SE457954B - 3-amino 1-azetidinsulfonsyraderivat eller salt daerav, ett b-laktamantibiotika - Google Patents

Description

457 954 2 grupper. De grupper som har l-l0 kolatomer föredrages.

Uttrycket "cykloalkyl" avser cykloalkylgrupper innehållande 3, 4, 5, 6 eller 7 kolatomer.

Uttrycket "alkenyl" avser både raka och grenade grupper. De grupper som har 2-10 kolatomer är föredragna.

Uttrycket "halogen" avser fluor, klor, brom och jod.

Såsom beskrives nedan kan ß-laktamerna enligt uppfinningen framställas på syntetisk väg. De ß-laktamer med formeln I, vari R2 är alkoxi, kan framställas av motsvarande icke-alkoxy- lerade ß-laktam. Vissa föreningar enligt uppfinningen kan kri- stalliseras eller omkristalliseras ur lösningsmedel innehål- lande vatten. I dessa fall kan hydratiseringsvatten bildas.

Uppfinningen innefattar stökiometriska hydrat såväl som före- ningar innehållande varierande mängder vatten, som kan bildas genom förfaranden såsom lyofilisering.

Vissa B-laktamer med formeln I har även framställts biolo- giskt. Odling av en stam av mikroorganismen Chromobacterium violaceum SC ll.378 ger ett salt av (R)-3-(acetylamino)-3- metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra. Odling av olika ättik- syrabakterier, t.ex. Gluconobacter-arten SC ll.435, ger ett salt av (R)-3-//N-(D-ïïglutamyl)-D-alanyl/amino/-3-metoxi-2- oxo-l-azetidinsulfonsyra. ß-laktamer med en sulfonsyrasaltsubstituent i l-ställning och en aminosubstituent i 3-ställning innehåller minst ett chiralt centrum - den kolatom (i 3-ställning i ß-laktamkärnan) till vilken aminosubstituenten är bunden.

Uppfinningen avser även de ß-laktamer, som beskrivits ovan, vari den stereokemiska konfigurationen vid det chirala centret i 3-ställning i ß-lak- tamkärnan är densamma som konfigurationen vid kolatomen i 6-ställning av naturligt förekommande penicilliner (t.ex. penicillin G) och som konfigurationen vid kolatomen i 7-ställ- ning i naturligt förekommande cefamyciner (t.ex. cefamycin C). 457 954 Med avseende på de föredragna ß-laktamerna har strukturform- lerna ritats för att visa den stereokemiska konfigurationen vid det chirala centret i 3-ställningen. På grund av nomenkla- turkonventionen är det så att de föreningar vari R2 är väte, har S-konfiguration och de föreningar vari R2 är alkoxi, har R-konfiguration.

Uppfinningen innefattar även racemiska blandningar, som inne- håller de ovan beskrivna ß-laktamerna. ß-laktamer med en sulfonsyrasaltsubstituent i l-ställning i ß-laktamkärnan och en aminosubstituent i 3-ställning i ß-lak- tamkärnan uppvisar aktivitet gentemot en mångfald gramnega- tiva och grampositiva organismer. Sulfonsyrasaltsubstituen- ten är väsentlig för föreningarnas enligt uppfinningen aktivi- tet. De föreningar, vari R3 och/eller R4 är väte eller alkyl, särskilt metyl, uppvisar en särskilt användbar aktivitet.

Föreningarna enligt uppfinningen kan användas såsom medel för att bekämpa bakterieinfektioner (innefattande infektioner i urinvägarna och andningsorganen) hos däggdjursarter, t.ex. tama djur (t.ex. hundar, katter, kor, hästar och liknande) samt människor.

För bekämpning av bakterieinfektioner hos däggdjur kan en förening enligt uppfinningen tillföras det däggdjur som är i behov därav i en mängd av ungefär 1,4 mg/kg/dag till ungefär 350 mg/kg/dag, företrädesvis ungefär l4 mg/kg/dag till unge- fär 100 mg/kg/dag. Samtliga tillförselsätt som användes tidigare för tillförsel av penicilliner och cefalosporiner till infek- tionsstället avses användas även för den nya familjen av B- laktamer enligt uppfinningen. Sådana tillförselsätt innefattar oral, intravenös, intramuskulär tillförsel samt i form av ett suppositorium.

B-laktamprodukterna enligt uppfinningen framställes i allmän- het genom införande av en sulfonsyrasubstituent (en sulfo- grupp -S03-) på kväveatomen i 1-ställning i B-laktamkärnan.

Denna sulfonerinqsreaktion utföres lätt genom behandling av B-laktamen med ett svaveltrioxidkomplex eller med ett ekviva- lent sulfonerande medel, såsom ett klorsulfonat. 457 954 De svaveltrioxidkomplex, som mest vanligt användes, är pyri- din-svaveltrioxid; lutidin-svaveltrioxid, dimetylformamid- svaveltrioxid; samt pikolin-svaveltrioxid. I stället för att använda ett i förväg bildat komplex kan komplexet bildas in situ, t.ex. med användning av klorsulfonyl-trimetylsilylester och pyridin såsom reagenter. Alternativt kan sulfoneringen åstadkommas medelst en intermediär förening såsom exempelvis först silylering av kväveatomen i B-laktamkärnan och därefter underkastar man den silerade föreningen för en silylbytes- reaktion med trimetylsilylklorsulfonat eller en liknande rea- gent. Exempel på silylerande medel är monosilyltrifluoracet- amid, trimetylsilylklorid/trietylamin och bis-trimetylsilyl- trifluoracetamid.

I allmänhet utföres sulfoneringsreaktionen i närvaro av ett organiskt lösningsmedel såsom pyridin eller en blandning av organiska lösningsmedel, företrädesvis en blandning av ett polärt lösningsmedel, såsom dimetylformamid och ett halogene~ rat kolväte, såsom diklormetan.

Den produkt som initiellt bildas vid sulfoneringsreaktionen är ett salt av den sulfonerade B-laktamen. När pyridin~svavel- trioxid är det sulfonerande komplexet är den initiellt bildade produkten det B-laktamsulfonerade pyridiniumsaltet av den sulfonerade B-laktam, vari M+ i formelnxuïmn är pyridinium- jonen: f-íl-so 14+ O 3 Dessa komplex kan omvandlas till andra sulfonsyrasalter med användning av konventionell teknik (t.ex. jonbytarhartser, kristallisation eller jonparextraktion). Dessa konversions- förfaranden är även användbara för rening av produkterna.

Omvandling av pyridinsaltet till kaliumsaltet med användning av kaliumfosfat eller kaliumetylhexanoat; till tetrabutyl- ammoniumsaltet med användning av tetrabutylammoniumvätesulfat; eller till en zwitterjonisk förening (M+ = väte) med användning av myrsyra; är särskilt användbar. 457 954 Det bör förstås att den sulfoneringsreaktion, som inför sulfo- gruppen på kväveatomen i B-laktamkärnan, kan utföras vid olika steg av syntesen, innefattande införande före bildningen av B-laktamkärnan, varvid ett sådant förfarande utföres såsom an- ges nedan. Sulfoneringsreaktionen utföres i närvaro av de ovan beskrivna lösningsmedlen och vanligen vid rumstemperatur. När aminofunktionen är närvarande utföres reaktionen företrädesvis med aminofunktionen skyddad.

Med användning av en bensyloxikarbonylskyddsgrupp såsom ett exempel kan sulfoneringsreaktionen åskådliggöras på följande sätt: R R 2 4 112 3:4 R _ H N- _ cönscnzoco NH R3 2 3 , N-so M+ 4 --NH l) sulfonering 0' 3 II 2) avskyddning III Andra skyddsgrupper kan användas för att skydda aminofunk- tionen, t.ex. en t-butyloxikarbonylgrupp, en enkel acylgrupp såsom acetyl eller bensoyl av fenylacetyl, en trifenylmetyl- grupp, eller uppvisande aminofunktionen i form av en azid- grupp. Den önskade acylgruppe1(Rl) kan bindas vid en konven- tionell acyleringsreaktion.

Exempel på acyleringsförfaranden innefattar reaktion med en karboxylsyra (Rl-OH) eller motsvarande karboxyl- syrahalogenid eller karboxylsyraanhydrid. När R2 är alkoxi, sker acylering bäst med användning av en syraklorid eller en syrabromid. Reaktionen med en karboxylsyra fortskrider lättast i närvaro av en karbodiimid såsom dicyklohexylkarbodiimid och en substans som kan bilda en aktiv ester in situ såsom N-hydroxi- bensotriazol. I de fall varvid acylgruppen (Rl) innehåller reaktiva funktioner (såsom amino- eller karboxylgrupper) kan 457 954 det vara nödvändigt att först skydda dessa funktionella grupper och sedan utföra acyleringsreaktionen och slutligen avskydda den resulterande produkten. Alternativt kan sulfoneringsreak- tionen utföras med acylgruppen redan i läge, t.ex.: az R4 :<2 R 4 R -NH- E R R -NH- E R 1 3 __________;> l I 3 ' - + 4::::l; sulfonering 5 N-SOBM “ IV V I det fall varvid R2 är lägre alkoxi kan ytterligare varia- tion förefinnas enär R2-lägre alkoxigruppen kan införas efter sulfoneringen såväl som före sulfoneringen med användning av konventionella förfaranden för klorering av den acylerade kväveatomen i 3-ställning åtföljt av reaktion med en lägre alkoxid Cl H 1:4 (Rzmnmia 112 få; aCy1-N_. :RB _ acyl-NH _ R3 _ + _ + Ligg M h-SO N 0,/ 3 0/ 3 VI V Acylgrupperna i reaktionsschemat ovan innefattar lätt avlägsningsbara grupper, som fungerar såsom en skyddande grupp och som kan avlägsnas efter reaktionen för erhållning av den "deacylerade" produkten (-NH2).

Dessutom kan B-laktamringen bildas via en cykliseringsreak- tion och sulfoneringsreaktionen kan utföras före cykliseringen såväl som därefter, dvs. 457 954 7 V R4 É; R4 acyl-NH R3 CYkliSafifi9 aCY1'NH“ 3 - + / _SO3"M+ ó-í-N-SÛIS M O VII Acylgruppen i denna reaktion är en lätt avlägsnings- bar grupp, som funktionerar såsom en skyddsgrupp och som efter avlägsning ger NH2-produkten.

De azetidinon-utgångsmaterial, vari R2 är väte och minst en av R3 och R4 är väte, kan även framställas av aminosyror som har formeln NHZ\~ ?H R4 XII CH C~\\ 3 \ R on ÖQC (minst en av R3 och R4 är väte). Aminogruppen skyddas först med en klassisk skyddsgrupp, t.ex. t-butoxikarbonyl (nedan be- tecknad “Boc“). Karboxylgruppen i den skyddade aminosyran bringas därefter att reagera med ett aminsalt, som har formeln XIII Y-o-Nnšci' vari Y är alkyl eller bensyl, i närvaro av en karbodiimid för erhållning av en förening, som har formeln H R ?/4 XIV soc-NH-cn cr\\R 3 ,c----NH-o-Y 0/ 457 954 (minst en av R3 och R4 är väte). Hydroxylgruppen i en före- ning med formeln XIV omvandlas till en bortgående grupp (V) med en klassisk reagent, t.ex. metansulfonylklorid (metan- sulfonyl betecknas nedan "Ms“). Andra bortgående grupper (V) som kan användas, är bensensulfonyl, toluensulfonyl, klor, brom och jod.

Den fullt skyddade föreningen, som har formeln 4 “f R BOC-NH-TH Cíiš XV R 3 o¿C NH-O-Y (mgßt en av R3 och R4 är väte) cykliseras genom behandling med en bas, t.ex. kaliumkarbonat. Reaktionen utföres före- trädesvis i ett organiskt lösningsmedel såsom aceton under återflödesbetingelser och ger en förening, som har formeln (minst en av R3 och R4 är väte).

Alternativt kan cykliseringen av en förening med formeln XIV åstadkommas utan att man först omvandlar hydroxylgruppen till en lämnande grupp. Behandling av en förening med formeln XIV med trifenylfosfin och dietylazodikarboxylat ger en förening med formeln XVI, vari minst en av R3 och R 3 är väte.

Avlägsning av skyddsgruppen från l-ställningen i en azetidínon med formeln XVI kan utföras via natriumreduktion när Y är alkyl och ger ett intermediat med formeln 457 954 9 §4 Boc-Nfl- _ R3 xvn I á-NH (minst en av R3 och R4 är väte). Om Y är bensyl ger katalytisk (t.ex. palladium på kol) hydrogenering initiellt den motsvarande N-hydroxiföreningen, vilken efter behandling med titantriklo- rid ger ett intermediat med formeln XVII, vari minst en av R3 och R4 är vate.

Syntes innefattande rinqslutning av den ovan beskrivna typen resulterar i en inversion av den stereokemiska konfigurationen av substituenterna R3 och R4.

Såsom nämnts ovan kan den ovannämnda azetidinonen sulfoneras till bildning av en förening, som har formeln XVIII BOC-NH1 ' R O,,--N-so 'rf (minst en av R och R är väte). 3 4 Ett alternativt förfarande för framställning av en förening med formeln I, vari R2 är väte och minst en av R3 och R4 är väte, utnyttjar såsom utgångsmaterial en aminosyraamid med formeln OH | /Rfl NHZ-CH-C\R3 XIX ÖQ NH2 (minst en av R3 och R4 är väte).

Skydd av aminogruppen med en klassisk skyddsgruPP: t.ex. ben- syloxikarbonyl (nedan betecknad "Z") eller Boc och omvandling 457 954 19 av hydroxylgruppen till en lämnande grupp (V) såsom Ms ger en förening, som har formeln OMs R XX ANH-cH---c/ 4 \\\ R OÖC NH2 3 (minst en av R3 och R4 är väte), vari A är en skyddande grupp.

Sulfonering av en förening med formeln XX ger en förening, som har formeln Ms R ANH-cn c/ 4 xx: 123 _ + Ota NHso3 M (minst en av R3 och R4 är väte).

Cyklisering av en förening med formeln XXI utföres med en bas, t.ex. kaliumkarbonat. Reaktionen utföres företrädesvis i en blandning av vatten och ett organiskt lösningsmedel, t.ex. ett halogenerat kolväte såsom 1,2-dikloretan) under återflödes- betingelser och ger en förening, som har formeln ANH R3 XXII (minst en av R3 och R4 är väte).

Avskyddning av en sulfonerad azetidinon med formeln XXII, vari A är en skyddsgrupp, såväl som motsvarande föreningar som beskrivits ovan uppvisande en R2-alkoxigrupp genom katalytisk hydrogenering ger en förening, som har formeln 457 954 ll XXIII - + 0/ 3 (minst en av R3 och R4 är väte), vari R2 är väte eller alkoxi, som kan omvandlas till motsvarande zwitterjon med formeln R +__ = R xxïv m3 \ 3 Od N-SO3 (minst en av R3 och R4 är väte) genom behandling med en syra såsom myrsyra.

Avskyddning av en sulfonerad azetidinon med formeln XXII, vari A är en Boc-skyddsgrupp, med användning av sura betingel- ser (t.ex. med användning av myrsyra) ger motsvarande zwitter- jon med formeln XIV.

En utmärkt källa för B-laktamutgângsmaterialen är 6-aminopeni- cillansyrorna och 7-aminocefalosporansyrorna, som kan uppvisa en eventuellt närvarande 6-alkoxi~ resp. 7-alkoxisubstituent.

Dessa föreningar har formlerna // 3 Rl-NH-- \CH 3 XXVEI resp. 457 954 12 R 3 s R -NH-' xxvb 1 _ coon vari R2 är väte eller alkoxi och Rl är väte eller acyl.

Genom anpassning av förfaranden som är beskrivna i litteraturen kan 3-amino-2-azetidinoner framställas; jämför exempelvis Chem. Soc. Special Publication nr. 28, p. 288 (1977): The Chemistry of Penicillins, Princeton Univ. Press, p. 257 och Synthesis, 494 (l977). 6-amino-penicillansyran eller 7-aminocefalosporansyran avsvav- las först genom reduktion med användning av Raney-nickel.

Reaktionen kan utföras i vatten under återfl ödesbetingelser; den erhållna föreningen har strukturformeln Rz :XXVI Rl-NH då N-en-cH(CH3)2 COOH Ersättning av karboxylgruppen i föreningen med formeln XXVI med en acetatgrupp åtföljt av hydrolys ger en 3-amino-3- alkoxi-2-azetidinon med formeln I, vari Rl är väte eller acyl, R2 är väte eller lägre alkoxi och R3 och R4 är väte. Behand- ling av en förening med formeln XXVI med kupriacetat och bly- tetraacetat i ett organiskt lösningsmedel (t.ex. acetonitril) ersätter karboxylgruppen med en acetatgrupp.

Hydrolys av den bildade föreningen kan utföras med användning av kaliumkarbo- nat i närvaro av natriumborhydrid.

Införande av en sulfogrupp i l-ställning i den ovan angivna 3-amino-3-alkoxi-2-azetidinon kan åstadkommas genom reaktion av intermediatet med ett komplex av dimetylformamid och svavel- 457 954 13 trioxid.

Ett 3-azido-2-azetidinon-utgångsmaterial kan framställas på så sätt att man först bringar en olefin med formeln *(14 XXVII CH2===C-R3 att reagera med ett halosulfonylisocyanat (företrädesvis klorsulfonylisocyanat) med formeln XXVIII 0===C===N--S0 -halogen 2 till bildning av en azetidinon med formeln R4 _ R3 XXIX då N-S02-halogen Reduktiv hydrolys av en azetidinon med formeln XXIX ger en N-osubstituerad B-laktam med formeln XXX För en mera detaljerad beskrivning av den ovan angivna reak- tionssekvensen hänvisas till litteraturen; jämför exempelvis Chem. Soc. Rev., §, 181 (1976) och J. Org. Chem., 35, 2043 (1970).

En azidogrupp kan införas i 3-ställningen av en azetidinon med formeln XXX (eller dess sulfonerade motsvarighet) genom reaktion av föreningen med en arylsulfonylazid (såsom toluen- sulfonylazid) till bildning av en utgângsazetidinon med for- meln 457 954 14 R4 __ = R N3 .3 xxx: Reaktionen fortskrider bäst genom att man först skyddar azeti- dinonkvävet med en silylrest (t.ex. t-butyldimetylsilyl eller t-butyldifenylsilyl), varefter man genererar anjonen vid kär- nans 3-ställning med en stark organisk bas (t.ex. litiumdi- isopropylamin) vid låg temperatur med efterföljande behand; ling av anjonen med toluensulfonylazid. Det bildade intermedia- tet behandlas med trimetylsilylklorid och efterföljande syra- hydrolys eller fluoridsolvolys av N-skyddsgruppen ger före- ningen med formeln XXXI.

Alternativt kan föreningen med formeln XXXI erhållas på så sätt att man först bringar en primär amin som har formeln H N-CH -alkyl _ 2 2*§::>*° eller n2N«<::>»o alkyl o-alkyi att reagera med en aldehyd som har formeln R3CH=O till bild- ning av motsvarande SchiffÄbas. En [2+2] en aktiverad form av -cykloaddition med -azidoättiksyra ger en 3-azido-2-azetidi- non med formeln vari Q är 457 954 15 Oxidativ avlägsning av Q-substituenten ger föreningen med formeln XXXI. 3-acylamino-2-azetidinonerna kan erhållas på så sätt att man först reducerar en 3-azido-2-azetidinon med formeln XXXI till bildning av motsvarande 3-amino-2-azetidinon, varefter man acylerar 3-amino-2-azetidinonen.

När R2 är lägre alkoxi kan, såsom ovan nämnts, produkten framställas från motsvarande produkt, vari R2 är väte. Klore- ring av amidkvävet i en icke-alkoxylerad förening ger ett intermediat med formeln 31 f* å* Rl“N"" _ XXXII - + O¿ N-S03 M Reagenser och förfaranden för N-klorering av amider är väl- kända. Exempel på reagenser är tert.-butylhypoklorit, natrium- hypoklorit och klor. Reaktionen kan utföras i ett organiskt lösningsmedel (t.ex. en lägre alkanol såsom metanol) eller i ett tvàfasigt lösningsmedelssystæm (t.ex. vatten/metylenklorid) i närvaro av en bas såsom natriumboratdekahydrat. Reaktionen utföres företrädesvis vid sänkt temperatur.

Reaktion av ett intermediat, som har formeln XXXI, med ett alkoxylerande medel, t.ex. en alkalimetallalkoxid, ger en produkt med formeln I, vari R2 är alkoxi, i kombination med dess enantiomer. Reaktionen kan utföras i ett organiskt lös- ningsmedel, t.ex. ett polärt organiskt lösningsmedel, såsom dimetylformamid, vid sänkt temperatur.

En alternativ syntes för framställning av de föreningar med formeln I, vari R2 är alkoxi, innefattar först alkoxylering av ett intermediat med formeln VI, vari RINH är ett karbamat (t.ex. Rl är bensyloxikarbonyl) och R2 är väte, varefter man inför en sulfogrupp i l-ställning av den erhållna föreningen. *f 457 954 16 Klorering av en förening med formeln VI med användning av det ovan beskrivna förfarandet för klorering av en icke-alkoxylerad förening med formeln I till bildning av en förening med formeln XXXII ger ett intermediat, som har formeln cl 34- c H -cH -o-co-N- 2 R 4 "N-cl o Med användning av det ovan beskrivna alkoxyleringsförfarandet (för omvandling av en förening med formeln XXXII till en pro- dukt med formeln I) och efterföljande tillsats av ett redu- cerande medel såsom trimetylfosfit kan föreningen med formeln XXXIII omvandlas till ett intermediat med formeln O-alkyl R c n o-co-NH- 3 R xxxïv 6 5 i 3 i kombination med dess enantiomer.

De ovan beskrivna förfarandena ger de produkter med formeln I, vari R2 är alkoxi, såsom en racemisk blandning. Om så önskas kan enantiomeren med konfigurationen R isoleras från den racemiska blandningen med användning av konventionella för- faranden såsom fraktionerad kristallisation av ett lämpligt salt med en optiskt aktiv organisk amin eller genom jonparad x kromatografi med användning av en optiskt aktiv katjon. 457 954 l7 Biologisk framställning av antibiotikum EM5ll7 Salter av (R)-3-(acetylamino)-3-metoxi-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra (formeln I, Rl äf acetyl och R2 är metoxi; nedan betecknad EM5ll7) kan även framställas genom odling av en stam av mikroorganismen Chromobacterium violaceum SC 11.378, som deponerats i American Type Culture Collection såsom ATCC nr. 31532.

Mikroorganismen Den mikroorganism som användes för framställning av EM5ll7 är en stam av Chromobacterium violaceum SC 11.378. En subkul- tur av mikroorganismen kan erhållas från den permanenta sam- lingen hos American Type Culture Collection, Rockville, Mary- land, USA. Dess tillgänglighetsnummer i depositoriet är ATCC nr. 31532. Utöver den specifika mikroorganism som be- skrives och karaktäriseras nedan bör det förstås av mutanter av mikroorganismen (t.ex. mutanter framställda med användning av röntgenstrålar, ultraviolett strålning eller senapsgas) även kan odlas till bildning av EM5ll7.

Chromobacterium violaceum SC ll.378, ATCC nr. 3l532 kan iso- leras från ett fuktigt jordprov innehållande mikroorganismen genom att man först avsätter jordprovet på ett medium inne- hållande: jordextrakt g 400 ml destillerat vatten 600 ml jästextrakt 5,0 g glukos 10,0 g agar 17,5 g Mediet inställes på pH 6,0 och steriliseras 1 en autoklav via 121°c i zo minuter. Efter 24-72 timmars inkubation vid 25oC isoleras kolonier av Chromobacterium violaceum SC 11.378 från jorden på plattan. Dessa isolerade kolonier odlas där- efter på ett medium innehållande: 457 954 18 jästextrakt l g katten-Jakt 1 g ' "NZ amine A" 2 g glukos 10 g agar 15 g destillerat vatten till l liter Mediet inställes på pH 7,3 och autoklaveras vid l2loC i 30 minuter.

Chromobacterium violaceum SC ll.378 är en gramnegativ stav som ofta uppvisar grening, bipolär fläckning och lipida inklusioner. Den är rörlig på grund av en enda polär flagel- lum med tillfälliga laterala flagella, som är mindre till sin storlek.

På näringsagar bildar Chromobacterium violaceum SC ll.378 violetta kolonier. Pigmentet förstärkes på media som är rika på tryptofan och jästextrakt. I näringsbuljong bildar den en violett ring runt rörets vägg men ingen sammanhängande hud. Det violetta pigmentet är lösligt i etanol men olösligt i vatten och kloroform.

Chromobacterium violaceum SC ll.378 är mesofil, växer inom ett intervall av 15-37°C; ingen tillväxt sker vid 4°C eller över 37°C. Kasein hydrolyseras kraftigt av mikroorganismen, som är oxidaspositiv. I närvaro av Chromobacterium violaceum SC ll.378 jäses glukos, fruktos och trehalos (metod enligt Hugh & Leifson, 1953). L-arabinos utnyttjas inte av mikro- organismen vare sig fermentativt eller oxidativt. Cyanväte bildas av mikroorganismen och aeskulinhydrolys är negativ.

De ovan beskrivna nyckelkaraktäristika ger en bas för identi- fikation av mikroorganismen såsom Chromobacterium violaceum till skillnad från Chromobacterium lividum, den enda andra art av släktet Chromobacterium som anges i 8:e upplagan av Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. 457 954 19 Ytterligare stammar av Chromobacterium violaceum kan även odlas till bildning av EM5ll7.

Antibiotikumet För framställning av antibiotikum EM5ll7, odlas Chromobacterium violaceum SC ll.378, ATCC nr. 31532 vid eller ungefär vid 25OC under submersa aerobiska betingelser på ett vattenhaltigt näringsmedelsmedium innehållande en assimilberbar kolkälla och kvävekälla. Fermentationen utföres tills väsentlig anti- biotisk aktivitet förlänats mediet, vanligen ungefär 18-24 timmar, företrädesvis ungefär 20 timmar.

Med användning av följande förfarande kan EM5ll7 separeras från fermentationsmediet och renas. Efter avslutad fermenta- tion kan odlingsvätskan centrifugeras för avlägsning av mycelium eller också kan filtrering alternativt användas för avlägsning av myceliet från odlingsvätskan. Efter avlägsning av myceliet från odlingsvätskan kan EM5ll7 extraheras däri- från. Företrädesvis extraheras odlingsvätskan vid pH 5 genmm jonparextraktion med cetyldimetylbensylammoniumklorid i metylenklorid och återextraktion till en vattenlösning av natriumjodid (inställd på pH 5 med ättiksyra). Efter koncen- trering av natriumjodidextraktet i vakuum kan en vattenlösning av återstoden tvättas med butanol. Koncentrering av den erhåll- na vattenlösningen till torrhet ger en återstod, som upplöses så långt möjligt är i metanol. Centrifugering kan användas för att separera olösliga substanser, som tvättas med metanol och därefter bortkastas.

Rening av antibiotikumet kan åstadkomas genom upplösning av metanolkoncentratet i metanol/vatten (lzl) och påföring av lösningen på en kromatograferingskolonn, t.ex. en kolonn inne- hållande Sephadex G-10 i samma lösningsmedelsblandning. Efter eluering med samma blandning kombineras aktiva fraktioner och koncentreras till torrhet. Återstoden blandas med metanol och olösligt material filtreras och bortkastas.

Ytterligare rening åstadkommas genom påföring av det metanol- 457 954 20 lösliga materialet på en kolonn av DEAE-cellulosa- Kolonnen kan elueras med en linjär gradient framställd från pH 5 natriumfosfatbuffert 0-0.M och pH 5 natriumfosfatbuffert O.lM- Aktiva fraktioner kombineras, koncentreras och metanololösligt material avlägsnas och bortkastas.

Ytterligare rening av EM5ll7 åstadkommes genom upplösning av detta material i vatten och påföring av lösningen på en kolonn av Sephadex LH-20 och eluering av kolonnen med vatten. Aktiva fraktioner kombineras och koncentreras. Ytterligare rening av EM5ll7 utföres därefter genom upplösning av materialet i vatten, pâföring av lösningen på en kolonn av Diaion HP-20AG och eluering med vatten. Aktiva fraktioner kombineras och koncentreras. Koncentratet löses i vatten och föres genom en kolonn av Dowex 50W~X2, kaliumformen, samt tvättning med vatten. Effluenten kan koncentreras för erhållning av ett kristallint material, som är det relativa rena kaliumsaltet av EM5ll7.

Den ovan beskrivna isolationen och reningsförfarandet ger kaliumsaltet av EM5ll7. Andra salter kan framställas mot- svarande formen av det jonbytarharts som användes vid det slutliga reningssteget.

Biologisk framställning av antibiotikum EM52lO Salter av (R)-3-[[N-(D-1=glutamyl)-D-alanyl]-amino]-3-metoxi- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra (formeln I, Rl är D~7>glutamyl- -D-alanyl och R2 är metoxi; nedan betecknat EM52lO) kan även framställas genom odling av olika ättiksyrabakterier.

Mikroorganismen Mikroorganismen Gluconobacter, arten SCll.435 kan användas för framställning av EM52lO. En subkultur av mikroorganismen kan erhållas från den permanenta samlingen i American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, USA. Dess tillgäng- lighetsnummer i depositoriet är ATCC nr. 31581. Utöver den specifika mikroorganismen som beskrives och karaktäriseras nedan bör det förstås att man kan använda mutanter av mikro- 457 954 21 organismen (t.ex. mutanter framställda med användning av rönt- genstrâlar, ultraviolett strålning eller senapsgas) kan även odlas till bildning av EM52lO.

Gluconobacter-arten SCll.435, ATCC nr. 31581 kan isoleras från jordmossa innehållande mikroorganismen på så sätt att man först inkuberar jordmossan i en l0%-ig vattenlösning av pektin (pH 2,5) i 7 dagar vid 25°C. Organismen kan därefter isoleras genom påföring därav på en platta med ett medium innehållande: x extrakt av Spartina patens-gräs 400 ml destillerat vatten 600 ml jästextrakt 5 g glukos lO g rå flingagar 17,5 g x Extrakt av Spartina patens-gräs framställes genom till- sats av SOO g upphugget, torrt gräs till 3 liter vattenled- ningsvatten, som bringas till kokning och får sjuda i 30 minuter.

Mediet inställes på pH 6,0 och steriliseras i en autoklav vid l2l°C i 20 minuter. Efter ungefär 18 timmar inkubation vid 25°C isoleras kolonier av Gluconobacter-stammen SCll.435 från den pektinanrikade lösningen på plattan. Dessa isolerade kolonier odlas därefter i ett medium innehållande: jästextrakt l g köttextrakt l g "NZ amine A" 2 g glukos 10 g agar 15 g destillarat vatten till l liter Mediet inställes på pH 7,3 och autoklaveras vid 12l°C i 30 minuter.

Gluconobacter-arten SCll.435 är en pleiomorf gramnegativ stav, som är rörlig på basis av en till tre polära flagella.

Den är obligat aerobisk, katalaspositiv och oxidativ. Den kan skiljas från Pseudomonas på grund av att den är cytokromoxidas- 457 954 22 negativ och tolerant mot extremt sura betingelser. Dessa karak- täristika indikerar att mikroorganismen är mer nära besläktat med ättiksyrabakterierna än de sanna Pseudomonaderna.

På "BBL Trypticase"-sojaagar växer Gluconobacter-arten SCll.435 såsom en blandning av grova och släta kolonityper. Den grova typen är associerad med ett svagt gult lösligt pigment, under det att den släta typen är mukoid och pigmentlös. Dissociation mellan de två typerna påverkas av mediet, temperaturen och lagringsbetingelserna. EM52lO-aktivitet tenderar att minska i kulturer där den grova komponenten är dominerande.

På "BBL Wart"-agar (pH 4,8) växer Gluconobacter-arten SCll.435 överflödande rikt såsom uppskjutna mukoida slemmiga kolonier.

Liknande tillväxt erhålles på malt-jästextraktagar (l % av vardera) inställd på pH 4,5.

Pâ ett medium innehållande 1 % jästextrakt, 10 % glukos, 3 % kalciumkarbonat och 2,5 % agar bildas tillräckligt med syra från glukosen till bildning av en zon som är fri från kalcium- karbonat runt tillväxten- Detta är ett karaktäristikum för Acetobacter och Gluconobacter.

I närvaro av Gluconobacter-arten SCll.435:(i) bildas ett brunt lösligt pigment på jästextrakt-glycerol- och jästextrakt- kalcium-laktat-agarplattor, (ii) syra bildas pâ glukos, fruk- tos, galaktos, mannos, xylos, mannitol och arabinos, men ingen tillväxt eller syrabildning sker på ramnos, laktos, sackaros eller maltos när dessa sockerarter införlivas med ett medium enligt Hugh och Leifson.

Den biologiska framställningen av EM52l0 är inte begränsad till Gluconobacter-arten SCll.435 utan är brett fördelad bland ättiksyrabakterierna. Följande kulturer kan var och en användas för framställning av EM52lO: Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianum ATCC 6033 Acetobacter aceti subsp. aceti ATCC 15973 457 954 23 Gluconobacter oxydans subsp. oxydans ATCC 19357 Gluconobacter oxydans subsp. suboxydans ATCC 23773 Gluconobacter oxydans subsp. oxydans ATCC 15178 Acetobacter aceti subsp. liquefaciens ATCC 23751 Acetobacter peroxydans ATCC 12874 Gluconobacter oxydans subsp. suboxydans ATCC 19441 Acetobacter sp. ATCC 21780 Gluconobacteroxydans subsp. industrialis ATCC 11894 Antibiotikumet .

För framställning av antibiotikum EM52lO kan Gluconobacter- arten SCll.435, ATCC nr. 31581 eller en av de ovan angivna mikroorganismerna odlas vid eller omkring 25°C under submersa aerobiska betingelser på ett vattenhaltigt näringsmedels- medium innehållande en assimilerbar kol- och kvävekälla. Fermen- tationen utföres tills väsentlig antibiotisk aktivitet för- länats mediet, vanligen ungefär 16-24 timmar, företrädesvis ungefär 20 timmar.

Med användning av följande förfarande kan EM52lO separeras från fermentationsmediet och renas. Efter det att fermenta- tionen blivit fullständig centrifugeras odlingsvätskan för avlägsning av bakterier och antibiotikumet avlägsnas från odlingsvätskans överflytande del vid pH 3,7 genom absorption på ett anjonbytarharts, t.ex. Dowex l-X2. Antibiotikumet elue-» ras från hartset med natriumklorid vid ungefärpfl 4 och elua- tet koncentreras och föres genom en kolkolonn. EM52lO elueras därefter från kolet med metanolzvatten (lzl). De aktiva frak- tionerna tillvaratages och torkas och placeras därefter på en anjonbytarkolonn, t.ex. Dowex l-X2, och elueras med en gradient av natriumklorid buffrad vid pH 4. Aktiva fraktioner koncen- treras och avsaltas på en kolonn av ett makroretikulärt styren/ divinylbensen-sampolymerharts ("Dianion HP 2OAG“). Aktiva frak- tioner elueras med vatten och koncentreras och frystorkas och detta material utgör natriumsaltet av EM52lO.

Det ovan beskrivna reningsförfarandet ger natriumsaltet av EM52lO. Andra salter kan erhållas genom utbyte av det salt som 457 954 24 användes för eluering av EM52lO i den ovan beskrivna jonbytar- kromatograferingen, t.ex. med användning av kaliumklorid för erhållning av kaliumsaltet.

Följande exempel utgör specifika utföringsformer av upp- finningen.

Exempel l.

(S)-N-(2-oxo-l- sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid,kaliumsalt Metod I: A) l-[(lR)-karboxi-2-metyl(propyl)]-2-oxo-(3S)- [fenyl[acetyl- (amino)]]azetidin Raney-nickel tvättas med vatten genom dekantering i flera timmar tills vattnets pH (5-6 gånger volymen av Raney-nicklet) är 7.6.

Till en lösning av 9,0 g penicillin G (Na+) i 500 ml vatten sattes 54 g (90 ml) Raney-nickel. Kolven, försedd med en åter- flödeskylare, nedsänkes i ett bad vid l5S°C. När återflödes- kokning börjar fortsättes den under l5 minuter. Kolven kyles omedelbart i ett is-vatten-bad och Raney-nicklet avlägsnas genom filtrering genom Celite. pH inställes på 3 med använd- ning av utspädd HCl och vattenlösningen koncentreras till unge- fär 150 ml och kyles. Det oljeartade skiktet kristalliserar vid skrapning. Efter tvättning med vatten och torkning i vakuum i 3 timmar vid SOOC erhålles 3,83 g av titelföreningen.

B) l-[acetyloxi-2-metyl(propyl)]-2-oxo-(38)-[fenyl-[acetyl- (amino)]]azetidin I Kväve bubblas i 15 minuter genom en omrörd suspension av 608 mg (2 mmol) av föreningen ovan i 20 ml torr acetonitril. Ett vattenbad vid 40-45°C användes i flera minuter för upplösning av all syra. Vattenbadet avlägsnas och pulverformigt kupri- acetatmonohydrat (182 mg, l mmol) tillsättes, varefter 886 mg (2 mmol) blytetraacetat tillsättes efter en minuts omröring.

Blandningen omröres vid rumstemperatur i 20 minuter. Aceto- nitrillösningen dekanteras från fällningen och de fasta sub- stanserna tvättas med etylacetat. Den förenade acetonitril/etyl- 457 954 25 acetat-lösningen indunstas till en återstod, som upptages i etylacetat/vatten. Etylacetatskiktet tvättas i följd med vatten (3 gånger), vattenlösning av natriumbikarbonat (pH 7) och vatten. Etylacetatskiktet torkas över natriumsulfat och indunstas till en återstod (515 mg), som användes utan ytter- ligare rening vid nästa reaktion.

C) 2-oxo-(3S)-[fenyl[acetyl(amino)]]azetidin Till en lösning av 911 mg (2,86 mmol) av föreningen ovan i 21 ml metanol sättes 3,5 ml vatten åtföljt av 383 mg (2,86 mmol) kaliumkarbonat. Blandningen omröres under kväve i 1 minut och därefter tillsättes 160 mg (4,3O mmol) natriumborhydrid. Reak- tionsblandningen omröres vid rumstemperatur i 20 minuter.

Metanolen avlägsnas i vakuum och återstoden upptages i etyl- acetat och en ringa mängd vatten. Därefter inställes på pH 2,5.

Etylacetatskiktet tvättas vid pH 7,0 med en vattenlösning av natriumbikarbonat och därefter med en ringa volym vatten och slutligen torkas över natriumsulfat och indunstas för erhåll- ning av den råa produkten (493 mg). Tillsats av en ringa mängd etylacetat ger 250 mg (43 % utbyte) av den önskade kristallina produkten. Ytterligare kvantiteter produkt kan erhållas genom kristallisation eller kromatografi.

D) (S)-N-(2-oxo-1-sulfo-3-azetidiny1)-2-fenyl-acetamid, kalium- šàlš - Pyridin'SO3-komplex (215 mg, 1,35 mmol) sättes till en omrörd lösning av 251 mg (l,23 mmol) av produkten ovan i 2 ml torr dimetylformamid och 2 ml torr dmetylenklorid under kväve vid rumstemperatur. Blandningen omröres i 3 timmar. Lösningsmedlen avlägsnas i vakuum och återstoden upptages i metylenklorid/ vatten. pH inställes på 6,5 med användning av 2N kaliumhydroxid.

Det vattenhaltiga skiktet tvättas med metylenklorid (3 gånger), filtreras och indunstas till en återstod. Återstoden omröres med 20 ml metanol och kaliumsulfatet avlägsnas genom filtrering.

Filtratet indunstas till en återstod, som omröres med 10-15 ml metanol. De fasta substanserna tillvaratages för erhållande av 49 mg av titelföreningen, smältpunkt l89oC, sönderdelning.

Analys: 457 954 26 Beräknat för CllH N 0 SK: 11 2 5 C 40,99 H 3,44 N 8,69 S 9,93 Funnet: C 45,96 H 3,83 N 9,86 S 8,99 Föreningen har spektralkaraktäristika som är identiska med de för den produkt som erhålles vid metod II.

Metod II: En lösning av 660 mg (S)-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyl]- amino]-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (jämför exempel 3Y i 13 ml vatten omröres i en atmosfär av väve i 2 timmar med 200 mg 10% palladium på kol. Katalysatorn filtreras och filtratet utspädes med en lika volym aceton och kyles på ett isbad. Under 30 minuter tillsättes fenylacetylklorid (8 por- om 40 ;0l) och lO %-ig kaliumbikarbonatlösning (pH mellan 5,2-5,8). Efter 40 minuter koncentreras lös~ tioner hålles ningen i vakuum för avlägsning av aceton och påföres en 200 ml HP-20-kolonn. Eluering med vatten och därefter vatten/aceton (9:l) ger l6O mg rå produkt efter TLC-undersökning av Rydon- positiva fraktioner, åtföljt av "poolning“ och indunstning.

Kristallisation ur metanol/eter ger lOl mg av titelföreningen, smältpunkt 2lOoC, sönderdelning.

Analys: Beräknat för CllHllN2O5SK°l/2H2O: C 39,86 H 3,65 N 8,45 S 9,68 K 11,80 Funnet: C 40,01 H 3,37 N 8,59 S 9,59 K 11,98 NMR (D20) 3,66 (S, 3), 3,67 (d av d, J=6,4), 3,90 (t, J=J> f 4,90 (d av d, J=6,4), 7,36 PPN (m.5).

MetOd III: Till en lösning av (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (l2l mg; jämför exempel 6A) i torr mety- lenklorid (3 ml) sättes 40 mg fenylättiksyra och 61 mg dicyklo- hexylkarbodiimid. Blandningen omröres i 48 timar vid rums- temperatur och filtreras för avlägsning av dicyklohexylurea.

Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum och återstoden upptages i aceton, filtreras och titelföreningen fälles genom tillsats av 457 954 27 5 ml aceton mättad med kaliumjodid. Den överflytande vätskan dekanteras, återstoden tvättas med aceton (3 gånger) och efter torkning erhålles 48 mg produkt uppvisande spektralkaraktäris- tika överensstämmande med de för produkterna enligt metoderna I Och II.

Metod IV: En lösning av 2,83 g (S)-2-oxo-3[[(fenylmetoxi)karbonyl]amino]- l-azetidinsulfonsyra, pyridinsalt (jämför exempel 2) i 36 ml vatten omröres i en atmosfär av väte med 707,5 mg 10% palla- dium på kol (175 ml väteupptagning). Efter 2 timmar filtreras uppslamningen och filtratet kyles till OOC och utspädes med 46 ml aceton (initiellt pH = 4,25 inställt på pH 6,7 med 10 % kaliumbikarbonatlösning)_ En lösning av 2,4 ml fenyl- acetylklorid i 10 ml aceton tillsättes droppvis under 15 minu- ter. pH hålles mellan 5,2 och 5,8 genom samtidig tillsats av kall l0%-ig kaliumbikarbonatlösning. Efter 45 minuter utspädes uppslamningen med 93 ml O,5M kaliumfosfat (pH 4,2) och koncen- treras för avlägsning av aceton. Uppslamningen filtreras och tvättas med vatten. Filtratet och tvättvätskorna kombineras och påföres en 450 ml HP-20-kolonn. Eluering med l liter 0,5M kaliumfosfat (pH 4,2), l liter vatten och därefter 2,5 liter 9:1 vatten/aceton ger 1,285 g av titelföreningen i fraktioner- na l4-19 (fraktionerna ldß är 200 ml, fraktionerna 16-21 är 100 ml). Spektraldata är i överensstämmelse med de som erhålles vid föregående metoder. Q Exempel 2.

(S)-2-oxo-3-[I(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-1-azetidinsulfon- syra, pyridinsalt (l:l) Metod I: A) l-I(lR)-karboxi-2-metyl(propyl)]-2-oxo-(3S)-[[(fenylmetoxi)- karbonyl]amino]azetidin En uppslamning av 6-aminopenicillansyra (l2,98 g, 0,06 mol) i 140 ml vatten innehållande 5,18 g natriumbikarbonat (omrörd i ungefär lO minuter utan fullständig lösning) tillsättes 1 en portion till en väl omrörd (mekanisk omröring) suspension av Raney-nickel (tvättad med vatten till pH 8,0, 260 ml upp- slamning = 130 g) i ett 70°C oljebad. Efter 15 minuter kyles 457 954 28 uppslamningen, filtreras och filtratet behandlas med 5,18 g natriumbikarbonat och en lösning av 11,94 g (0,07 mol) bensyl- klorformiat i 12 ml aceton. Efter 30 minuter surgöres lös- ningen till pH 2,5 och extraheras med metylenklorid. Det orga- niska skiktet torkas, indunstas och tritureras med eter/hexan för erhållning av totalt 6,83 g av titelföreningen.

B) 1-[(acetyloxi)-2-mety1(propy1)]-2-oxo- (3S)-[[(fenylmetoxi)- karbonyl]amino]azetidin En lösning av 6,83 g (0,02l3 mol) av syran ovan i 213 ml acetonitril behandlas med 1,95 g (0,0lO7 mol) kupriacetat- monohydrat och 9,5 g (0,02l3 mol) blytetraacetat. Uppslamningen nedsänkes i ett 65°C oljebad och omröres med ett flöde av kväve bubblande genom uppslamningen tills utgångsmaterialet förbrukats. Uppslamningen filtreras och de fasta substanserna tvättas med etylacetat. Det kombinerade filtratet och tvätt- vätskorna indunstas i vakuum och återstoden upptages i 100 ml vardera av etylacetat och vatten och inställes på pH 7. Etyl- acetatskiktet separeras, torkas och indunstas för erhållande av 6,235 g av titelföreningen.

C) (S)-(2-oxo-3-azetidinyl)karbamidsyra, fenylmetylester En lösning av 3,12 g (0,0093 mol) av acetatet ovan i 70 ml metanol och 7 ml vatten kyles till -l5°C och 1,33 g kalium- karbonat och 349 mg natriumborhydrid tillsättes. Reaktions- blandningen omröres vid -15 till OOC. Efter fullbordad reak- tion (ungefär 2 timmar) neutraliseras blandningen till pH 7 med 2N HCl och koncentreras i vakuum. på pH 5,8) gånger) Koncentratet inställes mättas med salt och extraheras med etylacetat (tre . Det organiska skiktet torkas och indunstas i vakuum. Återstoden kombineras med material från ett liknande försök och mättas med eter för erhållning av 3,30 g av titelföre- ningen.

D) (S)-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyl]amino] fonsyra, Exridinsalt Metod I: -l-azetidinsul- En lösning av 440 mg (0,002 mol) av azetidinonen ovan i 2 ml 457 954 29 vardera av torr metylenklorid och torr dimetylformamid omröres i 2 timmar under kväve med 350 mg (0.0022 mol) pyridin/svavel- trioxid-komplex. Huvuddelen av lösningsmedlet avlägsnas där- efter i vakuum och återstoden tritureras med etylacetat för erhållning av 758 mg fast substans, som primärt utgör titel- föreningen.

NMR (Dm-como) 3,63 (LH, d av d, J=6,4), 3,90 (lH, t, )=6), 4,85 (lH, d av d, /=6,4), 5,10 (2H, S), 7,27 (SH, s) 8,0-9,0 ppm(m's SH).

Metod II: Klorsulfonyltrimetylsilylester (l8,87 g) tillsättes droppvis vid -20°C till 7,9 g vattenfri pyridin under omröring och under en kvävgasatmosfär. När tillsatsen är fullständig fortsättes omröringen i 30 minuter vid rumstemperatur och trimetylklor- silan avlägsnas därefter i vakuum. En lösning av 20 g av azeti- dinonen ovan (metod I, del C) i 120 ml dimetylformamid och 120 ml metylenklorid tillsättes och omröringen vid rumstempera- tur fortsättes i 3,5 timmar. Lösningsmedlet avdestilleras i vakuum och den oljeartade återstoden kristalliseras genpm tillsats av etylacetat för erhållning av 31 g av titelföre- ningen. NMR-data är identiska för de för produkten enligt metod I.

Exempel 3. _ (S)-2-oxo-3-[E(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt Metod I: _ (S)-2-oxo-3-[I(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-l-azetidinsulfon- syra, pyridinsalt (135 mg; jämför exempel 2) löses i 2 ml 0,5M monobasiskt kaliumfosfat (inställt på pH 5,5 med 2N kalium- hydroxid) och påföres en 25 ml HP-20AG-kolonn. Kolonnen elueras med 100 ml buffert, 200 ml vatten och 100 ml 1:1 aceton/vatten.

Fraktionerna (25 ml) 14-15 är höggradigt Rydon-positiva.

Indunstning ger 80 mg material, som primärt utgör titelföre- ningen (spektraldata är identiska med de för framställningen nedan). 457 954 30 Metod II: (S)-2-oxo-3-[I(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-l-azetidinsulfon- syra, pyridinsalt (600 mg; jämför exempel 2) löses i 2 ml vatten och blandas med l5 ml pH 5,5 monobasisk kaliumfosfatbuffert.

En fast substans bildas och uppslamningen kyles till OOC, filtreras, tvättas med kall buffert, kall 50%-ig etanol, eta- nol och eter för erhållning av 370 mg av titelföreningen (en- ligt analys innehållande ett överskott av kaliumjon). En lös- ning av 280 mg av saltet i l0 ml vatten påföres en 100 ml HP- 20-kolonn. Kolonnen elueras med 200 ml vatten och därefter med vatten/aceton (9:l). Fraktioner (50 ml) tillvaratages; indunstning av fraktion 7 ger en fast substans. Triturering med aceton, filtrering och torkning i vakuum ger 164 mg av tirelföreningen, smältpunkt 193-19600.

Analys: Beräknat för CllHllN2O6SK'l/2H2O: C 38,02 H 3,48 N 8,06 S 9,23 K 11,25 Funnet: C 38,19 H 3,24 N 8,15 S 9,12 K 11,53 NMR (Dzoš 3,69 (lH, d, av d, ]=6,4), 3,91 (lH, t, ;=6), 4,76 (lH, m), 5,16 (2H, S), 7,43 ppm (SH, S).

Metod III: (S)-(2-oxo-3-azetidinyl)-karbamidsyra, fenylmetylester (20,0 g, jämför exempel 2C) suspenderas i 200 ml acetonitril, 21,6 ml monotrimetylsilyltrifluoracetamid (25,3 g) tillsättes och blandningen upphettas till 5000 under omröring i en timme- Efter kylning på ett isbad till OOC tillsättes 17,2 g trimetyl- silylklorsulfonat droppvis och lösningen omröres vid rums- temperatur i 6 timmar. Till lösningen sättes 24,2 g kalium- etylhexanoat i 100 ml butanol och omröring fortsättes i ytter- ligare en timme. Uppslamningen uthälles i l liter torr dietyl- eter och fällningen avfiltreras och torkas i vakuum.

Föreningen löses i 500 ml vatten, pH inställes på 5,0 med kaliumkarbonat,' olösligt material avfiltreras och moderluten frystorkas. Utbytet av rå förening är 19,4 g.

Föreningen innehåller små andelar kaliumklorid, som avlägsnas genom kromatografering; spektral- data var identiska med de som erhållits vid metod II. 457 954 31 Exemgel 4.

(S)-2-oxo-3-/IKfenylmetoxi)karbonyl]aminQ]-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (1:l) Metod I: (S)-2-oxo-3-/Yïfenylmetoxi)karbonyl]aminq]-l-azetidinsulfon- syra, pyridinsalt (l:l) (34,3 g; jämför exempel 2) löses i 800 ml vatten. Lösningen klaras med träkol, 30,7 g tetrabutyl- ammoniumvätesulfat i 80 ml vattenïtillsättes och pH inställes på 5,5 med lN kaliumhydroxid. Lösningsnedlet avlägsnas i vakuum tills man erhåller en volym av ungefär 200 ml. Det fällda tetra- butylammoniumsaltet filtreras och torkas i vakuum. Föreningen kan omkristalliseras ur vatten eller lösas i metylenklorid, filtreras och fällas genom tillsats av eter. Utbyte 34,3 g, snsitpunkt 1os-11o°c .

Metod II: (S)-2-oxo-3-/ZXfenylmetoxi)karbonyl]aminQ]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (lzl) (20,2 g; jämför exempel 3) löses i 500 ml vatten, filtreras och 20,3 g tetrabutylammoniumväte- sulfat i lOO ml vatten tillsättes. pH inställes på 5,5 med lN kaliumhydroxid. Volymen reduceras i vakuum till ungefär lOO ml och det fällda tetrabutylammoniumsaltet avfiltreras.

Föreningen löses i 30 ml metylenklorid, filtreras och fälles genom tillsats av eter för erhâllning av 21 g av titelföre- ningen, smältpunkt 109-lll?C.

Exemgel 5. (38)«x~[Z(2~oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)aminQ]-karbonyl]bensen- ättiksyra, fenylmetylester, kaliumsalt (lzl) A) (S)-3-amino-2-azetidinon (S)-(2-oxo-3-azetidinyl)karbamidsyra, fenylmetylester (3 g; jämför exempel 2C) hydrogeneras i 100 ml metanol i närvaro av l g palladium på träkol såsom katalysator. När den teoretiska mängden väte absorberats avfiltreras katalysatorn och filtra- tet indunstas till torrhet. Vid förvaring kristalliserar 1,1 g av titelföreningen. 457 954 32 B) (3S)-Qæjlï2-oxo~3-azetidinyl)aminqlkarbonylfebensenättik- syra, fenïlmetylester Azetidinonen ovan (3,0 g) löses i lOO ml dimetylformamid. Lös- ningen kyles till OOC och 4,5 g N-metylmorfolin tillsättes åtföljt (droppvis) av l0,8 g' u=(klorkarbonyl)bensenättik- syra, fenylmetylester, i 50 ml acetonitril under omröring.

Blandningen omröres i ungefär 16 timmar vid 5°C. Lösningsmed- let avdestilleras i vakuum och l00 ml vatten sättes till åter- stoden. Den vattenhaltiga suspensionen extraheras tvâ gånger med lOO ml andelar metylenklorid. De organiska skikten kombi- neras, tvättas med natriumbikarbonat, 2N fosforsyra och vatten, torkas med natriumsulfat, filtreras och indunstas till torr- het. Återstoden kristalliseras med etylacetat och petroleum- eter för erhållande av 8,7 g produkt, smältpunkt_l64-l66°C.

C) (3S)-ut-[XT2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)aminojkarbonylf- bensenättiksyra, fenylmetylester, kaliumsalt (l:l) Föreningen ovan (6,9 g) suspenderas i 150 ml acetonitril.

Monotrimetylsilyltrifluoracetamid (5,7 g) tillsättes och lös- ningen upphettas i 30 minuter vid 50°C under omröring. Lös- ningen kyles till OOC och 3,9 g trimetylsilylklorsulfonat tillsättes droppvis. När tillsatsen är fullständig upphettas blandningen till SOOC i 5 timmar. Efter kylning till 20°C tillsättes 7,6 g kaliumetylhexanoat i l0 ml butanol och om- röringen fortsättes i 30 minuter. Vid tillsats av 300 ml eter fälles titelföreningen och avfiltreras. Den råa produkten om- röres med 100 ml torr acetonitril i 30 minuter och avfilt- reras för erhâllning av 4,5 g av titelföreningen, smältpunkt ll8-12000. Ytterligare rening av den råa produkten med HP20- kromatografi âtföljt av frystorkning ger rent material med en smältpunkt av 188-l90OC.

Exemgel 6.

(S)-3-1212-amino-4-tiazolyl)acetyl]aminQ]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt A) (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (S)-2-oxo-3-jZ(fenylmetoxi)karbonyljaminQ7-1-azetidinsulfon- 457 954 33 syra, tetrabutylammoniumsalt (2 g; jämför exempel 4) löses i 100 ml dimetylformamid och hydrogeneras i ungefär 30 minuter med l g palladium på kol (10%) såsom katalysator). Katalysa- torn avfiltreras och dimetylformamiden avlägsnas för erhållande av titelföreningen i form av en olja. NMR (CDCl3) 3,82 (lH, t, ]= 5,5), 4,05 (d, lH, d av d, /= 5,5, 2,5 cps).

B) (S)-3-/212-amino-4-tiazolyl)acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt Föreningen ovan (2 g), 0,5 g aminotiazolättiksyra och 0,4 g hydroxibensotriazol omröres vid OOC i 100 ml torr dimetylform- amid under det att en lösning av 0,7 g dicyklohexylkarbodiimid i l0 ml dimetylformamid tillsättes droppvis. Efter avslutad tillsats fortsättes omröringen i 12 timmar vid ZOOC. Olöslig urea avfiltreras och lösningsmedlet avdunstas i vakuum. Den oljeartade återstoden behandlas med en lösning av kaliumper- fluorbutansulfonat i 20 ml aceton vid rumstemperatur i l5 minuter. Efter tillsats av 200 ml dimetyleter fäller titel- föreningen och avfiltreras, torkas och renas via kromatografe- ring på en 300 ml HP~20-kromatograferingskolonn med användning av vatten såsom elueringsmedel. Utbytet är 850 mg av titel- föreningen, smältpunkt ) 300°C.

Exemgel 7.

/BS(+)]-3-/Yïformyloxi)fenylacetylfaminoí-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylamonium- salt (1,5 g; jämför exempel 6A) i 100 ml dimetylformamid och 2 ml propylenoxid kyles till OOC. En lösning av O-formylmandel- syraklorid i 10 ml acetonitril tillsättes droppvis under om- röring. Temperaturen upprätthålles i en timme och lösnings- medlet avdestilleras därefter i vakuum. Den oljeartade åter- stoden behandlas med en lösning av 2 g kaliumperfluorbutan- sulfonat i l5 ml aceton. Efter tillsats av 200 ml eter kri- stalliserar titelföreningen och filtreras av för erhållning av l,S g produkt. Produkten renas genom HP-20-kromatografi, smältpunkt l80-l85°C under sönderdelning. all. ._ _, 457 954 34 Exemgel 8. ÅÉS(+l]-3-¿21formyloxi)fenylacetyljaminoj-2-oxo-l-azetidinÄ"”“ sulfonsyra, kaliumsalt Enligt förfarandet i exempel 7 men med användning av D-0-formyl- mandelsyraklorid i stället för 0-formylmandelsyraklorid er- hålles titelföreningen med smältpunkten 120-l25°C efter frys- torkning.

Exemgel 9. ŧS(-)]-3-Izlformyloxi)fenylacetyl]aminq]42-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt Enligt förfarandet i exempel 7 men med användning av L-O-for- mylmandelsyraklorid i stället för 0-formylmandelsyraklorid erhålles titelföreningen innehållande l mol vatten, smältpunkt 203-ZOSOC. Efter noggrann torkning smälter produkten vid 228- z3o°c.

Exemgel 10.

(S)-2-oxo-3-[Kl-oxooktyl)aminQ]>l-azetidinsulfonsyra, kalium- §3lE_ (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (1,5 g; jämför exempel 6A) i lO0 ml dimetylformamid och 2 ml propylenoxid kyles till OOC. Vid denna temperatur tillsättes droppvis en lösning av 0,8 g kaprylsyraklorid i 20 ml torr aceton och omröringen fortsättes i 30 minuter.

Lösningsmedlet avdunstas i vakuum och den oljeartade återsto- den behandlas med 2 g kaliumperfluorbutansulfonat i 15 ml ace- ton. Acetonen avdestilleras i vakuum. Återstoden löses i 5 ml vatten och kromatograferas med användning av 300 ml HP-ZO- harts och vatten/aceton (9:l) såsom elueringsmedel för erhåll- ning av 0,9 g av titelföreningen, smältpunkt 173-l80°C efter frystorkning.

Exemgel ll. [38(Z)]-3-[ZX2-amino-4-tiazolyl)[Y]hydroxi(fenylmetoxi)fosfi- nyl]metoxi]iminQ]acetyl]aminQ]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- 1: 457 954 35 salt (0,8 g; jämför exempel 6A) i 30 ml dimetylformamid, 0,9 g li)-2~amin0-«rZYYhydroxi(fenylmetoxi)fosfinyl]metoxi]iminQf-I 4-tiazolättiksyra, 0,3 g hydroxibensotriazol och 0,7 g dicyklo- hexylkarbodiimid omröres i 24 timmar vid rumstemperatur. Den fällda urean avfiltreras och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum.

Den kvarvarande oljan behandlas med en ekvivalent mängd kalium- perfluorbutansulfonat i 10 ml aceton. Titelföreningen avfilt- reras och renas med användning av HP-20-harts och vatten såsom elueringsmedel för erhållning av 500 mg substans, smältpunkt 210-2l5°C, sönderdelning.

Exemgel l2. /38(Z)I-3-[Z12-amino-4-tiazolyl)(etoxiimino)-acetyl]aminq7-2- oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (1,5 g; jämför exempel 6A) i 100 ml dimetylformamid, 0,6 g hydroxibensotriazol, l g dicyklohexylkarbodiimid och 0,8 g (Z)-2-amino«m:(etoxiimino)-4-tiazolättiksyra omröres vid rumstemperatur i 24 timmar. Lösningsmedlet avdestilleras och återstoden löses i 30 ml aceton. Urean avfiltreras och moder- luten behandlas med en lösning av 2 g kaliumperfluorbutansulfo- nat i 20 ml aceton. Efter tillsats av 200 ml eter fäller titel- föreningen, avfiltreras och torkas. Rening utföres genom kro- matografering med användning av en HP-20-kolonn och vatten sä- som elueringsmedel för erhållning av l,1 g av titelföreningen, smältpunkt 180-l85oC, sönderdelning.

Exemgel 13. ÅÉS(E)]-3-[212-amino-4-tiazolyl)(etoxiimino)acetyl7aming]-2- -oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Pâ det i exempel 12 beskrivna sättet men med användning av (E)-2-amino-«:(etoxiimino)-4-tiazolättiksyra i stället för (Z)-2-aminoflxr(etoxiimino)-4-tiazolättiksyra erhålles titel- föreningen med smältpunkten l60-l70°C efter frystorkning. 457 954 36 Exempel 14. [3S(Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)](2,2,2-trifluoretoxi)iminol- acetyl]amino]-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 12 beskrivna sättet men med användning av (Z)-2-amino-u-[(2,2,2-trifluoretoxi)imino]-4-tiazolättiksyra i stället för (Z)-2-amino-a-(etoxiimino)-4-tiazolättiksyra erhålles titelföreningen med smältpunkten 160-l70°C efter frystorkning.

Exempel 15.

(S)-2-oxo-3-[(l-oxopropyl)amino]-l-azetidinsulfonsyra, kalium- salt Metod I: (S)~3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (1,5 g; jämför exempel 6A) i 100 ml torr dimetylformamid och 4 ml propylenoxid kyles till OOC under omröring. Vid denna temperatur tillsättes 0,5 g propionsyraklorid i 10 ml acetonitril droppvis och blandningen omröres i 2 timmar.

Lösningsmedlet avdestilleras i vakuum och den oljeartade åter- stoden behandlas med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutan- sulfonat i 5 ml aceton. Vid tillsats av eter kristalliserar titelföreningen och avfiltreras för erhållning av 0,8 g produkt, smältpunkt 135-14000 efter frystorkning.

Metod II: (S)-2-oxo-3-%%(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-1-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (4 g; jämför exempel 4) hydro- generas i 100 ml diglym.med l g palladium på kol. Hydrogene- ringen är fullständig efter 2,5 timmar. Katalysatorn avfilt- reras och 2 ml propylenoxid tillsättes. Efter kylning till OOC tillsättes 0,5 g propionsyraklorid i 10 ml torr diglym under omröring. Efter 30 minuter avlägsnas lösningsmédlet i vakuum och den oljeartade återstoden behandlas med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 20 ml aceton. Efter tillsats av eter kristalliserar titelföreningen och avfiltreras och om- kristalliseras ur va-ten/aceton för erhållning av 0,9 g pro- dukt med smältpunkten 156-l60oC (sönderdelning). 457 954 37 Exemgel 16. [3S(+)]-3-[(hydroxifenylacetyl)amino]-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (l,5 g; jämför exempel 6A) i 100 ml torr dimetylformamid omröres i ungefär 16 timmar med l,5 g dicyklohexylkarbodiimid, 0,5 g hydroxibensotriazol och 0,6 g mandelsyra. Lösningsmed- let avlägsnas i vakuum och återstoden löses i 20 ml aceton.

Den fällda urean avfiltreras och moderluten behandlas med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat. Efter tillsats av eter fäller titelföreningen och avfiltreras för erhållning av l,4 g rå produkt. Efter omkristallisation ur vatten har produkten en smältpunkt av l38-l40OC.

Exemgel l7.

(S)-3-[[[(cyanometyl)tio]acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (1,5 g; jämför exempel 6A) och 0,72 g [(cyanometyl)tio]- ättiksyra löses i 70 ml acetonitril och en lösning av 1,04 g dicyklohexylkarbodiimid i acetonitril tillsättes droppvis.

Blandningen omröres i ungefär 16 timmar vid OOC och fälld dicyklohexylurea avfiltreras, filtratet indunstas och den oljeartade återstoden löses i aceton. Vid tillsats av en mättad lösning av kaliumjodid i açeton fäller titelföreningen, utbyte 1,1 g produkt, smäitpunkt 15o-155°c.

Exemgel 18.

(S)-2-oxo-3-[(lH-tetrazol-1-ylacetyl)amino]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt Till en lösning av 0,005 mol (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, tetrabutylammoniumsalt (jämför exempel 6A) i 70 ml dimetylformamid sättes 0,77 g lH-tetrazol-l-ättiksyra och en lösning av l,l3 g dicyklohexylkarbodiimid i 5 ml dimetylform- amid. Blandningen omröres i ungefär 16 timmar vid rumstempera- tur och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum. Den kvarvarande oljan löses i 20 ml aceton och behandlas med 0,006 mol av en lösning av kaliumperfluorbutansulfonat i aceton för erhållning 457 954 38 av 1,5 g av titelföreningen, smältpunkt 170-17500, sönder- delning.

Exemoel 19.

(S)-2-oxo-3-[(2H-tetrazol-2-ylacetyl)amino]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt På det i exempel l8 beskrivna sättet men med användning av 2H-tetrazol-2-ättiksyra i stället för lH-tetrazol-l-ättiksyra erhålles titelföreningen med smältpunkten 175-l77OC, sönder- delning. ' Å Exemgel 20.

(S)-2-oxo-3-[(2-tienylacetyl)amino1-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 18 beskrivna sättet men med användning av 2-tiofenättiksyra i stället för lH-tetrazol-l-ättiksyra erhålles titelföreningen med smältpunkten l80-l90°C, sönder- delning.

Exemgel Zl. [3S(Z)1-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)-acetyl]amino]- 2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (framställd såsom beskrives'i exempel 6A med användning av 7,9 g (S)-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-l-azetidin- sulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt) kyles till OOC och 3,53 g (Z)-2-amino-u-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra tillsättes följt av en lösning av 3,27 g dicyklohexylkarbodiimid i 10 ml di- metylformamid. Blandningen omröres i 16 timmar vid SOC, filt- reras och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum. Återstoden löses i aceton och filtreras. Vid tillsats av 60 ml av en 10%-ig lösning av kaliumperfluorbutansulfonat i aceton kristalli- serar 4,7 g rå produkt. Den råa produkten renas genom kremato- grafering på HP-20, 100-200 mesh, för erhållning av 3,0 g av titelföreningen med smältpunkten 23500. 457 954 39 Exempel 22. (38)-d-[I(2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)amino]-karbonyl]bensen- ättiksyra, dikaliumsalt (35)-a-[I(2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)amino]karbonyl]bensen- ättiksyra, fenylmetylester, kaliumsalt (100 mg; jämför exempel 5) löses i 20 ml vattenfri metanol. Palladium på kol (10 mg, 10%) tillsättes och blandningen behandlas med väte i 15 minu- ter. Katalysatorn avfiltreras och metanolen avdunstas i vakuum. Återstoden löses i 5 ml vatten och pH inställes på 6 med lN kaliumhydroxid. Efter frystorkning erhålles den råa produkten.

Den råa produkten kromatograferas på HP-20-harts (vatten såsom' elueringsmedel) för erhållning av 60 mg av titelföreningen med smä ltpunkten 80- 85 OC .

Exempel 23.

(S)-3-(acetylamino)-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Metod I: A) (S)-3-amino~2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-(bensyloxikarbonylamino)-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (169 mg; jämför exempel 3) löses i 4,0 ml vatten och hydrogeneras över 37 mg 10% palladium på kol i en timme och 40 minuter. Katalysatorn avlägsnas genom filtrering och tvättas med l ml 50%-ig vattenlösning av aceton.

B) (S)-3-(acetylamino)-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Lösningen ovan av den fria aminen utspädes med 3,5 ml aceton och omröres på ett isbad. Acetylklorid (320¿¿l) tillsättes under ungefär 15 minuter i små portioner och alterneras med fast kaliumbikarbonat för upprätthållande av pH till 6,5-7,2.

Efter 30 minuter behandlas med kíselgel-TLC i aceton/ättik- syra (l9:l) och ett Rydon-test utvisade att reaktionen var väsentligen avslutad. 6 ml 0,5M pH 5,5 monobasisk kaliumfosfat- buffert tillsättes och lösningen surgöres till pH 4,8 med 2N klorvätesyra. Acetonen avlägsnas i vakuum och den så erhållna vattenlösningen föres genom en 50 ml HP-20 AG-kolonn för er- hållning av 2,197 g fast substans. Denna uppslutes med meta- nol för erhållning av 282 mg extraherbart material, som fort- farande innehåller en viss mängd salt. Produkten renas ytter- .L 457 954 40 ligare genom passage genom en IRC-50-kolonn, åtföljt av surgö- ring till pH 3,8 med efterföljande avlägsning av lösningsmedel till torrhet i vakuum. Triturering med aceton ger 64 mg av den önskade produkten innehållande ungefär 0,5 ekvivalenter oorga- niska kaliumsalter. Slutlig passage genom en 200 ml HP-20-kolonn åtföljt av lyofilisering ur 0,5 ml vatten ger 22 mg produkt såsom ett amorft pulver, som torkas i vakuum i 2 timmar vid so°c, smältpunkt 17o-1so°c efter mjukning vid 1oo°c.

Analys: Beräknat för C5H7O5N2SK C 24,38 H 2,87 N 11,37 K 15,9 Funnet: C 26,06 H 3,14 N 9,96 K 18,04 Metod II: En lösning av 2,0 g (S)-2-oxo-3-[[(feny1metoxi)karbonyl]- amino]-l-azetidinsulfonsyra, pyridinsalt (jämför exempel 2) i 25 ml vatten hydrogeneras över 500 mg 10% palladium på kol.

Efter 2 timmar filtreras lösningen, kyles till OOC och 40 ml aceton tillsättes. Lösningens pH hålles mellan 5,2 och 5,8 genom samtidig tillsats av acetylklorid och kall 10%-ig kaliumbikarbonatlösning. Lösningens pH inställes på 4,2 med acetylklorid och lösningen koncentreras på en roterande in- dunstare för avlägsning av aceton. Kromatografering på en 300 ml HP-20 AG-kolonn (vatten såsom elueringsmedel - 25 ml- fraktioner) ger 900 mg av titelföreningen i fraktionerna 13 och 14 kontaminerade med viss mängd kaliumacetat. Förnyad kromatografi på HP-20 AG ger ett analytiskt prov med smält- punkten 205-2l0°C.

Analys: Beräknat för C5H7N2O5SK: C 24,38 H 2,86 N ll,38 S 13,02 K 15,88 Funnet: C 24,23 H 2,81 N ll,25 S 12,86 K 15,74 Exempel 24.

(S)-2-oxo-3-[(fenoxiacetyl)amino]-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (l,5 9% jämför exempel 6A) i 100 ml torr dimetylformamid 457 954 41 kyles till OOC. Propylenoxid (2 ml) tillsättes och l g fenoxi- acetylklorid tillsättes droppvis under omröring. Reaktíonen är fullständig inom en timme. Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum och återstoden behandlas med en ekvivalent mängd kaliumper- fluorbutansulfonat i 20 ml aceton. Vid tillsats av eter kri- stalliserar titelföreningen (l g) och avfiltreras och torkas.

Efter omkristallisation ur kokande vatten har titelföreningen en smälupunkt av 17s-1so°c.

Exemgel 25. [3S(Rx)]~3-[[[[[3-[(2-furanylmetylen)amino]-2-oxo-l-imidazoli- dinyllkarbonyllamino]fenylacetyl]amino]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt (S)-2-oxo-3-[{(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (3 g; jämför exempel 4) hydro- generas i 100 ml dimetylformamid med 1,5 g palladium på kol.

Efter 0,5 timmar avfiltreras katalysatorn och 1,8 g dicyklo- hexylkarbodiimid, 2 g (R)-a-[[[3-[(2-furanylmetylen)amino]- -2-oxo-1-imidazolidinyl]karbonyl]amino]-bensenättiksyra och 0,9 g hydroxibensotriazol tillsättes. Efter 3 timmar indunstas reaktionsblandningen till torrhet, löses i 50 ml torr aceton och fälld urea avlägsnas genom filtrering. En ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 20 ml aceton tillsättes och titelföreningen fäller. Kristallisationen göres fullständig genom tillsats av 200 ml eter. Efter filtrering omkristalli- seras titelföreningen ur vatten för erhâllning av 2 g med smältpunkten 220-225°C, sönderdelning.

Exemgel 26. [3S(Rx)]-2-oxo-3-[[[[(2-oxo-l-imidazolidinyl)karbonyl]amino]- fenylacetyl]amino]-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyllamino]-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (3 g; jämför exempel 4) hydro- generas i 100 ml torr dimetylformamid med 1,5 g palladium på kol; katalysatorn avfiltreras efter 30 minuter. (R)-u-[[(2- oxo-l-imidazolidityl)karbonyl]amino]bensenättiksyra (1,8 g), 1,3 g dicyklohexylkarbodiimid och 0,9 g hydroxibensotriazol tillsättes och lösningen omröres i 2,5 timmar. Lösningsmedlet 457 954 42 avlägsnas i vakuum och återstoden löses i 50 ml aceton. Den fällda urean avfiltreras och moderluten behandlas med en ekvi- valent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 20 ml aceton. Titel- föreningen kristalliserar och avfiltreras efter tillsats av 200 ml eter för erhållning av l,8 g produkt med smältpunkten 210-2l5OC efter omkristallisation ur vatten/aceton- Exemgel 27. [3S(z)]-3-[[(metoxiimino)fenylacetyl]amino]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt A) [3S(Z)]-3-[I(metoxiimino)fenylacetyl]amino]-2-azetidinon (Z)-a-(metoxiimino)bensenättiksyra (3,58 g) löses i metylen- klorid, kyles till SOC och behandlas med en lösning av 4,53 g dicyklohexylkarbodiimid i 50 ml metylenkloríd. Blandningen omröres i 30 minuter vid 5°C och en lösning av 1,72 g 3 -amino- _2_ azetidinon (jämför exempel 5A) i 100 ml metylenklorid till- sättes. Reaktionsblandningen hålles vid SOC i en timme och i 2 timmar vid rumstemperatur. Efter avlägsning av dicyklo- hexylurea genom filtrering indunstas filtratet för erhållning av 6,6 g rå produkt. Detta material renas genom kromatografi på 750 g kiselgel med användning av en blandning av metylen- klorid och etylacetat (7:3) såsom elueringsmedel för erhåll- ning av 2,9 g produkt.

B) [3S(Z)]-3-[[(metoxiimino)fenylacetyl]amino]-2-oxo-1-azeti- dinsulfonsyra, kaliumsalt Pyridin (0,5 ml) löses i 5 ml absolut metylenklorid, kyles till -3o°c och en lösning av o,93 m1 trimetylsilylklorsulfo- nat i 5 ml metylenklorid tillsättes. Blandningen omröres vid rumstemperatur i 30 minuter och indunstas i vakuum till torr- het. Återstoden löses i 10 ml dimetylformamid och behandlas vid rumstemperatur med en lösning av l,23 g av azetidinonen ovan i 10 ml dimetylformamid. Efter omröring i 2 timmar vid rumstemperatur indunstas lösningen till torrhet för erhåll- ning av 2,1 g rå [3S(Z)]-3-[I(metoxiimino)fenylacetyl]amino]- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, pyridinsalt. 457 954 43 Behandling av pyridinsaltet med tetrabutylammoniumvätesulfat ger motsvarande tetrabutylammoniumsalt, som extraheras med metylenklorid och förblir en olja efter indunstning.

Behandling av tetrabutylammoniumsaltet med en ekvimolär mängd kaliumperfluorbutansulfonat i aceton, indunstning och behand- ling av återstoden med eter ger l,6 g av kaliumsaltet av titelföreningen, som renas genom kromatografi på HP-20. Elue- ring utföres med vatten/aceton (90:10) och ger en produkt med smältpunkten 22OOC, sönderdelning.

Exemgel 28. [3S(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[[2-(difenylmetoxi)~l,l-di- metyl-2-oxoetoxi]imino]acetyl]-amino]-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (lzl) En lösning av 0,005 mol (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (jämför exempel 6A) och 0,006 mol (Z)-2-amino-a-[[2-(difenylmetoxi)-1,l-dimetyl-2-oxoetoxi]- imino]-4-tiazolättiksyra i 60 ml dimetylformamid behandlas med 0,7 g hydroxibensotriazol och l,l3 g dicyklohexylkarbodiimid.

Blandningen omröres i ungefär 16 timmar vid rumstemperatur, filtreras och filtratet indunstas. Återstoden löses i 30 ml aceton, filtreras och behandlas med 20 ml av en_lösning av 10%-ig kaliumperfluorbutansulfonat i aceton. Efter tillsats av petroleumeter fäller titelföreningen och behandlas med eter och filtreras för erhållning av 3,8 g produkt med smältpunkten l90°C, sönderdelning.

Exemgel 29. [3S(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[(1-karboxi~l-metyletoxi)imino]- acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, dikaliumsalt [3S(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[[2-(difenylmetoxi)-l,l-di- metyl-2-oxoetoxi]imino]acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (2 g; jämför exemfiJ28) suspenderas i 5 ml anisol och 25 ml trifluorättiksyra tillsättes vid -1090.

Blandningen omröres i 10 minuter vid -l0°C. Eter (100 ml) till- sättes långsamt vid -lO°C och därefter tillsättes 50 ml petro- leumeter. Fällningen filtreras för erhållning av l,6 g tri- fluorättiksyrasalt. Detta suspenderas i 20 ml vatten vid OOC, 457 954 44 inställes på pH 5,5 med utspädd kaliumhydroxid och renas på en HP-20-kolonn. Titelföreningen elueras med vatten och har en smältpunkt av 225°C, sönderdelning.

Exempel 30. [3S(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[[2-(difenylmetoxi)-2-oxo- etoxi]imino]acetyl]amino]-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kalium- salt Enligt förfarandet i exempel 28 men med användning av (Z)-2- -amino-u-[[2-(difenylmetoxi)-2-oxoetoxi]imino]-4-tiazo1ättik- syra i stället för (Z)-2-amino-u-[[2-(difenylmetoxi)-l,l- dimetyl-2-oxoetoxi]imino]-4-tiazolättiksyra erhålles titel- föreningen med smältpunkten l80°C, sönderdelning.

Exempel 3l. [3S(+)]-3-[(azidofenylacetyl)amino]-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt Metod I: A) (i,S)-a-azido-N-(2-oxo-3-azetidinyl)bensenacetamid (S)-3-amino-2-azetidinon (2,l5 g; jämför exempel SA) och 2,1 g natriumbikarbonat löses i 50 ml aceton/vatten (2:l). (i)-a-azidobensenacetylklorid (5 g) löst i lO ml aceton till- sättes droppvis under upprätthållande av temperaturen vid O-SOC och pH vid 6,8 med natriumbikarbonat. Efter omröring i en timme avdestilleras aceton och kvarvarande vattenlösning inställes på pH 8 med natriumkarbonat och extraheras med tre 50 ml-portioner metylenklorid. Indunstning av de natriumsulfat- torkade organiska skikten ger 3,6 g av titelföreningen såsom en olja, som kristalliserar efter tríturering med eter. Om- kristallisation ur metylenklorid/eter ger titelföreningen, smältpunkt 97-lO0°C.

B) [3S(i)]-3-[(azidofenylacetyl)amino]-2-oxo-l-azetidinsu1fon- syra, kaliumsalt En lösning av 2,45 g av azetidinonen ovan och 3 g monosilyl- trifluoracetamid i 20 ml acetonitril förvaras i en timme vid 4OOC. Efter kylning till OOC behandlas lösningen med 1,88 g trimetylsilylklorsulfonat och omröres 5 timmar under argon.

Slutligen tillsättes 6,12 ml av en 2N lösning av kalium-2-etyl- 457 954 45 hexanoat i n-butanol och omröringen fortsättes i 45 minuter.

Lösningen uthälles i 300 ml eter och fällningen avfiltreras.

En filtrerad lösning av 1,2 g fällning i fosfatbuffert (pH 5,5) kromatograferas på 100 ml HP-20. Eluering utföres med: l) 20 ml buffert; 2) 200 ml H20; 3) 200 ml vatten/aceton (9:l); 4) 200 ml vatten/aceton (3:l). Elueringen följer med TLC (Rydon-test på Si02). 25 ml-fraktioner upptages och från frak- tionerna 15 och 16 erhålles 280 mg av titelföreningen. En andra kolonnkromatografering av detta material ger 120 mg av titelföreningen, smältpunkt l48°C, sönderdelning.

Metod II: (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (2,03 g; jämför exempel 6A) och 0,9 g (i)-a-azido-bensen- ättiksyra löses i 30 ml acetonitril och en lösning av 1,03 g dicyklohexylkarbodiimid i l0 ml acetonitril tillsättes. Tem- peraturen hålles under en timme vid OOC och under 10 timmar vid rumstemperatur. Efter avfiltrering av den bildade fäll- ningen destilleras lösningsmedlet i vakuum och den oljeartade återstoden löses i 20 ml aceton och behandlas med 1,70 g kalium- perfluorbutansulfonat i aceton. Tillsatsen av 10 ml eter kri- stalliserar titelföreningen, smältpunkt l49°C, sönderdelning.

Metcd III : a-azidofenylacetylklorid (2,5 g) sättes till en lösning av 4,06 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (jämför exempel 6A) och 5 g propylenoxid i 30 ml aceto- nitril. Efter omröring i 2 timmar avdestilleras lösningsmedlet i vakuum och den oljeartade återstoden behandlas med en ekvi- valent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i aceton. Efter till- sats av eter kristalliserar titelföreningen och avfiltreras, smältpunkt 148-14900, sönderdelning.

Exemgel 32. [3S(D)]-3-[[[[[(4-metoxifenyl)metoxi]karbonyl]aminolfenyl- acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Till en lösning av 2,03 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (2,03 g; jämför exempel 6A) och 1,58 g' D-d-[ff(4-metoxifenyl)metoxi]karbonyl]amino]bensenättiksyra i 457 954 46 50 ml acetonitril,sättes droppvis en lösning av 1,03 g di- cyklohexylkarbodiimíd i 10 ml acetonitril. Temperaturen hålles vid SOC i en timme och i 6 timmar vid rumstemperatur. Separa- tion av den bildade dicyklohexylurean och destillation av lös- ningsmedlet ger titelföreningen i form av en oljeartad åter- stod. Behandling av denna olja i aceton med kaliumperfluor- butansulfonat och eter ger 2,4 g produkt , smältpunkt 1os-111°c, sönderdelning.

Exemglen 33-37.

På det i exempel 32 angivna sättet men med användning av de föreningar som anges i spalt l nedan i stället för (D) -[[[(4~metoxifenyl)metoxilkarbonyl]amino]-bensenättiksyra erhålles de föreningar som anges i spalt 2. _a_ 457 954 .u m«H|@«H uxczmuflmsm .uflmwšdfiflmx _mHæmfi0wæflmGflUfiumum|H|0xo|N |~0:flEmHH>uw0mfl>Gmflu|m|fiocflñmfiflæcønumx |~flxo@we^H>:wwHxo»we|«.H..HH|~|~^qvwm. >mcH:fiwuuwUG®m .uomßfiamßa nxcsmuamâw .vfimmäflflaøx _mnämnowflflmafluflummmlflloxo |N|~ocflEmfiH>uwomH>cmwfiocfiëøfiaæcoßumx |H«xø»@aAH>cw«Hxo»@æ|«,H.u.~|m|H^q,m~H 47 mcficfiwønwwcßw .uom~H|«~H uxc:m»~msm .pfimw nšøflamx _mænmcomaswcflwfluwnmlfinoxolmuocflëm 1~H>uwum~0GfiEmfiamconumxfifläøuwä^H>:ww |fixo»wa|vVH.Hflæcmu:«|~HH|m»~^+vmmH uo«m~«~m~ ~¥=:@@Hmew ~@Hmma:flHmx .m»>m ucomfismnflwfluwwmlflloxolmlfi0cHEmfia>uwum 1fiocfiåmwHæconuwxmflxoumšAflæcmwfixmuwål ««v.MH^H»HoNm«»|«|o=fiem|~,HH|m«fi^+Vmm. mcflcfiwwuwwcmw _Uow«H|««a uxcflmufimëm .uammësflfimx _muæwsowfiømcfiwfluwwmafinoxol |N\Hocflâmmflæuwumfiæüwflunmlflocfiëmfiflæconumx |Hflxo»w&^H>cwwflxo»we|«vH~.H.|m«H^nvmmH mu>mxH»»w:wwofl»|~|Hoaflsm~H>:on~mx |HfixoumE^H>:wwflxouwE|«vuHH|d|^Av mH>wxfluvwCwmnwAHOcflEmHHmGOnumM ufiflxoumäßflwcmwflxouweuwvHggzdlflqv mnæxmfiuuwcmuøwzmnfiocflemHfiæconumx |Hflxo»we^H>aw««xo»we|«V..H|u|^+v muæmxfiußw |AONmflu|«|H0cfiEmfiH>Gonumxfi«xOumE| |^H>cwmflxouwE|wvHHH|d|ocflEm|w|^+v mH>wxH@»m:wwofl~|~|Hocflam 1HfimflonumxfiflX0uwE^Hw:mwHxouwE|vV~HHsd|^oV ßm wm mm vm mm Hmmâwxm 457 954 48 %åš%g%%2%§ÉTmetyltio)tioxometylftiqffenylacety1]aminQ]-2- oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt En lösning av 1,03 g (ï)- -jzlmetyltio)tioxometylltiqfbensen- ättiksyra och 1,63 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetra- butylammoniumsalt (jämför exempel 6A) i 30 ml acetonitril be- handlas med 0,8 g dicyklohexylkarbodiimid löst i 10 ml aceto- nitril vid -SOC. Efter omröring i ungefär 16 timmar avfilt- reras bildad dicyklohexylurea och moderluten indunstas. Den kvarvarande oljeartade återstoden kromatograferas på en kolonn av 400 g kiselgel (etylacetat/metanol/vatten (8,5:l:0.5) utgör elueringsmedlet), varvid 1,3 g av titelföreningen erhålles.

Exemgel 39. 3(S)-3-/2]2Ymetyltio)tioxometylftiojfenylacetylZaminQ]¥2-oxo- -l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (3S)-3-[YYZYmetyltio)tioxometyl]tiQ]fenylacetylfaminqf-2- oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (1,3 g; jäm- för exempel 38) löses i aceton och behandlas med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat. Tillsatsen av eter kristalli- serar titelföreningen, som avfiltreras; utbyte 0,18 g produkt, smältpunkt 157%, sönaeraelning.

Exemgel 40.

[QS(D)]-3-122214-etyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)-karbonyl]aminQ]- -2-tienylacetylfaminq]-2-oáo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (D)-G:/214-etyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)-karbonyl]aminQ]-2- -tiofenättiksyra (3,25 g), 4,20 g 3-amino-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (jämför exenpel 6A) och 1,3 g N-hydroxibensotriazol löses i 25 ml acetonitril. Dropp- vis tillsats av 2,06 g dícyklohexylkarbodiimid löst i lO ml acetonitril vid -1000 tar 20 minuter och omröringen fortsättes i ungefär 16 timmar. Bildad urea avfiltreras och lösningsmedlet avdunstas i vakuum. Den kvarvarande oljan löses i 50 ml aceton och efter behandling med en ekvivalent mängd kaliumperfluor- butansulfonat kristalliserar titelföreningen, smältpunkt 185- 18700, sönderdelning. 457 954 49 Exemgel 41. _ W /ÉS(1)I-3-jïbromfenylacetyl)aminQ7-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt ærbromfenylacetylklorid (1,4 g) i lO ml acetonitril sättes droppvis till en lösning av 5 mM 3-amino-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, tetrabutylammoniumsalt, och 3 g propylenoxid i aceto- nitril vid OOC. Efter 3 timmars omröring avdestilleras lös- ningsmedlet och den kvarvarande oljeartade återstoden löses i 30 ml aceton. Den ekvivalenta mängden kaliumperfluorbutan- sulfonat i aceton tillsättes. Tillsatsen av eter kristalli- serar titelföreningen, smältpunkt 135-l37OC, sönderdelning.

Exemgel 42. /38(ilj-3-/Zf(aminokarbonyl)aminoj-2-tienylacetyl]aminQ]-2- -oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Metod I: Till en lösning av 2 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt och 1,5 g propylenoxid i acetonitril sättes 1,1 g (i)-2-amino-4-(2-tienyl)-5(4§)-oxazolon-hydro- klorid. Efter 3 timmars omröring vid OOC och en timme vid rumstemperatur avdestilleras lösningsmedlet och den oljeartade återstoden löses i 30 ml aceton. Genom tillsats av en ekviva- lent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i aceton kristalliserar títelföreningen. Rening genom kolonnkromatografi på HP-20 med användning av vatten såsom elueringsmedel ger titelföreningen, smäitpunkt 218-222°c, sönaerdeining.

MetOd II: Till en suspension av 2 g (1)-GL-Zlaminokarbonyl)äminqf-2' -tiofenättiksyra, lO mM (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt och 10 mM N-hydroxibensotriazol i 50 ml acetonitril vid OOC sättes (under omröring) 10 mM dicyklohexylkarbodiimid löst i l5 ml acetonitril. Omröringen forcsättes 1 en timme vid -15°c och 1 ungefär 16 timmar via rumstemperatur. Efter avfiltrering av dicyklohexylurea av- dunstas lösningsmedlet och den oljeartade återstoden löses i 50 ml aceton. Tillsats av den ekvivalenta mängden kaliumper- fluorbutansulfonat i aceton ger en kristallin produkt. Rening 457 954 50 genom kolonnkromatografi pâ HP-20 med användning av vatten såsom elueringsmedel ger titelföreningen, smältpunkt 220-ZÉÉOCÄ Exemgel 43. [38(iL7-3-[22YYmetylamino)karbonyljamino]-2-tienylacetylf- aminqj-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (i)-GL-jyïmetylamino)karbonyl]aminq]-2-tiofenättiksyra (O,54 g) och 1,00 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutyl- ammoniumsalt(jämför exempel 6A) löst i 20 ml acetonitril och 0,5 g dicyklohexylkarbodiimid tillsättes vid en temperatur av OOC. Efter omröring 8 timar avfiltreras dicyklohexylurean och efter destillation av lösningsmedlet löses den oljeartade återstoden i 50 ml aceton och den ekvivalenta mängden kalium- perfluorbutansulfonat tillsättes. Kristallin produkt avfilt- reras och rening utföres på HP-20 med användning av vatten så- som elueringsmedel, smältpunkt 205oC, sönderdelning.

Exemgel 44. [35(:L7-3-/Ylïaminooxoacetyl)aminoj-2-tienylacetyL]aminq]-2- -oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel Ä2 beskrivna sättet, metod II, men med använd- ning av (1)-af/Xaminooxoacetyl)-aminq]-2-tiofenättiksyra i stället för (i)-0L-[(aminokarbonyl)aminQ]-2-tiofenättiksyra, erhålles titelföreníngen med smältpunkten 2l8-222°C.

Exemgel 45. [as (15) j- 3-[[[[(4-ety1-2 , ædioxo-l-piperazinyl) -karbonyií- amino]fenylacetyl]aminq]2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 40 beskrivna sättet men med användning av * (R)-Qff[(4-etyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)karbonyl]aminQ]bensen- ättiksyra i stället för (D)~Q>]Y14-etyl-2,3-dioxo-l-piperazi- nyl)karbonylzaminq]-2-tiofenättiksyra erhålles titelföreningen med smältpunkten 155-l57°C (sönderdelning).

Exemgel 46. 3-(acetylamino)-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kalium- salt Metod Iz- 457 954 51 A) 3-[TN-acetyl-N-klor)aminq]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, blandat natrium- och kaliumsalt Till en lösning av 3-(acetylamino)-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (172 mg, jämför exempel 23) i metanol (l7 ml) inne- hållande 4 % natriumboratdekahydrat kyld till -l5oC till -IOOC sättes tert-butylhypoklorit (llO,ul). Blandningen omröres i kyla under en timme och 45 minuter, uthälles i 0,5 M enbasisk kaliumfosfatlösning (50 ml) och pH sänkes till 5,5. Lösnings- medlet avlägsnas i vakuum och återstoden löses i en minimal mängd vatten och kromatograferas på HP-ZOAG, lOO-2OO mesh (140 ml). Elueríng med vatten ger en olja (63 mg) som kristalli- serar vid förvaring. Triturering med metanol/eter och därefter eter ger en fast substans (53 mg) med smältpunkten l240C, lång- sam sönderdelning.

B) 3-(acetylamino)~3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt 3-[TN-acetyl-N-klor)aminq]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, blandat salt (37 mg) löses i 1,5 ml torr dimetylformamid och sättes till en lösning av litiummetoxid (50 mg) i metanol (l ml) vid -78°c. Efter emröring 15 minuter vid -vsoc tillsättes en o,sm lösning av enbasiskt kaliumfosfat (10 ml) och lösningen sur- göres därefter till pH 4 med lN klorvätesyra. Till lösningen sättes tetrabutylammoniumvätesulfat (70 mg) och lösningen extraheras fyra gånger med metylenklorid. De förenade extrak- ten toraks (natriumsulfat) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för erhâllning av 55 mg av en olja. Kromatografering pâ 5,5 g kiselgel ger den oljeartade produkten (41 mg) i form av tetrabutylammoniumsaltet (elueras med 8 % metanol:92 % mety- lenklorid). Oljan (31 mg) löses i vatten och föres genom en jonbytarkeienn (5 m1 AG sow-xz, Kaa-fem, 2oo-4oo mesn, 0,6 meq/ml). Avlägsning av vatten i vakuum ger en olja, som kri- stalliseras ur metanol/eter. Triturering tvâ gånger med eter ger produkten i form av ett färglöst pulver (ll mg); smält- punkt 182-l83OC, sönderdelning. 457 954 52 Metød II: A) 3-amino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutyl- ammoniumsalt z En 4%-ig natriumboratdekahydratlösning i metanol (l0O,ul) sättes till en suspension av 10% palladium på kol (30 mg) i metanol (2 ml) och blandningen omröres under en atmosfär av väte i 15 minuter. 3-metoxi-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyll- aminqf-l~azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (60 mg; jämför exempel 49) i metanol (2 ml) tillsättes och bland- ningen omröres kraftigt i 15 minuter under en vätgasatmosfär.

Katalysatorn avlägsnas genom filtrering genom Celite pâ ett milliporfilter (0,5 nya) och lösningsmedlet avlägsnas från filtratet i vakuum och återstoden extraheras med metylenklo- rid. Avlägsning av lösningsmedlet under förminskat tryck ger 35 mg av titelföreningen såsom en olja.

B) 3-(acetylamino)-3-metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kalium- EE Till en lösning av 3-amino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylamoniumsalt (35 mg) i metylenklorid (10 ml) vid OOC sättes propylenoxid (2 ml) ocn acetylklorid (74 l). Efter 2 timmar avlägsnas lösningsmedlet under förminskat tryck och den kvarvarande oljan kromatografera;på kiselgel (4 g). Elue- ring med 6-8 % metanol i metylenklorid ger en olja (18 mg), som löses i vatten och föres genom ett jonbytarharts (3 ml AG 5OW-X2, Kæ-form, 0,6 meg./ml). Avlägsning av vatten från eluatet i vakuum ger den önskade produkten (10 mg).

Exemgel 47. g N-(3-metoxi-2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, tetrabutylammoniumsalt A) N-klor-N-(2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, kaliumsalt Till en lösning av (S)-N-(2-oxo-l-sulfo-2-azetidinyl)-2- fenylacetamid, kaliumsalt (50 mg; jämför exempel l) i metanol innehållande 4 % natriumboratdekahydrat (5 ml) kyld i ett -s°c bad sattes terš-butyihypokiorit (zo A1) . Efter omröring i 32 minuter uthälles blandningen i 0,5 M pH 5,5 kaliumfosfat- 457 954 53 buffert vid OOC. Den erhållna lösningen (pH 5,9) inställes på pH 4,5, koncentreras i vakuum för avlägsning av metanol och kromatograferas på HP-ZOAG, 100-200 mesh (100 ml). Efter tvättning av kolonnen med 0,5M pH 5,5 buffert (100 ml) och vatten elueras den önskade produkten med 9:1 vatten/aceton.

Koncentrering i vakuum ger 50 mg av titelföreningen.

B) N-(3-metoxi-2~oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, tetrabutylammoniumsalt Till en omrörd lösning av litiummetoxid (160 mg) i 5 ml meta- nol kyld till -78°C sättes en lösning av N-klor-N-(2-oxo-l- sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, kaliumsalt (149 mg) i 10 ml torr dimetylformamid. Efter avslutad tillsats omröres blandningen i 15 minuter vid -78°C, uthälles i 0,5 N lösning av enbasiskt kaliumfosfat (100 ml) och tvättas tre gånger med metylenklorid. Tetrabutylammoniumbisulfat (213 mg) sättes till det vattenhaltiga skiktet, som därefter extraheras tre gånger med metylenklorid. De förenade extrakten torkas (natriumsul- fat) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för erhâllning av en olja (271 mg). Kromatografering av oljan på kiselgel (25 g) och eluering med 4 % metano1:96 % metylenklorid ger 149 mg av produkten såsom en olja.

Exemgel 48.

N-(3-metoxi-2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, kaliumsalt N-(3-metoxi-2-oxo-l~sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, tetrabutylammoniumsalt (91 mg; jämför exempel 47) löses i_ vatten och föres genom en jonbytarkolonn (lO ml AG 50W-X2, Kæ-form). Eluatet koncentreras i vakuum och den kvarvarande oljan stelnar vid skrapning med en metanol/aceton/eter-bland- ning. Efter triturering två gånger med eter erhålles produk- ten såsom en fast substans (53 mg):1)max 1762, 1665 cm_l; NMR (cD3oD) 53,41 (S, BH, 00113), 3,59 (S, zu, cfiz), 3,84 (ABq, J=6,3 Hz, 2H, H4), 7,30 (m, SH, aromatisk).

Analys: Beräkna: för cl2rxl31~12o6~1/2H2o C 39,88 H 3,62 N 7,75 Funnet: C 39,62 H 3,65 N 7,60 457 954 54 Exegpel 49. 3-metoxi-2-oxo-3-1Y(fenylmët0Xi)karbonyljaminof-l-azetidinê . sulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt Metod I: i A) 2-oxo-3-[N-klor-N-[Xfenylmetoxi)karbonvl]-aminq7-l-azeti- dinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (S)-2-oxo-3-jzïfenylmetoxi)karbonylfaminq]-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (0,9 g; jämför exempel 4) löst biananing (kyla till o-s°c) ll,8 ml av en 5,25%-ig natriumhypokloritlösning i 70 ml vatten. Reaktionsblandningen omröres kraftigt i 55 minuter under kylning på ett isbad. i 80 ml metylenklorid sättes till en av 3,17 g natriumboratdekahydrat och Efter utspädning av blandningen med 0,5M enbasiskt kalium- fosfat extraheras produkten med metylenklorid (tre 150 ml- portioner). Kombination av extrakten, torkning (natriumsul- fat) och avlägsning av lösningsmedlet i vakuum ger titelföre- ningen såsom en olja (0,94 g).

B) 3-metoxi-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyl]aminQ]-l-azeti- dinsulfonsyra, tetrabbtylammoniumsalt Till en omrörd lösning av litiummetoxid (667 mg) i vattenfri metanol (10 ml) vid -7800 sättes en lösning av 2-oxo-3-[N- klor-N-/(fenylmetoxi)karbonyl]aminQ]~l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (O,94 g) i torr dimetylformamid (10 ml).

Efter omröring av blandningen vid -78°C i en timme uthälles den i 0,5M lösning av enbasiskt kaliumfosfat och extraheras med metylenklorid (tre 150 ml-portioner). De förenade extrak- ten torkas (natriumsulfat) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för erhâllning av en olja (0,83 g). Den önskade pro- dukten erhålles genom kromatografering av oljan på kiselgel (100 g) och eluering med 4-5% metanol i metylenklonid för erhållning av en olja (513 mg): xåæx (neat) 1767, 1720 cm_l NMR (cnc13) 33,40 (s, ocn3), 3,03 (Aßq, J=6,5 Hz, H4), 5,08 (S, CH2), 6,00 (S, NH), 7,27 (S, aromatisk).

I Metod II: Till en lösning av 3-bensyloxikarbonylamino-3-metoxi-2-ox0- -l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (400 mg) i vatten sättes 457 954 55 en O,lM tetrabutylammoniumbisulfatlösning (lO,9 ml, inställd på pH 4,3 med kaliumhydroxid). Blandningen extraheras tre gånger med metylenklorid, extrakten kombineras, torkas (Na2SO4) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för erhâllning av ett skum (625 mg) uppvisande spektralkaraktäristika som ungefär liknar de för produkten enligt metod I.

Exempel SO. 3-metoxi-2-oxo-3-jY(fenylmetoxi)karbonylfaminqf-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt Metod I: A) 2-oxo-3-[N-klor-N-[(fenylmetoxi)karbonyl]-aminqf-l-azeti- dinsulfonsyra, kaliumsalt Till en lösning av (S)-2-oxo-3-/21fenylmetoxi)karbonylfaminqf- l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (l,OO g; jämför exempel 3) i metanol (90 ml) innehållande 4 % natriumboratdekahydrat vid -l0°C sättes tert-butylhypoklorit (420 1). Efter omröring i 2 timmar vid -l0OC tillsättes 0,5 M lösning av enbasiskt kaliumfosfat (100 ml) och pH instâlles på 6 med lN klorväte- syra. Efter koncentrering av lösningsmedlet till 30 ml kromato- graferades vattenlösningen på HP-ZOAG, 100-200 mesh (200 ml).

Efter passage av en lösning av enbasiskt kaliumfosfat (50 g) i vatten (1000 ml) åtföljt av vatten (2000 ml) eluerades pro- dukten med 10% aceton/90 % vatten. Lösningsmedlet avlägsnades i vakuum och titelföreningen kristalliseras ur vatten för erhållning av en fast substans (530 mg), smältpunkt 173-l75°C.

B) 3-metoxi-2~oxo-3-[ZXfenylmetoxi)karbonyl]amino]-l~azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt Tillen lösning av litiummetoxid (874 mg) i torr metanol (10 ml) vid -7800 sättes 2-oxo-3-[N-klor-N-[Kfenylmetoxi)karbonylj- aminQ]-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (857 mg) i torr di- metylformamid (13 ml). Efter 15 minuter vid -78OC uthälles blandningen i 0,SM lösning av enbasiskt kaliumfosfat (200 ml) och pH inställes på 5,5 med lN klorvätesyra. Den vattenhaltiga blandningen tvättas med metylenklorid (tre lOO ml-portioner) och tetrabutylammoniumbisulfat (l,l69 g) tillsättes. Produkten extraheras med metylenklorid (tre 200 ml-portioner), torkas 457 954 56 (natriumsulfat), filtreras och koncentreras i vakuum. Den kvar- varande oljan kromatograferas på kiselgel (150 g) och produk- ten elueras med 2-4 % metanol i metylenklorid för erhâllning av tetrabutylammoniumsaltet av produkten i form av en olja (701 mg). En andel av oljan (51 mg) löses i vatten och föres genom en jonbytarkolonn (3 ml AG 50W-X2, 200-400 mesh, Kæ- form, 0,6 meq./ml). Koncentrering av eluatet i vakuum ger en olja (30 mg), som kristalliseras genom skrapning med aceton: Qmax 3,92 (s, za, H4), 5,20 (s, zu, eng), 7,42 (s, sn, erenetiek), emältpnnkt 196-19a°c.

Metod II : A) l-klor-3-JN-klor-N-11fenylmetoxi)karbonyl]-2-azetidinon En lösning av 3-[Z1fenylmetoxi)karbonylfaminof-2-azetidinon (440 mg; jämför exempel 2C) i 40 ml 4%-ig metanollösning av borax kyles till 0°C och 0,5 ml t-butylhypoklorit tillsättes.

Efter so minuter vid o°c utnällee lösningen 1 2oo ml kallt vatten och extraheras med tvâ l00 ml-portioner etylacetat.

De förenade etylacetatskikten tvättas med vatten, torkas och indunstas i vakuum för erhållning av 546 mg av titelföreningen i form av en olja.

B) 3-metoxi-3~j2Wfenylmetoxi)karbonylYamíno]-2-azetidinon En lösning av 730 mg (o.oo2s moi) 1-k1or-3-¿h+k1er-N-¿1feny1- metoxi)karbonyl]aminQ]-2-azetidinon i 5 ml tetrahydrofuran kyles till -7800 och 4 ml metanol innehållande 285 mg litium- metoxid tillsättes. Efter 20 minuter vid -78oC tillsättes- 0,6 ml ättiksyra och 0,6 ml trimetylfosfit. Lösningen omröres i 5 minuter vid -78°C, får antaga rumstemeratur och omröres i 30ndnuter. Den erhållna lösningen utspädes med etylacetat, tvättas med 5%-igtnatriumbikarbonat, vatten, 5%-igt kaliumbi- sulfat, vatten, mättad saltlösning och torkas. Avlägsning av lösningsmedel ger en olja, som pâföres fyra 20 x 20 cm x 1 mm kiselgelplattor. Framkallning med bensen/etylacetat (lzl) och isolation av de övervägande UV-aktiva bandet för Rf=0,25 ger 91 mg olja, som kristalliserar ur eter till bildning av en fast substans. Omkristallisation ur eter ger titelföre~ ningen, smältpunkt 112-ll40C. 457 954 57 C) 3-metoxi-2-oxo-3-[27fenylmetoxi)karbonyl]aminq]~l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 25 mg 3-metoxi-3-[ZXfenylmetoxi)karbonyl]aminq]- 2-azetidinon i 0,175 ml av vardera diklormetan och dimetyl- formamid omröres 24 timmar med 55,4 mg av ett komplex av pyri- din och svaveltrioxid. Den erhållna uppslamningen utspädes med 5 ml kall O}5M lösning av enbasiskt kaliumfosfat (inställt på pH 4,5) och extraheras med etylacetat. Det vattenhaltiga skik- tet pâföres en 40 ml HP-20 AG-kolonn. Eluering med ytterligare buffert, vatten och vatten/aceton (9:l) ger 32 mg av titel- föreningen i form av en olja, som långsamt stelnar. Kristalli- sation ur aceton ger titelföreningen, smältpunkt 196-19800, sönderdelning.

Exempel 51. 3-/Il,3-díoxo-2-fenyl-3-(fenylmetoxi)propyl]amino]-3-metoxi- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt A) 3-/21,3-dioxo-2-fenyl-3-(fenylmetoxi)gropyl]aminQ]-3-metoxi- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt Rå 3-amino-3~metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutyl- ammoniumsalt (431 mg; jämför exempel 74) innehållande borax löses i 30 ml torr acetonitril. Torr pyridin (317/al) till- sättes och lösningen omröres noggrant vid -lOOC under torrt kväve. Oc-(bensyloxikarbonyl)-fenylacetylklorid (568 mg) i 3 ml torr acetonitril tillsättes droppvis. Tunnskiktskromato- grafi indikerar att reaktionen är fullständig efter 15 minu- ter. Kaliumfosfat-buffert (O,5M, pH 5,5, 17 ml) tillsättes och det mesta av acetonitrilen avlägsnas i vakuum. Återstoden utspädes med vatten och extraheras tre gånger med lika volymer metylenklorid. Extraktet torkas över vattenfritt natriumsulfat och indunstas i vakuum för erhâllning av 1,032 g rå produkt, som löses i 3 ml metylenklorid och kromatograferas på en kisel- gelkolonn med användning av metylenklorid/metanol för erhåll- ning av 470 mg av titelföreningen. 457 954 58 B) 3-[Y1,3-dioxo-2-feny1-3-(fenylmetoxi)propy1ZaminQ]-3- metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt 3¿[Y1,3-dioxo-2-fenyl-3-(fenylmetoxi)propyl]aminQY-3- metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (470 mg) löses i 15 ml 30%-ig aceton/vatten och föres genom en Dowex 5OWX2 (K+-form)-kolonn med användning av samma lös- ningsmedel såsom elueringsmedel. Det totala eluatet indunstas i vakuum för erhâllning av 345 mg av en amorf fast substans, som iyefiiieeree till ett emerff pulver, emältpunkt 1oo-12o°c.

Analys för C H O N SK 20 19 8 2 Beräknat: C 49,37 H 3,94 N 5,76 S 6,59 Funnet: C 49,08 H 4,00 N 5,58 S 6,29 Exemgel 52. (j)-3-1Y](cyanometyl)tiqfacetyljaminqj-3-metoxi-2-oxo-l-azeti- dinsulfonsyra, kaliumsalt.§ Till en lösning av 3-amino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (414 mg, jmf. exempel 74) i torr ecetenicril (so mi) vid -2o°c eättee aietyieniiin (21o,e1> och cyanometyltioacetylklorid (169 mg). Efter 10 minuter avlägsnas lösningsmedlet under förminskat tryck och en 0,lM lösning av tetrabutylammoniumsulfat (22,8 ml) inställd på pH 4,3 med kaliumhydroxid tillsättes och produkten extraheras med tre SO ml-portioner metylenklorid, torkas, filtreras och koncentreras under förminskat tryck. Den oljeartade återstoden renas på kiselgel (60 g) och produkten (294 mg) elueras med 4 % metanol/metylenklorid. Den renade produkten föres genom ett jenbyterherte (16 mi AG sow-xz (K+-form), o,e meq./mi, 200~400 mesh). Avlägsning av vatten ger 164 mg partiellt renad produkt. Produkten renas ytterligare på Diaion AG HP 20 (100 ml) med användning av vatten såsom elueringsmedel. Lösnings- medlet avlägsnas under förminskat tryck för erhâllning av 126 mg produkt, som tritureras med eter för erhâllning av 76 mg av titeiföreningen, emältpunkt 110-125°c.

Analys: Beräknat för C8HloN3S206K C 27,66 H 2,88 N 12,10 S 18,44 Funnet: C 27,25 H 3,00 N 10,84 S 17,53 457 954 59 Exemgel 53-56.

Pâ det i exempel 42 beskrivna sättet, metod II, men med användning av de föreningar som anges i spalt I i stället för (i) -lXf-flaminokarbonyl) aminoj-Z-tiofenättiksyra erhålles de föreningar som anges i spalt Il. mnfløfiwwfiwwqwm .uomwm uxcsmuflmåw .ufimmåøflfimx ~muæmnowH:m xcflflflumum|HxoxozN|NdCfiEmNAmumUmfl>:wm muæmxfiußwcwmcmn |\a:He«A~>=on~mxonflem«Nm\|m|N^xmVmm\ |Nw=flem^fi>=onH~xosflem,N|Qo\^mv .wm Û 6 U mOm|ßON uxcsmufimšm .vfimmäflflflmx _muwwcowH:m ¶ ncfiuflumumzfixoxoiN|\dflflEmNH>@womHmcww mnæmxfluuwfiwmcwn :\dcflEm^H>umomoxoo:flEmw\N\|m|N^xmvmmfl |\dcflEm^H>uwomoxoocHEdwNxJ|^mv .mm wcflcflwwuwwcwm ~ >mfi|mmH »xcsmafiwem .ufimmesflflflx .mn mcomHømcflwfluwwmnfl|0M0|~|\dcflEm A% |\a>umumHacwfiu|N|\dcflEmNfl>uwomoxo muæmxfluumcwwofiu|N|NdcfiEmNæ>u®wn nu 1«a=flsm^H>pweø=«>uv\w\N\|m«\¿Hvwww |0xpNa=fle~.fi>»weo=m>uV\NN|Q|^+V .qm n/ mcfiøfiwwuwucww .U WHNINAN pxnømpflmem CU .uflmmësfifimx omuæmcomfiøwøflwfluwwm n% |H|0x0|~|NdcflEmNA>umomfl>nmuøw|N: mnæwxfluumcmnww |NdcfiEm^fl>umomoxoO:flEmyNNN|mz^Hvwm\ |m1NdcflEm^fl>umomoxo0:HEmwN|à“|^+v .mm HH ßfimmw H »fimmm 457 954 61 Exem el 57. 235(i¶-3-222-(metyltio)-l-oxopropyl]aminq7-2-oxo-l-azetidin-L"M sulfonsyra-kaliumsalt På det i exempel 31 beskrivna sättet, metod II, men med använd- ning av (i)-2-(metyltio)-propansyra i stället för (i)~d:áZid0- bensenättiksyra erhålles titelföreningen, smältpunkt l73oC, sönderdelning.

Exemgel 58. [35(Rx)]-3-/YYZZÉ,3-dioxo-4-[Kfenylmetylen)amino)-l-piperazi- nyljkarbonylfaminqffenylacetyl]aminQ]-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (R)~«;jYZ2,3-dioxo-4-Zlfenylmetylen)aminofl-piperazinyl]karbo- nyLjaminqjbensenättiksyra (0,7 g) och (S)-3-amino-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (0,8 g; jämför exempel 6A) löses i 20 ml acetonitril. Under omröring till- sattes droppvis vid o°c o,4 g dicykiohexyikarboaiimia. om- röring fortsättes i 18 timmar och efter filtrering avdestille- ras lösningsmedlet varvid en oljeartad återstod kvarblir.

Aterstoden löses i aceton och behandlas med kaliumperfluor- butansulfonat för fällning av titelföreningen. Rening genom kolonnkromatografi på HP-20 med användning av vatten såsom elueringsmedel ger titelföreningen, smältpunkt 193-l94°C.

Exemgel 59. ÅÉS(Z)]-3-/212-amino-4-tiazolyl)[X2-metoxi-2-oxoetoxi)imino - acetyl]aminQ]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (Z)-2-aminowK:[I2-metoxi-2-oxoetoxi)iminq]-4-tiazolättiksyra (1,3 g) och (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetra- butylammoniumsalt (2,03 g; jämför exempel 6A) löses i 50 ml acetonitril och 1,03 g dicyklohexylkarbodiimid löst i 5 ml acetonitril tillsättes droppvis vid OOC. Efter omröring 15 timmar och filtrering av dicyklohexylurea avdestilleras lös- ningsmedlet. Den kvarvarande oljeartade återstoden löses i aceton och behandlas med en ekvivalent mängd kaliumperfluor- butansulfonat. Titelföreningen isoleras och renas genom kolonnkromatografi på HP-20 med användninglav vatten såsom elueringsmedel, för erhâllning av titelföreningen med en smältpunkt av 195-l98°C. 457 954 62 Exemgel 60. ¿3s(R*)1-3;/77713-1214-klorfenyl>metyienyaminqz-2 -oxo-l-imida- zolidinyl]karbonyl]aminQ]fenylacetylfaminqj- l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (l,5 g; jmf. exempel 6A) i lOO ml absolut diglym (diety- lenglykoldimetyleter), 1,5 g (R)«l-/123-/214 len]aminQ]-2-oxo-l- syra, -klorfenyl)mety- imidazolidinylfkarbonyljaminqjbensenâttik- en ekvivalent mängd dicyklohexylkarbodiimid och 0,5 g hydroxibensotriazol omröres tillsammans i 12 timmar. Lösnings- medlet avlägsnas i vakuum och återstoden löses i 50 ml ace- ton och filtreras. Aceton avdestilleras och återstoden löses i 200 ml metylenklorid. Lösningen tvättas med vattenlösning av natriumbikarbonat och därefter med vattenlösning av natrium- klorid. Metylenkloridskiktet torkas över natriumsulfat, in- dunstas till torrhet och kristalliseras genom tillsats av eter.

Föreningen omkristalliseras ur aceton/eter. Det erhållna vita kristallina pulvret löses i aceton och behandlas med en ekvi- valent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i aceton. Titelföre- ningen fälles och avfiltreras för erhållning av 1,4 g av produkten med smältpunkten 217-222OC.

Exemgel 6l.

¿§S(Rx)]-3-jZ]]]2-oxo-3-[Kfenylmetylen)aminQ]l-imidazolidinyl]- karbonylfaminqffenylacetylzaminqf-l -azetidinsulfonsyra, kalium- salt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt g; jmf. exempel 6A) i lOO ml torr dimetylformamid (DMF), en ekvivalent dicyklohexylkarbodiimid, 2,5 g (R)4Kr[YZÉ-oxo-3- -[(fenylmetylen)aminq]-l-imidazolidinylïkarbonyl]aminQ7-bensen- ättiksyra och 0,85 g hydroxibensotriazol omröres tillsammans vid rumstemperatur i 12 timmar. Efter denna tid avlägsnas DMF i vakuum och återstoden löses i 50 ml aceton. Den fällda urean avfiltreras och moderluten behandlas med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 20 ml aceton. Efter tillsats av lOO ml eter fälles titelföreningen och avfiltreras. Rening h fäll- , smäitpunkt 224-22s°c, âstadkommes genom lösning av föreningen i DMF/aceton oc ning med vatten, utbyte 1,5 g produkt sönderdelning. 457 954 63 Exemgel 62. [3S(Rx1Z-3-jY]][3-(metylsulfonyl)-2-oxo-l-imidazolidinyl]karbo- nyl]aminQ]fenylacetyljaminqj-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kalium- ëílL (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (2,25 9; jämför exempel 6A) i 60 ml dimetylformamid omröres 12 timmar med l,9 g (R)-fi:]]Z3-(metylsulfonyl)-2-oxo-l-imidazo~ lidinylfkarbonylfaminqjbensenättiksyra, 0,75 g hydroxibenso- triazol och 2,3 g dicyklohexylkarbodiimid. Lösningsmedlet av- lägsnas i vakuum och återstoden löses i D ml aceton och filt- reras. Moderluten behandlas med 1,87 g kaliumperfluorbutan- sulfonat i 20 ml aceton. Efter tillsats av eter fäller titel- föreningen för erhâllning av 2,0 g material. Föreningen renas genom omkristallisation ur vatten och har smältpunkten 240- 245%, sönderdelning.

Exemgel 63. [35(Rxlf-3-[Yhydroxifenylacetyl)aminqf-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (1,5 g; jämför exempel 6A) i lOO ml torr dimetylformamid omröres i ungefär 16 timmar med 1,5 g dicyklohexylkarbodiimid, 0,5 g hydroxibensotriazol och 0,6 g Rflxrhydroxibensenättiksyra.

Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum och återstoden löses i 20 ml aceton. Den fällda urean avfiltreras och moderluten behand- las med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat.

Efter tillsats av eter fällde titelföreningen och avfilt- rerades för erhâllning av l,3 g rå produkt. Produkten renas genom kromatografi med användning av HP-20 och vatten/aceton (9:l) såsom elueringsmedel och har en smältpunkt av 145-l50°C, sönderdelning.

Exemgel 64.

[ES(SxI}3-[Thydroxifenylacetyl)aminQ7-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt ' På det i exempel 63 beskrivna sättet men med användning av (S)wærhydroxibensenättíksyra i stället för (R)-G=hydnoxibensen- ättiksyra erhålles titelföreningen med smältpunkten 195-19700. 457 954 64 Exemgel 65. [äs(jj}2-oxo-3-jïfenylsulfoacetyl)amino]-l-azetidinsulfonsvraf6 kaliumsalt (1:2) (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (2,25 g; jämför exempel GA) i lOO ml torr diglym, 2,4 g trietylamin och 0,3 g dimetylaminopyridin kyldes till OOC.

(R)11:(klorkarbonyl)-bensenmetansulfonsyra (1,8 g) i 20 ml diglym tillsattes droppvis. Temperaturen hölls i 2 timmar, lösningsmedlet avdestillerades i vakuum och återstoden löstes i aceton. Den olösliga fällningen avfiltrerades och moderluten behandlades med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfo- nat. Efter tillsatsen av eter fälldes titelföreningen och av- filtrerades för erhâllning av 1,4 g rå produkt; smältpunkt 240-245OC, sönderdelning, efter omkristallisation ur vatten/ aceton.

Exemgel 66. [35(Z)-3-/712-amino-4-tiazolyl)j2Tdietoxifosfinyl)metoxif- iminqfacetylfaminoj-2-oxo-l-azetidinsulfonsyralskaliumsalt (S)~3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (2,25 g; jämför exempel 6A) i 100 ml torr dimetylform- amid behandlas med l,B7 g (Z)-2-amino-drllïdietoxifosfinyl)- metoxi]iminq]4-tiazolättiksyra, 0,75 g hydroxibenotriazol och 2,29 g dicyklohexylkarbodiimid i 12 timmar under omröring.

Den fällda urean avfiltrerades och lösningsmedlet avlägsnades i vakuum. Den kvarvarande oljan behandlades med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 20 ml aceton. Efter till- sats av eter fälldes titelföreningen och avfiltrerades för erhållning av 2,77 g rå produkt. Rening av denna råa produkt genom kolonnkromatografi med användning av HP-20 och vatten/ aceton (9:l) såsom elueringsmedel gav titelföreningen, smält- punkt l55-l60°C, sönderdelning.

Exemgel 67. , [35(Z)]-3-[ZX2-amino-4-tiazolyl)[22-(l,l-dimetyletoxi)-2-oxo- -l-fenyletoxi7iminq]acetyl]aminQ]~2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt I (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- 457 954 65 salt (2,25 g; jämför exempel 6A) i 60 ml dimetylformamid om- rördes vid rumstemperatur med 2,4 g (Z)-2-amino-xrfzï-(1,1-I dimetyletoxi)-2-oxo-l-fenyletoxi]iminQ]-4-tiazolättiksyra, 1 g hydroxibensotriazol och 1,5 g dicyklohexylkarbodíimid under 12 timmar. Lösningsmedlet avlägsnades i vakuum och återstoden löstes i 50 ml aceton. Den fällda urean avfiltrerades och moderluten behandlades med en ekvivalent mängd kaliumperfluor- butansulfonat. Efter tillsats av eter kristalliserade titel- föreningen och avfiltrerades. Rening av föreningen âstadkoms genom HP-20-kolonnkromatografi med användning av vatten/aceton (7:3) såsom elueringsmedel,för erhâllning av l g produkt med smältpunkten }250OC, sönderdelning.

Exemgel 68. [38(Z)]-3-[IK2-amino-4-tiazolyl)[YlH-tetrazol~5fy1metoxi)mminQ]- acety1]amino]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (1,9 g; jämför exempel 6A) i 60 ml dimetylformamid be- handlas med 1,4 g (Z)-2-aminofllrfïlH-tetrazol-5-ylmetoxi)iminQ]- -4-tiazolättiksyra, 0,7 g hydroxibensotriazol och 1,4 g dicyklo- hexylkarbodiimid under omröring i 24 timmar. Efter avlägsning av lösningsmedlet i vakuum löstes återstoden i aceton och den fällda urean avfiltrerades. Moderluten behandlades med en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 10 ml aceton.

Titelföreningen fälldes genom tillsats av 200 ml eter. Rening utfördes genom HP-20-kolonnkromatografi med användning av HP-20- harts och vatten såsom elueringsmedel och gav 1,05 g produkt, smältpunkt 250°C, sönderdelning. _ \ Exemgel 69. [äs(Z)]-3-1712-amino-4-tiazolyl)[Kfenylmetoxi)-iminq7-acetyl]- -amino)-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidínsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (1,5 g; jämför exempel GA), 1,23 g (Z)-2-aminowarfïfenylmetoxi)- iminqf-4-tiazolättiksyra, 0,57 g hydroxibensotriazol och l,l4 g dicyklohexylkarbodiimid omrördes i 60 ml dimetylformamid vid rumstemperatur i 24 timmar. Den fällda urean avfiltrerades, lösningsmedlet avlägsnades och återstoden behandlades med en 457 954 66 en ekvivalent mängd kaliumperfluorbutansulfonat i 10 ml aceton. Érter tillsats av 200 ml eter fällde titelföreningen och av? filtrerades och renades medelst HP-20-kolonnkromatografi med användning av vatten/aceton (9:l) såsom elueringsmedel för erhâllning av l g material med smältpunkten ZOOOC, sönderdel- ning.

Exempel 70. ÄBS(Z)Z-3-1212-amino-4-tiazolyl)Åïkarboximetoxi)iminqfacetylf- aminqf-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (l:1). 138(Z)]-3-/ZX2-amino-4-tiazolyl)j22-(difenylmetoxi)2-oxoetoxi7- iminQ]acetyl]aminQ]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (lzl) (1,3 g; jämför exempel 30) blandades med 5 ml anisol.

Vid -l5°C tillsattes 25 ml trifluorättiksyra och blandningen omrördes 10 minuter. Eter (100 ml) tillsattes långsamt vid -10°C och därefter 50 ml petroleumeter. Fällningen suspenderas under kylning i_2O ml vatten och inställes på pH 5,0 med utspädd kaliumhydroxid. Produkten renas kromatografiskt på en HP-20- kolonn för erhállning av 3,0 g av titelföreningen, smältpunkt 230-23s°c, sönaeraelning.

Exempel 71. ÅÉS(Z)]-3-[ZK2-amino-4-tiazolyl)/22-oxo-2-(fegylmetoxi)etoxi]- imingfacetylfaminoj-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 28 beskrivna sättet, men med användning av (Z)-2-amino-«:j22-oxo-2-(fenylmetoxi)etoxi]iminQ]-4-tiazol- ättiksyra i stället för (Z)-2-amino-d:Z2É-(difeny1metoxi)-l,l- dimetyl-2-oxoetoxi7iminQ]-4-tiazolättiksyra erhölls titel- föreningen med en smält unkt av ungefär l70oC, sönderdelning.

P Exempel 72.

¿§§(Z)]-3-12112-amino-2-oxoetoxi)iminq](2-amino-4-tiazolyl)- acetyl]aminQ]>2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Pâ det i exempel 28 beskrivna sättet, men med användning av (Z)-2-amino-1:112-amino-2-oxoetoxi)iminq]-4-tiazolättiksyra 1 stället för (z)-2-amino«xf122-(aifenyimetoxi)-1,1-aimety1- -2-oxoetoxi7iminq]-4-tiazolättiksyra erhölls titelföreningen med en smältpunkt av 205-2lO°C, sönderdelning. 457 954 67 Exemgel 73.

IÉS(Z)]-3-j](2-amino-4-tiazolyl)(hydroxiimino)-acetyl]amino]¿ -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 0,6 g 90%-ig hydroxibensotriazol i 100 ml dimetyl- formamid omrördes en timme med 10 g 4Å molekylsiktar, filtrera- des och filtratet sattes till en lösning av 0,004 mol (S)-3- amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (jäm- för exempel 6A) i dimetylformamid. (Z)-2-amino-uk(hydroxiimino)- -4-tiazolättiksyra (0,89 g) tillsättes åtföljt av tillsats av 0,91 g dicyklohexylkarbodiimid. Blandningen omröres i unge- fär 16 timmar, indunstas i vakuum och återstoden löstes i 20 ml aceton och filtreras. Tillsats av en lösning av kaliumper- fluorbutansulfonat fällde titelföreningen. Kromatografi på HP-20-harts gav 0,44 g produkt, smältpunkt >240oC.

Exemgel 74. 3-metoxi-2-oxo-3-[YZ-tienylacetyl)aminQ]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt A) 3-amino-3-metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutyl- ammoniumsalt (1)-3-metoxi-3-jzïfenylmetoxi)karbonylfaminqf-2-oxo-l~azetidin- sulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (143 mg; jämför exempel 49) löstes i 15 ml torr metanol. Na2B4O7.l0H2O (12 mg, 0,1 ekv.) tillsättes, âtföljt av 10% palladium på kol (72 mg). Bland- ningen hydrogeneras vid en atmosfärs tryck i 15 minuter. Kata- lysatorn avlägsnas genom filtrering och filtratet indunstas i vakuum för erhållning av 114 mg av titelföreningen.

B) 3-metoxi-2-oxo-3-112-tienylacetyl)aminQ]-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt 3-metoxi-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammo- niumsalt (102 mg) löses i 10 ml torr acetonitril. Torr pyridin (56,6,al) tillsättes och lösningen omröres noggrant vid ~l0°C under torrt kväve. Tienylacetylklorid (44,Ad) i 1 ml torr acetonitril tillsättes droppvis. Pâ 15 minuter är reaktionen färdig vilket framgår av tunnskiktskromatografi. Kaliumfosfat- buffert (0,5 M, pH 5,5, 4,2 ml) och tettabutylammoniumsulfat (8,5 mg, 0,1 ekv.) tillsättes och det mesta av acetonitrilen 457 954 68 avlägsnas i vakuum. Återstoden utspädes med vatten och ektna- ~ heras med tre 20 ml -portioner metylenklorid. Extraktet torkas över vattenfritt natriumsulfat och indunstas i vakuum förver- hâlhninq av 107 mg av en gummiliknande substans. Den råa pro- dukten kromatografiskt pà kiselgel med användning av metylen- klorid/metanol för erhâllning av 66 mg av titelföreningen.

C) 3-metoxi-2-oxo-3-[X2-tienylacetyl)aminQZ-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt 3-metoxi-2-oxo-3-[X2-tienylacetyl)-amingfll-azetidinsulfonsyra- tetrabutylammoniumsalt (l54 mg) löses i 3 ml 30% -ig aceton/ vatten, föres genom en kolonn av Dowex SOW-X2 (K+-form) och elueras med sama lösningsmedel. Det totala eluatet indunstas i vakuum för erhållning av 95 mg produkt, som lyofiliseras för erhållning av ett amorft pulver, smältpunkt 120-l35°C.

Analys: Beräknat för ClOHllN2O6S2K: C 33,51 H 3,09 N 7,82 S 17,89 Funnet: C 33,46 H 3,08 N 7,92 S 17,64 Exemgel 75. Åšß(Z)]-3*/YY2-amino-4-tiazolyl)Åïkarboximetoxi)iminqYacetyl7- aminoï-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt [BS(Z)]-3-[ZX2-amino-4-tiazolyl)j2?-oxo-2-(fenylmetoxi)- etoxif-iminofëacetylfaminqf-2-oxo-lëazetidinsulfonsyra, kalium- salt (O,l g; jämför exempel 71) löses i en blandning av 5 ml etanol och 5 ml vatten och hydrogeneras vid rumstemperatur i närvaro av 0,2 g 10%-igt palladium på kol. Efter 2 timmar av- filtreras katalysatorn och den kvarvarande lösningen frys- torkas för erhâllning av titelföreningen, smältpunkt 23S°C (sönderdelning).

Exemgel 76. 3-[Y(S)-Zïaminokarbonyl)aminqj-2-tienylacetyl]-aminq]-3-metoxi- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt, isomer A Till en lösning av 3-amino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (277 mg; jämför exemel 46, metod II, del A) i 15 ml torr acetonitril vid -ZOOC sattes pyridin (7l,æl) 457 954 69 (0,888 mol) och (D)-2-amino-4-(2-tienyl)-5-(4H)-oxazolinhydro; klorid (166 mg). Blandningen omröres i 10 minuter och en andra andel pyridin (7l,ul) och oxazolin (166 mg) tillsättes, Efter ytterligare 10 minuter avlägsnas lösningsmedlet under förminskat tryck och återstoden löses i en blandning av vatten och aceton och föres genom ett jonbytarharts (20 ml AG 50W-X2, K+-form, 200-400 mesh). Avlägsning av vatten från fraktionerna 2-3 ger en blandning av diastereomerer (248 mg).

Produkten renas och diastereomererna separeras på Diaion AG HP 20 (130 ml) och elueras med vatten. Isomer A elueras i fraktioner 23-28 (30 mg) och isomer B i fraktioner 35-45 (30 mg) (8 ml fraktioner). De mellersta fraktionerna (10 mg) kombi- neras med fraktioner från andra försök ochtotalt 35 mg isomer A och 59 mg isomer B isoleras.

Analys för isomer A, smältpunkt 158-16500.

Beräknat för CllHl3N4O7S2'K°l/2H20 C 31,05 H 3,29 N 13,18 Funnet: C 30,95 H 2,97 N 12,98 Analys för isomer B, smältpunkt 160-17000 (sönderdelning) Beräknat för CllHl3N407S2-K'l/2 H20 C 31,05 H 3,29 N 13,18 S 15,05 Funnet: C 31,17 H 3,09 N 13,13 S 15,09 Exemggl 77. 3-metoxi-2-oxo-3-[(fenylsu1foacetyl)amino]¥l-azetidinsulfon- syra, dikaliumsalt Till en omrörd lösning av rå 3-amino-3-metoxi-2-oxo-l~azeti- dinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (366 mg; jämför exempel 74A) och 38 mg borax i 35 ml torr acetonitril vid -1000 under kväve sättes 0,53 ml torr pyridin åtföljt av en tvâminuters tillsats av en lösning av drsulfofenylacetylkloridmonoeterat (348 mg) i 8 ml acetonitril. Efter 20 minuter avlägsnas lösningsmedlet i vakuum och återstoden behandlas med 35 ml 0,5M pH 5,5 kaliumfosfatbuffert. Tetrabutylammoniumväte- sulfat (383 mg) tillsättes och blandningen extraheras tre gånger med metylenklorid. Metylenkloriden torkas (natriumsul- fat) och avdunstas för erhållning av 685 mg rå produkt. 457 954 70 Den råa produkten kombineras med 115 mg râ produkt från ett andra försök och de kombinerade materialen renas på en kolonnh av SiliCAR CC-4 med användning av metylenklorid och därefter med 2, 4, 6, 8'och 10% metanol i metylenklorid såsom elue- ringsmedel. Produkten, en blandning (ungefär 6:1) av race- miska diastereomerer i tetrabutylammoniumsaltformen, omvandlas till kaliumsaltet genom passage genom Dowex SOW-X2 (Kf-form)- harts med användning av 20 % aceton i vatten såsom lösnings- medel. Produkten lyofiliseras för erhållning av l7l mg av titelföreningen, smältpunkt 205-2lO°C (sönderdelning).

Analys: Beräknat för Cl2Hl2N2O S K 'H O: 9 2 2 2 C 29,5l H 2,89 N 5,74 S 13,10 Funnet: C 29,45 H 2,74 N 5,51 S 12,82 Exempel 78. _ 3-jïkarboxifenylacetyl)-aminQY-3-metoxi-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, dikaliumsalt 3-[Yl,3-dioxo-2-fenyl-3-(fenylmetoxi)-propylIamino]-3-metoxi- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (39 mg; jämför exempel 51) löses i metanol (5 ml). Vattenfritt kaliumkarbonat (3,9 mg) och lO % palladium på kol (19 mg) tillsättes och blandningen hydrogeneras vid atmosfärstryck i 20 minuter. Katalysatorn avlägsnas genom filtrering och filtratet indunstas i vakuum för erhållning av en glasartad återstod (34 mg), som lyofili- seras till ett amorft pulver, smältpunkt 178-l90°C, sönder- delning.

Analys för Cl3Hl2O8N2S K2'O,5H O: 2 C 35,20 H 3,18 N 6,32 S 7,23 Funnet: C 35,51 H 2,96 N 6,29 S 6,92 Exempel 79. 135(Z)]-3-[ZX2-amino-4-tiazolyl)122-(1,1-dimetyletoxi)-l- -(metyltio)-2-oxoetoxijiminqíacetylf-aminQ]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 73 beskrivna sättet men med användning av (Z)-2-aminowz:ZZ2-(l,l-dimetyletoxi)-l-(metyltio)-2-oxoetoxi]- iminq]-4-tiazolättiksyra i stället för (Z)-2-amino-a&(hydroxi- 457 954 71 imino)-4-tiazolättiksyra erhålles titelföreningen, smältpunktA l30OC, sönderdelning.

Exemgel 80. (1)-3-butoxi-3-/Yïfenylmetoxi)karbonyljaminqf-2-oxo-l-azeti- dinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 185 mg 2-oxo-3-Åfi-klor-N-[Tfenylmetoxi)karbonylf- aminqf-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (jämför exempel 49A) i l ml dimetylformainid kyles till -7s°c och oflau litium-n-butoxia (3,8 ml) i n-butanol tillsättes via -7s°c-.

Efter 15 minuter tillsättes 0,5M enbasisk kaliumfosfatbuffert och produkten extraheras med diklormetan (tre 40 ml-portioner), torkas över natriumsulfat, filtreras och koncentreras i vakuum för erhällning av 179 mg av motsvarande tetrabutylammonium- salt av titelföreningen.

Till en lösning av 109 mg tetrabutylammoniumsalt i aceton sättes perfluorbutylsulfonsyra, kaliumsalt (60 mg) i aceton.

Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum och etylacetat tillsättes.

Produkten kristalliserar och tillvaratages och torkas för erhâllning av 66 mg av titelföreningen, smältpunkt l86,5~l87,5OC, sönderdelning.

Exemgel 81. 13:(EL7-3-metoxi-31[Z(metoxiimino)ZÜ-/Zlfenylmetoxi)karbonylj- aminqí-4-tiazolyl/acetyL]-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En suspension av 3-amino-3-metoxi-2~oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (exempel 46, metod II, del A) (O,l75 mmol) och natriumborat (0,0l75 mmol) i 2 ml diklormetan vid OOC behandlas med 28,ul pyridin och 0,175 mmol (E)-Q;(metoxi- imino)-2“ÄZ(fenylmetoxi)karbonyl7aminq]-4-tiazolylacetylklorid.

Efter en timme utspädes blandningen med diklormetan och be- handlas med vatten. Det organiska skiktet tvättas med vatten, mättad saltlösning, torkas och indunstas i vakuum. Aterstoden renas på Mallinckrodt SilicAR CC-4 kiselgel (20 g) för erhåll- ning av 43 mg av motsvarande tetrabutylammoníumsalt av titel- föreningen. 457 954 72 _Tetrabutylammoniumsaltet (43 mg) löses i 0,5 ml aceton och __ 20 mg kaliumperfluorbutansulfonat i 0,5 ml aceton tillsättes; Efter tillsats av 3 ml eter tillvaratages den fasta substansen och torkas i vakuum för erhâllning av 28 mg av titelföreningen, som smälter vid 144-146°c, sönaeraelning.

Exemgel 82. [É:(Z)]-3-metoxi-3-jyïmetoxiimino)Z?-jzïfenylmetoxi)karbonylf- aminqf-4-tiazolylfacetyL]-aminqj-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Pâ det i exempel 81 beskrivna sättet men med användning av (Z)-G:(metoxiimino)-2-jzïfenylmetoxi)karbonyl7aminQ]-4-tiazo- lylacetylklorid 1 stället för (E)-a= metoxi)-karbonylfaminqf-4-tiazolylacetylklorid erhålles titel- föreningen, smältpunkt 168-172°c, söndéraelning.

Exemgel 83. 3-j2YR)~K>fZl4-etyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)-karbonyl]aminQ2- fenylacetyl]aminq]¥3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Till en omrörd lösning av 0,69 mmol 3-amino-3-metoxi-2-oxo- -1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (exempel 46, metod II, del A) i 30 ml torr acetonitril vid -20°C under kväve sättes 242 l torr pyridin âtföljt av en lösning av 352 mg (R)-fi;]2I4-etyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)karbonylfaminqf- fenylacetylklorid i 4 ml acetonitril. Efter en timme tillsättes 84,«l pyridin åtföljt av ytterligare ll7 mg av den ovannämnda syrakloriden i l ml acetonitril. Reaktionsblandningen omröres i 20 minuter, utspädes med 24 ml 0,5 M pH 5,5 enbasisk kalium- fosfatbuffert och koncentreras i vakuum för avlägsning av acetonitril. Den vattenhaltiga återstoden extraheras tre gånger med metylenklorid och de förenade extrakten torkas (Na2SO4) och indunstas för erhâllning av 546 mg återstod.

Passage av återstoden genom en kiselgelkolonn med användning av metylenklorid och därefter 2%, 4% och 6% metanol i metylen- klorid gav tvâ fraktioner (285 mg och 173 mg) av motsvarande tetrabutylammoniumsalt av titelföreningen. 457 954 73 Passage av l73 mg-fraktionen genom 4,5 g Dowex 50-X2 (K+-form)- harts med användning av aceton/vatten såsom elueringsmedel gerl 119 mg av titelföreningen. En andel om l04 mg av detta material påföres en kolonn av HP 20-AG-harts i vatten. Eluering i följd med vatten, 5 % aceton i vatten och 10 % aceton i vatten gav 60 mg produkt såsom en blandning (ungefär l:l) av diastereo- merer. Lyofilisering av 60 mg-fnaktionen gav en fast substans, smältpunkt 171-172°c, sönderdslning.

Exempel 84.

N-(3-butoxi-2-oxo-l-sulfo-3~azetidinyl)-2-fenylacetamid, tetra- butylammoniumsalt Pâ det i exempel 80 beskrivna sättet, men med användning av N-klor-N-(2-oxo-l~sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylacetamid, tetra- butylammoniumsalt (jämför exempel 47A för framställning av motsvarande kaliumsalt) i stället för 2-oxo-3-[N-klor-N-ÅKfenyl- metoxi)karbonylfaminqj-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammo- niumsalt, ger titelföreningen i form av en olja: NMR (CDCl3) 3,62 (s, 2H, C H CH2), 4,03 (ABq, 2H,<9=7cps, C-4 CH2), 6,98 6 5 (s, lH, NH) och 7,30 ppm (S, 5H, C6H5).

Exempel 85.

(R)-3-metoxi-2-oxo-3-[Yfenylacetyl)amino7-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt En lM lösning av dimetylformamid-svaveltrioxid-komplex fram- ställes genom långsam tillsats av trimetylsilylklorsulfonat till dímetylformamid vid OOC âtföljt av evakuering vid 0,1 mm i 30 minuter vid 0-25OC. Under en argonatmosfär löses 50 mg (R)-N-(3-metoxi-2-oxo-l-azetidinyl)-fenylacetamid i 0,2 ml vattenfri dimetylformamid och kyles till 0°C. Kall lM dimetyl- formamid/svaveltrioxid-lösning (O,428 ml) tillsättes, bland- ningen omröres i 2 timmar och uthälles i 15 ml 0,5N enbasiskt kaliumfosfat. Lösningen extraheras två gånger med diklormetan (bortkastas) och 73 mg tetrabutylammoniumbisulfat tillsättes.

Extraktion med diklormetan (tre 10 ml-portioner) ger en viskös olja efter torkning och indunstning i vakuum. Kromatografi på Mallinckrodt CC-4 kiselgel (50:l) med användning av 2 % meta- nol i diklormetan såsom elueringsmedel ger 34 mg (R)-3-metoxi- 457 954 74 -2-oxo-3-Ålfenylacetyl)aminqf-l-azetidinsulfonsyra, tetra- butylammoniumsalt. Jonbyte på Dowex SOW-X2 (K+-form, 10-ekvie valenter) ger titelkaliumsaltet efter lyofilisering av det vattenhaltiga eluatet; smältpunkt l30°C O , sönderdelning, ÅQID = +52 (C = 0,5, vatten).

Exemgel 86.

(S)-3-[III]l-etyl-4-hydroxi-3-metyl-lH-pyrazolojä,4-h?pyri- din-5-yl)-karbonylfaminqffenylacetyl]amin0]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt Å På det i exempel 73 beskrivna sättet men med användning av aß-[Y(l-etyl-4-hydroxi-3-metyl-lH-pyrazolojfi,4-bfpyridin-5-yl)- karbonylfaminqjbensenättiksyra i stället för (Z)-2-aminoflxr (hydroxiimino)-4-tiazolättiksyra erhålles tfltelföreningen, smältpunkt 233-236°C, sönderdelning.

Exemgel 87.

(R)-3-acetylamino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kalium- salt A) 3-acetylamino-1-Zl-karboxi-2-metyl(propylX7-(3R)-3-metoxi- -2-oxoazetidin Till en lösningav (GR-cis)~7-acetylamino-7~metoxi-3-metyl-8-oxo- -5-tia-1-azabicyklojï.2.Q]okt-2-en-2-karboxylsyra (650 mg) och natriumbikarbonat (191 mg) i vatten sättes en uppslamning (ll ml) av Raney-nickel av_komersie1l kvalitet (0,6 g/ml), som tvättats till neutralitet med vatten. Blandningen ned- föres i ett oljebad som upphettats till l70°C och âterflödes- kokas i 2-3 minuter under det att badtemperaturen hâlles vid 150-l70°C. Efter âterflödeskokning i 15 minuter avbrytes reak- tionen genom kylning i ett isbad. Katalysatorn avlägsnas genom filtrering genom Celite och filtratet (pH ll) inställes på pH 2 med lN klorvätésyraa Efter extraktion av vattenlösningen 5 gånger med etylacetat torkas de kombinerade extrakten (Na2S04) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för erhâllning av en olja (487 mg). Kromatografi på kiselgel ger produkten (eluerad med kloroform) i form av en olja (381 mg). w 457 954 75 B) 3-acety1amino-1-¿ï-(acetyloxi)-2-mety1 metoxi-2-oxoazetidin Azetidinonen ovan (464 mg) löses i torr acetonitril (15 ml) och lösningen spolas med argon i l5 minuter. Kopparacetat (359 mg) tillsättes, omröres under en minut för upplösning av saltet och blytetraacetat (797 mg) tillsättes. Under det att argon fortsätter att bubbla genom blandningen stegras reaktionsblandningens temperatur genom nedsänkning av kolven i ett oljebad som i förväg upphettats till 55-65OC och hâlles vid denna temperatur i 15 minuter. Blandningen får svalna till rumstemperatur, filtreras genom Celite och filterkudden tvättas noggrant med acetonitril. Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum från blandning av filtrat och tvättvätskor. Återstoden upptages i vatten och extraheras fyra gånger med etylacetat.

De förenade extrakten torkas (Na2SO4) och lösningsmedlet av- lägsnas i vakuum för erhâllning av den önskade produkten såsom en olja (382 mg).

C) (R)-N-(3-metoxi-2-oxo-l-azetidinyl)-acetamid Den ovannämnda oljan löses i en blandning av metanol (10 ml) och vatten (l ml), kyles i ett is/metanol-bad vid -100 till -lSOC och kaliumkarbonat (194 mg) tillsättes åtföljt av natrium- bornyaria (53 mg). Efter omröring vid -1s° till -s°c 1 110 minuter avlägsnas lösningsnedlet i vakuum, återstoden upptages i vatten och lösningen inställes pâ pH 6 med lN klorvätesyra.

Noggrann extraktion med etylacetat, torkning (Na2SO4) och av- lägsning av lösningsmedlet i vakuum ger en olja (224 mg).

Kromatografi av oljan på kiselgel, eluering med 5 % metanol och 95 % metylenklorid ger en olja (169 mg). Titelföreningen kristalliseras ur eter/pentan för erhållning av l3l mg material, smäitpunkt los-112°c (sintring via 1o3,5°c).

D) (R)-3-acetylamino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Under en argonatmosfär införes 50 mg (R)-3-acetylamino-3-metoxi- -2-oxo-l-azetidin i en flaska och kyles till OOC. En lM lösning av dimetylformamid/svaveltrioxid-komplex i dimetylformamid (0,95 ml) införes därefter och lösningen omröres i 15 minuter. Kolvens 457 954 76 innehåll uthälles därefter i 40 ml O,5N KZHPO4 och extraheras tvâ gånger med lO ml metylenklorid. Tetrabutylammoniumsulfat' (1,2 ekv.) sättes till vattenlösningen och den erhållna bland- ningen extraheras medifyra lO ml-portioner metylenklorid.

Extrakten torkas därefter över Na2SO4 och koncentreras för erhållning av 39 mg produkt. Tetrabutylammoniumsaltet omvand- las till titelkaliumsaltet genom passage genom en kolonn av Dowex 50-X2 (K+-form). Koncentrering av den vattenhaltiga fraktionen ger 19 mg av kaliumsaltet, som har identiskt lika NMR-spektra som den produkt som framställts i EX46Ib och genom isolation från naturliga källor (ex. l65).

Exempel 88. (i)-3-[(azidofenylacetyl)aminQf-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt A) (i)-3-Åïazidofenylacetyl)aminqfë3-metoxi-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt 3-amino-3-metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammo- niumsalt (202 mg; jämför exempel 74A) löses i 20 ml torr aceto- nitril. Till den väl omrörda lösningen vid -2000 under torrt kväve sättes torr pyridin (l67¿zl) och drazidofenylacetylklorid (96,u¿). Efter 20 minuter tillsättes O,5M pH 5,5 enbasiskt kaliumfosfatbuffert (12 ml) och acetonitrilen avlägsnas i vakuum. Den vattenhaltiga återstoden extraheras tre gånger med metylenklorid. Extraktet torkas över vattenfritt natriumsulfat och indunstas i vakuum för erhållning av 281 mg rä produkt i form av en gummiliknande substans. Denna renas kromatogra- fiskt i en kolonn av kiselgel (30 g) med användning av metylen- klorid och blandningar av metylenklorid/metanol upp till 6 % metanol för erhâllning av 231 mg av titelföreningen.

B) (1)-3-[Tazidofenylacetyl)aminqf-3-metoxi-2-oxo-l-azetidin-_ sulfonsyra, kaliumsalt (1)-3-[(azidofenylacetyl)aminqj-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (231 mg) i 30 % aceton/vatten (15 ml) föres genom en kolonn av Dowex 50W-X2 (K+-form; 3 ml) och elueras med vatten. Det totala eluatet indunstas i vakuum för erhållning av en färglös glasartad substans (168 mg) i form 457 954 77 av en lzl-blandning av diastereomerer. Passage av denna genom en 60 ml kolonn av HP20-AG med användning av vatten och vatten] 10 % aceton ger 71 mg av en 1:1-blandning av racemiska diastereo- merer och 70 mg av en 1:3-blandning av racemiska diastereo- merer. Blandningen l:l lyofiliseras och torkas i vakuum vid 4o°c för ernålining av den torkade prøaukf-.en såsom ett hemi- hydrat, smältpunkt l30oC, sönderdelning.

Analys för C H N 0 'K'0,5 H O 12 12 5 6 2 Beräknat: C 35,90 H 3,26 N 17,45 S 7,98 Funnet: C 35,94 H 3,07 N 17,24 S 8,02 Exemgel 89. 3-Åïazidofenylacetyl)aminoj-3~metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt, isomer A Blandningen 1:3 av racemiska diastereomerer enligt exempel 88B får stå i deuteriumvatten vid rumstemperatur och isomer A kristalliserar. Efter kylning avlägsnas moderluten och kri- stallerna (28 mg) torkas i vakuum vid 4OOC, smältpunkt l30oC, sönderdelning, såsom ett monodeuterat.

Exemgel 90. [3i(RxL]-3-jY[[(4-etyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)karbonyljaminqj- fenylacetyl]aminq]3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kalium- salt Till en omrörd lösning av 3-amino-3-metoxi-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (O,69 mmol; jämför exempel 74A) i 30 ml torr acetonitril vid -20°C under kväve sättes 242,ul torr pyridin âtföljt av en lösning av 352 mg (R)-our ~[ZI4~etyl~2,3-dioxo-l-piperazinyl)karbonylfaminqffenylacetyl- klorid i 4 ml acetonitril. Efter en timme tillsättes 84/d. pyridin âtföljt av 117 mg ytterligare av syrakloriden i 1 ml acetonitril. Reaktionsblandningen omröres i 20 minuter, ut- spädes med 24 ml O,5M pH 5,5 enbasiskt kaliumfosfat-buffert och koncentreras i vakuum för avlägsning av acetonitril. Den vattenhaltiga återstoden extraheras tre gånger med metylenklo- rid och de förenade metylenkloridextrakten torkas (Na2S04) och indunstas till en återstod (546 mg). Passage av detta material genom en kolonn av SilicAR CC-4 med användning av metylenklo- 457 954 78 rid och därefter 2 %, 4 % och slutligen 6 % metanol i mety- lenklorid ger tvâ fraktioner (285 mg och 173 mg) av renad 'wdfi produkt i tetrabutylammoniumsaltformen.

Passage av 173 mg-andelen genom 4,5 g Dowex 50-X2 (K+-form)- harts med användning av aceton/vatten ger 119 mg kaliumsalt.

En 104 mg-portionav detta material pâföres en kolonn av HPZO- AG-harts i vatten. Eluering i följd med vatten, S % aceton i vatten och slutligen 10 % aceton i vatten ger 60 mg produkt i form av en blandning (ungefär 1:1) av diastereomerer och 21 mg produkt såsom en blandning (ungefär 9:1) av diastereomerer.

Lyofilisering av 60 mg-fraktionen ger titelföreningen, smält- punkt 171-172°c (sönder-delning).

Analys för clgnzzu o szvn o 5 9 2 Beräknat: C 41,23 H 4,37 N 12,65 S 5,78 Funnet: C 41,39 H 4,12 N 12,58 S 5,63 Lyofilisering av 21 mg-fraktionen gav titelföreningen, smält- punkt 171-172°C, sönderdelning.

Analys för Cl9H22N5O9SK'H2O Beräknat: C 41,23 H 4,37 N 12,65 Funnet: C 41,43 H 4,11 N 12,28 Behandling av 285 mg-fraktionen av tetrabutylammoniumsalt med Dowex SO-X2 (K+-form) ger 145 mg kaliumsaltj som kombineras med de kvarvarande 15 mg av den ovannämnda andelen 119 mg av kaliumsalt härrörande från Dowèx-hartset. Passage av detta material genom HP20-AG, såsom ovan beskrivits, ger ytterligare 31 mg produkt såsom en blandning (ungefär 1:1) av diastereo- merer och ytterligare 42 mg produkt såsom en blandning (unge- fär 9:1) av diastereomerer. Den totala mängden av (1:1)-bland- ning av diastereomerer är 91 mg och den totala mängden av (9:1)-blandning av diastereomerer är 63 mg.

Exemgel 91. [ss m1- s-fflmetoxiimino) [z-fl( fenylmetoxi) karbonyljaminqj- -4-tiazolyljacetyljaminqj-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kalium- salt 457 954 79 Till en lösning av (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (O,l7O mmol; jämför exempel 6A) och W natriumborat (O,l7O mmol) i 2 ml metylenklorid vid OOC sättes pyridin (62,ul) och (Z)-dr(metoxiimino)-2-jZYfenylmetoxi)- karbonylfaminqf-4-tiazolacetylklorid (O,5l mmol). Reaktions- blandningen utspädes efter 40 minuter med metylenklorid och vatten àtföljd av 0,lM tetrabutylammoniumsulfat buffrat till pH 4 (5,1 ml). Det organiska skiktet separeras och tvättas med vatten, inställes på pH 2, vatten inställt på pH 7, vatten mättat med natriumklorid, torkas över natriumsulfat, filtreras och koncentreras i vakuum. Återstoden renas på SilicAR CC-4- kiselgel (l0 g) och produkten elueras med 10 % metanol/metylen- klorid.

Tetrabutylammoniumsaltet, efter upplösning i aceton/vatten föres genom ett jonbytarharts (8 ml, AG SOW-X2, K+-form, 100- 200 mesh). Avlägsning av vattnet i vakuum från fraktionerna 1-2 ger 40 mg av titelföreningen, smältpunkt 172-17400, sönder- delning.

Analys för Cl7Hl6N5O8S2K°H2O: Beräknat: C 37,84 H 3,33 N 12,99 S 11,87 Funnet: C 37,95 H 3,30 N 12,73 S ll,53 Exemgel 92. (1)-3-butoxi-2-oxo-3-[Tfenylacetyl)aminqY-l-azetidinsu1fon- syra, kaliumsalt A) 3-¿klor(fenylacetyl)aminQZ-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt En lösning av (S)-2-oxo-31[ZKfenylmetoxi)karbonylfamino]-l- azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (350 mg; jämför exempel 4) i metylenklorid (3 ml) sättes till en suspension av natriumborat (l,27 g) i en 5,25%-ig lösning av natriumhypo- klorit (4,72 ml) och vatten (20 ml) vid OOC. Efter en timme tillsättes O,5M enbasiskt kaliumfosfat (25 ml) och blandningen extrahéras tre gånger med metylenklorid (50 ml-portioner).

De organiska extrakten torkas över natriumsulfat, filtreras och koncentreras i vakuum för erhållning av 344 mg av titel- föreningen.

'H1 457 954 80 B) (+)-3-butoxi-2-oxo-3-jïfenylacetyl)aminq]-l-azetidinsul- fonsyra, tetrabutylammoniumsalt En lösning av 31j2klpr(fenylmetoxi)karbonyl7aminQZ-l-azetidin- sulfonsura, tetrabutylammoniumsalt (344 mg) i dimetylformamid (5 ml) sättes till 0,73N n-litiumbutoxid i n-butanol (6 ml) i dimetylformamia (1 m1) vid -7s°c under en inert atmosfär.

Efter 10 minuter utspädes blandningen med 0,5M lösning av en- basiskt kaliumfosfat (175 ml). Efter extraktion tre gånger med metylenklorid torkas det organiska extraktet över natrium- sulfat, filtreras och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum. Åter- stoden renas på SilicAR CC-4 kiselgel (80 g) och titelföreningen (130 mg) elueras med 4-8 % metanol i metylenklorid.

C) (1)-3-butoxi-2-oxo-3-[Yfenylacetyl)anánQ]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (i)-3-butoxi-2-oxo-3-ZXfenylacetyl)aminQ]-l-azetidinsulfon- syra, tetrabutylammoniumsalt (43 mg) löses i en blandning av vatten och aceton (9:l) och pâföres en katjonbytarkolonn (Dowex AGMP SOW-X2, l00-200 mesh, 5 g, K+-form). Produkten elue- ras med vatten och eluatet koncentreras i vakuum för erhåll- ning av 20 mg av titelföreningen, smältpunkt 122-l25°C.

Analys för Cl5Hl9N206SK°l/2 H20: Beräknat: C 44,66 H 4,96 N 6,95 S 7,94 Funnet: C 44,77 H 4,76 N 6,76 S 7,75 Exemgel 93. (1)-3-etoxi-2-oxo-3-[Tfenylacetyl)aminq]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt 3-[klor(fenylacetyl)aminq]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (200 mg; jämför exemel 92A) i dimetyl- formamid (4 ml) sättes till 0,5N litiumetoxid i etanol (l2,20 ml) vid -780C under en inert atmosfär. Efter l0 minnter utspädes blandningen med 0,5M lösning av enbasískt kaliumfosfat (l5 ml)Ä Efter extraktion tre gånger med metylenklorid torkas det organiska skiktet över natriumsulfat, filtreras och lösnings- medlet avlägsnas i'vakuum. Återstoden renas på SilicAR CC-4 kiselgel (20 g) och tetrabutylammoniumsaltet av produkten (40 mg) elueras med 2 % metanol i metylenklorid. 457 954 81 Tetrabutylammoniumsaltet löses i en blandning av vatten och aceton (9:l) och påföres en katjonbytarkolonn (Dowex AGMP SÖWÄ X2, lOO-200 mesh (5 g, K+-form)). Produkten elueras med vatten och eluatet koncentreras i vakuum för erhållning av 25 mg av titelföreningen, smältpunkt 94-96OC.

Analys för Cl3Hl5N2O6SK: Beräknat: C 42,62 H 4,10 N 7,65 S 8,74 Funnet: C 40,36 H 3,66 N 6,77 S 8,44 Exegpel 94. lä:(ZX7-3~jZï2-amino-4-tiêZ0lyl)(metoxiimino)-acetyl]aminQ7- 3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt 3-amino-3-metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammo- niumsalt (se exempel 46, metod II, del A) löses i adetonitril (20 ml) och pyridin (l ml) och sättes till en kraftigt omrörd suspension av (Z)-«;(metoxiímino)-2-amino-4-tiazolacetylklo- rid 1 acetonitrii (20 mi) kyla till o-s°c. Efter omröring 1 kyla i en timme utspädes blandningen med O,5M lösning av en- basiskt kaliumfosfat (lOO ml) (pH i blandningen är 4,8) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum. Återstoden upptages i en minimal mängd vatten innehållande en ringa mängd aceton.

Kromatografering på jonbytarharts (AG SOW-X2, lOO-200 mesh, K+-form, 200 ml) ger den råa produkten såsom kaliumsaltet vid eluering med vatten. Ytterligare rening pâ HP-20-harts (200 ml) med användning av vatten såsom elueringsmedel ger 59 mg produkt såsom ett pulver efter triturering med aceto- nitril/eter och därefter tvâ gånger med eter. Produkten är ett amorft pulver, som smälter långsamt och sönderdelas över 15o°c.

Analys för C H N O SK: 10 12 5 7 Beräknat: C 28,77 H 2,90 N 16,78 S 15,36 K 9,37 Funnet: C 27,77 H 2,82 N 15,87 S 13,63 K lO,ll Exempel 95. jÉR(R?)-Och 38(Sx)]~3“!Y17êminokarbonyl)aminq]-fenylacetyl]- aminqj-3-metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt A) (i)-3-jflaminofenylacetyl)aminq]3-metoxi-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, inre salt 457 954 82 (i)-3-fïazidofenylacetyl)aminQI-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt (209 mg; jämför exempel 88) löses i 60 ml) torr metanol. Vattenfri trifluorättiksyna (0,6 ml) och 10 % palladium på kol (105 mg) tillsättes och blandningen hydrogene- ras i en timme. Katalysatorn avlägsnas genom filtrering och filtratet indunstas i vakuum för erhållning av 271 mg rå pro- dukt.

B) [3R(Rx)- och 3S(SXLI-3-IYZYaminokarbonyl)aminoffenylacetylj- amingj-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (i)-3-Lïaminofenylacetyl)aminq/-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt (271 mg) löses i 6,5 ml vatten. Kalium- cyanat (87 mg) tillsättes och blandningen omröres vid rums- temperatur i 3 timmar. Lösningen koncentreras i vakuum till ungefär 2 ml och kromatograferas på en lOO ml-kolonn av HP20- AG med användning av vatten såsom elueringsmedel. Isomer A (29 mg) isoleras efter lyofilisering, smältpunkt l6OOC, sönder- delning.

Analys för Cl3Hl5N407SK-monohydrat: Beräknat: C 36,44 H 3,99 N 13,07 S 7,48 Funnet: C 36,35 H 3,79 N 12,81 S 7,32 Exempel 96. jÉR(Sx)- och 3S(Rx)7-3-jY[(aminokarbonyl)aminq]-fenylacetyl]- aminQ]-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Tillsammans maa ¿äR(n*)- och as(sxL]-3-/7¶Ramin°karbony1)- aminqjfeny1acetylZamino-3-metoxi-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt, som framställts i exempel 95, bildas 21 mg [ÉR(Sx)- och 3S(RxL7-3-[YZ(aminokarbonyl)aminQ]fenylacetyl/- aminqj-3-metoxi-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt såsom- ett lyøfilat, smältpunkt 160oC, sönderdelning.

Analys för C H N O SK-seskvihydrat: 13 15 4 7 Beräknat: c 35,69 H 4,14 N 12,81 s 7,33 Famnet; c 35,98 'H 3,87 N 12,50 s 7,32 Exempel 97. [3i(S*)]-3-metoxi-3-122222-oxo-3-[Tfenylmetylen)aminQ]-l- imidazolidinyljkarbonyljaminoz-2-tienylacetyljaminol-2-oxo- -1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt 457 954 _83 Till en omrörd lösning av 3-amino-3-metoxi-2-oxo-azetidinsul- fonsyra, tetrabutylamoniumsalt (306 mg rått material som an- tages innehålla 274 mg organiskt material, framställt såsom beskrives i exempel 74) i 20 ml torr acetonitril vid -ZOOC under kväve sättes 0,30 ml torr pyridin (3,72 mmol) åtföljt av 484 mg (S)-jYX2-oxo-3-fenylmetylen)aminq]-l-imidazolidinyl]- -karbonyl]amino]-2-tienylacetylklorid delvis löst och suspen- derad i 10 ml torr acetonitril. Reaktionsblandningen omröres och temperaturen får stiga till O°C under loppet av en timme.

Reaktionsblandningen utspädes med en stor volym metylenklorid och behandlas därefter med 22 ml O,5M pH 5,5 buffert av en- basiskt kaliumfosfat. Det vattenhaltiga skiktet tvättas med metylenklorid och det kombinerade metylenkloridextraktet tvättas med vatten, torkas (Na2SO4) och indunstas till en återstod (508 mg). Denna återstod kromatograferas på 50 g SilicAR CC-4, med användning av metylenklorid och därefter med 2 % och 4 % metanol i metylenklorid för erhållning av 251 mg av tetrabutyl- ammoniumsaltet av titelföreníngen.

Till detta salt (251 mg) i aceton sättes en lösning av 107 mg perfluorbutansulfonsyra, kaliumsalt, i flera ml aceton. Etyl- acetat tillsättes och fällningen tvättas tre gånger med etyl- acetat genom centrifugering och torkas i vakuum vid 4000/l mm i 2 timmar för erhållning av 95 mg av det önskade kaliumsaltet såsom en blandning (ungefär 1:2) av diastereomerer med en smältpunkt av 200°C, sönderdelning.

Beräknat för C H N 0 S K: 21 21 6 8 2 C 42,85 H 3,60 N 14,28 S lO,87 Funnet: C 43,02 H 3,74 N 13,94 S 10,71 Exemgel 98. (1-cis)-4-metyl-2-oxo-3<ÅY1fenylmetoxi)karbonyl7aminq/-l- azetidinsulfonsyra, kaliumsalt A) N-bensyloxi-t-bocx-allotreoninamid En lösning av 6,9 g D,L-t-boc-allotreonin och den fria aminen från 5,3 g o-bensylhydroxylamin'HCl (ungefär 0,033 mol, etyl- acetat/natriumbikarbonat-liberation) i 80 ml tetrahydrofuran 457 954 84 behandlas med 4,82 g N-hydroxibensotriazol och 6,5 g dicyklo- hexylkarbodiimid i 20 ml tetrahydrofuran. Efter omröring i ungefär 16 timmar vid rumstemperatur filtreras uppslamningen, koncentreras i vakuum och kromatograferas på en 400 ml -kisel- gelkolonn. Eluering med 5-10 % etylacetat i kloroform ger 6,8 g av titelföreningen i fraktioner (200 ml vardera) 7-22. x boc användes för att definiera butoxikarbonyl B)(1-cis)-N-bensyloxi-3-t-butoxikarbonylamino-4-mety1azeti- dinon En lösning av 6,8 g N-bensyloxi-t-boc-allotreoninamid i 200 ml tetrahydrofuran omröres ungefär 16 timar vid 5,24 g trifenyl- fosfin och 3,2 mldietylazodikarboxylat. Lösningsmedlet avdunstas i vakuum och återstoden kromatograferas på en 500 m1-kise1ge1- kolonn. Eluering med metylenklorid åtföljt av kristallisation ur eter ger totalt 2,65 g azetidinon. Förnyad kromatografi av moderlutarna och blandade fraktioner ger ytterligare 0,6 g.

Kristallisation av en andel tvâ gånger ur eter (-2000) ger ett analytiskt prov av titelföreningen med smältpunkten 140-14200.

C) (1-cis)-3-t-butoxikarbonylamino-1-hydroxi-4-metylazetidinon En lösning av 3,2 g cis-N-bensyloxi-3-t-butoxikarbony1amino- -4-metylazetidinon i 200 ml 95%-ig etanol omröres i en atmos- fär av väte med 0,7 g 10% palladium på kol. Efter 40 minuter 249 ml) och filtratet in- erhâllning, i två skördar, av 2,05 g fast substans, smältpunkt 134-13s°c. filtreras uppslamningen (ufiptagning dunstas och tritureras med eter för D) (i-cis)-3-t-butoxikarbonylamino-4-metylazetidinon En lösning av 2,05 g cis-3-t-butyloxikarbonylamino-l-hydroxi- -4-metylazetidinon i 60 ml metanol behandlas med totalt 90 ml 4,5M ammoniumacetat (40, 20 och 30 ml portioner) och 45 ml l,5M titantriklorid (20, 10 och 15 ml-portioner), varvid de andra och de tredje tillsatserna gjordes efter 15 resp. 120 minuter. Efter 135 minuter utspäddes lösningen med en lika volym 8 % natriumklorid och extraheras med tre 300 ml-portioner etylacetat. De kombinerade organiska skikten tvättas med en blandning av 100 ml vardera av 5%-ig natriumbikarbonat och 457 954 ss mättad saltlösning, torkas och indunstas. Triturering med eter ger i två skördar 1,65 g fast substans. En andel av den första skörden omkristalliseras ur eter för erhâllning av ett analy-- tiskt prov med smältpunkten 176-l78,5°C.

E) (1-cis)-3-bensyloxikarbonylamino-4-metylazetidinon En lösning av 1,55 g cis-3-t-butoxikarbonylamino-4-metylazeti- don i 4 ml vardera av metylenklorid och anisol kyles till OOC och 50 ml kall trifluorättiksyra tillsättes: Efter 90 minuter avdunstas lösningsmedlen i vakuum (bensen tillsättes och av- dunstas tre gånger). Återstoden löses i 25 ml aceton, det ur- sprungliga pH-värdet (2,5) stegras till 7 med 5%-ig natriumbi- karbonat och 2 ml bensylklorformiat tillsättes; Lösningen hàlles vid OOC och pH 7 i 4 timmar och æetonen avlägsnas i vakuum för erhållning av en uppslamning, som filtreras. Filtra- tet mättas med salt och extraheras med metylenklorid. Den fasta substansen löses i metylenklorid och torkas. De organiska skik- ten kombineras, koncentreras och återstoden kromatograferas på 200 ml kiselgel i en kolonn. Eluering med 3:1 kloroform/etyl- acetat ger 850 mg av titelföreningen i fraktioner (100 ml var- dera) 4-ll. Kristallisation av ett ringa prov ur eter ger ett analytiskt prov med smältpunkten 165-l66°C.

F) (1-cis)-4-metyl-2-oxo-3-[ZXfenylmetoxi)-karbonyl7aminqZ- l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Till en suspension av cis-3-bensyloxikarbonylamino-4-metyl- azetidinon (0,75 g) i 7 ml vardera av dimetylformamid (torkad med 4A siktar aktiverade vid 32000 i 15 timmar under argon- flöde) och metylenklorid (torkad genom basisk Al203) sättes l,66 g pyridin/svaveltrioxid-komplex. Efter 3 timmars omrörflng vid rumstemperatur under kväve tillsättes en ytterligare mängd av pyridin/svaveltrioxid-komplex (l,66 g). Reaktions- blandningen omröres därefter vid rusteperatur under kväve i ungefär 16 timmar. Dimetylformamiden avlägsnas i vakuum för erhâllning av 4,6 g återstod, som löses i 300 ml 0,5M lösning av enbasiskt kaiiumføsfat (4o°c i 10-15 minuter). Lös- ningen kyles, föres genom en kolonn av HP-20-harts (3 cm x 60 cm) med 400 ml 0,5M enbasiskt kaliumfosfat, 1 liter destillerat vatten och (l4:l) vatten/aceton för erhâllning av 280 mg pro- 457 954 86 dukt i fraktioner 13-26 (100 ml vardera). Kristallisation ur Me0H/petroleumeter ger 757,5 mg av ett analytiskt prov, som smälter vid 214-21s,5°c, sönderdelning.

Analys för C H N S0 K: 12 13 2 6 Beräknat: C 40,90 H 3,72 N 7,95 S 9,10 K 11,10 Funnet: C 40,43 H 3,60 N 7,89 S 8,69 K 10,82 Exemgel 99. (38-trans)-4-metyl-2-oxo-3-[21fenylmetoxi)karbonylfaminql- -1-azetídinsulfonsyra, kaliumsalt Pâ det i exempel 98 beskrivna sättet men med användning av l-t-boc-treonin i stället för D,L-t-boc-allotreonín, erhålles títelföreningen med smältpunkten 133-13500.

Analys för Cl2Hl3N206SK: Beräknat: C 40,90 H 3,72 N 7,95 S 9,10 K ll,lO Funnet: C 40,72 H 3,60 N 7,99 S 8,80 K 10,82 Exemgel 100. (35-trans)-4-metyl-2-oxo-3-Zlfenylacetyl)aminQ7-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt A) (38)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutyl- ammoniumsalt (45-trans)-4-metyl-2-oxo-31121fenylmetoxi)karbonylïaminqí- -l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (352,4 mg; jämför exempel 99) löses i 20 ml destíllerat vatten och behandlas med 373,5 mg (1 mmol) tetrabutylammoniumvätesulfat. Efter 10 minuters om- röring vid rumstemperatur extraheras lösningen tre gånger med 10 ml-portioner metylenklorid efter mättnad med natrium- klorid. Metylenkloriden torkas över natriumsulfat och indunstas i vakuum för erhâllning av 536 mg av tetrabutylammoniumsaltet, som hydrogeneras med 270 mg 10% palladium på kol_i 25 ml di- metylformamid. Blandningen filtreras genom Celite och tvättas tvâ gånger med 2,5 ml-portioner dimetylformamíd för erhållning av titelföreningen i lösning. 457 954 87 B) (3S-trans)-4-metyl-2-oxo-3-Zïfenylacetyl)aminqf-l-azetidine sulfonsyra, kaliumsalt Denrâa (38)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyran, tetra- butylammoniumsaltet från A) (kombinationen av filtratet och tvättvatskorna) behandlas via o°c med 206 mg aicykianexyikarbo- diimid, 153 mg N-hydroxibensotriazol och 138 mg fenylättik- ,syra. Reaktionsblandningen omröres vid OOC i en timme och där- efter vid rumstemperatur iyï timmarf Den erhållna fällningen filtreras, filtratet indunstas i vakuum, återstoden löses i l0 ml aceton och filtreras. Filtratet behandlas med 25 ml ace- ton mättad med kaliumjodid och därefter med 200 ml eter. Den bildade fasta substansen (752,7 mg) är en blandning av kalium- och tetrabutylammoniumsalterna av titelföreningen. Den fasta substansen löses i 50 ml 0,5 enbasiskt kaliumfosfat och pâföres en HP-20-kolonn. Eluering med vatten och därefter vatten/aceton ger flera fraktioner; som kombineras och indunstas för erhâllning av det renade tetrabutylammoniumsaltet. En vattenlösning av detta material föres genom Dowex SOW-X2 (K+- form) för erhâllning av titel-kaliumsaltet (l2l,4 mg). Triture- ring med aceton/hexan ger 104,6 mg av titelföreningen, smält- punkt 211-213°c.

Analys: Cl2Hl3N2O5SK'l/2 H20: Beräknat: C 41,72 H 4,09 N 8,11 S 9,28 K 11,32 Funnet: C 41,70 H 4,01 N 8,07 S 9,01 K 11,02 Exemgel 101. (cis-4-metyl-2-oxo-3-[Tfenylacetyl)aminQ]-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt En lösning av 320 mg (1-cis)-4-metyl-2-oxo-3-[21fenylmetoxi)- karbonyllaminqï-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (jämför exempel 98) framställes i 20 ml vatten innehållande 483 mg tetrabutylammoniumvätesulfatoch inställes på pH 5,5.

Extraktion med sex 25 ml-portioner metylenklorid ger 517,3 mg olja. En lösning av detta material i 15 ml dimetylformamid omröres med 400 mg 10% palladium pâ kol i en atmosfär av väte i 90 minuter. Katalysatorn filtreras och filtratet omröres med 150 mg fenylättiksyra, 169 mg N-hydroxibensotriazol och 247 mg dícyklohexylkarbodiimid i 7,5 timmar. Lösningsmedlet 457 954 88 avlägsnas i vakuum och återstoden löses i 20 ml aceton och filtreras. Filtratet behandlas med 25 ml 0,044 M kaliumjodíd"" i aceton. Utspädning med en lika volym eter ger en fast substans (330 mg), som pâföres en 50 ml HP-20-kolonn i 20 ml 0,0SM enbasiskt kaliumfosfat. Eluering med 200 ml vatten âtföljt av 1:9 aceton/vatten ger Rydon-positivt material i fraktioner (50 ml) 6-10. Indunstning av fraktionerna 7-9 ger 81 mg fast substans. Omkristallisation ur acetogšfiril/vatten ger 46 mg av titelföreningen, som sönderdelas vid )205°C. En andra skörd (6 mg) erhålles ur filtratet. Ytterligare 5 mg erhålles från fraktionerna 6 och 10 genom indunstning och omkristallisation.

Analys: Cl2Hl3N2O5SK: Beräknat: C 42,84 H 3,89 N 8,33 S 9,53 K 11,62 Funnet: C 42,75 H 3,82 N 8,32 S 9,26 K 11,63 Exempel l02. Ägg-13412),&Q[[¥3-[II2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)acetyl7- amino]-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt A) (3S-trans)-4-metyl-2-oxo-3-[ZXfenylmetoxi)karbonylzaminqj- -l-azetidínsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (3S-trans)-4-metyl-2-oxo-3-121fenylmetoxi)-karbonylZaminq7- -l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (352,4 mg; jämför exempel 99) löses i 20 ml vatten och tetrabutylammoniumvätesulfat (373,S mg) tillsättes. Vattenlösningen extraheras tre gånger med metylenklorid och de förenade extrakten torkas över nat- riumsulfat. Efter avlägsning av lösningsmedel erhålles 534,6 mg av titelföreningen.

B) ¿3S-13412),4AÜ]-3-1212-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)- acetyl]aminQ]-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 534,6 mg (38-trans)-4-metyl-2-oxo-Bfilïïfenyl- metoxi)karbonylíaminqj-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylamo- niumsalt i 20 ml dimetylformamid hydrogeneras med 220 mg 10% palladium på kol vid atmosfärstryck i 2,75 timmar; väteupptag- ningen är 26,3 ml. Blandningen filtreras och tvättas tvâ gånger med 2,5 ml dimetylformamid. Filtratet och tvättvätskorna (totalt ungefär 25 ml) omröres under kväve med l6l mg (Z)-mf -(metoxiimino)-2-amino-4-tiazolättiksyra, 136 mg N-hydroxi- 457 954 89 bensotriazol och 164,8 mg dicyklohexylkarbodiimid. Blandningen omröres under kväve i ungefär 16 timmar. Dimetylformamiden7M'M avlägsnas i vakuum och den gummiartade återstoden löses i ace- ton och filtreras för avlägsning av urea. Till filtratet sättes en lösning innehållande 272 mg (0,8 mmol) perfluorbutansulfon- syra, kaliumsalt i 0,8 ml aceton. Uppslamningen utspädes med en lika volym eter och filtreras för erhållning av 325,5 mg rä produkt, som renas genom kromatografi på 75 ml-HP-20AG.

Eluering med 400 ml vatten och 400 ml (9:l) vatten/aceton (50 ml-fraktioner) ger 335 mg i fraktioner 3-10. Efter triture- ring med aceton/hexan erhålles 97,3 mg av ett analytiskt prov från fraktionerna 3-5. Liknande triturering av fraktionerna 6-10 ger ytterligare 90,4 mg produkt såsom en fast substans.

Analys: C H N O S K 10 12 5 6 2 Beräknat: C 29,92 H 3,01 N 17,45 S 15,97 K 9,74 Funnet: C 30,32 H 3,49 N 15,82 S 13,95 K 10,45 NMR (D20) 1,57 (3H, d, /=7), 3,97 (3H, S), 4,30 (lH, d av q, J=7,3), 4,70 (lH, d, J=7), 6,95 ppm (lH, S).

Exemgel lO3. [ss-fsøuz) , MJJ-B-ffl2-am1no-4-tiazo1y1)[u-karboxi-i-metyi- etoxi)iminqfacetylfaminqf-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, dikaliumsalt A) N~bensyloxi-t-boc-treoninamid En lösning av 8,76 g t-boc-treonin och den fria aminen från 6,4 g 0-bensylhydroxylamin.HCl (etylacetat/natriumbikarbonat- liberation) i 100 ml tetrahydrofuran behandlas med 6,12 g N-hydroxibensotriazol och 8,24 g dicyklohexylkarbodiimid i 20 ml tetrahydrofuran. Blandningen omröres under kväve i 26 timmar, filtreras och indunstas i vakuum. Återstoden kromato- graferas på 300 g kiselgel i en kolonn (eluering med kloro- form och kloroform/etylacetát (3:l)) för erhâllning av 7,2 g förening. Kristallisation ur eter/hexan ger 4,18 g av titel- föreningen. 457 954 90 ' B) (3S-trans)~N-bensyloxi-3-t-butoxikarbonylamino-4-metyl- anetidinon -nn! En lösning av l2,67 g N-bensyloxi-t-boc-treonin-amid, ll,5 g trifenylfosfin och 6,23 ml dietylazodikarboxylat i 380 ml tetrahydrofuran omröres under kväve i ungefär 16 timar.

Lösningen indunstas och kromatograferas på en 900 g kiselgel- kolonn. Eluering med kloroform/etylacetat (3:l) ger 13,69 g förening, som kristalliseras ur eter/hexan för erhâllning av 9,18 g av titelföreningen.

C) (35-trans)-3-t-butoxikarbonylamino-l-hydroxi-4-metylazeti- ëäflæ En lösning av 9,18 g (35-trans)-N-bensyloxi-3-t-butoxikarbo- nylamino-4-metylazetidinon i 300 ml 95%-ig etanol omröres i en atmosfär av väte med l,85 g 10% palladium på kol. Efter 141 minuter filtreras uppslamningen och indunstas i vakuum. Återstoden omkristalliseras ur eter/hexan för erhållning av 5,12 g av titelföreningen.

D) (35-trans)-3-t-butoxikarbonylamino-4-metylazetidinon En lösning av 4,98 g (38-trans)-3-t-butoxikarbonylamino-l- hydroxi-4-metylazetidinon i 200 ml metanol behandlas med . l32 ml 4,5M amoniumacetat och därefter med 66 ml l,5M titan- triklorid och omröres i 4,5 timmar. Vattenlösningen utspädes med en lika volym 8%-ig natriumklorid och extraheras med etyl- acetat för erhâllning av 3,48 g râ produkt. Omkristallisation ur eter/hexan ger 3,3 g av titelföreningen.

E) (38-trans)-3-bensyloxikarbonylanino-4-metylazetidinon En lösning av 3,3 g (38-trans)-3-t-butoxikarbonylamino-4- metylazetidinon i 10 ml vardera av diklorometan och anisol kyles till o°c och llz ml trlfluorattlksyra tillsättes.

Lösningen omröres i 90 minuter och indunstas i vakuum (bensen tillsättes och avdunstas tre gånger). Aterstoden löses i 70 ml aceton och lösningen inställes pâ pH 7 med 5% natriumbikarbonat- lösning. Totalt 5,33 g bensylklorformiat tillsättes under en timme vid pH 6,5-7,5. Blandningen omröres i 30 minuter vid pH 7, utspädes med 100 ml mättad saltlösning och extraheras 457 954 91 med etylacetat (tre 400 ml-portioner). Den genom indunstning erñâllna återstoden kromatograferas på en enliters kiselgeIï'" kolonn. Eluering med kloroform/etylacetat (4:l) ger 2,19 g förening. Kristallisation ur eter/hexan ger 1,125 g av titel- föreningen.

F) (3S-trans)-4-metyl-2-oxo-3-Zïïfenyimetoxi)karbonyljaminqj- -l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt En lösning av 600 mg (35-trans)-3-bensyloxikarbonylamino-4- metylazetidinon i 2 ml dimetylformamid kyles till OGC och 4 ml O,8M svaveltrioxid i dimetylformamid tillsättes. Lös- ningen omröres vid rumstemperatur under kväve i en timme och uthälles i 80 ml kall 0,5M enbasiskt kaliumfosfat (inställt på pH 5,5). Lösningen extraheras med tre 50 ml-portioner metylen- klorid (bortkastas) och 868 mg tetrabutylammoniumbisulfat tillsättes. Den erhållna lösningen extraheras med fyra 75 ml- portioner metylenklorid. De kombinerade organiska skikten tvättas med 8%-ig vattenlösning av natriumklorid, torkas och indunstas i vakuum för erhâllning av 1,54 g av titelföreningen. e) ßs-ßuz) ,MJJ-s-[fl2-am1no-4-t1azo1y1) -fu-aifenylmetoxi- karbonyl-l-metyletoxi)iminQ]-acetylzaminqj-4-metyl-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra, kaliumsaltï En lösning av 1,54 g (35-trans)-A-metyl-2-oxo-3-[Z(fenylmetoxi)- karbonyl7aminQ]-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt i 45 ml dimetylformamid omröres i en atmosfär av väte med 800 mg 10% palladium på kol 5 2 timar. Katalysatorn filtreras och filtratet omröres i ungefär 16 timmar med 1,24 g (Z)-2- amino-Myjïl-difenylmetoxikarbonyl-l-metyletoxi)iminQ7-4- tiazolättiksyra, 0,4 g N-hydroxbensotriazol och 580 mg dicyklo- hexylkarbodiimid. Uppslamningen indunstas i vakuum och åter- stoden tritureras med 20 ml aceton och filtreras. Filtratet (plus 2 ml av tvättvätskorna) behandlas med 868 mg kaliumper- fluorbutansulfonat i 3 ml aceton. Utspädning med 75 ml eter ger en fast substans, som isoleras genom dekantering av moder- luten, triturering med eter och filtrering för erhållning av 0,91 g av titelföreningen. Moderluten utspädes med ytterligare 100 ml eter för erhållningiav en andra skörd, 0,45 g, av titel- föreningen. 457 954 92 n) -fas-fw z) , IwJJ-s-[fl z-aminO-Lz-tiazøijl) fl l-karbøxi-:L- metyletoxi)iminq]-acetylfaminqj-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsul- fonsyra, dikaliumsalt En uppslamning av 140 mg [38-JÉMJZ),4417-3-1212-amino-4-tiazo- lyl)jY1-difenylmetoxikarbonyl-1-metyletoxí)iminQ7acetyl]aminQ7- -4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (första skörden) i 0,5 ml anisol omröres vid -l2°C under kväve och 2,5 ml kall (-1o°c> trifiuorättiksyra tillsättes. Efter io minuter tiil- sättes l0 ml eter och 5 ml hexan och den erhållna uppslam- ningen omröres i 5 minuter vid -l2°C och får antaga rums- temperatur. Den fasta substansen isoleras genom centrifugering och tvättas två gånger med eter. En lösning av denna fasta substans i 5 ml kallt vatten inställes omedelbart på pH 5,5 med 0,4N kaliumhydroxid och pàföres därefter en 80 ml HP-2OAG- kolonn. Eluering med vatten ger 72 mg av titelföreningen i fraktioner (10 ml) 7-11 efter indunstning (acetonitril till- sättes och avdunstas tre gånger) och triturering med eter, smältpunkt ungefär 25000-(sönderdelning).

Analys: Cl3Hl5N508S2K2: Beräknat: C 30,51 H 2,95 N 13,69 S 12,53 K 15,28 Funnet: C 29,63 H 3,20 N 12,96 S 11,94 K 12,78 NMR (D20) 1,46 (S, GH), 1,58 (lH, d, /=7), 4,28 (lH, d av q, /=7, 2,5), 4,67 (1H, d, J=2), 6,95 ppm (S, lH).

De återstående 1,22 g [38-/äxáz),4427-3-jZY2-amino-4-tiazo- lyl)11l-difenylmetoxikarbonyl-l-metyletoxi)-iminQ]acetylY- aminqj-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsaltet (skördarna l och 2) behandlas såsom ovan (4,2 ml anisol, 16 ml trifluorättiksyra, 13 minuter vid -l5°C). Kromatografering på en 300 ml HP-2OAG-kolonn ger 694 mg av titelföreningen i frak- tioner (60 ml) 6-9 efter behandling såsom ovan.

Exemplen 104-133.

På det i exempel ll beskrivna sättet men med användning av den syra som anges i spalt I i stället för (Z)-2-aminø-dr -[[[hyar0x1(feny1met<>x1> fosfinyflmetoxgiminqj-zx-ti azøiätcik- syra erhålles de föreningar som anges i spalt II. mcflcfiwøuwøzwm .Uo>mH|«mH uxnflmuamëm .uflmmäøfifimx .muæwcow naømcfluflvwNm|H|oNo|m|\0fiHEm\AæumomAfiæcmwfixon fløænlwvNdnfiëmmaænonnmxxäæøflNmuwmfim|H|NdnwEm 1^=wH>pweH»=w««w|«|oxøflø|m_mNNNNN|~|\¿xmvwww mcficflmøumøcmm .Uomæfl ux:D@u¿wEm ßufimmfiflflfimx .muæwcou |Hflmcfiøfivmumlfiløxolm1NdGfiEmNAæum0mNäC«Em |NA>conHmx^H>GHNmuwmHm|H|ox0flø|m_N|H>»w |wfiN\fi»|fi|cwfiwmxwnoHxæo|v_fiNN|m|NAxmvwww 457 954 93 uofißflammfi pxcømpflwew .ufimmäsflamx _mnæwcomHøwcflflHumNm|H|oxo|~ nßdcflšmmwæuwomfiæcmwflm|~1NdcflEmNAæc0QumxAwæcfiu «m~wmfi@|«|oxofl@|m_~«H»ßw|«~NNNw«m|\¿+Vmm\ mnfinflmwfiwwcmw _uo>mH ßxcømvfiwsm .ßfimmsufiñmx _maamcomHømcfløfluwNm|fi|0X0|~|NdQfiEmN4>u |mom|ÅaæøwmfixouflæslwvNdcflëmmææconumxAflæcfiu «m~mmflm|«|oxofiø|m_N|fl>vw|«.wNN\|m|\Åxmvmm\ mflflcawwnwmcmm .oooww ßxfiømuflwem _^H"HV »ßwøwn .pflmmaøfiflmx muhmcowfismcfløfluwumlfiaøxonN|NdcflEm\A>u0um |NddfiEfi\Hx0uwOxo|N|a>uwEna|^flXO#wHæumEflø «H_H,|m~^H>HoNm«»|«|o=flam|~vuæ HH »Hmmm muæmxfluvwnwwcwnflxouøæznwa |NdcflEmNA%conHmxNA%cflumu0mflm|Hlmdnfläm |^qwH»»wefl>=w««w|<|oxofl@|m.mNm\Lx|Amv mumm lxfiuumcmflflmxmcoaxæouw.H|NdnflEmNA>:0QHæx |^H>=HNm~w@fim|fi|oxoflw|m.~|fi>»w|«~NwLx|Amv mnæmxfißuwcmnøw|N|NUcflEmNäæ:onuWx |^H>cflnmuwmHm|H|0xofl@|m_N|Hmuw|«wNNnK|^+v muæmxflupm ncmmcmnfixouuæcavumvzflfimmawaoaumxAfiæc |fi~m»w@«m|H|oxo«c|m.~|H»»w\««N\1a\Amv mnæmxfluumfiommHv|«|NdcflEflNHx0um0xo|m «H>»wa|H|^fixo»@fi>»wefl@|H_HV|~m~|e|øa«am|N H ßfimmm .æOa .ßOfi .wOfi .mOH .wOfi mnficfiwwhmflflßm _Uooø~ uxflflmvfiwšw ~uHmmE5«fimx .øummcowaømcflw lflumNm|H|0X0|N|NdnflEwNH>uwumNd:flEfiAfixoflhucmm loflxæoww.~»Ho~«fi»|«|o=fiem»-N\rm|\^NVmm\ mnflnflwwuwøqmw .uomfiflfofifl uxusmuflmam muäflmâfldflufi ~ NHäwCOMHDmfiflflflflüNmu-HIOXOIN |NdnflEmN4æuwommdnflëflmwxoum^fixouwEH>swuvnwuøxo |~1H>»we|fiNN^~»HoN«H»|«|o=flem»~fiN\fmJwÄN.mmw mfiflcamfl nuwwcmm ~U Omm uxcnmuflwëm ßufimmëflflflmx .muæm asomfiømnflu uwumxH|NdcHEm\Amuw0mflæcmm|NdcflEm |Nææconumxmaæcflwflflommmfiâfl1HxwdcfiëmAcmflmumë nflaaflwfiuamfq«N1m|0xo|~NnNN\|m|oxo|~,N»xm.mn\ mcflcflwwuwwcwm .uowmw uxcømuflmëm .uflmmäøflflmx .muæwnouflflmnfløfluwumnfiuoxolN|NdGfiEm\AMumumaæcmw aNG=fiEæNa»sonumz\A>cH@«HoNmwflëflnfluoxoxNnwdcfläm |m:w~>»wa^fl»=w«fixo»@>:|««N\|mNNNmwrm|N@xm~www mcficflmm luwwcmm ~U maa uxcsmufiwëm .uflmmšsfiflmx .muam lnømfldmcww umumlaloxonNukdnflñmmæhumomAocflšfi |flxo=w«^^H>Ho~m«p|«|0uflem«~«N\-m-N~N.www mcflcflmflumwcmm .uommfl uxcsmufimëw .ufimwänfifimx .muæmcowfism xcfiufiumumzflnoxonN|Nd=fiEmN4>uwom\d:flEw^Hxoum |fl>»we|H~N^H>Ho~mfl»|«|o:«em»Nv\N|m|mANvmm\ 94 457 954 mH>mx«»»mHo~«H»»«- zmwcflefiAfixoflmucmmofixæofiïb|o=«Em|w|^mV nuæmxfiuuwflonmfluuw|NdcflEfi\AxøuwAflxouwë lfimcmwv|Nxoxolm|HäuwE|fiN\R¶T0:flEm|m|.NV muæmxfluumcmmcwn |\d:«EnmAhn0numxNA>:H©flH0NmwHE«|a|NGGflEm IÅcmaaumâfiæaflflfluämlww\|m|oxo|flNNNnxï^mv mummxfluuwcwm:wQ|\oc«Em |N4äa0nHmx\4æ:HuflH0Nm@flEfl|H|0X0|wnndcflâm Jfiøwfiwwws^H»=w«flxo~ø>=|«~N\|mNm\L«|fimv «»»m1flu»w |fi0~mfi»|w|^o:flE«fixo:wmvLxuocflñmnmaÅNV mu>mxfiuuwHoNmH» nwnmdcfiäfiAflxouwflæumënflwNnK|ocfiEm|N|^Nv .wflfi .maa .NHH .flfla .Oflfi .QOH W wafløfiwønwøcmw .uoom~ uxcnm |#HmEm ßufimmfivflamx _mummcomaømcfløfiumumnfiioxo INwmdflfišmmaæumumNd:flEfl\AxoNAæconumxAocfiüm |H>uw.NN\^H»HoNm«»|«|ocfle~|~vN\|m|N»~.www msflcamuumwcmm .uomma uxaflmufimëm .ufimwäøfiflmx .duæmcomflsmcflu lfluwumlfiaøxoxN|\dc«EmNA>uwomH>awwNduflEßNa>c zonumxumxæcflwflfloumwflëfinfiroxouw|Nd:fiEmNdmøflH>: -wmßfirv saæflaå. -,,$.-Q.Q.Q-m-wf.m. WG mcflcflmu nnwflamm .OO«wN uxcflmuflmšm ßßflmmäøfifidx .muæmcow afiflmøflwfiwwwmlfinoxoxmnwdcflämmäæuwumfifiæcwwfixon nwæscvvmdnflEmN4>coQumx\4æcfløfiHoumwfläfluHnøxo |NJNGGflEmfiflwaæuwëaæamusmumwN|mNNNNNrm|^mmv 457 954 .U oo~|mmH pxaømuflwem ~uHmmEdfiHmx _muæmcøwfimmcfiøfluwumufizmdcfläm |NfimflmumHhfiwwN@c«EmNA>floQumx\4æcflwfifioumøflñflnfi 1Aflaumäfiæcmwv|maoxoumNNNNN|m|oxox~NAxmVwmN maficflmwnwuanw .uo-~1>H~ uxcflaufimëm .ufimmšflfiamx .wuæmcowflømcfluflumum IH|NdcflEøNAmßmUmfiwnmwNd:flEmNAæGoQumxAflwnflfl |fiHoNmflfiEfl|H|Hænww|mnoxonmwNNN\rm|0xo|~|^mmv 95 mcflfiawwuwøcmm .UOOAH uxcflmßflmfim ~uHømEflHHmx .mumwcowfiflmcfiflfiu |wNm|H|0%o|N|NdGHEß^HMßm0ma>:mHDw|~w\|m|Åmv mqfiqfiwvumøcww .U omm wxaøm nvflwšm .uamwäøflflmx _mHhmc0masw:wwfiuwNm|H| J\GcflEmNA>umumNUcHEmNAmuwomNdcflåmmaæconumx 1AflxouweflæamuyNNN\A>awmN\rm«oxo|~|N»xmVwww muæwxfiupwfioumflß|««\waHefi|Nwxo |NAæcoQnmxAocHEm~>umvNNNLKTocflEø|~|ANV mummxfluuwcmmcwnwfiaflëm lmwæconumxmfihcflflfiAowmwfiëfluanoxoumumdcflñmfidmfl |fiH>a@mo»m|~|^H>=m»ø«|~v-mNwrmmmwbs\Am. mummxfiuumcmmcmn lfixouflæzl<|\0GHEmN4æ:onHmx\A>cfløHHonmuflëfl Ifiloxoamlmdflfiñm^:wHæuwEa>:mu5m|~wN|mNNN\K muæmxflußmcwwamßmdcfiëmmwæconnøxwæædflfl |HHo~mwfiefl|H|^fi>»@aHæ=w«.|m|oxo|mNNN|»v^mv mnamxflflumcmmcmQ\dcflEmhAæ:0numM |^~>=fiøfiHo~@w«efi|H|H>cw«|m|oxo|~VN\nx|Amy mnmmxfluvwcmnfluxw mnæmxflßumflwmcwn\oGflEmNA>umNdcflEm |NAæcoQnmxAfix0umEH>GwmyNN|N|0x0|fiNNkæF^mv .HNH .ONH .maa .maa .wflfi .maa .maa mcflaflwmnwøcwm .oomww »xøsm fluflmšm _uHmwE5flHmM _mnhmcomasmcflufiuwumuHnoxoxmn |Nö:HEm\A>uwumH>:mwNdcHEm\4humom\dcflëmßææconumx |\«xo»we^H>=w«flxo»ws1«~N\\NNmw|m-N^xmvwww wcfinfimwuwønmw .U omflnmmfl uxcsmufiwäm .ufimmëøflfimx .muæmcouflflwmfiwflßwnm _ 1fi|oxo|N|NdflflEmN4æumumH>awmNd:flEmN4møonumx 6 JxfiwnflwflHøNmwfiefl|H|oxo|~|H>»w|mvu<æN|m|n~amvwww 9 _ mcficfimunwwnmm .uømmfl vxcsmuflwäw .uflmwëøflflmx _muæmcomfismcfiwfluwuwlfiuoxonw|NO:«Em\A>umumH>cwu |NdGHEmmH>:0AHmxNAMnflvfiHoNmwfiEfl|H|oxo|N|md:«Em lmcmfiæuwe^onfiemfiaumaflw~N\rm\NNN\|m|mAxmVwww mnflaflwønwwawm .U omfl uxaømufiwew ~uHmmE:flHmx _mnämcowfiflmnflwHumumuflloxonNlonflëm |mA>»@um^o=Hsflflxo»wav^H>nwHs«|-N\|m|m¿NVmm\ . ßmfizmwfi pxqømßflmaw .ßfimw |E:HHmx _mnæwcomammnflwflumnmnflaoxo|N|Nocfinm a\A>øwomHæcmmNdcfiEm\4>connmx\Aæcflumuwmfim |H»0xofiw-m.N|^H>p@H»»we«H.|~NNNN\|m|N4xmVwm\ mcfiflflmfluwwßßm _UOmmH|æmfi uxcflßufimëw .uflmw näsflflmx _mummcowflßmzflwflumwmnfinoxonNnmdcfišm |\A>umomH>cww\O:HEm\a>:0nHmxNAæcHNmummfimufi |^H>umEH>:wwv|v|oX0flU|m_wNNNNN|m|N¿xmVmfl\ 457 954 _ muæmxfiuum |cmm:wn\dcflEm\w>ømomNd:flEmNA>connmx lmäxoamë^HäGwwfiMOumE|«wNNNNNhXrAmv mnæmxfluumcwm:wnNdnflEmNA>conumxÄfiæn nfiwflfionmwflâflnflnoxonwxfimumumwN\nKr^mv mnæmxfluumcwmcmnxdcfiäßmaæc |øn~mgNa>aflu@Ho~wøflafl1~|oxo|~Imacflsm |\=@H>»ms^o=fiamH»»wæflu~N\|mNN\Lxr.mv muæmxfluumcmuøunmnÄocfläflflxoumävušnfiwv mnwmgflpuw |cwmcmnNdc«EmNAæ:oQumxNAh:fiNmnwmHm nfixowoflusm-|^HæumH>uwE\fiV|flNNNnKT^mv muæwxflpuw | æconumx hcflumfiwmflm -H-mwwmwwmwwwwfifioxofimrfi 3.3? š .ßmfl .wwfi .mwfi .ewa .mmfi .NNH xhfwwifluwunßi \ \ IH WW wcfi: afiwwuwwcnm .uommwxomm uxcsmuflmëm .uflmmëøflamx _muæmdowHømcflmflumNm:H|o%o|N|NUfifiEmNA>conHmx |ñfiæaommxomfll«|H>cww|m|H>ßwEomwNN|m|Amy 457 954 .uoomflamfiå Éšáufiwem ...åmmesflmx _mnæmøowfldmcflwflvmam|H|ox0|~|NdflHEmNAmu0øm 1NdøflEHNwx0um0xocNnflævwälfllAflxøßwëfimømm uflw.|mN\^H>Ho~mfi»|«|o=Ham|~fiN\rm»N4N.www wnfiaflwugwwnww .u oo~|mmH ßxøsmvfiwew _»Hmw 7 nñflflfimx _muæmcowHmmcfløflumNm|H|0xo|N|NdcflEm umaæumomamcwwNdc«EmNAmnonuøxwflæaflwflaonmøfläfl |H|oxo|~|^H>»oH»ums|Hv|mwNNNN|m|mAxm.mmm mnflcawwuwøflßm .U mo~|Ho~ »xaøwpfiwew .vflmwaøfifiwx _«»>w |cowHømGfl©«umNm|a|0xO|~|NdcflEmNA>u®omAflæcmw uflxouøæzawVNdaflñmmaæconnmxnaæcflNmuwmflmsfi |oxoflø|m.w|^H>uwHæumE|Hv|fiNNNNN|m|NAxMvmmfl .mcflafiwwuwøcww _uooH~ uxcsmvfiwaw _»Hww aësfifimx _mnæwnowfiømcfløfl»mum|H|oxo|~|NönfiEm nmaæuwoæ^HmHoNmfiu|«|o:flEm|~vNdcfiäflÄflxouw |ox0|~|H>uwEfi©|H~H|ocflEm|mwNNN|mJN^NVmmfl mcflcawøuwwcwm .uømßfl uxcømufimšm ~uHmmEøHHwx .mnæmcowfløwcflw sfiuwum|fl|NdnflEmNA>umumfi>cmwNd:flEmNfl>c0QHmx |NH>cH®fiHoumwflšflaflnxdcfifimmaæconnmxAfixouws åäfi <\-Toxo- Q\\§¿Y0x0|~šfmv .MQ mumwfiæxonumxfiONmxomfl|«|Hæcww|m|HæumE|m mnæm xxflvuwflommfiulwumwcflñflmwwouwoxolmuaæuwâ |H|^flxouwEH>flmmfiøv|mN\CRTocfiEm|m|^Nv mu>mx«u»w |ammcwQ\0nflEmm4æøonumx\Aædfi©flfi0Nmøflšfi |H|oxo|~»^fi>»mH>»me|H.|mNxNL«|^mv muæmxflußmcwmflwn uflxonøænuw|NdøflEm\4æ:oQumx\H>:flNmuwmflm |H|ox0«w|m_N-^H>»wH»»ws|Hv»wNm\Lxr^mV mH>mxfiuum~oNm«u|w|Ndc«EfiAfixovmoxo |~|H>pwaflw|H.H|on«em|~vNhx|o=fiem|~|hav muæmxfluumcmmcmn |NdGHEmmA>:oQnwxNA>:flwflfloumflfiñfilflukdcflëm |\A>coQumxAflxoumäfiæcwwwN\|m|oNo|mNNNuKï^mV .mma .Nma .ana .OMH .mwfi .æmfi 457 954 se* Exemglen 134-135.

Pâ det i exempel 70 beskrivna sättet men med användning av de föreningar som anges i spalt I nedan i stället för Å3S(Z)7- -3-[I(2-amino-4-tiazolyl)j2É-(dífenylmetoxi)-2-oxoetox;7iminQ7- acetyljaminqj-2-oxo-1-azetidínsulfonsyra, kaliumsalt, erhålles de föreningar som anges i spalt II. 457 954 99 mcfiqfiwuuwøamw ~o omw vxcømuflwäm _uHmmESflHmx .mnæwcowflømaflflflwwnm |H|0xo|~|NdcHEmNA>umumH>cmmNdcfiEmNAMc0QHmx 1AHæcflwflfio~«@flafi|H|oxo»~|o=fie«|mvNNNw|««Amym wqflqfimwwwøcww .u mwfl @x=øm»flwaw ~^m"Hv ufimwšflflfimx ~muæmcoMH9mcflflfluwNm|H|0xO IN:NdcflëmNAæuwumNdcflEflN4xcumEÄoflufiæuwšv1 |fix0n»«#N\^H>Ho~mH»|@|o=flam|~fixwrmlwäwvwww HH ßfimmw ^wNH Hmmämxw wwv ufimwëøflfimx .muæmcowflsmcfløfluwumafi |Nd:flEmNA>uwumH»cmmNdcfiEmNHæc0nHmxNA>n nfløflHoumøwäwufinmdcfiëmkaæconumxnÅflxouwñ aaæcwuwN\rm|0xO|mNNNNN|m|oxO|N|NAxMVmm\ ^m> flwgëmxw www .ufimmëøfifimx .muæmaowflflmcfiøflumumnfluoxo |~|NdcHEmNAæumumfidflfiâfimflxoumoxoum| 1^o«pH>»@sV|H|^flxo»mH>»wafl@|~_H,:www |^H>Ho-fl»|«|oafiam|-m\|m|N^NVwww H »Hmmm .mmfl .wmfi 457 954 100 Exemgel 136 [3d(Z),4a]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)mmetoxiimino)acetyl]amino]- -4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 51,8 mg (cis)-4-metyl-2-oxo-3-[[(feny1metoxi)- karbonyl]amino]-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt och 51 mg tetra-n-butylammoniumbisulfat i 5 ml vatten extraheras med metylenklorid (fyra 10 ml-portioner) för erhâllning av 81 mg olja. Denna omröres i en atmosfär i väte i två timmar med 40 mg 10 % palladium på kol i 4 ml dimetylformamid. Katalysatorn avfiltras och tvättas med 1 ml dimetylformamid. Filtratet och tvättvätskorna kombineras och omröres i ungefär 16 timmar med 31 mg (Z)-2-amino-a-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra, 27 mg N-hydroxibensotriazol och 31,5 mg dicyklohexylkarbodiimid.

Lösningen indunstas i vakuum och återstoden tritureras med 3 ml aceton. Den erhållna uppslamningen centrifugeras och vätskan behandlas med 51 mg kaliumperfluorbutansulfonat. Ut- spädning med 5 ml eter och filtrering ger en fast substans.

Kromatografi på HP-20 AG (40 ml) ger Rydon-positivt material i fraktioner (20 ml) 3-5 (eluering med vatten). Indunstning och etertriturering ger 23 mg produkt såsom en hygroskopisk fast substans: Analys: N O S K: C1oH12 5 6 2 Beräknat: C 29,91 H 3,01 N 17,44 Funnet: C 29,30 H 3,31 N 16,66 NMR (020) 1,40 (sn, d, ;=7i, 3,97 (sn, s), 4,45 (ln, apparent pentet,j=7), 5,37 (lH, d, ;=7), 6,97 ppm (lH, S).

Exemgel 137. [3S-[3a(Z),4a]1-3-[[2-amino-4-tiazolyl)-metoxiimino)acetyl]-9 amino-4-mety1-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 201 mg (Z)-2-amino-of(metoxiimino)-4-tiazolättikE syra och 153 mg N-hydroxi-bensotriazolmonohydrat i 3 ml di- W metylformamid behandlas med 206 mg dicyklohexylkarbodiimid. å Blandningen omröres vid rumstemperatur i 20 minuter under i kväve och en lösning av 180 mg (35-cis)-3-amino-4-metyl-2- f oxo-l-azetidinsulfonsyra och 0,14 ml trietylamin i 2 ml dimetyl- formamid tillsättes (en ytterligare ml dimetylformamid an- 457 954 101 vändes för sköljning) och blandningen omröres i ungefär 16 timmar. Uppslamningen indunstas i vakuum, tritureras med 12 ml aceton, centrifugeras och vätskan behandlas med 338 mg kalium- perfluorbutansulfonat. Utspädning med 10 ml eter och filtrering ger en fast produkt, som kromatograferas på 200 ml HP-20-harts och eluering med vatten. Fraktioner (20 ml vardera) 18-30 kom- bineras och lyofiliseras för erhållning av 274 mg av titel- föreningen i form av en hygroskopisk fast substans.

Analys: Cl0Hl2N5O6S2K.

Beräknat: C 29,91 H 3,01 N 17,44 Funnet: C 30,03 H 3,21 N 17,06 NMR (D20) 1,40 (an, a, J=s,s), 3,98 (an, s), 4,48 (in, a av t, J=e,4, 5,5), 5,36 (ln, a, ,=s,s), 6,97 (in, s).

Exemgel ]33_3;3 Pâ det i exempel 137 beskrivna sättet men med användning av (35-trans)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra i stället för (3S-cis)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra och de syror som anges i spalt I i stället för (Z)-2-aminowflr (metoxiimino)-4-tiazolättiksyra, ger de föreningar som anges i spalt II. 7 mflflcfiwfluwwcwm .Uommfl uxcsmuflmëm .uflmwñnflflmx ~mn>m:owfism unflwflumnmlH|oxo|NlaæuwE|<|N0øflEmNAæuwumaacwflu |wJ\dcfiEmAaæamomoxoonflëmwNNN|m|\NH$_^+wxfi\|mm\ u omm uxcsmufimëw \uHmmEøflHøx .mn>m:owHsm:fi©fluwNm|«| noxoxN1H>uwE|v|\@nHEmNAæumumAocflëfiwxouwæsv 1^fl>HoNmflu|v|o:flEm|~wN\rm|\Nn+_^NwKm\|mm\ l02 mcflaflwwuwwnæw ~u ßßfi uxcsmßfimëm ~uHøwE:flHmx .muæmnoufiømcflwfl wnmlfiuoxolmlfixuwëavnwwcflëm :NAæuwomflænmumdcflšmkææcønnmxAfiæcflnmuwmfim |fi|oxoflu|m_~|H>»w|««NNmN|m|\Nwe_^xm«xm\1mmw mcflcfimflumfl :mmm .oomfim uxcømuflmëw _uHmmEflflHmx _mu>mcowH:m lflflvflumnmlaxoxonmnHæuwënw|N0:HEmNA>umomH>cmw |\OnfiEmNAæconumx\A>cflUHHonmwflëflnfiuoxouwnmdcflëm I^=mH>»waH>=m~=w|Nwwrmxwmmwfm«\Nw«_^xmu«mw|mmw HH »Hmmm 457 954 muæmxfluuwcwm uoflunmumøcflëm^amumomoxoo:HEmw\LKtA+v , «~>wxfi@»w |HoNmfi»|«|fiocfieflflxouuwnvh«|o=fism|~|^Nv muämxfluuwcwm:wANdc«EmNähc0numx |^H>:flumHwmflm|H|oxofifl|m.m|H>uw|wwNNLxT^mv muæmxflunwcwmcmn |N@cflEmN4>:onumMN4>cfløHHoumwfiEfl1H|oxo|N |Nd:flEmAcmfiæumäflæcmuswumwN|mNN\nX|^mV H uAm&m .avd .owfi .mmfl .æma 457 954 103 Exemgel 142. [ss-/søqm Aøjj-s-I! (2-am1no-4-t1azo1y1)fZï,1-a1mety1-2- -114-nitrofenyl)-metoxi7?2-oxoetoxi]-iminQ]-acetyl]aminQY- -4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Till en uppslamning av (3S-trans)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra (O,36 g, jämför exempel 139) i torr dimetylformamid (30 ml) under kväve vid 26°C sättes trietyl- amin (309,al). Efter ungefär 5 minuter erhålles en klar lös- ning och (Z)-2-aminoflxrjïï,l-dimetyl-2-[Y4-nitrofenyl)- metoxi]¥2-oxoetoxi7-iminqj-4-tiazolättiksyra (O,8l6 g) till- sättes âtföljt av N-hydroxibensotriazol (O,334 g) och dicyklo- hexylkarbodiimid (O,453 g). Blandningen omröres i l2 timmar vid 26°C, varefter lösningsmedlet avlägsnas i vakuum och äter- stoden tritureras med aceton (30 ml). Efter omröring i 5 minuter avlägsnas fasta substanser och filtratet behandlas med kaliumperfluorbutansulfonat (3,68O g) i aceton (5 ml).

Tillsats av eter (ungefär 40 ml) ger en fällning, som till- varatages och torkas i vakuum (l,073 g; en andra skörd 0,066 g; totalt 1,14 g).

Analys: C20H2lN60loS2K°l H20 Beräknat: C 38,33 H 3,70 N 13,41 S 10,23 K 6,24 Funnet: C 38,30 H 3,63 N l3,4l S 9,88 K 5,98 Exemgel 153- ÅÉQÅZ),4§Zf31[Zï2-amino-4-tiazolyl)ÅRl-karboxi-l-metyletoxi)-g iminQ7acetyl]aminq]-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, i kaliumsalt (l:2) w A) ¿30UZ),éqfl-3-12?-amino-4-tiazolyl)ZTl-difenylmetoxi- karbonyl-1-metyletoxi)iminqíacetylïaminqf-4-metyl-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av (cis)-4-metyl-2-oxo-3-jjïfenylmetoxi)karbonylí- aminqf-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (201 mg; framställt av motsvarande kaliumsalt enligt exempel 98 såsom beskrives i exempel 136) i 5 ml dimetylformamid omröres med 90 mg 10% palladium på kalciumkarbonat i en atmosfär av väte i 2 timmar. Uppslamningen filtreras och filtratet omröres i ungefär 16 timmar med 146 mg (Z)-2-aminoflmyll-difenylmetoxi- _ karbonyl-l-metyletoxi)iminqf-4-tiazolättiksyra, 73 mg dicyklof 457 954 104 hexylkarbodiimid och 51 mg N-hydroxibensotriazol under kväve.

Uppslamningen indunstas i vakuum och tritureras med 4 ml ace- ton. Uppslamningen filtreras och den fasta substansen tvättas tvâ gånger med 2 ml-portioner aceton. Filtxatet och tvätt- vätskorna kombineras och behandlas med 113 mg kaliumperfluor- butansulfonat. Utspädning med 24 ml eter ger en fast substans, som isoleras genom centrifugering och tvättas tre gånger med- eter för erhâllning av 186 mg av titelföreningen.

B) [3u(Z),4a]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[l-karboxi-l-metyletoxi]- imino]acetyl]amino]-2-metyl-4-oxo-l- azetidinsulfonsyra, kalium- salt (l:2) En uppslamning av 186 mg [3a(Z),4u]-3-[[2-amino-4-tiazolyl)[(1- difenylmetoxikarbonyl-l-metyletoxi)imino]acetyl]amino]-4-metyl- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt i 0,6 ml destillerad I anisol kyles till -l2°C och 3,0 ml destillerad trifluorättik- syra (vid -lO°C) tillsättes. Lösningen omröres 10 minuter och l2 ml eter tillsättes åtföljt av 6 ml hexan. Efter 5 minuter vid -ICOC och omröring i 15 minuter vid rumstemperatur isoleras den fasta substansen genom centrifugering och tvättas fyra Ä gånger med eter för erhâllning av 141 mg material. Detta torkas i vakuum, pulveriseras, löses i 5 ml kallt vatten och inställes omedelbart på pH 5,6 med O,4N kaliumhydroxid. Lösningen pâföres en 100 ml HP-ZOAG-kolonn och elueras med vatten. Fraktioner (10 ml) 8-12 kombineras och indunstas i vakuum (acetonitril tillsättes tregånger och indunstas). Återstoden tritureras med' eter för erhållning av 101,7 mg produkt i form av en hygro- É skopiskt fast substans.

Analys: Cl3Hl5N O S '2K: s s 2 i Beräknat: c 3ø,s1 n 2,95 N 13,69 s 12,53 x 15,28 funnen c 30,11 n 3,26 N 13,35 s 12,12 x 1s,o2 Exemgel 144. [38-[3a(Z),4B]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)-[ll-karboxi-l- metyletoxi)imino]acetyl]amino]-4-metyl-2-oxo- ÉXEÉ [38-[3a(Z),4B]]-3~[[(2-amino-4-tiazolyl)-[(l-karboxi-l-metyl- etoxi)imino]acetyl]amino]-4-metyl-2-oxo-l- l-azetidinsu1fon- azetidinsulfonsyra, dikaliumsalt (87,3 mg, jämför exempel 103) löses i l,38 ml 4574 95-4 105 vatten, kyles till OOC, behandlas med 0,34 ml lN klorvätesyra och de bildade kristallerna separeras genom centrifugering.

Den våta fasta substansen löses i metanol, filtreras, koncen- treras till ungefär 0,5 ml och blandas med l ml vatten för erhâllning av 55,9 mg av titelföreningen.

Exemoel 145. [35-[3a(Z),4B]]-3-[[(2~amino-4-tiazolyl)[(l-karboxi-l-mety1- etoxi)imino]-4-mety1-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, natriumsalt Ett 99,7 mg prov av [35-[3G(Z)1491]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)- [(1-karboxi-1-metyletoxi)imino]acetyl]amino]-4-metyl-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra blandas med 0,207 ml lN natriumhydroxid och den erhållna blandningen värmes försiktigt för lösning av kvarvarande fast substans. Vatten avlägsnas azeotropiskt med acetonitril och återstoden kristalliseras ur en blandning av 0,5 ml metanol (för lösning av återstoden) och 1 ml aceto- nitril för erhâllning av 81,8 mg fast substans. En andra om- kristallisation ur 0,8 ml metanol ger 47,9 mg, en tredje ur 0,24 ml metanol och 0,24 ml absolut etanol ger 44,8 mg och en fjärde ur 0,225 ml metanol och 0,225 ml absolut etanol ger 38,8 mg. Den fasta substansen torkas vid 20°C och 0,01 mm Hg i 18 timmar och ekvilibreras därefter med atmosfärisk fuktig- het i 24 timmar för erhâllning av 40,9 mg av titelföreningen.

Exemgel 146. _ [3S-[3a(Z),4ß]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(l-karboxi-l-metyl- étoxi)imino]-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, dinatrium- .S333 Ett 3,00 g prov av [38-[3a(Z),4B]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)- -[(1-karboxi-1-metyletoxi)imino]acetyllamino]-4-metyl-2-oxo- -l-azetidinsulfonsyra (jämför exempel 144) suspenderas i 30 ml vatten och titreras med lN natriumhydroxid, varvid er- fordras 12,0 ml för erhâllning av titeldinatriumsaltet. pH sänkes till 6,5 genom tillsats av något Dowex SOW-X2 (H+-form). blandningen filtreras och filtratet utspädes till 66,3 g med vatten. En 6,63 g-andel uttages för andra ändamål. Det kvar- varande filtratet lyofiliseras för erhâllning av 2,38 g fast § substans. Partiell ekvilibrering (24 timmar) med atmosfäriskfi f 457 954 106 fuktighet ger 2,54 g av titelföreningen.

Exemgel 147-láâ.

På det sätt som beskrives i exempel 137 men med användning av de föreningar som anges i spalt I nedan i stället för (Z)-2- amino-a-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra erhålles föreningarna som anges i spalt II. 457 954 107 ufimmšflfiflmx _mnæmcowfiflmcflwfluwum|HuoxouN|H>uwE|«|Hocflëm zfiflævwomaæcwwHocfiëmmfiæconnmx^H>cfiNmuwmflm|H |oxofiw|m.N|Hmum|w~uHHH|m|H~d«.AxmvdmH|mmH vfimmëflflflmx _muhmcowaøwcwwfluwumnfiuoxo |N|fiMuwE|w|HO:flEm~aæuwUmHæcwmfioüfiëmlmaæc lonumx~H>cfl©flHONmUflE«|a|0Xo|N|Høüflšml^:wH |>»wefl>n~Hø«|~.H:mUHHHH|m|*Hu«_Axmvumufmm. mzfinflwuuwwcwm .Q amg uxcømufimew .ufimw ašflflamx .nmumwawvmšfiæmww ~mH>mcflEmnumx~Hæc |fl~muwmflm|H|oxofl@|m.m|Hfiæconumzfiocfiëmmfiwum |fi%flwm|fi|ox0|N|H0GflEm^ahGfi®fluwum|m|0mHøm |H|oxo|~|H»»we-«.H1~u~H|v.|HHu«..xmVum~-wm@ HH ßflmmw mummxfluuwcwmflmnlfionflëmHflæconumxfifiwa |flnmummflm|fl10xofl@|m.NlflæumuovHH|ö|^mv muæwxfluuwnwmcwn |HocflñmHflmflonumxHamøflwflfiommøflšflnoxøuw zfionfiew^cwH>»meA>c~»=«|~VH~.~|u|^m, muämxfluuwcwmcwnlfioflfiñm |fiH>conHmxfiHæGfiNmuwmflm|fl|_ocfiämfifiæaonumx |.fixoßwEH»cmm.Uu|«|0xofl@|m-@HH|d|^mv H »Hmmm .ana .ævfl .ßvfi 457 954 108 Exemgel 150. [3S-[3a(Z),4a]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(l-karboxi-l-metyl- etoxi)imino]acetyl]amino]-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (l:2) A) [3S-[3a(Z),4a]]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)-[(l-difenylmetoxi- karbonyl-l-metyletoxi)imino]-acetyl]amino]-4-metyl-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 440 mg (Z)-2-amino-a-[(l-karboxi-l-metyletoxi)-. imino]-4-tiazolättiksyra och 153 mg N-hydroxibensotriazol- É monohydrat i 3 ml dimetylformamid behandlas med 206 mg dicyklo- hexylkarbodiimid. Blandningen omröres vid rumstemperatur i 30 minuter under kväve och en lösning av 180 mg (3S-cis)-3- amino-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra och 0,14 ml trietylamin i 2 ml dimetylformamid tillsättes (en ytterligare ml dimetylformamid användes för sköljning) och blandningen omröres i ungefär 16 timar. Uppslamningen indunstas i vakuum och tritureras med 12 ml aceton. Uppslam- ningen filtreras och den fasta substansen tvättas med aceton (två 3 ml-portioner). Filtratet och tvättvätskorna kombineras och behandlas med 338 mg kaliumperfluorbutansulfonat. Utspäd- ning med 30 ml eter ger en gummiartad fast substans, som lång- samt stelnar. Den fasta substansen filtreras och tvättas med eter för erhâllning av 656 mg av titelföreningen.

B) [35-[3a(Z),4u]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)-[(l-karboxi-l- metyletoxi)iminolacetyllamino]-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (l:2) _ - En uppslamning av 656 mg [38-[3d(Z),4a]]-3-[[(2-amino-4-tiazofi lyl)[(l-difenylmetoxikarbonyl-1-metyletoxi)imino]acetyl]amino]fi -4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt 1 2,3 ml destid- lerad anisol kyles till -l2°C och ll,5 ml trifluorättiksyra š (i förväg kyld till -lO°C) tillsättes. Lösningen omröres i I 15minuter och'46 ml eter tillsättes åtföljt av 23 ml hexan. É Efter 5 minuter vid -l0°C och omröring i 15 minuter vid É rumstemperatur filtreras den fasta substansen och tvättas Q med eter för erhållning av 457 mg av en mycket hygroskopisk ' gummiartad substans. Denna löses i 6 ml kallt vatten och inställes omedelbart på pH 5,6 med O,4N kaliumhydroxidlösning.

Lösningen påföres en 200 ml HP-20-harts-kolonn och elueras'med 457 954 109 vatten. Fraktioner (50 ml vardera) 7-ll kombineras och lyo- filiseras för erhållning av 239 mg av titelföreningen såsom en fast substans.

Analys: Cl3Hl5O8N5S2K2'l/2 H20: Beräknat: C 29,99 H 3,10 N 13,45 S 12,32 Funnet: C 29,94 H 3,30 N 13,30 S 11,93 NMR (D20) 1,44 (BH, d, /=75), 1,46 (sn, s), 4,48 (in, a av tf J=75, 5.5), 5.34 (IH. d, J=5,5) 6,96 ppm (la, s).

Exemgel l5]. [3+(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)-acetyl]amino]- -4,4-dimetyl-2-oxc-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av N-hydroxibensotriazolhydrat (50 mg) och (z)-2- amino-a-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra (0,323 mmol) i 0,5 ml dimetylformamid behandlas med 67 mg dicyklohexylkarbodiimid under argon vid rumstemperatur. Den erhållna blandningen om- röres i en timme varefter (i)-3-amino-4,4-dimetyl-2-oxo-l- -azetidinsulfonsyra (57 mg) tillsättes såsom fast substans åtföljt av droppvis tillsats av trietyl- amin (0,05 ml). Reaktionsblandningen omröres vid rumstemperalh tur i l6 timmar. Dimetylformamiden avlägsnas under högvakuum vid 30°C och återstoden uppslammas i 4 ml aceton och filtreras.

Filterkakan tvättas med ytterligare 4 ml aceton och kaliumper- fluorbutansulfonat (85 mg) sättes till filtratet åtföljt av eter. Triturering av den erhållna gummiartade substansen med eter ger 40 mg av en brunaktig fast substans, som kromato- graferas på en 70 ml HP-2OAG-kolonn. Eluering med vatten ger 20 mg av titelföreningen i fraktioner (5 ml) 16-40 efter in- dunstning, triturering med 1:1 aceton/hexan och torkning, smältpunkt 22s°c (sönaerae1n1ng>.

Analys: CllHl4N5O6S2-K: 3 Beräknat: C 31,80 H 3,40 N 16,86 S 15,43 Funnet: C 29,47 H 3,48 N 14,98 S 13,35 ¿ J! 457 954 110 Exemgel 152. (i)-4,4-dimetyl-2-oxo-3-[(fenylacetyl)amino]-1-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt En lösning av N-hydroxibensotriazolhydrat (45 mg) och fenyl- ättiksyra (40 mg) i 0,5 ml dimetylformamid behandlas med dicyklohexylkarbodiimid (61 mg) under argon vid rumstempera- tur. Den erhållna blandningen omröres en timme och (i)-3- amino-4,4-dimetyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra (52 mg; jämför exempel 153) tillsättes såsom en fast substans åtföljt av trietylamin droppvis (0,04 ml). Reaktionsblandningen omröres vid rumstemperatur i 24 timmar. Dimetylformamiden avlägsnas under högvakuum vid 3006 och återstoden uppslammas i aceton och filtreras. Kaliumperfluorbutansulfonat sättes till fíltra- tet, eter tillsättes och blandningen kyles. Den erhållna fasta substansen tvättas med aceton, hexan och torkas för erhållning av titelföreningen såsom ett pulver.

Analys: C H N 0 SK:_ 13 15 2 5 Beräknat: C 44,55 H 4,32 N 8,00 S 9,15 K 11,16 Funnet: C 43,83 H 4,16 N 7,96 S 8,76 K 11,43 NMR (D20) 1,33 (S, 3H), 1,58 (S, 3H), 3,68 (S, 3H), 4,70 (S, lH), 7,56 ppm (bred S, SH). 457 954 lll Exemgel 153. (38-trans)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)oxoacetyl]-amino]-4-metyl- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Till en lösning av difenylfosfinylklorid (1,85 g) i torr dimetylformamid (15 ml) kyld i ett is/metanol-bad (-150 till -20°C) sättes (2-amino-4-tiazolyl)glyoxylsyra, trietyl- aminsalt (2,l4 g). Efter omröring 1 0,5 timme tillsättes en lösning av (38-trans)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra (l,O8 g) och trietylamin (l,92 ml) i torr dimetylformamid (5 ml) till den kalla blandade anhyd- ridlösningen och reaktionsblandningen omröres vid SOC i 24 timmar. Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum, den kvarvarande mörka oljan löses i vatten och kromatograferas på Dowex SOX- 2-400-harts (Ka-form, 200 ml). Efter eluering med vatten (15 mlffraktioner) tillvaratages den råa produkten i fraktioner 13-27 (3,37 g). Kromatografi på HP-20-harts (200 ml), eluering med vatten (15 ml-fraktioner) ger den önskade produkten i fraktioner 18-26. Avlägsning av vatten i vakuum ger titel- föreningen såsom ett amorft pulver.

Analys: C H N O S K (372,42): 9 9 4 6 2 Beräknat: C 29,02 H 2,44 N 15,04 S 17,22 K 10,50 Funnet: C 23,87 H 2,62 N 14,85 S 15,09 K 10,81 Exemgel 154. [3S(Rx)]-3*[[[(aminoacetyl)amino]fenylacetyl]amino]~2-oxo-l- azetidinsulfonsyra, kaliumsalt, trifluoracetat-(lzl)-salt Avskyddning av [3S(Rx)]-3-[[[[[[[(4-metoxifenyl)metoxi]- karbonyl]amino]acetyl]amino]fenylacetyllamino]-2-oxo-1-azeti- dinsulfonsyra-kaliumsalt (jämför exempel 127) med användning av trifluorättiksyra och anisol ger titelföreningen, smält- punkt l65°C, sönderdelning.

Exemgel 155. (38-trans)-3-metoxi-4-mety1-2-oxo-3-[[(fenylmetoxi)karbonyl]- amino]-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt A) (38-trans)-4-metyl-3-metoxi-2-oxo-4-I[(fenylmetoxi)karbo- ny1]amino]-azetidin E En lösning av 2,5 g (0,0l06 mol) (3R-irans)-4-metyl-2-oxo- a I I 1 i i i 457 954 ll2 -3[[(fenylmetoxi)karbonyl]amino]azetidin (framställd av d- treonin med 12,6 % utbyte väsentligen såsom beskrivits för den racemiska cis-isomeren i exempel 980) i 112 ml 4% borax i metanol kyles till OOC och 3,5 ml t-butylhypoklorit till- sättes. Efter 20 minuter uthälles lösningen i 1 liter kallt _ vatten och extraheras med två 750 ml-portioner kall etylace- _ tat. Det organiska skiktet tvättas med kallt vatten (två 750 ml-portioner), mättad saltlösning, torkas och indunstas för erhållning av 3,05 g rå N,N'-dikloramid.

En lösning av 426 mg litiummetoxid i 20 ml torr metanol kyles till -78°C och utspädes med 40 ml torr tetrahydrofuran.

Under 30 sekunder tillsättes en lösning av den ovannämnda kloramiden i 20 ml tetrahydrofuran (-7800) via en injektions- spruta. Efter 20 minuter vid -78°C tillsättes 2 ml vardera av ättiksyra och trimetylfosfit. Efter 40 minuter vid rums- temperatur uthälles lösningen i 500 ml vatten och extraheras med etylacetat (tvâ 300 ml-portioner). Det organiska skiktet tvättas med vatten, torkas och indunstas för erhâllning av en olja. Kromatografering på en 200 ml kiselgelkolonn och elue- ring med 3:1 kloroform/etylacetat ger totalt 1,25 g av titel- föreningen.

B) (38-trans)-3-metoxi-4-metyl-2-oxo-3-[[(feny1metoxi)karbo- nyl]amino]-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av 800 mg (0,00303 mol) (38-trans)-4-metyl-3-met- oxi-2-oxo-4-[[(fenylmetoxi)karbonyl]amino]-azetidin i 2 ml dimetylformamid kyles till OOC och 4 ml dimetylformamid/ svaveltrioxid-komplex tillsättes. Efter en timme vid 0°C och 4 timmar vid rumstemperatur uthälles lösningen i 80 ml- O,5M enbasiskt kaliumfosfat (inställt på pH 5,5) och extra- § heras med metylenklorid (tvâ 50 ml-portioner som bortkastas).š Det vattenhaltiga skiktet behandlas med 1,04 g tetrabutyl- É ammoniumsulfat och extraheras med diklormetan för erhållning E av 1,42 g olja. Denna löses i aceton och behandlas med l,04 g kaliumperfluorbutansulfonat i l0 ml aceton. Utspädning med I 250 ml eter och noggrann triturering av den oljeartade åter- stoden ger 584 mg rå produkt. Kromatografering på HP-20AG (zoo m1) ger 418 mg renaa produkt i fraktioner (ioo m1) isï-"is" .nu 457 9754 113 (eluering med l liter vatten och därefter 9:1 vatten/aceton).

Triturering av ll4 mg av detta material med eter ger 104 mg av ett analytiskt prov.

Analys: C H N 0 SK'H2O: 13 14 2 7 Beräknat: C 39,06 H 4,04 N 7,01 S 8,03 K 9,78 Funnet: C 38,91 H 3,62 N 6,91 S 8,06 K 9,51 NMR (DZO) 1,33 (3H, d, J=7), 3,46 (3H, S), 4,22 (2H, d av d, J=6), 5,18 (2H, S), 7,43 ppm (SH, S).

Exempel l§§¿ (35-trans)-3-metoxi-4-metyl~2-oxo-3-[(fenylacety1)amino]- -l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (38-trans)-3-amino-3-metoxi-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt framställes genom katalytiskt hydro- genering av (3S~trans)-3-metoxi-4-metyl-2-oxo-3-[I(fenyl- metoxi)karbonyl]amino]-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (jämför exempel 155) efter omvandling till tetrabutylammo- niumsaltet. På det i exempel 88 beskrivna sättet men med användning av (3S~trans)-3-amino-3-metoxi-4-metyl-2-oxo-l- azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt och fenylacetyl- klorid erhålles titelföreningen.

Analys: C H N O SK: 13 15 2 6 Beräknat: C 42,61 H 4,31 N 7,65 Funnet: C 39,§7 H 4,09 N 7,30 NMR (DZQ) 1,29 (BH, d, J=7), 3,45 (3H, S), 3,73 (2H, S), 4,36 (2H, d av d,J=6),7,38 ppm (SH, S).

Exempel 157. [3S-[3a(Z),4B]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[[2~(difenylmetoxi)- -2-oxoetoxi]iminolacetyl]amino]-2-metyl-4-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt Pâ det i exempel 138 beskrivna sättet men med användning av (Z)-2-amino-a-[[2-(difenylmetoxi)-2-oxoetoxi]imino]-4-tiazol-E ättiksyra i stället för (Z)-2-amino-a-(metoxiimino)-4-tiazol-É ättiksyra och först behandling av (3S-cis)-3-amino-4-metyl- E -2-oxo-l-azetidinsulfonsyran med trietylamin erhålles titel- föreningen, smältpunkt 155-l60°C, sönderdelning. 457 954 ll4 Exemgel 158. [38-[3d(Z),4ß]]-3-[[[(ka4boximetoxi)imino](2-amino-4-tiazo- lvl)acetyllamino]-4-mety1-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, di- kaliumdsalt r Avskyddning av [35-[3a(Z),4B]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[[2- (difenylmetoxi)-2-oxoetoxi]iminolacetyllaminol-2-metyl-4- oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (jämför exempel 151) med användning av trifluorättiksyra och anisol ger titel- föreningen, som sönderdelas vid ZÉOOC.

Exemgel 159. (s)-3-[tt(2,6-aiklor-4-pyridinyl)tiø]acety1]am1no]-2-oxo-1- azetidinsulfonsyra, kaliumsalt Acylering av (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, tetra- butylammoniumsalt (jämför exempel 6A) med [(2,6-diklor-4- pyridinyl)tio]ättiksyra, 4-nitrofenylester, âtföljt av be- handling med kaliumperfluorbutansulfonat ger titelföreningen, smältpunkt 212-2l4°c.

Exemgel 160; [3S(Rx)]-3-[[[[(4-amino-2,3-dioxo-1-piperazinyl)karbonyll- amino]fenylacetyl]amino]-4-metyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt [3S(Rx)]-[4-[[[2-[(4-metyl-2-oxo-l-sulfo-3-azetidfinylrmmfino]-É 2-oxo-l-fenyletyl]amino]-karbonyl]-2,3-dioxo-l-piperazinyl]- : karbamidsyra, fenylmetylešter, kaliumsalt (jämför exempel 147fi hydrogeneras med användning av gasformigt väte och 10 % palla; dium på kol såsom katalysatoi för erhållning av titelföre- ningen, smältpunkt l65°C, sönderdelning. ä Exemgel 161. [3S(Zy]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)][(l-karboxi-l-metyletoXik- f(l:2) ,[3S(Z)]-3-[L(2-amino-4-tiazolyl)[[2-(difenylmetoxi)-l,l-di- metyl-2-oxoetoxi]imino]acetyl]amino1-2-oxo-l-azetidinsulfon- å .imino]acetyl]amino]-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt \ | I 1 z syra, tetrabutylammoniumsalt (jämför exempel 28) avskyddas g med användning av trifluorättiksyra och anisol för erhâllning" av titelföreningen, smältpunkt l85°C, sönderdelning, efter" 4-5.? 954 115 omvandling till dinatriumsaltet med vattenlösning av natrium- hydrokid och rening på HP-20.

Exemgel 162-165- Pâ det i exempel ll beskrivna sättet men med användning av de syror som anges i spalt I i stället för (Z)-2-amino-a- -[[hydroxi(fenylmetoxi)fosfinyl]-metoxi]imino]-4-tiazolättik- syra erhålles föreningarna i spalt II. mcfisfiwwuwwcmw ~uooß~|mwN uxcømuflmäm wvfimmënfifimx _mH>mcomHsmcflø«uwnm|Hxoxo |w|fi0cflEm~fl>uwUmH>cmmfiøcfišmfifimconumxfiflæ lwlnflflflšfinæmmwlm.N~owwH>m^H>cflumumm«m |H|H>a~o«|@v«~|«xo~w>:|m._...-mn^mm. 116 mcflcfiwwnwøcnm ~UOm.wmw uxfiømaawëm ßufimmšdflfimx ~mu>m:0uH5m nnflflfiuwumnflaHocflämHfiæowcwnmfiæumëfiofifiëm ffifiwqonnmx^flxo»weH>=w«v-_|~..»m|oxo-~-^m, mcflcfiwu unwwcmm .U Omflnmmfi uxcsmufimëm ~uHmmE:fiHmx _mnæmnomfinmfiflflflumum|H|0xO|N|fiocflñmfifiæumom |HOGfiEfl~flX0uSn0x0zv|Åflxoumäflhsmwflwv lqu.^H>~oN@fl»|«|o=fia«|~V.H»~|H^N.wm_ .mcflcfimwnwwcnm _UoOmH uxcdm |uHmEm “ufimwësflfimx .øuæmcowflsmcflflfiumnmxfi |0XO|N|~0CflEfl^fl%OmCwnfiX0uwEfiU|m_NVH|m|^mv 457 954 HH »Hmmm mnæmxfluumcmmcmn sfionfiëmfifimconnmxfiHæuwncfiuflëfluæm |Hv|m.~Hoflfln>mAflæaflumuwmflm |H|~>e»øm|«.|~|fixouw>:|mH..|u .mwfl muæmmomcwnfifimumämonflëm |~fi>=onumx^flxo»wEH>cmwvHwzw .vmfi mu>mxfl»»wHo~mfl» lwlfiocflëflmflxøusnoxøvvu_flxouwE . |fi>cmm«uv|wHH|d|oafiEm|N|^N. mwfi mu>mwowcmnHxouwEfl©|@.m .wmfi H »Hmmm 457 954 117 Exemgel 166. (trans,Z)-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(l-karboxi-l-metyletoxi)- imino]acetyl]amino]-4-etyl-2-oxo~1-azetidinsulfonsyra, dika- liumsalt A) (trans,Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[(l-difenylmetoxikarbonyl- -l-metyletoxi)iminolacetyl]amino]-4-etyl-2-oxo-1-azetidinsul- fonsyra, dikaliumsalt (trans)-3-amino-4-etyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra (O,55 g) och 335 mg trietylamin löses i 50 ml torr dimetylformamid.

(Z)-2-amino-Q-[(l-difenylmetoxikarbonyl-l-metyletoxi)imino]- -4-tiazolättiksyra (l,l4 g) tillsättes under omröring vid OOC åtföljt av 450 mg hydroxibensotriazol och därefter 0,69 g dicyklohexylkarbodiimid. Efter omröring i ungefär 16 timmar vid 0°C evakueras kolven. Torr aceton (25 ml) sättes till den fasta substansen under omröring. Blandningen filtreras och 0,94 g kaliumperfluorbutansulfonaf sättes till filtratet åt- följt av 100 ml eter. Efter förvaring i en timme vid OOC filtreras den fasta substansen, tvättas med eter och torkas i vakuum för erhållning av 1,58 g av titelföreningen.

B) (trans, Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[(l-karboxi-1-metyl- etoxi)imino]acetyl]amino]-4-etyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, dikaliumsalt _ Till en suspension av 1,31 g (trans,Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyll+ I(1-difenylmetoxikarbonyl-l-metyletoxi)imino]acetyl]amino]- É' -4-etyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, dikaliumsalt i 10 ml ani- ä sol sättes 5 ml trifluorättiksyra under en 10-minutersperiod ' vid -l5°C. Efter omröring i 2 timmar vid -l0°C erhålles en f klar lösning. Vid -30°C tillsättes 80 ml torr eter och den erhållna fällningen filtreras och behandlas därefter med 5 ml _vatten. pH inställes pâ 5,5 med lN kaliumhydroxid vid OOC 'och blandningen filtreras för avlägsning av icke omvandlat ! _utgångsmaterial. Filtratet kromatograferas på HP-20 med vatten ïsåsom elueringsmedel. Lyofilisering ger l85 mg av titelförenin hen, smältpunkt l60°C, sönderdelning.

Exemgel 167. [3S(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[(4-hydroxi-4-oxobutoxi)- imino]acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt lv 457 954 118 Avskyddning av [3S(Z)]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)[[4-(dífenyl- metoxi)-4-oxobutoxi1ímino]acetyl]amino]-2-oxo-1-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt (jämför exempel 163) med användning av trifluorättiksyra och anisol ger títelföreningen, smält- punkt > 2oo°c .

Exemgel l6& (S)-3-I[2-(aminometyl)bensoyl]amino]-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, inre salt Avskyddning av (S)-2-oxo-3-[[2w[I[(fenylmetoxi)karbonyl]amino]- metyl]bensoyl]amino]-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt med användning av vätgas, palladium på kol och klorvätesyra ger titelföreningen, smältpunkt 162-l65°C.

Exemgel 169.

(S)-3-[[2-(4-formyl-l-piperazinyl)-5-hydroxipyrido[2,3-d]- Eyyimidin-6-yl]karbonyl]amino]-2-oxo-l-azetidínsulfonsyra, kaliumsalt (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammonium- salt (jämför exempel 6A) kopplas med 2-(4-formyl-l-piperazi- nyl)-5-hydroxl-6-I(4-nitrofenoxi)karbonyl]pyrido[2,3-dlpyrimi-2 din och behandlas med kaliumperfluorbutansulfonat i aceton I för erhållning av titelföreningen, smältpunkt 290°C, sönder- delning.

Exemgel l70. (35-trans)-a-{[(4-metyl-2-oxo-1-sulfo-3-azetidinyl)-amino]- karbonyllbensenättiksyra, dikaliumsalt (3S-trans)-3-amino-4-mety1-2-oxo-l-azetidínsulfonsyra kopplas med u-(karboxyl)bensenacetylklorid och behandlas med trietylamin och kaliumperfluorbutansulfonata för erhållning av titelföreningen, smältpunkt l47°C, sönder- Édelning. 457 954 119 Exemgel l7I. [38-[3a(Z),4B]]-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)acetyl]- amino]-4-cyklohexyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt [35-trans]-3-amino-4 cyklohexyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra (O,25 g) löses i 30 ml torr dimetylformamid och 0,12 trietyl- amin under omröring. När en klar lösning erhållits tillsättes (Z)-2-amino-d-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra (0,2 g), 0,16 g hydroxibensotriazol och 0,42 g dicyklohexylkarbodiimid. Om- röringen fortsättes 48 timmar vid rumstemperatur. Den fällda urean avfiltreras och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum. Åter- stoden löses i lO ml aceton och 0,41 g kaliumperfluorbutan- sulfonat tillsättes. Efter tillsats av 50 ml eter fälles titel- föreningen och avfiltreras. Kolonnkromatografi med användning av HP-20 och vatten/aceton (9:l) såsom elueringsmedel ger 0,36 g produkt, smältpunkt 200-20500 (efter lyofilisering).

Exemgel 172. [35-[3d(z),4B]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(1-karboxi-1-metyl~ etoxi)imino]acetyl]amino]-4-cyklohexyl-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra, dikaliumsalt A) [38-[3a(Z),4ß]]-3-[{(2-amino-4-tiazolyl)[(1-difenylmetoxi:. karbonyl-l-metyletoxi)imino]acetyl]amino]-4-cyklohexyl-2-oxo- -l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt [35-trans]-3-amino-4-cyklohexyl-2*oxo-l-azetidinsulfonsyra (0,2 9) löses i 30 ml dimetylformamid och 0,09 g trietylamin under omröringq Hydroxibensotriazol (0,l2 g), 0,30 g (Z)-2-amino-d-[(l-difenylmetoxikarbonyl-l- metyletoxi)imino]-4-tiazolättiksyra och 0,33 g dicyklohexyl- karbodiimid tillsättes och omröringen vid rumstemperatur fortå sättes i 12 timmar. Den fällda urean avfiltreras och moder- ' luten indunstas till torrhet. Den kvarvarande oljan löses i '5 ml aceton, behandlas med 0,3 g kaliumperfluorbutansulfonat ioch uthälles i 100 ml eter under omröring. [3S-[3a(Z),4B]]- -3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(1-difenylmetoxikarbonyl-l-metyl- etoxi)imino]acetyllamino]-4-cyklohexyl-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, kaliumsalt (O,6l g) fälles och avfiltreras. 457 954 120 B) [35-[3a(z),4ß]]-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(l-karboxi-l- metyletoxi)imino]acetyl]amino]-4-cyklohexyl-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, dikaliumsalt [35-[3a(Z),4B]]-3-[E(2-amino-4-tiazolyl)[(l-difenylmetoxi- karbonyl-l-metyletoxi)imino]acetyl]amino]-4-cyklohexyl-2-oxo- -1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (0,6l g) suspenderas i 6 ml anisol, kyld till -l5°C och 5 ml trifluorättiksyra tilldroppas under omröring. Temperaturen upprätthâlles under en timme och sänkes därefter till -30oC. Ungefär 100 ml torr eter till- sättes vid sådan hastighet att temperaturen inte överskrider -lO°C. Den fällda föreningen avfiltreras och kromatograferas med användning av HP-20-harts och vatten/aceton (9:l) såsom elueringsmedel för erhållning av 0,3 g av titelföreningen, smältpunkt lll-l20°C, sönderdelning (efter lyofilisering).

Exemgel 173. [3S-[30,43]-4-cyklohexyl-3-[I[[[3-[(2-furanylmetylen)aminol- -2-oxo-1-imidazolidinyllkarbonyl]amino]fenylacetyllamino]-2 -oxo- -1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt [35-trans]-3-amino-4-cykloyexyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra (0,1 9) IÖSGS i en blandning av 30 ml torr dimetylformamid och 0,05 g trietylamin under omröring. [[[[(2-furanylmetylen)amino]-2-oxo-1-imidazolidinyl]karbonvl] aminolfenylättiksyra (O,l4 g), 0,06 g hydroxibensotriazol och 0,17 g dicyklohexylkarbodiimid tillsättes och lösningen omröres i 5 dagar vid rumstemperatur. Lösningsmedlet avlägsnas i vakuum, återstoden löses i'l0 ml aceton och den fällda urean: avfiltreras. Moderluten omröres med 0,15 g kaliumperfluorbutanf sulfonat och utspädes med 50 ml eter. Fällningen filtrenas och kromatograferas med HP-20 i s e -harts med användning av vatten/É aceton (9:l) såsom elueringsmedel för erhållning av 0,14 g pro} dukt, smältpunkt 195-ZOOOC, sönderdelning (efter lyofiliseringp 457 '954 121 Exemgel l7§¿ [3S-[3a(Rx)3451]-4-cyklohexyl-3-[[3-(4-e§yl-2,3-dioxo-l- piperazinyl)-l,3-dioxo-2-fenylpropyllamino]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt [38-trans]-3-amino-4-cyklohexyl-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra (0,1 g) löses i 30 ml dimetylformamid och 0,5 g trietylamin under omröring. (R)-a-[[(4-etyl-2,3- dioxo-l-piperazinyl)karbonyl]amino]bensenättiksyra, 0,06 g hydroxibensotriazol och 0,17 g dicyklohexylkarbodiimid till- sättes och blandningen omröres i ungefär 16 timmar vid rums- temperatur. Lösningsmedlet avdestilleras i vakuum och den kvarvarande oljan löses i 10 ml aceton. Den fällda urean avfiltreras och moderluten omröres med 0.15 g kaliumper- fluorbutansulfonat och utspädes med 50 ml eter. Fällningen filtreras och kromatograferas med HP-20-harts med användning av vatten/aceton (9:l) såsom elueringsmedel för erhållning av 0,15 g av titelföreningen, smältpunkt 175-180°C (efter lyofilisering).

Exemgel 175. (trans,Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)acetyl]amino]- -4-etyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 156 beskrivna sättet, del A, men med använd- ning av (Z)-2-amino-d-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra i stället för (Z)-2-amino-u-[(l-difenylmetoxikarbonyl-1-metyletoxi)- imíno]-4-tiazolättiksyra ger titelföreningen, smältpunkt 19000, 7 sönderdelning.

Atriturering med eter ger 43 mg fast substans, som innehåller tungefär 20 % av en förorening innehållande en tetrabutylammo- 457 954 122 Exempel 176. (i)-(trans)-2-oxo-4-fenyl-3-[(fenylacetyl)amino]-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt A) (1)-trans-2-oxo-4-fenyl-3-I(fenylacetyl)amino]-l-azetidin- sulfonsyra, tetrabutylamoniumsalt En lösning av N-hydroxibensotriazolmonohydrat (52 mg) och fenylättiksyra (46 mg) i dimetylformamid (0,3 ml) behandlas med fast aicykiahexyikarbodiimia (70 mg) under argon vid o°c.

Kylbadet avlägsnas och den erhållnawblandningen omröres vid rumstemperatur i en timme. Efter utspädning med ytterligare dimetylformamid (0,3 ml) tillsättes (1)-(trans)-3-amino-2-oxo- -4-fenyl-l-azetidinsulfonsyra såsom en fast substans (75 mg, jämför exempel 181) åtföljt av trietylamin (0,05 ml) dropp- vis. Reaktionsblandningen omröres vid rumstemperatur i 23 timmar, filtreras och filterkakan tvättas med dimetylformamid.

Filtratet sättes till 20 ml enbasiskt kaliumfosfat (pH 4,5), blandningen tvättas med tre B ml-portioner etylactat (bort- kastas) och 105 mg tetrabutylammoniumbisulfat (O,3l mol) till- sättes: Den erhållna blandningen extraheras med diklormetan (tre 15 ml-portioner). Extrakten tvättas med 10% -ig natrium- kloridlösning (tvâ 15 ml -portioner), mättad natriumkloridlös- ning (10 ml) och torkas (Na2SO4). Filtrering och koncentre-_ ring i vakuum (efter upphettning vid 32°C under högvakuum) ger 165 mg olja; ungefär 40 % utgör den önskade föreningen och 60 % utgöres av dimetylformamid.

B) (i)-trans-2-oxo-4-fenyl-3-E(fenylacetyl)amino] -l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt En lösning av (1)-trans-2-oxo-4-fenyl-3- [(fenylacetyl)amino]- -l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt i 1,5 ml aceton behandlas med 41 mg (0,l2l mol) kaliumperfluorbutansulfonat.

Utspädning med 12 ml eter ger en glasartad substans som vid . ............._..-... ...r . . niumgrupp. Den fasta substansen löses i 50%-ig vattenlösning av aceton och föres genom ett Dowex 50W-X2 K° -fasjonbytar- harts (l ml).

Avlägsning av lösningsmedlet ger en fast sub- stans, som tvättas med aceton, hexan och torkas (60°C, hög- :A) N-hensyliden-2,4-dimetoxibensylamin .12,0 g 2,4-dimetoxibensylaminhydroklorid sättes till 100 ml -lN natriumhydroxidlösning och blandningen extraheras med 457 954 123 vakuum). Utbytet av titelföreningen är 15 mg.

Analys: Cl7Hl N O S'K: 5 2 5 Beräknat: C 51,23 H 3,80 N 7,03 S 8,05 K 9,81 Funnet: C 50,44 H 4,20 N 7,01 S 7,59 K 9,40 Exemgel 177. (1)-(trans,Z)-3-[(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)acetyl]- amino]-2-oxo-4-fenyl-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av N-hydroxibensotriazolhydrat (52 mg) och (Z)-2- amino-a-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra (69 mg) i dimetyl- formamid (0,3 ml) behandlas med fast dicyklohexylkarbodiimid under argon (70 mg) vid rumstemperatur. Den erhållna bland- ningen omröres i en timme, (i)-(trans)-3-amino-2-oxo-4-feny1- -l-azetidinsulfonsyra (75 mg; jämför exempel 181) tillsättes såsom en fast substans åtföljt av trietylamin droppvis (0,05 ml). Reaktionsblandningen omröres vid rumstemperatur i 23 timmar. Dimetylformamiden avlägsnas under högvakuum vid 30°C och återstoden tritureras med 2 ml aceton och filtreras.

Filterkakan tvättas med ytterligare aceton (tvâ 3 ml-portioner) och kaliumperfluorbutansulfonat (86 mg) sättas till fi1tratet._ Utspädning med 10 ml eter ger en gumiartad fast substans, som tritureras, tvättas med aceton och hexan för erhâllning av 82 mg av titelföreningen såsom en fast substans efter tork- ning.

Analys: C15Hl4N5O6S2-K Beräknat: C 40,26 H 3,16 -N 15,65 S 14,33 K 8,74 Funnet: C 38,60 H 3,19 N 15,07 S 13,87 K 7,5 Exemgel 178. _ (cis)-2-oxo-4-fenyl-3-[(fenylacetyl)amino]-1-azetidinsulfon- syra, kaliumsalt 125 ml etylacetat. Det organiska skiktet torkas över vatten- fritt natriumsulfat och befrias från lösningsmedel för erhåll- 457 954 124 ning av 10,2 g 2,4-dimetoxibensylamin såsom en olja.

Denna amin löses i 150 ml bensen; 6,47 g bensaldehyd och 0,6 g p-toluen- sulfonsyramonohydrat tillsättes. Blandningen upphettas under återflöde för avlägsning av vatten med en separator enligt Dean-Stark och på två timmar separerar den beräknade vatten- mängden (l,l ml). Blandningen kyles till rumstemperatur. Vid ytterligare kylning avsätter bensenlösningen en viss mängd fällning. Bensenen avlägsnas under förminskat tryck och 60 ml petroleumeter sättes till återstoden. Ett oljeartat skikt separeras med mera fällning. Bensen (lO ml) tillsättes för att göra skikten homogena och den kvarvarande fällningen filt- reras. Filtratet befrias från lösningsmedel för erhâllning av 14,2 g av titelföreningen i form av en olja.

B) (i)-(cis)-4-fenyl-1-(2,4-dimetoxibensyl)-2-oxo-3-azido- azetidin a-Azidoättiksyra (l,62 g) löses i 25 ml metylenklorid under kväve. Till denna lösning sättes 3,24 g trietylamin och 1,02 g (4,0 mmol) av iminen N-bensyliden-2,4-dimetoxibensylamin löst i 10 ml metylenklorid. Blandningen kyles på ett isbad och 3,36 g trifluorättiksyraanhydrid tillsättes långsamt; Löëw ningen blir mörkfärgad. Efter omröring i en timme på ett isbad värmes blandningen till rumstemperatur och omröres ytterligare l5 minuter. Lösningen tvättas därefter med vatten (60 ml), 5%-ig NaHCO3-lösning (två 50 ml-portioner) och 1N HCl-lösning (60 ml). Det organiska skiktet torkas över vattenfritt natriumf sulfat och befrias från lösningsmedel för erhållning av 1,72 g¿ rå produkt i form av en mörk gummiliknande substans. Substansen behandlas med träkol flera gånger och den erhållna bruna blandÉ ningen kromatograferas på 40 g kiselgel och elueras med 1:1 É petroleumeter/etylacetat. De kombinerade fraktionerna ger kri- staller vid hastig frysning på ett torris/aceton-bad. Med ; användning av denna såsom ympfrö omkristalliseras produkten ur petroleumeter/etylacetat för erhâllning av 817 mg av titel- föreningen såsom nålar, som smälter vid värmning till rums- § temperatur. 457 95422 125 C) (1)-(cis)-4-fenyl-2-oxo-3-azidoazetidin (1)-(cis)-4-fenyl-l-(2,4-dimetoxibensyl)-2-oxo-3-azidoazetidin (737 mg) löses i 25 ml acetonitril och upphettas till 80-83°C under kväve. Till den erhållna lösningen sättes under en tids- period av en timme 943 mg kaliumpersulfat och 570 mg kalium- monovätefosfat, båda lösta i 25 ml vatten. Efter tillsatsen upphettas blandningen ytterligare vid 80-83°C i 7 timmar.

Blandningen kyles och pH inställes på 6-7 genom tillsats av fast kaliummonovätefosfat. Det mesta av acetonitrilen avlägsnas under förminskat tryck och den erhållna blandningen extraheras med 60 ml kloroform. Kloroformskiktet tvättas med vatten (60 ml), torkas över vattenfritt natriumsulfat och befrias från lösningsmedel för erhållning av den råa produkten såsom en olja.

Den råa produkten kromatograferas pâ 40 g kiselgel och elue- ring med l:l petroleumeter/etylacetat. De kombinerade frak- tionerna ger kristaller och produkten omkristalliseras ur petroleumeter/etylacetat för erhållning av 267 mg av titel- föreningen.

D) (1)-(cis)-4-fenyl-2-oxo-3-azido-l-azetidinsulfonsyra, tetrabutylammoniumsalt (i)-(cis)-4-fenyl-2-oxo-3-azidoazetidin (162 mg) kyles till OOC under kväve och 3;5 ml ungefär 0,5M dimetylformamid/svavel- trioxid-komplexlösning i dimetylformamid tillsättes droppvis via en injektionsspruta. Den erhållna klara lösningen omröresw vid OOC i 15 minuter. Blandningen uthälles därefter i 50 ml ; O,5M lsöning av enbasiskt kaliumfosfat och tvättas med metylen- klorid (tre 50 ml-portioner). Tetra-n-butylammoniumbisulfat I (292 mg) sättes till vattenlösnfingen och blandningen extrahe- ras med metylenklorid (sex 50 ml-portioner). De förenade | metylenkloridskikten torkas över vattenfritt natriumsulfat : och befrias från lösningsmedel för erhâllning av 272 mg av titel- föreningen i form av en gummiartad substans. i l .så 457 954 126 E) (i)-(cis)-2-oxo-4-fenyl-3-[(fenylacetyl)amino]-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt (i)-(cis)-4-fenyl-2-oxo-3-azido-l-azetidinsulfonsyra, tetra- butylammoniumsalt (293 mg) löses i 4 ml etanol och hydrogene- ras med 80 mg platinaoxidkatalysator vid en atmosfär. Efter en timmes omröring avfiltrenas katalysatorn medelst ett Milli- pore-filter med Celite; några katalysatorpartiklar passerar genom filtret och ger ett svart filtrati Etanol avlägsnas under förminskat tryck och återstoden löses i 4 ml dimetyl- formamid. N-hydroxibensotriazolmonohydrat (81 mg), 78 mg fenylättiksyra och ll? mg dicyklohexylkarbodiimid tillsättes och blandningen omröres i ungefär 16 timmar under kväve. Upp- slamningen indunstas i vakuum och tritureras med 10 ml aceton.

Den erhållna uppslamningen filtreras genom ett Millipore-filter med en Celite-topp och det bruna filtratet behandlas med 193 mg ka1iumperfluorbutansulfonat. Vid tillsats av 20 ml eter sepa- rerar en gummiartad substans. Vätska avlägsnas och den gummi- artade substansen tvättas med eter. Substansen löses i 10 ml metanol. vid tillsats av eter bildas en ringa mängd fällning.

Blandningen filtreras och det färgade fíltratet behandlas med ytterligare eter. Den bildade fällningen filtreras och omkristalliseras tvâ gånger ur eter/metanol för erhållning av 26 mg av titelföreníngen.

Analys: Cl7Hl5O5N2SK'2H2O: Beräknat; c 46,99 n 4,41 N 6,45 Funnet: C 47,24 H 4,19 N 6,34 _amino]-2-oxo-4-(2-fenyletenyl)-1-azetidinsulfonsyra, kalium- 457 954 127 Exemgel 179 (cis,Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)-acetyl]amino]- 2-oxo-4-fenyl-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (cis)-2-oxo-4-fenyl-3-[(fenylacetyl)amino]-l~azetidinsulfon- syra, kaliumsalt (560 mg; jämför exempel 178, del D) löses i 5 ml etanol och hydrogeneras med 110 mg phatinaoxidkatalysator vid en atmosfär. Efter en timmes omröring avlägsnas katalysa- torn genom ett Millipore-filter med Celite; katalysatorpartik- lar passerar genom filtret till bildning av ett svart filtrat.

Etanol avlägsnas under förminskat tryck och återstoden löses i 4 ml dimetylformamid. N-hydroxibensotriazolmonohydrat (168 mg), 221 mg (Z)-2-amino-a-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra och 227 mg dicyklohexylkarbodiimid tillsättes och blandningen omröres i ungefär 16 timmar under kväve. Uppslamningen in- dunstas i vakuum och tritureras med 15 ml aceton. Den bildade uppslamningen filtreras genom ett Millipore-filter med Celite och filtratet behandlas med 372 mg kaliumperfluorbutansulfonat.

Vid tillsats av 15 ml eter separerar en gummiartad substans.

Vätska avlägsnas och den gummiartade substansen tvättas med eter. Substansen löses i 5 ml vatten och påföres 150 ml HP-20- harts och elueras med vatten. Fraktioner (30 ml vardera) 16-34 kombineras och lyofiliseras för erhâllning av 201 mg av titel- föreningen såsom en fast substans. h Analys: Cl5Hl406N5S2K'll/2H2O: Beräknae c 36,73 n 3,119 N 14,28 s 13,o1 x 7.97 Funnet: C 36,65 H 3,00 »N 13,99 S 13,48 K 8,30 ExæQell1g (i)~(cis,Z)-3-[[(2-amino-4-tiazolyl)(metoxiimino)acetyl]- E salt å :En lösning av 68 mg (Z)-2-amino-a-(metoxiimino)-4-tiazolättik4 syra och 51 mg N-hydroxibensotriazolmonohydrat 1 2 ml dimetyl formamid behandlas med 69 mg dicyklohexylkarbodiimid. Bland- § »tureras med aceton. Den överflytande vätskan behandlas med 'kaliumperfluorbutansulfonat (67 mg). Utspädning med eter 457 954 '1128 ningen omröres vid rumstemperatur i 30 minuter under kväve. (cis)-3-amino-2-oxo-4-(2-fenyletenyl)-1-azetidinsulfonsyra (90 mg; jämför exempel 186) och 34 mg trietylamin tillsättes ooh blandningen omröres i 20 timmar under kväve. Uppslamningen indunstas i vakuum och tritureras med 10 ml aceton. Uppslam- ningen filtreras och filtratet behandlas med 113 mg kaliumper- fluorbutansulfonat. Utspädning med 30 ml eter och filtrering ger 169 mg av en fast produkt, som löses i en ringa mängd av ungefär 10%-ig acetonitril/vatten och påföres på 34 ml HP-20-harts och elueras med 150 ml vatten, därefter 10%-ig aceton/vatten. Fraktioner (15 ml vardera) 16-19 kombineras och befrias från lösningsmedel för erhâllning av 110 mg av titelföreningen såsom en fast substans.

Analys: Cl7Hl6O N S K-H O: 6 5 2 2 Beräknat: C 40,23 H 3,57 N 13,80 S 12,63 K 7,70 Funnet: C 40,03 H 3,05 N 13,61 S 12,31 K 7,56 Exempel l8Q (cis)-3-[[2-amino-4-tiazolyl)I[1-(difenylmetoxikarbonyl)- -1-metyletoxi]imino]acety1]amino]-4-(metoxikarbonyl)-2-oxo- -1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt En lösning av N~hydroxibensotriazolhydrat (34 mg) och 101 mg 2-amino-u-[[l-(difenylmetoxikarbonyl)-l-metyletoxi]imino]- -4-tiazolättiksyra i 0,5 m1 dimetylformamid behandlas med fast dicyklohexylkarbodiimid (45 mg) och blandningen omröres under argon i 45 minuter (rumstemperatur). (cis)-3-amino-4- -(metoxikarbonyl)-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra (45 mg; jämför exempel 188) tillsättes därefter såsom fast substans åtföljt av trietylamin (0,03 ml) droppvis. Reaktionsblandningen om- röres vid rumstemperatur i ungefär 16 timmar. Dimetylformf amiden avlägsnas under högvakuum vid 30°C och återstoden tri- ger en fiast substans, som tvättas med eter och torkas i § vakuum för erhâllning av 93 mg av titelföreningen. 457' 954 129 Exemgel 181. (cis)-3-[I(2-amino-4-tiazolyl)[(1-karboxi-l-metyletoxi)- imino]acetyl]aminc]-4-(metoxikarbonyl)-2-oxo-l-azetidinsul- fonsyra, dikaliumsalt En uppslamning av (cis)-3~[[2-amino-4-tiazolyl)-[[l-(difenyl- metoxikarbonyl)-l-metyletoxi)-imino]acetyl]amino]-4-(metoxi- karbonyl)-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt i 0,4 ml anisol omröres vid -l2°C under argon och 0,9 ml kall (-lO°C) trifluorättiksyra tillsättes. Efter l,5 timmar tillsättes 4 ml eter och 2 ml hexan och den erhållna uppslamnlngen om- röres i 15 minuter vid -lO0C och därefter 15 minuter vid rums- temperatur. Den fasta substansen isoleras genom centrifugering och tvättas med eter. pH i suspensionen av detta material i 0,5 ml kallt vatten inställes på pH 6 med lN kaliumhydroxid och påföres därefter en 30 ml HP-2OAG-kolonn. Eluering med vatten ger 30 mg av titelföreningen efter indunstning (aceto- nitril tillsättes och avdunstas två gånger).

Analys: Cl4H15K2N5O9 2: Beräknat: C 31,15 H 2,81 N 12,98 Funnet: C 29,08 H 3,03 N 12,19 den upptages i vatten, 457 954 130 Exemgel 182" [3s-[3a(z),4ß]]-3-[[(2-amino- 4-tiazolyl)(metoxiimino)acetyl]- amino]-4-etynyl-2-oxo- l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (metoxiimino)-4-tiazolättiksyra (100 mg), 85 mg N-hydroxibensotriazolmonohydrat och 113 mg dicyklohexylkarbo- diimid invägdes i en 10 ml kolv.

(Z)-2-amino-n- Kolven spolades med kväve och kyldes pâ ett is/vatten-bad. Därefter tillsättes 0,6 ml dimetyïformamid och blandningen omröres i 10 minuter, vid vilken tidpunkt ytterligare 0,6 ml dimetylformamid tillsättes.

(S)-(trans)-3-amino-4-etynyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra (95 mg; jämför exempel 191) tillsättes i fast form med l,O ml dimetylformamid och 56 ßl trietylamin. Det kalla badet av- lägsnas och blandningen omröres i 22 timmar. Aceton (3 ml) tillsättes och de närvarande fasta substanserna avlägsnas genom filtrering och tvättas med ytterligare 4 ml aceton.

Samtliga lösningsmedel avlägsnas i vakuum och återstoden upp- tages i 5 ml metanol och 162 mg kaliumperfluorbutansulfonat tillsättes och löses. Efter förvaring avsättes en fast sub- stans som därefter isoleras genom centrifugering för erhåll- ning av 68 mg av titelföreningen, smältpunktv>230°C.

Exemgel lßl (S)-3-[[[(2,5-diklorfenyl)tio]acetyl]amino]-2-oxo-l-azetidin- sulfonsyra, kaliumsalt 3-amino-2-oxo-1-azetidinsulfonsyra (100 mg) löses i torr di- metylformamid (2 ml) med trietylamin (0,083 ml). 2,5 -diklor- fenyltioättiksyra (123 mg ; 0,602 mmol), N-hydroxibensotriazolt ! hydrat (81 mg) och dicyklohexylkarbodiimid (124 mg) tillsättes) blandningen omröres i 2 timmar vid rumstemperatur och därefter; 1 2 dagar vid s°c. Lösningsmeael avlägsnas 1 vakuum, återsto- filtreras genom Celite och filtratet I 4:57 954 131 tvättas med etylacetat. Det vattenhaltiga skiktet kombineras med diklormetan, tetrabutylammoniumbisulfat (612 mg) till- sättes och pH stegras till 3 med 1N kaliumhydroxidlösning och efter extraktion totalt 3 gånger med diklormetan, torkas de förenade extrakten (Na2S04) och lösningsmedel avlägsnas i_vakuum för erhållning av en olja. En lösning av oljan i aceton sättes till en lösning av kaliumperfluorbutansulfonat (612 mg) i aceton som ger fällning av produkten. Efter till- sats av en ringa mängd eter tillvaratages den fasta substan- sen genom filtrering, tvättas flera gånger med aceton och torkas för erhållning av ett pulver (206 mg).

Analys: CllH9N205S2C12K: Beräknat: C 31,21 H 2,14 N 6,62 Cl 16,75 Funnet: C 27,90 H 2,11 N 5,84 Cl 18,04 Exemgel 184. (38-trans)-3-{[[(2,5-diklorfenyl)tio]acetyl]amino]-4-mepyl- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt (35-trans)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra (250 mg) löses i dimetylformamíd (2 ml) med trietylamin (193;L1). 2,5-diklorfenyltioättiksyra (285 mg), N-hydroxibensotriazolhydrat (213 mg) och dicyklohexylkarbo- diimid (287 mg) tillsättes. Efter omröring i ungefär 16 timmar vid rumstemperatur filtreras blandningen och lösnings-É medel avlägsnas i vakuum. Återstoden upptages i vatten och ' filtreras. Filtratet tvättas med etylacetat, skiktat med di- _ klormetan och tetrabutylammoniumbisulfat (4,2 mmol) tillsättes.

Efter totalt 3 extraktioner med diklormetan torkas de förenadá extrakten (Na2S04) och lösningsmedlet avlägsnas i vakuum för É erhållning av en olja (920 mg). Till en lösning av oljan i , aceton sättes kaliumperfluorbutansulfonat (946 mg) löst i ä aceton. En fast substans utfälles långsamt och ti11varatages,) tvättas 2 gånger med eter och renas för erhållning av ett ! pulver (306 mg). Kromatografi på HP-20-harts (100 ml-kolonn),i eluering med 20% acetonitril/80% vatten ger den önskade pro- : dukten, som kristalliserar vid avdunstning av en blandning av: vatten/metanol. Triturering av återstoden med aceton ger ett pulver (233 m9); Smältpunkt 212-2l3°C (sönderdelning). 1-." 457 954 132 Analys: Cl2HllN2O5Cl2S2K: Beräknat: C 32,95 H 2,54 N 6,41 Cl 16,21 S 14,66 Funnet: C 32,91 H 2,60 N 6,42 Cl 16,50 S 13,77 Exemgel 135-l36~ På det i exempel l37 beskrivna sättet men med användning av (38-trans)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfonsyra i stället för (38-cis)-3-amino-4-metyl-2-oxo-l-azetidinsulfon- syra och den syra som anges i spalt I nedan i stället för (Z)-2-amino-e-(metoxiimino)-4-tiazolättiksyra ger de före- ningar som anges i spalt II.

Spalt I Spalt II 195. (R)-I(aminooxoacetyl)amino]- [BS-[3a(Rx),4B]]-3-[[[(ami- -(4-hydroxifenyl)ättiksyra nooxoacetyl)amino](4-hydroxi- fenyl)acety1]amino]-4-metyl- -2-oxo-l-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt 196. (R)-I(aminooxoacetyl)amino]- [35-[3a(Rx),45]]-3-[[[(ami- fenylättiksyra nooxoacetyl)aminolfenylace- tyl]amino]-4-metyl-2-oxo-1- azetidinsulfonsyra, kalium- salt, smältpunkt l87°C, sönderdelningj Exemgel 187. [3S(Rx)]-3-[[[(aminooxoacetyl)amino](4-hydroxifenyl) -acetyl] É amino]-2-oxo-l~azetidinsulfonsyra, kaliumsalt På det i exempel 28 beskrivna sättet men med användning av ¿ (R)-[(aminooxoacetyl)amino](4-hydroxifenyl)-ättiksyra i stället för (Z)-2-amino-ar[[2-(difenylmetoxi)-1,1-dimetyl-2-oxoetoxi]å imino]-4-tiazolättiksyra erhålles titelföreningen med smält- punkten l28°C, sönderdelning.

Exemgel 188. [3s(R*)1-3-[I(2-amino-4-ciazolyl)[Ita-I(2-furany1mety1en)- amino]-2-oxo-l-imidazolidinyllkarbonyl]amino]acetyl]amino]- 2-oxo-1-azetidinsulfonsyra, kaliumsalt i r I På det i exempel 6 beskrivna sättet, men med användning av ' (R)-2-amino-a-{[[3-[(2-furanylmetylen)amino]-2-oxo-l-imidazolf- dinyl]karbonyl]aminol-4-tiazolättiksyra i stället för aminQ:l_ 4571954 133 tiazolättiksyra erhålles titelföreningen med smältpunkten >2so°c.

Exemgel 189.

Biologisk produktion av EM5ll7 9-liters fermentation Chromobacterium violaceum SC 11,378 ATCC No. 31532 odlades på följande steriliserade agarmedium (A): EEÉE jästextrakt l köttextrakt 1 NZ Amine A 2 glukos 10 agar 15 destillerat vatten till 1 liter pH inställes på 7,3 före sterilisering vid l21°C i 30 minuter.

En slingmängd ytväxt av mikroorganismen användes för inokule- ring av var och en av tre 500 ml Erlenmayer-kolvar, som var- dera innehöll 100 ml av följande steriliserade medium (B): 2229 havremjöl 20 É tomatpasta . 20 § vattenledningsvatten till l liter Install på pn 7,0 före steriiisering vid 121°c 1 15 minuter. E Kolvarna inkuberas därefter vid 25°C på en roterande skak- É I i apparat (300 varv/minut; slaglängd 50 mm) i ungefär 24 timarf i ä Efter riktig inkubering såsom beskrivits ovan överföres 1 % [ (volym/volym) från odlingskulturkolvarna till 100 500 ml- I Erlenmayer-kolvar, som vardera innehöll 100 ml av följande ä steriliserade medium (C): 1 457 954 134 ram havremjöl 20 tomatpasta 20 glukos 30 vattenledningsvatten till l liter pH inställes på 7,0 före sterilisering vid l21°C i 15 minu- . ter.

Efter inokulering inkuberas kolvarna vid.25°C på en roterande skakapparat (300 varv/minut; 50 mm slaglängd) i ungefär 18-24 timmar. Vid denna tidpunkt sammanföres kolvarnas innehåll och odlingsvätskan centrifugeras för erhâllning av ungefär 9 liter överflytande odlingsvätska. 250-liters fermentation En slingmängd ytväxt från en snedagar (medium A) av Chromo- bacterium violaceum SC 11,378, ATCC no. 31532 användes för inokulering av var och en av fem 500 ml-Erlenmeyerkolvar, som vardera innehåller 100 ml steriliserat medium (B). Kolvarna inkuberas därefter vid 25°C på en roterande skakapparat (300 varv/minut; 50 mm slaglängd) i ungefär 24 timmar: Efter korrekt inkubering såsom beskrivits ovan, göres överföringar av l % (volym/volym) från odlingskulturkolvarna till fem 4-liters Erlenmayer-kolvar, som vardera innehåller 1,5 liter steriliserat medium B. Efter inokulering inkuberas kolvarna vid 25°C på en; roterande skakapparat (300 varv/minut; S0 mm slaglängd) i unge- fär 24 timmar. Efter korrekt inkubering såsom beskrivits ovan göres en 1%-ig överföring (volym/volym) till en fermentations- tank försedd med omrörare, rymande 250 liter steriliserat medium (C). Efter inokulering fortsättes fermentationen under följande betingelser: temperatur - 25°C; tryck - 0,77 kp/cm2;§ luftning - 10 cfm; omröring - 155 varv/minut. "Ucon" tillsättes efter behov såsom skumningsförhindrande medel. Efter ungefär 18-24 timmar är fermentationen fullständig. Fermentationsvät- skan inställes därefter på pH 5,0 med användning av HCl och tankens innehåll av odlingsvätska centrifugeras för erhâllning av ungefär 230 liter överflytande vätska., I .

I s D4 liter O,lM natriumfosfatbuffert vid pH 5, varvid 20 ml- 457 954 135 Isolation och rening Den överflytande vätskan från 250 liters-fermentationsvätskan inställes på pH 5 med användning av svavelsyra och filtreras med användning av 3-5 % diatomacéjord (Celite). Odlingsvätske- filtratet extraheras med två 30-liters portioner av 0,005M cetyldimetylbensylamoniumklorid i metylenklorid.

Den kombinerade lägre fasen extraheras med 6 liter 0,05M natriumjodid, som inställes på pH 5 med ättiksyra. Den lägre fasen bortkastas och den övre fasen koncentreras i vakuum till 500 ml.

Det koncentrerade materialet extraheras med 400 ml n-butanol.

Den övre fasen bortkastas och den lägre fasen koncentreras till torrhet i vakuum. Återstoden löses (i möjligaste mån) i 150 ml metanol. Det olösliga materialet bortkastas och metanollösningen koncentreras till torrhet i vakuum för er- hållning av 38,6 g rå antibiotiskt material.

Den râa produkten löses i 10 ml metanol/vatten (lzl) och kro-' matograferas på en 500 ml-kolonn av tvärbunden dextrangel (Sephadex G-10) i samma lösningsmedelsblandning och eluerang É utföres vid 2 ml/minut och tillvaratagning av 20 ml-frak- tioner. Aktiva fraktioner (19-26) kombineras och koncentreras i vakuum. Återstoden (5,23 g) blandas med 50 ml metanol.

Olösligt material filtreras och bortkastas. Filtratet koncen- treras i vakuum. _ I Återstoden, 5,0 g material, löses i 10 ml 0,01M natriumfosfat- buffert vid pH 5 och pâföres en kolonn av DEAE-cellulosa (What man DE52 cellulose) packad och ekvilibrerad i samma buffert.

Kolonnen elueras vid 5 ml/minut med en linjär gradient fram- ställd från 4 liter 0,0lM natriumfosfatbuffert vid pH 5 och fraktioner tillvaratages. Aktiva fraktioner (192-222) kombi- neras och koncentreras i vakuum och metanololösligt material avlägsnas och tvättning med metanol utföres noggrant. Avlägs-É ning av lösningsmedel ger 576 mg material. 457 954 136 De 576 mg återstod löses i 4 ml vatten och pH inställes på 5 med ungefär 1 ml O,lN natriumhydroxid. Lösningen kromato- graferas på en kolonn av alkylerad tvärbunden dextrangel (Sephadex LH-20) i vatten och eluering vid l ml/minut och tillvaratagning av 10 ml-fraktioner. Aktiva fraktioner (38-44) kombineras och koncentreras för erhâllning av 459 mg åter- stod. 348 mg av den ovannämnda återstoden löses i vatten och lös- ningen placeras på en kolonn av makroretikulärtstyren/divinyl- bensen-sampolymerharts (Diaion HP2OAG); kolonnen hade först preparerats genom tvättning med metanolisk kaliumhydroxid, metanol, metanolisk klorväte, metanol och vatten och därefter packats i vatten. Kolonnen elueras med vatten vid 1 ml/minut, och tillvaratagning av l0 ml-fraktioner. Aktiva fraktioner (36-43) kombineras och koncentreras för erhållning av 186,4 mg material. Kromatografering (på samma sätt) av en annan kvanti- tet lO0 mg av de 459 mg återstod från föregående steg ger 51,5 mg material. Vid detta stadium är materialmängden 186,4 mg och materialmängden 51,5 mg nästan ren EM5ll7 såsom fram- går av tunnskiktskromatografi och NMR-spektrum.

Andelen EM5ll7 vägande 186,4 mg ovan löses i vatten och föresš genom en kolonn av jonbytarharts (Dowex SOW-X2, 100-200 mesh, kaliumformen), varefter tvättas med tvâ bäddvolymer vatten. É Koncentrering av den bortgående vätskan ger 189,0 mg kristallih fast substans. Omkristallisation av detta material utföres ' genom upplösning av materialet i 0,38 ml vatten och tillsats _ av 3,42 ml metanol. Den erhållna blandningen kyles på is och § filtreras för erhâllning av 145 mg kristallen"Två ytterligarä omkristallisationer på detta sätt utföres från vatten/metanolÄ 1:9, ñör erhållning av 95,9 mg EM5ll7, kaliumsalt, l94°C (sönderdelning). smältpunktå 137 Qptisk rotation i vatten vid 2l°C (c Ä (mn) 589 579 546 436 365 457 954 =1) [al +94,3° +98,6 +ll3,l +203 +348 Följande fermentationsmedia är effektiva för framställning av EM5ll7 och kan användas i stället för medium (B) och (C) i exemplet ovan.

Medium D "Nutrisoy"-mjöl Glukos "Yeastamine" CaCO3 Destillerat vatten till l liter Medium E Jästextrakt Maltextrakt Glukos Glycerol Destillerat vatten till l liter ram 30 50 2,5 Iam 10 30 Inställes på pH 7,3 före sterilisering Medium F Glycerol :L-asparagin KHZPO4 Na2HPO4 Glukos MgSO4'7H2O Jästextrakt Vattenledningsvatten till l liter gram 10 50 0,2 2,5 """" is 457 954 l38 Medium G: ram (NH4) 2so4 L-asparagin Glukos 50 Glycerol 10 KH2PO4 3 K2HPO4 7 MgSO4'7H2O 0,2 Jästextrakt 2,5 Destillerat vatten till 1 liter Inställes på pH 7,0 Medium H: ä KZHPOLI 7¶ KH2PO4 3 Na-citrat 0,5 MgSO4 0,1 (NH4)2SO4 l Glukos 30 Jästextrakt 2,5 Destillerat vatten till l liter Medium I: EEE "Nutrisoy“-mjöl 10 2so4 ' s Glukos 50 Jästextrakt 2,5 CaCO3 5 Destillerat vatten till l liter 139 Medium J: "Gerber's Baby“~havremjöl “Contadina“-tomatpasta Glukos Vattenledningsvatten till 1 liter Inställes på pH 7,0 Medium K: "Gerber's Baby"-havremjöl “Contadina“-tomatpasta Glukos Vattenledningsvatten till 1 liter Inställes på pH 7,0 Medium L: Jästextrakt Maltextrakt Glukos Medium M: "Amberex (l0O3)" Glukos Vattenledningsvatten till l liter Medium N: "Amberex" "Cerelose" Vattenledningsvatten till l liter 457 954 gram 30 457 954 140 Exemgel 190.

Biologisk framställning av EM52lO Gluconobacter-arten SCll,435 ATCC nr. 31581 upprätthålles på följande steriliserade agarmedium (A): EEÉE jästextrakt 1 köttextrakt 1 “NZ amine A" 2 glukos 10 agar 15 destillerat vatten till l liter pH inställes på 7,3 före sterilisering vid l2l°C i 30 minuter.

En slingmäng ytväxt från snedagarn (medium A) av Gluconobacter- arten SCll,435 användes för att inokulera var och en av tre 500 ml Erlenmeyer-kolvar, som vardera innehåller 100 ml av följande steriliserade medium (B): EEEE jästextrakt 4 maltextrakt lO - dextros 4 destillerat vatten l liter pa inetäliee på 7,3 före sterilisering vid 121°c i 15 minutern Efter inokulering inkuberas kolvarna vid 25°C på en roterande! skakapparat (300 varv/minut;'5 cm slaglängd) i ungefär 24 timmar. Efter korrekt inkubering såsom beskrivits ovan göres överföringar l % (volym/volym) från odlade kulturkolvarna till etthundra 500 ml Erlenmeyer-kolvar, som vardera innehålla ï 100 ml av följande steriliserade medium (C): HEÉE jästextrakt 5 glukos lO destillerat vatten 1 liter Mediet steriliseras vid l2l°C i l5 minuter. ' 457 954 141 Efter inokulering inkuberas kolvarna vid 25°C på en roterande skakapparat (300 varv/minut; 5 cm slaglängd) i l8 timmar. Vid denna tidpunkt sammanföres kolvarnas innehåll och odlings- vätskan centrifugeras för erhållning av ungefär 9 liter över- flytande vätska.

Isolering och rening (liten skala) Aktivitet från odlingsvätskans överflytande del (10 liter) absorberas på en 500 g-kolonn av starkt basiskt anjonbytar- harts med kvaternära ammoniumgrupper bundna till ett styren/ divinylbensen-sampolymergitter (Dowex AGl-X2(Cl_)), tvättat med vatten och eluerat med 5% natriumklorid i 0,0lM vatten- lösning av NaH2PO4. Eluatet koncentreras i vakuum. Återstoden absorberas på 250 g kol, som tvättas med vatten.

EM52lO elueras med metanol/vatten (lzl). De aktiva fraktioner- na kombineras och koncentreras i vakuum för erhâllning av rå EM52lO.

Den råa EM52lO kromatograferas på en 280 ml-kolonn av ett starkt basiskt anjonbytarharts (Bio.Rad AGl-X2 (Cl_)) med användning= av en linjär gradient framställd av l liter vatten och l liter 2M pyridiniumacetat (pH 4,5). De aktiva fraktionerna kombi- ; neras och koncentreras i vakuum.

Den partiellt renade EM52lO renas ytterligare genom gelfilt- _ reríng avhåterstoden på en 500 ml-kolonn av tvärbunden dextrant gel (Sephadex G-10) och eluering med vatten. De aktiva frak- t tionerna kombineras och koncentreras för erhâllning av 26 mg EM52lO. Kaliumsaltet av EM52lO framställes genom att man gför EM52lO genom en kolonn innehållande katjonbytarharts å(Dowex 50-X2) i kaliumformen. šlsolering och rening (stor skala) 'Odlingsvätskefiltratet från 250 liters fermentation (pH 3,7) _av Gluconobacter-arten SCll,435 absorberas på 10,8 kg av ett starkt basiskt anjonbytarharts (Dowex l-X8(Cl_)). Hartset tvättas med vatten och elueras med S % natriumklorid i 0,0l§ 457 954 142 natriumdivätefosfat. De aktiva fraktionerna kombineras och kon- centreras till en ringa volym. Det fällda saltet avlägsnas och filtratet avsaltas genom passage genom en kolonn av kol (l,l kg 20-40 mesh “Darco“) i vatten. Kolonnen tvättas med vatten och EM52lO elueras med metanol/vatten (lzl). Aktiva frak- tioner kombineras och koncentreras. Återstoden (l6 g) löses i vatten och kromatograferas på en kolonn (600 ml) av ett starkt basiskt jonbytarharts (Bio.Rad AG l-X2(Cl_), 200-400 mesh), och eluering med en linjär gradient framställd av l liter vatten och l liter l0%-ig natriumklorid i 0,0lM natrium- divätefosfat. Aktiva fraktioner kombineras, koncentreras i vakuum till en ringa volym och fällda salter avlägsnas genom filtrering. Filtratet pâföres en kolonn av makroretikulärt styren/divínylbensensampolymerharts. Kolonnen elueras med vatten. De aktiva fraktionerna kombineras, koncentreras till en ringa volym och frystorkas för erhållning av 120 mg av natriumsaltet av EM52lO. Överföringen av natriumsaltet till litiumsaltet sker med användning av ett jonbytarharts (Dowex SO W-X2, litiumform) i en kolonn. Natriumsaltet (lOO mg) löses i 0,5 ml vatten, påföres kolonnen och elueras med vatten. De aktiva fraktionerna kombineras och frystorkas direkt för erhâllning av 95 mg av É _ _ litiumsaltet av EM52l0 såsom en amorf fast substans. Q Den fria syran (inre salt) av EM52lO framställes genom passagé av ett bassalt av EM52lO genom en kolonn av svagt sunt jan- É bgtarharts i H+-form. Exempelvis kan ungefär 2,5 mg av litium- saltet påföras en kolonn av Bio.Rad Bio.Rex 70 (H+) och eluera med vatten för erhâllning av 1,45 mg av den fria syran (inre Isalt). iKemiska egenskaper för EM52l0 il. Ninhydrinpositiv Éz. syrahyaraiys (en Hcl vid 11s°c 1 16 timmar) ger tvâ över- 'vägande ninhydrinpositiva fläckar vid papperskromatografi (Whatman No. l, butanol/ättiksyra/vatten (5:l:4) och en svagt ninhydrinpositiv fläck som utsläcker UV-exciterad fluorescens.g ¿š7 954 ' 143 Två väsentliga ninhydrinpositiva fläckar utgöres av D-gluta- minsyra och D-alanin.

Fysikaliska egenskaper för EM52lO 1) UV-spektrum för natriumsaltet i vatten: slutabsorption 2) IR - stora toppar av litiumsaltet i KBr: 1770, 1640, 1530, 1384, 1242 och 1051 cm'l. 3) PMR - kemiska skiftningar av litiumsaltet i deutererat vatten, ppm nedåt fältet från TSP: 1,40 (d, J=7Hz), ca 2,14 (m), ca 2,44 (m), 3,49 (s), 3,73 (t,J=6Hz), 3,94 (s), 4,28 (m).

Optisk rotation för den fria syran (inre salt) i vatten vid 24°c (C = 0,15 %) (pa z,7)= Ä(nm) [ul 589 +73° 578 +79° 546 +91° 436 +1s9° ses +263° Följande fermentationsmedia har visat sig effektiva för _ framställning av EMS2lO och kan användas i stället för medium¿ .(B) och (C) i beskrivningen. 1 äeiëlfllh _ sLLLm s havremjöl 20 É tomatpasta . 20 É vattenledningsvatten till 1 liter l Éinstälies på pa 7,0 före sterilisering vid 121°c 1 15 minu- -ter. ÉMedium E: gram É “Éeastamine" 5 i "Cere1ose“ ll vattenledningsvatten till 1 liter :Sterilisering vid 12l°C i 15 minuter. 457 954 144 Medium F: H 'å glukos vinsyra jästextrakt (NH4)2PO4 (NH4)2S04 K HPO 2 4 NaH2PO4 MgSO4.7H2O CaCO3 Destillerat vatten ~ U1 HOOONI-*ONW _ _ _ N en <fl l liter Inställ pH på 6,0 före sterilisering vid l2l°C under 15 minu- ter.

Medium G: gšgm "NUtrisoy“-mjöl 30 glukos 50 “Yeastamine" 2,5 _CaCO3 I 7 Destillerat vatten till l liter sterilisering sker vid 121°c i ao minuter.

Medium H: grâm "NZ Amine A" 10 “Cerelose" 33 “Yeastamine“ 2,5 Vattenledningsvatten till 1 liter Sterilisering sker vid l2l°C i 15 minuter.

Medium I: ram š"Nutrisoy"-mjöl 15 Löslig stärkelse 15 'Glukos 50 i coclïsnzo 0,005 CaCO3 lO Destillerat vatten till 1 liter Sterilisering sker vid l2l°C i 30 minuter. 457 954 145 Biologisk aktivitet Följande metoder användes för bestämning av den minsta inhi- berande koncentrationen (nedan betecknad MIC) för ß-laktamerna enligt uppfinningen.

Testorganismerna odlas i ungefär l5-20 ml "Antibiotic Assay broth" (Difco) genom inokulering (i rör) av vätskan med en slingmängd av organismen från en “BHI" (Difco) snedagar.

De inokulerade rören inkuberas vid 37°C i l8-20 timmar; Dessa kulturer antages innehålla lO9 kolonibildande enheter nnedan kallade CFU) per ml. Kulturerna utspädes till l:lO0 för erhållning av en slutlig inokulumhalt av 104 CFU; utspäd- ningarna göres med K-10-odlingsvätska (definierad nedan).

Föreningarna löses i lämpligt lösningsmedel vid en koncentra- tion av l0OO,kg/ml. Tvåfaldiga utspädningar göres i K-lO- odlingsvätska för erhållning av ett intervall från l0OO,ug/ml till O,5.#9/ml. 1,5 ml av varje utspädning införes i indivi- duella kvadratiska petriskålar, vartill sättes 13,5 ml K-lO- agar (definieras nedan). Den slutliga läkemedelskoncentrationen i agarn varierar från lO0,«g/ml till 0,05,ug/ml. 0rganism~ tillväxtkontrollplattor innehållande enbart agar framställes och inokuleras före och efter testplattorna. Organismerna i påföres agarytan på varje platta med en "Denley Multipoint fresulterar i en slutlig inokulumhalt av lO4 CFU på agarytan.

Inoculator" (som ger ungefär 0,001 ml av varje organism) vilket Plattorna inkuberas vid 37°C i l8 timmar och MIC-värden be- _stämmes. MIC är den lägsta koncentration av förening som inhi- 'berar tillväxt av organismen. I n :K-10-odlingsvätska är en jäst/kötthhaltig odlingsvätska inne- Énananaef ) köttextrakt 1,5 g É jästextrakt 3,0 g pepton 6,0 g É dextros 1,0 g å destillerat vatten q.s. ad l liter 457 954 146 K-10-agar har följande sammansättning: köttextrakt 1,5 g jästextrakt 3,0 g pepton 6,0 g dextros 1,0 g agar 15,0 g " destillerat vatten q.s. ad l liter Tabellerna nedan anger resultat erhållna när B-laktamerna enligt uppfinningen testades gentemot olika organismer. Det tal som anges efter varje organism utgör antalet organismer i kollektionen hos E.R. Squibb & Sons, Inc., Princeton, New Jersey. Ett streck (-) i tabellen anger att den testade föreningen inte uppvisar aktivitet gentemot den speciella organismen vid lOO g/ml. Symbolen “N.T;“ anger att testning icke utförts. 457 954 147 -~Q..| v-ir-i r-lr-I v-lv-'lfllñ r-HW v-IMM oofi ooa om oofi ooa ß -IDO H m.Na .w n m m a m mm oofi ooa oofl ooa ooa oofl ooa ooa bofl .w . A Q n n H N w m m n-nlg-(Mlfl WW) ooa om oofl m.NH oofi om ooa om m.w mm m.mA m.w m.NH G ,-{ MCÛWNOMW m r1w\øc4o|firfi Na .w .M .w w Hmmšwxm umflficw uxøwøum .IEEE .uálfl ß w n m m æ åzoflfimuuoufiuo .wfiuumou Såå. mwmæ mvmm mmßm mama æßooa wmflæ mwvm mmfia wfiwm mßvm mmæm ßwmm ovvofi momofi mmmofl ßmæofi wmmm mmew ßmwm flaom mwfloa oowfl mmmm mßwa _ uwoswmzmmu muzosovsuwm _umo:wm:&wu muzosowzmwm _m=momæoauE ßwusaamm .mwwfizwak xwuuußosuwu .wmzmmonwu awßusaoawflzw ~uoouo~u amßuuaoawuzw _ wwzzow ufimmwzm. .uwâšš uäsššum _mwaumN:a wzmuoxm .Émmuuua wsmfigm _m¶~@auL¶E wzwßoam _ wumzoswxm u~NwwmQw~x _ww:wmo&wu u-m@mnu~M _wNou ewxowawxumm .wfloo ßmxowamxumm _mNou amxumxmxuwm _¶§ou uwxuusuaowm _w:æ@:N wzouooozowz _wuvuouNumu mxuuouonmwaum _mwNuuwu% wxuooooflmmaum _ wzmasu mzuoouoflmxmußw _ wzwxzu wsooooofiwxwufim _ wzmnzß mzououofi x ugn _ uzuazu w:uooooNm:nUum Emficmmuø 148 457 954 flwmšwxm umflacm uxswoum 1|:E.\.C111|1CC .C. C112. 1 C.C 1 CC CCC 1 CN CCH 1 1 1 C.~C 1 CCNH CC .CC CC CC C.C CC C.C CCC C.C. CCC CN C.C 1 C.~C 1 1 _ 1 1 C.C 1 C.C 1 1 1 1 C.C CCC C.C 1 1 1 1 C.C 1 C.C 1 1 1 . 1 C.C CN C.C 1 1 CCC 1 CC.Cv C.~H C.C 1 1 CCC 1 _ H.C CN C.C 1 CN CC 1 CC.Cv C.H CC.Cv 1 1 CCC 1 H.C C.~C ~.C 1 1 1 1 ~.C C.~C H.C .1 1 1 1 C.C CN C.C 1 CCC CCH 1 ~.C CN C.C 1 CCC CCC 1 C.C CC C.C 1 1 1 1 C.C CC C.C. 1 1 1 1 C.C CN C.C CCC CC CN CC C.C CN C.C CC C.C C.C C.~C C.C C.~C C.C 1 1 1 1 CCC 1 CCC CC C.~H C.~« CC 1 1 1 CN C.~C C.~« CC C.C. C.~C C.C om m.NH m.w om m.w mm n.w CC C.~C H.C CCH C.~C CN CJNC CH CC CH .CH CH CH NH n mm m ...ßšunfi C683 mo .Swuuaouwnwuw CNCC CCCC CCCC CCCC CCCCH CCNC CCCC CCCH CCCC CCCC CCCC CNCC CCCCH CCCCC CCCCC CCCCC CCNC CCCN CCCC CHCC CCCCC CCCN CCCN CCNC .uwoxwmszuu munssøwzmwm ~swo:wm:awu musosowzmwm fimxmommuaus u@Cuanwm ~mCw::ux\.amCouaoaCwu qmmxumoawu LuCuuao&m«:m ~wuuuoNu amuucaosuflrw .wwæaow c-wmwcm quwoxmmu u§Nm:o=aum ~mwaum~:C wzwfioam ~mLmmuuma wsmflonm «mmNmmu§mE mzmuoam ~wum=os:w=m uCNuwwnwN¥ Cwmxæmonwu ß~Nw@C@u~x ~wNou cuxuwaæxuww ~mNou øwxuwamxuww ~¶~oo uwxowzuxowm ~¶Nou uwzowaeæomm .w:wC:~ mzououozumë ~mu¶Cuu~umu wzuuoooummxflw .m¶Nuuuß% m:uuoooCmuaCw .mzmzzu C:ououo~mxmuCm .wzwzxß C:uuooo~mmmuuw qmswazu Czooouoflmmumum Cwzmazu C:uuouo~mxmuCm Ewflcmmuø 457 954 149 00 1 1 1 00 00 00 0000 .0000000000000 3000030000 H.m I. I. oo._.. mm 1 om mwmæ 0302003000 wuroëowxwwm 0.0 00 1 0.0 0. 0 00 00 0000 .0000000000 0000030000 0.0. 03 03 03 00 00 00 000.0 0000000000. 00.00.0000 0.0 1 1 03 0.0 00 1 300 . 60000000 0000000000 m . o I | | m . o .. .1 æßooa 0000000980. amuuuaoamuzm 0.0 0.0 1 1 03 0.0 03 1 030 .0000000 0000002300 0.0 0.0 1 1 03 0. 0 0.3 1 0000 300000 000000000 0.0 00.0V 1 1 03 0.0 00 1 003 60000000 0000000000 0.0 000V 1 1 1 0. 3 00 1 . 0000 60.00.0000 00000000 0.0 0.0 03 1 1 000V 0.3 1 00.00 000030.. 0000000 0. 0 N. 0 1 1 1 0.0 03 1 0000 .000000000 0000000 0.0 000V 1 1 1 0.0 00 1 0000 .0000000000 0000000000 0. 0 0.0 1 1 1 0.0 00 1 . 0003 600000000 0000000000 0.0 00.0V 03 .så 03 0.0 0.0 1 0003 ._0000 00000000000 0 0.0 03 1 03 0.0 0.3 1 0003 .0000 8000000030 0.0 00.0V 1. 1 03 0.0 00 1 0.003 _ _0000 0000000080 0.0 0.0 1 1 1 0.0 00 1 0000 .0000 0000000030 0.0 0.0 .3 1. 00 0.0 0.0 00 000.0. _ 000000 000000000000 0.0 0.0 .0 00 0.3 0.0 0.0 0.3 0000 0000000000 0000080000: om om . I | .1 oofi | | Hfiom 0000606010. wzouououcmsum. 00 00 . 0 03 03 03 0 . 0 0.3 033 000000 000000000000000. 0.0 0.0 0 .00 03 0.3 3.0 0.3 00 00 000.000 00000000000000. 0.0 0.0 0 00 03 0.3 0.0 0.3 0000 600000 00000000000000. 0. 0 0.0 0 00 00 0. 3 0.0 00 003 000.000 000000000000000. 00 00 00 3 . 3 00 00 3 Emflcmmuc 457 954 l50 1 1 1 1 1 øofl 1 1 1 1 1 1 om H.fl om 1 m~ m.~H m.- m~ m.~H æ.° A.m m.- 1 .1 1. 1 Qm m.° m.NH 1 1 1 1 1 1 w.d mw OCH 1 1 1 1 m.~H æ.° om 1 1 1 1 1 m.w w.° m.m 1 1 1 1 Cod m.@ ~.= H.m COA oofi 1 1 om ~.m m°.°v m.° mm m.- H.m m.w oofi m.~H H.o w.H mw 1 1 QQH m~ m.° mo.°v ~.Q m.@ 1 Cod .OCH OCH m.@ m°.ov m.H m.- 1 1 oofl OCH ~.@ mQ.Qv @.H om 1 1 1 1 m.- v.° m~ 1 Cod om om om H.m fi.° @.H om 1 om _.°°H om m.~H m.o H.~ mm m.~H ~.~ H." om m.m ~.o w.H mw 1 1 1 1. m.~H «.Q m.~H God w.H @.° w.H m.w m.- m~ H.~ m.~H «.Q ~.° «.o w.H «.Q _ m.- v.o H.m 1 1 QQH 1 1 1 m~ 1 m.~H H.m m.~H ~.w OCH 1 OCH oofi H.m w.~ w.fi n.w m~ 1 m~ m~ H.~ w.H @.° H.~ m.~H 1 mw m.- H.~ @.H @.H w.« m.- 1 m.~H ~.w mm mm. Nm Hm om mm m~ ß~ Ammšwxm umflacw uxøøonm .fiewmnv .u.H.z mmmm mwmm mmßm mama mßoofl mmmæ mvvæ mmfifi wfivm mßvm mmmm ßmmm ovvofi momofi mmmoa ßmmofl wmmæ mmvw ßæmm Hflom mwflofl oovm mmmm mßwfl mmmæ .mauwuwouoofiuu awflounouwxwuw ~umo:wm=xmu muæuëouzwmm «wwß:wm=xuc muzusowzumm .mzmuwwusufi uwuuasmß .www::oa% amuuuaoaflwu ~mm=wmoawu nmfiounonwflzm .wuuuoNu amfluuaonmurm .wwzanw uN~mmuam ~cmoxmm» uN~m=osNum ~mmaumN:a mzmuozm .maumuumä nzmfloam .ww w uxwë wxwuoam .muwsnsnumm u-m@w@wNx qwwzwaoawu uN~www@wNx «wNou u¶:uw&m=owm «¶Nou uwxuwsmxonm WQNQQ uwxuwawxupw »Non umxuwswxumm .w=w«:N wxuuouozuwz «mu¶«uuNumu wxououoflmmafim .ww~uumn\ wzuuouowmmnam 1m:ma:u w:uuøuoNm«muum qazazzu w:uuQooNa=mu«w .mnmasu w:ouuooNm ~n:mL=u n:ouoom~> Ewflcmmuo 457 934 151 Hmmšwxw vmflanw uxflwoum OOH 1 1 OO « | | O.O m.- Om OOO ~.O .Om OOO Om 0.0 Om - ..| O.H O.O OO 1 | O.H m.~A Om OOH .| O.p ~.O OO OOH OOH O.O O.H O~ OOO OOO O.Ov O.m Om - Om O.Ov O O.H OO Om. O.O O.Ov ~.O ON OOH OO OO.Ov H.O OO | | 0.0 O.O Om 1 _- O.O O.H OO Om OOO ~.O O.O ON Om 1 O.H O.~ ON OOH Om ~.O H.O Om | -. O.H O.O O.~O O.O O.O O.ñ O.H H.O O.O O.O O.O OOH 1 1 | OOH OO OOH OOH O.O O.O O.O O.~H O.~H O.A O.O H.O O.~H O.O. O.H O.O ~.O OO O.O O.H H.O OO OO OO HO OO M M M w _. WSUMÄQUUOUN UU »aa Uüßßuüïmwnåw mmmæ mvmm .mæßm wflmm æßoofl mmflæ mvvæ mmfifi mavm mheæ mmmm ßwmm ovvofi momoa mmmoa ßmæofi wmmm mmvw hmmm Hfiom mwaofl oovw mmmm mßwfl qsmoxwmzamu wusosowzmwm .cwozwmzacu wc:o=öw:mwm .w:wuw@uaaE.uwOunawm .wwwzzoxæ aw«ocnonO@u ~ww:mmoxwu fiwflouaoaæflxm .ufiouoflo mmfluunoæmurm .wwrzom uN~w wxm «uwoxmm» U-m:oENøw .w@aum~:= wzwfiomm qwswmuuwx wzmwoxm .ww~wnuLwE mzwfloam qwuwzoszmzm uN~uwm@m~x .wwzwmoawu uN~wwwnw~x qwfioo uwxuwxwxuwm ~«~oo uwxowswxuwm ~wNoc uwxuvaæxowm ~¶~oo uw:u¶Lmxøww «w:m»:~.n:uoouoauw2 .uuw«oc~uLu wzouoooumwaßm qwwfluoæßæ wzuuoueummaflw Omzussu w:ououoNmcmUum .mswazu w:uoooo~mxmuOm qmzwxzö w:uoooo~mxmU@w ~w:uL:u wzuoouoflmxmcfim Ewficmmuo 152 .1 l oc." _... .. x oofl m0... mnmæ ~wšuëwuaoufißu .šnouaoumxmuw oofi I | | I I 1 0.m mwmæ qumoxwmzsmu nuxosowxmpm 0.0 0.00 00 000 00 1 0.00 0.0 00.00 .3â00=.§0 mëašëæam 00 00 00 .. .. 000 000 0.0 0000 .æšåääs 00000000 00 00 _ 00 1 1 000 000 0.0 0000 .000..=....~..0 0000002000 m. ~._.. om . ooH 1. 1 1. 1. 0 . 0 310000 8900009800 afluuåosfixm mm mm om | | 1. oofl m . o wmmm .šwnaåu nuuncaummflsm .0.0 0.00 000 1 1 00 1 ...0 03.0 »S560 00000000. 0.0 0.0 000 1 1 00 1 0.0 0000 ...0200000 000000500 0. 0 00 1. 000 .. 1 1 000V 000.0 .00000000 9.000.000 0.0 0.00 000 1 000 00 1 0.0 02.0 .ïæfiäa 0000000 0.0 0.00 1 1 1 000 1 0.0 0000 .000000202 0000900 0.0. 0.00 00 1 1 00 1 000V 0000 .æ..saša..& 0000000000 0.0 00 000 1 1 000 1 0.0 0300 _ 030098.. 0000000000 0.0 0.00 00 1 000 0.00 ..0..z 0.0 00000 ._33 0.0.00.0.........å.0 0.0 0.00 00 _ .. 1 00 000 0.0 00000 .så 0000003000 0.0 0.00 000 000 000 00 1 0.. 0 00000 ._0000 ...:B.....æ_.30 0 . 0 0. 00 000 1 1 00 1 0 . 0 0.000 ...än 00000200000 0.0 0.0 0.00 0.0 0.0 0.0 00 0.0 000.0 _3300 000000000000 0.0 0.0 00 0.0 0.00 0.0 00 0.0 0000 000003000. 0000000000000 ooH | 1. 1. .1 1. x 1. 00mm .040000000000 mxooouonmmxfim. 000 000 000 00 00 00 000 00 00000 _2930 003000000030 . 0.0 0.00 000 00 00 0.00 000 0.0 000.0 ašå... 008000000030. 0.0 0.00 00 00 00 0.00 000 0.0 0000 Jäs... 0.....8ä0000000 0.0 0.00 0.0 0.00 0.00 0.00 000 0..0 0000 .00200 0090003000000 0.0 00 00 00 . 00 00. 00. 00. .

Em0cmm0o Ås? 954 0009050000 umfldw uxswoum 100303 6.0.: 457 954 153 1 N m6 ooH N oofl .. | ammo .mzumfiuuaoumßo agušoumzwbw oofl m.w m.w 1 m.wH I I 4 mwmm .cmosvmzfimu mfizoëowzmmm .Én ~.o wo mm oo om om máfl mwmo .uwozmmzzmu muzesowzwwm m~ w . .H o . .H mm .o . .n 1 om .. m mom Gzmuwwuacs swuwsnmm. m.w w.c v.o mm w.A I | z æawm ~w¶w::wx% xwununoauwo m.~H A.m fl.m H.m w.~ 1 | oofi oßoofl .wwxumßaæß ammuuaoaußzm m.m æ.o m.fl H.m æ.o I | oofl wmmm ~Eäño~u,äEuUæ9$¿:m Alm “io wo min Yo .. oofi om mïë .Jššâw ofiwmušw mÄ “io w.o o.o Ho | oofi måa moflfl .uwoåšfl ufimrošum fi.o mo.ov N.o H.m mo.ov I I mw mfivm fiwwsummzn wzmuoflm Mfio må än H... #0 03 Om .ä Så ...gmšnšä 352m mo oo må wÅ Ho 1 ooH mm mmæm .nfimmdßms wšåoxm mÅ ~.o. ~.o mo .To 1 n om ßwmm .mumxošflwsm ufimflëmmmx mÅÅ w.H æ.o .Ön m.ø | | ooH ovvoa åmæwoonmu ufiwwøawmx mÅ .To .Üo æ.o .To I oofi mN momofl .Sam owmonrëowuww fm ~.o Nå m6 No .. 03 E: 323 . .S3 uqëfigmmuwm wo mo.ov mo.ov min mo.ov a .. mm »mood ...Son uÉRrGauwm mo min m.o min o.o .. 1 om wmmæ .Som ummonšwæuwm min o.o eo Hm wÅ mN m6 m.w.fi mmwm 639.23 wzuuoufišoflaè v.o N.o N.o w.H m.o m.w m.~H ~.m ßæwm .muwouumumu wxuoououmwaum om EZ 2: - m S; I - Så áääæä ...šëufixïawm 8 om 3 2 .H13 03 1 S 3:3 .šëæu æšâåšomßßm Üm fm Ön må mÄ om. mmm mmm oowm åzmaš wzuoouoïmoomuom o. H ...à o. H mé m. c 2 93 To 33 ašaš. âuäußflmgmßüw då då må 92 Wo 2 93 m6 2.2 .æaas wšuâsšmäfiw Nw Hm. om mm mm ßm mm mm.

Emwcmmuo flwmñwxw umflacw uxøwoum 2.5 _: UH: o- 1.4 154 | I .. .1 ... 1 1 mmmm Hwzuflßwuuououu .Hmoounofimzwuw m . N H om o ofl .1 .1 1. .1 mm m m .uwozwošwu mczoëowxwmm o.H H.o o.o mo o.o m.~H ooH momo .um°=oo=ow= m@=°sQo=@@m o . o om m . o m. NH ooH ooH ooH 22 .šääëus uooëomo. m. .H mn mlw m-NH 1. 1. .1 _ mflmm .wwwmzunk .Hmuuuaoaowb w . .fi w . .H m . NH mw | .1 .1 mß oo .n Hwnoïoázwd xwooaasxmo rm m. o o. o m.w m. NH .1 .1 1. wmmm .wßucuïv zuuošwczhozm o.o o.H o.o m.~H 1 ooH 1 oooo .oo:=om uoomooow H.o ~.o ~.o H.o 1 ooH 1 moHH .qwooooo UNN@=osHqo m.O m.O N.O H.O I I I wfiflm qmwåöfimää wäßflßfifl o.ov moov ~.o ~.o ooH ooH 1 ot; .oowääa mooäå wÄ wo Hïo mo .1 .1 1 mmmm Howowanawë mswoozm o.o ...o o. H Há 1 1 1 Zoo .Nšoošooo USRÉSH wïo min nå. mšH 1 .. 1 0:3 .wwzmmonmu uïmwšuï "io oo mïfi .Üm 1. oofi 1 momoH _ .Eon uwxuwauxoøw H.o H o.o o.o m.~H 1 ooH 1 ooooH _ Hoooo coooooooowo o.H o.H o.H o.H 1 ooH 1 omooH. .oooo uoooooooupo o.H H o.H m.~H m.~H 1 1 1 vo~o .ooou ßooooaooupo ooH . mo o. o o .o 1 m . NH om moå .æšš oššuâflo: m~ o.~H, o.H H.o oom o.o H.o oooo .wuoouuooou @=uu°°ooomooo . 1. m I. mm .1 | i | 1 .Som Hwfiuomum. wsuuououmwaum .1 o 1. 1. 1 .1 m . NH m . NH m wfiofl 843.36 mxnmoooomxmuflm. ooH H. om máH mo 1 WNH m .NH ooå Jšëu flšääooooßoo . ooH H. om .WNH 2 1 oo To 22 aššu šuäëâofioo 1 H. .om mo mo ooH H.o o.o oo~H .o=»o=u o=n»oooHooowoo on m mw ßw mw mw vw mo Ilillmïtëmflcm »O 457 954 HÜQEÜXÜ flwflfiflw UÄSÜOHR .He\m=. .u.H.: 457 954 155 I I I m.mfl I om ooa I mm mm om oofi I oofi om I H.m m.m m.m m.mH om mm m.w m.mH H.m mm om m.w om mm mm oofifl.m m.mfl mm mm om mm m.mH om m.m mw oofl m.w oofl mm m.fi oofl w.H m.mH mm m.mfl ooa mm æ.o om w.H m.mH mm m.o mm m.mfi æ.o mm m.o mm om w.H mm mm æ.o m.ma m.o om om H.m oofi mm o.H fl.m mo.ov mm om a.m om m.H A.o w.fl m.o mm mm H.m om m.mH m.H m.ma æ.o mm om m.a mm mm æ.o m.ma fl.m mm ooa H.m om mm m.fl om w.o m.w mm æ.o m.mH m.mH æ.o m.mH m.H m.m mm m.fl mm m.mH H.m mm v.o m.mA ooa H.m mm mm w.H fi.n m.H mm om fi.m mm mm m.o mm m.H om I w.o A.m m.m m.m fi.m H.m I I H.m m.mH H.m H.m w.H ooa I I I I I oofi om I I I m.ma om m.ma om om m.mH I I m.m mm m.mA m.mH fi.m mm I I m.u mm m.m m.mfl H.m mm I I m.w m.mH m.m m.mH fi.m mm mß .ßß mß vw mn mß Hß flmmëwxw wwflaøw vxøøoum nmnm .nxuwflwouocouu awfiouauumzvuw mmmæ mwmm mæßm mama mßoofi mmmm mvwm mmfifl mflvm mßwæ mmwm »mmm ovwoa momofl wmmofl ßmmofl vmmm mmøm ßæmm fiaom mmaofi oowm momm wßma .uwozwnzawu mczotauzunm ~umo:@m:auu wuzoscfizwwm .wzmonwuacs umuuanum «w¶¶::us% xmumußozuvo «nc:,=u wc amfiuoauamtxm .wcmwowu Lwflufiaøxmßxw .mwzzow uoommwzw «uwoxmmw u-m:oENuw ~w¶aum~:= wzuuoaæ _. Tëafiša mäßoam «wm~wndLwE wzuuozm .muwsonšwzm u~Nmvwau~x fimwzumoawu u-m@wmm~x .wooo umxownmxowm .wmou uwxuwawxowm .moon uwxouswxuwm .wmoo swmumnmsumm qwzwuzm mzuoouoauww .wuwumuoueu wzuooooflmwaum ~w@osous% wxuuouoflmwnum qmzuazu wsououommamcum qwzmaxu wzuøoooomxmuum «wzw;u mzuuoooomxmuum ~w:wxxm wsuuoooomxmufim Emfl:mmuO 457 954 156 1 1 1 1 C 1 1D 1 m~ 1 CCC C.C CC CN” CCH 1 1 1 C.C 1 nu 1 1 1 1 m.- 1 1 1 1 1 m.- 1 1. 1 1 1 1 C.C 1 1.

Cm 1 1 1 H.C 1 1 CC 1 1 1 C.H CC CCH .Cm 1 1 CCH H.C Cm CCC C.C CCH 1 1 H.C CC CC C~ 1 1 1 C~.C CCH CCC CCC 1 1 1 C.~ CCH CCH CCH w 1 1 C.~fi 1 1 CC 1 1 1 C.H Cm CCC CN 1 1 1 C.C Cm Cm.

CN 1 1 CC C.C m.~H C.~C CCH 1 1 1 m.~H 1 1 H.C CC CCC C.H C.~H C.C C.C _ C.C m~ 1 C.C C.CH C.- C.- 1 1 1 CCH 1 1 1 I om I mm oofi om om CCH Cm 1 C.C CN CC m.~H CCH Cm 1 H.C CN CN C.~C CCH Cm 1 C.C m.~H CC m.~H CC CC NC HC CC CC CC HÜQEÜXÜ UÜHHCO UXDÜOHW AME 3 .U.H.2 mmnæ mmmm mvmm mæßm mama mßooa mmwæ mvwm mmflfi wavm mßvæ mmæm ßmmm ovvoa momofl mmmoa ßmæcfl vmmm mmvm ßmwm fiflom mwfiofi oowm amma wßwa Cwxowumuuoufluu amuuuaoflmzwcw ..uCo:um=awu Cuxossfizumm .umozwmznuu mczosowzuum .mzwomuonuë uvauaaun ~¶¶w::m&% amfioenoaflwu «æm:umoamu amøouaoamuzm «muouo~n xauouæamwuum ~mm:=om c-umwæn :CCEEE S Nwzoåum .m»auCN== Camuonm ~»aumCnma øzmuoæm _m»~»@unws wzuuopm qwuweosxwzm u-e»øAm~x .mmsæmoauu u-wwonmNx .»Noo u@xuwsu:nøm 1.@~oo uwxowauxuøw ~w~ou uwxnwawxomm ««~ou umxomsmxomm «m:u»:~ mzuoouoauwë .mu@«uuNumu Czuuoooumuaum ~Cw~uumßæ Czuuoooßmwaum fimzwnzc mzuoøuoumxmuflh ~C=m==u C=ueouoNm:muCm Cmzmaxu m=uuoooNmæmflm ~C=wa=u C=uuouo~mxm«m Ewficmmuo 457 954 157 1 1 1 1 1 Om Om 1 1 1 1 OOH 1 1. 1 Om 1 1 m.m om mm. 1 Om 1 1 m.~H Om mww 1 OOH 1 1 H.O Om Om. 1 1 1 1 m.~H OOH Om. 1 1 1 1 m.m Om Om.

OOH Om 1 1 H.m Om m.~H OOH Om 1 1 m.H 1 Om 1 OOH 1 1 mO.Ov 1 Om OOH Om 1 1 m.m OOH mw 1 OOH 1 1 H.O OOH Om ooa oofi I 1 w.H 1 om 1 ooa I 1 m.w .1 om Om mw 1 1 0.0 Om m.m OOH Om 1 1 m.H Om m.~H Om Om 1 1 ~.O OOH m~ con oofi I 1 m.w 1 mm.

Om m~ OOH 1 m.H m.m m.m .m1~H mm ooa oofl w.H m.NH m.m OOH OOH 1 OOH ~ 1 OOH Om Om OOH Om m.~H 1 Om m~ Om OOH Om m.m 1 Om m~ Om OOH OOH m.m 1 Om HoH oofi mm mm wa mm mm HUQEQXN QUfiHCÜ PMDTOHOw .He av .u.H.z mmmæ mmmæ mwmm mmßm mfimm æßoofl wmmm mvwæ mmfifl wfivm mßwæ mmæm ßmmm owvofi momofl mmæofi ßmæofl emma mmvm ßæmm Haom mwaoa oowm mmmw mßwfl qmzuwflmouoomuo amausnouwxwuw ~umo:~m=amu Ouzazafizuøm ~umO:@m:amu Ounosfifizmpm ~m:mommu&¶E uwuufiamw ~»¶w::waæ.au»uunOs«wu .wwzmmoawa amßuuaoaufizm ~muouoNo Lmuuuauhmfiæm qmwzroø wwmmmwxm Hfimmwm O. N: qmnwmuuma wzmoonm .mmHOmu»»=.~=@»°fim ~muw:osw:m uHHwwmnm~x qmmawmonmu uH~wmmnOHx «wHoo ummomauzoww »Oman uwxomßmæumm fiwmoo uwmumamxomw «@Hou uwxumamxonm ~m:m»:~ mzuooooaowä \mw@«ucHum¶ mzuoooowwumwm wwmuuwu Oznuooc O m ~m:wa:ß mzuuonowmæmcflm qmzunzm mzuouuoflmxmunw Hmxmazu Ozonouommæmuum «m:mm:u Ozuoouoflæxmuum ämflcømuc O I v-l . .m OOOOOI-'IWMWONN r-i v u n o - OCr-IHIOHIONLO mun fi@®ONfimoNooHvwwmwmm . .. vv . .. mxn 158 m in o o V o 0 o v O Gflfl-H PiW~r~4<'vf4-4<-m wcwf4fi>N1n o aLfi@ n oc 'OPM-i . r-HDKD .- 457 954 G 3 v-lmmnnncoccooccoco ß 3 flv-h-il-ñtdflmcf-qcmo m N I .oofl mšH Há S Ha m5 .bio H.m mä. mÅH .Tm m.~H NS m.m m.H m.NH v.o ÉH H10 N _10 m4. m5 ma To TH. H10 Há Ná H6 H¿ m5 2.3 O.ov mo.ov m.o mo.ov ø.ov mo.ov m.o mo.ov H... Há @.H m9? N.o H.o fi.m mo.ov m.o w.o mm v.o Nio H5 mñH m9? m.H æ.o m.m N.o Há H5 N... 3.3 má ”to WH. H5 m.~fi H.m w.H m.mH æ.ø m.H w.H om » _03 om 1 om om om 1 m.~H H.m m.w 1 WH Há H6 1 máH HA máH - maa maa vofi mofl Hmmëmxw umHH:w uxøvoum :Håmë då: mmmm mmmm mwmm mmßm mama æßcofl mmmæ mwvm mmfia wavm mßvw mmæm ßwmm ovvcfi momofl .wmæofi ßmæofl vmmm mmwm ßmmm Hflom mwfiofi ooqw mmmm wßwfl ~w=ewflmuuQuNuo amuufiaoflmxwnw quwoawmzawu wuzoscwzmsm .mmâämëâzu všosowzuum Hmzwumwuaus umnßsàwm ~mmw==maR &muucna&uwu Hmæzumoamu swfluuaonmfinm ~wuuuoHu amunuaonwuam wwwzauø u-mmwxm Humoxmä ßïmxoåum .m@aumN=a azwuonm Hwammuumn mzwuoam ~m@Hw@ua¶s wauuonm .wunnššåm ufimwšåx Hmwzwmonmu u~NwmmAuH¥ qwfiou uwxowfiumowm ~wNon uwxowawxomw .@Ncu uflæomawxopw HMHQQ uwaomawæomm .dzmflxfl šoooooaømë ~wu@«ou~umu mzonoooflmwaum .w@Huuuu% wzoooooflmaaum .mzwazu m=uuouo~m=muum Hwzuazu mxnooooflmxmuum .mzmxzu w=ooouoHm=mu«m Hmzuazu @=uuoun§m=mu«m EmH=umHo 457 954 159 ammëmxw umaacm uxßøonm ^aE\m:v .u.a.2 I I mm mw I ooa ~ oca m~ m.~a mN m.~a æá aá 9G m... m... ...9 n.w mm a.m m.m mw m.~a m.w mw m.o a.m m.~a w.a. må mm alm máa mw aá. a.m mm m.a m.m mm w.a, w.a mwma w.o a.m m.~a m.o «.° a.m «.o a.m m.w a.o møáv wa moév ïo To Nå mcáv fc æmo air. "io omov vá má Fo wá må N o mf... fi.w N o mfa m.w N-o än ~ m; fw 2 wá .. vao mé aá m.o a.m Nå I æ.c m.Na .N.o w.a m.m æ.o nå mfo wfo mofov moáv ~.o ~.o. 1 m; 3 mg. Ww 92 m5 aá Ná m... 9G m4. ïo m... nå. wá fo aa. Nio 70 wa ooa dm om ooa om mm om a.m m~ m.w om mm m.Na ooa æ.o m.@ a.m m.a a.m w.a m.m m.o m.~a a.m w.a m.a w.a fi.NH w.a a.n o.a w.a w.a mmma maa maa Naa aaa oaa moa mmmm mwmm mwmm mmßm mama mßooa mmmæ m«væ mmaa wawm mßvm mmmm ßmmm owwoa momoa mmmoa ßmmoa vmwm mmwm ßmmm aaom mmaoa oovw mmmm wßma qmzowumououauu s®uuuno«m:mo< flumozmmxauu muæosowzwwm .uwezwmzawu wuzoscflxwmm .mxwomwuaus uwauanam qmmwflzmaß awunuaoaflmb .muzwmoamu aauouaoawflnm qwuuuoao sauuuaonwuzm ~wm=:om uaawmwxm cwämwww mwfivaz m qwawmßuma nawflozm fimwawnsaws mzmuonm qwuwsosmzm uaamwmnuax .mmnwmonwm uaamwønuaæ wmaoo ßmxbmfiuxnam waou uwauwamxoum ~waou cwxowauxnwm qwaou uaxoaamxomm qwzmflza mzououoaowæ qwuwuøuaumu wznoooowmmaum qwwacowuk u:uocoo@mwaum Qazmazu mzuuoooamæmum .wzmazu mzooouoamænuuw qmzmaxu mzuøouoamxmflw qmzwazu wxououoamxmuuw emacmmuo 160 457 954 oofl m.w om mm oofl om mmmæ .dzuwumouofiuo .Sfiëeoumcmøw os fm 0. w om 000 .. . mwmm .umêwmzamu muzmšfiawwm 0.0 0.0 0.0 0. 3 0.0 0.3 0000 .000=...0=.æ.0 300503000 mN m.w m.O m.N._.. wfm m.N.w mmßm åämummbadE Uuàëww 00 0.3 0.0 0.0 04 -_ 300 .æâšaèfi 0000008000 m.~H 0.0 æ.o mw 0.0 1. mßoofi ~mw=0moLwe awuuuaoawuxm 0.0 3.0 0.0 0.0 3.0 03 0000 .3330 0000000=3å 0.0 0.0 0.0 0.0 0. 0 03 03.0 43:00 0000030. 0.3 0.0 0.0 0.0 03 03 003 3020000 3032500.

H.m fl.o mo.ov N.o mo.ov øofl mflvm .nmAum~:= øzmuonm 0.0 0.0 0.0 0.0 0.3 m0 2.00 .0200002 00809000 3.0 10 0.0 0.0 0.0 03 0000 .03000000 §80É 0.0 0.0 3.0 0.0 0.3 03 0000 .æëëšš0 0000000000 0.0 0.0 0.0 0.3 3.0 03 033 530023 00030030 0.3 0.0 00. 0v 0.0 .0.0 00 0003 ._38 030002000 3.0 0.0 0. 0 0.0.. 0.0 00. 0.003 v38 00000000000 . . v . v . . v _00 . .B03 300 000033000 Ww mmfi mwflm .UWY 040% 03 0000 .S8 0000300000 n.m m.o m.o .Üm må m.~._.. ma: 00030403 mzououofiuwë fi.m mo.ov mo.ov «.o ~.o H.m ßmmm qwuwßuufiumu mzuuoooumwaum u oofl oofl ooH om | :om ..mflåuuuu% mzuuouoæmwfim 03 03 _03 0.2 00 0.3 033 .00200 0000000000030. m.- H.m H.m 3.0 m.w m.w oovw qmzmnzu 0:ououo~mmmu0w mw H.m m.w w.~ H.m m.m mmm~ .mzwnzu 0:uoouoNææm0»m 00 0.0 0.0 0.0 3.0 0.0 002 600000 0000003000000. 33 03 03 03 02 03 . _ Emflcmmuo flwNEmxm umflficm uxøfloum :cimš .o.H.z 457 954 161 Awmåmxw ßmflflcm uzøøoum :E\ 5 .U.H.2 | f 1 om 1 | om m.~H o=H 1 m~ m.~H : m.@ «.o ~.~ m~ w.H m.~H mm w.o ~.m mw 1 MN m.~H mw @.~M w.H m.~H 4 mw m.~H OCH w.o. m.ø am 1 om Om OCH H.m. _«.° m.~H 1 m.~fi m.~H QOH m.o. «.° m.~H 1 m.m H.m m.~ @.o m@.ov m.~H 1 m.w H.m m.@ ~.c ~.° m.d m~ ~.o mo.ov H.m mø.øv mQ.° m.- f ~.m @.H @.H mo.ov mo.°v m.- | H.m v.o m.@ ~.° ~.° H.m | m.w m.Q m~ ~.o w.° m » mw m.~fi mw m.H fi.o w.H 1 w.~ m.° m.~H fl.° æ.o m.w » m.m ~.~ m.~H w.o ~.° ~.ø mw «.o H.o ~.@ mo.ov «.o m~ | m.~H m.@ mw w.H _ m.° ~.m ~.@ H.m H.~ H.m w.~ må m5 wå 90 _10 m... m... om om øofi OCH OCH | 1 om en mfl m~ Om m~ mw mwwfl m.w ~.m H.m ~.@ m.- m.w m~ H.m H.m H.m ~.@ m.~H A.m om w.° H.~ A.m m.w m.~H fl.m QNH m- ßmfi m~H mmfi QNH MNA mmmm mmmæ mwmm mmßm mama æßoofl wmmæ mwvæ mmfifi wavm mßvæ mmæm ßwmm ovvofi momofl wmæofi ßmmofl wmmm mmvm ßmwm Hflom mmfloa oovw mmmm wßwa ~m=u@@muuou~uu nmuuuaoamzwuw .umo:wm=amu,mu:osow=mæm quøozwmzauu musosowzmøm »mzæømmuadë Uwuuaàmm ~@@¶:=«a% amfiounoaflwu qwwzwmoaau nmuuuaoauæzm qmßuuofiu amfloußoawuam qwwazom uN~umwæm .uwoxmmß uN~m:os§um .wmaumN:= mzuuonm .wawmfiøwfi azuuonm ~m@~w@an@E wxuuoam -aumæosswzm u-uwunw~x qwmcwmoamu mN~muaAmNx .wNou uwxumàwaocm .wNoo uwxowawæoøm .w~ou uvxowsmxomm «w~ou uwxumäuzomm ~m:m«:~ mzooouonuwz qmc@«ou~umu wsuoouowmwnam .ww~uoms% wzuuouoßmunum qmzmaxu m:ououo~mx&c«m ~m:ma:c mzuoouofimxmum qmzmasu m=ouooo~mxmu«m ~m=mx:u m:ououo~mxmum Emflcmmuo 457 954 162 am mw 1 1 OCH om 1 1 mšfi .om 1 mw mw mšfi @.ø m.ø ~.m OCH ~.m m~ m.° «.° m~ m.w 1 m.~H m~ ~.wH ~.° m.~H ~.m 1 m.~H mm n.w “io m6 .Ta 1 mé om då.

~.° H.n æ.° 1 @.~ mm ~.m ~.° ~.fi @.~ 1 @.~ m.~H m.° mo.ov @.ø <.d 1 «.° m.~H «.o mo.ov «.c «.° om w.H v.° ~.o mcáv vä ...dáv EZ Éïov m6 wé mo.°v «.= «.= 1 m.H ~.w m.° H.° w.ø æ.ø 1 m.fi H.m ~.° @.° H.n H.~ 1 m.@ m w.H ~.° m.ø m.ø 1 m.° .@.H @.° ~.a m.~H ~.m OCH H.~ m.@ w.H_ mø.°v w.° m.° om m.o ~.o ~.° ~.d n.@ H.m 1 H.~ mw w.~. m.@ n.w øøfl @.fi H.m H.m mm H.n @.d dm m.~H «.o «.o m.~H v cm 1. 1 om oofl .1 1 om 1 m.- om om øofi Cm ~.fi 1 m.- ~.@ ~.@ m~ Qofi ~.n 1 H.m m.~H m.w m~ QQH H.m 1 m.@ m.~H m.w m~ wmfl mmfl «mH mmfi Nmfl fimfl omflfiwmëæxw umfläcm »xsuonm .HE\m=v .U.H.z ä: m m m w :šoï mououwuu amwušoflwzwow m N m m .dmoæflšzawu mwzoëowzumm m v m m :umoxmmzawu šaëuwxwmm m mß m .dxmuwuuàë dmflëwm. m fim m .Ušëšak amfiuuægfiwu m ß o o H :özumoawu afiušoawflš m m m m .. äuuåu aflecaoafi :w Slå Jšššm ufimmunü. 3,3 .qšâš Sflâßšuw :Ä :flflušxa .äšonm å. _. m Jršmflflæ wzšoam “mmm .@@~¶@u»»s ~=@»°»m ßwmm .m@¶=°E3m=@ uNNm»=@«N~ øvqofi .mw=w@@»»u @NNw»~@m§~ momofi ~@NQu ßwmuflamxuwm wmmofi .¶NQ» §»«u»=@@omm ßmmcfi QQNQQ w¶«u»=@=°@@ ämm Jåou uušuuršxnmm m www qmzwfiå mzuuouonuwz ß m m m .duä US u? mšuoufimmaum .Ûom .däuowuk wzuouucamwšm m w .fi o .H Jäsan månens» manga o o w N åzuäë m: uoouå azmuum. m mm N .mšwšë wšoouš mxnšm. w ß N .H .mnmšë 93038 mæmoum _ Ewfiåmuo 457 954 163 om OCH m.- m.~H m.~H fi.m OCH 1 m.~H m.~H w.° H.m ~.m æ.@ @.fi «.° H.~ w.@ @.H w.o m.° w.H w.° w.~ @.o m.° H.~ ~.m ~.~ @.H m.° ~.m w.H w.H w.ø «.° w.ø w.~ m.o v.o m°.°v ~.w @.@ æ.@ ~.o ~.o m°.°v @.H m.° @.° mo.ov mQ.ov m°.°v @.H m.ø A.° «.Q @.o m°.°v ~.w m.o w.H v.Q «.o H.° m.~ w.H w.H ~.Q H.o m.° 1 ~.m @.H w.~ w.o m°.°v m.w @.Q @.° ~.o H.@ ~.° ~.@ w.~ @.H w.~ «.o ~.° @.° «.° w.H mo.Ov ,mQ.ov «.o om @.H w.H @.H @.H m~ @.H m.~H H.m m.@ m.w om w.ø H.~ mw m.@ «.Q 1 m 1 m~ - | m NH OCH m.~H om - ~.w om. .H.z om - m.@ om m~ mm m«H Nqfl A«H Ammíwxm umflacw uxdwoum ^HE\m=v .U.H.2 mmmm mmmæ mvmm mmßm mama mßoofi mmmm mvwm mmafl mfivm aßvm mmmm ßmmm cwwofl moaofi mmmofl ßmmofl wmwm mavm ßmmm aflom mmfiofi oowm mmmw wßwa .mzuwwmuuouwuo smfiuunouwzwow uwosw :sun muzozöfiswøm ~umo:wm:amu munofiofisuwm ~m:wommoadE umuunäwm «@ww::ma% smuounoaflwu ~wm:mmozwu nunnunofimßzm qmuøuoflu sæfiouaoawuzw .wææzow u-umwxm :äoxmš 3 N wzofium ~mwaumN:a mauuonm qwawmuflmn mzmuosm ~qw~w@usmE æzmuonm «muw=ns:m:m uN~uwma«~æ ~mm=«moawc u-w@mam»x «w~oo umxowamxomm ~w~ou uwxowauaomw ~w~ou uwxuwamxmmm ~w~ou uwxowamxumm qmzwuzw mwcuouoaowz .mu@unu~umu mzuuououamaem ~mw~uowu% mzoooooumuaum qmzmnzu m:ououoNmm@w«w .mzæaxu msuoouoflmx uw ~m:mx:u mzuoouoflmxaum .mzmfisu mzuuøuoflmxmuum Emficmmuo 457 954 1.64 I I I mm m.NH om om.

I I I w.H m.NH m.NH ooa om I I v.o m.w m.NH H.m din. I E; ~¿ mé än än. fi.m I mm v.o fi.m m.~ fl.m. ; m.w I ooa æ.o m.m fi.m m.w.

H.m I oofl fl.o æ.o w.H m.H= H.n I mm a.o w.H m.o w.H H.m I m.mH mo.o w.o w.o u.fl m.w oøa m.~H mo.c mo.ov mo.ov mo.ov v.c oca m.o mo.o N.o w.fi w.a fl.n I m.~H mo.o v.o æ.o w.a m.w I m.m mo.o H.o N.o v.o m.w 1 oofl v.o m.Nfl w.H m.NH _ w.H I mm .B.z w.o ~.o w.o H.n I mw ~.o m.H v.o æ.o H.m om m.m H.o H.o mo.ov mo.ov m.w I om N.o ~.m m.~ H.n . oofi I I m.NH m.w fl.m H.m m.NH I I m.NH m.w «.o H.m I I I I oofi oofi I I I I I mm Üm mm I I I I m.m H.m m.w I I I I n.w ~.m m.w mmfi Nmfi. Hma omfl mwfi æwa ßvfi Awmëwxw umfiacm uxswouu .U.H.2 AHE lv mmmm mwmm mwmm mmßm mama æßoofl wmwæ mvvæ mmafi wavm mßwm mmmm ßwmm ovvofl momcfi .wmæofl ßmæofl vmmæ mmvw »mmm Hfiom mmfloa ooww mmmw mßmfl ~m:umwmououwco amuuünoumäwuw umozw :aus muansufiamem Iumozwmzawu muæusoflzwum .m:mummuadE uwunanmm fiwwwxzuak nmflcuaesæwu Immæmuoawu muwouaomuunm ~muuuo~u zuflouaonmuzm «ww::om u-umu@m quøoxmmfl u~Nm:es~um qwmmumfizn wzuflopm qwammflfima mzuuonm ««@~wnuamë wzuuonm ~muw:os:w:m u-æwunmNæ qmmswmøamu uNNmwmQwNæ qwfiou uwxomxmxomm qfluoo uwxuwaææumm .»~ou uwxcwamxusw -»Noa uwxuwàmxumm Jäößz» wzououoaumz. ~uc@fluuNumu mzuoouonmwaflm qwwwuowsæ mzuuoooumunuw .mzmazo msuuoooflmæmflm .wzmnzu mzuuoooflmæmuw .wzuazu nzououofimxmuuw qwamszu wzmuouoflmæmufim Emflcmmuo 457 954 165 awmämxw umflaøw uxøwoum ||||4¶l||¶l4l4l ^He\ 1. u H 2 oøfl om 1 Oøfi 1 øofi @.H om 1 m.~fl 1 @m «.° m.@ m~ w.o 1 m ~fi @.@ H." 1 «.o 1 om «.° H.m 1 ~.Q 1 om @.° ~.w 1 «.o 1 oofl ~.° m.w 1 ~.@ 1 cm H00 Now .l 0.0 I m°.°v ~.o OCH ~.° » Om mQ.ov ~.Q WN ~.° 1 om moáv ...e 1 2.0 1 om mQ.°v «.° Om ~.° 1 om mQ.ov ~.° 1 ~.o Qofl om ~.° @.H 1 @.o 1 Om m°.Qv @.° 1 1 H.° OCH mm @.o m.~H øofl H.@ OCH m~ H.c «.° WN ~.o 1 mw v.o H.m 1 w.o 1 om. m~ m.w «.o 1 1 w.H Om ~.@ «.o OCH 1 m.w 1 1 om 1 1 OCH 1 1 «.@ 1 1 cm 1 mw ~.o 1 .1 máfl 1 m.~H fl.o 1 1 m.~H 1 WN ~.o 1 1 m.~H .w. cmfi mmfi wmfl .wmfl qmfl mmmm mwmm mvmm mæßm æflmm mßoofi wmmæ mevæ mmafl wavm mßwæ mmmm ßumm owqofl momofi wmmoa ßmwca vmww mmww »mmm aaom mwflca ooww amma wßwfi .m:uwumosoo~ue nmuoeaoømnwnw .umozwmzawu muzoeowawsm qumozwmzawu muzosowzwmm quzmuwmnauë umeunamm qvuwzzmaæ amuucmnnuwo .wmzmmcamc n»«uunonwø:m qmßouofiu aæwuuaonmflzw ~ww::oa ufiummmxm .uwåïš ufiæzošum .mmasm~:ß mzmuonm .wammufius mzmoonm .mw~maunwE øzuuonm .ufiwzoszmcm uN~mwmam~x qmmzwmoamu u~Nuwø&m~¥ ~@~oo uwmownuæoww .@Noo uwmuwnwxomm .wwoo uwxowawxnmm ~¶~ou uwxowawmomm qmzwuzfl mzcoouoauwz .wu@«uu~um¶ wzuuoooøwwauw ~mw~uouu nzuoouon mxum :åvšu wzueøuoflmxmußm qwzmaxu mzuoouo~mxm«m .mzmazu m:ooouo~mmm»w .wzmazu mxumonofimxmuam Ewflcmmao

Claims (6)

457 954 ite PATENTKRAV

1. l. B-Laktam med formeln šz NH,fiC--ï-R] áè--N-SOÉMQ 0 r k ä n n e t e c k n a d därav, att R2 är väte eller alkoxi med l-4 kolatomer; R3 och R4 är lika eller olika och betecknar vardera väte eller alkyl, eller endera av R3 och R4 är väte och den andra är alkoxikarbonyl, alken-l-yl, alkyn-l-yl, cykloalkyl, fenyl, eventuellt med l, 2 eller 3 amino-, halo- gen-, hydroxyl-, trifluormetyl-, lägre alkyl- eller lägre alkoxígrupper substituerad fenyl, 2-fenyletyl eller 2-feny1- etynyl; och M är väte eller en katjon med det förbehållet att när både R3 och R4 är väte är R2 inte väte eller metoxí.

2. ß-Laktam enligt patentkravet 2, k ä n n e t därav, att R2 är väte.

3. ß-Laktam enligt patentkravet 2, k ä n därav, att R4 är metyl.

4. ß-Laktam enligt patentkravet 2, k ä n därav, att R3 är väte och R4 är metyl.

5. ß-Laktam enligt patentkravet 2, k ä n därav, att R3 är metyl och R4 är väte.

6. Förening med formeln vari R2 är väte eller alkoxi med l-4 kolatomer; R3 och R4 är U 457 954 Lu d lika eller olika och betecknar vardera väte eller alkyl, eller endera av R3 och R4 är väte och den andra är alkoxikarbonyl, alken-l-yl, alkyn-1-yl, cykloalkyl, fenyl, eventuellt med 1, 2 eller 3 amino-, halogen-, hydroxyl-, trifluormetyl-, lägre alkyl- eller lägre alkoxigrupper substituerad fenyl, 2-fenyl- etyl eller 2-fenyletynyl med det förbehållet att när både R3 och R4 är väte är R2 inte väte eller metoxi.