RU2002100071A

RU2002100071A - Модифицированные химерные полипептиды с улучшенными фармакокинетическими свойствами

Info

Publication number: RU2002100071A
Application number: RU2002100071/13A
Authority: RU
Inventors: Николас Дж. ПАПАДОПОУЛОС; Сэмюель ДЭВИС; Джордж Д. Янкопоулос
Original assignee: Ридженерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date: 1999-06-08
Filing date: 2000-05-23
Publication date: 2003-08-10

Claims

1. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый полипептид, способный связывать полипептид VEGF, включающая:

(a) нуклеотидную последовательность, кодирующую компонент рецептора VEGF, функционально связанный с

(b) нуклеотидной последовательностью, кодирующей мультимеризующий компонент, и в которой компонент рецептора VEGF является единственным компонентом рецептора VEGF слитого полипептида, и в которой нуклеотидная последовательность (а) по существу состоит из нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность домена 2 Ig внеклеточного домена первого рецептора VEGF, и нуклеотидной последовательности, кодирующей аминокислотную последовательность домена 3 Ig внеклеточного домена второго рецептора VEGF.

2. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, отличающаяся тем, что первый рецептор VEGF является Flt1.

3. Выделенная нуклеиновая кислота по п.1, отличающаяся тем, что второй рецептор VEGF является Flk1 или Flt4.

4. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, кодирующая домен 2 Ig внеклеточного домена первого рецептора VEGF, расположена выше нуклеотидной последовательности, кодирующей домен 3 Ig внеклеточного домена второго рецептора VEGF.

5. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что нуклеотидная последовательность, кодирующая домен 2 Ig внеклеточного домена первого рецептора VEGF, расположена ниже нуклеотидной последовательности, кодирующей домен 3 Ig внеклеточного домена второго рецептора VEGF.

6. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что мультимеризующий компонент включает домен иммуноглобулина.

7. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты по п.6, отличающаяся тем, что домен иммуноглобулина выбирают из группы, состоящей из домена Fc IgG, тяжелой цепи IgG и легкой цепи IgG.

8. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, включающая нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый полипептид модифицированного рецептора Flt1, в которой кодирующая область молекулы нуклеиновой кислоты по существу состоит из нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из:

(a) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.21А-21С;

(b) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.22А-22С;

(c) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.24А-24С; и

(d) нуклеотидной последовательности, которая в результате вырожденности генетического кода отличается от нуклеотидной последовательности (а), (b) или (с), и которая кодирует молекулу слитого полипептида, обладающую биологической активностью слитого полипептида модифицированного рецептора Flt1.

9. Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, включающая нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый полипептид модифицированного рецептора Flt1, в которой кодирующая область молекулы нуклеиновой кислоты по существу состоит из нуклеотидной последовательности, выбираемой из группы, состоящей из:

(a) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.13A-13D;

(b) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.14А-14С;

(c) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.15А-15С;

(d) нуклеотидной последовательности, показанной на фиг.16A-16D; и

(d) нуклеотидной последовательности, которая в результате вырожденности генетического кода отличается от нуклеотидной последовательности (а), (b), (с) или (d) и кодирует молекулу слитого полипептида, обладающую биологической активностью слитого полипептида модифицированного рецептора Flt1.

10. Слитый полипептид, кодируемый выделенной молекулой нуклеиновой кислоты по любому из предшествующих пунктов.

11. Слитый полипептид по п.10, отличающийся тем, что специфически связывает лиганд VEGF рецептора VEGF.

12. Композиция, способная связывать молекулу VEGF с образованием нефункционального комплекса, содержащего мультимер слитого полипептида по п.10 или 11.

13. Композиция по п.12, отличающаяся тем, что мультимером является димер.

14. Композиция по п.13, отличающаяся тем, что представляет собой фармацевтическую композицию, включающую носитель.

15. Вектор, который включает молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-9.

16. Экспрессирующий вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп.1-9, в котором молекула нуклеиновой кислоты функционально связана с регулирующей экспрессию последовательностью.

17. Система вектор-хозяин для продуцирования слитого полипептида, которая включает экспрессирующий вектор по п.16 в приемлемой клетке-хозяине.

18. Система вектор-хозяин по п.17, отличающаяся тем, что приемлемой клеткой-хозяином является бактериальная клетка, дрожжевая клетка, клетка насекомого или клетка млекопитающего.

19. Система вектор-хозяин по п.17, отличающаяся тем, что приемлемой клеткой-хозяином является Е. coli.

20. Система вектор-хозяин по п.17, отличающаяся тем, что приемлемой клеткой-хозяином является клетка COS или клетка СНО.

21. Способ получения слитого полипептида, который включает выращивание клеток системы вектор-хозяин по любому из пп.17-20 в условиях, обеспечивающих продуцирование слитого полипептида, и выделение полученного таким образом слитого полипептида.

22. Слитый полипептид, полученный способом по п.21.

23. Слитый полипептид, кодируемый нуклеотидной последовательностью, показанной на фигуре 10A-10D, фигуре 21А-21С, фигуре 22А-22С или фигуре 24А-24С, который модифицирован ацетилированием или обработкой полиэтиленгликолем.

24. Слитый полипептид по п.23, отличающийся тем, что модифицирование представляет собой ацетилирование, которое осуществляется по крайней мере 100-кратным молярным избытком ацетилирующего реагента.

25. Слитый полипептид по п.23, отличающийся тем, что модифицирование представляет собой ацетилирование, которое осуществляется молярным избытком ацетилирующего реагента в пределах от по крайней мере 10-кратного молярного избытка до примерно 100-кратного молярного избытка.

26. Слитый полипептид по п.23, отличающийся тем, что модифицирование представляет собой обработку полиэтиленгликолем с молекулярной массой 10000 или 20000.

27. Слитый полипептид, способный связывать полипептид VEGF, включающий:

(а) компонент рецептора VEGF, функционально связанный с (b) мультимеризующим компонентом,

в котором компонент рецептора VEGF является единственным компонентом рецептора VEGF в слитом полипептиде и по существу состоит из аминокислотной последовательности домена 2 Ig внеклеточного домена первого рецептора VEGF и аминокислотной последовательности домена 3 Ig внеклеточного домена второго рецептора VEGF.

28. Слитый полипептид, по существу состоящий из аминокислотной последовательности модифицированного рецептора Flt1, в котором аминокислотную последовательность выбирают из группы, состоящей из:

(a) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.21А-21С;

(b) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.22А-22С;

(c) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.24А-24С.

29. Слитый полипептид, включающий аминокислотную последовательность модифицированного рецептора Flt1, в котором аминокислотную последовательность выбирают из группы, состоящей из:

(a) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.13A-13D;

(b) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.14А-14С;

(c) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.15А-15С; и

(d) аминокислотной последовательности, показанной на фиг.16A-16D.

30. Применение слитого полипептида млекопитающего по любому из пп.10, 11 или 22-29 или композиции по любому из пп.12, 13 или 14 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для использования в способе уменьшения или подавления потери плазмы у млекопитающего.

31. Применение по п.30, отличающееся тем, что млекопитающим является человек.

32. Применение слитого полипептида по любому из пп.10, 11 или 22-29 или композиции по любому из пп.12, 13 или 14 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для использования в способе блокирования роста кровеносных сосудов у человека.

33. Применение слитого полипептида по любому из пп.10, 11 или 22-29 или композиции по любому из пп.12, 13 или 14 для изготовления лекарственного средства, предназначенного для использования в способе подавления активности лиганда рецептора VEGF у млекопитающего.

34. Применение по п.33, отличающееся тем, что млекопитающим является человек.

35. Применение по п.34 для уменьшения или предотвращения роста опухоли, образования отека или асцита у человека.

36. Применение по п.35, отличающееся тем, что отеком является отек мозга.

37. Применение по п.35, отличающееся тем, что асцит представляет собой асцит, обусловленный раком яичника.