SA109300228B1 - تحضير صيدلاني من FSH مأشوب (rFSH) وعملية واستخدام التحضير الصيدلاني - Google Patents
تحضير صيدلاني من FSH مأشوب (rFSH) وعملية واستخدام التحضير الصيدلاني Download PDFInfo
- Publication number
- SA109300228B1 SA109300228B1 SA109300228A SA109300228A SA109300228B1 SA 109300228 B1 SA109300228 B1 SA 109300228B1 SA 109300228 A SA109300228 A SA 109300228A SA 109300228 A SA109300228 A SA 109300228A SA 109300228 B1 SA109300228 B1 SA 109300228B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- fsh
- sialic acid
- mol
- sialylation
- recombinant
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 24
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 4
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims description 167
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims description 167
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims description 166
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 104
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 claims description 102
- 230000009450 sialylation Effects 0.000 claims description 26
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 12
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 4
- 230000036512 infertility Effects 0.000 claims description 4
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 claims description 4
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 55
- 239000000047 product Substances 0.000 description 47
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 20
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 20
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 20
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 18
- 102000003838 Sialyltransferases Human genes 0.000 description 18
- 108090000141 Sialyltransferases Proteins 0.000 description 18
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 17
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 17
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 description 13
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 description 13
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 13
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 description 12
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 11
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 8
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 229940057854 gonal f Drugs 0.000 description 7
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 7
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 6
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 6
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 102100031974 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Human genes 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 108010044715 asialofetuin Proteins 0.000 description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 5
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 description 5
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 4
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 description 4
- 108010002913 Asialoglycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 4
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 4
- 210000004198 anterior pituitary gland Anatomy 0.000 description 4
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 description 4
- 102000035824 beta Subunit Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 4
- 108010081485 beta Subunit Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 4
- 238000004305 normal phase HPLC Methods 0.000 description 4
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000863864 Homo sapiens Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1 Proteins 0.000 description 3
- 101000703754 Homo sapiens CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 3
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 3
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 3
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- -1 organic esters ethyl oleate Chemical class 0.000 description 3
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L (5-bromo-4-chloro-1h-indol-3-yl) phosphate Chemical compound C1=C(Br)C(Cl)=C2C(OP([O-])(=O)[O-])=CNC2=C1 QRXMUCSWCMTJGU-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101710186708 Agglutinin Proteins 0.000 description 2
- 102100029945 Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710083574 CMP-N-acetylneuraminate-beta-galactosamide-alpha-2,3-sialyltransferase 4 Proteins 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710146024 Horcolin Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 101710189395 Lectin Proteins 0.000 description 2
- 101710179758 Mannose-specific lectin Proteins 0.000 description 2
- 101710150763 Mannose-specific lectin 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710150745 Mannose-specific lectin 2 Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000003979 Mineralocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000375 Mineralocorticoid Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 2
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 2
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 2
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000000910 agglutinin Substances 0.000 description 2
- 102000002287 alpha Subunit Glycoprotein Hormones Human genes 0.000 description 2
- 108010000732 alpha Subunit Glycoprotein Hormones Proteins 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N bicinchoninic acid Chemical compound C1=CC=CC2=NC(C=3C=C(C4=CC=CC=C4N=3)C(=O)O)=CC(C(O)=O)=C21 AFYNADDZULBEJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000033581 fucosylation Effects 0.000 description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004368 gonadotroph Anatomy 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 238000006452 multicomponent reaction Methods 0.000 description 2
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000000624 ovulatory effect Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002684 recombinant hormone Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 2
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HORYNJCIACQHGZ-BHVWUGLYSA-N 1-[(3R,4R,5S,6R)-3-amino-2,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-5-[(2S,3R,4S,5R,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]ethanone Chemical compound C(C)(=O)C1(O)[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO HORYNJCIACQHGZ-BHVWUGLYSA-N 0.000 description 1
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 241001136792 Alle Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 244000187656 Eucalyptus cornuta Species 0.000 description 1
- 102000008175 FSH Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010060374 FSH Receptors Proteins 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Polymers OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700023372 Glycosyltransferases Proteins 0.000 description 1
- 101000863891 Homo sapiens Beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010082302 Human Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000003864 Human Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000234435 Lilium Species 0.000 description 1
- 241001521394 Maackia amurensis Species 0.000 description 1
- 102000048245 N-acetylneuraminate lyases Human genes 0.000 description 1
- 108700023220 N-acetylneuraminate lyases Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 description 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 240000006028 Sambucus nigra Species 0.000 description 1
- 235000003142 Sambucus nigra Nutrition 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 241001455273 Tetrapoda Species 0.000 description 1
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 1
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000429 assembly Methods 0.000 description 1
- 230000000712 assembly Effects 0.000 description 1
- 108010057005 beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 239000007844 bleaching agent Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 1
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 235000008995 european elder Nutrition 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000002468 fat body Anatomy 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 108060002885 fetuin Proteins 0.000 description 1
- 102000013361 fetuin Human genes 0.000 description 1
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 1
- 108010006578 follitropin alfa Proteins 0.000 description 1
- 108010081934 follitropin beta Proteins 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 102000045442 glycosyltransferase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700014210 glycosyltransferase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 description 1
- 102000048059 human St6Gal2 Human genes 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000037323 metabolic rate Effects 0.000 description 1
- 239000004530 micro-emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 125000001483 monosaccharide substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000004303 peritoneum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008063 pharmaceutical solvent Substances 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 229940071643 prefilled syringe Drugs 0.000 description 1
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960000874 thyrotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000001748 thyrotropin Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical group COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000001215 vagina Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/24—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g. HCG; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/08—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for gonadal disorders or for enhancing fertility, e.g. inducers of ovulation or of spermatogenesis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
- A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/59—Follicle-stimulating hormone [FSH]; Chorionic gonadotropins, e.g.hCG [human chorionic gonadotropin]; Luteinising hormone [LH]; Thyroid-stimulating hormone [TSH]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/99—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y204/00—Glycosyltransferases (2.4)
- C12Y204/99—Glycosyltransferases (2.4) transferring other glycosyl groups (2.4.99)
- C12Y204/99006—N-Acetyllactosaminide alpha-2,3-sialyltransferase (2.4.99.6)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gynecology & Obstetrics (AREA)
- Pregnancy & Childbirth (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
الملخـــص: يتعلق الاختراع الحالي بمستحضرات تحتوي على منتج مأشوب recombinant product لـ FSH (rFSH). شكل )1(
Description
_ Y -— وعملية واستخدام التحضير الصيدلاني (rFSH) مأشوب FSH تحضير صيدلاني من
A pharmaceutical preparation of recombinant FSH (rFSH), the process and the use thereof الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بمنشطات منسلية لاستخدامها في علاج العقم. وبصفة خاصة يتعلق follicle stimulating hormone (FSH) بالهرمون منبه الجريب تعد المنشطات المنسلية gonadotrophins مجموعة من هرمونات بروتين سكري غير متجانس oo ثنائي الوحدات heterodimeric glycoprotein hormones ينظم الوظيفة المنسلية gonadal follicle stimulating hormone وهي تشمل الهرمون المنبه للجريب ٠ الذكر والأنقى za) function chorionic والمنشط المنسلي المشيمائي luteinising hormone (LH) وهرمون اللوقتة «(FSH) -gonadotrophin (CG) ويتم عادة إفراز الهرمون منبه الجريب follicle stimulating hormone (FSH) .عن طريق الغدة ٠ النخامية anterior pituitary gland ويعمل على دعم نمو الجريب والتبويض. ويشتمل الهرمون منبه الجريب follicle stimulating hormone (FSH) على 7 وحدة فرعية للحمض الأميني ¢ و06 LH والمشتركة للهرومونات الأخرى للبروتين السكري + amino acid alpha sub-unit و١١١ وحدة Le ji للحمض الأميني amino acid alpha sub-unit خاص ب الهرمون منبه الجريب (Pierce and Parsons, تمنح التحديد الحيوي للهرومون follicle stimulating hormone (FSH) إضافة وحدات بنائية Gob بالترجمة_الوراثية عن de (1981._ويتم تعديل كل وحدة Ve
YY.
دس
هيدروكربونية معقدة complex carbohydrate residues . وتحمل كلتا الوحدتان الفرعيتان موقعين
لاتصال glycan المرتبط ب 27 » الوحدة الفرعية ألفا عند الوحدات الأمينية للحمض الأميني sub-
©Y unit at amino acid و “لا والوحدة due dll بيتا عند الوحدات الأمينية للحمض ١ لأميني او
.(Rathnam and Saxena, 1975, Saxena and Rathnam, 1 976) وبالتالي يعتبر الهرمون منبه © الجريب alles follicle stimulating hormone (FSH) بالجليكوزيل بنسبة تصل حوالي إلى 778
Dias and Van Roey. 2001. Fox ef al. 2001) بالكتلة
وقد تم استخدام الهرمون منبه الجريب follicle stimulating hormone (FSH) المنقى من البول
البشري human urinary بعد سن اليأس لعدة سنوات في علاج الخصوبة infertility treatment ¢
لتحفيز التبويض في التناسل الطبيعي وكذلك توفير البويضات لطرق مساعدة التناسل. وقد توفرت ٠ في منتصف التسعينيات من القرن العشرين نوعين من الهرمون منبه الجريب follicle stimulating
Puregon و (Serono) Gonal-F هما ¢ recombinant product مأشوب hormone (FSH)
Chinese hamster ovary وكلاهما معبر عنه في خلايا مبيض الهامستر الصيني .(Organon)
-(Howles, 1996) (CHO) cells
هناك عدم تجانس كبير مرتبط بمستحضرات الهرمون منبه الجريب FSH) التي ترتبط باختلاف Vo كميات مختلف الأنماط الأيسوية الموجودة. وتتميز الأنماط الإيسوية ل الهرمون منبه الجريب
(FSH) بمتواليات حمض أميني متطابقة؛ ولكنها تختلف في درجة تعديلها بعد الترجمة الوراثية؛
وتتميز أنماط أيسوية معينة بعدم تجانس الصيغ البنائية المتفرعة للهيدروكربونات وباختلاف كميات
دمج sialic acid (سكر طرفي)؛ ويبدو أن كليهما يؤثر في النشاط الحيوي للنمط الإيسوي.
ويتميز البروتين السكري ل الهرمون منبه الجريب follicle stimulating hormone (FSH) الطبيعي ail, 7٠ معقد للغاية. وقد تحتوي أنواع glycan في FSH النخامي الطبيعي على العديد من البنيات
YY.
م التي قد تضم توليفات من glycans ثنائية؛ وثلاثية ورباعية القرون المستشعرة (Pierce and Parsons, 1981. Ryan et al., 1987. Baenziger and Green, 1988) وقد تحمل أنواع glycan تعديلات أخرى: المعالجة اللبية بالفيكوز fucosylation ¢ جلوكوزامين ثنائي القطع bisecting glucosamine « وسلاسل ممتدة بأسيتيل لاكتوزامين chains extended with acetyl lactosamine « dalled, © الجزئية أو الكلية بالسياليل partial or complete sialylation + المعالجة ب ال sialylation باستخدام روباط YoY a وه TY والجلوكوزامين المكبرت الذي به استبدال بالجالاكتوز sulphated galactosamine substituted for galactose « .(Dalpathado et al., 2006) علاوة lly Je هناك اختلاف بين توزيعات بنيات glycan glycan structures عند المواقع الفردية للمعالجة ب glycosylation وقد وجد أن هناك مستوى قابل ٠ لاللمقارنة من تعقد glycan في المأخوذ كم مصل أفراد ومن بول نساء تجاوزن سن اليأس. (Wide et al., 2007) وتعكس المعالجة ب الجليكوز glycosylation لمنتجات FSH مأشوب recombinant product مدى إنزيمات glycosyl-transferases الموجودة في سلالة الخلايا المضيفة. ويتم أخذ منتجات 32 الموجودة من خلايا مبيض هامستر صيني معدلة وراثياً engineered Chinese hamster ovary cells Vo (خلايا (CHO وقيم تعديلات glycan 3 المأخوذ من CHO أكثر محدود أكثر من تلك الموجودة في المنتجات الطبيعية؛ المأخوذة إما من مستخلصات الغدة النخامية anterior pituitary gland أو البول urine . ومن أمثلة انخفاض عدم تجانس glycan الموجود في 7811 المأخوذ من CHO تشمل نقص الجلوكوزامين ثناثي القطع bisecting glucosamine وانخفاض محتوى المعالجة اللبية بالفوكوز core fucosylation | ٠ وإمتدادات )1990 lactosamine (Hard ef al., انزاءعه. وإضافة «ll فإن خلايا
ها
(Kagawa et al, 1988, Y 7 a باستخدام روابط sialic acid تتميز فقط بقدرتها على إضافة CHO
Takeuchi ef al, 1988, Svensson ef al., 1990) وهذا يختلف عن FSH المنتج طبيعياً والمحتوي
AY ay YoY a ذي الروابط sialic acid مع خليط من glycan على
(PD ذي نقطة تعادل كهربي FSH يختلف في كميات (Organon) FSH اتضح أن مستحضر ail المأخوذ من الغدة FSH مقارنة ب (acidic isoforms أقل من ؛ (تعتبر أنماط أسوية حامضية ©
النخامية anterior pituitary gland » أو مصل أو بول ما بعد سن اليأس (Ulloa-Aguirre er al.
1993 . وقد كانت كمية الأنماط الإسوية الحامضية isoforms 1016مة .في مستحضرات البول
(Organon) Puregons (Serono) Gonal-f ¢ أعلى بكثير من المنتجات المأغربة urine
(Andersen et al. 2004) ولابد أن يعكس ذلك محتوى مولاري Jil من sialic acid في rFSH نظراً ٠ الانخفاض محتوي glycan سالب الشحنة المعدل بالكبريت في FSH ويعد انخفاض محتوى sialic
acid ¢ مقارنة ب FSH الطبيعي؛ من سمات منتجات FSH التجارية المتوفرة ومن ثم لابد أن
يعكس قصوراً في عملية التصنيع )2005 -(Bassett and Driebergen,
وهناك الكثير من البحوث العلمية التي تقوم بتحليل ومحاولة تفسير الاختلافات في ارتباط بال
glycosylation بين الأفراد والتغيرات في مدة دورة التبويض. وهناك مناقشات كبيرة حول ظاهرة أن VO كل من تركيز FSH ومحتوى sialic acid ينخفضان أثناء مرحلة الدورة قبل التبويض. ويؤدي
انخفاض sialic acid إلى زيادة قاعدية FSH ؛ الذي تزداد سرعة تصفيته؛ وقوته؛ على الأقل في
المعمل»؛ عند المستقبل المستهدف )1996 (Zambrano ef al. ويظل السؤال بشأن bla الحيوي
لهذه التغيرات وكيف تدخل في اختيار الجريب :
-(reviewed by Ulloa-Aguirre, 2003)
-—- لقد تم توثيق مدة بقاء FSH للمواد من مختلف المصادر. وقد تم تصنيع بعض تلك المواد على أساس إجمالي الشحنة الجزيئية؛ مصنفة حسب pl ؛ حيث تعدل كمية أكبر من الحمض إلى شحنة i سلبية. وكما سبق LEY إليه فإن العامل الرئيسي في إجمالي الشحنة الجزيئية هو إجمالي محتوى sialic لكل جزيء FSH . فعلى سبيل المثال» فإن (Organon) FSH به محتوى من sialic acid © حوالي [Use A مول؛ بينما يزيد عن ذلك محتوى sialic acid 17511 المستمد من البول -(de Leeuw et al. 1996) urine als, معدلات تصفية البلازما المناظرة في الجرذان 074 £5 1+ مل/ دقيقة (Ulloa-Aguirre er (12003ه. وفي مثال آخر؛ حيث يتم تقسيم due من FSH مأشوب recombinant product إلى أجزاء عالية ومنخفضة pl ؛ وقد تم خفض قوة الجزء مرتفع pl (محتوى sialic acid المنخفض) ٠ داخل جسم الكائن الحي وكان له عمر نصف بلازما أقل )1999 .(D* Antonio ef al. وقد ورد كذلك أن زيادة قاعدية FSH الدائر أثناء المراحل الأخيرة من دورة التبويض ترجع إلى الخفض المتحكم فيه لإنزيم sialyl-transferase 02,3 في الغدة النخامية anterior pituitary gland الأمامية الناجمة عن زيادة مستويات إسترا ديول )2001 al. 1999. Ulloa-Aguirre ef al. كن -(Damian-Matsumara ولم ترد نتائج عن إنزيم sialyl-transferase 02,6- ٠ إن جمالي محتوى sialic acid لكل من FSH FSH ليسا متشابهين بشكل مباشر لأن sialic 10 ترتبط عادة في اتجاهين. يحتوي كل من FSH النخامي/ المصلي/ البولي urine على كل من sialic acids بالرابطتين » Yas YoY 6 مع سيادة الأول. ومع ذلك» فإن نواتج المأشوب المأخوذة من CHO WIA لا تحتوي إلى على (Kagawa VY a Ler al, 1988, Takeuchi ef al, 1988, Svensson et al., 1990) وهذا اختلاف آخر بين المنتجات ٠ الطبيعية والحالية المأشوبة recombinant product إضافة إلى انخفاض المحتوى الإجمالي من
م 7 _ sialic acid للأخير. sale ما يتم استخدام CHO WA في إنتاج بروتينات بشرية صيدلانية مأشوبة recombinant aly. product حدد التحليل البنائي أن sialic acid يتصل فقط بالرابطة : ١ 7 a )1990 ,له (Kagawa er al, 1988, Takeuchi ef al, 1988, Svensson ez ويحتوي الكثير pe © المنشطات المنسلية gonadotrophins على خليط من روابط YY a وه TY لذلك» فإن البروتينات المأشوبة recombinant product المعبر عنها باستخدام نظام CHO سوف تختلف عن نظائرها الطبيعية في نوع روابط sialic acid الطرفية. وهذه مسألة هامة في إنتاج المواد البيولوجية biologicals للاستخدام الصيدلاني لأن شقوق الهيدروكربونات قد تساهم في الخواص الدوائية للجزيء pharmacological attributes of the molecule ٠ .من المطلوب وجود منتج 7511: يضاعف أو (Slay الخواص الطبيعية والكيميائية والحركية الدوائية للمنتج المنتجة من البول البشري human urinary . ومن المرغوب فيه توفير منتج 7511: يكون له خاصية أو خواص دوائية حركية محسنة مقارنة بالمنتج المعروف المأشوب recombinant product الوصف العام للاختراع Ve وفقا للاختراع الحالي يتم توفير FSH مأشوب “rFSH”) recombinant product أو (“recFSH” يشتمل على معالجة ب sialylation ل «a2 و3؛ و معالجة ب السيليل sialylation ل 02« و6؛ وإختياريا معالجة ب sialylation ل 02؛ و8. يمكن أن يكون ل 1511 (أو مستحضر ai, (fFFSH للاختراع ٠١ 7 أو أكثر من إجمالي المعالجة ب السيليل sialylation ناتج معالجة ب sialylation ل 02؛ 35 على سبيل =to Jad دم 7 من إجمالي المعالجة ب sialylation يمكن أن يكون
م -
معالجة ب sialylation ل 02« و3. ويمكن أن يتسم 17811 (أو مستحضر (FSH وفقاً للاختراع بنسبة 5+0 7 أو Ji من إجمالي المعالجة ب sialylation معالجة ب sialylation ل 02« و6؛ على سبيل المثال Lovo —vo من إجمالي المعالجة ب 02 718000ل518» و6. ويمكن أن يتسم rFSH (أو مستحضر (fFFSH وفقاً للاختراع بنسبة © 7 أو أقل من إجمالي المعالجة ب 5181718000 بحيث
© تكون معالجة ب 18000لزا812 ل 2؛ و8؛ على سبيل المثال =o) 708 من إجمالي المعالجة ب 2ه csialylation و8. ويمكن أن يتسم Sf) FSH مستحضر 07811) Wy للاختراع بمحتوى من sialic acids [ الذي يتم التعبير عنه من حيث نسبة المولات من sialic acid إلى المولات من البروتين] بنسبة 6 مول / مول أو أكبر» على سبيل المثال تتراوح بين + مول / مول و5١ مول /
٠ وقد تبين لدى مقدمي الطلب أن نوع sialic acid Li) + 2« أو -3؛ أو 02؛ أو -6؛ يمكن أن يكون له تأثير هائل على الإزالة البيولوجية ل 7511. يمكن أن تعبر سلالات الخلية البشرية؛ مقارنة بسلالات خلية «CHO عن FSH مأشروب recombinant product مع sialic acid الملحقة بكل
من ارتباطي 2؛ أو -3؛ أو 2ه؛ أو -6. وفي المثال رقم ؛ تم تحضير سلالة خلية FSH مأشوب recombinant product والتي عبرت عن FSH الذي يحتوي على glycans ذات مستويات
Vo منخفضة من كل من a2 أو -3؛ أو 02 أو -6 مرتبطة ب sialic acid (الشكل رقم 76). وتمت إزالة هذه المادة الأساسية؛ ذات المحتوى المحدود من sialic acid (الشكل رقم 4) بسرعة للغاية من الجهاز الدوري في الجرذ وفقا لما سيكون مدركا (الشكل رقم /). وتم تعريض سلالة الخلية إلى خطوة هندسة وراثية ثانية مع إضافة الجين الذي يشفر إنزيم 62,6-sialyl-transferase (المثال رقم
°( وتمت معالجة (FSH الناتج بسليل بدرجة عالية مما أظهر محتوى sialic acid وتوزيع pl
٠ المقارن مع 24 البول urine (الشكل رقم *). ومع ذلك؛ تمت إزالة المادة بسرعة شديدة من الجهاز الدوري في الجرذان بمعدل مقارن بالمادة الأصلية التي كان لها محتوى منخفض من sialic
-و- 0 (الشكل رقم (A . وكانت تلك ملاحظة غير متوقعة نظرا لأنه من المعروف أن نسبة من sialic acid على FSH الطبيعي والفعال بيولوجيا يكون مرتبطا ب Yo +-. وقد تبين أن إزالة FSH المعالج ب 02,6-sialylated يتم التوسط فيه بمستقبل البروتين السكري أسيل asialoglycoprotein (ASGP) في الكبد liver (المثال رقم 3( وقد تم توضيح هذا بواسطة الإعاقة العابرة لمستقبلات (ASGP) © باستخدام كمية زائدة من ركيزة أخرى للمستقبل. بينما يكون المستقبل مسدوداً بواسطة asialofetuin ¢ تمت استعادة الإزالة المتوقعة للمادة المعالجة ب sialylated بدرجة عالية (الشكل رقم 4). وتم الإبقاء على هذا saad ساعات حتى تم التغلب على الإعاقة واستأنف FSH المعالج + المرتبط ب ١ Yo بدرجة عالية إزالته السريعة. : تم تحضير FSH مأشوب recombinant product باستخدام خليط من كل من sialic acid المرتبط Yo, ¥ «Yao Vo +- بواسطة الهندسة الوراثية لسلالة خلية بشرية للتعبير عن كل من IFSH وانزيم sialyltransferase 02,3 و (المثال رقم ¢ و 0( وكان المنتج المعبر عنه حمضي بدرجة عالية ويحمل خليطا من كل من sialic acid المرتبطة ب Yay ¥ Ya 7-؛ بحيث كان الأخير مزودا بنشاط إنزيم sialyl transferase خارجي المنشاً في CHO Wa تقليدية: أولا كانت المادة معالجة ب sialic acid بدرجة dle أكثر نتيجة للأنشطة المشتركة من اثنين من إنزيمي sialyl transferase ؛ Vo وثانياً تشبه المادة FSH الطبيعي على نحو وثيق أكثر. ويحتمل أن يكون هذا الأمر مناسبا بيولوجيا أكثر مقارنة بمنتجات مأشوبة recombinant product المشتقة من خلية CHO والتي أنتجت sialic acid المرتبط ب «Yo ¥ فقط (Kagawa er al, 1988, Takeuchi ef al, 1988, Svensson ef al, )1990 وقللت من محتوى )2004 sialic acid (Ulloa-Aguirre ef al. 1995., Andersen et al. وقد تبين لدى مقدمي الطلب على نحو يثير الاندهاش أن الموافق للاختراع يمكن أن ينتسخ أو Slay Ye على نحو وثيق أكثر الخواص الفيزيو كيميائية والحركية الدوائية للمنتج البولي البشري ry.
Sy. =
human urinary الطبيعي عن منتجات أخرى مأشوبة recombinant product بعبارة أخرى؛ يمكن
أن يكون 7511 من الاختراع أقرب إلى FSH "الطبيعي". ويمكن أن يتسم هذا بمزايا هامة Lod
يتعلق بالجرعات؛ الخ. وعلاوة على ما سبق؛ يمكن أن يكون المنتج "الطبيعي" أكثر أو"البشري"
أكثر مرغوبا أكثر لدى المريض؛ الذي يرغب في العلاج؛ على الرغم من أنه في معنى صناعي؛ © بحيث يكون "طبيعيا" بأقصى قدر ممكن. ويمكن أن يكون هناك Ube أخرى (على سبيل المثال؛
مزايا حركية دوائية) في منتج مأشوب recombinant product الذي يتسم ببنية الكربوهيدرات (على
سبيل المثال؛ جليكان) التي تكون أقرب إلى FSH الطبيعي (على سبيل المثال؛ البولي البشري
human urinary ( من منتجات مأشوبة.
وبالتالي Jie الاختراع نسخة مأشوبة من FSH الذي يحمل خليطا من sialic acid المرتبط Yo cYay © ٠ +- ولهذا السبب يشبه إلى حد بعيد للغاية FSH الطبيعي. ومن المتوقع أن يترقب على
استخدام هذا المركب للتحفيز المبيضي المتحكم فيه؛ في تقنيات AVF وحفز التبويض حفز طبيعي
أكثر للمبيض مقارنة بمنتجات مأشوبة موجودة.
وفقا للاختراع الحالي يتم توفير FSH مأشوب “rFSH”) أو (“recFSH” (و/ أو مستحضر 81
مأشوب) يشتمل على معالجة ب (Yo sialic acid ¥ ومعالجة ب » acid عثلةاه7» = يمكن على ٠ نحو اختياري أن يشتمل مستحضر “rFSH” أو “recFSH” أيضا على معالجة ب م sialic acid 7
١ A
وفي الطلب Jd) يشتمل التعبير مستحضر FSH مأشوب l= recombinant product
مستحضر»؛ على سبيل JB خاص بالاستخدام Vaal يشتمل على FSH مأشوب
recombinant product . في النماذج الخاصة بالاختراع؛ يمكن أن يكون IFSH موجودا في صورةٌ ٠ نمط أسوي أو في صورة خليط من الأنماط الإسوية.
١١
يمكن أن يتسم tFSH (أو مستحضر 0511) وفقا للاختراع بمحتوى من sialic acid [يتم التعبير عنه من حيث نسبة المولات من sialic acid إلى المولات من البروتين] تبلغ 7 مول / مول أو أكثر (المثال رقم 4)؛ على سبيل المثال بين > مول / مول و5١ مول / مول؛ على سبيل المثال؛ بين A مول / مول و4١ مول / مول؛ على سبيل المثال؛ بين ٠١ مول / مول VE مول / مول» وعلى © سبيل المثال؛ بين ١١ مول / مول VE مول / مول؛ و على سبيل المثال؛ بين VY مول / مول و6١ مول / مول؛ وعلى سبيل Jal بين VY مول / مول و9١ مول / مول. يمكن إنتاج 17511:
الخاص بالاختراع أو يتم التعبير عنه في سلالة خلية بشرية. يمكن أن يتسم 7511 (أو مستحضر (FSH وفقا للاختراع ب ٠١ #7 أو أكثر من إجمالي المعالجة ب sialic acid بحيث يكون ذلك ناتج المعالجة ب sialic acid 02,3 . على سبيل المثال؛ يمكن أن ٠ تكون نسبة ٠١ أو 3١ أو 40 أو Jeon 10 أو Jove 88 أو 960 #2 أو أكثر من إجمالي المعالجة ب sialic acid عبارة عن ناتج المعالجة ب Ya sialic acid “-. يمكن أن يشتمل 07811 (أو مستحضر 05811) على ناتج المعالجة ب sialic acid 02,3 بكمية تتراوح من 15 إلى 85 / من إجمالي المعالجة ب 86:4 sialic على سبيل المثال؛ ما يتراوح من 7١ إلى 774 7 من إجمالي المعالجة ب sialic acid . يمكن أن يتسم 7811: (أو مستحضر 811؟0) وفقا للاختراع ب 5٠ 7 أو Ye أقل من إجمالي المعالجة ب sialic acid بحيث يكون ذلك ناتج المعالجة ب sialic acid 02,6. على سبيل (Jad يمكن أن تكون نسبة 460 أو ٠١ Sere أو ٠١ أو © 7 أو أقل من إجمالي المعالجة ب sialic acid عبارة عن ناتج المعالجة ب sialic acid 02,6. يمكن أن يشتمل (RSH (أو مستحضر 7511:) على ناتج المعالجة ب sialic acid 02,6 بكمية تتراوح من ١١ إلى Yo من إجمالي المعالجة ب «sialic acid على سبيل المثال؛ ما يتراوح من ٠١0 إلى 30 7 من إجمالي ٠ المعالجة ب «sialic acid على سبيل المثال؛ ما يتراوح من 9١ إلى 74 # من إجمالي المعالجة ب sialic acid . يمكن أن يتسم 7511 (أو مستحضر (FSH وفقا للاختراع ب © 7 أو أقل من Yr
“hy - إجمالي المعالجة ب 8610 sialic بحيث يكون ذلك ناتج المعالجة ب sialylation 8 ,02. على سبيل المثال؛ يمكن أن تكون نسبة ©,7 #7 أو أقل من إجمالي المعالجة ب sialic acid عبارة عن ناتج المعالجة ب sialylation 8 ,02. _ يمكن FSH Jad of (أو مستحضر 511) على ناتج المعالجة ب a2, 8 sialylation بكمية تتراوح من ٠.١ إلى 4 / من إجمالي المعالجة ب ونع sialic © ء على سبيل JE) ما يتراوح من ١,5 إلى ؟ 7 من إجمالي المعالجة ب sialicacid ؛ على سبيل oJ ما يتراوح من ٠,9 إلى 7,9 7 من إجمالي المعالجة ب sialic acid . ويكون المقصود بتعبير المعالجة ب 2010 sialic كمية من الوحدات البنائية ل sialic acid المؤجودة على بنيات كربوهيدرات (FSH ويعني التعبير ناتج المعالجة ب sialic acid 2,3» المعالجة ب sialic acid عند الموضع 7؛ ؟ (وفقا لما هو معروف جيدا في المجال) والمعالجة ب »ىه «Ysialic acid 1 عند ٠ الموضع TY (وفقا لما هو معروف جيدا في المجال). وبالتالي يشير التعبير"النسبة المثوية لإجمالي المعالجة ب sialic acid يمكن أن تكون ناتج المعالجة ب sialic acid 02,3 " إلى النسبة المثوية لإجمالي عدد الوحدات البنائية sialic acidd الموجودة في FSH الذي يكون معالجا ب sialic 10 في الموضع ؟. وبالتالي يشير التعبير"النسبة المثوية لإجمالي المعالجة ب sialic acid يمكن أن تكون ناتج المعالجة ب » acid عناهئو7؛ =" إلى النسبة المئوية لإجمالي عدد الوحدات Ye البنائية ل sialic acid الموجودة في FSH الذي يكون معالجا ب sialic acid في الموضع 7؛ 6. يمكن أن يتسم 811: (أو مستحضر (FSH وفقاً للاختراع بمحتوى من sialic acid (مقدار المعالجة ب sialic acid لكل جزيء من (FSH من (الذي أساسه كتلة البروتين؛ بدلا من كتلة البروتين بالإضافة إلى الكربوهيدرات) بنسبة +7 # أو أكبر (على سبيل المثال؛ بين + 7 N05 على سبيل JED بين JAY SIV على سبيل المثال؛ بين 748 5 AVY على سبيل المثال؛ بين 71١ Ye و2710 على سبيل المثال؛ بين 717 £5 (TV بالكتلة. TE
اس يشتمل FSH مأشوب recombinant product المعبر عنه في خلايا مبيض الهامستر الصيني (CHO) على نحو حصري على المعالجة ب 2,3 (Kagawa et al, 1988, Takeuchi sialic acid a
.et al. 1988, Svensson et al. 1990) يمكن إنتاج (FSH الخاص بالاختراع أو يتم التعبير عنه في سلالة خلية بشرية. ويمكن أن يبسط © هذا (ويجعلها أكثر فعالية) من طريقة الإنتاج لأن المعالجة والتحكم في؛ على سبيل المثال؛ وسط نمو الخلية للاحتفاظ بالمعالجة ب sialic acid يمكن أن يكون أقل أهمية منه باستخدام العمليات المعروفة. يمكن كذلك أن تكون الطريقة أكثر فعالية لأنه يتم إنتاج القليل من FSH الأساسي عنه في إنتاج منتجات rFSH معروفة؛ ويتم إنتاج (FSH أكثر حموضة ويثير فصل / إزالة FSH القاعدي مشاكل أقل ٠ ويمكن إنتاج FSH أو التعبير عنه في سلالة خلية Per.C6 أو ADL خلية ٠ مشتقة من Per.C6 أو سلالة خلية Per.C6 معدلة. (Say تعديل سلالة الخلية باستخدام إنزيم -02,6 sialyltransferase -. على نحو بديل أو على نحو إضافي؛ يمكن أن يشتمل rFSH على sialic
40 المرتبطة ب Ya +- (معالجة به «Ysialic acid 1) مزودة بنشاط sialyl transferase ay خارجي المنشاً [لسلالة الخلية]. (Sa إنتاج rFSH باستخدام إنزيم a2,6-sialyltransferase -و أو Ya = ويمكن إنتاج FSH Yo باستخدام إنزيم a2,6-sialyltransferase -. و يمكن أن يشتمل 1 على sialic acid المرتبطة Ya 2 >- (معالجة ب «Vsialic acid a 76) مزودة بنشاط إنزيم ©0016 الإلهاه خارجي المتشاً. وفقا للاختراع الحالي في جانب آخر يتم توفير طريقة لإنتاج 511: و/ أو فصل 811 وفقا لما تم وصفه في الطلب الحالي (وفقا لجوانب من الاختراع) تشتمل على خطوة إنتاج أو التعبير عن (FSH في سلالة خلية بشرية؛ على سبيل المثال؛ سلالة خلية Per.C6 أو سلالة خلية مشتقة من yi.
-١6- معدلة؛ على سبيل المتال؛ سلالة خلية تم تعديلها باستخدام إنزيم Per.C6 أو سلالة خلية 6 .— a2,6-sialyltransferase glycan على شقوق جليكان. ويمكن أن يحدث التفرع مما يترتب عليه أن يحتوي FSH تحتوي بنية أو ؟ء أو © أو ؛ من الوحدات البناثية للسكر الطرفي أو " قرون استشعار”؛ وفقا لما هو ١ على مع وجود معالجة ب glycans وفقاً للاختراع على (FSH معروف جيدا في الفن. ويمكن أن يحتوي © على بنيات ذات قرن استشعار أحادي و/ أو قرن استشعار ثنائي و/ أو قرن استشعار sialic acid على بنيات جليكان PSH ثلاثي و/ أو قرن استشعار رباعي. يمكن على نحو مفضل أن يشتمل sialic أو ثلاثية المعالجة ب » sialic acid أو ثنائية المعالجة ب » sialic acid أحادية المعالجة ب أحادية 7 ve -4 بكميات نسبية على النحو التالي: sialic ورباعية المعالجة ب لونم 48 ؛ أو 7+0 7+6 7 ثلاثية sialic acid ثنائية المعالجة ب 7 Yo YY ؛ sialic acid المعالجة ب ٠ (على سبيل المثال؛ وفقا لما sialic acid رباعية المعالجة ب 79 Yo sialic acid المعالجة ب zh المشحونة؛ وفقا لما تم ذكرهِ في المثال رقم glycans! WAX هو موضح بواسطة تحليل وفقا للاختراع الحالي في جانب آخر يتم توفير 7511 المنتج (على سبيل المثال؛ المعبر عنه) في .-2,66 و 02,3 sialic acid على ناتج المعالجة ب (FSH سلالة خلية بشرية. ويمكن أن يشتمل أو Per.C6 أو سلالة خلية مشتقة من Per.C6 أو التعبير عنه في سلالة خلية FSH ويمكن إنتاج ٠ . a2,3-sialyltransferase معدلة. ويمكن تعديل سلالة الخلية باستخدام إنزيم Per.C6 Ada سلالة على نحو بديل أو على نحو . 02,6-sialyltransferase ويمكن تعديل سلالة الخلية باستخدام إنزيم sialic (ناتج معالجة ب = «Yo المرتبطة ب sialic acid إضافي؛ يمكن أن يشتمل 811 على خارجي المنشاً [لسلالة الخلية]. يمكن أن sialyl transferase مزودة بنشاط إنزيم (1 «Yacid © أو أكثر من إجمالي المعالجة ب 7 ٠١ وفقاً للاختراع (FSH (أو مستحضر FSH ايكون ل ٠٠
-و١- sialylation معالجة ب Jsialylation 02« و3؛ على سبيل المثال =o عدم / من إجمالي المعالجة ب sialylation يمكن أن يكون معالجة ب sialylation ل 02« و3. ويمكن أن يتسم 5811 (أو مستحضر (fFSH وفقاً للاختراع بنسبة 0٠ 7 أو أقل من إجمالي المعالجة ب السيليل sialylation dallas ب sialylation ل 02« و6؛ على سبيل المثال vo —vo من إجمالي المعالجة ب © 2ه esialylation و6. ويمكن أن يتسم FSH (أو مستحضر (fFFSH وفقاً للاختراع بنسبة © / أو أقل من إجمالي المعالجة ب sialylation بحيث تكون معالجة ب sialylation ل 02؛ و8؛ على سبيل المثال 5,م- Lot من إجمالي المعالجة ب 2ه ssialylation و8. ويمكن أن rFSH anil (أو مستحضر 17511) وفقاً للاختراع بمحتوى من sialic acids [ الذي يتم التعبير عنه من Cua نسبة المولات من sialic acid إلى المولات من البروتين] بنسبة + مول / مول أو أكبر؛ على سبيل المثال ٠ تتراوح بين ١ مول / مول و5١ مول / مول.
وفقا للاختراع الحالي في جانب AT يتم توفير تركيبة صيدلانية تشتمل على 8811 يحتوي على ناتج معالجة ب 02,3-sialylation and a2,6-sialylation ( على سبيل المثال؛ وفقا لما تم ذكره فيما
سبق). ويمكن أن تشتمل التركيبة الصيدلانية أيضا على 1600 و/ أو LH يمكن الحصول على hCG بواسطة أي وسيلة معروفة في الفن. ويشتمل hCG وفقا لما تم وصفه ٠ في الطلب الحالي؛ على 100 المشتق من البشر و مأشوب recombinant product . ويمكن تتقية LH المشتق من البشر من أي مصدر مناسب (على سبيل «Ball البول urine والمشيمة) بواسطة أي طريقة معروفة في الفن. وتكون طرق التعبير عن hCG مأشوب recombinant product
وتتقيته معروفة في الفن.
١1 = - يمكن الحصول على LH بواسطة أي وسيلة معروفة في الفن. ويشتمل (LH وفقا لما تم وصفه في الطلب الحالي؛ على LH المشتق من البشر و مأشوب. ويمكن تنقية LH المشتق من البشر من أي مصدر مناسب (على سبيل المثال؛ البول (urine بواسطة أي طريقة معروفة في الفن. وتكون طرق التعبير عن وتنقية LH مأشوب معروفة في الفن. © _يمكن أن تكون التركيبة الصيدلانية خاصة بعلاج pind على سبيل المثال؛ للاستخدام في؛ على سبيل المثال؛ تكنولوجيات تكاثرية مساعدة (ART) أو حفز التبويض أو إمناء داخل الرحم (UT) يمكن استخدام التركيبة الصيدلانية» على سبيل المثال؛ في دواعي الاستعمال الطبية حيث يتم استخدام مستحضرات FSH المعروفة. ويقدم الاختراع Jal أيضا استخدام 8811 و/ أو مستحضر IFSH الموصوف في الطلب الحالي (وفقا لجوانب من الاختراع) لأجل أو في تصنيع ٠ دواءء؛ لعلاج العقم. : يمكن صياغة التركيبات الصيدلانية من الاختراع الحالي في تركيبات معروفة للغاية لأي مسلك لإعطاء العقار؛ على سبيل (JB عن طريق الفم oral ؛ أو المستقيم «rectal أو عن غير طريق القناة الهضمية parenteral ؛ أو عبر الأدمة transdermal (على سبيل (Jal) تقنية الرقعة patch technology )؛_وفي_الوريد intravenous ¢ وفي العضلات «intramuscular وتحت الجلد subcutaneous ٠5 ؛ أو في عظم intrasusternal ual) » أو في المهبل؛ أو في الغشاء البريتوني؛ أو موضعيا (في صورة مساحيق؛ أو مراهم أو نقط) أو في صورة رش للصدغ أو بالأنف. وتشتمل التركيبة النمطية على مادة حاملة مقبولة صيدلانياء متل محلول مائي؛ أو سواغات غير سامة؛ بما في ذلك أملاح ومواد حافظة preservatives » أو محاليل منظمة وما شابه ذلك؛ وفقا لما تم وصفه في Remington’s Pharmaceutical Sciences fifteenth edition (Matt Publishing Company,
- ١7 -
at pages 1405 to 1412 and 1461 — 87 ,(1975» والطبعة الرابعة عشر من نكتيب الوصفات
الوطني )1975 «(American Pharmaceutical Association, من بين مراجع أخرى. تشتمل الأمثلة على المواد الحاملة؛ والمواد المخففة؛ أو المذيبات أو المواد الناقلة الصيدلانية المائية وغير المائية المناسبة على ماء؛ 5 glycerol, propylene glycol, Ji) polyols; ¢ ethanol polyethylene glycol © ؛ وما شابه carboxymethyleellulose s «(ld وخلائط مناسبة منهاء وزيوت نباتية (متل زيت الزيتون)؛ وإسترات عضوية organic esters قابلة للحقن ethyl oleate Jie يمكن كذلك أن تحتوي تركيبة الاختراع Jal) على مواد إضافة مثل؛ ولكن ليس على سبيل الحصرء مواد حافظة preservatives ؛ أو عوامل ترطيب wetting agents ؛ أو عوامل استحلاب emulsifying agents Ve ¢ وعوامل تشتيت dispersing agents . ويمكن إدراج العوامل المضادة للبكتيريا والمضادة للفطريات لمنع نمو الميكروبات وتشتمل؛ على سبيل المثال؛ على paraben, chlorobutanol, phenol, sorbic acid + وما شابه ذلك. وعلاوة على ما سبق؛ يمكن أن من المرغوب فيه أن تشتمل على عوامل متساوية التوتر السطحي sugars, sodium chloride (Jie «
وما شابه ذلك.
VO في بعض الحالات؛ لتحقيق تأثير مطول يكون من المرغوب فيه إبطاء امتصاص FSH (والمكونات الفعالة الأخرى؛ إذا كانت موجودة) من الحقن تحت الجلد أو في العضلات. ويمكن إنجاز هذا الأمر بواسطة استخدام معلق سائل لمادة بلورية أو غير متبلرة ذات قابلية ذوبان ضعيفة. حينئذ يعتمد معدل امتصاص 3 على معدل إذابته؛ والذي بدوره يمكن أن يعتمد على الحجم البلوري والصورة البلورية. على نحو بديل» يتم تحقيق الامتصاص المتأخر لتوليفة FSH تم إعطاؤها عن ٠ غير طريق القناة الهضمية parenteral عن طريق إذابة أو تعليق توليفة 1115 في مادة ناقلة زيتية.
“VA (والعوامل FSH يمكن تحضير صور تخزينية قابلة للحقن بواسطة تشكيل قوالب كبسولات دقيقة من . polylactide-polyglycolide الأخرى؛ في حالة وجودها) في بوليمرات قابلة للتحلل حيويا مثل مر المعين المستخدم؛ يمكن urine مر وطبيعة البولي urine إلى البولي FSH وبناء على نسبة مرات الأخرى القابلة للتحلل urine وتشتمل الأمثلة على البولي FSH التحكم في معدل إطلاق : حيويا على © الخ. يتم كذلك تحضير الصيغ polyvinylpyrrolidone, poly(orthoesters), poly(anhydrides) في أجسام دهنية أو مستحلبات دقيقة تكون متوافقة مع FSH التخزينية القابلة للحقن بواسطة احتجاز أنسجة الجسم. يمكن تعقيم الصيغ القابلة للحقن؛ على سبيل المثال؛ بواسطة الترشيح من خلال مرشح يحتجز البكتيرياء أو بواسطة إدراج عوامل تعقيم في صورة تركيبات صلبة معقمة يمكن إذابتها أو تشتيتها ٠ في ماء معقم أو وسط آخر معقم قابل للحقن قبل الاستخدام مباشرة. ويمكن توريد الصيغ القابلة للحقن في أي حاوية مناسبة؛ على سبيل المثال؛ قارورة؛ أو محقنة مملوءة مسبقة؛ أو خرطوشات حقن؛ وما شابه ذلك.
FSH يمكن توريد الصيغ القابلة للحقن في صورة منتج يحتوي على تركيبات صيدلانية تحتوي على وعلى سبيل FSH و111 الخ). وإذا كان هناك أكثر من مكون فعال واحد (أي؛ ¢hCG مع wal) ٠ فإنها يمكن أن تكون مناسبة للإعطاء على نحو منفصل أو مجتمعة. وفي (LH أو 1100 Jd حالة إعطائها على حدة؛ يمكن أن يكون الإعطاء تتابعياً. ويمكن توريد المنتج في أي عبوة مناسبة. يمكن أن يحتوي المنتج على عدد من المحقنات المملوءة مسبقا التي تحتوي على JO على سبيل أو المحقنات معبأة في عبوة hCG و FSH أو توليفة من كل من hCG أو FSH ما على
Yr
مجمعة أو وسيلة أخرى للمحافظة على التعقيم. ويمكن أن يحتوي المنتج اختياريا على تعليمات لاستخدام صيغ FSH و hCG ويتم تضبيط الرقم الهيدروجيني pH وتركيز المكونات المتنوعة للتركيبة الصيدلانية وفقا لتطبيق روتيني في هذا المجال. انظر : GOODMAN and GILMAN’s THE PHARMACOLOGICAL BASIS FOR ° THERAPEUTICES, 7" ed في أحد النماذج المفضلة؛ يتم توريد تركيبات الاختراع في صورةٍ تركيبات للإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية parenteral . وتكون الطرق العامة لتحضير صيغ الإعطاء عن غير طريق الفناة الهضمية parenteral معروفة في الفن ويتم وصفها في: REMINGTON; THE SCIENCE AND PRACTICE OF PHARMACY, supra, at pages Ye 780-820 ويمكن توريد تركيبات للإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية parenteral في صيغة سائلة أو في صورة صلبة يتم خلطها مع وسط معقم قابل للحقن قبل | لإعطا ع مباشرة. وفي نموذج مفضل على نحو خاصض»؛ يتم توريد تركيبات الإعطاء عن غير طريق القناة الهضمية parenteral في صورة Yo وحدة جرعات لتسهيل إعطاء وتناسق الجرعات . pa ح مختصر للرسومات سوف يتم الآن وصف الاختراع الحالي بمزيد من التفصيل بالإشارة إلى الأمثلة التالية والرسومات المصاحبة؛ والتي فيها :
.و شكل ١ : يوضح خريط بلازميدية لناقل التعبير عن pFSH ألفا/ بيتا؛ شكل ؟ : يبين ناقل تعبير expression vector عن ¢02,3-sialyltransferase (ST3GAL4) شكل ؟ : يبين ناقل تعبير عن ta2,6-sialyltransferase (ST6GAL1) شكل ؛ : يوضح تركيز التعادل الكهربي ل FSH مأشوب recombinant product الذي تنتجه © خلايا Per.C6 التي تعبر عن FSH ؛ شكل © : يوضح مثالاً للنسائل التي تم تحليلها بتركيز التعادل الكهربي ل FSH مأشوب recombinant product الذي تنتجه Per.C6 WA التي تعبر عن FSH بعد التعديل ب a2,3- or a2,6-sialyltransferase ¢ شكل 6 : يوضح تحليلاً لروابط sialic acid الخاصة ب هرمون Per.C6 FSH ¢ ٠ شكل V : يوضح معدلات التصفية الأيضية (MCRS) لعينات هرمون Per.C6 FSH ؛ شكل A : يوضح MCRs لعينات هرمون Per.C6 FSH المعدلة بإنزيم 02,6-sialytransferase ؛ شكل 4 : وضح 140168 لعينات هرمون Per.C6 FSH المعدلة بإنزيم a2,6-sialytransferase شكل ٠١ : وضح MCRs لعينات هرمون FSH 2606 _المعدلة بإنزيم 02,3-sialytransferase شكل ١١ : يوضح الزيادة في وزن المبيض باستخدام نسائل Per.C6 rFSH) Per.C6 rFSH الأم؛ ٠ طبقاً لطريقة )1953( ¢Steelman and Pohley شكل VY : يوضح الزيادة في وزن المبيض باستخدام نسائل Per.C6 rFSH ل Per.C6 (02,6-sialyltransferase)rFSH ؛و YY.
شكل ٠١ : يوضح الزيادة في وزن المبيض باستخدام نسائل Per.C6 rFSHJ Per.C6 rFSH .(«2,3-sialyltransferase) انتقاء المتواليات FSH © البشري تم استخدام منطقة الترميز alpha polypeptide 3 طبقاً ل )1981( .Fiddes and Goodman. تم إيداع المتوالية برقم 211007338 وعند الإنشاء لم تكن هناك صور مختلفة أخرى من هذه المتوالية للبروتين. وتتم الإشارة إلى المتوالية في هذه الوثيقة بالمتوالية رقم .١ تم استخدام منطقة الترميز ل FSH beta polypeptide طبقاً ل )1981( .)1989( Keene ef al تم ٠ إيداع المتوالية برقم NM_000510 وعند الإنشاء لم تكن هناك صور مختلفة أخرى من هذه المتوالية للبروتين. وتتم الإشارة إلى المتوالية في هذه الوثيقة بالمتوالية رقم ؟. Sialyltransferase a2,3-Sialyltransferase - تم استخدام منطقة ترميز الجين : beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase 4 (02,3-sialyltransferase, ST3GALA4) Vo طبقاً ل Kitagawa and Paulson (1994) تم إيداع المتوالية برقم 7 وتتم الإشارة إلى المتوالية في هذه الوثيقة بالمتوالية رقم “.
10705168 7ل2,6-510» تم استخدام منطقة ترميز الجين : beta-galactosamide alpha-2,6-sialyltransferase 1 (a2,6-sialyltransferase, ST6GALI) طبقاً )1990( Grundmann et al. تم إيداع المتوالية برقم 123767 وتتم الإشارة إلى المتوالية في هذه الوثيقة بالمتوالية رقم ؟. oo الأمثلة المثال رقم ١ إنشاء ناقل التعبير عن FSH تم تضخيم المتوالية المرمزة <AH007338) FSH beta polypeptide متوالية رقم )١ و FSH beta polypeptide (204_003032,؛ متوالية رقم ؟) عن طريق PCR باستخدام توليفات بادئات FSHa- FSHa-revs fw و FSHb-rec s FSHb-fw على الترتيب. FSHasfw 5°-CCAGGATCCGCCACCATGGATTACTACAGAAAAATATGC-3’ FSHa-rev 5-GGATGGCTAGCTTAAGATTTGTGATAATAAC-3’ FSHb-fw 5’-CCAGGCGCGCCACCATGAAGACACTCCAGTTTTTC-3’ FSHb-rev 5’-CCGGGTTAACTTATTATTCTTTCATTTCACCAAAGG-3’ Yo تم اهتضام DNA ل Gy FSH الناتج المضخم بإنزيم التقييد Hpal 5 Ascl وادخاله في مواقع Ascl Je Hpal ناقل التعبير الثديي الموجه ب CMV والحامل لمرقم انتقاء neomycin . كذلك تم
Y Y —-_ — اهتضام DNA ل FSH ألفا Nels BamHla وإدخاله على مواقع Niels BamHI على ناقل التعبير المحتوي بالفعل على DNA بولي ببتيد بيتا ل FSH . تم استخدام DNA للناقل في تحويل سلالة »2115 للإشريشيا كولاي. تم جمع ستين مستعمرات للتضخيم حيث احتوت سبعة وخمسين منها على ناقل يحتوي على كل من 7811 ألفا وبيتا. تم © اختيار عشرين من بين المستعمرات المختارة لتكون متواليات وقد احتوت جميعاً على المتواليات 0 . الصحيحة طبقاً للمتوالية رقم ١؛ والمتوالية رقم ؟. وتم انتقاء البلازميدة A+B#17 7511م لتقل العدوى. (شكل .)١ المثال رقم ؟ إنشاء ناقل التعبير 973 تم تضخيم متوالية الترميز 4 «ST3, 123767( beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase ٠ متوالية رقم ؟) عن طريق PCR باستخدام توليفة البادئات ت ¥ STfw رت عدتع. 2,38Tfw 5-CCAGGATCCGCCACCATGTGTCCTGCAGGCTGGAAGC-3’ 2.3STrev 5°-TTTTTTTCTTAAGTCAGAAGGACGTGAGGTTCTTG-3’ ثم اهتضام DNA ل 513 بيتا gold) المضخم بإنزيمات التقييد 1 5 Hpal وإدخاله في مواقع 1 و7111 وإدخاله في الموقعين AFIT 5 BamHI على ناقل التعبير الثديي الموجه ب CMV VO والناقل لمرقم مقاومة hygromycin . تم تضخيم الناقل كما سبق وصفه وتكون المتواليات. وقد احتوت النسيلة pST3#1 clone (شكل ؟) على المتوالية الصحيحة طبقاً للمتوالية ؟ وتم انتقاءها لنقل العدوى. المثال رقم ؟ إنشاء ناقل التعبير 576 YY
Y $ _ _- تم تضخيم متوالية الترميز 1 ST6) beta-galactosamide alpha-2,6-sialyltransferase ‘ (NM_003032 متوالية رقم ؛) عن طريق PCR باستخدام توليفة بادئات 7 1 «878 5 Y 511671١ . STfw 5’-CCAGGATCCGCCACCATGATTCACACCAACCTGAAG-3’ 2.6 2,6STrev 5’-TTTTTTTCTTAAGTTAGCAGTGAATGGTCCGG-3’ ° تم اهتضام J DNA 16كبيتا الناتج المضخم بإنزيمات التقييد Hpal 5 Ascl وإدخاله في مواقع Aflll s BamHI وإدخاله في الموقعين 1 و4/711_ على ناقل التعبير الثدبي الموجه ب CMV والناقل لمرقم مقاومة hygromycin .تم تضخيم الناقل WS سبق وصفه وتكون المتواليات. وقد احتوت النسيلة clone 0516811 (شكل ©) على المتوالية الصحيحة طبقاً للمتوالية ¢ وتم ٠ اتتقاءها لنقل العدوى. المثال رقم 4 التعبير الثابت عن pFSH A+B في خلايا 2218.66. عزل تقل العدوى وفحص النسائل . تم توليد 1 المنتجة لنسائل Per.C6 بالتعبير (hal عن كل من سلاسل FSH J polypeptide من single plasmid (انظر مثال .)١ ٠ للحصول على نساتل تابتة يتم إجراء نقل العدوى أساسه جسيم دهني مع تركيبة .pFSH A+B تم انتقاء نسائل ثابتة في VPRO مكمل ب 7٠ من FCS وتحتوي على 0418. وبعد نقل العدوى بثلاثة أسابيع تنامت النسائل المقومة ل 0418. وتم انتقاء إجمالي عدد من النسائل You aly للعزل. وتم استنبات النسائل المعزولة في وسط انتقاء حتى تتلازق نسبة 80-76 /. وتمت تجربة المحاليل الطافية لمحتوى بروتين هرمون FSH باستخدام تجربة ELISA الانتقائية لهرمون FSH ف
- Yo -
والنشاط الدوائي عند مستقبل هرمون FSH في سلالة الخلية المستنسخة؛ باستخدام تجربة تراكم
.cAMP تم تطوير نسائل (98) التي تعبر عن البروتين الوظيفي لتمديد المزرعة إلى قوارير بها
YE عيناء و“ عيون و180.
تم بدء الدراسات لتحديد الإنتاجية والنوعية المادة من سبع نسائل في قوارير 180 لتوليد مادة كافية. © وتم استنبات الخلايا في أوساط تكميلية وفقا لما تم وصفه Lah سبق لمدة 7 أيام وتم تجميع المحلول
الطافي. وتم تحديد الإنتاجية باستخدام تجربة ELISA الانتقائية لهرمون FSH وتم تحديد خواص
التعادل الكهربائي للمادة (المثال رقم 76). وتم توضيح العينات التمثيلية في الشكل رقم 4. وتم
استخدام المعلومات من TFE لانتقاء نسائل لتحليل معدل الإزالة الأيضية (المثال رقم 1). وتم انتقاء
النسائل (144 ,223 ,179 ,104 ,005( «ld الإنتاجية والنوعية الكافية للهندسة الوراثية لإنزيم sialyltransferase ٠ .
JBI رقم © تتم زيادة مستوي المعالجة ب sialic acids في الخلايا التي تفرط في التعبير عن
إنزيم (Yo ff - a2,6-sialyltransferase +-. التعبير الثابت ل pST3 أو 6 في هرمون FSH
الذي يعبر عن WDA 021.©6؛ والعزل بنقل العدوى وفحص النساثل.
تم توليد نسائل 268.06 التي تتتج هرمون FSH المعالج sialic acide بدرجة عالية بواسطة التعبير Vo عن إنزيم sialyltransferase 2,6ه sialyltransferase or 02,3 من البلازميدات المنفصلة (انظر
المثالين رقمي ١ و7) في WDA 708.06 التي تعبر بالفعل عن كل من سلاسل بولي ببتيد لهرمون
1 (انظر المثال رقم ؛). وتم انتقاء أربع نسائل تم إنتاجها من خلايا PER.CO® وفقا لما تم
ذكره في المثال رقم ؛ لخصائصها المميزة Ly في ذلك الإنتاجية؛ وخواص النمو الجيدة؛ وإنتاج
البروتين الوظيفي؛ وهرمون FSH المنتج الذي اشتمل على بعض المعالجة ب ٠ sialic acids
ا تم توليد نسائل ثابتة وفقا لما تم وصفه من قبل في المثال رقم ؛. وتم عزل ما إجماليه 707 نسيلة clone من برنامج إنزيم a2,6-sialyltransferase .و١١٠7 نسيلة clone من برنامج إنزيم 02,6 107106 ¢ وتم baad وتجربتها. وكان عدد النسائل النهائي لدراسة Ya = هو ١١ و١٠ لدراسة و7 .-١ © وتمت تهيئة نسائل إنزيم 02,6-sialyltransferase لظروف أوساط ومعلق خالية من المصل.
وفقا لما ذكر من قبل تمت تجربة النسائل باستخدام تجربة ELISA الانتقائية لهرمون (FSH والاستجابة الوظيفية في سلالة خلية مستقبل هرمون TBE (FSH (المثال رقم 6)؛ ومعدل AY) الأيضية (المثال رقم 4) وتحليل Steelman Pohley (المثال رقم .)٠١ وتمت مقارنة النتائج مع هرمون مأشوب recombinant product المتوفر تجاريا (Gonal-f, Serono) وسلالات خلايا
٠ الرئيسية (FSH Per.C6 وتم توضيح العينات التمثيلية في الشكل رقم ©. aly توضح بعض النسائل أي زيادة في المعالجة ب sialic acid غير أنه يمكن تصور أن هرمون FSH المنتج بواسطة معظم Jill قد حسن من المعالجة ب sialic acid بدرجة كبيرة (أي؛ في متوسط أكبر من الصور المتساوية لهرمون FSH ذات الأعداد الكبيرة من sialic acid ( مقارنة بهرمون FSH الذي تم التعبير عنه بدون إنزيم asl - a2,6-sialyltransferase تكح
٠ نستنتج مما سبق ترتب على التعبير عن هرمون 1811 إلى جانب إنزيم sialyliransferase في WA 026.06 مستويات متزايدة من هرمون FSH المعالج ب sialic acid مقارنة بالخلايا التي تعبر عن هرمون FSH فقط. المثال رقم + تحليل pI للصور النمطية لهرمون FSH المنتج بواسطة Per.C6 بواسطة تركيز التعادل الكهربائي.
YY.
- ل“
يتم تعريف الاستشراد الكهربائي على أنه انتقال الجزيئات المشحونة من خلال مذيب بواسطة مجال كهربائي. تعتمد حركة الجزيء الحيوي من خلال المجال الكهربائي على مقاومة المجال؛ وعلى التغيير الكلي على الجزيء؛ وحجم وشكل الجزيءء والقوة الأيونية وخواص الوسط الذي JET من خلاله الجزيئات.
© يعد تركيز التعادل الكهربائي (IBF) تقنية استشراد كهربائي لفصل البروتينات بناء على ]م الخاصة بها. تكون pI الرقم الهيدروجيني pH الذي لا يكون عنده للبروتين أي شحنة كلية ولا ينتقل في مجال كهربائي. ويغير المحتوى من sialic acid للصور المتساوية من هرمون FSH بقوة من نقطة pl لكل صورة متساوية؛ Ally يمكن استغلالها باستخدام هذه التقنية لرؤية الصور المتساوية لهرمون Per.C6 FSH من كل نسيلة clone .
٠ تتم تحليل نقاط التعادل الكهربائي للصور المتساوية لهرمون هرمون Per.C6 FSH في المحاليل الطافية لمزرعة الخلايا باستخدام تركيز التعادل الكهربائي. وتم إنتاج أوساط مزرعة الخلايا من نسائل هرمون هرمون Per.C6 FSH وفقا لما تم وصفه في المثال رقم ؛ ورم #. تم فصل lie من هرمون Per.C6 FSH على جلات Novex® IEF تحتوي على Loo من polyacrylamide تحت ظروف أصلية على رقم هيدروجيني pH يتراوح من VV متدرج في
- محلول أمفوليت برقم هيدروجيني pH يتراوح من VY تم نقل البروتينات على nitrocellulose محمول وتمت رؤيتها باستخدام جسم مضاد رئيسي وحيد النسيلة clone مضاد ل FSHo وجسم مضاد ثانوي مترافق مع إنزيم فوسفاتاز قلوي alkaline IgG phosphatase مضاد للفأر و 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-phosphate (BCIP) ومادة كاشفة من تترازوليوم أزرق نيترى nitro blue tetrazolium (NBT) لرؤية النطاقات.
وفقا لما تمت الإشارةٍ إليه في الشكلين رقمي ؛ و*؛ تمثل النطاقات الصور المتساوية لهرمون FSH الذي يحتوي على أعداد مختلفة من جزيئات sialic acid . باستخدام هذه الطريقة تم تمييز النسائل التي تنتج الصور المتساوية لهرمون FSH ذات عدد أعلى من جزيئات sialic acid . وقد ترتب على الهندسة الوراثية باستخدام إنزيم 02,6-sialyltransferase أو «Yo - نسائل بها sialic acids أكثر ورقّم آم أقل.
المثال رقم ١ تحليل ارتباطات sialic acid لهرمون Per.C6 FSH . تم تحليل مترافقات الجليكو Glycoconjugates باستخدام طريقة تمييز جليكان أساسها ليكتين lectin glycan 08860._باستخدام هذه الطريقة يمكن تحديد خواص بروتينات glycoproteins sSala ومترافقات جليكو glycoconjuagtes المرتبطة في nitrocellulose . وتتعرف Lectins انتقائيا على
٠ شق معين»؛ على سبيل sialic acids Jad مرتبط ب «Yo ©. ويتم ترافق Lectin المطبقة مع steroid hapten digoxigenin يمكن من الكشف المناعي للكتينات المرتبطة. تم فصل هرمون Per.C6 FSH المنقى عن نسيلة clone رئيسية (بدون إنزيم sialyltransferase of Ala) ونسيلة «Yo clone ؟- إنزيم sialyltransferase مهندسة Uilyy ونسيلة -7١ «Yo clone إنزيم sialyltransferase مهندسة وراثياً باستخدام تقنيات SDS-PAGE القياسية.
5 ثم استخدام هرمون مأشوب recombinant product المتوفر تجارياً (Gonal-f, Serono) كقياس. تم تحليل sialic acid باستخدام طقم تمييز (Cat.
No. 11 210 238 001, Roche) DIG Glycan وفقا لتعليمات جهة التصنيع. وقد أظهرت التفاعلات الموجبة باستخدام nigra agglutinin sialic acid (SNA) Sambucus المرتبط طرفياً (©-2). وقد أظهرت التفاعلات الموجبة باستخدام Maackia amurensis agglutinin IT (MAA) المرتبط طرفياً (02-3).
باختصار احتوت النسيلة clone الرئيسية 005 على مستويات منخفضة من كل من sialic 02,3 acid و»7”ء .->١ واحتوت النسائل المهندسة ورأثيا مع إنزيم 02,6-sialyltransferase - على مستويات عالية من ارتباطات sialic acid 02,3 وعلى مستويات منخفضة من ارتباطات sialic ¢Yacid a = واحتوت النسائل المهندسة وراثيا مع إنزيم sialyltransferase 02,6 - على مستويات © عالية من ارتباطات Jey = (Ysialic acid a مستويات منخفضة من ارثباطات sialic acid 02.3 ٠ واحتوت العينة المقارنة القياسية Gonal-f على ارتباطات sialic acid 02,3 فقط. وهذا يتسق مع ما هو معروف حول بروتينات مأشوبة dame) recombinant product في WIA مبيض الهامستر الصيني .(Kagawa et al, 1988, Takeuchi ef al, 1988, Svensson et al., 1990) (CHO) ونستنتج مما سبق؛ أدت الهندسة الوراثية لخلايا هرمون Per.C6 FSH باستخدام إنزيم -2,6» ٠ فوفص 10رلواه -أو -١ Ya بنجاح إلى زيادة عدد جزيئات sialic acid المترافقة مع FSH في العينة. المثال رقم TA تحديد كمية إجمالي sialic acid يُعد sialic acid كربوهيدرات مرتبط ببروتين ويعتبر mono-saccharide ويحدث في توليفة مع أحاديات السكريات الأخرى galactose, mannose, glucosamine, galactosamine and Ji fucose ٠ تم قياس إجمالي sialic acid على (FSH المنقى (المثال رقم (VY باستخدام طقم تحديد كمية sialic 0 الإنزيمي ly لبروتوكول المصنعين (Sigma, Sialic-Q) باختصار يقوم إنزيم :
-— ا N-acetylneuraminic acid aldolase catalyses sialic acid to N-acetylmannoasine and pyruvic acid.
The pyruvic acid can be reduced to lactic acid by f-NADH and lactic dehydrogenase. ويمكن قياس أكسدة B-NADH بدقة بواسطة القياس الطيفي الضوئي. © وتم قياس تركيز البروتين في أطباق دقيقة العيار باستخدام طقم تجربة bicinchoninic acid (BCA) (Sigma, B 9643) بناء على طريقة .(Lowry et al, 1951) Lowry وتم قياس إجمالي محتوى sialic acid من هرمون Per.C6 FSH وتبين أنه أكبر من 6 مول / مول. المثال رقم هب تحديد مقدار الكميات النسبية ل (Vsialic acid a تروت A Yoel ٠ تتم قياس كميات النسبة المئوية النسبة ل Vsialic acid a كت A oY ay «1 «Yo على 1511 المتقى (المثال رقم )١١ باستخدام تقنيات معروفة. تم تثبيت كل عينة من (FSH (كتلة جلات)؛ وتم غسلهاء وتم اختزالهاء وتمت ألكلتها وتم اهتضامها باستخدام إنزيم PNGase F طوال الليل. وتم بعد ذلك استخلاص ومعالجة glycans - N . تم تمييز N-glycans لإجراء تحليل WAX-HPLC 5 NP-HPLC باستخدام dala اللون 2AB وفقا لما تم ٠ وصفه في Royle et al تم إمرار N-glycans على HPLC للطور الطبيعي normal phase (NP) على عمود TSK aul (وفقا لما تم تفصيله في (Royle etal بأوقات احتجاز في وحدات جلوكوز glucose units (GU) . YY
١س تم اهتضام Clie من glycans المستخلصة؛ والمجمعة (تم استخلاصها كما سبق) باستخدام إنزيمات sialidase مختلفة لتحديد الارتباطات. ويطلق 1 NAN (إنزيمات ©1085 مأشوبة sialic acid ( recombinant product الطرفية غير المختزلة المرتبطة ب NeuNAc) 7 «Yo و «(NeuNGe ويطلق sialic acid (drthrobacter ureafaciens sialidase) ABS الطرفية غير © المختزلة المرتبطة ب ¢F «Yo وه ¥« NeuNAc)A 7 at و .(NeuNGe وتم تحليل العينات بواسطة (NP-HPLC لتسمح بمقارنة العينة غير المهتضمة مع تلك المهتضمة ب NANT وثلك المهتضمة ب LABS توضح _مقارنة مسحات العينات الثلاث ب ye) NP-HPLC مهتضمة؛ ومهتضمة ب (NANT ومهتضمة ب (ABS أن الاهتضام ب NAN 5 ABS يعطي نتائج مختلفة. مما يشير إلى أن العينات احتوت على sialic acid ذات ارتباطات ب فت AY ast Yas ٠ وتم حساب النسب المئوية النسبية من البنيات الموجودة في تجميعات جليكان غير المهتضمة وتبين أنها في قيم مدى تتراوح من 65 7 = 85 7 (على سبيل المثال» 77,76 7( للمعالجة ب sialic Yacid © ؛ وتتراوح من Vo إلى Yo 7# (على سبيل المثال» 71,47 7( للمعالجة ب sialic acid Ya ؛ ونتراوح من ٠,١ إلى ¥ 7 للمعالجة ب نه «Ysialic acid 8 المثال رقم 4ج تحديد مقدار الكميات النسبية oil الأحادية؛ والثنائية» والثلاثية؛ والرباعية ٠ المعالجة ب sialic acid تم قياس كميات النسبة المئوية النسبية للبنيات الأحادية؛ والثنائية؛ والثلاثية؛ والرباعية المعالجة ب sialic acid على glycans المستخلصة من (FSH المنقى (المثال رقم )١١ باستخدام تقنيات معروفة. تم تثبيت كل عينة من ALS) (FSH جلات)؛ وتم غسلهاء وتم اختزالها؛ وتمت ألكلتها وتم اهتضامها ٠١ - باستخدام إنزيم PNGase F طوال الليل. وتم بعد ذلك استخلاص ومعالجة glycans - N . تم تمييز
glycans — N لإجراء تحليل WAX-HPLC 5 NP-HPLC باستخدام Jala اللون 2AB وفقا لما تم وصفه بالتفصيل في Royle et al تم إجراء (WAX) HPLC لتبادل أنيون ضعيف لفصل glycans - N بواسطة الشحنة (المثال رقم A ب) وفقا لما تم ذكره في Royle etal باستخدام مقياس glycan - N Fetuin كمرجع. وتم sha) © التصفية التتابعية وفقا لعدد sialic acid التي احتوت عليها. واشتملت جميع العينات على بنيات معالجة ب sialic أحادية (18)؛ أو ثنائية )28( أو ثلاثية (3S) ورباعية (45). وتبين أن الكميات النسبية من البنيات المعالجة ب sialic acid في النسب التالية (18:28:458:48) : 15-4 -7١7 if if 1-70: ٠ 11-75 7 (على سبيل YOY 1¥0, £4 : YATE YE (Jaa JU) رقم 9 تحديد معدلات الإزالة الأيضية لهرمون FSH ٠ تحديد معدل الإزالة الأيضية (MCR) لعينات من هرمون Per.C6 FSH تم حقن إناث جرذان في Alla وعي (ثلاث حيوانات لكل نسيلة (clone في وريد الذيل في الوقت صفر بجرعة كبيرة من هرمون ١ y= ١ ) rFSH ميكرو جرام / جرذ ¢ بناء على تحديد كمية العينات باستخدام تجربة (DRG EIA 1288 ELISA وتم أخذ عينات الدم )£00 ميكرو لتر) من طرف الذيل عند ٠؛ و ل و A of و NY و ¥ و YY ساعة بعد حقن Aue الاختبار. ٠ وتم تجميع المصل بواسطة الطرد المركزي وتمت تجربته لفحص محتواه من هرمون FSH بواسطة تجربة .(DRG EIA 1288) ELISA تعرف مستقبل بروتين أسيالوجليكى asialoglycoprotein (ASGP-R) .على جليكو بروتينات المنزوع recognizes desialyated منها sialic acids (بطرف جلاكتوز galactose-terminated ) «(Pricer and Ashwell, 1971. Van Lenten and Ashwell, 1972) ٠ asialofetuin (ASF) Jie وتم
استبطان مستقبل ASGP وجليكو بروتين المنزوع منه sialic acids المرتبط في الخلية حيث تمت إعادة تدوير المستقبل وتم تحلل المركب الترابطي : .(Regoeczi et al, 1978, Steer and Ashwell, 1980) لإجراء فحص لتبين ما إذا كانت مادة هرمون FSH 7.06 قد تمت إزالتها عن طريق هذه الآلية؛ © تم إشباع .asialofetuin ASGP-R وتم تحديد معدل الإزالة الأيضية للمادة المهندسة Lily الرئيسية لإنزيم sialyltransferase 02,6 أو Wy -٠ «Ya لما تم وصفه بالإعطاء المشترك لزيادة مولارية © ضعف بحد أدنى من asialofetuin لإشباع ASGP-R لمدة 7-١ ساعة. احتوت المادة المنتجة بواسطة نسائل الهرمون الرئيسي Per.C6 FSH على بعض مادة MCR أطول غير أنه تمت إزإلة نسبة مئوية عالية بسرعة (الشكل رقم .)١ وتمت هندسة النسيلة dal) clone ٠ 005 التي احتوت على معظم المادة المعالجة ب sialic acid باستخدام إنزيم 02,6 sialyltransferase أو —Y (Ya (المثال رقم #). على الرغم من أن النسائل المهندسة Lays بإنزيم sialyltransferase 02,6 أظهرت معالجة زائدة ب sialic acid (الشكل رقم 0( إلا أنه لم يكن هناك أي تحسين في MCR (الشكل رقم 7). واستعادت إعاقة ١ Yo sald MCR ASGR إلى تلك القيمة القياسية مما يوضح أنه حتى مع الارتباطات المتزايدة من Yo 1 تمت AY) المادة بسرعة ٠ (الشكل رقم /). وترتب على الهندسة الوراثية باستخدام إنزيم «Ya sialyltransferase 7- نسائل MCR ila مقارنة للمقياس (الشكل رقم 9) وكان المحتوى المتفاوت من sialic acid متسقا مع ما هو معروف للصور المتساوية من هرمون FSH (الشكل رقم Ye ( . المثال رقم Steelman-Pohley ٠١ في تجربة في الكائن الحي ry.
دهم لتوضيح أن المحتوى المتزايد من sialic acid على هرمون FSH يترتب عليه تأثير بيولوجي Mie تم فحص الزيادة في الأوزان المبيضية في الجرذان بواسطة هرمون FSH المعالج ب sialylated بدرجة عالية Jie المنتج في المثال رقم 0 تم تحليل الزيادة في أوزان المبايض نتيجة لتحليل نسائل Gig Per.C6 FSH (pap لطريقة Steelman and Pohley )1953( © وتم تحديد كمية هرمون Per.C6 rFSH من عينات أوساط الخلية المرشحة بواسطة تجربة ELISA (0180,8514-1288. .وتم اختبار العينات (Per.C6 FSH) والمقاييس (Gonal-f rFSH) عند خمس جرعات مختلفة (7 حيوانات / جرعة). وتم إعطاء جرعات من You 5 ؛٠٠١و co Gonalf و5060 و00 نانو جرام/ جرذ. وتم حساب جرعات العينة باستخدام AUC af الخاصة بها بالنسبة ل «Gonal-f وهي نمطيا 2,66 - ٠١ ميكرو جرام/ جرذ. ٠ نستنتج مما سبق؛ لم تكن المادة دون مستوى المعالجة ب sialic acid المنتجة بواسطة نسائل هرمون الرئيسي Per.C6 FSH (الشكل رقم )١١ قوية في تجربة تعزيز وزن المبيض Jie هرمون 3 المتوفر تجاريا. وأدت الهندسة الوراثية لإنزيم sialyltransferase لإضافة ارتباطات Yo >- إضافية إلى زيادة المحتوى من sialic acid غير أنها لم تحسن من القوة في التجربة في الكائن الحي (الشكل رقم (VY ومع ذلك؛ أدت ارتباطات Yo = إضافية إلى تحسين القوة (الشكل رقم (VF Vo وأظهر مستحضرا هرمون FSH مأشوب Per.C6) recombinant product و المشتق من WA (CHO خواص متساوية للغاية في هذه التجربة. المثال رقم ١١ نظرةٍ dale على الإنتاج والتنقية تم ابتكار إجراء لإنتاج هرمون FSH في خلايا التي تم استنباتها في معلق في وسط خال من المصل. وتم وصف الإجراء فيما يلي وتم تطبيقه على العديد من سلالات خلايا PER.C6 التي Yo تنتج هرمون FSH Yr.
دوم تم تحضير هرمون FSH من النسيلة clone الرئيسية 005؛ والنسيلة «Ya clone ؟- 007 والنسيلة
Lowry et al. (1976) باستخدام تعديل للطريقة التي تم وصفها بواسطة 059 ١ «Ya clone
Excell 525 لإنتاج 01218.06-7511؛ تمت تهيئة سلالات الخلايا وفقا لوسط خال من المصل» أي؛ استنبات الخلايا لتشكل نسبة تتراوح من 76 7 - 0 7 من طبقة Yl وتم (JRH Biosciences) أحادية متلازقة في قارورة مزرعة 180. وعند التمرير؛ تمت إعادة تعليق الخلايا في الوسط الخالي © خلية ١ ٠١” إلى كثافة خلية تبلغ ",م » L-glutamine ملي مولار 4 + Excell 525 « من المصل دورة في ٠٠١ في قارورة جهاز رج وتم رجها عند WAY مل من معلق YO مل. وتم وضع / خلية/ " ٠١ XT وبعد الوصول إلى كثافة خلايا أكبر من .COp الدقيقة عند 77م عند © 7 من خلية / مل وتم استنباتها " ٠١ 7 0,7 أو ٠,7 تم استنبات الخلايا فرعيا إلى كثافة خلية تبلغ Ja ٠ بعد ذلك في قوارير وسيلة رج عند VV م؛ و © 7 من ,0© و ٠٠١ دورة في الدقيقة. لإنتاج هرمون FSH تم نقل الخلايا إلى وسط إنتاج خال من المصل؛ أي VPRO (RH Biosciences), يدعم نمو خلايا PER.C6 إلى كثافات خلايا عالية للغاية (عادة أكبر من م خلية/ مل في مزرعة بالدفعة). وتم أولا استنبات الخلايا إلى أكبر من 1 7 ٠١ ' خلية/ مل في 61 وتم بعد ذلك تدويرها مغزليا لمدة © دقائق عند ٠٠٠١ دورة في الدقيقة . وتم V0 تعليقها بعد ذلك في وسط VPRO + > ملي مولار من L-GLUTAMINE إلى إلى كثافة خلية TY XY ala خلية / مل. وتم بعد ذلك استنبات الخلايا في قارورة جهاز رج لمدة ٠١ -١ أيام عند TY م؛ و © 7 من ٠٠١ CO, دورة في الدقيقة. أثناء هذه الفترة» تم نمو الخلايا إلى كثافة خلايا أكبر من ٠١ ” خلية/ مل. وتم تجميع وسط المزرعة بعد أن بدأت حياة الخلية في التدني. وتم تدوير الخلايا مغزلياً لمدة © دقائق عند ٠٠٠١ دورة في الدقيقة وتم استخدام المحلول Yr
باستخدام تجربة FSH الطافي لتحديد الكمية والتنقية من هرمون 1511. وتم تحديد تركيز هرمون .(DRG EIA 1288) ELISA باستخدام تعديل على الطريقة التي تم وصفها من قبل FSH وبعد ذلك ؛ تم إجراء تنقية هرمون وترشيح « DEAE cellulose تحقيق هذا بواسطة كروماتوجراف على 35 Lowry ef al. (1976) واستشراد كهربائي « hydroxyapatite وكروماتوجراف امتزاز على «Sephadex 6100 هلام على © تحضيري. polyacrylamide ل electrophoresis المناعي التفاعلي FSH جميع الإجراءات الكروماتوجرافية؛ تم التأكيد على وجود هرمون Ati .)3 (المثال رقم IEF و RIA (DRG EIA 1288) بواسطة المراجع Andersen CY, Westergaard LG, and van Wely 11. (2004). FSH isoform composition of commercial gonadotrophin preparations: a neglected aspect? Reprod Biomed Online. 9(2), 231-236.
Arey BJ, Stevis PE, Deecher DC, Shen ES, Frail DE, Negro-Vilar A, and Lopez FJ. (1997) Induction of promiscuous G protein coupling of the follicle-stimulating hormone (FSMP receptor: a novel mechanism for transducing pleiotropic actions of FSH isoforms.
Mol Endocrinol. 11(5), 517-526.
Baenziger JU and Green ED. (1988). Pituitary glycoprotein hormone oligosaccharides: structure, synthesis and function of the asparagine-linked oligosaccharides on lutropin, follitropin and thyrotropin. Biochim Biophys Acta. 947(2), 287-306.
Yr
— YY -
Bassett RM, and Driebergen R. (2005). Continued improvements in the quality and consistency of follitropin alfa, recombinant human FSH. Reprod Biomed Online. 10(2), 169-177.
Damién-Matsumura P, Zaga V, Maldonado A, Sanchez-Hernandez C, Timossi C, and
Ullda-Aguirre A. (1999). Oestrogens regulate pituitary alpha2,3-sialyltransferase messenger ribonucleic acid levels in the female rat. J Mol Endocrinol. 23(2), 153-165.
D’ Antonio M., Borrelli F. , Datola A., Bucci R. , Mascia M. , Polletta P., Piscitelli D., and Papoian R. (1999) Biological characterization of recombinant human follicle stimulating hormone isoforms. Human Reproduction 14, 1160-1167
Dalpathado DS, Irungu J, Go EP, Butnev VY, Norton K, Bousfield GR, and Desaire H. (2006). Comparative glycomics of the glycoprotein follicle stimulating hormone: glycopeptide analysis of isolates from two mammalian species. Biochemistry. 45(28), 8665-8673. No copy
Dias JA, Van Roey P. (2001). Structural biology of human follitropin and its receptor.
Arch Med Res. 32(6), 510-519
Fiddes, J. C. and Goodman, H. M. (1979) Isolation, cloning and sequence analysis of the cDNA for the alpha-subunit of human chorionic gonadotropin. Nature, 281, 351-356.
YY
—_ YA —
Flack, M.R., Bennet, A.P., Froehlich, J. Anasti, JN and Nisula, B. (1994). Increased biological activity due to basic isoforms in recombinant human follicle-stimulating hormone produced in a human cell line. J. Clin. Endocrinol. Metab., 79, 756-760
Fox KM, Dias JA, and Van Roey P. (2001). Three-dimensional structure of human folliRle-stimulating hormone. Mol Endocrinol. 15(3), 378-89
Grabenhorst E, Hoffmann A, Nimtz M, Zettlmeissl G, and Conradt HS. (1995).
Construction of stable BHK-21 cells coexpressing human secretory glycoproteins and human Gal(beta 1-4)GlcNAc-R alpha 2,6-sialyltransferase alpha 2,6-linked NeuAc is preferentially attached to the Gal(beta 1-4)GlcNAc(beta 1-2)Man(alpha 1-3)-branch of diantennary oligosaccharides from secreted recombinant beta-trace protein. Eur J
Biochem. 232(3), 718-25.
Green ED and Baenziger JU. (1988). Asparagine-linked oligosaccharides on lutropin, follitropin, and thyrotropin. 11. Distributions of sulfated and sialylated oligosaccharides on bovine, ovine, and human pituitary glycoprotein hormones. J Biol Chem. 263(1), 36- 44.
Grundmann, .نآ Nerlich,C., Rein, 1. and Zettlmeissl, G. (1990). Complete cDNA sequence encoding human beta-galactoside alpha-2,6-sialyltransferase. G Nucleic Acids
Res. 18 (3), 667
- Ya —
Howles, C.M. (1996). Genetic engineering of human FSH (Gonal-F). Hum Reprod.
Update, 2,172-191.
Kagawa Y, Takasaki S, Utsumi J, Hosoi K, Shimizu H, Kochibe N, and Kobata A. (1988). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of natural human intefferon-beta 1 and recombinant human interferon-beta 1 produced by three different mammalian cells. J Biol Chem. 263(33), 17508-17515.
Keene, J.L., Matzuk, M.M., Otani, T., Fauser, B,C,J,M., Galway, A.B., Hsueh, AJ.W. and Boime, I. (1989). Expression of Biologically active Human Follitropin in Chinese
Hamster Ovary Cells. The Journal of Biological Chemistry, 264(9), 4769-4775.
Kitagawa,H. and Paulson,].C (1994) Cloning of a novel alpha 2,3-sialyltransferase that sialylates glycoprotein and glycolipid carbohydrate groups. J. Biol. Chem. 269(2), 1394- 1401.
Lee EU, Roth J, and Paulson JC (1989) Alteration of terminal glycosylation sequences on N-linked oligosaccharides of Chinese hamster ovary cells by expression of beta- galat®side alpha 2,6-sialyltransferase. J Biol Chem. 264(23), 13848-13855. de Leeuw, R., Mulders, J., Voortman, G. Rombout, F. Damm, J. and Kloosterboer, L. (1996) Structure-function relationship of recombinant follicle stimulating hormone (Puregon). Mol. Hum. Reprod., 2, 361-369.
او Lowry OH, Rosebrough NJ, Farr AL, Randall RJ. (195 1) Protein measurement with the Folin phenol reagent.
J Biol Chem. 193(1), 265-75. Lowry, PJ, McLean, C, Jones RL and Satgunasingam N. (1976) Purification of anterior pituitary and hypothalamic hormones Clin Pathol Suppl (Assoc Clin Pathol). 7, 16-21. Pier€e JG, and Parsons TF (1981) Glycoprotein hormones: structure and function Annu Rev Biochem. 50, 465-495. Pricer WE Jr, and Ashwell G. (1971). The binding of desialylated glycoproteins by plasma membranes of rat liver.
J Biol Chem. 246(15), 4825-33. Rathnam P, and Saxena BB. (1975). Primary amino acid sequence of follicle-stimulating hormone from human pituitary glands.
I. alpha subunit.
J Biol Chem.;250(17):6735- .6746 Regoeczi E, Debanne MT, Hatton MC, and Koj A. (1978) Elimination of asialofetuin and asialoorosomucoid by the intact rat.
Quantitative aspects of the hepatic clearance mechanism.
Biochim Biophys Acta. 541(3), 372-84. Roy¥L, Radcliffe CM, Dwek RA and Rudd PM (2006) Methods in Molecular Biology, ed I Brockhausen-Schutzbach (Humana Press), 347: Glycobiology protocols, 125-144. Ryan RJ, Keutmann HT, Charlesworth MC, McCormick DJ, Milius RP, Calvo FO and Vutyavanich T. (1987). Structure-function relationships of gonadotropins.
Recent Prog Horm Res.;43,:383-429. rE
— $ \ -—
Saxena BB and Rathnam P. (1976) Amino acid sequence of the beta subunit of follicle- stimulating hormone from human pituitary glands. J Biol Chem. 251(4), 993- 1005
Steelman SL, and Pohley FM. (1953) Assay of the follicle stimulating hormone based on the augmentation with human chorionic gonadotropin. Endocrinology. 53 (6), 604-616.
Stee? CJ, and Ashwell G. (1980) Studies on a mammalian hepatic binding protein specific for asialoglycoproteins. Evidence for receptor recycling in isolated rat hepatocytes. J Biol Chem. 255(7), 3008-13.
Svensson EC, Soreghan B, and Paulson JC. (1990) Organization of the beta-galactoside alpha 2,6-sialyltransferase gene. Evidence for the transcriptional regulation of terminal glycbsylation. J Biol Chem. 265(34):20863-20868.
Takeuchi M, Takasaki S, Miyazaki H, Kato T, Hoshi S, Kochibe N, and Kobata A (1988). Comparative study of the asparagine-linked sugar chains of human erythropoietins purified from urine and the culture medium of recombinant Chinese hamster ovary cells. J Biol Chem. 263(8), 3657-3663.
Timbssi CM, Barrios de Tomasi J, Zambrano E, Gonzalez R, Ulloa-Aguirre A. (1998).
A naturally occurring basically charged human follicle-stimulating hormone (FSH) variant inhibits FSH-induced androgen aromatization and tissue-type plasminogen activator enzyme activity in vitro. Neuroendocrinology. 67(3), 153-163.
YY
_ 4 Y _
Timossi CM, Barrios-de-Tomasi J, Gonzélez-Suarez R, Arranz MC, Padmanabhan V,
Conn PM, and Ulloa-Aguirre A. (2000). Differential effects of the charge variants of human follicle-stimulating hormone. J Endocrinol. 165(2), 193-205.
Ulloa-Aguirre, A., Espinoza, R., Damian-Matsumura, ©. and Chappel, S.C. (1988)
Imnfunological and biological potencies of the different molecular species of gonadotrophins. Hum. Reprod. 3, 491-501.
Ulloa-Aguirre, A., Cravioto, A., Damian-Matsumura, P. Jimenez, M, Zambrano, E and
Diaz-Sanchez, V. (1992) Biological characterization of the naturally occurring analogues of intrapituitary human follicle stimulating hormone. Hum. Reprod. 7, 23-30.
Ulloh*Aguirre A, Midgley AR Jr, Beitins IZ, and Padmanabhan V. (1995). Follicle- stimulating isohormones: characterization and physiological relevance. Endocr
Rev.16(6), 765-787.
Ulloa-Aguirre A, Maldonado A, Damian-Matsumura P, and Timossi C (2001).
Endocrine regulation of gonadotropin glycosylation. Arch Med Res. 32(6), 520-532.
Ulloh®Aguirre A, Timossi C, Barrios-de-Tomasi J, Maldonado A, and Nayudu P. (2003).
Impact of carbohydrate heterogeneity in function of follicle-stimulating hormone: studies derived from in vitro and in vivo models. Biol Reprod. 69(2), 379-389.
Ye.
_- ¢Y —
Van Lenten L, and Ashwell G. (1972) The binding of desialylated glycoproteins by plasma membranes of rat liver. Development of a quantitative inhibition assay. J Biol
Chem. 247(14), 4633-40.
Wide, L. and Albertsson-Wikland, K. (1990) Change in electrophoretic mobility of hunfan follicle-stimulating hormone in serum after administration of gonadotropin-releasing hormone. J. Clin. Endocrinol. Metab. 70, 271-276.
Wide, L. and Bakos, O. (1993). More basic forms of both human follicle- stimulating hormone and luteinizing hormone in serum at midcycle compared with the follicular or luteal phase. J. Clin. Endocrinol. Metab., 76, 885-889.
Wide'L, Naessén T, Sundstrém-Poromaa |, Eriksson K. (2007) Sulfonation and sialylation of gonadotropins in women during the menstrual cycle, after menopause, and with polycystic ovarian syndrome and in men. J Clin Endocrinol
Metab.;92(11), 4410-4417.
Zambrano E, Zarifian T, Olivares A, Barrios-de-Tomasi J, and Ulloa-Aguirre A. (1999).
Recdptor binding activity and in vitro biological activity of the human FSH charge isoforms as disclosed by heterologous and homologous assay systems: implications for the structure-function relationship of the FSH variants. Endocrine. 10(2), 113-121.
-— $ $ —
Zhang X, Lok SH, and Kon OL (1998) Stable expression of human alpha-2,6- sialyltransferase in Chinese hamster ovary cells: functional consequences for human erythropoietin expression and bioactivity. Biochim Biophys Acta. 1425(3), 441-452 0 ١ متوالية رقم
Follicle stimulating hormone alpha polypeptide Wl الهرمون المنبه للجريب polypeptide
AH007338 رقم الوصول ألفا FSH ل Nucleotide متوالية 1 AFGGATTACT ACAGAAAATA TGCAGCTATC TTTCTGGTCA
CATTGTCGGT GTTTCTGCAT
61 GTTCTCCATT CCGCTCCTGA TGTGCAGGAT TGCCCAGAAT
GCACGCTACA GGAAAACCCA
121 TTCTTCTCCC AGCCGGGTGC CCCAATACTT CAGTGCATGG
GCTGCTGCTT CTCTAGAGCA
181 TATCCCACTC CACTAAGGTC CAAGAAGACG ATGTTGGTCC
AAAAGAACGT CACCTCAGAG
YY
— $0 — 241 TCCACTTGCT GTGTAGCTAA ATCATATAAC AGGGTCACAG
TAATGGGGGG TTTCAAAGTG
301 GAGAACCACA CGGCGTGCCA CTGCAGTACT TGTTATTATC
ACAAATCTTA A
ProtRin sequence of FSH alpha 1 MKTLQFFFLF CCWKAICCNS CELTNITIAI EKEECRFCIS INTTWCAGYC
YTRDLVYKDP
61 ARPKIQKTCT FKELVYETVR VPGCAHHADS LYTYPVATQC HCGKCDSDST
DCTVRGLGPS
121 Y"CSFGEMKE ١ متوالية رقم
Follicle stimulating hormone beta polypeptide بولي ببتيد الهرمون المنبه للجريب بيتا
NM_000510 رقم الوصول بيتا FSH ل Nucleotide متوالية 1 APGAAGACAC 10040611111 CTTCCTTTTC TGTTGCTGGA AAGCAATCTG
CTGCAATAGC
61 TGTGAGCTGA CCAACATCAC CATTGCAATA GAGAAAGAAG
AATGTCGTTT CTGCATAAGC
121 ATCAACACCA CTTGGTGTGC TGGCTACTGC TACACCAGGG
ATCTGGTGTA TAAGGACCCA
181 GCCAGGCCCA AAATCCAGAA AACATGTACC TTCAAGGAAC
TGGTATATGA AACAGTGAGA
241 GTGCCCGGCT GTGCTCACCA TGCAGATTCC TTGTATACAT
ACCCAGTGGC CACCCAGTGT
301 CACTGTGGCA AGTGTGACAG CGACAGCACT GATTGTACTG
TGOGAGGCCT GGGGCCCAGC
361 TACTGCTCCT TTGGTGAAAT GAAAGAATAA
FSH beta J متوالية البروثين 1 MKTLQFFFLF CCWKAICCNS CELTNITIAI EKEECRFCIS INTTWCAGYC
YTRDLVYKDP
61 ARPKIQKTCT FKELVYETVR VPGCAHHADS LYTYPVATQC HCGKCDSDST
DCTVRGLGPS
121 YCSFGEMKE
-— ¢ لا — متوالية رقم ؟
Beta-galactoside alpha-2,3-sialyltransferase 4 123767 رقم الوصول
ST3GAL4 ل Nucleotide ا متوالية 1 ATGTGTCCTG CAGGCTGGAA GCTCCTGGCC ATGTTGGCTC
TGGTCCTGGT CGTCATGGTG
61 TGGTATTCCA TCTCCCGGGA AGACAGGTAC ATCGAGCTTT
TITATTTTCC CATCCCAGAG
121 AAGAAGGAGC CGTGCCTCCA GGGTGAGGCA GAGAGCAAGG
CCTCTAAGCT CTTTGGCAAC
181 TACTCCCGGG ATCAGCCCAT CTTCCTGCGG CTTGAGGATT
ATTTCTGGGT CAAGACGCCA
241 TCTGCTTACG AGCTGCCCTA TGGGACCAAG GGGAGTGAGG
ATCTGCTCCT CCGGGTGCTA
301 GCCATCACCA GCTCCTCCAT CCCCAAGAAC ATCCAGAGCC
TCAGGTGCCG CCGCTGTGTG
—_ $ A —_ 361 GTCGTGGGGA ACGGGCACCG GCTGCGGAAC AGCTCACTGG
GAGATGCCAT CAACAAGTAC
421 GATGTGGTCA TCAGATTGAA CAATGCCCCA GTGGCTGGCT
ATGAGGGTGA CGTGGGCTCC
481 AAGACCACCA TGCGTCTCTT CTACCCTGAA TCTGCCCACT
TCGACCCCAA AGTAGAAAAC
541 AACCCAGACA CACTCCTCGT CCTGGTAGCT TTCAAGGCAA
TGGACTTCCA CTGGATTGAG
601 ACCATCCTGA GTGATAAGAA GCGGGTGCGA AAGGGTTTCT
GGAAACAGCC TCCCCTCATC
661 TGGGATGTCA ATCCTAAACA GATTCGGATT CTCAACCCCT
TCTTCATGGA GATTGCAGCT
721 GACAAACTGC TGAGCCTGCC AATGCAACAG CCACGGAAGA
TTAAGCAGAA GCCCACCACG
781 BGCCTGTTGG CCATCACGCT GGCCCTCCAC CTCTGTGACT
TGGTGCACAT TGCCGGCTTT
841 GGCTACCCAG ACGCCTACAA CAAGAAGCAG ACCATTCACT
ACTATGAGCA GATCACGCTC
YL
-_ ع q —_ 901 AAGTCCATGG CGGGGTCAGG CCATAATGTC TCCCAAGAGG
CCCTGGCCAT TAAGCGGATG
961 CTGGAGATGG GAGCTATCAA GAACCTCACG TCCTTCTGA
ST3GAL4 متوالية البروتين ل 1 MCPAGWKLLA MLALVLVVMYV WYSISREDRY IELFYFPIPE KKEPCLQGEA
ESKASKLFGN
61 YSRDQPIFLR LEDYFWVKTP SAYELPYGTK GSEDLLLRVL AITSSSIPKN
IQSLRCRRCV
121 VVGNGHRLRN SSLGDAINKY DVVIRLNNAP VAGYEGDVGS
KTIMRLFYPE SAHFDPKVEN
181 NPDTLLVLVA FKAMDFHWIE TILSDKKRVR KGFWKQPPLI WDVNPKQIRI
LNPFFMEIAA
241 DKLLSLPMQQ PRKIKQKPTT GLLAITLALH LCDLVHIAGF GYPDAYNKKQ
TIHYYEQITL
301 KSMAGSGHNV SQEALAIKRM LEMGAIKNLT SF 4 متوالية رقم
Beta-galactosamide alpha-2,6-sialyltransferase 1
YY.
- وج _ رقم الوصول NM_003032 متوالية Nucleotide ل ST6GAL1 1 ATGATTCACA CCAACCTGAA GAAAAAGTTC AGCTGCTGCG
TCCTGGTCTT TCTTCTGTTT
61 GCAGTCATCT GTGTGTGGAA GGAAAAGAAG AAAGGGAGTT
ACTATGATTC CTTTAAATTG
121 CAAACCAAGG AATTCCAGGT GTTAAAGAGT CTGGGGAAAT
TGGCCATGGG GTCTGATTCC
181 CAGTCTGTAT CCTCAAGCAG CACCCAGGAC CCCCACAGGG
GCAGCCAGAC CCTCGGCAGT
241 CTCAGAGGCC TAGCCAAGGC CAAACCAGAG GCCTCCTTCC
AGGTGTGGAA CAAGGACAGC
301 TCTTCCAAAA ACCTTATCCC TAGGCTGCAA AAGATCTGGA
AGAATTACCT AAGCATGAAC
36YRAAGTACAAAG TGTCCTACAA GGGGCCAGGA CCAGGCATCA
AGTTCAGTGC AGAGGCCCTG
421 CGCTGCCACC TCCGGGACCA TGTGAATGTA TCCATGGTAG
AGGTCACAGA TTTTCCCTTC
-— 0 \ - 481 AATACCTCTG AATGGGAGGG TTATCTGCCC AAGGAGAGCA
TTAGGACCAA GGCTGGGCCT
541 TGGGGCAGGT GTGCTGTTGT GTCGTCAGCG GGATCTCTGA
AGTCCTCCCA ACTAGGCAGA
60I°GAAATCGATG ATCATGACGC AGTCCTGAGG TTTAATGGGG
CACCCACAGC CAACTTCCAA
661 CAAGATGTGG GCACAAAAAC TACCATTCGC CTGATGAACT
CTCAGTTGGT TACCACAGAG
721 AAGCGCTTCC TCAAAGACAG TTTGTACAAT GAAGGAATCC
TAATTGTATG GGACCCATCT
781 GTATACCACT CAGATATCCC AAAGTGGTAC CAGAATCCGG
ATTATAATTT CTTTAACAAC
841 TACAAGACTT ATCGTAAGCT GCACCCCAAT CAGCCCTTTT
ACATCCTCAA GCCCCAGATG
901'eCTTGGGAGC TATGGGACAT TCTTCAAGAA ATCTCCCCAG
AAGAGATTCA GCCAAACCCC
961 CCATCCTCTG GGATGCTTGG TATCATCATC ATGATGACGC
TGTGTGACCA GGTGGATATT
TY
اج TATGAGTTCC TCCCATCCAA GCGCAAGACT GACGTGTGCT 1021 ACTACTACCA GAAGTTCTTC GATAGTGCCT GCACGATGGG TGCCTACCAC CCGCTGCTCT 1081 ATGAGAAGAA TTTGGTGAAG CATCTCAACC AGGGCACAGA TGAGGACATC TACCTGCTTG 114 GAAAAGCCAC ACTGCCTGGC TTCCGGACCA TTCACTGCTA A0p- 1201 متوالية البروتين STEGALL MIHTNLKKKF SCCVLVFLLF AVICVWKEKK KGSYYDSFKL QTKEFQVLKS ٠ 1 LGKLAMGSDS QSVSSSSTQD PHRGRQTLGS LRGLAKAKPE ASFQVWNKDS SSKNLIPRLQ 61 KIWKNYLSMN KYKVSYKGPG PGIKFSAEAL RCHLRDHVNV SMVEVTDFPF 121 NTSEWEGYLP KESIRTKAGP Vo WGRCAVVSSA GSLKSSQLGR EIDDHDAVLR FNGAPTANFQ 181 QDVGTKTTIR LMNSQLVTTE YY
- اج 241 KRFLKDSLYN EGILIVWDPS VYHSDIPKWY QNPDYNFFNN
YKTYRKLHPN QPFYILKPQM
301 PWELWDILQE ISPEEIQPNP 15501116111 MMTLCDQVDI YEFLPSKRKT
DVCYYYQKFF
361 DSACTMGAYH PLLYEKNLVK HLNQGTDEDI YLLGKATLPG FRTIHC ©
FY.
Claims (1)
- of — - عناصر_ الحماية -١ ١ هرمون منبه الجريب مأشوب Recombinant FSH (FSH) يحتوي على إضافة مجموعة Cus »2,3- and a2,6-sialylation تكون نسبة 7700 أو أكثر من إجمالي إضافة مجموعة sialylation ¥ عبارة عن إضافة مجموعة sialylation -02,3 وتكون نسبة تتراوح من 0 = 740 من ؛ إجمالي إضافة مجموعة sialylation عبارة عن إضافة مجموعة 02,6-sialylation ؛ Cua يشتمل © هرمون منبه الجريب مأشوب Recombinant FSH (FSH) على محتوى من sialic acid [معبراً ١ عنه بنسبة عدد مولات sialic acid إلى عدد مولات البروتين] يتراوح من ٠١ مول/مول إلى Vo ١ مول/مول. ١ ”- هرمون منبه الجريب مأشوب Ta Recombinant FSH (rFSH) لعنصر الحماية Cua) " يشتمل أيضاً على إضافة مجموعة sialylation -02,8. ١ *- تركيبة صيدلانية تشتمل على هرمون منبه الجريب مأشوب FSH يحتوي على إضافة Y مجموعة Gus »2,3- and 02,6-sialylation تكون ds 708 أو أكثر من إجمالي إضافة " مجموعة sialylation عبارة عن إضافة مجموعة (Yo 7-سياليل وتكون نسبة تتراوح من 0 - ؛ Tee من إجمالي إضافة مجموعة «71800ل58 عبارة عن إضافة مجموعة a2,6-sialylation ¢ © ويشتمل على محتوى من sialic acid (معبراً die بنسبة عدد مولات sialic acid إلى عدد 1 -_مولات البروتين] يتراوح من ٠١ مول/مول إلى Yo مول/مول. ١ ؛- تركيبة صيدلانية تشتمل على 811 وفقاً لعنصر الحماية 7.LH تركيبة صيدلانية وفقاً لعنصر الحماية أو ؛ تشتمل أيضاً على 5006 و/أو -* ١ تركيبة صيدلانية وفقاً لأي من عناصر الحماية ” إلى © لاستخدامها في علاج العقم -+ ١ .nfertility Y تشتمل على خطوة إنتاج أو ١ أو ١ وفقاً لأي من عنصري الحماية FSH طريقة لإنتاج -7 ١ . human cell line في سلالة خلية بشرية FSH التعبير وراتياً عن "ف
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US4542408P | 2008-04-16 | 2008-04-16 | |
| EP08251528 | 2008-04-25 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA109300228B1 true SA109300228B1 (ar) | 2014-04-08 |
Family
ID=39717519
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA109300228A SA109300228B1 (ar) | 2008-04-16 | 2009-04-18 | تحضير صيدلاني من FSH مأشوب (rFSH) وعملية واستخدام التحضير الصيدلاني |
Country Status (29)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US8951967B2 (ar) |
| EP (7) | EP3045471B1 (ar) |
| JP (7) | JP2011519359A (ar) |
| KR (5) | KR20180095140A (ar) |
| CN (3) | CN102066414A (ar) |
| AR (1) | AR071479A1 (ar) |
| AU (5) | AU2009237479B2 (ar) |
| BR (1) | BRPI0910461B8 (ar) |
| CA (1) | CA2725257A1 (ar) |
| CY (1) | CY1115413T1 (ar) |
| DK (4) | DK3144318T3 (ar) |
| ES (3) | ES2610277T3 (ar) |
| FR (1) | FR17C1020I2 (ar) |
| HK (2) | HK1146284A1 (ar) |
| HR (3) | HRP20140535T1 (ar) |
| HU (5) | HUE030652T4 (ar) |
| IL (2) | IL208538A (ar) |
| LT (4) | LT3045471T (ar) |
| MX (3) | MX2010011343A (ar) |
| NO (2) | NO2017025I1 (ar) |
| NZ (1) | NZ588381A (ar) |
| PL (4) | PL2268666T3 (ar) |
| PT (4) | PT2808340T (ar) |
| RU (3) | RU2537268C2 (ar) |
| SA (1) | SA109300228B1 (ar) |
| SI (4) | SI3045471T1 (ar) |
| TW (1) | TWI488640B (ar) |
| WO (1) | WO2009127826A1 (ar) |
| ZA (1) | ZA201007373B (ar) |
Families Citing this family (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI488640B (zh) | 2008-04-16 | 2015-06-21 | Ferring Int Ct Sa | 藥學製劑 |
| TWI532495B (zh) | 2009-10-05 | 2016-05-11 | 菲瑞茵國際中心股份有限公司 | 藥學製劑 |
| EP2417982A1 (en) | 2010-07-30 | 2012-02-15 | Ferring B.V. | Stabilization of gonadotropins |
| WO2012016576A1 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Glycotope Gmbh | Improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
| ES2547233T5 (es) | 2010-09-29 | 2024-03-27 | Ferring Bv | Composición para su uso en el tratamiento de la esterilidad |
| WO2012050175A1 (ja) | 2010-10-15 | 2012-04-19 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | 糖鎖の非還元末端がマンノース残基である糖蛋白質の製造方法 |
| US9757469B2 (en) | 2011-03-31 | 2017-09-12 | Ferring B.V. | Pharmaceutical preparation |
| EP2717904A1 (en) | 2011-06-06 | 2014-04-16 | Ferring BV | Pharmaceutical preparation comprising recombinant fsh |
| JO3092B1 (ar) * | 2011-08-08 | 2017-03-15 | Ferring Bv | مركب لتحفيز مسيطر عليه للمبيض |
| AU2012340501A1 (en) * | 2011-12-19 | 2013-07-11 | Grifols, S.A. | Compositions, methods, and kits for preparing sialylated recombinant proteins |
| WO2013161958A1 (ja) * | 2012-04-27 | 2013-10-31 | 日本ケミカルリサーチ株式会社 | 新規な発現ベクター |
| EP2824176A1 (en) * | 2013-07-11 | 2015-01-14 | Siamed'xpress | Methods for producing sialylated therapeutic proteins |
| JP6652334B2 (ja) | 2014-05-31 | 2020-02-19 | Ｊｃｒファーマ株式会社 | ウリジンとｎ−アセチル−ｄ−マンノサミンとを含有する培地 |
| EP3237608B1 (en) * | 2014-12-22 | 2019-10-09 | F. Hoffmann-La Roche AG | Cmp-dependent sialidase activity |
| DK3662925T3 (da) | 2015-04-17 | 2021-06-28 | Ferring Bv | Sammensætning, der omfatter fsh, til behandling af infertilitet |
| RU2719468C2 (ru) | 2015-06-26 | 2020-04-17 | Ферринг Б.В. | Способы очистки и/или вирусной инактивации |
| EP3205719A1 (en) * | 2016-02-15 | 2017-08-16 | CEVEC Pharmaceuticals GmbH | Cell lines for producing recombinant glycoproteins with di-antennary n-glycans, methods using the same, and recombinant glycoproteins |
| GB201603280D0 (en) | 2016-02-24 | 2016-04-13 | Ferring Bv | Stable liquid gonadotropin formulation |
| EP3382014A1 (en) | 2017-03-29 | 2018-10-03 | CEVEC Pharmaceuticals GmbH | Recombinant glycoproteins with reduced antennary fucosylation |
| MX2020002235A (es) | 2017-09-01 | 2020-07-20 | Ferring Bv | Composicion para la estimulacion ovarica controlada. |
| TW201945024A (zh) | 2018-04-30 | 2019-12-01 | 荷蘭商菲林公司 | 用於經控制之卵巢刺激的組成物 |
| TW202027780A (zh) | 2018-10-17 | 2020-08-01 | 荷蘭商菲林公司 | 用於控制性卵巢刺激之組成物及方法 |
| WO2021081670A1 (en) * | 2019-11-01 | 2021-05-06 | The University Of British Columbia | Compositions and methods for sialylated mucin-type o-glycosylation of therapeutic proteins |
| TW202237173A (zh) | 2020-12-09 | 2022-10-01 | 荷蘭商菲林公司 | 用於受控的卵巢刺激之組成物及方法 |
| WO2023186331A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Ferring B.V. | Mixed protocol for treatment of infertility |
| WO2023227761A1 (en) | 2022-05-26 | 2023-11-30 | Ferring B.V. | Compositions and methods for treatment of infertility in males |
| WO2024008971A1 (en) | 2022-07-08 | 2024-01-11 | Ferring B.V. | Compositions and methods for intrauterine insemination (iui) |
Family Cites Families (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1206302B (it) | 1987-06-26 | 1989-04-14 | Serono Cesare Ist Ricerca | Ormone follicolo-stimolante urinario |
| US5541083A (en) | 1989-10-24 | 1996-07-30 | The Regents Of The University Of California | Method for producing secretable glycosyltransferases and other golgi processing enzymes |
| KR100449181B1 (ko) | 1995-06-15 | 2005-01-24 | 크루셀 홀란드 비.브이. | 유전자요법에사용할수있는사람의재조합아데노바이러스패키징시스템 |
| JP3559652B2 (ja) * | 1996-06-25 | 2004-09-02 | グローリー工業株式会社 | 売上精算システムの管理装置 |
| TW518235B (en) * | 1997-01-15 | 2003-01-21 | Akzo Nobel Nv | A gonadotropin-containing pharmaceutical composition with improved stability on prolong storage |
| JP2001507215A (ja) | 1997-01-16 | 2001-06-05 | サイテル コーポレイション | 組換え糖タンパク質のインビトロでの実用的なシアリル化 |
| JPH1111665A (ja) | 1997-06-28 | 1999-01-19 | Shibuya Kogyo Co Ltd | 無菌エア搬送コンベヤ装置 |
| TWI235158B (en) * | 1997-09-01 | 2005-07-01 | Kirin Brewery | Human thrombopoietin produced by human established cell lines, processes foe preparing the same, and pharmaceutical composition comprising the same |
| EP1176976B2 (en) | 1999-05-07 | 2015-10-21 | Laboratoires Serono SA | Use of lh administered in mid- or late-follicular phase for the treatment of anovulatory women |
| JP2002011665A (ja) | 2000-06-28 | 2002-01-15 | Sintokogio Ltd | ショットブラスト装置モニタシステム |
| IL140110A0 (en) | 2000-12-05 | 2002-02-10 | Applied Research Systems | Improvement of homogeneity and secretion of recombinant proteins in mammalian systems |
| MEP38608A (en) * | 2001-10-22 | 2011-02-10 | Merck Serono Sa | Gonadotrophins for folliculogenesis |
| EA012340B1 (ru) | 2001-10-29 | 2009-10-30 | Круселл Холланд Б.В. | Способ получения гликозилированной белковой молекулы, содержащей структуру lewis x, и/или сиалил-lewis x, и/или lacdinac |
| NZ533124A (en) | 2001-12-07 | 2005-11-25 | Crucell Holland B | Production of viruses, viral isolates and vaccines |
| US20040248784A1 (en) * | 2003-06-03 | 2004-12-09 | Marco Filicori | Unitary combinations of FSH and hCG |
| EP1694351A2 (en) * | 2003-12-03 | 2006-08-30 | Neose Technologies, Inc. | Glycopegylated follicle stimulating hormone |
| US8431355B2 (en) | 2004-02-04 | 2013-04-30 | Universite De Provence Aix-Marseille 1 | Process for screening glycoform-specific antibodies |
| CA2557725C (en) | 2004-02-13 | 2015-06-30 | Glycotope Gmbh | Highly active glycoproteins-process conditions and an efficient method for their production |
| TWI488640B (zh) | 2008-04-16 | 2015-06-21 | Ferring Int Ct Sa | 藥學製劑 |
| TWI532495B (zh) | 2009-10-05 | 2016-05-11 | 菲瑞茵國際中心股份有限公司 | 藥學製劑 |
| EP2417982A1 (en) | 2010-07-30 | 2012-02-15 | Ferring B.V. | Stabilization of gonadotropins |
| WO2012016575A1 (en) | 2010-08-03 | 2012-02-09 | King Saud University | Stoma coat |
| WO2012016576A1 (en) | 2010-08-04 | 2012-02-09 | Glycotope Gmbh | Improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
| ES2547233T5 (es) | 2010-09-29 | 2024-03-27 | Ferring Bv | Composición para su uso en el tratamiento de la esterilidad |
| US9757469B2 (en) | 2011-03-31 | 2017-09-12 | Ferring B.V. | Pharmaceutical preparation |
| EP2717904A1 (en) | 2011-06-06 | 2014-04-16 | Ferring BV | Pharmaceutical preparation comprising recombinant fsh |
| JO3092B1 (ar) | 2011-08-08 | 2017-03-15 | Ferring Bv | مركب لتحفيز مسيطر عليه للمبيض |
| US20170035854A1 (en) | 2014-04-18 | 2017-02-09 | Glycotope Gmbh | Controlled ovarian hyperstimulation with improved recombinant human follicle-stimulating hormone |
-
2009
- 2009-04-15 TW TW098112483A patent/TWI488640B/zh active
- 2009-04-16 CN CN200980121391XA patent/CN102066414A/zh active Pending
- 2009-04-16 KR KR1020187023820A patent/KR20180095140A/ko active Application Filing
- 2009-04-16 PL PL09733497T patent/PL2268666T3/pl unknown
- 2009-04-16 ES ES14178729.1T patent/ES2610277T3/es active Active
- 2009-04-16 NZ NZ588381A patent/NZ588381A/en unknown
- 2009-04-16 EP EP16158141.8A patent/EP3045471B1/en not_active Revoked
- 2009-04-16 RU RU2010141908/10A patent/RU2537268C2/ru active
- 2009-04-16 PT PT141787291T patent/PT2808340T/pt unknown
- 2009-04-16 CN CN201510933827.2A patent/CN105906703A/zh active Pending
- 2009-04-16 PL PL16194925T patent/PL3144318T3/pl unknown
- 2009-04-16 ES ES09733497.3T patent/ES2468318T3/es active Active
- 2009-04-16 EP EP09733497.3A patent/EP2268666B1/en not_active Revoked
- 2009-04-16 DK DK16194925.0T patent/DK3144318T3/da active
- 2009-04-16 LT LTEP16158141.8T patent/LT3045471T/lt unknown
- 2009-04-16 CN CN201510933782.9A patent/CN105906702A/zh active Pending
- 2009-04-16 MX MX2010011343A patent/MX2010011343A/es active IP Right Grant
- 2009-04-16 PT PT161581418T patent/PT3045471T/pt unknown
- 2009-04-16 EP EP14178729.1A patent/EP2808340B1/en not_active Revoked
- 2009-04-16 HU HUE14178729A patent/HUE030652T4/en unknown
- 2009-04-16 US US12/988,218 patent/US8951967B2/en active Active
- 2009-04-16 SI SI200931670A patent/SI3045471T1/sl unknown
- 2009-04-16 ES ES16158141.8T patent/ES2629392T3/es active Active
- 2009-04-16 KR KR1020197022294A patent/KR102108377B1/ko active IP Right Grant
- 2009-04-16 SI SI200931547A patent/SI2808340T1/sl unknown
- 2009-04-16 AR ARP090101333A patent/AR071479A1/es not_active Application Discontinuation
- 2009-04-16 KR KR1020107025581A patent/KR101622944B1/ko active IP Right Grant
- 2009-04-16 PT PT97334973T patent/PT2268666E/pt unknown
- 2009-04-16 KR KR1020167012148A patent/KR20160056960A/ko not_active Application Discontinuation
- 2009-04-16 EP EP13193214.7A patent/EP2722339A1/en active Pending
- 2009-04-16 KR KR1020177026920A patent/KR20170110741A/ko not_active Application Discontinuation
- 2009-04-16 CA CA2725257A patent/CA2725257A1/en active Pending
- 2009-04-16 EP EP16179121.5A patent/EP3098234A1/en active Pending
- 2009-04-16 AU AU2009237479A patent/AU2009237479B2/en active Active
- 2009-04-16 EP EP16194925.0A patent/EP3144318B1/en active Active
- 2009-04-16 LT LTEP14178729.1T patent/LT2808340T/lt unknown
- 2009-04-16 JP JP2011504527A patent/JP2011519359A/ja active Pending
- 2009-04-16 PL PL16158141T patent/PL3045471T3/pl unknown
- 2009-04-16 MX MX2014011348A patent/MX348622B/es unknown
- 2009-04-16 SI SI200932094T patent/SI3144318T1/sl unknown
- 2009-04-16 SI SI200930931T patent/SI2268666T1/sl unknown
- 2009-04-16 DK DK14178729.1T patent/DK2808340T3/en active
- 2009-04-16 DK DK16158141.8T patent/DK3045471T3/en active
- 2009-04-16 WO PCT/GB2009/000978 patent/WO2009127826A1/en active Application Filing
- 2009-04-16 RU RU2014141994A patent/RU2682270C2/ru active
- 2009-04-16 HU HUE16158141A patent/HUE033830T2/en unknown
- 2009-04-16 PL PL14178729T patent/PL2808340T3/pl unknown
- 2009-04-16 PT PT161949250T patent/PT3144318T/pt unknown
- 2009-04-16 BR BRPI0910461A patent/BRPI0910461B8/pt active IP Right Grant
- 2009-04-16 MX MX2017007881A patent/MX355457B/es unknown
- 2009-04-16 DK DK09733497.3T patent/DK2268666T3/da active
- 2009-04-16 EP EP21212873.0A patent/EP4015527A1/en active Pending
- 2009-04-18 SA SA109300228A patent/SA109300228B1/ar unknown
-
2010
- 2010-10-07 IL IL208538A patent/IL208538A/en active Protection Beyond IP Right Term
- 2010-10-14 ZA ZA2010/07373A patent/ZA201007373B/en unknown
-
2011
- 2011-01-17 HK HK11100441.2A patent/HK1146284A1/xx unknown
-
2014
- 2014-01-21 IL IL230571A patent/IL230571A/en active IP Right Grant
- 2014-06-06 CY CY20141100402T patent/CY1115413T1/el unknown
- 2014-06-09 HR HRP20140535AT patent/HRP20140535T1/hr unknown
- 2014-06-17 AU AU2014203277A patent/AU2014203277C1/en active Active
- 2014-11-14 US US14/541,852 patent/US9546204B2/en active Active
- 2014-12-10 HK HK14112411.0A patent/HK1199039A1/xx unknown
- 2014-12-25 JP JP2014262056A patent/JP2015120696A/ja active Pending
-
2016
- 2016-08-16 US US15/238,362 patent/US9771407B2/en active Active
- 2016-10-07 JP JP2016198588A patent/JP6486310B2/ja active Active
- 2016-11-16 HR HRP20161520TT patent/HRP20161520T1/hr unknown
-
2017
- 2017-05-30 HU HUS1700024C patent/HUS1700024I1/hu unknown
- 2017-05-31 HU HUS1700025C patent/HUS1700025I1/hu unknown
- 2017-06-05 LT LTPA2017018C patent/LTPA2017018I1/lt unknown
- 2017-06-06 NO NO2017025C patent/NO2017025I1/no unknown
- 2017-06-06 FR FR17C1020C patent/FR17C1020I2/fr active Active
- 2017-06-23 AU AU2017204259A patent/AU2017204259B2/en active Active
- 2017-06-23 AU AU2017204258A patent/AU2017204258B2/en active Active
- 2017-06-26 HR HRP20170958TT patent/HRP20170958T1/hr unknown
- 2017-08-01 JP JP2017148823A patent/JP6762916B2/ja active Active
- 2017-08-29 US US15/690,061 patent/US10995128B2/en active Active
- 2017-09-05 AU AU2017225020A patent/AU2017225020B2/en active Active
- 2017-09-27 LT LTPA2017029C patent/LTPA2017029I1/lt unknown
- 2017-09-27 HU HUS1700036C patent/HUS1700036I1/hu unknown
- 2017-09-28 NO NO2017050C patent/NO2017050I1/no unknown
-
2018
- 2018-11-08 RU RU2018139379A patent/RU2745557C3/ru active Protection Beyond IP Right Term
-
2019
- 2019-10-25 JP JP2019194476A patent/JP7316905B2/ja active Active
-
2021
- 2021-04-30 US US17/246,348 patent/US11952407B2/en active Active
- 2021-10-27 JP JP2021175403A patent/JP2022031652A/ja active Pending
-
2023
- 2023-12-21 JP JP2023215339A patent/JP2024038000A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7316905B2 (ja) | アルファ２，３－およびアルファ２，６－シアリル化を含む組換えｆｓｈ | |
| AU2010304922A1 (en) | Pharmaceutical preparation comprising recombinant hCG |