CN1557479A - 干扰素脂质体乳膏 - Google Patents

Abstract

本发明为干扰素脂质体乳膏产品，采用干扰素脂质体与乳化剂等赋形剂组成的基质制备成乳膏剂型，在基质中采用聚山梨酯80作为乳化剂，组分包括干扰素脂质体和基质。干扰素脂质体组份是：干扰素，大豆磷脂，胆固醇，VitE，硬脂酰胺。基质的组份是：白凡士林，甘油，单硬脂酸甘油酯，右旋糖酐40，对羟基苯甲酸乙酯，聚山梨酯80，乳酸乙酯。由于聚山梨酯80对干扰素脂质体不但没有破坏作用，反而对脂质体有稳定作用，可减少脂质体中干扰素的泄露，提高干扰素脂质体在乳膏中的稳定性，从而提高干扰素的药效。

Description

干扰素脂质体乳膏

所属领域：

本发明属于干扰素制品领域。

现有技术：

干扰素作为抗病毒、抗增殖和免疫调节药物已广泛使用，采用的剂型主要是针剂和外用剂型。外用型的干扰素可以直接作用于病灶部位，使用方便。但在应用过程中发现需要解决干扰素的活性保持和透皮吸收的问题。为了保持干扰素生物学活性的稳定，并改善干扰素的透皮吸收，达到治疗目的，较好的方式就是采用脂质体将干扰素包封，再制备相应的外用剂型。但现有技术中，采用脂质体包封的干扰素存在着许多的不足。如国外文献仅报道有脂质体作为外用药物载体包封干扰素，但干扰素脂质体用药后与皮肤或粘膜不能牢固结合而发挥疗效，大大降低了干扰素的治疗指数。又如中国专利号97109122.6号发明专利提供了一种含有碘伏和脂质体的预防性药物，由于采用了碘伏，对干扰素的本身具有破坏性，同时因其具有高氧化性对脂质体也将有破坏作用，从而降低干扰素的生物学活性，影响干扰素的疗效。此外，中国专利号97109123.4号发明专利，提供了一种干扰素脂质体凝胶剂，其采用凝胶与干扰素脂质体组合，使干扰素在脱水后成为粉状，使用前需先在水中全部溶解后成为凝胶水溶液，再作为外涂药物使用。同时，该种干扰素脂质体凝胶在制备时需将赋形剂与干扰素脂质体在0-4℃相混合，干燥后成为微粒粉状的干扰素脂质体凝胶剂。该发明的凝胶剂具有以下的不足：1、制备工艺复杂，需要经过冻干过程，此过程将降低干扰素的活性；2、要将凝胶剂用水溶解后才能作为外涂药物使用，使用不方便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干扰素脂质体乳膏产品，它具有包封率高，且制剂工艺稳定，粒子均一性好，药效稳定，易于均匀的涂敷于皮肤粘膜，粘附性好，且无刺激性，容易被皮肤吸收，使用方便的优点。

本发明采用干扰素脂质体与乳化剂等赋形剂组成的基质制备成乳膏剂型，提高了干扰素脂质体稳定性以及干扰素活性和药效，同时具有制备简单，使用方便的优点。

本发明的干扰素脂质体乳膏，包含有干扰素脂质体和基质，在基质中采用聚山梨酯80作为乳化剂。由于聚山梨酯80对干扰素脂质体不但没有破坏作用，反而对脂质体有稳定作用，即可减少脂质体中干扰素的泄露，提高干扰素脂质体的稳定性，从而提高干扰素的药效。

如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素脂质体组份是：干扰素，大豆磷脂，胆固醇，VitE，硬脂酰胺。

如上所述的每克干扰素脂质体乳膏中干扰素的含量为：0.1×10⁴％～5×10⁸IU。脂质体的组分为65％～90％大豆磷脂，5％～30％胆固醇，0.2％～2％VitE，0.005％～0.05％硬脂酰胺。干扰素∶脂质体液为10⁶～10⁸IU∶1ml(脂质体的包封率不小于80％)。

如上所述的干扰素脂质体乳膏的基质的组份是：白凡士林，甘油，单硬脂酸甘油酯，右旋糖酐40，对羟基苯甲酸乙酯，聚山梨酯80，乳酸乙酯。

如上所述的干扰素脂质体乳膏的基质的组份是：5％～30％白凡士林，10％～40％甘油，5％～35％单硬脂酸甘油酯，0.2％～20％右旋糖酐40，0.01％～0.15％对羟基苯甲酸乙酯，0.5％～8％聚山梨酯80，0.25％～2.5％乳酸乙酯。

干扰素脂质体乳膏的组份含量为：干扰素脂质体(生物活性)∶基质＝(5×10³IU～5×10⁶IU)∶1g。作为优选项，干扰素脂质体∶乳膏基质＝5×10⁴IU∶1g的比例。

如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素可以是天然的，基因重组的人干扰素，可以是αβγ三种的任一型别。

如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素优选为α2b亚型。由于干扰素α2b具有比活性高，抗病毒作用强，中和抗体产生率低的优点，再经脂质体包封，使得干扰素不仅活性稳定，而且透皮吸收好，治疗靶向性强，同时作用持久、对干扰素有控释与缓释作用。使用重组人扰素α2b脂质体乳膏可治疗由病毒感染引起的皮肤病，如带状疱疹、疱疹性口炎、疣、尖锐湿疣、染性软疣、外生殖器疱疹、扁平疣、寻常疣、生殖器溃疡、口疮及瘙痒等。同时，本发明的乳膏具有易于均匀的涂敷于皮肤粘膜，粘着性好，且无刺激性，更易被皮肤吸收，使用方便的优点。

本发明脂质体包封的干扰素乳膏产品，它具有包封率高，且制剂工艺稳定，制品均一性好，药效稳定，使用方便的优点。采用干扰素脂质体与乳化剂等赋形剂组成的基质制备成乳膏剂型，能够提高脂质体包封性，提高干扰素活性和药效，同时具有制备简单，使用方便的优点。在基质中采用聚山梨酯80作为乳化剂。由于聚山梨酯80对干扰素脂质体不但没有破坏作用，反而对脂质体有稳定作用，可减少脂质体中干扰素的泄露，提高干扰素脂质体的稳定性，提高干扰素的药效。

具体实施例：

一、组方：

干扰素脂质体配方(每克)：

5×10⁶IU干扰素；脂质体为大豆磷脂∶胆固醇∶硬脂酰胺∶VitE＝80∶18∶1∶1。基质配方：甘油∶单硬脂酸甘油酯∶白凡士林∶聚山梨酯80∶右旋糖酐40∶乳酸乙酯∶对羟基苯甲酸乙酯＝20∶20∶5∶3∶1∶1∶0.1。干扰素脂质体乳膏所含干扰素含量∶基质为5×10⁴IU∶1g

二、制备方法

(一)、干扰素脂质体的制备

1、干扰素原液的稀释，取干扰素原液，用含0.8％人血白蛋白的PBS稀释至250ml，使干扰素含量为0.8×10⁷IU/ml，除菌过滤后备用。

2、旋转蒸发，用CH₂CL₂分别将称量好的注射用大豆磷脂9.2克，脂固醇1.03克，溶解后，加入球型瓶中，再加入含0.7％维生素E的CH₂CL₂4.5ml和含0.008％硬脂酰胺的CH₂CL₂8ml，40℃100rpm旋转蒸发30小时，然后收集悬液290ml。

3、超声处理，将收集的悬液290ml用浴式超声仪，超声分散。

4、凝胶过滤，将经过超声分散的干扰素脂质体液280ml通过G25柱过滤，洗脱液洗脱收集800ml干扰素脂质体液，

5、将过柱后的干扰素脂质体液体800ml经0.22μ的滤膜除菌过滤，过滤收集780ml。

(二)、基质的配制

1、油相  单硬脂甘油酯4200克

         白凡士林1050克

         聚山梨脂80  630克    混匀

2、水相  甘油4200克

         右旋糖酐40  210克

         对羟基苯甲酸乙脂21克

         乳酸乙脂210克

         蒸馏水8400克            混匀

3、将油相、水相分别融化，经过滤、灭菌后，将油相、水相混合制成基质。

(三)、乳膏制备

将干扰素脂质体加入到18921克的基质中，使干扰素的最终生物活性为5×10⁴IU/克，并搅拌均匀后将其按15克/支进行分装。

三、药理及毒理性实验

(一)药理学研究实验：

重组人干扰素α2b脂质体乳膏0.6×10⁴、1.0×10⁴、10.0×10⁴IU/只，每日分2次涂抹患处，连续7日，对豚鼠实验性单疱病毒性疱疹有明显抑制作用，且其强度随剂量增大而增强。

另实验证明，该乳膏0.9×10⁴、1.5×10⁴、15.0×10⁴IU/只涂抹小鼠破损皮肤对其自主活动无明显影响；麻醉猫破损皮肤涂抹该乳膏0.3×10⁵、0.5×10⁵、5.0×10⁵IU/只，对其血压、心率、呼吸频率、呼吸深度及心电图无明显影响。

(二)、毒理学研究实验：

1、大鼠急性毒性试验：重组人干扰素α2b脂质体乳膏最大给药量2.78×10⁷IU/kg，连续观察7天，7天内大鼠无一死亡，亦未出现异常反应，该剂量相当于临床剂量的1.1×10⁴倍，所以临床用药非常安全。

2、大鼠长期毒性试验：重组人干扰素α2b脂质体乳膏按2.5×10⁶IU/只剂量于大鼠破损皮肤处给药，每日一次，连续28天(相当于临床拟用周期的4倍)。结果与对照组比较，对所观察的各指标(活动、体重、饮食量、饮水量、血常规、血生化指标、脏器系数、组织病理学检查)均无明显异常。连续给药28天后再停药观察14天，上述各指标均无明显异常。

四、安全性检查实验：

(一)、皮肤过敏试验：重组人干扰素α2b脂质体乳膏按5.0×10⁴IU/g，0.2g/次剂量，反复接触皮肤，无见红肿、坏死等过敏反应。

(二)、皮肤刺激性试验：重组人干扰素α2b脂质体乳膏按5.0×10⁴IU/g，1.0g/次剂量，连续7日涂抹皮肤，对豚鼠完整皮肤和破损皮肤无刺激性反应。

五、对单疱病毒性疱疹实验

重组人干扰素α2b脂质体乳膏按0.6×10⁴、1.0×10⁴、10.0×10⁴IU/只，每日分2次涂抹已形成疱疹模型的豚鼠皮患处，连续7日。给药后1-2天，病情无明显差异。1.0×10⁴IU/只组和10.0×10⁴IU/只组给药后第3天开始，0.6×10⁴IU/只组从第4天开始，病情恢复程度明显好于模型组。与阳性对照组阿昔洛韦软膏比较，抗单纯疱疹病毒作用更强。

六、聚山梨酯80对干扰素脂质体稳定性试验：

一、试验材料：

聚山梨酯80：药用级，广东省肇庆市超能实业有限公司

干扰素脂质体原液：自制，干扰素活性为6.2×10⁶IU/ml

PBS：磷酸盐缓冲液，浓度为0.1M，pH为7.2

脂质体裂解剂：0.04％Triton X-100的PBS

722型光栅分光光度计：上海第三分析仪器厂

倒置显微镜：型号：CK2，日本OLYMPUS公司

二、试验方法：

1.用PBS将脂质体干扰素60倍稀释，使其活性为1.0×10⁵IU/ml

2.用PBS将聚山梨酯80稀释成浓度为1％、2％、5％、10％溶液

3.取6只试管，分别加入稀释后的脂质体各2ml，分别标1~6号备用

4.1～4号试管中分别加入稀释好的不同的聚山梨酯80溶液各2ml，使聚山梨酯80的终浓度分别为0.5％、1％、2.5％、5％

5.5号、6号加入PBS和裂解液各2ml阴性和阳性对照，6号管中Triton X100的终浓度为0.02％

6.各样品分别在40℃水浴中作用5分钟，用722型光栅分光光度计测定OD值，测定波长为600nm

7.分别取部分40℃水浴过的样品进行活性测定

8.干扰素的生物学活性采用微量细胞病变抑制法

三、试验结果：

样品编号  聚山梨酯80终浓度(％)   OD值     生物学活性(IU/ml)

   1               0.5           0.210    1.98×10⁴

   2               1             0.208    1.18×10⁴

   3               2.5           0.203    0.65×10⁴

   4               5             0.212    0.69×10⁴

   5            阴性对照         0.211    1.76×10⁴

   6            阳性对照         0.012    4.05×10⁴

五、结论：

从测得的OD值数据可以看出，加入不同浓度聚山梨酯80的脂质体溶液测定的OD值与阴性对照的OD值基本一致，说明聚山梨酯80没有使脂质体裂解。而阳性对照测定的OD值明显很低，说明终浓度为0.02％TritonX-100的PBS溶液可以使低浓度的脂质体裂解。

从活性的测定结果来看，随着聚山梨酯80浓度的提高，脂质体溶液中游离的干扰素活性降低，但含有2.5％～5.0％的聚山梨酯80的脂质体溶液，其游离干扰素活性的变化不明显，说明聚山梨酯80对脂质体的保护浓度在2.5％左右。

总之，不大于5％的聚山梨酯80对脂质体不但没有破坏作用，反而对脂质体有稳定性作用，即减少了脂质体中干扰素的泄露。

Claims (11)

1.干扰素脂质体乳膏，其特征在于干扰素脂质体与乳化剂等乳膏赋形剂组成。

2.如权利要求1所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于包含有干扰素脂质体和基质，在基质中采用聚山梨酯80作为乳化剂。

3.如权利要求2所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏中的干扰素脂质体组份是：干扰素，大豆磷脂，胆固醇，VitE，硬脂酰胺。

4.如权利要求3所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于所述的干扰素脂质体乳膏含有干扰素为0.1×10⁴-5×10⁸IU/克；其中脂质体的质量组成为65％～90％大豆磷脂，5％～30％胆固醇，0.2％～2％VitE，0.005％～0.05％硬脂酰胺；干扰素∶脂质体为10⁸-10¹²IU∶100g。

5.如权利要求2所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏的基质的组份是：白凡士林，甘油，单硬脂酸甘油酯，右旋糖酐40，对羟基苯甲酸乙酯，聚山梨酯80，乳酸乙酯。

6.如权利要求5所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏的基质的组份是：5％～30％凡士林，10％～40％甘油，5％～35％单硬脂酸甘油酯，0.2％～20％右旋糖酐40，0.01％～0.15％对羟基苯甲酸乙酯，0.5％～8％聚山梨酯80，0.25％～2.5％乳酸乙酯。

7.如权利要求1至6任一权利要求所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于干扰素脂质体乳膏的组份含量为：干扰素脂质体(生物活性)∶基质＝(5×10³IU～5×10⁶IU)∶1g。作为优选项，干扰素脂质体∶乳膏基质＝5×10⁴IU∶1g的比例。

8.如权利要求7所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素可以是天然的，基因重组的人干扰素，可以是α、β、γ三种的任一型别。

9.如权利要求1至6任一权利要求所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素可以是天然的，基因重组的人干扰素，可以是α、β、γ三种的任一型别。

10.如权利要求8所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素优选为α2b亚型。

11.如权利要求9所述的干扰素脂质体乳膏，其特征在于如上所述的干扰素脂质体乳膏的干扰素优选为α2b亚型。