HU220462B1 - A Dermatophagoides nemzetség allergénjéből származó peptidek, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és eljárás házi poratka-érzékenység kimutatására - Google Patents

Abstract

A találmány a Dermatophagoides nemzetségből származó főproteinallergének izolált peptidjeit bocsátja rendelkezésre. Atalálmány szerinti peptidek a Der p I, Der p II, Der f I és Der f IIproteinallergén valamelyikének legalább egy, előnyösen legalább kétepitópját tartalmazzák. A találmány továbbá olyan módosítottpeptidekre vonatkozik, amelyek a megfelelő, természetben előfordulóallergénnel vagy részletével megegyező vagy annál kedvezőbbgyógyászati jellemzőkkel rendelkeznek, miközben mellékhatásaikkisebbek. A találmány továbbá a találmány szerinti peptideket kódolónukleinsavszekvenciákat bocsát rendelkezésre. Eljárásokat írtak leemberek háziporatkára vonatkozó érzékenységének kezelésére éskimutatására, továbbá egy vagy két – találmány szerinti – peptidettartalmazó gyógyászati készítményt bocsátanak rendelkezésre. ŕ

Description

A találmány Dermatophagoides allergénjeiből származó peptidekre, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítményekre és diagnosztikai eljárásra vonatkozik.

Az utóbbi időkben végzett kutatások a háziporatkaallergiát illetően az I. csoportba (például Dér p I Dér fi) és a II. csoportba (például Dér p II és Dér /II) tartozó proteinallergénekre adott reakciók jelentőségéről számolnak be. Például leírták, hogy a páciensek több mint 60 százalékában az anti-atkaantitestek legalább 50%-a ezen proteinek ellen irányul (például Lind, P. és munkatársai, Allergy, 39, 259-274,1984; van dér Zee, J. S. és munkatársai, Journal Allergy and Clinical Immunology, 81, 884-896,1988). Valószínű, hogy a gyermekek az I. és II. csoportba tartozó allergénekre még nagyobb mértékű reaktivitást mutatnak (Thompson, P. J. és munkatársai, Immunology, 64, 301-314, 1988). A Dermatophagoides nemzetségbe tartozó atkákra vonatkozó allergia olyan következményekkel jár, mint az asztma, a nátha és az ectopiás bőrgyulladás. Két faj, a D. pteronyssinus és a D. farinae a leggyakoribb, s emiatt jelentős erőfeszítéseket tettek az e két faj által termelt allergének azonosítása érdekében.

Összehangolt kísérleteket végeztek mind a D. pteronyssinus, mind D. farinae fő allergénjeinek génklónozásos karakterizálására. Következésképpen, jó néhány publikációban több különböző allergén - beleértve a Dér p I-et (Thomas, W. R. és munkatársai, International Archives of Allergy and Applied Immunology, 85, 127-129, 1988; Chua, Κ. Y. és munkatársai, Journal of Experimental Medicine, 167, 175-182, 1988), a Dér p ΙΙ-t (Chua, Κ. Y. és munkatársai, International Archives of Allergy and Applied Immunology, 91, 118-123,1990), a Dér fl-et (Dilworth, R. J. és munkatársai, Clinical and Experimental Allergy, 21, 25-32, 1991), a Dér f ΙΙ-t (Yuuki, T. és munkatársai, Japan Journal Allergol., 39, 557-461,1990; Trudinger, M. és munkatársai, Clinical and Experimental Allergy, 21, 33-37, 1991) és egy kis molekulatömegű allergént (Ovey, E. R. és munkatársai, Journal of Experimental Medicine, 170, 1457-1462, 1989) - teljes nukleotidszekvenciáját leírták.

A Dér p I-et és a Dér/I-et kódoló cDNS-ek közrebocsátott nukleotidszekvenciái azt bizonyítják, e két protein az aminosavak szintjén messzemenően homológ (81%-os azonosság), és az érett proteintermékek 222, illetve 223 aminosavgyökből állnak (Chua, Κ. Y. és munkatársai, Journal of Experimental Medicine, 167, 175-182, 1988; Dilworth, R. J. és munkatársai, supra). A Dér p II és a Dér/II proteinallergének mindegyike 129 aminosavgyökből áll, s az aminosavszekvenciát illetően szintén messzemenően homológok (88%-os azonosság) (Trudinger, M. és munkatársai, supra; Chua, Κ. Y. és munkatársai, International Archieves of Allergy and Applied Immunology, 91, 118-123,1990).

A Dér p I-et és a Dér p ΙΙ-t kódoló cDNS-klónok izolálása lehetővé tette a rekombináns antigéneken végzett antitestkötési vizsgálatokat (Green, W. K. és munkatársai, International Archieves of Allergy and Applied Immunology, 92, 30-38,1990; Chua, Κ. Y. és munkatársai, International Archives of Allergy and Applied Immunology, 91, 124-129, 1990). A Dér p I komplementer DNS-fragmenseit E. coliban expresszálták, és az összegyűjtött humán-atkaallergiás IgE-szérummal végzett IgE-kötési vizsgálatok a molekulán belül kötő és nem kötő régiókat mutattak ki (Thomas W. R. és munkatársai, Epitopes of Atopic Allergens, Proceedings of Workshop írom XIV Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology, Berlin, 1989. szeptember, pp. 77-82). Leírták a Dér p I T-sejt-epitópjait (O’Hehir, R. E. és munkatársai, Annual Review Immunology, 9, 67-95, 1991; Stewart, G. A. és munkatársai, Epitopes of Atopic Allergens, Proceedings of Workshop from XIV Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology, Berlin, 1989. szeptember, pp. 41-47; Yessel, H. és munkatársai, T cell Activation in Health and Disease: Discrimination Between Immunity and Tolerance, Konferencia, Trinity College, Oxford, U. K., 1990. szeptember, 22-26; Hessel, H. és munkatársai, Journal of Immunology, 148, (3), 738-745, 1992. február 1.).

A találmány a Dermatophagoides nemzetség fő proteinallergénjeinek izolált peptidjeit bocsátja közre. A találmány területébe tartozó peptidek legalább egy, lehetőleg legalább két proteinallergén T-sejt-epitópot tartalmaznak, mely allergén a Dér p I, Dér p II, Dér fi vagy Dér f II allergének közül való. A találmány továbbá olyan peptideket bocsát rendelkezésre, amelyek két legalább egy atka-proteinallergén T-sejt-epitópot tartalmazó - régióval rendelkeznek. A régiók a Dermatophagoides nemzetség azonos vagy eltérő proteinallergénjeiből származhatnak.

A találmány rendelkezésre bocsát olyan módosított peptideket is, amelyek a megfelelő, természetes állapotban előforduló allergénnel - vagy annak részletével azonos vagy annál előnyösebb gyógyászati tulajdonságokkal rendelkeznek, miközben kisebb mellékhatásokat mutatnak, továbbá ezen módosított peptidek olyan előnyös tulajdonságokkal rendelkeznek, mint a megnövelt oldékonyság és stabilitás. A találmány szerinti módosított peptidek alkalmasak - háziporatkára érzékeny betegek adva - a beteg háziporatka-allergén - vagy a háziporatka-allergénnel immunológiailag keresztreaktív allergén - elleni allergiás reakciójának megváltoztatására. Emberek háziporatkára vonatkozó érzékenységének kezelési és diagnosztikai eljárásait, valamint a találmány szerinti, egy vagy több peptidet tartalmazó gyógyászati készítményeket is rendelkezésre bocsátunk.

Az ábrák rövid leírása

Az 1. ábra a D. pteronyssinus és a D. farinae I. és II. csoportba tartozó allergénjeinek szubklónozását és expresszálását mutatja be.

A 2/a. ábra a Dér p I és a Dér fi expresszálásához használt adaptorokat mutatja be, míg a 2/b. ábra a Derf II és a Dér p II amplifikálásához használt primereket, valamint egy Dér/II mutagenezis prímért ábrázol.

A 3. ábra a Dér p I és a Dér p II proteinallergénekból származó különböző - kívánt hosszúságú peptideket ábrázol.

HU 220 462 Bl

A 4. ábra a Dér fi és a Dér/II proteinallergénekből származó különböző - kívánt hosszúságú - peptideket ábrázol.

Az 5. ábra grafikusan ábrázolja 33 páciensből származó - tisztított natív (N), illetve rekombináns (R) Dér p I proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér p I peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a pepiidre adott pozitív reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 6. ábra grafikusan ábrázolja 16 páciensből származó - a Dér fi proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér fi peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejtstimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a pepiidre adott pozitív reakciók átlagos Tsejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 7. ábra grafikusan ábrázolja 14 páciensből származó - a Dér p I proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér p I peptidekre és az azokkal lényegében összetartozó Dér fi peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő Tsejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos Tsejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 8. ábra grafikusan ábrázolja 8 páciensből származó - a Dér fi proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dérfi peptidekre és az azokkal lényegében összetartozó Dér p I peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 9. ábra grafikusan ábrázolja 29 páciensből származó - a Dér p II proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér p II peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő Tsejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos Tsejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 10. ábra grafikusan ábrázolja 10 páciensből származó - a Dér fii proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér f II peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő Tsejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos Tsejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

All. ábra grafikusan ábrázolja 10 páciensből származó - a Dér/II proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér/II peptidekre és az azokkal lényegében összetartozó Dér p II peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő Tsejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos Tsejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 12. ábra grafikusan ábrázolja 26 páciensből származó - a Dér p II proteinre in vitro immunmozgósított és különböző, átfedő Dér f II peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő Tsejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos Tsejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 13. ábra grafikusan ábrázolja 33 páciensből származó - Dér p I proteinre in vitro immunmozgósított és a Dérp I proteinallergénből származó, kívánt hosszúságú, szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 14. ábra grafikusan ábrázolja 9 páciensből származó - Dér fi proteinre in vitro immunmozgósított és a Dér fi proteinallergénből származó, kívánt hosszúságú, szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, a peptidre adott pozitív reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét, valamint a peptidreakciók sorozatösszegét.

A 15/a. ábra grafikusan ábrázolja 30 összepárosított páciensből származó - Dér p I proteinre in vitro immunmozgósított és a Dér pl és a Dér fi proteinallergénből származó, kívánt hosszúságú, szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, valamint a peptidre adott pozitív reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét.

A 15/b. ábra a 15/a. ábra adatai alapján grafikusan ábrázolja a Dérp I-re mozgósított T-sejteknek az előnyben részesített Dér p I peptidekre adott reakcióját, amit a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs értéket mutató reakciók százalékos arányával (az oszlopok fölötti érték), az átlagos T-sejt-stimulációs indexszel (az oszlopok fölött zárójelben), valamint a peptidreakciók sorozatösszegével vizsgáltunk.

A 16/a. ábra grafikusan ábrázolja 9 összepárosított páciensből származó - Dér fi proteinre in vitro immunmozgósított és a Dér fi és a Dér p I proteinallergénből származó, kívánt hosszúságú, szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejt sejtvonal reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, valamint a peptidre adott, legalább

HU 220 462 Bl kettő stimulációs indexértékkel rendelkező reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét.

A 16/b. ábra a 16/a. ábra adatai alapján grafikusan ábrázolja a Dér p I-re in vitro immunmozgósított sejtvonalaknak a Dér fi és a Dér p I peptidekre adott reakcióját, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, valamint a pepiidre adott, legalább kettő stimulációs indexértékkel rendelkező reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét.

A 17/a. ábra grafikusan ábrázolja 29 páciensből származó - Dér p II proteinre in vitro immunmozgósított és a Dér p II proteinallergénből származó, kívánt hosszúságú, szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - T-sejtek reakcióit, bemutatva a peptidre adott, legalább kettő stimulációs indexértékkel rendelkező reakciók T-sejt-stimulációs indexét.

A 17/b. ábra grafikusan ábrázolja 30 - Dér p II proteinre in vitro immunmozgósított és a Dér p II proteinallergénből származó szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált - páciens immunreakcióit, bemutatva a tesztelt személyekben legalább kettő stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát (az oszlopok fölötti érték), az átlagos T-sejt-stimulációs indexet (az oszlopok fölött zárójelben), valamint a peptidreakciók sorozatösszegét (Y tengely).

A 18/a. ábra grafikusan ábrázolja 10 - Dér/II proteinre in vitro immunmozgósított és a Dér/II és a Dér p II proteinallergénből származó, kívánt hosszúságú, szelektált peptidekre adott reakciókat illetően vizsgált

- páciens T-sejtjeinek reakcióit, bemutatva a peptidre adott, legalább kettő stimulációs indexértékkel rendelkező reakció T-sejt-stimulációs indexét.

A 18/b. ábra a 18/a. ábra adatai alapján grafikusan ábrázolja Dér/I-re in vitro immunmozgósított sejtvonalaknak az előnyben részesített Dér p II peptidekre adott reakcióját, amit a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs értéket mutató reakciók százalékos arányával (az oszlopok fölötti érték), az átlagos T-sejtstimulációs indexszel (az oszlopok fölött zárójelben), valamint a peptidreakciók sorozatösszegével (Y tengely) vizsgáltunk.

A 18/c. ábra grafikusan ábrázolja négy összepárosított páciensből származó - I. csoportba tartozó atkaallergénnel immunmozgósított és az előnyben részesített Dér pl és Dér fi peptidekre adott reakciót illetően vizsgált - T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, valamint a peptidre adott, legalább kettő stimulációs indexértékkel rendelkező reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét.

A 18/d. ábra grafikusan ábrázolja hat összepárosított páciensből származó - II. csoportba tartozó atkaallergénnel immunmozgósított és az előnyben részesített Dér p II peptidekre adott reakciót illetően vizsgált

- T-sejt sejtvonalak reakcióit, bemutatva a tesztelt páciensekben legalább kettő T-sejt-stimulációs indexértéket mutató reakciók százalékos arányát, valamint a peptidre adott, legalább kettő stimulációs indexértékkel rendelkező reakciók átlagos T-sejt-stimulációs indexét.

A 19/a. és 19/b. ábra grafikusan mutatja be az IgE tisztított és rekombináns Dér p 1 és Dér p II proteinekhez, illetve bizonyos átfedő Dér pl és Dér p II peptidekhez történő közvetlen kötési vizsgálatának eredményeit.

A 20/a. és 20/b. ábra grafikusan mutatja be az IgE tisztított és rekombináns Dér f 1 és Dér f II proteinekhez, illetve bizonyos átfedő Dér fi és Dér f II peptidekhez történő közvetlen kötési vizsgálatának eredményeit.

A 21/a-21/h. ábra grafikusan mutatja be az IgE biokémiailag tisztított atkaallergének (PMA) elegyéhez és különböző, Dér p I, Dér fi, Dér p II és Dér fii proteinekből származó peptidekhez történő közvetlen kötési vizsgálatának eredményeit.

A 22. ábra öt, a Dér p I proteinen belül polimorfizmust mutató Dér p I klón (a-e) aminosavszekvenciájának összetett sorba állítását mutatja be. A számozás a Dérp I(a) klón szekvenciájára vonatkozik. A (-) jelek azt jelzik, hogy a megfelelő helyen az adott Dér p I klón aminosavgyöke megegyezik a felette lévő Dér p I(a) aminosavgyökkel. A kiónok aminosavszekvenciái azt mutatják, hogy - mivel az öt szekvenciában öt polimorf aminosavgyök található - a Dér p I proteinben jelentős variáció lehetséges.

A 23. ábra három, a Dér p II proteinen belül polimorfizmust mutató Dér p II klón [(c), (1) és (2)] aminosavszekvenciájának összetett sorba állítását mutatja be. A számozás a Dér p II(c) klón szekvenciájára vonatkozik. A (.) jelek azt jelzik, hogy a megfelelő helyen az adott Dér p II klón aminosavgyöke megegyezik a felette lévő Dérp II(c) aminosavgyökkel.

A 24. ábra hat, a Dér fii proteinen belül polimorfizmust mutató Dér fii klón (pFLl, pFL2, MT3, MT5, MTI8 és MTI6) aminosavszekvenciájának összetett sorba állítását mutatja be. A számozás a Dér f pLFl klón szekvenciájára vonatkozik. A (.) jelek azt jelzik, hogy a megfelelő helyen az adott Dér f II klón aminosavgyöke megegyezik a felette lévő Dér f II pFLl aminosavgyökkel.

A 25. ábra a Dér p I, Dér p II és Dér f I proteinallergénekből származó különböző régiókat tartalmazó, kiválasztott peptid nukleotid- és aminosavszekvenciáit mutatja be.

A 26. ábra a Dér p I, Dér p II és Dér f I proteinallergénekből származó különböző régiókat tartalmazó, kiválaszott peptid nukleotid- és aminosavszekvenciáit mutatja be.

A 27. ábra a Dér p I, Dér p II és Dér f I proteinallergénekből származó különböző régiókat tartalmazó, kiválasztott peptid nukleotid- és aminosavszekvenciáit mutatja be.

A 28. ábra a találmány szerinti módosított peptidek aminosavszekvenciáit mutatja be.

A találmány a Dermatophagoides nemzetség fő proteinallergénjeiből származó izolált peptideket bocsát közre. A találmány szóhasználatában a „peptid” vagy „egy protein fragmense” kifejezés olyan aminosavszek4

HU 220 462 Bl venciára vonatkozik, amely kevesebb aminosavgyökből áll, mint a protein teljes aminosavszekvenciája. A találmány szerinti peptidek közé tartoznak a Dér p I (1. és 2. számú szekvencia), Dér p II (3. és 4. számú szekvencia), Dér f\ (5. és 6. számú szekvencia) és a Dér fii (7. és 8. számú szekvencia) proteinekből származó peptidek, amelyek az allergén legalább egy Tsejt-epitópját tartalmazzák.

A találmány területébe tartoznak azon proteinek is, amelyek legalább két olyan régiót tartalmaznak, melyek mindegyike rendelkezik legalább egy Dermatophagoides proteinallergén T-sejt-epitóppal. Az ilyen peptidek valamennyi régiója azonos vagy különböző atkaallergénből származik. A legalább két atka-proteinallergén T-sejt-epitópot tartalmazó izolált peptidek - vagy az izolált peptidek régiói - a megnövelt gyógyászati hatékonyságot illetően különösen előnyösek. Azon peptidek, amelyek immunológiai rokonságot mutatnak a találmány szerinti peptidekkel (például antitest vagy T-sejt-keresztreakció alapján), szintén a találmány területébe tartoznak. Az immunológiailag antitest-keresztreaktivitás alapján rokon peptideket a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjének egy peptidjére specifikus antitestek kötik meg. Az immunológiailag T-sejt-keresztreaktivitás alapján rokon peptidek ugyanazokkal a T-sejtekkel képesek reagálni, mint a találmány szerinti peptidek. A találmány szerinti izolált peptidek egy ilyen peptidet kódoló szekvenciával rendelkező nukleinsavval transzformált gazdasejtben, rekombinációs DNS-technikákkal állíthatók elő. A találmány szerinti izolált peptidek kémiai szintézissel is előállíthatok. Bizonyos korlátozott esetekben az izolált peptidek a proteinallergén kémiai hasításával állíthatók elő. Abban az esetben, ha egy peptidet rekombináns DNS-technikákkal állítunk elő, a - peptidet kódoló szekvenciával rendelkező - nukleinsavval vagy a nukleinsav funkcionális ekvivalensével transzformált gazdasejteket a sejteknek megfelelő tápközegben tenyésztjük, és a peptidek a tudományban peptidek és proteinek tisztításához ismert eljárásokkal tisztíthatok a tápközegtől, a sejtektől (vagy mindkettőtől). Ilyenek az ioncserélő kromatográfia, a gélfiltrációs kromatográfia, az ultrafiltrálás, az elektroforézis, illetve a pepiidre vagy arra a Dermatophagoides proteinallergénre (vagy annak részletére), amelyből a peptid származik - specifikus antitestek alkalmazásával végzett immuntisztítás. A találmány szerinti izolált peptidek - rekombináns DNS-technikákkal történő előállítás esetén - lényegében mentesek a sejtek anyagától és a tápközegtől, illetve - kémiai szintézis esetén - lényegében mentesek a prekurzoroktól, illetve más kémiai anyagoktól.

A találmány a találmány szerinti nukleinsavszekvenciák expresszálásához expressziós vektorokat és transzformáit gazdasejteket bocsát rendelkezésre. Egy atkaallergént - vagy annak legalább egy részletét - kódoló nukleinsavszekvencia expresszálható baktériumsejtekben (mint például E. coli), rovarsejtekben (bakulovírus), élesztő- vagy emlőssejtekben, például kínaihörcsögpetefészek-sejtekben (CHO). Az alkalmazható expressziós vektorok, promoterek, enhanszerek és más expressziós szabályozóelemek megtalálhatók: Sambrook és munkatársai, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, második kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, 1989. Egyéb alkalmas expressziós vektorok, promoterek, enhanszerek és más expressziós szabályozóelemek a szakemberek számára ismertek. Az emlős-, élesztővagy rovarsejtekben történő expresszió a rekombináns anyag teljes vagy részleges glikozilálását és láncok közötti vagy láncon belüli diszulfidhidak kialakulását eredményezi. Az élesztőben történő expresszióhoz alkalmas vektorok közé tartozik a YepSecl (Baldari és munkatársai, EMBO J., 6, 229-234, 1987), a pMFa (Kurjan és Herskowitz, Cell, 30, 933-943, 1982), a JPY88 (Schultz és munkatársai, Gene, 54, 113-123, 1987) és a pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, CA). Ezen vektorok szabadon beszerezhetők, csakúgy, mint a bakulovírus- és emlős-expressziósrendszerek. Például egy bakulovírus-rendszer kereskedelmileg beszerezhető (PharMingen, San Diego, CA) rovarsejtekben történő expresszióhoz, míg a pMSG vektor emlőssejtekben végzett expresszióhoz szerezhető be (Pharmacia, Piscataway, NJ).

Az E. coliban történő expresszióhoz alkalmas vektorok közé tartozik, többek között, a pTRC (Atmann és munkatársai, Gene, 69, 301-315, 1988), a pGEX (Amrad Corp., Melbourne, Ausztrália), a pKAL (N.E. Biolabs, Beverly, MA), a pRIT5 (Pharmacia, Piscataway; NJ), a pET-lld (Novagen, Madison, WI; Jameel és munkatársai, J. Virol., 64, 3963-3966,1990) és a pSEM (Knapp és munkatársai, BioTechniques, 8, 280-281, 1990). A pTRC és a pET-lld alkalmazása például fuzionálatlan protein expresszálását eredményezi. A pMAL, pRIT5, a pSEM és a pGEX alkalmazása maltóz E-kötő proteinhez (pMAL), A proteinhez (pRIT5), megrövidített β-galaktozidázhoz (pSEM), illetve glutation S-transzferázhoz (pGEX) fuzionált allergén expresszálásához vezet. Abban az esetben, ha egy proteinallergén vagy annak ffagmense, illetve fragmensei fúziós proteinként expresszálódnak, különösen előnyös a hordozó protein és a proteinallergén (vagy fragmense) közötti fúziós kapcsolódás helyén enzimhasítási helyet bejuttatni. Később az atka-proteinallergén (vagy ffagmense) az enzim felismerési helyén történő enzimes hasítással és - proteinek és peptidek tisztítására alkalmas - hagyományos technikákkal végzett biokémiai tisztítással visszanyerhető a fúziós proteinről. Az alkalmazható enzimhasítási helyek közé tartoznak az Xa véralvadási faktorhoz vagy a trombinhoz valók, melyekhez kereskedelmileg beszerezhetők a megfelelő enzimek és hasítási eljárások (például Sigma Chemical Company, St. Louis, MO; és N.E. Biolabs, Beverly, MA). A különböző vektorok különböző promoterrégiókkal rendelkeznek, melyek konstitutív vagy - IPTG indukcióval (PRTC, Amann és munkatásrai, supra, 1988; pET-lld, Novagen, Madison, WI) vagy hőmérsékletindukcióval (pRIT5, Pharmacia, Piscataway, NJ) - indukálható expressziót tesznek lehetővé.

A találmány szerinti izolált peptidek előállításához egy atkaallergént a 3. példában részletezett módon

HU 220 462 BI olyan, kívánt hosszúságú, nem átfedő peptidekre - vagy kívánt hosszúságú, átfedő peptidekre - osztjuk, amelyek rekombináns módon, szintetikusan - vagy bizonyos korlátozott esetekben - az allergén kémiai hasításával állíthatók elő. A legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó peptidek képesek T-sejt-reakció (stimulálás, úgymint proliferáció vagy limfokin szekréció) kiváltására és/vagy képesek T-sejt-anergia (úgymint tolerancia) indukálására. A legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó peptidek azonosítása érdekében az izolált peptideket például T-sejtes biológiai módszerekkel teszteljük, hogy meghatározhassuk, vajon a peptidek kiváltják-e a Tsejt-reakciót, vagy indukálják-e a T-sejt-anergiát. Azokat a peptideket, amelyekről úgy találtuk, hogy T-sejtreakciót váltanak ki vagy T-sejt-anergiát indukálnak, Tsejt-stimuláló aktivitásúként határoztuk meg.

Amint azt a példákban részletesen leírjuk, a humán T-sejt-stimuláló aktivitás atkaallergénre érzékeny személyből (azaz olyan személyből, aki egy atkaallergénre IgE-közvetett immunreakciót mutat) nyert T-sejteknek az allergénből származó peptiddel végzett tenyésztésével, valamint annak meghatározásával tesztelhető, hogy a T-sejtek proliferációja a peptidre adott reakcióként történik-e, ami például tríciummal jelölt timidin celluláris felvételével mérhető. A T-sejtek peptidekre adott reakcióinak stimulációs indexei a következők szerint számíthatók: egy peptidre adott reakció maximális percenkénti beütésszáma (CPM) osztva a kontroll-CPM-mel. Azt a T-sejt-stimulációs indexet tekintjük pozitívnak, amely a háttérszínt kétszeres értékével egyenlő vagy annál nagyobb. A pozitív eredményeket használjuk a tesztelt peptidek átlagos stimulációs indexének kiszámításához. A találmány szerinti előnyben részesített peptidek legalább egy T-sejt-epitópot tartalmaznak, s 2,0 - vagy nagyobb - átlagos stimulációs indexszel rendelkeznek. A 2,0 - vagy nagyobb - stimulációs indexszel rendelkező peptidet tartjuk gyógyászati szerként alkalmasnak. Az előnyben részesített peptidek legalább 2,5, lehetőleg legalább 3,5, előnyösebben legalább 4,0, legelőnyösebben minimum 5,0 átlagos Tsejt-stimulációs indexszel rendelkeznek.

Ráadásul az előnyben részesített peptidek legalább 100, lehetőleg legalább 150, előnyösebben legalább 200, legelőnyösebben minimum 250 pozitivitási indexszel rendelkeznek. Egy peptid pozitivitási indexét úgy határozhatjuk meg, hogy az átlagos T-sejt-stimulációs indexet megszorozzuk a háziporatkára érzékeny páciensek egy csoportjában (például lehetőleg minimum 9, előnyösebben minimum 16 vagy több, méginkább lehetőleg 29 vagy több, még előnyösebben legalább 30 vagy több személyből álló csoport) a peptidre reagáló T-sejtekkel rendelkező páciensek százalékos arányával. Ilyenformán a pozitivitási index egyaránt kifejezi a peptidre adott T-sejt-reakció erősségét (stimulációs index) és a háziporatkára érzékeny személyek csoportjában a peptidre adott T-sejt-reakció gyakoriságát. Például, amint az 5. ábrán látható, a DP 1-1 peptid 4,7-es stimulációs indexszel rendelkezik, és a tesztelt páciensek csoportjában a 73%-os pozitív reakcióarány 343, 1-es pozitivitási indexet eredményez. A Dér p I legalább körülbelül 150 pozitivitási indexszel és legalább körülbelül 4 T-sejt-stimulációs indexszel rendelkező peptidjei közé tartoznak a DP 1-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia); a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia); a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 1-23.2 (34. számú szekvencia); a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia) és a DP 1-26.1 (37. számú szekvencia) peptidek.

A pontos T-sejt-epitópok - például finomtérképezést technikákkal történő - meghatározása érdekében egy T-sejt-stimuláló aktivitással rendelkező - és ebből következően (amint azt T-sejtes biológiai technikákkal meghatároztuk) legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó - peptidet, aminosavgyököknek akár a peptid N-, akár C-terminálisán történő addíciójával vagy deléciójával, módosítjuk, illetve a módosított peptidre adott Tsejt-reaktivitás meghatározására teszteljük. Ha két vagy több, a natív protein szekvenciájának átfedő területén osztozó peptid mutatkozik humán T-sejt-stimuláló aktivitásúnak (amint azt T-sejtes biológiai technikákkal kimutattuk), további olyan peptidek állíthatók elő, amelyek az említett peptid egészét vagy részletét tartalmazzák, s ezen további peptidek a fentiekkel azonos módon tesztelhetők. Ezen eljárás szerint a peptideket rekombináns módon vagy szintetikusan szelektáljuk és állítjuk elő. A peptideket különböző faktorok alapján szelektáljuk; ezek közé tartozik a peptidre adott T-sejt-reakció erőssége (például stimulációs index), a háziporatkára érzékeny páciensek egy csoportjában a peptidre adott T-sejt-reakció gyakorisága és a peptid más Dermatophagoides allergénekre vonatkozó potenciális keresztreaktivitása. A kiválasztott peptidek fizikai és kémiai tulajdonságait (például oldhatóság, stabilitás) annak meghatározása érdekében vizsgáljuk, hogy a peptidek alkalmasak-e gyógyászati készítményekben történő felhasználásra, illetve hogy szükség van-e a peptidek - találmányban leírt - módosítására. A kiválasztott peptidek vagy a kiválasztott módosított peptidek humán T-sejt-stimuláló képességét (például proliferáció, limfokin szekréció indukálása) meghatározzuk.

Az eddigieken felül a találmány szerinti előnyben részesített peptidek nem kötik az immunglobulin E-t (IgE) vagy annál a proteinallergénnél, melyből származnak, lényegesen kisebb mértékben kötik. A hagyományos immunterápiák fő komplikációit az IgE-közvetett reakciók jelentik, mint az anafilaxis. Az immunglobulin E az anaíílaxiás reakciók egyik mediátora, mely reakciókat az antigénnek az IgE-hez - hízósejteken vagy bazofil sejteken - történő kötődése és keresztkötése, illetve a mediátorok (például hisztamin, szerotonin, eozinofil kemotatikus faktorok) kiszabadulása eredményezi. Ezáltal az immunterápiában olyan peptid vagy peptidek alkalmazásával, melyek a háziporatkára érzékeny egyének populációjának jelentős százalékában (például legalább 75%) nem kötik az IgE-t - vagy ha a peptid mégis köti az IgE-t, az ilyen kötődés nem eredményezi a mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását -, a háziporatkára érzékeny személyek populációjának jelentős hányadában elkerül6

HU 220 462 Β1 hető az anafilaxia. Az anafilaxia rizikója az immunterápiában csökkent mértékű IgE-kötést mutató peptid vagy peptidek alkalmazásával mérsékelhető. Ezenfelül a gyógyászati hatékonyság szempontjából a minimális IgE-stimuláló aktivitással rendelkező peptidek kívánatosak. A minimális IgE-stimuláló aktivitás azt jelenti, hogy az IgE-termelés mértéke kisebb, mint a natív proteinallergén (például Dér p I) által stimulált IgEtermelés és/vagy IL-4-termelés mértéke.

A találmány szerinti peptid háziporatkára allergiás személynek adva képes a páciens allergén elleni allergiás reakciójának módosítására. Részletesebben, a találmány szerinti, legalább egy atkaallergén T-sejt-epitópot vagy legalább két, atkaallergénből származó régiót mely régiók mindegyike rendelkezik legalább egy Tsejt-epitóppal - tartalmazó peptidek háziporatkára érzékeny személynek adva képesek a páciens allergén elleni T-sejt-reakciójának módosítására. A találmány szóhasználatában az „egyén háziporatka-allergén elleni allergiás reakciójának módosítása” kifejezés azt jelenti, hogy atkaallergén hatására érzéketlenség vagy a tünetek csökkenése következik be (amint az standard klinikai módszerekkel meghatározható, lásd például Vamey és munkatársai, British Medical Journal, 302, 265-269, 1990), beleértve az atkaallergén által indukált asztmás tünetek csökkenését. A tünetek csökkenése kifejezés magában foglal minden, a találmány szerinti peptiddel vagy proteinnel végzett kezeléssorozat befejezése után az egyén allergén elleni allergiás reakciójában mutatkozó mérséklődést. Ez a csökkenés lehet szubjektív, vagyis a páciens az allergén jelenlétében - a kezelés után jobban érzi magát. A tünetek csökkenése a tudományban ismert standard bőrtesztek alkalmazásával klinikailag is meghatározható.

A találmányban leírt munkánk eredményeként atkaallergénből származó, legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó peptideket állítottunk elő. Úgy tartjuk, hogy a T-sejt-epitópok részt vesznek az atkaallergén(ek) elleni immunreakciók iniciálásában és fenntartásában, amely reakciók felelősek az atkaallergia klinikai tüneteiért. Ezen T-sejt-epitópoktól azt gondoljuk, hogy - egy antigénprezentáló sejt felületén megfelelő HLA molekulához kötődve és a megfelelő T-sejt szubpopulációt stimulálva - a T-helper-sejtek szintjén váltanak ki korai eseményeket. Ezen események T-sejt-proliferációhoz, limfokin szekrécióhoz, helyi gyulladásos reakciókhoz vezetnek, s további immunsejtek helyszínre érkezését és a B-sejt-kaszkád aktiválását eredményezik, ami antitestek termléséhez vezet. Ezen antitestek egyik izotípusa, az IgE az allergiás tünetek kialakulásában alapvető szerepet játszik, s termelődését a T-helper-sejtek szintjén a korai események idején a szekretált limfokinek természete befolyásolja. A T-sejt-epitóp a T-sejt-receptorok felismerésének alapvető eleme, illetve legkisebb egysége, amely a receptor felismeréséhez esszenciális aminosavgyököket tartalmazza; ezek a protein aminosavszekvenciájában összefüggően és vagy nem összefüggően helyezkedhetnek el. Azok az aminosavszekvenciák tartoznak a találmány területébe, amelyek a T-sejt-epitópok aminosavszekvenciáit utánozzák, s amelyek módosítják a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjei elleni allergiás reakciókat.

A találmány szerinti peptideket atkaallergiás pácienseknek adva a megfelelő T-sejt szubpopulációk toleránssá vagy anergiássá tehetők, miáltal érzéketlenné válnak az atkaallergén(ek)re, s e peptidek bejuttatásának hatására nem vesznek részt az immunreakció kialakításában. Ráadásul a találmány szerinti peptid alkalmazásával - a természetesen előforduló proteinallergén vagy annak részlete hatására kialakuló limfokinszekréciós profilhoz képest - módosíthatjuk a limfokinszekréciót (például a peptid alkalmazása az IL-4 csökkenését és/vagy az IL-2 növekedését eredményezi). Ezenfelül a találmány szerinti peptid alkalmazása oly módon befolyásolhatja a normális esetben az atkaallergén(ek) elleni reakcióban részt vevő T-sejt szubpopulációkat, hogy a T-sejtek az allergén eredeti bejutási helyétől (például ormyálkahártya, bőr, tüdő) a peptid - gyógykezelés során történő - bejuttatást helye felé húzódnak el. A Tsejt szubpopulációk ilyenfajta átrendezése enyhítheti vagy csökkentheti egy páciens immunrendszerének azon képességét, hogy az atkaallergén normális bejutási helyén immunreakciót alakítson ki, s ezáltal az allergiás tünetek csökkenését eredményezi.

A találmány szerinti izolált peptidek a Dermatophagoides nemzetség egy proteinallergénjének legalább egy T-sejt-epitópját tartalmazzák, s ilyenformán a proteinallergén - hozzávetőleg - legalább hét aminosavgyökét tartalmazzák. A gyógyászati hatékonyság céljából a találmány szerinti gyógyászati készítmények előnyösen legalább két atkaallergén T-sejt-epitópot tartalmaznak. Ennek megfelelően a találmány szerinti izolált peptidek előnyösen legalább két T-sejt-epitópot tartalmaznak, s ilyenformán - hozzávetőleg - legalább nyolc, előnyösebben 15 aminosavgyököt tartalmaznak. Ezenfelül a találmány szerinti gyógyászati készítmények lehetőleg a teljes proteinallergén T-sejt-epitópjainak elégséges hányadát tartalmazzák ahhoz, hogy a háziporatkára érzékeny személy gyógyászati készítménnyel végzett kezelése proteinallergénre toleráns Tsejteket eredményezzen a páciensben. A találmány szerinti szintetikusan előállított peptidek - hozzávetőleg - maximum 45, legelőnyösebben - hozzávetőleg maximum 30 aminosavgyökből állnak (hosszúságot tekintve), mivel a hosszúság növekedése a peptidszintézisben és a nemkívánatos tulajdonságok (például immunglobulin-kötés vagy enzimatikus aktivitás) visszaszorításában egyaránt nehézségeket okoz, köszönhetően a peptid és a proteinallergén (amelyből a peptid származik) közötti konformációs hasonlóság megmaradásának. A 3. és 4. ábrán bemutatott valamennyi peptid humán T-sejt-stimuláló aktivitásúnak mutatkozott.

Az előnyben részesített peptidek a Dér p I, Dér p II, Dér /1 és Dér fii fő T-sejt-reakti vitás területeinek egészét vagy részletét tartalmazzák; ezek az 1. régió, a 2. régió, a 3. régió, a 4. régió, az 5. régió, a 6/a régió, a 6/b régió, a 7. régió, a 8. régió, a 9. régió és a 10. régió. Ezeket a következők szerint határozzuk meg: az 1. régió a Dér p I és a Dér fi proteinallergén 1-28. aminosavgyökét tartalmazza, a 2. régió a Dér p I és a Dér fi pro7

HU 220 462 Β1 teinallergén 36-68. aminosavgyökét, a 3. régió a Dérp

I és a Dér fi proteinallergén 74-109. aminosavgyökét, a 4. régió a Dér p I és a Dér f I proteinallergén 118-139. aminosavgyökét, az 5. régió a Dér p I és a Dér fi proteinallergén 141-166. aminosavgyökét, a 6/a régió a Dér p I és a Dér f I proteinallergén 161-185. aminosavgyökét, a 6/b régió a Dér pl és a Dér fi proteinallergén 173-201. aminosavgyökét, a 7. régió a Dér p II és a Dér /II proteinallergén 1-26. aminosavgyökét, a 8. régió a Dérp II és a Dér/II proteinallergén 33-67. aminosavgyökét, a 9. régió a Dérp

II és a Dér /II proteinallergén 79-104. aminosavgyökét, a 10. régió pedig a Dér p II és a Dér f II proteinallergén 107-129. aminosavgyökét tartalmazza.

A Dér p I proteinből származó előnyben részesített peptidek a következő peptidek egészét vagy részletét tartalmazzák: DP 1-1 (9. számú szekvencia); DP 1-2 (10. számú szekvencia); DP 1-3 (11. számú szekvencia); DP 1-4 (12. számú szekvencia); DP I—11.1 (13. számú szekvencia); DP 1-12.1 (14. számú szekvencia); DP 1-5 (15. számú szekvencia); DP 1-13 (17. számú szekvencia); DP 1-14 (18. számú szekvencia); DP 1-15 (19. számú szekvencia); DP 1-6.1 (20. számú szekvencia); DP 1-7.1 (21. számú szekvencia); DP 1-8 (22. számú szekvencia); DP 1-9 (23. számú szekvencia); DP 1-16 (24. számú szekvencia); DP I—10 (25. számú szekvencia); DP 1-17 (26. számú szekvencia); DP 1-21.1 (27. számú szekvencia); DP 1-21.2 (28. számú szekvencia); DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); DP 1-22.2 (30. számú szekvencia); DP 1-22.3 (31. számú szekvencia); DP 1-22.4 (32. számú szekvencia); DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); DP 1-23.2 (34. számú szekvencia); DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); DP 1-26.1 (37. számú szekvencia); DP 1-27.1 (38. számú szekvencia); DP 1-28.1 (39. számú szekvencia); DP 1-28.2 (40. számú szekvencia). A peptid részlete azon peptid átlagos T-sejt-stimulációs indexével lényegében megegyező vagy annál nagyobb stimulációs indexszel rendelkezik, amelyből a szóban forgó részlet származik, amint az az 5. és 13. ábrán látható. Előnyösebben, a Dér p I proteinből származó peptidek a DP 1-21.2, DP 1-22.2, DP 1-23.1, DP 1-25.2, DP 1-26.1, DP 1-27.1 és DP 1-28.1 peptidek egészét vagy részletét tartalmazzák;, illetve legelőnyösebben a DP 1-21.2, DP 1-23.1 és DP 1-26.1 peptidek egészét vagy részletét tartalmazzák, peptid részlete azon peptid átlagos T-sejt-stimulációs indexével lényegében megegyező vagy annál nagyobb stimulációs indexszel rendelkezik, amelyből a szóban forgó részlet származik, amint az az 5. és 13. ábrán látható.

A Dér fi, Dér p II és Dér/II proteinekből származó előnyben részesített peptidek közé tartoznak a DF 1-1 (72. számú szekvencia); DF 1-2.1 (73. számú szekvencia); DF 1-3 (74. számú szekvencia); DF 1-4 (75. számú szekvencia); DF I—11 (76. számú szekvencia); DF 1-12 (77. számú szekvencia); DF 1-5 (78. számú szekvencia); DF 1-13 (79. számú szekvencia); DF 1-14 (80. számú szekvencia); DF 1-15 (81. számú szekvencia); DF 1-6 (82. számú szekvencia); DF

1-7 (83. számú szekvencia); DF 1-8.1 (84. számú szekvencia); DF 1-8 (85. számú szekvencia); DF 1-9 (86. számú szekvencia); DF 1-16 (87. számú szekvencia); DF I—10 (88. számú szekvencia); DF 1-17 (89. számú szekvencia); DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); DF 1-22.1. (92. számú szekvencia); DF 1-22.2 (93. számú szekvencia); DF 1-22.4 (94. számú szekvencia); DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); DF 1-23.2 (96. számú szekvencia); DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); DF 1-25.2 (98. számú szekvencia); DF 1-26.1 (99. számú szekvencia); DF

I- 27.1 (100. számú szekvencia); DF 1-28.1 (101. számú szekvencia); DF 1-28.2 (102. számú szekvencia); DP 11-20 (50. számú szekvencia); DP II—20.1 (51. számú szekvencia); DP II—20.2 (52. számú szekvencia); DP II-20.3 (53. számú szekvencia); DP II—20.4 (54. számú szekvencia); DP II—20.5 (55. számú szekvencia); DP II—20.6 (56. számú szekvencia); DP II-1 (41. számú szekvencia); DP II-2 (42. számú szekvencia); DP II—3.1 (43. számú szekvencia); DP II—4 (44. számú szekvencia); DP II-5 (45. számú szekvencia); DP

II— 6 (46. számú szekvencia); DP II—7 (47. számú szekvencia); DP II—8 (48. számú szekvencia); DP II—9 (49. számú szekvencia); DP II—1.1 (57. számú szekvencia); DP II-1.2 (58. számú szekvencia); DP II—2.1 (59. számú szekvencia); DP II—2.2 (60. számú szekvencia); DP II-2.3 (61. számú szekvencia); DP 11-21 (-62. számú szekvencia); DP 11-22 (63. számú szekvencia); DP 11-26 (64. számú szekvencia); DP II—26.1 (65. számú szekvencia); DP 11-23 (66. számú szekvencia); DP 11-23.1 (67. számú szekvencia); DP 11-24 (68. számú szekvencia); DP 11-25 (69. számú szekvencia); DP II—25.1 (70. számú szekvencia); DP II—25.2 (71. számú szekvencia); DF II-1 (103. számú szekvencia); DF II—2 (104. számú szekvencia); DF 11-13.1 (105. számú szekvencia); DF II—3.1 (106. számú szekvencia); DF II—4.5 (107. számú szekvencia); DF II-4.3 (108. számú szekvencia); DF 11-15 (109. számú szekvencia); DF 11-16 (110. számú szekvencia); DF 11-17 (111. számú szekvencia); DF 11-18 (112. számú szekvencia); DF 11-19 (113. számú szekvencia); DF II—19.1 (114. számú szekvencia); DF 11-21 (115. számú szekvencia); DF 11-22 (116. számú szekvencia) peptidek vagy ezen peptidek legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó részletei. A Dér f I, Dér p II és Dér f II proteinekből származó peptid részlete előnyösen azon peptid átlagos T-sejt-stimulációs indexével lényegében megegyező vagy annál nagyobb stimulációs indexszel rendelkezik, amelyből a szóban forgó részlet származik, amint az a 10., 15/a., 15/b. és 16. ábrán látható. Még előnyösebben a Dér p II és Dér fi proteinekből származó peptidek a DF 1-22.2, DP II-20.6, DP 11-22, DP 11-24 és DP 11-25.2 peptid egészét vagy részletét tartalmazza.

A találmány egyik tárgyaként a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjének egy peptidjét írja le. A peptid - vagy részlete - a proteinallergén legalább egy T-sejt-epitópját tartalmazza, s az X_n-Y-Z_m képlettel írható le. A képletben az Y a következő csoportból való aminosavszekvenciátjelöl: DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); DF

HU 220 462 Β1

1-22.1 (92. számú szekvencia); DF 1-22.2 (93. számú szekvencia); DF 1-22.4 (94. számú szekvencia); DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); DF 1-23.2 (96. számú szekvencia); DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); DF 1-25.2 (98. számú szekvencia); DF 1-26.1 (99. számú szekvencia); DF 1-27.1 (100. számú szekvencia); DF

I- 28.1 (101. számú szekvencia); DF 1-28.2 (102. számú szekvencia); DF 1-1 (72. számú szekvencia); DP

II- 20 (50. számú szekvencia); DP 11-20.1 (51. számú szekvencia); DP II—20.2 (52. számú szekvencia); DP II—20.3 (53. számú szekvencia); DP II-20.4 (54. számú szekvencia); DP II—20.5 (55. számú szekvencia); DP II-20.6 (56. számú szekvencia); DP II—1 (41. számú szekvencia); DP II-2 (42. számú szekvencia); DP II—3.1 (43. számú szekvencia); DP II—4 (44. számú szekvencia); DP II-5 (45. számú szekvencia); DP II—6 (46. számú szekvencia); DP II—7 (47. számú szekvencia); DP II—8 (48. számú szekvencia); DP II—9 (49. számú szekvencia); DP II—1.1 (57. számú szekvencia); DP II-1.2 (58. számú szekvencia); DP II—2.1 (59. számú szekvencia); DP lí—2.2 (60. számú szekvencia); DP II—2.3 (61. számú szekvencia); DP 11-21 (-62. számú szekvencia); DP 11-22 (63. számú szekvencia); DP 11-26 (64. számú szekvencia); DP 11-26.1 (65. számú szekvencia); DP II-23 (66. számú szekvencia); DP 11-23.1 (67. számú szekvencia); DP 11-24 (68. számú szekvencia); DP 11-25 (69. számú szekvencia); DP 11-25.1 (70. számú szekvencia); DP II-25.2 (71. számú szekvencia); DF II-1 (103. számú szekvencia); DF II-2 (104. számú szekvencia); DF II-13.1 (105. számú szekvencia); DF II—3.1 (106. számú szekvencia); DF II—4.5 (107. számú szekvencia); DF II—4.3 (108. számú szekvencia); DF 11—15 (109. számú szekvencia); DF 11-16 (110. számú szekvencia); DF 11-17 (111. számú szekvencia); DF 11—18. (112. számú szekvencia); DF 11-19 (113. számú szekvencia); DF II-19.1 (114. számú szekvencia); DF 11-21 (115. számú szekvencia); DF 11-22 (116. számú szekvencia). Az X_n a proteinallergén aminosavszekvenciájában az Y Nterminálisával összefüggő aminosavgyököket jelent, míg a Z_m a proteinallergén aminosavszekvenciájában az Y C-terminálisával összefüggő aminosavakat jelent. A képletben n és m értéke egyaránt 0-30 lehet.

A találmány egy másik tárgyaként legalább két régiót tartalmazó peptideket bocsátunk közre, mely régiók mindegyike legalább egy, a Dermatophagoides nemzetség egy proteinallergénjéből származó T-sejtepitópot tartalmaz, s ilyenformán valamennyi régió hozzávetőleg - legalább hét aminosavgyökből áll. E legalább két régiót tartalmazó peptidek kívánt számú aminosavgyökből állhatnak, ezen belül is legalább körülbelül 14, előnyösebben körülbelül 30, legelőnyösebben minimum körülbelül 40 aminosavgyököt tartalmaznak. Az ilyen peptidek minden régiója lehetőleg maximum 45, előnyösen maximum 40, legelőnyösebben maximum 30 aminosavgyököt tartalmaz (hosszúságot tekintve), mivel a hosszúság növekedése a peptidszintézisben és a nemkívánatos tulajdonságok (például immunglobulin-kötés vagy enzimatikus aktivitás) visszaszorításában egyaránt nehézségeket okoz, köszönhetően a peptid és a proteinallergén (amelyből a peptid származik) közötti információs hasonlóság megmaradásának. Ha szükséges, az antigénprezentáló sejtek által feldolgozott antigénekre mutatott érzékenység növelése érdekében a régiók aminosavszekvenciái linkerek felhasználásával állíthatók elő és kapcsolhatók össze. Ilyen linker lehet bármilyen nem epitóp aminosavszekvencia vagy más alkalmas kapcsolóágens.

Annak érdekében, hogy a legalább két régiót - melyek mindegyike rendelkezik legalább egy T-sejt-epitóppal - tartalmazó, előnyben részesített peptideket nyerjük, a régiókat más konfigurációban rendezzük el, mint amilyenben azok az allergénben vagy a különböző atka-proteinallergének kombinációjában természetes körülmények között elhelyezkednek. Például T-sejt-epitópo(ka)t tartalmazó régiók elrendezhetők nem összefüggő konfigurációban, és előnyösen egyazon proteinallergénből vagy proteinallergének kombinációjából származtathatók. A „nem összefüggő” kifejezésen azt értjük, hogy a T-sejt-epitópo(ka)t tartalmazó régiók elrendeződése különbözik a proteinallergénben (amelyből a régiók származnak) tapasztalható aminosavszekvenciaelrendeződéstől. Sőt a nem összefüggő, T-sejt-epitópokat tartalmazó régiók nem szekvenciális sorrendben is elrendezhetők például a natív proteinallergén - melyből a T-sejt-epitópo(ka)t tartalmazó régiók származnak, s amelyben az aminosavak az N-terminálistól a Cterminálisig rendeződnek - aminosavsorrendjétől eltérő sorrendben. Egy peptid az atkaallergén T-sejt-epitópjainak legalább 15%-át, lehetőleg legalább 30%-át, még előnyösebben legalább 50%-át, legelőnyösebben maximum 100%-át tartalmazhatja.

Az egyes peptidek előállíthatok és tesztelhetők annak megállapítása érdekében, hogy mely régiók kötik az atkaallergénre specifikus immunglobulin E-t, illetve hogy e régiók közül melyik okozhatja a mediátorok (például hisztamin) hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását. Azokat a peptidrégiókat, amelyekről azt találtuk, hogy kötik az immunglobulin E-t és a mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását a tesztelt allergiás szérumban hozzávetőleg 10-15 százalékánál nagyobb arányban okozzák, lehetőleg nem alkalmazzuk a találmány szerinti peptidek előállításához.

A találmány szerinti előnyben részesített peptidek két vagy több - azonos vagy különböző atkaallergénből származó - régiót tartalmaznak (például Dér p I, Derp II, Dér f\ és Dér/II). Például egy régió származhat a Dér p I-ből, egy másik a Dér p II-ből; egy régió származhat a Dér p I-ből, egy másik a Dér/I-ből; egy régió származhat a Dér p 77-ből, egy másik a Dér f 7-ből egy régió származhat a Dérp II-ből, egy másik a Dér f II-ből; egy régió származhat a Dér p I-ből, egy másik a Dér/II-ből; egy régió származhat a Dér/I-ből, egy másik a Dér/II-ből. Ezeken kívül a régiók származhatnak egyazon proteinallergénből is, például egy régió a Dér p I-ből, egy másik szintén a Dér p I-ből.

A találmány szerinti peptid régiói lehetőleg az egyes atkaallergéneken belüli, fentebb leírt, előnyben részesített fő T-sejt-reaktivitási területek mindegyikét

HU 220 462 Bl

- vagy azok egy részét - tartalmazzák (például a Dér p I és a Dér fi 1—6/a—6/b régióit és Dér p II és a Dér/II 7-10 régióit). Például egy régió tartalmazhatja az 1. régió (a Dér ρ I vagy a Dér fi protein 1-28. aminosavgyökei) egészét vagy részletét, és egy régió tartalmazhatja a 2. régió (a Dér ρ I vagy a Dér f I protein 36-68. aminosavgyökei) egészét vagy részletét. A találmány szerinti peptidek ezen régiók (azaz az 1-10. régiók) közül kettőnek vagy többnek is tartalmazhatják az egészét vagy részletét, és az így kapott előnyben részesített peptidek nem kötik az IgE-t és nem okozzák a mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását. A Dér pl és a Dér fi proteinekből származó előnyben részesített peptidek az 1., 2. és 3. és tetszés szerint a 4. régió egészét vagy részletét tartalmazzák. A Dér ρ II és a Dér/II proteinekből származó, előnyben részesített peptidek a 7., 8. és 10. régió egészét vagy részletét tartalmazzák. Ha ezen régiók valamelyikéről kiderül, hogy köti az IgE-t, és hogy a mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását okozza, úgy előnyös, ha a peptid nem tartalmazza az ilyen régiókat, hanem olyan régiókat tartalmaz, amelyek nem kötik az IgE-t és nem okozzák a mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását.

Az előnyben részesített régiók közé tartoznak a következő aminosavszekvenciák (vagy azok részletei): DP 1-21.1 (27. számú szekvencia); DP1—21.2 (28. számú szekvencia); DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); DP 1-22.2 (30. számú szekvencia); DP 1-22.3 (31. számú szekvencia); DP 1-22.4 (32. számú szekvencia); DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); DP 1-23.2 (34. számú szekvencia); DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); DP 1-26.1 (37. számú szekvencia); DP 1-27.1 (38. számú szekvencia); DP 1-28.1 (39. számú szekvencia); DP 1-28.2 (40. számú szekvencia); DP 1-1 (9. számú szekvencia); DF 1-1 (72. számú szekvencia); DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); DF 1-22.2 (93. számú szekvencia); DF 1-22.4 (94. számú szekvencia); DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); DF 1-23.2 (96. számú szekvencia); DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); DF 1-25.2 (98. számú szekvencia); DF 1-26.1 (99. számú szekvencia); DF 1-27.1 (100. számú szekvencia); DF

I- 28.1 (101. számú szekvencia); DF 1-28.2 (102. számú szekvencia); DP 11-20 (50. számú szekvencia); DP

II— 20.1 (51. számú szekvencia); DP II—20.2 (52. számú szekvencia); DP II-20.3 (53. számú szekvencia); DP II—20.4 (54. számú szekvencia); DP II—20.5 (55. számú szekvencia); DP II—20.6 (56. számú szekvencia); DP II—1 (41. számú szekvencia); DP II—1.1 (57. számú szekvencia); DP II—1.2 (58. számú szekvencia); DP II—2.1 (59. számú szekvencia); DP II—2.2 (60. számú szekvencia); DP II-2.3 (61. számú szekvencia); DP 11-21 (62. számú szekvencia); DP 11-22 (63. számú szekvencia); DP 11-26 (64. számú szekvencia); DP II-26.1 (65. számú szekvencia); DP 11—23 (66. számú szekvencia); DP II—23.1 (67. számú szekvencia); DP 11—24 (68. számú szekvencia); DP 11-25 (69. számú szekvencia); DP II—25.1 (70. számú szekvencia); DP ΙΙ-25.2 (71. számú szekvencia); DF II—1 (103. számú szekvencia); DF II—2 (104. számú szekvencia); DF II-13.1 (105. számú szekvencia); DF II—3.1 (106. számú szekvencia); DF II—4.5 (107. számú szekvencia); DF II—4.3 (108. számú szekvencia); DF 11-15 (109. számú szekvencia); DF 11-16 (110. számú szekvencia); DF 11-17 (111. számú szekvencia); DF 11-18 (112. számú szekvencia); DF 11-19. (113. számú szekvencia); DF II-19.1 (114. számú szekvencia); DF 11-21 (115. számú szekvencia); DF 11-22 (116. számú szekvencia), amely régiók aminosavszekvenciái a 3. és

4. ábrán láthatók, illetve a felsorolt régiók legalább egy T-sejt-epitopot tartalmazó részletei.

Az előnyben részesített peptidek két vagy több régió különböző kombinációit tartalmazzák, mely régiók mindegyike rendelkezik a korábban leírt, előnyben részesített fő T-sejt-reaktivitási területek egészével vagy részletével. Az előnyben részesített peptidek két vagy több régió kombinációját tartalmazzák (mely régiók mindegyike a 3. és 4. ábrán bemutatott aminosavszekvenciával rendelkezik); ezek közé tartoznak a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-28.1 (39. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia) és a DP 1-26.1 (37. számú szekvencia); a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); a DF 1-1 (72. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-1 (72. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia) és a DF 1-1 (72. számú szekvencia); t)

HU 220 462 Bl a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF

I- 21.1 (90. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia) és a DP 11-25.2 (71. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29, számú szekvencia); a DP

II- 22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia) és a DP II—20.6 (56. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP II-20.6 (56. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP

I- 25.2 (36. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP

II— 25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II-25.2 (71, számú szekvencia), a DP 1-1 (9. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF II-2 (104. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF 11-19.1 (114. számú szekvencia); a DF II-4.5 (107. számú szekvencia), a DF II—2 (104. számú szekvencia) és a DF II-19.1 (114. számú szekvencia); a DF 11—4,5 (107. számú szekvencia), a DF II—2 (104. számú szekvencia) és a DF II—9 (86. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DP 11-22 (63. számú szekvencia) és a DP II—25.2 (71. számú szekvencia); és a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF II—2 (104. számú szekvencia) és a DP 11-22 (63. számú szekvencia).

A két vagy több régió kombinációját tartalmazó további előnyben részesített peptidek a következő kombinációkat tartalmazzák: DP 1-21.2, DP 1-23.1, DP

I- 26.1, DP II—20.6, DP 11-22, DP II-25.2 és DF

II- 22.2; DP 1-21.2, DF II-22.2; DP 1-21.2, DF 1-22.2, DP 1-23.1, DP 1-25.2, DP 1-26.1, DP 1-27.1, DP II—20.6, DP 11-22, DP 11-24 és DP II-25.2; DP

I- 23.1, DP 1-21.2, DP 1-22, DF 1-22.2, DP

II- 20.6 és DP II—25.2; DP 1-23.1, DP 1-21.2, DF 1-22.2, DP II—20.6 és DP II-25.2; DP 1-23.1, DF

I- 22 és DP II—20.6; DP 1-26.1, DF 1-22.2 és DP

II— 25.2; DP 1-21.2, DF 1-22.2 és DP 11-22; valamint DP 1-21.2 és DP 11-22.

A leginkább előnyben részesített peptidek két vagy több - Dér ρ I, Dér ρ II és Dér f I proteinallergénből származó - régió kombinációját tartalmazzák (mely régiók mindegyike a 3. és 4. ábrán bemutatott aminosavszekvenciával rendelkezik); az említett, előnyben részesített peptidek az alábbi specifikus aminosavszekvencia-elrendeződéssel rendelkeznek (lásd 25-27. ábra): DPI-26.1, DPII-25.2, DFI-22, DPII-20.6, illetve DPI-21.2; DPII-25.2, DFI-22.2, DPI-23.1, DPII-22, DPI-21.2, illetve DPII-20.6; és DPII-25.2, DPI-21.2, DPI-23.1, DPI-26.1, DPII-22., DPII-20.6, illetve DFI-22.2. Ezen peptidek nukleinsav- és aminosavszekvenciáját a 25., 26., illetve 27. ábrán mutatjuk be.

A találmány területébe tartozó, a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjeiből származó peptidek felhasználhatók atkaallergének elleni allergiás reakciók kezelésére és megelőzésére. Ilyenformán a találmány egyik vonatkozásában olyan gyógyászati készítményeket bocsátunk közre, amelyek legalább egy, előnyösebben legalább két T-sejt-epitópot tartalmazó - Dér ρ I, Dér ρ II, Dér fi vagy Dér fii proteinből származó peptideket, valamint gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaznak. Más vonatkozásban a gyógyászati készítmény gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst, valamint olyan peptidet tartalmaz, amely legalább két régióval rendelkezik, melyek mindegyike legalább egy atkaallergén T-sejt-epitópot tartalmaz, s azonos vagy különböző atka-proteinallergénből származik.

Az előnyben részesített gyógyászati készítmények a Dermatophagoides nemzetség legalább egy proteinallergénjéből származó legalább egy peptidet tartalmaznak. A készítmény a legalább egy proteinallergénből származó T-sejt-epitópok elégséges százalékát tartalmazza ahhoz, hogy a készítménnyel háziporatka-allergénre érzékeny pácienst kezelve a páciens T-sejtjeit toleránssá tegye a proteinallergénre. Előnyösen, a készítmény oly módon tartalmazza az egy vagy több proteinallergénből származó T-sejt-epitópok elégséges százalékát, hogy minden egyes protein T-sejt-reaktivitásának legalább körülbelül 40%-a, előnyösebben legalább körülbelül 60%-a a készítményben legyen. Az ilyen készítmények a háziporatkára - vagy a háziporatka-allergénekkel immunológiailag keresztreaktív allergénre - vonatkozó érzékenység kezelése és megelőzése érdekében adhatók a páciensnek.

Egy páciens deszenzibilizálása érdekében a találmány szerinti gyógyászati készítményeket ismert technikákat felhasználva adhatjuk. Például egy atkaallergénből származó, legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó peptid alkalmas diluenssel, hordozóval és/vagy adjuvánssal kombinálva alkalmazható. Egy páciensben T-sejt-anergia indukálása érdekében a gyógyászati készítményt lehetőleg nem immunogén formában alkalmazzuk, például adjuváns nélkül. A gyógyszerészetileg alkalmas diluensek közé tartozik a sóoldat és a vizes pufferoldatok. A gyógyszerészetileg alkalmas hordozók közé tartozik a polietilénglikol (Wie és munkatársai, International Archieves of Allergy and Applied Immunology, 64, 84-99, 1981) és a liposzómák (Strejan és munkatársai, Journal of Neuroimmunology, 7, 17, 1984). A leírt készítményeket általában injekcióban (szubkután, intravénás stb.), orálisan (például kapszula formájában), inhalálással, transzdermálisan vagy végbélen keresztül adjuk be. A találmány szerinti gyó11

HU 220 462 Β1 gyászati készítményeket a páciens háziporatka-allergénre vonatkozó érzékenységének csökkentéséhez (például az allergiás reakció csökkentéséhez) hatásos adagolásban és ideig alkalmazzuk. Egy vagy több, azonos vagy különböző gyógyászati készítmény gyógyászatilag hatásos mennyiségét a háziporatkára érzékeny páciensnek egyidejűleg vagy egymást követően adhatjuk. A gyógyászati készítmény hatásos mennyisége olyan tényezők szerint változik, mint a páciens háziporatkára vonatkozó érzékenységének mértéke, a páciens kora, neme, testtömege, illetve a pepiidnek a páciensben Tsejt-reakciót stimuláló képessége.

A találmány egy további tárgyaként olyan készítményt bocsátunk közre, amely legalább két - egyenként legalább egy Dermatophagoides proteinallergén T-sejt-epitópot tartalmazó - pepiidet tartalmaz (például legalább két peptid fizikai keverékét). A peptidek azonos vagy különböző atkaallergénekből származnak. Az ilyen készítmények gyógyszerészetileg alkalmas hordozóval vagy diluenssel gyógyászati készítményekként alkalmazhatók. Egy vagy több ilyen gyógyászati készítmény gyógyászatilag hatásos mennyiségét a háziporatkára érzékeny páciensnek egyidejűleg vagy egymást követően adhatjuk.

Az egyidejűleg vagy egymást követően alkalmazható előnyben részesített készítmények és előnyben részesített peptidkombinációk (melyek a 3. és 4. ábrán bemutatott aminosavszekvenciákkal rendelkező peptideket tartalmaznak) közé tartoznak a következő kombinációk: DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-28.1 (39. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia) és a DP 1-26.1 (37. számú szekvencia); a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); a DF 1-1 (72. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-1 (72. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29.

számú szekvencia) és a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia) és a DF 1-1 (72. számú szekvencia); t) a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP

I- 25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); a DP

II- 22 (63. számú szekvencia) és a DP 11-25.2 (71. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia) és a DP II—20.6 (56. számú szekvencia); a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP

I- 23.1 (33. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP ΙΙ-25.2 (71. számú szekvencia), a DP II—20.6 (56. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1—22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP

II- 22 (63. számú szekvencia), a DP ΙΙ-25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP

I- 21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP

II- 25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-1 (9. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF II—2 (104. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF II-19.1 (114. számú szekvencia); a DF ΙΙ-4.5 (107. számú szekvencia), a DF II—2 (104. számú szekvencia) és a DF II-19.1 (114. számú szekvencia); a DF II-4.5 (107. számú szekvencia), a DF II—2 (104. számú szekvencia) és a DF II—9 (86. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DP 11-22 (63. számú szekvencia) és a DP 11-25.2 (71. számú szekvencia); és a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF ΙΙ-2 (104. számú szekvencia) és a DP 11-22 (63. számú szekvencia), valamint a DP 1-26.1, DP II-25.2, DF 1-22, DP II-20.6 és DP 1-21.2.

A találmány továbbá eljárásokat nyújt emberek háziporatka-allergénekre vonatkozó érzékenységének kimutatására, melyek során a pácienstől vett vérmintát a találmány szerinti egyik pepiiddel kevetjük össze (a vérkomponensek peptidhez történő kötődéséhez alkalmas feltételek mellett), és meghatározzuk azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik. Ezt a mennyiséget T-sejt-működés, T-sejt-proliferáció vagy ezek kombinációjának elemzésével határoztuk meg.

HU 220 462 Bl

Az oldékonyság, a terápiás vagy megelőzési hatékonyság, illetve a stabilitás (például az ex vivő tárolási idő és az in vivő proteolitikus lebomlás elleni rezisztencia) növelése érdekében lehetőség van a találmány szerinti peptid szerkezetének módosítására. Olyan módosított peptid állítható elő, amely - az immunogenitás módosítása és/vagy az allergenitás csökkentése érdekében - aminosavszubsztitúcióval, delécióval vagy addícióval megváltoztatott aminosavszekvenciával rendelkezik, vagy amelyhez - hasonló célok érdekében - valamilyen komponenst adtunk.

Például egy peptid módosítható úgy, hogy megtartsa a T-sejt-anergiát indukáló és MHC-proteineket kötő képességét, anélkül, hogy immunogénként alkalmazva erős proliferatív reakciót vagy - lehetőség szerint bármilyen proliferatív reakciót okozna. Ebben az esetben a T-sejt-receptorhoz való kötődést illetően kritikus fontosságú gyökök ismert eljárásokkal azonosíthatók (például valamennyi gyök szubsztitúcióját követően a T-sejt-reaktivitás meghatározásával). A T-sejt-receptorral való kötődést illetően esszenciálisnak mutatkozó gyökök más, lehetőleg hasonló aminosavgyökökkel cserélhetők ki (konzervatív szubsztitúció), amelyek jelenléte növeli, csökkenti, de nem szünteti meg, illetve nem hozza létre a T-sejt-reaktivitást. Ezenfelül a T-sejt-receptorinterakcióban nem esszenciális aminosavgyökök olyan aminosavakra cserélve módosíthatók, amelyek jelenléte növeli, csökkenti vagy nem okoz T-sejt-reaktivitást, de nem szünteti meg a releváns MHC-hez történő kötődést.

A találmány szerinti peptidek továbbá az MHC-proteinkomplexszel való kötődést illetően esszenciálisnak mutatkozó gyökök más, lehetőleg hasonló aminosavgyökökkel történő helyettesítésével (konzervatív szubsztitúció) módosíthatók, amelyek jelenléte növeli, csökkenti, de nem szünteti meg, illetve nem hozza létre a T-sejt-reaktivitást. Ráadásul az MHC-proteinkomplex-interakcióban nem esszenciális, de azért az MHCproteinkomplexet kötő aminosavgyökök olyan aminosavakra cserélve módosíthatók, amelyek jelenléte növeli, csökkenti vagy nem hozza létre, de nem szünteti meg a T-sejt-reakciót. A nem esszenciális aminosavak szubsztitúciói közé tartozik - többek között - az alaninnal, glutaminsawal vagy metil-aminosavval végzett szubsztitúció.

A peptidek módosításának másik példája a ciszteingyökök lehetőleg szerinnel, treoninnal, leucinnal vagy glutaminsawal - a diszulfidhidak útján kialakuló dimerizáció minimumra csökkentése érdekében - történő szubsztitúciója. Például a Dérp II vagy Dér/II proteinből származó peptid (amely ezen allergének valamelyikének első tíz aminosavgyökét tartalmazza) stabilitása a 8. aminosavgyök helyén elhelyezkedő cisztein lehetőleg alaninnal, glutaminsawal vagy más lehetőség szerint szerinnel vagy treoninnal történő szubsztitúciójával növelhető.

A stabilitás és/vagy reaktivitás érdekében a peptidek megváltoztathatók úgy, hogy a természetes allélvariációkból (25-27. ábra) származó egy vagy több polimorfizmust foglalunk a proteinallergén aminosavszekvenciájába. A találmány területébe tartozó módosított peptidek előállítása érdekében továbbá D-aminosavak, nem természetes aminosavak vagy nem aminosavanalógok szubsztituálhatók vagy addícionálhatók. A felsoroltakon kívül a találmány szerinti peptidek A. Sehon és munkatársai polietilénglikolos (PEG) eljárásával (Wie és munkatársai, supra) is módosíthatók, miáltal PEGkonjugált peptidek állíthatók elő. A PEG a találmány szerinti peptid kémiai szintézise során adható. A peptidek vagy részleteik módosítása közé tartozik még a redukálás/alkilezés (Tarr, Methods of Protein Microcharacterization, szerk.: J. E. Silver, Humana Press, Clifton, NJ., pp. 155-194,1986), az acilezés (Tarr, supra), az észteresítés (Tan, supra), az alkalmas hordozóhoz történő kémiai kapcsolás [Mishell és Shiigi (szerk.), Selected Methods in Cellular Immunology, WH Freeman, San Francisco, CA, 1980; 4 939 239 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás] vagy a gyenge formalinos kezelés (Marsh, International Archieves of Allergy and Applied Immunology, 41, 199-215, 1971).

Egy másik vonatkozásban egy allergéncsoportba (például Dér p I vagy Dér p II) tartozó peptidek módosíthatók a T-sejt-reaktivitás érdekében. Mivel az I. és II. csoportba tartozó allergének között a keresztreaktivitás adott, az egyik allergéncsoport peptidje, amely a másik allergéncsoportba tartozó, aminosavpozíciót illetően egyező peptidnél kevésbé reaktív, a megfelelő peptid egy vagy több aminosavával szubsztituálható (például a DF II-1 peptid esetében, e Dér f II peptid reaktivitásának érdekében a Dér fii aminosavszekvenciájának 17. gyöke [metionin] a Dér p II szekvenciájában a 17. helyen lévő aminosavval [leucin] szubsztituálható). A peptidek továbbá úgy is módosíthatók, hogy a természetes allélvariációkból származó egy vagy több polimorfizmust foglalunk a proteinallergén aminosavszekvenciájába. A peptidek ilyen módosítása - melynek eredményeként a fenti polimorfizmusok közül egyet vagy többet tartalmaznak - növelheti a stabilitást és/vagy a reaktivitást.

A találmány szerinti peptidek tisztításának elősegítése és oldékonyságuk potenciális növelése érdekében lehetőség van arra, hogy a peptid vázához reporter csoporto(ka)t adjunk. Például immobilizált fémion-affinitáskromatográfiás tisztítás érdekében egy pepiidhez polihisztidint adhatunk (Hochuli, E. és munkatársai, Bio/Technology, 6, 1321—1325,1988). Ezenfelül, szükség szerint, a reporter csoport és a peptid aminosavszekvenciája közé specifikus endoproteáz hasítási helyek vihetők be, hogy a nem odatartozó szekvenciáktól mentes peptideket izolálhassuk. Annak érdekében, hogy egy pácienst sikeresen deszenzibilizálhassunk egy proteinallergénre, szükség lehet a peptid oldékonyságának növelésére, melyet úgy hajthatunk végre, hogy a pepiidhez funkciós csoportokat kapcsolunk, vagy a hidrofób T-sejt-epitópokat - vagy a hidrofób T-sejt-epitópokat tartalmazó régiókat - kihagyjuk a peptidből.

Hogy elősegítsük a peptid T-sejt-epitópjainak megfelelő antigénfeldolgozását, a legalább egy T-sejt-epitópot tartalmazó régiók közé - rekombináns vagy szinte13

HU 220 462 Β1 tikus módszerrel - kanonikus proteázérzékeny helyek építhetők be. Például töltéssel rendelkező aminosavpárok, mint például a KK vagy RR, a peptid rekombináns módon történő kialakítása alatt beépíthetők a rekombináns peptid régiói közé. A kapott peptid szenzitívvé tehető a katepszin és/vagy más tripszinszerű enzimek hasítására, hogy így, egy vagy több T-sejt-epitópot tartalmazó peptidrészleteket alakíthassunk ki. Ráadásul az ilyen, töltéssel rendelkező aminosavgyökök növelhetik a rekombitóp peptid oldékonyságát is.

A peptid szerkezetének módosításához a találmány szerinti peptidet kódoló DNS helyre irányuló mutagenezisét alkalmazhatjuk. Az ilyen eljárások közé tartozik a PCR technika (Ho és munkatársai, Gene, 77, 51-59, 1989) vagy a mutált gének teljes szintézise (Hostomsky, Z. és munkatársai, Biochem. Biophys. Rés. Comm., 161, 1056-1063, 1989). A bakteriális expresszió növelése érdekében az említett módszerek más eljárásokkal együtt alkalmazhatók, miáltal a találmány szerinti peptideket kódoló DNS-struktúrák eukarióta kodonjai az elsősorban E. coliban használt kodonokra cserélhetők.

A fentiekben leírt egy vagy több módosítóeljárással megváltoztatott peptidek - többek között - a DPI-23.1 és DPII-22 peptid módosításait foglalják magukban (lásd 28. ábra). Részletesebben, a 23.1 peptid módosításai közé tartozik - az oldékonyság növelése érdekében végzett - töltéssel rendelkező aminosavpárok addíciója (23.1.1) és a ciszteingyök szerinnel (23.1.3) vagy glutaminsavval (23.1.4) végzett helyettesítése. A 22-es peptid változásai közé tartozik a - szintén az oldékonyság növelése érdekében végzett - töltéssel rendelkező aminosavpárok addíciója (22.1 és 22.2).

A találmány továbbá nukleinsavszekvenciákat bocsát rendelkezésre, amelyek a találmány szerinti peptideket kódolják. A találmány bármely megvalósításában használt nukleinsavszekvenciák lehetnek a találmányban leírt cDNS-ek, illetve, más lehetőség szerint, lehetnek bármely olyan oligodezoxinukleotidszekvenciák, amelyek valamely itt leírt szekvencia - vagy annak funkcionális megfelelőjének - egészével vagy részletével rendelkeznek. Az ilyen oligodezoxinukleotidszekvenciák ismert technikákkal, kémiai vagy mechanikai úton állíthatók elő. Egy oligonukleotidszekvencia funkcionális megfelelője olyan szekvencia, 1) amely képes egy olyan komplementer oligonukleotiddal hibridizálni, amellyel az 1., 3., 5. és 7. számú szekvencia (vagy megfelelő szekvenciarészletei) vagy fragmensei hibridizálnak; vagy 2) amely szekvencia (vagy megfelelő szekvenciarészlete) komplementer az 1., 3., 5. és 7. számú szekvenciával, és/vagy 3) amely olyan terméket kódol (például polipeptidet vagy peptidet), amely az 1., 3.,

5. és 7. számú szekvencia (vagy megfelelő szekvenciarészlete) által kódolt termékkel azonos funkcionális jellemzőkkel rendelkezik. Hogy a funkcionális ekvivalensnek egy vagy több kritériumnak kell-e megfelelni, az alkalmazásától függ (például ha csak hibridizációs próbaként használjuk, az első két feltételnek kell megfelelnie, míg ha a találmány szerinti peptid előállításához használjuk, csak a harmadik feltételnek kell eleget tennie).

A találmányt a továbbiakban a következő, nem korlátozó jellegű példákkal jellemezzük.

1. példa:

Natív atkaallergén tisztítása

Elsőként a Dermatophagoides pteronyssinus és a Dermatophagoides farinae háziporatkák I. és II. csoportba tartozó allergénjeinek natív formában történő tisztításának folyamatát írjuk le, mely allergéneket primer antigénekként humán T-sejt-epitóptérképezéshez használtuk.

Mind a négy proteinallergént, a Dér fi, Dér p I, Dér f II és Dér p II allergént a Commonwealth Sera Laboratories Melboume-től (Ausztrália), illetve dr. Larry G. Arlientől (Wright State University Dayton, Ohio) kapott, használt atka tenyésztápközegből tisztítottuk (immunaffinitás-tisztítással). 4 °C-on egy éjszakán keresztül történő keveréssel a szárított, használt atkatenyésztápközegből foszfátpufferelt sóoldatban (PBS) 10%-os (tömeg/térfogat) vizes kivonatot készítettünk. Az oldhatatlan anyagokat 4 °C-on egy órán keresztül 10 000 g-vel végzett centrifugálással távolítottuk el. Ezután a felülúszót Whatman 1 papíron keresztül vákuumfilteren szűrtük, majd 4 °C-on egy órán keresztül 15 000 g-vel centrifugáltuk. Az utolsó filtrációt 0,45 m cellulóz-acetát-filteren végeztük.

Az I., illetve II. csoportba tartozó allergének immunaffinitás-tisztításához 4C1 és 6D6 monoklonális antitesteket (University of Virginia, NC) használtunk (Chapman és munkatársai, J. Allergy Clin. Immunoi., 80, 1479-1484,1987; Heymann és munkatársai, J. Allergy Clin. Immunoi., 83, 1055-1067,1989). A 4C1 antitest mind a Dér fi, mind a Dér p I protein epitópjával reagál; hasonlóan, a 6D6 monoklonális antitest mind a Dér fii, mind a Dér p II proteinnel reagál.

Mindkét monoklonális antitest esetében ascitesfolyadékot 50%-os ammónium-szuifátban kezeltünk, és az antitesteket 4 °C-on, egy éjszakán keresztül 100 mM NaHCOj és 500 mM NaCl oldatában (pH=8,3) CNBraktivált Sepharose 4B-hez (Pharmacia) kapcsoltuk.

A monoklonális antitestoszlopokat PBS-ben ekvilibráltuk, és a szűrt extraktumokkal 15 ml/óra sebességgel töltöttük fel. Az oszlopot ezután húszszoros térfogat PBS-sel mostuk, miután 500 mM NaCl-dal kiegészített, húszszoros oszioptérfogat PBS-sel erőteljesebb mosást végeztünk. A proteineket 500 mM NaCl és 100 mM glicin (pH=ll,0) oldattal eluáltuk, és a frakciók proteintartalmát 280 nm-en spektrofotometrikus abszorbanciavizsgálattal értékeltük. A csúcsokat tartalmazó frakciókat összegyűjtöttük és PBS-sel szemben alaposan dializáltuk, negatív nyomású dializálókészülékkel (Amicon, Beverly, MA) koncentráltuk, és az I. és II. csoportba tartozó atkaallergének epitóptérképezési vizsgálatához használtuk. A kinyert proteinek tisztasága 80%-tól (I. csoport) 90%-ig terjedt.

Az immunaffinitással tisztított, II. csoportba tartozó atka-proteinallergéneket a Heymann és munkatársai (J. Allergy Clin. Immunoi., 83, 1055-1067,1989) által leírt körülmények fenntartásával reverz fázisú HPLC-kromatográfiával tisztítottuk tovább. Röviden: az immun14

HU 220 462 Bl affinitás-tisztított proteint 0,1 térfogat% TFA/H₂O oldatban 5 pm 300 Angström C-8 oszlopra (Applied Biosystems Inc.) vittük. Az átfolyási sebesség 0-60% acetonitril/0,1% TFA gradiens mellett 1 ml/perc volt, 60 percen keresztül. AII. csoportba tartozó proteinek körülbelül 45% acetonitril/0,1% TFA gradiensnél eluáltak. A frakciók tisztaságát SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel, majd denzitometrikus elemzéssel vizsgáltuk. A 90%-nál nagyobb tisztaságú II. csoportba tartozó proteint tartalmazó frakciókat használtuk az allergén humán T-sejt térképezéséhez.

2. példa:

Rekombináns atkaallergén expresszálása

Ebben a példában a Dermatophagoides pteronyssinus és a Dermatophagoides farinae háziporatkák I. és II. csoportba tartozó allergénjeinek E. coliban végzett, rekombináns proteinekként történő előállítását írjuk le.

A Dér f I, Dér p I, Dér f II és Dér p II proteinallergént az érett N-terminálisaikon az MGHHHHHHEF vezérszekvenciával kapcsoltuk össze, melyben az EF aminosavakat a GAATTC EcoRI restrikciós hely kódolja. Mivel a H₆ szekvencia az NTA agarózoszlopon (Diagen GmbH) koordinatívan köti a Ni+Monokat, e tulajdonságot felhasználtuk a rekombináns proteinek tisztításában (Hocholi és munkatársai, Biotechnology, 86, 1321-1325,1988). Végül mind a négy allergént a T7 fág gn 10 promoter transzkripciós kontrollja mellett - a pET lld expressziós vektorba szubklónoztuk (Studier és munkatársai, Methods In Enzymology, 185, 60-88,1990).

A Dermatophagoides pteronyssinus és a Dermatophagoides farinae I. és II. csoportba tartozó allergénjeit kódoló cDNS-eket - lambda-gt 11-ből származó szubklónokként, plazmidformában (Chua és munkatársai, J. Exp. Med., 167, 175-182, 1988; Dilworth és munkatársai, Clin. Exp. Allergy, 21, 25-32, 1990) dr. Wayne Thomastól kaptuk. A Dérp I cDNS-t dr. Roland Buelow (Immulogic, Palo Alto) szubklónozta egy M13 RF plazmidból - EcoRI-ffagmensként - pUC18ba, míg a Dér fi cDNS-t közvetlenül az M13 mpl9 RF Dfl(l) plazmidból szubklónoztuk.

A cDNS-eket elsőként a pTrc99A RRRS His₆ inszert expressziós vektorba (amely a pTrc99A [Amman és munkatársai, Gene, 69, 301-315] egy módosított változata) szubklónoztuk. Az eredeti vektort úgy módosítottuk, hogy a polilinker 5’-végén az Ncol (MG) és EcoRI (EF) helyei közé - az MGHHHHHHEF vezérszekvenciát kódoló, két komplementer oligonukleotidot tartalmazó - szintetikus adaptort, illetve a polilinker 3’-végén, a vektor HindlII helyén egy RRS-t (retroregulátor szekvencia) addícionáltunk. A vezérszekvenciát a fentebb leírt tisztítás elősegítése érdekében, míg az RRS-t a rekombináns üzenet stabilitásának növelése - s ezáltal a kitermelt rekombináns protein kitermelésének növelése - érdekében addícionáltuk (Skokglund és munkatársai, Gene, 88, 1-5, 1990). Végül, a H₆ vezérszekvenciával egy leolvasási keretben EcoRI-PstI fragmensként - egy inszertet, esetünkben egy, a parlagfű fő allergénjét kódoló Amb a 1.1 cDNS-t szubklónoztunk.

Az I. csoportba tartozó allergének expresszálásához az Amb a 1.1 cDNS-t EcoRI/HindlII-emésztéssel kivágtuk és - komplementer oligonukleotidpárból álló oEcoRI/HindlII túlnyúló szálakkal rendelkező adapterokkal helyettesítettük. Ezek az adapterok (2/a. ábra) kódolják az érett Dérp I N-terminálisán a PstI helyig elhelyezkedő első öt, illetve az érett Dér f I Nterminálisán a Hpal helyig elhelyezkedő első tíz aminosavat. A vektor EcoRI-helye és az adapterok oEcoRIhelyének ligálásának hatására a vektor EcoRI-helye megsemmisült, miáltal az adaptorban intemálisan kódolt EcoRI-hely maradt az egyedüli EcoRI-hely a pTrc99A His₆ 5’ pl RRS és a pTrc99A His₆ 5’ fi RRS intermedier konstrukcióban. A Dér p I cDNS-t Pstl/EcoRI fragmensként a Pstl/EcoRI enzimekkel emésztett pTrc99A His₆ 5’ pl RRS konstrukcióba, míg a Dér f I cDNS-t Hpal/EcoRI fragmensként a Hpal/EcoRI-emésztett pTrc99A His₆ 5’ fi RRS konstrukcióba inszertáltuk. A pTrc99A His₆ 5’ pl RRS és a pTrc99A His₆ 5’ fi RRS konstrukció 5’-végének szekvenciáját Sequenase™ II kit (U.S. Biochemicals) felhasználásával didezoxi-láncterminációs DNS-szekvenálással ellenőriztük. A H₆ pl és H₆ fl kódolókazettákat NcoI/Nhel-emésztéssel kivágtuk (az RRs adapter 3’végén létezett egy Nhel-hely), és az Ncol/Nhelemésztett pETlld-be inszertáltuk. A pETlld His₆ pl RRS és a pETlld His₆ fl RRS konstrukciót a rekombináns proteinek expresszálásához kompetens BL21 [DE3] baktériumba transzformáltuk. A BL21 [DE3] törzs a lac UV5 promoter transzkripciós kontrollja alatt egy T7 fág RNS-polimeráz-génnel együtt egy DE3 rekombináns lambda-fág lizogént tartalmaz. A T7 RNS-polimeráz-gén expresszióját IPTG (Izopropil-B-D-tio-galaktopirano-oldallánc) hozzáadásával indukáljuk, ami végül a pET vektor T7 gn 10 promoterének 3’-végére szubklónozott rekombináns gén magas szintű expresszióját eredményezi.

A Dermatophagoides pteronyssinus és a Dermatophagoides farinae II. csoportba tartozó allergénjeit kódoló cDNS-eket lambda-gtl 1-ből származó szubklónokként, plazmid formájában szintén dr. Wayne Thomastól kaptuk (Chua és munkatársai, Int. Arch. Appl. Immun., 91, 118-123, 1990; Trudinger és munkatársai, Clin. Exp. Allergy, 21, 33-37, 1991). Az eredeti Dér p II cDNS-t egy M13RF plazmidból a pCA és pGEX vektorokba dr. Roland Bueloá (Palo Alto) szubklónozta. Dr. Thomas csoportja a Dér fii cDNS-t szubklónként juttatta be a pGEX vektorba. Mindkét, II. csoportba tartozó cDNS-t tartalmazó pGEX plazmidot azonos 5’-szensz/3’-antiszensz primerpárral (2/b. ábra) alkalmaztuk a PCR amplifikáció templátjaként. A primereket arra szántuk, hogy EcoRI helyet (az EF aminosavakat kódoló GAATTC szekvenciát) fuzionáljunk a II. csoportba tartozó érett proteinek N-terminálisával egy leolvasási keretben, és hogy a II. csoportba tartozó kódolórégió 3’-részére PstI helyet tegyünk. A PCR amplifikációhoz Perkin Elmer - Cetus Gene Amp kit reagensek felhasználásával - harmincszor ismételt

HU 220 462 Bl °C, 1 perc/55 °C, 1,5 perc/72 °C, 2 perc programmal

- MJ Research Thermal Controller hőszabályozót használtunk. A PCR termékeket EcoRI/PstI enzimekkel emésztettük és EcoRI/Pstl-emésztett M13mpl9RF-be szubklónoztuk. A PCR termékek szekvenciájának ellenőrzéséhez DNS-szekvencia-analízist végeztünk. A helyes M13RF-et EcoRI/Pstl-emésztettük, a II. csoportba tartozó cDNS-eket izoláltuk és EcoRI/Pstl-emésztett pTrc99A His₆ Amb az 1.1 RRS vektorba szubklónoztuk (ami a II. csoportba tartozó cDNS-ek parlagfű cDNS-re történő cserélését szolgálta, 1. ábra).

A Dér /II cDNS az 54. helyen szekvenciapolimorfizmust tartalmaz (izoleucin helyén treoningyököt). E polimorfizmus megváltoztatása érdekében a Dér f II cDNS 54-es (T₅₄) helyén, Kunkel (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 82, 488-492,1985) módszere alapján, MutaGene kit (Bio-Rad Laboratories) felhasználásával, helyre irányuló mutagenezist végeztünk. A T₅₄ Dér f II cDNS-sel rendelkező, eredeti M13mpl9RF-et CJ236 baktériumokba transzformáltuk, melyek a DNS-replikáció során kibírták az uracilnak a timidin helyére történő juttatását, s templátként egyszálú fág-DNS-t készítettünk. A 17 bázispámyi mutagén prímért (2/b. ábra) a fág templát-DNS-sel temperáltuk. A templát-DNS másolásához - printerként mutagén oligonukleotiddal T4 DNS-polimerázt használtunk, és T4 DNS-ligáz szolgált a DNS-szál hiányosságainak pótlására. A reakciót MV1190 baktériumba transzformáltuk - amely a DNS uracilgyökeinek beépítését illetően vad típusú, s ilyenformán szelektíven másolja a mutagenizált (uracilt nem tartalmazó) szálat - majd a rekombináns (fehér) plakkokból egyszálú fág-DNS-t készítettünk. A különféle rekombinánsokat DNS-szekvencia-analízisnek vetettük alá, s a kijavított I^-szekvenciával rendelkező Dér /II cDNS-t EcoRI/PstI fragmensként az EcoRI/Pstlemésztett pTrc99A His₆ Amb az 1.1 RRS-be szubklónoztuk.

Mivel egy korábbi munka során megbizonyosodtunk arról, hogy - a legtöbb esetben - a pETlld vektor magasabb szinten képes expresszálni a rekombináns proteineket, mint a pTrc99A vektor, a két, II. csoportba tartozó cDNS-t H₆-fúziós proteinként T7 vektorba szubklónoztuk. A pTrc99A His₅ f II RRS-t és a pTrc99A His₆ p II RRS-t Ncol/Nhel enzimekkel emésztettük, és az izolált cDNS-inszerteket NcoI/Nhel-emésztett pETl ld His₆ pl-be szubklónoztuk (1. ábra). A rekombináns plazmidokat az expresszióhoz BL 21 [DE3] baktériumba transzformáltuk.

A pETlld atkaallergén expressziós konstrukciókat tartalmazó BL21 DE3 baktériumgazdákat frissen 200 pg/ml ampicillinnel kiegészített - BHI agarlemezekre kentük (3,7 m/v% Difco Brain Heart Infusion; 1,5 m/v% Difco agar) és egy éjszakán keresztül 37 °Con inkubáltuk. Egy különálló telepet 2 ml 200 pg/ml ampicillin/BHI tápközegbe (3,7 m/v% Difco Brain Heart Infusion) oltottuk, s rázógépen 37 °C-on, 300 percenkénti fordulattal, zavarosodás - de nem kicsapódás

- eléréséig kevertük. A 2 ml-nyi tenyészetet 100 ml 200 pg/ml ampicillin/BHI tápközeghez adtuk, kicsapás nélkül, zavarosság eléréséig, 37 °C-on 300 percenkénti fordulattal ráztuk, miután a 200 pg/ml ampicillin/BHI tápközeges tenyészetet 18x500 ml részre osztottuk (összesen 9 1), s 37 °C-on, 300 percenkénti fordulattal tovább ráztuk. Amikor a tenyészet OD₅₉₅-értéke elérte az 1,0-et, a rekombináns molekulák expresszióját 400 μΜ IPTG hozzáadásával indukáltuk, s két órán keresztül hagytuk lejátszódni.

A baktériumokat 10 000 g-vel 15 percen keresztül végzett centrifugálással gyűjtöttük össze, 1/20 térfogat lízispufferben (0,2 mg/ml lizozim, 100 mM NaPO₄, pH=8,0, 50 mM NaCl) reszuszpendáltuk, majd 30 percig jégen inkubáltuk és -70 °C-on befagyasztottuk. A fagyott baktériumokat 37 °C-ra történő gyors felolvasztással elroncsoltuk, majd 30 másodperces szünetekkel, ötször egymás után 20 másodpercig hangkezeltük. A hangkezelt mintákat ezután 15 000 g-vel centrifugáltuk, hogy elkülönítsük az oldható és a szemcsés baktériumproteineket. Az oldható proteineket kiöntöttük, és a szemcsés proteineket 6 M guanidin-HCl, 100 mM 2merkapto-etanol, 100 mM NaPO₄ és 10 mM Tris (pH=8,0) elegyében reszuszpendáltuk. E szuszpenziót 15 000 g-vel centrifugáltuk, a felülúszót levettük, pHját 10 N NaOH-dal 8,0-ra állítottuk be, majd - előzőleg 6 M guanidin-HCl, 100 mM NaPO₄ és 10 mM Tris (pH=8,0) elegyével ekvilibrált - NTA agarózoszlopra vittük. Az oszlopot 6 M guanidin-HCl, 100 mM NaPO₄ és 10 mM Tris (pH=8,0) addig mostuk, míg az effluensfrakció OD₂₈₀-értéke el nem érte az alapszintet. Az oszlop pufferét ezután 8 M karbamid, 100 mM NaPO₄ és 10 mM Tris (pH = 8,0) elegyére cseréltük. Az ekvilibrálás után 8 M karbamid, 100 mM NaOAc és 10 mM Tris (pH=6,3) elegyével erőteljesebb mosást végeztünk, míg az effluensffakció OD₂₈₀-értéke el nem érte az alapszintet. A rekombináns atkaproteint ezután (H₆-fúzióként) 8 M karbamid, 100 mM NaOAc és 10 mM Tris (pH=4,5) elegyével eluáltuk, s megfigyeltük az összegyűjtött aliquotok OD₂₈₀-profilját. A proteincsúcsokat háromszor 500 térfogat PBS-sel szemben dializáltuk. A kitermelés literenként 10-70 mg rekombináns protein volt, a densitometrikus elemzéssel meghatározott tisztaság 80%-tól (Dér/II) 95%-ig terjedt.

A rekombináns Dér/II proteinallergén további tisztítása érdekében reverz fázisú HPLC kromatográfiát végeztünk. Hozzávetőleg 100 mg His₆-£>er/II proteint 20 mM DTT-ben 36 °C-on 30 percig redukáltunk, majd 0,1 v/v% TFA/H₂O oldatban Pharmacia PRO RPC HR 10/10 oszlopra vittük. Az oszlop átfolyási sebessége 1,5 ml/perc volt; 40 percig 0-70%-os acetonitrilgradienssel (0,1% TFAban), majd 70-100%-os acetonitrilgradienssel (0,1% TFAban). A His₆-Der/II protein 54-96%-os acetonitrilgrandiensnél eluálódott. A 214 nm-nél és 180 nm-nél detektált frakciók tisztaságát SDS-poliakrilamid gélelektroforézissel és denzitometrikus elemzéssel vizsgáltuk. A His₆-Der / II proteint 95%-nál nagyobb tisztaságban tartalmazó frakciókat ezután az allergén humán T-sejt térképezéséhez használtuk. A preparatív reverz fázisú HPLC kitermelése hozzávetőleg 69%-os volt.

A Dér p I, Dér p II és Dér/II allergének nukleotidszekvencia polimorfizmusainak meghatározása

HU 220 462 Β1

Azt vártuk, hogy a Dér ρ I, Dér ρ II, Dér fi és Dér f II proteineket kódoló nukleinsavszekvenciákban - az egyes atkák közötti természetes allélvariációnak köszönhetően - szekvenciapolimorfizmusok vannak. A különböző Dér ρ I, Dér ρ II és Dér f II kiónok szekvenálása közben több nukleotid- (és ebből eredően aminosav) szekvencia-polimorfizmust fedeztünk fel. Az aminosavszekvencia-polimorfizmusokat a 22., 23. és 24. ábrákon mutatjuk be.

3. példa:

Átfedő peptidek szintézise

A 3. és 4. ábrán bemutatott Dér ρ I, Dér ρ II, Dér fi és Dér f II átfedő peptideket standard Fmoc/tBoc kémiai szintézissel szintetizáltuk és dialízissel vagy reverz fázisú HPLC-vei tisztítottuk. Az ábrákon a szintetizált peptidek aminosavait a peptid neve mellett zárójelben közöltük, és az aminosavszekvenciát a peptid neve után egybetűs kóddal írtuk le. A peptidek nevét az összes ábrán következetesen tüntettük fel. A Dér ρ I, Dér fi, Dér ρ II és Dér/II proteineket úgy osztottuk átfedő peptidekre, hogy a Dér ρ I és Dér fi, illetve a Dér ρ II és Dér f II proteinek átfedő peptidjei egymással megegyező számú aminosavgyökkel rendelkezzen, például a DPI-1, illetve a DFI-1 peptid a Dér ρ I, illetve a Dér fi allergén 1-20. aminosavgyökeit tartalmazza. A Dér p és Dér f peptideknek az aminosavak pozícióját illető azonosságát céltudatosan alakítottuk ki annak érdekében, hogy minél jobban tudjuk tesztelni a Dér p és Dér/T-sejt-epitópok keresztreaktivitását, s hogy ezáltal meghatározhassuk azokat a peptideket, amelyek háziporatkára allergiás személyeknek adva alkalmasak mind a Dér p, mind a Dér f allergénekre vonatkozó érzékenység kezelésére. Az átfedő peptidek kijelölésekor figyelembe vettük az I. és II. csoportba tartozó allergének T-sejt-keresztreaktivitás szintjén megvalósuló keresztreaktivitását. Ezenfelül számításba vettük az I. csoportba tartozó allergének szerinproteáz funkcióját, s az I. csoportba tartozó allergéneken belül hasonló, stabil és variábilis régiók azonosítása érdekében más ismert szerinproteáz (például papain, aktinidin) aminosavszekvenciáját is megvizsgáltuk. Valószínűnek tartottuk, hogy az I. csoportba tartozó allergéneken belüli stabil régiók „osztott” T-sejt-epitópokat tartalmaznak.

4. példa:

Atkaallergiás páciens Dér pl és Dér ρ II proteinekre, illetve peptidekre adott primer T-sejt-reakciói Atkaallergiás páciensből (R.B.) származó perifériás vérmintából Ficoll-Hypaque centrifugálással egymagvú perifériás vérsejteket (PBMC) tisztítottunk, amelyeket különböző antigénekre (azaz affinitástisztított Dér pl, affinitástisztított Dér ρ II, különböző Dér pl és Dér ρ II peptidekre) reagáló proliferációt illetően vizsgáltunk. A vizsgálathoz 5% humán AB-szérumot és különböző koncentrációjú antigént tartalmazó 200 pl RPMI-1640 tápközegben, három mikrozsebben 5 χ 10⁴ PBMC-t tenyésztettünk (37 °C-on, hét napig). A zsebekhez ezután 16 órára 1 pCi tríciummal kezelt timidint adtunk. A beütéseket üvegszálas filteren gyűjtöttük és folyadékszcintillációs számoláshoz készítettük elő. A vizsgálat eredményeit az I. táblázatban mutatjuk be. A táblázatban a CPM ± standard szórás értékeket közöljük. Valamennyi reakció esetén a stimulációs index (S. I.) egyenlő az antigénre adott reakcióban a sejt ³Htimidin CPM-értéke osztva az antigén nélküli tápközegben lévő sejtek ³H-timidin CPM-értékével. Az eredmények azt mutatják, hogy a vizsgált páciens a DP I—1, DP 1-3, DP 1-8, DP 1-10, DP 1-5.2, DP II-4 és DP II—9 peptidekre legalább 2,0 stimulációs indexszel reagál. Ilyenformán ezen peptidek tartalmaznak olyan Dér ρ I vagy Dér ρ II T-sejt-epitópokat, amelyeket a szóban forgó allergiás páciens T-sejtjei felismernek.

1. táblázat

Antigén	Koncentráció (pg/ml)	CPM ± szórás	S. I.
Tápközeg	-	1071+30	-
Dér pl	10	920+15	0,9
30	2122+93	2,0
100	1492+13	1,4
DPI-1	10	1099+48	1,0
30	3527+73	3,3
100	2746+81	2,6
DPI-2	10	1395+47	1,3
30	1283+34	1,5
100	1486+38	1,4
DPI-3	10	2608+52	2,4
30	1561 + 13	1,5
100	5252+67	4,9
DPI-8	10	1439+32	1,3
30	1045+32	1,0
100	2272+40	2,1
DPI-10	10	1936+50	1,8
30	3042+89	2,8
100	2644+63	2,5
DP 1-5.2	10	1374+20	1,3
30	2241+87	2,1
100	3132+111	2,9
Dér ρ II	10	1113+35	1,0
30	2104+43	2,0
100	1057+27	1,0
DP II—4	10	2126+25	2,0
30	1979+94	1,8
100	2314+116	2,2
DP II—9	10	3970+87	3,7
30	4464+86	4,2
100	2237+53	2,1

HU 220 462 Bl

5. példa:

T-sejt-epitópvizsgálatok Dér p I allergénnel

Az atkaallergia klinikai tüneteit, valamint háziporatkára pozitív bőrtesztet mutató, háziporatkára allergiás páciensektől vett, heparinnal kezelt perifériás vér 60 ml-ének Ficoll-Hypaque centrifúgálásával perifériás egymagvú vérsejteket (PBMC) tisztítottunk.

Az 543. páciensből származó 10⁷ PBMC-t 5% összegyűjtött humán AB-szérumot tartalmazó, glutaminnal, penicillinnel, sztreptomicinnel és HEPES pufferrel kiegészített 10 ml RPMI-1640 tápközegben, 20 pg/ml tisztított natív Dér p I allergén jelenlétében, 37 °C-on hét napig tenyésztettünk. Az életképes sejteket Ficoll-Hypaque centrifugálással tisztítottuk tovább, s még két hétig 5% AB-szérumot, 5 egység/ml rekombináns humán IL-2-t és 5 egység/ml rekombináns humán IL-4-et tartalmazó RPMI-1640 tápközegben tenyésztettük. A nyugvó T-sejteket ezután másodlagos proliferációs vizsgálattal teszteltük, hogy megállapítsuk a különböző háziporatka proteinekre és peptidekre adott T-sejt-reakciókat. A vizsgálathoz 200 μΐ RPMI-1640/5% AB-szérum tápközegben - különböző koncentrációjú, tisztított natív Dér p I vagy szintetikus Dérp I peptideket tartalmazó antigénprezentáló sejtekként -2 x1ο⁴ autológ, Epstein-Barr-vírussal transzformáit B-sejtek (20 000 rád) jelenlétében, 37 °C-on, három napig 2χ10⁴ nyugvó T-sejtet tenyésztettünk. A zsebekhez ezután 16 órára 1 pCi tríciummal kezelt timidint adtunk. A beütéseket üvegszálas filteren gyűjtöttük és folyadékszcintillációs számoláshoz készítettük elő. Az allergént vagy peptidet nem tartalmazó tápközeget használtuk negatív kontrollként. E kísérlet eredményei azt mutatják, hogy az adott páciens jó néhány, Dér p I proteinből származó pepiiddel reagál minimum 2,0 stimulációs indexszel. Ezek közé tartozik DP I—1, DP 1-2, DP 1-4, DP 1-11, DP 1-5, DP 1-13, DP 1-15, DP 1-6.1, DP 1-8, DP 1-9, DP 1-16, DP I-10, DP 1-17 peptid (adatokat nem közöltünk).

A fenti eljárást számos más, háziporatkára allergiás páciens esetében elvégeztük, azzal a különbséggel, hogy a) egyes esetekben az IL-2-vel és IL-4-gyel végzett tenyésztés idejét megváltoztattuk; b) bizonyos esetekben tisztított natív (N) és rekombináns (R) Dér p I proteint (20 vagy 10 gg/ml koncentrációban) egyaránt alkalmaztunk a T-sejtek immunmozgósításához; és c) egyes esetekben a másodlagos proliferációs vizsgálathoz antigénprezentáló sejtként röntgensugárzással (3500 rád) kezelt PBMC-t használtunk. Három további peptidet találtunk, amelyek aminosavszekvenciájukban a natív szekvenciához képest kevés számú konzervatív eltérést tartalmaztak (DP I—11.1,117. számú szekvencia; DP 1-12, 118. számú szekvencia; és DP II—3,119. számú szekvencia). Három további peptidet (DP 1-11.1,13. számú szekvencia; DP 1-12.1,14. számú szekvencia; és DP II-3.1 számú szekvencia) szintetizáltunk, amelyek nem tartalmaztak eltéréseket a natív szekvenciától. Néhány T-sejtanalízist az eredeti peptidekkel (például DP I—11, DP 1-12 és DP 11-13) végeztünk. A járulékos peptidekkel (vagyis a DP I—11.1, DP 1-12.1 és DP ΙΙ-3.1 peptidekkel) végzett következő T-sejt-analízis során az eredeti és a járulékos peptidek között az átlagos stimulációs indexet és a pozitív reakciók százalékos arányát illetően nem találtunk jelentős különbségeket. Ilyenformán mindkét pepticsoport adatait összegyűjtöttük.

Az egyes eredményeket akkor ítéltük pozitívnak és akkor használtuk fel, ha a páciens a Dér p I proteinre és az abból származó legalább egy pepiidre 2,0 - vagy nagyobb - stimulációs indexszel reagált. A 33. ábrán 33 pozitív kísérlet eredményeinek összesítése látható. A rekombináns vagy natív Dér p I proteinnel stimulált PBMC-vel immunmozgósított nyugvó T-sejt-vonalakat szintetikus Dér p I peptidekre mutatott reaktivitást illetően teszteltük. Valamennyi peptidet illetően a maximális reakció a T-sejt-stimulációs indexként fejezhető ki. A stimulációs index egyenlő a peptidre adott reakcióban a sejtek által befogott percenkénti beütésszám (CPM) osztva az antigén nélküli tápközegben lévő sejtek által befogott CPM-mel. A háttérszintnél nagyobb stimulációs indexérték azt jelenti, hogy a peptid T-sejtepitópot tartalmaz. A tesztelt páciens vagy páciensek csoportja esetében azonban csak a 2,0 vagy az annál nagyobb S. I. értékeket (az alapszintnél legalább kétszer nagyobb reakció, melyet a találmányban pozitív eredményként említünk) használtuk az egyes peptidekre vonatkozó átlagos T-sejt-stimulációs index kiszámításához. A hisztogramokon az oszlopok fölött zárójelben az átlagos T-sejt-stimulációs indexek láthatók, amelyeket - a túlzott eltérések hatásának csökkentése érdekében - valamennyi peptid esetében a legnagyobb és a legalacsonyabb pozitív reakciók kihagyásával számítottunk. A T-sejt-stimulációs indexet a következők szerint számítottuk:

A T-sejt+APC+antigén CPM-értéke

A T-sejt+APC+kontroll CPM-értéke

Az ábrákon az oszlopok a páciensek csoportjában a peptidreakció sorozatösszegét ábrázolják. A sorozatösszeg meghatározásához minden páciens esetében kiválasztottuk az öt legnagyobb stimulációs indexszel rendelkező peptidet, s csökkenő számsorrendet alakítottunk ki, melyben az ötös jelenti a legerősebb reakciót. Ezután összeadtuk a csoport valamennyi páciensében - az egyes peptidekre - kapott számot, miáltal meghatároztuk az adott peptid sorozatösszegét. Az oszlopok fölött feltüntettük a tesztelt páciensek csoportjában az adott peptidre legalább 2,0 stimulációs indexszel bíró pozitív reakciók százalékos arányát. Ennek, illetve az átlagos T-sejt-stimulációs index ismeretében minden peptidre kiszámítható a pozitivitási index (P. I.), mégpedig úgy, hogy az átlagos, stimulációs indexet megszorozzuk a háziporatkára érzékeny személyek egy csoportjában (amely például lehetőleg minimum 15, előnyösebben, legalább 30 vagy több személyből áll) azon páciensek százalékos arányával, akik az adott peptidre legalább 2,0 stimulációs indexszel reagálnak (például az 5. ábrán a DP 1-1 peptidre a pozitivitási index értéke körülbelül 343 [73% χ 4,7]). A pozitivitási index ilyenformán egyaránt kifejezi a peptidre adott T-sejtreakció erősségét (S. I.) és a háziporatkára érzékeny személyek csoportjában a peptidre adott T-sejt-reakció gyakoriságát. Az 5. ábra azt bizonyítja, hogy a DP 1-1,

HU 220 462 Β1

DP 1-2, DP 1-3, DP 1-4, DP 1-5, DP 1-6.1, DP 1-7.1, DP 1-8, DP 1-9, DP 1-16 és DP I-10 peptid a vizsgált páciensekben jelentős T-sejt-reaktivitási régiókat tartalmaz.

6. példa:

T-sejt-vizsgálatok Dér fi allergénekkel

A Dér fi protein T-sejt-reaktív területeinek meghatározása érdekében az 5. példában leírtakhoz hasonló kísérleteket végeztünk. Például a 783., háziporatkára allergiás páciensből az 5. példában leírt módon perifériás egymagvú vérsejteket izoláltunk, melyeket 20 pg/ml tisztított, rekombináns Dérfi allergénnel in vitro stimuláltunk. Az antigénprezentáló sejtekként röntgensugárzott (3500 rád) autológ PBMC felhasználásával a Dér f

I peptidekkel végzett proliferációs vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy a szóban forgó páciens Tsejtjei a DF 1-8.1, DF 1-9, DF 1-6, DF 1-10, DF 1-2.1, DF 1-3, DF 1-11, DF 1-5, DF 1-1 és DF 1-17 peptidekre reagálnak (adatokat nem közöltünk).

A fenti eljárást számos páciens esetében elvégeztük, azzal a különbséggel, hogy egyes esetekben a T-sejteket affinitástisztított Dér f I allergénnel 20 pg/ml vagy 10 pg/ml koncentrációban immunmozgósítottuk, illetve hogy antigénprezentáló sejtekként Epstein-Barrvírussal transzformált, röntgensugárzással kezelt (25 000 rád) autológ B-sejteket alkalmaztunk. A 6. ábrán 16 pozitív kísérlet eredményeit foglaltuk össze. Az adatokat az 5. példában leírtak szerint értékeltük. Az eredmények azt jelzik, hogy a Dér f I protein T-sejtreaktivitást illetően fontos területei a DF 1-1, DF 1-2, DF 1-3, DF 1-4, DF 1-11, DF 1-5, DF 1-7, DF 1-14, DF 1-15, DF 1-8.1 és DF 1-9 peptidekben találhatók.

7. példa:

Vizsgálat a Dér p I és Dér f I T-sejt-epitopok keresztreaktivitásának kimutatására A Dér p I és Dér fi proteinek nagyon homológok (81%-os azonosság). Hogy meghatározzuk a Dér p I allergénnel immunmozgósított T-sejt sejtvonalak - különböző Dér p I peptidek és azokkal párba állított Dér f

II peptidek által kiváltott - T-sejt-reakcióit, az 5. példában leírtakhoz hasonló kísérleteket végeztünk. A T-sejt sejtvonalakat az 5. példában leírtak szerint in vitro immunmozgósítottuk, és lényegében párba állított Dér p I és Dér fii peptidekre (például a Dér p I protein 1-20. aminosavgyökeiből álló DP 1-1 vagy a Dér fi protein 1-20. aminosavgyökeiből álló DF 1-1 pepiidre) adott reakcióra teszteltük. Az adatokat az 5. példában leírtak szerint értékeltük, azzal a különbséggel, hogy az átlagos stimulációs index kiszámításakor nem hagytuk ki a peptidekre adott pozitív reakciók legnagyobb és legalacsonyabb stimulációs indexértékét. A 7. ábrán több ilyen kísérlet eredményét foglaltuk össze. 14 pozitív kísérlet eredményei azt mutatják, hogy a Dér p I-re immunmozgósított T-sejtek különböző Dér fi peptidekkel reagálnak, bizonyítva ezzel az I. csoportba tartozó allergének közötti keresztreaktivitást. A Dér p I proteinre immunmozgósított T-sejtek jelentős mértékben reagáltak a DF 1-1, DF 1-2, DF 1-3, DF 1-4, DF

I- 11, DF 1-12, DF 1-15, DF 1-8, DF 1-9, DF 1-15 és DF 1-6 peptidekre. Néhány páciensben a Dér fi peptid a Dér p I-re immunmozgósított T-sejtek számára hatásosabb stimulátor volt, mint a megfelelő Dér p I peptid. A 8. ábra fordított kísérletek eredményeit ábrázolja, melyekben a - több páciensből származó - T-sejteket in vitro Dér fi proteinre immunmozgósítottuk, és különböző Dér p I és lényegében párba állított Dér f I peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltuk. 8 pozitív kísérlet eredményei azt mutatják, hogy a Dér/I-re immunmozgósított T-sejtek jelentős mértékben reagáltak a DP 1-1, DP 1-3, DP 1-4, DP 1-11/11.1, DP 1-14, DP 1-5, DP 1-15 és DP 1-18 peptidekre.

8. példa:

T-sejt-vizsgálatok Dér p II allergénekkel

A Dérp II protein T-sejt-reaktív területeinek meghatározása érdekében az 5. példában leírtakhoz hasonló kísérleteket végeztünk. Például a 348., háziporatkára allergiás páciensből az 5. példában leírt módon perifériás egymagvú vérsejteket izoláltunk, melyeket 20 pg/ml tisztított, natív Dér p II allergénnel in vitro stimuláltunk. Az antigénprezentáló sejtekként Epstein-Barr-vírussal transzformált, röntgensugárzott (25 000 rád) autológ B-sejtek felhasználásával a Dér p II peptidekkel végzett proliferációs vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy a szóban forgó páciens jól reagál a DP H-l, DP 11-17, DP II-8, DP II-2 és DP

II- 9 peptidekkel (adatokat nem közlünk).

A fenti eljárást számos páciens esetében elvégeztük, azzal a különbséggel, hogy egyes esetekben a Tsejteket affinitástisztított Dér p II allergénnel 20 pg/ml vagy 3 pg/ml koncentrációban immunmozgósítottuk, illetve hogy antigénprezentáló sejtekként Epstein-Barrvírussal transzformált, röntgensugárzással kezelt (3500 rád) autológ perifériás egymagvú vérsejteket alkalmaztunk. A 9. ábrán 26 pozitív kísérlet eredményeit foglaltuk össze. Az adatokat az 5. példában leírtak szerint értékeltük, azzal a különbséggel, hogy a pepiidre adott reakciók sorozatösszegének kiszámításához a három legnagyobb stimulációs indexszel rendelkező reakciót használtuk. A Dér p II protein a vizsgált páciensek esetében a T-sejt-reaktivitást illetően jelentős területei a DP II-1, DP II-2, DP II-3, DP II-4, DP II-7, DP II—8 és DP II—9 peptidekben találhatók.

9. példa:

T-sejt-vizsgálatok Dér/II allergénekkel

A Dér/II protein T-sejt-reaktív területeinek meghatározása érdekében az 5. példában leírtakhoz hasonló kísérleteket végeztünk. Például a 384., háziporatkára allergiás pácienst Dér/II allergénnel in vitro stimuláltuk, és a T-sejt sejtvonal reakcióját - antigénprezentáló sejtekként Epstein-Barr-vírussal transzformált, röntgensugárzással kezelt (25 000 rád) autológ B-sejtek jelenlétében - különböző, átfedő Dér/II peptidekkel váltottuk ki. A proliferációs vizsgálat eredményei azt mutatják, hogy a szóban forgó páciens jól reagál a DF H-l, DF II-2, DF II—3.1, DF II-4.5, DF 11-15, DF 11-16 és DF II-19.1 peptidekre (adatokat nem közöltünk).

HU 220 462 BI

A fenti eljárást további tíz páciens esetében végzetük el, azzal a különbséggel, hogy egyes esetekben a Tsejteket a páciens egymagvú perifériás vérsejtjeinek tisztított natív Dér f II allergénnel 20 pg/ml vagy 3 pg/ml koncentrációban történő stimulálásával immunmozgósítottuk, illetve hogy a T-sejt sejtvonalat antigénprezentáló sejtekként - röntgensugárzással kezelt (3500 rád) autológ PBMC-sejtek jelenlétében vizsgáltuk. A 10. ábrán 10 pozitív kísérlet eredményeit foglaljuk össze. Az adatokat az 5. példában leírtak szerint értékeltük, azzal a különbséggel, hogy az egyes peptidekre adott pozitív reakciók legalacsonyabb és legnagyobb stimulációs indexértékeit nem hagytuk ki a számításból. Az eredmények azt mutatják, hogy a Dér f protein T-sejt-reaktivitást illetően jelentős területei a DF II-l, DF II—2, DF 11-13.1, DF II-4.5, DF 11-15, DF11-17 és DF II—19— 1 peptidekben találhatók.

10. példa:

Vizsgálat a Dér p II és Dér f II T-sejt-epitópok keresztreaktivitásának kimutatására A Dér p II és Dér f II proteinek T-sejt-keresztreaktivitásának meghatározásához a 7. példában leírthoz hasonló vizsgálatot végeztünk. Dér /II proteinnel immunmozgósított T-sejtek reakcióit különböző Dér f II és lényegében párba állított Dér p II peptidekkel váltottuk ki. A 11. ábrán 10 pozitív kísérlet eredményeit foglaltuk össze, melyek azt mutatják, hogy a Dér/II-re immunmozgósított T-sejtek jelentős reakciót mutatnak a DP II-l, DP II-3/3.1, DP II-4 és DP II—7 peptidekre. A 12. ábrán fordított kísérlet eredményei láthatók, melynek során a - több páciensből származó - T-sejteket in vitro Dér p II proteinre immunmozgósítottuk, és különböző Dér /II peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltuk. 26 pozitív kísérlet eredményei azt mutatják, hogy a Dér p II-re immunmozgósított T-sejtek jelentős mértékben reagáltak a DF II-l, DF II—4.5, DF 11-15, DF ΙΙ-17, DF 11-18 és DF II—19.1 peptidekre.

11. példa:

Domináns peptidek szintézise

Az 5-10. példákban leírt vizsgálatok alapján azonosítottuk a Dér p I, Dér p II, Dér /1 és Dér f II proteineken belüli fő T-sejt-reaktivitási területeket. Valamennyi vizsgálatban valamennyi pácienst egy proteinallergént illetően (például Dér p I) és legalább egy, az adott protein fő T-sejt-reaktivitási területéből származó peptidet illetően teszteltük. A Dér p I és Dér fi proteinekben hét fő T-sejt-reaktivitási régiót azonosítottunk (1., 2., 3., 4., 5., 6/a és 6/b régió). Ezen régiókat következők szerint határozzuk meg: az 1. régió a Dérp I és a Dér fi proteinallergén 1-28. aminosavgyökét tartalmazza, a 2. régió a Dér p I és a Dér f I proteinallergén 36-68. aminosavgyökét, a 3. régió aDerp I és a Dér fi proteinallergén 74-109. aminosavgyökét, a 4. régió a Dér p I és a Dér f I proteinallergén 118-139. aminosavgyökét, az 5. régió a Dér p I és a Dér fi proteinallergén 141-166. aminosavgyökét, a 6/a régió a Dér p I és a Dér f I proteinallergén

161-185. aminosavgyökét, a 6/b régió pedig a Dér p I és a Dér fi proteinallergén 173-201. aminosavgyökét tartalmazza.

Hasonlóan, a Dér p II és Dér/II proteinekben négy fő T-sejt-reaktivitási régiót azonosítottunk (7., 8., 9. és 10. régió). E régiókat a következők szerint határozzuk meg: a 7. régió a Dérp II és a Dér/II proteinallergén 1-26. aminosavgyökét, a 8. régió a Dér p II és a Dér f II proteinallergén 33-67. aminosavgyökét, a 9. régió a Dér p II és a Dér /II proteinallergén 79-104. aminosavgyökét, a 10. régió pedig a Dér p II és a Dér f II proteinallergén 107-129. aminosavgyökét tartalmazza. Részben az 5-10. példákban leírt T-sejt-reaktivitás alapján Dér p I, Dér p II, Dér / I és Dér f II proteinekből származó peptideket választottunk ki, amelyeket a peptid 5’- vagy 3’-végén aminosavgyökök addíciójával vagy deléciójával módosítottunk. E szelektált peptidek kijelölésekor különböző tényezőket vettünk figyelembe, mint például az átfedő peptidekre kapott sorozatösszegeket, a peptidre adott, legalább 2,0 stimulációs indexszel rendelkező reakciók százalékos arányát, a peptidek potenciális keresztreaktivitását, a peptidek előállításának nehézségeit stb. E kiválasztott peptidekkel a Dér p I és Dér fi proteinek 1-6/a régióinak, illetve a Dérp II és Dér/II proteinek 7-10. régióinak fő T-sejt-reaktivitási területeinek pontosabb meghatározása érdekében az 5-10. példában leírtakhoz hasonló T-sejtes vizsgálatokat végeztünk.

A Dér p I, Dér p II, Dér fi és Dér/II proteinekből származó kiválasztott peptidek felhasználásával végzett T-sejtes vizsgálatok eredményei a 13-18/a-d. ábrákon láthatók. Az 5. példában leírt eljárás szerint számos páciensből származó T-sejt sejtvonalat in vitro Dér p I proteinre immunmozgósítottunk, majd a Dér p I-szekvenciából származó kiválasztott peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltunk. A 13. ábrán bemutatott 33 pozitív kísérlet eredményei azt mutatják, hogy a Dér p I-re immunmozgósított T-sejtek jelentős reakciót mutattak a DP 1-21.1, DP 1-21.2, DP 1-22.2, DP 1-25.2, DP 1-22.1, DP 1-23.1, DP 1-23.2, DP 1-26.1 és DP 1-28.1 peptidekre.

Hasonlóan, a 6. példában leírt eljárás szerint 9 páciensből származó T-sejt sejtvonalat in vitro Dér fi proteinre immunmozgósítottunk, majd a proteinből származó kiválasztott peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltunk. Az adatokat szintén a 6. példában leírt módon értékeltük. A 14. ábrán bemutatott, kilenc pácienssel végzett kísérletek eredményei a Dér fi proteinből származó, kiválasztott peptidek T-sejt-reaktivitását bizonyítják.

Egy másik kísérletben számos páciensből származó T-sejt sejtvonalakat in vitro Dér p I proteinre immunmozgósítottunk, majd a Dér p I proteinből származó kiválasztott peptidekre, illetve a Dér fi proteinből származó, lényegében párba állított peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltunk. 30 pozitív kísérlet adatait az 5. példában leírt módon értékeltük. Amint a 15/a. ábrán látható, a Dér p I-re immunmozgósított T-sejtek jelentős reakciót mutattak a DF 1-21.1, DF 1-21.2, DF 1-23.1, DF 1-22.2, DF 1-22.3, DF 1-22.4, DF 1-23.2,

HU 220 462 Bl

DF 1-25.1, DF 1-26.1 és DF 1-27.1 peptidekre. A 15/b. ábra a 15/a. ábrán bemutatott adatok részhalmaza, bemutatva a Dér p I-re immunmozgósított T-sejtek

- sorozatösszeggel vizsgált - peptidekre adott reakcióját. Az ábra azt mutatja, hogy ebben a kísérletben vizsgált peptidek közül a DP 1-23.1 peptid rendelkezik a legnagyobb sorozatösszeggel. A 16/a. ábra fordított kísérlet eredményeit mutatja be, melynek során 9 páciensből származó T-sejteket in vitro Dér fi proteinre immunmozgósítottuk, és a reakciókat szelektált Dér fi peptidekkel és lényegében párba állított Dér ρ I peptidekkel váltottuk ki. Az eredmények azt jelzik, hogy a 9 páciensből származó, Dér/I-re immunmozgósított T-sejtek reagálnak a Dér ρ I proteinből származó kiválasztott peptidekre. A 16/a. ábra azt mutatja, hogy ebben a kísérletben vizsgált peptidek közül a DF 1-22.1 és DF 1-25.1 peptid rendelkezik a legnagyobb stimulációs indexszel. A 16/b. ábra a 16/a. ábrán látható adatok részhalmaza, mely az előnyben részesített Dér fi és Dér ρ I peptidek reakcióit ábrázolja. Az ábra azt mutatja, hogy az e kísérletben vizsgált előnyben részesített peptidek közül a DF 1-22.2 rendelkezik a legnagyobb stimulációs indexszel.

Egy másik kísérletben a 8. példában leírt eljárás szerint 29, a Dér ρ II proteinre immunmozgósított páciens Dér ρ II peptidekre mutatott reakcióit vizsgáltuk. A 17/a. ábra azt mutatja, hogy egy páciensből származó Dér p I-re immunmozgósított T-sejtek reagáltak a Dér ρ II szelektált peptidekre. A 17/b. ábrán az előzőhöz hasonló, 30 pácienssel végzett kísérlet eredményei láthatók, melyekben az alacsony és magas értékeket kihagytuk az átlag kiszámításából. A 17/b. ábra azt mutatja, hogy az e kísérletben vizsgált előnyben részesített peptidek közül a DP II-20.6 rendelkezik a legnagyobb stimulációs indexszel. A 18/a. ábra fordított kísérlet eredményeit mutatja be, melynek során egy páciensből származó T-sejteket in vitro Dér /II proteinre immunmozgósítottuk, és a reakciókat Dér ρ II proteinből származó szelektált peptidekkel váltottuk ki. Az ábra azt mutatja, hogy 10 páciensből származó, Dér /II-re immunmozgósított T-sejtek reagáltak a Dér ρ II proteinből származó szelektált peptidekre. Amint a 18/a. ábrán látható, a DP 11-25 rendelkezik a legnagyobb stimulációs indexszel. A 18/b. ábra 15/a. ábrán bemutatott adatok részhalmaza és a natív Dér/II-re immunmozgósított T-sejtek - sorozatösszeggel vizsgált

- előnyben részesített Dér ρ II peptidekre adott reakcióját mutatja be. Amint az ábrán látható, ebben a kísérletben vizsgált előnyben részesített peptidek közül a DP II—25.2 rendelkezik a legnagyobb sorozatösszeggel.

12. példa:

Vizsgálat az I. és II. csoportba tartozó epitópok keresztreaktivitásának kimutatására A 7. példában leírthoz hasonló vizsgálatot végeztünk négy párba állított páciensből származó, I. csoportba tartozó Dér f és Dér p proteinnel in vitro immunmozgósított T-sejtekkel, melyeket a Dér ρ I és Dér fi proteinekből származó szelektált, előnyben részesített peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltunk. A 18/c. ábrán látható eredmények azt mutatják, hogy a T-sejt-reaktivitás számos szelektált, előnyben részesített Dér ρ I pepiidet illetően lényegében azonos volt a megfelelő Dér f I pepiidre adott reaktivitással és viszont.

A 18/d. ábra hasonló kísérlet eredményeit mutatja, melynek során 6 párba állított páciensből származó, II. csoportba tartozó Dér f és Dér p proteinnel in vitro immunmozgósított T-sejteket a Dér ρ II és Dér f II proteinekből származó szelektált, előnyben részesített peptidekre adott reakciót illetően vizsgáltunk. A 18/c. ábrán látható eredményekhez hasonlóan, a T-sejt-reaktivitás számos szelektált, előnyben részesített Dér ρ II peptidet illetően lényegében azonos volt a megfelelő Dér/II peptidre adott reaktivitással és viszont.

73. példa:

Az IgE-atkaallergén proteinekhez és peptidekhez történő közvetlen kötési vizsgálata

Corning vizsgálati lemezeket (25882-96) a 19., 20.

és 21. ábrákon felsorolt bevonóantigének 5 pg/ml-es koncentrációjával 50 μ1/100 ml/zseb mennyiségben vontunk be. A lemezeket egy éjszakán keresztül 4 °C-on inkubáltuk. A bevonóantigéneket eltávolítottuk, és a zsebeket 300 μΐ/zseb mennyiségű 0,5% zselatin/PBS-sel szobahőmérsékleten két órán keresztül rögzítettük. Összegyűjtött humán vérplazmából (20, a kereskedelemben beszerezhető atkakivonatra pozitív bőrtesztet mutató páciensből származó vérplazmaminták keveréke) PBS-Tween-20 oldattal (PBS+nemionos Tween-20 detergens, Sigma, St. Louis, MO) sorozathígítást készítettünk, s 100 μΐ/zseb mennyiségben a zsebekhez adtuk, majd 4 °C-on egy éjszakán keresztül inkubáltuk (a plazmahígításokat duplán teszteltük). A második antitestet (biotinilált kecske antihumán IgE, 1:1000, Kierkegaard&Perry Laboratories Inc., Gaithersburg, MD) szobahőmérsékleten 100 μΐ/zseb mennyiségben egy órára adtuk a zsebekhez. Az oldat eltávolítása után szobahőmérsékleten 100 μΐ/zseb mennyiségben sztreptavidin-HRPO-t (1:1000, Southern Biotechnology Associates Inc., Birmingham, AL) adtunk egy órára (az egyes inkubációs lépések között valamennyi zsebet háromszor PBS-Tween-oldattal mostuk). A zsebekhez TMB Membráné Peroxidase Substrate rendszert (Kirkegaard&Perry Laboratories) adtunk (100 ml/zseb). A színt 2-5 percig hagytuk kifejlődni, majd a reakciót 100 ml/zseb 1 M foszforsav hozzáadásával állítottuk le. A lemezeket 450 nm-es szűrővel Microplate IL310 Autoreader készüléken (Biotech Instruments, Winooski, VT) olvastuk le. A dupla zsebek abszorbanciaértékét átlagoltuk. Az ELISA-vizsgálatból származó grafikus eredményeket (hígítás logaritmusa vs. abszorbancia) a 19/a-b., 20/a-b. és 21/a-b. ábrákon mutatjuk be. Az ábrákon a feliratban függőlegesen felsorolt bevonóantigének sorrendje megfelel a hisztogramok esetében balról jobbra felsorolt bevonó antigénsorrendnek.

Az ELISA-vizsgálat 19/b. ábrán bemutatott eredményei azt bizonyítják, hogy a humán IgE jól kötődik mind

HU 220 462 Bl használtuk valamennyi bevont ELISA-lemezre. Ezen ELISA-vizsgálatok eredményeit a 21/a-h. ábrákon mutatjuk be. A tisztított vagy rekombináns proteint, illetve a PMA antigénkészítményt illetően valamennyi lemez esetében jól látható a kötődés, ami jó IgE-aktivitást jelent. A PMA antigén-készítmény azonban a szérum nélküli hígításnál (ahol első antitestoldatot nem adtunk a zsebekhez) nagyfokú nem specifikus reaktivitást mutat. Ez a nem specifikus reaktivitás a PMA antigén és a biotinilált második antitest között mutatkozik, s nem befolyásolja az antigénre vonatkozó specifikus IgE-reaktivitás létezését. Pozitív leolvasásként a legnagyobb plazmakoncentrációnál az alapérték kétszeresét használva az e kísérletben vizsgált 56 peptid közül egy sem mutatott IgE-reaktivitást.

Bár a találmányt az előnyös megvalósítási módjai alapján írtuk le, más megvalósítási módok is azonos eredménnyel hajthatók végre. A találmány változtatásai és módosításai a szakemberek számára nyilvánvalóak lesznek, s ezeket a találmány területébe tartozó módosításokat és tartalmi megfelelőket igyekeztünk a szabadalmi igénypontokba foglalni.

a biokémiailag tisztított Dér p II proteinhez, mind a rekombináns Dér p II (rDer p II) proteinhez, a Dér p II peptidekhez azonban nem mutatható ki kötődés. Az IgE Dér p peptidekhez és proteinekhez történő kötődése megegyezik a Dér f proteinek és peptidekhez történő kötődé- 5 si aktivitással, vagyis a Dér fi vagy Dér fii peptidekhez és a rekombináns Dér /I-hez kimutatható kötődés nem tapasztalható. Az IgE csak a biokémiailag tisztított Dér f I és a rekombináns és biokémiailag tisztított Dér fii proteinhez kötődött. Az IgE mindkét esetben jobban kötő- 10 dött a rekombináns Dér p II vagy Dér /II proteinekhez, mint a biokémiailag tisztított változataikhoz. A fenti ELISA-vizsgálatból származó következtetéseket egybevetettük egy másik vizsgálati módszer (nitrocellulóz papíron készített dot-blot) eredményeivel, melyhez a leírt 15 antitesteket és antigénreagenseket használtuk.

A pozitív kontrollként alkalmazott antigénkészítmény a négy fő, biokémiailag tisztított atkaallergén (PMA, Purified Mite Allergen) elegye volt (Dér f I,

Dér/II, Dér p I, Dér p II). Ezt az elegyet az egyes pro- 20 teinek 100 pg-ja/ml vagy az összes protein 400 pgja/ml koncentrációban készítettük. Ezt a készítményt

SZEKVENCIALISTA (1) ÁLTALÁNOS TUDNIVALÓK (iii) SZEKVENCIÁK SZÁMA: 119 (2) TUDNIVALÓK AZ 1. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 834bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG:

(A) NÉV/KULCS: KÓDOLÓSZEKVENCIA (CDS) (B) ELHELYEZKEDÉS: 1.. .738 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 1. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

AAA 48

AAC

CGA

TTT

TTG

ATG

AGT

GCA

GAA

GCT

TTT

GAA

CAC

CTC

AAA

ATC

Lys 1

Asn

Arg

Phe

Leu 5

Me t

Ser

Al a

Glu

Al a 10

Phe

Glu

Hi s

Leu

Lys 15

Thr

CAA 96

TTC

GAT

TTG

AAT

GCT

GAA

ACT

AAC

GCC

TGC

AGT

ATC

AAT

GAA

AAT

Gin

Phe

Asp

Leu 20

Asn

Al a

Glu

Thr

Asn 25

Al a

Cys

Ser

Ile

Asn 30

Gly

Asn

GCT 144

CCA

GCT

GAA

ATC

GAT

TTG

CGA

CAA

ATG

CGA

ACT

GTC

ACT

CCC

ATT

Al a

Pro

Al a 35

Glu

Ile

As p

Leu

Arg 40

Gin

Me t

Arg

Thr

Val 45

Thr

Pro

I le

CGT 192

ATG

CAA

GGA

GGC

TGT

GGT

TCA

TGT

TGG

GCT

TTC

TCT

GGT

GTT

GCC

Arg

Me t 50

Gin

Gly

Gly

Cy s

Gly 55

Ser

Cy s

Trp

Al a

Phe 60

Ser

Gly

Va 1

Al a

GCA 240

ACT

GAA

TCA

GCT

TAT

TTG

GCT

CAC

CGT

AAT

CAA

TCA

TTG

GAT

CTT

Al a 65

Thr

Glu

Ser

Al a

Tyr 70

Leu

Al a

Hi s

Arg

Asn 75

Gin

Ser

Leu

As p

Leu 80

GCT 288

GAA

CAA

GAA

TTA

GTC

GAT

TGT

GCT

TCC

CAA

CAC

GGT

TGT

CAT

GGT

HU 220 462 Β1

Al a

Glu

Gin

Glu

Leu 85

Va 1

Asp

Cy s

Al a

Ser 90

Gin

Hi s

Gly

Cys

Hi s 95

Gly

GAT 336

ACC

ATT

CCA

CGT

GGT

ATT

GAA

TAC

ATC

CAA

CAT

AAT

GGT

GTC

GTC

Asp

Thr

Ile

Pro 100

Arg

Gly

Ile

Glu

Tyr 105

Ile

Gin

Hi s

Asn

Gly 110

Val

Val

CAA 384

GAA

AGC

TAC

TAT

CGA

TAC

GTT

GCA

CGA

GAA

CAA

TCA

TGC

CGA

CGA

Gin

Glu

Ser 115

Tyr

Tyr

Arg

Tyr

Val 120

Alá

Arg

Glu

Gin

Ser 125

Cys

Arg

Arg

CCA 432

AAT

GCA

CAA

CGT

TTC

GGT

ATC

TCA

AAC

TAT

TGC

CAA

ATT

TAC

CCA

Pro

Asn 130

Al a

Gin

Arg

Phe

Gly 135

Ile

Ser

Asn

Tyr

Cys 140

Gin

Ile

Tyr

Pro

CCA 480

AAT

GCA

AAC

AAA

ATT

CGT

GAA

GCT

TTG

GCT

CAA

ACC

CAC

AGC

GCT

Pro 145

Asn

Al a

Asn

Ly s

Ile 150

Arg

Glu

Al a

Leu

Al a 155

Gin

Thr

Hi s

Ser

Al a 160

ATT 528

GCC

GTC

ATT

ATT

GGC

ATC

AAA

GAT

TTA

GAC

GCA

TTC

CGT

CAT

TAT

Ile

Al a

Val

Ile

Ile 165

Gly

Ile

Ly s

Asp

Leu 170

Asp

Alá

Phe

Arg

Hi s 175

Tyr

GAT 576

GGC

CGA

ACA

ATC

ATT

CAA

CGC

GAT

AAT

GGT

TAC

CAA

CCA

AAC

TAT

Asp

Gly

Arg

Thr 180

Ile

Ile

Gin

Arg

As p 185

Asn

Gly

Tyr

Gin

Pro 190

Asn

Tyr

CAC 624

GCT

GTC

AAC

ATT

GTT

GGT

TAC

AGT

AAC

GCA

CAA

GGT

GTC

GAT

TAT

Hi s

Al a

Val 195

Asn

Ile

Val

Gly

Tyr 200

Ser

As n

Al a

GI n

Gly 205

Va 1

Asp

Tyr

TGG 672

ATC

GTA

CGA

AAC

AGT

TGG

GAT

ACC

AAT

TGG

GGT

GAT

AAT

GGT

TAC

Trp

Ile 210

Val

Arg

Asn

Ser

Trp 215

As p

Thr

Asn

Trp

Gly 220

Asp

As n

Gly

Tyr

GGT 720

TAT

TTT

GCT

GCC

AAC

ATC

GAT

TTG

ATG

ATG

ATT

GAA

GAA

TAT

CCA

Gly 225

Tyr

Phe

Al a

Al a

Asn 230

Ile

As p

Leu

Me t

Me t 235

Ile

Glu

Glu

Tyr

Pro 240

TAT GTT GTC ATT CTC TAAACAAAAA GACAATTTCT TATATGATTG TCACTAATTT 775

Tyr Val Val Ile Leu 245

ATTTAAAATC AAAATTTTTT AGAAAATGAA TAAATTCATT CACAAAAATT AAAAAAAAA (2) TUDNIVALÓK A 2. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 245 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 2. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Lys 1

Asn

Arg

Phe

Leu 5

Me t

Ser

Al a

Glu

Al a 10

Phe

Glu

Hi s

Le u

Ly s 15

Thr

Gin

Phe

As p

Leu 20

Asn

Al a

Glu

Thr

Asn 25

Al a

Cy s

Ser

Ile

Asn 30

Gly

Asn

Al a

Pro

Al a 35

Glu

Ile

Asp

Leu

Arg 40

Gin

Me t

Arg

Thr

Val 45

Thr

Pro

Ile

Arg

Me t 50

Gin

Gly

Gly

Cys

Gly 55

Ser

Cys

Trp

Al a

Phe 60

Ser

Gly

Val

Al a

Al a 65

Thr

Glu

Ser

Al a

Tyr 70

Leu

Al a

Hi s

Arg

Asn 75

Gin

Ser

Leu

Asp

Leu 80

HU 220 462 Β1

Alá Glu

Gin Glu

Leu 85

Val

Asp

Cys

Al a

Ser 90

Gin

Hi s

Gly

Cy s

Hi s 95

Gly

Asp

Thr

Ile

Pro

Arg

Gly

Ile

Glu

Tyr

Ile

Gin

Hi s

Asn

Gly

Va 1

Val

100

105

110

Gin

Glu

Ser

Tyr

Tyr

Arg

Tyr

Va 1

Al a

Arg

Glu

Gin

Ser

Cy s

Arg

Arg

115

120

125

Pro

Asn

Al a

Gin

Arg

Phe

Gly

Ile

Ser

Asn

Tyr

Cy s

Gin

Ile

Tyr

Pro

130

135

140

Pro

Asn

Al a

Asn

Lys

Ile

Arg

Glu

Al a

Leu

Al a

Gin

Thr

Hi s

Ser

Al a

145

150

155

160

Ile

Al a

Val

Ile

Ile

Gly

Ile

Ly s

As p

Leu

As p

Al a

Phe

Arg

Hi s

Tyr

165

170

175

Asp

Gly

Arg

Thr

Ile

Ile

Gin

Arg

Asp

Asn

Gly

Tyr

Gin

Pro

Asn

Tyr

180

185

190

Hi s

Al a

Val

Asn

Ile

Va 1

Gly

Tyr

Ser

Asn

Al a

Gin

Gly

Va 1

Asp

Tyr

195

200

205

Trp

Ile

Val

Arg

Asn

Ser

Trp

As p

Thr

Asn

Trp

Gly

Asp

Asn

Gly

Tyr

210

215

220

Gly

Tyr

Phe

Al a

Al a

Asn

Ile

As p

Leu

Me t

Me t

Ile

Glu

Glu

Tyr

Pro

225

230

235

240

Tyr

Val

Val

Ile

Leu

245 (2) TUDNIVALÓK A 3. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 588 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG:

(A) NÉV/KULCS: KÓDOLÓSZEKVENCIA (CDS) (B) ELHELYEZKEDÉSE: 69...509 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 3. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

CACAAATTCT TCTTTCTTCC TTACTACTGA TCATTAATCT GAAAACAAAA CCAAACAAAC 60

CATTCAAA ATG ATG TAC AAA ATT TTG TGT CTT TCA TTG TTG GTC GCA GCC 110

Met Met Tyr Lys Ile Leu Cys Leu Ser Leu Leu Val Alá Alá

1

1

5

10

GTT 158

GCT

CGT

GAT

CAA

GTC

GAT

GTC

AAA

GAT

TGT

GCC

AAT

CAT

GAA

ATC

Val 15

Al a

Arg

As p

Gin

Va 1 20

Asp

Va 1

Lys

Asp

Cys 25

Al a

Asn

Hi s

Glu

Ile 30

AAA 206

AAA

GTT

TTG

GTA

CCA

GGA

TGC

CAT

GGT

TCA

GAA

CCA

TGT

ATC

ATT

Lys

Ly s

Val

Leu

Va 1 35

Pro

Gly

Cys

Hi s

Gly 40

Ser

Glu

Pro

Cy s

Ile 45

Ile

CAT 254

CGT

GGT

AAA

CCA

TTC

CAA

TTG

GAA

GCC

GTT

TTC

GAA

GCC

AAC

CAA

Hi s

Arg

Gly

Lys 50

Pro

Phe

Gin

Leu

Glu 55

Al a

Va 1

Phe

Glu

Al a 60

Asn

Gin

AAC 302

ACA

AAA

ACG

GCT

AAA

ATT

GAA

ATC

AAA

GCC

TCA

ATC

GAT

GGT

TTA

Asn

Thr

Lys 65

Thr

Al a

Lys

Ile

G1 u 70

Ile

Ly s

Al a

Ser

Ile 75

As p

Gly

Leu

GAA 350

GTT

GAT

GTT

CCC

GGT

ATC

GAT

CCA

AAT

GCA

TGC

CAT

TAC

ATG

AAA

Glu

Va 1 80

As p

Val

Pro

Gly

I le 85

As p

Pro

Asn

Al a

Cys 90

Hi s

Tyr

Me t

Ly s

HU 220 462 Bl

110

TGC

CCA

TTG

GTT

AAA

GGA

CAA

CAA

TAT

GAT

ATT

AAA

TAT

ACA

TGG

398

Cy s

Pro

Leu

Val

Lys

Gly

Gin

Gin

Tyr

As p

Ile

Lys

Tyr

Thr

Trp

95

100

105

GTT

CCG

AAA

ATT

GCA

CCA

AAA

TCT

GAA

AAT

GTT

GTC

GTC

ACT

GTT

446

Va 1

Pro

Ly s

Ile

Alá

Pro

Ly s

Ser

Glu

Asn

Va 1

Val

Val

Thr

Va 1

115

120

125

GTT

ATG

GGT

CAT

GAT

GGT

GTT

TTG

GCC

TGT

GCT

ATT

GCT

ACT

CAT

494

Val

Me t

Gly

Asp

As p

Gly

Val

Leu

Al a

Cys

Al a

Ile

Al a

Thr

Hi s

130

135

140

AAA

ATC

CGC

GAT

TAAATAAACA AAATTTATTG ATTTTGTAAT CACAAATGAT

546

Lys I1e Arg Asp 145

TGATTTTCTT TCCAAAAAAA AAATAAATAA AATTTTGGGA AT 588 (2) TUDNIVALÓK A 4. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 146 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 4. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Me t

Me t

Tyr

Ly s

Ile

Leu

Cys

Leu

Ser

Leu

Leu

Va 1

Al a

Al a

1

5

10

Val

Al a

Arg

Asp

Gin

Val

Asp

Val

Lys

Asp

Cys

Al a

Asn

Hi s

Glu

Ile

15

20

25

30

Ly s

Ly s

Va 1

Leu

Va 1

Pro

Gly

Cy s

Hi s

Gly

Ser

Glu

Pro

Cy s

Ile

Ile

35

40

45

Hi s

Arg

Gly

Ly s

Pro

Phe

Gin

Leu

Glu

Al a

Val

Phe

Glu

Al a

Asn

Gin

50

55

60

Asn

Thr

Lys

Thr

Al a

Ly s

Ile

G1 u

Ile

Ly s

Al a

Ser

Ile

As p

Gly

Leu

65

70

75

Glu

Val

Asp

Val

Pro

Gly

lle

As p

Pro

Asn

Al a

Cy s

Hi s

Tyr

Me t

Lys

80

85

90

Cy s

Pro

Leu

Val

Ly s

Gly

Gin

G1 n

Tyr

As p

Ile

Lys

Tyr

Thr

Trp

Asn

95

100

105

110

Val

Pro

Ly s

Ile

Al a

Pro

Ly s

Ser

Glu

Asn

Va 1

Val

Val

Thr

Val

Lys

115

120

125

Val

Me t

Gly

As p

As p

Gly

Val

Leu

Al a

Cy s

Al a

Ile

Al a

Thr

Hi s

Al a

130

135

140

Ly s

Ile

Arg

Asp

145

(2) TUDNIVALÓK AZ 5. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 1072 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG:

(A) NÉV/KULCS: KÓDOLÓSZEKVENCIA (CDS) (B) ELHELYEZKEDÉSE: 36... 1001 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 5. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

CGTTTTCTTC CATCAAAATT AAAAATTCAT CAAAA ATG AAA TTC GTT TTG GCC 53

Met Lys Phe Val Leu Alá 1 5

HU 220 462 Β1

ATT 101

GCC

TCT

TTG

TTG

GTA

TTG

AGC

ACT

GTT

TAT

GCT

CGT

CCA

GCT

TCA

I le

Al a

Ser

Leu 10

Leu

Va 1

Leu

Ser

Thr 15

Va 1

Tyr

Al a

Arg

Pro 20

Al a

Ser

ATC 149

AAA

ACT

TTT

GAA

GAA

TTC

AAA

AAA

GCC

TTC

AAC

AAA

AAC

TCT

GCC

1 le

Ly s

Thr 25

Phe

Glu

Glu

Phe

Ly s 30

Ly s

Al a

Phe

Asn

Ly s 35

Asn

Tyr

Al a

ACC 197

GTT

GAA

GAG

GAA

GAA

GTT

GCC

CGT

AAA

AAC

TTT

TTG

GAA

TCA

TTG

Thr

Va 1 40

Glu

Glu

Glu

Glu

Val 45

Al a

Arg

Lys

Asn

Phe 50

Leu

Glu

Ser

Leu

AAA 245

TAT

GTT

GAA

GCT

AAC

AAA

GGT

GCC

ATC

AAC

CAT

TTG

TCC

GAT

TTG

Lys 55

Tyr

Val

Glu

Al a

Asn 60

Ly s

Gly

Al a

I le

Asn 65

Hi s

Leu

Ser

As p

Leu 70

TCA 293

TTG

GAT

GAA

TTC

AAA

AAC

CGT

TAT

TTG

ATG

AGT

GCT

GAA

GCT

TTT

Ser

Leu

Asp

Glu

Phe 75

Ly s

Asn

Arg

Tyr

Leu 80

Me t

Ser

Al a

Glu

Al a 85

Phe

GAA 341

CAA

CTC

AAA

ACT

CAA

TTC

GAT

TTG

AAT

GCC

GAA

ACA

AGC

GCT

TGC

Glu

Gin

Leu

Lys 90

Thr

Gin

Phe

As p

Leu 95

Asn

Al a

G1 u

Thr

Ser 100

Al a

Cys

CGT 389

ATC

AAT

TCG

GTT

AAC

GTT

CCA

TCG

GAA

TTG

GAT

TTA

CGA

TCA

CTG

Arg

I le

Asn 105

Ser

Val

Asn

Val

Pro 110

Ser

Glu

Leu

As p

Leu 115

Arg

Ser

Leu

CGA 437

ACT

GTC

ACT

CCA

ATC

CGT

ATG

CAA

GGA

GGC

TGT

GGT

TCA

TGT

TGG

Arg

Thr 120

Val

Thr

Pro

I le

Arg 125

Me t

Gin

Gly

Gly

Cys 130

Gly

Ser

Cys

Trp

GCT 485

TTC

TCT

GGT

GTT

GCC

GCA

ACT

GAA

TCA

GCT

TAT

TTG

GCC

TAC

CGT

Al a 135

Phe

Ser

Gly

Va 1

Al a 140

Al a

Thr

Glu

Ser

Al a 145

Tyr

Leu

Al a

Tyr

Arg 150

AAC 533

ACG

TCT

TTG

GAT

CTT

TCT

GAA

CAG

GAA

CTC

GTC

GAT

TGC

GCA

TCT

Asn

Thr

Ser

Leu

As p 155

Leu

Ser

Glu

Gin

Glu 160

Leu

Val

Asp

Cy s

Al a 165

Ser

CAA 581

CAC

GGA

TGT

CAC

GGC

GAT

ACA

ATA

CCA

AGA

GGC

ATC

GAA

TAC

ATC

Gin

Hi s

Gly

Cys 170

Hi s

Gly

As p

Thr

I le 175

Pro

Arg

Gly

I le

Glu 180

Tyr

I le

CAA 629

CAA

AAT

GGT

GTC

GTT

GAA

GAA

AGA

AGC

TAT

CCA

TAC

GTT

GCA

CGA

Gin

Gin

Asn 185

Gly

Val

Val

Glu

Glu 190

Arg

Ser

Tyr

Pro

Tyr 195

Val

Al a

Arg

GAA 677

CAA

CGA

TGC

CGA

CGA

CCA

AAT

TCG

CAA

CAT

TAC

GGT

ATC

TCA

AAC

Glu

Gin 200

Arg

Cys

Arg

Arg

Pro 205

Asn

Ser

Gin

Hi s

Tyr 210

Gly

He

Ser

Asn

TAC 725

TGC

CAA

ATT

TAT

CCA

CCA

GAT

GTG

AAA

CAA

ATC

CGT

GAA

GCT

TTG

Tyr 215

Cys

Gin

I le

Tyr

Pro 220

Pro

Asp

Val

Lys

Gin 225

I le

Arg

Glu

Al a

Leu 230

ACT 773

CAA

ACA

CAC

ACA

GCT

ATT

GCC

GTC

ATT

ATT

GGC

ATC

AAA

GAT

TTG

Thr

Gin

Thr

Hi s

Thr 235

Al a

I le

Al a

Va 1

I le 240

I le

Gly

I le

Ly s

As p 245

Leu

HU 220 462 Bl

AGA

GCT

TTC

CAA

CAT

TAT

GAT

GGA

CGA

ACA

ATC

ATT

CAA

CAT

GAC

AAT

821

Arg

Al a

Phe

Gin

Hi s

Tyr

As p

Gly

Arg

Thr

Ile

Ile

Gin

Hi s

Asp

Asn

250

255

260

GGT

TAT

CAA

CCA

AAC

TAT

CAT

GCC

GTC

AAC

ATT

GTC

GGT

TAC

GGA

AGT

869

Gly

Tyr

Gin

Pro

Asn

Tyr

Hi s

Al a

Val

Asn

Ile

Va 1

Gly

Tyr

Gly

Ser

265

270

275

ACA

CAA

GGC

GAC

GAT

TAT

TGG

ATC

GTA

CGA

AAC

AGT

TGG

GAT

ACT

ACC

917

Thr

Gin

Gly

Asp

As p

Tyr

Trp

Ile

Val

Arg

Asn

Ser

Trp

As p

Thr

Thr

280

285

290

TGG

GGA

GAT

AGC

GGA

TAC

GGA

TAT

TTC

CAA

GCC

GGA

AAC

AAC

CTC

ATG

965

Trp

Gly

Asp

Ser

Gly

Tyr

Gly

Tyr

Phe

Gin

Al a

Gly

Asn

Asn

Leu

Me t

295

300

305

310

ATG

ATC

GAA

CAA

TAT

CCA

TAT

GTT

GTA

ATC

ATG

TGAACATTTG AAATTGAATA

1018

Me t

Ile

Glu

Gin

Tyr

Pro

Tyr

Val

Val

Ile

Me t

315 320

TATTTATTTG TTTTCAAAAT AAAAACAACT ACTCTTGCGA GTATTTTTTA CTCG 1072 (2) TUDNIVALÓK A 6. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 129 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 6. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Me t 1

Ly s

Phe

Val

Leu c

Al a

Ile

Al a

Ser

Leu

Leu

Val

Leu

Ser

Thr

Val

1 Tyr

Al a

Arg

Pro

Al a

Ser

10

15

20

Ile

Lys

Thr

Phe

Glu

Glu

Phe

Ly s

Lys

Al a

Phe

As n

Ly s

As n

Tyr

Al a

25

30

35

Thr

Val

Glu

Glu

Glu

Glu

Val

Al a

Arg

Lys

Asn

Phe

Leu

Glu

Ser

Leu

40

45

50

Ly s

Tyr

Val

Glu

Al a

Asn

Ly s

Gly

Al a

Ile

As n

Hi s

Leu

Ser

Asp

Leu

55

60

65

70

Ser

Leu

Asp

Glu

Ph e

Lys

Asn

Arg

Tyr

Leu

Me t

Ser

Al a

Glu

Ala

Phe

75

80

85

Glu

Gin

Leu

Lys

Thr

Gin

Phe

As p

Leu

Asn

Al a

Glu

Thr

Ser

Al a

Cy s

90

95

100

Arg

Ile

Asn

Ser

Va 1

As n

Va 1

Pro

Ser

Glu

Leu

Asp

Leu

Arg

Ser

Leu

105

110

115

Arg

Thr

Val

Thr

Pro

Ile

Arg

Me t

Gin

Gly

Gly

Cy s

Gly

Ser

Cy s

Trp

120

125

130

Al a

Phe

Ser

Gly

Val

Al a

Al a

Thr

Glu

Ser

Al a

Tyr

Leu

Al a

Tyr

Arg

135

140

145

150

Asn

Thr

Ser

Leu

As p

Leu

Ser

Glu

Gin

Glu

Leu

Val

Asp

Cy s

Al a

Ser

155

160

165

Gin

Hi s

Gly

Cy s

Hi s

Gly

Asp

Thr

Ile

Pro

Arg

Gly

Ile

Glu

Tyr

I le

170

175

180

Gin

Gin

Asn

Gly

Val

Val

Glu

Glu

Arg

Ser

Tyr

Pro

Tyr

Val

Al a

Arg

185

190

195

Glu

Gin

Arg

Cy s

Arg

Arg

Pro

Asn

Ser

Gin

Hi s

Tyr

Gly

Ile

Ser

Asn

200

205

210

Tyr

Cy s

Gin

Ile

Tyr

Pro

Pro

As p

Val

Ly s

Gin

Ile

Arg

Glu

Al a

Leu

215

220

225

230

HU 220 462 Bl

Thr

Gin

Thr

Hi s

Thr 235

Al a

Ile

Al a

Val

Ile 240

Ile

Gly

Ile

Ly s

Asp 245

Leu

Arg

Al a

Phe

Gin

Hi s

Tyr

As p

Gly

Arg

Thr

Ile

Ile

Gin

Hi s

As p

Asn

250

255

260

Gly

Tyr

Gin

Pro

As n

Tyr

Hi s

Al a

Val

Asn

Ile

Val

Gly

Tyr

Gly

Ser

265

270

275

Thr

Gin

Gly

Asp

As p

Tyr

Trp

Ile

Val

Arg

Asn

Ser

Trp

As p

Thr

Thr

280

285

290

Trp

Gly

Asp

Ser

Gly

Tyr

Gly

Tyr

Phe

Gin

Al a

Gly

Asn

Asn

Leu

Me t

295

300

305

310

Me t

Ile

Glu

Gin

Tyr

Pro

Tyr

Va 1

Val

Ile

Me t

315 320 (2) TUDNIVALÓK A 7. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 491 bázispár (B) TÍPUS: nukleinsav (C) SZÁL: egyszálú (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: cDNS (ix) SAJÁTOS JELLEGZETESSÉG:

(A) NÉV/KULCS: KÓDOLÓSZEKVENCIA (CDS) (B) ELHELYEZKEDÉSE: 1.. .390 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 7. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

GAT CAA GTC GAT	GTT AAA GAT	TGT GCC	AAC AAT GAA ATC AAA	AAA GTA
48
Asp Gin Val Asp	Val Lys Asp	Cys Alá	Asn Asn Glu Ile Lys	Lys Val
1	5		10	15
ATG GTC GAT GGT	TGC CAT GGT	TCT GAT	CCA TGC ATA ATC CAT	CGT GGT
96
Me t Va1 Asp Gly	Cys His Gly	Ser Asp	Pro Cys Ile Ile His	Arg Gly
20		25	30
AAA CCA TTC ACT	TTG GAA GCC	TTA TTC	GAT GCC AAC CAA AAC	ACT AAA
144
Lys Pro Phe Thr	Leu Glu Alá	Leu Phe	Asp Alá Asn Gin Asn	Thr Lys
35		40	45
ACC GCT AAA ACT	GAA ATC AAA	GCC AGC	CTC GAT GGT CTT GAA	ATT GAT
192
Thr Alá Lys Thr	Glu Ile Lys	Alá Ser	Leu Asp Gly Leu Glu	Ile Asp
50	55		60
GTT CCC GGT ATT	GAT ACC AAT	GCT TGC	CAT TTT ATG AAA TGT	CCA TTG
240
Val Pro G1y Ile	Asp Thr Asn	Alá Cys	His Phe Met Lys Cys	Pro Leu
65	70		75	80
GTT AAA GGT CAA	CAA TAT GAT	GCC AAA	TAT ACA TGG AAT GTG	CCC AAA
288
Val Lys Gly Gin	Gin Tyr Asp	Alá Lys	Tyr Thr Trp Asn Val	Pro Lys
	85		90	95
ATT GCA CCA AAA	TCT GAA AAC	GTT GTC	GTT ACA GTC AAA CTT	GTT GGT
336
Ile Alá Pro Lys	Ser Glu Asn	Val Val	Val Thr Val Lys Leu	Val Gly
100		105	110
GAT AAT GGT GTT	TTGGCT TGC GCT ATT GCT ACC CAC GCT AAA ATC CGT
384
Asp Asn Gly Val	Leu Alá Cys	Alá Ile	Alá Thr His Alá Lys	Ile Arg
115		120	125

GAT TAAAAAAAAA AAATAAATAT GAAAATTTTC ACCAACATCG AACAAAATTC

437

As p

129

HU 220 462 Bl

AATAACCAAA ATTTGAATCA AAAACGGAAT TCCAAGCTGA GCGCCGGTCG CTAC 491 (2) TUDNIVALÓK A 8. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 129 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: protein (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 8. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gin Val 1

Asp

Va 1 5

Lys Asp Cys Alá

Asn 10

Asn

Glu

Ile

Ly s

Lys 15

Val

Me t

Va 1

Asp

Gly

Cy s

Hi s

Gly

Ser

As p

Pro

Cy s

Ile

Ile

Hi s

Arg

Gly

20

25

30

Ly s

Pro

Phe

Thr

Leu

Glu

Al a

Leu

Phe

As p

Al a

Asn

G1 n

Asn

Thr

Ly s

35

40

45

Thr

Al a

Lys

Thr

Glu

Ile

Lys

Al a

Ser

Leu

As p

Gly

Leu

Glu

Ile

As p

50

55

60

Va 1

Pro

Gly

Ile

As p

Thr

Asn

Al a

Cy s

Hi s

Phe

Me t

Ly s

Cy s

Pro

Leu

65

70

75

80

Val

Ly s

Gly

Gin

Gin

Tyr

Asp

Al a

Ly s

Tyr

Thr

Trp

Asn

Va 1

Pro

Ly s

85

90

95

Ile

Al a

Pro

Lys

Ser

Glu

As n

Va 1

Va 1

Val

Thr

Va 1

Ly s

Leu

Val

G1 y

100

105

110

Asp

Asn

Gly

Val

Leu

Al a

Cy s

Al a

Ile

Al a

Thr

Hi s

Al a

Ly s

Ile

Arg

115

120

125

As p

129 (2) TUDNIVALÓK A 9. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 20 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 9. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr Asn Alá Cys Ser Ile Asn Gly Asn Alá Pro Alá Glu Ile Asp Leu 15 10 15

Arg Gin Met Arg (2) TUDNIVALÓK A 10. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 10. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Glu Ile Asp Leu Arg Gin Met Arg Thr Val Thr Pro Ile Arg Met Gin 15 10 15

Gly Gly Cys Gly Ser Cys Trp Alá Phe Ser Gly

25 (2) TUDNIVALÓK A 11. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Β1 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 11. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr 1	Val	Thr	Pro	Ile 5	Arg	Me t	Gin Gly	Gly 10	Cy s
Phe	Ser	Gly	Val	Al a	Al a	Thr	Glu	Ser	Al a	Tyr
			20					25

Gly Ser

Leu Alá (2) TUDNIVALÓK A 12. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 12. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val Alá Alá Thr Glu Ser Alá Tyr Leu Alá His 1 10 Asp Leu Alá Glu Gin (2) TUDNIVALÓK A 13. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 13. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s 1	Arg	Asn	G1 n	Ser 5	Leu Asp	Leu Alá Glu Gin 10
Al a	Ser	Gin	Hi s 20	Gly	Cy s

Glu Leu (2) TUDNIVALÓK A 14. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 14. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Glu Leu Val Asp Cys Alá	Ser Gin His Gly Cys
1 5	10
Pro Arg Gly Ile Glu
20

His Gly (2) TUDNIVALÓK A 15. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 15. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Cy s

Trp Alá 15

Arg Asn

Gin

Ser Leu 15

Va 1

Asp Cys 15

As p

Thr Ile 15

Asn

Gly Val 15

Gly 1	As p	Thr	Ile	Pro 5	Arg	Gly	Ile	G1 u	Tyr 10	Ile
Val	Gin	Glu	Ser	Tyr	Tyr	Arg	Tyr	Val	Al a	Arg
			20					25

Gin His

Glu (2) TUDNIVALÓK A 16. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 20aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Β1 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 16. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Glu Tyr Ile Gin His Asn Gly Val Val Gin Glu Ser Tyr Tyr 1 5 10

Val Alá Arg Glu 20 (2) TUDNIVALÓK A 17. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 17. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s 1	Asn	Gly	Val	Val 5	Gin	Glu	Ser	Tyr	Tyr Arg Tyr Val Alá 10
Gin	Ser	Cy s	Arg 20	Arg	Pro	Asn	Al a	Gin 25

Arg Glu 15 (2) TUDNIVALÓK A 18. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 19 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 18. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin Ser Cys Arg Arg Pro Asn Alá Gin Arg Phe Gly Ile Ser 1 5 10

Cys Gin Ile (2) TUDNIVALÓK A 19. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 19. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Arg Tyr 15

Asn Tyr 15

Arg 1	Phe	Gly	Ile	Ser 5	Asn Tyr Cys Gin	Ile Tyr Pro Pro Asn 10
Lys	Ile	Arg	Glu 20	Al a	Leu

Alá Asn 15 (2) TUDNIVALÓK A 20. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 24 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 20. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Tyr 1	Pro	Pro	Asn	Alá 5	Asn	Lys	Ile Arg	Glu Alá Leu Alá Gin 10
Ser	Al a	Ile	Al a 20	Val	Ile	Ile	Gly

Thr His 15 (2) TUDNIVALÓK A 21. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Bl (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 21. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Al a 1	Gin	Thr	Hi s	Ser 5	Al a	Ile	Al a	Val	Ile 10
As p	Al a	Phe	Arg 20	Hi s	Tyr	Asp	Gly	Arg 25	Thr

Ile Gly Ile Lys Asp Leu 15 (2) TUDNIVALÓK A 22. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 22. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ile 1	Lys	Asp	Leu	As p 5	Al a	Phe	Arg	Hi s	Tyr 10
Gin	Arg	Asp	Asn 20	Gly	Tyr	Gin	Pro	Asn 25	Tyr

Asp Gly Thr Arg Ile Ile 15 (2) TUDNIVALÓK A 23. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 23. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ile 1	Ile	Gin	Arg	As p 5	Asn	Gly Tyr Gin	Pro 10
Ile	Val	Gly	Tyr 20	Ser	Asn	Al a

Asn Tyr His Alá Val Asn 15 (2) TUDNIVALÓK A 24. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 24. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s 1	Al a	Va 1	As n	Ile 5	Val Gly Tyr Ser Asn 10
Trp	Ile	Val	Arg 20	Asn	Ser

Alá Gin Gly Val Asp Tyr 15 (2) TUDNIVALÓK A 25. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 24 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 25. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1	Gly	Val	As p	Tyr 5	Trp	Ile	Val	Arg Asn 10
Gly	As p	Asn	Gly 20	Tyr	Gly	Tyr	Phe

Ser Trp Asp Thr Asn Trp 15 (2) TUDNIVALÓK A 26. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Β1 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 26. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gly	As p	Asn	Gly	Tyr	Gly	Tyr	Phe	Al a	Alá Asn	Ile Asp Leu Met Met
1				5					10	15
Ile	Glu	Glu	Tyr	Pro	Tyr	Val	Val	Ile	Leu
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 27. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 27. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr 1

Asn

Al a

Cy s

Ser 5

Ile

Asn

Gly

Asn

Al a 10

Pro

Alá Glu

Ile Asp Leu 15

Arg

Gin

Me t

Arg 20

Thr

Va 1

Thr

Pro

Ile 25

Arg

Me t

G1 n

(2) TUDNIVALÓK A 28. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 24 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 28. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ser 1	Ile	Asn	Gly	Asn 5	Al a	Pro	Alá Glu	Ile 10	Asp Leu Arg Gin Met 15
Thr	Va 1	Thr	Pro	Ile	Arg	Me t	Gin
			20

(2) TUDNIVALÓK A 29. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 29. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Al a 1

Phe

Ser

Gly

Val 5

Al a

Al a

Thr

Glu

Ser 10

Al a

Tyr

Leu

Asn

Gin

Ser

Leu 20

As p

Leu

Al a

Glu

Gin 25

Glu

Leu

Val

Asp

(2) TUDNIVALÓK A 30. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 30. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val 1	Alá	Al a	Thr	Glu 5	Ser	Al a	Tyr	Leu	Alá His Arg Asn Gin Ser Leu 10 15
As p	Leu	Al a	Glu 20	Gin	Glu	Leu	Va 1	Asp 25

(2) TUDNIVALÓK A 31. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Β1 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 31. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Al a 1	Phe	Ser	Gly	Val 5	Al a	Alá	Thr	Glu	Ser Alá Tyr 10	Leu Alá His 15
Asn	Gin	Ser	Leu	As p	Leu	Al a	Glu	Gin
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 32. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 32. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val 1

Al a

Al a

Thr

Glu 5

Ser

Alá

Tyr

Leu

Alá 10

Hi s

Arg

Asn Gin

Ser Leu 15

As p

Leu

Al a

Glu

Gin

Glu

Leu

Va 1

As p

Cy s

Al a

Ser

Gin

20

25

(2) TUDNIVALÓK A 33. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 33. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gl u 1	Tyr	lle	Gin	Hi s 5	Asn	Gl y	Va 1	Va 1	Gin 10	Glu	Ser Tyr Tyr Arg Tyr 15
Val	Alá	Arg	Glu	Gin	Cys	Arg	Arg	Pro	Asn	Al a	Gin
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 34. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 34. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp

Thr

lle

Pro Arg

Gly

lle

Glu

Tyr

lle

Gin

Hi s

Asn

Gly Val Val

1

5

10

15

Gin

Glu

Ser

Tyr Tyr

Arg

Tyr

Va 1

Al a

Arg

Glu

Gin

Ser

20

25

(2) TUDNIVALÓK A 35. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 35. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1

lle

Tyr

Pro

Pro 5

Asn

Al a

Asn

Lys

lle 10

Arg

Glu

Al a

Leu Alá Gin 15

Thr

Hi s

Ser

Al a 20

lle

Al a

Va 1

lle

lle 25

Gly

lle

Ly s

As p

(2) TUDNIVALÓK A 36. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Bl (xi) SZEKVENCIALEIRAS: 36. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin	Ile	Tyr	Pro	Pro	Asn Alá Asn Lys	Ile
1				5		10
Thr	Hi s	Ser	Al a	Ile	Al a
			20

(2) TUDNIVALÓK A 37. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 37. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ile Ile Gly Ile Lys Asp Leu Asp Alá Phe Arg His Tyr Asp Gly Arg 5 10

5

Thr Ile Ile Gin Arg Asp Asn Gly Tyr Gin (2) TUDNIVALÓK A 38. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 38. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Arg Asp Asn Gly Tyr Gin Phe Asn Tyr His Alá Val Asn Ile Val Gly 5 10

Tyr Ser Asn Alá Gin Gly Val Asp Tyr (2) TUDNIVALÓK A 39. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 39. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Alá Gin Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val 5 10

5

Arg Asn Ser Trp Asp Thr Asn Trp Gly Asp Asn Gly Tyr (2) TUDNIVALÓK A 40. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 40. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asn Ile Val Gly Tyr Ser Asn Alá Gin Gly Val Asp Tyr Trp Ile Val 1 5 10

Arg Asn Ser Trp Asn Thr Asn (2) TUDNIVALÓK A 41. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Bl (xi) SZEKVENCIALEIRAS: 41. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Alá Asn His Glu Ile Lys Lys Val 15 10 15

Leu Val Pro Gly (2) TUDNIVALÓK A 42. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 42. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu Pro 5 10

5

Cys Ile Ile His Arg Gly Lys Pro Phe (2) TUDNIVALÓK A 43. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 43. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s

Gly

Ser

Glu

Pro

Cy s

Ile

Ile

Hi s

Arg

Gly

Ly s

Pro

Phe Gin

1

5

10

15

Glu

Al a

Va 1

Phe

G1 u

Al a

Asn

Gin

Asn

Thr

Ly s

Thr

Al a

20

25

(2) TUDNIVALÓK A 44. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 44. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin	Leu	Glu	Al a	Va 1	Phe	Glu	Al a	Asn	Gin Asn Thr	Lys Thr Alá
1				5					10	15
He	Glu	Ile	Lys	Al a	Ser	Ile	As p	Gly
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 45. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 45. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Lys Ile Glu Ile Lys Alá Ser Ile Asp Gly Leu Glu Val Asp Val Pro 15 10 15

Gly Ile Asp Pro Asn Alá Cys His Tyr Met Lys (2) TUDNIVALÓK A 46. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Β1 (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 46. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Leu 1	Glu	Val	As p	Val 5	Pro	Gly	11 e	Asp	Pro Asn Alá Cys His Tyr Met 10 15
Ly s	Cys	Pro	Leu	Va 1	Lys	Gly	Gin	Gin	Tyr
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 47. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 47. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Cys 1	Pro	Leu	Va 1	Ly s 5	Gly	Gin	Gin	Tyr	Asp 10	11 e Lys	Tyr Thr Trp Asn 15
Val	Pro	Lys	I le	Al a	Pro	Lys	Ser	Glu	Asn	Val
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 48. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 48. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp 1	I le	Lys	Tyr	Thr 5	Trp	Asn	Val	Pro	Ly s 10	I le Alá Pro Lys Ser Glu 15
Asn	Va 1	Val	Val 20	Thr	Val	Ly s	Va 1	Me t 25	Gly

(2) TUDNIVALÓK A 49. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 49. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Va 1 1	Val	Thr Val	Lys Val Met 5	Gly Asp Asp Gly Val 10	Leu Alá Cys Alá 15
I le	Al a	Thr	Hi s	Al a	Lys	11 e	Arg	As p
			20					25

(2) TUDNIVALÓK AZ 50. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 50. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

As p	Gin	Val	As p	Val	Lys	Asp	Cys	Al a	Asn Hi s Glu	I1e Lys Lys Val
1				5					10	15
Leu	Val	Pro	Gly	Cy s	Hi s	Gly	Ser	Glu	Pro
			20					25

(2) TUDNIVALÓK AZ 51. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Bl (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 51. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gin Val Asp Val	Lys	Asp	Glu	Al a	Asn His Glu	11 e Lys Lys Val
1				5					10	15
Leu	Val	Pro	Gly	Cy s	H i s	Gly	Se r	Glu	Pro
			20					25

(2) TUDNIVALÓK AZ 52. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 52. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp 1	Gin	Val	Asp	Va 1 5	Ly s	Asp	Ser	Al a	Asn His Glu 10	I1e Lys Lys Val 15
Leu	Va 1	Pro	Gly	Cys	Hi s	Gly	Ser	Glu	Pro
			20					25

(2) TUDNIVALÓK AZ 53. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 53. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp 1	Gin	Val	Asp	Va 1 5	Lys	Asp	Cy s	Al a	Asn His Glu 10	I1e Lys Lys Val 15
Leu	Va 1	Pro	Gly 20	Glu	Hi s	Gly	Ser	G1 u 25	Pro

(2) TUDNIVALÓK AZ 54. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 54. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp	Gin	Val	Asp	Va 1	Ly s	As p	Cy s	Al a	Asn His Glu	11e Lys Lys Val
1				5					10	15
Leu	Val	Pro	Gly	Ser	Hi s	Gly	Ser	Glu	Pro
			20					25

(2) TUDNIVALÓK AZ 55. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 55. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp	Gin	Val	Asp	Val	Ly s	Asp	Glu	Al a	Asn His Glu	Ile Lys Lys Val
1				5					10	1 5
Leu	Va 1	Pro	Gly	Glu	Hi s	Gly	Ser	Glu	Pro
			20					25

(2) TUDNIVALÓK AZ 56. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Bl (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 56. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp	Gin	Val	Asp	Val	Lys	Asp	Ser	Al a	Asn His Glu	Ile Lys Lys
1				5					10	15
Leu	Va 1	Pro	Gly	Ser	Hi s	Gly	Ser	Glu	Pro
			20					25

Val (2) TUDNIVALÓK AZ 57. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 20 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 57. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Glu Alá Asn Hi

Glu Ile Lys Lys

Val

Leu Val Pro Gly 20 (2) TUDNIVALÓK AZ 58. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 20 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 58. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gin Val

Asp Val Lys Asp Ser Alá Asn His

Glu

Ile Lys Lys

Va 1

Leu Val Pro Gly 20 (2) TUDNIVALÓK AZ 59. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 16 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 59. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Cys His Gly Ser Glu 15 10 15 (2) TUDNIVALÓK A 60. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 16 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 60. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Glu His Gly Ser Glu 15 10 15 (2) TUDNIVALÓK A 61. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 16 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 61. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

His Glu Ile Lys Lys Val Leu Val Pro Gly Ser His Gly Ser Glu 15 10 15

Pro

Pro

Pro

HU 220 462 Β1 (2) TUDNIVALÓK A 62. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 62. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Lys 1

Pro

Phe

Gin

Leu 5

Glu

Alá

Val

Phe

Glu 10

Al a

Asn Gin Asn

Thr 15

Thr

Al a

Lys

Ile 20

Glu

Ile

Ly s

Al a

Ser 25

I le

As p

Gly

Lys (2) TUDNIVALÓK A 63. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 63. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1

Leu Glu Alá

Val 5

Phe

Glu

Al a

Asn

Gin 10

As n

Thr

Lys Thr Alá 15

Ile

Glu

Ile

Lys

Al a

Ser

Ile

Asp

Gly

Leu

Glu

Val

20

25

Lys (2) TUDNIVALÓK A 64. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 64. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Phe	Glu	Al a	Asn	Gin	Asn	Thr	Ly s	Thr	Al a	Lys Ile Glu	Ile Lys
1				5					10		15
Ser	Ile	Asp	Gly	Leu	Glu	Val	As p	Val	Pro	Gly
			20					25

Al a (2) TUDNIVALÓK A 65. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 65. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1	Asn	Thr	Lys	Thr 5	Al a	Ly s	Ile Glu Ile Lys Alá Ser 10	Ile Asp 15
Leu	Glu	Val	Asp	Val	Pro	Gly
			20

Gly (2) TUDNIVALÓK A 66. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 66. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Pro Leu 1

Pro Lys

Val Lys

Ile Alá 20

Gly Gin 5

Pro Lys

Gin Tyr

Ser Glu

Asp Ile 10

Asn Val 25

Lys Tyr

Thr Trp Asn 15

Val

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓK A 67. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 67. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Pro	Leu	Val	Lys	Gly	Gin	Gin	Tyr	As p	Ile Lys Tyr Thr Tyr
1				5					10
Pro	Lys	Ile	Alá	Pro	Ly s	Ser	Glu	Asn	Val
			20					25

Asn

Val

Thr (2) TUDNIVALÓK A 68. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 13 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 68. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Lys Ser Glu Asn Val Val Val Thr Val Lys Val Met Gly 1 5 10 (2) TUDNIVALÓK A 69. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 69. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val 1 5 10

Thr His Alá Lys Ile Arg Asp (2) TUDNIVALÓK A 70. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 70. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr Val Lys Val Met Gly Asp Asp Gly Val Leu Alá Glu Alá 1 5 10

Thr His Alá Lys Ile Arg Asp (2) TUDNIVALÓK A 71. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 71. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr Val Lys Val Leu Gly Asp Asp Gly Val 5 10

Lys I1e Arg Asp

Leu Alá Cys Alá

Ile

Al a

Ile

Alá

Ile

Alá

Leu Alá Ser Alá

His Alá

HU 220 462 Β1 (2) TUDNIVALÓK A 72. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 72. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr 1	Ser	Al a	Cys	Arg 5	Ile Asn Ser Val Asn Val 10	Pro Ser Glu Leu 15
Leu	Arg	Ser	Leu	Arg
			20

Asp (2) TUDNIVALÓK A 73. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 73. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Glu	Leu	Asp	Leu	Arg	Ser	Leu	Arg	Thr	Val	Thr Pro	Ile Arg Me t
1				5					10		15
Gly	Gly	Cy s	Gly	Ser	Cy s	Trp	Al a	Phe	Ser	Gly
			20					25

Gin (2) TUDNIVALÓK A 74. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 74. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr 1

Val

Thr

Pro

Ile 5

Arg

Me t

Gin

Gly

Gly 10

Cys

Gly

Ser Cys

Trp 15

Phe

Ser

G1 y

Val 20

Al a

Al a

Thr

Glu

Ser 25

Al a

Tyr

Leu

Alá

Alá (2) TUDNIVALÓK A 75. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 75. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val 1	Al a	Alá	Thr	Glu Ser Alá Tyr Leu Alá Tyr Arg Asn Thr 5 10	Ser 15
Asp	Leu	Ser	Glu 20	Gin

Leu (2) TUDNIVALÓK A 76. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-tenninális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 76. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Tyr	Arg	Asn	Thr	Ser	Leu Asp Leu Ser Glu Gin Glu	Leu Val Asp
1				5	10	15
Al a	Ser	Gin	Hi s	Gly	Cy s
			20

Cy s

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓK A 77. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: ΊΊ. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Glu 1	Leu	Val	Asp	Cys Ala 5	Ser Gin His Gly 10
Pro	Arg	Gly	Ile 20	Glu

(2) TUDNIVALÓK A 78. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris

Cys His Gly Asp Thr Ile 15 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 78. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gly Asp Thr Ile Pro Arg Gly Ile Glu Tyr

Val Glu Glu Arg Ser Tyr Pro Tyr Val Ala

Ile Gin Gin Asn Gly Val 15

Arg Glu (2) TUDNIVALÓK A 79. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-teiminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 79. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1	As n	Gly	Val	Val 5	Glu	Glu	Arg	Ser	Tyr 10
Gin	Arg	Cys	Arg 20	Arg	Pro	Asn	Ser	Gin 25

(2) TUDNIVALÓK A 80. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 19 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris

Pro Tyr Val Ala Arg Glu 15 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 80. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin Arg Cys Arg Arg Pro Asn Ser Gin His 1 5 10

Cys Gin Ile (2) TUDNIVALÓK A 81. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 81. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Tyr Gly Ile Ser Asn Tyr 15

Hi s 1	Tyr	Gly	Ile	Ser 5	Asn Tyr Cys Gin	Ile 10
Gin	Ile	Arg	Glu 20	Al a	Leu

Tyr Pro Pro Asp Val Lys 15

HU 220 462 Β1 (2) TUDNIVALÓK A 82. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 24 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 82. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Tyr Pro Pro Asp Val Lys Gin Ile Arg Glu 1 5 10

Thr Alá Ile Alá Val Ile Ile Gly (2) TUDNIVALÓK A 83. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 83. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Alá Leu Phe Gin Thr His 15

Thr	GI n	Thr	Hi s	Thr	Al a	Ile	Al a	Val	Ile
1				5					10
Arg	Al a	Phe	Gin	Hi s	Tyr	Asp	Gly	Arg	Thr
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 84. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris

Ile Gly Ile Lys Asp Leu 15 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 84. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ile 1	Lys	Asp	Leu	Arg 5	Al a	Phe	Gin	Hi s	Tyr 10
Gin	Hi s	Asp	Asn 20	Gly	Tyr	Gin	Pro	Asn 25	Tyr

Asp Gly Arg Thr Ile Ile 15 (2) TUDNIVALÓK A 85. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 15 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 85. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gly Arg Thr Ile Ile Gin His Asp Asn 1 5 10 (2) TUDNIVALÓK A 86. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris

Gly Tyr Gin Pro Asn 15 (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 86. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ile Ile Gin His Asp Asn Gly Tyr Gin Pro 1 5 10

Ile Val Gly Tyr Gly Ser Thr

Asn Tyr His Alá Val Asn 15

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓK A 87. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 87. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s 1	Al a	Val	Asn	Ile 5	Val Gly Tyr Gly	Ser Thr Gin Gly Asp Asp Tyr
10	15
Trp	Ile	Val	Arg	Asn	Ser
			20

(2) TUDNIVALÓK A 88. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 24 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 88. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin Gly Asp Asp Tyr	Trp	Ile	Val	Arg Asn	Ser Trp Asp Thr Thr
1				5				10	15
Gly	Asp	Ser	Gly	Tyr	Gly	Tyr	Phe
			20

(2) TUDNIVALÓK A 89. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 89. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gly 1	As p	Ser	Gly	Tyr 5	Gly	Tyr	Phe	Gin	Alá Gly Asn Asn Leu Met Met
10	15
Ile	Glu	Gin	Tyr	Pro	Tyr	Val	Val	Ile	Me t
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 90. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 90. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr 1

Ser

Al a

Cy s

Arg 5

Ile

Asn

Ser

Val

Asn 10

Va 1

Pro

Ser Glu

Leu Asp 15

Leu

Arg

Ser

Leu 20

Arg

Thr

Val

Thr

Pro 25

Ile

Arg

Me t

Gin

(2) TUDNIVALÓK A 91. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 91. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Arg 1	Ile	Asn	Ser	Val 5	Asn	Val	Pro	Ser	Glu Leu Asp Leu Arg Ser Leu
10	15
Arg	Thr	Val	Thr	Pro	Ile	Arg	Me t	Gin
			20					25

HU 220 462 Β1 (2) TUDNIVALÓK A 92. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 92. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Al a 1

Phe

Ser

Gly

Val 5

Al a

Al a

Thr

Glu

Ser 10

Al a

Tyr

Leu Alá

Tyr 15

Asn

Thr

Ser

Leu

As p

Leu

Ser

Glu

Gin

Glu

Leu

Va 1

As p

20

25

(2) TUDNIVALÓK A 93. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 93. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val 1	Al a	Al a	Thr	Glu 5	Ser	Al a	Tyr	Leu	Alá Tyr Arg Asn Thr 10	Ser Leu 15
As p	Leu	Ser	Glu	Gin	Glu	Leu	Va 1	As p
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 94. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 94. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val 1

Al a

Al a

Thr

Glu 5

Ser

Al a

Tyr

Leu

Al a 10

Tyr

Arg

Asn Thr

Ser Leu 15

Asp

Leu

Ser

Glu 20

Gin

Glu

Leu

Val

Asp 25

Cy s

Al a

Ser

Gin

(2) TUDNIVALÓK A 95. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 95. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Glu 1

Tyr

Ile

Gin

Gin 5

Asn

Gly

Val

Va 1

Glu 10

Glu Arg

Ser Tyr

Pro 15

Val

Al a

Arg

Glu

Gin

Arg

Cy s

Arg

Arg

Pro

Asn

Ser

Gin

20

25

(2) TUDNIVALÓK A 96. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 96. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp 1

Thr

Ile

Pro

Arg 5

Gly

Ile

Glu

Tyr

Ile 10

Gin

Gin

Asn Gly

Val Val 15

Glu

Glu

Arg

Ser 20

Tyr

Pro

Tyr

Va 1

Al a 25

Arg

Glu

Gin

Arg

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓK A 97. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 97. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1

Ile

Tyr

Pro

Pro 5

Asp

Val

Ly s

Gin

Ile 10

Arg

Glu

Al a

Thr

Hi s

Thr

Al a 20

Ile

Al a

Val

Ile

Ile 25

Gly

Ile

Ly s

Asp

(2) TUDNIVALÓK A 98. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 98. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1	Ile	Tyr	Pro	Pro 5	Asp Val	Lys Gin Ile Arg Glu Alá Leu Thr Gin
10	15
Thr	Hi s	Thr	Al a	Ile	Al a
			20

(2) TUDNIVALÓK A 99. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 99. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ile 1	Ile	Gly	I le	Ly s 5	Asp	Leu	Arg	Al a	Phe Gin His Tyr Asp Gly Arg 10 15
Thr	Ile	Ile	Gin 20	Hi s	Asp	As n	Gly	Tyr 25	Gin

(2) TUDNIVALÓKA 100. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 100. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s 1	As p	Asn	Gly	Tyr 5	Gin	Pro	Asn	Tyr	His Alá Val Asn 10	Ile Val 15
Tyr	Gly	Ser	Thr	Gin	Gly	Asp	As p	Tyr
			20				25

(2) TUDNIVALÓK A 101. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 101. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asn 1

Ile

Val

Gly

Tyr 5

Gly

Ser

Thr

Gin

Gly 10

Asp

Asp

Tyr Trp

Ile Val 15

Arg

Asn

Ser

Trp

As p

Thr

Thr

Trp

Gly

Asp

Ser

Gly

Tyr

20

25

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓK A 102. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 23 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 102. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asn 1	Ile	Val	Gly	Tyr 5	Gly	Ser	Thr Gin Gly Asp Asp 10
Arg	Asn	Ser	Trp 20	Asp	Thr	Thr

(2) TUDNIVALÓK A 103. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 20 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 103. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Gin Val Asp Val Lys Asp Cys Alá Asn Asn Glu Ile 1 5 10

Me t Val Asp Gly 20 (2) TUDNIVALÓK A 104. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 104. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asn 1	Glu	Ile	Ly s	Ly s 5	Val	Me t	Val	Asp	Gly Cys His Gly 10
Cys	Ile	Ile	Hi s 20	Arg	Gly	Lys	Pro	Phe 25

Ser Asp Pro 15 (2) TUDNIVALÓK A 105. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

(xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 105. SZÁMÚ SZEKVENCIA:
His Gly Ser Asp Pro Cys Ile Ile His	Arg	Gly	Lys	Pro
1 5	10
Glu Alá Leu Phe Asp Alá Asn Gin Asn	Thr	Lys	Thr	Al a
20 25

Phe Thr Leu 15 (2) TUDNIVALÓK A 106. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 19 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 106. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

His Arg Gly Lys Pro Phe Thr Leu Glu Alá Leu Phe Asp 1 5 10

Asn Thr Lys

Trp Ile Val 15

Lys Lys Val 15

Alá Asn Gin 15

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓKA 107. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 107. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr 1	Le u	Glu Alá	Leu 5	Phe	Asp Alá	Asn	Gin Asn Thr 10	Lys Thr Alá 15
Ile	Glu	Ile	Ly s	Al a	Ser	Leu	As p	Gly
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 108. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 108. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Gin 1	Asn	Thr	Lys	Thr 5	Al a	Lys	Ile	Glu	Ile Lys Alá 10	Ser Leu Asp Gly 15
Leu	Glu	Ile	Asp	Val	Pro	Gly	Ile	Asp	Thr
			20					25

(2) TUDNIVALÓKA 109. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 109. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Ly s	Ile	Glu	Ile	Ly s	Alá	Ser	Leu	Asp	Gly	Leu Glu	I 1e Asp Va1 Pro
1				5					10		15
Gly	Ile	Asp	Thr	As n	Al a	Cy s	Hi s	Phe	Me t	Ly s
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 110. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 110. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Leu 1	Glu	Ile	Asp	Va 1 5	Pro	Gly	Ile	Asp	Thr Asn Alá Cys His Phe Met 10 15
Lys	Cys	Pro	Leu	Val	Lys	Gly	Gl n	Gin	Tyr
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 111. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG : 27 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 111. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Cys 1	Pro Leu Val	Ly s 5	Gly	Gin Gin	Tyr	Asp 10	Alá Lys	Tyr Thr Trp Asn 15
Val	Pro	Ly s	I 1 e	Al a	Pro	Lys	Ser	Glu	Asn	Va 1
			20					25

HU 220 462 Bl (2) TUDNIVALÓK A 112. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 26 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 112. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp 1	Al a	Lys	Tyr	Thr 5	Trp	Asn	Val	Pro	Lys 10	I le Alá Pro Lys Ser Glu 15
Asn	Val	Val	Va 1	Thr	Val	Ly s	Leu	Val	Gly
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 113. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 35 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 113. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Pro 1

Ly s

I le

Al a

Pro 5

Lys

Ser

Glu

Asn

Val 10

Va 1

Val

Thr

Val

Lys 15

Leu

Val

G1 y

Asp

Asn

Gly

Val

Leu

Al a

Cys

Al a

I le

Alá

Thr

Hi s

Al a

Lys

20

25

30

1 le

Arg

Asp

35

(2) TUDNIVALÓK A 114. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 25 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 114. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Val 1	Va 1	Thr	Va 1	Lys 5	Leu Val	Gly	Asp	Asn Gly Val 10	Leu Alá Cys Alá 15
I le	Al a	Thr	Hi s	Al a	Ly s	I le	Arg	As p
			20					25

(2) TUDNIVALÓK A 115. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 115. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Lys 1

Pro

Phe

Thr

Leu Glu 5

Al a

Leu

Phe

Asp 10

Al a

Asn Gin Asn

Thr 15

Thr

Al a

Lys

11 e

Glu

I le

Lys

Al a

Ser

Leu

Asp

Gly

20

25

(2) TUDNIVALÓK A 116. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 28 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D) ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális

HU 220 462 Bl (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 116. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Thr Leu Glu Alá Leu Phe Asp Alá Asn Gin Asn Thr Lys Thr Alá Lys 15 10 15

Ile Glu Ile Lys Alá Ser Leu Asp Gly Leu Glu Ile

25 (2) TUDNIVALÓK A 117. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 22 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 117. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

His Arg Asn Gin Ser Leu Asp Leu Alá Glu Gin Asp Leu Val Asp Cys 15 10 15

Alá Ser Gin His Gly Cys (2) TUDNIVALÓK A 118. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 21 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 118. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Asp Leu Val Asp Cys Alá Ser Gin His Gly Cys His Gly Asp Thr Ile 15 10 15

Pro Arg Gly Ile Glu (2) TUDNIVALÓK A 119. SZÁMÚ SZEKVENCIÁHOZ (i) SZEKVENCIAJELLEMZŐK:

(A) HOSSZÚSÁG: 29 aminosav (B) TÍPUS: aminosav (D)ALAK: lineáris (ii) MOLEKULA TÍPUSA: peptid (v) FRAGMENS TÍPUSA: N-terminális (xi) SZEKVENCIALEÍRÁS: 119. SZÁMÚ SZEKVENCIA:

Hi s 1

Gly

Ser

Glu

Pro 5

Cys

Ile

Ile

Hi s

Arg 10

Gly

Lys

Pro

Phe Gin Leu 15

Glu

Al a

Val

Phe

Glu

Al a

Va 1

G1 n

Asn

Thr

Lys

Thr

Al a

20

25

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

Claims (63)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. A Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjéből származó izolált peptid, azzal jellemezve, hogy a proteinallergén legalább egy T-sejt-epitópját tartalmazza, pozitivitási indexe legalább 150, átlagos T-sejtstimulációs indexe pedig legalább 4,0.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett peptid a DP 1-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia); a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia); a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 1-23.2 (34. számú szekvencia); a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia) és a DP 1-26,1 (37. számú szekvencia) peptidek közül származik.
3. 3. Az 1. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett peptid a 3. és 4. ábrán bemutatott DP 1-21.2, DP 1-23.1, DP 1-26.1, DP II-20.6, DP 11-22, DP II—25.2 és DF 1-22.2 peptidek közül származik.
4. 4. Az 1. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy a proteinallergénre érzékeny egyénekben gyakorlatilag nem köti a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjére specifikus immunglobulin E-t, vagy ha a peptid köti az immunglobulin E-t, az ilyen kötődés nem okozza mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását és mértéke lényegesen kisebb, mint a kiindulási proteinallergén esetében.
5. 5. Az 1. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy legalább két T-sejt-epitópot tartalmaz.
6. 6. Egy Dér ρ I peptid vagy részlete, amely legalább egy Dér ρ I T-sejt-epitópot tartalmaz, azzal jellemezve, hogy szerkezete a

   HU 220 462 Bl

   DP 1-1 (9. számú szekvencia);

   DP 1-2 (10. számú szekvencia);

   DP 1-3 (11. számú szekvencia);

   DP 1-4 (12. számú szekvencia);

   DP I—11.1 (13. számú szekvencia);

   DP 1-12.1 (14. számú szekvencia);

   DP 1-5 (15. számú szekvencia);

   DP 1-13 (17. számú szekvencia);

   DP 1-14 (18. számú szekvencia);

   DP 1-15 (19. számú szekvencia);

   DP 1-6.1 (20. számú szekvencia);

   DP 1-7.1 (21. számú szekvencia);

   DP 1-8 (22. számú szekvencia);

   DP 1-9 (23. számú szekvencia);

   DP 1-16 (24. számú szekvencia);

   DP I—10 (25. számú szekvencia);

   DP 1-17 (26. számú szekvencia);

   DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

   DP 1-21.2 (28. számú szekvencia);

   DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

   DP 1-22.2 (30. számú szekvencia);

   DP 1-22.3 (31. számú szekvencia);

   DP 1-22.4 (32. számú szekvencia);

   DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

   DP 1-23.2 (34. számú szekvencia);

   DP 1-25.1 (35. számú szekvencia);

   DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

   DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

   DP 1-27.1 (38. számú szekvencia);

   DP 1-28.1 (39. számú szekvencia) vagy

   DP 1-28.2 (40. számú szekvencia), peptid vagy részlete szerkezetével azonos, és a peptidrészlet a megfelelő peptid 5. és 13. ábrán bemutatott T-sejt-stimulációs indexével megegyező vagy annál nagyobb stimulációs indexszel rendelkezik.
7. 7. A 6. igénypont szerinti izolált peptid részlete, azzal jellemezve, hogy legalább 4,0 átlagos T-sejt-stimulációs indexértékkel rendelkezik.
8. 8. A 6. igénypont szerinti izolált peptid részlete, azzal jellemezve, hogy a Dér p I-re érzékeny egyénekben gyakorlatilag nem köti a Dér p I-re specifikus immunglobulin E-t, vagy ha köti az immunglobulin E-t, az ilyen kötődés a Dér p I-re érzékeny személyben nem okozza mediátorok hízósejtjeiből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását.
9. 9. A 6. igénypont szerinti izolált peptid részlete, azzal jellemezve, hogy legalább 15 aminosavat tartalmaz.
10. 10. Izolált nukleinsav, azzal jellemezve, hogy a 6. igénypont szerinti peptidet vagy részletét kódoló szekvenciával vagy e szekvencia funkcionális megfelelőjével rendelkezik, immunológiailag keresztreaktív a 6. igénypont szerinti peptidre vagy részletére specifikus antitestekkel és immunológiailag keresztreaktív, a 6. igénypont szerinti peptidre vagy részletére reaktív Tsejtekkel.
11. 11. Izolált Dér ρ I peptid, azzal jellemezve, hogy az alábbi peptidek valamelyikének aminosavszekvenciájával;

    DP 1-1 (9. számú szekvencia);

    DP 1-2 (10. számú szekvencia);

    DP 1-3 (11. számú szekvencia);

    DP 1-4 (12. számú szekvencia);

    DPI-11.1(13. számú szekvencia);

    DP 1-12.1 (14. számú szekvencia);

    DP 1-5 (15. számú szekvencia);

    DP 1-13 (17. számú szekvencia);

    DP 1-14 (18. számú szekvencia);

    DP 1-15 (19. számú szekvencia);

    DP 1-6.1 (20. számú szekvencia);

    DP 1-7.1 (21. számú szekvencia);

    DP 1-8 (22. számú szekvencia);

    DP 1-9 (23. számú szekvencia);

    DP 1-16 (24. számú szekvencia);

    DP I—10 (25. számú szekvencia);

    DP 1-17 (26. számú szekvencia);

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

    DP 1-21.2 (28. számú szekvencia);

    DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    DP 1-22.2 (30. számú szekvencia);

    DP 1-22.3 (31. számú szekvencia);

    DP 1-22.4 (32. számú szekvencia);

    DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    DP 1-23.2 (34. számú szekvencia);

    DP 1-25.1 (35. számú szekvencia);

    DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    DP 1-27.1 (38. számú szekvencia);

    DP 1-28.1 (39. számú szekvencia);

    DP 1-28.2 (40. számú szekvencia) és

    DP 1-5.1 (16. számú szekvencia), előnyösen az a)-p) peptid szekvenciájával rendelkezik.
12. 12. Izolált nukleinsav, azzal jellemezve, hogy all. igénypont szerinti peptidet vagy részletét kódoló szekvenciával vagy e szekvencia funkcionális megfelelőjével rendelkezik.
13. 13. A 11. igénypont szerinti peptid, azzal jellemezve, hogy a 28. ábrán bemutatott DP 1-23.1, DP 1-23.1.2, DP 1-23.1.3 és DP 1-23.1.4 peptidek egyikéből származik.
14. 14. A 11. igénypont szerinti peptid vagy részlete, azzal jellemezve, hogy a Dér p I-r e érzékeny egyénekben gyakorlatilag nem köti a Dér p I-re specifikus immunglobulin E-t, vagy ha köti az említett immunglobulin E-t, az ilyen kötődés nem okozza mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását.
15. 15. Izolált peptid, azzal jellemezve, hogy legalább két olyan régiót tartalmaz, amely régiók mindegyike tartalmaz legalább egy, Dermatophagoides proteinallergénből származó T-sejt-epitópot, s amely régiók azonos vagy különböző Dermatophagoides proteinallergénekből származnak, továbbá amely régiók mindegyike a következő peptidek valamelyike aminosavszekvenciáját vagy ennek epitóptartalmú részletét tartalmazza:

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

    DP 1-21.2 (28. számú szekvencia);

    DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    DP 1-22.2 (30. számú szekvencia);

    HU 220 462 Β1

    DP 1-22.3 (31. számú szekvencia); DP 1-22.4 (32. számú szekvencia); DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); DP 1-23.2 (34. számú szekvencia); DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); DP 1-26.1 (37. számú szekvencia); DP 1-27.1 (38. számú szekvencia); DP 1-28.1 (39. számú szekvencia); DP 1-28.2 (40. számú szekvencia); DP 1-1 (9. számú szekvencia);

    DF1-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); DF 1-22.2 (93. számú szekvencia); DF 1-22.4 (94. számú szekvencia); DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); DF 1-23.2 (96. számú szekvencia); DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); DF 1-25.2 (98. számú szekvencia); DF 1-26.1 (99. számú szekvencia); DF 1-27.1 (100. számú szekvencia); DF 1-28.1 (101. számú szekvencia); DP 1-28.2 (102. számú szekvencia); DP 11-20 (50. számú szekvencia);

    DP II-20.1 (51. számú szekvencia); DP II—20.2 (52. számú szekvencia); DP II—20.3 (53. számú szekvencia); DP II—20.4 (54. számú szekvencia); DP II-20.5 (55. számú szekvencia); DP II—20.6 (56. számú szekvencia); DP II-1 (41. számú szekvencia);

    DP II-1.1 (57. számú szekvencia); DP II-1.2 (58. számú szekvencia); DP II—2.1 (59. számú szekvencia); DP II-2.2 (60. számú szekvencia); DP II—2.3 (61. számú szekvencia); DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11—22 (63. számú szekvencia);

    DP 11-26 (64. számú szekvencia);

    DP II—26.1 (65. számú szekvencia); DP H-23 (66. számú szekvencia);

    DP 11-23.1 (67. számú szekvencia); DP ΙΙ-24 (68. számú szekvencia);

    DP 11-25 (69. számú szekvencia);

    DP 11-25.1 (70. számú szekvencia); DP II-25.2 (71. számú szekvencia); DF II— 1 (103. számú szekvencia);

    DF II—2 (104. számú szekvencia);

    DF 11-13.1 (105. számú szekvencia); DF II—3.1 (106. számú szekvencia); DF II—4.5 (107. számú szekvencia); DF II—4.3 (108. számú szekvencia); DF 11-15 (109. számú szekvencia); DF 11-16 (110. számú szekvencia); DF ΙΙ-17 (111. számú szekvencia); DF 11-18 (112. számú szekvencia); DF 11-19 (113. számú szekvencia); DF II—19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-21 (115. számú szekvencia);

    DF 11-22 (116. számú szekvencia).
16. 16. A 15. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett régiók a

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

    DP 1-21.2 (28. számú szekvencia);

    DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    DP 1-28.1 (39. számú szekvencia);

    DP 1-1 (9. számú szekvencia);

    DF I-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia);

    DF 1-22.1 (92. számú szekvencia);

    DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    DP II-1 (41. számú szekvencia);

    DP II-1.2 (58. számú szekvencia);

    DP II—2.0 (56. számú szekvencia);

    DP ΙΙ-20.3 (53. számú szekvencia);

    DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11—22 (63. számú szekvencia);

    DP II-25 (69. számú szekvencia);

    DP 11-25.2 (71. számú szekvencia);

    DF II—2 (104. számú szekvencia);

    DF ΙΙ-4.5 (107. számú szekvencia);

    DF 11-15 (109. számú szekvencia);

    DF 11-17 (111. számú szekvencia);

    DF II-19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia) vagy

    DP 11-20.6 (56. számú szekvencia); peptidek valamelyikének aminosavszekvenciáját vagy epitóptartalmú részletét tartalmazzák.
17. 17. A 15. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett régiók a 3. és 4. ábrán bemutatott

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

    DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    DP II—20.6 (56. számú szekvencia);

    DP 11-22 (63. számú szekvencia);

    DP II—25.2 (71. számú szekvencia) és

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia) peptidek valamelyikének aminosavszekvenciáját vagy epitóptartalmú részletét tartalmazzák.
18. 18. A 15. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett peptid a következő régiókombinációk valamelyikét tartalmazza:

    DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP

    1-25.1 (35. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP

    I-1 (9. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP

    1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-28.1 (39. számú szekvencia);

    HU 220 462 Β1 a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia) és a DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    a DF 1-1 (72. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-1 (72. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DF

    I- 22.1 (92. számú szekvencia);

    a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia) és a DF 1-1 (72. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia) és a DP

    II— 25.2 (71. számú szekvencia);

    a DP 11—22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP ΙΙ-25.2 (71. számú szekvencia), DP II—20.6. (56. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP

    II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP II—20.6 (56.

    számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a

    DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP ΙΙ-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-1 (9. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF

    II—2 (104. számú szekvencia); a DF II-4.5 (107. számú szekvencia) és a DF II-19.1 (114. számú szekvencia);

    a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF

    II-2 (104. számú szekvencia) és a DF

    II—19.1 (114. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF II-2 (104. számú szekvencia) és a DF ΙΙ-9 (86. számú szekvencia);

    a DF II-45 (107. számú szekvencia) és a DF

    I- 21.1 (90. számú szekvencia);

    a DF 11-4,5 (107. számú szekvencia), a DP

    II- 22 (63. számú szekvencia) és a DP 11-25.2 (71. számú szekvencia) vagy a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF

    II—2 (104. számú szekvencia) és a DP II-22 (63. számú szekvencia).
19. 19. A 15. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett peptid a régiókat a következő kombinációban tartalmazza; DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), DP 1-23.1 (33. számú szekvencia), DP

    I- 26.1 (37. számú szekvencia), DP II—20.6 (56. számú szekvencia), DP 11-22 (63. számú szekvencia), DP

    II— 25.2 (71. számú szekvencia) és DF 1-22.2 (93. számú szekvencia).
20. 20. Izolált nukleinsav, azzal jellemezve, hogy a 17. igénypont szerinti peptidet vagy epitóptartalmú részletét kódoló szekvenciával vagy e nukleinsavszekvencia funkcionális megfelelőjével rendelkezik.
21. 21. Izolált peptid, azzal jellemezve, hogy a 20. igénypont szerinti nukleinsavval transzformált gazdasejtben állítjuk elő.
22. 22. A 15. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az aminosavszekvenciákat specifikus szekvenciális elrendeződésben tartalmazza, a következők szerint:

    DP 1-26.1, DP II-25.2, DF 1-22, DP II-20.6 és

    DP 1-21.2 (25. ábra);

    DP II—25.2, DF 1-22.2, DP 1-23.1, DP 11-22, DP

    I- 26.1, DP 1-21.2 és DP II-20.6 (26. ábra), valamint

    DP II-25.2, DP 1-21.1, DP 1-26.1, DP 11-22, DP

    II— 20.6 és DF 1-22.2 (27. ábra).
23. 23. A 15. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy az említett régiók a

    HU 220 462 Bl

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia); DP 1-21.2 (28. számú szekvencia); DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); DP 1-22.2 (30. számú szekvencia); DP 1-22.3 (31. számú szekvencia); DP 1-22.4 (32. számú szekvencia); DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); DP 1-23.2 (34. számú szekvencia); DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); DP 1-26.1 (37. számú szekvencia); DP 1-27.1 (38. számú szekvencia); DP 1-28.1 (39. számú szekvencia); DP 1-28.2 (40. számú szekvencia); DP I-1 (9. számú szekvencia);

    DF 1-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); DF 1-22.2 (93. számú szekvencia); DF 1-22.4 (94. számú szekvencia); DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); DF 1-23.2 (96. számú szekvencia); DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); DF 1-25.2 (98. számú szekvencia); DF 1-26.1 (99. számú szekvencia); DF 1-27.1 (100. számú szekvencia); DF 1-28.1 (101. számú szekvencia); DF 1-28.2 (102. számú szekvencia); DP 11—20 (50. számú szekvencia);

    DP II—20.1 (51. számú szekvencia); DP II—20.2 (52. számú szekvencia); DP II—20.3 (53. számú szekvencia); DP II—20.4 (54. számú szekvencia); DP II—20.5 (55. számú szekvencia); DP II—20.6 (56. számú szekvencia); DP Π-1 (41. számú szekvencia);

    DP II-1.1 (57. számú szekvencia); DP II-1.2 (58. számú szekvencia); DP ΙΙ-2.1 (59. számú szekvencia); DP II—2.2 (60. számú szekvencia); DP II—2.3 (61. számú szekvencia); DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11-22 (63. számú szekvencia);

    DP 11-26 (64. számú szekvencia);

    DP 11-26.1 (65. számú szekvencia); DP 11—23 (66. számú szekvencia);

    DP II-23.1 (67. számú szekvencia); DP 11-24 (68. számú szekvencia);

    DP 11-25 (69. számú szekvencia);

    DP 11-25.1 (70. számú szekvencia); DP ΙΙ-25.2 (71. számú szekvencia); DF II-1 (103. számú szekvencia);

    DF II—2 (104. számú szekvencia);

    DF 11-13.1 (105. számú szekvencia); DF II—3.1 (106. számú szekvencia); DF II—4.5 (107. számú szekvencia); DF II—4.3 (108. számú szekvencia); DF 11—15 (109. számú szekvencia); DF II-16 (110. számú szekvencia);

    DF 11-17 (111. számú szekvencia);

    DF 11-18 (112. számú szekvencia);

    DF 11-19 (113. számú szekvencia);

    DF II-19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-21 (115. számú szekvencia);

    DF 11-22 (116. számú szekvencia) peptidek valamelyikének aminosavszekvenciáját tartalmazzák.
24. 24. Izolált nukleinsav, azzal jellemezve, hogy a 15. igénypont szerinti peptidet vagy részletét kódoló szekvenciával vagy ennek funkcionális megfelelőjével rendelkezik.
25. 25. A Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjéből származó izolált peptid vagy részlete, azzal jellemezve, hogy a proteinallergén legalább egy T-sejtepitópját tartalmazza, és az x„-Y-z_m általános képlettel írható le, ahol Y a

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia);

    DF 1-21.2 (91. számú szekvencia);

    DF 1-22.1 (92. számú szekvencia);

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia);

    DF 1-22.4 (94. számú szekvencia);

    DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    DF 1-23.2 (96. számú szekvencia);

    DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    DF 1-25.2 (98. számú szekvencia);

    DF 1-26.1 (99. számú szekvencia);

    DF 1-27.1 (100. számú szekvencia);

    DF 1-28.1 (101. számú szekvencia);

    DF 1-28.2 (102. számú szekvencia);

    DF 1-1 (72. számú szekvencia);

    DP II-20 (50. számú szekvencia);

    DP 11-20.1 (51. számú szekvencia);

    DP II—20.2 (52. számú szekvencia);

    DP II—20.3 (53. számú szekvencia);

    DP II-20.4 (54. számú szekvencia);

    DP II—20.5 (55. számú szekvencia);

    DP 11-20.6 (56. számú szekvencia);

    DP II—1 (41. számú szekvencia);

    DP II-1.1 (57. számú szekvencia);

    DP II-1.2 (58. számú szekvencia);

    DP II—2.1 (59. számú szekvencia);

    DP II-2.2 (60. számú szekvencia);

    DP II-2.3 (61. számú szekvencia);

    DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11-22 (63. számú szekvencia);

    DP 11-26 (64. számú szekvencia);

    DP II—26.1 (65. számú szekvencia);

    DP 11-23 (66. számú szekvencia);

    DP 11-23.1 (67. számú szekvencia);

    DP 11-24 (68. számú szekvencia);

    DP 11-25 (69. számú szekvencia);

    DP 11-25.1 (70. számú szekvencia);

    DP II—25.2 (71. számú szekvencia);

    DF II-1 (103. számú szekvencia);

    DF II—2 (104. számú szekvencia);

    DF II-13.1 (105. számú szekvencia);

    DF ΙΙ-3.1 (106. számú szekvencia);

    DF II—4.5 (107. számú szekvencia);

    HU 220 462 Bl

    DF II—4.3 (108. számú szekvencia);

    DFΙΙ-15 (109. számú szekvencia);

    DF II-16 (110. számú szekvencia);

    DF 11-17 (111. számú szekvencia);

    DF II-18 (112. számú szekvencia);

    DF 11-19 (113. számú szekvencia);

    DF II-19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-21 (115. számú szekvencia);

    DF 11-22 (116. számú szekvencia) peptidek aminosavszekvenciáinak valamelyikét jelenti; X„ a proteinallergén aminosavszekvenciájában az Y Nterminálisával összefüggő aminosavgyököket, míg Z_m a proteinallergén aminosavszekvenciájában az Y Cterminálisával összefüggő aminosavgyököket jelenti, és n és m értéke egyaránt 0-30.
26. 26. A 25. igénypont szerinti izolált peptid vagy részlete, azzal jellemezve, hogy az n és m értéke nulla.
27. 27. A 25. igénypont szerinti izolált peptid részlete, azzal jellemezve, hogy legalább 15 aminosavat tartalmaz.
28. 28. A 25. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy maximum 45 aminosavat tartalmaz.
29. 29. A 25. igénypont szerinti izolált peptid vagy peptidrészlet, azzal jellemezve, hogy a proteinallergénre érzékeny egyénekben gyakorlatilag nem köti a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjére specifikus immunglobulin E-t, vagy ha köti az immunglobulin E-t, az ilyen kötődés nem okozza mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását és mértéke lényegesen kisebb, mint azon proteinallergén esetében, amelyből a peptid származik.
30. 30. A Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjéből származó izolált peptid vagy részlete, azzal jellemezve, hogy a proteinallergén legalább egy T-sejt-epitópját tartalmazza, továbbá hogy az említett peptid a

    DF I-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-2.1 (73. számú szekvencia);

    DF 1-3 (74. számú szekvencia);

    DF 1-4 (75. számú szekvencia);

    DF I— 11 (76. számú szekvencia);

    DF 1-12 (77. számú szekvencia);

    DF 1-5 (78. számú szekvencia);

    DF 1-13 (79. számú szekvencia);

    DF I-14 (80. számú szekvencia);

    DF 1-15 (81. számú szekvencia);

    DF 1-6 (82. számú szekvencia);

    DF 1-7 (83. számú szekvencia);

    DF 1-8.1 (84. számú szekvencia);

    DF 1-8 (85. számú szekvencia);

    DF 1-9 (86. számú szekvencia);

    DF 1-16 (87. számú szekvencia);

    DF I—10 (88. számú szekvencia);

    DF 1-17 (89. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia);

    DF 1-21.2 (91. számú szekvencia);

    DF 1-22.1 (92. számú szekvencia);

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia);

    DF 1-22.4 (94. számú szekvencia);

    DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    DF 1-23.2 (96. számú szekvencia);

    DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    DF 1-25.2 (98. számú szekvencia);

    DF 1-26.1 (99. számú szekvencia);

    DF 1-27.1 (100. számú szekvencia);

    DF 1-28.1 (101. számú szekvencia);

    DF 1-28.2 (102. számú szekvencia);

    DPΙΙ-20 (50. számú szekvencia);

    DP II—20.1 (51. számú szekvencia);

    DP II—20.2 (52. számú szekvencia);

    DP II—20.3 (53. számú szekvencia);

    DP II-20.4 (54. számú szekvencia);

    DP II—20.5 (55. számú szekvencia);

    DP ΙΙ-20.6 (56. számú szekvencia);

    DP II-1 (41. számú szekvencia);

    DP II-2 (42. számú szekvencia);

    DP II—3.1 (43. számú szekvencia);

    DP ΙΙ-4 (44. számú szekvencia);

    DP II-5 (45. számú szekvencia);

    DP II—6 (46. számú szekvencia);

    DP II—7 (47. számú szekvencia);

    DP II-8 (48. számú szekvencia);

    DP II-9 (49. számú szekvencia);

    DP II— 1.1 (57. számú szekvencia);

    DP II-1.2 (58. számú szekvencia);

    DP II—2.1 (59. számú szekvencia);

    DP II—2.2 (60. számú szekvencia);

    DP II—2.3 (61. számú szekvencia);

    DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11-22 (63. számú szekvencia);

    DP 11—26 (64. számú szekvencia);

    DP 11-26.1 (65. számú szekvencia);

    DP 11-23 (66. számú szekvencia);

    DP 11-23.1 (67. számú szekvencia);

    DP II-24 (68. számú szekvencia);

    DP 11-25 (69. számú szekvencia);

    DP 11-25.1 (70. számú szekvencia);

    DP II-25.2 (71. számú szekvencia);

    DF II-1 (103. számú szekvencia);

    DF Π-2 (104. számú szekvencia);

    DF 11-13.1 (105. számú szekvencia);

    DF II—3.1 (106. számú szekvencia);

    DF II—4.5 (107. számú szekvencia);

    DF ΙΙ-4.3 (108. számú szekvencia);

    DF 11-15 (109. számú szekvencia);

    DF 11-16 (110. számú szekvencia);

    DF II-17 (111. számú szekvencia);

    DF 11-18 (112. számú szekvencia);

    DF 11-19 (113. számú szekvencia);

    DF 11-19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-21 (115. számú szekvencia) vagy

    DF 11-22 (116. számú szekvencia) aminosavszekvenciák valamelyikét tartalmazza.
31. 31. A 30. igénypont szerinti izolált peptid részlete, azzal jellemezve, hogy a peptid átlagos T-sejt-stimulációs indexével megegyező vagy annál nagyobb átlagos T-sejt-stimulációs indexszel rendelkezik, amint ezt a 10., 15a. és 16a. ábra bemutatja.
32. 32. A 30. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy legalább 15 aminosavat tartalmaz.

    HU 220 462 BI
33. 33. A 30. igénypont szerinti izolált peptid, azzal jellemezve, hogy maximum 45 aminosavat tartalmaz.
34. 34. A 30. igénypont szerinti izolált peptid vagy peptidrészlet, azzal jellemezve, hogy a proteinallergénre érzékeny egyénekben gyakorlatilag nem köti a Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjére specifikus immunglobulin E-t, vagy ha az említett immunglobulin E-t, az ilyen kötődés nem okozza mediátorok hízósejtekből vagy bazofil sejtekből történő kiszabadulását és mértéke lényegesen kisebb, mint azon proteinallergén esetében, amelyből a peptid származik.
35. 35. Izolált nukleinsav, azzal jellemezve, hogy a 30. igénypont szerinti peptidet vagy részletét kódoló szekvenciával vagy e nukleinsavszekvencia funkcionális megfelelőjével rendelkezik.
36. 36. Izolált peptid, azzal jellemezve, hogy immunológiailag keresztreaktív a 30. igénypont szerinti peptidre vagy részletére specifikus antitestekkel és a 30. igénypont szerinti peptidre vagy részletére reaktív Tsejtekkel.
37. 37. A Dermatophagoides nemzetség proteinallergénjéből származó izolált peptid, azzal jellemezve, hogy a következő peptidek szerkezetével rendelkezik:

    DF 1-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia);

    DF 1-22.1 (92. számú szekvencia);

    DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    DF 1-9 (86. számú szekvencia);

    DF 1-21.2 (91. számú szekvencia);

    DP II-l (41. számú szekvencia);

    DP II-1.2 (58. számú szekvencia);

    DP II-22 (63. számú szekvencia);

    DP 11-25.1 (70. számú szekvencia);

    DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11-25 (69. számú szekvencia);

    DP II—20.6 (56. számú szekvencia);

    DP 11-20 (50. számú szekvencia);

    DF II—4.5 (107. számú szekvencia);

    DF II—2 (104. számú szekvencia);

    DF II-19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-17 (111. számú szekvencia);

    DF 11-15 (109. számú szekvencia);

    DP II—25.2 (71. számú szekvencia);

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia).
38. 38. A 30. igénypont szerinti peptid vagy peptidrészlet, azzal jellemezve, hogy szerkezete a 28. ábrán bemutatott DP II—22.1 vagy DP II—22.2 peptidével azonos.
39. 39. A 37. igénypont szerinti peptid, azzal jellemezve, hogy a következő peptidek szerkezetével rendelkezik:

    DF I-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-2.1 (73. számú szekvencia);

    DF 1-3 (74. számú szekvencia);

    DF 1-4 (75. számú szekvencia);

    DF I—11 (76. számú szekvencia);

    DF 1-12 (77. számú szekvencia);

    DF 1-5 (78. számú szekvencia);

    DF 1-13 (79. számú szekvencia);

    DF 1-14 (80. számú szekvencia);

    DF 1-15 (81. számú szekvencia);

    DF 1-6 (82. számú szekvencia);

    DF 1-7 (83. számú szekvencia);

    5 DF 1-8.1 (84. számú szekvencia); DF 1-8 (85. számú szekvencia);

    DF 1-9 (86. számú szekvencia);

    DF 1-16 (87. számú szekvencia);

    DF I—10 (88. számú szekvencia);

    10 DF I-17 (89. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); DF 1-22.2 (93. számú szekvencia);

    15 DF 1-22.4 (94. számú szekvencia); DF 1-23.1 (95. számú szekvencia); DF 1-23.2 (96. számú szekvencia); DF 1-25.1 (97. számú szekvencia); DF 1-25.2 (98. számú szekvencia);

    20 DF 1-26.1 (99. számú szekvencia); DF 1-27.1 (100. számú szekvencia); DF 1-28.1 (101. számú szekvencia); DF 1-28.2 (102. számú szekvencia); DP 11-20 (50. számú szekvencia);

    25 DP II—20.1 (51. számú szekvencia); DP II—20.2 (52. számú szekvencia); DP II—20.3 (53. számú szekvencia); DP ΙΙ-20.4 (54. számú szekvencia); DP II—20.5 (55. számú szekvencia);

    30 DP II-20.6 (56. számú szekvencia); DP II-l (41. számú szekvencia);

    DP II—2 (42. számú szekvencia);

    DP II—3.1 (43. számú szekvencia); DP H-4 (44. számú szekvencia);

    35 DP II—5 (45. számú szekvencia);

    DP II—6 (46. számú szekvencia);

    DP II—7 (47. számú szekvencia);

    DP II—8 (48. számú szekvencia);

    DP II—9 (49. számú szekvencia);
40. 40 DP II-1.1 (57. számú szekvencia); DP II-1.2 (58. számú szekvencia); DP II—2.1 (59. számú szekvencia); DP II—2.2 (60. számú szekvencia); DP II—2.3 (61. számú szekvencia);

    45 DP 11—21 (62. számú szekvencia); DP 11-22 (63. számú szekvencia); DP 11-26 (64. számú szekvencia); DP 11-26.1 (65. számú szekvencia); DP 11-23 (66. számú szekvencia);

    50 DP 11-23.1 (67. számú szekvencia); DP 11-24 (68. számú szekvencia); DP 11-25 (69. számú szekvencia); DP 11-25.1 (70. számú szekvencia); DP II—25.2 (71. számú szekvencia);

    55 DF II-l (103. számú szekvencia); DF II—2 (104. számú szekvencia); DF 11-13.1 (105. számú szekvencia): DF II—3.1 (106. számú szekvencia); DF ΙΙ-4.5 (107. számú szekvencia);

    60 DF II—4.3 (108. számú szekvencia);

    HU 220 462 Bl

    DF11-15 (109. számú szekvencia);

    DFII-16 (110. számú szekvencia);

    DF 11-17 (111. számú szekvencia);

    DF 11-18 (112. számú szekvencia);

    DF 11-19 (113. számú szekvencia);

    DF II—19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-21 (115. számú szekvencia) vagy

    DF 11-22 (116. számú szekvencia).

    40. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, az 1. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
41. 41. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, all. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
42. 42. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, a 17. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
43. 43. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, a 22. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
44. 44. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, a 25. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
45. 45. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, a 30. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
46. 46. Gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy legalább egy, a 39. igénypont szerinti peptidet és gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst tartalmaz.
47. 47. Eljárás háziporatka-érzékenység kimutatására emberben, azzal jellemezve, hogy a pácienstől vett vérmintát legalább egy, az 1. igénypont szerinti pepiiddel, a vérkomponensek pepiidhez történő kötődéséhez alkalmas feltételek mellett, összekeverjük, és meghatározzuk azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik.
48. 48. A 47. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik, a T-sejt-működés, a T-sejt-proliferáció vagy ezek kombinációjának elemzésével határozzuk meg.
49. 49. Eljárás háziporatka-érzékenység kimutatására emberben, azzal jellemezve, hogy a pácienstől vett vérmintát all. igénypont szerinti legalább egy pepiiddel, a vérkomponensek pepiidhez történő kötődéséhez alkalmas feltételek mellett, összekeverjük, és meghatározzuk azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik.
50. 50. A 49. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik, a T-sejt-működés, T-sejt-proliferáció vagy ezek kombinációjának elemzésével határozzuk meg.
51. 51. Eljárás háziporatka-érzékenység kimutatására emberben, azzal jellemezve, hogy a pácienstől vett vérmintát legalább egy, a 25. igénypont szerinti peptiddel, a vérkomponensek pepiidhez történő kötődéséhez alkalmas feltételek mellett, összekeverjük, és meghatározzuk azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik.
52. 52. Az 51. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy azt a peptidmennyiséget, amelyre a kötődés bekövetkezik, a T-sejt-működés, T-sejt-prolifeTáció vagy ezek kombinációjának elemzésével határozzuk meg.
53. 53. Gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst és legalább két peptidet tartalmaz, melyek mindegyike legalább egy, Dermatophagoides proteinallergénből származó T-sejt-epitópot tartalmaz, s az említett peptidek azonos vagy különböző Dermatophagoides proteinallergénből származnak.
54. 54. Az 53. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a következő peptidek egyikét:

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

    DP 1-21.2 (28. számú szekvencia);

    DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    DP 1-22.2 (30. számú szekvencia);

    DP 1-22.3 (31. számú szekvencia);

    DP 1-22.4 (32. számú szekvencia);

    DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    DP 1-23.2 (34. számú szekvencia);

    DP 1-25.1 (35. számú szekvencia);

    DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    DP 1-27.1 (38. számú szekvencia);

    DP 1-28.1 (39. számú szekvencia);

    DP 1-28.2 (40. számú szekvencia);

    DP I-1 (9. számú szekvencia);

    DF 1-1 (72. számú szekvencia);

    DF 1-21.1 (90. számú szekvencia);

    DF 1-21.2 (91. számú szekvencia);

    DF 1-22.1 (92. számú szekvencia);

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia);

    DF 1-22.4 (94. számú szekvencia);

    DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    DF 1-23.2 (96. számú szekvencia);

    DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    DF 1-25.2 (98. számú szekvencia);

    DF 1-26.1 (99. számú szekvencia);

    DF 1-27.1 (100. számú szekvencia);

    DF 1-28.1 (101. számú szekvencia);

    DF 1-28.2 (102. számú szekvencia);

    DP 11-20 (50. számú szekvencia);

    DP 11-20.1 (51. számú szekvencia);

    DP II-20.2 (52. számú szekvencia);

    DP II—20.3 (53. számú szekvencia);

    DP II—20.4 (54. számú szekvencia);

    DP II—20.5 (55. számú szekvencia);

    DP 11-20.6 (56. számú szekvencia);

    DP II-1 (41. számú szekvencia);

    DP II—1.1 (57. számú szekvencia);

    DP II—1.2 (58. számú szekvencia);

    DP II—2.1 (59. számú szekvencia);

    DP II-2.2 (60. számú szekvencia);

    HU 220 462 Β1

    DP ΙΙ-2.3 (61. számú szekvencia);

    DP 11-21 (62. számú szekvencia);

    DP 11-22 (63. számú szekvencia);

    DP 11-26 (64. számú szekvencia);

    DP II—26.1 (65. számú szekvencia);

    DP 11-23 (66. számú szekvencia);

    DP 11-23.1 (67. számú szekvencia);

    DP 11-24 (68. számú szekvencia);

    DP 11-25 (69. számú szekvencia);

    DP 11-25.1 (70. számú szekvencia);

    DP II—25.2 (71. számú szekvencia);

    DF II-1 (103. számú szekvencia);

    DF II—2 (104. számú szekvencia);

    DF II-13.1 (105. számú szekvencia);

    DF II—3.1 (106. számú szekvencia);

    DF II—4.5 (107. számú szekvencia);

    DF II—4.3 (108. számú szekvencia);

    DF 11-15 (109. számú szekvencia);

    DF II-16 (110. számú szekvencia);

    DF 11-17 (111. számú szekvencia);

    DF 11-18 (112. számú szekvencia);

    DF 11-19 (113. számú szekvencia);

    DF II—19.1 (114. számú szekvencia);

    DF 11-21 (115. számú szekvencia) vagy

    DF 11-22 (116. számú szekvencia), és a legalább egy proteinallergénből származó T-sejtepitópokat tartalmazza.
55. 55. Az 54. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a következő peptidek valamelyikét tartalmazza:

    DP 1-21.1 (27. számú szekvencia);

    DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    DP II—20.6 (56. számú szekvencia);

    DP 11-22 (63. számú szekvencia);

    DP II—25.2 (71. számú szekvencia) és

    DF 1-22.2 (93. számú szekvencia).
56. 56. A 53. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a következő peptidkombinációk valamelyikét tartalmazza:

    DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP

    1-25.1 (35. számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP

    1-1 (9, számú szekvencia); a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP

    1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-28.1 (39. számú szekvencia);

    a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP

    1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33.

    számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.2 (28. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia) és a DP 1-26.1 (37. számú szekvencia);

    a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    a DF 1-1 (72. számú szekvencia) és a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia); a DF 1-1 (72. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-25.1 (97. számú szekvencia);

    a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia); a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia), a DF 1-22.1 (92. számú szekvencia) és a DF 1-23.1 (95. számú szekvencia);

    a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DF

    I- 22.1 (92. számú szekvencia);

    a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia) és a DF 1-1 (72. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.2 (91. számú szekvencia); a DP 1-1 (9. számú szekvencia), a DP 1-25.1 (35. számú szekvencia), a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia) és a DF 1-21.1 (90. számú szekvencia); a DP II-22 (63. számú szekvencia) és a DP ΙΙ-25.2 (71. számú szekvencia);

    a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP

    II— 25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia);

    a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), DP II—20.6. (56. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia);

    a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP II—20.6 (56. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia);

    a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II-25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-25.2 (36. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-21.1 (27.

    HU 220 462 Β1 számú szekvencia), a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia) és a DP 1-23.1 (33. számú szekvencia); a DP 11-22 (63. számú szekvencia), a DP II—25.2 (71. számú szekvencia), a DP 1-1 (9. számú szekvencia) és a DP 1-22.1 (29. számú szekvencia); a DF ΙΙ-4.5 (107. számú szekvencia) és a DF II—2 (104. számú szekvencia);

    a DF ΙΙ-4.5 (107. számú szekvencia) és a DF

    II-19.1 (114. számú szekvencia); a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF II—2 (104. számú szekvencia) és a DF II-19.1 (114. számú szekvencia);

    a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DF

    II—2 (104. számú szekvencia) és a DF II—9 (86. számú szekvencia);

    a DF II—4.5 (107. számú szekvencia) és a DF

    I- 21.1 (90. számú szekvencia);

    a DF II—4.5 (107. számú szekvencia), a DP

    II- 22 (63. számú szekvencia) és a DP 11-25.2 (71. számú szekvencia); vagy a DF ΙΙ-4.5 (107. számú szekvencia), a DF

    II—2 (104. számú szekvencia) és a DP 11—22 (63. számú szekvencia).
57. 57. Az 54. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a következő peptidkombinációt tartalmazza: DP 1-21.1 (27. számú szekvencia), DP 1-23.1 (33. számú szekvencia), DP 1-26.1 (37. számú szekvencia), DP 11-20.6 (56. számú szekvencia), DP 11-22 (63. számú szekvencia), DP II—25.2 (71. számú szekvencia) és DF 1-22.2 (93. számú szekvencia).
58. 58. Gyógyászati készítmény, azzal jellemezve, hogy gyógyszerészetileg alkalmas hordozót vagy diluenst és legalább egy, 1. igénypont szerinti Dermatophagoides proteinallergénből származó pepiidet tartalmaz.
59. 59. Az 58. igénypont szerinti gyógyászati készítmény atkaérzékenység ellen, azzal jellemezve, hogy a proteinallergén a Dér p I, Dér fi, Dér p II vagy Dér fii protein.
60. 60. A 6. vagy 30. igénypont szerinti peptid, azzal jellemezve, hogy az MHC-proteinkomplexet kötő, de az ilyen kötéshez nem esszenciális aminosavgyökök közül legalább egyet szubsztitúcióval módosítunk.
61. 61. A 60. igénypont szerinti peptid, azzal jellemezve, hogy az említett aminosavgyököket alaninnal, glutaminsavval vagy valamilyen metil-aminosavval szubsztituáljuk.
62. 62. A 60. igénypont szerinti peptid, azzal jellemezve, hogy az MHC-proteinkomplex kötését illetően esszenciális aminosavgyökök közül legalább egyet szubsztitúcióval módosítunk.
63. 63. A 6. vagy 30. igénypont szerinti peptid, azzal jellemezve, hogy a T-sejt-receptorhoz kötődő, de az ilyen kötéshez nem esszenciális aminosavgyökök közül legalább egyet szubsztitúcióval módosítunk.