PT2283896E - Formulações de interferão beta sem hsa - Google Patents

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Bret Shirley
Minna Choe
Melanie Tellers
Susan Babuka
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Novartis Vaccines & Diagnostic
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Description

DESCRIÇÃO
FORMULAÇÕES DE INTERFERÃO BETA SEM HSA
CAMPO DA INVENÇÃO
Em geral, a invenção refere-se a composições farmacêuticas, mais particularmente a formulações estabilizadas de interferão β sem seroalbumina humana como um excipiente farmacêutico adicionado.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Os interferões são uma família de glicoproteínas cuja secreção das células é induzida por uma quantidade de sinais, incluindo vírus, ARNs de cadeia dupla, outros polinucleótidos, antigénios e mitógenos. Os interferões apresentam múltiplas atividades biológicas, incluindo atividades antivirais, antiproliferativas e imunomoduladoras. Pelo menos, foram distinguidos três tipos distintos de interferões humanos, α, β e γ, com base numa quantidade de fatores, incluindo atividades antivirais e antiproliferativas. 0 interferão β (IFN-β) é o primeiro tratamento eficaz identificado para pessoas com esclerose múltipla (EM), e foi provado que reduz o número de crises sofridas por pacientes com EM recorrente e remitente e EM progressiva secundária. As composições de IFN-β são igualmente úteis no tratamento de infeções de hepatite B e C.
Tal como acontece com todos os fármacos à base de proteínas, um grande obstáculo que tem de ser vencido na utilização de IFN-β como agente terapêutico é a perda de utilidade farmacêutica que pode resultar da respetiva instabilidade nas formulações farmacêuticas. As instabilidades físicas que ameaçam a eficácia e a atividade polipeptídica nas formulações farmacêuticas incluem a desnaturação e a formação de agregados solúveis e 2 insolúveis, enquanto as instabilidades químicas incluem a hidrólise, a formação de imida, a oxidação, a racemização e a desamidação. É sabido que algumas destas alterações levam à perda ou redução da atividade farmacêutica da proteína de interesse. Noutros casos, os efeitos precisos destas alterações são desconhecidos, mas os produtos de degradação resultantes continuam a ser considerados como sendo farmaceuticamente inaceitáveis devido à possibilidade de efeitos secundários indesejados. A estabilização de polipéptidos nas composições farmacêuticas continua a ser uma área na qual a experiência e o erro desempenham um papel fundamental (revisto por Wang (1999) Int. J. Pharm. 185:129-188; Wang e Hanson (1988) J. Parenteral Sei. Tech. 42:S3-S26). Os excipientes que são adicionados às formulações farmacêuticas polipeptídicas para aumentar a respetiva estabilidade incluem tampões, açúcares, tensioativos, aminoácidos, polietilenoglicóis e polímeros, mas os efeitos de estabilização destes aditivos químicos variam consoante a proteína. Neste contexto o documento US 5004605 é considerado relevante.
Um dos maiores obstáculos na preparação de formulações farmacêuticas estabilizadas de IFN-β tem sido a fraca solubilidade da molécula de IFN-β. As formulações atuais utilizam HSA como agente de melhoramento da solubilidade para IFN-β. Contudo, a utilização de HSA tem desvantagens. A HSA é um produto de sangue humano e, por conseguinte, tem de ser colhido a partir de seres humanos. Enquanto são dados passos para reduzir o risco, a utilização de produtos de sangue humano, tais como HSA, potência a possível introdução de vírus humanos, tais como VIH e VHC. A introdução de HSA na formulação interfere igualmente na capacidade de determinar corretamente a estabilidade de IFN-β na formulação. Isto deve-se ao facto de tanto a HSA como o IFN-β serem proteínas, e a HSA interfere em alguns ensaios que indicam a estabilidade de IFN-β. 3
Além disso, IFN-β é uma proteína que apresenta formação de agregados quando preparada nas composições farmacêuticas e, por isso, a quantidade desta proteína no respetivo estado monomérico biologicamente ativo é comprometida durante o armazenamento destas composições. A formação de agregados por um polipéptido, tal como IFN-β, durante o armazenamento de uma composição farmacêutica, pode afetar negativamente a atividade biológica desse polipéptido, resultando na perda de eficácia terapêutica da composição farmacêutica. Além do mais, a formação de agregados pode originar outros problemas, tais como obstrução de entubação, membranas ou bombas, quando a composição farmacêutica de IFN-β é administrada utilizando um sistema de infusão. Além disso, a injeção de uma composição farmacêutica compreendendo a forma agregada de uma proteína tem a possibilidade de gerar uma reação imunogénica na proteína agregada.
Consequentemente, são necessárias composições farmacêuticas de IFN-β adicionais compreendendo estabilizadores fisiologicamente compatíveis que aperfeiçoem a solubilidade desta proteína e estabilizem a proteína contra a formação de agregados, melhorando assim a respetiva utilidade farmacêutica.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
As composições compreendendo interferão beta (IFN-β) como componente terapeuticamente ativo e os métodos úteis na respetiva preparação são fornecidos. As composições são composições farmacêuticas estabilizadas sem seroalbumina humana (HSA) como um excipiente farmacêutico e que compreendem IFN-β substancialmente monomérico solubilizado numa formulação de força iónica baixa. A formulação de força iónica baixa é uma solução que compreende um tampão numa quantidade suficiente para manter a composição num pH especificado de mais ou menos 0,5 unidades, em que o pH especificado é de cerca de 3,0 a cerca de 5,0, e que tem 4 uma força iónica não superior a cerca de 20 mM. Um agente tonificante não iónico é incorporado nas composições farmacêuticas para tornar as composições isotónicas, em que o agente tonificante é um hidrato de carbono. São igualmente fornecidos os métodos para aumentar a solubilidade de IFN-β nas composições farmacêuticas e para aumentar a quantidade de IFN-β monomérico nestas composições sem a utilização de seroalbumina humana.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A Figura 1 ilustra a solubilidade de IFN-β-Ιό nas soluções de cloreto de sódio. A Figura 2 ilustra a solubilidade de IFN-β-Ιό nas formulações de força iónica baixa. A Figura 3 ilustra o efeito de PH O 00 no estado de agregação de IFN-β-Ιό. A Figura 4 ilustra o efeito de PH 4,0 no estado de agregação de IFN-β-Ιό. A Figura 5 ilustra 0 efeito de PH 5, 0 no estado de agregação de IFN-β-Ιό. A Figura 6 ilustra o efeito da força iónica (0 mM de NaCl) no estado de agregação de IFN-β-Ιό. A Figura 7 ilustra o efeito da força iónica (50 mM de NaCl) no estado de agregação de IFN-β-Ιό. A Figura 8 ilustra o efeito da força iónica (150 mM de NaCl) no estado de agregação de IFN-β-Ιό. A Figura 9 ilustra o estado de agregação de IFN-β-Ιό numa formulação de pH 3,0 contendo apenas o agente de tamponamento de 5 mM de glicina. A Figura 10 ilustra o efeito de um agente tonificante não iónico (9% de sacarose) no estado de agregação de IFN-β-Ιό na formulação ilustrada na Figura 9. A Figura 11 ilustra o efeito de um agente tonificante não iónico (9% de trealose) no estado de agregação de IFN-β-Ιό na formulação ilustrada na Figura 9. A Figura 12 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-Ιό inicial nas formulações liofilizadas contendo 9% de 5 trealose ou 9% de sacarose depois de 8 semanas de armazenamento a 40°C. A concentração foi determinada pela absorção de UV. A Figura 13 ilustra a percentagem de pico principal de IFN-β-lb inicial nas formulações liofilizadas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 8 semanas de armazenamento a 40°C. A percentagem de pico principal foi determinada mediante análise por RP-HPLC. A Figura 14 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-lb inicial nas formulações liofilizadas contendo 9% de trealose depois de 9 meses de armazenamento a 5°C ou 30°C. A concentração foi determinada pela espetroscopia de UV. A Figura 15 ilustra a percentagem de pico principal de IFN-β-lb inicial nas formulações liofilizadas contendo 9% de trealose depois de 9 meses de armazenamento a 5°C ou 30°C. A percentagem de pico principal foi determinada mediante análise por RP-HPLC. A Figura 16 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-lb inicial nas formulações liquidas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 9 semanas de armazenamento a 30°C. A concentração foi determinada pela absorbância de UV. A Figura 17 ilustra a percentagem de pico principal de IFN-β-lb nas formulações liquidas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 8 semanas de armazenamento a 30°C. A percentagem de pico principal foi determinada mediante análise por RP-HPLC. A Figura 18 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-lb inicial nas formulações liquidas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 9 meses de armazenamento em frascos a 5°C. A concentração foi determinada pela espetroscopia de UV. A Figura 19 ilustra a percentagem de pico principal de IFN-β-lb nas formulações liquidas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 9 meses de armazenamento em frascos a 5°C. A percentagem de pico principal foi determinada mediante análise por RP-HPLC. 6 A Figura 20 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-lb inicial nas formulações liquidas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 9 semanas de armazenamento a 30°C. A concentração foi determinada pela espetroscopia de UV. A Figura 21 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-lb inicial nas formulações liofilizadas contendo 9% de trealose ou 9% de sacarose depois de 8 semanas de armazenamento a 40°C. A concentração foi determinada pela espetroscopia de UV. A Figura 22 ilustra a percentagem de concentração de IFN-β-lb inicial nas formulações liquidas contendo 5% de manitol com 6 meses de armazenamento a 5°C. A concentração foi determinada pela espetroscopia de UV. A Figura 23 ilustra a percentagem de pico principal de IFN-β-lb nas formulações liquidas contendo 5% de manitol com 6 meses de armazenamento a 5°C. A percentagem de pico principal foi determinada mediante análise por RP-HPLC.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A presente invenção refere-se a composições farmacêuticas estabilizadas que compreendem interferão beta (IFN-β) covalentemente ligado com polietileno glicol e aos métodos para a respetiva preparação. Estas composições são preparadas na ausência de seroalbumina humana (HSA) e, por conseguinte, são livres deste excipiente farmacêutico. Estas composições são aqui designadas por composições farmacêuticas de IFN-β "sem HSA". As composições compreendem IFN-β substancialmente monomérico que é solubilizado numa formulação de força iónica baixa. O termo formulação de "força iónica baixa" significa uma solução que compreende um tampão numa quantidade suficiente para manter o pH da composição farmacêutica em mais ou menos 0,5 unidades de um pH especificado, e que tem uma força iónica não superior a cerca de 60 mM. O termo "força iónica" significa a definição química padrão conforme aplicada a uma solução, em que a força iónica de uma solução é igual a 7 2 ^ Σ CiZi , na qual c corresponde à concentração e z corresponde à carga. 0 tampão está presente na formulação de força iónica baixa numa concentração de cerca de 2 mM a cerca de 2 0 mM, mais preferencialmente de cerca de 2 mM a cerca de 10 mM, ainda mais preferencialmente de cerca de 2 mM a cerca de 5 mM. Por conseguinte, em algumas formas de realização, a formulação de força iónica baixa compreende um tampão numa concentração de cerca de 2 mM a cerca de 10 mM, cerca de 2 mM a cerca de 7 mM, cerca de 2 mM a cerca de 5 mM, cerca de 2 mM, cerca de 3 mM, cerca de 4 mM ou cerca de 5 mM. Os tampões adequados que podem ser utilizados para preparar a formulação de força iónica baixa na qual o IFN-β é solubilizado incluem, mas não se limitam a, glicina, ácido aspártico, succinato de sódio, citrato, formato, acetato, ácido glutâmico, histidina, imidazol e fosfato, preferencialmente glicina, ácido aspártico e succinato de sódio, mais preferencialmente glicina e ácido aspártico.
De preferência, a formulação de baixa força iónica, tem uma força iónica que não é maior do que cerca de 60 mM, mais preferivelmente não superior a cerca de 40 mM, ainda mais preferencialmente não superior a cerca de 20 mM. Em algumas formas de realização, a força iónica da formulação é unicamente determinada pela concentração do tampão, e, portanto, a formulação não tem espécies iónicas adicionais, tais como cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto de magnésio, sal de amónio, e outros semelhantes, contribuindo para a sua força iónica. A utilização de uma formulação de força iónica baixa, que seja uma solução compreendendo um tampão numa concentração de cerca de lmM a cerca de 30 mM, preferencialmente de 2 mM a cerca de 5 mM, permite a preparação de composições farmacêuticas estabilizadas de IFN-β que tenham um pH de cerca de 3,0 a cerca de 5,0, preferencialmente de cerca de 3,0 a cerca de 4,5, mais preferencialmente de cerca de 3,0 8 a cerca de 4,0, ainda mais preferencialmente de cerca de 3,5 a cerca de 4,0, e o mais preferencialmente de cerca de 4,0, dependendo do tampão especifico utilizado. Por conseguinte, quando o tampão é glicina, o pH da composição é de cerca de 3,0 a cerca de 3,5, preferencialmente de cerca de 3,0. Quando o tampão é ácido aspártico, o pH da composição é de cerca de 3,5 a cerca de 4,5, preferencialmente de cerca de 4,0. Quando o tampão é succinato de sódio, o pH da composição é de cerca de 4,5 a cerca de 5,0, preferencialmente de cerca de 5,0.
Ao manter o pH das composições farmacêuticas de IFN-β da invenção entre cerca de pH 3,0 e cerca de pH 5,0, é possível aumentar a solubilidade de IFN-β nestas composições para além do normalmente possível na ausência da utilização de seroalbumina humana. Além disso, ao incorporar IFN-β numa formulação de força iónica baixa, conforme aqui definido, é possível preparar composições farmacêuticas que compreendam IFN-β substancialmente monomérico. O termo "substancialmente monomérico" significa que a maioria de IFN-β (em peso) presente na composição está na respetiva forma monomérica em vez de numa forma agregada. O termo "agregada" significa uma interação física entre as moléculas polipeptídicas que resulta na formação de multímeros (dímeros, trímeros, etc.) que possam permanecer solúveis ou precipitar-se para fora da solução. A forma monomérica do polipéptido de IFN-β permanece solúvel e, por isso, é referida como sendo "solubilizada" na formulação de força iónica baixa ou nas composições farmacêuticas da presente invenção. A percentagem (em peso) de IFN-β que está na respetiva forma monomérica nas composições sem HSA da invenção pode variar a partir de 80% ou mais. Deste modo, a presente invenção fornece composições farmacêuticas de IFN-β sem HSA que compreendem, pelo menos, cerca de 80% do IFN-β na respetiva forma monomérica, em oposição à respetiva forma agregada, preferencialmente, pelo menos, cerca de 85%, mais 9 ainda mais preferencialmente, pelo menos, cerca de 90%, preferencialmente cerca de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais do IFN-β na respetiva forma monomérica.
Em algumas formas de realização da invenção, as composições farmacêuticas de IFN-β sem HSA compreendem ainda um agente tonificante não iónico numa quantidade suficiente para tornar as composições isotónicas com fluidos corporais. As composições podem ser tornadas isotónicas com uma quantidade de agentes de modificação de tonicidade não iónicos bem conhecidos dos peritos na técnica. Estes são normalmente hidratos de carbono de várias classificações (consulte, por exemplo, Voet e Voet (1990) Biochemistry (John Wiley & Sons, Nova Iorque). Os monossacáridos classificados como aldoses, tais como glicose, manose, arabinose e ribose, bem como os classificados como cetoses, tais como frutose, sorbose e xilulose, podem ser utilizados como agentes tonificantes não iónicos na presente invenção. Os dissacáridos, tais como sacarose, maltose, trealose e lactose também podem ser utilizados. Além disso, os alditóis (álcoois polihidroxilados acíclicos), tais como glicerol, manitol, xilitol e sorbitol, são agentes tonificantes não iónicos úteis na presente invenção. Os agentes tonificantes não iónicos preferidos são trealose, sacarose e manitol, ou uma combinação dos mesmos. 0 agente tonificante não iónico é adicionado numa quantidade suficiente para tornar a formulação isotónica com fluidos corporais. Quando incorporado nas composições farmacêuticas de IFN-β sem HSA, o agente tonificante não iónico está presente numa concentração de cerca de 1% a cerca de 10%, dependendo do agente utilizado. Por conseguinte, numa forma de realização, o agente tonificante não iónico é trealose ou sacarose numa concentração de cerca de 8% a cerca de 10%, preferencialmente de cerca de 9% em peso por volume e, de preferência, é trealose nesta concentração. Noutra forma de realização, o agente tonificante não iónico é manitol 10 numa concentração de cerca de 4% a cerca de 6%, preferencialmente de cerca de 5% em peso por volume. Noutras formas de realização, o agente tonificante não iónico é uma combinação de trealose e manitol, ou sacarose e manitol, em que a trealose e a sacarose estão presentes numa concentração de cerca de 1% em peso por volume e o manitol está presente numa concentração de cerca de 3% a cerca de 5% em peso por volume, preferencialmente de cerca de 4,6% em peso por volume.
As composições farmacêuticas de IFN-β livres de HSA da invenção englobam composições liquidas e formas secas das mesmas. Para os fins da presente invenção, o termo "liquido" no que se refere a composições farmacêuticas ou formulações destina-se a incluir o termo "aquoso", e inclui formulações líquidas que são congeladas. Por "forma seca" entende-se que a composição farmacêutica líquida ou formulação é seca, quer por secagem por congelação (isto é, liofilização; ver, por exemplo, Williams e Polli (1984) J. Parenteral Sei Technol 38: 48-59), secagem por pulverização (ver Masters (1991) em Spray-Drying Handbook (5a ed; Longman Scientific and Technical, Essez, Reino Unido), pp 491-676; Broadhead et al (1992) Drug Devei Ind Pharm 18: 1169-1206 ; e Mumenthaler et al (1994) Pharm Res 11:12-20), ou secagem ao ar (Carpenter e Crowe (1988) Cryobiology 25: 459-470; e Roser (1991) Biopharm 4:47-53). O termo "liofilizar" no que diz respeito às formulações farmacêuticas de IFN-β destina-se a referir-se a rápida secagem por congelação a pressão reduzida de uma pluralidade de frascos, cada um contendo uma dose unitária da formulação de interferão da presente invenção. Liofilizadores, que realizam o processo de liofilização descrito acima, estão comercialmente disponíveis e 11 prontamente acessíveis por aqueles peritos na técnica. Numa forma de realização da presente invenção, a composição líquida é preparada como uma composição liofilizada.
Em outras formas de realização da invenção, as composições farmacêuticas de IFN-β livres de HSA da invenção podem ser preparados de uma forma que seja adequada para administração pulmonar e administração da preparação para o sujeito através de inalação pulmonar. Por "inalação pulmonar" entende-se a composição farmacêutica que é administrada diretamente ao pulmão através da entrega a composição de um aerossol ou outra preparação adequada a partir de um dispositivo de administração na cavidade oral do sujeito como o sujeito inala através da cavidade oral. Por "aerossol" entende-se uma suspensão de partículas sólidas ou líquidas numa corrente de ar ou outra corrente de gás fisiologicamente aceitável. Outras preparações adequadas incluem, mas não estão limitados a, neblina, vapor, ou as preparações para pulverização desde que as partículas que compreendem a composição de proteína sejam fornecidas numa gama de tamanhos compatível com o descrito para a forma de pó seco da composição farmacêutica, tal como definido abaixo. Inalação pulmonar também pode ser realizada por outros métodos adequados conhecidos dos peritos na técnica. Estes podem incluir a instilação líquida utilizando um dispositivo adequado, ou outros métodos. Inalação pulmonar resulta na deposição de proteína na composição inalada nos alvéolos dos pulmões do sujeito. Uma vez depositado, a proteína pode ser absorvido, de forma passiva ou ativamente, através das camadas do epitélio e dos alvéolos do epitélio capilar para a corrente sanguínea para distribuição sistémica subsequente. 12 A administração pulmonar de um polipeptídeo ou proteína, tais como IFN-β requer distribuição da substância biologicamente ativa a partir de um dispositivo de administração na cavidade bucal de um paciente durante a inalação. Para os fins da presente invenção, composições farmacêuticas compreendendo de IFN-β livres de HSA ou as suas variantes são administrados através da inalação de um aerossol ou outra preparação adequada que é obtida a partir de uma forma de solução ou suspensão aquosa ou não aquosa, ou numa forma de pó sólido ou seco da composição farmacêutica, dependendo do dispositivo de administração utilizada. Tais dispositivos de administração são bem conhecidos na técnica e incluem, mas não estão limitados a, nebulizadores, inaladores de dose medida, e inaladores de pó seco, ou quaisquer outros mecanismos de transmissão apropriada que permitem a distribuição de uma composição farmacêutica tal como uma solução aquosa ou não aquosa ou suspensão ou como uma forma de pó sólido ou seco. Quando utilizado no contexto de composições farmacêuticas apropriadas para a administração pulmonar, esses termos têm o seguinte significado pretendido. Por "aquoso" entende-se uma composição preparada com, contendo, ou dissolvida em água, incluindo as misturas em que a água é a substância predominante na mistura. Uma substância predominando está presente numa quantidade maior do que um outro componente da mistura. Por "não aquoso" entende-se uma composição preparada com, contendo, ou dissolvida numa substância que não seja água ou misturas de água, em que a substância não é predominante na mistura. Por "solução" entende-se uma preparação homogénea de duas ou mais substâncias, que podem ser sólidos, líquidos, gases ou intercombinações dos mesmos. Por "suspensão" entende-se uma mistura de substâncias de tal modo que uma ou mais substâncias 13 insolúveis são homogeneamente dispersas na outra substância predominante.
Para os fins da presente invenção, os termos "sólido" e "pó seco" são usados alternadamente com referência às composições farmacêuticas livres de HSA adequados para a administração pulmonar. Por forma "de pó seco" ou "sólido" de uma composição farmacêutica entende-se que a composição foi seca para um pó finamente dividido, tendo um teor de humidade abaixo de cerca de 10% em peso, usualmente abaixo de cerca de 5%, em peso, e de preferência abaixo de cerca de 3 % em peso. Esta forma de pó seco da composição é constituída por partículas que compreendem o IFN-β ou suas variantes. Preferidos são tamanhos de partículas inferior a cerca de 10,0 pm de diâmetro médio, mais preferivelmente menos do que cerca de 7,0 pm, ainda mais de preferência cerca de menos do que cerca de 6,0 pm, ainda mais preferencialmente no intervalo de 0,1 a 5,0 pm, mais preferivelmente na gama de cerca de 1,0 a cerca de 5,0 pm de diâmetro médio.
Assim, uma composição farmacêutica líquida compreendendo IFN-β livre de HSA ou variantes da mesma que se destina a entrega pulmonar ou pode ser usada como uma solução líquida ou suspensão no dispositivo de administração ou ser previamente transformada numa forma de pó seco utilizando liofilização ou técnicas de secagem em spray bem conhecidos na técnica. Sempre que uma solução líquida ou suspensão é utilizado no dispositivo de administração, um nebulizador, um inalador de dose medida, ou outro dispositivo de entrega adequado proporciona, numa dose fracionada única ou múltipla, por inalação pulmonar de uma quantidade farmaceuticamente eficaz da composição para os pulmões do 14 sujeito como gotícuias tendo a mesma gama de tamanho de partícula mencionado acima para a forma de pó seco. Por "quantidade farmaceuticamente eficaz" pretende-se uma quantidade que é útil no tratamento, prevenção ou diagnóstico de uma doença ou condição que responde a IFN-β. A solução líquida ou suspensão da composição pode ser usada com agentes fisiologicamente adequados estabilizantes, excipientes, modificadores de viscosidade, agentes de volume, agentes tensioativos, ou suas combinações, conhecidos pelos especialistas na arte, desde que não comprometam as características distintivas das composições de IFN-β livres de HSA da invenção.
Quando a composição farmacêutica líquida é liofilizada antes do uso em administração pulmonar, a composição liofilizada é moída para se obter o pó seco finamente dividido constituído por partículas dentro da gama de tamanhos desejados indicados acima. Quando a secagem por pulverização é usada para se obter uma forma de pó seco da composição farmacêutica líquida, o processo é realizado sob condições que resultam na forma de um pó seco finamente dividido substancialmente amorfa que consiste em partículas dentro da gama de tamanhos desejada indicada acima. Da mesma forma, se a composição farmacêutica de partida já está numa forma liofilizada, a composição pode ser moída para se obter a forma de pó seco para a preparação subsequente como um aerossol ou outra preparação adequada para inalação pulmonar. Quando a composição farmacêutica de partida está na sua forma seca por pulverização, a composição foi preparada de preferência de tal modo que já se encontra numa forma de pó seco tendo o tamanho de partícula apropriado para a distribuição como uma solução aquosa ou não aquosa ou suspensão ou na forma de pó seco de 15 acordo administração pulmonar. Para os métodos de preparação de formas de pó seco de composições farmacêuticas, ver, por exemplo, WO 96/32149, WO 97/41833, WO 98/29096, e Patentes US 5976574, 5985248, e 6001336. A forma de pó seco resultante da composição é, então, colocada dentro de um dispositivo de entrega adequado para a preparação subsequente como um aerossol ou outra preparação adequada que é entregue ao sujeito através de inalação pulmonar. Quando a forma de pó seco da composição farmacêutica é para ser preparada e dispensada como uma solução aquosa ou não aquosa ou suspensão, é usado um inalador de dose calibrada, ou outro dispositivo de entrega adequado. Uma quantidade farmaceuticamente eficaz da forma de pó seco da composição é administrada num aerossol ou outra preparação adequada para inalação pulmonar. A quantidade de forma de pó seco da composição colocada dentro do dispositivo de entrega é suficiente para permitir a entrega de uma quantidade farmaceuticamente eficaz da composição ao sujeito por inalação. Assim, a quantidade de pó seco para ser colocada no dispositivo de administração irá compensar as possíveis perdas para o dispositivo durante o armazenamento e entrega da forma de pó seco da composição. Após a colocação da forma de pó seco dentro de um dispositivo de administração, as partículas de tamanho adequado como notado acima são suspensas num propulsor de aerossol. A suspensão não aquosa pressurizada é então libertada do dispositivo de administração para dentro da passagem de ar do sujeito enquanto inala. O dispositivo de administração de entrega, numa dose única ou múltipla fracionada, por inalação pulmonar de uma quantidade farmaceuticamente eficaz da composição para os pulmões do 16 sujeito. 0 propulsor de aerosol pode ser qualquer material convencional empregue para este propósito, tais como um clorofluorocarboneto, fluorocarbono-hidroclorotiazida, hidrofluorocarboneto, ou hidrocarboneto, incluindo triclorofluorometano, diclorodifluro-metano, diclorotetrafluorometano, diclorodifluoro-metano, diclorotetrafluoroetanol, e 1,1, 1,2-tetra-fluoroetano, ou suas combinações. Um tensioativo pode ser adicionado à composição farmacêutica para reduzir a aderência do pó seco contendo proteína para as paredes do dispositivo de entrega a partir do qual o aerossol é dispensado. Os tensioativos adequados para este uso pretendido incluem, mas não estão limitados a, trioleato de sorbitano, lecitina de soja, e ácido oleico. Dispositivos adequados para entrega pulmonar de uma forma de pó seco, de uma composição de proteína como uma suspensão não aquoso estão disponíveis comercialmente. Exemplos de tais dispositivos incluem o inalador de dose calibrada Ventolin (Glaxo Inc., Research Triangle Park, NC) e o inalador Intal (Fisons, Corp., Bedford, MA). Ver também os dispositivos de fornecimento de aerossol descritos em Patentes US 5522378, 5775320, 5934272 e 5960792.
Quando a forma de pó sólido seco ou da composição farmacêutica de IFN-β livre de HSA é para ser entregue como uma forma de pó seco, é preferencialmente utilizado um inalador de pó seco ou outro dispositivo de entrega adequado. O pó seco da composição farmacêutica é de preferência preparado como um aerossol de pó seco por dispersão num fluxo de ar ou outra corrente de gás fisiologicamente aceitável de um modo convencional. Exemplos comercialmente disponíveis de inaladores de pó seco adequados para utilização em conformidade com os 17 métodos aqui incluem o inalador de pó Spinhaler (Fisons Corp., Bedford, MA) e o Rotahaler Ventolin (Glaxo Inc., Research Triangle Park, NC) . Ver também os dispositivos de administração de pó seco descritos nas WO 93/00951, WO 96/09085, WO 96/32152, e Patentes US 5458135, 5785049, e 5993783. O pó seco da composição farmacêutica compreendendo lFN-β livre de HSA ou sua variante biologicamente ativa pode ser reconstituída a uma solução aquosa para entrega subsequente como uma solução aquosa de aerossol usando um nebulizador, um inalador de dose medida, ou outro dispositivo de entrega adequado. No caso de um nebulizador, a solução aquosa realizada dentro de um reservatório de fluido é convertida num aerossol aquoso, apenas uma pequena porção do qual deixa o nebulizador para entrega ao sujeito em qualquer dado momento. Os drenos de pulverização restantes para trás para um reservatório de fluido no interior do nebulizador, onde é novamente transformado em aerossol dentro de um spray aquoso. Este processo é repetido até que o reservatório de fluido seja completamente dispensado ou até a administração do spray aerossol esteja terminada. Tais nebulizadores estão disponíveis comercialmente e incluem, por exemplo, o nebulizador Ultravent (Mallinckrodt Inc., St. Louis, MO) e o nebulizador Acorn II (Marquest Medicai Products, Englewood, CO). Ver também o nebulizador descrito em WO 93/00951 e o dispositivo para a administração de formulações aquosas de aerossol descritas na Patente US 5544646.
As composições farmacêuticas de IFN-β sem HSA da invenção da presente invenção são composições "estabilizadas". O termo "estabilizadas" significa que as composições mantêm o polipéptido de IFN-β no respetivo estado substancialmente 18 monomérico durante o armazenamento e, por isso, a eficácia terapêutica deste polipéptido não é comprometida devido à formação de agregados. 0 termo "durante o armazenamento" significa uma formulação ou composição farmacêutica liquida que, uma vez preparada, não é imediatamente administrada a uma pessoa. De preferência, a seguir à preparação, é embalada para armazenamento numa forma liquida, num estado congelado ou numa forma seca para ser reconstituída posteriormente numa forma líquida ou noutra forma adequada para ser administrada a uma pessoa. Esta estabilidade é alcançada na ausência da utilização de HSA como agente de estabilização e solubilização. Preferencialmente, as composições da invenção são armazenadas diretamente na respetiva forma líquida para tirar total partido da vantagem de ter estabilidade de armazenamento na forma líquida, facilidade de administração sem reconstituição, e capacidade de fornecer a formulação em seringas pré-cheias e prontas a utilizar ou como preparações multidose se a formulação for compatível com agentes bacteriostáticos. As composições estabilizadas de IFN-β sem HSA da invenção têm preferencialmente uma duração de armazenamento de, pelo menos, cerca de 6 meses, 12 meses, 18 meses, mais preferencialmente de, pelo menos, 20 meses, ainda mais preferencialmente de, pelo menos, cerca de 22 meses, e o mais preferencialmente de, pelo menos, cerca de 24 meses quando armazenadas a uma temperatura de 2 a 8°C.
Os métodos para monitorizar a estabilidade das composições farmacêuticas de IFN-β sem HSA da invenção estão disponíveis na técnica, incluindo os métodos descritos nos exemplos aqui divulgados. Por conseguinte, a formação de agregados de IFN-β durante o armazenamento de uma composição farmacêutica líquida da invenção pode ser prontamente determinada medindo a alteração no IFN-β solúvel na solução ao longo do tempo. A quantidade de polipéptido solúvel na solução pode ser quantificada por uma quantidade de ensaios analíticos adaptados para a 19 deteção de IFN-β. Esses ensaios incluem, por exemplo, HPLC em fase reversa (RP) e espetroscopia de absorção de UV, conforme descrito nos Exemplos abaixo. A determinação dos agregados solúveis e insolúveis durante o armazenamento nas formulações liquidas pode ser alcançada, por exemplo, utilizando ultracentrifugação analítica, conforme referido nos Exemplos abaixo, para distinguir entre essa porção do polipéptido solúvel que está presente como agregados solúveis e essa porção que está presente na forma molecular não agregada biologicamente ativa.
As formulações farmacêuticas estabilizadas da invenção compreendem IFN-β e variantes do mesmo, que são covalentemente ligadas com polietileno glicol. 0 termo "IFN-β" conforme aqui utilizado refere-se a IFN-β ou variantes do mesmo, por vezes designadas por polipéptidos tipo IFN-β. As variantes de IFN-β humano, que podem ocorrer naturalmente (por ex., variantes alélicas que ocorrem no lócus de IFN-β) ou ser produzidas de forma recombinante, têm sequências de aminoácidos que são iguais, semelhantes ou substancialmente semelhantes à sequência do IFN-β nativo maduro. Os fragmentos de IFN-β ou as formas truncadas de IFN-β que mantêm a respetiva atividade também são abrangidos. Estes fragmentos biologicamente ativos ou formas truncadas de IFN-β são gerados removendo resíduos de aminoácidos de toda a sequência de aminoácidos do IFN-β utilizando técnicas de ADN recombinante bem conhecidas na técnica. Os polipéptidos de IFN-β podem ser glicosilados ou não glicosilados, tal como foi referido na documentação, em que tanto o IFN-β glicosilado como o não glicosilado apresentam atividades específicas qualitativamente semelhantes e, por conseguinte, as metades de glicosil não estão envolvidas na atividade biológica de IFN-β nem contribuem para a mesma.
As variantes de IFN-β aqui abrangidas incluem muteínas da sequência do IFN-β nativo maduro, em que um ou mais 20 resíduos de cisteína que não são essenciais para a atividade biológica foram deliberadamente eliminados ou substituídos por outros aminoácidos para eliminar locais para ligação cruzada intermolecular ou formação incorreta de ligações dissulfeto intramoleculares. As variantes de IFN-β deste tipo incluem as que contêm glicina, valina, alanina, leucina, isoleucina, tirosina, fenilalanina, histidina, triptofano, serina, treonina ou metionina em substituição da cisteína encontrada no aminoácido 17 da sequência de aminoácidos nativa madura. A serina e a treonina são as substituições preferidas devido à respetiva analogia química à cisteína. As substituições de serina são as mais preferidas. Numa forma de realização, a cisteína encontrada no aminoácido 17 da sequência nativa madura é substituída por serina. A cisteína 17 também pode ser eliminada utilizando métodos conhecidos na técnica (consulte, por exemplo, a Patente US 4588584), resultando numa muteína de IFN-β maduro que é um aminoácido mais pequeno do que o IFN-β nativo maduro. Consulte igualmente, como exemplos, as Patentes US 4530787; 4572798; e 4588585. Por conseguinte, as variantes de IFN-β com uma ou mais mutações que aperfeiçoam, por exemplo, a respetiva utilidade farmacêutica também são abrangidas pela presente invenção. O perito na técnica irá apreciar o facto de poderem ser introduzidas alterações adicionais por mutação nas sequências de nucleótidos que codificam IFN-β, levando assim a alterações na sequência de aminoácidos do IFN-β, sem alterar a atividade biológica do interferão. Por conseguinte, uma molécula de ácido nucleico isolada que codifica uma variante de IFN-β contendo uma sequência que difere da sequência de aminoácidos para o IFN-β nativo maduro pode ser criada introduzindo uma ou mais substituições, adições ou eliminações de nucleótidos na sequência de nucleótidos correspondente aqui divulgada, de modo a que uma ou mais substituições, adições ou 21 eliminações de aminoácidos sejam introduzidas no IFN-β codificado. As mutações podem ser introduzidas através de técnicas padrão, tais como mutagénese especifica de um local e mutagénese mediada por PCR. Estas variantes de IFN-β também são abrangidas pela presente invenção.
Por exemplo, as substituições de aminoácidos moderadas podem ser feitas num ou mais resíduos de aminoácidos previsíveis e preferencialmente não essenciais. Um resíduo de aminoácido "não essencial" é um resíduo que pode ser alterado da sequência selvagem de IFN-β sem alterar a respetiva atividade biológica, ao passo que um resíduo de aminoácido "essencial" é necessário para a atividade biológica. Uma "substituição de aminoácidos moderada" corresponde a uma em que o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido contendo uma cadeia lateral semelhante. As famílias de resíduos de aminoácidos contendo cadeias laterais semelhantes foram definidas na técnica. Estas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por ex., lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por ex., ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares não carregadas (por ex., glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais não polares (por ex., alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais ramificadas beta (por ex., treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por ex., tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina). Estas substituições não serão efetuadas para resíduos de aminoácidos conservados nem para resíduos de aminoácidos a residir num motivo conservado.
Em alternativa, as sequências de nucleótidos de variante de IFN-β podem ser feitas introduzindo mutações aleatoriamente ao longo de toda ou parte da sequência de codificação de IFN-β, tal como mediante mutagénese por saturação, e é 22 possível fazer a despistagem dos mutantes resultantes relativamente à atividade biológica de IFN-β para identificar mutantes que mantêm a atividade. A seguir à mutagénese, a proteína codificada pode ser expressa de forma recombinante, e a atividade da proteína pode ser determinada utilizando técnicas de ensaio padrão aqui descritas.
Em geral, as variantes biologicamente ativas de IFN-β terão, pelo menos, 80%, preferencialmente cerca de 90% a cerca de 95% ou mais, e mais preferencialmente cerca de 96% a cerca de 99% ou mais de identidade de sequência de aminoácidos para a sequência de aminoácidos do IFN-β nativo maduro, que serve como base de comparação. O termo "identidade de sequência" significa que existem os mesmos resíduos de aminoácidos no polipéptido da variante e na molécula de polipéptido que serve como referência quando um segmento contíguo especificado da sequência de aminoácidos da variante é alinhado e comparado com a sequência de aminoácidos da molécula de referência.
Para efeitos de alinhamento ideal das duas sequências para fins de determinação da identidade de sequência, o segmento contíguo da sequência de aminoácidos da variante pode ter resíduos de aminoácidos adicionais ou resíduos de aminoácidos eliminados relativamente à sequência de aminoácidos da molécula de referência. O segmento contíguo utilizado para comparação para a sequência de aminoácidos de referência irá compreender, pelo menos, 20 resíduos de aminoácidos contíguos. As correções da identidade de sequência aumentada associadas à inclusão de lacunas na sequência de aminoácidos da variante podem ser efetuadas atribuindo penalidades para lacunas. Os métodos de alinhamento de sequência são bem conhecidos na técnica.
Por conseguinte, a determinação da percentagem de identidade entre quaisquer duas sequências pode ser 23 realizada utilizando um algoritmo matemático. Um exemplo preferido não limitativo de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de sequências é o algoritmo de Myers e Miller (1988) Comput. Appl. Biosci. 4:11-7. Este algoritmo é utilizado no programa ALIGN (versão 2.0), que faz parte do pacote de programas de alinhamento GCG. Uma tabela de resíduos e pesos PAM120, uma penalidade de tamanho de lacunas de 12, e uma penalidade para lacunas de 4 podem ser utilizadas com o programa ALIGN ao comparar sequências de aminoácidos. Outro exemplo preferido não limitativo de um algoritmo matemático para utilizar na comparação de duas sequências é o algoritmo de Karlin e Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 90:5873-5877, modificado tal como em Karlin e Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sei EUA 90:5873-5877. Este algoritmo está incorporado nos programas NBLAST e XBLAST de Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410. As pesquisas de sequência de aminoácidos BLAST podem ser efetuadas com o programa XBLAST, resultado = 50, comprimento da palavra = 3, para obter uma sequência de aminoácidos semelhante ao polipéptido de interesse. Para obter alinhamentos com lacunas para fins de comparação, pode ser utilizado BLAST com lacunas, conforme descrito em Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402. Em alternativa, pode ser utilizado PSI-BLAST para efetuar uma pesquisa integrada que detete relações distantes entre moléculas. Consulte Altschul et al. (1997) acima. Ao utilizar os programas BLAST, BLAST com lacunas ou PSI-BLAST, os parâmetros predefinidos podem ser utilizados. Consulte http://www.ncbi.nlm.nih.gov. Consulte igualmente o programa ALIGN (Dayhoff (1978) em Atlas of Protein Sequence and Structure 5:Suppl. 3, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C.) e os programas no Wisconsin Sequence Analysis Package, Versão 8 (disponível em Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin) , por exemplo, o programa GAP, em que são utilizados os parâmetros predefinidos do programa. 24
Ao considerar a percentagem de identidade da sequência de aminoácidos, algumas posições de resíduos de aminoácidos podem divergir como resultado de substituições de aminoácidos moderadas, que não afetam as propriedades da função da proteína. Nestes casos, a percentagem de identidade de sequência pode ser ajustada para cima para explicar a semelhança nos aminoácidos substituídos de forma moderada. Estes ajustes são bem conhecidos na técnica. Consulte, por exemplo, Myers e Miller (1988) Comput. Appl. Biosci. 4: 11-17.
As variantes biologicamente ativas de IFN-β abrangidas pela invenção também incluem polipéptidos de IFN-β que foram ligados de forma covalente a, por exemplo, polietilenoglicol (PEG) ou albumina. Estas moléculas de IFN-β híbridas covalentes têm determinadas propriedades farmacêuticas desejáveis, tais como uma semivida no soro prolongada após a administração a um paciente. Os métodos para criar adutores de PEG-IFN implicam a modificação química de monometoxi-polietilenoglicol para criar um composto ativado que irá reagir com IFN-β. Os métodos para criar e utilizar polipéptidos ligados a PEG são descritos, por exemplo, em Delgado et al. (1992) Crit. Rev. Ther. Drug. Carrier Syst. 9:249-304. Os métodos para criar polipéptidos de fusão de albumina implicam a fusão das sequências de codificação do polipéptido de interesse (por ex., IFN-β) e da albumina, e são descritos na Patente US 5.876.969.
As variantes biologicamente ativas de IFN-β abrangidas pela invenção devem manter as atividades de IFN-β, em particular a capacidade de ligar a recetores de IFN-β. Em algumas formas de realização, a variante de IFN-β mantém, pelo menos, cerca de 25%, cerca de 50%, cerca de 75%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, cerca de 98%, cerca de 99% ou mais da atividade biológica dos polipéptidos, cujas sequências de aminoácidos são apresentadas na Figura 1 ou 25 2. As variantes de IFN-β, cuja atividade é aumentada em comparação com a atividade dos polipéptidos ilustrada na Figura 1 ou 2, também são abrangidas. A atividade biológica das variantes de IFN-β pode ser medida através de qualquer método conhecido na técnica. Os exemplos destes ensaios podem ser encontrados em Fellous et al. (1982) Proc. Natl. Acad. Sei EUA 79:3082-3086; Czerniecki et al. (1984) J. Virol. 49(2):490-496; Mark et al. (1984) Proc. Natl Acad. Sei. EUA 81:5662-5666; Branca et al. (1981) Nature 277:221-223; Williams et al. (1979) Nature 282:582-586; Herberman et al. (1979) Nature 277:221-223; Anderson et al. (1982) J. Biol. Chem. 257 (19) :11301-11304; e o ensaio de potência de IFN-β aqui descrito (consulte o Exemplo 2). O IFN-β das formulações da invenção pode ser de qualquer espécie animal, incluindo, mas não se limitando a, aviária, canina, bovina, suina, equina e humana. Preferencialmente, o IFN-β é de uma espécie de mamífero quando a formulação se destina a ser utilizada no tratamento de um distúrbio de IFN-β de mamífero e, mais preferencialmente, é de um mamífero da mesma espécie do mamífero que está a ser submetido ao tratamento desse distúrbio. Por conseguinte, quando o mamífero que está a ser tratado é um ser humano, de preferência é administrada à pessoa uma composição farmacêutica sem HSA compreendendo o IFN-β humano substancialmente monomérico ou a variante biologicamente ativa do mesmo.
Os exemplos não limitativos de polipéptidos de IFN-β e polipéptidos de variante de IFN-β abrangidos pela invenção são apresentados em Nagata et al. (1980) Nature 284:316-320; Goeddel et al. (1980) Nature 287:411-416; Yelverton et al. (1981) Nucleic Acids Res. 9:731-741; Streuli et al. (1981) Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 78:2848-2852; EP028033B1 e EP109748B1. Consulte igualmente as Patentes US 4518584; 4569908; 4588585; 4738844; 4753795; 4769233; 4793995; 4914033; 4959314; 5545723; e 5814485. Estas 26 citações também fornecem orientação relativamente a resíduos e regiões do polipéptido de IFN-β que podem ser alterados sem perder a atividade biológica.
Numa forma de realização da presente invenção, o IFN-β nas formulações farmacêuticas estabilizadas é o polipéptido de IFN-β nativo maturo. Noutra forma de realização, o IFN-β nestas formulações é o polipéptido de IFN-β maturo, em que a cisteína encontrada no aminoácido 17 da sequência nativa matura é substituída por serina, conforme descrito acima. Contudo, a presente invenção abrange outras formas de realização em que o IFN-β na formulação farmacêutica estabilizada é qualquer polipéptido de IFN-β biologicamente ativo ou variante, conforme aqui descrito.
Em algumas formas de realização da presente invenção, o IFN-β é produzido de forma recombinante. 0 termo "IFN-β produzido de forma recombinante" significa um IFN-β que tem uma atividade biológica comparável com o IFN-β nativo maduro e que foi preparado mediante técnicas de ADN recombinante. 0 IFN-β pode ser produzido mediante cultura de uma célula hospedeira transformada com um vetor de expressão compreendendo uma sequência de nucleótidos que codifica um polipéptido de IFN-β. A célula hospedeira pode transcrever a sequência de nucleótidos e produzir a proteína desejada, e pode ser procariótica (por exemplo, E. coli) ou eucariótica (por exemplo uma célula de levedura, de inseto ou de mamífero). Os exemplos de produção recombinante de IFN-β são apresentados em Mantei et al. (1982) Nature 297:128; Ohno et al. (1982) Nucleic Acids Res. 10:967; Smith et al. (1983) Mol. Cell. Biol. 3:2156, e Patentes US 4.462.940, 5.702.699 e 5.814.485. Os genes de interferão humano foram clonados utilizando a tecnologia de ADN recombinante ("ADNr") e foram expressos em E. coli (Nagola et al. (1980) Nature 284:316; Goeddel et al. (1980) Nature 287:411; Yelverton et al. (1981) Nuc. Acid Res. 9:731; Streuli et al. (1981) Proc. Natl. Acad. Sei. E.U.A. 27 78:2848). Em alternativa, o IFN-β pode ser produzido por uma planta ou animal transgénico que tenha sido manipulado geneticamente para expressar a proteína IFN-β de interesse de acordo com os métodos conhecidos na técnica.
As proteínas ou os polipéptidos que apresentam propriedades tipo interferão beta nativo também podem ser produzidos com tecnologia de ADNr extraindo o ARN mensageiro 12S rico em poli-A das células humanas induzidas de forma virai, sintetizando o ADNc de cadeia dupla utilizando o ARNm como modelo, introduzindo o ADNc num vetor de clonagem apropriado, transformando microorganismos adequados com o vetor, colhendo os micro-organismos e extraindo o interferão beta dos mesmos. Consulte, por exemplo, os Pedidos de Patente europeia 28033 (publicado a 6 de maio de 1981); 32134 (publicado a 15 de julho de 1981); e 34307 (publicado a 26 de agosto de 1981), que descrevem vários métodos para a produção de interferão beta utilizando técnicas de ADNr.
Em alternativa, o IFN-β pode ser sintetizado quimicamente através de qualquer uma das diversas técnicas conhecidas dos peritos na técnica de péptidos. Consulte, por exemplo, Li et al. (1983) Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 80:2216-2220, Steward e Young (1984) Solid PHSAe Peptide Synthesis (Pierce Chemical Company, Rockford, Illinois), e Baraney e Merrifield (1980) The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, ed. Gross e Meinhofer, Vol. 2 (Academic Press, Nova Iorque, 1980), págs. 3 a 254, que descrevem as técnicas de síntese do péptido em fase sólida; e Bodansky (1984) Principies of Peptide Synthesis (Springer-Verlag, Berlin) e Gross e Meinhofer, eds. (1980) The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology, Vol. 1 (Academic Press, Nova Iorque), que descrevem a síntese da solução clássica. O IFN-β também pode ser preparado quimicamente através do método de síntese de múltiplos péptidos simultâneos. Consulte, por exemplo, Houghten (1984) Proc. Natl. Acad. 28
Sei. EUA 82:5131-5135; e a Patente US 4.631.211. 0 IFN-β produzido de forma recombinante para ser utilizado na preparação de composições farmacêuticas estabilizadas de IFN-β sem HSA da invenção pode ser recuperado e purificado utilizando qualquer método conhecido de um perito na técnica. Esses métodos incluem os divulqados nas Patentes US 4.462.940 e 5.702.699. Estes métodos recuperam o interferão numa forma pura de IFN-β que tem tendência para formar agregados na ausência de SDS, que é utilizado como agente de solubilização. Além disso, estes métodos expõem a proteína a condições de pH elevado que podem afetar negativamente as propriedades biológicas da proteína, e podem resultar em composições contendo quantidades residuais de SDS utilizadas para solubilizar a proteína durante a purificação. Por conseguinte, enquanto o IFN-β pode ser obtido utilizando estes métodos, de preferência é recuperado e purificado através do método melhorado divulgado no pedido de patente US 2002/0137895.
Estes pedidos de patente copendentes e concorrentemente apresentados divulgam dois métodos de recuperação e purificação melhorados para o IFN-β. O primeiro destes métodos de recuperação e purificação compreende a precipitação do IFN-β substancialmente purificado com um álcool, tal como um álcool alifático, e a dissolução do IFN-β precipitado em cloridrato de guanidina. Em seguida, a solução resultante é diluída num tampão apropriado para renaturar a proteína. O segundo destes métodos de recuperação e purificação omite a fase de precipitação. Desta forma, uma amostra compreendendo IFN-β substancialmente purificado é misturada com cloridrato de guanidina para formar uma solução compreendendo IFN-β desnaturado solubilizado e esta solução é, em seguida, diluída num tampão apropriado para renaturar a proteína. Em ambos os métodos, a solução compreendendo IFN-β renaturado é, em seguida, diafiltrada ou dialisada num tampão 29 utilizado para fins farmacêuticos. Quando utilizada para preparar uma composição farmacêutica sem HSA da presente invenção, a proteína IFN-β renaturada purificada é diafiltrada ou dialisada numa formulação de força iónica baixa da presente invenção, conforme descrito no Exemplo 8 abaixo.
As composições abrangidas pela invenção podem ter, no mínimo, cerca de 0,01 mg/ml de IFN-β e, no máximo, cerca de 20.0 mg/ml de IFN-β (peso/volume). Em várias formas de realização, o IFN-β está presente numa concentração de cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 20,0 mg/ml, de cerca de 0,015 mg/ml a cerca de 12,5 mg/ml, de cerca de 0,025 mg/ml a cerca de 10,0 mg/ml, de cerca de 0,05 mg/ml a cerca de 8.0 mg/ml, de cerca de 0,075 mg/ml a cerca de 6,0 mg/ml, de cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 4,0 mg/ml, de cerca de 0,125 mg/ml a cerca de 2,0 mg/ml, de cerca de 0,175 mg/ml a cerca de 1,0 mg/ml, de cerca de 0,2 mg/ml a cerca de 0.5 mg/ml, de cerca de 0,225 mg/ml a cerca de 0,3 mg/ml, e de cerca de 0,25 mg/ml.
Em algumas formas de realização, as formulações da invenção compreendem um transportador farmaceuticamente aceitável. O termo "transportador farmaceuticamente aceitável" significa um transportador que é convencionalmente utilizado na técnica para facilitar o armazenamento, a administração e/ou o efeito de cura dos componentes terapêuticos. Um transportador pode reduzir igualmente quaisquer efeitos secundários indesejados do IFN-β. Um transportador adequado deve ser estável, ou seja, não pode reagir com outros componentes na formulação. Não deve produzir efeitos adversos sistémicos ou locais significativos nos destinatários nas dosagens e concentrações utilizadas para tratamento. Estes transportadores são geralmente conhecidos na técnica. Os transportadores adequados para esta invenção são as macromoléculas estáveis e grandes convencionalmente utilizadas, tais como gelatina, colagénio, polissacárido, 30 monossacáridos, polivinilpirrolidona, ácido poliláctico, ácido poliglicólico, aminoácidos poliméricos, óleos fixos, oleato de etilo, lipossomas, glicose, lactose, manose, dextrose, dextrano, celulose, sorbitol, polietilenoglicol (PEG) e afins. Os transportadores de libertação lenta, tais como o ácido hialurónico, também podem ser adequados. Consulte especialmente Prisell et al. (1992) Int. J. Pharmaceu. 85:51-56 e a Patente US 5.166.331. A composição farmacêutica pode compreender adicionalmente um agente de solubilização ou um agente de melhoramento da solubilidade que contribui para a solubilidade da proteína para além da solubilidade melhorada obtida utilizando as formulações de força iónica baixa aqui divulgadas. Os compostos contendo um grupo de guanidina, mais preferencialmente arginina, são agentes de melhoramento da solubilidade adequados para IFN-β. Os exemplos desses agentes de melhoramento da solubilidade incluem o aminoácido arginina e o aminoácido análogos de arginina que mantêm a capacidade de melhorar a solubilidade de IFN-β. Esses análogos incluem, sem limitação, dipéptidos e tripéptidos que contêm arginina. Os agentes de solubilização adequados adicionais são divulgados nas Patentes US 4.816.440; 4.894.330; 5.004.605; 5.183.746; 5.643.566; e em Wang et al. (1980) J. Parenteral Drug Assoe. 34:452-462.
Além desses agentes divulgados acima, outros agentes de estabilização, tais como ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) ou um dos respetivos sais, tais como EDTA dissódico, podem ser adicionados para melhorar ainda mais a estabilidade das composições farmacêuticas líquidas. O EDTA funciona como uma armadilha de iões de metal conhecida por catalisar muitas reações de oxidação, fornecendo assim um agente de estabilização adicional. Outros agentes de estabilização adequados incluem tensioativos não iónicos, incluindo ésteres de polioxietileno-sorbitol, tais como 31 polissorbato 80 (Tween 80) e polissorbato 20 (Tween 20); ésteres de polioxipropileno-polioxietileno, tais como Pluronic F68 e Pluronic F127; álcoois de polioxietileno, tais como Brij 35; simeticone; polietilenoglicol, tal como PEG400; lisofosfatidilcolina; e polioxietileno-p-t-octilfenol, tal como Triton X-100. A estabilização clássica de fármacos através de tensioativos é descrita, por exemplo, em Levine et al. (1991) J. Parenteral Sei. Technol. 45 (3) :160-165.
Uma quantidade farmaceuticamente eficaz de uma formulação estabilizada de IFN-β sem HSA liquida da invenção é administrada a uma pessoa. O termo "quantidade farmaceuticamente eficaz" significa uma quantidade que é útil no tratamento, na prevenção ou no diagnóstico de uma doença ou de um problema de saúde. As vias típicas de administração incluem, mas não se limitam a, administração oral, nasal, pulmonar e parentérica, incluindo infusão ou injeção transdérmica, intravenosa, intramuscular, subcutânea, intra-arterial e intraperitoneal. Numa dessas formas de realização, a administração é feita por injeção, preferencialmente injeção subcutânea. As formas injetáveis das composições da invenção incluem, mas não se limitam a, soluções, suspensões e emulsões. Normalmente, uma quantidade terapeuticamente eficaz de IFN-β compreende cerca de 0,01 yg/kg a cerca de 5 mg/kg da composição, preferencialmente cerca de 0,05 yg/kg a cerca de 1000 yg/kg, mais preferencialmente cerca de 0,1 yg/kg a cerca de 500 yg/kg, e ainda mais preferencialmente cerca de 0,5 yg/kg a cerca 30 yg/kg.
Numa forma de realização, a composição farmacêutica estabilizada sem HSA compreendendo IFN-β substancialmente monomérico é formulada numa dosagem única e pode ser numa forma injetável ou infusível, tal como solução, suspensão ou emulsão. A composição farmacêutica estabilizada pode ser esterilizada através de filtração por membrana e é 32 armazenada em recipientes de unidose ou multidose, tais como ampolas ou frascos selados. Os métodos adicionais para formular uma composição farmacêutica geralmente conhecidos na técnica podem ser utilizados para melhorar ainda mais a estabilidade de armazenamento das composições farmacêuticas aqui divulgadas, desde que não afetem negativamente os efeitos benéficos dos agentes de estabilização conforme aqui divulgado. É possível encontrar uma descrição minuciosa da formulação e seleção dos transportadores farmaceuticamente aceitáveis, estabilizadores, etc. em Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) (18a ed., Mack Publishing Company, Eaton, Pensilvânia).
As formulações compreendendo uma quantidade eficaz das composições farmacêuticas da invenção compreendendo interferão β (IFN-β) ou variante do mesmo, tal como a muteína de IFN-β humano (hIFN-β) designada por hIFN^seri7, são úteis no diagnóstico, na prevenção e no tratamento (local ou sistémico) de indicações clínicas recetivas à terapia com este polipéptido. Estas indicações clínicas incluem, por exemplo, distúrbios ou doenças do sistema nervoso central (SNC), cérebro e/ou medula espinal, incluindo doença de Alzheimer, doença de Parkinson, demência com corpos de Lewy, esclerose múltipla, epilepsia, ataxia cerebelosa, paralisia supranuclear progressiva, esclerose lateral amiotrófica, distúrbios emocionais, distúrbios de ansiedade, distúrbios obsessivo-compulsivos, distúrbios de personalidade, distúrbio de défice de atenção, distúrbio de hiperatividade com défice de atenção, síndrome de Tourette, doença de Tay-Sachs, doença de Niemann-Pick e esquizofrenia; lesão nervosa de distúrbios cerebrovasculares, tais uma lesão no cérebro ou na medula espinal, de infeções do SNC, incluindo meningite e VIH, de tumores do cérebro e da medula espinal, ou de uma doença do prião; doenças autoimunes, incluindo imunodeficiência adquirida, artrite reumatoide, psoríase, doença de Crohn, síndrome de Sjõgren, esclerose lateral amiotrópica e lúpus; 33 e cancros, incluindo cancros da mama, da próstata, da vesícula, do rim e do cólon. A administração de IFN-β ou respetivas muteínas a humanos ou animais pode ser feita de forma oral, intraperitoneal, intramuscular, subcutânea, intravenosa, intranasal ou pulmonar, conforme for considerado apropriado pelo médico. A presente invenção fornece um método para aumentar a solubilidade de interferão beta (IFN-β) ou variante biologicamente ativa do mesmo numa composição farmacêutica na ausência de seroalbumina humana. 0 método compreende a preparação da composição com uma formulação de força iónica baixa, conforme aqui divulgado, de modo a que o pH da composição seja mantido entre cerca de pH 3,0 e cerca de pH 5,0, e a incorporação do IFN-β ou variante biologicamente ativa do mesmo na composição. A composição pode ainda compreender um agente tonificante não iónico numa quantidade suficiente para tornar a composição isotónica com fluidos corporais, conforme aqui divulgado. Numa forma de realização, o agente tonificante não iónico é selecionado a partir do grupo que consiste em trealose, sacarose, manitol e qualquer combinação dos mesmos. Além disso, ao manter o pH desta composição entre cerca de pH 3,0 e pH 5,0, preferencialmente pH 4,0, é possível manter a maioria do IFN-β no respetivo estado monomérico. Por conseguinte, a invenção fornece igualmente um método para preparar uma composição farmacêutica estabilizada sem HSA compreendendo IFN-β substancialmente monomérico.
Os exemplos seguintes são fornecidos como ilustração e não como limitação.
EXPERIMENTAL A invenção atual foi realizada para uma melhor compreensão das propriedades de solubilidade e estabilidade de IFN-β-lb. As características preferidas das formulações de IFN-β-Ιό sem HSA são um intervalo de pH entre cerca de pH 3,0 e 34 cerca de pH 5,0 e condições de força iónica muito baixa. A utilização de condições de força iónica muito baixa neste intervalo de pH resulta num teor mais elevado de IFN-β-Ιό monomérico e num teor mais baixo de espécies de IFN-β-Ιό agregado. Estas condições permitem a estabilidade e solubilidade de IFN-β-Ιό não alcançáveis anteriormente sem a utilização de HSA na formulação. Igualmente, permitem formulações contendo o teor máximo de IFN-β-Ιό monomérico. O IFN-β-Ιό para utilização nestas experiências foi produzido em E. coli essencialmente conforme descrito nas primeiras diversas fases de purificação apresentadas nas Patentes US 4.462.940 e/ou 4.816.400. Ou seja, foram utilizadas bactérias transformadas para produzir IFN-β; as células hospedeiras foram concentradas e as respetivas paredes celulares desfeitas para obter material a granel de IFN-β-Ιό. O material a granel de IFN-p-lb assim obtido contém 50 mM de acetato de sódio, 1 mM de EDTA, 0,1% de dodecilsulfato de sódio (SDS) com pH 5,5. Para criar o material inicial para as medidas de solubilidade e estabilidade descritas abaixo, o SDS foi removido do material a granel de IFN-β-Ιό processando o material através de uma coluna G-25 (Pharmacia) equilibrada com 1,5 mM de hidróxido de sódio com >pH 11. Depois de recolher o conjunto (pool) da coluna G-25, um volume de 1 M de glicina, pH 3, igual a aproximadamente 1/10 do conjunto foi adicionado com uma agitação rápida para ajustar o conjunto para ~pH 3. Os materiais foram armazenados a 4°C ou congelados para utilização subsequente nas medidas de solubilidade e estabilidade.
Exemplo 1: - Determinação da Solubilidade de ΙΕΝ-β-lb Foram realizadas experiências iniciais para compreender a solubilidade de IFN-β-Ιό numa vasta variedade de condições de pH, tipo de tampão e força iónica. Uma solução de IFN-β- 35
lb (~0,8 mg/ml ΙΓΝ-β-lb em 100 mM de glicina, pH 3,0) foi dialisada contra os tampões no Quadro 1. Os resultados são ilustrados na Figura 1. Estes resultados mostram que a solubilidade de ΙΕΝ-β-lb depende do pH e da força iónica. 0 IFN-p-lb com pH 3,0 permanece solúvel em todas as concentrações de cloreto de sódio até 200 mM. Para formulações com pH 4,0, o ΙΕΝ-β-lb torna-se menos solúvel à medida que a concentração de cloreto de sódio atinge 150 mM. Para formulações com pH 5,0, o ΙΕΝ-β-lb torna-se menos solúvel quando a formulação contém apenas 100 mM de cloreto de sódio. Considerados em conjunto, estes dados indicam que o ΙΕΝ-β-lb é mais solúvel nas formulações com pH 3,0, menos solúvel nas formulações com pH 4,0, e menos solúvel com pH 5.0. Estes dados também indicam que aumentar a força iónica das formulações (aumentando a concentração de cloreto de sódio) reduz igualmente a solubilidade de ΙΕΝ-β-lb.
Embora a experiência acima tenha conseguido determinar as condições favoráveis para a solubilidade de ΙΕΝ-β-lb, não determinou o limite de solubilidade em nenhuma das condições apresentadas. Uma experiência subsequente foi realizada para determinar os limites de solubilidade de ΙΕΝ-β-lb. Para tirar o máximo proveito de ΙΓΝ-β-lb, foram utilizadas formulações de força iónica baixa (ou seja, 5 mM de tampão e nenhuns sais, tais como cloreto de sódio). Após a diálise, o ΙΓΝ-β-lb foi concentrado para determinar o limite de solubilidade numa determinada formulação. Os resultados destas experiências são ilustrados na Figura 2. As formulações com pH 3,0 e 4,0 são mais solúveis, mostrando uma solubilidade de, pelo menos, 16 mg/ml. A formulação com pH 5 foi solúvel até, aproximadamente, 8 mg/ml. As formulações acima de pH 5,0 foram solúveis só até, aproximadamente, 0,2 mg/ml. Estes resultados indicam novamente que o pH tem um forte efeito na solubilidade de ΙΕΝ-β-lb. As formulações de força iónica baixa com pH 3,0 e pH 4,0 são mais solúveis do que com pH 5,0. Acima de pH 5.0, o ΙΕΝ-β-lb é essencialmente insolúvel nas formulações 36 de força iónica baixa. 37
Quadro 1: Formulações para Examinar o pH de Solubilidade de IFN-p-lb, 0 Tipo de Tampão e a Concentração de Cloreto de Sódio Tampão pH Concentração de Cloreto de Sódio (mM) 5 mM de Glicina pH 3 0 mM 5 mM de Glicina pH 3 5 0 mM 5 mM de Glicina pH 3 10 0 mM 5 mM de Glicina pH 3 150 mM 5 mM de Citrato pH 4 0 mM 5 mM de Citrato pH 4 50 mM 5 mM de Citrato pH 4 10 0 mM 5 mM de Citrato pH 4 150 mM 5 mM de Acetato pH 4 0 mM 5 mM de Acetato pH 4 5 0 mM 5 mM de Acetato pH 4 10 0 mM 5 mM de Acetato pH 4 150 mM 5 mM de Formato pH 4 0 mM 5 mM de Formato pH 4 5 0 mM 5 mM de Formato pH 4 10 0 mM 5 mM de Formato pH 4 150 mM 5 mM de Acetato pH 5 0 mM 5 mM de Acetato pH 5 5 0 mM 5 mM de Acetato pH 5 10 0 mM 5 mM de Acetato pH 5 150 mM 5 mM de . Histidina pH 5 0 mM 5 mM de . Histidina pH 5 5 0 mM 5 mM de . Histidina pH 5 10 0 mM 5 mM de . Histidina pH 5 150 mM 5 mM de Succinato de sódio pH 5 0 mM 5 mM de Succinato de sódio pH 5 5 0 mM 5 mM de Succinato de sódio pH 5 10 0 mM 5 mM de Succinato de sódio pH 5 150 mM
Exemplo 2 - Experiências de Ultracentrifugação Analítica Embora as experiências de solubilidade possam determinar a quantidade de IFN-p-lb existente na solução, são 38 necessárias outras técnicas para determinar o estado de agregação da proteína. É importante determinar se uma proteína é monomérica numa formulação específica e determinar a quantidade da proteína (se existir) existente em formas de ordem mais elevada, tais como dímeros, trímeros, etc. A ultracentrifugação analítica é uma das técnicas mais eficazes para esclarecer o estado de agregação das proteínas (consulte Liu e Shire (1999) J. Pharm. Sei. 88: 1237-1241). Foram realizadas três experiências para caracterizar o teor monomérico de diversas formulações de IFN-p-lb com a utilização de ultracentrifugação analítica. Cada uma destas experiências de ultracentrifugação analítica foi realizada com uma preparação diferente de IFN-p-lb. Nesta matéria, cada experiência continha uma formulação comum (5 mM de glicina, pH 3,0). Contudo, cada uma destas formulações comuns variava ligeiramente na percentagem de monómero (Figura 3 -89,8%; Figura 6 - 94,2%; Figura 9 - 86,3%). O procedimento de purificação e recuperação utilizado para preparar estas formulações de IFN-β-Ιό produz alguma agregação da molécula de IFN-β-Ιό, que é sobretudo covalente na natureza. Por conseguinte, a formulação de 5 mM de glicina e pH 3,0 para cada experiência serve como ponto de partida para a quantidade de agregado na formulação no início de cada experiência. A primeira experiência examinou o efeito do pH no estado de agregação de IFN-p-lb. As formulações com pH 3,0 (contendo apenas 5 mM de glicina para tamponar a solução), pH 4,0 (contendo apenas 5 mM de ácido aspártico para tamponar a solução) e pH 5,0 (contendo apenas 5 mM de succinato de sódio para tamponar a solução) foram analisadas. Os resultados são ilustrados nas Figuras 3, 4 e 5. O pico principal nestes perfis corresponde a um peso molecular de aproximadamente 20 kDa, que está muito próximo do peso molecular de IFN-β-Ιό (19,878 kDa). Por conseguinte, o pico principal é o monómero de IFN-β-Ιό. As espécies maiores 39 (dímeros, trímeros, etc.) correspondem a coeficientes de sedimentação mais elevados. Estes resultados mostram que, enquanto o ΙΕΝ-β-lb é principalmente monomérico com pH 3, 0 e pH 4,0 (cerca de 90%), com pH 5,0 a molécula começa a agregar-se numa espécie de ordem mais elevada e é apenas cerca de 75% monomérica. Estes resultados indicam que o estado de agregação de ΙΕΝ-β-lb é suscetível a alterações no pH, e que o monómero de ΙΕΝ-β-lb é favorecido por condições de pH baixo, tais como pH 3,0 e pH 4,0. A segunda experiência investigou o efeito da força iónica no estado de agregação de ΙΕΝ-β-lb. A força iónica da formulação foi aumentada nas formulações com pH 3,0 (tamponadas com 5 mM de glicina) adicionando 0, 50 mM e 150 mM de cloreto de sódio. Os resultados são ilustrados nas Figuras 6, 7 e 8. Para a formulação que não contém qualquer cloreto de sódio adicionado (Figura 6), a forma monomérica de ΙΕΝ-β-lb compreende cerca de 94% do ΙΕΝ-β-lb total (ou seja, 94% de pico principal) . Quando 50 mM de cloreto de sódio são adicionados à formulação, o teor de monómero baixa para cerca de 76% (Figura 7), e com 150 mM de cloreto de sódio na formulação, o monómero baixa para menos de 10% (Figura 8). Estes resultados indicam que o estado de agregação de ΙΕΝ-β-lb é profundamente suscetível à força iónica e que o monómero de ΙΕΝ-β-lb é favorecido por condições de força iónica baixa.
Uma característica desejável de uma formulação farmacêutica injetável é ser isotónica com fluidos corporais. As substâncias iónicas (tais como o cloreto de sódio) e as substâncias não iónicas (tais como açúcares, sacarose e trealose) podem ser utilizadas para tornar a formulação isotónica com fluidos corporais. As experiências de ultracentrifugação analítica anteriores examinaram formulações que não eram isotónicas (contendo apenas 5 mM de tampão) nem continham cloreto de sódio como tonificante iónico. Uma terceira experiência examinou o efeito dos 40 agentes tonificantes não iónicos no estado de agregação de IFN-p-lb. Nesta experiência, foram preparadas três formulações com pH 3,0 (tamponadas com 5 mM de glicina). A primeira continha apenas o agente de tamponamento de glicina, a segunda foi tonificada com 9% de sacarose e a terceira foi tonificada com 9% de trealose. Os resultados da ultracentrifugação analítica são ilustrados nas Figuras 9, 10 e 11. O teor de monómero da formulação apenas com o agente de tamponamento (Figura 9) é de apenas cerca de 86%. Ao adicionar sacarose (Figura 10) ou trealose (Figura 11) como agente tonificante, o teor de monómero é de cerca de 89%. Estes resultados indicam que os agentes tonificantes não iónicos, tais como sacarose e trealose, não provocam a agregação da molécula de IFN-β-Ιό.
Exemplo 3 - Estabilidade de Formulações Liofilizadas de IFN-p-lb sem HSA em Condições de Temperatura Aceleradas
As formulações de IFN-3-lb sem HSA com pH 3,0 (5 mM de glicina como tampão) e pH 4,0 (5 mM de ácido aspártico como tampão) contendo 9% de trealose (pH 3,0 e pH 4,0) ou 9% de sacarose (pH 4,0) foram liofilizadas. Em seguida, as formulações liofilizadas foram armazenadas a 40°C e a respetiva estabilidade medida durante 8 semanas. A sacarose e a trealose são agentes de estabilização típicos utilizados nas formulações liofilizadas. Um nível de 9% destes reagentes é utilizado para que a formulação reconstituída seja isotónica com fluidos corporais. Para minimizar a força iónica das formulações e, deste modo, a quantidade de IFN-3-lb agregado, a quantidade de tampão foi mantida num nível mínimo. Por conseguinte, todos os tampões estavam numa concentração de 5 mM. A condição de armazenamento típica para produtos farmacêuticos à base de proteína é muitas vezes 5°C. Contudo, as condições de temperatura aceleradas são frequentemente utilizadas nos estudos de formulação para aumentar a taxa de degradação de uma determinada formulação 41 para que os dados de estabilidade relevantes possam ser recolhidos num período de tempo mais curto. Nesta experiência, foram utilizados 40°C para tentar a degradação forçada de ΙΕΝ-β-lb nas formulações sem HSA. Os resultados para as medidas de concentração e análise por HPLC em fase reversa (RP-HPLC) são ilustrados nas Figuras 12 e 13. Estes resultados mostram que, mesmo a temperaturas elevadas, estas formulações de ΙΕΝ-β-lb não mostram quaisquer alterações detetáveis durante o estudo de 8 semanas.
Exemplo 4 - Estabilidade de Formulações Liofilizadas de ΙΕΝ-β-lb sem HSA Contendo Trealose em Condições de Armazenamento em Tempo Real
Embora uma condição de armazenamento típica para fármacos à base de proteínas seja 5°C, é aconselhável ter um produto com estabilidade a temperatura ambiente (25°C a 30°C) . Nesta experiência, as formulações contendo 9% de trealose (5 mM de glicina, pH 3, ou 5 mM de ácido aspártico, pH 4) foram liofilizadas. Uma concentração de 9% de trealose foi utilizada para que a formulação reconstituída fosse isotónica com fluidos corporais. As formulações foram armazenadas a 5°C e 30°C e a respetiva estabilidade medida durante 9 meses. Os resultados para as medidas de concentração e análise por HPLC em fase reversa (RP-HPLC) são ilustrados na Figura 14 e na Figura 15. Estes resultados mostram que, mesmo a 30°C, estas formulações de ΙΕΝ-β-lb não mostram quaisquer alterações detetáveis durante os 9 meses do estudo.
Exemplo 5 - Estabilidade de Formulações Líquidas de IFN-β-lb sem HSA em Condições de Temperatura Aceleradas A estabilidade de formulações de ΙΓΝ-β-lb sem HSA com pH 3,0 e pH 4,0 também foi examinada no estado líquido. A composição das formulações era igual à descrita no Exemplo 3 (9% de trealose (pH 3,0 e pH 4,0) ou 9% de sacarose (pH 4,0)). Novamente, para minimizar a força iónica das formulações e minimizar assim a quantidade de ΙΕΝ-β-lb 42 agregado, a quantidade de tampão foi mantida num nivel mínimo (5 mM). As formulações líquidas foram armazenadas a 30°C e a respetiva estabilidade medida durante 9 semanas. A condição de armazenamento típica para formulações líquidas de proteína é 5°C. Por conseguinte, um armazenamento a 30°C representa condições de temperatura aceleradas concebidas para aumentar a taxa de degradação de ΙΕΝ-β-lb. Os resultados ilustrados na Figura 16 (medidas de concentração) e na Figura 17 (análise por HPLC em fase reversa) não mostram quaisquer alterações detetáveis nas formulações durante o estudo de 9 semanas. Estes resultados indicam que, nestas formulações nestas condições, o IFN-β-lb é estável durante o estudo.
Exemplo 6 - Estabilidade de Formulações Líquidas de ΙΕΝ-β-lb sem HSA em Condições de Armazenamento em Tempo Real Nesta experiência, as formulações líquidas contendo 9% de trealose (5 mM de glicina, pH 3, ou 5 mM de ácido aspártico, pH 4) ou 9% de sacarose (5 mM de glicina, pH 3, ou 5 mM de ácido aspártico, pH 4) foram examinadas em condições de armazenamento em tempo real de 5°C. As formulações foram introduzidas em frascos e as respetivas estabilidades medidas durante 9 meses. Os resultados das medidas de concentração e análise por HPLC em fase reversa (RP-HPLC) são ilustrados na Figura 18 e Figura 19, respetivamente. Estes resultados indicam que o ΙΕΝ-β-lb nestas formulações é estável durante os 9 meses deste estudo.
Exemplo 7 - A Trealose é Preferível à Sacarose como Agente Tonificante Não Iónico para Formulações de IFN^-lb Nesta experiência, as formulações contendo 9% de trealose (5 mM de glicina, pH 3, ou 5 mM de ácido aspártico, pH 4) e 9% de sacarose (5 mM de glicina, pH 3, ou 5 mM de ácido aspártico, pH 4) foram preparadas e introduzidas em frascos como um líquido, e os frascos da mesma formulação foram liofilizados. As respetivas estabilidades foram medidas em 43 condições de temperatura aceleradas, que são muitas vezes preditivas da estabilidade de ordem hierárquica das formulações de uma determinada proteína. As formulações líquidas foram armazenadas a 30°C durante 9 semanas, e as formulações liofilizadas foram armazenadas a 40°C durante 8 semanas. Os resultados das medidas de concentração são ilustrados na Figura 20 (líquidas) e Figura 21 (liofilizadas). Estes resultados indicam que as formulações com pH 3 contendo sacarose mostram um aumento evidente na concentração. Este aumento evidente na concentração deve-se à hidrólise da sacarose num pH baixo para formar açúcares redutores, que resultam num escurecimento não enzimático (ou seja, reação de Maillard) das formulações. A trealose é muito mais resistente à hidrólise e, por conseguinte, é preferida em relação à sacarose nestas formulações (consulte, 0'Brien (1996) Science 61:679-682).
Exemplo 8: Remoção de SDS e Formulação de ΙΒΝ-β-lb Utilizando Precipitação de Cloridrato de Guanidina
Foi armazenado IFN-p-lb purificado (1 1 de 1,91 mg/ml em 0,4% de SDS, 50 mM de tampão de acetato, pH 5,5) a 5°C. Durante o armazenamento, algum do SDS presente precipitou-se. Foram misturados 250 ml deste material (477,5 mg) com 229 g de cloridrato de guanidina (6 M, volume total de 400 ml) e agitados à temperatura ambiente durante 15 minutos utilizando um barra de agitação magnética. Em seguida, a solução de 6 M de cloridrato de guanidina/proteína foi filtrada com uma Cápsula Sartobran® P (0,45ym de tamanho do poro) para remover o SDS precipitado. A concentração de proteína conforme determinado por UV em 280 nm foi de 1,02 mg/ml. A produção de proteína foi de 406 mg ou 85%. O material tratado de 400 ml de cloridrato de guanidina foi concentrado utilizando um sistema de diafiltração TFF Millipore® Labscale® (Millipore, Inc.) com duas membranas de polissulfona de 10 kD de 0,1 cm2 Pellicon® XL Biomax® (Millipore, Inc.) O volume a seguir à fase de concentração 44 era de 37 ml com uma concentração de proteína de 10,3 mg/ml para uma produção de pós-concentração de 381 mg ou 93%.
Através da utilização de uma pipeta de transferência, 10 ml (103 mg) da solução de cloridrato de guanidina/proteína concentrada foram adicionados gradualmente a 590 ml da solução de 5 mM de glicina e pH 3,2. 0 tampão estava numa agitação rápida utilizando uma barra de agitação magnética; a solução de proteína foi adicionada diretamente ao vórtice. Esta diluição de 60X da solução de 6 M de cloridrato de guanidina/proteína produziu uma solução de 0,1 M de cloridrato de guanidina/proteína com 0,17 mg/ml. Estes 600 ml foram transferidos para uma unidade de diafiltração em escala de 500 ml equipada com duas membranas de polissulfona de 10 kD de 0,1 m2 Pellicon® II. Esta solução foi concentrada inicialmente em -400 ml para uma concentração de proteína de 0,23 mg/ml, e diafiltrada subsequentemente contra 9 alterações de volume (3,61) de 5 mM de glicina com pH 3,2. O diafiltrado final (402 ml) foi medido por UV em 280 nm para uma concentração de proteína final de 0,23 mg/ml com uma produção de 92,46 mg ou 90% para a fase de diafiltração e uma produção global de 72% de proteína solúvel para o processo de purificação.
Exemplo 9 - Estabilidade de Formulações Líquidas de IFN-β-lb sem HSA Contendo Manitol como Agente Tonificante
Nesta experiência, as formulações líquidas contendo 5 mM de ácido aspártico e 5% de manitol foram examinadas em condições de armazenamento em tempo real de 5°C. Três preparações separadas (denominadas Prep A, Prep B e Prep C nas figuras) foram preparadas a partir de um único lote de ΙΕΝ-β-lb sem HSA e introduzidas em frascos. Os frascos foram armazenados a 5°C e a estabilidade das formulações foi medida durante 6 meses. Os resultados das medidas de concentração e análise por HPLC em fase reversa (RP-HPLC) são ilustrados na Figura 22 e Figura 23, respetivamente. Os resultados mostram que não ocorreram quaisquer alterações 45 detetáveis nestas formulações de IFN-p-lb durante o estudo de 6 meses.
Todas as publicações e pedidos de patente mencionados na descrição são indicativos do nível daqueles proficientes na técnica à qual esta invenção pertence. Os subtítulos no documento de descrição estão incluídos unicamente para facilitar a análise do documento e não têm a intenção de ser uma limitação sobre o conteúdo do documento em qualquer forma.
Embora a invenção anterior tenha sido descrita detalhadamente como ilustração e exemplo para uma melhor compreensão, será óbvio que podem ser efetuadas determinadas alterações e modificações no âmbito da invenção, conforme definido pelas reivindicações. 46

Claims (13)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composição farmacêutica livre de HSA estabilizada compreendendo interferão-beta (IFN-β) substancialmente monomérico ou uma variante biologicamente ativa do mesmo solubilizado numa formulação de baixa força iónica, em que a referida formulação de baixa força iónica, é uma solução que compreende um tampão numa quantidade suficiente para manter o pH da referida composição dentro de mais ou menos 0,5 unidades de pH especificado de 3,0 a 5,0, a referida formulação tendo uma força iónica que não é maior do que cerca de 60 mM, e em que o IFN-β está ligado de forma covalente com polietileno glicol.
  2. 2. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que o interferão-beta tem pelo menos 80% de identidade de sequência de aminoácidos com a sequência de aminoácidos do IFN-β nativa.
  3. 3. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que a atividade de IFN-β é aumentada em comparação com a atividade de IFN^-lb.
  4. 4. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que o referido tampão está presente numa concentração de (i) cerca de 1 mM a cerca de 30 mM; (ii) cerca de 1 mM a cerca de 10 mM; (iii) cerca de 2 mM a cerca de 7 mM; (iv) cerca de 2 mM até cerca de 5 mM; ou (v) de cerca de 5 mM.
  5. 5. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que o pH é especificado: (i) cerca de 3,0 a cerca de 4,5; (ii) cerca de 3,0 a cerca de 4,0; (iii) cerca de 3,5 a cerca de 4,0; ou (iv) cerca de 4,0. 1
  6. 6. Composição de qualquer reivindicação anterior, que compreende adicionalmente um composto que contenha um grupo de guanidina, tais como arginina.
  7. 7. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que a referida composição é um liquido ou uma forma seca; em que a referida forma líquida é selecionada de entre o grupo que consiste de uma solução aquosa ou não aquosa, e uma suspensão aquosa ou não-aquosa; e em que a referida forma seca é selecionada a partir do grupo que consiste numa forma liofilizada, uma forma seca ao ar, e de uma forma seca por pulverização.
  8. 8. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que o IFN-β é glicosilado ou não glicosilado.
  9. 9. Composição de qualquer reivindicação anterior, em que o IFN-β está presente a uma concentração de (i) cerca de 0,01 mg/ml a cerca de 20,0 mg/ml; (ii) cerca de 0,015mg/ ml a cerca de 12,5 mg/ml; (iii) cerca de 0,025 mg/ml a cerca de 10,0 mg/ml; (iv) cerca de 0,05 mg/ml a cerca de 8,0 mg/ml; (v) a cerca de 0,075mg/ml a cerca de 6,0 mg/ml; ou (vi) cerca de 0,1 mg/ml a cerca de 4,0 mg/ml.
  10. 10. Composição de qualquer reivindicação anterior, para administração oral, administração nasal, administração pulmonar, ou administração parenteral; por exemplo, para administração transdérmica, intravenosa, intramuscular, subcutânea, intra-arterial ou intraperitoneal.
  11. 11. Composição de qualquer reivindicação anterior, para utilização no tratamento da esclerose múltipla.
  12. 12. Método para a preparação de uma composição farmacêutica substancialmente livre de HSA compreendendo interferão-beta (IFN-β) monomérico, o referido método compreendendo a preparação da referida composição com 2 uma formulação de baixa força iónica, em que a referida formulação de baixa força iónica é uma solução que compreende um tampão numa quantidade suficiente para manter o pH da referida composição dentro de mais ou menos 0,5 unidades de pH especificado, em que o pH é especificado 3,0 a 5,0, a referida formulação tendo uma força iónica não superior a cerca de 60 mM, e incorporando o dito IFN-β ou uma variante biologicamente ativa do mesmo para dentro da referida composição, em que o IFN-β está ligado de forma covalente com polietileno glicol.
  13. 13. Método da reivindicação 12, em que o referido tampão está presente numa concentração de (i) cerca de 1 mM a cerca de 30 mM; ou (ii) de cerca de 2 mM a cerca de 5 mM. 3
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Families Citing this family (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999051272A1 (en) * 1998-04-03 1999-10-14 Chiron Corporation Injectable igf-formulations containing succinate as buffering agent
US7544354B2 (en) * 2000-10-27 2009-06-09 Novartis Vaccines And Diagnostics Methods of protein purification and recovery
AU3070702A (en) * 2000-11-07 2002-05-21 Chiron Corp Stabilized inteferon compositions
US6887462B2 (en) 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
AR034749A1 (es) * 2001-07-09 2004-03-17 Schering Ag Formulaciones de interferon beta humano
JP2005519946A (ja) * 2002-03-12 2005-07-07 マキシジェン エーピーエス 発作の処置のためのインターフェロンβ様分子
US20040037809A1 (en) * 2002-06-28 2004-02-26 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for enhanced mucosal delivery of interferon beta
DE10240894A1 (de) * 2002-09-04 2004-03-11 Procom Biotechnologische Produktions Gmbh Verstärkung der Resorption von Subtanzen über die Haut und Schleimhaut
US8129330B2 (en) * 2002-09-30 2012-03-06 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates with decreased antigenicity, methods of preparation and uses thereof
US9453251B2 (en) 2002-10-08 2016-09-27 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
US20040136952A1 (en) * 2002-12-26 2004-07-15 Mountain View Pharmaceuticals, Inc. Polymer conjugates of cytokines, chemokines, growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity
KR101238517B1 (ko) * 2002-12-26 2013-02-28 마운틴 뷰 파마슈티컬즈, 인크. 생물학적 효능이 향상된 인터페론-베타의 중합체 접합체
TWI272948B (en) * 2003-05-01 2007-02-11 Ares Trading Sa HSA-free stabilized interferon liquid formulations
WO2005042002A2 (en) * 2003-10-30 2005-05-12 Entelos, Inc. Treatment of rhematoid arthritis with flip antagonists
AU2004288854B2 (en) * 2003-11-10 2009-10-01 Arriva-Pharmaceuticals, Inc. Dry recombinant human alpha 1-antitrypsin formulation
EP1532983A1 (en) * 2003-11-18 2005-05-25 ZLB Bioplasma AG Immunoglobulin preparations having increased stability
EP1691825B1 (en) * 2003-12-11 2011-09-28 Ares Trading S.A. Stabilized interferon liquid formulations
CN1557479A (zh) * 2004-01-16 2004-12-29 深圳市海王英特龙生物技术股份有限公 干扰素脂质体乳膏
DE102004008168B4 (de) * 2004-02-19 2015-12-10 Voxeljet Ag Verfahren und Vorrichtung zum Auftragen von Fluiden und Verwendung der Vorrichtung
EP1734988A4 (en) * 2004-03-01 2009-08-05 Enzon Pharmaceuticals Inc INTERFERON BETA-polymer
US20050220764A1 (en) * 2004-04-01 2005-10-06 Schering Aktiengesellschaft Higher-doses of interferon-beta for treatment of multiple sclerosis
US7879320B2 (en) * 2004-05-17 2011-02-01 Ares Trading S.A. Hydrogel interferon formulations
UA92146C2 (ru) * 2004-06-01 2010-10-11 Эйрэс Трейдинг С.А. Стабилизированная жидкая композиция, которая содержит интерферон
KR101191536B1 (ko) * 2004-06-01 2012-10-15 아레스 트레이딩 에스.에이. 안정화된 인터페론 액상 제제
JP2008500995A (ja) * 2004-06-01 2008-01-17 アレス トレーディング ソシエテ アノニム タンパク質安定化法
WO2005120540A2 (en) * 2004-06-09 2005-12-22 Schering Aktiengesellschaft Interferon alpha or beta for treatment of cardiomyopathy and endothelial dysfunction
AU2005269527B2 (en) 2004-07-26 2011-12-01 Pfenex Inc. Process for improved protein expression by strain engineering
WO2006015165A2 (en) * 2004-07-26 2006-02-09 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Optimized interferon-beta gene
KR20070045244A (ko) * 2004-08-12 2007-05-02 쉐링 코포레이션 안정한 페길화된 인터페론 제형
DOP2006000117A (es) * 2005-05-19 2007-11-30 Schering Ag Terapia génica de interferon-beta usando un sistema mejorado de expresión regulada
US20070179113A1 (en) * 2005-05-19 2007-08-02 Schering Aktiengesellachaft GM-CSF gene therapy for Crohn's disease using an improved regulated expression system
US20080076729A1 (en) * 2005-05-19 2008-03-27 Schering Aktiengesellachaft Interferon-beta gene therapy using an improved, regulated expression system
EP1885858A2 (en) * 2005-05-19 2008-02-13 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Treatment of disease using an improved regulated expression system
CU23432B6 (es) * 2005-11-02 2009-10-16 Ct Ingenieria Genetica Biotech Formulaciones estabilizadas que contienen a los interferones gamma y alfa en proporciones potenciadoras
US20140113860A1 (en) 2006-02-03 2014-04-24 Prolor Biotech Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8304386B2 (en) * 2006-02-03 2012-11-06 Prolor Biotech, Inc. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US8048848B2 (en) * 2006-02-03 2011-11-01 Prolor Biotech Ltd. Long-acting interferons and derivatives thereof and methods thereof
US10221228B2 (en) 2006-02-03 2019-03-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US7553940B2 (en) 2006-02-03 2009-06-30 Modigene Inc Long-acting EPO polypeptides and derivatives thereof and methods thereof
US9458444B2 (en) 2006-02-03 2016-10-04 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8759292B2 (en) 2006-02-03 2014-06-24 Prolor Biotech, Llc Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8450269B2 (en) 2006-02-03 2013-05-28 Prolor Biotech Ltd. Long-acting growth hormone and methods of producing same
US8048849B2 (en) 2006-02-03 2011-11-01 Modigene, Inc. Long-acting polypeptides and methods of producing same
US9249407B2 (en) 2006-02-03 2016-02-02 Opko Biologics Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US8946155B2 (en) 2006-02-03 2015-02-03 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
US8476234B2 (en) * 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
US10351615B2 (en) 2006-02-03 2019-07-16 Opko Biologics Ltd. Methods of treatment with long-acting growth hormone
US20150038413A1 (en) 2006-02-03 2015-02-05 Opko Biologics Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
AU2007234612B2 (en) * 2006-12-14 2013-06-27 Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc Protein stabilization formulations
JP5444553B2 (ja) 2007-04-27 2014-03-19 フェネックス インコーポレイテッド 微生物宿主を迅速にスクリーニングして、異種タンパク質発現の収率および／または質が改善されている特定の株を同定する方法
US9580719B2 (en) 2007-04-27 2017-02-28 Pfenex, Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
EP2076533B1 (en) 2007-05-02 2014-10-08 Ambrx, Inc. Modified interferon beta polypeptides and their uses
WO2009030065A1 (zh) * 2007-09-04 2009-03-12 Biosteed Gene Expression Tech. Co., Ltd. 聚乙二醇修饰的干扰素α2a及其制备方法和应用
MX2010002557A (es) * 2007-09-04 2011-12-16 Biosteed Gene Expression Tech Co Ltd Interferon alfa 2b modificado por glicol de polietileno, la preparacion y el uso del mismo.
US8273561B2 (en) * 2007-10-05 2012-09-25 Nuron Biotech, Inc. High pressure treatment of aggregated interferons
DK2234645T3 (da) * 2007-12-20 2012-07-09 Merck Serono Sa Peg-interferon-beta-formuleringer
US20100196272A1 (en) * 2009-01-30 2010-08-05 Neoprobe Corporation Compositions for radiolabeling diethylenetriaminepentaacetic acid (dtpa)-dextran
US20100203014A1 (en) * 2009-02-04 2010-08-12 Aegis Therapeutics Llc Zwitterionic buffered acidic peptide and protein formulations
EP2440251A4 (en) 2009-06-09 2013-01-16 Defyrus Inc INTERFERON ADMINISTRATION FOR PROPHYLAXIS AGAINST PATHOGEN INFECTION OR TREATMENT OF PATHOGEN INFECTION
US9663778B2 (en) 2009-07-09 2017-05-30 OPKO Biologies Ltd. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
CA2788863C (en) 2010-02-04 2020-07-07 Reinhard Franz Bolli Immunoglobulin preparation
EP2361636A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 CSL Behring AG Immunoglobulin preparation and storage system for an immunoglobulin preparation
US20120269770A1 (en) * 2010-11-22 2012-10-25 Mark Brader Stable Preserved Compositions of Interferon-Beta
CN105853348B (zh) * 2011-03-10 2019-08-30 Xeris药物公司 肠胃外注射用稳定溶液
PE20142405A1 (es) 2012-04-19 2015-01-25 Opko Biolog Ltd Variantes de oxintomodulina de accion prolongada y metodos de produccion de las mismas
SG10202010383YA (en) 2012-11-20 2020-11-27 Opko Biologics Ltd Method of increasing the hydrodynamic volume of polypeptides by attaching to gonadotrophin carboxy terminal peptides
US20150158926A1 (en) 2013-10-21 2015-06-11 Opko Biologics, Ltd. Long-acting polypeptides and methods of producing and administering same
JPWO2016052584A1 (ja) * 2014-09-30 2017-07-13 東レ株式会社 ポリエチレングリコール修飾インターフェロン−βの検出及び定量に使用する試料液の前処理方法、ポリエチレングリコール修飾インターフェロン−βの検出方法及び定量方法
CN104766952B (zh) * 2015-04-21 2017-01-25 武汉凯迪工程技术研究总院有限公司 利用生物质气化炉滤渣制备锂离子电池负极材料的方法
CN108289851B (zh) 2015-06-19 2021-06-01 Opko生物科学有限公司 长效凝固因子及其产生方法
FI126979B (en) * 2016-02-29 2017-09-15 Faron Pharmaceuticals Oy Lyophilized pharmaceutical formulation and use thereof
KR20240006077A (ko) 2016-07-11 2024-01-12 옵코 바이오로직스 리미티드 지속성 응고 인자 vii 및 그 제조 방법
AU2017307313B2 (en) * 2016-08-02 2021-09-09 Ambah Ip Limited Stable ibuprofen injectable composition
KR101943160B1 (ko) * 2016-10-06 2019-01-30 에이비온 주식회사 인터페론 베타 변이체의 안정화 제제
US11690799B2 (en) 2018-04-19 2023-07-04 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Microneedle system for applying interferon
MX2020011004A (es) * 2018-04-19 2020-11-09 Lts Lohmann Therapie Systeme Ag Sistema de microagujas para la aplicacion de interferon.

Family Cites Families (68)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU538665B2 (en) 1979-10-30 1984-08-23 Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research Human interferon dna
CA1341567C (en) 1980-01-08 2008-02-19 Charles Weissmann Dna sequences, recombinant dna molecules and processes for producing human interferon - like polypeptides
DE3005897A1 (de) 1980-02-16 1981-09-03 Hoechst Ag, 6000 Frankfurt Genprodukt eines hoeheren organismus aus einem dieses gen enhtaltenden mikroorganismus
US4439181A (en) 1981-01-26 1984-03-27 Regents Of The University Of Minnesota Polyol-hormone mixture for use in chronic parenteral hormone administration
JPS5821691A (ja) 1981-07-29 1983-02-08 Mochida Pharmaceut Co Ltd α−及びβ−インタ−フェロンの精製方法
DE3273597D1 (en) 1981-11-28 1986-11-06 Sunstar Kk Pharmaceutical composition containing interferon in stable state
IT1167610B (it) 1982-01-19 1987-05-13 Cetus Corp Interfreron ibrido multiclasse, composizione farmaceutica che lo contiene e procedimento di produzione
AU1234383A (en) 1982-03-17 1983-09-22 Inter-Yeda Ltd. Interferon stabilised with polyvinyl-pyrrolidone
US5702699A (en) 1982-09-23 1997-12-30 Cetus Corporation Process for the recovery of lipophilic proteins
US4462940A (en) 1982-09-23 1984-07-31 Cetus Corporation Process for the recovery of human β-interferon-like polypeptides
US5643566A (en) 1982-09-23 1997-07-01 Cetus Corporation Formulation processes for lipophilic proteins
US4992271A (en) 1982-09-23 1991-02-12 Cetus Corporation Formulation for lipophilic IL-2 proteins
US5166331A (en) 1983-10-10 1992-11-24 Fidia, S.P.A. Hyaluronics acid fractions, methods for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing same
IE56026B1 (en) 1982-10-19 1991-03-27 Cetus Corp Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US4588585A (en) 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4518584A (en) 1983-04-15 1985-05-21 Cetus Corporation Human recombinant interleukin-2 muteins
US4816400A (en) 1983-05-19 1989-03-28 Karl Tryggvason Basement membrane collagen degrading enzyme and method of purifying same
US4588584A (en) 1983-06-01 1986-05-13 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Medium for the isolation of Pseudomonas cepacia biotype from soil and the isolated biotype
GB8317880D0 (en) 1983-07-01 1983-08-03 Searle & Co Structure and synthesis of interferons
EP0133767B1 (en) 1983-08-04 1991-04-03 The Green Cross Corporation Gamma interferon composition
JPS6069037A (ja) 1983-09-26 1985-04-19 Sunstar Inc エリテマト−デス治療用外用剤
WO1985002118A1 (en) 1983-11-21 1985-05-23 Regents Of The University Of Minnesota A buffered polyol-hormone mixture for use in chronic parenteral hormone administration
US4530787A (en) 1984-03-28 1985-07-23 Cetus Corporation Controlled oxidation of microbially produced cysteine-containing proteins
JPS60243028A (ja) * 1984-04-28 1985-12-03 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd インタ−フエロンの可溶化方法
GB8412564D0 (en) 1984-05-17 1984-06-20 Searle & Co Structure and properties
US4605555A (en) 1984-09-20 1986-08-12 Sun Star Kabushiki Kaisha Composition and method for treating keratosic disorder of skin and mucosa
US4959314A (en) 1984-11-09 1990-09-25 Cetus Corporation Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins
US4572798A (en) 1984-12-06 1986-02-25 Cetus Corporation Method for promoting disulfide bond formation in recombinant proteins
US4631211A (en) 1985-03-25 1986-12-23 Scripps Clinic & Research Foundation Means for sequential solid phase organic synthesis and methods using the same
US4816440A (en) 1985-09-26 1989-03-28 Cetus Corporation Stable formulation of biologically active proteins for parenteral injection
US5183746A (en) 1986-10-27 1993-02-02 Schering Aktiengesellschaft Formulation processes for pharmaceutical compositions of recombinant β-
US4894330A (en) 1986-12-23 1990-01-16 Cetus Corporation Purification of recombinant beta-interferon incorporating RP-HPLC
EP0284249A1 (en) 1987-03-13 1988-09-28 Interferon Sciences, Inc. Lyophilized lymphokine composition
US5151265A (en) 1987-11-03 1992-09-29 Genentech, Inc. Gamma interferon formulation
US5004605A (en) 1987-12-10 1991-04-02 Cetus Corporation Low pH pharmaceutical compositions of recombinant β-interferon
US5104651A (en) 1988-12-16 1992-04-14 Amgen Inc. Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf
EP0410207B1 (en) 1989-07-24 1997-01-22 Bayer Corporation Stabilization of highly purified proteins
JPH05963A (ja) 1990-04-13 1993-01-08 Toray Ind Inc ポリペプチド類組成物
US5763566A (en) * 1990-06-11 1998-06-09 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: tissue SELEX
JP3532204B2 (ja) 1991-03-05 2004-05-31 アラダイム コーポレーション 流量計の圧力センサのドリフトオフセットを補正する方法および装置
JP3230056B2 (ja) 1991-07-02 2001-11-19 インヘイル・インコーポレーテッド 薬剤のエーロゾル化服用量を形成する装置
FR2686899B1 (fr) 1992-01-31 1995-09-01 Rhone Poulenc Rorer Sa Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant.
US5785049A (en) 1994-09-21 1998-07-28 Inhale Therapeutic Systems Method and apparatus for dispersion of dry powder medicaments
US6582728B1 (en) 1992-07-08 2003-06-24 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Spray drying of macromolecules to produce inhaleable dry powders
US5558085A (en) 1993-01-29 1996-09-24 Aradigm Corporation Intrapulmonary delivery of peptide drugs
US5934272A (en) 1993-01-29 1999-08-10 Aradigm Corporation Device and method of creating aerosolized mist of respiratory drug
US5497763A (en) 1993-05-21 1996-03-12 Aradigm Corporation Disposable package for intrapulmonary delivery of aerosolized formulations
TW249202B (pt) 1993-08-13 1995-06-11 Ciba Gerigy Corp
US6051256A (en) 1994-03-07 2000-04-18 Inhale Therapeutic Systems Dispersible macromolecule compositions and methods for their preparation and use
US5545723A (en) 1994-03-15 1996-08-13 Biogen Inc. Muteins of IFN-β
FR2719479B1 (fr) 1994-05-04 1996-07-26 Sanofi Elf Formulation stable lyophilisée comprenant une protéine: kit de dosage.
US5453433A (en) 1994-05-13 1995-09-26 Sterling Winthrop Inc. Thiadiazoles and antipicornaviral compositions
IT1272252B (it) 1994-05-16 1997-06-16 Applied Research Systems Formulazioni liquide di interferone beta
DE69534318T2 (de) 1994-05-18 2006-04-20 Nektar Therapeutics, San Carlos Methoden und zusammensetzungen für die trockenpuderarznei aus interferonen
NZ293163A (en) 1994-09-21 1998-09-24 Inhale Therapeutic Syst Inhalation medicament disperser, aerosol from high pressure gas entrainment of fluidised powder drawn from receptacle feed tube
TW426523B (en) 1995-04-06 2001-03-21 Hoffmann La Roche Interferon solution
US5780014A (en) 1995-04-14 1998-07-14 Inhale Therapeutic Systems Method and apparatus for pulmonary administration of dry powder alpha 1-antitrypsin
US5814485A (en) 1995-06-06 1998-09-29 Chiron Corporation Production of interferon-β (IFN-β) in E. coli
EA002754B1 (ru) * 1996-12-24 2002-08-29 Байоджен, Инк. Устойчивые жидкие составы интерферона
JP2001507701A (ja) 1996-12-31 2001-06-12 インヘイル・セラピューティック・システムズ・インコーポレーテッド 親水性賦形剤を有する疎水性薬剤の溶液を噴霧乾燥するための方法及びその方法によって作製された組成物
EP1224940B2 (de) 1997-09-23 2010-08-11 Rentschler Biotechnologie GmbH Flüssige Interferon-Beta Formulierungen
WO1999051272A1 (en) 1998-04-03 1999-10-14 Chiron Corporation Injectable igf-formulations containing succinate as buffering agent
LT2599503T (lt) * 1998-10-16 2017-06-26 Biogen Ma Inc. Interferono beta-1a polimero konjugatai ir jų panaudojimas
PL211886B1 (pl) * 1999-10-04 2012-07-31 Novartis Vaccines & Diagnostic Stabilizowana ciekła kompozycja farmaceutyczna, sposób zwiększania trwałości polipeptydu, sposób zwiększania trwałości podczas przechowywania kompozycji, sucha postać kompozycji oraz preparat zawierający kompozycję
US6465425B1 (en) 2000-02-10 2002-10-15 Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Microencapsulation and sustained release of biologically active acid-stable or free sulfhydryl-containing proteins
US7544354B2 (en) 2000-10-27 2009-06-09 Novartis Vaccines And Diagnostics Methods of protein purification and recovery
US6887462B2 (en) 2001-04-09 2005-05-03 Chiron Corporation HSA-free formulations of interferon-beta
AR034749A1 (es) 2001-07-09 2004-03-17 Schering Ag Formulaciones de interferon beta humano

Also Published As

Publication number Publication date
JP2013064020A (ja) 2013-04-11
WO2002080976A3 (en) 2003-01-09
ES2524322T3 (es) 2014-12-05
NO20034492D0 (no) 2003-10-07
CA2442854C (en) 2012-03-13
BG108322A (bg) 2005-08-31
EP2283897A2 (en) 2011-02-16
CA2762966A1 (en) 2002-10-17
WO2002080976A2 (en) 2002-10-17
EP2283897B1 (en) 2014-02-26
US6887462B2 (en) 2005-05-03
KR20030097825A (ko) 2003-12-31
JP5580521B2 (ja) 2014-08-27
ATE545430T1 (de) 2012-03-15
US20020172661A1 (en) 2002-11-21
LU92060I2 (fr) 2012-10-15
JP2008285499A (ja) 2008-11-27
IL157963A (en) 2013-08-29
US7892531B2 (en) 2011-02-22
BG66300B1 (bg) 2013-03-29
CN1313148C (zh) 2007-05-02
EP1381432A2 (en) 2004-01-21
HU228581B1 (en) 2013-04-29
NO330259B1 (no) 2011-03-14
CA2442854A1 (en) 2002-10-17
EP2283897A3 (en) 2011-06-15
EP2283896B1 (en) 2014-09-03
US7371373B2 (en) 2008-05-13
EP2283896A3 (en) 2011-05-25
PL366790A1 (en) 2005-02-07
CZ305994B6 (cs) 2016-06-08
JP2015044882A (ja) 2015-03-12
CY1113609T1 (el) 2015-08-05
US20040191219A1 (en) 2004-09-30
EP1381432B1 (en) 2012-02-15
ES2367761T1 (es) 2011-11-08
JP2004529917A (ja) 2004-09-30
US20110104116A1 (en) 2011-05-05
PL213297B1 (pl) 2013-02-28
ES2453623T3 (es) 2014-04-08
JP5701323B2 (ja) 2015-04-15
US20080193415A1 (en) 2008-08-14
HUP0303732A2 (en) 2007-09-28
CZ20032735A3 (cs) 2005-03-16
US20050142110A1 (en) 2005-06-30
NO20034492L (no) 2003-11-25
JP2010018633A (ja) 2010-01-28
CN1511053A (zh) 2004-07-07
US7399463B2 (en) 2008-07-15
ES2367761T3 (es) 2012-05-04
KR100900753B1 (ko) 2009-06-02
LU92060I9 (pt) 2019-01-02
IL157963A0 (en) 2004-03-28
EP1381432B9 (en) 2012-04-25
DK1381432T3 (da) 2012-03-12
EP2283896A2 (en) 2011-02-16
US8333958B2 (en) 2012-12-18
CY2012023I1 (el) 2015-08-05
CY2012023I2 (el) 2015-08-05
AU2002241769B2 (en) 2006-06-01
PT1381432E (pt) 2012-04-03

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