JPH09501043A - Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ（室内塵ダニ）由来の主要アレルゲンのｔ細胞エピトープ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、Dermatophagoides属の主要蛋白質アレルゲンの単離したペプチド及び／又は改変ペプチドを提供する。この発明の範囲内のペプチドは、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含み、好ましくは、アレルゲンDerpＩ、DerpII、DerfＩ又はDerfIIから選択する蛋白質アレルゲンの少なくとも２つのＴ細胞エピトープを含む。この発明は又、対応する天然のアレルゲン若しくはその部分と同様の若しくは増大された治療特性を有するが、減少された副作用しか有しない更に改変されたペプチドに関係する。この発明は、更に、この発明のペプチドをコードする核酸配列を提供する。個人における室内塵ダニに対する感受性の治療又は診断方法及びこの発明の１種以上のペプチドを含む治療用組成物も又提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 DERMATOPHAGOIDES（室内塵ダニ）由来の 主要アレルゲンのＴ細胞エピトープ発明の背景 最近の報告は、室内塵ダニアレルギーにおけるグループＩ（例えば、DerpＩ及 びDerfＩ）及びグループII（例えば、DerpII及びDerfII）蛋白質アレルゲンに対 する応答の重要性を記載している。例えば、患者の６０％より多くがこれらの蛋 白質に対する抗ダニ抗体の少なくとも５０％を有することが記載されている（例 えば、Lind,P.等、Allergy,39:259-274(1984);van der Zee,J.S.等、Journal Al lergy and Clinical Immunology ,81:884-896(1988)）。子供がグループＩ及びグ ループIIアレルゲンに対する一層大きい反応性を示すことはあり得ることである （Thompson,P.J．等、Immunology,64:301-314(1988)）。Dermatophagoides（D. ）属のダニに対するアレルギーは、喘息、鼻炎及び異所性皮膚炎等の病気と関連 している。２つの種 D.pteronyssinus及びD.farinae が優勢であり、その結果、 相当の努力が、これらの２種により生成されるアレルゲンを同定する試みに費や された。 D.pteronyssinus 及びD.farinae の両者からの主要アレルゲンを遺伝子クロー ニングにより特性決定するため に協力した努力が為された。その結果、幾つかの刊行物が、DerpＩ（Thomas,W.R ．等、International Archives of Allergy and Applied Immunology,85:127-12 9(1988)及び Chua,K.Y.等、Journal of Experimental Medicine,167:175-182(1 988)）、DerpII（Chua,K.Y.等、International Archives of Allergy and Appli ed Immunology ,91:118-123(1990)）、DerfＩ（Dilworth,R.J.等、Clinical and Experimental Allergy 21:25-32(1991)Derf II（Yuuki，T．等、Japan Journal Allergol. ,39:557-461(1990)及びTrudinger,M.等、Clinical and Experimental Allerg y,21:33-37(1991)）及び低分子量アレルゲン（Ovey,E.R．等、Journal of Experimental Medicine ,170:1457-1462(1989)）を含む幾つかのアレルゲンの完 全なヌクレオチド配列を報告している。 DerpＩ及びDerfＩをコードするｃＤＮＡの公表されたヌクレオチド配列は、こ れらの２種の蛋白質がアミノ酸レベルで高度に相同性である（８１％同一）こと 及び成熟蛋白質生成物がそれぞれ２２２及び２２３残基からなることを示してい る（Chua,K.Y．等、Journal of Experimental Medicine,167:175-182(1988)及び Dilworth,R.J．等、前出）。蛋白質アレルゲンDerpII及びDerfIIは、両方とも１ ２９残基からなり、やはりアミノ酸配列において高度に相同性（８８％同一）で ある（Trudinger,M.等、前出、Yuuki,T等、前出、Chua,K.Y. 等、International Archives of Allergy and Applied Immunology 91:118-123( 1990)）。 DerpＩ及びDerpIIをコードするｃＤＮＡクローンの単離は、組換え抗原に対す る抗体結合の研究を可能にした（Green,W.K.等、International Archives of Al lergy and Applied Immunology ,92:30-38(1990);Chua,K.Y.等、International A rchives of Allergy and Applied Immunology ,91:124-129(1990);）。DerpＩの 相補性ＤＮＡ断片が大腸菌において発現され、プールしたヒトのダニアレルギー 性ＩｇＥ血清を用いるＩｇＥ結合研究は分子中の結合及び非結合領域を示した（ Thomas,W.R．等、Epitopes of Atopic Allergens，Proceedings of Workshop fr om XIV Congress of the European Academy of Allergy and Clinical Immunolo gy ,Berlin,1989年９月、77-82頁）。DerpＩのＴ細胞エピトープは報告されてい る（O'Hehir,R.E.等、Annual Review Immunology,9:67-95(1991);Stewart,G.A． 等、Epitopes of Atopic Allergens，Proceedings of Workshop from XIV Congr ess of the European Academy of Allergy and Clinical Immunology,Berlin，1 989年９月、41-47頁;Yessel,H 等、T cell Activation in Health and Disease: Discrimination Between Immunity and Tolerance，Conference 22-26 1990年９ 月、Trinity College，Oxford,英国及びHessel，H.等、Journal of Immunology, 148(3):738-745(1992年２月１日)。発明の要約 本発明は、Dermatophagoides属の主要蛋白質アレルゲンの単離した改変ペプチ ドを提供する。この発明の範囲内のペプチドは、DerpＩ、DerpII、DerfＩ又はDe rf IIから選択する蛋白質アレルゲンの少なくとも１つのＴ細胞エピトープ、好ま しくは少なくとも２つのＴ細胞エピトープを含む。この発明は更に、それぞれ少 なくとも１つのダニ蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む少なくとも２つ の領域を含むペプチドを提供する。これらの領域は、Dermatophagoides属の同じ 又は異なる蛋白質アレルゲンから導かれる。 更に改変した、対応する天然のアレルゲン若しくはその部分と同様の若しくは 増大された治療特性を有し且つ減じた副作用しか有しないこの発明のペプチド並 びに増大した溶解度及び安定性等の改良された特性を有する改変ペプチドをも提 供する。この発明のペプチドは、それらを投与される室内塵ダニ感受性の個人に おいて、その個人の室内塵ダニアレルゲン若しくは室内塵ダニアレルゲンと免疫 学的に交差反応性のアレルゲンに対するアレルギー応答を改変することが出来る 。個人における室内塵ダニに対する感受性の治療又は診断方法及びこの発明の１ 種以上のペプチドを含む治療用組成物も又提供する。図面の簡単な説明 図１は、D.pteronyssinus 及びD.farinae からのグループＩ及びグループIIア レルゲンのサブクローニング及び発現を示す。 図２ａは、DerpＩ及びDerfＩの発現において用いたアダプターを示し、図２ｂ は、DerfII及びDerpIIの増幅のためのプライマー及びDerfII突然変異誘発プライ マーを示す。 図３は、DerpＩ及びDerpII蛋白質アレルゲンから誘導した所望の長さの種々の ペプチドを示す。 図４は、DerfＩ及びDerfII蛋白質アレルゲンから誘導した所望の長さの種々の ペプチドを示す。 図５は、精製した天然（Ｎ）若しくは組換え（Ｒ）DerpＩ蛋白質の何れかに対 してイン・ビトロでプライムし、種々の重複DerpＩペプチドに対する応答につい て、試験した個人の内の少なくとも２のＴ細胞剌激インデックス（Ｓ．Ｉ．）を 有する応答のパーセント、ペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ細胞剌激インデッ クス及びランク付けしたペプチド応答の総和により分析した３３人の患者からの Ｔ細胞系統の応答を描いたグラフ表示である。 図６は、DerfＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複DerfＩ ペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２の刺激インデ ックス（Ｓ．Ｉ．）を有する応答のパーセント、ペプチドに対する陽性応答の平 均Ｔ細胞剌激インデックス及びラン ク付けしたペプチド応答の総和により分析した１６人の患者からのＴ細胞系統の 応答を描いたグラフ表示である。 図７は、DerpＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複DerpＩ ペプチド及び実質的に一致するDerfＩペプチドに対する応答について、試験した 個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセント、ペプチドに対す る陽性応答の平均Ｔ細胞刺激インデックス及びランク付けしたペプチド応答の総 和により分析した１４人の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示であ る。 図８は、DerfＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複DerfＩ ペプチド及び実質的に一致するDerpＩペプチドに対する応答について、試験した 個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセント、ペプチドに対す る陽性応答の平均Ｔ細胞剌激インデックス及びランク付けしたペプチド応答の総 和により分析した８人の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示である 。 図９は、DerpII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複DerpII ペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を 有する応答のパーセント、ペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ細胞刺激インデッ クス及びランク付けしたペプチド応答の総和により分析した２９人の患者からの Ｔ細胞系統 の応答を描いたグラフ表示である。 図１０は、DerfII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複Derf IIペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ． を有する応答のパーセント、ペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ細胞刺激インデ ックス及びランク付けしたペプチド応答の総和により分析した１０人の患者から のＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示である。 図１１は、DerfII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複Derf IIペプチド及び実質的に一致するDerpIIペプチドに対する応答について、試験し た個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセント、ペプチドに対 する陽性応答の平均Ｔ細胞剌激インデックス及びランク付けしたペプチド応答の 総和により分析した１０人の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示で ある。 図１２は、DerpII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々の重複Derf IIペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ． を有する応答のパーセント、ペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ細胞刺激インデ ックス及びランク付けしたペプチド応答の総和により分析した２６人の患者から のＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示である。 図１３は、DerpＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerpＩ蛋白質ア レルゲンから誘導した所望の長 さの選択したペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２ のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセント、ペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ細胞 刺激インデックス及びランク付けしたペプチド応答の総和により分析した３３人 の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示である。 図１４は、DerfＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerfＩ蛋白質ア レルゲンから誘導した所望の長さの選択したペプチドに対する応答について、試 験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセント、ペプチド に対する陽性応答の平均Ｔ細胞刺激インデックス及びランク付けしたペプチド応 答の総和により分析した９人の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示 である。 図１５ａは、DerpＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerpＩ及びDe rf Ｉ蛋白質アレルゲンから誘導した所望の長さの選択したペプチドに対する応答 について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセン ト及びペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ細胞剌激インデックスにより分析した ３０人の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ表示である。 図１５ｂは、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパー セント（各バーの上）、平均Ｔ細胞剌激インデックス（各バーの上の括弧内）及 びランク付けしたペプチド応答の総和により分析したDerpＩプ ライムしたＴ細胞の好適DerpＩペプチドに対する応答を示す図１５ａに示した同 じデータから導いたグラフ表示である。 図１６ａは、DerfＩ蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerfＩ及びDe rp Ｉ蛋白質アレルゲンから誘導した所望の長さの選択したペプチドに対する応答 について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセン ト及びペプチドに対する少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答の平均Ｔ細胞刺激 インデックスにより分析した９人の患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ 表示である。 図１６ｂは、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパー セント及びペプチドに対する少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答の平均Ｔ細胞 剌激インデックスによるDerpＩプライムしたＴ細胞系統の好適DerfＩ及びDerpＩ ペプチドに対する応答を示す図１６ａに示した同じデータから導いたグラフ表示 である。 図１７ａは、DerpII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerpII蛋白質 から誘導した所望の長さの選択したペプチドに対する応答について、ペプチドに 対する少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のＴ細胞剌激インデックスにより分 析した２９人の患者からのＴ細胞の応答を描いたグラフ表示である。 図１７ｂは、DerpII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerpII蛋白質 から誘導した選択したペプチド に対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応 答のパーセント（各バーの上）、平均Ｔ細胞剌激インデックス（各バーの上の各 個内）及びランク付けしたペプチド応答の総和（Ｘ軸）により分析した３０人の 患者の応答を描いたグラフ表示である。 図１８ａは、DerfII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、DerpII及びDe rf II蛋白質から誘導した所望の長さの選択したペプチドに対する応答について、 ペプチドに対する少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のＴ細胞刺激インデック スにより分析した１０人の患者からのＴ細胞の応答を描いたグラフ表示である。 図１８ｂは、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ．を有する応答のパー セント（各バーの上）、平均Ｔ細胞刺激インデックス（各バーの上の各個内）及 びランク付けしたペプチド応答の総和（Ｘ軸）により分析したDerfIIプライムし たＴ細胞系統の好適DerpIIペプチドに対する応答を示す図１８ａに示した同じデ ータから導いたグラフ表示である。 図１８ｃは、ダニグループＩアレルゲンでイン・ビトロでプライムし、好適De rp Ｉ及びDerfＩペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも ２のＳ．Ｉ．を有する応答のパーセント及びペプチドに対する陽性応答の平均Ｔ 細胞刺激インデックスにより分析した４人の一致した患者からのＴ細胞系統の応 答を描いた グラフ表示である。 図１８ｄは、ダニグループIIアレルゲンでイン・ビトロでプライムし、好適De rp IIペプチドに対する応答について、試験した個人の内の少なくとも２のＳ．Ｉ ．を有する応答のパーセント及びペプチドに対する陽性応答の平均刺激インデッ クスにより分析した６人の一致した患者からのＴ細胞系統の応答を描いたグラフ 表示である。 図１９ａ〜１９ｂは、アフィニティー精製した及び組換えのDerpＩ及びDerpII 蛋白質並びにあるDerpＩ及びDerpII重複ペプチドに対するＩｇＥの直接結合アッ セイの結果のグラフ表示である。 図２０ａ〜２０ｂは、アフィニティー精製した及び組換えのDerfＩ及びDerfII 蛋白質並びにあるDerfＩ及びDerfII重複ペプチドに対するＩｇＥの直接結合アッ セイの結果のグラフ表示である。 図２１ａ〜２１ｈは、生化学的に精製したダニアレルゲン（ＰＭＡ）及びDerp Ｉ、DerfＩ、DerpII及びDerfIIから導いた種々のペプチドに対するＩｇＥの直接 結合アッセイの結果のグラフ表示である。 図２２は、DerpＩ蛋白質における多形を説明する５つのDerpＩクローン(a) 〜 (e) のアミノ酸配列の混成整列である。番号付けは、DerpＩ(e) クローンの配列 を参照する。記号（−）は、DerpＩクローンのアミノ酸残基がその位置でDerpＩ (a) の対応アミノ酸残基と同一であることを示すのに使っている。これらのクロ ーンのアミノ 酸配列は、DerpＩに有意の変種があり得ることを示している（５つの配列に５つ の多形アミノ酸残基がある）。 図２３は、DerpII蛋白質における多形を説明する３つのDerpIIクローン(c),(1 ) 及び(2) のアミノ酸配列の混成整列である。番号付けは、DerpII(c) クローン の配列を参照する。記号（．）は、DerpIIクローンのアミノ酸残基がその位置でDerp II(c) の対応アミノ酸残基と同一であることを示すのに使っている。 図２４は、多形がDerfII蛋白質であることを説明する６つのDerfIIクローン（ 即ち、ｐＦＬ１、ｐＦＬ２、ＭＴ３、ＭＴ５、ＭＴ１８及びＭＴ１６）のアミノ 酸配列の混成整列である。番号付けは、DerfｐＬＦ１クローンの配列を参照する 。記号（．）は、DerfIIクローンのアミノ酸残基がその位置でDerfIIｐＬＦ１の 対応アミノ酸残基と同一であることを示すのに使っている。 図２５は、改変ペプチドのアミノ酸配列を示す。 図２６は、この発明による改変ペプチドのアミノ酸配列を示す。発明の詳細な説明 本発明は、Dermatophagoides属の主要蛋白質アレルゲンから誘導した単離した 改変したペプチドを提供する。ここで用いる場合、ペプチド又は蛋白質の断片と は、蛋白質の完全なアミノ酸配列より少ないアミノ酸残基を有するアミノ酸配列 のことをいう。ここで用いる場合、改 変したペプチドとは、Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンから誘導したペプ チドであって、アミノ酸配列がアミノ酸の置換、欠失若しくは付加により改変さ れたペプチドのことをいう。この発明のペプチドは、少なくとも１つのアレルゲ ンのＴ細胞エピトープを含むDerpＩ（SEQ ID NO:１及び２）、DerpII（SEQ ID N O:３及び４）、DerfＩ（SEQ ID NO:５及び６）及びDerfII（SEQ ID NO:７及び８ ）から誘導した改変したペプチドを含む。 それぞれ少なくとも１つのDermatophagoides属の蛋白質アレルゲンのＴ細胞エ ピトープを含む少なくとも２つの領域を含むペプチドも又、この発明の範囲内に ある。かかるペプチドの各領域は、同じ又は異なるダニアレルゲンから誘導され る。それぞれ少なくとも２つのダニ蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む 単離したペプチド又は単離したペプチドの領域は、増大された治療効果に特に望 ましい。本発明のペプチドに（例えば、抗体又はＴ細胞交差反応性により）免疫 学的に関連するペプチドも又、この発明の範囲内にある。抗体交差反応により免 疫学的に関連したペプチドは、Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンのペプチ ドに特異的な抗体により結合される。Ｔ細胞交差反応性により免疫学的に関連し たペプチドは、この発明のペプチドと同じＴ細胞と反応することが出来る。 この発明の単離したペプチドは、かかるペプチドをコ ードする配列を有する核酸でトランスフォームした宿主細胞において組換えＤＮ Ａ技術により生成することが出来る。この発明の単離したペプチドは又、化学合 成によっても生成することが出来る。ある限られた状況においては、単離したペ プチドを蛋白質アレルゲンの化学的開裂によって生成することが出来る。ペプチ ドを組換え技術によって生成するときは、そのペプチドをコードする配列を有す る核酸又はその核酸配列の機能的同等物でトランスフォームした宿主細胞をそれ らの細胞に適した培地中で培養し、ペプチドを、細胞培養培地、宿主細胞又はそ の両者から、ペプチド及び蛋白質の精製用に当業者に公知の技術を用いて精製す ることが出来る。該技術は、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマト グラフィー、限外濾過、電気泳動又はペプチドが由来したDermatophagoides属の ペプチド、蛋白質アレルゲン、又はその一部分に特異的な抗体を用いる免疫精製 法を含む。この発明の単離したペプチドは、組換えＤＮＡ技術により生成したと きは細胞物質若しくは培養培地を実質的に含まず、又は化学合成したときは化学 的前駆物質若しくは他の化学物質を実質的に含まない。 本発明は、この発明の核酸配列を発現するための発現ベクター及びトランスフ ォームした宿主細胞を提供する。ダニアレルゲンをコードする核酸配列又は少な くともその一断片を細菌細胞例えば大腸菌、昆虫細胞（バキュロウイルス）、酵 母、又は哺乳動物細胞例えばチャイ ニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）において発現させることが出来る。適当な 発現ベクター、プロモーター、エンハンサー及びその他の発現制御要素は、Samb rook等、Molecular Cloning：A Laboratory Manual,第二版、Cold Spring Harbo r Laboratory Press,Cold Spring Harbor，New York（1989）中に見出すことが 出来る。他の適当な発現ベクター、プロモーター、エンハンサー及びその他の発 現要素は、当業者に公知である。哺乳動物、酵母若しくは昆虫細胞での発現は、 組換え物質の部分的若しくは完全なグリコシル化及び任意の鎖間及び鎖内ジスル フィド結合の形成へと導く。酵母での発現に適したベクターは、ＹｅｐＳｅｃｌ （Baldari 等(1987)Embo J.6:229-234）；ｐＭＦａ（Kurjan及びHerskowitz(198 2)Cell 30:933-943)；ＪＲＹ８８（Schultz 等(1987)Gene 54:113-123）及びｐ ＹＥＳ２（カリフォルニア、San Diego 在、Invitrogen Corporation）を含む。これらの ベクターは、自由に利用することが出来る。バキュロウイルス及び哺乳動物発現 系も又、利用可能である。例えば、バキュロウイルス発現系は、昆虫細胞での発 現用に市販されており （カリフォルニア、San Diego在、Phar Mingen）、他方、ｐＭ ＳＧベクターは、哺乳動物細胞における発現用に市販されている（ニュージャージー、Pi scatawsy在、Pharmacia）。 大腸菌での発現用に適当な発現ベクターは、特に、ｐＴＲＣ（Amann 等（1988 ）Gene 69:301-315）； ｐＧＥＸ（オーストラリア国、Melbourne 在、Amrad Corp．）；ｐＭＡＬ（マサチューセッツ 、Beverly 在、N.E.Biolabs ）；ｐＲＩＴ５（ニュージャージー、Piscataway 在、Ph armacia ）；ｐＥＴ−１１ｄ（ウィスコンシン、Madison 在、Novagen ）Jameel等(1990) J.Virol.64:3963-3966 及びｐＳＥＭ（Knapp 等（1990）BioTechniques 8:280-2 81）を含む。例えば、ｐＴＲＣ及びｐＥＴ−１１ｄの使用は、非融合蛋白質の発 現へと導くであろう。ｐＭＡＬ、ｐＲＩＴ５ｐＳＥＭ及びｐＧＥＸの使用は、マ ルトースＥ結合蛋白質（ｐＭＡＬ）、プロテインＡ（ｐＲＩＴ５）、切り詰めら れたβ−ガラクトシダーゼ（ＰＳＥＭ）又はグルタチオンＳトランスフェラーゼ （ｐＧＥＸ）と融合したアレルゲンの発現へと導くであろう。ダニ蛋白質アレル ゲン又はその断片が融合蛋白質として発現される場合は、キャリアー蛋白質とダ ニ蛋白質アレルゲン若しくはその断片との間の融合点に酵素開裂部位を導入する のが特に有利である。次いで、ダニ蛋白質アレルゲン若しくはその断片を、その 酵素部位での酵素的開裂並びに蛋白質及びペプチドの精製用の慣用技術を用いる 生化学的精製によって融合蛋白質から回収することが出来る。適当な酵素開裂部 位は、血液凝固因子Ｘａ又はトロンビンに対するものを含み、それに対する適当 な酵素及び開裂のためのプロトコールは、例えば、ミズーリ、st.Louis 在、Sigma Ch emical Company 及び マサチューセッツ、Beverly 在、N.E.Biolabsから市販されている。 異なるベ クターは又、異なるプロモーター領域をも有し、それは構成的発現又は例えばＩ ＰＴＧで誘導し得る発現を与え（ＰＲＴＣ、Amann 等（1988）前出、ｐＥＴ−１ １ｄ、ウィスコンシン、Madison 在、Novagen）又は温度誘導（ｐＲＩＴ５、ニュージャージー、Pi scataway 在、Pharmacia）による発現を与える。 本発明の単離したペプチドを得るために、ダニアレルゲンを、実施例IIIで検 討するように、所望の長さの重複しないペプチド又は所望の長さの重複するペプ チドに分割する（これは、組換えにより、合成により、又はある限られた状況に おいてはアレルゲンの化学的開裂によって生成することが出来る）。少なくとも １つのＴ細胞エピトープを含むペプチドは、剌激（即ち、増殖又はリンホカイン 分泌）等のＴ細胞応答を誘出することが出来且つ／又はＴ細胞アネルギー（即ち 、寛容）を誘導することが出来る。少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むペ プチドを決定するために、単離したペプチドを、例えばＴ細胞生物学技術により 試験してそれらのペプチドがＴ細胞応答を誘出し又はＴ細胞アネルギーを誘導す るかどうかを決定する。Ｔ細胞応答を誘出し又はＴ細胞アネルギーを誘導するこ とが見出されたペプチドを、Ｔ細胞刺激活性を有すると規定する。 実施例で検討するように、ヒトＴ細胞剌激活性を、ダニアレルゲンに感受性の 個人（即ち、ダニアレルゲンに対するＩｇＥ媒介の免疫応答有する個人）から得 たＴ細 胞を、アレルゲンから誘導したペプチドと共に培養し、Ｔ細胞の増殖がそのペプ チドに応じて起きるかどうかを例えば細胞のトリチウムチミジンの取込みによっ て測定することによって試験することが出来る。ペプチドに対するＴ細胞による 応答についての刺激インデックスは、ペプチドに対する応答における最大ＣＰＭ を対照ＣＰＭで除したものとして計算することが出来る。バックグラウンドレベ ルの２倍以上のＴ細胞刺激インデックス（Ｓ．Ｉ．）を「陽性」と見なす。陽性 結果を用いて、試験したペプチドの群について、各ペプチドに対する平均剌激イ ンデックスを計算することが出来る。この発明の好適ペプチドは、少なくとも１ つのＴ細胞エピトープを含み且つ２．０以上の平均Ｔ細胞刺激インデックスを有 する。２．０以上のＴ細胞剌激インデックスを有するペプチドは、治療剤として 有用であると考えられる。好適ペプチドは、少なくとも２．５の、一層好ましく は少なくとも３．５の、更に一層好ましくは少なくとも４．０の、最も好ましく は少なくとも５．０の平均Ｔ細胞剌激インデックスを有する。 更に、好適ペプチドは、少なくとも約１００の、一層好ましくは少なくとも１ ５０の、更に一層好ましくは少なくとも約２００の、最も好ましくは少なくとも 約２５０のポジティビティーインデックス（Ｐ．Ｉ．）を有する。ペプチドに対 するポジティビティーインデックスは、平均Ｔ細胞刺激インデックスに、室内塵 ダニに感 受性の個人の集団（例えば、好ましくは、少なくとも９人の個人、一層好ましく は少なくとも１６人以上の個人、更に好ましくは少なくとも２９人以上の個人、 更に一層好ましくは少なくとも３０人以上の個人）におけるそのペプチドに応答 するＴ細胞を有する個人のパーセントを乗じることにより測定する。従って、ポ ジティビティーインデックスは、ペプチドに対するＴ細胞応答の強さ（Ｓ．Ｉ． ）及び室内塵ダニに感受性の個人の集団におけるペプチドに対するＴ細胞応答の 頻度の両者を表す。 例えば微細マッピング技術によって正確なＴ細胞エピトープを決定するために 、Ｔ細胞剌激活性を有し、従って少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む（Ｔ 細胞生物学技術による測定）ペプチドを、そのペプチドのアミノ若しくはカルボ キシ末端の何れかにおけるアミノ酸残基の付加若しくは欠失により改変し、その 改変ペプチドに対するＴ細胞活性の変化を試験して測定した。もし、天然の蛋白 質配列中のある重複領域を共有する２種以上のペプチドが、Ｔ細胞生物学技術に より測定して、ヒトＴ細胞剌激活性を有することが見出されたならば、かかるペ プチドのすべて若しくは一部を含む更なるペプチドを生成することが出来、これ らの更なるペプチドを同様の手順によって試験することが出来る。この技術に続 いて、ペプチドを選択し、組換えにより又は合成によって生成する。ペプチドを 、種々の因子に基づいて選択する が、該因子は、ペプチドに対するＴ細胞応答の強さ（例えば、剌激インデックス ）、室内塵ダニに感受性の個人の集団におけるペプチドに対するＴ細胞応答の頻 度、及びそのペプチドのDermatophagoides属の他のアレルゲンとの潜在的交差反 応性を含む。これらの選択したペプチドの物理的及び化学的特性（例えば、溶解 度、安定性）を試験して、これらのペプチドが治療用組成物で使用するのに適し ているかどうか或はこれらのペプチドがここに記載したような改変を必要とする かどうかを決定する。選択したペプチド又は選択した改変ペプチドのヒトＴ細胞 を剌激する能力（例えば、増殖、リンホカイン分泌を誘導する能力）を測定する 。 更に、この発明の好適ペプチドは、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）に結合せず、 又はそのペプチドが由来する蛋白質アレルゲンよりも実質的に低い程度でしか結 合しない。標準的免疫療法の主要な合併症は、ＩｇＥ媒介の応答例えばアナフィ ラキシーである。免疫グロブリンＥは、アナフィラキシー反応のメディエーター であり、該反応は、マスト細胞若しくは好塩基球上のＩｇＥへの抗原の結合及び 架橋及びメディエーター（例えば、ヒスタミン、セロトニン、エオシン好性走化 性因子）の放出により生じる。従って、室内塵ダニに感受性の個人の集団の相当 のパーセンテージにおけるアナフィラキシーは、免疫療法において、室内塵ダニ アレルゲンに感受性の個人の集団の相当のパーセンテージ（例えば、少なくとも 約７５％）においてＩｇＥと結合しないペプチドを使用することによって（或は 、もし結合するとしても、かかる結合がマスト細胞若しくは好塩基球からのメデ ィエーターの放出を生じないならば）回避し得るであろう。アナフィラキシーの 危険は、免疫療法において、減少したＩｇＥ結合を有するペプチドを使用するこ とにより減少させることが出来るであろう。更に、最小ＩｇＥ剌激活性を有する ペプチドは、治療効果に対して望ましい。最小ＩｇＥ刺激活性とは、天然蛋白質 アレルゲン（例えば、DerpＩ）により刺激されたＩｇＥ産生量及び／又はＩＬ− ４産生より少ないＩｇＥ産生のことをいう。 この発明のペプチドは、室内塵ダニ感受性の個人に投与した場合に、その個人 のそのアレルゲンに対するアレルギー応答を改変することが出来る。特に、ダニ アレルゲンの少なくとも１つのＴ細胞エピトープ又はダニアレルゲンから誘導し た少なくとも２つの領域（それぞれ、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む ）を含むこの発明のペプチドは、室内塵ダニに感受性の個人に投与した場合に、 その個人のそのアレルゲンに対するＴ細胞応答を改変することが出来る。ここで 用いる場合、個人の室内塵ダニアレルゲンに対するアレルギー応答の改変とは、 標準臨床手順により測定して、ダニアレルゲンにさらした際の無応答又は症状の 減少（ダニアレルゲンで誘発される喘息症状の減少を含む）として規定し得る（ 例えば、Varney等、British Medical Journal 302:265- 269(1990)を参照されたい）。ここでいう場合、症状の減少とは、個人がこの発 明のペプチド又は蛋白質を用いる治療養生を完了した後のその個人のアレルゲン に対するアレルギー応答の如何なる減少をも含む。この減少は主観的であってよ い（即ち、患者がアレルゲンの存在下において一層楽に感じればよい）。症状の 減少は、当分野で公知の標準皮膚試験を用いて、臨床的に測定することも出来る 。 ここに記載した仕事の結果として、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む ダニアレルゲン由来の改変ペプチドが生成された。Ｔ細胞エピトープは、ダニア レルギーの臨床症状の原因であるダニアレルゲンに対する免疫応答の開始及び維 持に関与していると考えられる。これらのＴ細胞エピトープは、抗原提示細胞の 表面上の適当なＨＬＡ分子に結合して関連Ｔ細胞サブポピュレーションを剌激す ることにより、ヘルパーＴ細胞のレベルで初期事象の引き金を引くと考えられて いる。これらの事象は、Ｔ細胞増殖、リンホカイン分泌、局所的炎症反応、更な る免疫細胞のその部位への補充及び抗体産生へと導くＢ細胞カスケードの活性化 へと導く。これらの抗体の１つのイソ型であるＩｇＥは、アレルギー症状の発達 において基本的に重要であり、その産生は、事象のカスケードの初期に、ヘルパ ーＴ細胞のレベルで、分泌されたリンホカインの性質により影響を受ける。Ｔ細 胞エピトープは、基本的要素であり又はＴ細胞レセプターによる 認識の最小単位であって、レセプター認識に必須のアミノ酸残基を含む（該アミ ノ酸残基は、蛋白質のアミノ酸配列中において、隣接し及び／又は隣接していな くてもよい）。Ｔ細胞エピトープのアミノ酸配列を真似たアミノ酸配列及びDerm atophagoides 属の蛋白質アレルゲンに対するアレルギー応答を改変するアミノ酸 配列は、この発明の範囲内にある。 ダニアレルギー患者を本発明のペプチドにさらすことは、適当なＴ細胞サブポ ピュレーションを寛容化し若しくは無力化して、それらをダニアレルゲンに対し て非応答性とし、このようにさらされても免疫応答の開始に関与しなくさせる。 更に、本発明のペプチドの投与は、天然のダニ蛋白質アレルゲン若しくはその部 分にさらした場合と比較して、リンホカイン分泌プロフィルを改変することが出 来る（例えば、ＩＬ−４の減少及び／又はＩＬ−２の増加を生じる）。更に、こ の発明のペプチドにさらすことは、通常ダニアレルゲンに対する応答に関与する Ｔ細胞サブポピュレーションに影響を与えて、それらのＴ細胞が通常アレルゲン にさらされる部位（例えば、鼻粘膜、皮膚及び肺）から去ってペプチドを治療用 に投与した部位に向かうようにすることが出来る。このＴ細胞サブポピュレーシ ョンの再分配は、個人の免疫系が通常ダニアレルゲンにさらされる部位において 免疫応答を開始する能力を改善し又は減少させることが出来、アレルギー症状の 減少を生じる。 この発明の単離したペプチドは、Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンの少 なくとも１つのＴ細胞エピトープを含み、従って、このペプチドは、蛋白質アレ ルゲンの少なくとも約７アミノ酸残基を含む。治療効果の目的のためには、この 発明の治療用組成物は、好ましくは、ダニアレルゲンの少なくとも２つのＴ細胞 エピトープを含む。従って、この発明の単離したペプチドは、少なくとも２つの Ｔ細胞エピトープを含み、従って、そのペプチドは、少なくとも約８アミノ酸残 基を、好ましくは１５アミノ酸残基を含む。更に、この発明の治療用組成物は、 好ましくは、室内塵ダニに感受性の個人に対するその組成物の投与の治療養生が その個人のＴ細胞のその蛋白質アレルゲンに対する寛容化を生じるだけ十分なパ ーセンテージの完全な蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む。合成により 生成した、最長で約４５アミノ酸残基まで、最も好ましくは最長で約３０アミノ 酸残基までを含むこの発明のペプチドは、長さが増すとペプチド合成が困難とな り、又、ペプチドとそれが由来した蛋白質アレルゲンの間のコンホメーション類 似性が維持されるために望ましくない特性（例えば、免疫グロブリン結合又は酵 素活性）の保持を生じるので特に望ましい。図３及び図４に示したすべてのペプ チドは、ヒトＴ細胞刺激活性を有することが見出された。 本発明の一具体例は、Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンの改変ペプチド を特徴とする。このペプチド又 はその一部分は、少なくとも１つの蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含み 且つ式Ｘ_n−Ｙ−Ｚ_mを有する。この式に従って、Ｙは、下記よりなる群から選択 するアミノ酸配列である： ＤＰＩ−２１．７；ＤＰＩ−２３．１０；ＤＰＩ−２３．１１；ＤＰＩ−２３． １２；ＤＰＩ−２３．５；ＤＰＩ−２３．６；ＤＰＩ−２３．７；ＤＰＩ−２３ ．８；ＤＰＩ−２３．９；ＤＰＩ−２６．２；ＤＰII−２０．７；ＤＰII−２２ ．６；ＤＰII−２２．３；ＤＰII−２２．４；ＤＰII−２２．５；ＤＰII−２５ ．３；ＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２３．１３；ＤＰＩ−２３．１４；ＤＰＩ− ２３．１５；ＤＰＩ−２３．１６；ＤＰＩ−２３．１７；ＤＰＩ−２６．３；Ｄ ＰＩ−２６．４；ＤＰＩ−２６．５；ＤＰII−２２．７；ＤＰII−２２．８；Ｄ ＰII−２２．９；ＤＰII−２２．１０；及びＤＰII−２２．１１（これらは、す べて、図２６に示してある）。 更に、Ｘ_nは、蛋白質アレルゲンのアミノ酸配列においてＹのアミノ末端に隣 接するアミノ酸残基であり、Ｚ_mは、蛋白質アレルゲンのアミノ酸配列において Ｙのカルボキシ末端に隣接するアミノ酸残基である。この式において、ｎは０〜 ３０であり、ｍは０〜３０である。 本発明の他の具体例は、少なくとも２つの領域を含むペプチドを提供する（各 領域は、少なくとも１つのDermatophagoides属の蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピ ト ープを含み、従って、各領域は、少なくとも約７アミノ酸残基を含む）。これら の少なくとも２つの領域を含むペプチドは、所望するだけ多くのアミン酸残基を 含むことが出来、好ましくは、ダニアレルゲンの少なくとも約１４、一層好まし くは約３０、最も好ましくは少なくとも約４０アミノ酸残基を含む。かかるペプ チドの各領域は、長さが増すとペプチド合成が困難となり、又、ペプチドとそれ が由来した蛋白質アレルゲンの間のコンホメーション類似性が維持されるために 望ましくない特性（例えば、免疫グロブリン結合又は酵素活性）の保持を生じる ので、好ましくは、最長で４５アミノ酸残基まで、一層好ましくは最長で４０残 基まで、最も好ましくは最長で３０アミノ酸残基までを含む。所望であれば、こ れらの領域のアミノ酸残基を生成してリンカーで結合して抗原提示細胞によるプ ロセッシングに対する感受性を増大させることが出来る。かかるリンカーは、任 意の非エピトープアミノ酸配列又はその他の適当な結合剤であってよい。それぞ れ少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む少なくとも２つの領域を含む好適ペ プチドを得るために、これらの領域を、アレルゲン又は種々のダニ蛋白質アレル ゲンの組合せにおけるこれらの領域の天然の構成とは異なる構成で配置する。例 えば、Ｔ細胞エピトープを含む領域を、隣接しない構成で配置することが出来、 好ましくは、同じ蛋白質アレルゲン又は蛋白質アレルゲンの組合せから誘導する ことが出来る。隣接しな いとは、Ｔ細胞エピトープを含む領域の、これらの領域が由来した蛋白質アレル ゲン中に存在するアミノ酸配列の配置とは異なる配置として規定する。更に、Ｔ 細胞エピトープを含む非隣接領域を非逐次的順序（例えば、アミノ酸がアミノ末 端からカルボキシ末端まで配置されたＴ細胞エピトープを含む領域が由来した天 然蛋白質アレルゲンのアミノ酸の順序と異なる順序）で配置することが出来る。 ペプチドは、ダニアレルゲンのＴ細胞エピトープの少なくとも１５％、少なくと も３０％、少なくとも５０％又は最大１００％までを含むことが出来る。 個々のペプチド領域を生成し、どの領域がダニアレルゲンに特異的な免疫グロ ブリンＥに結合するのか及びかかる領域のどれがマスト細胞若しくは好塩基球か らのメディエーター（例えば、ヒスタミン）の放出を引き起こすのかを試験して 決定することが出来る。免疫グロブリンＥに結合し且つ試験したアレルギー血清 の約１０〜１５％より多くにおいてマスト細胞若しくは好塩基球からのメディエ ーターの放出を引き起こすことが見出されたペプチド領域は、好ましくは、この 発明のペプチドを形成するために配置されるペプチド領域内に含まれない。 この発明の好適ペプチドは、同一若しくは異なるダニアレルゲン（例えば、De rp Ｉ、DerpII、DerfＩ及びDerfII）から誘導した２つ以上の領域を含む。例えば 、一領域をDerpＩから導き且つ一領域をDerpIIから導くこ とが出来；一領域をDerpＩから導き且つ一領域をDerfＩから導くことが出来；一 領域をDerpIIから導き且つ一領域をDerfＩから導くことが出来；一領域をDerpII から導き且つ一領域をDerfIIから導くことが出来；一領域をDerpＩから導き且つ 一領域をDerfIIから導くことが出来；一領域をDerfＩから導き且つ一領域をDerf IIから導くことが出来る。更に、これらの領域を同じ蛋白質アレルゲン例えばDe rp Ｉ及びDerpＩ等から導くことが出来る。 好適ペプチドは、それぞれDermatophagoides属の蛋白質アレルゲンの１つ以上 のＴ細胞エピトープを含む２つ以上の領域の種々の組合せを含み、これらの領域 は、Dermatophagoides属の同一若しくは異なる蛋白質アレルゲンから誘導するこ とが出来、ここに、少なくとも１つの領域は下記の群より選択するアミノ酸配列 を含み： ＤＰＩ−２１．１（SEQ ID NO:２７）；ＤＰＩ−２１．２（SEQ ID NO:２８）； ＤＰＩ−２２．１（SEQ ID NO:２９）；ＤＰＩ−２３．１（SEQ ID NO:３３）； ＤＰＩ−２５．２（SEQ ID NO:３６）；ＤＰＩ−２６．１（SEQ ID NO:３７）； ＤＰＩ−２８．１（SEQ ID NO:３９）；ＤＰＩ−１（SEQ ID NO:９）；ＤＦＩ− １（SEQ ID NO:７２）；ＤＦＩ−２１．１（SEQ ID NO:９０）；ＤＦＩ−２２． １（SEQ ID NO:９２）；ＤＦＩ−２３．１（SEQ ID NO:９５）；ＤＦＩ−２５． １（SEQ ID NO:９７）；ＤＰII−１（SEQ ID NO:４１）；ＤＰII−１．２（SEQ ID NO:５８）；ＤＰII−２．０ （SEQ ID NO:５６）；ＤＰII−２０．３（SEQ ID NO:５３）；ＤＰII−２１（SE Q ID NO:６２）；ＤＰII−２２（SEQ ID NO:６３）；ＤＰII−２５（SEQ ID NO: ６９）；ＤＰII−２５．２（SEQ ID NO:７１）；ＤＦII−２（SEQ ID NO:１０４ ）；ＤＦII−４．５（SEQ ID NO:１０７）；ＤＦII−１５（SEQ ID NO:１０９） ；ＤＦII−１７（SEQ ID NO:１１１）；ＤＦII−１９．１（SEQ ID NO:１１４） ；ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）及びＤＰII−２０．６（SEQ ID NO:５６ ）（これらすべては、図３〜４に示してある）、又、少なくとも１つの領域は、 下記よりなる群から選択するアミノ酸配列を含む： ＤＰＩ−２１．７；ＤＰＩ−２３．１０；ＤＰＩ−２３．１１；ＤＰＩ−２３． １２；ＤＰＩ−２３．５；ＤＰＩ−２３．６；ＤＰＩ−２３．７；ＤＰＩ−２３ ．８；ＤＰＩ−２３．９；ＤＰＩ−２６．２；ＤＰII−２０．７；ＤＰII−２２ ．６；ＤＰII−２２．３；ＤＰII−２２．４；ＤＰII−２２．５；ＤＰII−２５ ．３；ＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２３．１３；ＤＰＩ−２３．１４；ＤＰＩ− ２３．１５；ＤＰＩ−２３．１６；ＤＰＩ−２３．１７；ＤＰＩ−２６．３；Ｄ ＰＩ−２６．４；ＤＰＩ−２６．５；ＤＰII−２２．７；ＤＰII−２２．８；Ｄ ＰII−２２．９；ＤＰII−２２．１０；ＤＰII−２２．１１（これらすべては、 図２６に示してある）。 好適ペプチドは、次を含む２つ以上の領域（各領域は図３、４及び２５に示し たアミノ酸配列を有する）の組合せを含む：ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２． ２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２ ．３及びＤＰII−２５．２；ＤＰＩ−２１．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２ ３．１０、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII −２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰ Ｉ−２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４；Ｄ ＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２６．４、 ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．２；ＤＰＩ−２１．７ 、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２６．５、ＤＰII−２０．７ 、ＤＰII−２２．７及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２． ２、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２． ８及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３ ．７、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．９及びＤＰII−２ ５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ−２ ６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ− ２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰ II−２０．７、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３、ＤＰＩ−２１．７、Ｄ ＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰII−２０．６、 ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２ 、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２． ６及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３ ．１５、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰII− ２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ −２６．５、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．４；ＤＰ Ｉ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２６．２、Ｄ ＰII−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、 ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII−２０．６、 ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２ 、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６ 及びＤＰII−２５．３；並びにＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ− ２３．５、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII− ２５．４。 更なる好適ペプチドは、少なくとも２つの次の領域の組合せを任意の配置で含 む：Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ、Ｃ、 Ｄ、ここに、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ− ２２．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３． １１、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ −２３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、 ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８又はＤＰＩ−２３．９ であり；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ −２６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２ ０．７であり；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰ II−２２．８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、 ＤＰII−２２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり；ＤはＤＰII −２５．２、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し、Ｘ、Ｙ、Ｚ 、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄは次の領域の組合せではない：ＤＰＩ−２１．２、ＤＦＩ−２ ２．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２ ２及びＤＰII−２５．２。 他の好適ペプチドは、アミノ酸配列の特定の逐次的配置を含み、該特定の逐次 的配置は、下記式を有する： ＡＤＹＣＺＢＸ （式中、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２２ ．２であり；ＺはＤＰＩ− ２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰＩ−２３．１２、Ｄ ＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ−２３． １６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２ ３．７、ＤＰＩ−２３．８、又はＤＰＩ−２３．９であり；ＡはＤＰＩ−２６． １、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ−２６．４又はＤＰＩ−２６ ．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２０．７であり；ＣはＤＰII− ２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２２．８、ＤＰII−２２ ．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２２．３、ＤＰII− ２２．４又はＤＰII−２２．５であり；ＤはＤＰII−２５．２、ＤＰII−２５． ３又はＤＰII−２５．４であり、但し、ＡＤＹＣＺＢＸは、それぞれ、ＤＰＩ− ２６．１、ＤＰII−２５．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰII−２２、ＤＰＩ−２３ ．１、ＤＰII−２０．６及びＤＰＩ−２１．２でない）。 他の好適ペプチドは、アミノ酸配列の特定の逐次的配置を含み、該特定の逐次 的配置は、次式を有する： ＤＹＺＣＡＸＢ （式中、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２２ ．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１１ 、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ− ２３．１４、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、 ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８又 はＤＰＩ−２３．９であり；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ −２６．３、ＤＰＩ−２６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０ ．６又はＤＰII−２０．７；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２ ２．７、ＤＰII−２２．８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII− ２２．１１、ＤＰII−２２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり ；ＤはＤＰII−２５．２、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し 、ＤＹＺＣＡＸＢは、それぞれ、ＤＰII−２５．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ −２３．１、ＤＰII−２２、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２１．２及びＤＰII− ２０．６でない）。 更に他の好適ペプチドは、アミノ酸配列の特定の配置を有し、該特定の逐次的 配置は、下記式を有する： ＤＸＺＡＣＢＹ （式中、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２２ ．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１１ 、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２ ３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰ Ｉ −２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８又はＤＰＩ−２３．９であり ；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ−２６ ．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２０．７ ；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２２．８ 、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２２ ．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり；ＤはＤＰII−２５．２、 ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し、ＤＸＺＡＣＢＹは、それ ぞれ、ＤＰII−２５．２、ＤＰＩ−２１．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２６ ．１、ＤＰII−２２、ＤＰII−２０．６及びＤＦＩ−２２．２でない）。 この発明の範囲内のDermatophagoides属の蛋白質アレルゲンのペプチドは、ダ ニアレルゲンに対するアレルギー反応を治療し及び予防する方法において利用す ることが出来る。従って、本発明の一つの面は、少なくとも１つのＴ細胞エピト ープを、好ましくは少なくとも２つのＴ細胞エピトープを含むDerpＩ、DerpII、Derf Ｉ又はDerfIIのペプチド若しくは改変ペプチド及び製薬上許容し得るキャリ アー若しくは希釈剤を含む治療用組成物を提供する。他の面において、これらの 治療用組成物は、製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤及び少なくとも２ つの領域を含むペプチド（各領域は、少なくとも １つのダニアレルゲンのＴ細胞エピトープを含み且つ同一若しくは異なるダニ蛋 白質アレルゲンから誘導される）を含む。 好適治療用組成物は、Dermatophagoides属の少なくとも１つの蛋白質アレルゲ ンの少なくとも１つのペプチド及び／又は改変ペプチドを含む。この組成物は、 室内塵ダニアレルゲンに感受性の個人へのこの組成物の投与の治療養生がその個 人のＴ細胞をその蛋白質アレルゲンに対して寛容化するのに十分なパーセンテー ジの少なくとも１つの蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む。好ましくは 、この組成物は、各蛋白質のＴ細胞反応性の少なくとも約４０％一層好ましくは 少なくとも約６０％がこの組成物に含まれるのに十分なパーセンテージの１つ以 上の蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む。かかる組成物を個人に投与し て室内塵ダニ又は室内塵ダニと免疫学的に交差反応性のアレルゲンに対する感受 性を治療し又は予防することが出来る。 個人を脱感作するための本発明の治療用組成物の投与は、公知技術を用いて行 なうことが出来る。例えば、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含むダニアレ ルゲンから誘導したペプチドを適当な希釈剤、キャリアー及び／又はアジュバン トと組み合わせて投与することが出来る。個人にＴ細胞アネルギーを誘導するた めに、治療用組成物を、好ましくは、非免疫原形態で投与する（例えば、それは アジュバントを含まない）。製薬上許容し得 る希釈剤は、塩溶液及び水性緩衝溶液を含む。製薬上許容し得るキャリアーは、 ポリエチレングリコール(Wie等、International Archives of Allergy and Appl ied Immunology 64:84-99(1981))及びリポソーム（Strejan等、Journal of Neur oimmunology 7:27(1984)）を含む。かかる組成物を、一般に、注射（皮下、静脈 等）、経口投与（例えば、カプセル形態で）、吸入、経皮適用又は直腸投与によ り投与する。この発明の治療用組成物を、室内塵ダニに感受性の個人に、その個 人の室内塵ダニアレルゲンに対する感受性を減じる（即ち、アレルギー応答を減 じる）のに有効な投薬量及び期間にて投与する。治療上有効な量の１種以上の同 一若しくは異なる治療用組成物を同時に又は逐次的に室内塵ダニに感受性の個人 に投与することが出来る。これらの治療用組成物の有効量は、個人の室内塵ダニ に対する感受性の程度、年齢、性別及び体重等の因子及びその個人においてＴ細 胞応答を刺激するペプチドの能力によって変化する。 この発明の好適治療用組成物は、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む少 なくとも１種のこの発明の下記の改変ペプチド及び製薬上許容し得るキャリアー 若しくは希釈剤を含む：ＤＰＩ−２１．７；ＤＰＩ−２３．１０；ＤＰＩ−２３ ．１１；ＤＰＩ−２３．１２；ＤＰＩ−２３．５；ＤＰＩ−２３．６；ＤＰＩ− ２３．７；ＤＰＩ−２３．８；ＤＰＩ−２３．９；ＤＰＩ−２６．２；ＤＰII− ２０．７；ＤＰII−２２．６；ＤＰII− ２２．３；ＤＰII−２２．４；ＤＰII−２２．５；ＤＰII−２５．３；ＤＰII− ２５．４；ＤＰＩ−２３．１３；ＤＰＩ−２３．１４；ＤＰＩ−２３．１５；Ｄ ＰＩ−２３．１６；ＤＰＩ−２３．１７；ＤＰＩ−２６．３；ＤＰＩ−２６．４ ；ＤＰＩ−２６．５；ＤＰII−２２．７；ＤＰII−２２．８；ＤＰII−２２．９ ；ＤＰII−２２．１０及びＤＰII−２２．１１（これらすべては図２６に示して ある）。 本発明の更に他の面において、それぞれ少なくとも１つのDermatophagoides属 の蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む少なくとも２種のペプチドを含む 組成物（例えば、少なくとも２種のペプチドの物理的混合物）を提供する。これ らのペプチド又は改変したペプチドは、同一若しくは異なるダニアレルゲンから 誘導される。かかる組成物は、製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤を有 する治療用組成物の形態で投与することが出来る。１種以上のかかる組成物の治 療上有効な量を室内塵ダニに感受性の個人に同時に又は逐次的に投与することが 出来る。 製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤及び少なくとも２種のペプチド（ それぞれ、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む）を含む好適治療用組成物 は、下記よりなる群から選択する少なくとも１つのペプチドを含む： ＤＰＩ−１（SEQ ID NO:９）；ＤＰＩ−２（SEQ ID NO: １０）；ＤＰＩ−３（SEQ ID NO:１１）；ＤＰＩ−４（SEQ ID NO:１２）；ＤＰ Ｉ−１１．１（SEQ ID NO:１３）；ＤＰＩ−１２．１（SEQ ID NO:１４）；ＤＰ Ｉ−５（SEQ ID NO:１５）；ＤＰＩ−１３（SEQ ID NO:１７）；ＤＰＩ−１４（ SEQ ID NO:１８）；ＤＰＩ−１５（SEQ ID NO:１９）；ＤＰＩ−６．１（SEQ ID NO:２０）；ＤＰＩ−７．１（SEQ ID NO:２１）；ＤＰＩ−８（SEQ ID NO:２２ ）；ＤＰＩ−９（SEQ ID NO:２３）；ＤＰＩ−１６（SEQ ID NO:２４）；ＤＰＩ −１０（SEQ ID NO:２５）；ＤＰＩ−１７（SEQ ID NO:２６）；ＤＰＩ−２１． １（SEQ ID NO:２７）；ＤＰＩ−２１．２（SEQ ID NO:２８）；ＤＰＩ−２２． １（SEQ ID NO:２９）；ＤＰＩ−２２．２（SEQ ID NO:３０）；ＤＰＩ−２２． ３（SEQ ID NO:３１）；ＤＰＩ−２２．４（SEQ ID NO:３２）；ＤＰＩ−２３． １(SEQ ID NO:３３）；ＤＰＩ−２３．２（SEQ ID NO:３４）；ＤＰＩ−２５． １（SEQ ID NO:３５）；ＤＰＩ−２５．２（SEQ ID NO：３６）；ＤＰＩ−２６ ．１(SEQ ID NO:３７）；ＤＰＩ−２７．１（SEQ ID NO:３８）；ＤＰＩ−２８ ．１（SEQ ID NO:３９）；ＤＰＩ−２８．２（SEQ ID NO:４０）；ＤＦＩ−１（ SEQ ID NO:７２）；ＤＦＩ−２．１（SEQ ID NO:７３）；ＤＦＩ−３（SEQ ID N O:７４）；ＤＦＩ−４（SEQ ID NO:７５）；ＤＦＩ−１１（SEQ ID NO:７６）； ＤＦＩ−１２（SEQ ID NO:７７）；ＤＦＩ−５（SEQ ID NO: ７８）；ＤＦＩ−１３（SEQ ID NO:７９）；ＤＦＩ−１４（SEQ ID NO:８０）； ＤＦＩ−１５（SEQ ID NO:８１）；ＤＦＩ−６（SEQ ID NO:８２）；ＤＦＩ−７ （SEQ ID NO:８３）；ＤＦＩ−８．１（SEQ ID NO:８４）；ＤＦＩ−８（SEQ ID NO:８５）；ＤＦＩ−９（SEQ ID NO:８６）；ＤＦＩ−１６（SEQ ID NO:８７） ；ＤＦＩ−１０（SEQ ID NO:８８）；ＤＦＩ−１７（SEQ ID NO:８９）；ＤＦＩ −２１．１（SEQ ID NO:９０）；ＤＦＩ−２１．２（SEQ ID NO:９１）；ＤＦＩ −２２．１（SEQ ID NO:９２）；ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）；ＤＦＩ −２２．４（SEQ ID NO:９４）；ＤＦＩ−２３．１（SEQ ID NO:９５）；ＤＦＩ −２３．２（SEQ ID NO:９６）；ＤＦＩ−２５．１（SEQ ID NO:９７）；ＤＦＩ −２５．２（SEQ ID NO:９８）；ＤＦＩ−２６．１（SEQ ID NO:９９）；ＤＦＩ −２７．１（SEQ ID NO:１００）；ＤＦＩ−２８．１（SEQ ID NO:１０１）；Ｄ ＦＩ−２８．２（SEQ ID NO:１０２）；ＤＰII−２０（SEQ ID NO:５０）；ＤＰ II−２０．１（SEQ ID NO:５１）；ＤＰII−２０．２（SEQ ID NO:５２）；ＤＰ II−２０．３（SEQ ID NO:５３）；ＤＰII−２０．４（SEQ ID NO:５４）；ＤＰ II−２０．５（SEQ ID NO:５５）；ＤＰII−２０．６（SEQ ID NO:５６）；ＤＰ II−１（SEQ ID NO:４１）；ＤＰII−２（SEQ ID NO:４２）；ＤＰII−３．１（ SEQ ID NO:４３）；ＤＰII−４（SEQ ID NO：４４）；ＤＰII−５ （SEQ ID NO:４５）；ＤＰII−６（SEQ ID NO:４６）；ＤＰII−７（SEQ ID NO: ４７）；ＤＰII−８（SEQ ID NO:４８）；ＤＰII−９（SEQ ID NO:４９）；ＤＰ II−１．１（SEQ ID NO：５７）；ＤＰII−１．２（SEQ ID NO:５８）；ＤＰII −２．１（SEQ ID NO:５９）；ＤＰII−２．２（SEQ ID NO:６０）；ＤＰII−２ ．３（SEQ ID NO:６１）；ＤＰII−２１（SEQ ID NO:６２）；ＤＰII−２２（SE Q ID NO:６３）；ＤＰII−２６（SEQ ID NO:６４）；ＤＰII−２６．１（SEQ ID NO:６５）；ＤＰII−２３（SEQ ID NO:６６）；ＤＰII−２３．１（SEQ ID NO: ６７）；ＤＰII−２４（SEQ ID NO:６８）；ＤＰII−２５（SEQ ID NO:６９）； ＤＰII−２５．１（SEQ ID NO:７０）；ＤＰII−２５．２（SEQ ID NO:７１）； ＤＦII−１（SEQ ID NO:１０３）；ＤＦII−２（SEQ ID NO:１０４）；ＤＦII− １３．１（SEQ ID NO:１０５）；ＤＦII−３．１（SEQ ID NO:１０６）；ＤＦII −４．５（SEQ ID NO:１０７）；ＤＦII−４．３（SEQ ID NO:１０８）；ＤＦII −１５（SEQ ID NO:１０９）；ＤＦII−１６（SEQ ID NO:１１０）；ＤＦII−１ ７（SEQ ID NO:１１１）；ＤＦII−１８（SEQ ID NO:１１２）；ＤＦII−１９（ SEQ ID NO:１１３）；ＤＦII−１９．１（SEQ ID NO:１１４）；ＤＦII−２１（ SEQ ID NO:１１５）；ＤＦII−２２（SEQ ID NO:１１６）、ＤＰＩ−２３．１． １、ＤＰＩ−２３．１．２、ＤＰＩ−２３．１．３、ＤＰＩ −２３．１．４、ＤＰII−２２．１、ＤＰII−２２．２（すべて図３、４及び２ ５に示してある）、そして、少なくとも１つの領域は、次の群から選択する改変 アミノ酸配列を含む：ＤＰＩ−２１．７；ＤＰＩ−２３．１０；ＤＰＩ−２３． １１；ＤＰＩ−２３．１２；ＤＰＩ−２３．５；ＤＰＩ−２３．６；ＤＰＩ−２ ３．７；ＤＰＩ−２３．８；ＤＰＩ−２３．９；ＤＰＩ−２６．２；ＤＰII−２ ０．７；ＤＰII−２２．６；ＤＰII−２２．３；ＤＰII−２２．４；ＤＰII−２ ２．５；ＤＰII−２５．３；ＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２３．１３；ＤＰＩ− ２３．１４；ＤＰＩ−２３．１５；ＤＰＩ−２３．１６；ＤＰＩ−２３．１７； ＤＰＩ−２６．３；ＤＰＩ−２６．４；ＤＰＩ−２６．５；ＤＰII−２２．７； ＤＰII−２２．８；ＤＰII−２２．９；ＤＰII−２２．１０及びＤＰII−２２． １１（すべて図２６に示してある）。 製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤及び少なくとも２種のペプチド（ それぞれ、少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含む）を含む一層更に好適な治 療用組成物は、下記よりなる群から選択する少なくとも１つのペプチドを含む： ＤＰＩ−２１．１（SEQ ID NO:２７）；ＤＰＩ−２１．２（SEQ ID NO:２８）； ＤＰＩ−２２．１（SEQ ID NO:２９）；ＤＰＩ−２２．２（SEQ ID NO:３０）； ＤＰＩ−２２．３（SEQ ID NO:３１）；ＤＰＩ−２２．４（SEQ ID NO:３２）； ＤＰＩ−２３． １（SEQ ID NO:３３）；ＤＰＩ−２３．２（SEQ ID NO:３４）；ＤＰＩ−２５． １（SEQ ID NO:３５）；ＤＰＩ−２５．２（SEQ ID NO:３６）；ＤＰＩ−２６． １（SEQ ID NO:３７）；ＤＰＩ−２７．１（SEQ ID NO:３８）；ＤＰＩ−２８． １（SEQ ID NO:３９）；ＤＰＩ−２８．２（SEQ ID NO:４０）；ＤＰＩ−１（SE Q ID NO:９）；ＤＦＩ−１（SEQ ID NO:７２）；ＤＦＩ−２１．１（SEQ ID NO: ９０）；ＤＦＩ−２１．２（SEQ ID NO:９１）；ＤＦＩ−２２．１（SEQ ID NO: ９２）；ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）；ＤＦＩ−２２．４（SEQ ID NO: ９４）；ＤＦＩ−２３．１（SEQ ID NO:９５）；ＤＦＩ−２３．２（SEQ ID NO: ９６）；ＤＦＩ−２５．１（SEQ ID NO:９７）；ＤＦＩ−２５．２（SEQ ID NO: ９８）；ＤＦＩ−２６．１（SEQ ID NO:９９）；ＤＦＩ−２７．１（SEQ ID NO: １００）；ＤＦＩ−２８．１（SEQ ID NO:１０１）；ＤＦＩ−２８．２（SEQ ID NO:１０２）；ＤＰII−２０（SEQ ID NO:５０）；ＤＰII−２０．１（SEQ ID N O:５１）；ＤＰII−２０．２（SEQ ID NO:５２）；ＤＰII−２０．３（SEQ ID N O:５３）；ＤＰII−２０．４（SEQ ID NO:５４）；ＤＰII−２０．５（SEQ ID N O:５５）；ＤＰII−２０．６（SEQ ID NO:５６）；ＤＰII−１（SEQ ID NO:４１ ）；ＤＰII−１．１（SEQ ID NO:５７）；ＤＰII−１．２（SEQ ID NO:５８）； ＤＰII−２．１（SEQ ID NO:５９）；ＤＰII−２．２（SEQ ID NO: ６０）；ＤＰII−２．３（SEQ ID NO:６１）；ＤＰII−２１（SEQ ID NO:６２） ；ＤＰII−２２（SEQ ID NO:６３）；ＤＰII−２６（SEQ ID NO:６４）；ＤＰII −２６．１（SEQ ID NO:６５）；ＤＰII−２３（SEQ ID NO:６６）；ＤＰII−２ ３．１（SEQ ID NO:６７）；ＤＰII−２４（SEQ ID NO:６８）；ＤＰII−２５（ SEQ ID NO:６９）；ＤＰII−２５．１（SEQ ID NO:７０）；ＤＰII−２５．２（ SEQ ID NO:７１）；ＤＦII−１（SEQ ID NO:１０３）；ＤＦII−２（SEQ ID NO: １０４）；ＤＦII−１３．１（SEQ ID NO:１０５）；ＤＦII−３．１（SEQ ID N O:１０６）；ＤＦII−４．５（SEQ ID NO:１０７）；ＤＦII−４．３（SEQ ID N O:１０８）；ＤＦII−１５（SEQ ID NO:１０９）；ＤＦII−１６（SEQ ID NO:１ １０）；ＤＦII−１７（SEQ ID NO:１１１）；ＤＦII−１８（SEQ ID NO:１１２ ）；ＤＦII−１９（SEQ ID NO:１１３）；ＤＦII−１９．１（SEQ ID NO:１１４ ）；ＤＦII−２１（SEQ ID NO:１１５）及びＤＦII−２２（SEQ ID NO:１１６） 、そして少なくとも１つの改変ペプチドは、下記よりなる群から選択する：ＤＰ Ｉ−２１．７；ＤＰＩ−２３．１０；ＤＰＩ−２３．１１；ＤＰＩ−２３．１２ ；ＤＰＩ−２３．５；ＤＰＩ−２３．６；ＤＰＩ−２３．７；ＤＰＩ−２３．８ ；ＤＰＩ−２３．９；ＤＰＩ−２６．２；ＤＰII−２０．７；ＤＰII−２２．６ ；ＤＰII−２２．３；ＤＰII−２２．４；ＤＰII−２２．５；ＤＰII− ２５．３；ＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２３．１３；ＤＰＩ−２３．１４；ＤＰ Ｉ−２３．１５；ＤＰＩ−２３．１６；ＤＰＩ−２３．１７；ＤＰＩ−２６．３ ；ＤＰＩ−２６．４；ＤＰＩ−２６．５；ＤＰII−２２．７；ＤＰII−２２．８ ；ＤＰII−２２．９；ＤＰII−２２．１０及びＤＰII−２２．１１（すべて図２ ６に示してあり、ここに、該組成物は、室内塵ダニアレルゲンに感受性の個人へ の投与に際してその個人のＴ細胞を少なくとも１つの蛋白質アレルゲンに対して 寛容にするのに十分なパーセンテージの当該少なくとも１つの蛋白質アレルゲン のＴ細胞エピトープを含む）。 この発明の他の好適組成物は、下記のペプチド及び／又は改変ペプチドの組合 せ及び製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤を含む： ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２６．１ 、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．２；ＤＰＩ−２１． ２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２０ ．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２ ２．２、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII− ２２．５及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ −２３．１２、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤ ＰII−２５．２；ＤＰＩ−２１．７、 ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２６．５、ＤＰII−２０．７、 ＤＰII−２２．７及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２ 、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．８ 及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３． ７、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．９及びＤＰII−２５ ．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ−２６ ．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２ １．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２ ０．７、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ− ２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII −２２．５及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰ Ｉ−２３．１４、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII−２０．７、 ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２ 、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２． ６及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３ ．１６、ＤＰＩ−２６．５、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII− ２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ − ２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３；ＤＰＩ −２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰII −２０．６、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４；ＤＰＩ−２１．７、ＤＦ Ｉ−２２．２、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰ II−２２．６及びＤＰII−２５．３；並びにＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２． ２、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２． ７及びＤＰII−２５．４。 この発明の更に別の面において、製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤 及び少なくとも２種の、好ましくは少なくとも４種の、一層好ましくは少なくと も６種の、更に一層好ましくは少なくとも７種の下記のペプチドの組合せを含む 組成物を提供する： Ｘ，Ｙ，Ｚ，Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ （ここに、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２ ２．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１ １、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ− ２３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、Ｄ ＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８又はＤＰＩ−２３．９で あり；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ− ２６．４又 はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２０．７であり ；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２２．８ 、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２２ ．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり；且つＤはＤＰII−２５． ２、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ 、Ｃ、Ｄは次のペプチドの組合せではない： ＤＰＩ−２１．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２６．１、 ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２及びＤＰII−２５．２）。 本発明は又、個人における室内塵ダニアレルゲンに対する感受性を検出する方 法であって、その個人から得た血液試料を、血液成分とペプチドとの結合に適し た条件下で本発明のペプチドと合わせて、かかる結合が生じる程度を測定するこ とを含む上記の方法をも提供する。結合が起きる程度は、Ｔ細胞機能、Ｔ細胞増 殖又はそれらの組合せを評価することにより測定する。 この発明のペプチドの構造を、溶解度を増し、治療若しくは予防効果又は安定 性（例えば、生体外での棚持ち及び生体内での蛋白質分解に対する抵抗性）を増 大させる目的で、改変し又は更に改変することも可能である。アミノ酸の置換、 欠失又は付加等によりアミノ酸配列を変更して免疫原性を改変し及び／又はアレ ルゲン性を減 じた、或は同じ目的のために成分を加えた改変ペプチドを生成することが出来る 。 例えば、ペプチドを改変して、それが強い増殖応答を誘導する能力を伴わずに 或は免疫原形態で投与したときに如何なる増殖応答も伴わずにＴ細胞アネルギー を誘導し且つＭＨＣ蛋白質に結合する能力を維持するようにすることが出来る。 この場合に、Ｔ細胞レセプターに対する重要な結合性残基を公知技術（例えば、 各残基の置換及びＴ細胞反応性の有無の測定）を用いて決定することが出来る。 Ｔ細胞レセプターとの相互作用に必須であることが示された残基を、必須のアミ ノ酸を他の望ましくは類似のアミノ酸残基であってその存在がＴ細胞反応性を増 大させ、減少させるが除去せず、又は該反応性に影響しないアミノ酸残基で置き 換えること（保存的置換）により改変することが出来る。更に、Ｔ細胞レセプタ ー相互作用に必須でないアミノ酸残基を、他のアミノ酸であって、その取込みが Ｔ細胞反応性を増大させ、減少させ或は該反応性に影響しないが関連ＭＨＣへの 結合を排除しないアミノ酸で置き換えることにより改変することが出来る。 更に、この発明のペプチドを、ＭＨＣ蛋白質複合体との相互作用に必須である ことが示されたアミノ酸を他の好ましくは類似のアミノ酸でであって、その存在 がＴ細胞活性を増大させ、減少させるが除去しないことが示されたアミノ酸で置 き換えることにより改変することが出 来る（保存的置換）。更に、ＭＨＣ蛋白質複合体との相互作用に必須ではないが やはりＭＨＣ蛋白質複合体に結合するアミノ酸残基を、他のアミノ酸であって、 その取込みがＴ細胞反応性を増大させ、該反応性に影響せず、又は該反応性を減 少させるアミノ酸で置き換えることによって改変することが出来る。非必須アミ ノ酸についての好適アミノ酸置換は、限定はしないが、アラニン、グルタミン酸 又はメチルアミノ酸での置換を含む。 ペプチドの改変の他の例は、システイン残基を好ましくはセリン、スレオニン 、ロイシン、又はグルタミン酸で置換してジスルフィド結合による２量体化を最 小化することである。例えば、DerpII又はDerfIIの何れかのアレルゲンの最初の １０アミノ酸残基を含むペプチドの安定性を、８番目のアミノ酸残基に位置する システインを好ましくはアラニン又はグルタミン酸で、或はセリン又はスレオニ ンで置き換えることにより増大させることが出来る。 安定性及び／又は反応性を増大させるために、ペプチドを改変して、蛋白質ア レルゲンのアミノ酸配列に天然の対立遺伝子変異により生じる一つ以上の多形を 取り込むことも出来る。更に、Ｄ−アミノ酸、非天然アミノ酸又は非アミノ酸ア ナログを代用として又は追加してこの発明の範囲内の改変ペプチドを生成するこ とが出来る。更に、本発明のペプチドを、A.Sehon と共同研究者（Wie 等、前出 ）のポリエチレングリコール（ＰＥＧ） 法を用いて改変してＰＥＧと結合したペプチドを生成することが出来る。更に、 ＰＥＧを、この発明のペプチドの化学合成中に加えることが出来る。ペプチド若 しくはその部分の改変は又、還元／アルキル化（Tarr:Methods of Protein Micr ocharacterization ，J.E.Silver編、Humana Press，ニュージャージー、Clifton在、155- 194頁(1986)）；アクリル化（Tarr，前出）；エステル化（Tarr，前出）；適当 なキャリアーへの化学カップリング(Mishell 及びShiigi編、Selected Methods in Cellular Immunology ，WH Freeman，カリフォルニア、San Francisco 在(1980);米国 特許第４，９３９，２３９号);又は温和なホルマリン処理（Marsh Internationa l Archives of Allergy and Aplied Immunology 41:199-215(1971)）を含むこと も出来る。 他の具体例において、アレルゲングループ内のペプチド（例えば、DerpＩ又はDerp II）を改変してＴ細胞反応性を増大させることが出来る。グループＩとグル ープII内に交差反応性があるならば、アミノ酸の位置で対応する他のグループの アレルゲンのペプチドより反応性が低い１つのグループのアレルゲンのペプチド は、対応するペプチドから１つ以上のアミノ酸が置換された１つ以上のアミノ酸 を有し得る。更に、ペプチドを改変して蛋白質アレルゲンのアミノ酸配列に天然 の対立遺伝子変異から生じる多形を取り込むことが出来る。これらの多形の１つ 以上を含むペプチドの改変は、増大された安定性及 び／又は反応性を生じ得る。 この発明のペプチドの精製を容易にし、その溶解度を潜在的に増大させるため に、レポーター基をペプチド主鎖に加えることは可能である。例えば、ポリヒス チジンをペプチドに加えてそのペプチドを固定化金属イオンアフィニティークロ マトグラフィー上で精製することが出来る（Hochuli,E.等、Bio/Technology，6: 1321-1325(1988)）。更に、特異的エンドプロテアーゼ開裂部位を、所望であれ ば、レポーター基とペプチドのアミノ酸配列の間に導入して無関係な配列を含ま ないペプチドの単離を容易にすることが出来る。上首尾に個人を蛋白質抗原に対 して脱感作するためには、官能基をそのペプチドに加えることにより又は疎水性 Ｔ細胞エピトープ若しくは疎水性エピトープを含む領域をそれらのペプチド中に 含まないことによってペプチドの溶解度を増すことが必要であり得る。 ペプチド内のＴ細胞エピトープの適当な抗原プロセッシングを潜在的に助ける ために、標準的プロテアーゼ感受性部位を、それぞれ少なくとも１つのＴ細胞エ ピトープを含む領域の間に組換えにより又は合成により作成することが出来る。 例えば、帯電したアミノ酸対例えばＫＫ又はＲＲを、ペプチドの組換え構築中に ペプチド内の領域間に導入することが出来る。その結果生成するペプチドを、１ つ以上のＴ細胞エピトープを含むペプチドの部分を生成するカテプシン及び／又 は他のトリプシン 様酵素での開裂に対して感受性にすることが出来る。更に、かかる帯電したアミ ノ酸残基は、ペプチドの溶解度の増大を生じ得る。 この発明のペプチドをコードするＤＮＡの位置指定突然変異導入法を用いてそ のペプチドの構造を改変することが出来る。かかる方法は、ＰＣＲ（Ho等、Gene ,77:51-59(1989)）又は突然変異した遺伝子の全合成（Hostomsky,Z.等、Biochem .Biophys.Res.Comm. ,161:1056-1063）を含み得る。細菌での発現を増大させるた めに、前述の方法を他の手順と共に用いてこの発明のペプチドをコードするＤＮ Ａ構築物中の真核生物のコドンを大腸菌において優先的に利用されるものに変え ることが出来る。 上述の改変手順の１つ以上によって改変したこの発明のペプチドの特定の例は 、限定はしないが、図２５に示したようなペプチドＤＰＩ−２３．１に対する改 変物及びペプチドＤＰII−２２に対する改変物を含む。更に詳細には、ペプチド ２３．１に対する改変物は、溶解度を増すための帯電アミノ酸（ＤＰＩ−２３． ７）、帯電アミノ酸対（ＤＰＩ−２３．５）の追加及びシステイン残基のセリン （ＤＰＩ−２３．６）又はグルタミン酸での置換を含む。ペプチドＤＰII−２２ への荷電は、図２５に示すように、溶解度を増すための帯電アミノ酸対の追加（ ２２．６及び２２．３）を含む。 本発明は又、この発明のペプチドをコードする配列を 有する核酸をも提供する。この発明の任意の具体例において用いた核酸配列は、 ここに記載したようなｃＤＮＡであってよく、或は、ここに表した配列のすべて 又は一部を有する任意のオリゴデオキシヌクレオチド配列であってよく、或は、 それらの機能的同等物であってよい。かかるオリゴデオキシヌクレオチド配列は 、公知技術を用いて、化学的に又は機械的に生成することが出来る。 この発明を、更に、下記の非制限的実施例により説明する。実施例Ｉ 天然のダニアレルゲンの精製 下記は、室内塵ダニDermatophagoides pteronyssinus及びDermatophagoides f arinae のグループＩ及びグループIIアレルゲンを、ヒトＴ細胞エピトープマッピ ングのための第一次抗原としてそれらの天然形態で精製するためになされた仕事 の説明である。 ４つのすべての蛋白質アレルゲンDerfＩ、DerpＩ，DerfII及びDerpIIを、オー ストラリア国、Melbourne在、Commonwealth Sera Laboratories又はオハイオ、Dayto n在、Wright State大学のLarry G．Arlian 博士から得た消費したダニ培養培地 からイムノアフィニティー精製した。乾燥した消費したダニ培養培地の１０％（ wt/vol）水性抽出物を、ＰＢＳ（リン酸緩衝塩溶液）中で４℃で一晩撹拌しなが ら調製した。不溶性物質を、４℃で、１０，０００×ｇで１時間の遠心分離によ り除去した。 次いで、上清を真空マニホールド上でWhatman #1紙を通して濾過し、４℃で、１ ５，０００×ｇで１時間再遠心分離した。最後の濾過を０．４５ｍセルロースア セテートフィルターを通して行なった。 モノクローナル抗体４Ｃ１及び６Ｄ６（ノースカロライナ、Virginia大学）を、それぞ れ、グループＩ及びグループIIダニアレルゲンのイムノアフィニティー精製に用 いた（Chapman 等、J.Allergy Clin.Immunol. 80:1479-1484(1987)；Heymann 等 、J.Allergy Clin.Immunol.83:1055-1067(1989)）。この４Ｃ１モノクローナル 抗体は、DerfＩ及びDerpＩ蛋白質の両方に共有されるエピトープと反応し、同様 に、６Ｄ６モノクローナル抗体は、DerfII及びDerpII蛋白質の両方と反応する。 各モノクローナル抗体について、腹水液を５０％硫安にてカットし、抗体を１ ００ｍＭ ＮａＨＣＯ₃、５００ｍＭ ＮａＣｌ（ｐＨ８．３）中でＣＮＢｒ活 性化セファロース４Ｂ（Pharmacia）に一晩４℃にて結合させた。 モノクローナル抗体のカラムをＰＢＳにて平衡化し、濾過した抽出物を１５ｍ ｌ／時で載せた。次いで、カラムを２０容のＰＢＳで洗い、その後、一層ストリ ンジェントな５００ｍＭ ＮａＣｌを補ったＰＢＳでの洗浄（２０カラム容積） を行なった。蛋白質を５００ｍＭＮａＣｌ、１００ｍＭ グリシン（ｐＨ１１． ０）にて溶出し、２８０ｎｍでの吸光度測定により画分の蛋白質 含量を評価した。ピーク画分をプールして、ＰＢＳに対して何回も透析し、陰圧 透析装置（マサチューセッツ、Beverly在、Amiconより購入）を用いて濃縮し、ダニグル ープＩ及びグループIIアレルゲンのＴ細胞エピトープマッピング研究で用いた。 回収した蛋白質は、８０％（グループII）から９０％（グループＩ）に及ぶ純度 にて得られた。 逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィーを適用して、イムノアフィニティー精製した グループIIダニ蛋白質アレルゲンを、Heymann等、J.Allergy Clin.Immunol. 83: 1055-1067(1989)の条件に従って、更に精製した。簡単に言えば、イムノアフィ ニティー精製した蛋白質を、０．１％(vol/vol)ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏにて、５μｍの３ ００ÅＣ−８カラム（Applied Biosystems Inc．）に加えた。カラムに対する流 量は、１ｍｌ／分であり、６０分間にわたって０〜６０％アセトニトリル／０． １％ＴＦＡの勾配を伴った。グループII蛋白質は、４５％アセトニトリル／０． １％ＴＦＡ辺りで溶出した。ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動とその後の 密度スキャンにより画分の純度を分析した。９０％より高い純度のグループII蛋 白質を有する画分を、続いて、そのアレルゲンのヒトＴ細胞マッピングに利用し た。実施例II 組換えダニアレルゲンの発現 下記は、室内塵ダニDermatophagoides pteronyssinus 及びDermatophagoides farinaeのグループＩ及びグループIIアレルゲンを、大腸 菌において、組換え蛋白質として生成するためになされた仕事の説明である。 ４つのすべての蛋白質アレルゲンDerfＩ、DerpＩ、DerfII及びDerpIIを、それ らの成熟アミノ末端にて、リーダー配列ＭＧＨＨＨＨＨＨＥＦ（ここに、アミノ 酸ＥＦは、ＥｃｏＲＩ制限部位GAATTCによりコードされる）と融合させた。アミ ノ酸のＨ₆ストレッチはＮＴＡアガロースカラム（Diagen GmbH ）においてＮｉ^{+ +} イオンと配位結合するので、この活性は、組換え蛋白質の精製に利用された（H ochuli等、Biotechnology 86:1321-1325(1988)）。最終的に、４つのすべてのア レルゲンを、発現ベクターｐＥＴ１１ｄ（Studier 等、Methods in Enzymology 185 :60-88(1990)）中に、ファージＴ７のｇｎ１０プロモーターの転写制御下に てサブクローン化した。 D. pteronyssinus及びD. farinae由来のグループＩアレルゲンをコードするｃ ＤＮＡを、Wayne Thomas博士から、λｇｔ１１（Chua等、J.Exp.Med. 167:175-1 82(1988)；Dilworth等、Clin.Exp.Allergy 21:25-32(1991)）からのサブクロー ンとして得た。DerpＩのｃＤＮＡは、ImmuLogic（Palo Alto）にて、Roland Bue low博士により、Ｍ１３ＲＦプラスミッドから、ＥｃｏＲＩ断片として、ｐＵＣ １８中にサブクローン化されたが、他方、DerfＩのｃＤＮＡは、Ｍ１３ｍｐ１９ ＲＦプラスミッドＤｆＩ（１）から直接操作した。 初めに、これらのｃＤＮＡを、ｐＴｒｃ９９Ａ（Amann 等、Gene 69:301-315( 1988)）の改変バージョンである発現ベクターｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆インサート ＲＲＲＳ中にサブクローン化した。元のベクターは、ポリリンカーの５’末端の ＮｃｏＩ（ＭＧ）及びＥｃｏＲＩ（ＥＦ）部位の間へのリーダー配列ＭＧＨＨＨ ＨＨＨＥＦをコードする合成アダプター（２つの相補的オリゴヌクレオチドから なる）、及びＲＲＳ（逆制御配列）のポリリンカーの３’末端のＨｉｎｄＩＩＩ 部位への付加により改変された。リーダー配列は、上記のように、精製の補助と して利用されたが、他方、ＲＲＳは、組換え体メッセージの安定性を増大し、そ れにより組換え体蛋白質収量を増大させるために加えられた（Skoglund等、Gene 88:1-5(1990)）。最後に、インサート（この場合には、短ブタクサの主要アレ ルゲンをコードするAmb a Ｉ.1ｃＤＮＡ（Rafnar等、J.Biol.Chem. 226:1229-12 36(1991)）がＥｃｏＲＩ〜ＰｓｔＩ断片として、Ｈ₆リーダーとフレームを合わ せてサブクローン化された。 ダニのグループＩアレルゲンを発現させるために、Amb a Ｉ.1ｃＤＮＡをＥｃ ｏＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ消化により切り出してφＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩオ ーバーハングを有するアダプター（相補的オリゴヌクレオチドの対からなる）に より置き換えた。これらのアダプター（図２ａ）は、成熟DerpＩのＮＨ₂末端の 最初の５アミノ酸（ｐｓｔＩ部位まで）及び成熟DerfＩのＮＨ₂末端の最初の１ ０アミノ酸（ＨｐａＩ部位まで）をコードした。ベクターのＥｃｏＲＩ部位とア ダプター中のφＥｃｏＲＩ部位とのライゲーションに際して、ベクターのＥｃｏ ＲＩ部位は破壊され、内部にコードされるアダプターのＥｃｏＲＩ部位が中間体 構築物ｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆５’ｐ１ＲＲＳ及びｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆５’ｆ １ＲＲＳ中の単独ＥｃｏＲＩ部位として残った。DerpＩのｃＤＮＡを、ＰｓｔＩ ／ＥｃｏＲＩ断片として、ＰｓｔＩ／ＥｃｏＲＩ消化したｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆ ５’ｐ１ＲＲＳ中に挿入したが、他方、DerfＩｃＤＮＡは、ＨｐａＩ／Ｅｃｏ ＲＩ断片として、ＨｐａＩ／ＥｃｏＲＩ消化したｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆５’ｆ １ＲＲＳ中に挿入した。各構築物ｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆５’ｐ１ＲＲＳ及びｐ Ｔｒｃ９９ＡＨｉｓ₆５’ｆ１ＲＲＳの５’末端の配列を、シーケナーゼ（商標 ）IIキット（U.S.Biochemicals）を用いて、ジデオキシチェーンターミネーショ ンＤＮＡ配列決定により確認した。ＮｃｏＩ／ＮｈｅＩ消化（ＮｈｅＩ部位は ＲＲＳアダプターの３’末端に存在した）により、Ｈ₆ｐ１及びＨ₆ｆ１コーディ ングカセットを両方共切り出し、ＮｃｏＩ／ＮｈｅＩ消化したｐＥＴ１１ｄ中に 挿入した。これらの２つの構築物ｐＥＴ１１ｄＨｉｓ₆ｐ１ＲＲＳ及びｐＥＴ１ １ｄＨｉｓ₆ｆ１ＲＲＳを、組換え蛋白質の発現用のコンピテントなＢＬ２１［ ＤＥ３］細菌中にトランスフォームした。ＢＬ２１［ＤＥ３］は、組換えλファ ージ溶原ＤＥ３を、ｌａｃＵＶ５プロモーターの転写制御下のＴ７ファージＲＮ Ａポリメラーゼ遺伝子と共に含む。Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼ遺伝子発現は、ＩＰ ＴＧ（イソプロピル−Ｂ−Ｄ−チオガラクトピラノシド）の添加により誘導され 、それが更に、ｐＥＴベクターのＴ７ｇｎ１０プロモーターの３’にサブクロー ン化された組換え遺伝子の高レベルの発現へと導く。 D. pteronyssinus及びD. farinae由来のグループIIアレルゲンをコードするｃ ＤＮＡも又、Wayne Thomas博士から、λｇｔ１１（Chua等、Int Arch.Appl.Immu n. 91:118-123(1990)；Trudinger等、Clin.Exp.Allergy 21:33-37(1991)）から のサブクローンとして入手した。元のDerpIIｃＤＮＡは、ImmuLogic（Palo Alto ）のRoland Buelow博士により、Ｍ１３ＲＦプラスミッドから、ｐＣＡ及びｐＧ ＥＸベクター中にサブクローン化された。Thomas博士のグループは、DerfIIｃＤ ＮＡをｐＧＥＸ中のサブクローンとして供給した。グループIIのｃＤＮＡを有す る両ｐＧＥＸプラスミッドを、同じ ５’センス／３’アンチセンスプライマー対（図２ｂ）を用いるＰＣＲ増幅のた めのテンプレートとして用いた。これらのプライマーは、成熟グループII蛋白質 のＮＨ₂末端にフレームを合わせてＥｃｏＲＩ部位（アミノ酸ＥＦをコードするG AATTC）を融合させ且つグループIIコード領域の３’側にＰｓｔＩ部位を位置さ せるようにデザインされた。３０×（９４℃１分間／５５℃１分３０秒間／７２ ℃２分間）のプログラムを有するMJ Researchサーマルコントローラーを、ＰＣ Ｒ増幅のためのPerkin Elmer-Cetus Gene Ampキットからの試薬と共に用いた。 ＰＣＲ生成物をＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ消化し、ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ消化したＭ １３ｍｐ１９ＲＦ中にサブクローン化した。ＤＮＡ配列分析を行なってＰＣＲ生 成物の配列を確認した。正しいＭ１３ＲＦをＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ消化し、それ らのグループIIｃＤＮＡインサートを単離し、且つＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ消化し たｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ₆ Amb a I.1 ＲＲＳ（これは、グループIIｃＤＮＡをブ タクサｃＤＮＡと交換するために用いた（図１））中にサブクローン化した。 DerfIIｃＤＮＡは、５４位に配列多形（即ち、イソロイシンの位置にスレオニ ン）を有した。この多形を変えるために、DerfIIｃＤＮＡのＴ₅₄残基の位置指定 突然変異導入法を、Kunkel，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:488-492(1985)の方法 に基づいて、Bio-Rad Laboratoriesの Muta-Geneキットを用いて行なった。Ｔ ₅₄DerfIIｃＤＮＡを有する元のＭ１３ｍ ｐ１９ＲＦを、ＤＮＡ複製時にチミジンの代わりにウラシルを取込むことを許容 するＣＪ２３６細菌中にトランスフォームし、一本鎖ファージＤＮＡをテンプレ ートとして調製した。突然変異誘発性の１７塩基対のプライマー（図２ｂ）をこ のファージテンプレートＤＮＡにアニールさせた。Ｔ４ＤＮＡポリメラーゼを用 いて、突然変異誘発性オリゴヌクレオチドによりプライムしてテンプレートＤＮ Ａを複製し、Ｔ４ＤＮＡリガーゼを用いてＤＮＡ鎖中のギャップを閉じた。この 反応物を、ＤＮＡからのウラシル残基の削除について野生型であり、それ故、突 然変異した（ウラシルを含まない）鎖を選択的に複製するＭＶ１１９０細菌中に トランスフォームし、一本鎖ファージＤＮＡを組換え体（白色）プラークから調 製した。幾つかの組換え体をＤＮＡ配列分析にかけ、修正されたＩ₅₄を有するDe rf IIｃＤＮＡ配列を、ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ断片として、ＥｃｏＲＩ／ＰｓｔＩ 消化したｐＴｒｃ９９ＡＨｉｓ ₆Amb a I.1 ＲＲＳ中にサブクローン化した。 以前の仕事が、殆どの場合に、ｐＥＴ１１ｄベクターが、ｐＴｒｃ９９Ａベク ターよりも高レベルで組換え蛋白質を発現することが出来るということを示した ので、２つのダニグループIIｃＤＮＡを、Ｈ₆融合蛋白質としてＴ７ベクター中 にサブクローン化した。ｐＴｒｃｐｐＡＨｉｓ₆ｆIIＲＲＳ及びｐＴｒｃ９９Ａ Ｈｉｓ₆ｐII ＲＲＳをＮｃｏＩ／Ｎｈｅ消化してｃＤＮＡインサートを単離し、ＮｃｏＩ／Ｎ ｈｅ消化したｐＥＴ１１ｄＨｉｓ₆ｐ１中にサブクローン化した（図１）。組換 え体プラスミッドを、発現用のＢＬ２１［ＤＥ３］細菌中にトランスフォームし た。 ｐＥＴ１１ｄダニアレルゲン発現構築物を有するＢＬ２１ＤＥ３宿主細菌を、 新たに、２００μｇ／ｍｌ アンピシリンを補ったＢＨ１アガープレート（３． ７％（wt/vol）Difco Brain Heart Infusion、１．５％（wt/vol）Difcoアガー ）上に線状に塗り付けて３７℃で一晩インキュベートした。単一コロニーを２ｍ ｌの２００μｇ／ｍｌアンピシリン／ＢＨ１培地（３．７％（wt/vol）Difco Br ain Heart Infusion）に接種し、飽和ではないが濃濁になるまで、３７℃にて３ ００ｒｐｍで震盪した。次いで、２ｍｌの培養物を１００ｍｌの２００μｇ／ｍ ｌ アンピシリン／ＢＨ１培地に加えて飽和ではないが濃濁になるまで３７℃に て３００ｒｐｍで震盪し、その時点で、培養物を１８×５００ｍｌ（９リットル ）の２００μｇ／ｍｌ アンピシリン／ＢＨ１培地中に分け、３７℃にて３００ ｒｐｍで震盪した。培養物のＯＤ₅₉₅が１．０に達したときに、組換え分子の発 現を、ＩＰＴＧを４００μＭまで加えることにより誘発して、２時間継続した。 細菌を、１０，０００×ｇで１５分間の遠心分離によって採取し、１／２０容 積の溶菌緩衝液（０．２ｍｇ／ ｍｌ リゾチーム、１００ｍＭ ＮａＰＯ₄（ｐＨ８．０）、５０ｍＭ ＮａＣ ｌ）中に再懸濁して氷上で３０分間インキュベートし、−７０℃にて凍結した。 凍結した細菌を、３７℃で急速解凍し、次いで、３０秒の間隔で２０秒間の超音 波処理を５回行なうことにより破砕した。超音波処理した試料を、１５，０００ ×ｇで遠心分離して可溶性及び粒子状の細菌性蛋白質を分離した。可溶性蛋白質 を注ぎ出し、ペレット化蛋白質を、６Ｍ グアニジンＨＣｌ、１００ｍＭ ２− メルカプトエタノール、１００ｍＭ ＮａＰＯ₄、１０ｍＭ トリス（ｐＨ８． ０）に再懸濁した。この懸濁液を、１５，０００×ｇの遠心分離にかけ、上清を 取り出してｐＨを１０Ｎ ＮａＯＨで８．０に調節し、６Ｍ グアニジンＨＣｌ 、１００ｍＭ ＮａＰＯ₄、１０ｍＭ トリス（ｐＨ８．０）にて平衡化したＮ ＴＡアガロースカラムに加えた。このカラムを６Ｍ グアニジンＨＣｌ、１００ ｍＭ ＮａＰＯ₄、１０ｍＭ トリス（ｐＨ８．０）にて、溶出液のＯＤ₂₈₀がバ ックグラウンドに達するまで洗った。次いで、カラム緩衝液を８Ｍ 尿素、１０ ０ｍＭ ＮａＰＯ₄、１０ｍＭ トリス（ｐＨ８．０）に切り替えた。平衡化の 後に、一層ストリンジェントな洗浄を、８Ｍ 尿素、１００ｍＭ ＮａＯＡｃ、 １０ｍＭ トリス（ｐＨ６．３）にて、溶出液のＯＤ₂₈₀がバックグラウンドに 達するまで行なった。次いで、組換え体ダニ蛋白質（Ｈ₆融合体）を８Ｍ 尿 素、１００ｍＭ ＮａＯＡｃ、１０ｍＭ トリス（ｐＨ４．５）にて溶出してア リコートを集め、そのＯＤ₂₈₀プロフィルをモニターした。蛋白質ピークを、ヒ トＴ細胞分析のために５００容のＰＢＳ中に３回透析した。組換え体蛋白質の収 量は、１リットル当り１０〜７０ｍｇに及び、純度（密度スキャニングにより測 定）は、８０（DerfII）〜９５％に及んだ。 組換えDerfII蛋白質アレルゲンを更に精製するために、逆相ＨＰＬＣクロマト グラフィーを適用した。約１００ｍｇのＨｉｓ₆−DerfII蛋白質を２０ｍＭ Ｄ ＴＴにて３６℃で３０分間還元し、次いで、Pharmacia PRO RPC HR 10/10カラム （０．１％ v/v ＴＦＡ／Ｈ₂Ｏ）に加えた。カラムへの流量は、１．５ｍｌ／分 であり、４０分間にわたって、０〜７０％アセトニトリルの勾配（０．１％ＴＦ Ａ中）を、及びその後７０〜１００％アセトニトリルの勾配（０．１％ＴＦＡ中 ）を伴った。Ｈｉｓ₆−DerfII蛋白質は、５４〜９６％アセトニトリルにて溶出 された。２１４ｎｍ及び２８０ｎｍにて検出した画分の純度をＳＤＳポリアクリ ルアミドゲル電気泳動／密度スキャニングにより分析した。Ｈｉｓ₆−DerfII蛋 白質の純度が９５％より高い画分を、続いて、このアレルゲンのヒトＴ細胞マッ ピング用に利用した。この調製用逆相ＨＰＬＣからの収率は、約６９％であった 。DerpＩ、DerpII及びDerfIIアレルゲンにおける ヌクレオチド配列多形の測定 個々のダニの間の天然の対立遺伝子変異のために、DerpＩ、DerpII、DerfＩ及 びDerfIIをコードする核酸配列に配列多形があることが予想された。種々のDerp Ｉ、DerpII及びDerfIIクローンの配列決定中に、幾つかのヌクレオチド及びそれ から生じるアミノ酸配列の多形が発見された。これらのアミノ酸配列多形を、図 ２２、２３及び２４に示す。実施例III 重複ペプチドの合成 図３及び４に示したDerpＩ、DerfＩ、DerpII及びDerfII重複ペプチドを、標準 的Ｆｍｏｃ／ｔＢｏｃ合成化学を用いて合成し、透析又は逆相ＨＰＬＣにより精 製した。これらの合成ペプチドのアミノ酸残基はペプチド名のわきの括弧内に、 アミノ酸配列（１文字コード）はペプチド名の次にある。これらのペプチド名は 、これらの図を通して一貫している。DerpＩ、DerfＩ、DerpII及びDerfII蛋白質 を、DerpＩ及びDerfＩの並びにDerpII及びDerfIIについての重複ペプチドが対応 するアミノ酸残基数を有する（例えば、ＤＰＩ−１及びＤＦＩ−１の両者は、そ れぞれ、DerpＩ及びDerfＩアレルゲンのアミノ酸残基１〜２０を含む）ような仕 方で、重複する蛋白質に分割した。このDerp及びDerfペプチド間のアミノ酸の位 置における対応は、Derp及びDerfＴ細胞エピトープの交差反応性について最良の 試験をし、そうして、塵ダニに 感受性の個人に投与したときにDerp及びDerfアレルゲンの両者に対する感受性を 治療するであろうペプチドを決定するために意図的に為された。これらの重複ペ プチドのデザインにおいては、Ｔ細胞交差反応性のレベルにおけるグループＩ及 びグループIIアレルゲンの関係を考慮した。更に、グループＩアレルゲンのセリ ンプロテアーゼとしての機能を考慮し且つ他の公知のセリンプロテアーゼ（例え ば、パパイン、アクチニジン）のアミノ酸配列を調べて、グループＩアレルゲン 中の類似の保存された領域及び変化しやすい領域を同定した。グループＩアレル ゲン内の保存された領域が「共有される」Ｔ細胞エピトープを含むであろうこと は予想された。実施例IV DerpＩ及びDerpII蛋白質及びペプチドに対するダニアレルギー患者の 一次Ｔ細胞応答 末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ダニアレルギー患者Ｒ．Ｂ．からの末梢血 液試料のフィコール−ハイパーク遠心分離により精製し、種々の抗原（例えば、 アフィニティー精製したDerpＩ、アフィニティー精製したDerpII、種々のDerpＩ 及びDerpIIペプチド）に応答した増殖をアッセイした。アッセイ用に、５×１０⁴ ＰＢＭＣを、３連のミクロウェルにて、５％ヒトＡＢ血清を含む２００μｌの ＲＰＭＩ−１６４０中で、種々の濃度の抗原の存在下で、３７℃にて７日間培養 した。次いで、各ウェルに１μＣｉのトリチウムチミジンを１６時間加え た。取込まれたカウントをガラス繊維フィルター上に集め、液体シンチレーショ ン計数処理した。表Ｉは、このアッセイの結果を示す。ＣＰＭ＋／−標準偏差を 示してある。各応答の刺激インデックス（Ｓ．Ｉ．）は、抗原に応答して細胞に より取込まれた³Ｈ−チミジンのＣＰＭを培地だけの培地中の細胞により取込ま れた³Ｈ−チミジンのＣＰＭで除した比率である。これらの結果は、この患者が 、少なくとも２．０のＳ．Ｉ．をもって、ペプチドＤＰＩ−１、ＤＰＩ−３、Ｄ ＰＩ−８、ＤＰＩ−１０、ＤＰＩ−５．２、ＤＰII−４及びＤＰII−９に応答す ることを示している。従って、これらのペプチドは、この特定のアレルギー患者 からのＴ細胞により認識されるDerpＩ又はDerpIIＴ細胞エピトープを含む。 実施例Ｖ DerpＩを用いるＴ細胞エピトープの研究 末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）を、ダニアレルギーの臨床症状を示し且つ室内 塵ダニに対する皮膚試験陽性の室内塵ダニアレルギーの個人からの６０ｍｌのヘ パリン化末梢血液のフィコール−ハイパーク遠心分離により精製した。 個人５４３からの１０⁷のＰＢＭＣを、５％のプールしたヒトＡＢ血清を含み 且つグルタミン、ペニシリン、ストレプトマイシン及びＨＥＰＥＳ緩衝液を補っ た１０ｍｌのＲＰＭＩ−１６４０中で、２０μｇ／ｍｌの精製した天然DerpＩ／ ｍｌの存在下で、３７℃にて７日間培養した。次いで、生存力のある細胞をフィ コール−ハイパーク遠心分離により精製して、更に２週間、５単位の組換えヒト ＩＬ−２／ｍｌ及び５単位の組換えヒトＩＬ−４／ｍｌを含むＲＰＭＩ−１６４ ０／５％ＡＢ血清中で培養した。次いで、休止Ｔ細胞を、第２増殖アッセイにて 試験し、種々の室内塵ダニ蛋白質及びペプチドに対するＴ細胞応答を評価した。 アッセイ用に、２×１０⁴休止Ｔ細胞を、２００μｌのＲＰＭＩ−１６４０／５ ％ＡＢ血清中で、種々の濃度の精製した天然DerpＩ又は合成DerpＩペプチドを有 する抗原提示細胞としての２×１０⁴の自家エプスタイン−バールウイルストラ ンスフォームしたＢ細胞（２０，０００ラド）の存在下で、３日間３７℃にて培 養した。次いで、各ウェルに１μＣｉのトリチウムチミジンを１６時間加えた。 取込まれたカ ウントをガラス繊維フィルター上に集め、液体シンチレーション計数処理した。 培地単独（負の対照として働く）は、アレルゲン又はペプチドを含まなかった。 この実験の結果は、この特定の患者が、少なくとも２．０のＳ．Ｉ．をもって、 ＤＰＩ−１、ＤＰＩ−２、ＤＰＩ−４、ＤＰＩ−１１、ＤＰＩ−５、ＤＰＩ−１ ３、ＤＰＩ−１５、ＤＰＩ−６．１、ＤＰＩ−８、ＤＰＩ−９、ＤＰＩ−１６、 ＤＰＩ−１０及びＤＰＩ−１７を含む幾つかのDerpＩ蛋白質から誘導されたペプ チドに応答することを示す（データは示さない）。 上記の手順を、幾人かの他の室内塵ダニアレルギーの個人について続けた。但 し、ａ）ある場合には、ＩＬ−２及びＩＬ−４を伴う培養時間の長さを変え、ｂ ）ある場合には、Ｔ細胞を、２０μｇ／ｍｌ若しくは１０ｐｇ／ｍｌの精製した 天然（Ｎ）若しくは組換え（Ｒ）のDerpＩ蛋白質の何れかでプライムし、又ｃ） ある場合には、ｘ線照射（３５００ラド）した自家ＰＢＭＣを第２増殖アッセイ において抗原提示細胞として用いた。更に、３つのペプチド（ＤＰＩ−１１（SE Q ID NO:１１７）、ＤＰＩ−１２（SEQ ID N0:１１８）及びＤＰII−３（SEQ ID NO:１１９））は、それらのアミノ酸配列において、天然の配列からの少数の保 存的変化を含むことが見出された。３つの更なるペプチド（ＤＰＩ−１１．１（ SEQ ID NO:１３）、ＤＰＩ−１２．１（SEQ ID NO:１４）及びＤＰII−３．１（ SEQ ID NO:４３） は、天然の配列からの変化を含まずに合成された。幾つかのＴ細胞分析を、元の ペプチド（即ち、ＤＰＩ−１１、ＤＰＩ−１２及びＤＰII−３）を用いて行なっ た。更なるペプチド（即ち、ＤＰＩ−１１．１、ＤＰＩ−１２．１及びＤＰII− ３．１）を用いて行なったＴ細胞分析の後に、元のペプチドと更なるペプチドと の間で平均Ｓ．Ｉ．又は陽性応答のパーセンテージに有意の差異は検出されなか った。こうして、ペプチドの両グループからのデータをプールした。 個人がDerpＩ蛋白質及びDerpＩから導いた少なくとも１つのペプチドに対して ２．０以上のＳ．Ｉ．で応答した場合には、その結果を陽性と見なして利用した 。３３の陽性の実験結果の要約を図５に示す。組換え若しくは天然DerpＩで刺激 したＰＢＭＣでプライムした休止Ｔ細胞系統を、合成DerpＩペプチドに対する反 応性について試験した。抗原の滴定における各ペプチドについての最大応答を、 Ｔ細胞剌激インデックス（Ｓ．Ｉ．）として表す。Ｓ．Ｉ．は、ペプチドに対す る応答における細胞により取込まれたカウント／分（ＣＰＭ）を培地のみの培地 中の細胞により取込まれたＣＰＭで除したものである。バックグラウンドレベル より大きいＳ．Ｉ．値は、そのペプチドがＴ細胞エピトープを含むことを示す。 しかしながら、２．０以上のＳ．Ｉ．値（バックグラウンドの２倍以上）のみを 、ここでは、「陽性」結果として参照し、試験した患者又は患者グループについ ての各ペ プチドに対する平均Ｔ細胞剌激インデックスの計算に利用した。ヒストグラムの 各バーの上の括弧内にあるのは、各ペプチドに対する最高及び最低陽性応答を捨 てて極端なアウトライアーの影響を最小化した後に計算した平均Ｔ細胞刺激イン デックスである。Ｔ細胞刺激インデックスは、次式により計算する： バーは、患者グループにおけるペプチド応答の累積的ランクを表す。この累積 的ランクを決定するために、各個人における最高Ｓ．Ｉ．を有する５つのペプチ ドを測定し、最強応答を表す５を用いて降順に数値的ランクを割り当てた。次い で、各ペプチドについてのランクを患者グループ内で合計して、ペプチドに対す る累積的ランクを決定した。各バーの上にあるのは、試験した患者グループ内で の、ペプチドに対する少なくとも２．０のＳ．Ｉ．を有する陽性応答のパーセン トである。陽性パーセント及び平均Ｔ細胞刺激インデックスが与えられれば、各 ペプチドに対するポジティビティーインデックス（Ｐ．Ｉ．）を計算することが 出来る。各個人についてのＰ．Ｉ．は、平均Ｓ．Ｉ．に、室内塵ダニに感受性の 個人の集団（例えば、好ましくは、少なくとも１５人、 一層好ましくは少なくとも３０人以上）における、そのペプチドに対して少なく とも２．０のＳ．Ｉ．で応答した個人のパーセントを乗じることにより決定され る（例えば、図５のＤＰＩ−１については、Ｐ．Ｉ．は、約３４３（７３％×４ ．７）である）。従って、Ｐ．Ｉ．は、ペプチドに対するＴ細胞応答の強さ（Ｓ ．Ｉ．）と室内塵ダニに感受性の個人の集団におけるペプチドに対するＴ細胞応 答の頻度の両方を表す。図５は、ペプチドＤＰＩ−１、ＤＰＩ−２、ＤＰＩ−３ 、ＤＰＩ−４、ＤＰＩ−５、ＤＰＩ−６．１、ＤＰＩ−７．１、ＤＰＩ−８、Ｄ ＰＩ−９、ＤＰＩ−１６及びＤＰＩ−１０が、この患者のパネルにおける有意の Ｔ細胞反応性領域を含むことを示す。実施例VI DerfＩを用いるＴ細胞エピトープ研究 実施例Ｖと類似の実験を行なって、DerfＩ蛋白質のＴ細胞反応性領域を決定し た。例えば、室内塵ダニアレルギー患者７８３からのＰＢＭＣを実施例Ｖに記載 のようにして単離し、イン・ビボで、２０μｇ／ｍｌの組換え精製DerfＩにて剌 激した。ｘ線照射（３５００ラド）した自家ＰＢＭＣを抗原提示細胞として用い るDerfＩペプチドでの増殖アッセイの結果は、この患者からのＴ細胞がペプチド ＤＦＩ−８．１、ＤＦＩ−９、ＤＦＩ−６、ＤＦＩ−１０、ＤＦＩ−２．１、Ｄ ＦＩ−３、ＤＦＩ−１１、ＤＦＩ−５、ＤＦＩ−１及びＤＦＩ−１７に応答 することを示す（データは示さない）。 上記の手順を、幾人かの患者について続けた。但し、ある場合には、Ｔ細胞を 、２０μｇ／ｍｌ若しくは１０μｇ／ｍｌのアフィニティー精製したDerfＩでプ ライムし、ｘ線照射（２５，０００ラド）した自家エプスタイン−バールウイル ストランスフォームしたＢ細胞を抗原提示細胞として用いた。１６の陽性実験の 結果の要約を図６に示す。このデータを、実施例Ｖに記載したように分析した。 このデータは、DerfＩ蛋白質における有意のＴ細胞反応性領域が、ペプチドＤＦ Ｉ−１、ＤＦＩ−２、ＤＦＩ−３、ＤＦＩ−４、ＤＦＩ−１１、ＤＦＩ−５、Ｄ ＦＩ−６、ＤＦＩ−７、ＤＦＩ−１４、ＤＦＩ−１５、ＤＦＩ−８．１及びＤＦ Ｉ−９において見出されることを示す。実施例VII DerpＩ及びDerfＩＴ細胞エピトープの交差反応性を示す研究 DerpＩ及びDerfＩ蛋白質は、非常に相同性（８１％同一）である。従って、実 施例Ｖと類似の実験を行なって、種々のDerpＩペプチド及び実質的に一致するDe rf IIペプチドでチャレンジしたときに、DerpＩプライムしたＴ細胞系統のＴ細胞 応答を測定した。Ｔ細胞系統を、実施例Ｖに記載したようにイン・ビトロでプラ イムして、実質的に一致するDerpＩ及びDerfＩペプチド（例えば、ＤＰＩ−１（Derp Ｉのアミノ酸残基１〜２０）又は ＤＦＩ−１（DerfＩのアミノ酸残基１〜２０）のセットに対する応答について試 験した。そのデータを、実施例Ｖに記載したように分析した。但し、各ペプチド に対する陽性応答の最高及び最低のＳ．Ｉ．値を、平均Ｓ．Ｉ．の計算から削除 した。かかる実験の幾つかの要約を図７に示す。これらの１４の陽性実験の結果 は、DerpＩプライムしたＴ細胞が種々のDerfＩペプチドと応答して、グループＩ アレルゲン内の交差反応性を示していることを示す。DerpＩプライムしたＴ細胞 は、ペプチドＤＦＩ−１、ＤＦＩ−２、ＤＦＩ−３、ＤＦＩ−４、ＤＦＩ−１１ 、ＤＦＩ−１２、ＤＦＩ−１５、ＤＦＩ−８、ＤＦＩ−９、ＤＦＩ−１５及びＤ ＦＩ−６に対して有意に応答する。幾人かの患者において、DerfＩペプチドは、 対応するDerpＩペプチドよりも、DerpＩプライムしたＴ細胞の一層強力な刺激剤 であった。図８は、幾人かの患者からのＴ細胞をイン・ビトロでDerfＩ蛋白質に 対してプライムして種々のDerpＩペプチド及び実質的に一致するDerfＩペプチド のセットに対する応答について分析した逆実験の結果を示す。８の陽性実験結果 は、DerfＩプライムしたＴ細胞がペプチドＤＰＩ−１、ＤＰＩ−３、ＤＰＩ−４ 、ＤＰＩ−１１／１１．１、ＤＰＩ−１４、ＤＰＩ−５、ＤＰＩ−１５及びＤＰ Ｉ−８に対して有意に応答することを示す。実施例VIII DerpIIを用いるＴ細胞エピトープの研究 実施例Ｖと類似の実験を行なって、DerpII蛋白質のＴ細胞反応領域を決定した 。例えば、室内塵ダニアレルギー患者３４８からのＰＢＭＣを、実施例Ｖに記載 したようにして単離し、イン・ビトロで、精製した天然DerpII２０μｇ／ｍｌで 刺激した。ｘ線照射（２５，０００）したエプスタイン−バールウイルストラン スフォームした自家Ｂ細胞を抗原提示細胞として用いる、種々のDerpIIペプチド での増殖アッセイの結果は、この特定の患者がペプチドＤＰII−１、ＤＰII−７ 、ＤＰII−８、ＤＰII−２及びＤＰII−９によく応答することを示す（データは 示さない）。 上記の手順を、幾人かの患者に続けた。但し、ある場合には、Ｔ細胞系統を、 ２０μｇ／ｍｌ若しくは３μｇ／ｍｌの組換えDerpIIでプライムし、ｘ線照射（ ３５００ラド）した自家ＰＢＭＣを抗原提示細胞として用いた。２６の陽性実験 結果の要約を、図９に示す。このデータを、実施例Ｖに記載したように分析した 。但し、ペプチド応答のランク付けした総和を、３、２及び１の値を３つの最大 Ｓ．Ｉ．応答に割り当てて分析した。この患者のパネルについて、DerfII蛋白質 内の有意のＴ細胞反応性領域が、ペプチドＤＰII−１、ＤＰII−２、ＤＰII−３ 、ＤＰII−４、ＤＰII−７、ＤＰII−８及びＤＰII−９において見出される。実施例IX DerfIIを用いるＴ細胞エピトープの研究 実施例Ｖと類似の実験を行なって、DerfII蛋白質のＴ細胞反応領域を決定した 。例えば、室内塵ダニアレルギー患者３８４からのＰＢＭＣを、精製した組換えDerf IIでイン・ビトロで剌激し、次いで、Ｔ細胞系統を、抗原提示細胞としての Ｘ線照射（２５，０００ラド）した自家エプスタイン−バールウイルストランス フォームしたＢ細胞の存在下で、種々の重複DerfIIペプチドでチャレンジした。 この増殖アッセイの結果は、この特定の患者からのＴ細胞がペプチドＤＦII−１ 、ＤＦII−２、ＤＦII−３．１、ＤＦII−４．５、ＤＦII−１５、ＤＦII−１６ 及びＤＦII−１９．１によく応答することを示す（データは示さない）。 上記の手順を、１０人の患者に対して続けた。但し、ある場合には、Ｔ細胞系 統を、２０μｇ／ｍｌ若しくは３μｇ／ｍｌの精製した天然DerfIIで患者のＰＢ ＭＣを刺激することによりプライムし、抗原提示細胞としてのｘ線照射（３５０ ０ラド）した自家ＰＢＭＣの存在下でアッセイした。これらの１０の陽性実験結 果の要約を図１０に示す。このデータを、実施例IXに記載したように分析した。 但し、各ペプチドに対する陽性応答の最高及び最低Ｓ．Ｉ．値を計算から削除し なかった。このデータは、DerfII蛋白質内の有意のＴ細胞反応性領域が、ペプチ ドＤＦII−１、ＤＦII−２、ＤＦII−１３．１、ＤＦII−４．５、ＤＦII−１５ 、ＤＦII−１７及びＤＦII−１９．１において見出されることを示す。実施例Ｘ DerpII及びDerfIIＴ細胞エピトープの交差反応性を示す研究 実施例VIIに記載したものと類似の研究を行なって、DerpII及びDerfII蛋白質 のＴ細胞交差反応性を測定した。DerfII蛋白質でプライムしたＴ細胞を種々のDe rf IIペプチド及び実質的に一致するDerpIIペプチドのセットでチャレンジした。 １０の陽性実験結果の要約を、図１１に示す。これらの結果は、DerpIIプライム したＴ細胞がペプチドＤＰII−１、ＤＰII−３／３．１、ＤＰII−４及びＤＰII −７に対して有意に応答することを示す。図１２は、幾人かの患者からのＴ細胞 をDerpII蛋白質に対してイン・ビトロでプライムし、種々のDerfIIペプチドに対 する応答について分析した逆実験の結果を示す。２６の陽性実験結果は、DerpII プライムしたＴ細胞がペプチドＤＦII−１、ＤＦII−４．５、ＤＦII−１５、Ｄ ＦII−１７、ＤＦII−１８及びＤＦII−１９．１に対して有意に応答することを 示す。実施例XI 主要ペプチドの合成 実施例Ｖ〜Ｘに記載した分析に基づいて、DerpＩ、DerpII、DerfＩ及びDerfII 内の主要Ｔ細胞反応性領域を同定した。各研究において、試験した患者のすべて が、蛋白質アレルゲン（例えば、DerpＩ）及び蛋白質内の主要Ｔ細胞反応性領域 から導かれた少なくとも１つのペプチドに応答した。７つの主要Ｔ細胞反応性領 域（領域 １、領域２、領域３、領域４、領域５、領域６ａ及び領域６ｂ）を、DerpＩ及びDerf Ｉ蛋白質内に同定した。これらの領域を下記のように定義する： 領域１、DerpＩ及びDerfＩ蛋白質のアミノ酸残基１〜２８；領域２、DerpＩ及びDerf Ｉ蛋白質のアミノ酸残基３６〜６８；領域３、DerpＩ及びDerfＩ蛋白質のア ミノ酸残基７４〜１０９；領域４、DerpＩ及びDerfＩ蛋白質のアミノ酸残基１１ ８〜１３９；領域５、DerpＩ及びDerfＩ蛋白質のアミノ酸残基１４１〜１６６； 領域６ａ、DerpＩ及びDerfＩ蛋白質のアミノ酸残基１６１〜１８５；領域６ｂ、Derp Ｉ及びDerfＩ蛋白質のアミノ酸残基１７３〜２０１。 同様に、４つの主要Ｔ細胞反応性領域（領域７、領域８、領域９及び領域１０ ）を、DerpII及びDerfII蛋白質中に同定した。これらの領域を次のように定義す る： 領域７、DerpII及びDerfII蛋白質のアミノ酸残基１〜２６；領域８、DerpII及びDerf II蛋白質のアミノ酸残基３３〜６７；領域９、DerpII及びDerfII蛋白質のア ミノ酸残基７９〜１０４；領域１０、DerpII及びDerfII蛋白質のアミノ酸残基１ ０７〜１２９。部分的に実施例Ｖ〜Ｘに記載したＴ細胞反応性に基づいて、Derp Ｉ、DerfＩ、DerpII及びDerfIIから導いたペプチドを選択し及びペプチドの５’ 若しくは３’末端の何れかでアミノ酸残基を付加若しくは欠失させることにより 改変した。これらの選択したペプチドをデザインするために、重複ペプ チドのランク付けした総和、これらのペプチドに対する少なくとも２．０のＳ． Ｉ．を有する応答のパーセンテージ、これらのペプチドの潜在的交差反応性、こ れらのペプチドの製造の困難性等を含む種々の因子を考慮した。実施例Ｖ〜Ｘに 記載したものと類似のＴ細胞研究を、これらの選択したペプチドを用いて行ない 、DerpＩ及びDerfＩ蛋白質の領域１〜６ａ及び６ｂ並びにDerpII及びDerfIIの領 域７〜１０内の主要Ｔ細胞反応性領域を一層正確に規定した。 DerpＩ、DerfＩ、DerpII及びDerfII蛋白質から導いた選択したペプチドを用い るＴ細胞研究の結果を、図１３〜図１８ａ〜ｄに示す。実施例Ｖに記載の手順を 、幾人かの患者からのＴ細胞系統に続けた（イン・ビトロでDerpＩ蛋白質に対し てプライムし、次いで、DerpＩ配列から導いた選択したペプチドに対する応答に ついて分析）。図１３に示した３３の陽性実験結果は、DerpＩプライムしたＴ細 胞が、ペプチドＤＰＩ−２１．１、ＤＰＩ−２１．２、ＤＰＩ−２２．２、ＤＰ Ｉ−２５．２、ＤＰＩ−２２．１、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．２、ＤＰ Ｉ−２６．１及びＤＰＩ−２８．１において見出されるペプチドに対して有意に 応答することを示す。 同様にして、実施例VIに記載した手順を、９人の患者からのＴ細胞系統に続け た（イン・ビトロでDerfＩ蛋白質に対してプライムし、次いで、その蛋白質から 導いた 選択したペプチドに対する応答について分析）。データを、実施例VIに記載した ように分析した。図１４に示したこれらの９人の患者の結果は、DerfＩからの選 択したペプチドに対するＴ細胞反応性を示す。 他の実験において、幾人かの患者からのＴ細胞系統を、イン・ビトロでDerpＩ 蛋白質に対してプライムし、DerpＩ蛋白質から導いた選択したペプチド及びDerf Ｉ蛋白質から導いた実質的に一致するペプチドのセットに対する応答について分 析した。３０の陽性実験からのデータを、実施例Ｖに記載したように分析した。 図１５ａに示すように、DerpＩプライムしたＴ細胞は、ペプチドＤＦＩ−２１． １、ＤＦＩ−２１．２、ＤＦＩ−２３．１、ＤＦＩ−２２．２、ＤＦＩ−２２． ３、ＤＦＩ−２２．４、ＤＦＩ−２３．２、ＤＦＩ−２５．１、ＤＦＩ−２６． １及びＤＦＩ−２７．１に対して有意に応答する。図１５ｂは、図１５ａに示し たデータのサブセットであり、ランク付けした総和により分析したペプチドに対 するDerpＩプライムしたＴ細胞の応答を示す。図１５ｂは、ＤＰＩ−２３．１が 、この研究において、このペプチドグループの最大のランク付けした総和を有す ることを示す。図１６ａは、９人の患者からのＴ細胞をイン・ビトロでDerfＩ蛋 白質に対してプライムし、選択したDerfＩペプチド及び実質的に一致するDerpＩ ペプチドのセットでチャレンジした逆実験の結果を示す。これらの結果は、９人 の患者からのDerfＩプライムしたＴ 細胞がDerpＩからの選択したペプチドに応答することを示す。図１６ａは、ＤＦ Ｉ−２２．１及びＤＦＩ−２５．１がこのペプチドグループの最大刺激インデッ クスを有することを示す。図１６ｂは、図１６ａに示したのと同じデータのサブ セットであり、好適なDerfＩ及びDerpＩペプチドの応答を示す。図１６ｂは、Ｄ ＦＩ−２２．２が、この実験において、この好適なペプチドのグループの最大刺 激インデックスを有することを示す。 実施例VIIIに記載した手順に従う他の実験は、２９人の患者の応答を分析した （イン・ビトロでDerpII蛋白質に対してプライムし、DerpII配列から導いた選択 したペプチドでチャレンジ）。図１７ａは、１人の患者からのDerpIIプライムし たＴ細胞が、DerpIIからの選択したペプチドに応答することを示す。図１７ｂは 、３０人の患者のセット及び平均から削除された高低を伴う図１７ａに示したも のと類似の実験からの結果を示す。図１７ｂは、ＤＰII−２０．６が、この研究 において、この好適ペプチドのグループの最大のランク付けされた総和を有する ことを示す。図１８ａは、１人の患者からのＴ細胞をイン・ビトロでDerfII蛋白 質に対してプライムし、DerpII配列から導いた選択したペプチドでチャレンジし た逆実験を示す。図１８ａは、１０人の患者からのDerfIIプライムしたＴ細胞が 、DerpIIからの選択したペプチドに応答することを示す。図１８ａに示すように 、ＤＰII−２５は、最大剌激インデックスを有する。図１８ｂ は、図１８ａに示した同じデータのサブセットであり、ランク付けした総和によ り分析した好適DerpIIペプチドに対する天然DerfIIプライムしたＴ細胞系統の応 答を示す。図１８ｂに示すように、ＤＰII−２５．２は、この研究において、好 適ペプチドの最大のランク付けした総和を有する。実施例XII 選択したグループＩ及びグループIIエピトープの交差反応性を示す 研究 実施例VII載したものと類似の研究を、４人の一致した患者からのＴ細胞を用 いて行なった（イン・ビトロでDerf及びDerpからのグループＩ蛋白質でプライム し、次いで、DerpＩ及びDerfＩからの選択した好適ペプチドに対する応答を分析 ）。図１８ｃの結果は、選択した好適DerpＩペプチドの幾つかに対するＴ細胞反 応性が、本質的に、それらのDerfＩ対応物と等しく、逆も又同じであることを示 す。 図１８ｄは、６人の一致した患者からのＴ細胞を用いる類似の研究（イン・ビ トロでDerp及びDerfからのグループII蛋白質でプライムし、次いで、選択した好 適DerpII及びDerfIIペプチドに対する応答について分析）の結果を示す。図１８ ｃの結果と類似して、DerpIIの選択した好適ペプチドの幾つかに対するＴ細胞反 応性は、本質的に、それらのDerfII対応物と等しく、逆も又同じである。実施例XIII ダニアレルゲン蛋白質及びペプチドに対するＩｇＥの直接結合アッ セイ Corningアッセイプレート（＃25882-96）を図１９、２０及び２１に列記した 各被覆抗原５μｇ／ｍｌで、５０μｌ／１００ｍｌ／ウェルにて被覆し、一晩４ ℃でインキュベートした。これらの被覆抗原を除去し、ウェルを、ＰＢＳ中の０ ．５％セラチンで、３００μｌ／ウェルにて、２時間室温でブロックした。プー ルしたヒト血漿（市販のダニ抽出物に対して皮膚試験陽性であった２０人の患者 からの血漿試料の混合物）をＰＢＳ−ツイーン２０（非イオン性洗浄剤ツイーン ２０（ミズーリ、st.Louis在、Sigma）０．０５％を有するＰＢＳ）で連続希釈し、 １００μｌ／ウェルで加え、一晩４℃でインキュベートした（血漿希釈物を２連 で試験した）。第２抗体（ビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＥ、１：１０００、メリーランド 、Gaithersburg在、Kirkegaard & Perry Laboratories Inc.）を、１００μｌ／ ウェルで、１時間室温で加えた。この溶液を除去し、次いで、ストレプトアビジ ン−ＨＲＰＯ、１：１００００（アラバマ、Birmingham在、Southern Biotechnology Associates，Inc．）を、１００μｌ／ウェルで、１時間室温で加えた（すべて のウェルを、各インキュベーション工程の間に、ＰＢＳ−ツイーンで３回洗った ）。ＴＭＢメンブレンペルオキシダーゼサブストレートシステム（Kirkegaard & Perry Laboratories）を新たにミスして、１００ｍｌ／ウェル にて加えた。２〜５分間発色させた。１００ｍｌ／ウェルの１Ｍ リン酸を加え ることにより反応を停止させた。プレートを、４５０ｎｍフィルターを付けたマ イクロプレートIL310オートリーダー（バーモント、Winooski在、Biotech Instr uments）にて読んだ。２連のウェルの吸光度レベルを平均した。グラフ化したＥ ＬＩＳＡの結果（希釈の対数対吸光度）を図１９ａ〜ｂ、図２０ａ〜ｂ及び図２ １ａ〜ｈに示す。これらの図の説明中で縦に列記した被覆抗原の順序は、各ヒス トグラムについて、被覆抗原の左から右への順序と対応している。 図１９ｂに示したＥＬＩＳＡアッセイの結果は、生化学的に精製したDerpII及 び組換えDerpII（rDerp II）がヒトＩｇＥとよく結合すること及びDerpIIペプチ ドに対する検出可能な結合がないことを示す。ペプチド及び蛋白質のDerpセット に対するＩｇＥ結合（図２０ａ及び２０ｂ）は、Derfセットと同じ反応性パター ンを示す。即ち、DerfＩ若しくはDerfIIペプチド又は組換えDerfＩに対する検出 可能な結合はなく、生化学的に精製したDerfＩ並びに組換え及び生化学的精製に よるDerfIIに対してのみ結合した。どちらの場合にも、生化学的精製型よりも組 換えDerpII又はDerfIIに対して一層よい結合が見られる。上記のＥＬＩＳＡアッ セイデータから導かれるすべての結論は、同じ抗体及び抗原試薬のセットを用い る他のアッセイ方法、ニトロセルロース上でのドットブロットにより協力された 。 陽性対照として用いた抗原調製物は、４つの主要な生化学的に精製したダニア レルゲン（ＰＭＡと呼ぶ）；DerfＩ、DerfII、DerpＩ及びDerpIIの混合物であっ た。各蛋白質のストックを１００μｇ／ｍｌ（又は、４００μｇ全蛋白質／ｍｌ ）の濃度で生成した。この調製物を各被覆したＥＬＩＳＡプレートにて用いた。 これらのＥＬＩＳＡアッセイの結果を図２１ａ〜ｈに示す。各プレートにおいて 、精製した若しくは組換えの蛋白質又はＰＭＡ抗原調製物の何れかに対する明確 な結合があり、良好なＩｇＥ反応性を示している。しかしながら、このＰＭＡ抗 原調製物は、第１抗体溶液を加えなかったバックグラウンド希釈において見られ た高度の非特異的反応性を示す。この非特異的反応性は、ＰＭＡ抗原とビオチン 化第２抗体との間で生じ、この抗原に対する特異的なＩｇＥ反応性の発見を汚染 しない。陽性の読みとして最高血漿濃度におけるバックグラウンドを２倍上回る 定量値を用いるならば、このアッセイ方法によりスクリーニングした５６のペプ チドの何れに対しても検出可能なＩｇＥ反応性はない。 この発明をその好適具体例を参照して説明したが、他の具体例も同様の結果に 達し得る。本発明に対する変形物及び改変物は、当業者には明白であり、この発 明の真の精神及び範囲に従うかかるすべての改変物及び同等物は、添付の請求の 範囲においてカバーされるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/569 0276−2Ｊ Ｇ０１Ｎ 33/569 Ａ //(Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 グリーンスタイン，ジュリア エル. アメリカ合衆国 02165 マサチューセッ ツ，ウエスト ニュートン，マウント バ ーナン ストリート 174 (72)発明者 ロジャーズ，ブルース エル. アメリカ合衆国 02178 マサチューセッ ツ，ベルモント，リチャードソン ロード 54 (72)発明者 フラーンセイン，ヘンリー エム. アメリカ合衆国 02172 マサチューセッ ツ，ウォータータウン，チャールズ リバ ー ロード 372

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンの少なくとも１つのＴ細胞エピトー プを含む該蛋白質アレルゲンの単離した改変ペプチドであって、該ペプチドを下 記よりなる群から選択しする、上記の単離した改変ペプチド： ａ） ＤＰＩ−２１．７； ｂ） ＤＰＩ−２３．１０； ｃ） ＤＰＩ−２３．１１； ｄ） ＤＰＩ−２３．１２； ｅ） ＤＰＩ−２３．５； ｆ） ＤＰＩ−２３．６； ｇ） ＤＰＩ−２３．７； ｈ） ＤＰＩ−２３．８； ｉ） ＤＰＩ−２３．９； ｊ） ＤＰＩ−２６．２； ｋ） ＤＰII−２０．７； ｌ） ＤＰII−２２．６； ｍ） ＤＰII−２２．３； ｎ） ＤＰII−２２．４； ｏ） ＤＰII−２２．５； ｐ） ＤＰII−２５．３； ｑ） ＤＰII−２５．４； ｒ） ＤＰＩ−２３．１３； ｓ） ＤＰＩ−２３．１４； ｔ） ＤＰＩ−２３．１５； ｕ） ＤＰＩ−２３．１６： ｖ） ＤＰＩ−２３．１７； ｗ） ＤＰＩ−２６．３； ｘ） ＤＰＩ−２６．４； ｙ） ＤＰＩ−２６．５； ｚ） ＤＰII−２２．７； ａ’）ＤＰII−２２．８； ｂ’）ＤＰII−２２．９； ｃ’）ＤＰII−２２．１０及び ｄ’）ＤＰII−２２．１１（これらすべては図２６に示してある） 。 ２．Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンに感受性の個人の相当のパーセンテ ージにおいて、該アレルゲンに特異的な免疫グロブリンＥに結合せず、或は、ペ プチド若しくはその部分の該免疫グロブリンＥへの結合が起きる場合には、かか る結合が該蛋白質アレルゲンに感受性の個人の相当のパーセンテージにおいてマ スト細胞若しくは好塩基球からのメディエーターの放出を生じない、請求項１に 記載の単離したペプチド。 ３．単離したペプチドを投与する室内塵ダニに感受性の個人において、その個人 の室内塵ダニアレルゲンに対するアレルギー応答を改変する、請求項１に記載の 単離したペプチド。 ４．請求項１に記載のペプチドをコードする配列を有す る単離した核酸、又は該核酸配列のの機能的同等物。 ５．請求項１に記載のペプチドに特異的な抗体と免疫学的に交差反応性である単 離したペプチド。 ６．請求項１に記載のペプチドのすべて又は一部分と反応性のＴ細胞と免疫学的 に交差反応性である単離したペプチド。 ７．更に改変された、請求項１に記載の単離した改変ペプチド。 ８．帯電したアミノ酸又は帯電したアミノ酸対を前記のペプチドに追加して溶解 度を増すことにより更に改変された、請求項７に記載の単離した改変ペプチド。 ９．前記のペプチド内に存在する少なくとも１つのシステイン残基をセリン又は グルタミン酸で置換して溶解度を増すことにより更に改変された、請求項７に記 載の単離した改変ペプチド。 １０．少なくとも２つの領域を含む単離したペプチドであって、該領域はDermat ophagoides 属の蛋白質アレルゲンの少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含み、 該領域は同一若しくは異なるDermatophagoides属の蛋白質アレルゲンから導かれ 、ここに、少なくとも１つの領域は、下記よりなる群から選択するアミノ酸配列 を含み、 ａ）ＤＰＩ−２１．１（SEQ ID NO:２７）； ｂ）ＤＰＩ−２１．２（SEQ ID NO:２８）； ｃ）ＤＰＩ−２２．１（SEQ ID NO:２９）； ｄ）ＤＰＩ−２３．１（SEQ ID NO:３３）； ｅ）ＤＰＩ−２５．２（SEQ ID NO:３６）； ｆ）ＤＰＩ−２６．１（SEQ ID NO:３７）； ｇ）ＤＰＩ−２８．１（SEQ ID NO:３９）； ｈ）ＤＰＩ−１（SEQ ID NO:９）； ｉ）ＤＦＩ−１（SEQ ID NO:７２）； ｊ）ＤＦＩ−２１．１（SEQ ID NO:９０）； ｋ）ＤＦＩ−２２．１（SEQ ID NO:９２）； ｌ）ＤＦＩ−２３．１（SEQ ID NO:９５）； ｍ）ＤＦＩ−２５．１（SEQ ID NO:９７）； ｎ）ＤＰII−１（SEQ ID NO:４１）； ｏ）ＤＰII−１．２（SEQ ID NO:５８）； ｐ）ＤＰII−２．０（SEQ ID NO:５６）； ｑ）ＤＰII−２０．３（SEQ ID NO:５３）； ｒ）ＤＰII−２１（SEQ ID NO:６２）； ｓ）ＤＰII−２２（SEQ ID NO:６３）； ｔ）ＤＰII−２５（SEQ ID NO:６９）； ｕ）ＤＰII−２５．２（SEQ ID NO:７１）； ｖ）ＤＦII−２（SEQ ID NO:１０４）； ｗ）ＤＦII−４．５（SEQ ID NO:１０７）； ｘ）ＤＦII−１５（SEQ ID NO:１０９）； ｙ）ＤＦII−１７（SEQ ID NO:１１１）； ｚ）ＤＦII−１９．１（SEQ ID NO:１１４）； ａ’）ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）及び ｂ’）ＤＰII−２０．６（SEQ ID NO:５６）、 又、少なくとも１つの領域は、下記よりなる群から選択 するアミノ酸配列を含む： ａ）ＤＰＩ−２１．７； ｂ）ＤＰＩ−２３．１０； ｃ）ＤＰＩ−２３．１１； ｄ）ＤＰＩ−２３．１２； ｅ）ＤＰＩ−２３．５； ｆ）ＤＰＩ−２３．６； ｇ）ＤＰＩ−２３．７； ｈ）ＤＰＩ−２３．８； ｉ）ＤＰＩ−２３．９； ｊ）ＤＰＩ−２６．２； ｋ）ＤＰII−２０．７； ｌ）ＤＰII−２２．６； ｍ）ＤＰII−２２．３； ｎ）ＤＰII−２２．４； ｏ）ＤＰII−２２．５； ｐ）ＤＰII−２５．３； ｑ）ＤＰII−２５．４； ｒ）ＤＰＩ−２３．１３； ｓ）ＤＰＩ−２３．１４； ｔ）ＤＰＩ−２３．１５； ｕ）ＤＰＩ−２３．１６； ｖ）ＤＰＩ−２３．１７； ｗ）ＤＰＩ−２６．３； ｘ）ＤＰＩ−２６．４； ｙ）ＤＰＩ−２６．５； ｚ）ＤＰII−２２．７； ａ’）ＤＰII−２２．８； ｂ’）ＤＰII−２２．９； ｃ’）ＤＰII−２２．１０； ｄ’）ＤＰII−２２．１１（これらすべては、図２６に示してある）。 １１．少なくとも１つの領域が下記よりなる群から選択するアミノ酸配列を含み ： ａ）ＤＰＩ−２１．１（SEQ ID NO:２７）； ｂ）ＤＰＩ−２３．１（SEQ ID NO:３３）； ｃ）ＤＰＩ−２６．１（SEQ ID NO:３７）； ｄ）ＤＰII−２．０（SEQ ID NO:５６）； ｅ）ＤＰII−２２（SEQ ID NO:６３）； ｆ）ＤＰII−２５．２（SEQ ID NO:７１）及び ｇ）ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）、 （これらすべては、図３〜４に示してある）、又、少なくとも１つのアミノ酸配 列を下記よりなる群から選択する、請求項１０に記載の単離したペプチド： ａ）ＤＰＩ−２１．７； ｂ）ＤＰＩ−２３．１０； ｃ）ＤＰＩ−２３．１１； ｄ）ＤＰＩ−２３．１２； ｅ）ＤＰＩ−２３．５； ｆ）ＤＰＩ−２３．６； ｇ）ＤＰＩ−２３．７； ｈ）ＤＰＩ−２３．８； ｉ）ＤＰＩ−２３．９； ｊ）ＤＰＩ−２６．２； ｋ）ＤＰII−２０．７； ｌ）ＤＰII−２２．６； ｍ）ＤＰII−２２．３； ｎ）ＤＰII−２２．４； ｏ）ＤＰII−２２．５； ｐ）ＤＰII−２５．３； ｑ）ＤＰII−２５．４； ｒ）ＤＰＩ−２３．１３； ｓ）ＤＰＩ−２３．１４； ｔ）ＤＰＩ−２３．１５； ｕ）ＤＰＩ−２３．１６； ｖ）ＤＰＩ−２３．１７； ｗ）ＤＰＩ−２６．３； ｘ）ＤＰＩ−２６．４； ｙ）ＤＰＩ−２６．５； ｚ）ＤＰII−２２．７； ａ’）ＤＰII−２２．８； ｂ’）ＤＰII−２２．９； ｃ’）ＤＰII−２２．１０； ｄ’）ＤＰII−２２．１１（これらすべては、図２６に示してある）。 １２．前記のペプチドが下記よりなる群から選択する領域の組合せを含む、請求 項１０に記載の単離したペプチド： ａ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ −２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．２； ｂ）ＤＰＩ−２１．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ −２６．２、ＤＰＩ−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３； ｃ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰＩ −２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４； ｄ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ −２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．２； ｅ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ− ２６．５、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．７及びＤＰII−２５．３； ｆ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ− ２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．８及びＤＰII−２５．４； ｇ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ− ２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．９及びＤＰII−２５．２； ｈ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ −２３．８、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰ II−２５．４； ｉ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ− ２６．１、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３ ｊ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ −２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４； ｋ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ −２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．３； ｌ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ −２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．３； ｍ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ −２６．５、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．２； ｎ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ −２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３； ｏ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ− ２６．３、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４； ｐ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ− ２６．４、ＤＰII−２０．６、 ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．３；並びに ｑ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ −２６．５、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２５．４。 １３．前記のペプチドが下記の領域の組合せの任意の配置を含む、請求項１０に 記載の単離したペプチド： Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ここに、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１ ．７であり；ＹはＤＦＩ−２２．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２ ３．１０、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、Ｄ ＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３． １７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３ ．８又はＤＰＩ−２３．９であり；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、 ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ−２６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ −２０．６又はＤＰII−２０．７であり；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６ 、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２２．８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１ ０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２ ２．５であり；ＤはＤＰII−２５．２、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４ であり、但し、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄは次の領域の組合せではない：ＤＰ Ｉ−２１．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２６．１、 ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２及びＤＰII−２５．２。 １４．前記のペプチドがアミノ酸配列の特定の逐次的配置を有し、該配置が下記 式を有する、請求項１０に記載の単離したペプチド： ＡＤＹＣＺＢＸ （式中、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２２ ．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１１ 、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２ ３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰ Ｉ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８、又はＤＰＩ−２３．９で あり；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ− ２６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２０ ．７であり；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII −２２．８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、Ｄ ＰII−２２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり；ＤはＤＰII− ２５．２、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し、ＡＤＹＣＺＢ Ｘは、それぞれ、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２５．２、ＤＦＩ−２２．２、Ｄ ＰII−２２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰII−２０．６及びＤＰＩ−２１．２でな い）。 １５．前記のペプチドがアミノ酸配列の特定の逐次的配置を有し、該配置が下記 式を有する、請求項１０に記載の単離したペプチド： ＤＹＺＣＡＸＢ （式中、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２２ ．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１１ 、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２ ３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰ Ｉ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８又はＤＰＩ−２３．９であ り；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ−２ ６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２０． ７；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２２． ８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２ ２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり；ＤはＤＰII−２５．２ 、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し、ＤＹＺＣＡＸＢは、そ れぞれ、ＤＰII−２５．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰII−２ ２、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２１．２及びＤＰII−２０．６でない）。 １６．前記のペプチドがアミノ酸配列の特定の逐次的配置を有し、該配置が下記 式を有する、請求項１０に記載の単離したペプチド： ＤＸＺＡＣＢＹ （式中、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１．７であり；ＹはＤＦＩ−２２ ．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ−２３．１１ 、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２ ３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰ Ｉ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３．８又はＤＰＩ−２３．９であ り；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ−２ ６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ−２０．６又はＤＰII−２０． ７；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰ11−２２． ８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２ ２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２２．５であり；ＤはＤＰII−２５．２ 、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４であり、但し、ＤＸＺＡＣＢＹは、そ れぞれ、ＤＰII−２５．２、ＤＰＩ−２１．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２ ６．１、ＤＰII−２２、ＤＰII−２０．６及びＤＦＩ−２２．２でない）。 １７．請求項１０に記載のペプチドの全部又は一部分を コードする配列を有する単離した核酸、又は該核酸配列の機能的同等物。 １８．請求項１７に記載の核酸でトランスフォームした宿主細胞中で生成した単 離したペプチド。 １９．Dermatophagoides属の蛋白質アレルゲンの単離したペプチドであって、該 ペプチド又はその一部分が少なくとも１つの該蛋白質アレルゲンのＴ細胞エピト ープを含み、該ペプチドが式Ｘ_n−Ｙ−Ｚ_mを有し、ここに、Ｙは、下記よりなる 群から選択するアミノ酸配列であり： ａ） ＤＰＩ−２１．７； ｂ） ＤＰＩ−２３．１０； ｃ） ＤＰＩ−２３．１１； ｄ） ＤＰＩ−２３．１２； ｅ） ＤＰＩ−２３．５； ｆ） ＤＰＩ−２３．６； ｇ） ＤＰＩ−２３．７； ｈ） ＤＰＩ−２３．８； ｉ） ＤＰＩ−２３．９； ｊ） ＤＰＩ−２６．２； ｋ） ＤＰII−２０．７； ｌ） ＤＰII−２２．６； ｍ） ＤＰII−２２．３； ｎ） ＤＰII−２２．４； ｏ） ＤＰII−２２．５； ｐ） ＤＰII−２５．３； ｑ） ＤＰII−２５．４； ｒ） ＤＰＩ−２３．１３； ｓ） ＤＰＩ−２３．１４； ｔ） ＤＰＩ−２３．１５； ｕ） ＤＰＩ−２３．１６； ｖ） ＤＰＩ−２３．１７； ｗ） ＤＰＩ−２６．３； ｘ） ＤＰＩ−２６．４； ｙ） ＤＰＩ−２６．５； ｚ） ＤＰII−２２．７； ａ’）ＤＰII−２２．８； ｂ’）ＤＰII−２２．９； ｃ’）ＤＰII−２２．１０及び ｄ’）ＤＰII−２２．１１ （これらすべては図２６に示してあり、ここに、Ｘ_nは、該蛋白質アレルゲンの アミノ酸配列においてＹのアミノ末端に隣接するアミノ酸残基であり、Ｚ_mは、 該蛋白質アレルゲンのアミノ酸配列においてＹのカルボキシ末端に隣接するアミ ノ酸残基であり、ｎは０〜３０であり、ｍは０〜３０である）。 ２０．ｎ＝０且つｍ＝０である、請求項１９に記載の単離したペプチド。 ２１．少なくとも１種の請求項１に記載の単離したペプチド及び製薬上許容し得 るキャリアー若しくは希釈剤を 含む、治療用組成物。 ２２．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療す方法であって、その個人 に治療上有効な量の請求項２１に記載の組成物を投与することを含む、上記の治 療方法。 ２３．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療す方法であって、その個人 に治療上有効な量の少なくとも２種の異なる請求項２１に記載の組成物を同時に 又は逐次的に投与することを含む、上記の治療方法。 ２４．少なくとも１種の請求項１０に記載の単離したペプチド及び製薬上許容し 得るキャリアー若しくは希釈剤を含む治療用組成物。 ２５．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療す方法であって、その個人 に治療上有効な量の請求項２４に記載の組成物を投与することを含む、上記の治 療方法。 ２６．個人における室内塵ダニに対する感受性を検出する方法であって、その個 人から得た血液試料を、血液成分とペプチドとの結合に適した条件下で、少なく とも１種の請求項１に記載のペプチドと合わせ、かかる結合が起きる程度をその 個人における室内塵ダニに対する感受性の表示として測定することを含む、上記 の方法。 ２７．結合が起きる程度を、Ｔ細胞機能、Ｔ細胞増殖又はそれらの組合せを評価 することにより測定する、請求項２６に記載の方法。 ２８．製薬上許容し得るキャリアー若しくは希釈剤及び少なくとも２種のペプチ ドを含む治療用組成物であって、該ペプチドが、それぞれ、Dermatophagoides属 の蛋白質アレルゲンの少なくとも１つのＴ細胞エピトープを含み、ここに、少な くとも１つのペプチドを下記よりなる群から選択し： ａ） ＤＰＩ−２１．１（SEQ ID NO:２７）； ｂ） ＤＰＩ−２１．２（SEQ ID NO:２８）； ｃ） ＤＰＩ−２２．１（SEQ ID NO:２９）； ｄ） ＤＰＩ−２２．２（SEQ ID NO:３０）； ｅ） ＤＰＩ−２２．３（SEQ ID NO:３１）； ｆ） ＤＰＩ−２２．４（SEQ ID NO:３２）； ｇ） ＤＰＩ−２３．１（SEQ ID NO:３３）； ｈ） ＤＰＩ−２３．２（SEQ ID NO:３４）； ｉ） ＤＰＩ−２５．１（SEQ ID NO:３５）； ｊ） ＤＰＩ−２５．２（SEQ ID NO:３６）； ｋ） ＤＰＩ−２６．１（SEQ ID NO:３７）； ｌ） ＤＰＩ−２７．１（SEQ ID NO:３８）； ｍ） ＤＰＩ−２８．１（SEQ ID NO:３９）； ｎ） ＤＰＩ−２８．２（SEQ ID NO:４０）； ｏ） ＤＰＩ−１（SEQ ID NO:９）； ｐ） ＤＦＩ−１（SEQ ID NO:７２）； ｑ） ＤＦＩ−２１．１（SEQ ID NO:９０）； ｒ） ＤＦＩ−２１．２（SEQ ID NO:９１）； ｓ） ＤＦＩ−２２．１（SEQ ID NO:９２）； ｔ） ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）； ｕ） ＤＦＩ−２２．４（SEQ ID NO:９４）； ｖ） ＤＦＩ−２３．１（SEQ ID NO:９５）； ｗ） ＤＦＩ−２３．２（SEQ ID NO:９６）； ｘ） ＤＦＩ−２５．１（SEQ ID NO:９７）； ｙ） ＤＦＩ−２５．２（SEQ ID NO:９８）； ｚ） ＤＦＩ−２６．１（SEQ ID NO:９９）； ａ’）ＤＦＩ−２７．１（SEQ ID NO:１００）； ｂ’）ＤＦＩ−２８．１（SEQ ID NO:１０１）； ｃ’）ＤＦＩ−２８．２（SEQ ID NO:１０２）； ｄ’）ＤＰII−２０（SEQ ID NO:５０）； ｅ’）ＤＰII−２０．１（SEQ ID NO:５１）； ｆ’）ＤＰII−２０．２（SEQ ID NO:５２）； ｇ’）ＤＰII−２０．３（SEQ ID NO:５３）； ｈ’）ＤＰII−２０．４（SEQ ID NO:５４）； ｉ’）ＤＰII−２０．５（SEQ ID NO:５５）； ｊ’）ＤＰII−２０．６（SEQ ID NO:５６）； ｋ’）ＤＰII−１（SEQ ID NO:４１）； ｌ’）ＤＰII−１．１（SEQ ID NO:５７）； ｍ’）ＤＰII−１．２（SEQ ID NO:５８）； ｎ’）ＤＰII−２．１（SEQ ID NO:５９）； ｏ’）ＤＰII−２．２（SEQ ID NO:６０）； ｐ’）ＤＰII−２．３（SEQ ID NO:６１）； ｑ’）ＤＰII−２１（SEQ ID NO:６２）； ｒ’）ＤＰII−２２（SEQ ID NO:６３）； ｓ’）ＤＰII−２６（SEQ ID NO:６４）； ｔ’）ＤＰII−２６．１（SEQ ID NO:６５）； ｕ’）ＤＰII−２３（SEQ ID NO:６６）； ｖ’）ＤＰII−２３．１（SEQ ID NO:６７）； ｗ’）ＤＰII−２４（SEQ ID NO:６８）； ｘ’）ＤＰII−２５（SEQ ID NO:６９）； ｙ’）ＤＰII−２５．１（SEQ ID NO:７０）； ｚ’）ＤＰII−２５．２（SEQ ID NO:７１）； ａ”）ＤＦII−１（SEQ ID NO:１０３）； ｂ”）ＤＦII−２（SEQ ID NO:１０４）； ｃ”）ＤＦII−１３．１（SEQ ID NO:１０５）； ｄ”）ＤＦII−３．１（SEQ ID NO:１０６）； ｅ”）ＤＦII−４．５（SEQ ID NO:１０７）； ｆ”）ＤＦII−４．３（SEQ ID NO:１０８）； ｇ”）ＤＦII−１５（SEQ ID NO:１０９）； ｈ”）ＤＦII−１６（SEQ ID NO:１１０）； ｉ”）ＤＦII−１７（SEQ ID NO:１１１）； ｊ”）ＤＦII−１８（SEQ ID NO:１１２）； ｋ”）ＤＦII−１９（SEQ ID NO:１１３）； ｌ”）ＤＦII−１９．１（SEQ ID NO:１１４）； ｍ”）ＤＦII−２１（SEQ ID NO:１１５）及び ｎ”）ＤＦII−２２（SEQ ID NO:１１６）、 そして少なくとも１つの改変ペプチドを下記よりなる群から選択し： ａ） ＤＰＩ−２１．７； ｂ） ＤＰＩ−２３．１０； ｃ） ＤＰＩ−２３．１１； ｄ） ＤＰＩ−２３．１２； ｅ） ＤＰＩ−２３．５； ｆ） ＤＰＩ−２３．６； ｇ） ＤＰＩ−２３．７； ｈ） ＤＰＩ−２３．８； ｉ） ＤＰＩ−２３．９； ｊ） ＤＰＩ−２６．２； ｋ） ＤＰII−２０．７； ｌ） ＤＰII−２２．６； ｍ） ＤＰII−２２．３； ｎ） ＤＰII−２２．４； ｏ） ＤＰII−２２．５； ｐ） ＤＰII−２５．３； ｑ） ＤＰII−２５．４； ｒ） ＤＰＩ−２３．１３； ｓ） ＤＰＩ−２３．１４； ｔ） ＤＰＩ−２３．１５； ｕ） ＤＰＩ−２３．１６； ｖ） ＤＰＩ−２３．１７； ｗ） ＤＰＩ−２６．３； ｘ） ＤＰＩ−２６．４； ｙ） ＤＰＩ−２６．５； ｚ） ＤＰII−２２．７； ａ’）ＤＰII−２２．８； ｂ’）ＤＰII−２２．９； ｃ’）ＤＰII−２２．１０及び ｄ’）ＤＰII−２２．１１ （すべて図２６に示してあり、ここに、該組成物は、室内塵ダニアレルゲンに感 受性の個人への投与に際してその個人のＴ細胞を少なくとも１つの蛋白質アレル ゲンに対して寛容にするのに十分なパーセンテージの当該少なくとも１つの蛋白 質アレルゲンのＴ細胞エピトープを含む）。 ２９．少なくとも１種のペプチドを下記よりなる群から選択し： ａ）ＤＰＩ−２１．１（SEQ ID NO:２７）； ｂ）ＤＰＩ−２３．１（SEQ ID NO:３３）； ｃ）ＤＰＩ−２６．１（SEQ ID NO:３７）； ｄ）ＤＰII−２．０（SEQ ID NO:５６）； ｅ）ＤＰII−２２（SEQ ID NO:６３）； ｆ）ＤＰII−２５．２（SEQ ID NO:７１）及び ｇ）ＤＦＩ−２２．２（SEQ ID NO:９３）、 又、少なくとも１つのアミノ酸配列を下記よりなる群から選択する、請求項２８ に記載の組成物： ａ）ＤＰＩ−２１．７； ｂ）ＤＰＩ−２３．１０； ｃ）ＤＰＩ−２３．１１； ｄ）ＤＰＩ−２３．１２； ｅ）ＤＰＩ−２３．５； ｆ）ＤＰＩ−２３．６； ｇ）ＤＰＩ−２３．７； ｈ）ＤＰＩ−２３．８； ｉ）ＤＰＩ−２３．９； ｊ）ＤＰＩ−２６．２； ｋ）ＤＰII−２０．７； ｌ）ＤＰII−２２．６； ｍ）ＤＰII−２２．３； ｎ）ＤＰII−２２．４； ｏ）ＤＰII−２２．５； ｐ）ＤＰII−２５．３； ｑ）ＤＰII−２５．４； ｒ）ＤＰＩ−２３．１３； ｓ）ＤＰＩ−２３．１４； ｔ）ＤＰＩ−２３．１５； ｕ）ＤＰＩ−２３．１６； ｖ）ＤＰＩ−２３．１７； ｗ）ＤＰＩ−２６．３； ｘ）ＤＰＩ−２６．４； ｙ）ＤＰＩ−２６．５； ｚ）ＤＰII−２２．７； ａ’）ＤＰII−２２．８； ｂ’）ＤＰII−２２．９； ｃ’）ＤＰII−２２．１０； ｄ’）ＤＰII−２２．１１（これらすべては、図２６に示してある）。 ３０．下記よりなる群から選択するペプチドの組合せを含む、請求項２８に記載 の組成物： ａ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ− ２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．２； ｂ）ＤＰＩ−２１．２、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１０、ＤＰＩ− ２６．２、ＤＰＩ−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３； ｃ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰＩ− ２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４； ｄ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ− ２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．２； ｅ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２ ６．５、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．７及びＤＰII−２５．３； ｆ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２ ６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．８及びＤＰII−２５．４； ｇ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２ ６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．９及びＤＰII−２５．２； ｈ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ−２ ６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．４； ｉ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．９、ＤＰＩ−２ ６．１、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３ ｊ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ− ２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４； ｋ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ− ２６．３、ＤＰII−２０．７、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．３； ｌ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ− ２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰII−２５．３； ｍ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ− ２６．５、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．３及びＤＰII−２５．２； ｎ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１７、ＤＰＩ− ２６．２、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．４及びＤＰII−２５．３； ｏ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．８、ＤＰＩ−２ ６．３、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．５及びＤＰII−２５．４； ｐ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ −２３．９、ＤＰＩ−２６．４、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．６及びＤＰ II−２５．３；並びに ｑ）ＤＰＩ−２１．７、ＤＦＩ−２２．２、ＤＰＩ−２３．１３、ＤＰＩ− ２６．５、ＤＰII−２０．６、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２５．４。 ３１．下記の少なくとも２種のペプチドの組合せを含む、請求項２９に記載の組 成物： Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、ここに、ＸはＤＰＩ−２１．２又はＤＰＩ−２１ ．７であり；ＹはＤＦＩ−２２．２であり；ＺはＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２ ３．１０、ＤＰＩ−２３．１１、ＤＰＩ−２３．１２、ＤＰＩ−２３．１３、Ｄ ＰＩ−２３．１４、ＤＰＩ−２３．１５、ＤＰＩ−２３．１６、ＤＰＩ−２３． １７、ＤＰＩ−２３．５、ＤＰＩ−２３．６、ＤＰＩ−２３．７、ＤＰＩ−２３ ．８又はＤＰＩ−２３．９であり；ＡはＤＰＩ−２６．１、ＤＰＩ−２６．２、 ＤＰＩ−２６．３、ＤＰＩ−２６．４又はＤＰＩ−２６．５であり；ＢはＤＰＩ −２０．６又はＤＰII−２０．７であり；ＣはＤＰII−２２、ＤＰII−２２．６ 、ＤＰII−２２．７、ＤＰII−２２．８、ＤＰII−２２．９、ＤＰII−２２．１ ０、ＤＰII−２２．１１、ＤＰII−２２．３、ＤＰII−２２．４又はＤＰII−２ ２．５であり；ＤはＤＰII−２５．２、ＤＰII−２５．３又はＤＰII−２５．４ であり、但し、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄは次の領域の組合せではない：ＤＰ Ｉ−２１．２、ＤＦＩ −２２．２、ＤＰＩ−２３．１、ＤＰＩ−２６．１、ＤＰII−２０．６、ＤＰII −２２及びＤＰII−２５．２。 ３２．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療方法であって、その個人に 治療上有効な量の請求項２８に記載の組成物を投与することを含む、上記の方法 。 ３３．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療方法であって、その個人に 治療上有効な量の少なくとも２種の異なる請求項２８に記載の組成物を同時に又 は逐次的に投与することを含む、上記の方法。 ３４．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療方法であって、その個人に 治療上有効な量の請求項２９に記載の組成物を投与することを含む、上記の方法 。 ３５．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療方法であって、その個人に 治療上有効な量の請求項３０に記載の組成物を投与することを含む、上記の方法 。 ３６．個人における室内塵ダニに対する感受性の治療方法であって、その個人に 治療上有効な量の請求項３１に記載の組成物を投与することを含む、上記の方法 。 ３７．ＭＨＣ蛋白質複合体に結合するが、かかる結合に必須ではない少なくとも １つのアミノ酸残基が置換され且つＴ細胞反応性が除去されていない、請求項１ に記載の単離した改変ペプチド。 ３８．前記のアミノ酸残基を、アラニン、グルタミン酸及びメチルアミノ酸から なる群より選択するアミノ酸で 置換した、請求項３７に記載の単離した改変ペプチド。 ３９．Ｔ細胞レセプターに結合するが、かかる結合に必須ではない少なくとも１ つのアミノ酸残基が置換され且つ関連ＭＨＣ蛋白質複合体への結合が除去されて いない、請求項１に記載の単離した改変ペプチド。 ４０．前記のアミノ酸残基を、メチルアミノ酸、グルタミン酸及びアラニンから なる群より選択するアミノ酸で置換した、請求項３９に記載の単離したペプチド 。 ４１．Ｔ細胞レセプターへの結合に必須である少なくとも１つのアミノ酸残基を 保存的アミノ酸残基で置換し、関連ＭＨＣ蛋白質複合体への結合が除去されてい ない、請求項１に記載の単離したペプチド。 ４２．下記の工程を含む方法により改変した請求項１に記載のペプチド： ａ）Ｔ細胞レセプター認識に必須である該ペプチドのアミノ酸残基を決定し、 ｂ）Ｔ細胞レセプター相互作用に必須でないアミノ酸残基とのＴ細胞レセプタ ー相互作用に必須でない少なくとも１つのアミノ酸残基を、メチルアミノ酸、ア ラニン及びグルタミン酸よりなる群から選択するアミノ酸残基で置換し、ここに 、関連ＭＨＣ蛋白質複合体への結合は除去されない。 ４３．Ｔ細胞相互作用に必須の少なくとも１つのアミノ酸残基を類似のアミノ酸 残基で置換する工程を更に含む、請求項４２に記載のペプチド。 ４４．下記の工程を含む方法により改変した請求項１に記載のペプチド： ａ）Ｔ細胞レセプター認識に必須である該ペプチドのアミノ酸残基を決定し、 ｂ）Ｔ細胞相互作用に必須の少なくとも１つのアミノ酸残基を類似の酸残基で 置換し、ここに、関連ＭＨＣ蛋白質複合体への結合は除去されない。 ４５．下記の工程を更に含む、請求項４４に記載のペプチド： 少なくとも１つのＴ細胞レセプター相互作用に必須でないアミノ酸残基を、メ チルアミノ酸、アラニン及びグルタミン酸からなる群より選択するアミノ酸残基 で置換し、ここに、関連ＭＨＣ蛋白質複合体への結合は除去されない。