NL8100571A - Antibiotische beta-lactamen. - Google Patents

Antibiotische beta-lactamen. Download PDF

Info

Publication number
NL8100571A
NL8100571A NL8100571A NL8100571A NL8100571A NL 8100571 A NL8100571 A NL 8100571A NL 8100571 A NL8100571 A NL 8100571A NL 8100571 A NL8100571 A NL 8100571A NL 8100571 A NL8100571 A NL 8100571A
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
amino
oxo
salt
sulfonic acid
formula
Prior art date
Application number
NL8100571A
Other languages
English (en)
Other versions
NL192924B (nl
NL192924C (nl
Original Assignee
Squibb & Sons Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Squibb & Sons Inc filed Critical Squibb & Sons Inc
Publication of NL8100571A publication Critical patent/NL8100571A/nl
Publication of NL192924B publication Critical patent/NL192924B/nl
Application granted granted Critical
Publication of NL192924C publication Critical patent/NL192924C/nl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/397—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having four-membered rings, e.g. azetidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D205/00—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D205/02—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D205/06—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D205/08—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams
    • C07D205/085—Heterocyclic compounds containing four-membered rings with one nitrogen atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with one oxygen atom directly attached in position 2, e.g. beta-lactams with a nitrogen atom directly attached in position 3
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/0803—Compounds with Si-C or Si-Si linkages
    • C07F7/081—Compounds with Si-C or Si-Si linkages comprising at least one atom selected from the elements N, O, halogen, S, Se or Te
    • C07F7/0812—Compounds with Si-C or Si-Si linkages comprising at least one atom selected from the elements N, O, halogen, S, Se or Te comprising a heterocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F7/00—Compounds containing elements of Groups 4 or 14 of the Periodic Table
    • C07F7/02—Silicon compounds
    • C07F7/08—Compounds having one or more C—Si linkages
    • C07F7/10—Compounds having one or more C—Si linkages containing nitrogen having a Si-N linkage
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6558—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system
    • C07F9/65583—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom containing at least two different or differently substituted hetero rings neither condensed among themselves nor condensed with a common carbocyclic ring or ring system each of the hetero rings containing nitrogen as ring hetero atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/10—Nitrogen as only ring hetero atom
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Cephalosporin Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Description

Antibiotische β-lactamen
De uitvinding heeft betrekking op β-lactamen met een sulfonzuur substituent op de 1-plaats en een aminefunctie op de 3-plaats en op hun gebruik als antibiotica.
De verbindingen van de uitvinding vormen een nieuwe familie van antibiotische β-lactamen, die men met name als antibacteriele middelen kan gebruiken.
Er werd gevonden, dat men de β-lactamkern biologisch kan activeren door een sulfonzuurzout substituent, die aan het stikstofatoom in de kern is gebonden.
β-Lactamen met een sulfonzuursout (met inbegrip van "inwendig zout”) substituent op de 1-plaats en een acylamino substituent op de 3-plaats vertonen werking tegen een gebied van gramnegatieve en grampositieve bacteriën.
De leden' van de nieuwe familie van antibiotische β-lactamen van de uitvinding, die de voorkeur verdienen, hebben de formule 1.
Naast de boven beschreven β-lactamen met een sulfonzuurzout substituent op de 1-plaats en een acylamino substituent op de 3-plaats, heeft de uitvinding ook betrekking op β-lactamen met een sulfonzuurzout (met inbegrip van "inwendig zout") substituent op de 1-plaats en een amino substituent op de 3-plaats.
De voorkeursverbindingen van dit type hebben de formule la. Deze verbindingen zijn tussenprodukten voor de bereiding van overeenkomstige 3-acylaminoverbindingen.
In de formules 1 en la en in de gehele beschrijving hebben de symbolen de volgende betekenis:
Rj is acyl.
Rj is waterstof of alkoxy met 1-4 koolstofatomen.
R^ en R^ zijn hetzelfde of verschillend en zijn elk waterstof, alkyl, cycloalkyl, fenyl of gesubstitueerde fenyl, of één van R3 en R^ is waterstof en de andere is alkoxycarbonyl, alkenyl-1, alkynyl-1, 2-fenylethenyl of 2-fenylethynyl.
J*· 2 M+ is waterstof of een kation.
De uitdrukkingen "alkyl'* en "alkoxy" hebben zowel betrekking op groepen met rechte keten als op groepen met vertakte keten. Dergelijke groepen met 1-10 koolstofatomen ver-5 dienen de voorkeur.
De uitdrukkingen "eycloalkyl" en "cycloalkenyl" hebben betrekking op eycloalkyl- en cylcloalkenylgroepen met 3, 4, 5, 6 of 7 koolstofatomen.
De uitdrukking "alkenyl" heeft zowel betrekking 10 op groepen met rechte keten als op groepen met vertakte keten.
Dergelijke groepen met 2-10 koolstofatomen verdienen de voorkeur..
Figure NL8100571AD00031
De uitdrukking "halogeen" heeft betrekking op fluor, chloor, broom en jodium,
De uitdrukking "gesubstitueerde fenyl" heeft 15 betrekking op ëen fenylgroep, die gesubstitueerd is 1,2 of 3 amino, halogeen, hydroxyl, trifluormethyl en/of lagere alkyl en/of alkoxy-groepen.
De pitdrukking "beschermde carboxyl" heeft betrekking op een cafboxylgroep, die veresterd is met een gebruike-20 lijke beschermende estergroep. Deze groepen zijn algemeen bekend, zie bijvoorbeeld het Amerikaanse octrooischrift 4.144.333. De beschermde carboxylgroepen, die de voorkeur verdient zijn benzyl-, Een zhydryl- en t-butylesters.
w
De uitdrukking "acyl" omvat alle organische 25 radikalen, die zijn afgeleid van een organisch zuur (dat wil zeggen een carhonzuur} door verwijdering van de hydroxylgroep, Bepaalde acylgroepen verdienen natuurlijk de voorkeur, maar deze voorkeur mag niet worden gezien als een beperking van de omvang van de uitvinding. Voorbeelden van acylgroepen zijn de acylgroepen, die 30 in het verleden zijn gebruikt voor het acyleren van antibiotische l3--lactamen met inbegrip van 6-aminopenicillaanzuur en derivaten en 7-aminocefalosporaanzuur en derivaten (zie bijvoorbeeld Cephalosporins and Penicellina, uitgegeven door Flynn, Academie Press (1972), het Duitse Offenlegungsschrift 2,716.677, het Belgische octrooi-35 schrift 867.994, de Amerikaanse octroorschriften 4.152.432, 3.971.778 en 4.172.199 en het Britse octrooischrift 1,348.894.
8100571 - 3 -
Figure NL8100571AD00041
De volgende lijst van acylgroepen wordt gegeven ter verdere toelichting van het begrip "acyl". Voorbeelden van acylgroepen zijn: a. alifatische groepen met de formule (CO)-, 5 waarin R<. alkyl, cycloalkyl, alkoxy, alkenyl, cycloalkenyl, cyclo- hexadienyl, of alkyl of alkenyl, gesubstitueerd met 1 of meer halogenen, cyaan, nitro, amino, mercapto, alkylthio of cyaanmethyl-thiogroepen voorstelt.
b. Carbocyclische aromatische groepen met één 10 der formules 35 t/m 40, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, Rg, R^ en Rg elk, onafhankelijk van elkaar, waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of aminomethyl voorstellen en Rg amino, hydroxyl, een carbonzuurzout, beschermde carboxyl, formyloxy, een 15 sulfozout, een sulfoaminozout, azido, halogeen, hydrazino, alkyl- hydrazino, fenylhydrazino, of [_ (alkylthio)thioxomethyl_/thio voorstelt.
Carbocyclische aromatische acylgroepen, die de voorkeur verdienen, zijn die met de formules 41, 42, 43, (waarin 20 Rg bij voorkeur een carbonzuurzout of sulfozout voorstelt) en 44, (waarin Rg bij voorkeur een carbonzuurzout of sulfozout voorstelt.
c. Hetero-aromatische groepen met één der formules 45 t/m 49, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, Rg bovengenoemde betekenis heeft en R^g een al of niet gesubstitueerde 5-, 6-, of 7-ledige 25 heterocyclische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 (bij voorkeur 1 of 2) stikstof-, zuurstof- en/of zwavelatomen. Voorbeelden van heterocyclische ringen zijn thienyl, furyl, pyrrolyl, pyridinyl, pyrazi-nyl, thiazolyl, morfolinyl, pyrimidinyl, en tetrazolyl. Voorbeelden van substituenten zijn halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, 30 trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen of alkoxy met 1-4 koolstofatomen.
Heteroaromatische acylgroepen, die de voorkeur verdienen, zijn die groepen met bovengenoemde formules, waarin R^g 2-amino-4-thiazolyl, 2-amino-5-halogeen-4-thiazolyl, 4-aminopyrimi-35 dinyl-2,j5-amino-l,2,4-thiadiazolyl-5, 2-thienyl of 2-furanyl voor- 81 00 57 1 - 4 - stelt.
d. / £ (4-Gesubstitueerde-2,3-dioxo-l-piperazi-nyl) carbonyl /amino /arylacetylgroepen met' de formule 50, waarin Rjj een aromatische groep voorstelt (met inbegrip van carboeyclische 5 aromaten als die met de formule 51 en heteroaromaten als inbegrepen in de definitie van Rjq) en alkyl, gesubstitueerde alkyl (waarin de alkylgroep gesubstitueerd is met één of meer halogeen-, cyaan-, nitro-, amino- of mercaptogroepen) arylmethyleenamino (dat wil zeggen -N=CH-R^j, waarin R^ ^ bovengenoemde betekenis heeft), aryΙ-ΙΟ carbonylamino (dat wil zeggen -NH-(CO)-R^, waarin R^ bovengenoemde betekenis heeft), of alkylcarbonylamino voorstelt.
( / (4rGesubstitueerde-2,3-dioxo-l-piperazinyl) -carbonyl_/amino_/arylacetylgroepen, die de voorkeur verdienen zijn die, waarin R^ ethyl, fenylmethyleenamino of 2-furylmethyleenamino 15 voorstelt.
e. (Gesubstitueerde oxyimino)arylacetylgroepen met de formule 52, waarin R^ bovengenoemde betekenis heeft en R^ waterstof, alkyl, cycloalkyl, alkylaminocarbonyl, arylaminocarbonyl (dat wil zeggen -(CO)-Nh-Rjj, waarin R^ bovengenoemde betekenis /'-V {·, ,v 'V-Jf 20 heeft) of gesubstitueerde alkyl voorstelt (in welk laatste geval de alkylgroep gesubstitueerd is met één of meer halogeen-, cyaan-, nitro-, amino-, mercapto-, alkylthio-, aromatische groep (als gedefinieerd door Rjj)> carboxyl (met inbegrip van de zouten daarvan), amido, alkoxycarbonyl, fenylmethoxycarbonyl, difenylmethoxycarbonyl, 25 hydroxyalkoxyfosfinyl, dihydroxyfosfinyl, hydroxy(fenylmethoxy)-fosfinyl, of dialkoxyfosfinyl substituenten).
(Gesubstitueerde oxyimino)arylacetylgroepen, die de voorkeur verdienen, zijn die, waarin R^j 2-amino-4-thiazolyl voorstelt. Ook de voorkeur verdienen groepen, waarin R^ methyl, 30 ethyl, carboxymethyl of'2-carboxyisopropyl voorstelt.
f. (Acylamino)arylacetylgroepen met de formule 53, waarin R^ ^ bovengenoemde betekenis heeft en R^ een groep met de formule 54, amino, alkylamino, (cyaanalkyl) amino, amido, alkyl-amido, (cyaanalkyl) amido, of een groep met één der formules 55 t/m 35 60 voorstelt.
8 1 0 0 5 7 1 -5- (Acylamino)arylacetyIgroepen met bovengenoemde formule, die de voorkeur verdienen zijn de groepen, waarin R^ amino of amido voorstelt. De voorkeur verdienen ook de groepen, waarin fenyl of 2-thienyl voorstelt.
5 g, £ L L 3-Gesubstitueerde-2-oxo-l-imidazolidi- nyl_/carbonyl /amino_/arylacetyIgroepen met de formule 61, waarin R^j bovengenoemde betekenis heeft en R^ waterstof, alkylsulfonyl, arylmethyleenamino (dat wil zeggen -N=CH-R^, waarin R^ bovengenoemde betekenis heeft), -(CO)-Rlg (waarin Rlg waterstof, alkyl 10 of halogeenalkyl voorstelt), een aromatische groep (als boven gedefinieerd door Rj^), alkyl of gesubstitueerde alkyl voorstelt, (in welk laatste geval de alkylgroep gesubstitueerd is met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino of mercaptogroepen).
/ / / 3-Gesubstitueerde-2-oxo-l-imidazolidinyl_/-15 carbonyl_7amino_7arylacetyIgroepen met bovengenoemde formule, die de voorkeur verdienen, zijn die, waarin R^ fenyl of 2-thienyl voorstelt. Ook de voorkeur verdienen de groepen, waarin R^ waterstof, methylsulfonyl, fenylmethyleenamino of 2-furylmethyleenamino voorstelt.
20 De door de gehele beschrijving gebruikte uit drukking "kation" heeft betrekking op allerlei positief geladen atomen of atoomgroepen, De "-SO^ M+" substituent aan het stikstofatoom van de β-lactamen van de uitvinding heeft betrekking op alle sulfonzuurzouten. Farmaceutisch aanvaardbare zouten verdienen 25 natuurlijk de voorkeur, hoewel men ook andere zouten kan gebruiken bij het zuiveren van de produkten van de uitvinding of als tussen-produkten voor de bereiding van farmaceutisch aanvaardbare zouten. Het kationogene gedeelte van de sulfonzuurzouten van de uitvinding kan worden verkregen uit hetzij organische, hetzij anorganische 30 basen. Een dergelijk kationogeen gedeelte omvat bijvoorbeeld de volgende ionen: ammonium, gesubstitueerde ammonium, bijvoorbeeld alkylammonium (net name tetra-n-butylammonium, in het vervolg tetrabutylammonium genoemd), alkalimetaal, bijvoorbeeld lithium, natrium en kalium, aardal' .limetaal, bijvoorbeeld calcium en mag-35 nesium, pyridinium, dicyclohexylammonium, hydrabaminium, benzathi- 81 0 0 5 7 i 6 6
Figure NL8100571AD00071
nium en N-me thy1-D-glucaminium.
Als weergegeven in de formule 3 en in de definities omtrent de formule 3, kan M+ waterstof zijn.
Als nader zal worden beschreven kunnen de β-lac-5 tarnen van de uitvinding langs synthetische weg worden bereid. De niet gealkoxyleerde 4-ongesubstitueerde β-lactamen -met de formule 3, dat wil zeggen de verbindingen met de formule 1, waarin R^ en R^ waterstof zijn kunnen worden gebruikt onder gebruikmaking van 6-aminopenicillaanzuur of een ö^acylaminopenicillaanzuur als 30 uitgangsstof. De β- lactamen met de formule 1, waarin R2 alkoxy is, kunnen uit het overeenkomstige niet gealkoxyleerde β-lactam worden bereid. Sommige verbindingen van de uitvinding kunnen worden gekristalliseerd of herkristalliseerd uit water bevattende oplosmiddelen. In dergelijke gevallen kan er hydraatwater worden ge-35 vormd. De onderhavige uitvinding heeft betrekking op stoechio- metrische hydraten, alsmede op verbindingen, die wisselende hoeveelheden water bevatten en leunnen worden bereid volgens werkwijzen als vriesdrogen.
Sommige β-lactamen met de formule 1 zijn ook 20 langs biologische weg bereid. Kweek van een stam van het micro-organisme Cfaromobacterium violaceum SC 13,378 levert een zout op van (R)-3-(acetylamino)-3-methoxy-2-oxo-3-azethidinesulfonzuur. Kweek van verschillende azijnzuurbacteriën, bijvoorbeeld Gluconobacter species SC 33.435 lévert een zout op van (R)-3-£^|r-25 (D-y-glutamyl)-D-alanylJ7 aminoJ7-3-methoxy-2-oxo-3 -azethidine-sulfonzuur.
β-Lactamen met een sulfonzuurzout substituent op de 3-plaats en een amino- of acylaraino substituent op de 3-plaats bevatten tenminste ëén chiraal centrum——het koolstof-30 atoom (op de 3-plaats van de β-lactamkern) waaraan de amino- of acylamino substituent is gehecht. De uitvinding heeft betrekking op die β-lactamen, die boven beschreven zijn, waarin de stereo- i 81 00 57 1 - 7 -
Figure NL8100571AD00081
chemie aan het chirale centrum op de 3-plaats van de β-lactamkem dezelfde is als de configuratie aan hetzelfde koolstofatoom op de 6-plaats van in de natuur voorkomende penicillinen (bijvoorbeeld penicilline G) en als de configuratie aan het koolstofatoom op de 5 7-plaats van in de natuur voorkomen cefamycine (bijvoorbeeld cefamycine C).
Met betrekking tot de 3-lactarnen met de formules 1 en la, die de voorkeur verdienen, zijn de structuurformules zodanig getekend, dat zij de stereochemie aan het chirale centrum op de 10 3-plaats weergeven. Vanwege de nomenclatuurconventie hebben de verbindingen met de formules 1 en la, waarin R2 waterstof is de S-configuratie en de verbindingen met de formules 1 en la, waarin R alkoxy is, de R-configuratie.
Ook onder de uitvinding vallen racemische meng-15 seis, die boven beschreven 3-lactamen bevatten.
β-Lactamen met een sulfonzuurzout substituent op de 1-plaats van de g-lactamkern en een amino- of acylamino substituent op de 3-plaats van de β-lactamkem hebben een werking tegen een gebied van gramnegatieve en grampositieve organismen. De 20 sulfonzuurout substituent is voor de werking van de verbindingen van de uitvinding essentieel. De verbindingen, waarin R^ en/of R^ waterstof of alkyl zijn, in het bijzonder methyl vertonen een bijzonder waardevolle werking.
De verbindingen van de uitvinding kunnen worden 25 gebruikt als middelen ter bestrijding van bacteriële infecties (waaronder infecties van de urinewegen en ademhalingswegen) bij zoog-dierspeciës als huisdieren (bijvoorbeeld honden, katten, runderen, paarden, enz.) en bij de mens.
Voor het bestrijden van bacteriële infecties 30 bij zoogdieren kan men een verbinding van de uitvinding naar behoefte aan een zoogdier toedienen in een hoeveelheid van 1,4 mg/kg/dag tot 350 mg/kg/dag, bij voorkeur van 14 mg/kg/dag tot 100 mg/kg/dag. Alle toedieningswijzen, die men in het verleden heeft gebruikt voor het afleveren van penicillinen en cefalosporinen aan de plaats van 35 infectie zijn ook van toepassing bij het gebruik van de nieuwe 81 00 57 1 - 8 - familie van β-lactamen van de uitvinding. Dergelijke toedienings-wegen omvatten oraal, intraveneus, intramusculair en als supposito-rium.
De β-lactamprodukten van de uitvinding worden in 5 het algemeen bereid door het invoeren van een sulfonzuur substituent (een sulfogroep -SO^-) aan het stikstofatoom op de 1-plaats van de β-lactamkern, De sulfoneringsreactie wordt gemakkelijk uitgevoerd door het β-lactam te behandelen met een zwaveltrioxyde-complex of met een equivalent sulfonerend reagens, bijvoorbeeld een chloor-10 sulfonaat.
De meest gebruikte zwaveltrioxydecomplexen zijn pyridine-zwaveltrioxyde, lutidine-zwaveltrioxyde, dimethylformami-de-zwaveltrioxyde en pikoline-zwaveltrioxyde. In plaats dat men een vooraf gevormd complex gebruikt, kan het complex ook in situ worden 15 gevormd, bijvoorbeeld onder gebruikmaking van chloorsulfonyl-tri-methylsilylester en pyridine als reagentia. Eventueel kan men de sulfonering uitvoeren via een tussenprodukt, door bijvoorbeeld het stikstofatoom aan de β-lactamkem eerst te silyleren en de gesily-leerde verbinding daarna te onderwerpen aan een silyluitwisselings-20 reactie met trimethylsilylchloorsulfonaat of een soortgelijk reagens. Voorbeelden van silyleermiddelen zijn monosilyltrifluor-aceetamide, trimethylsilylchloride/triethylamine en bis-trimethyl-silyltrifluoraceetamide.
In het algemeen voert men de sulfoneringsreactie 25 uit in aanwezigheid van een organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld pyridine of een mengsel van organische oplosmiddelen, bij voorkeur een mengsel van een polair oplosmiddel als dimethylformamide en een halogeenkoolwaterstof als dichloormethaan.
Het oorspronkelijk bij de sulfoneringsreactie 30 gevormde produkt'is een zout van het gesulfoneerde β-lactam. Als pyridinelzwaveltrioxyde het sulfonerende complex is, is het aanvankelijk gevormde produkt het β-lactam gesulfoneerde pyridinium-zout van het gesulfoneerde β-lactam, waarbij M+ in de formule 62 een pyridiniumion voorstelt. Deze complexen kunnen op de gebruike-35 lijke wijzen in andere sulfonzuurzouten worden omgezet (bijvoorbeeld 8 1 0 0 5 7 1 f; - 9 - met ionen uitwisselende harsen, kristallisatie of ionenpaar-extrac-tie). Deze omzettingsmethoden zijn ook geschikt voor het zuiveren van de produkten. Omzetting van het pyridinezout in het kaliumzout onder gebruikmaking van kaliumfosfaat of kaliumethylhexanaat, in het 5 tetrabutylansnoniumzout of onder gebruikmaking van tetrabutylammonium-waterstofsulfaat of in een Zwitter-ion (M+ = waterstof) onder gebruikmaking van mierezuur, zijn bijzonder waardevol.
De sulf oneringsreactie, die de sulfogroep aan het stikstofatoom van de β-lactamkem invoert kan natuurlijk in 10 verschillende stadia van de synthese worden uitgevoerd, waaronder inpassing voor de vorming van de β-lactamkem, wanneer men een dergelijke werkwijze volgt als onder uiteen wordt gezet. De sulfone-ringsreactie wordt uitgevoerd in aanwezigheid van eerder beschreven oplosmiddelen en gewoonlijk bij kamertenperatuur. Als de aminofunctie 15 aanwezig is voert men de reactie bij voorkeur met de beschermde aminofunctie uit.
Onder gebruikmaking van een beschermende benzyl-oxycarbonylgroep als voorbeeld, kan men de sulf oneringsreactie voorstellen met reactieschema A.
20 Men kan andere beschermende groepen gebruiken voor het beschermen van de aminefunctie, bijvoorbeeld een p-butyloxy-carbonylgroep, een eenvoudige acylgroep als acetyl of benzoyl of fenylacetyl, een trifenylmethylgroep, of een groep met de aminofunctie in de vorm van een azidegroep. De gewenste acylgroep (R^) 25 kan daarna met een gewone acyleringsreactie worden bevestigd.
Voorbeelden van acyleermethoden voor het omzetten van een verbinding met de formule 3 in een produkt met de formule 1 behelzen reactie met een carbonzuur (R^-OH), of overeenkomstig carbonzuurhalogenide of carbonzuuranhydride. Als R£ aikoxy 30 is, kan men de acylering het beste uitvoeren met een zuurchloride of zuurbromide. De reactie met een carbonzuur verloopt het gemakkelijkst in aanwezigheid van een carbodiimide, bijvoorbeeld dicyclo-hexylcarbodiimide en een stof, die in situ een actieve ester kan vormen, bijvoorbeeld N-hydroxybenztriazool. In die gevallen, waarin 35 de acylgroep (R^) een reactieve functie bevat (bijvoorbeeld amino 81 0 0 5 7 1
£ X
- 10 - of carboxylgroepen) kan het nodig zijn deze functionele groepen eerst te beschermen en daarna de acyleringsreactie uit te voeren en tenslotte het verkregen produkt te deprotegeren. Eventueel kan men de sulfoneringsreactie uitvoeren, terwijl de acylgroep reeds 5 ter plaatse is, dat wil zeggen volgens reactieschema B.
In geval R2 lagere alkoxy voorstelt, kan er een extra variatie zijn, omdat de ï^-lagere alkoxygroep zowel vóór als né de sulfonering kan worden ingevoerd onder gebruikmaking van de gewone methode, waarbij men het geacyleerde stikstofatoom op de 10 3-plaats chloreert gevolgd door reactie met een lager alkanolaat, als weergegeven in reactieschema C.
De acylgroepen bevatten bij bovenstaande reactie ook gemakkelijk verwijderbare groepen, die als beschermende groep fungeren en na de reactie kunnen worden verwijderd onder verkrij-15 ging van het "gedeacyleerde" produkt .
Voorts kan de (3-lactamring worden gevormd via een ringsluitingsreactie en kan de sulfoneringsreactie zowel vóór als na de ringsluiting worden uitgevoerd als bijvoorbeeld weergegeven in reactieschema D.
20 De acylgroep kan bij deze reactie ook een gemak kelijk verwijderbare groep zijn, die als beschermende groep fungeert en bij verwijdering het -NHj produkt oplevert,
De azetidinonen, waarvan men uitgaat en waarin R2 waterstof is en tenminste één der symbolen en R^ waterstof is, 25 kunnen ook worden bereid uit aminozuren met de formule 12 (waarin tenminste één der symbolen R^ en R4 waterstof is), De aminogroep wordt eerst beschermd met een klassieke beschermende groep, bijvoorbeeld p-butoxycarbonyl (in het vervolg aangeduid als "BOC"). Men laat de carboxylgroep van het beschermde aminozuur daarna in aan-30 wezigheid van een carbodiimide reageren met een aminezout met de formule 13 onder verkrijging van een verbinding met de formule 14 (tenminste één der symbolen R^ en R^ is waterstof). De hydroxy1-groep van een verbinding met de formule 14 wordt in een verlatende groep (V) omgezet met een klassiek reagens, bijvoorbeeld methaan-35 sulfonylchloride (methaansulfonyl wordt in het vervolg aangeduid 81 00 57 1 - 11 - κ
A
als "Ms"!. Andere verlatende groepen (V), die men kan gebruiken, zijn benzeensulfonyl, tolueensulfonyl, chloor, broom en jodium.
De volledig beschermde verbinding met de formule 15 (waarin tenminste één der symbolen en R4 waterstof is) wordt 5 aan ringsluiting onderworpen door behandeling met een base, bijvoorbeeld kaliumcarbonaat. Men voert de reactie bij voorkeur onder verwarming aan een terugvloeikoeler uit in een organisch oplosmiddel als aceton, waarbij men een verbinding verkrijgt met de formule 17 (tenminste één der symbolen en R^ is waterstof).
10 Eventueel kan ringsluiting van een verbinding met de formule 14 worden bewerkstelligd zonder dat men de hydroxy1-groep eerst in een verlatende groep omzet. Behandeling van een verbinding met de formule 14 met trifenylfosfine en diethylazodicar-boxylaat levert een verbinding op met de formule 16, waarin ten-15 minste één der synboleh en R^ waterstof is.
Verwijdering van de beschermende groep van de 1-plaats van een azetidinonjmet de formule 16 kan geschieden via natriumreductie als Y alkyl is en levert een tussenprodukt op met de formule 17, waarin tenminste één der symbolen R^ en water-20 stof is). Als Y benzyl is, levert katalytische (dat wil zeggen met palladium op kool) hydrogenering aanvankelijk de overeenkomstige N-hydroxyverbinding op, die bij behandeling met titaantri-chloride een tussenprodukt oplevert met de formule 17, waarin tenminste één der symbolen R^ en R4 waterstof is.
25 Een synthese, waarbij ringsluiting van het boven beschreven type besproken is, leidt tot inversie van de stereochemische configuratie van de R3 en R4 substituenten.
Als reeds gezegd kan men het bovengenoemde azetidinon sulfoneren onder vorming van een verbinding met de 30 formule 18 (tenminste één der symbolen R3 en R^ is waterstof).
Een eventuele andere werkwijze voor het bereiden van een verbinding met de formule 1, waarin R2 waterstof is en tenminste één der symbolen R3 en R^ waterstof is, gaat van een aminozuuramide uit met de formule 19 (waarin tenminste één der 35 symbolen R3 en R^ waterstof is). Bescherming van de aminogroep 81 00 57 1 Μ· ^ - 12 - met een klassieke beschermende groep, bijvoorbeeld benzyloxycarbonyl (in het vervolg aangeduid als 2) of BOC en omzetting van de hydroxylgroep in een verlatende groep (bijvoorbeeld V) bijvoorbeeld Ms levert een verbinding op met de formule 20 (waarin tenminste één 5 der symbolen R^ en waterstof is), waarin A de beschermende groep voorstelt.
Sulfonering van een verbinding met formule 20 levert een verbinding op met de formule 21 (waarin tenminste één der symbolen R^ en R^ waterstof is).
10 Ringsluiting van een verbinding met de formule V ) 21 geschiedt met een base, bijvoorbeeld kaliumcarbonaat. Men voert de reactie bij voorkeur uit in een mengsel van water en een organisch oplosmiddel (bijvoorbeeld een halogeenkoolwaterstof als 1,2-dichloorethaan) onder verwarming aan een terugvloeikoeler, waarbij 15 men een verbinding verkrijgt met de formule 22 (waarin tenminste één der symbolen R^ en R^ waterstof is).
Ο
Deprotectie van een gesulfoneerd azetidinon met de formule 22, waarin A een beschermende groep voorstelt, alsmede van de boven beschreven tegenhangers met een Rj-alkoxygroep, door 20 katalytische hydrogenering levert een verbinding op met de formule 23 (waarin tenminste één der symbolen R^ en waterstof is), waarin R£ waterstof of alkoxy is, kunnen worden omgezet in het overeenkomstige Zwitterion met de formule 24 (waarin tenminste één der symbolen R^ en R^ waterstof is) door behandeling met een zuur 25 als mierezuur.
Deprotectie van een gesulfoneerd azetidinon met de formule 22, waarin A een beschermende BOC groep voorstelt onder gebruikmaking van zure omstandigheden (bijvoorbeeld onder gebruikmaking van mierezuur) levert het overeenkomstige Zwitterion op met 30 de formule J4·
Een uitstekende bron voor de β-lactamen, waarvan men uitgaat zijn de 6-aminopenicillaanzuren en de 7-aminocefalospo-raanzuren, die eventueel respectievelijk een 6-alkoxy substituent of 7-alkoxy substituent kunnen dragen. Deze verbindingen hebben res-35 pectievelijk de formules 25a en 25b, waarin Rj waterstof of alkoxy 81 00 57 1
It 13 voorstelt en Rj waterstof of acyl voorstelt. Door aanpassing van in de literatuur beschreven werkwijzen kannen 3-amino-2-azetindinonen bereiden; zie bijvoorbeeld Chem.Soc. Special Publication No. 28, blz. 288 (1977); The Chemistry of Penicillins, Princeton üniv.
5 Press, blz. 257, en Synthesis, 494 (1977).
Aldus wordt 6-aminopenicillaanzuur of 7-amino-cefalosporaanzuur eerst gedesulfureerd door reductie met Raney nikkel. De reactie kan onder verwarming aan een terugvloeikoeler in water worden uitgevoerd en de verkregen verbinding heeft de 10 formule 26.
Vervanging van de carboxylgroep van de verbinding met de formule 26 door een acetaatgroep, gevolgd door hydrolyse, levert een 3-amino-3-alkaxy-2-azetidinon op met de formule 1 , waarin R^ waterstof' of acyl en R£ waterstof of lagere alkoxy 15 voorstelt en R^ en R^ waterstof voorstellen. Behandeling van een verbinding met de formule 26 met cupriacetaat en loodtetraacetaat in een organisch oplosmiddel (bijvoorbeeld azijnzuurnitril) vervangt de carboxylgroep door een acetaatgroep. Hydrolyse van de resülterende verbinding kan geschieden met kaliumcarbonaat in 2Q aanwezigheid van natriumhydride.
Invoering van een sulfogroep op de 1-plaats van een verbinding van bovengenoemde 3-amino-3-alkoxy-2-azetidinon verbinding kan geschieden door het tussenprodukt te laten reageren met een complex van dimethylformamide en zwaveltrioxyde.
25 Men kan een als uitgangsstof gebruikt 3-azido- 2-azetidinon bereiden door eerst een alkeen met de formule 27 te laten reageren met een halogeensnlfonylisocyanaat (bij voorkeur chloorsulfonylisocyanaat) met de formule 28 onder verkrijging van een azetidinon met de formule 29. Reductieve hydrolyse van een 3Q azetidinon met de formule 29 levert een N-ongesub s ti tueerd g-lactam op met de formule 30. Yoor een meer gedetailleerde beschrijving van hoven beschreven reactiereeks kan worden verwezen naar de literatuur, zie bijvoorbeeld Chem, Soc.Rev.',^ 5, 1818 (1976) en J.Qrg.Chem. ,^ 35^ , 2043 (1970), 35 Een azidogroep kan op de 3-rplaats van een azeti dinon met de formule 30 (of zijn gesulfoneerde tegenhanger) 81 00 57 1 - 14 - worden ingevoerd door reactie van de verbinding met een arylsulfonyl azide (bijvoorbeeld tolueensulfonylazide) onder verkrijging van een als uitgangsstof te gebruiken azetidinon met de formule 31. Oe reactie verloopt het beste door eerst de azetidinonstikstof te 5 beschermen met een silylrest (bijvoorbeeld t-butyldimethylsilyl, of p-butyldifenylsilyl), daarna het anion op de 3-plaats van de kern te doen ontstaan met een sterke organische base (bijvoorbeeld lithiumdiisopropylamine) bij lage temperatuur en daarna het anion met tolueensulfonylazide te behandelen. Bet verkregen tussenprodukt 10 wordt afgeschrikt met trimethylsilylchloride en daaropvolgende zure hydrolyse of fluoridesulvolyse van de N-beschermende groep levert ^ de verbinding met de formule 31 op.
^ Eventueel kan men de verbinding met de formule 31 verkrijgen door eerst een primair amine met de formule 63 of 64 te 15 laten reageren met een aldehyde met de formule R^CH^O onder verkrijging van de overeenkomstige base van Schiff. Een / 2+2__/cyclo-additie met een geactiveerde vorm van azidoazijnzuur levert een 3-azido-2-azetidinon op met de formule 65, waarin Q een groep met de formule 66 of 67 voorstelt, Oxydatieve verontreiniging van de 20 Q-substituent levert de verbinding met de formule 31 op.
De 3-acylamino-2-azetidinonen kunnen worden verkregen door eerst een 3-azido-2-azetidinon met de formule 31 te reduceren onder verkrijging van het overeenkomstige 3-amino-2-aze-tidinon en daarna het 3-amino-2-azetidinon te acyleren. v/ 25 Als reeds gezegd kan het produkt, wanneer R£ lagere alkoxy voorstelt, worden bereid uit de tegenhanger, waarin R^ waterstof is. Chlorering van de amidestikstof van een niet gealkoxyleerde verbinding levert een tussenprodukt op met de formule 32. Reagentia en werkwijzen voor het N-chloreren van amiden zijn in 30 de techniek bekend. Voorbeelden van reagentia zijn t-butylhypochlo-riet, natriumhypochloriet en chloor. Men kan de reactie uitvoeren in een organisch oplosmiddel (bijvoorbeeld een lagere alkanol als methanol) of in een tweefasig oplosmiddelsysteem (bijvoorbeeld water/methyleenchloride) in aanwezigheid van een base als natrium-35 boraatdecahydraat. Men voert de reactie bij voorkeur bij verlaagde 81 00 57 1 ?- £ 5 - 15 - temperatuur uit.
Reactie van een tussenprodukt met de formule 31 met een alkoxyleermiddel, bijvoorbeeld een alkalialkanolaat, levert een produkt pet de formule 1 op, waarin R2 alkoxy voorstelt, in combinatie met zijn enantiomeer. Men kan de reactie uitvoeren in een organisch oplosmiddel, bijvoorbeeld een polair organisch oplosmiddel als dimethylformamide, bij verlaagde temperatuur.
10 15 20 25
Een eventuele andere syntheseweg ter bereiding van de verbindingen met de formule 1, waarin alkoxy is, behelst het eerst alkoxyleren van een tussenprodukt met de formule 6, waarin RjNH een carbamaat is (R^ is bijvoorbeeld benzyloxycarbonyl) en R^ waterstof is en het daarna invoeren van een sulfogroep op de 1-plaats van de resulterende verbinding. Chlorering van een verbinding met de formule 6 volgens de boven beschreven werkwijze (voor chlorering van een niet gealkoxyleerde verbinding met de formule 1 tot een verbinding met de formule 22) levert een tussenprodukt op met de formule 33.. Volgens de boven beschreven alkoxy-leringswijze (voor het omzetten van een verbinding met de formule 32 in een produkt met de formule 1), gevolgd door toevoeging van een reductiemiddel, bijvoorbeeld trimethylfosfiet, kan de verbinding met de formule 33 worden omgezet in een tussenprodukt met de formule 34 in combinatie met haar enantiomeer.
Boven beschreven werkwijzen leveren de produkten met de formule 1, waarin R2 alkoxy is, op als een racemisch mengsel. Desgewenst kan men het enantiomeer met de R-configuratie uit het racemische mengsel op de gebruikelijke wijzen winnen, bijvoorbeeld door gefractioneerde kristallisatie van een geschikt zout met een optisch actief organisch amine of door ionenparenchromatografie onder gebruikmaking van een optisch actief kation.
30
Biologische produktie van het antibioticum EM5117.
35
Zouten van (R)-3-(acetylamino)-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (formule 1, Rj is acetyl en R2 is methoxy, in het vervolg aangeduid als EM5117) kunnen ook worden bereid door 81 00 57 1 kweek van een stam van het micro-organisme Chromobacterium violaceum SC 11.378, dat gedeponeerd is in de American Type Culture Collection als A.T.C.C. No. 3153-2. - 16 - r * 5 Het micro-organisme»
Het voor de produktie van EM5117 gebruikte micro-organisme is een stam van Chromobacterium violaceum SC 11.378. Een subcultuur van het micro-organisme kan worden verkregen uit de permanente collectie van de American Type Culture Collection, Rock-10 ville, Maryland. Zijn bestelnummer luidt A.T.C.C. No. 31532. Behalve het hiet beschreven en gekenmerkte specifieke micro-organisme kan men natuurlijk mutanten van het micro-organisme (bijvoorbeeld mutanten, die verkregen zijn door gebruik van röntgenstraling, ultraviolette straling of stikstofmosterd) ook ter produktie van 15 EM5117 worden gekweekt.
Chromobacterium violaceum SC 11.378, A.T.C.C.
No. 31532 kan uit een vochtig bodemmonster, dat het micro-organisme bevat, worden gewonnen door eerst het modenmmonster te stampen op een medium, dat bevat: 20 Bodemextract 400 ml
Gedestilleerd water 400 ml
Gistextract 5,0 g
Glucose 10,0 g
Agar 17,5 g
Figure NL8100571AD00171
25 Het medium wordt op pH 6,0 ingesteld en 20 min.
in een autoclaaf bij 121° C gesteriliseerd. Na 24-72 uur incubatie bij 25° C wint men kolonies van Chromobacterium violaceum SC 11.378 uit de uitgestreken aarde. Men laat deze geïsoleerde kolonies daarna groeien op een medium, dat bevat:
Gistextract 1 g Rundvleesextract 1 g NZ amine A 22 g Glucose 10 g Agar 15 g Gedestilleerd water tot 1 1 8100571 17
Het medium wordt op pH 7,3 ingesteld en 30 min. op 121° C in een autoclaaf verhit.
Chromobacterium violaceum SC 11,378 is een gramnegatieve staaf, die vaak dwarsligging, bipolaire vlekvorming 5 en lipide insluitsels vertoont. Het is motiel met één enkel polair flagellum met van tijd tot tijd laterale fLagella, die kleiner van afmeting zijn.
Op voedingsagar produceert Chromobacterium violaceum SC 11.378 violette kolonies. Het pigment wordt versterkt 10 op aan tryptofaan rijke media en gistextract. In voedingsvloeistof produceert het een violette ring aan de wand van de buis, maar geen confluent pellikel. Het violette pigment is oplosbaar in ethanol, maar onoplosbaar in water en chloroform.
Chromobacterium violaceum SC 11.378 is mesofiel 15 en groeit over een traject van 15-37° C, maar er treedt geen groei op bij 4° C of boven 37° C. Caseïne wordt sterk gehydrolyseerd door het micro-organisme, dat oxydase positief is. In aanwezigheid van Chromobacterium violaceum SC 11.378 worden glucose, fructose en trehalose gefermenteerd (methode van Hugh & Leifson, 1953).
20 L-Arabinose wordt door het micro-organisme noch fermentatief, noch oxydatief gebruikt. Er wordt door het micro-organisme cyaanwater-stof geproduceerd en aesculine hydrolyse is negatief.
De boven beschreven sleuteleigenschappen verschaffen de basis voor de identificatie van het micro-organisme als 25 Chromobacterium violaceum ter onderscheiding van Chromobacterium lividum, de enige andere species van het genus Chromobacterium, die in de 8e editie van Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, wordt onderscheiden.
Nog andere stammen van Chromobacterium violaceum 30 kunnen ook ter produktie van EM5117 worden gekweekt.
Het antibioticum.
Ter verkrijging van het antibioticum EM5117 laat men Chromobacterium violaceum SC 11.378 A.T.C.C. No. 31532 35 bij of bij ongeveer 25° C onder submerse aerobe omstandigheden 81 0 0 5 7 1 * - 18 - groeien op een waterig voedingsmedium, dat een assimileerbare koolstof en »stikstofbron bevat. De fermentatie wordt uitgevoerd totdat het medium aanzienlijke antibiotische werking heeft verkregen, gewoonlijk 18-24 uur, bij voorkeur 20 uur.
5 Onder gebruikmaking van de volgende werkwijze kan men EM5117 van het fermentatieroedium scheiden en zuiveren. Nadat de fermentatie voltooid is kan men de vloeistof centrifugeren ter verwijdering van het mycelium, of eventueel ook filtreren teneinde het mycelium uit de vloeistof te verwijderen. Na verwijdering 10 van het mycelium uit de vloeistof kan men EM5117 uit de vloeistof extraheren. Bij voorkeur wordt de vloeistof bij pH 5 geëxtraheerd door ionenpaarextractie met cetyldimethylbenzylammoniumchloride in methyleenchloride en teruggeêxtraheerd in waterig natriumjodide (ingesteld op pH 5 met azijnzuur). Na concentratie van het natrium-15 jodideextract in vacuum kan men een oplossing van het overblijfsel in water met butanol wassen. Concentratie van de resulterende waterige oplossing tot droog levert een overblijfsel op, dat voor zover mogelijk in methanol wordt opgelost. Men kan de onoplosbare stoffen afcentrifugeren en daarna wassen met methanol en vervolgens 20 wegwerpen.
Zuivering van het antibioticum kan geschieden door het methanolconcentraat op te lossen in methanol/water (1:1) en het te leiden over een chromatografiekolom, bijvoorbeeld een kolom van Sephadex G-10 in hetzelfde oplosmiddelmengsel. Na eluëring 25 van hetzelfde mengsel worden de actieve fracties gecombineerd en geconcentreerd tot droog. Het overblijfsel wordt met methanol vermengd en de onoplosbare stof wordt afgefiltreerd en weggeworpen.
Verdere zuivering wordt verkregen door de in methanol oplosbare stof te leiden over een kolom van DEAE cellulose. 30 De kolom kan worden geëlueerd met een lineaire gradiënt, bereid uit pH 5 natrium 0,0 M fosfaatbuffer en pH 5 natrium 0,1 M fosfaat-buffer. De actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd en de in methanol onoplosbare stoffen worden verwijderd en weggeworpen .
35 Nog verdere zuivering van EM5117 wordt verkregen 81 00 57 1 i, t - 19 - door deze stof in water op te lossen en de oplossing te leiden over een kolom van Sephadex LH-20 en de kolom met water te elueren. De actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd. Verdere zuivering van EM5117 wordt dan verkregen door de stof in water op 5 te lossen, de oplossing over een kolom van Diaion HP-20AG te leiden en met water te elueren, De actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd. Het concentraat wordt opgelost in water en geleid over een kolom Dowe 50W-X2, kaliumvorm onder wassing met water, De effluent kan worden geconcentreerd tot een kristallijne stof, 10 die het betrekkelijk zuivere kaliumzout van EM5117 is.
Boven beschreven winning en zuivering levert het kaliumzout op van EM5117. Men kan andere zouten bereiden in overeenstemming met de vorm van de ionen uitwisselende hars, die men bij de laatste zuiveringstrap gebruikt.
15
Biologische produktie van het antibioticum EM5210.
Zouten van (R)-3-/_ (_ N- (D-γ-glutamyl)-D-alanyl_/-amino /-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (formule 1, waarin 20 Rj D-y-glutamyl-D-alanyl en methoxy voorstelt, in het vervolg aangeduid als EM5210) kunnen eveneens worden bereid door kweek van verschillende azijnzuurbacteriën.
Het micro-organisme.
25 Het micro-organisme Gluconobacter species SC
11.435 kan worden gebruikt voor de produktie van EM5210. Een subcultuur van het micro-organisme kan worden verkregen van de permanent collectie van de American Type Culture Collection, Rockville, Maryland. Zijn bestelnummer in de verzameling luidt A.T.C.C. No.
30 13581. Naast het hier beschreven en gekenmerkte specifieke micro- organisme kan men natuurlijk ook mutanten van het micro-organisme (bijvoorbeeld mutanten, verkregen door gebruik van röntgenstraling, ultraviolette straling of stikstofmosterd) kweken ter produktie van EM5210.
35 Gluconobacter species SC 11.435, A.T.C.C. No.
81 00571 “' ï - 20 - 10 15 20 25 30 35 31581 kan worden gewonnen uit grondmos, dat het micro-organisme bevat, door het grondmos eerst gedurende 7 dagen bij 25° C te incuberen in een 10 * pectine oplossing in water (pH 2,5). Het organisme kan dan worden geïsoleerd door uitstrijking op een medium, dat bevat: χ Extract van Spartina patens gras 400 ml Gedestilleerd water 600 ml Gistextract 5 g Glucose 10 g Ruwe agarvlokken 17,5 g *Extract van Spartina patens gras wordt bereid door 500 g fijngehakt, gedroogd gras toe te voegen aan 3 1 leidingwater, dat aan de kook is gebracht en 30 min. heeft gesudderd. Het medium wordt ingesteld op pH 6,0 en 20 min. in een autoclaaf bij 121° C gesteriliseerd. Na 18 uur incubatie bij 25° C wint men kolonies van Gluconobacter species SC 11.435 uit de uitgestreken pectine verrijkingsoplossing. Men laat deze geïsoleerde kolonie daarna groeien op een medium, dat bevat: Gistextract 1 g Rundvleesextract 1 g NZ Amine A 2 g Glucose 10 g Agar 15 g Gedestilleerd water tot 1 liter. Het medium wordt op pH 7,3 ingesteld en 30 min. in een autoclaaf op 121° C verhit. Gluconobacter species SC 11.435 is een pleiomorfe gramnegatieve staaf, die motiel is met 1-3 polaire flagella. Het is onvermijdelijk aerobe, katalase positief en oxydatief. Het onderscheidt zich van Pseudomonas, omdat het cytochroom oxydase negatief en tolerant onder extreem zure omstandigheden is. Deze eigenschappen wijzen er op, dat het micro-organisme nauwer verwant is aan de azijnzuurbacteriën dan aan echte Pseudomonas. Op BBL Trypticase soja agar groeit Gluconobacter speciës SC 11.435 als een mengsel van ruwe en gladde kolonietypen.
81 00 57 1 *_ Λ - 21 -
Het ruwe type gaat gepaard met een lichtgeel oplosbaar pigment, terwijl het gladde type mucolde en pigmentloos is. Dissociatie tussen de twee typen wordt beïnvloed door media, temperatuur en opslagomstandigheden. De werking van EM5210 neigt tot vermindering 5 in cultures, waarin de ruwe component overheerst.
Op BBL Wart agar (pH 4,8) groeit Gluconobacter species SC 11.435 weelderig als opgehoopte mucolde slijmkolonies. Een soortgelijke groei wordt verkregen op moutgistextractagar (1 % elk) ingesteld op pH 4,5.
10 Op medium, dat 1 % gistextract, 10 % glucose, 3 % calciumcarbonaat en 2,5 % agar bevat, wordt uit de glucose voldoende zuur geproduceerd voor het produceren van een klarings-zöne van het calciumcarbonaat om de groei. Dit is een kenmerkend aspect van Acetobacter en Gluconobacter.
15 In aanwezigheid van Gluconobacter species SC 11.435 wordt er I. een bruin oplosbaar pigment geproduceerd op gistextract-glycerol en gistextract-calciumlactaat agarplaten en II. zuur geproduceerd op glucose, fructose, galactose, mannose, xylose, mannitol en arabinose, maar er treedt geen groei of zuur-20 produktie op op rhamnose, lactose, saccharose of maltose, wanneer deze suikers worden opgenomen in Hugh en Leifson's medium.
De biologische produktie van EM5210 is niet beperkt tot Gluconobacter species SC 11.435, maar is breed verspreid over de azijnzuurbacteriën. De volgende cultures kunnen elk 25 worden gebruikt voor de produktie van EM 5210:
Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianum A.T.C.C.6033.
Acetobacter aceti subsp. aceti A.T.C.C. 15973.
Gluconobacter oxydans subsp. oxydans A.T.C.C. 19357.
Gluconobacter oxvdans subsp. suboxydans A.T.C.C. 23773.
30 Gluconobacter oxydans subsp. oxydans A.T.C.C. 15178.
Acetobacter aceti subsp. liquefaciens A.T.C.C. 23751.
Acetobacter peroxydans A.T.C.C. 12874.
Gluconobacter oxydans subsp. suboxydans A.T.C.C. 19441.
Acetobacter sp. A.T.C.C. 21780.
35 Gluconobacter oxydans subsp. industralis A.T.C.C. 11894.
81 00 57 1
Het antibioticum.
Ter verkrijging van het antibioticum EM5210 kan men Gluconobacter species SC 11.435 A.T.C.C. No. 31581 of één der boven opgesomde micro-organismen bij of bij ongeveer 25° C onder 5 submerse aerobe omstandigheden laten groeien op een waterig voedings-medium, dat een assimileerbare koolstof- en stikstofbron bevat. De fermentatie wordt uitgevoerd totdat het medium aanzienlijke antibiotische werking heeft verkregen, gewoonlijk 16-24 uur, bij voorkeur 20 uur.
10 Op de volgende wijze kan men EM 5210 van het fermentatiemediurn scheiden en zuiveren. Nadat de fermentatie voltooid is wordt de vloeistof ter verwijdering van de bacteriin gecentrifugeerd en wordt het antibioticum uit de bovenstaande vloeistof verwijderd door absorptie bij pH 3,7 op een anionen uitwisselen-15 de hars, bijvoorbeeld Dowex 1-X2. Het antibioticum wordt van de hars bij pH 4 geëlueerd met natriumchloride en het eluaat wordt geconcentreerd en over een actieve koolkolom geleid. EM 5210 wordt daarna van de actieve kool geëlueerd met methanol:water, 1:1. De actieve fracties worden opgevangen en gedroogd en daarna over een 20 anionen uitwisselende kolom geleid, bijvoorbeeld Dowex 1-X2 en geëlueerd met een gradiënt van natriumchloride, gebufferd op pH 4.
De actieve fracties worden geconcentreerd en ontzouten op een macro-reticulaire styreen-divinylbenzeen copolymeer harskolom (Dianion HF 20AG). De actieve fracties worden met water geëlueerd 25 en geconcentreerd en gevriesdroogd en dit materiaal is het natrium-zout van EM5210.
Boven beschreven zuiveringswijze levert het natriumzout van EM5210 op. Men kan andere zouten verkrijgen door het zout te veranderen, dat men gebruikt voor het elueren van EM5210 30 bij de ionen uitwisselingschromatografie als boven beschreven, bijvoorbeeld door gebruik te maken van kaliumchloride, waardoor men het kaliumzout verkrijgt.
De volgende voorbeelden lichten de uitvinding toe.
81 00 57 1 35
Voorbeeld 1 (S)-N-(2-Oxo-l-sulfo-3-zetidinyl)-2-fenylaceetamide, kaliumzout.
Methode I: A) l-/_ < 1R) -carboxy-2-methyl (propyl)_/-2-oxo-(3S)-/ fenyl/ acetyl(amino)_/__/azetidine.
Raney nikkel wordt met water gewassen door het enkele uren te decanteren totdat de pH van het water (5-6 maal het volume van het Raney nikkel) 7,6 bedraagt.
Bij een oplossing van 9,0 g penicilline G (Na+) in 500 ml water voegt men 54 g of 90 ml Raney nikkel. De kolf, die van een terugvloeikoeler is voorzien, wordt in een bad van 155° C gedompeld. Als het terugvloeien begint zet men dit 15 min. voort.
De kolf wordt onmiddellijk afgekoeld in een ijs-waterbad en het Raney nikkel wordt verwijderd door filtratie door Celite. De pH wordt met verdund HCl op 3 ingesteld en de oplossing in water wordt tot cirka 150 ml geconcentreerd en afgekoeld. De olielaag kristalliseert bij krassen uit. Na wassen met water en drogen in vacuum gedurende 3 uur bij 50° C verkrijgt men 3,83 g in de titel genoemde verbinding.
B) 1-/ Acetyloxy-2-methyl(propyl)_/-2-oxo-(3S)-f_ fenyl/ acetyl (amino)_/j/azetidine.
Men laat 15 min. stikstof onder roeren borrelen door een suspensie van 608 mg of 2 mmol bovengenoemde verbinding in 20 ml droog azijnzuurnitril. Men gebruikt gedurende enige minuten een waterbad van 40-45° C teneinde al het zuur te doen oplossen. Men verwijdert het waterbad en voegt 182 mg of 1 mmol poedervormig cupriacetaatmonohydraat toe, gevolgd na 1 min. roeren door 886 mg of 2 mmol loodtetraacetaat. Eet mengsel wordt 20 min. bij kamertemperatuur geroerd. De azijnzuumitriloplossing wordt van het precipi-taat gedecanteerd en de vaste stoffen worden met ethylacetaat gewassen. De gecombineerde azijnzuumitril-ethylacetaatoplossing wordt afgedampt tot een residu, dat men opneemt in ethylacetaat-water.
De ethylacetaatlaag wordt achtereenvolgens gewassen met water (drie maal), natriumbicarbonaat in water (pH 7) en water. De ethylacetaatlaag wordt boven natriumsulfaat gedroogd en afgedankt tot 515 mg residu, dat men zonder verdere zuivering bij de volgende reactie 5 gebruikt.
C) 2-0xo- (3S) -/_ fenyV acetyl (amino)__/_/azetidine.
Bij een oplossing van 911 mg of 2,86 mmol bovengenoemde verbinding in 21 ml methanol voegt men 3,5 ml water, ge-10 volgd door 383 mg of 2,86 mmol kaliumcarbonaat. Het mengsel wordt 1 min. onder stikstof geroerd, waarna men 160 mg of 4,30 mmol natriumboriumhydride toevoegt. Men roert de reactie 20 min. bij kamertemperatuur. De methanol wordt in vacuum verwijderd en het residu wordt opgenomen in ethylacetaat en een kleine hoeveelheid 15 water. Dit wordt ingesteld op pH 2,5. De ethylacetaatlaag wordt bij pH 7,0 gewassen met waterig natriumbicarbonaat en daarna met een klein volume water en tenslotte gedroogd boven natriumsulfaat en afgedampt tot 493 mg ruw produkt. Toevoeging van een kleine hoeveelheid ethylacetaat levert 250 mg (43 % opbrengst) gewenst 20 kristallijne produkt op. Men kan nog meer hoeveelheden produkt verkrijgen door kristallisatie of chromatografie.
D) (S)-N-(2-Oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenyl-aceetamide, kaliumzout.
25 Men voegt 215 mg of 1,35 mmol pyridine.SO^ complex onder stikstof bij kamertemperatuur onder roeren toe aan een oplossing van 251 mg of 1,23 mmol bovengenoemd produkt in 2 ml droog dimethylformamide en 2 ml droog methyleenchloride. Het mengsel wordt 3 uur geroerd, De oplosmiddelen ^worden in vacuum verwijderd 30 en het residu opgenomen in methyleenchloride-water. De pH wordt met 2N kaliumhydroxyde op 6,5 ingesteld. De waterlaag wordt gewassen met methyleenchloride (drie maal), gefiltreerd en afgedampt tot een residu. Het residu wordt geroerd met 20 ml methanol en het kaliumsulfaat wordt afgefiltreerd. Het filtraat wordt afgedampt tot een 35 residu, dat men met 10-15 ml methanol roert. De vaste stoffen 10057 1 - 25 - worden verzameld tot 49 mg in de titel genoemde verbinding, smeltpunt 189° C onder ontleding.
Analyse: Berekend voor cuHuN205®K: C 40,99; H 3,44; N 8,69; S 9,93; 5 Gevonden: C 45,96; H 3,83; N 9,86; S 8,99.
De verbinding beeft identieke spectraal eigenschappen als het bij Methode II verkregen produkt.
Methode II:
Een oplossing van 660 mg (S)-2-oxo-3-V {_ (fe-10 nylmethoxy)carbonyl_/amino__/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 3) in 13 ml water wordt 2 uur in een waterstof atmosfeer geroerd met 200 mg 10 % palladium op kool. De katalysator wordt af gefiltreerd en het filtraat verdund met een gelijk volume aceton en in een ijsbad afgekoeld. In 30 min. voegt men fenylace-15 tylchloride in 8 porties van 40 /*1 en 10 % kaliumbicarbonaat toe (waarbij men de pH tussen 5,2-5,8 houdt). Na 40 min. wordt de oplossing in vacuum geconcentreerd ter verwijdering van aceton en geleid over een 200 ml HP-20 kolom. Eluëring met water en daarna met water-aceton (9:1) levert 160 mg ruw produkt op na dunnelaag-20 chromatografisch onderzoek van Rydonpositieve fracties, gevolgd door bundeling en afdamping. Kristallisatie uit methanol-ether levert 101 mg in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 210° C onder ontleding.
Analyse: Berekend voor εΐ1Η11Ν2°5δΚΛ H20: 25 C 39,86; H 3,65; N 8,45; S 9,68; K 11,80;
Gevonden: C 40,01; H 3,37; N 8,59; S 9,59; K 11,98.
NMR (D20) 3,66 (s, 3), 3,67 (d Van d ,/= 6,4), 3,90 (tj=j), 4,90 (d van d, j = 6,4), 7,36 ppm (m. 5),
Methode III: 30 Bij een oplossing van 120 mg (S)-3-amino-2-oxo- 1-azetidinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 3 ml droog methyleenchloride voegt men 40 mg fenylazijnzuur en 61 mg dicyclohexylcarbodiimide. Het mengsel wordt 48 uur bij kamer-tenperatuur geroerd en ter verwijdering van dicyclohexylureum ge-35 filtreerd. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het residu 81 0057 1 i' fc - 26 - wordt opgenomen in aceton, gefiltreerd en de in de titel genoemde verbinding wordt geprecipiteerd door toevoeging van 5 ml met kaliura-jodide verzadigde aceton. De bovenstaande vloeistof wordt afgegoten en het residu wordt gewassen met aceton (drie maal) en na droging 5 verkrijgt men 48 mg produkt met spectrale eigenschappen in overeenstemming met die van de produkten van Methoden I en II.
Methode IV;
Men roert een oplossing van 2,83 g (S)-2-oxo-3-l_ / (fenylmethoxy)carbonyl__/amino_/-l-azetidinesulf onzuur, pyridine-10 zout (zie voorbeeld 2) in 36 ml water in een waters tof atmosfeer met 707,5 mg 10 % palladium op kool (waterstofopneming 175 ml). Na 2 uur wordt de brij gefiltreerd en het filtraat tot 0° C afgekoeld en verdund met 46 ml aceton (begin pH = 4,25, ingesteld op pH 6,7 met koude 10 % kaliumbicarbonaatoplossing). Men voegt een oplossing van 15 2,4 ml fenylacetylchloride in 10 ml aceton druppelsgewijze toe in
Figure NL8100571AD00271
15 min.. De pH wordt tussen 5,2 en 5,8 gehouden door gelijktijdige toevoeging van 10 % kaliumbicarbonaatoplossing. Na 45 min. wordt de brij verdund met 93 ml 0,5M kaliumfosfaat (pH = 4,2) en geconcentreerd ter verwijdering van aceton. De brij wordt gefiltreerd en 20 met water gewassen. Filtraat en wassingen worden gecombineerd en geleid over een 450 ml HP-20 kolom. Eluering met 1 1 0,5M kaliumfosfaat (pH = 4,2), 1 1 water en daarna 2,5 1 9:1 water-aceton levert 1,285 g in de titel genoemde verbinding op in fracties 14-19 (fracties 1-15 waren 200 ml, fracties 16-21 waren 100 ml). De 25 spectraalgegevens zijn in overeenstemming met wat bij de voorgaande methoden werd verkregen.
Voorbeeld 2, (S) -2-Oxo-3-/^ ,/ (fenylmethoxy) carbony 1_/amino_/-1 -azetidinesulfonzuur, pyridine (1:1) zout.
Methode I: A) 1—/_ (IR)-Carboxy-2-methyl(propyl)__/-2-oxo-(3S) -/ /_ (fenylmethoxy) carbonyl_/amino_/azetidine.
35 Een brij van 12,98 g of 0,06 mol 6-aminopenlcil- 81 00 57 1 * Jt - 27 - laanzuur in 140 al water, die 5,1 g natriumcarbonaat bevat {cilka 10 min. geroerd zonder volledige oplossing) wordt in één portie toegevoegd aan een goed geroerde (mechanische roerder) suspensie van Raney nikkel (gewassen met water tot pH 8,0, 260 ml brij =130 5 g) in een oliebad van 70° C. Na 15 min. wordt de brij afgekoeld, gefiltreerd en het filtraat behandeld met 5,18 g natriumcarbonaat en een oplossing van 11,94 g of 0,07 mol benzylchloorformiaat in 12 ml aceton. Na 30 min. wordt de oplossing aangezuurd tot pH 2,5 en met methyleenchloride geëxtraheerd. De organische laag wordt 10 gedroogd, afgedampt en aangewreven met ether-hexaan tot een totaal vein 6,83 g in de titel genoemde verbinding.
B) 1-/ (Acetyloxy) -2-methyl (propyl)__/-2-oxo- (3S) -/ / (fenylmethoxy)carbonyl /amino /azetidine.
15 Een oplossing van 6,83 g of 0,0213 mol bovenge noemd zuur in 213 ml azijnzuurnitril wordt behandeld met 1,95 g of 0,0107 mol cupriacetaatmonohydraat en 9,5 g of 0,0213 mol lood-tetraacetaat. De brij wordt gedompeld in een 65° C oliebad en geroerd met een door de brij borrelende stikstofstroom todat de uit-20 gangsstof verbruikt is. De brij wordt gefiltreerd en de vaste stoffen worden met ethylacetaat gewassen. De combinatie van filtraat en wassingen wordt in vacuum afgedampt en het residu opgenomen in 100 ml ethylacetaat plus 100 ml water en ingesteld op pH 7. De ethylacetaatlaag wordt afgescheiden, gedroogd en afgedampt tot 25 6,235 g in de titel genoemde verbinding.
C) (S)-(2-Oxo-3-azetidinyl)carbaminezuur, fenyl- methylester.
Men koelt een oplossing van 3,12 g of 0,0093 30 mol bovengenoemd acetaat in 70 ml methanol en 7 ml water af tot -15° C en voegt 1,33 g kaliumcarbonaat en 349 mg natriumboriumhy-dride toe. Men roert het reactiemengsel bij -15 - 0° C. Nadat de reactie voltooid is (cirka 2 uur) wordt het mengsel tot pH 7 geneutraliseerd met 2N HC1 en in vacuum geconcentreerd. Het concentraat 35 wordt op pH 5,8 ingesteld, met zout verzadigd en met ethylacetaat 81 00 57 1 4L > - 28 - geëxtraheerd (drie maal). De organische laag wordt gedroogd en in vacuum ingedampt. Het residu wordt gecombineerd met materiaal van een soortgelijke proef en aangewreven met ether onder verkrijging van 3,30 g in de titel genoemde verbinding.
5 D) (S)-2-Oxo-3-/_ /_ (fenylmethoxy)carbonji_/- amino /-1-azetidinesulfonzuur, pyridinezout.
Methode Is
Men roert een oplossing van 440 mg of 0,002 mol 10 bovengenoemd azetidinon in een mengsel van 2 ml droog methyleen-chloride en 2 ml droog dimethylformamide 2 uur onder stikstof met 350 mg of 0,0022 mol pyridine-zwaveltrioxydecomplex. De massa van het oplosmiddel wordt daarna in vacuum verwijderd en het residu wordt aangewreven met ethylacetaat onder verkrijging van 758 mg 15 vaste stof, die in hoofdzaak de in de titel genoemde verbinding is.
NMR <D20-CD30D) 3,63 (1H, d van d, } = 6,4), 3,90 (1H, t, j = 6), 4,85 (1H, d van d, j = 6,4), 5,10 (2H, S), 7,27 (5H, s), 8-0-9,0 ppm (m's 5H).
Methode II; 20 Men voegt 18,87 g chloorsulfonyltrimethylsilyl- ester druppelsgewijze bij -20° C onder roeren en onder een stikstof-atmosfeer toe aan 7,9 g watervrije pyridine. Ais men alles heeft toegevoegd zet men het roeren 30 min. bij kamertemperatuur voort en verwijdert daarna trimethylchloorsilan in vacuum. Men voegt een 25 oplossing van 20 g bovengenoemd azetidinon (methode I, deel C) in 120 ml dimethylformamide'en 120 ml methyleenchloride toe en zet het roeren bij kamertemperatuur gedurende 3,5 uur voort. Het oplosmiddel wordt in vacuum afgedestilleerd en het olie-achtige overblijfsel wordt gekristalliseerd door toevoeging van ethylacetaat, waardoor 30 men 31 g van de in de titel genoemde verbinding verkrijgt. De NMR gegevens zijn identiek met die van het produkt van methode 1. Voorbeeld 3 (S)-2-Oxo-3-/_/ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-l-azetidinesulfon-zuur, kaliumzout.
35 8100571 ï 2 - 29 -Methode I;
Men lost 135 mg (S)-2-oxo-3-/ / (fenylmethoxy)-carbonyl_7amino_7-l-azetidinesulfonzuur, pyridinezout (zie voorbeeld 2) op in 2 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat (ingesteld op pH 5,5 5 met 2N kaliumhydroxyde) en leidt de oplossing over een 25 ml HP-20 AG kolom, De kolom wordt geëlueerd met 100 ml buffer, 200 ml water en 100 ml 1:1 aceton-water. Fracties (25 ml) 14-15 zijn sterk Rydonpositief. Af damping levert 80 mg materiaal op, dat in hoofdzaak de in de titel genoemde verbinding is (de spectraalgegevens zijn 10 identiek met die van als onderstaand bereid produkt).
Methode II: 600 Mg (S)-2-oxo-3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl_/-amino__/-l-azetidinesulfonzuur pyridinezout (zie voorbeeld 2) wordt opgelost in 2 ml water en vermengd met 15 ml pH 5,5 monobasische 15 kaliumfosfaatbuffer. Er vormt zich een vaste stof en de brij wordt tot 0° C afgekoeld, gefiltreerd, gewassen met koude buffer, koude 50 % ethanol, ethanol en ether onder verkrijging van 370 mg in de titel genoemde verbinding (die blijkens analyse overmaat kalium-ionen bevat). Men leidt een oplossing van 280 mg van het zout in 10 20 ml water over een 100 ml HP-20 kolom. De kolom wordt geëlueerd met 200 ml water en daarna met water-aceton (9:1).
Men verzamelt fracties (50 ml) en afdamping van fractie 7 levert een vaste stof op. Aanwrijven met aceton, filtreren en drogen in vacuum levert 164 mg in de titel genoemde verbinding 25 op met smeltpunt 193-196° C.
Analyse: Berekend voor cnHuN2°gSK,3i H20: C 38,02; H 3,48; N 8,06; S 9,23; K 11,25;
Gevonden: C 38,19; H 3,24; N 8,15; S 9,12; K 11,53.
NMR (D2Q) 3,69 (1H, d van d, j = 6,4), 3,91 (1H, t, j - 6), 4,76 30 (1H, m), 5,16 (2h, S), 7,43 ppm (5H, S).
Methode III:
Men suspendeert 20,0 g (S)-(2-oxo-3-azetidinyl)-carbaminezuur, fenylmethylester (zie voorbeeld 2C) in 200 ml azijn-zuumitril, voegt 21,6 ml of 25,3 g monotrimethylsilyltrifluor-35 aceetamide toe en verwarmt het mengsel 1 uur onder roeren op 50° C.
81 00 57 1 ΐ * - 30 -
Na afkoeling in een ijsbad tot 0° C, druppelt men 17,2 g trimethyl-silylchloorsulfonaat in en roert de oplossing 6 uur bij kamertemperatuur. Bij de oplossing voegt men 24,2 g kaliumethylhexanaat in 100 ml butanol en zet het roeren nog een uur voort. Men giet de 5 brij uit in 1 1 droge diethylether en filtreert het precipitaat af en droogt het in vacuum. Men lost de verbinding op in 500 ml water, stelt de pH met kaliumcarbonaat in op 5,0, filtreert onoplosbare stof af en vriesdroogt de moederloog. De opbrengst aan ruwe verbinding bedraagt 19,4 g. De verbinding bevat kleine hoeveelheden 10 kaliumchloride, dat men chromatografisch verwijdert. De spectraal-gegevens zijn identiek met die van Methode II.
Voorbeeld 4 (S)-2-Oxo-3V /_ (fenylmethoxy) carbonyl_/amino__/-l-azetidinesulfon-zuur, tetrabutylammoniumzout. (1:1)· 15
Methode I:
Men lost 34,3 g (S)-2-oxo-3-/ / (fenylmethoxy)-carbonyl_/amino__/-1 -azetidinesulfonzuur, pyridinezout (lil) (zie voorbeeld 2) op in 800 ml water. Men klaart de oplossing met 20 actieve kool, voegt 30,7 g tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat in 80 ml water toe en stelt de pH op 5,5 in met IN kaliumhydroxyde.
Figure NL8100571AD00311
Men verwijdert het oplosmiddel in vacuum totdat een volume van 200 ml is bereikt. Het geprecipiteerde tetrabutylammoniumzout wordt afgefiltreerd en in vacuum gedroogd. De verbinding kan worden her-25 kristalliseerd uit water of worden opgelost in methyléenchloride, gefiltreerd en geprecipiteerd door toevoeging van ether. Opbrengst 34,3 g, smeltpunt 108-110° C.
Methode II:
Men lost 20,2 g (S)-2-oxo-3~>7 f_ (fenylmethoxy)-30 carbonyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (1:1) (zie voorbeeld 3) op in 500 ml water, filtreert en voegt 20,3 g tetrabu-tylammoniurawaterstofsulfaat in 100 ml water toe. Men brengt de pH met IN kaliumhydroxyde op 5,5. Het volume wordt in vacuum tot 100 ml verminderd en het geprecipiteerde tetrabutylammoniumzout wordt 35 afgefiltreerd. De verbinding wordt opgelost in 30 ml methyleen- 8100571 i - 31 - chloride, gefiltreerd en geprecipiteerd door toevoeging van ether, waardoor men 21 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 109-111° C.
Voorbeeld 5 5 (3S)~a-/_ / (2-0xo-l-sulfo-3-azetidinyl)amino_/carbonyl_/benzeen- azijnzuur, fenylmethylester, kaliumzout (1:1).
A) (S)-3-Amino-2-azetidinon.
10 Men hydrogeneert 3 g (S)-(2-oxo-3-azetidinyl)- carbaminezuur, fenylmethylester (zie voorbeeld 2C) in 100 ml methanol in aanwezigheid van 1 g palladium op kool als katalysator.
Als de theoretische hoeveelheid waterstof geabsorbeerd is, filtreert men de katalysator af en dampt het filtraat af tot droog.
15 Bij laten staan kristalliseert er 1,1 g in de titel genoemde verbinding uit.
B) (3S) -a-/_ /_ (2-Oxo-3-azetidinyl)amino__/car-bonyl /benzeenazijnzuur, fenylmethylester.
20 Men lost 3,0 g bovengenoemde azetidinon op in 100 ml dimethylmethylformamide. Men koelt de oplossing tot 0° C af en voegt 4,5 g N-methylmorfoline toe, gevolgd door (druppelsgewijze) 10,8 g a-(chloorcarbonyl)benzeenazijnzuur, fenylmethylester in 50 ml azijnzuumitril onder roeren. Men roert het mengsel 16 25 uur bij 5° C. Het oplosmiddel wordt in vacuum afgedestilleerd en men voegt aan het residu 100 ml water toe. De suspensie in water wordt twee maal geëxtraheerd, telkens met 100 ml methyleenchloride. De organische lagen worden gecombineerd, gewassen met natriumbicarbonaat, 2N fosforzuur en water, gedroogd met natriumsulfaat, gefil-30 treerd en afgedampt tot droog. Het residu wordt herkristalliseerd uit ethylacetaat en petroleumether, waarbij men 8,7 g verkrijgt met smeltpunt 164-166° C.
C) (3S) -a-/_ /_ (2-Oxb-l-sulfo-3-azetidinyl)ami-no-/carbonyl_/benzeenazijnzuur, fenylmethylester, kaliumzout (1:1). 35 81 0 0 5 7 1 - 32 -
Men suspendeert 6,9 g bovengenoemde verbinding in 150 ml azijnzuurnitril. Men voegt 5,7 g monotrimethylsilyltri-fluoraceetamide toe en verhit de oplossing onder roeren 30 min. op 50° C. De oplossing wordt tot 0° C afgekoeld en men voegt druppels-5 gewijze 3,9 g trimethylsilylchloorsulfonaat toe. Als men alles heeft toegevoegd verwarmt men het mengsel 5 uur op 50° C. Ma afkoeling tot 20° C voegt men 7,6 g kaliumethylhexanaat in 10 ml butanol toe en roert nog 30 min. voort. Bij toevoeging van 300 ml ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding en men fil-10 treert deze verbinding af. Het ruwe produkt wordt 30 min. geroerd met 100 ml droog azijnzuurnitril en afgefiltreerd, waarbij men 4,5 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 118-120° C. Verdere zuivering van het ruwe produkt met HP-20 chromatografie, gevolgd door vriesdrogen, levert zuiver materiaal op met smeltpunt 15 188-190° C.
Voorbeeld 6 (S) — 3—/_ [_ (2-Amino-4-thiazolyl) acetyl__/amino__/-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, kaliumzout.
20 A) (S)-3-Araino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
2 g (S)-2-oxo-3V / (fenylmethoxy)carbonyl_/~ amino 7-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voor-25 beeld 4) wordt opgelost in 100 ml dimethylformamide en 30 min. ge-hydrogeneerd met 1 g palladium op kool (10 %) als katalysator.
De katalysator wordt afgefiltreerd en het dimethylformamide wordt verwijderd onder achterlating van de in de titel genoemde verbinding als een olie. NMR (CÏ>Cl3) 3,82 (1H, t, ; =5,5), 4,05 (d. 1H, 30 d van d, j = 5,5, 2,5 cps.).
B) (S)-3-/ /_ (2-Amino-4-thiazolyl)acetyl_/-amino T-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men roert 2 g bovengenoemde verbinding, 0,5 g 35 aminothiazoolazijnzuur en 0,4 g hydroxybenztriazool bij 0° C in 8100571 - 33 - 100 ml droog dimethylformamide, terwijl men druppelsgewijze een oplossing van 0,7 g dicyclohexylcarbodiimide in 10 ml dimethylforma-mide toevoegt. Nadat men alles heeft toegevoegd zet men het roeren nog 12 uur bij 20° C voort. Onoplosbaar ureum wordt afgefiltreerd 5 en het oplosmiddel wordt in vacuum afgedampt. Het olie-achtige overblijfsel wordt 15 min. bij kamertemperatuur behandeld met een oplossing van kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. Na toevoeging van 200 ml dimethylether precipiteert de in de titel genoemde verbinding en deze verbinding wordt afgefiltreerd, ge-10 droogd en gezuiverd via een 300 ml HP-20 chromatografiekolom onder gebruikmaking van water als elueermiddel. De opbrengst bedraagt 850 mg in de titel genoemde verbinding, smeltpunt >300° C. Voorbeeld 7 f_ 3S(+)-/-3“(_L (F°rmyloxy)fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidine-15 sulf onzuur, kaliumzout.
1,5 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml dimethylformamide en 2 ml propyleenoxyde worden op 0° C afgekoeld. Men voegt 20 onder roeren, druppelsgewijs, een oplossing van O-formylamandel- zuurchloride in 10 ml azijnzuurnitril toe. Men houdt de temperatuur 1 uur aan en destilleert het oplosmiddel daarna in vacuum af. Het olie-achtige residu wordt behandeld met een oplossing van 2 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in 15 ml aceton. Na toevoeging van 200 ml 25 ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit en men filtreert deze verbinding af onder verkrijging van 1,5 g produkt. Het produkt wordt gezuiverd door HP-20 chromatografie. Smeltpunt 180-185° C onder ontleding.
Voorbeeld 8 30 /_ 3S (+)__/-3-V /_ (Formyloxy)fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidine- sulf onzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 7 volgt, maar D-O-formylamandelzuurchloride gebruikt in plaats van O-formyl-35 amandelzuurchloride, verkrijgt men de in de titel genoemde 81 00 57 1 I > - 34 - verbinding met smeltpunt 120-125° C na vriesdrogen.
Voorbeeld 9 /~~3S(~) 7-3-/ / (Formyloxy)fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, kaliumzout.
5 10
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 7 volgt, maar L-O-formylamandelzuurchloride gebruikt in plaats van 0-formyl-amandelzuurchloride, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding, die 1 mol water bevat, met smeltpunt 203-205° C. Na zorgvuldig drogen smelt het prodükt bij 228-230° C.
Voorbeeld 10 (S)-2-Oxo—3-/ (1-oxooctyl)amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
1,5 g (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, 15 tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml dimethylforraa- mide en 2 ml propyleenoxyde worden op 0° C afgekoeld. Bij deze temperatuur voegt men druppelsgewijze een oplossing toe van 0,8 g caprylzuurchloride in 200 ml droge aceton en zet het roeren 30 min. voort. Het oplosmiddel wordt in vacuum afgedampt en het olie-achtige 20 residu wordt behandeld met 2 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in 15 ml aceton. De aceton wordt in vacuum afgedestilleerd. Het residu wordt opgelost in 5 ml water en gechromatografeerd onder gebruikmaking van HP-20 hars en water/aceton (9:1) als elueermiddel, waarbij men 0,9 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 25 173-180° C na vriesdrogen.
Voorbeeld 11 / 3S(Z)_/-3-£ / (2-Amino-4-thiazolyl)/ £ £ hydroxy(fenylmethoxy)-fosfinyl_/methoxy__/imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
30 0,8 g (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 30 ml dimèthylformamide, 0,9 g (Z)-2-amino-a-/ /_ hydroxy(fenylmethoxy)fosfinyl_/methoxy_/~ imino_/-4-thiazoolazijnzuur, 0,3 g hydroxybenztriazool en 0,7 g 35 dicyclohexylcarbodiimide worden 24 uur bij kamertemperatuur geroerd.
81 0 0 57 1 % - 35 -
De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd. De resterende olie wordt behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in 10 ml aceton. De in de titel genoemde verbinding wordt afgefil- 5 treerd en gezuiverd onder gebruikmaking van HP-20 hars en water als elueermiddel, waarbij men 500 mg verkrijgt met smeltpunt 210- 215° C onder ontleding.
Voorbeeld 12 /_ 3S(Z)_/-3-/ (_ (2-Amino-4-thiazolyl) (ethoxyimino) -acetyl_/amino__/-10 2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
1,5 g (S)-3-Amino-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml dimethylforma-mide, 0,6 g hydroxybenztriazool, 1 g dicyclohexylcarbodiimide en 15 0,8 g (Z)-2-amino-a-(ethosyimino)-4-thiazoolazijnzuur worden 24 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het oplosmiddel wordt afgefiltreerd en het residu wordt opgelost in 30 ml aceton. Men filtreert ureum af en behandelt de moederloog met een oplossing van 2 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. Na de toevoeging van 200 20 ml ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die wordt afgefiltreerd en gedroogd. Zuivering geschiedt door chromatografie met een HP-20 kolom en water als elueermiddel, waarbij men 1,1 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 180-185° C onder ontleding.
25 Voorbeeld 13 /_ 3S(E)_/-3-V / (2-Amino-4-thiazolyl) (ethoxyimino) acetyl_/amino__/- 2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 12 volgt 30 maar (E)-2-amino-a-(ethoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-(ethoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 160- 170° C na vriesdrogen 35
Figure NL8100571AD00361
λ
Voorbeeld 14 /~3S(Z)_/-3-V / (2-Amino-4-thiazolyl)£ (2,2,2-trifluorethoxy)amino_/ acetyl /amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
5 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 12 volgt, maar (Z)-2-amino-a-/ (2,2,2-rtrifluorethoxy)imino_/-4-thiazoolazijn-zuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-(ethoxyimino)-4-thiazool-azijnzuur verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 160-170° C na;; vriesdrogen.
10 Voorbeeld 15 (S)-2-Oxo-3-/ (1-oxopropyl)amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Methode I: 1,5 g (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, 15 tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml droog dimethyl-formamide en 4 ml propyleenoxyde worden onder roeren op 0° C afgekoeld. Bij deze temperatuur voegt men druppelsgewijze 0,5 g propion-zuurchloride in 10 ml azijnzuurnitril toe en roert het mengsel nog 2 uur. Het oplosmiddel wordt in vacuum afgedestilleerd en het olie-20 actige residu wordt behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in 5 ml aceton. Bij toevoeging van ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit, die wordt afgefiltreerd, waarbij men 0,8 g produkt verkrijgt met smeltpunt 135-140° C na vriesdrogen.
25 Methode II:
Men hydrogeneert 4 g (S) -2-oxo-3-/^ (fenyl-methoxy)carbonyl_/amino_/-1-azetidine sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 4) in 100 ml diglyme met 1 g palladium op kool. De hydrogenering is na 2,5 uur voltooid. Men filtreert de katalysa-30 tor af en voegt 2 ml propyleenoxyde toe. Na afkoeling op 0° c voegt men 0,5 g propionzuurchloride in 10 ml droge diglyme onder roeren toe. Na 30 min. verwijdert men het oplosmiddel in vacuum en behandelt het olie-achtige overblijfsel met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. Na toevoeging van 35 ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit, die men 8100571 - 37 - affiltreert en herkristalliseert uit water/aceton, waarbij men 0,9 g produkt verkrijgt met smeltpunt 156-160° C onder ontleding. Voorbeeld 16 L (+,)_/-3-/ (Hydroxyfenylacetyl) amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfon- 5 zuur, kaliumzout.
Men roert 1,5 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylarmnoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml droog dimethylformamide 16 uur met 1,5 g dicyclohexylcarbodiimide, 10 0,5 g hydroxybenztriazool en 0,6 g amandelzuur. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het residu opgelost in 20 ml aceton.
De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en de moederloog wordt behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluobutaansul-fonaat. Na toevoeging van ether precipiteert de in de titel genoemde 15 verbinding, die men affiltreert, waarbij men 1,4 g ruw produkt verkrijgt. Na herkristallisatie uit water heeft het produkt een smeltpunt van 138-140° C.
Voorbeeld 17 (S)-3-/^ /_ f_ (Cyaanmethyl)thio_/acetyiyamino_/-2-oxo-l-azetidine-20 sulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 1,5 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-sulf onzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6Ά) en 0,72 g / (cyaanmethyl) thio_/azijnzuur op in 70 ml azijnzuumitril en voegt 25 druppelsgewijze een oplossing toe van 1,04 g dicyclohexylcarbodiimide in azijnzuumitril. Het mengsel wordt 16 uur bij 0° C geroerd en de geprecipiteerde dicyclohexylureum wordt afgefiltreerd, het filtraat wordt afgedampt en het olie-achtige residu in benzeen opgelost. Bij toevoeging van een verzadigde kaliumjodide-oplossing in 30 aceton precipiteert de in de titel genoemde verbinding onder verkrijging van 1,1 g produkt met smeltpunt 150-155° C.
Voorbeeld 18 (S)-2-Oxo-3-/ (lH-tetrazol-l-ylacetyl)amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
35 81 00 57 1 I % - 38 - 5 Bij een oplossing van 0,005 mol (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 70 ml dimethylformamide voegt men 0,77 g lH-tetrazCol-l-azijnzuur en een oplossing van 1,13 g dicyclohexylcarbodiimide in 5 ml dimethyl· formamide. Men roert het mengsel 16 uur bij kamertemperatuur en verwijdert het oplosmiddel in vacuum. De resterende olie wordt opgelost in 20 ml aceton en behandeld met 0,006 mol oplossing van kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton, waarbij men 1,5 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 170-175° C, onder o *—1 ontleding. Voorbeeld 19 (S)-2-Oxo-3-/~ (2H-tetrazol-2-ylacetyl)amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. 15 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 18 volgt, maar 2H-tetrazool-2-azijnzuur gebruikt in plaats van lH-tetrazool-1-azijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 175-177° C onder ontleding. Voorbeeld 20 20 (S)-2-OXO-3V (2-thienylacetyl)amino__/-1-azetidinesulf onzuur, kaliumzout. in CM Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 18 volgt, maar 2-thiofeenazijnzuur gebruikt in plaats van IH-tetrazool-l-azijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 180-190° C, onder ontleding. Voorbeeld 21 / 3S(Z)_/—3—/ / (2-Amino-4-thiazolyl)(methoxyimino)acetyl__/amino_/- 2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. 30 35 Men koelt (S)-3-amino-2-oxo-l~azetidinesulfonzuur tetrabutylammoniumzout (bereid als beschreven in voorbeeld 6A uit 7,9 g (S) —2—oxo—3—/_ £ (fenylmethoxy) carbonyl__/amino_/-1-aze tidinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout) af tot 0° G en voegt 3,53 g (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur toe, gevolgd door 81 00 57 1
ΐ- X
- 39 - een oplossing van 3,27 g dicyclohexylcarbodiimide in 10 ml dimethyl-formamide. Het mengsel wordt 16 uur bij 5° C geroerd, gefiltreerd en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd. Het residu wordt in aceton opgelost en gefiltreerd. Bij toevoeging van 60 ml 10 % oplos-5 sing van kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton, kristalliseert er 4,7 g ruw produkt uit. Het ruwe produkt wordt gezuiverd door chromatografie over HP-20, 0,074-0,0149 mm, waarbij men 3,0 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 235° C. Voorbeeld 22 10 (3S)-a~/_ /_ (2-Oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)amino>_/carbonyl_/benzeen- azijnzuur, dikaliumzout.
Men lost 100 mg (3S) -a~/_ /_ (2-Oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)amino_/carbonyl_/benzeenazijnzuur, fenylmethylester, 15 kaliumzout (zie voorbeeld 5) op in 20 ml watervrije methanol. Men voegt 10 mg 10 % palladium op kool toe en behandelt het mengsel 15 min. met waterstof, De katalysator wordt afgefiltreerd en de methanol in vacuum afgedampt. Het residu wordt opgelost in 5 ml water en men stelt de pH met IN kaliumhydroxyde in op 6. Na vries-20 drogen verkrijgt men ruw produkt. Het ruwe materiaal wordt gechro-matografeerd over HP-20 hars (water als elueermiddel), waarbij men 60 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 80-85°C. Voorbeeld 23.
(S)-3-(Acetylamino)-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout, 25
Methode I; A) (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
30 169 Mg (S)-3-(benzyloxycarbonylamino)-2-oxo-l- azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 3) worden opgelost in 4,0 ml water en 1 uur 40 min. gehydrogeneerd op 37 mg 10 % palladium op kool. De katalysator wordt afgefiltreerd en met 1 ml 50 % waterige aceton gewassen.
35 81 00 57 1 - 40 - B) (S)-3-(Acetylamino)-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur kaliumzout
Bovengenoemde oplossing van het vrije amine 5 wordt met 3,5 ml aceton verdund en in een ijsbad geroerd. Men voegt over cirka 15 min. 320 1 acetylchloride in kleine porties toe, afgewisseld met vast kaliumbicarbonaat teneinde de pH op 6,5- 7,2 te houden. Na 30 min. wijzen een silicagel dunnelaagchromato-grafie in aéeton:azijnzuur (19:1) en de Rydontest uit, dat de reac-10 tie in wezen geëindigd is. Men voegt 6 ml 0,5 M pH 5,5 éénbasisch kaliumfosfaatbuffer toe en zuurt de oplossing met 2N zoutzuur aan tot pH 4,8. De aceton wordt in vacuum verwijderd en de aldus verkregen oplossing in water wordt geleid over een 50 ml HP-20AG kolom onder verkrijging van 2,197 g vaste stof. Deze wordt met 15 methanol gedigereerd onder verkrijging van 282 mg extraheerbaar materiaal, dat nog enig zout bevat. Het produkt wordt verder gezuiverd door het over een IKC-50 kolom te leiden, gevolgd door aanzu-ring tot pH 3,8 met daaropvolgend af strippen tot droog in vacuum. Aanwrijven met aceton levert 64 mg gewenst produkt op, dat cirka 20 0,5 equivalent anorganische kaliumzouten bevat. Uiteindelijk leiden door een 200 ml AP-20AG kolom, gevolgd door lyofilisering vanuit 0,5 ml water levert 22 mg produkt op als amorf poeder, dat men 2 uur bij 50° C in vacuum droogt, smeltpunt 170-180° C na verweking bij 100° C.
25 Analyse: Berekend voor C5H7°5N2SK: C 24,38; H 2,87; N 11,37; K 15,9;
Gevonden: C 26,06; H 3,14; N 9,96; K 18,04.
Methode II: ^ Een oplossing van 2,0 g (S)-2-oxo-3-/ / (fenyl-
30 methoxy)carbonyl__/amino /-1-azetidinesulfonzuur, pyridinezout (zie voorbeeld 2) in 25 ml water wordt gehydrogeneerd boven 500 mg 10 % palladium op kool. Na 2 uur wordt de oplossing gefiltreerd, tot 0° C afgekoeld en voegt men 40 ml aceton toe. De pH van de oplossing wordt tussen 5,2-5,8 gehouden door gelijktijdig toevoegen van 35 acetylchloride en koude 10 % kaliumbicarbonaatoplossing. De pH
8100571 - 41 - van de oplossing wordt op 4,2 ingesteld met acetylchloride en de oplossing wordt geconcentreerd op een roterende verdamper ter verwijdering van aceton. Chromatografie over 300 ml HP-20AG kolom (water als elueermiddel - 25 ml fracties) levert 900 mg in de 5 titel genoemde verbinding op in fracties 13 en 14/ die met enig kaliumacetaat verontreinigd zijn. Herchromatografie over HP-20AG levert een analytisch monster op met smeltpunt 205-210° C. Analyse: Berekend voor CgH^^OgSK: C 24/38; H 2,86; N 11,38; S 13,02; K 15,88; 10 Gevonden: C 24,23; H 2;,81; N 11,25; S 12,86; K 15,74.
Voorbeeld 24 (S)-2-Oxo-3-/_ (fenoxyacetyl)amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kalium-zout.
15 1,5 g (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml droog dimethyl-formamide wordt op 0° C afgekoeld. Men voegt 2 ml propyleenoxyde toe en druppelsgewijze onder roeren 1 g fenoxyacetylchloride. De reactie is binnen 1 uur voltooid. Het oplosmiddel wordt in vacuum 20 verwijderd en het overblijfsel behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. Bij toevoeging van ether kristalliseert 1 g in de titel genoemde verbinding uit, die men affiltreert en droogt. Na herkristallisatie uit kokend water heeft de in de titel genoemde verbinding een smelt-25 punt van 176-180° C.
Voorbeeld 25 / 3S (RX)_/-3-/_ / / / /. 3-/ (2-Furanylmethyleen) amino__/-2-oxo-l-azetidinyl_/carbonyl_/amino_/fenylacetyl_/ amino_/-2-oxo-1-azetidi-nesulfonzuur, kaliumzout.
30 3 g (S)-2—Oxo-3—/""/ (fenylmethoxy) carbonyl_/-amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 4) wordt in 100 ml dimethylformamide gehydrogeneerd met 1,5 g palladium op kool. Na 0,5 uur filtreert men de katalysator af en 35 voegt 1,8 g dicyclohexylcarbodiimide, 2 g (R)-o-/ / / 3-/ (2-fura- 81 00 57 1 - 42 - * ny lmethy leen J amino_/-2-oxo-1 -imidazolidinyl_/carbonyl_/amino_/-benzeenazijnzuur en 0,9 g hydroxybenztriazool toe. Na 3 uur wordt het reactiemengsel afgedampt tot droog, opgelost in 50 ml droge aceton en de geprecipiteerde ureum afgefiltreerd. Men voegt een 5 equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton toe en de in de titel genoemde verbinding precipiteert.
De kristallisatie wordt voltooid door toevoeging van 200 ml ether. Na filtratie herkristalliseert men de in de titel genoemde verbinding uit water, waarbij men 2 g verkrijgt met smeltpunt 220-225° C, 10 onder ontleding.
Voorbeeld 26 £ 3S (RX)_/-2-Oxo-3-/_ (_!_(_ (2-oxo-1 -imidazolidiny 1) carbony 1_/-amino__/fenylacetyl_/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
15 3 g (S)-2-Oxo-3V /_ (fenylmethoxy) carbony 1__/- amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 4) wordt gehydrogeneerd in 100 ml droog diraethylformamide met 1,5 g palladium op kool, De katalysator wordt na 30 min. afgefiltreerd. Men voegt 1,8 g (R)-aV / (2-oxo-l-imidazolidinyl)-20 carbonyl_/amino__/benzeenazijnzuur, 1,3 g dicyclohexylcarbodiimide en 0,9 g hydroxybenztriazool toe en roert de oplossing 2,5 uur.
Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het residu in 50 ml aceton opgelost. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en de moederloog behandeld met een equivalente hoeveelheid kalium-25 perfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. De in de titel genoemde verbinding kristalliseert uit en wordt afgefiltreerd na toevoeging van 200 ml ether, waarbij men 1,8 g produkt verkrijgt met smeltpunt 210-215° C na herkristallisatie uit water/aceton. Voorbeeld 27 30 / 3S(Z)_/-3~l_(_ (Methoxyimino)fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azeti- dinesulfonzuur, kaliumzout.
A) £ 3S(Z)_/-3-/"7 (Methoxyimino)fenylacetyl/-amino_/-2-azetidinon.
35 81 00 57 1 Μ- y - 43 - 3,58 g (Z)-a-(Methoxyimino)benzeenazijnzuur wordt opgelost in methyleenchloride, tot 5° C afgekoeld en behandeld met een oplossing van 4,53 g dicyclohexylcarbodiimide in 50 ml methyleenchloride. Het mengsel wordt 30 min. bij 5° C geroerd en men voegt een oplossing toe van 1,72 g 3-amino-2-azetidinon (zie voorbeeld 5A) in 100 ml methyleenchloride. Het reactiemengsel wordt 1 uur op 5° C gehouden en 2 uur op kamertemperatuur. Nadat men dicyclohexylureum heeft afgefiltreerd, dampt men het filtraat af en verkrijgt 6,6 g ruw produkt. Dit materiaal wordt gezuiverd door chromatografie over 750 g silicagel onder gebruikmaking van een mengsel van methyleenchloride/ethylacetaat (7:3) als elueer-middel, waarbij men 2,9 g produkt verkrijgt.
5 10 B) (_ 3S(Z)_/-3(Methoxyimino)fenylacetyl__/-amino /-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
15 20 0,5 ml Pyridine wordt opgelost in 5 ml absoluut methyleenchloride, afgekoeld tot -30° C en men voegt een oplossing van 0,93 ml trimethylsilylchloorsulfonaat in 5 ml methyleenchloride toe. Het mengsel wordt 30 min. bij kamertemperatuur geroerd en in vacuum ingedampt tot droog. Het overblijfsel wordt opgelost in 10 ml dimethylformamide enüj kamertemperatuur behandeld met een oplossing van 1,23 g van bovengenoemd azetidinon in 10 ml dimethylformamide.
25
Na 2 uur roeren bij kamertemperatuur wordt de oplossing afgedampt tot droog, waarbij men 2,1 g ruw /_ 3S(Z)__/-3V / (methoxyimino)-fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, pyridinezout verkrijgt.
30
Behandeling van het pyridinezout met tetra-butylammoniumwaterstofsulfaat levert het overeenkomstige tetrabutyl-ammoniumzout op, dat met methyleenchloride wordt geëxtraheerd en na afdamping als een olie overblijft.
35
Behandeling van het tetrabutylammoniumzout met een equimolaire hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton, afdamping en behandeling van het residu met ether, levert 1,6 g in de titel genoemd kaliumzout op, dat men zuivert door chromatografie over HP-20. De eluering geschiedt met water/aceton 90:10 en levert 81 00 57 1 - 44 - een produkt op met smeltpunt 220° C, onder ontleding.
Voorbeeld 28 / 3S(Z)_/—3—/_ /_ (2-Araino-4-thiazolyl)//2-(difenylmethoxy)-l,l- dimethyl-2-oxoethoxy_/imino_/acetyl_/amino__/-2-oxo-l-azetidine-5 sulfonzuur, kaliumzout. (1:1).
Figure NL8100571AD00451
Een oplossing van 0,005 mol (S)-3-amino-2-oxo- 1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) en 0,006 mol (Z)-2-amino-a-/ / 2-(difenylmethoxy)-l,1-dimethy1-2-10 oxoethoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur in 60 ml dimethylformamide wordt behandeld met 0,7 g hydroxybenztriazool en 1,13 g dicyclohexyl-carbodiimide. Het mengsel wordt 16 uur bij kamertemperatuur geroerd, gefiltreerd en het filtraat afgedampt. Het residu wordt opgelost in 30 ml aceton, gefiltreerd en behandeld met 20 ml oplossing van 10 % 15 kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton. Na toevoeging van petro-leumether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die men met ether behandelt en filtreert onder verkrijging van 3,8 g produkt met smeltpunt 190° C onder ontleding.
Voorbeeld 29 20 f_ 3S(Z)_/-3-V /_ 2-Amino-4-thiazolyl)/_ (1-carboxy-l-methylethoxy)-imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, dikaliumzout.
Figure NL8100571AD00452
25 30 35
Men suspendeert 2 g /3S(Z)_/-3-/ /_ (2-amino- 4-thiazolyl)/_ 2- (difenylmethoxy) -1,1-dimethy 1-2-oxoethoxy__/~ imino_/acetyl_/amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 28) in 5 ml anisool en voegt 25 ml trifluorazijnzuur toe bij -10° C. Men roert het mengsel 10 min. bij -10° C. Men voegt bij -10° C langzaam 100 ml ether en vervolgens 50 ml petroleum- 'i' ether toe. Het precipitaat wordt afgefiltreerd onder verkrijging van 1,6 g trifluorazijnzuurzout. Dit wordt gesuspendeerd in 20 ml water bij 0° C, ingesteld op pH 5,5 met verdund kaliumhydroxyde en gezuiverd over een HP-20 kolom. De in de titel genoemde verbinding wordt met water geëlueerd en heeft een smeltpunt van 225° C, onder ontleding.
Voorbeeld 30 81 0 0 5 7 1 (_ 3Ξ (Z) /—3—(2-Amino-4-thiazolyl)-/_ /_ 2- (difenylmethoxy) -2- oxoethoxy__/ imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 28 volgt, maar (Z)-2-amino-a-/ / 2-(difenylmethoxy)-2-oxoethoxy__/imino_/-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-/ / 2-(difenylmethoxy) -1,l-dimethyl-2-oxoethoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 180° C, onder ontleding.
Voorbeeld 31 / 3S{+)_/-3-£ (Azidofenylacetyl)amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfon-zuur, kaliumzout.
Methode I; A) (+,S)-α-Azido-N-(2-oxo-3-azetidinyl)benzeen- aceetamide.
2,15 g (S)-3-amino-2-azetidinon (zie voorbeeld 5A) en 2,1 g natriumbicarbonaat worden opgelost in 50 ml aceton/ water (2:1). Men voegt 5 g (+)-a-azidobenzeenacetylchloride, opgelost in 10 ml aceton, druppelsgewijze toe, terwijl men de temperatuur op 0-5° C en de pH met natriumbicarbonaat op 6,8 houdt. Na 1 uur roeren, destilleert men de aceton af en stelt de overblijvende oplossing in water met natriumcarbonaat in op pH 8 en extraheert met drie porties van 50 ml methyleenchloride. Afdamping van de met natriumsulfaat gedroogde organische lagen levert 3,6 g in de titel genoemde verbinding op als een olie, die uitkristalliseert na aanwrijven met ether. Herkristallisatie uit methyleenchloride/ ether levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 97-100° C.
B) /_ 3S (+)_/“3V (Azidofenylacetyl)amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout _
Een oplossing van 2,45 g bovengenoemd azetidinon
t X
- 46 - en 3 g monosilyltrifluoraceetamide in 20 ml azijnzuurnitri 1 wordt 1 uur op 40° C gehouden. Na afkoeling tot 0° C behandelt men de oplossing met 1,88 g trimethylsilylchloorsulfonaat en roert 5 uur onder argon. Tenslotte voegt men 6,12 ml 2N oplossing van kalium-5 2-ethylhexanaat in n-butanol toe en zet het roeren nog 45 min.
voort. De oplossing wordt in 300 ml ether uitgegoten en het preci-pitaat afgefiltreerd. Een gefiltreerde oplossing van 1,2 g precipi-taat in fosfaatbuffer (pH 5,5) wordt gechromatografeerd over 100 ml HP-20. De eluering geschiedt met: 1) 20 ml buffer, 2) 200 ml HjO, 10 3) 20 ml water:aceton (9:1), 4) 200 ml watersaceton (3:1). De eluering wordt gevolgd met dunnelaagchromatografie (Rydontest op SK^). Men neemt fracties van 25 ml en uit fracties 15 en 16 verkrijgt men 280 mg in de titel genoemde verbinding. Een tweede kolomchromatografie van dit materiaal levert 120 mg in de titel 15 genoemde verbinding op met smeltpunt 148° C, onder ontleding.
Methode II:
Men lost 2,0 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) en 0,9 g (+)-α-azidobenzeenazijnzuur op in 30 ml azijnzuurnitril en voegt 20 een oplossing van 1,03 g dicyclohexylcarbodiimide in 10 ml azijnzuurnitril toe, De temperatuur wordt 1 uur op 0° C gehouden en 10 uur op kamertemperatuur. Nadat men het resulterende precipitaat heeft afgefiltreerd destilleert men het oplosmiddel in vacuum af en lost het olie-achtige residu op in 20 ml aceton en behandelt 25 met 1,70 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton. Na toevoeging van 10 ml ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit. Smeltpunt 149° C, onder ontleding.
Methode III:
Men voegt 2,5 g a-azidofenylacetylchloride 30 toe aan een oplossing van 4,06 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfon-zuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) en 5 g propyleen-oxyde in 30 ml azijnzuurnitril. Na 2 uur roeren destilleert men het oplosmiddel in vacuum af en behandelt het olie-achtige residu met 1 equivalent kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton. Na toevoeging 35 van ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit, 8100571 47 - > die men affiltreert. Smeltpunt 148-149° C, onder ontleding. Voorbeeld 32 /_ 3S(D) _/-3-/ / / / / (4-Methoxyfeny 1) methoxy_/carbony 1_/amino_/-fenylacetyl /amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
5 10 15
Bij een oplossing van 2,03 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) en 1,58 g D-a-/_ (_ f_ (4-methoxyfeny 1) methoxy__/carbonyl_/amino__/ben-zeenazijnzuur in 50 ml azijnzuurnitril voegt men druppelsgewijze een oplossing van 1,03 g dicyclohexylcarbodiimide in 10 ml azijnzuurnitril, Men houdt de temperatuur 1 uur op 5° C en 6 uur op kamertemperatuur. Afscheiden van de gevormde dicyclohexylureum en afdestilleren van het oplosmiddel levert de in de titel genoemde verbinding op als een olie-achtig residu. Behandeling van deze olie in aceton met kaliumperfluorbutaansulfonaat en ether levert 2,4 g produkt op met smeltpunt 108-111° C, onder ontleding. Voorbeelden 33-37.
20
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 32 volgt, maar de in kolom 1 van onderstaande tabel opgegeven verbinding gebruikt in plaats van (D) -a-/_ /_ f_ (4-methoxyfenyl)methoxy_/car-bonyl_/amino_/benzeenazijnzuur, verkrijgt men de overeenkomstige in kolom 2 van onderstaande tabel genoemde verbinding.
25 8100571 CS I Η s
a o I—I
I Η I ,10 1 NS 3 SA" 0, I P SNS ii ο a 8 G P λ ·Η Η I S'^I * 4-1 H * >i >1 Ή X P 3 a) 0 Ο N id g H 3 H G H V
•ns I H o >i N 1—.+* i S. © *—l - cl' o 5 v f ff
- O' < c •rl - Ό P (U
3 3 N C 0 44 H 3 ., W I φ
Sji ill l\,H' β >1 H * — C Ό CJ a g h — Λ P 0 ,W P Φ CO lm, id n 'ί o id «-t
I I — cs Η, I SN οι o H c &§ o, id JSS, +J O) H a >i p I C 3 O' 0 3 I ,¾ fi N,S5 i"N S Ί* & § Ö 0 44 1 Jc o P H SIS
IO co >i H o.i n1\.
U H <d H oU c -
Ic ..HO JC >1 44 2 3 d 0 3 Λ W P 0) id C Ο H INS ?a-s cs 0 ,— -c Ni Vh CO >1 * 1 Ci l"v, © CS P l*n . I a + * Jft
id H
I rf I 0 c, NO idO' I io — CS I I 0 cs X co 0 cs 1 O W Λ ,co p . © "via 0 P c H H 0) 1 §
I >1 X Λ P P, I 3 as, 3 a n I H c O' >1 ΤΊ — C H Ί« CU
N id H o o I N N
I cs I
-Tl0 + 1 a) ν' 4-1 O P a I P O' <U, I ^K1 Η O ts C Ή
CO
8 1 0 0 57 1 I H I I -V O I Η X O' >1 ocs C I -* Φ CS 4-1 I P SNS i SB1 P Η H 1,11 3N" ki&S ,00 NS I >Nl >ι Ο H §G Id Η X lil - 11 Ί3 cs H 3 1 , >t N N s s ,00 "v|P 44 I P to id I . o
I iH I I 1 0 K, x I ! o co >t I o* Ü N H O, I 5NS U o 3 H-X f} rH S δ s C\.S © to 4-t H >1 >i * X P H Φ 3 O O id N
>> 0 0 Λ X P P 0 c ai I 3 S cs a — I P Hj\ H N _lg cos V C to 4-1 H X. I -P 0 h's, 3 Λ 0 p Η N a> Ss e O' B -P 3 β 1 β» Η H O' Ο Η Ό w id id tu S i rH ^ rH Sj >♦ -P kiS p s I .Ή 3 SK, 3 P , In φ ,ν,ΐο CO 1 , c o c vJh <p o I SH n, id 3 · ,ΐΚ,Μϋ K, 1© H CO --. >iH m Pi G Ό t" — Ο Η H 01 A P I .CO p 01 cs 1 .dot' s| u id h 5* rH 0) 0 5 ai a 1 O' & ai β Λ"Ιθ J , C ,w "ν1·Η 44 1 1 d IO. id 3 . 1 K.05 N-'S 3 &S u O' c •H Ό P 0) " H P c o P 0) Ό c 0 3 to © . ·c tlx Ό Ü '-'OH 01 J3 P O rn P ai co , o n cs sis «η
N
O « Λ ,co p \ u
*iH PO <u ω N O' id H
I <*** Η I SN 0) o 4-t C &! In (U H a >i p I C 3 f O 3 Nf N I , P c NSS NN8 NS'S Ö 0 P I Λ 3 —,P 44 + |φ I — a cs I djv! c "Ti 0) o 44 C >< H x a £jK! (U H a >i p I c 3 O’ 0 3 ,— 43 N c
NS
I , Ο H N^S i X 0) Ö 0 Φ I Λ N — PC P) Φ Φ — a λ
I Η. 1 φ o 44 C >< H §,l SN Φ Η P a >i 3 1 C 3 Ο· Ο N .- Λ C 1 ,ΡΐΊ N S d NNS \ >1 Φ I X Φ a o 44 I Λ O — PH ►3 Φ P — BP
in co co O' co co y - 49 -
Vo&rbeeld 38 (3S)-3-/ /"""/ / (Methylthio)thioxomethyl_/thio_/fenylacetyl_/amino_/- 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, te trabutylammoniumzout, 5 Een oplossing van 1,0 g (+) -a-/_ /_ (methylthio)- thioxomethyl_/thio__/benzeenazijnzuur en 1,63 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 30 ml azijnzuurnitril wordt bij -5° C behandeld met 0,8 g dicyclo-hexylcarbodiimide, opgelost in 10 ml azijnzuurnitril. Na 16 uur 10 roeren wordt de gevormde dicyclohexylureum af gefiltreerd en de moederloog ingedampt. Het verkregen olie-achtige residu wordt ge-chromatografeerd over een kolom van 400 g silica (ethylacetaat/ methanol/water (8,5:1:0,5) is het elueermiddel), waarbij men 1,3 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
15 Voorbeeld 39 3(S)-3-/ [_ {_ £ (Methylthio) thioxomethyl_/thio_/fenylacetyl_/amino_/- 2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
1,3 g (3S)-3-/ / / / (Methylthio)thioxomethyl_/-20 thio_/fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutyl- ammoniumzout (zie voorbeeld 38) wordt opgelost in aceton en behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat. Bij toevoeging van ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit, die men affiltreert. Opbrengst 0,18 g produkt met 25 smeltpunt 157° c, onder ontleding.
Voorbeeld 40 / 3S(D)V-3-/ / / / (4-Ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl_/-amino__/-2-thienylacetyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
30 3,25 g (D)-aV / (4-Ethyl-2,3-dioxo-l-piperazi-nyl)carbonyl_/amino_/-2-thiofeenazijnzuur, 4,20 g 3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) en 1,3 g N-hydroxybenztriazool worden opgelost in 25 ml azijnzuur-35 nitril. Druppelsgewijze toevoeging van 2,06 g dicyclohexylcarbodi- 81 00 57 1 h * - 50 - imide, opgelost in 10 ml azijnzuurnitril bij -10° C, vergt 20 min. en men zet het roeren nog 16 uur voort. De gevormde ureum wordt afgefiltreerd en het oplosmiddel in vacuum afgedampt. De resterende olie wordt in 50 ml aceton opgelost en na behandeling met een equi-5 valente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit. Smeltpunt 185-187° C, onder ontleding.
Voorbeeld 41 / 3S(+)^/-3-/ (Broomfenylacetyl)amino__/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, 10 kaliumzout.
Men voegt 1,4 g a-broomfenylacetylchloride in 10 ml azijnzuurnitril druppelsgewijze toe aan een oplossing van 5mM
3-amino-2-oxo-1-azetidinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout en 3 g 15 propyleenoxyde in azijnzuurnitril bij 0° C. Na 3 uur roeren wordt het oplosmiddel afgefiltreerd en het resterende olie-achtige overblijfsel in 30 ml aceton opgelost. Men voegt de equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton toe. Door toevoeging van ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding 20 uit. Smeltpunt 135-137° C, onder ontleding.
Voorbeeld 42 L 3S(+W-3-/, //, (Aminocarbonyl)amino_/-2-thienylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
25 Methode I:
Bij een oplossing van 2 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout en 1,5 g propyleenoxyde in azijnzuurnitril voegt men 1,1 g (+)-2-amino-4-(2-thienyl)-5-(4H)-oxazolon, hydrochloride. Na 3 uur roeren bij 0° C en 1 uur bij kamer-30 temperatuur destilleert men het oplosmiddel af en lost het olieachtige residu in 30 ml aceton op. Door toevoeging van een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit. zuivering door kolomchromatografie over HP-20 onder gebruikmaking van water als 35 elueermiddel levert de in de titel genoemde verbinding op met 81 00 57 1 - 51 - smeltpunt 218-222° C, onder ontleding.
Methode II:
Bij een suspensie van 2 g (+)-a-/ (aminocarbonyl)-amino__/-2-thiofeenazijnzuur, 10 mM (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-5 sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout en 10 mM N-hydroxybenztriazool in 50 ml azijnzuumitril voegt men bij 0° C (onder roeren) 10 mM dicyclohexylcarbodiimide, opgelost in 15 ml azijnzuumitril. Men zet het roeren nog 1 uur bij -15° C en 16 uur bij kamertemperatuur voort. Nadat men de dicyclohexylureum heeft af gefiltreerd dampt men 10 het oplosmiddel af en lost het olie-achtige residu op in 50 ml aceton. Toevoeging van de equivalente hoeveelheid kaliumperfluor-butaansulfonaat in aceton levert kristallijn produkt op. Zuivering door kolomchromatografie over HP-20 met water als elueermiddel levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 220-223°C. 15 Voorbeeld 43 {_ 3S(+)__/-3-/ / / / (Methylamino)carbonyl_/amino_/-2-thienylacetyl_/-amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 0,54 g (+)“<*-// (methylamino)carbonyl__/-20 amino_/-2-thiofeenazijnzuur en 1,00 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) op in 20 ml azijnzuumitril en voegt bij een temperatuur van 0° C 0,5 g dicyclohexylcarbodiimide toe. Na 8 uur roeren filtreert men dicyclohexylureum af en nadat men het oplosmiddel heeft afgedestilleerd lost 25 men het olie-achtige residu op in 50 ml aceton en voegt de equivalente hoeveelheid kaliiunperfluorbutaansulfonaat toe. Het kristallijne produkt wordt afgefiltreerd en de zuivering geschiedt over HP-20 onder gebruikmaking van water als elueermiddel. Smeltpunt 205° C, onder ontleding.
30 Voorbeeld 44 / 3S(+) /-3“/././ (Aminooxoacetyl)amino_/-2-thienylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 35 42, methode II volgt, maar (+) -a-/_ (aminooxoacetyl)amino__/-2- 81 00 57 1
X
- 52 - 5 thiofe enazijnzuur gebruikt in plaats van (+)-a-/ (aminocarbonyl)-amino_/-2-thiofeenazijn2uur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 218-222° C. Voorbeeld. 45 / 3S(RX)_/-3-,/ (_ /_ / (4-Ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl) carbonyl__/-amino_/ fenylacetyl_/amino__/-2-oxo-1 -azetidine sulfonzuur, kaliumzout. :ιο c Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 40 volgt, maar (R)-a-/ / (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl) carbonyl_/amino_/-benzeenazijnzuur gebruikt in plaats van (D)-a-V / (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl__/araino_/-2-thiofeenazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 155-157° C, onder ontleding. Voorbeeld 46. 15 3-(Acetylamino)-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. 20 Methode I: A) 3-/ (N-Acetyl-N-chloor) amino__/-2-oxo-l-azetidine sulfonzuur, gemengd natrium- en kaliumzout. Bij een oplossing van 172 mg 3-(acetylamino)-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 23) in 17 ml methanol, die 4 % natriumboraat decahydraat bevat en op -15 tot -10° C is afgekoeld voegt men 110 yl t-butylhypochloriet. Men roert t.3 25 c 'J het mengsel 1 uur en 45 min. in de koude, giet haar uit in 50 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing en verlaagt de pH tot 5,5. Men verwijdert het oplosmiddel in vacuum en lost het residu op in een minimum hoeveelheid water en chromatografeert over 140 ml HP-20 AG, 0,074-0,149 mm. Eluering met water levert 63 mg olie op, die •'30 bij laten staan uitkristalliseert. Aanwrijven met methanol/ether en daarna met ether levert 53 g vaste stof op met smeltpunt 124° C onder langzame ontleding B) 3-(Acetylamino)-3-methoxy-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, kaliumzout. 35 8100571 X.
- 53 - % 37 mg 3-/ (N-Acety1-N-chloor)amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, gemengd zout wordt opgelost in 1,5 ml droog dimethylformamide en toegevoegd aan een oplossing van 50 mg lithium-methanolaat in 1 ml methanol bij -78° C. Na 15 min, roeren bij 5 -78° C voegt men 10 ml 0,5 M éénbasische kaliumfosfaatoplossing toe en zuurt de oplossing daarna met 1 N zoutzuur aan tot pH 4. Men voegt bij de oplossing 70 mg tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat en extraheert de oplossing vier maal met methyleenchloride. De gecombineerde extracten worden gedroogd (natriumsulfaat) en het oplos-10 middel wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van 55 mg olie. Chromatografie over 5,5 g silicagel levert 41 mg olie-achtig pro-dukt op als het tetrabutylammoniumzout (geëlueerd met 8 % methanol: 92 % methyleenchloride). 31 mg Van de olie wordt opgelost in water en geleid over een ionen uitwisselkolom (5 mg AG 50W-X2, K+ Vorm, 15 0,037-0,074 mm, 0,6 meq/ml). Verwijdering van water in vacuum levert een olie op, die uit methanol-ether uitkristalliseert.
Twee maal aanwrijven met ether levert het produkt op als 11 mg kleurloos poeder met smeltpunt 182-183° C onder ontleding.
Methode II? 20 A) 3-Amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Men voegt 100 4 % natriumboraat decahydraat oplossing in methanol toe aan een suspensie van 30 mg 10 % palla-25 dium op kool in 2 ml methanol en roert het mengsel 15 min. onder een waterstofatmosfeer. Men voegt 60 mg 3-methoxy-2-oxo-3-£ /_ (fe-nylraethoxy)carbonyl_/amino_/-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 49) in 2 ml methanol toe en roert het mengsel hevig 15 min. onder een waterstofatmosfeer. Men filtreert 30 de katalysator af door Celite op een milliporiënfilter (0,5 m^), en verwijdert het oplosmiddel uit het filtraat in vacuum en extraheert het residu met methyleenchloride. Verwijdering van oplosmiddel onder verlaagde druk levert 35 mg in de titel genoemde verbinding op als een olie.
35 8100571 B) 3-(Acetylamino)-3-methoxy-2-oxo-1-azetidine sulfonzuur, kaliumzout.
Bij een oplossing van 35 mg 3-amino-3-methoxy-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout in 10 ml methy-leenchloride van 0° C voegt men 2 ml propyleenoxyde en 74 1 acetyl chloride. Na 2 uur verwijdert men het oplosmiddel onder verlaagde druk en chromatografeert de resterende olie over 4 g silicagel. Eluering met 6-8 % methanol in methyleenchloride levert 18 mg olie op, die men oplost in water en leidt over 3 ml ionen uitwisselende hars (AG 50W-X2, K+ vorm, 0,6 meq/ml). Verwijdering van water uit het eluaat in vacuum levert 10 mg gewenst produkt op.
Voorbeeld 47 N-(3-Methoxy-2-oxo-1-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, tetrabutylammoniumzout.
A) N-Chloor-N-(2-oxo-1-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, kaliumzout.
Bij een oplossing van 50 mg (S)-N-(2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, kaliumzout (zie voorbeeld 1) in methanol, die 5 ml 4 % natriumboraat decahydraat bevat en gekoeld wordt in een -5° C bad, voegt men 20 jol t-butylhypochloriet. Na 32 min. roeren giet men het mengsel bij 0° C uit in 0,5 M pH 5,5 kaliumfosfaatbuffer. Resulterende oplossing (pH 5,9) wordt op pH
4,5 ingesteld, in vacuum geconcentreerd ter verwijdering van methanol en gechromatografeerd over 100 ml HP-20AG, 0,074^0,149 mm.
Nadat men de kolom met 100 ml 0,5 M pH 5,5 buffer en water heeft gewassen, elueert men het gewenste produkt met 9j1 water:aceton. Concentratie in vacuum levert 50 mg in de titel genoemde verbinding op.
B) N-(3-Methoxy-2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, tetrabutylammoniumzout.
Men voegt onder roeren bij een oplossing van - 55 - 160 mg lithiummethanolaat in 5 ml methanol, die op -78° C wordt gekoeld, een oplossing van 149 mg N-chloor-N-(2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, kaliumzout in 10 ml droog dimethyl-formamide. Nadat men alles heeft toegevoegd wordt het mengsel 15 5 min. bij -78° C geroerd, uitgegoten in 100 ml 0,5 N éénbasisch kaliumfosfaatoplossing en drie maal gewassen met methyleenchloride. Men voegt 213 mg tetrabutylammoniumbisulfaat toe aan de waterlaag, die daarna drie maal met methyleenchloride wordt geëxtraheerd. De gecombineerde extracten worden gedroogd (natriumsulfaat) en het 10 oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van 271 rag olie. Chromatografie van de olie over 25 g silicagel en eluering met 4 % methanols 96 %methyleenchloride levert 149 mg produkt op als een olie.
Voorbeeld 48 15 N-(3-Methoxy-2-oxo-1-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, kaliumzout.
91 mg N-(3-Methoxy-2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)- 2- fenylaceetamide, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 47) wordt 20 opgelost in water en geleid over 10 ml ionen uitwisselende kolom (AG 50W-X2 K+ vorm). Het eluaat wordt in vacuum geconcentreerd en de resterende olie verstart bij krassen met een methanol-aceton- ether mengsel. Na twee maal aanwrijven met ether wordt het produkt verkregen als 53 mg vaste stof met de volgende eigenschappen: 25 v 1762, 1665 cm"1; NMR (CD,GD) δ 3,41 (s, 3H, OCH,), 3,59 (S, max J 3 2H, CH^), 3,84 (ABq, J =* 6,3 Hz, 2H, H4), 7,30 (m, 5H, aromatisch). Analyse berekend voor: C 39,88; H 3,62; N 7,75;
Gevonden: C 39,62; H 3,65; N 7,60.
30 Voorbeeld 49 3- Methoxy-2-oxo-3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl_-/amino_/-l -azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Methode I: 35 81 00 57 1 - 56 - A) 2-Oxo-3-/_ N-chloor-N-y (fenylmethoxy)carbonyl Zamino /-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
0,9 g (S)-2-Oxo-3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl_/-5 amino_/-l-aze-tidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voor beeld 4) opgelost in 80 ml methyleenchloride voegt men toe aan een mengsel (afgekoeld op 0-5° C) van 3,17 g natriumboraat decahydraat en 11,8 ml 5,25 % natriumhypochlorietoplossing in 70 ml water. Het reactiemengsel wordt 55 min. hevig geroerd onder afkoeling in een 10 ijsbad. Na verdunning van het mengsel met 0,5 M éénbasische kalium-fosfaatoplossing, wordt het produkt met methyleenchloride geëxtraheerd (drie porties van 150 ml). Combinatie van de extracten, droging (natriumsulfaat) en verwijdering van oplosmiddel in vacuum levert de in de titel genoemde verbinding op als 0,94 g olie.
15 B) 3-Methoxy-2-oxo-3V / (fenylmethoxy) carbonyl__/- araino /-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Men voegt onder roeren 667 mg lithiummethanolaat in 10 ml watervrije methanol bij -78° C toe aan een oplossing van 20 0,94 g 2-oxo-3-/_ N-chloor-N-/_ (fenylmethoxy)carbonyl__/amino_/-l- azetidinesulfonzuur tetrabutylammoniumzout in 10 ml droog dimethyl-formamide. Nadat men het mengsel 1 uur bij -78° C heeft geroerd, giet men het uit in 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing en extraheert met methyleenchloride (drie porties van 150 ml). De 25 gecombineerde extracten worden gedroogd (natriumsulfaat) en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van 0,83 g olie. Het gewenste produkt wordt verkregen door de olie te chromato-graferen over 100 ml silicagel en te elueren met 4-5 % methanol in methyleenchloride onder verkrijging van 513 mg olie: v (netto)
luaX
30 1767, 1720 cm"1; NMR (CDClg) 6 3,40 (S, OCH3), 3,03 (ABq, J - 6,5
Hz, H4), 508 (S, CH2), 6,00 (S, NH), 7,27 (S, aromatisch).
Methode II:
Bij een oplossing van 400 mg 3-benzyloxycarbonyl-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout in water 35 voegt men 10,9 ml 0,1 M tetrabutylammoniumbisulfaatoplossing, die 8100571 * * - 57 - met kaliumhydroxyde is ingesteld op pH 4,3. Het mengsel wordt drie maal met methyleenchloride geëxtraheerd, de extracten worden gecombineerd, gedroogd (^2^0^) en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van 625 mg schuim met spectraal eigen-5 schappen, die naderen tot die van het produkt van methode I. Voorbeeld 50 3-Methoxy-2-oxo-3-/_/ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-l-azetidine-sulfonzuur, kaliumzout.
10 Methode I: A) 2-Oxo-3V N-chloor-N-/ (fenylmethoxy) carbo· nyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Bij een oplossing van 1,00 g (S)-2-oxo-3-/ (_ (fe-15 nylmethoxy) carbonylji'amino^/- 1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 3) in 90 ml methanol, die 4 % natriumboraat decahy-draat bevat, voegt men bij -10° C 420 1 t-butylhypochloriet. Na 2 uren roeren bij -10° C voegt men 100 ml 0,5 M eenbasisch kaliura-fosfaatoplossing toe en stelt de pH met IN zoutzuur in op 6. Na 20 concentratie van het oplosmiddel in vacuum tot 30 ml, chromatogra-feert men de oplossing in water over 200 ml HP-20AG, 0,074-0,149 mm. Na passage van een oplossing van 50 g eenbasisch kaliumfosfaat in 1000 ml water, gevolgd door 2000 ml water, elueert men het produkt met 10 % aceton-90 % water. Men verwijdert het oplosmiddel 25 in vacuum en herkristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit water onder verkrijging van 530 mg vaste stof met smeltpunt 173-175° C.
B) 3-Methoxy-2-oxo-3V [_ (fenylmethoxy)carbo-nyl_/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
30
Bij een oplossing van 874 mg lithiummethanolaat in 10 ml droge methanol voegt men bij -78° C 857 mg 2-oxo-3-/ N-chloor-N-/" (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout in 13 ml droog dimethylformamide. Na 15 min. bij -78° C 35 giet men het mengsel uit in 200 ml 0,5 M eenbasisch kaliumfosfaat- 81 00 57 1 f * - 58 - oplossing en stelt de pH op 5,5 in met IN zoutzuur. Het waterige mengsel wordt gewassen met methyleenchloride (drie porties van 100 ml) en men voegt 1,169 g tetrabutylammoniumbisulfaat toe. Het produkt wordt geëxtraheerd met methyleenchloride (drie porties van 5 200 ml), gedroogd (natriumsulfaat), gefiltreerd en in vacuum gecon centreerd. De resterende olie wordt gechromatografeerd over 150 g silicagel en het produk.t wordt geëlueerd met 2-4 % methanol in methyleenchloride, waarbij men het tetrabutylammoniumzout van het produkt verkrijgt als 701 mg olie. Een deel, dat wil zeggen 51 mg 10 van de olie wordt opgelost in water en geleid over een ionen uit-wisselkolom (3 ml AG 50W-X2, 0,037-0,074 mm, K+ vorm 0,6 meq/ml). Concentratie van het eluaat in vacuum levert 30 mg olie op, die men laat kristalliseren door krassen met aceton: v (KBr) 1760, max 1725 cm"1; NMR (D20) 6 3,48 (S, 3H, OCH3), 392 (S, 2H, H4); 5,20 (S, 15 2H, CH2), 7,42 (S, 5H, aromatisch); smpt. 196-198° C.
Methode II; A) l-Chloor-3-/ N-chloor-N-/ (fenylmethoxy)-carbonyl /-2razetidinon.
20 Men koelt een oplossing van 440 mg 3-/ f_ (fenyl- methoxy)carbonyl_/amino_/-2-azetidinon (zie voorbeeld 2C) in 40 ml 40 % methanolische borax af tot 0° C en voegt 0,5 ml t-butylhypo-chloriet toe. Na 30 min. bij 0° C giet men de oplossing uit in 200 ml koud water en extraheert met twee porties van 100 ml ethylacetaat. 25 De gecombineerde ethylacetaatlaag wordt gewassen met water, gedroogd en afgedampt in vacuum onder verkrijging van 546 mg in de titel genoemde verbinding als een olie.
B) 3-Methoxy-3V /_ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino__/- 2-azetidinon.
30
Men koelt een oplossing van 730 mg of 0,0025 mol l-chloor-3-/ N-chloor-N-/ (fenylmethoxy) carbonyl__/amino__/-2-azeti-dinon in 5 ml tetrahydrofuran af op -78° C en voegt 4 ml methanol, die 285 mg lithiumraethoxyde bevat, toe. Na 20 min. bij -78° C voegt 35 men 0,6 ml azijnzuur en 0,6 ml trimethylfosfiet toe. Men roert de 8100571 - 59 - 5 oplossing 5 min. bij -18° c, laat baar tot kamertemperatuur opwarmeu en roert 30 min.. De resulterende oplossing wordt verdund met ethyl-acetaat, gewassen met 5 % natriumbicarbonaat, water, 5 % kaliumbi-sulfaat, water en verzadigde zoutoplossing en gedroogd. Verwijdering van oplosmiddel levert een olie op, die men leidt over vier 20 x 20 cm x 1 mm silicagelplaten. Ontwikkeling met benzeen-ethylacetaat (1:1) en winning van de voornaamste UV-actieve band van Rf = 0,25 levert 91 mg olie op, die uit ether kristalliseert tot een vaste 10 t stof. Herkristallisatie uit ether levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 112-114° C. C) 3-Methoxy-2-oxo-3-/~/ (fenylmethoxy) carbonyl__/-amino_/-1-azetidinesulf onzuur, kaliumzout. 15 Men roert een oplossing van 25 mg 3-methoxy-3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-2-azetidinon in 0,175 ml di-chloormethaan en 0,175 ml dimethylformamide 24 uur met 55,4 mg complex van pyridine-zwaveltrioxyde. De verkregen brij wordt met 5 ml koud 0,5 M eenbasisch kaliumfosfaat (ingesteld op pH 4,5) verdund en met ethylacetaat geëxtraheerd. Men leidt de waterlaag over 20 een 40 ml HP-20AG kolom. Eluering met meer buffer,·water en water-aceton (9:1) levert 32 mg in de titel genoemde verbinding op als een olie, die langzaam verstart, herkristallisatie uit aceton levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 196-198° C onder ontleding. f " 25 λ» Voorbeeld 51 3-/_ / l,3-Dioxo-2-feny 1-3-(fenylmethoxy)propyl_yamino__/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. 30 A) 3-/ / 1,3-Dioxo-2-feny1-3-(fenylmethoxy)-propyl /amino /-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutyl-ammoniumzout. 35 Men lost 431 mg ruw 3-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 74), dat borax bevat, op in 30 ml droog azijnzuurnitril. Men voegt 81 00 57 1 - 60 - 317 μΐ droge pyridine toe en roert de oplossing bij -10° C goed onder droge stikstof. Men voegt druppelsgewijze 568 mg a-(benzyl-oxycarbonyD-fenylacetylchloride in 3 ml droog azijnzuurnitril toe. Dunnelaagchromatografie wijst uit, dat de reactie na 15 min. voltooid 5 is. Men voegt 17 ml 0,5 M kaliumfosfaatbuffer pH 5,5 toe en verwijdert het merendeel van de azijnzuurnitril in vacuum. Het residu wordt met water verdund en drie maal geëxtraheerd met gelijke volumina methyleenchloride. Het extract wordt boven watervrije natrium-sulfaat gedroogd en in vacuum afgedampt onder verkrijging van 1,032 10 g ruw produkt, dat wordt opgelost in 3 ml methyleenchloride en ge-chromatografeerd wordt over een silicakolom onder gebruikmaking van methyleenchloride-methanol, waarbij men 470 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
B) 3-£ /_ l,3-Dioxo-2-fenyl-3-(fenylmethoxy)-15 propyl /amino 7-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 470 mg 3-/^/ 1,3-dioxo-2-fenyl-3-(fenyl-methoxy) propyl__/amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout op in 15 ml 30 % acetoniwater en leidt de 20 oplossing over een Dowex 50W-X2(K+ vorm) kolom onder gebruik van hetzelfde oplosmiddel als elueermiddel. Het totale eluaat wordt in vacuum ingedampt tot 345 mg amorfe vaste stof, die wordt gevriesdroogd tot een amorf poeder met smeltpunt 100-120° C.
Analyse Berekend voor C20H19°8N2SK 25 C 49,37; H 3,94; N 5,76; S 6,59;
Gevonden: C 49,08; H 4,00; N 5,58; S 6,29.
Voorbeeld 52 (+)-3-/_ / f_ (Cyaanmethyl) thio_/acetyl_/amino__/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidine sulfonzuur, kaliumzout. 3.
30
Bij een oplossing van 414 mg 3-amino-3-methoxy-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 74) in 50 ml droog azijnzuurnitril voegt men bij -20° C 210 1 diethyl- aniline en 169 mg cyaanmethylthioacetylchloride. Na 10 min. ver-35 wijdert men het oplosmiddel onder verlaagde druk en voegt 22,8 ml 8 1 0 0 57 1 - 61 - 0/1 Μ tetrabutylammoniumsulfaatoplossing, die met kaliumhydroxyde op pH 4,3 is ingesteld, toe en extraheert het produkt met drie porties van 50 ml methyleenchloride, droogt, filtreert en concentreert onder verlaagde druk. Het olie-achtige residu wordt gezui-5 verd over 60 g silicagel en het produkt (294 mg) wordt geëlueerd met 4 % methanol-methyleenchloride. Het gezuiverde produkt wordt over 16 ml ionen uitwisselende hars (AG50 W-X2 K+ vorm), 0,6 meq/ml, 0,037-0,074 mm, geleid. Verwijdering van water levert 164 mg gedeeltelijk gezuiverd produkt op. Het produkt wordt verder gezuiverd 10 over 100 ml Diaion AG HP 20 onder gebruikmaking van water als elueermiddel. Het oplosmiddel wordt onder verlaagde druk verwij- / derd onder verkrijging van 126 mg produkt, dat met ether wordt aangewreven tot 76 mg in de titel genoemd produkt met smeltpunt 110-125° C.
15 Analyse berekend voor C8H10N3S2°6K! C 27,66; H 2,88; N 12,10; S 18,44;
Gevonden; C 27,25; H 3,00; N 10,84; S 17,53.
Voorbeelden 53-56
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 42, 20 methode II volgt, maar een in kolom I van onderstaande tabel op- gesomde verbinding gebruikt in plaats van (+)-c*V (aminocarbonyl)-amino /-2-thiofeenazijnzuur, verkrijgt men de daarachter staande verbinding uit kolos II.
81 00 57 1 I 62 f H H 8 H & H H O —I £
I I ρ a >1 3 C P (O P Ρ (0 3 M P I - CN P O» I 1 3 C 3 P N T3 O G d) GOH P lp p a h g (0 3 0 <-* W rM) H >i (! ® Ρ Ρ Ό (DOG ü P O (0 P 0 <D * X N U 0 (0 0 I 0 C Η ΙΛ Ρ I P ε o (n (0 X I 0 CN I , i 'vltN CN hfSs >'ë E Cl fl D BH 'X? + h — >1 * W P P ,ci 41 3 ,00 vj «J N
I H I I i o in o x σι X o *h Λ 4J ok§ S o'8 s e f (0 P <D —•BH P, 3 W JS I * P PP 0) >i 3 B P O §0 N O g (O (O 3 >|H Ή O SnP _ — s n) B> I , OJ M C >Jp Ή NV \JCN § l , · N kh| '•x O <P I G H _ ro P 3 Ό i-Li S § -h-S - + 1-1 <0 o W 4J +>0 ,η e o r* I , o n σ> \| (tj |Q p T3 P 0)
P 1 P P >0 Sn* G <P P Ki3 O N C G P O E <P (O P — 3 -I M Sn d) P G
I >1 G <D c •ft
§ ft P <0 M
•ft Ό P +> 0) N 10 I o 01
CJ
o CN t Γ" o I o X Γ"!<Ν CN l^\P >V§ n c ft !Si | V-?" — SN - W Ρ P ,<Ί O 3 I ,ο o s|id n
r-l & o X) P <0 o o G
P 1 1 P 3 n <v c •η Ό -t p P 0) <D Ό N G (O O I
(P c •ft Ό 0) -P G O
a i u (O o ,— xo l , O m ,\i I CN , CN CN I "v.P· c o 3 C 0+ p +r 4-1,1 *, 1« K —t — >i * W Ρ P ,n dl 3 1 ,oo vjlj N
I co k
— P P 3 Sn 3 P N G
O) o (O o X o o G P
I I — o P P >t JS P P P I (D CN b, i
•η N 3 G (O P 3 +t (O I >'^l Ö o I c —ip ±‘S
§h (O o >t c O P — SP .3 3 '•xK., 3
I P P Sn 2 P 3 (1) N O G β ·—> O P X N
i — P P 3 >i 3 G N ' C
, . N t , Sn ·η \|P P I <U N Ö O (0 I (0 G O dl + |X (U —, O P ï
(0 0 G C dl P o g N 3 G rj} Ö o 1 G —* P « H
P P (0 N O (0 O G G 0) P d) H N 3 c Γ,Λ >K! 0 O 1 G —· p Pi H
« P <D dl fi O !> n in -d* in in in 10 in 8100571 £ ,Τ - 63 -
Voorbeeld 57 L 3S (+)__/-3V /_ 2- (Methylthio) -l-oxopropyl_/amino_/-2-oxo-l-azeti-dinesulfonzuur, kaliumzout.
5 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 31, metho de II volgt, maar (+)-2-(methylthio)-propaanzuur gebruikt in plaats van (+)-a-azidobenzeenazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 173° C, onder ontleding.
Voorbeeld 58 10 (_ 3S(R*)_/-3-/ (_(_/_(_ (2,3-Dioxo-4-/ (fenylmethyleen)amino_/-l- piperazinyl_/carbonyl_/amino_/fenylacetyl__/amino__/-2-oxo-1 -azeti-dinesulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 0,7 g (R)-a-/ / / 2,3-Dioxo-4V (fenyl-15 methyleen) amino_/-l-piperazinyl__/carbonyl_/amino_/benzeenazi jnzuur en 0,8 g (S)-3-êimino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammo-niumzout (zie voorbeeld 6A) op in 20 ml azijnzuurnitril. Men voegt onder roeren druppelsgewijze bij 0° C 0,4 g dicyclohexylcarbodiimide toe. Men zet het roeren 18 uur voort en destilleert na filtratie 20 het oplosmiddel af onder achterlating van een olie-achtig residu.
Het residu wordt opgelost in aceton en met kaliumperfluobutaan-sulfonaat behandeld ter precipitatie van de in de titel genoemde verbinding. Zuivering door kolomchromatografie over HP-20 onder gebruikmaking van water als elueermiddel levert de in de titel 25 genoemde verbinding op met smeltpunt 193-194° C.
Voorbeeld 59 /*3S(Z)_7-3-/ /_ (2-Amino-4-thiazoly 1)/ (2-methoxy-2-oxoethoxy)imi-no /acetyl 7amino__/ -2 -oxo-1 -aze t idine sulf on zuur, kaliumzout.
30 Men lost 1,3 g (Z)-2-amino-oV (2-methoxy~2-oxo-
ethoxy)imino_/-4-thiazoolazijnzuur en 2,03 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) iop in 50 ml azijnzuurnitril en men voegt druppelsgewijze bij 0° C
1,03 g dicyclohexylcarbodiimide, opgelost in 5 ml azijnzuurnitril 35 toe. Na 15 uur roeren en nadat men dicyclohexylureum heeft afgefil- 81 0 0 5 7 1 I 1 - 64 - treerd, destilleert men het oplosmiddel af. Het resterende olieachtige residu wordt opgelost in aceton en behandeld met de equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat. De in de titel genoemde verbinding wordt gewonnen en gezuiverd door kolomchromato-5 grafie over HP-20 onder gebruikmaking van water als elueermiddel, waarbij men de in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 195-198° C.
Voorbeeld 60 (_ 3S (rX)_/~3-/_ /./././. 3 V /_ (4-Chloorfenyl)methyleen_/amino__/-2-10 oxo-1 -imidazolidinyl__/ carbonyl_/amino_/ fenylace ty l_/amino_/-1 -aze- tidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men roert 1,5 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml 15 absolute diglyme (diethyleenglycoldimethylether), 1,5 g (R) —c<— / f_ (_ 3-/_ /_ (4-chloorfenyl)methyleen__/amino_/-2-oxo-l-imidazolidi-nyl_/carbonyl_/amino_/benzeenazijnzuur, een equivalente hoeveelheid dicyclohexylcarbodiimide en 0,5 g hydroxybenztriazool 12 uur dooreen. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het residu opgelost 20 in 50 ml aceton en gefiltreerd. Men destilleert de aceton af en lost het residu op in 200 ml methyleenchloride. De oplossing wordt met natriumbicarbonaatoplossing in water en daarna met natriumchlo-ride-oplossing in water gewassen. De methyleenchloridelaag wordt boven natriumsulfaat gedroogd, drooggedampt en gekristalliseerd 25 door toevoeging van ether. De verbinding wordt herkristalliseerd uit aceton-ether. Het verkregen witte kristallijne poeder wordt opgplost in aceton en behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in aceton. De in de titel genoemde verbinding precipiteert en wordt afgefiltreerd onder verkrijging 30 van 1,4 g produkt met smeltpunt 217-222° C.
Voorbeeld 61 / 3S (R*)_/—3—/_ / / / /. 2-Oxo-3V (fenylmethyleen)amino_/-l-imida- zolidiny 1_/carbony l_/amino_/f enylace tyl_/amino_7-l-azetidinesulf onzuur, kaliumzout.
35 " 8 1 0 0 5 7 1 f. Λ - 65 -
Men roert 2,25 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniurazout (zie voorbeeld 6Ά) in 100 ml droog dimethylformamide (DMF), een equivalent dicyclohexylcarbodi-imide, 2,5 g (R)-a-/ / / 2-oxo-3-/ (fenylmethyleen)amino_/-l-5 iraidazolidinyl_/carbonyl__/amino__/benzeenazijnzuur en 0,85 g hydroxy- benztriazool bij kamertemperatuur 12 uur dooreen. Op dit tijdstip verwijdert men DMF in vacuum en lost het residu op in 50 ral aceton. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en de moederloog behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansul-10 fonaat in 20 ral aceton. Na toevoeging van 100 ml ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die wordt afgefiltreerd. Men zuivert het produkt door de verbinding in DMF/aceton op te lossen en te precipiteren met water onder verkrijging van 1,5 g produkt met smeltpunt 224°-226° C, onder ontleding.
15 Voorbeeld 62 / 3S (Rx)_/-3-/_ /_/_(_/_ 3- (Methylsulfonyl) -2-oxo-1-imidazolidinyl_/~ carbony1 /amino_/fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, ~ kaliurazout.
20 Men roert 2,25 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine- sulf onzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 60 ml dimethylformamide 12 uur met 1,9 g (R) -a-/ /_ f_ 3-(methylsulfonyl)-2-oxo-l-imidazolidinyl_/carbonyl_/amino_ybenzeenazijnzuur, 0,75 g hydroxybenztriazool en 2,3 g dicyclohexylcarbodiimide. Het oplos-25 middel wordt in vacuum verwijderd en het overblijfsel opgelost in 20 ml aceton en gefiltreerd. De moederloog wordt behandeld met 1,87 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. Na toevoeging van ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding onder verkrijging van 2,0 g materiaal. De verbinding wordt gezuiverd door 30 herkristallisatie uit water en heeft een smeltpunt van 240-245° C, onder ontleding.
35 81 0 0 57 1 i- τ - 66 -
Voorbeeld 63 £ 3S (RX)__/-3-£ (hydroxyfenylacetyl)amino_/-2-oxo-l-azetidinesul~ fonzuur, kallumzout.
5 Men roert 1,5 g (S)-3-amino-2-oxo-1-azetidine- sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6Ά) in 100 ml droog dimethylformamide 16 uur met 1,5 g dicyclohexylcarbodiimide, 0,5 g hydroxybenztriazool en 0,6 g R-a-hydroxybenzeenazijnzuur. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het residu opgelost 10 in 20 ml aceton. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en de moederloog behandeld met een equivalente hoeveelheid kalium-perfluorbutaansulfonaat. Na toevoeging van ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die men af filtreert onder verkrijging van 1,3 g ruw produkt. Het produkt wordt gezuiverd door 15 chromatografie onder gebruikmaking van HP-20 en water/aceton (9:1) als elueermiddel. Het heeft een smeltpunt van 145-150° C onder ontleding.
Voorbeeld 64 £ 3S (SX)__/-3-£ (Hydroxyfenylacety 1) amino_/-2-oxo-1 -azetidinesul-20 fonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 63 volgt, maar (S)-a-hydroxybenzeenazijnzuur gebruikt in plaats van (R)-a-hydroxybenzeenazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde 25 verbinding met smeltpunt 195-197° C.
Voorbeeld 65 £ 3S(+)__/-2-Oxo-3-£ (fenylsulfoacetyl)amino_/-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (1:2).
30 2,25 g (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml droge diglyme, 2,4 g triethylamine en 0,3 g dimethylaminopyridine worden tot 0° C afgekoeld. Men voegt druppelsgewijze 1,8 g (R)-a-(chloorcarbonyl)-benzeenmethaansulfonzuur in 20 ml diglyme toe. De temperatuur 35 wordt 2 uur aangehouden, het oplosmiddel in vacuum afgedestilleerd 8100571 r - 67 - en het residu in aceton opgelost. Het onoplosbare precipitaat wordt afgefiltreerd en de moederloog behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat. Na toevoeging van ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die men affil-5 treert onder verkrijging van 1,4 g ruw produkt met smeltpunt 240-245° C, onder ontleding, na herkristallisatie uit water/aceton. Voorbeeld 66 / 3S(Z)__/-3V / (2-Amino-4-thiazolyl)/_ /_ (diethoxyfosfinyl) methoxy_/~ imino_/acetyl__/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
10
Men behandelt 2,25 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azeti-dinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 100 ml droog dimethylformamide 12 uur onder roeren met 1,87 g (Z)-2-amino-aV / (diethoxyfosfinyl)methoxy__/imino_/-4-thiazoolazijnzuur, 15 0,75 g hydroxybenztriazool en 2,29 g dicyclohexylcarbodiimide. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en het oplosmiddel in vacuum verwijderd. De resterende olie wordt behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat in 20 ml aceton. Na toevoeging van ether precipiteert de in de titel genoem-20 de verbinding, die wordt afgefiltreerd onder verkrijging van 2,77 g ruw produkt. Zuivering van dit ruwe produkt door kolomchromatogra-fie onder gebruikmaking van HP-20 en water/aceton (9:1) als elueer-middel, levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 155-160° C, onder ontleding.
25 Voorbeeld 67 / 3S(Z)__7-3-/”/~(2-Amino-4-thiazolyl)/_ /_ 2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxo-l-fentlethoxy__/iminp_/acetyl_/aminq_/-2-oxo-l-azetidinesulfon-zuur, kaliumzout.
30 Men roert 2,2 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidine- sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 60 ml dimethylformamide bij kamertemperatuur 12 uur met 2,4 g (Z)-2-amino-a-/ / 2-(1,1-dimethylethoxy)-2-oxo-l-fenylethoxy_/imino_/- 4-thiazoolazijnzuur, 1 g hydroxybenztriazool en 1,5 g dicyclohexyl-35 carbodiimide. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het 81 0 0 5 7 1 * 1 - 68 - residu in 50 ml aceton opgelost. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en de moederloog behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat. Na toevoeging van ether kristalliseert de in de titel genoemde verbinding uit, die men 5 affiltreert. Zuivering van de verbinding wordt bereikt door HP-20 kolomchromatografie met water/aceton (7:3) als elueermiddel, onder verkrijging van 1 g produkt met smeltpunt >250° C, onder ontleding. Voorbeeld 68 /_ 3S(Z)^/-3-/ £ (2-Amino-4-thiazolyl)/_ (lH-tetrazol-5-ylmethoxy)-10 imino_/acetyl_/amino__/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men behandelt 1,9 g (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidi-nesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) in 60 ml dimethylformamide onder roeren 24 uur met 1,4 g (Z)-2-amino-a-V (1H-15 tetrazol-5-ylmethoxy)imino_/-4-thiazoolazijnzuur, 0,7 g hydroxy- benztriazool en 1,4 g dicyclohexylcarbodiimide. Nadat het oplosmiddel in vacuum is verwijderd wordt het residu qpgelost in aceton en de geprecipiteerde ureum afgefiltreerd, De moederloog wordt behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansulfonaat 20 in 10 ml aceton. De in de titel genoemde verbinding wordt geprecipiteerd door toevoeging van 200 ml ether. Zuivering wordt verkregen door HP-20 kolomchromatografie met HP-20 hars en water als elueermiddel, waarbij 1,05 g produkt wordt verkregen met smeltpunt 250° C, onder ontleding.
25 Voorbeeld 69 / 3S(Z)_7-3-/ Γ(2-Amino-4-thiazolyl)/ (fenylmethoxy)imino_/acetyl_/-amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men roert 1,5 g (S)-3-amino-2~oxo-l-azetidine-30 sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A), 1,23 g (Z) — 2-amino-a-/ (fenylmethoxy)imino__/-4-thiazoolazijnzuur, 0,57 g hy-droxybenztriazool en 1,14 g dicyclohexylcarbodiimide bij kamertem-preatuur 24 uur in 60 ml dimethylformamide. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd, het oplosmiddel verwijderd en het residu 35 behandeld met een equivalente hoeveelheid kaliumperfluorbutaansul- 81 0 0 5 7 1 - 69 - fonaat in 10 ml aceton. Na toevoeging van 200 ml ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die men affiltreert en zuivert door HP-20 kolomchromatografie met water/aceton (9:1) als elueer-middel onder verkrijging van 1 g materiaal met smeltpunt 200° C# 5 onder ontleding.
Voorbeeld 70 / 3S (Z)_7*"3-/ / (2-ftmino-4-thiazolyl)/ (carboxymethoxy) imino__/acetyl /amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (1:1).
10 Men vermengt 1,3 g / 3S(Z)_/-3-£/ (2-amino-4- thiazolyl)/_/ 2-(difenylmethoxy)-2-oxoethoxy_/imino_/acetyl_/- amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (1:1) (zie voor- o beeld 30) met 5 ml anisool. Men voegt bij -15 C 25 ml trifluor-azijnzuur toe en roert het mengsel 10 min.. Men voegt bij -10° C 15 langzaam 100 ml ether toe en vervolgens 50 ml petroleumether. Het precipitaat wordt onder koeling gesuspendeerd in 20 ml water en met verdund kaliumhydroxyde ingesteld op pH 5,0. Het produkt wordt gezuiverd door chromatografie over een HP-20 kolom onder verkrijging van 3,0 g in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 230-20 235° C, onder ontleding.
Voorbeeld 71 f_ 3S (Z)_/-3-/_ / (2-Amino-4-thiazoly 1) /^ [_ 2-oxo-2- (fenylmethoxy) -ethoxy__/ imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo- 1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
25
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 28 volgt, maar (Z)-2-amino-a-/ / 2-oxo-2-(fenylmethoxy)ethoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van (Z) -2-amino-ct-;/ /_ 2-(difenylmethoxy) -1,l-dimethyl-2-oxoethoxy__/ imino_/-4-thiazoolazijn-30 zuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt cirka 170° C, onder ontleding.
Voorbeeld 72 / 3S (Z)_/-3-/_ £ /_ (2-Amino-2-oxoethoxy) imino__/ (2-amino-4-thiazolyl) -acetyl__/amino__/-2-oxo-1 -azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
35 81 00 57 1
Wanneer men 'de werkwijze..van- voorbeeld 28 volgt, maar (2) -2-amino-aV (2-amino-2-oxoethoxy)imi£c|§!f'-4-^iaze^lazijn-zuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-/_/_ 2-(difenylmethoxy)- 1,1 -dimethyl-2-oxöethoxy_7iraino_v<’-%-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel-genoemde verbinding met smeltpunt 205-210° c, onder ontleding.
Voorbeeld 73 / 3S(zW-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl)(tydroxyimino) -acetyl_/amino_/~ 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout,
Men roert een oplossing van 0,6 g 90 % hydroxy-benztriazool in 100 ml dimethylformamide 1 uur met 10 g 4A moleculaire zeven, filtreert en voegt het filtraat toe aan een oplossing van 0,004 mol (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutyl-ammoniumzout (zie voorbeeld 6Ά) in dimethylformamide. Men voegt 0,89 g (Z)-2-amino-a-(hydroxyimino)-4-thiazoolazijnzuur toe en vervolgens 0,91 g dicyclohexylcarbodiimide. Het mengsel wordt 16 uur geroerd, in vacuum afgedampt en het overblijfsel opgelost in 20 ml aceton en gefiltreerd. Toevoeging van een kaliumperfluor-butaansulfonaatoplossing doet de in de titel genoemde verbinding precipiteren. Chromatografie over HP-20 hars levert 0,44 g produkt op met smeltpunt >240° C.
Voorbeeld 74 3-Methoxy-2-oxo-3V (2-thienylacety1)araino__/-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
A) 3-Amino-3-methoxy-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Men lost 143 mg (+) -S-methoxy-SV /_ (fenylmethoxy) carbonyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 49) op in 15 ml droge methanol. Men voegt 2 mg of 0,1 equivalent Na2B4O^.10 HgO toe, gevolgd door 72 mg 10 % palladium op kool. Het mengsel wordt 15 min. bij 1 atmosfeer druk gehy-drogeneerd. De katalysator wordt afgefiltreerd en het filtraat in 5
ir A
--71- vacuum af gedampt, waarbij men*114 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt, - B) 3-Methoxy-2-oxo-3-/ (2^ëHienylacetyl) amino__/- 1-azetidinesulfonzuury tetrabutylammoniumzout, 10 15 20
Men lost 102 mg 3-methoxy-3-amino-2-oxo-l-azeti-dinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout op in 10 ml droog azijnzuur-nitril. Men voegt 56,5 /tl droog pyridine toe en roert de oplossing bij -10° C goed onder droge stikstof. Men voegt druppelsgewijze 44 μΐ thienylacetylchloride in 1 ml droog azijnzuumitril toe. In 15 min. is de reactie voltooid blijkens dunnelaagchromatografie.
Men voegt 4,2 ml 0,5 M kaliumfosfaatbuffer, pH 5,5 en 8,5 mg of 0,1 equivalent tetrabutylammoniumsulfaat toe en verwijdert het merendeel van de azijnzuumitril in vacuum. Het residu wordt met water verdund en geëxtraheerd met drie porties van 20 ml methyleen-chloride. Het extract wordt boven watervrij natriumsulfaat gedroogd en in vacuum afgedempt tot 107 mg gom. Het ruwe produkt wordt gezuiverd door chromatografie over silicagel onder gebruikmaking van methyleenchloride-methanol, waarbij men 66 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
C) 3-Methoxy-2-oxo-3-/_ (2-thienylacetyl)amino__/- 1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 154 mg 3-methoxy-2~oxo-3-/_ (2-thienyl- 25 acetyl)amino__/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout op in 3 ml 30 % aceton-water, leidt de oplossing door een kolom van
Dowex 50W-X2 (K+ vorm) en elueert met hetzelfde oplosmiddel. Het totale eluaat wordt in vacuum afgedampt tot 95 mg produkt, dat men vriesdroogt tot een amorf poeder met smeltpunt 120-135° C.
30 Analyse berekend voor C,nH.,N 0,S_K: IU 11 2 o 2 C 33,51; H 3,09; N 7,82; S 17,89;
Gevonden: C 33,46; H 3,08; N 7,92; S 17,64.
35 81 00 57 1 - 72 -
Voorbeeld 75 “ /~3S(Z) 7-3-/7 (2-Amino-4-thiazoly1)/ (carboa^ethoxx)Jjnino_/acetyl 7amino_7- 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur/ kaïlOTzout, " 5 0,1 g/ 3S(25)7-3-77 (2-amino-4-thiazolyl)/_ /_ 2- oxo-2- (fenylmethoxyj ethoxy_/imino__/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidi-nesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 71) wordt opgelost in een mengsel van 5 ml ethanol en 5 ml water en bij kamertemperatuur gehydrogeneerd in aanwezigheid van 0,2 g 10 % palladium op kool.
10 Na 2 uur wordt de katalysator afgefiltreerd en de resterende oplossing gevriesdroogd onder verkrijging van de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 235° C onder ontleding.
Voorbeeld 76 3-/”/“(S)-/ (Aminocarbonyl)amino_y-2-thienylacetyl_/araino_/-3-15 methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout, isomeer A.
Bij een oplossing van 277 mg 3-amino-3-methoxy-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 46, methode II, deel A) in 15 ml droog azijnzuuraitril voegt men bij 20 -20° C 71 yu-l of 0,888 mmol pyridine en 166 mg (D)-2-amino-4-(2- thienyl)-5-(4H)-oxazolinehydrochloride. Men roert het mengsel 10 min. en voegt een tweede hoeveelheid van 71 /1 pyridine en 166 mg oxazoline toe. Na nog 10 min. wordt het oplosmiddel onder verlaagde druk verwijderd en het residu opgelost in een water-aceton mengsel 25 en geleid over 20 ml ionen uitwisselende hars (AG 50W-X2, K+ vorm, 0,073-0,074 mm). Verwijdering van water uit fracties 2-3 levert 248 mg diastereomeren-mengsel op.
Het produkt wordt gezuiverd en de diastereomeren worden gescheiden over 130 ml Diaion AG HP 20 en met water geëlueerd. 30 Isomeer A wordt geëlueerd in fracties 23-28 (30 mg) en isomeer B in fracties 35-45 (30 mg) (fracties van 8 ml). De middelfracties (10 mg) worden gecombineerd met fracties van andere gangen en men wint een totaal van 35 mg isomeer A en 59 mg isomeer B.
Analyse voor isomeer A, smeltpunt 158-165° C.
35 Berekend voor C^H^N^S^K.^O
81 0 0 57 1 5 - 73 - 10 15 20 25 30 35 C 31,05 ? Η 3,29; N 13,18; „ Gevonden: C 30,95; H 2,97; N 12,93.4¾¾¾' Analyse voor isomeer B, smeltpunt 160-170° C (ontleding) Berekend voor -,>C 31,05; H 3,29; N 13,18; S 15,05; Gevonden: C 31,17; H 3,09; N 13,13; S 15,09. Voorbeeld 77 3-Methoxy-2-oxo-3-/ (fenylsufloacetyl)amino /-1-azetidinesulfon-di ” - zuur,/kaliumzout.
Bij een oplossing van 366 mg ruw 3-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 74A) en 38 mg borax in 35 ral droog azijnzuumitril voegt men bij -10° C onder stikstof 0,53 ml droge pyridine, gevolgd door 2 min. toevoeging van een oplossing van 348 mg a-sulfofenylacetyl-chloride monoetheraat in 8 ml azijnzuumitril. Na 20 min. wordt het oplosmiddel in vacuum verwijderd en het residu behandeld met 35 ml 0,5 M kaliumfosfaatbuffer pH 5,5. Men voegt 383 mg tetrabutyl-ammoniumwaterstofsulfaat toe en extraheert het mengsel drie maal met methyleenchloride. Het methyleenchloride wordt gedroogd (na-triumsulfaat) en afgedampt tot 685 mg ruw produkt. Het ruwe produkt wordt gecombineerd met 115 mg ruw produkt van een tweede gang en het gecombineerde materiaal wordt gezuiverd over een kolom van SiliCAR CC-4 onder gebruikmaking van methyleenchloride en daarna 2, 4, 6, 8 en 10% methanol in methyleenchloride als elueermiddel. Het produkt, een mengsel (ongeveer 6:1) van racemische diastereomeren in de tetrabutylammonium-zoutvorm, wordt in het kaliumzout omgezet door het te leiden over Dowex 50W-X2 (K+ vorm) hars onder gebruikmaking van 20 % aceton in water als oplosmiddel. Het produkt wordt gevriesdroogd tot 171 mg in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 205-210° C onder ontleding. Analyse berekend voor C^H^2N2°9S2K2*H2° C 29,51; H 2,89; N 5,74; S 13,10; Gevonden: C 29,45; H 2,74; N 5,51; S 12,82.
81 00 57 1 * - 74 -
Voorbeeld 78 . __ 3-/ (Carboxyfenylacetyl) amino__/-3-methoxv-2-oxQ?i-azetldinesulfon-zuur, dikaliumzout.
5 «KtfMen lost 39~mg 3-/ / l,3-dioxo-2-fenyl-3~(fenyl- methoxy) propyl_7amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 51} op in 5 ml methanol. Men voegt 3,9 mg watervrij kaliumcarbonaat en 19 mg 10 % palladium op kool toe en hydrogeneert het mengsel 20 min. bij atmosferische druk. De 10 katalysator wordt afgefiltreerd en het filtraat in vacuum afgedampt onder verkrijging van 34 mg glasachtig residu, dat gevriesdroogd wordt tot een amorf poeder met smeltpunt 178-190° C, onder ontleding.
Analyse voor ci3H12°8N2S K2*0'5 H20i C 35,20; H 3,18; N 6,32; S 7,23; 15 Gevonden: C 35,51; H 2,96; N 6,29; S 6,92.
Voorbeeld 79 £ 3S(Z)_/-3-/_ /_ (2-Amino-4-thiazolyl)/ £ 2-(1, l-dimethylethoxy)-l-(inethylthio) -2-oxoethoxy_/iniino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidi-ne sulfonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 73 volgt, maar (Z) -2-amino-a-£ £ 2- (1,1-dimethylethoxy) -1- (methylthio) -2-oxo-ethoxy__/imino_/-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van (Z)—2— amino-a-(hydroxyimino)-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de 25 titel genoemde verbinding met smeltpunt 130° C, onder ontleding. Voorbeeld 80 (+)-3-Butoxy-3-£ £ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidi- ÏC' nesulfonzuur, kaliumzout. 4 30 Een oplossing van 185 mg 2-oxo-3-£ N-chloor-N- £ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabu-tylammoniumzout (zie voorbeeld 49A) in 1 ml dimethylformamide wordt op -78° C afgekoeld en men voegt 3,8 ml 0,73 N lithium n-buta-nolaat in n-butanol bij -78° C toe. Na 15 min. wordt 0,5 M één-35 basisch kaliumfosfaatbuffer toegevoegd en het produkt geëxtraheerd 8100571
r. A
- 75 - 5 in dichloormethaan: (drie-p05ti.es van 40 ml) op natriumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd in vacuum tot 179 mg overeenkomstig tetrabutylammoniumzout van deirH binding.
ver- 10
Bij een oplossing· van 109 mg van dit tetrabtuyl· ammoniumzout in aceton voegt men 60 mg perfluorbutylsulfonzuur, kaliumzout in aceton. Hen verwijdert het oplosmiddel in vacuum en voegt ethylacetaat toe. Het produkt kristalliseert uit en wordt gewonnen en gedroogd tot 66 mg in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 186,5-187,5° C onder ontleding.
Voorbeeld 81 {_ 3+(E)_/-3-Methoxy-3-/_ /_ (methoxyimino)-/ 2·-/,/, (fenylmethoxy)-carbonyl_/ amino_/-4-thiazolyl_/acetyl_/ amino_/-2-oxo-1-azetidine-sulfonzuur, kaliumzout.
15 20 25
Hen behandelt een suspensie van 0,175 mmol 3-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (voorbeeld 46, methode II, deel Ά) en 0,0175 mmol natriumboraat in 2 ml dichloormethaan bij 0° C met 28 1 pyridine en 0,175 mmol (E)-a- (methoxyimino) -2-/_ /_ (fenylmethoxy) carbonyl_/amino_/-4-thia-zolylacetylchloride* Na 1 uur wordt het mengsel met dichloormethaan verdund en met water afgeschrikt. De organische laag wordt gewassen met water, verzadigd zout, gedroogd en in vacuum ingedampt. Het overblijfsel wordt gezuiverd over 20 g Mallinckrodt SiliCAR CC-4 silicagel onder verkrijging van 43 mg overeenkomstig tetrabutylammoniumzout van de in de titel genoemde verbinding.
30
Men lost 43 mg van dit tetrabutylammoniumzout op in 0,5 ml aceton en voegt 20 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat in 0,5 ml aceton toe. Na toevoeging van 3 ml ether wordt de vaste stof gewonnen en in vacuum gedroogd tot 28 mg in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 144-146° C onder ontleding.
Voorbeeld 82 35 / 3+(Z)__/-3-Methoxy-3-/ / (methoxyimino)/ 2-/ / (fenylmethoxy)car-bonyl_/amino_/-4-thiazolyl__/ acetyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
81 00 57 1 - 76 -
Wanneersmen de werkwijze van voorbeeld 81 volgt, maar (Z) -a- (methoxyimino) -2-£/ (fenylmethoxy) carbonyl_/amino__/- 4-thiazolylacetylchloride gebruikt in pl'aatffi^fe^^^a- (methoxyimino) -2-/_ / (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-4-thiazolylacety 1-5 chloride, verkrijgt men de indë^tïtel genoemde verbinding met smeltpunt 168-172¾1 C onder ontleding.
Voorbeeld 83 3-/ /"(R)-a-/_ /_ (4-Ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl__/amino_/-fenylacetyl_/amino_/-3~methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kalium-10 zout.
Bij een oplossing van 0,69 mmol 3-amino-3-me-thoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (voorbeeld 46, methode II, deel A) in 30 ml droog azijnzuurnitril voegt 15 men bij -20° C onder roeren en onder stikstof 242 1 droge pyridi ne, gevolgd door een oplossing van 352 mg (R)-a-/ / (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl_/amino_/fenylacetylchloride in 4 ml azijnzuurnitril. Na 1 uur voegt men 84 1 pyridine toe, gevolgd door nog 117 mg bovengenoemd zuurchloride in 1 ml azijnzuurnitril. 20 De reactie wordt’20 min. geroerd, verdund met 24 ml 0,5 M pH 5,5 éénbasisch kaliumfosfaatbuffer en geconcentreerd in vacuum ter verwijdering van azijnzuurnitril. Het waterige restant wordt drie maal geëxtraheerd met methyleenchloride en de gecombineerde extracten worden gedroogd (Na^o^) en ingedampt onder achterlating 25 van 546 mg residu. Wanneer men het residu leidt door een eilicagel-kolom onder gebruikmaking van methyleenchloride en daarna van 2 %, 4 % en 6 % methanol in methyleenchloride, verkrijgt men twee fracties (285 mg en 173 mg) van het overeenkomstige tetrabutylammoniumzout van de in de titel genoemde verbinding. Leiden van de fractie 30 van 173 mg door 4,5 mg Dowex 50-X2 (K+) hars met aceton-water als elueermiddel levert 119 mg in de titel genoemde verbinding op.
Men leidt een hoeveelheid van 104 mg van dit materiaal over een kolom van HP-20AG hars in water. Daaropvolgende eluering met water, 5 % aceton in water en 10 % aceton in water, levert 60 mg produkt 35 op als een mengsel (cirka 1;1) van diastereomeren. Vriesdrogen van 810057 1
.A
- 77 - de fractie van 60 mg levert een vaste stof .op.„met smeltpunt 171- 172° C onder ontleding. ......--- —
Voorbeeld 84 N-{3-Butoxy-2-oxo-l-sulfo-3-azefeM±nyl)-2-fenylaceetamide, tetra-buty lammoniumzout ,.=-
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 80 volgt, maar N-chloor-N-(2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)-2-fenylaceetamide, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 47A voor de bereiding van het 10 overeenkomstige kaliumzout) gebiruikt in plaats van 2-OXO-3V N-chloor-N-/ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding als een olie: nmr (CDCl^) 3,62 (s, 2H, C^-H^C^), 4,03 (ABq, 2H, V = 7 cps, C-4 CH2) , 6,98 (s,. 1H, NH) en 7,30 ppm (S, 15 5H, CgH5).
Voorbeeld 85 (R) -3-Methoxy-2-oxo-3-/_ (fenylacetyl)amino__/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
20 Men bereidt een 1M oplossing van dimethylforma- mide-zwaveltrioxydecomplex door langzame toevoeging van trimethyl-silylchloorsulfonaat aan dimethylformamide bij 0° C gevolgd door het aanleggen van een vacuum van 0,1 mm gedurende 30 min. bij 0-25°C. Onder een stikstofatmosfeer lost men 50 mg (R)-N-(3-methoxy-2-oxo-25 1-azetidinyl)fenylaceetamide op in 0,2 ml watervrij dimethylforma mide en koelt tot 0° C af. Men voegt 0,428 ml koude 1M dimethyl-formamide-zwaveltrioxyde-oplossing toe, roert het mengsel 2 uur en giet het uit in 15 ml 0,5 N éénbasisch kaliumfosfaat. Men extraheert de oplossing twee maal met dichloormethaan {weggeworpen) en voegt 30 73 mg tetrabutylammoniumbisulfaat toe. Extractie met dichloormethaan (drie porties van 10 ml) levert na drogen en afdampen in vacuum een visceuze olie op. Chromatografie over Mallinckrodt CC-4 silicagel (50: 1) onder gebruikmaking van 2 % methanol in dichloormethaan als elueermiddel levert 43 mg (R)-3-methoxy-2-oxo-3-/_ (fenylacetyl)ami-35 no /-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout op. Ionen 81 00 57 1 uitwisseling over 50W-X2-H*!» 10 equivalenten) levert na vriesdrogen van het waterige eluaatrhet in de titel.genoemde kaliumzout op met smeltpunt 130° C, onder ontledingr (C = 0,5, water), -*1'
Voorbeeld 86 rtSigS
(S)-3-/ ///"""(l-Ethyl-4-hydroxy-3-methyl-lH-pyrazolo/ 3,4-b_/-pyridin-5-yl) carbonyl__/amino>_7fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-l-azeti-dine sulfonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 73 volgt, maar a-/ / <l-ethyl-4-hydroxy-3-methyl-lH-pyrazolo/ 3,4-b__/pyridin- S-yljcarbonyl^/amino^/benzeenazijnzuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino- -(hydroxyimino)-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 233-236° C, onder ontleding.
Voorbeeld 87 (R)-3-Acetylamino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, kaliumzout.
A) 3-Acetylamino-1 -/_ 1 -carboxy-2-methyl(propyl)_/-(3R)-3-methoxy-2-oxoazetidine.
Bij een oplossing van 650 mg (6R-cis)-7-acetyl-amino-7-methoxy-3-methyl-8-oxo-5-thia-l-azabicyclo£ 4,2,0__/oct- 2-een-2-carbonzuur en 191 mg natriumbicarbonaat in water voegt men 11 ml brij van technische kwaliteit Raney nikkel (0,6 g/ml), die met water tot neutraal is gewassen. Men laat het mengsel zakken in een oliebad, dat vooraf op 170° C is verhit en het begint binnen 2-3 min. te koken onder terugvloeiing, terwijl men de badtempera-tuur op 150-170 C houdt. Na 15 min. ko-ken onder#terugvloeiing wordt de reactie afgeschrikt door afkoeling in een ijsbad. De katalysator wordt afgefiltreerd door Celite en het filtraat (pH 11) wordt op pH 2 ingesteld met IN zoutzuur. Nadat de waterige oplossing vijf maal met ethylacetaat is geëxtraheerd, worden de gecombineerde extracten gedroogd (Na^SO^) en wordt het oplosmiddel in vacuum verwijderd onder verkrijging van 487 mg olie. Chromatografie # 79 - 5 over silicagel levert het produkt (geëlueerd in chloroform) op als 381 mg olie. ______' B) 3-Acetylamino-l-/_ 1-(acetyloxy)-2-methyl-(propyl_/- (3R) -3-methoïjy-2-oxoazetidine.
10
IS
20
Men lost 464 mg bovengenoemd azetidinon op in 15 ml droog azijnzuumitril en spuit de oplossing 15 min. door met argon. Men voegt 359 mg koperacetaat toe, roert 1 min. om het zout op te lossen en voegt 797 mg loodtetraacetaat toe. Terwijl de argon door het mengsel blijft borrelen brengt men de reactietemperatuur omhoog door de kolf te laten dalen in een oliebad, dat is voorverhit en 15 min. op 55-65° C wordt gehouden. Men laat het mengsel tot kamertemperatuur afkoelen, filtreert door Celite en wast het filterkussen goed met azijnzuumitril. Men verwijdert het oplosmiddel in vacuum uit de combinatie van filtraat en wassingen. Het residu wordt opgenomen in water en vier maal geëxtraheerd met
ethylacetaat. De gecombineerde extracten worden gedroogd (Na.SOJ
λ 4 en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van 382 mg gewenst produkt als een olie.
C) (R) -N—(3-Methoxy-2-oxo—1—azetidinyl)aceet- amide.
Bovengenoemde olie wordt opgelost in een mengsel van 10 ml methanol en 1 ml water, af gekoeld in een ijs-methanol 25 bad op -10 tot -15° C en men voegt 194 mg kaliumcarbonaat toe, gevolgd door 53 mg natrlumborlumhydride. Na 110 min. roeren bij -15 tot -8° C, wordt het oplosmiddel in vacuum verwijderd, het residu in water opgenomen en de oplossing op pH 6 ingesteld met IN zoutzuur. Uitputtende extractie met ethylacetaat, drogen (Na2S04) 30 en verwijdering van oplosmiddel in vacuum levert 224 mg olie op. Chromatografie van de olie over silicagel, gevolgd door eluering raet 5 % methanol:95 % methyleenchloride levert 169 mg olie op. De in de titel genoemde verbinding kristalliseert uit ether-pentaan uit onder verkrijging van 131 mg materiaal met smeltpunt 106-112° C 35 (versintering 103,5° C).
81 00 57 1 80 - * * D) (R)-3^Acetylamino-3-raefhoxy-2-oxo-1 -azetidi-
Figure NL8100571AD00811
nesulfonzuur, kaliumzout
Onder een argofcatmosfeer brengt men 50 mg (R)-5 3-acetylamino-3-methoxy-2-oxo-1-azetidine in een kolf en koelt tot 0° C. Daarna voegt men 0,95 ml 1M oplossing van dimethylformamide-zwaveltrioxydecomplex in dimethylformamide toe en roert de oplossing 15 min.. De kolfinhoud wordt daarna uitgegoten in 40 ml 0,5 N KjHPO^ oplossing en twee maal geëxtraheerd met 10 ml methyleenchlo-10 ride. Men voegt 1,2 equivalenten tetrabutylammoniumsulfaat aan de waterige oplossing toe en extraheert het verkregen mengsel met vier porties van 10 ml methyleenchloride. De extracten worden boven Na2S0^ gedroogd en geconcentreerd tot 39 mg produkt. Het tetrabu-tylammoniumzout wordt in het in de titel genoemde kaliumzout omge-15 zet door het te leiden door een kolom van Dowex 50-X2 (K+).
Concentratie van de waterfractie levert 19 mg kaliumzout op met identieke NMR spectrum gegevens als de produkten, bereid volgens voorbeeld 46, methode I, B en als gewonnen door winning uit natuurlijke bronnen (voorbeeld 165).
20 Voorbeeld 88 (+)-3V (Azidofenylacetyl)amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesul-fonzuur, kaliumzout.
A) (+)-3-/_ (Azidofenylacetyl)amino_/-3-methoxy-25 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniurnzout.
Men lost 202 mg 3-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azeti-dinesulfonzuur, tetrabutylammoniurnzout (zie voorbeeld 74A) op in 20 ml droog azijnzuumitril, Men voegt bij de oplossing bij -20° C 30 onder droge stikstof onder goed roeren 167 μΐ droge pyridine en 96 μΐ o-azidofenylacetylchloride. Na 20 min. voegt men 12 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatbuffer pH 5,5 toe en verwijdert de azijn-zuumitril in vacuum. Het waterige residu wordt drie maal geëxtraheerd met methyleenchloride. Het extract wordt boven watervrij 35 natriumsulfaat gedroogd en in vacuum afgedampt onder verkrijging 8100571
Figure NL8100571AD00821
81 - van 281 mg ruw produkt als „een gom. Dit wordt gezuiverd door chroma-tografie door een kolom van 30 g silicage 1 pndeE.'g^ruikmaking van methyleenchloride en mengsels van.methyleenchloride-methanol tot 6 % methanol, waarbij men. 231 me^g. de titel genoemde verbinding 5 verkrijgt.
B) (+)-3-/ (Azidofenylacetyl)amino_/-3-methoxy-2-oxo-1-azetidinesulf onzuur, kaliumzout.
231 Mg (+)-3-/^ (azidofenylacetyl) amino_/-3-10 methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniurazout in 15 ml 30 % aceton:water wordt door een kolom van 3 ml Dowex 50W-X2 (K+ vorm) geleid en geëlueerd met water. Het totale eluaat wordt in vacuum afgedacht tot 168 mg kleurloos glas als 1:1 mengsel van diastereomeren. Wanneer men dit mengsel leidt door een 60 ml kolom 15 van HP-20-A6 onder gebruikmaking van water en water:10 % aceton verkrijgt men 71 mg 1:1 mengsel van racemische diastereomeren en 70 mg 1:3 mengsel van racemische diastereomeren. Het 1:1 mengsel wordt gevriesdroogd en gedroogd in vacuum bij 40° C, waarbij men het gedroogde produkt verkrijgt als hemihydraat met smeltpunt onder 20 ontleding 130° C.
Analyse voor Cj2Hi2N5°6*K* SHjO:
Berekend: C 35,90; H 3,26; N 17,45; S 7,98;
Gevonden: C 35,94; H 3,07; N 17,24; S 8,02.
Voorbeeld 89 25 3-/ (Azidofenylacetyl)amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout, isomeer A.
Men laat het 1:3 mengsel van racemische distereo-meren, verkregen in voorbeeld 88 B in gedeutereerd water bij kamer-30 temperatuur staan en isomeer A kristalliseert uit. Na afkoeling in een koelkast wordt de moederloog verwijderd en de kristallen (28 mg) worden gedroogd in vacuum bij 40° C. Ze hebben een smeltpunt van 130° C onder ontleding als monodeuteraat.
81 00 57 1 % i 5 10 15 20 25 30 35
Figure NL8100571AD00831
Voorbeeld 90 -. ____.-=«»-·· /~3+_(RK) {_ / (4-Ethyl-2,3-dioxo-l-piB&baz^^l) carbonyl_/- amino_/fenylacetyl_/amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. —.....®
Bij een oplossing van 0,69 mmol 3-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 74A) in 30 ml droog azijnzuurnitril voegt men bij -20° C onder roeren en onder stikstof 242 ui droge pyridine, gevolgd door een oplossing van 352 mg (R)-a-/ / (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazi-nyl)carbonyl__/amino_/fenylacetylchloride in 4 ml azijnzuurnitril. Na 1 uur voegt men 84 μΐ pyridine toe, gevolgd door nog 117 mg van het zuurchloride in 1 ml azijnzuurnitril. De reactie wordt 20 min. geroerd, met 24 ml 0,5 M pH 5,5 éénbasisch kaliumfosfaat-buffer verdund en in vacuum geconcentreerd ter verwijdering van azijnzuurnitril. Het waterige restant wordt drie maal geëxtraheerd met methyleenchloride en de gecombineerde methyleenchloride-extrac-ten worden gedroogd (Na^SO^) en afgedampt tot 546 mg residu. Wanneer men dit materiaal leidt door een kolom van SiliCAR CC-4 onder gebruikmaking van methyleenchloride en daarna. 2 %, 4 % en tenslotte 6 % methanol in methyleenchloride verkrijgt men twee fracties (285 mg en 173 mg) gezuiverd produkt in de tetrabutylammoniumzoutvorm. Wanneer men de portie van 173 mg leidt door 4,5 g Dowex 50-X2 (K+) hars onder gebruikmaking van aceton-water, verkrijgt men 119 mg kaliumzout. Een portie van 104 mg van dit materiaal wordt geleid over een kolom vein HP-20-AG hars in water. Daaropvolgende eluering met water, 5 % aceton in water en tenslotte 10 % aceton in water levert 60 mg produkt op als een mengsel (cirka lïl) van diastereomeren en 21 mg produkt als een mengsel (cirka 9:1) van diastereomeren. Vriesdrogen van de fractie van 60 mg levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 171-172° C, onder ontleding. Analyse voor cigH22N5°9SK*H2°! Berekend: C 41,23; H 4,37; N 12,65; S 5,78; Gevonden: C 41,39; H 4,12; N 12,58; S 5,63.
81 00 57 1 - 83 - t *
Vriesdrogen;van de fractie van 21 mg levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltgunfcyEffi-1720 C, onder ontleding. .. ··.
Analyse voor C^E22U^Q-SK.B2Qi-^m 5 Berekend: C 41,23? H 4,37? N 12,65?
Gevonden: C 41,43? H 4,11? N 12,28.
Behandeling van de fractie van 285 mg tetrabutylammoniumzout met Dowex 50-X2 (K+) levert 145 mg kaliumzout op, dat men combineert met de resterende 15 mg van de bovengenoemde hoeveel-10 heid van 119 mg met Dowex hars verkregen kaliumzout. Wanneer men dit materiaal leidt door HP-20AG als reeds beschreven, verkrijgt men nog 31 mg produkt als mengsel (cirka 1:1) van diastereomeren en nog 42 mg produkt als mengsel (cirka 9:1) van diasteremeren. De totale hoeveelheid (1:1) mengsel van diastereomeren bedraagt 91 mg 15 en de totale hoeveelheid (9:1) mengsel van diastereomeren bedraagt 63 mg.
Voorbeeld 91 f_ 3S(Z)_/-3-/ / (Methoxyimino)/^ 2-V /_ (fenylmethoxy)carbonyl_/-araino__/-4-thiazolyl_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, 20 kaliumzout.
Bij een oplossing van 0,170 mmol (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) en 0,170 mmol natriumboraat in 2 ml methyleenchloride bij 0° C 25 voegt men 62 pi pyridine en 0,51 mmol (Z)-a-(Methoxyimino)-2-/ / (fe· nylmethoxy)caxbonyl_/amino_/-4-thiazoolacetylchloride. Het reactie-mengsel wordt na 40 min. verdund met methyleenchloride en water, gevolgd door 5,1 ml 0,1 M tetrabutylammoniumsulfaat, dat tot pH 4 is gebufferd. De organische laag wordt afgescheiden en gewassen 30 met water, ingesteld op pH 2, water ingesteld op pH 7 en water, dat met natriumchloride is verzadigd, boven natriumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en in vacuum geconcentreerd. Het residu wordt gezuiverd over 10 g SiliCAR CC-4 silicagel en het produkt geëlueerd met 10 % methanol/methyieenchloride.
35 Men leidt het tetrabutylammoniumzout na oplossing 81 00 57 1 : - 84 - ' . Γγί!ί8ΒΕ in aceton/water door een-^ionen uitwisselende, hars (8 ml, AG 50W-X2, K+ vorm, 0,074-0,149 ma), Verwtlderinq^yf^ÉM^Pwater in vacuum uit fracties 1-2 levert:..40 mg in.'de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 172-174°-*C7 onder^pitleding.
5 Analyse voor C ^ 7H ^ gN ^.OgS. H^O: ~
Berekend: C 37,84; H 3,33; N 12,99; S 11,87;
Gevonden: C 37,95; H 3,30; N 12,73; S 11,53.
Voorbeeld 92 (+)-3-Butoxy-2-oxo-3V (fenylacetyl)amino__/-1-azetidinesulfonzuur, 10 kaliumzout.
A) 3-/_ Chloor(fenylacetyl)amino_/-2-oxo-l-azeti· dinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
15 Men voegt een oplossing van 350 mg (S)-2-oxo- 3-/_ f_ (fenylmethoxy) carbonyl^/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 4) in 3 ml methyleenchloride bij 0° C toe aan een suspensie van 1,27 g natriumboraat in 4,72 ml 5,25 % natriumhypochlorietoplossing en 20 ml water. Na 1 uur voegt 20 men 25 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat toe en extraheert het mengsel drie maal met methyleenchloride (porties van 50 ml), De organische extracten worden boven natriumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en in vacuum geconcentreerd tot 344 mg in de titel genoemde verbinding.
25 B) (+) -3-Butoxy-2-oxo-3-/_ (fenylacetyl) amino__/- 1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Men voegt een oplossing van 344 mg 3-/ /__ chlbor-(fenylmethoxy)carbonyl__/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutyl-30 ammoniumzout in 5 ml dimethylformamide bij -78° C onder een inerte atmosfeer toe aan 6 ml 0,73 N n-lithiumbutanolaat in n-butanol in 1 ml dimethylformamide. Na 10 min. wordt het mengsel verdund met 175 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing. Na drie maal extraheren met methyleenchloride wordt het organische extract op natrium-35 sulfaat gedroogd, gefiltreerd en het oplosmiddel in vacuum ver- 81 00 57 1 5 I. ψ.
- 85 - wijderd. Het residu wordt gezuiverd over 80 g SiliCAR CC-4 silicagel en men elueert 130 mg in de titel genoemde vërbfnZpng met 4-8 % methanol in methyleenchloride.
C) (+). -3-ÈutQxy-2-oxo-3-/ (fenylacetyl) amino__/-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
10 15 43 mg (+)-3-Butoxy-2-oxo-3-/ {fenylacetyl)-amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout wordt opgelost in een water-aceton mengsel (9:1) en geleid over een kationen uitwisselende kolom van 5 g (Dowk AGMP 50W-X2, 0,074-0,149 mm, K+ vorm).
Het produkt wordt geëlueerd met water en het eluaat geconcentreerd in vacuum, waarbij men 20 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 122-125° C.
Analyse voor Ο^,-Η^Ν^εκΛΗ,,Ο:
Berekend: C 44,66; H 4,96; N 6,95; S 7,94;
Gevonden: C 44,77; H 4,76; N 6,76; S 7,75.
Voorbeeld 93 (+) -3-Ethoxy-2-oxo-3(fenylacetyl) amino__/-1 -azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
20 25 30
Men voegt 200 mg 3-/ chloor (fenylacetyl) amino__/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 92A) in 4 ml dimethylformamide bij -78° C onder een inerte atmosfeer toe aan 12,20 ml 0,5 N lithiumethanolaat in ethanol. Na 10 min. wordt het mengsel verdund met 15 ml 0,5 M éénbasisch kalium-fosfaatoplossing. Na drie maal extraheren met methyleenchloride wordt de organische laag op natriumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en het oplosmiddel in vacuum verwijderd. Het residu wordt gezuiverd over 20 g SiliCAR CC-4 silicagel en men elueert 40 mg tetrabutylammoniumzout van het produkt met 2 % methanol in methyleenchloride.
35
Het tetrabutylammoniumzout wordt opgelost in een 9:1 water-aceton mengsel er geleid over 5 g kationen uitwisselende kolom (Dowex AGMP 50W-X2, 0,074-0,149 mm, K+ vorm). Het produkt wordt met water geëlueerd en het eluaat in vacuum geconcentreerd tot 25 mg in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 94- 8100571 * β #86 - 96° C.
Analyse berekend voor ci3H15N2°6SK:
Gevonden: Voorbeeld 94 C 42,62; H 4,10; N 7,65; S 8,74; C 40,36,- N 6,77; S 8,44.
L 3+ <Z)3—/_ /__ (2-Ainino-4-thiazolyl) (methoxyimino) acetyl_/amino_/· 3-methoxy-2-oxo-1-azetidine sulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 3-amino-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesul-10 fonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 46, methode II, deel A) op in 20 ml azijnzuurnitril en 1 ml pyridine en voegt de oplossing onder hevig roeren toe aan een suspensie van (Z) -a- (methoxy-imino)-2-amino-4-thiazoolacetylchloride in 20 ml azijnzuurnitril, die op 0-5° C is afgekoeld. Na 1 uur koud roeren verdunt men het 15 mengsel met 100 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing (pH van het mengsel is 4,8) en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd. Het residu wordt opgenomen in een minimum hoeveelheid water, die een kleine hoeveelheid aceton bevat. Chromatografie over 200 ml ionen uitwisselende hars (AG 50W-X2, 0,074-0,149 mm, K+ vorm) levert 20 bij eluering met water het ruwe produkt als het kaliumzout op.
Verdere zuivering over 200 ml HP-20 hars met water als elueermiddel levert 59 mg produkt op als een poeder na aanwrijven met azijnzuur-nitril-ether en daarna twee maal met ether. Het produkt is een amorf poeder, dat langzaam smelt en boven 150° C ontleedt.
25 Analyse berekend voor C10H12N5°7SK! C 28,77; H 2,90; N 16,78; S 15,36; K 9,37; Gevonden: C 27,77; H 2,82; N 15,87; S 13,63; K 10,11.
Voorbeeld 95 ’)· / 3R(RX) en 3S(Sx)__/-3-/ /_ / fAminocarbonyl)amino__/fenylacetyl__/-30 amino__/-3-methoxy-2-oxo“l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
A) (+)-3.-/ (Aminofenylacetyl) amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, inwendig zout» 35 209 mg (+)-3-/ (Azidofenylacetyl)amino_/-3- 8100571 methoxy-2-oxo-l-azetidineet$lfon2Uur, kaliumzout (zie voorbeeld 88) wordt opgelost in 60 ml'droge methanol. Men voegt 0,6 ml watervrij trifluorazijnzuur en 105 mg 10 %-palladium-opgpSSar toe en hydroge-neert het mengsel 1 uur. De katalysator wordt afgefiltreerd en het filtraat in vacuum ingedampt totï*§71 mg ruw produkt.
B) /—3R(RX)ven 3S(SX)_/-3“/ / [_ (Aminocarbonyl)· amino_/fenylacetyl_/amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men lost 271 mg (+)-3-/ (aminofenylacetyl) amino__/- 3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout op in 6,5 ml water. Men voegt 87 mg kaliumcyanaat toe en roert het mengsel 3 uur bij kamertemperatuur. De oplossing wordt in vacuum geconcentreerd tot ongeveer 2 ml en gechromatografeerd over een 100 ml kolom van HP-20AG met water als elueermiddel. Men wint na vriesdrogen 29 mg isomeer A met smeltpunt 160° C, onder ontleding.
Analyse berekend voor C^H^tjN^O-ySK monohydraat: C 36,44; H 3,99; N 13,07; S 7,48;
Gevonden: C 36,35; H 3,79; N 12,81; S 7,32,
Voorbeeld 96 / 3R(SX) en 3S(RX)_/-3-/ £ £ (Aminocarbonyl)amino__/fenylacetyl_/-amino__/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Naast in voorbeeld 95 geproduceerd /_3R(R ) en 3S(SX)_/-3-/_ / £ (aminocarbonyl)amino_/fenylacetyl_/amino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout wordt er 21 mg /”3R(SX) en 3s(RX)__/-3-/ /”V""(aminocarbonyl) araino_7fenylacetyl_/-aunino_/-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout geproduceerd als gevriesdroogd produkt met smeltpunt 160° C onder ontleding.
Analyse voor sesquihydraat:
Berekend: C 35,69; H 4,14; N 12,81; S 7,33;
Gevonden: C 35,98; H 3,87; N 12,50; S 7,32.
88 - at * ~ ......... ............ Voorbeeld 97 _______ / 3;+(SX)_/-3-Methoxy-3-/ / / / 7 (2-oxo-3-^^^^5lniethyleen)ainino_/-1 -imidazolidinyl_/carbonyl Vamino__/-2-thieny lace tyl /amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kalagiizout. 5 Bij een oplossing van 3-amino-3-methoxy-2-oxo-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (306 mg ruw materiaal, waarvan wordt aangenomen, dat het 274 mg organisch materiaal bevat 10 en bereid als beschreven in voorbeeld 74) in 20 ml droog azijnzuur-nitril voegt men bij -20° C onder roeren en onder stikstof 0,30 /-'S V..V· ml of 3,72 mraol droge pyridine, gevolgd door 484 mg (S)-/ /./.2-oxo-3-fenylmethyleen)amino__/-l-imidazolidinyl_/carbonyl_/amino__/-2-thienylacetylchloride, gedeeltelijk opgelost en gesuspendeerd 15 in 10 ml droog azijnzuurnitril. Men roert de reactie en laat de temperatuur in de loop van 1 uur tot 0° C stijgen. De reactie wordt verdund met een groot volume methyleenchloride en daarna behandeld met 22 ml 0,5 M„pH 5,5 één-basisch kaliumfosfaatbuffer. De waterlaag wordt gewassen met methyleenchloride en het gecombineerde methyleenchloride-extract wordt 20 met water gewassen, gedroogd (Na^SO^) en afgedampt tot 508 mg residu . Dit residu wordt gechromatografeerd over 50 g SiliCAR CC-4 onder gebruikmaking van methyleenchloride en daarna 2 % en 4 % methanol in methyleenchloride onder verkrijging van 251 mg tetrabutylammoniumzout van de in de titel genoemde verbinding. t· ’ 25 Bij 251 mg van dit zout in aceton voegt men een oplossing van 107 mg perfluorbutaansulfonzuur kaliumzout in enkele ml aceton. Men voegt de ethylacetaat toe en wast het preci-pitaat drie maal met ethylacetaat door het te centrifugeren en droogt in vacuum 2 uur bij 40° C/l mm onder verkrijging van 95 mg 30 gewenst kaliumzout als mengsel (cirka 1:2) van diastereomeren met een smeltpunt van 200° C, onder ontleding. Analyse voor c2iH2lN6°8S2K! Berekend: C 42,85? H 3,60? N 14,28? S 10,87? Gevonden: C 43,02? H 3,74? N 13,94? S 10,71. 35 81 00 57 1
Figure NL8100571AD00901
Voorbeeld 98 (+-cis)-4-Methyl-2-oxo-3-/_ f_ (fenylmethoxy) c azetidinesulfonzuur, kaliumzout*
Figure NL8100571AD00902
1 /amino /-1 A) N-Benzyloxy-t-boc -allotreonineamine
Een oplossing van 6,9 g d,l-t-box-allotreonine en het vrije amine uit 5,3 g o-benzylhydroxylamine.HCl (~ 0,033 mol, ethylacetaat-natriumbicarbonaat vrijmaking) in 80 ml tetra-hydrofuran wordt behandeld met 4,82 g N-hydroxybenztriazool en 6,5 g dicyclohexylcarbodiimide in 20 ml tetrahydrofuran. Na 16 uur roeren bij kamertemperatuur wordt de brij gefiltreerd, in vacuum geconcentreerd en gechromatografeerd over 400 ral silicagelkolom. Eluering met 5-10 % ethylacetaat in chloroform levert 6,8 g in de titel genoemde verbinding op in fracties 7-22 (elk 200 ml).
31 "boe" betekent butoxycarbonyl, B) (+-cis)-N-Benzyloxy-3-t-butoxycarbonylamino- 4-methylaze tidinon.
Een oplossing van 6,8 g N-benzyloxy-t-boc-allo-treonineamide in 200 ml tetrahydrofuran wordt 16 uur geroerd met 5,24 g trifenylfosfine en 3,2 ml diethylazodicarboxylaat. De oplosmiddelen worden in vacuum verdankt en het residu wordt ge chroma to-grafeerd over een 500 ml silicagelkolom. Eluering met methyleen-chloride, gevolgd door kristallisatie uit ether levert een totaal op van 2,65 g azetidinon. Herchromatografie van de moederlogen en gemengde fracties levert nog 0,6 g op. Tweemalige herkristallisatie van een hoeveelheid uit ether (- 20° C) levert het analytische monster van de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 140-142° C.
C) (+^cis)-3-t-Butoxycarbonylamino-l-hydroxy-4- methylazetidinon.
Een oplossing van 3,2 g cis-N-benzyloxy-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylazetidinon in 200 ml 95 % ethanol wordt 5 90 - “ ........... '~' ....... : in een waterstofatmosfeer;;^eroerd met 0,7 g 10 % palladium op kool.. Na 40 min. wordt de brij-gefiltreerdeCo^gning 249 ml) en wordt het filtraat afgedampt en%et ether aangewreven onder verkrijging van, in twee hoeveelheden, 2,05 g vaste stof met smeltpunt 134-136° C. φρ D) (+-cis)-3-t-Butoxycarbonylamino-4-methyl- azetidinon.
Eén oplossing van 2,05 g cis-3-t-butyloxycarbo-10 nylamino-l-hydroxy-4-methylazetidinon in 60 ml methanol wordt behandeld met een totaal van 90 ml 4,5M ammoniumacetaat (porties van 40, 20 en 30 ml) en 45 ml 1,5 M titaantrichloride (porties van 20, 10 en 15 ml), waarbij men de tweede en de derde toevoeging na respectievelijk 15 en 120 min. uitvoert. Na 135 min. wordt 15 de oplossing verdund met een gelijk volume 8 % natriumchloride en geëxtraheerd met drie porties van 300 ml ethylacetaat. De gecombineerde organische laag wordt gewassen met een mengsel van 100 ml 5 % natriumbicarbonaatoplossing en 100 ml verzadigde zoutoplossing, * gedroogd en afgedampt, Aanwrijving met ether, levert, in twee 20 hoeveelheden, 1,65 g vaste stof op. Een deel van de eerste hoeveelheid wordt uit ether herkristall!seerd tot het analytische monster met smeltpunt 176-178,5° C.
E) (+-cis)-3-Benzyloxycarbonylamino-4-methyl- azetidinon.
Een oplossing van 1,55 g cis-3-t-butoxycarbonyl-amino-4-methylazetidinon in 4 ml methyleenchloride en 4 ml anisool wordt tot 0° C afgekoeld en men voegt 50 ml koud trifluorazijnzuur toe. Na 90 min. worden de oplosmiddelen in vacuum af gedampt (drie 30 maal benzeen toegevoegd en afgedampt). Het residu wordt opgelost in 25 ml aceton, de begin pH (2,5) wordt op 7 gebracht met 5 % natriumbicarbonaat en men •voegt 2 ml benzylchloorformiaat toe.
De oplossing wordt gedurende 4 op 0° C en pH 7 gehouden en de ace-ton wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van een brij, die 35 men filtreert. Het filtraat wordt met zout verzadigd en met 81 00 57 1 i. ï 5 - 91 - i. ï 5 - 91 - 10 15 20 25 30 .....- ......
methyleenchloride geëxtraheerd. De vaste stof wordt in methyleenchlo-ride opgelost en gedroogd. De organische lag^^^rden gecombineerd, geconcentreerd en het residu gechrömatografeerd over een 200 ml sili-cagelkolom. Eluering met 3:1 chloroform, ethylacetaat levert 850 mg in de titel genoemde verbinding op in fracties 4-11 (elk 100 ml). Kristallisatie van een klein monster uit ether levert het analytische monster op met smeltpunt 165-166° C.
F) (j^-cis) -4-Methyl-2-oxo-3-/_ /_ (fenylmethoxy) -carbonyl /amino /-1-azetidinesulf onzuur, kaliumzout.
Bij een suspensie van 0,75 g cis-3-benzyloxy-carbonylamino-4-methylazetidinon in 7 ml dimethylformamide (gedroogd met 4Ά zeven die 15 uur onder argonstroom bij 320° C geactiveerd zijn en 7 ml methyleenchloride (gedroogd door basisch Al^O^) voegt men 1,66 g pyridine-zwaveltrioxydecomplex. Na 3 uur roeren bij kamertemperatuur onder stikstof voegt men nog 1,66 g pyridine-zwa-veltrioxydecomplex toe. Het reactiemengsel wordt dan 16 uur bij kamertemperatuur onder stikstof geroerd. Het dimethylformamide wordt in vacuum verwijderd onder verkrijging van 4,6 g residu, dat wordt opgelost in 300 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing (40° C gedurende 10-15 min.). De oplossing wordt afgekoeld, door een kolom HP-20 hars (3 cm x 60 cm) geleid met 400 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat, 1 1 gedestilleerd water en (14:1) water: aceton onder verkrijging van 280 mg produkt in fracties 13-26 (elk 100 ml). Herkristallisatie uit methylalcohol:petroleumether levert 757,5 mg analytisch monster op met smeltpunt 214-215,5° C, onder ontleding. Analyse voor ci2H13N2S°6K: Berekend: C 40,90,· H 3,72; N 7,95; S 9,10; K 11,10. Gevonden: C 40,43; H 3,60; N 7,89; S 8,69; K 10,82. Voorbeeld 99 (3S-trans)-4-Methyl-2-oxo-3-/_ j_ (fenylmethoxy)carbonyl_/amino__/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
35
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 98 volgt, 81 0057 1 92 maar 1-t-boc-treonine gebruikt in plaats van ,d, 1-t-boc-allotreonine, verkrijgt men de in de titel genpemde verbinj^^P'met smeltpunt 133-135° C. #
Analyse berekend voor ; C 40,90; H-*3,72; N 7,95; S 9,10; K 11,10;
Gevonden: C 40,72; H 3,60; N 7,99; S 8,80; K 10,82,
Voorbeeld 100 (3S-trans)-4-Methyl-2-oxo-3-/_ (fenylacetyl)amino__/-l-azetidinesulfon-zuur, kaliumzout.
10 A) (3S)-3-Amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfon-zuur, tetrabutylammoniumzout.
352,4 mg (4S-trans)-4-Methyl-2-oxo-3-/ / (fe-15 nylme thoxy) carbonyl_/amino_/-1 -azetidinesulfonzuur, kaliumzout
Figure NL8100571AD00931
(zie voorbeeld 99) wordt opgelost in 20 ml gedestilleerd water en behandeld met 373,5 mg of 1 mmol tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat. Na 10 min. roeren bij kamertemperatuur wordt de oplossing drie maal geëxtraheerd met porties van 10 ml methyleenchloride na verzadiging 20 met natriumchloride. Het me.-thyleenchloride wordt op natriumsulfaat gedroogd en in vacuum afgedampt onder verkrijging van 536 mg tetra-butylammoniumzout, dat gehydrogeneerd wordt met 270 mg 10 % palladium op kool in 25 ml dimethylformamide. Het mengsel wordt gefiltreerd door Celite en twee maal gewassen met porties van 2,5 ml 25 dimethylformamide onder verkrijging van de in de titel genoemde verbinding in oplossing, B) (3S-trans)-4-Methyl-2-oxo-3-/_ (fenylacetyl)-amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
30 Het ruwe (3S)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidine sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout van deel A (de combinatie van filtraat en wassingen) wordt bij 0° C behandeld met 206 mg di-cyclohexylcarbodiimide, 153 mg N-hydroxybenztriazool en 138 mg fenylazijnzuur. Het reactiemengsel wordt 1 uur bij 0° C geroerd 35 en daarna 2 uur bij kamertemperatuur. Het verkregen precipitaat 81 00 57 1
Jr * .--93-.
**"'rf!S8U
wordt gefiltreerd, het filtraat wordt in vacuum afgedampt en het residu wordt in 10 ml aceton opgelost en gefingeerd. Het filtraat wordt behandeld met 25 ml met kaliumjodide verzadigde aceton en daarna met 200 ml ether..De verregen vaste stof (752,7 mg) is een 5 mengsel van het kalium- en tetgrabutylammoniumzout van de in de titel genoemde verbinding. De vaste stof wordt opgelost in 50 ml 0,5 één-basisch kaliumfosfaat en geleid over een HP-20 kolom. Eluering met water en daarna met water-aceton levert verschillende fracties op, die gecombineerd en afgedampt worden tot het gezuiverde tetrabutyl-10 amraoniumzout. Een oplossing in water van dit materiaal wordt geleid door Dowex 50W-X2 (K+ vorm) onder verkrijging van 121,4 mg in de titel genoemd kaliumzout. Aanwrijven met aceton-hexaan levert -104,6 mg in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 211-213° C. Analyse berekend voor cj 2Η j : 15 C 41,72; H 4,09; N 8,11; S 9,28; K 11,32;
Gevonden: C 41,70; H 4,01; N 8,07; S 9,01; K 11,02.
Voorbeeld 101 (cis)-4-Methyl-2-oxo-3-/> (fenylacetyl)araino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
20
Men bereidt een oplossing van 320 mg (+-cis)-4-methyl-2-oxo-3-/> /_ (fenylmethoxy) carbonyl__/amino_/-l-azetidinesul-fonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 98) in 20 ml water, dat 483 mg tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat bevat en stelt haar in-op pH 5,5. 25 Extractie met zes porties van 25 ml methyleenchloride levert 517,3 mg olie op. Een oplossing van dit materiaal in 15 ml dimethylforma-mide wordt 90 min. in een waterstofatmosfeer geroerd met 400 mg 10 % palladium op kool. De katalysator wordt afgefiltreerd en het filtraat 7,5 uur geroerd met 150 mg fenylazijnzuur, 169 mg N-hydroxy-30 benztriazool en 247 mg dicyclohexylcarbodiimide. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd en het residu opgelost in 20 ml aceton en gefiltreerd. Het filtraat wordt behandeld met 25 ml 0,044 M kaliumjodide in aceton. Verdunning met een gelijk volume ether levert 330 mg vaste stof op, die men leidt over een 50 ml HP-20 35 kolom in 20 ml 0,05 M éénbasisch kaliumfosfaat. Eluering met 200 ml 81 0 0 5 7 1 » - 94 - —•«"iSSu.
water, gevolgd door 1:9 acetort-water levert Rydonpositief materiaal op in fracties 6-10 (50 ml). Af damping van--f^^Ëies 7-9 levert 81 mg vaste stof op. Herkristallisatie uit azijnzuurnitril-water levert 46 mg in de titel genoemde verbinding op, die bij >205 C ontleedt. Een tweede hoeveelheid van 6 mg wordt uit het filtraat verkregen. Nog 5 mg wordt verkregen uit fracties 6 en 10 door af-damping en herkristallisatie.
Analyse berekend voor ci2H13N2°5SK: 10 C 42,84; H 3,89; N 8,33; S 9,53; K 11,62; Gevonden: C 42,75; H 3,82; N 8,32; S 9,26; K 11,63.
Voorbeeld 102 /”3S-/~3a-(2) ,4β_Τ_7-3-/"/”(2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino)acetyl /amino /-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
15 A) (3S-trans) -4-Methyl-2-oxo-3-£ /_ (fenylmethoxy) · carbonyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
352,4 mg (3S-trans)-4-Methyl-2-oxo-3-/ f_ (fenyl-methoxy)carbonyl_/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie 20 voorbeeld 99) wordt opgelost in 20 ml water en men voegt 373,5 mg tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat toe. De oplossing in water wordt drie maal met methyleenchloride geëxtraheerd en de gecombineerde extracten worden op natriumsulfaat gedroogd. Na verwijdering van het oplosmiddel verkrijgt men 534,6 mg in de titel genoemde verbin-25 ding.
B) /~3S-/~3a(Z) #48j^7-3-/V“(2-Amino-4-thia-zolyl) (methoxyimino)acetyl_/amino_7-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesul-fonzuur, kaliumzout.
30 Een oplossing van 534,6 mg (3S-trans-)-4-methyl- 2-oxo-3-/ f_ (fenylmethoxy) carbonyl__/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout in 20 ml dimethylformamide wordt bij atmosferische druk 2,75 uur gehydrogeneerd met 220 mg 10 % palladium op kool; de waterstof opneming bedraagt 26,3 ml. Het mengsel wordt ge-35 filtreerd en twee maal gewassen met 2,5 ml dimethylformamide. Het 8100571 - 95 - filtraat en de wassingen (totaal cirka 25 ml) worden onder stikstof geroerd met 161 mg (Z)-a-(methoxyimino)r^^^nino-4-thiazool-azijnzuur, 136 mg N-hydroxybenztriazool en 164,8 mg tricyclohexyl-carbodiimide. Het mengsel"wordfesa6 uur onder stikstof geroerd. Het 5 dimethylformamide wordt in vacuum verwijderd en het gomachtige residu in aceton opgelost en gefiltreerd ter verwijdering van ureum. Bij het filtraat voegt men een oplossing, die 272 mg of 0,8 mmol perfluorbutaansulfonzuur, kaliumzout in 0,8 ml aceton bevat. De brij wordt verdund met een gelijk volume ether en gefiltreerd tot 10 325,5 mg ruw produkt, dat men chromatografisch zuivert over 75 ml ΗΡ-20Ά6. Eluering met 400 ml water en 400 ml (9:1) water:aceton mengsel (fracties van 50 ml) levert 335 mg op in fracties 3-10. Na aanwrijving met aceton-hexaan verkrijgt men 97,3 mg analytisch monster uit fracties 3-5. Soortgelijke aanwrijving van fracties 6-10 15 levert nog 90,4 mg produkt als vaste stof op.
Analyse berekend voor cigHi2N5°6S2Ki C 29,92; H 3,01; N 17,45; S 15,97; K 9,74; Gevonden: C 30,32; H 3,49; N 15,82; S 13,95; K 10,45.
NMR (D2q) 1,57 (3H, d, j « 7), 3,97 (3H, S), 4,30 1H, d van q, 20 j - 7,3), 4,70 (1H, d, , = 7), 6,95 ppm (1H, S).
Voorbeeld 103 f_ 3S-/ 3α(Ζ) ,4β_/-/-3-/_ £ (2-Amino-4-thiazolyl)/_ (1-carboxy-l-methylethoxy) imino_/acetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, dikaliumzout.
25 A) N-Benzyloxy-t-boc-treonineamide.
Een oplossing van 8,76 g t-boc-treonine en het vrije amine uit 6,4 g O-benzylhydroxylamine HC1 (ethylacetaat-30 natriumbicarbonaat vrijmaking) in 100 ml tetrahydrofuran wordt behandeld met 6,12 g N-hydroxybenztriazool en 8,24 g dicyclo-hexylcarbodiimide in 20 ml tetrahydrofuran. Het mengsel wordt 26 uur onder stikstof geroerd, gefiltreerd en in vacuum afgedampt.
Het residu wordt gechromatografeerd over 300 g silicagelkolom (elu-35 ering met chloroform en chloroform-ethylacetaat (3:1)), waarbij men 81 00 57 1 20
Een oplossing van 9,18 g (3S-trans)-N-benzyl-oxy-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylazetidinon in 300 ml 95 % ethanol wordt in een waterstofatmosfeer geroerd met 1,85 g 10 %-palladium op kool. Na 141 min. wordt de brij gefiltreerd en in vacuum afgedampt. Het residu wordt herkristalliseerd uit ether-hexaan onder verkrijging van 5,12 g in de titel genoemde verbinding.
D) (3S-trans-)-3-t-Butoxycarbonylamino-4- methylazetidinon.
•·Λ 15 5 10 (
Figure NL8100571AD00971
- 96 - 7,2 g verbinding verkrijgt.Herkristallisatie uit ether-hexaan levert 4,18 g in de titel genoemde verbindix|§§5p. B) (3S-transj'-N-Benzyloxy-3-t-butoxycarbonyl-amino-4-methylazetidinon; Een oplossing van 12,67 g N-benzyloxy-t-boc-treonineamide, 11,5 g trifenylfosfine en 6,23 ml diethylazodicar-boxylaat in 380 ml tetrahydrofuran wordt 16 uur onder stikstof geroerd. De oplossing wordt afgedampt en gechromatografeerd over een 900 g silicagelkolom. Eluering met chloroform-ethylacetaat (3:1) levert 13,69 g verbinding op, die uit ether-hexaan kristalliseert tot 9,18 g in de titel genoemde verbinding. C) (3S-trans)-3-t-Butoxycarbonylamino-l-hydroxy- 4-methylazetidinon.
25 Een oplossing van 4,98 g (3S-trans)-3-t-butoxy- carbonylamino-l-hydroxy-4-methylazetidinon in 200 ral ethanol wordt behandeld met 132 ml 4,5 M ammoniumacetaat en daarna 66 ml 1,5 M titaantrichloride en 4,5 uur geroerd. De oplossing in water wordt verdund met een gelijk volume 8 % natriumchloride en geëxtraheerd 30 met ethylacetaat onder verkrijging van 3,48 g ruw produkt. Her- kristallisatie uit ether-hexaan levert 3,3 g in de titel genoemde verbinding op.
E) (3S-trans)-3-Benzyloxycarbonylamino-4-methyl- azetidinon.
81 0057 1 τ - 97 -
Een„oplossing van 3,3 g (3S-trans)-3-t-butoxy-carbonylaminor4-methylazetidinon in 10 ml dichloormethaan en 10
Figure NL8100571AD00981
ml anisool wordt tot 0° C af gekoeld en men^|§pt 112 ml trifluor-azijnzuur toe. De oplossing wordt 90 min. geroerd en in vacuum 5 afgedampt (benzeen drie maal·t®egevoegd en afgedampt). Het residu wordt opgelost in 70 ml aceton en de oplossing wordt met 5 % natrium-bicarbonaatoplossing op pH 7 ingesteld. Men voegt in verloop van een uur bij pH 6,5-7,5 in totaal 5,33 g benzylchloorformiaat toe.
Het mengsel wordt 30 min. bij pH 7 geroerd, met 100 ml verzadigde 10 zoutoplossing verdund en geëxtraheerd met ethylacetaat (drie porties van 400 ml). Het door afdamping verkregen residu wordt gechro-matografeerd over een 1 1 silicagelkolom. Eluering met chloroform-ethylacetaat (4:1) levert 2,19 g verbinding op. Herkristallisatie uit ether-hexaan levert 1,125 g in de titel genoemde verbinding op.
15 P) (3S-trans)-4-Methyl-2-oxo-3-/”/ (fenylmethoxy)- carbonyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Een oplossing van 600 mg (3S-trans)-3-benzyl-oxycarbonylamino-4-methylazetidinon in 2 ml dimethylformamide wordt 20 tot 0° C afgekoeld en men voegt 4 ml 0,8 M zwaveltrioxyde in dimethylformamide toe. De oplossing wordt 1 uur onder stikstof bij kamertemperatuur geroerd en uitgegoten in 80 ml koud 0,5 M één-basisch kaliumfosfaat (ingesteld op pH 5,5). Men extraheert de oplossing met drie porties van 50 ml methyleenchloride (weggeworpen) 25 en voegt 868 mg tetrabutylammoniumbisulfaat toe. De resulterende oplossing wordt geëxtraheerd met vier porties van 75 ml methyleenchloride. De gecombineerde organische laag wordt gewassen met 8 % natriumchloride in water, gedroogd en in vacuum af gedampt onder verkrijging van 1,54 g in de titel genoemde verbinding.
30 G) / 3S-/ 3α(Ζ),4β /-/-3-/ / (2-Amino-4-thiazo- ly 1) -/_ (1 -difenylme thoxycarbony 1-1 -methylethoxy) imino__/acetyl_/-amino /-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Een oplossing van 1,54 g (3S-trans)-4-methyl-2-35 oxo-3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, 81 00 57 1 J: * - 98 - tetrabutylammoniumzout in 4&.jnl dimethylformamide wordt twee uur in een waterstofatmosfeer geroerd met 800 ma^Qpplialladium op kool. De katalysator wordt gefiltreerd en„het filtraat 16 uur geroerd met 1,24 g (Z) -2-amino-a-/~(1-difeaydmethoxycarbonyl-l-methylethoxy)-5 imino__/-4-thiazoolazijnzuur, Q>4 g N-hydroxybenztriazool en 580 mg dicyclohexylcarbodiimide. De brij wordt in vacuum afgedampt en het residu aangewreven met 20 ml aceton en gefiltreerd. Het filtraat (plus 2 ml wassingen) wordt behandeld met 868 mg kaliumperfluor-butaansulfonaat in 3 ml aceton. Verdunning met 75 ml ether levert 10 een vaste stof op, die men wint door de moederloog te decanteren,
Figure NL8100571AD00991
met ether aan te wrijven en te filtreren onder verkrijging van 0,91 g in de titel genoemde verbinding. De moederloog wordt verdund met nog 100 ml ether onder verkrijging van een tweede hoeveelheid van 0,45 g in de titel genoemde verbinding.
15 H) /~3S~/"”3a(Z) >45_7_7~3(2-Amino-4- thiazolyl) / (1-carboxy-1 -methylethoxy) imino_/acetyl__/amino_/-4-methy1-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, dikaliumzout.
Men roert een brij van 140 mg J_ 3S-/ 3α (Z) ,4β__/_/-20 3-V (_ (2-amino-4-thiazolyl)/_ (1-difenylmethoxycarbonyl-l-methyl- ¢- *.* ethoxy) imino__/acetyl_/amino__/-4-me thy 1-2-oxo-l-azetidinesulf onzuur, kaliumzout (eerste hoeveelheid) in 0,5 ml anisool bij -12° C onder stikstof en voegt 2,5 ml koud (-10° C) trifluorazijnzuur toe. Na 10 min. voegt men 10 ml ether en 5 ml hexaan toe en roert de resul-25 terende brij 5 min. bij —12° C en laat haar tot kamertemperatuur opwarmen. De vaste stof wordt afgecentrifugeerd en twee maal met ether gewassen. Een oplossing van deze vaste stof in 5 ml koud water wordt onmiddellijk op pH 5,5 ingesteld met 0,4 N kaliumhydroxy-de en daarna geleid over een 80 ml HP-20AG kolom. Eluering met 30 water levert 72 mg in de titel genoemde verbinding op in fracties 7-11 (10 ml) na afdamping (azijnzuurnitril drie maal toegevoegd en afgedampt) en aanwrijving met ether, smeltpunt ongeveer 250° C (onder ontleding).
Analyse berekend voor C,,H._Nc0oS„K_:
1j 15 D o Z Z
35 C 30,51; H 2,95; N 13,69; S 12,53; K 15,28.
81 00 57 1
Ir - 99 -
Gevonden: C 29,63;_H..3,20; N 12,96; S 11,94; K 12,78.
NMR (D20) 1,46 (S, 6H), 1,58 (lH, d, j = 7}JÊf28 (1H, d, van q, , = 7, 2,5), 4,67 (1H, d, j » 2£ 6,95 ppm (S, 1H).
De resterende 1,22 g /"~3S-/""3 (Z),4 77“3-5 /“/ (2-amino-4-thiazolyl)/ (1-difenylmethoxycarbonyl-1-methyl- ethoxy)imino_/acetyl_/amino__/-4-methy1-2-oxo-1-azetidinesulfon-zuur, kaliumzout (oogsten 1 en 2) wordt behandeld als boven (4,2 ml anisool, 16 ml trifluorazijnzuur, 13 min. bij -15° C). Chroma-tografie over een 300 ml HP-20AG kolom levert 694 mg in de titel 10 genoemde verbinding op in fracties 6-9 (60 ml) na behandeling als boven.
Voorbeelden 104-133
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 11 volgt, maar een in kolom I opgesomd zuur gebruikt in plaats van (Z)-2-15 amino-o-/ /_ / hydroxy (fenylmethoxy)fosfinyl__/methoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de overeenkomstige verbinding, opgesomd in kolom II.
20 81 0 0 57 1 §
I .CN
n α 3 30 N O 3 O o I . Ή \ls Ss ω
0 N 3 •H 5 1 Ν' I o e •H
-P 8 k,?
» CN
3 H Ό •H ft Φ N 3 Η I >1 '-i ft I
η 3 <D CU
ft H 0) 8 <o ft H ft Φ >i 3 ft+> O •HUN ft ü E I (0 3 Ν' ^ -H 1 rl rH O >4 3 x e x 0 ® •H «ft T & ro o - ft CN «Ö 1 >1 Η ft ft § N 3 O «ft I O 04 ft c ft, ft S ® •ft e s Oi.'x. 03 i I 3* I 0 X o
O X 0 1 CN I , I , Γ n iv>bi?, >'§§·“ po ft -ft -, f -P 8 ft |v., (U, (3 3 J.ftK, O
ft 3 3 ft O» 3 •ft <0 V ft 3 O ft ® Ό 3 0 Ό I ro > S5 CA dl .po S .•ft N -ft r-l 8 Ό >i 3 ft -ft (U H O 3
(1) rH ft I ,fl u iu 3 'v.lO I'S M O
Λ'^ι Ê&4, ft O 3 Φ ft 3 S ft N •ft «U 3 Ό O τι I X -ft T-t O N - I 3 r-4 CN rH W I o I H O ,CN >i N kjS5 <a ft V? V 25 Ν' I 1,1 § *Ki •ft X o §03 3 ft -ft I ft 6 cn 0) -ft
>1 I H Λ Ν' 3 ft ^ CO CU. I Φ » K. 3 Ν' |-ft ,w O Φ I , 3 -ft ,\l-ft ft 1 .§ <u ,vj « n K.3 ΛνΙΙ I ] »”C \1 >,io 13 0 0 PO O X (Tl , I Λ O «H l>s * 1 . «ON fi *« 3K1 §. — O ft CA 3 3 H , PO -ft -ft (U I ,n s s \}m «o co 'V t o O 3 X -ft 0 s . •Η, 3 ft fKg PO Η N * >1 3 CN 3 το 1 O -ft ta * 5 s CU f N* > 3 iw c S 1 .·Ή >3 ,\ N > ,Λ X \ift O I Q) ft B OtO I -ft >i O O» ·« Pi I I 4-· 4-4 N
CN ft I 3 rH 4-1 b * ft CN ft. I
>1 ft ft 3 CU o O N 3 8 >-ft £3 M
U
3 3 Φ d) N
ft 3 · 3 1) \ N I Ίβ Ν' O O . ^ 3 «ft I ,-ft H § n l^lS \ 3 -ft I O ft po A O ,1 ft N O 3 Λ I o co + |h I r~ —’ >4 O «ft CA 3 X I , po -ft o cn I , N * ^ \i «J CN i o 0 3 δ ·£ °.§ VK PO H - > CN 3 1 O •ft Λ >, ft Λ « ft O d> >«· I ift «f >, 3 W £3 .pi I ,*ft ή ,\1 N N ! ,ιβ (β \ ft 3 I 0) (0 K Oi ft I -ft 3 «*, Oi «ft +1 i I «-4 CN
ft 3 3 N
t *>! S’ I ,-ft ft H É I .33 nJ\. n •ft 3 ><ft O » >i«W 3-t β O 3 Λ co ft 3 O -ft r—. ·ζ3 •ft 'ft >ift U 3 0) •ft NO n ιβ in _ 3 I ω >ι ft *« 4-1 ΰ αι ι C 04 ο Ν' -ft X * Ot 0 -Η ι I CN
I 3 Φ •ft Ό 3 X Φ Λ Ο Ό Φ Η ft 3 Ο ft . Φ Φ Ό 3 3 Ο Λ I ft > Φ Λ s ι •ft Ν' >ι ^ 3. I « <w |ft * — Ο Φ U I , 3 Ν \ -ft 30 ι e ι > Ν' δ « σι ft 1 & . -M . , · Η 'vjShl I Ο Ο co PO -ft c , C Ό -ft -Κ, ι § ft I ro, (β 3 -Τ' 0 X CN Ν « ι η ε " Η >ι 3 CA >ft -ft ,ΡΟ Λ Φ Η ! , ft U 3 \ Φ 3 Μ 3 C0 Φ 3 •ft Ό
. X Ν' > Ο <Τι 3 I τ-ι Ο CN •Ρ, 1 S1 CN. Ο Ο •τ C 1-ft ι , ·· ε ,vj >4, 3 « ,3 Ν. to ,\]-ft 1 1 Ν ft · ,\1 3 >4 ft I ,ft ft 3 S^O Φ c 04 g PO -ft 3 , I 04-- 3 Κ. ι η -ft ! 4—4 >4 H «,1 S3 Χ.Κ.Φ M » (X «ft &> “· 0 >4 ^ 3 CA 3 X ft -ft ,po -ft 0 3 Ό ,S ft 3 Φ ν. ιβ Ό N H
ft . , c •ft φ ε
o N
>4 Φ ft 5-53 Φ «0 3 E -ft 0 I ft *—4 -φ * ,— N U . 10 \i e 0 λη in Η I C\ 0 0ft Ν I 3 3 CN 3 •rH, I 04 1 § 1 I *r| ΙΛ §,§u-3 rH O C >4 N cn ft ε 4— Φ 3 0 -ft 3 rH . "Ift ι 0 PO 3 — C -ft ft 3 O' I I 3 3 3 --% "—- Ν -ft N > 3 V 4— X Ο Φ CA Ο «Η Π ,P0 ft H ft I ,ft 3 0 sl® o o ςϋ cn 1 » * 'S '>il 1 1 c 0 Φ I >4 0 3 Ή ft 1 X X -ft ft ,4- φ Ν' 0 I — ly - Ν' f1' 0 ft I 4ft 3 3 0, I -ft 3 0 § 3 •ft, 3 3 N C 'Ιβ fO Η ·π « > -ft «NON t o a •ft Λ c >4 ft φ h 3 φ ft 0 -ft U «Ό 1 ·—I 3 Ν' >ι X ,4- 3 Φ ,-ft Λ .•ν N O ,3ft \! ft g c Φ >4 & 04 ο I -ft I P5 I ^ δκι§ δ 0 )33 •ft Obs.,·!-» «0 3 1-ft 1 ft ft N po 8 >4 3 «. 3 c 0 ,CN« 0 O ,3 Λ Φ ,νΙφ ft , Φ 3 Ν-k» ^ ft 1 >4 I ft ft X ¾ Φ >4 0 » 8 3 ft r-4 rft *ft Ό P5 >4 N >4 4*- 3 3 ft N 3 Φ .ft 5 § φ N H 3 >4 TO ft -H ft N Φ 3 0 kiS 4 5 I ft 0 ft 3 I •Η Ν' f,4 CN 0 1 3 n e 4- ·ιΗ
Ό rH Φ in «0 r- CO 00 Φ O 0 0 0 0 0 fl 0 !> iH H H
8100571
101 Η Η s ο Η S
Η Ε Ο Η S
P 3 3 1 1 N ι ρ αι υ 1 β 0» — δ ν >1 0 fi ρ. ο δο X «Η Ρ I β 1-* CD ΟΡΌ η β 3 Ο Ο Ρ ι CM δ ω ρ <Η >1 0 Ρ Ο Ρ >1 β X Ρ w β β X Ρ 0 β κ . n Ρ I 3 flW 3 Η >ιΝ Ρ fi β >1 ο ο Ή I ^ Η Μ* δ 3 ,·*-' Ο — Ρ Ο Ο Ό I 3 Η Ό H Ή Μ ft >ιΡ Ρ Ό Η, I +> Η -Ρ Ο >ι 0ΐ\,Η Ο <0 Ό Α Ν |3 Ν Ν fi I Λ Ο 6 δ δ Ο Ό C Μ HI ,w -Η -Η ι ε θ' 3 Ρ Ό _ β) Μ Η ..© -Ρ fi C Η τ| Ο >ι Ό 0) Ν δ ι I υ ο χο Ο m _ ι νώ β CM Ρ •η, ι !κι£ I Ο 3 CM β ft -Η 4J ε ή δ 3 r ε - JM I Η CO >ι -, I Ρ Ρ Ν., Ο 3 1θ Ο *·», (0 Ν ta ~ ΐ 03 C Ή . CO *W γ—ί ,ε <ο Μρ χ I <3· I Ο ο β Η ε •Η ΪΒ β 3 V 3 Ή Ν — β 4- "Η1 ο Ή I Η Ο 3 β Ρ •Η Ο ε ο β η ι δ CM Ρ I Α — ρ Ν I —' •δ' ,Μρ. 3 ρ . ι Κ, g Μρ 1 ο I I Η Ν ,ι*ι ο χ ε i . X +ι 3 ,Μ Ο ® -Η i I Ο Ρ Η? 3 £ f'hë’ - Si ο δ u I ,β,Ή 3 0> 'xJ-hI’n., 3 β 18 I Ν Ή en, δ Ο β Ό ,ιΚ,ε ο © Ρ Ρ Ρ fi Ε Ρ Ρ ««,« 3 β χ οι Ν. η ο « Ρ Ο ~ >,Ρ C Ρ ca Α >ι·η ο Ρ Ρ* rjj >0 I , 0) Ο -Η β "ν.! ε λ -Ρ ο >1 .. . § 0 CM Λ P, I P UK|8 » . §h§ 3" Ρ Ρ N ,'-' 8 >i fi I .«fin ,W,P -H , 2 Ν ΒΉ « 1 0> P fi ,cn δ ο α> I Ρ Ν © ,M >, δ N \ ,A *0 fi SlP p o vlv‘^1 ϊ Η rt o 1 >t 1 β — COP (¾ a x ε ^ ρ o 3 I &
A I
I en L Ο ·Η I Η .CM Ο I .2 '"ίΚ 1^8 0*0 ,Μρ β en I . f Ρ CM 1^7.141 7¾ I η 0 Η ft Μ (U Ό β Ο ι υ
„ >t Ρ Ρ Ρ P ε <u g δ o 8 δ in rH >1 β V
I 0 X 0 I — CM β I 1 ® hi . ^ — >iP 0 X Ρΐ\, n « ρ ε — © o 3 Μ 8 β -H . ΓΊ rl fl fl I . tn 8 δ \lc δϋ P 3 , I , 1 .hh •δ1 Ο H 1^,-5 fi 3 ΉI fi 3 m — p fi ι fi δ Τ-» 0 o, o P X « Ν, N Ο ρ δ 1 >1 H ti .CM A >1 0) I ,p c ο ,Μ Ο) P N I 8 *0 fi .'sjp P 0 Μβ o|v J. P N iS fl e o I P *0 c λ Μ ·Η *Η tü >i e ε ^ ftp 3 Λ £ 4? Ρ. I 3 ΛΙΓ ,ρ §#·-Μ® ρ I ,ο δ \«ϋ „ — ft ρ } * β >ι ο Ρ Ρ Ρ β 3 *ο Ο Ρ 3 © Ν Β ν Ρ δ.ρ β ρ ρ \, ο β Α Ή Ο Ρ >ι Ρ I X 3 Ρ «Ό « Ο I Α 01 Ό Ο Ρ β fi β Ο Ρ ο Ρ — Ό 8 >»Ρ * δ X Ρ Ο ι ο α> CM A NO ,·*·' Ρ δ m I , ο ι ρ .Μ 8 ρ ρ I ,ρ ι ι Μ>ι ο ο I β X Ρ en ο ο ρ , I Ρ t Μ"' Μ -Ü 1 ι, ι β — CM Μ, 3 Μ I ft '-'OOP W X β Ρ .ΠΟΡΟ) S .1 ε ε Μ cm δ δ ,‘λ Ρ Ο 3 & Λ 3 Λ -Ρ Ν Ρ <ϋ β 0) —·η 8 ϊ*ι Ρ Τ X Ν ,ρ 0 δ I ι·5! ^ ,Μ-ρ ο I ,οο Μεν ι ρ δ ^ Χρ ι β χ ο αι ρ c «η ι Ρ —' Β I , I δ CM I'S. t ι ! CM O 0 I X β — OP N I 8 —' CM Ρ
Figure NL8100571AD01021
I P I >1 fi p -rv β P 0) N ft δ O p P 0 0 o >1 N ο δ ,w P Μ·Ρ 4 1 Z> <ƒ 1 i 1 Sh ρ O 8 fi δ ρ I 8 CM P 1 — — >1 Ν X ν' 0 U 3 3 >. N β, t fi ΟΐΙ^,τη <h Ip ν' Ο N I , fi δ Mp fi I .so δ ο I CM I 0 X 0 1 -I N I fi p a) >1.Λ Sh A O ,ρ y e SIu I ^fp1 I A >, — -p A ei a> p ν' g (J,
u B N β •r» Ρ Ν δ I Ρ 3 Ρ I CM
*0 «Η 0) Ο 8 ο Β
CM
en in co 81 00 57 1
102 I I P P
Φ P
P u 0Λ . NO 0 3 CN N I CN 3 m CN Ό, I I ηΚ,ρ* s Jm Ρ Ο (N m P P A.i S IMS Q) r—I <w >i a> 1 p a mow I o Ο Λ * X Η P 0 >i 3 1 C O CN «U N ,'-,Ή g 1¾¾ Cl* kK.B'ï I I 3 P m P 3 Ό I >i n a) 0 e a h x o o P ΟΛ>Η g 1 Ρ Ρ O CN id 3 I o to p -s -. <D <U W P 3 Ό Π >, P fi “COO
I Η I I IMS Ρ Ρ O ΦΜ S p M h o >1 O * 3 3 P Ο) H 3 Ή >,0 — 3 N > <U § n,m 3 I \ p 0 H X O Id 0 3 M 1 P CN S * ‘ At V. Ρ N . >i 3 vj 3 0 , Ο Ή S-fl v.1 e in ι. ο o cn K. fi I P ΟΠΌ x >ι·η υ Ο 3 P I Ρ oo CN Ό Ν Ο I Ρ 3 Ο |ν. Η I CN Ο Ή I «ν.ι m *, 3Κ σι « Ό I»-· — ρ 0 w a 3 ρ ,η ρ ρ β I ,1 § 3 \1-ι 3 a |ν. I I Ρ 0 ί?3 Ο 3 I <0 Ρ NP Ο Ρ 1 -- 3 Ο 3, I Ή Ό Η'ν'Ο 3 3 -Η Ο Ο 0 (U 3 Η ·Η I? I 5|ν 0 11 Ε Η Ο Ρ >ι X >ι 3 Ο 3 Ο I Hl Λ (Ν Ρ Ρ, I μ. 3 3 Ν,ρ Ρ, Ο Η ι Κ. ο ο cn 13 ε — Ρ -Η 01 . >t § ν 3,3 « 1 ρ|Χ.,Ρ mm I ei
Ρ Q) ' Ν U 3 I Ο ΝΤ "d* CN
Pi ”, I ι K,
Pi P a ‘ v iw 1 co I 0 >1 3 3 3 O Λ 3 P ·π 3 Ή _ Ο N X id Ο H 3 I >1 O cn a a> P N ,¾ 3 ,V. P 0 I .Η.Λ V.I OK.. JL Ν I Q <d 0 I Ό 3 r-v ·Η *H «Eg
Figure NL8100571AD01031
,Α AKm kiA,·?. § ki q'1 S I , 3 Λ -Γ-"Nyl ·A P P I g 3 N «303 VI, >« I p P o I 1 N' M? | f-4s T?· * CN'^^'I CJ I 3 O ”Ή XO rid Oin >iW I 01 3 P CN «-I 3 o.i , P NVP 3 3 3 POOS I P 3 ft CN E -rj P ^ ·Η 6 H ι 1,(3 g r.ïMs MS >, . Mfïs ,rn cn u O ,1 3 N 1^KI >, § SlO 3 P kl-S.iS 3 khg u51 I 3 P 3 co o Η H (W X >. >1-H 05 3 3 3 « β O B W ft.0 0) m 0 P 3 , P 3 P \ ft ü 3
Figure NL8100571AD01032
3 _ *w 3 Ό N O P P 3 O P O Ό 3 O
0 Ά P N >i 3 3 P O PON 3 ü S P. 3 3 ι K.-P 31 H 1 0 3 0 3 X · 3 P O» P E * 3 S Ή Μ ·Η ?Kis 1 a&a · ,0 o i^ha x» >1 3 P 1 3 w 0 m O O Ό ι I Λ 3 3 hSd 0 *—, OP * ν ^ ρ υ — o o w e NO cn. p 3 o ι cn H CN
ι-» ki§
P 3 O
ι P P >t I 3 λΚ. o P 1 N 0) H S E >i 3 P P P >1 O H 3 0 3 0 3 t4 P P vc . » 1 3 P 3* O 3 Ό I ,P 3 0 0 \, Ν P X 3 P 0 0 0 3 P 3 P O Ό Ρ P 1 S 3 P m, o n o -K, o Ό ,CN ,Ιβ 3 1 . p p o ,\l >1 Ό I , 3 p * O P O 1 p o Si P NO 3 3 O' o ι in
o> 3 •H
. 11 ι I P 0 CO m >, x in ,IB0m Κ,Ρ ι , 1 N CN P ο β I 3 k pIv.,3 « o 1ft — ft o P W P 3 P .cn ftp o kirn i «
I N I 0 -d p a Ό. 3 AMs 1 P 3 CN >i 0 l· Ρ N P O I ^ 3 P St Ρ H P >i 3 O 3 M P O jsK, H P „I 3 0 0 3 E 3 N 1 Ρ 3 m a 0 '—.OP ,AM1 1 M Si § -a u I ,Ρ Ό ,ν.1 P PO 1 , 3 P P« - '0 oo \N H . 13 I ι ρ ι in m >, m 00 , l 3 I rn SlN 8 P -1 3 0 3 * Ρ I 3 Pi O CN ft — ft, I P W Ρ}ν,,Ρ rfo's •Vim 3 M
Figure NL8100571AD01033
CMiM 13 3 3 en o P 3 O Ό O
P 3 3 i.üMl, \ 3 P ,-rH Ρ \ H O 1 S m 3 3.m ι . 3 Ol-v., Mei MaT -v.1 I W l CN I . .. « I O X., I — x I H 0 H SÜ >< I >1 — 3 CN 3 O N 3 0) ,Λ O 3 •rl % .'M P O > 3 Λ ·A ρ a Ο,Ρ rh X|P » ' N 3 0 3 Vs, N I 3 J P tv 0 >tP 1 3 N 0 0 3 3 Λ P P P o E 3 O Son 1 -i 3 CN Ο P I 3 Λ ~ P P n a ι — 3 3· I O, I SKl. I p 3 NT >1 O I 3 O Ο Ρ N X N e 0 3 0 ρ Ρ.Λ Ό Ο V., ' s· J cn P 0 - ft 3 , CN I P I ,H E \ £ >i 3 1 Ρ 3 N «003 I S Λ τι ,—. p P p 1¾ >1 3 N m 3 O 3
3 Ρ τη P Λ, I N Pk 3 0 ,1 3 ρ ρ o >i >1 0 A 3 N Ρ P 3 Ο Ν O E 3.Λ ι Plv., m Ο I — ft 0 1 P 3 Cii.i S; « Ό I I cn . Pi i 3 — CN O
3 0 β
r* ω σι o CN cn H H CN CM CN CM dH H rH rl P rH
81 00 57 1 - 103 - - 103 - 'V Η -3 $8 © Ν ο 8 « 3 λ -Η 8¾ tx •Η % &8 Ο 3 58 (3 3 0) φ 3 •Η Ό •Η 3 Φ Ν « · I , I ο S,. rt I , ΙΟ ο ο I X m ο ι 1 1 κ7 Φ ε
>1 c « 3 3 Ή I CM
νο
-3 3 'I3 Ia — ο +» W 3 Η ,η τΐ 41 kiS I
Μ I φ Η +» 3 Ο I1' 8 ο 3 •Η θ' 3 _ -Η <Η Ό
sjH
U
3 Φ Ό 3 Ο
Figure NL8100571AD01041
ι '"'I'S η η Η Ί 3 Η Μ >ι Φ 3 3 0 Ζΐ •Ρ 3 Μ -3 Φ -μ <0,0 φ ηΙ\, ν &J1u 3 >ι-3θ Φ 3 I ΐΛ Εή om •3 Ό X -< Ο Ή Ο — Η I 3 I . ο CM 3 :>ν Ν. I 3 .«1s, a >!3 JÜ I -3 Ο (3 η S C g I ,·η ή ε S.I » 8 ra Ηϊκμ l'''. ο >< ο s, I -3 X I .CM φ 8 S 1 9 3 I I'S, <0 -3 CO ΙιΗ Η , 1 Ο >ι β Is, 3 3 X 1·3 φ χ~ Ιΐ\. μ £κΙο'§ W 3 3 Ν ,ΡΟ φ -3 3 ! , φ 8 ο rits Κ,β ra ο Φ — λ c χ μ ή οί <ο <ο '-μ ο -3 W — -30 «Η ΦΟ 1 ,Mm \Ι 3 <0 *-< , 0 -3 \ 3 Ό , I -Η -3 3 η 8 -3 Φ . ι, <0 Φ Ό 1 1 ïU §
#-ι Η I
X >1 ή * « 3 I ϋ ~ Ο Ο m λ χο ,m 3 ο ω i ,<β ι νο
S.I U CM CN
mj\ <ο ι Η r Ο Η >, -3 X >1 3 3 0 3 Φ 0 1 Ο.Ή Ν cm Λ|\. 8 ,13 I 3 Is», <0 Ο Ή J2.au *« Κ,Ι Μ -- ο I's, ,- ω a 1 μ η ρ ι-ι 3 , Φ >ι 3 Nig 3 Ν Κβ ο ι ο -μ -
Π C Φ ο , I ·3 X
Κ. ε « ο I-w t ο ·3 *-Ι Ν >1 I CM — X Ο , w ο χ -μ ,η Λ Ο 3 1,-313 s,| φ CVJ ft I 3 θ' >ι 3 3 X 3 -3 0 X Ό I 3 3 Φ ΙΊ Ο Ο Η
V >, <3 +J
« 3 μ c 113 0 —. ^3* ΕΟ ι—ί. — φ 3 ixjs, s φ α Ι-μ ό •3 Ο Ό 3 φ 3 Ή Ο Η *3 -3 >ι 8 Φ * 3,8 ΝΟ Pi's., <0 Φ ΙΟ ê ηη η I >ι I Ο μ 3 ΟΝ —ΟΧΙ I Λ Ο Η
^310 I . <0 CM CM
ι -10 3 .s, >, e a ,sJ-3 8 <3 I , X, « © sj «Κ 8 13 |n m φ >3 , ι a >» r I's,-3 -3 -3 ia® s too X «3 « X «1—8 ^ ο h 3 W X >i -3 ,m 0 3 «3 1 Φ <0 'vi'O <3 jx I § 3 3 <3 I CM I 0 3 •3 8 •3 & 0 +3 Φ 3 *8 1 -n — -3 Ν X w <0
Figure NL8100571AD01042
t èh X H 3 0 >i 3 1 3 3 CM O N I Λ 3 3 3 n >t <0 -3 £ ° 8 Φ H 3 f >t Φ me Γ.ν ~ ,Ss|-3 Φ >'1'S & <0 0 I Ό 3 λ *H *H «88 ^3 « Φ X 3 l 3 Φ I Φ >ι, I N Xk 3 Ο I© 3 ïsi's, S e 'I fas -0-3-3 — <0 8 1 U! 10 't'h'l s.1 o -3 0 3 >lSl\.3 è H 0 3 I >i 3 -m — 3-3-3 « Φ 8 X «H <0 <0 , » , ι 3 nb «3 0 H 3 >i ,-3 3 Ms W m <3 \j „ ι >i|s. -r> 0 3 1-3 X 0 >3 X Ο Λ >1 « 13 3 3 ,CM <0 -3 Φ kii 3 a kl&’o S I .Ο Ν.Λ \ £ «I's J, -3 Ό l δ Φ -3 O 18 8 3 .— ,3-3-3 « >ι ι 8 w c — g I, I "b — o I 3 Ο -3 3 8 •3 -3 8 *— (¾ >1 I X 3 CM 0 Cl3 X Ο T-1 δ x -3 I O X 0 I « 3 cm H •3 I O SH O « >ι X 1 A « CM 5 -3 I Φ A — 8-3 N -3 I Ό O’ P P X 3
» — I Η 3 I >t « 3 A, Ο Φ 3 I's., Λ Φ >1 Η p3 X >ι >ι Ο A 3 3 -3 -3 Ό Φ X >ι ? gf *-i Ο TAX r.f-a1! ι^Τ5 3 i^a.s -a >'3κιί -¾ Ό <3 Λ I I > 3 -ν rn 3 Φ « " 0 Φ w cm Λ X
CM
ΙΟ CM
10 GO O' o CN CM CM CM m Ψ·* Η H T-4 81 00 57 1 'X - 104 - {·)
Figure NL8100571AD01051
--inigKg?' I I — O ^ Λ >i X Λ ιβ +J, Ο
Η B O H S
«K,c Η |·η >lH Ή Jq >( n Ρββ a ·η c 6 Ό O I *H 0) «-* Η N w O C I N Q) ,η ιβ.Λ ,όΚ ,\Ι·* „I I ιε 2 ,'ν ·Η c xl- I t i J PS I >i — N β K1 I > h x II <H (U •H 0 Ό * — Ο ->·4 I I .CM CM id ,5--) i"£8 VS " ö (U I o c •H t id êl ISiX I X CM 0 • s sa
o c •H δ •H
o o N «J X 0 (0 •w 1 I H >1 C 0} <H I CO x t 3 H 3 >i N Λ C V o g £ I Ιβ m u Ό V <D *8 o o >
»4 CM ro r> n n v-4 ▼H
81 00 57 1 t ï - 105 -
Voorbeelden 134-135
Wanneer men1 de werkwijze yan voorbeeld 70 volgt, maar een in kolom I opgesomde verbinding "gwmiikt in plaats van /"~3S (Z)J-3-/“/“(2-amino-4-thiazdIyl)/""/ 2- (difenylmethoxy)-2-oxo-5 ethoxy_/imino_/acetyl_/amino_/^5^oxo-l-azetidinesulfonzuur, kalium- zout, verkrijgt men de'overeenkomstige verbinding van kolom II.
81 0 0 5 7 1
*· I - 106 - I
υ Ο I J3 «Ν - Ρ. I ~ <ΰ Ν..™ ,ϋ I» I ο ιΜ~ ΐ:§* ηΝ. 3 >1 ο Η Η Ν ο >ι| & Ν +J 3 β < φ »1 Ή τ| U Η H) ΐ,ί Λ ® ΐ'Μ Ö 'ΤΟ *· C I β Ρ Ο Ο ·Η 3 3 Ε 3 •Η Ν Ο §ΚΙ § « Η Η § Η £
Figure NL8100571AD01071
.ΡΟ Ή ί Λ Ο -Ρ 4J I \Ιρ φ φ cm μ
Figure NL8100571AD01072
MP n C I >ι Ή Ο (Ν X Η w η 3 » I ,ί«υ ,ν» 53 a I Ο 30 >1Ε ·Η ΙΛ I — ·Τ3 νθ η Ο ·Η "t . J -Η -U . Ν..Λ φ -Ρ I+J Ν 3 -. Η (β 3 Ν >ι I Οι Α ·η +J W -Ρ I ,η 0) ο 1 .ε * "si'-' Ο » Η I >1 Ο 5 Φ
Φ S W
- σι Μ r-3 3 Ό
I CM
X 3 β VI. _ Ε <Ν , ld ΜΗ •Η J Κ». 3 « Ό 1 Ο Ο I Ο Η ΤΜ η Ή ·Η >ι Η Μ « Α -Ρ 3 Ο Ρ V 10 ο
Ο Φ > I >ι <β 3 CM £Π\·Η β) ,-ρ Ιό -η >»| φ ο -Η Ν . ,Ε 3 -Ρ — en 'vl*-' -Η α) 1^1 Ε Ν 4-| I'S» Η «-ι ,-Η (0 I >ι I Ν, · Η ^ 1«Η Ν Ο >1 >1 I «ΜΗ Μ β Ο Ο X
*-» ο Η I Ο >1 r-t ιη 3 I CM •Η ο Ό X -Ρ •HOC Η ι 3 Ο CM 0+ Ν, I 4J (Ö Κ,Η Ό J Φ •HOS sen •Η ·Η I Β * «Η. (3 4J ι ρ ο ο X Η Ν Ο >1 S I 4J 3 CM φ ·Η I Ο Η Ο Φ ιΰ 3 Η ^ •Η >ι Ε 3 -(0 φ Ρ «Κ. 3 ,w 1 Ν I . Ο 3 θ’ ι^5 δ S 1^,8¾¾ I , I Φ 4J > Η 3 3 I >1 Η Ο η 3 Ό I Ο -Η Μ -* Λ -Ρ Φ ΙΟ h Φ Ό w id Ν 3 η Ο Φ Ο , I ι Κ, ι . .CM I -s». > —< I . ο η 1Ρ ω ,\1λ £ η 3 <μ I , ρ c ί* 5 -« ,''»! φ Η -Ρ Ν I , ο Ό Φ 3 Ό -Η Ο Ο Η I , >1 Η η) Ή Φ X ο Η Η φ 1 , ο Ν >1 3 Λ v.l.5 id 3 to μ I +3 Ό Φ Φ Ο η φ -H.m 3 Ο ι ε εΚ,-η > ΟΗΗ Ιό X >ι I Ο -Η Φ Ο 3 Η 3 ·Ρ ·Η ) Φ. ) ·Η φ Ν CM 4-11\. EN — ι * j <ö <ö K .oki -P -hi § ««V - Ακ,ο O 3 W I Ixi 3 -H ,n 0 H P -H H ,X >, ld Ë IÖ •V. O 3 o Id x
Figure NL8100571AD01073
in cn 8 1 0 0 57 1 - 107 -
Voorbeeld 136 .
/~3α(Ζ) ,4α_7-3-/"/Γ(2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino) acetyl_/-amino /-4-methy1-2-oxo-1 -aze t idinesulfonzqj|r, kaliumzout.
5 Een oplossiggk van 51,8 mg (cis)-4-methyl-2-oxo- 3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl__/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout en 51 mg tetra-n-butylammoniumbisulfaat in 5 ml water wordt geëxtraheerd met methyleenchloride (vier porties van 10 ml) onder verkrijging van 41 mg olie. Deze wordt in een waterstofatmosfeer 10 2 uur geroerd met 40 mg 10 % palladium op kool in 4 ml dimethyl- formamide. De katalysator wordt gefiltreerd en gewassen met 1 ml dime thyIformamide. Filtraat en wassingen worden gecombineerd en 16 uur geroerd met 31 mg (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thiazool-azijnzuur, 27 mg N-hydroxybenztriazool en 31,5 mg dicyclohexylcarbo-15 diimide. De oplossing wordt in vacuum afgedampt en het residu met 3 ml aceton aangewreven. De verkregen brij wordt gecentrifugeerd en de vloeistof behandeld met 41 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Verdunning met 5 ml ether en filtratie levert een vaste stof op. Chromatografie over 40 ml HP-20AG levert Rydonpositief materiaal 20 op in fracties 3-5 (20 ml) (eluering met water). Afdamping en aanwrijven met ether levert 23 mg produkt op als hygroscopische vaste stof.
Analyse berekend voor ci()Hl2N506S2K: C 29,91; H 3,01; N 17,44; 25 Gevonden: C 29,30; H 3,31; N 16,66.
NMR (D2Q) 1,40 (3H, d, j = 7), 3,97 (3H, S), 4,46 (1H, schijnbaar pentet, } = 7), 5,37 (1H, d, ; « 7), 6,97 ppm (1H, S).
Voorbeeld 137 (3S-cis)-3-Amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
30 A) t-Boc-1-allotreonine.
Een suspensie van 6,72 g 1-allotreonine in 70 ml 50 % waterige dioxan wordt behandeld met 9,45 ml triethylamine en 35 18,1 g t-butylpyrocarbonaat. Het verkregen mengsel wordt 4 uur bij 81 00 57 1 kamertempe ra tuur geroerd "en daarna verdund met 70 ml water en 140 ml ethylacetaat. Na grondig schudden wordejpde lagen gescheiden en wordt de organische laag gewassen me t 3 0 ml 2:1 water:pekel. De gecombineerde waterlagen wordendaarna teruggeëxtraheerd met 70 ml ethylacetaat. De waterlaag wordt in een ijsbad gekoeld en men voegt 10 % kaliumbisulfietoplossing toe tot pH 2,3. De aangezuurde oplossing wordt met ethylacetaat geëxtraheerd (vier porties van 150 ml). De gecombineerde organische lagen worden op watervrij natriumsulfaat gedroogd, waarna het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van 9,13 g in de titel genoemde verbinding.
B) N-Methoxy-t-boc-l-allotreonineami-de.
Men lost 9,13 g t-boc-l-allotreonine op in 85 ml water en 41 ml IN kaliumhydroxyde-oplossing. Men voegt 5,22 g metho-xyarainehydroxychloride en 8,67 g 1 -ethyl- 3,3- (dime thylaminopropy 1) -carbodiimide.HCl toe. Het mengsel wordt 4 uur bij kamertemperatuur geroerd en daarna met natrium kaliumtartraat verzadigd. Het verkregen mengsel wordt met ethylacetaat geëxtraheerd (vier porties van 150 ml) en de organische laag wordt op watervrij natriumsulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van 7,38 g in de titel genoemde verbinding als een vaste stof.
C) Ο-Methaansulfony1-N-methoxy-t-boc-1-allotreo- nineamide.
7,32 g N-Methoxy-t-boc-l-allotreonineamide wordt in 40 ml pyridine opgelost en onder stikstof op -20° C afgekoeld. Men voegt druppelsgewijze met een injectiespuit in een periode van 5 min. 3 ml methaansulfonylchloride toe. Het resulterende mengsel wordt langzaam tot 0° C opgewarmd en 3 uur bij deze temperatuur geroerd. Men voegt 500 ml ethylacetaat toe en wast de oplossing met 250 ml ijskoude 3N HCl-oplossing en daarna met 100 ml 5 % NaHCO^-oplossing. De ethylacetaatlaag wordt op watervrij natriumsulfaat gedroogd, waarna het oplosmiddel wordt afgestript en men 8,64 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt als een witte vaste stof.
* - 109 - D}.(3S-cis)-3-t-Butoxycarbonylamino-l-methoxy-4- methylazetidinon,
Men lost 8,64 g O-methaansu1f ony1-N-methoxy-t-5 boc-l-allotreonineamide op in ^30 ml aceton en voegt lig vast kaliumcarbonaat toe. Men warmt het mengsel onder stikstof langzaam tot 65° C op en roert 1 uur bij deze temperatuur. Het reactiemengsel wordt daarna gefiltreerd door Celite en de filterkoek wordt met ethylacetaat gewassen. Het filtraat wordt geconcentreerd en het 10 residu opgenomen in 250 ml ethylacetaat. De ethylacetaatoplossing wordt gewassen met 100 ml IN zoutzuuroplossing en 100 ml 5 % natrium-bicarbonaatoplossing. De ethylacetaatlaag wordt op watervrij natrium-sulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van 6,63 g ruw produkt.
15 E) (3S-cis)-3-t-butoxycarbonylamino-4-methylaze- tidinon.
Men lost 1,35 g natrium bij -50° C op in 300 ml vloeibare ammoniak en voegt via een injectiespuit druppelsgewijze 20 5,87 g (3S-cis)-3-t-butoxycarbonylamino-l-methoxy-4-methylazetidi- non in 35 ml tetrahydrofuran toe. Men gebruikt nog 10 ml tetrahy-drofuran voor het uitspoelen. Tegen het einde van de toevoeging voegt men nog 100 mg natrium toe. Het mengsel wordt nog 5 min. geroerd en daarna afgeschrikt door toevoeging van 3,35 g vast ammo-25 niumchloride in één portie. De ammoniak wordt met een stikstof- stroom weggeblazen en men voegt aan het residu 250 ml ethylacetaat toe. Nadat de vaste stof is afgefiltreerd en met ethylacetaat is gewassen, stript men uit het gecombineerde filtraat het oplosmiddel af onder verkrijging van 4,82 g in de titel genoemde verbinding.
30 P) (3S-cis)-3-t-Butoxycarbonylamino-4-methyl-2-oxo- 1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Men lost 4,98 g / 3S,4R_7-3-t-butoxycarbonyl-araino-4-methylazetidinon op in 30 ml dimethylformamide. Men voegt 35 11,9 g pyridine-zwaveltrioxydecomplex toe en roert het mengsel bij 81 0057 1 - 110 - kamertemperatuur onder^stikstof. Na 14 uur roeren voegt men nog 1,8 g pyridine-zwaveltrioxydëcomplex. toe en^ roert nog 80 uur voort. Het reactiemengsel wordt uitgegoten in"7Ö^pil.0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing en met methyleenchloride gewassen (drie 5 porties van 300 ml). Men voegti?8,45 g t-n-butylammoniumbisulfaat aan de waterige oplossing toe en extraheert het mengsel met methyleenchloride (vier porties van 300 ml). De gecombineerde methyleen-chloridelagen worden op watervrij natriumsulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van 10,76 g in de 10 titel genoemde verbinding als een gom.
G) (3S-cis)-3-Amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidine- . ƒ sulfonzuur.
10,76 g (3S-cis)-3-t-Butoxycarbonylamino-4-15 methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout, wordt in 50 ml 95-97% mierenzuur opgelost en 4 uur onder stikstof geroerd. Men voegt een kleine hoeveelheid produkt van een eerdere reactie toe als ent en roert het mengsel nog een uur. Het mengsel wordt 16 uur in een vrieskast bewaard en het bevroren mengsel wordt tot 20 kamertemperatuur opgewarmd en nog een uur geroerd. De gevormde vaste stof wordt afgefiltreerd en met methyleenchloride gewassen onder verkrijging van 982 mg in de titel genoemde verbinding. Het filtraat wordt met 1 1 methyleenchloride verdund en 4 uur op -20° C gehouden. Het zich vormende precipitaat wordt herkristalliseerd 25 uit water-raethanol-aceton onder verkrijging van nog 167 mg in de titel genoemde verbinding. NMR (D^) 1,63 (3H, d, j = 6,5 cps), lR(nujol)1775 cm”V.
Voorbeeld 138 (_ 3SV 3α (Z) ,4a_/-/-3-£ /_ 2-Amino-4-thiazolyl)methoxyimino)acetyl_/-30 amino__/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men behandelt een oplossing van 201 mg (Z)-2-amino-α-(methoxyiraino)-4-thiazoolazijnzuur en 153 mg N-hydroxybenz-triazool monohydraat in 3 ml dimethylformamide met 206 mg dicyclo-35 hexylcarbodiimide. Het mengsel wordt 20 min. bij kamertemperatuur 81 0 0 5 7 1
* X
- Ill - .........---«Sfe.....
onder stikstof geroerd en men_voegt een oplossing van 180 mg (3S-cis)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidines«^f onzuur en 0,14 ml tri- ïiss.. ** ethylamine in 2 ml dimethylformamide toe (men gebruikt nog 1 ml
* ... jC
- dimethylformamide voor het uitspoelen) en roert het mengsel 16 ' 5 uur. De brij wordt in vacuum af gedampt, met 12 ml aceton aangewreven, gecentrifugeerd en de vloeistof wordt behandeld met 338 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Verdunning met 10 ml ether en filtratie levert een vast produkt op, dat men chromatografeert over 200 ml HP-20 hars onder eluering met water. Fracties 18-30 (elk 10 20 ml) worden gecombineerd en gevriesdroogd tot 274 mg in de titel genoemde verbinding als hygroscopische vaste stof.
Analyse berekend voor ^¢)^12^^6^2^ C 29,91; H 3,01? N 17,44?
Gevonden: C 30,03; H 3,21; N 17,06.
15 NMR (D2Q) 1,40 (3H, d, } = 6,5), 3,98 (3H, S), 4,48 (1H, d van t, j - 6,4, 5,5), 5,36 (1H, d, j = 5,5) 6,97 (1H, S).
Voorbeeld 139 (3S-trans)-3-Amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
20 A) Treonine, methylester, hydrochloride.
Onder een stikstof atmosfeer koelt men een kolf, die 500 ml methanol bevat, tot -5° C af, (ijs/pekel) en voegt 130 ml thionylchloride (overmaat) in zodanige mate toe, dat de reactie-25 temperatuur tussen 0 en 10° C wordt gehouden. Na opnieuw tot -5° C te hebben af gekoeld, voegt men 59,5 g 1-treonine toe en laat het mengsel op kamertemperatuur komen en roert 16 uur. Het mengsel wordt geconcentreerd en 2 uur onder vacuum gebracht bij 10 * torr, waarbij men een visceuze olie verkrijgt. Dit materiaal wordt recht-30 streeks voor de volgende trap gebruikt.
B) Treonine-amide,
Het ruwe produkt van deel A wordt in 2,5 1 methanol opgelost en op -5° C afgekoeld (ijs/pekel). Men verzadigt de 35 oplossing met ammoniakgas, verwijdert het koelbad en laat het 81 00 57 1 5 - 112 - af gedichte vat 3 dagen staan. Na verwijdering van het merendeel van de niet gereageerd hebbende ammoniak via de blazer, voegt men 100
Figure NL8100571AD01131
g natriumbicarbonaat en 50 mi water toe- érferstriDt het mengsel af tot een visceuze ol
Men verdunt het ruwe produkt van deel B (dat reeds de vereiste hoeveelheid natriumbicarbonaat bevat) met water tot een volume van 1 1. Bij deze oplossing voegt men onder snel 10 roeren in een periode van 1 uur 94 g (88 ml 90 % zuiver materiaal) benzyloxycarbonylchloride als een oplossing in 80 ml tetrahydro-furan. Daarna wordt het reactiemengsel nog 16 uur geroerd en geëxtraheerd met ethylacetaat (één portie van 500 ml, twee porties van 250 ml). De gecombineerde extracten worden op magnesiumsulfaat 15 gedroogd en geconcentreerd. Het kristallijne residu wordt daarna opgelost in 250 ml heet ethylacetaat en men voegt 300 ml hexaan toe, waarna men kookt tot een heldere oplossing is bereikt. Afkoelen en filtratie van de kristallijne massa levert na drogen 104 g in de titel genoemde verbinding op.
20 D) Benzyloxycarbonyltreonineamide, O-mesylaat.
Onder een argonatmosfeer lost men 100 g benzyl- oxycarbonyltreonineamide op in 400 ml watervrije pyridine en koelt in een ijs/zoutbad. Bij deze oplossing voegt men in een periode van 25 15 min. onder roeren 36,8 ml (54,5 g) methaansulfonylchloride. Na 2 uur roeren voegt men nog 0,3 equivalenten methaansulfonylchloride toe. Daarna wordt de reactie 1 uur geroerd en uitgegoten in een mengsel van 1,5 1 ijs en 2 1 water. De verkregen brij wordt 30 min.
o geroerd en gefiltreerd. Drogen van het ruwe produkt bij 60 C gedu-30 rende 16 uur in een vacuumoven levert 109 g in de titel genoemde verbinding op.
E) N-Sulfonylbenzyloxycarbonyltreoninearaide O-mesylaat, tetrabutylammoniumzout 35
Een oplossing van 17,8 ml 2-pikoline in 90 ml 81 00 57 1 * J5 - 113 - methyleenchloride wordt-stot -5° C afgekoeld (ijs-pekel) en men voegt 5,97 ml chloorsulfonzuur in zodanig mate toe, dat de inwendige reactietemperatuur beneden 5° C wóreK gehouden, De resulterende oplossing wordt via canula toegevoegd aan een suspensie van 7,56 g 5 benzyloxycarbonyltreonineamfde^ O-mesylaat in 120 ml methyleenchloride, Het resulterende, heterogene mengsel wordt 16 uur aan een terugvloeikoeler verwarmd onder verkrijging van een heldere oplossing, De oplossing wordt uitgegoten in 500 ml pH 4,5 fosfaat-buffer (0,5 M) en verder verdund met 120 ml methyleenchloride. De 10 afgescheiden organische laag wordt daarna één maal gewassen met 100 ml bufferoplossing en de gecombineerde waterfasen worden behandeld met 10,2 g tetra-n-butylammoniumwaterstofsulfaat en geëxtraheerd met methyleenchloride (één portie van 300 ml en twee porties van 150 ml), Na drogen van de gecombineerde organische extrac-15 ten op natriumsulfaat wordt de oplossing geconcentreerd onder verkrijging van 12,7 g schuim.
F) (3S-trans)-3-amino-4-methy1-2-oxo-1-azeti- dinesulfonzuur.
20 Een mengsel, bestaande uit 5,52 g kaliumcar- bonaat in 20 ml water en 160 ml 1,2-dichloorethaan wordt aan een terugvloeikoeler verwarmd en men voegt 15,5 mmol N-sulfonylbenzyl-oxycarbonyltreonineamide, O-mesylaat, tetrabutylammoniumzout toe in 20 ml 1,2-dichloorethaan (20 ml wordt als spoeling gebruikt).
25 Na 30 min. verwarmen aan een terugvloeikoeler wordt het mengsel uitgegoten in een scheidtrechter, met 50 ml water en 100 ml methyleenchloride verdund en men splitst de fasen. De resulterende organische fase wordt op natriumsulfaat gedroogd en geconcentreerd tot ruw (3S-trans)-3-benzyloxycarbonylamino-4-methyl-2-oxo-l-azeti-30 dinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout. Het ruwe azetidinon wordt in 250 ml ethanol behandeld met 0,8 g 5 % palladium op kool katalysator en men laat waterstof door de oplossing borrelen. Na 90 min. wordt het mengsel gefiltreerd door Celite, waarbij men 50 ml ethanol als spoeling gebruikt. Toevoeging van 1,2 ml mierenzuur 35 aan deze oplossing veroorzaakt een onmiddellijke precipitatie van 8 1 00 57 1 - 114 - - 114 -
Figure NL8100571AD01151
* het in de titel genoemde zwitterion, dat men na 1 uur roeren affiltreert onder verkrijging van na' drogen geurende l · uur bij 10 * torr 1,1 g produkt. Men verkrijgt eenjtweede oogst aan produkt bij concentratie van het filtraat- én toevoeging van meer mierenzuur 5 onder verkrijging van 1,3 g in de titel genoemd zwitterion.
Smeltpunt >218° C (ontleding), /aJQ = -41,1 (Ol, H20). NMR (D2Q) 1,58 (3H, d, j * 7), 4,80 (2H, M).
Voorbeelden 140-143
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 138 10 volgt, maar (3S-trans-)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur gebruikt in plaats van (3S-cis)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur en een in kolom I van onderstaande tabel genoemd zuur gebruikt in plaats van (Z)-2-araino-a-(methoxyimino)-4-thiazool-azijnzuur, verkrijgt men de overeenkomstige verbinding uit kolom 15 II van onderstaande tabel.
i ".
81 00 57 1 - 115 - I 8 0 1 Μ Ir* HO >ιΛ S g Ρ, 0 ,3l\ *W I Η >,+» N >ιΛ Η I ,-Η 03 Η S 03 ΓΉ I ,η Η 'Τ * §hL 3 I o X Θ H Ό.
ι o
0» G H Ό 0) H P G O
ι ;a ms S ms a Ν 11B 'vïK η x i\,° K7 - K.H αα I >, COG
§ H ι—Ϊ lx
H X ΕΚ. οι 0) «3 I 03 Ό w O G G Ö G G -Η O n j) η Ό i , 0) S H - \ h, a +> u ι >K o) 03 Λ 1 NO m 4J H id m ® >t I
G -» H, AKi3 >H 3 M >1 N I +J G H 0) O >ι Ο <H 43 a H 33 H 3 >t W P GOO) ,0) G ·0 «Η -H G l JV..*» Ο Ki J-i ι Ο +) * Ma δ ° Mi ft Mm? 5 m Η O , I >1 X hS f MS'? CQ. (d «H Ü >i «H J V&8 ^ *W ) 8 N ^ O ) ,mK m «
0! I
λ t o Η «Η O >ι ι n Η Ο <N 0 X , N O +) <C ι G Ή N 3 λ ι a +) H +) 1 >1H ^ ί ® ι -p a ο 0) to g a t ι * ^ U" I 00 — X W* +> g il
Mia G cm I ft O CO H G H ,n CrjH I ,i § « H CM >i I -P +> h c Φ >|3 g 43 ft a +> +) o 0) H X a 0) ο ι a Ο Ό* 03 « G. I * *- hK, «· e -¾1 +> a J-p 3,I 3 3 O 3 I K, O ,— G O CM N 1 ,Η N r,s ι Mi § kilft A*V AS·" K >, u K g u , 1+)3. ja 3 K, ® 3 K,H 3 i Ü N out c 0 «. 0 <w — G H N H 3 ^ a οι a h o> cn >t c . X H n|0 Ό I P H CO Ό +) ,n >i ffl i S3 mK a }>i N CQ. c C O' ·>* 0) O G « Η <H H «,Λ Η Ό + +) 3 0) W I 03 H 8 CM 0) +) ,n, t G C UM3 0 I Ο Η P CO G -P 0) ,η Η 0) Ό Mi S § I ι a, ) saK *s § s * a -« a n i,3 3 O N, (M X I ) Ο H CM I >i 1~M O MMS ,η o a n I ,3,0 C MlK? M * ft S MSc - ρ G 0) 8 0) Ό 0) 1 Η H >, H K X o N G . 0) « +) Μ Λ I 0 X 0 Ή. I «Κ, ι Ip WAS * >i 3 CM G N ) O G Η x n >» y h λ a n 33 o a Q) ~ e ι H 0) 'tf >i 0) ,w G N ίκ N I \I Pl\. ι ο) I Ö ft 0 1 H c ft H « r a id o c •H a •H >1 X 0 M T3 ->« 3 Λ H — G 1 τ» 8 H > N o a c h ft 8 a n ι a CM -w ) x —»+) N I w M 3 U 3 ) 3 ~ N H G >t τι +) H 0) N o a X 0) Ο Ή o o ö τ! Η 43 ε -ρ r.7 >κι 8 Ο ) G λ Η Τ3 Η 0) Ο β ο !> Ο wr
CM
Η 81 00 57 1 * t - 116 - 5 Voorbeeld 144 / 3S-/ 3α(Ζ) ,4β_/_/-3-/ 7 (2-Aminö-4-thiazolyl)/’7 1,l-dimethyl-2-/ (4-nitrofenyl')methoxy /-2-oxoethoxy /jajino /acetyl /amino /-4-me thy1-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. - —Μ&β Bij een brij van 0,36 g (3S-trans)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 139) in 30 ml droog dimethylformamide voegt men onder stikstof bij 26° C 309 p.1 triethylamine. Na ongeveer 5 min. verkrijgt men een heldere oplos- 10 sing en voegt men 0,816 g (Z)-2-amino-aV / 1,1-dimethy1-2-/ (4-nitrofenyl)methoxy_/-2-oxoethoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur toe, Θ· gevolgd door 0,334 g N-hydroxybenztriazool en 0,453 g dicyclohexyl-carbodiimide. Men roert het mengsel 12 uur bij 26° C, waarop men het oplosmiddel in vacuum verwijdert en het residu aanwrijft met 15 30 ml aceton. Na 5 min. roeren wordt de vaste stof verwijderd en het filtraat behandeld met 3,680 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in 5 ml aceton. Toevoeging van ongeveer 40 ml ether levert een precipitaat op, dat men wint en in vacuum droogt. Opbrengst 1,073 g, tweede oogst, 0,066 g, totaal 1,14 g. 20 Analyse berekend voor C-.H-.N^O.-S^K.1 H_0 2U 21 b 1U 2 2 C 38,33; H 3,70; N 13,41; S 10,23; K 6,24; Gevonden: C 38,30; H 3,63; N 13,41; S 9,88; K 5,98. Voorbeeld 145 25 w /_ 3a(Z) ,4<x_/-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl)£( 1 -carboxy-1 -methylethoxy) imino__/acetyl /amino_/-4-methyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. 30 A) £ 3a (Z) ,4a__/-3-/ £(2-Amino-4-thiazolyl)/> (1-difenylmethoxycarbonyl-l-methylethoxy)imino>_/acetyl>J/ainino_y-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. 35 Een oplossing van 201 mg (cis)-4-methyl-2-oxo-3~LL (fenylmethoxy)carbonyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, tetra-butylammoniumzout (bereid uit het overeenkomstige kaliumzout van voorbeeld 98 als beschreven in voorbeeld 136) in 5 ml dimethyl- 8100571 ♦· - 117 - formamide wordt 2 uur in een waterstofatmosfeer geroerd met 90 mg 10 % palladium op calciumcarbonaat. De^pïj wordt gefiltreerd en het filtraat 16 uur onder stikstof geroerd met 146 mg (Z)-2-amino- ·> mm a -/(1 -difenylmethoxycarbonyl-l^-me thy le thoxy) imino__/-4-thiazoolazi jn 5 zuur, 73 mg dicyclohexylcarbodiimide en 51 mg N-hydroxybenztriazool De brij wordt in vacuum afgedampt en met 4 ml aceton aangewreven.
De brij wordt gefiltreerd en de vaste stof twee maal gewassen met porties van 2 ml aceton. Filtraat en wassingen worden gecombineerd en behandeld met 113 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Verdunning 10 met 24 ml ether levert een vaste stof op, die men afcentrifugeert en drie maal met ether wast onder verkrijging van 186 mg in de titel genoemde verbinding.
B) /_ 3α(Z) ,4a_/-3-/ /_ (2-Amino-4-thiazolyl)/_ 1-carboxy-l-methylethoxy_/imino__/acetyl_/amino_/-2-methyl-4-oxo-l-15 azetidinesulfonzuur, kaliumzour (1:2).
Een brij van 186 mg / 3α(Z),4a_/-3-/ / (2-amino- 4-thiazolyl)/ (1-difenylmethoxycarbonyl-1-methylethoxy)imino__/-acetyl /amino /-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout 20 in 0,6 ml gedestilleerde anisool wordt op -12° C afgekoeld en men voegt bij -10° C 3,0 ml gedestilleerd trifluorazijnzuur toe. De oplossing wordt 10 min. geroerd en men voegt 12 ml ether toe, gevolgd door 6 ml hexaan. Na 5 min. bij -10° C en 15 min. roeren bij kamertemperatuur, centrifugeert men de vaste stof af en wast 25 hem vier maal met ether onder verkrijging van 141 rag materiaal.
Dit wordt in vacuum gedroogd, gepoederd, opgelost in 5 ml koud water en onmiddellijk op pH 5,6 ingesteld met 0,4 N kaliumhydroxy-de. De oplossing wordt geleid over een 100 ml HP-20AG kolom en met water geëlueerd. Fracties 8-12 (10 ml) worden gecombineerd en in 30 vacuum afgedampt, (azijnzuurnitril wordt drie maal toegevoegd en afgedampt). Het residu wordt met ether aangewreven onder verkrijging van 101,7 mg produkt als hygroscopische vaste stof.
Analyse berekend voor C^Hj^NgOgS^K: C 30,51? H 2,95; N 13,69? S 12,53; K 15,28; 35 Gevonden: C 30,11? H 3,26? N 13,35; S 12,12? K 15,02.
81 0 0 5 7 1 ï - 118 - 5
Voorbeeld 146 ^½. / 3S-/ 3α (Z) ,4g / /-3-/ / (^amino-^thi^zolyl)/ (1-carboxy-l-methyl-
Figure NL8100571AD01191
87,3 mg 7/3S~/_ 3α (Z) ,4β__/-3-/ £ (2-Amino-4-thia-zolyl)/ (1-carboxy-l-methylethoxy)imino_/acetyl_/amino_/-4-methyl- 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, dikaliumzout (zie voorbeeld 103) wordt opgelost in 1,38 ml water, tot 0° C afgekoeld, behandeld met 0,34 ml
Figure NL8100571AD01192
IN zoutzuur en de resulterende kristallen worden afgecentrifugeerd. 10 De natte vaste stof wordt in methanol opgelost, gefiltreerd, geconcentreerd tot ongeveer 0,5 ml en vermengd met 1 ml water, onder verkrijging van 55,9 mg in de titel genoemde verbinding.
Voorbeeld 147 /_ 3S-f_ 3α(Z) ,4β__/_/-3-/ (2-Amino-4-thiazolyl)/ (1 -carboxy-1 -me-15 thylethoxy) imino_/—4-methy 1-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, natrium- zout.
Een monster vein 99,7 mg £ 3SV 3α(Z) ,4β__/-3-/_ / (2-amino-4-thiazolyl) /_ (l-carboxy-l-'methylethoxy)imino_/ace-20 tyl /amino /-4-methy1-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur wordt vermengd met 0,207 ml IN natriumhydroxyde en het resulterende mengsel wordt zacht verwarmd teneinde de resterende vaste stof te doen oplossen. Water wordt azeotroop verwijderd met azijnzuurnitril en het residu wordt herkristalliseerd uit een mengsel van 0,5 ml methanol (ter
Figure NL8100571AD01193
25 oplossing van het residu) en 1 ml azijnzuurnitril, waarbij men 81,8 mg vaste stof verkrijgt. Een tweede herkristallisatie uit 0,8 ml methanol levert 47,9 mg op, een derde uit 0,24 ml methanol en 0,24 ml absolute ethanol levert 44,8 mg op en een vierde uit 0,225 ml methanol en 0,225 ml absolute ethanol levert 38,8 mg op. De vaste 30 stof wordt 18 uur bij 20° C en 0,01 mm Hg gedroogd en daarna 24 uur in evenwicht gebracht met atmosferisch vocht, waarbij men 40,9 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
8 1 0 0 57 1 .35 119 - t
Voorbeeld 148 !_ 3S-/_ 3aj[Z) »43_/__/-3-/_ /_ (2-Amino-4-thiazolyl) /_ (1-carboxy-l-methyl-ethoxy) imino__/-4-methyl-2-oxo-l-azetidiJf|esulfonzuur, dinatriumzout.
5 Een monsteasivan 3,00 g (_ 3S-/ 3α(ζ) ,4β_/_/-3- /_ /_ (2-amino-4-thiazolyl) [_ (1-carboxy-l -methylethoxy) imino_/-acetyl__/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 146), wordt in 30 ml water gesuspendeerd en met 1 N natriumhydroxyde aangewreven, waartoe men 12,0 ml nodig heeft en men verkrijgt het 10 in de titel genoemde dinatriumzout. De pH wordt tot 6,5 verlaagd door toevoeging van een weinig Dowex 50W-X2 (H+). Het mengsel wordt gefiltreerd en het filtraat met water tot 66,3 g verdund. Een hoeveelheid van 6,63 g wordt voor andere doeleinden verwijderd. Het resterende filtraat wordt gevriesdroogd onder verkrijging van 2,38 g 15 vaste stof. Partiële in evenwicht brenging (24 uur) met atmosferisch vocht levert 2,54 g in de titel genoemde verbinding op.
Voorbeelden 149-151
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 138 volgt, maar een in kolom I van onderstaande tabel opgegeven verbin-20 ding gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thia-zoolazijnzuur, verkrijgt men de overeenkomstige in kolom II opgegeven verbinding.
81 00 57 1 - 120 £ Voorbeeld i s,, fKii CM Η Λ I >i P >1 5 U . . 5 3K|i ai >1 h w S C >1 i ai β Mi Ή ·Ρ I N 3 P ai (¾ 3 *H -H ïï x l<
P 8 N
v| I CM 8 M? CS Λ1 Vo'S .mts o | -p -p ^17 . i «η Η Ή |V,P - >1 *0 . >1 CM A a» Ν,β, I P H HKs +i 3 Ό SC Η H 0 >i >. 3 3 P 0 Λ P 3 O
P 0) P co ai
Mi - 4J —, <]) X N « al — I β CO ,co I , - ,oK
ai ai ιρ Ό 3 *· 3 U N 0)0 3 1H P σ» ε *ί w o ,m m I I 1 vj«p i 0) lp *— I Sj o». V CV I -P I cj* ε h p I , 3 >i 3 OVC 3 X ON 0 >P Λ 3 •H >t P ·η fl C β Ή 1 O. O N m λΚ 3 *· p lc ,n m p ci kii & 8 VI S? N § I .0 3,Λ •vkc P V i -p a) I e a) ft o i e i4 e rH fij Ή « >1 “ E — fi »P 3 I I 0 0. >ιΛ X §P O <0 I P, U CM 3V I lp H I H >, CM >, A ,— 3 P ,·ρ ai VS ? ,fO Η Ί I ,ο.ι VS'V* VS g g ,V.i 8 *P N 1 ,-h ε g I ,’Ρΐ'ν,'Ρ V I h I Ο Η (β ro X >i x , I 0 -P K,i » - . |CM Ο P Γν, I Its 3 K,H 3 3 1 >i N ίγ o fi s - s a> o —. -p.ip ip *« g'vs ^ —« Ο w β a a a> ,co 3 ·Ρ c I . 3 ε -p \|h. 3 Ό I W'V.'H W A |P m p h a) 1 ,0) >i N \|S c « 0 o X 3 P Ο Ή 3 Ή 8 O Ό, ίο N Ακι! » Η ·Ρ CM >i H 1 4-1 (0 h as x >1 o A itS * P Η P a) >1 3 I 3 3 P< φ N 1 N.,° ,vl 1¾ i . Ο H V -η a ViS >K|3 ro η ή , I >i P VB 8 Ki« 1 3 (0 *p Mi Ü I o -P X X >1 0 (¾ 3 I — -P CM 8 N I ,η (0 rP I . p >1 >| 4) A I ft P W -P <u ,η ft ε Ι,ιι V.J*P Mi |< H >1 <p I 3 >ι Ο Ο P β X Λ 3 3 Ο P 3 P I 3 N 3 cm, O 3 <P, I kn 11—. ,1-p CM |ip N O >1 ItS ν|·ρ -P § kiSS 8 kï5 3 S I ,3 Ν,Λ vj 0) it! V, I Η Ό i 8 -P O I A E 3 p -P -P tf a) I ε « g «-Η 3 I s P , YK|P co ip 3 k >i 3 CM C N I O 3 P Λ ·η >i P -P Λ 3 .N P O 3 3 3 I Η 3 Mi >i 3 3 N I ,*P 3 Λνΐ N 3 I I «,Λ \ P N, I 3 8 ft O 1 *ri 5 ΪΒ ψ* (Ö
σι o H Mi in in H H H
8100571 5 r s 121 -.
Voorbeeld 152 ν-^: / 3S-/ 3α(Ζ),4α_/ /-3-/ / (2-Amino-4-th£azolyl)/~C 1-carboxy-1-me-_ “ _ . “ thylethoxy) imino__/ acetyl_/ amino_/-4*-meïnyl-2-oxo-l-azetidinesulfon-zuur, kaliumzout (1:2). ,-7' A) /_ 3S-/ 3α (Z) ,4a__/_/-3-/ /_ (2-Amino-4-thiazo-lyl)/ (1 -difenylmethoxycarbony 1-1 -methylethoxy) imino_/acety 1_/-amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
10
O
15 20 s - ' 25
Een oplossing van 440 mg (Z)-2-amino-aV (1-carboxy-1-methylethoxy)imino_/-4-thiazoolazijnzuur en 153 mg N-hydroxybenztriazool monohydraat in 3 ml dimethylformamide wordt behandeld met 206 mg dicyclohexylcarbodiimide. Het mengsel wordt bij kamertemperatuur 30 min. onder stikstof geroerd en men voegt een oplossing van 180 mg (3s-cis)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidi-nesulfonzuur (zie voorbeeld 137) en 0,14 ml triethylamine in 2 ml dimethylformamide toe (men gebruikt nog 1 ml dimethylformamide voor het uitspoelen) en roert het mengsel ongeveer 16 uur. De brij wordt in vacuum afgedampt en met 12 ml aceton aangewreven. De brij wordt gefiltreerd en de vaste stof met aceton gewassen (twee porties van 3 ml). De combinatie van filtraat en wassingen wordt behandeld met 338 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Verdunning met 30 ml ether levert een gomachtige vaste stof op, die langzaam verstard. De vaste stof wordt afgefiltreerd en met ether gewassen onder verkrijging van 656 mg in de titel genoemde verbinding. B) ΓBS-/"*3 α (Z) , 4*7 Ί-1-ΓΓ(2-Amino-4-thiazolyl) /_ (1-carboxy-l-methylethoxy) imino_/acety 1_/amino__/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (1:2).
Men koelt een brij van 656 mg /_ 3S-V 3α (Z) ,4a_/_/-3-/ f_ (2-amino-4-thiazolyl) /_ (1-difenylmethoxycarbony 1-1 -methylethoxy) imino_/acetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout in 2,3 ml gedestilleerde anisool af tot -12° C en voegt 11,5 ml trifluorazijnzuur (voorgekoeld op -10° C) toe. De oplossing wordt 15 min. geroerd en men voegt 46 ml ether, gevolgd door 23 ml 81 00 57 1 ί - 122 - hexaan toe. Na 5 min. bij -10° C en 15 min. roeren bij kamertempe- ratuur wordt de vaste stof afgefiltreerd en met ether gewassen onder ... .. .:¾
verkrijging van 457 mg zeer hygroscopische gom. Deze wordt in 6 ml koud water opgelost en onmiddellijk op pH 5,6 ingesteld met 0,4 N
ii ijSfrir- - kaliumhydroxyde-oplossing. De^oplossing wordt over 200 ml HP-20 hars geleid en met water geëlueerd. Fracties 7-11 (elk 50 ml) worden gecombineerd en gevriesdroogd tot 239 mg in de titel genoemde verbinding als vaste stof.
Analyse berekend voor ci3Hi5°gN5S2K2*Js H20: 10 Ο 15 C 29,99; H 3,10; N 13,45; S 12,32;
Gevonden: C 29,94; H 3,30; N 13,30; S 11,93.
NMR (D2Q) 1,44 (3H, d, ; =75), 1,46 (6H, S), 4,48 (1H, d van t, , - 75, 5,5), 5,34 (1H, d, j - 5,5), 6,96 ppm (1H, S).
Voorbeeld 153 (+)-3-Amino-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
A) (+)-4,4-Dimethyl-2-oxo-l-azetidine-tert.butyl- difenylsilan.
20 Een oplossing van 40,5 ml t-butylchloordifenyl- v- silan in 112 ml dimethylformamide wordt tot 0° C afgekoeld. Hierbij voegt men 22 ml triethylamine. Men voegt in 10 min. druppelsgewijze een oplossing van 12,87 g 4,4-dimethy1-2-azetidinon in 25 ml dimethylformamide toe aan de gekoelde triethylamine-oplossing. De ver-25 kregen troebele oplossing wordt 18 uur onder argon bij 5° C geroerd. Het mengsel wordt uitgegoten in 400 ml ijswater en geëxtraheerd met drie porties van 150 ml 2:1 etherzethylacetaat. De gecombineerde' extracten worden gewassen met vier porties van 100 ml 0,5M éénba-sisch kaliumfosfaatbuffer, één portie van 150 ml natriumbicarbonaat-30 oplossing, twee porties van 150 ml water en één portie van 150 ml verzadigde natriumchloride-oplossing. De oplossing wordt op natrium-sulfaat gedroogd en in vacuum geconcentreerd tot 33,03 g in de titel genoemde verbinding als vaste stof.
B) (+)-3-Azido-4,4-dimethy1-2-oxo-l-azetidine-35 tert.butyldifenylsilan.
81 0 0 5 7 1 - 123 - - 123 - ir 4
MenrËiereidt bij -50° C onder argon in een 100 ml driehalskolf een oplossing van'4,25 ml^J.,6M n-butyllithium in hexaan en 11 ml droge tetrahydrofuran. Men voegt een oplossing van 0,083 g trifenylmethaan in 1 ml tetrahydrofuran toe. Men koelt de verkre-5 gen oplossing tot -60° C af en voegt druppelsgewijze met een injectiespuit 1.,0 ml diisopropylamine toe. Men roert 15 min. en koelt dan op -78° C af. Men voegt langzaam met een injectiespuit een oplossing toe van 2,3 g (+)-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidine-t-butyl-difenylsilan in 8 ml tetrahydrofuran. De resulterende oplossing 10 wordt 20 min. bij -78° C geroerd, in welke tijd er zware precipita- tie optreedt en gelijkmatig roeren moeilijk wordt. Men voegt druppelsgewijze een oplossing toe van 1,33 g p-tolueensulfonylazide in 5 ml tetrahydrofuran. Men laat het verkregen mengsel 20 min. bij -78° C onder roeren staan en voegt druppelsgewijze 2 ml trimethylsilyl-15 chloride toe. Het reactiemengsel wordt tot kamertemperatuur opgewarmd en 1 uur geroerd. Daarna wordt het mengsel tot 0° C afgekoeld en uitgegoten in 150 ml ethylacetaat van 0° C. Men voegt voldoende 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatbuffer toe voor het helder maken van zowel de waterlaag als de organische laag. De twee lagen worden 20 gescheiden en de organische laag wordt gewassen met drie porties van 150 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing, één portie van 150 ml natriumchloride-oplossing en één portie van 150 ml verzadigde natriumchloride-oplossing en op natriumsulfaat gedroogd. De oplossing wordt in vacuum geconcentreerd tot 2,83 g olie, die bij aan-25 wrijving met hexaan 1,67 g in de titel genoemde verbinding oplevert als een vaste stof.
C) (+)-3-Azido-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidine.
Men lost in een 50 ml driehalskolf 1,52 g (+)-3-30 azido-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidine-t-butyldifenylsilan op in 25 ml azijnzuumitril. Bij deze oplossing voegt men onder roeren 0,25 ml 48 % fluorwaterstofzuur. Men roert bij kamertemperatuur en voegt elke 60 min. een portie van 0,5 ml 48 % fluorwaterstof toe, totdat, na 6,5 uur in totaal 3,25 ml 48 % fluorwaterstofzuur is 35 toegevoegd. Het reactiemengsel wordt daarna tot 0° C afgekoeld, 81 00 57 1 met verzadigd natriumbicarbonaat geneutraliseerd en met 120 ml ethyl-acetaat geëxtraheerd. De organische laag wordt daarna gewassen met 100 ml water en 100 mlverzadigde nati^umchloride-oplossing en op natriumsulfaat gedroogd. De droge oplöising wordt in vacuum gecon-centreerd tot 1,34 g olie. Deze onzuivere olie wordt gechromatogra-feèrd over 27 g silicagel met hexaan, gevolgd door 33 % ethylacetaat in hexaan, waarbij men 0,358 g in de titel genoemde verbinding als vaste stof verkrijgt.
D) (+)-3-Azido-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
Bij 0,100 g (+)-3-azido-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidine voegt men bij 0° C onder argon 2,8 ml 0,5 M dimethyl-formamide-zwaveltrioxydecomplex. Men laat dit mengsel tot kamer-temperatuur opwarmen en roert 45 min. Daarna wordt de oplossing uitgegoten in 20 ml 0,5 M pH 5,5 éénbasisch kaliumfosfaatbuffer.
Men wast met drie porties van 20 ml methyleenchloride (weggeworpen) en voegt aan de oplossing in water 0,237 g tetrabutylammoniumwater-stofsulfaat toe. Men extraheert met vier porties van 20 ml methyleenchloride en de gecombineerde organische extracten worden met 20 ml 8 % natriumchloride gewassen. De methyleenchloride-oplossing wordt gedroogd (natriumsulfaat) en in vacuum geconcentreerd tot 0,31 g olie, die blijkens nmr 50 % dimethylformamide en 50 % in de titel genoemde verbinding is.
E) (+)-3-Amino-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidine- sulfonzuur.
Men hydrogeneert een oplossing van 0,155 g (+)- 3-azido-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammo-nium in 0,6 mol methanol 20 min. bij 1 atmosfeer boven 10 % palladium op kool. De katalysator wordt afgefiltreerd en met methyleenchloride gespoeld, dat met de methanoloplossing wordt gecombineerd. Deze heldere oplossing wordt behandeld met 0,123 ml 97 % mierenzuur. Bij toevoeging vein het zuur wordt de oplossing onmiddellijk troebel. Na 1 uur staan bij 5° C wordt de vaste stof afgefiltreerd onder 125 verkrijging van 0,066 g in .de titel genoemde verbinding met smelt
Figure NL8100571AD01261
punt 200-202° C (onder ontleding) NMR (D20) 1,64 (3H, S), 1,68 (3H, S), 4,42 (1H, S), IR (KBr) 1765 cm 5 Voorbeeld 154 /~3+ (Z W-3 -f~[_ (2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino) acetyl_/amino_/- 4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Een oplossing van 50 mg N-hydroxybenztriazool- 10 hydraat en 0,323 mmol (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thiazoolazijn-zuur in 0,5 ml dimethylformamide wordt onder argon bij kamertemperatuur behandeld met 67 mg dicyclohexylcarbodiimide. Het verkregen mengsel wordt 1 uur geroerd, waarop men 57 mg (+)-3-amino-4,4-dimethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 153) toevoegt 15 als een vaste stof, gevolgd door druppelsgewijze toevoeging van 0,05 ml triethylamine. Men roert de reactie 16 uur bij kamertemperatuur. Het dimethylformamide wordt onder hoog vacuum bij 30° C verwijderd en het residu wordt met 4 ml aceton tot brij vermengd en gefiltreerd. De filterkoek wordt met nog 4 ml aceton gewassen 20 en men voegt bij het filtraat 85 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat gevolgd door ether. Aanwrijven van de resulterende gom met ether levert 40 mg taankleurige vaste stof op, die men chromatografeert over een 70 ml HP-20AG kolom. Eluering met water levert 20 mg in de titel genoemde verbinding op in fracties 16-40 (5 ml) na af-25 damping, aanwrijving met 1:1 aceton-hexaan en droging. Smeltpunt 225° C (onder ontleding).
Analyse berekend voor C^jH^^N^OgS^K
Gevonden: C 31,80; H 3,40,- N 16,86; S 15,43; C 29,47; H 3,48; N 14,98; S 13,35.
30 Voorbeeld 155 (+)-4,4-Dimethyl-2-oxo-3-/ (fenylacetyl)amino__/-l-azetidinesulf onzuur, kaliumzout.
Men behandelt een oplossing van 45 mg N-hydroxy- 35 benztriazool hydraat en 40 mg fenylazijnzuur in 0,5 ml dimethyl- 81 00 57 1 < * - 126 - 5 formamide onder argon bij kamertemperatuur met 61 mg dicyclohexyl- carbodiimide. Het resulterende mengsel wordt 1 uur geroerd en men jm*....... voegt 52 mg (+)-3-amino-4,4-dimethyl-%oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 153) toe als eerrvasterïtof, gevolgd door druppelsgewijze toevoeging van 0,04 ml’ triethylamine. De reactie wordt 24 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het dimethylformamide wordt onder hoog vacuum bij 30° C verwijderd en het residu wordt met aceton tot brij vermengd en gefiltreerd. Men voegt bij het filtraat kaliumperfluorbutaansulfonaat, voegt ether toe en koelt het mengsel. 10 De resulterende vaste stof wordt gewassen met aceton en hexaan en gedroogd onder oplevering van de in de titel genoemde verbinding als een poeder. (/) Analyse berekend voor ci3Hi5N2°5SK: C 44,55,· H 4,32; N 8,00; S 9,15; K 11,16; 15 Gevonden: C 43,83; H 4,16; N 7,96; S 8,76; K 11,43. NMR (D2Q) 1,33 (S, 3H), 1,58 (S, 3H), 3,68 (S, 3H), 4,70 (S, 1H), 7,56 ppm (breed S, 5H). 20 Voorbeeld 156. (3S-trans)-3-/_ /_ (2-Amino-4-thiazolyl)oxoacetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-1-aze tidinesulfonzuur, kaliumzout. r~> 25 O Bij een oplossing van 1,85 g difenylfosfinyl-chloride in 15 ml droog dimethylformamide, afgekoeld in een ijs-methanol bad (-15 tot -20° C) voegt men 2,14 g (2-amino-4-thiazolyl) glyoxylzuur, triethylaminezout, Na 0,5 uur roeren voegt men een oplossing van 1,08 g (3S-trans)-3-araino-4-methyl-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur (zie voorbeeld 139) en 1,92 ml triethylamine in 5 ml droog dimethylformamide toe aan de koude, gemengd anhydride-oplos-sing en roert het reactiemengsel 24 uur bij 5° C. Men verwijdert 30 het oplosmiddel in vacuum, lost de resterende donkere olie in water op en chromatografeert over 200 ml Dowex 50 X 2-400 hars (K+ vorm). Bij eluering met water (fracties van 15 ml) wordt het ruwe produkt opgevangen in fracties 13-27 (3,37 g). Chromatografie over 200 ml HP-20 hars en eluering met water (fracties van 15 ml) levert het 35 gewenste produkt op in fracties 18-25. Verwijdering van water in 8100571 4 * - 127 - vacuum levert de in de titel genoemde verbinding op als een amorf poeder.
•aisar-·,,.
Analyse berekend voor CgH^N^OgS^K (37^42): C 29,02; Η Τ,44} 1^5,04; S 17,22; K 10,50; Gevonden: C 28,87; H 2,62; N 14,85; S 15,09; K 10,81.
- Mr
Voorbeeld 157 £ 3S(RX) /-3V / /_ (Aminoacetyl) amino__/fenylacetyl_/amino_/-2-oxo-1-azetidinesulf onzuur, kaliumzout trifluoracetaat (1:1).
Deprotectie van / 3S (RX)_/-3-/ ////.//. (4-methoxyfenyl) me thoxy_/carbonyl__/amino__/acety l__/amino__/fenylacety 1_/-amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 127) onder gebruikmaking van trifluorazijnzuur en anisool levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 165° C, onder ontleding.
Voorbeeld 158 (3S-trans-) -3-Methoxy-4-methyl-2-oxo-3-/ f_ (fenylmethoxy) carbonyl_/-amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
A) (3S-trans)-4-Methyl-3-methoxy-2-oxo-4-/_/ (fenylmethoxy) carbonyl /amino /azetidine.
Men koelt een oplossing van 2,5 g of 0,0106 mol (3R-trans) -4-methyl-2-oxo-3-/ / (fenylmethoxy) carbonyl_/amino__/-azetidine (bereid uit d-treonine met 12,6 % opbrengst, in wezen als beschreven voor het racemische cis-isomeer in voorbeeld 98C) in 112 ml 4 % borax in methanol tot 0° C af en voegt 3,0 ml t-butyl-hypochloriet toe. Na 20 min. wordt de oplossing uitgegoten in 1 1 koud water en geëxtraheerd met twee porties van 750 ml koud ethyl-acetaat. De organische laag wordt gewassen met koud water (twee porties van 750 ml), verzadigde zoutoplossing, gedroogd en afge-dampt tot 3,05 g ruw N,N*-dichlooramide.
Een oplossing van 426 mg lithiummethanolaat in 20 ml droge methanol wordt tot -78° C afgekoeld en verdund met 40 ml droog tetrahydrof tiran. Men voegt via een injectiespuit in verloop 00 57 1 - 128 - %. -x van 30 sec. bij -78° C een oplossing toe van bovengenoemd chloor-amide in 20 ml tetrahydrofuran. Na 20 min. bij -78° C voegt men 2 ml azijnzuur en ,2 ml trimethylfosf||rt toe. Na 40 min. bij kamertemperatuur giet men de oplossing uit in 500 ml water en extraheert 5 met twee porties van 300 mlgathvlacetaat. De organische laag wordt gewassen met water, gedroogd en afgedampt tot een olie. Chromato-grafie over een 200 ml silicagelkolom en eluering met 3 s1 chloroform sethylacetaat levert in totaal 1,25 g in de titel genoemde verbinding op.
10 r ' b) (3s-trans) -3-Methoxy-4-methyl-2-oxo-3-/ /_ (fe- nylmethoxy)carbonyl /amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Q
Men koelt een oplossing van 800 mg of 0,00303 mol (3S-trans-)-4-methy1-3-methoxy-2-oxo-4-/_{_ (fenylmethoxy)-15 carbonyl_/amino_/azetidine in 2 ml dimethylformamide tot 0° C af en voegt 4 ml dimethylformamide-zwaveltrioxydecomplex toe. Na 1 uur bij 0° C en 4 uur bij kamertemperatuur giet men de oplossing uit in 80 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat (ingesteld op pH 5,5) en extraheert met methyleenchloride (twee porties van 50 ml die 20 men wegwerpt). De waterlaag wordt behandeld met 1,04 g tetrabutyl- ammoniumsulfaat en geëxtraheerd met dichloormethaan onder verkrijging van 1,42 g olie. Deze wordt in aceton opgelost en behandeld met 1,04 g kaliumperfluorbutaansulfonaat in 10 ml aceton. Verdunning met 250 ml ether en extensieve aanwrijving van de olie-achtige 25 vaste stof levert 584 mg ruw produkt op. Chromatografie over 200 ml HP-20AG levert 418 mg gezuiverd produkt op in fracties 13-16 (100 ml) eluering met 1 1 water en daarna met 9:1 water-aceton. Aanwrijving van 114 rag van dit materiaal met ether levert 104 mg analytisch monster op.
30 Analyse berekend voor H14N207SK.H20: C 39,06; H 4,04; N 7,01; S 8,03; K 9,78.
Gevonden: C 38,91; H 3,62; N 6,91; S 8,06; K 9,51.
NMR (D20) 1,33 (3H, d, j =7), 3,46 (3H, S), 4,22 (2H, d van d, j =6), 5,18 (2H, S), 7,43 ppm (5H, S).
-35 8 1 0 0 57 1 * - 129 -
Voorbeeld 159 (3-S-trans)-3-Methoxy-4-methyl-2-oxo-3-/ (fenylacetyl)amino_/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. -¾
Men bereidt (3S-trans)-3-amino-3-methoxy-4-methy 1-2-oxo-1-azetidinesulf onzuur, tetrabutylammoniumzout door katalytische hydrogenering van (3S-trans) -3-methoxy-4-methyl-2-oxo-3-/_ /_ (fe-nylmethoxy) carbonyl_/amino_/-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 158) na omzetting in het tetrabutylammoniumzout. Volgens de werkwijze van voorbeeld 88, maar onder gebruikmaking van (3S-trans)-3-amino-3-methoxy-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfon-zuur, tetrabutylammoniumzout en fenylacetylchloride verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding.
Analyse berekend voor C^H^^OgSKs C 42,61? H 4,31? N 7,65?
Gevonden: C 39,67? H 4,09? N 7,30.
NMR (D2Q) 1,29 (BH, d, j » 7), 3,45 (3H, S), 3,73 (2H, S), 4,36 (2H, d van d, j =6), 7,38 ppm (5H, S).
Voorbeeld 160 /_ 3S-/ 3α(Z) ,4β_/_/-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl)/_ / 2-(difenyl-methoxy) -2-oxoethoxy__/imino_/acetyl__/ amino_/-2-methyl-4-oxo-l-aze-tidinesulf onzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 138 volgt, maar (Z)-2-amino-aV / 2-(difenylmethoxy)-2-oxoethoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-(methoxyimi-no)-4-thiazoolazijnzuur en eerst het (3S-cis)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur met triethylamine behandelt verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 155-160° C, onder ontleding.
Voorbeeld 161 / 3S-/ 3α(Z),4β_Τ_/-3-/_ / (Carboxymethoxy)imino_/ (2-amino-4-thia zolyl) acetyl 7amino__/-4-methy1-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, dikalium-zout.
*; * - 130 - 5
Figure NL8100571AD01311
10 15 20 25 30
Deprotectie van (_ 3S-/ 3α (Z) ,48_/_/-3-/ / (2-amino-4-thiazolyl)/< / 2- (difenylmethqxy) -2-oxoethoxy_/imino_/-acetyl__/amino /-2-methyl-4-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 160) onder .gebruikmaking van trifluorazijnzuur en anisool levert de in de titel genoemde verbinding op, die ontleedt bij > 250° C. Voorbeeld 162 (S) -3-/_ /_ £ (2,6-Dichloor-4-pyridinyl) thio_/acetyl__/amino_/-2-oxo-1 -azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Acylering van (S)-3-amino-2-oxo-l-azetidinesul-fonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie voorbeeld 6A) met /_ (2,6-di-chloor-4-pyridinyl)thio_/azijnzuur, 4-nitrofenylester, gevolgd door behandeling met kaliumperfluorbutaansulfonaat, levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 212-214° C. Voorbeeld 163 (_ 3S(RX)__/-3“/.//./. (4-Amino-2,3-dioxo-l-piperazinyl)-carbonyl__/-amino_/fenylacetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout. Wanneer men /_ 3S (RX)_/-/ 4-/_ / f_ 2-(_ (4-methyl-2-oxo-1-sulfo-3-azetidinyl)amino_/-2-oxo-l-fenylethyl_/amino__/-carbonyl__/-2,3-dioxo-1 -piperaziny 1__/carbaminezuur, fenylraethylester, kaliumzout (zie voorbeeld 149) hydrogeneert met waterstofgas en 10 % palladium op kool als katalysator, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 165° C, onder ontleding. Voorbeeld 164 / 3S(Z)__/-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl)/^ (1-carboxy-l-methylethoxy)-imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, natriumzout (1:2).
Wanneer men (_ 3S (Z)_/-3-/ /_ (2-amino-4-thiazolyl)-/ (_ 2- (difenylraethoxy)-1 ,l-dimethyl-2-oxo-ethoxy__/imino__/acetyl_/-amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout (zie 35 voorbeeld 28) deprotegeert onder gebruikmaking van trifluorazijnzuur 81 0057 i » - 131 - en anisool verkrijgt men de.in de titel genoemde verbinding met O — ',*f smeltpunt 185 C, onder ontledingt--naromzetting in het dinatrium- - »***.’ - — zout met waterig natriumhydroxyde en zuivering over HP-20. Voorbeelden 165-168 — 5 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 11 volgt, maar een in kolom I van onderstaande tabel opgegeven zuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino ~a-/_ {_ hydroxy(fenylmethoxy)fosfinyl_/-methoxy_/imino /-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de overeenkomstige in kolom II opgegeven verbinding.
10 81 0057 1 132 8 Ρ f i ,7* K.H gj o a e «o is ρ ~ 3 H O >1 N o e N P C H O rH Λ fÖ & ï* ' o 5 c Ή * Ό P (1) . P H Φ P P S N β •H C O Ό O I P p (£ Η Φ « P Ό (N 1/1 β ,'·' φ o 1 . β ν,Ι-Η ·> I Ό U co ·γ) I 4JO φ ο Ui Ν 00 — <β »-ι 1 Ή •Η Ρ Ό Ο ^ Ν I , I § rhl ιν&1 \Ιρ χ _ φ ϋ> Η U ' β >ι id Ρ Η Η|\ Ρ Ό ο 3 φ Ν Ο Ν Γ-Ι id β β Ρ •Η ·Η Ο β Λ S Ή Ο Ρ,Η Η IV3 Ρ V I 0) Φ I >ι Φ Ό Ο X fi Ü β Ο -Η Ο Η Ρ Ό Β 3 ·Η -(Ö Λ Ρ U I Ο Φ (Ν X NO Ο Φ Ο I ,ι ι « ,-νΙ’ϋ’ «Η *Η Ι.ι>ι \1^ ο ιη t >1 κ οι Μ X Ο Η ,ιοι cm Ρ |ρ, · c Λ Sl\3 Ν S JQ, "-HOP W >ι β Η .η ö -η Φ kj« § ϊ a ? •Η I Ό , I β Φ Ο Η 1·ρ ρ ι—i Η Ν 3 β UJ Ο Φ Λ β -Ρ Η Ό » Ό β ϋ Η Ο -Ρ Ntl ‘ Ss Ν U Ο Φ Α I Ο Ρ ι-· ΙΛ φ, I - SK.^ Η |ro >ι 0 CM β β , φ Η Ρ <n ε β I Ν, H-'s l'H&S Va Β CM φ * If,! Λ J? Β I Ρ Η S i 5 ?‘V CM Ο ι β Η ui a 8 Ρ φ Ρ 3 3 Ν
I —; •Ρ I Ν HP id 3 Φ Ρ, ι Μ;Ό φ -V φ .β ft Ι-Ρ*** Ή Η Ή ft >ιΌ * I β Η Ο Η Ο +1 I Λ ΦΟ Η Ρ Ν Ο >ι id <ΰ Γ" 8, Ο I CM Phv.^H ι ο ι m <P H O Vfl I >1 κ CM <a· ι o — VO I I I CM N fi, I s I TlK ft >ιΌ P κ η ο h p a β φ Ρ Η ·Η B Ό P 8 tn >i ><, « Cl Qj'S. TKJtj h 3 I fl >i o ,xl ι -p n ,η Φ a * u 3 I .cm id n ,\I Η H i ,>! >1 « 1 ,Ό Φ Dl Vj-P IP - C I P \, P H co >i 1 3 Ό I ft 0 3 Φ ffi λ β Ν H Ui Η Η β P η >i a ο β " β ld IH O
-Ρ β 3
P ï N >Φ O N β Φ £ 5? o 5 φ a •H o ( vo CM
. 1 U • K, 3 Φ ,1 3 <W >i N rj κ c Ό 0 ·η « ·Ρ Tl I 3 N .Μ1 Λ ld , I H NO O ,κ o slo n ι ι id Ö Mil H ι I A 0 P •5 1 v «l CM φ O ι a β Η τΗ n >, a w fi *H
I 0 I Λ !Φ P O id Ν Ο β *·<* α) &ν« ο ι Α Η Ρ >ι Φ A 1¾ Sl-ί, « ο1 ,'- β f 0¾ 1 >ι 3 CM β Ν 1 . * &ΚΙ fifi-L 0 co | lp « H 1 ,CN >, P ^ iS 3- w "v.1 o 1 2 -9 CM Ό P I Ή ld η >1 P, O H S ^Nlïï p ft -12 P *“» Η β Ό H >i Φ >1 >t I Λ β VO I Η I .lil Η Β I , id η,_ Ρ Ό V. ,0)·Η ,\Ι ft Β ο 1 ,Η Η β νΡΪ,Ι ö -ι ft id 3 Ν β Φ Ν β Φ ,Λ 2 ω φ ιΛ Ό r- φ U3 VO νο νο fl 0 :> Η Η Η 81 0 0 57 1 (transl)-3-Amino-4-ethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
4 -* - 133 -
Voorbeeld 169
Figure NL8100571AD01341
A) t-Boc-N-methy1-g-treoethylserinamide.
Men lost 1,33 g treo-D-L-g-ethylserine op in 10 ml 2N kaliumhydroxyde en 5 ml t-butanol. Na toevoeging van 2,46 g di-t-butylpyrocarbonaat aan het tweefasige mengsel roert men 4 uur bij kamertemperatuur. Men voegt 1,25 g O-methylhydroxylammonium-10 chloride toe en stelt de pH in op 4 met IN zoutzuur. Men voegt 1,92 g l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride toe en stelt de pH weer in op 4. Na 1 uur roeren wordt het reactiemeng-sel met natriumchloride verzadigd en geëxtraheerd met vier porties van 50 ml ethylacetaat. De ethylacetaatextracten worden gecombineerd 15 en op MgSO^ gedroogd. Verwijdering van het oplosmiddel in vacuum levert 1 g in de titel genoemde verbinding op.
B) t-Boc-O-methaansulfonyl-N-methoxy-g-treo- propionamide.
•20 Men lost 10,5 g t-Boc-N-methoxy-g-treoethyl serinamide op in 65 ml pyridine. Men voegt druppelsgewijze bij 0° C 4,65 ml methaansulfonylchloride toe. Na 3 uur roeren bij kamertemperatuur wordt het reactiemengsel uitgegoten in 200 g ijs en 300 ml IN zoutzuur. De pH wordt met geconcentreerd zoutzuur op 25 4 ingesteld. Na extractie met drie porties van 85 ml ethylacetaat worden de gecombineerde extracten gedroogd op MgSO^ en in vacuum geconcentreerd. Het residu wordt met tetrachloorkoolstof behandeld en opnieuw geconcentreerd. Roeren met ether, gevolgd door filtreren levert 6,9 g in de titel genoemde verbinding op.
30 C) (trans)~3-t-Butoxycarbonylamino-4-ethyl-l- methoxy-2-azetidinon.
Men verwarmt 4,15 g watervrij kaliumcarbonaat en 125 ml droge aceton aan een terugvloeikoeler en voegt 3,4 g t-boc-35 O-methaansulfonyl-N-methoxy-g-treopropionamide in 25 ml aceton toe.
8100571 - 134 -
Na 1 uur wordt het reactiemengsel afgekoeld en gefiltreerd en het filtraat in vacuum geconcentreerd. Het olie-achtige overblijfsel wordt met hexaan geroerd tot _2,2 g. ij||de titel genoemde verbinding.
D) (trans)-3-t-Butoxycarbonylamino-4-ethyl-2- azetidinon.
Men voegt bij -78 C onder stikstof 3 g (trans)-3-t-butoxycarbonylamino-4-ethy1-1-methoxy-2-azetidinon toe aan 170 ml vloeibare ammoniak en voegt in een periode van 5 min. 1,68 g 10 natrium onder roeren in vijf porties toe. Men zet het roeren nog c 30 min. voort. Daarna voegt men langzaam ammoniumchloride toe, totdat de blauwe kleur van het reactiemengsel verdwijnt. Na verwijdering van de ammoniak onder stikstof extraheert men de vaste stof met twee porties van 100 ml ethylacetaat. Verwijdering van het 15 oplosmiddel, gevolgd door drogen in vacuum, levert 2,7 g in de titel genoemde verbinding op.
E) (trans)-3-t-Butoxycarbonylamino-4-ethyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
20 Bij 2 ml absolute pyridine in 20 ml droog di- chloormethaan voegt men 3,7 ml trimethylsilylsulfonylchloride in 5 ml droog dichloormethaan, De toevoeging geschiedt over een periode van 10 min. onder stikstof bij -30° C. Na 30 min. roeren bij kamertemperatuur brengt men de kolf onder vacuum ter verkrijging van een 25 pyridine-zwaveltrioxydecomplex. Men brengt 2,67 g (trans-)-3-t- butoxycarbonylamino-4-ethyl-2-azetidinon en 20 ml droge pyridine in de kolf, die men daarna in een op 90° C voorverhit oliebad plaatst. Na 15 min. is een heldere oplossing verkregen, die men uitgiet in 200 ml 1M oplossing van dibasisch kaliumfosfaat. Na toevoeging van 30 27 g dibasisch kaliumfosfaat en 100 ml water is een heldere oplos sing verkregen. De oplossing wordt geëxtraheerd met twee porties van 60 ml ethylacetaat. Men voegt aan de waterlaag tetrabutylammonium-waterstofsulfaat toe en extraheert de oplossing in water met drie porties van 100 ml dichloormethaan en droogt de gecombineerde orga-35 nische lagen op MgSO^. Concentratie in vacuum levert 6,9 g in de 81 00 57 1
St * - 135 - titel genoemde verbinding op.
F.) (tran3-3-Amino-4-ethyl-2-oxo-l-azetidinesul t * f onzuur..
5 Men roert 6,75 g (trans)-3-t-butoxycarbonylamino- 4-ethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout in 40 ml 98 % mierenzuur 3 uur bij kamertemperatuur. Men voegt 60 ml di-chloormethaan toe en koelt het mengsel 16 uur af in een koelkast.
Het resulterende precipitant wordt afgefiltreerd en daarna in 10 vacuum gedroogd tot 0,85 g in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 185° C, onder ontleding.
Voorbeeld 170 (trans,Z)-3-/ / (2-Amino-4-thiazoly 1){_ (1-carboxy-l-methylethoxy)-imino_/acetyl_/amino_/-4-ethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, dika-15 liumzout.
A) (trans,Z)-3-/_ [_ (2-Amino-4-thiazolyl)/_ (1-difenylmethoxycarbonyl-l-methylethoxy)imino_/acetyl__/ amino_/-4-ethyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, dikaliumzout.
20 25 30 35
Men lost 0,55 g (trans)-3-amino-4-ethy1-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, en 335 mg triethylamine op in 50 ml droog dimethylformamide. Men voegt onder roeren bij 0° C, 1,14 g (Z)-2-amino-a-/ (1 -difenylmethoxycarbonyl-1 -methylethoxy) imino__/-4-thiazoolazijnzuur toe, gevolgd door 450 mg hydroxybenztriazool en daarna 0,69 g dicyclohexylcarbodiimide. Na 16 uur roeren bij 0° C brengt men de kolf onder vacuum. Men voegt onder roeren 25 ml droge aceton aan de vaste stof toe. Men filtreert het mengsel en voegt aan het filtraat 0,94 g kaliumperfluorbutaansulfonaat toe, gevolgd door 100 ml ether. Na 1 uur staan bij 0° C wordt de vaste stof afgefiltreerd, gewassen met ether en in vacuum gedroogd onder verkrijging van 1,58 g in de titel genoemde verbinding.
B) (trans,Z)-3-£ / (Z-Amino^-thiazolyl)/^ (1-carboxy-1-methylethoxy)imino_/acetyl_/amino__/-4-ethyl-2-oxo-l-azetidine sulfonzuur, dikaliumzout.
81 00 57 1 - 136 - 5 Bij een suspensie van 1,31 g (trans,Z)-3-/ / (2-amino-4-thiazolyl) /_ (1-difenylmethoxycarbonyl-l-methylethoxy)iraino_/-acetyl /amino /-4-ethyl-2-oxó^l^azeiIdinesulfonzuur, dikaliumzout in 10 ml anisool voegt men'in een periode van 10 min, bij -15° C 5 ral trifluorazijnzuur. Na*2 uur roeren bij -10° C verkrijgt men een heldere oplossing. Men voegt bij -30° C 80 ml droge ether toe en filtreert het resulterende precipitaat en behandelt het daarna met 5 ml water. De pH wordt bij 0° C met IN kaliumhydroxyde op 5,5 ingesteld en het mengsel wordt gefiltreerd ter verwijdering van 10 onomgezette uitgangsstof. Het filtraat wordt gechromatografeerd over HP-20 met water als elueermiddel. Vriesdrogen levert 185 mg in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 160° C onder ontleding. Voorbeeld 171. 15 />(Z)J-3-/ / (2-Amino-4-.thiazolyl)/ (4-hydroxy-4-oxobutoxy)-imino_/acetyl__/amino__/-2-oxo-l-azetidi. esulfonzuur, kaliumzout. 20 Deprotectie van / 3S(Z)_/-3-V / (2-amino-4-thiazolyl)/ / 4-(difenylmethoxy)-4-oxobutoxy_/imino_/acetyl_/-amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 166) onder gebruikmaking van trifluorazijnzuur en anisool levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt >200° C. Voorbeeld 172 (S)-3-/_ £ 2-(Aminomethyl)benzoyl__/araino_/-2-oxo-l-azetidinesulfon- U 25 zuur, inwendig zout. 30 Deptrotectie van (S)-2-oxo-3-V /_ 2-/ /_ /_ (fenyl- methoxy) carbonyl_/amino_/methyl_/benzoyl_/amino__/-l-azetidinesul-fonzuur, kaliumzout onder gebruikmaking van waterstofgas, palladium op kool en zoutzuur levert de in de titel genoemde verbinding op met smeltpunt 162-165° C. Voorbeeld 173 (S)-3-/ / / 2-(4-Formyl-l-piperazinyl)-5-hydroxypyrido/_ 2,3-d__/pyri-midin-6-yl /carbonyl_/amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kalium- 35 zout.
8 i O O 5 7 1 '« * - 137 - (S)-3-Amino-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, tetra-butylammoniumzout (zie voorbeeld 6jp wordt gekoppeld met 2— (4— formyl-1-piperazinyl)-5-hydroxy-6-/_ (4-nitrofenoxy)carbonyl_/~ pyrido/”"2,3-d Tpyriraidine^an behandeld met kaliumperfluorbutaan-5 sulfonaat in aceton onder verkrijging van de in de titel genoemde verbinding met sneltpunt 290° C, onder ontleding.
Voorbeeld 174 (3S,trans)-a-/ (_ (4-Methyl-2-oxo-l-sulfo-3-azetidinyl)amino_/car-bonyl_/benzeenazijnzuur, dikaliumzout.
10 (3S-trans)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur (zie voorbeeld 139) wordt gekoppeld met a-(carboxyl)-benzeenacetylchloride en behandeld met triethylamine en kalium-perfluorbutaansulfonaat onder verkrijging van de in de titel 15 genoemde verbinding met smeltpunt 147° C, onder ontleding. Voorbeeld 175 /_ 3S-trans 7-3-Amino-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
A) a-(t-Butoxycarbonylamino)-6-cyclohexyl-3-20 hydroxy-treopropionzutir.
Men suspendeert 15 g B-cyclohexyl-a-amino-β-hydroxytreopropionzuur in 150 ml azijnzuurriitril en 70 ml water. Men voegt 17,8 g triethylamine toe en verwarmt het mengsel onder 25 roeren op 60° C. Bij deze temperatuur verkrijgt men een heldere oplossing en men voegt 21,0 g di-t-butylpyrocarbonaat toe en zet het roeren bij 60° C 1,5 uur voort. Men verwijdert het oplosmiddel in vacuum en voegt 50 ml water toe. De waterlaag wordt geëxtraheerd met ethylacetaat bij pH 2, die men instelt door toevoeging 30 van 3N HC1. De organische laag wordt afgescheiden, gedroogd op Na2S04 en drooggedampt. Het resterende kristallijne materiaal wordt gefiltreerd met petroleumether, waarbij men 20,4 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 113-115° C.
B) a- (t-Butoxycarbonylamino) -f5-cyclohexyl-3-35 hydroxy-N-methoxy-treopropionamide.
81 00 57 1 - 138 -
Men suspendeert 20,2 g α-(t-butoxycarbonylaini.no)- 8-cyclohexyl-8-hydroxytreppropionzuur en 7,6 g O-methylhydroxyamine-hydrochloride in 350 ml water lap.,* 171Pml t-butanol. De pH van het mengsel wordt met kaliumcarbonaat ingesteld op 4. Men voegt 16,4 g 5 l-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide toe en houdt de pH onder roeren 1,5 uur op 4. Men verwijdert t-butanol in vacuum en verzadigt de resterende oplossing in water met natriumchloride en extraheert twee maal met porties van 100 ml ethylacetaat. De organische lagen worden gecombineerd, gedroogd op Na£>0^ en droogge-10 dampt. De resterende kristallen worden afgefiltreerd met petroleum-ether, waarbij men 18,6 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunt 125-127° C.
C) a-(t-Butoxycarbonylamino)-β-cyclohexyl-B-(methaansulfonyloxy)-N-methoxy-treopropionamide.
15
Men lost 18,3 g a-(t-butoxycarbonylamino)-6-cyclohexyl-B-hydroxy-N-methoxytreopropionamide onder roeren op in 100 ml droge pyridine. De oplossing wordt onder roeren tot 0° C ' af gekoeld en men druppelt 9,3 g methaansulfonylchloride bij. Na 20 1 uur voegt men bij 0° C nog 3,3 g methaansulfonylchloride toe en zet het roeren nog een uur voort. Men giet de oplossing uit in 300 ml ijswater, voegt 200 ml ethylacetaat toe en stelt de pH met verdund zoutzuur in op 3. De organische laag wordt afgescheiden, op Na^SO^ gedroogd en het oplosmiddel wordt verwijderd in vacuum.
25 De resterende vaste stof wordt met petroleumether gewonnen onder verkrijging van 19,0 g in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 150·Ί52ο C.
D) /"*3S-trans_/-3-(t-Butoxycarbonylamino)-4-cyclohexyl-l-methoxy-2-azetidinon, 30
Men lost 18,7 g cx-(t-butoxycarbonylamino)-$-cylochexyl-β-(methaansulfonyloxy)-N-methoxytreopropionamide op in 500 ml droge aceton. Men voegt 9,8 g kaliumcarbonaat toe en verwarmt de suspensie 5 uur onder roeren aan een terugvloeikoeler.
35 Men filtreert het onoplosbare, anorganische materiaal af en 81 00 57 1 - 139 - verwijdert het oplosmiddel in vacuum en lost de resterende olie op in 30 ml ethylacetaat. Bij toevoeging van petroleumether precipiteert de in de titel genoemde verbÏQcling, die men af filtreert. Op- • . · q brengst 12,9 g met smeltpunt 110-112 C.
5 E) /_ 3§^trans_/-3- (t-Butoxycarbonylamino) -4-cyclo- hexyl-2-azetidinon.
Men voegt onder roeren 1 g / 3S-trans_/-3-(t-butoxycarbonylamino)-4-cyclohexyl-1-methoxy-2-aze tidinon toe aan 10 50 ml vloeibare ammoniak. Men voegt in 5 min. 0,154 g natrium toe in vijf tot zes porties. Daarna voegt men nog een hoeveelheid van 0,025 g natrium toe en zet het roeren nog 5 min. voort. Men voegt 0,89 g ammoniumchloride toe en verwijdert de ammoniak. Het residu wordt met warm ethylacetaat geëxtraheerd. Het organische extract 15 wordt drooggedampt en de resterende kristallen van de in de titel genoemde verbinding worden met petroleumether afgefiltreerd. Opbrengst 0,5 g met smeltpunt 130-132° C.
F) / 3S-trans_/-3-(t-Butoxycarbonylamino)-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, pyridinezout.
20 5,3 g / 3S-trans_/-3-(t-Butoxycarbonylamino)-4-cyclohexyl-2-azetidinon wordt opgelost in 20 ml methyleenchioride en 80 ml dimethylformamide. Na toevoeging van 60 mmol pyridine-zwaveltrioxydecomplex wordt de oplossing 6 uur bij kamertemperatuur 25 geroerd. Verwijdering van het oplosmiddel in vacuum levert 11,3 g in de titel genoemde verbinding op als een olie.
G) / 3S-trans__/-3- (t-Butoxycarbonylamino) -4-cyclohexy1-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
30 Men lost 11,3 g £ 3S-trans_/-3-(t-butoxycarbonyl- amino)-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, pyridinezout op in 250 ml water. Men voegt onder roeren 9,0 g tetrabutylammoniumwater-stofsulfaat toe en stelt de pH met IN kaliumhydroxyde in op 6,5.
De waterige oplossing wordt twee maal geëxtraheerd met porties van 35 200 ml methyleenchloride. De organische porties worden gedroogd op 81 0 0 57 1 140
Na2SO^, gefiltreerd en het oplosmiddel wordt afgedestilleerd onder verkrijging van·8 g in de titel.genoemde verbinding met smeltpunt 135-138° C.
H) [_ 3S-trans_/-3-Amino-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
10 Θ
Men roert 3,8 g / 3S-trans_/-3-(t-butoxycarbonyl-amino)-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur tetrabutylammonium-zout 3 uur in 20 ml mierenzuur, gevolgd door toevoeging van 20 ml methyleenchloride. De geprecipiteerde in de titel genoemde verbinding (1,0 g) wordt afgefiltreerd. Smeltpunt 217-219° C.
Voorbeeld 176 £ 3SV 3α(Ζ),4β_/ /-3-/_ [_ (2-Amino-4-thiazolyl)fnethoxyimino)acetyl__/-amino /-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
15
Men lost 0,25 g / 3S-trans__/-3-amino-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur onder roeren Op in 30 ml droog dime-thylformamide en 0,12 g triethylamine. Als men een heldere oplossing heeft verkregen voegt men 0,2 g (Z)-2-amino-a~(methoxyimino)- 20 25 4-thiazoolazijnzuur, 0,16 g hydroxybenztriazool en 0,42 g dicyclo-hexylcarbodiimide toe. Men zet het roeren nog 48 uur bij kamertemperatuur voort, De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd. Het residu wordt opgelost in 10 ml aceton en men voegt 0,41 g kaliumperfluorbutaansulfo-naat toe. Na toevoeging van 50 ml ether precipiteert de in de titel genoemde verbinding, die men affiltreert. Kolomchromatografie onder gebruikmaking van HP-20 en water/aceton (9:1) als elueermid-del levert 0,36 g produkt op met smeltpunt 200-205° C (na vriesdrogen) .
30
Voorbeeld 177 f_ 3S-/_ 3α(Z) ,43__/_/-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl)/ (1-carboxy-l-me-thylethoxy) imino__/ ace ty 1__/ amino__/-4-cyclohexyl-2-oxo- 1-azetidine-sulfonzuur, dikaliumzout.
35 81 00 57 1 *- « - 141 - A) / 3S-/ 3α (Z), 4β__/__/-3-Υ /_ (2-Amino-4-thiazo- lyl)/ (1-difenylmethoxycarbonyl-l-methylethoxy) imino /acetyl /- _ ·=· ““ 1 amino /-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetieËnesulfonzuur, kaliumzout.
5 Men lo3€ 0,2 g / 3S-trans_/-3-amino-4-cyclohexyl- 2-oxo-1-azetidinesulf onzuur (zie voorbeeld 175) onder roeren op in 30 ml dimethylformamide en 0,09 g triethylamine. Men voegt 0,12 g hydroxybenztriazool, 0,3 g (Z)-2-amino-a-/_ (1-difenylmethoxycarbo-nyl-l-methylethoxy)imino_/-4-thiazoolazijnzuur en 0,33 g dicyclo-10 hexylcarbodiimide toe en zet het roeren bij kamertemperatuur nog 12 uur voort. De geprecipiteerde ureum wordt afgefiltreerd en de moederloog drooggedampt. De resterende olie wordt in 5 ml aceton opgelost, behandeld met 0,3 g kaliumperfluorbutaansulfonaat en onder roeren uitgegoten in 100 ml ether. Er precipiteert 0,61 g 15 / 3S-/ 3α(Ζ) ,4β__/_/-3-/ / (2-amino-4-thiazolyl)-/ (1-difenylmethoxy- carbonyl-l-methylethoxy)imino__/acetyl_/amino_/-4-cyclohexyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout, dat men affiltreert.
B) Γ3S-/~3α (Z), (2-Amino-4-thiazo- lyl) (_ (1 -carboxy-1 -methylethoxy) imino__/acetyl__/amino__/-4-cyclo-20 hexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, dikaliumzout.
Men suspendeert 0,61 g / 3S-/_ 3α(Z) ,43_/__/-3-/_ /_ (2-amino-4-thiazolyl) -/_ (1-difenylmethoxycarbony 1-1-methy 1-ethoxy) imino_/acetyl_/ amino_/-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesul-25 fonzuur, kaliumzout in 6 ml anisool, die tot -15° C is afgekoeld en druppelt onder roeren 5 ml trifluorazijnzuur in. Men houdt de temperatuur 1 uur aan en verlaagt haar daarna tot -30° C. Men voegt 100 ml droge ether met zodanige snelheid toe, dat de temperatuur niet boven -10° C komt. De geprecipiteerde verbinding wordt 30 afgefiltreerd en gechromatografeerd onder gebruikmaking van HP-20 hars en water/aceton (9:1) als elueermiddel, onder verkrijging van 3,0 g in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 117-120° C, onder ontleding, (na vriesdrogen).
35 81 00 57 1 έ - 142 -
Voorbeeld 178 .
[_ 3S-/ 3α,43_/_/-4-Cyclohexy / / 3-/ (2-furanylmethyleen)- amino_/-2-oxo-l-imidazolidinyl_/carbonyl_/amino__/fenylacetyl__/ amino 7-2-oxo-l-azetidineeulfonzuur, kaliumzout.
5 10 15 20
Men lost 0,1 g / 3S-trans /-3-amino-4-cyclohexyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 175) onder roeren op in een mengsel van 30 ml droog dimethylformamide en 0,05 g triethyl-amine. Men voegt 0,14 g [_ /_ (_ / (2-furanylmethyleeiiamino_/-2-oxo-l-imidazolidinyl__/carbonyl_/amino_/f enylazi jnzuur, 0,06g hydroxybenz-triazool en 0,17 g dicyclohexylcarbodiimide toe en roert de oplossing 5 dagen bij kamertemperatuur. Het oplosmiddel wordt in vacuum verwijderd, het residu in 10 ml aceton opgelost en de geprecipiteerde ureum afgefiltreerd. De moederloog wordt geroerd met 0,15 g kaliumperfluorbutaansulfonaat en verdund met 50 ml ether. Het pre-cipitaat wordt gefiltreerd en gechromatografeerd met HP-20 hars met water/aceton (9:1), als elueermiddel onder gebruikmaking van 0,14 g produkt met smeltpunt 195-200° C, onder ontleding (na vriesdrogen) .
Voorbeeld 179 (_ 3S-/_ 3a (R5*) 243__/_/-4-Cyclohexyl-3-/_ {_ 3- (4-ethy 1-2,3-dioxo-1-piperaz iny 1) -1,3-dioxo-2-f eny lpropyl__/amino_/-2-oxo-1 -aze tidine-sulfonzuur, kaliumzout.
25 Men lost 0,1 g f_ 3s-trans__/-3-amino-4-cyclohexyl- 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 175) onder roeren op in 30 ml dimethylformamide en 0,5 g triethylamine. Men voegt (R)-a-LL (4-ethy 1-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl /amino_/benzeen-azijnzuur, 0,06 g hydroxybenztriazool en 0,17 g dicyclohexylcarbo-30 diimide toe en roert het mengsel 16 uur bij kamertemperatuur. Het oplosmiddel wordt in vacuum afgedestilleerd en de resterende olie in 10 ml aceton opgelost. De geprecipiteerde ureum wordt afgefil-treerd en de moedérloog geroerd met 0,15 g kaliumperfluorbutaansulfonaat en verdund met 50 ml ether. Het precipitaat wordt afge-35 filtreerd en gechromatografeerd met HP-20 hars met water/aceton 8 1 0 0 57 1 - 143 - (9:1) als elueermiddel, waarbij men 0,15 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt met smeltpunfe, 175-180° C (na vriesdrogen). Voorbeeld 180 '· (trans,Z)-3-/ f_ (2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino) acetyl_/amino_/~ m 5 2-4-ethy1-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Wanneer men de werkwijze volgt van voorbeeld 170, deel A, maar (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van (Z)-2-araino-aV (1-difenylmethoxycarbonyl-l-10 methylethoxy)imino_/-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 190° C, onder ontleding. Voorbeeld 181 ( (+)-(trans)-3-Amino-2-oxo-4-fenyl-l-azetidinesulfonzuur.
15 A) (+)-(trans)-2-oxo-4-fenyl-l-azetidine-t-butyl- difenylsilaan.
Een oplossing van 20,56 g t-butylchloordifenyl-silaan in 45 ml dimethylformamide wordt onder argon tot 0° C afge-20 koeld en behandeld met 10,4 ml triethylamine en daarna met (+)-2-oxo-4-feny1-1-azetidine. Na enkele uren bij 0° C wordt het resulterende mengsel behandeld met nog 1 ml triethylamine en 12,1 g t-butylchloorfenylsilaan, waarna men het onder roeren 65 uur bij 5° C laat staan. Het reactiemengsel wordt uitgegoten in 300 ml 25 ijswater en geëxtraheerd met 3:1 ethyl-ethylacetaat (drie porties van 125 ml). De organische extracten worden gewassen met pH 4,5 fosfaatbuffer (drie porties van 50 ml), 50 ml verzadigde natrium-bicarbonaatoplossing, twee porties van 50 ml water, verzadigde natriumchloride-oplossing en gedroogd op Na^SO^. Filtratie en 30 concentratie in vacuum levert een vaste stof op, die men met hexaan wast, waarna men na drogen (hoog vacuum) 15 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt als een vaste stof.
B) (+)-(trans-)-3-azido-2-oxo-4-fenyl-l-azeti-dine-t-butyldifenylsilaan.
35 81 00 57 1 4 - 144 -
Een 50 ml kolf, voorzien van roerstaaf, gasinlaat en septum wordt onder argon in de vlam gedroogd en gevuld met 0,65 ml 1,6 M n-butyllithiumoplossinghexaan, af gekoeld tot -40° C en opgelost in 2 ml tetrahydrofuran. Men voegt druppelsgewijze 0,16 5 ml diisopropylamine toe ear roert het resulterende mengsel 30 min. en koelt tot -78° C af. Men voegt druppelsgewijze in 5 min. een oplossing toe van 400 mg (+)-(trans)-2-oxo-4-fenyl-l-azetidine-t-butyl-difenylsilaan in 1,5 ml tetrahydrofuran. Na nog 20 min. roeren behandelt men de oplossing met 204 mg p-tolueensulfonylazide in 10 0,5 ml tetrahydrofuran. Het resulterende mengsel wordt 10 min. bij -78° C geroerd en druppelsgewijze behandeld met 0,4 ml chloortri-methylsilaan. Na nog 10 min. roeren verwijdert men het koelbad en roert het reactiemengsel 2,5 uur bij kamertemperatuur. Daarna voegt men, terwijl men op 0° C koelt, 20 ml ethylacetaat toe, gevolgd 15 door 8 ml pH 4,5 fosfaatbuffer. De organische laag wordt gewassen met nog meer buffer (twee porties van 8 ml), drie porties van 10 ml 5 % natriumbicarbonaatoplossing, 10 ml 50 % natriumchloride-oplossing, 10 ml verzadigde natriumchloride-oplossing en gedroogd op Na2SO^. Filtratie en concentratie in vacuum levert 500 mg olie 20 op, die men flitschromatografeert met 5 % ethylacetaat-hexaan, waarbij men 253 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
C) (+)-(trans)-3-azido-2-oxo-4-fenyl-1-azetidine.
Een oplossing van 17 g ruw (+)-(trans)-3-azido- 25 2-oxo-4-fenyl-l-azetidine-t-butyldifenylsilaan wordt opgelost in 250 ml methanol en bij 0° C druppelsgewijze behandeld met 35 ml geconcentreerd zoutzuur. Men verwijdert het koelbad, roert de reactie 1 uur bij kamertemperatuur en koelt haar weer tot 0° af, waarop men natriumbicarbonaatoplossing toevoegt tot neutraal. Het 30 resulterende mengsel wordt geëxtraheerd met ethylacetaat (één portie van 300 ml en vier porties van 100 ml) en de organische extracten worden gewassen met 1:1 5 % natriumbicarbonaat, 50 % natriumchloride- oplossing, verzadigde natriumchloride-oplossing en gedroogd op (Na_SO,). Filtratie en concentratie in vacuum levert 15 g zware 2 4 35 olie op, die gechromatografeerd wordt over 100 g silicagel met 81 00 57 1 5 * ? - 145 - 20 % ethylacetaat-hexaan onder verkrijging van 460 mg in de titel genoemde verbinding. ' ^ . -*g, D) (+)-(trans) Azido-4-feny1-1-azetidinesulfon zuur, tetrabutylammoniumzout.
10 15 20
Een oplossing van 300 mg (+)-(trans)-3-azido-2-oxo-4-fenyl-l-azetidine in 3 ml dimethylformamide wordt onder argon op 0° C af gekoeld en druppelsgewijze behandeld met een complex van dimethylformamide en zwaveltrioxyde (7,78 ml van een 0,5 M oplossing in dimethylformamide). Men verwijdert het koelbad, roert het reac-tiemengsel 2 uur bij kamertemperatuur en giet het uit in 80 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat (pH 5,5). De oplossing wordt geëxtraheerd met dichloormethaan (weggeworpen) en men voegt 541 mg tetrabutyl-ammoniumbisulfaat toe. Het resulterende mengsel wordt geëxtraheerd met dichloormethaan en de organische extracten worden gewassen met 10 % natriumchloride-oplossing en gedroogd (Na2SO^). Filtratie en concentratie in vacuum levert 800 mg olie op, ongeveer 40 % van het gewenste produkt, de rest dimethylformamide. Men gebruikt dit mengsel zonder zuivering bij de volgende trap.
E) (+)-(trans)-3-Amino-4-f enyl-1-azetidinesulfon zuur.
Men hydrogeneert een oplossing van (+)-(trans)- 3-amino-4-fenyl-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout in 25 4 ml methanol over 30 mg platinaoxyde bij 1 atmosfeer en kamertem peratuur .Na 15 min. brengt men het systeem onder vacuum en voert verse waterstof in. Na nog 45 min. is de reactie voltooid en flitst men het systeem met stikstof. Na enkele dagen bij kamertemperatuur in dichloormethaan-methanol (4:1), 200 ml, is de katalysatoraggre-30 gatie volledig en de filtratie voltooid. Het filtraat wordt in vacuum geconcentreerd tot 18 ml en men voegt 0,2 ml 97 % mierenzuur toe. Na enkele uren koelen bij 5° C wordt de resulterende vaste stof gefiltreerd en gewassen met dichloormethaan waarop men na drogen, 150 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt als vaste stof.
35 61 00 57 1 i- % - 146 -
Analyse berekend voor CgH^t^O^S: C 44,62; H 4,1% N 11,57; S 13,23;
Gevonden: C 43,36; H~4,31; N 11,09; S 13,02.
Voorbeeld 182 —. -...-.-------- __ __ 5 (+)-(trans)-2-Oxo-4-fenyl-3-/ (fenylacetyl)amino_/-l-azetidinesul- fonzuur, kaliumzout.
A) (+)-trans-2-oxo-4-fenyl-3'V (fenylacetyl)-amino /-1-azetidinesulfonzuur tetrabutylammoniumzout.
10
Men behandelt een oplossing van 52 mg N-hydroxy-benztriazool monohydraat en 46 mg fenylazijnzuur in 0,3 ml dimethyl-formamide onder argon bij 0° C met 70 mg vast dicyclohexylcarbodi-imide. Men verwijdert het koelbad en roert het resulterende mengsel 15 1 uur bij kamertemperatuur. Na verdunning met nog 0,3 ml dimethyl- formamide voegt men 75 rag (+) - (trans) -3-amino-2~oxo-4-fenyl-l-azetidinesulfonzuur toe als vaste stof (zie voorbeeld 181), gevolgd door druppelsgewijze toevoeging van 0,05 ml triethylamine. De reactie wordt 23 uur bij kamertemperatuur geroerd, gefiltreerd en 20 de filterkoek met dimethylformamide gewassen. Men voegt het filtraat bij 20 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat met pH 4,5, wast het meng-sel met drie porties van 8 ml ethylacetaat (weggeworpen) en voegt 105 mg of 0,31 mmol tetrabutylammoniumbisulfaat toe. Het verkregen mengsel wordt met drie porties vein 15 ml dichloormethaan geëxtra-25 heerd. De extracten worden gewassen met 10 % natriumchloride-oplos-sing (twee porties van 15 ml) en 10 ml verzadigde natriumchloride-oplossing en op natriumsulfaat gedroogd. Filtratie en concentratie in vacuum levert (na verwarming op 32° C onder hoog vacuum) 165 mg olie op, waarvan ongeveer 40 % de gewenste verbinding 'en 60 % di-30 methylformamide is.
B) (+)-trans-2-Oxo-4-fenyl-3-V (fenylacetyl)-amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Een oplossing van (+)-trans-2-oxo-4-fenyl-3-35 / (fenylacetyl)amino /-1-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout 8100571 - 147 in 1,5 ml aceton wordt behandeld met 41 mg of 0,121 mmol kaliumper-fluorbutaansulfonaat..Verdunning met 12 ml ether levert een glas op, dat bij aanwrijving met ether .43 zag vaste stof op levert, die 20 % onzuiverheid bevat, die een tetrabutylammoniumrest bevat. De vaste 5 stof wordt in 50 % waterige aceton opgelost en geleid over 1 ml
Dowex 50W-X2 K+ ionen-uitwisselingshars. Verwijdering van oplosmiddel levert een vaste stof op, die met aceton en hexaan wordt gewassen en bij 60° C onder hoog vacuum wordt gedroogd. De opbrengst van de in de titel genoemde verbinding bedraagt 15 mg.
10 Analyse berekend voor Cj^H^N^O^S.K: C 51,23; H 3,80; N 7,03; S 8,05; K 9,81;
Gevonden: C 50,44; H 4,20; N 7,01; S 7,59; K 9,40.
Voorbeeld 183 (+)-(trans,Z)-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl)(methoxyimino)acetyl_/-15 amino /-2-oxo-4-fenyl-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men behandelt een oplossing van 52 mg N-hydroxy-benztriazool hydraat en 69 mg (Z)-2-a iino-α-(methoxyimino)-4-thia-zoolazijnzuur in 0,3 ml dimethylformamide onder argon bij kamer-20 temperatuur met 70 mg vast dicyclohexylcarbodiimide. Men roert het resulterende mengsel 1 uur, voegt 75 mg (+)-(trans)-3-amino-2-oxo- 4-fenyl-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 181) toe als vaste stof en vervolgens druppelsgewijze 0,05 ml triethylamine. Men roert de reactie 23 uur bij kamertemperatuur. Het dimethylformamide wordt 25 bij 30° C onder hoog vacuum verwijderd en het residu aangewreven met 2 ml aceton en gefiltreerd. De filterkoek wordt met nog meer aceton (twee porties van 3 ml) gewassen en men voegt aan het filtraat 86 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat toe. Verdunning met 10 ml ether levert een gomachtige vaste stof op, die men aanwrijft en wast met 30 aceton en hexaan onder verkrijging na droging, van 82 mg in de titel genoemde verbinding als vaste stof.
Analyse voor ci5Hi4N5°6S2’K
Berekend: C 40,26; H 3,16; N 15,65; S 14,33; K 8,74;
Gevonden; C 38,60; H 3,19; N 15,07; S 13,87; K 7,5 35 81 0057 1 * - 148 -
Voorbeeld 184 (cis)-2-Oxo-4-fenyl-3-/ kaliumzout.
A) N-Ijenzylideen-2,4-dimethoxybenzylamine.
Men voegt 12,0 g 2,4-dimethoxybenzylaminehydro-chloride toe aan 100 ml IN natriumhydroxyde-oplossing en extraheert het mengsel met 125 ml ethylacetaat. De organische laag wordt op 10 watervrij natriumsulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van 10,2 g 2,4-dimethoxybenzylamine als een olie. Dit amine wordt opgelost in 150 ml benzeen en men voegt 6,47 g benzaldehyde en 0,6 g p-tolueensulfonzuurraonohydraat toe.
Het mengsel wordt aan een terugvloeikoeler verwarmd onder verwij-15 dering van water met een Dean-Stark scheider en in 2 uur is de berekende hoeveelheid water van 1,1 ml afgescheiden. Het mengsel wordt tot kamertemperatuur gekoeld. Na verdere afkoeling zet de benzeenoplossing enig precipitaat af. Men verwijdert benzeen onder verlaagde druk en voegt aan het residu 60 ml petroleumether toe.
20 Er scheidt zich een olielaag af met meer precipitaat. Men voegt 10 ml benzeen toe teneinde de lagen homogeen te maken en filtreert het resterende precipitaat af. Men stript het oplosmiddel uit het filtraat af, waarbij men 14,2 g in de titel genoemde verbinding verkrijgt als een olie.
'·) (fenylacetyl)amino__/-l-azetidinesulf onzuur,
Figure NL8100571AD01491
5 25 B) (+)~(cis-)-4-Fenyl-l-(2,4-dimethoxybenzyl)- 2-oxo-3-azidoazetidine.
Men lost onder stikstof 1,62 g a-azidoazijnzuur op in 25 ml methyleenchloride. Bij deze oplossing voegt men 3,24 g 30 triethylamine en 1.02 g of 4,0 mmol van het imine N-benzylideen- 2,4-dimethoxybenzylamine, opgelost in 10 ml methyleenchloride. Men koelt het mengsel in een ijsbad af en voegt langzaam 3,36 g tri-fluorazijnzuuranhydride toe, waarbij de oplossing donker gekleurd wordt. Na 1 uur roeren in een ijsbad warmt men het mengsel tot 35 kamertemperatuur op en roert nog 15 min. De oplossing wordt daarna 81 0057 1 * * - 149 - gewassen met 60 ml water, twee porties van 50 ml 5 % natriumbicar-bonaatoplossing en 60 ml IN zoutzuur. De organische laag wordt op watervrij natriumsulfaat gedroogd-^ waarna men het oplosmiddel af-stript onder verkrijging van 1,72 g ruw produkt als donkere gom.
5 De gom wordt enkele malen met actieve kool behandeld en het verkre-gen bruine mengsel wordt gechromatografeerd over 40 g silicagel onder eluering met 1:1 petroleumether:ethylacetaat. De gecombineerde fracties leveren bij snel bevriezen in een droogijs-acetonbad kristallen op. Onder gebruikmaking van dit als ent herkristalliseert 10 men het produkt uit petroleumether-ethylacetaat onder verkrijging van 817 mg in de titel genoemde verbinding als naalden, die bij opwarming tot kamertemperatuur smelten.
C) (+)-(cis)-4-Fenyl-2-oxo-3-azidoazetidine.
15 737 mg (+)-(cis)-4-Feny1-1-(2,4-dimethoxybenzyl)- 2-oxo-3-azidoazetidine wordt in 25 ml azijnzuumitril opgelost en onder stikstof op 80-83° C verhit. Bij de resulterende oplossing voegt men over een periode van 1 uur 943 mg kaliumpersulfaat en 570 mg kaliummonowaterstofsulfaat, beide opgelost in 25 ml water.
20 Na toevoeging wordt het mengsel 7 uur verder verhit op 80-83° C.
Het mengsel wordt afgekoeld en de pH op 6-7 ingesteld door toevoeging van vast kaliummonowaterstofsulfaat. Het merendeel van het azijnzuumitril wordt onder verlaagde druk verwijderd en het resulterende mengsel wordt geëxtraheerd met 60 ml chloroform. De chloro-25 formlaag wordt met 60 ml water gewassen, op watervrij natriumsulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van een ruw produkt als een olie. Het ruwe produkt wordt gechromatografeerd over 40 g silicagel onder eluering met 1:1 petroleumether-ethylacetaat. De gecombineerde fracties leveren kristallen op 30 en het produkt wordt herkristalliseerd uit petroleumether-ethylacetaat onder verkrijging van 267 mg in de titel genoemde verbinding.
D) (+)-(cis)-4-Fenyl-2-oxo-3-azido-l-azetidine-sulfonzuur, tetrabutylammoniumzout.
35 81 0057 1
Figure NL8100571AD01511
*
L
- 150 -
Men koelt 162 mg (+)-(cis)-4-fenyl-2-oxo-3-• azidoazetidine onder stikstof tot 0° C af en voegt druppelsgewijze via een injectiespuit 3,5 ml cirica 0,5M dimethylformamide-zwavel-trioxydecomplex oplossing in dimethylformamide toe. De resulterende -ΊψΒ· 5 heldere oplossing wordt 15 min. bij 0° C geroerd. Het mengsel wordt daarna uitgegoten in 50 ml 0,5M éénbasische kaliumfosfaat-oplossing en gewassen met drie porties van 50 ml methyleenchlori-de. Men voegt 292 mg t-n-butylammoniumbisulfaat aan de waterige oplossing toe en bxtraheert het mengsel met zes porties van 50 ral 10 methyleenchloride. De gecombineerde methyleenchloridelagen worden op watervrij natriumsulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van 272 mg in de titel genoemde verbinding als een gom.
E) (+)-(cis)-2-Oxo-4-fenyl-3-/_ (fenylacetyl)-15 amino /-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
293 mg Jj -(cis)-4-fenyl-2-oxo-3-azido-l-azetidi-nesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout, wordt opgelost in 4 ml ethanol en gehydrogeneerd met 80 mg platinaoxyde als katalysator bij 20 1 atmosfeer. Na 1 uur roeren wordt de katalysator afgefiltreerd door een Milliporefilter met Celite, waarbij sommige katalysator-deeltjes door het filter gaan en een zwart filtraat wordt verkregen. Men verwijdert de ethanol onder verlaagde druk en lost het residu op in 4 ml dimethylformamide. Men voegt 81 mg N-hydroxy-25 benztriazoolraonohydraat, 78 mg fenylazijnzuur en 117 mg dicyclo-hexylcarbodiimide toe en roert het mengsel 16 uur onder stikstof.
De brij wordt in vacuum af gedampt en met 10 ml aceton aangewreven. De resulterende brij wordt gefiltreerd door een Milliporefilter met een Celitetop en het bruine filtraat wordt behandeld met 193 30 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Na toevoeging van 20 ml ether scheidt zich een gom af. Men verwijdert de vloeistof en wast de gom met ether. De gom wordt in 10 ml methanol opgelost. Na toevoeging van ether vormt zich een kleine hoeveelheid precipitaat.
Het mengsel wordt gefiltreerd en het gekleurde filtraat met meer 35 ether behandeld. Het gevormde precipitaat wordt gefiltreerd en 81 0057 1 - 151 - twee maal herkristalliseerd uit ether-methanol, waarbij men 26 mg in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
Figure NL8100571AD01521
C 46,99; H 4,41; N 6,45; 5 Gevonden; C 47^24; H 4,19; N 6,34.
Voorbeeld 185 (cis,Z)-3-V /_ (2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino) acetyl_/amino__/-2-oxo-4-f enyl-1-aze tidinesulfonzuur, kaliumzout.
10 560 mg (cis)-2-Oxo-4-fenyl-3-/ (fenylacetyl)- amino__/-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout (zie voorbeeld 184, deel O) wordt opgelost in 5 ml ethanol en gehydrogeneerd met 110 mg platinaoxyde als katalysator bij 1 atmosfeer. Na 1 uur roeren wordt de katalysator afgefiltreerd door een Milliporefilter met Celite, 15 waarbij katalysatordeeltjes door het filter gaan en een zwart fil-traat wordt verkregen. De ethanol wordt onder verlaagde druk verwijderd en het residu in 4 ral dimethylformamide opgelost. Men voegt 168 mg N-hydroxybenztriazool monohydraat, 221 mg (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur en 227 mg dicyclohexylcarbodiirai-20 de toe en roert het mengsel 16 uur onder stikstof. De brij wordt in vacuum afgedampt en met 15 ml aceton aangewreven. De verkregen brij wordt gefiltreerd door een Millipore met Celite en het filtraat behandeld met 372 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Bij toevoeging van 15 ml ether scheidt zich een gom af. De vloeistof wordt ver-25 wijderd en de gom met ether gewassen. De gom wordt in 5 ml water opgelost en over 150 ml HP-20 hars geleid onder eluering met water. Fracties 16-34 (elk 30 ml) worden gecombineerd en gevriesdroogd, tot 201 mg in de titel genoemde verbinding als een vaste stof.
} Analyse berekend voor 1½ h^O; 30
Gevonden: C 36,73; H 3,49; N 14,28; S 13,07; K 7,97; C 36,65; H 3,00; N 13,99; S 13,48; K 8,30.
Voorbeeld 186 (cis)-3-Amino-2-oxo-4-(2-fenylethenyl)-1-azetidinesulfonzuur 35 A) N-(3-Fenyl-2-propenylideen)-4-methoxyaniline 81 00 57 1 - 152 - » *
Men lost 12,32 g p-anisidine op 160 ml methyleen-. chloride en voegt 20 g watervrij magnesiumsulfaat toe. Men koelt het mengsel in een ijsbad af en voegt 13,22 g trans-kaneelaldehyde toe. Men roert het mengsel 2 uur onder stikstof, waarna men filtreert.
5 Het filtraat wordt afgedampt tot een vaste stof. Het ruwe produkt wordt herkristalliseerd uit methyleenchloride-petroleumether, waarbij men 20,96 g in de titel genoemde verbinding als vaste stof ver-krijgt- B) (+)-(cis)-3-Azido-l-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-10 4-(2-fenylethenyl)azetidine.
Men lost 24,26 g 2-azidoazijnzuur op in 100 ml methyleenchloride en koelt in een ijsbad. Bij deze oplossing voegt men 48,57 g triethylamine en 14,24 g N-(3-fenyl-2-propylideen)-15 4-methoxyaniline, opgelost in 250 ml methyleenchloride. Bij de resulterende oplossing voegt men druppelsgewijze over een periode van 1 uur 50,41 g trifluorazijnzuuranhydride. Na 1 uur roeren in een ijsbad warmt men het mengsel tot kamertemperatuur op en roert 16 uur. Het mengsel wordt daarna met 250 ml methyleenchloride ver-20 dund en met 750 ml water, twee porties van 750 ml 5 % natriumbicar-bonaatoplossing en 750 ml IN zoutzuur gewassen. Men droogt de organisch laag op watervrij natriumsulfaat en stript het oplosmiddel af onder verkrijging van een vaste stof. Het ruwe produkt wordt uit ethylacetaat herkristalliseerd onder verkrijging van 11,39 g in de 25 titel genoemde verbinding als een vaste stof.
C) (+)-(cis)-3-Azido-2-oxo-4-(2-fenylethenyl)- azetidine.
Bij een oplossing van 10,22 g cerieammoniumni-30 traat in 13 ml water voegt men bij 0° C in een periode van 15 min. 1,99 g (+)-(cis)-3-azido-l-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-4-(2-fenylethe-nyl)azetidine, opgelost in 65 ml azijnzuumitril, waarbij men nog 10 ml azijnzuumitril voor het spoelen gebruikt. Het mengsel wordt nog 15 min. bij 0° C geroerd, met 750 ral ethylacetaat verdund, 35 gewassen met zes porties water van 600 ml, op watervrij natrium- 81 00 57 1 - 153 - sulfaat gedroogd en het oplosmiddel wordt afgestript onder verkrijging van een olie. Het ruwe produkt wordt gechromatografeerd over 90 g silicagel, waarbij men eêrs? elueert met 250 ml 30 % ethylace-taat/petroleumether en daarna met 50 % ethylacetaat/petroleumether. Fracties 11-16 (elk van 50 ml) worden gecombineerd en afgedampt tot 802 mg in de titel genoemde verbinding als een olie.
D) (+)-(cis)-3~Azido-2-oxo-4-(2-fenylethenyl)- 1-azetidinesulfonzuur, tetra-n-butylammoniumzout.
10 Men lost 334 mg (+)-(cis)-3-azido-2-oxo-4-(2-
Figure NL8100571AD01541
Figure NL8100571AD01542
fenylethenyl)-azetidine op in 3 ml dimethylformamide en voegt 868 mg pyridine-zwaveltrioxyde toe. Het mengsel wordt 40 uur bij kamertemperatuur onder stikstof geroerd en daarna uitgegoten in 200 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaatoplossing en gewassen met 30 ml 15 methyleenchloride. Men voegt bij de waterige oplossing 530 mg t-n-butylammoniumbisulfaat en extraheert het mengsel met vier porties van 50 ml methyleenchloride. De gecombineerde organische lagen worden met twéé porties van 100 ml water uitgewassen, op watervrij magnesiumsulfaat gedroogd en men stript het oplosmiddel 20 af onder verkrijging van 824 mg in de titel genoemde verbinding als een gom.
E) (+)-(cis)-3-Azido-2-oxo-4-(2-fenylethenyl)- 1-azetidinesulfonzuur.
25 300 mg (+)-(cis)-3-Azido-2-oxo-4-(2-fenyl- ethenyl)-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylarnmoniumzout wordt in 4 ml tetrahydrofuran opgelost en snel geroerd. Bij het mengsel voegt men 600 mg zinkstof, gevolgd door 0,8 ml IN éénbasisch kaliumfosfaatoplossing. Het mengsel wordt op 45° C verwarmd en 30 3 uur bij deze temperatuur geroerd. Het mengsel wordt daarna ge filtreerd en het filtraat wordt opgenomen in 40 ml methyleenchloride en 10 ml water. De waterlaag wordt verder geëxtraheerd met drie porties van 40 ml methyleenchloride en de gecombineerde me-thyleenchloridelagen worden door afstrippen van oplosmiddel bevrijd 35 onder verkrijging van 256 mg schuim. Dit ruwe produkt wordt j 81 0 0 57 1 ♦ - 154 - opgelost in een kleine hoeveelheid cirka 30 % aceton-water en geleid over 7,5 ml Dowex (k+)'h«?Jis (0,7 meq/vnl) onder eluering met 40 ml water. Het elueermiddel wordt afgedampt onder verkrijging. van 151 mg schuim, dat in 2 ml water wordt opgelost en tot pH 2 wordt aangezuurd met IN zoutzuur. Men voegt een kleine hoeveelheid azijnzuurnitril toe teneinde het precipitaat op te lossen en leidt de resulterende oplossing over 15 ml HP-20 hars onder eluering met 150 ml water en daarna 10 % aceton-water. Fracties 2-13 (elk 15 ml) worden gecombineerd en afgedampt tot 101 mg in de titel genoemde verbinding als een schuim.
10 o
Voorbeeld 187 (+)-(cis,Z)-3-/_ / (2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino)acetyl_/-amino /-2-oxo-4-(2-fenylethenyl)-1-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
15 Men behandelt een oplossing van 68 mg (Z)-2- amino-α-(methoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur en 51 mg N-hydroxybenz-triazool monohydraat in 2 ml dimethylformamide met 69 mg dicyclo-hexylcarbodiimide. Men roert het mengsel 30 min. onder stikstof bij kamertemperatuur. Men voegt 90 mg (cis)-3-amino-2-oxo-4-(2-20 fenylethenyl)-1-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 186) en 34 mg triethylamine toe en roert het mengsel 20 uur onder stikstof. De brij wordt in vacuum afgedampt en met 10 ml aceton aangewreven.
De brij wordt gefiltreerd en het filtraat behandeld met 113 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat. Verdunning met 30 ml ether en fil-25 tratie levert 169 mg vast produkt op, dat wordt opgelost in een kleine hoeveelheid van cirka 10 % azijnzuurnitril/water en wordt geleid over 34 ml HP-20 hars onder eluering met 150 ml water en daarna met 10 % aceton/water. Fracties 16-19 (elk 15 ml) worden gecombineerd en door afstrippen van oplosmiddel bevrijd onder ver-30 krijging van 110 mg in de titel genoemde verbinding als een vaste stof.
Analyse berekend voor C^HjgOgNgS2K.H20: C 40,23; H 3,57; N 13,80; S 12,63; K 7,70 Gevonden: C 40,03; H 3,05; N 13,61; S 12,31; K 7,56.
35 8 1 0 0 5 7 1
Voorbeeld 188 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur.
(cis)-3-Amino-4- A) / (4-Methoxyf eny1) imino_/azijnzuur, raethyl- ester.
Een droge driehalskolf van 1 1, voorzien van stikstofinlaat en roerstaaf, wordt gevuld met 56,88 g MgSO^, gevolgd door een oplossing van 19,43 g herkristalliseerd anisidine in 250 ml dichloormethaan. Na afkoeling tot 0° C voegt men in 1,5 uur een oplossing toe van 19,92 g methylglyoxylaat hemiacetaal in 250 ml dichloormethaan. Na nog 20 min. roeren bij 0° C wordt het reactiemengsel afgezogen, op natriumsulfaat gedroogd, gefiltreerd en geconcentreerd in vacuum tot een kwart volume. Men voegt 300 ml hexaan toe en concentreert de oplossing tot een olie, die bij staan onder hoog vacuum bij 5° C half verstard. B) (cis)-3-(1,3-Dihydro-l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)- 4-methoxycarbonyl-2-oxo-l- (4-methox.yfenyl) azetidine.
Een droge driehalskolf van 500 ml, voorzien van roerstaaf, toevoertrechter, septum en stikstofinlaat wordt gevuld met een oplossing van 21,09 g / (4-methoxyfenyl)imino_/azijnzuur, methylester in 150 ml dichloormethaan en tot 0° C afgekoeld. Men voegt druppelsgewijze 19,2 ml of 0,14 mol triethylamine toe, gevolgd door een oplossing van 28,4 g (N-ftaalimido)-acetylchloride in 150 ml dichloormethaan in 1 uur. Het resultrerende mengsel wordt 1,5 uur bij 0° C geroerd en met 2,5 1 dichloormethaan verdund. De organische oplossing wordt gewassen met twee porties van 500 ml éénbasisch kallumfosfaat pH 4,5, twee porties van 500 ml 5 % natriumbicarbonaat en 500 ml verzadigde natriumchloride-oplossing en op natriumsulfaat gedroogd. Filtratie en concentratie in vacuum levert een vaste stof op, die wordt gewassen met ethylacetaat, koude aceton en hexaan, waarbij men 18,65 g produkt verkrijgt. C) (cis)-4-(Methoxycarbonyl)-1-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-/_ /_ (fenylmethoxy) carbonyl__/amino_/azetidine.
- 156 - *
Een droge 500 ml kolf, voorzien van stikstofinlaat, roerstaaf en septum wordtefgevuld met 18,65 g (cis)-3-(l,3-dioxo-2H-isoindol-2-yl)-4-methoxycarbonyl-2-oxo-l~(4-methoxyfenyl) azetidine en 325 ml dichloormethaan. Men koelt de resulterende 5 suspensie tot -30° C af en voegt druppelsgewijze 3,52 ml methyl-hydrazine toe. De reactie wordt tot 0° C opgewarmd en 1 uur geroerd, Men voegt nog 0,4 ml methylhydrazine toe en roert het mengsel 10 min.. Deze volgorde wordt herhaald totdat een totaal van 2,9 equivalent methylhydrazine ofwel 7,7 ml is toegevoegd. Men 10 verwijdert het oplosmiddel in vacuum, voegt 200 ml vers dichloormethaan toe en concentreert het mengsel opnieuw. Deze volgorde wordt nog tweemaal herhaald en het resulterende schuim wordt 20 l) min. onder hoog vacuum gedroogd, in 225 ml dichloormethaan opnieuw opgelost en 16 uur bij kamertemperatuur met rust gelaten, in welke 15 tijd er een aanzienlijke hoeveelheid vaste stof precipiteert. Het mengsel wordt onder stikstof gefiltreerd, het filtraat tot 0° C afgekoeld (onder stikstofatmosfeer) en druppelsgewijze behandeld met 17 ml diisopropylethylamine, gevolgd door 7 ml benzylchloor-formiaat, De reactie wordt 30 min. bij 0° C geroerd en daarna 20 1,5 uur bij kamertemperatuur. Het mengsel wordt gewassen met twee porties van 300 ml pH 4,5 éénbasisch kaliumfosfaatbuffer, twee porties van 300 ml 5 % natriumbicarbonaat en 300 ml verzadigd na-triurachloride, op natriumsulfaat gedroogd en gefiltreerd. Concentratie in vacuum levert een schuim op, dat "bij aanwrijving met {T) 25 ether 9,9 g in de titel genoemde verbinding oplevert als een vaste stof, D) (cis) -4- (Methoxycarbonyl)-2-oxo-3-/^ /_ (fe-nylmethoxy)carbonyl /amino /-1-azetidine.
30 Men behandelt een oplossing van 8,59 g cerie- ammoniumnitraat in 60 ml 1:1 azijnzuurnitril-water in 10 min. met een brij van 2 g (cis)-4-(methoxycarbonyl)-l-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-/ / (fenylmethoxy) carbonyl__7amino__/azetidine in 50 ml azijn-zuurnitril. Het reactiemengsel wordt nog 10 uur bij kamertempera-35 tuur geroerd en met 100 ml ethylacetaat verdund. De afgescheiden 8100571 5 ψ r - 157 - waterlaag wordt gewassen met drie porties van 40 ml ethylacetaat en de gecombineerde organische extracten worden gewassen met drie porties van 70 ml 50 % natriumbicarbonaat« De basisch wassingen worden uitgewassen met 50 ml ethylacetaat en de gecombineerde organische extracten worden gewassen met natriumbisulfiet in water, 100 ml 5 % natriumcarbonaat in water, twee porties van 100 ml 5 % natriumchloride-oplossing en twee porties van 50 ml verzadigde natriumchloride en 30 min. geroerd over actieve kool (Darco G-60). Men voegt natriumsulfaat toe en filtreert het mengsel en concentreert het in vacuum tot een olie die bij aanwrijving met ether 685 mg in de titel genoemde verbinding oplevert als een vaste stof.
10 ί ; E) (cis)-4-(Methoxycarbonyl)-2-oxo-3-/ £ (fenyl-methoxy)carbonyl__/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammonium-zout.
15 20 / ί ν,> 25
Men roert een mengsel van 100 mg (cis)-4-(me-thoxycarbonyl)-2-OXO-3-/ / (fenylmethoxy)carbonyl_/amino_/-l-azeti-dine en 172 mg pyridine-zwaveltrioxydecomplex in 1 ml pyridine onder argon 3 uur bij 80° C. Het reactiemengsel wordt uitgegoten in 70 ml 0,5 M éénbasisch kaliumfosfaat pH 5,5 en geëxtraheerd met vier porties 30 ml dichloormethaan (weggeworpen). Men voegt 122 mg tetrabutylammoniumwaterstofsulfaat toe aan de waterlaag, die daarna wordt geëxtraheerd met vier porties van 30 ml dichloormethaan. De organische extracten worden gewassen met 8 % natriumchloride-oplossing, op natriumsulfaat gedroogd en gefiltreerd. Concentratie in vacuum levert 186 mg in de titel genoemde verbinding op als een visceuze olie.
F) (cis)-3-Amino-4-(methoxycarbonyl)-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur.
30 35
Een oplossing van 186 mg (cis)-4-(methoxycarbonyl) -2-oxo-3-£ /_ (fenylmethoxy) carbonyl__/amino_/-l-azetidinesulfonzuur, tetrabutylammoniumzout in 2 ml methanol wordt 1,5 uur bij 1 atmosfeer gehydrogeneerd over 95 mg 10 % palladium op kool. De katalysator wordt afgefiltreerd en met dichloormethaan gespoeld 81 00 57 1 ΐ - 158 - en het filtraat wordt met 97 % mierenzuur behandeld en tot -50° C afgekoeld (in dit stadium is ter inleiding van kristallisatie de aanwezigheid van een entkristalSnoodzakelijk). Nadat de kristallisatie begint laat men het mengsel 16 uur bij 10° C staan. De 5 resulterende vaste stof wordt gewassen met dichloormethaan en hexaan en in vacuum gedroogd onder verkrijging van 50 mg in de titel genoemde verbinding.
Voorbeeld 189 (cis)-3-/ /(2-Amino-4-thiazolyl)/_/_ 1-(difenylmethoxycarbonyl-1-10 methylethoxy)imino_/acetyl_/amino_/-4-(methoxycarbonyl)-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
Men behandelt een oplossing van 34 mg N-hydroxy-benztriazoolhydraat en 101 mg 2-amino-a-/_ /_ 1- (difenylmethoxycarbo-15 nyl)-1-methylethoxy_/imino_/-4-thiazoolazijnzuur in 0,5 ml dimethyl- formamide met 45 mg vast dicyclohexylcarbodiimide en roert het mengsel 45 min. onder argon bij kamertemperatuur. Daarna voegt men 45 mg (cis)-3-amino-4-(methoxycarbonyl)-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 188)als vaste stof toe, gevolgd door druppelsgewijze 20 toediening van 0,03 ml triethylamine. Men roert het reactiemengsel 16 uur bij kamertemperatuur. Het dimethylformamide wordt bij 30° C onder hoog vacuum verwijderd en het residu met aceton aangewreven.
De bovenstaande vloeistof wordt behandeld met 67 mg kaliumperfluor-butaansulfonaat. Verdunning met ether levert een vaste stof op, die 25 met ether wordt gewassen en in vacuum wordt gedroogd onder verkrij- ging van 93 mg in de titel genoemde verbinding.
Voorbeeld 190 (cis)-3-/^ (_ (2-Amino-4-thiazolyl)/ (1-carboxy-l-methylethoxy) imino_/-acetyl /amino /-4-(methoxycarbonyl)-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, 30 dikaliumzout.
Men roert een brij van (cis)-3-/ / (2-amino-4-thiazolyl)£ / 1-(difenylmethoxycarbonyl)-l-methylethoxy_/imino_/-acety1 7amino_/-4-(methoxycarbonyl)-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur, 35 kaliumzout in 0,4 ml anisool bij -12° C onder argon en voegt 0,9 ml 81 00 57 1 - 159 - * koud (-10° C) trifluorazijnzuur toe. Na 1,5 uur voegt men 4 ml ether en 2 ml hexaan toe en roert de -resulterende brij 15 min. bij -10° C en daarna 15 min. bij kamertemperatuur. De vaste stof wordt af gecentrifugeerd en met ether gewassen. De pH van een suspensie van dit 5 materiaal in 0,5 ml koud water wordt met 1 N kaliumhydroxyde op 6 ingesteld, waarna men het geheel leidt over een kolom van 30 ml HP-20AG. Eluering met water levert na afdamping 30 mg in de titel genoemde verbinding op (twee maal azijnzuurnitril toegevoegd en afgedempt).
10 Analyse berekend voor c14Hi5K2N5°gS2: C 31,15; H 2,81; N 12,98;
Gevonden: C 29,08; H 3,03; N 12,19.
Voorbeeld 191 (S)-(trans)-3-Amino-4-ethynyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
15 A) 2- (Trimethylsilyl) ethynylmagnesiumbromide.
In een me.t een vlam gedroogde 50 ml kolf, die onder een overdruk van stikstof wordt gehouden, brengt men 20 ml 20 droog tetrahydrofuran, 2,20 ml trimethylsilylacetyleen en 5,05 ml 3,06 M oplossing van methylmagnesiumbromide in ether. Men roert het mengsel 140 min., waarbij men de in de titel genoemde verbinding verkrijgt.
B) (S) - (trans) -4-/_ 2- (trimethylsilyl) ethynyl_/-25 2-OXO-3-/ (trifenylmethyl)amino /azetidine.
In een met een vlam gedroogde driehalskolf van 250 ml brengt men 6,00 g (S)-(cis)-4-(methylsulfonyl)-2-oxo~3-/ (trifenylmethyl)amino /azetidine, De kolf wordt met stikstof 30 doorgespoten en daarna onder een overdruk van stikstof gehouden.
Nadat het reactieraengsel in een droogijs/isopropanolbad is gekoeld voegt men druppelsgewijze onder snel roeren via een injectiespuit 4,65 ml 3,06 M oplossing van methylmagnesiumbromide in ether toe.
Men voegt de volgens deel A bereide oplossing van 2-(trimethylsilyl)-35 ethynylmagnesiumbromide toe via een Tëflon buis onder stikstof 8100571 9 * - 160 - r*· ’•’•«Λ* 5 10 15 20 overdruk (men spoelt de kolf, die het reagens bevat, uit met 7 ml tetrahydrofuran). Als men alles , heeft toegevoegd neemt men het koelbad weg. Na 45 min. voegt men een oplossing van 3,5 g kalium-bisulfaat in 20 ml water toe. Het merendeel van de tetrahydrofuran wordt op de roterende verdamper verwijderd. Het residu wordt met ether en water naar een scheidtrechter overgebracht. De waterlaag wordt afgescheiden en twee maal met ether geëxtraheerd. De gecombineerde etherlagen worden één maal gewassen met verzadigd natrium-chloride in water, op natriumsulfaat gedroogd en gefiltreerd. Verwijdering van het oplosmiddel levert een schuim op, dat men chroma-tografeert over een silicakolom. Eluering met 2 1 dichloormethaan, 111% ether/dichloormethaan, 212% dichloormethaan en 1,5 1 10 % ether/dichloormethaan (fractie 1 =* 1000 ml, fractie 2, 3 = 500 ral, fractie 4 - eind « 250 ml) levert 1,30 g in de titel genoemde verbinding op in fracties 2-8 en 1,80 g overeenkomstigtrans-isomeer in fracties 12-19. Fracties 9-11 bevatten 1,19 g van een. mengsel van cis- en trans-isomeer. C) (S)—(trans)-4-ethynyl-2-oxo-3-£ (trifenylme-thyl)amino /azetidine.
25 30
Men lost 2,97 g (S)-(trans)-4-/^ 2-(trimethyl-silyl)ethynyl__/-2-oxo-3-/_(trifenylmethyl)amino_/azetidine op in 30 ml dichloormethaan en voegt 330 mg tetrabutylammoniumfluoride (dat 20-25 % water bevat) toe. Na 20. min. verwijdert men het oplosmiddel in vacuum. Het residu wordt opgenomen in ethylacetaat en water. De organische laag wordt afgescheiden, één maal met water en één maal met verzadigd natriumchloride in water gewassen, op natriumsulfaat gedroogd en gefiltreerd. Verwijdering van het oplosmiddel levert een olie op, die men 15 min. roert met 60 ml pentaan ter verkrijging van 2,35 g in de titel genoemde verbinding als een poeder (na drogen in vacuum).
D) (S)-(trans)-3-amino-4-ethynyl-2-oxo-l-azeti- dinesulfonzuur.
Figure NL8100571AD01611
Men brengt 404 mg (S)-(trans)-4-ethynyl-2-oxo-3- 81 00 57 1 * « - 161 - [_ (trifenylmethyl) amino_/azetidine en 560 mg complex van pyridine en zwaveltrioxyde in een 25 ml kolf. Nadat men de kolf met stikstof heeft doorgespoeld voegt men 4*13 ml droge pyridine toe en verhit het mengsel drie uur op 80-85° C. Men voegt het mengsel onder snel 5 roeren toe aan een mengsel van 4,0 ml geconcentreerd zoutzuur, 50 ml water en 50 ml ethylacetaat. De pH wordt met natriumcarbonaat op 3,15 ingesteld. De waterlaag wordt afgescheiden en één maal geëxtraheerd met ethylacetaat, De gecombineerde organische laag wordt één maal gewassen met verzadigd natriumchloride in water, op 10 natriumsulfaat gedroogd en gefiltreerd. Verwijdering van oplosmiddel in vacuum levert een schuim op, dat men in 10 ml dichloormethaan opneemt. Men voegt 8 ml 98 % mieren-zuur toe en concentreert het mengsel na 15 min. tot 4 ml en voegt 10 ml dichloormethaan toe onder verkrijging van een in oplossing gesuspendeerde vaste stof. Filtra-15 tie levert 100 ml in de titel genoemde verbinding op als een vaste stof (opvallende verkleuring bij smelting >180° C).
Voorbeeld 192 / 3S-/ 3<x(Z) /-3-/ / (2-Amino-4-thiazolyl) (methoxyimino) ace- _4_ethynyl- 2-oxo-1 -aze tidinesulfon zuur, kaliumzout.
20 ------------------------------------------------------------------
Men weegt 100 mg (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)- 4-thiazoolazijnzuur, 85 mg N-hydroxybenztriazool monohydraat en 113 mg dicyclohexylcarbodiimide af in een 10 ml kolf. De kolf wordt met stikstof doorgespoten en in een ijs-waterbad gekoeld. Daarna 25 voegt men 0,6 ml dimethylformamide toe en roert het mengsel 10 min., waarop men nog 0,6 ml dimethylformamide toevoegt. Men voegt 95 mg (S)-(trans)-3-amino-4-ethynyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 191) toe als een vaste stof met 1,0 ml dimethylformamide en 56 μΐ triethylamine. Het koelbad wordt verwijderd en het mengsel 30 22 uur geroerd. Men voegt 3 ml aceton toe en filtreert de aanwezige vaste stoffen af en wast met nog 4 ml aceton. Men verwijdert alle oplosmiddelen in vacuum en neemt het residu op in 5 ml methanol en voegt 162 mg kaliumperfluorbutaansulfonaat toe en lost dit op. Na staan zet zich een vaste af, die men afcentrifugeert onder ver-35 krijging van 68 mg in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 81 00 57 1
Vi - 162 - * > 230 C.
Voorbeeld 193 _ _ _ -«fig _ _ _ (S)-3-£ £ £ (2,5-DichloorfenyI)thio_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azeti- dinesulfonzuur, kaliumzout.
5 Men lost 100 mg 3-amino-2-oxo-l-azetidinesulfon- zuur op in 2 ml dimethylformamide met 0,083 ml triethylamine. Men voegt 123 mg of 0,602 mmol 2,5-dichloorfenylthioazijnzuur, 61 mg N-hydroxybenztriazoolhydraat en 124 mg dicyclohexylcarbodiimide toe, roert het mengsel 2 uur bij kamertemperatuur en daarna 2 dagen 10 bij 5° C. Men verwijdert het oplosmiddel in vacuum, neemt het residu op in water, filtreert door Celite en wast het filtraat met ethylacetaat. Men combineert de waterlaag met dichloormethaan, voegt 612 mg tetrabutylammoniumbisulfaat toe, brengt de pH tot 3 omhoog met IN kaliumhydroxyde-oplossing en droogt na totaal drie maal met 15 dichloormethaan te hebben geëxtraheerd, de gecombineerde extracten op natriumsulfaat en verwijdert het oplosmiddel in vacuum onder verkrijging van een olie. Men voegt een oplossing van de olie in aceton toe aan een oplossing van 612 mg kaliumperfluorbutaansulfo-naat in aceton, waardoor het produkt wordt geprecipiteerd. Na toe-20 voeging van een kleine hoeveelheid ether filtreert men de vaste stof af, wast deze enkele malen met aceton en droogt onder verkrijging van 206 mg poeder.
Analyse berekend voor C^Hg^Oj^C^K: C 31,21; H 2,14; N 6,62; Cl 16,75; 25 Gevonden: C 27,90; H 2,11; N 5,84; Cl 18,04.
Voorbeeld 194 (3S-trans)-3-£ £ £ (2,5-Dichloorfenyl)thio_/acetyl_yamino__/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
30 Men lost 250 mg (3S-trans)-3-amino-4-methyl-2- oxo-1-azetidinesulfonzuur (zie voorbeeld 139) op in 2 ml dimethylformamide met 193 ρ1 triethylamine. Men voegt 285 mg 2,5-dichloorfenylthioazijnzuur, 213 mg N-hydroxybenztriazoolhydraat en 287 mg dicyclohexylcarbodiimide toe. Na 16 uur roeren bij kamertemperatuur 35........... . .............. ...........
8 1 0 0 57 1
If Mi - 163 - wordt het mengsel gefiltreerd en het oplosmiddel in vacuum verwijderd. Het residu wordt in water opgenoraen en gefiltreerd. Men wast het filtraat met ethylacetaat, bedekt het met een laag di-chloormethaan en voegt 4,2 mmol tetrabutylammoniumbisulfaat toe.
5 Na in totaal drie extracties met dichloormethaan, worden de gecombineerde extracten op natriumsulfaat gedroogd en wordt het oplosmiddel in vacuum verwijderd onder verkrijging van 920 mg olie. Bij een oplossing van de olie in aceton voegt men 946 mg kaliumper-fluorbutaansulfonaat, opgelost in aceton. Er precipiteert langzaam 10 een vaste stof, die men wint, twee maal met ether wast en droogt tot 306 mg poeder. Chromatografie over een kolom van 100 ml HP-20 hars en eluering met 20 % azijnzuurnitril : 80 % water, levert het gewenste produkt op, dat uitkristalliseert na afdamping van een water:methanol mengsel. Aanwrijving van het residu met aceton 15 levert 233 mg poeder op met smeltpunt 212-213° C onder ontleding.
Analyse berekend voor C12H11N2°5C12S2K: C 32,95) B 2,54; N 6,41; Cl 16,21; S 14,66;
Gevonden: C 32,91; H 2,60; N 6,42; Cl 16,50; S 13,77.
Voorbeelden 195-196 20 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 138 volgt, maar (3S-trans)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur gebruikt in plaats van (3S-cis)-3-amino-4-methyl-2-oxo-l-azetidine-sulfonzuur en een zuur uit kolom I van onderstaande tabel gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-(methoxyimino)-4-thiazoolazijnzuur, 25 verkrijgt men de overeenkomstige verbinding van kolom II van onderstaande tabel.
30 81 00 57 1
* * - 164 - Voorbeeld Kolom I Kolom II
i H • I >1 p s P I V I ü <Ö, I P o\ s Pi o 0 0 N 0 C I c -π 3 •H g -H 4-i3 I ,-r f- & n' Γ- 8 l N.1 «J N 1 -» fi m H o ,1 >ιΉ K, β H K p oi s'srs 0 A •HO Ή >i P Pi Λ <ΰ —- I Μ a ·*· (ö P0,w I K-H \ I 10 0 M β X ,η ·ι-ι o kilA
'ί •5 p 1 § N H G Ss ·η P Ή O) N O lö a O H Pi >1 O β O 0) 5¾ § 3 .w P VI C? * in <n u o I C" « I CO Η Η H .& O P o a c o o 3 a i a 0 CN P Pi I H OHO) 0 >i B β Λ W •Η P 6 <D * S B P ,'-' I O 1 ·7 | O Ή \|C H 1 -ri « (O g M 1¾¾ Ki* s ca P N if ® C Öi ' O O β G <W -rl * Η Η Ό Pi Ss 3 V — C 01 H a <d <u p ,n m c c khS ° I o -w u w g p o ·Ρ dl T3 kil S §
* c •H
iH * O o «J O Pi o o β •H
io Ή .w N 1 ,<« \|Ή I Ss o Pi dl *— M-i vo σι 8100571 * * - 165 -
Voorbeeld 197 / 3S(RX)_/-3-/ / /_ (Arainooxoacetyl)amino_/(4-hydroxyfenyl)acetyl_/- amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
_____”----------------------:-:¾------------------------------------- 5 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 28 volgt, maar (R) -/_ (aminooxoacetyl)amino_/ (4-hydroxyfenyl)azijnzuur gebruikt in plaats van (Z)-2-amino-a-/_/ 2-(difenylmethoxy)-1,l-dimethyl-2-oxoethoxy_/imino /-4-thiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt 128° C, onder ontleding.
10 Voorbeeld 198 f_ 3S(RX)_/-3-V / (2-Amino-4-thiazolyl)/ / / 3-/ (2-furanylmethyleen) -amino__/-2-oxo-1 -imidazolidinyl_/carbony amino__/ acetyl__/amino_/-2- oxo-l-azetidinesulfonzuur, kaliumzout.
15 Wanneer men de werkwijze van voorbeeld 6 volgt, maar (R)-2-amino-a-y / / 3-V (2-furanylmethyleen)amino_/-2-oxo-1-imidazolidinyl_/carbonyl_/amino__/-4-thiazoolazijnzuur gebruikt in plaats van aminothiazoolazijnzuur, verkrijgt men de in de titel genoemde verbinding met smeltpunt > 250° C.
20 Voorbeeld 199
Biologische produktie van EM5117.
9 Liter fermentatie.
Chromobacterium violaceum SC 11,378, A.T.C.C. No. 31532 wordt gehouden op het volgens gesteriliseerde agarmedium 25 (A):
Gram
Gistextract 1
Rundvleesextract 1 NZ Amine A 2 30 Glucose 10
Agar 15
Gedestilleerd water tot 1 liter
De pH wordt op 7,3 ingesteld vóór sterilisatie bij 121° C gedurende 30 min.
35 Men neemt een lusje oppervlaktegroei van het 81 00 57 1 - 166 - ·* fe 5 10 15 20 25 30 35 micro-organisme voor het enten van elk van drie 500 ml Erlenmeyer kolven, die elk 100 ml bevatten van het volgende gesteriliseerde medium (B): Gram Havermeel 20 Tomatenpasta 20 Leidingwater tot 1 liter Men stelt de pH in op 7,0 alvorens 15 min. bij 121° C te steriliseren. De kolven worden daarna bij 25° C geincubeerd op een roterende schudinrichting (300 omw./min., slag 5 cm) gedurende 24 uur. Na ongeveer te hebben gelncubeerd als boven omschreven maakt men 1 vol.% transfers vanuit de groeicultuur kolven op 100 Erlenmeyer kolven van 500 ml, die elk 100 ml bevatten van het volgende gesteriliseerde medium (C): Gram Havermeel 20 Tomatenpasta 20 Glucose 30 Leidingwater tot 1 liter Men stelt de pH in op 7,0 alvorens 15 min. bij 121° C te steriliseren. Na de enting worden de kolven 18-24 uur bij 25° C gelncubeerd op een roterende schudinrichting (300 omw./min,, slag 5 cm). Daarop worden de kolfinhouden verenigd en wordt de vloeistof gecentrifugeerd onder verkrijging van ongeveer 9 liter bovenstaande vloeistof. 250 Liter fermentatie. Men gebruikt een lusje oppervlaktegroei van een schuine agarcultuur (medium A) van Chromobacterium violaceum SC 11.738 A.T.C.C. No. 31532 voor het enten van elk van vijf 500 ml Erlenmeyer kolven, die elk 100 ml gesteriliseerd medium (B) bevatten. De kolven worden daarna bij 25° C 24 uur gelncubeerd op een roterende schudinrichting (300 omw./min., slag 5 cm). Nadat men 81 0 0 57 1
* V
- 167 - ongeveer geïncubeerd heeft als boven beschreven maakt men transfers van 1 vol.% vanuit de groeicultuurkolven naar vijf Erlenmeyer sr ' - kolven van 4 liter, die elk 1,5 liter gesteriliseerd medium B bevatten. Na enting worden de kolven vervolgens 24 uur bij 25° C gelncu-5 beerd op een roterende schudinrichting (300 omw./min., slag 5 cm). Nadat men ongeveer als boven beschreven heeft geïncubeerd maakt men een transfer van 1 vol.% naar een van een roerder voorziene fermen-teertank, die 250 liter gesteriliseerd medium (C) bevat. Na enting zet men de fermentatie voort onder de volgende omstandigheden: 10 temperatuur 25° C, druk 70 kPa overdruk, aerering 280 Ι/min., beroering 155 omw./min.. Men voegt indien nodig als een antifchuiramiddel Ucon toe. Na 18-24 uur is de fermentatie voltooid. De fermentatie-vloeistof wordt daarna met zoutzuur ingesteld op pH 5,0 en de vloei-stofinhoud van de tank wordt gecentrifugeerd onder opbrengst van 15 230 liter bovenstaande vloeistof.
Winning en zuivering.
De bovenstaande vloeistof van de fermentatie van 250 liter wordt met zwavelzuur op pH 5 ingesteld en gefiltreerd 20 onder gebruikmaking van 3-5 % diatomeeënaarde (Celite). Het vloeistof filtraat wordt geëxtraheerd met twee porties van 30 ml 0,005 M cetyldimethylbenzylammoniumchloride in methyleenchloride.
De gecombineerde onderste fase wordt geëxtraheerd met 6 liter 0,05 M natriumjodide, dat met azijnzuur op pH 5 is 25 ingesteld. De onderste fase wordt weggeworpen en de bovenste fase in vacuum tot 500 ml geconcentreerd.
Men extraheert het geconcentreerde materiaal met 400 ml n-butanol. De bovenste fase wordt weggeworpen en de onderste fase wordt in vacuum geconcentreerd tot droog. Het residu 30 wordt, voor zover mogelijk in 150 ml methanol opgelost. De onoplosbare stof wordt weggeworpen en de methanoloplossing wordt in vacuum geconcentreerd tot droog, waarbij men 38,6 g ruw antibioticum verkrijgt.
Het ruwe produkt wordt opgelost in 10 ml metha-35 nol-water (1:1) en gechromatografeerd over een 500 ml kolom van 81 00 57 1 '·» w - 168 - verknoopte dextrangel (Sephadex G-10) in hetzelfde oplosmiddelmeng-sel, waarbij men elueert met 2 ml/min. en fracties van 20 ml opvangt. De actieve fracties (19r26) worden gecombineerd en in vacuum ge-concentreerd. Het residu van 5,23 g wordt met 50 ml methanol ver-5 mengd. Onoplosbaar materiaal wordt afgefiltreerd en weggeworpen.
Het filtraat wordt in vacuum geconcentreerd.
Het residu van 5,0 g materiaal wordt opgelost in 10 ml natrium 0,01 M fosfaatbuffer pH 5 en geleid over een kolom van DEAE cellulose (Whatman DE52 cellulose), dat gevuld en in even-10 wicht gebracht met dezelfde buffer is. De kolom wordt geëlueerd fc'-Λ V; 1 bij 5 ml/min. met een lineaire gradiënt, bereid uit 4 liter 0,01 M natriumfosfaatbuffer pH 5 en 4 liter 0,1 M natriumfosfaatbuffer pH 5 onder opvangst van 20 ml fracties. De actieve fracties (192-222) worden gecombineerd en in vacuum geconcentreerd en in methanol 15 onoplosbaar materiaal wordt verwijderd onder goed uitwassen met methanol. Verwijdering van oplosmiddel levert 576 mg materiaal op.
Men lost dit residu van 576 mg ,op in 4 ml water en stelt de pH met 1 ml 0,1 N natriumhydroxyde in op 5. Men chromatografeert de oplossing over een kolom van gealkyleerde, 20 verknoopte dextrangel (Sephadex LH-20) in water onder eluering bij 1 ml/min. en vangt fracties van 10 ml op, De actieve fracties (38-44) worden gecombineerd en geconcentreerd onder verkrijging van 459 mg residu.
Men lost 348 mg van dit residu op in water en 25 leidt deze oplossing over een kolom van macroreticulair styreen-divinylbenzeen copolymeerhars (Diaion HP20AG), welke kolom eerst is toebereid door wassen met methanolisch kaliumhydroxyde, methanol, methanolisch zoutzuur, methanol en water en daarna met water is gevuld. De kolom wordt met water geëlueerd bij 1 ml/min. onder op-30 vangst van 10 ml fracties. De actieve fracties (36-43) worden gecombineerd en geconcentreerd tot 186,4 mg materiaal. Chromatografie op dezelfde wijze van nog 100 mg van de 459 mg residu van de voorafgaande trap, levert 51,5 mg materiaal op. In dit stadium zijn de 186,4 mg materiaal en 51,5 mg materiaal nagenoeg zuiver EM5117 als 35 blijkt door dunnelaagchromatografie en kernmagnetische resonantie-----------------spectra. ----------------- - - .............................. ............ - ........................... -................-........
8100571 w * - 169 - 5 10 15 20 25 30 35
De 186,4 mg portie van EM5117 als boven verkregen, wordt opgelost in water en door een ionen uitwisselende harskolom geleid (Dowex 50W^£2, 0,074-0,037 mm, kaliumvorm) waarbij men met twee bedvolumina water wast. Concentratie van de effluent levert 189,0 mg kristallijne vaste stof op. Herkristallisatie van dit materiaal geschiedt door het in 0,38 ml water op te lossen en 3,42 ml methanol toe te voegen. Het resulterende mengsel wordt op ijs afgekoeld en gefiltreerd onder verkrijging van 145 mg kristallen. Twee verdere herkristallisaties op deze wijze uit water-methanol, 1:9, leveren 95,9 mg EM 5117, kaliumzout op met smeltpunt 194° c onder ontleding. Optische rotatie in water bij 21° C (c = 1).
λ (nm) 589 579 546 436 365 L aJ +94,3° +98,6 +113,1 +203 +348
De volgende fermentatiemedia zijn doeltreffend voor de produktie van EM5117 en kunnen worden gebruikt in plaats van media B en C van bovenstaand voorbeeld: Medium D
Voedingsbloem Glucose Gistamine
Gram 30 50 2,5
CaC03 7 Gedestilleerd water tot 1 liter. Medium E
Gram
Gistextract 4 Moutextract 10 Glucose 30 Glycerol 2
Gedestilleerd water tot 1 liter 81 00 57 1 t - 170 - Ingesteld op pH 7,3 voor sterilisatie Medium F Gram Glycerol 10 5 L-Asparagine 5 kh2po4 1 Na„HPO. 2 4 2 Glucose 50 MgS04„7H20 0,2 10 Gistextract 2,5 Leidingwater tot 1 liter. Medium G Gram <NH4>2S04 2 15 L-Asparagine 5 Glucose 50 Glycerol 10 Kh2P°4 3 K2HP04 7 20 MgS04.7H20 0,2 Gistextract 2,5 Gedestilleerd water tot 1 liter. pH ingesteld op 7,0 • Mediüm H 25 Gram k2hpo4 7 kh2po4 3 Na citraat 0,5 MgS04 0,1 30 <NH4> 2s04 1 Glucose 30 Gistextract 2,5 Gedestilleerd water tot 1 liter. Medium I 35 Gram 8 1 0 0 57 1 171
Gram
Voedingsbloem 10 <HH4>2S0* 5
Glucose 50 5
Gistextract 2,5
CaC03 5
Gedestilleerd water tot 1 liter. Medium J
10 15 20
Gram Baby havermeel . van Gerber 20 Tomatenpasta van Contadina 5 Glucose 20 Leidingwater tot 1 liter pH ingesteld op 7,0. Medium K Gram Baby havermeel van Gerber 5 Tomatenpasta van Contadina 20 Glucose 20 Leidingwater tot 1 liter pH ingesteld op 7,0.
Medium L
Gram
Gistextract 4 25
Moutextract 10
Glucose 34
Medium M
Gram
Amberex (1003) 5 30
Glucose 30
Leidingwater tot 1 liter 8 1 0 0 5 7 1 35
X
Medium N
- 172 -
Amberex Cerelose 5
Leidingwater tot 1 liter
Voorbeeld 200
BiologiscHe produktie van EM 5210.
Gluconobacter species SC 11.435 A.T.C.C. No. 31581 wordt gehouden op het volgende gesteriliseerde agarmedium (A): 10
Gram 15
Gistextract 1 Rundvleesextract 1 NZ Amine A 2 Glucose 10 Agar 15
Gedestilleerd water tot 1 liter De pH wordt op 7,3 ingesteld vóór sterilisatie bij 121° C gedurende 20 min..
20
Een lusje oppervlaktegroei van de schuingeplaatste agarcultuur (medium A) van Gluconobacter species SC 11,435 wordt gebruikt voor het enten van elk van drie 500 ml Erlenmeyer kolven, dieëLk 100 ml bevatten van het volgende gesteriliseerde medium (B):
Gram
Gistextract 4 25
Moutextract 10
Dextrose 4
Gedestilleerd water tot 1 liter Men stelt de pH op 7,3 in alvorens 15 min. bij 121° C te steriliseren.
30 35
Gram 5 33
Na de ent worden de kolven 24 uur bij 25° C geïncubeerd op een roterende schudinrichting (300 omw./min., slag 5 cm). Na ongeveer als boven omschreven te hebben geïncubeerd maakt men transfers van 1 vol,% vanuit de groeicultuurkolven naar 100 Erlenmeyer kolven van 500 ml, die elk 100 ml bevatten van het volgende gesteriliseerde medium (C): 8100571 *- ï
Gram - 173 - 5 Gistextract 5 Glucose ^ 10 Gedestilleerd water 1 liter Het medium wordt 15 min, bij 121° C gesteriliseerd. Na enting worden de kolven 18 uur bij 25° C geincubeerd op een roterende schudinrichting (300 omw./min., slag 5 cm). Daarop worden de kolfinhouden verzameld en de vloeistof 10 gecentrifugeerd, waarbij men ongeveer 9 liter bovenstaande vloeistof verkrijgt. f > Winning en zuivering (kleinschalig). De actieve stof uit de bovenstaande vloeistof 15 ·* (10 1) wordt geabsorbeerd aan een 500 g kolom van sterk basische anionen uitwisselende hars met guaternaire ammoniumgroepen, die gebonden zijn aan een styreen-divinylbenzeen copolymeer rooster (Dowex AG1-X2(Cl-)), gewassen met water en geëlueerd met 5 % na- 20 triumchloride in waterig 0,01 M NaH^PO^. Het eluaat wordt in vacuum geconcentreerd. Het residu wordt geadsorbeerd aan 250 g actieve kool, die met water wordt gewassen. EM5210 wordt geëlueerd met methanol-water (1:1). De actieve fracties worden gecombineerd en in vacuum geconcentreerd onder verkrijging van ruw EM5210. m CN Het ruwe EM5210 wordt gechromatografeerd over een 280 ml kolom van sterk basische anionen uitwisselende heirs (Bio.Rad AG 1-X2 (Cl-)) onder gebruikmaking van een lineaire gradiënt, bereid uit 1 liter water en 1 liter 2N pyridiniumacetaat (pH 4,5). De actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd 30 in vacuum. Het gedeeltelijk gezuiverde EM5210 wordt verder gezuiverd door gelfiltratie van het residu over een 500 ml kolom van verknoopt dextrangel (Sephadex G-10) onder eluering met water. De actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd onder 35 verkrijging van 26 mg EM5210. Het kaliumzout van EM5210 wordt 81 00 57 1 V t - 174 - bereid door EM5210 te leiden door een kolom van kationen uitwisselende hars (Dowex 50-X2) in de kaliumvorm.
%
Winning en zuivering (grootschalig).
5 Het vloeistoffiltraat van een 250 liter fermen <-;.s f tatie (pH 3,7) van Gluconobacter species SC 11.435 wordt geabsorbeerd aan 10,8 kg sterk basische anionen uitwisselende hars (Dowex 1-X8 (Cl-)). De hars wordt gewassen met water en geêlueerd met 5 % natriumchloride in 0,01 M natriumdiwaterstoffosfaat. De 10 actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd tot een klein volume. Het geprecipiteerde zout wordt verwijderd en het filtraat wordt van zout bevrijd door het te leiden over een kolom van actieve kool (1,1 kg 0,42-0,84 mm Darco) in water. Men wast de kolom met water en elueert het EM5210 met methanol-water, 1:1.
15 De actieve fracties worden gecombineerd en geconcentreerd. Het residu van 16 g wordt opgelost in water en gechromatografeerd over een kolom van 600 ml sterk basische ionen uitwisselende hars (Bio. Rad AG 1-X2 (Cl"), 0,037-0,074 mm), onder eluering met een lineaire gradiënt, bereid uit 1 liter water en 1 liter 10 % natrium-20 chloride in 0,01 M natriumdiwaterstoffosfaat. De actieve fracties worden gecombineerd, in vacuum tot een klein volume geconcentreerd en de geprecipiteerde zouten worden afgefiltreerd. Het filtraat wordt geleid over een kolom van macroreticulaire styreen-divinyl-benzeen copolymeerhars. De kolom wordt met water geêlueerd. De 25 actieve fracties worden gecombineerd, tot een klein volume geconcentreerd en gevriesdroogd, onder verkrijging van 120 mg natriumzout van EM5210.
Teneinde het natriumzout om te zetten in het lithiumzout gebruikt men een ionen uitwisselende harskolom (Dowex 30 50 W-X2, lithiumvorm). 100 mg Van het natriumzout wordt opgelost in 0,5 ml water, over de kolom geleid en met water geêlueerd. De actieve fracties worden gecombineerd en rechtstreeks gevriesdroogd onder verkrijging van 95 mg lithiumzout van EM5210 als amorfe vaste stof.
35 Het vrije zuur (inwendig zout) van EM5210 wordt 8 1 0 0 5 7 1 £ - 175 - bereid door een basisch zout van EM5210 te leiden over een kolom van zwak zure ionen uitwisselende hars in de H+ vorm. Zo kan men bijvoorbeeld 2 mg van het lithiumzout leiden over een kolom vein Bio. Rad Bio. Rex 70 (H j en met water elueren onder verkrijging 5 van 1r45 mg van het vrije zuur (inwendig zout).
Chemische eigénschappen van EM5210.
1) Ninhydrine positief 2) Zure hydrolyse (6N HCl bij 115° C gedurende 16 uur) levert twee belangrijke ninhydrine positieve vlekken op 10 bij papierchromatografie (Whatman No. 1, butanol-azijnzuur-water (5:1:4) en één zwakke ninhydrine positieve vlek, die door UV-geëxciteerde fluorescentie afschrikt. De twee belangrijke ninhydrine positieve vlekken zijn D-glutaminezuur en D-alanine.
15 Fysische eigenschappen van EM5210.
1) UV-spectrum van het natriumzout in water: eindabsozptie.
2) IR. - Hoofdpieken van het lithiumzout in KBr: 1770, 1640, 1530, 1384, 1242 en 1051 cm""1.
20 3) PMR. - Chemische verschuivingen van het lithiumzout in gedeutereerd water, ppm, afwaarts van TSP: 1,40 (d,J=7Hz), ca. 2,14 (m), ca, 2,44 (m), 3.49 (s), 3,73 (t,J=6Hz), 3,94 (s), 4,28 (m).
Optische draaiing van het vrije zuur (inwendig 25 zout) in water bij 24° C (00,15 %) (pH 2,7): λ (nm) / o_/ 589 +73° 578 +79° 546 +91° 30 436 +159° 365 +263°
De volgende fermentatiemedia zijn doeltreffend bevonden voor de produktie van EM5210 en kunnen worden gebruikt in plaats van medium (B) en (C), die in de tekst zijn genoemd.
35 81 00 57 1
Medium D
- 176 -
Gram
Havermeel 20
Tomatenpasta 20
Leidingwater tot 1 liter.
Men stelt de pH in op 7,0 alvorens 15 min. bij 121° C te steriliseren.
Medium E
Gram Θ 10 Gistamine 5 Cerelose Leidingwater tot 1 liter. 11 Sterilisatie gedurende 15 Medium F min. bij 12 15 Gram Glucose 5 Wijnsteenzuur 2 Gistextract 0,5 (iffl4)2ro4 1 20 «V2S°4 2 K2HP04 0,5 NaH^PO. 2 4 0,5 MgS04.7H20 0,2 CaCO^ 1 25 Gedestilleerd water tot 1 liter. Men stelt de pH in op 6,0 121° C te steriliseren. Medium G alvorens 15 . Gram 30 Voedingssojabloem 30 Glucose 50 Gistamine 2,5 CaCO^ 7 Gedestilleerd water tot 1 liter Sterilisatie bij 121° C gedurende 30 min.
35 8100571 5 ï β
Medium Η
Gram - 177 - NZ Amine A 10
Cerelose 33
Gist amine 2,5
Leidingwater tot 1 liter.
Sterilisatie bij 121° C gedurende 15 min.. Medium I
Gram 10
Voedingssojabloem 15
Oplosbaar zetmeel 15
Glucose 50
CoCl2.6H20 0,005
CaC03 10 15
Gedestilleerd water tot 1 liter Sterilisatie bij 121° C gedurende 30 min.. Biologische activiteit 20
Men gebruikt de volgende methodologie voor het bepalen van de minimum inhibiterende concentratie (hierna MIC genoemd) van de β-lactamen van de uitvinding.
De proef organismen worden gekweekt in ongeveer 15-20 ml antibiotische proefvloeistof (Difco) door de vloeistof (in buizen) te enten met een lusje van het organisme van een BHI (Difco) schuingeplaatste agarcultuur. De geënte buizen worden 25 18-20 uur bij 37° C geïncubeerd. Deze cultures bevatten naar men g aanneemt 10 kolonie-vormende eenheden (hierna genoemd KVE) per ml. De cultures worden verdund op 1:100 teneinde een definitief 4 30 entgehalte te verkrijgen van 10 KVE. De verdunningen worden gemaakt met K-10 vloeistof (waarvan de samenstelling nog nader zal worden gegeven).
35
De verbindingen worden in het geschikte verdun-ningsmiddel opgelost in een concentratie van 1000 pg/ml. Men maakt tweevoudige verdunningen in K-10 vloeistof, resulterende in een reeks van 1000 yg/ml tot 0,5 yg/ml. 1,5 ml van elke verdunning wordt geplaatst in afzonderlijke vierkante Petri-schalen, waarin 81 0 0 57 1 178 - 13,5 ml K-10 agar is gebracht. (De samenstelling van K-10 agar zal nog nader worden gegeven). De definitieve concentratie van de actieve stof in de agar varieert van 100 /^g/ml tot 0,05 g/ml. Controleplaten op de organismegroei, die slechts agar bevatten 5 worden vóór en na de proefplaten bereid en geënt. De organismen worden op het agaroppervlak van elke plaat aangebracht met een Denley Multipoint Inoculator (die ongeveer 0,001 ml van elk organismen aflevert), resulterend in een definitief entgehalte van 4 10 KVE op het agaroppervlak.
10 De platen worden 18 uur bij 37° C geïncubeerd en de MlC's worden bepaald. De MIC is de laagste concentratie van de verbinding, die groei van het organisme inhibiteert.
K-10 Vloeistof is een gistrundvleesvloeistof, die bevat: 15 Rundvleesextract 1,5 g
Gistextract 3,0 g
Pepton 6,0 g
Dextrose 1,0 g
Gedestilleerd water als nodig tot 1 liter.
20 K-10 agar bestaat uit:
Rundvleesextract 1,5 g
Gistextract 3,0 g
Pepton 6,0 g ^25 Dextrose 1,0 g
Agar 15,0 g
Gedestilleerd water als nodig tot 1 liter De thans volgende tabellen zijn de getabelleerde resultaten, die werden verkregen toen men de β-lactamen van de 30 uitvinding beproefde op verschillende organismen. Het nummer achter elk organisme heeft betrekking op het nummer van het organisme in de verzameling van E.R. Squibb & Sons, Inc., Princeton, New Jersey. Een streepje (-) in de tabellen betekent, dat de beproefde verbinding geen activiteit tegen het betrokken organisme vertoonde bij 35 100 ji.q/m.1. Het symbool "N.T" betekent niet getest.
81 00 57 1 .179 GC155f (ug/ml) u H 2
Ό t~» Φ O! Λ ft 01 o > c <c > +» ü 3 Ό O U & rlriflW rH ΓΠ 1 o ♦ · · · o « · I 1 1 1 1 1 1 1 o 1 1 1 1 1 o 1 1 H ηιηιοπ o co co o o Η H rH rH rinn rH rH 1 r 1 tn 1 1 • · · tn o · · 1 o o o o o o o o o o 1 σι moioNonn ooinooLOioomo CM rH rH rH iH iH .*H rH ·* rtHdW co in 1 1 I • · · · 1 · · 1 o o o 1 1 i o i 1 1 1 o o 1 o vonioN 10 CM o o o in tn o r-i rH ι-H rH i-H rH HrfClin co co 1 1 o tn 1 . · · · · 1 · · 1 ‘o o o 1 1 o o o o o 1 1 r- nmeN rH CO o o o o o o o o o CM H rH rH rH rH rH rH rH rH rH tn co in CO in • · · in 1 · O 1 1 o o i 1 o · I O 1 1 1 1 O 1 1 o co CM CO CM CM co in o in o CM o tn o rH i—i <-) rH rH rH rH ίο co io n 00 co • · « · 1 ♦ · 1 in i i 1 1 1 1 m 1 1 1 1 1 I 1 1 1 in HOHUJ O H CM CM (OOrlr^ • t · · 1 in o 1 1 1 1 1 1 1 O 1 1 t 1 1 1 1 1 1 1 n VO 10 CO CO cm in o rH co co rH in H co I i i * I ♦ · o o tn in o o l in i o o 1 1 1 o o 1 1 rH HHMM PO co LO O CM CM O O CM m tn o o rH rH rH rH iH rH
co σι o in 1—1 r-« in CO σι O Γ- in cn VO in cn CO CO 00 ΓΟ in 03 CO Γ* σ\ o CO rH CO σι σι in cn o M· CM in r~ rH σι "3· Γ0 Γ rH CO M· CM ro CM ΓΟ M* ,—i O CM M· CM CO 00 σι M* in CO rr rH rf CM Ο in Γ— in CO ro I—Γ CM CM o σι σι CM 00 o σ o O σι ro 00 cn •H CO CO o σι σι cn CO CO rH rH rH iH 1—i rH ·, to 03 «> 3 G •t3 w «» - *. to G ’r3 * n 03 G G 43 G 05 2 03 03 +3 03 n G n ft 03 G 3 3 3 r3 0) 03 0) ft s. O 8 G ¢3 G ¢3 G G G a. 03 Ö G •<4 ft O ft St, ft G t^3 CO ft c·* Ö 0 Gl »0 ft •t3 •5 G •3 3 3 G G 3 < 03 O 03 ** CO a G C3 ft G Gl G 5 G G G Gj 03 r3 **3 •3 •a 0J3 g •3 V O Q 3 G ? a G Cl-, G +a p3 t~3 r3 T-3 Q St, •r-a 3 ra G G G 03 ft G ft G o 03 3 03 03 3 o o O 0 ft •tJ 03 ft. 2 G r r4 G G 3 3 3 03 03 tal 03 03 03 03 03 33 0T3 Ö 53 3? «Κ G G G ft O $ ¢) G 3 3 , G cx OS +3 05 4a ft St, St St, 03 03 .2 m O G G Ü G ¢3 03 G G G OJ St, -M τ-ύ 0 01 G St, G 43 0 w ft* o o O O O ¢3 <s3 "r-3 •3 G OS •3 0) ö co 44> 43 E Ö G ε o G G ¢3 O Ό δ .ft .ST 3; rft r3 ra E St, ra G G •ft G ft ft G m o 0 O O G G ¢3 03 03 03 03 fO ra t-a C G G G O Ό 33 -H t-Λ r-3 T*4 T-3 o O O V3 •3 **i 03 03 03 2 03 2 ra 33 33 G <4 E E O c 33 33 33 +3 +3 O ft St, St, •p> *3 ·«»* pj •v Vat K ra p O 33 43 rS G 43 frt .ft .g Λ Λ CX S3, C, 03 0) ot 03 to CO 03 03 03 0 03 r, St, O G 'S 2 IU α CX S3, 5¾ G a ft -ft as 3Ϊ 33 33 +3 -» 43 E Cïj G G St, ft 3 s ft Cr G <3 G St, St, G 03 03 03 03 03 03 O p O t-a •3 43 +3 43 ft G G •3 ft 43 4a +3 +1 +3 43 *ri 03 03 03 to r-3 ra St, St, OS pa ft ft •3 .03 03 G o ¢0 to CO CO Co CO fel fe3 fel fe3 fei cx sx ft, CQ CO fel &3 CJ CO ft, ft, "=C
81 00 57 1 GCl55i <,180.
Figure NL8100571AD01811
Figure NL8100571AD01812
18 ο ο ιη ο m in cm ιη 1 50 100 1 1 1 1 1 1 lilt 1 1 1 1 o o o ο in o rH rH 1 in in in in CO CO co r- • · · · 1 • in 1 1 o o 1 1 i m i i 1 1 1 1 • O 1 t Η (N CM CM CM VO CM o o CM vo in •vo rH rH H rH rH rH H m in in CO VD • · · « 1 • in 1 1 o o 1 1 o in o o 1 1 1 1 o in 1 1 Η CO VO CM CM VO CM o o O CM o o O CM H rH rH rH i—1 rH rH rH Ο) (1) £ in Μ ιη o o o o 1 • o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 in o 1 o Η 0 »Η o m in in cm in cm in in V > H rH tτ 3. 5 in in Π3 in co ro 6 8 4 8 1 2 4 2 1 0 1 0 8 4 8 1 1 4 in Ρ Μ· • · · I o o • γΗ CM VO VO 0 1 0 0 0 3 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 3 0 CM o ο 4J rH iH V V rH H • 0 Η 3 • Ό in in in in vo in 2 Ο η in in · l 1 • in in o o in in • · m · in 1 o 1 l o 1 1 U -Η CM CM CM CM CM CM in in cm CM CM CM I—) CM CM CM o in 0. rH rH rH rH rH r-H in in ro ro VO VO 00 vo «vr M* 1 2 0 4 1 4 M* CO rH 5 8 5 (Μ • · · · 1 o in rH CM VO VO 0 1 1 0 o r-\ O o o o o o o O o o m CM O CM CM -H H V rH rH
VO σι o in rH r» in M* r·» VO σι o r- in cn vo in cn vo 00 co m in σι ro r~~ σι o vo H co σι σι in cn o M* CM in Is- H cn M* CO ΓΜ rH 00 M* CM co CM co M· rH O CM *3« CM 00 •co cn M· in co M* Ή rH M" CM o in r· in ro m iH CM CM O σι cn CM 00 o o o o σι CO 00 cn 1—i 00 00 o σι σι cn 00 00 i—1 rH i—1 rH i—i i—1 « G •H G 40 n *» 03 •is 03 G G G 03 03 03 C'J •H -13 G G *> 03 03 G a a a a t-3 o 03 G G a t3 0 O G g ca ca 0) G G G •r3 G G MO 03 a a O a a ft <0 T-3 CO G a Ö G Gj a M3 •H G -vl t-) 3 2 —1 to G a G o 03 Λ ·% CO G p> a G Gl Go t—3 « G a G C3 G M •H •r3 Ö3 g *r3 03 O 0 a a G •s* r-1 a G 0 40 T-3 r-3 T-O t~o Q a T—3 s. •Η ra •H 1—3 G G CO a a G 3 03 03 03 a O O O O R. Ή G R. cl G G ,a G G G a a fO 03 03 T-3 G G O 0 G rO Ö3 G f33 K G G a a g ¢3 G δ a r—> G Cl Ö +3 ¢33 iS a R. a a G V g g Ü C3 G G 03 G G G G G Rl +3 T—3 0 G G a G 03 03 4o o o o o G G a •ri •H •H Ή a •r3 3 G 03 +3 +3 G E 0 G G E G G G G 0 O δ rG tG rG 1-0 1-3 ε s, a t—3 G G 40 a a G W o o o o G G G G G G G r-0 T—3 r—J G G G G G Q o rCl *r{ 1—3 t-3 T-3 T-3 o Q o *j3 •to •H •<0 G G 03 03 03 G 1—3 rC3 rCl G •H E E o as a> aj aj 43 +3 G a a R, a Ή •H (H a a a 1-3 o o rQ 40 o rS 40 lx ra rC as rC ft, Cb c G cj G G 03 03 G G G o G R. R| G G 'G s (3 ο. 1¾ ft. Pj G G R, .C rG r-G -a rCl rft +3 +3 +3 E Gi G G a a 3 a a tr G Q SH G G G G G G G o o 0 1-3 Ή +3 43 40 a G G •H R| Ίο 4o +3 -vo 40 40 MO 03 03 .03 03 ts 1-3 Rj R, R. G ra a _a Ή G 03 03 G O co co Co CO to co 5 C*J CO k) CO S< ft. ft. ft. CO co C*3 ki CJ co ft. ft. m: 81 00 57 1
GC155f -181- x vo CM
in CM
*r CM
vo co >h ω η m vo η 4T v 4f n 4j η n o* tn t · .mo · < · «in · ......... in o · · o HrinOWOnVOONWVOOOOOOVOVONNlrtONin «H
mmm mm vo vn to HODMOOO'tOM'fOOC'lTrCO'iCOM'H • •tno·····*·······*····· m «HfHiHCMmOOOOOOOOOOOOOOOOOOCOCM VVV V V
4'
ριριηπ rHin ····! *·||00ΙΙΙ0|ΙΙΙΙΙ00ΙΙ vo vo m vo m cm . o o o om· fH H r-4 tH iH
'd
Figure NL8100571AD01821
S
(uq/ml) u H 2 jJ ü 3 Ό O u 04 O) £ w •H c (Ö t? J-t o
n CM
CM CM
o o oo lol i i i Eh i m m m o m · · Η Z
I I I I I 1 I I O I I I o i—I
O O O O I m o o o cm in rH i—I i—I iH
tn cn O I O O O I I I I 1-000 I O O · O I -- ooo ooo o o vo o H iH rH H I—I I—I rH rH <H
m mmm vomaocovococococoóvooocovocom h η ·<·οο··*··........ . . . o «mm CM CMCMCMOOiHVOOOfHOOOOOrHOOfHOVOmrOCMCM Η Η Η H p—f V i—iriiHcnrirn mm m m o · · · · i · · m m · · o m o · o o · o i o o tn i o cm mmmvo mvocMCMCMvomcMocMinmcMo mmcN m i—1 rH i—I >H r 1 mmm m cv m · · · I «olllllllllllllimmoo CM CM CM CM . CM m CMCMintn I—i i—I I—i I—i vocnomrHr^inTr-va fOOVCHCOffiCvinov CNPIM'HOCMM'NCOCO iHCMCMocncncMoooo fH ιΗ Ή
σι o m Otf (Mm o tf m cd o o σι m i—I i—I
σ vo m σι r- rH σ\ η* rj· rH ’a* oo σι H co
vo oo co m p- fH cm o m co o σι i—I
co m σι m co rj· cm co [n m n co σι o co co CU o
co c; CO co •pl 41 η VU •t ti) 3 3 3 3 p-3 O co 0 •J1 01 va 03 va VB O ö -1 VB •pi O •S ^ S, ε. ε, S, ÜM co 3 3 p 0 *!> Oipw K P4 3 3 3 va JX *1 λ *» n va O co co Ö O e ? O <3 ö ö <3 Q) *cA ·ϊ* Οι r -pi v co 0 p 0 Si 3 « «k ö ^ Ni NJ NJ o 3 P3 54 “f3 t-Xi *pl t-i vu 0 w O C3 co co 3 0 0 0 0 Si va *pi vu Si 04 0 0 0 *J 3 3 3 co co p-3 O O O O va Si rO Ö3 S Si R? <c 0 ¢3 O 5 0 3 3 o ex 0 43 C33-W ~ ε. ^ ει O O 0 O 0 0 co ö ö ö ö s, 43 p-3 O Q) 8> ε, 2 O O 0 O <a O 3 ·ρ3 ·ρ3 ·ρ3 *f3 0 0 -«4 va 3 ö CO -W 43 5 E O O O O 0 O OfC^^iM p-i E s, 3 p-3 0 0 43 O O- O O O 0 O O 0 0 O P4 P-3 r-3 ö Q 0 0 0 PJ P-3 P3 P-3 0 O O 'pl ·ρ3 “p3 *pl VB va co co co O M r-O tQ O ’Pl O ö 03 03 8 8 •pl co co « Ö _ Si Si Si 43 43 Si va va o O VB S-, riï *£.· 'pl VB vo O va CO P4 •pl 3 CO VB Λ 43 VB O p-3 S4 ^ £ VB VB 43 43 O O o p< co Ώ p-3 _ w va s, ε, fjl vu VB O ö - - SH Si 43 Ί3 +3 Si p3 VB
§§§*8· 43 43 43 43 co co Co Co Γ-4 cv. va va c. 54 43 43 »,3 CO Co co S &a O O O O 03 vo
CO 3 o *pl -u vb o O o <a Cn Q fS
11 VB VB
Si •ö c ë O Λ E o O +3 o
p3 CO CO O
Co Co Cj Co Óf Ö4 -¾ 8100571 GCl55f
Figure NL8100571AD01831
> -182 -
•rH H H in r? VO tn 1 1 1 in l 1 1 in f * · « 1 · · 1 • 1 O 1 • o 1 1 tn 1 1 m cn <n n cs O H CS o cs o cs rH rH H rH rH COVOCOH CS CO rH rH 1 tn cn • · · t 1 · · 1 • o o 1 1 o 1 • 1 1 l 1 1 • 1 1 m H iH rH Cn o o m tn tn o cn · CS rH rH vo oo vo in Tji VO H ’ cn 1 1 tn CS • · · · o · · 1 • O O 1 o o o • 1 1 l 1 • 1 1 . <n H O H CS O o H cnoin o o o vo • cs Ό Η H rH Η Η H H «H ίο h cn m vo cn 1 1 o; iH • · · · 1 · · 1 o o o l o o tn o o o l 1 tn 1 1 A cn H *n vo vo H O tn tn tn. o o cn o m o cs iH M rH rH rH rH g 0 < 0 > Dn in in ^inincninHincncncDinHcncnin tn 3. C o • · tn o 1 * · 1 o • o 1 3 cn CS CS cs o 0 2 2 6 2 3 2 6 6 o cs cn vo vo CS in CS tn * > rH rH rH rH rH Η H rH H rH U +j in in in in • 0 in n· 2 8 1 4 o o O H o cs 00 00 VO 00 co rH H 3 cn 1 1 1 1 i · tn o • Ό CS cs cs o o o o o o o o o o o 0 0 1 0 o cn o s 0 rH V V V V rH 3 & in "CP I-H in 6 1 6 vo vo cs 6 8 1 cn tn rH 00 • mino tn · · o in • • o 1 CS CS CS CN O cs o m cs 1 3 1 2 rH rH o 1 0 3 vo m CN CS cn tn rH rH rH H cn m H m in cn tn r- • · tn o 1 · · o imno i o · • in in o 1 1 o 1 • 1 1 CS vo cs cs o m cs o cs cs in in cs vo CS CS o o cs rH rH rH rH H rH H rH
vo cn O tn iH r» tn sp r*· vo cn 0 tn σι vo tn cn vo 00 CO cn tn σι ro P- en o VO >H 00 cn σι tn cn 0 rp CS tn pv rH σν TP m pv rH co «5P rs cn CN cn rH O CS rr cs 00 co cn «3· tn co ^P rH ^P cs 0 tn Pv tn m m F—1 cs CS O σι σι CS 00 0 0 0 0 cn m co σι rH co co 0 σι σι σι co 00 rM rH rH H rH 1—1 ·* co •1 ca d •t r. *1 § -Ö V v ·» 1 co •3 •\ co d d ^3 CO co co co *3 -3 n d n d CO co 'V •v» fO 3 Tv} d CO d d c~~» '3 •t 9 0 o ca ca d d •1 d •3 n d d C.0 3 3 Ό Pi 3 3 5h O tv} CO 3 3 n ö d ts 3 •3 *3 V LJ • i 3 d d 3 Λ •s d p CO T\ •t CO d 0 '3 d do dj hJ d d d d ,d dj d •3 •3 •3 •3 dj § •3 *3 co O 0 3 ίνΐ d V* 3 CS A\ d +} tv} tv} Tvl Tv} O 3 tv} 3 •3 •3 tvj ca vij (> co 3 3 co co co w 3 0 0 0 O 3 Si •3 d £ cx, Si d d d d d 3 3 3 w co tvl d d d d d 3 -O dj d j5i 3 d d d Sm S O d O 3 3 d d d Cl, d -3 dj 3 3 3 3 'o O 0 0 d d co d d 3 -3 tv} O d d ri « co s ΗΛ o O O O d d 3 •3 •3 •3 •3 d d •3 d 3 ö Co -3 •3 E d d d O O d 0 0 d r3 *3 r3 Tv} tv} E 3 3 rvi d d 3 ïv 0 0 0 0 0 d d d d d d d Tv} tv} r-i d ü d d O P r-O IV} tv} o 0 0 •3 V *3 d d co co CO to T3 -O Λ Q *3 E E O r? Ξ? 3 •3 d £ £ £ £ *3 •3 3 IV) 3 K tv} 0 O 3 0 o -w r3 ♦3 *3 Cl, Cl, 0 d d d d CO co d d d 0 d 51, 3 £ S "cl, n, O, P, d d 3 td t3 t3 Λ r-Q +} -3 3 δ dj d d Sm 3 3 3 Si tl % 8^ 8^ 3 3 d d d d d d d O 0 O r*vi •3 -3 •3 3 d d -3 -3 -3 +} •3 co co CO co tv} 3 3 3 ö t3 3 3 C.0 co 0 Co co <0 CO co CO ¾ to Co to Co CU 53 0} co CO Cc CO ft. d.
(D
E
w
•H
C
rtJ
Cn 3
O
8 1 0 0 5 7 1 -183 _ i GC155f Μ.» I. C. (ua/ml) Product .van voorbeeld
Hrin CDHiHrlncOMHHCOHCOHin m rH 1 rr I · · · in o · · m tn * o «3* nmoNOriGnniflritornnHnrHnNtoNtNfno H rH rH in m h m m 1 m m « · o 1 · · oinininoinininoininoooo · o «3* rv cn nj o ΠΝΐη«ΝΝΐηΝΝΝΐηηΝΐηιηιηΐΛ« o Η H rH rH rH nnin co cn CM • ·’ · o 1 * · i o o o i 1 O O 1 o o o 1 i o o 1 1 »3· «UNO H co o m in o in o o o o in Η H H rH · rlHH rH CO CD CO iH CO iH CO - 1 rH • · 1 « 1 · · l o i O 1 1 O · O O O 1 1 1 o o 1 ΗΗΗΠ Η n • in o in co in o o in o rH rH rH rH in rl rl r-! ΓΠ cococoincoNco'ioininin rr co co co co n m o in COnrïCOOOi-iHOrtOOOOOOOOPr-ii-iHOCOCg rH V V V V 00 00 CD rH *3- 00 in m 1 Ov • · » · O · · 1 · o 1 { 1 i om i i i 1 l 1 · I n 0 0 0 3 in o o CM O O CM CM rH rH «—1 rH m cn co n*''CQ r» • * · o l · · I O 1 I 1 1 1 1 O J J 1 I 1 1 o 1 1 co «COrIO O <—1 m o o rH rH rH mnH ΝΓ m CO 0 0* 0 1 * · 1 I 1 t 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 I I 1 1 m . lo co cn in O CO vocTiOiniHr^inrrr'VOCTior^-in r'movoricouimmmO'fNin NfOfl'WOM^rNCOCDfflVinCO HNNOO)0\N»OOOOOWn iH C-H Ή 1—| I—1 σ\ co in cn cd co co h rl οι rr n iH rr^H^fNOin co σ» iH oo oo o σι nm οι π O <i (N fO Mnnn σ\ σ» co co
01 g W «r4 c «0 tn D O
«o CO 5 3 <5: G i ^ g 03 03 o o *4 *3 CO 03 § δ
G
33 S3 rC *3 Dj Dj G O +3 +3 00 CQ
« 03 3 ? O G O O O o G o Q O 1-3 t-3 §*8* +3 +3 CQ CO
G ·. G co -r3 •t3 +3 r-3 O G G O r-3 G G ,G G; ^ G
·> 03 G ·ρ3 ·γ3 43 Γ-3 Γ-3 3 0 0 !0 (0 ΰ Cj
δ δ Ο Ο Ο Ο Ο Ü Ο Ο +3 +3 Dj Dj Qi ο Pw Ρ< +3 +3 CO CO
co G G 3 ·*3 ·,3 ü ti; tC G G G Q 'rl -,3 GDP, O G G SuCl? G G G •r3 ¢0 03 5; fc] Cq
*rS *t3 r-3 t*>3 O G G G G G •C3 *,3 *3 -3 G G *£ D G G »3 ·« G G 03 to fcl fcJ
G s> D G G G tv3 r>3 ,-3 rj G G to *,3 -,3 3 to to G rQ* +3 G G O MM J,
a •r* ,-3 t3 Dj’p G V E
*g.2 G Si Ö3 G +1 Go +3 t-3 G 3 P« D to 03 3 3 G G +3 43 O O P, S, CL) O.
G to O 1 r£.‘ ·γ3 D, G 33 3 43 £ O G to T~3 r-3 Q Q) t-3 3 1-1 Λ to Ί G Λ G 3 ‘3 G ay G 1¾1¾ G G 3 O S. 3 Μ B O G G D D ^ , G D 43 43 o G +i - G G ΛΛ Ö Ο O A P, P, O G G D 43 43 -u δ a to 3 G •r3 η 43 G G G co co 0) o 2 ö 3 3 Q t3 ·γ3 G Cft Oo»-3 G G CS P, to -S G G 3 G 0-0 E O O 43 0¾¾ O P, 3 3 3 P di ov G to a G G SP Öh 3 81 00 57 1
184 GCl55f 54 rinn vovorommHnro fnnvoooHH^ovoion^vo Η H rH rH CO VD rH nmonncM 12.5 25 25 6.3 100 1 mmin Hcnininmin inmin m tn in n • · * o m (N (N OJ O IniOCMCMCMCMCMCMCMCMCMVDCMCMininCMCMI 1 rlrl rl H r-1 rH i—) r—1 Η rl H H ·· rH tn CM OO O o in · ooininoo o O O O O O O O o m in m o o 1 CMCMOOCMCMOin 1 O. 1 oom o m m in i o H rH rlHH H »H Η H rH rH H 01 in mm 0) rH • in o o 1 · · 1 jO 1 1 1 1 i i o 1 1 1 1 1 1 O 1 1 Λ in cm cm in in «5 rM o o o rH p u 0 H rH rH \ 0 > in tr • in in m m m 3. ja o CM CM CM CM 1 · · 1 O 1 O 1 1 1 o 1 1 1 I 1 1 I O 1 1 <0 s in rH CM ID o o o in • rH Η H H O u • 0 in m m O r~i in H 0 OO • · · m 1 · o o m · o o O O 1 O O 1 I o o 1 1 l • T3 CM CM CM CM iDcninincMCMom o m in m o o £ O HHi-l rH rH iH r—1 H u fa E-c m LD O O O O 1 o o 110-11 1 1 1 1 I O 1 o 0*10 -^p O O O O in in o 2 o o o CM o i—1 rH H rH rH iH r-1 —1 r-l r-1 in m io io io l£0 CO 8 4 8 2 6 0 HrIO 1 4 8 CO CO 1 4 1 5 in • · ♦ tn l · · Η Η H CM 1 1 O o O O |H O O O O O O O iH r—| 3 0 3 2 V V rH
w m o in H Md r» σ\ o ίο h co σι (N n^rlON'i Η N N O (Π Λ N
•ςΤ Γ> U3 CT> O Γ' LD oun σ o t π ui cm cxj oo σι «si· in oo oo o o o o σ\ m l—l l—Ir—) i—I
cniDinm'Dcoooi’UOffim r'Hffi^'nn'rico'jfMtn OOff\HOOCOOmC3\ffiCDCO
<0 •i p p « co 3 3 o « 3 rH '•Ö o Λ P O « Ί O, i p P ca ca P p (3 *» o V ö P p-j imd co p P Ri o rH co S3 P Λ ö co Po iH S3 V 3 3 3 3 Cl' P •1 -1 ca o co Ί co p Co P Cn <3 p P p .¾ Po ca V •3 V V Po V V co O ·% P ri C-' P *v **-» P +0 rH rn rH r-o O t^O P •H rP V rn P Mi r co P co. co CQ 00 tO o O o O P P P Pi P P P c. P 3 3 3 •o rH Co Co rH co CO o P ca K rO Po 3 3o S3 P P 0 0 CO p 3 3 <3 P, P +0 Po +0 S3 P P P 0) ¢) O 0 o o CO w ö <3 C3 <3 P +0 rH O P P P P co /-* O O 0 co co CO 3 •H *-n •<n 13 α •3 3 ö w ΗΠ HH P B P 6 P O p co o o CO rif fa fa *«*«*. rH ε P P rH CO co -P S3 Ifl O O o o co co CO co co P P rH ro rH ö P P P P O •H rH Tsi rH rH o Ό co vo *r» V V P P co co « rH Λ Pi P *P er c 33 3} 3o 3) +0 HO co P P P P •3 V 3 3 ««4 2 rn Co O-C0 SH r§ rrt -P 33 rP fa Cl, Pi o CD IV P 2 co w P P P O P ·*! P Ci P p ïu co, a, Pi Pi ca ca P fa •s. r>* -Cl Λ •w +0 4a ε P> P <0 P P *%» C7> p 0 P P P o CO P P P P P o O P rH *|H HH +H +0 P ca H -U -fo u •u +5 +s *r» co co w co r-0 rJ p P p ö P .¾) co o CO co Co Co Co Co “i. fa fa fa fa fa fa fa fa fa co fa fa fa Co fa
*<o +0 *\ ·*\ Λ» ö c o « co q O O rH
o p P -M P p o -Q ε o O ΊΗ 8100571 -185- •i * GCl55f
Figure NL8100571AD01861
•ü H 0) O) 4J O D *0 O U CU
CN VO
r-U VO
o VO
σι in 00 in r- tn VD in
H vd η ^vom'fHWimooeHvoHfni/Hn iH • ••oo·····...........in o i ΠΗηΐηΐ/ΙΟΗ'ίΟηΗΝΗΟΟΟΗΠΙΟΜΌΝΠΟ i—1 i—I r4 m m i-IVOr) «COOONi-nOtMOOtOOWlDH <J*'VO <M PI • ••oo..................... (ΊΗΟΜΟΟΟΗΟΟΟΗΟΟΗΟΟΟΟΠΟγΙΟΌΝ Γ-J V V in VD VO Η Ν·ϋ·ΟΟΟΝΗ»ΝνθΗΝΟΟ·ίΙΟι-1·ΓΦ·ίη(η *··οο···· ·.··············· Η i—I m m ο ο © oo οοοοΗποοοιπηοιΠονονο _H_V_ tn cn cn νοΗ'ονοηοΗονοι-ΐι-ιο'ΟΗΗ m • · · in i ········.......min · i o (N VD VO CM HnHrlOOnOHOflOHnONNVO o· i—1 iH in in cd cn vd in eovomoNriooHHHOHvjOovovovooDin · < · o · · · · *...... · .......in OOi-JCNinOHOOOOOOOOOOOOr-liHHOPJiN .Η V V r-i m o invnooo >tn I l l I I I ΙΟΙ I I I I I I o I o NNinO OVDM iH tno Ή H tH
in in in inn • · · i i · · l looi loolooi l i o o -s cn rq cn cn vo oo o in oo min rU Η H i—i Η H rH i—I iH
m m in ι-l in in tn • · · o i · ·οιηοιηο©ιηιηιη · o o o ι ι · ι i vd vo cn m rnNinNoNointNoicNiNinoo cn I-I ι—I iH rH γΗιΗιΗ ’ι—I
mm π cn cn in cn m σι oo co * co 21 O •t-i 43 03 o CS
νοσίοιηΗΜΠ'ΤΓ' MpovoHcooioun (ΝΜ·<ΓΗΟ<Ν·<ί(Νοο rlNNOmoiNMO voavor»tncrivoincrivooooom σνο·^’(ΝΐηΓ'Ησΐ'3·<Ί0Γ'ιΗ03 COOl’TVnCBTfM'iHiit'IO uvc--οοοονηοοσιΗωωοονσι i—I ι—i i—I rH ai E Ui •H c (0 tP S4 o •X 03 CS ·» •Ί *1 •ï n co *f3 Λ C5 CS CS co co co Ώ •f3 +3 Λ <ü.r co co ·) a —> ra rO r-3 C3 Co <3 Κ."ί r» o o o o 03 03 CS CS n 03 •f3 Λ ¢1 03 f-a to si I— SU Si SU t3 t-3 CO . f- si n CS o ¢33¾ f* •f3 •f3 -1 lO ra 2 03 CS 3 *1 •X 03 o CO •X »» CO o a δ cn S3 CS *3 CS CS .CS Ö3 03 •f3 •f3 •f3 *f3 Cn r: •f3 •f3 CO o O SU FÏ 03 a a CS 4-3 1-3 r-3 t—3 v—3 O 2 t—3 SU •f3 a; •f3 03 f CO SU SU co co CO co — CS o O O SU 2 •f3 0) SU Cu 03 0 03 03 03 a a a a CO co f-3 CS CS CS CS 2 a "3 F15 CS fa j— —Ί C3 CS CS o C3 C3 to a a CS CS CS Cu 43 Cn 43 c S-, „ SU os 03 O C3 o C3 CO CS CS SU 43 T-3 o o- P* ö co co o o O O o t3 3 •f3 •f3 •f3 •f3 CS CS •f3 2 a CS co 43 03 E CS CS 0 0 C3 t3 o CS S ai as as r— t—3 r-3 E P. 23 f-3 CS CSÏ1 a si o o O O o t) C3 CS cs CS ts 1-3 «-3 t-3 CS 2 CS CS O 1 1-3 t-3 t—3 r-3 o o CS V V •f3 •f3 03 03 co CO co 2 f-3 rQ CS f3 E E cn 25 ao -» 43 O £ SU SU •f3 •f3 *·* ·>** r-i a t-3 O 0-0 43 O CS a; ^r* ü. Oi O 03 2 03 03 co CO 03 03 03 o 03 o «•s SU P CS ’CS 'CS Cu Cu s. 03 03 SU r« as r** ►*·», rQ rC> +3 43 43 E Cn tv. as Ja SU a r-3 8^ 8^ CS CS Ss SU ts CS CS CS C3 03 03 O o o t-5 *f3 +> 43 -S3 Pi 03 03 ' -tó -u •o 40 43 •f3 co co co CO t>3 T—3 SU SU CS a: s: C'f3 .o co CO Co Co to to to to :¾ Co Co (¾ co co Oi Q. Oi to to igcs to Qi CU
81 00 57 1 GCl55f Ir * ”186 / ' c. -. ! e \ tr 3.
O H s
p u 3 Ό 0 Sh CU
o r~ σι vo 00 vo Γ" vo vo V£> in vo
*3· VO
m vo
0) e U) •H c tn Jh O
m vovOfHTj<vocovooco-q<cooovovor>vDin I o o ι i m ©.................. OO ΓΊΟγΙγΙΜΟγΙΟγΙΟΟΟΟΟΗγΙΌγΙΝ Η H rH V . (H
rlrlH HHUlOOinVO nvOM'f Η«ΙΛ Ιή vo • · · o in · · · · · · in · · · · · · · vn · tn · o l WCinuiNOONONHNVDrlOOnvflNNNNHO iH rH fH i—I Ή
in in vovomoovorr'O'OcoMiocovo rH o o o i I · in ............. in o · o l inmin ' ΜΜΗΗβΟΗοοοοοΗΟΗΝίηηιη rH V
min vo'jinvonvomoTfNNNnninnnn - ...............••••••••••©l NNOI nJrHOnJrHVOrHVOHOOOOVDVOnjVOVOVOO i—I rH rH rH rH
HoinvoinHinHcoNHHinm in in mininii *............... · ·ιη l l CN (N CN ηθ(ΝΗΝ(ΊΝ(ΊΟΟΟ(0(ΊΜΝΝΝΝ f—1 i—I rH I—1 i—i rH rH
O I I I lol o m
cn I O I I I I I I O · I I o o vo Ή rH
rH o in m • · « · Π VO CN CN rH rH
m m • · l o o o I VO CN o o o rH rH rH rH
I O I O O o o o rH rH rH
in ΙΟ·ΙΙ O CN rH rH
η n in in m • · · · | · O VO VO CN CN vo in rH rH
looi I o o rH rH
vo en o in rH p- in *3* Γ' vo cn 0 E' in cn vo in cn vo CO CO cn in cn r- cn 0 VO rH CD 0 cn in σι o 3* cn in r» >-H cn *3* n r~ rH co N· (N cn m "vr rH o cn *vr CN co CD cn *3* in co •Ν’ N* rH "Ν’. cn 0 in r- in cn rH CN CN o cn cn CN 00 0 0 0 0 <Jl n CO 0J H 05 co 0 σι cn cn co rH rH rH r-i rH ·» Q> n •1 * n +1 •1 CO •ri *. co 3 ö co co 0 co ·<** +3 n 3 λ C0‘ co *>o r-Λ 0 co 3 P>' 1¾ r° ·,Λ 0 0 Q) Q) ö Q Λ a 3» •3 *Ί 6 co 3 £ δ δ Sn δ •>0 Co 3 ·, 3 s *3 -J fO Q> CS 3 *1 n 3 O CO *\ *> CO Cf O 3 3 Cn ÏS CS CS Q Q ö 3 •ri *3 3 Co I •3 CO O 1 r_\ f* **H 3 g 3 CS δ S-, M -U3 3 T3 L3 0 3 r3 SU •3 r3 ‘3 r^3 CO Cl CO co CQ co ·>» n O O O O SU 3 ‘3 3 δ CU 3 ö ïjS 0 3 3 3 3 3 3 3 CO co CJ CJ CJ CJ SC -O Cm 3 3 O O 0 es 3 3 3 Cl, 3 +5 Cn-3 3 r· SU O 3 0 3 O O CO CS CS 3 3 SU -3 rvi O Cl. cj· SU 3 23 w O O 0 0 3 O 3 •3 *3 •3 •3 3 3 *3 3 3 3 CO <. 3 ε 3 3 O 0 0 0 O 0 δ 3C 3; f* 3C »3 r3 S SU 3 r3 0 3 -3 3 3 3 O O 0 o O O 3 O 0 3 n tvi >3 f3 CJ CS 3 3 O O r-J »3 *—^ O O 0 •3 *3 •3 •3. 3 3 CO co CO 3 r3 * Ή 3j 3 •3 ε ε a .¾ ii .On-3 -3 CJ sh δ SU δ •3 *3 3 3 3 CU C O 30 -3 o o -3 3; 3; El. Q. O CJ CJ O s co 3 3 3 0 3 ?»· SU 0 S Ό T3 3. 0 O £4 3; IN» *3 3} -3 -3 •3 £: Cn 1*. 3 SU Ci 3 3 CS CS Cf SU 0 O CJ CJ 3 3 3 O O OM’3 H.: •3 -U SU 3 3 w 3 •r* co co co co *4 r3 SU !U SU 3 -3 r·-» SC *3 ,3 CO w CO C/3 Co CO Cq Cq ¾ CN to cn Cn cu CU CU co co Ü Cn Cj co CU cu
3 *3 •3 3 3 CS O O r3 CS
8 1 0 0 57 1 -187- * GC155f -187- * GC155f a\ r* co s Γ- M.I.C. (uq/ml) Product van voorbeeld vo Γ'· TT Γ m P'· in
If) HOVO'iO'iHCONOMNUJWnHHH
mm · I o · .......... *in i
cn cm cm oflrtHOHonoooooHriwnnnN
r—1 f-4 V
η I i i i | iioommoomooommoino · o l inocMNomcnnininNNONinwm Η Η «H
m m mm h os ηή wcOriWHriHOoainrn min in ....................in · · o · ΙΟΙΟΙΟΓΜ ΠΟηΠΗΟηΗηηηΗΟίΊΆΝΰΙΝΟΝ i—1 H HHrl m m ri in •mmol · · m m m «omooommoooooi I n n n m (NmrMcscMCMmfMmmofMcNoommm ι—1 i—i f—1 r-( r—it—i m m in in h m mm in id m • · · · i · · m in · «mm · · m in · in in in in in ο o ID CD CM CM mOMCNfMMN(MNi-)NN(NtMtMN(NNOlfl ι—1 r—1 f—1- i—1 ι—1 i—i *—1 cm I" i—Ϊ r- m m in r-imcoLOr-icoLOcoLOr-tLoaoooaoLoin m • · · ο o ·.·.····· ••••••m*oo
NNNKlonWOrlClOi-IOHOHOOOHNNÏHnO
,—1 I—i I—i 1—I I—I 1—1 rlrtrl ID rH .H m 1Π lil U3 Η 1Π in • · · ο o · · in · in · o · · · · · in ο ο ο ο · ι l
nnnminrinNnNNiniMNHnNNinotnoN
rH i—1 ιΗ ι—I ι—I ι—I rH
ID σι o in r—1 ps in rr r- ID σι O r- m σ\ ID m σι ID Q0 00 m m σ m Γ- 0% o VO rl 00 cr> σι m Cl o M1 2 3 CM m ι—1 σι rp m rs iH 00 •tp CM m CM m tr rH O CM rf CM CO CO cn tr m CO rr ι—1 •M· CM o in m m m ι—1 CM CM O σν CO CM CO o O o o σι m CO σι t—1 00 CO o cn a\ σι CO 00 i—f iH H «—I r-t r-i Ί CO 1 n\ Ö •t n n s Cl •a +0 n CO •a ·> « tj CJ. ta to CO to to a a ta ff to to Cl a a a a ia Ci to « a fO A. 1 o P CJ ci ta ci <a cj <3 n « a *1 rj Ϊ) T^Jll 1 to a pk. o § % & a a ci ta ta ö to a ·> n n a ¢1 a o n « «*1 Ö to IV δ )« it π £ ra 5 •a Cn •a Cn Cl ta tj δ CJ ¢3 tn <55 •a •a •a •a cn ε: •a to o n o X. Cl rO a CJ '•-n CJ -a 1—l ta ta ta o ta •a ra •a r-i Γ» Q) to a a Cl a to to to a o O O O S •a QJ s. a, <55 Cj e ta <a <55 a a a a to to ta <0 Cl Cl Cl ta Q Sn a '‘-ι Cl CJ <3 St ci ο ci ci a -*» fs» <3 a, ö cn -a *>» t· . & s, <51 ci ci ci ci CJ Cl to <3 <3 CJ tj a ta o a ΓΛ St CJ to to -a QJ c* - o o o o ¢) Cl “tl •a •a •a •a Ö « •a ca fv) Ö «0 •a •Ü* ta E CJ CJ Cl C ci ci Cl ci Q ο s .a t-a a; ►a ta ta ε ta c.· -a a a CJ to o 0 o 0 Cl ci ¢) CO CO ci Cl ta ta ta a Cl CJ o o tO •H ta ta ta to O o o •a •a •a •a Hi <51 to CO to ta •C, CJ •a E E o G a4 So sn -a -a ci £ S, s. s< a *a rO a rO Q Ci -o -a o Q a ffi λ; »>5? -a Ci, Dj o ta <B ta 0) to to S Cj Co o <a a p CJ ta *u CT* 8* ta is £ St ci a; ci Ü a? Cl ►a ci •C) 01 ca -a o -a Ο +5 E ta tj. Ί.. St -a t· M St po ta <a c a u -a +0 -a •a •a to to to to ta ta a St CJ a •a a to to Cl o Co <*> Co to CO to ¾ to Co fel fcO :¾ a. a. CO Co bj £j O co CL, Ot te 81 00 57 1 m m m tn m m m 2 i i i i | om · · · m m in m o in · · m · m «ml 3
miMrMlDVOCMCNrMCMmCMtMrMnjCMfMlOCM
4
Η Η Η H
GC155f Λ > t-isar-ν ιΗ ε \ cn 3.
CJ
1 · 1 H rp 000 • lotninmooin · 0 0 0 1 1 0 1 1 1 ai oool 1 ncoocNCNtNoocNfoininm 1 0 rlHH H rH rH rH n OOOO in in O in 1 1 0 in in m in 1 CN CN 1 1 I 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 CN H CN 1 1 1 1 1 1 O 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 I 1 1 σι O H ΗΗΠ co 10 • · · in 0 • · 0 0 O rH 3 3 6 2 0 oh 1 m 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 O 1 1 σ rH rH rH in • * in 5 5 5 8 3 6 5 6 2 1 1 6 1 co in in CO rH • in in 0 • 0 o CN CN OJ O 1 CN CN CN O l£> 1—1 CN 1 6 3 0 1 3 10 CN CN IO co m 1 0 «H rH rH f—i rH rH f-H H • LD N· LD σ\ LD LD O O • · · O O 0 0 o 0 0 in co CN CN LD LD 1 cn 0 1 cn in LD 1 O O LD LD LD 1 1 1 1 1 CN 1 1 Η H rH H LD LD LD in 00 in co * · * O • · * O 0 OOOOO in co CN CN CN in 1 cn 0 1 cn m 0 1 0 0 in 0 0 1 1 1 1 1 CN 1 1 (—1 1—| 1 rH H . iH rH rH rH jH - voaiOMnm^inm^cooonincnn c\o,*i,CNinr^r-iOT,,3,tr>n«Hco'si'CNro com^inro^'jH'iCNOinrMnnn
oooff>noomHcoooff>wffiooco iH rH rH rH I
I 03 •H c m tJi n
ujmotDiHr'LDrrr^ Γ*σ\ονοΗωσιθΜΛ CNCOrPr-IOlNrl'CNOO HNNOCnoitNCOq iH
Figure NL8100571AD01891
μ -tJ « -u co «α 03 cq 81 0 0 57 1 GCl55f -Ί89-
F—i O
o o rH
cn σι tn tntnoo · · o o o o o o o o o NNino i Nifloinoifl l o | o I o o I rH iH rH rH r-i r-i r-i r-i I I I I I (
o o o o ininooomooooooo ooo tninmoinicNotntnnroooinoinini lotntni i i—1 rH rH rH rH rH iH
Γ*{ ε x C7i 3.
Ό .H Φ (!) A U O O > co cn
OOO O O OOO I f O O I I I I 1 I I I I I I I I I I I I I f—11—t <—I H rH
O O O O O o tn tn o 1 o i ι i H rH rH
I I I I I I I I I 1 1 I I III
Ό -JJ o 3 Ό O U Pk r- cn vo σι tn cn
E co -H C (0 Cr H O
tn nnm ifl(onN>i05<*nürino(OHninHui ro • · « tn ................... · o tOtOCMCN I ΗΠΌΟΗΟΙΟΗΠΙΟΟΗΠΙΟΜΙΌΜ VO O I ι—I V i—1 rH ι—)
tn en • · ooo oo oooooo o I ι ι ι ι «ίο ι o tnw ι looi itnmomtninlin lH lH rH rH rH
co co m en tn o o o o · «mm · · o o o tn o o >ooom ro o tn tn tn o i votoMMNOtntnincsininMtntntnN^tn'l tn rH rH rH ...... .
(omotnHMr’ThtooioMnn'otnmUJcommncin r'ffiotoHcocicninmoo'Ninr'Hai^nr'rHco'vriNn cNoi^THo(N'>3in!racQcJiirincoH''fHH,o)Oinr-in(n(ri ricMCMocncnnicoooooococomrHcocoocncncncoco 'rH rH rH rH rH Ή
Figure NL8100571AD01901
0) <U V β JO O 8* 8* 8* §*2 HA HA HA HA 44 CQ CQ CQ tQ 0J
0 0 5 7 t >, * GC155f 00 o
in m mm VO Η H 00 0000 ONHMONOOH«flO io oo io oo in • · · LD O · i i ··········· · · · iQ η co m cnj m o oo ooooooooooh hohonki V V V H
HUOlfl fflrlrl Η Ό «ï rl'Ï «p Η Η «ί CO tOOOHOOCNU") p. r · » o **# ·········· .....* in o whh irt l dnnoHönoooooowiomooNN H
in in mrotn οοίηοοΗΐοΝοοΝΗΟΟΗ'ίοοιβηιηοιΛ ιο · · »· o »·»·»·*·»····· · · * » .·o o mvoiNin l· dNadHodoooodöOHioiNoonn rH i—I i—I V V «—) i—I
r-( S \ cr η
u * H
0 0) ja n o o > § >, 4J O 3 Ό O S-i CU
in in rH iHH lOH«JHCOHsrHHOOHspcO(aiOHfMH in · * ♦ o ...........· · ••••-••in O OOrOrOtnOHPOOOOOOOOOOOOOOr-lfOOrOCM rH i—I V V
«sp o rH
n o rH
mnn vo ic n <n ro vo h «3 m oo oo m imn r-t •••oo .... · . ........m · · · o NiouininHriiooiOHNnHooon'flNNNnm l rH Η H in m in in in m in in rponjO'i'OOOOOCN'a' f vnoh o · ................o l ii i lincsooooooooooooooooroo HVVVVVVV iH
in m m in m m m ooo HrlHOHOOlHHOOOHl'lsrHOCOO · o οοιηιι..................o<n Η H rH ooco. OOOOOOOOOÖOOOOO. OrlH. V V _VVV_ ιοσιοιηΗΜη·ρΜθ£ηοΜησιΐοιησΜοωσ3Πΐησιη iN-mon>HcocriOuncno,p<Ninr'Hoi«i' oho oin«THO(N^MCOCDcn«rinco«tr}'H«rNOinMnmn riiNNOOioiOKoooooftnoocnHcoooocncnincoco rH rH rH i—I rI Ή 0) e co •H β cd u o
·> *> λ n to 05 05 05 3 3 3 3 05 ¢) 05 05 5m & fi 3 3 3 3 O ö o ö 05 05 05 05 3 3 3 3 O Q C5 C5 Ü 0 C3 C5 O O O O O CJ 0 O 3 O T*i O O r~J r~5 §·§·§·§- U .·« +l -U CQ CQ CO CO
Figure NL8100571AD01911
C3 « T'-i 0 r-5 V ® tt 3 V ·♦» _ sa « co ΛΛΛΛ O CJ ® 05 q qnm Cq &J S<i
Figure NL8100571AD01912
0) 0) V β ® O ft* Αι 81 0 0 57 1 GC155f < in
co «H
VO 00 CO iH CO rH co co in • · · · · · · ö Ö · · Hoo noon i vo i i ι © ι © vo ι ι ι \ f l cm i i H rH rH H
in m wtnci cdmoncommomo o η π η n cj ·. · tind · ....... · · .........(/) cNiNtecsinddricid o'cn hoo oonn uveudn ι hh v v
rH H iH CO *«3· 00 -M* in CO CO CO rf VO .H UO H ....©..in· .·ιη·*. · * · in m in in * o nncucindoctocnocniuoo wcocmcmcmcncmcooj rH rH rH
rH E cr o
+J o 3 Ό O CU
01 E tn *H c 10 crj o
CM iH
iH r—! rH
O iH rH
O O H
tn m VO V0 VO rICOOOOCMHOCMM'CDOM'M'VDHCOHO • · · o o........········. «mm HH H lil OOOOÖOO rHOOÖOOOi—ICOOCOOCM CM rH V V
in ίο ίο h CMtnnouJcnnvDvoHifH η π in h co oo m • · ino .................* * m Hrinoilf, ΟΟΙΟΟΗΟΙΟΗΗΠΟΟ Cl VO CM fO VO O CM CM V rH rH
vo vo vo tn ^TfincMcoiH co vo co tn in co ....in····.··/)··· •••mm*tn*in rHiHiHCMCMOOCNOMOfOCNVOrHO O VO CM CM CM CM CMOCM I rH rH rH rH
tn tn tn CO VOCOCOCMCOCMVOCNCMOCMrHOOVOrHVOlOrrtn ···©©··· ............. ...o CMCMVOOinrHO© OOOHOOOO OOtHCOHCMOCNO rlH Η V r4 rH rH
vomoiiiHt^inMT'VocrioMnmvoinm'ocoraroincrici r"cnovDiHcoo\cnin<Tio'M,CMinr-Hcri'a,cr>r-'rHco'3,cMCO CMHM'HOClM'NCOCOtnM'iniXIM'M'HM'C'lOtnMnfOn HMNomoiNOOooomncooiHoicooommrora rH rH rH rH Η Ή
Figure NL8100571AD01921
oa p* o, ^ MMMlM _ _ a> +> ΛΛΛΛ CV, Ctr 8·8·§·8·2 2 -u +i 43 co oj oa oj cq cq 81 00 57 1 GCl55f K ο -Ί92- rH ε tP α Ό , H α) I <u •s o 8 cj
+j υ 3 Ό o n CU
d) ε W •H c «5 Cr H
CN o CN H cn co vo rH iH t uo uo CO VO H CO co n* co o 6 4 3 2 6 8 0 8 6 1 5 1 3 1 • · · · · · · UO uo O H CO VO 1 o o vo o 1 0 6 0 1 0 0 OH CO CN 3 6 3 2 2 V V rH in η co iH vo 1 6 3 1 1 2 1 6 1 3 5 CO uo uo · o · · · 3. 1. 6. 3. 3. 0 . 3. Ö UO · α o CN CN CN O 1 CO CO CO H 1 3 6 2 uo cn vo σ α r—1 rH rH rH rH in LD Η Η H OfflHO CO CN CO 00 Η Η H 6 6 1 3 6 3 2 1 3 • · · O O * · · cococooooocoo 0 0 6 0 3 3 0 1 1 3 6 1 6 0 3 6 H rH V V in ÜO uo uo CO fO i-H o co CN o 2 0 4 1 4 2 0 CN CN CD co 4 8 4 co • · · ö o · · · VDVOCOOOOOOO o o o o o σ o O O o o 0 0 0 vo uo HH V V V V VO VO H UO *>r rH UO rH VO CO UO co rH CO CN co co co co uo vo ••••o··· o uo HHCOCNOOCOCN o 1 0 2 6 3 6 0 VO VO vo CN VO CN rH UO CN Η Η Ή r-H uo uo ΗΗΠ CN VC r—1 o 8 2 1 6 8 6 0 VO VO rH co 6 6 3 * · * LD O · · · o o COCOVO cn vn O Ή co o 0 0 3 1 0 1 0 rH i—1 cn vo 1 1 6 o o V V rH rH co co co uo h in uo uo • · · · » · o σ ooo o o uo o σ o o • · o VO VO VO CN | CO CN O uo UO uo O O O CN O O O o 1 1 CN CN 1 uo rH rH rH Η pH Η Η Η H rH . Η· H
amomHP-in'a'r^vocnoMncnvoinm^coco n m m fo ι>^ονοΗθ3σιθΜησιό,3'ίνιΐΛΐ^Ησι,ίΠΓΉθ3,ί,οιπ NM'iHoM'J'Ncocom'a'incDrr^ri^NoinMnrm NNOCMJiNoooooocnnraoi ' ~ —- — — ~ r—1 ιΗ H H r) cocoocncncnoocD
Figure NL8100571AD01931
§·§·§*§* HA +» +i H4 co CQ CO tQ
8f 0 0 57 1
-193- GCl55f tn m tn cy o in · o o ................ . .. cm ιηο4θ4ΐηιητ-ιοσοοοοοοοοοοοβι-ΗοθΝ I rH V V rH
coi-icn oh now rH tr> in oo in in in m rH oo · · ·οσ · *m · » -o ...... .0 » w *0 cm οΜΌΐηιηαηΝΟ ιο i-rm mrjtNd ojrjojintN moo i Η H rH iH rH rH rH
HHH VO Π f»» · · · 10 o · · in CJ ΓΟΓΟΠΟΙΟΗΦ I CM f· 1 Η H
in in 11(0411(11(0411 M.I.C. (uq/ml) Product van voorbeeld
HHH co rH in tji 0 vo ο h rH 04 0 0 in vo 10 •••mo···» · · in...... -o in in · in 0 cm nnniNoonNo id η ιί ο η η o uj iooj m « cm «-h cm in rH 1—I rH rH in moo 'iriOH HCoineorf^OriHin in in in m in · · · 0 0.......*....... 0 CM lOlOlOinOOfniOOOOCMOOiHOOOCNmCMCMCMCNI rH rH rH VrHrHiHi—l—4 in in in co-H o in in o is η n in • · · in · · in · · · in tn · . · · ό ο o in in CM Ol CM CM I Ο Ο Γ4 VO <MCMCMCMVOrHOVCC4 000CM04 I I HHH Η H (—it—I I—I I—! in mm rH Η O VO VO VO O *3" rH VO 04 CM Ο © CM TP CO rH CO VOOO O o . . ·m ···.············ ·*·ο 04 OOlDCM I 1-HrHrHO OOrHOOO OOOOOO HO VOin rH V V V
«3· CM rH
01 •H G ns & n O
io<xiotnrHf''io>'3*r'*io<nor-incniotncniocoajotncno 0'OOvor-ico(Ticnmoo'3'CMmr'rHcn'vror~iHco'3’CNO niO'THoiNTjnromcjiYrinro^rrH'rnioinhmnn HNtNocnoinioDoooonncocnHCDcnocncnoicDCO —1 rH r—i rH i—4 r !
Figure NL8100571AD01941
MM M _ _ 3iHi Hi Λ Λ Λ Λ CU CU Ο Λ O O O QQQ-.--.- to to to to to to Ö 5» 5) CQ T-i TM
§·§·§·&£ 8 δ +i -u ·« -u ΰ -B y 03 CO CQ 03 Ö3 &3 % § CO 09 Q) TM 3 3CN 3-SS 8 §, O O O TM ·Μ
ö Ί *1 03 CO O 1 S, -Ji ö> ti S _ Hi tS-C 3 Sr Hi tM O M 51 3^ CO
Figure NL8100571AD01942
51 V to O cu m: 0 0 57 1 GC155f
Figure NL8100571AD01951
* - 194- tn in m in in (ΗΓΟ (N Ö <N H TJ1 rH O O O α CN <N ·** ÏN rr 00 «5 OOO .......*..........Cf co o o m ι öoaoooaoaoooooöö tin iHrlH V VVVV hhh conncoifleoHo^'i'iOHHoifi com in · · · OÖ · * ·►···*· »··»* » · lO · · lO η oonimnclO'ociNdocloooooouiNNdNN rH «H rH m rlOOH COrlOO^1 O'f'iWOOrHrinO tj< oa ................. ..o η I I i i iindnortoodaoodHonovo«iin i r-l -H v M.I.C. (yig/ml) Product wan voorbeeld
r)H m m m vo 4 4** · · OO m VOntNtN ( (N rH I in o I rH Η Ή rH
O O O ( i o LO i i i i i i o i lH rH
tn tnton ^HricoHcDn«nflo'flH'«'fi<',)uiinH cm · · · o o................... o fO NNUJini/lOMMO ποόηηοηοηηόγίνπ cno
ro rH
MM O H* rH £Ν (Ή U5 Η Μ Μ Η1 ΙΟ tn • · · o o · · ld · · · o · · · · · · m o m m m m o vovovom oortnotCHinovotoomMiN un oj cm γή cnlo i—I rH rH
m voc'ivo'ftocjcoNtNH'raHHMMOtn o iflifiifiö · m ·· ............... Γ0 CM CM CM O I NMHOHOHOOOOOOmrUflWON | rH rH rH ......rH
tDmoinHn'tn^n-tooior'incji'ntnm'ncocDMinoiM f'motDrHoocriCfuniTiovNLn r~ rH oi.h'M^hcoh'NM MMVHONH,nlCOCOmr}M/lCOHl^rlH,(NainMnMm
cocoooicnfficoco i—I
0) B CQ •H c (0 Oi M O
HNtNOCtOlNfflOOOOmMtDOi rH H rH rl H 3 δ I 3 « ö 6 ö
Figure NL8100571AD01952
n r n co ca to ® 3 3 3 3 03 ca ca g •» CS <3 1 . to Q v ¢1 ο ί o ‘H Λ ·Η ΤΗ ca k ex m b +? ÖJ-S5 C Sr +3 τη o o> 3 » tt -H 3 tH O TH ö ö Q Q to Η A 3 3 C τη O to (0 O to Ü
Figure NL8100571AD01953
0) α *h « e o O-i Ri -¾ 81 00 57 1 GCl55f -195 - ir in m in mifl Tf N N O CO H O O OOrf 00 OQ CO V CO H om · ...... .... ......o I l I I itncNOooooooooooooooocnm v v v v v
rjmm co vo ττηη mnvovocn m . . .o · «o ». . ...... moifl o * io m cn in [ onto OW l mu>hhv>m non ion i i rH H I-H rH
M.I.C. (ijq/ml) Product van voorbeeld
er TT rH
N· rH
O TT rH
00 co
HinCOVCOCOHCOOCOOJODejHrICOHH ooo ... ..... ....... ...oei WWO I I nMHOrlOflrlOOOOCifOMrlflflöO rH rH iH rH
• in in E-i · in in CN · CN CN | CNnHHrIOHHHOOOHHfCOO® J CN 3 Ή rH
rHlOVOlOOOlOlOVOrHCOCOlOVOrHCOCOCO
in
in in n oho o co i—i co HvvoiNcocoH co cocoinin moo .................... CN m ΙΟ I I lOVDrHOrHOrHOOOOOOi-HCOrHrHOCNCN V V HH
in tn Cf ηβο^ rH 00 rH W O CN V 00 CO 00 ΟΟΌΙΠίη in in in- ..................... CN CN CN I I ΟΌιΗΟΟ OO ΟΟΟΟΟΟΟιΗ O OrHCNCN V V rH H
in in in in in in in Ό01ΗΟΗ OCN OOOOOrlHN rH CN "T ο σ c> .................. o in O in in I [ rHOCSOOOOGOOOOOoOOOOOCN rH V* V VVVVV ......I-H
lomoinHMnvMDmoMncncoinmOcomninmn >mocoHCDmcriinmovNinr'rHcnN'(r)rTHooN|iNcn NrtTfHONVMCOCOmH'lilCOH'ctrHVNOLnMnOin HNtNommiNcooooonnmtnHcDCootnmcnrom rH rH rH rH rH rH
81 0057 1
m ε (0 t4 G «3 oi M O
Figure NL8100571AD01961
*3) 5) *3) Η» Hi Hi Hi Cq CO CQ CO
o§«„ CJ C3 CJ cj o ~ CJ _ _ o o o o
§§· is is Co CO
CJ rH t-n OMM r» « q> sh v ·*» 0) co Q ΛΛΛΛ O O ¢1 « 03 0) ri rJ &} &J S*i *<i
Figure NL8100571AD01962
HO O OMV
e§*il O f, 3 O T-i Q5 01 CO α δ S s, § Hi Hi a ε Ο Ο +i ö Ö Q ¢3 H5 Λ CJ M Ο Ο Λ Η» S< JC, ‘ CO 3 CJ Μ »1 . Hi CJ CJ 03 ¢0 CO C3 O CJ CJ s: sc o Μ Cj Cn Crjri 3 3 CJ f, SH C3 03 03 CJ CJ SH 03 CO +i
Figure NL8100571AD01963
Cj Co Λ» τζ -_196,- Ή
-_196,- Ή vo in rH
GCX55f in mHrUommH^PiriHHMiHH ♦O·····.....· · · · · O I I I I lNO«dcirnew<no«nn(*nonnii)i l rH e tr 3.
U
H
Ό H φ αί sx. M< O O > £ > 4J ü 3 Ό O M (¾
ID o o in 1 1 1 1 1 1 1 i in i i · i i i o o 1 1 1 1 1 1 1 1 1 rH rH H po ro in oo in m o · imn o · · · tn o o m o tn 1 1 1 1 1 1 1 in vo chcnovocnocncncn oocno 1 1 1 rH rH rH rH rH rH rH rH • m m m in in in 5 2 1 2 T 4 0 0 0 o o rH rH 8 4 2 T VO CN ΙΠ LH 1 1 1 1 1 CN 2 0 0 0 N 0 0 0 0 o o o o 0 0 0 o rH CN rH rH H in m m mrOrHrHVD^.inrH'tfCN o -sP vo co 3 1 3 PO in tn rH • · m o tn KO vo CN O 1 VD VOfOOrHOCNOOO o o rH O 6 3 6 VD <N CN rH rH rH V rH rH in in rH rH ro n* ΗΛ0ΟΌ·Ρ110ΓΝ0ΰ10 o co vö 1 6 1 m in o • è • O O in m m VD O 1 O COrHOOOrHOOrH o o O rH 3 1 3 CN 04 in *H rH V V rH rH in m ro ro rH ΗΗΟΟΟ'ίΐη'ίΌΐΰ o to VO VO 3 1 1 rH σι • 1 m o o n< VO VO CN 1 i n 3 3 0 0 0 2 0 1 1 0 1 1 1 6 3 3 P0 o in rH V rH V rH
^οσίοιηΗΜη-ίΓΊΌσιΟΜησιωιη^νοωαιπιησιη Γ'σιθ'ΰΗα3οιθΜηαιο·'ΓΜΐπΓΉσι,ίΠΓ'Ηο,τΝ(θ
cnooocncricncoco rH
NMii'HOCS'fl'NCOCOOl^intD^'TH'TNOinMiinn HN(NoiTimtsmoooooi(ricD(n-Jmmr''T'"''T’mm rH Η H Hrl <Ί •1 CO •i ca Ί O co CS a SS ca **» i cs Cü s £ i cs o Co ca O co *i <i co CS o Cn P co O i O SC,
φ e tn •H C n) Oi M O
Figure NL8100571AD01971
Figure NL8100571AD01972
§*8·8*§* •ü -» « +» co to CO tQ ft ft n; 8 f 0 0 57 1 * Μ. -.197- GCl55f #«—* Λ iH u CS) ε 0 CO \ tn 0 > «H n e <β > • iH u +l SO « O ·—i H D • Ό S 0 U Οι cn in r-i <u ε co • Ή c fij oi u o in r-i in in in tn in in 4 1 8 0 2 0 0 0 0 0 1 1 8 4 8 4 6 * om····........ 1 ! 1 1 I mcsoooooooooooo O O O O H O V V V V V V r-i m nnri'rincD'fitNN'N'NMnnnHHn in · m CS) CN CN 1 I loiocoocNOr-ioooooioiosomcotöin in r-i iH ι-l r-i CN N* o* • · · · o • · in o o m o m ooooinooicNol ι I tn i cn o l l I f I CN 1 t iH r-i m Ό* CNi-lHCOCNCNOCNCN-^CN 4 2 4 8 5 O ......... · · · 1 I I 1 I OIOOOOOOOOOOOO O O O O CN O iH r-i r-i o o o 1 1 1 t I II1IOOIOIIIIII 1 I ( ( f I r-tl—t 1—t in in in m vo tn • · · o o • · o m tn tn o ooooomoo oo · o o cNCNCNinosOiHtncNcNCNin inmininmcNino tnincNino Η Η H »H rH . r-i r-i . ιοσιΟίηΗΓΜΠ'ϊΐ'Γ'ΊΐιηοΡΊηΐΛ'βιπσι^οοσιπίΛΰιπ t'-movDHtxjmOMnaio^Ninr'Hor^Mr-Hco'fNn NMTiHoN'TNcncam'tfinco'i'TH'J'tNfoinrMnfon riNNocnaiMCoooooinniDcnHcDCDocricntnooo! iH Η Η Η Η Ή
Figure NL8100571AD01981
§*§*§*§* ·»+>+>+» Co CQ CQ to O O O m co co PO PO PO
03 C3 3 3
Figure NL8100571AD01982
¢) r-3 rQ k N O 1-i •1 ·» 63 1 ·» CQ ö co O ·> O r-3 3 ri -tJ r-J M tt> Fi fX 0) C3 :§& C33-S3 3 es ca ___sill 8.S O o ® O O οώνί! 81 0 0 57 1

Claims (41)

1. β-Lactam met een sulfonzuurzout substituent ~s°2 M+» waarin M+ waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een amino substituent -Nï^ of een beschermde vorm daarvan 5 op de 3-plaats. l'a. β-Lactam met een sulfonzuurzout substituent -SO^ M+, waarin M+ waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een azido substituent -N^ op de 3-plaats. 2. β-Lactam volgens conclusie 1, met een sulfon- 10 zuurzout substituent -SO^ M+, waarin M+ waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een amino substituent -NHj of een beschermde vorm daarvan op de 3-plaats en een alkyl substituent op de 4-plaats. 2a. β-Lactam volgens conclusie 1 met een sulfon- * *f ·|· 15 zuurzout substituent -SO^ M , waarin M waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een amino substituent -NHj of een beschermde vorm daarvan op de 3-plaats en cycloalkyl, fenyl of gesubstitueerde fenyl op de 4-plaats. 2b. β-Lactam volgens conclusie 1 met een sulfon- mm *J· 20 zuurzout substituent -SO^M , waarin M waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een amino substituent -NI^ of een beschermde vorm daarvan op de 3-plaats en alkoxycarbonyl, alken-1-yl, alkyn-l-yl, 2-fenylethenyl of 2-fenylethynyl op de 4-plaats. 25 2c. β-Lactam volgens conclusie 1, met een sulfon- zuurzout substituent -SO^ M , waarin M waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een azido substituent -N^ op de 3-plaats en een alkyl substituent op de 4-plaats. 2d. β-Lactam volgens conclusie 1 met een sulfon- 30 zuurzout substituent -SO^ M , waarin M waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een azido substituent -N^ op de 3-plaats en cycloalkyl, fenyl of gesubstitueerde fenyl op de 4-plaats 2e. β-Lactam volgens conclusie 1 met een sulfon- 35 zuurzout substituent -SO^~M+, waarin M+ waterstof of een kation 00 57 1 t '3è - 199 - op de 1-plaats voorstelt en met een azido substituent -N^ op de 3-plaats en alkoxycarbonyl, alken-1-yl, alkyn-l-yl, 2-fenylethenyl of 2-fenylethynyl op de 4-plaats. 3. β-Lactam volgens conclusie 2 met een sulfon- 5 zuurzout substituent -SO^ M , waarin M waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt, een amino substituent -N^ of een beschermde vorm daarvan op de 3-plaats en een methyl substituent op de 4-plaats. 4. β-Lactam volgens conclusie 1 met de formule 10 la, waarin waterstof of alkoxy met 1-4 koolstofatomen voorstelt en en hetzelfde of verschillend zijn en elk waterstof, alkyl, cycloalkyl, fenyl of gesubstitueerde fenyl voorstellen, of één van Rg en waterstof voorstelt en de andere alkoxycarbonyl, alken-l-yl, alkyn-l-yl, 2-fenylethenyl of 2-fenylethynyl voorstelt 15 en M+ waterstof of een kation voorstelt. 4a. β-Lactam volgens conclusie 1 met de formule la, waarin de symbolen dezelfde betekenis hebben als in conclusie 4, met dien verstande, dat de aminogroep is vervangen door een azidogroep. 20 5. β-Lactam volgens conclusie 4 of 4a, met het kenmerk, dat waterstof voorstelt. 6. β-Lactam volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat Rj en R^ methyl voorstellen. 7. β-Lactam volgens conclusie 5, met het kenmerk, 25 dat R„ en R. waterstof voorstellen. 3 4 8. β-Lactam volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat R^ waterstof en R4 methyl voorstelt. 9. β-Lactam volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat R3 methyl en R^ waterstof voorstelt. 30 10. β-Lactam volgens conclusie 4-9, met het ken merk, dat de amino substituent (-N^) op de 3-plaats beschermd is. 11. β-lactam volgens conclusie 10, met het kenmerk, dat de amino substituent in de vorm van een azidogroep verkeert. 35 12. β-Lactam volgens conclusie 11, met het ken- 81 0 0 57 1 - 200 - merk. dat het de formule 68 heeft, waarin R_ en R. hetzelfde of - 3 4 verschillend zijn en elk waterstof of alkyl voorstellen en M waterstof of een kation voorstelt. 13. β-Lactam volgens conclusie 12, met het ken- 5 merk, dat R^ en R^ hetzelfde of verschuilend zijn en elk waterstof of methyl voorstellen. 14. β-Lactam met een sulfonzuurzout substituent -S03 M+, waarin M+ waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een acylamino substituent op de 3-plaats. 10 15. β-Lactam volgens conclusie 14 met een sulfon zuurzout substituent -SO^ M+, waarin M+ waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een acylaminosubstituent op de 3-plaats en een alkylsubstituent op de 4-plaats. 16. β-Lactam volgens conclusie 14, met een sul- 15 fonzuurzout substituent -SO^ M , waarin M waterstof of een kation op de 1-plaats voorstelt en met een acylamino substituent op de 3-plaats en een methyl substituent op de 4-plaats. 17. β-Lactam volgens conclusie 14 met de formule 1, waarin R^ acyl voorstelt, R2 waterstof of alkoxy met 1-4 kool- 20 stofatomen voorstelt, en R^ hetzelfde of verschillend zijn en elk waterstof of alkyl, cycloalkyl of fenyl voorstellen, terwijl bovendien wanneer één der symbolen R^ en R^ waterstof voorstelt, het andere alkenyl, styryl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, carboxyl of een alkylester daarvan, hydroxymethyl, lagere alkylsulfonyl- 25 methyl, fenylsulfonylmethyl, waarin de fenylgroep met methyl of halogeen gesubstitueerd kan zijn, halogeenmethyl, mercaptomethyl of een benzyl of trifenylmethylthioderivaat daarvan, azidomethyl of aminomethyl kan voorstellen en M waterstof of een kation voorstelt, 30 18. β-Lactam volgens conclusie 17, met het ken merk, dat R2 waterstof voorstelt. 19. β-Lactam volgens conclusie 18, met het kenmerk, dat R^ en R^ methyl voorstellen. 20. β-Lactam volgens conclusie 18, met het ken- 35 merk, dat R. en R, waterstof voorstellen, — 3 4 81 00 57 1 5 & V - 201 - 21. 8-Lactam volgens conclusie 18, met het kenmerk, dat R^ waterstof en methyl voorstelt. 22. 8-Lactam volgens conclusie 18, met het kenmerk, dat R^ methyl en waterstof voorstelt. 10 15 20 25 30 35 23. g-Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat R^ een alifatische groep voorstelt met de formule R(CO)- waarin R,. alkyl, cycloalkyl, alkoxy, alkenyl, cycloalkenyl, cyclohexadienyl of alkyl of alkenyl, gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino, mercapto, alkylthio of cyaan-methylthiogroepen voorstelt. 24. β-Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat Rj een carbocyclische aromatische groep voorstelt met één der formules 35 t/m 40, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, Rg, en Rq elk, onafhankelijk van elkaar waterstof, halogeen, hydroxyl, O nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of amino voorstellen en Rg amino, hydroxyl, een carboxylzout, beschermde carboxyl, formyloxy, een sulfozout, een sulfoaminozout, azido, halogeen, hydrazino, alkyl-hydrazino, fenylhydrazino of f_ (alkylthio) thioxomethyl_/thio voorstelt. 25. 8“Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat R^ een heteroaromatische groep voorstelt met één der formules 45 t/m 49, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, Rg amino, hydroxyl, een carboxylzout, beschermde carboxyl, formyloxy, een sulfozout, een sulfoaminozout, azido, halogeen, hydrazino, alkylhydrazino, fenylhydrazino of /_ (alkylthio)thioxomethyl_/thio voorstelt en R^Q een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische aromatische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen. 26. β-Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat R^ een groep voorstelt met de formule 50, waarin R^j (1) een groep voorstelt met de formule 51, waarin Rg, R? en Rg elk onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of aminomethyl voorstellen, of (II) een al of 1 00 57 1 s. I* - 202 - niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen en R12 -NH(CO)-Rjj, alkylcarbonylamino, alkyl of alkyl, gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino en/of 5 mercaptogroepen voorstelt. 27. β-Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat R^ een groep voorstelt met de formule 52, waarin R^^ (I) een groep voorstelt met de formule 51, waarin R,., R_ en R„ elk 6. o onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, 10 trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstof atomen of aminomethyl voorstellen of (II) een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met C 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen en R^ waterstof, alkyl, cycloalkyl, alkylaminocarbonyl, -(COjNH-R^, of alkyl, 15 gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino, mercapto, alkylthio, R^, carboxyl, carboxylzout, amido, alkoxy-carbonyl, fenylmethoxycarbonyl, difenylmethoxycarbonyl, hydroxy-alkoxyfosfinyl, dihydroxyfosfinyl, hydroxy(fenylmethoxy)fosfinyl of dialkoxyfosfinyl substituenten voorstelt. 20 28. β-Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat R^ een groep voorste lt met de formule 53, waarin R^ (I) een groep voorstelt met de formule 51, waarin Rg, R^ en Rg elk onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxy, nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met x 25 1-4 koolstofatomen of aminomethyl voorstellen, of (II) een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuuestof en/of zwavelatomen en Rj^ een groep met de formule 54 (waarin n 0, 1, 2 of 3 is), amino, alkylamino, (cyaanalkyl)araino, amido, alkylamido, (cyaanalky.1)-30 amido, of een groep met één der formules 55 t/m 60 voorstelt. 29. β-Lactam volgens conclusie 17-22, met het kenmerk, dat Rj een groep voorstelt met de formule 61, waarin R^^ (I) een groep voorstelt met de formule 51, waarin Rg, R^ en Rg elk onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, 35 trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 kool- 810057 1 5 - 203 - ί* V- stofatomen of aminomethyl voorstellen of (II) een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1,2, 3, of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen en waterstof, alkylsulfonyl, -N=CH-R,,, -(CO)-R (waarin R _ waterstof, 11 lo lo alkyl, of halogeenalkyl voorstelt), alkyl of alkyl,gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino en/of mercap-togroepen voorstelt. 30. 0-Lactam volgens conclusie 27, met het kenmerk, dat R^ 2-amino-4-thiazolyl voorstelt. 10 15 20 25 30 35 31. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S (Z)_/-3-£ / (2-amino-4-thiazolyl)-(methoxyimino)acetyl_yamino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 32. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S(Z)__/-3-£ £ (2-amino-4-thiazolyl)-£ (carboxymethoxy) imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 33. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S(Z)_/-3-/ £ (2-amino-4-thiazolyl)-£ (1-carboxy-l-methylethoxy)imino_/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azeti-dinesulfonzuur. 34. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S-£ 3a(z) ,40-3-£ £ (2-amino-4-thiazolyl)(methoxyimino)acetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidine-sulf onzuur. 35. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S-£ 3α (Z) ,40_/_/-3-£ £ £ (carboxymethoxy) imino /(2-amino-4-thiazolyl)acetyl /amino /-4-methyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur. 36. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S-£ 3α(Z),40_/_/-3-£ £ (2-amino- 4-thiazolyl)£ (1-carboxy-l-methylethoxy)imino__/acetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 37. 0-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het het dikaliumzout is van £ 3S-£ 3α(Z),4β_/_/-3-£ £ (2-amino-4-thiazolyl)£ (1-carboxy-l-methylethoxy)imino_/acetyl_/-amino /-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 8100571 - 204 - 10 O 15 20 25 30 35 38. β-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van £ 3S-/ 3a (Z), 4a_/_/-3-/_ /_ (2-amino-4-thiazolyl)(methoxyimino)acetyl_/amino_/-4-methy1-2-oxo-1-azeti-dinesulfonzuur. 39. β-Lactam volgens conclusie 30, met het kenmerk, dat het een zout is van f_ 3S-/_ 3a (Z), 4α__/__/-3-/_ A-(2-amino-4-thiazolyl)/_ (1-carboxy-l-methylethoxy) imino_/acetyl__/amino_/-4-methy1-2-oxo-1-azetidine sulfon zuur. 40. β-Lactam volgens conclusie 29, met het ken-merk, dat R^ een groep voorstelt met de formule 69, 41. β-Lactam volgens conclusie 40, met het kenmerk, dat R1 een groep voorstelt met de formule 70. 42. β-Lactam volgens conclusie 40, met het kenmerk, dat het een zout is van /^33(^)^/-3-/^ / £ / /~3-/~ (2-furanyl-methyleen)amino_/-2-oxo-l-imidazolidinyl_/carbonyl_/amino_/fenyl-acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 43. β-Lactam volgens conclusie 40, met het kenmerk, dat het een zout is van /"*3S-/~3a(RX) 7-3-Γ"Γ"/^3- / (2-furanylmethyleen)amino_/-2-oxo-l-imidazolidinyl /carbonyl /-amino_/ fenylacetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulf onzuur. 44. β-Lactam volgens conclusie 40, met het kenmerk, dat het een zout is van / 3S-/_ 3a (R*), 4a_/_/-3-/ /,///. 3-/ (2-furanylmethyleen)amino_7-2-oxo-l-imidazolidinyl_/carbonyl_/-amino_/fenylacetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-aze tidinesulf onzuur. 45. β-Lactam volgens conclusie 26, met het ken- merk, dat R^ een groep voorstelt met de formule 71. 46. β-Lactam volgens conclusie 45, met het kenmerk, dat het een zout is van /_ 3S (RX)_/-3-/_ /_[_/_ (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl /amino_/fenylacetyl /amino /-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 47. β-Lactam volgens conclusie 45, met het kenmerk, dat het een zout is Van ,/ 3S-/_ 3a(RX) ,4β_/_/-3-/_ /_/_/_ (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl_/amino_/fenylacetyl_/-amino_/-4-methy1-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur. 48. β-Lactam volgens conclusie 45, met het ken- 8 7 0 0 5 7 1 - 205 - 5 merk» dat het een zout is van / 3S-/ 3a(RX) ,4a / /-3-/ /~~/*""/—(4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl_/amino /fenylacetyl /amino / 4-methyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur. 49. Werkwijze voor het behandelen van bacteriële infecties bij zoogdieren, metJhet kenmerk, dat men aan een zoogdier naar behoefte een doeltreffende hoeveelheid toedient van een 0-lactam met de formule 1, waarin acyl voorstelt, R2 waterstof of alkoxy met 1-4 koolstof atomen voorstelt, R^ en R4 hetzelfde of verschillend zijn en elk waterstof of alkyl voorstellen en M+ water· 10 stof of een kation voorstelt. 50. Preparaat, met het kenmerk, dat het een doel- i 15 treffende hoeveelheid 0-lactam bevat met de formule 1, waarin acyl voorstelt, R2 waterstof of een alkoxy met 1-4 koolstofatomen voorstelt, R^ en R^ hetzelfde of verschillend zijn en elk waterstof of alkyl, cycloalkyl of fenyl voorstelt, terwijl bovendien, wanneer één der symbolen R^ en R^ waterstof voorstelt, het andere alkenyl, styryl, alkynyl, alkoxy, alkylthio, carboxyl of een alkylester daarvan, hydroxymethyl, lagere alkylsulfonylmethyl, fenylsulfonyl-methyl, waa-rin de fenylgroep gesubstitueerd kan zijn met methyl of 20 halogeen, halogeenmethyl, mercaptomethyl of een benzyl of trifenyl-methylthioderivaat daarvan azidomethyl of aminomethyl voorstelt en M+ waterstof of een kation voorstelt. 25 51, Verbinding met de formule 72 waarin R^ -NH- een beschermde aminogroep voorstelt, of waarin Rj acyl voorstelt, V een verlatende groep, als methaansulfonyl, benzeensulfonyl, tolueensulfonyl, chloor, broom of jodium voorstelt, terwijl R3 en R^ bovengenoemde betekenis hebben en de vrije aminogroep in sulfon-zuurzoutvorm kan verkeren. 52. Verbinding met de formule 24, waarin de 30 overeenkomstige symbolen dezelfde betekenis hebben als in conclusie 4. 53. Verbinding met de formule 32, waarin de overeenkomstige symbolen dezelfde betekenis hebben als in conclusie 4. 35 54. Werkwijze voor het bereiden van een 0-lactam 81 00 57 1 - 206 - met een sulfonzuurzout substituent -SO^ M+, waarin M+ waterstof of een kation voorstelt op de 1-plaats en een amino substituent -NH2 of een beschermde vorm daarvan op de 3-plaats, met het kenmerk, dat men een overeenkomstig β-lactam met een waterstof substituent op 5 de 1-plaats en een beschermde amino substituent op de 3-plaats sulfoneert en de beschermende groep van de amino verwijdert.
55. Werkwijze volgens conclusie 54, met het kenmerk, dat de amino substituent op de 3-plaats geacyleerd wordt en men deze acylering vóór of na de sulfoneringsreactie uitvoert.
56. Werkwijze volgens conclusie 54 of 55, met het kenmerk, dat het produkt een alkyl substituent op de 4-plaats bevat.
57. Werkwijze volgens conclusie 54-56, met het kenmerk, dat het produkt de formule 1 heeft, waarin R^ waterstof of 15 acyl voorstelt of de groep -NH-beschermde amino voorstelt, r2 waterstof of alkoxy met 1-4 koolstofatomen voorstelt, R^ en R^ hetzelfde of verschillend zijn en elk waterstof, alkyl, cycloalkyl, fenyl of gesubstitueerde fenyl voorstellen, of waarin één der symbolen R^ en R^ waterstof voorstelt en het andere alkoxycarbony1, 20 alken-l-yl, alkyn-l-yl, 2-fenylethenyl of 2-fenylethynyl voorstelt en M+ waterstof of een kation voorstelt en men de sulfonering uitvoert aan een verbinding met de formule 73, of een voorloper daarvan met de formule 72, die men aan ringsluiting onderwerpt, terwijl men de sulfoneringsreactie vóór of na de ringsluiting uitvoert en 25 Rj -NH- in reagentia een beschermende aminogroep voorstelt of R^ acyl voorstelt, V een verlatende groep voorstelt als methaansulfo-nyl, benzeensulfonyl, tolüeensulfonyl, chloor, broom of jodium en R2, R3 en R^ bovengenoemde betekenis hebben.
58. Werkwijze volgens conclusie 57, met het ken-30 merk, dat R^ waterstof voorstelt of de groep R^-NH- een beschermde aminogroep voorstelt.
59. Werkwijze volgens conclusie 57, met het kenmerk, dat R^ acyl voorstelt.
60. Werkwijze volgens conclusie 57, met het ken-35 merk, dat de acylgroep is gekozen uit: 10057 1 - 207 - <5 ΪΓ a. een alifatische groep voorstelt met de formule Rg (CO) — waarin R<_ alkyl, cycloalkyl, alkoxy, alkenyl, cycloalkenyl, cyclohexadienyl of alkyl of alkenyl, gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino, mercapto, alkylthio of cyaan- 5 methylthiogroepen voorstelt, b. een carboxyxlische aromatische groep met één der formules 35 t/m 40, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, R_, R„ en R_ elk, onafhankelijk van elkaar waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy 10 met 1-4 koolstofatomen of amino voorstellen en Rg amino, hydroxyl, een carboxylzout, beschermde carboxyl, formyloxy, een sulfozout, een sulfoaminozout, azido, halogeen, hydrazino, alkylhydrazino, fenylhydrazino of / (alkylthio)thioxomethyl_/thio voorstelt, c. een heteroaromatische groepen met één der 15 formules 45 t/m 49, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, RQ amino, hydroxyl, een carbonzuurzout, beschermde carboxyl, formyloxy, een sulfozout, een sulfoaminozout, azido, halogeen, hydrazino, alkylhydrazino, fenylhydrazino of [_ (alkylthio)thioxomethyl_/thio voorstelt en R^ een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische 20 ring voorstelt met 1,2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelato-men, d. groepen met de formule 50, waarin R^^ (I) een groep voorstelt met de formule 51, waarin Rg, en Rg elk onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, 25 trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of aminomethyl voorstellen, of (II) een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen en R^ -N=CH-R^j, -NH(C0)Rjj, alkylcarbonylamino, alkyl of alkyl, gesub- 30 stitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino en/of mercaptogroepen voorstelt, e. groepen met de formule 52, waarin R (I) een groep voor stelt met de formule 51, waarin Rg, R^ en Rg elk onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, 35 trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 kool- 81 00 57 1 ί- % - 208 - stofatomen of aminomethyl voorstellen, of (II) een al of niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen en waterstof, alkyl, cycloalkyl, alkylaminocarbonyl, -(CO)-NH-R^^, of 5 alkyl, gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino, mercapto, alkylthio, R^, carboxyl, carboxylzout, amido, alkoxycarbony1, fenylmethoxycarbonyl, difenylmethoxycarbonyl, hydroxyalkoxyfosfinyl, dihydroxyfosfinyl, hydroxy(fenylmethoxy)-fosfinyl of dialkoxyfosfinyl substituenten voorstelt. 10 f. groepen met de formule 53, waarin R^ (I) Ο een groep voorstelt met de formule 51, waarin Rg, R^ en Rg elk onafhankelijk waterstof, halogeen, hydroxy, nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of aminomethyl voorstellen of (II) een al of niet 15 gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1, 2, 3 of 4 stikstof, zuurstof en/of zwavelatomen en R^ een groep voorstelt met de formule 54, waarin n 0, 1, 2 of 3 is, amino, alkylamino, (cyaanalkyl)amino, amido, alkylamido, (cyaanalkyl)-araido of een groep met één der formules 55 t/m 60 voorstelt, 20 g. groepen met de formule 61, waarin R^ (I) r·--. tv een groep voorstelt met de formule 51, waarin Rg, R^ en Rg onaf hankelijk van elkaar waterstof, halogeen, hydroxyl, nitro, amino, cyaan, trifluormethyl, alkyl met 1-4 koolstofatomen, alkoxy met 1-4 koolstofatomen of aminomethyl voorstellen of (II) een al of 25 niet gesubstitueerde 5-, 6- of 7-ledige heterocyclische ring voorstelt met 1,2, 3 of 4 stikstof, zuurstof, en/of zwavelatomen en Ri_ waterstof, alkylsulfonyl, -N=CH-R.,, -(CO)R, ct waarin R.,. water- 11 lb lb stof, alkyl of halogeenalkyl voorstelt, Rjj alkyl, of alkyl, gesubstitueerd met één of meer halogeen, cyaan, nitro, amino of mercap-30 togroepen voorstelt.
61. Werkwijze volgens conclusie 60, met het kenmerk, dat R^j 2-amino-4-thiazolyl voorstelt.
62. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van / 3S(2)^/-3-/_/ (2-amino-4~ 35 thiazolyl)(methoxyimino)acetyl /amino_/-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. 8 1 0 0 5 7 1 ^ * - 209 -
63. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van / 3S (Z)_/-3-/*~/ (2-amino-4-thiazolyl)(carboxymethoxy) imino__/acetyl_/amino_/-2-oxo-l-azeti-dine sulfonzuur.
64. Werkwijze volgens conclusie 61, met het ken merk, dat het produkt een zout is van / 3S(Z) /-3-V / (2-amino-4-thiazolyl) f_ (1-carboxy-l -methylethoxy) imino_/acetyl__/amino__/-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur.
65. Werkwijze volgens conclusie 61, met het ken- 10 merk, dat het produkt een zout is van / 3S-/ 3α(Z),4β_/__/-3-/ / (2- amino-4-thiazolyl)(methoxyimino)acetyl /amino_/-4-methyl-2-oxo-1-azetidinesulfonzuur.
66. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van / 3S-/ 3a (z) ,48__/_/-3-*/ / /"”(car- 15 boxymethoxy)imino__/(2-amino-4-thiazolyl)acetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo- 1-azetidinesulfonzuur.
67. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van / 3S-/ 3a(z),4β_/_/-3-/_/ (2-amino-4-thiazoly1)/ {1-carboxy-1-methylethoxy)imino__/acetyl_/- 20 amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
68. Werkwijze volgens conclusie 67, met het kenmerk, dat het produkt het dikaliumzout is van /_ 3S-/ 3α (Z) ,48 / /-3-/_ /_ (2-amino-4-thiazolyl)(1-carboxy-l-methylethoxy) imino_/-acetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
69. Werkwijze volgens conclusie 61, met het ken merk, dat het produkt een zout is van /_ 3SV 3α (Z), 4a_/_/-3-/~V (2-amino-4-thiazolyl)(methoxyimino)acetyl_/amino__/-4-methyl-2-oxo-1-azetidine sulfonzuur.
70. Werkwijze volgens conclusie 61, met het ken- 30 merk, dat het produkt een zout is van / 3S-/ 3α(Z),4a_/-/-3-/ / (2- amino-4-thiazoly 1) / (1-carboxy-l-methy lethoxy) imino__/acetyl_/-amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur.
71. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van 3S (RK)_/-3-/_ //././, 3- 35 [_ (2-furanylmethyleen) amino_/-2-oxo-l-imidazolidinyl__/carbonyl /- 81 0 0 57 1 - 210 - amino_/fenylacety l_/amino_/-2-oxo-1 -aze tidinesulf onzuur.
72. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van /_ 3S-/_ 3a (RX) ,4β_/_/-3- L L L L L ^~L (2-furanylmethyleen)amino_/-2-oxo-l-imidazolidinyl_/- 5 carbonyl__/amino__/fenylacetyl_/amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidine- sulfonzuur.
73. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van [_ 3S-/ 3a(RX) ,4a_/__/-3-//£/_/ 3-/_ (2-furanylmethyleen)amino__/-2-oxo-l-imidazolidinyl_/- 10 carbonyl /amino /fenylacetyl /amino_/-4-methyl-2-oxo-l-azetidine- sulfonzuur.
74. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van / 3S(RX)__/-3-/ /./,/. (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl_/amino__/fenylacetyl_/amino__/- 15 2-oxo-1-azetidinesulfonzuur.
75. Werkwijze volgens conclusie 61, met het kenmerk, dat het produkt een zout is van f_ 3S-/_ 3a(RX)_/,43- / / / / (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl__/amino_/fenyl-acetyl /amino /-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur. emm mm
76. Werkwijze volgens conclusie 61, met het ken merk, dat het produkt een zout is van /_ 3S-/_ 3a (RX) ,4a / /-3-[_/_/_ /_ (4-ethyl-2,3-dioxo-l-piperazinyl)carbonyl_/amino__/fenyl-acetyl_/amino__/-4-methyl-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur,
77. Werkwijze volgens één der conclusies 54- 25 76, met het kenmerk, dat men de sulfonering uitvoert door behande ling met een zwaveltrioxydecomplex of een equivalent sulfoneer-middel.
78. Werkwijze volgens conclusie 77, met het kenmerk, dat het sulfonerende complex pyridine-zwaveltrioxyde- 30 complex is.
79. Werkwijze volgens conclusie 77, met het kenmerk, dat het sulfonerende complex dimethylformamide-zwavel-trioxydecomplex is.
80. Werkwijze volgens conclusie 54, met het 35 kenmerk, dat de amino substituent op de 3-plaats in de azidevorm 1 0 0 57 1 - 211 - is beschermd.
81. Werkwijze volgens conclusie 57, met het kenmerk, dat de groep R^-NH een in de azidevorm beschermde aminogroep is.
82. Werkwijze volgens conclusie 80 of 81, met het kenmerk, dat men de beschermende azidegroep reduceert onder vorming van de amino substituent (-nh2).
83. Werkwijze volgens conclusie 54 of 57, met het kenmerk, dat de amino beschermende groep benzyloxycarbonyl of 10 butyloxycarbonyl is.
84. Werkwijze volgens conclusie 54, 56 en 57, met het kenmerk, dat het produkt de formule la heeft, waarin de verschillende groepen dezelfde betekenis hebben als in conclusie 57, waarbij de aminogroep in beschermde vorm kan verkeren.
85. Werkwijze volgens conclusie 57, met het ken merk, dat R2 waterstof voorstelt en R^ en R^ hetzelfde of verschillend zijn en waterstof of alkyl kunnen voorstellen.
86. Werkwijze volgens conclusie 85, met het kenmerk, dat de alkylgroep methyl is. 20 87, Werkwijze volgens conclusie 54-87, met het kenmerk, dat het kation M+ een pyridinium-ion of een tetrabtuyl-ammonium-ion of een aklium-ion is.
88. Werkwijze voor het bereiden van een zout van (R) -3-(acetylamino)-3-methoxy-2-oxo-l-azetidinesulfonzuur, met het 25 kenmerk, dat men een stam van het micro-organisme Chromobacterium violaceum A.T.C.C, 31532 kweekt in een watermedium, dat gistextract, rundvleesextract, NZ amine, glucose en agar bevat.
89. Werkwijze voor het bereiden van een zout van (R) ~3~/_ /_ N- (ϋ-γ-glutamyl) -D-alanyl_/amino_/-3-methoxy-2-oxo- 30 azetidinesulfonzuur met het kenmerk, dat men een stam van het micro-organisme Gluconobacter A.T.C.C. 31581 kweekt in een watermedium, dat gistextract, rundvleesextract, NZ amine A, glucose en agar bevat.
90. Werkwijze voor het bereiden van een nieuwe 35 verbinding met het kenmerk, dat men een verbinding bereidt met de 81 00 57 1 * 'φ - 212 - formule 21 als boven gedefinieerd, met dien verstande, dat OMs nu de betekenis heeft van V in de formule 15, door een verbinding met de formule 20, waarin OMs eveneens dezelfde betekenis heeft als V in de formule 15 sulfoneert.
91. Verbinding met de formule 21, waarin de symbolen dezelfde betekenis hebben als in conclusie 90.
92. Verbinding met de formule 32, waarin de symbolen bovengenoemde betekenis hebben.
93. Verbinding met de formule 1, met dien ver-10 stande, dat de groep R^-NH- is vervangen door een azidogroep N^-. 81 00 57 f * β Rx ?x ?« R,- Ntf- C-C- R-s 0Λ—-n-so;m+ 1 Nhj _ C o*c C - R* 1 - * N. SO M 9 la -A. R* Rii CAH5-CHi oco-nh r-Rj. H^N R, liit 1) sulfonering r aj deprotectie N-SO'M* 3 -B- R, Rk Rr NH
4-R, NH sulfonering R-NH 1 R» R* l-R» n-so'm* -C. Cl i H R; Rx ?<> acyl. N- i-R» acyl _ NH- N-SO’M* (RSW<lnolaat ,<* f— Rj N.SOM* ) -D. acyl. NH- ,/R< acyl. NH- nnpÏïïIFïng^ R, R> •ιΛ •NH-SCTM 8 N- SO'M* \ E.R. Squibb & Sons, Inc., Princeton, New Jersey, Ver.St.v.Amerika 81 00 57 1 * ·* nu NHX i . Ra 'CH —c(n I Nr5 BOC-NH-CH OH „ ' /R* C o* 12 BOC-NH-CH I
N.SO~M+ 3 Y-O-NHjCf OH 13 0 V r, R; BOC-NH-rr— —r R* C nRj I I n«c — N- O-Y u BOC.NH- NH-O-Y *k 1-R: NH NH^CH. 19 16 17 / \ R. NH. ANH-CH I n.C · OMs 1 C NR, NH. 20 ANH-CH I o*c'
NHSO“M * ANH. R4 Ri HjN- ?λ 4—R· •N. SCf M* 21 22 23 n-so;m* R» NH. Ri •R. -N-SO, R-NH- 1 2L CH; R‘ f'CH, - N — C-COOH 25a R-NH. r -Nv^ CH3 CO OH 25b R-NH -N-CH.CH(CH^ 26 cooh * R4 ch-c-r3 27 O = C - N -SO^- halogeen 28 Or
•N.SO -halogeen 29 o ?a f*. .NH .30
8100571 E.R, Squibb & Sons, lac., Princeton, New Jersey, Ver.St.v.Amerika Cl^» I Η Ra CL Ra RfN -R, C H ·* CH -O-CO.N 6 1 .R 0.aLkyl R*.
3. H O.CO.NH (, s 32 N-SoV * 33 N-CL NH 34
45. R^CCH^-C-
E.R. Squibb S Soos, Inc., Princeton, New Jersey, Ver.St.v.Aaerika 8 1 0 0 5 7 1 '
OH
^ O / V ii N-CH O O O i -CCH-NH-C-N' nN.R,_ • \ I Rn CHi- CH* 61
n.so'm*
O-aLkyl ?4 HiN ' ^ °'aLky 1 0.alkyl 63
O.aLkyl 68 o π o V o N ,CN
70 R-NH-CH 1 N-N=CH -C-CH-NH-C-N 1 CH, IN 0 71 V „ Rx 1 yRk P MM Γ -C \ Rj Γν - ΙΗΓ1- U , ’ 1 * ΝΗλ cx 1 ' 0" R* m Φ C-R. λ 3 73 72 E.R. Squibb & Sons, Inc., Princeton, New Jersey, Ver.St.v.Amerika 8100571
NL8100571A 1980-02-07 1981-02-06 ß-Lactamverbindingen met anti-biotische werking en bereiding daarvan. NL192924C (nl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11927680A 1980-02-07 1980-02-07
US11927680 1980-02-07
US18889380A 1980-09-29 1980-09-29
US18889380 1980-09-29

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NL8100571A true NL8100571A (nl) 1981-09-01
NL192924B NL192924B (nl) 1998-01-05
NL192924C NL192924C (nl) 1998-05-07

Family

ID=26817179

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8100571A NL192924C (nl) 1980-02-07 1981-02-06 ß-Lactamverbindingen met anti-biotische werking en bereiding daarvan.

Country Status (29)

Country Link
JP (3) JPS56125362A (nl)
KR (1) KR860001289B1 (nl)
AR (1) AR245932A1 (nl)
AU (1) AU569407B2 (nl)
CA (1) CA1338670C (nl)
CH (2) CH651020A5 (nl)
DD (1) DD156180A5 (nl)
DE (1) DE3104145C2 (nl)
DK (1) DK166280C (nl)
ES (1) ES8205397A1 (nl)
FI (1) FI80271C (nl)
FR (1) FR2509299B1 (nl)
GB (2) GB2071650B (nl)
GR (1) GR74151B (nl)
HK (1) HK57785A (nl)
IE (2) IE51393B1 (nl)
IL (1) IL62082A (nl)
IT (1) IT1135360B (nl)
KE (1) KE3539A (nl)
LU (1) LU83117A1 (nl)
MY (1) MY8600179A (nl)
NL (1) NL192924C (nl)
NO (2) NO161065C (nl)
NZ (2) NZ205240A (nl)
PH (3) PH24729A (nl)
PT (1) PT72465B (nl)
SE (3) SE457954B (nl)
SG (1) SG39185G (nl)
YU (1) YU44829B (nl)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013109217A1 (en) 2012-01-16 2013-07-25 Mahmut Bilgic Pharmaceutical formulations comprising aztreonam
US9174978B2 (en) 2014-03-24 2015-11-03 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
US10919887B2 (en) 2015-09-23 2021-02-16 Novartis Ag Salts and solid forms of a monobactam antibiotic
US11414411B2 (en) 2017-08-02 2022-08-16 Novartis Ag Chemical process for manufacturing monobactam antibiotic and intermediates thereof

Families Citing this family (47)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0050965A1 (en) * 1980-10-23 1982-05-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Beta-lactamase inhibitory composition
WO1982001873A1 (en) * 1980-12-05 1982-06-10 Takeda Chemical Industries Ltd 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and process for their preparation
US4782147A (en) * 1980-12-05 1988-11-01 Takeda Chemical Industries, Ltd. 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and their production
JPS57131758A (en) * 1980-12-05 1982-08-14 Takeda Chem Ind Ltd 1-sulfo-2-oxoazetidine derivative, its preparation and use
US4675397A (en) * 1980-12-05 1987-06-23 Takeda Chemical Industries, Ltd. 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and their production
WO1983000690A1 (en) * 1981-08-25 1983-03-03 Takeda Chemical Industries Ltd Azetidine derivatives and process for their preparation
MX7096E (es) * 1980-12-05 1987-06-19 Takeda Chemical Industries Ltd Metodo para preparacion de derivados de 2-oxoazetidina
US4673739A (en) * 1980-12-05 1987-06-16 Takeda Chemical Industries, Ltd. 4-carbamoyloxymethyl-1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and their production
JPS58210061A (ja) * 1982-05-31 1983-12-07 Takeda Chem Ind Ltd １−スルホ−２−オキソアゼチジン誘導体、その製造法および用途
US4572801A (en) * 1981-04-30 1986-02-25 Takeda Chemical Industries, Ltd. 4-Carbamoyloxymethyl-1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and their production
CA1181075A (en) * 1981-07-13 1985-01-15 David M. Floyd CRYSTALLINE ANHYDROUS FORM OF [3-S-[3.alpha.(Z),4 .beta.]]-3-[[(2-AMINO-4-THIAZOLYL) [(1-CARBOXY-1-METHYLETHOXY)IMINO]ACETYL] AMINO]-4-METHYL-2-OXO-1-AZETIDINESULFONIC ACID
FR2515182B1 (fr) * 1981-10-23 1986-05-09 Roussel Uclaf Nouveaux produits derives de l'acide 3-amino 2-oxo azetidine 1-sulfamique, leur procede de preparation, leur application comme medicaments et les produits intermediaires necessaires a leur preparation
FR2538389B2 (fr) * 1981-10-23 1986-05-16 Roussel Uclaf Nouveaux produits derives de l'acide 3-amino 2-oxo azetidine-1-sulfamique, nouveau procede de preparation de produits optiquement actifs, application des nouveaux produits comme medicaments et produits necessaires a leur preparation
IL67451A (en) * 1981-12-25 1987-10-20 Takeda Chemical Industries Ltd 4-cyano-2-azetidinones and production thereof and process for the preparation of 4-carbamoyl-2-azetidinones using them
EP0086563A1 (en) * 1982-01-22 1983-08-24 Beecham Group Plc Antibacterial agents, their preparation and use
EP0088488B1 (en) * 1982-01-22 1986-10-01 Beecham Group Plc Antibacterial agents, their preparation and use
US4443374A (en) * 1982-02-01 1984-04-17 E. R. Squibb & Sons, Inc. Process for preparing (3S)-3-[[(2-amino-4-thiazolyl)[(1-carboxy-1-methylethoxy)imino]-acetyl]amino]-2-oxo-1-azetidinesulfonic acid, and 4-substituted derivatives
WO1983002942A1 (en) * 1982-02-19 1983-09-01 Yoshioka, Kouichi Process for preparing 2-azetidinone-1-sulfonic acids, and starting materials therefor
AU564150B2 (en) * 1982-04-30 1987-08-06 Takeda Chemical Industries Ltd. 1-sulfo-2-azetidinone derivatives
DE3377061D1 (en) * 1982-06-03 1988-07-21 Hoffmann La Roche Process for the preparation of 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives
DE3372768D1 (de) * 1982-06-03 1987-09-03 Hoffmann La Roche 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives
US4704457A (en) * 1982-06-21 1987-11-03 E. R. Squibb & Sons, Inc. Process for the preparation of (3S)-3-[[[2-(protected amino)-4-thiazolyl]-oxoacetyl]amino]-2-oxo-1-azetidinesulfonic acid and 4-substituted derivatives thereof
US4939253A (en) * 1982-08-04 1990-07-03 E. R. Squibb & Sons, Inc. 2-oxoazetidin-1-yloxy acetic acids and analogs
US4681937A (en) * 1982-09-27 1987-07-21 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-acylamino-2-oxo-1-azetidinyl esters of phosphonic acids, phosphoric acid and phosphoric acid esters
US4551276A (en) * 1982-10-06 1985-11-05 E. R. Squibb & Sons, Inc. 2-Oxoazetidin-1-yloxymethyl sulfonic acid and analogs
US4533495A (en) * 1982-12-30 1985-08-06 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method of producing 2-azetidinone-1-sulfonic acid compounds
US4548747A (en) * 1983-05-02 1985-10-22 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-Acylamino-1-sulfonylaminocarbonylmethoxy-2-azetidinones
US4670554A (en) * 1983-05-31 1987-06-02 E. R. Squibb & Sons, Inc. ((3-Acylamino-2-oxo-1-azetidinyl)oxy)methyl)phosphinic acids
US4652651A (en) * 1983-05-31 1987-03-24 Hoffmann-La Roche Inc. Process for the manufacture of 1-sulpho-2-oxoazetidine carboxylic acid intermediates via catalytic ester cleavage
US4501697A (en) * 1983-06-17 1985-02-26 E. R. Squibb & Sons, Inc. 4-[[(Amidomethyl)oxy]methyl]-2-oxo-1-azetidinesulfonic acid salts
JPS601162A (ja) * 1983-06-17 1985-01-07 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd ３―アジド―２―オキソアゼチジン―１―スルホン酸誘導体の製造法
US4587051A (en) * 1983-07-18 1986-05-06 E. R. Squibb & Sons, Inc. Desulfonation process for preparing 2-azetidinones
US4596777A (en) * 1983-08-10 1986-06-24 E. R. Squibb & Sons, Inc. Process for preparing (3S)-3-[[[2-(protected or unprotected amino)-4-thiazolyl]acetyl]amino]-2-oxo-1-azetidinesulfonic acid and 4-substituted derivatives thereof
US4551277A (en) * 1983-11-09 1985-11-05 E. R. Squibb & Sons, Inc. 4-(3-Acylamino-2-oxo-1-azetidinyl)-4-oxo-2-butenoic acid
JPS60112789A (ja) * 1983-11-21 1985-06-19 Otsuka Chem Co Ltd ３−アシルアミノ−４−アルキル−２−アゼチジノン−１−スルホン酸誘導体、その製造方法および該誘導体を含有する薬剤
JPS60226855A (ja) * 1984-04-26 1985-11-12 Nippon Kayaku Co Ltd Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−ｌ−スレオニンアミド・１／２水和物およびその製造法
US4918185A (en) * 1984-05-22 1990-04-17 Eli Lilly And Company Process for carbon-carbon bond formation at the C-4 position of 3-acylaminoazetidinones and products and starting materials therefor
US4771135A (en) * 1984-05-22 1988-09-13 Eli Lilly And Company Process for carbon-carbon bond formation at the C-4 position of 3-acylaminoazetidinones and products and starting materials therefor
US4680409A (en) * 1984-10-09 1987-07-14 E. R. Squibb & Sons, Inc. Hydrazide containing derivatives of 2-amino-4-thiazole-acetic acid
US4610824A (en) * 1984-10-09 1986-09-09 E. R. Squibb & Sons, Inc. Hydrazide derivatives of monocyclic beta-lactam antibiotics
US4647660A (en) * 1985-05-02 1987-03-03 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-acylamino-2-oxo-1-azetidinesulfonic acids
US4632985A (en) * 1985-06-03 1986-12-30 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-acylamino-2-oxo-1-azetidinesulfonic acids
US4638062A (en) * 1985-06-17 1987-01-20 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-acylamino-2-oxo-1-azetidinesulfonic acids
US4754041A (en) * 1985-06-17 1988-06-28 E. R. Squibb & Sons, Inc. 3-acylamino-2-oxo-1-azetidinesulfonic acids
FR2588867B1 (fr) * 1985-10-23 1988-12-09 Roussel Uclaf Nouveaux produits derives de la serie de la 3-amino 2-oxo azetidine, leur procede de preparation et leur application
ATE423115T1 (de) * 2005-05-09 2009-03-15 Sicor Inc Herstellungsverfahren für aztreonam
JP5648250B2 (ja) * 2007-11-21 2015-01-07 国立大学法人東京工業大学 スルホン化含窒素複素環を有する高分子有機化合物および有機化合物、それらの製造方法、およびそれらを用いたイオン交換体、電解質膜、医薬品、触媒、膜電極接合体、燃料電池

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6046955B2 (ja) * 1977-12-30 1985-10-18 武田薬品工業株式会社 抗生物質ｇ−６３０２
JPS55164672A (en) * 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Azetidine derivative and its preparation
EP0021678B1 (en) * 1979-06-08 1984-11-07 Takeda Chemical Industries, Ltd. 1-sulpho-2-oxoazetidine derivatives, their production and pharmaceutical compositions thereof
WO1982001873A1 (en) * 1980-12-05 1982-06-10 Takeda Chemical Industries Ltd 1-sulfo-2-oxoazetidine derivatives and process for their preparation
JPS57131758A (en) * 1980-12-05 1982-08-14 Takeda Chem Ind Ltd 1-sulfo-2-oxoazetidine derivative, its preparation and use

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013109217A1 (en) 2012-01-16 2013-07-25 Mahmut Bilgic Pharmaceutical formulations comprising aztreonam
US9174978B2 (en) 2014-03-24 2015-11-03 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
US10369138B2 (en) 2014-03-24 2019-08-06 Novartis Ag Monobactam organic compounds for the treatment of bacterial infections
US10919887B2 (en) 2015-09-23 2021-02-16 Novartis Ag Salts and solid forms of a monobactam antibiotic
US11414411B2 (en) 2017-08-02 2022-08-16 Novartis Ag Chemical process for manufacturing monobactam antibiotic and intermediates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
DE3104145A1 (de) 1981-12-17
KR830005131A (ko) 1983-08-03
KE3539A (en) 1985-07-12
CA1338670C (en) 1996-10-22
JPH02160764A (ja) 1990-06-20
NO161065B (no) 1989-03-20
AR245932A1 (es) 1994-03-30
NZ205240A (en) 1984-07-31
FI80271B (fi) 1990-01-31
GB2071650A (en) 1981-09-23
PH24729A (en) 1990-10-01
NO161065C (no) 1989-06-28
CH653993A5 (de) 1986-01-31
DK52381A (da) 1981-08-08
IT1135360B (it) 1986-08-20
IE51393B1 (en) 1986-12-24
CH651020A5 (de) 1985-08-30
FI80271C (fi) 1990-05-10
GB2139618B (en) 1985-05-01
AU6698581A (en) 1981-08-13
LU83117A1 (fr) 1982-09-10
PH23316A (en) 1989-07-14
JPS56125362A (en) 1981-10-01
SE8100861L (sv) 1981-08-08
GR74151B (nl) 1984-06-06
HK57785A (en) 1985-08-09
ES499171A0 (es) 1982-06-01
AU548896B2 (en) 1986-01-09
NO860225L (no) 1981-08-10
AU569407B2 (en) 1988-01-28
NL192924B (nl) 1998-01-05
NO810410L (no) 1981-08-10
JPH0670006B2 (ja) 1994-09-07
DK166280C (da) 1993-08-30
DE3104145C2 (de) 1999-05-12
SE8602193D0 (sv) 1986-05-14
GB2071650B (en) 1984-12-05
IT8119587A0 (it) 1981-02-06
DD156180A5 (de) 1982-08-04
SE457954B (sv) 1989-02-13
ES8205397A1 (es) 1982-06-01
FI810352L (fi) 1981-08-08
IL62082A (en) 1986-08-31
IE51392B1 (en) 1986-12-24
GB2139618A (en) 1984-11-14
SE8602193L (sv) 1986-05-14
IL62082A0 (en) 1981-03-31
SE500216C2 (sv) 1994-05-09
PT72465A (pt) 1981-03-01
SE8602194D0 (sv) 1986-05-14
JPH0586023A (ja) 1993-04-06
AU4574885A (en) 1985-11-07
PT72465B (en) 1982-02-04
FR2509299B1 (fr) 1985-08-30
SG39185G (en) 1985-12-13
NO170015C (no) 1992-09-02
MY8600179A (en) 1986-12-31
YU31981A (en) 1984-02-29
IE810230L (en) 1981-08-07
NZ196202A (en) 1984-07-31
IE862297L (en) 1981-08-07
PH23317A (en) 1989-07-14
SE8602194L (sv) 1986-05-14
KR860001289B1 (ko) 1986-09-10
GB8333191D0 (en) 1984-01-18
YU44829B (en) 1991-04-30
NL192924C (nl) 1998-05-07
NO170015B (no) 1992-05-25
DK166280B (da) 1993-03-29
FR2509299A1 (fr) 1983-01-14
JPH0623188B2 (ja) 1994-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NL8100571A (nl) Antibiotische beta-lactamen.
US4775670A (en) 2-oxo-1-azetidinesulfonic acid salts
AU648329B2 (en) Cephalosporins and homologues, preparations and pharmaceutical compositions
DK160304B (da) Analogifremgangsmaade til fremstilling af 2-(3&#39;-hydroxy-pyrid-2&#39;-yl)-2-thiazolin-4-carboxylsyre-derivater samt salte og metalkomplekser deraf.
EP0048953B1 (en) Beta-lactam antibiotics
IE55839B1 (en) Azetidine compounds
US4529698A (en) Process for preparing a 2-oxo-1-azetidinesulfonic acid salt
CA1340253C (en) B-lactam antibiotics
EP0308416A1 (en) N-1 substituted sulfonylaminocarbonyl, c-4 substituted monobactams
US5635500A (en) Cephem compound and pharmaceutical composition containing the compound
TWI297689B (en) Novel β-lactam compounds and process for producing the same
EP0548186B1 (en) Cephalosporin derivatives and their homologues
JPH03123771A (ja) 光学活性３―置換アゼチジノン化合物の新規製造法
CN1081641C (zh) 碳代青霉烯衍生物和抗菌剂
CN86107742A (zh) 季胺化的2-位具有杂硫烷硫取代基的碳代氰霉烯
US4698339A (en) Carbapenems, their production and use
KR930001405B1 (ko) 2-(4-치환아미노-3-옥소-이속사졸리디닐)-5-옥소-2-테트라히드로푸란카르복실산 유도체의 제조방법
CN1161333A (zh) 新的杂芳基噁唑烷酮类化合物
JPH0475238B2 (nl)
EP0187355A1 (en) Process for preparing beta-lactam antibiotics
WO1986003752A1 (en) Novel antibiotic derivatives, process for their preparation and use thereof
JPS595189A (ja) カルバペネム−３−カルボン酸誘導体およびペネム−３−カルボン酸誘導体ならびにそれらの製法
CN1067657A (zh) β-内酰胺化合物的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
A85 Still pending on 85-01-01
BA A request for search or an international-type search has been filed
BB A search report has been drawn up
BC A request for examination has been filed
V4 Discontinued because of reaching the maximum lifetime of a patent

Free format text: 20010206