SA111320266B1 - أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني - Google Patents

أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني Download PDF

Info

Publication number
SA111320266B1
SA111320266B1 SA111320266A SA111320266A SA111320266B1 SA 111320266 B1 SA111320266 B1 SA 111320266B1 SA 111320266 A SA111320266 A SA 111320266A SA 111320266 A SA111320266 A SA 111320266A SA 111320266 B1 SA111320266 B1 SA 111320266B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
antibody
antigen
antibodies
binding
dependent
Prior art date
Application number
SA111320266A
Other languages
English (en)
Inventor
جاوم بونز
يافير فرناندو شابارو ريجرس
بروس تشارلز جومز
هونج ليانج
كابيل ماياوالا
جيروم توماس متيتال الثاني
جفري رايموند تشابوت
ارفيند راجبال
دافيد لويس شيلتون
Original Assignee
رينات نيوروساينس كوربوريشن
فايزر انك
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by رينات نيوروساينس كوربوريشن, فايزر انك filed Critical رينات نيوروساينس كوربوريشن
Publication of SA111320266B1 publication Critical patent/SA111320266B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
    • C07K16/4283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig
    • C07K16/4291—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins against an allotypic or isotypic determinant on Ig against IgE
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag

Abstract

أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني Antibodies with pH Dependent Antigen Binding الملخص يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة (antibodies) مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني إلى المولد المضاد الخاص بها بحيث يكون الانجذاب للارتباط مع المولد المضاد عند أس هيدروجيني فسيولوجي (أي، أس هيدروجيني 7.4) أكبر من الانجذاب عند أس هيدروجيني داخل الجسم (أي، أس هيدروجيني 6 أو 5.5). بطريقة أخرى، أن نسبة KD أو Koff عند الأس الهيدروجيني 5.5/ الأس الهيدروجيني 7.4 أو عند الأس الهيدروجيني 6/ الأس الهيدروجيني 7.4 تتعدى، أو تتراوح بين 2، 3، 4، 8، 10، 16، 20، 30، 40، أو 100 أو أكثر. يفضل انفصال الأجسام المضادة التي تعتمد على الأس الهيدروجيني هذه عن المولد المضاد في داخل الجسم. يمكن أن يزيد هذا من عمر نصف الجسم المضاد، بالمقارنة مع أجسام مضادة مع KDs مكافئ عند أس هيدروجيني 7.4 لكن بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني، عندما يكون المولد المضاد خاضع لتصفية يتوسطها مولد مضاد (مثل، PCSK9). يمكن أن تخفض أجسام مضادة تعتمد على الأس الهيدروجيني إجمالي عمر النصف للمولد المضاد عندما يخضع مولد المضاد لتصفية منخفضة عند الارتباط مع الجسم المضاد (مثل، IL6). يمكن أيضا أن تعمل أجسام مضادة تعتمد على الأس الهيدروجيني على خفض في المولد المضاد غير المرتبط إلى جسم مضاد. إن هذا يمكن أن يكون هاما عند معارضة مولد مضاد مستهدف نموذجيا موجود بمستويات مرتفعة (مثل، IgE، DKK1، C5 وSOST). إضافيا، إن هذه الأجسام المضادة يمكن أن تزيد عمر النصف للمولد المضاد عندما يكون المولد المضاد مستقبل ويكون للمستقبل تصفية متزايدة عند الارتباط مع الجسم المضاد مثل، مستقبل GMCSF.

Description

ل أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني ‎Antibodies with pH dependent antigen binding‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة ‎¢(antibodies)‏ مثل؛ أجسام مضادة كاملة الطول ‎(full length antibodies)‏ أو أقسام منها ترتبط مع المولد المضاد ‎¢(antigen)‏ لها ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني ‎(pH)‏ بحيث تكون نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎kor‏ عند أس هيدروجيني داخل ‎٠‏ الجسم/ أس هيدروجيني فسيولوجي (مثل الأس الهيدروجيني 0,0[ الأس الهيدروجيني ‎SVE‏ ‏الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 7,4) 7 أو أكثر. أصبحت ‎١‏ لأجسام المضادة أحادية النسخ ‎(mAbs) (monoclonal antibodies)‏ اختيارات علاجية مهمة لأمراض عديدة: ‎(Brekke and Sandlie, Nat Rev Drug Discov 2: 52-62, 2003; Maggon, Curr Med‏ ‎Chem 14: 1978-1987,2007). Ve‏ معظم ‎mAbs‏ الموجودة الآن في الأسواق هي أجسام مضادة ‎TgG‏ يتوسط ارتباط ‎FeRn‏ الطول النسبي لعمر النصف من ‎mAbs‏ يحدث امتصاص 150 داخل الخلية بالاحتساء الخلوي للطور المائع؛ ويرتبط 156 على التوالي مع ‎FeRn‏ في البيئة الحمضية (أس هيدروجيني ‎(V‏ ‏للمكمل داخل الجسم )2004 ,2645-2668 :93 ‎J Pharm Sci‏ .ل ‎(Lobo et‏ تحمي إعادة التدوير ‎V0‏ إلى سطح خلية 186 مرتبط مع ‎FoR‏ من التفكك حيث يسهل الأس الهيدروجيني المتعادل انفصال وإنطلاق ‎IgG‏ داخل الدورة الدموية. في المقابل؛ ينقل ‎IgG‏ غير مرتبط إلى ‎lysosomes‏ ويتحلل بعد ذلك )2005 ,5-9 :15 :15 ‎-(Lencer and Blumberg, Trends Cell Biol‏ حالياء تستخدم تقنيات عديدة لنشاط وظيفي أمثل للجسم المضاد 186 بإدخال استبدالات معينة لخفض الجرعة و/أو خفض تكرار الجرعة وتحسين التأثير والسلامة ‎(Presta, Curr.
Opinion Immunol 20: 460-470, 2008 | ٠٠‏ عموماء يمكن تصنيف ‎١‏ لأجسام المضادة ‎IgG‏ المثلى إلى هندسة المنطقة الثابتة ‎(Fe‏ لدمج ارتباط الجسم المضاد إلى ‎FeRn‏ ‏28 والنظام التكميلي؛ وهندسة المنطقة المتغيرة لدمج انجذاب الارتباط. تصف دراسات عديدة هندسة المنطقة الثابتة لزيادة ارتباط مستقبلات 7 ‎Fe‏ وبالتالي حث لوظيفية المستجيب للجسم المضاد ‎IgGl‏
’ ‎(Stavenhagen et al., Cancer Res 67: 8882-8890, 2007; Zalevsky et al., Blood 113:‏ .)2009 ,3735-3743 تحسن استبدالات مشل ‎$239D/I1332E/A330L‏ أو ‎F243L/R292P/Y300L/V305IP396L‏ ‏إلى 1 ارتباط ‎Illa‏ مستقبل 7 ‎Fo‏ ويظهر نشاط سام للخلية خلوي يعتمد على جسم مضاد © أعلى ‎(ADCC) (antibody-dependent cellular cytotoxicity)‏ في المعمل وتأثير أعلى في الكائن الحي بالمقارنة مع نوع بري من 1801. بالتالي؛ بالمقارنة مع نوع بري لأجسام مضادة؛ من المتوقع أن تظهر الأجسام المضادة مع هذه الاستبدالات تأثير ‎lef‏ عند نفس الجرعة أو تأثير قابل للمقارنة عند جرعة أقل و/أو مع تكرار أقل لتجريع في آدمي. إن طريقة أخرى لخفض الجرعة و/أو تكرار التجريع هي تخفيض التخلص من الجسم ‎٠‏ المضاد ‎IgG‏ يسجل أن عمر النصف الطويل للأجسام المضادة 156 تعتمد في ارتباطها على ‎FeRn‏ لذلك» تدرس باستفاضة الاستبدالات التي تزيد انجذاب ارتباط ‎IgG‏ إلى ‎FeRn‏ عند أس هيدروجيني ‎Lan ١‏ يستبقى على اعتماد التفاعل على الأس الهيدروجيني بهندسة المنطقة الثابتة: ‎(Ghetie et al., Nature Biotech. 15: 637-640, 1997; Hinton et al., IBC 279: 6213-‏ ‎Dall'Acqua et al., J Immunol 117: 1129-1138, 2006). Vo‏ ;2004 ,6216 تؤدي استبدالات؛ مثل ‎(MA2SL/NG34S‏ إلى زيادة عمر النصف وزيادة التأثير الديناميكي دوائي في أشكال مختلفة )2010 ,157-159 :28 ‎.(Zalevsky et al., Nature Biotech.‏ تسجل دراسات عديدة زيادة ناجحة في عمر النصف بإدخال استبدالات مثل ‎T250Q/M428L‏ أو 028 لزيادة الارتباط مع ه76 عند أس هيدروجيني حمضي. في. دراسة ‎٠‏ حركيات دوائية في حيوان رئيس غير آدمي؛ يوضح استبدال ,12500/144281 للجسم المضاد 1 نصف عمر من ‎YO‏ يوم؛ زيادة واضحة تتعدى ‎VE‏ يوم كعمر النصف لنوع بري من ‎Immunol 176: 346-356, 2006) IgGl‏ ل ‎-(Hinton et al.,‏ على الرغم من أن الاستبدالات في المنطقة الثابتة قادرة على تحسين شديد في وظائف الأجسام المضادة 10 العلاجية؛ يكون للاستبدالات في منطقة ثابتة محافظة جدا خطر تولد © المناعة في آدمي: : ‎(Presta, supra, 20081: De Groot and Martin, Clin Immunol 131: 189-201 , 2009)‏
¢ ويمكن أن يكون استبدال في ترتيب منطقة متغيرة متنوع جدا أقل توليدا للمناعة. إن تسجيلات تتعلق بالمنطقة المتغيرة تتضمن هندسة متخلفات ‎CDR‏ لتحسين انجذاب الارتباط مع المولد المضاد: ‎(Rothe et al., Expert Opin Biol Ther 6: 177-187, 2006; Bostrom et al., Methods Mol‏ ‎Biol 525: 353-376, 2009; Thie et al., Methods Mol Biol 525: 309-322, 2009) °‏ وهندسة متخلفات الإطار 5 ‎CDR‏ لتحسين الثبات: ‎(W6rn and Pliickthun, J Mol Biol 305: 989-1010, 2001; Ewert et al., Methods 34:‏ )2004 ,184-199 وخفض خطورة التولد المناعي: ‎(De Groot and Martin, supra, 2009; Jones et al., Methods Mol Bio 525: 405-423, ٠١‏ ‎xiv, 2009).‏ كما ‎Jamu‏ يمكن تحقيق انجذاب محسن للمولد المضاد بواسطة انضاج الاتجذاب باستخدام ‎ribosome lek)‏ أو بلعم لمكتبة عشوائية. يمكن الحصول على ثبات محسن فعليا من تصميم منطقي يعتمد على البناء والترتيب. يمكن تحقيق انخفاض في خطر تولد مناعي (إزالة ‎٠‏ التحصين) بواسطة منهجيات آدمية متعددة وإزالة 01065 الخلية 1؛ التي يمكن توقعها باستخدام تقنيات ‎silico‏ أو تتحدد باختبارات في المعمل. إضافياء تتم هندسة المناطق المتغيرة لخفض 1م. يلاحظ عمر نصف أطول لتلك ‎١‏ لأجسام المضادة بالمقارنة مع أجسام مضادة من نوع بري برغم ارتباط ‎FeRn‏ القابل للمقارنة: ‎(Igawa et al., PEDS, Advance Access, doi: 10.1093/protein/gzq009, 1 0).‏ ‎Ye‏ يتعلق الاختراع الحالي بهندسة أو انتقاء أجسام مضادة مع مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني لتعديل الجسم المضاد و/أو تعديل عمر النصف للمولد المضاد. يمكن تفقصير عمر النتصف للجسم المضاد 1502 إذا تحلل الجسم المضاد بآليات تصفية يتوسطها المولد المضاد طبيعيا عند الارتباط مع المولد المضاد. بالمثل؛ يمكن أيضا أن يؤثر معقد المولد المضاد للجسم المضاد على عمر النصف للمولد المضاد؛ إما إطالة عمر النصف بحماية ‎Yo‏ المولد المضاد من عمليات التحلل النموذجية؛ أو بتقصير عمر النصف بواسطة تحلل يتوسطه الجسم المضاد. يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة مع انجذاب أعلى لمولد مضاد عند الأس الهيدروجيني 7,4 بالمقارنة مع الأس الهيدروجيني داخل الجسم (أي؛ أس هيدروجيني
° ‎(oo‏ بحيث تكون نسبة ‎Kp‏ عند الأس الهيدروجيني 0,0[ الأس الهيدروجيني 7.4 أو عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني ‎YE‏ هي ‎١‏ أو أكثر. يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني إلى المولد المضاد الخاص ‎dy‏ وطرق لتصميم؛ تكوين واستخدام هذه الأجسام المضادة. إن أمثلة © على أجسام مضادة مفيدة تستهدف مولدات مضادة مثل ‎proprotein convertase subtilisin‏ ‎«(PCSK9) kexin type 9‏ تعرف أيضا ‎dickkopf-related protein 1 «IgE <NARC-1 Jie‏ ‎(SOST) sclerostin «(C5) Complement 5 «(DKK1)‏ ومستقبل ‎.GMCSF‏ ‏يعرف ‎PCSK9‏ مثل ‎protein‏ مع طفرة جينية في بعض أشكال فرط ‎cholesterol‏ الدم ‎hs‏ . يخلق 20519 ‎Jie‏ مولد للإنزيم يخضع لمعالجة تحفيزية ذاتية عند محث معين في ‎٠‏ شبكة هيول باطنية ‎(endoplasmic reticulum)‏ تظهر دراسات مجمعة أن بعض طفرات 9 تكون "اكتساب لوظيفية ‎(gain-of-function)‏ وتوجد في أفراد مع فرط ‎cholesterol‏ ‏الدم السائد الجسدي الذاتي؛ بينما طفرات 'فقد لوظيفية ‎(LOF) "(loss-of-function)‏ أخرى تتعلق بانخفاض ‎cholesterol‏ 0185008. توضح جدا دراسات لنسبة انتشار المرض ومعدل الوفيات أن خفض وظيفية 708169 ‎JIE‏ جدا من خطر الإصابة بمرض قلبي وعائي. ‎٠‏ الوصف العام للاختراع يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني إلى المولد المضاد الخاص بها بحيث يكون الانجذاب للارتباط مع المولد المضاد عند أس هيدروجيني فسيولوجي (أي أس هيدروجيني ‎(VLE‏ أكبر من الانجذاب عند أس هيدروجيني داخل الجسم (أي أس هيدروجيني ‎١‏ أو 5,*). بطريقة ‎coal‏ أن نسبة ‎Kp‏ أو ‎Kop‏ عند الأس الهيدروجيني ‎foe x.‏ الأس الهيدروجيني 7,4 أو عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 4 ,ا تتعدى؛ أو تتراوح بين ‎0٠١ A EY‏ 11 70 30 60 أو ‎٠٠١‏ أو أكثر. يفضل انفصال الأجسام المضادة التي تعتمد على الأس الهيدروجيني هذه عن المولد المضاد في داخل الجسم. يمكن أن يزيد هذا من عمر نصف الجسم المضاد؛ بالمقارنة مع أجسام مضادة مع ‎Kips‏ مكافئ عند أس هيدروجيني 7,4 لكن بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني؛ عندما يكون المولد ‎vo‏ المضاد خاضع لتصفية يتوسطها مولد مضاد (مثل؛ ‎(PCSKY‏ يمكن أن تخفض أجسام مضادة تعتمد على الأس الهيدروجيني إجمالي عمر النصف للمولد المضاد عندما يخضع مولد المضاد لتصفية منخفضة عند الارتباط مع الجسم المضاد (مثل؛ 11.6). يمكن أيضا أن تعمل
: أجسام مضادة تعتمد على الأس الهيدروجيني على خفض في المولد المضاد غير المرتبط إلى جسم مضاد. إن هذا يمكن أن يكون هاما عند معارضة مولد مضاد مستهدف نموذجيا موجود بمستويات مرتفعة (مثل؛ ‎«DKKI (IgE‏ 5© و5057). إضافيا؛ إن هذه الأجسام المضادة يمكن أن تزيد عمر النصف للمولد المضاد عندما يكون المولد المضاد مستقبل ويكون للمستقبل © تصفية متزايدة عند الارّباط مع الجسم المضاد (مثل؛ مستقبل 014051). في أي تجسيد من الاختراع الموصوف أدناه؛ يمكن قياس ‎Kory Kp‏ عند إما ©7*مئوية أو ١"مئوية.‏ في تجسيد مفضل؛ يرتبط الجسم المضاد المعتمد على الأس الهيدروجيني تحديدا بمولد مضاد مع انجذاب عند الأس الهيدروجيني 7.4 أعلى منه عند الأس الهيدروجيني ‎A‏ ‏حيث تكون نسبة ‎Kp‏ و/أو نسبة م1 عند الأس الهيدروجيني 1[ الأس الهيدروجيني ‎Vit‏ وعند ‎٠‏ 1#مثوية تزيد عن؛ أو تتراوح بين» ‎VT 0٠0 eh of oF OY‏ أو أكثرء وبما أن للجسم المضاد تصفية ‎plasma‏ منخفضة في الكائن الحي عند التعرض إلى المولد المضاد المذكور بالمقارنة مع أجسام مضادة لا تعتمد على الأس الهيدروجيني له نفس الانجذاب للمولد المضاد عند الأس الهيدروجيني 4؛ لكن له نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎kor‏ قابلة للمقارنة عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 7,4 تقل عن 7. يفضل؛ ألا يكون المولد ‎٠‏ المضاد هو مستقبل ‎interleukin-6‏ (11.68؛ أو يفضل. ألا يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد ضد 11.68 ‎Fv3-m73‏ 4-073" أو ‎H3pUL73‏ كالموضح في 2010/106812 ‎WO‏ ‏أو 2009/041621 1170. في تجسيد مفضل ‎«SAT‏ فإن الجسم المضاد المعتمد على الأس الهيدروجيني الذي يرتبط تحديدا إلى مولد مضاد مع انجذاب عند أس هيدروجيني ‎١,4‏ أعلى منه عند الأس ‎Ye‏ الهيدروجيني 1 حيث تكون نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎kor‏ عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني ‎Vt‏ وعند © ‎Aue‏ تزيد ‎coe‏ أو تتراوح بين؛ 7ء » ‎٠٠١ A cf‏ 16 أو أكثرء وحيث أن المولد المضاد يرتبط بالغشاء وقابل للذوبان في الكائن الحي وحيث يتوسط الجسم المضاد زيادة التموضع إلى مستقبل غشاء الخلية بالمقارنة مع جسم مضاد له انجذاب مماثل للمولد المضاد عند أس هيدروجيني 7,4 لكن له نسبة ‎Kp‏ و/أو »ما قابلة للمقارنة عند الأس الهيدروجيني 1/ ‎Yo‏ الأس الهيدروجيني 7.4 تقل عن 7. يفضل؛ ألا يكون المولد المضاد 11.68. في تجسيد مفضل آخرء يكون المولد المضاد هو مستقبل قابل للذوبان حيث يكون طعم لا يرسل إشارة. في تجسيد مفضل أيضاء فإن الجسم المضاد المعتمد على الأس الهيدروجيني هو مقترن عقار
ل بجسم مضاد؛ يتوسط سمية خلية يتوسطه خلية تعتمد على الجسم المضاد ‎«(ADCC)‏ و/أو سمية خلية يعتمد على التكملة (000). يتضمن الاختراع الجسم المضاد المعتمد على الأس الهيدروجيني الذي يرتبط تحديدا إلى مولد مضاد مع انجذاب عند أس هيدروجيني 7,4 أعلى منه عند الأس الهيدروجيني 7 حيث © تكون نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎kor‏ عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 4 ,أ وعند ‎seo‏ ‏تزيد عن؛ أو تتراوح بين؛ ‎0٠0 A cE FY‏ 156 أو ‎GET‏ وحيث أن الانخفاض في كمية مولد مضاد مرتبط مع غير جسم مضاد في الكائن الحي يستمر عند التعرض إلى الجسم المضاد المذكور بالمقارنة مع جسم مضاد بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني له انجذاب مماثل للمولد المضاد عند الأس الهيدروجيني ‎eV,‏ لكن له نسبة ‎Kp‏ و/أو م قابلة ‎El ٠‏ عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 7,4 تقل عن 7. يوفر الاختراع الجسم المضاد المعتمد على الأس الهيدروجيني الذي يرتبط تحديدا إلى مولد ‎alias‏ مع انجذاب عند أس هيدروجيني 7,4 أعلى منه عند الأس الهيدروجيني 7؛ حيث تكون ّ نسبة ‎Kp‏ و/أو مم1 عند الأس الهيدروجيني 1/ الأس الهيدروجيني ‎١,4‏ وعند © 7"مئوية تزيد عن؛ أو تتراوح بين ‎٠١ A cE TOY‏ 16 أو أكثرء وحيث أن الانخفاض في كمية ‎Age‏ ‎٠‏ مضاد مرتبط مع الجسم المضاد في الكائن الحي بالمقارنة مع جسم مضاد بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني له انجذاب ‎Biles‏ للمولد المضاد عند الأس الهيدروجيني 7,4؛ لكن له نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎keer‏ قابلة للمقارنة عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 7,4 تقل عن ". في تجسيد مفضل؛ فإن المولد المضاد هو ‎.osteopontin‏ ‏يوفر الاختراع أيضا جسم مضاد معضد مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني ‎Ys‏ يرتبط تحديدا بمولد مضاد مع انجذاب عند الأس الهيدروجيني 7,4 أعلى منه عند الأس الهيدروجيني 7؛ حيث نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎Kor‏ عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 4 وعند ‎see‏ تزيد عن» أو تتراوح بين ‎٠١ A 4 YOY‏ 13 أو أكثر؛ وحيث يكون المولد المضاد هو مستقبل له تصفية منخفضة في الكائن الحي عند التعرض للجسم المضاد المذكور بالمقارنة مع جسم مضاد له انجذاب مماثل للمستقبل عند الأس الهيدروجيني 4 ,7 ‎ve‏ لكن له نسبة ‎Kp‏ و/أو ‎key‏ قابلة للمقارنة عند الأس الهيدروجيني ‎/١‏ الأس الهيدروجيني 7,4 تقل عن 7. في تجسيد مفضل؛ يكون المستقبل هو المستقبل 0140587.
A
‏أو النسبة مما‎ Kp ‏في تجسيد مفضل آخر لأي من الأجسام المضادة المذكورة؛ فإن النسبة‎ ‏أو‎ ٠٠١ ‏أو‎ 50 0 7١ ‏أو تتراوح بين‎ VE ‏الأس الهيدروجيني‎ /٠ ‏عند الأس الهيدروجيني‎ ‏الأس‎ /١ ‏عند الأس الهيدروجيني‎ keg ‏أو‎ Kp ‏أكثر. في تجسيد مفضل آخرء فإن النسبة‎ ‏أو أكثر؛ أو‎ ٠١-7" FAY OY ‏اح‎ EY PY ‏تتراوح بين‎ YE ‏الهيدروجيني‎ ‏؛ح1اء أو ؛-١٠ أو أكثرء أو‎ Vim ‏أو انك أو كحي‎ ١1-٠ ‏م الى تن لين‎ ‏أو أكثر.‎ 70-١١ ‏أو أكثرء أو‎ ٠١-٠١ 11-٠١ ‏أو أكثرء‎ 7-6 ata ٠١ ‏إلى‎ 4 ‏في تجسيدات مفضلة أخرى للأجسام المضادة الموصوفة سابقاء فإن للجسم المضاد المرتبط‎ ‏نانوجزيئي‎ ٠0٠ ‏حوالي‎ Kp ‏وعند © 7"مثوية نسبة‎ ١,4 ‏بالمولد المضاد عند الأس الهيدروجيني‎ ‏نانوجزيئي جرامي‎ ١.١ ‏نانوجزيئي جرامي؛ أو يفضل أكثرء عند حوالي‎ ٠٠١ ‏جرامي إلى حوالي‎ ‏نانوجزيئي جرامي.‎ ٠١ ‏إلى حوالي‎ ٠ ‏في تجسيد مفضل آخر للأجسام المضادة الموصوفة سابقاء يكون لارتباط الجسم المضاد‎ ‏حوالي 8-1 1108-4 إلى حوالي‎ Kor ‏نسبة‎ ١,4 ‏المضاد عند الأس الهيدروجيني‎ age ‏مع‎ ‎AX10E-1 8-1 ‏يفضل أكثر؛ حوالي 8-1 1101-3 إلى حوالي‎ «1x10E-1 8-1 ‏في تجسيد مفضل آخر للأجسام المضادة الموصوفة سابقا؛ يكون المولد المضاد هو‎
HIM300N ‏هو‎ PCSK9 ‏ضد‎ alias ‏في أحد التجسيدات المفضلة؛ لا يكون جسم‎ .PCSK9 5 ‏يكون المولد‎ «graf ‏تجسيدات مفضلة‎ 4 .(US2010/0166768 ‏(انظر‎ 705169 alias ‏جسم‎ ‎٠١ ‏تانوجزيئي جرامي إلى حوالي‎ ١ ‏بين‎ Kp ‏ويتراوح‎ DKK ‏أو‎ «C5 gE ‏المضاد هو‎ ‏نانوجزيئي جرامي.‎ ٠٠١ ‏نانوجزيئي جرامي إلى حوالي‎ ١ ‏نانوجزيئي جرامي أو بين‎ ‏يوفر الاختراع أيضا طريقة تجريع ممتد على فترات و/أو خفض للجرعة العلاجية لمعالجة‎ ‏مريض مع جسم مضاد علاجيء تلك الطريقة تشمل إعطاء المريض كمية فعالة علاجيا من‎ Yo ‏جسم مضاد من أي من الأجسام المضادة الموصوفة سابقا في الاختراع» حيث يكون للجسم‎ ‏بالمقارنة مع جسم مضاد‎ dish ‏المضاد المذكور تأثير ديناميكي دوائي ممتد و/أو عمر نصف‎ ‏و/أو نسبة مم1 عند أس‎ Kp ‏لكن نسبة‎ ١7,4 ‏له انجذاب مماشل عند الأس الهيدروجيني‎ .١ ‏تقل عن‎ ACY ‏وعند‎ Vo E[T ‏هيدروجيني‎ ‏الاختراع طريقة لعمل جسم مضاد مع عمر نصف طويل و/أو تأثير ديناميكي‎ Lad ‏يوفر‎ Yo ‏دوائي ممتد بتنظيم انجذاب ارتباط الجسم المضاد في أسلوب يعتمد على الأس الهيدروجيني؛‎ ‏لتوخي‎ (Al ‏أو متخلفات‎ CDR alias ‏لجسم‎ histidine ‏تشمل الطريقة المذكورة انتقاء متخلفات‎
أمتل بيئة دقيقة تؤثر على ‎pKa‏ بحيث يكون لارتباط جسم مضاد بمولد مضاد نسبة ‎Kp‏ و/أو نسبة ‎lr‏ عند أس هيدروجيني 1[ أس هيدروجيني ‎١,4‏ تزيد عن» أو تتراوح بين؛ 7 7 4 ‎V1 ٠١ GA‏ أو أكثر. يوفر الاختراع أيضا أجسام مضادة متكونة بهذه الطريقة؛ تتضمن أجسام مضادة مع استبدالات ‎cf 7 oY ١٠ histidine‏ ©؛ أو أكثر في متخلفات ‎CDR‏ لتوخي ‎٠‏ أمثل بيئة دقيقة تؤثر على ‎pKa‏ ‏في تجسيد مفضل من الطريقة الموصوفة أعلاه؛ تشمل الطريقة إضافيا توليد طفرة لجسم مضاد لتحقيق انجذاب جسم مضاد مع ‎Kp‏ عند أس هيدروجيني ‎١,4‏ على الأقل ‎٠٠١‏ ‏نانوجزيئي جرامي مقاسا عند 8.355070( تجسيد ‎«SAT‏ يوفر الاختراع مكتبة جسم مضاد غنية مع ‎histidines‏ في متخلفات ‎CDR‏ أو متخلفات أخرى لتوخي أمثل بيئة دقيقة تؤثر على ‎.pKa 0 ٠‏ في تجسيدات مفضلة ‎eg al‏ يوفر الاختراع جسم مضاد منعزل يرتبط تحديدا مع 08169[ ويشمل منطقة تحديد تكميلية واحد ‎(CDR)‏ لمنطقة متغيرة السلسلة الثقيلة ‎(VH)‏ لها ترتيب ‎8x aseamino acid‏ تعريف الترتيب رقم: 1« 0012 | 711 لهاترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎¢V‏ و/أو ‎VH CDR3‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ ‎١‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎<A‏ أو شكل متباين منها له استبدالات ‎amino acid‏ محافظة واحدة أو أكثر في ‎«CDR2 «CDR1‏ و/أو ‎«CDR3‏ بالإضافة إلى جسم مضاد منعزل يرتبط تحديدا مع ‎PCSK9‏ ويشمل ‎VH CDRI‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: 1« ‎VE CDR2‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: لاء و/أو ‎VH‏ ‎Led CDR3‏ ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: 68 أو شكل متباين منها له ‎٠‏ استبدالات ‎amino acid‏ محافظة واحدة أو ‎JI‏ في ‎«CDR2 «CDR1‏ و/أو ‎.CDR3‏ ‏في تجسيد إضافي؛ يوفر الاختراع جسم مضاد منعزل يشمل 001.1 لمنطقة متغيرة لسلسلة خفيفة ‎(VL)‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ١٠؛‏ ‎VL CDR2‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎١١‏ و/أو ‎VL CDR3‏ لها ترثيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم : ‎١7‏ أو شكل متباين منها له ‎Yo‏ استبدالات ‎amino acid‏ محافظة واحدة أو أكثر في ‎«CDR2 «CDRI‏ و/أو ‎.CDR3‏ ‏في تجسيدات مفضلة من المذكور أعلاه؛ يشمل الجسم المضاد ‎Lilia)‏ منطقة ‎VH‏ تشمل ‎VL CDRI‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎VL CDR2 ٠١‏ لها
Yo amino ‏لها ترتيب‎ VL CDR3 ‏و/أو‎ ١ ‏موضح في تعريف الترتيب رقم:‎ amino acid ‏ترتيب‎ ‎amino acid ‏أو شكل متباين منها له استبدالات‎ VY ‏في تعريف الترتيب رقم:‎ riage acid
VH ‏يفضل؛ تشمل المنطقة‎ «CDR3 ‏و/أو‎ «CDR2 00181 ‏محافظة واحدة أو أكثر في‎ .7 ‏تعريف الترتيب رقم:‎ VI ‏تعريف الترتيب رقم: ؛ أو تعريف الترتيب رقم: © وتشمل المنطقة‎ ‏في تجسيد آخرء يوفر الاختراع جسم مضاد أو قسم منه مرتبط بالمولد المضاد؛‎ o ‏أو‎ (PTA-10547 :ATCC ‏وله رقم وصسول‎ ATCC ‏مترسب عند‎ plasmid ‏يشفر بواسطة‎ ‏و/أو 1-10549ط.‎ (PTA-10548 ‏يوفر الاختراع أيضا تركيبات دوائية تشمل كمية فعالة علاجيا من أي من الأجسام المضادة‎ ‏الموصوفة أعلاه؛ خلية عائل تنتج تخليقيا جسم مضاد من أي من الأجسام المضادة الموصوفة‎ nucleic ‏منعزل يشفر أي من أ لأجسام المضادة الموصوفة سابقاء و8611‎ nucleic acid ‏سابقاء‎ ٠ ‏منعزل يشفر أي من الأجسام المضادة الموصوفة سابقا.‎
PTA- :ATCC ‏وله رقم وصول‎ ATCC ‏منعزل مترسب عند‎ plasmid ‏يوفر الاختراع أيضا‎
LDL- ‏بالإضافة إلى الطريقة لخفض مستوى‎ (PTA-10549 ‏و/أو‎ PTA-10548 i <10547 ‏في الدم في فرد بحاجة لهذا تشمل إعطاء الفرد كمية فعالة علاجيا من أي جسم‎ 1019601
PCSK9 ‏مضاد في الاختراع يستهدف المولد المضاد‎ ١ ‏شرح مختصر. للرسومات‎
Kp ‏هو رسم بياني يوضح زيادة تركيز الجسم المضاد مع الوقت كوظيفية لنسبة‎ ١ ‏شكل‎ ‏شكل ؟ هو رسم بياني يوضح انخفاض المركب الترابطي الحر (المولد المضاد) مع الوقت‎
Kp ‏كوظيفية لنسبة‎ ‏على تركيز الجسم المضاد مع الوقت.‎ Kons kor ‏شكل © هو رسم بياني يوضح تأثير تغيير‎ ve ‏شكل ؛ هو عرض لخريطة حرارية توضح عدد الأيام اللازمة للجسم المضاد الذي يرتبط‎ ‏عمر‎ R KD ‏اعتمادا على الأس الهيدروجيني لخفض تركيز مولد مضاد مصلي كوظيفية من‎
KD ‏لنسبة‎ LS R ‏النصف لمصل المولد المضاد وتركيز المولد المضاد في المصل. تكون‎ ‏عند أس هيدروجيني داخل الجسم ضد أس هيدروجيني فسيولوجي.‎ ‏شكل 0 يوضح القدرة على تنبؤ نموذج لجسم مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني. يتوقع‎ Yo ‏النموذج بنجاح إجمالي تركيز الجسم المضاد من أجل 5810 (الشكل #لا)). الشكل *(ب) هو‎
LDL ‏رسم بياني يوضح تأثير المدى الزمني من 5810 على‎
١١ ‏شكل 1 يوضح القدرة على تنبؤ نموذج لجسم مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني. يتوقع‎ (<1 ‏النموذج بنجاح إجمالي تركيز الجسم المضاد من أجل 653113 (الشكل 71()). الشكل‎ 613113 ‏إن الجسم المضاد‎ .LDL ‏هو رسم بياني يوضح تأثير المدى الزمني من 613113 على‎ ‏الذي يرتبط اعتمادا على الأس الهيدروجيني يزيد الفاصل الزمني الذي ينخفض في مستوى‎ .5810 ‏بالمقارنة مع‎ IDL © ‏عند إعطاء أجسام مضادة‎ cholesterol ‏يوضح المدى الزمني لإجمالي تأثير‎ ١7 ‏شكل‎ ‏يوضح التأثير المعتمد على الجرعة من 5810 على إجمالي‎ (TY ‏متعددة. شكل‎ 69 ‏على الجرعة للجسم المضاد‎ a ied) ‏شسكل 7(ب) يوضح التأثير‎ cholesterol ‏الذي يعتمد على الأس الهيدروجيني. يمتد هذا التأثير بالمقارنة مع تأثير‎ 5717211123 3 ‏لذ‎ ٠ ‏هو رسم بياني يوضح أن أجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني؛‎ A ‏شكل‎ ‏و51:17211123_613113؛ لها تحلل لجسم مضاد منخفض وعمر نصف‎ 5117211123 3 ‏هو‎ (DA ‏طويل بالمقارنة مع أجسام مضادة بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني. شكل‎ ‏ينتج عن تحلل يتوسطه المادة المستهدفة.‎ (JA ‏رسم بياني يوضح أن التأثير الموضح في شكل‎
PCSK9 ‏يزيد بشدة تحلل الأجسام المضادة في فثران خالية من 708129 بعد حقنها مع‎ Ve ‏شكل 9 هو رسم بياني يوضح تأثير أجسام مضادة تعارض 708129 حساسة للأس‎ ‏الهيدروجيني وأجسام مضادة تعارض 1708129 غير حساسة للأس الهيدروجيني على مستويات‎ ‏(شكل 4())؛‎ HDL ‏في القردة. بينما لا يظهر أي اختلاف واضح في مستويات‎ cholesterol ‏تتوسط الأجسام المضادة الحساسة للأس الهيدروجيني انخفاض مستمر لفترة أطول في‎ ‏بالمقارنة مع أجسام مضادة 1113 لا تعتمد على الأس الهيدروجيني.‎ LDL ‏مستويات‎ Ye ‏هو رسم بياني يوضح أن للأُجسام المضادة 1708169 مع ارتباط يعتمد على‎ ٠١ ‏شكل‎ ‏الأس الهيدروجيني عمر نصف طويل في الكائن الحي بالمقارنة مع أجسام مضادة لا تعتمد‎ ‏على الأس الهيدروجيني.‎ ‏هو خريطة حرارية توضح النموذج العام لارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني.‎ ١١ ‏شكل‎ ‏أو 05؛ يمكن أن‎ (IgE DKK1 ‏إن هذه الأجسام المضادة الموجهة ضد المولدات المضادة‎ Yo ‏تزيد بشدة عدد الأيام التي يحتاجها المولد المضاد لخفض مستويات المولد المضاد بالمقارنة مع‎ ‏جسم مضاد بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني.‎
١ ‏هو نموذج للمدى الزمني لتركيز المولد المضاد بعد إعطاء جسم مضاد مع‎ VY ‏شكل‎ ‎IgE ‏ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني موجه ضد المولد المضاد‎ ‏هو نموذج للمدى الزمني لتركيز المولد المضاد بعد إعطاء جسم مضاد مع‎ VF ‏شكل‎ ‎DKKI ‏ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني موجه ضد المولد المضاد‎ ‏هو نموذج للمدى الزمني لتركيز المولد المضاد بعد إعطاء جسم مضاد مع‎ VE ‏شكل‎ ° (C5 ‏ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني موجه ضد المولد المضاد‎ ‏يصف تفصيليا نظام لحركة سير أجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس‎ ١١ ‏شكل‎ ‏الهيدروجيني باستخدام عمل نموذج.‎ ‏يتعلق الاختراع الحالي بأجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني إلى‎ Ve ‏مولدتها المضادة بحيث يزيد الانجذاب للارتباط بمولد مضاد عند أس هيدروجيني فسيولوجي‎ ‏عن الانجذاب عند أس هيدروجيني داخل الجسم (أي؛ أس‎ (VE ‏(أي؛ أس هيدروجيني‎ ‏عند أس هيدروجيني 0,0[ أس‎ kop ‏أو‎ Kp ‏تكون نسبة‎ cg al ‏هيدروجيني 1 أو 0,0( بطريقة‎
OF Om ‏عند أس هيدروجيني 1[ أس هيدروجيني 4 ,ا تتعدى؛ أو تتراوح‎ SVE ‏هيدروجيني‎ ‏أو أكثر. يفضل أن تنتفصل الأجسام المضادة‎ ٠٠١ ‏أو‎ 0 ١ Ye OT ٠١ AE ٠ ‏المعتمدة على الأس الهيدروجيني تلك عن المولد المضاد داخل الجسم. يمكن أن يزيد هذا من‎ ‏مكافئ عند أس هيدروجيني‎ Kps ‏عمر نصف الجسم المضاد؛ بالمقارنة مع أجسام مضادة مع‎ ‏لكن بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني؛ عندما يكون المولد المضاد خاضع‎ 4 ‏لتصفية يتوسطها مولد مضاد (مثل؛ 005129). يمكن أن تخفض أجسام مضادة تعتمد على‎ ‏النصف للمولد المضاد عندما يخضع المولد المضاد لتصفية‎ jee ‏الأس الهيدروجيني إجمالي‎ ٠ ‏يمكن أيضا أن تعمل أجسام مضادة‎ (IL6 ‏منخفضة عند الارتباط مع الجسم المضاد (مثل؛‎ ‏تعتمد على الأس الهيدروجيني على خفض في المولد المضاد غير المرتبط إلى جسم مضاد.‎ ‏إن هذا يمكن أن يكون هاما عند معارضة مولد مضاد مستهدف موجود بمستويات مرتفعة‎ ‏(مثل؛ 8و1 01061 5© و5057). إضافياء إن هذه الأجسام المضادة يمكن أن تزيد عمر‎ ‏يكون المولد المضاد مستقبل ويكون للمستقبل تصفية متزايدة عند‎ Laie ‏النصف للمولد المضاد‎ Yo .)014087 ‏الارتباط مع الجسم المضاد (مثل؛ مستقبل‎
VY
‏خضع المولد المضاد لتحلل تتوسطه المادة المستهدفة؛ عندئذ فإن استخدام تلك الأجسام‎ 13) ‏المضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني لتحقيق انحلال داخل الجسم يمكن أن يزيد‎ ‏التأثير الديناميكي الدوائي للجسم المضاد؛ على سبيل المثال؛ عندما يخضع المولد المضاد‎ ‏ينفصل الجسم المضاد مع ارتباط يعتمد‎ L(PCSKY ‏لتصفية تتوسطها المادة المستهدفة (مثل؛‎ ‏على الأس الهيدروجيني عن المولد المضاد؛ متخطيا التحلل الذي يتوسطه المولد المضاد‎ © ‏ويكون له عمر نصف أطول من‎ FoR ‏ويمكن إعادة تدويره خارج الخلية بواسطة الارتباط مع‎ ‏مماثلة عند أس هيدروجيني 7,4 لكن بدون ارتباط يعتمد على الأس‎ Kp ‏جسم مضاد مع‎ ‏الهيدروجيني.‎ ‏إن استخدام الأجسام المضادة هذه الذي ترتبط اعتمادا على الأس الهيدروجيني يفيد أيضا‎ ‏1ج0161؛ أو‎ «C5 (IgE ‏علاجيا عندما يوجد المولد المضاد القابل للذوبان بتركيز مرتفع (مثل»‎ ٠ dlysozome ‏عند الانفصال عن المولد المضاد داخل الجسم وتحلل المولد المضاد في‎ 1 ‏مضاد حر آخرء ويمكن أن‎ alge ‏ليرتبط إلى‎ plasma ‏يمكن إعادة تدوير الجسم المضاد داخل‎ ‏يطيل من انخفاض المولد المضاد غير المرتبط مع جسم مضاد؛ ويمكن أن يخفض الجرعة‎ ‏عند أس هيدروجيني 7,4 لكن‎ Ailes Kp ‏العلاجية المطلوبة؛ بالمقارنة مع جسم مضاد مع‎ ‏بدون ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني.‎ Ve ‏فإن استخدام أجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني يمكن أن‎ (Lali) «Jie ‏يفيد عندما يوجد مولد مضاد في ارتباط بغشاء بالإضافة إلى الشكل القابل للذوبان»‎ ‏مستقبل» ومن المطلوب تحسين الارتباط للشكل المرتبط بغشاء. بواسطة الانفصال عن الشكل‎ ‏القابل للذويان» يكون للجسم المضاد فرصة متزايدة لإعادة الارتباط مع الشكل الغشائي؛ مما‎ ‏يزيد الجسم المضاد بالنسبة لغشاء الخلية. عند الارتباط بالشكل الغشائي في أسلوب ثنائي‎ _ ٠ ‏التكافو؛ يمكن أن يزيد الانجذاب الفعال من خلال تأثير الشراهة.‎ (antibody-drug conjugates) ‏يوجد طلب لاستخدام مواد اقتران عقار بجسم مضاد‎ ‏عند استهداف مولد مضاد موجود في كل من ارتباط بغشاء وشكل قابل للذوبان. في‎ (ADC) sale) ‏يتم تصفية المولد المضاد القابل للذوبان في الخلايا المبطنة مع‎ FeRn ‏خلايا تشمل‎ ‏على أية حال عند الارتباط بالمستقبل في أسلوب ثنائي‎ plasma ‏إلى قسم‎ ADC ‏تدوير‎ Yo ‏داخل المستقبل. بالنسبة‎ ADC ‏التكافؤ» فإن الشراهة يمكن أن تزيد الانجذاب الفعال ويصبح‎ ‏لأجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني؛ فإن زيادة الارتباط مع الشكل‎
\¢ ‏المرتبط بغشاء؛ إما بأسلوب ثنائي التكافؤ أو أحادي التكافؤ؛ يؤدي إلى زيادة دخول الجسم‎ ‏المضاد في المولد المضاد المرتبط بغشاء وموت الخلية.‎ ‏باستخدام‎ (CDC) ‏وتسمم الخلية المعتمد على المكمل‎ ADCC ‏يمكن أيضا توضيح آلية‎ ‏يعمل المولد‎ cFeRn ‏أجسام مضادة بارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني. في خلايا تفتقر إلى‎ ‏المضاد القابل للذوبان كمادة ترسيب. إن تحرر الأجسام المضادة من المستقبل القابل للذوبان‎ © ‏يزيد من الجسم المضاد الحر المرتبط إلى مولد مضاد مرتبط بغشاء ويزيد من القدرة على قتل‎ ‏الخلية.‎ ‏التقنيات العامة‎ ‏إن الممارسة العملية للاختراع الحالي سوف تستعمل» إذا لم يشر بخلاف ذلك؛ تقنيات‎ ‏الأحياء الدقيقة؛ علم أحياء الخلية؛‎ ale ‏حيوية جزيئية تقليدية (متضمنة تقنيات تخليقية)؛‎ ٠ ‏الكيمياء الحيوية وعلم المناعة؛ وذلك في متناول مهارة الفن. إن هذه التقنيات مشروحة بصورة‎ ‏تامة في الأدبيات؛ متل؛‎
Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989)
Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984);
Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Vo
Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture ‏ع‎ ‎Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E.
Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A.
Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons;
Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Ye.
Immunology (DM. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for
Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in
Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain
Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan etal., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1 999); Yo
Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1 997);
Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1 989),
Yo
Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds.,
Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M.
Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995). ‏التعريفات‎ 0 إن “جسم مضاد ‎"(antibody)‏ هو جزيء ‎globulin‏ مناعي يستطيع الارتباط بصفة خاصة مع هدف؛ ‎polynucleotide «carbohydrate (Jie‏ دهن» ‎polypeptide‏ إلخ»؛ من خلال مكان إدراك ‎alge‏ مضاد واحد على الأقل» يقع في المنطقة المتغيرة من جزيء ‎globulin‏ المناعي. حسب الاستخدام هنا يشمل المصطلح ليس فقط الأجسام المضادة السليمة؛ عديدة النسخ أو ‎٠‏ أحادية النسخ؛ لكن أيضا أجزاء منها (مثل ‎(Fv F(ab’), Fab’ Fab‏ أجسام مضادة وحيدة السلسلة ‎(ScFv) (single chain)‏ ومجال سيطرة ‎(domain)‏ (مثل أجسام مضادة مجال سيطرة آدمية؛ ‎ccamelid‏ أو ‎proteins 5 «(shark‏ اندماج ‎(fusion)‏ تشمل قسم من جسم مضادء؛ وأي هيئة معدلة أخرى لجزيء ‎globulin‏ المناعي تشمل مكان إدراك ‎alge‏ مضاد. يتضمن الجسم المضاد جسم مضاد من أي صنف»؛ مثل ‎IgA dgG‏ أو ‎IgM‏ (أو صنف فرعي من ذلك)؛ ‎٠‏ وليست هناك حاجة لأن يكون الجسم المضاد من أي صنف خاص. اعتمادا على ترتيب ‎amino acid‏ للجسم المضاد للمنطقة الثابتة لسلاسلها ‎AL)‏ يمكن تقسيم ‎globuling‏ المناعية إلى أصناف مختلفة. هناك 0 أصناف كبرى من ‎globulins‏ المناعية: ‎dgG «IgE «IgD IgA‏ ‎IgM‏ ويقسم عديد من هذه إضافيا إلى أصناف فرعية (أنواع مماثلة)؛ مثلا ‎«IgGl‏ 802 ‎[gAT 1204 3‏ و 42فع1. تسمى المناطق الثابتة السلسلة الثقيلة المقابلة للأصتاف ‎٠‏ المختلفة من ‎globulins‏ المناعية ‎«muy «gamma «epsilon «delta alpha :(Igs)‏ على الترتيب. إن بناءات الوحدة الفرعية والهيئات ثلاثية الأبعاد من أجل الأصناف المختلفة من ‎globulins‏ المناعية معروفة جيدا. حسب الاستخدام ‎cls‏ يشير "جسم مضاد أحادي النسخ ‎(mAb) (monoclonal antibody)‏ إلى جسم مضاد ناتج من مجموعة أجسام مضادة متماثلة جوهرياء أي؛ أن الأجسام المضادة ©؟ المنفردة المكونة للمجموعة متماثلة ‎Lad‏ عدا الطفرات الممكنة الطبيعية الحدوث التي قد تكون موجودة بكميات تانوية. إن الأجسام المضادة أحادية النسخ خاصة للغاية؛ موجهة ضد مكان واحد مولد لمضاد. إضافة لذلك؛ على العكس من مستحضرات جسم مضاد عديد النسخ؛ التي
‏مختلفة؛ فإن كل جسم‎ (epitopes) ‏تتضمن نموذجيا أجسام مضادة مختلفة موجهة ضد محددات‎ ‏المضاد. إن المعدل "أحادي النسخ‎ alse ‏مضاد أحادي النسخ موجه ضد محدد واحد على‎ ‏يشير إلى سمة للجسم المضاد حسب الحصول عليه من مجموعة أجسام‎ (monoclonal) ‏مضادة متماثلة جوهرياء ولا يجب تقيده بأنه يتطلب إنتاج جسم مضاد بأي طريقة خاصة. على‎ ‏تحضر الأجسام المضادة أحادية النسخ المستخدمة طبقا للاختراع الحالي بطريقة‎ (JB ‏سبيل‎ © ‏الورم الهجين الموصوفة أولا بواسطة‎
Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495, ‏تخليقية حسب الوصف في براءة الاختراع الأمريكية رقم‎ DNA ‏أو يمكن تحضيرها بطرق‎ ‏الأجسام المضادة أحادية النسخ من مكتبات بلعم متولدة‎ Jie ‏يمكن أيضا‎ £AYIOTY ‏باستخدام التقنيات الموصوفة في‎ (phage libraries generated) ٠
McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554, ‏على سبيل المثال.‎ "(hAb) (humanized) ‏حسب الاستخدام هنا؛ يشير جسم مضاد "مكتسب السمة الآدمية‎ ‏مناعية هجينة‎ globulins ‏فأرية) عبارة عن‎ Sie) ‏إلى أشكال أجسام مضادة غير آدمية‎ ‏أو‎ F(ab), «Fab' «Fab «Fv ‏مناعية؛ أو أجزاء من ذلك (مثل‎ globulin ‏سلاسل‎ ¢(chimeric) Ve ‏ترتيبات فرعية أخرى من أجسام مضادة تربط مولد مضاد) تحتوي على ترتيب أدنى مشتق من‎ ‏مناعي غير آدمي. بصورة مفضلة؛ تكون الأجسام المضادة مكتسبة السمة الآدمية‎ globulin
CDR ‏مناعية آدمية (جسم مضاد مستقبل) مستبدلة فيها متخلفات من‎ globulins ‏عبارة عن‎ ‏من نوع غير آدمي (جسم مضاد معطي) مثل فأر» حيوان‎ CDR ‏للمستقبل بمتخلفات من‎ ‏قارضء أو أرنب لها الخصوصية؛ الانجذاب؛ والقدرة المطلوبة. في بعض الحالات؛ تستبدل‎ ٠ ‏مناعي آدمي بمتخلفات‎ globulin ‏في‎ (FR) (framework region) Fv ‏متخلفات منطقة إطار‎ ‏غير آدمية مقابلة. إضافة لذلك؛ قد يشمل الجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية متخلفات غير‎ ‏لكنها متضمنة‎ UY) ‏الواردة أو ترتيبات‎ CDR ‏موجودة في الجسم المضاد المستقبل ولا في‎ ‏من أجل تنقية إضافية ولجعل أداء الجسم المضاد في صورة مثلى. بصفة عامة؛ سوف يشمل‎ ‏الجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية جوهريا كل واحد على الأقل؛ ونموذجياء اثنين من‎ Yo ‏مطابقة لتلك من‎ CDR ‏مجالات سيطرة متغيرة» التي تكون فيها كل أو جوهريا كل مناطق‎ ‏هي تلك من ترتيبات‎ FR ‏مناعي غير أدمي وتكون كل أو جوهريا كل مناطق‎ globulin
VY
‏مناعي آدمي المتفق عليه. إن الجسم المضاد مكتسب السمة الآدمية سوف يشمل‎ globulin ‏بصورة مثالية قسما على الأقل من منطقة تابتة أو مجال‎ Lf ‏لأجسام‎ ١ ‏مناعي آدمي. تفضل‎ globulin ‏مناعي»؛ نموذجيا ذلك من‎ globulin (Fc) ‏سيطرة‎ ‏هناك أشكال‎ .170 99/58572 ‏معدلة حسب الوصف في‎ Fo ‏المضادة التي بها مناطق‎ «CDR 11( CDRs ‏أخرى من أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية بها واحدة أو أكثر من‎ © ‏معدلة بالنسبة للجسم المضاد‎ (CDR 113 ‏و/أو‎ «CDR H2 «CDR 111 «CDR 13 «CDR L2 ‏واحدة أو أكثر‎ "(derived from) ‏"مشتقة من‎ CDRs ‏واحدة أو أكثر من‎ Load ‏الأصلي؛ وتسمى‎ ‏من الجسم المضاد الأصلي.‎ CDRs ‏من‎ ‏جسم مضاد له ترتيب‎ “(human antibody) ‏حسب الاستخدام هناء يعني ”جسم مضاد آدمي‎ ‏مطابق لذلك لجسم مضاد ناتج بواسطة آدمي و/أو مصنع باستخدام أي من‎ amino acid ٠ ‏التقنيات لتحضير الأجسام المضادة الآدمية المعروفة للمهرة في الفن أو المعلنة هنا. يتضمن‎ ‏سلسلة تقيلة آدمي واحد‎ polypeptide ‏هذا التعريف للجسم المضاد الآدمي أجسام مضادة تشمل‎ ‏سلسلة خفيفة آدمي واحد على الأقل. إن المثال لذلك هو جسم‎ polypeptide ‏على الأقل أو‎ ‏سلسلة خفيفة فأرية وسلسلة تقيلة آدمية. يمكن إنتاج أجسام مضادة‎ polypeptides ‏مضاد يشمل‎ ‏آدمية باستخدام تقنيات مختلفة معروفة في الفن. في بعض التجسيدات؛ ينتقى الجسم المضاد‎ ١ ‏تظهر مكتبة البلعم تلك أجسام مضادة آدمية‎ Cum ‏الآدمي من مكتبة بلعم؛‎ (Vaughan et al.,, 1996, Nature Biotechnology, 14:309-314; Sheets et al., 1998, Proc.
Natl. Acad. Sci. (USA) 95:6157-6162; Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol.
Biol., 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol., 222:581). ‏يمكن أيضا تصنيع أجسام مضادة آدمية عن طريق تحصين الحيوانات يتم فيها طفريا إدخال‎ ٠
LIS ‏فئران يتم فيها جزئيا أو‎ lie ‏مناعي آدمي بدلا من المواضع الداخلية؛‎ globulin ‏مواقع‎ ‏مناعي الداخلية. إن هذا الأسلوب موصوف في براءات الاختراع‎ globulin ‏إخماد نشاط جينات‎ ‏املكف ما جف‎ YT (00TAAYO ‏الأمريكية أرقام نمدم تمد‎ ‏بطريقة بديلة؛ يمكن تحضير جسم مضاد آدمي بإبقاء الحياة بصورة سرمدية‎ LOTT) VT ‏تنتج جسم مضاد موجه ضد مولد مضاد‎ (human B lymphocytes) ‏آدمية‎ B ‏لخلايا ليمفاوية‎ Yo ‏مستهدف (يمكن استرجاع تلك الخلايا الليمفاوية 3 من كائن أو يمكن تحصينها في المعمل).‎ ‏انظرء مثلاء‎
YA
Cole et al. Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77, 1985;
Boerner et al., 1991, J. Immunol., 147 (1):86-95; and U.S. Patent No. 5,750,373. ‏من جسم مضاد إلى المنطقة المتغيرة من السلسلة‎ "(variable region) ‏تشير "منطقة متغيرة‎ ‏الخفيفة جسم مضاد أو المنطقة المتغيرة من السلسلة الثقيلة جسم مضادء إما وحدها أو في‎ ‏فإن المناطق المتغيرة لكل من السلسلة الثقيلة والخفيفة تتكون‎ (oll ‏اتحاد. كما هو معروف في‎ © ‏معروفة‎ (CDRs) ‏متصلة بواسطة ¥ مناطق محددة للتكملة‎ (FR) ‏كل منها من ؛ مناطق إطار‎ ‏في كل سلسلة تظل متماسكة مع بعضها بصورة‎ CDRs ‏أيضا بأنها مناطق مفرطة التغير. إن‎ ‏من السلسلة الأخرى؛ تساهم في تكوين مكان ربط‎ CDRs ‏متقاربة جدا بواسطة 17185 5« مع‎ ‏طريقة تعتمد‎ )١( :CDRs ‏مولد المضاد في الأجسام المضادة. هناك تقنيتان على الأقل لتحديد‎ ‏على تباين الترتيب بين الأنواع:‎ ٠ (i.e., Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991,
National Institutes of Health, Bethesda MD)); ‏مضاد- جسم مضاد:‎ alge ‏طريقة تعتمد على دراسات تصوير بلوري لمعقدات‎ (Y)s (Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948). ‏محددة بأي طريقة أو باتحاد من الطريقتين.‎ CDRs ‏إلى‎ CDR ‏حسب الاستخدام هناء تشير‎ Vo ‏لجسم مضاد إلى المنطقة‎ ‘(constant region) ‏كما هو معروف في الفن تشير "منطقة ثابتة‎ ‏جسم مضاد؛ إما وحدها أو‎ ALE ‏الثابتة لسلسلة خفيفة جسم مضاد أو المنطقة الثابتة لسلسلة‎ ‏في اتحاد.‎ ‏كما هو مستخدم هناء يشير المصطلح ”005129“ إلى أي شكل من 708169 وأشكال‎ ‏من نشاط 008169. ما لم يذكر خلاف هذاء مثلا‎ ean ‏مغايرة منه التي تحتفظ على الأقل‎ ٠ ‏كل الأجناس الثديية من الترتيب‎ PCSKY ‏بالإشارة الخاصة إلى 708129 آدمي؛ يتضمن‎ ‏الأصلي 008129 مثلاء آدمي؛ كلبي؛ بقري؛ سنوري؛ وخيلي. يوجد مثال على 705169 آدمي‎ (V7 ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ Uniprot Accession Number QSNBP7 ‏في‎ ‏كما هو مستخدم هناء يشير "جسم مضاد معارض 05129 إلى جسم مضاد قادر على‎ ‏متضمنة‎ (PCSKY ‏تثبيط نشاط 205129 الحيوي و/أو ممر (ممرات) لاحقة يتداخل فيها تأشير‎ Yo ‏المتدخل فيه‎ LDL ‏وخفض تخلص الدم من‎ (LDLR ‏خفض التنظيم المدخل في 69 من‎ ‏الأجسام المضادة التي تعوق؛‎ pH ‏معتمد على‎ PCSK9 ‏يشمل جسم مضاد معارض‎ .PCSKY
تعارض» تكبح أو تخفض (بأي درجة ملحوظة) نشاط 705129 الحيوي؛ بما في ذلك الممرات اللاحقة المتدخل فيها تأشير 00519 ‎Jie‏ التفاعل البيني من ‎LDLR‏ و/أو استنباط استجابة خلوية إلى 008169. من أجل الاختراع الحالي؛ من المفهوم صراحة أن المصطلح "جسم مضاد معارض 705169 يضم كل المصطلحات المحددة مسبقا؛ العناوين؛ والحالات الوظيفية © والخصائص السابقة التي فيها يكون 70819 نفسه؛ نشاط 7051629 الحيوي (على سبيل المثال لا الحصر قدرته على التدخل في أي جانب من التفاعل البيني مع ‎(LDLR‏ خفض تنظيم 0118 وخفض التخلص من ‎LDL‏ الدم)؛ أو توابع النشاط الحيوي؛ ملغيا؛ منخفضاء؛ أو متعادلا جوهريا بأي درجة معقولة. في بعض التجسيدات؛ يرتبط الجسم المضاد المعارض 69 المعتمد على ‎pH‏ مع ‎PCSK9‏ ويمنع التفاعل البيني مع ‎.LDLR‏ تتوافر هنا أمثلة ‎٠‏ على أجسام مضادة معارضة ‎PCSK9‏ ‏إن المصطلحات ‎“peptide” «“oligopeptide” «“polypeptide”‏ و ‎“protein”‏ مستخدمة بصورة تبادلية هنا لتشير إلى سلاسل ‎amino acids‏ بأي طول؛ يفضل؛ قصيرة نسبيا ‎ie)‏ ‎(amino acids ٠٠١١-٠‏ . قد تكون السلسلة خطية أو متفرعة؛ وقد تشمل ‎amino acids‏ معدلة؛ و/أو قد تكون منقطعة التسلسل بواسطة أحماض غير ‎camino‏ تشمل المصطلحات ‎٠‏ أيضا سلسلة ‎amino acid‏ معدلة طبيعيا أو بتدخل خارجي؛ ‎Nie‏ تكوين رابطة ‎(disulfide‏ ‎«phosphorylation «acetylation lipidation «glycosylation‏ أو أي معالجة أخرى أو تعديل آخر؛ مثل اتحاد مع مكون تعليم ‎(labeling component)‏ يتضمن التعريف أيضاء مثلاء 565 تحتوي على واحدة أو أكثر من مواد مماثلة لأجل ‎amino acid‏ (متضمنة؛ ‎Sle‏ ‎amino acids‏ غير طبيعية؛ إلخ)؛ بالإضافة إلى تعديلات أخرى معروفة في الفن. من المفهوم ‎٠٠‏ أن ‎polypeptides‏ يمكن تواجدها كسلاسل وحيدة ‎(single chains)‏ أو كسلاسل متلازمة ‎.(associated chains)‏ كما هو معروف في الفن» فإن ‎“polynucleotide”‏ أى ‎“nucleic acid”‏ المستخدمان هنا بصورة تبادلية؛ يشيران إلى سلاسل ‎nucleotides‏ بأي طول؛ وتتضمن ‎RNA 5 DNA‏ قد تكون ‎nucleotides‏ هي ‎nucleotides «ribonucleotides «deoxyribonucleotides‏ أو قواعد ‎(bases)‏ ‎lane Yo‏ و/أو مماثلاتهاء أو أي مادة خاضعة ‎(substrate)‏ يمكن دمجها في سلسلة بواسطة ‎DNA polymerase‏ أو ‎.-RNA‏ إن ‎polynucleotide‏ قد يشمل ‎nucleotides‏ معدلة؛ مثل ‎methylated nucleotides‏ ومماثلاتها. عند وجوده؛ فإن التعديل لبناء ‎nucleotide‏ يمكن أن يتم
Y. قبل أو بعد تجميع السلسلة. يمكن أن يكون ترتيب ‎nucleotides‏ منقطع التسلسل بواسطة مكونات غير ‎nucleotide‏ يمكن أن يكون ‎polynucleotide‏ معدلا إضافيا بعد ‎polymerization‏ مثلا باتحاد مع مكون تعليم . تتضمن أنوا 2 أخرى من التعديلات؛ ‎ie‏ ‏"أغطية قمية ‎(caps)‏ استبدال واحدة أو أكثر من ‎nucleotides‏ طبيعية الوجود مع مثيل؛ © تعديلات بين ‎cJianucleotides‏ تلك مع وصلات غير مشحونة ‎«methyl phosphonates Jie)‏ ‎ccarbamates phosphoamidates «phosphotriesters‏ إلخ) ومع وصلات مشضحونة ‎cphosphorodithioates «phosphorothioates « is)‏ إلخ) ؛» تلك المحتوية على أجزاء متدلية ‎proteins Jie «(pendant moieties)‏ (مثاف ‎«toxins «nucleases‏ أجسام مضادة؛ ‎peptides‏ ‏إشارة ‎<poly-L-lysine‏ إلخ)؛ تلك مع مواد مقحمة ‎cacridine «33 «) (intercalators)‏ ‎(metals) ‏فلزات‎ Sis) (chelators) ‏إلخ)؛ تلك التي تحتوي على مواد كلابية‎ psoralen ٠ «(oxidative metals) oxidative ‏فلزات‎ boron «(radioactive metals) ‏فلزات مشعة نشطة‎
Hie) ‏تلك مع وصلات معدل‎ calkylators ‏إلخ)؛ تلك التي تحتوي على مواد‎ ‏بالإضافة إلى أشضكال غير معدلة من‎ ٠ ‏إلخ)‎ «alpha anomeric nucleic acids ‏الموجودة طبيعيا في‎ hydroxyl ‏يمكن استبدال أي من مجموعات‎ (Lilia) polynucleotides) ‎Ve‏ السكريات ‎¢(sugars)‏ مثلاء بمجموعات ‎cphosphonate‏ مجموعات ‎phosphate‏ محمية بمجموعة حماية قياسية؛ أو منشطة لتحضير وصلات إضافية لأجل ‎nucleotides‏ إضافية؛ أو ‏قد تتحد مع دعامات صلبة ‎-(solid supports)‏ إن المجموعة ‎OH‏ الطرفية ©' و 7 يمكن أن تكون ‎phosphorylation‏ أو مستبدلة مع ‎amines‏ أو أجزاء مجموعة تغطية طرفية عضوية ‎(organic capping group moieties)‏ بها من ‎١‏ إلى ‎٠٠‏ ذرةٍ ‎carbon‏ يمكن أيضا اشتقاق ‎hydroxyls Y-‏ | لأخرى إلى مجموعات حماية قياسية. يمكن أيضا أن تحتوي ‎polynucleotides‏ ‏على أشكال مماثلة لسكريات ‎ribose‏ أو ‎deoxyribose‏ المعروفة ‎dale‏ في الفن؛ متضمنة؛ ‎Jie‏ ‎2’-fluoro- «2’-0O-allyl ¢2’-O-methyl-‏ أو 27-2100-1096 ‎clas‏ سكر ‎«carbocyclic‏ ‏سكريات ‎cbeta-anomeric sl alpha-‏ سكريات ‎epimeric‏ مل ‎xyloses «arabinose‏ أو ‎clyxoses‏ سكريات ‎pyranose‏ سكريات ‎¢sedoheptuloses «furanose‏ مماثلات غير ‎cyclic‏ ‎Yo‏ ومماثلات ‎nucleoside‏ غير قاعدي مثل ‎.methyl riboside‏ يمكن استبدال واحدة أو أكثر من وصلات ‎phosphodiester‏ بمجموعات واصلة بديلة. تتضمن هذه المجموعات الواصلة البديلة؛ بدون تحديد؛ تجسيدات مستبدل فيها ‎phosphate‏ بواسطة ‎P(S)S «P(O)S(“thioate”)‏
ص ‎«CH, (“formacetal”) Jl CO P(O)OR’ P(O)R «(O)NR, (“amidate”) «(“dithioate”)‏ فيها كل من # أو 8 على حدة هو ‎H‏ أو ‎alkyl‏ مستبدل أو غير مستبدل (© 1-220( يحتوي اختياريا على وصلة )-0-( ‎.araldyl 0 cycloalkenyl cycloalkyl «alkenyl «aryl cether‏ ليست هناك ‎dala‏ لتكون كل الوصلات في ‎polynucleotides‏ متماثلة. ينتطبق الوصف السابق © على كل ‎polynucleotides‏ المشار إليها هناء متضمنة ‎DNA 5s RNA‏ إن جسم مضاد 'يرتبط بصفة خاصة ‎"(specifically binds)‏ أو 'يرتبط بصورة مفضلة ‎"(preferentially binds)‏ مع هدف إذا كان يرتبط مع انجذاب ‎sl‏ شراهة أكبر؛ سرعة أكبر؛ ض و/أو فترة زمنية أطول مع ارتباطه مع مواد أخرى. على سبيل ‎JE‏ فإن جسم مضاد يرتبط بصفة خاصة أو بصورة مفضلة مع ‎PCSK epitope‏ هو جسم مضاد يربط هذا ‎epitope‏ مع ‎٠‏ انجذاب أكبر» شراهة أكبرء بسرعة أكبر» و/أو مع فترة زمنية أطول من ارتباطه مع 005109 ‎epitopes‏ أخرى أو ‎epitopes‏ أخرى غير ‎.PCSK9‏ من المفهوم أيضا من قراءة هذا التعريف أنه على سبيل المثال؛ قد يرتبط جسم مضاد (أو جزء أو ‎(epitope‏ بصفة خاصة أو بصورة مفضلة مع هدف أول وقد أو قد لا يرتبط بصفة خاصة أو بصورة مفضلة مع هدف ثان. حسب ذلك»؛ فإن "الارتباط الخاص ‎“(specific binding)‏ أو "الارتباط المفضل ‎(preferential‏ ‎binding) ٠‏ لا يتطلب بالضرورة (برغم أنه قد يتضمن) ارتباط حصري. بصفة عامة؛ لكن ليس بالضرورة؛ فإن الإشارة إلى ارتباط تعني ارتباط مفضل. ‎ash off‏ غير مؤشر ‎'(non-signalling decoy)‏ هو شكل مماثل لمستقبل قابل للذوبان أو ‎protein‏ ارتباط الذي ينحي المركب الترابطي من مستقبله (مستقبلاته) المشابه له. حسب الاستخدام هناء يشير "نقي جوهريا ‎"(substantially pure)‏ إلى مادة لها نقاء ‎٠‏ 79 ‎Ye‏ على الأقل؛ (أي؛ خالية من الملوثات)؛ يفضل أكثر؛ لها نقاء ‎749٠8‏ على الأقل؛ يفضل ‎«AST‏ ‏لها نقاء 7905 على الأقل؛ أيضا يفضل أكثرء لها نقاء 798 على الأقل؛ وأكثر تفضيلا؛ لها نقاء 7949 على الأقل. تتضمن "خلية عائلة ‎cell)‏ 608" خلية منفردة أو مزرعة خلية مستقبلة أو أصبحت مستقبلة ‎(vector) Jill‏ (نواقل) لدمج إدخالات ‎polynucleotide‏ تتضمن خلايا عائلة نسل ‎(progeny)‏ ‎Yo‏ خلية عائلة واحدة؛ وقد لا يكون النسل بالضرورة مماثلا ‎LIS‏ (في الشكل أو في مكمل ‎DNA‏ ‏الجينومي) للخلية الأم الأصلية بسبب ‎Hil‏ طبيعية؛ عرضية؛ أو متداولة. تتضمن خلية ‎Ale‏ ‎A‏ مستقبلة حامل الجين من العاثل في الجسم مع ‎polynucleotide(s)‏ من هذا الاختراع.
A
‏لتحديد منطقة‎ "(Fe region) Fe ‏كما هو معروف في الفن؛ يستخدم المصطلح "منطقة‎ ‏هي منطقة‎ "(Fc region) Fe ‏مناعي. قد تكون "المنطقة‎ globulin ‏طرفية-© في سلسلة تقيلة‎ globulin ‏من سلسلة ثقيلة‎ Fe ‏متغيرة. برغم أن حدود المنطقة‎ Fo ‏لها ترتيب أولي أو منطقة‎ Fe sale ‏مناعي آدمي تتحدد‎ globulin ‏سلسلة ثقيلة‎ Fe ‏مناعي لابد أن تكون مختلفة؛ فإن منطقة‎ ‏إلى نهاية‎ Pro230 ‏أو من‎ <Cys226 ‏عند المكان‎ amino acid ‏بأنها ممتدة من متخلف‎ ©
Kabat ‏مثلما في‎ EU ‏هو ذلك لمؤشر‎ Fe ‏من ذلك. إن ترقيم المتخلفات في المنطقة‎ carboxyl
Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Sth Ed. Public Health
Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991. ‏مناعي تشمل عامة ؟ من مجالات سيطرة ثابتة‎ globulin ‏من‎ Fe ‏إن المنتطقة‎ ‏و0113.‎ CH2 «(constant domains) ٠ ‏يصف مستقبل يرتبط‎ “FcR” 5 "(Fe receptor) Fo ‏حسب الاستخدام في الفن» فإن "مستقبل‎ ‏آدمي له ترتيب أولي. علاوة‎ FER ‏المفضل هو‎ FeR ‏من الجسم المضاد. إن‎ Fo ‏مع المنطقة‎ ‏ويتضمن‎ (gamma ‏(مستقبل‎ IgG ‏على ذلك؛ فإن 1708 مفضل هو مستقبل يربط جسم مضاد‎ allelic ‏متضمنا الأشكال المتبايئة‎ «FeyRUL sy «FeyRIT «FeyRI ‏مستقبلات من الأنوا ع الفرعية‎ ‏والأشكال المجدولة تبادليا من هذه المستقبلات. تتضمن مستقبلات‎ ٠ ‏("مستقبل تثبيط‎ FoyRIIB ‏و‎ ('(activating receptor) ‏تنشيط‎ Jia") FeyRIIA :FeyRII ‏متشابهة التي تختلف أساسيا في‎ amino acid ‏التي لها ترتيبات‎ ¢('(inhibiting receptor) ‏مشروحة في:‎ FeRs ‏إن‎ -(cytoplasmic) ‏مجالات سيطرتها السيتوبلازمية‎
Ravetch and Kinet, 1991, Ann. Rev. Immunol., 9:457-92; Capel et al., 1994,
Immunomethods, 4:25-34; and de Haas et al., 1995, J. Lab. Clin. Med., 126:330-41. Ye ‏من الأم إلى‎ IgGs ‏المسئول عن انتقال‎ FeRn ‏مستقبل حديث الولادة؛‎ “FoR” Load ‏يتضمن‎ ‏الجنين‎ ‎(Guyer et al., 1976, J. Immunol., 117:587: and Kim et al., 1994, J. Immunol., 24:249). ‏حسب الاستخدام هنا بالنسبة لجسم مضاد؛ يعني أن‎ (compete) ‏إن المصطلح 'يتنافس‎ Yo ‏بطريقة تشابه بدرجة كافية‎ epitope ‏مضاد؛ يرتبط مع‎ alge ‏أول؛ أو قسم منه يربط‎ alias ‏جسم‎ ‏جسم مضاد ثان؛ أو قسم منه يربط مولد مضاد؛ بحيث إن نتيجة ارتباط الجسم المضاد‎ al)
vy ‏له تقل بدرجة يمكن تحديدها في وجود الجسم المضاد‎ (cognate) ‏القرين‎ epitope ‏الأول مع‎ ‏وهو أن‎ edad) ‏الثاني مقارنة بارتباط الجسم المضاد الأول في غياب الجسم المضاد الثاني. إن‎ ‏الخاص به يقل أيضا بصورةٍ يمكن تحديدها في وجود‎ epitope ‏ارتباط الجسم المضاد الثاني مع‎ ‏الجسم المضاد الأول يمكن أن يكون هو الحال برغم عدم الحاجة لذلك. بمعنى أن؛ الجسم‎ ‏الخاص به بدون أن‎ epitope ‏المضاد الأول يمكن أن يثبط ارتباط الجسم المضاد الثاني مع‎ ٠ ‏الخاص به. على أية‎ epitope ‏يثبط الجسم المضاد الثاني ارتباط الجسم المضاد الأول مع‎ ‏مع‎ AY ‏حال؛ عندما يثبط كل جسم مضاد بدرجة يمكن تحديدها ارتباط الجسم المضاد‎ ‏أو المركب الترابطي القرين له سواء كان بنفس الدرجة أو بدرجة أكبر أو أقل» يقال إن‎ epitope ‏مع بعضها البعض لارتباط‎ "(cross-compete) ‏لأجسام المضادة 'تتنافس بصورة متبادلة‎ ‏الخاصة بها. يشمل الاختراع الحالي كل من الأجسام المضادة التنافسية ومتبادلة‎ epitope(s) ٠ ‏بغض النظر عن الآلية التي‎ (competing and cross-competing antibodies) ‏التتافس‎ ‏الإعاقة التجسيمية‎ Sag) ‏يحدث بها ذلك التتافس أو التتافس المتبادل‎ epitope ‏أو الارتباط مع‎ «(conformational change) ‏التغير التركيبي‎ (steric hindrance) ‏مشترك؛ أو قسم من ذلك)؛ فإن الصانع الماهر سوف يدرك؛ اعتمادا على التعاليم المتوافرة هناء‎ ‏أن الأجسام المضادة تلك التنافسية و/أو متبادلة التنتافس مشتملة ويمكن أن تكون مفيدة للطرق‎ ١٠ ia ‏المعلنة‎ ‏لها وظيفة مستجيب واحدة على الأقل‎ "(functional Fe region) ‏وظيفية‎ Fo ‏إن 'منطقة‎ ‏تمثيلية ربط‎ "(effector functions) ‏لها ترتيب أولي. تتضمن "وظائف مستجيب‎ Fo ‏لمنطقة‎ ‏سمية خلوية عن‎ fF ‏معتمدة على مكمل؛ ربط مستقبل‎ (cytotoxicity) ‏سمية خلوية‎ ¢Clg ‏طريق- خلية تعتمد على جسم مضاد؛ بلعمة خلوية؛ خفض مستوى تنظيم مستقبلات سطح‎
Fo ‏اتحاد المنطقة‎ dale ‏خلية (مثلا مستقبل خلية 8)؛ إلخ. إن تلك الوظائف للمستجيب تتطلب‎ ‏مع مجال سيطرة رابط (مثلا مجال سيطرة متغير جسم مضاد) ويمكن تحديدها باختبارات عديدة‎ ‏معروفة في الفن لتقييم تلك الوظائف للمستجيب للجسم المضاد.‎ amino acid ‏ترتيب‎ "(native sequence Fc region) ‏لها ترتيب أولي‎ Fe ‏تشمل "منطقة‎ ‏متباينة‎ Fo ‏'منطقة‎ Jodi ‏موجودة في الطبيعة.‎ Fo ‏من منطقة‎ amino acid ‏مماثل لترتيب‎ Yo ‏أولية الترتيب بفعل تعديل‎ Fo ‏يختلف عن ذلك لمنطقة‎ amino acid ‏ترتيب‎ "(variant Fe region)
Fo ‏واحد على الأقل؛ وتحتفظ أيضا بوظيفة مستجيب واحدة على الأقل للمنطقة‎ amino acid
د" أولية الترتيب. بصورة ‎(Aline‏ فإن المنطقة ‎Fo‏ المتباينة بها استبدال ‎amino acid‏ واحد على الأقل مقارنة بمنطقة ‎Fe‏ أولية الترتيب أو بمنطقة ‎Fe‏ من ‎polypeptide‏ أصلي؛ مثلا من حوالي ‎١‏ إلى حوالي ‎٠‏ استبدالات ‎camino acid‏ ويفضل؛ من حوالي ‎١‏ إلى حوالي © استبدالات ‎amino acid‏ في منطقة ‎Fe‏ أولية الترتيب أو في المنطقة ‎Fc‏ لأجل ‎polypeptide‏ | لأصلي. إن © المنطقة ‎Fe‏ المتباينة سوف يكون لها هنا بصورة مفضلة تماثل ترتيب حوالي 7850 على الأقل مع منطقة ‎Fe‏ أولية الترتيب و/أو مع منطقة ‎Fc‏ من ‎polypeptide‏ أصلي؛ والأكثر تفضيلاء تماثل ترتيب حوالي 798 على الأقل معهماء يفضل أكثر؛ تماثل ترتيب حوالي 74985 على الأقل» حوالي 797 على الأقل» حوالي 747 على الأقل؛ حوالي 7948 على ‎«dB‏ حوالي 4 على الأقل معهما. (Minimal Anticipated Biological Effect ‏المقصود من "أدنى مستوى تأثير حيوي متوقع‎ a ‏هو مستوى الجرعة المتوقعة الأدنى المؤدية إلى أدنى تأثير حيوي في‎ "(MABEL) Level)
MABEL ‏الآدميين. تطبق عادة عوامل الأمان في حساب الجرعة الأولى في الإنسان من‎ ‏كل الحركات الدوائية ومعلومات الديناميكية الدوائية المتعلقة‎ MABEL ‏يجب أن يستخدم حساب‎ ‏بهذا في المعمل وفي الجسم الحي.‎ "(therapeutically effective) Ladle ‏و'مؤثر‎ "(treatment) ‏كما هو مستخدم هناء "العلاج‎ Yo ‏هما طرق للحصول على نتائج سريرية مفيدة أو مرغوبة. من أجل هذا الاختراع المتعلق‎ ‏تتضمن النتائج السريرية النافعة أو‎ pH ‏بالأجسام المضادة المعارضة 205129 المعتمدة على‎ ‏وخفض‎ LDL ‏المرغوبة؛ لكن لا تقتصر علىء واحد أو أكثر مما يلي: تعزيز التخلص من‎ ‏الدهني الزائغة الناتجة عن‎ protein ‏و/أو‎ cholesterol ‏حدوث أو التخفيف من مستويات‎ ‎Yo‏ اضطرابات الأيض و/أو الأكل» أو متضمنا فرط ‎cholesterol‏ في الدم؛ خلل الدهن في الدم المولد للتصلب؛ التصلب العصيدي؛ و؛ بصفة عامة أكثر؛ الأمراض الوعائية القلبية ‎(CVD) (cardiovascular disease)‏ الراجعة لعوامل وراثية. ‏إن 'تقليل حدوث ‎"(reducing incidence)‏ يعني أيا من تقليل الشدة (الذي يمكن ‏أن يتضمن تقليل الحاجة إلى و/أو كمية (مثلاء الخضوع إلى) عقاقير أخرى و/أو ‎Yo‏ علاجات أخرى مستخدمة بصفة عامة لهذه الحالة. كما يدرك المهرة في الفن؛ فقد يختلف الأفراد من ناحية استجابتهم للمعالجة؛ و حسب ذلك؛ ‎Oli‏ فإن 'طريقة لتقليل حدوث ‎"(method of reducing incidence)‏ تعكس إعطاء الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ استنادا
Yo ‏إلى توقع منطقي بأن ذلك الإعطاء من المحتمل أن يسبب التقليل في حدوث الإصابة في ذلك‎ ‏الفرد الخاص.‎ ‏إن 'تحسين (عدناة806110)" يعني تقليل أو تحسن واحد أو أكثر من الأعراض مقارنة بعدم‎ ‏أيضا تقصير أمد‎ "(ameliorating) ‏يتضمن "التحسين‎ pH ‏إعطاء الجسم المضاد المعتمد على‎ ‏أو تقليل المدة الزمنية للعرض.‎ ٠ ‏أو 'كمية مؤثرة‎ "(effective dosage) ‏مؤثرة‎ dejan’ ‏حسب الاستخدام هناء فإن‎ ‏أو تركيبة دوائية‎ (compound) ‏من عقار (ين«0)» مركب‎ "(effective amount) ‏هي كمية كافية لإنتاج أي واحدة أو أكثر من النتائج المفيدة‎ (pharmaceutical composition) ‏أو المطلوبة. للاستخدام الوقائي» تتضمن النتائج المفيدة أو المطلوبة إزالة أو تقليل خطورة»؛‎ ‏تقليل شدة؛ أو تأخير بداية المرض؛ متضمنا أعراض المرض الكيميائية الحيوية؛ النسيجية‎ ٠ ‏و/أو السلوكية؛ مضاعفاته والأنواع الشكلية المرضية الوسطية التي تظهر أثناء حدوث‎ ‏المرض. للاستخدام العلاجي لجسم مضاد معارض 7081629 معتمد على الأس الهيدروجيني؛‎ ‏المرتفعة‎ cholesterol ‏تقليل مستويات‎ Jie ‏تتضمن النتائج المفيدة أو المطلوبة نتائج إكلينيكية‎ ‏في الدم؛ أو تقليل عرض واحد أو أكثر من مرض خلل مستوى الدهن في الدم؛ تصلب‎ ‏مطلوبة لعلاج المرض؛‎ gyal ‏أو مرض القلب التاجي؛ تقليل جرعة أدوية‎ «CVD ‏الشرايين»‎ ١٠ ‏و/أو تأخير تطور المرض في المرضى. يمكن إعطاء جرعة مؤثرة في‎ aT ‏تعزيز تأثير دواء‎ ‏مركب؛‎ ls ‏واحدة أو أكثر من مرات الإعطاء. لأغراض هذا الاختراع» فإن جرعة مؤثرة من‎ ‏أو تركيبة دوائية هي كمية كافية لتحقيق معالجة وقائية أو علاجية إما مباشرة أو بصورة غير‎ ‏مركب؛ أو تركيبة‎ lis ‏مباشرة. كما هو مفهوم في السياق الإكلينيكي؛ فإن جرعة مؤثرة من‎ ‏مركب»؛ أو تركيبة دوائية آخر. لذلك؛ تعتبر‎ lie ‏دوائية قد وقد لا تتحقق في اتحاد مع‎ 7١ ‏في السياق إعطاء واحد أو أكثر من العوامل العلاجية؛‎ "(effective dosage) ‏المؤثرة‎ de yall ‏وأن عامل واحد يعطى بكمية مؤثرة إذا تحققت؛ في اتحاد مع واحد أو أكثر من عوامل أخرى؛‎ ‏نتيجة مطلوبة أو كان من الممكن تحقيقها.‎ ‏أو "الكائن (806[(6©0)" هو كائن ثديي؛ يفضل أكثر؛ أدمي. تتضمن‎ "(individual) ‏إن "الفرد‎ ‏حيوانات المزارع» حيوانات الرياضة؛ الحيوانات المدللة؛ الحيوانات‎ cant ‏بدون‎ clad ‏الثدييات‎ Yo ‏الرئيسة؛ الخيول؛ الكلاب؛ القطط» الفثران والقوارض.‎
حسب الاستخدام ‎(Lia‏ فإن "ناقل ‎(vector)‏ يعني بنية؛ قادرة على توصيل» و» يفضل؛ إظهار؛ واحد أو أكثر من الجين (الجينات) أو الترتيب (الترتيبات) الهام في خلية عائلة. تتضمن أمثلة النواقل؛ لكن بدون تحديد؛ نواقل فيروسية؛ نواقل إظهار ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ مجردة؛ ‎«plasmid‏ نواقل ‎cosmid‏ أو ‎coals‏ نواقل إظهار ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ ملازمة لعوامل تكثيف ‎cationic ©‏ نواقل إظهار ‎DNA‏ أو ‎RNA‏ مكبسلة في أجسام دهنية ‎«(liposomes)‏ وخلايا خاصة سوية النواة ‎WIA Jia c(eukaryotic cells)‏ منتجة. حسب الاستخدام هناء فإن "ترتيب تحكم في الإظهار ‎"(expression control sequence)‏ يعني ترتقيب ‎nucleic acid‏ يباشر نسخ ‎nucleic acid‏ يمكن أن يكون ترتيب التحكم في الإظهار هو ترتيب محث؛ ‎io‏ محث بنائي أو قابل للحث؛ أو تريب معزز. إن ترتيب التحكم ‎٠‏ في الإظهار متصل تشغيليا بترتقيب ‎nucleic acid‏ المراد نسخه. حسب الاستخدام هناء يتضمن 'مادة حاملة مقبولة دوائيا ‎(pharmaceutically acceptable‏ ‎"carrier)‏ أو 32 مسوغة مقبولة ‎"(pharmaceutical acceptable excipient) ils)‏ أي مادة؛ عند الاتحاد مع مقوم نشط ‎(active ingredient)‏ تسمح للمقوم بالاحتفاظ بنشاطه الحيوي وتكون مكون غير متفاعل مع الجهاز المناعي للكائن. تتضمن الأمثلة؛ بدون تحديد؛ أيا من ‎٠‏ المواد الحاملة الدوائية القياسية ‎Jia‏ محلول ملح ثابت الأس الهيدروجيني بواسطة ‎«phosphate‏ ‎cole‏ مستحلبات ‎(emulsions)‏ مثل مستحلب زيت/ ماء؛ وأنواع مختلفة من عوامل البلل ‎(Wetting agents)‏ إن مواد التخفيف ‎(diluents)‏ المفضلة للإعطاء رذاذ هوائي أو إعطاء عن غير الطريق المعوي هي محلول ملح ثابت الأس الهيدروجيني بواسطة ‎(PBS) phosphate‏ أو محلول ملح عادي ( 4 ). تصاغ التركيبات المشتملة على تلك المواد الحاملة بطرق تقليدية ‎Yo‏ معروفة جيدا؛ انظرء على سبيل ‎(JE‏ ‎Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A.
Gennaro, ed., Mack‏ ‎Publishing Co., Easton, PA, 1990; and Remington, The Science and Practice of‏ ‎Pharmacy 20th Ed.
Mack Publishing, 2000.‏ يشير المصطلح ‎(ky,‏ حسب الاستخدام هناء إلى ثابت المعدل لتلازم الجسم المضاد مع ‎alge Yo‏ مضاد. بصفة خاصة؛ تقاس ثوابت المعدل ‎(Kors kon)‏ وثوابت تفكك الاتزان باستخدام أجزاء جسم مضاد ‎Fab‏ (أي؛ أحادية التكافؤ ‎Aga ((univalent)‏ مضاد.
Yv ‏حسب الاستخدام هنا؛ إلى ثابت المعدل لتفكك جسم مضاد عن‎ Co" ‏يشير المصطلح‎ ‏معقد جسم مضاد/ مولد مضاد.‎ ‏إلى ثابت تفكك الاتزان لتفاعل جسم مضاد-‎ cba ‏حسب الاستخدام‎ Kp" ‏يشير المصطلح‎ ‏مولد مضاد.‎ 0 إن تحديد ثوابت معدل الارتباط والتفكك؛ ‎kgs ka‏ على التوالي؛ من أجل تحديد نسب ‎Kp‏ ‎opr‏ تعد باستخدام مجس حيوي معتمد على رنين ‎plasmon‏ سطح لتمييز التفاعل البيني بين مادة تحليل/ مركب ترابطي تحت ظروف حيث تكون مادة التحليل أحادية التكافؤ بالنسبة للارتباط مع مركب ترابطي غير متحرك عند قدرة منخفضة على سطح المجس عبر عامل كاشف للإمساك . يجرى التحليل باستخدام طريقة معايرة طاقة حركية الموصوفة في:
Karlsson et al., Anal. Biochem 349, 136-147, 2006. Ve ‏تختار رقاقة المجسء العامل الكاشف للإمساك؛ وعامل ضبط الاختبار المستعمل لاختبار‎ ‏معين لإعطاء إمساك مستقر للمركب الترابطي على سطح المجس» مع الحد من الارتباط غير‎ ‏محللة تكون ملائمة من‎ Bale ‏النوعي للمادة المحللة مع الأسطح, وإنتاج استجابات مرتبطة مع‎ ‏أجل تحليل الطاقة الحركية؛ طبقا لتوصيات:‎
Myszka, J. Mol. Recognit 12, 279-284, 1999. Vo ‏إن الاستجابات المرتبطة بالمادة المحللة لكل تفاعل بيني بين المادة المحللة/ المركب الترابطي‎ (mass ‏'تموذج محدود لنقل الكتلنة‎ ١:١ Langmuir ‏تكون مزدوجة المرجع وملائمة إلى‎ ‏كمحددات عامة كما هو موصوف في:‎ Rigs ka ka ‏مع‎ "transport limited model)
Myszka & Morton et al., Biophys. Chem 64, 127-137 (1997). ‏يفضل‎ Kp = ko/ky ‏من نسبة ثوابت معدل الطاقة الحركية»‎ Kp ‏يخصم ثابت التفكك المتوازي»‎ ٠ .ةيوثم”7١ ‏ضبط هذه التحديدات عند 75”مئوية أو‎ ‏(أ) طرق لمنع أو علاج اضطرابات‎ ‏يوفر‎ pH ‏في أحد الجوانب المتعلقة بالأجسام المضادة المعارضة 208169 المعتمدة على‎ ‏في الدم؛ و/أو على الأقل عرض واحد‎ cholesterol ‏الاختراع الحالي طريقة لعلاج أو منع فرط‎ ‏أو مرض قلبي أورطي؛ في شخص تشمل‎ CVD ‏خلل الدهن في الدم؛ التصلب العصيدي»‎ ge Yo ‏التي‎ pH ‏إعطاء الشخص كمية مؤثرة من الجسم المضاد المعارض 005129 المعتمد على‎
PCSK9 ‏تعارض دوران‎
YA
‏يوفر الاختراع كمية مؤثرة من جسم مضاد معارض 705169 معتمد‎ Als) ‏في جانب‎ ‏في‎ cholesterol ‏الذي يعارض دوران 00819 للاستخدام في علاج أو منع فرط‎ pH ‏على‎ ‏أو‎ CVD ‏التصلب العصيدي؛‎ andl ‏و/أو على الأقل عرض واحد من خلل الدهن في‎ cal ‏مرض قلبي أورطي؛ في شخص. يوفر الاختراع أيضا استخدام كمية مؤثرة من جسم مضاد‎ ‏معارض 208129 معتمد على الأس الهيدروجيني الذي يعارض 705169 خارج الخلية أو دورانه‎ © ‏على الأقل عرض واحد من خلل‎ Ss ‏في الدم؛‎ cholesterol ‏في صنع دواء لعلاج أو منع فرط‎ ‏أو مرض قلبي أورطي؛ في شخص.‎ CVD ‏الدهن في الدم؛ التصلب العصيدي؛‎ ‏الدم و/أو خفض‎ cholesterol ‏يفضل أن ينتج عن إعطاء علاج الجسم المضاد خفض‎ 7٠ ‏الدم على الأقل حوالي‎ LDL ‏الدم و/أو خفض‎ cholesterol ‏الدم؛ يفضل أن يكون‎ LDL
LDL (add ‏الدم و/أو‎ cholesterol ‏أقل منه قبل الإعطاء. يفضل أكثر ؛ أن يكون‎ ve ‏أو‎ ٠ ‏أقل منه قبل إعطاء الجسم المضاد. يفضل أكثر أيضا أن يكون‎ 77١ ‏الدم على الأقل حوالي‎ ‏أقل منه قبل إعطاء الجسم المضاد.‎ 77١0 ‏الدم على الأقل‎ LDL ‏الدم و/أو خفض‎ cholesterol ‏الدم على الأقل 40 أقل منه‎ LDL ‏الدم و/أو خفض‎ cholesterol ‏بصورة مفضلة أن يكون‎ ‏الدم‎ LDL ‏الدم و/أو خفض‎ cholesterol ‏قبل إعطاء الجسم المضاد. المميز أكثر أن يكون‎ cholesterol ‏أقل منه قبل إعطاء الجسم المضاد. يفضل جدا أن يكون‎ 75 ٠ ‏على الأقل‎ vo ‏الدم على الأقل 7710 أقل منه قبل إعطاء الجسم المضاد. الأفضل أن‎ LDL ‏و/أو خفض‎ ‏أقل منه قبل إعطاء الجسم‎ ve ‏و/أو خفض .111 الدم على الأقل‎ all cholesterol ‏يكون‎ ‏المضاد.‎ ‎pH ‏فإن الإشارة إلى معضد أجسام مضادة معتمدة على‎ clin ‏بالنسبة لكل الطرق الموصوفة‎ ‏مضاد ملاءم تتضمن أيضا تركيبات تشمل واحدا أو أكثر من عوامل إضافية‎ alse ‏لأي‎ ‏قد تشمل هذه التركيبات إضافيا مواد مسوغة مناسبة؛ مثل مواد مسوغة‎ (additional agents) ‏المعروفة جيدا في الفن. يمكن‎ (buffers) ‏الهيدروجيني‎ OU ‏مقبولة دوائيا متضمنة مواد مثبتة‎ ‏أخرى تفليدية.‎ dallas ‏استخدام الاختراع الحالي وحده أو في اتحاد مع طرق‎ ‏لكائن بأي طريقة مناسبة. لابد أن يكون‎ pH ‏يمكن إعطاء الجسم المضاد المعتمد على‎ ‏واضحا للماهر في الفن أن الأمثلة الموصوفة هنا لا يقصد بها تحديد لكن توضيح للتقنيات‎ Yo ‏المتوافرة. طبقا لذلك؛ في بعض التجسيدات؛ يعطى الجسم المضاد المعتمد على 11م لكائن‎ ‏أو بالتشريب المستمر‎ (bolus) ‏كمضغة‎ ie ‏إعطاء في الوريد؛‎ Jia ‏طبقا لطرق معروفة؛‎
‎(continuous infusion)‏ خلال مدة من الوقت؛ بالإعطاء في العضل؛ في البريتون؛ في المخ والحبل الشوكي؛ عبر الجلد؛ تحت الجلد؛ في المفاصل؛ تحت اللسان؛ في غشاء مصلي؛ بالنفخ» في الغمد؛ بالفم؛ بالاستنشاق أو سطحيا. يمكن أن يكون الإعطاء عموميا؛ مثلاء في ‎cays‏ أو موضعيا. إن المرذذات المتوافرة تجاريا للمستحضرات السائلة؛ متضمنة مرذذات نفاثة © ومرذذات موجات فوق صوتية مفيدة للإعطاء. إن المستحضرات السائلة يمكن ترذيذها مباشرة ويمكن ترذيذ المسحوق المجفد ‎(lyophilized)‏ بعد إعادة تشكيله. بطريقة بديلة؛ يمكن أن ‎My‏ ‏هوائيا الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ باستخدام مستحضر ‎fluorocarbon‏ وأداة استنشاق مقاسة الجرعة؛ أو استتشاقه كمسحوق ‎dae‏ ومطحون ‎(milled)‏ ‏في بعض التجسيدات؛ يعطى الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ بتقنيات توصيل موضعي ‎٠‏ خاص بمكان أو مستهدف. تتضمن أمثلة تقنيات التوصيل الموضعي الخاص بمكان أو مستهدف مصادر مخزنة عديدة قابلة للازبراع للجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ أو قسطرات توصيل موضعي؛ مثل قسطرات تشريب»؛ قسطرات كامنة؛ أو قسطرات ‎pf‏ رقع مصنعة؛ لفافات عارضة؛ تحويلات ودعامات أو أدوات أخرى يمكن ازدراعهاء مواد حاملة خاصة ‎(lS‏ حقن مباشرء أو استخدام مباشر. انظر؛ ‎Sle‏ ‎PCT Publication No.
WO 00/53211 and U.S.
Patent No. 5,981,568. Vo‏ يمكن للإعطاء استخدام مستحضرات مختلفة من الجسم المضاد المعتمد على 11م. في بعض التجسيدات؛ يمكن إعطاء الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ بدون تخفيف. في بعض التجسيدات؛ قد يتواجد الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ ومادة مسوغة مقبولة دوائيا في مستحضرات عديدة. إن المواد المسوغة المقبولة دوائيا معروفة في الفن؛ وهي مواد خاملة ‎(inert) | ٠‏ نسبيا تسهل إعطاء مادة مؤثرة فارماكولوجيا. على سبيل المثال؛ فإن المادة المسوغة قد تعطي شكلا أو قواماء أو تؤثر كمادة تخفيف. تتضمن المواد المسوغة المناسبة لكن بدون تحديد عوامل مثبتة؛ عوامل بلل واستحلاب؛ أملاح لتنويع الأوزمولارية؛ عوامل كبسلة؛ مواد لتثبيت الأس الهيدروجيني؛ ومواد لزيادة اختراق الجلد. إن المواد المسوغة بالإضافة إلى المستحضرات لتوصيل عقار بالطريق غير المعوي وبغير الطريق المعوي مذكورة في: ‎Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed.
Mack Publishing, 2000. Yo‏
Ye
يمكن أن تتحد هذه العوامل مع أوساط ناقلة مقبولة دوائيا مثل محلول ملح؛ محلول ‎(Ringer‏ محلول 16»0086؛ إلخ. إن نظام التجريع الخاص» ‎eel‏ الجرعة؛ التوقيت والتكرار؛
سوف يعتمد على الكائن الخاص والتاريخ الطبي الخاص لذلك الكائن. يمكن إعطاء الأجسام المضادة مع ارتباط معتمد على ‎pH‏ بالاستنشاق؛ حسب الوصف © هنا. بصفة عامة؛ لإعطاء أجسام مضادة معتمدة على ‎pH‏ فإن الجرعة الأولية المرشحة يمكن أن تعادل حوالي ؟ مجم/ كجم. لأغراض الاختراع الحالي؛ فإن الجرعة اليومية النتموذجية تتراوح من حوالي أي من ميكروجرام/ ‎cans‏ إلى ‎Fo‏ ميكروجرام/ كجم؛ إلى ‎Vee‏ ميكروجرام/ كجم؛ إلى ؟ مجم/ كجم؛ إلى ‎©١‏ مجم/ كجم؛ إلى ‎٠٠١‏ مجم/ كجم أو أكثر اعتمادا على العوامل المذكورة أعلاه. على سبيل المثال» يمكن استخدام جرعات حوالي ‎١‏ مجم/ كجم؛ حوالي ‎٠‏ 7,5 مجم/ كجم» حوالي © مجم/ كجم؛ حوالي ‎٠١‏ مجم/ كجم؛ وحوالي ‎YO‏ مجم/ كجم. للإعطاءات المتكررة خلال عدة أيام أو أكثر؛ اعتمادا على الحالة؛ تدوم المعالجة حتى حدوث كبح مطلوب للأعراض أو حتى تتحقق مستويات علاجية كافية؛ على سبيل المثال؛ تقليل مستويات ‎glucose‏ الدم. يشمل نظام التجريع التمثيلي إعطاء جرعة أولية حوالي ¥ مجم/ كجم؛ تليها جرعة استبقائية أسبوعية حوالي ‎١‏ مجم/ كجم من الجسم المضادء أو تليها جرعة استبقائية ‎٠‏ حوالي ‎١‏ مجم/ ‎pal‏ أسبوع بعد أسبوع. على أية حال؛ هناك برامج تجريع أخرى مفيدة؛ اعتمادا على نمط التحلل الدوائي الحركي الذي يرغب الممارس في أن يتحقق. على سبيل المثال» في بعض التجسيدات؛ يتوقع تجريع من ‎١‏ إلى ؛ مرات في الأسبوع. في تجسيدات أخرى؛ يتوقع تجريع مرة في الشهر أو مرة شهر بعد شهر أو مرة كل ¥ شهور. إن تطور هذا العلاج تتم مراقبته بسهولة بتقنيات واختبارات تقليدية. يمكن أن يختلف نظام التجريع (متضمنا الجسم
‎٠٠‏ المضاد المستخدم) مع مرور الوقت.
‏لأغراض الاختراع الحالي؛ سوف تعتمد الجرعة الملائمة من الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ على الجسم المضاد (أو تركيباته) المستعمل؛ نوع وشدة الأعراض المراد علاجهاء؛ وما إذا كان العامل معطى لأغراض وقائية أو علاجية؛ علاج ‎(Gila‏ التاريخ الإكلينيكي للمريض والاستجابة للعامل؛ مستويات مولد مضاد في دم المريض؛ معدل تصنيع وتصفية المريض ‎Yo‏ لمولد المضاد؛ معدل تصفية المريض للعامل المعطى؛ وتقدير الطبيب المعالج. سوف يعطي الطبيب نموذجيا الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ حتى الوصول إلى جرعة تحقق النتيجة المطلوبة. يمكن أن تختلف الجرعة و/أو معدل التكرار خلال فترة المعالجة. هناك اعتبارات
تجريبية؛ متل ‎jee‏ = النصف؛ سوف تساهم عامة في تحديد الجرعة. على سبيل المثال؛ فإن الأجسام المضادة المتوائمة مع الجهاز المناعي الآدمي؛ مثل أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية أو أجسام مضادة آدمية ‎(LIS‏ يمكن استخدامها لإطالة عمر- النصف للجسم المضاد ولمنع مهاجمة الجسم المضاد بواسطة الجهاز المناعي للعائل. يمكن تحديد معدل تكرار © الإعطاء وضبطه خلال فترة العلاج» ويعتمد عامة؛ وليس بالضرورة؛ على معالجة و/أو إخماد و/أو تحسين و/أو تأخير الأعراض ‎٠+‏ مثلاء فرط ‎cholesterol‏ الدم. بطريقة بديلة؛ فإن المستحضرات ممتدة الإطلاق للأجسام المضادة ملائمة. هناك مستحضرات وأدوات مختلفة لتحقيق إطلاق مستديم معروفة في الفن. في أحد التجسيدات؛ يمكن تجريبيا تحديد الجرعات للجسم المضاد المعارض في أفراد تم ‎٠‏ إعطاؤهم مرةٍ واحدة أو أكثر من الجسم المضاد المعارض. يعطى الأفراد جرعات متزايدة تدريجيا من الجسم المضاد. لتحديد الفعالية؛ يمكن اتباع مؤشر للمرض. إن إعطاء الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ طبقا للطريقة في الاختراع الحالي يمكن أن يكون مستمرا أو متقطعاء اعتمادا؛ ‎Sie‏ على الحالة الفسيولوجية للمتلقي للعلاج» سواء كان غرض الإعطاء ‎Ladle‏ أو وقائياء وعوامل أخرى معروفة للممارسين المهرة. قد يكون إعطاء ‎٠‏ الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ مستمرا بصورة أساسية خلال فترة زمنية مسبقة التحديد أو قد يكون في سلسلة من الجرعات المتباعدة. في بعض التجسيدات؛ قد يتواجد أكثر من جسم مضاد معارض واحد. يمكن تواجد ‎١‏ على الأقل؛ ‎١‏ على الأقل؛ 3 على الأقل؛ ؛ على الأقل؛ © على الأقل؛ أو أكثر من مضاد أجسام مضادة و/أو ‎peptides‏ بصفة عامة؛ قد تكون هذه الأجسام المضادة أو ‎peptides‏ لها أنشطة ْ ‎Ye‏ تتكميلية لا تؤثر بدرجة ضارة على بعضها البعض. يمكن أيضا استخدام جسم مضاد معتمد على 11م في اتحاد مع عوامل علاجية أخرى. يمكن أيضا استخدام جسم مضاد معتمد على ‎pH‏ في اتحاد مع عوامل أخرى تخدم في تعزيز و/أو تكملة كفاية العوامل. إن المواد الحاملة؛ المواد المسوغة؛ أو المواد المثبتة المقبولة غير سامة للمتعاطين لها عند الجرعات والتركيزات المستعملة؛ وقد تشمل مواد مثبتة للأس الهيدروجيني مثل ‎phosphate‏ ‎ccitrate Yo‏ وأحماض عضوية ‎(organic acids)‏ أخرى؛ أملاح ‎¢sodium chloride (Jie‏ مواد مضادة للأكسدة متضمنة ‎¢methionine y ascorbic acid‏ مواد حافظة (مثل ‎thexamethonium chloride ¢octadecyldimethylbenzyl ~~ ammonium chloride‏
‎tbenzyl alcohol sf butyl ¢<phenol ¢benzethonium chloride <benzalkonium chloride‏ ‎calkyl parabens‏ مثل ‎methyl‏ أو ‎tcyclohexanol ¢resorcinol ¢catechol ¢propyl paraben‏ ‎ALE polypeptides ¢(m-cresol 5 ¢3-pentanol‏ الوزن ‎al)‏ (أقل من حوالي ‎٠١‏ متخلفات)؛ ‎albumin Jie ¢proteins‏ مصل؛ ‎«gelatin‏ أى ‎globulins‏ مناعية؛ ‎polymers‏ ماصة للماء ‎Jie‏ ‎amino acids ¢polyvinylpyrrolidone ©‏ مقل ‎<histidine «asparagine «glutamine «glycine‏ ‎«arginine‏ أو ‎disaccharides «monosaccharides ¢lysine‏ ومواد ‎carbohydrates‏ أخرى متضمنة ‎cmannose «glucose‏ أو ‎tdextrins‏ عوامل كلابية ‎(chelating agents)‏ مثل ‎¢EDTA‏ ‏سكريات ‎(sugars)‏ مثل ‎¢sucrose‏ امتنمسعص ‎¢sorbitol sl trehalose‏ مده مقابلة تشكل ملحا ‎¢sodium Jie‏ معقدات فلز ‎(metal complexes)‏ (مثل معقدات ‎«(Zn-protein‏ و/أو منشطات ‎٠‏ سطح ‎(surfactants)‏ غير ‎ionic‏ مقل ‎polyethylene 5} PLURONICS™ (TWEEN™‏ ‎.glycol (PEG)‏ تحضر أجسام دهنية ‎(liposomes)‏ تحتوي على الجسم المضاد المعتمد على ‎PH‏ بطرق معروفة في الفن» ‎Jia‏ الموصوفة في: ‎Epstein, et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 82:3688, 1985; Hwang, et al., Proc.
Natl‏ ‎Acad.
Sci.
USA 77:4030, 1980; and U.S.
Pat.
Nos. 4,485,045 and 4,544,545. Yo‏ إن الأجسام الدهنية مع زمن زائد في الدورة الدموية معلنة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 1 . يمكن توليد أجسام دهنية مفيدة بصفة خاصة بطريقة تبخير طور معكوس مع تركيبة دهن تشمل ‎phosphatidyl ethanolamine s cholesterol «phosphatidylcholine‏ مشتق من ‎(PEG-PE) PEG‏ تنبثق الأجسام الدهنية خلال مرشحات ‎(filters)‏ لها مقاس مسام ‎Ye‏ محدد لتنتج أجسام دهنية لها القطر المطلوب. إن المقومات النشطة يمكن أيضا احتجازها في كبسولات صغيرة محضرة؛ ‎Nie‏ ‏بتقنيات عنقودية تساهمية ‎(coacervation)‏ أو بواسطة ‎polymerization‏ بين الأسطح؛ ‎OE 4‏ كبسولات صغيرة ‎hydroxymethylcellulose‏ 0 70 وكبسولات صغيرة ‎poly-(methylmethacrylate)‏ على الترتيب»؛ في أنظمة توصيل عقار غروية ‎Oli) (colloidal drug delivery systems) Yo‏ أجسام دهنية؛ كرات صغيرة ‎calbumin‏ مستحلبات ‎Aids‏ جسيمات ‎nano‏ المقاس وكبسولات ‎nano‏ المقاس) أو في مستحلبات كبيرة. إن تلك التقنيات معلنة في:
YY
‎Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000.‏ يمكن تحضير مستحضرات ممتدة الإطلاق. تتضمن الأمثلة المناسبة لمستحضرات ممتدة الإطلاق بنيات شبه منفذة من ‎polymers‏ صلبة صادة للماء تحتوي على الجسم المضاد؛ تكون تلك البنيات في شكل أدوات متشكلة؛ مثلا أغشية؛ أو كبسولات دقيقة. تتضمن الأمثلة لبنيات © ممتدة الإطلاق ‎poly(2-hydroxyethyl- «JL ill Ju le) hydrogels ¢polyesters‏ ‎polylactides ¢(poly(vinylalcohol) 0 «(methacrylate‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم 4 ؟!؟؟!؟؟) ‎polymers‏ تساهمية ‎ethylene- «7 ethyl-L-glutamate 5 L-glutamic acid‏ ‎vinyl acetate‏ غير قابلة للتحللء ‎polymers‏ تساهمية ‎Tactic acid-glycolic acid‏ قابلة للتحلل مثل ™ ‎LUPRON DEPOT‏ (كرات صغيرة قابلة للحقن تتكون من ‎polymer‏ تساهمي ‎¢sucrose acetate isobutyrate «(leuprolide acetate g lactic acid-glycolic acid ٠‏ ‎-poly-D-(-)-3-hydroxybutyric acid s ‏إن المستحضرات المستخدمة للإعطاء في الجسم لابد أن تكون معقمة. يتحقق هذا‎ ‏الترشيح خلال أغشية مرشح معقمة. إن التركيبات العلاجية لجسم مضاد‎ Sle ‏تماما بواسطة؛‎ (bag) ‏كيس‎ ia ‏لها منفذ وصول معقم؛‎ (container) ‏توضع عامة في حاوية‎ pH ‏معتمد على‎ ‏يمكن ثقبها بواسطة إبرة حقن تحت‎ (stopper) ‏محلول في الوريد له سدادة‎ (vial) ‏أو زجاجة‎ ٠ ‏الأدمة. ‏يمكن تحضير المستحلبات المناسبة باستخدام مستحلبات دهن متوافرة تجارياء ‎Jie‏ ‎Lipofundin™ dInfonutrol™ «Liposyn™ «Intralipid™‏ وأ ‎.Lipiphysan™‏ يمكن للمقوم النشط إما أن يكون ذائبا في تركيبة مستحلب مسبقة الخلط أو بطريقة بديلة فقد يذاب في زيت ‎Ye‏ (مثل زيت فول الصويا ‎(soybean oil)‏ زيت العصفر ‎(safflower oil)‏ زيت بذرة القطن ‎oil)‏ 001:005668)؛ زيت السمسم ‎«(sesame oil)‏ زيت الذرة ‎(corn oil)‏ أو زيت اللوز ‎(almond‏ ‎(oil)‏ ويتكون مستحلب عند الخلط مع دهن فوسفوري ‎(phospholipid)‏ (مثل دهون فوسفورية من البيض ‎phospholipids)‏ 88)؛ دهون فوسفورية من فول صويا ‎(soybean phospholipids)‏ أو ‎lecithin‏ فول صويا) وماء. لابد من إدراك إمكانية إضافة ‎Yo‏ مقومات أخرى؛ مثلا ‎glycerol‏ أو ‎glucose‏ لضبط تواتر المستحلب. تحتوي المستحلبات المناسبة ما يصل إلى ‎77١0‏ زيت؛ مثلا؛ بين © و7780. يمكن أن يشمل مستحلب الدهن
Ye ‏ميكرومتر؛ ولها أس هيدروجيني في‎ 4,05 ١١ ‏ميكرومتر؛ تحديدا‎ ١و‎ ١١ ‏قطيرات دهن بين‎
A Jeo ‏نطاق‎ ‏يمكن أن تكون تركيبات المستحلب هي تلك المحضرة بخلط الجسم المضاد المعتمد على‎ ‏أو مكونات من ذلك (زيت فول صوياء دهون فوسفورية من البيض؛‎ Intralipid™ ‏مع‎ pH ‎glycerol ٠‏ وماء). تتضمن التركيبات للاستتشاق أو النفخ محاليل ومعلقات في مذيبات مائية أو عضوية مقبولة دوائياء أو خلطات منهاء ومساحيق. تحتوي التركيبات السائلة أو الصلبة على مواد مسوغة مناسبة مقبولة دوائيا كما هو محدد أعلاه. في بعض التجسيدات؛ تعطى التركيبات عن طريق الفم أو الأنف والجهاز التنفسي للتأثير الموضعي أو العمومي. إن التركيبات في مذيبات ‎٠‏ معقمة بصورة مفضلة المقبولة دوائيا يمكن ترذيذها باستخدام غازات. يمكن استنشاق المحاليل المرذذة مباشرة من أداة ترذيذ أو يمكن أن تتصل أداة الترذيذ مع قناع للوجنة؛ خيمة أو أداة تنفس متقطعة موجبة الضغط. يمكن إعطاء تركيبات محلول؛ معلق أو مسحوق؛ يفضل بالفم ‏أو بالأنف؛ من أدوات توصل المستحضر بطريقة ملائمة. (ب) أجسام مضادة معتمدة على ‎pH‏ ‎vo‏ يمكن أن تشمل الأجسام المضادة المفيدة في الاختراع الحالي أجسام مضادة أحادية النسخ؛ أجسام مضادة عديدة التسخ» أجزاء جسم مضاد (مثلاء ‎Fe Fv «F(ab’)2 Fab’ Fab‏ &(« أجسام مضادة ‎dima‏ أجسام مضادة ثنائية الخصوصية؛ أجسام مضادة اتحاد مغاير؛ وحيدة السلسلة ‎((ScFv)‏ طفرات من ذلك؛ ‎proteins‏ اندماج تشمل قسم جسم مضاد ‎Oia)‏ جسم مضاد مجال سيطرة)؛ أجسام مضادة آدمية؛ أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية؛ وأي هيئة ‎٠‏ معدلة لجزيء ‎globulin‏ مناعي يشمل مكان إدراك مولد مضاد له الخصوصية المطلوبة؛ متضمنا أشكال متباينة ‎glycosylation‏ من ‎١‏ لأجسام المضادة؛ أشكال ‎Alia‏ ترتيب ‎amino‏ ‏0 من الأجسام المضادة؛ وأجسام مضادة معدلة تساهميا. قد تكون الأجسام المضادة فأرية؛ من حيوان قارض؛ آدمية؛ أو من أي مصدر آخر (متضمنة أجسام مضادة هجينة أو مكتسبة السمة الآدمية). ‎Yo‏ في بعض التجسيدات؛ قد يكون الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ هو جسم مضاد أحادي النسخ. يمكن أيضا أن يكون الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ هو جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية. في تجسيدات ‎(AT‏ قد يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد آدمي.
vo ‏منطقة ثابتة خاملة‎ Jie ‏في بعض التجسيدات؛ يشمل الجسم المضاد منطقة ثابتة معدلة؛‎ ‏لها إمكانية قليلة لحث استجابة مناعية. في بعض التجسيدات؛ تعدل‎ of ‏بمعنى‎ (Lie lia ‏المنطقة الثابتة حسب الوصف في:‎
Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624; PCT Application No. PCT/GB99/01441; and/or UK Patent Application No. 9809951.8. ° 1802 ‏عبارة عن‎ Fo ‏عبارة عن 1802 آدمي أو 1804 آدمي. قد تكون‎ Fo ‏يمكن أن تكون‎ amino ‏ترقم فيها متخلفات‎ «(IgG2Aa) 83305331 ‏إلى‎ A330P331 ‏آدمي يحتوي على الطفرة‎ «(wild type) ‏بالرجوع إلى ترتيب 1802 النوع البري‎ 0
Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624. ‏تشمل الطفرات التالية‎ IgG4 ‏في بعض التجسيدات؛ يشمل الجسم المضاد منطقة ثابتة‎ ٠ ‏إلى‎ 2233172341235 :(Armour et al., (2003) Molecular Immunology 40 585-593) el ‏(0442ع1)؛ والتي يتم الترقيم فيها بالرجوع إلى 1804 النوع‎ 5 12233172341235 ‏عبارة عن 1904 آدمي مع‎ Fo ‏في تجسيد آخر أيضاء تكون‎ ‏عبارة‎ Fo ‏في تجسيد آخر؛ تكون‎ -(IgG4Ab) 6236 ‏إلى 7233172348235 مع حذف‎ ‏تحتوي على طفرة مفصلية مثبتة‎ (IgG4AC ‏آدمي (1804 1804 أو‎ 1264 Fe ‏عن أي‎ ٠ :P228 ‏إلى‎ S228 (hinge stabilizing mutation) (Aalberse et al., (2002) Immunology 105, 9-19). -glycosylation ‏غير‎ Fc ‏هي‎ Fe ‏في تجسيد آخر « تكون‎ ‏بإجراء طفرةٍ لمتخلف‎ glycosylation ‏في بعض التجسيدات؛ تكون المنطقة الثابتة غير‎ ‏و/أو متخلفات جانبية تشكل جزءا من ترتيب إدراك‎ (Asn297 ‏(مثل‎ oligosaccharide ‏ارتباط‎ ٠ ‏في المنطقة الثابتة. في بعض التجسيدات؛ تكون المنطقة الثابتة غير‎ glycosylation
An ‏قد تكون المنطقة‎ enzymatically ‏متصلة]1‎ glycosylation ‏من أجل‎ glycosylation ‏أو بإظهار في خلية‎ enzymatically ‏متصلة-]1‎ glycosylation ‏من أجل‎ glycosylation ‏غير‎ ‎.glycosylation ‏عائلة ناقصة‎ ‏إن الطريقة لتحديد انجذاب ارتباط الأجسام المضادة لمولد مضاد هي قياس انجذاب ارتباط‎ Yo ‏أحادية الوظيفة؛‎ Fab ‏أحادية الوظيفة من الجسم المضاد. للحصول على أجزاء‎ Fab ‏أجزاء‎
اط يمكن فصل الجسم المضاد (مثلاء ‎(IgG‏ مع ‎papain‏ أو إظهاره تخليقيا. يمكن تحديد انجذاب ‎Fab ea‏ من الجسم المضاد بواسطة رنين ‎plasmon‏ سطح: ‎(Biacore3000™ surface plasmon resonance (SPR) system, Biacore, INC, Piscataway‏ ‎NJ)‏ ‏© مجهز مع رقاقات مجس ‎streptavidin‏ مسبقة التسكين ‎(SA)‏ باستخدام مثبت أس هيدروجيني ‎(pH)‏ متدفق ‎١.0٠ HEPES) HBS-EP‏ جزيئي ‎aba‏ أس هيدروجيني .ا ‎NaCl‏ ٠ر0‏ ‎EDTA‏ ؟ مللي جزيئي جرامي؛ منشط سطح ‎P20‏ 70.000 حجم/ حجم). يمكن تخفيف مولد مضاد ‎Biotinylated‏ في مثبت ‎HBS-EP pH‏ إلى تركيز أقل من ‎١,#‏ ميكروجرام/ ملليلتر ويحقن عبر قنوات الرقاقة المنفردة باستخدام أزمنة تلامس متبايئة؛ لتحقيق نطاقين لكثافة مولد ‎٠‏ المضاد؛ إما ‎700-8٠‏ وحدة استجابة ‎(RU)‏ لدراسات حركية تفصيلية أو ‎RU ٠٠٠١-8٠60‏ لاختبارات الحجب. أظهرت دراسات ‎sale)‏ التوليد أن ‎YO NaOH‏ مللي ‎Aa‏ جرامي في ‎ethanol ٠8‏ حجم/ حجم يزيل بدرجة مؤثرة ‎Fab‏ المرتبط مع استبقاء نشاط ‎alge‏ مضاد على الرقاقة لأكثر من ‎٠٠١‏ مرة حقن. نموذجيا؛ تحقن تخفيفات متسلسلة (تركيزات في نطاق ‎١,١‏ - ‎٠‏ مرات ‎Kp Jie‏ المقدرة) من عينات ‎Fab‏ نقية لمدة دقيقة واحدة عند ‎٠٠١‏ ميكرولتر/ الدقيقة ‎VO‏ ويسمح بأزمئة تفكك تصل إلى ساعتين. تتحدد تركيزات ‎Fab proteins‏ بواسطة ‎ELISA‏ و/أو انتقال كهربي ‎SDS-PAGE‏ باستخدام ‎Fab‏ معلوم التركيز (حسب التحديد بتحليل ‎(amino acid‏ كمعيار قياسي. تنتج معدلات التلازم ‎(kon)‏ ومعدلات التفكك ‎(om)‏ الحركية في نفس الوقت بمطابقة البيانات بصورة شاملة مع نموذج ارتباط ‎:1:١ Langmuir‏ ‎(Karlsson, R.
Roos, 11. Fagerstam, L.
Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6.‏ ‎Y.‏ )99-110 باستخدام برنامج تقييم ‎BIA‏ تحسب قيم ثابت تفكك اتزان ‎(Kp)‏ مثل ‎Kon/kotr‏ إن هذا البروتوكول مناسب للاستخدام في تحديد انجذاب ارتباط الجسم المضاد مع أي مولد مضاد؛ متضمنا أصناف آدمية أو ثديية أخرى ‎Jie)‏ فأري» قارض» حيوان رئيس). يقاس عامة انجذاب ارتباط الجسم المضاد عند 7©5"مئوية؛ لكن يمكن أيضا قياسه عند ١؟"مئوية.‏ ‎Yo‏ يمكن تحضير الأجسام المضادة بأي طريقة معروفة في الفن. إن طريقة وبرنامج تحصين الحيوان العائل متطابقة بصفة عامة مع تقنيات راسخة وتقليدية لإثارة وإنتاج جسم مضاد؛ حسب الوصف إضافيا هنا. هناك تقنيات عامة لإنتاج أجسام مضادة آدمية وفأرية معروفة في
رظن الفن و/أو موصوفة هنا. ‎Jal‏ أجسام مضادة معتمدة على ‎pH‏ ضد ‎(PCSK9‏ إن طريقة مفضلة حديثة لتحضير الأجسام المضادة تشمل تحصين حيوانات (/- 005129 ناقصة 69 كما هو موصوف هنا. من المتوقع أن أي كائن ثديي متضمنا الآدميين أو خلايا منه تنتج جسم مضاد يمكن ‎٠‏ معالجته ليكون هو الأساس لإنتاج خطوط خلية ورم هجين كائن ثديي؛ متضمنا آدمي. نموذجياء؛ يلقح الحيوان العائل في البريتون» في العضل؛ بالفم؛ تحت الجلد؛ في باطن القدم؛ و/أو في أدمة الجلد مع كمية من مولد للمناعة؛ متضمنا حسب الوصف هنا. يمكن تحضير أورام هجينة من خلايا ليمفاوية وخلايا ورم مناعي سرمدية البقاء باستخدام تقنية تهجين خلية جسدية عامة من: ‎Kohler, 3. and Milstein, C., 1975, Nature 256:495-497 or as modified by Buck, D.
Vo‏ ‎W., etal, 1982.‏ إن خطوط ورم نخاعي متوافرة»؛ متضمنة بدون تحديد ‎X63-Ag8.653‏ وتلك من ‎«Salk Institute, Cell Distribution Center, San Diego, Calif., USA‏ يمكن استخدامها في التهجين. بصفة عامة؛ تشمل التقنية اندماج ‎LOA‏ ورم نخاعي وخلايا شبيهة ليمفاوية باستخدام ‎fusogen ٠6‏ مثل ‎«polyethylene glycol‏ أو بوسيلة كهربية معروفة جيدا للمهرة في ‎Od‏ بعد الاندماج؛ تتفصل الخلايا عن وسط الاندماج وتنمو في وسط نمو انتقائي؛ مثل وسط ‎chypoxanthine-aminopterin-thymidine (HAT)‏ لإزالة ‎Lod‏ الأم غير المتهجنة. يمكن استخدام أي من الأوساط الموصوفة هناء مدعمة مع أو بدون مصل؛ لزراعة أورام هجينة تفرز أجسام مضادة أحادية النسخ. كبديل ‎AT‏ لتقنية اندماج الخلية؛ يمكن استخدام ‎B WDA‏ سرمدية ‎٠‏ البقاء ‎EBV‏ لإنتاج أجسام مضادة أحادية النسخ 705169 من الاختراع الحالي. تزداد في الحجم الأورام الهجينة وتنسخ ‎(Lie jd‏ عند الطلب؛ وتختبر المواد الطافية من أجل النشاط المضاد لمولد المناعة بإجراءات اختبار مناعي تقليدي ‎Ola)‏ اختبار مناعي إشعاعي؛ اختبار مناعي ‎enzyme‏ أو اختبار مناعي استشعاعي). تشتمل الأورام الهجينة المستخدمة كمصدر أجسام مضادة كل المشتقات؛ خلايا نسل الأورام ‎Yo‏ الهجينة الأم التي تنتج أجسام مضادة أحادية النسخ تخص 08129 أو قسم من ذلك. قد تنمو الأورام الهجينة المنتجة لتلك الأجسام المضادة في المعمل أو في الجسم باستخدام إجراءات معروفة. يمكن عزل الأجسام المضادة أحادية النسخ من أوساط المزرعة أو موائع
YA
‏انتقال‎ cammonium sulfate ‏مناعي تقليدية مثل ترسيب‎ globulin ‏الجسد؛ بإجراءات تنقية‎ ‏كهربي لهلام؛ ديلزة؛ تحليل كروماتوجرافي؛ وترشيح فائق؛ عند الطلب. إن النتشاط غير‎ ‏مثلاء بتمرير المستحضر فوق مواد امتزاز مصنعة من‎ call] ‏المطلوب؛ عند وجوده؛ يمكن‎ ‏مولد المناعة المرتبط مع الطور الصلب وفصل أو إطلاق الأجسام المضادة المطلوبة عن مولد‎ ‏المناعة. إن تحصين حيوان عائل مع 208129 آدميء أو جزء يحتوي على ترتيب‎ ٠ ie ‏مولد للمناعة في النوع المراد تحصينه؛‎ protein ‏المستهدف المتحد مع‎ amino acid trypsin ‏درقي بقري؛ أو مقبط‎ globulin ‏مصل؛‎ albumin « ‏تقب رئيسي‎ limpet hemocyanin maleimidobenzoyl | ‏فول صويا باستخدام عامل ثنائي الوظيفة أو اشتقاق؛ مثلاء‎
N-hydroxysuccinimide «(cysteine ‏(اتحاد من خلال متخلفات‎ sulfosuccinimide ester 0 «SOCI; «succinic anhydride «glutaraldehyde «(lysine ‏(من خلال متخلفات‎ ٠١ ‏مختلفة؛ يمكن أن ينتج مجموعات من أجسام‎ alkyl ‏مجموعات‎ RR ‏حيث‎ R'N=C=NR ‏مضادة (مثلاء أجسام مضادة أحادية النسخ).‎ ‏أو اختيار الأجسام المضادة؛ يمكن رفع مستوى الأجسام المضادة للارتباط‎ alg ayaa ‏على سبيل المثال؛ كما هو مبين في المثال 1 هنا.‎ pH ‏المعتمد على‎ ‏(أحادي النسخ أو عديد النسخ) الهام‎ pH ‏عند الطلب؛ فإن الجسم المضاد المعتمد على‎ Yo ‏في ناقل للإظهار أو للانتشار. يمكن‎ polynucleotide ‏نسخ ترتيب‎ Male ‏يمكن ترتيبه ويمكن‎ ‏استبقاء الترتيب المشفر للجسم المضاد الهام في ناقل في خلية عائلة ويمكن عندئذ للخلية‎ ‏العائلة أن تزداد في الحجم وتتجمد من أجل الاستخدام مستقبلا. يمكن إنتاج أجسام مضادة‎ ‏بوسيلة‎ B ‏أحادية النسخ تخليقية في مزرعة خلية من خلال نسخ جينات جسم مضاد من خلايا‎ ‏على سبيل المثال:‎ hail ‏معروفة في الفن.‎ ٠
Tiller et al. (2008) J. Immunol. Methods 329, 112; US Patent No. 7,314,622. ‏للمعالجة الجينية من أجل "إكساب السمة‎ polynucleotide ‏كبديل» يمكن استخدام ترتيب‎ ‏للجسم المضاد أو لتحسين الانجذاب؛ أو سمات أخرى للجسم المضاد.‎ (humanize) ‏الآدمية‎ ‏يمكن تصميم المنطقة الثابتة لكي تشبه بدرجة قريبة أكثر مناطق ثابتة‎ JU ‏على سبيل‎ ‏آدمية لتفادي حدوث استجابة مناعية إذا تم استخدام الجسم المضاد في تجارب إكلينيكية‎ Yo ‏وللمعالجات في الآدميين. قد تتطلب معالجة جينية لترتيب الجسم المضاد للحصول على‎ ‏انجذاب أكبر مع مولد المضاد وفعالية أكبر. سوف يتضح للماهر في الفن إمكانية حدوث واحد‎
Ya ‏ولا يزال يحتفظ‎ pH ‏للجسم المضاد المعتمد على‎ polynucleotide ‏أو أكثر من التغييرات لأجل‎ ‏بقدرته على الارتباط مع المولد المضاد.‎ ‏تحديد‎ )١( ‏هناك ؛ خطوات عامة لإكساب السمة الآدمية لجسم مضاد أحادي النسخ. إنها:‎ ‏المتوقع لمجالات السيطرة المتغيرة الخفيفة والثقيلة للجسم‎ amino ‏و8610‎ nucleotide ‏ترتيب‎ ‏المضاد البادئ؛ (7) تصميم جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية؛ أي؛ تقرير منطقة إطار جسم‎ © ‏مضاد التي سيتم استخدامها أثناء عملية إكساب السمة الآدمية؛ )1( طرق/ تقنيات إكساب‎ ‏السمة الآدمية الفعلية؛ و(؛) استقبال حامل الجين من العائل وإاظهار جسم مضاد مكتسب‎
EAYTOTY ‏براءات الاختراع الأمريكية أرقام‎ (JUD ‏السمة الآدمية. انظرء على سبيل‎
OTATVAY ‏مداااضادم الكتتتمد؛ 0ا17؛ اناء«١اعمدب لكااكحخد‎ 112١١ ‏حم مل/مف‎ ٠ (humanized) ‏لقد تم وصف عدد من جزيئات الجسم المضاد 'مكتسب السمة الأدمية‎ ‏مناعي غير آدمي؛ متضمنة أجسام مضادة‎ globulin ‏تشمل مكان ربط مولد مضاد مشتق من‎ ‏هجينة بها مناطق 17 من حيوان قارض أو من حيوان قارض معدلة و0015 المصاحبة لها‎ ‏المندمجة مع مجالات سيطرة ثابتة آدمية. انظرء على سبيل المثال؛‎
Winter et al., 1991, Nature 349:293-299; Lobuglio et al., 1989, Proc. Nat. Acad. Sci. Yo
USA 86:4220-4224; Shaw et al., 1987, J Immunol. 138:4534-4538; and Brown et al., 1987, Cancer Res. 47:3577-3583. ‏قبل‎ (FR) ‏حيوان قارض مطعمة في منطقة إطار تدعيمية آدمية‎ CDRs ‏تصف مراجع أخرى‎ ‏الاندماج مع منطقة ثابتة جسم مضاد آأدمي ملائم. انظرء على سبيل المثال؛‎
Riechmann et al.,1988, Nature 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science Y. 239:1534-1536; and Jones et ‏لة‎ 1986, Nature 321:522-525. ‏حيوان قارض مدعمة بمناطق إطار حيوان قارض مصممة تخليقيا.‎ CDRs ‏يصف مرجع آخر‎ ‏تصمم هذه‎ European Patent Publication No. 0519596 ‏انظر؛ على سبيل المثال»‎ ‏لتقليل إلى أدنى حد استجابة مناعية غير‎ (humanized) ‏الجزيئات "المكتسبة السمة الآدمية‎ ‏مطلوبة تجاه جزيئات جسم مضاد من حيوان قارض المضادة لآدمي وذلك يحد من الفترة‎ Yo ‏الزمنية والفعالية للاستخدامات العلاجية لهذه الأجزاء في الآدميين المتعاطيين. على سبيل‎ ge ‏لا تثير‎ Slik) Lelie ‏تصميم المنطقة الثابتة للجسم المضاد بحيث تكون خاملة‎ (Say ‏المثال»‎ ‎Mie ‏تحلل مكمل). انظر»‎
PCT Publ. No. 17099/58572: UK Patent Application No. 98099518. ‏هناك طرق أخرى لإكساب السمة الآدمية للأجسام المضادة يمكن أيضا استعمالها معلنة‎ ‏بواسطة:‎ ©
Daugherty et al., 1991, Nucl. Acids Res. 19:2471-2476 and in U.S. Patent Nos. 6,180,377; 6,054,297; 5,997,867; 5,866,692; 6,210,671; and 6,350,861; and in PCT
Publ. No. WO 01/27160. ‏بديل آخر أيضاء يمكن الحصول على أجسام مضادة آدمية كليا باستخدام فئران متوافرة‎ ‏مناعي آدمية خاصة. إن الحيوانات الطفرية‎ globulin proteins ‏لإظهار‎ dallas ‏تجاريا‎ ٠ ‏المعالجة لإنتاج استجابة مناعية مطلوبة أكثر أو قوية أكثر يمكن أيضا استخدامها لتوليد‎ ‏أجسام مضادة مكتسبة السمة الآدمية أو أجسام مضادة آدمية. إن الأمثلة لتلك التقنية هي:‎
Xenomouse™ from Abgenix, Inc. (Fremont, CA), HuMAb-Mouse® and TC
Mouse™ from Medarex, Inc. (Princeton, NJ), and the VelocImmune® mouse from
Regeneron Pharmaceuticals, Inc. (Tarrytown, NY). Vo ‏في طريقة بديلة؛ يمكن تحضير الأجسام المضادة تخليقيا وإظهارها بأي طريقة معروفة في‎ ‏يمكن تحضير الأجسام المضادة تخليقيا بتقنية إظهار بلعم. انظر؛ على‎ «AT ‏الفن. في بديل‎
COVITYEY c00AYIY 5628777 ‏براءات الاختراع الأمريكية أرقام‎ (JUAN ‏سبيل‎ ‏بطريقة بديلة؛‎ Winter et ‏.له‎ 1994, Annu. Rev. Immunol. 12:433-455 5 ‏و17158156؛‎ ‏_يمكن استخدام تقنية إظهار بلعم‎ ٠ (McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-553) ‏لإنتاج أجسام مضادة آدمية وأجزاء جسم مضاد آدمية في المعمل؛ من ذخائر جين مجال‎ ‏مناعي من معطيين غير محصنين. طبقا لهذه التقنية؛ تنسخ‎ globulin (V) ‏سيطرة متغير‎ ‏غلاف إما كبير أو ثانوي‎ protein ‏جسم مضاد في إطار في جين‎ V ‏جينات مجال سيطرة‎ ‏لملتهم جراثيم خيطي؛ مثل 1413 أو 50؛ وتظهر كأجزاء جسم مضاد وظيفية على سطح جسيم‎ Yo ‏فردي الشريط من جينوم البلعم؛ فإن‎ DNA ‏البلعم. لأن الجسيم الخيطي يحتوي على نسخة‎ ‏الانتقاءات المعتمدة على الخواص الوظيفية للجسم المضاد تؤدي أيضا إلى انتقاء الجين‎
١ ‏المشفر للجسم المضاد المظهر لتلك الخواص. لذلك»؛ فإن البلعم يحاكي بعض خواص الخلية‎ ‏يمكن إظهار البلعم في تشكيلة من الهيئات؛ لمراجعة ذلك انظر؛ مثلا؛‎ .8
Johnson, Kevin 5. and Chiswell, David J., 1993, Current Opinion in Structural
Biology 3:564-571. ‏يمكن استخدام مصادر عديدة لقطع جين-7؟ لإظهار البلعم. عزل‎ © ‎Clackson et al., 1991, Nature 352:624-628‏ ترتيب واسع النطاق من أجسام مضادة ضد ‎Oxazolone‏ من مكتبة صغيرة عشوائية اتحادية لجينات-7 مشتقة من طحالات ‎hall‏ المحصنة. يمكن تشييد ذخيرة جينات 6 من معطيين آدميين غير محصنين ويمكن ‎Jie‏ الأجسام المضادة لترتيب واسع النطاق من مولدات مضاد ‎٠‏ (متضمنة مولدات مضاد ذاتية) بصورة أساسية باتباع التقنيات الموصوفة بواسطة ‎Mark et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-597, or Griffith et al., 1993, EMBO J.‏ .12:725-734 في استجابة مناعية طبيعية؛ تسبب جينات جسم مضاد تراكم الطفرات عند معدل كبير (طفرة مفرطة جسدية). سوف توفر بعض التغييرات الداخلة انجذابا أكبرء ويفضل ‎٠‏ نسخ خلايا 3 التي تظهر ‎globulin‏ مناعي سطح عالي الانجذاب وتباينها أثناء تحدي تالي لمولد مضاد. يمكن محاكاة هذه العملية الطبيعية باستعمال التقنية المسماة "تدعيم سلسلة ‎(Marks et al., 1992, Bio/Technol. 10:779-783) ."(chain shuffling)‏ في هذه الطريقة؛ يمكن تحسين انجذاب أجسام مضادة آدمية "أولية ‎"(primary)‏ ناتجة بواسطة إظهار بلعم بواسطة استبدال على التوالي لجينات المنطقة 7 للسلسلة الثقيلة والخفيفة مع ذخائر أشكال ‎Yo‏ متباينة طبيعية الوجود (ذخائر) لجينات مجال سيطرة ‎V‏ ناتجة من معطيين غير محصنين. تسمح هذه التقنية بإنتاج أجسام مضادة وأجزاء جسم مضاد لها انجذابات في نطاق بيكوجزيئي جرامي- نانوجزيئي جرامي. وصفت سياسة لتحضير ذخائر جسم مضاد بلعم كبيرة جدا (تسمى أيضا ‎af‏ كل المكتبات ‎mother-of-all libraries)‏ عط)') بواسطة ,1993 ‎Waterhouse et al.,‏ ‎Nucl. Acids Res. 21:2265-2266.‏ يمكن ‎Load‏ استخدام تدعيم جين لاشتقاق أجسام ‎saline‏ ‎Yo‏ آدمية من أجسام مضادة حيوان قارض» حيث يكون الجسم المضاد الآدمي له انجذابات وخصوصيات مشابهة للجسم المضاد البادئ من حيوان قارض. طبقا لهذه الطريقة؛ المشار إليها أيضا 'تحكم ‎(epitope imprinting) epitope‏ يستبدل جين مجال سيطرة ‎V‏ سلسلة ثقيلة
أو خفيفة لأجسام مضادة من حيوان قارض ناتجة بتقنية إظهار البلعم مع ذخيرة جينات مجال سيطرة ‎V‏ آدمية؛ لتوليد هجائن حيوان قارض- آدمي. إن الانتقاء على مولد المضاد يؤدي إلى عزل مناطق متغيرة آدمية قادرة على استعادة مكان ربط- مولد مضاد وظيفي؛ أي؛ أن ‎epitope‏ يحكم (يحدد سمة) اختيار القرين ‎(partner)‏ عند تكرار العملية لاستبدال مجال سيطرة 0 7 القارض المتبقي؛ ينتج جسم مضاد آدمي ‎-(PCT Publication No.
WO 93/06213 ail)‏ على العكس من إكساب السمة الآدمية التقليدي للأجسام المضادة من حيوان قارض بتطعيم ‎«CDR‏ فإن هذه التقنية توفر أجسام مضادة آدمية ‎LIK‏ ليس بها متخلفات إطار أو ‎CDR‏ من مصدر قارض. من الواضح أنه على الرغم من أن الشرح أعلاه يتعلق بالأجسام المضادة المكتسبة السمة ‎٠‏ الآدمية؛ فإن المبادئ العامة المشروحة يمكن تطبيقها لتصنيع أجسام مضادة للاستخدام؛ ‎lie‏ ‏في الكلاب؛ القطط» الحيوانات الرئيسة؛ الخيول والأبقار. من الواضح إضافيا أن واحد أو أكثر من جوانب إكساب السمة الآدمية لجسم مضاد الموصوف هنا قد تتحد مع؛ ‎lie‏ تطعيم ‎«CDR‏ طفرة إطار وطفرة ‎.CDR‏ ‏يمكن تحضير الأجسام المضادة تخليقيا أولا بعزل الأجسام المضادة والخلايا المنتجة الجسم ‎١٠‏ المضاد من حيوانات عائلة؛ الحصول على ترتيب الجين؛ واستخدام ترتيب الجين لإظهار الجسم المضاد تخليقيا في خلايا عائلة ‎Oli)‏ خلايا ‎(CHO‏ إن طريقة أخرى يمكن استعمالها هي إظهار ترتيب جسم مضاد في نباتات ‎Oe)‏ تبغ) أو لبن طفري. إن طرق إظهار الأجسام المضادة تخليقيا في نباتات أو لبن تم الإعلان عنها. انظر؛ مثلا؛ ‎Peeters, 2001, et al.
Vaccine 19:2756; Lonberg, N. and 10. Huszar, 1995, Int.
Rev.‏ ‎Immunol 13:65; and Pollock, et al., 1999, J Immunol Methods 231:147. Ye.‏ إن طرق تحضير مشتقات الأجسام المضادة؛ مثلاء مكتسبة السمة الآدمية؛ وحيدة السلسلة؛ إلخ معروفة في الفن. أيضا استعمال الاختبارات المناعية وتقنيات تصنيف قياس خلوي انسيابي مثل تصنيف خلية ينشطه استشعاع ‎(FACS)‏ من أجل عزل الأجسام المضادة تخص مولد المضاد ‎Ye‏ المطلوب. يمكن أن ترتبط الأجسام المضادة مع مواد حاملة كثيرة مختلفة. قد تكون المواد الحاملة نشطة و/أو خاملة. تتضمن أمثلة مواد حاملة معروفة جيدا ‎«polystyrene «polypropylene‏
ا( ‎«amylases «nylon «dextran «polyethylene‏ نجاج؛ ‎i muha celluloses‏ ومعدلة؛ ‎magnetite 5 agaroses «polyacrylamides‏ قد تكون طبيعة المادة الحاملة ‎La}‏ قابلة أو غير قابلة للذوبان لأغراض الاختراع. سيعلم المهرة في الفن مواد حاملة أخرى مناسبة ‎LLY‏ ‏الأجسام المضادة؛ أو سيصبحون قادرين على ‎asl‏ ذلك؛ باستخدام تجريب روتيني. في بعض © التجسيدات؛ تشمل المادة الحاملة جزءا يستهدف عضلات القلب. إن 0108 المشفر الأجسام المضادة أحادية النسخ يتم ‎adie‏ وترتيبه بسهولة باستخدام إجراءات تقليدية ‎Sia)‏ باستخدام مجسات ‎oligonucleotide‏ قادرة على الارتباط بصفة خاصة مع جينات تشفر السلاسل الثقيلة والخفيفة للأجسام المضادة أحادية النسخ). تخدم خلايا الورم الهجين كمصدر مفضل لذلك ‎DNA‏ بمجرد العزل؛ يمكن إدخال ‎DNA‏ في نواقل إظهار (مثل ‎٠‏ نواقل الإظهار المعلنة في منشور ‎PCT‏ رقم 87/04462 ‎(WO‏ ويتم عندئذ استقبال ‎dela‏ الجين من العائل في خلايا عائلة مثل خلايا ‎COS WA 2. coli‏ طيرية ‎«(simian COS cells)‏ خلايا مبيض هامستر صيني ‎«(CHO) (Chinese hamster ovary)‏ أو خلايا ورم نخاعي لا تنتج بطريقة أخرى ‎globulin protein‏ مناعي؛ للحصول على تخليق أجسام مضادة أحادية ‎Fail‏ في الخلايا العائلة المخلقة. انظر؛ مثلا؛ منشور ‎PCT‏ رقم ‎.WO 87/04462 ٠‏ قد يكون ‎DNA‏ معدلا أيضاء؛ مثلا؛ باستبدال ترتيب التشفير للمناطق الثابتة السلسلة الثقيلة والخفيفة الآدمية بدلا من الترتيبات الفأرية المتماثلة؛ ‎Morrison et al., Proc.
Nat.
Acad.
Sci. 81:6851 (1984),‏ أو بالارتباط تساهميا مع ترتيب تشفير ‎globulin‏ مناعي لكل أو ‎da‏ من ترتيب التشفير لأجل ‎polypeptide‏ غير ‎globulin‏ مناعي. بتلك الطريقة؛ تحضر أجسام مضادة ‎ings’‏ ‎٠‏ (تتعصتطه) أو "هجينة ‎(hybrid)‏ لها خصوصية ارتباط جسم مضاد أحادي النسخ هنا. يمكن تحديد أو تمييز أجسام مضادة معتمدة على ‎polypeptides s pH‏ بطرق معروفة في الفن؛ بحيث يمكن ‎(Jali‏ تحسين؛ أو تعادل النشاط الحيوي. في بعض التجسيدات؛ يتحدد الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ أو ‎polypeptide‏ بإجراء حضانة لعامل مرشح مع ‎alse‏ مضاد ومراقبة الارتباط و/أو التقليل أو التعادل الموجود للنشاط الحيوي. يمكن إجراء اختبار الارتباط ‎Yo‏ مع ‎alga polypeptides)‏ مضاد نقي؛ أو مع خلايا تظهر طبيعياء أو مستقبلا فيها ‎DNA‏ ‏خارجي لكي تظهر؛ (00170©0006)0. في بعض التجسيدات؛ يكون اختبار الارتباط هو اختبار ارتباط تنافسي؛ حيث يتم تقييم قدرة جسم مضاد مرشح على التنافس مع مضاد معروف للربط.
يمكن إجراء الاختبار في هيئات عديدة؛ تتضمن هيئة ‎ELISA‏ في تجسيدات أخرى؛ يتحدد جسم مضاد معتمد على ‎pH‏ بإجراء حضانة لعامل مرشح مع مولد مضاد ومراقبة الارتباط ‎Janis‏ ضروري لإظهار ‎LDLR‏ و/أو نقاء ‎cholesterol‏ الدم. عقب التحديد الأولي؛ يمكن إضافيا تأكيد نشاط الجسم المضاد المرشح المعتمد على 11م © باختبارات حيوية معروفة لاختبار الأنشطة الحيوية المستهدفة. بطريقة ‎Aly‏ يمكن استخدام ْ اختبارات حيوية لحجب المركبات المرشحة مباشرة. توصف بالتفصيل في الأمثلة بعض الطرق لتحديد وتمييز أجسام مضادة؛ ‎.aptamers 0 «peptides‏ يمكن تمييز الارتباط مع الأجسام المضادة المعتمدة على ‎pH‏ بطرق معروفة جيدا في الفن. ‎Sia‏ تتضمن طريقة تحديد ‎epitope‏ الذي يرتبط معه؛ أو 'تخطيط ‎epitope‏ ‎(epitope mapping) ٠‏ هناك طرق كثيرة معروفة في الفن لتخطيط وتمييز موضع ‎epitopes‏ ‏على ‎proteins‏ متضمنة حل بناء بلورة لمعقد جسم مضاد- ‎alse‏ مضاد؛ اختبارات منافسة؛ اختبارات إظهار جزء جين؛ واختبارات معتمدة على ‎peptide‏ مصنع؛ ‎Cua‏ الوصف؛ ‎Sle‏ ‏الفصل ‎١١‏ من: ‎Harlow and Lane, Using Antibodies, a Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor‏ ‎Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1999). Yo‏ في مثال إضافي؛ يمكن استخدام تخطيط ‎epitope‏ لتحديد الترتيب الذي يرتبط معه جسم مضاد معتمد على ‎pH‏ إن تخطيط ‎epitope‏ متوافر تجاريا من مصادر عديدة؛ ‎Sle‏ ‎Pepscan Systems (Edelhertweg 15, 8219 PH Lelystad, The Netherlands).‏ إن ‎epitope‏ قد يكون ‎epitope‏ خطي؛ أي؛ يحتوي امتداد واحد من ‎epitope ol camino acids‏ ‎٠‏ بنائي يتكون بتداخل ثلاثي الأبعاد لأجل ‎amino acids‏ التي قد لا تكون موجودة بالضرورة في امتداد واحد. إن ‎peptides‏ مختلفة الأطوال (مثلاء على الأقل 1-4 ‎amino acid‏ في الطول) ‎(Say‏ عزلها أو تصنيعها ‎Oe)‏ تخليقيا) واستخدامها لاختبارات ارتباط مع الجسم المضاد. في مثال آخر؛ يمكن تحديد ‎epitope‏ الذي يرتبط معه جسم مضاد معتمد على 11م[ في حجب نظامي باستخدام وم متراكبة مشتقة من ترتيب مولد المضاد وتحديد الارتباط بواسطة ‎Yo‏ الجسم المضاد. طبقا لاختبارات إظهار ‎opal ea‏ يتجزاً إطار القراءة المفتوح المشفر مولد المضاد إما عشوائيا أو بواسطة بنيات جينية خاصة ويتحدد نشاط الأجزاء الظاهرة لمولد المضاد مع الجسم المضاد المراد اختباره. قد تنتج أجزاء الجين؛ ‎Mie‏ بواسطة ‎PCR‏ وعندئذ
م تنسخ وتترجم إلى ‎protein‏ في المعمل» في وجود ‎amino acids‏ مشعة نشطة. يتحدد عندئذ ارتباط الجسم المضاد مع الأجزاء المعلمة بمادة نشطة إشعاعيا بالترسيب المناعي وانتقال كهربي لهلام. يمكن أيضا تحديد ‎epitopes‏ خاصة باستخدام مكتبات كبيرة من ترتيبات ‎peptide‏ عشوائية ظاهرة على سطح جسيمات بلعم (مكتبات بلعم). بطريقة بديلة؛ يمكن اختبار © مكتبة محددة لأجزاء ‎peptide‏ متراكبة للارتباط مع جسم مضاد الاختبار في اختبارات ارتباط بسيطة. في مثال إضافي؛ يمكن إجراء تكوين طفري لمجال سيطرة ربط ‎alse‏ مضاد؛ تجارب مسح مجال ‎Bhan‏ وتكوين طفري ‎alk‏ لأجل ‎alanine‏ من أجل تحديد متخلفات مطلوبة؛ ‎Als‏ و/أو ضرورية لارتباط ‎epitope‏ على سبيل المثال؛ يمكن إجراء تجارب مسح مجال سيطرة باستخدام ‎Age‏ مضاد طفري مستبدلة فيه أجزاء عديدة من ‎polypeptide‏ (ممسوحة) مع ‎٠‏ ترتيبات مولد مضاد من أنواع ‎«pal‏ أو ‎protein‏ قريب الشبه ‎das‏ لكنه مميز بالنسبة لتوليد مضاد ‎Je A)‏ عضو أخر من عاللسة ‎protein convertase‏ | لأولي) . باختبار ارّباط الجسم المضاد مع مولد المضاد الطفري؛ يمكن اختبار أهمية ارتباط ‎Age eda‏ مضاد خاص من الجسم المضاد. يمكن أيضا استخدام طريقة أخرى لتمييز جسم مضاد معتمد على ‎pH‏ تتضمن استخدام ‎١‏ اختبارات منافسة مع أجسام مضادة أخرى معروفة بارتباطها مع نفس ‎alge‏ المضاد لتحديد ما إذا كان الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ يرتبط مع نفس ‎Jie epitope‏ أجسام مضادة أخرى ‎ol‏ ‏لا. إن اختبارات المنافسة معروفة جيدا للمهرة في الفن. يمكن استخدام ناقل إظهار لمباشرة إظهار جسم مضاد معتمد على ‎pH‏ يألف الماهر في الفن إعطاء نواقل إظهار للحصول على إظهار لأجل ‎protein‏ خارجي في الجسم. انظر؛ ‎She‏ ‎٠‏ براءات الاختراع الأمريكية ‎(TEVA‏ 14174457؛ و1771497/1. يتضمن إعطاء نواقل إظهار إعطاء موضعي أو عمومي؛ متضمنا حقن؛ إعطاء ‎cally‏ إعطاء بمسدس جسيم أو بقسطرة؛ وإعطاء سطحي. في تجسيد آخرء يعطى ناقل الإظهار مباشرة إلى الجذع السيمبثاوي أو الكتلة العصبية؛ أو في شريان تاجيء أذين؛ بطين؛ أو غشاء التامور. يمكن أيضا استخدام توصيل مستهدف لتركيبات علاجية تحتوي على ناقل إظهارء أو ‎polynucleotides ٠‏ دون الجينومية. توصف تقنيات توصيل ‎DNA‏ بواسطة مستقبل في؛ ‎lie‏ ‎Findeis et al., 1993, Trends Biotechnol. 11:202; Chiou et al., 1994, Gene‏ ‎Therapeutics: Methods And Applications Of Direct Gene Transfer (J.A.
Wolff, ed.);‏
‎Wuetal, 1988, J.
Biol.
Chem. 263:621; Wu et al., 1994, J.
Biol.
Chem. 269:542;‏ ‎J.
Biol.‏ ,1991 ملق ‎Zenke et al, 1990, Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA 87:3655; Wu et‏ ‎Chem. 266:338.‏ تعطى تركيبات علاجية تحتوي على ‎polynucleotide‏ في نطاق حوالي ‎٠٠١‏ نانوجرام إلى © حوالي ‎Yoo‏ مجم من 0118 للإعطاء الموضعي في بروتوكول علاج جين. يمكن أيضا أثناء بروتوكول علاج جين استخدام نطاقات تركيز من حوالي ‎9٠٠‏ نانوجرام إلى حوالي 00 مجم؛ حوالي ‎١‏ ميكروجرام إلى حوالي ‎cane ١‏ حوالي © ميكروجرام إلى حوالي ‎9٠٠‏ ميكروجرام؛ وحوالي ‎٠‏ ميكروجرام إلى حوالي ‎٠٠١‏ ميكروجرام من ‎DNA‏ يمكن توصيل ‎polypeptide s polynucleotides‏ العلاجية باستخدام أوساط ناقلة لتوصيل جين. يمكن أن ‎٠‏ يكون الوسط الناقل لتوصيل الجين من مصدر فيروسي أو غير فيروسي؛ انظرء بصورة عامة؛ ‎Jolly, 1994, Cancer Gene Therapy 1:51; Kimura, 1994, Human Gene Therapy‏ ‎Connelly, 1995, Human Gene Therapy 1:185; and Kaplitt, 1994, Nature‏ ;5:845 ‎Genetics 6:148.‏ يمكن حث إظهار ترتيبات التشفير تلك باستخدام محثات داخلية ثديية أو مغايرة. إن إظهار ‎Vo‏ ترتيب التشفير قد يكون إما تكوينيا أو منظما. إن النواقل المعتمدة على فيروس لتوصيل ‎polynucleotide‏ مطلوب وإظهار في خلية مطلوبة معروفة جيدا في الفن. تتضمن أوساط ناقلة تمثيلية معتمدة على فيروس» لكن بدون تحديد؛ فيروسات ارتجاعية مخلقة؛ انظر؛ مثلاء ‎PCT Publ.
Nos.
WO 90/07936; WO 94/03622; WO 93/25698; WO 93/25234; WO‏ ‎WO 93/10218; WO 91/02805; U.S.
Patent Nos. 5, 219,740 and Ye‏ ;93/11230 ‎GB Patent No. 2,200,651; and EP Patent No. 0 345 242,‏ ;4,777,127 نواقل معتمدة على فيروس ‎alpha‏ إمثلا؛ نواقل فيروس ‎«Sindbis‏ فيروس غابة ‎«(ATCC VR-67; ATCC VR-1247) Semliki‏ فيروس ‎Ross River‏ ‎(ATCC VR-373; ATCC VR-1246)‏ وفيروس التهاب دماغي خيلي ‎venezuelan‏ ‎((ATCC VR-923; ATCC VR-1250; ATCC VR 1 249; ATCC VR-532) Ye‏ » ونواقل فيروس ملازم لغدة ‎(AAV)‏ انظر» مثلاء منشورات ‎PCT‏ أرقام:
ty
WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 and
WO 95/00655. ‏مرتبط مع فيروس غدي مقتول حسب الوصف في‎ DNA ‏يمكن أيضا استعمال طريقة إعطاء‎ -Curiel, Hum. Gene Ther. (1992) 3:147 ‏استعمال أوساط ناقلة غير فيروسية للتوصيل وطرق؛ تتضمن؛ بدون تحديد؛‎ Lead ‏يمكن‎ ° ‏متصل أو غير متصل مع فيروس غدي مقتول وحده (انظرء‎ polycationic ‏متكثف‎ DNA ‏متصل بمركب ترابطي (انظر؛ مثلا؛‎ DNA ¢(Curiel, 1992, Hum. Gene Ther. 3:147 Ni ‏أوساط ناقلة توصيل خلية سوية النواة؛‎ LA ¢(Wu, J, 1989, Biol. Chem. 264:16985
OM EEAY ‏براءة الاختراع الأمريكية رقم‎ Sia ‏انظر»‎ ‎PCT Publication Nos. WO 95/07994; WO 96/17072; WO 95/30763; and WO Ye 97/42338 ‏مجرد. توصف‎ DNA ‏وتعادل شحنة نووية أو اندماج مع أغشية خلية. يمكن أيضا استعمال‎ ‏وبراءة الاختراع‎ WO 90/11092 ‏رقم‎ PCT ‏مجرد تمثيلية في منشور‎ DNA ‏طرق إدخال‎ ‏الأمريكية رقم 498 . توصف أجسام دهنية يمكن أن تؤثر كأوساط ناقلة لتوصيل جين‎ : | a.
U.S. Patent No. 5,422,120; PCT Publ. Nos. WO 95/13796; WO 94/23697;, WO 91/14445; and EP 0524968. Additional approaches are described in Philip, 1994,
Mol. Cell Biol., 14:2411, and in Woffendin, 1994 Proc. Natl. Acad. Sci. 91:1581. ‏يشتمل هذا الاختراع على تركيبات؛ تتضمن تركيبات دوائية؛ تشمل أجسام مضادة موصوفة‎ ‏هنا أو مصنعة بالطرق وبالسمات المميزة الموصوفة هنا. حسب الاستخدام هناء تشمل‎ Yo ‏و/أو واحد أو أكثر من‎ pH ‏التركيبات واحد أو أكثر من أجسام مضادة معتمدة على‎ ‏تشمل ترتيبات تشفر واحد أو أكثر من الأجسام المضادة هذه. قد تشمل هذه‎ polynucleotides (PH ‏التركيبات إضافيا مواد مسوغة مناسبة؛ مثل مواد مسوغة مقبولة دوائيا متضمنة مثبتات‎ ‏المعروفة جيدا في الفن.‎ ‏(تتضمن‎ pH ‏من أجسام مضادة معتمدة على‎ CDR ‏يوفر الاختراع أيضا أقسام‎ Yo ‏أمر جيد في متناول مهارة الفن.‎ CDR ‏إن تحديد مناطق‎ (Kabat CDRs 3 Chothia CDRs ‏عبارة عن اتحاد من‎ CDRs ‏من المفهوم أنه في بعض التجسيدات» يمكن أن يكون‎
ب ‎Chothia CDR 5 Kabat CDR‏ (تسمى أيضا ‎"saa CDRs"‏ أو "00155 ممتدة"). في بعض التجسيدات تكون ‎CDRs‏ هي ‎-Kabat CDRs‏ في بعض التجسيدات؛ تكون ‎CDRs‏ هي ‎Chothia CDRs‏ بطريقة أخرى» في تجسيدات ‎SST‏ من ‎CDR‏ واحدة؛ قد تكون ‎CDRs‏ أيا من ‎«Chothia CDRs «Kabat CDRs‏ اتحاد ‎«CDRs‏ أو اتحادات من ذلك. ° يوفر الاختراع أيضا طرق لتصنيع أي من هذه الأجسام المضادة أو ‎polypeptides‏ يمكن تحضير الأجسام المضادة من هذا الاختراع بإجراءات معروفة في الفن. يمكن إنتاج ‎polypeptides‏ بتحليل بروتيني أو تحلل آخر للأجسام المضادة؛ بطريقة تخليقية (أي؛ ‎polypeptides‏ وحيدة أو اندماج) حسب الوصف أعلاه أو بتخليق كيميائي. إن ‎polypeptides‏ ‏الأجسام المضادة؛ خاصة ‎polypeptides‏ الأقصر التي تصل إلى حوالي »© ‎camino acids‏ ‎٠‏ تصنع تقليديا بتخليق كيميائي. إن طرق التخليق الكيميائي معروفة في الفن ومتوافرة تجاريا. على سبيل ‎JU‏ يمكن إنتاج جسم مضاد بواسطة أداة تخليق ‎polypeptide‏ أوتوماتية باستعمال طريقة الطور الصلب. انظر أيضا براءات الاختراع الأمريكية أرقام ‎OA YYY0‏ 08117 1771615 في بديل آخر؛ يمكن تصنيع الأجسام المضادة 5 ‎Lalas peptides‏ باستخدام إجراءات ‎٠‏ معروفة جيدا في الفن. في أحد التجسيدات؛ يشمل ‎polynucleotide‏ ترتيب يشفر المناطق المتغيرة السلسلة الثقيلة و/أو الخفيفة لجسم مضاد 5م4» 5810؛ ‎«6F6‏ 704 أو 1113. يمكن استبقاء الترتيب المشفر للجسم المضاد الهام في ناقل في خلية عائلة ويمكن عندئذ أن تنمو الخلية العائلة وتتجمد للاستخدام في المستقبل. إن النواقل (متضمنة نواقل الإظهار) والخلايا العائلة موصوفة هنا إضافيا . ‎Ye‏ يشتمل الاختراع أيضا ‎scFv‏ لأجسام مضادة من هذا الاختراع. تصنع أجزاء منطقة متغيرة وحيدة السلسلة بتوصيل مناطق متغيرة سلسلة خفيفة و/أو ‎ALE‏ باستخدام ‎peptide‏ رابط قصير ‎.Bird et al. (1988) Science 242:423-426‏ إن مثال لأجل ‎peptide‏ رابط هو ‎(GGGGS);‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: ‎(YY‏ الذي يجسر تقريبا 7,5 نانومتر بين نهاية ‎carboxy‏ لمنطقة متغيرة واحدة والنهاية ‎amino‏ للمنطقة المتغيرة الأخرى. لقد تم تصميم واستخدام روابط لترتيبات أخرى ‎(Bird et al. (1 988( Yo‏ أعلاه. لابد أن تكون الروابط هي ‎polypeptides‏ قصيرة؛ مرنة وتفضل أن تكون أقل من حوالي ‎٠٠‏ متخلف ‎amino acid‏ يمكن أن تكون الروابط في المقابل معدلة من أجل وظائف إضافية؛ مثل ارتباط عقاقير أو ارتباط دعامات صلبة. يمكن إنتاج أشكال متباينة
£9 وحيدة السلسلة إما تخليقيا أو تصنيعيا. لإنتاج ‎scFv‏ تصنيعيا؛ يمكن استخدام أداة تصنيع أوتوماتية. لإنتاج ‎scFy‏ تخليقيا؛ يمكن إدخال ‎plasmid‏ مناسب يحتوي على ‎polynucleotide‏ ‏يشفر ‎scFv‏ في خلية عائلة مناسبة؛ إما سوية النواة» ‎LDA Jie‏ خميرة؛ نبات؛ حشرة؛ أو كائن تديي؛ أو بدائية النواة؛ ‎.E. coli (Lie‏ يمكن تحضير ‎scFv ai Polynucleotides‏ الهام © بمعالجات روتينية ‎Jie‏ ربط 201770016005. يمكن ‎scFv Jie‏ الناتج بتقنيات تنقية ‎protein‏ ‏قياسية معروفة في الفن. هناك أشكال أخرى لأجسام مضادة وحيدة السلسلة مثل أجسام ثنائية مشتملة أيضا. إن الأجسام الثنائية هي ‎Abs‏ ثنائية التكافؤ ثنائية الخصوصية تظهر فيها مجالات السيطرةٍ ‎VH‏ ‎VI‏ على سلسلة ‎polypeptide‏ واحدة؛ لكن باستخدام رابط قصير جدا للسماح بالازدواج بين ‎٠‏ مجالين للسيطرة على نفس السلسلة؛ وبذلك يتم دفع مجالات السيطرة لكي تزدوج مع مجالات سيطرة مكملة لسلسلة أخرى وتوليد ‎١‏ من أماكن ربط مولد مضاد. انظر على سبيل المثال: ‎Holliger, P., et al., 1993, Proc.
Natl.
Acad Sci.
USA 90:6444-6448; Poljak, R.
J., et‏ ‎al., 1994, Structure 2:1121-1123‏ على ‎Ju‏ المقال» يمكن تحضير ‎SU Abs‏ الخصوصية ‎mAbs‏ لها 0 خصوصيات ارثباط لاثنين على الأقل من مولدات مضاد مختلفة؛ باستخدام ‎Abs‏ الموصوفة هنا. إن طرق تحضير ‎Abs‏ ثنائية الخصوصية معروفة في الفن (انظر على سبيل المثال؛ ‎(Suresh et al., 1986, Methods in Enzymology 121:210‏ . تقليدياء يعتمد الإنتاج التخليقي للأجسام المضادة ثنائية الخصوصية على إظهار مشترك لاثنين من أزواج سلسلة ثقيلة- سلسلة خفيفة ‎dg‏ حيث تكون للسلستين الثقيلتين خصوصيات مختلفة: ‎(Milstein and Cuello, 1983, Nature 305, 537-539). Ye‏ طبقا لأسلوب اندماج أجسام مضادة ثنائية الخصوصية؛ تندمج مجالات سيطرة متغيرة ‎Ab‏ ‏لها خصوصيات الارتباط المطلوبة ‎SW)‏ اتحاد ‎—Ab‏ مولد مضاد) مع ترتيبات مجال سيطرة ثابت ع1. يفضل أن يحدث الاندماج مع مجال سيطرة ثابت سلسلة ثقيلة ‎dg‏ يشمل جزء على الأقل من مناطق المفصلة 0112 و0113. يفضل وجود المنطقة الثابتة السلسلة الثقيلة الأولى ‎Yo‏ (011)»؛ محتوية المكان الضروري لارتباط السلسلة الخفيفة؛ في واحدة على الأقل من الاندماجات. إن ‎DNAS‏ المشفرة اندماجات سلسلة ثقيلة ع عند الطلب؛ السلسلة الخفيفة ‎dg‏ ‏يتم إدخالها في نواقل إظهار منفصلة؛ ويتم استقبالها لحامل الجين من العائل بصورة مشتركة
في كائن حي عاثل مناسب. يوفر هذا مرونة كبيرة في ضبط النسب الطفرية لأجزاء ‎polypeptide‏ الثلاثة في تجسيدات توفر فيها النسب الغير متساوية للسلاسل ‎polypeptide‏ ‏الثلاثة المستخدمة في التشييد الإنتاجيات المثتلى. من الممكن؛ على أية حال؛ إدخال ترتيبات التشفير لاثنين من أو لكل سلاسل ‎polypeptide‏ الثلاثة في ناقل إظهار واحد عندما ينتج © إظهار ؟ على الأقل من سلاسل ‎polypeptide‏ بنسب متساوية إنتاجيات كبيرة أو عندما لا تكون للنسب دلالة خاصة. في أسلوب؛ تتكون ‎Abs‏ ثنائية الخصوصية من سلسلة ثقيلة ‎dias Ig‏ مع خصوصية ‎bls)‏ أولى في ذراع واحد وزوج سلسلة ثقيلة- سلسلة خفيفة ‎Ig‏ هجين (يوفر خصوصية ربط ثانية) في الذراع الآخر. إن هذا البناء غير ‎clad)‏ مع سلسلة خفيفة ‎Ig‏ في ‎٠‏ نصف واحد فقط من الجزيء ثنائي الخصوصية؛ يسهل فصل المركب المطلوب ثنائي الخصوصية من اتحادات سلسلة ‎Tg‏ غير مطلوبة. يوصف هذا الأسلوب في منشور ‎PTC‏ رقم ‎WO 94/04690‏ إن الأجسام المضادة مغايرة الاتحاد؛ المشتملة على ¥ من هذه الأجسام المضادة المرتبطة تساهميا؛ هي ‎Lad‏ في نطاق الاختراع. تم استخدام تلك ‎Abs‏ لاستهداف خلايا جهاز المناعة ‎No‏ لخلايا غير مرغوبة (براءة الاختراع الأمريكية رقم 479719860)؛ ولمعالجة عدوى ‎HIV‏ ‏(منشور ‎PCT‏ رقم 91/00360 ‎WO‏ و92/200373 ‎¢WO‏ 03089 80). قد تحضر ‎Abs‏ مغايرة الاتحاد باستخدام أي طرق تقليدية للربط المتقاطع. إن عوامل وتقنيات ربط متقاطع مناسبة معروفة جيدا في الفن» وموصوفة في براءة الاختراع الأمريكية رقم 4597164976 . يمكن أيضا تحضير ‎Abs‏ هجينة أو مهجنة في المعمل بطرق معروفة في كيمياء ‎protein‏ ‎Yo‏ التصنيعية؛ متضمنة تلك المشتملة عوامل ربط متقاطع. على سبيل المثال؛ يمكن تشييد ‎toxins‏ ‏مناعية باستخدام ‎Jeli‏ استبدال ‎disulfide‏ أو بتكوين رابطة ‎thioether‏ تتضمن أمثلة لعوامل كاشفة مناسبة لهذا الغرض ‎.methyl-4-mercaptobutyrimidate iminothiolate‏ يمكن تصنيع جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية يشمل واحد أو أكثر من ‎CDRs‏ من أجسام مضادة 5810 أو 704 أو واحد أو أكثر من ‎CDRs‏ مشتقة من أجسام مضادة 5/810 © أو 704 بأي طرق معروفة في الفن. على سبيل المثال» يمكن استخدام ؛ خطوات عامة لإكساب السمة الآدمية لجسم مضاد أحادى النسخ. إنها: ‎)١(‏ تحديد ترتيب ‎nucleotide‏ ‎amino acid‏ المتوقع لمجالات السيطرة المتغيرة الخفيفة والثقيلة للجسم المضاد البادئ» ‎(Y)‏
‏تصميم جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية؛ أي تقرير منطقة إطار جسم مضاد التي سيتم‎ ‏استخدامها أثناء عملية إكساب السمة الآدمية؛ (7) طرق/ تقنيات إكساب السمة الآدمية‎ ‏الجين من العائل وإظهار جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية.‎ als ‏استقبال‎ (£) 5 cided) (OALYYYO 48116657 ‏انظر» على سبيل المثال؛ براءات الاختراع الأمريكية أرقام‎ $00A0 AT €0TATYIY ‏اكحتكجده مفففن عت م١ ءأمم لكلااكحتد‎ ©
SDIAGYY
‏لتفادي التفاعل‎ Fo ‏في الأجسام المضادة مكتسبة السمة الآدمية المخلقة؛ يمكن تعديل القسم‎
WO ‏في‎ Abs ‏والمكمل وأجهزةٍ المناعة. توصف التقنيات لتحضير تلك‎ Foy ‏البيني مع مستقبل‎ ‏مثلاء يمكن تصميم المنطقة الثابتة لتشبه بدرجة أكبر مناطق ثابتة آدمية لتفادي‎ .2 ‏في تجارب إكلينيكية ومعالجات في الآدميين. انظر‎ Ab ‏حدوث استجابة مناعية إذا تم استخدام‎ ٠ .80415747 ‏على سبيل المثال براءات الاختراع الأمريكية أرقام 884174851 و‎ ‏يمكن تصنيع جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية يشمل مناطق متغيرة سلسلة خفيفة أو‎ ‏من جسم مضاد أو أشكاله المتباينة الموضحة في الجدول‎ CDRs ‏ثقيلة أو واحد أو أكثر من‎ ‏مشتقة من الجسم المضاد أو أشكاله المتباينة الموضجة في‎ CDRs ‏أو واحد أو أكثر من‎ 0) ‏الجدول ؟ باستخدام أي طرق معروفة في الفن.‎ ١ ‏قد تصنع الأجسام المضادة المكتسبة السمة الآدمية بأي طريقة معروفة في الفن.‎ ‏من الأشكال المتباينة‎ polypeptides 5 ‏يشتمل الاختراع على تعديلات للأجسام المضادة‎ ‏مكافئة وظيفيا لا تؤثر بدرجة ملحوظة‎ Abs ‏متضمنة‎ ١ ‏المبتكرة الموضحة في جدول‎
JU ‏على خواصها وأشكال متباينة لها نشاط و/أو انجذاب زائد أو قليل. على سبيل‎ ‏للحصول على طم لها انجذاب الارتباط المطلوب مع‎ amino acid ‏قد تحدث طفرةٍ لترتيب‎ ٠ ‏لوصفها هنا‎ dala ‏ممارسة روتينية في الفن ولا‎ polypeptides ‏مولده المضاد. إن تعديل‎ ‏معدلة‎ polypeptides ‏موصوف في الأمثلة. تتضمن أمثلة‎ polypeptides ‏بالتفصيل. إن تعديل‎ ‏واحدة أو أكثر من الإزالات أو‎ camino acid ‏مع استبدالات واقية لمتخلفات‎ 018 ‏التي لا تغير بصورةٍ ضارة وبدرجة هامة النشاط الوظيفي؛ أو‎ amino acids ‏الإضافات من‎ ‏لمركبه الترابطي» أو باستخدام مماثلات كيميائية.‎ polypeptide ‏تعزز (تزيد) انجذاب‎ Ye ‏تتراوح في‎ carboxyl ‏و/أو‎ amino ‏اندماجات طرفية-‎ amino acid ‏تتضمن إدخالات ترتيب‎ ‏متخلف أو أكثرء بالإضافة إلى‎ ٠٠١ ‏تحتوي على‎ polypeptides ‏الطول من متخلف واحد إلى‎ oy ‏وحيدة أو متعددة. تتضمن أمثلة لإدخالات‎ amino acid ‏إدخالات داخل الترتيب لمتخلفات‎
Gale ‏أو الجسم المضاد مندمج مع جزءٍ‎ N= sk methionyl ‏مع متخلف‎ Ab ‏طرفية‎ ‏تتضمن أشكال متباينة إدخالية أخرى لجزيء الجسم المضاد الاندماج مع النهاية-17‎ epitope ‏يزيد عمر النصف للجسم المضاد في الدورة‎ polypeptide ‏أو -© للجسم المضاد لإنزيم أو‎ ‏الدموية.‎ ٠ ‏تمت‎ Ab ‏واحد في جزيء‎ amino acid ‏إن أشكال متباينة للاستبدال بها على الأقل متخلف‎ ‏إزالته وإدخال متخلف بدلا منه. تتضمن الأماكن الأكثر أهمية لتكوين طفري استبدالي المناطق‎
VY ‏متوقعة أيضا. إن الاستبدالات الحامية مبينة في جدول‎ FR ‏مفرطة التغيرء لكن تعديلات‎ ‏تحت العنوان "استبدالات حامية". إذا أدت تلك الاستبدالات إلى تغير في النشاط الحيوي؛‎ ‏أو حسب‎ oY ‏في جدول‎ "lia ‏فهناك عندئذ مزيد من التغيرات الجوهرية؛ تسمى "استبدالات‎ ٠ ‏يمكن إدخالها ويتم فحص المنتجات.‎ camino acid ‏أدناه بالإشارة إلى أنواع‎ Lilia) ‏الوصف‎ ‎amino acid ‏جدول ؟: استبدا لات‎ ‏ض‎ oy ‏تجرى تعديلات جوهرية في الخواص الحيوية للجسم المضاد بانتقاء استبدالات تختلف‎ ‏في‎ polypeptide ‏بدرجة ملحوظة في تأثيرها على استبقاء (أ) بناء الهيكل الأساسي لأجل‎ ‏مثلاء كشكل صفحة أو حلزوني؛ (ب) شحنة أو صد الماء للجزيء عند‎ (Jain) ‏منطقة‎ ‏المكان المستهدف؛ أو (ج) ضخامة السلسلة الجانبية. تقسم المتخلفات طبيعية الوجود إلى‎ : | ‏مجموعات على أساس خواص السلسلة الجانبية المشتركة:‎ © tlle <Leu «Val «Ala «Met «Norleucine ‏غير قطبية:‎ (9) ¢GIn «Asn «Thr «Ser «Cys ‏قطبية بدون شحنة:‎ )7( ¢Glu «Asp ‏حمضية (سالبة الشحنة):‎ (1) tArg Lys ‏قاعدية (موجبة الشحنة):‎ (£) ‏و‎ «Pro «Gly ‏متخلفات تؤثر على اتجاه السلسلة:‎ (°) ١
His «Phe «Tyr «Trp ‏أروماتية:‎ (1)
AT ‏تجرى استبدالات غير محمية باستبدال عضو من واحد من هذه الأنواع بدلا من نوع‎ ‏غير مشتمل في استبقاء الشكل الجيد للجسم المضاد يمكن أيضا‎ cysteine ‏إن أي متخلف‎ ‏لتحسين الثبات التأكسدي للجزيء ومنع الربط المتقاطع الشاذ. على‎ serine ‏عامة مع‎ calla ‏إلى الجسم المضاد لتحسين ثباته؛ تحديدا عندما‎ cysteine ‏العكس» يمكن إضافة رابطة (روابط)‎ ١
Fv ‏جزء‎ Jia Ab ‏هو جزءٍ‎ Ab ‏يكون‎ ‎amino acids ‏من تغيير أو تعديل واحد أو أكثر من‎ amino acid ‏يمكن أن تتراوح تعديلات‎ ‏لإكمال إعادة تصميم المنطقة؛ مثل المنطقة المتغيرة. إن التغييرات في المنطقة المتغيرة يمكن‎ * ‏إلى‎ ١ ‏انجذاب و/أو خصوصية الارتباط. في بعض التجسيدات؛ لا يجرى أكثر من‎ us ‏أن‎ ‏لا يجري أكثر‎ (gyal ‏في تجسيدات‎ CDR ‏محمية في مجال سيطرة‎ amino acids ‏استبدالات‎ ٠ o¢ ‏محمية في مجال سيطرة 01018. في تجسيدات أخرى‎ amino acids ‏إلى استبدالات‎ ١ ‏من‎ ‎.CDRL3 ‏و/أو‎ CDR H3 ‏هو‎ CDR ‏أيضاء يكون مجال سيطرةٍ‎ ‏وغير 817005718160؛ بالإضافة إلى‎ glycosylated polypeptides ‏نتضمن تعديلات أيضا‎ ‏مع سكريات مختلفة؛‎ glycosylation «(Jie ‏مع تعديلات أخرى بعد الترجمة‎ polypeptides ‏عند أماكن محمية‎ glycosylated ‏لأجسام المضادة‎ ١ ‏تكون‎ .phosphorylation y acetylation ٠ ‏في مناطقها الثابتة‎ (Jefteris and Lund, 1997, Chem. Immunol. 65:111-128; Wright and Morrison, 1997,
TibTECH 15:26-32). protein ‏المناعية تؤثر على وظيفة‎ globulins JaY oligosaccharide ‏إن السلاسل الجانبية‎ (Boyd et ‏,.لة‎ 1996, Mol. Immunol. 32:1311-1318; Wittwe and Howard, 1 990, Yo
Biochem. 29:4175-4180) ‏السكري؛ والذي يمكن أن يؤثر على الشكل‎ protein ‏والتفاعل داخل الجزيئات بين أقسام‎ ‏السكري ض‎ protein ‏والسطح المقدم ثلاثي الأبعاد لأجل‎ ‏ا‎ (Jefferis and Lund, supra; Wyss and Wagner, 1996, Current Opin. Biotech. 7:409- 416) Yo hide! ‏سكري معين لجزيئات خاصة‎ protein ‏لاستهداف‎ Lay Oligosaccharides ‏قد تخدم‎ ‏بأنها تؤثر على‎ Lad ‏مضادات الجسم مقررة‎ Glycosylation ‏على بناءات إدراك خاصة. إن‎ ‏مع إظهار‎ CHO ‏بصفة خاصة؛ تقرر أن خلايا‎ .(ADCC) Ab ‏سمية خلية خلوية تعتمد على‎ ‏وهو‎ «(GnTIII) B(1,4)-N-acetylglucosaminyltransferase ITT ‏من أجل‎ tetracycline ‏محسن‎ ADCC ‏نصفية؛ تقرر بأن لها نشاط‎ GlcNAc ‏يحفز تكوين‎ glycosyltransferase ٠ -(Umana et al., 1999, Mature Biotech. 17:176-180) ‏أو رابطة-0. تشير رابطة-]1‎ Noda) ‏الأجسام المضادة نموذجيا إما‎ glycosylation ‏إن‎ ‏إن ترتيبات‎ -asparagines ‏مع السلسلة الجانبية لمتخلف‎ carbohydrate sya ‏إلى ارتباط‎ «asparagine-X-cysteine ‏و‎ asparagine-X-threonine «asparagine-X-serine tripeptide ‏هي ترتيبات الإدراك للارتباط الإنزيمي لجزء‎ «proline ‏ماعدا‎ amino acid ‏حيث لز هو أي‎ Yo ‏فإن وجود أي من هذه‎ «ll asparagines ‏مع السلسلة الجانبية لأجل‎ carbohydrate ‏ممكن. تشير‎ glycosylation ‏يولد مكان‎ polypeptide ‏في‎ tripeptide ‏الترتيبات‎ oo «N-acetylgalactosamine ‏متصلة -0 إلى ارتباط واحد من السكريات‎ glycosylation ‏برغم‎ cthreonine ‏أو‎ serine ‏أكثر شيرعا‎ <hydroxyamino acid ‏مع‎ xylose ‏أو‎ «galactose .5-hydroxylysine ‏أى‎ 5-hydroxyproline ‏أنه يمكن أيضا استخدام‎ ‏إلى الجسم المضاد تتحقق تقليديا بتعديل ترتيب‎ glycosylation ‏إن إضافة أماكن‎ ‏الموصوفة أعلاه (لأماكن‎ tripeptide ‏بحيث يحتوي واحد أو أكثر من الترتيبات‎ amino acid © ‏متصلة -11). يمكن أيضا إجراء تعديل بإضافة؛ أو استبدال بواسطة؛ واحد أو‎ glycosylation glycosylation ‏ا لأصلي (لأماكن‎ Ab ‏إلى ترتيب‎ threonine ‏أو‎ serine ‏أكثر من متخلفات‎ ‏متصلة-0).‎ ‏للأجسام المضادة يمكن أيضا تعديله بدون تعديل‎ glycosylation ‏إن نمط‎ ‏بدرجة كبيرة على الخلية العائلة‎ glycosylation ‏الكائن. تعتمد‎ nucleotide ‏لترتيب‎ ٠ ‏سكرية مخلفة؛‎ protein ‏المستخدمة لإظهار الجسم المضاد. لأن نوع الخلية المستخدمة لإظهار‎ ‏مثلاء الأجسام المضادة؛ كعلاجات ممكنة بصورة نادرة هو الخلية الأولية؛‎
Sle pail) ‏للأجسام المضادة‎ glycosylation ‏فمن الممكن أن نتوقع حدوث تباينات في نمط‎ . (Hse etal. ,1997, J. Biol. Chem. 272:9062-9070 ‏أثناء الإنتاج‎ glycosylation ‏بالإضافة إلى اختيار الخلايا العائلة؛ فإن العوامل المؤثرة على‎ yo ‏التخليقي لأجسام مضادة تتضمن طريقة النمو؛ مستحضر الأوساط؛ كثافة المزرعة؛‎ ‏الأس الهيدروجيني؛ برامج التتقية؛ إلخ. هناك طرق عديدة مقترحة لتعديل نمط‎ coxygenation ‏متضمنة إدخال أو إظهار زائد لإنزيمات‎ pals ‏الموجود في كائن حي عائل‎ glycosylation 0+ gYYYo ‏(براءات الاختراع الأمريكية أرقام‎ oligosaccharide ‏خاصة مشتملة في إنتاج‎ ‏يمكن‎ cglycosylation ‏أو أنواع خاصة من‎ cglycosylation ‏إن‎ .(0YYAYA4 ‏وى‎ 810751 ٠
N- «(Endo 11( endoglycosidase H ‏باستخدام‎ Sia ‏السكري؛‎ protein ‏إزالتها إنزيميا من‎ .endoglycosidase 173 ‏6و:د0510اع010؛‎ F2 «endoglycosidase F1 «glycosidase F ‏علاوة على ذلك؛ فإن الخلية العائلة المخلقة يمكن معالجتها جينيا لكي تكون ناقصة في تصنيع‎ ‏إن هذه التقنيات وأخرى مشابهة معروفة جيدا في الفن.‎ polysaccharides ‏أنوا 2 خاصة من‎ ‏تتضمن طرق أخرى للتعديل استخدام تقنيات اقتران معروفة في الفن؛ تتضمن؛ بدون‎ Yo ‏واستخدام عوامل كلابية. يمكن استخدام التعديلات؛‎ oxidative ‏تحديد؛ وسائل إنزيمية؛ استبدال‎
‎lia‏ لارتباط علامات لاختبار مناعي. تحضر ‎polypeptides‏ معدلة بإجراءات راسخة في الفن ويمكن فحصها باختبارات قياسية معروفة في الفن؛ بعضها موصوف أدناه وفي الأمثلة. في بعض تجسيدات الاختراع؛ يشمل الجسم المضاد منطقة ثابتة معدلة؛ مثل منطقة ثابتة خاملة ‎Lelie‏ أو خاملة جزئيا؛ ‎lie‏ لا تثير تحلل بسبب مكمل؛ لا تثير ©©80؛ أو لا تنشط © الخلايا غير العصبية في ‎€ONS‏ أو لها نشاطات قليلة (مقارنة مع ‎Ab‏ غير معدل) في أي واحدة أو أكثر مما يلي: إثارة تحلل بسبب مكمل؛ إثارة ©800؛ أو تنشيط ‎WA‏ غير عصبية في ‎.ONS‏ إن التعديلات المختلفة للمنطقة الثابتة يمكن استخدامها لتحقيق مستوى أمثل و/أو اتحاد أمتل من وظائف المستجيب. انظر على سبيل المثال ‎Morgan et al., 1995, Immunology 86:319-324; Lund et al., 1996, J.
Inmunology‏ ‎Idusogie et al., 2000, J.
Immunology 164:4178-4184; Ve‏ ;157:4963-4969 157:4963-9 ‎Tao et al., 1989, J.
Immunology 143: 2595-2601; and Jefferis et al., 1998,‏ ‎Immunological Reviews 163:59-76.‏ في بعض التجسيدات؛ تعدل المنطقة الثابتة حسب الوصف في ,1999 ‎Eur.
J.
Immunol.,‏ 29:2613-4؛ منشور ‎PTC‏ رقم 117099/58572؛ و/أو منشور براءة الاختراع البريطانية رقم ‎_8.4A 49004 ٠‏ تجسيدات أخرى؛ يشمل الجسم المضاد منطقة ثابتة 1802 سلسلة ثقيلة آدمية تشمل الطفرات التالية ‎A330P331‏ إلى 53305331 (يتم ترقيم ‎amino acid‏ إلى ترتيب 2 النوع البري). 29:2613-2624 ,1999 ‎Bur.
J.
Immunol.,‏ في تجسيدات أخرى أيضاء تكون المنطقة الثابتة غير ‎glycosylated‏ بالنسبة إلى ‎glycosylation‏ متصلة ‎N-‏ في بعض التجسيدات؛ تكون المنطقة الثابتة غير ‎glycosylation‏ بالنسبة ‎glycosylation‏ متصلة ‎Y-‏ 1-2 بحدوث طفرة لمتخلف ‎glycosylated amino acid‏ أو المتخلفات الجانبية التي تشكل جزءا من ترتيب إدراك ‎N- glycosylation‏ في المنطقة الثابتة. على سبيل المثال» يمكن إجراء طفرة لمكان ‎N- glycosylation‏ 11297 إلى ‎JH JK «Q «A‏ انظر: ‎Tao et al., 1989, J.
Immunology 143: 2595-2601; and Jefferis et al., 1998,‏ ‎Immunological Reviews 163:59-76.‏ ‎٠‏ في بعض التجسيدات» تكون المنطقة الثابتة غير ‎glycosylation‏ بالنسبة ‎glycosylation‏ ‏متصلة ‎N=‏ قد تكون المنطقة الثابتة غير ‎glycosylation‏ بالنسبة ‎glycosylation‏ متصلة ‎N-‏ ov ‏أو بإظهار في خلية عائلة ناقصة‎ ((PNGase ‏بواسطة إنزيم‎ carbohydrate ‏إزالة‎ Jie) ‏إنزيميا‎ ‎.glycosylation
تتضمن تعديلات ‎Ab‏ أخرى ‎Abs‏ معدل حسب الوصف في منشور ‎PCT‏ رقم 2 170. تشمل ‎Abs‏ هذه بالإضافة إلى مجال سيطرة ربط موجه عند الجزيء © المستهدف» مجال سيطرة مستجيب له ترتيب ‎amino acid‏ مماثل جوهريا لكل أو لجزءِ من مجال سيطرة ثابت من سلسلة تقيلة ‎Ig‏ آدمي . إن هذه ‎Ab‏ قادرة على ربط الجزيء المستهدف بدون إثارة تحلل ملحوظ معتمد على مكمل؛ أو تحطيم بواسطة خلية للهدف. في بعض التجسيدات؛ يكون مجال السيطرة المستجيب قادر على ربط بصفة خاصة 7680 و/أو م81©. تعتمد هذه أساسيا على مجالات سيطرةٍ هجينة مشتقة من ‎١‏ أو أكثر من مجالات ‎٠‏ سيطرة ‎C2‏ سلسلة ثقيلة ‎Ig‏ = . إن ‎Abs‏ المعدلة بهذه الطريقة مناسبة بصفة خاصة للاستخدام في علاج ‎Ab‏ مزمن؛ لتفادي تفاعلات التهابية والأخرى الضارة لعلاج ‎Ab‏ التقليدي. يتضمن الاختراع تجسيدات مكتملة الانجذاب. على سبيل المثال؛ يمكن إنتاج ‎Abs‏ مكتملة
الانجذاب بإجراءات معروفة في الفن ‎(Marks et al., 1992, Bio/Technology, 10:779-783; Barbas et al., 1994, Proc Nat.‏ ‎Acad.
Sci, USA 91:3809-3813; Schier et al., 1995, Gene, 169:147-155; Yelton et al., yo‏ ‎J.
Immunol., 155:1994-2004; Jackson et al., 1995, J.
Immunol., 154(7):3310-‏ ,1995 ‎Hawkins et al., 1992, J.
Mol.
Biol., 226:889-896; and PCT Publ.
NO.‏ ;9 ‎W02004/058184).‏ ‏يمكن استخدام الطرق التالية لضبط انجذاب ‎Ab‏ ولتمييز ‎.CDR‏ إن طريقة لتمييز ‎CDR‏ ‎٠‏ من ‎Ab‏ و/أو تعديل ‎i)‏ تحسين) انجذاب ارتباط ‎cpolypeptide‏ مثل ‎<Ab‏ تسمى 'تكوين طفري ماسح لمكتبة ‎(library scanning mutagenesis)‏ بصفة عامة؛ يتم التكوين الطفري الماسح للمكتبة كما يلي. يستبدل واحد أو أكثر من أماكن ‎amino acid‏ في ‎CDR‏ مع ؟ أو أكثر من ‎Si) amino acids‏ كت ىف عت ‎Od he‏ لل كل الكل مل تل ‎١9 OA OY‏ أو ‎)٠١‏ باستخدام طرق يدركها الفن. يولد هذا مكتبات صغيرة من النسخ (في ‎Yo‏ بعض التجسيدات؛ واحدة لكل مكان ‎amino acids‏ تم تحليله)؛ لكل منها مجموعة مركبة من ‎١‏ ‏أو أكثر من الأعضاء (عند استبدال ؟ أو أكثر من ‎amino acids‏ عند كل مكان). بصفة عامة؛ تتضمن المكتبة أيضا نسخة تشمل ‎amino acid‏ الأولي (غير مستبدل). يتم فحص عدد oA ‏نسخة (اعتمادا على تعقيد المكتبة)؛ من كل مكتبة من‎ 80-7١ ‏صغير من النسخ؛ مثلا حوالي‎ ‏المستهدف (أو هدف ارتباط آخر)؛ ويتم تحديد النسخ‎ polypeptide ‏أجل انجذاب الارتباط مع‎ ‏المرشحة مع ارتباط زائد؛ متماثل» ناقص» أو عدم ارتباط. إن طرق تحديد انجذاب الارتباط‎ «Biacore ‏سطح‎ plasmon ‏معروفة جيدا في الفن. يمكن تحديد انجذاب ارتباط باستخدام رنين‎ ‏مفيد تحديدا‎ Biacore ‏الذي يحدد الاختلافات في انجذاب ارتباط حوالي ضعفين أو أكبر. إن‎ ٠ ٠١ ‏حوالي‎ Kp ‏يرتبط الجسم المضاد البادئ بسهولة مع انجذاب كبير نسبياء مثلا‎ Lorie ‏في‎ Biacore ‏سطح‎ plasmon ‏نانوجزيئي جرامي أو أقل . يوصف الفحص باستخدام رنين‎ ‏الأمثلة؛ هنا.‎ «Kinexa Biocensor ‏يمكن تحديد انجذاب الارتباط باستخدام اختبارات اقتراب وميض‎ ‏إخماد استشعاع؛ انتقال استشعاع؛ و/أو إظهار‎ (IGEN) ORIGEN ‏اختبار مناعي‎ (ELISA ٠ ‏خميرة. يمكن أيضا فحص انجذاب الارتباط باستخدام اختبار حيوي مناسب.‎ ‏(في بعض التجسيدات؛‎ CDR ‏في‎ amino acid ‏في بعض التجسيدات؛ يستبدل كل مكان‎ ‏الطبيعية باستخدام طرق تكوين طفري يدركها‎ amino acids ٠١ ‏واحد في نفس الوقت) مع كل‎ ‏يولد هذا مكتبات صغيرة من النسخ (في بعض التجسيدات؛‎ (Lis ‏الفن (بعضها موصوف‎ ‏عضو (عند استبدال كل‎ ٠١ ‏يتم تحليله)؛ كل منها مركبة من‎ amino acid ‏واحدة لكل مكان‎ ٠ ‏عند كل مكان).‎ amino acid ‏العشرين‎ ‏في بعض التجسيدات؛ تشتمل المكتبة المطلوب فحصها استبدالات في ؟ أو أكثر من‎ ‏لذلك؛ قد تشمل المكتبة‎ LCDR ‏أو أكثر من‎ ١ ‏أو في‎ CDR ‏الأماكن؛ قد تكون في نفس‎ ‏أو أكثر من‎ ١ ‏واحدة. قد تشمل المكتبة استبدال في‎ CDR ‏أو أكثر من‎ ١ ‏استبدالات في‎ ‏أكثر من‎ eo ‏الأماكن في ؟ أو أكثر من م001. قد تشمل المكتبة استبدال في ؛ 4؛‎ ٠ ‏يمكن إجراء‎ CDRs + ‏4؛ ©؛ أو‎ » ¥ oY ‏الأماكن» حيث تتواجد الأماكن المذكورة في‎
Balint etal., 1993, Gene ‏قليلة الوفرة. (انظر مثلا جدول ¥ من‎ codons ‏الاستبدال باستخدام‎ .)137)01(:109-8 ‏هي واحدة أو أكثر من‎ CDR ‏قد تكون‎ .CDRL3 ‏و/أو‎ CDRH3 ‏هي‎ CDR ‏قد تكون‎ ‏هي‎ CDR ‏قد تكون‎ .CDRH3 ‏و/أو‎ <CDRH2 «CDRHI «CDRL3 «CDRL2 «CDRL] Yo ‏ممتدة.‎ CDR ‏أو‎ <Chothia CDR «Kabat CDR
إن النسخ المرشحة مع ارتباط محسن يمكن ترتيبها؛ وبذلك يمكن تحديد طفرة استبدال ‎CDR‏ تؤدي إلى انجذاب محسن (يسمى أيضا استبدال "محسن"). إن النسخ المرشحة المرتبطة يمكن أيضا ترتيبها؛ وبذلك يتحدد استبدال ‎CDR‏ يحتفظ بالارتباط. يمكن إجراء عدة دورات من الفحص. على سبيل المثال؛ فإن النسخ المرشحة (المشتملة كل © منها استبدال ‎amino acid‏ عند مكان واحد أو أكثر من واحدة أو أكثر من ‎(CDRs‏ مع ارتباط محسن مفيد أيضا لتصميم مكتبة ثانية تحتوي على الأقل ‎amino acid‏ الأصلي والمستبدل عند كل مكان ‎CDR‏ محسن (أي؛ مكان ‎amino acid‏ في ‎CDR‏ تظهر ‎odie‏ طفرة استبدال ارتباط محسن). إن تحضير؛ وفحص أو انتقاء هذه المكتبة مشروح إضافيا أدناه. يوفر أيضا تكوين طفري ماسح مكتبة وسيلة لتمييز ‎(CDR‏ تعدد تكرار النسخ التي لها ‎٠‏ ارتباط محسن؛ نفس الارتباط؛» الارتباط القليل أو عدم الارتباط فإن ذلك يوفر أيضا معلومات تتعلق بأهمية كل مكان ‎amino acid‏ لثبات معقد ‎alge Ab‏ مضاد. على سبيل المثال؛ عندما يحتفظ مكان ‎CDR‏ بالارتباط عند تغيير كل ‎amino acids‏ العشرين؛ فإن ذلك المكان يتم تحديده كمكان من غير المحتمل أن يكون مطلوب لارتباط مولد مضاد. على النقيض؛ عندما يحتفظ مكان ‎CDR‏ فقط بنسبة مئوية قليلة من الاستبدالات؛ يحدد ذلك المكان بأنه مكان هام ‎١‏ لوظيفة ‎LCDR‏ لذلك؛ فإن طرق تكوين طفري ماسح مكتبة تولد معلومات تتعلق بأماكن في ‎CDRs‏ يمكن تغييرها مع ‎amino acids‏ كثيرة مختلفة (تتضمن كل ‎amino acids‏ العشرين)؛ وأماكن في ‎CDRs‏ لا يمكن تغييرها أو يمكن تغييرها فقط مع ‎amino acid‏ قليلة العدد. إن النسخ المرشحة مع انجذاب محسن قد تتحد في مكتبة ‎Axil‏ تتضمن ‎amino acid‏ المحسن؛ ‎amino acid‏ الأصلي عند ذلك المكان؛ وقد تتضمن إضافيا استبدالات إضافية عند ‎٠‏ ذلك المكان؛ اعتمادا على تعقيد المكتبة المطلوبة؛ أو المسموح بها باستخدام طريقة الفحص أو الانتقاء المطلوبة. إضافياء عند الطلب؛ فإن مكان ‎amino acid‏ مجاور يمكن أن يكون عشوائيا من أجل ¥ على الأقل أو أكثر من ‎.amino acid‏ إن العشوائية لأجل ‎amino acids‏ متجاورة قد تسمح بمرونة بنائية إضافية في ‎CDR‏ الطفرية؛ والذي؛ في المقابل؛ يسمح أو يسهل إدخال عدد كبير من طفرات التحسين. قد تشمل المكتبة أيضا استبدالات عند أماكن لا تظهر انجذاب ‎YO‏ محسن في الجولة الأولى من الفحص. يتم فحص أو انتقاء المكتبة الثانية من أجل أعضاء المكتبة التي لها انجذاب ارتباط محسن ‎Sif‏ معدل باستخدام أي طريقة معروفة في الفن؛ متضمنة الفحص باستخدام تحليل رنين
Te ‏وانتقاء باستخدام أي طريقة معروفة في الفن للانتقاء» متضمنة‎ «Biacore ‏سطح‎ plasmon ribosome leks ‏إظهار بلعم؛ إظهار خميرة؛‎ ‏اندماج تشمل واحد أو أكثر من الأجزاء أو المناطق‎ proteins ‏يشتمل الاختراع أيضا‎ ‏اندماج‎ polypeptide ‏من تاه أو 5 من هذا الاختراع. في أحد التجسيدات؛ يتوافر‎ ‏متجاورة من منطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة المبينة في‎ amino acids ٠١ ‏يشمل على الأقل‎ © ‏على الأقل من‎ amino acids ٠١ ‏و/أو‎ ٠9 ‏أو‎ OA OY OT oF ‏تعريفات الترتيب أرقام:‎
XY ‏أو‎ 17 YY 7١0 of ‏في تعريفات الترتيب أرقام:‎ Aa) ‏منطقة السلسلة الثقيلة المتغيرة‎ ‏اندماج يشمل على الأقل حوالي ١٠؛ على الأقل‎ polypeptide ‏يتوافر‎ «opal ‏في تجسيدات‎ amino T+ ‏أو على الأقل حوالي‎ (Yo ‏على الأقل حوالي‎ Ye ‏على الأقل حوالي‎ Vo ‏حوالي‎ ‎؛٠١ ‏متجاور من منطقة السلسلة الخفيفة المتغيرة و/أو على الأقل حوالي‎ 8609 ٠ ‏على الأقل حوالي ١؛ على الأقل حوالي © أو على الأقل‎ Ve ‏على الأقل حوالي‎ ‏يشمل‎ al ‏متجاور من منطقة السلسلة الثقيلة المتغيرة. في تجسيد‎ amino acids Vo ‏حوالي‎ ‏كما هو‎ ald ‏منطقة متغيرة سلسلة خفيفة و/أو منطقة متغيرة سلسلة‎ Lea! polypeptide ٠١ ‏و24‎ oF ‏مبين في أي من أزواج الترتيب المنتقاة من ضمن تعريفات الترتيب أرقام:‎ ‏الاندماج واحدة‎ polypeptide ‏في تجسيد آخر؛ يشمل‎ YTV ١9و‎ YY 5A YI IV ٠١و‎ 00
CDR 113 ‏الاندماج‎ polypeptide ‏في تجسيدات أخرى أيضاء يشمل‎ .CDR(s) ‏أو أكثر من‎ ‏اندماج‎ protein ‏لأغراض هذا الاختراع» يحتوي‎ (VL CDR3) CDR 13 ‏و/أو‎ (VH CDR3) ‏في الجزيء الأصلي؛ مثلا‎ Ane ‏غير مرتبط‎ al amino acid ‏وترتيب‎ Abs ‏واحد أو أكثر من‎ ‏ترتيب مغاير أو ترتيب مماثل من منطقة أخرى. تتضمن ترتيبات مغايرة تمثيلية؛ لكن بدون‎ ‏إن الأجزاء الملحقة‎ 6His ‏أو جزء ملحق‎ FLAG ‏(عم)" مثل جزءٍ ملحق‎ Bale ‏تحديد؛ "جزء‎ ٠٠ ‏معروفة جيدا في الفن.‎ ‏صناعيا‎ (JU) ‏اندماج بطرق معروفة في الفن؛ على سبيل‎ polypeptide ‏يمكن أن يتولد‎ ‏الاندماج من هذا الاختراع بتحضير وإظهار‎ proteins ‏نموذجيا؛ تحضر‎ Lalas ‏أو‎ ‏يشفرهم باستخدام طرق تخليقية موصوفة هناء برغم أنه يمكن تحضيرهم أيضا‎ polynucleotide ‏تصنيع كيميائي.‎ Sia ‏بطرق أخرى معروفة في الفن؛ متضمنة؛‎ YO
Nia) ‏متحدة‎ polypeptides ‏يوفر هذا الاختراع أيضا تركيبات تشمل أجسام مضادة أو‎ ‏للتبسيط؛ ستتم‎ (avidin ‏أو‎ biotin Jie) ‏متصلة) مع عامل يسهل الاقتران مع دعامة صلبة‎
‏أن هذه الطرق تنطبق على أي من تجسيدات ارتباط‎ hy ‏مع‎ Abs ‏الإشارة بصفة عامة إلى‎ ‏مولد مضاد و/أو مضاد حسب الوصف هنا. يشير الاتحاد بصفة عامة إلى توصيل هذه‎ ‏المكونات حسب الوصف هنا. إن التوصيل (وهو بصفة عامة تثبيت هذه المكونات في تلازم‎ ‏يمكن حدوث تفاعل‎ Oia ‏قريب على الأقل للإعطاء) يمكن أن يتم بأي عدد من الطرق.‎ ‏مباشر بين عامل وجسم مضاد عندما يمتلك كل منهما بديلا لديه القدرة على التفاعل مع‎ © ‏على واحد‎ «sulfhydryl ‏أو‎ amino ‏مجموعة‎ Jie ‏الآخر . مثلاء فقد تكون مجموعة محبة للنواة؛‎ ‏أو مع‎ «acid halide ‏أو‎ anhydride ‏مثل‎ carbonyl ‏تحتوي‎ de sane ‏قادرة على التفاعل مع‎ ‏على الآخر.‎ (halide Nie) ‏تحتوي مجموعة تاركة جيدة‎ alkyl ‏مجموعة‎ ‏من هذا الاختراع مع عامل تعليم مثل جزيء استشعاعي؛‎ polypeptide ‏أو‎ Ab ‏قد يتصل‎ ‏جزيء نشط إشعاعيا أو أي علامات أخرى معروفة في الفن. إن العلامات معروفة في الفن‎ ٠ ‏وتوفر عامة (إما بصورة مباشرة أو غير مباشرة) إشارة.‎ ٠ ‏يوفر الاختراع أيضا تركيبات (تتضمن تركيبات دوائية) ومجموعات تشمل؛ حسب التوضيح‎ ‏الموصوفة هنا.‎ polypeptide ‏و/أو‎ Abs ‏من أو كل‎ Ul pill ‏في هذا‎ ‏من الاختراع؛ ونواقل وخلايا‎ Abs ‏معزولة تشفر‎ polynucleotides ‏يوفر الاختراع أيضا‎ .polynucleotide ‏عائلة تشمل‎ ٠ ‏تشفر أيا من الأجسام المضادة (متضمنة‎ polynucleotides ‏في جانب آخرء يوفر الاختراع‎ ‏لها‎ polypeptides ‏أجسام مضادة و‎ Mie ‏موصوفة هناء‎ polypeptides 5 ‏قطع جسم مضاد)‎ ‏بإجراءات معروفة في‎ polynucleotides ‏تحضير وإظهار‎ (Say ‏وظيفة مستجيب غير صالحة.‎ ‏الفن.‎ ‏تركيبات دوائية) تشمل أيا من‎ Joe) ‏في جانب آخرء يوفر الاختراع تركيبات‎ - Ye ‏الاختراع. في بعض التجسيدات تشمل التركيبة ناقل إظهار يشمل‎ 155 ‏تشمل التركيبة ناقل‎ al ‏تشفر جسم مضاد حسب الوصف هنا. في تجسيد‎ 045 ‏الموصوفة هنا.‎ polypeptides ‏يشفر أيا من أجسام مضادة أو‎ polynucleotide ‏إظهار يشمل‎ ‏الموضحة في‎ polynucleotides ‏في تجسيدات أخرى أيضاء تشمل التركيبة أيا من أو كلا من‎ ‏تعريف الترتيب رقم: وتعريف الترتيب رقم:. إن نواقل الإظهار وإعطاء تركيبات‎ YO ‏موصوفة إضافيا هنا.‎ polynucleotides . ‏الموصوفة هنا‎ polynucleotides ‏في جانب آخرء يوفر الاختراع طريقة لتحضير أي من‎
+ يشمل الاختراع الحالي أيضا ‎polynucleotides‏ مكملة لأي من تلك الترتيبات. قد تكون ‎polynucleotides‏ 4038 الشريط (تشفيري أو مضاد للإحساس) أو ثنائية الشريط» وقد تكون عبارة عن جزيئات ‎cDNA ¢ asia) DNA‏ أو مصنع) أو ‎RNA‏ تتضمن جزيئات ‎RNA‏ ‏جزيثات 110518 التي تحتوي على ‎introns‏ وتطابق جزيء ‎DNA‏ بطريقة واحد- إلى - © واحد؛ وجزيئات ‎mRNA‏ التي لا تحتوي على ‎introns‏ هناك ترتيبات تشفيرية أو غير تشفيرية إضافية قد تكون»؛ لكن ليست هناك حاجة لذلك ¢ موجودة في ‎polynucleotide‏ من الاختراع الحالي؛ وقد يكون ‎polynucleotide‏ برغم عدم الحاجة إلى ذلك؛ متصلا مع جزيئات أخرى و/أو مواد تدعيم أخرى. قد تشمل ‎polynucleotides‏ ترتيب أولي (أي؛ ترتيب داخلي يشفر جسم مضاد أو قسم منه) ‎٠‏ أو قد تشمل شكل متباين من ذلك الترتيب. تحتوي أشكال متباينة ‎polynucleotide‏ واحدة أو أكثر من الاستبدالات؛ الإضافات؛ الإزالات و/أو الإدخالات بحيث لا يقل النشاط المناعي لأجل ‎polypeptide‏ المشفر» مقارنة بجزيء أولي نشط مناعيا. إن التأثير على النشاط المناعي لأجل ‎polypeptide‏ مشفر يمكن تحديده عامة حسب الوصف هنا. يفضل أن تظهر الأشكال المتباينة تماثل حوالي 7970 على الأقل؛ يفضل أكثر؛ حوالي 780 على الأقل؛ أيضا يفضل ‎٠‏ أكثرء حوالي 7950 على ‎(JB‏ والأكثر تفضيلاء حوالي 795 على الأقل مع ترتيب ‎polynucleotide‏ يشفر جسم مضاد أولي أو قسم منه. يقال أن ‎Cpa‏ من ترتيبات ‎polynucleotide‏ أو ‎polypeptide‏ 'متماثلان" إذا كان ترتيب ‎nucleotides‏ أو ‎amino acids‏ في الترتيبن هو نفسه عند الاصطفاف من أجل التطابق الأقصى حسب الوصف أدناه. تجرى المقارنات بين ترتيبين نموذجيا بمقارنة الترتيبات عبر ‎٠‏ نطاق مقارنة لتحديد ومقارنة المناطق الموضعية لتشابه الترتيب. إن 'نطاق مقارنة "حسب الاستخدم ‎clin‏ يشير إلى قطعة من حوالي ‎٠١‏ مكان متجاور على الأقل ؛ عادة ‎٠‏ إلى حوالي ‎evo‏ أو 40 إلى حوالي ٠٠؛‏ يمكن فيها مقارنة ترتيب مع ترتيب مرجعي له نفس العدد من الأماكن المتجاورة بعد اصطفاف الترتيبين بصورة مثالية. يمكن إجراء اصطفاف أمثل للترتيبات للمقارنة باستخدام برنامج ‎Megalign‏ في ‎Lasergene suite of bioinformatics software (DNASTAR, Inc., Madison, WI), Yo‏ باستخدام معايير الفقد. يجسد هذا البرنامج برامج اصطفاف عديدة موصوفة في المراجع التالية:
Dayhoff, M.O., 1978, A model of evolutionary change in proteins - Matrices for detecting distant relationships. In Dayhoff, M.O. (ed.) Atlas of Protein Sequence and Structure (National Biomedical Research Foundation, Washington DC), Vol. 5,
Suppl. 3, pp. 345-358; Hein J., 1990, Unified Approach to Alignment and
Phylogenes pp. 626-645 Methods in Enzymology vol. 183, (Academic Press, Inc., ©
San Diego, CA); Higgins, D.G. and Sharp, P.M., 1989, CABIOS 5:151-153; Myers,
E.W. and Muller W., 1988, CABIOS 4:11-17; Robinson, E.D., 1971, Comb. Theor. 11:105; Santou, N., Nes, M., 1987, Mol. Biol. Evol. 4:406-425; Sneath, P.H.A. and
Sokal, R.R., 1973, Numerical Taxonomy the Principles and Practice of Numerical
Taxonomy (Freeman Press, San Francisco, CA); Wilbur, W.J. and Lipman, D.J., Ve 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:726-730. بصورة مفضلة؛ يتحدد "تماثل الترتقيب 7" بمقارنة ترتيبين مصطفين بصورة مقلى عبر نطاق مقارنة ‎٠١‏ مكان على الأقل ؛٠‏ حيث يشمل قسم ‎polynucleotide‏ أى ‎polypeptide‏ في نطاق المقارنة إضافات أو إزالات ‎gl)‏ ثغرات) ‎77١‏ أو ‎(Jal‏ عادة © إلى ‎Sve‏ ‏إلى 217 مقارنة بالترتيبات المرجعية (التي لا تشمل إضافات أو إزالات) من‎ ٠١ V0 ‏أجل الاصطفاف الأمثل للترتيبين. تحسب 7 بتحديد عدد الأماكن الموجود عندها قواعد‎ ‏متماثلة في كل من الترتيبين لينتج عدد الأماكن‎ amino acid ‏أو متخلف‎ nucleic acid ‏المتطابقة؛ قسمة عدد الأماكن المتطابقة على العدد الكلي للأماكن في الترتيب المرجعي (أي؛‎ .7 ‏لتنتج تمائل الترتيب‎ ٠ * ‏مقاس النطاق) وضرب الناتج‎ ‎٠‏ قد تكون الأشكال المتباينة أيضاء أو بطريقة بديلة؛ مماثلة جوهريا لجين أولي؛ أو قسم أو مكمل من ذلك. إن تلك الأشكال المتباينة ‎polynucleotide‏ قادرة على التهجين تحت شروط صارمة بدرجة متوسطة لترتيب ‎DNA‏ طبيعي الوجود المشفر للجسم المضاد الأولي (أو ترتيب ‏تتضمن "شروط متوسطة الصرامة" مناسبة غسيل مسبق في محلول #»” ‎SDS «SSC‏ ‎١ EDTA «feo Yo‏ مللي جزيئي جرامي (أس هيدروجيني ‎f(A‏ تهجين عند ٠*"مئوية‏ إلى 58 مثوية؛ ‎«SSC x0‏ طوال الليل؛ ويلي ذلك غسيل مرتين عند ©أ+"مثوية لمدة ‎٠١‏ دقيقة مع ‎.7 ١.١ SDS ‏يحتوي‎ SSC X +,Y 5X 0,8 XY ‏كل من‎
+ حسب الاستخدام هناء فإن ‎Jag yd‏ صارمة للغاية" أو 'شروط ‎Alle‏ الصرامة" هي تلك التي: ‎)١(‏ تستعمل شدة أيونية قليلة ودرجة حرارة عالية للغسيل» ‎sodium chloride Mie‏ ف جزيئي جرامي/ ‎٠.0٠٠ sodium citrate‏ جزيئي جرامي/عتظلد: ‎7,١ sodium dodecyl‏ عند ‎gsi‏ (7) تستعمل أثناء التهجين عامل مغير للطبيعة؛ مثل ‎Mia formamide‏ ‎formamide ©‏ 750 (حجم/ حجم) مع ‎albumin‏ مصل بقري ‎١ Ficoll /7 ١١‏ 1 ‎polyvinylpyrrolidone‏ ,+ 7[ مثبت أس هيدروجيني ‎٠٠ sodium phosphate‏ مللي جزيثي جرامي عند أس هيدروجيني 1,0 مع ‎sodium chloride‏ 5 مللي جزيئي جرامي؛ ‎sodium‏ ‎Yo citrate‏ مللي ‎a‏ جرامي عند ‎PETE‏ )¥( تستعمل ‎formamide‏ .ف ه ‎x‏ ‎+,Y0 NaCl) SSC‏ جزيئي جرامي؛ ‎VO sodium citrate‏ + ,+ جزيئي جرامي) ‎sodium‏ ‎٠ phosphate ٠‏ © مللي جزيئي جرامي (أس هيدروجيني ‎sodium pyrophosphate ¢(T,A‏ ‎0١‏ ؛ محلول © ‎DNA Denhardt’s X‏ منوي سالمون معالج بالموجات الصوتية (0* ميكروجرام/ ملليلتر)» ‎5٠١ dextran sulfates ¢ 70.١ SDS‏ عند 7؛"مئوية؛ مع غسيل عند 7 "مثوية في ‎formamide 5 (sodium citrate [sodium chloride) SSC * +,Y‏ 750 عند 08 مثوية؛ ويلي ذلك غسسيل عالي الصرامة يتكون مسن ‎0,١ Ve‏ 85307 يحتوي على ‎EDTA‏ عند ©**مثوية. سيدرك الصانع ‎ald)‏ كيفية ضبط درجة الحرارة» الشدة الأيونية» إلخ؛ حسب الضرورة للتكيف مع العوامل مثل طول المجس وما شابه. سيدرك أصحاب المهارة العادية في الفن ‎cad‏ نتيجة لإنحلال الشفرة الجينية؛ توجد ترتيبات 1006 كثيرة تشفر ‎polypeptide‏ حسب الوصف هنا. تحمل بعض هذه ‎polynucleotides‏ ‏تشابه أدنى مع ترتيب ‎nucleotide‏ لأي جين أولي. برغم ‎«lla‏ فإن ‎polynucleotides‏ التي ‎٠‏ تتنوع بسبب الاختلافات في استخدام ‎codon‏ متوقعة بصفة خاصة في الاختراع الحالي. إضافيا ؛ فإن ‎alleles‏ الجينات المشتملة على ترتيبات ‎polynucleotide‏ المتوافرة هنا في نطاق الاختراع الحالي. إن ‎Alleles‏ هي جينات داخلية معدلة نتيجة لواحدة أو أكثقر من الطفرات؛ ‎Jha‏ إزالاتء إضافات و/أو استبدالات ‎nucleotides‏ قد يكون ‎protein s mRNA‏ الناتجانء لكن بدون حاجة لذلك؛ لهما بناء أو وظيفة متغيران. يمكن تحديد ‎Alleles‏ بتقنيات قياسية ‎Jie)‏ ‎YO‏ تهجين؛ تكبير و/أو مقارنة ترتيب قاعدة بيانات). يمكن الحصول على ‎polynucleotides‏ من هذا الاختراع باستخدام تصنيع كيميائي»؛ طرق تخليقية؛ أو ‎PCR‏ إن الطرق للتصنيع الكيميائي لأجل ‎polynucleotide‏ معروفة جيدا في الفن
6+ ولا حاجة لوصفها هنا بالتفصيل. يمكن للماهر في الفن استخدام الترتيبات المتوافرة هنا وأداة تصنيع ‎DNA‏ تجارية لإنتاج ترتيب ‎DNA‏ مطلوب. لتحضير ‎polynucleotides‏ باستخدام طرق تخليقية؛ يمكن إدخال ‎polynucleotide‏ يشمل ترتيب مطلوب في ناقل مناسب؛ ويمكن إدخال الناقل في المقابل في خلية عائلة مناسبة للنسخ © والتكبير ؛ حسب الشرح إضافيا هنا. يمكن إدخال ‎polynucleotides‏ في خلايا ‎alle‏ بأي وسيلة معروفة في الفن. تتحول الخلايا بإدخال ‎polynucleotide‏ خارجي بامتصاص مباشرء؛ بلعمة خلوية؛ استقبال حامل الجين من العائل؛ ‎Fills‏ أو تثقيب كهربي. بمجرد الدخول؛ يمكن استبقاء ‎polynucleotide‏ الخارجي في خلية كناقل غير تكاملي (مثل ‎(plasmid‏ أو متكامل في ّ جينوم الخلية العائلة. يمكن عزل ‎polynucleotide‏ المكبر بتلك الطريقة من الخلية العائلة ‎٠‏ بطرق معروفة جيدا في الفن. انظر مثلا 1989 ‎«Sambrook et al.,‏ أعلاه. بطريقة ‎«Adin‏ يسمح ‎PCR‏ بإعادة إنتاج ترتيبات 0118. إن تقنية ‎PCR‏ معروفة جيدا في الفن وموصوفة في براءة الاختراع الأمريكية أرقام ‎(£TAYYA0‏ كفن تك مت علا و5187797؛ بالإضافة إلى ‎PCR: The Polymerase Chain Reaction, Mullis et al., 1994, eds. (Birkauswer Press,‏ ‎Boston, MA). Yo‏ يمكن الحصول على ‎RNA‏ باستخدام ‎RNA‏ المعزول في ناقل ملائم وإدخاله في خلية عائلة مناسبة. عندما يتم نسخ الخلية ويتم نسخ ‎DNA‏ إلى ‎RNA‏ يمكن عندئذ عزل ‎RNA‏ ‏باستخدام طرق معروفة جيدا للمهرة في الفن» كما هو مذكور في ‎(Sambrook et al‏ 184 أعلاه. على سبيل ‎JE‏ ‎Ye‏ يمكن تشييد نواقل نسخ مناسبة طبقا لتقنيات قياسية؛ أو يمكن انتقائهم من عدد كبير من نواقل النسخ المتوافرة في الفن. برغم أن ناقل النسخ المنتقى يمكن أن يختلف طبقا للخلية العائلة المعني استخدامها؛ فإن نواقل النسخ المفيدة ستكون لها عامة القدرة على النسخ الذاتي؛ وقد يكون لها هدف واحد لأجل ‎endonuclease‏ داخلي خاص للتحديد؛ و/أو قد تحمل جينات من أجل دلالة يمكن استخدامها في انتقاء نسخ تحتوي على الناقل. تتقضمن ‎vo‏ أمثلة مناسبة ‎plasmids‏ وفيروسات بكتيرية؛ مثلا ‎Bluescript pUC19 (pUCIS‏ (مثلا ‎(pBS SK+‏ ومشتقات من ذلك؟ 18مرس ‎(RP4 «pCR1 «ColE1 «pMB9 ¢pBR322 «mp19‏
15> بلعمة ‎(DNAs‏ ونواقل مكوكية ‎PAT28 5 pSA3 Jie‏ إن هذه النواقل ونواقل نسخ أخرى كثيرة متوافرة من باعة تجاريين ‎Invitrogen «Strategene «BioRad Jie‏ إن نواقل الإظهار بصفة عامة هي بنيات ‎polynucleotide‏ قابلة للنسخ تحتوي على ‎polynucleotide‏ طبقا للاختراع. من الضروري أن يكون ناقل الإظهار قابلا للنسخ في الخلايا © العائلة ‎episomes Jie Le‏ أو كجزء متكامل من ‎DNA‏ الكروموسومي. تتضمن نواقل إظهار مناسبة لكن بدون تحديد ‎cplasmids‏ نواقل فيروسية؛ متضمنة فيروسات غدية؛ فيروسات ملازمة لغدة؛ فيروسات ارتجاعية؛ ‎cosmids‏ وناقل ‎(ils)‏ إظهار» حسب الإعلان في؛ ‎lia‏ ‎PCT calla‏ رقم 87/04462 1770. تتضمن مكونات الناقل عامة؛ بدون تحديد؛ واحد أو أكثر مما يلي: ترتيب إشارة؛ مصدر نسغ؛ واحد أو أكثر من جينات دلالة؛ عناصر مناسبة للتحكم ‎٠‏ في النسخ ‎cline Jia)‏ معززات وعنصر إنهاء). للإظهار (أي؛ الترجمة)؛ هناك حاجة ‎sale‏ ‏أيضا لواحد أو أكثر من عناصر التحكم في الترجمة؛ ‎Jie‏ أماكن ربط ‎ribosome‏ أماكن بداية ترجمة»؛ ‎codons‏ إيقاف. يمكن إدخال النواقل التي تحتوي على ‎polynucleotides‏ الهامة في الخلية العائلة بأي عدد من الوسائل الملائمة؛ متضمنة تثقيب كهربي؛ استقبال حامل الجين من العائل باستعمال ‎«calcium phosphate <rubidium chloride «calcium chloride ٠‏ مصمصا«عل-عفتات أو مواد أخرى؛ تصادم دافع دقيق؛ إدخال دهن خارجي؛ وعدوى (مثلاء عندما يكون الناقل هو عامل معدي ‎Jie‏ فيروس جدري البقر). إن خيار إدخال نواقل أو ‎polynucleotide‏ سوف يعتمد دائما على سمات الخلية العائلة. يوفر الاختراع أيضا خلايا عائلة تشمل ‎Li‏ من ‎polynucleotides‏ الموصوفة هنا. يمكن ‎٠‏ استخدام أي خلية عائلة قادرة على إظهار زائد لأجل ‎DNAs‏ مغايرة بغرض عزل الجينات المشفرة للجسم المضاد» ‎«polypeptide‏ أو ‎protein‏ هام . تتضمن أمثلة غير مقيدة لخلايا عائلة من كائن ثديي لكن بدون تحديد ‎NSO «HeLa «COS WA‏ و0110. انظر ‎Lay‏ طلب ‎PCT‏ ‏رقم 87/04462 70. تتضمن خلايا ‎Alle‏ مناسبة من غير كائن ثديي بدائيات النواة ‎Jia)‏ ‎coli‏ .5 أو ‎(B. subtilis‏ وخميرة (مثل ‎¢S. pombe 5. cerevisae‏ أو ‎.(K. lactis‏ بصورة ‎Yo‏ مفضلة؛ تظهر الخلايا العائلة ‎cDNAs‏ عند مستوى أعلى حوالي © مرات؛ يفضل أكثرء أعلى حوالي ‎٠١‏ مرات؛ أيضا يفضل أكثر؛ أعلى حوالي ‎٠١‏ مرةٍ من ذلك للجسم المضاد أو ‎protein‏ ‏الهام الداخلي المقابل؛ عند وجوده في خلايا عائلة. إن فحص الخلايا العائلة للارتباط الخاص
ااي مع مولد مضاد يتم باختبار مناعي أو 585. يمكن تحديد خلية تظهر بدرجة زائدة الجسم المضاد أو ‎protein‏ الهام. (ج) التركيبات تشمل التركيبات المستخدمة في طرق الاختراع كمية مؤثرة من جسم مضاد معتمد على ‎JH ©‏ 56 مشتق من جسم مضاد معتمد على ‎(pH‏ موصوف هنا. إن أمثلة على تلك التركيبات؛ بالإضافة إلى كيفية صياغتهاء موصوفة أيضا في جزء سابق وأدناه. في بعض التجسيدات؛ تشمل التركيبة واحد أو أكثر من أجسام مضادة معتمدة على ‎pH‏ في تجسيدات أخرى؛ فإن الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ يدرك 708129 آدمي. في تجسيدات أخرى أيضاء يكون الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ هو جسم مضاد مكتسب للسمة الآدمية. في تجسيدات ‎٠‏ أخرى أيضا ؛ يشمل الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ منطقة ثابتة لا تثير استجابة مناعية غير مرغوبة أو غير مطلوبة؛ مثل تحلل بسبب جسم مضاد أو 800. في تجسيدات أخرى. يشمل الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ واحدة أو أكثر من (0017 من جسم مضاد (مثل ‎١‏ ‎cf oF oY‏ 0 أو في بعض التجسيدات؛ كل ‎CDRs‏ الستة). في بعض التجسيدات»؛ يكون الجسم المضاد المعتمد على ‎pH‏ هو جسم مضاد آدمي. يمكن أن تشمل إضافيا التركيبات المستخدمة في الاختراع الحالي مواد حاملة؛ مواد مسوغة؛ أو مواد مثبتة مقبولة دوائيا: ‎(Remington: The Science and practice of Pharmacy 20th Ed., 2000, Lippincott‏ ‎Williams and Wilkins, Ed.
K.
E.
Hoover),‏ في شكل مستحضرات مجففة بالتبريد أو محاليل ماثية. إن المواد الحاملة؛ المواد ‎٠‏ المسوغةء أو المواد المثبتة المقبولة غير سامة لمتعاطيها عند الجرعات والتركيزات ‎lanl‏ وقد ‎Jain‏ مثبتات الأس الهيدروجيني مثل ‎«citrate «phosphate‏ وأحماض عضوية أخرى؛ مضادات أكسدة متضمنة ‎¢methionine 5 ascorbic acid‏ مواد حافظة (مثل ‎thexamethonium chloride ¢octadecyldimethylbenzyl ~~ ammonium chloride‏ ‎¢tbenzyl alcohol 0 butyl «phenol ¢benzethonium chloride <benzalkonium chloride‏ ‎alkyl parabens Yo‏ مثل ‎methyl‏ أو ‎¢cyclohexanol ¢resorcinol ¢catechol ¢propyl paraben‏ ‎polypeptides ¢(m-cresol 5 ¢3-pentanol‏ قليلة الوزن الجزيئي (أقل من حوالي ‎٠١‏ متخلفات)؛ ‎albumin Jie ¢proteins‏ مصل» ‎«gelatin‏ أو ‎polymers ¢Igs‏ ماصسة للماء مقل
TA chistidine «asparagine «glutamine ¢glycine Jie amino acids ¢polyvinylpyrrolidone ‏أخرى متضمنة‎ carbohydrates ‏و‎ «disaccharides «monosaccharides ¢[ysine ‏أو‎ «arginine csucrose ‏سكريات مقل‎ (EDTA ‏عوامل كلابية مقل‎ ¢dextrans ‏أو‎ «mannose «glucose ‏معقدات فلز‎ ¢sodium ‏مضادة تشكل ملحا مثل‎ fons ¢sorbitol ‏أو‎ trehalose «mannitol «TWEEN™ (}_‘is jonic ‏و/أو منشطات سطح غير‎ ¢(Zn-protein ‏(مثلاء معقدات‎ © ‏إن مواد مسوغة مقبولة دوائيا موصوفة‎ -(PEG) polyethylene glycol ‏أو‎ PLURONICS™ ‏هنا إضافيا.‎ ‏في‎ pH ‏في أحد التجسيدات؛ يعطى الجسم المضاد في مستحضر كمحلول مائي معقم له‎ ‏مجم/‎ 7٠١ ‏مجم/ ملليلتر إلى حوالي‎ ١ ‏المدى من حوالي © إلى حوالي 1,5 ويشمل من حوالي‎ ‏مللي جزيئي‎ ٠٠١ ‏مللي جزيئي جرامي إلى حوالي‎ ١ ‏مليلتر من جسم مضاد؛ من حوالي‎ ٠ ‏مجم/ ملليلتر‎ ٠١ ‏مجم/ ملليلتر إلى حوالي‎ ١50٠ ‏من حوالي‎ chistidine pH ‏جرامي من مثبت‎ ‏مللي جزيئي جرامي إلى حوالي 50860 مللي جزيئي‎ ٠٠١ ‏من حوالي‎ cpolysorbate 80 ‏من‎ ‏مللي جزيئي‎ ١ ‏مللي جزيئي جرامي إلى حوالي‎ ١.0٠ ‏ومن حوالي‎ crehalose ‏جرامي من‎ : .disodium EDTA dihydrate ‏جرامي من‎ ‏يمكن أيضا استخدام الجسم المضاد المعتمد على 11م والتركيبات من ذلك في اتحاد مع‎ Vo ‏عوامل أخرى التي تعمل على تعزيز و/أو تكملة فعالية العوامل.‎ ‏(د) المجموعات‎ ‏يوفر الاختراع أيضا مجموعات للاستخدام في الطرق الحاضرة. تتضمن مجموعات‎ ‏الاختراع واحدة أو أكثر من الحاويات المشتملة الجسم المضاد المعتمد على 11م (مثل جسم‎ ‏مضاد آدمي) أو 56م موصوف هنا وإرشادات للاستخدام طبقا لأي من طرق الاختراع‎ ٠٠ ‏الموصوفة هنا. بصفة عامة؛ تشمل هذه الإرشادات وصف لإعطاء جسم مضاد معتمد على‎ ‏للمعالجات العلاجية الموصوفة أعلاه.‎ pH ‏في بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد مكتسب السمة الآدمية. في‎ ‏بعض التجسيدات؛ يكون الجسم المضاد هو جسم مضاد آدمي. في بعض التجسيدات؛ يكون‎ ‏الجسم المضاد هو جسم مضاد أحادي النسخ. إن الإرشادات الخاصة باستخدام الجسم المضاد‎ Ye ‏برنامج التجريع؛ وطريقة الإعطاء‎ ie pall ‏تتضمن عامة معلومات خاصة‎ pH ‏المعتمد على‎ ‏للمعالجة المعنية. قد تكون الحاويات عبارة عن عبوات ضخمة لجرعات وحدة (مثلا؛ عبوات‎
متعددة الجرعة) أو دون جرعات وحدة. إن الإرشادات المتوافرة في مجموعات الاختراع هي إرشادات مكتوبة نموذجيا على علامة أو نشرة داخلية في العبوة ‎Mid)‏ صفحة ورقية متضمنة في المجموعة)؛ لكن الإرشادات التي يمكن قراءتها بماكينة (مثلاء إرشادات محمولة على قرص تخزين مغناطيسي أو بصري) مقبولة أيضا. 0 إن مجموعات هذا الاختراع مقدمة في عبوات مناسبة. تتضمن العبوات المناسبة» بدون تحديد؛ زجاجات؛ قارورات» أواني» عبوة مرنة (مثلا؛ أكياس ‎Mylar‏ أو بلاستيك مانعة للتسرب)؛ إلخ. يمكن أيضا استخدام عبوات للاستخدام في اتحاد مع أدوات خاصة؛ مثل أداة استنشاق؛ أداة إعطاء ‎Sli) Ca‏ مرئذ) أو أداة تشريب مثل مضخة صغيرة. قد يكون للمجموعة منفذ وصول معقم (مثلاء قد تكون الحاوية في كيس محلول في الوريد أو زجاجة لها ‎٠‏ سدادة يمكن تقبها بإبرة حقن تحت الأدمة). قد يكون للحاوية أيضا منفذ وصول معقم (على سبيل المثال قد تكون الحاوية عبارة عن كيس محلول في الوريد أو زجاجة لها سدادة يمكن ثقبها بإبرة حقن تحت الأدمة) . يكون عامل نشط واحد على الأقل في التركيبة هو جسم مضاد معتمد على ‎pH‏ قد تشمل الحاوية ‎(Die)‏ سرنجة معبأة مسبقا أو حاقن آلي) إضافيا عامل ثان نشط دوائيا. قد توفر المجموعات اختياريا مكونات إضافية مثل مثبتات أس هيدروجيني ومعلومات تفسيرية. طبيعيا» تشمل المجموعة حاوية وعلامة أو نشرة (نشرات) عبوة داخلية على أو بمصاحبة الحاوية. الطفرات والتعديلات لإظهار الأجسام المضادة من الاختراع الحالي؛ يمكن أولا الحصول على أجزاء ‎DNA‏ ‎Ye‏ تشفر ‎VL VH‏ باستخدام أي من الطرق الموصوفة أعلاه. يمكن ‎Load‏ إدخال تعديلات متنوعة؛ مثلا طفرات؛ إزالات؛ و/أو إضافات في ترتيبات ‎DNA‏ باستخدام طرق قياسية معروفة للمهرة في الفن. على سبيل المثال؛ يمكن إجراء تكوين طفري بطرق قياسية؛ ‎Jie‏ تكوين طفري ‎(PCR-ia nis‏ التي يتم فيها دمج ‎nucleotides‏ الطفرية في مواد أولية ‎PCR‏ بحيث يحتوي منتج ‎PCR‏ على الطفرات المطلوبة أو تكوين طفري موجه لمكان. ‎FO‏ إن نوع استبدال؛ على سبيل ‎JE‏ يمكن القيام به هو تغيير واحد أو أكثر من ‎cysteines‏ ‏في الجسم المضاد » والذي قد يكون نشطا كيميائياء إإلى متخلف ‎Al‏ مثل؛ بدون تحديد؛ ‎alanine‏ أو ‎serine‏ على سبيل المثال» يمكن حدوث استبدال لأجل ‎cysteine‏ غير قويم. ‎(Say‏
Ye ‏أو منطقة إطار لمجال سيطرة متغير أو في المنطقة الثابتة من‎ CDR ‏إجراء الاستبدال في‎ ‏قويما.‎ cysteine ‏الجسم المضاد. في بعض التجسيدات؛ يكون‎ ‏في مجالات السيطرة المتغيرة للسلاسل الثقيلة و/أو‎ Die » ‏معدلة أيضا‎ Abs ‏قد تكون‎ ‏على سبيل المثال» يمكن إجراء طفرة في واحدة أو‎ (Ab ‏مثلا؛ لتعديل خاصية ارتباط‎ (Aisa) ‏من الجسم المضاد لمولد مضادء لزيادة أو تقليل‎ Kp ‏لزيادة أو تقليل‎ CDR ‏أكثر من مناطق‎ ‏أو لتعديل خصوصية ارتباط الجسم المضاد. إن التقنيات في التكوين الطفري الموجه‎ chor ‏وآخرين» أعلاه.‎ Ausubel 5 ‏وآخرين‎ Sambrook ‏لمكان معروفة جيدا في الفن. انظر؛ مثلا»‎ ‏يمكن أيضا إجراء تعديل أو طفرة في منطقة إطار أو مجال سيطرة ثابت لزيادة عمر‎
WO 00/09560 ‏رقم‎ PCT ‏انظرء مثلاً؛ منشور‎ pH ‏النصف للجسم المضاد المعتمد على‎ ‏مجال سيطرة ثابت لتعديل التولد المناعي للجسم المضاد؛‎ SFR ‏إجراء طفرة في‎ Lad ‏يمكن‎ ٠ ‏لتوفير مكان للتكافؤ التساهمي أو غير التساهمي مرتبط مع جزيء آخرء أو لتعديل تلك‎ ‏وحيد‎ Ab ‏طبقا للاختراع؛ قد توجد طفرات‎ LADCC 5 FoR ‏الخواص مثل تثبيت مكمل»؛ ربط‎ ‏لمجال السيطرة المتغير أو في مجال السيطرة‎ FRs ‏أو‎ CDRs ‏في أي واحدة أو أكثر من‎ ‏الثابت.‎ ‏يمكن إجراء طفرة لأجل‎ ¢(germlining) ‏في عملية تسمى 'تكوين خط جرثومة‎ Vo ‏و7 لمطابقة تلك الموجودة طبيعيا في ترتيبات خط‎ Vy ‏معينة في ترتيبات‎ amino acids ‏لمناطق الإطار‎ amino acid ‏بصفة خاصة؛ يمكن حدوث طفرةٍ في ترتيبات‎ Vi Vin ‏جرثومة‎ ‏لمطابقة ترتيبات خط الجرثومة لتقليل إمكانية حدوث تولد مناعي‎ Vis Vig ‏في ترتيبات‎ (FR9) ‏و7 آدمية معروفة في الفن؛‎ Vig ‏خط جرثومة لجينات‎ DNA ‏عند إعطاء طم. إن ترتيبات‎ ‏انظر مثلا:‎ ٠
The "Vbase" human germline sequence database; see also Kabat, E. A., et al., 1991,
Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of
Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Tomlinson et al., 1992,
J. Mol. Biol. 227:776-798; and Cox et al., 1994, Eur. J. Immunol. 24:827-836). ‏المحتملة‎ protein ‏يمكن القيام به هو إزالة أماكن التحلل‎ amino acid ‏إن نوع أخر لاستبدال‎ Yo ‏لمجال سيطرة متغير أو في‎ FR ‏أو‎ CDR ‏في الجسم المضاد. قد تتواجد تلك الأماكن في‎ protein ‏وإزالة أماكن التحلل‎ cysteine ‏المنطقة الثابتة من الجسم المضاد. إن استبدال متخلفات‎
فل قد يقال احتمالية التغاير في منتج الجسم المضاد وبالتالي يزيد تجانسه. إن نوع آخر لاستبدال ‎amino acid‏ هو ‎al‏ أزواج ‎casparagine-glycine‏ التي تشكل أماكن إزالة ‎amidation‏ ‏محتملة؛ بتعديل واحد من أو كل من المتخلفين. في مثال آخرء يمكن فصل ‎Iysine‏ الطرفي-© في السلسلة التقيلة من الجسم المضاد المعتمد على 1 من الاختراع. في تجسيدات مختلفة © للاختراع؛ قد تتضمن اختياريا السلاسل الثقيلة والخفيفة من الأجسام المضادة ترتيب إشارة. بمجرد الحصول على أجزاء ‎DNA‏ تشفر قطع ‎VL 5 VH‏ من الاختراع ‎call‏ يمكن إجراء معالجة إضافية لأجزاء ‎DNA‏ هذه بتقنيات ‎DNA‏ تخليقية قياسية؛ ‎Nia‏ لتحويل جينات المنطقة المتغيرة إلى جينات سلسلة ‎Ab‏ كاملة الطول؛ إلى جينات جزء ‎Fab‏ أو إلى جين ‎scFv‏ في هذه المعالجات؛ يكون جزء ‎DNA‏ المشفر-71 أو ‎VH-‏ متصل تشغيليا مع جزء ‎0٠‏ غلاط آخر يشفر ‎protein‏ آخر؛ ‎Jie‏ منطقة ثابتة ‎Ab‏ أو رابط مرن. إن المصطلح "متصل تشغيليا ‎(operatively linked)‏ حسب الاستخدام في هذا ‎(Bled)‏ يقصد به أن يعني أن جزئي ‎DNA‏ متصلان بحيث تظل ترتيبات ‎amino acid‏ المشفرة بواسطة جزثي ‎DNA‏ في إطار. إن 0108 المعزول الذي يشفر المنطقة ‎VH‏ يمكن تحويله إلى جين سلسلة ثقيلة كاملة الطول بتوصيل بطريقة تشغيلية ‎DNA‏ المشفر1711 مع جزيء ‎HAT DNA‏ يشفر مناطق ثابتة ‎١٠‏ سلسلة ثقيلة ‎CH2 «CHI)‏ و6113). إن ترتيبات جينات المنطقة الثابتة ‎ALLL‏ الثقيلة الآدمية معروفة في الفن؛ انظر مثلا: ‎Kabat, E.
A., et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth‏ ‎Edition, U.S.
Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-‏ )3242 ‎٠‏ ويمكن الحصول على أجزاء ‎DNA‏ تشمل هذه المناطق بتكبير ‎PCR‏ قياسي. قد تكون المنطقة الثابتة السلسلة الثقيلة هي منطقة ثابتة ‎dgG3 dgG2 «IgGl‏ 04ع1 ‎IgM (IgE (IgA‏ أو 0]. لكن أكثر تفضيلا أن تكون عبارة عن منطقة ثابتة 1801 أو 1802. قد يكون ترتيب منطقة ثابتة ‎IgG‏ هو أي من ‎alleles‏ أو الأنواع المتباينة المختلفة المعروفة بحدوثها ضمن أفراد مختلفين» ‎.Gm(17) 5 «Gm(3) «Gm(2) «Gm(1) Jie‏ تمثل هذه الأنواع المتباينة استبدال ‎amino acid Yo‏ طبيعي الوجود في المناطق الثابتة 801]. بالنسبة لجين سلسلة ثقيلة جزء ‎(Fab‏ ‏يمكن أن يكون ‎DNA‏ المشفر ‎VH-‏ متصلا تشغيليا مع جزيء ‎HAT DNA‏ يشفر فقط منطقة
ثابتة ‎CHI‏ للسلسلة الثقيلة. قد تشتق المنطقة الثابتة السلسلة الثقيلة ‎CHI‏ من أي من جينات السلسلة الثقيلة. يمكن تحويل ‎DNA‏ المعزول المشفر للمنطقة ‎VE‏ إلى جين سلسلة خفيفة كاملة الطول (بالإضافة إلى جين سلسلة خفيفة ‎(Fab‏ بالتوصيل تشغيليا لأجل ‎VL- jiiall DNA protein‏ © مع جزيء ‎DNA‏ آخر يشفر المنطقة الثابتة للسلسلة الخفيفة؛ .1©. إن ترتيبات جينات المنطقة الثابتة السلسلة الخفيفة الآدمية معروفة في ‎(dll‏ انظر مثلا: ‎et al.,1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth‏ مط ‎(Kabat, E.‏ ‎Edition, U.S.
Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-‏ )3242 ‎٠‏ ويمكن الحصول على ‎DNA shal‏ تشتمل على هذه المناطق بتكبير ‎POR‏ قياسي. قد تكون المنطقة الثابتة السلسلة الخفيفة هي منطقة ثابتة ‎kappa‏ أو ‎lambda‏ قد تكون المنطقة الثابتة ‎kappa‏ > أي من ‎alleles‏ المختلفة المعروفة بوجودها ضمن أفراد مختلفين؛ مثل ‎dnv(l)‏ ‎<Inv(2)‏ و(109)3. قد تشتق المنطقة الثابتة ‎lambda‏ من أي من جينات ‎lambda‏ الثلاثة. لتوليد جين ‎scFv‏ تتصل تشغيليا أجزاء ‎DNA‏ المشفرة-1711 و.171 مع جزء آخر يشفر رابط ‎٠‏ مرن؛ ‎Ole‏ يشفر ترتيب ‎«(Glys -Ser); amino acid‏ بحيث يمكن إظهار ترتيبات ‎VL VH‏ على أنه 03 سلسلة- وحيدة متجاور؛ وحيث تتصل المناطق ‎VL‏ و1711 بواسطة الرابط المرن» انظر مثلا: ‎Proc.
Natl.
Acad.
Sci.‏ ,1988 لة ‎(Bird et al., 1988, Science 242:423-426; Huston et‏ ‎USA 85:5879-5883; McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554).‏ ‎٠‏ قد يكون ‎Ab‏ وحيد ‎AL‏ أحادي ‎«sill‏ عند استخدام فقط ‎VL 5 VH‏ بمفرده؛ ثنائي التكافوء عند استخدام أكثر من اثنين من ‎VL VH‏ أو عديد ‎SI‏ عند استخدام أكثر من اثنين من ‎LVL 3 VH‏ قد تتولد ‎Abs‏ ثنائية الخصوصية أو عديدة التكافؤ ترتبط بصفة خاصة مع مولد مضاد ومع جزيء آخر. في تجسيد آخر؛ يمكن تحضير جسم مضاد اندماج أو تلاصق مناعي يشمل كل أو قسم ‎YO‏ من جسم مضاد من الاختراع متصلا مع ‎polypeptide‏ آخر. في تجسيد آخرء ترتبط فقط مجالات السيطرة المتغيرة من جسم مضاد مع ‎polypeptide‏ في تجسيد آخر؛ يتصل مجال السيطرة ‎VH‏ من جسم مضاد مع ‎polypeptide‏ أول ؛ بينما يرتبط مجال السيطرة ‎VL‏ من جسم
ل مضاد مع ‎polypeptide‏ ثان يلازم ‎polypeptide‏ الأول بطريقة بحيث يمكن أن تتفاعل مجالات السيطرة 1 ‎VL‏ مع بعضهما البعض لتكوين مكان ربط مولد مضاد. في تجسيد آخر ‎«Jude‏ يكون مجال سيطرة ‎VH‏ منفصلا عن مجال سيطرة ‎VL‏ بواسطة رابط بحيث يمكن أن تتفاعل مجالات السيطرة 1 .آل مع بعضهما البعض. يرتبط عندئذ الجسم المضاد ‎VL‏ ‎VH-Ly ©‏ مع ‎polypeptide‏ الهام. بالإضافة لذلك؛ يمكن أن تتولد أجسام مضادة اندماج تتصل فيها مع بعضها اثنين (أو أكثر) من أجسام مضادة وحيدة السلسلة. إن هذا مفيد عندما يطلب توليد جسم مضاد ثنائي أو متعدد التكافؤ على سلسلة ‎polypeptide‏ واحدة؛ أو عندما يطلب توليد جسم مضاد ثنائي الخصوصية. في تجسيدات ‎(opal‏ يمكن تحضير أجسام مضادة معدلة أخرى باستخدام جسم مضاد ‎٠‏ معتمد على ‎pH‏ يشفر جزئيات 8610 ‎nucleic‏ على سبيل المثال؛ يمكن تحضير: ‎“Kappa bodies” (Ill et al., 1997, Protein Eng. 10:949-57), “Minibodies” (Martin‏ ‎et al., 1994, EMBO J. 13:5303-9), “Diabodies” (Holliger et al., 1993, Proc.
Natl.‏ ‎Acad.
Sci.
USA 90:6444-6448), or “Janusins” (Traunecker et al., 1991, EMBO J.‏ ‎and Traunecker et al., 1992, Int.
J.
Cancer (Suppl.) 7:51-52)‏ 10:3655-3659 باستخدام تقنيات حيوية جزيئية قياسية باتباع تعاليم المواصفة. يمكن إنتاج أجسام مضادة ثنائية الخصوصية أو أجزاء تربط مولد مضاد بتشكيلة من الطرق التي تتضمن اندماج أورام هجينة أو ربط أجزاء ‎Fab’‏ انظر؛ ‎Mia‏ ‎Songsivilai & Lachmann, 1990, Clin.
Exp.
Immunol. 79:3 15-321, Kostelny et al.,‏ ‎J.
Immunol. 148:1547-1553.‏ ,1992 ‎Ye‏ بالإضافة لذلك؛ يمكن تكوين أجسام مضادة ثنائية الخصوصية مثل "أجسام 808 ‎"(diabodies)‏ أو ‎"Tanusins”‏ في بعض التجسيدات؛ يرتبط جسم مضاد ثنائي الخصوصية مع اثنين من ‎epitopes‏ المختلفة من مولد المضاد. في بعض التجسيدات؛ تحضر الأجسام المضادة المعدلة الموصوفة أعلاه باستخدام واحد أو أكثر من مجالات سيطرة متغيرة أو مناطق ‎CDR‏ من جسم مضاد آدمي متوافر هنا. ‎Yo‏ توليد أجسام مضادة خاصة بمولد مضاد إن أكثر من 9080 جسم مضاد عديد النسج أو أحادي النسخ يضاد ‎PCSK9‏ آدمي كامل الطول مصنع؛ 008129 فأري كامل الطول مصنع؛ 5 ‎peptides‏ مخلقة عديدة تقيم قدرتها
ا لخفض إجمالي ‎protein‏ 10118 في خلايا كبد آدمي 7 مزروعة. تتضمن تلك الأجسام المضادة مجموعة تقابل وتتفاعل مع مجموعة من ‎polypeptides 7١-١١‏ لمتخلف ‎camino acid‏ اعتمادا على بناء ‎PCSKY‏ ويتوقع أنها تغطي معظم سطح ‎protein‏ عند أعلى تركيز» يكون لأفضل الأجسام المضادة فقط حوالي 770 نشاط معيق. ° لذلك؛ قد يستخدم أسلوب بديل وغير مكتشف؛ يسمىء توليد أجسام مضادة أحادية النسخ بتحصين فران خالية من 7083169 مع ‎protein‏ 2051629 كامل الطول مصنع. ينتج هذا الأسلوب لتحضير جسم مضاد أجسام مضادة معارضة تظهر إعاقة كاملة لارتباط 805819 إلى ‎(LDLR‏ إعاقة كاملة لخفض مستويات ‎LDLR‏ يتوسطه 008169 في خلايا ‎(Huh7‏ ‏وخفض ‎LDLe‏ في الكائن الحي متضمنا فئران إلى مستويات ‎ALE‏ للمقارنة مع تلك الواضحة .7 ‏في 205169 -/- فئران؛ كالموضح في المثال‎ ٠ ‏لسلسلتين خفيفة وثقيلة لأجسام مضادة نموذجية من الاختراع الحالي؛‎ DNA ‏يوضح‎ ‏توضح في:‎ SL1721H23_6L3H3 5 SL1721H23_6L3
American Type Culture Collection (ATCC) ‏ويكون لها رقم الوصول‎ «Yo 09 ‏ديسمبر‎ YY ‏في‎ (Budapest Treaty ‏المصطلح‎ aa) ‏بالتالي يصعب‎ plasmids ‏الموضح في الجدول ؟. إن كل القيود على إتاحية مجموعة‎ ٠ ‏عند مناقشة براءة الاختراع من مواصفة الاختراع الحالي. إن مراجع‎ uid ‏إزالة‎ ‏هي على‎ SL1721H23_6L3 ‏لأجسام مضادة من أجل السلسلتين الخفيفة والثقيلة من‎ ‏إن مراجع لأجسام مضادة من أجل‎ -UC-H5L1721-6L3 ‏التوالي 170-1151123 و‎
UC-HSH23-6H3 ‏السلسلتين الخفيفة والثقيلة من 613113 51,17211123 هي على التوالي‎ .UC-H5L1721-6L35 ٠ ‏جدول ؟‎
ATCC ‏مرجع الجسم المضاد رقم وصول‎
PTA-10547 UC-H5H23
PTA-10548 UC-H5H23-6H3
PTA-10549 UC-HSL1721-61.3 Ye ‏الأمثلة‎
Yo ‏مثال 1: إعداد نموذج لجسم مضاد يرتبط بالاعتماد على الأس الهيدروجيني مع المولد المضاد‎
PCSK9 ‏يستخدم نموذج حاسوبي لتوقع إمكانية تأثير جسم مضاد مع ارتباط بمولد مضاد يعتمد‎
PCSK9 ‏على الأس الهيدروجيني على عمر النصف للجسم المضاد الذي يقلل تركيز مصل‎ ‏ميكروجزيئي جرامي كجرعة الجسم‎ ١ ‏من أجل إعداد هذا النموذج تعطى الافتراضات التالية:‎ © ‏يوم (لا تعتمد على لأس الهيدروجيني) كعمر النصف للجسم المضاد؛‎ ١١٠ ‏المضاد في الدم ؛‎ ‏يوم؛ من أجل جسم مضاد يعتمد على الأس‎ ٠٠١ ‏الفترة الزمنية لعملية محاكاة من‎ ‏يعد نموذج‎ Kp * Kop = ‏عند أس هيدروجيني متعادل‎ Kop ‏165/24/5؛‎ = Kan ‏الهيدروجيني؛‎ ‏عند‎ Kops ‏الأجسام الحمضية؛‎ Jah Koy ‏لارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني للزيادة في‎ ‏عند أس هيدروجيني متعادل.‎ 1 * Ko = ‏أس هيدروجيني حمضي‎ ٠ ‏تكون المعد لات الزمنية لتغيير لأجناس في النموذج محددة في معايير للنموذج بواسطة‎ ‏المعادلات المتباينة أدناه . عموما؛ يسمح للنموذج بالعمل مع مستويات لجسم مضادة مضبوطة‎ ‏عند صفر حتى تصل إلى مرحلة ثابتة؛ عند تلك الفترة الزمنية؛ تكون مضغة لجسم مضاد‎ ‏يسمح‎ Mic ‘ ‏من صفر إلى مستوى يعكس الجرعة‎ [mAD] ‏محاكاة بواسطة إعادة ضبط‎ ‏للنموذج الموصوف أدناه بالعمل.‎ ١ 2 = kp create = ‏ا‎ etiveuptake [7] - kr oteinon [LpLr]P] + kp 2 " LDLR] - k proteinon [LoL : LDLR]P] + kp of [pL -P- LDLR] - 2K on nontral [ma ‏[ماة‎ + Koff neutral [rma b- pl _ Ko meutrat [ra b- rr] + 2k meutral [rma b-P- 2 _ Kondouprarel P - Fete? ‏سام‎ ‎[LoL] = Ky create - ky crear [LoL] - K protein,on [LpLr]LDL] + ky op [LoL : LDLR] —proteimonlP - LDLRILDL]+ ‏ا‎ [LDL - P- LDLR] [LDLR] = ‏سيم‎ = ster LDLR]= K pin on ILDLRILDLY + ‏و‎ [LDL - LDLR]~ ke 101 on LDLREP] Y. + kp or [P- LDLR]+ Kyeepere LDL - LDLR], [ma 5] = -2/ ‏رو‎ neutral [mas]P] + Ko neutral [ma b- 71 - hate t8] ‏موا‎ intel + Kk endouptake 0 - A)F [ma ble + ko douptaice 0 7 AF [ma ‏ممم‎ ‎Vv Vv vi [na b- Pl =2 ‏ممما‎ [ma s]P] - Kor neutral [ma b- 7[ - Kop neutral [rma b- rir] + PL ‏ممم لو‎ [rma b-pP- pr] _ ‏لعا نا‎ b- 71 0 ‏لمم‎ [ma b- Pl, + ‏ممما‎ 0 AF [rma b- Plu. 2 2 - Kociveuptae [mab : P] [ma b-P- 2 = Kon neutral [mas * rlr] = 2K of5 neutral [ma b-P- 7[ _ ‏تممه ا‎ [mab -P- 2 . ‏اممو‎ [rma b-P- Pl. + ‏مسا( - 0 ا‎ b-P- Plu
V 2 - 2k ctivenptake [rma b-P- 2 [LDL- LDLR] = ‏...ا‎ ILDLRILDL]~ ‏وب‎ [LDL - LDLR]- k 1,1 on [LDL - LDLRYP] 8 + ‏لومم‎ P- LDLR]~ ‏-تصنام... :ا‎ LDLR] ‏م‎ ّ LDLR] = K protein,on [LoLr]P] = kp or [Pp : LDLR] - K protein,on [rp ١ LDLR]LDL] + ky yy [LDL P- LDLR]- Kippornie [P - LDLR] [LDL-P-LDLR] - ‏اهنا ...م‎ LDLRIP]- kp ofr [LDL - P- LDLR]+ k,, 01, [P- LDLR]LDL] — ky op [LDL- P- LDLR]~ ‏-اصللي....ما‎ P- LDLR]
Ye ‎LDLR],,‏ : م ‎LDLR] - Kreepcte‏ ّ م عونا وزوز = ‎LDLR],‏ ّ م ‎[LDL-LDLR),, = ‏«عاصنا ممما‎ LDLR)~k,,,,..[LDL- LDLR],, ‎[LDL-P.LDLR], = kypprnaie [LDL P- LDLR]~ ‏نهنا..ما‎ P- LDLR], Yo ‎4 k., ouptake mAb -k,, oupta A mAb ari [ma blu = CL - 2k, neutral [ma blur, (PL... early k,, ouptake 1-AjmAb ari + Kor neutral [ma b- 2 = ‏...ا‎ Atl, early , 7 01 Pl-k take ‏وال‎ ar ‏ماما‎ = Srl] bese Alken - 27 py peutrat [masl.., [PL.., + Koff neutral [mab : Pl. k 1-A)P = k,, neutral [map : Pl, [PL..., + 2k ‏وو‎ neutral [mas -P- Plo, - btm Wy early ‎Ye yy , mAb - 7 [- ‏-فمضإمى....مومية‎ PL, [ma b- Pl. = Sate 19: PI ‏مها‎ Ath Ply, + 2k py neutral [rma b | [PL.., early - Koff neutral [rma b- Plo, = Ko neutral [ma b- Plo, [PL.., + 27 ‏امهم و‎ [ma b-P. Ploy, _ ‏وزومو‎ 0 - A)fmab : Plas
Yearly ! K endouptake [rma b-P- 7[ - K endouptare A [ma b-pP. Pl, [ma b-P- 2 = - vv. + kop neutral [ma b- Ploy (PL... early k 1-AjfmAb-P-P _ 2 ofp metal [ma b-P- 2 _ endouptake ( 7 ‏ب بأ‎ early ! k., oupta 1- ar [na ‏ممأة‎ = CT ‏افأ‎ - 2K op acidic [ma 1 ‏.ماما‎ + Kor acidic [a b- Pl... 5 late _ K endouptate 0 —-A Xt - F)mA blue
Viate ! ‏ا‎ endouptate 0 0 ‏وساماله‎ ‎[Pl = v_ = 2k op gcidic [ma blue 2. + Kor ‏للم‎ [ma b- Plu - Kon acidic [map : Plu. ‏.ماما‎ ‎late ‎+ 2K yr ‏م‎ [ma b-P- Plu _ het = AJP. ate ٠ ‏...مم‎ AYmAb- PL, [ma b- Plu = hope 4 ‏سا ف‎ + 2k op acidic [ma b lie ‏ماما‎ - k off acidic [ma b- Pl... late k 1-A)F|mAdb- P - Kon geidic [ma b- Pl... [Pl + 2k op acidic [ma b-P- Plu - Seal te Phe ate _ LS — 0 -A Xt - F)mA b- Plie
Viate
Ye rk 1-AfmAb-P-P [ma b-P- Pl... = ‏اماه = المسمفه؟‎ P- Ply + Kop acidic [ra b- Plc ‏ماما‎ - 2k of ‏م‎ [mas -P- Plus late _ ‏مسرم‎ 0 AF [ma b-P. Plc. _ I — 0 -24 Xa - ‏مسلا‎ b-P- Plu.
Viste Viate [ma Ble = 2k op acidic ‏ممافكما‎ 2 + Koff acidic [ma b- Plone - ko gouptake 0 - AN - Fm ‏ممأ‎ ‎_ Oh ‏ممم‎ 0 -A ‏ممأ سام‎
V active 2 = 2k pp pcidic [ma b | ‏اما‎ + Kot acidic [mas : Pie - kop acidic [map : Plcve [PL Yo + 2k off acidic [ma b-pP- 2 = 0 ppdouptake 0 ~A ‏ماما‎
YA
[nb Pls = ‏,م2 + سوام طلقا مممسممة‎ pic AB Lie [Puce = ‏مهروما‎ Ib ‏ما‎ ‎- ‏.وما‎ 45 Pligg [Place + ‏وملة‎ ace 1145 P- ‏-المسومسما = مصمات‎ Amb Plo, [tb P- Plus. = Wscireupuse mab - P- ‏و2 - مساظامهمأت - ففهأ ريما + وام‎ Imad - P+ ‏مات‎ ‎- ‏مومه‎ - Amb - P+ ‏مهما‎ ‏توصف أدناه المعايير المستخدمة في النموذج. في بعض الحالات؛ تشتق المعايير من‎ ‏كميات مقاسة أو مناسبة فسيولوجيا؛ توضح تلك المعايير في الجدول أدناه.‎ © ‏تعتمد على الأس‎ mAb = (AS) ‏لا تعتمد على الأس الهيدروجيني؛‎ mAb = (N) ١ ‏الجدول‎ ‏الهيدروجيني‎ ‏سس | معدل الترتيب الأول لامتصاص 708169 | (10)2// سس شد‎
Lal)
LDLR
LDL v4 0 ‏م‎ kp,
PCSKO/LDLR ‏ثابت معدل انفصال‎
PCSKI/LDLR ‏انجذاب‎ ‎a ‏ف م‎ 5 ok ‏(7/1112داخلى‎ LDLR ‏معدل الترتيب الأول لإدخال‎
LDLR ‏النطاق الزمني لإدخال‎ 1% $ “ 535 52 k ‏إعادة تدوير معدل الترتيب الأول لإعادة تدوير (1/111)2 إعادة تدوير‎
LDLR rx ri 3 ‏لق‎ ‏ثانية”‎ Taba ‏جزيئي‎ Tox), 0) | POSK9/aldadll ‏|معدل ارتباط الجسم‎ .** kon ™ )7,4 ‏(أس هيدروجيني‎ ‏جزيئي جرامي”'‎ Ye x LT (AS) ' ‏ثانية‎ ‎(N) Tl "٠١ * £,A0 | ‏تلات .| معدل انفصال الجسم المضاد/768»9‎ (Vf ‏(أس هيدروجبني‎ a9 ‏ادف قا‎ "ba ‏جزيئي‎ "٠١ X 3,72 | ‏حت |معدل ارتباط الجسم المضاد/008»9‎ 00 ' ‏ثانية‎ (Vf ‏(أس هيدروجيني‎ “ils ‏ل 2 جزيئي جرامي”'‎ 1" (AS)
ON) EE ٠١ x 1,54 | PCSKOslad) ‏معدل انفصال الجسم‎ | oF (0,0 ‏(أس هيدروجيني‎ ‏ميكرولتر/ دقيقة‎ A | ‏أ امتصاص داخلي جم معدل الامتصاص داخل أجسام‎ ‏داخلية مبكرة‎ ‏ا ودين عدا‎ |. pa ‏(بدون أبعاد)‎ ٠ avy ‏فعالية إعادة تدوير جسم مضاد يتوسطها‎ F
FcRn 3) £ | als pan aled ipa play | 9]
Ae ‏مائع)‎ ‏لأس‎ Kp ‏ينتج عن زيادة نسبة‎ .١ ‏تتضح إحدى التصورات لإعداد النموذج في الشكل‎ ‏هيدروجيني داخل الجسم (أي أس هيدروجيني 50,0 7)/ أس هيدروجيني فسيولوجي 1,4 من‎ ‏عند تغير‎ Kp ‏زيادة تركيز الجسم المضاد مع الزمن؛ الذي يضبط بقيمة نسبة‎ AY ‏إلى‎ ١ )7 ‏يتغير تركيز المركب الترابطي الحر من المولد المضاد (الشكل‎ dion ‏أو »,1 أو‎ Kp ‏نسبة‎ ‎oY ‏(الشكل‎ Kp ‏بالإضافة إلى تركيز الجسم المضاد (الشكل ") في ارتباط مع زيادة نسبة‎ © ‏(الشكل ؟(ب)). لا تعتمد تلك النتائج على إذا ما كان‎ kon ‏(الشكل “(أ)) وانخفاض‎ kogr ‏زيادة‎ ‎.1 ‏الأس الهيدروجيني داخل الجسم *,5 أو‎
‎Las‏ صورةٍ للخريطة الحرارية (الشكل 4؛) من أجل نموذج عام لأجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني؛ التي توضح جيدا عدد الأيام اللازمة لجسم مضاد مع ارتباط ‎٠‏ يعتمد على الأس الهيدروجيني لخفض تركيز مصل المولد المضاد أقل من التركيز لجسم مضاد لا يعتمد على الأس الهيدروجيني. توضح أيام الانخفاض الشديد في التركيز بواسطة العدد الصحيح من: ((0,..)0(/)0....070)-1 من اليوم صفر إلى اليوم ١٠٠؛ ‎Sie‏ إن ‎٠‏ انخفاض في تركيز المصل لمدة ‎N‏ يوم يتبعه الرجوع إلى مستوى ما قبل المعالجة يقابل ‎N‏ يوم للانخفاض الشديد في التركيز. توضح الخرائط الحرارية زيادة في عدد أيام الانخفاض ‎١٠‏ الشديد في التركيز لأجسام مضادة تعتمد على الأس الهيدروجيني؛ بالمقارنة مع أجسام مضادة مقارنة؛ اعتمادا على ‎Kp‏ عند أس هيدروجيني متعادل وأيضا فإن نسبة ‎Kp‏ هي (08. تلاحظ التأثيرات عبر كل قيم ‎Kp‏ المعدة للنموذج؛ تحديدا بين ‎0,0٠‏ و١٠٠٠‏ نانوجزيئي جرامي؛ وتحديدا أكثر بين ‎Kp‏ من ‎١,١‏ إلى ‎٠١‏ نانوجزيئي جرامي. تؤدي تغيرات في بعض المعايير» مثل؛ مقاس الجرعة؛ حركيات الجسم ‎aba)‏ الفترةٍ الزمنية للمحاكاة؛ أو كميات أخرى إلى
‎Ye‏ بعض الاختلافات في القيم الموضحة على الخرائط الحرارية. إن التقديرات المعدة للنموذج من أجل أداء الأجسام المضادة 008129؛ مع أو بدون ‎Lali)‏ ‏يعتمد على الأس الهيدروجيني؛ تتناسب جدا مع النتائج التجريبية الفعلية. في ‎Jal‏ #لأ)؛ يوضح إجمالي تركيز الجسم المضاد مع الزمن بعد إعطاء الجسم المضاد 5810 الذي لا يعتمد ارتباطه على الأس الهيدروجيني وتكون نسبة ‎Kp‏ هي ‎.١١‏ توضح مستويات ‎LDL‏ ‎Yo‏ متطابقة في الشكل *(ب). في الشكل ١(أ)؛‏ يوضح إجمالي تركيز الجسم المضاد مع الزمن
AY
‏الذي له ارتباط يعتمد على الأس‎ SL1721H23_6L3H3 ‏بعد إعطاء الجسم المضاد‎ ‏مناظرة. لتلك النماذج‎ LDL ‏يوضح الشكل 7(ب) مستويات‎ .١ 6,4 Kp ‏الهيدروجيني ونسبة‎ ‏تجريبية للأجسام‎ Kp ‏والتجارب في الشكلين 150 يقدر أس هيدروجيني 0,0 وتحسب قيم‎ ‏المضادة عند الأس الهيدروجيني 10,0 يوضح جسم مضاد يرتبط اعتمادا على الأس‎
LDL ‏الهيدروجيني إجمالي تركيز جسم مضاد ثابت لفترة أطول وتثبيط لفترة أطول لمستويات‎ © ‏يوضح المثال 4 توضيح إضافي لنموذج عام للأجسام المضادة التي‎ (SATO ‏بالمقارنة مع‎ ‏ترتبط اعتمادا على الأس الهيدروجيني.‎ ‏مثال 2: توليد ومسح أجسام مضادة ضد 708169 مع ارتباط 208129 يعتمد على الأس‎ ‏الهيدروجيني‎ ‏من الجسم المضاد 15/810 أحادي النسخ‎ CDRs ‏لكل‎ histidine ‏يجرى توليد طفري لمسح‎ ٠١ ‏هذا الجسم المضاد من جسم مضاد 5810 أحادي‎ Lay .)5810 hu ‏(يعرف أيضا بالإطار‎ ‏النسخ فأري (يعرف أيضا مثل 5810.38)؛ لكن له مناطق إطار آدمية. يوضح أدناه ترتيب‎ ‏بخط تقيل):‎ CDRs ‏الجسم المضاد 15/810 المستخدم كجزيء تركيبي بادئ (تكتب‎ ‏سلسلة خفيفة متغيرة:‎
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSA ‏مد‎ ‎SYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATY YCQQRYSTPRTFGQGTKL
EIK
)١ ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ ‏سلسلة ثقيلة متغيرة:‎
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWM AR
GEINPSGGRTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR
ERPLYAMDYWGQGTTVTVSS
(Y ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ ‏في‎ Fabs ‏يستنسخ الجسم المضاد 15810 في ناقل إظهار بكتيري؛ الذي يسمح بإظهار‎ ‏مما‎ chistidine ‏إلى‎ CDR ‏باستخدام المواد الأولية» يتحور كل موضع‎ .E. coli ‏في‎ periplasm ~~ Yo .15810 ‏مفردة للجسم المضاد‎ histidine ‏طفرات‎ OA ‏ينتج‎
AY
‏بعد‎ BE. coli ‏في‎ periplasm ‏مفردة في‎ histidine ‏تظهر أ لأجسام المضادة مع تلك طفرات‎ ‏تقاس انجذابات‎ (CHI ‏على © طرفية في‎ histidine ‏الحث مع 1016 وتتقى باستخدام ملحق‎ ‏نقية عند الأس الهيدروجيني 8 و4 ,لا مع ©:31800. توجد الطفرات التي تحث النسبة‎ Fabs 112 12 <L1) ‏مختلفة‎ CDR’s ‏في أربع‎ ١4 ‏الأس الهيدروجيني‎ foe ‏الهيدروجيني‎ Ud Kp ‏المعتمد على الأس الهيدروجيني بين انخفاض أدنى وانخفاض شديد.‎ Kp ‏و113). يتراوح تغير‎ © [0,0 ‏للأس الهيدروجيني‎ Kp ‏و112) تزيد النسبة‎ 12 »11( CDRs ‏إن طفرات من ثلاث‎ ‏بدون الإضرار بالانجذاب عند الأس الهيدروجيني 7,4 وتتولد الأجسام‎ Vif ‏الأس الهيدروجيني‎ ‏تشمل تلك الطفرات. من أجل 15810 وكل الطفرات؛ يكون ترتيب‎ CDRs ‏المضادة المتحدة مع‎ ‏(تعريف الترتيب رقم: 1). من أجل‎ GYTFTSYYMH ‏هو‎ 060181 (HI) ‏السلسلة الثقيلة‎ ‏يكون ترتيب السلسلة الخفيفة‎ SL1721H23_6H3 5 AD ‏طفرات أحادية؛ ثنائية؛‎ 5A10 ٠ ‏من أجل الطفرات ناضجة الانجذاب الأخرى والطفرات‎ .QQRYSTPRT ‏هو‎ CDR3 )03( ‏تتضح‎ .)١١ ‏(تعريف الترتيب رقم:‎ QQRYSLWRT ‏المعتمدة على 1.113» يكون 13 هو‎ ‏أدناه.‎ ١ ‏لأجسام مضادة تشمل تلك الاتحادات المختلفة للطفرات في الجدول‎ CDR ‏ترتيبات‎ ‏تتوفر محددات لرقم الترتيب بين القوسين.‎ 3 ‏جدول‎ Yo ‏طفرات‎ ‏مفردة:‎ ‎ew ‎TT Tesoowmam wena 0 ‏سمي ا‎ 0 ‏اتن‎ 1١1١لا٠ل0‎
ERPLHAMDY
‏الث‎ ‏طفرات‎ ‏ثنائية:‎ ‏ااا‎ | svi 000 ‏ممعي في | ا‎ ‏مم | متسس‎ wey
AY
51.21 ooo ‏لتنا‎ [5 mesma [se ‏طفرات‎ ‏ثلاثية:‎ ‎511721 ‎EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | HASYRYT(11) | KASQDVHTAVA(10) H23 he EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | SASHRYT(18) | KASQDVHTAVA(10)
ERPLHAMDY SASHRYT(18) | KASQDVHTAVA(10) (21) H35 ‏طفرات‎ ‏ناضجة‎ ‏الانجذاب:‎ ‎ERPLYASDL SLI721 © EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | HASYRYT(11)| KASQDVHTAVA(10) | H23_6
H3 5L1721
EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | HASYRYT(11) | KASQDVHTAVA(10) | H23_6L 3 1-4
EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | SASHRYT(18) | KASQDVHTAVA(10) | H23_6L 3
ERPLYASDL SL1721 © EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | HASYRYT(11) | KASQDVHTAVA(10) | H23_6L 3H3 501724
EIHPSGGRTNYNEKFKS(7) | SASHRYT(18) | KASQDVHTAVA(10) 3H3 ‏طفرات‎ ‏تعتمد على‎ :L1L3 ©) [moon [mewn | ‏وتسم‎ ‎even msoumsatan [am ‏الس‎ ‎.5810.38 ‏لا تتضح تغيرات في ترتيبات الإطار لتلك الأجسام المضادة بالمقارنة مع‎
SL1721H23 613 ‏تتوفر أدناه ترتيبات السلاسل الثقيلة المتغيرة من‎ (JU ‏على سبيل‎ ‏و51,17211123_613113. تستخدم نفس السلسلة الخفيفة المتغيرة في كل من تلك الأجسام‎ ‏بالخط الثقيل.‎ CDRs ‏المضادة وأيضا تكون متوفرة أدناه. تكتب‎ :5L1721H23_6L3H3 ‏و‎ SL1721H23 6L3 ‏سلسلة خفيفة متغيرة من‎ ©
ْ د ‎DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQDVHTAVAWYQQKPGKAPKLLIYHA‏ ‎SYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQRYSLWRTFGQGTK‏ ‎LEIK‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎(V‏ ‏© سلسلة ثقيلة متغيرة 613 ‎:5L1721H23‏ ‎QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWM‏ ‎GEIHPSGGRTNYNEKFKSRVITMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR‏ ‎ERPLYAMDY WGQGTTVTVSS‏ (تعريف الترتيب رقم: 4) :5L1721H23 613133 ‏سلسلة ثقيلة متغيرة‎ ٠
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWM
GEIHPSGGRTNYNEKFKSRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCAR
ERPLYASDL WGQGTTVTVSS
(تعريف الترتيب رقم: 0( ‎VO‏ سلسلة خفيفة متغيرة ‎(kappa)‏ من ‎SL1721H23_6L3‏ و ‎:5L1721H23_6L3H3‏ ‎gatatccagatgacacagtceccatectecetgtetgectetgtgggegaccegegteaccatcacctgeaaggectetea‏ ‎ggatgtgcatactgetgtagectggtatcageagaagecaggeaaagecccaaaactgetgatctaccatgeateetace‏ ‎gctacactggtgteccatcacgettcagtggeagiggetetggtacagatttcaccttcaccattagecagectgeaaccag‏ ‎aagatattgccacttattactgccagcaacgttatagictgtggegeacgttcggtcaaggeaccaagetggagatcaaa‏ ‎٠‏ (تعريف الترتيب رقم: ‎(VY‏ ‏سلسلة ثقيلة متغيرة من 51,17211123_61.3113: ‎caggtgcagetggtgcagtetggtgctgaggtgaagaagectggegettcegtgaaggtttectgecaaageatetggita‏ ‎cacctttaccagetactatatgeactgggtgegecaageccetggteaaggectggagtggatgggegagattcatecta‏ ‎geggcggtegtactaactacaatgagaagttcaagagecgegtgactatgactegegatacctecaccageactgtetac‏ ‎atggaactgagctctctgegetctgaggacactgetgtgtattactgtgeccgegagegeeccctgtatgetagegacctg Yo‏ ‎tggggccagggtaccacggtcaccgtctectca‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: ‎(YE‏
AO
‏عند أس هيدروجيني‎ Kp ‏عند 4,/ا ونسبة‎ Kp ‏تظهر تلك الأجسام المضادة وتنقى لتحديد‎ ‏السطح‎ plasmon ‏رنين‎ Biacore 0 ‏8م أس هيدروجيني 4 ,7؛ كما يقيس المجس الحيوي‎
HBS-EP ‏مجهز مع رقاقة لجس درجة البحث باستخدام مثتبت أس هيدروجيني متدفق‎
Ms ‏ضد‎ IgGs ‏تقترن‎ .(Biacore AB, Uppsala, Sweden — now GE Healthcare) ‏عند مستويات التشبع على الرقاقة التي تستخدم كيمياء‎ amine ‏عديدة النسخ أرنبية مع‎ 0
N-hydroxysuccinimide/ ethyldimethylaminopropyl carbodiimide ~(NHS/EDC) ‏مجم/‎ ١ + BSA ‏مجم/ ملليلتر‎ ١ + HBS-EP ‏قياسي. يتبدل مثبت الأس الهيدروجيني إلى‎ ‏ميكروجرام/ ملليلتر‎ ١١ ‏كاملة الطول إلى حوالي‎ 705169 IgGs ‏تخفف‎ .CM-dextran ‏ملليلتر‎ ‎[RU 08 ‏وتستبقى لمدة دقيقة واحدة عند © ميكرولتر/ دقيقة لإعطاء مستويات من حوالي‎ ‏نانوجزيئي‎ ٠١ 7-7, ‏خلية تدفق؛ مع ترك إحدى القنوات فارغة لتعمل كقناة المرجع. يحقن‎ ٠ ‏نانوجزيئي جرامي 1708129 في صورة سلاسل ثلاثة‎ Yo 6-7,8 4 ‏جرامي 1708129 أو‎ ‏ميكرولتر/ دقيقة. يراقب الانفصال‎ ٠٠١ ‏أضعاف من خمسة أعضاء لمدة دقيقة واحدة عند‎ ‏مللي جزيئي‎ ٠٠١ ‏لمدة © دقائق. يعاد توليد الرقاقة بعد الحقن الأخير في كل معايرة مع‎ ‏ثانية مرتين. إن دورات مثبت الأس الهيدروجيني التي توفر‎ 7١ ‏كل‎ phosphoric acid ‏جرامي‎ ‏الفوارغ من أجل التأكيد المزدوج على البيانات؛ تكون عندئذ ملائمة عالميا لنموذج ارتباط بسيط‎ ٠ ‏باستخدام برنامج 1 «متتقتطه»©31:2. تستنتج الانجذابات من خارج قسمة ثوابت معدل‎ 7 ‏مك). توضح نتائج الانجذاب من أجل 708129 آدمي في الجدول‎ = Kotor) ‏الحركية‎ ‏وتوضح نتائج الانجذاب من أجل 008169 فأري في الجدول 8. توضح تلك البيانات إمكانية‎ ‏تصميم وانتقاء الأجسام المضادة ليكون لها انجذاب أعلى تجاه 705169 آدمي أو فأري عند‎ 0,0 ‏وانجذاب أقل عند الأس الهيدروجيني‎ VLE ‏الأس الهيدروجيني‎ ٠ ‏انجذابات الارتباط لأجسام مضادة ضد 208169 ترتبط مع 708129 آدمي عند الأس‎ oY ‏جدول‎ ‎0,05 VY, 4 ‏الهيدروجيني‎ ‏م‎ ‎aM | ®Ru) | am) | avs) | ‏تم‎ | RU) | (Us) | ‏تمه‎ ‎553 ‏ا‎
A
2.61E- | 1.105+ 2.01E- | 5.02E+ 1 Y¢ 6 3 1¢
I, vor | are | 00166 4507 | ws avs | 214E- | 3.09E+ | SL1721H23_6 04 04 04 L3 vo van | 772B-| 415+ ١ ‏ب‎ | 273E- | 3.74E+ | SL1721H23_6 03 05 04 04 H3
YY 1.24E+ 3.99E- | 3.17E+ ١ "<1 ٠١ VY 4]. es nv | ‏.م‎ | 789E- | 9.55E+ ‏ى‎ | yoy. | 342E- | 2238+ ١ 6 03 04 04 04 L3H3
Yeo te | veo. | rir | 754+ i. ay. | 790E- | 3398+ | 5L1724H23 6 v 04 04 04 L3 238E- | 6.55E+ 733E- | 5.81E+
Y,q yay ive 71 AY 793E- | 2.03E+ ya ١6 ص9١‎ ‏ءاسا‎ ew ‏ناتوجزيئي جرامي‎ :4 ‏ثانية)‎ /١( :)1/9( ‏ضد 708169 ترتبط مع 708169 فأري عند الأس‎ alias ‏جدول 8: انجذابات الارتباط لأجسام‎ ‏الهيدروجيني ¢ ولأ و5,5.‎ ‏ممم‎ ‎wd) msPCK9 msPCK9 ‏الأس الهيدروجيني 8,0 الهيدروجيني‎ ١,4 ‏الأس الهيدروجيني‎ 1/8 om | ‏وله مع‎ | ams) | ‏هتم‎ | RU) | (15s) | (1/Ms) a ET Ed Ec ‏ع‎ ‏مساك‎ or [or ‏سمه مسرا‎ ‏كا‎ won ‏مجم سد‎ ‏ده امسا سالا .ا‎ [few [ar 0.0428 | 1.05E+05 6.708 4.75E+04 | SL1721H23 6L3 soe | Laz 0 vor | smn ‏ضف‎ oe [A or | rm ‏انا نح انا الا ا‎ [| ee - ‏سا‎ Eee] ‏سمه‎ ‏)/لد: نانوجزيئي جرامي‎ © ‏ثانية)‎ /١( :)1/9(
AY
‏تكون كل المعايير الحركية ومعايير الانجذاب للأجسام المضادة 15810 التي تعارض‎ ‏بالإضافة إلى الأجسام المضادة 1111430017 التي تعارض‎ SL1721H23_6L3H3 5 PCSK9 ‏في الجدول *). تجرى كل التجارب على المجس‎ Sie (US2010/0166768 ‏(إانظر‎ 69 .Biacore 2000 ‏الحيوي‎ ‏آدمي بتتنشيط كل خلايا التدفق لرقاقة المجس‎ Fo ‏تحضر رقاقة مجس المضاد‎ ° ٠٠١و‎ 206 ‏(حجم/ حجم) خليط من 500 مللي جزيئي جرامي‎ Vi) ‏مع‎ Biacore 4 ‏ميكرولتر/ دقيقة. يخفف عامل‎ ٠١ ‏دقائق؛ عند معدل تدفق‎ ١ ‏لمدة‎ NHS ‏مللي جزيئي جرامي‎ ‏آدمي:‎ Fe ‏كاشف لمضاد‎ (Goat F(AB')2 Fragment to Human IgG Fc, Cappel Catalog #: 55053) ‏عند أس‎ Sodium Acetate ‏مللي جزيئي جرامي‎ ٠١ ‏ميكروجرام/ ملليلتر في‎ ٠ ‏إلى‎ ٠ ‏ميكرولتر/ دقيقة. تعاق‎ ٠١ ‏دقائق بمعدل‎ ١ ‏هيدروجيني © ويحقن على كل خلايا التدفق لمدة‎ ‏في ١٠٠١مللي جزيئي‎ ethylenediamine ‏مللي جزيثي جرامي‎ ٠٠١ ‏كل خلايا التدفق مع‎ ‏دقائق بمعدل‎ ١ ‏لمدة‎ Ao ‏عند أس هيدروجيني‎ Borate ‏جرامي من مثبت الأس الهيدروجيني‎ ‏ميكرولتر/ دقيقة.‎ ٠ ‏يجرى اختبار الحركيات باستخدام طريقة معايرة حركية كالموصوفة في:‎
Karlsson et al., Anal. Biochem 349, 136-147 (2006). ‏على خلايا التدفق أسفل التيار‎ (SL1721H23_6L3H3 ‏يثبت نفس الجسم المضاد (مثل‎
Fo ‏ميكرولتر/ دقيقة لمدة‎ ٠١ ‏(خلايا تدفق © £57( عند 7 ميكروجرام/ ملليلتر بمعدل تدفق‎ ١ ‏و؛ على التوالي. تستخدم خلية التدفق‎ ١ 7 ‏ثانية و١١ ثانية لخلايا التدفق‎ ٠ ‏ثانية‎ ‏ميكرولتر/ دقيقة على‎ Fr ‏بمعدل‎ 705129 (ing ‏كسطح مرجعي. بعد تثبيت الأجسام المضادة»‎ *٠ ‏كل خلايا التدفق في سلسلة من الحقنات من تركيز أقل إلى تركيز أعلى. إن تركيز القمة هو‎ ‏نانوجزيئي جرامي 205129 ويكون معامل التخفيف هو ثلاث أضعاف. تستغرق كل حقنة‎ 0 ‏نانوجزيئي جرامي 708169 هي‎ Yoo ‏دقيقتين» تكون الفترة الزمنية للانفصال بعد حقن‎ 69 ‏دقيقة. تجرى مجموعة من الحقنات المتماثتلة مع مثبت أس هيدروجيني متدفق في مكان‎ ٠
Myszka, J. Mol. ‏من أجل المرجعية المزدوجة (توصف المرجعية المزدوجة في‎ 20869 ٠ ‏بعد كل دورة تحليل يعاد توليد كل خلايا التدفق مع ثلاث‎ .(Recognit 12, 279-284, 1999 ‏إن مخططات المجس‎ (Phosphoric Acid ‏مللي جزيئي جرامي‎ VO ‏ثانية من‎ ٠١٠ ‏حقنات كل‎
AA
Langmuir ٠:١ ‏جسم مضاد تتتاسب عالميا مع‎ [PCSK9 ‏و؟ لزوج من‎ ١ ‏من خلايا التدفق‎ ‏بسيط مع نموذج ارتباط لنقل كتلة.‎ ‏تجرى التجارب عند الأس الهيدروجيني 7 و4 ,7 باستخدام عينة ومثبتات أس هيدروجيني‎
Sodium ‏مللي جزيئي جرامي‎ ٠5١ «Sodium Phosphate ‏مللي جزيئي جرامي‎ ٠١ ‏متدفقة من‎
Sodium يمارج ‏مللي جزيثي‎ ٠١و‎ ١ ‏أس هيدروجيني‎ (Tween20 70,05 «Chloride © ‏أس‎ «Tween-20 7٠١0 «Sodium Chloride ‏مللي > جرامي‎ ١٠٠١ (Phosphate ‏على التوالي.‎ VE ‏هيدروجيني‎
17 = [7 2 on oA 283 4 = ‏دان لما‎ 2 [٠ ‏لا‎ = 3 ? [24 22 = | ~~ y ‏له‎ ‎4333 F REE
Fi 7 en ‏ني نا‎ 2 ;
Sd = w 1S ‏م‎ ‎3| d= 3 2g ‏اماي‎ ~ Viola |e oS — A gq ug 1 | 7 25 3 2 + = ~— ‏و‎ ‏بم‎ ‎5 ‏اج‎ oa 4 Alo ‏ذا‎ ‎© 3 7 2 ‏ا‎ ‏م‎ ‎0 vy ‏ها هذا‎
So ‏ذو‎ TIFT - ‏ها ها مق 3 + اذ‎ < Dla ‏نذا 9 > + ا‎ 3 ِ Sola ‏ا‎ ‎1 ‎2 I ‏يها‎ ‎i.g 2 128 nz 3 2 |g 25 w > v ‏يي نا‎ > ‏م‎ ‎2 2 / | ‏بي‎ a ‏ال‎ 3 3 lee 27 5 2) ‏ذا‎ ‎< ‎Ay ‎gl o =| MM 4. : 7 2243 “Zz 21 5 ‏ل‎ | << 3 a a 4 ‏ا 2 ب‎ 2 3 < — 24 ‏لج . سه‎ -— — 43 4 = ‏م‎ ‎3 ~~ ٠ 5 o a + ne 28% ‏مو | لل‎ 54547 7) ‏ص‎ : ---
مثال 3: أجسام مضادة ترتبط مع 205169 اعتمادا على الأس الهيدروجيني لها تأثير دوائي ديناميكي لخفض ‎Cholesterol‏
(أ) أجسام مضادة معارضة ترتبط مع 708169 اعتمادا على الأس الهيدروجيني لخفض
‎cholesterol‏ المصل لفترة زمنية ‎igh‏ في فئران ° لتحديد ما إذا كان الأجسام المضادة التي تضاد ارتباط 008129 اعتمادا على الأس الهيدروجيني يمكنها خفض مستويات ‎cholesterol‏ في الكائن الحي لفترة زمنية طويلة بالمقارنة مع أجسام مضادة لا تعتمد على الأس الهيدروجيني؛ تختبر تأثيرات المدى الزمني للجسمين المضادين ‎SL1721H23_6H3‏ و51,17211123_613113 الحساسين الحمض والجسمين المضادين 15810 (يعطى بجرعة من ‎٠١‏ مجم/ كجم فقط) و5810.38 غير الحساسين ‎٠‏ ا لحمض على ‎cholesterol‏ المصل عند حقنها عند ‎+٠١‏ 7 أو ‎٠‏ مجم/ كجم في الفئران. يكون لكل الأجسام المضادة الأربعة انجذابات ارتباط ‎Allie‏ من ‎١4-٠‏ نانو جزيئي جرامي عند أس هيدروجيني متعادل (أس هيدروجيني 8 ‎(V,‏ بالنسبة إلى 708169 فأري. يكون للجسمين المضادين ‎SL1721H23_6L3H3 5 SL1721H23_6H3‏ انجذاب منخفض من ‎١١7‏ نانو جزيئي جرامي و08 نانو جزيئي جرامي؛ على التوالي؛ عند الأس الهيدروجيني 0,0 حيث ‎٠‏ يكون لكل من 15810 و5810138 قيمة ‎Kp‏ عند الأس الهيدروجيني 0,0 مماثلة لقيمتها عند ‎0,Y) 4‏ نانو جزيئي جرامي). تستبقى فئران ذكور 057/016؛ من عمر ‎١‏ إلى ‎١7‏ أسابيع؛ في دورة نهار/ ليل من ‎١١‏ ساعة؛ تنزف لتجميع حوالي ‎Ve‏ ميكرولتر مصل في اليوم 7. إن الأجسام المضادة المعارضة 008169 المضادة والنوع الأصلي المقارن الذي يتماشى مع جسم مضاد أحادي النسخ بحيث لا ترتبط تلك الجرعة مع أي ‎Api proteins‏ معروفة تحقن في ‎٠‏ الوريد في فأر ذكر 057/016 ‎Voges‏ أسابيع وتجمع عينات المصل في الأيام 0 017 ‎AR‏ ‎Vo 5 TY 1‏ بعد الحقن. تحلل كل عينات ‎dead)‏ من أجل إجمالي ‎«cholesterol‏ ‎HDL cholesterol «triglyceride‏ على جهاز ‎(Alfa Wassermann, West Ace Alera‏ ‎Caldwell, NJ)‏ وتحسب مستويات ‎LDL cholesterol‏ باستخدام معادلة ‎(Friedewald‏ يوضح الشكل ‎V‏ انخفاض سريع يعتمد على ‎Yo‏ الجرعة في إجمالي مستويات ‎cholesterol‏ بعد حقن جسم مضاد يعارض 005169. تكون مستويات ‎LDL cholesterol‏ في الفثران منخفضة جدا لكي تحسب وتقاس بسهولة. عند الجرعة ‎٠‏ مجم/ كجم؛ فإن كل الأجسام المضادة الأربعة تخفض ‎HDL-cholesterol‏ بنسبة 5 إلى
Nn
SL1721H23_6H3 ‏في اليومين © و7١ بينما لا تتعافى الحيوانات المحقونة مع‎ ٠ ‏و5810.88 إلى‎ hSA10 ‏تعود الحيوانات المحقونة مع‎ 7١ ‏حتى يوم‎ SL1721H23_6L3H3 5 ‏على التوالي.‎ FY 5 77 ‏المستويات الأساسية في اليومين‎ ‏(ب) أجسام مضادة ترتبط مع 208169 اعتمادا على الأس الهيدروجيني لها عمر نصف‎ dl ‏طويل في‎ © ‏تتحدد تركيزات المصل للجسم المضاد في نفس الدراسة الموصوفة في المثال (ب) لتحديد‎ ‏ما إذا كانت الأجسام المضادة التي تضاد 0205129 الحساسة للأس الهيدروجيني ينتج عنها‎ 115810 (Fie ‏عمر نصف لجسم مضاد طويل. يكون لأجسام مضادة تضاد 008129 طبيعية‎ ‏و5810.36 عمر نصف قصير يعتمد على الجرعة بالمقارنة مع الأجسام المضادة المرتبطة‎ ‏لمعقد الجسم المضاد/‎ PCSKO ‏نتيجة تحلل يتوسطه‎ al ‏مع مولدات مضادة قابلة للذويان‎ ٠ ‏خاصية الارتباط المعتمد على الأس‎ old (A ‏المعضد المضاد. كما يتضح في الشكل‎ ‏الهيدروجيني تخفض تحلل الجسم المضاد وتطيل عمر النصف لجسمين مضادين‎
PK ‏لتوضيح إضافيا أن‎ .PCSK9 ‏يضادان‎ SL1721H23_6L3H3 5 5117211123 3 008169 ‏ينتج من تصفية يتوسطها‎ SL1721H23_6L3H3 ‏و‎ SL1721H23_6H3 ‏طويل من‎ 20819 ‏منخفضة جدا للأجسام المضادة؛ تجرى دراسة مماثلة للمدى الزمني في فثران مع‎ ٠ ‏منخفض جدا. إن الاختلافات في تركيزات جسم مضاد لمصل ومعدلات الانخفاض بين‎ ‏الهيدروجيني تكون‎ GO ‏الأجسام المضادة الحساسة للأس الهيدروجيني وغير الحساسة‎ ‏واضحة حتى تحقن ؟ مجم/ كجم 705169 آدمي في الفئران. بعد هذا الحقن؛ تظهر الأجسام‎ ‏المضادة 005169 غير الحساسة للأس الهيدروجيني زيادة في التحلل بالمقارنة مع أجسام‎ ‏تشير تلك‎ (QA ‏مضادة حساسة للأس الهيدروجيني وجسم مضاد مقارن سلبي (الشكل‎ "٠
PCSK9 ‏النتائج إلى أن التحلل المنخفض الواضح للأجسام المضادة 708169 المرتبطة مع‎ ‏يعتمد على الأس الهيدروجيني ينتج عن انفصال الجسم المضاد عن 708129 5 بالتالي» نجاة‎
PCSK9 ‏الجسم المضاد من تحلل يتوسطه‎ cholesterol ‏حساسة للأس الهيدروجيني تخفض‎ PCSK9 ‏أجسام مضادة تعارض‎ (=) ‏المصل لفترة زمنية أطول في القردة‎ Yo
SL1721H23 6H3 ‏يوضح الشكل ؟(ب) تأثير الجبسمين المضادين‎ ‏المضادين لمضاد 008129 الحساسين للأس الهيدروجيني والجسم‎ SL1721H23_6L3H3 5
Y
‏المصل لقرود‎ LDL-cholesterol ‏المضاد 1,113 مضاد 005169 غير الحساس على مستويات‎ ‏كجم من كل‎ [ane 1,0) ‏في شكل نسبة لمثال مقارن. تعطى الأجسام المضادة‎ cynomolgus ‏في الوريد كحقنة واحدة. ينخفض‎ cynomolgus ‏جسم مضاد) في اليوم صفر إلى إناث قردة‎ ‏من القيمة الأساسية يوميا في المجموعات الثلاث المعالجة‎ 75 ٠ ‏إلى‎ LDL-cholesterol ‏بعد‎ ٠١ ‏إلى القيمة الأساسية في اليوم‎ LDL-cholesterol ‏بالجسم المضاد. بينما تعود مستويات‎ © ‏إعطاء جسم مضاد غير حساس للأس الهيدروجيني؛ تظل مستويات‎ ‏؟ في قردة معالجة مع أجسام مضادة حساسة للأس‎ ١ ‏منخفضة حتى يوم‎ LDL-cholesterol ‏غير متغيرة جوهريا كنتيجة لمعالجة بالجسم المضاد‎ HDL ‏الهيدروجيني. تبقى مستويات‎ 008169 ‏أنه يتم إطالة عمر النصف لأجسام مضادة تضاد‎ ٠١ ‏(الشكل 4لا)). يوضح الشكل‎ ‏الهيدروجيني.‎ GO ‏الهيدروجيني بالمقارنة مع 1.113 غير حساسة‎ ood ‏حساسة‎ 0٠ ‏مثال 4: إعداد نموذج عام لأجسام مضادة مع ارتباط بمولد مضاد يعتمد على الأس‎ ‏الهيدروجيني‎ ‏يستخدم نموذج حاسوبي لتوقع ما إذا كان الارتباط المعتمد على الأس الهيدروجيني لجسم‎ ‏مضاد إلى المولد المضاد الأصلي له يمكن أن يؤثر في عمر التصف للجسم المضاد و/أو‎ ‏الفترة الزمنية لخفض كمية المولد المضاد أو تركيز المصل. من أجل أغراض من هذا النموذج؛‎ Vo ‏ميكرو جزيئي جرامي جسم مضاد في‎ ١ ‏الجسم المضاد؛ جرعة من‎ )١ ‏يتم افتراض الآتي:‎ ‏يوم؛ يكون ارتباط‎ ٠٠١ ‏يوم؛ 7) تجرى المحاكاة لمدة‎ 7١ ‏عمر نصف للجسم المضاد‎ coal ‏الجبم المضاد والارتباط المعتصد على الأس الهميدروجيني هوء‎ ‏يتم التعبير عن الارتباط‎ Kon X Kp = ‏»مك عند أس هيدروجيني متعادل‎ ¢165/M/s = Kop ‏في أجسام داخلية حمضية؛ ,16 عند أس‎ Kor ‏المعتمد على الأس الهيدروجيني كزيادة في‎ ٠ ‏عند أس هيدروجيني متعادل.‎ Kop X R= ‏هيدروجيني حمضي‎ ‏تفصيلا نموذج لحركة سير أجسام مضادة مع ارتباط يعتمد على الأس‎ Vo ‏يوضح الشكل‎ ‏الهيدروجيني مستخدم لإعداد النموذج؛ وتكون المعادلات الموضحة للنموذج كالتالي:‎ d/dt (Normal Dose) = - k_dist*Normal Dose
Yo ay d/dt (mAb) = k_dist*Normal Dose - (mAb*kon*Normal antigen) + (kon*KD* mAb antigen) - k_blood endo*mAb/ Viozm + £1% k_blood endo*mAb e/ Vyorm + )1-21(* f2*k_blood_endo*mAb le/ Vyorn d/dt (mAb antigen) = (mAb*kon*Normal antigen) - (kon*KD* mAb antigen) 8 - k_blood _endo*mAb antigen/ Vyorm + 1* k_blood endo*mAb antigen e/
Viorm + (1-£f1) * f£2%k_blood endo*cmplx_le/ Viorm d/dt (Normal antigen) = - (mAb*kon*Normal antigen) + (kon*KD* mAb antigen) + 1n (2) /antigen halflife*antigen level - ye. 1n(2) /antigen_halflife*Normal antigen - k_blood_endo*Normal antigen/
Vorn + 17* k_blood endo*Endosomes_antigen_e/ Viorn d/dt (mAb e) = k blood endo*mAb / Vga, — f£l*k_blood endo*mAb_e /
Vengo — (mAb_e*kon*Endosomes antigen e) + ( kon*KD* mAb antigen e) - Vo (1-£f1) *k blood endo *mAb e/ Ven, d/dt (mAb_antigen _e) = k_blood endo*mAb_ antigen / Vinge — fl*k blood endo*mAb antigen e / Vino + (mAb _e*kon*Endosomes antigen e) - (kon*KD* mAb antigen e) - (1-f1) Ye *k_blood endo *mAb_antigen e/ Vena d/dt (Endosomes_antigen e) = k_blood endo*Normal antigen/ Vendo - fl*k_blood endo*Endosomes antigen e / Vendo - (mAb _e*kon*Endosomes_antigen e) + (kon*KD* mAb antigen e) - )1-21( Yo *k blood endo *Endosomes_antigen e / ‏مدا‎
§¢ d/dt (mAb le) = -(1-f1)* f2%k_blood endo* mAb le/ Vig + (1-£1) *k_blood endo *mAb e/ Vigo - (mAb_letkon*Antigen_le) + (R¥kon*KD* cplx le) - (1-f1)*(1-£2)*k_blood endo*mAb le/ Vig d/dt(cplx le) = -)1-11(* f£2*%k blood endo*cplx le/ Viens + (1-£f1) 5 *k_blood endo *mAb antigen e/ Vig + (mAb_letkon*Antigen le) - {(R*kon*KD* cplx le) -(1-f1)* (1-£2) *k_blood endo*cplx le/ Vigndo d/dt (Antigen le) = + (1-f1l) *k_blood endo *Endosomes antigen e/
Viendgo - (mAb lexkon*Antigen le) + (R¥kon*KD* cplx_le) - (1-f1) ٠١ *k_blood endo*Antigen le/ Vigaswo ‏أدناه.‎ ٠١ ‏توصف المعايير المستخدمة في النموذج في الجدول‎ ٠١ ‏جدول‎ ‏نانو جزيئي معدل اتحاد المولد المضاد‎ fe, een) kon ma? ‏جرامي/ ثانية‎ ‏لا إعادة تدوير الكسر من أجسام‎ fl ‏داخلية مبكرة‎ £2 6" تدوير الكسر ‎MAD‏ من أجسام داخلية متأخرة ‎Ko‏ متغاير الانجذاب للارتباط [نانوجزيئي جرامي] ‎R‏ متغاير نسبة الانجذاب عند أس ‏هيدروجيني جسم داخلي مقابل q0 ‏سوست‎ ‏في الدم [أيام]‎ ‏الدم [نانوجزيئي جرامي]‎ ‏توضح الخرائط الحرارية في الشكل ؟ التأثير الإضافي لجسم مضاد مع ارتباط يعتمد على‎ ‏الأس الهيدروجيني على خفض المولد المضاد أقل من الخفض الشديد بواسطة جسم مضاد‎ ‏بدون ارتباط يعتمد على أس هيدروجيني. تتحدد كمية الانخفاض الشديد بواسطة قياس المساحة‎ ‏يوم من المحاكاة. يمكن‎ ٠٠١ ‏بين متحنيين المولد المضاد الحر للجسمين المضادين خلال‎ ‏التعبير عنها بعدد الأيام اللازمة لجسم مضاد يرتبط اعتمادا على الأس الهيدروجيني لخفض‎ © ‏المولد المضاد أقل من الخفض الشديد بواسطة جسم مضاد بدون ارتباط يعتمد على الأس‎ ‏الهيدروجيني» على الرغم من أن هذين القياسين لا يرتبطان جوهريا. تعكس المناطق الأفتح‎ ‏على الخريطة فترةٍ زمنية أطول و/أو خفض أشد في المولد المضاد الحر. توضح الخريطة‎ ‏شدة تأثير أجسام مضادة مع ارتباط بمولد مضاد يعتمد على الأس‎ ١١ ‏الحرارية من الشكل‎ ‏أو 5©. لكل‎ IgE 016161 ‏الهيدروجيني على خفض المولد المضاد إذا كان المولد المضاد هو‎ ٠ ‏مولد مضاد؛ فإن الجسم المضاد مع ارتباط يعتمد على الأس الهيدروجيني يمكن أن يطيل من‎ ‏فترة خفض المولد المضاد.‎ ‏بتفصيل أكثر إعداد نموذج لجسم مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني‎ ١١ ‏يوضح شكل‎ ١ ‏حوالي‎ Kp ‏له‎ alias ‏بواسطة جسم‎ IgE ‏يحدث إطالة في الفترة الزمنية لخفض‎ IgE ‏إلى‎ ‏أو أكثر.‎ “ 08( VLE ‏عند أس هيدروجيني‎ Kp ‏نانو جزيئي جرامي أو أكثر ونسبة‎ _ ٠ ‏في‎ C5 ‏وللمولد المضاد‎ ١١ ‏يتضح في الشكل‎ DKK ‏إن تحليل مماثل للمولد المضاد‎ ‏نانو جزيئي جرامي‎ ٠٠١-١ ‏هو‎ Kp ‏يكون المدى النموذجي من‎ DKK ‏من أجل‎ .٠6 ‏الشكل‎ ‎٠٠١١-١ ‏هو‎ Kp ‏يكون المدى النموذجي من‎ «C5 ‏من أجل‎ FT ‏من‎ Kp ‏على مدى نسبة‎
Fm ‏من‎ Kp ‏نانو جزيئي جرامي من أجل نسبة‎ ‏مع ارتباط مع 181 يعتمد على الأس‎ IgE ‏مثال 5: توليد ومسح أجسام مضادة تضاد‎ ٠ ‏الهيدروجيني‎
تجرى استبدالات ‎Histidine‏ عند المواقع للمتخلفات التي تحتها خط في جسم مضاد ‎5.948-H100Y‏ يضاد ‎IgE‏ الذي له ترتيبات ‎amino acid‏ تالية لها سلسلة خفيفة متغيرة ‎(VL)‏ ‏وسلسلة تقيلة متغيرة ‎(VH)‏ (تكتب ‎CDRs‏ بخط تقيل). ‎VL‏ ‎DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQSPQLL ٠‏ ‎IYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPAT‏ ‎FGGGTKVEIK‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: ‎(Yo‏ ‎VH‏ ‎QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMG ٠١‏ ‎WMDPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR‏ ‎GYYDSDGYYSFSGMDVWGQGTTVTVSS‏ ‏(تعريف الترتيب رقم: ‎(YT‏ ‏تختبر الأجسام المضادة للارتباط مع ‎IgE‏ عند © 7"مئوية. لتحديد الانجذابات والثوابت ‎١‏ الحركية تجرى جميع التجارب على المجس الحيوي 1200 ‎.Biacore‏ ‏يحضر سطح لتثبيت ‎biotin‏ بتحصين 111871010: تتنشط كل خلايا التدفق لرقاقة المجس ‎Biacore CM4‏ مع ‎١:١‏ (حجم/ حجم) خليط من 5800 مللي جزيئي جرامي ‎EDC‏ ‏و١٠٠‏ مللي جزيئي جرامي ‎NHS‏ لمدة ‎١‏ دقائق؛ عند معدل تدفق ‎٠١‏ ميكرولتر/ دقيقة. يخفف ‎(Pierce, product #: 31000) NeutrAvidin‏ إلى ‎٠٠١‏ ميكروجم/ ملليلتر في ‎٠١‏ مللي جزيئي ‎٠‏ جرامي ‎Sodium Acetate‏ عند أس هيدروجيني 0,£ ويحقن على كل خلايا التدفق لمدة لا دقائق بمعدل ‎٠١‏ ميكرولتر/ دقيقة. تعاق كل خلايا التدفق مع ‎٠٠١‏ مللي جزيئي جرامي ‎Ethylenediamine‏ في ‎Ak Ve‏ جزيئي جرامي ‎Cafe‏ أس هيدروجيني ‎Borate‏ عند الأس الهيدروجيني ©,4 لمدة ‎١‏ دقائق بمعدل ‎٠١‏ ميكرولتر/ دقيقة. يخضع البناء ‎IgE-Fc (Ch2-Ch3-Ch4)) IgE‏ )= ¢ يظهر وينقى في المعمل) إلى أدنى ‎biotinylation‏ بواسطة تحضين ‎IgE‏ مع كمية مكافثة جزيئية جرامية من ‎(Thermo Scientific, catalog # 21343) EZ-Link NHS-LC-LC-biotin‏ لمدة ‎"١‏ دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. يزال ‎biotin‏ حر بواسطة تغيير مثبت الأس الهيدروجيني.
ay (£57 ‏باستخدام اثنين من خلايا التدفق الأربعة (١و7؟ أو‎ Biacore ‏تجرى كل تجارب‎ ‏لرقاقة المجس على التوازي. تستخدم خلية التدفق أسفل التيار كخلية تدفق تحليلية بينما تستخدم‎ ‏على خلية‎ (B-IgE) biotinylated IgE ‏خلية التدفق الأخرى كسطح مرجعي. لذلك؛ يثبت‎ ‏نقي على كليهما. يتم طرح مخطط المجس لخلايا التدفق‎ 780 sa ‏التدفق التحليلية ويحقن كل‎ ‏المرجعية من مخطط المجس لخلايا التدفق التحليلية.‎ ©
يخفف 3-187 داخل مثبت أس هيدروجيني متدفق إلى تركيز نهائي © ميكروجم/ ملليلتر مباشرةٍ قبل التثبيت. عند الأس الهيدروجيني ‎T‏ يحقن 3-187 بمعدل ‎٠١‏ ميكرولتر/ دقيقة ‎saad‏ ‎٠‏ ثانية. عند الأس الهيدروجيني 7,4 يحقن 3-187 لمدة ‎Av‏ ثانية للحصول على مستويات
تثبيت متماثلة.
‎٠‏ يجرى اختبار الحركيات باستخدام طريقة معايرة حركية كالموصوفة في
‎Karlsson et al., Anal Biochem 349: 136-147, 2006‏ بعد تثبيت ‎B-IgE‏ يحقن ‎Fab ohn‏ نقي بمعدل ‎Vo‏ ميكرولتر/ دقيقة على خلايا التدفق التحليلية والمرجعية في سلسلة من الحقنات من تركيز أقل إلى تركيز أعلى. يتراوح تركيز الذروة من أجل ‎Fab‏ من ‎Te‏ نانو جزيئي جرامي إلى ‎٠٠١‏ نانو جزيئي جرامي ويكون عامل التخفيف ‎VO‏ هو ؟ أضعاف. يحقن كل تخفيف ‎Fab‏ لمدة دقيقتين» متبوعا بفترة انفصال نهائية ‎١‏ ثانية بعد ‎A‏ حقن. تجرى مجموعة مماثلة من الحقنات مع مثبت أس هيدروجيني متدفق في مكان ‎Fab‏ ‏لأغراض ازدواج المرجعية (يوصف ازدواج المرجعية في -279 :12 ‎Myszka, J Mol Recognit‏ 9 ,284). تكون مخططات المجس مزدوجة المرجعية ملائمة عالميا إلى ‎٠:١ Langmuir‏ بسيط مع نموذج ارتباط لنقل الكتلة.
‎v.‏ تجرى التجارب عند الأس الهيدروجيني ‎١‏ و4, باستخدام عينة و مثبتات أس هيدروجيني جارية من ‎٠١‏ مللي جزيثي جرامي من ‎٠٠١ Sodium Phosphate‏ نانو جزيئي جرامي ‎١ 160-20 750.05 «Sodium Chloride‏ مجم/ ملليلتر ‎(BSA‏ أس هيدروجيني + و١٠‏ مللي جزيثي جرامي ‎٠5١ Sodium Phosphate‏ مللي جزيثي جرامي ‎١ (Tween-20 750.06 «Sodium hloride‏ مجم/ ملليلتر ‎BSA‏ أس هيدروجيني ‎Vf‏ على
‎Ye‏ التتوالي.
aA ‏في جسم مضاد‎ histidine ‏أدناه؛ ينتج بنجاح عن استبدال‎ ١١ ‏كما يتضح في الجدول‎ ‏أسرع عند الأس الهيدروجيني + ونسب أعلى‎ kop ‏أجسام مضادة مع‎ IgE - 5.948-H100Y
Vt ‏الأس الهيدروجيني‎ /١ ‏عند الأس الهيدروجيني‎ kor Kp ‏من‎
4 x > ‏بج‎ ‎3 Sz 5 — 0 ‏ما‎ ‎.e ‏ب‎ = iT &
KS = oN 3 5 8 ‏ذا‎ ‎_ = = 4 oF | 5 18 18 ‏ا‎ ‎ge) — 4 37 + + + + © a 3 3: ‏ب‎ 0 |= Qa 8 fy, 5 oN AN 0 on 3 4 1 = N a ‏ب‎ ‏اح‎ : — on [al [a] wn = on ‏لح‎ ‏ف 2 33,3 ض‎ ald olf ‏كذ د‎ Nn CN ‏قات ماه‎ 2 = + — ‏ب‎ — on > 17 _ J a Q a > 3g Iv J Tr a 7 ‏ِو‎ ‎al ‏ذا <2| * رك مو‎ 1 ‏.حر‎ . 1 1, 3 I 73 2 4 ES 2 ‏الى‎ |B ‏من اااي‎ 3 ‏ماه 6 © )4 ,1 ا‎ © 3 ‏م 9 — ؛‎ = 5 gS 384 © 8 a py 4 “a3 + + + + o 4 A 5, J: 2 Hl = = <a 4, ‏ل‎ S |e ‏ا با‎ ‏ب : ل‎ © on oN 1a = 2 4 3 © ‏و ذاو الى اي‎ 0 | ; ‏اه واه ذه نه‎ 2
No a >» a < 1 ‏ب‎ > | > |< | w a. Zz | ‏مو‎ - a
Hom 0 ‏ليح سن‎ > ‏دي‎ 3 o ¥ | at 3 wie 3 . < > > IT ‏ور‎ -— Q ) ~~ . 1 1 1 I a WK A 5 HE ‏ى لاح‎ 2:34 8 ' ~— << ‏ص‎ \O ‏ب‎ ‎5 ‎a 5 M . oa ‏ب 2 يا‎ ole ‏ذا ا‎ —_ d= a > " 2 ‏ل‎ 2 3) ! 3 4 3 > < ‏عو‎ : ~~ 14 0 ‏ص‎ 7 Nw ‏حي‎ ~~
J 7 4 5 5 3 4 3 >» = < < 2 <3
١ ٠١٠ ‏إن شروحات كل المراجع المذكورة في السياق تكون مندمجة كمرجع هنا.‎ ‏قوائم الترتيب‎
٠١١ >110< ‏رينات نيوروسيانس كورب.‎ ‏فايزر انك‎ >120< ‏أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني‎ <130> 42 <150> 05 2 <151> 2010-03-11 <150> US 61/447,638 <151> 2011-02-28 <160> 27 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Tyr Ser Thr Pro Arg 85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 2 <211> 118
٠١ <212> PRT <213> Homo sapien <400> 2
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala 20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45
٠١١
Tyr His Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg 85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 4 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 4
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
Gly Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
Yet <210> 5 <211> 118 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
Gly Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 60
Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Ser Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 6
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His 1 5 10 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapien
١ «0 <400> 7
Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15
Ser <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 8
Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 9
Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Ser Asp Leu 1 5 <210> 10 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 10
Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 11 <211> 7 ‏ا‎ <212> PRT <213> Homo sapien <400> 11
His Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5
٠١ <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 12
Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg Thr 1 5 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 13
Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 14
Lys Ala Ser Gln Asp His Ser Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 15
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 16 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 6
Arg Ala Ser Gln Gly Ile His Ser Ala Leu Ala 1 5 10
١٠١ <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 17
Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 18
Ser Ala Ser His Arg Tyr Thr 1 5 <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 19
Glu Ile Asn Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15
Ser <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 20
Glu Ile Ser Pro Phe Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15
Ser <210> 21 <211> 9 <212> PRT
٠١ <213> Homo sapien <400> 21
Glu Arg Pro Leu His Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 22 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 22
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 23 <211> 321 <212> DNA <213> Homo sapien <400> 23 gatatccaga tgacacagtc cccatcctce ctgtetgect ctgtgggega ccgcgtecacc 60 atcacctgca aggcctctca ggatgtgcat actgctgtag cctggtatca gcagaagcca 120 ggcaaagccc caaaactgct gatctaccat gcatcctacc gctacactgg tgtcccatca 180 cgcttcagtg gcagtggctce tggtacagat ttcaccttca ccattageag cctgcaacca 240 gaagatattg ccacttatta ctgccagcaa cgttatagtc tgtggcgeac gttcggtcaa 300 ggcaccaagc tggagatcaa a 321 <210> 24 <211> 354 <212> DNA <213> Homo sapien <400> 24 caggtgcage tggtgcagtc tggtgctgag gtgaagaagc ctggcgcette cgtgaaggtt 60 tcctgecaaag catctggtta cacctttacce agctactata tgcactgggt gcgccaagcce 120
٠١ cctggtcaag gecctggagtg gatgggecgag attcatccta geggeggtceg tactaactac 180 aatgagaagt tcaagagccg cgtgactatg actcgcgata cctccaccag cactgtctac 240 atggaactga gctctctgcg ctctgaggac actgctgtgt attactgtge ccgecgagege 300 ccecetgtatg ctagcgacct gtggggecag ggtaccacgg tcaccgtcete ctea 354 <210> 25 <211> 113 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 25
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala 85 90 95
Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 100 105 110
Lys <210> 6 <211> 125
ARI
<212> PRT <213> Homo sapien <400> 6
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapien <400> 27
Gln Gln Arg Tyr Ser Thr Pro Arg Thr 1 5

Claims (1)

  1. ١١١
    عناصر الحماية ‎-١ ١‏ جسم مضاد منعزل ‎(isolated antibody)‏ يرتبط بصفة خاصة مع 705129 ويشتمل على " منطقة تحديد تكميلية واحدة لمنطقة متغيرة سلسلة قيلة ‎CDR2 «(CDR1) (VH)‏ ىت ور ‎VH‏ ‏" 0083 من ترتيب ‎VH amino acid‏ الموضح في تعريف الترتيب رقم: 4 أو 0 ‎١‏ ”- جسم مضاد منعزل ‎(isolated antibody)‏ من عنصر الحماية ١؛‏ يشتمل إضافيا على منطقة 7 متغيرة سلسلة خفيفة ‎CDR3 5 «CDR2 «CDR1 (VL)‏ من ترتيب ‎VL amino acid‏ موضح في " تعريف الترتيب رقم: . ‎١‏ ؟- جسم مضاد منعزل ‎(isolated antibody)‏ من عنصر الحماية 7؛ حيث يكون 60181 711 لها " ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: 7« ‎VH CDR2‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ " موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎CDR3 »١‏ 711 لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف ؛ الترتيب رقم: ‎A‏ أو 68 00181 ‎VL‏ لها ترتيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎Vo‏ ‎VL 0082 ٠‏ لها ترقيب ‎amino acid‏ موضح في تعريف الترتيب ‎VL CDR3 5 ١١ tad)‏ لها ترتيب ‎amino acid 1‏ موضح في تعريف الترتيب رقم: ‎AY‏ ‎١‏ ؛- جسم مضاد منعزل ‎(isolated antibody)‏ من عنصر الحماية ‎«FF‏ حيث يكون ‎VH CDR3‏ لها ‎ ¥‏ ترتيب ‎amino acid‏ من تعريف الترتيب رقم: ‎A‏ ‎١‏ #- الجسم المضاد المنعزل ‎«(isolated antibody)‏ عنصر الحماية ‎of‏ حيث تشتمل المنطقة 11117 على تعريف الترتيب رقم: 4 أو تعريف الترتيب رقم: © وتشتمل المنطقة ‎VL‏ على تعريف ‎v‏ الترتيب رقم: ؟. ‎١‏ 1= الجسم المضاد المنعزل ‎(isolated antibody)‏ من عنصر الحماية 0 حيث تشتمل المنطقة ْ ‎OY‏ 7117 على تعريف الترتيب ‎tay‏ 0 ‎١‏ 7- جسم مضاد ‎(antibody)‏ أو قسم منه مرتبط بمولد ‎«(antigen-binding portion) alias‏ يشفر 7 بواسطة ‎plasmid‏ المترسب عند ‎ATCC‏ وله رقم وصول 100م: ‎(PTA-10547‏ أو ‎PTA-‏ ‏" 10548 و/أو ‎PTA-10549‏
SA111320266A 2010-03-11 2011-03-09 أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني SA111320266B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31310210P 2010-03-11 2010-03-11
US201161447638P 2011-02-28 2011-02-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA111320266B1 true SA111320266B1 (ar) 2015-06-21

Family

ID=44483937

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA111320266A SA111320266B1 (ar) 2010-03-11 2011-03-09 أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني

Country Status (18)

Country Link
US (3) US9029515B2 (ar)
EP (1) EP2545079A2 (ar)
JP (1) JP5932670B2 (ar)
KR (2) KR20120138241A (ar)
CN (2) CN105218674A (ar)
AR (1) AR080511A1 (ar)
AU (1) AU2011225716A1 (ar)
BR (1) BR112012022917A2 (ar)
CA (1) CA2792740A1 (ar)
CO (1) CO6592103A2 (ar)
MX (1) MX2012010481A (ar)
NZ (1) NZ602220A (ar)
PE (1) PE20130393A1 (ar)
RU (1) RU2570729C2 (ar)
SA (1) SA111320266B1 (ar)
SG (2) SG10201507722QA (ar)
WO (1) WO2011111007A2 (ar)
ZA (1) ZA201207211B (ar)

Families Citing this family (209)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2592271T3 (es) 2005-03-31 2016-11-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Métodos de producción de polipéptidos mediante la regulación de la asociación de los polipéptidos
WO2007114325A1 (ja) 2006-03-31 2007-10-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法
EP4001409A1 (en) 2006-03-31 2022-05-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US20130072665A1 (en) * 2007-08-23 2013-03-21 Simon Mark Jackson Antigen binding proteins to proprotein convertase subtilisin kexin type 9 (pcsk9)
JOP20080381B1 (ar) 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
CN101874042B9 (zh) 2007-09-26 2019-01-01 中外制药株式会社 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法
MX342551B (es) 2007-09-26 2016-10-04 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Region constante de anticuerpo modificada.
US20110129459A1 (en) 2007-12-05 2011-06-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-nr10 antibody and use thereof
NZ602884A (en) * 2008-04-11 2014-08-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
JO3672B1 (ar) 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
US20130064834A1 (en) 2008-12-15 2013-03-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating hypercholesterolemia using antibodies to pcsk9
JP5787446B2 (ja) 2009-03-19 2015-09-30 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
KR20120024763A (ko) 2009-05-15 2012-03-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항ａｘｌ 항체
EP2481752B1 (en) 2009-09-24 2016-11-09 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Modified antibody constant regions
WO2011108714A1 (ja) 2010-03-04 2011-09-09 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
TWI667346B (zh) 2010-03-30 2019-08-01 中外製藥股份有限公司 促進抗原消失之具有經修飾的FcRn親和力之抗體
PT2644698T (pt) 2010-11-17 2018-01-31 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Molécula multiespecífica de ligação ao antigénio com uma função alternativa à função do fator viii de coagulação do sangue
KR102385507B1 (ko) 2010-11-30 2022-04-12 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복해서 결합하는 항원 결합 분자
RU2721279C2 (ru) 2011-01-28 2020-05-18 Санофи Байотекнолоджи Антитела человека к pcsk9 для применения в способах лечения конкретных групп индивидуумов
US20140093496A1 (en) 2011-02-25 2014-04-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc-gamma-RIIb-SPECIFIC Fc ANTIBODY
EP3138581B1 (en) 2011-03-17 2019-01-02 The University of Birmingham Re-directed immunotherapy
EP2731623A1 (en) * 2011-07-14 2014-05-21 Pfizer Inc Treatment with anti-pcsk9 antibodies
AR087305A1 (es) 2011-07-28 2014-03-12 Regeneron Pharma Formulaciones estabilizadas que contienen anticuerpos anti-pcsk9, metodo de preparacion y kit
JP6158813B2 (ja) 2011-09-16 2017-07-05 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． プロタンパク質転換酵素サブチリシンケキシン−９（ＰＣＳＫ９）の阻害剤を投与することによってリポタンパク質（ａ）レベルを低下させる方法
AR087715A1 (es) 2011-09-16 2014-04-09 Lilly Co Eli Anticuerpos anti pcsk9 y usos de los mismos
CA3186007A1 (en) * 2011-09-30 2013-04-04 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Ion concentration-dependent binding molecule library
CA2850322C (en) 2011-09-30 2023-10-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule inducing immune response to target antigen
TW201817745A (zh) 2011-09-30 2018-05-16 日商中外製藥股份有限公司 具有促進抗原清除之ＦｃＲｎ結合域的治療性抗原結合分子
WO2013047748A1 (ja) 2011-09-30 2013-04-04 中外製薬株式会社 複数の生理活性を有する抗原の消失を促進する抗原結合分子
KR20140100532A (ko) 2011-11-30 2014-08-14 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 면역 복합체를 형성하는 세포내로의 운반체（캐리어）를 포함하는 의약
JP6635655B2 (ja) 2011-12-08 2020-01-29 アムジエン・インコーポレーテツド ヒトｌｃａｔ抗原結合タンパク質および治療法におけるそれらの使用
LT2825037T (lt) * 2012-03-16 2019-08-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Graužikai, ekspresuojantys ph jautrias imunoglobulino sekas
RS57118B1 (sr) * 2012-03-16 2018-06-29 Regeneron Pharma Antitela sa lakim lancem konstruisanim sa histidinom i genetički modifikovani glodari za generisanje istih
RU2014141536A (ru) 2012-03-16 2016-05-10 Регенерон Фармасьютикалз, Инк. Мыши, которые продуцируют антигенсвязывающие белки с зависимыми от величины ph характеристиками связывания
US20140013456A1 (en) 2012-03-16 2014-01-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Histidine Engineered Light Chain Antibodies and Genetically Modified Non-Human Animals for Generating the Same
US9255154B2 (en) 2012-05-08 2016-02-09 Alderbio Holdings, Llc Anti-PCSK9 antibodies and use thereof
EP2852840B1 (en) * 2012-05-23 2019-10-09 F.Hoffmann-La Roche Ag Selection method for therapeutic agents
DK2857420T3 (da) 2012-05-30 2020-11-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Målvævsspecifikt antigenbindende molekyle
WO2013188855A1 (en) 2012-06-15 2013-12-19 Genentech, Inc. Anti-pcsk9 antibodies, formulations, dosing, and methods of use
TWI596115B (zh) * 2012-08-13 2017-08-21 再生元醫藥公司 具有ｐＨ－依賴性結合特性之抗－ＰＣＳＫ９抗體
RU2729831C2 (ru) 2012-08-24 2020-08-12 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся ВАРИАНТЫ FcγRIIB-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ Fc-ОБЛАСТИ
JP6774164B2 (ja) 2012-08-24 2020-10-21 中外製薬株式会社 マウスＦｃγＲＩＩ特異的Ｆｃ抗体
WO2014047222A2 (en) * 2012-09-19 2014-03-27 Abbvie Biotherapeutics Inc. Methods for identifying antibodies with reduced immunogenicity
EP2922590B1 (en) 2012-11-21 2020-02-05 Amgen Inc. Drug delivery device
US10766960B2 (en) 2012-12-27 2020-09-08 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
WO2014107739A1 (en) * 2013-01-07 2014-07-10 Eleven Biotherapeutics, Inc. Antibodies against pcsk9
ES2736052T3 (es) * 2013-02-20 2019-12-23 Regeneron Pharma Ratones que expresan co-receptores humanizados de células T
EP2958937B1 (en) * 2013-02-22 2018-08-15 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice expressing humanized major histocompatibility complex
CN105208855B (zh) * 2013-03-11 2018-04-27 瑞泽恩制药公司 表达嵌合的主要组织相容性复合物(mhc)ii类分子的转基因小鼠
EP3593839A1 (en) 2013-03-15 2020-01-15 Amgen Inc. Drug cassette
US20160009818A1 (en) * 2013-03-15 2016-01-14 Bayer Healthcare Llc Anti-TFPI Antibody Variants with Differential Binding Across pH Range For Improved Pharmacokinetics
TWI580451B (zh) 2013-03-15 2017-05-01 安美基公司 用於注射器之匣盒及使用具有自動注射器及匣盒之自動注射器設備之方法
LT2976117T (lt) 2013-03-22 2021-02-25 Amgen Inc. Purkštuvas ir surinkimo būdas
EP3783017A1 (en) 2013-04-02 2021-02-24 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Fc region variant
US10111953B2 (en) 2013-05-30 2018-10-30 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing remnant cholesterol and other lipoprotein fractions by administering an inhibitor of proprotein convertase subtilisin kexin-9 (PCSK9)
EP2862877A1 (en) 2013-10-18 2015-04-22 Sanofi Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of PCSK9
CA2914721A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibiting atherosclerosis by administering an inhibitor of pcsk9
AR096890A1 (es) * 2013-07-12 2016-02-03 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Conjugando fc de inmunoglobulina, que mantiene la afinidad de unión del fragmento fc de la inmunoglobulina a fcrn
ES2738679T3 (es) * 2013-09-18 2020-01-24 Regeneron Pharma Anticuerpos de cadena ligera diseñados genéticamente con histidina y animales no humanos modificados genéticamente para generar los mismos
SG11201602261VA (en) 2013-09-27 2016-04-28 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for producing polypeptide heteromultimer
WO2015061389A1 (en) 2013-10-24 2015-04-30 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
AU2014340171B2 (en) 2013-10-24 2019-05-30 Amgen Inc. Injector and method of assembly
WO2015073494A1 (en) 2013-11-12 2015-05-21 Sanofi Dosing regimens for use with pcsk9 inhibitors
MX2016007312A (es) * 2013-12-04 2017-01-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Moleculas de union al antigeno, cuya actividad de union al antigeno varia de acuerdo con la concentracion de los compuestos y bibliotecas de dichas moleculas.
US9914769B2 (en) 2014-07-15 2018-03-13 Kymab Limited Precision medicine for cholesterol treatment
US9051378B1 (en) 2014-07-15 2015-06-09 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8945560B1 (en) 2014-07-15 2015-02-03 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US8986694B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Targeting human nav1.7 variants for treatment of pain
US9023359B1 (en) 2014-07-15 2015-05-05 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8992927B1 (en) 2014-07-15 2015-03-31 Kymab Limited Targeting human NAV1.7 variants for treatment of pain
US8980273B1 (en) 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US9067998B1 (en) 2014-07-15 2015-06-30 Kymab Limited Targeting PD-1 variants for treatment of cancer
US9045548B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision Medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8883157B1 (en) 2013-12-17 2014-11-11 Kymab Limited Targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
US8986691B1 (en) 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US9034332B1 (en) 2014-07-15 2015-05-19 Kymab Limited Precision medicine by targeting rare human PCSK9 variants for cholesterol treatment
DE202014010499U1 (de) 2013-12-17 2015-10-20 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
US9017678B1 (en) 2014-07-15 2015-04-28 Kymab Limited Method of treating rheumatoid arthritis using antibody to IL6R
US9045545B1 (en) 2014-07-15 2015-06-02 Kymab Limited Precision medicine by targeting PD-L1 variants for treatment of cancer
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
MX2016009858A (es) 2014-02-21 2017-01-26 Medimmune Llc Fusiones anti proteína convertasa subtilisina/kexina tipo 9 (anti-pcsk9)n péptido 1 similar a glucagón (glp-1) y métodos de uso.
GB201403775D0 (en) 2014-03-04 2014-04-16 Kymab Ltd Antibodies, uses & methods
NZ631007A (en) * 2014-03-07 2015-10-30 Alexion Pharma Inc Anti-c5 antibodies having improved pharmacokinetics
MX2016012667A (es) * 2014-03-28 2017-01-09 Opko Diagnostics Llc Composiciones y metodos relacionados con el diagnostico de cancer de prostata.
CA3193070A1 (en) 2014-05-07 2015-11-12 Amgen Inc. Autoinjector with shock reducing elements
WO2015175375A1 (en) 2014-05-13 2015-11-19 Short Jay M Conditionally active biological proteins
JP6817074B2 (ja) 2014-06-03 2021-01-20 アムジエン・インコーポレーテツド 制御可能な薬物送達システム及び使用方法
CN106459192B (zh) * 2014-06-30 2021-08-03 默克专利股份公司 具有pH依赖性抗原结合的抗TNFa抗体
DE202015008974U1 (de) 2014-07-15 2016-06-30 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
US9150660B1 (en) 2014-07-15 2015-10-06 Kymab Limited Precision Medicine by targeting human NAV1.8 variants for treatment of pain
EP3332790A1 (en) 2014-07-15 2018-06-13 Kymab Limited Antibodies for use in treating conditions related to specific pcsk9 variants in specific patients populations
DE202015009002U1 (de) 2014-07-15 2016-08-18 Kymab Limited Targeting von humaner PCSK9 zur Cholesterinbehandlung
US9139648B1 (en) 2014-07-15 2015-09-22 Kymab Limited Precision medicine by targeting human NAV1.9 variants for treatment of pain
AU2015289613B2 (en) 2014-07-16 2021-07-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for treating patients with heterozygous familial hypercholesterolemia (heFH)
WO2016023916A1 (en) 2014-08-12 2016-02-18 Kymab Limited Treatment of disease using ligand binding to targets of interest
MA40764A (fr) 2014-09-26 2017-08-01 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité
MX2021014323A (es) 2014-10-14 2023-02-02 Amgen Inc Dispositivo de inyección de fármaco con indicadores visuales y audibles.
WO2016071701A1 (en) 2014-11-07 2016-05-12 Kymab Limited Treatment of disease using ligand binding to targets of interest
KR20160069363A (ko) 2014-12-08 2016-06-16 삼성전자주식회사 항체 선별 방법
AU2015365167B2 (en) 2014-12-19 2021-07-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-C5 antibodies and methods of use
SG11201700841QA (en) 2014-12-19 2017-03-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
EP3233163B1 (en) 2014-12-19 2021-10-13 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
US11357916B2 (en) 2014-12-19 2022-06-14 Amgen Inc. Drug delivery device with live button or user interface field
JP2018511557A (ja) * 2015-01-22 2018-04-26 中外製薬株式会社 ２種以上の抗ｃ５抗体の組み合わせおよび使用方法
CN114773469A (zh) 2015-02-05 2022-07-22 中外制药株式会社 包含离子浓度依赖性的抗原结合结构域的抗体，fc区变体，il-8-结合抗体及其应用
CA3069716C (en) 2015-02-17 2021-11-09 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
EP3981450A1 (en) 2015-02-27 2022-04-13 Amgen, Inc Drug delivery device having a needle guard mechanism with a tunable threshold of resistance to needle guard movement
JP6130983B2 (ja) 2015-02-27 2017-05-17 中外製薬株式会社 Ｉｌ−６関連疾患治療用組成物
ES2867798T3 (es) 2015-03-27 2021-10-20 Opko Diagnostics Llc Estándares del antígeno prostático y usos de estos
WO2016159213A1 (ja) 2015-04-01 2016-10-06 中外製薬株式会社 ポリペプチド異種多量体の製造方法
WO2016191659A1 (en) * 2015-05-28 2016-12-01 Bio-Rad Laboratories, Inc. Affinity ligands and methods relating thereto
JP2018523684A (ja) 2015-08-18 2018-08-23 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． リポタンパク質アフェレーシスを受けている高脂血症の患者を治療するための抗ｐｃｓｋ９阻害抗体
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
JP7082568B2 (ja) 2015-12-09 2022-06-08 アムジエン・インコーポレーテツド 信号伝達キャップ付き自動注射器
WO2017104783A1 (en) * 2015-12-18 2017-06-22 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variant fc regions, and methods of use
KR102467124B1 (ko) * 2015-12-18 2022-11-15 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항-c5 항체 및 사용 방법
US11359009B2 (en) 2015-12-25 2022-06-14 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-myostatin antibodies and methods of use
CA3004288A1 (en) 2015-12-28 2017-07-06 Nobuyuki Tanaka Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide
JP7032662B2 (ja) 2015-12-31 2022-03-09 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド Ｐｃｓｋ９抗体、その抗原結合フラグメント及び医薬用途
WO2017118307A1 (zh) 2016-01-05 2017-07-13 江苏恒瑞医药股份有限公司 Pcsk9抗体、其抗原结合片段及其医药用途
WO2017120178A1 (en) 2016-01-06 2017-07-13 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
RU2746754C2 (ru) 2016-03-14 2021-04-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Индуцирующее повреждение клеток терапевтическое лекарственное средство, предназначенное для противораковой терапии
EP3721922B1 (en) 2016-03-15 2022-05-04 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
EP3443012A4 (en) * 2016-04-15 2019-09-11 Bioatla, LLC ANTI-AXL ANTIBODIES, ANTIBODY FRAGMENTS AND ITS IMMUNOCONJUGATES AND USES THEREOF
US11541168B2 (en) 2016-04-29 2023-01-03 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
US11389588B2 (en) 2016-05-02 2022-07-19 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
CA3018426A1 (en) 2016-05-13 2017-11-16 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
WO2017200989A1 (en) 2016-05-16 2017-11-23 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
EP3465124A1 (en) 2016-06-03 2019-04-10 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
MY187848A (en) * 2016-06-17 2021-10-26 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anti-c5 antibodies and methods of use
EP3478342A1 (en) 2016-07-01 2019-05-08 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
EP3481864A1 (en) 2016-07-08 2019-05-15 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
SG11201801024XA (en) 2016-08-05 2018-05-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Therapeutic or preventive compositions for il-8-related diseases
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
US20200261643A1 (en) 2016-10-25 2020-08-20 Amgen Inc. On-body injector
WO2018083248A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Kymab Limited Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods
JP2020518240A (ja) 2017-01-17 2020-06-25 ザ テキサス エー アンド エム ユニバーシティー システム 標的細胞のエンドリソソーム区画へのカーゴ分子の送達の向上のためのエンドリソソーム標的化コンジュゲート
AU2018210301A1 (en) 2017-01-17 2019-08-01 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
WO2018139623A1 (en) * 2017-01-30 2018-08-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-sclerostin antibodies and methods of use
SG10201908697XA (en) 2017-01-31 2019-10-30 Chugai Pharmaceutical Co Ltd A pharmaceutical composition for use in the treatment or prevention of a c5-related disease and a method for treating or preventing a c5-related disease
EP3582829A1 (en) 2017-02-17 2019-12-25 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
MX2019009625A (es) 2017-02-17 2019-10-09 Amgen Inc Dispositivo de administracion de farmacos con trayectoria de flujo de fluido esteril y metodo relacionado de ensamblaje.
CA3050927A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Brian Stonecipher Drug delivery device with activation prevention feature
CA3052482A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 Amgen Inc. Needle insertion by overpressure
IL303449B1 (en) 2017-03-09 2024-04-01 Amgen Inc Insertion mechanism for a drug delivery device
MA49886A (fr) 2017-03-16 2020-06-24 Medimmune Ltd Anticorps anti-par2 et leurs utilisations
CN114588404A (zh) 2017-03-28 2022-06-07 美国安进公司 柱塞杆和注射器组件系统以及方法
WO2018193427A1 (en) * 2017-04-21 2018-10-25 Staten Biotechnology B.V. Anti-apoc3 antibodies and methods of use thereof
JP7185884B2 (ja) 2017-05-02 2022-12-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
AU2018280054B2 (en) 2017-06-08 2023-07-13 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
AU2018282077B2 (en) 2017-06-08 2023-11-23 Amgen Inc. Torque driven drug delivery device
AU2018288604B2 (en) 2017-06-22 2023-12-21 Amgen Inc. Device activation impact/shock reduction
MX2019015479A (es) 2017-06-23 2020-02-20 Amgen Inc Dispositivo electronico de administracion de farmacos con tapa accionada por un conjunto de conmutador.
WO2019014014A1 (en) 2017-07-14 2019-01-17 Amgen Inc. NEEDLE INSERTION-RETRACTING SYSTEM HAVING DOUBLE TORSION SPRING SYSTEM
JP2020527376A (ja) 2017-07-21 2020-09-10 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物容器のためのガス透過性シーリング部材及び組立方法
JP7242562B2 (ja) 2017-07-25 2023-03-20 アムジエン・インコーポレーテツド 容器アクセスシステムを有する薬物送達デバイス及び関連する組立方法
EP3658203B1 (en) 2017-07-25 2022-08-31 Amgen Inc. Drug delivery device with gear module and related method of assembly
SI3658184T1 (sl) 2017-07-27 2024-01-31 Alexion Pharmaceuticals, Inc., Formulacije z visoko koncentracijo protiteles proti-C5
MA49838A (fr) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre
US11077246B2 (en) 2017-08-18 2021-08-03 Amgen Inc. Wearable injector with sterile adhesive patch
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
US11759565B2 (en) 2017-10-04 2023-09-19 Amgen Inc. Flow adapter for drug delivery device
EP4257164A3 (en) 2017-10-06 2024-01-17 Amgen Inc. Drug delivery device with interlock assembly and related method of assembly
US11464903B2 (en) 2017-10-09 2022-10-11 Amgen Inc. Drug delivery device with drive assembly and related method of assembly
JP7039694B2 (ja) 2017-10-31 2022-03-22 スターテン・バイオテクノロジー・ベー・フェー 抗ａｐｏｃ３抗体およびその使用方法
US10538583B2 (en) 2017-10-31 2020-01-21 Staten Biotechnology B.V. Anti-APOC3 antibodies and compositions thereof
WO2019090086A1 (en) 2017-11-03 2019-05-09 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
MA50553A (fr) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament avec détection de positionnement et de débit
MA50569A (fr) 2017-11-06 2020-09-16 Amgen Inc Ensembles de remplissage-finition et procédés associés
JP7247174B2 (ja) 2017-11-10 2023-03-28 アムジエン・インコーポレーテツド 薬物送達デバイスのプランジャ
AU2018368340B2 (en) 2017-11-16 2024-03-07 Amgen Inc. Door latch mechanism for drug delivery device
MA50903A (fr) 2017-11-16 2021-05-12 Amgen Inc Auto-injecteur avec détection de décrochage et de point d'extrémité
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
CA3103681A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
WO2020023220A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation
US20210228815A1 (en) 2018-07-24 2021-07-29 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
MA53375A (fr) 2018-07-24 2021-06-02 Amgen Inc Dispositifs d'administration pour l'administration de médicaments
MA53320A (fr) 2018-07-31 2021-11-03 Amgen Inc Ensemble de trajet de fluide pour dispositif d'administration de médicament
CN112512563A (zh) 2018-08-01 2021-03-16 中外制药株式会社 用于治疗或预防c5相关疾病的药物组合物和治疗或预防c5相关疾病的方法
US20210346601A1 (en) 2018-09-24 2021-11-11 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
WO2020068476A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Amgen Inc. Muscle wire escapement activation assembly for a drug delivery device
AR116679A1 (es) 2018-10-02 2021-06-02 Amgen Inc Sistemas de inyección para la administración de fármacos con transmisión de fuerza interna
US20210338936A1 (en) 2018-10-05 2021-11-04 Amgen Inc. Drug delivery device having dose indicator
EP3866890A1 (en) 2018-10-15 2021-08-25 Amgen Inc. Drug delivery device having damping mechanism
CA3109988A1 (en) 2018-10-15 2020-04-23 Amgen Inc. Platform assembly process for drug delivery device
WO2020091981A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
EP3873567A1 (en) 2018-11-01 2021-09-08 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial needle retraction
WO2020091956A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Amgen Inc. Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
EP3903102B1 (en) * 2018-12-30 2023-04-12 F. Hoffmann-La Roche AG Ph-gradient spr-based binding assay
MX2021012557A (es) 2019-04-24 2021-11-12 Amgen Inc Conjuntos y metodos de verificacion de esterilizacion de jeringuillas.
WO2020236670A1 (en) 2019-05-17 2020-11-26 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Genome-based methods for reducing cardiovascular risk
AU2020287165A1 (en) * 2019-06-06 2022-02-03 Mythic Therapeutics, Inc. Antigen-binding protein constructs and uses thereof
EP3980130A1 (en) * 2019-06-06 2022-04-13 Mythic Therapeutics, Inc. Antigen-binding protein constructs and uses thereof
WO2020247873A1 (en) * 2019-06-07 2020-12-10 Mythic Therapeutics, Inc. Antigen-binding protein constructs and uses thereof
US20220288219A1 (en) * 2019-07-08 2022-09-15 Mythic Therapeutics, Inc. Antigen-binding protein constructs and uses thereof
US20230018417A1 (en) 2019-07-26 2023-01-19 Shire Human Genetic Therapies, Inc. Recombinant Heme Oxygenase-1 (HO-1) for the Treatment of Sickle Cell Disease
JP2022543771A (ja) * 2019-07-30 2022-10-14 ミシック セラピューティクス インコーポレイテッド 抗原結合タンパク質構築物及びその使用
US20220273887A1 (en) 2019-08-23 2022-09-01 Amgen Inc. Drug delivery device with configurable needle shield engagement components and related methods
US20220348679A1 (en) * 2019-10-04 2022-11-03 Mythic Therapeutics, Inc. Antigen-binding protein constructs and uses thereof
BR112022021450A2 (pt) 2020-04-24 2022-12-27 Millennium Pharm Inc O cd19 ou fragmento de ligação, método de tratamento de um câncer, composição farmacêutica, ácido nucleico, vetor, e, célula isolada
CN114716560B (zh) * 2021-01-04 2024-02-02 中国医学科学院基础医学研究所 一种人乳头瘤病毒18型嵌合蛋白及其用途
CN117425673A (zh) 2021-04-09 2024-01-19 武田药品工业株式会社 靶向补体因子d的抗体和其用途
CN117580860A (zh) 2021-04-26 2024-02-20 米伦纽姆医药公司 抗adgre2抗体及其用途
CA3216770A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Tomoki Yoshihara Anti-clec12a antibodies and uses thereof
CA3217207A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Amgen Inc. Method of optimizing a filling recipe for a drug container
WO2023068382A2 (en) 2021-10-20 2023-04-27 Takeda Pharmaceutical Company Limited Compositions targeting bcma and methods of use thereof

Family Cites Families (97)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US4485045A (en) 1981-07-06 1984-11-27 Research Corporation Synthetic phosphatidyl cholines useful in forming liposomes
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4544545A (en) 1983-06-20 1985-10-01 Trustees University Of Massachusetts Liposomes containing modified cholesterol for organ targeting
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4754065A (en) 1984-12-18 1988-06-28 Cetus Corporation Precursor to nucleic acid probe
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4777127A (en) 1985-09-30 1988-10-11 Labsystems Oy Human retrovirus-related products and methods of diagnosing and treating conditions associated with said retrovirus
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
GB8702816D0 (en) 1987-02-07 1987-03-11 Al Sumidaie A M K Obtaining retrovirus-containing fraction
US5219740A (en) 1987-02-13 1993-06-15 Fred Hutchinson Cancer Research Center Retroviral gene transfer into diploid fibroblasts for gene therapy
US5422120A (en) 1988-05-30 1995-06-06 Depotech Corporation Heterovesicular liposomes
AP129A (en) 1988-06-03 1991-04-17 Smithkline Biologicals S A Expression of retrovirus gag protein eukaryotic cells
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5047335A (en) 1988-12-21 1991-09-10 The Regents Of The University Of Calif. Process for controlling intracellular glycosylation of proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
EP0454781B1 (en) 1989-01-23 1998-12-16 Chiron Corporation Recombinant cells for therapies of infection and hyperproliferative disorders and preparation thereof
CA2489769A1 (en) 1989-03-21 1990-10-04 Philip L. Felgner Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate
US6673776B1 (en) 1989-03-21 2004-01-06 Vical Incorporated Expression of exogenous polynucleotide sequences in a vertebrate, mammal, fish, bird or human
US5703055A (en) 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
EP0479909B1 (en) 1989-06-29 1996-10-30 Medarex, Inc. Bispecific reagents for aids therapy
EP1001032A3 (en) 1989-08-18 2005-02-23 Chiron Corporation Recombinant retroviruses delivering vector constructs to target cells
US5585362A (en) 1989-08-22 1996-12-17 The Regents Of The University Of Michigan Adenovirus vectors for gene therapy
US5013556A (en) 1989-10-20 1991-05-07 Liposome Technology, Inc. Liposomes with enhanced circulation time
NZ237464A (en) 1990-03-21 1995-02-24 Depotech Corp Liposomes with at least two separate chambers encapsulating two separate biologically active substances
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5278299A (en) 1991-03-18 1994-01-11 Scripps Clinic And Research Foundation Method and composition for synthesizing sialylated glycosyl compounds
EP0586505A1 (en) 1991-05-14 1994-03-16 Repligen Corporation Heteroconjugate antibodies for treatment of hiv infection
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
CA2115742A1 (en) 1991-08-20 1993-03-04 Ronald G. Crystal Adenovirus mediated transfer of genes to the gastrointestinal tract
AU669124B2 (en) 1991-09-18 1996-05-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing humanized chimera antibody
DE69229477T2 (de) 1991-09-23 1999-12-09 Cambridge Antibody Tech Methoden zur Herstellung humanisierter Antikörper
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
WO1993010218A1 (en) 1991-11-14 1993-05-27 The United States Government As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Vectors including foreign genes and negative selective markers
AU3144193A (en) 1991-11-21 1993-06-15 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Controlling degradation of glycoprotein oligosaccharides by extracellular glycosisases
GB9125623D0 (en) 1991-12-02 1992-01-29 Dynal As Cell modification
US5714350A (en) 1992-03-09 1998-02-03 Protein Design Labs, Inc. Increasing antibody affinity by altering glycosylation in the immunoglobulin variable region
FR2688514A1 (fr) 1992-03-16 1993-09-17 Centre Nat Rech Scient Adenovirus recombinants defectifs exprimant des cytokines et medicaments antitumoraux les contenant.
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
WO1993025234A1 (en) 1992-06-08 1993-12-23 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for targeting specific tissue
EP0644946A4 (en) 1992-06-10 1997-03-12 Us Health VECTOR PARTICLES RESISTANT TO HUMAN SERUM INACTIVATION.
GB2269175A (en) 1992-07-31 1994-02-02 Imperial College Retroviral vectors
CA2140280A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Avi J. Ashkenazi Bispecific immunoadhesins
US6210671B1 (en) 1992-12-01 2001-04-03 Protein Design Labs, Inc. Humanized antibodies reactive with L-selectin
JPH08503855A (ja) 1992-12-03 1996-04-30 ジェンザイム・コーポレイション 嚢胞性線維症に対する遺伝子治療
US5981568A (en) 1993-01-28 1999-11-09 Neorx Corporation Therapeutic inhibitor of vascular smooth muscle cells
EP0695169B1 (en) 1993-04-22 2002-11-20 SkyePharma Inc. Multivesicular cyclodextrin liposomes encapsulating pharmacologic compounds and methods for their use
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
DE69434486T2 (de) 1993-06-24 2006-07-06 Advec Inc. Adenovirus vektoren für gentherapie
EP0814154B1 (en) 1993-09-15 2009-07-29 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Recombinant alphavirus vectors
US6015686A (en) 1993-09-15 2000-01-18 Chiron Viagene, Inc. Eukaryotic layered vector initiation systems
ATE314482T1 (de) 1993-10-25 2006-01-15 Canji Inc Rekombinante adenoviren-vektor und verfahren zur verwendung
ES2149955T3 (es) 1993-11-16 2000-11-16 Skyepharma Inc Vesiculas con liberacion controlada de sustancias activas.
IL107742A0 (en) 1993-11-24 1994-02-27 Yeda Res & Dev Chemically-modified binding proteins
US6436908B1 (en) 1995-05-30 2002-08-20 Duke University Use of exogenous β-adrenergic receptor and β-adrenergic receptor kinase gene constructs to enhance myocardial function
AU2585395A (en) 1994-05-09 1995-11-29 Chiron Corporation Retroviral vectors having a reduced recombination rate
WO1996017072A2 (en) 1994-11-30 1996-06-06 Chiron Viagene, Inc. Recombinant alphavirus vectors
US6326155B1 (en) 1995-03-20 2001-12-04 Dyax Corp. Engineering affinity ligands for macromolecules
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
DE69739286D1 (de) 1996-05-06 2009-04-16 Oxford Biomedica Ltd Rekombinationsunfähige retrovirale vektoren
US5994511A (en) * 1997-07-02 1999-11-30 Genentech, Inc. Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides
WO1999018792A1 (en) 1997-10-10 1999-04-22 Johns Hopkins University Gene delivery compositions and methods
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
CA2341029A1 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
CA2364484A1 (en) 1999-03-09 2000-09-14 University Of Southern California Method of promoting myocyte proliferation and myocardial tissue repair
US6236155B1 (en) * 1999-04-12 2001-05-22 Osram Sylvania Inc. High chromium second anode button for cathode ray tube
US6849425B1 (en) 1999-10-14 2005-02-01 Ixsys, Inc. Methods of optimizing antibody variable region binding affinity
DK1317537T3 (da) * 2000-09-08 2007-04-30 Massachusetts Inst Technology Sammensætninger og fremgangsmåder med G-CSF analoger
CN1305905C (zh) 2002-03-22 2007-03-21 Aprogen株式会社 人源化抗体及其制备方法
CA2921578C (en) 2002-12-24 2017-02-14 Rinat Neuroscience Corp. Anti-ngf antibodies and methods using same
US20050169921A1 (en) * 2004-02-03 2005-08-04 Leonard Bell Method of treating hemolytic disease
AU2005285347A1 (en) * 2004-08-19 2006-03-23 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
EP1871417B1 (en) 2005-04-15 2013-09-11 Precision Biologics, Inc. Recombinant monoclonal antibodies and corresponding antigens for colon and pancreatic cancers
AR060017A1 (es) * 2006-01-13 2008-05-21 Novartis Ag Composiciones y metodos de uso para anticuerpos de dickkopf -1
EP4001409A1 (en) * 2006-03-31 2022-05-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies
US20100040610A1 (en) * 2006-11-07 2010-02-18 Ayesha Sitlani Antagonists of pcsk9
CN101636179B (zh) * 2006-11-07 2012-10-10 默沙东公司 Pcsk9拮抗剂
JOP20080381B1 (ar) * 2007-08-23 2023-03-28 Amgen Inc بروتينات مرتبطة بمولدات مضادات تتفاعل مع بروبروتين كونفيرتاز سيتيليزين ككسين من النوع 9 (pcsk9)
JP2009069095A (ja) 2007-09-18 2009-04-02 Daiwa House Ind Co Ltd コンクリート中性化サンプル抽出装置および中性化測定方法
CN101874042B9 (zh) * 2007-09-26 2019-01-01 中外制药株式会社 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法
BRPI0817250A2 (pt) * 2007-09-26 2014-06-17 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Anticorpo anti-receptor da il-6.
WO2009041062A1 (ja) * 2007-09-28 2009-04-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 血漿中動態が改善されたグリピカン３抗体
NZ602884A (en) * 2008-04-11 2014-08-29 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Antigen-binding molecule capable of binding to two or more antigen molecules repeatedly
JO3672B1 (ar) * 2008-12-15 2020-08-27 Regeneron Pharma أجسام مضادة بشرية عالية التفاعل الكيماوي بالنسبة لإنزيم سبتيليسين كنفرتيز بروبروتين / كيكسين نوع 9 (pcsk9).
RU2565809C2 (ru) 2009-03-19 2015-10-20 Чугаи Сейяку Кабусики Кайся Фармацевтический состав, содержащий молекулы антител с улучшенными свойствами

Also Published As

Publication number Publication date
RU2570729C2 (ru) 2015-12-10
JP2013521772A (ja) 2013-06-13
AR080511A1 (es) 2012-04-11
CN102844332A (zh) 2012-12-26
WO2011111007A3 (en) 2011-12-01
KR20120138241A (ko) 2012-12-24
US20200024366A1 (en) 2020-01-23
AU2011225716A1 (en) 2012-09-27
CA2792740A1 (en) 2011-09-15
CN102844332B (zh) 2015-08-19
EP2545079A2 (en) 2013-01-16
WO2011111007A2 (en) 2011-09-15
KR20150002894A (ko) 2015-01-07
BR112012022917A2 (pt) 2017-01-10
PE20130393A1 (es) 2013-04-07
US20110229489A1 (en) 2011-09-22
JP5932670B2 (ja) 2016-06-08
RU2012137490A (ru) 2014-05-10
US9029515B2 (en) 2015-05-12
CN105218674A (zh) 2016-01-06
CO6592103A2 (es) 2013-01-02
US20150266974A1 (en) 2015-09-24
SG10201507722QA (en) 2015-10-29
ZA201207211B (en) 2014-06-25
MX2012010481A (es) 2012-10-09
NZ602220A (en) 2014-10-31
SG183867A1 (en) 2012-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA111320266B1 (ar) أجسام مضادة مع ارتباط مولد مضاد يعتمد على الأس الهيدروجيني
TWI516501B (zh) Ｐｃｓｋ９拮抗劑類
CA2678181C (en) Antibodies against erbb3 and uses thereof
JP6230488B2 (ja) アンタゴニスト抗ｉｌ−７受容体抗体および方法
ES2389960T3 (es) Procedimientos para tratar dolor por osteoartritis administrando un antagonista del factor de crecimiento nervioso y composiciones que contienen el mismo
KR20180085793A (ko) 글리코실화된 pd-1에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
KR102574549B1 (ko) 항-fam19a5 항체 및 이의 용도
TW201331224A (zh) 金黃色葡萄球菌特異性抗體及其用途
TW201206466A (en) Antibodies with pH dependent antigen binding
KR20220088428A (ko) 글리코실화된 ctla-4에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법
AU2014201648B2 (en) Antagonist anti-il-7 receptor antibodies and methods
KR20220088438A (ko) 글리코실화된 lag3에 대해 특이적인 항체 및 이의 사용 방법