BR122014024864B1 - Derivado de pirimidina, processo para preparar um derivado de pirimidina, composição farmacêutica, e, uso de um derivado de pirimidina - Google Patents

Abstract

“derivado de pirimidina, processo para preparar um derivado de pirimidina, composição farmacêutica, e, uso de um derivado de pirimidina” n r1 hn g q1 q2 (i) os derivados de pirimidina da fórmula (1) em que q1, q2, g e r1 são como definidos aqui e seus sais farmaceuticamente aceitáveis e ésteres hidrolisáveis in vivo são descritos. os processos para sua fabricação, composições farmacêuticas e seu uso como inibidores da serina/treonina cinase dependente de ciclina (cdk) e da cinase de adesão focal (fak) também são descritos.

Description

Dividido do PI 0108879-3, depositado em 26/02/2001 [0001] A invenção diz respeito a derivados de pirimidina ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis ou ésteres hidrolisáveis in vivo, que possuem atividade inibidora do ciclo celular e são conseqüentemente úteis para a sua atividade anti-câncer (tal como antiproliferador celular, anti-migração celular e/ou apoptótico) e, portanto, são úteis em métodos de tratamento de um animal de sangue quente, tal como o ser humano. A invenção também diz respeito ao processo para a fabricação dos ditos derivados de pirimidina, a composições farmacêuticas que os contenham e a seu uso na fabricação de medicamentos ou uso na produção de um efeito anti-câncer (antiproliferação/migração celular e/ou apoptótico) em um animal de sangue quente, tal como o ser humano.

[0002] Uma família de proteínas intracelulares denominadas ciclinas desempenham um papel central no ciclo celular. A síntese e a degradação de ciclinas são rigorosamente controladas, tal que seu nível de expressão flutue durante o ciclo celular. As ciclinas ligam-se às serina/treonina cinases dependentes de ciclina (CDKs) e esta associação é essencial para a atividade de CDK (tal como CDK1, CDK2, CDK4 e/ou CDK6) dentro da célula. Embora os detalhes precisos de como cada um destes fatores se combinam para regular a atividade de CDK sejam mal entendidos, o equilíbrio entre os dois dita de qualquer forma se a célula progredirá por todo o ciclo celular.

[0001] A recente convergência da pesquisa de oncogene e do gene supressor de tumor identificou a regulagem da entrada na célula como um ponto de controle chave da mitogênese em tumores. Além disso, as CDKs parecem estar a jusante de diversos caminhos que sinalizam o oncogene. A desregulagem da atividade de CDK pela superregulagem de ciclinas e/ou anulação dos inibidores endógenos parece ser um eixo importante entre os / 63 caminhos de sinalização mitogênicos e de proliferação de células tumorais. [0004] Conseqüentemente, foi reconhecido que um inibidor das cinases do ciclo celular, particularmente inibidores de CDK2, CDK4 e/ou CDK6 (que operam na fase S, GI-S e fase GI-S respectivamente) deve ser de valor como um inibidor seletivo da proliferação celular, tal como o desenvolvimento de células cancerígenas em mamíferos.

[0005] Além disso, acredita-se que a inibição da cinase de adesão focal (FAK), que está envolvida nos caminhos de transdução de sinal, induz a apoptose (morte celular) e/ou inibe a migração celular e um inibidor de FAK, portanto, pode ter valor como um agente anti-câncer.

[0006] A presente invenção está fundamentada na verificação de que certos compostos de 2,4-pirimidina inibem surpreendentemente os efeitos das cinases do ciclo celular que apresentam seletividade quanto a CDK2, CDK4 e CDK6 e também inibem a FAK e, desta maneira possuem propriedades anticâncer (anti-migração/proliferação celular e/ou apoptótico). Espera-se que tais propriedades sejam de valor no tratamento de estados de doenças associados com ciclos celulares e proliferação celular aberrantes, tais como canceres (tumores sólidos e leucemias), distúrbios fibroproliferativos e diferenciativos, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, nefropatias agudas e crônicas, ateroma, aterosclerose, restenose arterial, doenças autoimunes, inflamação aguda e crônica, doenças ósseas e doenças oculares com a proliferação de vaso retinal.

[0007] De acordo com a invenção, é fornecido um derivado de pirimidina da fórmula / 63

em que:

Qi e Q₂ são independentemente selecionados de arila ou heteroarila ligada a carbono e um de Q₁ e Q₂ ou ambos de Q₁ e Q₂ são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de N-( alquila C₁₂)amino, N,N-di-(alquila C_1-2)amino, fenila, grupo heterocíclico, fenóxi, grupo -O- heterocíclico, alquila C_1-2 substituída, alcóxi C_1-2 substituído, alcóxi C_1-2 carbonila substituído, N-(alquila C_1-2)amino substituída, alcóxi C₁₂ alquila C_1-2 substituída, alquenila C_2-4 substituída e alquinila C_2-4 substituída; em que os ditos substituintes para alquila C_1-2, alcóxi C_1-2, alcóxi C_1-2 carbonila, N-(alquila C_1-2)amino, alcóxi C_1-2 alquila C_1-2, alquenila C_2-4 e alquinila C_2-4 são selecionados de halo, hidróxi, mercapto, nitro, formila, formamido, carbóxi, ciano, amino, ureído, carbamoil, sulfamoil, alcanoil C1-4, alcóxi C_1-4 carbonila, fenila, grupo heterocíclico, benzoil, grupo -C(O)heterocíclico, alquila C_1-4 S(O)_a em que a é de 0 a 2, N-(alquila C_1-4)ureído, N,N-di-(alquila C_1-4)ureído, N-(alquila C_1-4)-N-(alquila C_1-4)ureído, N,N-di-(alquila C_1-4)-N-(alquila C_1-4)ureído, N-alquila C_1-4 amino, N,N-di-(alquila C1-4)amino, N-(alquila C1-4) sulfamoil, N,N-di-(alquila C14)sulfamoil, N-alquila C1-4 carbamoil,

N,N-di-(alquila C1-4)carbamoil e alcanoil C1-4 amino; em que qualquer fenila, benzila, benzoil ou grupo heterocíclico é opcionalmente substituída em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^a; e em que se qualquer grupo heterocíclico contém uma porção de -NH / 63 cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^b;

G é -O- ou -NR²-;

R² é selecionado de hidrogênio, alquila C1-6, alquenila C3-6 e alquinila C3-6; em que as ditas alquila C1-6, alquenila C3-6 e alquinila C3-6 são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos selecionados de R^c;

R¹ é selecionado de hidrogênio, halo, hidróxi, nitro, amino, N-(alquila C1-3)amino, N,N-di-(alquila G^amino, ciano, trifluorometila, triclorometila, alquila C1-3 [opcionalmente substituído por 1 ou 2 substituintes independentemente selecionados de halo, ciano, amino, N-(alquila C1-

3) amino, NN-di-(alquila C1-3)amino, hidróxi e trifluorometila], alquenila C3-5 [opcionalmente substituído por até três substituintes halo ou por um substituinte], alquinila C3-5, alcóxi C1-3, mercapto, alquila C1-3 sulfanila, carbóxi e alcóxi C1-3 carbonila;

Q1 é opcionalmente substituída em um anel de carbono por um a quatro substituintes independentemente selecionados de halo, mercapto, nitro, formila, formamido, carbóxi, ciano, amino, ureído, carbamoil, sulfamoil, alquila C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4 [em que as ditas alquila C1-4, alquenila C2-4 e alquinila C2-4 são opcionalmente substituídas por um ou mais grupos selecionados de R^d], alcanoil C1-4, alcóxi C1-4 carbonila, grupo heterocíclico, alquila C1-4 S(O)a em que a é de 0 a 2 [opcionalmente substituído por hidróxi], N-(alquila C1-4)ureído, N,N-di-(alquila C1-4)ureído, N-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído, N,N-di-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-

4) ureído, N-alquila C1-4 amino, NN-di-(alquila C1-4)amino, N-(alquila C14)sulfamoil, NN-di-(alquila C1-4)sulfamoil, N-alquila C1-4 carbamoil, N,N-di-(alquila C1-4)carbamoil e alcanoil C1-4 amino;

e também independentemente, ou além dos substituintes acima, Q¹ pode ser opcionalmente substituídos por um ou dois substituintes independentemente selecionados de arila, cicloalquila C3-8 e um grupo / 63 heterocíclico; em que as ditas arila, cicloalquila C3-8 ou grupo heterocíclico podem ser opcionalmente substituídos em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^e; e em que, se o dito grupo heterocíclico conter uma porção de -NH- cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^f;

Q² é opcionalmente substituído em um anel de carbono por um a quatro substituintes independentemente selecionado de halo, hidróxi, mercapto, nitro, formila, formamido, carbóxi, ciano, amino, ureído, carbamoil, sulfamoil, alquila C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4, alcóxi C1-4 [em que as ditas alquila C1-4, alquenila C2-4, alquinila C2-4 e alcóxi C1-4 são opcionalmente substituídos por um ou mais grupos selecionados de R^g], alcanoil C1-4, alcóxi C1-4 carbonila, grupo heterocíclico, alquila C1-4 S(O)a em que a é de 0 a 2 [opcionalmente substituído por hidróxi], N-(alquila C14)ureído, N,N’-di-(alquila C1-4)ureído, N-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído, N,N-di-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído, N-alquila C1-4 amino, NN-di-(alquila C1-4)amino, N-(alquila C1-4)sulfamoil, N,N-di-(alquila C14)sulfamoil, N-alquila C1-4 carbamoil, N,N-di-(alquila C1-4)carbamoil, alquenilóxi C2-4, alquinilóxi C2-4, alcanoil C1-4 amino;

e também independentemente, ou além dos substituintes acima, Q² pode ser opcionalmente substituído por um ou dois substituintes independentemente selecionados de arila, cicloalquila C3-8 ou a grupo heterocíclico; em que as ditas arilas, cicloalquila C3-8 ou grupo heterocíclico podem ser opcionalmente substituídos em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^h; e em que se o dito grupo heterocíclico conter uma porção de -NH- cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R¹;

R^c, R^d e R^g são independentemente selecionados de hidróxi, halo, amino, ciano, formila, formamido, carbóxi, nitro, mercapto, carbamoil, sulfamoil, N-alquila C1-4 amino, N,N-di-(alquila C1-4)amino, alcanoil C1-4, / 63 alcanoilóxi C1-4, alcóxi C1-4, alcóxi C1-4 carbonila, N- alquila C1-4 carbamoil, N,N-di-(alquila C1-4)carbamoil, alcanoil C1-4 amino, alquila C1-4 S(O)a em que a é de 0 a 2, alquila C1-4 sulfonilamino, N-(alquila C1-4)sulfamoil, N-(alquila C1-4)2sulfamoil, N-(alquila C1-4)carbamoil, N-(alquila C1-4)2carbamoil, fenila, feniltio, fenóxi, cicloalquila C3-8 e um grupo heterocíclico; em que as ditas fenila, feniltio, fenóxi, cicloalquila C3-8 ou grupo heterocíclico podem ser opcionalmente substituídos em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^j e em que se o dito grupo heterocíclico conter uma porção de -NH- cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^k;

R^a, R^e, R^h e R^J são independentemente selecionados de hidróxi, halo, amino, ciano, formila, formamido, carbóxi, nitro, mercapto, carbamoil, sulfamoil, alquila C1-4 [opcionalmente substituídos por um ou mais grupos selecionados de halo, ciano, amino, N-alquila C1-4 amino, N,N-di-(alquila C14)amino ou hidróxi], alquenila C2-4 [opcionalmente substituídos por um ou mais grupos selecionados de halo], alquinila C2-4, N-alquila C1-4 amino, N,N-di-(alquila C1-4)amino, alcanoil C1-4, alcanoilóxi C1-4, alcóxi C1-4 [opcionalmente substituídos por um ou mais grupos selecionados de halo], alcóxi C1-4 carbonila, N-alquila C1-4 carbamoil, N,N-di-(alquila C14)carbamoil, alcanoil C1-4 amino, alquil C1-4 S(O)a em que a é de 0 a 2, alquila C1-4 sulfonilamino, N-(alquila C1-4)sulfamoil, N-(alquila C1-4)2sulfamoil, fenila, cicloalquila C3-8 e um grupo heterocíclico; e

R^b, R^f, Rⁱ e R^k são independentemente selecionados de alquila C1-4, alcanoil C1-4, alquila C1-4 sulfonila, carbamoil, N-(alquila C1-4)carbamoil, N,N-(alquila C1-4)carbamoil, benzila, benziloxicarbonila, benzoil e fenilsulfonila; ou um sal ou éster hidrolisável in vivo destes farmaceuticamente aceitáveis.

[0008] “Arila” é um anel de carbono total ou parcialmente insaturado mono ou bicíclico que contém de 4 a 12 átomos. Preferivelmente, a “arila” é / 63 um anel monocíclico que contém 5 ou 6 átomos ou um anel bicíclico que contém 9 ou 10 átomos. Mais preferivelmente “arila” é fenila, naftila, tetralinila ou indanila. Particularmente “arila” é fenila, naftila ou indanila. Mais particularmente “arila” é fenila.

[0009] Uma “heteroarila ligada a carbono” é um anel monocíclico totalmente insaturado de 5 ou de 6 membros ou anel bicíclico de 9 ou 10 membros, do qual pelo menos um átomo é escolhido de nitrogênio, enxofre ou oxigênio. Este anel é ligado por intermédio de um átomo de carbono ao -NH- (por Q1) ou G (por Q₂). Preferivelmente, a “heteroarila ligada a carbono” é furanila, tienila, pirrolila, oxazolila, isoxazolila, tiazolila, isotiazolila, imidazolila, pirazolila, furazanila, triazolila, tiadiazolila, piridila, pirimidila, pirazinila, piridazinila, triazinila, indolila, quinolila ou benzimidazolila. Mais preferivelmente a “heteroarila ligada a carbono” é piridila, tiazolila ou pirazolila. Particularmente a “heteroarila ligada a carbono” é piridila.

[0010] Um “grupo heterocíclico” é um anel saturado, parcialmente saturado, ou insaturado, mono ou bicíclico que contém que contém de 4 a 12 átomos, dos quais pelo menos um átomo é escolhido do nitrogênio, enxofre ou oxigênio, que pode, a não ser que especificado de outra maneira, ser ligado a carbono ou nitrogênio, em que um grupo -CH2 pode ser opcionalmente substituído por -C(O)- e um átomo de átomo de enxofre do anel pode ser opcionalmente oxidado para formar S-óxido(s). Preferivelmente um “grupo heterocíclico” é pirrolidinila, morfolino, piperidila, quinuclidinila, piridila, piranila, pirrolila, isotiazolila, indolila, quinolila, tienila, furila, 1,3-benzodioxolila, tiadiazolila, piperazinila, tiazolidinila, pirrolidinila, succinimidila, tiomorfolino, pirazolila, pirrolinila, homopiperazinila, tetraidropiranila, imidazolila, pirimidila, pirazinila, piridazinila, isoxazolila, ftalimidila, 4-piridona, 1-isoquinolona, 2-pirrolidona, 4-tiazolidona, imidazo[1,2-a]piridina ou 3-aza-8oxabiciclo[3,2,1]hexano. Mais / 63 preferivelmente um “grupo heterocíclico” é pirrolidinila, morfolino, piperidila, quinuclidinila, piperazinila, succinimidila, imidazolila ou ftalimidila.

[0011] Neste relatório descritivo o termo “alquila” inclui tant o grupo alquila de cadeia reta quanto ramificada mas referências a grupos alquila individuais, tais como “propila” são específicos apenas para a versão de cadeia reta. Uma convenção análoga aplica-se a outros termos genéricos. “Halo” é flúor, cloro, bromo e iodo.

[0012] Os exemplos de alquenila C2-4 são vinila e alila; os exemplos de alquenila C2-6 são alquenila C3-6, vinila e alila; um exemplo de alquenila C3-6 é alila; uns exemplos de alquinila C3-6 são alquinila C3-5 e propin-2-ila; os exemplos de alquinila C2-4 são etinila e propin-2-ila; os exemplos de alquinila C2-4 são etinila e propin-2-ila; os exemplos de alcanoil C1-4 são acetila e propionila; os exemplos de alcóxi C1-4 carbonila são alcóxi C1-3 carbonila, alcóxi C1-2 carbonila, metoxicarbonila, etoxicarbonila, propoxicarbonila e terc-butoxicarbonila; os exemplos de alquileno C1-4 são metileno, etileno e propileno; os exemplos de alquila C1-4 são alquila C1-3, alquila C1-2, metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila e terc-butila; os exemplos de alquila C1-6 são metila, etila, propila, isopropila, butila, isobutila, sec-butila, terc-butila e 3-metilbutila; os exemplos de alcóxi C1-4 são alcóxi C1-3, alcóxi C1-2, metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi e butóxi; um exemplo de alquenilóxi C2-4 é alilóxi; um exemplo de alquinilóxi C2-4 é propinilóxi; os exemplos de alquila C1-4 S(O)a em que a é de 0 a 2 são alquila C1-3 sulfanila, metiltio, etiltio, propiltio, metilsulfinila, etilsulfinila, propilsulfinila, mesila, etilsulfonila e propilsulfonila; os exemplos de N-alquila C1-4 carbamoil são N-metilcarbamoil, N-etilcarbamoil e N-propilcarbamoil; os exemplos de NN-di-(alquila C1-4)-carbamoil são N,N-dimetilcarbamoil,

N-etil-N-metilcarbamoil e NN-dietilcarbamoil; os exemplos de N-alquila C1-4 amino são N-(alquila C1-3)amino, N-(alquila C1-2)amino, metilamino, / 63 etilamino e propilamino; os exemplos de N,N-di-(alquila Ci-4)amino são N,N-di-(alquila C1-3)amino, NN-di-(alquila C1-2)amino, dimetilamino, N-etil-N-metilamino, dietilamino, N-metil-N-propilamino e dipropilamino; os exemplos de alcanoil C1-4 amino são acetamido, propionamido e butiramido; os exemplos de cicloalquila C3-8 são ciclopropila, ciclopentila e cicloexila; os exemplos de alcanoil C1-4 são acetila e propionila; os exemplos de alcanoilóxi C1-4 são acetilóxi e propionilóxi; os exemplos de N’-(alquila C1-4)ureído são N-metilureído e N-etilureído; os exemplos de N’,N’-di-(alquila C1-4)ureído são N,N’-dimetilureído, N,N’-diisopropil-ureído e N’-metil-N’-propilureído; os exemplos de N-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído são N-metil-N-etilureído e N-metil-N-metilureído; os exemplos de N’,N’-di-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído são N’,N’-dimetil-N-etilureído e N’-metil-N’-propil-N-butil-ureído; os exemplos de N’-(alquila C14)sulfamoil são N-metilsulfamoil e N-isopropilsulfamoil; os exemplos de N,N-di-(alquila C1-4)sulfamoil são N-metil-N-etilsulfamoil e

N,N-dipropilsulfamoil; os exemplos de alquila C1-4 sulfonilamino são mesilamino, etilsulfonilamino e propil-sulfonilamino; os exemplos de grupo O- heterocíclico são piperidinilóxi, piridilóxi e pirimidinilóxi; os exemplos de alcóxi C1-2 alquila C1-2 são metoximetila e etoxietila; os exemplos de grupo heterocíclico -C(O)- são piperazinilcarbonila, piridilcarbonila e pirimidinilcarbonila.

[0013] Um sal farmaceuticamente aceitável de um derivado de pirimidina da invenção é, por exemplo, um sal de adição ácida de um derivado de pirimidina da invenção que é suficientemente básico, por exemplo, um sal de adição ácida com, por exemplo, um ácido inorgânico ou orgânico, por exemplo, ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico, trifluoroacético, cítrico ou maléico. Além disso um sal farmaceuticamente aceitável de um derivado de pirimidina da invenção que é suficientemente ácido é um sal de metal alcalino, por exemplo, por exemplo um sal de / 63 potássio ou de sódio, um sal de metal alcalino terroso, por exemplo, um sal de cálcio ou de magnésio, um sal de amônio ou um sal com uma base orgânica que produz um cátion fisiologicamente aceitável, por exemplo, um sal com metilamina, dimetilamina, trimetilamina, piperidina, morfolina ou tris-(2-hidroxietil)amina.

[0014] Os compostos da fórmula (I) podem ser administrados na forma de um pró-medicamento que é destruído no corpo humano ou animal para dar um composto da fórmula (1). Os exemplos de pró-medicamentos incluem os ésteres hidrolisáveis in vivo de um composto da fórmula (I).

[0015] Um éster hidrolisável in vivo de um composto da fórmula (I) que contém um grupo carbóxi ou hidróxi é, por exemplo, um éster farmaceuticamente aceitável que é hidrolisado no corpo humano ou animal para produzir o ácido ou o álcool parente. Os ésteres farmaceuticamente aceitáveis adequados para carbóxi incluem ésteres alcoximetílicos C1-6, por exemplo, metoximetila, ésteres alcanoiloximetílicos C1-6, por exemplo, pivaloiloximetila, ésteres ftalidílicos, ésteres cicloalcóxi C3-8 carboniloxialquílicos C1-6, por exemplo, 1-cicloexilcarboniloxietila; éster 1,3-dioxolen-2-onilmetílico, por exemplo, 5-metil-1,3-dioxolen-2-onilmetila; e ésteres alcóxi C1-6 carboniloxietílico, por exemplo, 1-metoxicarboniloxietila e podem ser formados em qualquer grupo carbóxi nos compostos desta invenção.

[0016] Um éster hidrolisável in vivo de um composto da fórmula (I) que contém um grupo hidróxi inclui ésteres inorgânicos, tais como os ésteres de fosfato e ésteres -aciloxialquílicos e compostos relacionados que como um resultado da hidrólise in vivo do éster destruído para dar o grupo hidróxi precursor. Os exemplos de éteres -aciloxialquílicos incluem acetoximetóxi e 2,2-dimetilpropionilóxi-metóxi. Uma seleção de éster hidrolisável in vivo que forma grupos para hidróxi inclui alcanoil, benzoil, fenilacetila e benzoil substituída e fenilacetila, alcoxicarbonila (para dar ésteres de carbonato de / 63 alquila), dialquilcarbamoil e N-(dialquilaminoetil)-N-alquilcarbamoil (para dar carbamatos), dialquil-aminoacetila e carboxiacetila. Os exemplos de substituintes em benzoil incluem morfolino e piperazino ligados a partir de um átomo de nitrogênio do anel por intermédio de um grupo metileno à posição 3 ou 4 do anel de benzoil.

[0017] Alguns dos compostos da fórmula (I) podem ter centros quirais e/ou centros isoméricos geométricos (isômeros E e Z) e deve ser entendido que a invenção abrange todos os tais diastereo-isômeros e isômeros geométricos óticos que possuem atividade inibidora de CDK e/ou FAK.

[0018] A invenção diz respeito a qualquer um e a todas as formas tautoméricas dos compostos da fórmula (I) que possuem atividade inibidora de CDK e/ou FAK.

[0019] Também deve ser entendido que certos compostos da fórmula (I) podem existir nas formas solvatadas bem como nas não solvatadas tais como, por exemplo, formas hidratadas. Deve ser entendido que a invenção abrange todas tais formas solvatadas que possuem atividade inibidora de CDK e/ou FAK.

[0020] Os compostos preferidos particulares da invenção compreendem um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis, em que R¹, Q1, Q2, e G têm qualquer um dos significados definidos anteriormente ou qualquer um dos seguintes valores. Tais valores podem ser usados quando apropriado com qualquer uma das definições, reivindicações ou modalidades definidas anteriormente ou a seguir.

[0021] Preferivelmente Q1 e Q2 são independentemente selecionados de fenila e de piridila.

[0022] Preferivelmente Q1 é fenila.

[0023] Preferivelmente Q2 é fenila ou piridila.

[0024] Preferivelmente Q1 é fenila e Q2 é selecionado de fenila e de / 63 piridila.

[0025] Preferivelmente um de Qi e Q2 ou ambos de Qi e Q2 são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de NN-di-(alquila C1-2)amino, grupo heterocíclico, grupo -O- heterocíclico, alquila C1-2 substituída, alcóxi C1-2 substituído, alcóxi C1-2 carbonila substituída, N-(alquila C1-2)amino substituída, alcóxi C1-2 alquil C1-2 substituída e alquinila C2-4 substituída; em que os ditos substituintes para alquila C1-2, alcóxi C1-2, alcóxi C1-2 carbonila, N-(alquila C1-2)amino, alcóxi C1-2 alquila C1-2 e alquinila C2-4 são selecionados de hidróxi, carbóxi, amino, grupo heterocíclico, grupo heterocíclico-C(O)-, N-alquila C1-4 amino e N,N-di-(alquila C1-4)amino; em que qualquer grupo heterocíclico é opcionalmente substituído em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^a; e em que se qualquer grupo heterocíclico conter uma porção de -NH- cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^b.

[0026] Mais preferivelmente um de Q1 e Q2 ou ambos de Q1 e Q2 são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de N,N-di-(alquila C1-2)amino, piperazino (opcionalmente substituídos no 4-nitrogênio por metila), piperidin-3-ilóxi (opcionalmente substituídos no nitrogênio por metila), piperidin-4-ilóxi (opcionalmente substituídos no nitrogênio por metila), alquila C1-2 substituída, alcóxi C1-2 substituído, alcóxi C1-2 carbonila substituído, N-(alquila C1-2)amino substituído, alcóxi C1-2 alquila C1-2 substituída e alquinila C2-4 substituída; em que os ditos substituintes para alquila C1-2, alcóxi C1-2, alcóxi C1-2 carbonila, N-(alquila C1-2)amino, alcóxi C1-2 alquila C1-2 e alquinila C2-4 são selecionados de hidróxi, carbóxi, amino, succinimid-1-ila, piperidin-3-ila (opcionalmente substituídos no nitrogênio por metila), ptalimid-1-ila, morfolino, quinuclidin-3-ila (opcionalmente substituído por hidróxi), piperidin-4-ila, pirrolidin-1-ila, piperazino (opcionalmente substituídos no nitrogênio por / 63 metila), imidazol-1-ila, piperidino, piperazinocarbonila (opcionalmente substituídos no nitrogênio por isopropila), N-alquila C1-4 amino e N,N-di-(alquila C1-4)amino.

[0027] Particularmente um de Q1 e Q2 ou ambos de Q1 e Q2 são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de dimetilamino, 4-metilpiperazino, aminometila, 2-hidroxietoximetila, succinimid-1-ilmetila, 2-pirrolidin-1-iletila, 2-aminoetila, piperid-4-ilóxi,

1- metilpiperid-4-ilóxi, 1-metilpiperid-3-ilóxi, carboximetóxi, 1- metilpiperid-2-ilmetóxi, 1-metilpiperid-3-ilmetóxi, piperid-4-ilmetóxi, 4isopropilpiperazinocarbonilmetóxi, 2-ptalimid- 1-iletóxi, 2-morfolinoetóxi, 2dimetilaminoetóxi, 2-dietilaminoetóxi, 2-(4-metilpiperazino)etóxi,

2- imidazo-1-iletóxi, 2-pirrolidin-1-iletóxi, 2-aminoetinila, 2-dimetil- aminoetinila, 2-metilaminoetinila, 2-(3-hidroxiquinuclidin-3-il)etinila, 2-morfolinoetoximetila, 2-dietilaminoetoximetila, 2-pirrolidin1-iletoximetila, 2-(4-metilpiperazino)etoximetila, 2-dietilaminoetoxicarbonila, 2-piperidinoetilamino ou 2-isopropilaminoetilamino.

[0028] Mais particularmente um de Q1 e Q2 ou ambos de Q1 e Q2 são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de 1-metilpiperid-4-ilóxi, carboximetóxi, 2-dimetilaminoetóxi, 2-metilaminoetinila, 2-piperidinoetilamino ou 2-isopropilaminoetilamino.

[0029] Preferivelmente este é Q1 que é substituído em um carbono do anel por um substituinte selecionado de N-(alquila C1-2)amino, N,N-di-(alquila C1-2)amino, fenila, grupo heterocíclico, fenóxi, grupo -O- heterocíclico, substituída alquila C1-2, alcóxi C1-2 substituído, alcóxi C1-2 carbonila substituída, N-(alquila C1-2)amino substituída, alcóxi C1-2 alquila C1-2 substituída, alquenila C2-4 substituída e alquinila C2-4; em que os ditos substituintes para alquila C1-2, alcóxi C1-2, alcóxi C1-2 carbonila, N-(alquila C1-2)amino, alcóxi C1-2 alquila C1-2, alquenila C2-4 e alquinila C2-4 são selecionados de halo, hidróxi, mercapto, nitro, formila, formamido, carbóxi, ciano, amino, ureído, carbamoil, sulfamoil, alcanoil / 63

C1-4, alcóxi C1-4 carbonila, fenila, grupo heterocíclico, benzoil, grupo heterocíclico -C(O)-, alquila C1-4 S(O)a em que a é de 0 a 2, N-(alquila C14)ureído, N,N-di-(alquila C1-4)ureído, N-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído, N,N-di-(alquila C1-4)-N-(alquila C1-4)ureído, N-alquila C1-4 amino, NN-di-(alquila C1-4)amino, N-(alquila C1-4)sulfamoil, N,N-di-(alquila C14)sulfamoil, N-alquila C1-4 carbamoil, N,N-di-(alquila C1-4)carbamoil e alcanoil C1-4 amino; em que qualquer fenila, benzila, benzoil ou grupo heterocíclico é opcionalmente substituído em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^a; e em que se qualquer grupo heterocíclico conter uma porção de -NH- cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^b e mais preferivelmente Q1 é não substituído a parte de um substituinte selecionado desta lista.

[0030] Mais preferivelmente Q1 é substituído na posição para ou meta com relação a -NH-.

[0031] Particularmente Q1 é substituído na posição para com relação ao -NH-.

[0032] Em um aspecto da invenção, preferivelmente G é -O-.

[0033] Em um outro aspecto da invenção preferivelmente G é -NR²-.

[0034] Em um aspecto da invenção quando G é -NR²-, preferivelmente R² é hidrogênio.

[0035] Em um outro aspecto da invenção quando G é -NR²-, preferivelmente R² não é hidrogênio. Preferivelmente R² é hidrogênio, cloro ou bromo. Mais preferivelmente R¹ é bromo.

[0036] Preferivelmente Q² é não substituído ou substituído por um grupo selecionado de flúor, bromo, metila, metóxi e ciano. Mais preferivelmente Q² é não substituído ou substituído por um grupo metila. [0037] Preferivelmente Q² é fenila, 2-cianofenila, 3-metilfenila,

4-fluorofenila, 4-bromofenila, 4-metoxifenila ou 6-metilpirid-2-ila.

[0038] Mais preferivelmente Q² é fenila ou 6-metilpirid-2-ila.

/ 63 [0039] Portanto, em um aspecto preferido da invenção é fornecido um derivado de pirimidina da fórmula (I) como descrito acima, em que:

Q1 e Q2 são independentemente selecionados de fenila e piridila; e Q1 é substituído em um carbono do anel por um substituinte selecionado de N,N-di-(alquila C1-2)amino, grupo heterocíclico, grupo -O- heterocíclico, alquila C1-2 substituída, alcóxi C1-2 substituído, alcóxi C1-2 carbonila substituída, N-(alquila C1-2)amino substituído, alcóxi C1-2 alquila C1-2 substituída e alquinila C2-4; em que os ditos substituintes para alquila C1-2, alcóxi C1-2, alcóxi C1-2 carbonila, N-(alquila C1-2)amino, alcóxi C1-2 alquila C1-2 e alquinila C2-4 são selecionados de hidróxi, carbóxi, amino, grupo heterocíclico, grupo heterocíclico -C(O)-, N-alquila C1-4 amino e N,N-di-(alquila C1-4)amino; em que qualquer grupo heterocíclico é opcionalmente substituído em um anel de carbono por um ou mais grupos selecionados de R^a; e em que se qualquer grupo heterocíclico conter uma porção de -NH- cujo nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^b; e Q2 é não substituído ou substituído por um grupo selecionado de flúor, bromo, metila, metóxi e ciano;

G é -NH-; e

R¹ é hidrogênio, cloro ou bromo; ou sal ou éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitável deste.

[0040] Portanto, em um aspecto mais preferido da invenção é fornecido um derivado de pirimidina da fórmula (I) como descrito acima, em que:

Q1 é fenila e Q2 é selecionado de fenila e piridila; Q1 é substituído na posição meta ou para em relação ao -NH- por um substituinte selecionado de dimetilamino, 4-metilpiperazino, aminometila, 2-hidroxietoximetila, succinimid-1-ilmetila, 2-pirrolidin-1-iletila, 2-aminoetila, piperid-4-ilóxi, 1-metilpiperid-4-ilóxi, 1-metilpiperid-3-ilóxi, carboximetóxi,

1-metilpiperid-2-ilmetóxi, 1-metilpiperid-3-ilmetóxi, piperid-4-ilmetóxi, / 63

4-isopropilpiperazinocarbonilmetóxi, 2-ptalimid-1 iletóxi, 2-morfolinoetóxi, 2-dimetilaminoetóxi, 2-dietilaminoetóxi, 2-(4metilpiperazino)etóxi, 2-imidazol-1-iletóxi, 2-pirrolidin-1-iletóxi, 2-amino-etinila, 2dimetilaminoetinila, 2-metilaminoetinila, 2-(3-hidroxiquinuclidin-3-il)etinila, 2-morfolinoetoximetila, 2-dietilaminoetoximetila, 2-pirrolidin1-iletoximetila, 2-(4metilpiperazino)etoximetila, 2-dietilaminoetoxicarbonila, 2-piperidinoetilamino ou 2-isopropilaminoetilamino; e Q2 é não substituído ou substituído por um grupo selecionado de flúor, bromo, metila, metóxi e ciano

G é -NH-; e

R¹ é hidrogênio, cloro ou bromo; ou sal ou éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0041] Em um aspecto da invenção, os compostos preferidos da invenção são aqueles dos Exemplos 2, 12, 21, 28, 30 ou 38 ou sal ou éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0042] Em um outro aspecto da invenção os compostos preferidos da invenção incluem qualquer um dos exemplos ou sal ou éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitáveis destes.

[0043] Os aspectos preferidos da invenção são aqueles que se relacionam com o composto ou com um sal farmaceuticamente aceitável deste.

[0044] Um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou sal ou éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitáveis destes, pode ser preparado por qualquer processo conhecido a ser aplicável à preparação dos compostos relacionados quimicamente. Tais processos, quando usados para preparar um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um ou sal ou éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitáveis destes, são fornecidos como uma outra característica da invenção e são ilustrados pelos seguintes exemplos representativos em que, a não ser que estabelecido de outra maneira R¹, Q¹, Q² / 63 e G tem qualquer um dos significados definidos anteriormente para um derivado de pirimidina da fórmula (I) e a não ser que um outro substituinte seja retirado do anel Q1 ou Q2, o anel pode carregar qualquer um dos substituintes descritos anteriormente (opcionalmente protegidos quando necessário). Quando um substituinte é retirado do anel Q1, isto inclui (a não ser que estabelecido de outra maneira) as possibilidades do substituinte estar no anel Q2 além de ou no lugar do substituinte que está no anel Q1. Os materiais de partida necessários podem ser obtidos pelos procedimentos padrão da química orgânica (ver, por exemplo, Advanced Organic Chemistry (Wiley-Interscience), Jerry March - também útil para a direção geral nas condições e reagentes de reação). A preparação de tais materiais é descrita nos processos e Exemplos não limitantes anexos. Alternativamente, os materiais de partida necessários são obteníveis pelos procedimentos análogos àqueles ilustrados que estão dentro da habilidade comum de um químico orgânico. [0045] Desta maneira, como uma outra característica da invenção são fornecidos os seguintes processos que compreendem de:a) para os compostos da fórmula (I) onde G é -NR²-; reagir uma pirimidina da fórmula (II):

(II) em que L é um grupo substituível como definido abaixo, com um composto da fórmula (III):

H—G (III) onde G é -NR²-;

/ 63

b) reação de uma pirimidina da fórmula (IV):

(IV) em que L é um grupo substituível como definido abaixo, com um composto da fórmula (V):

NH e a seguir se necessário:

i) converter um composto da fórmula (I) em um outro composto da fórmula (I);

ii) remover quaisquer grupos de proteção;

iii) formar um sal ou um éster hidrolisável in vivo farmaceuticamente aceitáveis.

[0046] L é um grupo substituível, os valores adequados para L são, por exemplo, um grupo halo, sulfonilóxi ou enxofre, por exemplo, um cloro, bromo, metanossulfonilóxi, tolueno-4-sulfonilóxi, mesila, metiltio e metilsulfinila.

[0047] As condições de reação específicas para as reações acima são como segue:Processo a) [0048] As pirimidinas da fórmula (II) e os compostos da fórmula (III) podem ser reagidas juntas:

i) opcionalmente na presença de um ácido adequado, por exemplo, um ácido inorgânico tal como o ácido clorídrico ou ácido sulfúrico / 63 ou um ácido orgânico, tal como ácido acético ou ácido fórmico. A reação é preferivelmente realizada em um solvente ou diluente inerte adequado, por exemplo, diclorometano (DCM), acetonitrila, butanol, tetrametileno sulfona, tetraidrofurano, 1,2-dimetoxietano, N,N-dimetilformamida,

N,N-dimetilacetamida ou N-metilpirrolidin-2-ona e em uma temperatura na faixa de, por exemplo, 0° a 150° C, convenientemente em ou próximo da temperatura de refluxo; ou ii) sob as condições de Buchwald padrão (por exemplo, ver J. Am. Chem. Soc., 118, 7215; J. Am. Chem. Soc., 119, 8451; J. Org. Chem., 62, 1568 e 6066) por exemplo, na presença de acetato de paládio, em um solvente adequado, por exemplo, um solvente adequado, por exemplo, um solvente aromático, tal como tolueno, benzeno ou xileno, com uma base adequada, por exemplo, uma base inorgânica, tal como carbonato de césio ou uma base orgânica, tal como t-butóxido de potássio, na presença de um ligando adequado, tal como 2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftila e em uma temperatura ambiente na faixa de 25 a 80° C.

[0049] As pirimidinas da fórmula (II) podem ser preparadas de acordo com o seguinte esquema:

/ 63

(II) (IIB) em que R^a é um grupo alquila ou arila opcionalmente substituído e L é um grupo substituível como definido acima. Preferivelmente R^a é metila, etila ou p-tolila.

[0050] Os compostos da fórmula (III) estão comercialmente disponíveis ou são preparados por processos conhecidos na técnica.

Processo b) [0051] As pirimidinas da fórmula (IV) e as anilinas da fórmula (V) podem ser reagidas juntas, i) na presença de um solvente adequado, por exemplo, uma cetona, tal como acetona ou um álcool, tal como etanol ou butanol ou um hidrocarboneto aromático, tal como tolueno ou N-metil pirrolidina, opcionalmente na presença de um ácido adequado, tal como aqueles definidos acima (ou um ácido de Lewis adequado) e em uma temperatura na faixa de 0° C ao refluxo, preferivelmente refluxo; ou ii) sob condições de Buchwald padrão como descrito acima. [0052] As pirimidinas da fórmula (IV) são preparadas de acordo com o seguinte esquema:

/ 63

L

R¹

1) ¹Pl^,2EtN ,BuOH, Δ ; ou (III) ⁷---²----------- > (IV)

2) condições de Buchwald (IVA) em que L é um grupo substituível como definido acima.

[0053] As anilinas da fórmula (V) estão comercialmente disponíveis ou são preparadas por processos conhecidos na técnica.

[0054] As pirimidinas da fórmula (IVA) estão comercialmente disponíveis ou podem ser preparadas, por exemplo, pela reação de um composto da fórmula (IVA) em que L é -OH (isto é, uma uracila), com POCl3 para dar um composto da fórmula (IVA) em que L é -Cl.

[0055] Os exemplos de conversões de um composto da fórmula (I) em um outro composto da fórmula (I) são:

i) onde G é -NR²-; conversão de R² como hidrogênio em outro

R² por exemplo:

H

(IA)

em que L é um grupo substituível;

ii) onde G é -NR²-; conversão de R² como uma cadeia secundária substituída em uma outra cadeia secundária substituída, por exemplo:

/ 63

em que Ms é metanossulfonila e Nu é um nucleófílo que introduz um substituinte que é um substituinte opcional para R² como definido na fórmula (I) (NB a porção hidroxila não deve estar necessariamente no carbono terminal como descrito acima);

iii) a conversão de um valor de R¹ em um outro valor de R¹, usando-se técnicas padrão, por exemplo, a conversão de R¹ como hidróxi em alcóxi C_1-4.

[0056] Um processo preferido da invenção é o Processo b).

[0057] Será avaliado que certos dos vários substituintes de anéis nos compostos da presente invenção podem ser introduzidos por reações de substituição aromática padrão ou gerados por modificações de grupo funcional convencionais antes dos, ou imediatamente seguinte aos processos mencionados acima e, como tal, são incluídos no aspecto do processo da invenção. Tais reações e modificações incluem, por exemplo, a introdução de um substituinte por meio de uma reação de substituição aromática, redução de substituintes, alquilação de substituintes e oxidação de substituintes. Os reagentes e as condições de reação para tais procedimentos são bem conhecidos na técnica química. Os exemplos particulares de reações de / 63 substituição aromática incluem a introdução de um grupo nitro usando-se ácido nítrico concentrado, a introdução de um grupo acila usando-se, por exemplo, um haleto de acila e ácido de Lewis (tal como, tricloreto de alumínio) sob condições de Friedel Crafts; a introdução de um grupo alquila usando-se um haleto de alquila e ácido de Lewis (tal como, tricloreto de alumínio) sob condições de Friedel Crafts; e a introdução de um grupo halo. Os exemplos particulares de modificações incluem a redução de um grupo nitro a um grupo amino, por exemplo, hidrogenação catalítica com um catalisador de níquel ou tratamento com ferro na presença de ácido clorídrico com aquecimento; oxidação de alquiltio para alquilsulfinila ou alquilsulfonila.

[0058] Também será estimado que em algumas das reações mencionadas aqui podem ser necessárias/desejáveis para proteger quaisquer grupos sensitivos nos compostos. Os exemplos onde a proteção é necessária ou desejável e métodos adequados para a proteção são conhecidos daqueles habilitados na técnica. Os grupos de proteção convencionais podem ser usados de acordo com prática padrão (para ilustração ver T.W. Green, Protective Grupos in Organic Synthesis, John Wiley e Sons, 1991). Assim, se os reagentes incluem grupos, tais como amino, carbóxi ou hidróxi, pode ser desejável proteger o grupo em algumas das reações mencionadas aqui.

[0059] Um grupo de proteção adequado para um grupo amino ou alquilamino é, por exemplo, um grupo acila, por exemplo um grupo alcanoil, tal como acetila, um grupo alcoxicarbonila, por exemplo, um grupo metoxicarbonila, etoxicarbonila ou t-butoxicarbonila, um grupo arilmetoxicarbonila, por exemplo benziloxicarbonila ou um grupo aroil, por exemplo, benzoil. As condições de desproteção para os grupos de proteção acima necessariamente variam com a escolha do grupo de proteção. Desta maneira, por exemplo, um grupo acila, tal como, um grupo alcanoil ou alcoxicarbonila ou um grupo aroil podem ser removidos por exemplo, por / 63 hidrólise com uma base adequada, tal como um hidróxido de metal alcalino, por exemplo, hidróxido de lítio ou de sódio. Alternativamente, um grupo acila, tal como um grupo t-butoxicarbonila pode ser removido, por exemplo, pelo tratamento com um ácido adequado como o ácido clorídrico, sulfúrico ou fosfórico ou ácido trifluoroacético e um grupo arilmetoxicarbonila, tal como um grupo benziloxicarbonila pode ser removido, por exemplo, por hidrogenação em um catalisador, tal como paládio em carbono ou pelo tratamento com um ácido de Lewis, por exemplo, tris(trifluoroacetato) de boro. Um grupo de proteção alternativo adequado para um grupo amino primário é, por exemplo, um grupo ftaloíla que pode ser removido pelo tratamento com uma alquilamina, por exemplo dimetilaminopropilamina ou com hidrazina.

[0060] Um grupo de proteção adequada para um grupo hidróxi é, por exemplo, um grupo acila, por exemplo um grupo alcanoil, tal como acetila, um grupo aroil, por exemplo benzoil ou um grupo arilmetila, por exemplo benzila. As condições de desproteção para os grupos de proteção acima necessariamente variarão com a escolha do grupo de proteção. Assim, por exemplo, um grupo acila, tal como um grupo alcanoil ou um aroil podem ser removidos, por exemplo, por hidrólise com uma base adequada, tal como um hidróxido de metal alcalino, por exemplo hidróxido de lítio ou de sódio. Alternativamente, um grupo arilmetila, tal como um grupo benzila pode ser removido, por exemplo, por hidrogenação em um catalisador, tal como paládio em carbono.

[0061] Um grupo de proteção adequado para um grupo carbóxi é, por exemplo, um grupo de esterificação, por exemplo um grupo metila ou um grupo etila que podem ser removidos, por exemplo, por hidrólise com uma base, tal como hidróxido de sódio ou, por exemplo, um grupo t-butila que pode ser removido, por exemplo, pelo tratamento com um ácido, por exemplo um ácido orgânico, tal como ácido trifluoroacético ou, por exemplo um grupo / 63 benzila que pode ser removido, por exemplo, por hidrogenação em um catalisador tal como paládio em carbono.

[0062] Os grupos de proteção podem ser removidos em qualquer estágio conveniente na síntese, usando-se técnicas convencionais bem conhecidas na técnica química.

[0063] Muitos dos intermediários definidos aqui são novos, por exemplo, aqueles da fórmula II e IV e estes são fornecidos como uma característica adicional da invenção.

[0064] ENSAIOS [0065] Como anteriormente estabelecido o derivado de pirimidina definido na presente invenção possui atividade anti-proliferação celular tal como atividade anti-câncer que acredita-se surja da atividade inibidora de CDK e/ou de FAK do composto. Estas propriedades podem ser avaliadas, por exemplo, usando-se o procedimento apresentado abaixo:

Ensaio de Inibição de CDK4 [0066] As seguintes abreviações foram usadas:

[0067] HEPES é N-(2-Hidroxietil)piperazina-N’-(ácido

2-etanossulfônico) [0068] DTT é Ditiotretiol [0069] PMSF é Fluoreto de fenilmetilsulfonila [0070] Os compostos foram testados em um ensaio de cinase in vitro em formato de 96 reservatórios usando-se o Ensaio de Proximidade de Cintilação (SPA - obtido da Amersham) para medir a incorporação de Trifosfato de [y-33-P]-Adenosina em um substrato de teste (GSTRetinoblastoma). Em cada reservatório foi colocado o composto a ser testado (diluído em DMSO e água para corrigir as concentrações) e em reservatórios de controle p16 como um controle de inibidor ou DMSO como um controle positivo.

[0071] Aproximadamente 0,5 μl de enzima CDK4/Ciclina D1 / 63 parcialmente purificada (quantidade dependente da atividade da enzima) diluído em 25 ql de tampão de incubação foi adicionado a cada reservatório depois 20 ql de mistura de GST-Rb/ATP/ATP33 (contendo 0,5 qg GST-Rb e 0,2 qM ATP e 0,14 qCi Trifosfato de [y-33-P]-Adenosina), e a mistura resultante suavemente agitada, depois incubada na temperatura ambiente durante 60 minutos.

[0072] A cada reservatório foram depois adicionados 150 ql de solução de parada contendo (0,8 mg/reservatório de pérolas de Proteína A-PVT SPA (Amersham)), 20 pM/reservatório de Anti-Glutationa Transferase, IgG de Coelho (obtida da Molecular Probes), 61 mM de EDTA e 50 mM de HEPES pH 7,5 contendo 0,05 % de azida de sódio.

[0073] As placas foram seladas com seladores de placa Topseal-S, deixadas durante duas horas, depois giradas a 2500 rpm, 1124xg., durante 5 minutos. As placas foram lidas em uma Topcount durante 30 segundos por reservatório.

[0074] O tampão de incubação usado para diluir as misturas de enzima e substrato conteve 50 mM de HEPES pH 7,5, 10 mM de MnCl₂, 1 mM de DTT, 100 qM de vanadato de sódio, 100 qM de NaF, 10 mM de Glicerofosfato de Sódio, BSA (1 mg/ml final).

[0075] Como um controle, um outro inibidor de CDK4 conhecido pode ser usado no lugar do p16.

Substrato de Teste [0076] Neste ensaio apenas parte da retinoblastoma (Science 1987

Mar 13; 235 (4794): 1394 a 1399; Lee W. H., Bookstein R., Hong F., Young L. J., Shew J. Y., Lee E. Y.) foi usada, fundida a um rótulo GST. A PCR dos aminoácidos de retinoblastoma 379 a 928 (obtidos do plasmídeo de retinoblastoma ATCC pLRbRNL) foi realizada e a seqüência clonada no vetor de fusão pGEX 2T (Smith D. B. e Johnson, K. S. Gene 67, 31 (1988); que conteve um promotor tac para a expressão indutível, o gene interno lac I^q / 63 para o uso em qualquer hospedeiro de E. Coli, e uma região codificadora para a clivagem de trombina - obtida da Pharmacia Biotech) que foi usada para amplificar os aminoácidos de 792 a 928. Esta seqüência foi novamente clonada no pGEX 2T.

[0077] A seqüência de retinoblastoma de 792 a 928 assim obtida foi expressada na E. Coli (células BL21 (DE3) pLisS) usando técnicas de expressão indutíveis padrão e purificadas como segue.

[0078] A pasta de E. coli foi recolocada em suspensão em 10 ml/g de tampão NETN (50 mM de Tris pH 7,5, 120 mM de NaCl, 1 mM de EDTA, 0,5 % v/v de NP-40, 1 mM de PMSF, 1 gg/ml de leupeptina, 1 gg/ml de aprotinina e 1 gg/ml de pepstatina) e sonicados por 2 x 45 segundos por 100 ml de homogenado. Depois da centrifugação, o sobrenadante foi carregado em uma coluna glutationa Sefarose de 10 ml (Pharmacia Biotech, Herts, UK) e lavada com tampão NETN. Depois da lavagem com tampão de cinase (50 mM de HEPES pH 7,5, 10 mM de MgCh, 1 mM de DTT, 1 mM PMSF, 1 gg/ml de leupeptina, 1 gg/ml aprotinina e 1 gg/ml pepstatina) a proteína foi eluída com 50 mM de glutationa reduzida em tampão de cinase. As frações contendo GST-Rb(792-927) foram reunidas e dialisadas durante a noite contra tampão de cinase. O produto final foi analisado por Dodeca Sulfato de Sódio (SDS) PAGE (gel de Poliacrilamida) usando de 8 a 16 % de géis de Tris-Glicina (Novex, San Diego, USA).

CDK4 e Ciclina D1 [0079] CDK4 e Ciclina D1 foram clonados a partir do RNA da linha de célula MCF-7 (obtida da ATCC número: HTB22, linha de adenocarcinoma de mama) como segue. O RNA foi preparado a partir de células MCF-7, depois transcrito de modo reverso usando-se iniciadores oligo dT. A PCR foi usada para amplificar a seqüência codificadora completa de cada gene [CDK4 aminoácidos de 1 a 303; Ref. Cell 1992 Oct 16; 71 (2): 323 a 334; Matsushime H., Ewen M. E., Stron D. K., Kato J. Y., Hanks S. K., / 63

Roussel M. F., Sherr C. J. e Cyclin D1 amino acids 1 a 296; Ref. Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1991; 56: 93 a 97; Arnold A., Motokura T., Bloom T., Kronenburg, Ruderman J., Juppner H., Kim H. G.].

[0080] Após o seqüenciamento, os produtos de PCR foram clonados usando-se técnicas padrão no vetor de expressão de inseto pVL1393 (obtido da Invitrogen 1995 número de catálogo V 1392-20). Os produtos de PCR foram depois duplamente expressados [usando uma técnica de co-infecção Baculogold de vírus padrão] no sistema de célula de inseto SF21 (células de Spodoptera Frugiperda derivadas do tecido de ovário do Fall Army Worm Comercialmente disponíveis).

[0081] Os seguintes Exemplos fornecem detalhes da produção de

Ciclina D1/CDK4 em células SF21 (em TC100 + 10 % de FBS (TCS) + 0,2 % de Pluronic) tendo infecção dupla de MOI 3 para cada vírus de Ciclina D1 & CDK4.

Produção de Exemplo de Ciclina D1/CDK4 [0082] Células SF21 cultivadas em uma cultura de garrafa roladora para 2,33 x 10⁶ células/ml foram usadas para inocular 10 x garrafas roladoras de 500 ml a 0,2 x 10E6 células/ml. As garrafas roladoras foram incubadas em um equipamento rolador a 28° C.

[0083] Depois de 3 dias (72 horas) as células foram contadas e a média de 2 garrafas verificada ser 1,86 x 10E6 células/ml. (99 % viáveis). As culturas foram depois infectadas com os vírus duplos a uma MOI 3 para cada vírus.

[0084] 10 x 500 ml foram infectados com título de vírus JS303

Ciclina D1 - 9 x 10E7 pfu/ml. Título de vírus JS304 CDK4 - 1 x 10E8 pfu/ml.

Ciclina D1 1,86 x 10E6 x 500 x 3 = 31 ml de vírus para cada garrafa de 500

0,9 x 10⁸ ml.

/ 63

CDK4 1,86 x 10E6 x 500 x 3 = 28 ml de vírus para cada garrafa de 500 ml.

x 10⁸ [0085] Os vírus foram misturados juntos antes da adição às culturas e as culturas retornaram para o equipamento rolador a 28° C.

[0086] Depois de 3 dias (72 horas) após a infeção os 5 litros de cultura foram colhidos. A contagem de célula total na colheita foi 1,58 x 10E6 células/ml (99 % viáveis). As células foram giradas a 2500 rpm, 30 minutos, 4° C em Heraeus Omnifuge 2.0 RS em lotes de 250 ml. O sobrenadante foi descartado. 20 pelotas de ~ 4 x 10E8 células/pelota foram instantaneamente congeladas em LN2 e armazenadas a -80° C em ambiente frio por CCRF. As células SF21 foram depois hipotonicamente lisadas recolocando-se em suspensão em tampão de lise (50 mM de HEPES pH 7,5, 10 mM de cloreto de magnésio, 1 mM de DTT, 10 mM de glicerofosfato, 0,1 mM de PMSF, 0,1 mM de fluoreto de sódio, 0,1 mM de ortovanadato de sódio, 5 μg/ml de aprotinina, 5 μg/ml de leupeptina e 20 % p/v de sacarose) e adicionando-se água desionizada esfriada em gelo. Depois da centrifugação, o sobrenadante foi carregado em uma coluna trocadora de ânion Poros HQ/M 1.4/100 (PE Biosystems, Hertford, UK). A CDK4 e a Ciclina D1 foram coeluídas com 375 mM de NaCl em tampão de lise e a sua presença checada pelo Western blot, usando-se anticorpos anti-CDK4 e anti-Ciclina D1 adequados (obtidos da Santa Cruz Biotechnology, Califórnia, US).

Controle p16 (Nature 366.: 704 a 707; 1993; Serrano M. Hannon GJ. Beach D) [0087] O p16 (o inibidor natural de CDK4/Ciclina D1) foi amplificado a partir de cDNA de HeLa (células HeLa obtidas da ATCC CCL2, carcinoma de epitelóide humano da nuca; Cancer Res. 12: 264, 1952), clonado no pTB 375 NBSE que teve um rótulo 5’ His e transformado usando se técnicas padrão nas células BL21 (DE3) pLysS (obtidas da Promega; Ref. Studier F. W. e Moffat B. A., J. Mol. Biol., 189, 113, 1986). Uma cultura de 1 / 63 litro foi cultivada até a OD apropriada, depois induzida com IPTG para expressar p16 durante a noite. As células foram então lisadas pela sonicação em 50 mM de fosfato de sódio, 0,5 M de cloreto de sódio, PMSF, 0,5 qg/ml de leupeptina e 0,5 qg/ml de aprotinina. A mistura foi girada, o sobrenadante adicionado às pérolas de quelato de níquel e misturadas durante 1 ½ hora. As pérolas foram lavadas em fosfato de sódio, NaCl pH 6,0 e o produto de p16 eluído em fosfato de sódio, NaCl pH 7,4 com 200 mM de imidazol.

[0088] O pTB NBSE foi construído a partir do pTB 375 NBPE como segue: pTB375 [0089] O vetor de fundo usado para a geração de pTB 375 foi o pZEN0042 (ver a patente UK 2253852) e conteve a seqüência de resistência à tetraciclina indutível tetA/tetR a partir do plasmídeo RP4 e a seqüência de estabilidade cer a partir do plasmídeo pKS492 em um fundo derivado de pAT153. O pTB375 foi gerado pela adição de um cassete de expressão consistindo do promotor 10 do gene T7, o sítio de clonagem múltipla e a seqüência de terminação 10 do gene T7. Além disso, uma seqüência terminadora planejada para reduzir a transcrição transcricional do vetor fundo foi incluída à montante do cassete de expressão.

pTB 375 NBPE [0090] O sítio de restrição EcoRI único presente no pTB 375 foi removido. Um novo sítio de clonagem múltiplo contendo as seqüências de reconhecimento para as enzimas de restrição NdeI, BamHI, PstI e EcoRI foi introduzido no pTB 375 entre os sítios NdeI e BamHI que destroem o sítio BamHI original presente no pTB 375.

pTB 375 NBSE [0091] Um novo sítio de clonagem múltiplo contendo as seqüências de reconhecimento para as enzimas de restrição NdeI, BamHI, SmaI e EcoRI foi introduzido no pTB 375 NBPE entre os sítios NdeI e EcoRI. O / 63 oligonucleotídeo contendo estes sítios de restrição também contiveram 6 códons de histidina localizados entre os sítios NdeI e BamHI na mesma matriz de leitura como o códon iniciador (ATG) presente dentro do sítio NdeI.

[0092] Por analogia ao exposto acima, os ensaios planejados para estimar a inibição de CDK2 e CDK6 podem ser construídos. A CDK2 (EMBL Acesso N^o X62071) pode ser usada junto com a Ciclina A ou Ciclina E (ver EMBL Acesso N^o M73812), e mais detalhes para tais ensaios estão contidos na Publicação Internacional PCT N^o WO 99/21845, as seções Biochemical & Biological Evaluation relevantes da qual são por meio deste aqui incorporadas por referência.

[0093] Se usar CDK2 com Ciclina E a co-purificação parcial pode ser obtida como segue: as células Sf21 são recolocadas em suspensão em tampão de lise (50 mM de Tris pH 8,2, 10 mM de MgCl₂, 1 mM de DTT, 10 mM de glicerofosfato, 0,1 mM de ortovanadato de sódio, 0,1 mM de NaF, 1 mM de PMSF, l Lig/ml de leupeptina e 1 qg/ml de aprotinina) e homogeneizado durante 2 minutos em um homogeneizador Dounce de 10 ml. Depois da centrifugação, o sobrenadante é carregado em uma coluna trocadora de ânion Poros HQ/M 1,4/100 (PE Biosystems, Hertford, UK). A CDK2 e a Ciclina E são co-eluídas no começo de um gradiente de 0 a 1 M de NaCl (conduzido em tampão de lise menos inibidores de protease) em 20 volumes de coluna. A co-eluição é checada pelo western blot usando tanto o anticorpo anti-CDK2 quanto o anti-Ciclina E (Santa Cruz Biotechnology, Califórnia, US).

TESTE DE INIBIÇÃO DA CINASE FAK3 [0094] Este teste determina a capacidade de um composto de teste inibir a atividade da tirosina cinase da Cinase de Adesão Focal humana (FAK).

[0095] O DNA que codifica a FAK é obtida pela síntese de gene total (Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19 a 25, 1987) ou pela / 63 clonagem. Estes são então expressados em um sistema de expressão adequado para obter um polipeptídeo com atividade de tirosina cinase. Por exemplo, a FAK, obtida pela expressão da proteína recombinante em células de inseto, foi observada apresentar atividade de tirosina cinase intrínseca. [0096] A FAK (cDNA humano de comprimento total descrito por

Andre et al (Biochemical and Biophysical Research Communications, 1993, 190 (1): 140 a 147; Número de Acesso EMBLIGenBank L05186)) foi modificado tal que a proteína resultante quando traduzida tenha um rótulo de 6-histidina no terminal N que precede imediatamente o início da metionina. A proteína de FAK ativa foi previamente expressada em um sistema de baculovírus usando-se um rótulo de histidina de terminal N similar (Protein Expression And Purification, 1996, 7: 12 a 18). O cDNA de FAK humano foi clonado no vetor de transcolocação de baculovírus, pFastbac 1 (Life Technologies), e a construção recombinante foi co-transfectada nas células de inseto (por exemplo, Spodoptera frugiperda 21(Sf21)) com DNA viral para preparar baculovírus recombinante (detalhes dos métodos para a montagem das moléculas de DNA recombinantes e a preparação e o uso de baculovírus recombinante podem ser encontrados nos textos padrão, por exemplo, Sambrook et al, 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2^a edição, Cold Spring Harbour Laboratory Press and O'Reilly et al, 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co, New York. Os detalhes específicos para o uso do sistema pFastbac ('Bac a Bac') são fornecidos em Anderson et al., 1995, FOCUS (Life Technologies Bulletin Magazine), 17, p53).

[0097] Para a expressão da proteína de FAK humana biologicamente ativa, as células Sf21 foram infectadas com o vírus recombinante de FAK puro em placa em uma multiplicidade de infeção de 3 e colhidas 48 horas depois. As células colhidas foram lavadas com solução gelada de salmoura tamponada por fosfato (PBS) (10 mM de fosfato de sódio pH 7,4, 138 mM de / 63 cloreto de sódio, 2,7 mM de cloreto de potássio) depois recolocado em suspensão em tampão de lise gelado (50 mM de HEPES pH 7,5, 1 mM de Ditiotreitol, 100 uM de fluoreto de sódio, 100 uM de ortovanadato de sódio, 10 mM de glicerofosfato, 100 uM de fluoreto de fenilmetilsulfonila (PMSF), 5 ug/ml de Aprotinina, 5 ug/ml de Leupeptina, 1 % de Tween; o PMSF sendo adicionado logo antes do uso de uma solução de 100 mM em metanol recentemente preparada) usando-se 250 pl de tampão de lise por 10 milhões de células. A suspensão foi então incubada em gelo por 15 minutos e submetida à centrifugação por 10 minutos a 13.000 rpm a 4° C. O sobrenadante (material de enzima) foi removido e alíquotas e alíquotas feitas que foram congelada por pressão em nitrogênio líquido e depois armazenadas a -70° C. para um grupo típico, a enzima de material foi diluída 1 em 250 com o diluente de enzima ((100 mM de HEPES pH 7,4, 0,2 mM de Ditiotreitol, 200 uM de ortovanadato de sódio, 0,1 % de Triton X-100) e 50 ml de enzima recentemente diluída foi usada para cada reservatório de (ver o protocolo de FAK3, abaixo).

FAK3: PROTOCOLO DO ENSAIO DE ENZIMA IN VITRO [0098] Um material de solução de substrato foi preparado a partir de um copolímero randômico contendo tirosina, por exemplo, Poly (Glu, Ala, Tyr) 6:3:1 (Sigma P3899), armazenado como um material de 1 mg/ml em PBS a -20° C e diluído 1 em 500 com PBS para o revestimento de placa.

[0099] No dia anterior ao teste 100 pl de solução de substrato diluída foram dispensados em todos os reservatórios das placas de ensaio (imunoplacas de 96 reservatórios Maxisorp Life technologies, Cat. N^o 439454A) que são selados com seladores de placa e deixados durante a noite a 4° C.

[00100] No dia do teste a solução de substrato foi descartada e os reservatórios da placa de ensaio foram lavados uma vez com 200 pl de PBST (PBS contendo 0,05 % v/v de Tween 20) e uma vez com 200 pl de 50 mM de / 63

Hepes pH 7,4.

[00101] Os compostos de teste, foram fabricados como materiais de 10 mM ou 30 mM em DMSO e depois ainda diluídos em água destilada em vidro diluída a uma concentração 10 vezes maior do que a concentração do ensaio final. 10 ql do composto diluído foi transferido aos reservatórios nas placas de ensaio lavadas. Os reservatórios de controle “sem composto” continham 10 ql de água destilada em vidro em vez do composto.

[00102] Quarenta microlitros de 25 mM de cloreto de manganês contendo 6,25 qM de adenosina-5'-trifosfato (ATP) foram adicionados a todos os reservatórios de teste. Para iniciar as reações 50 ql de enzima recentemente diluída foram adicionados a cada reservatório e as placas foram incubadas a 23° C durante 90 minutos. Então a reação foi interrompida pela adição de 100 ql de PBS contendo 20 mM de EDTA. O líquido foi então descartado e os reservatórios foram lavados duas vezes com PBST.

[00103] Cem microlitros de anticorpo anti-fosfotirosina ligado a HRP de camundongo (Santa Cruz, Product SC 7020-HRP), diluído 1 em 1500 com PBST contendo 0,5 % p/v de albumina de soro bovino (BSA), foram adicionados a cada reservatório e as placas foram incubadas por 1 hora em temperatura ambiente antes de descartar o líquido e lavar os reservatórios duas vezes com 200 ql de PBST. Cem microlitros de solução de ácido 2,2'-azino-bis(3-etilbenztiazolino-6-sulfônico) (ABTS), recentemente preparado usando-se um tablete de 50 mg de ABTS (Boehringer 1204 521) em 50 ml recentemente preparados de 50 mM de tampão de fosfato-citrato pH 5,0 + 0,03 % de perborato de sódio (feito com 1 tampão de citrato de fosfato com cápsula de perborato de sódio (PCSB) (Sigma P4922) por 100 ml de água destilada), foram adicionados a cada reservatório. As placas foram então incubadas durante 20 a 60 minutos em temperatura ambiente até o valor de absorbância dos reservatórios de controle “sem composto”, medidos em 405 nm usando-se um espectrômetro leitor de placa, ser de aproximadamente / 63

1.0.

[00104] As curvas de resposta de dose foram geradas a partir das leituras de absorbância usando-se Origin Software. Os compostos foram classificados quanto à potência usando-se a Concentração Inibidora 50 (IC50) coo definido pela análise do Origin Software.

[00105] Embora as propriedades farmacológicas dos compostos da fórmula (I) variem com a mudança estrutural, no geral, a atividade possuída pelos compostos da fórmula (I) nos ensaios acima pode ser demonstrada nas concentrações IC50 ou doses na faixa de 250 pM a 1 nM.

[00106] Quando testada no ensaio in vitro acima a atividade inibidora de CDK4 do Exemplo 31 foi medida como IC50 = 0,679 pM. Quando testado no teste in vitro acima, a atividade inibidora de FAK do Exemplo 25 foi medida como IC50 = 0,218 pM.

[00107] A atividade in vivo dos compostos da presente invenção pode ser estimada por técnicas padrão, por exemplo medindo-se a inibição do desenvolvimento celular e estimando-se a citotoxicidade. Por exemplo, outros detalhes podem ser encontrados nas seguintes referências:

a) Attenuation of the Expression of the Focal Adhesion Kinase induces Apoptosis in Tumor Cells. Xu L-h et al., Cell Growth & Differentiation (1996) p 413 a 418.

b) The COOH-Terminal domain of the Focal Adhesion Kinase Induces Loss of Adhesion and Cell Death in Human Tumour Cells. Cell Growth & Differentiation (1998) 9, p 999 a 1005.

c) Inhibition of pp125-FAK in Cultured Fibroblasts Results in Apoptosis. Hungerford J. E. et al., The Journal of Cell Biology (1996) 135, p 1383 a 1390.

d) Inhibition of Focal Adhesion Kinase (FAK) Signalling in Focal Adhesions Decreases Cell Motility and Proliferation. Gilmore A. P. and Romer L. H. Molecular Biology of the Cell (1996) 7, p 1209 a 1224.

/ 63 [00108] A inibição do desenvolvimento celular pode ser medida tingindo-se as células com Sulforodamina B (SRB), um pigmento fluorescente que tinge proteínas e dá portanto uma estimativa da quantidade de proteína (isto é, células) em um reservatório (ver Boyd, M. R. (1989) Status of the NCI preclinical antitumour drug discovery screen. Prin. Prac Oncol 10: 1 a 12). Assim, os seguintes detalhes são fornecidos de medir a inibição do desenvolvimento celular:

[00109] As células foram colocadas em placa em meio apropriado em um volume de 100 μl em placas de 96 reservatórios; o meio foi o meio de Eagle modificado por Dulbecco para MCF-7, SK-UT-1B e SK-UT-1. As células foram deixadas ligar durante a noite, depois os compostos inibidores foram adicionados em várias concentrações em uma concentração máxima de 1 % de DMSO (v/v). Uma placa de controle foi ensaiada para dar um valor para as células antes da dosagem. As células foram incubadas a 37° C, (5 % de CO2) durante três dias.

[00110] No final dos três dias TCA foi adicionado às placas a uma concentração final de 16 % (v/v). As placas foram depois incubadas a 4° C durante 1 hora, o sobrenadante removido e as placas lavadas em água de torneira. Depois da secagem, 100 μl de pigmento SRB (0,4 % de SRB em 1 % de ácido acético) foi adicionado durante 30 minutos a 37° C. O SRB em excesso foi removido e as placas lavadas em 1 % de ácido acético. O SRB ligado à proteína foi solubilizado em 10 mM de Tris pH 7,5 e agitado durante 30 minutos na temperatura ambiente. As ODs foram lidas a 540 nm e a concentração de inibidor que causa 50 % de inibição do desenvolvimento foi determinada a partir de uma plotagem de semi-log da concentração de inibidor versus a absorbância. A concentração de composto que reduziu a densidade ótica até abaixo daquela obtida quando as células foram colocadas em placa no início do experimento deu o valor para a toxicidade.

[00111] Os valores de IC50 típicos para os compostos da invenção / 63 quando testados no ensaio SRB estão na faixa de 1 mM a 1 nM.

[00112] De acordo com um outro aspecto da invenção é fornecida uma composição farmacêutica que compreende um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis, como anteriormente definido em associação com um diluente ou carregador farmaceuticamente aceitáveis.

[00113] A composição pode estar em uma forma adequada para a administração oral, por exemplo, como um tablete ou cápsula, para a injeção parenteral (incluindo intravenosa, subcutânea, intramuscular, intravascular ou infusão) como uma solução, suspensão ou emulsão, estéreis para a administração tópica como um ungüento ou creme ou para a administração retal como um supositório.

[00114] No geral as composições acima podem ser preparadas em uma maneira convencional usando-se excipientes convencionais.

[00115] A pirimidina será normalmente administrada a um animal de sangue quente em uma dose unitária dentro da faixa de 5 a 5000 mg por metro quadrado de área corpórea do animal, isto é, aproximadamente 0,1 a 100 mg/kg, e esta normalmente fornece uma dose terapeuticamente eficaz. Uma forma de dose unitária tal como um tablete ou cápsula conterá usualmente, por exemplo de 1 a 250 mg de ingrediente ativo. Preferivelmente uma dose diária na faixa de 1 a 50 mg/kg é utilizada. Entretanto, a dose diária será necessariamente variada dependendo do hospedeiro tratado, da via particular de administração e da gravidade da doença que é tratada. Conseqüentemente a dosagem ótima pode ser determinada pelo clínico que está tratando qualquer paciente em particular.

[00116] De acordo com um outro aspecto da presente invenção é fornecido um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis, como anteriormente definido para o uso em um método de tratamento profilático ou terapêutico de / 63 um animal de sangue quente, tal como o homem.

[00117] Verificou-se que os derivados de pirimidina definidos na presente invenção ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis, são inibidores do ciclo celular eficazes (agentes anti-proliferação celular), cuja propriedade (sem estar ligado pela teoria) acredita-se originar das suas propriedades inibidoras de CDK. Os compostos também são inibidores eficazes de FAK. Conseqüentemente supõe-se que os compostos da presente invenção sejam úteis no tratamento de doenças ou condições médicas mediadas sozinhas ou em parte pelas enzimas CDK e/ou FAK, isto é, os compostos podem ser usados para produzir um efeito inibidor de CDK e/ou de FAK em um animal de sangue quente em necessidade de tal tratamento. Desta maneira, os compostos da presente invenção fornecem um método para tratar a proliferação e/ou a migração de células malignas caracterizado pela inibição das enzimas CDK e/ou FAK, isto é, os compostos podem ser usados para produzir um efeito anti-proliferativo/migração mediado sozinho ou em parte pela inibição de CDKs e/ou FAK. Os compostos também podem ser úteis como inibidores de FAK pela indução da morte celular. Espera-se que tais derivados de pirimidina da invenção possuam uma faixa ampla de propriedades anti-câncer visto que as CDKs e/ou FAK foram implicadas em muitos canceres humanos comuns, tais como a leucemia e os canceres de mama, pulmão, cólon, retal, estômago, próstata, bexiga, pâncreas e ovário. Desta maneira, é esperado que um derivado de pirimidina da invenção possua atividade anti-câncer contra estes canceres. É esperado, além disso, que um derivado de pirimidina da presente invenção possuirá atividade contra uma faixa de leucemias, malignidades linfóides e tumores sólidos tais como carcinomas e sarcomas em tecidos tais como o fígado, rim, próstata e pâncreas. Em particular, tais compostos da invenção são esperados diminuir vantajosamente o desenvolvimento de tumores sólidos primários e recorrentes, por exemplo, do / 63 cólon, mama, próstata, pulmões e pele. Mais particularmente tais compostos da invenção ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis, são esperados inibir o desenvolvimento daqueles tumores sólidos primários e recorrentes que estão associados com a CDK e/ou FAK, especialmente aqueles tumores que são significantemente dependentes da CDK e/ou FAK para o seu desenvolvimento e disseminação, incluindo, por exemplo, certos tumores do cólon, mama, próstata, pulmão, vulva e pele.

[00118] É ainda esperado que um derivado de pirimidina da presente invenção possuirá atividade contra outras doenças de proliferação/migração celular em uma faixa ampla de outros estados de doença incluindo leucemias, distúrbios fibroproliferativos e diferenciativos, psoríase, artrite reumatóide, sarcoma de Kaposi, hemangioma, nefropatias agudas e crônicas, ateroma, aterosclerose, restenose arterial, doenças autoimunes, inflamação aguda e crônica, doenças ósseas e doenças oculares com proliferação de vaso retinal.

[00119] Desta maneira, de acordo com este aspecto da invenção é fornecido um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis, como anteriormente definido para o uso como um medicamento; e o uso de um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis como anteriormente definido na fabricação de um medicamento para o uso na produção de um efeito inibidor do ciclo celular (anti-proliferação celular), anti-câncer e/ou um efeito inibidor de FAK (anti-migração celular e/ou indutor da apoptose) em um animal de sangue quente tal como o homem. Particularmente, um efeito inibidor do ciclo celular é produzido na fase S ou G1-S pela inibição de CDK2, CDK4 e/ou CDK6, especialmente CDK4 e CDK6.

[00120] De acordo com uma outra característica deste aspecto da invenção é fornecido um método para produzir um efeito inibidor do ciclo celular (anti-proliferação celular), anti-câncer e/ou um efeito inibidor de FAK / 63 (anti-migração celular e/ou indutor da apoptose) em um animal de sangue quente, tal como o homem, em necessidade de tal tratamento que compreende administrar ao dito animal uma quantidade eficaz de um derivado de pirimidina como definido imediatamente acima. Particularmente, um efeito inibidor é produzido na fase S ou G1-S pela inibição de CDK2, CDK4 e/ou CDK6, especialmente CDK4 e CDK6.

[00121] Como estabelecido acima o tamanho da dose requerida para o tratamento terapêutico ou profilático de uma doença de proliferação celular particular será necessariamente variado dependendo do hospedeiro tratado, da via de administração e da gravidade da doença a ser tratada. Uma dose unitária na faixa, por exemplo, de 1 a 100 mg/kg, preferivelmente de 1 a 50 mg/kg é considerada.

[00122] A atividade inibidora de CDK e/ou FAK anteriormente definida pode ser aplicada como uma terapia única ou pode envolver, além de um composto da invenção, uma ou mais outras substâncias e/ou tratamentos. Tal tratamento conjunto pode ser obtido por meio da administração simultânea, seqüencial ou separada dos componentes individuais do tratamento. No campo da oncologia médica é prática normal usar uma combinação de formas diferentes de tratamento para tratar cada paciente com câncer. Na oncologia médica o(s) outro(s) componente(s) de tal tratamento conjunto além do tratamento inibidor do ciclo celular anteriormente definido pode ser: cirurgia, radioterapia ou quimioterapia. Tal quimioterapia pode abranger três categorias principais de agente terapêutico:

[00123] (i) outros agentes inibidores do ciclo celular que trabalham pelos mesmos ou por mecanismos diferentes daqueles anteriormente definidos;

[00124] (ii) agentes citostáticos tais como anti-estrogênios (por exemplo tamoxifen, toremifeno, raloxifeno, droloxifeno, iodoxifeno), progestogênios (por exemplo, acetato de megestrol), inibidores de aromatase / 63 (por exemplo, anastrozol, letrazol, vorazol, exemestano), antiprogestogênios, antiandrogênios (por exemplo, flutamida, nilutamida, bicalutamida, acetato de ciproterona), agonistas e antagonistas de LHRH (por exemplo, acetato de goserelina, luprolide), inibidores de testosterona 5oc-diidroreductase (por exemplo, finasteride), agentes anti-invasão (por exemplo, inibidores de metaloproteinase como marimastat e inibidores da função receptora do ativador plasminogênico de urocinase) e inibidores da função do fator de desenvolvimento, (tais fatores de desenvolvimento incluem por exemplo fator de desenvolvimento derivado de plaqueta e fator de desenvolvimento hepatócito, tais inibidores incluem anticorpos de fator de desenvolvimento, anticorpos do receptor de fator de desenvolvimento, inibidores de tirosina cinase e inibidores de serina/treonina cinase); e [00125] (iii) medicamentos antiproliferativos/antineoplásticos e suas combinações, como usados na oncologia médica, tais como antimetabólitos (por exemplo antifolatos como metotrexato, fluoropirimidinas como análogos de 5-fluorouracila, purina e adenosina, citosina arabinosida); antibióticos anti-tumor (por exemplo, antraciclinas como doxorubicina, daunomicina, epirubicina e idarubicina, mitomicina-C, dactinomicina, mitramicina); derivados de platina (por exemplo cisplatina, carboplatina); agentes de alquilação (por exemplo mostarda de nitrogênio, melfalan, clorambucil, busulfan, ciclofosfamida, ifosfamida, nitrosouréias, tiotepa); agentes antimitóticos (por exemplo alcalóides de vinca como vincrisitina e taxóides como taxol, taxotere); inibidores de topoisomerase (por exemplo epipodofilotoxinas como etoposídeo e teniposídeo, ansacrina, topotecan). De acordo com este aspecto da invenção é fornecido um produto farmacêutico que compreende um derivado de pirimidina da fórmula (I) como anteriormente definido ou um sal ou éster hidrolisável in vivo deste farmaceuticamente aceitáveis e uma substância anti-tumor adicional como anteriormente definido para o tratamento conjunto de câncer. Um / 63 anti-emético também pode ser utilmente administrado, por exemplo quando do uso de tal tratamento conjunto como descrito acima.

[00126] Além do seu uso na medicina terapêutica, os compostos da fórmula (I) e seus sais farmaceuticamente aceitáveis também são úteis como ferramentas farmacológicas no desenvolvimento e padronização de sistemas de teste in vitro e in vivo para a avaliação dos efeitos de inibidores da atividade do ciclo celular em animais de laboratório tais como gatos, cães, coelhos, macacos, ratos e camundongos, como parte da pesquisa por novos agentes terapêuticos.

[00127] Nas outras composições farmacêuticas, processos, métodos, usos e características de fabricação de medicamento, acima as formas de realização alternativas e preferidas dos compostos da invenção aqui descritas também se aplicam.

[00128] A invenção será agora ilustrada nos seguintes Exemplos não limitantes, em que técnicas padrão conhecidas pelo químico habilitado e técnicas análogas àquelas descritas nestes Exemplos podem ser usadas onde apropriadas, e em que, a menos que de outro modo estabelecido:

(i) as evaporações foram realizadas pela evaporação rotativa em vácuo e os procedimentos de trabalho foram realizados depois da remoção dos sólidos residuais tais como agentes de secagem por filtração;

(ii) as operações foram realizadas na temperatura ambiente, tipicamente na faixa de 18 a 25° C e ao ar a menos que de outro modo estabelecido ou ao menos que a pessoa habilitada possa de outro modo operar sob uma atmosfera de um gás inerte tal como argônio;

(iii) a cromatografia de coluna (pelo procedimento relâmpago) e cromatografia líquida de média pressão (MPLC) foram realizada em gel de sílica Merck (Art. 9385) ou sílica de fase reversa Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) obtida da E. Merck, Darmstadt, Alemanha; a cromatografia de eluição de ligação foi realizada usando-se cartuchos Varian Mega Bond Elut / 63 (10 g, código de ordem 1225-6034) obtidos da Varian Sample Preparation Products, Califória, EUA.

(iv) os rendimentos são dados apenas para ilustração e não são necessariamente o máximo obtenível;

(v) as estruturas dos produtos finais da fórmula (I) foram, no geral, confirmados pela ressonância magnética nuclear (no geral de próton) (RMN) e técnicas espectrais de massa; os valores de mudança química de ressonância magnética de próton foram medidos em DMSO-d6 deuterado (a menos que de outro modo estabelecido) na escala delta (ppm em campo descendente a partir de tetrametilsilano) usando um espectrômetro Varian Gemini 2000 operando em uma intensidade de campo de 300 MHz ou um espectrômetro Bruker AM250 que opera em uma intensidade de campo de 250 MHz; e as multiplicidades de pico são mostradas como segue: s, singleto; d, dubleto; t, tripleto; m, multipleto; br, amplo; a espectrometria de massa (MS) foi realizada pela eletropulverização em uma plataforma VG;

(vi) a não ser que outros detalhes sejam especificados no texto, s cromatografia líquida de alto desempenho analítica (HPLC) foi realizada em uma coluna Waters Spherisorb ODS1 de 25 cm, em uma razão de fluxo de 2 ml/minuto usando-se acetonitrila/água/ácido trifluoroacético (60:40:0,1 v/v) como o eluente, a detecção ocorreu em um comprimento de onda de 254 nm os dados são cotados como tempo de retenção (RT) em minutos;

(vii) a síntese robótica foi realizada usando-se um robô Zymate XP, com adições de solução por intermédio de Zymate Master Laboratory Station e agitado por intermédio de um Stem RS5000 Reacto-Station a 25° C;

(viii) o trabalho e a purificação das misturas de reação da síntese robótica foi realizada como segue: as evaporações foram realizadas a vácuo usando-se um Savant AES 2000; a cromatografia de coluna foi / 63 realizada usando-se sistemas Anachem Sympur MPLC ou Jones Flashmaster MPLC em sílica usando-se cartuchos Varian Mega Bond Elut; as estruturas dos produtos finais foram confirmadas por LCMS em um sistema Micromass OpenLynx usando-se o seguinte e são cotados como tempo de retenção (RT) em minutos:

Coluna: 4,6 mm x 10 cm Hichrom RPB 100Â (Sistema A) 2,1 nm x 3 cm Waters Symmetry C18 3,5 pm (Sistema B) Solvente: I = água + 0,1 % de ácido fórmico,

II = Acetonitrila + 0,1 % ácido fórmico

Tempo de funcionamento: 10 minutos com um gradiente de 6 minutos de 5 a 95 % de II (Sistema A) minutos com um gradiente de 4,5 minutos de 5 a 95 % de II (Sistema B)

Comprimento de onda: 254 nm, largura de banda 10 nm

Detector de massa: Plataforma LC (ix) no geral, os intermediários não foram totalmente caracterizados e a pureza foi estimada pela cromatografia de camada fina (TLC), HPLC, infra-vermelho (IR), análise por MS ou RMN;

(x) quando as soluções são secas, o sulfato de magnésio foi o agente secador;

(xi) as seguintes abreviações podem ser usadas anteriormente

ou a seguir:- DCM	diclorometano;
DMF	N,N-dimetilformamida;
DMSO	sulfóxido de dimetila;
NMP	N-metilpirrolidin-2-ona;
THF	tetraidrofurano.

Exemplo 1

4-Anilino-5-bromo-2-[4-(4-metilpiperazino)anilino]pirimidina / 63 [00129] Uma solução de cloridreto de 4-(4-metilpiperazino)anilina (obtida como descrito em J. Med. Chem. 1993, 36, 2716-25; 156 mg, 0,56 mmol) em metanol (1 ml) foi adicionada a uma solução de 4-anilino-5bromo-2-cloropirimidina (Método 1, 250 mg, 0,90 mmol) em n-butanol (2 ml). A mistura foi aquecida a 100° C por 5 horas e o sólido insolúvel foi coletado e lavado com n-butanol (5 ml) e éter dietílico 5 (ml) para dar o produto como um sal de cloridreto (50 mg, 14 %). RMN: 2,2 (s, 3H), 3,0 (m, 4H), 6,8 (m, 2H), 7,1 (m, 1H), 7,3 - 7,5 (m, 4H), 7,7 (m, 2H), 8,2 (s, 1H), 8,4 (s, 1H), 9,0 (s, 1H); MS (MH⁺): 438,9, 440,9.

EXEMPLO 2 a 6 [00130] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 1, começando da 4-anilino-5-bromo-2cloropirimidina (Método 1) e do cloridreto de anilina apropriada (obtido como descrito em J. Med. Chem., 1993, 36, 2716-25; Eur. Pat. Appl. EP 487252; Eur. Pat. Appl. EP 401358; J. Med. Chem., 1972, 15, 523-9; J. Med.

Chem., 1985, 28, 1427):

Ex	R	RMN	MS (MH+)
21	dimetilamino	2,19 (s, 6H), 2,57 (t, 2H), 3,96 (t, 2H), 6,75 (d, 2H), 7,11 (t, 1H), 7,33 (dd, 2H), 7,45 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 8,16 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 9,09 (s, 1H)	428,3, 430,3
31·2	ftalimido		529, 531,9
43	morfolino	3,1 - 3,25 (m, 2H), 3,4 - 3,55 (m, 4H), 3,8 - 4,0 (m, 4H), 4,39 (t, 2H), 6,85 (d, 2H), 7,21 (t, 1H), 7,35 - 7,45 (d, 2H), 8,31 (s, 1H), 9,36 (br s, 1H), 10,03 (br s, 1H)	470, 471,9
54	4-metila piperazino	2,81 (s, 3H), 3,4 - 3,8 (m, 10H), 4,38 (t, 2H), 6,87 (d, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,39 (d, 2H), 7,41 (dd, 2H), 7,55 (d, 2H), 8,32 (s, 1H), 9,38 (br. s, 1H), 10,05 (br s, 1H)	482,9, 484,9

/ 63

Ex	R	RMN	MS (MH+)
61	imidazol-1-ila	4,18 (t, 2H), 4,31 (t, 2H), 6,72 (d, 2H), 6,89 (d, 1H), 7,12 (t, 1H), 7,21 (d, 1H), 7,33 (dd, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,66 (s, 1H), 8,15 (s, 1H), 8,47 (s, 1H), 9,11 (s, 1H)	450,8, 452,8

¹ Produto isolado como base livre pela cromatografia de eluição de ligação, eluindo-se com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM ² HPLC (RT): 6,33 ³ Reação realizada na presença de cloreto de hidrogênio etéreo 1,0M (2 eq) e produto isolado como sal de dicloridreto ⁴ Reação realizada na presença de cloreto de hidrogênio etéreo 1,0M (2 eq) e produto isolado como sal de tricloridreto

EXEMPLOS 7 a 9 [00131] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 1, começando a partir da 4-anilino-2cloro-5-halopirimidina apropriada (Métodos 2-3, ou obtido como descrito em PCT Int. Appl. WO 9719065) e do cloridreto de anilina apropriado (obtido como descrito em Eur. Pat. Appl. EP 401358; J. Med. Chem., 1985, 28, 1427; Ger. Offen. DE 2315791), e isolando-se os produtos como bases livres pela cromatografia de eluição de ligação eluindo-se com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM:

R³

Ex	R1	R2	R3	RMN	MS(MH+)
7	Cl	2-CN	morfolino	2,44 (t, 4H), 2,62 (t, 2H), 3,57 (t, 4H), 3,98 (t, 2H), 6,63 (d, 2H), 7,29 (d, 2H), 7,44 (t, 1H), 7,63 (d, 1H), 7,75 (dt, 1H), 7,89 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 9,13 (s, 1H), 9,20 (s, 1H)	451, 453
8	Br	4-OMe	imidazol-1- ila	3,77 (s, 3H), 4,15 (t, 2H), 4,30 (t, 2H), 6,70 (d, 2H), 6,88 (d, 1H), 6,91 (d, 2H), 7,22 (d, 1H), 7,4 - 7,45 (m, 4H), 7,66 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,46 (s, 1H), 9,08 (s, 1H)	481,4, 483,4
9	H	H	pirrolidin-1- ila	1,85 - 1,95 (m, 2H), 2,0 - 2,1 (m, 2H), 3,1 - 3,2 (m, 2H), 3,65 - 3,8 (m, 4H), 4,3 (t, 2H), 6,4 (d, 1H), 7,05 (d, 2H), 7,15 - 7,25 (m, 1H), 7,3 - 7,4 (m, 2H), 7,4 - 7,5 (d, 2H), 7,6 - 7,7 (m, 2H), 7,95 (d, 1H)	376

[00132] EXEMPLOS 10 a 12 [00133] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 1, começando a partir da 4-anilino-5 / 63 bromo-2-cloropirimidina (Método 1) e do cloridreto de anilina apropriado (comercialmente disponível ou obtido como descrito em Bioorg. Med. Chem. Lett., 1997, 7, 1921 a 1926; J. Med. Chem., 1984, 27, 967-78) e isolando-se os produtos como bases livres pela cromatografia de eluição de ligação eluindo-se com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM:

Ex	R	RMN	MS (MH+)
10	4(2,5-dioxopirrolidin-1-ilmetila)	2,64 (s, 4H), 4,64 (s, 2H), 7,03 (d, 2H), 7,2 (t, 1H), 7,4 (m, 4H), 7,55 (d, 2H), 8,3 (s,1H), 9,2 (br s, 1H), 9,82 (br s, 1H)	452,454
111	3-dimetilamino		384,0, 386,0
12	4-carboximetóxi	4,6 (s, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,2 (t, 1H), 7,4 (m, 4H), 7,6 (m, 2H), 8,3 (s, 1H)	414,8, 416,8

¹ HPLC (RT): 5,73

EXEMPLO 13

4-Anilino-5-bromo-2-[4-(aminometil)anilino]pirimidina [00134] A 4-aminobenzilamina (122 mg, 1,0 mmol) e o cloreto de hidrogênio etéreo (1,0M; 1,0 ml, 1,0 mmol) foram adicionados a uma solução de 4-anilino-5-bromo-2-cloropirimidina (256 mg, 9 mmoles) em n-butanol (4 ml) e a mistura foi aquecida a 100°C por 16 horas. O sólido insolúvel foi retirado por filtração e dissolvido em metanol (5 ml). Sílica (2 g) foi adicionada e o material volátil foi removido por evaporação. O resíduo foi purificado pela cromatografia de eluição de ligação, eluindo-se com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM, para dar o produto (163 mg, 49 %): LCMS (MH⁺): 370, 372; HPLC (RT, Sistema A): 2,04.

EXEMPLOS 14 e 15 [00135] Os seguintes compostos foram preparados usando-se um robô Zymate XP por um método análogo àquele descrito no Exemplo 13, começando a partir da 4-anilino-5-bromo-2-cloropirimidina (Método 1) e da / 63 anilina apropriada:

Ex	R	LCMS (MH+)	HPLC (RT)1
14	2-(dietilamino)etóxicarbonil a	484, 486	2,26
15	2-aminoetila	384, 386	5,78

¹ Sistema B

EXEMPLOS 16 e 17 [00136] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 1, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-cloropirimidina (Método 1) e o cloridreto de anilina apropriado (obtido como descrito em J. Med. Chem., 1971, 14, 836-42; PCT Int. Appl. WO 9921846) e isolando-se os produtos como bases livres pela cromatografia de eluição de ligação eluindo-se com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM:

Ex	R	RMN	MS (MH+)
16	Dietilamino	0,94 (t, 6H), 2,51 (q, 4H), 2,70 (t, 2H), 3,85 (t, 2H), 6,45 (dd, 1H), 7,01 (dd, 1H), 7,11 (t, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,34 (dd, 2H), 7,62 (d, 2H), 8,20 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 9,22 (s, 1H).	456,4, 458,4
17	Morfolino	2,4 (m, 4H), 2,6 (m, 2H), 3,6 (m, 4H), 3,9 (m, 2H), 6,5 (m, 1H), 7,0 - 7,4 (m, 6H), 7,6 (m, 2H), 8,2 (s, 1H), 8,5 (s, 1H), 9,2 (m, 1H)	470,2, 472,2

/ 63

EXEMPLOS 18 e 19 [00137] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 1, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-cloropirimidina apropriada (Métodos 1, 4) e do cloridreto de 4-(4isopropilpiperazino)carbometoxianilina (Método 13) e isolando-se os produtos como bases livres pela cromatografia de eluição de ligação eluindose com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM:

Ex	R	RMN	MS (MH+)
18	H	1,2 (d, 6H), 3,6 - 4,1 (m, 8H), 4,4 (m, 1H), 4,8 (s, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,2 (m, 1H), 7,4 (m, 4H), 7,6 (d, 2H), 8,2 (s, 1 H), 9,2 (br s, 1H), 9,4 (br s, 1H)	525,2, 526,9
19	F	1.2 (d, 6H), 2,8 - 3,1 (m, 2H), 3,4 (m, 2H), 3,6 - 4,0 (m, 2H), 4,4 (m, 2H), 4,8 (s, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,2 (m, 2H), 7,3 (m, 2H), 7,5 (m, 2H), 8.3 (s, 1H), 9,4 (br s, 1H)	543,4, 545,3

EXEMPLOS 20 a 23 [00138] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 13, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-cloropirimidina (Método 1) e da anilina apropriada (Métodos 15 17):

/ 63

Br

OR

Ex	R	RMN	MS (MH+)
201	Piperidin-4-ila	1,4 (m, 2H), 1,9 (m, 2H), 2,56 (m, 2H), 2,95 (m, 2H), 4,25 (m, 1H), 6,76 (d, 2H), 7,1 (t, 1H), 7,35 (t, 2H), 7,4 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 9,05 (s, 1H)	440, 442
21	1-metil piperidin-4-ila	1.5 - 1,7 (m, 2H), 1,8 - 1,95 (m, 2H), 2,15 - 2,3 (m, 5H), 2.6 - 2,8 (m, 2H), 6,75 (d, 2H), 7,1 (t, 1H), 7,3 (dd, 2H), 7,45 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,5 (s, 1H), 9,1 (s, 1H)	454,3, 456,3
22	(1-metil piperidin-2- il)metila	1,2 - 1,6 (m, 4H), 1,6 - 1,8 (m, 2H), 2,0 (m, 1H), 2,1 - 2,2 (m, 1H), 2,2 (s, 3H), 2,7 - 2,8 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 4,0 (m, 1H), 6,75 (d, 2H), 7,1 (t, 1H), 7,3 (dd, 2H), 7,45 (d, 2H), 7,6 (d, 2H), 8,15 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 9,1 (s, 1H)	468,3, 470,3
232	1-metil piperidin-3-ila		454,3, 456,3

¹ Diretamente isolado da reação de 4-anilino-5-bromo-2-cloropirimidina com 4-[1-(t- butoxicarbonila)piperidin-4-il]anilina (obtida como descrito em PCT Int. Appl. WO 9952895) ² HPLC (RT): 3,50

EXEMPLO 24

4-Anilino-5-bromo-2-[3-(1-metilpiperidin-3-il)metoxianilino]pirimidina [00139] Uma mistura de carbonato de potássio (160 mg, 1,2 mmol), 4-anilino-5-bromo-2-(3-hidroxianilino)pirimidina (Método 10, 200 mg, 0,6 mmol) e 3-clorometil-1-metilpiperidina (obtida como descrito em Eur. J. Med. Chem. 1994, 29, 967-73; 0,11 ml, 0,62 mmol) em DMSO (2 ml) foi aquecida a 100°C por 18 horas. Sílica (1 g) foi adicionada e o material volátil foi removido por evaporação. O resíduo foi carregado em uma coluna Varian Mega Bond Elut e a coluna foi eluída com 0 a 10 % de solução de amônia metanólica 2,0M para dar o produto como um sólido marrom (40 mg, 15 %). RMN: 1,0 (m, 1H), 1,4 (m, 1H), 1,6 (m, 3H), 1,8 (m, 2H), 2,1 (s, 3H), 2,6 2,8 (m, 2H), 3,6 (m, 2H), 6,4 (d, 1H), 7,0 - 7,4 (m, 6H), 7,6 (m, 2H), 8,2 (s, 1H), 8,5 (s, 1H), 9,2 (s, 1H); MS (MH⁺): 468,5, 470,5.

EXEMPLOS 25 e 26 [00140] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 24, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-(4-hidroxianilino)pirimidina (Método 9) e do cloreto de 2-(dialquil / 63 amino)etila apropriado:

Ex	R	MS (MH+)	HPLC (RT)
25	dietilamino	455,9, 457,9	5,72
26	pirrolidin-1-ila	453,9, 455,9	5,52

EXEMPLOS 27 a 30 [00141] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 1, começando a partir da 5-bromo-2cloropirimidina 4-substituída apropriada (Métodos 1, 5 ao 7) e do cloridreto de anilina apropriado (Métodos 21 e 22) e isolando-se os produtos como bases livres pela cromatografia de eluição de ligação eluindo-se com 0 a 4 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM:

Ex	X	R1	R2	R3	MS (MH+)	HPLC (RT)
27	CH	Me	H	piperidino	481,0, 483,0	7,45
28	N	Me	H	piperidino	482,0, 484,0	6,65

/ 63

29	CH	H	Br	/-PrNH	518,9, 520,9	3,03
30	CH	H	H	/-PrNH	441,0, 443,0	4,48

EXEMPLO 31

4-Anilino-5-bromo-2-[4-(2-hidroxietóxi)metilanilino]pirimidina [00142] A 4-anilino-5-bromo-2-cloropirimidina (Método 1, 2,0 g, 7,03 mmoles) foi dissolvida em n-butanol (40 ml) e metanol (10 ml). O álcool 4-aminobenzílico (778 mg, 6,33 mmoles) e o cloreto de hidrogênio etéreo (1,0M; 6,33 ml, 6,33 mmoles) foram adicionados e a solução foi aquecida a 100°C por 20 horas. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi dissolvido em etileno glicol (20 ml). A solução foi aquecida a 100°C por 6 horas e o material volátil foi removido por evaporação. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna, eluindo-se com 0 a 4 % de solução de metanol em DCM contendo 0,5 % de solução aquosa de amônia, para dar o produto como um sólido branco (550 mg, 19 %). RMN: 3,40 (t, 2H), 3,50 (dt, 2H), 4,37 (s, 2H), 4,57 (t, 1H), 7,09 (d, 2H), 7,10 (s, 1H), 7,15 (t, 1H), 7,36 (dd, 2H), 7,54 (d, 2H), 7,60 (d, 2H), 8,09 (s, 1H), 8,54 (s, 1H), 9,29 (s, 1H); MS (MH^-): 415,2, 417,2.

EXEMPLO 32

4-Anilino-5-bromo-2-{4-[2-(dietilamino)etóxi]metilanilino}pirimidina [00143] Trietilamina (33 ml, 0,241 mmol) e cloreto de metanossulfonila (19 ml, 0,241 mmol) foram adicionados a uma solução de 4-anilino-5-bromo-2-[4-(2-hidroxietóxi)metilanilino] pirimidina (Exemplo 31; 100 mg, 0,241 mmol) em DCM (5 ml) a 0° C. A solução foi aquecida até a temperatura ambiente e deixada repousar por 1 hora. Dietilamina (2 ml) foi adicionada e a mistura foi aquecida a 50°C por 3 horas. O solvente foi removido por evaporação e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna, eluindo-se com 0 a 2 % de solução de metanol em DCM contendo 0,5 % de solução aquosa de amônia, para dar o produto como um sólido creme (38 mg, 34 %). RMN (CDCi₃): 1,03 (t, 6H), 2,58 (q, 4H), 2,69 (t, 2H), 3,54 (t, 2H), 4,48 (s, 2H), 7,06 (d, 2H), 7,17 (t, 1H), 7,22 (s, 1H), 7,26 ( s, 1H), 7,38 / 63 (dd, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,58 (d, 2H), 8,15 (s, 1H); MS (MH⁺): 470,4, 472,4.

[00144] [00145]

EXEMPLOS 33 a 35 Os seguintes compostos foram preparados por um método

análogo àquele descrito no Exemplo 32, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-[4-(2-hidroxietóxi)metilanilino] pirimidina (Exemplo 31) e da amina apropriada e isolando-se os produtos como sais de di ou de tricloridreto:

Ex	R	RMN	MS (MH+)
331	morfolino	3,0 - 3,2 (m, 2H), 3,3 - 3,45 (m, 4H), 3,75 - 3,85(m, 4H), 3,9 4,0 (m, 2H), 4,42 (s, 2H), 7,17 (d, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,40 (dd, 2H), 7,48 (d, 2H), 7,55 (d, 2H), 8,34 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 10,09 (s, 1H)	484,2, 486,2
341	pirrolidin-1-ila	1,8 - 2,05 (m, 4H), 2,95 - 3,1 (m, 2H), 3,33 (t, 2H), 3,4 - 3,55 (m, 2H), 3,70 (t, 2H), 4,45 (s, 2H), 7,17 (d, 2H), 7,23 (t, 1H), 7,40 (dd, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,56 (d, 2H), 8,35 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 10,08 (s, 1H)	467,9, 469,9
352	4-metilpiperazino	2,80 (s, 3H), 3,35 - 3,75 (m, 10H), 3,80 (t, 2H), 4,44 (s, 2H), 7,18 (d, 2H), 7,26 (t, 1H), 7,40 (dd, 2H), 7,49 (d, 2H), 7,56 (d, 2H), 8,34 (s, 1H), 9,30 (s, 1H), 10,09 (s, 1H)	497,0, 499,0

¹ Isolado como o sal de dicloridreto ² Isolado como o sal de tricloridreto

EXEMPLO 36

4-Anilino-5-bromo-2-[4-(2-pirrolidin-1-iletil)anilino]pirimidina [00146] Usando-se um método análogo àquele descrito no Exemplo

32, mas começando a partir da 4-anilino-5-bromo-2-[4-(2hidroxietil)anilino]-pirimidina (Método 11) e pirrolidina, o produto foi obtido. MS (MH⁺): 438,1, 440,1; HPLC (RT): 5,64.

/ 63

EXEMPLO 37

4-Anilino-5-bromo-2-[4-(3-dimetilamino-1-propinil)anilino]pirimidina [00147] Uma solução de 4-anilino-5-bromo-2-(4-iodoanilino) pirimidina (Método 12; 200 mg, 0,40 mmol), N,N-dimetilpropargilamina (0,09 ml, 0,85 mmol) e tetraquis(trifenilfosfino)paládio (0) (25 mg, 0,02 mmol) em pirrolidina (3 ml) foi agitada por 60 horas e depois aquecida a 80° C por 2 horas. A mistura foi diluída com DCM (10 ml) e sílica (2 g) foi adicionada. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi carregado em uma coluna Varian Mega Bond Elut. A eluição com 0 a 10 % de solução de amônia metanólica 2,0M em DCM deu o produto (30 mg, 17 %). RMN: 2,2 (s, 6H), 3,4 (s, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,4 (m, 2H), 7,6 (m, 4H), 8,2 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H); MS (MH⁺): 422,3, 424,3.

EXEMPLOS 38 e 39 [00148] Os seguintes compostos foram preparados por um método análogo àquele descrito no Exemplo 37, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-(4-iodoanilino)pirimidina (Método 12) e do alquino apropriado (comercialmente disponível ou obtida como descrito em PCT Int. Appl. WO 9425459):

R

Ex	R	RMN	MS (MH+)
38	MeNHCH2	2,3 (s, 3H), 3,5 (s, 2H), 7,2 (m, 3H), 7,4 (m, 2H), 7,6 (m, 4H), 8,2 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H)	408,3, 410,3

/ 63

39

^OH

1,3 (m, 1H), 1,6 (m, 1H), 1,8 (m, 4H), 2,6 (m, 3H), 2,8 (d, 1H), 3,0 (s, 1H), 5,5 (s, 1H), 7,2 (m, 3H), 7,4 (m, 2H), 7,6 (m, 4H), 8,2 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H)

490,1, 492,1

EXEMPLO 40 [00149] Anilino-5-bromo-2-[4-(3-amino-1-propinil)anilino]pirimidina [00150] O ácido trifluoroacético (0,25 ml) foi adicionado a uma solução de 4-anilino-5-bromo-2-{4-[3-(t-butoxicarbonilamino)-1-propinil]anilino}pirimidina (Método 25; 30 mg, 0,06 mmol) em DCM (1 ml). A solução foi deixada repousar por 3 horas e o material volátil foi removido por evaporação. O resíduo foi triturado com éter dietílico para dar o produto como um sal de fluoroacetato (25 mg, 81 %). RMN: 4,0 (m, 2H), 7,2 (m, 2H), 7,4 (m, 2H), 7,5 - 7,7 (m, 4H), 7,8 (m, 1H), 8,2 (br s, 2H), 8,7 (s, 1H), 9,6 (s, 1H); MS (MH⁺): 394,3, 396,3.

EXEMPLO 41 [00151] Anilino-5-bromo 2-[4-(piperidin-4-il)metoxianilino]pirimidina [00152] Usando-se um método análogo àquele descrito no Exemplo 40, mas começando a partir da 4-anilino-5-bromo-2-{4-[1-(t-butoxicarbonil)piperidin-4-il]metoxianilino}pirimidina (Método 26), o produto foi obtido. RMN: 1,4 - 1,6 (m, 2H), 1,8 - 2,0 (m, 3H), 2,8 - 3,0 (m, 2H), 3,2 - 3,3 (m, 2H), 3,8 (d, 2H), 6,8 (d, 2H), 7,25 (t, 1H), 7,3 - 7,4 (m, 4H), 7,55 (d, 2H), 8,35 (s, 1H), 8,6 - 9,0 (br d, 1H), 9,0 - 9,2 (br s, 1H), 9,5 (br s, 1H); MS (MH⁺): 453,9, 455,9.

PREPARAÇÃO DE MATERIAIS DE PARTIDA:

[00153] Os materiais de partida para os Exemplos acima estão comercialmente disponíveis ou são facilmente preparados por métodos padrão a partir de materiais conhecidos. Por exemplo, as seguintes reações são uma ilustração, mas não uma limitação, de alguns dos materiais de partida usados nas reações acima.

MÉTODO 1

4-Anilino-5-bromo-2-cloropirimidina [00154] Uma solução de 5-bromo-2,4-dicloropirimidina (6,84 g, 30,0 / 63 mmoles), anilina (2,79 g, 30,0 mmoles) e N,N-diisopropiletilamina (3,87 g, 30,0 mmoles) em n-butanol (75 ml) foi aquecida sob refluxo por 4 horas. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi dissolvido em DCM (100 ml). A solução foi lavada com água (3 x 100 ml) e salmoura saturada (100 ml) e secada. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna, eluindo-se com 15 % de acetato de etila/isoexano, para dar o produto como um óleo que se solidificou no repouso (5,12 g, 60 %). RMN: 7,1 (t, 1H), 7,4 (t, 2H), 7,55 (d, 2H), 8,4 (s, 1H), 9,2 (br s, 1H); MS (MH⁺): 284, 286, 288.

MÉTODOS 2 a 7 [00155] Os seguintes intermediários foram preparados por um método análogo àquele descrito no Método 1, usando-se a anilina ou a aminopiridina apropriadas substituídas e a 5-bromo-2,4-dicloropirimidina ou a

2,4,5-tricloropirimidina (Método 8):

Método	X	R1	R2	R3	MS (MH+)
2	C.CN	Cl	H	H	265,1, 267,1, 269,1
3	CH	Br	H	OMe	314, 316
41	CH	Br	H	F
5	CH	Br	Me	H	298, 300, 302
6	N	Br	Me	H	299, 301
7	CH	Br	H	Br	360,0, 362,0, 364,0, 366,0 (MH-)

¹ RMN: 7,22 (m, 2H), 7,55 (m, 2H), 8,42 (s, 1H), 9,32 (s, 1H)

MÉTODO 8

2,4,5-Tricloropirimidina [00156] A 5-clorouracila (10,0 g, 68,5 mmoles) foi dissolvida em oxicloreto de fósforo (60 ml) e pentacloreto de fósforo (16,0 g, 77,0 / 63 mmoles) foi adicionada. A mistura foi aquecida sob refluxo por 16 horas, deixada esfriar e depois lentamente vertida em água (200 ml) com agitação vigorosa. A mistura foi agitada por 1,5 hora e depois acetato de etila (250 ml) foi adicionado. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com uma porção adicional de acetato de etila (250 ml). Os extratos combinados foram lavados com bicarbonato de sódio saturado (200 ml) e cloreto de sódio saturado (200 ml) e depois secados. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna, eluindo-se com DCM, para dar o produto como um líquido amarelo (6,37 g, 51 %). RMN (CDCh): 8,62 (s, 1H); MS (MH⁺): 182, 184, 186.

MÉTODO 9

4-Anilino-5-bromo-2-(4-hidroxianilino)pirimidina [00157] O 4-aminofenol (0,73 g, 7,8 mmoles) e o ácido clorídrico concentrado (1,30 ml, 7,1 mmoles) foram adicionados à 4-anilino-5-bromo-2-cloropirimidina (Método 1; 3,0 g, 7,1 mmoles) em n-butanol (30 ml) e a mistura foi aquecida a 100° C por 12 horas. O sólido que precipitou no esfriamento foi retirado por filtração e lavado com n-butanol e éter dietílico para dar o produto (0,80 g, 32 %). MS (MH⁺): 357, 359.

MÉTODOS 10 a 12 [00158] Os seguintes intermediários foram preparados por um método análogo àquele descrito no Método 9, começando a partir da 4-anilino-5bromo-2-cloropirimidina (Método 1) e da anilina substituída apropriada:

/ 63

R
Método	R	MS (MH+)
10	3-OH	357, 359
11	4-CH2CH2OH	383,3, 385,3 (MH-)
12	4-I	467,2, 469,2

MÉTODO 13

4-(4-Isopropilpiperazino)carbometoxianilina [00159] Uma solução de 4-[(4-isopropilpiperazino)carbometóxi]nitrobenzeno (Método 14, 830 mg, 2,70 mmoles) em etanol (25 ml) foi cataliticamente hidrogenada em 10 % de paládio em carbono (60 mg) por 2 horas. O catalisador foi removido por filtração através de terra diatomácea e o filtrado foi concentrado a um volume de 5 ml. Cloreto de hidrogênio etéreo (1,0M, 3 ml) foi adicionado e o sólido precipitado foi coletado por filtração para dar o produto como um sal de cloridreto (613 mg, 82 %). RMN: 0,9 (d, 6H), 2,4 (m, 4H), 2,7 (m, 1H), 3,4 (m, 2H), 4,6 (m, 4H), 6,4 (d, 2H), 6,6 (d, 2H); MS (MH⁺): 277,9.

MÉTODO 14

4-[(4-Isopropilpiperazino)carbometóxi]nitrobenzeno [00160] O cloridreto de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,14 g, 11,0 mmoles) foi adicionada a uma solução de ácido 4-nitrofenóxiacético (obtida como descrito em J. Med. Chem., 1984, 27, 967-78; 2,0 g, 10,0 mmoles), 4-isopropilpiperazina (2,56 g, 20,0 mmoles) e 1-hidróxibenzotriazol (2,06 g, 15,0 mmoles) em DMF (50 ml) a 0° C. A mistura foi agitada por 16 horas e o material volátil foi removido por evaporação. Água (50 ml) foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila (3 x 100 / 63 ml). Os extratos foram secados e concentrados por evaporação para dar o produto como um sólido amarelo (600 mg, 22 %). RMN: 1,0 (d, 6H), 2,4 (m, 4H), 2,7 (m, 1H), 3,4 (m, 4H), 5,0 (s, 2H), 7,1 (d, 2H), 8,2 (d, 2H); MS (MH⁺): 307,9.

MÉTODOS 15 a 17 [00161] Os seguintes intermediários foram preparados por um método análogo àquele descrito no Método 13, começando a partir do nitrobenzeno substituído apropriado (Métodos 18 a 20):

NH2 γΊ

OR

Método	R	MS (MH+)
15	1 -metilpiperidin-4-ila	207,2
16	(1 -metilpiperidin-2-il)metila	221,2
17	1-metilpiperidin-3-ila	207,2

MÉTODO 18

4-(1 -Metilpiperidin-4-ilóxi)nitrobenzeno [00162] A trifenilfosfina (7,9 g, 30,0 mmoles) foi adicionada a uma solução agitada de 4-nitrofenol (1,39 g, 10,0 mmoles) em DCM (100 ml) e a solução foi agitada por 30 minutos. Uma solução de 4-hidróxi- 1 -metilpiperidina (1,15 g, 11,0 mmoles) em DCM (5 ml) foi adicionada e a solução foi agitada por 2 minutos. Azodicarboxilato de dietila (4,9 ml, 30,0 mmoles) foi adicionado, às gotas, e a mistura foi agitada por 4 horas. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi dissolvido em acetato de etila (200 ml). A solução foi lavada com água (2 x 100 ml) e depois extraída com ácido clorídrico 2M (2 x 50 ml). Os extratos ácidos combinados foram lavados com éter (2 x 100 ml) e depois basificados pela adição de 0,88 de solução de amônia. A solução basificada foi extraída com éter (2 x 100 ml) e / 63 os extratos foram lavados com água (2 x 100 ml) e cloreto de sódio saturado (100 ml) e secados. O material volátil foi removido por evaporação e uma solução saturada de cloreto de hidrogênio em metanol foi adicionada ao resíduo. O material volátil foi removido por evaporação e o resíduo foi recristalizado a partir de uma mistura de etanol e éter para dar o produto como um sal de cloridreto (350 mg). RMN (373 K): 2,0 - 2,1 (m, 2H), 2,2 2,3 (m, 2H), 2,75 (s, 3H), 2,8 - 3,0 (m, 2H), 3,2 - 3,4 (m, 2H), 4,9 (br s, 1H), 7,2 (d, 2H), 8,2 (d, 2H); MS (MH⁺): 237.

MÉTODO 19

4-[(1-Metilpiperidin-2-il)metóxi)nitrobenzeno [00163] Hidreto de sódio (60 % de dispersão em óleo; 400 mg, 10,0 mmoles) foi adicionado a uma solução de 2-hidroximetil- 1 -metilpiperidina (1,29 g, 10,0 mmoles) em DMF (20 ml) e a mistura foi agitada por 2 horas. O 4-fluoronitrobenzeno (1,4 g, 10,0 mmoles) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 80° C por 17 horas. A mistura foi vertida em água (100 ml) e extraída com acetato de etila (2 x 100 ml). Os extratos foram lavados com água (2 x 100 ml) e depois extraídos com ácido clorídrico 2M (2 x 50 ml). Os extratos ácidos combinados foram lavados com éter (2 x 100 ml) e depois basificados pela adição de 0,88 de solução de amônia. A solução basificada foi extraída com éter (2 x 100 ml) e os extratos foram lavados com água (2 x 100 ml) e cloreto de sódio saturado (100 ml) e secados. O material volátil foi removido por evaporação e uma solução saturada de cloreto de hidrogênio em metanol foi adicionada ao resíduo. A evaporação deu o sal de cloridreto do produto como um óleo (2,4 g). RMN (o asterisco denota forma conformérica): 1,4 - 1,6 (m, 1H), 1,6 - 1,9 (m, 4H), 1,9 - 2,0 (m, 1H), 2,75 (s, 3H)*, 2,8 (s, 3H)*, 3,0 - 3,2 (m, 2H)*, 3,3 - 3,4 (m, 2H)*, 3,4 - 3,6 (m, 1H)*, 3,7 - 3,9 (m, 1H)*, 4,4 (m, 2H), 7,2 (d, 2H), 8,2 (d, 2H), 10,6 - 10,8 (br s, 1H)*, 11,0 - 11,1 (br s, 1H)*; MS (MH⁺): 251,2.

MÉTODO 20 / 63

4-(1-Metilpiperidin-3-ilóxi)nitrobenzeno [00164] Usando-se um procedimento análogo àquele descrito no Método 18, mas começando a partir do 4-nitrofenol e da 3-hidróxi-1-metilpiperidina, o produto foi obtido. MS (MH⁺): 237.

MÉTODOS 21 e 22 [00165] Os seguintes intermediários foram preparados por um método análogo àquele descrito no Método 13, começando a partir do nitrobenzeno apropriado (Métodos 23 e 24):

NH₂

NH

R

Método	R	MS (MH+)
21	i-PrNH	194
22	piperidino	220

MÉTODO 23

4-[2-(Isopropilamino)etilamino]nitrobenzeno [00166] A N-isopropiletilenodiamina (4,87 ml, 39,0 mmoles) e o carbonato de potássio (6,37 g, 46,0 mmoles) foram adicionados a uma solução de 4-fluoronitrobenzeno (5,0 g, 35,0 mmoles) em DMF (50 ml) e a mistura foi aquecida a 70° C por 3 horas sob uma atmosfera de nitrogênio. O material insolúvel foi removido por filtração e o filtrado foi concentrado. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (300 ml) e a solução foi lavada com água (3 x 100 ml) e cloreto de sódio saturado (50 ml) e secada. O solvente foi removido por evaporação para dar o produto como um óleo laranja que cristalizou no repouso (7,55 g, 95 %). RMN: 1,0 (d, 6H), 1,7 (m, 1H), 2,7 (m, 3H), 3,2 (m, 1H), 6,6 (m, 2H), 7,1 (m, 1H), 8,0 (m, 2H); MS (MH⁺): 224.

MÉTODO 24 / 63

4-[2-(Piperidino)etilamino]nitrobenzeno [00167] Usando-se um procedimento análogo àquele descrito no Método 23, mas começando a partir do 4-fluoronitrobenzeno e da 1-(2aminoetil)piperidina, o produto foi obtido. RMN: 1,3 (m, 2H), 1,5 (m, 4H), 2,3 (m, 4H), 2,4 (t, 2H), 3,2 (m, 2H), 6,6 (d, 2H), 7,1 (m, 1H), 8,0 (d, 2H); MS (MH⁺): 250.

MÉTODO 25

4-Anilino-5-bromo-2-{4-[3-(t-butoxicarbonilamino)-1-propinil]anilino}pirimidina [00168] Usando-se um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 37, começando a partir da 4-anilino-5-bromo-2-(4-iodoanilino)pirimidina (Método 12) e do 3-(t-butoxicarbonilamino) propino, o produto foi obtido. RMN: 1,4 (s, 9H), 3,9 (d, 2H), 7,1 - 7,3 (m, 4H), 7,4 (m, 2H), 7,6 (m, 4H), 8,2 (s, 1H), 8,6 (s, 1H), 9,5 (s, 1H); MS (MH⁺): 494,3, 496,3.

MÉTODO 26

4-Anilino-5-bromo-2-{4-(1 -(t-butoxicarbonil)piperidin-4-il]metoxianilino } pirimidina [00169] Usando-se um procedimento análogo àquele descrito no Exemplo 24, começando a partir da 4-anilino-5-bromo-2-(4-hidroxianilino)pirimidina (Método 9) e da 1-(t-butoxicarbonil)-4-(4-toluenossulfonilóxi)metilpiperidina (obtida como descrito em PCT Int. Appl. WO 9427965), o produto foi obtido e foi usado sem caracterização no estágio seguinte.

EXEMPLO 42 [00170] O seguinte ilustra as formas de dosagem farmacêutica representativas contendo o composto da fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável ou éster hidrolisável in vivo deste (a seguir composto X), para o uso terapêutico ou profilático em humanos:

(a): Tablete I	mg/tablete
Composto X	100
Lactose Ph.Eur	182,75
Croscarmelose de sódio	12,0

/ 63

Pasta de amido de milho (pasta a 5 % p/v)	2,25
Estearato de magnésio	3,0

(b): Tablete II	mg/tablete
Composto X	50
Lactose Ph.Eur	223,75
Croscarmelose de sódio	6,0
Amido de milho	15,0
Polivinilpirrolidona (pasta a 5% p/v)	2,25
Estearato de magnésio	3,0

(c): Tablete III	mg/tablete
Composto X	1,0
Lactose Ph.Eur	93,25
Croscarmelose de sódio	4,0
Pasta de amido de milho (5% p/v pasta)	0,75
Estearato de magnésio	1,0

(d): Cápsula	mg/cápsula
Composto X	10
Lactose Ph.Eur	488,5
Estearato de magnésio	1,5

(e): Injeção I	(50 mg/ml)
Composto X	5,0 % p/v
Solução de hidróxido de sódio 1M	15,0 % v/v
Ácido clorídrico 0,1 M	(para ajustar o pH a 7,6)
Polietileno glicol 400	4,5 % p/v
Água para injeção	a 100 %

(f): Injeção II	10 Mg2SO4/ml
Composto X	1,0 % p/v
Fosfato de sódio BP	3,6 % p/v
Solução de hidróxido de sódio 0,1M	15,0 % v/v
Água para injeção	a 100 %

(g): Injeção III	(1 mg/ml, tamponado ao pH6)
Composto X	0,1 % p/v
Fosfato de sódio BP	2,26 % p/v
Ácido cítrico	0,38 % p/v
Polietileno glicol 400	3,5 % p/v
Água para injeção	a 100 %

Nota:

As formulações acima podem ser obtidas por procedimentos convencionais bem conhecidos na técnica farmacêutica. Os tabletes (a)-(c) podem ser revestidos entericamente por meios convencionais, por exemplo, para fornecer um revestimento de acetato ftalato de celulose.

Claims (13)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Derivado de pirimidina, caracterizado pelo fato de ser da fórmula (I):

   em que:

   Q₁ e Q₂ são independentemente selecionados de fenila ou piridila; e um de Q1 e Q2 ou ambos de Q1 e Q2 são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de N-(alquila C_1-2)amino, N,N-di-(alquila C_{1- 2})amino, grupo heterocíclico, grupo -O- heterocíclico, alquila C_1-2 substituída, alcóxi C_1-2 substituído, alcóxi C_1-2 carbonila substituído, N-(alquila C₁₂)amino substituída, alcóxi C_1-2 alquila C_1-2 substituída, alquenila C_2-4 substituída e alquinila C_2-4 substituída; em que os ditos substituintes para alquila C_1-2, alcóxi C_1-2, alcóxi C_1-2 carbonila, N-(alquila C_1-2)amino, alcóxi C_1-2 alquila C_1-2, alquenila C_2-4 e alquinila C_2-4 são selecionados de hidróxi, carbóxi, ciano, amino, grupo heterocíclico, grupo -C(O)- heterocíclico, N-alquila C_1-4 amino, e N,N-di-(alquila C_1-4)amino, em que qualquer grupo heterocíclico é opcionalmente substituído em um carbono do anel por um ou mais grupos selecionados de R^a; e em que se qualquer grupo heterocíclico contém uma porção de -NH-, o nitrogênio pode ser opcionalmente substituído por um grupo selecionado de R^b;

   G é -NR²-;

   R² é selecionado de hidrogênio;

   R¹ é selecionado de hidrogênio e halo;

   Qi é opcionalmente substituída em um carbono do anel por um a quatro cianos;

   Q² é opcionalmente substituído em um carbono do anel por um a quatro substituintes independentemente selecionados de halo, ciano, alquila C1-4, e alcóxi C1-4;

   R^a é selecionado de hidróxi; e

   R^b é selecionado de alquila C_1-4;

   em que o “grupo heterocíclico” é selecionado de 2,5dioxopirrolidinila, piperidinila, ftalimido, morfolino, quinuclidinila, pirrolidinila, piperazinila e imidazolila;

   ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
2. 2. Derivado de pirimidina de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Q¹ é fenila, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
3. 3. Derivado de pirimidina de acordo com cada uma das reivindicações 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que Q² é fenila ou piridila, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
4. 4. Derivado de pirimidina de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 3, caracterizado pelo fato de que um de Q₁ e Q₂ ou ambos de Q1 e Q2 são substituídos em um carbono do anel por um substituinte selecionado de dimetilamino, 4-metilpiperazino, aminometila,

   2-hidroxietoximetila, succinimid-1-ilmetila, 2-pirrolidin-1-iletila,

   2-aminoetila, piperid-4-ilóxi, 1-metilpiperid-4-ilóxi, 1-metilpiperid-3-ilóxi, carboximetóxi, 1-metil-piperid-2-ilmetóxi, 1-metilpiperid-3-ilmetóxi, piperid-4-ilmetóxi, 4-isopropilpiperazinocarbonilmetóxi, 2-ftalimid-1-iletóxi, 2-morfolino-etóxi, 2-dimetilaminoetóxi, 2-dietilaminoetóxi, 2-(4metilpiperazino)etóxi, 2-imidazol-1-iletóxi, 2-pirrolidin-1-iletóxi,

   2-aminoetinila, 2-dimetilamino-etinila, 2-metilaminoetinila,

   2-(3-hidroxiquinuclidin-3-il)etinila, 2-morfolinoetoximetila,

   2-dietilaminoetoximetila, 2-pirrolidin-1-iletoximetila, 2-(4- metilpiperazino)etoximetila, 2-dietilaminoetoxicarbonila, 2-piperidinoetilamino ou 2-isopropilaminoetilamino, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
5. 5. Derivado de pirimidina de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 4, caracterizado pelo fato de que Q₁ é substituído na posição para ou meta relativa a -NH-, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
6. 6. Derivado de pirimidina de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, caracterizado pelo fato de que G é -NH-, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
7. 7. Derivado de pirimidina de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 6, caracterizado pelo fato de que R¹ é hidrogênio, cloro ou bromo ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
8. 8. Derivado de pirimidina de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 7 caracterizado pelo fato de que Q² é não substituído ou substituído por um grupo selecionado de flúor, bromo, metila, metóxi e ciano, ou um sal deste farmaceuticamente aceitável.
9. 9. Derivado de pirimidina de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 8, caracterizado pelo fato de que é selecionado de:

   4-anilino-5-bromo-2-[4-(2-dimetilaminoetóxi)anilino] pirimidina;

   4-anilino-5-bromo-2-[4-(carboximetóxi)anilino]pirimidina; 4-anilino-5-bromo-2-[4-(1-metilpiperid-4-ilóxi)anilino] pirimidina;

   4-(6-metilpirid-2-il)-5-bromo-2-[4-(2-piperid-1-iletilamino) anilino]-pirimidina;

   4-anilino-5-bromo-2-[4-(2-isopropilaminoetilamino)anilino] pirimidina; ou

   4-anilino-5-bromo-2-[4-(3-metilamino-1-propinil)anilino] pirimidina;

   ou um sal destes farmaceuticamente aceitável.
10. 10. Processo para preparar um derivado de pirimidina como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de que é selecionado de:

    a) para os compostos da fórmula (I) onde G é -NR²-; reagir uma pirimidina da fórmula (II):

    H

    N

    N

    R¹ (II) em que L é um grupo substituível como definido abaixo, com um composto da fórmula (III):

    onde G é -NR²-;

    b) reação de uma pirimidina da fórmula (IV):

    em que L é um grupo substituível como definido abaixo, com um composto da fórmula (V):

    d nh₂ (V) e, a seguir, se necessário:

    i) converter um composto da fórmula (I) em um outro composto da fórmula (I);

    ii) remover quaisquer grupos de proteção;

    iii) formar um sal deste farmaceuticamente aceitável.
11. 11. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um derivado de pirimidina da fórmula (I) ou um sal deste farmaceuticamente aceitável, como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, em associação com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitáveis.
12. 12. Derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um sal deste farmaceuticamente aceitável, como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser para o uso em um método de tratamento profilático ou terapêutico de um animal de sangue quente, tal como o homem.
13. 13. Uso de um derivado de pirimidina da fórmula (I), ou um sal deste farmaceuticamente aceitável, como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, caracterizado pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o uso na produção de um efeito inibidor do ciclo celular, anti-câncer (anti-proliferação celular) e/ou um efeito inibidor de FAK (antimigração celular e/ou indutor da apoptose) em um animal de sangue quente, tal como o homem.