PT2083856E - Péptidos para a dessensibilização contra alergénios - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO PÉPTIDOS PARA A DESSENSIBILIZAÇÃO CONTRA ALERGÉNIOS Campo da Invenção [0001] A presente invenção diz respeito a composições que compreendem péptidos para prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó doméstico e, em particular, a combinações ideais de péptidos para prevenir ou tratar a dita alergia.

Antecedentes da Invenção

[0002] O reconhecimento de antigénio pelos linfócitos T requer que as células apresentadoras de antigénio (APCs) apresentem fragmentos de antigénio (péptidos) nas suas superfícies celulares em associação com moléculas do complexo major de histocompatibilidade (MHC). Os linfócitos T utilizam os seus receptores específicos de antigénios (TCRs) para reconhecer os fragmentos de antigénio apresentados pelas APC. Este reconhecimento actua como um estímulo para o sistema imunitário gerar uma variedade de respostas para erradicar o antigénio que foi reconhecido.

[0003] O reconhecimento de antigénios externos pelo sistema imunitário de um organismo, como um ser humano, pode nalguns casos originar doenças, conhecidas como doenças atópicas. Exemplos disto são as doenças alérgicas incluindo asma, dermatite atópica e rinite alérgica. Neste grupo de doenças, os linfócitos B geram anticorpos da classe IgE (em humanos) que se ligam a antigénios derivados externamente, que são designados alergénios neste contexto uma vez que estas moléculas desencadeiam uma resposta alérgica. A produção de IgE específica a um alergénio depende dos linfócitos T que também são 1 activados pelo (são específicos ao) alergénio. Os anticorpos IgE específicos ao alergénio ligam-se à superfície das células, como basófilos e mastócitos, em virtude da expressão por estas células de receptores de superfície para IgE.

[0004] A ligação cruzada de moléculas de IgE ligadas à superfície por um alergénio resulta na desgranulação destas células efectoras causando a libertação de mediadores inflamatórios como histamina, 5-hidroxitriptamina e mediadores lipídicos, tais como sulfidoleucotrienos. Para além dos eventos dependentes da IgE, algumas doenças alérgicas como a asma são caracterizadas por eventos independentes da IgE.

[0005] As doenças alérgicas mediadas pela IgE são actualmente tratadas com agentes que fornecem alívio ou prevenção dos sintomas. Exemplos destes agentes são os anti-histamínicos, agonistas β2 e glucocorticosteróides. Além destes, algumas doenças mediadas pela IgE são tratadas com procedimentos de dessensibilização que envolvem a injecção periódica de componentes ou extractos alergénicos. Os tratamentos de dessensibilização podem induzir uma resposta IgG que compete com IgE por alergénio, ou podem induzir linfócitos T supressores específicos que bloqueiam a síntese de IgE dirigida contra o alergénio. Esta forma de tratamento nem sempre é eficaz e apresenta o risco de provocar efeitos secundários graves, particularmente choque anafiláctico. Este pode ser fatal a menos que seja detectado imediatamente e tratado com adrenalina. Um tratamento terapêutico que reduzisse ou eliminasse a resposta alérgica-imunitária indesejada a um alergénio específico, sem alterar a reactividade imunitária a outros antigénios 2 estranhos, nem desencadear uma resposta alérgica, seria de grande benefício para os indivíduos alérgicos.

[0006] Os ácaros do pó doméstico são universalmente reconhecidos como uma das principais causas de doenças alérgicas nos humanos e nos animais, incluindo asma, rinite alérgica e dermatite alérgica. Duas espécies próximas de ácaros são responsáveis pela maioria dos casos de alergia ao pó doméstico a nível mundial. São a Dermatophagoides pteronyssinus (predominante na Europa) e a Dermatophagoides farinae (predominante na América). Os alergénios dos ácaros do pó doméstico derivam, principalmente, de proteínas do revestimento do interior do intestino do ácaro, que está presente nas fezes, e às quais nos referimos como proteína Der p (para D. pteronyssinus) e proteína Der f (para D. farinae) . Um ácaro médio produzirá cerca de 20 grânulos de fezes por dia, na sua vida: duas vezes o peso do seu próprio corpo. Um grama de pó contém, geralmente, até 500 ácaros, enquanto um colchão pode ter mais de dois milhões. A quantidade de ácaros e seus resíduos presentes aumenta com a idade. Um décimo do peso de uma almofada com seis anos pode consistir em ácaros ou resíduos de ácaros. Num tapete, haverá, normalmente, entre 1.000 a 10.000 ácaros por metro quadrado.

[0007] As doenças alérgicas, particularmente a asma, são um enorme e crescente problema nos países industrializados. Estima-se que 5-10% da população dos principais países industrializados sofre de asma. Desses, aproximadamente um quinto terá asma grave, precisando de hospitalização frequentemente. O custo da asma nos Estados Unidos foi calculado em $12,6 biliões de dólares (£7,9 libras) por ano. Os valores que para a Europa são 3 ainda mais elevados. Um estudo canadiano estimou que os custos da asma rondam em média £21 libras, por ano, para cada membro da população dos principais países industrializados. Só no Reino Unido, 2000 pessoas morrerão de asma, todos os anos.

[0008] A asma é uma doença crónica causada por reacções alérgicas e irritação no sistema respiratório. Entre 50% e 90% dos asmáticos que reagem à matéria veiculada pelo ar, são sensíveis aos alergénios dos ácaros do pó e num estudo britânico 10% da população geral reagiu a estes alergénios. Quase duzentos milhões de americanos vivem em áreas fortemente afectadas por infestações de ácaros do pó doméstico. A sensibilização a este material ocorre na infância, geralmente entre os três e os seis meses de idade, mas a asma dura toda a vida.

[0009] Um tratamento terapêutico ou preventivo seria , por conseguinte, de grande benefício para os humanos que sofrem ou estão em risco de sofrer de alergia aos ácaros do pó doméstico.

Resumo da Invenção [0010] Os presentes inventores descobriram que determinadas combinações de fragmentos peptídicos derivados do alergénio dos ácaros do pó do Grupo 1 (Der p 1, Der f 1), do alergénio dos ácaros do pó do Grupo 2 (Der p 2, Der f 2) e do alergénio dos ácaros do pó do Grupo 3 (Der p 7, Der f 7) são particularmente úteis na dessensibilização de indivíduos a esses alergénios. As combinações de polipéptidos da invenção foram seleccionadas pela sua capacidade de induzirem uma resposta das citocinas numa elevada proporção de sujeitos 4 de um painel de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico.

[0011] Os polipéptidos da invenção foram, inicialmente, seleccionados como epítopos dos linfócitos T através de avaliação in silíco e in vitro das características de ligação do péptido ao MHC. Ver, por exemplo, a Tabela 3 que demonstra a capacidade de uma variedade de péptidos derivados dos alergénios acima se ligar a múltiplos tipos de DR em ensaios de ligação do MHC de classe II. Epítopos adicionais foram identificados por homologia. Estes polipéptidos candidatos foram, então, examinados para utilização potencial no desenvolvimento de tolerância (tolerização).

[0012] Uma dificuldade associada às abordagens à dessensibilização através da imunização com péptidos reside em como seleccionar um tamanho e região adequados do alergénio como base para o péptido ser usado na imunização. O tamanho do péptido seleccionado é crucial. Se o péptido for pequeno demais, a vacina não será eficaz na indução de uma resposta imunológica. Se os péptidos forem grandes demais ou se o antigénio inteiro for introduzido num indivíduo, há o risco de induzir reacções adversas, como anafilaxia, que pode ser fatal.

[0013] Os polipéptidos da invenção foram seleccionados para conservar a especificidade dos linfócitos T ao mesmo tempo que são suficientemente pequenos para não possuir uma estrutura terciária significativa que lhes permitisse manter a conformação de um epítopo de ligação a igE da molécula inteira. Assim, os polipéptidos da invenção não induzem a ligação cruzada significativa das moléculas IgE adjacentes específicas em células como mastócitos e 5 basófilos e consequentemente nao causam uma libertação significativa de histamina.

[0014] Uma vantagem da invenção é a capacidade das combinações de péptidos visarem largamente as moléculas do complexo major de histocompatibilidade (MHC). Os receptores de linfócitos T (TCRs) são altamente variáveis na sua especificidade. A variabilidade é gerada, como no caso de moléculas de anticorpos, através de eventos de recombinação dos genes dentro da célula. Os TCRs reconhecem o antigénio sob a forma de péptidos curtos ligados a moléculas codificadas pelos genes do complexo major de histocompatibilidade (MHC). Estes produtos de genes são as mesmas moléculas que originam os "tipos de tecidos" usados nos transplantes e também são designados de antigénios leucocitários humanos (HLAs), expressões que podem ser usadas indistintamente. As moléculas individuais do MHC possuem fendas de ligação peptidicas que, devido ao seu formato e carga, só são capazes de se ligar a um grupo limitado de péptidos. Os péptidos ligados por uma molécula do MHC podem não ser necessariamente ligados por outras moléculas do MHC.

[0015] Quando uma molécula de proteína como um antigénio ou um alergénio é capturada por células apresentadoras de antigénio tais como linfócitos B, células dendriticas, monocitos e macrófagos, a molécula é degradada enzimaticamente dentro da célula. O processo de degradação dá origem a fragmentos peptidicos da molécula que, se tiverem o tamanho, carga e formato adequados, podem então ligar-se dentro da fenda de ligação peptídica de determinadas moléculas do MHC e ser subsequentemente exibidas na superfície de células apresentadoras de antigénio. Se os complexos péptido/MHC estiverem 6 presentes na superfície da célula apresentadora de antigénio em quantidade suficiente podem então activar linfócitos T que comportam os receptores de linfócitos T adequados específicos do péptido/MHC.

[0016] Devido à natureza polimórfica do MHC, os indivíduos numa população não consanguínea como a humana irão expressar combinações diferentes de moléculas MHC nas respectivas superfícies celulares. Uma vez que diferentes moléculas do MHC se podem ligar a diferentes péptidos a partir da mesma molécula com base no tamanho, carga e formato do péptido, indivíduos diferentes irão apresentar um repertório diferente de péptidos ligados às suas moléculas do MHC. A identificação de epítopos de péptidos universais de ligação ao MHC numa população não consanguínea como a humana é mais difícil do que no caso de animais de populações consanguíneas (como determinadas estirpes de ratinhos de laboratório). Devido à expressão diferencial do MHC entre indivíduos e às diferenças inerentes na ligação peptídica e na respectiva apresentação, é pouco provável que seja possível identificar um péptido único que seja útil na terapêutica de dessensibilização em humanos.

[0017] As combinações de péptidos da invenção, contudo, oferecem uma ampla cobertura de eficácia na população humana visando várias moléculas de MHC diferentes. Uma vacina elaborada com os péptidos da invenção teria, portanto, uma utilidade abrangente.

[0018] O trabalho dos inventores produziu combinações de péptidos com as seguintes características: 7 • A combinação induz uma resposta das citocinas numa elevada proporção de sujeitos, de um painel de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico. • Os péptidos das combinações são solúveis.

[0019] Consequentemente, a presente invenção fornece uma composição para ser usada na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó doméstico, pela criação de tolerância, compreendendo:

(i) um polipétido de HDM203B DLRQMRTVTPIRMQGGSGS, OU (ii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste em: o a sequência de (i); ou o uma sequência que tem, pelo menos, 70% de homologia à sequência de (i), sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo à sequência de (i), ou (iii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste numa sequência que representa: o um fragmento da sequência de (i); ou o um homólogo de um fragmento da sequência de (i) , sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo à sequência de (i) e que tem, pelo menos, 9 aminoácidos de comprimento, e em que o dito homólogo tem, pelo menos, 70% de homologia a qualquer um dos 9 aminoácidos contíguos na sequência de (i).

[0020] A invenção fornece, ainda, um polipéptido de 8 HDM203B DLRQMRTVTPIRMQGGSGS, ou uma variante deste, conforme definido em (ii) ou (iii), acima.

[0021] Aqui está também descrita uma composição para ser usada na prevenção ou tratamento de alergias aos ácaros do pó doméstico por criação de tolerância, compreendendo, pelo menos, um polipéptido seleccionado de HDM203B (SEQ ID 83), HDM201 (SEQ ID 80), HDM205 (SEQ ID 85), HDM203A (SEQ ID 82), HDM202 (SEQ ID 81), SEQ N.°s ID 1 a 79, 84, ou 86 a 104 (isto é qualquer uma das SEQ N.°s ID la 104) ou uma variante destes. Habitualmente, a composição compreende pelo menos quatro polipéptidos, em que os polipéptidos são independentemente seleccionados de qualquer um dos seguintes: (i) um polipéptido com uma SEQ N.° ID 1 a 104; ou (ii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste em: o qualquer uma das sequência de (i) ; ou o uma sequência que tem, pelo menos, 65% de homologia a qualquer uma das sequências de (i) , sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo a qualquer uma das sequências de (i), ou (iii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste numa sequência que representa: o um fragmento de qualquer uma das sequências de (i); ou o um homólogo de um fragmento de qualquer uma das sequência de (i), 9 sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo a qualquer uma das sequências de (i) e que tem, pelo menos, 9 aminoácidos de comprimento, e em que o dito homólogo tem, pelo menos, 65% de homologia a qualquer um dos 9 aminoácidos contíguos em qualquer uma das sequências de (i).

Descrição das figuras [0022]

Figura 1 - Sequência de comparação do Der p 1 versus Der f 1 (Fig. IA), Der p 2 versus Der f 2 (Fig. 1B) e Der p 7 versus Der f 7 (Fig. 1C) . As regiões que contêm epítopos estão destacadas a cinzento. Locais de péptidos específicos estão indicados pelas linhas acima ou abaixo da sequência. A sequência de Der p 1 está publicamente disponível com o n.° de acesso P08176 no NCBI. Quanto às sequências correspondentes para Der p 2 e Der p 7 (Tabela 6) estão disponíveis com o n.°s de acesso P49278 e P49273, respectivamente, no NCBI. A sequência para Der f 1 é retirada do n.° de acesso P16311 do NCBI, Der f 2 é do n.° de acesso Q00855 do NCBI e o Der f 7 é do n.° de acesso Q26456 do NCBI. A Figura 2 mostra a percentagem de indivíduos sensíveis aos diferentes péptidos da invenção, medida pela produção de IL13 ou IF-gama.

As Figuras 3 e 4 mostram a percentagem de indivíduos sensíveis às diferentes combinações de péptidos da invenção, medida pela produção de IL13 ou IF-gama. 10

Descrição das sequências aqui referidas [0023] As SEQ. N.° ID de 1 a 104 fornecem as sequências de polipéptidos como estabelecido nas Tabelas 3 a 8. As SEQ. N.° ID 105 em diante, fornecem sequências adicionais.

Descrição detalhada da invenção [0024] A invenção diz respeito a péptidos e combinações de péptidos que podem ser usadas na criação de tolerância. Os péptidos aqui descritos podem compreender, consistem em, ou consistem essencialmente nas sequências apresentadas em qualquer uma de entre: HDM203B (SEQ. ID 83), HDM201 (SEQ. ID 80), HDM205 (SEQ. ID 85), HDM203A (SEQ. ID 82), HDM202 (SEQ. ID 81), SEQ N.°S ID la 79, 84, ou 86 a 104 (isto é qualquer uma das SEQ N.°s ID 1 a 104) . Variantes destes péptidos específicos podem também ser usadas. As variantes podem compreender, consistir em, ou consistir essencialmente em sequências que são fragmentos de qualquer uma das SEQ. N.°s ID de 1 a 104 ou homólogos de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104.

[0025] Numa modalidade, a invenção refere-se a uma composição para o uso na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó doméstico. Tipicamente, a composição compreende ou consiste em, pelo menos quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze ou doze polipéptidos, até a um máximo de treze. Por outras palavras, a composição compreende entre quarto a treze polipéptidos. Os polipéptidos aqui descritos são seleccionados independentemente, de qualquer um dos seguintes: (i) um polipéptido com uma SEQ. N.° ID 1 a 104; ou 11 (ii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste em: o qualquer uma das sequência de (i); ou o uma sequência que tem, pelo menos, 65% de homologia a qualquer uma das sequências de (i) , sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo a qualquer uma das sequências de (i), ou (iii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste numa sequência que representa: o um fragmento de qualquer uma das sequências de (i); ou o um homólogo de um fragmento de qualquer uma das sequência de (i), sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo a qualquer uma das sequências de (i) e que tem, pelo menos, 9 aminoácidos de comprimento, e em que o dito homólogo tem, pelo menos, 65% de homologia a qualquer um dos 9 aminoácidos contíguos em qualquer uma das sequências de (i).

[0026] A invenção também fornece produtos e formulações que compreendem os polipéptidos da invenção e composições, produtos e vectores que compreendem polinucleótidos capazes de expressar os polipéptidos da invenção para uso na prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó doméstico por criação de tolerância. Habitualmente, esta criação de tolerância será a um epítopo (por exemplo, a um epítopo do MHC de classe II) presente em qualquer uma das SEQ. N.°s ID de 1 a 104. 12

Fragmentos de péptidos dos alergénios dos ácaros do pó do Grupo 1, Grupo 2 e Grupo 7 [0027] Os principais alergénios dos ácaros do pó doméstico incluem o alergénio dos ácaros do pó do Grupo 1 (Der p 1, Der f 1), do Grupo 2 (Der p 2, Der f 2) e do Grupo 3 (Der p 7, Der f 7), em que Der p "X" e Der f "X" indicam que a proteina "X" é um homólogo que deriva do D. pteronyssinus e do D. farinae, respectivamente. Como é mostrado na Figura 1, cada uma das proteínas do Der p é altamente homóloga à sua proteína Der f correspondente.

[0028] As regiões que compreendem os epítopos do linfócito T de ligação ao MHC de classe II estão especialmente bem conservadas entre os homólogos Der p e Der f de uma dada proteína. Os péptidos derivados das regiões relevantes, por exemplo, da proteína 1 tanto de D. pteronyssinus como de D. farinae são, assim, adequados para o uso na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó, pela criação de tolerância ao alergénio dos ácaros do pó do Grupo 1. Similarmente, os péptidos derivados das regiões relevantes da proteína 2, de ambas as espécies, são adequados para o uso na prevenção e tratamento da alergia aos ácaros do pó, por criação de tolerância ao alergénio dos ácaros do pó do Grupo 2, e os péptidos derivados de regiões relevantes da proteína 7, de ambas as espécies, são adequados para o uso na prevenção e tratamento da alergia aos ácaros do pó doméstico, por criação de tolerância ao alergénio dos ácaros do pó do Grupo 7.

[0029] O alergénio do Grupo 1 é uma cisteína protease homóloga à papaína. Esta enzima revelou clivar a 13 ocludina, um componente proteico das junções intercelulares estreitas. Isto revela uma possível razão para a alergenicidade de certas enzimas. Ao destruir a integridade das junções estreitas entre as células epiteliais, o Der p 1 e o Der f 1, podem obter um acesso anormal às células subepiteliais apresentadoras de antigénios, aos mastócitos residentes e aos eosinófilos.

[0030] A função do alergénio do Grupo 2 não é conhecida, embora o Der p 2 e o Der f 2 demonstrem uma homologia distante a uma família de proteínas de ligação de lípidos. Os níveis séricos de igE em resposta à estimulação com Der p 2 in vivo, mostraram representar cerca de um terço da resposta sérica total de IgE à estimulação com extractos de ácaros inteiros.

[0031] A função do alergénio do Grupo 7 também não é conhecida. Os níveis séricos de IgE em resposta à estimulação com Der p 7 in vivo, mostraram representar cerca de um quinto da resposta séria total de IgE à estimulação com extractos de ácaros inteiros.

[0032] Os péptidos aqui descritos são derivados dos alergénios dos ácaros do pó do Grupo 1, do Grupo 2 e do Grupo 3, como mostrado nas Tabelas 3 a 8. Os termos "péptido" e "polipéptido" são usados aqui indistintamente. As proteínas acima são também aqui referidas como "os alergénios".

[0033] As Tabelas 3 a 8 mostram as sequências de péptidos, indicando a proteína precursora da qual deriva cada um dos péptidos. As sequências nas Tabelas 4 a 6 estão agrupadas em pares. Em cada par, a sequência mais acima foi seleccionada como um epítopo do linfócito T, 14 através do uso dos ensaios de ligação do péptido ao MHC. A sequência mais abaixo foi seleccionada para uma pesquisa de homologia dentro da sequência da proteína alternativa, no referido Grupo do alergénio dos ácaros do pó. Por exemplo, o péptido HDM01, na Tabela 4, é derivado do Der p 1, a sequência homóloga abaixo do péptido deriva do Der f 1.

Combinações de Péptidos [0034] Normalmente, a composição compreende uma combinação de, pelo menos, quatro polipéptidos diferentes aqui descritos, até a um máximo de treze polipéptidos diferentes. Assim, a composição da invenção pode consistir em quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez, onze, doze ou treze péptidos. A composição da invenção pode, normalmente, compreender pelo menos um polipéptido ou variante deste (por exemplo uma variante funcional) seleccionado de um péptido que deriva de cada um dos Der p 1, Der p 2 e Der p 7 (ou os Der f equivalentes) . As combinações de polipéptidos na composição da invenção são seleccionadas para fornecer uma cobertura, o mais abrangente possível, da população humana, ou seja, a composição da invenção produzirá uma resposta imune numa elevada proporção de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó, preferencialmente mais de 30%, 40%, 45%, 50%, 60% ou 70% dos indivíduos alérgicos aos ácaros do pó, num painel ou população de tais indivíduos. O número de indivíduos numa população de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó pode ser um qualquer número adequado, normalmente, pelo menos, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ou 100 indivíduos.

Preferencialmente, a população tem frequências de alelos do MHC dentro do intervalo de frequências que é 15 representativo da população Caucasiana. Na Tabela 1 são mostradas frequências de alelos da população de referência para 11 famílias dos alelos DR1B comuns (dados retirados de HLA Facts Book, Parham and Barber).

[0035] As composições aqui descritas compreendem, normalmente, pelo menos, um polipéptido seleccionado de um polipéptido de HDM203B (SEQ. N.° ID 83), HDM202 (SEQ. N.° ID 81), HDM201 (SEQ. N.° ID 80), HDM205 (SEQ. N.° ID 85), HDM203A (SEQ. N.° ID 82), ou uma variante destes. Preferencialmente, a composição compreende, pelo menos, dois, três ou quarto polipéptidos independentemente seleccionados de um polipéptido de HDM203B (SEQ. N.° ID 83), HDM202 (SEQ. N.° ID 81), HDM201 (SEQ. N.° ID 80), HDM205 (SEQ. N.° ID 85), HDM203A (SEQ. N.° ID 82), ou uma variante destes, com a condição de que não mais de um polipéptido ou variante das SEQ. N.° ID 82 e 83 seja seleccionado.

[0036] Variantes particulares de HDM202 (SEQ. N.° ID 81) São HDM202D (SEQ. N.° ID 102; FKNRFLMSAEA) , HDM202E (SEQ. N.° ID 103; FKNRFLMSAE) e HDM202H (SEQ. N.° ID 104; EFKNRFLMSAE), que são truncamentos da sequência de HDM202. Está previsto que cada uma dessas sequências possa ser modificada para se adicionar pelo menos um (e até 6) residuo na extremidade N e/ou C-terminal seleccionada de R, K, Η, E e D.

[0037] Opcionalmente, a composição pode também compreender, pelo menos, um polipéptido adicional seleccionado de um péptido de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 5, 51, 52, 100, 101, 72, 73, 74, ou uma variante destas. Esse polipéptido adicional é preferencialmente um 16 polipéptido de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 51, 73, 100 e 101.

[0038] Opcionalmente, a composição pode compreender, adicionalmente, pelo menos um polipéptido adicional seleccionado de um polipéptido de qualquer uma das SEQ. N.0 ID 1, 9, 21, 24, 48, 54, 56, 57, 62, 63, 65, 76, 84 e 86, ou uma variante destas. Este polipéptido adicional é preferencialmente um polipéptido de qualquer uma das sequências de SEQ. N.° ID 63 e 65, ou uma variante destas.

[0039] Também aqui descrita, está uma composição que compreende entre quatro a treze polipéptidos, que consiste em: a) Pelo menos um dos polipéptidos das SEQ. N.° ID 83 e 82, ou variantes destas, preferencialmente a SEQ. N. 0 ID 83; b) Pelo menos dois polipéptidos das SEQ. N.° ID 80, 81 e 85, ou variantes destas; e opcionalmente c) Pelo menos um dos polipéptidos de qualquer uma das SEQ. N.° ID 5, 51, 52, 100, 101, 72, 73, e 74, ou uma variante destas, preferencialmente SEQ. N.° ID 51, 73, 100 e 104 ou uma variante destas; e/ou d) Pelo menos um dos polipéptidos de qualquer uma das SEQ. N.° ID 1, 9, 21, 24, 48, 54, 56, 57, 62, 63, 65, 76, 84 e 86, ou uma variante destas, preferencialmente SEQ. N.° ID 63 e 65, ou uma variante destas.

[0040] Também aqui descrita, está uma composição para o uso na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó, por criação de tolerância, que compreende entre 17 em que a quarto a treze sequências de péptidos composição consiste em: a) Pelo menos um dos polipéptidos com as seguintes sequências: HDM203B jDLRQMRTVTPIRMQGGSGS (SEQ. N.° ID 83) e HDM203A jDLRQMRTVTPIRMQGGCGS (SEQ. N.° ID 82);

Ou uma variante destes, e; b) Pelo menos dois dos polipéptidos com as seguintes sequências: HDM201 jESVKYVQSNGGAI (SEQ. N.° ID 80); HDM202 IDEFKNRFLMSAEAFE (SEQ. N.° ID 81); e HDM205 ISYYRYVAREQS (SEQ. N.° ID 85)

Ou variantes destes e opcionalmente c) Pelo menos um dos polipéptidos com as seguintes sequências: HDM09A !REALAQTHSAIAVI (SEQ. N.° ID 5); HDM03D jRNQSLDLAEQELVDSASQH (SEQ. N.° ID 51); HDM03E jRNQSLDLAEQEL VDEASQH* (SEQ. N.° ID 52); HDM03V ÍEQELVDSASQHG (SEQ. N.° ID 100); HDM03W ÍELVDSASQHG (SEQ. N.° ID 101); HDM101 ÍNYCQIYPPNVNKIREA (SEQ. N.° ID 72); HDM101A ijNYSQIYPPNVNKIREA (SEQ. N.° ID 73); e HDM101B ÍNYEQIYPPNVNKIREA* (SEQ. N.0 ID 74)

Ou uma variante destes, e/ou d) Pelo menos um dos polipéptidos com as seguintes sequências: 18

HDM01 jIDLRQMRTVTPIR (SEQ. N.° ID 1); 1 HDM21A jKPFQLEAVFEANQNTK (SEQ. N.° ID 9); | HDM4 8 jTAIFQDTVRAEMTK (SEQ. N.° ID 21); HDM51A :VDFKGELAMRNIEAR (SEQ. N.° ID 24); HDM01A ÍIDLRQMRTVTPIRMQGGSG (SEQ. N.° ID 48) ; | HDM06A jRYVAREQSSRRP (SEQ. N.° ID 54); I HDM07 ÍPNVNKIREALAQT (SEQ. N.° ID 56); j: HDM19A (DQVDVKDSANHEIKK (SEQ. N.° ID 57); 1 HDM23C jGLEVDVPGIDPNASH (SEQ. N.° ID 62); I HDM26B IGVLASAIATHAKIR (SEQ. N.° ID 63); I HDM35A jRGLKQMKRVGDANV (SEQ. N.° ID 65); ] HDM102A ||nAQRFGISNYSQI (SEQ. N.° ID 76); í HDM204 ]SAYLAYRNQSLDLA (SEQ. N.° ID 84); e | HDM206 ÍDNGYGYFAANIDLMMIEE (SEQ. N.° ID. 86) I ou uma variante destes. *E = ácido aminobutirico.

[0041] Deverá ser referido que (a) a (d) acima indicados, representam critérios rigorosos e altamente selectivos, para a identificação de combinações de péptidos adequadas. Por exemplo, se seleccionássemos oito péptidos, à sorte, das sequências da invenção, existiriam perto de 100 biliões de combinações possíveis para escolher. Em contrapartida, é útil considerar um exemplo de uma combinação de oito polipéptidos no qual os critérios acima são aplicados. Por exemplo, consideremos uma combinação em que os seguintes polipéptidos são seleccionados: 19 i) quaisquer dois dos polipéptidos da SEQ. N.° ID 80, 81 e 85 e pelo menos um dos polipéptidos da SEQ. N.0 ID 82 e 83; e ii) outros dois polipéptidos seleccionados dos polipéptidos de qualquer uma das SEQ. N.° ID 5, 51, 52, 72, 73, 74, 100 e 101; e finalmente iii) outros dois polipéptidos seleccionados dos polipéptidos de qualquer uma das SEQ. N.° ID 1, 9, 21, 24, 48, 54, 56, 57, 62, 63, 65, 76, 84 e 86.

Baseado em tal selecção, o número de combinações possíveis representa menos de 0,0006% do total disponível de combinações se os critérios determinados pelos inventores não forem aplicados.

[0042] Com base no acima referido, uma combinação particularmente preferida da invenção compreende ou consiste nos polipéptidos HDM201 (SEQ. N.° ID 80), HDM203B (SEQ. N.° ID 83), HDM205 (SEQ. N.° ID 85), HDM03W (SEQ. N.° ID 101), HDM101A (SEQ. N.° ID 73), HDM26B (SEQ. N.° ID 63), HDM35A (SEQ. N.° ID 65) e, opcionalmente, SEQ. N.° ID 24, ou variantes destes.

[0043] Outra combinação preferida da invenção compreende ou consiste nos polipéptidos HDM201 (SEQ. N.° ID 80), HDM203B (SEQ. N.° ID 83), HDM205 (SEQ. N.° ID 85) e HDM03W (SEQ. N.0 ID 101).

[0044] Conforme referido acima, a composição pode, opcionalmente, compreender outros polipéptidos até um 20 total de treze polipéptidos únicos. Estes outros polipéptidos estão relacionados (ou seja, são habitualmente homólogos e/ou fragmentos de) com outras sequências, p. ex. as SEQ. N.°s ID 1 a 104, que não estão entre os polipéptidos já seleccionados. Estes outros péptidos são, normalmente, variantes funcionais de um dos péptidos das SEQ. N.°s ID 1 a 104. Esses polipéptidos podem ser idênticos a qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104. A composição pode, então, compreender até treze polipéptidos diferentes, tal como previsto em qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104. Contudo, estes polipéptidos opcionais não precisam de ser 100% idênticos a nenhuma das SEQ. N.°s ID 1 a 104. Eles são, preferencialmente, pelo menos, 65% idênticos a, pelo menos, 9 (por exemplo, pelo menos 10, 11, 12 ou 13) ou mais aminoácidos contíguos em qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104, dos que ainda não foram seleccionados de entre o(s) polipéptido(s) previamente escolhidos. Esses aminoácidos contíguos podem compreender um epítopo do MHC de classe II, por exemplo que se liga a qualquer uma das moléculas do MHC aqui mencionadas. Por outras palavras, a composição pode, opcionalmente, compreender outros polipéptidos, até um total de treze polipéptidos únicos, em que esses polipéptidos: (i) compreendem uma sequência que tem, pelo menos 65% de identidade de sequência a, pelo menos, 9 ou mais aminoácidos contíguos em qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104 não seleccionadas em (a) a (d) acima referidas; e (ii) têm 9 a 30 aminoácidos de comprimento; 21 em que cada um dos diferentes polipéptidos é para uso simultâneo, separado ou sequencial, na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó, por criação de tolerância.

[0045] Adicionalmente aqui descrito, está um produto que contém entre quatro a treze polipéptidos, como os acima definidos em (a) a (d); e opcionalmente: (e) Um polipéptido: (i) que compreende uma sequência que tem, pelo menos, 65% de identidade a uma sequência de, pelo menos, 9 ou mais aminoácidos contíguos em qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104 não seleccionada acima em a), a d) ; e (ii) 9 a 30 aminoácidos de comprimento; e opcionalmente (f) Um polipéptido como o definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em d); e opcionalmente (g) Um polipéptido como o definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a f) acima; e opcionalmente (h) Um polipéptido como o definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a g) acima; e opcionalmente (i) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a h) acima; e opcionalmente (j) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a i) acima; e opcionalmente (k) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a j) acima; e opcionalmente 22 (l) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a k) acima; e opcionalmente (m) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente, não seleccionado em e) a 1) acima; e opcionalmente (n) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente não seleccionado em e) a m) acima; e opcionalmente (o) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente não seleccionado em e) a n) acima; e opcionalmente (p) Um polipéptido como definido em e), mas adicionalmente não seleccionado em e) a o) acima para uso simultâneo, separado ou sequencial na prevenção ou tratamento da alergia ao pó dos ácaros por criação de tolerância.

[0046] Aqui também descrita está uma composição para uso na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó doméstico por criação de tolerância, compreendendo um ou mais polipéptidos, em que o polipéptido é seleccionado de qualquer uma das seguintes: (i) um polipéptido de qualquer um de HDM203B (SEQ. N.° ID 83), HDM202 (SEQ. N.° ID 81), HDM201 (SEQ. N.° ID80), HDM205 (SEQ. N.° ID85), HDM203A (SEQ. N.° ID 82), SEQ. N.° ID 1 a 79, 84, ou 86 a 104 (que é qualquer uma das SEQ. N. °s ID 1 a 104); ou (ii) (ii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste em: 23 o qualquer uma das sequência de (i); ou o uma sequência que tem, pelo menos, 65% de homologia a qualquer uma das sequências de (i), sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo a qualquer uma das sequências de (i), ou o (iii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste numa sequência que representa: o um fragmento de qualquer uma das sequências de (i); ou o um homólogo de um fragmento de qualquer uma das sequência de (i), sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo a qualquer uma das sequências de (i) e que tem, pelo menos, 9 aminoácidos de comprimento, e em que o dito homólogo tem, pelo menos, 65% de homologia a qualquer um dos 9 aminoácidos contíguos em qualquer uma das sequências de (i).

[0047] As composiçoes ou produtos da invenção podem compreender variantes de qualquer uma das sequências acima definidas. Normalmente, a variante compreende 1, 2, 3 ou mais epítopos do MHC de classe II presentes no péptido correspondente de SEQ. N.° ID 1 a 104.

[0048] Variantes funcionais são aqui mencionadas. Estas variantes podem ser capazes de criar tolerância num indivíduo a um epítopo do MHC de Classe II presente no péptido correspondente com a SEQ. N.° ID 1 a 104, e, portanto, normalmente compreenderá uma sequência que se liga à mesma molécula do MHC de Classe II e/ou é 24 reconhecida por um linfócito T que reconhece o epítopo correspondente no polipéptido de SEQ. N.° ID de 1 a 104.

[0049] Variantes das SEQ. N.° ID 1 a 104 podem ser fragmentos derivados por truncamento. O truncamento refere-se à remoção de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais aminoácidos das extremidades N e/ou C-terminais de um polipéptido das SEQ. N.° ID de 1 a 104. Exemplos de truncamentos adequados são fornecidos com finalidade ilustrativa no Exemplo 5. Particularmente, truncamentos da SEQ. N.° ID 81 são fornecidos como SEQ. N.° ID de 102 a 104. Similarmente, um número das variantes preferidas de HDM03 (SEQ. N.0 ID de 89 a 101) são truncamentos. Em particular, truncamentos preferenciais de HDM03 são HDM03V e HDM 03W (SEQ. N.° ID 100 e 101).

[0050] Os fragmentos também podem ser gerados por uma ou mais deleções internas, desde que os 9 aminoácidos essenciais que compõem o epitopo do linfócito T não sejam substancialmente alterados.

[0051] Por exemplo, uma variante da SEQ N.° ID 1 pode compreender um fragmento da SEQ N.° ID 1, ou seja uma sequência mais curta. Isto pode incluir uma deleção de um, dois, três, quatro, cinco, seis, sete, oito, nove, dez ou mais aminoácidos da extremidade N-terminal da SEQ. N.° ID 1 ou da extremidade C-terminal da SEQ. N.° ID 1. Estas eliminações podem ser efectuadas a partir de ambas as extremidades da SEQ. N.° ID 1. Uma variante da SEQ. N.° ID 1 pode incluir aminoácidos adicionais (por exemplo da sequência da proteina precursora da qual deriva o péptido) que se estendem para além da(s) extremidade(s) da SEQ. N.° ID 1. Uma variante pode incluir uma 25 combinação das deleções e adições acima discutidas. Por exemplo, os aminoácidos podem ser eliminados numa extremidade da SEQ. N.° ID 1, mas aminoácidos adicionais da sequência completa da proteína precursora, podem ser adicionados na outra extremidade da SEQ. N.° ID 1. A mesma discussão das variantes acima, também se aplica às SEQ. N.°s ID 2 a 104.

[0052] Uma variante peptídica pode incluir uma ou mais substituições de aminoácidos da sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ. N.°s ID de 1 a 104 ou um fragmento destas. Uma variante peptídica pode compreender uma sequência que tem, pelo menos, 65% de identidade de sequência a, pelo menos, 9 ou mais aminoácidos contíguos em qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104. Preferivelmente, uma variante adequada pode compreender, pelo menos 70%, pelo menos75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 98% de identidade de aminoácidos a pelo menos 9 aminoácidos contíguos de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104. Este nível de identidade de aminoácidos pode ser visto em qualquer secção do péptido, embora, seja preferível na região central. O nível de identidade de aminoácidos é de, pelo menos, 9 aminoácidos contíguos, mas pode ser de, pelo menos 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou pelo menos 16 ou 17 aminoácidos, dependendo do tamanho dos péptidos de comparação. Portanto, qualquer um dos níveis de identidade, acima especificados, pode ser encontrado ao longo de todo o comprimento da sequência.

[0053] Em relação às sequências de aminoácidos, "identidade de sequência" refere-se a sequências que têm o valor indicado quando avaliadas usando ClustalW (Thompson et ai., Nucleic Acids Res. 1994 Nov 26 11; 22 (22) :4673-80) com os seguintes parâmetros: Parâmetros de alinhamento de emparelhamento -Método: exacto, Matriz: PAM, Penalização por abertura de espaçamentos: 10,00, Penalização por extensão de espaçamentos: 0,10; Parâmetros de alinhamento múltiplo -Matriz: PAM, Penalização por abertura de espaçamentos: 10,00, % identidade para atraso: 30, Penalização por fim de espaçamento: ligada, Distância de separação de espaçamentos: 0, Matriz negativa: não, Penalização por extensão de espaçamentos: 0,20, Penalização por espaçamento especifico ao residuo: ligada, Penalização por espaçamento hidrófilo: ligada, Resíduos hidrófilos: GPSNDQEKR. A identidade de sequência num resíduo particular destina-se a incluir resíduos idênticos que foram simplesmente derivados.

[0054] Um péptido variante pode compreender 1, 2, 3, 4, 5 ou mais ou até 10 substituições de aminoácidos de qualquer SEQ. N.° ID 1 to 104. As variantes de substituição envolvem, de preferência, a substituição de um ou mais aminoácidos com o mesmo número de aminoácidos e a realização de substituições conservadoras de aminoácidos. Por exemplo, um aminoácido pode ser substituído por um aminoácido alternativo com propriedades semelhantes, por exemplo, outro aminoácido básico, outro aminoácido ácido, outro aminoácido neutro, outro aminoácido alterado, outro aminoácido hidrófilo, outro aminoácido hidrófobo, outro aminoácido polar, outro aminoácido aromático ou outro aminoácido alifático. Algumas propriedades dos 20 aminoácidos principais que podem ser usados para seleccionar substituintes adequados são as seguintes: 27 AI jalifático, hidrófobo, neutro jMe jhidrófobo, neutro j a j jt j j Cy jpolar, hidrófobo, neutro jAs jpolar, hidrófilo, j s | jn jneutro j As jpolar, hidrófilo, carregadojPr jhidrófobo, neutro j p | (-) jo j j G1 jpolar, hidrófilo, carregado|g1 jpolar, hidrófilo, j u | (-) jn jneutro Ph jaromático, hidrófobo, neutro jAr jpolar, hidrófilo, j e j jg jcarregado ( + ) I G1 jalifático, neutro jSe jpolar, hidrófilo, j y j jr jneutro Hi jaromático, polar, hidrófilo, jTh jpolar, hidrófilo, j s jcarregado (+) jr jneutro 11 jalifático, hidrófobo, neutro jva jalifático, hidrófobo,j e j jl jneutro Ly jpolar, hidrófilo, carregadojTr jaromático, hidrófobo, j s | ( + ) jp jneutro § ......................................4

Le jalifático, hidrófobo, neutro jTy jaromático, polar,j u I jr jhidrófobo j [0055] Outras variantes incluem aquelas nas quais em vez do aminoácido natural, o aminoácido que aparece na sequência é um análogo estrutural deste. Os aminoácidos usados nas sequências também podem ser modificados, p. ex. marcados, desde que a função do péptido não seja significativamente afectada de forma adversa. Quando o péptido tem uma sequência diferente da sequência de qualquer uma das SEQ. N.° ID 1 a 104 ou um fragmento destas, as substituições podem ocorrer a todo o comprimento da sequência, dentro da sequência de qualquer 28 uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104 ou fora da sequência de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 140. Por exemplo, as variações aqui descritas, tais como adições, deleções, substituições e modificações, podem ocorrer dentro da sequência de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 140. Um péptido variante pode compreender ou consistir essencialmente na sequência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104 em que foram efectuadas uma, duas, três, quatro ou mais substituições de aminoácidos. Um péptido variante pode compreender um fragmento de uma proteína precursora de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 140. Nesta modalidade, as variações aqui descritas, tais como substituições e modificações, podem ocorrer dentro e/ou fora da sequência de qualquer uma das SEQ. N.°s ID 1 a 104.

[0056] Os péptidos variantes da invenção têm 9 a 30 aminoácidos de comprimento, inclusive. De preferência, podem ter de 9 a 20 aminoácidos de comprimento ou, mais preferencialmente, de 13 a 17. Os péptidos podem ter o mesmo comprimento do que as sequências de péptidos em qualquer uma das SEQ N.°s ID 1 a 20.

[0057] Os péptidos podem ser quimicamente derivados do alergénio polipeptídico, por exemplo por clivagem proteolítica ou podem ser derivados num sentido intelectual do alergénio polipéptido, por exemplo utilizando a sequência de aminoácidos do alergénio polipéptido e sintetizando péptidos com base na sequência. Os péptidos podem ser sintetizados utilizando métodos bem conhecidos na arte.

[0058] Quando os polipéptidos compreendem resíduos que são, normalmente, difíceis de preservar durante a 29 produção, esses resíduos podem ser substituídos. Por exemplo, o glutamato forma, espontaneamente, piroglutamato em solução, particularmente, quando presente na extremidade N-terminal de um polipéptido. Assim, os resíduos dos péptidos da invenção, que correspondem a glutamato na sequência de uma proteína de alergénio nativa, pode ser substituídos com piroglutamato nos péptidos da invenção, quando tais resíduos estão presentes na extremidade N-terminal de um péptido.

[0059] O termo "péptido" inclui não apenas moléculas nas quais os resíduos de aminoácidos são unidos por ligações peptídicas (-CO-NH-) mas também moléculas nas quais a ligação peptídica é revertida. Estes peptidomiméticos retro-invertidos podem ser produzidos utilizando métodos conhecidos na arte, por exemplo tais como os descritos por Meziere et al (1997) J. Immunol.159, 3230-3237. Esta abordagem envolve a produção de pseudo-péptidos com alterações que envolvem o cerne e não a orientação das cadeias laterais. Meziere et al (1997) revelam que, pelo menos para as respostas de linfócitos T adjuvantes e do MHC de classe II, estes pseudopéptidos são úteis. Péptidos retro-invertidos, que contêm ligações NH-CO em vez de ligações peptídicas CO-NH, são muito mais resistentes à proteólise.

[0060] Do mesmo modo, a ligação peptídica pode ser totalmente dispensada desde que uma fracção de ligação adequada que mantenha o espaçamento entre os átomos de carbono dos resíduos de aminoácido seja usada; é preferível que a fracção de ligação tenha substancialmente a mesma distribuição de carga e substancialmente a mesma planaridade do que uma ligação peptídica. Também é de referir que o péptido pode ser 30 convenientemente bloqueado na sua extremidade N-terminal ou C-terminal de modo a ajudar a reduzir a susceptibilidade à digestão exoproteolitica. Por exemplo, o grupo amino N-terminal dos péptidos pode ser protegido através da reacção com um ácido carboxilico e o grupo carboxilo C-terminal do péptido pode ser protegido através de reacção com uma amina. Outros exemplos de modificações incluem glicosilação e fosforilação. Outra modificação potencial é a substituição de hidrogénio nas aminas da cadeia lateral de R ou K poderem ser substituídos por grupos metileno (-NH2 -> -NH(Me) ou -N(Me) 2) .

[0061] Os análogos de péptidos de acordo com a invenção podem também incluir variantes peptídicas que aumentam ou diminuem a semivida dos péptidos in vivo. Exemplos de análogos capazes de aumentar a semivida dos péptidos usados de acordo com a invenção incluem análogos peptóides dos péptidos, derivados do aminoácido D dos péptidos, e os híbridos péptido-peptóides. Outra modalidade dos polipéptidos variantes usados de acordo com a invenção compreende formas do aminoácido D do polipéptido. A preparação de polipéptidos usando aminoácidos D em vez de aminoácidos L reduz grandemente qualquer degradação indesejada de um tal agente por processos metabólicos normais, reduzindo as quantidades de agente que é necessário administrar, bem como a frequência da sua administração.

[0062] Os péptidos fornecidos pela presente invenção podem ser derivados de variantes de splicing das proteínas precursoras codificadas por mRNA geradas por splicing alternativo da transcrição primária que codifica as cadeias de proteínas precursoras. Os péptidos podem 31 também ser derivados de mutantes de aminoácidos, variantes de glicosilação e outros derivados covalentes de proteínas precursoras que conservam pelo menos uma propriedade de ligação ao MHC dos alergénios. Derivados exemplares incluem moléculas em que os péptidos da invenção são modificados covalentemente por substituição, química, enzimática ou por outro meio adequado, com uma fracção que não um aminoácido natural. Também estão incluídas variantes das proteínas precursoras que ocorrem naturalmente em diferentes ácaros. Estas variantes podem ser codificadas por uma variante alélica ou representar uma variante de splicing alternativa.

[0063] As variantes acima descritas podem ser preparadas durante a síntese do péptido ou por modificação pós-produção ou quando o péptido está sob a forma recombinante usando as técnicas conhecidas da mutagénese dirigida, mutagénese aleatória ou clivagem enzimática e/ou ligação de ácidos nucleicos.

[0064] De acordo com a invenção, os outros péptidos que a composição pode compreender são variantes funcionais preferidas de qualquer uma das SEQ. N.° ID la 104. Ou seja, os péptidos são de preferência capazes de induzir uma resposta imune. Em particular, os péptidos são, preferencialmente, capazes de induzir a produção de citocinas em indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico. Normalmente, a composição da invenção irá, então, compreender, pelo menos, um polipéptido ou variante deste que produza uma resposta das citocinas em mais de 30%, 35%, 40%, preferencialmente 45% ou 50% dos indivíduos numa população de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico. O número de indivíduos num painel de indivíduos alérgicos a ácaros do pó doméstico pode ser 32 qualquer número superior a um, por exemplo pelo menos 2, 3, 5, 10, 15, 20, 30, 50, 80 ou 100 indivíduos. Preferencialmente, a composição compreende, pelo menos, dois, três ou, mais preferencialmente, quatro desses péptidos. Preferencialmente, a resposta das citocinas é a produção de IL13 ou IFN-gama. A produção de citocinas pode ser medida por qualquer método adequado. Considera-se que ocorreu a produção de uma citocina em resposta a um péptido, normalmente, se o nível de citocinas produzido na presença de um péptido está, pelo menos 2, 3, 4 ou 5 vezes acima do nível base da dita citocina que é produzida na ausência de um estimulo (ou seja, o nível produzido pelo mesmo indivíduo na ausência do péptido ou qualquer outro estimulo). Alternativamente, pode considerar-se que ocorreu a produção de uma citocina, se a quantidade de produção da citocina exceder um limite reconhecido, normalmente 90, 95 ou, preferencialmente, 100 pg/ml, habitualmente de uma amostra de, aproximadamente, l,25xl06 células em 250 μΐ.

[0065] Os métodos adequados para medir a produção de citocinas incluem, normalmente, a medição da libertação de citocinas das células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) a partir de uma amostra colhida de um sujeito. A amostra é, normalmente, sangue ou soro. A libertação de citocinas das PBMCs é medida após incubar as células na presença de um determinado péptido. Os sobrenadantes da mistura da incubação são, então, testado quanto à presença de citocinas, usando qualquer ensaio adequado, por exemplo um ensaio ELISA, ELISPOT ou citometria de fluxo. Métodos particularmente preferidos incluem ensaios de esferas Multiplex conforme descrito por de Jager et al, Clinicai and Diagnostic Laboratory Immunology, 2003, Vol 10(1) pág. 133-139. Normalmente, a 33 composição pode compreender, pelo menos, um péptido adicional ou variante deste que não esteja entre os polipéptidos já seleccionados, até um total de treze péptidos diferentes, que produzem uma resposta das citocinas em mais de 20%, 25%, preferencialmente 30%, 35% ou 40% de indivíduos numa população de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico.

[0066] A composição pode, ainda, compreender um ou mais péptidos adicionais ou variantes deste que não estejam entre os polipéptidos já seleccionados, até um total de treze péptidos diferentes, que produzem uma resposta de citocinas em mais 10%, 15%, preferencialmente 20% de indivíduos numa população de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico.

[0067] Variantes adequadas capazes de se ligar a TCRs podem ser derivadas empiricamente ou seleccionadas de acordo com critérios conhecidos. Dentro de um único péptido há determinados residuos que contribuem para a ligação dentro da fenda de ligação do antigénio do MHC e outros residuos que interagem com as regiões hipervariáveis do receptor de linfócitos T (Allen et al (1987) Nature 327: 713-5).

[0068] De entre os residuos que contribuem para a interacção do receptor de linfócitos T, foi demonstrada a existência de uma hierarquia que se refere à dependência da activação dos linfócitos T mediante substituição de um determinado resíduo peptídico. Ao utilizar péptidos com uma ou mais substituições dos resíduos de contacto do receptor de linfócitos T por um aminoácido diferente, vários grupos demonstraram efeitos profundos no processo de activação dos linfócitos T. Evavold & Allen (1991) 34

Nature 252: 1308-10) demonstraram a dissociação da proliferação de linfócitos T e da produção de citocinas. Neste modelo in vitro, um clone de linfócito T especifico dos resíduos 64-76 da hemoglobina (no contexto de l-Ek), foi provocado com um análogo peptídico, tendo sido efectuada uma substituição conservadora de ácido aspártico por ácido glutâmico. Esta substituição não interferiu significativamente com a capacidade do análogo se ligar a I-Ek.

[0069] Após a provocação in vitro de um clone de linfócito T com este análogo, não foi detectada qualquer proliferação, embora a secreção de IL-4 se tenha mantido, assim como a capacidade do clone de ajudar as respostas dos linfócitos B. Num estudo subsequente, o mesmo grupo demonstrou a separação da citólise mediada por linfócitos T em relação à produção de citocinas. Neste caso, a primeira permaneceu inalterada, enquanto a última foi comprometida. A eficácia de ligandos de péptidos alterados in vivo foi inicialmente demonstrada num modelo murino de EAE (encefalomielite alérgica experimental) por McDevitt e colaboradores (Smilek et al (1991) Proc Natl Acad Sei USA 88: 9633-9637). Neste modelo, a EAE é induzida por imunização com o péptido encefalitogénico Acl-11 da MBP (proteína básica da mielina). A substituição na posição quatro (lisina) por um resíduo de alanina gerou um péptido que se ligou bem ao seu elemento limitativo (ΑαυΑβυ), mas que era não-imunogénico na estirpe susceptível PL/JxSJLFl e que, além disso, evitou o aparecimento de EAE quando administrado quer antes quer após a imunização com o péptido encefalitogénico. Assim, podem ser identificados resíduos nos péptidos que afectam a capacidade dos péptidos para induzir várias funções dos linfócitos T. 35 [0070] Vantajosamente, os péptidos podem ser concebidos de modo a favorecer a proliferação de linfócitos T e a indução de dessensibilização. Metzler and Wraith demonstraram a melhoria da capacidade tolerogénica de péptidos nos quais foram efectuadas as substituições que aumentam a afinidade péptido-MHC (Metzler & Wraith(1993) Int Immunol ~ : 1159-65) . Foi demonstrado que um ligando de péptido alterado pode provocar anergia profunda e de longa duração nos linfócitos T clonados - Sloan-Lancaster et al (1993) Nature 363: 156-9.

[0071] As composições da invenção são capazes de induzir uma resposta de fase tardia num indivíduo sensibilizado aos alergénios. O termo "resposta de fase tardia" inclui o significado definido em Allergy and Allergic Diseases (1997) A. B. Kay (Ed.), Blackwell Science, pp 1113-1130. A resposta de fase tardia pode ser qualquer resposta de fase tardia (LPR). De preferência, os péptidos são capazes de induzir uma resposta asmática tardia (LAR) ou uma resposta rinitica tardia ou uma resposta cutânea tardia ou uma resposta ocular tardia. É possível determinar se um péptido particular pode ou não originar uma LPR utilizando métodos bem conhecido na arte; um método particularmente preferido é o descrito por Cromwell O, Durham SR, Shaw RJ, Mackay J e Kay AB. Provocation tests and measurements of mediators from mast cells and basophils in asthma and allergic rhinitis. Em: Handbook of Experimental Immunology (4) Chapter 127, Editor: Weir DM, Blackwell Scientific Publications, 1986.

[0072] Assim, de preferência, os péptidos individuais da invenção são capazes de induzir uma LPR num indivíduo que tenha sido sensibilizado aos alergénios. É possível determinar se um indivíduo foi sensibilizado aos 36 alergénios através de procedimentos bem conhecidos como o teste de escarificação com soluções de extractos de alergénio, indução de LPRs cutâneas, história clinica, provocação alergénica e prova cutânea RAST (teste radio-alergo-absorvente) para medição da IgE especifica do alergénio. 0 médico poderá determinar se é ou não expectável que um indivíduo específico beneficie do tratamento com base, por exemplo, nesses testes.

[0073] A dessensibilização ou criação de tolerância de um indivíduo aos alergénios significa a inibição ou redução das reacções alérgicas dos tecidos induzida pelos alergénios em indivíduos adequadamente sensibilizados. Tem sido demonstrado que os linfócitos T podem ser activados selectivamente e depois modificados para deixar de responder. Além disso, a retirada de energia ou eliminação destes linfócitos T conduz à dessensibilização do doente a um alergénio particular. A dessensibilização manifesta-se pela redução da resposta a um alergénio ou a um péptido derivado do alergénio, ou de preferência pela eliminação de tal resposta, na segunda e posteriores administrações do alergénio ou do péptido derivado do alergénio. A segunda administração pode ocorrer depois de passado um período de tempo adequado para permitir a ocorrência da dessensibilização; ou seja de preferência qualquer período entre um dia e várias semanas. É preferido um intervalo de cerca de duas semanas.

[0074] Embora as composições da invenção sejam capazes de induzir uma LPR num indivíduo alérgico a ácaros do pó, deverá ser referido que quando uma composição é usada para tratar um doente é preferível que seja usada uma concentração suficientemente baixa da composição de forma a que não ocorra qualquer LPR observável e a resposta 37 seja suficiente para dessensibilizar parcialmente os linfócitos T de forma a que a próxima dose (de preferência superior) possa ser administrada e por ai em diante. Deste modo, a dose é acumulada para conferir uma dessensibilização total, mas habitualmente sem chegar a induzir uma LPR no doente. Contudo, a composição ou péptido é capaz de o fazer a uma concentração mais elevada do que é administrada.

[0075] As composições da invenção de preferência sao capazes de induzir uma resposta de fase tardia em 50 % ou mais de um painel de indivíduos alérgicos a ácaros do pó da população. Mais preferencialmente, as composições são capazes de induzir uma LPR em 55% ou mais, 60 % ou mais, 65 % ou mais, 70% ou mais, 75% ou mais, 80% ou mais, 85% ou mais, ou 90 % ou mais de indivíduos sensibilizados num painel. É possível determinar se as composições são capazes ou não de induzir uma LPR numa determinada percentagem de sujeitos de um painel através de métodos que são bem conhecidos na arte.

[0076] Será compreendido que os péptidos da invenção compreendem um epítopo de um linfócito T que consiste em 9 aminoácidos essenciais, que são a sequência mínima essencial, necessária para a ligação do MHC de classe I. Contudo, os péptidos podem também compreender resíduos adicionais que flanqueiam os 9 aminoácidos essenciais. Os péptidos podem, portanto, compreender uma região que contém um epítopo de linfócito T, no qual alguns resíduos podem ser modificados sem afectar a função do epítopo. Consequentemente, variantes funcionais dos péptidos, como definido acima, incluem péptidos que são alterados para melhorar a sua solubilidade relativamente à sequência nativa dos péptidos. Uma solubilidade melhorada é 38 vantajosa para a criação de tolerância dos sujeitos aos alergénios dos quais os péptidos da invenção derivam, já que a administração de agentes pouco solúveis aos sujeitos causa respostas inflamatórias indesejáveis. A solubilidade dos péptidos pode ser melhorada com a alteração de residuos que flanqueiam a região que contém um epitopo do linfócito T. Um péptido da invenção pode ser concebido para ser mais solúvel, de forma a compreender: i) uma extremidade N-terminal para os residuos do péptido que flanqueiam um epitopo do linfócito T: um a seis aminoácidos contíguos que correspondem aos dois a seis aminoácidos contíguos imediatos ao N-terminal, em relação aos ditos resíduos da sequência da proteína da qual o péptido deriva; e/ou ii) uma extremidade C-terminal para os resíduos do péptido que flanqueiam um epitopo do linfócito T: um a seis aminoácidos contíguos que correspondem aos um a seis aminoácidos contíguos imediatos ao C-terminal, em relação aos ditos resíduos da sequência da proteína da qual o péptido deriva; ou iii) as duas extremidades N-terminal e C-terminal em relação aos resíduos do péptido que flanqueiam um epitopo do linfócito T, pelo menos um aminoácido seleccionado da arginina, lisina, histidina, glutamato e aspartato.

[0077] Opcionalmente, os péptidos da invenção podem também ser concebidos para serem mais solúveis, de forma a que: 39 i) quaisquer resíduos de cisteína na sequência nativa do péptido, sejam substituídos com serina ou ácido 2-aminobutírico; e/ou ii) quaisquer resíduos na extremidade N-terminal ou C-terminal da sequência nativa do péptido, que não estejam compreendidos num epítopo de linfócito T, sejam eliminados; e/ou iii) quaisquer dois aminoácidos consecutivos compreendendo a sequência Asp-Gly nos quatro aminoácidos na extremidade N-terminal ou C-terminal da sequência nativa do péptido, que não estejam compreendidos num epítopo de linfócito T, sejam eliminados. Ácidos nucleicos e vectores [0078] Os péptidos individuais que compõem as composições e produtos da invenção podem ser administrados directamente ou podem ser administrados indirectamente por expressão de uma sequência de codificação. Por exemplo, pode ser fornecido um polinucleótido que codifica um péptido da invenção, como qualquer um dos péptidos acima descritos. Um péptido da invenção pode, assim, ser produzido a partir de ou fornecido sob a forma de um polinucleótido que o codifica e é capaz de o expressar. Qualquer referência aqui presente ao uso, fornecimento ou administração de um péptido da invenção pretende incluir o uso, fornecimento ou administração indirecto desse péptido através da expressão por um polinucleótido que o codifica.

[0079] Os termos "molécula de ácido nucleico" e "polinucleótido" são aqui usados indistintamente e referem-se a uma forma polimérica dos nucleótidos de 40 qualquer comprimento, quer desoxirribonucleótidos, quer ribonucleótidos, ou análogos destes. Exemplos não limitativos de polinucleótidos incluem um gene, um fragmento de gene, RNA mensageiro (mRNA), cDNA, polinucleótidos recombinantes, plasmideos, vectores, DNA isolado de qualquer sequência, RNA isolado de qualquer sequência, sondas de ácidos nucleicos e iniciadores (primers). Um polinucleótido da invenção pode ser fornecido sob a forma purificada ou isolado. Uma sequência de ácido nucleico que "codifica" um polipéptido seleccionado é uma molécula de ácido nucleico que é transcrita (no caso do DNA) e traduzida (no caso do mRNA) num polipéptido in vivo quando colocada sob o controlo de sequências reguladoras adequadas. Os limites da sequência de codificação são determinados por um códão de inicio na extremidade 5' (amino) e um códão de terminação da tradução na extremidade 3' (carboxilo). Para os fins a que a invenção se destina, estas sequências de ácido nucleico podem incluir, mas não se limitam a, cDNA virai, mRNA procariótico ou eucarótico, sequências genómicas de DNA ou RNA virai ou procariótico, e mesmo sequências de DNA sintético. Uma sequência de terminação da transcrição pode localizar-se na 3' da sequência de codificação.

[0080] Os polinucleótidos da invenção podem ser sintetizados segundo métodos bem conhecidos na arte, por exemplo conforme descrito por Sambrook et al (19104, Molecular Cloning - a laboratory manual; Cold Spring Harbor Press) .

[0081] As moléculas de polinucleótidos podem ser fornecidas sob a forma de uma cassete de expressão que inclui sequências de controlo ligadas operacionalmente à sequência inserida, permitindo assim a expressão do 41 péptido da invenção in vivo num sujeito alvo. Estas cassetes de expressão, por sua vez, são habitualmente fornecidas em vectores (p. ex., plasmideos ou vectores virais recombinantes) que são adequados para uso como reagentes para a imunização de ácido nucleico. Esta cassete de expressão pode ser administrada directamente a um hospedeiro. Em alternativa, pode ser administrado a um hospedeiro um vector que compreende um polinucleótido da invenção. De preferência, o polinucleótido é preparado e/ou administrado usando um vector genético. Um vector adequado pode ser qualquer vector capaz de suportar uma quantidade suficiente de informação genética e que permite a expressão de um péptido da invenção.

[0082] Também aqui descrito estão vectores de expressão que compreendem essas sequências de polinucleótidos. Assim, é descrito um vector para uso na prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó por criação de tolerância que compreende quatro ou mais sequências de polinucleótidos que codificam diferentes polipéptidos da invenção e opcionalmente uma ou mais sequências de polinucleótidos adicionais que codificam diferentes polipéptidos, conforme aqui definido. 0 vector pode compreender 4, 5, 6 ou 7 sequências de polinucleótidos que codificam os diferentes polipéptidos da invenção.

[0083] Além disso, deverá ser referido que as composições e produtos da invenção podem compreender uma mistura de polipéptidos e polinucleótidos. Assim, é descrita uma composição ou produto conforme aqui definido, em que no lugar de um dos polipéptidos está um polinucleótido capaz de expressar o referido polipéptido.

[0084] Os vectores de expressão são produzidos por 42 rotina em biologia molecular e podem, por exemplo, envolver o uso de DNA plasmideo e iniciadores, promotores, potenciadores e outros elementos adequados, como por exemplo sinais de poliadenilação que podem ser necessários, e que são posicionados na orientação correcta, de modo a permitir a expressão de um péptido da invenção. Outros vectores adequados serão evidentes para os especialistas na arte. A titulo de exemplo, a este respeito referimo-nos a Sambrook et al.

[0085] Assim, um polipéptido da invenção pode ser fornecido através da administração de um vector a uma célula e permitindo a ocorrência da transcrição do vector. De preferência, um polinucleótido aqui descrito ou para uso na invenção num vector é operacionalmente ligado a uma sequência de controlo que permite a expressão da sequência de codificação pelas células hospedeiras, ou seja, o vector é um vector de expressão.

[0086] "Operacionalmente ligado" refere-se a uma disposição dos elementos em que os componentes assim descritos são configurados de modo a realizar a sua função habitual. Assim, uma determinada sequência reguladora, como um promotor, operacionalmente ligado a uma sequência de ácido nucleico, é capaz de efectuar a expressão dessa sequência quando estão presentes as enzimas adequadas. O promotor não precisa de estar contíguo à sequência, desde que actue de modo a dirigir a expressão desta. Assim, por exemplo, podem estar presentes sequências intervenientes não traduzidas mas transcritas, entre a sequência promotora e a sequência de ácido nucleico, e a sequência promotora pode ainda assim ser considerada "operacionalmente ligada" à sequência de codificação. 43 [0087] Vários sistemas de expressão têm sido descritos na arte, cada um habitualmente consistindo num vector com um gene ou sequência de nucleótido de interesse operacionalmente ligados a sequências de controlo da expressão. Estas sequências de controlo incluem sequências promotoras de transcrição e sequências de inicio e terminação da transcrição. Os vectores da invenção podem ser, por exemplo, plasmideos, virus ou bacteriófagos que apresentem uma origem de replicação, opcionalmente um promotor para expressão do referido polinucleótido e opcionalmente um regulador do promotor. Um "plasmideo" é um vector sob a forma de um elemento genético extracromossómico. Os vectores podem conter um ou mais genes marcadores seleccionáveis, por exemplo um gene resistente à ampicilina no caso de um plasmideo bacteriano ou um gene de resistência para um vector fúngico. Os vectores podem ser usados in vitro, por exemplo para a produção de DNA ou RNA ou usados para transfectar ou transformar uma célula hospedeira, por exemplo, uma célula hospedeira mamífera. Os vectores podem também ser adaptados para serem usados in vivo, por exemplo para permitir a expressão in vivo do polipéptido.

[0088] Um "promotor" é uma sequência de nucleótidos que inicia e regula a transcrição de um polinucleótido que codifica um polipéptido. Os promotores podem incluir promotores induzíveis (em que a expressão de uma sequência de polinucleótidos operacionalmente ligada ao promotor é induzida por um analito, cofactor, proteína reguladora, etc.), promotores repressores (em que a expressão de uma sequência de polinucleótidos operacionalmente ligada ao promotor é reprimida por um analito, cofactor, proteína reguladora, etc.) e 44 promotores constitutivos. Pretende-se que o termo "promotor" ou "elemento de controlo" inclua regiões promotoras completas e segmentos funcionais destas regiões (p. ex., controla a transcrição ou translação).

[0089] Um polinucleótido, cassete de expressão ou vector aqui descrito pode adicionalmente compreender uma sequência do péptido sinal. A sequência do péptido sinal é geralmente inserida numa ligação operacional com o promotor de forma a que o péptido sinal seja expresso e facilita a secreção de um polipéptido codificado pela sequência de codificação também em ligação operacional com o promotor.

[0090] Habitualmente, uma sequência de péptidos sinal codifica um péptido de 10 a 30 aminoácidos, por exemplo 15 a 20 aminoácidos. Frequentemente, os aminoácidos são predominantemente hidrófobos. Numa situação típica, um péptido sinal tem por alvo uma cadeia de polipéptidos crescente que transporta o péptido sinal para o retículo endoplásmico da célula de expressão. O péptido sinal é clivado no retículo endoplásmico, permitindo a secreção do polipéptido através do aparelho de Golgi. Assim, um péptido da invenção pode ser fornecido a um indivíduo através de expressão a partir de células dentro do indivíduo e secreção a partir dessas células.

[0091] Em alternativa, os polinucleótidos aqui descritos podem ser expressos de um modo adequado para permitir a apresentação do péptido da invenção por uma molécula do MHC de classe II na superfície de uma célula apresentadora de antigénio. Por exemplo, um polinucleótido, cassete de expressão ou vector pode ter como alvo as células apresentadoras de antigénio, ou a 45 expressão do péptido codificado pode ser de preferência estimulada ou induzida nessas células.

[0092] Os polinucleótidos de interesse podem ser usados in vitro, ex vivo ou in vivo na produção de um péptido da invenção. Tais polinucleótidos podem ser administrados ou usados na prevenção ou tratamento da alergia por criação de tolerância.

[0093] Métodos para a fornecimento de genes são conhecidos na arte. Ver, p. ex., as patentes norte-americanas n.°s 5.399.346, 5.580.859 e 5.5104.466. A molécula de ácido nucleico pode ser introduzida directamente no sujeito, por ex. através de injecção intramuscular ou intradérmica Standard, administração transdérmica de partículas, por inalação, topicamente ou através dos modos de administração oral, intranasal ou pela mucosa. Em alternativa, a molécula pode ser introduzida ex vivo em células que tenham sido removidas de um sujeito. Por exemplo, um polinucleótido, cassete de expressão ou vector pode ser introduzido nas APCs de um indivíduo ex vivo. As células que contêm a molécula de ácido nucleico de interesse são reintroduzidas no sujeito de forma a produzir uma resposta imune contra o péptido codificado pela molécula de ácido nucleico. As moléculas de ácido nucleico usadas nessa imunização são aqui designadas como "vacinas de ácido nucleico".

[0094] Os polipéptidos, polinucleótidos, vectores ou células da invenção podem estar presentes numa forma substancialmente isolada. Podem ser misturados com veículos ou diluentes que não interfiram com a sua utilização prevista e continuarão a ser considerados como substancialmente isolados. Podem também estar numa forma 46 substancialmente purificada, situação na qual irão geralmente compreender pelo menos 90%, p. ex. pelo menos 95%, 98% ou 99%, das proteínas, polinucleótidos, células ou massa seca da preparação. Células apresentadoras de antigénio (APCs) [0095] Também aqui descrita está a utilização in vitro de um método de produção de uma população de APCs que apresentam os péptidos da invenção na sua superfície, que podem ser subsequentemente usados na terapia. Tal método pode ser realizado ex vivo numa amostra de células obtida de um doente. As APCs produzidas deste modo formam, assim, um agente farmacêutico que pode ser usado no tratamento ou prevenção da alergia a ácaros do pó por criação de tolerância. As células deverão ser aceites pelo sistema imunitário do indivíduo porque derivam desse indivíduo. A administração de células produzidas deste modo ao indivíduo do qual foram originalmente retiradas, constitui assim uma modalidade terapêutica da presente divulgação.

Formulações e composições [0096] Os péptidos, polinucleótidos, vectores e células aqui descritos podem ser fornecidos a um indivíduo quer isoladamente, quer em combinação. Cada molécula ou célula pode ser fornecida a um indivíduo numa forma isolada, substancialmente isolada, purificada ou substancialmente purificada. Por exemplo, um péptido da invenção pode ser fornecido a um indivíduo substancialmente livre de outros péptidos.

[0097] Embora seja possível que os péptidos, 47 polinucleótidos ou composições de acordo com a invenção sejam apresentados em bruto, é preferível apresentá-los como uma formulação farmacêutica. Assim, de acordo com um aspecto adicional da invenção, a presente invenção fornece uma formulação farmacêutica para uso na prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó por criação de tolerância que compreende uma composição, vector ou produto de acordo com a invenção, em conjunto com um ou mais veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis e opcionalmente um ou mais de outros ingredientes terapêuticos. 0 veículo deve ser 'aceitável' no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não ser prejudicial para o sujeito. Habitualmente, os veículos para injecção e a formulação final são estéreis e apirógenos.

[0098] A formulação de uma composição que compreende o péptido, polinucleótidos ou células aqui descritos pode ser produzida utilizando técnicas e metodologias químicas padronizadas de formulação farmacêutica que estão à disposição do especialista.

[0099] Por exemplo, composições que contenham uma ou mais moléculas ou células da invenção podem ser combinadas com um ou mais excipientes ou veículos farmaceuticamente aceitáveis. Substâncias auxiliares, como agentes humidificadores ou emulsionantes, substâncias de tampão de pH ou similares, podem estar presentes no excipiente ou veículo. Estes excipientes, veículos e substâncias auxiliares são geralmente agentes farmacêuticos que não induzem uma resposta imune no indivíduo que recebe a composição, e que podem ser administrados sem toxicidade indevida. Excipientes farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não se limitam 48 a, líquidos como água, solução salina, polietilenoglicol, ácido hialurónico e etanol. Sais farmaceuticamente aceitáveis também podem ser aqui incluídos, por exemplo, sais de ácidos minerais como cloridratos, hidrobrometos, fosfatos, sulfatos ou similares; e sais de ácidos orgânicos como acetatos, propionatos, malonatos, benzoatos ou similares. Um discussão completa sobre os excipientes, veículos e substâncias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis está disponível em Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Pub. Co., N.J. 1991).

[0100] Estas composições podem ser preparadas, embaladas ou comercializadas numa forma adequada para a administração em bolus ou para administração contínua. É possível preparar, embalar ou comercializar composições injectáveis em formas farmacêuticas unitárias, por exemplo em ampolas ou em recipientes multidose contendo um conservante. As composições incluem, mas não se limitam a, suspensões, soluções, emulsões em veículos oleosos ou aquosos, pastas, e formulações implantáveis de libertação prolongada ou biodegradáveis. Estas composições podem ainda compreender um ou mais ingredientes adicionais incluindo, mas não se limitando a, agentes de suspensão, estabilizadores ou dispersores. Numa modalidade de uma composição para administração parentérica, o ingrediente activo é fornecido na forma seca (por ex., um pó ou grânulos) para reconstituição com um veículo adequado (p. ex., água estéril e apirógena) antes da administração parentérica da composição reconstituída. As composições farmacêuticas podem ser preparadas, embaladas ou comercializadas sob a forma de uma suspensão ou solução aquosa ou oleosa estéril injectável. Esta suspensão ou solução pode ser formulada 49 de acordo com a arte conhecida e pode compreender, para além do ingrediente activo, ingredientes adicionais tais como os agentes dispersores, agentes humidificadores ou agentes de suspensão aqui descritos. Estas formulações estéreis injectáveis podem ser preparadas usando um diluente ou solvente não tóxico aceitável para administração parentérica, como água ou 1,3-butanodiol, por exemplo. Outros diluentes e solventes aceitáveis incluem, mas não se limitam a, solução de Ringer, solução isotónica de cloreto de sódio e óleos fixos, tais como mono ou di-glicéridos sintéticos. Outras composições passíveis de administração parentérica que são úteis incluem as que compreendem o ingrediente activo numa forma microcristalina, numa preparação lipossomal ou como um componente de um sistema polimérico biodegradável. Composições para libertação prolongada ou implantação podem compreender materiais poliméricos ou hidrófobos farmaceuticamente aceitáveis, tais como uma emulsão, uma resina permutadora de iões, um polímero pouco solúvel ou um sal pouco solúvel.

[0101] Em alternativa, os péptidos ou polinucleótidos aqui descritos podem ser encapsulados, adsorvidos a, ou associados a, veículos particulados. Veículos particulados adequados incluem os derivados de polímeros de polimetil metacrilato, bem como micropartículas PLG derivadas de poli (lactides) e poli (lactide-co-glicólidos) . Ver, p. ex., Jeffery et al. (1993) Pharm. Res. 10:362-368. Também é possível utilizar outros sistemas particulados e polímeros, por exemplo, polímeros como polilisina, poliarginina, poliornitina, espermina, espermidina, assim como conjugados destas moléculas.

[0102] A formulação de qualquer um dos péptidos, 50 polinucleótidos ou células aqui referidos dependerá de factores como a natureza da substância e o método de administração. Qualquer uma dessas substâncias pode ser administrada numa variedade de formas farmacêuticas. Pode ser administrada oralmente (p. ex., comprimidos, pílulas, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou grânulos dispersíveis), por via parentérica, epicutânea, subcutânea, por inalação, por via intravenosa, intramuscular, intra-esternal, transdérmica, intradérmica, sublingual, intranasal, bucal, ou através de técnicas de perfusão. A substância também pode ser administrada como supositórios. 0 médico deverá determinar a via de administração adequada para cada indivíduo particular.

[0103] As composições de formulações aqui descritas compreenderão a concentração adequada de cada péptido/polinucleótido/célula que se revela eficaz sem causar reacções adversas. Habitualmente, a concentração de cada péptido na composição estará no intervalo de 0,03 a 200 nmol/ml. Mais preferencialmente, no intervalo de 0,3 a 200 nmol/ml, 3 a 180 nmol/ml, 10 a 150 nmol/ml ou 30 a 120 nmol/ml. A composição ou a formulações devem ter uma pureza superior a 95% ou 98% ou uma pureza de pelo menos 99%.

[0104] Assim, polinucleótidos, são usados para outros agentes administrados sequencialmente. ou em diferentes numa das modalidades, os péptidos, células ou composições aqui descritos, terapia em combinação com um ou mais terapêuticos. Os agentes podem ser separadamente, simultaneamente ou Estes podem ser administrados na mesma composições. Em conformidade, num método 51 aqui descrito, o sujeito pode, também, ser tratado com outro agente terapêutico.

[0105] Assim, é possível formular uma composição que compreenda uma molécula e/ou célula aqui descritas, bem como uma ou mais outras moléculas terapêuticas. Uma composição da invenção pode, em alternativa, ser usada simultaneamente, sequencialmente ou separadamente com uma ou mais outras composições terapêuticas como parte de um tratamento combinado. Métodos terapêuticos e indivíduo a tratar [0106] A presente invenção refere-se a péptidos, polinucleótidos, vectores e células que são capazes de dessensibilizar ou criar tolerância em indivíduos humanos aos alergénios acima descritos e que são, assim, úteis na prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó. A invenção fornece composições, produtos, vectores e formulações para uso na prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó por criação de tolerância. Aqui também descrito está um método de criação de tolerância ou dessensibilização de um indivíduo alérgico a ácaros do pó que compreende administrar, isoladamente ou em combinação, os polipéptidos/polinucleótidos/células, conforme descrito acima.

[0107] O indivíduo a tratar ou a receber a composição ou formulação da invenção é de preferência um humano. Deverá ser referido que o indivíduo a tratar pode ter uma alergia confirmada aos alergénios, pode estar em risco de ser sensibilizado ou haver suspeita de ter sido sensibilizado. O indivíduo pode ser testado quanto à sua sensibilização através de técnicas bem conhecidas na arte 52 e conforme aqui descrito. Em alternativa, o indivíduo pode ter uma história familiar de alergia a ácaros do pó. Pode não ser necessário testar um indivíduo quanto à sensibilização aos ácaros do pó porque o indivíduo apresenta sintomas de alergia quando exposto a ácaros do pó. 0 termo "exposição" significa proximidade a, por exemplo, um item como roupa, um colchão, uma almofada, uma fronha, um lençol, um cobertor ou outra roupa de cama, que não tenham sido lavados a mais de 50 °C há mais de, aproximadamente, uma semana, ou um tapete, uma cortina ou um item estofado que não tenha sido aspirado à mais de, aproximadamente, uma semana. Por proximidade entenda-se 10 metros ou menos, 5 metros ou menos, 2 metros ou menos, 1 metro ou menos ou 0 metros dos itens acima descritos. Os sintomas da alergia podem incluir comichão nos olhos, corrimento nasal, dificuldades respiratórias, pele avermelhada e irritada ou erupção cutânea.

[0108] O indivíduo a tratar pode ter qualquer idade.

Contudo, de preferência, o indivíduo pode estar no grupo etário de 1 a 90, 5 a 60, 10 a 40 ou, mais preferencialmente, 18 a 35 anos.

[0109] De preferência, o indivíduo a tratar pertence a uma população que tem frequências de alelos do MHC dentro do intervalo de frequências que é representativo da população caucasiana. As frequências de alelos da população de referência para 11 famílias de alelos DRBl comuns estão apresentadas na Tabela 1 (dados retirados de HLA Facts Book, Parham and Barber). 53

Tabela 1 DRBl I1 I3 j 4 7 18 11 112 13 114 15 j 16 O, O |6. 114 . 115 . 8.8 13. 8.3 j 3. 14 . Í2. 17. |2. u 17 |7 14 i9 7 i9 6 ! 5 População de 19. ]ll. 112 . 13. |3. 13. |2. 10. 13. 10. |3. referência % u i1 |s 2 |7 4 13 2 |2 7 |6

As frequências de referência foram obtidas por análise de múltiplos estudos que apresentaram frequências e os valores apresentados são valores médios. Assim, de preferência, o indivíduo a ser tratado pertence a uma população que tem frequências de alelos do MHC equivalentes às da população de referência para os alelos indicados na Tabela 1 (p. ex., para pelo menos 1, 2, 3, 4, 5 ou todos os alelos), por exemplo, dentro dos intervalos desses valores mais ou menos 1, 2, 3, 5, 10, 15 ou 20%.

[0110] De preferência, o indivíduo pertence a uma população na qual as frequências de alelos dos seguintes alelos DRBl são as que se seguem: 4 - pelo menos 9% 7 - pelo menos 10% 11 - pelo menos 8% [0111] O indivíduo pode ter tido alergia a ácaros do pó durante pelo menos 2 semanas, 1 mês, 6 meses, 1 ano ou 5 anos. O indivíduo pode apresentar erupção cutânea, congestão nasal, corrimento nasal e/ou tosse causada pela alergia. O indivíduo pode ou não ter recebido outras composições/compostos que tratam a alergia a ácaros do pó. O indivíduo pode viver numa região geográfica que 54 tenha uma humidade relativa diária média superior a 50%, preferivelmente 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80% ou 90%. O indivíduo pode viver numa região geográfica conhecida por sustentar populações de ácaros do pó, por exemplo, a metade oriental dos Estados Unidos (e a maioria das cidades costeiras ocidentais dos Estados Unidos), áreas populosas do Canadá, Europa Ocidental, do Japão, da Coreia, e áreas costeiras da América do Sul, da Austrália e da África do Sul.

Imunoterapia de combinação [0112] Uma vez que muitos indivíduos são alérgicos ou podem requerer dessensibilização a vários antigénios de polipéptido, a presente invenção também fornece meios de dessensibilização de indivíduos que são alérgicos a múltiplos antigénios. A "tolerância" induzida num indivíduo a um primeiro antigénio ou alergénio de polipéptido pode criar no indivíduo um "ambiente tolerogénico", em que as respostas imunes inadequadas a outros antigénios podem ser moderadas de forma a criar tolerância a outros antigénios.

[0113] Este resultado significa que indivíduos alérgicos a múltiplos alergénios podem ser tratados num período tempo muito reduzido e que indivíduos gravemente alérgicos a alguns alergénios (p. ex., amendoim), mas apenas ligeiramente alérgicos a outros alergénios (p. ex., pêlo de gato) podem beneficiar de uma terapêutica na qual é estabelecida a tolerância ao alergénio mais ligeiro e depois este ambiente tolerogénico é usado para criar tolerância ao outro alergénio mais extremo. Além disso, os indivíduos que sofrem de uma doença auto-imune que são também sensibilizados (ou mesmo imunes) a um 55 antigénio ou alergénio não relacionado podem beneficiar de um regime de tratamento no qual a tolerância ao antigénio ou alergénio não relacionado é primeiro estabelecida e depois este ambiente tolerogénico é usado para fornecer tolerância ao auto-antigénio associado à doença auto-imune.

[0114] Assim, é fornecido um método para dessensibilizar um indivíduo alérgico a ácaros do pó ao antigénio de ácaros do pó conforme descrito acima e a um ou mais outros antigénios de polipéptidos diferentes. O método implica, num primeiro passo, administrar ao indivíduo a composição /produto/formulação (composição primária) de acordo com a invenção, conforme aqui descrito, e em que a administração é efectuada de um modo suficiente para gerar um estado hiporreactivo contra o antigénio de ácaros do pó. Quando tiver sido estabelecido um estado hiporreactivo em relação ao antigénio de ácaros do pó ou pelo menos quando tiver ocorrido uma viragem em direcção à dessensibilização, o método envolve a administração de uma composição secundária compreendendo um segundo antigénio de polipéptido diferente a que o indivíduo irá ser sensibilizado. A administração da composição secundária é efectuada de modo a tirar partido do ambiente tolerogénico estabelecido pelo uso da composição primária, sendo agora possível criar tolerância ao segundo antigénio de polipéptido diferente. A composição secundária é co-administrada com a primeira composição primária ou com um fragmento maior de Fel dl. 0 termo "co-administrada" designa a administração simultânea ou concomitante, p. ex., quando os dois estão presentes na mesma composição ou são administrados em composições separadas aproximadamente ao mesmo tempo mas em locais diferentes, assim como a administração dos antigénios do 56 polipéptido em composições separadas em momentos diferentes. Por exemplo, a composição secundária pode ser administrada antes ou depois da administração da primeira composição no mesmo local ou num local diferente. 0 tempo entre administrações pode variar de cerca de vários segundos a cerca de vários minutos, várias horas ou mesmo vários dias. Além disso, podem ser empregues diferentes métodos de administração.

[0115] O segundo antigénio de polipéptido é de preferência um alergénio diferente do alergénio de ácaros do pó. Alergénios adequados para uso nos métodos da invenção podem, naturalmente, ser obtidos e/ou produzidos usando métodos conhecidos. Classes de alergénios adequados incluem, mas não se limitam a, outros alergénios de ácaros do pó, pólenes, pêlo de animal que não de gato (especialmente pêlo de gato), ervas, bolores, pós, antibióticos, venenos de picada de insecto e uma variedade de alergénios ambientais (incluindo químicos e metais), de fármacos e de alimentos. Alergénios comuns de árvores incluem pólenes de choupo, freixo, vidoeiro, bordo, carvalho, elmo, nogueira amarga e nogueira-pecã; alergénios comuns de plantas incluem os da artemísia, ambrósia, banana-da-terra, azedas e anserina; alergénios de plantas de contacto incluem os do carvalho venenoso, hera venenosa e urtigas; alergénios de erva comuns incluem os do azevém, erva-dos-prados, sorgo bravo, relva das bermudas, festuca e poa; alergénios comuns também podem ser obtidos de bolores ou fungos como a Alternaria, Fusarium, Hormodendrum, Aspergillus, Micropolyspora, mucor e actinomicetos termofílicos; alergénios epidérmicos podem ser obtidos a partir do pó doméstico ou orgânico (habitualmente de origem fúngica), ou de origem animal, como penas de aves e pêlo de cão; alergénios 57 alimentares comuns incluem leite e queijo (lacticínios), ovos, trigo, frutos de casca rija (p. ex., amendoim), marisco (p. ex., crustáceos), ervilhas, feijão e glúten; alergénios ambientais comuns incluem metais (níquel e ouro), químicos (formaldeído, trinitrofenol e turpentina), látex, borracha, fibras (algodão ou lã), serapilheira, tinta para o cabelo, cosméticos, detergentes e perfumes; alergénios de fármacos comuns incluem anestésicos locais e salicilato; alergénios de antibióticos incluem penicilina, tetraciclinas e sulfonamida; e alergénios comuns de insectos incluem alergénios de veneno de abelha, vespa e formiga e resíduos de barata. Alergénios particularmente bem caracterizados incluem, mas não se limitam ao, principal alergénios dos gatos Fel dl, fosfolipase A2 (PLA) do veneno de abelhas, (Akdis et al. (1996) J. Clin. Invest. 98:1676-1683), alergénio de pólen de vidoeiro Bet v 1 (Bauer et al. (1997) Clin. Exp. Immunol. 107:536-541), e o alergénio de relva multi-epitópico recombinante rKBG8.3 (Cao et al. (1997) Immunology 90:46-51). Estes e outros alergénios adequados estão comercialmente disponíveis e/ou podem ser facilmente preparados como extractos seguindo técnicas conhecidas.

[0116] De preferência, o segundo alergénio de polipéptido é seleccionado da lista de sequências de alergénio e números de acesso da base de dados (números de acesso ao Entrez do NCBI) abaixo. O NCBI é o National Center for Biotechnology Information e é uma divisão do US National Institutes of Health. O site da Web do NCBI, através do qual se pode aceder à base de dados é www.ncbi.nlm.nih.gov/. Sequências de alergénio e números de acesso da base de dados (números de acesso ao Entrez do NCBI) : 58 Ácaros do pó doméstico

Dermatophagoides pteronyssinus [0117]

Der p 1

MKIVLAIASLLALSAVYARPSSIKTFEEYKKAFNKSYATFEDEEAARKNFLES

VKYVQSNGGAINHLSDLSLDEFKNRFLMSAEAFEHLKTQFDLNAETNACSIN

GNAPAEIDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNQSLDLA

EQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGWQESYYRYVAREQSCRRPNAQR

FGISNYCQIYPPNVNKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGRTIIQRDNGY

QPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWrVRNSWDTNWGDNGYGYFAANIDLMMIEE

YPYWIL

Der p 2

IK/JJAMAbIOVbK8EMAAAlAKAWCDDGArVCVIVlHVmD 0ΓΕνΛΕΕνΜ0Μ1ΐανΐαΕΙΚν2Ι0αΓΕΑΟΛΕαΐΟΕΜν€ΗΛΙΛΙΚ:α>ΓΛΚ000ΛΟ WNAKircr8rrAWAVKDÓADAKDCVMHEIKKArAJbGCHG8EbCIIHKGKl>L·

Der p 3

MIIYNILIVLLLAINTLANPILPASPNATIVGGEKALAGECPYQISLQSSSHFCGG

TILDEYWILTAAHCVAGQTASKLSIRYNSLKHSLGGEKISVAKIFAHEKYDSY

QEDNDIALIKLKSPMKLNQKNAKAVGLPAKGSDVKVGDQVRVSGWGYLEEG

SYSLPSELRRVDIAWSRKECNELYSKANAEVTDNMICGGDVANGGKDSCQ

GDSGGPWDVKNNQWGIVSWGYGCARKGYPGVYTRVGNFIDWIESICRSQ

Der p 4 KYXNPHFIGXRSVITXLME Der p 5 59

MKFIIAFFVATLAVMTVSGEDKKHDYQNEFDFLLMERIHEQIKKGELALFYLQ

EQINHFEEKPTKEMKDKIVAEMDTI1AMIDGVRGVLDRLMQRKDLDIFEQYN

LEMAKKSGDILERDLKKEEARVKK1EV

Der p 6 AIGXQPAAEAEAPFQISLMK Der p 7

MMKLLLIAAAAFVAVSADPIHYDKITEEINKAVDEAVAAIEKSETFDPMKVP

DHSDKFERHIGIIDLKGELDMRNIQVRGLKQMKRVGDANVKSEDGWKAHL

LVGVHDDWSMEYDLAYKLGDLHPNTHV1SDIQDFWELSLEVSEEGNMTLT

SFEVRQFANWNHIGGLSILDPIFAVLSDVLTAIFQDTVRAEMTKVLAPAFKK

ELERNNQ

Der p9

IVGGSNASPGDAVYQIAL

Dermatophagoides farinae [0118]

Der f 1

MKFVLAIASLLVLTVYARPASIKTFEFKKAFNKNYATVEEEEVARKNFLESLK

YVEANKGAINHLSDLSLDEFKNRYLMSAEAFEQLKTQFDLNAETSACRINSV NVPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAYRNTSLDLSEQ ELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQQNGWEERSYPYVAREQRCRRPNSQHYG ISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGIKDLRAFQHYDGRTIIQHDNGYQP NYH A VNIV G Y GSTQGDD YWTVRN S WDTTW GDSGY G YFQAGNNLMMIEQY PYWIM

Der f 2 60

Derf 3

Der f 4 AVGGQDADLAEAPFQISLLK Derf 7

MMKFLLIAAVAFVAVSADPIHYDKHEEINKAIDDAIAAIEQSETIDPMKVPDH

ADKFERHVGIVDFKGELAMRNIEARGLKQMKRQGDANVKGEEGIVKAHLLI

GVHDDIVSMEYDLAYKLGDLHPTTHVISDIQDFWALSLEISDEGNITMTSFE

VRQFANWNHIGGLSILDPIFGVLSDVLTAIFQDTVRKEMTKVLAPAFKRELE

KN

[0119] Sequências adicionais de alergénios de ácaros (acesso ao Entrez do NCBI): 1170095; 1359436; 2440053; 666007; 487661; 1545803; 84702; 84699; 625532; 404370; 1091577; 1460058; 7413; 9072; 387592.

Gato [0120]

Sequências de Felis (acesso ao Entrez do NCBI): [0121] 539716; 539715; 423193; 423192; 423191; 423190; 1364213; 1364212; 395407; 163827; 163823; 163825; 1169665; 232086 1169666. Látex [0122]

Sequências de hévea: 61 [0123]

Hev b 1

MAEDEDNQQGQGEGLKYLGFVQDAATYAVTTFSNVYLFAKDKSGPLQPGV

DIIEGPVKNVAVPLYNRFSYIPNGALKFVDSTWASVTnDRSLPPIVKDASIQV

VSAIRAAPEAARSLASSLPGQTKJLAKVFYGEN

Hev b 3

MAEEVEEERLKYLDFVRAAGVYAVDSFSTLYLYAKDISGPLKPGVDTIENW

KTWTPVYYIPLEAVKFVDKTVDVSVTSLDGWPPVIKQVSAQTYSVAQDAP

RIVLDVASSVFNTGVQEGAKALYANLEPKAEQYAVITWRALNKLPLVPQVA

NVWPTAVYFSEKYNDWRGTTEQGYRVSSYLPLLPTEKITKVFGDEAS

[0124] Sequências adicionais de hévea (acesso ao Entrez do NCBI): 3319923; 3319921; 3087805; 1493836; 1480457 ; 1223884; 3452147; 3451147; 1916805; 232267; 123335; 2501578; 3319662; 3288200; 1942537; 2392631; 2392630 ; 1421554; 1311006; 494093; 3183706; 3172534; 283243; 1170248; 1708278; 1706547; 464775; 2661042; 231586; 123337; 116359; 123062; 2213877; 542013; 2144920; 1070656; 2129914; 2129913; 2129912; 100135; 82026; 1076559; 82028; 82027; 282933; 280399; 100138; 1086972; 108697; 1086976; 1086978; 1086978; 1086976; 1086974; 1086972; 913758; 913757; 913756; 234388; 1092500; 228691; 1177405; 18839; 18837; 18835; 18833; 18831; 1209317; 1184668; 168217; 168215; 168213; 168211; 168209; 348137.

Azevém [0125]

Sequências de Lolium: 62 [0126] 126385 Lol p 1

MASSSSVLLWALFAVFLGSAHGIAKVPPGPNHAEY GDKWLDAKSTWY GK

PTGAGPKDNGGACGYKNVDKAPFNGMTGCGNTPIFKDGRGCGSCFEIKCTK

PESCSGEAVTVTITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGSMAKKGEEQNVRSAGELEL

QFRRVKCKYPDDTKPTFHVEKASNPNYLAILVKYVDGDGDWAVDIKEKGK

DKWIELKESWGAVWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKSEFEDVIPEGWKADT

SYSAK 126386 Lol p 2a

AAPVEFTVEKGSDEKNLALSDCYNKEGDSMAEVELKEHGSNEWLALKKNGD

GVWEIKSDKPLKGPFNFRFVSEICGMRNVFDDWPADFKVGTTYKPE 126387 Lol p 3

TKVDLTVEKGSDAKTLVLNIKYTRPGDTLAEVELRQHGSEEWEPMTKKGNL

WEVKSAKPLTGPMNFRFLSKGGMKNVFDEVPTAFTVGKTYTPEYN 2498581 Lol p 5a

MAVQKYTVALFLRRGPRGGPGRSYAADAGYTPAAAATPATPAATPAGGWR

EGDDRRAEAAGGRQRLASRQPWPPLPTPLRRTSSRSSRPPSPSPPRASSPTSA

AKAPGLIPKLDTAYDVAYKAAEAHPRGQVRRLRHCPHRSLRVLAGALEVHA

VKPATEEVLAAKIPTGELQrVDKIDAAFKJAATAANAAPTNDKFTVFESAFNK

ALNECTGGAMRPTSSSPPSRPRSSRPTPPPSPAAPEVKYAVFEAALTKAITAM

TQAQKAGKPAAAAATAAATVATAAATAAAVLPPPLLWQSLISLLIYY 2498582 Lol p 5b

MAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATP

ATPATPAAVPSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAWPPADKYKTFVETF

GTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDA

YVATLTEALRV1AGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQLIDKVDAAYRTA

ATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAA

KQ AT AP EVKYTV S ET ALKKA VT AM S E AEKE ATP AAAAT ATPTP AAATAT AT

P AAAY ATATP AAATAT ATP AAAT ATP AAAGG YKV 63 455288 Lol p isoform 9

MAVQKHTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPATPAAPATAATPATP

ATPATPAAWSGKATTEEQKLIEKINAGFKAAVAAAAWPPADKYKTFVETF

GTATNKAFVEGLASGYADQSKNQLTSKLDAALKLAYEAAQGATPEAKYDA

YVATLTEALRVIAGTLEVHAVKPAAEEVKVGAIPAAEVQL1DKVDAAYRTA

ATAANAAPANDKFTVFENTFNNAIKVSLGAAYDSYKFIPTLVAAVKQAYAA

KQ AT APE VKYTV SETALKKA VT AMSEAEKE ATP AAAATATPTP AAATAT AT

P AAAY ATATP AAATATATP AAATATP AAAGG YK V 1582249 Lol p 11

DKGPGFWTGRVYCDPCRAGFETNVSHNVEGATVAVDCRPFDGGESKLKAE ATTDKDGWYKIEIDQDHQEEICEWLAKSPDKSCSEIEEFRDRARVPLTSNXG IKQQGIRY ANPIAFFRKEPLKECGGILQ AY

[0127] Sequências adicionais de Lolium (acesso ao Entrez do NCBI): 135480; 417103; 687261; 687259; 1771355 ; 2388662; 631955 542131; 542130; 542129; 100636; 626029; 542132; 320616; 320615; 320614; 100638; 100634; 82450; 626028; 100639; 283345; 542133; 1771353; 1763163 ; 1040877; 1040875; 250525; 551047; 515377; 510911; 939932; 439950; 2718; 168316; 168314; 485371; 2388664; 2832717; 2828273; 548867.

Oliveira

Sequências de oliveira [0128] 416610 Ole e 1

ÉDIPQPPVSQFHIQGQVYCDTCRAGFITELSEFIPGASLRLQCKDKENGDVTFT

EVGYTRAEGLYSMLVERDHKNEFCEITLISSGRKDCNEIPTEGWAKPSLKFKL

NTVNGTTRTVNPLGFFKKEALPKCAQVYNKLGMYPPNM 64

Parietaria [0129]

Sequências de Parietaria: [0130] 2497750 Par j P2

MRTVSMAALWIAAALAWTSSAEPAPAPAPGEEACGKWQDIMPCLHFVKG

EEKEPSKECCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVRATKGISGIKNELVAEVPK

KCDIKTTLPPITADFDCSKIQSTIFRGYY 1352506 Par j P2

MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAM

KTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGWPRQPQLPVSLRH

GPVTGPSDPAHKARLERPQIRVPPPAPEKA 1532056 Par j P8

MRTVSMAALWIAAALAWTSSAELASAPAPGEGPCGKWHHIMPCLKJFVKG

EEKEPSKSCCSGTKKLSEEVKTTEQKREACKCIVAATKGISGIKNELVAEVPK

KCGITTTLPPITADFDCSKIESTIFRGYY 1532058 Par j P9

MRTVSAPSAVALWIVAAGLAWTSLASVAPPAPAPGSEETCGTWRALMPC

LPFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGLQRVHACECIQTAMKTYSDIDGK

LVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGWPRQPQLPVSLRHGPVTGPSDPA

HKARLERPQIRVPPPAPEKA 2497749 Par j P9

MRTVSARSSVALWIVAAVLVWTSSASVAPAPAPGSEETCGTWGALMPCL

PFVQGKEKEPSKGCCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAMKTYSDIDGKL

VSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTLGVLHYKGN 65 1086003 Par j 1

MVRALMPCLPFVQGKEKEPSKGÇCSGAKRLDGETKTGPQRVHACECIQTAM

KTYSDIDGKLVSEVPKHCGIVDSKLPPIDVNMDCKTVGWPRQPQLPVSLRH

GPVTGPSRSRPPTKHGWRDPRLEFRPPHRKKPNPAFSTLG

[0131] Sequências adicionais de Parietaria (acesso ao Entrez do NCBI): 543659; 1836011; 1836010; 1311513; 1311512; 1311511; 1311510; 1311509; 240971.

Erva-dos-prados [0132]

Sequências de Phlevun: [0133]

Phl p 1

MASSSSVLLVWLFAVFLGSAYGIPKVPPGPNITATYGDKWLDAKSTWYGKP

TGAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPE

ACSGEPVWHITDDNEEPIAPYHFDLSGHAFGAMAKKGDEQKLRSAGELELQ

FRRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKYVNGDGDWAVDIKEKGK

DKWIELKESWGAIWRIDTPDKLTGPFTVRYTTEGGTKTEAEDVIPEGWKADT

SYESK

Phl p 1

MASSSSVLLWALFAVFLGSAHGIPKVPPGPNITATYGDKWLDAKSTWYGKP

TAAGPKDNGGACGYKDVDKPPFSGMTGCGNTPIFKSGRGCGSCFEIKCTKPE 66

ACSGEPWYHITDDNEEPIAAYHFDLSGIAFGSMAKKGDHQKLRSAGEVEIQF

RRVKCKYPEGTKVTFHVEKGSNPNYLALLVKFSGDGDWAVDIKEKGKDK

WIALKESWGAIWRIDTPEVLKGPFTVRYTTEGGTKARAKDVIPEGWKADTA

YESK

Phlp 2

MSMASSSSSSLLAMAVLAALFAGAWCVPKVTFTVEKGSNEKHLAVLVKYE GDTMAEVELREHGSDEWVAMTKGEGGVWTFDSEEPLQGPFNFRFLTEKGM KNVFDD WPEKYTIGATY APEE

Phl p 5

ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPA

DKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYK taegatpeakydayvatlsealriiagtlevhavkpaaeevkvipagelqvie

KVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEA A VKQAY AATVAT APEVKYTVFETALKKAFT AMSE AQKAAKP ΑΤΕΑΤΑΤ AT AAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5

ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPA DKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYK TAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIE K VDS AFKV AAT AANAAP ANDKFTVFEAAFNNAIKASTGG AYES YKFIP ALE A A VKQAY AATVAT APEVKYTVFET ALKKAITAMSE AQKAAKP ATE AT AT AT AAVGAATGAATAATGGYKV

Phl p 5b

AAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDIN

VGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVA

YKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGE

LQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIP

SLEAA VKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAHAMSEVQKVSQPATGAA

TVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 67

Phl p 5a

ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKA

ALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSK

LDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEV

KVPAGELQVffiKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGA

YESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAA

KP AAAAT AT ATAA V G AAT G AATAAT GG YK V

Phl p 5

MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQ KLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKJLD AAYSVSYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRV1AGALEVHAVKPVTEEPGM AKIPAGELQUDKIDAAFKVAATAAATAPADTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTY KCIPSLEAAVKQAY AATVAAAPQVKY AVFE AALTKAIT AMS EV QKV SQP AT G AATV AAG AATT AAG AASG AATVAAGG YKV

Phl p 5

MAVQKYTVALFLAVALVAGPAASYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQ KLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLD AAYSVAYKAAV G ATPE AKFDSFVASLTE ALRVLAG ALE VH A VKP VTEDP AW PKIP AGELQUDKIDAAFKV AAT AAAT AP ADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGA Y DTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQ PATG AATV AAG AATT ATG AASGAATV AAGGYKV

Phl p 5

ADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKF KTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVAS LTEALRVIAGALEVHA VKP VTEEPGMAKIPAGELQIIDKrDAAFKV AATAAAT APADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEAAVKQAYAATVAAAP QVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAAGAATTAAGAASGAA TVAAGGYKV 68

Phl ρ 5

SVKRSNGSAEVHRGAVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKA TTEEQKLIEDINVGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGL VPKLDAAYSVAYKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVT EEPGMAKIPAGELQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKES TGGAYDTYKCEPSLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAWEAALTKAITAMSEV QKVSQP ATGAATVAAGAATTAAGAA SG AATV AAGG YK V

Phl p 5

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAGSYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP

AGAEPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVPPADKYRTFVATFGAAS

NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY

VATVSEALRUAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA

NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT

APEVKYTWET ALKKAIT AMSEAQKAAKPAAAAT AT ATAA VG AATGAAT A

ATGGYKV

Phl p 5

ADLGYGGPATPAAPAEAAPAGKATTEEQKLIEKINDGFKAALAAAAGVPPA

DKYKTFVATFGAASNKAFAEGLSAEPKGAAESSSKAALTSFCLDAAYKLAYK

TAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIE

KVDSAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNNAIKASTGGAYESYKFIPALEA

AVKQAY AATV ATAPEVKYTWETALKKAFTAMSEAQKAAKPATEATAT AT AA VGAATG AAT AATGGYKV

Phl p5b

AAAAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDIN

VGFKAAVAAAASVPAADKFKTFEAAFTSSSKAAAAKAPGLVPKLDAAYSVA

YKAAVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKJPAGE

LQIIDKIDAAFKVAATAAATAPADDKFTWEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIP

SLEAAVKQAYAATVAAAPQVKYAWEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAA

TVAAGAATTAAGAASGAATVAAGGYKV 69

Phl p5a

ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKA

ALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSK

LDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEV

KVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGA

YESYKEIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTVFETALKKAITAMSEAQKAA

KP AAAAT AT AT AA V G AAT G AAT AATGG YKV

Phl p 5

AVPRRGPRGGPGRSYAADAGYAPATPAAAGAEAGKATTEEQKLIEDINVGF KAAVAAAASVPAGDKFKTFEAAFTSSSKAATAKAPGLVPKLDAAYSVAYKA AVGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQII DKID AAFKV AATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCEPSLE AAVKQAYAATVAAAPQVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVA AG AATT AT G AASG AATV A AGG YK V

Phl p 5b

MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVG

FKAAVAARQRPAADKFKTFEAASPRHPRPLRQGAGLVPKLDAAYSVAYKAA

VGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIID

KJD AAFKV AATAAATAP ADDKFTVFE AAFNKADCESTGG A YDTYKCIP S LEA AVKQ AY AATVAAAAEVKY A VFEAALTKAITAMSEVQKVSQP ATGAATVAA GAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP

AEAAPAGKATTEEQKLEEKJNAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS

NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY

VATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVD AAFKV AATAA

NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT

APE VKYTVFET ALKKAIT AM SE AQKAA KP A AAAT AT AT A A VG AAT GA AT A

ATGGYKV 70

Phl ρ 5

EAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALARRLQPADKYRTFVATFGPASNKAFA

EGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLS

EALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAAELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPA

NDKFTVFEAAFNDEIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKY

TVFETALKKAITAMSEAQKAAKPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV

Phl p 5

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP

AEAAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS

NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY

VATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA

NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT

APE VKYT VFET ALKKAITAMSE AQKAAKP AAAAT AT AT AA VG AAT G AAT A

ATGGYKV

Phl p 5b

MAVPRRGPRGGPGRSYTADAGYAPATPAAAGAAAGKATTEEQKLIEDINVG

FKAAVAARQRPAADKFKTFEAASPRHPRPLRQGAGLVPKLDAAYSVAYKAA

VGATPEAKFDSFVASLTEALRVIAGALEVHAVKPVTEEPGMAKIPAGELQIID

KJDAAFKVAATAAATAPADDKFTVFEAAFNKAIKESTGGAYDTYKCIPSLEA

AVKQAYAATVAAAAEVKYAVFEAALTKAITAMSEVQKVSQPATGAATVAA

GAATTAAGAASGAATVAAGGYKV

Phl p 5a

ADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAPAGADAAGKATTEEQKLIEKINAGFKA

ALAGAGVQPADKYRTFVATFGPASNKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSK

LDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEV

KVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAANAAPANDKFTVFEAAFNDEIKASTGGA

YESYKFIPALEAAVKQAYAATVATAPEVKYTWETALKKA1TAMSEAQKAA

KPPPLPPPPQPPPLAATGAATAATGGYKV 71

Phl ρ 5

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADLGYGPATPAAPAAGYTPATPAAP

AEAAPAGKATTEEQKLIEKINAGFKAALAAAAGVQPADKYRTFVATFGAAS

NKAFAEGLSGEPKGAAESSSKAALTSKLDAAYKLAYKTAEGATPEAKYDAY

VATLSEALRIIAGTLEVHAVKPAAEEVKVIPAGELQVIEKVDAAFKVAATAA

NAAPANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYESYKFIPALEAAVKQAYAATVAT

APEVKYTVFETALKXAITAMSEAQKAAKPAAAATATATAAVGAATGAATA

ATGGYKV

Phl p 6

MAAH1CFMVAMFLAVAWLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDVNASFRAAM ATTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNA ADH AA P E DKYEAF VLHFS EALRIIAGTPE VH A VKPG A

Phl p 6

SKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHA

VKPGA

Phl p 6

ADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAPE

DKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHAVKPGA

Phl p 6

TEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVPPADKYKTLEAAFTVSSKRNLADAVSK AP QLVPKLDE VYN AA YN A A DH AAP EDKYEAF VLHFS EALRIIAGTP E VHA VK PGA

Phl p 6

MAAHKFMVAMFLAVAWLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDINASFRAAMA TTANVPPADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAA DHAAPEDKYEAFVLHFSEALHIIAGTPEVHA VKPGA

Phl p 6

MVAMFLAVAWLGLATSPTAEGGKATTEEQKLIEDVNASFRAAMATTANVP PADKYKTFEAAFTVSSKRNLADAVSKAPQLVPKLDEVYNAAYNAADHAAP EDKYEAFVLHFSEALRIIAGTPEVHA VKPGA 72

Phl ρ 7 ΟΕΙΌΕΜΕΕΙδΕαΊνΜΒαΓΝΚϋΛνΚΛΕ

WVDDWEKItK¥tDlMGDGK18r2EriDVrKirG212VDEAÓKlMWVEIDlDGD

Phl ρ 11

MSWQTYVDEHLMCEIEGHHLASAAILGHDGTVWAQSADFPQFKPEEITGIM

KDFDEPGHLAPTGMFVAGAKYMVIQGEPGRVIRGKKGAGGITIKKTGQALV

VGIYDEPMTPGQCNMWERLGDYLVEQGM

[0134] Sequências adicionais de Phleum (acesso ao Entrez do NCBI): 458878; 548863; 2529314; 2529308; 2415702; 2415700; 2415698; 542168; 542167; 626037; 542169; 541814; 542171; 253337; 253336; 453976; 439960 .

Vespa (e relacionados)

Sequências de Vespula: [0135] 465054 ALERGÉNIO VES V 5 MEISGLVYLinVTnDLPYGKANNYCKIKCLKGGVHTACKYGSLKPNCGNKV WSYGLTKQEKQDILKEHNDFRQKIARGLETRGNPGPQPPAKNMKNLVWND ELAYVAQVWANQCQYGHDTCRDVAKYQVGQNVALTGSTAAKYDDPVKLV KMWEDEVKDYNPKKKFSGNDFLKTGHYTQMVWANTKEVGCGSIKYIQEK WHKHYLVCNY GPSGNFMNEELYQTK. 73 1709545 ALERGÉNIO VES Μ 1

GPKCPFNSDTVSIIIETRENRNRDLYTLQTLQNHPEFKKKTITRPWFITHGFTS

SASEKNFINLAKALVDKDNYMVISIDWQTAACTNEYPGLKYAYYPTAASNT

RLVGQYIATITQKLVKDYKISMANIRLIGHSLGAHVSGFAGKRVQELKLGKYS

EIIGLDPARPSFDSNHCSERLCETDAEYVQIIHTSNYLGTEK1LGTVDFYMNNG

KNNPGCGRFFSEVCSHTRAVIYMAECIICHECCLIGIPRSKSSQPISRCTKQECV

CVGLNAKKYPSRGSFYVPVESTAPFCNNKGKII 1352699 ALERGÉNIO VES V 1

MEENMNLKYLLLFVYFV Q VLNCC Y GHGDPLS YELDRGPKCPFN SDTVSIIIET

RENRNRDLYTLQTLQNHPEFKKKTITRPWFITHGFTSSASETNFINLAKALVD

KDNYMVISIDWQTAACTNEAAGLKYLYYPTAARNTRLVGQYIATITQKLVK

HYKlSMANíRLIGHSLGAHASGFAGKKVQELKLGKYSEííGLDPARPSFDSNH

CSERLCETDAEYVQIIHTSNYLGTEKTLGTVDFYMNNGKNQPGCGRFFSEVC

SHSRAVIYMAECIKHECCLIGIPKSKSSQPISSCTKQECVCVGLNAKKYPSRGS

FYVPVESTAPFCNNKGKJI 1346323 ALERGÉNIO VES V 2

SERPKRVFNIYWNVPTFMCHQYDLYFDEVTNFNIKRNSKDDFQGDKIAIFYD

PGEFPALLSLKDGKYKKRNGGVPQEGNITIHLQKFIENLDKIYPNRNFSGIGVI

DFERWRPIFRQNWGNMKIHKNFSIDLVRNEHPTWNKKMIELEASKRFEKYA

RFFMEETLKLAKKTRKQADWGYYGYPYCFNMSPNNLVPECDVTAMHENDK

MSWLFNNQNVLLPSVYVRQELTPDQRIGLVQGRVKEAVRISNNLKHSPKVLS

YWWYVYQDETNTFLTETDVKKTFQEIVINGGDGinWGSSSDVNSLSKCKRL

QDYLLTVLGPIAINVTEAVN 74

549194 ALERGÉNIO VES VI 5KVNYCKIKCLKGGVHTACKYGTSTKPNCGKMWKAYGLTEAEKQEILKVH

NDFRQKVAKGLETRGNPGPQPPAKNMNNLVWNDELANIAQVWASQCNYG

HDTCKDTEKYPVGQNIAKRSTTAALFDSPGKLVKMWENEVKDFNPNIEWSK

NNLKKTGHYTQMVWAKTKEIGCGSVKYVKDEWYTHYLVCNYGPSGNFRN EKLYEKK [0136] Sequências adicionais de Vespula (acesso ao Entrez do NCBI): 549193; 549192; 549191; 549190; 5491104; 117414; 126761; 69576; 625255; 6271104; 627188; 627187; 482382; 112561; 627186; 627185; 1923233; 1047645; 1047647; 745570; 225764; 162551.

Sequências de alergénios de árvores (principalmente de vidoeiro): [0137] 114922 Bet v 1

MGVFNYETETTSVIPAARLFKAFILDGDNLFPKVAPQAISSVENIEGNGGPGTI

KKISFPEGFPFKYVKDRVDEVDHTNFKYNYSVIEGGPIGDTLEKISNEIKIVAT

PDGGSILKISNKYHTKGDHEVKAEQVKASKEMGETLLRAVESYLLAHSDAY

N 130975 Bet v 2 MSWQTYVDEHLMCDIDGQASNSLASAIVGHDGSVWAQSSSFPQFKPQEITG1

MKDFEEPGHLAPTGLHLGGIKYMVIQGEAGAVIRGKKGSGGITIKKTGQALV

FGIYEEPVTPGQCNMWERLGDYLIDQGL 75 1168696 Bet v 3

MPCSTEAMEKAGHGHASTPRKRSLSNSSFRLRSESLNTLRLRRIFDLFDKNSD

GIITVDELSRALNLLGLETDLSELESTVKSFTREGNIGLQFEDF1SLHQSLNDSY

FAYGGEDEDDNEEDMRKSILSQEEADSFGGFKVFDEDGDGYISARELQMVL

GKLGFSEGSEIDRVEKMIVSVDSNRDGRVDFFEFKDMMRSVLVRSS 809536 Bet v 4

MADDHPQDKAERERIFKRFDANGDGKISAAELGEALKTLGSITPDEVKHMM

AEIDTDGDGFISFQEFTDFGRANRGLLKDVAKIF

543675 Que a I - Quercus alba = carvalhos (fragmento) GVFTXESQETSVIAPAXLFKALFL 543509 Car b I - Carpinus betulus = faias-brancas (fragmento)

GVFNYEAETPSVIPAARLFKSYVLDGDKLIPKVAPQAIXK 543491 Aln g I - Alnus glutinosa = amieiros (fragmento)

GVFNYEAETPSVIPAARLFKAFILDGDKLLPKVAPEAVSSVENI 1204056 Rubisco

VQCMQVWPPLGLKKFETLSYLPPLSSEQLAKEVDYLLRKNLIPCLEFELEHGF

VYREHNRSPGYYDGRYWTMWKLPMFGCNDSSQVLKELEECKKAYPSAFIRI IGFDDK [0138] Sequências adicionais de alergenios de arvores (número de acesso ao Entrez do NCB): 131919; 128193; 585564; 2414158; 1321728; 1321726; 1321718; 1321716; 1321714; 464576; 1705843; 1168701; 1168707; 1168706; 1168705; 1842188; 2564228; 2564226; 2051993; 18131041; 15368104 1340000; 1339998; 2149808; 1076247; 629480; 481805; 1361966; 1361965; 1361964; 1942360; 2554672; 2392209; 1321724; 1321722; 1321720; 1321712; 3015520; 2935416; 1168710; 1168709; 1168708; 1168704; 1168703; 1168702; 2564224; 2564222; 2564220; ; 534910; 534900; 5341048; 66207; 2129477; 1076249; 81443; 1361968; 1361967; 1361963; 1361962; 1361961; 76 1361960; 1361959; 320546; 629483 ; 629482; 629481; 541804; 320545; 81444; 541814:; 629484; 474911; 452742; 1834387; 298737; 298736; 1584322; 1584321; 584320; 1542873; 1542871; 1542869; 1542867; 1542865; 1542863; 1542861; 1542859; 1542857; 1483232; 1483230; 1483228; 558561; 551640; 488605; 452746; 452744; 452740; 452738; 452736; 452734; 452732; 452730; 452728; 450885; 17938; 17927; 17925; 17921; 297538; 510951; 2104331; 2104329; 166953 .

Amendoim

Sequências de amendoim [0139] 1168391 Ara h 1

MRGRVSPLMLLLGILVLASVSATHAKSSPYQKKTENPCAQRCLQSCQQEPDD

LKQKACESRCTKLEYDPRCVYDPRGHTGTTNQRSPPGERTRGRQPGDYDDD

RRQPRREEGGRWGPAGPREREREEDWRQPREDWRRPSHQQPRKIRPEGREG

EQEWGTPGSHVREETSRNNPFYFPSRRFSTRYGNQNGRIRVLQRFDQRSRQF

QNLQNHRIVQIEAKPNTLVLPKHADADNILVIQQGQATVTVANGNNRKSFNL

DEGHALRIPSGFISYILNRHDNQNLRVAKISMPVNTPGQFEDFFPASSRDQSSY

LQGFSRNTLEAAFNAEFNEIRRVLLEENAGGEQEERGQRRWSTRSSENNEGVI

VKVSKEHVEELTKHAKSVSKKGSEEEGDITNPINLREGEPDLSNNFGKLFEVK

PDKKNPQLQDLDMMLTCVEKEGALMLPHFNSKAMVIWVNKGTGNLELV

AVRKEQQQRGRREEEEDEDEEEEGSNREVRRYTARLKEGDVFIMPAAHPVAI

NASSELHLLGFGINAENNHRIFLAGDKDNVIDQIEKQAKDLAFPGSGEQVEKL

IKNQKESHFVSARPQSQSQSPSSPEKESPEKEDQEEENQGGKGPLLSILKAFN

Ambrósia

Sequências de ambrósia 77 [0140] 113478 Amb a 1

MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDLQQILPSANETRSLTTCGTYNIIDGC

WRGKADWAENRKALADCAQGFAKGTIGGKDGDIYTVTSELDDDVANPKEG

TLRFGAAQNRPLWIIFARDMVIRLDRELAINNDKTIDGRGAKVEIINAGFAIYN

VKNIUHNUMHDIWNPQGLIKSHDGPPWRKGSDGDAIGISGGSQIWIDHCSLS

KAVDGLIDAKHGSTHFTVSNCLFTQHQYLLLFWDFDERGMLCTVAFNKFTD

NVDQRMPNLRHGFVQWNNNYERWGSYALGGSAGPTILSQGNRFLASDKK

EWGRYGESAMSESINWNWRSYMDVFENGAIFVPSGVDPVLTPEQNAGMIP

AEPGEAVLRLTSSAGVLSCQPGAPC 113479 Amb a 2

MG1KHCCYILYFTLALVTLVQAGRLGEEVDILPSPNDTRRSLQGCEAHNIIDK

CWRCKPDWAENRQALGNCAQGFGKATHGGKWGDIYMVTSDQDDDWNP

KEGTLRFGATQDRPLWIIFQRDMIIYLQQEMWTSDKTIDGRGAKVELVYGGI

TLMNVKNVIIHNIDIHDVRVLPGGRIKSNGGPAIPRHQSDGDAIHVTGSSDIWI

DHCTLSKSFDGLVDVNWGSTGVTISNCKFTHHEKAVLLGASDTHFQDLKMH

VTLAYNEFTNTVHERMPRCRFGFFQIVNNFYDRWDKYAIGGSSNPTILSQGNK

FVAPDFIYKKNVCLRTGAQEPEWMTWNWRTQNDVLENGAJFVASGSDPVLT AEQNAGMMQAEPGDMVPQLTMNAGVLTCSPGAPC 113477 Amb a 1.3

MGIKQCCYILYFTLALVALLQPVRSAEGVGEILPSVNETRSLQACEALNIIDKC

WRGKADWENNRQALADCAQGFAKGTYGGK.WGDVYTVTSNLDDDVANPK

EGTLRFAAAQNRPLWHFKNDMVINLNQELWNSDKTIDGRGVKVEIINGGLT

LMNVKNIIIHNINIHD VKVLPGGMIKSNDGPPILRQA SDGDTIN V AGS SQIWID

HCSLSKSFDGLVDVTLGSTHVTISNCKFTQQSKAILLGADDTHVQDKGMLAT

VAFNMFTDNVDQRMPRCRFGFFQWNNNYDRWGTYAIGGSSAPTILCQGNR

FLAPDDQIKKNVLARTGTGAAESMAWNWRSDKDLLENGAIFVTSGSDPVLT

PVQSAGMIPAEPGEAAIKLTSSAGVFSCHPGAPC 78 113476 Amb a 1.2

MGIKHCCYILYFTLALVTLLQPVRSAEDVEEFLPSANETRRSLKACEAHNIIDK

CWRCKADWANNRQALADCAQGFAKGTYGGKHGDVYTVTSDKDDDVANP

KEGTLRFAAAQNRPLWIIFKRNMVIHLNQELVWSDKTIDGRGVKVNIVNAG

LTLMNYKNIUHNINIHDIKVCPGGMIKSNDGPPILRQQSDGDAINVAGSSQIWI

DHCSLSKASDGLLDITLGSSHVTVSNCKFTQHQFVLLLGADDTHYQDKGML atvafnmftdhvdqrmprcrfgffqwnnnydrwgtyaiggssaptilsqg

NRFFAPDDIIKKNVLARTGTGNAESMSWNWRTDRDLLENGAIFLPSGSDPVL

TPEQKAGMIPAEPGEAVLRLTSSAGVLSCHQGAPC 113475 Amb a 1.1

Sequências de cedro [0141]

493634 precursor de Cry j IB

MDSPCLVALLVFSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS

STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKM

PMY1AGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLYLYGCSTSVLGNVL

INESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLTSTGVTISN

NLFFNH Η K VM SLGHDD A Y SDDKSMK VTVAFNQFGPNCGQRMPRARY GLV

HVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCS

NWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPHLTQNA

GVLTCSLSKRC 79

493632 precursor de Cry j IA

MDSPCLVALLVLSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS

STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLK

MPMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLHLYGCSTSVLGN

VLINESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLSSTGVTI

SNNLFFNHHKVMLLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGL

VHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSC

SNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPQLTKN

AGVLTCSLSKRC 1076242 precursor de Cry j II - cedro japonês

MAMKLIAPMAFLAMQLIIMAAAEDQSAQIMLDSWEKYLRSNRSLRKVEHS

RHDAINIFNVEKYGAVGDGKHDCTEAFSTAWQAACíCNPSAMLLVPGSKKFV

VNNLFFNGPCQPHFTFKVDGIIAAYQNPASWKNNRIWLQFAKLTGFTLMGKG

VIDGQGKQWWAGQCKWVNGREICNDRDRPTAIKFDFSTGLIIQGLKLMNSPE

FHLVFGNCEGVKIIGISITAPRDSPNTDGIDIFASKNFHLQKNTIGTGDDCVAIG

TGSSNIVIEDLICGPGHGISIGSLGRENSRAEVSYVHVNGAKFIDTQNGLRIKT

WQGGSGMASHIIYENVEMINSENPILINQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYK

NIRGTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKLSDISLKLTSGKIASCLNDNANGYFSGH

VIPACKNLSPSAKRKESKSHKHPKTVMVENMRAYDKGNRTRILLGSRPPNCT

NKCHGCSPCKAKLVIVHRIMPQEYYPQRWICSCHGKIYHP 1076241 proteína Cry j II - cedro japonês

MAMKFIAPMAFVAMQLIIMAAAEDQSAQIMLDSDIEQYLRSNRSLRKVEHSR

HDAINIFNVEKYGAVGDGKHDCTEAFSTAWQAACKKPSAMLLVPGNKKFV

VNNLFFNGPCQPHFTFKVDGIIAAYQNPASWKNNRrWLQFAKLTGFTLMGKG

VIDGQGKQWWAGQCKWVNGREICNDRDRPTAIKFDFSTGLIIQGLKLMNSPE

FHLVFGNCEGVKIIGISITAPRDSPNTDGroiFASKNFHLQKNTIGTGDDCVAIG

TGSSNIVIEDLICGPGHGIS1GSLGRENSRAEVSYVHVNGAKFIDTQNGLRIKT

WQGGSGMASHIIYENVEMINSENPILINQFYCTSASACQNQRSAVQIQDVTYK

NIRGTSATAAAIQLKCSDSMPCKDIKLSDISLKLTSGKIASCLNDNANGYFSGH

VIPACKNLSPSAKRKESKSHKHPKTVMVKNMGAYDKGNRTRILLGSRPPNCT

NKCHGCSPCKAKLVIVHRIMPQEYYPQRWMCSRHGKIYHP 80 541803 precursor de Cry j I - cedro japonês

MDSPCLVALLVLSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS

STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLKM

PMYIAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLHLYGCSTSVLGNVL

INESFGVEPVHPQDGDALTLRTATNIWIDHNSFSNSSDGLVDVTLSSTGVTISN

NLFFNHHKVMLLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGLV

HVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSCS

NWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPQLTKNA

GVLTCSLSKRC 541802 precursor de Cry j I - cedro japonês

MDSPCLVALLVFSFVIGSCFSDNPIDSCWRGDSNWAQNRMKLADCAVGFGS

STMGGKGGDLYTVTNSDDDPVNPAPGTLRYGATRDRPLWIIFSGNMNIKLK

MPMYLAGYKTFDGRGAQVYIGNGGPCVFIKRVSNVIIHGLYLYGCSTSVLGN

VLINESFGVHPVHPQDGDALTLRTATNrWIDHNSFSNSSDGLVDVTLTSTGVTI

SNNLFFNHHKVMSLGHDDAYSDDKSMKVTVAFNQFGPNCGQRMPRARYGL

VHVANNNYDPWTIYAIGGSSNPTILSEGNSFTAPNESYKKQVTIRIGCKTSSSC

SNWVWQSTQDVFYNGAYFVSSGKYEGGNIYTKKEAFNVENGNATPHLTQN

AGVLTCSLSKRC Cão

Sequências Caninas: [0142]

Can f 1

MKTLLLTIGFSLIAILQAQDTPALGKDTVAVSGKWYLKAMTADQEVPEKPDS

VTPMILKAQKGGNLEAK1TMLTNGQCQN1TWLHKTSEPGKYTAYEGQRW

FIQPSPVRDHYILYCEGELHGRQIRMAKLLGRDPEQSQEALEDFREFSRAKGL

NQEILELAQSETCSPGGQ

Fragmento de albumina sérica EAYKSEIAHRYNDLGEEHFRGLVL 81

Fragmento de albumina sérica

LSSAKERFKCASLQKFGDRAFKAWSVARLSQRFPKADFAEISKWTDLTKVH

KECCHGDLLECADDRADLAKYMCENQDSISTKLKECCDKPVLEKSQCLAEV

ERDELPGDLPSLAADFVEDKEVCKNYQEAKDVFLGTFLYEYSRRHPEYSVSL

LLRLAKEYEATLEKCCATDDPPTCYAKVLDEFKPLVDEPQNLVKTNCELFEK

LGEYGFQNALLVRYTKKAPQVSTPTLWEVSRKLGKVGTKCCKKPESERMS

CADDFLS

Can f 2

MQLLLLTVGLALICGLQAQEGNHEEPQGGLEELSGRWHSVALASNKSDLEKP WGHFRVFIHSMSAKDGNLHGDILIPQDGQCEKVSLTAFKTATSNKFDLEYWG HNDLYLAEVDPKSYLILYMINQYNDDTSLVAHLMVRDLSRQQDFLPAFESVC EDIGLHKDQIWLSDDDRCQGSRD

[0143] Proteínas adicionais de alergénios de cão (acesso ao NCBI): 1731859

Cavalo

Sequências de Equus: [0144] 1575778 Equ Cl

MKLLLLCLGLILVCAQQEENSDVAIRNFDISKISGEWYSIFLASDVKEKIEENG SMRVFVDVIRALDNSSLY AEY QTKVNGECTEFPMVFDKTEEDG VYSLNYDG YNVFRISEFENDEHIILYLVNFDKDRPFQLFEFYAREPDVSPEIKEEFVKIVQKR GÍVKENIIDLTKIDRCFQLRGNGVAQA

3121755 Equ c 2 SQXPQSETDYSQLSGEWNTIYGAASNIXK 82

Euroglyphus (ácaro)

Sequências de Euroglyphus: [0145]

Eur m 1 (variante)

TYACSINSVSLPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVASTESAYLAYRN

MSLDLAEQELVDCASQNGCHGDTIPRGIEYIQQNGWQEHYYPYVAREQSC

HRPNAQRYGLKNYCQISPPDSNKIRQALTQTHTAVAVIIGIKDLNAFRHYDGR

TIMQHDNGYQPNYHAVNIVGYGNTQGVDYWIVRNSWDTTWGDNGYGYFA

ANINL

Eur m 1 (variante)

TYACSINSVSLPSELDLRSLRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVASTESAYLAYRN MSLDLAEQELVDCASQNGCHGDTIPRGIEYIQQNGWQEHYYPYVAREQSC HRPNAQRYGLKNYCQISPPDSNKIRQALTQTHTAVAVnGIKDLNAFRHYDGR TIMQHDNG Y QPNYHAVNIVGY GNTQG VDYWIVRNS WDTTWGDNGY GYFA ANINL

Eur m 1 (variante)

ETNACSINGNAPAEEDLRQMRTVTPIRMQGGCGSCWAFSGVAATESAYLAY

RNQSLDLAEQELVDCASQHGCHGDTIPRGIEYIQHNGWQESYYRYVAREQS

CRRPNAQRFGISNYCQIYPPNANKIREALAQTHSAIAVIIGIKDLDAFRHYDGR

TIIQRDNGYQPNYHAVNIVGYSNAQGVDYWIVRNSWDTNWGDNGYGYFAA

NIDL

Eur m 1 (variante) etsacrinsvnvpseldlrslrtvtpirmqggcgscwafsgvaatesaylay 83

RNTSLDLSEQELVDCASQHGCHGDTEPRGIEYIQQNGWEERSYPYVAREQQ

CRRPNSQHYGISNYCQIYPPDVKQIREALTQTHTAIAVIIGIKDLRAFQHYDGR

TIIQHDNGYQPNYHAVNIVGYGSTQGVDYWIVRNSWDTTWGDSGYGYFQA

GNNL

Sequências de Poa (relva) [0146] 113562 ALERGÉNIO DE PÓLEN DE POA P 9

MAVQKYTVALFLVALWGPAASYAADLSYGAPATPAAPAAGYTPAAPAGA

APKATTDEQKMIEKINVGFKAAVAAAGGVPAANKYKTFVATFGAASNKAFA

EALSTEPKGAAVDSSKAALTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYDDYVATLS

EALRIIAGTLEVHGVKPAAEEVKATPAGELQVIDKVDAAFKVAATAANAAPA

NDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAYQSYKFIPALEAAVKQSYAATVATAPAVK

YTVFETALKKAITAMSQ AQKAAKP AAAAT GT AT AA V GAAT G AAT AAAGGY

KV 113561 POA P 9

MAVHQYTVALFLAVALVAGPAASYAADVGYGAPATLATPATPAAPAAGYT PAAPAGAAPKATTDEQKLIEKINAGFKAAVAAAAGVPAVDKYKTFVATFGT ASNKAFAEALSTEPKGAAAASSNAVLTSKLDAAYKLAYKSAEGATPEAKYD AYVATLSEALRI1AGTLEVHAVKPAGEEVKAIPAGELQVIDKVDAAFKVAAT AANAAP ANDKFTVFEAAFNDAIKASTGGAY QS YKFIPALEAAVKQS Y AATV ATAPAVKYTVFETALKKAITAMSQAQKAAKPAAAVTATATGAVGAATGAV GAATGAATAAAGGYKTGAATPTAGGYKV 113560 POA P 9

MDKANGAYKTALKAASAVAPAEKFPVFQATFDKNLKEGLSGPDAVGFAKK

LDAFIQTSYLSTKAAEPKEKFDLFVLSLTEVLRFMAGAVKAPPASKFPAKPAP

KVAAYTPAAPAGAAPKATTDEQKLIEKINVGFKAAVAAAAGVPAASKYKTF

VATFGAASNKAFAEALSTEPKGAAVASSKAVLTSKLDAAYKLAYKSAEGAT

PEAKYDAYVATLSEALRIIAGTLEVHGVKPAAEEVKAIPAGELQVIDKVDAA

Sequências de barata 84 [0147] 2833325 Cr pl

MKTALVE AAWAFV AARFPDHKDYKQLADKQFLAKQRD VLRLFHR VH QHN

ELNDQVEVGIPMTSKQTSATTVPPSGEAVHGVLQEGHARPRGEPFSVNYEKH

REQAIMLYDLLYFANDYDTFYKTACWARDRVNEGMFMYSFSIAVFHRDDM

QGVMLPPPYEVYPYLFVDHDVIHMAQKYWMKNAGSGEHHSHVIPVNFTLR

TQDHLLAYFTSDVNLNAFNTYYRYYYPSWYNTTLYGHNIDRRGEQFYYTYK

QIYARYFLERLSNDLPDVYPFYYSKPVKSAYNPNLRYHNGEEMPVRPSNMY

VTNFDLYYIADIKNYEKRVEDAIDFGYAFDEHMKPHSLYHDVHGMEYLADM

IEGNMDSPNFYFYGSIYHMYHSMIGHIVDPYHKMGLAPSLEHPETVLRDPVF

YQLWKRVDHLFQKYKNRLPRYTHDELAFEGVKVENVDVGKLYTYFEQYD

MSLDMAVYVNNVDQISNVDVQLAVRLNHKPFTYNIEVSSDKAQDVYVAVF

LGPKYDYLGREYDLNDRRHYFVEMDRFPYHVGAGKTVIERNSHDSNIIAPER

DSYRTFYKKVQEAYEGKSQYYVDKGHNYCGYPENLLIPKGKKGGQAYTFY

VIVTPYVKQDEHDFEPYNYKAFSYCGVGSERKYPDNKPLGYPFDRKIYSNDF

YTPNMYFKDVnFHKKYDEVGVQGH 2231297 Cr p2

INEIHSIIGLPPFVPPSRRHARRGVGINGLIDDV1AILPVDELKALFQEKLETSPD

FKALYDAIRSPEFQSIISTLNAMQRSEHHQNLRDKGVDVDHFIQLIRALFGLSR

AARNLQDDLNDFLHSLEPISPRHRHGLPRQRRRSARVSAYLHADDFHKIITTIE

ALPEFANFYNFLKEHGLDWDYINEIHSIIGLPPFVPPSRRHARRGVGINGLIDD

VIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALYDAIRSPEFQSnSTLNAMPEYQELLQN

LRDKGVDVDHFIRVDQGTLRTLSSGQRNLQDDLNDFLALIPTDQILAIAMDYL

ANDAEVQELVAYLQSDDFHKinTIEALPEFANFYNFLKEHGLDWDYINEIHS

IIGLPPFVPPSQRHARRGVGINGLIDDVIAILPVDELKALFQEKLETSPDFKALY

DAEJLRSSRA 85 1703445 Bla g 2

MIGLKLVTVLFAVATITHAAELQRVPLYKJLVHWÍNTQYAGITKJGNQNFLTV

FDSTSCNVWASQECVGGACVCPNLQKYEKLKPKYISDGNVQVKFFDTGSA

V GRGIED SLTISNLTTSQQDIVLADELSQEVCILS AD VW GIAAPGCPN ALKGK

TVLENFVEENLIAPVFSIHHARFQDGEHFGEIIFGGSDWKYVDGEFTYVPLVG

DDSWKFRLDGVKIGDTTVAPAGTQAIIDTSKAIIVGPKAYVNPINEAIGCWE

KTTTRRICKLDCSKIPSLPDVTFVINGRNFNISSQYYIQQNGNLCYSGFQPCGH

SDHFFIGDFFVDHYYSEFNWENKTMGFGRSVE

SV 1705483 Bla g 4

AVLALCATDTLANEDCFRHESLVPNLDYERFRGSWIIAAGTSEALTQYKCWI

DRFSYDDALVSKYTDSQGKNRmRGRTKFEGNKFTIDYNDKGKAFSAPYSV

LATDYENYAIVEGCPAAANGHVTYVQIRFSVRRFHPKLGDKEMIQHYTLDQV

NQHKKAIEEDLKHFNLKYEDLHSTCH 2326190 Bla g 5

YKLTYCPVKALGEPIRFLLSYGEKDFEDYRFQEGDWPNLKPSMPFGKTPVLEI

DGKQTHQSVAISRYLGKQFGLSGKDDWENLEIDMIVDTISDFRAAIANYHYD

ADENSKQKKWDPLKKETIPYYTKKFDEWKANGGYLAAGKLTWADFYFVA ILDYLNHMAKEDLVANQPNLKALREKVLGLPAIKAWVAKRPPTDL [0148] Sequências adicionais de barata (números de acesso ao NCBI): 2580504; 1580797; 1580794; 1362590; 544619; 544618; 15315104; 1580792; 1166573; 1176397; 21047849.

Sequências de alergénio (gerais): [0149]

Números de acesso do NCBI 2739154; 3719257; 3703107; 3687326; 3643813; 3087805; 1864024; 1493836; 1480457; 25910476; 25910474; 1575778; 86 763532; 746485; 163827; 163823; 3080761; 163825; 3608493; 3581965; 2253610; 2231297; 21047849; 3409499; 3409498 3409497; 3409496; 3409495; 3409494; 3409493; 3409492 3409491; 3409490; 34094104; 3409488; 3409487; 3409486 3409485; 3409484; 3409483; 3409482; 3409481; 3409480 3409479; 3409478; 3409477; 3409476; 3409475; 3409474 3409473; 3409472; 3409471; 3409470; 3409469; 3409468 3409467; 3409466; 3409465; 3409464; 3409463; 3409462 3409461; 3409460; 3409459; 3409458; 3409457; 3409456 3318885; 3396070 ; 3367732 1916805; 3337403; 2851457 2851456; 1351295; 549187; 136467; 1173367; 2499810 2498582; 2498581; 1346478; 1171009; 126608; 114091 2506771; 1706660; 1169665; 1169531; 232086; 4161048 114922; 2497701; 1703232; 1703233; 1703233; 1703232 3287877; 3122132; 3182907; 3121758; 3121756; 3121755 3121746; 3121745; 3319925; 3319923; 3319921; 3319651 33187104; 3318779; 3309647; 3309047; 3309045; 3309043 3309041; 3309039; 3288200; 3288068; 2924494; 3256212 3256210; 3243234; 3210053; 3210052; 3210051; 3210050 3210049; 3210048; 3210047; 3210046; 3210045; 3210044 3210043; 3210042; 3210041; 3210040; 3210039; 3210038 3210037; 3210036; 3210035; 3210034; 3210033; 3210032 3210031; 3210030; 3210029; 3210028; 3210027; 3210026 3210025; 3210024; 3210023; 3210022; 3210021; 3210020 3210019; 3210018; 3210017; 3210016; 3210015; 3210014 3210013; 3210012; 3210011; 3210010; 3210009; 3210008 3210007; 3210006; 3210005; 3210004; 3210003; 3210002 3210001; 3210000; 3209999; 3201547; 2781152; 2392605 2392604; 2781014; 1942360; 2554672; 2392209; 3114481 3114480; 2981657; 3183706; 3152922 ; 3135503 ; 3135501 3135499; 3135497; 2414158; 1321733; 1321731; 1321728 1321726; 1321724; 1321722; 1321720; 1321718; 1321716 1321714; 1321712; 3095075; 3062795; 3062793; 3062791 2266625; 2266623; 2182106; 3044216; 2154736; 3021324 87 3004467; 3005841; 3005839; 3004485; 3004473; 3004469; 3004465; 2440053; 1805730; 2970629 ; 2935527 ; 2935416; 809536 ; 730091; 585279; 2498195; 2833325; 2498604; 2498317; 2498299; 2498586; 2498585; 2498576; 2497749; 2493446; 1513216 ; 729944 ; 2498099 ; 548449; 465054; 465052; 548671; 548670; 548660; 548658 ; 548657; 232084; 2500822; 2498118; 2498119; 2498119; 1708296; 1708793; 416607; 416608; 416608; 2499791; 2498580; 2498579; 2498578; 2498577; 1705483; 1703445; 1709542; 1709545; 17105104; 1346568; 1346323; 1346322; 2507248; 11352240; 1352237; 1352229; 1351935; 1350779; 1346806; 1346803; 1170095; 1168701; 1352506; 1171011; 1171005; 1171004; 1171002; 1171001; 1168710; 1168708; 1168707; 1168706; 1168705; 1168704; 1168702; 1168696; 1168391; 1168390; 1168348; 1173074; 1173071; 1169290; 11610470; 1168402; 729320; 729979; 729970; 729315; 730050; 730049 549194; 549193; 549192; 549191; 549190; 5491104 549185; 549184; 549183; 549182; 549181; 549180 464471; 585290; 416731; 1169666; 113478; 113479 113476; 113475; 130975; 119656; 113562; 113561 416610; 126387; 126386; 126385; 132270; 416611 416612; 416611; 730035; 127205; 1352238; 125887 137395; 730036; 133174; 114090; 131112; 126949 3004471; 29591048; 584968; 2493414; 2493445; 465053; 2832430; 2498118; 416607; 2497750; 1352699; 1352239; 1346804; 1171008; 1168709; 1168703; 1173075; 729764; ; 730048; ; 549188; ; 549179; ; 113477; ; 113560; ; 416612; ; 549186; ; 129293; 2796175; 2735110; 2735098 ; 2580504 ; 2465127; 2051993; 2488684; 2488678; 124757; 129501; 416636; 2801531; 2796177; 2677826; 2735118; 2735116; 2735114; 2735112; 2735108; 2735106 ; 2735104; 2735102 ; 2735100 ; 2735096 ; 2707295 ; 2154730 ; 2154728; 1684720; 2465137; 2465135; 2465133; 2465131; 2465129; 2564228; 2564226; 2564224; 2564222; 2564220; 1313972; 1313970; 1313968; 1313966; 2443824 ; 2488683; 2488682; 2488681; 2488680; 2488679; 88 2326190 2398757 1684718 2245060 1532056 1731859 516728; 1086046 1086001 2147108 631911; 542129; 71728; 423193; 627188; 482381; 321044; 1085122 280576; 84700; 102572; 542167; 320614; 280409; 322803; 1362136 1362130 1362049 2129813 2129800 629480; 1361968 1361962 543622; ; 2464905; 2415702; 2415700; 2415698; 2398759; ; 2353266 ; 2338288 ; 1167836; 414703 ; 2276458 ; 2293571 ; 1580797 ; 1580794 ; 2245508 ; 1261972; 2190552 ; 1881574 ; 511953 ; 1532058; ; 1532054; 1359436; 666007; 487661; 217308; ; 217306; 217304; 1545803; 1514943; 577696; 506858; 493634; 493632; 2154734; 2154732; 543659; ; 1086045; 2147643; 2147642; 1086003; 1086002; ; 543675; 543623; 543509; 543491; 1364099; ; 2147107; 1364001; 1085628; 631913; 631912; 2147092; 477301; 543482; 345521; 542131; 542130; 100636; 2146809; 480443; 2114497; 2144915; 72355; 319828; 1082946; 1082945; 1082944; 539716; 539715; 423192; 423191; 423190; 1079187; 627190; 6271104; 627187; 482382; 1362656; 627186; 627185; 627182; 85299; 85298; 2133756; 2133755; 1079186; 627181; 321043; 112559; 112558; 1362590; 2133564; ; 10710471; 627144; 627143; 627142; 627141; 102835; 102834; 102833 ; 102832; 84703; 84702; 84699; 84698; 84696; 477888; 477505; 102575; 478272; 2130094; 629813; 629812; 542172; 542168; 481432; 320620; 280414; 626029; 542132; 320615; 100638; 100637; 100635; 82449; 320611; 320610; 320607; 320606; 539051; 539050; 539049; 539048; 280407; 100501; 100498; 100497; 100496; 1362137; ; 1362135; 1362134; 1362133; 1362132; 1362131; ; 1362129; 1362128; 100478; 21291041; 1076531; ; 1076486; 2129817; 2129816; 2129815; 2129814; ; 2129812; 2129805; 2129804; 2129802; 2129801; ; 2129799; 479902; 479901; 2129477; 1076247; 1076242; 1076241; 54 1803; 541802; 280372; 280371; ; 1361967; 1361966; 1361965; 1361964; 1361963; ; 1361961; 1361960; 1361959; 320546; 2119763; 541804; 478825; 478824; 478823; 421788; 320545; 89 81444; 626037; 626028; 539056; 483123; 481398; 481397; 100733; 100732; 100639; 625532; 1083651; 322674; 322673; 81719; 81718; 2118430; 2118429; 2118428; 2118427; 419801; 419800; 419799; 419798; 282991; 100691; 322995; 322994; 11824; 626077; 414553 ; 398830 ; 1311457; 1916292 ; 1911819; 1911818; 1911659; 1911582; 467629; 467627; 467619; 467617 ; 915347; 1871507; 1322185; 1322183; 1047645 ; 1047647 ; 1850544 ; 1850542 ; 1850540 ; 2810417; 452742; 1842045 ; 1839305; 1836011; 1836010; 1829900; 18291049 ; 18291048; 18291047; 18291046; 18291045; 18291044; 1825459 ; 18010487 ; 159653 ; 1773369 ; 1769849; 1769847; 608690 ; 1040877 1040875; 1438761; 1311513; 1311512; 1311511; 1311510} 1311509; 13116104; 1246120; 1246119; 1246118; 1246117; 1246116; 1478293; 1478292; 1311642; 1174278; 1174276; 1086972; 1086974; 1086976; 1086978; 1086978; 1086976; 1086974; 1086972; 999009; 999356; 999355; 994866; 994865; 913758; 913757; 913756; 913285; 913283; 926885; 807138; 632782; 601807; 546852; 633938; 544619; 544618; 453094; 451275; 451274; 407610; 407609; 404371; 409328; 299551; 299550; 264742; 261407; 255657; 250902; 250525; 1613674; 1613673 1613672; 1613671; 1613670; 1613304; 1613303; 1613302 1613240; 1613239; 1613238; 1612181; 1612180; 1612179 1612178; 1612177; 1612176; 1612175; 1612174; 1612173 1612172; 1612171; 1612170; 1612169; 1612168; 1612167 1612166; 1612165; 1612164; 1612163; 1612162; 1612161 1612160; 1612159; 1612158; 1612157; 1612156; 1612155 1612154; 1612153; 1612152; 1612151; 1612150; 1612149 1612148; 1612147; 1612146; 1612145; 1612144; 1612143 1612142; 1612141; 1612140; 1612139; 1093120; 447712 447711; 447710; 1587177; 158542; 1582223; 1582222 15315104 ; 1580792 ; 886215; 15451047; 15451045 15451043; 15451041 ; 15458104 ; 1545887 ; 1545885; 1545883 1545881; 1545879; 1545877; 1545875; 166486 ; 1498496 90 1460058; 972513; 1009442 ; 1009440 ; 1009438 ; 1009436 ; 1009434 ; 7413 ; 1421808 ; 551228; 452606 ; 32905; 1377859 ; 1364213; 1364212; 395407; 22690 ; 22688 ; 22686; 22684 ; 488605 ; 17680 ; 1052817 ; 1008445 ; 1008443 ; 992612; 706811 ; 886683; 747852 ; 939932 ; 19003 ; 1247377 ; 1247375; 1247373; 862307 ; 312284 ; 999462; 999460; 999458 ; 587450 ; 763064 ; 886209 ; 1176397 ; 1173557 ; 902012; 997915; 997914; 997913; 997912; 997911; 997910; 99790; 997908; 997907; 997906; 997905; 997904; 997903; 997902; 997901; 997900; 9971049; 9971048; 9971047; 9971046; 9971045; 9971044; 9971043; 9971042; 910984; 910983; 910982; 910981; 511604 ; 169631 ; 169629 ; 169627 ; 168316 ; 168314 ; 607633 ; 555616; 293902 ; 485371 ; 455288 ; 166447 ; 166445 ; 166443 ; 166435 ; 162551 ; 160780; 552080 ; 156719 ; 156715 ; 515957 ; 515956 ; 515955 ; 515954 ; 515953 ; 459163; 166953 ; 386678 ; 169865.

Alergénios/antigénios particularmente preferidos incluem: proteinas de pêlo de gato Fel dl; proteínas dos ácaros do pó doméstico Der Pl, Der P2 e Der P7; proteína de ambrósia amb a 1.1, a 1.2, a 1.3 ou a 1.4; proteínas de azevém lol pl e lol p5; proteínas da erva-dos-prados phl pl e phl p5; proteína Cyn d 5 da relva das Bermudas; proteínas alternativas de Alternaria Alt a 1, Alt a 2 e Enolase (Alt a 6); proteína do vidoeiro Bet vl e P14; proteína da barata alemã Bla g 1, Bla g 2, Bla g 3, Bla g 4, Bla g 5 e Bla g 6; proteína da artemísia Art v 1; proteína do cardo-da-Rússia Sal k 1 e Sal k 2; amendoim Ara hl, Ara h2, Ara h3, Ara h4, Ara h5, Ara h6, proteínas de transferência de lípidos ou profilinas vegetais ou um antigénio leucocitário humano. Métodos de administração 91 [0150] Uma vez formuladas, as composições da invenção podem ser administradas a um sujeito in vivo usando uma variedade de vias e técnicas conhecidas. Por exemplo, um composição pode ser fornecida como uma solução injectável, suspensão ou emulsão e administrada por via parentérica, subcutânea, epidérmica, intradérmica, intramuscular, intra-arterial, intraperitoneal, injecção intravenosa usando uma agulha e seringa convencionais ou usando um sistema de injecção de jacto liquido. As composições também podem ser administradas topicamente na pele ou mucosas, por exemplo por via nasal, endotraqueal, intestinal, rectal ou vaginal ou fornecidas como um spray com partículas muito finas adequado para administração respiratória ou pulmonar. Outros modos de administração incluem a administração oral, supositórios, administração sublingual e técnicas de administração transdérmica activa ou passiva.

[0151] Quando se pretende administrar um péptido da invenção, é preferível administrar o péptido num local no corpo onde este tenha a capacidade de entrar em contacto com células apresentadoras de antigénio adequadas, e onde tenha a oportunidade de contactar com os linfócitos T do indivíduo. Quando se pretende administrar uma APC, é preferível administrar a APC num local do corpo onde esta tenha a possibilidade de entrar em contacto e activar os linfócitos T adequados do indivíduo.

Regimes de administração [0152] A administraçao dos péptidos/polinucleótidos/células (como a composição que 92 contém uma pluralidade de péptidos) pode efectuar-se através de qualquer método adequado, conforme descrito acima. As quantidades adequadas do péptido podem ser determinadas empiricamente, mas habitualmente estão dentro do intervalo indicado abaixo. Uma única administração de cada péptido pode ser suficiente para ter um efeito benéfico para o doente, mas deve ser referido que poderá ser benéfico se o péptido for administrado mais do que uma vez e, nesse caso, os regimes de administração habituais podem ser, por exemplo, uma ou duas vezes por semana durante 2-4 semanas a cada 6 meses ou uma vez ao dia durante uma semana a cada quatro a seis meses. Cada péptido ou polinucleótido ou combinação de péptidos e/ou polinucleótidos pode ser administrado a um doente isoladamente ou em combinação.

[0153] As dosagens para administração dependerão de vários factores incluindo a natureza da composição, a via de administração e o esquema e momento recomendado para a administração. Doses adequadas de uma molécula aqui descrita podem estar na ordem dos até 15 pg, até 20 pg, até 25 pg, até 30pg, até 50 pg, até 100 pg, até 500 pg ou mais, por administração. Doses adequadas podem ser inferiores a 15 pg, mas pelo menos 1 ng, ou pelo menos 2 ng ou pelo menos 5 ng ou pelo menos 50 ng ou pelo menos 100 ng ou pelo menos 500 ng ou pelo menos 1 pg ou pelo menos 10 pg. Para algumas moléculas aqui descritas, a dose usada pode ser superior, por exemplo, até 1 mg, até 2 mg, até 3 mg, até 4 mg, até 5 mg ou superior. Estas doses podem ser fornecidas numa formulação líquida, numa concentração adequada para permitir um volume adequado para administração pela via seleccionada. 93

Kits [0154] A presente divulgação também diz respeito a uma combinação de componentes aqui descritos, adequados para uso num tratamento da invenção que são embalados sob a forma de um kit num recipiente. Estes kits podem compreender uma série de componentes para permitir o tratamento de acordo com a invenção. Por exemplo, um kit pode compreender um ou mais péptidos, polinucleótidos e/ou células aqui descritos ou um ou mais péptidos, polinucleótidos ou células aqui descritos e um ou mais agentes terapêuticos adicionais adequados por administração simultânea, sequencial ou separada. O kit pode, opcionalmente, conter outros reagentes adequados, instruções ou similares.

[0155] A invenção está ilustrada nos exemplos que se seguem.

Exemplo 1

Pesquisa da ligação do MHC de Classe II

[0156] O objectivo deste estudo é identificar um painel distinto de péptidos com fortes afinidades aos sete alótipos humanos mais comuns do MHC de Classe n HLA-DRBl* (abrangendo no total cerca de 63% dos alótipos encontrados na população caucasiana média). Para identificar ligações de péptidos nos alergénios dos ácaros do pó doméstico (HDM), Der p 1, Der p 2 e Der p 7, foram realizados ensaios de ligação in vitro, num subconjunto de péptidos dessas proteínas alergénicas. Péptidos para testar em ensaios de ligação foram, 94 inicialmente, identificados por uma abordagem in silico conhecida como "peptide threading" (realizada por Biovation, Ltd., Aberdeen, Escócia, RU). Trata-se de uma análise bio-informática de péptidos consecutivos de uma sequência para o potencial ser acomodado dentro da fenda de ligação das moléculas de HLA-DR do MHC de classe II. Este subconjunto de péptidos foi pré-analisado quanto à solubilidade num meio aquoso e ácido e um painel final de 44 péptidos foi seleccionado para teste num ensaio de ligação do MHC de classe II, in vitro. Métodos [0157] O ensaio empregado é um ensaio competitivo de ligação do MHC de classe II, onde cada péptido é analisado quanto à sua capacidade de deslocar um ligante de controlo conhecido de cada um dos alótipos humanos do MHC de classe II investigados. Os alótipos e os péptidos de controlo usados neste estudo são mostrados na Tabela 2:

Tabela 2. Péptidos de Controlo usados nos ensaios de ligação in vitro

Alótipo jPéptido de controlo ^Sequência

DRBl *0101 lHemaglutinina J 307-319 de InfluenzajPKYVKQNTLKLAT DRBl *0301|Myco. tuberculosis/lepraejAKTIAYDEEARRGLE \hsp 652-16 | DRBl *0401 |Hemaglutinina j 307-319 de InfluenzajPKYVKQNTLKLAT DRBl *0701 |Hemaglutinina i 307-319 de InfluenzajPKYVKQNTLKLAT 95

Sequência

Alótipo iPéptido de controlo DRBl *1101jHemaglutinina de Influenza\PKYVKQNTLKLAT 5 3 0 7—319 |

TERVRLVTRHIYNREE DRBl *1301 |HLA-DQB1*0603 21-36

DRBl *1501 iProteína básica de mielina ÍIENPVVHFFKNIVTPR humana 85-99

FVNQHLCGSHLVEAL DQBl *0602jlnsulina humana B 1-15 [0158] Cada um dos 44 péptidos HDM (que são mostrados nas Tabelas 3A e 3B) foram analisados no ensaio de competição e rastreados relativamente à ligação relativa comparada com o péptido de controlo. Devido à natureza do ensaio competitivo, os dados para cada péptido são representados como uma razão da sua própria CI50 para a do péptido de controlo. Assim, um péptido que tem um valor de CI50 que tem paridade ao péptido de controlo tem uma afinidade de ligação idêntica, enquanto péptidos com uma razão inferior a um têm uma afinidade mais elevada e aqueles com uma razão maior que um têm uma afinidade mais baixa.

Resultados [0159] A solubilidade em solução aquosa é um critério essencial para um péptido ser um agente terapêutico eficaz. Assim, em consequência da análise da solubilidade, eliminaremos muitos péptidos hidrófobos, com uma alta frequência de grandes resíduos de aminoácidos hidrófobos em múltiplos registos de ligação. Esta é uma característica de ligantes promíscuos HLA-DRBl*. Os dados dos ensaios de ligação são mostrados na Tabela 3B. A ligação relativa de cada péptido é mostrada 96 para cada um dos alótipos no estudo. Os dados mostram que 24 dos 44 péptidos testados se ligam a um ou mais alótipos do MHC de classe II. É observada uma variação de reacções cruzadas com 5 péptidos a ligar-se apenas a um alótipo, 8 péptidos a ligar-se a dois, 9 péptidos a ligar-se a três e dois péptidos a ligar-se a quatro alótipos diferentes do MHC de classe II (vermelho). É também esperado que tais péptidos possam ter a capacidade de ligar alótipos similares que não tenham sido testados através da homologia das estruturas de MHC. Isto pode ser visto na reactividade cruzada de péptidos para DRBl *0101, *0401, *0701 e*1101 em vários casos aqui. Também mostrado está o estado da solubilidade do péptido nas maiores concentrações na solução aquosa do ensaio de ligação. O valor ilustra a mais baixa concentração na qual um precipitado branco é visto. Parece não existir qualquer efeito inespecifico significativo da formação do precipitado nos ensaios. Vários péptidos que precipitam em concentrações elevadas também se ligam ao MHC de classe II; contudo, vários demonstram, também, não ter capacidade para competir com os péptidos de controlo. É expectável que os péptidos, que são susceptiveis de formar precipitados, possam exibir uma elevada afinidade e ligação promíscua devido à presença de muitos residuos hidrófobos.

[0160] A % de pureza dos péptidos está indicada na

Tabela 3A. Isto é significativo porque foram observadas purezas que variam de 60-90%. Isto terá um efeito considerável na capacidade de um péptido competir caso este seja relativamente impuro. Por exemplo, o HDM23A e o HDM32 mostram baixa afinidade de ligação; contudo, eles são de pureza reduzida (66,7% e 68,7%, respectivamente) comparados com outros péptidos HDM. Portanto, se a pureza 97 for tomada em consideração, eles podem ter, de facto, uma afinidade equivalente a um péptido de maior pureza.

[0161] Pode ser visto que alquns alótipos do MHC de classe II se ligam a mais péptidos do que outros; isto é expectável porque existe uma variabilidade entre as posições das cavidades nas diferentes fendas de ligação do MHC de classe II. No entanto, também existem várias diferenças bem caracterizadas entre as afinidades dos vários péptidos de controlo. Claramente, um péptido de controlo com alta afinidade será mais dificil de deslocar pelo péptido HDM concorrente, resultando na identificação de menos péptidos de ligação. Isto pode ser ilustrado pelos dados aqui apresentados. Por exemplo, o péptido de controlo da hemaglutinina de Influenza 307-319, tem uma afinidade variante de acordo com o alótipo, onde DRB1*0101>*0401>*0701>*1101. Isto reflecte-se no número de ligantes para cada um dos alótipos, onde DRB1 *0101 tem o número mais baixo de ligantes (5) e DRB1*1101 tem o mais alto (14) . Além do mais, o ensaio de ligação para DRB1*1501 é muito rigoroso devido à alta afinidade de Proteína Básica da Mielina 85-99 para este alótipo. Na análise de elevado nível de rigor, o péptido Fel d 1 EQVAQYKALPVVLENA, que foi testado num estudo anterior, obteve uma razão de 0,97 indicando que os ligantes de alta afinidade podem ser identificados nesse nível de rigor.

[0162] Adicionalmente, para identificar ligantes de menor afinidade, o ensaio foi também realizado sob condições menos rigorosas. Todos os péptidos de ligação Der p mostraram ter uma razão elevada quando testados contra este alótipo, mostrando que eram ligantes de baixa afinidade comparativamente ao péptido de controlo. O 98 ensaio de ligação DQA1 *0102/DQB1 *0602 utiliza um péptido da cadeia B de insulina humana que tem baixa afinidade comparativamente aos usados nos ensaios de DR. Isto significa que o ensaio de DQ é muito sensivel e tende a produzir valores de razão muito baixos para os ligantes mais fortes deste alótipo do MHC de classe II. Esta sensibilidade também explica o número relativamente elevado de péptidos de ligação DQ dentro do painel seleccionado. Finalmente, numa análise mais detalhada, os péptidos identificados como ligantes para a superfamilia de DRBl *0101, *0401, *0701, revelam incorporar um motivo que é caracteristico de ligantes promíscuos a esta familia de alótipos onde: Pl = Y, F, W, L, I, V, ou M (resíduos aromáticos ou hidrófobos grandes), P6 = S, T, C, A, P, V, I, M (resíduos pequenos, não carregados). Dos 16 péptidos (e.g. HDM 21B RGKPFQLEAVFEANQNT) identificados como ligantes a todos ou a uma combinação destes 3 alótipos, 14 (87.5%) contêm este motivo, o que sugere que estes são ligantes promíscuos com afinidades variáveis para os alótipos 1-4-7.

Conclusões [0163] Uma série de péptidos revelaram ter a capacidade de ligar os alótipos do MHC de classe II testados e podem ser testados quanto à sua capacidade de estimular a proliferação in vitro dos linfócitos T CD4+ e estimular a secreção de citocinas dos linfócitos T.

Tabela 3A 99 Péptid ISequência IResídu 5 0, í 0 |Teste iPrecipi j o ! los na ipurez |de jtação | |precur |a |solubi |no | |sora ilidade |ensaio | HDM01 ÍIDLRQMRTVTPIR ] 112- i79.2 | SIM jNenhuma | 1124 I I HDM02 IRTVTPIRMQGGCG ] 118- 179.6 | SIM |Nenhuma | 1130 \ \ HDM03C IRNQSLDLAEQELVDCASQH ] 14 9- 160.1 | SIM |Nenhuma | 116 7 \ \ | I HDM05 jEYIQHNGWQESY i 179- ]77.5 | SIM |Nenhuma | ] 191 \ \ | I HDM06 jRYVAREQSCRRPN J193- ] 7 9.7 | SIM iNenhuma | 12 0 5 \ \ | I HDM07 ÍPNVNKIREALAQT |220- 188.6 | SIM iNenhuma | |232 I | HDM08 ÍNKIREALAQTHSA |223- j87.6 | SIM iNenhuma | |235 I I HDM09A |REALAQTHSAIAVI 12 2 6 — 16 9.6 | SIM ] 1000 μΜ | |239 I I | (2,9mg/ | jml) | HDMll iIGIKDLDAFRHYD 12 4 0 — ]77.6 I SIM iNenhuma | |252 | | HDM12 ÍKDLDAFRHYDGRT |243- ] 72.9 | SIM iNenhuma | |255 \ \ \ I HDM13 ÍRTIIQRDNGYQPNY |254- 170.7 |não jNenhuma j s 2 6 7 \ \ \ I HDM16A ÍRNSWDTNWGDNGYG j 2 8 7 — 170.00 | SIM iNenhuma j 1300 \ I HDM17 ÍNSVNVPSELDLRSLRT i 105- \l4.5 1 SIM INenhuma ! 100 Péptid ο

Sequência iResidu i% iTeste iPrecipi |os naipurez ide itação iprecur ia isolubi |no isora i ilidade iensaio 1120 HDMl 9 DQVDVKDCANHEIKK 118-32 181.4 | SIM (Nenhuma HDM20 CIIHRGKPFQLEA i 4 4 — 5 6 177.4 iSIM (Nenhuma HDM21 KPFQLEAVFEANQNT i 50-64 !88.7 I SIM i 2 0 0 μΜ I (0,3 img/ml) HDM21A KPFQLEAVFEANQNTK LO 1 o LO 190.10 !SIM 15 0 0 0 μΜ | (9,3 img/ml) HDM21B RGKPFQLEAVFEANQNT U 8-64 182.60 ]SIM ! 1000 μΜ | (1,98mg (/ml) HDM22A EAVFEANQNTKTAK j 55-68 i90.30 iSIM iNenhuma HDM23A DGLEVDVPGIDPNACH j 76-88 ]66.7 1 SIM iNenhuma HDM26A DGVLACAIATHAKIR 1131-114 5 ( ( (1000 μΜ |(1,5mg/ iml) HDM27 AKIEIKASLDGLE 167-79 (65.9 | SIM (1000 μΜ I (1,4mg/ |ml) HDM28 KAVDEAVAAIEKS (31-43 (86.8 (SIM (1000 μΜ |(1,3mg/ (ml) HDM2 9 ETFDPMKVPDHSD i 4 4 — 5 6 (84.7 | SIM iNenhuma HDM29A ETFDPMKVPDHSDK |44-57 !91.7 ! SIM (Nenhuma 101 Péptid 0 iSequência iResídu |% jTeste jos naipurez ide iprecur ia isolubi jsora i ilidade iPrecipi i itação | jno i jensaio | HDM29B ÍKSETFDPMKVPDHSD |42-56 192.5 jsiM jlOOO μΜ I |(1,7 | jmg/ml) i HDM30 Ídkferhigiidlk J56-68 181.4 1 SIM i 5 0 0 0 μΜ | i(7,9mg/ | jml) i HDM31 jIGIIDLKGELDMRN 162-75 I I jlOOO μΜ | |(l,8mg/ | jml) 1 HDM31A ÍHIGIIDLKGELDMRN ΐ61-75 i66.40 iSIM |l000 μΜ | |d,7 j jmg/ml) j HDM32 jlDLKGELDMRNIQ 165-77 168.7 jsiM j5000 μΜ j 1(7,7mg/ j iml) j HDM32A jIDLKGELDMRNIQVR 165-79 185.20 |siM i 5 0 0 0 μΜ j i(9,Omg/ j iml) j HDM33 ÍLDMRNIQVRGLKQ 171-83 170.3 |SIM iNenhuma j HDM34 ÍRNIQVRGLKQMKRVG 174-88 174.7 |siM iNenhuma j HDM35 ; RGLKQMKRVGDAN j79-91 |84.00 ]SIM iNenhuma j HDM36 ÍKRVGDANVKSEDG 185-97 (82.9 jsiM iNenhuma j HDM37 ÍANVKSEDGWKAH 190-102 (76.5 |SIM jNenhuma j HDM39 ÍDDWSMEYDLAYK jl09- (84.9 |NÃO* jl21 I 1 iNenhuma i HDM39A ÍHDDWSMEYDLAYKL |l08- |80.9 jsiM jlOOO μΜ 102 Péptid Sequência jResídu ' 0. 5 o jTeste jPrecipi | 0 |os na |purez |de jtação | Iprecur Ia Isolubi jno I |sora jlidade |ensaio j |l21 5 \ | (1,8mg/ I \ I \ |ml) j HDM40A VSMEYDLAYKLGDLH |ll2- ! 66.9 jSIM j1000 μΜ j |l24 \ \ j(l,8mg/ | í \ I jml·) j HDM48 TAIFQDTVRAEMTK ] 187- ! 7 9.1 | SIM jlOOO μΜ | |200 | | | (1,6mg/ | \ jml) | HDM4 9 DTVRAEMTKVLAP ] 192- ! 69.5 | SIM jNenhuma j |204 | 1 | HDM50 KVLAPAFKKELER 12 0 0 — o co | SIM jNenhuma | 1212 | | | HDM51 VDFKGELAMRNIE 165-77 co jsiM 51000 μΜ | \ 5 j(l,5mg/ | \ | \ jml) | HDM51A VDFKGELAMRNIEAR 165-79 |82.1 jsiM iNenhuma \

Tabela 3B Pépt |drbi* |drbi* ido j 0101 |0301 DRB1* jDRBl* jDRBl* 0401 j 0701 11101 DRBl* jDRBl* jDQAl* | 1301 j1501 j 0102 j | Idqbi* | 1 5 0 602 1 HDMO | |l9.23 !16 1 % 5 5 1 ! 1 | | í ^ § HDMO | 1 | | 180 lo.03 | 2 | | 1 | i· 5 jj 103 Pépt jDRBl* IDRBl * DRBl* jDRBl* IDRBl* DRBl* jDRBl* 1DQA1 ido joiOl 10301 0401 j 0701 ] 1101 1301 j1501 ]0102 \ | \ | | Idqbi | | | | | J 0 602 HDMO | I S | | |0.16

130.36 HDMO6 HDMO 7 HDMO8 HDMO 9A HDMl1 10.86 10.49 121.15 1200

HDMl | 3 HDMl | 6A ! HDMl | 7 j HDMl | 9 HDM2 0 1.1 28 242.11 2.37 104 Pépt Idrbi* Idrbi* DRBl* Idrbi* Idrbi* DRBl* |drbi* Idqai* ido 10101 10301 0401 j 0701 ] 1101 1301 j 1501 ] 0102 I | | Idqbi* s s s 10 602 11.15 \ 111.73 HDM2 192ι I HDM2 |200 ΙΑ | HDM2 113.5 1Β j HDM2 | 2Α | HDM2 | 3Α | HDM2 142.3 6Α s HDM2 | 7 I HDM2 8 HDM2 9 HDM2 9Α HDM2 9Β HDM3 Ο HDM3 1 1347 52.17 \ 110.27 0.78 |4.1 328.6 ϊ 116.28 6.2 10.76 10.61 105 Pépt Idrbi* Idrbi* DRBl* Idrbi* Idrbi* DRBl* |drbi* Idqai* ido 10101 10301 0401 j 0701 11101 1301 j 1501 10102 1 I 1 | | Idqbi* s s s 10 602 HDM3 ΙΑ HDM3 2Α HDM3 3 |46.51 |41.5 263.1 6 HDM3 4 13.38 3.7 1769.213 HDM3 5 11.26 HDM3 6 HDM3 7 HDM3 9 HDM3 9Α HDM4 ΟΑ 76.19 10.71 S2.29 16 10.1 HDM4 |211.2 I 6 115.71 113.57 HDM4 9 HDM5 Ο

1671.4 11.7 I 3 I 106 Pépt |drbi* Idrbi* drbi* Idrbi* Idrbi* drbi* |drbi* Idqai* | ido joioi 10301 0401 |0701 jllOl 1301 j1501 10102 | | | I |dqbi* 1 | | | | 1 |0602 | HDM5 | I 120.93 j30.91 \ | | 1 ! I | | 1 1 1

Exemplo 2

Pesquisa de homologia [0164] As sequências de cada um dos 24 péptidos acima identificados como de ligação a mhc de Classe II foram usadas para investigar a sequência da proteina alternativa no grupo dos alergénios dos ácaros do pó do qual a sequência precursora deriva. Por exemplo, o péptido HDM01 na Tabela 3A é do Der p 1, portanto a sequência de HDM01 foi usada para procurar uma sequência homóloga em Der f 1. A mesma prática foi aplicada em todos os 24 péptidos acima identificados. Os péptidos identificados no Exemplo 1 e no Exemplo 2 são mostrados nas Tabelas 4 a 6.

Tabela 4

Resíduos iSEQ na |N.° precurso jlD ira | Péptido na sMolécula iSequência Tabela sprecurso j 3A/B jra | HDM01

Der p 1 Der f 1

IDLRQMRTVTPIR LDLRSLRTVTPIR 112- 124 113- 125 1 25 HDM02

Der p 1

RTVTPIRMQGGCG 118-130 2 107

Péptido na IMolécula iSequência Tabela Iprecurso I 3A/B Ira I

iResíduos iSEQ ina |n. 0 iprecurso llD ira I

\Der f 1 \RTVTP IRMQGGCG 1119-131 \26 HDM03C \Der p 1 jRNQSLDLAEQELVDCASQH 114 9-167 \3 \Der f 1 IrnTSLDLSEQELVDCASQH \150-168 \27 HDM06 | Der P i |ryvareqscrrpn 1193-205 N | Der f 1 \PYVAREQRCRRPN i194-206 128 HDM09A | Der p 1 iREALAQTHSAIAVI IDer f 1 \REALTQTHTAIAVI Tabela 5 1226- 239 15 1227- 240 129

Péptido na Tabela 3A/B HDM19

Molécula ISequência orecurso | ra | Der p 2 IDQVDVKDCANHEIKK Der f 2 IDQVDVKDCANNEIKK iResíduos |SEQ ina |N.0 ID iprecursor | ia | i18-32 i18-32 \ 6 i 30 HDM20

Der p 2 ICIIHRGKPFQLEA 14 4-56 |7

Der f 2 iciIHRGKPFTLEA \44~56 131 HDM21

Der f 2 \KPFTLEALFDANQNT 50-64 \8 50-64 132 108

Resíduos jSEQ \ na |n.0 ID \ precursor | j a I | Péptido naiMolécula iSequência Tabela 3A/B iprecurso \ ira i HDM21A \Der p 2 |KPFQLEAVFEANQNTK i50-65 |9 \Der f 2 ÍKPFTLEALFDANQNTK 150-65 j 33 HDM21B \Der P 2 iRGKPFQLEAVFEANQNT CO 1 I10 [Der f 2 ! RGKPFTLEALFDANQNT \ 48-64 134 HDM22A \Der p 2 IeAVFEANQNTKTAK Ϊ55-68 jll \Der f 2 \EALFDANQNTKTAK \55~68 \35 HDM23A i Der P 2 |DGLEVDVPGIDPNACH 1 CO CO i 12 \Der f 2 | DGLEIDVPGIDTNACH i76-88 \36 HDM26A iDer p 2 |DGVLACAIATHAKIR Ϊ131-14 5 I13 1 \Der f 2 | NGVLACAIATHGKIR '\131-145 137 | Tabela 6 Péptido na Tabela 3A/B iMolécula iprecurso ira ÍSequência iResíduos |na sprecursor Ia | SEQ ! |n.0 ID | HDM30 \Der p 7 ÍDKFERHIGIIDLK OD CO 1 CO LO 114 I iDer f 7 \DKFERHVGIVDFK i 56-68 ! 38 \ 109 Péptido na Molécula ISequência ^Resíduos | SEQ Tabela 3a/b precurso ina |n. 0 ra iprecursor Ia í HDM32 Der p 7 |IDLKGELDMRNIQ c_n 1 I15 Der f 7 i VDFKGELAMRNIE | 65-77 \39 HDM33 \Der P 7 \ LDMRNIQVRGLKQ |71-83 116 \Der f 7 ILAMRNIEARGLKQ | 71-83 | 40 HDM34 \Der P 7 ÍRNIQVRGLKQMKRVG 1 co co 117 \Der f 7 iRNIEARGLKQMKRQG 1 74-88 Í41 HDM35

Der p 7 jRGLKQMKRVGDAN \l9~91 |l8 Der f 7 \RGLK QMKR Q GD AN \79~91 \42 HDM39A \Der P 7 ;HDDVVSMEYDLAYKL 1108-122 119 \Der f 7 '! HDD IVSME YD LA YKL ! 108-122 \43

HDM40A

Der p 7 ÍVSMEYDLAYKLGDLH \112-126 |20 Der f 7 ÍVSMEYDLAYKLGDLH \112~126 \44 HDM4 8 \Der P 7 ÍTAIFQDTVRAEMTK ! 187-200 \21 \Der f 7 i TAIFQDTVRKEMTK \l87-200 ! 45 HDM4 9

Der p 7 jDTVRAEMTKVLAP jl92-204 |22 Der f 7 \DTVRKEMTKVLAP \l92-204 \46 110 Péptido na Tabela 3a/b Molécula precurso ra Sequência jResíduos jna jprecursor |a | SEQ | |n. 0 ID 1 HDM51 Der f 7 VDFKGELAMRNIE 165-77 I23 | Der p 7 IDLKGELDMRNIQ j 65-77 j 15 | HDM51A Der f 7 VDFKGELAMRNIEAR 165-79 |24 | Der p 7 IDLKGELDMRNIQVR | 65-79 ] 4 7 | [0165] Na Tabela 4, a sequência de Der p 1 da qual são derivadas as posições dos "resíduos na precursora" está publicamente disponível com o N.° de Acesso P08176 no NCBI. As sequências correspondentes do Der p 2 (Tabela 5) e Der p 7 (Tabela 6) estão no NCBI com os N.° de acesso P49278 e P49273, respectivamente. A sequência de Der f 1 é tirada do N.° de acesso P 16311 do NCBI, a Der f 2 é do N.° de acesso Q00855 do NCBI e a Der f 7 é do N.° de acesso Q26456 do NCBI.

Exemplo 3

Pesquisa da ligação do MHC de classe II

[0166] O objectivo deste estudo é identificar um painel distinto de péptidos com fortes afinidades aos sete alótipos humanos mais comuns dos HLA-DRBl* do MHC de classe II (abrangendo no total cerca de 63% dos alótipos encontrados na população caucasiana média). De forma a 111 identificar péptidos de ligação nos principais alergénios dos ácaros do pó doméstico Der p 1, Der p 2 e Der p 7, foram identificados péptidos por uma abordagem in silico conhecida como "peptide threading" que utiliza o algoritmo EpiMatrix disponível comercialmente (EpiVax Inc.)· Trata-se de uma análise bioinfomática de péptidos de uma sequência quanto ao seu potencial de serem acomodados dentro da fenda de ligação das moléculas de HLA-DR do MHC de classe II. EpiMatrix é um algoritmo baseado em matrizes que classifica segmentos com 10 aminoácidos de comprimento, que se sobrepõem em 9 aminoácidos, de qualquer sequência polipeptidica, através da probabilidade estimada de ligação a cada uma das moléculas do MHC seleccionadas. (De Groot et al., AIDS Research and Human Retroviruses 13:539-41 (1997)). O procedimento para o desenvolvimento dos motivos da matriz foi publicado por Schafer et al, 16 Vaccine 1998 (1998) . Neste exemplo, é avaliado o potencial de ligação para HLA DRl, DR2, DR3, DR4, DR7, DR8, DRll, DR13 e DR15. Ligandos putativos do MHC são seleccionados pontuando cada estrutura de 10-mer numa sequência de proteínas. Este resultado é derivado através da comparação da sequência de 10-mer com a matriz de sequências de 10 aminoácidos conhecidos por se ligarem a cada alelo do MHC. Estudos retrospectivos demonstraram que o EpiMatrix prevê, com precisão, os ligandos do MHC (Jesdale et al., in Vaccines '97 (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1997)). Foi também confirmada uma previsão bem sucedida de péptidos que se ligam a múltiplas moléculas do MHC.

[0167] Uma probabilidade estimada de ligação a uma molécula do MHC seleccionada é, também, calculada pelo EpiMatrix, como se apresenta de seguida. Os péptidos são pontuados estimando a promoção ou inibição relativas da 112 ligação a cada aminoácido, comparativamente aos ligantes conhecidos do MHC para um dado alelo do MHC. Esta informação é somada em todo o péptido e é atribuída uma pontuação de resumo (resultado emx) ao péptido inteiro. Depois de comparar o resultado EMX aos resultados dos ligandos conhecidos do MHC, o EpiMatrix chega a uma "probabilidade estimada de ligação" (abreviada como EBP, mas não estritamente uma probabilidade). A EBP descreve a proporção de péptidos com resultados EpiMatrix elevados que se irão ligar a uma dada molécula do MHC. 0 intervalo da EBPs vai de 100% (muito alta probabilidade de ligação) a menos de 1% [0168] (muito baixa probabilidade de ligação).

[0169] As análises do EpiMatrix foram realizadas na sequência inteira do Der p 1 como publicado na base de dados do NCBI (N° de acesso P08176). Estas análises identificaram péptidos centrais (e as suas sequências flanqueadoras) derivados das sequências acima que se prevê terem uma boa ligação ao MHC de classe II. Estas sequências são mostradas abaixo na Tabela 7A. As Tabelas 7B e 7C mostram as sequências para as análises equivalentes de sequências conhecidas do Der p 2 e do Der p 7, respectivamente (N.°s de acesso do NCBI P49278 e P49273) .

[0170] Nas Tabelas 7A - C: "resíduos na sequência" dá-nos a localização do péptido dentro das sequências que foram analisadas. O péptido central (aminoácidos do meio em negrito) define a sequência de ligação que foi, de facto, identificada durante a análise. Os flancos de estabilização (N-terminal e C-terminal, não estão em negrito) foram incluídos para uso com a sequência central 113 e são, normalmente, necessários para ajudar na produção dos péptidos. 0 "número de acertos" refere-se ao número de afinidades de ligação elevada previstas para todos os tipos de MHC testados na sequência. 0 "resultado do grupo EpiMatrix" é derivado do número de acertos normalizados para o comprimento do grupo. 0 resultado do grupo é, então, o excesso ou o défice nas propriedades de ligação estimadas do MHC agregado relativamente a um péptido padrão aleatório. Considera-se que um resultado de 10 ou superior indica propriedades claras de ligação do MHC. O Epivax também analisou a hidrofobicidade dos péptidos que contêm epitopos. Consideram-se inadequados para administração e/ou produção, resultados superiores a 1. TABELA 7A - Der p 1

Sequên Residu SEQUÊNCIA Hidrofo Acert |Resul SE | cia de os na bicidad os jtado Q 1 entrad sequên e EpiMa jde N. | a (N° cia trix jgrupo 0 § do (incl. (excl |EpiMa ID i NCBI) flanco jtrix | s) flanc \(excl 5 os) |. I jflanc I \os) P08176 1-21 MKIVLAI AS LLALS AVYARP 1.42 22 |38.91 io | S 5 | P08176 51-67 LESVKYVQSNGGAINHL -0.15 6 jlO.87 ío | 6 ] P08176 72-88 LDEFKNRFLMSAEAFEH -0.49 6 jlO.55 io | 7 ! P08176 111 - EIDLROMRTVTPIRMOGGCG -0.24 16 12 6.3 4 io | 134 SCWA | 8 ! 114

Sequên Resídu 1 SEQUÊNCIA Hidrofo Acert jResul SE | cia de os na j bicidad os jtado Q | entrad sequênj e EpiMa|de N. | a (N° cia ji trix [grupo 0 í do (incl. | (excl [EpiMa ID1 NCBI) flanco [trix s) 1 flane|(excl § os) |. 1 jflanc SOS) P08176 142 -(ESAYLAYRNOSLDLAEQE -0.91 10 jl6.43 io | 159 j \ 9 | P08176 188 -Iqesyyryvareoscrrpnaq -1.70 14 [24.92 ii j 209 |rf o | P08176 2 96 - ;DNGYGYFAANIDLMMIEE -0.08 7 [ 10.24 11 [ 313 | \ í 1 TABELA 7B - Der p 2

Sequên Residu SEQUÊNCIA (Hidrofob [Acert Resul SE | cia de os na [icidade |os tado Q | entrad sequên | [EpiMa de N. I a (N.0 cia \ jtrix grupo O 5 do (incl. \ | (excl EpiMa ID! NCBI) flanco ! | · trix \ s) \ jflanc (excl \ j |os) f lane \ ji ^ os) I P49278 1-22 MMYKILCLSLLVAAVA11.2 4 j14 21.8 11 j R DQVDV | | 2 ! P49278 42 EPCIIHRGKPFQLEAV[—0.50 |l0 14.62 11 | EANQN 63 F I | 3 ! TABELA 7C - Der p 7 115

Sequên jResidu 1SEQUÊNCIA Hidrofob Acert |Resul SE 5 cia de jos na | icidade os jtado q I entrad |sequên | EpiMa jde N. | a (N.0 jcia | trix |grupo 0 Í do !(incl. | (excl |EpiMa ID1 NCBI) jflanco | |trix 1 !s) I flanc | (excl ϊ i; 5 os) |. I | I | flanc ' | I |os) P49273 j 1 - 17 Immkllliaaaafvavs 2.2 12 |20.16 11 j j |a 4 | P49273 | 7 0 -|E LDMRNIQVRGLKQMK -0.71 9 |l2.3 11 j | 92 |R VGDANV 5 |

Exemplo 4

Selecção de péptidos para outros testes [0171] Com base nos péptidos e epítopos identificados nos exemplos 1 a 3, os inventores seleccionaram os péptidos mostrados na Tabela 8 para outros testes. Alguns dos péptidos seleccionados podem ser considerados variantes dos péptidos do exemplo 1 a 3, mas também se consideram ser péptidos da invenção. Em particular, os resíduos em negrito na Tabela 8 indicam alterações do resíduo correspondente na sequência nativa da proteína precursora. Estas alterações reduzem a formação de dimeros de péptido e melhora a solubilidade sem diminuir a funcionalidade de um péptido como um epítopo do linfócito T. As alterações mostradas são a substituição de uma cisteina (c) na sequência nativa por uma serina 116 (S) ou ácido 5-aminobutírico (B), ou cisteína (C) como indicado.

[0172] Adicionalmente, algumas sequências podem compreender mais ou menos resíduos da proteína precursora da qual derivam, quando comparados com as sequências dos péptidos dos Exemplos 1 a 3. Portanto, pode considerar-se que tais sequências representam variantes de extensão ou truncação dos péptidos dos Exemplos 1 a 3. Por exemplo, o péptido HDM03F corresponde aos resíduos 149-165 do Der pl. HDM03E corresponde aos resíduos 149-167. Portanto, pode considerar-se HDM03F como uma variante truncada do HDM03E formada pela remoção de 2 resíduos da extremidade N-terminal do HDM03E. As posições "resíduos na precursora" na Tabela 8 referem-se às sequências de Der p 1, Der p 2 e Der p 7 como usados nas Tabelas 4 a 7. Esses péptidos indicados na Tabela 8 que têm um resíduo de glutamato N-terminal (E), por exemplo HDM03K, L, V e W, podem ter o glutamato substituído por piroglutamato para melhorar a estabilidade durante a produção, sem afectar a função do péptido. Os dados de outros testes desses péptidos (Exemplo 5) são, normalmente, obtidos usando péptidos onde tal substituição tenha ocorrido.

Quadro 8 Péptido sMolécul Sequência (Resíduos SEQ | Ia (na N. ° ( (precurs Iprecurso ID ( (ora Ira i HDM01 (Der p 1 IDLRQMRTVTPIR 1112-124 1 HDM01A §Der p 1 IDLRQMRTVTPIRMQGGSG |ll2-130 48 HDM02A |Der p 1 RTVTPIRMQGGSG |ll8-130 49 HDM02B (Der p 1 RTVTPIRMQGGBG |ll8-130 50 | 117 Péptido IMolécul Ia |precurs |ora iSequência |Resíduos ina iprecurso jra SEQ I N. 0 | ID ! HDM03D |Der P 1 ÍRNQSLDLAEQELVDSASQH ! 14 9 — 16 7 51 1 HDM03E per P 1 ÍRNQSLDLAEQELVDBASQH J14 9—16 7 52 | HDM03F |Der P 1 jRNQSLDLAEQELVDSAS ! 14 9 — 16 5 53 I HDM03G |Der P 1 ÍQSLDLAEQELVDBASQHG 1151 — 16 8 89 | HDM03H |Der P 1 ÍLDLAEQELVDEASQHG !15 3 — 16 8 90 I HDM03J iDer P 1 ; IAEQELVDBASQHG j 15 5 — 16 8 91 | HDM03K per P 1 lEQELVDBASQHG 115 7 — 16 8 92 | HDM03L per P 1 ÍELVDBASQHG 115 9 — 16 8 93 | HDM03M per P 1 ÍRNQSLDLAEQELVDCASQHG 1149-168 94 | HDM03N per P 1 Írnqsldlaeqelvdcasqhg |l49-168 95 | HDM03P Per P 1 | SAYLAHRNQSLDLAEQELVDCAS ! 14 3 — 16 6 96 j HDM03R per P 1 ÍQSLDLAEQELVDSASQHG 1151 — 16 8 97 I HDM03S Per P 1 ÍLDLAEQELVDSASQHG 115 3 — 16 8 98 | HDM03T per P 1 ílaeqelvdsasqhg ! 15 5 — 16 8 99 | HDM03V per P 1 ÍEQELVDSASQHG !15 7 — 16 8 100 | HDM03W per P 1 ÍELVDSASQHG J15 9—16 8 101 | HDM06A per P 1 ÍRYVAREQSSRRP j193-205 54 | HDM06B per P 1 iRYVAREQSBRRP 1193-205 55 | HDM07 per P 1 ÍPNVNKIREALAQT Ϊ220-232 56 | HDM09A per P 1 ÍREALAQTHSAIAVI 1226-239 5 | HDM19A per P 2 i D QVDVKD SAN HEIKK j18-32 57 | HDM19B per P 2 ÍDQVDVKDBANHEIKK 118-32 58 | HDM20A per P 2 11IHRGKPFQLEA 14 5-56 59 | 118 Péptido IMolécul Ia |precurs |ora iSequência jResíduos Ina iprecurso jra SEQ I N.0 | ID ! HDM20B |Der P 2 jSIIHRGKPFQLEA i 4 4-5 6 60 I HDM21 per P 2 ÍKPFQLEAVFEANQNT 150-64 8 | HDM21A |Der P 2 jKPFQLEAVFEANQNTK j 50-65 9 I HDM21B |Der P 2 ÍRGKPFQLEAVFEANQNT 14 8-64 10 1 HDM22A |Der P 2 i EAVFEANQNTKTAK 155-68 11 j HDM23B iDer P 2 ÍGLEVDVPGIDPNA 1 co 61 | HDM23C per P 2 Iglevdvpgidpnash --j --j 1 co co 62 | HDM26B per P 2 iGVLASAIATHAKIR 1132-14 5 63 | HDM26C per P 2 | GVLABAIATHAKIR 1132-14 5 64 | HDM30 per P 7 ÍDKFERHIGIIDLK 15 6-68 14 1 HDM32 Per P 7 ; IDLKGELDMRNIQ 165-77 15 ] HDM33 per P 7 ÍLDMRNIQVRGLKQ 171-83 16 \ HDM34 Per P 7 | RNIQVRGLKQMKRVG 1 co co 17 ! HDM35A per P 7 j RGLKQMKRVGDANV 17 9-92 65 | HDM39A per P 7 | HDDWSMEYDLAYKL ! 10 8 — 121 19 \ HDM39B per P 7 ÍHDDWSMEYDLAYKLGDLH j 10 8 — 12 5 66 | HDM40A per P 7 iVSMEYDLAYKLGDLH j112 — 12 4 20 | HDM40B per P 7 iVSMEYDLAYKLGDL ! 112 — 12 3 67 | HDM4 8 per P 7 : TAIFQDTVRAEMTK 118 7—2 0 0 21 ] HDM48A per P 7 iTAIFQDTVRAEMTKVLAP 118 7—2 0 4 68 | HDM4 9 per P 7 i D TVRAEMTKVLAP 1192-20 4 22 I HDM51 per P 7 iVDFKGELAMRNIE 165-77 23 | HDM51A per P 7 | VDFKGELAMRNIEAR 165-79 24 j 119 Péptido iMolécul Ia |precurs |ora ÍSequência |Resíduos ina iprecurso |ra SEQ I N. 0 | ID ! HDM100 |Der P 1 ÍRFGISNYCQIYPPNVNK 12 0 8—2 2 4 69 I HDM100A |Der P 1 Írfgisnysqiyppnvnk |208-224 70 | HDM100B |Der P 1 IrfgisnybqiYPPNVNK |208-224 71 I HDM101 ber P 1 ÍNYCQIYPPNVNKIREA 1213-228 72 I HDMlOlA |Der P 1 ÍNYSQIYPPNVNKIREA |213-228 73 I HDM101B |Der P 1 Ínybqiyppnvnkirea |213-228 74 | HDM102 |Der P 1 Inaqrfgisnycqi |205-217 75 | HDM102A |Der P 1 ínaqrfgisnysqi 1205-217 76 | HDM102B |Der P 1 ÍNAQRFGISNYBQI 12 0 5—217 77 | HDM103 sDer P 2 ÍKGQQYDIKYTWNVPKIAP j 99-116 78 | HDM104 ber P 2 |wnvpkiapksenv ! 10 9 — 121 79 j HDM201 ber P 1 1E SVKYVQSNGGAI j 52-64 80 I HDM202 |Der P 1 ÍDEFKNRFLMSAEAFE OJ 1 co 81 ! HDM202D ber P 1 ÍFKNRFLMSAEA j 7 5-85 102 | HDM202E ber P 1 ÍFKNRFLMSAE 17 5-84 103 | HDM202H ber P 1 ÍEFKNRFLMSAE j 7 4-84 104 | HDM203A |Der P 1 ÍDLRQMRTVTPIRMQGGCGS 1113 — 131 82 | HDM203B |Der P 1 ÍDLRQMRTVTPIRMQGGSGS ! 113 — 131 83 | HDM204 |Der P 1 ; SAYLAYRNQSLDLA 114 3-15 6 84 | HDM205 |Der P 1 ÍSYYRYVAREQS 1190-199 85 | HDM206 ber P 1 ÍDNGYGYFAANIDLMMIEE 12 9 6 — 313 86 | HDM206A ber P 1 ÍNGYGYFAANIDLMM |297-310 87 | HDM207 sDer P 7 | D MRNIQVRGLKQMKRVGD 172-104 88 | 120

Exemplo 5

Ensaio de libertação de citocinas e selecção de combinações peptídicas [0173] Os perfis de libertação de citocinas das PBMCs são analisados em resposta à estimulação do péptido usando os péptidos do Exemplo 3. Os sobrenadantes do ensaio de libertação de citocinas são testados quanto à presença de 2 citocinas, iFN-γ e il-13, usando o ensaio ELISA. Os perfis de secreção de citocinas das PBMCs foram analisados em resposta à estimulação peptidica usando os péptidos indicados. Os sobrenadantes do ensaio de libertação de citocinas foram testados quanto à presença de 2 citocinas, IFN-γ e IL-13, usando um ensaio ELISA ou um ensaio de esferas Multiplex.

[0174] Um ensaio, normal, de libertação de citocinas requer 40xl06 PBMCs por sujeito. Detalhadamente, 250 μΐ de uma solução de 200 pg/ml da concentração de péptido ou antigénio adequado são distribuídos nos poços adequados de placas de 48 poços. As placas são então incubadas numa incubadora humidificada com 5% de C02 a 37°C no máximo durante 4 horas. 250 μΐ de uma suspensão de PBMC 5xl06 células/ml são então adicionados a cada poço e as placas são colocadas na incubadora durante 5 dias. Após a estimulação, amostras de sobrenadante de cultura são colhidas para testes através dos ensaios ELISA ou ensaios de esferas Multiplex, de acordo com os protocolos Standard.

[0175] As respostas da IL-13 e do IFN-gama a cada 121 péptido foram classificadas como epítopos dos linfócitos T positivos, quando a quantidade de citocina produzida no poço para esse péptido excedia 100 pq/ml, i.e. 100 pg por l,25xl06 células. Assim, considerou-se que um indivíduo respondia a um péptido caso as suas células produzissem uma resposta superior a 100 pg/ml para a IL-13 ou para o IFN-gama. A percentagem de respondedores a cada péptido é mostrada na Figura 2.

[0176] Os cinco primeiros péptidos por percentagem de indivíduos com uma resposta de IL-13 ou IFN-gama superior a 100 pg/ml são HDM203B, HDM201, HDM205, HDM203A e HDM202, e (SEQ. ID N.° 83, 80, 85, 82 e 81).

[0177] HDM203A e 203B são variantes da mesma sequência com 203B modificado de forma a que a serina substitua a cisteína (no terceiro resíduo da extremidade C-terminal) para obter uma melhor fabricabilidade e estabilidade. Portanto, uma combinação preferida de péptidos deverá compreender pelo menos um desses péptidos ou uma sua variante.

[0178] Os péptidos seguintes mais potentes são HDM09A, HDM03D, HDM03E, HDM101, HDM101A, HDM101B (SEQ. ID N.°s 5, 51, 52, 72, 73 e 74) . Uma combinação peptídica preferida pode, tipicamente, compreender pelo menos um péptido adicional seleccionado deste grupo. Deste grupo, HDM03D e HDM03E são variantes de sequência um do outro, em que a serina e o ácido aminobutírico (respectivamente) substituem a cisteína (no quinto resíduo a partir da extremidade C-terminal da sequência nativa do Der p 1) para obter uma melhor fabricabilidade e estabilidade. Estas sequências são consideradas equivalentes. 122 [0179] Outras variantes de HDM03, nomeadamente HDM03V e HDM03W (SEQ. ID N.° 100 e 101) também são consideradas adequadas. Estas variantes são fragmentos que compreendem um truncamento até aos últimos onze ou dez (respectivamente) residuos da extremidade C-terminal de HDMO 3D. Estes péptidos não estão incluidos no ensaio acima descrito, mas em teste foram considerados, pelo menos, equivalentes a HDM03D (dados não mostrados).

[0180] HDM101, HDM101A e HDM101B são também variantes de sequência um do outro, em que o HDM101A tem uma serina e o HDM 101B tem um ácido aminobutirico a substituir uma cisteina em HDM101 (terceiro resíduo da extremidade N-terminal). Todas as três séries de péptidos HDM101 são consideradas equivalentes, sendo a HDM101A ou a HDM101B preferidas em termos de fabricabilidade e estabilidade.

[0181] Dos restantes péptidos testados, os seguintes têm respostas em >25% dos indivíduos testados: HDM01 [Der pl], HDM01A [Der pl], HDM06A [Der p2], HDM07 [Der pl], HDM19A [Der p2], HDM21A [Der p2], HDM23C [Der p2], HDM26B [Der p2], HDM35A [Der p7], HDM48 [Der p7], HDM51A [Der f 7], HDM102A [Der pl], HDM204 [Der pl] e HDM206 [Der pl] (SEQ N.0s ID 1, 48, 54, 56, 57, 9, 62, 63, 65, 21, 24, 76, 84, e 86 respectivamente). Uma combinação peptídica preferida pode, tipicamente, compreender pelo menos um péptido adicional seleccionado deste grupo. Ao considerar quais os péptidos adicionais a adicionar à mistura, devem ser escolhidos, de preferência, representantes deste grupo final dos epítopos retirados do Der p2 e do Der p7, uma vez que os grupos anteriores são dominados pelo Der p 1. HDM26B [Der p2] e HDM 35A [Der p7] são especialmente preferidos. Estudos adicionais (dados não apresentados) 123 demonstram que estes são os péptidos com melhor desempenho do Der p 2 e do Der p 7, respectivamente.

[0182] A Figura 3 mostra o número de indivíduos que respondem a uma mistura central de HDM201, HDM202, HDM203B e HDM205. O efeito aumentativo de adicionar HDM03D e HDM101A, bem como o efeito aumentativo de adicionar HDM26B e HDM35A, são também mostrados. O benefício de adicionar epítopos do segundo e terceiro grupos de péptidos é claramente mostrado.

[0183] Significativamente, a adição dos péptidos 03D, 26B, 35A, 101A à mistura central converteu 4 indivíduos de não respondedores em respondedores. É também evidente que remover um dos péptidos 201, 202, 203B ou 205 da mistura não reduziria o número de respondedores globais às misturas propostas, porque a maioria das pessoas tem três ou quatro respostas a este grupo peptídico. Isto é demonstrado na Figura 4, que mostra resultados similares para uma mistura central de HDM201, HDM203B e HDM205. 124

Claims (15)

1. Reivindicações 1. Uma composição para uso na prevenção ou tratamento da alergia a ácaros do pó doméstico por criação de tolerância, que compreende: (i) um polipétido de HDM203B DLRQMRTVTPIRMQGGSGS, ou (ii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste em: - a sequência de (i) ; ou uma sequência que tem, pelo menos, 70% de homologia à sequência de (i), sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo à sequência de (i), ou (iii) uma variante de um polipéptido de acordo com (i), em que a dita variante é um polipétido com 9 a 30 aminoácidos de comprimento, que compreende uma região que consiste numa sequência que representa: - um fragmento da sequência de (i); ou - um homólogo de um fragmento da sequência de (i), sequência essa que é capaz de criar tolerância num indivíduo à sequência de (i) e que tem, pelo menos, 9 aminoácidos de comprimento, e em que o dito homólogo tem, pelo menos, 70% de homologia a qualquer um dos 9 aminoácidos contíguos na sequência de (i).
2. 2. A composição de acordo com a reivindicação 1, compreendendo adicionalmente os polipéptidos de HDM201 ESVKYVQSNGGAI, HDM205 SYYRYVAREQS, HDM03W ELVDSASQHG, ou 1 uma variante destes, conforme definido na reivindicação 1(ii) ou (iii) .
3. 3. A composição de acordo com as reivindicações 1 ou 2 que consiste nos polipéptidos de: HDM203B DLRQMRTVTPIRMQGGSGS; j HDM03W ELVDSASQHG; j HDM26B GVLASAIATHAKIR; j HDM35A RGLKQMKRVGDANV; j HDMlOlA NYSQIYPPNVNKIREA; | HDM201 ESVKYVQSNGGAI; e j HDM205 SYYRYVAREQS; \ ou uma variante destes, conforme definido na reivindicação 1 (ii) ou (iii).
4. 4. A composição conforme definido nas reivindicações 2 ou 3, em que o residuo de glutamato presente na extremidade N-terminal dos polipéptidos de HDM201 ESVKYVQSNGGAI e/ou HDM03W ELVDSASQHG é substituído por piroglutamato.
5. 5. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que a composição: a) é capaz de criar tolerância em, pelo menos, 50% ou, pelo menos, 60% dum painel de indivíduos alérgicos aos ácaros do pó doméstico, na população; e/ou b) compreende, pelo menos, um outro polipéptido até um total de treze polipéptidos únicos/diferentes, em que os outros polipéptidos: 2 - compreendem uma sequência com pelo menos 70% de identidade de sequência a pelo menos 9 ou mais aminoácidos contíguos em qualquer das SEQ N.°s ID 1 a 104 como mostrado nas Tabelas 4 a 6 e 8 que não estão entre os polipéptidos já seleccionados; e - têm 9 a 30, 9 a 20 ou 13 a 17 aminoácidos de comprimento; e/ou c) compreende até um máximo de treze polipéptidos.
6. 6. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que um ou mais dos polipéptidos têm uma ou mais modificações seleccionadas das seguintes: (i) acetilação N-terminal; (ii) amidação C-terminal; (iii) um ou mais hidrogénios nas aminas da cadeia lateral da Arginina e/ou Lisina substituído por um grupo metileno; (iv) glicosilação; e (v) fosforilação.
7. 7. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores em que pelo menos um dos péptidos foi concebido para ser mais solúvel, de forma a compreender: i) uma extremidade N-terminal para os resíduos do péptido que flanqueiam um epítopo do linfócito T: um a seis aminoácidos contíguos que correspondem aos dois a seis aminoácidos contíguos imediatos ao N-terminal, em relação aos ditos resíduos da sequência da proteína da qual o péptido deriva; e/ou 3 ii) uma extremidade C-terminal para os resíduos do péptido que flanqueiam um epítopo do linfócito T: um a seis aminoácidos contíguos que correspondem aos um a seis aminoácidos contíguos imediatos ao C-terminal, em relação aos ditos resíduos da sequência da proteína da qual o péptido deriva; ou iii) as duas extremidades N-terminal e C-terminal em relação aos resíduos do péptido que flanqueiam um epítopo do linfócito T, pelo menos um aminoácido seleccionado da arginina, lisina, histidina, glutamato e aspartato, em que o polipéptido tem uma solubilidade de pelo menos 3,5 mg/ml e o epítopo do linfócito T tem uma solubilidade inferior a 3,5 mg/ml; e/ou em que pelo menos um dos péptidos foi concebido para ser solúvel, de forma a que: iv) quaisquer resíduos de cisteína na sequência nativa do péptido, sejam substituídos com serina ou ácido 2-aminobutírico; e/ou v) quaisquer resíduos hidrófobos nos até três aminoácidos na extremidade N-terminal ou C-terminal da sequência nativa do péptido, que não estejam compreendidos num epítopo de linfócito T, sejam eliminados; e/ou vi) quaisquer dois aminoácidos consecutivos compreendendo a sequência Asp-Gly nos quatro aminoácidos na extremidade N-terminal ou C-terminal da sequência nativa do péptido, que não estejam compreendidos num epítopo de linfócito T, sejam eliminados.
8. 8. A composição de acordo com qualquer uma das reivindicações anteriores, em que cada polipéptido tem 4 uma concentração nos intervalos de 0,03 a 200 nmol/ml, 0,3 a 200 nmol/ml ou 10 a 120 nmol/ml.
9. 9. Uma composição ou vector usados na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó por criação de tolerância, em que no lugar de qualquer um dos polipéptidos, coforme definido nas reivindicações 1 a 5, está um polinucleótido capaz de expressar o dito polipéptido, em que, opcionalmente, a composição ou vector compreende entre quatro a treze sequências de polinucleótidos diferentes, cada uma das quais codificando um polipéptido diferente.
10. 10. Um produto que contém entre quatro a treze polipéptidos, incluindo um polipéptido com a composição da reivindicação 1, em que cada polipéptido diferente é para utilização simultânea, separada ou sequencial na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó doméstico por criação de tolerância, em que, opcionalmente, o produto inclui ainda os polipéptidos com a composição de qualquer uma das reivindicações 2 a 5.
11. 11. Um polipéptido de HDM203B DLRQMRTVTPIRMQGGSGS, ou uma variante deste, conforme definido na reivindicação 1 (ii) ou (iii) .
12. 12. Uma formulação farmacêutica para uso na prevenção ou tratamento da alergia aos ácaros do pó doméstico por criação de tolerância, que compreende uma composição ou vector de acordo com qualquer umas das reivindicações 1 a 9 ou um produto de acordo com a reivindicação 10; e um veiculo ou diluente farmaceuticamente aceitável, em que, opcionalmente, a composição, vector ou produto são formulados para administração oral, nasal, epicutânea, 5 subcutânea, sublingual, intradérmica, bucal, ou por inalação ou por injecção.
13. 13. A composição conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9 ou produto conforme definido na reivindicação 10, compreende, adicionalmente, um outro alergénio de polipéptido para uso na criação de tolerância num indivíduo ao alergénio adicional do polipéptido.
14. 14. Um método in vitro para determinar se os linfócitos T reconhecem um polipéptido conforme definido na reivindicação 1 que compreende colocar os ditos linfócitos T em contacto com o dito polipéptido e detectar se os ditos linfócitos T são estimulados pelo dito polipéptido.
15. 15. Um método in vitro para determinar se um indivíduo tem, ou está em risco de ter, uma condição que se caracteriza por sintomas alérgicos em resposta a um alergénio dos ácaros do pó doméstico, o método compreendendo testar se o indivíduo tem linfócitos T que respondem a uma composição como a definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, determinando, desse modo, se o indivíduo tem, ou está em risco de ter, a condição; opcionalmente, em que uma resposta do linfócito T à dita composição, é medida colocando a composição em contacto com linfócitos T numa amostra retirada do sujeito, sob condições que permitem à composição e aos linfócitos T interagir; e determinar se algum dos linfócitos T são, ou não, estimulados e desse modo determinar se uma resposta imune dos linfócitos T está, ou não, presente. 6