NO170014B

NO170014B - Analogifremgangsmaate for fremstilling av den terapeutisk aktive forbindelse (3s(z))-2-(((1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-((2,2-dimetyl-4-okso-1-(sulfooksy)-3-azetidinyl)amino)-2-oksoetyliden)amino)oksy)-eddiksyre

Info

Publication number: NO170014B
Application number: NO860273A
Authority: NO
Inventors: William A Slusarchyk; Tamara Dejneka; William H Koster
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1985-01-28
Filing date: 1986-01-27
Publication date: 1992-05-25
Also published as: FI85022B; HUT40407A; PL257668A1; IL77661A; DD248584A5; IT1190604B; NO170014C; NZ214836A; KR900000675B1; SE467824B; GR860239B; DK39486D0; CH670824A5; ES551252A0; PL149156B1; ES557057A0; AT389511B; LU86262A1; AU588017B2; PT81914A

Description

US-patent 4 337 197, publisert 29. juni 1982, beskriver O-sulfaterte Ø-laktam-hydroksaminsyrer med antibakteriell ak-tivitet. Foretrukkede forbindelser, som beskrevet i patentet,

har formelen

hvor R'^ er acyl, og R'^ er de samme eller forskjellige og hver er hydrogen eller alkyl, og M® er hydrogen eller et kation.

Flere fremgangsmåter for fremstilling av ovennevnte forbindelser er beskrevet, innbefattende en fremgangsmåte som an-

vender et mellomprodukt med formelen

hvor A<1> er en nitrogenbeskyttende gruppe og Y<1> er benzyl eller pivaloyl. Som beskrevet i patentet omdannes hydroksylgruppen i ovennevnte mellomprodukt til en utgående gruppe, for eksempel under anvendelse av et klassisk reagens så som metansulfonyl-klorid. Den fullstendig beskyttede forbindelse har formelen

(L' er en utgående gruppe) og kan sykliseres ved behandling med base, for eksempel kaliumkarbonat, idet man får en forbind-

else med formelen:

Alternativt beskriver patentet den enkelttrinns-cyklise-ringsprosess som omfatter behandling av et mellomprodukt med formelen

med trifenylfosfin og dietylazodikarboksylat.

Det er blitt funnet at et farmasøytisk tilfredsstillende salt av [3S(Z)]-2-[[[l-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfoksy)-3- azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]amino]-oksy]eddiksyre, hvilken forbindelse har formelen:

I

er et utmerket antibakterielt middel.

For fremstilling av [3S (Z)-2- [ [ [1 - (2-amino-4-tiazolyl) -2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfoksy)-3- azetidnyl]amino]-2-oksoetyliden] amino] oksy] eddiksyre var det ønskelig å forbedre fremgangsmåten beskrevet i US-patent 4 337 197.

Det er blitt funnet at en forbindelse med formelen:

kan sulfoneres under dannelse av en forbindelse med formelen: Cyklisering av en fullstendig beskyttet forbindelse ifølge formel III gir det nyttige mellomprodukt med formelen

Anvendt i formlene II, III og IV og gjennom hele beskri-velsen er symbolene som angitt nedenfor.

A er benzyloksykarbonyl, p-nitrobenzyloksykarbonyl, t-butyloksykarbonyl, o-nitrofenylsulfenyl eller trifenylmetyl;

R^ er benzyl, p-nitrobenzyl, benzyloksymetyl, 2-metoksy-2-propyl, 2-etoksy-2-propyl, tetrahydropyran-2-yl, 2-trimetyl-silyletyl, t-butyldimetylsilyl eller t-butyldifenylSilyl.

De farmasøytisk tilfredsstillende salter av forbindelsene ifølge formel I innbefatter slike basiske salter som dannes med uorganiske og organiske kationer. Slike salter innbefatter ammo-niumsalter, alkalimetallsalter så som natrium- og kaliumsalter, jordalkalimetallsalter så som kalsium- og magnesiumsalter og salter som stammer fra organiske baser så som dicykloheksyl-amin, benzatin, hydrabamin, N-metyl-D-glukamin.

Forbindelsene ifølge formlene I, VI og IX er presentert som syrer. De kan imidlertid også finnes som zwitterioner (in-terne eller indre salter), og disse er også innbefattet i uttryk-ket "farmasøytisk tilfredsstillende salter".

Farmasøytisk tilfredsstillende salter av [3S (Z) ]-2-[ [ [1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfoksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]amino]oksy]eddiksyre er over forventning utmerkede antibakterielle midler sammenlignet med andre O-sulfaterte 3-laktamhydroksaminsyrer. Mer spesifikt har saltene fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse utmerkede orale adsorpsjons-karakteristika i pattedyr, sammen med forbedret stabilitet overfor Ø-laktamaseenzymer som er ansvarlig for Ø-laktam-motstandsdyktighet i klinikken og dessuten forbedret kjemisk stabilitet.

Farmasøytisk tilfredsstillende salter av forbindelsen ifølge formel I kan anvendes ved bekjempelse av gram-negative bakterielle infeksjoner hos pattedyr, så som husdyr (f.eks. hunder, katter, hester og lignende) og mennesker. Saltene er spesielt egnet for oral administrering, men alle administrerings-måter som er blitt anvendt tidligere for tilføring av penicilli-ner og cefalosporiner til infeksjonsstedet er også påtenkt.

For bekjempelse av en gram-negativ bakteriell infeksjon

i et pattedyr kan et farmasøytisk tilfredsstillende salt av forbindelsen ifølge formel I administreres til et pattedyr som har behov for dette, i en mengde på fra ca. 1 mg/kg/dag til ca.

350 mg/kg/dag, fortrinnsvis fra ca. 10 mg/kg/dag til ca.

100 mg/kg/dag.

For oral administrering kan et farmasøytisk tilfredsstillende salt av forbindelsen ifølge formel I utformes som en tab-lett, kapsel, eller oppløsning eller suspensjon i en vandig bærervæske.

Omdannelse av hydroksylgruppen i en forbindelse med formelen :

til en utgående gruppe kompliseres ved det faktum at forbindelsen er en tertiær alkohol. Det er blitt funnet at hvis en forbindelse ifølge formel II sulfoneres under anvendelse av et pyridin- (eller substituert pyridin-)svoveltrioksydkompleks med formelen: hvor m er 0, 1, 2 eller 3, vil reaksjonen gi en forbindelse med formelen

med høyt utbytte. Pyridin-svoveltrioksyd-komplekset reagerer fortrinnsvis med hydroksylgruppen (som ønskelig).

Sulfoneringsreaksjonen kan kjøres i et organisk løsnings-middel så som pyridin, mono-, di- eller tri-metylpyridin, klor-erte hydrokarboner (f.eks. diklormetan, 1,2-dikloretan), acetonitril, dimetylformamid og dioksan. Reaksjonen vil fortrinnsvis bli kjørt ved ca. 0-lOO°C.

Baseformidlet cyklisering av en forbindelse ifølge formel III gir det tilsvarende mellomprodukt med formelen

Basen er fortrinnsvis en uorganisk base så som et alkalimetall-karbonat (for eksempel natriumkarbonat eller kaliumkarbonat) og bør være til stede i overskudd (ca. 2-10 ekvivalenter pr. reak-tant ifølge formel III). Reaksjonen kjøres fortrinnsvis i en blanding av vann og organisk løsningsmiddel. Den organiske komponent kan være etylacetat, acetonitril, aceton, metyletylketon, metylpropylketon, metylbutylketon, metylisobutylketon, 1,2-dikloretan, pyridin eller mono-, di- eller trimetylpyridin.

Som beskrevet i- US-patent 4 337 197 kan den beskyttende gruppe "R3" først fjernes fra et mellomprodukt ifølge formel IV, idet man får den tilsvarende hydroksaminsyre med formelen

De reaksjoner som anvendes for fjerning av de forskjellige "R^"-grupper, er kjent på området og vil selvfølgelig avhenge av den spesielle "R^"-gruppe.

Sulfonering av en forbindelse ifølge formel VII gir den tilsvarende forbindelse med formelen

eller et basisk salt derav, og kan utføres ved omsetning med et kompleks av svoveltrioksyd med pyridin, dimetylformamid eller 2,6-lutidin.

Fjerning av den 3-amino-beskyttende gruppe "A" fra en forbindelse ifølge formel VIII gir det tilsvarende nøkkel-mellomprodukt med formelen IX som representerer et trekk ved foreliggende oppfinnelse.

Den fremgangsmåte som anvendes for fjerning av den beskyttende gruppe, vil avhenge av den spesielle beskyttende gruppe.

Ved fremstilling ifølge oppfinnelsen av det ønskede produkt ifølge formel I, acyleres en forbindelse ifølge formel IX

med en karboksylsyreforbindelse ifølge formelen

hvor R er en karboksylsyre-beskyttende gruppe som senere fjernes ifølge konvensjonelle fremgangsmåter. Acyleringen er konven-sjonell og kan utføres under anvendelse av karboksylsyren som så-dan, eller et karboksylsyrehalogenid eller -anhydrid eller en aktiv ester.

De følgende eksempler illustrerer fremgangsmåten ifølge denne oppfinnelse ytterligere. Fremgangsmåten anvendes for fremstilling av [3S(Z)]-2-[[[l-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-di-metyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]-amino]oksy]-eddiksyre som et kiralt materiale og som en komponent i en racemisk blanding.

Eksempel 1

[3+(Z)]-2- [ [ [1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]]-2-oksoetyliden]amino]oksy]eddiksyre, dinatriumsalt

å.) N-(t-butyloksykarbonyl)-N 2- (f enylmetoksy) -D,L-3- hydrok syva1inamid

En oppløsning av 24,84 g (106,6 mmol) N-t-butyloksykarbonyl-D,L-3-hydroksyvalin og 16,33 g (106,6 mmol) hydroksybenzo-triazol-monohydrat i 500 ml tørt tetrahydrofuran ble avkjølt til -10°C og 22 g (106,6 mmol) dicykloheksylkarbodiimid ble tilsatt. Blandingen ble omrørt under nitrogen i 1 time ved 0°C. Derefter ble en oppløsning av 13,13 g (106,6 mmol) O-benzylhydroksylamin i 250 ml tørt tetrahydrofuran tilsatt i løpet av 15 minutter til den aktiverte esterblanding, og den resulterende blanding ble om-rørt under nitrogen i 1 time ved 0°C. Det uoppløselige materiale ble filtrert bort, og filtratet ble avdrevet til et skum i vakuum. Skummet ble ekstrahert med etylacetat og mer uoppløselig materiale ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble vasket to ganger med 5 % natriumbikarbonatoppløsning. Den organiske fase ble tørket (natriumsulfat) og inndampet til en sirup, som ble krystallisert fra 130 ml isopropyleter, idet man fikk 24,7 g av tittelforbindelsen, smeltepunkt 76-78°C. Moderluten ble inndampet til en sirup (10 g), som ble kromatografert på en kolonne som inneholdt 300 g "SilicAR" CC-4 pakket i kloroform. Kolonnen ble eluert først med 1 liter kloroform og deretter med 2 liter 2 % metanol i kloroform. Sistnevnte løsningsmiddelsystem eluerte ytterligere produkt (TLC R^ 0,9, kloroform/metanol, 3:1) pluss en forurensning som flyttet seg til løsningsmiddelfronten. De sammenslåtte fraksjoner ble inndampet i vakuum til en sirup (8 g), som ble krystallisert fra 25 ml isopropyleter, idet man fikk ytterligere 5 g av tittelforbindelsen, smeltepunkt 76-78°C.

B) N-(t-butyloksykarbonyl)-N2-(fen<y>lmetoksy)-D,L-3- sulfooksy) valinamid, pyridiniumsalt

Tørt pyridin (8,08 ml, 0,10 mol) ble anbrakt i en 500 ml rundbundet kolbe og avkjølt til -10°C under nitrogen. Trimetyl-silylklorsulfonat (15,6 ml, 0,10 mol) ble tilsatt dråpevis (kraftig magnetisk omrøring) hvoretter den meget tykke reaksjonsblanding

(på grunn av produktutfelling) ble omrørt i 0,5 time ved 0°C. Klortrimetylsilan ble fjernet i vakuum, hvilket gav 15 g pyridin-svoveltrioksyd-kompleks.

N- (t-butyloksykarbonyl)-N 2-(fenylmetoksy)-D,L-3-hydroksy-valinamid (16,92 g, 50 mmol) ble oppløst i 200 ml tørt pyridin og 9,87 g (62,5 mmol) pyridin-svoveltrioksyd-kompleks ble tilsatt. Blandingen ble omrørt ved 55°C under nitrogen i 2 timer. En ny porsjon (790 mg, 5 mmol) pyridin-svoveltrioksyd-kompleks ble tilsatt og omrøringen ble fortsatt i ytterligere 1 time.

TLC (n-butanol/eddiksyre/vann (3:1:1)) viste bare ett produkt, Rf 0,77 (utgangsmateriale flytter seg til løsningsmiddelfronten). Reaksjonsblandingen ble avdrevet i vakuum til en olje. Oljen ble avdrevet fra acetonitril 3 ganger i vakuum, idet man fikk ubearbeidet tittelforbindelse som et skum. Utbyttet ble antatt å være kvantitativt.

C) (3+^) -3- [ (t-butyloksykarbonyl) amino] -4 ,4-dimetyl-1-( fenylmetoksy)- 2- azetidinon

Kolben som inneholdt ubearbeidet N-(t-butyloksykarbonyl)-N 2-(fenylmetoksy)-D,L-3-(sulfoksy)-valinamid, pyridiniumsalt

(ca. 50 mmol) ble anbrakt i et isbad, og 400 ml etylacetat, fulgt av en oppløsning av 42,8 g (0,31 mol) kaliumkarbonat i 90 ml vann, ble tilsatt under kraftig omrøring. Den resulterende blanding ble omrørt kraftig under tilbakeløp (oljebadtempera-tur 95°C) i 2 timer under nitrogen. Reaksjonsblandingen ble av-kjølt til romtemperatur og fasene ble atskilt. Den vandige fase ble ekstrahert med 2 x 200 ml etylacetat og alle de organiske fa-ser ble blandet, tørket (natriumsulfat) og inndampet i vakuum. Oljen ble tatt opp i 40 % etylacetat/heksan (125 ml) og filtrert hurtig gjennom en masse på 350 ml (10 cm) "silicAR" CC-7 under anvendelse av 3-4 liter 40 % etylacetat/heksan. Filtratet ble inndampet i vakuum til et faststoff (12,2 g) . Krystallisering fra 50 ml isopropyleter gav 7,15 g av tittelforbindelsen, smeltepunkt 110°C. Inndampning av moderluten gav 4,75 g av ét gummi-aktig faststoff som inneholdt ca. 15 % ytterligere forbindelse på basis av <1>H-NMR-spektret.

D) (3+)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-1-hydroksy-4, 4- dimetyl- 2- azetidinon

(3jM -3-C (t-butyloksykarbonyl)amino]-4,4-dimetyl-l-

1-(fenylmetoksy)-2-azetidinon (8,07 g, 25 mmol) ble hydrogenert ved.atmosfæretrykk og omgivelsestemperatur i 40 ml metanol med 0,6 g 10 % palladium på trekull som katalysator i 2 timer. Re-aks jonsblandingen ble filtrert gjennom en masse av "Celite" og filtratet ble konsentrert i vakuum. Acetonitril ble tilsatt og inndampet fra residuet (to ganger), idet man fikk 5,78 g av tittelforbindelsen som et fast skum.

E) (3 + ) -3- [ (t-butyloksykarbonyl) amino] -2-oksoT*4 ,4-dimetyl- l- azetidinylsulfat, kaliumsalt

Pyridin-SO-j-kompleks (8,02 g, 50 mmol) ble tilsatt por-sjonsvis til en oppløsning av (3+;) -3-(t-butyloksykarbonyl) - amino]-l-hydroksy-4,4-dimetyl-2-asetidinon (5,78 g, 25 mmol) i tørt pyridin (120 ml) ved 0°C under argon. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2,5 timer og konsentrert i vakuum. Residuet ble oppløst i 32 ml av en oppløsning som inneholdt 10 % aceton:vandig 0,.5 M monobasisk kaliumfosfatbuffer (pH 7) , og pH ble justert til 5,2 med IN kaliumhydroksyd. Dette ble kromatografert gjennom 270 ml harpiks av typen "Dowex" 50 (K+) med en oppløsning som inneholdt 10 % aceton i vann. De brukbare fraksjoner ble dannet og konsentrert i vakuum, idet man fikk 13,6 g råprodukt. Dette ble ytterligere renset ved kromatografi gjennom 680 ml HP-20-harpiks først med 200 ml vann, og deretter med 10 % aceton i vann. De brukbare fraksjoner ble blandet og lyofilisert, idet man fikk 7,13 g av tittelforbindelsen, smeltepunkt 163-170°C, dek.

F) (3_+) -3-amino-2-okso-4 ,4-dimetyl-l-

azetidinylsulfat

(3_+) -3- [ (t-butyloksykarbonyl) amino] -4 ,4-dimetyl-l-azetidinylsulfat, kaliumsalt (5,48 g, 15 mmol) ble suspendert i 20 ml tørt diklormetan ved -10°C under argon. Anisol (6 ml)

ble tilsatt, fulgt av tilsetning av 26 ml trifluoreddiksyre i løpet av 2 minutter. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -10°C

i 20 minutter og deretter konsentrert i vakuum. Residuet ble findelt med eter (3 ganger) og tørket i vakuum, idet man fikk ubearbeidet tittelforbindelse som et hvitt faststoff.

G) [3+(Z)]-2-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]amino]oksy]eddiksyre, difenylmetyl-

ester, natriumsalt

(Z)-(2-amino-4-tiazolyl)[[(2-difenylmetoksy)-2-okso-etoksy]imino]eddiksyre (6,52 g, 16 mmol) og trietylamin (2,5 ml, 18 mmol) ble oppløst i 60 ml dimetylformamid ved -30°C under argon. Difenylklorfosfat (3,5 ml, 17 mmol) ble tilsatt dråpevis og reaksjonsblandingen ble omrørt ved -30°C i 1,5 timer.

Til det ubearbeidede ( 3 + ) -3-amino-2-okso-4,4-dimetyl-l-azetidinylsulfat fremstilt ovenfor, oppløst i 10 ml dimetylformamid ved 0°C, ble det tilsatt 6,6 ml trietylamin. Denne oppløs-ning ble tilsatt dråpevis til ovennevnte blandede anhydrid ved

-30°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved fra -30 til -20°C

i 3 1/2 timer, og temperaturen fikk derefter stige til romtemperatur. Uoppløselige materialer ble filtrert fra og filtratet ble konsentrert i vakuum. Residuet ble oppløst i 60 ml av en buffer som inneholdt 20 % aceton i 0,5 M monobasisk natriumfos-fatoppløsning (pH 7), og pH ble justert til 6,0 med 2N natriumhydroksyd. Dette ble kromatografert gjennom 300 ml harpiks av typen "Dowex" 50 Na<+> med en oppløsning som inneholdt 20 % aceton i vann. De brukbare fraksjoner ble blandet og lyofilisert til tørrhet. Råproduktet ble oppløst i 200 ml fuktig acetonitril,

og de uoppløselige uorganiske salter ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble konsentrert i vakuum, idet man fikk 19,32 g av tittelforbindelsen, forurenset med syre-utgangsmaterialet.

H) [3+(Z)]-2- [ [ [1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2- oksoetyliden] amino] oksy] eddiksyre, dinatriumsalt Ubearbeidet [3+(Z)]-2-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[ [2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]-amino]oksy]eddiksyre, difenylmetylester,. natriumsalt (19,3 g) ble suspendert i 50 ml diklormetan og 6 ml anisol ved -10°C under argon. Trifluoreddiksyre (90 ml) ble tilsatt, og reaksjonsblandingen ble omrørt i 1 time, konsentrert i vakuum og findelt med eter (3 ganger). Råproduktet ble oppløst i 40 ml buffer av 0,5M monobasisk natriumfosfat, pH 7,0, og pH ble justert til 6,8 med 2N natriumhydroksyd. Denne oppløsning ble kromatografert gjennom 900 ml HP-20 med vann. De brukbare fraksjoner ble delt i to porsjoner. Den mindre rene porsjon ble kromatografert på nytt på 500 ml HP-20. De brukbare fraksjoner ble blandet med de oppsamlede fraksjoner fra den første kromatografi og lyof ilisert,. idet man fikk 3,8 g av tittelf orbindelsen, smeltepunkt 195-210°C, dek.

Analyse beregnet for C]_2Hi3N5°9S2Na2 "2 "4 H20:

C 27,46; H 3,41; N 13.35; S 12,22

Funnet: C 27,46; H 3,48; ; N 13,06; S 12,04.

Eksempel 2

[3S(Z)]-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-1-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]-amino]okso]eddiksyre, dinatriumsalt

A) N-(t-butyloksykarbonyl)-L-3-hydroksyvalin, g- metylbenzylaminsalt

En oppløsning av N-t-butyloksykarbonyl-Ø-hydroksyvalin (7,02 g, 30 mmol) i 250 ml etyleter ble behandlet med 3,63 g (30 mmol) S-(-)-a-metylbenzylamin og den resulterende oppløsning tilsatt krystallisasjonskimer av findelt salt fra en tidligere spaltning. Etter henstand i 8 timer ved 25°C ble det resulterende hvite faststoff filtrert, vasket med eter og tørket i luft, idet man fikk 4,78 g ubearbeidet tittelforbindelse, smeltepunkt 137-140°C.

Omkrystallisering av 8,8 7 g råmateriale ble utført ved oppløsning i 200 ml acetonitril ved tilbakeløp og avkjøling til 25°C. Henstand ved 25°C i 1 time og filtrering gav, efter vask-- ing med acetonitril og etylacetat, og tørking i luft, 6,81 g

av tittelforbindelsen, smeltepunkt 144-146°C. En andre omkrystallisering av prøven på 6,81 g fra 150 ml acetonitril gav 6,02 g av tittelforbindelsen, smeltepunkt 146-147°C [a] = 4,5°

(C = 2,0, metanol).

B) N-( t- butyloksykarbonyl)- L- 3- hydroksyvalin

N-(t-butyloksykarbonyl)-L-3-hydroksyvalin, cc-metylbenzylaminsalt (5,02 g, 17,0 mmol) ble rystet med en blanding av 250 ml etylacetat og 100 ml 10 % kaliumbisulfat, og fasene ble atskilt. Den organiske fase ble vasket med vann og saltoppløsning, tørket (natriumsulfat) og inndampet til et skum. Findeling med heksan gav tittelforbindelsen som et frittstrømmende, hvitt pulver, 3,79 g, smp. 116-118°C, [a] = +7,6°C (C = 2,0, etylacetat).

En prøve av tittelforbindelsen ble omdannet til sin metyl-ester med diazometan. Proton-NMR (400 MHz) av en blanding av 5 mg av metylesteren og 10 mg tris[3-(heptafluorpropylhydroksy-metylen)-d-kamforato], europium (III) ved 0°C viste et forhold mellom enantiomerene på 95:5.

Avblokkering av forbindelsen (saltsyre/etylacetat) til sitt frie aminosyrehydroklorid og sammenligning med litteratur-rotasjonen angav at forbindelsens absolutte stereokjemi var S

(se Bull. Chem. Soc. Japan, 35, 2287 (1966)).

C) N-(t-butyloksykarbonyl)-N 2-(fenylmetoksy)-L-3-hydroksyva1inamid

Idet man fulgte fremgangsmåten ifølge eksempel IA, men anvendte N-(t-butyloksykarbonyl)-L-3-hydroksyvalin istedenfor N-(t-butyloksykarbonyl)-D,L-3-hydroksyvalin, fikk man tittelforbindelsen .

D) (3S)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-4,4-dimetyl-l-( fenylmetoksy)- 2- azetidinon

Idet man fulgte fremgangsmåtene ifølge eksempel IB og 1C, men anvendte N-(t-butyloksykarbonyl)-N <2->(fenylmetoksy)-L-3-hydroksyvalinamid istedenfor N-(t-butyloksykarbonyl)-N 2-(fenyl-metoksy )-D,L-3-hydroksyvalinamid, fikk man tittelforbindelsen. Moderluten fra krystalliseringen ble renset ved hurtig-kromatografi ("flash chromatography") på silikagel LPS-1 (eluering med 20 % etylacetat/heksan).

E) (3S)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-1-hydroksy-4 , 4- dimetyl- 2- azetidinon

Idet man fulgte fremgangsmåten ifølge eksempel ID, men anvendte (3S)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-4,4-dimetyl-l-(fenylmetoksy)-2-azetidinon istedenfor (3_+)-3-[ (t-butyloksykarbonyl) amino]-4,4-dimetyl-l-l-(fenylmetoksy)-2-azetidinon, fikk man tittelforbindelsen.

F) (3S)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-2-okso-4,4-dimetyl- l- azetidinylsulfat, kaliumsalt

Idet man fulgte fremgangsmåten ifølge eksempel 1E, men anvendte (3S)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-l-hydroksy-4,4-dimetyl-2-azetidinon istedenfor (3+)-3-[(t-butyloksykarbonyl)-amino]-l-hydroksy-4,4-dimetyl-2-azetidinon, fikk man tittelforbindelsen. Etter fjerning av de flyktige forbindelser ble det ubearbeidede residuum oppløst i 10 % aceton/0,5M monobasisk kaliumfosfatbuffer (pH 7,2), og pH ble justert til 5,0 med 3N kaliumhydroksyd. Denne oppløsning ble kromatografert på "Dowex"

(kaliumformen) fulgt av rensning på HP-20.

G) [3S(Z)]-2-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]amino]oksy]eddiksyre,

difenylmetylester, natriumsalt

Diisopropyletylamin (0,54 ml, 3,09 mmol) ble tilsatt til 1,152 g (2,81 mmol) (Z)-(2-amino-4-tiazolyl)-[[2-difenylmetoksy-2-oksoetoksy]imino]-eddiksyre i 9,4 ml dimetylformamid. Blandingen ble avkjølt til -20°C, difenylklorfosfat (0,59 ml, 2,81 mmol) ble tilsatt og den resulterende blanding ble omrørt i 1 time, idet man fikk et blandet anhydrid.

(3S)-3-[(t-butyloksykarbonyl)amino]-2-okso-4,4-dimetyl-l-azetidinylsulfat, kaliumsalt(0,98 g, 2,81 mmol) ble suspendert i 7,5 ml diklormetan, og avkjølt til -10°C. Anisol (2,13 ml)

ble tilsatt, og deretter ble 9,4 ml trifluoreddiksyre tilsatt. Den resulterende blanding ble omrørt ved -10°C i 1 time. Toluen (^5 ml) ble tilsatt, og de flyktige forbindelser ble inndampet. Residuet ble findelt med heksan og vannfri eter og inndampet, idet man fikk et hvitt pulver, (3S)-amino-2-okso-4,4-dimetyl-l-azetidinylsulfat.

Residuet ble avkjølt til -20°C og oppløst i 9,4 ml dimetylformamid. Diisopropyletylamin (1,47 ml, 8,34 mmol) ble tilsatt, og deretter ble det blandede anhydrid straks tilsatt. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -20°C i 3 timer. De flyktige forbindelser ble fjernet under vakuum, residuet ble oppløst i 20 % aceton/vann ved 0°C, og pH ble justert til 6,5 med vandig natriumbikarbonat.

Den resulterende blanding ble renset ved kolonnekromatogra-fi med 20 % aceton/vann på harpiks av typen "Dowex" 50x2-400 (natriumform), fulgt av kromatografi på HP-20 (eluering med vann, 5 % aceton/vann, 10 % aceton/vann, 20 % aceton/vann, 30 % aceton/ vann og 40 % aceton/vann), idet man fikk tittelforbindelsen. H) [3S(Z)]-2-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2- oksoetyliden] amino] oksy] eddiksyre, dinatriumsalt [3S(Z)]-2-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-1-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]amino]-oksy]eddiksyre, difenylmetylester, natriumsalt ble suspendert i 11,2 ml diklormetan ved -10°C. Anisol (1,12 ml) ble tilsatt, fulgt av dråpevis tilsetning av 18,7 ml trifluoreddiksyre. Blandingen ble omrørt ved 0°C i 40 minutter. Toluen ble tilsatt og de flyktige forbindelser ble inndampet. Residuet ble findelt med vannfri eter og evakuert, idet man fikk et hvitt faststoff. Residuet ble oppløst i vann (pH 2,75) og renset ved kromatografi på HP-20 (eluering med vann, 5 % aceton/vann, 10 % aceton/vann og 20 % aceton/vann),. idet man ved lyofilisering fikk 640 mg av zwitterionet av tittelforbindelsen. Zwitterionet ble oppløst i vann, og 2 ekvivalenter av natriumbikarbonat (244 mg, 2,9 mmol) ble tilsatt (pH = 5,75). Kromatografering av denne oppløsning på HP-20 (eluering med vann) gav ved lyofilisering 572 mg av tittelforbindelsen, smp. 140-145°C, dek.

Analyse beregnet for C12H.^N509S2Na2.1,56H20:

C 28,31; H 3,10; N 13,64

Funnet: C 28,31; H 3,19; N 13,76.

Claims

1. Analogifremgangsmåte for fremstilling av den terapeutisk aktive forbindelsen [3S(Z)]-2-[[[1-(2-amino-4-tiazolyl)-2-[[2,2-dimetyl-4-okso-l-(sulfooksy)-3-azetidinyl]amino]-2-oksoetyliden]amino]oksy]-eddiksyre med formelen og farmasøytisk tilfredsstillende salter derav, karakterisert ved at man acylerer en forbindelse ifølge formelen med en karboksylsyreforbindelse ifølge formelen hvor R er en karboksylsyrebeskyttende gruppe som senere fjernes.

2. Ny forbindelse, karakterisert ved at den er (3S)-3-amino-2-okso-4,4-dimetyl-l-azetidinylsulfat med formelen og basiske salter derav.