PT1928850E - Agentes para a prevenção e tratamento de perturbações envolvendo a modulação dos recetores de ryr - Google Patents

Agentes para a prevenção e tratamento de perturbações envolvendo a modulação dos recetores de ryr Download PDF

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Donald W Landry
Andrew Robert Marks
Zhen Zhuang Cheng
Stephan E Lehnart
Shixian Deng
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Univ Columbia
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Description

1
DESCRIÇÃO "AGENTES PARA A PREVENÇÃO E TRATAMENTO DE PERTURBAÇÕES ENVOLVENDO A MODULAÇÃO DOS RECETORES DE RYR" A presente invenção foi realizada com o apoio do governo sob a concessão NIH n° P01 HL 67849-01. Como tal, o governo dos Estados Unidos pode ter certos direitos sobre a presente invenção. O presente pedido reivindica a prioridade do pedido de patente nos EUA número 11/212, 413, depositado em 25 de agosto de 2005.
CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a compostos e à sua utilização para o tratamento e prevenção de perturbações e doenças associadas com os recetores de rianodina (RyRS) que regulam o funcionamento do canal de cálcio nas células. Mais particularmente, a invenção divulga compostos que estão relacionados com 1,4-benzotiazepinas e são úteis para o tratamento de perturbações cardíacas e musculares esqueléticas. A invenção também divulga composições farmacêuticas que compreendem os compostos e artigos de fabrico que compreendem as composições farmacêuticas.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO 0 retículo sarcoplasmático (SR) é uma estrutura nas células que funciona, entre outras coisas, como um armazenamento especializado de cálcio intracelular (Ca2+) . Os canais no SR chamados de recetores de rianodina (RyRs) abrem e fecham para regular a libertação de Ca2+ a partir do SR para o citoplasma intracelular da célula. A libertação de Ca2+ no 2 interior do citoplasma do SR aumenta a concentração de citoplasmática de Ca2+. A probabilidade de abertura (Po) da RyR refere-se à probabilidade de o canal RyR estar aberto em qualquer dado momento e, portanto, ser capaz de libertar o Ca2+ no citoplasma a partir do SR.
Existem três tipos de recetores de rianodina, todos os quais são canais altamente relacionados de Ca2+: RYR1, RyR2 e RyR3. 0 RYR1 é encontrado predominantemente no músculo esquelético, bem como noutros tecidos, o RyR2 é encontrado predominantemente no coração, bem como noutros tecidos, e o RyR3 é encontrado no cérebro, bem como noutros tecidos. Os canais de RYR são formados por quatro polipeptídeos RYR em associação com quatro proteínas de ligação a FK506 (FKBPs), especificamente a FKBP12 (calstabinl) e FKBP12.6 (calstabin2). A calstabinl liga-se a RYR1, a calstabin2 liga-se a RyR2, e a calstabinl liga-se a RyR3. As proteínas FKBP (calstabinl e calstabin2) ligam-se ao canal RyR (uma molécula por subunidade RyR), estabilizam o funcionamento de canais RyR e facilitam a propagação acoplada entre canais RYR vizinhos, impedindo assim a ativação anormal do canal durante o estado fechado do canal.
Para além das proteínas de ligação a calstabin, a proteína quinase A (PKA) também se liga à superfície citoplasmática dos RyRs. A fosforilação por PKA dos RyRs provoca a dissociação parcial de calstabins a partir de RyRs. A dissociação de calstabin de RyR provoca um aumento da probabilidade de abertura de RyR e, portanto, um aumento da libertação de Ca2+ a partir do SR para o interior do citoplasma intracelular. A libertação de Ca2+ a partir do SR em células do músculo esquelético e células do coração é um mecanismo fisiológico chave que controla o desempenho do 3 músculo, porque o aumento da concentração de Ca2+ no citoplasma intracelular provoca a contração do músculo.
Os espetros de contração de acoplamento (EC) em músculos esqueléticos envolvem a despolarização elétrica da membrana plasmática, no túbulo transversal (túbulo T) , que ativa canais Ca2+ tipo-L dependentes da voltagem (LTCCs). Os LTCCs desencadeiam a libertação de Ca2+ a partir do SR através da interação física com RYR1. 0 aumento resultante na concentração citoplasmática de Ca2+ induz a interação actina-miosina e a contração muscular. Para permitir o relaxamento, o Ca2+ intracelular é bombeado de volta para o SR via bombas de SR Ca2+-ATPase (SERCAs), que são reguladas por fospliolamban (PLB), dependendo do tipo de fibra muscular.
Demonstrou-se que as formas de doenças que resultam na ativação sustentada do sistema nervoso simpático e no aumento dos níveis plasmáticos de catecolaminas causam a ativação de vias de stress intracelulares desajustadas que resultam na desestabilização do estado fechado do canal RYR1 e no vazamento intracelular de Ca2+. 0 vazamento de Ca2+ no SR através de canais RYR1 demonstrou esgotar as reservas de cálcio intracelular em SR, para aumentar o consumo de energia de compensação, e provocar a aceleração significativa da fadiga muscular. 0 defeito muscular induzido pelo stress reduz permanentemente o desempenho do músculo isolado e o desempenho in vivo particularmente em situações de maior exigência.
Também foi demonstrado que a desestabilização do estado fechado de RYR1 ocorre em condições patológicas de ativação simpática aumentada e envolve a depleção da subunidade do 4 canal de calstabinl (FKBP12) de estabilização. Experiências do tipo prova de conceito têm mostrado que a ativação de PKA como um efetor final dos sistemas nervosos simpáticos aumenta a fosforilação por PKA de RYR1 em Ser-2843, o que diminui a afinidade de ligação de calstabinl a RYR1 e aumenta a probabilidade de abertura do canal.
No músculo estriado cardíaco, o RyR2 é o principal canal de libertação de Ca2+ necessário para um acoplamento EC e contração muscular. Durante o acoplamento de EC, a despolarização da membrana das células do músculo cardíaco durante a fase zero do potencial de ação ativa canais Ca2+ dependentes da voltagem. 0 influxo de Ca2+ através dos canais dependentes da voltagem abertos, por sua vez, inicia a libertação de Ca2+ a partir de SR via RyR2. Este processo é conhecido como libertação de Ca2+ induzida por Ca2+. A libertação de Ca2+ mediada por RyR2, e induzida por Ca2+, ativa então as proteínas contráteis na célula cardíaca, resultando na contração do músculo cardíaco. A fosforilação do RyR2 cardíaco por PKA é uma parte importante da resposta "luta ou fuga" que aumenta o ganho de acoplamento EC cardíaco, aumentando a quantidade de Ca2+ libertado para um determinado desencadeamento. Esta via de sinalização fornece um mecanismo pelo qual a ativação do sistema nervoso simpático, em resposta ao stress, resulta num aumento do débito cardíaco. A fosforilação por PKA de RyR2 aumenta a probabilidade de abertura do canal ao dissociar a calstabin2 (FKBP12.6) a partir do complexo de canal. Isto, por sua vez, aumenta a sensibilidade do RyR2 à ativação dependente de Ca2+.
Apesar dos avanços no tratamento, a insuficiência cardíaca 5 continua a ser uma importante causa de mortalidade nos países ocidentais. Um marco importante na insuficiência cardíaca é a reduzida contratilidade miocárdica. Na insuficiência cardíaca, as alterações contráteis resultam, em parte, de alterações na via de sinalização que permite que a ação cardíaca potencial desencadeie a libertação de Ca2+ através de canais RyR2 e contração muscular. Em particular, em corações com insuficiência, a amplitude do conjunto de células transientes de Ca2+ é diminuída e a duração prolongada. A arritmia cardíaca, uma característica comum de insuficiência cardíaca, resulta em muitas das mortes associadas à doença. A fibrilação atrial (AF) é a arritmia cardíaca mais comum nos seres humanos, e representa uma das principais causas de morbilidade e mortalidade. A remodelação estrutural e elétrica - incluindo o encurtamento da refratividade atrial, perda de adaptação relacionada com a taxa de refratividade, e encurtamento do comprimento de onda de ondas re-entrantes - acompanha a taquicardia sustentada. Esta remodelação é provavelmente importante no desenvolvimento, manutenção e progressão da fibrilação atrial. Estudos sugerem que o tratamento de cálcio desempenha um papel na remodelação elétrica na fibrilação atrial.
Aproximadamente 50% de todos os pacientes com insuficiência cardíaca morrem de arritmias cardíacas fatais. Em alguns casos, uma arritmia ventricular no coração é rapidamente fatal - um fenómeno preferido como "morte súbita cardíaca" (SCD) . As arritmias ventriculares fatais e SCD também ocorrem em indivíduos jovens e aparentemente saudáveis, que se desconhece terem uma doença cardíaca estrutural. Na 6 verdade, a arritmia ventricular é a causa mais comum de morte súbita em indivíduos aparentemente saudáveis. A taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) é uma doença hereditária em indivíduos com coração estruturalmente normal. É caracterizada por taquicardia ventricular induzida pelo stress - uma arritmia fatal que provoca SCD. Em indivíduos com CPVT, o esforço físico e/ou stress induzem taquicardias ventriculares bidirecionais e/ou polimórficas que levam à SCD, mesmo na ausência de doença cardíaca estrutural detetável. A CPVT é predominantemente herdada na forma autossómica dominante. Indivíduos com CPVT têm arritmias ventriculares quando sujeitos ao exercício, mas não desenvolvem arritmias em repouso. Estudos identificaram as mutações no gene RyR2 humano, no cromossoma Iq42-q43, em indivíduos com CPVT.
Corações com insuficiência (por exemplo, em pacientes com insuficiência cardíaca e em modelos animais de insuficiência cardíaca) são caracterizados por uma resposta inadequada, que inclui estimulação hiperadrenérgica crónica. Na insuficiência cardíaca, a estimulação beta-adrenérgica crónica está associada com a ativação de recetores beta-adrenérgicos no coração, os quais, através de acoplamento com proteínas G, ativam a adenilil ciclase e, assim, aumentam a concentração de cAMP intracelular. 0 CAMP ativa PKA dependente de cAMP, o qual tem demonstrado induzir a hiperfosforilação de RyR2. Dessa forma, a insuficiência cardíaca crónica é um estado hiperadrenérgico crónico que resulta em várias consequências patológicas, incluindo a hiperfosforilação por PKA de RyR2. A hiperfosforilação por PKA de RyR2 tem sido proposta como 7 um fator que contribui para a função contrátil deprimida e arritmogénese na insuficiência cardiaca. Consistente com esta hipótese, a hiperfosforilação por PKA de RyR2 em corações com insuficiência foi demonstrada, in vivo, tanto em modelos animais como em pacientes com insuficiência cardiaca submetidos a transplante cardíaco.
Em corações com insuficiência, a hiperfosforilação por PKA de RyR2 induz a dissociação do FKBP12.6 (calstabin2) a partir do canal RyR2. Isso provoca mudanças marcantes nas propriedades biofísicas do canal RyR2, incluindo o aumento da probabilidade de abertura (Po), devido a um aumento da sensibilidade à ativação dependente de Ca2+; desestabilização do canal, resultando em estados de subcondutância; e dependência de acoplamento prejudicada dos canais, resultando num acoplamento EC defeituoso e numa disfunção cardíaca. Assim, o RyR2 PKA-hiperfosforilado é muito sensível a uma estimulação de Ca2+ de baixo nível, e isto manifesta-se como um vazamento diastólico de Ca2+ de SR através do canal RyR2 PKA hiperfosforilado. A resposta inadequada ao stress na insuficiência cardíaca resulta no esgotamento de FKBP12.6 do complexo macromolecular do canal. Isto leva a um desvio para a esquerda na sensibilidade de RyR2 a uma libertação de Ca2+ induzida por Ca2+, resultando em canais que são mais ativos a concentrações baixas a moderadas de Ca2+. Ao longo do tempo, o aumento do "vazamento" através de RyR2 resulta na reposição do teor de Ca2+ no SR para um nível mais baixo, o que por sua vez reduz o ganho de acoplamento EC e contribui para a contratilidade sistólica diminuída.
Além disso, uma subpopulação de RyR2 que é particularmente "vazante", pode libertar Ca2+ de SR durante a fase de repouso do ciclo cardíaco, a diástole. Isto resulta em despolarizações da membrana cardiomiócita conhecida como pós-despolarizações tardias (DADs), que são conhecidas por provocarem arritmias ventriculares cardíacas fatais.
Em pacientes com mutações CPVT no seu RyR2 e corações de outra forma estruturalmente normais, um fenómeno semelhante está em andamento. Especificamente, sabe-se que o exercício físico e o stress induzem a libertação de catecolaminas, que ativam os recetores beta-adrenérgicos no coração. A ativação dos recetores beta-adrenérgicos leva à hiperfosforilação por PKA de canais RyR2. As evidências também sugerem que a hiperfosforilação por PKA de RyR2 resultante da ativação do recetor beta-adrenérgico rende canais mutantes de RyR2 mais propensos a abrir na fase de relaxamento do ciclo cardíaco, aumentando a probabilidade de arritmias.
As arritmias cardíacas são conhecidas por estarem associadas a vazamentos de Ca2+ do SR diastólicos em pacientes com mutações CPVT no seu RyR2 e com corações de outra forma estruturalmente normais. Nestes casos, o mecanismo mais comum para a indução e manutenção da taquicardia ventricular é o automatismo anormal. Uma forma de automatismo anormal, conhecida como arritmia desencadeada, está associada com a libertação aberrante de Ca2+ do SR, o que inicia DADs. As DADs são despolarizações anormais em cardiomiócitos que ocorrem após a repolarização do potencial de ação cardíaca. A base molecular para a libertação anormal de Ca2+ de SR que resulta em DADs não foi totalmente elucidada. No entanto, as DADs são conhecidas por serem bloqueadas por rianodina, fornecendo 9 evidências de que o RyR2 desempenha um papel fundamental na patogénese desta libertação aberrante de Ca2+. A Patente US 6,489,125 descreve monocloridrato de JTV-519 (4-[3-(4-benzilpiperidin-l-il)-propionil]-7-metoxi-2,3,4,5-tetra-hidro-1,4-benzotiazepina; também conhecido como K201 ou ICP-Calstan 100), uma 1,4-benzotiazepina, como um novo modulador dos canais de cálcio e iões de RYR. O pedido co-pendente US 10/763,498 argumenta o RyR2 como um alvo para o tratamento e prevenção da insuficiência cardíaca e arritmias cardíacas, incluindo a fibrilação atrial e as arritmias cardíacas que causam a morte súbita cardíaca induzida pelo exercício (SCD). Os canais de RyR2 com 7 diferentes mutações de CPVT (por exemplo, S2246L, R2474S, N4104K, R4497C, P2328S, Q4201R, V4653F) demonstraram ter defeitos funcionais que resultaram em canais que se tornavam permeáveis (ou seja, um vazamento de cálcio) quando estimulados durante o exercício. O mecanismo para a VT em CPVT demonstrou ser o mesmo que o mecanismo para VT na insuficiência cardíaca.
Demonstrou-se que as arritmias induzidas por exercício e a morte súbita (em pacientes com CPVT) resultam de uma reduzida afinidade de FKBP12.6 (calstabin2) com o RyR2. Além disso, tem sido demonstrado que o exercício ativa o RyR2 como resultado da fosforilação pela proteína quinase (PKA) dependente da adenosina 3',5'-monofosfato (cAMP). Os canais RyR2 mutantes, que tinham função normal em bicamadas lipídicas planas em condições basais, foram mais sensíveis à ativação por fosforilação por PKA - exibindo aumento da atividade (probabilidade de abertura) e estados abertos prolongados, em comparação com os canais do tipo selvagem. 10
Além disso, os canais RyR2 PKA-fosforilados mutantes eram resistentes à inibição por Mg2+, um inibidor fisiológico do canal, e mostraram uma ligação reduzida a FKBP12.6 (aka calstabin2, gue estabiliza o canal no estado fechado). Estes resultados indicam gue, durante o exercício, quando os RyR2 são PKA-fosforilados, os canais CPVT mutantes são mais propensos a abrir na fase de relaxamento do ciclo cardíaco (diástole), aumentando a probabilidade de arritmias desencadeadas por vazamento de Ca2+ de SR.
Além disso, o Pedido de Patente co-pendente nos EUA n° 09/288, 606 descreve um método para a regulação da contração do coração de um indivíduo, por administração de um composto que regula a fosforilação por PKA de um RyR2 e especificamente diminui a fosforilação por PKA. O Pedido de Patente co-pendente nos EUA n° 10/608, 723 também descreve um método para o tratamento e profilaxia de taquiarritmia arterial e arritmias induzidas pelo stress e exercício através da administração de um agente que inibe a fosforilação por PKA de RyR2. O documento EP0565721 descreve um composto derivado de 1,4-benzotiazepina, que inibe a morte cinética de células dos músculos cardíacos sem funções cardíacas inibidoras. Os documentos W02005/037195 e W02005/094457 proporcionam um método para limitar ou prevenir uma diminuição no nível de FKBP 12.6 ligado a RyR2 num indivíduo, um método para o tratamento ou prevenção de arritmia cardíaca induzida por exercício num indivíduo, e um método para a prevenção da morte cardíaca súbita induzida pelo exercício num indivíduo. Também são fornecidos usos de JTV-519 nestes métodos. O documento WO91/04328 descreve um método para o isolamento de um ADNc específico para o recetor de rianodina humano. 11
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Tendo em conta o acima exposto, existe uma necessidade de identificar novos agentes eficazes para o tratamento ou prevenção de perturbações e doenças associadas com os RyRs que regulam o funcionamento do canal de cálcio em células, incluindo perturbações e doenças musculares esqueléticas e especialmente perturbações e doenças cardíacas. Mais em particular, permanece a necessidade de identificar novos compostos que possam ser utilizados para tratar perturbações associadas com RYR, por exemplo, pela reparação do vazamento em canais RyR e melhoramento da ligação de proteínas FKBP (calstabinl e calstabin2) a RyR PKA-fosforilado, e RyR mutante que de outra forma têm afinidade reduzida, ou não se ligam a FKBP12 e FKBP 12.6. As formas de realização da invenção resolvem algumas ou todas estas necessidades.
Em conformidade, a presente invenção fornece em geral compostos representados pela estrutura da fórmula 1-K:
(Fórmula 1-k) em que R' e R'' são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo por H, halogéneo, -OH, -NH2, -N02, -CN, -CF3, OCF3, —N3, -SO3H, -s (=0) 2alquilo, -S (=0) alquilo, 12 0S(=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero)arilo, (hetero) ariltio, e (hetero) arilamino; e em que cada um de acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero)arilo, (hetero)ariltio podem ser substituídos; n é 0, 1 ou 2; e p é 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10; em que: quando p é 0, Ri8 é alquilo Ci-C4; e quando pél, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10;
Ris é selecionado de entre o grupo constituído por (C=0)0Ri5, —OR15, alquilo, arilo, em que cada alquilo e arilo pode ser substituído; e
Ris é selecionado a partir do grupo que consiste em H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo e heterociclilalquilo, em que cada acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterocíclico, e heterociclilalquilo pode ser substituído; e enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos e complexos dos mesmos.
Numa forma de realização, a presente invenção proporciona um composto representado pela estrutura: 13Slll
MeO
OH ou um seu hidrato ou sal farmaceuticamente aceitável.
Numa forma de realização, a presente invenção proporciona um sal farmaceuticamente aceitável de
MôO or o
OH (Slll).
Numa forma de realização, a presente invenção proporciona um composto representado pela estrutura:
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato.
Numa forma de realização, a presente invenção fornece um composto da fórmula 1-k, em que p é 0 e Ris é alquilo C1-C4. 14
Numa forma de realização, a presente invenção proporciona um composto representado pela estrutura:
(SI 07) ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato.
Numa forma de realização, a presente invenção proporciona um sal farmaceuticamente aceitável de
(SI 07). A invenção pode proporcionar ainda uma composição farmacêutica compreendendo um composto da fórmula 1-k e pelo menos um aditivo selecionado de entre o grupo consistindo em agentes antioxidantes, aromatizantes, tampões, ligantes, corantes, desintegrantes, diluentes, emulsionantes, excipientes, diluentes, agentes de melhoramento do sabor, agentes gelificantes, agentes de deslizamento, conservantes, intensificadores de penetração na pele, solubilizantes, estabilizantes, agentes de suspensão, adoçantes, agentes de tonicidade, veículos, e agentes de aumento da viscosidade. A composição farmacêutica pode estar na forma de uma cápsula, grânulo, pó, solução, suspensão, ou comprimido e pode ser concebida para administração por uma via oral, sublingual, bucal, parentérica, intravenosa, transdérmica, por inalação, por via intranasal, vaginal, intramuscular ou retal. A invenção também pode proporcionar um composto da fórmula 1-k ou uma composição compreendendo um composto da fórmula 1-k para a utilização no tratamento ou prevenção de uma perturbação ou 15 doença associada a um RyR que regula o funcionamento do canal de cálcio nas células. A perturbação ou doença podem ser selecionadas a partir do grupo que consiste em perturbações e doenças cardíacas, perturbações e doenças musculares esqueléticas, perturbações e doenças cognitivas, hipertermia maligna, diabetes e síndrome da morte súbita do lactente. As perturbações e doenças cardíacas podem ser selecionadas a partir do grupo consistindo de perturbações e doenças dos batimentos cardíacos irregulares; perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício; a morte cardíaca súbita; a morte cardíaca súbita induzida por exercício; insuficiência cardíaca congestiva; doença pulmonar obstrutiva crónica; e alta pressão arterial. As perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares e as perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício podem ser selecionadas a partir do grupo constituído por arritmia atrial e ventricular; fibrilação atrial e ventricular; taquiarritmia atrial e ventricular; taquicardia atrial e ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT); e variantes das mesmas induzidas pelo exercício. As perturbações e doenças musculares esqueléticas podem ser selecionadas a partir do grupo constituído por fadiga do músculo esquelético, a fadiga do músculo esquelético induzida pelo exercício, distrofia muscular, perturbações da bexiga e incontinência. As perturbações e doenças cognitivas podem ser selecionadas a partir do grupo consistindo de doença de Alzheimer, as formas de perda de memória, e perda de memória dependente da idade. A invenção também pode proporcionar o uso de um composto da fórmula 1-k ou uma composição compreendendo um composto da fórmula 1-k para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma perturbação ou doença 16 associada a um RyR que regula o funcionamento do canal de cálcio nas células.
Numa forma de realização, o composto é selecionado a partir do grupo que consiste em S84, S 107, S110, Slll, S120, e S121. A presente invenção também proporciona métodos para a síntese de compostos da Fórmula 1-k, e os seus sais, hidratos, solvatos e complexos dos mesmos. A presente invenção proporciona ainda compostos para o tratamento ou prevenção de várias perturbações e doenças num indivíduo que estão associadas com RyRs, tais como perturbações musculares e cardíacas, compreendendo a administração ao indivíduo de uma quantidade de um composto eficaz para prevenir ou tratar uma perturbações ou doença associada aos RyRs, em que o composto é da Fórmula 1-K, ou sais, hidratos, solvatos, complexos e pró-fármacos dos mesmos.
Também são proporcionados compostos para a prevenção ou tratamento de um vazamento num RyR2 num indivíduo, incluindo a administração ao indivíduo de uma quantidade de um composto eficaz para prevenir ou tratar um vazamento no RyR2, em que o composto de Fórmula 1-k, ou sais, hidratos, solvatos, complexos e pró-fármacos destes. O objeto é, por exemplo, um sistema in vitro (por exemplo, células de cultura ou tecidos) , ou em sistema in vivo (por exemplo, animal ou ser humano).
Além disso, a presente invenção fornece compostos para a modulação da ligação de RyR e FKBP num indivíduo, incluindo 17 a administração ao indivíduo de uma quantidade de um composto eficaz para modular o nível de FKBP ligado a RyR, em que o composto é da Fórmula 1-K ou sais, hidratos, solvatos, complexos e pró-fármacos destes. 0 objeto é, por exemplo, um sistema in vitro (por exemplo, células de cultura ou tecidos) , ou em sistema in vivo (por exemplo, animal ou ser humano). A presente invenção proporciona também artigos de fabrico para o tratamento e prevenção de perturbações e doenças associadas a RyRs, tais como perturbações musculares e cardíacas num indivíduo. Os artigos de fabrico compreendem uma composição farmacêutica de um ou mais dos compostos da Fórmula 1-k ou os seus sais, hidratos, solvatos, e complexos. Os artigos de fabrico, são embalados com indicações de várias perturbações que as composições farmacêuticas são capazes de tratar e/ou prevenir.
Outras características e vantagens da presente invenção irão tornar-se evidentes a partir da seguinte descrição detalhada. Deve ser compreendido, porém, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indicando várias formas de realização da invenção, são dados apenas a título de ilustração.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Na Figura 1, as formas de realização A, B e C são, respetivamente, (A) vestígios de corrente de um canal simples de RyR2-P2328S e RyR2-WT; (B) vestígios de corrente de canal simples de RyR2-P2328S; e (C) análise de imunomarcação da ligação a calstabin-2 de RyR2-P2328S. 18
Na Figura 2, as formas de realização A e B são, respetivamente, (A) uma imunomarcação de RyR2 imunoprecipitado com um anticorpo contra RyR2 e imunomarcações de fosforilação por PKA de RyR2 em Ser-2809 e calstabin2; e (B) um gráfico de barras de quantificação da quantidade relativa de RyR2 PKA-fosforilado em Ser-2808 (correspondente a Ser-2809 humano) ligado a RyR2 de ratinhos de tipo selvagem (controlo) e com deficiência em calstabin2 (FKBP12.6_/“) .
Na Figura 3, as formas de realização A, B, e C, são, respetivamente, gráficos de barras de (A) ecocardiograma quantitativos in vivo em modo M comparando a fração de ejeção (EF), antes e após operação simulada ou ligação da artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) permanente em ratinhos knockin do tipo selvagem e RyR2-S2808A; (B) quantificação in vivo do ciclo pressão-volume da variação de pressão máxima ao longo do tempo (dP/dt) em ratinhos knockin do tipo selvagem e RyR2-S2808A após operação simulada ou ligação da artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) permanente; e (C) avaliação quantitativa em modo M ecocardiográfica de diâmetro sistólico final (ESD) em ratinhos knockin de tipo selvagem e RyR2-S2808A após operação simulada ou ligação da artéria coronária descendente anterior esquerda (LAD) permanente.
Na Figura 4, as formas de realização A, B, C, D, E, e F mostram que a função do canal RYR1 é aumentada e normalizada em ratinhos mdx tratados com JTV-519. As formas de realização A e B são, respetivamente, um vestígio de corrente de canal simples e um histograma de amplitude de RYRl a partir do músculo sóleo de um ratinho de controlo 19 (de tipo selvagem) sob condições de repouso. As formas de realização C e D são, respetivamente, um vestigio de corrente de canal simples e um histograma de amplitude RYR1 a partir do músculo sóleo de um ratinho mdx. As formas de realização E e F são, respetivamente, um vestigio de corrente de canal simples e um histograma de amplitude do RYRl a partir do músculo sóleo de um ratinho mdx tratado com JTV-519.
Na Figura 5, as formas de realização A e B são, respetivamente, imunomarcações de RYRl, RYRl-pSer2843 e calstabinl associada a RYRl em ratinhos mdx e ratinhos de tipo selvagem; e os gráficos de barras dos valores relativos de RYRl-pSer2843 e calstabinl em ratinhos mdx e do tipo selvagem.
Na Figura 6, as formas de realização A, B e C, demonstram que um vazamento de Ca2+ de SR é detetável em músculos esqueléticos de animais com insuficiência cardíaca. As formas de realização A e B sao imagens de varrimento em linha por fluorescência de parcelas de Ca2+ em miofibras de, respetivamente, ratos com enfarte simulado (sham) e com enfarte do miocárdio (PMI). A forma de realização C fornece gráficos de barras que resumem a amplitude, tempo de subida, FDHM e FWHM das parcelas de Ca2+ para os ratinhos sham (símbolos abertos) e com PMI (símbolos fechados).
Na Figura 7, as formas de realização A, B, C e D, demonstram que a fosforilação por PKA de Ser-2843 aumenta a probabilidade de abertura e a cinética de dependência de canais RYRl. A forma de realização A fornece vestígios de corrente de canal simples e histograma correspondente de RyRl do tipo selvagem. A forma de realização B proporciona 20 vestígios de corrente de canal simples e histograma correspondente de RyRl do tipo selvagem que é PKA-fosforilado. A forma de realização C fornece vestígios de corrente de canal simples e histograma correspondente de RYR1-Ser-2843A. A forma de realização D fornece vestígios de corrente de canal simples e histograma correspondente de RYR1-Ser-2843D.
Na Figura 8, as formas de realização A e B, demonstram a hiperfosforilação por PKA e deficiência de calstabinl de canais RYR1 após o exercício sustentado. A forma de realização A são immunomarcações de RYR1, RYRl-pSer2844 , RYRl-PSer2849 e calstabinl para ratinhos de controlo e swim na sequência de um regime de exercícios. A forma de realização B é um gráfico de barras que resume as quantidades relativas dos compostos indicados seguindo o regime de exercício.
Na Figura 9, as formas de realização A e B demonstram que a fosforilação por PKA de RYR1 aumenta após a exposição a durações crescentes de exercício sustentado. A forma de realização A fornece imunomarcaçoes de RYRl e RYRl-pSer seguindo crescentes períodos de exercício sustentado. A forma de realização B é um gráfico que mostra a fosforilação por PKA de RYR1 relativa para diferentes durações de exercício.
Na Figura 10, as formas de realização A, B e C, demonstram que a fosforilação por PKA de RYR1 aumenta com a fadiga muscular. As formas de realização A e B são, respetivamente, vestígios de tempo de fadiga e um gráfico de barras que mostra o tempo médio de fadiga para o músculo sóleo de ratinhos de insuficiência cardíaca e ratinhos de 21 controlo. A forma de realização C é um gráfico de fosforilação por PKA em função do tempo de fadiga. A Figura 11 mostra colorações tricrómicas e de hematoxilina-eosina de secções transversais do ratinho M. extensor digitorum longus e demonstra a degeneração de miofibras consistente com a remodelação distrófica após o exercício sustentado. A Figura 12 é um gráfico de concentração-resposta mostrando a percentagem de inibição da corrente hERG após a aplicação de ARM 107 a várias concentrações. A Figura 13 é um gráfico de concentração-resposta mostrando a percentagem de inibição da corrente hERG após a aplicação de JTV-519 ("ARM00X") a várias concentrações.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Tal como aqui utilizado e nas reivindicações em anexo, as formas singulares "um", "uma", e "o/a" incluem referências plurais a menos que o conteúdo dite claramente o contrário. Assim, por exemplo, a referência a "um agente" inclui uma pluralidade de tais agentes e seus equivalentes conhecidos pelos peritos na arte, e a referência a "o polipeptídeo FKBP12.6" é uma referência a um ou mais polipept ídeos FKBP12.6 (também conhecidos como calstabin2) e seus equivalentes conhecidos dos peritos na arte, e assim por diante.
Seguidamente fornecem-se definições de termos utilizados na presente descrição. A definição inicial fornecida para um grupo ou termo aplica-se aqui a esse grupo ou termo ao 22 longo da presente descrição, individualmente ou como parte de outro grupo, a menos que indicado de outra forma.
Tal como aqui utilizado, o termo "compostos RyCal" refere-se a compostos da Fórmula geral 1-k, tal como prevista pela invenção, e é aqui referido como "composto(s) da invenção".
Os compostos da invenção são designados usando um sistema de nomenclatura numérica, com os números de compostos 1 a 123 aqui proporcionados. Estes compostos numerados são referidos utilizando o prefixo "S" ou o prefixo "ARM". Assim, o primeiro composto numerado é referido como "Sl" ou "ARMO01", o segundo composto numerado é referenciado como "S2" ou "ARM002", o terceiro composto numerado é referenciado como "S3" ou " ARM003 ", e assim por diante. Os sistemas de nomenclatura "S" e "ARM" são utilizados indiferentemente ao longo da descrição, desenhos e reivindicações. O termo "alquilo", tal como aqui utilizado, refere-se a um hidrocarboneto saturado linear ou ramificado, tendo de 1 a 6 átomos de carbono. Os grupos alquilo representativos incluem, mas não estão limitados a, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo, isohexilo, e neo-hexilo. O termo "alquilo C1-C4" refere-se a um radical de alcano de cadeia linear ou ramificada (hidrocarboneto) contendo de 1 a 4 átomos de carbono, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, n-butilo, t-butilo, e isobutilo. O termo "alquenilo", tal como aqui utilizado, refere-se a um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada tendo de 2 a 6 átomos de carbono e possuindo pelo menos uma ligação 23 dupla carbono-carbono. Numa forma de realização, o alquenilo tem uma ou duas ligações duplas. A quantidade de alquenilo pode estar presente na conformação E ou Z e os compostos da presente invenção incluem ambas as conformações. 0 termo "alquinilo", tal como aqui utilizado, refere-se a um hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada tendo de 2 a 6 átomos de carbono e possuindo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono. 0 termo "arilo", tal como aqui utilizado, refere-se a um grupo aromático contendo 1 a 3 anéis aromáticos, quer fundidos ou ligados. 0 termo "grupo cicloalquilo", tal como aqui utilizado, refere-se a um anel de carbono saturado ou parcialmente insaturado com três a sete membros. Qualquer posição adequada do anel do grupo cicloalquilo pode ser ligada covalentemente à estrutura química definida. Os grupos cicloalquilo exemplificativos incluem ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, e cicloheptilo. 0 termo "halogéneo", tal como aqui utilizado refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo. 0 termo "grupo heterocíclico" ou "heterocíclico" ou "heterociclilo" ou "heterociclo", conforme aqui utilizado, refere-se a grupos cíclicos completamente saturados, ou parcialmente ou totalmente insaturados, incluindo grupos aromáticos (isto é, "heteroarilo") (por exemplo, sistemas de anel de 4 a 7 membros monocíclicos, de 7 a 11 membros bicíclicos, ou de 10 a 16 membros tricíclicos), que 24 apresentam pelo menos um heteroátomo em pelo menos um anel contendo um átomo de carbono. Cada anel do grupo heterocíclico contendo um heteroátomo pode ter 1, 2, 3, ou 4 heteroátomos selecionados a partir de átomos de azoto, átomos de oxigénio e/ou átomos de enxofre, em que os heteroátomos de azoto e enxofre podem ser opcionalmente oxidados e os heteroátomos de azoto podem ser opcionalmente quaternizados. 0 grupo heterocíclico pode estar ligado ao resto da molécula em qualquer heteroátomo ou átomo de carbono do anel ou do sistema de anel. Exemplos de grupos heterocíclicos incluem, mas não estão limitados a, azepanilo, azetidinilo, aziridinilo, dioxolanilo, furanilo, furazanilo, homo piperazinilo, imidazolidinilo, imidazolinilo, isotiazolilo, isoxazolilo, morfolinilo, oxadiazolilo, oxazolidinilo, oxazolilo, oxazolidinilo, pirimidinilo, fenantridinilo, fenantrolinilo, piperazinilo, piperidinilo, piranilo, pirazinilo, pirazolidinilo, pirazolinilo, pirazolilo, piridazinilo, piridooxazolilo, piridoimidazolilo, piridotiazolilo, piridinilo, pirimidinilo, pirrolidinilo, pirrolinilo, quinuclidinilo, tetra-hidrofuranilo, tiadiazinilo, tiadiazolilo, tienilo, tienotiazolilo, tienooxazolilo, tienoimidazolilo, tiomorfolinilo, tiofenilo, triazinilo, e triazolilo. Exemplos de grupos heterocíclicos bicíclicos incluem indolilo, isoindolilo, benzotiazolilo, benzoxazolilo, benzoxadiazolilo, benzotienilo, quinuclidinilo, quinolinilo, tetrahidroisoquinolinilo, isoquinolinilo, benzimidazolilo, benzopiranilo, indolizinilo, benzofurilo, benzofurazanilo, cromonilo, cumarinilo, benzopiranilo, cinolinilo, quinoxalinilo, indazolilo, pirrolopiridilo, furopiridinilo (tal como furo[2,3-c]piridinilo, furo[3,2-b]piridinil], ou furo[2,3-b]piridinilo), di-hidroisoindolilo, di-hidroquinazolinilo (tal como 3,4-di- 25 hidro-4-oxo-quinazolinilo) , triazinilazepinilo, tetra-hidroquinolinilo e semelhantes. Exemplos de grupos heterocíclicos tricíclicos incluem carbazolilo, benzidolilo, fenantrolinilo, acridinilo, fenantridinilo, xantenilo e semelhantes.
Os termos acima mencionados "alquilo", "alquenilo", "alquinilo", "arilo", "fenilo", "grupo cíclico", "cicloalquilo", "heterociclilo", "heterociclo" e "heterociclo" podem ser adicionalmente opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes. Substituintes exemplares incluem, mas não estão limitados a um ou mais dos seguintes grupos: hidrogénio, halogéneo, CF3, OCF3, ciano, nitro, N3, oxo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, heterociclo, arilo, alquilarilo, heteroarilo, 0Ra, SRa, S (=0) Re, S(=0)2Re, P(=0)2Re, S (=0) 20Ra, P (=0) 20Ra, NRbRc, NRbS (=0) 2Re, NRbP (=0) 2Re, S(=0)2NRbRc, P (=0) 2NRbRc, C(=0)0Ra, C (=0) Ra, C (=0) NRbRc, OC (=0) Ra, 0C(=0)NRbRc, NRbC (=0) 0Ra, NRdC (=0) NRbRc, NRdS (=0) 2NRbRc, NRdP (=0) 2NRbRc, NRbC (=0) Ra, ou NRbP (=0) 2Re, em que Ra é hidrogénio, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclo, ou arilo; Rb, Rc e Rd são independentemente hidrogénio, alquilo, cicloalquilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclo, arilo, ou o referido Rb e Rc, juntamente com o N ao qual se encontram ligados, formam facultativamente um heterociclo; e Re é alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclo, ou arilo. Nos referidos substituintes exemplificativos, grupos tais como alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquenilo, alquilarilo, heteroarilo, heterociclo e arilo podem, eles próprios, ser opcionalmente substituídos. 26 0 termo "azoto quaternário" refere-se a um átomo de azoto tetravalente de carga positiva, incluindo, por exemplo, o azoto de carga positiva num grupo tetra-alquilamónio (por exemplo, tetrametilamónio, N-metilpiridinio), o azoto carregado positivamente em espécies de amónio protonado (por exemplo, trimetil-hidroamónio, N-hidropiridinio), o azoto de carga positiva em N-óxidos de amina (por exemplo, N-óxido de N-metil-morfolina, N-óxido de piridina), e o azoto carregado positivamente num grupo N-amino-amónio (por exemplo, N-aminopiridinio).
Ao longo da descrição, a menos que indicado de outra maneira, o azoto no anel da benzotiazepina de compostos da presente invenção pode, opcionalmente, ser um azoto quaternário.
Os compostos da presente invenção podem estar presentes na sua forma tautomérica. Todas as referidas formas tautoméricas estão aqui contempladas como parte da presente invenção.
Todos os estereoisómeros dos compostos da presente invenção (por exemplo, aqueles que podem existir devido a carbonos assimétricos em diversos substituintes), incluindo as formas enantioméricas e diastereoméricas, estão contemplados dentro do âmbito da presente invenção. Os estereoisómeros individuais dos compostos da invenção podem, por exemplo, ser substancialmente livres de outros isómeros (por exemplo, como um isómero ótico puro ou substancialmente puro, com uma atividade especificada), ou podem ser misturados, por exemplo, como racematos ou com todos os outros estereoisómeros, ou com outros estereoisómeros escolhidos. Os centros quirais da presente 27 invenção podem ter a configuração S ou R como definido pelas Recomendações da IUPAC 1974. As formas racémicas podem ser resolvidas através de métodos físicos, tais como, por exemplo, cristalização fracionada, separação ou cristalização de derivados diastereoméricos, ou separação por cromatografia em coluna quiral. Os isómeros óticos individuais podem ser obtidos a partir dos racematos por qualquer método adequado, incluindo, sem limitação, os métodos convencionais, tais como, por exemplo, a formação de sal com um ácido oticamente ativo seguido por cristalização.
Os compostos da presente invenção são, após a sua preparação, preferivelmente isolados e purificados para se obter uma composição contendo uma quantidade em peso igual ou superior a 99% do composto (composto "substancialmente puro"), que é então utilizado ou formulado como aqui descrito. Tais compostos "substancialmente puros" da presente invenção são também aqui contemplados como parte da presente invenção.
Todos os isómeros configuracionais dos compostos da presente invenção estão contemplados, quer numa mistura ou em forma pura ou substancialmente pura. A definição dos compostos da presente invenção abrange os isómeros cis (Z) e trans (E) alceno, bem como os isómeros cis e trans de hidrocarboneto cíclico ou anéis heterocíclicos.
Ao longo da descrição, grupos e substituintes dos mesmos podem ser selecionados para fornecer quantidades e compostos estáveis. A presente invenção proporciona compostos que são capazes 28 de tratar e prevenir doenças e perturbações associadas aos RyRs que regulam o funcionamento do canal de cálcio nas células. Mais particularmente, a presente invenção proporciona compostos que são capazes de tratamento ou prevenção de um vazamento em canais de RYR. "Perturbações e doenças associadas com os RyRs" significam perturbações e doenças que podem ser tratadas e/ou prevenidas por modulação dos RyRs que regulam o funcionamento do canal de cálcio nas células. "Perturbações e doenças associadas com os RyRs" incluem, sem limitação, perturbações e doenças cardíacas, perturbações e doenças musculares esqueléticas, perturbações e doenças cognitivas, hipertermia maligna, diabetes e síndrome da morte súbita do lactente. As perturbações e doenças cardíacas incluem, mas não estão limitadas a, perturbações e doenças dos batimentos cardíacos irregulares; perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício; a morte cardíaca súbita; a morte cardíaca súbita induzida por exercício; insuficiência cardíaca congestiva; doença pulmonar obstrutiva crónica; e alta pressão arterial. As perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares e as perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício incluem, mas não estão limitadas a, arritmia atrial e ventricular; fibrilação atrial e ventricular; taquiarritmia atrial e ventricular; taquicardia atrial e ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT); e variantes das mesmas induzidas pelo exercício. As perturbações e doenças musculares esqueléticas incluem, mas não estão limitadas a, fadiga do músculo-esquelético, fadiga do músculo-esquelético induzida pelo exercício, distrofia muscular, perturbações da bexiga e incontinência. Perturbações e doenças cognitivas incluem, mas não estão limitadas a, 29 doença de Alzheimer, formas de perda de memória, e perda de memória dependente da idade.
Compostos
Numa forma de realização, a presente invenção fornece compostos da fórmula I-k:
em que R' e R'' sao selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de H, halogéneo, -OH, -NH2, -NO2, -CN, -CF3, 0CF3, -N3,-S03H, -S (=0)2alquilo, -S (=0) alquilo, -0S(=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero)arilo, (hetero)ariltio, e (hetero) arilamino; e em que cada um de acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero)arilo, (hetero)ariltio podem ser substituídos ou não substituídos; R18 é selecionado a partir do grupo consistindo de (C=0)0Ri5, -OR15, alquilo, arilo, em que cada um de alquilo, arilo, podem ser substituídos ou não substituídos; R15 e Ri6 são independentemente selecionados a partir do grupo que consiste em H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo, e heterociclilalquilo; em que cada um de acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, amino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, 30 heterociclilo, e heterociclilalquilo podem ser opcionalmente substituídos; e opcionalmente Ri5 e Ri6 em conjunto com o N ao qual estão ligados, podem formar um heterociclo que pode ser substituído; em que p é 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ou 10; e n é 0, 1, ou 2; e enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos e complexos dos mesmos.
Em certas formas de realização, a presente invenção proporciona compostos da fórmula I-k, em que R' e R" são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de H, halogéneo, -OH, OMe, -NH2, -N02, -CN, -CF3, -OCF3 , -N3, -S (=0) 2Ci-C4alquilo, -S (= O) Ci-C4alquilo, -S-C4-C4aquilo, -0S(=0)2CF3, Ph, -NHCH2Ph, -C(=0)Me, -0C(=0)Me, morfolinilo e propenilo; e n é 0, 1 ou 3. Em alguns casos, R' é H ou OMe, e R" é H.
Noutras formas de realização, a presente invenção proporciona compostos da fórmula I-k, em que R48 é selecionado a partir do grupo consistindo de -(C=0)0Ri5, - ORis, alquilo, arilo e em que cada alquilo e arilo podem ser substituídos ou não substituídos. Em alguns casos, m é 1, e Ris é Ph, C(=0)0Me, C(=0)0H, aminoalquilo, NH2, NHOH, ou NHCbz. Noutros casos, m é 0, e Ris é alquilo Ci-C4, tal como Me, Et, propilo, e butilo.
Os compostos da fórmula I-k tratam e previnem perturbações e doenças associadas aos RyRs.
Exemplos de tais compostos incluem, sem limitação, S84, S107, S110, Slll, S120, e S121. Estes compostos têm as 31 seguintes estruturas:
SI tl
SI2C 32
«! O í Jite
Vias de Atividade
Os compostos da invenção, tal como os compostos da fórmula I-k, reduzem a probabilidade de abertura do RyR aumentando a afinidade da FKBP12 (calstabinl) e FKBP12.6 (calstabin2) com, respetivamente, a RYR1 PKA-f osf orilada e RyR2 PKA-fosforilada. Além disso, os compostos da invenção normalizam a dependência de canais RYR mutantes, incluindo canais RyR2 mutantes associados a CPVT, através do aumento da afinidade de ligação da FKBP12 (calstabinl) e FKBP12.6 (calstabin2). Portanto, os compostos da invenção previnem perturbações e doenças envolvendo a modulação dos RyRs, particularmente o RYR1 e RyR2. Exemplos de tais perturbações e condições incluem, sem limitação, perturbações e doenças cardíacas, perturbações e doenças musculares esqueléticas, perturbações e doenças cognitivas, hipertermia maligna, diabetes e síndrome da morte súbita do lactente. As perturbações e doenças cardíacas incluem, mas não estão limitadas a, perturbações e doenças dos batimentos cardíacos irregulares; perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício; a morte cardíaca súbita; a morte cardíaca súbita induzida por exercício; insuficiência cardíaca congestiva; doença pulmonar obstrutiva crónica; e pressão arterial alta. As perturbações e doenças nos batimentos cardíacos 33 irregulares e as perturbações e doenças nos batimentos cardiacos irregulares induzidos por exercício incluem, mas não estão limitadas a, arritmia atrial e ventricular; fibrilação atrial e ventricular; taguiarritmia atrial e ventricular; taquicardia atrial e ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT); e variantes das mesmas induzidas pelo exercício. As perturbações e doenças musculares esqueléticas incluem, mas não estão limitadas a, fadiga do músculo esquelético, fadiga do músculo esquelético induzida pelo exercício, distrofia muscular, perturbações da bexiga e incontinência. Perturbações e doenças cognitivas incluem, mas não estão limitadas a, doença de Alzheimer, formas de perda de memória, e perda de memória dependente da idade. Os compostos da invenção tratam destas perturbações e doenças, aumentando a afinidade de ligação FKBP12 (calstabinl)-RYR1 e aumentando a afinidade de ligação a FKBP12.6 (calstabin2)-RyR2.
Os compostos da invenção podem ser utilizados para limitar ou prevenir uma queda no nível de FKBP (calstabin) ligada a RyR em células de um indivíduo. Tal como aqui utilizado, "RyR", inclui RYR1, RyR2 e RyR3. Além disso, a FKBP inclui tanto FKBP12 (calstabinl) como a FKBP12.6 (calstabin2). "FKBP ligada a RyR", portanto, refere-se a PKBP12 (calstabinl) ligada a RyRl, FKBP12.6 (calstabin2) ligada a RyR2, e FKBP12 (calstabinl) ligada a RyR3.
Tal como aqui utilizado, "RyR" também inclui uma "proteína RyR" e um "análogo de RyR". Um "análogo de RyR" é uma variante funcional da proteína RyR, possuindo atividade biológica RyR, que tem 60% ou mais de homologia de sequência de aminoácidos com a proteína RyR. Os RyRs da 34 presente invenção são não fosforilados, fosforilados (por exemplo, por PKA), ou hiperfosforilados (por exemplo, por PKA). Como ainda utilizado aqui, o termo "atividade biológica de RyR" refere-se à atividade de uma proteína ou péptido que demonstra uma capacidade de se associar fisicamente com, ou se ligar, à FKBP12 (calstabinl) no caso de RYR1 e RyR3 e FKBP12.6 (calstabin2) no caso de RyR2 (isto é, a ligação de cerca de duas vezes ou cerca de cinco vezes, acima da ligação de fundo de um controlo negativo), de acordo com as condições dos ensaios aqui descritos.
Tal como aqui utilizado, "FKBP" inclui tanto uma ''proteína FKBP" e um "análogo de FKBP", quer se trate de FKBP12 (calstabinl) ou FKBP12.6 (calstabin2). A menos que de outro modo aqui indicado, "proteína" inclui uma proteína, domínio de proteína, polipéptido, ou péptidos, e qualquer seu fragmento. Um "análogo de FKBP" é uma variante funcional da proteína FKBP, possuindo atividade biológica FKBP, que tem 60% ou mais de homologia de sequência de aminoácidos com a proteína FKBP, seja FKBP12 (calstabinl) ou FKBP12.6 (calstabin2). Como ainda utilizado aqui, o termo "atividade biológica de FKBP" refere-se à atividade de uma proteína ou péptido que demonstra uma capacidade de se associar fisicamente com, ou se ligar, a RyR2 não fosforilado ou não hiperfosforilado (isto é, a ligação de cerca de duas vezes, ou cerca de cinco vezes, acima da ligação de um controlo negativo de fundo), sob as condições dos ensaios aqui descritos. A FKBP liga-se ao canal RyR, uma molécula por subunidade RyR. Assim, tal como é aqui utilizado, o termo "PKBP ligado a RyR" inclui uma molécula de uma proteína FKBP12 (calstabinl) que está ligada a uma subunidade de proteína 35 RYR1 ou a um tetrâmero de FKBP12 que está em associação com um tetrâmero de RYR1, uma molécula de proteína FKBP12. 6 (calstabin2) que está ligada a uma subunidade de proteína de RyR2 ou um tetrâmero de FKBP12.6 que está em associação com um tetrâmero de RyP2, e uma molécula de uma proteína FKBP12 (calstabinl) que está ligada a uma subunidade de proteína RyR3 ou um tetrâmero de FKBP12 que está em associação com um tetrâmero de RyR3. Portanto, "FKBP ligada a PyP" refere-se a "FKBP12 ligada a RYR1", "FKBP12.6 ligada a RyR2" e "FKBP12 ligada a RyR3".
De acordo com a utilização dos compostos da presente invenção, uma "diminuição" ou "doença" ao nível de FKBP ligada a RyR em células de um indivíduo refere-se a uma diminuição detetável, diminuição ou redução do nível de FKBP ligada a RyR em células do indivíduo. Tal diminuição é limitada ou impedida, em células de um indivíduo, quando a redução é de alguma forma interrompida, impedida, evitada, obstruída ou reduzida pela administração de compostos da invenção, de tal modo que o nível de FKBP ligada a RyR em células do indivíduo é maior do que seria de outro modo na ausência do composto administrado. 0 nível de FKBP ligada a RyR num indivíduo é detetado através de ensaios e técnicas padronizados, incluindo aqueles prontamente determinados a partir da arte conhecida (por exemplo, técnicas imunológicas, análise por hibridação, imunoprecipitação, análise de Western-blot, técnicas de imagem de fluorescência e/ou deteção por radiação, etc.), bem como quaisquer ensaios e métodos de deteção aqui descritos. Por exemplo, a proteína é isolada e purificada a partir de células de um indivíduo utilizando os métodos padrão conhecidos na técnica, incluindo, sem 36 limitação, a extração a partir das células (por exemplo, com um detergente que solubiliza a proteína) se necessário, seguido por purificação de afinidade numa coluna, cromatografia (por exemplo, FTLC e HPLC), imunoprecipitação (com um anticorpo), e precipitação (por exemplo, com isopropanol e um reagente tal como o Trizol). 0 isolamento e purificação da proteína são seguidos por eletroforese (por exemplo, num gel de SDS-poliacrilamida) . Uma diminuição no nível de FKBP ligada a RyR num indivíduo, ou a sua limitação ou prevenção, é determinada por comparação da quantidade de FKBP ligada a RyR detetada antes da administração de JTV-519 ou de um composto da fórmula I-k (em conformidade com os métodos descritos a seguir) com a quantidade detetada num tempo adequado após a administração do composto.
Uma redução do nível de FKBP ligada a RyR em células de um indivíduo é limitada ou impedida, por exemplo, inibindo a dissociação de FKBP e RyR nas células do indivíduo; aumentando a ligação entre a FKBP e RyR nas células do indivíduo; ou estabilizando o complexo RyR-PKBP em células de um indivíduo. Tal como aqui utilizado, o termo "inibir a dissociação" inclui o bloqueio, diminuição, inibição, limitação ou impedimento da dissociação física ou a separação de uma subunidade de FKBP de uma molécula RyR nas células do indivíduo, e o bloqueio, diminuição, inibição, limitação ou impedimento da dissociação física ou separação de uma molécula RyR de uma subunidade de FKBP em células do indivíduo. Como ainda utilizado aqui, o termo "aumentar a ligação" inclui intensificar, aumentar, ou melhorar a capacidade de o RyR fosforilado se associar fisicamente com a FKBP (por exemplo, a ligação de cerca de duas vezes, ou cerca de cinco vezes, acima da ligação de fundo de um 37 controlo negativo) em células do indivíduo e intensificar, aumentar, ou melhorar a capacidade da FKBP se associar fisicamente com o RyR fosforilado (por exemplo, a ligação de cerca de duas vezes, ou cerca de cinco vezes, acima da ligação de fundo de um controlo negativo) em células do indivíduo. Além disso, uma diminuição no nível de FKBP ligadas a RyR em células de um indivíduo é limitada ou impedida ao diminuir diretamente o nível de RyR fosforilado nas células do indivíduo ou ao diminuir indiretamente o nível de RyR fosforilado nas células (por exemplo, pela orientação de uma enzima (tal como a PKA) ou outra molécula endógena que regule ou module os níveis ou funções de RyR fosforilado nas células). Numa forma de realização, o nível de RyR fosforilado nas células é reduzido em pelo menos 10% na utilização dos compostos da presente invenção. Numa outra forma de realização, o nível de RyR fosforilado é diminuído em pelo menos 20%.
Os indivíduos que podem ser testados na presente invenção são sistemas in vitro e in vivo, incluindo, sem limitação, células ou tecidos isolados ou cultivados, sistemas de ensaio in vitro não-celulares e um animal (por exemplo, um anfíbio, uma ave, um peixe, um mamífero, um marsupial, um humano, um animal doméstico (por exemplo, um cão, gato, macaco, ratinho ou rato) um animal comercial (por exemplo, uma vaca ou um porco)).
As células de um indivíduo incluem as células do músculo estriado. Um músculo estriado é um músculo em que as unidades de repetição (sarcómeros) das miofibrilas contráteis estão dispostas em alinhamento por toda a célula, resultando em estrias transversais ou oblíquas que são observadas ao nível do microscópio ótico. Exemplos de 38 células do músculo estriado incluem, sem limitação, células musculares voluntárias (esquelético) e células musculares cardíacas. Numa forma de realização, a célula utilizada no método da presente invenção é uma célula do músculo cardíaco humano. Tal como aqui utilizado, o termo "célula muscular cardíaca" inclui fibras do músculo cardíaco, tais como as encontradas no miocárdio do coração. As fibras musculares cardíacas são compostas de cadeias de células de músculo cardíaco contíguas, ou cardiomiócitos, juntas de ponta a ponta em discos intercalares. Estes discos possuem dois tipos de junções celulares: desmosomas expandidas que se estendem ao longo das suas porções transversais, e junções de espaços, a maior das quais se encontra ao longo das suas porções longitudinais.
Uma redução do nível de FKBP ligada ao RyR é limitada ou impedida, em células de um indivíduo através da administração dos compostos da invenção ao indivíduo; isto também iria permitir o contacto entre as células do indivíduo e os compostos da invenção. Os compostos da invenção são moduladores de canais de iões de cálcio. Além de regular os níveis de Ca2+ nas células do miocárdio, os compostos da invenção modulam a corrente de Na+ atual e a corrente K+ retificadora nas células, tais como células as células ventriculares de cobaias, e inibe uma corrente K+ retificadora atrasada corrente nas células, tais como as células atriais de cobaias.
Composição Farmacêutica
Os compostos da invenção são formulados em composições farmacêuticas para administração a seres humanos numa forma biologicamente compatível adequada para administração in 39 vivo. De acordo com um outro aspeto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo compostos da fórmula I-k em mistura com um diluente farmaceuticamente aceitável e/ou agente de suporte. 0 agente de suporte farmaceuticamente aceitável deverá ser "aceitável" no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da composição e não prejudicial para o seu recipiente. 0 agente de suporte farmaceuticamente aceitável aqui utilizado é selecionado de entre vários materiais orgânicos ou inorgânicos que são usados como materiais para formulações farmacêuticas, e que são incorporados como agentes analgésicos, tampões, ligantes, desintegrantes, emulsionantes, diluentes, excipientes, diluentes, agentes deslizantes, solubilizantes, estabilizantes, agentes suspensores, agentes de tonicidade e agentes de suporte e agentes de aumento da viscosidade. Se necessário, os aditivos farmacêuticos, tais como antioxidantes, aromatizantes, corantes, agentes de melhoramento do sabor, conservantes e adoçantes, são também adicionados. Exemplos de agentes de suporte farmaceuticamente aceitáveis incluem a carboximetilcelulose, celulose cristalina, glicerina, goma-arábica, lactose, estearato de magnésio, metilcelulose, pós, solução salina, alginato de sódio, sacarose, amido, talco e água, entre outros.
As formulações farmacêuticas da presente invenção são preparadas por métodos bem conhecidos nas artes farmacêuticas. Por exemplo, os compostos da fórmula I-k são colocados em associação com um agente de suporte e/ou diluente, tal como uma suspensão ou solução. Opcionalmente, um ou mais ingredientes acessórios (por exemplo, tampões, agentes aromatizantes, agentes superficialmente ativos, e semelhantes) são também adicionados. A escolha do agente de 40 suporte é determinada pela solubilidade e natureza química dos compostos, via de administração escolhida e da prática farmacêutica padrão.
Os compostos da fórmula I-k são administrados a um indivíduo por contacto das células alvo (por exemplo, células do músculo cardíaco) in vivo no indivíduo com os compostos. Os compostos são contactados com (por exemplo, introduzido em) células do indivíduo usando técnicas conhecidas, utilizadas para a introdução e administração de proteínas, ácidos nucleicos e outros fármacos. Exemplos de métodos para o contacto das células com (isto é, o tratamento das células com) os compostos da invenção incluem, sem limitação, a absorção, a eletroporação, injeção, imersão, introdução, distribuição de lipossomas, transfecção, transfusão, vetores e outros agentes de suporte de distribuição de fármacos e métodos. Quando as células alvo estão localizadas numa porção específica de um indivíduo, é desejável introduzir os compostos da invenção diretamente nas células, por injeção ou por outros meios (por exemplo, por introdução dos compostos no sangue ou outro fluido corporal). As células alvo estão contidas em tecidos de um indivíduo e são detetadas por métodos de deteção padrão prontamente determinados a partir da técnica conhecida, os exemplos dos quais incluem, sem limitação, técnicas imunológicas (por exemplo, coloração imuno-histoquímica), as técnicas de imagiologia de fluorescência e técnicas microscópicas.
Além disso, os compostos da presente invenção são administrados a um indivíduo humano ou animal por meio de processos conhecidos incluindo, sem limitação, administração oral, administração sublingual ou bucal, 41 administração parentérica, administração transdérmica, via inalação ou via intranasal, vaginal, retal e por via intramuscular. Os compostos de acordo com a invenção são administrados por via parentérica, por epifascial, intracapsular, intracraniana, intradérmica, intratecal, intramuscular, intraorbital, intraperitoneal, intraespinal, intraesternal, intravascular, intravenosa, parenquimatosa, a injeção subcutânea ou por via sublingual, ou por meio de cateter. Numa forma de realização, o agente é administrado ao indivíduo por meio de distribuição nos músculos do indivíduo, incluindo, mas não limitado aos músculos cardíacos do indivíduo. Numa forma de realização, o agente é administrado ao indivíduo por via de administração direcionada para as células do músculo cardíaco através de um cateter inserido no coração do indivíduo.
Para a administração oral, uma formulação dos compostos da invenção pode ser apresentada na forma de cápsulas, comprimidos, pós, grânulos, ou como uma suspensão ou solução. A formulação tem aditivos convencionais, tais como a lactose, manitol, amido de milho ou amido de batata. A formulação também é apresentada com ligantes, tais como celulose cristalina, derivados de celulose, acácia, amido de milho ou gelatinas. Além disso, a formulação é apresentada com desintegradores, tais como amido de milho, amido de batata ou carboximetilcelulose de sódio. A formulação também é apresentada com o fosfato de cálcio dibásico anidro ou glicolato amido de sódio. Finalmente, a formulação é apresentada com lubrificantes, tais como talco ou estearato de magnésio.
Para a administração parentérica (isto é, a administração por injeção através de uma outra via que não o canal 42 alimentar), os compostos da invenção são combinados com uma solução aquosa estéril que seja isotónica com o sangue do indivíduo. Tal formulação é preparada por dissolução de um ingrediente ativo sólido em água contendo substâncias fisiologicamente compatíveis tais como o cloreto de sódio, glicina e semelhantes, e possuindo um pH tamponado compatível com condições fisiológicas, de modo a produzir uma solução aquosa, seguida de fornecimento da dita solução estéril. A formulação está apresentada em recipientes de dose unitária ou multi-dose, tais como ampolas ou frascos selados. A formulação é libertada por qualquer modo de injeção, incluindo, sem limitação, epifascial, intracapsular, intracraniana, intradérmica, intratecal, intramuscular, intraorbital, intraperitoneal, intraespinal, intraesternal, intravascular, intravenosa, parenquimatosa, subcutânea, ou por via sublingual ou por via de cateter no coração do indivíduo.
Para a administração transdérmica, os compostos da invenção são combinados com potenciadores da penetração na pele, tais como propileno glicol, polietileno glicol, isopropanol, etanol, ácido oleico, iV-met ilpirrolidona e semelhantes, que aumentam a permeabilidade da pele aos compostos da invenção e permitem que os compostos penetrem através da pele para a corrente sanguínea. As composições de compostos/estimuladoras podem também ser ainda combinadas com uma substância polimérica, tal como etilcelulose, hidroxipropilcelulose, etileno/acetato de vinilo, polivinilpirrolidona, e semelhantes, para proporcionar a composição na forma de gel, que é dissolvida num solvente, tal como cloreto de metileno, evaporada para a viscosidade desejada e, em seguida, aplicada a material de suporte para proporcionar um remendo. 43
Em algumas formas de realização, a composição está na forma de dose unitária tal como um comprimido, cápsula ou frasco de dose única. As doses adequadas da unidade, ou seja, quantidades terapeuticamente eficazes, podem ser determinadas durante os ensaios clínicos concebidos de forma adequada para cada uma das condições para as quais a administração de um composto escolhido é indicada, e irá, evidentemente, variar em função do parâmetro clínico desejado. 0 presente pedido de patente descreve também artigos de fabrico para o tratamento e prevenção de perturbações, tais como perturbações cardíacas, num indivíduo. Os artigos de fabrico compreendem uma composição farmacêutica de um ou mais dos compostos da Fórmula I-k, tal como aqui descrita. Os artigos de fabrico, são embalados com indicações de várias perturbações que as composições farmacêuticas são capazes de tratar e/ou prevenir. Por exemplo, os artigos de fabrico compreendem uma dose unitária de um composto aqui descrito que é capaz de tratamento ou prevenção de uma perturbação muscular, e uma indicação de que a dose unitária é capaz de tratamento ou prevenção de uma determinada doença, por exemplo, uma arritmia.
De acordo com a utilização dos compostos da presente invenção, os compostos da fórmula I-k são administrados ao indivíduo (ou são postos em contacto com células do indivíduo) numa quantidade eficaz para limitar ou prevenir uma queda no nível de FKBP ligada a RyR no indivíduo, em particular em células do indivíduo. Esta quantidade é facilmente determinada pelo perito na arte, com base em técnicas conhecidas, incluindo a análise de curvas de titulação estabelecidos in vivo e os métodos e ensaios aqui 44 revelados. Numa forma de realização, uma quantidade apropriada dos compostos da invenção eficaz para limitar ou prevenir uma queda no nível de FKBP ligada a RyR nas gamas do indivíduo de cerca de 0,01 mg/kg/dia a cerca de 20 mg/kg/dia, e/ou é uma quantidade suficiente para atingir níveis plasmáticos que vão desde cerca de 300 ng/mL a cerca de 1000 ng/mL. Numa forma de realização, a quantidade dos compostos a partir da invenção varia de cerca de 10 mg/kg/dia a cerca de 20 mg/kg/dia. Numa outra forma de realização > é administrada a partir de cerca o 0) TS 01 mg/kg/dia a cerca de 10 mg/kg/dia. Numa outra forma de realização > é administrada a partir de cerca de 0, 01 mg/kg/dia a cerca de 5 mg/kg/dia. Numa outra forma de realização > é administrada a partir de cerca de 0, 05 mg/kg/dia a cerca de 5 mg/kg/dia. Numa outra forma de realização > é administrada a partir de cerca de 0, 05 mg/kg/dia a cerca de 1 mg/kg/dia.
Utilizações A presente invenção proporciona compostos para uma nova gama de tratamentos terapêuticos para pacientes com várias perturbações envolvendo a modulação de RyRs, particularmente perturbações musculares esqueléticas (RYR1), perturbações cardíacas (RyR2) e perturbações cognitivas (RyR3).
Numa forma de realização da presente invenção, o indivíduo ainda não desenvolveu uma perturbação, tal como uma perturbação cardíaca (por exemplo arritmia cardíaca induzida por exercício). Numa outra forma de realização da presente invenção, o indivíduo está em necessidade de tratamento para uma perturbação, incluindo uma perturbação 45 cardíaca. Várias perturbações que os compostos da invenção tratam ou previnem incluem, mas não estão limitadas a, perturbações e doenças cardíacas, perturbações e doenças musculares esqueléticas, perturbações e doenças cognitivas, hipertermia maligna, diabetes e síndrome da morte súbita do lactente. As perturbações e doenças cardíacas incluem, mas não estão limitadas a, perturbações e doenças dos batimentos cardíacos irregulares; perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício; a morte cardíaca súbita; a morte cardíaca súbita induzida por exercício; insuficiência cardíaca congestiva; doença pulmonar obstrutiva crónica; e alta pressão arterial. As perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares e as perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício incluem, mas não estão limitadas a, arritmia atrial e ventricular; fibrilação atrial e ventricular; taquiarritmia atrial e ventricular; taquicardia atrial e ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT); e variantes das mesmas induzidas pelo exercício. As perturbações e doenças musculares esqueléticas incluem, mas não estão limitadas a, fadiga do músculo esquelético, fadiga do músculo esquelético induzida pelo exercício, distrofia muscular, perturbações da bexiga e incontinência. Perturbações e doenças cognitivas incluem, mas não estão limitadas a, doença de Alzheimer, formas de perda de memória e perda de memória dependente da idade. Um perito na técnica irá reconhecer ainda outras doenças, incluindo, mas não limitadas a perturbações musculares e cardíacas, que os compostos da invenção podem ser úteis para tratar, de acordo com a informação aqui fornecida. 46 A quantidade de compostos da invenção eficazes para limitar ou prevenir uma diminuição no nível de FKBP12.6 ligada a RyR2 no indivíduo é uma quantidade eficaz para prevenir a arritmia cardíaca induzida por exercício no indivíduo. A arritmia cardíaca é uma perturbação da atividade elétrica do coração, que se manifesta como uma anormalidade no batimento cardíaco ou ritmo cardíaco. Tal como aqui utilizado, uma quantidade de compostos de acordo com a invenção "eficazes para impedir a arritmia cardíaca induzida por exercício", inclui uma quantidade de compostos de Fórmula I-k, eficazes para prevenir o desenvolvimento da disfunção clínica ou sintomas da arritmia cardíaca induzida pelo exercício (por exemplo, palpitações, desmaios, fibrilação ventricular, taquicardia ventricular e morte súbita cardíaca). A quantidade dos compostos eficazes para evitar a arritmia cardíaca induzida por exercício num indivíduo irá variar, dependendo dos fatores específicos de cada caso, incluindo o tipo de arritmia cardíaca induzida por exercício, o peso do indivíduo, a gravidade da condição do indivíduo, e o modo de administração dos compostos. Esta quantidade é facilmente determinada pelo perito na arte, com base em técnicas conhecidas, incluindo ensaios clínicos e métodos aqui divulgados. Numa forma de realização, a quantidade dos compostos da invenção eficazes para evitar a arritmia cardíaca induzida pelo exercício é uma quantidade eficaz para prevenir a morte cardíaca súbita induzida por exercício no indivíduo. Numa outra forma de realização, os compostos da invenção evitam a arritmia cardíaca induzida por exercício e a morte súbita cardíaca induzida por exercício no indivíduo.
Devido à sua capacidade para estabilizar a FKBP ligada ao 47
RyR e para manter e restaurar o equilíbrio no contexto da dinâmica da fosforilação e desfosforilação por PKA do RyR, os compostos da invenção também são úteis no tratamento de um indivíduo que já tenha tido sintomas clínicos destas várias perturbações. Por exemplo, se os sintomas da perturbação forem observados no indivíduo suficientemente cedo, os compostos da Fórmula I-k são eficazes para limitar ou impedir uma maior redução no nível de FKBP ligada a RyR no indivíduo.
Além disso, o indivíduo da presente invenção é um candidato a perturbações cardíacas induzidas por exercício, tal como a arritmia cardíaca induzida por exercício. A arritmia cardíaca induzida por exercício é uma condição cardíaca (por exemplo, uma fibrilação ventricular ou taquicardia ventricular, incluindo as que conduzem à morte cardíaca súbita), que se desenvolve durante/após um indivíduo ter feito exercício físico. Um "candidato" a uma doença cardíaca induzida pelo exercício é um indivíduo que é conhecido por estar, ou se acreditar que está, ou é suspeito de estar, em risco de desenvolver uma doença cardíaca durante/após o exercício físico. Exemplos de candidatos a arritmia cardíaca induzida por exercício incluem, sem limitação, um animal/pessoa conhecido por ter taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT) ; um animal/pessoa que se suspeita ter CPVT; e um animal/pessoa, que é conhecido por estar, ou se acredita estar, ou é suspeito de estar em risco de desenvolver arritmias cardíacas durante/após o exercício físico, e que está prestes a fazer exercício, está em exercício, ou acabou de fazer exercício. Como discutido acima, a CPVT é uma perturbação hereditária em indivíduos com corações estruturalmente normais. É caracterizada por taquicardia 48 ventricular induzida pelo stress - uma arritmia fatal que provoca a morte cardíaca súbita. Em indivíduos com CPVT, o esforço físico e/ou stress induzem taquicardias ventriculares bidirecionais e/ou polimórficas que levam à morte cardíaca súbita (SCD), na ausência de doença cardíaca estrutural detetável. Indivíduos com CPVT têm arritmias ventriculares quando sujeitos ao exercício, mas não desenvolvem arritmias em repouso.
Em conformidade, ainda numa outra forma de realização da presente invenção, o indivíduo esteve a praticar exercício, ou está atualmente a praticar exercício, e desenvolveu uma perturbação induzida pelo exercício. Neste caso, a quantidade de compostos da invenção eficazes para limitar ou prevenir uma diminuição no nível de FKBP ligada a RyR no indivíduo é uma quantidade de composto eficaz para o tratamento da perturbação induzida por exercício no indivíduo. Tal como aqui utilizado, uma quantidade de compostos de acordo com a invenção "eficazes para tratar uma perturbação induzida por exercício", inclui uma quantidade de composto de Fórmula I-k, eficaz para aliviar ou melhorar a descompensação clínica ou sintomas da perturbação induzida pelo exercício (por exemplo, no caso de arritmia cardíaca, palpitações, desmaios, fibrilação ventricular, taquicardia ventricular e morte súbita cardíaca). A quantidade dos compostos da invenção eficazes para evitar uma perturbação induzida por exercício num indivíduo irá variar, dependendo dos fatores específicos de cada caso, incluindo o tipo de perturbação induzida por exercício, o peso do indivíduo, a qravidade da condição do indivíduo, e o modo de administração dos compostos. Esta quantidade é facilmente determinada pelo perito na arte, com base em técnicas conhecidas, incluindo ensaios clínicos 49 e métodos aqui divulgados. Numa forma de realização, os compostos da Fórmula I-k tratam perturbações induzidas por exercício no indivíduo. A presente invenção fornece ainda compostos para o tratamento de perturbações induzidas pelo exercício num indivíduo. 0 método compreende a administração de compostos de Fórmula I-k a um indivíduo, numa quantidade eficaz para tratar a perturbação induzida por exercício no indivíduo. Uma quantidade apropriada dos compostos eficaz para tratar, por exemplo, a arritmia cardíaca induzida por exercício num indivíduo varia de 5 mg/kg/dia a cerca de 20 mg/kg/dia, e/ou é uma quantidade suficiente para atingir níveis plasmáticos que vão desde cerca de 300 ng/mL a cerca de 1000 ng/mL. A presente invenção também proporciona um método para a prevenção de uma perturbação induzida por exercício num indivíduo. 0 método compreende a administração de compostos da invenção a um indivíduo, numa quantidade eficaz para prevenir a perturbação induzida por exercício no indivíduo. Uma quantidade apropriada dos compostos da invenção eficaz para prevenir a perturbação induzida por exercício num indivíduo varia de 5 mg/kg/dia a cerca de 20 mg/kg/dia, e/ou é uma quantidade suficiente para atingir níveis plasmáticos que vão desde cerca de 300 ng/mL a cerca de 1000 ng/mL. Adicionalmente, a presente invenção proporciona um método para a prevenção de perturbações induzidas por exercício num indivíduo. O método compreende a administração de compostos da invenção ao indivíduo, numa quantidade eficaz para prevenir uma perturbação induzida por exercício no indivíduo. Uma quantidade apropriada dos compostos da invenção eficaz para prevenir uma perturbação induzida por exercício num indivíduo varia de 5 mg/kg/dia a cerca de 20 mg/kg/dia, 50 e/ou é uma quantidade suficiente para atingir níveis plasmáticos que vão desde cerca de 300 ng/mL a cerca de 1000 ng/mL.
Além disso, os compostos previnem perturbações de batimento cardíaco irregular em indivíduos com deficiências nos heterozigotos do gene FKBP12.6.
Os compostos da Fórmula I-k, podem ser utilizados sozinhos, em combinação uns com os outros, ou em combinação com outros agentes que tenham atividade cardiovascular, incluindo, mas não limitado a, diuréticos, anticoagulantes, agentes antiplaquetários, agentes antiarrítmicos, agentes inotrópicos, agentes cronotrópicos e bloqueadores α e β, inibidores da angiotensina e vasodilatadores. Além disso, tais combinações dos compostos da presente invenção e outros agentes cardiovasculares são administrados separadamente ou em conjunto. Além disso, a administração de um elemento da combinação é anterior a, simultânea, ou subsequente à administração de outro (s) agente(s).
Em várias formas de realização dos métodos acima descritos, a arritmia cardíaca induzida por exercício no indivíduo está relacionada com VT. Em algumas formas de realização, a VT é CPVT. Em outras formas de realização destes métodos, o indivíduo é um candidato a arritmia cardíaca induzida por exercício, incluindo candidatos a morte cardíaca súbita induzida por exercício. A presente invenção também proporciona compostos para utilização na limitação ou prevenção de uma queda no nível de FKBP ligada a RyR num indivíduo candidato a uma perturbação. A presente invenção também proporciona 51 compostos para a utilização no tratamento ou prevenção de uma perturbação muscular num indivíduo. Além disso, a presente invenção proporciona compostos para a utilização num método para o tratamento de prevenção ou prevenção de perturbações musculares induzidas pelo exercício num indivíduo. 0 RyR, incluindo RYR1, RyR2, e RyR3, tem sido implicado numa série de eventos biológicos em células. Por exemplo, tem sido mostrado que os canais de RyR2 desempenham um importante papel no acoplamento EC e contratilidade nas células do músculo cardíaco. Portanto, é evidente que os fármacos preventivos destinados a limitar ou a evitar uma diminuição no nível de FKBP ligada a RyR em células, particularmente FKPB12.6 ligada a RyR2 em células do músculo cardíaco, são úteis na regulação de uma série de eventos biológicos associados com RyR, incluindo o acoplamento EC e contratilidade.
Assim, numa forma de realização específica, a presente invenção proporciona um método de tratamento de insuficiência cardíaca, fibrilação atrial ou arritmia cardíaca induzida por exercício, compreendendo a administração a um animal que dela necessite, de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto selecionado a partir dos compostos da Fórmula I-k. 0 vazamento intracelular de Ca2+ é proposto como principal mediador do desempenho muscular deprimido e remodelação músculo-distrófica. As distrofias musculares são doenças hereditárias heterogéneas caracterizadas por fraqueza e atrofia muscular progressiva. De todas as formas de distrofias musculares que envolvem o complexo de proteína associada à distrofina (referido como distrofinopatias), a distrofia muscular de Duchenne (DMD) é uma das doenças 52 genéticas mais frequentes (ligada ao X; 1 em cada 3.500 meninos) com a morte ocorrendo geralmente antes dos 30 anos por insuficiência respiratória e/ou cardíaca num elevado número de pacientes. A distrofia muscular de Becker (BMD), representa uma forma mais suave da doença associada com uma redução na quantidade ou na expressão de uma forma truncada da proteína distrofina, enquanto os pacientes com Duchenne foram caracterizados pela ausência completa ou níveis muito baixos de distrofina. A distrofia muscular de Duchenne ou Becker (DMD/BMD) são causadas por mutações no gene que codifica a proteína distrofina 427-kDa do citoesqueleto. No entanto, com o aumento da idade, os sintomas cardíacos da BMD são mais comuns do que em pacientes com DMD e não se correlacionam com sintomas musculoesqueléticos. Uma vez que o rastreio genético não elimina a DMD, devido a uma elevada incidência de casos esporádicos, uma terapia eficaz é altamente desejável. A DMD/BMD têm sido consistentemente associadas com o metabolismo do cálcio intracelular perturbado. Uma vez que se acredita que as alterações de concentrações intracelulares de Ca2+ em miofibras DMD representam um mecanismo patogénico central, é altamente desejável o desenvolvimento de uma intervenção terapêutica que impeça anormalidades intracelulares de Ca2+ como uma causa da degeneração do musculoesquelético. É bem conhecido que a falta de expressão de distrofina é o principal defeito genético na DMD e BMD. No entanto, o mecanismo-chave que leva à lesão muscular progressiva é em grande parte desconhecido. Tem sido sugerido que os aumentos de concentrações intracelulares de Ca2+ ( [Ca2+]i), sob condições de repouso contribuíam diretamente para a lesão tóxica da célula muscular (miofibras), e ativação simultânea de proteases dependentes de Ca2+. Visto que a 53 atividade de calpaína é aumentada nas fibras musculares necróticas de ratinhos mdx e a disfunção de calpaína contribui para distrofia muscular dos membros, a prevenção da ativação de proteases dependentes de cálcio pela inibição das elevações intracelulares de Ca2+ representa uma estratégia para evitar perda de massa muscular na DMD. Diferenças significativas em [Ca2+]! entre os músculos normais e distrófica têm sido relatadas em miotubos e em modelos animais, incluindo o ratinho mdx deficiente em distrofina. As elevações intracelulares de Ca2+ são prevenidas por administração de uma composição farmacêutica compreendendo um composto de Fórmula I-k. A presente invenção também fornece compostos para um método de diagnóstico de uma doença ou perturbação num indivíduo, o referido método compreendendo: a obtenção de uma amostra de tecido ou célula a partir do indivíduo; a obtenção de ADN a partir da célula ou do tecido, comparando o ADN da célula ou tecido com um controlo de ADN que codifica o RyR para determinar se uma mutação está presente no ADN da célula ou tecido, a presença de uma mutação, indicando uma doença ou perturbação. Numa forma de realização, a mutação é uma mutação RyR2 no cromossoma Iq42-q43. Numa outra forma de realização, a mutação é uma ou mais mutações de CPVT. Noutra forma de realização, a mutação pode ser uma mutação que está presente no ADN que codifica RyR2 de um indivíduo com SIDS. 0 método de diagnóstico é usado para detetar a presença de uma doença ou perturbação num adulto, uma criança ou feto. As perturbações e condições incluem, mas não estão limitadas a, perturbações e doenças cardíacas, perturbações e doenças musculoesqueléticas, perturbações e doenças cognitivas, hipertermia maligna, diabetes e síndrome da morte súbita do lactente. As perturbações e 54 doenças cardíacas incluem, mas não estão limitadas a, perturbações e doenças dos batimentos cardíacos irregulares; perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício; a morte cardíaca súbita; a morte cardíaca súbita induzida por exercício; insuficiência cardíaca congestiva; doença pulmonar obstrutiva crónica; e pressão arterial alta. As perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares e as perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício incluem, mas não estão limitadas a, arritmia atrial e ventricular; fibrilação atrial e ventricular; taguiarritmia atrial e ventricular; taguicardia atrial e ventricular; taguicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT); e variantes das mesmas induzidas pelo exercício. As perturbações e doenças musculares esqueléticas incluem, mas não estão limitadas a, fadiga do musculoesquelético, fadiga do músculo esquelético induzida pelo exercício, distrofia muscular, perturbações da bexiga e incontinência. Perturbações e doenças cognitivas incluem, mas não estão limitadas a, doença de Alzheimer, formas de perda de memória e, perda de memória dependente da idade. Métodos de Síntese A presente invenção, proporciona, num outro aspeto, processos para a preparação de um composto de Fórmula I-k, e os seus sais, solvatos, hidratos, complexos, e pró-fármacos, e sais farmaceuticamente aceitáveis de tais pró-fármacos. Mais particularmente, a presente invenção proporciona processos para a preparação de compostos selecionados a partir do grupo que consiste em S84, S107, S110, S111, S12 0, S121 e sais, solvatos, hidratos, 55 complexos, e pró-fármacos destes, e sais farmaceuticamente aceitáveis de tais pró-fármacos. As diferentes vias de síntese para os compostos são descritas no presente documento.
Algumas das seguintes sínteses utilizam solventes. Numa forma de realização, o solvente é um solvente orgânico. Numa outra forma de realização, o solvente orgânico é cloreto de metileno (CH2CI2) , clorofórmio (CCI4) , formaldeído (CH20) ou metanol (CH30H) . Algumas das seguintes sínteses também utilizam um catalisador de base. Numa forma de realização, o catalisador de base é um composto de amina. Numa outra forma de realização, o catalisador de base é uma alquilamina, tal como trietilamina (TEA). Ainda numa outra forma de realização, o catalisador de base é piridina. Algumas das seguintes sínteses também utilizam soluções básicas. Numa forma de realização, a solução básica é bicarbonato de sódio ou carbonato de cálcio. Numa outra forma de realização, a solução básica é bicarbonato de sódio saturado ou carbonato de cálcio saturado. Algumas das seguintes sínteses utilizam soluções ácidas. Numa forma de realização, a solução ácida é uma solução de ácido sulfúrico, uma solução de ácido clorídrico, ou uma solução de ácido nítrico. Numa forma de realização, a solução é IN HC1. Um perito na arte apreciará ainda outros solventes, solventes orgânicos, catalisadores de base, soluções básicas, e soluções ácidas que são usados nas formas de realização, de acordo com a presente descrição. Os solventes, solventes orgânicos, reagentes, catalisadores, soluções de lavagem, e assim por diante são adicionados a temperaturas adequadas (por exemplo, temperatura ambiente ou cerca de 20 °C - 25 °C, 0 °C, etc.). 56
Algumas das seguintes sínteses utilizam o composto S68 como material de partida. 0 S68 está comercialmente disponível pela MicroChemistry Ltd. (Moscovo, Rússia). Ver também o documento WOOl/55118 para a preparação de S68. Várias das seguintes sínteses utilizam o S26 como material de partida. Os métodos para a síntese de S26 estão também descritos no Pedido de Patente nos EUA N ° 10/680, 988.
Algumas das seguintes sínteses requerem a purificação da mistura de reação para se obter um produto final. A purificação da mistura de reação envolve um ou mais processos tais como a remoção de qualquer solvente, a cristalização do produto, a separação cromatográfica do produto (incluindo HPLC, cromatografia em gel de sílica, cromatografia em coluna, e assim por diante), lavagem com solução básica, lavagem com solução ácida, re-dissolução do produto noutro solvente, e assim por diante. Um perito na arte apreciará ainda outros processos que são usados nas formas de realização, de acordo com a presente descrição.
As reações são levadas a cabo durante o tempo necessário (por exemplo, uma hora, várias horas, durante a noite, 24 horas, etc.), para se obterem os rendimentos desejados ideais dos compostos desejados. Muitas vezes, as misturas de reação são agitadas. As reações são realizadas a temperaturas adequadas (por exemplo, temperatura ambiente ou cerca de 20 °C - 25 °C, 0 °C, 100 °C, etc.). O Synthon S26 é preparado de acordo com os métodos descritos no Pedido de Patente nos EUA n° 10/680,988. 57 S84 é preparado a partir do S68 por reação com brometo de benzilo. Numa forma de realização, a reação tem lugar num solvente, tal como um solvente orgânico, tal como cloreto de metileno. Um catalisador básico tal como trietilamina é adicionado como necessário para catalizar a reação. A mistura de reação formada pela mistura dos reagentes e solvente é purificada para se obter S84. S107 pode ser preparado a partir de S26 como se segue. A uma solução de S26 em solvente (tal como MeOH), formaldeido (CH20) e cianoboro-hidreto de sódio (NaBCNH3) são adicionados e deixados a reagir. De preferência, a mistura de reação é mantida a cerca de um pH 4-5, por exemplo, por adição de algumas gotas de IN HC1. Os solventes são, em seguida, removidos, por exemplo, sob pressão reduzida. Se necessário, o resíduo pode ser dissolvido em acetato de etilo e lavado com uma ou mais de uma solução básica (por exemplo, NaOH), e água. Os solventes podem ser removidos, e o produto pode ser ainda purificado, por exemplo, utilizando cromatografia em coluna de SÍO2. S 110 pode ser preparado como se segue. Uma mistura de S26, 1-bromoacetato de metilo e piridina, são feitos reagir em DMF durante um período de tempo adequado. A esta mistura, acetato de etilo é adicionado e, se necessário, a mistura de reação é lavada com uma solução básica (por exemplo NaHCCU) , ou água. O produto S 110, como um óleo, pode ser purificado, por exemplo por cromatografia em coluna de Si02 · S 111 pode ser preparado como se segue. Uma base (tal como IN NaOH) é adicionada a S110 num solvente (tal como MeOH) , e a mistura é deixada a reagir durante um período de tempo 58 adequado. Os solventes são, em seguida, removidos, por exemplo, sob pressão reduzida, e o resíduo pode então ser dissolvido numa solução aquosa, tal como água. A fase aquosa pode ser lavada com acetato de etilo e acidificada, por exemplo, com IN HC1, a um pH de cerca de 4. Os solventes podem então ser removidos, por exemplo, sob pressão reduzida, para produzir Slll em bruto. 0 NaCl pode ser removido utilizando um álcool, tal como etanol, para se obter Slll puro na forma de um sólido. 5120 pode ser sintetizado como se segue. Uma mistura de S26, brometo de benzilo e Na2C03 num solvente (tal como DMF) , é feita reagir por um período de tempo adequado, de preferência durante a noite. 0 acetato de etilo é adicionado à reação, e, em seguida, se necessário, a reacção é lavada com um solvente adequado, por exemplo, com H20 (4x10 mL) . A fase orgânica pode ser concentrada, por exemplo sob pressão reduzida, e o resíduo pode ser purificado, por exemplo por cromatografia em coluna para dar S121. 5121 pode ser sintetizado como o S120, mas utilizando brometo de 4-OH-benzilo em vez de brometo de benzilo.
Deve notar-se que os compostos utilizados como materiais de partida, ou gerados como intermediários para a síntese dos compostos da invenção, podem eles próprios ter estruturas abrangidas pelas fórmulas da invenção, e/ou podem ser eles próprios agentes ativos úteis nos métodos e nas composições da presente invenção. Tais materiais de partida e intermediários podem ser úteis para, inter alia, o tratamento ou prevenção de várias perturbações e doenças associadas com RyRs tais como perturbações musculares e 59 cardíacas, no tratamento ou prevenção de um vazamento num RyR2 num indivíduo, ou a modulação da ligação de RyR e FKBP num indivíduo. A presente invenção abrange qualquer um dos materiais de partida ou intermediários aqui descritos que têm estruturas abrangidas pela Fórmula I-k, e/ou que são úteis como agentes ativos nos métodos e composições da presente invenção. Por exemplo, numa forma de realização, o composto S68, que é útil como um material de partida para a síntese de compostos S84, pode ser utilizado, inter alia, no tratamento ou prevenção de várias perturbações e doenças associadas a RyRs, no tratamento ou prevenção de um vazamento num RyR2, ou na modulação da ligação de RyR e FKBP num indivíduo.
Numa outra forma de realização, o composto S26, que é útil na síntese de muitos dos compostos aqui descritos, pode ser utilizado, inter alia, no tratamento ou prevenção de várias perturbações e doenças associadas a RyRs, no tratamento ou prevenção de um vazamento num RyR2, ou na modulação da ligação de RyR e FKBP num indivíduo.
Os compostos da presente invenção são preparados em diferentes formas, tais como sais, hidratos, solvatos e complexos. 0 termo "composto (s) da invenção", tal como aqui utilizado, significa um composto de Fórmula I-k, e os seus sais, hidratos e solvatos.
Uma "composição farmacêutica" refere-se a uma mistura de um ou mais compostos aqui descritos, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos com outros componentes químicos, tais como agentes de suporte e 60 excipientes fisiologicamente aceitáveis. O objetivo de uma composição farmacêutica é facilitar a administração de um composto a um organismo.
Um composto da presente invenção também pode ser formulado como um sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, um sal de adição de ácido e complexos deste. A preparação desses sais pode facilitar a utilização farmacológica por alteração das características físicas do agente, sem impedir o seu efeito fisiológico. Exemplos de alterações úteis nas propriedades físicas incluem, mas não estão limitados a, diminuir o ponto de fusão para facilitar a administração transmucosa e aumentar a solubilidade para facilitar a administração de maiores concentrações do fármaco. O termo "sal farmaceuticamente aceitável" significa um sal de adição de ácido, que é adequado para, ou compatível, com o tratamento de um paciente ou de um indivíduo, tal como um paciente humano ou um animal tal como um cão. O termo "sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável" tal como é aqui utilizado, significa qualquer sal orgânico ou inorgânico não tóxico de quaisquer compostos de base representados pela Fórmula I-k, ou qualquer dos seus intermediários. Ácidos inorgânicos ilustrativos, que formam sais apropriados de adição de ácido, incluem ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico e fosfórico, bem como os sais metálicos, tais como monohidrogeno ortofosfato de sódio e sulfato de hidrogénio e potássio. Os ácidos orgânicos ilustrativos, que formam sais adequados de adição de ácido, incluem ácidos mono-, di- e tricarboxílicos, tais como o ácido glicólico, 61 láctico, pirúvico, malónico, succínico, glutárico, fumárico, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, maleico, benzoico, fenilacético, cinâmico e salicílico, bem como os ácidos sulfónicos tais como o p-tolueno-sulfónico e os ácidos metanossulfónicos. Tanto os sais mono, como di-ácidos, podem ser formados e tais sais existem quer numa forma hidratada, solvatada ou substancialmente anidra. Em geral, os sais de adição de ácido dos compostos de Fórmula I-k, são mais solúveis em água e em diversos solventes orgânicos hidrofílicos e apresentam geralmente pontos de fusão mais elevados em comparação com as suas formas de base livres. A seleção de um sal apropriado será conhecida dos peritos na arte. Outros sais não farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, oxalatos, são utilizados, por exemplo, no isolamento dos compostos da invenção para utilização laboratorial ou para subsequente conversão num sal de adição de ácido farmaceuticamente aceitável.
Os compostos da presente invenção formam hidratos ou solvatos, que estão incluídos no âmbito das reivindicações. Quando os compostos da presente invenção existem como regioisómeros, isómeros configuracionais, confórmeros ou formas diasteroisoméricas, todas essas formas e diversas misturas das mesmas estão incluídas no âmbito da Fórmula I-k. É possível isolar os isómeros individuais, utilizando métodos de separação e purificação conhecidos, se desejado. Por exemplo, quando um composto da presente invenção é um racemato, o racemato pode ser separado no composto(S) e composto(R) por resolução ótica. Os isómeros óticos individuais e suas misturas estão incluídos no âmbito da Fórmula I-k. 0 termo "solvato" como aqui utilizado significa um composto 62 da Fórmula I-k, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, em que as moléculas de um solvente adequado estão incorporadas na rede cristalina. Um solvente adequado é fisiologicamente tolerável na dosagem administrada. Exemplos de solventes adequados são o etanol, a água e similares. Quando a água é o solvente, a molécula é referida como um "hidrato". 0 termo "uma quantidade eficaz", "quantidade suficiente" ou "quantidade terapeuticamente eficaz" de um agente, tal como aqui utilizado é uma quantidade suficiente para efetuar resultados benéficos ou desejados, incluindo resultados clinicos e, como tal, uma "quantidade eficaz" depende do contexto no qual ela está a ser aplicada. A resposta é preventiva e/ou terapêutica. 0 termo "quantidade eficaz" também inclui a quantidade do composto da Fórmula I-k que é "terapeuticamente eficaz", e que evita ou atenua substancialmente, os efeitos secundários indesejáveis.
Tal como aqui utilizado e como bem entendido na arte, "tratamento" é uma abordagem para obtenção de resultados benéficos ou desejados, incluindo resultados clinicos. Os resultados clinicos benéficos ou desejados podem incluir, mas não estão limitados a, alivio ou melhoramento de um ou mais sintomas ou condições, diminuição da extensão da doença, estabilização (ou seja, sem piorar) do estado de doença, a prevenção de propagação da doença, atraso ou abrandamento de progressão da doença, melhoria ou paliação do estado da doença e remissão (quer parcial ou total), quer seja detetável ou indetetável. "Tratamento" também pode significar prolongar a sobrevivência, em comparação com a sobrevivência esperada sem o recebimento do tratamento. 63
Os termos "animal", "indivíduo" e "paciente", como aqui usados incluem todos os membros do reino animal, incluindo, mas não limitado a, mamíferos, animais (por exemplo, gatos, cães, cavalos, etc.) e os seres humanos. A título de exemplo, os compostos marcados com rádio da invenção são preparados como se segue. Um composto da invenção pode ser desmetilado no anel fenilo com BBr3. 0 composto de fenol resultante é então re-metilado com um agente de metilação de marcação de rádio (por exemplo, 3H-dimetilsulfato) , na presença de uma base (tal como NaH) para proporcionar compostos marcados com 3H. A presente invenção fornece ainda compostos que podem ser classificados como 1,4-benzotiazepinas, incluindo, a título de exemplo, e sem limitação, S84, S107, S110, Slll, S120, e S121.
Estes e quaisquer outros compostos da presente invenção são associados com um agente de suporte farmaceuticamente aceitável, tal como descrito acima, de modo a formar uma composição farmacêutica. A redução no nível de FKBP ligada a RyR é limitada ou evitada no indivíduo através da redução do nível de RyR fosforilado no indivíduo. Numa forma de realização, a quantidade de agente eficaz para limitar ou prevenir uma diminuição no nível de FKBP12.6 ligada a RyR2 no indivíduo é uma quantidade de agente eficaz para o tratamento ou prevenção da insuficiência cardíaca, fibrilação atrial e/ou arritmia cardíaca induzida pelo exercício no indivíduo. Numa outra forma de realização, a quantidade de agente 64 eficaz para limitar ou prevenir uma diminuição no nível de FKBP12.6 ligada a RyR2 no indivíduo é uma quantidade de agente eficaz para prevenir a morte súbita cardíaca induzida por exercício no indivíduo.
Tendo em conta o anteriormente exposto, a presente invenção proporciona ainda compostos para um método para o tratamento ou prevenção de arritmia cardíaca induzida por exercício num indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de um composto 1,4-benzotiazepina, como aqui descrito, numa quantidade eficaz para tratar ou prevenir a arritmia cardíaca induzida por exercício no indivíduo. Do mesmo modo, a presente invenção proporciona um método para a prevenção da morte súbita cardíaca induzida por exercício num indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de um composto 1,4-benzotiazepina, como aqui descrito, numa quantidade eficaz para prevenir a morte súbita cardíaca induzida por exercício no indivíduo. Adicionalmente, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou prevenção de fibrilação atrial ou insuficiência cardíaca num indivíduo, compreendendo a administração ao indivíduo de um composto como aqui descrito, numa quantidade eficaz para tratar ou prevenir a fibrilação atrial ou insuficiência cardíaca no indivíduo. Em cada um destes métodos, o composto é selecionado a partir do grupo de compostos consistindo de compostos da fórmula I-k e sais, hidratos, solvatos, e complexos dos mesmos.
Exemplos de tais compostos incluem, sem limitação, S84, S107, S110, Slll, S120, e S121. 65
Manifestações de Eficácia A Figura 1, formas de realização A, B e C, mostram a função e estrutura do canal RyR2-P2328S associado a CPVT. Na forma de realização A, são mostrados os vestígios de corrente de canal simples representativos de RyR2-P2328S e RyR2-WT, enquanto a forma de realização B mostra RyR2-P2328S. A forma de realização C mostra análise de imunomarcação da ligação calstabin-2 de RyR2-P2328S.
Como demonstrado na Figura 2, formas de realização A e B, o tratamento com JTV-519 reduz a fosforilação de RyR2 por PKA em ratinhos com insuficiência cardíaca. Quantidades equivalentes de RYR2 são imunoprecipitadas com um anticorpo contra RYR2 (marcação superior). Imunomarcações representativas (forma de realização A) e gráficos de barras (forma de realização B) mostram a quantidade de fosforilação de RyR2 por PKA em Ser-2808 ligado a RyR2 em ratinhos do tipo selvagem e de calstabin2 (FKBP12.6) _/“ . 0 tratamento com JTV-519 (0,5 mg/kg/h) durante 28 dias pós-enfarte do miocárdio reduz a fosforilação de RyR2 por PKA, presumivelmente devido a uma remodelação cardíaca inversa, em ratinhos do tipo selvagem, mas não de calstabin-2 (FKBP12. 6) _/“.
Como demonstrado na Figura 3, formas de realização A e B, os ratinhos em que o RyR2 cardíaco não pode ser fosforilado por PKA (ratinhos knockin RyR2-S2808A) melhoraram a função cardíaca após enfarte do miocárdio. Mostrada na forma de realização A está a quantificação de ecocardiogramas em modo-M mostrando a fração de ejeção melhorada em ratinhos knockin RyR2-S2808A em comparação com os de tipo selvagem, 28 dias após ligação da artéria coronária permanente.
Mostrado nas formas de realização B e C estão as quantificações do ciclo de pressão-volume que mostram (forma de realização B) a melhoria da contratilidade cardíaca e diminuição da dilatação cardíaca (forma de realização C) em ratinhos knockin RyR2-S2808A em comparação com ratinhos de tipo selvagem após enfarte do miocárdio.
Como mostrado na Figura 4, formas de realização A, B, C, D, e E, o funcionamento do canal RYR1 é aumentado e normalizado em ratinhos mdx (deficiência em distrofina) tratados com JTV-519. Na Figura 4, as aberturas de canal são representadas como deflexões ascendentes; "c" indica o estado fechado; e a amplitude de corrente 4 pA aberta é indicada pelo traço. Os traços superiores representam 5 segs e os traços inferiores 500 ms; as linhas pontilhadas indicam estados de subcondutância. A forma de realização A na Figura 4 mostra um vestígio de corrente de canal simples de RYR1 a partir do músculo sóleo de ratinhos de controlo (de tipo selvagem) sob condições de repouso (Ca2+ citoplasmático a 150 nM) . Como se vê, RyRl está predominantemente fechado. A forma de realização C da Figura 4 mostra que a função do canal RYR1 de ratinhos mdx mostra um aumento da probabilidade de abertura significativo, o aumento médio de abertura, e diminuição média de tempos de permanência fechada, To a Tc, respetivamente. O aumento Po em ratinhos mdx é consistente com o vazamento intracelular de Ca2+. Os histogramas de amplitude nas formas de realização B, D e F mostram vários estados de subcondutância consistentes com a depleção de calstabinl (FKBP12) no RYR1 do músculo sóleo de mdx. A forma de realização E da Figura 4 mostra um ratinho mdx tratado com 1,0 μΜ de JTV-519. Como pode ser visto, os 67 canais RYR1 do ratinho tratado com JTV-519 demonstram uma atividade normal que não é significativamente diferente dos vestígios de ratinhos não tratados do tipo selvagem, indicando, assim, que o JTV-519 pode normalizar a função do canal RYR1 em ratinhos mdx.
Os dados da Figura 4 são consistentes com o vazamento intracelular de Ca2+ através de canais RYR1 como a causa do aumento do vazamento citosólico de Ca2+ nos músculos esqueléticos de ratinhos mdx (com deficiência em distrofina) .
As formas de realização A e B da Figura 5 demonstram que o
músculo esquelético de mdx tem níveis normais de fosforilação por PKA de RyRl, mas níveis de calstabinl empobrecidos. As imunomarcações na forma de realização A mostram que ratinhos do tipo mdx têm níveis empobrecidos de calstabinl comparado com um ratinho de controlo (tipo selvagem). Os gráficos de barras sumários da forma de realização B mostram que o ratinho mdx, no entanto, tem um nível equivalente de fosforilação por PKA. Portanto, conclui-se que o empobrecimento de calstabinl é um defeito que é consistente com o vazamento intracelular de Ca2+ observado em células do músculo esquelético de ratinhos mdx e de miofibras de agentes de suporte de mutação humana. 0 vazamento intracelular de Ca2+ é suscetível de contribuir para a morte de miofibras e perda de massa muscular por sobrecarga de Ca2+ intracelular tóxica e ativação de proteases. A Figura 6, formas de realização A, B e C, mostra que o vazamento de Ca2+ no SR ao nível subcelular em músculos do esqueleto de animais com insuficiência cardíaca é 68 detetável. A qualidade de vida e prognóstico em pacientes com insuficiência cardíaca (HF) é gravemente diminuída devido a uma disfunção do músculo esquelético (por exemplo, falta de ar, devido à fraqueza do diafragma, e intolerância ao exercício devido à fadiga do músculo esquelético do membro), além de função cardíaca deprimida. A desregulação da libertação do Ca2+ intracelular do SR é um mecanismo patogénico subjacente à disfunção muscular esquelética na HF. A HF em animais provoca uma aceleração intrínseca significativa da fadiga do músculo esquelético.
As formas de realização A e B da Figura 6 são imagens de varrimento em linha por fluorescência Af/F de exemplos representativos de parcelas de Ca2+ em miofibras de ratinhos sham e pós-enfarte do miocárdio (PMI) e correspondente curso do tempo de parcela de Ca2+. A forma de realização C mostra a distribuição relativa das propriedades espácio-temporais das parcelas de Ca2+. Gráficos indicam os percentis 25, 50, 75, as linhas horizontais indicam o intervalo de 1-99% da distribuição. Sham, símbolos abertos (n = 137, três animais); pós-enfarte do miocárdio (PMI), símbolos cinza (n = 82, dois animais). *, P <0,05. FDHM, duração total a uma amplitude de pico de 50%; FWHM, largura total de 50% da amplitude de pico. A Figura 7, formas de realização A, B, C e D demonstra que Ser-2843 é o local de fosforilação por PKA único em canais RYR1 esqueléticos. (A) vestígios representativos de canal simples de RyRl do tipo selvagem, (B) Efeito de fosforilação de PKA exógena de RyRl (wt RyRl-P) , (C) PKA não afeta RYR1-S2843A que contém um local de fosforilação por PKA não funcional. Uma vez que a PKA não aumenta a atividade de RYR1-S2843A, Ser-2843 parece constituir o 69 único local de fosforilação por PKA em canais RYR1 no músculo esquelético. Por conseguinte, (D) o RYR1-S2843D constitutivamente fosforilado imita a fosforilação por PKA exógena mostrada em (B), confirmando que Ser-2843 é o único local de fosforilação por PKA em canais esqueléticos RYR1. Os registos de canal único RYR1 em bicamadas lipidicas planas apresentam atividade dos canais a 150 nM de [Ca2+]Cis (lado citosólico) com 1 mM de ATP. Os registos foram realizados a 0 mV, o estado fechado dos canais, tal como indicado por "c", e as aberturas de canal são deflexões ascendentes. Todos os histogramas de amplitude são mostrados à direita. A probabilidade de abertura (Po) e os tempos médios de permanência em fechado (Tc) e aberto (To) são indicados acima de cada traçado do canal. A Figura 8, formas de realização A e B, mostra a depleção de estabilização de calstabinl e hiperfosforilação por PKA de canais RYR1 a partir de exercício sustentado. O exercício aeróbico pode ser definido como uma forma de exercício físico que aumenta a frequência cardíaca e melhora o consumo de oxigénio para melhorar o desempenho. Exemplos de exercícios aeróbicos são a corrida, ciclismo e natação. Durante o estudo da Figura 8, os ratinhos foram desafiados por exercícios aeróbicos (natação forçada) durante 90 minutos duas vezes por dia. Os animais estavam acostumados a nadar em sessões de treinamento preliminares: dia -3 duas vezes de 30 minutos, dia 2 - duas vezes por 45 minutos, dia 1 - duas vezes por 60 minutos, dia 0 e seguintes - duas vezes por 90 minutos. Os ratinhos foram, em seguida, exercitados por 1, 7 ou 21 dias consecutivos adicionais, durante 90 minutos duas vezes por dia. Entre as sessões de natação, separadas por um período de descanso de 4 horas os ratinhos são mantidos aquecidos e com comida e 70 água. Uma piscina com água de corrente ajustável foi usada para exercitar ratinhos por natação. Utilizou-se uma piscina de acrílico (90 cm de comprimento x 45 cm de largura x 45 cm de profundidade) com água até uma profundidade de 25 cm. Uma corrente na piscina foi gerada com uma bomba. A velocidade da corrente, durante a sessão de natação foi a uma velocidade constante de caudal de 1 1/min. A temperatura da água foi mantida a 34 °C com um aquecedor elétrico. Foram usados ratinhos com a mesma idade e peso para excluir as diferenças de flutuabilidade devida à gordura corporal.
Utilizando natação forçada como um protocolo eficiente para aumentar a capacidade aeróbica do músculo esquelético nos ratinhos, o estado de composição e fosforilação do complexo do canal RYR1 esquelético foi investigado. Inesperadamente, após 3 semanas de 90 minutos de natação duas vezes por dia, os ratinhos do tipo selvagem C57B16 apresentaram um aumento significativo de fosforilação por PKA no RYR1 enquanto que a fosforilação de Ca2+-calmodulina cinase II (CaMKII) não foi alterada, indicando que a especificidade da via de expressão de proteína de stress de RYR1 era estável, contudo, os canais RyRl foram esgotados da subunidade calstabinl de estabilização (FKBP12). Tem sido demonstrado que a hiperfosforilação de RYR1 e depleção de calstabinl são consistentes com canais RYR1 vazantes que causam o vazamento intracelular de Ca2+ no SR.
Os canais RYR1 são PKA-hiperfosforilados e empobrecidos da subunidade de estabilização de calstabinl após 3 semanas de natação a 90 minutos duas vezes por dia. Como pode ser visto na forma de realização A, o complexo do canal macromolecular de RyRl imunoprecipitado mostra um aumento 71 da fosforilação por PKA em Ser-2844 (correspondente ao RYRl-Ser-2843 humano), enquanto a fosforilação de CaMKII em Ser-2849 (correspondente ao RYRl-Ser-2848 humano) se manteve inalterada. Concomitantemente com o aumento da hiperfosforilação de RYRl-Ser-2844 por PKA, a calstabinl está esgotado a partir do complexo de canal. Como se vê na forma de realização B, a normalização da fosforilação e teor de calstabinl para quatro subunidades do complexo do canal tetramico mostra um significativo aumento na fosforilação por PKA e de esgotamento da subunidade de estabilização de calstabinl. Controlo, ratinhos não exercitados; natação, ratinhos exercitados durante 90 minutos duas vezes por dia durante 3 semanas (dados preliminares). P < 0,05. A Figura 9, formas de realização A e B, demonstra que a fosforilação por PKA aumenta as durações do exercício sustentado. Para investigar a influência da duração do exercício sustentado no defeito da libertação de Ca2+ em RYR1, os ratinhos foram expostos a natação durante 1, 7, ou 21 dias, seguido de sacrifício imediato. A exposição mais prolongada a exercício sustentado resulta num aumento significativo de hiperf osf orilação por PKA em RYR1 com início aos 7 dias e aos 21 dias de saturação.
Na Figura 9, forma de realização A, o complexo do canal RYR1 imunoprecipitado mostra fosforilação por PKA em Ser-2844 aumentada e a níveis significativamente acima dos fisiológicos (correspondente ao RYRl-Ser-2843 humano), após 7 dias de exercício de natação. Na Figura 9, forma de realização B, a normalização da fosforilação de RyR2-Ser-2844 no complexo de canal tetramérico documenta um aumento significativo da fosforilação por PKA. *, P < 0,05; **, P < 72 Ο,005.
Em resumo, os dados da Figura 9 mostram que o exercício sustentado resulta numa fosforilação aumentada de RYR1 pela proteína cinase A (PKA), o que contribui para a depleção da subunidade de estabilização de calstabinl do complexo do canal, como a causa de um defeito de ganho-de-função. A Figura 10 proporciona dados que mostram que o aumento crónico da estimulação simpática dos músculos esqueléticos resulta num vazamento de Ca2+ intracelular dependente de RYR1 e numa fadiga muscular significativamente aumentada. Qual é a consequência funcional do aumento crónico da hiperfosforilação por PKA de RYR1? Como mostrado na Figura 10 para ratinhos e ratos com insuficiência cardíaca a partir de enfarte do miocárdio, a hiperfosforilação crónica por PKA de RYRl resulta em fadiga muscular aumentada.
Na forma de realização A, pode ver-se o músculo esquelético de insuficiência cardíaca antes do controlo. O músculo sóleo de ratos (n = 5 controlo, n = 8 HF) foi montado num banho de tecidos para avaliar a função contrátil. O traçado do tempo representativo da fadiga é mostrado para os músculos esqueléticos de controlo e HF. O gráfico de barras mostra o tempo médio (±DP) até à fadiga a 40%. *, P <0,05. Na forma de realização B, pode ser visto que o músculo esquelético de insuficiência cardíaca atingiu a força tetânica máxima mais lentamente do que os músculos esqueléticos de controlo. A força tetânica foi induzida pela estimulação de campo de alta frequência. O gráfico de barras mostra o tempo de concentração tetânica a 50%. **, P <0,01. A forma de realização C demonstra a correlação entre o tempo até à fadiga e a fosforilação por PKA de RYRl (r = 73 0,88) no músculo esquelético de ratos e animais com sham e insuficiência cardíaca. A função muscular e a fosforilação por PKA de RYR1 foram avaliadas através de músculos sóleo contralaterais de cada animal.
Em resumo, a Figura 10 fornece dados que mostram que o exercício sustentado provoca hiperfosforilação por PKA de RYR1 e depleção de calstabinl, e a Figura 10 mostra que o defeito idêntico ocorre nas formas da doença com o aumento da atividade simpática causando o vazamento intracelular de Ca2+ em SR e fadiga muscular esquelética significativamente acelerada.
Um problema adicional durante o exercício sustentado e stress é a degeneração do músculo esquelético contribuindo ainda mais para o desempenho diminuído do músculo esquelético. Para avaliar as mudanças estruturais durante o exercício sustentado, alterações histológicas nos músculos de contração rápida de ratinhos expostos a 3 semanas de exercício por natação foram caracterizados. Os resultados são mostrados na Figura 11. As secções transversais do ratinho M. extensor digitorum longus (EDL) apresentaram alterações histológicas consistentes com a degeneração de células musculares por sobrecarga de Ca2+ intracelular de canais defeituosos RYR1. Portanto, o exercício sustentado por 90 minutos duas vezes ao dia provoca um fenótipo distrófico nos músculos EDL de ratinhos C57B16 normais.
Coloração tricromo mostra miofibras embaladas com dimensão transversal semelhante em ratinhos de controlo não exercitados (WT) (à esquerda). Três semanas de natação resultam em degeneração de miofibras e em depósitos de colagénio intersticial com tamanhos de fibra irregulares. A 74 coloração com Hematoxilina-eosina (Η & E) indica alterações nucleares e morte das miofibras. Estas alterações são consistentes com a remodelação distrófica. 0 canal de potássio retificador tardio rápido (I(Kr)) é importante para a repolarização do potencial de ação cardíaca. HERG é a subunidade formadora de poros do canal I(Kr). A supressão da função de I(Kr), por exemplo, como um efeito secundário de um fármaco ou o resultado de uma mutação no hERG, pode levar a síndrome do QT longo (LQT), que está associado ao aumento do risco de arritmias potencialmente fatais. Os compostos da presente invenção exibem um nível inferior de atividade bloqueadora de hERG do que o JTV-519. Assim, os compostos da presente invenção estão previstos como sendo menos tóxicos e/ou como apresentando menos efeitos secundários do que o JTV-519. A Figura 12 é um gráfico que mostra a dependência da concentração do efeito de ARM107 na corrente hERG. A Tabela 1 apresenta os dados numéricos que são ilustrados graficamente na Figura 12. Uma vez que a maior concentração de ARM107 testado resultou na inibição de corrente inferior a 50%, não foi possível determinar um valor de IC50 para ARM107. 75
Tabela 1 ID Artigo de Teste ICso (μΜ) Cone, (μΜ) % Média de Inibição hERG % Desvio Padrão % Erro Padrão n Dados Individuais (% Inibição) 001 29% 1,6% 12% 2 1,7% 4,0% 0,1 40% 1,2% 0,9% 2 3,1% ARM107 ND 4,8% 1 62% 59% 42% 2 20% 10,4% 10 32,1% 111% 79% 2 24,2% 39,9% A Figura 13 é um gráfico que mostra a dependência da concentração do efeito de JTV-519 (referido na figura como "ARMOXX") na corrente de hERG. A Tabela 2 apresenta os dados numéricos que são ilustrados graficamente na Figura 13. 0 valor de IC50 para JTV-519 foi de 0,463 μΜ.
Tabela 2 ID Artigo de Teste ICso (μΜ) Cone, (μΜ) % Média de Inibição hERG % Desvio Padrão % Erro Padrão n Dados Individuais (% Inibição) 001 5,0% 0,3% 02% 2 5,2% 48% 01 181% 114% 81% 2 100% ARMOXX 0463 26,1% 1 684% 191% 135% 2 81,9% 54,9% 10 928% 5,8% 41% 2 96,9% 887% 76 0 fármaco antiarrítmico E-4031, um bloqueador conhecido de correntes hERG, foi utilizado como controlo positivo. 0 E-4031 bloqueou a corrente hERG com um IC5o de 0,5 μΜ (n=6).
Em resumo, os compostos da presente invenção exibem uma reduzida atividade bloqueadora de hERG em comparação com o JTV-519. Assim, os compostos da invenção estão previstos como sendo menos tóxicos e/ou como apresentando menos efeitos secundários do que o JTV-519. A tabela 3 abaixo apresenta os valores de EC50 para os compostos S4-S107. Os compostos 4-36 são exemplos comparativos, tomados a partir do documento WO 2005/094457. Estes dados de EC50 foram obtidos utilizando três ensaios de religação a FKBP12.6 descritos acima, para determinar a quantidade de ligação de FKBP12.6 a RyR2 PKA-fosforilado a várias concentrações (0,5 - 1000 nM) dos compostos mostrados na Tabela 3. Os valores de EC50 são calculados utilizando o ajuste de curva de Michaelis-Menten.
Tabela 3
Composto na EC50 (nM) Composto nfi EC50 (nM) 4 102 7 55 25 40 26 40 27 Ca. 50 36 15 107 190 77
EXEMPLOS EXEMPLO 1 - Fosforilaçao por PKA de RYR2 e ligação de FKBP12.6
Membranas cardíacas SR são preparadas, tal como descrito anteriormente (Marx et al, PKA phosphorylation dissociates FKBP12.6 from the calcium release channel (ryanodine receptor): defective regulation in failing hearts). Cell 101:365-76, 2000; Kaftan, et al. , Effects of rapamycin on ryanodine receptor/Ca(2+)-release channels from cardiac muscle. Circ. Res., 78:990-97, 1996). A FKBP12.6 marcada com 35S foi gerada usando o sistema de transcrição/tradução TNT ™ Quick Coupled da Promega (Madison, WI) . ligação de rianodina [3H] é utilizada para quantificar os níveis de RyR2. 100 pg de microssomas são diluídos em 100 pL de 10-mM de tampão de imidazole (pH 6,8), incubada com 250 nM (concentração final), [35S]-FKBP12.6 a 37 °C durante 60 minutos, depois extinguida com 500 pL de tampão de imidazole gelado. As amostras são centrifugadas a 100.000 g durante 10 min e lavadas três vezes em tampão de imidazol. A quantidade de ligação [35 S]-FKBP12.6 é determinada por contagem de cintilação líquida do pelete.
EXEMPLO 2 - IMUNOMARCAÇÕES A imunomarcação de microssomas (50 pg) é realizada como descrito, com anti-FKBP 12/12.6 (1:1000), anti-RyR-5029 (1:3000) (Jayaraman, et al., FK506 binding protein associated with the calcium release channel (ryanodine receptor). J. Biol. Chem., 267:9474-77, 1992), ou anti- fosfoRyR2-P2809 (1:5000) durante 1 h à temperatura ambiente (Reiken, et al., Beta-blockers restore calcium release 78
channel function and improve cardiac muscle performance in human heart failure. Circulation 107:2459-66, 2003). O anticorpo anti-RyR2 específico do P2809-fosfoepítopo é um anticorpo policlonal de coelho purificado por afinidade, feito por encomenda pela Zymed Laboratories (São Francisco, CA), utilizando o péptido, CRTRRI-(pS)-QTSQ, o que corresponde ao RyR2 PKA-f osf orilado em Ser2809 . Após incubação com IgG anti-coelho marcado com HRP (diluição 1:5000; Transduction Laboratories, Lexington, KY), as marcações são desenvolvidas utilizando ECL (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).
EXEMPLO 3 - REGISTOS DE CANAL SIMPLES
Os registos de canal simples de RyR2 nativo do coração de ratinhos, ou RyR2 recombinante, são adquiridos em condições de adesão de tensão a 0 mV, como descrito anteriormente (Marx, et al., PKA phosphorylation dissociates FKBP12.6 from the calcium release channel (ryanodine receptor): defective regulation in failing hearts. Cell, 101:365-76, 2000). As soluções simétricas utilizadas para registos de canais são: o compartimento trans - HEPES, 250 mmol/L; Ba(OH)2, 53 mmol/L (em algumas experiências, Ba(OH)2 é substituída por Ca(OH)2); pH 7,35; e compartimento cis -HEPES, 250 mmol/L; de base Tris, 125 mmol/L; EGTA, 1,0 mmol/L e CaCl2, 0,5 mmol/L; pH 7,35. Salvo indicação em contrário, os registos de canais simples foram feitos na presença de 150-nM de [Ca2+] e 1,0-mM de [Mg2+] no compartimento cis. A Rianodina (5 mM) é aplicada ao compartimento cis para confirmar a identidade de todos os canais. Os dados são analisados a partir de gravações atuais digitalizadas usando software Fetchan (Axon Instruments, Union City, CA) . Todos os dados são expressos 79 como média ±EP. 0 T-testis de Student não pareado foi usado para comparação estatística dos valores médios entre as experiências. Um valor de p <0,05 é considerado estatisticamente significativo.
EXEMPLO 4 - COMPOSTOS E MÉTODOS PARA A SUA SÍNTESE O Synthon S26 foi preparado de acordo com os métodos descritos no Pedido de Patente nos EUA n° 10/680,988.
Esquema 13: Síntese de SS4
m
Usando S68 como material de partida, o composto S84, como mostrado no Esquema 13, também é sintetizado de forma semelhante aos compostos que têm um grupo metoxi no anel de benzeno (R = 4-OCH3 na Fórmula I).
Esquema li: Síntese de ÃRillS?
A Síntese de S107 (ARM107) pode ser conseguida como 80 mostrado no Esquema 19. O que se segue é um exemplo da síntese: A S26 (180 mg, 0,92 mmol) em MeOH (20 ml) foi adicionada uma solução de CH20 a 30% (1,5 mL em excesso) e cianoboro-hidreto de sódio (NaBCNH3) (0,4 g em excesso). A mistura de reacção foi agitada à temperatura ambiente, e o pH da solução foi mantido a cerca de pH 4-5 por adição de umas gotas de IN HC1. Após 3 horas, os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 20 mL de acetato de etilo e lavado com H20 e NaHC03 saturado (2 x 10 mL) . Os solventes foram removidos e o ARM107 foi purificado por cromatografia em coluna de Si02 para se obter um rendimento: 170 mg, 93%.
Esquema 22: Síntese de ARM11#
ÂrafiHÔ
SIS A Síntese de S110 (ARM110) pode ser conseguida como mostrado no Esquema 22. O que se segue é um exemplo da síntese: Uma mistura de S26 (100 mg, 0,51 mmol) e 1- bromoacetato de metilo (100 mg, 1,2 eq.) e piridina (50 mg) em DMF (o gue é DMF?) (5 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. A esta mistura, adicionou-se acetato de etilo (50 mL) e lavou-se com solução saturada de NaHC03 (2x10 mL) e H20 (2x10 mL) . O produto ARM110 na forma de um óleo foi purificado por cromatograf ia em coluna de Si02, para dar um rendimento de 32 mg, 23%. 81
Esquema 23: Síntese de ARM111
A Síntese de Slll (ARM111) pode ser conseguida como mostrado no Esquema 23. 0 que se segue é um exemplo da síntese: A uma mistura de ARM110 (16 mg, 0,06 mmol) em MeOH (2 mL) foi adicionado IN NaOH (0,1 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi dissolvido em H20 (10 mL) . A fase aquosa foi lavada com acetato de etilo (2x5 mL) e acidificada com IN HC1, a um pH = 4. A remoção dos solventes sob pressão reduzida forneceu ARMlll em bruto. O NaCl foi retirado usando etanol para se obter ARMlll puro na forma de um sólido, com um rendimento de 13 mg, 87%.
Esquema 31: Síntese de ARM120 e AR Mi 21
A Síntese de S120 (ARM120) e S121 (ARM121) pode ser conseguida como mostrado no Esquema 31. O que se segue é um exemplo da síntese: Uma mistura de S26 (195 mg, 1 mmol), brometo de benzilo (1,1 mmol) e Na2CC>3 (10 mmol) em DMF (10 mL) foi agitada durante a noite. Acetato de etilo (30 mL) 82 foi adicionado à reação, e, em seguida, a reação foi lavada com H20 (4x 10 mL) . A fase orgânica foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatograf ia em coluna para se obter S121, como um pó branco, com um rendimento de 280 mg, a 98%. S120 foi sintetizado de forma semelhante, mas utilizando brometo de 4-OH-benzilo em vez de brometo de benzilo.
EXEMPLO 5 - MÉTODO DE RASTREIO DE ALTO DÉBITO
Ensaios para o rastreio de moléculas pequenas biologicamente ativas têm sido desenvolvidos. Estes ensaios são baseados na religação da proteína FKBP12 a RyR.
Um método altamente eficiente para o rastreio de alto rendimento para as pequenas moléculas é desenvolvido pela imobilização de FKBP12.6 (proteína de fusão-GST) numa placa de 96 poços revestidas com glutationa. O recetor de rianodina do tipo 2 PKA-fosforilado (RyR2) é carregado na placa revestida com FKBP12.6, e incubado com análogos de JTV-519 a várias concentrações (10-100 nM) durante 30 min. Em seguida, a placa é lavada para remover o RyR2 não ligado e, em seguida, é incubada com anticorpo RyR2 durante 30 min. A placa é lavada para remover o anticorpo anti-RyR2 não ligado, e é depois tratada com o anticorpo secundário marcado com fluorescência. A placa foi lida por um leitor de placas fluorescentes automático em termos de atividade de ligação.
Num ensaio alternativo, o RyR2 é PKA-fosforilado na presença de 32P-ATP. O RyR2 PKA-fosforilado radioativo é carregado numa placa de 96 poços revestida com FKBP12.6, na presença de análogos de JTV-519 a várias concentrações (10- 83 100 nM) durante 30 min. A placa é lavada para remover o RyR2 radiomarcado não ligado, e, em seguida, é lida por um leitor de placas automático.
EXEMPLO 6 - EFEITO DE COMPOSTOS EM CORRENTES HERG
Os efeitos dos compostos da invenção em correntes hERG foram estudados utilizando células cultivadas de rim embrionário humano 293 (HEK 293), que tinham sido estavelmente tranfectadas com ADNc de hERG. As células HEK 293 não expressam hERG endógeno. As células HEK293 foram transfectadas com um plasmideo contendo o ADNc de hERG e um gene de resistência à neomicina. Os transfectantes estáveis foram selecionados por cultura das células na presença de G418. A pressão de seleção foi mantida pela cultura continuada na presença de G418. As células foram cultivadas em Meio Modificado Eagle Médium da Dulbecco/Nutreint Mizture F-12 (D-MEM/F-12) suplementado com soro fetal bovino a 10%, 199U/mL de penicilina G de sódio, sulfato de estreptomicina a 10 pg/mL e 500 pg/mL de G418. As células para utilização em eletrofisiologia foram cultivadas em pratos de 35 mm.
Os registos eletrofisiológicos (usando o método de fixação de membranas de célula inteira) foram realizados à temperatura ambiente (18 °C-24 °C) . Cada célula atuou como seu próprio controlo. O efeito de ARM036 foi avaliado em duas concentrações: 10 e 100 pM. Cada concentração foi testada em pelo menos três células (n > 3) . 90 nM de Cisapride (disponível comercialmente a partir de TOCRIS Bioscience), foi utilizado como um controlo positivo para bloqueio de hERG. Para o registo, as células foram transferidas para a câmara de registo e superfundidas com 84 uma solução de controlo do veículo. A solução na pipeta adesiva para registo de célula inteira continha aspartato de potássio a 130 mM, MgC12 a 5 mM, EGTA a 5 mM, ATP a 4 mM e HEPES a 10 mM. O pH foi ajustado para 7,2 com KOH. A solução da pipeta foi preparada em lotes, aliquotada e armazenada congelada. Uma alíquota fresca foi descongelada e utilizada a cada dia. As pipetas adesivas foram feitas a partir de tubos capilares de vidro utilizando um puxador de micropipeta P-97 (Sutter Instruments, Novato, CA) . Um amplificador de adesão do adesivo comercial foi usado para registo de células inteiras. Antes da digitalização, os registos atuais foram passados por filtro passa-baixo a um quinto da frequência de amostragem. O início e estado bloqueado constante da corrente hERG foi medido utilizando um padrão de impulsos com amplitudes fixas (condicionamento de pré-pulso: +20 mV durante 2 segundos; pulso de teste: _50 mV durante 2 segundos) repetidos em intervalos de 10 segundos, a partir de um potencial de manutenção de -80 mV. A corrente de pico de cauda foi medida durante o passo de 2 segundos para _50 mV. Um estado estacionário foi mantido durante pelo menos 30 segundos antes de se aplicar o composto de ensaio ou o controlo positivo. A corrente de pico de cauda foi monitorizada até que um novo estado de equilíbrio fosse alcançado. As concentrações dos compostos de teste foram aplicadas cumulativamente, em ordem ascendente sem lavagem entre aplicações. A aquisição e análise dos dados foram realizadas utilizando os programas de aplicativo pCLAMP (Vre. 8.2) (Axon Instruments, Union City, CA) . O estado estacionário foi definido pela taxa constante de limitação da mudança com o 85 tempo (dependência de tempo linear). 0 estado estacionário antes e depois da aplicação dos compostos de teste ou controlo foi usado para calcular a percentagem de inibição de corrente para cada concentração. Os dados de concentração-resposta foram ajustados numa equação da forma:
1 onde [Test] é a concentração do composto de teste, a IC50 (concentração inibidora 50) é a concentração do composto do teste produzindo inibição semi-máxima, N é o coeficiente de Hill, e % Block a percentagem da corrente hERG inibida para cada concentração do composto de teste. Os ajustes quadrados não-lineares foram resolvidos com o Solver add-in para Excel 2000 (Microsoft, Redmond, WA) . Para alguns compostos não foi possível determinar o IC50, porque a maior concentração do composto de teste utilizada não bloqueou o canal hERG em 50% ou mais.
EXEMPLO 7 - EFEITO DE VÁRIOS COMPOSTOS SOBRE CORRENTES HERG Múltiplos compostos da invenção foram testados em termos dos seus efeitos sobre as correntes hERG. Os compostos testados incluem o ARM107. A título comparativo, o efeito de JTV-519 (referido nas figuras como ARM00X) em correntes de hERG também foi testado. Os registos eletrofisiológicos foram feitos usando o sistema de adesão paralela automático PatchXpress 7000A (Molecular Devices). Cada composto foi testado a 0,01, 0,1, 1 e 10 mM, sendo cada concentração testada em 2 células (n> 2). A duração da exposição a cada concentração de teste foi de 5 minutos. Outros aspetos dos 86 protocolos experimentais foram essencialmente semelhantes aos descritos no Exemplo 6. Para alguns compostos não foi possível determinar o IC50, porque a maior concentração do composto de teste utilizada não bloqueou o canal hERG em 50% ou mais.
Lisboa,

Claims (16)

1 REIVINDICAÇÕES 1. Um composto representado pela fórmula I-k: r Ύ
/ (formata í-kj em que R' e R' ' são selecionados independentemente de entre o grupo consistindo de H, halogéneo, -OH,-NH2, - N02, -CN, -CF3, OCF3, -N3,-S03H, -S (=0) 2alquilo, S(=0)alquilo, -0S(=0)2CF3, acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, alquiltio, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero)arilo, (hetero)ariltio, e (hetero) arilamino; e em que cada um de acilo, alquilo, alcoxilo, alquilamino, cicloalquilo, arilo, heterociclilo, heterociclilalquilo, alquenilo, alquinilo, (hetero)arilo, (hetero)ariltio podem ser substituídos; n é 0, 1 ou 2; e pél, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; em que: quando p é 0, Ris é alquilo Ci-C4; e quando pél, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10; r18 é selecionado a partir do grupo consistindo de -(C=0)0Ri5, -OR15, alquilo e arilo, em que cada um de alquilo e arilo, podem ser substituídos; e R15 é selecionado a partir do grupo que consiste em H, acilo, alquenilo, alcoxilo, OH, NH2, alquilo, alquilamino, arilo, alquilarilo, cicloalquilo, cicloalquilalquilo, heteroarilo, heterociclilo e 2 heterociclilalquilo, em que cada um de acilo, alquenilo, alcoxilo, alquilo, alquilamino, arilo, 2 cicloalquilalquilo alquilarilo cicloalquilo heteroarilo, heterocíclico, e heterociclilalquilo pode ser substituído; e enantiómeros, diastereómeros, tautómeros, sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, solvatos e complexos dos mesmos.
2. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, representado pela estrutura:
ou um seu hidrato ou sal farmaceuticamente aceitável.
3. 0 composto de acordo com a reivindicação 2, em que o composto é um sal farmaceuticamente aceitável de
© ,QM
4. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, representado pela estrutura: 3
ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato.
5. 0 composto de acordo com a reivindicação 1, em que p é 0 e Ris é alquilo C1-C4.
6. 0 composto de acordo com a reivindicação 5, representado pela estrutura:
(Sl07} 4 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou hidrato.
7. 0 composto de acordo com a reivindicação 6, em que o composto é um sal farmaceuticamente aceitável de
8. Uma composição farmacêutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, e pelo menos um aditivo selecionado a partir do grupo consistindo em agentes antioxidantes, aromatizantes, tampões, ligantes, corantes, desintegrantes, diluentes, emulsionantes, excipientes, diluentes, agentes de melhoramento do sabor, gelificantes, de deslizamento, conservantes, intensificadores de penetração na pele, solubilizantes, estabilizantes, agentes de suspensão, adoçantes, agentes de tonicidade, veículos, e agentes de aumento da viscosidade.
9. A composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 8, na forma de uma cápsula, grânulo, pó, solução, suspensão, ou comprimido e que é concebida para administração por uma via oral, sublingual, bucal, parentérica, intravenosa, transdérmica, por inalação, por via intranasal, vaginal, intramuscular ou retal.
10. Um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou uma composição de acordo com as reivindicações 8 ou 9, para a utilização no tratamento ou prevenção de uma perturbação ou doença associada a um RyR que regula o funcionamento do canal 5 de cálcio nas células.
11. 0 composto de acordo com a reivindicação 10, em que a perturbação ou doença são selecionadas a partir do grupo que consiste em perturbações e doenças cardíacas, perturbações e doenças musculares esqueléticas, perturbações e doenças cognitivas, hipertermia maligna, diabetes e síndrome da morte súbita do lactente.
12. O composto de acordo com a reivindicação 11, em que as perturbações e doenças cardíacas são selecionadas a partir do grupo consistindo de perturbações e doenças dos batimentos cardíacos irregulares; perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício; a morte cardíaca súbita; a morte cardíaca súbita induzida por exercício; insuficiência cardíaca congestiva; doença pulmonar obstrutiva crónica; e pressão arterial alta.
13. O composto de acordo com a reivindicação 12, em que as perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares e as perturbações e doenças nos batimentos cardíacos irregulares induzidos por exercício são selecionadas a partir do grupo constituído por arritmia atrial e ventricular; fibrilação atrial e ventricular; taquiarritmia atrial e ventricular; taquicardia atrial e ventricular; taquicardia ventricular polimórfica catecolaminérgica (CPVT); e variantes das mesmas induzidas pelo exercício.
14. O composto de acordo com a reivindicação 11, em que as perturbações e doenças musculares esqueléticas são selecionadas a partir do grupo constituído por fadiga 6 do músculo esquelético, a fadiga do músculo esquelético induzida pelo exercício, distrofia muscular, perturbações da bexiga e incontinência.
15. 0 composto de acordo com a reivindicação 11, em que as perturbações e doenças cognitivas são selecionadas a partir do grupo consistindo de doença de Alzheimer, as formas de perda de memória, e perda de memória dependente da idade.
16. Utilização de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, ou uma de composição de acordo com as reivindicações 8 ou 9, para o fabrico de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma perturbação ou doença associada a um RyR que regula o funcionamento do canal de cálcio nas células. Lisboa,
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Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040048780A1 (en) * 2000-05-10 2004-03-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for treating and preventing cardiac arrhythmia
US20040229781A1 (en) * 2000-05-10 2004-11-18 Marks Andrew Robert Compounds and methods for treating and preventing exercise-induced cardiac arrhythmias
US6489125B1 (en) * 2000-05-10 2002-12-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying chemical compounds that inhibit dissociation of FKBP12.6 binding protein from type 2 ryanodine receptor
US7718644B2 (en) * 2004-01-22 2010-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrhythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2) and uses thereof
US7879840B2 (en) * 2005-08-25 2011-02-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US20060293266A1 (en) * 2000-05-10 2006-12-28 The Trustees Of Columbia Phosphodiesterase 4D in the ryanodine receptor complex protects against heart failure
US7393652B2 (en) * 2000-05-10 2008-07-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying a chemical compound that directly enhances binding of FKBP12.6 to PKA-phosphorylated type 2 ryanodine receptor (RyR2)
US8022058B2 (en) * 2000-05-10 2011-09-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US7544678B2 (en) * 2002-11-05 2009-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2)
AU2004220548A1 (en) * 2003-03-07 2004-09-23 The Trustees Of Columbia University, In The City Of New York Type 1 ryanodine receptor-based methods
US8710045B2 (en) * 2004-01-22 2014-04-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the ryanodine receptors
US7704990B2 (en) 2005-08-25 2010-04-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
WO2008144483A2 (en) * 2007-05-18 2008-11-27 Armgo Pharma, Inc. Agents for treating disorders involving modulation of ryanodine receptors
WO2009111463A1 (en) * 2008-03-03 2009-09-11 Armgo Pharma, Inc. Process for preparing benzothiazepines from gamma-aminoalkylbenzenes
AU2008243144A1 (en) * 2008-11-06 2010-05-20 Quark Technologies Australia Pty Ltd Improvements in Radiopharmaceutical Purification
RU2011138955A (ru) 2009-02-25 2013-04-10 Нобору КАНЕКО Производные 1, 4-бензотиазепин-1-оксида и фармацевтическая композиция с использованием таких соединений
EP2418950A4 (en) * 2009-04-15 2012-10-24 State Of Oregon By & Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of Portland State Unv COMPOUNDS AND METHODS FOR MODULATING THE ACTIVITY OF CALCIUM RELEASE CHANNELS
CN101812523B (zh) * 2010-04-09 2012-08-22 广州益善生物技术有限公司 Ryr1基因snp检测特异性引物、液相芯片和检测方法
WO2012019076A1 (en) 2010-08-06 2012-02-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compositions and methods for preventing and treating cardiac ischemia/reperfusion injury
US9464322B2 (en) 2011-09-09 2016-10-11 University Of Kentucky Research Foundation Methods for diagnosing and treating alzheimer's disease (AD) using the molecules that stabilize intracellular calcium (Ca2+) release
EP2708535A1 (en) * 2012-05-11 2014-03-19 Les Laboratoires Servier Agents for treating disorders involving modulation of ryanodine receptors
US9572528B1 (en) 2012-08-06 2017-02-21 Los Angeles Biomedical Research Insitute at Harbor-UCLA Medical Center Monitor for SIDS research and prevention
US10214574B2 (en) 2015-04-15 2019-02-26 Ohio State Innovation Foundation Engineered calmodulin for treatment of ryanopathies
ES2643856B1 (es) 2016-05-24 2018-08-03 Universidad Del Pais Vasco / Euskal Herriko Unibertsitatea Triazoles para la regulación de la homeostasis de calcio intracelular
EP3554258B1 (en) 2016-12-15 2023-07-19 Société des Produits Nestlé S.A. Compositions and methods that modulate phosphorus or enzymes in a companion animal
CA3069127A1 (en) * 2017-07-06 2019-01-10 Children's Medical Center Corporation Compositions and methods for treating or preventing catecholaminergic polymorphic ventricular tachycardia
CN108588085B (zh) * 2018-05-30 2021-11-09 上海市第十人民医院 恶性心律失常的筛查试剂盒、动物模型的建立方法及应用
US11129871B1 (en) 2018-06-19 2021-09-28 Washington University Compositions and methods for treating and preventing endoplasmic reticulum (ER) stress-mediated kidney diseases
TWI827866B (zh) 2019-07-22 2024-01-01 日商埃塔斯製藥股份有限公司 有光學活性的1,4-苯並硫氮呯-1-氧化物衍生物的製造方法
CN116887839A (zh) 2021-01-08 2023-10-13 阿姆果制药有限公司 兰诺定受体调节剂的结晶形式及其用途
WO2022246114A2 (en) 2021-05-20 2022-11-24 Armgo Pharma, Inc. Pharmaceutical compositions comprising a ryanodine receptor modulator and uses thereof

Family Cites Families (204)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1060786A (en) 1963-10-09 1967-03-08 Wander Ag Dr A Process for the preparation of lactams
US3519647A (en) 1966-10-12 1970-07-07 Squibb & Sons Inc 2,3,4,5-tetrahydro-1,5-benzothiazepines
EP0150996B1 (en) 1984-01-27 1988-01-07 Ajinomoto Co., Inc. Manufacture of heptanoic acid derivatives
EP0238700B1 (en) 1986-03-27 1991-01-23 Topy Industries, Limited Carbon monoxide oxidizing catalyst
US4567254A (en) 1984-09-19 1986-01-28 Kikkoman Corporation Method for preparing N6,8-disubstituted 3',5'-cyclic adenosine monophosphate and salt thereof
US4849535A (en) 1985-02-26 1989-07-18 Ajinomoto Co., Inc. Production of cyclopentenylheptanoic acid derivatives
US4841055A (en) 1985-03-25 1989-06-20 Japan Tobacco Inc. Desmosine derivatives and reagent for preparing artificial antigens
US4723012A (en) 1985-03-25 1988-02-02 Japan Tobacco Inc. Desmosine derivatives having a disulfide bond and preparation of artificial antigen using the same
US6956032B1 (en) 1986-04-18 2005-10-18 Carnegie Mellon University Cyanine dyes as labeling reagents for detection of biological and other materials by luminescence methods
JPS63227599A (ja) 1987-03-14 1988-09-21 Kirin Brewery Co Ltd アンスラサイクリン化合物およびその用途
US5179125A (en) 1987-12-03 1993-01-12 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. N-substituted mercaptopropanamide derivatives
US5210266A (en) 1987-12-03 1993-05-11 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. N-substituted mercaptopropanamide derivatives
EP0368063B1 (de) 1988-11-05 1992-06-10 Bayer Ag Verfahren zur Kernchlorierung von aromatischen Kohlenwasserstoffen
JPH0662567B2 (ja) 1988-12-27 1994-08-17 麒麟麦酒株式会社 ピリジンカルボキシイミダミド誘導体、その製造中間体、製造法および用途
US5223508A (en) 1988-12-27 1993-06-29 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Pyridyl carboximidamide compounds useful in treating blood pressure
US5272164A (en) 1988-12-27 1993-12-21 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Carboximidamide derivatives
US5142647A (en) 1989-04-18 1992-08-25 Japan Tobacco, Inc. Magnus measuring apparatus
CA1341094C (en) * 1989-09-25 2000-09-05 Ronald G. Worton Diagnosis for malignant hyperthermia
WO1991004654A1 (en) 1989-09-30 1991-04-18 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Method of producing seedling
US5153184A (en) 1989-10-10 1992-10-06 Dowelanco ((N-heterocyclyl)carbonyl)phosphoramidothioate ester insecticides
US5075293A (en) 1989-10-10 1991-12-24 The Dow Chemical Company ((N-heterocyclyl)carbonyl)phosphoramidothioate ester insecticides
KR940000166B1 (ko) 1989-11-09 1994-01-08 니혼다바고 상교오 가부시기가이샤 신규 글루코사민 유도체 및 이것을 막 구성성분으로서 함유한 리포솜
US4963671A (en) 1989-11-20 1990-10-16 E. R. Squibb & Sons, Inc. Process for resolving chiral intermediates used in making calcium channel blockers
KR940003297B1 (ko) 1989-12-27 1994-04-20 니혼다바고 상교오 가부시기가이샤 1,3,2-디옥사티오렌옥시드 유도체
WO1991015487A1 (fr) 1990-03-30 1991-10-17 Japan Tobacco Inc. Nouveau derive de 4-1-benzoxazine-4h-3,1
WO1992018488A1 (fr) 1991-04-10 1992-10-29 Japan Tobacco Inc. Nouveau derive d'oxazinone
JP2651043B2 (ja) 1990-07-10 1997-09-10 麒麟麦酒株式会社 ジフェニルメチルピペラジン誘導体
US5082847A (en) 1990-07-18 1992-01-21 Syntex (U.S.A.) Inc. Carbostyril compounds connected via an oxyalkyl group with a piperidine ring and having pharmaceutical utility
US5064810A (en) 1990-09-14 1991-11-12 Jeffrey Askanazi Use of branched chain amino acids to effect diaphragm contractility and fatigue
JP2703408B2 (ja) 1990-12-28 1998-01-26 麒麟麦酒株式会社 １，４‐ベンゾチアゼピン誘導体
DE4102103A1 (de) 1991-01-25 1992-08-20 Bayer Ag Substituierte benzoxazepine und benzthiazepine, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung in arzneimitteln
US5180720A (en) 1991-05-03 1993-01-19 G. D. Searle & Co. 2- and 3-alkoxy or hydroxy-8-substituted-dibenz[b,f]-[1,4]oxazepine-10(11H)-carboxylic acid, substituted hydrazides and methods for treating pain
US5182272A (en) 1991-05-03 1993-01-26 G. D. Searle & Co. 8-substituted-dibenz[b,f][1,4]oxazepine-10(11)-carboxylic acid, substituted hydrazides, pharmaceutical compositions, and methods for treating pain
ATE180830T1 (de) 1991-07-04 1999-06-15 Japan Tobacco Inc Verfahren zur kultivierung von vorläufer t- zellinien
US5593988A (en) 1991-10-11 1997-01-14 Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. Therapeutic agent for osteoporosis and diazepine compound
WO1993013082A1 (en) 1991-12-20 1993-07-08 G.D. Searle & Co. Substituted dibenzoxazepines or dibenzothiazepines and their use as prostaglandin e2 antagonists
MX9300433A (es) 1992-01-28 1994-07-29 Kirin Brewery Compuestos de piridincarboximidamina y composiciones farmaceuticas que los contienen.
GB9203347D0 (en) 1992-02-17 1992-04-01 Wellcome Found Hypolipidaemic compounds
JP2667351B2 (ja) 1992-03-24 1997-10-27 麒麟麦酒株式会社 食餌脂質消化吸収阻害剤および飲食品
US5387684A (en) 1992-03-25 1995-02-07 The Green Cross Corporation Isoindazole compound
JP3093419B2 (ja) 1992-03-30 2000-10-03 麒麟麦酒株式会社 １，４‐ベンゾチアゼピン誘導体
US5304644A (en) 1992-04-15 1994-04-19 G. D. Searle & Co. 1-,2-,3-,4-,5-,6-,7-,8- and/or 9 substituted dibenzoxazepine compounds, pharmaceutical compositions and methods for treating pain
US5478832A (en) 1992-05-08 1995-12-26 The Green Cross Corporation Quinoline compounds
KR950702188A (ko) 1992-07-02 1995-06-19 후지야마 로오 아미노산 유도체 생산 및 합성의 신규 중간체
CA2142883A1 (en) 1992-08-21 1994-03-03 Saizo Shibata Dioxacycloalkane compound having renin-inhibitory activity
US5260286A (en) 1992-10-16 1993-11-09 Japan Tobacco, Inc. 2-piperidinecarboxylic acid derivatives useful as NMDA receptor antagonists
EP0667866B1 (en) * 1992-11-09 1998-03-11 Knoll AG 1,4-benzothiazepines useful as neurological agents
US5354758A (en) 1992-12-16 1994-10-11 Japan Tobacco Inc. Benzomorphans useful as NMDA receptor antagonists
ZA94284B (en) * 1993-01-27 1994-08-17 Shionogi & Co Process for preparing benzothiazepine derivatives
IL108634A0 (en) 1993-02-15 1994-05-30 Wellcome Found Hypolipidaemic heterocyclic compounds, their prepatation and pharmaceutical compositions containing them
IL108633A (en) 1993-02-15 1998-07-15 Wellcome Found History of Benzothiazepine Hypolipidemic Preparation and Pharmaceutical Preparations Containing Them
EP0694558B1 (en) 1993-04-15 1999-01-27 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel sphingoglycolipid and use thereof
US5354747A (en) 1993-06-16 1994-10-11 G. D. Searle & Co. 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9- and/or 10-substituted dibenzoxazepine and dibenzthiazepine compounds, pharmaceutical compositions and methods of use
US5461047A (en) 1993-06-16 1995-10-24 G. D. Searle & Co. 2-,3-,4-,5-,6-,7-,8-,9- and/or 10-substituted dibenzoxazepine and dibenzthiazepine compounds, pharmaceutical compositions and methods of use
US5824862A (en) 1993-08-19 1998-10-20 Japan Tobacco Inc. DNA encoding ATP-dependent fructose 6-phosphate 1-phosphotransferase originating from plant, recombinant vector containing the same and method for changing sugar content in plant cells under low temperature
FR2709753B1 (fr) 1993-09-09 1995-12-01 Hoechst Lab Nitrates organiques, leur procédé de préparation et leur application comme médicaments.
WO1995013272A1 (fr) 1993-11-10 1995-05-18 Japan Tobacco Inc. Derive de chromanne et utilisation therapeutique de ce dernier
US6897295B1 (en) 1993-11-10 2005-05-24 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Antibodies and fragments thereof to Fas ligand and Fas ligand derived polypeptides
JPH08127594A (ja) 1993-11-10 1996-05-21 Mochida Pharmaceut Co Ltd Ｆａｓ抗原に結合する新規蛋白質およびそれをコードするＤＮＡ
JP3914272B2 (ja) 1993-12-28 2007-05-16 中外製薬株式会社 アドゼベリンをコードする遺伝子
JP2706755B2 (ja) 1994-02-10 1998-01-28 日本たばこ産業株式会社 新規なベンジルアミノエトキシベンゼン誘導体
US5457182A (en) 1994-02-15 1995-10-10 Merck & Co., Inc. FK-506 cytosolic binding protein, FKBP12.6
US5449675A (en) 1994-06-09 1995-09-12 G. D. Searle & Co. Substituted dibenzoxazepine and dibenzthiazepine urea compounds, pharmaceutical compositions and methods of use
AU2682495A (en) 1994-06-15 1996-01-05 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Novel transferase and amylase, process for producing the enzymes,use thereof, and gene coding for the same
US20040175814A1 (en) 1994-06-15 2004-09-09 Kirin Beer Kubushiki Kaisha Novel transferase and amylase, process for producing the enzymes, use thereof, and gene coding for the same
ZA956647B (en) 1994-08-10 1997-02-10 Wellcome Found Hypolipidaemic compounds.
EP0741144B1 (en) 1994-11-11 2002-07-24 Noboru Kaneko Antiannexin-v monoclonal antibody, process for producing the same, and use therof
EP0792880A4 (en) 1994-11-18 1998-03-25 Japan Tobacco Inc OSTEOPOROSIS MEDICINE AND TRIAZEPINE COMPOUND
US6632976B1 (en) 1995-08-29 2003-10-14 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Chimeric mice that are produced by microcell mediated chromosome transfer and that retain a human antibody gene
JP3193301B2 (ja) 1995-09-14 2001-07-30 麒麟麦酒株式会社 生理活性タンパク質ｐ１６０
US6660837B1 (en) 1995-09-14 2003-12-09 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Modified protein derived from protein kinase N
US5906819A (en) 1995-11-20 1999-05-25 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Rho target protein Rho-kinase
US5866341A (en) 1996-04-03 1999-02-02 Chugai Pharmaceutical Co., Ltd. Compositions and methods for screening drug libraries
EP0933354B1 (en) 1996-07-08 2011-03-30 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Calcium receptor-active compounds
JP3861187B2 (ja) * 1996-08-02 2006-12-20 住友精化株式会社 チアゼピン誘導体の製造方法
US6111072A (en) 1996-08-26 2000-08-29 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Rho target protein human mDia and gene encoding same
ATE290068T1 (de) 1996-12-12 2005-03-15 Kirin Brewery Beta 1-4 n-acetylglucosaminyltransferase sowie das für diese kodierende gen
TW555562B (en) 1996-12-27 2003-10-01 Kirin Brewery Method for activation of human antigen-presenting cells, activated human antigen-presenting cells and use thereof
JP2894445B2 (ja) 1997-02-12 1999-05-24 日本たばこ産業株式会社 Ｃｅｔｐ活性阻害剤として有効な化合物
US7112655B1 (en) 1997-02-27 2006-09-26 Japan Tobacco, Inc. JTT-1 protein and methods of inhibiting lymphocyte activation
JP3521382B2 (ja) 1997-02-27 2004-04-19 日本たばこ産業株式会社 細胞間接着及びシグナル伝達を媒介する細胞表面分子
JP3885177B2 (ja) 1997-03-26 2007-02-21 大塚製薬株式会社 ヒト遺伝子
US6011036A (en) 1997-04-15 2000-01-04 Dr. Reddy's Research Foundation Heterocyclic compounds having antidiabetic hypolipidemic antihypertensive properties process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
DE19722317C1 (de) 1997-05-28 1998-10-08 Boehringer Ingelheim Int Das Protein des humanen Ryanodinrezeptors vom Typ 3 sowie dafür kodierende DNA-Moleküle
AUPO941497A0 (en) 1997-09-24 1997-10-16 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Novel compounds
EP0965840A4 (en) 1997-10-08 2001-10-31 Noboru Kaneko METHOD FOR ANALYZING ANNEXIN V IN URINE AND THEIR USE
GB9724813D0 (en) 1997-11-25 1998-01-21 Univ Nottingham Reducing muscle fatigue
JP2959765B2 (ja) 1997-12-12 1999-10-06 日本たばこ産業株式会社 ３−ピペリジル−４−オキソキナゾリン誘導体及びそれを含有してなる医薬組成物
US6562618B1 (en) 1997-12-25 2003-05-13 Japan Tobacco, Inc. Monoclonal antibody against connective tissue growth factor and medicinal uses thereof
US6583157B2 (en) 1998-01-29 2003-06-24 Tularik Inc. Quinolinyl and benzothiazolyl modulators
US6051714A (en) 1998-03-12 2000-04-18 Reilly Industries, Inc. Processes for dechlorinating pyridines
BR9909666A (pt) 1998-03-26 2001-09-11 Japan Tobacco Inc Derivados de amida e antagonistas de nociceptina
SK15072000A3 (sk) 1998-04-10 2001-08-06 Japan Tobacco Inc. Amidové zlúčeniny
EP1085890A1 (en) 1998-06-08 2001-03-28 Advanced Medicine, Inc. Novel sodium channel drugs and uses
EP1122311A4 (en) 1998-07-31 2002-04-17 Kirin Brewery MEDICINES FOR TREATING NEUROPATHY CONTAINING GALECTIN-1 OR DERIVATIVES THEREOF AS ACTIVE SUBSTANCE
CA2342602A1 (en) 1998-09-17 2000-03-30 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Remedies for photochemotherapy
CA2357038C (en) 1998-12-28 2008-10-21 Japan Tobacco Inc. Medical compositions comprising 1,4-benzothiazepine derivatives for the treatment of atrial fibrillation
DK1167537T3 (da) 1999-03-30 2008-11-10 Japan Tobacco Inc Fremgangsmåde til fremstilling af et monoklonalt antistof
AU774656B2 (en) 1999-05-19 2004-07-01 Noboru Kaneko Use of 1,4-benzothiazepine derivatives as drugs overcoming carcinostatic tolerance
GB9914745D0 (en) * 1999-06-24 1999-08-25 Knoll Ag Therapeutic agents
JP3871503B2 (ja) 1999-08-30 2007-01-24 日本たばこ産業株式会社 免疫性疾患治療剤
WO2001016321A1 (en) 1999-09-01 2001-03-08 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Platelet membrane glycoprotein vi (gpvi) dna and protein sequences, and uses thereof
WO2001022968A1 (fr) 1999-09-30 2001-04-05 Noboru Kaneko Agents anticancereux
AU2223201A (en) 1999-12-24 2001-07-09 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Quinoline and quinazoline derivatives and drugs containing the same
EP1244457B1 (en) 1999-12-29 2004-10-27 Glaxo Group Limited Use of modulators of annexin for the manufacture of a medicament for the treatment and/or prevention of arthritis and arthritic diseases
AU2001241420A1 (en) 2000-01-14 2001-07-24 Mitokor Screening assays using intramitochondrial calcium
KR20020069362A (ko) 2000-01-20 2002-08-30 에자이 가부시키가이샤 함질소환 화합물 및 이들을 포함하는 의약 조성물
KR20020067937A (ko) * 2000-01-26 2002-08-24 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 벤젠 축합 헤테로환 유도체 및 그 유도체를 유효성분으로서 함유하는 약제
US6824973B2 (en) 2000-02-03 2004-11-30 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Method of promoting stem cell proliferation or survival by contacting a cell with a stem cell factor-like polypeptide
TWI288136B (en) 2000-02-18 2007-10-11 Kirin Brewery Novel isoxazole and thiazole compounds and use thereof as drugs
MY135721A (en) 2000-03-24 2008-06-30 Pharmacia Corp Amidino compounds useful as nitric oxide synthase inhibitors
AR032318A1 (es) 2000-04-13 2003-11-05 Pharmacia Corp Compuesto derivado halogenado del acido 2-amino-5,6 heptenoico; composicion farmaceutica que lo comprende y su uso en la fabricacion de un medicamento util como inhibidor de la oxido nitrico sintetasa
US6545170B2 (en) 2000-04-13 2003-04-08 Pharmacia Corporation 2-amino-5, 6 heptenoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
US6787668B2 (en) 2000-04-13 2004-09-07 Pharmacia Corporation 2-amino-4,5 heptenoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
AR034120A1 (es) 2000-04-13 2004-02-04 Pharmacia Corp Compuesto derivado halogenado del acido 2-amino-4,5 heptenoico, composicion farmaceutica que lo comprende y el uso de dicho compuesto y dicha composicion en la fabricacion de un medicamento para inhibir o modular la sintesis de acido nitrico
US7879840B2 (en) 2005-08-25 2011-02-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US6489125B1 (en) 2000-05-10 2002-12-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying chemical compounds that inhibit dissociation of FKBP12.6 binding protein from type 2 ryanodine receptor
US20040048780A1 (en) 2000-05-10 2004-03-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for treating and preventing cardiac arrhythmia
US20040229781A1 (en) 2000-05-10 2004-11-18 Marks Andrew Robert Compounds and methods for treating and preventing exercise-induced cardiac arrhythmias
US8022058B2 (en) 2000-05-10 2011-09-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US7718644B2 (en) 2004-01-22 2010-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrhythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2) and uses thereof
US20060293266A1 (en) 2000-05-10 2006-12-28 The Trustees Of Columbia Phosphodiesterase 4D in the ryanodine receptor complex protects against heart failure
US7393652B2 (en) 2000-05-10 2008-07-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying a chemical compound that directly enhances binding of FKBP12.6 to PKA-phosphorylated type 2 ryanodine receptor (RyR2)
AU2001261434A1 (en) 2000-05-11 2001-11-26 Pharmacia Corporation Aldosterone antagonist composition for release during aldosterone acrophase
US20030220312A1 (en) 2000-05-11 2003-11-27 G.D. Searle & Co. Epoxy-steroidal aldosterone antagonist and calcium channel blocker combination therapy for treatment of cardiovascular disorders
CN101498731A (zh) 2000-05-18 2009-08-05 日本烟草产业株式会社 抗协同刺激信号转导分子ailim的人单克隆抗体及其药物用途
JP3597140B2 (ja) 2000-05-18 2004-12-02 日本たばこ産業株式会社 副刺激伝達分子ａｉｌｉｍに対するヒトモノクローナル抗体及びその医薬用途
WO2002002101A1 (fr) 2000-07-05 2002-01-10 Ajinomoto Co., Inc. Composes hypoglycemiques
AU2001267879A1 (en) 2000-07-05 2002-01-14 Ajinomoto Co., Inc. Acylsulfonamide derivatives
ATE357257T1 (de) 2000-07-27 2007-04-15 Pharmacia Corp Kombinationstherapie mit epoxy-steroidalen aldosteronantagonisten und kalziumkanalblocker zur behandlung von kongestivem herzversagen
CA2415851A1 (en) 2000-08-01 2002-02-07 Pharmacia Corporation Hexahydro-7-1h-azepin-2-yl-haxanoic acid derivatives as inhibitors of inducible nitric oxide synthase
AR031129A1 (es) 2000-09-15 2003-09-10 Pharmacia Corp Derivados de los acidos 2-amino-2-alquil-4-hexenoico y -hexinoico utiles como inhibidores de oxido nitrico sintetasa
AR031608A1 (es) 2000-09-15 2003-09-24 Pharmacia Corp Derivados de los acidos 2-amino-2-alquil-3-hexenoico y -hexinoico utiles como inhibidores de oxido nitrico sintetasa
MY131964A (en) 2000-09-15 2007-09-28 Pharmacia Corp 2-amino-2-alkyl-5 heptenoic and heptynoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
US6936426B2 (en) 2000-10-06 2005-08-30 Harbor-Ucla Research And Education Institute Detection of antibody mediated inflammatory auto-immune disorders
ES2405944T3 (es) 2000-11-30 2013-06-04 Medarex, Inc. Ácidos nucleicos que codifican las secuencias de inmunoglobulina humana reorganizadas a partir de ratones transcromoscómicos transgénicos zadas
US6673904B2 (en) 2000-12-23 2004-01-06 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Stem cell growth factor-like polypeptides
US6962926B2 (en) 2001-01-31 2005-11-08 Telik, Inc. Antagonist of MCP-1 function, and compositions and methods of use thereof
CA2437021A1 (en) 2001-02-01 2002-08-08 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. Adiponectin-associated protein
JP4817514B2 (ja) 2001-03-09 2011-11-16 協和発酵キリン株式会社 新規動物細胞用ベクターおよびその使用
EP1369129A4 (en) 2001-03-14 2005-08-03 Ono Pharmaceutical Co ANTIDEPRESSOR REMEDIES CONTAINING AN EP1 ANTAGONIST AS ACTIVE INGREDIENT
US20030054531A1 (en) 2001-03-19 2003-03-20 Decode Genetics Ehf, Human stroke gene
AU2002306868A1 (en) 2001-03-28 2002-10-15 Pharmacia Corporation Therapeutic combinations for cardiovascular and inflammatory indications
PL209822B1 (pl) 2001-04-27 2011-10-31 Kirin Pharma Kk Pochodna chinoliny lub chinazoliny, zawierająca ją kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie
JP4230681B2 (ja) 2001-07-06 2009-02-25 株式会社東芝 高耐圧半導体装置
US20030220310A1 (en) 2001-07-27 2003-11-27 Schuh Joseph R. Epoxy-steroidal aldosterone antagonist and calcium channel blocker combination therapy for treatment of congestive heart failure
GB0121621D0 (en) * 2001-09-07 2001-10-31 Astrazeneca Ab Chemical compounds
EP1435946B8 (en) 2001-09-14 2013-12-18 Amgen Inc. Linked biaryl compounds
JP2003095977A (ja) * 2001-09-21 2003-04-03 Masafumi Yano 筋肉収縮・弛緩機能障害関連疾患の治療又は予防剤
US20050177884A1 (en) 2001-11-15 2005-08-11 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Chimeric nonhuman animal
JP2003145746A (ja) 2001-11-16 2003-05-21 Seiko Epson Corp インクジェット記録方法及びインクジェット記録装置
EP1447096A1 (en) 2001-11-19 2004-08-18 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Remedies for urinary frequency
WO2003048140A1 (fr) 2001-12-03 2003-06-12 Japan Tobacco Inc. Compose azole et utilisation medicinale de celui-ci
US20040171613A1 (en) 2001-12-27 2004-09-02 Japan Tobacco Inc. Therapeutic agent for non-immediate type allergic diseases
WO2003061699A1 (fr) 2001-12-27 2003-07-31 Japan Tobacco, Inc. Remedes pour affections allergiques
US6852753B2 (en) 2002-01-17 2005-02-08 Pharmacia Corporation Alkyl/aryl hydroxy or keto thiepine compounds as inhibitors of apical sodium co-dependent bile acid transport (ASBT) and taurocholate uptake
BR0307409A (pt) 2002-02-01 2004-12-28 Dainippon Pharmaceutical Co Compostos de hidrazida de ácido 2-furanocarboxìlico, composições farmacêuticas contendo os mesmos e uso dos mesmos para preparação de um agente preventivo ou terapêutico
CN1870983B (zh) 2002-02-14 2010-12-01 麒麟麦酒株式会社 用于改善脂质代谢的组合物和食品
CN1655696A (zh) 2002-04-26 2005-08-17 日本烟草产业株式会社 棒状物品成形装置
WO2003091280A1 (en) 2002-04-26 2003-11-06 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Polypeptide having an activity to support proliferation or survival of hematopoietic stem cell or hematopoietic progenitor cell, and dna coding for the same
JP4113042B2 (ja) 2002-05-24 2008-07-02 シチズンホールディングス株式会社 表示装置およびカラー表示方法
DE10237723A1 (de) 2002-08-17 2004-07-08 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Verwendung von IKappaB-Kinase Inhibitoren in der Schmerztherapie
DE60311821T2 (de) 2002-08-30 2007-10-31 Japan Tobacco Inc. Dibenzylaminverbindung und deren medizinische verwendung
JP2004103256A (ja) 2002-09-04 2004-04-02 Nippon Chemicon Corp 非常灯
CN100383140C (zh) 2002-09-12 2008-04-23 麒麟麦酒株式会社 具有激酶抑制活性的异喹啉衍生物和包含异喹啉衍生物的药剂
BR0314640A (pt) 2002-09-20 2005-08-02 Kirin Brewery Inibidor de vìrus de hepatite c compreendendo, como um ingrediente ativo, alfa-glicosilceramida
CA2501068C (en) 2002-10-04 2014-12-16 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Human artificial chromosome (hac) vector
US7544678B2 (en) 2002-11-05 2009-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2)
AU2003301894A1 (en) 2002-11-08 2004-06-07 Bayer Healthcare Ag Diagnostics and therapeutics for diseases associated with human phosphodiesterase 4d (pde4d)
EP1562956A4 (en) 2002-11-22 2007-10-10 Japan Tobacco Inc HETEROCYCLES CONTAINING FUSED BICYCLIC NITROGEN
EP1439221B1 (en) 2002-12-17 2007-01-24 F. Hoffmann-La Roche Ag PDE core construct
JP4400563B2 (ja) 2003-02-13 2010-01-20 萬有製薬株式会社 新規２−ピリジンカルボキサミド誘導体
AU2004220548A1 (en) 2003-03-07 2004-09-23 The Trustees Of Columbia University, In The City Of New York Type 1 ryanodine receptor-based methods
TWI220798B (en) 2003-03-07 2004-09-01 Hitachi Cable Light-emitting diode array
MXPA05009848A (es) 2003-03-17 2005-12-06 Japan Tobacco Inc Composiciones farmaceuticas de inhibidores de la proteina de transferencia del ester de colesterilo.
AU2004222436A1 (en) 2003-03-17 2004-09-30 Japan Tobacco Inc. Method for increasing the oral bioavailability of S-(2-(((1- (2-ethylbutyl) cyclohexyl)carbonyl) amino) phenyl)-2-methylpropanethioate
CL2004000544A1 (es) 2003-03-18 2005-01-28 Pharmacia Corp Sa Organizada B Uso de una combinacion farmaceutica, de un antagonista del receptor de aldosterona y un inhibidor de endopeptidasa neutral, util para el tratamiento y prevencion de una condicion patologica relacionada con hipertension, disfuncion renal, insulinopati
US20050032210A1 (en) 2003-03-18 2005-02-10 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Method of preparing immuno-regulatory dendritic cells and the use thereof
US20040235162A1 (en) 2003-03-18 2004-11-25 Kirin Beer Kabushiki Kaisha Method of preparing immunoregulatory dendritic cells and the use thereof
US8134015B2 (en) 2003-03-27 2012-03-13 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Compound inhibiting in vivo phosphorous transport and medicine containing the same
TW200500362A (en) 2003-04-09 2005-01-01 Japan Tobacco Inc 5-membered heteroaromatic ring compound and pharmaceutical use thereof
US20040229803A1 (en) 2003-04-22 2004-11-18 Pharmacia Corporation Compositions of a cyclooxygenase-2 selective inhibitor and a potassium ion channel modulator for the treatment of pain, inflammation or inflammation mediated disorders
US20050009733A1 (en) 2003-04-22 2005-01-13 Pharmacia Corporation Compositions of a cyclooxygenase-2 selective inhibitor and a potassium ion channel modulator for the treatment of central nervous system damage
US20060135506A1 (en) 2003-04-22 2006-06-22 Pharmacia Corporation Compositions of a cyclooxygenase-2 selective inhibitor and a calcium modulating agent for the treatment of pain, inflammation or inflammation mediated disorders
US20050159403A1 (en) 2003-04-22 2005-07-21 Pharmacia Corporation Compositions of a cyclooxygenase-2 selective inhibitor and a calcium modulating agent for the treatment of central nervous system damage
TWI494102B (zh) 2003-05-02 2015-08-01 Japan Tobacco Inc 包含ｓ-〔２（〔〔１-（２-乙基丁基）環己基〕羰基〕胺基）苯基〕２-甲基丙烷硫酯及ｈｍｇ輔酶ａ還原酶抑制劑之組合
US20050070543A1 (en) 2003-07-11 2005-03-31 Pharmacia Corporation Compositions of a chromene or phenyl acetic acid cyclooxygenase-2 selective inhibitor and an ACE inhibitor for the treatment of central nervous system damage
EP1653969A4 (en) 2003-08-07 2006-12-20 Japan Tobacco Inc PYRROLO 1,2-B PYRIDAZINE DERIVATIVES
CA2536173A1 (en) 2003-08-20 2005-03-03 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated cardiovascular compounds, compositions and methods of use
US7282519B2 (en) 2003-08-28 2007-10-16 Nitromed, Inc. Nitrosated and nitrosylated diuretic compounds, compositions and methods of use
US20050187221A1 (en) 2003-09-08 2005-08-25 Japan Tobacco Inc. Method of treating ischemia reperfusion injury
CA2548309A1 (en) 2003-12-22 2005-07-14 Amgen Inc. Aryl sulfonamide compounds and uses related thereto
US7165879B2 (en) 2004-03-25 2007-01-23 Red Devil Equipment Company Clamp lock apparatus and method for a paint mixer
JP2007533328A (ja) 2004-04-22 2007-11-22 キリンホールディングス株式会社 トランスジェニック動物及びその用途
KR20110071112A (ko) 2004-04-28 2011-06-28 가부시키가이샤 아에타스 파루마 근이완 촉진제 및 근이완 부전등의 근조직계 질병의 치료약
US7378423B2 (en) 2004-06-11 2008-05-27 Japan Tobacco Inc. Pyrimidine compound and medical use thereof
JP3968358B2 (ja) 2004-06-30 2007-08-29 日本電信電話株式会社 薄型フラットツイストぺアすきまケーブル及びすきまナビゲータユニット
CN1984906A (zh) 2004-07-15 2007-06-20 日本烟草产业株式会社 稠合苯甲酰胺化合物和香草素受体1(vr1)活性抑制剂
JP2006094849A (ja) 2004-08-30 2006-04-13 Kirin Brewery Co Ltd 相同組換え効率が向上した分化多能性細胞及びその利用
AR051780A1 (es) 2004-11-29 2007-02-07 Japan Tobacco Inc Compuestos en anillo fusionados que contienen nitrogeno y utilizacion de los mismos
US7396829B2 (en) 2005-02-24 2008-07-08 Nitromed, Inc. Nitric oxide enhancing diuretic compounds, compositions and methods of use
NZ561000A (en) 2005-02-28 2010-01-29 Japan Tobacco Inc Novel aminopyridine compound with Syk inhibitory activity
WO2006098394A1 (ja) 2005-03-14 2006-09-21 Japan Tobacco Inc. 脂質吸収抑制方法および脂質吸収抑制剤
US7704990B2 (en) 2005-08-25 2010-04-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors

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Publication number Publication date
EP1928850B1 (en) 2013-06-19
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