PT1272477E - Compostos de pirimidina. - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO "COMPOSTOS DE PIRIMIDINA" A invenção refere-se a derivados de pirimidina ou a sais farmaceuticamente aceitáveis destes, os quais possuem actividade inibidora do ciclo celular e são, por consequência, úteis pela sua actividade de antiproliferação celular (tal como anticancerigena) sendo desse modo úteis como medicamentos. A invenção também se refere a processos para o fabrico dos referidos derivados de pirimidina, a composições farmacêuticas que os contêm e à sua utilização no fabrico de medicamentos ou utilização na produção de um efeito antiproliferação celular num animal de sangue quente tal como o homem.

Uma familia de proteínas intracelulares chamadas de ciclinas desempenha uma função central no ciclo celular. A síntese e degradação de ciclinas são extremamente controladas, de modo a que o seu nível de expressão varie durante o ciclo celular. As ciclinas ligam-se a serina/treonina-cinases dependentes de ciclina (CDKs) e esta associação é essencial para a actividade da CDK (tais como CDKl, CDK2, CDK4 e/ou CDK6) dentro da célula. Apesar dos detalhes exactos de como cada um destes factores se combina para regular a actividade da CDK serem mal compreendidos, o equilíbrio entre os dois determina se a célula progride ou não através do ciclo celular. A convergência recente da investigação de oncogenes e de genes supressores de tumores identificou a regulação da entrada no ciclo celular como um ponto de controlo chave da mitogénese 1 em tumores. Além disso, as CDKs parecem surgir a jusante de um número de percursos de sinalização de oncogenes. A desregulação da actividade da CDK pela regulação positiva de ciclinas e/ou deleção de inibidores endógenos parece ser um eixo importante entre as vias de sinalização mitogénica e a proliferação de células tumorais.

Consequentemente reconheceu-se que um inibidor das cinases do ciclo celular, em particular os inibidores da CDK2, CDK4 e/ou CDK6 (que actuam na fase S, Gl-S e fase Gl-S, respectivamente) deveriam ser úteis como um inibidor selectivo da proliferação celular, tal como do crescimento de células cancerígenas em mamíferos. A presente invenção baseia-se na constatação de que determinados compostos de 2,4-pirimidina inibem, surpreendentemente, os efeitos das cinases do ciclo celular, apresentando selectividade para as CDK2, CDK4 e CDK6, e possuindo, desse modo, propriedades de antiproliferação celular. Espera-se que tais propriedades sejam úteis no tratamento de estados patológicos associados aos ciclos celulares e proliferações celulares aberrantes, tais como cancros (tumores sólidos e leucemias), distúrbios de fibroproliferação e diferenciação, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Karposi, hemangioma, nefropatias aguda e crónica, ateroma, aterosclerose, restenose arterial, doenças autoimunes, inflamação aguda e crónica, doenças ósseas e doenças oculares com proliferação de vasos retinianos.

De acordo com a invenção é proporcionado um derivado de pirimidina da fórmula (I): 2

em que:

Qi e Q2 são fenilo; e um de Qi e Q2 ou ambos Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) , N,N-di-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (Ia'):

σ») em que: Y é -NHS(0)2-, -S(0)2NH- ou -S (0) 2-; Z é Ra0-, RbRcN-, RdS-, ReRfNNRg-, cicloalquiloC3-8, fenilo ou um grupo heterocíclico; em que o referido fenilo, 3 cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rh; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de R1;

Ra, R\ Rc, Rd, Re, Rf e Rg são independentemente seleccionados de hidrogénio, alquiloCi-4, alceniloC2-4, fenilo, grupo heterocíclico e cicloalquiloC3-8; em que o referido alquiloCi- -4, alceniloC2- -4 e cicloalquiloC3-8 estão opcionalmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados de Rj; n é 0 ou 1; m é 1, 2 ou 3, além disso m pode ser 0 quando Z é cicloalquiloC3-8, fenilo ou um grupo heterocíclico; Q3 é um heterociclo ligado através de azoto; em que o referido heterociclo está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rk; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH-, este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rm G é -0-, -S- ou -NR2-; R2 é seleccionado de hidrogénio, alquiloCi-6, alceniloC3-6 e alciniloC3-6; em que o referido alquiloCi-6, alceniloC3-6 e alciniloC3-6 estão opcionalmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados de Rn; 4 R1 é seleccionado de hidrogénio, halo, hidroxilo, nitro, amino, N- (alquilCi-3) amino, N,N-di-(alquilCi-3) amino, ciano, trifluorometilo, triclorometilo, alquiloCi-3 [opcionalmente substituído com 1 ou 2 substituintes independentemente seleccionados de halo, ciano, amino, N- (alquilCi_3) amino, NfN-di-(alquilCi-3) amino, hidroxilo e trifluorometilo] , alceniloC3-5 [opcionalmente substituído com até três substituintes halo, ou com um substituinte trifluorometilo] , alciniloC3-5, alcoxiloCi_3, mercapto, alquilsulfaniloCi-3, carboxilo e (alcoxi C1-3) carbonilo;

Qi está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até quatro substituintes independentemente seleccionados de halo, mercapto, nitro, formilo, formamido, carboxilo, ciano, amino, ureído, carbamoílo, alquiloCi-4, alceniloC2-4, alciniloC2-4, alcanoílo C1-4, (alcoxi C1-4) carbonilo, grupo heterocíclico, (alquilCi-4) S (0) a em que a é 0 ou 1, N'-(alquilCi-4) ureído, N'rN'-di- (alquilCi-4) ureído, Ν'- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, Ν' ,N'~di- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di- (alquilCi-4) amino, N- (alquilCi-4) carbamoílo, NrN-di- (alquilCi-4) carbamoílo e (alcanoilCi-4) amino; e, também, independentemente, ou adicionalmente, aos substituintes acima, Qi pode estar opcionalmente substituído com um até dois substituintes independentemente seleccionados de arilo, cicloalquiloC3-8 e um grupo heterocíclico; em que o referido arilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico pode estar opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rp; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir 5 uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rq; e, também, independentemente, ou adicionalmente, aos substituintes acima, Qi pode estar opcionalmente substituído com um alcoxiloCi-4 ou com um substituinte hidroxilo; Q2 está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até quatro substituintes independentemente seleccionados de halo, hidroxilo, mercapto, nitro, formilo, formamido, carboxilo, ciano, amino, ureído, carbamoílo, alquiloCi-4, alceniloC2-4, alciniloC2-4, alcoxiloCi-4, alcanoílo C1-4, (alcoxi Ci_4) carbonilo, grupo heterocíclico, (alquilCi-4) S (0) a em que a é 0 ou 1, N'-(alquilCi-4) ureído, N',Ν'-di- (alquilCi-4) ureído, Ν'- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, Ν' ,Ν'-di- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di- (alquilCi-4) amino, N- (alquilCi-4) carbamoílo, N,N-di- (alquilCi-4) carbamoílo, alceniloxiloC2-4, alciniloxiloC2-4 e (alcanoilCi-4) amino; e também independentemente, ou adicionalmente, aos substituintes acima, Q2 pode estar opcionalmente substituído com um até dois substituintes independentemente seleccionados de arilo, cicloalquiloC3-8 ou um grupo heterocíclico; em que 0 referido arilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico pode estar opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rs; e em que se 0 referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rt; 6

Rj e Rn são independentemente seleccionados de hidroxilo, halo, amino, ciano, formilo, formamido, carboxilo, nitro, mercapto, carbamoilo, sulfamoilo, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di-(alquilCi-4) amino, alcanoilo C1-4, alcanoiloxiloCi-4, alcoxiloCi-4, (alcoxi C1-4) carbonilo, N- (alquilCi-4) carbamoilo, N,N-di- (alquilCi-4) carbamoilo, (alcanoilCi-4) amino, (alquilCi-4) S (0) a em que a é 0 até 2, (alquilCi-4) sulfonilamino, N- (alquilCi-4) sulfamoilo, N- (alquilCi-4) 2Sulfamoilo, N- (alquilCi-4) carbamoilo, N- (alquilCi-4) 2carbamoílo, fenilo, feniltio, fenoxilo, cicloalquiloC3-8 e um grupo heterociclico; em que 0 referido fenilo, feniltio, fenoxilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterociclico pode estar opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Ru; e em que se o referido grupo heterociclico possuir uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rv;

Rh, Rk, Rp, Rs e Ru são independentemente seleccionados de hidroxilo, halo, amino, ciano, formilo, formamido, carboxilo, nitro, mercapto, carbamoilo, sulfamoilo, alquiloCi-4 [opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleccionados de halo, ciano, amino, N- (alquilCi-4) amino, N,N- di-(alquilCi-4) amino ou hidroxilo], alceniloC2-4 [opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleccionados de halo], alciniloC2-4, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di-(alquilCi-4) amino, alcanoilo C1-4, alcanoíloxiloCi-4, alcoxiloCi-4 [opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleccionados de halo], (alcoxi C1-4) carbonilo, N- (alquilCi-4) carbamoilo, N,N-di- (alquilCi-4) carbamoilo, (alcanoilCi-4) amino, (alquilCi-4) S (0) a em que a é 0 até 2, (alquilCi-4) sulfonilamino, N- (alquilCi-4) sulfamoilo, 7 W-(alquilCi-4) 2Sulfamoílo, fenilo, cicloalquiloC3-8 e um grupo heterocíclico; e R1, Rq, Rt e Rv são independentemente seleccionados de alquiloCi-4, alcanoílo Ci_4, alquilsulfoniloCi-4, (alcoxi Ci_4) carbonilo, carbamoílo, N- (alquilCi-4) carbamoílo, NfN- (alquilCi-4) carbamoílo, benzilo, benziloxicarbonilo, benzoílo e fenilsulfonilo; na condição de que quando R1 representa nitro, G é -NH e Qi e Q2 são iguais, então Qi não é fenilo substituído na posição 4 com sulfamoílo ou um sulfamoílo substituído no N em que o substituinte no azoto seja seleccionado de pirimidina, 4-metil-pirimidina ou 4,6-dimetil-pirimidina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. "Arilo" é um anel hidrocarboneto mono ou bicíclico, total ou parcialmente insaturado que contém 4-12 átomos. De um modo preferido, "arilo" é um anel monocíclico contendo 5 ou 6 átomos ou um anel bicíclico contendo 9 ou 10 átomos. De um modo mais preferido "arilo" é fenilo, naftilo, tetralinilo ou indanilo. Particularmente "arilo" é fenilo, naftilo ou indanilo. Mais particularmente "arilo" é fenilo.

Um "grupo heterocíclico" é um anel mono ou bicíclico saturado, parcialmente saturado ou insaturado, contendo 4-12 átomos dos quais, pelo menos, um átomo é escolhido de azoto, enxofre ou oxigénio, o qual pode, a menos que especificado de outro modo, estar ligado através de carbono ou azoto, em que um grupo -CH2- pode estar opcionalmente substituído por um -C(O)-, e um átomo de enxofre endocíclico pode estar opcionalmente oxidado para formar S-óxido(s). De um modo preferido um "grupo heterocíclico" é pirrolidinilo, morfolino, 8 piperidilo, piridilo, piranilo, pirrolilo, isotiazolilo, indolilo, quinolilo, tienilo, furilo, 1,3-benzodioxolilo, tiadiazolilo, piperazinilo, isoxazolilo, tiazolilo, tiazolidinilo, pirrolidinilo, tiomorfolino, pirazolilo, pirrolinilo, homopiperazinilo, tetra-hidropiranilo, imidazolilo, pirimidilo, pirazinilo, piridazinilo, isoxazolilo, 4-piridona, 1-isoquinolona, 2-pirrolidona, 4-tiazolidona, imidazo[l,2-ajpiridina ou 3-aza-8-oxabiciclo[3,2,1]hexano. De um modo mais preferido um "grupo heterocíclico" é pirrolidinilo, morfolino, piperidilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, tiazolilo, piridilo, indolilo, tienilo, furilo, piperazinilo, tiomorfolino, pirazolilo, imidazolilo, 2-pirrolidona, imidazo[1,2-a]piridina ou 3-aza-8-oxabiciclo[3,2,1]hexano. Particularmente um "grupo heterocíclico" é morfolino, isoxazolilo, tiadiazolilo, tiazolilo ou piridilo.

Um "heterociclo ligado através de azoto" é um anel mono ou bicíclico saturado, parcialmente saturado ou totalmente insaturado, contendo 4-12 átomos, um átomo dos quais é um átomo de azoto (ligado para formar uma amida como apresentado) e os outros átomos são todos átomos de carbono ou são átomos de carbono e 1-3 heteroátomos escolhidos de azoto, enxofre ou oxigénio, em que um grupo -CH2- pode estar opcionalmente substituído por um -C (0)- e um átomo de enxofre endocíclico pode estar opcionalmente oxidado para formar os S-óxidos. Entender-se-á que ao formar esta ligação de azoto, o átomo de azoto não está quaternizado, i. e. obtém-se um composto neutro. De um modo preferido "heterociclo ligado através de azoto" é pirrol-l-ilo, pirrolin-l-ilo, pirrolidin-l-ilo, imidazol-l-ilo, imidazolin-1-ilo, imidazolidin-l-ilo, pirazol-l-ilo, pirazolin-l-ilo, pirazolidin-l-ilo, triazol-l-ilo, piperidin-l-ilo, piperazin-1-ilo, morfolino, tiomorfolino, indol-l-ilo, indolidin-l-ilo ou 9 benzimidazol-l-ilo. De um modo mais preferido "heterociclo ligado através de azoto" é piperidin-l-ilo.

Nesta descrição o termo "alquilo" inclui grupos alquilo de cadeia linear e ramificada mas as referências a grupos alquilo individuais, tal como "propilo", são especificas apenas para a versão de cadeia linear. Aplica-se uma convenção análoga a outros termos genéricos. "Halo" é fluoro, cloro, bromo e iodo.

Exemplos de alceniloC2-4 são vinilo e alilo; exemplos de alceniloC2-6 são alceniloC3-5, vinilo e alilo; exemplos de alceniloC3_6 são alciniloC3-s e alilo; um exemplo de alciniloC3_6 é propin-2-ilo; exemplos de alciniloC2-4 são etinilo e propin-2-ilo; exemplos de alciniloC2-6 são etinilo e propin-2-ilo; exemplos de alcanoílo C1-4 são acetilo e propionilo; exemplos de (alcoxi C1-4) carbonilo são (alcoxi C1-3) carbonilo, metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, propoxicarbonilo e terc-butoxicarbonilo; exemplos de alquileno C1-4 são metileno, etileno e propileno; exemplos de alquiloCi-4 são alquiloCi-3, metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo e terc-butilo; exemplos de alquiloCi-6 são metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo e 3-metilbutilo; exemplos de alcoxiloCi-4 são alcoxiloCi-3, metoxilo, etoxilo, propoxilo, isopropoxilo e butoxilo; um exemplo de alceniloxiloC2-4 é aliloxilo; um exemplo de alciniloxiloC2-4 é propiniloxilo; exemplos de (alquilCi-4) S (O) a em que a é 0 ou 1 são alquilsulfaniloCi-3, metiltio, etiltio, propiltio, metilsulfinilo, etilsulfinilo e propilsulfinilo; exemplos de Ci-4alquilS (0) a em que a é 0 até 2 são metiltio, etiltio, propiltio, metilsulfinilo, etilsulfinilo, propilsulfinilo, mesilo, etilsulfonilo e propilsulfonilo; exemplos de alquilsulfoniloCi-4 são mesilo e etilsulfonilo; 10 exemplos de N-(alquilCi-4)carbamoílo são N-metilcarbamoílo, W-etilcarbamoílo e W-propilcarbamoílo; exemplos de N,N-di-(alquilCi-4)-carbamoílo são Ν,Ν-dimetilcarbamoílo, W-etil-W-metilcarbamoílo e N,N-dietilcarbamoílo; exemplos de N- (alquilCi-4) amino são N- (alquilCi-3) amino, metilamino, etilamino e propilamino; exemplos de ίί,Ν-di- (alquilCi-4) amino são N,N-di-(alquilCi-3) amino, dimetilamino, N-etil-N-metilamino, dietilamino, W-metil-W-propilamino e dipropilamino; exemplos de (alcanoilCi-4)amino são acetamido, propionamido e butiramido; exemplos de cicloalquiloC3_8 são ciclopropilo, ciclopentilo e ciclo-hexilo; exemplos de alcanoílo C1-4 são acetilo e propionilo; exemplos de alcanoíloxiloCi-4 são acetiloxilo e propioniloxilo; exemplos de Ν'- (alquilCi-4)ureído são i\J-metilureído e N'-eti lureído; exemplos de N',N'-di-(alquilCi-4) ureído são N',N'~dimetilureído, N',N'~ diisopropilureído e N'-metil-N' -propilureído; exemplos de Ν'- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído são W'-metil-W-etilureído e ^'-metil-iV-metilureído; exemplos de N',N'-di- (Ci-4acil) -N-(alquilCi-4)ureído são Ν',Ν'-dimetil-N-etilureído e Ν'-metil-N'-propil-N-butilureído; exemplos de N- (alquilCi-4) sulfamoílo são W-metilsulf amoí lo e Z\7-isopropilsulfamoílo; exemplos de N,N- di-(alquilCi-4) sulfamoílo são N-metil-W-etilsulfamoílo e Ν,Ν-dipropilsulfamoílo; e exemplos de (alquilCi-4)sulfonilamino são mesilamino, etilsulfonilamino e propilsulfonilamino.

Um sal farmaceuticamente aceitável adequado de um derivado de pirimidina da invenção é, por exemplo, um sal de adição de ácido de um derivado de pirimidina da invenção que seja suficientemente básico, por exemplo, um sal de adição de ácido com, por exemplo, um ácido orgânico ou inorgânico, por exemplo, ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, trifluoroacético, cítrico ou maleico. Além disso, um sal 11 farmaceuticamente aceitável adequado de um derivado de pirimidina da invenção que seja suficientemente ácido é um sal de metal alcalino, por exemplo, um sal de sódio ou potássio, um sal de metal alcalino terroso, por exemplo, um sal de cálcio ou magnésio, um sal de amónio ou um sal com uma base orgânica que proporcione um catião fisiologicamente aceitável, por exemplo, um sal com metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados na forma de um pró-fármaco, o qual é degradado no organismo humano ou animal para dar um composto da fórmula (I) . Exemplos de pró-fármacos incluem ésteres hidrolisáveis in vivo de um composto da fórmula (I).

Um éster hidrolisável in vivo de um composto da fórmula (I) contendo um grupo carboxilo ou hidroxilo é, por exemplo, um éster farmaceuticamente aceitável, o qual é hidrolisado no organismo humano ou animal para produzir o ácido ou álcool parental. Os ésteres farmaceuticamente aceitáveis adequados para carboxilo incluem os ésteres de (alcoxi Ci-6)metilo por exemplo metoximetilo, ésteres de (alcanoiloxi Ci-6)metilo por exemplo pivaloiloximetilo, ésteres de ftalidilo, ésteres de (cicloalcoxi C3-8) carboniloxialquiloCi_6 por exemplo 1-ciclo-hexilcarboniloxietilo; ésteres de 1,3-dioxolen-2-onilmetilo por exemplo 5-metil-l,3-dioxolen-2-onilmetilo; e ésteres de (alcoxicarboniloxi Ci-6)etilo por exemplo 1-metoxicarboniloxietilo e pode ser preparado em qualquer grupo carboxilo nos compostos desta invenção.

Um éster hidrolisável in vivo de um composto da fórmula (I) contendo um grupo hidroxilo inclui ésteres inorgânicos tais como 12 ésteres de fosfato e éteres de α-aciloxialquilo e compostos relacionados, os quais, em resultado da hidrólise in vivo do éster, degradam-se para dar o grupo hidroxilo parental. Exemplos de éteres de α-aciloxialquilo incluem acetoximetoxilo e 2,2-dimetilpropioniloxi-metoxilo. Uma selecção de grupos formadores de ésteres hidrolisáveis in vivo para hidroxilo incluem alcanoilo, benzoilo, fenilacetilo e benzoilo e fenilacetilo substituídos, alcoxicarbonilo (para dar ésteres de carbonato de alquilo), dialquilcarbamoílo e N- (dialquilaminoetil)-N-alquilcarbamoílo (para dar carbamatos), dialquilaminoacetilo e carboxiacetilo. Exemplos de substituintes no benzoilo incluem morfolino e piperazino ligados a partir de um átomo de azoto endocíclico através de um grupo metileno à posição 3 ou 4 do anel de benzoilo.

Alguns compostos da fórmula (I) podem ter centros quirais e/ou centros isoméricos geométricos (isómeros E e Z), e entender-se-á que a invenção abrange todos esses isómeros ópticos, diastereoisómeros e isómeros geométricos que possuam actividade inibidora de CDK. A invenção refere-se a qualquer uma e todas as formas tautoméricas dos compostos da fórmula (I) que possuam actividade inibidora de CDK.

Entender-se-á também que determinados compostos da fórmula (I) podem existir em formas solvatadas e não solvatadas, tais como, por exemplo, formas hidratadas. Entender-se-á que a invenção abrange todas essas formas solvatadas que possuam actividade inibidora de CDK. 13

Os compostos particularmente preferidos da invenção compreendem um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou sal farmaceuticamente aceitável deste, em que R1, Qi, Q2 e G têm qualquer um dos significados anteriormente definidos ou qualquer um dos valores seguintes. Estes valores podem ser utilizados, quando apropriado, com qualquer das definições, reivindicações ou formas de realização anteriormente ou subsequentemente definidas.

De um modo preferido um de Qi e Q2 ou ambos Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo, N,N-di-(alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 ou um substituinte de fórmula (Ia) em que: Y é -S (0)2NH- ou -S (0) 2-; Z é Ra0-, RbRcN- ou um grupo heterocíclico; em que o grupo heterocíclico está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rh;

Ra, Rb e Rc são independentemente seleccionados de hidrogénio, alquiloCi-4 e fenilo; n é 0; m é 2 ou, além disso, m pode ser 0 quando Z é um grupo heterocíclico.

De um modo mais preferido um de Qi e Q2 ou ambos de Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo 14 seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo, N,N-di-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 ou um substituinte de fórmula (Ia) em que: Y é -S (0) 2NH- ou -S (0) 2-; Z é Ra0-, RbRcN-, tiazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, piridilo ou morfolino; em que tiazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo, piridilo ou morfolino está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais metilo;

Ra, Rb e Rc são independentemente seleccionados de hidrogénio, alquiloCi-4 e fenilo; n é 0; m é 2 ou, além disso, m pode ser 0 quando Z é tiazolilo, isoxazolilo, tiadiazolilo ou piridilo.

Particularmente um de Qi e Q2 ou ambos de Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, mesilo, N-(2-dietilaminoetil)sulfamoílo, 2-(N-metil-IV-fenilamino)etilsulfonilo, 2-morfolinoetilsulfonilo, N- (5-metiltiadiazol-2-il)sulfamoílo, N,N-di-(2- hidroxietil)sulfamoílo, N-(tiazol-2-il)sulfamoílo, N-(3,4-dimetilisoxazol-5-il)sulfamoílo, N-(pirid-2-il)sulfamoílo e N-metilsulfamoílo.

Mais particularmente um de Qi e Q2 ou ambos de Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo e N-metilsulfamoílo. 15

De um modo preferido é Qi que está substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), NrN-di-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) , alquilsulfoniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (Ia'); e Q2 está opcional e adicionalmente substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo.

De um modo mais preferido é Qi que está substituído na posição para ou meta relativamente ao -NH- com sulfamoílo, N-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), N,N- di-(alquilCi_4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (Ia'); e Q2 está opcional e adicionalmente substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo para relativamente a G.

Particularmente é Qi que está substituído na posição para relativamente ao -NH- com sulfamoílo, N-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), N,N- di-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (Ia'); e Q2 está opcional e adicionalmente substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo para relativamente a G.

Num aspecto da invenção, de um modo preferido, G é -0-.

Noutro aspecto da invenção, de um modo preferido, G é -S-. 16

Num outro aspecto da invenção, de um modo preferido, G é -NR2-.

Num aspecto da invenção, de um modo preferido, G é -0- ou -NR2-.

Num aspecto da invenção quando G é -NR2-, de um modo preferido R2 é hidrogénio.

Noutro aspecto da invenção quando G é -NR2-, de um modo preferido R2 não é hidrogénio

De um modo preferido G é -0- ou -NR2-, em que R2 é seleccionado de hidrogénio, alquiloCi-6 e alceniloC3-6; em que os referido alquiloCi-e e alceniloC3-6 estão opcionalmente substituídos com um ou mais halo, ciano ou fenilo.

De um modo mais preferido G é -0- ou -NR2- em que R2 é seleccionado de hidrogénio, alquiloCi-6 e alceniloC3-6; em que os referidos alquiloCi-6 e alceniloC3-6 estão opcionalmente substituídos com um ou mais halo ou fenilo.

Particularmente G é -0-, -NH-, -(4,4,4-trifluorobutil)N-, -(3-bromo-2-propenil)N- ou -(3-fenil-2-propenil)N-.

Mais particularmente G é -0- ou -NH-.

De um modo preferido R1 é hidrogénio ou halo.

De um modo mais preferido R1 é hidrogénio, cloro ou bromo. 17

De um modo preferido Qi está opcionalmente substituído com um substituinte alcoxiloCi-4 e está substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) , N,N-di-(alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), alquilsulf oniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (la').

De um modo mais preferido Qi está substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N-(alquilCi-4)sulfamoílo ou N,N-di-(alquilCi-4) sulfamoílo.

De um modo preferido Q2 está não substituído ou substituído com um ou dois grupos seleccionados de halo, ciano, alquiloCi-4, alcoxiloCi-4 e um grupo heterocíclico.

De um modo mais preferido Q2 está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até dois substituintes independentemente seleccionados de halo, ciano, metilo, metoxilo e morfolino.

Particularmente Q2 está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até dois substituintes independentemente seleccionados de ciano e metoxilo.

De um modo preferido Q2 é fenilo, 2-morfolinofenilo, 2-cianofenilo, 4-bromofenilo, 2-fluoro-5-metilfenilo, 4-metoxifenilo ou 4-sulfamoilfenilo.

De um modo mais preferido Q2 é fenilo, 2-cianofenilo, 4-metoxifenilo ou 4-sulfamoilfenilo. 18

Por conseguinte, num aspecto preferido da invenção é proporcionado um derivado de pirimidina da fórmula (I) como representado acima, em que:

Qi e Q2 são fenilo; e um de Qi e Q2 ou ambos Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo, N,N-di-(alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 ou um substituinte de fórmula (Ia) em que: Y é -S(0)2NH- ou -S (0) 2-; Z é Ra0-, RbRcN- ou um grupo heterocíclico; em que o grupo heterocíclico está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rh;

Ra, Rb e Rc são independentemente seleccionados de hidrogénio, alquiloCi-4 e fenilo; n é 0; m é 2 ou, além disso, m pode ser 0 quando Z é um grupo heterocíclico; G é -0- ou -NR2- em que R2 é seleccionado de hidrogénio, alquiloCi-6 e alceniloC3-6; em que os referidos alquiloCi-6 e alceniloC3-6 estão opcionalmente substituídos com um ou mais halo ou fenilo; 19 R1 é hidrogénio ou halo; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Por conseguinte, num aspecto mais preferido da invenção é proporcionado um derivado de pirimidina da fórmula (I) como representado acima, em que:

Qi é fenilo opcionalmente substituído com um substituinte alcoxiloCi-4 e Q2 é fenilo opcionalmente substituído com um ou mais halo, ciano, metilo, metoxilo e morfolino; e Qi está substituído na posição para relativamente ao -NH- com um grupo seleccionado de sulfamoílo, mesilo, N-(2-dietilaminoetil)sulfamoílo, 2-(N-metil-N- fenilamino)etilsulfonilo, 2-morfolinoetilsulfonilo, N- (5-metiltiadiazol-2-il)sulfamoílo, N,N-di-(2- hidroxietil)sulfamoílo, N-(tiazol-2-il)sulfamoílo, N-(3,4-dimetilisoxazol-5-il)sulfamoílo, N-(pirid-2- il)sulfamoílo e N-metilsulfamoílo; e Q2 está opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de sulfamoílo; G é -0-, -NH-, - (4,4,4-trifluorobutil)N-, -(3-bromo-2- propenil)N- ou - (3-fenil-2-propenil)N-; R1 é hidrogénio, cloro ou bromo ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Num aspecto da invenção os compostos preferidos da invenção são os dos Exemplos 1, 20, 21, 29 ou 31 ou um sal farmaceuticamente aceitável destes. 20

Num outro aspecto da invenção os compostos preferidos da invenção incluem qualquer um dos Exemplos ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.

Um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, pode ser preparado por qualquer processo conhecido como sendo aplicável à preparação de compostos quimicamente afins. Tais processos, quando utilizados para preparar um derivado de pirimidina da fórmula (I) , ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, são proporcionados como uma outra particularidade da invenção e são ilustrados pelos exemplos representativos seguintes nos quais, a menos que indicado de outro modo R1, Qi, Q2 e G têm qualquer dos significados anteriormente definidos para um derivado de pirimidina da fórmula (I) e a menos que esteja representado outro substituinte no anel Qi ou Q2, o anel pode ser portador de qualquer dos substituintes anteriormente descritos (opcionalmente protegidos, consoante necessário). Nos casos em que é representado um substituinte no anel Qi, este inclui (a menos que indicado de outro modo) as possibilidades do substituinte estar no anel Q2 para além, ou em vez, do substituinte estar no anel Qi Os materiais de partida necessários podem ser obtidos por processos correntes de química orgânica (ver, por exemplo, Advanced Organic Chemistry (Wiley-Interscience) , Jerry March - também útil para orientação geral sobre as condições reaccionais e reagentes). A preparação de tais materiais de partida é descrita nos processos e Exemplos não limitativos apensos. Alternativamente, os materiais de partida necessários podem ser obtidos por processos análogos aos ilustrados e os quais estão dentro do conhecimento corrente de um químico orgânico. 21

Assim, como uma outra particularidade da invenção são proporcionados os processos seguintes, os quais compreendem: a) para compostos de fórmula (I) em que G é -NR2-; fazer reagir uma pirimidina de fórmula (II):

em que L é um grupo substituível como definido a seguir, com um composto de fórmula (III): H—G—( Q2 (III) em que G é -NR2-; b) reacção de uma pirimidina de fórmula (IV):

L

22 em que L é um grupo substituível como definido a seguir, com um composto de fórmula (V) :

nh2 (V) c) para compostos de fórmula (I) em que a cadeia lateral é de fórmula (Ia) e Y é -S(0)2NH-; por reacção de um composto de fórmula (VI) :

em que L é um grupo substituível; com uma amina de fórmula (VII): Z-(CH2)m-NH2 (VII) d) para compostos de fórmula (I) em que a cadeia lateral é de fórmula (Ia) e Y é -NHS(0)2- por reacção de uma amina de fórmula (VIII):

q2 23 com um composto de fórmula (IX): Z-(CH2)m-S02L (IX) em que L é um grupo substituível; e) para compostos de fórmula (I) em que a cadeia lateral é de fórmula (Ia'); por reacção de um composto de fórmula (VI) com uma amina de fórmula (X):

(X) e subsequentemente se necessário: i) converter um composto da fórmula (I) noutro composto da fórmula (I); ii) remover quaisquer grupos de protecção; iii) formar um sal farmaceuticamente aceitável. 0 leitor especializado aperceber-se-á também que o processo c) também pode ser utilizado para preparar compostos de fórmula (I), em que um de Qi e Q2 ou ambos de Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4)sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou N,N-di-(alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo). 24 L é um grupo substituível, os valores adequados para L são por exemplo, um grupo halo, sulfoniloxilo ou enxofre, por exemplo, um cloro, bromo, metanossulfoniloxilo, tolueno-4-sulfoniloxilo, mesilo, metiltio e metilsulfinilo.

As condições reaccionais específicas para as reacções acima são as seguintes:

Processo a)

As pirimidinas de fórmula (II) e compostos de fórmula (III) podem ser feitos reagir em conjunto: i) opcionalmente na presença de um ácido adequado, por exemplo um ácido inorgânico tal como ácido clorídrico ou ácido sulfúrico, ou um ácido orgânico tal como ácido acético ou ácido fórmico. A reacção é de um modo preferido realizada num solvente ou diluente inerte adequado, por exemplo diclorometano (DCM), acetonitrilo, butanol, tetrametilenossulfona, tetra-hidrofurano, 1,2-dimetoxietano, N,N-dimetilformamida, NfN-dimetilacetamida ou W-metilpirrolidin-2-ona, e a uma temperatura na gama, por exemplo, 0 0 até 150 °C, convenientemente à ou próximo da temperatura de refluxo; ou ii) sob condições correntes de Buchwald (por exemplo ver J. Am. Chem. Soc., 118, 7215; J. Am. Chem. Soc., 119, 8451; J. Org. Chem., 62, 1568 e 6066), por exemplo, na presença de acetato de paládio, num solvente adequado, por exemplo, um solvente aromático tal como tolueno, benzeno ou xileno, com uma base adequada, por exemplo, uma base inorgânica tal 25 como carbonato de césio ou uma base orgânica tal como t-butóxido de potássio, na presença de um ligando adequado tal como 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo e a uma temperatura na gama de 25 até 80 °C.

As pirimidinas da fórmula (II) podem ser preparadas de acordo com o esquema seguinte:

em que L é um grupo substituível como se definiu acima.

Os compostos de fórmula (UB) e (III) estão comercialmente disponíveis ou são preparados por processos conhecidos na técnica. 26

Processo b)

As pirimidinas de fórmula (IV) e anilinas de fórmula (V) podem ser feitas reagir uma com a outra, i) na presença de um solvente adequado por exemplo uma cetona tal como acetona ou um álcool tal como etanol ou butanol ou um hidrocarboneto aromático tal como tolueno ou N-metilpirrolidina, opcionalmente na presença de um ácido adequado, tais como os definidos acima (ou um ácido de Lewis adequado) e a uma temperatura na gama de 0 °C até refluxo, de um modo preferido refluxo; ou ii) sob condições correntes de Buchwald como se descreveu acima.

As pirimidinas de fórmula (IV) são preparadas de acordo com o esquema seguinte:

L

(III) —--» <iv) 2) condições de Buchwald (IVA) em que L é um grupo substituível como se definiu acima.

As anilinas de fórmula (V) estão comercialmente disponíveis ou são preparadas por processos conhecidos na técnica.

As pirimidinas da fórmula (IVA) estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparadas, por exemplo, fazendo reagir um composto de fórmula (IVA) no qual L é -OH (i. e. um uracilo), com POCI3 para dar um composto de fórmula (IVA) no qual L é -Cl. 27

Processo c)

Os compostos de fórmula (VI) e as aminas de fórmula (VII) podem ser condensados um com o outro na presença de uma base, por exemplo, uma amina terciária tal como trietilamina e na presença de um catalisador, por exemplo, dimetilaminopiridina. Os solventes adequados para a reacção incluem nitritos, tais como acetonitrilo e amidas, tal como dimetilformamida. A reacção é convenientemente realizada a uma temperatura na gama desde 0 até 120 °C.

Os compostos de fórmula (VI) (por exemplo, quando L é cloro) podem ser preparados de acordo com o esquema seguinte: (IV) + S-(CH,)b- Pg l)'Pr,EtN ,BuOH, Δ ; ou

condições de Buclmald S-(CH2)n- pg

H (Via) (VIb)

em que Pg é um agente de protecção de enxofre adequado, tais como os que se descrevem a seguir.

As aminas de fórmula (VII) e aminas de fórmula (Via) estão comercialmente disponíveis ou são preparadas por processos conhecidos na técnica. 28

Processo d)

Os compostos de fórmula (IX) e as aminas de fórmula (VIII) podem ser condensadas um com o outro nas condições descritas no processo c) acima.

As aminas de fórmula (VIII) podem ser preparadas de acordo com o esquema seguinte:

'NHP (VlIIa)

em que Pg é um grupo de protecção de amina adequado, tais como os que se descrevem abaixo.

Os compostos de fórmula (IX) estão comercialmente disponíveis ou são preparados por processos conhecidos na técnica.

Processo e)

Os compostos de fórmula (VI) e as aminas de fórmula (X) podem ser condensados um com o outro nas condições descritas no processo c) acima. 29

As aminas de fórmula (X) estão comercialmente disponíveis ou são preparadas por processos conhecidos na técnica.

Exemplos de conversões de um composto de fórmula (I) noutro composto de fórmula (I) são: i) nos casos em que G é -NR2-; conversão de R2 como hidrogénio noutro R2, por exemplo:

em que L é um grupo substituível; ii) nos casos em que G é -NR2-; conversão de R2 como uma cadeia lateral substituída noutra cadeia lateral substituída, por exemplo:

(IE)

OMs (ID) 30 em que Ms é metanossulfonilo, e Nu é um nucleófilo que introduz um substituinte que é um substituinte opcional para R2 como definido na fórmula (I) (NB a unidade hidroxilo não tem de estar, necessariamente, no carbono terminal como representada acima); iii) conversão de uma cadeia lateral de fórmula (Ia) noutra cadeia lateral de fórmula (la) iv) conversão de um valor de R1 noutro valor de R1, utilizando técnicas correntes, por exemplo, conversão de R1 como hidroxilo em alcoxiloCi-4. 0 leitor especializado aperceber-se-á que a formação da cadeia lateral (Ia) ou (Ia') descrita nos Processos c), d) e e) acima e da cadeia lateral R2 em i) e ii) acima também pode ser efectuada em intermediários.

Um processo preferido da invenção é o Processo b).

Entender-se-á que alguns dos vários substituintes de anel nos compostos da presente invenção podem ser introduzidos por reacções de substituição aromática correntes ou produzidos por modificações convencionais de grupo funcional antes ou imediatamente após os processos mencionados acima, e como tal estão incluídos no aspecto de processo da invenção. Estas reacções e modificações incluem, por exemplo, introdução de um substituinte por meio de uma reacção de substituição aromática, redução de substituintes, alquilação de substituintes e oxidação de substituintes. Os reagentes e condições reaccionais para tais processos são bem conhecidos na técnica de química. Exemplos particulares de reacções de substituição aromática incluem a 31 introdução de um grupo nitro utilizando ácido nítrico condensado, a introdução de um grupo acilo utilizando, por exemplo, um halogeneto de acilo e ácidos de Lewis (tal como tetracloreto de alumínio) sob condições de Friedel Crafts; a introdução de um grupo alquilo utilizando um halogeneto de alquilo e ácido de Lewis (tal como tricloreto de alumínio) sob condições de Friedel Crafts; e a introdução de um grupo halo. Exemplos particulares de modificações incluem a redução de um grupo nitro a um grupo amino, por exemplo, por hidrogenação catalítica com um catalisador de níquel, ou tratamento com ferro na presença de ácido clorídrico com aquecimento; oxidação de alquiltio a alquilsulfinilo ou alquilsulfonilo.

Entender-se-á também que em algumas das reacções aqui mencionadas pode ser necessário/desejável proteger quaisquer grupos sensíveis nos compostos. Os casos em que a protecção é necessária ou desejada e os métodos adequados para protecção são conhecidos dos especialistas na técnica. Os grupos de protecção convencionais podem ser utilizados de acordo com a prática corrente (para ilustração ver T. W. Green, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 1991) . Deste modo, se os reagentes incluírem grupos, tais como amino, carboxilo ou hidroxilo pode ser desejável proteger o grupo em algumas das reacções aqui mencionadas.

Um grupo de protecção adequado para um grupo amino ou alquilamino é, por exemplo, um grupo acilo, por exemplo um grupo alcanoílo tal como acetilo, um grupo alcoxicarbonilo, por exemplo um grupo metoxicarbonilo, etoxicarbonilo ou t-butoxicarbonilo, um grupo arilmetoxicarbonilo, por exemplo, benziloxicarbonilo, ou um grupo aroílo, por exemplo, benzoílo. As condições de desprotecção para os grupos de protecção 32 anteriores variam necessariamente com a escolha do grupo de protecção. Assim, por exemplo, um grupo acilo, tais como um grupo alcanoilo ou alcoxicarbonilo, ou um grupo aroilo pode ser eliminado, por exemplo, por hidrólise com uma base adequada tal como um hidróxido de metal alcalino, por exemplo, hidróxido de litio ou sódio. Alternativamente, um grupo acilo tal como um grupo t-butoxicarbonilo pode ser eliminado, por exemplo, por tratamento com um ácido adequado como ácido clorídrico, sulfúrico ou fosfórico ou trifluoroacético e um grupo arilmetoxicarbonilo tal como um grupo benziloxicarbonilo pode ser eliminado, por exemplo, por hidrogenação sobre um catalisador tal como paládio sobre carvão ou por tratamento com um ácido de Lewis, por exemplo tris(trifluoroacetato) de boro. Um grupo de protecção alternativo adequado para um grupo do tipo amina primária é, por exemplo, um grupo ftaloílo o qual pode ser eliminado por tratamento com uma alquilamina, por exemplo, dimetilaminopropilamina, ou com hidrazina.

Um grupo de protecção adequado para um grupo hidroxilo é, por exemplo, um grupo acilo, por exemplo, um grupo alcanoilo, tal como acetilo, um grupo aroilo, por exemplo benzoílo, ou um grupo arilmetilo, por exemplo benzilo. As condições de desprotecção para os grupos de protecção anteriores variarão necessariamente com a escolha do grupo de protecção. Assim, por exemplo, um grupo acilo tal como um grupo alcanoilo ou um grupo aroilo pode ser eliminado, por exemplo, por hidrólise com uma base adequada tal como um hidróxido de metal alcalino, por exemplo, hidróxido de litio ou sódio. Alternativamente, um grupo arilmetilo tal como um grupo benzilo pode ser eliminado, por exemplo, por hidrogenação sobre um catalisador tal como paládio sobre carvão. 33

Um grupo de protecção adequado para um grupo tio é, por exemplo, um grupo acilo, por exemplo, um grupo alcanoílo tal como acetilo, um grupo aroílo, por exemplo, benzoílo, ou um grupo arilmetilo, por exemplo, benzilo. As condições de desprotecção para os grupos de protecção anteriores variarão necessariamente com a escolha do grupo de protecção. Assim, por exemplo, um grupo acilo tal como um grupo alcanoilo ou um grupo aroilo pode ser eliminado, por exemplo, por hidrólise com uma base adequada tal como um hidróxido de metal alcalino, por exemplo, hidróxido de litio ou sódio. Alternativamente um grupo acetilo ou benzoilo pode ser eliminado, por exemplo, por clivagem com sódio e amónia.

Um grupo de protecção adequado para um grupo carboxilo é, por exemplo, um grupo de esterificação, por exemplo, um grupo metilo ou etilo, o qual pode ser eliminado, por exemplo, por hidrólise com uma base tal como hidróxido de sódio, ou por exemplo, um grupo t-butilo o qual pode ser eliminado, por exemplo, por tratamento com um ácido, por exemplo, um ácido orgânico tal como ácido trifluoroacético, ou por exemplo, um grupo benzilo o qual pode ser eliminado, por exemplo, por hidrogenação sobre um catalisador tal como paládio sobre carvão.

Os grupos de protecção podem ser eliminados em qualquer etapa conveniente da síntese utilizando técnicas convencionais bem conhecidas na técnica química.

Muitos dos intermediários aqui definidos são novos, por exemplo, os da fórmula II e IV e estes são proporcionados como uma outra particularidade da invenção. 34

ENSAIOS

Como mencionado acima o derivado de pirimidina definido na presente invenção possui actividade antiproliferação celular tal como actividade antineoplásica, a qual se julga que resulte da actividade inibidora da CDK do composto. Estas propriedades podem ser avaliadas, por exemplo, utilizando o processo descrito abaixo:-

Ensaio de Inibição de CDK4

Utilizou-se as abreviaturas seguintes HEPES é ácido N-(2-Hidroxietil)piperazina-N'-(2- etanossulfónico) DTT é Ditiotreitol PMSF é Fluoreto de fenilmetilsulfonilo

Os compostos foram testados num ensaio cinase in vitro no formato de 96 poços utilizando um Ensaio de Cintilação de Proximidade (SPA - obtido de Amersham) para medir a incorporação de Trifosfato de [γ-33-Ρ]-Adenosina num substrato de ensaio (GST-Retinoblastoma) . Em cada poço colocou-se o composto a ser testado (diluido em DMSO e água para corrigir as concentrações) e nos poços de controlo p 16 como um controlo inibidor ou DMSO como um controlo positivo.

Adicionou-se aproximadamente 0,5 μ]6 de enzima CDK4/Ciclina Dl parcialmente purificada (quantidade dependente da actividade da enzima) diluída em 25 μ]6 de tampão de incubação a cada poço e 35 em seguida 20 \iL da mistura de GST-Rb/ATP/ATP33 (contendo 0,5 μς de GST-Rb e ATP 0,2 μΜ e 0,14 μΟί de Trifosfato de [γ-33-Ρ]-Adenosina), e agitou-se suavemente a mistura resultante, incubou-se então à temperatura ambiente durante 60 minutos. A cada poço adicionou-se em seguida 150 μ]1 de solução de paragem contendo (0,8 mg/poço de pérolas SPA de Proteína A-PVT (Amersham)), 20 pM/poço de Anti-Glutationa Transferase, IgG de coelho (obtida de Molecular Probes), EDTA 61 mM e HEPES 50 mM pH 7,5 contendo 0,05% de azida de sódio.

Selou-se as placas com selantes de placas Topseal-S, deixou-se durante duas horas, centrifugou-se em seguida a 2500 rpm, 1124xg., durante 5 minutos. Leu-se as placas num Topcount durante 30 segundos por poço. O tampão de incubação utilizado para diluir as misturas de enzima e substrato continham HEPES 50 mM pH 7,5, MnCl2 10 mM, DTT 1 mM, vanadato de sódio 100μΜ, NaF 100μΜ, Glicerofosfato de Sódio 10 mM, BSA (1 mg/mL final).

Como um controlo pode utilizar-se outro inibidor conhecido de CDK4 em vez de p 16.

Substrato de Teste

Neste ensaio utilizou-se apenas parte do retinoblastoma (Science 1987 Marl3;235(4794):1394-1399; Lee W.H., Bookstein R., Hong F., Young L.J., Shew J.Y., Lee E.Y.) fundido com uma etiqueta GST. Realizou-se PCR dos aminoácidos 379-928 do 36 retinoblastoma (obtidos do plasmídeo do retinoblastoma ATCC pLRbRNL) e clonou-se a sequência no vector de fusão pGEX 2T (Smith D.B. e Johnson, K.S. Gene 67, 31 (1988); o qual continha um promotor tac para expressão induzida, gene lac Iq interno para ser utilizado em qualquer hospedeiro de tipo E. Coli e uma região de codificação para clivagem de trombina - obtida de Pharmacia Biotech) a qual foi utilizada pata amplificar os aminoácidos 792-928. Esta sequência foi novamente clonada em pGEX 2T. A sequência 792-928 de retinoblastoma assim obtida foi expressada em E. Coli (células BL21 (DE3) pLysS) utilizando técnicas correntes de expressão induzida, e purificada como se segue.

Ressuspendeu-se a pasta de E. coli em 10 mL/g de tampão NETN (Tris 50 mM pH 7,5, NaCl 120 mM, EDTA 1 mM, 0,5%v/v de NP-40, PMSF 1 mM, 1 ug/mL de leupeptina, 1 ug/mL de aprotinina e 1 ug/mL pepstatina) e submeteu-se a ultra-sons durante 2 x 45 segundos por 100 mL de homogenato. Após centrifugação,

transferiu-se o sobrenadante para uma coluna de 10 mL de glutationa Sepharose (Pharmacia Biotech, Herts, UK), e lavou-se com tampão NETN. Depois de lavar com tampão de cinase (HEPES 50 mM pH 7,5, MgCl2 10 mM, DTT 1 mM, PMSF 1 mM, 1 ug/mL de leupeptina, 1 ug/mL de aprotinina e 1 ug/mL de pepstatina) eluiu-se a proteína com glutationa reduzida 50 mM em tampão de cinase. Reuniu-se as fracções contendo GST-Rb(792-927) e submeteu-se a diálise dum dia para o outro contra tampão de cinase. 0 produto final foi analisado por PAGE (gel de poliacrilamida) com Dodecassulfato de Sódio (SDS) utilizando geles com 8-16% de Tris-Glicina (Novex, San Diego, USA). 37 CDK4 e Ciclina Dl

As CDK4 e Ciclina Dl foram clonadas a partir de ARN da linha de células MCF-7 (obtida do número ATCC:HTB22, linha de adenocarcinoma da mama) como se segue. Preparou-se o ARN de células MCF-7, transcreveu-se então inversamente utilizando iniciadores oligo dT. Utilizou-se PCR para amplificar a sequência de codificação completa de cada gene [aminoácidos 1-303 de CDK4; Ref. Cell 16 Out, 1992; 71(2): 323-334;

Matsushime H., Ewen M.E., Stron D.K., Kato J.Y., Hanks S.K., Roussel M.F., Sherr C.J. e aminoácidos 1-296 da Ciclina Dl; Ref. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1991; 56:93-97; Arnold A., Motokura T., Bloom T., Kronenburg, Ruderman J., Juppner H., Kim H.G. ] .

Após a sequenciação, clonou-se os produtos de PCR utilizando técnicas correntes no vector de expressão de insecto pVL1393 (obtido de Invitrogen 1995, número de catálogo: V1392-20) . Os produtos de PCR foram depois duplamente expressos [utilizando uma técnica de co-infecção corrente em vírus Baculogold] no sistema de células SF21 de insectos (células de Spodoptera Frugiperda provenientes de tecido do ovário da "Fali Army Worm" - Comercialmente disponível). 0 Exemplo seguinte proporciona pormenores sobre a produção de Ciclina D1/CDK4 em células SF21 (em TC100 + 10% de FBS(TCS) + 0,2% de Pluronic) possuindo infecção dupla MOI 3 para cada vírus de Ciclina Dl & CDK4. 38

Exemplo de produção de Ciclina D1/CDK4

Utilizou-se células SF21 multiplicadas em cultura em frascos rotativos até 2,33 x 106 células/mL para inocular frascos rotativos 10 x 500 mL com 0,2 x 10E6 células/mL. Incubou-se os frascos rotativos num aparelho rotativo a 28 °C.

Após 3 dias (72 h) contou-se as células, tendo-se determinado que a média de 2 frascos era de 1,86 x 10E6 células/mL. (99% viáveis). Infectou-se então as culturas com os virus duplos a uma MOI 3 por cada virus.

Infectou-se 10 x 500 mL com virus JS303 Ciclina Dl, titulo -9 x 10E7 pfu/mL. Virus JS304 CDK4, titulo - 1 x 10E8 pfu/mL.

Ciclina D l 1.86 x 10E6 x 500 x 3 = 31 ml de vírus por cada frasco de 500 ml 0.9 x 10* CDK4 1.86 x 10E6 x 500 x 3 = 28 ml de vírus por cada frasco de 500 ml 1 x 108

Misturou-se os virus antes de serem adicionados às culturas, e colocou-se novamente as culturas no aparelho rotativo a 28 °C.

Decorridos 3 dias (72 h) após infecção, colheu-se os 5 litros de cultura. A contagem total de células no momento da colheita foi de 1,58 x 10E6 células/mL.(99% viáveis).

Centrifugou-se as células a 2500 rpm, 30 min., 4 °C numa Heraeus Omnifuge 2.0 RS em lotes de 250 mL. Rejeitou-se o sobrenadante. 39

Congelou-se instantaneamente 20 sedimentos com ~4 x 10E8 células/sedimento em N2L e conservou-se a -80 °C numa sala fria de CCRF. Submeteu-se então as células SF21 a lise hipotónica ressuspendendo em tampão de lise (HEPES 50 mM pH 7,5, cloreto de magnésio 10 mM, DTT 1 mM, glicerofosfato 10 mM, PMSF 0,1 mM, fluoreto de sódio 0,1 mM, ortovanadato de sódio 0,1 mM, 5 ug/mL de aprotinina, 5 ug/mL de leupeptina e 20% p/v de sacarose) e adicionando água desionizada gelada. Após centrifugação, transferiu-se o sobrenadante para uma coluna de troca aniónica Poros HQ/M 1,4/100 (PE Biosystems, Hertford, UK) . A CDK4 e a Ciclina Dl coeluiram com NaCl 375 mM em tampão de lise e a sua presença verificada por transferência de Western, utilizando anticorpos anti-CDK4 e anti-Ciclina Dl adequados (obtidos de Santa Cruz Biotechnology, Califórnia, US) .

Controlo de p!6 (Nature 366,:704-707,- 1993; Serrano M,

Hannon GJ, Beach D)

Amplificou-se pl6 (o inibidor natural de CDK4/Ciclina Dl) a partir do ADNc de HeLa (células HeLa obtidas de ATCC CCL2, carcinoma epitelióide humano do colo do útero; Câncer Res. 12: 264, 1952), clonado em pTB 375 NBSE que tinha uma etiqueta His 5', e transformou-se utilizando técnicas correntes em células BL21 (DE3) pLysS (obtidas de Promega; Ref. Studier F.W. e Moffat B.A., J. Mol. Biol., 189, 113, 1986). Multiplicou-se uma cultura de 1 litro até à DO apropriada e induziu-se em seguida com IPTG para expressar o pl6 dum dia para o outro. Submeteu-se então as células a lise com ultra-sons em fosfato de sódio 50 mM, cloreto de sódio 0,5 M, PMSF, 0,5 μg/mL de leupeptina e 0,5 μρ/πΛ de aprotinina. Centrifugou-se a mistura, adicionou-se o 40 sobrenadante a pérolas de quelato de níquel e misturou-se durante 1 horas. Lavou-se as pérolas em fosfato de sódio, NaCl pH 6,0 e eluiu-se o produto pl6 em fosfato de sódio, NaCl pH 7,4 com imidazole 200 mM. O pTB NBSE foi construído a partir de pTB 375 NBPE como se segue:- p TB375 O vector de referência utilizado para produção pTB 375 foi o pZEN0042 (ver patente UK 2253852) que continha a sequência indutível de resistência às tetraciclinas tetA/tetR do plasmídeo RP4 e a sequência de estabilidade cer do plasmídeo pKS492 numa referência proveniente de pAT153. O pTB375 foi produzido através da adição de uma cassete de expressão consistindo da sequência promotora 10 do gene T7, do sítio de clonagem múltiplo e da sequência de terminação 10 do gene T7. Além disso incluiu-se uma sequência de terminação concebida para reduzir a leitura transcricional do vector de referência a montante da cassete de expressão.

pTB 375 NBPE

Eliminou-se o único sítio de restrição EcoRI presente no pTB 375. Introduziu-se um novo sítio de clonagem múltipla contendo as sequências de reconhecimento para as enzimas de restrição Ndel, BamHI, PstI e EcoRI no pTB 375 entre os sítios Ndel e BamHI destruindo-se o sítio BamHI original presente no pTB 375. 41

ρΤΒ 375 NBSE

Introduziu-se um sítio de clonagem múltipla contendo as sequências de reconhecimento para as enzimas de restrição Ndel, BamHI, Smal e EcoRI no pTB 375 NBPE entre os sítios Ndel e EcoRI. 0 oligonucleótido contendo estes sítios de restrição também continha 6 codões de histidina localizados entre os sítios Ndel e BamHI na mesma grelha de leitura que o códão iniciador (ATG) presente no sítio Ndel.

Por analogia com o descrito acima pode construir-se ensaios concebidos para avaliar a inibição de CDK2 e CDK6. Pode utilizar-se CDK2 (N° de Depósito EMBL X62071) conjuntamente com Ciclina A ou Ciclina E (ver N° de Depósito EMBL M73812), encontrando-se mais pormenores desses ensaios na Publicação Internacional PCT N° W099/21845, cujas secções relevantes de Avaliação Bioquímica e Biológica são aqui incorporadas por referência.

Se se utilizar a CDK2 com Ciclina E pode conseguir-se co-purificação parcial do seguinte modo:- ressuspendeu-se células Sf21 em tampão de lise (Tris 50 mM pH 8,2, MgCl2 10 mM, DTT 1 mM, glicerofosfato 10 mM, ortovanadato de sódio 0,1 mM, NaF 0,1 mM, PMSF 1 mM, 1 ug/mL de leupeptina e 1 ug/mL de aprotinina) e homogeneizou-se, durante 2 minutos, num homogeneizador Dounce de 10 mL. Após centrifugação, transfere-se o sobrenadante para uma coluna de troca aniónica Poros HQ/M 1,4/100 (PE Biosystems,

Hertford, UK) . As CDK2 e Ciclina E coeluem no início de um gradiente de NaCl 0-1 M (corrido em tampão de lise sem inibidores de protease) ao longo de 20 volumes de coluna . A coeluição é verificada por transferência de Western utilizando 42 anticorpos anti-CDK2 e anti-Ciclina E (Santa Cruz Biotechnology, Califórnia, US).

Embora as propriedades farmacológicas dos compostos da fórmula (I) variem com a modificação estrutural, duma maneira geral pode demonstrar-se que os compostos da fórmula (I) possuem actividade nos ensaios anteriores a concentrações ou doses de IC50 na gama de 250 μΜ até 1 nM.

Quando avaliada no ensaio ín vitro acima, a actividade inibidora de CDK2 do Exemplo 23 foi medida como IC50 = 0,347 μΜ. A actividade in vivo dos compostos da presente invenção pode ser avaliada por técnicas correntes, por exemplo, medindo a inibição do crescimento celular e avaliando a citotoxicidade. A inibição do crescimento celular pode ser medida relevando células com Sulforrodamina B (SRB), um corante fluorescente que revela proteínas e dá, por conseguinte, uma estimativa da quantidade de proteína (i. e. células) num poço (ver Boyd, M.R. (1989) Status of the NC1 preclinical antitumour drug discovery screen. Prin. Prac Oncol 10:1-12). Assim são proporcionados os detalhes seguintes sobre a medição da inibição do crescimento celular:-

Aplicou-se células em meio apropriado num volume de 100 μΐ) em placas de 96 poços; o meio foi meio de Eagle Modificado por Dulbecco para MCF-7, SK-UT-1B e SK-UT-1. Deixou-se que as células se fixassem dum dia para o outro, adicionou-se então os compostos inibidores a várias concentrações numa concentração máxima de 1% de DMSO (v/v) . Avaliou-se uma placa de controlo 43 para se obter um valor para as células antes da dosagem. Incubou-se as células a 37 °C, (5% de CO2) durante três dias.

Ao fim de três dias adicionou-se TCA às placas até uma concentração final de 16% (v/v). Incubou-se então as placas a 4 °C durante 1 hora, eliminou-se o sobrenadante e lavou-se as placas em água corrente. Depois de secar, adicionou-se 100 [IL de

corante SRB (0,4 % de SRB em ácido acético a 1%) durante 30 minutos a 37 °C. Eliminou-se 0 excesso de SRB e lavou-se as placas em ácido acético a 1%. Solubilizou-se 0 SRB ligado à proteína em Tris 10 mM pH 7,5 e agitou-se durante 30 minutos â temperatura ambiente. Leu-se as DO a 54 0 nm e determinou-se a concentração de inibidor que provoca 50% de inibição do crescimento a partir de um gráfico semi -logarítmico da concentração de inibidor em função da absorvância. A concentração de composto que reduziu a densidade óptica abaixo da obtida quando as células foram aplicadas no inicio da experiência deu o valor de toxicidade.

Os valores de IC50 típicos para os compostos da invenção quando avaliados no ensaio de SRB situam-se na gama de 1 mM até 1 nM.

De acordo com um outro aspecto da invenção é proporcionada uma composição farmacêutica, a qual compreende um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou éster hidrolisável ín vivo, como anteriormente definido associado a um diluente ou veiculo farmaceuticamente aceitável. A composição pode estar numa forma adequada para administração oral, por exemplo, como um comprimido ou cápsula, 44 para injecção parentérica (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão) como uma solução, suspensão ou emulsão estéril, para administração tópica como uma pomada ou creme ou para administração rectal como um supositório.

Duma maneira geral as composições acima podem ser preparadas de um modo convencional utilizando excipientes convencionais. A pirimidina será normalmente administrada a um animal de sangue quente numa dose unitária na gama de 5-5000 mg por metro quadrado de área corporal do animal, i. e., aproximadamente, 0,1-100 mg/kg, o que proporciona normalmente uma dose terapeuticamente eficaz. Uma forma de dose unitária tal como um comprimido ou cápsula conterá geralmente, por exemplo 1-250 mg de substância activa. De um modo preferido é empregue uma dose diária na gama de 1-50 mg/kg. No entanto, a dose diária variará necessariamente em função do hospedeiro tratado, da via de administração particular e da gravidade da doença a ser tratada. Assim sendo, a dosagem óptima pode ser determinada pelo médico assistente que está a tratar qualquer doente particular.

De acordo com um outro aspecto da presente invenção é proporcionado um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou éster hidrolisável in vivo, como anteriormente definido para ser utilizado num método de tratamento profiláctico ou terapêutico de um animal de sangue quente, tal como o homem.

Costatou-se que os derivados de pirimidina definidos na presente invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou 45 éster hidrolisável in vivo, são inibidores eficazes do ciclo celular (agentes de antiproliferação celular), propriedade essa (sem que se fique limitado pela teoria) que se julga resultar das suas propriedades inibidoras de CDK. Assim sendo é expectável que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento de doenças ou patologias mediadas somente ou em parte pelas enzimas CDK, i. e. os compostos podem ser utilizados para produzir um efeito inibidor de CDK num animal de sangue quente necessitado de tal tratamento. Assim, os compostos da presente invenção podem ser utilizados para tratar a proliferação de células malignas caracterizada pela inibição das enzimas CDK, i. e. os compostos podem ser utilizados para produzir um efeito antiproliferativo mediado somente ou em parte pela inibição de CDKs. Espera-se que um tal derivado de pirimidina da invenção possua uma gama alargada de propriedades anticancerigenas já que as CDKs foram implicadas em muitos cancros humanos comuns, tais como leucemia e cancro da mama, pulmão, cólon, rectal, estômago, próstata, bexiga, pâncreas e ovário. Deste modo é esperado que um derivado de pirimidina da invenção possua actividade anticancerigena contra estes cancros. É ainda esperado que um derivado de pirimidina da presente invenção possua actividade contra uma gama de leucemias, doenças linfóides e tumores sólidos tais como carcinomas e sarcomas em tecidos, tais como figado, rim, próstata e pâncreas. Em particular é esperado que tais compostos da invenção abrandem vantajosamente o crescimento de tumores sólidos primários e recorrentes, por exemplo, do cólon, mama, próstata, pulmões e pele. Mais particularmente é esperado que tais compostos da invenção, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou éster hidrolisável in vivo, inibam o crescimento daqueles tumores sólidos primários e recorrentes que estão associados à CDK, especialmente aqueles tumores que são significativamente dependentes da CDK para o seu 46 crescimento e disseminação, incluindo por exemplo, determinados tumores do cólon, mama, próstata, pulmão, vulva e pele. É ainda esperado que um derivado de pirimidina da presente invenção possua actividade contra outras doenças de proliferação celular numa vasta gama de outros estados patológicos incluindo leucemias, distúrbios de fibroproliferação e diferenciação, psoriase, artrite reumatóide, sarcoma de Karposi, hemangioma, nefropatias aguda e crónica, ateroma, aterosclerose, restenose arterial, doenças autoimunes, inflamação aguda e crónica, doenças ósseas e doenças oculares com proliferação de vasos retinianos.

Assim, de acordo com este aspecto da invenção é proporcionado um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como anteriormente definido para ser utilizado como um medicamento; e a utilização de um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como anteriormente definido no fabrico de um medicamento para ser utilizado na produção de um efeito anticancerígeno, inibidor do ciclo celular (antiproliferação celular) num animal de sangue quente tal como um ser humano. Particularmente, o efeito inibidor do ciclo celular é produzido na fase S ou Gl-S através da inibição de CDK2, CDK4 e/ou CDK6, especialmente CDK2.

De acordo com uma outra particularidade deste aspecto da invenção é proporcionado um método para produzir um efeito anticancerígeno, inibidor do ciclo celular (antiproliferação celular) num animal de sangue quente, tal como o homem, necessitado de tal tratamento o qual compreende administrar ao referido animal uma quantidade eficaz de um derivado de 47 pirimidina como definido imediatamente acima. Particularmente, o efeito inibidor é produzido na fase S ou Gl-S através da inibição de CDK2, CDK4 e/ou CDK6, especialmente CDK2.

Como mencionado acima o tamanho da dose necessária para o tratamento terapêutico ou profiláctico de uma doença de proliferação celular particular variará necessariamente em função do hospedeiro tratado, da via de administração e da gravidade da doença a ser tratada. É perspectivada uma dose unitária na gama, por exemplo, 1-100 mg/kg, de um modo preferido 1-50 mg/kg. A actividade inibidora de CDK anteriormente definida pode ser aplicada como uma terapia única ou pode envolver, além de um composto da invenção, uma ou mais de outras substâncias e/ou tratamentos. Um tal tratamento conjunto pode ser conseguido através da administração simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. Na área da oncologia médica é prática normal utilizar uma associação de formas de tratamento diferentes para tratar cada doente com cancro. Na oncologia médica o(s) outro (s) componente (s) desse tratamento conjunto, além do tratamento inibidor do ciclo celular anteriormente definido, podem ser: cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Esta quimioterapia pode cobrir três categorias principais de agente terapêutico: (i) outros agentes inibidores do ciclo celular que actuam através do mesmo ou de mecanismos diferentes dos anteriormente definidos; (ii) agentes citostáticos, tais como antiestrogénios (por exemplo, tamoxifeno, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, 48 iodoxifeno), progestogénios (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores da aromatase (por exemplo, anastrozole, letrazole, vorazole, exemestano), antiprogestogénios, antiandrogénios (por exemplo flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas e antagonistas de LHRH (por exemplo, acetato de goserelina, luprolida), inibidores de testosterona 5a-di-hidro-reductase (por exemplo, finasteride), agentes anti-invasivos (por exemplo, inibidores de metaloproteinase como marimastat e inibidores da função receptora do activador plasminogénio da urocinase) e inibidores da função do factor de crescimento (tais factores de crescimento incluem por exemplo o factor de crescimento derivado de plaquetas e o factor de crescimento de hepatócitos e tais inibidores incluem os anticorpos do factor de crescimento, anticorpos do receptor do factor de crescimento, inibidores da tirosina-cinase e inibidores da serina/treonina-cinase); e (iii) os fármacos antiproliferativos/antineoplásicos e associações destes, como utilizados em oncologia médica, tais como antimetabolitos (por exemplo antifolatos como metotrexato, fluoropirimidinas como 5-fluorouracilo, análogos de purina e adenosina, citosina arabinósida); antibióticos antitumorais (por exemplo, antraciclinas como doxorrubicina, daunomicina, epirrubicina e idarrubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina); derivados de platina (por exemplo cisplatina, carboplatina); agentes alquilantes (por exemplo, mostarda de azoto, melfalan, clorambucil, bussulfan, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosoureias, tiotepa); agentes antimitóticos (por exemplo, alcaloides de vinca como vincristina e taxóides como taxol, taxotere); inibidores da topoisomerase (por 49 exemplo, epipodofilotoxinas como etoposido e teniposido, amsacrina, topotecana). De acordo com este aspecto da invenção é proporcionado um produto farmacêutico compreendendo um derivado de pirimidina da fórmula (I) como anteriormente definido, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou éster hidrolisável in vivo, e uma substância antitumoral adicional como anteriormente definida para o tratamento conjunto de cancro. De modo útil também se pode administrar um antiemético, por exemplo quando se utiliza um tal tratamento conjunto como descrito acima.

Além da sua utilização na medicina terapêutica, os compostos de fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis são também úteis como ferramentas farmacológicas no desenvolvimento e padronização de sistemas de ensaio in vitro e in vivo para a avaliação dos efeitos de inibidores da actividade do ciclo celular em animais de laboratório, tais como gatos, cães, coelhos, macacos, ratos e ratinhos, como parte da pesquisa de novos agentes terapêuticos.

Nas outras particularidades acima de composição farmacêutica, processo, método, utilização e fabrico de medicamento também se aplicam as formas de realização alternativas e preferidas dos compostos da invenção aqui descritos. A invenção será agora ilustrada nos Exemplos não limitativos seguintes, nos quais podem ser utilizadas, quando apropriado, técnicas correntes conhecidas do químico especializado e técnicas análogas às descritas nestes Exemplos e nos quais, a menos que indicado de outro modo: 50 (i) as evaporações foram realizadas por evaporação rotativa in vacuo e os processos de trabalho foram realizados após remoção dos sólidos residuais tais como agentes de secagem por filtração; (ii) as operações foram realizadas à temperatura ambiente, tipicamente na gama 18-25 °C e ao ar a menos que indicado de outro modo, ou a menos que o especialista operasse de outro modo sob uma atmosfera de um gás inerte tal como árgon; (iii) a cromatografia em coluna (pelo processo flash) e a cromatografia liquida de pressão média (MPLC) foram realizadas em silica Merck Kieselgel (Art. 9385) ou sílica de fase inversa Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) obtida de E. Merck,

Darmstadt, Alemanha; (iv) os rendimentos são dados apenas para ilustração e não são necessariamente os máximos obteníveis; (v) os pontos de fusão quando fornecidos foram determinados utilizando um equipamento automático de ponto de fusão Mettler SP62, num equipamento em banho de óleo ou num equipamento de placa quente Koffler. (vi) as estruturas dos produtos finais da fórmula (I) foram geralmente confirmadas pelas técnicas de ressonância magnética nuclear (RMN) (geralmente protão) e espectrometria de massa; os valores de desvio químico da ressonância magnética de protão foram medidos em DMSO-dê deuterado (a menos que indicado de outro modo) na escala delta (ppm para campo mais baixo relativamente ao tetrametilsilano) utilizando um espectrómetro Varian Gemini 2000 a operar a uma força de campo de 300 MHz a menos que 51 indicado de outro modo; e as multiplicidades de pico são mostradas como se segue: s, singuleto; d, dupleto; t, tripleto; m, multipleto; 1, largo; a espectrometria de massa (MS) foi realizada por electropulverização numa plataforma VG; (vii) duma maneira geral os intermediários não foram completamente caracterizados e a pureza foi avaliada através de análise por cromatografia em camada fina (TLC), cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC), infravermelho (IR), MS ou RMN; (viii) as abreviaturas seguintes abaixo: - DMF Ν,Ν-dimetilformamida; NMP iV-metilpirrolidin-2-ona; DMSO sulfóxido de dimetilo; Tr tempo de retenção; (ix) Sistema A:

Coluna Solvente

Tempo de ensaio

4,6 mm x 10 cm Hichrom RPB 5A A = 95% de água, 5% de acetonitrilo + 0,1% de ácido fórmico B = 95% de acetonitrilo, 5% de água + 0,1% de ácido fórmico 10 minutos com um gradiente de 9,5

minutos de 5-95% de B

Comprimento de onda 254 nm, largura de banda 10 nm

Detector de massa Platform LC 52

Exemplo 1 2-(4-Sulfamoilanilino)-4-(2-cianoanilino)pirimidina

Dissolveu-se 2-cloro-4-(2-cianoanilino)pirimidina (250 mg, 1,09 mmol) em n-butanol (3 mL) e adicionou-se sulfanilamida (150 mg, 0,87 mmol). Tratou-se a suspensão resultante com metanol até à dissolução total do sólido. Aqueceu-se a mistura reaccional a 95 °C durante 12 horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Basificou-se então a mistura reaccional até pH 9-10 utilizando amoníaco metanólico e evaporou-se sobre sílica (5 mL) . Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna eluindo com 0-15% de solução de amoníaco metanólico 2,0 M em diclorometano para proporcionar um produto sólido (256 mg) . RMN (303, 1K): 6,58 (d, 1H) , 7,24 (s 1, 2H) , 7,56 (m, 5H) , 7,69 (d, 1H), 7,82 (t, 1H), 7,95 (d, 1H) , 8,16 (d, 1H) , 10,88 (s 1, 1H), 11,07 (s 1, 1H); MS (M+H)+: 367,1.

Exemplos 2-11

Os compostos seguintes foram preparados por um método análogo ao descrito no Exemplo 1 utilizando os intermediários 4-sulfonilanilina e 2-cloro-4-anilinopirimidina apropriados. 53 ΗΝ Ν Ν^Ν R2 Ο—S=0 R3

54 (continuação)

Ex. R1 R2 R3 R4 RMN, 400 MHz a MS 373 k (M+H) + 5 -CH2CH=CHPh 4-Br Λ' H 0,89 (t, 6H), 2,43 635,4, HN (m, 6H), 2,83 (t, 637,4 Ί 2H), 4,70 (d, 2H) , | 6,00 (d, 1H), 6,39 (m, 1H), 6,59 (d, k 1H), 6,72 (s 1, 1H), 7,29 (m, 7H) , 7,61 (d, 2H), 7,67 (d, 2H), 7,83 (d, 2H), 8,00 (d, 9,25 (s, 1H) 1H) , 6 H 2-CN ch3 H 3,09 (s, 3H), 6,41 366,3 (d, 1H), 7,40 (m, 1H), 7,68 (d, 2H) , 7,74 (m, 2H), 7,84 (d, 1H), 7,88 (d, 2H), 8,17 (d, 1H) , 9,30 (s, 1H), 9,37 (s, 1H) 7 H 2-F, -nh2 H (303,1K) 2,28 (s, 374,3 5-CH3 3H), 6,55 (d, 1H) , 7,16 (m, 1H), 7,25 (m, 3H), 7,46 (d, 1H), 7,64 (t, 8,09 (d, 1H), 4H) , 10,71 (s 1, 1H), 10,98 (s 1, 1H) 8 CH2CH2CH2CF3 2-F, -ch3 H 1,86 (m, 2H), 2,32 483,4 5-CH3 (m, 2H), 2, 33 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 3,94 (t, 2H) , 5,88 (d, 1H), 7,26 (m, 3H), 7,68 (d, 2H), 7,83 (d, 2H) , 8,00 (d, 1H), (s, 1H) 9,31 9 -CH2CH=CHPh 2-F, -ch3 H 2,32 (s, 3H), 3,06 489,5 5-CH3 (s, 3H), 4, 65 (d, 2H), 5,97 (d, 1H), 6,37 (m, 1H) , 6,61 (d, 1H), 7,28 (m, 8H), 7,66 (d, 2H), 7,87 (d, 2 H) , 8,02 (d, 1H), (s, 1H) 9,35 55 (continuação) Ex. R1 R2 R3 R4 RMN, 373 400 k MHz a MS (M+H) + 10 -CH2CH=CHBr 2- -F, -ch3 H 2,33 (s, 3H) , 3,08 491, 3, 5- -ch3 (s, 3H) , 4, 48 493, 3 (d, 1H) , 4,61 (d, 1H) f 5,89 (m, 1H) , 6,40 (m, 1H) , 6,54 (m, 1H) , 7,24 (m, 3H) , 7,69 (d, 2H) , 7,85 (d, 2H) , 8,01 (d, 1H) , 9,37 (s, 1H) 11 -CH2CH=CHPh 2- -F, -nh2 Cl 2,28 (s, 3H) , 4,71 524, 5, 5- -ch3 (d, 2H) , 6, 39 526, 4 (m, 1H) , 6,52 (d, 1H) , 6,75 (s 1, 2H) , 7,10 (m, 2H) , 7,19 (m, 2H) , 7,27 (m, 4 H) , 7,69 (d, 2H) , 7,80 (d, 2H) , 8,08 (s, 1H), 9,38 (s 1 , 1H) 2 12 H H V-o Br RMN (temp ambiente) 4H), 2,5 e 2,2 (m, (m, 4H) , 518, 520 3,4 (m, 4H), 7,2 (t, 1H) , 7,4 (t, 2H), 7,6 (m, 4H) , 7,8 (d, 2H), 8,3 (s, 1H) , 8,8 (s, 1H) , 9,8 (s, 1H) 1Produto purificado duas vezes por cromatografia em coluna seguida de recristalização de metanol. 2Analisado num equipamento de RMN de 500 MHz.

Exemplo 13 2-(4-Sulfamoilanilino)-4-[2-fluoro-5-metil-A/-(4,4,4-trifluorobutil)anilino]pirimidina

Dissolveu-se 2-cloro-4-(N-4,4,4,-trifluorobutil-2-fluoro-5-metilanilino)pirimidina (215 mg, 0,62 mmol) em n-butanol (2 mL) e adicionou-se sulfanilamida (85 mg, 0,50 mmol). Tratou-se a 56 suspensão resultante com metanol até à dissolução total do sólido. Aqueceu-se a mistura reaccional a 95 °C durante 12 horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. 0 sólido que precipitou foi recolhido por filtração, lavado com um volume pequeno de metanol e seco in vacuo para produzir um sólido branco (132 mg). RMN (400 MHz a 373 K) : 1,85 (m, 2H) , 2,31 (m, 2H) , 2,35 (s, 3H), 3,97 (t, 2H) , 6,04 (d, 1H) , 7,29 (m, 3H) , 7,67 (m, 4H), 8,02 (d, 1H), 10,00 (s 1, 1H); MS (M+H)+: 484,4.

Exemplos 14-22

Os compostos seguintes foram preparados por um método análogo ao descrito no Exemplo 13 utilizando os intermediários 4-sulfonilanilina e 2-cloro-4-anilinopirimidina apropriados.

N 'R4 , , ^R1

HN N N . -+-R2 o=s=o R3 57 Εχ. R1 R2 R3 R4 RMN, 400 MHz a MS 373 k (M+H) + 14 -CH2CH=CHBr 2-F, -nh2 H 2,34 (s, 3H), 4,50 492,3, 5-CH3 (d, 1H), 4,66 (d, 494,3 1H), 6,00 (m, 1H) , 6, 39 (m, 1H) , 6,58 (m, 1H), 7,29 (m, 3H), 7,69 (m, 4H) , 8,05 (d, 1H), (s 1, 1H) 9,99 15 -CH2CH=CHPh 2-F, -nh2 H 2,33 (s, 3H), 4,69 490,5 5-CH3 (d, 2H), 6,09 (d, 1H), 6,32 (m, 1H) , 6,60 (d, 1H), 7,28 (m, 8H), 7,69 (s, 4H), 8,05 (d, 1H) , 10,00 (s 1, 1H) 16 -ch2ch2ch2cf3 2-CN -nh2 H 1,91 (m, 2H) , 2,36 477,4 (m, 2H), 4,04 (t, 2H), 6,06 (d, 1H) , 7, 62 (m, 6H) , 7,89 (t, 1H), 7,98 (d, 1H), 8,09 (d, 9,70 (s 1, 1H) 1H) , 17 -CH2CH=CHBr 2-CN -nh2 H 4,59 (d, 1H), 4,74 485,3, (d, 1H), 6,07 (dd, 487,3 1H), 6,48 (m, 1H), 6,65 (m, 1H) , 7, 65 (m, 6H) , 7,90 (m, 1H), 7,99 (d, 1H), 8,12 (d, 9,79 (s 1, 1H) 1H) , 18 -CH2CH=CHPh 2-CN -nh2 H (500 MHz a 373K) 483,4 4,74 (d, 2H), 6,09 (d, 1H), 6,36 (m, 1H), 6,63 (d, 1H) , 7,21 (t, 1H), 7,29 (t, 2H), 7,34 (d, 2H), 7,61 (m, 6H) , 7,85 (t, 1H), 7,92 (d, 1H), 8,10 (d, 1H), 9,51 (s 1 1H) r 19 H H H Λ Br Tr = 2,461 498 u 58 (continuação)

Ex. R1 R2 R3 R4 RMN, 400 MHz a 373 k MS (M+H) + 20 H H nhch3 Br Tr = 2,561 435 21 H H nh2 Br Tr = 2,401 421 22 H H v yMe N ó Br (temperatura ambiente) 2,7 (s, 3H), 3,38 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 6,55 (d, 2H) , 6,6 (t, 1H), 7,1 (t, 2H), 7.2 (t, 1H), 7,4 (t, 2H), 7,6 (m, 4H), 7,8 (d, 2H), 8.3 (s, 1H), 8,8 (s 1, 1H) , 9,95 (s 1, 1H) 538, 540 1 Cromatografia e MS foram efectuados por LCMS num sistema Micromass OpenLynx utilizando o Sistema A.

Exemplo 23 2-(4-Sulfamoilanilino)-4-(2-cianoanilino)-5-cloropirimidina

Dissolveu-se 2,5-dicloro-4-(2-cianoanilino)pirimidina (265 mg, 1,00 mmol) em n-butanol (1 mL) e adicionou-se sulfanilamida (207 mg, 1,20 mmol). Aqueceu-se a suspensão resultante a refluxo durante 2 horas e deixou-se arrefecer até à temperatura ambiente. Basificou-se então a mistura reaccional utilizando amoníaco metanólico e evaporou-se sobre sílica. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna eluindo com 0-15% de solução de amoníaco metanólico 2,0 M em diclorometano para proporcionar um produto sólido (42,6 mg). RMN (303, 1K) : 7,09 (2H, s) , 7,41- 7,59 (5H, m), 7,65 (1H, d), 7,74-7,86 (1H, m) , 7,94 (1H, d), 8,25 (1H, s), 9,46 (1H, s), 9,78 (1H, s); MS (M+H)+: 401, 403. 59

Exemplos 24-28

Os compostos seguintes foram preparados por um método análogo ao descrito no Exemplo 23 utilizando a 4-sulfonilanilina apropriada. R4

N

HN

N NH

o-s=o R3

60 (continuação)

Exemplo 29 2, 4-Di-(4-sulfamoilanilino)-5-bromopirimidina

Aqueceu-se a 100 °C durante 16 horas uma solução de 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (228 mg, 1,0 mmol), 4-sulfanilamida (180 mg, 1,05 mmol) e Ν,Λί-diisopropiletilamina (174 μό, 1,0 mmol) em n-butanol (30 mL) . Formou-se uma goma a partir da solução. Adicionou-se éter dietilico (20 mL), originando a solidificação da goma e ocorrendo mais precipitação. Recolheu-se o sólido por filtração e triturou-se com metanol quente, dando o produto em epigrafe (55 mg) como um 61 sólido branco. RMN: (s, 2H) , 7,30 (s, 2H) , 7,64 (d, 2H) , 7,80 (m, 4H), 7,88 (d, 2H), 8,36 (s, 1H), 8,93 (s, 1H) , 9,88 (s, 1H) .

Exemplo 30 2-(3-Sulfamoilanilino)-4-[(2-morfolino)anilino]pirimidina Neste exemplo as operações foram realizadas utilizando um robô Zymate XP com adições de solução via uma Estação de

Trabalho Zymate Master e agitadas numa Reacto-Station Stem RS5000. A estrutura do composto foi confirmada por LCMS num sistema Micromass OpenLynx utilizando o Sistema A. A 3-aminobenzenossulfonamida (172 mg, 1,0 mmol) em 1.4- dioxano (8 mL) adicionou-se 2-Cloro-4-[(2-

Morfolino)anilino]-pirimidina (290 mg, 1 mmol) e cloreto de hidrogénio (solução 4,0 M em 1,4-dioxano, 50 μΐ^ . Aqueceu-se a mistura a 100 °C durante 60 h. Arrefeceu-se a mistura reaccional, filtrou-se o sólido resultante, lavou-se com 1.4- dioxano e secou-se (in vácuo a 48 °C) para dar um sólido castanho pálido (358 mg). Tr 5,88; MS (M+H)+: 427.

Exemplo 31 2-(4-Sulfamoilanilino)-4-(4-metoxifenoxi)-5-cloropirimidina

Aqueceu-se até 100 °C durante 4 horas uma solução de 2,5-dicloro-4-(4-metoxifenoxi)pirimidina (Método 25; 0,65 g, 2,4 mmol) e sulfanilamida (0,38 g, 2,2 mmol) em NMP (1,5 mL) . Partilhou-se a mistura reaccional entre água e acetato de etilo. Evaporou-se a solução orgânica e purificou-se o resíduo por 62 cromatografia em coluna eluindo com 0,1% de ácido fórmico, 4% de metanol em diclorometano para proporcionar um produto sólido (0,17 g, 19%). RMN: 3,81 (s, 3H) , 7,05 (d, 2H) , 7,10 (s, 2H) , 7,22 (d, 2H), 7,50 (d, 4H) , 8,50 (s, 1H) , 10,6 (s 1, 1H) ; MS 405, 407.

Preparação de Materiais de Partida

Os materiais de partida para os exemplos acima estão comercialmente disponíveis ou são facilmente preparados por métodos correntes a partir de compostos conhecidos. Os que se seguem são métodos utilizados na preparação de alguns dos materiais de partida utilizados nas reacções acima. Método 1 2-Cloro-4- (2-fluoro-5-metil(N-4,4,4-trifluorobutil)anilino)pirimidina

Dissolveu-se 2-cloro-4-(2-fluoro-5-metilanilino)pirimidina (750 mg, 3,16 mmol), 4,4,4-trifluoro-l-bromobutano (725 mg, 3,80 mmol) e carbonato de potássio (525 mg, 3,80 mmol) em N,N-Dimetilformamida (3 mL) . Agitou-se a mistura reaccional à temperatura ambiente durante 12 horas e evaporou-se, em seguida, sobre sílica (5 mL) e purificou-se por cromatografia em coluna, eluindo com acetato de etilo (0-40%):iso-hexano, para produzir um sólido na evaporação (976 mg). RMN (373 K) : 1,79 (m, 2H) , 2,28 (m, 2H), 2,33 (s, 3H), 3,91 (t, 2H), 6,19 (d, 1H), 7,28 (m, 3H) , 8,03 (d, 1H); MS (M+H) + : 347, 349. 63 Métodos 2-10

Os compostos seguintes foram preparados por um método análogo ao descrito no Método 1, utilizando a 2-cloro-4-anilinopirimidina apropriada e o agente de alquilação relevante.

Método R1 R2 R3 MS (M+H)+ 2 -CH2CH2CH2CF3 4-Br H 393, 3951 3 -CH2CH=CHBr 4-Br H 401, 403, 4051 4 -CH2CH=CHPh 4-Br H 400,2, 402,2 5 -CH2CH=CHBr 2-F, 5-CH3 H 355, 3571 6 -CH2CH=CHPh 2-F, 5-CH3 H 354,3, 356,3 7 -ch2ch2ch2cf3 2-CN H 3 4 01 8 -CH2CH=CHBr 2-CN H 348, 350, 3521 9 -CH2CH=CHPh 2-CN H 347,2, 349,3 10 -CH2CH=CHPh 2-F, 5-CH3 Cl 388,3, 390,3 1onde a massa apresentada é um M+' Método 11 2-Cloro-4-(2-cianoanilino)pirimidina (3 g, 0,02 mol), e ácido clorídrico

Adicionou-se 2,4-dicloropirimidina antranilonitrilo (2,38 g, 0,02 mol) 64 concentrado (quantidade catalítica) a água (5 mL) . Aqueceu-se a mistura reaccional até 40 °C para dissolver os materiais de partida e agitou-se a solução resultante à temperatura ambiente durante 12 horas. Recolheu-se o precipitado sólido que se formou por filtração e secou-se in vacuo para produzir um sólido amarelo pálido (5,14 g) . RMN: 6,78 (d, 1H) , 7,39 (t, 1H) , 7,61 (d, 1H), 7,71 (t, 1H), 7,85 (d, 1H) , 8,20 (d, 1H) , 10,22 (s 1, 1H); MS (M+H)+: 231,1, 233, 1. Método 12 2-Cloro-4-(4-bromoanilino)pirimidina

Dissolveu-se 2,4-dicloropirimidina (3 g, 20,14 mmol), 4-bromoanilina (3,46 g, 20,14 mmol) e di-isopropiletilamina (3,86 mL, 22,15 mmol) em n-butanol (5 mL) . Aqueceu-se a mistura reaccional a 120 °C durante 12 horas, arrefeceu-se e evaporou-se sobre sílica (5 mL) . Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna e eluiu-se com acetato de etilo (50%):iso-hexano para produzir um sólido na evaporação (4,77 g) . RMN: 6,74 (d, 1H) , 7,55 (m, 4H), 8,16 (d, 1H), 10,09 (s 1, 1H); MS (M+H) + : 284,1, 286,1, 288,0. Métodos 13-17

Os compostos seguintes foram preparados por um método análogo ao descrito no Método 12 utilizando a 2,4-dicloropirimidina apropriada e a anilina relevante. 65

Cl N N

ϊ-R2 Método R2 R3 RMN, 400 MHz MS (M+H)+ 13 2-F, 5-CH3H H 238,1, 240,1 14 2-F, 5-CH3 Cl 2,29 (s, 3H), 7,17 (m, 3H), 8,35 (s, 1H), 9,49 (s, 1H) 15 H Br 282,1, 284,1, 286,1 16 2-CN Cl 265,1, 267,1 17 2- /O H 291, 293 Método 18 4-[2-(77,iV-Dietilamino)etilamino]benzenossulfonamida 0 material de partida acima foi preparado como descrito em Therapie, 1965, 20 (4), pág. 917-29. 66 Método 19 2, 4,5-Tricloropirimidina

Dissolveu-se 5-clorouracilo (10,0 g, 68,5 mmol) em oxicloreto de fósforo (60 mL) e adicionou-se pentacloreto de fósforo (16,0 g, 77 mmol). Agitou-se então a mistura reaccional a refluxo (110 °C) durante 16 h, deixou-se então arrefecer até 20 °C. Verteu-se em seguida lenta e cuidadosamente a mistura reaccional para água (200 mL) a 25 °C sob agitação vigorosa. Em seguida agitou-se bem durante 90 minutos antes da adição de AcOEt (250 mL) . Separou-se a camada orgânica e reextraiu-se a camada aquosa para AcOEt (250 mL) . Combinou-se então as camadas orgânicas e lavou-se com bicarbonato de sódio (200 mL de solução aquosa), solução aquosa saturada de cloreto de sódio (200 mL) e evaporou-se em seguida até um liquido amarelo. Purificou-se o produto em bruto por cromatografia em coluna eluindo com diclorometano para proporcionar o produto como um liquido amarelo (6,37 g, 51%). RMN (CDC13) : 8,62 (s, 1H) ; MS (M+) : 182, 184, 186. Método 20

Cloridrato de 4-[2-hidroxi-3-(dimetilamino)propoxi]anilina

Hidrogenou-se cataliticamente uma solução de 4-[2-hidroxi-3-(dimetilamino)propoxi]nitrobenzeno (Método 21, 3,75 g) em etanol (40 mL) sobre paládio a 10% sobre carvão (0,4 g) dum dia para o outro. Eliminou-se o catalisador por filtração através de terra de diatomáceas e concentrou-se o filtrado. Dissolveu-se o resíduo em éter dietílico contendo uma pequena quantidade de 67 isopropanol e adicionou-se cloreto de hidrogénio etéreo (1 M, 16 mL) . Eliminou-se o éter dietilico por evaporação e suspendeu-se o resíduo sólido em isopropanol. Aqueceu-se a mistura num banho de vapor durante vários minutos e deixou-se arrefecer em seguida. Recolheu-se o sólido insolúvel por filtração, lavou-se com isopropanol e éter, e secou-se para dar o produto (3,04 g, 72,4%). RMN: 2,80 (s, 6H), 3,15 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 4,25 (m, 1H) , 5,93 (s 1, 1H), 6,88 (m, 4H) ; MS (M+H) + : 211; 0ιιΗι8Ν2Ο2,1,6 HC1 requer: C; 49,2, H; 7,4, N; 10,4, Cl; 21,7%; encontrado: C; 49,2, H; 7,2, N; 10,1; Cl; 19,1%. Método 21 4-[2-Hidroxi-3-(dimetilamino)propoxi]nitrobenzeno

Dissolveu-se 4-(2,3-epoxipropoxi)nitrobenzeno (obtido como descrito em Synthetic Communications, 1994, 24, 833; 4,3 g,) em metanol (30 mL) e DMF (10 mL) . Adicionou-se uma solução de dimetilamina em metanol (2 M, 17 mL) e agitou-se a mistura dum dia para o outro. Eliminou-se o material volátil por evaporação e partilhou-se o resíduo entre bicarbonato de sódio saturado (100 mL) e acetato de etilo (100 mL). Separou-se a camada orgânica e lavou-se com cloreto de sódio saturado (2 x 100 mL) e secou-se (MgS04) . A concentração deu o produto como um óleo que cristalizou lentamente sob alto vácuo (4,79 g, 89,9%). RMN (CDC13) : 2,33 (s, 6H) , 2,98 (m, 1H) , 2,54 (m, 1H) , 4,00 (m, 3H) , 7,00 (d, 2H), 8,20 (d, 2H); MS (M+H)+: 241. 68 Método 22 4- {2- [ (iV-Metil-.A/-f enil) amino] etilsulfonil} anilina A uma solução de 4-{2-[(N-metil-N- fenil)amino]etilsulfonil}nitrobenzeno (Método 23; 10 g, 31,25 mmol) em etanol (100 mL) adicionou-se 5 mL de água, 1 mL de HC1 (conc.) e 25 g de limalha de ferro. Aqueceu-se a reacção a refluxo durante 3 horas. Arrefeceu-se a reacção, basificou-se através da adição de soda cáustica e filtrou-se. Extraiu-se o residuo de ferro com mais 100 mL de etanol em ebulição e filtrou-se novamente. Aos filtrados reunidos adicionou-se água (400 mL) , recolheu-se o produto por filtração. Dissolveu-se o produto em bruto em acetona (80 mL) tratou-se com carvão, filtrou-se e precipitou-se através da adição de água. Recolheu-se o produto por filtração. (6 g) . P.f. 158-159 °C; RMN: 2,8 (s, 3H) , 3,2 (m, 2H) , 3,5 (m, 2H) , 6,1 (s, 2H) , 6,5 (d, 2H) , 6,6 (m. 3H), 7,1 (t, 2H), 7,5 (d, 2H); MS (M+H)+: 291. Método 23 4 — {2 — [ (AZ-Metil-iV-fenil) amino] etilsulfonil} nitrobenzeno A uma solução de 1-[ (2-cloroetil)sulfonil]-4-nitrobenzeno (Patente U.S. n° 5 716 936; 5 g, 22,8 mmol) em água (50 mL) adicionou-se acetato de sódio (3 g, 36,6 mmol) e N-metilanilina (3,3 g, 30,8 mmol). Aqueceu-se a reacção até refluxo durante 1 hora. Depois de se arrefecer um pouco, decantou-se o sobrenadante aquoso quente. Lavou-se o óleo residual com água fria. Recolheu-se o sólido resultante por filtração e secou-se ao ar. Recristalizou-se o produto em bruto de benzeno/éter de 69 petróleo para dar cristais vermelhos (5,3 g) . P.f. 111-113 °C. Este produto foi utilizado sem qualquer purificação adicional. Método 24 4-[(2-[N-Morfolino]etil)sulfonil]anilina 0 composto em epígrafe pode ser preparado por um método análogo ao utilizado no Método 22 acima (partes A-C) utilizando morfolina em vez de N-metilanilina. RMN: 2,2 (m, 4H), 3,3 (m, 4H), 3,4 (m, 4H) , 6,05 (s 1, 2H) , 6,6 (d, 2H) , 7,4 (d, 2H) ; MS (M+H)+: 271. Método 25 2, 5-Dicloro-4-(4-metoxifenoxi)pirimidina

Tratou-se uma solução de 2,4,5-tricloropirimidina (1,0 g, 5,4 mmol) e 4-metoxifenol (0,64 g, 5,2 mmol) em NMP (2,5 mL) com carbonato de potássio anidro (1,65 g, 12 mmol). Deixou-se que a mistura reaccional agitasse à temperatura ambiente durante 18 horas. Partilhou-se a reacção entre água e acetato de etilo. Evaporou-se a camada orgânica e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna eluindo com 10% de acetato de etilo em iso-hexano para proporcionar um produto sólido (1,33 g, 90%). RMN: 3,78 (s, 3H) , 7,00 (d, 2H), 7,20 (d, 2H), 8,77 (s, 1H) ; MS (M+H)+ 271, 273. 70

Exemplo 32

Os seguintes ilustram formas de dosagem farmacêuticas representativas contendo o composto de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável ou éster hidrolisável in vivo (doravante composto X), para utilização terapêutica ou profiláctica em humanos (a): Comprimido I mg/comprimido Composto X 100 Lactose Ph.Eur 182,75 Croscarmelose de sódio 12,0 Pasta de amido de milho (pasta a 5% p/v) 2,25 Estearato de magnésio O 00 (b): Comprimido II mg/comprimido Composto X 50 Lactose Ph.Eur 223,75 Croscarmelose de sódio 6,0 Amido de milho 15,0 Polivinilpirrolidona (pasta a 5% p/v) 2,25 Estearato de magnésio 3,0 (c): Comprimido III mg/comprimido Composto X 1,0 Lactose Ph.Eur 93,25 Croscarmelose de sódio 4,0 Pasta de amido de milho (pasta a 5% p/v) 0,75 Estearato de magnésio 1,0 71 (d): Cápsula mg/cápsula Composto X 10 Lactose Ph.Eur 488,5 Estearato de magnésio 1,5 (e): Injecção I (50 mg/mL) Composto X 5,0% p/v Solução de hidróxido de sódio 1 M 15,0% v/v Ácido clorídrico 0,1 M (para ajustar o pH até 7,6) Polietileno glicol 400 4,5% p/v Água para injecção até 100% (f): Injecção II 10 mg/mL Composto X 1,0% p/v Fosfato de sódio BP 3,6% p/v Solução de hidróxido de sódio 0,1 M 15,0% v/v Água para injecção até 100% (g): Injecção III (1 mg/mL, tamponada a pH 6) Composto X 0,1% p/v Fosfato de sódio BP 2,26% p/v Ácido cítrico 0,38% p/v Polietileno glicol 400 3,5% p/v Água para injecção até 100% 72

Nota

As formulações anteriores podem ser obtidas por processos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica. Os comprimidos (a)-(c) podem ser revestidos entericamente por meios convencionais, por exemplo, para proporcionar um revestimento de acetato ftalato de celulose.

Lisboa, 4 de Julho de 2007 73

Claims (13)

1. REIVINDICAÇÕES 1. Derivado de pirimidina da fórmula (I):

   R* d) em que: Qi e Q2 são fenilo; e um de Qi e Q2 ou ambos Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), Ν,Ν-ái- (alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (la') :

   (Ia) (Ia·) 1 em que: Y é -NHS(0)2-, -S(0)2NH- ou -S(0)2-; Z é Ra0-, RbRcN-, RdS-, ReRfNNR9-, cicloalquiloC3-8, fenilo ou um grupo heterocíclico; em que o referido fenilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rh; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH-este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de R1; Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf e Rg são independentemente seleccionados de hidrogénio, alquiloCi-4, alceniloC2-4, fenilo, grupo heterocíclico e cicloalquiloC3-8; em que o referido alquiloCi-4, alceniloC2-4 e cicloalquiloC3-8 estão opcionalmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados de R3; n é 0 ou 1; m é 1, 2 ou 3, além disso, m pode ser 0 quando Z é cicloalquiloC3-8, fenilo ou um grupo heterocíclico; Q3 é um heterociclo ligado através de azoto; em que o referido heterociclo está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rk; e em que se 0 referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rm 2 G é -0-, -S- ou -NR2-; R2 é seleccionado de hidrogénio, alquiloCi-6, alceniloC3-6 e alciniloC3-6; em que o referido alquiloCi-6, alceniloC3-6 e alciniloC3-6 estão opcionalmente substituídos com um ou mais grupos seleccionados de R°; R1 é seleccionado de hidrogénio, halo, hidroxilo, nitro, amino, N- (alquilCi_3) amino, N,N-di- (alquilCi-3) amino, ciano, trifluorometilo, triclorometilo, alquiloCi-3 [opcionalmente substituído com 1 ou 2 substituintes independentemente seleccionados de halo, ciano, amino, N- (alquilCi-3) amino, Ν,Ν-ái- (alquilCi-3) amino, hidroxilo e trifluorometilo] , alceniloC3_5 [opcionalmente substituído com até três substituintes halo ou com um substituinte trifluorometilo], alciniloC3-5, alcoxiloCi-3, mercapto, alquilsulfaniloCi-3, carboxilo e (alcoxi C1-3) carbonilo; Qi está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até quatro substituintes independentemente seleccionados de halo, mercapto, nitro, formilo, formamido, carboxilo, ciano, amino, ureído, carbamoílo, alquiloCi-4, alceniloC2-4, alciniloC2-4f alcanoílo Ci-4, (alcoxi C1-4) carbonilo, grupo heterocíclico, (alquilCi_4) S (0) a em que a é 0 ou 1, N'-(alquilCi-4) ureído, N' (alquilCi-4) ureído, Ν'- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, N' ,N'~di- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, N- (alquilCi-4) amino, 3 Ν,Ν-di- (alquilCi-4) amino, N- (alquilCi-4) carbamoílo, N,N-di-{alquilCi-4) carbamoílo e (alcanoilCi-4) amino; e também, independentemente ou adicionalmente, aos substituintes acima, Qi pode estar opcionalmente substituído com um até dois substituintes independentemente seleccionados de arilo, cicloalquiloC3-8 e um grupo heterocíclico; em que o referido arilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico pode estar opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Rp; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rq; e também independentemente, ou adicionalmente, aos substituintes acima, Qi pode estar opcionalmente substituído com um alcoxiloCi-4 ou com um substituinte hidroxilo; Q2 está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até quatro substituintes independentemente seleccionados de halo, hidroxilo, mercapto, nitro, formilo, formamido, carboxilo, ciano, amino, ureído, carbamoílo, alquiloCi-4, alceniloC2-4, alciniloC2-4, alcoxiloCi-4, alcanoílo C1-4, (alcoxi C1-4) carbonilo, grupo heterocíclico, (alquilCi-4) S (0) a em que a é 0 ou 1, Ν'- (alquilCi-4) ureído, N' ,N'-di- (alquilCi-4) ureído, Ν'- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, Ν', Ν' , -di- (alquilCi-4) -N- (alquilCi-4) ureído, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di- (alquilCi-4) amino, N- (alquilCi-4) carbamoílo, 4 Ν,Ν-di- (alquilCi-4) carbamoílo, alciniloxiloC2-4 e (alcanoilCi-4) amino; alceniloxiloC 2-4, e também, independentemente ou adicionalmente, aos substituintes acima, Q2 pode estar opcionalmente substituído com um até dois substituintes independentemente seleccionados de arilo, cicloalquiloC3-8 ou um grupo heterocíclico; em que o referido arilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico pode estar opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Ra; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH- este azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de RS* R1 e Rn são independentemente seleccionados de hidroxilo, halo, amino, ciano, formilo, formamido, carboxilo, nitro, mercapto, carbamoílo, sulfamoílo, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di- (alquilCi-4) amino, alcanoílo C1-4, alcanoíloxiloCi-4, alcoxiloCi-4, (alcoxi C1-4) carbonilo, N- (alquilCi-4) carbamoílo, N,N-di- (alquilCi-4) carbamoílo, (alcanoilCi-4) amino, a é 0 até 2, N- (alquilCi-4) sulfamoílo, N- (alquilCi-4) carbamoílo, (alquilCi-4) S (0) a em que (alquilCi-4) sulfonilamino, N- (alquilCi-4) 2sulfamoílo, N- (alquilCi-4) 2carbamoílo, fenilo, feniltio, fenoxilo, cicloalquiloC3-8 e um grupo heterocíclico; em que o referido fenilo, feniltio, fenoxilo, cicloalquiloC3-8 ou grupo heterocíclico pode estar opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um ou mais grupos seleccionados de Ru; e em que se o referido grupo heterocíclico possuir uma unidade -NH- este 5 azoto pode estar opcionalmente substituído com um grupo seleccionado de Rv. Rh, Rk, Rp Rs e Ru são independentemente seleccionados de hidroxilo, halo, amino, ciano, formilo, formamido, carboxilo, nitro, mercapto, carbamoílo, sulfamoílo, alquiloCi-4 [opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleccionados de halo, ciano, amino, N- (alquilCi-4) amino, NfN-di-(alquilCi-4) amino ou hidroxilo], alceniloC2-4 [opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleccionados de halo], alciniloC2-4, N- (alquilCi-4) amino, N,N-di- (alquilCi_4) amino, alcanoílo C1-4, alcanoíloxiloCi-4, alcoxiloCi-4 [opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleccionados de halo], (alcoxiCi-4) carbonilo, N- (alquilCi-4) carbamoílo, N,N-di- (alquilCi-4) carbamoílo, (alcanoilCi-4) amino, (alquilCi-4) S (0) a em que a é 0 até 2, (alquilCi-4) sulfonilamino, N- (alquilCi-4) sulfamoílo, N- (alquilCi-4) 2Sulfamoílo, fenilo, cicloalquiloC3-8 e um grupo heterocíclico; e Rj, Rq, Rk e Rv são independentemente seleccionados de alquiloCi-4, alcanoílo C1-4, alquilsulfoniloCi-4, (alcoxi C1-4) carbonilo, carbamoílo, N- (alquilCi-4) carbamoílo, N,N- (alquilCi-4) carbamoílo, benzilo, benziloxicarbonilo, benzoílo e fenilsulfonilo; na condição de que quando R1 representa nitro, G é -NH e Qi e Q2 são iguais, então Qi não seja fenilo substituído na posição 4 com sulfamoílo ou um sulfamoílo substituído no N, em que o substituinte no azoto seja seleccionado de pirimidina, 4-metil- pirimidina ou 4,6-dimetil-pirimidina; 6 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Derivado de pirimidina como reivindicado na reivindicação 1, em que um de Qi e Q2 ou ambos de Qi e Q2 estão substituídos num carbono endocíclico com um grupo seleccionado de sulfamoílo, mesilo, N-(2-dietilaminoetil)sulfamoílo, 2-(N-metil-N- fenilamino)etilsulfonilo, 2-morfolinoetilsulfonilo, N-(5-metiltiadiazol-2-il)sulfamoílo, N,N-di-(2- hidroxietil) sulfamoílo, N- (tiazol-2-il) sulfamoílo, 2\T— (3,4 — dimetilisoxazol-5-il)sulfamoílo, N- (pirid-2-il)sulfamoílo e N-metilsulfamoílo ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
3. 3. Derivado de pirimidina como reivindicado na reivindicação 1 ou reivindicação 2 em que Qi é fenilo substituído na posição para ou meta relativamente ao -NH- com sulfamoílo, N- (alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) , N,N-di-(alquilCi-4) sulfamoílo (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo), alquilsulfoniloCi-4 (opcionalmente substituído com halo ou hidroxilo) ou um substituinte da fórmula (Ia) ou (Ia') ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
4. 4. Derivado de pirimidina como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 3, em que G é -0-, -NH-, -(4,4,4-trifluorobutil)N-, -(3-bromo-2-propenil)N- ou - (3-fenil-2- propenil)N- ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. 7
5. 5. Derivado de pirimidina como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 4, em que R1 é hidrogénio ou halo ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
6. 6. Derivado de pirimidina como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 5, em que Qi está opcionalmente substituído com um substituinte alcoxiloCi-4 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
7. 7. Derivado de pirimidina como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 6, em que Ch está opcionalmente substituído num carbono endocíclico com um até dois substituintes independentemente seleccionados de halo, ciano, metilo, metoxilo e morfolino ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
8. 8. Derivado de pirimidina como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 7 seleccionado de: 2-(4-sulfamoilanilino)-4-(2-cianoanilino)pirimidina; 2-(4-N-metilsulfamoilanilino)-4-anilino-5-bromopirimidina; 2-(4-sulfamoilanilino)-4-anilino-5-bromopirimidina; 2,4-di-(4-sulfamoilanilino)-5-bromopirimidina; ou 2- (4-sulfamoilanilino)-4-(4-metoxifenoxi) -5-cloropirimidina; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. Processo para a preparação de um derivado de pirimidina, ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado 9. em qualquer uma das reivindicações 1 até 8, o qual compreende:- a) para compostos de fórmula (I) em que G é -NR2-; fazer reagir uma pirimidina de fórmula (II):

   em que L é um grupo substituível como definido a seguir, com um composto de fórmula (III) : H—G—( Q2 (III) em que G é -NR2-; b) reacção de uma pirimidina de fórmula (IV): L
9. 9 em que L é um grupo substituível como definido a seguir, com um composto de fórmula (V):

   NH2 (V) c) para compostos de fórmula (I) em que a cadeia lateral é de fórmula (Ia) e Y é -S(0)2NH-; por reacção de um composto de fórmula (VI):

   em que L é um grupo substituível; com uma amina de fórmula (VII): Z-(CH2)m-NH2 (VII) d) para compostos de fórmula (I) em que a cadeia lateral é de fórmula (Ia) e Y é -NHS(0)2- por reacção de uma amina de fórmula (VIII):
10. 10. Composição farmacêutica, a qual compreende um derivado de pirimidina de fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 8, em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável.

    10 com um composto de fórmula (IX): Z(CH2)m-S02L (IX) em que L é um grupo substituível; e) para compostos de fórmula (I) em que a cadeia lateral é de fórmula (Ia'); por reacção de um composto de fórmula (VI) com uma amina de fórmula (X):

    (X) e subsequentemente se necessário: i) converter um composto da fórmula (I) noutro composto da fórmula (I); ii) eliminar quaisquer grupos de protecção; iii) formar um sal farmaceuticamente aceitável.
11. 11. Derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer 11 uma das reivindicações 1 até 8, para ser utilizado num método de tratamento profiláctico ou terapêutico de um animal de sangue quente, tal como o homem.
12. 12. Derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 8, para ser utilizado como um medicamento.
13. 13. Utilização de um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, como reivindicado em qualquer uma das reivindicações 1 até 8, no fabrico de um medicamento para ser utilizado na produção de um efeito anticancerigeno, inibidor do ciclo celular (antiproliferação celular) num animal de sangue quente tal como o homem. Lisboa, 4 de Julho de 2007 12