NO341746B1 - Pyrazoler, farmasøytisk preparat inneholdende samme, slike forbindelser som terapeutisk aktive substanser samt slike forbindelser for anvendelse i behandling av sykdommer - Google Patents

Pyrazoler, farmasøytisk preparat inneholdende samme, slike forbindelser som terapeutisk aktive substanser samt slike forbindelser for anvendelse i behandling av sykdommer Download PDF

Info

Publication number
NO341746B1
NO341746B1 NO20083863A NO20083863A NO341746B1 NO 341746 B1 NO341746 B1 NO 341746B1 NO 20083863 A NO20083863 A NO 20083863A NO 20083863 A NO20083863 A NO 20083863A NO 341746 B1 NO341746 B1 NO 341746B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
carboxylic acid
pyrazole
adamantan
mmol
trans
Prior art date
Application number
NO20083863A
Other languages
English (en)
Swedish (sv)
Other versions
NO20083863L (no
Inventor
Nancy-Ellen Haynes
Kevin Richard Guertin
Paul Gillespie
Nader Fotouhi
Lida Qi
Jr Robert Alan Goodnow
Kshitij Chhabilbhai Thakkar
Qiang Zhang
Sherrie Lynn Pietranico-Cole
Nathan Robert Scott
Jefferson Wright Tilley
Kevin William Anderson
Michael Paul Myers
Pamela Loreen Rossman
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=38430507&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO341746(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of NO20083863L publication Critical patent/NO20083863L/no
Publication of NO341746B1 publication Critical patent/NO341746B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4155—1,2-Diazoles non condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/12—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/16—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D231/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings
    • C07D231/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings
    • C07D231/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D231/14—Heterocyclic compounds containing 1,2-diazole or hydrogenated 1,2-diazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D231/38—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D407/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00
    • C07D407/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D405/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

Det er her tilveiebrakt forbindelser med formel (I): så vel som farmasøytisk akseptable salter derav, hvor substituentene er som beskrevet i beskrivelsen. Disse forbindelsene og de farmasøytiske preparatene som inneholder dem, er anvendelige for behandling av sykdommer som for eksempel diabetes mellitus type II og metabolsk syndrom.

Description

Oppfinnelsen angår inhibitorer av 11β-hydroksysteroid-dehydrogenase. Inhibitorene omfatter for eksempel pyrazoler og derivater av disse og er anvendelige for behandling av sykdommer så som diabetes mellitus type II og metabolsk syndrom.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Diabetes mellitus er en alvorlig sykdom som påvirker et økende antall mennesker over hele verden. Insidensen øker sammen med den økende tendens til fedme i mange land. De alvorlige konsekvenser av sykdommen omfatter øket risiko for slag, hjertesykdom, nyreskade, blindhet og amputasjon. Diabetes er karakterisert ved redusert insulinsekresjon og/eller at perifert vev har svekket evne til å respondere på insulin, hvilket resulterer i øket glukosenivå i plasma. Det er to former for diabetes: insulinavhengig og ikke-insulinavhengig, og de aller fleste diabetikere lider av den ikke-insulinavhengige form av sykdommen, kjent som type 2 diabetes eller ikke-insulinavhengig diabetes mellitus (NIDDM). På grunn av de alvorlige konsekvensene er det et presserende behov for å kontrollere diabetes.
Behandling av NIDDM starter generelt med slanking, sunt kosthold og et treningsprogram. Disse faktorene er spesielt viktige med tanke på de kardiovaskulære risiki som er reletert til diabetes, men de er vanligvis ineffektive med hensyn til å kontrollere selve sykdommen. Det finnes flere medikament-behandlinger, inkludert insulin, metformin, sulfonylureaforbindelser, akarbose og tiazolidindioner. Alle disse behandlingene har imidlertid ulemper, og det er fortsatt behov for nye medikamenter for behandling av diabetes.
Metformin er et effektivt middel som reduserer fastende glukosenivå i plasma og forbedrer perifert vevs sensitivitet for insulin. Metformin har flere effekter in vivo, inkludert økning av glykogensyntesen, den polymere lagringsformen av glukose [R. A. De Fronzo Drugs 1999, 58 Suppl.1, 29]. Metformin har også fordelaktig effekt på lipidprofilen, hvilket har fordelaktig effekt på kardiovaskulær helse - behandling med metformin fører til redusert nivå av LDL-kolesterol og triglycerider [S. E. Inzucchi JAMA 2002, 287, 360]. I løpet av noen år mister imidlertid metformin sin effekt [R. C. Turner et al. JAMA 1999, 281, 2005], og det er følgelig behov for nye behandlinger mot diabetes.
Tiazolidindioner er aktivatorer av den nukleære reseptor peroksisom-proliferator-aktivert reseptor-gamma. De gir effektiv reduksjon av blodglukosenivået, og effektiviteten blir primært tilskrevet den reduserte insulinresistens i skjelettmuskulatur [M. Tadayyon og S. A. Smith Expert Opin. Investig. Drugs 2003, 12, 307]. Én ulempe forbundet med anvendelse av tiazolidindioner, er vektøkning.
Sulfonylurea-forbindelser bindes til sulfonylurea-reseptoren på pankreatiske beta-celler, stimulerer insulinsekresjon og reduserer følgelig blodglukose-nivået. Vektøkning er også relatert til anvendelse av sulfonylurea-forbindelser [S. E. Inzucchi JAMA 2002, 287, 360] og effekten reduseres over tid, som for metformin [R. C. Turner et al. JAMA 1999, 281, 2005]. Et annet problem som pasienter som behandles med sulfonylurea-forbindelser opplever, er hypoglykemi [M. Salas J. J. og Caro Adv. Drug React. Tox. Rev.2002, 21, 205-217].
Akarbose er en inhibitor av enzymet alfa-glukosidase, som bryter ned disakkarider og komplekse karbohydrater i tarmen. Det har lavere effektivitet enn metformin eller sulfonylurea-forbindelser og forårsaker ubehag i tarmen og diaré, hvilket ofte medfører seponering [S. E. Inzucchi JAMA 2002, 287, 360].
Metabolsk syndrom er en tilstand hvor pasienter har flere enn to av de følgende symptomer: fedme, hypertriglyceridemi, lavt nivå av HDL-kolesterol, høyt blodtrykk og forhøyet fastende glukosenivå. Dette syndromet er ofte en forløper for type 2 diabetes og har høy prevalens i USA (estimert til 24%) (E. S. Ford et al. JAMA 2002, 287, 356). Et terapeutisk middel som bedrer metabolsk syndrom, vil være anvendelig for potensielt å stanse progresjonen eller redusere progresjonshastigheten til type 2 diabetes.
I leveren blir glukose produsert i to forskjellige prosesser: glukoneogenese, hvor ny glukose blir dannet i en serie enzymatiske reaksjoner fra pyruvat og glykolyse, og ved nedbrytning av polymeren glykogen.
To av de viktigste enzymene i prosessen glukoneogenese er fosfoenolpyruvatkarboksykinase (PEPCK), som katalyserer omdanningen av oksalacetat til fosfoenolpyruvat og glukose-6-fosfatase (G6Pase), som katalyserer hydrolysen av glukose-6-fosfat, hvilket gir fri glukose. Omdanningen av oksalacetat til fosfoenolpyruvat, katalysert av PEPCK, er det hastighetsbegrensende trinn i glukoneogenesen. Ved fasting blir både PEPCK og G6Pase oppregulert, hvilket medfører at hastigheten av glukoneogenesen øker. Nivået av disse enzymene blir kontrollert til dels av kortikosteroidhormonene (kortisol hos mennesker og kortikosteron hos mus). Når kortikosteroidet bindes til kortikosteroidreseptoren, blir det utløst en signaleringskaskade som resulterer i oppregulering av disse enzymene.
Kortikosteroidhormonene finnes i kroppen sammen med deres oksiderte 11-dehydroanaloger (kortison og 11-dehydrokortikosteron hos henholdsvis mennesker og mus), som ikke har aktivitet ved glukokortikoid-reseptoren. Virkningene av hormonet avhenger av den lokale konsentrasjon i vevet hvor kortikosteroid-reseptorene blir uttrykt. På grunn av virkningene av redoksenzymer i vevet kan denne lokale konsentrasjonen avvike fra nivået av hormonet i plasma. Enzymene som modifiserer oksidasjonstrinnet av hormonet, er 11beta-hydroksysteroid-dehydrogenase form I og II. Form I (11β-HSD1) er ansvarlig for reduksjon av kortison til kortisol in vivo, mens form II (11β-HSD2) er ansvarlig for oksidering av kortisol til kortison. Enzymene har lav homologi og blir uttrykt i forskjellige vev. 11β-HSD1 blir kraftig uttrykt i flere vevstyper, inkludert lever, fettvev og hjerne, mens 11β-HSD2 blir kraftig uttrykt i målvev for mineralokortikoid, så som nyrer og tykktarm.11β-HSD2 forhindrer bindingen av kortisol til mineralokortikoid-reseptoren, og defekter ved dette enzymet er funnet å være relatert til AME-syndromet (”apparent mineralocorticoid excess”).
Siden bindingen av 11β-hydroksysteroider til kortikosteroid-reseptoren fører til oppregulering av PEPCK og derfor øket blodglukosenivå, er inhibering av 11β-HSD1 en lovende tilnærmingsgmåte til behandling av diabetes. I tillegg til den biokjemiske drøftingen ovenfor, finnes det bevis fra forskning med transgene mus, og også fra små kliniske studier med mennesker, som bekrefter det terapeutiske potensialet for inhibering av 11β-HSD1.
Forsøk med transgene mus indikerer at modulering av aktiviteten til 11β-HSD1 kan ha fordelaktige terapeutiske effekter ved diabetes og metabolsk syndrom. Når for eksempel 11β-HSD1-genet blir eliminert hos mus, fører fasting ikke til normal økning av nivået av G6Pase og PEPCK, og dyrene er ikke følsomme for stress- eller fedme-relatert hyperglykemi. Videre har ”knockout”-dyr som blir gjort overvektige med fettrikt kosthold, vesentlig lavere fastende glukosenivå enn vekt-matchede kontroller (Y. Kotolevtsev et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1997, 94, 14924). Det er også funnet at 11β-HSD1-knockoutmus har forbedret lipidprofil, insulinsensitivitet og glukosetoleranse (N. M. Morton et al. J. Biol. Chem.2001, 276, 41293). Effekten av å overuttrykke 11β-HSD1-genet hos mus har også vært studert. Disse transgene musene oppviste øket 11β-HSD1-aktivitet i fettvev, samt bukfedme, som er relatert til metabolsk syndrom. Nivået av kortikosteronet økte i fettvev, men ikke i serum, og musen hadde øket tendens til fedme, spesielt på et fettrikt kosthold. Mus matet med kost med lavt fettinnhold, ble hyperglykemiske og hyperinsulinemiske og oppviste også glukoseintoleranse og insulinresistens (H. Masuzaki et al. Science, 2001, 294, 2166).
Virkningene av den ikke-selektive 11β-hydroksysteroid-dehydrogenase-inhibitoren karbenoksolon er studert i flere små studier med mennesker. I én studie ble det funnet at karbenoksolon fører til en økning i hele kroppens insulinsensitivitet, og denne økningen ble tilskrevet redusert glukoseproduksjon i leveren (B. R. Walker et al. J. Clin. Endocrinol. Metab. 1995, 80, 3155). I en annen studie ble redusert glukoseproduksjon og glykogenolyse observert som respons på glukagon-provokasjon hos diabetikere, men ikke hos friske personer (R. C. Andrews et al. J. Clin. Enocrinol. Metab. 2003, 88, 285).
Dessuten ble det funnet at karbenoksolon forbedrer kognitiv funksjon hos friske, eldre menn og hos type 2 diabetikere (T. C. Sandeep et al. Proc. Natl. Acad. Sci USA 2004, 101, 6734).
Flere uspesifikke inhibitorer av 11β-HSD1 og 11β-HSD2 er identifisert, inkludert glycyrrhetinsyre, abietinsyre og karbenoksolon. Dessuten er det oppdaget flere selektive inhibitorer av 11β-HSD1, inkludert kenodeoksykolsyre, flavanon og 2'-hydroksyflavanon (S. Diederich et al. Eur. J. Endocrinol.2000, 142, 200 og R. A. S. Schweizer et al. Mol. Cell. Endocrinol. 2003, 212, 41).
WO 2004/089896 A1 angår nye forbindelser med defienrt formel (I) som modulerer aktiviteten til 11β-hydroksysteroid-dehydrogenase.
Innen området er det behov for 11β-HSD1-inhibitorer som er effektive ved behandling av sykdommer som diabetes mellitus type II og metabolsk syndrom. Videre er det innen området et behov for 11β-HSD1-inhibitorer som har IC50-verdier under ca.1 μM.
OPPSUMMERING AV OPPFINNELSEN
I én utførelsesform av oppfinnelsen er det tilveiebrakt en forbindelse med formel (I):
R1 er hydrogen;
R2er adamantan, usubstituert eller substituert med hydroksy eller halogen;
R3 er trifluormetyl, pyrazol, triazol, piperidin, pyrrolidin, hydroksymetylpiperidin, benzylpiperazin, hydroksypyrrolidin, tert-butyl pyrrolidin, hydroksyetylpiperazin, hydroksypiperidin eller en tiomorfolingruppe;
R4 er cyklopropyl, tert-butyl, -C(CH3)2CH2OH, metyl, -CF3 eller -(CH2)nCF3 gruppe, hvor n er 1 eller 2;
R5 er hydrogen eller C1-C7-alkyl, usubstituert eller substituert med halogen;
og farmasøytisk akseptable salter derav.
I en annen utførelsesform av oppfinnelsen er det tilveiebrakt et farmasøytisk preparat som omfatter en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse med formel I, eller farmasøytisk akseptable salter derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
DETALJERT BESKRIVELSE AV OPPFINNELSEN
Foreliggende oppfinnelse angår forbindelse med formel (I):
hvor:
R1er hydrogen;
R2 er adamantan, usubstituert eller substituert med hydroksy eller halogen;
R3er trifluormetyl, pyrazol, triazol, piperidin, pyrrolidin, hydroksymetylpiperidin, benzylpiperazin, hydroksypyrrolidin, tert-butyl pyrrolidin, hydroksyetylpiperazin, hydroksypiperidin eller en tiomorfolingruppe;
R4er cyklopropyl, tert-butyl, -C(CH3)2CH2OH, metyl, -CF3eller -(CH2)nCF3gruppe, hvor n er 1 eller 2;
R5er hydrogen eller C1-C7-alkyl, usubstituert eller substituert med halogen;
og farmasøytisk akseptable salter derav.
Om ikke på annen måte definert i kravene gjelder følgende definisjoner:
I denne beskrivelsen betyr betegnelsen “aryl” et mono- eller polycyklisk, aromatisk ringsystem, hvor ringene kan være karbocykliske; eller hvor ringene kan inneholde ett eller flere atomer valgt fra O, S og N, typisk kalt en heteroarylring. Eksempler på arylgrupper er fenyl, pyridyl, benzimidazolyl, benzofuranyl, benzotiazolyl, benzotiofenyl, cinnolinyl, furyl, imidazo[4,5-c]pyridinyl, imidazolyl, indolyl, isokinolinyl, isoksazolyl, naftyl, [1,7]naftyridinyl, oksadiazolyl, oksazolyl, ftalazinyl, purinyl, pyidazinyl, pyrazolyl, pyrido[2,3-d]pyrimidinyl, pyrimidinyl, pyrimido[4,5-d]pyrimidinyl, pyrrolo[2,3-d]pyrimidinyl, pyrrolyl, kinazolinyl, kinolinyl, kinoksalinyl, tetrazolyl, tiadiazolyl, tiazolyl, tiofenyl, triazolyl.
Slik den blir anvendt her, betyr betegnelsen “alkyl” for eksempel en forgrenet eller uforgrenet, cyklisk eller acyklisk, mettet eller umettet (f.eks. alkenyl eller alkynyl) hydrokarbylrest som kan være substituert eller usubstituert. Når alkylgruppen er cyklisk, er den fortrinnsvis C3 til C12, mer foretrukket C5 til C10, mer foretrukket C5 til C7. Når alkylgruppen er acyklisk er den fortrinnsvis C1 til C10, mer foretrukket C1 til C6, mer foretrukket metyl, etyl, propyl (n-propyl eller isopropyl), butyl (n-butyl, isobutyl, sek-butyl eller tertiær-butyl) eller pentyl (inkludert n-pentyl og isopentyl), mer foretrukket metyl. Det er derfor underforstått at betegnelsen “alkyl” slik den blir anvendt her, omfatter alkyl (forgrenet eller uforgrenet), substituert alkyl (forgrenet eller uforgrenet), alkenyl (forgrenet eller uforgrenet), substituert alkenyl (forgrenet eller uforgrenet), alkynyl (forgrenet eller uforgrenet), substituert alkynyl (forgrenet eller uforgrenet), cykloalkyl, substituert cykloalkyl, cykloalkenyl, substituert cykloalkenyl, cykloalkynyl og substituert cykloalkynyl.
Betegnelsen “heterocyklyl” viser til en mettet eller delvis umettet, 5- eller 6-leddet ring som kan omfatte ett, to eller tre atomer valgt fra nitrogen, oksygen og/eller svovel. Eksempler på heterocyklylringer omfatter piperidinyl, piperazinyl, azepinyl, pyrrolidinyl, pyrazolidinyl, imidazolinyl, imidazolidinyl, oksazolidinyl, isoksazolidinyl, morfolinyl, tiazolidinyl, isotiazolidinyl, tiadiazolylidinyl, dihydrofuryl, tetrahydrofuryl, dihydropyranyl, tetrahydropyranyl og tiomorfolinyl.
Slik den blir anvendt her, betyr betegnelsen “lavere alkyl” for eksempel en forgrenet eller uforgrenet, cyklisk eller acyklisk, mettet eller umettet (f.eks. alkenyl eller alkynyl) hydrokarbylrest, hvor den nevnte cykliske lavere alkylgruppe er C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9eller C10, fortrinnsvis C3, C4, C5, C6 eller C7; og hvor den nevnte acykliske lavere alkylgruppe er C1, C2, C3, C4, C5, C6 eller C7, fortrinnsvis C1, C2, C3, C4, som for eksempel metyl, etyl, propyl (n-propyl eller isopropyl) eller butyl (n-butyl, sek-butyl, isobutyl eller tertiær-butyl). Det er derfor underforstått at betegnelsen “lavere alkyl” slik den blir anvendt her, omfatter lavere alkyl (forgrenet eller uforgrenet), lavere alkenyl (forgrenet eller uforgrenet), lavere alkynyl (forgrenet eller uforgrenet), cyklisk lavere alkyl, cyklisk lavere alkenyl og cyklisk lavere alkynyl.
Alkyl- og arylgruppene kan være substituerte eller usubstituerte. Når de er substituerte, vil det vanligvis foreligge for eksempel 1 til 3 substituenter, fortrinnsvis 1 substituent.
Substituenter kan for eksempel omfatte: karbon-holdige så som alkyl, aryl, arylalkyl (f.eks. substituert og usubstituert fenyl, substituert og usubstituert benzyl); halogenatomer og halogen-holdige grupper så som halogenalkyl (f.eks. trifluormetyl); oksygen-holdige grupper så som alkoholer (f.eks. hydroksyl, hydroksyalkyl, aryl(hydroksyl)alkyl), etere (f.eks. alkoksy, aryloksy, alkoksyalkyl, aryloksyalkyl), aldehyder (f.eks. karboksaldehyd), ketoner (f.eks. alkylkarbonyl, alkylkarbonylalkyl, arylkarbonyl, arylalkylkarbonyl, arykarbonylalkyl), syrer (f.eks. karboksy, karboksyalkyl), syrederivater så som estere (f.eks. alkoksykarbonyl, alkoksykarbonylalkyl, alkylkarbonyloksy, alkylkarbonyloksyalkyl), amider (f.eks. aminokarbonyl, mono- eller di-alkylaminokarbonyl, aminokarbonylalkyl, mono- eller di-alkylaminokarbonylalkyl, arylaminokarbonyl), karbamater (f.eks. alkoksykarbonylamino, arloksykarbonylamino, aminokarbonyloksy, mono- eller di-alkylaminokarbonyloksy, arylaminokarbonyloksy) og urea-grupper (f.eks. mono- eller di-alkylaminokarbonylamino eller arylaminokarbonylamino); nitrogen-holdige grupper så som aminer (f.eks. amino, mono- eller di-alkylamino, aminoalkyl, mono- eller di-alkylaminoalkyl), azider, nitriler (f.eks. cyano, cyanoalkyl), nitro; svovel-holdige grupper så som tioler, tioetere, sulfoksider og sulfoner (f.eks. alkyltio, alkylsulfinyl, alkylsulfonyl, alkyltioalkyl, alkylsulfinylalkyl, alkylsulfonylalkyl, aryltio, arysulfinyl, arysulfonyl, arytioalkyl, arylsulfinylalkyl, arylsulfonylalkyl); og heterocykliske grupper som inneholder ett eller flere, fortrinnsvis ett heteroatom (f.eks. tienyl, furanyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, tiazolyl, isotiazolyl, oksazolyl, oksadiazolyl, tiadiazolyl, aziridinyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, pyrrolinyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, pyrazolidinyl, tetrahydrofuranyl, pyranyl, pyronyl, pyridyl, pyrazinyl, pyridazinyl, piperidyl, heksahydroazepinyl, piperazinyl, morfolinyl, tianaftyl, benzofuranyl, isobenzofuranyl, indolyl, oksyindolyl, isoindolyl, indazolyl, indolinyl, 7-azaindolyl, benzopyranyl, kumarinyl, isokumarinyl, kinolinyl, isokinolinyl, naftridinyl, cinnolinyl, kinazolinyl, pyridopyridyl, benzoksazinyl, kinoksalinyl, kromenyl, kromanyl, isokromanyl, ftalazinyl og karbolinyl).
De lavere alkylgruppene kan være substituerte eller usubstituerte, fortrinnsvis usubstituerte. Når de er substituerte, vil det vanligvis foreligge for eksempel 1 til 3 substituenter, fortrinnsvis 1 substituent.
Slik den blir anvendt her, betyr betegnelsen “alkoksy” for eksempel alkyl-O-, og “alkoyl” betyr for eksempel alkyl-CO-. Alkoksy-substituentgrupper eller alkoksy-holdige substituentgrupper kan være substituert med for eksempel én eller flere alkylgrupper.
Slik den blir anvendt her, betyr betegnelsen “halogen” for eksempel en fluor-, klor-, bromeller jod-rest, fortrinnsvis en fluor-, klor- eller brom-rest og mer foretrukket en fluor- eller klor-rest.
Slik den blir anvendt her, betyr betegnelsen “farmasøytisk akseptabelt salt” et hvilket som helst farmasøytisk akseptabelt salt av forbindelsen med formel (I). Salter kan fremstilles fra farmasøytisk akseptable, ikke-toksiske syrer og baser som omfatter uorganiske og organiske syrer og baser. Slike syrer omfatter for eksempel eddiksyre, benzensulfonsyre, benzosyre, kamfersulfonsyre, sitronsyre, etensulfonsyre, dikloreddiksyre, maursyre, fumarsyre, glukonsyre, glutaminsyre, hippursyre, bromhydrogensyre, saltsyre, isetioninsyre, melkesyre, maleinsyre, eplesyre, mandelsyre, metansulfonsyre, slimsyre, salpetersyre, oksalsyre, pamoinsyre, pantotensyre, fosforsyre, ravsyre, svovelsyre, vinsyre, oksalsyre, p-toluensulfonsyre. Spesielt foretrukket er fumarsyre, saltsyre, bromhydrogensyre, fosforsyre, ravsyre, svovelsyre og metansulfonsyrer. Akseptable basesalter omfatter alkalimetall- (f.eks. natrium, kalium), jordalkalimetall- (f.eks. kalsium, magnesium) og aluminiumsalter.
Forbindelser med formel I kan ha ett eller flere asymmetriske karbonatomer og kan foreligge som optisk rene enantiomerer, blandinger av enantiomerer, som for eksempel racemater, optisk rene diastereoisomerer, blandinger av diastereoisomerer, diastereoisomere racemater eller blandinger av diastereoisomere racemater. De optisk aktive former kan oppnås for eksempel ved oppløsning av racematene, ved asymmetrisk syntese eller asymmetrisk kromatografi (kromatografi med et kiralt adsorberende middel eller elueringsmiddel). Oppfinnelsen omfatter alle disse formene.
Foretrukket er forbindelse ifølge formel I, hvor
R2er usubstituert adamantan; og
R3er trifluormetyl, pyrazol, triazol, piperidin, pyrrolidin, hydroksymetylpiperidin, benzylpiperazin, hydroksypyrrolidin, tert-butyl pyrrolidin, hydroksyetylpiperazin, hydroksypiperidin eller en tiomorfolingruppe.
Ytterligere foretrukket er også forbindelse ifølge formel I, hvor
R2 er adamantan substituert med hydroksy eller halogen; og
R3er trifluormetyl, pyrazol, triazol, piperidin, pyrrolidin, hydroksymetylpiperidin, benzylpiperazin, hydroksypyrrolidin, tert-butyl pyrrolidin, hydroksyetylpiperazin, hydroksypiperidin eller en tiomorfolingruppe.
Også foretrukket er også forbindelse ifølge formel I, hvor
R2er usubstituert adamantan; og
R4 er cyklopropyl, tert-butyl, -C(CH3)2CH2OH, metyl, -CF3 eller -(CH2)nCF3 gruppe, hvor n er 1 eller 2.
Et annet fortrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse er forbindelse ifølge formel I, hvor
R2 er adamantan substituert med hydroksy eller halogen; og
R4er cyklopropyl, tert-butyl, -C(CH3)2CH2OH, metyl, -CF3eller -(CH2)nCF3gruppe, hvor n er 1 eller 2.
Et annet fortrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse er forbindelse ifølge formel I, hvor R2er trans-hydroksy adamantan.
Ytterligere foretrukket er forbindelse ifølge formel I, hvor R3er en trifluormetylgruppe.
Et annet fortrukket aspekt ved foreliggende oppfinnelse er forbindelse ifølge formel I, hvor R3 er en pyrazol, triazol, piperidin, pyrrolidin, hydroksymetyl piperidin, benzylpiperazin, hydroksypyrrolidin, tert-butyl pyrrolidin, hydroksyetyl piperazin, hydroksypiperidin eller tiomorfolingruppe.
Ytterligere foretrukket er forbindelse ifølge formel I, hvor R5 er en trifluormetylgruppe.
Foretrukket er også forbindelse ifølge formel I, valgt fra
2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
metyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre amid;
cis-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre amid;
trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid; cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid; metyl-5-[1,2,4]triazol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
metyl-5-pyrrolidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; 5-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
5-(4-hydroksymetyl-piperidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
5-(4-benzyl-piperazin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
5-(R-3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; tert-butyl-5-pyrrolidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
5-[4-(2-hydroksy-etyl)-piperazin-1-yl]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantanylamid;
2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid; tert-butyl-5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; tert-butyl-5-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; metyl-5-tiomorfolin-4-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
tert-butyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-fluor-adamantan-2-yl)-amid;
trans-1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-2'-tert-butyl-4-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-2'-tert-butyl-4-klor-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
Ytterligere foretrukket er forbindelse ifølge formel I valgt fra
trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid; 2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
1-metyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre adamantan-2-ylamid;
trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
cis-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid; 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre adamantan-2-ylamid; og
Ytterligere foretrukket er også forbindelse ifølge formel I, hvor nevnte forbindelse er valgt fra gruppen bestående av
trans-1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2 yl)-amid;
trans-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-2'-tert-butyl-4-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
trans-2'-tert-butyl-4-klor-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid;
Et annet foretrukket aspekt er forbindelse ifølge formel I bestående av:
trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid.
Oppfinnelsen angår også farmasøytisk preparat, omfattende en terapeutisk effektiv mengde av forbindelse ifølge formel I eller farmasøytisk akseptable salter derav og en farmasøytisk akseptabel bærere.
Oppfinnelsen angår også preparatet over, hvor nevnte forbindelse er trans-2'-tertbutyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid.
Oppfinnelsen angår også forbindelse med formel I for anvendelse som terapeutisk aktiv substans.
Oppfinnelsen angår også forbindelse som definert over hvor nevnte forbindelse er trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid.
Oppfinnelsen angår også forbindelse med formel I for anvendelse ved behandling av diabetes, fedme eller metabolsk syndrom.
Oppfinnelsen angår også forbindelse for anvendelse som definert over hvor nevnte forbindelse er trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid.
Oppfinnelsen angår også forbindelse ifølge formel I for anvendelse ved fremstilling av medikamenter for behandling av a metabolsk lidelse.
Oppfinnelsen angår også forbindelse for anvendelse som definert over hvor nevnte forbindelse er trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid.
Oppfinnelsen angår også anvendelse av forbindelse med formel I for fremstilling av medikamenter for behandling av diabetes, fedme eller metabolsk syndrom.
Oppfinnelsen angår også anvendelsen av forbindelse som definert over for fremstilling av medikamenter for behandling av diabetes, fedme eller metabolsk syndrom, hvor nevnte forbindelse er trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid.
Generell syntese av forbindelser ifølge oppfinnelsen
Skjema 1
En generell syntesemetode for forbindelser ifølge oppfinnelsen, er vist i Skjema 1. I henhold til denne prosessen blir en β-keto-ester med formel 2 omdannet til en forbindelse med formel 3, hvor X representerer dialkylamino (så som dimetylamino) eller laverealkoksy (så som etoksy), og deretter blir forbindelsen med formel 3 omsatt med et hydrazin, hvilket gir forbindelsen med formel 4. Den ester-beskyttende gruppen i forbindelsen med formel 4 blir deretter avspaltet, og den resulterende karboksylsyre blir koblet med et amin med formel HNR1R2, hvilket gir den ønskede forbindelsen med formel 1. Omsetning av en forbindelse med formel 2, hvilket gir en forbindelse med formel 3, kan utføres ved anvendelse av betingelser som er velkjente innen faget. I tilfellet hvor for eksempel X representerer dimetylamino, kan forbindelsen med formel 3 fremstilles ved å behandle en forbindelse med formel 2 med N,N-dimetylformamid-dimetylacetal i et inert løsningsmiddel så som et aromatisk hydrokarbon (for eksempel toluen) ved en temperatur mellom ca.50°C og ca.100°C. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i H. H. Wassermann et al. Tetrahedron Lett.1984, 25, 3743-3746, i S. Gelin et al. Synthesis 1983, 566-568 og i J. Svete et al. Synthesis 1990, 70-72. I tilfeller hvor X representerer etoksy, kan forbindelsen med formel 3 fremstilles ved å behandle en forbindelse med formel 2 med trietylortoformat i nærvær av eddiksyreanhydrid ved tilbakeløpstemperatur. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i L. Claisen Liebigs Ann. Chem.1897, 297, 1-18; i L.
Crombie et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. IN 1979, 464-471; i M. S. S. Palanki et al. J. Med. Chem.2000, 43, 3995-4004; og i M. T. Herrero et al. Tetrahedron 2002, 58, 8581-8589.
En annen generell syntesemetode for mellomprodukt 4 er også vist i Skjema 1. I denne metoden (Int. PCT-søknad 2003051820) hvor X = dimetylamino, blir kommersielt tilgjengelig 3-dimetylamino-akrylsyre-etylester (formel 2b) behandlet med trifluoreddiksyreanhydrid i toluen og danner derved et mellomprodukt som er representert ved formel 2c. Behandling av mellomproduktet med formel 2c med et alkylhydrazin gir forbindelser med den generelle formel 4.
Omsetning av forbindelsen med formel 3 med et hydrazin, kan utføres under en rekke betingelser. Forbindelsen med formel 3 kan omsettes med for eksempel et hydrazin eller et syreaddisjonssalt av et hydrazin, i et inert løsningsmiddel så som en alkohol (for eksempel etanol). I tilfeller hvor et syreaddisjonssalt av hydrazin blir anvendt, blir reaksjonen utført i nærvær av en base, så som et tertiært alkylamin (for eksempel trietylamin eller diisopropyletylamin). Det er hensiktsmessig at reaksjonen blir utført ved en temperatur mellom ca. -20°C og ca. 80°C. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i J. R. Beck et al. J. Heterocycl. Chem.1987, 24, 739-740; i G. Menozzi et al. J. Heterocycl. Chem.1987, 24, 1669-1676; i F. R. Busch et al., int. PCT-søknad WO 2003051845; i J. F. Lambert et al., int. PCT-søknad WO 2002044133; i H. Shimotori et al. US 4.792.565; og i H. Ohki et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2002, 12, 3191-3193.
Spaltning av en forbindelse med formel 4 til den tilsvarende karboksylsyre, blir utført ved anvendelse av reaksjonsbetingelser som er velkjente innen faget organisk syntese, og flere er beskrevet i “Protective Groups in Organic Synthesis” [T. W. Greene og P. G. M. Wuts, 2. utgave., John Wiley & Sons, N.Y.1991]. I tilfeller hvor R4 representerer for eksempel metyl eller etyl, er det hensiktsmessig at reaksjonen utføres ved å behandle forbindelsen med én ekvivalent av et alkalimetallhydroksid, så som kaliumhydroksid, natriumhydroksid eller litiumhydroksid, fortrinnsvis litiumhydroksid, i et egnet løsningsmiddel, så som en blanding av tetrahydrofuran, metanol og vann. Reaksjonen kan utføres ved en temperatur mellom ca.0°C og ca. romtemperatur, fortrinnsvis ved ca. romtemperatur. I tilfeller hvor R4representerer en gruppe som kan avspaltes under sure betingelser, så som en tert-butylgruppe, kan, som et annet eksempel, esteren behandles med en sterk, uorganisk syre, for eksempel en hydrohalogensyre så som hydrogenklorid eller hydrogenbromid, eller en sterk, organisk syre, for eksempel en halogenert alkankarboksylsyre så som trifluoreddiksyre. Det er hensiktsmessig at reaksjonen blir utført i nærvær av et inert, organisk løsningsmiddel (så som diklormetan) og ved en temperatur mellom ca.0°C og ca. romtemperatur, fortrinnsvis ved ca. romtemperatur. I tilfeller hvor R4 representerer en gruppe som kan avspaltes ved katalytisk hydrogenering og med det ytterligere forbehold at resten av molekylet er stabilt ved slike betingelser, kan, som et avsluttende (men ikke begrensende) eksempel, reaksjonen utføres ved hydrogenering i nærvær av en edelmetall-katalysator så som palladium-på-karbon, i nærvær av et inert løsningsmiddel (for eksempel en alkohol så som etanol) ved ca. romtemperatur og under atmosfærisk trykk.
Koblingen av en karboksylsyre med struktur 4, hvor R4 representerer hydrogen, med et amin med struktur HNR1R2, i henhold til Skjema 1, kan utføres ved anvendelse av metoder som er velkjente for fagkyndige. Omdanningen kan utføres for eksempel ved omsetning av en karboksylsyre med struktur 4, hvor R4 representerer hydrogen, eller av et passende derivat derav, så som en aktivert ester, med et amin med struktur HNR1R2eller et tilsvarende syreaddisjonssalt (f.eks. hydrokloridsaltet), om nødvendig i nærvær av et koblingsmiddel, mange eksempler på dette er i og for seg velkjent innenfor peptidkjemien. Det er hensiktsmessig at reaksjonen blir utført ved å behandle karboksylsyren med struktur 4, hvor R4representerer hydrogen, med hydrokloridet av aminet med struktur HNR1R2, i nærvær av en passende base, så som diisopropyletylamin, et koblingsmiddel så som O-(benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-heksafluorfosfat eller TSTU, og eventuelt i nærvær av en substans som øker reaksjonens hastighet, så som 1-hydroksybenzotriazol eller 1-hydroksy-7-azabenzotriazol, i et inert løsningsmiddel, så som et klorert hydrokarbon (f.eks. diklormetan) eller N,N-dimetylformamid eller N-metylpyrrolidinon, ved en temperatur mellom ca.0 °C og ca. romtemperatur, fortrinnsvis ved ca. romtemperatur. Alternativt kan reaksjonen utføres ved omdanning av karboksylsyren med formel 4, hvor R4 representerer hydrogen, til et aktivert esterderivat, så som N-hydroksysuccinimidesteren, og deretter omsetning av dette med aminet med struktur HNR1R2eller et tilsvarende syreaddisjonssalt. Denne reaksjonssekvensen kan utføres ved omsetning av karboksylsyren med formel 4, hvor R4representerer hydrogen, med N-hydroksysuccinimid i nærvær av et koblingsmiddel, så som N,N'-dicykloheksylkarbodiimid, i et inert løsningsmiddel så som tetrahydrofuran, ved en temperatur mellom ca.0 °C og ca. romtemperatur. Den resulterende N-hydroksysuccinimid-ester blir deretter behandlet med aminet med struktur HNR1R2 eller et tilsvarende syreaddisjonssalt, i nærvær av en base, så som en organisk base (f.eks. trietylamin eller diisopropyletylamin eller lignende) i et egnet inert løsningsmiddel så som N,N-dimetylformamid, ved ca. romtemperatur.
I tilfeller hvor X representerer en polymer-bundet aminogruppe, kan reaksjonssekvensen som er vist i Skjema 1, også utføres ved anvendelse av fastfase-syntese. I henhold til denne metoden blir forbindelsen med formel 2 behandlet med N-formylimidazoldimetylacetal og et polymer-bundet amin, så som et anilin-funksjonalisert cellulose-derivat (for eksempel 4-amino-fenyl-sulfonyl-etoksy-cellulose, som er tilgjengelig fra Iontosorb, Usti nad Labem, Den Tjekkiske Republikk) i nærvær av en syrekatalysator, så som kamfersulfonsyre, i et inert løsningsmiddel, så som N,N-dimetylformamid, ved en temperatur rundt 80°C, hvilket gir en forbindelse med formel 3, hvor X representerer et polymer-bundet anilin. Forbindelsen med formel 3 blir deretter omdannet til forbindelsen med formel 4 ved behandling med et hydrazin i et inert løsningsmiddel så som en alkohol (for eksempel isopropanol), ved en temperatur rundt kokepunktet til løsningsmidlet.
Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i L. De Luca et al. J. Comb. Chem.2003, 5, 465-471.
<6>7 1
Skjema 2
Et pyrazol-4-karboksamid med formel 1, hvor R5 = hydrogen, kan fremstilles i henhold til Skjema 2, hvor et β-keto-amid med formel 6 blir omdannet til en forbindelse med formel 7, hvor X representerer dialkylamino (så som dimetylamino) eller lavere alkoksy (så som etoksy), og deretter blir forbindelsen med formel 7 omsatt med et hydrazin, hvilket gir forbindelsen med formel 1. Omsetning av en forbindelse med formel 6, hvilket gir en forbindelse med formel 7, kan utføres ved anvendelse av betingelser som er velkjente innen faget. I tilfeller hvor for eksempel X representerer dimetylamino, kan forbindelsen med formel 7 fremstilles ved å behandle en forbindelse med formel 6 med N,N-dimetylformamid-dimetylacetal i et inert løsningsmiddel så som et aromatisk hydrokarbon (for eksempel toluen), ved en temperatur mellom ca.50°C og ca.100°C. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i R. Zupet et al. J. Heterocycl. Chem.1991, 28, 1731-1740; i D. E. Seitz et al. Tetrahedron Lett.1995, 36, 1413-1416; i A. V. Rama Rao et al. Tetrahedron Lett.1990, 31, 1439-42; og i P. Kocienski et al. Tetrahedron Lett.1988, 29, 4481-4. I tilfeller hvor X representerer etoksy, kan forbindelsen med formel 7 fremstilles ved å behandle en forbindelse med formel 6 med trietylortoformat, i nærvær av eddiksyreanhydrid ved tilbakeløpstemperatur. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i J. H. Dewar et al. J. Chem. Soc.1961, 3254-3260.
Omsetning av forbindelsen med formel 7 med et hydrazin kan utføres under en rekke betingelser. Forbindelsen med formel 7 kan omsettes med for eksempel et hydrazin eller et syreaddisjonssalt av et hydrazin, i et inert løsningsmiddel så som en alkohol (for eksempel etanol). I tilfeller hvor det blir anvendt et syreaddisjonssalt av hydrazinet, blir reaksjonen utført i nærvær av en base, så som et tertiært alkylamin (for eksempel trietylamin eller diisopropyletylamin). Det er hensiktsmessig at reaksjonen blir utført ved en temperatur mellom ca. -20°C og ca. 80°C. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i A. X. Wang et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.1998, 8, 2787-2792; i T. A. Elmaati et al. Pol. J. Chem.2002, 76, 945-952 Kjemisk Abstracts EN 2002:501464; og i G. Giacomelli et al. Eur. J. Org. Chem.2003, 537-541.
Reaksjonssekvensen som er vist i Skjema 2, kan også utføres i tilfeller hvor X representerer et anilin. En forbindelse med formel 7 kan altså fremstilles fra en forbindelse med formel 6 ved behandling med et N-(alkoksymetylen)-anilin, eventuelt i nærvær av et inert løsningsmiddel, så som kerosen, ved forhøyet temperatur, f.eks. mellom ca.125°C og ca.140°C. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i F. B. Dains Chem. Ber.1902, 35, 2496-2500; i F. B. Dains et al. J. Am. Chem. Soc. 1909, 31, 1148-1157; i F. B. Dains et al. J. Am. Chem. Soc.1918, 40, 562-569; og i O. S. Wolfbeis Chem. Ber.1981, 114, 3471-3484. Forbindelsen med formel 7 kan deretter omdannes til forbindelsen med formel 1 ved behandling med et hydrazin i et inert løsningsmiddel så som etanol, ved en temperatur rundt tilbakeløpstemperaturen til løsningsmidlet. Eksempler på betingelser for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i F. B. Dains et al. J. Am. Chem. Soc.1909, 31, 1148-1157; i F. B. Dains et al. J. Am. Chem. Soc.1916, 38, 1515; i F. B. Dains et al. J. Am. Chem. Soc.1918, 40, 562-569; og i A. N. Borisevich et al. Ukrainskii Khimicheskii Zhurnal 1986, 52, 641-7 Chemical Abstracts AN 1987:458919.
<8 9 10>11
Skjema 3
Forbindelser ifølge oppfinnelsen hvor R5representerer lavere alkyl, inkludert lavere halogenalkyl så som trifluormetyl, kan fremstilles i henhold til kjemien som er vist i Skjema 3. I henhold til denne metoden, som er beskrevet i EP 1067121A2, blir, i tilfeller hvor R5representerer trifluormetyl, et alkylcyanoacetat så som etylcyanoacetat, behandlet med en ester så som etyltrifluoraceat, i nærvær av en base så som natriumetoksid, i etanol. Det resulterende natriumsalt-addukt 10 blir deretter behandlet med et alkylhydrazin så som metylhydrazin, hvilket medfører cyklisering til 5-amino-1-alkylpyrazol 11. 5-aminogruppen kan deretter omdannes til andre grupper så som halogen (se nedenfor).
<12 13 14>
Skjema 4
Som vist i Skjema 4 kan et 1-alkyl-5-pyrrolyl-pyrazol-4-karboksylsyre-derivat med formel 14 fremstilles med utgangspunkt i en 3-alkoksy-2-cyano-akrylsyreester med formel 12, ved omsetning med et hydrazin med formel RNHNH2, hvilket gir et 5-amino-pyrazolmellomprodukt med formel 13, som deretter kan omsettes med 2,5-dimetoksytetrahydrofuran, hvilket gir 5-pyrrolyl-pyrazolet med formel 14. Dette kan omdannes til et karboksamid ifølge oppfinnelsen ved reaksjoner som er analoge med de som er beskrevet ovenfor ved henvisning til Skjema 1. Det er hensiktsmessig at den pyrazol-dannende reaksjon blir utført ved å behandle en 3-alkoksy-2-cyano-akrylsyreester med formel 12 (så som 3-etoksy-2-cyano-akrylsyre-etylester) med et hydrazin med formel RNHNH2i et inert løsningsmiddel så som etanol, ved tilbakeløpstemperatur. Det er hensiktsmessig at den påfølgende ringdanning for å danne pyrrolringen, blir utført ved oppvarming av 5-aminopyrazol-mellomproduktet med 2,5-dimetoksy-tetrahydrofuran i en organisk syre så som eddiksyre, ved en temperatur på rundt 100°C. Et eksempel på betingelser som er egnet for denne prosessen, kan finnes i litteraturen, for eksempel i M. Kopp et al. J. Heterocycl. Chem. 2001, 38, 1045-1050. Ytterligere eksempler på prosedyrer for fremstilling av 5-amino-1-aryl-pyrazol-4-karboksylatestere, kan finnes i J. Svetlik Heterocycles 1984, 22, 2513-2516; i J. R. Beck et al. J. Heterocycl. Chem.1987, 24, 267-270; og i T. Luebbers et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2000, 10, 821-826. Karboksylatesteren med formel 14 kan deretter hydrolyseres til den tilsvarende karboksylsyre og kobles med et amin med formel HNR1R2 ved anvendelse av prosedyrer som er analoge med de som er beskrevet ovenfor for omdanningen av en karboksylatester med formel 4 til en forbindelse ifølge oppfinnelsen med formel 1.
Skjema 5
Som vist i Skjema 5, kan et 1-alkyl-5-aryl-pyrazol-4-karboksylsyre-derivat med formel 18 fremstilles med utgangspunkt i en 5-amino-pyrazol-4-karboksylatester med formel 15, ved diazotering av aminogruppen i nærvær av et halogeneringsmiddel så som kobber(II)bromid. Det er hensiktsmessig at reaksjonen blir utført ved å behandle forbindelsen med formel 15 med et alkylnitritt så som tert-butylnitritt eller isoamylnitritt, i et inert løsningsmiddel så som et halogenert hydrokarbon (for eksempel karbontetraklorid), ved en temperatur rundt 50°C, i nærvær av en bromkilde så som brom, kobber(II)bromid, dibrommetan eller bromoform. Alternativt kan klorering i C-5-stilling utføres ved å erstatte bromkilden med en kloridkilde så som kobber(II)klorid. Betingelser som er egnet for denne reaksjonen, kan finnes i litteraturen, for eksempel i J. R. Beck og M. P. Lynch US 4.620.865 og i H. Mizukawa JP 2002003410. Omdanningen av esteren med formel 16 til et amid med formel 17 utføres med omdanningen av en forbindelse med formel 4 til en forbindelse med formel 1 som beskrevet ovenfor, og kan utføres ved anvendelse av lignende reaksjoner. Omdanningen av en forbindelse med formel 17 til en forbindelse ifølge oppfinnelsen med formel 18, kan utføres ved anvendelse av en Suzuki-reaksjon med et organoboron-mellomprodukt så som en arylboronsyre eller en ester derav, en reaksjon som er velkjent for en gjennomsnittlig fagkyndig. Det er hensiktsmessig at reaksjonen utføres for eksmpel ved omsetning av en forbindelse med formel 17 med en arylboronsyre i et hensiktsmessig, inert løsningsmiddel, så som et polart, aprotisk løsningsmiddel (f.eks. N,N-dimetylformamid) eller en eter (f.eks. dioksan) eller vann, i nærvær av en katalytisk mengde av et palladium(0)kompleks (f.eks. tetrakis(trifenylfosfin)-palladium(0)) eller en forbindelse som kan reduseres in situ, hvilket gir palladium(0) (for eksempel palladium(II)acetat eller bis(trifenylfosfin)-palladium(II)klorid), eventuelt i nærvær av en katalytisk mengde av et fosfinligand, for eksempel tri-o-tolylfosfin eller tri-tertbutylfosfin, eller alternativt i nærvær av et forhåndsdannet kompleks av palladium(0) med et fosfinligand, så som bis(tri-cykloheksyl-fosfin)palladium, og også i nærvær av en uorganisk base, for eksempel et alkalimetallkarbonat, -bikarbonat, -hydroksid eller -fosfat (f.eks. kaliumfosfat eller natriumkarbonat eller natriumhydroksid), ved en temperatur mellom ca. romtemperatur og ca.100°C og fortrinnsvis mellom ca. romtemperatur og ca. 50°C. Betingelser som er egnet for denne reaksjonen, kan finnes i litteraturen, for eksempel i X.-J. Wang og K. Grozinger Tetrahedron Lett.2000, 41, 4713-4716.
Utgangsmaterialet med formel 15 kan fremstilles fra en 3-alkoksy-2-cyano-akrylsyreester med formel 12 ved omsetning med et alkyl-hydrazin, ved reaksjoner som er analoge med de som er beskrevet ovenfor for fremstilling av en forbindelse med formel 13. Betingelser som er egnet for denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i F. Bondavalli et al. J. Med. Chem.2002, 45, 4875-4887; i S. Schenon et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.2001, 11, 2529-2531; i M. Kopp et al. J. Heterocycl. Chem.2001, 38, 1045-1050; og i P. Seneci et al. Synth. Commun.1999, 29, 311-341.
Skjema 6
Som vist i Skjema 6, er det mulig å erstatte 5-brom-pyrazol med struktur 21 med aminer under mikrobølgeoppvarming, for å danne forbindelser med den generelle struktur 22.
Skjema 7
Som vist i Skjema 7, kan en forbindelse med formel 24, hvor R1 representerer lavere alkyl , fremstilles fra en forbindelse med formel 23 ved omsetning med en sterk base (så som natriumhydrid), i et inert løsningsmiddel (så som dimetylformamid) ved romtemperatur, hvilket gir det tilsvarende anion. Dette blir deretter omsatt uten isolering med et lavere alkylhalogenid med formel R1X ved romtemperatur, hvilket gir den ønskede forbindelsen med formel 24, hvor R1representerer lavere alkyl.
Metoder som er egnet for fremstilling av mange β-keto-estere med formel 2, hvor det anvendes en rekke syntesemetoder, er kjente fra litteraturen. En liste over mange av disse metodene, kan finnes i "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" [R. C. Larock, VCH Publishers, Inc. New York, 1989], se for eksempel s. 685, 694-695 og 768. Ytterligere eksempler på syntesemetoder som er egnet for fremstilling av mange β-keto-estere med formel 2, kan finnes i “Advanced Organic Chemistry” [J. March, 3. utgave, John Wiley & Sons, Inc. New York, 1985], s.437-439 og 823-824. Dessuten er flere hundre β-keto-estere med formel 2 listet opp som kommersielt tilgjengelige i The Available Chemicals Directory, som er velkjent for en fagmann innenfor faget organisk syntese.
<25 26 2>
Skjema 8
Ett eksempel på en metode for fremstilling av en β-keto-ester med formel 2, er beskrevet i Skjema 8. Meldrums syre (25) blir behandlet med et acylklorid med formel R3COCl i et vannfritt, inert løsningsmiddel så som et halogenert hydrokarbon (f.eks. metylenklorid eller dikloretan). Reaksjonen blir utført i nærvær av en vannfri, organisk base, så som pyridin, trietylamin eller diisopropyletylamin, ved ca. romtemperatur. Betingelser som er egnet for denne reaksjonen, kan finnes i litteraturen, se for eksempel i H. Emtenäs et al. J. Org. Chem. 2001, 26, 6756 -6761. Det resulterende mellomprodukt med formel 26 blir deretter oppvarmet med en alkohol med formel HOR4, enten ved anvendelse av alkoholen som løsningsmiddel (for eksempel i tilfeller hvor alkoholen er metanol eller etanol) eller i et inert løsningsmiddel så som benzen (for eksempel i tilfeller hvor alkoholen er benzylalkohol eller tert-butylalkohol). Det er hensiktsmessig at reaksjonen blir utført ved en temperatur mellom ca.60°C og ca.80°C. Betingelser som er egnet for denne reaksjonen, kan finnes i litteraturen, for eksempel i Y. Oikawa et al. J. Org. Chem.1978, 43, 2087-2088.
<26 27>
Skjema 9
β-keto-amider med formel 27 kan fremstilles fra mellomproduktet med formel 26 ved behandling med en støkiometrisk mengde av et amin med formel HNR1R2, i et egnet inert løsningsmiddel så som toluen, ved tilbakeløpstemperatur. Betingelser som er egnet for denne reaksjonen, kan finnes i litteraturen, for eksempel i C. S Pak et al. Synthesis 1992, 1213-1214.
Kilder til monosubstituerte hydraziner med formel 5
Mange monosubstituerte hydraziner med formel 5 kan anskaffes eller fremstilles ved anvendelse av én av en rekke synteseprosedyrer som er velkjente innenfor faget organisk kjemi, som beskrevet nedenfor.
Over hundre hydraziner med formel 5, hvorav noen kan være anvendelige i foreliggende oppfinnelse, er kommersielt tilgjengelige fra leverandører som Aldrich Chemical, Inc., Milwaukee, WI; TCI America, Portland, OR; Lancaster Syntese Ltd, Lancashire, Storbritannia ; ASDI Inc., Newark, DE ; Ryan Scientific, Isle of Palms, SC; Oakwood Products, Inc., West Columbia, SC; Alfa Aesar, Ward Hill, MA. Mange andre eksempler kan finnes ved å konsultere The Available Chemicals Directory (MDL Information Systems, San Leandro, CA) eller SciFinder (Chemical Abstracts Services, Columbus, OH).
En rekke metoder som er kjent for fremstilling av hydraziner og som er gjennomgått i "The Chemistry of the Hydrazo, Azo and Azoksy Groups. Part 1" [J. Timberlake and J. Stowell; S. Patai Ed.; John Wiley & Sons, Ltd. London 1975, 69-107]. Videre er flere metoder for fremstilling av substituerte hydraziner, beskrevet i U. Ragnarsson Che. Soc. Rev.2001, 30, 205-213.
I tillegg til metodene som er beskrevet detaljert nedenfor, har de følgende prosesser vært anvendt for å fremstille alkylhydraziner: omsetning av et aldehyd eller keton med et hydrazid, fulgt av reduksjon og hydrolyse (CH 307629, Chem. Abs.51:25623; N. I. Ghali et al. J Org. Chem.1981, 46, 5413-5414); Hofmann-omsetning av en urea-forbindelse (J. Viret et al. Tetrahedron 1987, 43, 891-894); elektrofil aminering av et alkylamin: (L. F.
Audrieth og L. H. Diamond J. Am. Chem. Soc.1954, 76, 4869-4871; A. Koziara et al.
Synth. Commun.1995, 25, 3805-3812); Mitsunobu-omsetning av en alkohol med N-tertbutoksykarbonylaminoftalimid, fulgt av hydrolyse (N. Brosse et al. Tetrahedron Lett. 2000, 41, 205-207); omdanning av et alkylamin til det tilsvarende N-alkylsydnon, fulgt av hydrolyse (J. Fugger et al. J. Am. Chem. Soc.1955, 77, 1843-1848); omsetning av et alkylbromid med N'-isopropyliden-fosforohydrazidinsyre-dietylester eller difenylfosfinsyrehydrazid, fulgt av avbeskyttelse (S. Zawadzki et al. Synthesis 1987, 485-487; B.
Mlotkowska og Z. Zwierzak Tetrahedron Lett.1978, 19, 4731-4734).
R LG<R N>
NH2
<LG=X 28>5
LG=OTos 29
<LG=SCH>330
Skjema 10
Et monosubstituert hydrazin med formel 5 kan fremstilles ved nukleofil substitusjon av en forbindelse med en egnet utgående gruppe som vist i Skjema 10. Egnede utgående grupper er de som er forenlige med reaksjonsbetingelsene som blir anvendt for å fremstille forbindelser ifølge oppfinnelsen. Eksempler på slike grupper er p-toluensulfonat (OTos) eller halogengrupper, inkludert bromid, klorid og fluorid, fortrinnsvis bromid og klorid. En forbindelse med struktur 5 kan for eksempel fremstilles fra en forbindelse med struktur 28, ved behandling av den halogenerte forbindelsen med formel 28 med hydrazinhydrat, i et alkoholisk løsningsmiddel så som metanol, etanol eller 1-butanol, ved ca. romtemperatur eller ved det anvendte løsningsmidlets tilbakeløpstemperatur.
Alkyl NH2Alkyl NHNH2
<29>5<(R=Alkyl)>
Skjema 11
Alkylhydraziner med formel 5 kan fremstilles fra det tilsvarende amin med struktur 29 som vist i Skjema 11. Reaksjonen kan utføres ved behandling av aminet med struktur 29 med hydroksylamin-O-sulfonsyre i isvann, i nærvær av en uorganisk base så som kaliumhydroksid, og vann. Syntesen blir utført ved ca. tilbakeløpstemperatur.
Hydroksylamin-O-sulfonsyre er kommersielt tilgjengelig.
Alternativt kan en forbindelse med struktur 5 fremstilles ved å sette kloramin langsomt til aminet med struktur 29 i nærvær av kaliumhydroksid. Den resulterende blandingen blir hensatt i noen få timer og blir om nødvendig filtrert for å fjerne utfelt amin-hydroklorid og/eller ammoniumklorid fra reaksjonsblandingen. Alkylhydrazinet med struktur 5 blir renset ved destillering. Kloramin kan fremstilles ved omsetning av klor med ammoniakk.
33 5
Skjema 12
Noen alkylhydraziner med struktur 5 kan også oppnås fra et keton eller aldehyd med struktur 30, i henhold til Skjema 12, ved fremstilling av et tert-butylalkylidinkarbazat med formel 32, som videre kan reduseres og hydrolyseres, hvilket gir et hydrokloridsalt av en forbindelse med formel 5. Den første reaksjonen kan utføres ved å behandle karbonylforbindelsen med formel 30 med tert-butylkarbazat med formel 31, i et inert løsningsmiddel så som heksan, ved tilbakeløpstemperatur i en kort tidsperiode. Det resulterende mellomprodukt 32 kan deretter reduseres med diboran i tetrahydrofuran under vannfrie betingelser ved ca. romtemperatur, hvilket gir karbazat-mellomproduktet med formel 33. Hydrolyse av karbazatet med struktur 33 kan utføres med en fortynnet syre, så som saltsyre, ved ca.100°C, hvilket gir hydrokloridsaltet av et alkylhydrazin med formel 5. Et eksempel på anvendelse av denne prosessen for fremstilling av alkylhydraziner, kan finnes i N.I. Ghali, et.al J. Org. Chem.1981, 46, 5413.
Skjema 13
For mange alkylhydrazin-derivater som ikke kan anskaffes kommersielt, representerer Skjema 13 en generell prosedyre som muliggjør syntetisering av disse. Tert-butylisopropylidenkarbazat blir behandlet under basiske alkyleringsbetingelser, så som behandling med kaliumhydroksid og alkylhalogenider, i toluen ved 80°C, i nærvær av en faseoverføringskatalysator, så som tetra-butylammoniumbisulfat. Etter alkylering fjernes isopropylidenet og Boc-beskyttelsesgruppene ved syrehydrolyse, hvilket gir det ønskede hydrazin som et hydrokloridsalt. Fremstilling av tert-butyl-isopropylidenkarbazat, samt alkylering av dette, er rapportert i Synlett 2004, 2355-2356.
<30 36 5>
Skjema 14
Alternativt kan alkylhydraziner med formel 5 fremstilles fra et keton eller aldehyd med formel 30, i henhold til Skjema 14, ved dannelse av hydrazon-mellomproduktet med formel 36, fulgt av reduksjon, hvilket gir forbindelsen med struktur 5. Det er mulig å fremstille forbindelser med den generelle struktur 36 ved omsetning av et aldehyd eller keton (struktur 30) med overskudd av hydrazinhydrat, i et løsningsmiddel så som metanol, etanol, isopropanol eller dioksan, ved løsningsmidlets tilbakeløpstemperatur.
Hydrogenering av hydrazon-mellomproduktet med struktur 36 kan utføres ved anvendelse av palladiumhydroksid eller palladium på en bærer (f.eks. aktivert trekull) som katalysator, i et alkoholisk løsningsmiddel (f.eks. metanol, etanol) i nærvær av eddiksyre, ved ca. romtemperatur og under et trykk på 4,2 kg/cm<2>.
Skjema 15
En ytterligere syntesemetode starter med et Boc-beskyttet amin med formel 37 som blir behandlet med NOBF4i nærvær av pyridin, i et aprotisk løsningsmiddel så som acetonitril, hvilket gir et N-nitroso-N-Boc-alkylamin med formel 38. Etter behandling av N-nitroso-N-Boc-alkylaminet med formel 38 med konsentrert HCl og aktivert sinkpulver ved lav temperatur, så som -78°C, i et løsningsmiddel så som metanol, blir det dannet et alkylhydrazin med formel 5 (Skjema 15). Denne metoden er rapportert i vitenskapelig litteratur (R. Kuang, et al., Tetrahedron Lett.2000, 41, 9575-9579).
Mange aminer med formel HNR1R2er kommersielt tilgjengelige og kjente for fagfolk.
Dessuten kjenner gjennomsnittlig fagkyndige til en rekke metoder for syntetisering av aminer med formel HNR1R2. Mange av disse metodene er spesifisert i "The Chemistry of The Amino Group " [M. S. Gibson; S. Patai Ed.; John Wiley & Sons, Ltd. London 1968, 37-77], i ”Advanced Organic Chemistry" [J. March, 3. utgave, John Wiley & Sons, Inc. New York, 1985], s.1153-1154 og i "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" [R. C. Larock, VCH Publishers, Inc. New York, 1989] s. 1061-1063. Som ett eksempel på fremstilling av et amin med formel HNR1R2, blir en løsning av oksimet som er avledet fra (1R)-(+)-kamfer, i en alkohol så som amylalkohol, behandlet med natrium som blir tilsatt i små stykker over en lengre tidsperiode, f.eks. ca.4 timer. Reaksjonen blir utført ved løsningsmidlets tilbakeløpstemperatur, og produktet er (-)-endobornylamin-hydroklorid, en forbindelse med formel HR1R2hvor R1representerer hydrogen og R2 representerer bornylgruppen. Nøyaktige betingelser for å utføre denne reaksjonen kan finnes i litteraturen, for eksempel i L. A. Paquette og R. F. Doehner, Jr. J. Org. Chem.1980, 45, 5105-5113.1-hydroksyadamantan-4-on reagerer med hydroksylamin-hydroklorid i tilbakeløpskokende etanol, i nærvær av vandig natriumhydroksid, hvilket gir 1-hydroksyadamantan-4-on-oksim. Dette blir deretter redusert med litiumaluminiumhydrid i et inert løsningsmiddel så som tetrahydrofuran, ved tilbakeløpstemperatur, hvilket gir 4-aminoadamantan-1-ol, som det er er hensiktsmessig å isolere og karakterisere som hydrokloridsaltet. Betingelser for disse reaksjoner kan finnes i litteraturen, for eksempel i H. W. Geluk og J. L. M. A. Schlatmann Tetrahedron 1968, 24, 5369-5377.
Det er også mulig å fremstille og cis- og trans-isomerer av 4-aminoadamantan-1-ol i en 3-trinns-prosedyre. Først blir kommersielt tilgjengelig 1-hydroksyadamantan-4-on omsatt med (S)-(-)-1-fenyletylamin under reduktive amineringsbetingelser (natriumtriacetoksy borhydrid i eddiksyre og diklormetan ved romtemperatur i 12 timer eller mer). Det er deretter mulig å separere cis- og trans-isomerene av produktene dannet ved reduktiv aminering av 1-fenyletylamin, ved kromatografi. Cis- og trans-isomerene av 4-aminoadamantan-1-ol blir deretter oppnådd under separate hydrogenolyse-betingelser som vist i Skjema 16 nedenfor.
Skjema 16
Derivater av hydroksyadamant-amider kan dannes som vist i Skjema 17 nedenfor. Den tertiære hydroksylgruppen i 43 kan erstattes av fluor ved anvendelse av et egnet reagens så som (dietylamino)svovel-trifluorid (DAST), i et ikke-polart løsningsmiddel så som metylenklorid. Forbindelse 43 kan også omdannes til aminderivatet 45 i en 2-trinns sekvens som involverer omsetning av Ritter-type med kloracetonitril, fulgt av termolyse med tiourea, hvilket gir forbindelse 45. Ved anvendelse av lignende reaksjonsbetingelser (Ritter) kan forbindelse 43 omdannes til N-acetyl-derivatet 46.
Skjema 17
Som beskrevet i Skjema 18, er det er mulig å fremstille mellomprodukter som er trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamider (dvs. 49). Beskyttelse av den primære aminogruppen i trans – 41, fulgt av Ritter-reaksjon, tilveiebringer mellomprodukt 48 som blir avbeskyttet, hvilket gir trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid 49. Alternativt kan forbindelse 49 fremstilles direkte fra trans - 41 (Mellomprodukt 2) ved oppvarming med et nitril i trifluoreddiksyre, fulgt av hydrolyse under basiske betingelser.
Skjema 18
Som beskrevet i Skjema 19, er det også mulig å fremstille trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamider (dvs.53). Det FMOC-beskyttede adamantylalkoholmellomproduktet 47 kan omdannes til klormetylacetamid-mellomproduktet 50 ved anvendelse av betingelser for Ritter-reaksjon. Omsetning av 50 med tiourea under oppvarming i et alkoholisk løsningsmiddel og eddiksyre, tilveiebringer aminet 51.
Reaksjonsbetingelser for utførelse av omdanningen av 47 til 51, kan finnes i litteraturen (Jirgensons, A.; Kauss, V.; Kalvinsh, I.; Gould, M.R. Synthesis 2000, 12, 1709-1712). Sulfonylering av 51 under basiske betingelser ved anvendelse av et egnet sulfonylklorid så som metansulfonylklorid, fulgt av avbeskyttelse, tilveiebringer trans-N-(4-aminoadamantan-1-yl)-metansulfonamider 53.
Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamider (dvs.49), trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamider (dvs.53) eller trans-4-amino-adamantan-1-ol (Mellomprodukt 2) kan deretter kobles til
Skjema 19
en egnet pyrazol-karboksylsyre så som 5, hvilket gir mellomproduktet adamantylamid 55. Fortrengning av klorgruppen med 55 kan utføres med en rekke nukleofiler så som pyrazol eller substituert pyrazol, under basiske betingelser og oppvarming, hvilket gir produktet 56.
56
Skjema 20
Som beskrevet i Skjema 21, kan 1-alkyl-5-alkoksymetyl-pyrazol-4-karboksylsyrer 60 fremstilles fra en 1-alkyl-5-metyl-pyrazol-4-karboksylsyreester 57 ved bromering med N-bromsuccinimid, hvilket gir mellomproduktet brommetyl-derivat 58. Et eksempel på betingelser som er egnet for å utføre denne bromeringsreaksjonen, kan finnes i litteraturen (Beck, J. et al., J. Heterocycl. Chem.1987, 24, 693-695). Fortrengning av brom med et egnet alkoksid og ledsagende omestring, kan utføres ved oppvarming av mellomproduktet 58 i et alkoholisk løsningsmiddel med det tilsvarende natriumsalt. Et eksempel på betingelser som er egnet for å utføre denne omdanningen, kan finnes i litteraturen (Onodera, G. et al. Organic Letters 2005, 18, 4029). Når natriumalkoksidsaltene ikke er kommersielt tilgjengelige, kan de lett fremstilles ved å behandle en egnet alkohol med natriumhydrid. Hydrolyse av estergruppen med 59 tilveiebringer mellomprodukt-syre 60, som deretter kan kobles til trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamider (dvs.49), trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamider (dvs.: 53) eller trans-4-amino-adamantan-1-ol (Mellomprodukt 2), hvilket gir forbindelser med struktur 61.
Skjema 21
Som beskrevet i Skjema 22, kan isoksazol-substituerte forbindelser med struktur 65 fremstilles med utgangspunkt i forbindelse 62. Oppvarming av forbindelse 62 med et egnet hydrazin 5, fulgt av hydrolyse av estergruppen, tilveiebringer mellomproduktet karboksylsyre 64. Forbindelse 64 kan deretter kobles til trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamider (dvs. 49), trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamider (dvs.53) eller trans-4-amino-adamantan-1-ol (Mellomprodukt 2), hvilket gir forbindelser med struktur 65.
Skjema 22
Som et avsluttende, men ikke begrensende eksempel på syntesen av et amin med formel HNR1R2, kan et sekundært amin fremstilles ved reduktiv aminering, som er velkjent for én gjennomsnittlig fagkyndig innenfor faget organisk syntese, hvor et amin blir behandlet med et keton, hvilket gir et imin, som blir redusert med ett av flere reduksjonsmidler. Mange eksempler på betingelser som kan anvendes for denne reaksjonen, er spesifisert i "Comprehensive Organic Transformations: A Guide to Functional Group Preparations" [R. C. Larock, VCH Publishers, Inc. New York, 1989], s.421-423. Aminet og ketonet kan for eksempel behandles med et reduksjonsmiddel så som tetrabutylammoniumcyanoborhydrid, i et inert løsningsmiddel så som et halogenert hydrokarbon (f.eks.
diklormetan), i nærvær av metanolisk saltsyre ved ca. romtemperatur.
Det er hensiktsmessig at ugangsmaterialer med formel 12 blir fremstilt ved å behandle en cyanoacetatester med et trialkylortoformiat i nærvær av en syreanhydrid-katalysator så som eddiksyreanhydrid, ved 80-160°C. Betingelser for en slik reaksjon kan finnes i litteraturen, for eksempel i R. G. Jones J. Am. Chem. Soc.1952, 74, 4889-4891; i N. J. Cusack et al. J. Chem. Soc. C 1971, 1501-1507; og i O. Ackermann et al. US 4,277,418.
Ved praktisering av metoden ifølge foreliggende oppfinnelse blir en effektiv mengde av hvilken som helst av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse eller en kombinasjon av hvilke som helst av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav, administrert via hvilken som helst av de vanlige og akseptable metoder som er kjente innen faget, enten alene eller i kombinasjon. Forbindelsene eller preparatene kan følgelig administreres oralt (f.eks. bukalt), sublingvalt, parenteralt (f.eks. intramuskulært, intravenøst eller subkutant), rektalt (f.eks. som suppositorier eller skyllevæsker), transdermalt (f.eks. hud-elektroporering) eller ved inhalering (f.eks. som aerosol) og i form av faste, flytende eller gassformige doser, inkludert tabletter og suspensjoner. Administreringen kan utføres med én enkelt enhetsdoseform med kontinuerlig terapi, eller ved terapi med en enkelt dose ad libitum. Det terapeutiske preparatet kan også være i form av en oljeemulsjon eller dispersjon sammen med et lipofilt salt så som pamoinsyre, eller i form av et bionedbrytbart preparat med forlenget frigjøring, for subkutan eller intramuskulær administrering.
Anvendelige farmasøytiske bærere for fremstilling av de foreliggende preparater, kan være faste stoffer, væsker eller gasser; følgelig kan preparatene være i form av tabletter, piller, kapsler, suppositorier, pulvere, enterisk belagte formuleringer eller andre beskyttede formuleringer (f.eks. bundet til ionebytter-harpikser eller pakket i lipid/protein-vesikler), formuleringer med forlenget frigjøring, løsninger, suspensjoner, eliksirer, aerosolpreparater. Bæreren kan velges fra de forskjellige oljer som har animalsk, vegetabilsk eller syntetisk opprinnelse eller fra hydrokarboner (”petroleum”), f.eks. jordnøttolje, soyabønneolje, mineralolje, sesamolje. Vann, saltløsning, vandig dekstrose og glykoler er foretrukne flytende bærere, spesielt (når de er isotone med blodet) for injiserbare løsninger. Formuleringer for intravenøs administrering omfatter for eksempel sterile, vandige løsninger av virkestoffet/ene, som blir fremstilt ved oppløsning av ett eller flere faste virkestoffer i vann for å danne en vandig løsning, samt sterilisering av løsningen. Egnede farmasøytiske hjelpestoffer omfatter stivelse, cellulose, talkum, glukose, laktose, gelatin, malt, ris, mel, kalk, silika, magnesiumstearat, natriumstearat, glycerolmonostearat, natriumklorid, tørket skummet melk, glycerol, propylenglykol, vann, etanol. Preparatene kan inneholde konvensjonelle farmasøytiske additiver så som konserveringsmidler, stabiliserende midler, fukte- eller emulgeringsmidler, salter for regulering av osmotisk trykk, buffere. Egnede farmasøytiske bærere og formulering av disse er beskrevet i Remington's Pharmaceutical Sciences av E. W. Martin. Slike preparater vil i alle tilfeller inneholde en effektiv mengde av den aktive forbindelsen sammen med en egnet bærer, for å fremstille den korrekte doseform for korrekt administrering til mottakeren.
Dosen av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse avhenger av flere faktorer, som for eksempel administreringsmetoden, alder, kroppsvekt og tilstand til pasienten som skal behandles, og vil i siste instans bli fastsatt av den behandlende lege eller veterinær. En slik mengde av den aktive forbindelse som blir fastsatt av den behandlende lege eller veterinær, er her og i kravene kalt en "effektiv mengde". Det er typisk at dosen av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse er for eksempel i området ca. 1 til ca.1000 mg pr. dag.
Oppfinnelsen vil nå beskrives nærmere i eksemplene nedenfor, som er ment kun som en illustrasjon.
EKSEMPLER
Alle eksempler som ikke er dekket av kravene skal betraktes som referanseeksempler.
Reagenser ble anskaffet fra Aldrich, Sigma, Maybridge, Advanced ChemTech og Lancaster eller fra andre leverandører som er angitt nedenfor, og ble anvendt uten ytterligere rensing. LC/MS-spektra (væskekromatografi/massespektroskopi) ble registrert ved anvendelse av følgende system. For måling av massespektra bestod systemet av et spektrometer av typen Micromass Platform II: ES-ionisasjon i positivt modus (masseområde: 150 -1200 amu). Samtidig kromatografisk separering ble oppnådd med det følgende HPLC-system: kolonne ES Industries Chromegabond WR C-183u 120Å (3,2 x 30mm); mobil fase A: Vann (0,02% TFA) og fase B: Acetonitril (0,02% TFA); gradient 10% B til 90% B i løpet av 3 minutter; ekvilibreringstid 1 minutt; strømningshastighet 2 ml/minutt.
Superkritiske væskekromatografi-separeringer ble utført ved anvendelse av et Mettler-Toledo Minigram-system under de følgende typiske betingelser: 100 bar, 30 °C, 2,0 ml/min ved eluering gjennom en 12 mm AD-kolonne med 40% MeOH i superkritisk flytende CO2. I tilfeller med forbindelser med basiske aminogrupper, ble 0,2% isopropylamin satt til metanol-modifisatoren.
Fremstilling av foretrukne mellomprodukter i syntesen
Mellomprodukt 1: 4-amino-adamantan-1-ol (cis/trans-blanding)
Trinn 1: 5-hydroksy-adamantan-2-on-oksim
5-hydroksy-2-admantanon (15 g, 90,2 mmol, CAS #: 20098-14-0, anskaffet fra TCI) ble oppløst i EtOH (100 ml) og satt til en løsning av hydroksylamin-hydroklorid (10 g, 143,9 mmol) i 1N NaOH (80 ml). Blandingen ble oppvarmet ved 100 °C i 2 timer. EtOH ble avdampet, og vann og diklormetan ble tilsatt. Den resulterende blandingen ble omrørt i 10 min og ble deretter filtrert. Det faste stoffet ble oppsamlet. Den resulterende blandingen ble separert. Det vandige laget ble videre ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble konsentrert under høyvakuum. Det resulterende residuet ble kombinert med det faste stoffet fra filtreringen. Utkystallisering fra EtOAc ga 5-hydroksyadamantan-2-on-oksim (12 g, 73%). Massespektrum: m/z: 182 (M+1).
Trinn 2: 4-amino-adamantan-1-ol
Rh/Al2O3 (2,3 g, 5 vekt%, 1,1 mmol) ble satt til en blanding av 5-hydroksy-admantan-2-onoksim (10 g, 55 mmol) i EtOH (100 ml) i en Parr hydrogeneringsflaske. Hydrogeneringsreaksjonen ble utført i et Parr hydrogeneringsapparat ved et hydrogentrykk på 3,9 kg/cm<2>ved 50°C i 48 timer. Forbrukt utgangsmateriale og dannelse av produktet ble påvist ved LC-MS. Blandingen ble filtrert gjennom Celite og ble konsentrert til tørrhet under vakuum, hvilket ga 4-amino-adamantan-1-ol (ca.9 g, ~98%) som ble anvendt i neste trinn uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 168,1 (M+1).
Mellomprodukt 2: 4-amino-adamantan-1-ol (Trans)
Trinn 1.4-(S-1-fenyl-etylamino)-adamantan-1-ol
Palladiumhydroksid på karbon (2,54 g, 50 vekt% vann, 20 vekt% Pd tørrstoff, 4,8 mmol) ble satt til en Parr-flaske (350 ml) under en nitrogenatmosfære. 5-hydroksy-2-adamantanon (15 g, 90,2 mmol), aluminium-isopropoksid (18,43 g, 90,2 mmol), (S)-(-)-1-fenyl-etylamin (99+%, 99% ee, 10,94 g, 90,3 mmol) og toluen (150 ml) ble tilsatt sekvensielt under en nitrogenatmosfære. Blandingen ble ristet godt i noen få minutter og ble deretter underkastet hydrogenering med H2(3,9 kg/cm<2>) i 5 timer ved romtemperatur.
1N NaOH-løsning (200 ml) ble deretter tilsatt, og reaksjonsblandingen ble grundig blandet. Etter filtrering gjennom Celite og vasking med MeOH ble filtratet konsentrert for å fjerne organiske løsningsmidler. Den gjenværende basiske, vandige blandingen ble ekstrahert med diklormetan (3 x 200 ml). De samlede organiske faser ble konsentrert under ”house”-vakuum og deretter under høyvakuum, hvilket ga 4-(S-1-fenyl-etylamino)-adamantan-1-ol (21,65 g, 88%) som en olje. Et forhold mellom trans og cis på 100:5 ble bestemt ut ifra<1>H-NMR av det rå materialet. Massespektrum: m/z: 272,2 (M+1).
Trinn 2.4-amino-adamantan-1-ol (trans)
10% palladium på karbon (1,7 g,1,6 mmol) ble satt forsiktig til en 350 ml Parr-flaske. En løsning av trans-4-(S-1-fenyl-etylamino)-adamantan-1-ol (fra forrige trinn, uten ytterligere rensing, 21,65 g, 79,8 mmol) i etanol (150 ml) ble forsiktig hatt i Parr-flasken under en argonatmosfære. Reaksjonsblandingen ble hydrogenert i Parr-stasjonen med H2 (3,9 kg/cm<2>) ved romtemperatur natten over. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom Celite under argon, Celite-sjiktet ble vasket med etanol og de samlede filtrater ble konsentrert under høyvakuum, hvilket ga et klebrig, fast stoff (15 g). Acetonitril (60 ml) ble tilsatt, og løsningen ble lyofilisert, hvilket ga trans-4-amino-adamantan-1-ol (13,8 g, kvantitativt) som et pulver. Massespektrum: m/z: 168,1 (M+1).
En foretrukket metode for fremstilling av Mellomprodukt 2 med utgangspunkt i 5-hydroksy-adamantan-2-on, er beskrevet nedenfor.
Trinn 1: 4-amino-adamantan-1-ol
5-hydroksy-adamantan-2-on (15 g, 90,24 mmol, International Speciality) og Pd/C (1,498 g, Degussa 19985880, 5%, 50% vann) ble satt til en Parr-reaktor, fulgt av ammoniakk i metanol (7N, 300,4 ml, 2,1 mol). Reaktoren ble trykksatt med hydrogen ved 14 - 23,5 kg/cm<2>i 18 timer. Blandingen ble deretter filtrert gjennom et sjikt av Celite og ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 4-amino-adamantan-1-ol (15,15 g, 4/1 = trans/cis ved NMR-D2O) som et hvitt, fast stoff. Dette materialet ble anvendt direkte uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid
4-amino-adamantan-1-ol (15,15 g, 90,58 mmol som en 4/1 = trans/cis-blanding) ble oppslemmet i metanol og avkjølt til 0 °C. Trimetylsilylklorid (12,16 ml, 95,11 mmol) ble langsomt tilsatt, mens den indre temperaturen ble holdt under 7°C. Den resulterende blandingen ble omrørt ved 0°C i 1 time, ble deretter oppvarmet til romtemperatur og ble triturert ved tilbakeløp i 6 timer. Suspensjonen ble avkjølt til romtemperatur og ble omrørt i 13 timer. Det faste stoffet ble deretter filtrert og tørket ved 60 °C under vakuum i 18 timer. Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (12,7 g) ble oppnådd som et hvitt, fast stoff (95,15% rent ifølge gasskromatografi, ren trans ifølge NMR-D2O).
Mellomprodukt 3: 1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (20 g, 91,2 mmol; tilgjengelig fra Butt Park Ltd., Camelford, Cornwall, Storbritannia) i metanol (100 ml) og vann (100 ml), ble tilsatt LiOH (2,4 g, 100 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 4 timer og ble deretter konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, surgjort til pH 2 med konsentrert HCl (9 ml) og ble ekstrahert med etylacetat. De samlede ekstrakter ble inndampet under vakuum, hvilket ga 1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Mellomprodukt 4: Etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat
Trifluoreddiksyreanhydrid (10,1 g, 48/1 mmol) ble i løpet av ca.20 minutter satt dråpevis til en blanding av etyl-N,N-dimetylaminoakrylat (6,9 g, 48,2 mmol) i toluen (10 ml), som var avkjølt i aceton/-is-bad (ca. -10<o>C). Reaksjonsblandingen fikk deretter nå romtemperatur og ble omrørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med diklormetan (100 ml) og vann (80 ml). Blandingen ble omrørt i 15 minutter, og den organiske fasen ble fraseparert. Den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved silikagel-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-40% etylacetat/heksaner, deretter 40% etylacetat/heksaner, hvilket ga etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat 10,2 g, 89%).
Mellomprodukt 5: Cyklopropylhydrazin-hydroklorid
Trinn 1. N-(tert-butoksykarbonyl)cyklopropylamin
En løsning av cyklopropylamin (12,4 g, 252,2 mmol) i diklormetan (50 ml) ble ved 0<o>C og i et is/vann-bad tilsatt en løsning av di-tert-butyldikarbonat (43,7 g, 200 mmol) i diklormetan (100 ml). Reaksjonsblandingen ble deretter omrørt ved romtemperatur i 18 timer.
Løsningsmidlet ble avdampet under vakuum, hvilket ga N-(tertbutoksykarbonyl)cyklopropylamin (31 g, 99%).
Trinn 2. N-nitroso-N-(tert-butoksykarbonyl)amino-cyklopropan
Nitrosonium-tetrafluorborat (9,32 g, 79,8 mmol) ble i flere porsjoner satt forsiktig til en avkjølt (-30 °C) løsning av N-(tert-butoksykarbonyl)cyklopropylamin (9,57 g, 60,9 mmol) og vannfri pyridin (11,7 ml) i tørr acetonitril (150 ml). Løsningen ble omrørt ved -30 °C i 30 minutter og deretter ved 0 °C i 2 timer. Isvann og EtOAc ble tilsatt, og den organiske fasen ble fraseparert og vasket raskt med 1N HCl for å fjerne pyridin. Den organiske fasen ble vasket med 1N NaHCO3 og saltløsning og ble tørket (MgSO4), filtrert og inndampet under høyvakuum ved en vannbadtemperatur under 40 °C, hvilket ga N-nitroso-N-(tertbutoksykarbonyl)amino-cyklopropan (12,1 g, kvantitativt) som en olje.
Trinn 3. Cyklopropylhydrazin-hydroklorid
N-nitroso-N-(tert-butoksykarbonyl)amino-cyklopropan (12 g, ~60,9 mmol) ble oppløst i MeOH (600 ml) og avkjølt til -78<o>C i et aceton/tørris-bad ved -78<o>C, og kons. HCl (54 ml) ble langsomt satt til den omrørte reaksjonsblandingen. Deretter ble aktivert sink (33,7 g, 516 mmol; aktivert pulver i nanostørrelse fra Aldrich) langsomt satt til den omrørte reaksjonsblandingen ved -78<o>C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved -78<o>C i 8 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen filtrert gjennom Celite. Filtratet ble konsentrert under høyvakuum med en vannbadtemperatur under 40<o>C, hvilket ga rått cyklopropylhydrazinhydroklorid som et klebrig, halvfast stoff.
Mellomprodukt 6. 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Trinn 1.1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Trietylamin (2,2 g, 21,7 mmol) og cyklopropylhydrazin-hydroklorid (Mellomprodukt 5 uten ytterligere rensing; 0,8 g, 7,4 mmol) ble sekvensielt tilsatt en løsning av etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat (Mellomprodukt 4, 1,76 g, 7,4 mmol) i etanol (12 ml).
Den resulterende suspensjonen ble grundig blandet og oppdelt i like volum i tre 10 ml Personal Chemistry mikrobølgerør (Biotage AB, Sverige). Rørene ble lukket med et septum og ble underkastet 150 W mikrobølgebestråling ved anvendelse av et Personal Chemistry-system for mikrobølgesyntese (Biotage AB, Sverige) ved 160°C i 30 minutter. Reaksjonsblandingene i de tre rørene ble samlet, og etanolen ble avdampet under redusert trykk. Den gjenværende blandingen ble fordelt mellom diklormetan og vann, og vannfasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De organiske fasene ble samlet, konsentrert under vakuum og renset ved silika-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-20% etylacetat/heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner, hvilket ga 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (140 mg, 8%). Massespektrum: m/z: 249,1 (M+1).
Trinn 2.1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (140 mg, 0,56 mmol) i CH3OH (2 ml) og vann (2 ml), ble tilsatt LiOH (16 mg, 0,67 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH 2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat tre ganger. De samlede organiske ekstrakter ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (130 mg, kvantitativt), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Mellomprodukt 7: 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (5 g, 21,2 mmol, anskaffet fra Bionet) i CH3OH (45 ml) og vann (45 ml), ble tilsatt LiOH (0,54 g, 22,5 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 4 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH 2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat tre ganger. De samlede organiske ekstrakter ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (4,02 g, 80%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Mellomprodukt 8.2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre
Trinn 1.5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av t-butylnitritt (29,5 ml, 248 mmol), kobber(I)klorid (17,6 g, 177,8 mmol) og vannfritt acetonitril (490 ml), ble ved 0<o>C tilsatt 5-amino-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (25 g, 148 mmol) porsjonsvis i løpet av 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 65°C i 1 time.
Blandingen ble deretter hellet i 6N HCl (600 ml) og ble ekstrahert med diklormetan. Den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble konsentrert under vakuum, og det rå residuet ble renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-20% etylacetat/heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner, hvilket ga 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (18 g, 64%).
Trinn 2.2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-etylester
Natriumhydrid (60% i olje; 767 mg, 19 mmol) ble satt til en løsning av pyrazol (1,36 g, 20 mmol) i tørr DMF (40 ml) under nitrogen ved 0<o>C i et is/vann-bad, og blandingen ble oppvarmet til 40°C i 1 time.5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,89 g, 10 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet til 100°C natten over og ble deretter avkjølt. Vann og etylacetat ble tilsatt, det organiske laget ble fraseparert og den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. De samlede organiske faser ble konsentrert under vakuum, og residuet ble renset ved flash-kromatografi (silika) ved eluering med en gradient av 0-20% etylacetat/heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner, hvilket ga 2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-etylester (0,2 g, 9%).
Trinn 3.2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre
En løsning av 2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-etylester (340 mg, 1,54 mmol) i CH3OH (5 ml) og vann (55 ml), ble tilsatt LiOH (41 mg, 1,71 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 4 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH 2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert tre ganger med etylacetat. De samlede organiske ekstrakter ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (300 mg, kvantitativt), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Mellomprodukt 9.1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Trinn 1.5-amino-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En løsning som inneholdt t-butylhydrazin-hydrokloridsalt (10 g, 80,3 mmol), etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (13,6 g, 80,4 mmol) og vannfrtt natriumacetat (8,2 g, 100 mmol) i 100 ml etanol, ble omrørt og tilbakeløpskokt i 16 timer. Løsningen ble hellet i isvann. Den fraseparerte vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble vasket suksessivt med vann og mettet saltløsning og ble tørket med natriumsulfat. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum, hvilket ga 5-amino-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (13 g, 77%).
Trinn 2.1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av t-butylnitritt (7,2 ml, 60,5 mmol), kobber(I)klorid (4,8 g, 48,5 mmol) og vannfritt acetonitril (120 ml), ble ved 0 °C tilsatt 5-amino-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (8,4 g, 39,8 mmol) porsjonsvis i løpet av 30 minutter. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 65 °C i 1 time.
Blandingen ble deretter hellet i 6N HCl (120 ml) og ble ekstrahert med diklormetan. Den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. Etter at de samlede organiske faser var konsentrert under vakuum, ble det rå residuet renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-20% etylacetat/heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner, hvilket ga 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (5,5 g, 39%).
Trinn 3.1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (5 g, 21,7 mmol) i metanol (50 ml) og vann (50 ml), ble tilsatt LiOH (0,63 g, 26,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over og ble deretter konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, surgjort til pH 2 med konsentrert HCl (4 ml) og ekstrahert med etylacetat. De organiske ekstrakter ble inndampet under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (4 g, 91%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Fremstilling av foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen
Eksempel 1
Metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 3, 38 mg, 0,2 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,14 ml, 0,8 mmol) og TSTU (72 mg, 0,22 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 4-amino-adamantan-1-ol (33 mg, 0,2 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga Eksempel 1: 1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (44 mg, 65%). Massespektrum: m/z: 341,2 (M+1).
Eksempel 2
Trans-1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 3, 2,66 g, 13,9 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (40 ml) og tørr DMF (10 ml). DIPEA (14,5 ml, 83,2 mmol) og TSTU (5,02 g, 15,2 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS.
Deretter ble 4-amino-adamantan-1-ol (2,32 g, 13,9 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 25-35%. Eksempel 2, trans-1-metyl-5-pyrrol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid ble isolert som den andre toppen, tilsvarende et massespektrum på m/z = 341,2 (M+1).
Eksempel 3
2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (Mellomprodukt 8, 50 mg, 0,26 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol) og TSTU (93 mg, 0,28 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (58 mg, 0,31 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (65 mg, 77%).
Massespektrum: m/z: 362,2 (M+1).
Eksempel 4
Metyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Metyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (77 mg, 0,4 mmol, CAS#: 119083-00-0, anskaffet fra Bionet) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,28 ml, 1,6 mmol) og TSTU (145 mg, 0,44 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (75 mg, 0,4 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 1-metyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (85 mg, 65%). Massespektrum: m/z: 328,2 (M+1).
Eksempel 5
5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (64 mg, 0,4 mmol, CAS#: 54367-66-7, anskaffet fra Oakwood) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,28 ml, 1,6 mmol) og TSTU (145 mg, 0,44 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (75 mg, 0,4 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (70 mg, 60%). Massespektrum: m/z: 294,1 (M+1).
Eksempel 6
Tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 7, 61 mg, 0,26 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol) og TSTU (93 mg, 0,28 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (58 mg, 0,31 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (62 mg, 65%).
Massespektrum: m/z: 370,2 (M+1).
Eksempel 7 og 8
Trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreamid og cis-1-tertbutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreamid
Tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 7, 3,28 g, 13,9 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (40 ml) og tørr DMF (10 ml). DIPEA (14,5 ml, 83,4 mmol) og TSTU (5 g, 16,7 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS.4-aminoadamantan-1-ol (2,32 g, 13,9 mmol) ble tilsatt. Etter ytterligere 4 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum og renset ved silikakromatografi ved eluering med en gradient av 0-60% etylacetat/heksaner, deretter 60% etylacetat/heksaner, hvilket ga cis-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (Eksempel 8, 1,75 g, 33%) og trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (Eksempel 7, 0,85 g, 16%). Trans-isomeren ble eluert etter cis-isomeren. Begge forbindelser ble karakterisert ved massespektrum: m/z: 386,2 (M+1).
Eksempel 9
Trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre (Mellomprodukt 8, 296 mg, 1,54 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (24 ml) og tørr DMF (6 ml). DIPEA (1,6 ml, 9,2 mmol) og TSTU (556 mg, 1,68 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS.4-aminoadamantan-1-ol (258 mg, 1,54 mmol) ble tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 15-20% acetonitril/vann, hvilket ga cis-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (100 mg, 19%, Massespektrum: m/z: 342,2 (M+1)), fulgt av trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid.
Eksempel 10
5-klor-1-metyl-3-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
5-klor-1-metyl-3-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (91 mg, 0,4 mmol, CAS#:
128455-63-0, anskaffet fra Maybridge) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,28 ml, 1,6 mmol) og TSTU (145 mg, 0,44 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (75 mg, 0,4 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 5-klor-1-metyl-3-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (55 mg, 38%). Massespektrum: m/z: 362,1 (M+1).
Eksempel 11
5-klor-1,3-dimetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
5-klor-1,3-dimetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (69 mg, 0,4 mmol, CAS#: 27006-82-2, anskaffet fra Maybridge) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (3,2 ml) og tørr DMF (0,8 ml). DIPEA (0,28 ml, 1,6 mmol) og TSTU (145 mg, 0,4 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (75 mg, 0,4 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 5-klor-1,3-dimetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (72 mg, 58%). Massespektrum: m/z: 308,1 (M+1).
Eksempel 12
Cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 6, 20 mg, 0,09 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (1,6 ml) og tørr DMF (0,2 ml). DIPEA (0,1 ml, 0,57 mmol) og TSTU (33 mg, 0,11 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS.
Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (17 mg, 0,09 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum og renset ved silika-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-40% etylacetat/heksaner, deretter 40% etylacetat/heksaner, hvilket ga 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (18 mg, 56%).
Massespektrum: m/z: 354,2 (M+1).
Eksempel 13
Cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 6, 100 mg, 0,45 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (4 ml) og tørr DMF (1 ml). DIPEA (0,5 ml, 2,9 mmol) og TSTU (165 mg, 0,5 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS.
Deretter ble 4-amino-adamantan-1-ol (77 mg, 0,46 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 4 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (79 mg, 48%. Massespektrum: m/z: 370,2 (M+1).
Eksempel 14
Metyl-5-(4-metyl-piperazin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
En løsning av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 59 mg; 0,20 mmol) og 1-metylpiperazin (0,47 ml; 4,2 mmol) i N-metylpyrrolidinon (0,8 ml) ble oppvarmet til 230°C i en lukket ampulle under mikrobølgebestråling i 2 timer. Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur, og det rå produktet ble renset ved omvendt fase HPLC, hvilket ga metyl-5-(4-metyl-piperazin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (41 mg, 57%) som et gråhvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C20H32N5O (M+H<+>) 358,2602, funnet 358,2597.
Eksempel 15
5-(2-hydroksy-etylamino)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 59 mg; 0,20 mmol) og etanolamin (0,20 ml; 3,3 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 14, Trinn 2, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(2-hydroksy-etylamino)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (26 mg, 41%) som et hvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C17H27N4O2 (M+H<+>) 319,2129, funnet 319,2127.
Eksempel 16
Metyl-5-[1.2.4]triazol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol), trietylamin (0,22 ml; 1,56 mmol) og 1,2,4-triazol (0,21 g; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i 4 timer i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-metyl-5-[1.2.4]triazol-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (11 mg, 11%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C17H22N6O (M+H<+>) 327,1928, funnet 327,1924.
Eksempel 17
Metyl-5-pyrrolidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og pyrrolidin (0,25 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-metyl-5-pyrrolidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (60 mg, 61%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C19H29N4O (M+H<+>) 329,2336, funnet 329,2334.
Eksempel 18
5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og DL-3-pyrrolidinol (0,25 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (68 mg, 66%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C19H29N4O2(M+H<+>) 345,2285, funnet 345,2281.
Eksempel 19
5-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og 4-hydroksypiperidin (0,31 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (87 mg, 81%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C20H31N4O2(M+H<+>) 359,2442, funnet 359,2437.
Eksempel 20
5-[(2-hydroksy-etyl)-metyl-amino]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og 2-(metylamino)etanol (0,25 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-[(2-hydroksy-etyl)-metyl-amino]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (29 mg, 29%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C18H29N4O2(M+H<+>) 333,2285, funnet 333,2282.
Eksempel 21
5-(2-hydroksy-propylamino)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og 1-amino-2-propanol (0,25 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(2-hydroksy-propylamino)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (65 mg, 65%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C18H29N4O2(M+H<+>) 333,2285, funnet 333,2282.
Eksempel 22
Metyl-5-morfolin-4-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og morfolin (0,26 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i 4 timer i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-metyl-5-morfolin-4-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (76 mg, 74%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C19H28N4O2(M+H<+>) 345,2285, funnet 345,2282.
Eksempel 23
5-(2-metoksy-etylamino)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og 2-metoksyetylamin (0,26 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(2-metoksy-etylamino)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (65 mg, 65%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C18H29N4O2(M+H<+>) 333,2285, funnet 333,2282.
Eksempel 24
5-isopropylamino-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol), trietylamin (0,43 ml; 3,1 mmol) og 2-aminoisosmørsyre (320 mg; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i 6 timer i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-isopropylamino-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (28 mg, 29%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C18H29N4O (M+H<+>) 317,2336, funnet 317,2334.
Eksempel 25
Metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og piperidin (0,31 ml; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (52 mg, 51%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C20H31N4O (M+H<+>) 343,2493, funnet 343,2489.
Eksempel 26
5-(4-hydroksymetyl-piperidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og piperidin (0,31 ml; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(4-hydroksymetyl-piperidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (40 mg, 36%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C21H33N4O2(M+H<+>) 373,2598, funnet 373,2597.
Eksempel 27
5-(4-benzyl-piperazin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og N-benzylpiperazin (0,54 ml; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(4-benzyl-piperazin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (50 mg, 38%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C26H35N5O (M+H<+>) 434,2915, funnet 434,2910.
Eksempel 28
5-(R-3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og (R)-(+)-3-hydroksypyrrolidin (0,26 ml; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-(R-3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (56 mg, 54%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C19H29N4O2(M+H<+>) 345,2285, funnet 345,2283.
Eksempel 29
5-dietylamino-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og dietylamin (0,32 ml; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-dietylamino-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (16 mg, 16%) som et gråhvitt pulver. ES-MS m/e beregnet for C19H31N4O (M+H<+>) 331, funnet 331.
Eksempel 30
Tert-butyl-5-pyrrolidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (100 mg; 0,30 mmol) og pyrrolidin (0,25 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 37, Trinn 5, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-tert-butyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (14 mg, 16%) som et hvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C22H34N4O (M+H<+>) 371,2806, funnet 371,2801.
Eksempel 31
5-[4-(2-hydroksy-etyl)-piperazin-1-yl]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantanylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og 1-(2-hydroksyetyl)piperazin (0,38 ml; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-[4-(2-hydroksy-etyl)-piperazin-1-yl]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantanylamid (71 mg, 61%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C21H34N5O2 (M+H<+>) 388,2707, funnet 388,2702.
Eksempel 32
5-[(2-metoksy-etyl)-metyl-amino]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 88 mg; 0,30 mmol) og (2-metoksy-etyl)-metyl-amin (276 mg; 3,1 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet for Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-[(2-metoksy-etyl)-metyl-amino]-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (61 mg, 59%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C19H31N4O2(M+H<+>) 347,2442, funnet 347,2438.
Eksempel 33
2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
I et Personal Chemistry mikrobølgerør (Biotage AB, Sverige) ble 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 36, 100 mg, 0,30 mmol), pyrazol (41 mg, 0,60 mmol), KF (35 mg, 0,60 mmol) og DMSO (2 ml) godt blandet. Røret ble lukket med et septum og ble underkastet 150 W mikrobølgebestråling ved anvendelse av et Personal Chemistry-system for mikrobølgesyntese (Biotage AB, Sverige) ved 230°C i 20 minutter. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom etylacetat og vann, og den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med etylacetat. De organiske fasene ble samlet, konsentrert under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4' karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (45 mg, 41%). Massespektrum: m/z: 368,2 (M+1).
Eksempel 34
Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 9, 2 g, 9,87 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (40 ml) og tørr DMF (10 ml). DIPEA (10,3 ml, 59,1 mmol) og TSTU (3,6 g, 10,9 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 4-amino-adamantan-1-ol (1,65 g, 9,9 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 4 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble først renset ved silika-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-60% etylacetat/heksaner, deretter 60% etylacetat/heksaner, og ble ytterligere renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 25-50% acetonitril/vann, hvilket ga cis-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (Eksempel 34, 900 mg, 26%, Massespektrum: m/z: 352,2 (M+1)), fulgt av trans-1-tertbutyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (1400 mg, 40%).
Eksempel 35
Trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% i olje; 420 mg, 10,5 mmol) ble satt til en løsning av pyrazol (714 mg, 10,5 mmol) i tørr DMF (140 ml) under nitrogen ved 0 °C i et is/vann-bad, og blandingen ble oppvarmet til 40 °C i 1 time. Trans-5-klor-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (Eksempel 34, 1,89 g, 5,4 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110 °C natten over og ble deretter avkjølt. Vann og etylacetat ble tilsatt, det organiske laget ble fraseparert og den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. De samlede organiske faser ble konsentrert under vakuum, og residuet ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (500 mg, 24%). Massespektrum: m/z: 384,2 (M+1).
En foretrukket metode for fremstilling av trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid med utgangspunkt i etyl-3,3-dietoksypropionat, er beskrevet nedenfor.
Trinn 1: 2-Formyl-3-okso-propionsyre-etylester
Etyl-3,3-dietoksypropionat (100 g, 525,7 mmol) ble oppløst i THF (360 ml) ved romtemperatur, og etylformiat (175,1 ml, 2,1 mol) ble tilsatt ved romtemperatur.
Løsningen ble avkjølt i et isbad til 0 °C, og tBuOK (1M løsning i THF, 1,156 ml, 1,156 mol) ble langsom (i løpet av 30 min) tilsatt via en tilsetningstrakt, mens den indre temperaturen ble holdt under 5 °C. Blandingen endret seg øyeblikkelig fra fargeløs til mørk oransje. Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur og ble omrørt i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, og 1 L av løsningsmidlet ble fjernet. Den gjenværende brunaktige løsningen med hvitt, fast stoff i, ble avkjølt i et isbad, og saltsyre (6N, 200 ml) ble tilsatt for å regulere pH = 3, mens den indre temperaturen ble holdt under 20°C. Den resulterende klart gule suspensjonen ble deretter oppvarmet til romtemperatur og omrørt i 1 time. Ytterligere 700 ml løsningsmiddel ble fjernet under vakuum ved romtemperatur Vann (400 ml) ble tilsatt for å oppløse alt det hvite, faste stoffet, etylacetat (500 ml) ble tilsatt og blandingen ble overført til en skilletrakt. Den vandige fasen ble ekstrahert én gang med etylacetat (200 ml). De samlede organiske ekstrakter ble vasket én gang med saltløsning (100 ml). Etter tørking med MgSO4 og konsentrering under vakuum, ble 2-formyl-3-okso-propionsyre-etylester (75,85 g) oppnådd som gul olje.
Trinn 2: 1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Formyl-3-okso-propionsyre-etylester (75,85 g, 525,6 mmol) ble oppløst i etanol (1 L) ved romtemperatur. Tert-butylhydrazin-hydroklorid (65,5 g, 525,6 mmol) ble tilsatt ved romtemperatur, og reaksjonstemperaturen ble gradvis øket til 32°C. Kolben ble deretter plassert i et isbad for avkjøling til 20°C. Det tok ca.1 time til t-butylhydrazin var fullstendig oppløst. Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt i et isbad. Natriumhydroksid (4N, 152,4 g) ble tilsatt for å nøytralisere saltsyren. Mesteparten av etanolen ble deretter fjernet under vakuum, og metanol (300 ml) ble tilsatt, fulgt av mer natriumhydroksid (4N, 304,8 g, 1,05 mol). Den indre temperaturen steg gradvis til 32°C. Reaksjonskolben ble deretter plassert i et vannbad for avkjøling til romtemperatur, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Metanol (300 ml) ble deretter fjernet under vakuum, mens vannbadtemperaturen ble holdt under 30°C. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til 0°C, og saltsyre (6N, 190 ml) ble langsomt tilsatt mens den indre temperaturen ble holdt under 15 °C. Løsningen ble regulert til pH = 2. Den resulterende suspensjonen ble omrørt i isbad i 2 timer, og det faste stoffet ble frafiltrert. Etter tørking ved 60 °C under vakuum i 2,5 dager, ble 1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (56,06 g) oppsamlet i form av gråhvitt, fast stoff. Moderluten ble ekstrahert 3 ganger med diklormetan (200 ml x 3). De samlede organiske lag ble vasket én gang med saltløsning (100 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat. Etter konsentrering under vakuum og tørking ble 16,5 g gulaktig, fast stoff oppsamlet. Det rå materialet ble utkrystallisert i varm isopropylacetat (25 ml) og heptan (25 ml). Etter avkjøling til romtemperatur ble det faste stoffet frafiltrert, og filterkaken ble vasket med en blanding av isopropylacetat og heptan (1/1 (volum/volum, 14 ml) og ble tørket i ovn ved 60 °C under vakuum i 5 timer. Et andre utbytte av 1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (7 g) ble oppsamlet som et hvitt, fast stoff.
Trinn 3: 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5 g, 29,73 mmol) ble oppløst i tetrahydrofuran (50 ml) ved romtemperatur. n-butyllitium (2,5M løsning i heksan, 29,73 ml, 74,33 mmol) ble hatt i en separat kolbe, og blandingen ble avkjølt til -15°C. 1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-løsningen ble satt dråpevis til n-butyllitium-løsningen mens den indre temperaturen ble holdt under -10 °C. Den totale tilsetningstiden var 30 min. Den resulterende brunaktige suspensjonen ble omrørt og holdt mellom -10°C og -15°C i 40 min. Reaksjonen ble deretter avkjølt til -15°C til -20°C. En løsning av heksakloretan (14,08 g, 59,46 mmol) i tetrahydrofuran (50 ml) ble tilsatt dråpevis, mens den indre temperaturen ble holdt under -10°C. Den totale tilsetningstiden var 20 min. Etter tilsetning ble den resulterende mørkebrune løsningen omrørt ved -10°C til -15°C i 30 min og ble oppvarmet til romtemperatur i løpet av 1 time. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt til 15 °C, og vann (50 ml) ble langsomt tilsatt mens den indre temperaturen ble holdt under 20°C. 120 ml organiske løsningsmidler ble avdestillert under redusert trykk ved 25°C i vannbad, hvilket ga en suspensjon. Heptan (50 ml) ble tilsatt, hvilket ga en klar, brunaktig, bifasisk løsning. Etter omrøring ved romtemperatur i 15 min ble det vandige laget (pH = 11,8) fraseparert. Det organiske laget ble ekstrahert én gang med NaOH (1N, 20 ml). Den samlede vandige fase ble vasket med heptan (25 ml) og avkjølt i et isbad. Saltsyre (6N) ble tilsatt for å regulere pH til 2, mens den indre temperaturen ble holdt under 20°C.
Suspensjonen ble omrørt i isbad ved 0-5°C i 1 time, og det faste stoffet ble frafiltrert og vasket med vann (40 ml). Etter tørking under vakuum ved 60°C i 18 timer ble 1-tertbutyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5,28 g) oppnådd som et lysegult, fast stoff.
Trinn 4: Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5 g, 24,67 mmol) ble oppslemmet i toluen (50 ml) ved romtemperatur. Dimetylformamid (12 μL) ble tilsatt, og reaksjonskolben ble plassert i et vannbad. Suspensjonen ble tilsatt oksalylklorid (3,3 ml, 37 mmol) dråpevis i løpet av 10 min. Det oppstod en svakt eksoterm reaksjon, og den indre temperaturen steg fra til 21°C til 23°C. Suspensjonen ble omrørt ved romtemperatur i 5 timer. Toluen (25 ml) ble fjernet under vakuum ved en badtemperatur på 21 ºC for å fjerne overskudd av oksalylklorid. Den resulterende acylklorid-løsningen i toluen ble tilsatt tetrahydrofuran (25 ml), hvilket ga en klar, mørkt oransje løsning. Trans-4-amino-adamantan-1-olhydrokloridsalt (5,28 g, 25,91 mmol, Mellomprodukt 2) og natriumhydroksid-løsning (1N, 49,34 ml, 49,34 mmol) ble hatt i en separat reaksjonskolbe, hvilket ga en melkeaktig løsning. Denne løsningen ble plassert i et vannbad. Den ovennevnte acylkloridløsningen ble via en tilsetningstrakt satt til den vandige løsningen i løpet av 20 min, mens den indre temperaturen ble holdt under 25°C. Etter tilsetning ble den resulterende suspensjonen omrørt ved romtemperatur i 18 timer. Det faste stoffet ble frafiltrert og tørket ved 60°C under vakuum i 18 timer. Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (5,92 g) ble oppsamlet som et hvitt, fast stoff. Moderluten ble tilsatt heptan (50 ml), og den resulterende suspensjonen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Det faste stoffet ble igjen frafiltrert. Etter tørking ved 60°C under vakuum i 18 timer ble det oppsamlet et andre utbytte (1,7 g). HPLC-renhet var 96,92%.
Trinn 5: Trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (20 g, 56,84 mmol) og pyrazol (7,74 g, 113,7 mmol) ble tilsatt N-metylpyrrolidinon (400 ml) og ble omrørt ved romtemperatur. Natriumhydroksid-løsning (50%, 18,19 g, 227,4 mmol) ble tilsatt. Suspensjonen ble oppvarmet til 120°C, hvilket ga en gulaktig løsning.
Reaksjonen ble deretter oppvarmet ved 120°C i 10 timer. Ytterligere pyrazol (3,87 g, 56,84 mol) og natriumhydroksid-løsning (50%, 4,55 g, 56,84 mmol) ble tilsatt.
Reaksjonen fikk fortsette ved 120°C i 6 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter avkjølt i et isbad til 5°C. Vann (500 ml) og mettet ammoniumklorid-løsning (500 ml) ble tilsatt mens den indre temperaturen ble holdt under 20°C. Den resulterende suspensjonen ble omrørt i isbad i 2 timer, og deretter ble det faste stoffet frafiltrert, vasket med vann (300 ml) og tørket i ovn ved 50°C under vakuum i 18 timer. Trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (16,81 g) ble oppnådd som et hvitt, fast stoff.
Eksempel 36
Tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 9, 0,5 g, 2,47 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (12 ml) og tørr DMF (3 ml). DIPEA (2,6 ml, 14,9 mmol) og TSTU (0,9 g, 2,7 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 1 time, ble tilstedeværelse av aktiv ester påvist ved LC-MS. Deretter ble 2-aminoadamantan-hydroklorid (0,44 g, 2,34 mmol) tilsatt. Etter ytterligere 2 timer ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble tørket under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/vann, hvilket ga 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (650 mg, 83%).
Massespektrum: m/z: 336,2 (M+1).
Eksempel 37
Tert-butyl-5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Trinn 1 til 3: 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre ble fremstilt i henhold til prosedyrer som er beskrevet tidligere for Mellomprodukt 9.
Trinn 4: Fremstilling av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
En omrørt løsning av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (3,040 g; 15,0 mmol) i N,N-dimetylformamid/metylenklorid (forhold 1:4, 20 ml) ved romtemperatur, ble tilsatt diisopropyletylamin (21,2 ml; 120,4 mmol). TSTU (5,420 g; 18,0 mmol) ble deretter tilsatt. Den resulterende blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer, og deretter ble 2-adamantylamin-hydroklorid (2,844 g; 15,0 mmol) tilsatt. Blandingen ble omrørt over helgen ved romtemperatur og ble deretter konsentrert under vakuum. Residuet ble fordelt mellom etylacetat og vann. Det organiske laget ble vasket med saltløsning, tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Den resulterende lysegule gummien ble utgnidd med dietyleter, hvilket ga 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (4,02 g, 80%) som et hvitt pulver.
Trinn 5: Fremstilling av 1-tert-butyl-5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
En blanding av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 36, 101 mg; 0,30 mmol) og pyrrolidin-3-ol (+/-) (0,25 ml; 3,0 mmol) i N-metylpyrrolidinon (1 ml), ble oppvarmet til 250°C i en lukket ampulle under mikrobølgebestråling i 4 timer. Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur, og det rå produktet ble renset ved omvendt fase HPLC, hvilket ga 1-tert-butyl-5-(3-hydroksy-pyrrolidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (25 mg, 22%) som et gråhvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C22H35N4O2 (M+H<+>) 358,2602, funnet 358,2602.
Eksempel 38
Tert-butyl-5-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 36, 101 mg; 0,30 mmol) og piperidin-4-ol (303 mg; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 37, Trinn 5, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-tert-butyl-5-(4-hydroksy-piperidin-1-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (14 mg, 12%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C23H37N4O2 (M+H<+>) 357,2649, funnet 357,2650.
Eksempel 39
5-azepan-1-yl-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 60 mg; 0,20 mmol) og azepan (0,23 ml; 2,0 mmol) til 250°C under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 5-azepan-1-yl-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (41 mg, 58%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C21H33N4O (M+H<+>) 357,2649, funnet 357,2644.
Eksempel 40
Metyl-5-tiomorfolin-4-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 5, 60 mg; 0,20 mmol) og tiomorfolin (0,20 ml; 2,0 mmol) til 250°C under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 14, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-metyl-5-tiomorfolin-4-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreadamantan-2-ylamid (15 mg, 21%) som lysebrunt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C19H29N4OS4(M+H<+>) 361,2057, funnet 361,2053.
Eksempel 41
Tert-butyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid
Oppvarming av en blanding av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (Eksempel 36, 101 mg; 0,30 mmol) og piperidin (0,30 ml; 3,0 mmol) under mikrobølgebestråling i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 37, Trinn 5, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 1-tert-butyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (19 mg, 16%) som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C23H37N4O (M+H<+>) 385,2962, funnet 385,2958.
Eksempel 42
Trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-fluor-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Fremstilling av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En omrørt blanding av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (3,000 g; 11,4 mmol) i metanol/vann (forhold 1:1, 50 ml), ble tilsatt litiumhydroksid (0,383 g; 16,0 mmol) ved romtemperatur. Blandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 2 timer, fikk deretter avkjøles til romtemperatur og ble konsentrert til omtrent halvparten av det opprinnelige volumet. Den resulterende blandingen ble surgjort med 1N HCl til ~pH1 og ble ekstrahert med metylenklorid. Ekstraktene ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert, hvilket ga 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (2,47 g, 92%).
Trinn 2: Fremstilling av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
En omrørt løsning av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (2,334 g; 9,88 mmol) i N,N-dimetylformamid/metylenklorid (forhold 1:4, 15 ml), ble ved romtemperatur tilsatt diisopropyletylamin (9,00 ml; 51,13 mmol). TSTU (5,420 g; 18,0 mmol) ble deretter tilsatt. Den resulterende blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer, og deretter ble 2-adamantylamin (1,654 g; 9,89 mmol) tilsatt. Blandingen ble omrørt natten over ved romtemperatur og ble deretter konsentrert under vakuum. Residuet ble fordelt mellom etylacetat og vann. Det organiske laget ble vasket sekvensielt med 0,5N HCl, mettet natriumbikarbonat, så saltløsning, og ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga det rå produktet som et lysebrunt, fast stoff. Rensing ved kolonnekromatografi (RediSep-120 g silikagel, 10% - 100% etylacetat/heksaner) ga den ønskede trans-isomer av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (1,23 g, 32%) som et hvitt, fast stoff. ved resulterende lysegule gummi ble utgnidd med dietyleter, hvilket ga 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-adamantan-2-ylamid (4,02 g, 80%) som et hvitt pulver. Cis-isomeren ble også isolert (1,58 g, 41%).
Trinn 3: 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-fluor-adamantan-2-yl)-amid
En omrørt løsning av trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (trans-isomer) (60 mg, 0,16 mmol) i tørr metylenklorid (2 ml) avkjølt til 0°C under nitrogen, ble tilsatt DAST-reagens dråpevis via sprøyte.
Blandingen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen behandlet med mettet natriumbikarbonat-løsning (0,5 ml). Den resulterende blandingen ble fortynnet med metylenklorid. Det organiske laget ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert, hvilket ga et rått produkt. Rensing ved omvendt fase HPLC ga trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-fluor-adamantan-2-yl)-amid (28 mg, 45%) som et hvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C19H26F4N3O (M+H<+>) 385,2962, funnet 385,2963
Eksempel 43
Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid
Trinn 1: Trans-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester En oppslemming av 4-amino-adamantanol-hydroklorid (Mellomprodukt 2, 26,48 g; 130,0 mmol) i diklormetan (800 ml), ble tilsatt trietylamin (92,0 ml; 656,8 mmol). Denne blandingen ble tilsatt FMOC-OSu (65,78 g; 195 mmol) porsjonsvis i løpet av 15 minutter. Den resulterende oppslemmingen ble omrørt under argon ved romtemperatur. Etter 20 timer ble trietylamin (28 m; 199 mmol), FMOC-OSu (21,92 g; 65,0 mmol) og diklormetan (300 ml) tilsatt. Etter ytterligere 20 timer ble reaksjonsblandingen avkjølt til 0<o>C, 4N HCL (400 ml) ble langsomt tilsatt under omrøring og blandingen fikk nå romtemperatur. Den organiske fasen ble fraseparert og vasket sekvensielt med vann (300 ml), mettet natriumbikarbonat (300 ml) og mettet natriumklorid-løsning (300 ml). Det organiske laget ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 86,8 g rått produkt. Dette materialet ble utgnidd to ganger med heksaner (2 x 300 ml), og det faste materialet ble frafiltrert, vasket flere ganger med heksaner (totalt 300 ml) og lufttørket, hvilket ga 40,6 g trans-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester som et gråhvitt, fast stoff.
Trinn 2: Trans-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester En omrørt oppslemming av trans-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester (11,69 g; 30,0 mmol), acetonitril (23 ml) og iseddik (30 ml) avkjølt til 0<o>C, ble langsomt tilsatt konsentrert svovelsyre (30 ml) i løpet av 20 minutter. Blandingen fikk deretter nå romtemperatur, ble omrørt i 30 timer og ble deretter lagret i fryser natten over (20 timer). Reaksjonsblandingen ble deretter hellet over knust is / vann (500 ml) og fikk oppvarmes til romtemperatur i løpet av 2 timer. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med etylacetat. Ekstraktet ble vasket sekvensielt med vann, mettet natriumbikarbonat-løsning og til slutt mettet natriumklorid-løsning. Ekstraktet ble deretter tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 10,23 g trans-(5 acetylamino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester som et gult skum.
Trinn 3: Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid
En omrørt løsning av trans-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester (10,21 g; 23,7 mmol) i tørr dimetylformamid (30 ml), ble tilsatt piperidin (8 ml). Etter 45 minutter ble reaksjonsblandingen konsentrert under vakuum. Det resulterende residuet ble oppslemmet i vann (100 ml) og omrørt ved romtemperatur i 1 time. Den resulterende oppslemmingen ble filtrert, og det faste materialet ble vasket med 100 ml vann. De samlede filtrat- og vaskevolumer ble overført til en skilletrakt og ble vasket med dietyleter. Den vandige fasen ble deretter konsentrert under vakuum, hvilket ga en viskøs væske som ble lyofilisert, hvilket ga 3,28 g trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid som et lysegult, fast stoff. Dette materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
En foretrukket metode for fremstilling av trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid med utgangspunkt i trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (Mellomprodukt 2), er beskrevet nedenfor.
Trinn 1: N-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-2,2,2-trifluor-acetamid
Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (120 g, 589,1 mmol) ble satt til en reaksjonskolbe, fulgt av acetonitril (1,5 L) og trifluoreddiksyre (1 L, 12,85 mol). Etter omrøring ved romtemperatur i 6 dager ble reaksjonsblandingen konsentrert under vakuum. Innholdet ble deretter tatt opp i etylacetat (4 L) og ble vasket sekvensielt med mettet natriumbikarbonat-løsning (2x3 L) og vann (1x 3 L). Den organiske fasen ble deretter fraseparert og filtrert gjennom en trakt av sintret glass. Filtratet ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 150 g fast stoff. Dette faste stoffet ble tatt opp i etylacetat (1 L) og omrørt i 1 time. Under konsentrering ble løsningsmidlet byttet ut med med heptan (1 L), og den resulterende suspensjonen ble filtrert. Det faste stoffet ble vasket med et blandet løsningsmiddel av etylacetat/heptan (1/4, 500 ml). Det faste stoffet ble deretter frafiltrert og tørket i ovn ved 45 °C og under vakuum i 18 timer, hvilket ga N-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-2,2,2-trifluor-acetamid (135 g) som et hvitt, fast stoff.
Trinn 2: N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamidhydroklorid
N-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-2,2,2-trifluor-acetamid (135 g, 443,6 mmol) ble satt til en reaksjonskolbe, fulgt av etanol (2 L) og natriumhydroksid (37 g, 913,8 mmol).
Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 50-55 °C og ble omrørt over helgen. Reaksjonsblandingen fikk deretter avkjøles til romtemperatur, og iseddik (100 ml, 1,748 mol) ble tilsatt. Den resulterende blandingen ble deretter konsentrert under vakuum, hvilket ga et hvitt, fast stoff. Det faste stoffet ble oppslemmet i eter (1 L) og omrørt i 1 time. Det faste stoffet ble deretter frafiltrert, vasket med eter (200 ml) og tørket i ovn ved 45°C i 18 timer, hvilket ga 240 g fast stoff. Det faste stoffet ble tatt opp i metanol (500 ml). Under omrøring ble saltsyre (4N løsning i dioksan, 500 ml) tilsatt, fulgt av dråpevis tilsetning av 2 L eter. Blandingen ble deretter konsentrert under vakuum, hvilket ga et hvitt, fast stoff. Det faste stoffet ble tatt opp i metanol (1 L) og omrørt i 1 time. Det faste stoffet ble frafiltrert og kastet. Filtratet ble konsentrert under vakuum inntil utkrystallisering startet (ca. 500 ml). Den tynne suspensjonen ble overført til en kolbe. Under omrøring ble eter (2 L) tilsatt dråpevis, hvilket ga en tykk suspensjon av hvitt, fast stoff. Det faste stoffet ble frafiltrert og vasket med eter. Etter tørking i ovn ved 45°C i 18 timer ble N-(4-aminoadamantan-1-yl)-acetamidhydroklorid (96 g) oppnådd som et hvitt, fast stoff.
Eksempel 44
Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamid
Trinn 1: Trans-[5-(2-klor-acetylamino)-adamantan-2-yl]-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester
En omrørt blanding av trans-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester (11,69 g; 30,0 mmol), kloracetonitril (20 ml) og iseddik (25 ml) avkjølt til 0<o>C, ble tilsatt konsentrert svovelsyre (25 ml). Den resulterende blandingen fikk nå romtemperatur. Etter 7 timer ble blandingen lagret i fryser ved -20<o>C natten over og fikk deretter nå romtemperatur i løpet av 6 timer. Reaksjonsblandingen ble deretter hellet over knust is / vann (600 ml) og fikk oppvarmes til romtemperatur i løpet av 3 timer under omrøring. Blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat (550 ml). Ekstraktet ble sekvensielt vasket med vann, mettet natriumbikarbonat-løsning og mettet natriumkloridløsning. Det organiske laget ble deretter tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 6,18 g trans-[5-(2-klor-acetylamino)-adamantan-2-yl]-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester som et gult skum.
Trinn 2: Trans-(5-amino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester En omrørt løsning av trans-[5-(2-klor-acetylamino)-adamantan-2-yl]-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester (1,017 g; 2,19 mmol) i etanol (10 ml), ble tilsatt tiourea (206 mg; 2,67 mmol), fulgt av iseddik (2 ml). Den resulterende løsningen ble oppvarmet til 80<o>C i et lukket rør i 21 timer og ble hensatt i 72 timer ved romtemperatur. Blandingen ble deretter konsentrert til halve volumet under en strøm av tørr nitrogen og ble deretter oppslemmet i dietyleter, og det faste materialet ble frafiltrert. Det faste stoffet ble vasket med dietyleter, hvilket ga 1,14 g trans-(5-amino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester som et hvitt, fast stoff.
Trinn 3: Trans-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester
En omrørt løsning av trans-(5-amino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-ylmetylester (991 mg; 2,33 mmol) i etylacetat (100 ml), ble tilsatt mettet natriumbikarbonatløsning (75 ml), fulgt av vann (25 ml). Metansulfonylklorid (2,0 ml; 25,7 mmol) ble deretter tilsatt dråpevis i løpet av 5 minutter, og omrøringen ble fortsatt i 1,5 timer.
Deretter ble natriumkarbonat (5,83 g) langsomt satt til reaksjonsblandingen, fulgt av metansulfonylklorid (2,0 ml), og blandingen ble omrørt i 20 timer ved romtemperatur.
Den langsomme tilsetningen av natriumkarbonat (18,2 g), fulgt av metansulfonylklorid (4,0 ml), ble gjentatt, og blandingen ble igjen omrørt i 24 timer ved romtemperatur. Det organiske laget ble vasket flere ganger med 3N saltsyreløsning, fulgt av mettet natriumbikarbonat-løsning og til slutt mettet natriumklorid-løsning. Det organiske laget ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 722 mg rått produkt som et gråhvitt, fast stoff. Det rå produktet ble ytterligere renset ved kromatografi (ISCO Companion-system, RS-40 g silikagelkolonne; elueringsmiddel: etylacetat / heksaner; gradient 0-100%; strømningshastighet 40 ml/min), hvilket ga 660 mg trans-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-yl-metylester som et hvitt skum.
Trinn 4: Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamid
En løsning av trans-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-karbaminsyre-9H-fluoren-9-yl-metylester (1,73 g; 3,71 mmol) i N,N-dimetylformamid (4 ml), ble tilsatt piperidin (1,0 ml). Blandingen ble tykk etter noen få minutter, og ytterligere 4 ml dimetylfomamid og 1,0 ml piperidin ble tilsatt for å lette omrøringen. Den resulterende oppslemmingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer og ble deretter konsentrert under vakuum. Residuet ble fordelt mellom dietyleter og vann. Det vandige laget ble deretter konsentrert under vakuum og oppvarming, og det lysegule, oljeaktige residuet ble lyofilisert, hvilket ga 741 mg trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamid som et lysegult, fast stoff.
Eksempel 45
Trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
En omrørt løsning av trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-
adamantan-2-yl)-amid (103 mg; 0,30 mmol; fremstilt i Eksempel 9) i acetonitril (3 ml) og
iseddik (0,10 ml) avkjølt til 0<o>C, ble tilsatt konsentrert svovelsyre (0,10 ml) dråpevis.
Isbadet ble deretter fjernet, og blandingen fikk oppvarmes til romtemperatur. Etter 4
timer ble iseddik (0,5 ml) og konsentrert svovelsyre (0,50 ml) tilsatt, og blandingen ble
omrørt i 70 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert
under en strøm av tørr nitrogen for å fjerne acetonitril, og deretter ble is (15 ml) satt til
reaksjonsblandingen. Blandingen ble omrørt i 1 time ved romtemperatur. Blandingen ble
deretter filtrert, og det hvite, faste stoffet ble vasket flere ganger med mettet
natriumbikarbonat-løsning, fulgt av vann, og det faste stoffet fikk lufttørke natten over,
hvilket ga 93 mg trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-
adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C20H26N6O2Na
(M+Na<+>) 405,2009, funnet 405,2007.
Eksempel 46
Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
En løsning av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 9; 134 mg; 0,66 mmol) i N,N-dimetylformamid (1,0 ml), ble tilsatt N,N-diisopropyletylamin (0,63 ml; 3,60 mmol), fulgt av TSTU (253 mg; 0,84 mmol). Etter 1 time ble trans-N-(4-aminoadamantan-1-yl)-acetamid (fremstilt i Eksempel 43; 125 mg; 0,60 mmol) tilsatt, og blandingen ble omrørt i 18 timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert under en strøm av tørr nitrogen, ble tatt opp i etylacetat og ble vasket sekvensielt med 0,5N saltsyre, mettet natriumbikarbonat-løsning, vann og mettet natriumklorid-løsning. Det organiske laget ble tørket (natriumsulfat), filtrert og konsentrert, hvilket ga ett rått, beige, fast stoff. Det rå produktet ble renset ved omvendt fase HPLC, hvilket ga 104 mg trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C20H30N4O2Cl (M+H<+>) 393,2052, funnet 393,2053.
Eksempel 47
Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metansulfonylaminoadamantan-2-yl)-amid
Kobling av 1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 9; 100 mg; 0,50 mmol) og trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamid (Fremstilt i Eksempel 44; 110 mg; 0,45 mmol) ved anvendelse av TSTU i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 46, ga etter omvendt fase HPLC, 63 mg trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff. ES-HRMS m/e beregnet for C19H30N4O3ClS (M+H<+>) 429,1722, funnet 429,1722.
Eksempel 48
Trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Kobling av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 7; 52 mg; 0,26 mmol) og trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (fremstilt i Eksempel 43; 125 mg; 0,60 mmol) ved anvendelse av TSTU i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 46, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 43 mg trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C21H30N4O2F3(M+H<+>) 427,2316, funnet
427,2314.
Eksempel 49
Trans-1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-amid
Kobling av 1-tert-butyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 7; 62 mg; 0,22 mmol) og trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamid (fremstilt i Eksempel 44; 61 mg; 0,25 mmol) ved anvendelse av TSTU i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 46, ga etter rensing ved omvendt fase HPLC, 44 mg trans-1-tertbutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C20H30N4O3F3S (M+H<+>) 463,1985, funnet 463,1982.
Eksempel 50
Trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
En omrørt suspensjon av natriumhydrid (601 mg; 15,03 mmol) i N,N-dimetylformamid (25,0 ml) under argon og ved romtemperatur, ble tilsatt pyrazol (1,255 g; 18,06 mmol). Straks hydrogenutviklingen var opphørt, ble blandingen oppvarmet til 40<o>C i et lukket trykkrør i 1 time. Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid (fremstilt i Eksempel 46; 589 mg; 1,50 mmol) ble tilsatt, og den resulterende blandingen ble oppvarmet til 110<o>C i det lukkede trykkrøret i 17 timer.
Reaksjonsblandingen ble deretter konsentrert under vakuum og oppvarming. Residuet ble oppslemmet i vann (50 ml), surgjort til pH=1 med 1N saltsyre og fortynnet med 100 ml vann. Blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat. Det organiske laget ble vasket med mettet natriumklorid-løsning, tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Residuet ble utgnidd med dietyleter, hvilket ga 593 mg trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et off-white pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C23H33N6O2(M+H<+>) 425,2660, funnet 425,2660.
Eksempel 51
Trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-metansulfonylaminoadamantan-2-yl)-amid
Omsetning av trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metansulfonylaminoadamantan-2-yl)-amid (fremstilt i Eksempel 47; 50 mg; 0,12 mmol) med overskudd av pyrazol (102 mg; 1,47 mmol) og natriumhydrid (50 mg; 1,24 mmol), ved anvendelse av metoden som er beskrevet i Eksempel 50, og ekstraksjon av den surgjorte, vandige blandingen med metylenklorid, fulgt av utgnidning av det rå produktet med dietyleter, ga 51 mg trans-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-metansulfonylaminoadamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C22H33N6O3S (M+H<+>) 461,2330, funnet 461,2329.
Eksempel 52
Trans-1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Trans-5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Kobling av 1-metyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (CAS# 54367-66-7, anskaffet fra Oakwood; 2,00 g; 12,46 mmol) og trans-4-amino-adamantan-1-ol (Mellomprodukt 2; 2,84 g; 14,00 mmol) ved anvendelse av TSTU i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 46, ga etter utgnidning av det rå produktet med dietyleter, 1,44 g trans-5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff.
Trinn 2: Trans-1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
En blanding av trans-5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (500 mg; 1,62 mmol) og piperidin (1,29 ml; 13,0 mmol) i N-metylpyrrolidinon (10 ml), ble oppvarmet til 250<o>C i et lukket trykkrør under mikrobølgebestråling i 3 timer.
Blandingen fikk avkjøles til romtemperatur, og mesteparten av overskuddet av piperidin ble fjernet under høyvakuum. Den resulterende løsningen ble renset ved omvendt fase HPLC, hvilket ga 545 mg trans-1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt pulver.
Trinn 3: Trans-1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
En omrørt løsning av trans-1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (70 mg; 0,20 mmol) i acetonitril (1,0 ml) og iseddik (0,20 ml) ved romtemperatur, ble tilsatt konsentrert svovelsyre (0,40 ml) dråpevis. Etter 22 timer ble reaksjonsblandingen nøytralisert med mettet natriumbikarbonat-løsning.
Blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat, og ekstraktet ble tørket (natriumsulfat), filtrert og konsentrert under vakuum. Det rå produktet ble renset ved omvendt fase HPLC, hvilket ga 35 mg trans-1-metyl-5-piperidin-1-yl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt pulver. ES-HRMS m/e beregnet for C22H34N5O2 (M+H<+>) 400,2707, funnet 400,2708.
Eksempel 53
Trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-metansulfonylaminoadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Trans-5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metyl-adamantan-2-yl)-amid Kobling av 1-metyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (CAS# 54367-66-7, anskaffet fra Oakwood; 80 mg; 0,50 mmol) og trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-metansulfonamid (fremstilt i Eksempel 44; 110 mg; 0,45 mmol) ved anvendelse av TSTU i henhold til metoden som er beskrevet i Eksempel 46, ga etter rensing av det rå produktet ved omvendt fase HPLC, 60 mg trans-5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metyladamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff.
Trinn 2: Trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-metansulfonylaminoadamantan-2-yl)-amid
Omsetning av trans-5-klor-1-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-metyl-adamantan-2-yl)-amid (46 mg; 0,12 mmol) med overskudd av pyrazol (71 mg; 1,02 mmol) og natriumhydrid (39 mg; 0,97 mmol), ved anvendelse av metoden som er beskrevet i Eksempel 50, og ekstraksjon av den surgjorte, vandige blandingen med metylenklorid, fulgt av utgnidning av det rå produktet med dietyleter, ga 43 mg trans-2'-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4' karboksylsyre-(5-metansulfonylamino-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt pulver. ES-LRMS m/e beregnet for C19H27N6O3S (M+H<+>) 419, funnet 419..
Eksempel 54
Trans-1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 2-dimetylaminometylen-3-okso-smørsyre-metylester
En løsning av metylacetoacetat (5,0 ml, 46,33 mmol) og N,N-dimetylformamiddimetylacetal (6,8 ml, 47,95 mmol) ble oppvarmet til 80 ̊C i 2,3 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 25 ̊C og konsentrert under vakuum, hvilket ga 2-dimetylaminometylen-3-okso-smørsyre-metylester (7,43 g, 94%) som et rødsort, fast stoff. Dette materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester
En løsning av 2-dimetylaminometylen-3-okso-smørsyre-metylester (7,43 g, 43,40 mmol) i absolutt etanol (70 ml), ble behandlet med tert-butylhydrazin-hydroklorid (5,52 g, 44,29 mmol) og natriumacetat (4,42 g, 53,88 mmol). Den resulterende blandingen ble oppvarmet til 90 ̊C i 18 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 25 ̊C. Reaksjonsblandingen ble hellet i is ved anvendelse av diklormetan under overføringen (50 ml).
Blandingen ble overført til en skilletrakt, og lagene ble ristet og separert. Det vandige laget ble videre ekstrahert med diklormetan (1 x 50 ml). De samlede organiske lag ble vasket med mettet, vandig natriumbikarbonat-løsning (1 x 50 ml), vann (1 x 50 ml) og mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 50 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. ISCO CombiFlash (120 g kolonne; 0-10% etylacetat/ heksaner) ga 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (6,04 g, 71%) som en gul olje.
Trinn 3: 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (2,0 g, 10,19 mmol) i metanol (6,8 ml) avkjølt til 0 ̊C, ble behandlet dråpevis med en 4N vandig natriumhydroksid-løsning (5,1 ml, 20,4 mmol). Reaksjonen fikk langsomt nå 25<o>C.
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum for å fjerne metanol. Residuet ble fortynnet med vann (25 ml) og ble deretter ekstrahert med etylacetat (1 x 25 ml). Det vandige laget ble deretter surgjort til pH=1 med 3N vandig saltsyreløsning. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og heksaner og ble deretter tørket under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (1,43 g, 78%) som et hvitt, fast stoff.
Trinn 4: Trans-1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
En løsning av 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (500 mg, 2,74 mmol), trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (590 mg, 2,89 mmol), 1-hydroksybenzotriazol (450 mg, 3,33 mmol) og O-(benzotriazol-1-yl)-N,N,N’,N’-tetrametyluronium-heksafluorfosfat (1,25 g, 3,29 mmol) i N,N-dimetylformamid (8,0 ml, 0,34 M) under en nitrogenatmosfære, ble avkjølt til 0 ̊C og omrørt ved 0 ̊C i 35 min. Deretter ble reaksjonen behandlet dråpevis med N,N-diisopropyletylamin (1,9 ml, 10,90 mmol) via en annen trakt. Reaksjonen fikk gradvis nå 25 ̊C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 0 ̊C og ble behandlet dråpevis med 2N vandig natriumhydroksid-løsning (4,2 ml, 8,40 mmol). Den resulterende blandingen fikk gradvis nå 25 ̊C i løpet av 3 timer. Deretter ble reaksjonen behandlet med diklormetan (25 ml). Den resulterende løsningen ble omrørt ved 25 ̊C i ytterligere 1,5 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen fordelt mellom vann (25 ml) og diklormetan (25 ml). Det vandige laget ble videre ekstrahert med diklormetan (1 x 25 ml). De samlede organiske lag ble vasket med mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 25 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. ISCO CombiFlash (40 g kolonne; 50-100% etylacetat/heksaner) ga trans-1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (75,3 mg, 8%) som et hvitt, fast stoff. ES<+>-HRMS m/e beregnet for C19H29N3O2 (M+H<+>) 332,2333, funnet 332,2333.
På analog måte ble det oppnådd:
Fra 4-metoksy-3-okso-smørsyre-metylester: Trans-1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et lysebrunt, fast stoff (494,6 mg, 58,2%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C20H31N3O3(M+H<+>) 362,2438, funnet 362,2437.
Fra 4,4,5,5,5-pentafluor-3-okso-pentansyre-metylester: Trans-1-tert-butyl-5-pentafluoretyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (13,1 mg, 29%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C20H26F5N3O2(M+H<+>) 436,2018, funnet 436,2018.
Fra 5-metoksy-3-okso-pentansyre-metylester: Trans-1-tert-butyl-5-(2-metoksy-etyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (389 mg, 47%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C21H33N3O3 (M+H<+>) 376,2595, funnet 376,2595.
Fra 3-okso-heksansyre-metylester: Trans-1-tert-butyl-5-propyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (698,2 mg, 81,6%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C21H33N3O2(M+H<+>) 360,2646, funnet 360,2645.
Fra 3-okso-pentansyre-metylester: Trans-1-tert-butyl-5-etyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (683,9 mg, 77,9%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C20H31N3O2 (M+H<+>) 346,2489, funnet 346,2490.
Fra 4-metyl-3-okso-pentansyre-metylester: Trans-1-tert-butyl-5-isopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (94,5 mg, 28%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C21H33N3O2 (M+H<+>) 360,2646, funnet 360,2646.
Eksempel 55
Trans-1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester
En løsning av 1-tert-butyl-5-metyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (3,38 g, 17,22 mmol) (som beskrevet i Eksempel 54, Trinn 2) i karbontetraklorid (12,2 ml, 1,41M), ble ved 25 ̊C behandlet med N-bromsuccinimid (3,10 g, 17,41 mmol). Reaksjonskolben ble utstyrt med en tilbakeløpskjøler. Utstyret ble pakket inn i aluminiumsfolie og ble deretter bestrålet med en 250 watts sollampe i 3 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen filtrert og vasket med karbontetraklorid. Filtratet ble overført til en skilletrakt og ble vasket med vann (1 x 50 ml) og mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 50 ml). De organiske fasene ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert, vasket med karbontetraklorid og konsentrert under vakuum til en lysegul olje. ISCO CombiFlash-kromatografi (120 g, 0-10% etylacetat/heksaner) ga 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (4,51 g, 95%) som en klar olje. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: 1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En løsning av 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (220 mg, 0,79 mmol) i etanol (4,0 ml, 0,2M), ble behandlet med natriumetoksid (65,4 mg, 0,96 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 90 ̊C og ble omrørt i 2,5 timer. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum. Residuet ble fordelt mellom etylacetat (75 ml) og vann (50 ml). De organiske faser ble vasket med mettet, vandig natriumbikarbonatløsning (1 x 50 ml) og mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 50 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (102,8 mg, 51%) som en oransje olje. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: 1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (99,8 mg, 0,39 mmol) i metanol (0,5 ml) og vann (0,5 ml), ble ved 25 ̊C behandlet med litiumhydroksid-monohydrat (20,2 mg, 0,48 mmol). Reaksjonsblandingen ble utstyrt med en tilbakeløpskjøler og ble deretter oppvarmet til 100 ̊C i 2 timer. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum. Det resulterende residuet ble surgjort til pH=1 med 1N vandig saltsyreløsning. Dette resulterte i en uklar blanding. Materialet ble brakt til basisk pH ved behandling med 1N vandig natriumhydroksid-løsning. Denne løsningen ble ekstrahert med etylaceat (1 x 10 ml). Det organiske laget ble kastet. Det vandige laget ble surgjort til pH=1 med 1N vandig saltsyreløsning. Denne løsningen ble ekstrahert med etylacetat (2 x 10 ml). De organiske lag ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (77,5 mg, 87%) som et gult, fast stoff. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 4: Trans-1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (76,8 mg, 0,33 mmol), trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (71,3 mg, 0,35 mmol), 1-hydroksybenzotriazol (55,8 mg, 0,41 mmol) og O-(benzotriazol-1-yl)-N,N,N’,N’-tetrametyluroniumheksafluorfosfat (155,1 g, 0,40 mmol) i N,N-dimetylformamid (1,0 ml, 0,34 M), ble under en nitrogenatmosfære avkjølt til 0 ̊C og omrørt i 35 min. Deretter ble reaksjonen behandlet dråpevis med N,N-diisopropyletylamin (0,23 ml, 1,34 mmol). Reaksjonen fikk gradvis oppvarmes til 25<o>C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over.
Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 0<o>C og ble behandlet dråpevis med 2N vandig natriumhydroksid-løsning (0,55 ml, 1,1 mmol). Den resulterende blandingen fikk gradvis oppvarmes til 25 ̊C i løpet av 5 timer. Deretter ble reaksjonen behandlet med diklormetan (5 ml). Den resulterende løsningen ble omrørt ved 25 ̊C i ytterligere 1,5 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen fordelt mellom vann (25 ml) og diklormetan (25 ml). Det vandige laget ble videre ekstrahert med diklormetan. De samlede organiske lag ble vasket med mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 25 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. ISCO CombiFlash (4 g kolonne, 0,5-4% metanol/ diklormetan) ga trans-1-tert-butyl-5-etoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (66,2 mg, 52%) som et gråhvitt, fast stoff. ES<+>-HRMS m/e beregnet for C21H33N3O3(M+H<+>) 376,2595, funnet 376,2595.
På analog måte ble det oppnådd:
Fra 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester og propan-2-ol:
Trans-1-tert-butyl-5-isopropoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (274,7 mg, 68%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C22H35N3O3 (M+H<+>) 390,2751, funnet 390,2751.
Fra 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester og 2-metyl-propan-1-ol: Trans-1-tert-butyl-5-isobutoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (130,5 mg, 41%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C23H37N3O3(M+H<+>) 404,2908, funnet 404,2905.
Fra 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester og cyklopropylmetanol: Trans-1-tert-butyl-5-cyklopropylmetoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (153,4 mg, 61%). ES<+>-HRMS m/e beregnet for C23H35N3O3(M+H<+>) 402,2751, funnet 402,2753.
Eksempel 56
Trans-1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-brommetyl-1-tert-butyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (1,51 g, 5,48 mmol) (som fremstilt i Eksempel 55, Trinn 1) i natriummetoksid (23,8 ml, 11,9 mmol, 0,5M løsning i metanol), ble oppvarmet til 90 ̊C og omrørt i 2,5 timer. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum. Den resulterende hvite, faste stoffet ble tatt opp i vann (100 ml) og ble ekstrahert med etylacetat (1 x 150 ml). De organiske faser ble deretter vasket med mettet, vandig natriumbikarbonat-løsning (1 x 100 ml), vann (1 x 100 ml) og mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 100 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Det ble oppdaget at produktet ikke var i de organiske ekstrakter, så det vandige laget ble samlet og surgjort til pH=1 med konsentrert vandig saltsyre og ble deretter ble ekstrahert med diklormetan (1 x 150 ml). Det organiske laget ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (1,03 g, 88%) som et hvitt, fast stoff. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Trans-1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
En løsning av 1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (317,9 mg, 1,49 mmol) i diklormetan (8,5 ml, 0,18 M), ble behandlet med N,N-diisopropyletylamin (1,6 ml, 9,18 mmol) og N,N,N’,N’-tetrametyl-O-(N-succinimidyl)uroniumtetrafluorborat (539,5 mg, 1,79 mmol). Den resulterende blandingen ble omrørt ved 25 ̊C i 2,6 timer. Deretter ble reaksjonen behandlet med trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamidhydroklorid (476,8 mg, 1,94 mmol) (som fremstilt i Eksempel 43). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen fordelt mellom vann (100 ml) og diklormetan (100 ml). Det vandige laget ble videre ekstrahert med diklormetan (1 x 100 ml). De samlede organiske lag ble vasket med vann (4 x 100 ml) og mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 100 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. ISCO CombiFlash (40 g kolonne, 0,5-5% metanol/ diklormetan) ga trans-1-tert-butyl-5-metoksymetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (428,7 mg, 71%) som et hvitt, fast stoff. ES<+>-HRMS m/e beregnet for C22H34N4O3 (M+H<+>) 403,2704, funnet 403,2706.
Eksempel 57
Trans-1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 3-dimetylamino-2-(5-metyl-isoksazol-3-karbonyl)-akrylsyre-etylester
En løsning av 5-metyl-isoksazol-3-karboksylsyre (3,5 g, 27,53 mmol) i diklormetan (27,53 ml, 1,0M) avkjølt til 0 ̊C, ble behandlet med oksalylklorid (5,63 ml, 63,33 mmol, 98%), fulgt av noen få dråper N,N-dimetylformamid. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0<o>C i 30 min. Deretter fikk den gradvis oppvarmes til 25 ̊C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum og ble tørket under høyvakuum i 1,5 timer. Det resulterende faste stoffet ble deretter oppslemmet i toluen (21,2 ml, 1,3M) ved 25 ̊C og ble deretter behandlet dråpevis med en løsning av etyl-(3-dimetylamino)akrylat (3,98 g, 27,81 mmol) i trietylamin (8,02 ml, 57,55 mmol). Den resulterende sorte reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 120 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 25 ̊C og ble så fordelt mellom vann (150 ml) og diklormetan (3 x 100 ml). De samlede organiske lag ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 3-dimetylamino-2-(5-metyl-isoksazol-3-karbonyl)-akrylsyre-etylester (antatt kvantitativt utbytte, 27,53 mmol) som en sort olje. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester En løsning av 3-dimetylamino-2-(5-metyl-isoksazol-3-karbonyl)-akrylsyre-etylester (27,53 mmol) i absolutt etanol (41,7 ml), ble behandlet med tert-butylhydrazin-hydroklorid (3,57 g, 28,63 mmol) og natriumacetat (2,80 g, 34,13 mmol). Den resulterende blandingen ble oppvarmet til 90 ̊C i 18 timer. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 25 ̊C.
Reaksjonen ble fortynnet med vann (200 ml) og ble deretter ekstrahert med diklormetan (3 x 150 ml). De samlede organiske lag ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (7,37 g, 96%) som et sort, fast stoff. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyremetylester (7,37 g, 26,59 mmol) i metanol (17,7 ml, 1,5M) avkjølt til 0 ̊C, ble behandlet dråpevis med a 4N vandig natriumhydroksid-løsning (13,3 ml, 53,15 mmol). Reaksjonen fikk langsomt oppvarmes til 25 ̊C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum for å fjerne metanol. Residuet ble fortynnet med vann (150 ml) og ble deretter ekstrahert med diklormetan (3 x 150 ml). Disse organiske lagene ble kastet. Det vandige laget ble deretter surgjort til pH=1 med a 2N vandig saltsyreløsning. Denne løsningen ble ekstrahert med en diklormetan/metanolløsning 90/10 (3 x 150 ml). De samlede organiske lag ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (5,42 g, 82%) som et brunt, fast stoff. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 4: Trans-1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
En løsning av 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (350 mg, 1,40 mmol) i diklormetan (7,8 ml, 0,18 M) ble behandlet med N,N-diisopropyletylamin (1,49 ml, 8,60 mmol) og N,N,N’,N’-tetrametyl-O-(N-succinimidyl)uroniumtetrafluorborat (507,2 mg, 1,68 mmol). Den resulterende blandingen ble omrørt ved 25 ̊C i 2 timer. Deretter ble reaksjonen behandlet med trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamidhydroklorid (446,7 mg, 1,82 mmol) (som fremstilt i Eksempel 43).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen fordelt mellom vann (150 ml) og diklormetan (3 x 100 ml). De samlede organiske lag ble tørket med natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Biotage-kromatografi (40M kolonne, 2-4% metanol/diklormetan) ga trans-1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (330,8 mg, 54%) som et gråhvitt, fast stoff. ES<+>-HRMS m/e beregnet for C24H33N5O3 (M+H<+>) 440,2656, funnet
440,2656.
På analog måte ble det oppnådd:
Fra 1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre og trans-4-amino-
adamantan-1-ol: Trans-1-tert-butyl-5-(5-metyl-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-
(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (193,4 mg, 60%). ES<+>-
HRMS m/e beregnet for C22H30N4O3 (M+H<+>) 399,2391, funnet 399,2387.
Eksempel 58
Trans-1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 2-(5-klor-isoksazol-3-karbonyl)-3-dimetylamino-akrylsyre-etylester
En løsning av 5-klor-isoksazol-3-karboksylsyre (791 mg, 5,43 mmol) (fremstillingen er
beskrevet i WO03093250 A2) i diklormetan (27,2 ml, 0,2M) avkjølt til 0 ̊C, ble behandlet
med oksalylklorid (0,71 ml, 8,15 mmol, 98%), fulgt av noen få dråper N,N-dimetylformamid.
Reaksjonen fikk gradvis oppvarmes til 25 ̊C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C
natten over. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum. Det resulterende
residuet ble oppløst i diklormetan og konsentrert to ganger for å fjerne gjenværende
oksalylklorid. Residuet ble deretter oppløst i diklormetan (16 ml, 0,34M) og ble behandlet dråpevis med en løsning av etyl-3-(dimetylamino)akrylat (0,79 g, 5,51 mmol) i trietylamin (1,6 ml, 11,47 mmol). Den resulterende rød/oransje reaksjonsløsningen ble oppvarmet til 60 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 25 ̊C og fordelt mellom vann (50 ml) og diklormetan (100 ml). De organiske faser ble deretter vasket med vann (50 ml) og mettet, vandig natriumklorid-løsning (50 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Biotage-kromatografi (40M kolonne, 50-60% etylacetat/heksaner) ga 2-(5-klor-isoksazol-3-karbonyl)-3-dimetylamino-akrylsyre-etylester (300,6 mg, 20%) som en rød olje.
Trinn 2: 1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En løsning av 2-(5-klor-isoksazol-3-karbonyl)-3-dimetylamino-akrylsyre-etylester (294,8 mg, 1,08 mmol) i absolutt etanol (1,4 ml, 0,77M), ble behandlet med tert-butylhydrazinhydroklorid (137,3 mg, 1,10 mmol) og natriumacetat (108,6 mg, 1,32 mmol). Den resulterende blandingen ble oppvarmet til 90 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen avkjølt til 25 ̊C og konsentrert under vakuum. Reaksjonsblandingen ble fordelt mellom vann (200 ml) og diklormetan (2 x 50 ml). De samlede organiske lag ble vasket med mettet, vandig natriumklorid-løsning og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Biotage-kromatografi (40S kolonne 60% etylaceat/heksaner), fulgt av ISCO CombiFlash (4 g kolonne 0-20% etylacetat/heksaner), ga 1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (67,4 g, 21%) som en gul olje.
Trinn 3: 1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (55,3 mg, 0,18 mmol) i absolutt etanol (0,93 ml, 0,2M), ble behandlet med 2M vandig litiumhydroksid-løsning (0,18 ml, 0,37 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C i 1,5 timer og ble deretter oppvarmet til 100 ̊C i 1 time. Deretter fikk reaksjonsblandingen avkjøles til 25 ̊C og ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonen konsentrert under vakuum. Residuet ble behandlet med vann, fulgt av surgjøring til pH=1 med 1N vandig saltsyreløsning. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og heksaner og tørket under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (38,7 mg, 77%) som et gråhvitt, fast stoff.
Trinn 4: Trans-1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
En løsning av 1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (36,2 mg, 0,13 mmol) i diklormetan (0,54 ml) og N,N-dimetylformamid (0,13 ml) ble ved 25 ̊C behandlet med N,N-diisopropyletylamin (0,18 ml, 1,03 mmol) og N,N,N’,N’-tetrametyl-O-(N-succinimidyl)uroniumtetrafluorborat (48,3 mg, 0,16 mmol). Den resulterende blandingen ble omrørt ved 25 ̊C i 6,5 timer. Deretter ble reaksjonen behandlet med trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (Mellomprodukt 2; 35,3 mg, 0,17 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 25 ̊C natten over. Deretter ble reaksjonsblandingen fordelt mellom vann (25 ml) og diklormetan (3 x 25 ml). De samlede organiske lag ble vasket med mettet, vandig natriumklorid-løsning (1 x 25 ml) og ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. ISCO CombiFlash (4 g kolonne, 0-44-100% etylacetat/heksaner) ga trans-1-tert-butyl-5-(5-klor-isoksazol-3-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (12,8 mg, 23%) som et gråhvitt, fast stoff. ES<+>-HRMS m/e beregnet for C21H27ClN4O3 (M+H<+>) 419,1845, funnet 419,1844.
Eksempel 59
Trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 5-amino-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Cykloheksylhydrazin-hydroklorid (3,057 g, 20,29 mmol, CAS #24214-73-1, anskaffet fra Aldrich) ble kombinert med etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (3,390 g, 20,04 mmol) og vannfritt natriumacetat (2,080 g, 25,36 mmol) i 30 ml etanol. Blandingen ble oppvarmet ved 70<o>C i 16 timer og ble deretter avkjølt til romtemperatur og konsentrert. Residuet ble fordelt mellom metylenklorid og vann. Den fraseparerte vandige fasen ble ekstrahert med en ny porsjon metylenklorid. De organiske fasene ble suksessivt vasket med vann og saltløsning og ble deretter kombinert, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Residuet ble renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 25-70% etylacetat/heksaner, hvilket ga 5-amino-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester (4,42 g, 92%). Massespektrum: m/z: 238,1 (M+H).
Trinn 2: 5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
Kobber(I)klorid (2,500 g, 25,25 mmol) ble oppslemmet i 7,0 ml kaldt (is/aceton-bad), vannfritt acetonitril. t-butyl nitritt (5,75 ml, 90%, 43,56 mmol) ble tilsatt, fulgt av en suspensjon av 5-amino-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (4,408 g, 18,58 mmol) i 27,0 ml acetonitril. Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 45 minutter og deretter ved 70<o>C i 1,25 time. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur, ble langsomt satt til 6N HCl (17,5 ml) og ble deretter ekstrahert med metylenklorid. Den organiske fasen ble vasket sekvensielt med vann og saltløsning. Den vandige fasen ble ekstrahert med en ny porsjon metylenklorid. De to organiske fasene ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Det rå residuet ble kromatografert ved flashkromatografi ved eluering med en gradient av 10-50% etylacetat/heksaner, hvilket ga 5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,98 g; 42%). Massespektrum: m/z: 257,3 (M+H).
Trinn 3: 5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,969 g, 7,67 mmol) ble oppløst i metanol (11,5 ml). Litiumhydroksid (0,250 g; 10,44 mmol) og vann (11,5 ml) ble tilsatt. Blandingen ble oppvarmet ved 80-85<o>C i 1,5 timer og ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under vakuum for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med tetrahydrofuran og ble igjen konsentrert for å sikre fullstendig fjerning av metanolen.
Dette residuet ble deretter fortynnet med vann og surgjort med 6N HCl (1,80 ml) til pH 2-2,5. Det faste stoffet som ble utfelt fra løsningen, ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under redusert trykk ved 100<o>C, hvilket ga 5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (1,676 g, 96%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Massespektrum: m/z: 229,0 (M+H)
Trinn 4: Trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,152 g, 0,66 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr N,N-dimetylformamid (2,6 ml) og tørr metylenklorid (0,7 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (0,91 ml, 5,26 mmol) og TSTU (0,238 g, 0,79 mmol) ble satt til løsningen, og løsningen ble omrørt under argon i 3,5 timer. LC-MS viste at den aktive ester var dannet, og trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (0,136 g, 0,67 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt. Omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 44 timer. Reaksjonsblandingen ble satt til vann og ekstrahert to ganger med metylenklorid. De organiske fasene ble samlet og vasket to ganger med vann og deretter saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Det rå residuet ble renset ved flash-kromatografi, ved eluering med en gradient av 60-100% etylacetat/heksaner. Produkt-holdige fraksjoner ble konsentrert under vakuum, og residuet ble utgnidd med etylacetat/heksaner, hvilket ga trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (0,179 g, 71%) HR-MS (ES) m/e beregnet for C20H28ClN3O2(M+H<+>) 378,1943, Funnet 378,1943.
Eksempel 60
Trans-2’-cykloheksyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (117 mg, 0,310 mmol, Eksempel 59) og pyrazol (66 mg, 0,969 mmol) ble kombinert i 1-metyl-2-pyrrolidinon (2,1 ml). 50% vandig natriumhydroksid (135 mg, 1,688 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 120<o>C i 10-11 timer. Blandingen ble avkjølt i et is/vann-bad, og vann (2,62 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid-løsning (2,62 ml) ble sekvensielt tilsatt. Løsningen var klar en stund før produktet ble utfelt. Etter omrøring under avkjøling i 1,5 timer ble det faste stoffet oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga trans-2’-cykloheksyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (107,5 mg, 85%). HR-MS(ES) m/e beregnet for C23H31N5O2 (M+H<+>) 410,2551, Funnet 410,2550.
Eksempel 61
Trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,213 g, 0,93 mmol, fremstilt i Eksempel 59, Trinn 3) ble oppløst i en blanding av tørr N,N-dimetylformamid (3,6 ml) og tørr metylenklorid (0,9 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (1,25 ml, 7,22 mmol) og TSTU (0,334 g, 1,11 mmol) ble tilsatt, og løsningen ble omrørt ved romtemperatur under argon i 3 timer. LC-MS viste at den aktive ester var dannet. Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)acetamid (0,194 g, 0,93 mmol, fremstilt i Eksempel 43) ble tilsatt. Omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur natten over. Reaksjonsblandingen ble satt til vann og ble ekstrahert to ganger med metylenklorid. Hver organiske fase ble vasket med vann og saltløsning. De organiske fasene ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Det rå residuet ble renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-40% metanol/metylenklorid. Produkt-holdige fraksjoner ble konsentrert under vakuum. Residuet ble utkrystallisert fra varm etylacetat/heksaner og ble tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (0,194 g, 50%).
HR-MS (ES) m/e beregnet for C22H31ClN4O2 (M+H<+>) 419,2209, Funnet 419,2207.
Eksempel 62
Trans-2’-cykloheksyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Trans-5-klor-1-cykloheksyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (151,8 mg, 0,362 mmol, Eksempel 61) og pyrazol (77 mg, 1,131 mmol) ble kombinert i 1-metyl-2-pyrrolidinon (2,4 ml). 50% vandig natriumhydroksid (158 mg, 1,975 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 120<o>C i 11 time. Blandingen ble avkjølt i et is/vann-bad, og vann (3,2 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid (3,2 ml) ble tilsatt. Det ble dannet en klar løsning en kort stund før produktet ble utfelt. Blandingen ble omrørt i ~2 timer, og deretter ble det faste stoffet oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga trans-2’-cykloheksyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (139,1 mg, 84%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C25H34N6O2 (M+H<+>) 451,2816, Funnet 451,2816.
Eksempel 63
Trans-2’-(tetrahydro-pyran-4-yl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: N’-(tetrahydro-pyran-4-yliden)-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester Tetrahydro-4H-pyran-4-on (1,002 g, 10,01 mmol, CAS #29943-42-8, anskaffet fra Fluka) ble kombinert med tert-butylkarbazat (1,322 g, 10,00 mmol) i heksaner (10 ml).
Blandingen ble oppvarmet i et oljebad ved 65-70<o>C i 75 minutter. Et nytt presipitat begynte å utfelles før karbazatet var fullstendig oppløst. Blandingen ble meget tykk av fast presipitat. Blandingen ble fortynnet med mer heksaner og ble oppvarmet i ytterligere 15 minutter. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under vakuum. Isopropanol ble satt til residuet, og blandingen ble omrørt kraftig i 5 minutter og ble deretter fortynnet med eter og avkjølt. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering og tørket under vakuum, hvilket ga N’-(tetrahydro-pyran-4-yliden)-hydrazinkarboksylsyre-tertbutylester 1,326 g, 62%). Et andre utbytte (0,373 g, 17%) ble oppsamlet fra moderluten.
Trinn 2: (Tetrahydro-pyran-4-yl)-hydrazin-hydroklorid
N’-(tetrahydro-pyran-4-yliden)-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (5,210 g, 24,32 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr tetrahydrofuran (22 ml) og tørr metanol (30 ml).
Natriumcyanoborhydrid ble satt til løsningen, hvilket resulterte i brusing. Da brusingen hadde avtatt, ble blandingen oppvarmet til tilbakeløp i 5-10 minutter. Etter avkjøling til romtemperatur ble 6N HCl (10,5 ml) langsomt tilsatt, og deretter ble blandingen oppvarmet til tilbakeløp i 20 minutter. Etter avkjøling til romtemperatur ble løsningsmidlet fjernet under vakuum. Residuet ble utgnidd med varm isopropanol og ble deretter avkjølt til romtemperatur, fortynnet med eter og avkjølt. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering og ble funnet å være det reduserte materialet som ikke var fullstendig avbeskyttet. Det faste stoffet ble oppløst i samme THF/metanol-blanding og ble behandlet med 6N HCl (10,5 ml) ved tilbakeløp i ytterligere 1,5 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen filtrert for å fjerne litt uoppløselig materiale. Filtratet ble deretter konsentrert under vakuum. Isopropanol ble satt til residuet, og fast stoff begynte raskt å utkrystalliseres fra løsningen. Etter avkjøling natten over ble eter tilsatt, fulgt av ytterligere avkjøling. Det faste stoffet ble deretter oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket under vakuum, hvilket ga (tetrahydro-pyran-4-yl)-hydrazin-hydroklorid (2,22 g, 60%).
Trinn 3: 5-amino-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (Tetrahydro-pyran-4-yl)-hydrazin-hydroklorid (1,975 g, 12,94 mmol), etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (1,958 g, 11,57 mmol) og natriumacetat (1,370 g; 16,70 mmol) ble kombinert i etanol (16 ml). Blandingen ble oppvarmet ved 80-85<o>C i 17 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonen konsentrert, og residuet ble fordelt mellom metylenklorid og vann. Den organiske fasen ble fraseparert og vasket med vann og deretter saltløsning. Hver vandige fase ble ekstrahert med metylenklorid. De to organiske fasene ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Det rå materialet ble renset ved flash-kromatografi ved eluering med 60-100% etylacetat/heksaner, hvilket ga 5-amino-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (2,554 g, 92%).
Trinn 4: 5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Kobber(I)klorid (1,700 g, 17,17 mmol) ble oppslemmet i kaldt (is/vann-bad) acetonitril (5 ml). t-butyl nitritt (2,35 ml, 90%, 17,80 mmol) ble satt til suspensjonen, fulgt av dråpevis tilsetning av en løsning av 5-amino-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester (3,157 g, 13,19 mmol) i acetonitril (19 ml). Kjølebadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 70<o>C i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og satt til 6N HCl (12,5 ml). Etter omrøring i 15 minutter ble blandingen ekstrahert med metylenklorid. Den organiske fasen ble vasket sekvensielt med vann og saltløsning. Hver vandige fase ble deretter ekstrahert med en enkelt porsjon metylenklorid. De to organiske fasene ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 40-100% EtOAc-heksaner, ga 5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (2,205 g, 63%). Massespektrum: m/z: 259,30 (M+H).
Trinn 5: 5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (2,194 g (98%), 8,31 mmol) ble oppløst i metanol (12,5 ml). Litiumhydroksid (0,274 g, 11,44 mmol) og vann (12,5 ml) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 1 time. Etter avkjøling til romtemperatur ble blandingen konsentrert for å fjerne metanolen. Tetrahydrofuran ble satt til residuet og ble fjernet under vakuum for å sikre fullstendig fjerning av metanolen. Det vandige residuet ble behandlet med 6N HCl (1,88 ml), hvilket resulterte i utfelling av et tykt, melkeaktig, fast stoff. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum og oppvarming, hvilket ga 5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (1,900 g, 99%). Massespektrum: m/z: 231,30 (M+H).
Trinn 6: Trans-5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (124,5 mg, 0,540 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr N,N-dimetylformamid (2,1 ml) og tørr metylenklorid (0,5 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (0,75 ml, 4,335 mmol) og TSTU (193,8 mg, 0,644 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen. Etter 2 timer viste LC-MS at den aktive ester var dannet. Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (113,0 mg, 0,555 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur under argon i 45 timer. Reaksjonsblandingen ble satt til vann og ble ekstrahert to ganger med metylenklorid. De to organiske lag ble samlet og vasket to ganger med vann og deretter én gang med saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert. Flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 5-10% metanol-metylenklorid, fulgt av utkrystallisering fra etylacetat-heksaner, ga trans-5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (138 mg (96% ren), 65%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C19H26ClN3O3(M+H<+>) 380,1736, Funnet 380,1733.
Trinn 7: Trans-2’-(tetrahydro-pyran-4-yl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trans-5-klor-1-(tetrahydro-pyran-4-yl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (78,3 mg, 96%, 0,198 mmol) ble kombinert med pyrazol (46 mg, 0,676 mmol) og 50% vandig natriumhydroksid (105,0 mg, 1,313 mmol) i 1-metyl-2-pyrrolidinon. Blandingen ble oppvarmet ved 120<o>C i 12 timer og ble deretter omrørt ved romtemperatur i 6 timer. Den resulterende tykke, heterogene blandingen ble behandlet sekvensielt med vann (1,74 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid (1,74 ml). Dette resulterte i en klar løsning en kort stund før fast stoff igjen begynte å utfelles. Blandingen ble omrørt under avkjøling i 2 timer og ble deretter filtrert, vasket med vann og tørket under høyvakuum og oppvarming, hvilket ga trans-2’-(tetrahydro-pyran-4-yl)-2’H
[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (59,3 mg, 73%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C22H29N5O3(M+H<+>) 412,2343, Funnet 412,2343.
Eksempel 64
Trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: N’-cyklopentyl-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester
Cyklopentanon (5,000 g, 59,44 mmol; CAS #120-92-3, anskaffet fra Aldrich) ble oppløst i heksaner (90 ml). t-butylkarbazat (7,860 g, 59,47 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 65-70<o>C i 1 time. Blandingen ble avkjølt og konsentrert under vakuum. Residuet ble tatt opp i isopropanol (25 ml) - eter (25 ml) - heksaner (50 ml) og ble avkjølt. Det krystallinske materialet ble oppsamlet ved filtrering, hvilket ga N’-cyklopentylhydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (5,51 g; 47%). Et andre utbytte (2,62 g, 22%) ble oppsamlet fra moderluten.
Trinn 2: Cyklopentyl-hydrazin-hydroklorid
N’-cyklopentyl-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (5,448 g, 27,48 mmol) ble oppløst i tørr tetrahydrofuran (25 ml) og tørr metanol (34 ml). Natriumcyanoborhydrid (2,044 g, 32,53 mmol) ble tilsatt porsjonsvis, og deretter ble blandingen tilbakeløpskokt under argon i 10 minutter. Etter avkjøling til romtemperatur ble 6N HCl (12 ml) tilsatt, og blandingen ble tilbakeløpskokt i 1,5 timer. På dette tidspunktet viste NMR av en prøve at noe BOC beskyttet materiale fortsatt var til stede. Ytterligere 6N HCl ble tilsatt, og blandingen ble tilbakeløpskokt i ytterligere 3 timer og ble deretter avkjølt til romtemperatur og omrørt natten over. Blandingen ble filtrert for å fjerne det uoppløselige materialet og ble konsentrert og azeotrop-behandlet tre ganger med toluen for å fjerne vannet. Residuet ble oppløst i varm isopropanol, avkjølt til romtemperatur, fortynnet med eter og avkjølt. Filtrering ga cyklopentyl-hydrazin-hydroklorid (3,903 g, 103%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: 5-amino-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
Cyklopentyl-hydrazin-hydroklorid (1,000 g; 7,32 mmol), etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (1,026 g, 6,61 mmol) og vannfritt natriumacetat (0,644 g, 7,85 mmol) ble kombinert i etanol (10 ml) og oppvarmet ved 70<o>C i 20 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble etanol fjernet under vakuum, og residuet ble fordelt mellom metylenklorid og vann. Den organiske fasen ble vasket sekvensielt med vann og saltløsning. Hver vandige fase ble ekstrahert med en enkelt porsjon metylenklorid. De to organiske faser ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi ved eluering med 10-40% EtOAc/heksaner ga 5-amino-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,170 g, 73%). Massespektrum: m/z: 224,1 (M+H).
Trinn 4: 5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
5-amino-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,164 g, 4,96 mmol) ble oppløst i acetonitril (10,0 ml). Kobber(I)klorid (0,722 g, 7,29 mmol) og iseddik (0,60 ml, 10,48 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble avkjølt i et is/vann-bad. Den første porsjonen tbutylnitritt (0,29 ml, 90%, 2,20 mmol) ble tilsatt. Kjølebadet ble fjernet, og blandingen fikk oppvarmes til romtemperatur. Den andre porsjonen t-butylnitritt (0,58 ml, 4,39 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonen ble stanset med vann og fortynnet med etylacetat. Etter kraftig omrøring ble lagene separert. Den organiske fasen ble vasket med saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 20:80 etylacetat-heksan, ga 5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,710 g; 61%).
Massespektrum: m/z: 243,1 (M+H).
Trinn 5: 5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,710 g, 2,93 mmol) ble oppløst i metanol (4,3 ml). Vann (4,3 ml) og litiumhydroksid (0,097 g, 4,05 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 2 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble metanol fjernet under vakuum. Tetrahydrofuran ble satt til residuet og ble deretter fjernet under vakuum for å sikre fullstendig fjerning av metanolen. Residuet ble fortynnet med vann og ble behandlet med 6N HCl til pH 2-3, hvilket resulterte i utfelling av et melkeaktig, fast stoff. Det faste stoffet ble oppsamlet, vasket med vann og tørket under ”house”-vakuum ved 45<o>C, hvilket ga 5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,580 g, 91%). Dette materialet ble anvendt som er uten ytterligere rensing.
Trinn 6: Trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,225 g, 1,05 mmol) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (4,0 ml) og tørr metylenklorid (1,0 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (1,45 ml, 8,38 mmol) og TSTU (0,359 g, 1,19 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 2,5 timer og ved dette tidspunktet viste LC-MS at omsetning til den aktiverte ester var fullstendig. Trans-4-aminoadamantan-1-ol-hydrokloridet (0,224 g, 1,10 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur under argon natten over. Reaksjonsblandingen ble satt til vann og ble ekstrahert med metylenklorid to ganger. Hver organiske fase ble vasket med vann og deretter saltløsning. De to organiske faser ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi (ved eluering med en gradient av 50-100% etylacetat-heksaner), fulgt av utkrystallisering fra etylacetat-heksaner, ga trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (0,174 g, 46%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C19H26ClN3O2 (M+H<+>) 364,1787, Funnet 364,1785.
Eksempel 65
Trans-2’-cyklopentyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (137 mg, 0,376 mmol, Eksempel 64) ble kombinert med pyrazol (82,8 mg, 1,216 mmol) og 50% vandig natriumhydroksid (164 mg, 2,050 mmol) i 1-metyl-2-pyrrolidinon (2,5 ml) og ble oppvarmet ved 120<o>C i 11 timer. Blandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur og omrørt i 8 timer. Vann (3,0 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid-løsning (3,0 ml) ble sekvensielt tilsatt. Det oppstod en klar løsning en kort stund før nytt fast stoff begynte å utfelles fra løsningen. Blandingen ble omrørt i et is/vann-bad i 2 timer og ble deretter filtrert, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga trans-2’-cyklopentyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (126,5 mg , 84%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C22H29N5O2 (M+H<+>) 418,2213, Funnet 418,2213
Eksempel 66
Trans-2’-cyklopentyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetyaminoadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,334 g, 1,56 mmol, fremstilt i Eksempel 64, Trinn 5) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (6,0 ml) og tørr metylenklorid (1,5 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (2,15 ml, 12,43 mmol) og TSTU (0,563 g, 1,87 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 3 timer og ved dette tidspunktet viste LC-MS at omsetning til den aktiverte ester var fullstendig. Trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (0,330 g, 1,58 mmol, fremstilt i Eksempel 43) ble tilsatt, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 22 timer. Reaksjonsblandingen ble satt til vann og ekstrahert med metylenklorid to ganger. De to organiske faser ble samlet, vasket to ganger med vann og én gang med saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert. Det rå materialet ble renset ved en kombinasjon av flashkromatografi og utkrystallisering fra varm metylenklorid-eter-heksaner, hvilket ga trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (0,417 g, 66%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C21H29ClN4O2 (M+H<+>) 405,2052, Funnet 405,2052.
Trinn 2: Trans-2’-cyklopentyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetyaminoadamantan-2-yl)-amid
Trans-5-klor-1-cyklopentyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (150,0 mg, 0,333 mmol) ble kombinert med pyrazol (69,2 mg, 1,016 mmol) og 50% vandig natriumhydroksid-løsning (148 mg, 1,850 mmol) i 1-metyl-2-pyrrolidinon (2,2 ml). Blandingen ble oppvarmet ved 120<o>C og ble deretter avkjølt til romtemperatur og omrørt i 5 timer. Vann (2,8 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid (2,8 ml) ble satt til den tykke blandingen. Det ble observert en klar løsning en kort stund før fast stoff begynte å utfelles fra løsningen. Blandingen ble omrørt i badet i 1,5 timer og ble deretter filtrert, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C. Det rå faste stoffet ble omkrystallisert fra metylenklorid-eter-heksaner, hvilket ga trans-2’-cyklopentyl-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetyamino-adamantan-2-yl)-amid (103 mg, 71%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C24H32N6O2 (M+H<+>) 437,2660, Funnet 437,2660.
Eksempel 67
Trans-5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: N’-[4-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksy)-cykloheksyliden]-hydrazinkarboksylsyre-tertbutylester
Tert-butyldimetylsilyloksy-cykloheksanon (3,146 g, 97%, 13,36 mmol, CAS #55145-45-4, anskaffet fra Aldrich) ble oppløst i heksaner (24 ml). Tert-butylkarbazat (1,80 g, 98%, 13,35 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 70<o>C i 3 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble et hvitt, fast stoff utfelt fra løsningen. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med heksaner og tørket, hvilket ga N’-[4-(tert-butyl-dimetylsilanyloksy)-cykloheksyliden]-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (4,12 g, 90%).
Trinn 2: 4-hydrazino-cykloheksanol-hydroklorid
N’-[4-(tert-butyl-dimetyl-silanyloksy)-cykloheksyliden]-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (4,103 g, 11,98 mmol) ble oppløst i tørr tetrahydrofuran (11,5 ml) og tørr metanol (15,0 ml). Natriumcyanoborhydrid (0,945 g, 14,29 mmol) ble tilsatt porsjonsvis. Når brusingen hadde avtatt, ble blandingen tilbakeløpskokt i 1,5 timer. Deretter ble litt mer natriumcyanoborhydrid (0,047 g, 0,75 mmol) tilsatt, og tilbakeløpsbehandlingen ble fortsatt i ytterligere 30 minutter for å sikre fullstendig reaksjon. Etter avkjøling til romtemperatur ble 6N HCl (10 ml) tilsatt, hvilket resulterte i utfelling av et hvitt, fast stoff. Blandingen ble oppvarmet ved 70<o>C i 6 timer og ble deretter avkjølt til romtemperatur og omrørt i 12 timer. Reaksjonsblandingen ble konsentrert og azeotrop-behandlet med toluen for å fjerne nesten alt vannet. Residuet ble deretter oppløst i varm isopropanol og ble avkjølt til romtemperatur. Eventuelt uoppløselig materiale ble fjernet ved filtrering. Filtratet ble fortynnet med eter og avkjølt. Materialet ble utfelt fra løsningen som en olje/gummi.
Moderluten ble fjernet ved dekantering. Oljen/gummien ble deretter vasket med eter og tørket under vakuum, hvilket ga 4-hydrazino-cykloheksanol-hydroklorid (1,920 g, 96%). Et andre utbytte (0,261 g, 13%) ble oppsamlet fra moderluten. Utbyttet var større enn teoretisk verdi på grunn av tilstedeværelse av innkapslet løsningsmiddel, samt litt urenheter. Materialet ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: 5-amino-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Hydrazino-cykloheksanol-hydroklorid (1,920 g, 9,79 mmol) ble oppløst i varm etanol og ble deretter lett avkjølt. Etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (1,520 g, 8,98 mmol) og vannfritt natriumacetat (2,013 g, 24,54 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 70<o>C i 15 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble blandingen fordelt mellom metylenklorid og vann. Den vandige fasen ble vasket med en ny porsjon metylenklorid. De to organiske faser ble samlet, vasket med saltløsning, tørket med natriumsulfat og konsentrert. Flashkromatografi ved eluering med en gradient av 0-20% metanol/etylacetat, ga en stor porsjon av en cis/trans-blanding av isomerer. Etter kromatografi ble rene fraksjoner av hver isomer samlet og utkrystallisert fra EtOAc-heksaner, hvilket ga 5-amino-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,511 g, 23% (utbytte 1); 0,121 g, 5% (utbytte 2)) og 5-amino-1-(trans-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,625 g, 28%).
Trinn 4: 5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Kobber(I)klorid (126 mg, 1,273 mmol) og t-butyl nitritt (180 µl, 1,364 mmol) ble kombinert i kaldt (is/vann-bad) acetonitril (2,0 ml). 5-amino-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (230 mg, 0,908 mmol) ble tilsatt porsjonsvis.
Kjølebadet ble fjernet, og blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 30 minutter og deretter ved 70<o>C i 30 minutter. Etter avkjøling til romtemperatur ble blandingen behandlet med 6N HCl (0,9 ml) og ble ekstrahert med metylenklorid fire ganger. De organiske fasene ble samlet, vasket med vann og saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Rensing ved flash-kromatografi ved eluering med 50-100% etylacetat/heksaner, ga 5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (137 mg, 55%).
Trinn 5: 5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (183 mg, 0,631 mmol) ble oppløst i metanol (1,2 ml). Litiumhydroksid (20,8 mg, 0,869 mmol) og vann (1,2 ml) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 1 time. Reaksjonen ble konsentrert og ble deretter konsentrert igjen fra tetrahydrofuran for å sikre fullstendig fjerning av metanolen. Residuet ble fortynnet med vann og ble behandlet med 6N HCl (160 µl), hvilket resulterte i utfelling av et fast stoff. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 50<o>C, hvilket ga 5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (140 mg, 91%). Massespektrum: m/z: 245,0 (M+H).
Trinn 6: Trans-5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (52,4 mg, 0,214 mmol) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (0,8 ml) og tørr metylenklorid (0,2 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (0,30 ml, 1,734 mmol) og TSTU (73 mg, 0,242 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur i 3 timer og ved dette tidspunktet viste LC-MS fullstendig omsetning til den aktiverte ester. Trans-4-aminoadamantan-1-ol-hydroklorid (45 mg, 0,221 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon natten over. Reaksjonsblandingen ble satt til vann og ble ekstrahert to ganger med metylenklorid. De to organiske faser ble samlet, vasket sekvensielt med vann og saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Rensing ved flash-kromatografi (ved eluering med 0-20% metanol-etylacetat), fulgt av utkrystallisering fra varm etylacetatheksaner, ga trans-5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (42,4 mg, 65%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C20H28ClN3O3 (M+H<+>) 394,1892, Funnet 394,1894.
Eksempel 68
Trans-2’-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trans-5-klor-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (143 mg, 97%, 0,352 mmol, Eksempel 67) ble kombinert med pyrazol (75 mg, 1,102 mmol) og 50% vandig natriumhydroksid (156 mg, 1,950 mmol) i 1-metyl-2-pyrrolidinon (2,4 ml). Blandingen ble oppvarmet ved 120<o>C i 12 timer og ble deretter omrørt ved romtemperatur i 5 timer. Blandingen ble deretter avkjølt i et is/vannbad. Vann (3,0 ml) og mettet, vandig ammoniumklorid (3,0 ml) ble sekvensielt tilsatt. Reaksjonsblandingen var i en kort studn en klar løsning, før produkt ble utfelt fra løsningen. Etter omrøring under avkjøling i 2 timer ble det faste stoffet oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga trans-2’-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (115 mg, 77%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C23H31N5O3(M+H<+>) 426,2500, Funnet 426,2500.
Eksempel 69
Trans-1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Cyklopentyl-hydrazin-hydroklorid (0,250 g, 1,83 mmol, Eksempel 64, Trinn 2),
2-dimetylaminometylen-4,4,4-trifluor-3-okso-smørsyre-etylester (0,403 g, 1,68 mmol) og vannfritt natriumacetat (0,163 g, 1,99 mmol) ble kombinert i etanol (2,5 ml) og oppvarmet ved 70<o>C i 17 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen fordelt mellom metylenklorid og vann. Den organiske fasen ble vasket med vann og saltløsning. Hver vandige fase ble ekstrahert med en ny porsjon metylenklorid. De to organiske faser ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Rensing ved flashkromatografi ved eluering med en gradient av 10-40% etylacetat-heksaner, ga
1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,244 g, 52%).
Massespektrum: m/z: 277,1 (M+H).
Trinn 2: 1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,237 g, 0,858 mmol) ble oppløst i metanol (2,0 ml). Vann (2,0 ml) og litiumhydroksid (0,027 g, 1,127 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 2 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble metanolen fjernet under vakuum. THF ble satt til residuet og ble deretter fjernet under vakuum for å sikre fullstendig fjerning av metanolen. 6N HCl (0,2 ml) ble satt til det vandige residuet til pH 2-3, hvilket resulterte i utfelling av et hvitt, fast stoff. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga 1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,134 g, 63%).
Trinn 3: Trans-1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (125 mg, 0,504 mmol) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (2,0 ml) og tørr metylenklorid (0,5 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (0,70 ml, 4,046 mmol) og TSTU (181 mg, 0,601 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur i 3 timer og på dette tidspunktet viste LC-MS at omsetningen til den aktiverte esteren var fullstendig. Trans-4-aminoadamantan-1-ol-hydroklorid (107,8 mg, 0,529 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 17 timer. Den rå reaksjonsblandingen ble satt til vann og ekstrahert to ganger med metylenklorid. Hver organiske fase ble vasket sekvensielt med vann og saltløsning. De to organiske faser ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi, fulgt av utkrystallisering fra etylacetat-heksaner, ga trans-1-cyklopentyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (133 mg, 66%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C20H26F3N3O2(M+H<+>) 398,2050, Funnet 398,2050.
Eksempel 70
Trans-1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester Cykloheksyl-hydrazin-hydroklorid (0,276 g, 1,59 mmol, CAS #24214-73-1, anskaffet fra Aldrich), 2-dimetylaminometylen-4,4,4-trifluor-3-okso-smørsyre-etylester (0,459 g, 1,67 mmol) og vannfritt natriumacetat (0,188 g, 2,29 mmol) ble kombinert i etanol (2,9 ml) og oppvarmet ved 70<o>C i 15 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen fordelt mellom metylenklorid og vann. Den organiske fasen ble vasket med vann og saltløsning. Hver vandige fase ble ekstrahert med en ny porsjon metylenklorid. De to organiske faser ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Rensing ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 5-40% etylacetatheksaner, ga 1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,270 g, 55%). Massespektrum: m/z: 291,3 (M+H).
Trinn 2: 1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,265 g, 0,91 mmol) ble oppløst i metanol (1,4 ml). Vann (1,4 ml) og litiumhydroksid (0,029 g, 1,21 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 1,5 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble metanolen fjernet under vakuum. Tetrahydrofuran ble satt til residuet og ble deretter fjernet under vakuum for å sikre fullstendig fjerning av metanolen. 6N HCl ble satt til det vandige residuet til pH 2-3, hvilket resulterte i utfelling av et fast stoff. Det faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 100<o>C, hvilket ga 1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,206 g, 86%).
Massespektrum: m/z: 263,3 (M+H).
Trinn 3: Trans-1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (196 mg, 0,747 mmol) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (2,9 ml) og tørr metylenklorid (0,7 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (1,00 ml, 5,78 mmol) og TSTU (270 mg, 0,897 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 3 timer og på dette tidspunktet viste LC-MS at omsetningen til den aktiverte esteren var fullstendig. Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (160 mg, 0,785 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur natten over. Den rå reaksjonsblandingen ble satt til vann og ekstrahert to ganger med metylenklorid. Hver organiske fase ble vasket sekvensielt med vann og saltløsning. De to organiske faser ble samlet, tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi, fulgt av utkrystallisering fra etylacetat-heksaner, ga trans-1-cykloheksyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (208 mg, 67%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C21H28F3N3O2(M+H<+>) 412,2207, Funnet 412,2206.
Eksempel 71
Trans-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester 4-hydrazino-cykloheksanol-hydroklorid (0,255 g, 1,53 mmol, fremstilt i Eksempel 67, Trinn 2), 2-dimetylaminometylen-4,4,4-trifluor-3-okso-smørsyre-etylester (0,272 g, 1,14 mmol) og vannfritt natriumacetat (0,256 g, 3,12 mmol) ble kombinert i etanol (2,0 ml) og oppvarmet ved 70<o>C under argon i 14 timer. Etter avkjøling til romtemperatur ble reaksjonsblandingen fordelt mellom metylenklorid og vann. Den vandige fasen ble vasket en gang til med metylenklorid. De to organiske faser ble samlet, vasket med saltløsning, tørket med natriumsulfat og konsentrert under vakuum. Rensing ved flashkromatografi (ved eluering med en gradient av 40-100% etylacetat-heksaner) ga vellykket separering av cis/trans-isomerer, hvilket ga cis-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (96,1 mg, 27%) og trans-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (63,5 mg, 18%).
Trinn 2: cis-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
Cis-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (94,7 mg, 0,309 mmol) ble oppløst i metanol (0,5 ml). Litiumhydroksid (10,3 mg, 0,430 mmol) og vann (0,5 ml) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 1 time. Etter avkjøling til romtemperatur ble metanolen fjernet under vakuum. Tetrahydrofuran ble tilsatt og fjernet under vakuum for å sikre fullstendig fjerning av metanol. Residuet ble fortynnet med vann og surgjort med 6N HCl (75 µl; pH 1,5-2). Det faste stoffet som ble utfelt fra løsningen, ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket under høyvakuum ved 50<o>C, hvilket ga cis-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (70 mg; 81%). Massespektrum: m/z: 279,1 (M+H).
Trinn 3: Trans-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Cis-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (67 mg, 0,241 mmol) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (1,0 ml) og tørr metylenklorid (0,2 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (0,33 ml, 1,907 mmol) og TSTU (82 mg, 0,272 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 3 timer og på dette tidspunktet viste LC-MS at omsetningen til den aktiverte esteren var fullstendig. Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (50 mg, 0,245 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon natten over. Den rå reaksjonsblandingen ble satt til vann og ekstrahert to ganger med metylenklorid. De to organiske faser ble samlet og vasket sekvensielt med vann og saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flashkromatografi (ved eluering med en gradient av 0-20% metanol-etylacetat), fulgt av utkrystallisering fra etylacetat-eter, ga trans-1-(cis-4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (44,9 mg, 43%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C21H28F3N3O3(M+H<+>) 428,2156, Funnet 428,2157.
Eksempel 72
Trans-1-(trans-4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Trans-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre Trans-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (62,3 mg, 0,203 mmol, fremstilt i Eksempel 71, Trinn 1) ble oppløst i metanol (0,3 ml). Litiumhydroksid (7,1 mg, 0,297 mmol) og vann (0,3 ml) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 80<o>C i 1 time. Etter avkjøling til romtemperatur ble metanolen fjernet under vakuum. Tetrahydrofuran ble tilsatt og fjernet under vakuum for å sikre fullstendig fjerning av metanol. Residuet ble fortynnet med vann og surgjort med 6N HCl. Fast stoff ble først utfelt, men ble raskt til en olje/gummi. Blandingen ble ekstrahert med metylenklorid to ganger. De to organiske faser ble samlet, vasket med vann, tørket med natriumsulfat og konsentrert, hvilket ga trans-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (35,8 mg; 63%). Massespektrum: m/z: 277,1 (M-H).
Trinn 2: Trans-1-(trans-4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trans-1-(4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (31,6 mg, 0,114 mmol) ble oppløst i tørr N,N-dimetylformamid (0,5 ml) og tørr metylenklorid (0,1 ml). N,N-diisopropyl-N-etylamin (155 µl, 0,896 mmol) og TSTU (39 mg, 0,130 mmol) ble satt sekvensielt til løsningen, og omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 5 timer. Trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (24 mg, 0,118 mmol, Mellomprodukt 2) ble tilsatt, og omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur under argon i 23 timer. Den rå reaksjonsblandingen ble satt til vann og ekstrahert to ganger med metylenklorid. De to organiske faser ble samlet og vasket sekvensielt med vann (3x) og saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og konsentrert. Rensing ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-20% metanol-etylacetat, fulgt av utkrystallisering fra etylacetat-eter, ga trans-1-(trans-4-hydroksy-cykloheksyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (30,4 mg, 63%). HR-MS (ES) m/e beregnet for C21H28F3N3O3 (M+H<+>) 428,2156, Funnet 428,2156.
Eksempel 73
Trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-hydroksyadamantan-2-yl-amid
Trinn 1: Fremstilling av (2-metoksyetyl)-hydrazin
En løsning av hydrazin-monohydrat (22 ml, 453,5 mmol) i etanol (7 ml) ble ved 0<o>C (is/vann-bad) tilsatt 1-brom-2-metoksyetan (4,0 ml, 42,44 mmol) dråpevis i løpet av 20 minutter. Reaksjonen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur, ble omrørt i 40 minutter og ble deretter oppvarmet til 45<o>C i et foroppvarmet oljebad i 12 timer. Reaksjonen ble deretter avkjølt til romtemperatur og ble konsentrert for å fjerne etanolen. Det gjenværende vandige lag ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 100 ml) og dietyleter (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert, hvilket ga (2-metoksyetyl)-hydrazin som fargeløs olje (2,35 g, 61 %).
Trinn 2: Fremstilling av 5-amino-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester En løsning av (2-metoksyetyl)-hydrazin (2,35 g, 26,07 mmol) i etanol (40 ml) ble tilsatt etyl(etoksymetylen)cyanoacetat (4,40 g, 26,48 mmol). Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i et foroppvarmet oljebad (90<o>C) i 3 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og ble konsentrert for å fjerne etanolen. Residuet ble oppløst i metylenklorid (~100 ml) og ble vasket med vann (10 ml) og saltløsning (10 ml). Det organiske laget ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-amino-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4 karboksylsyre-etylester (5,3 g, 95%) som en oransje olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 214,0 (M+1).
Trinn 3: Fremstilling av 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester En blanding av t-butylnitritt (5,3 ml, 40,10 mmol), vannfritt kobber(I)klorid (4,10 g, 41,41 mmol) og vannfritt acetonitril (100 ml), ble tilsatt 5-amino-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (17,8 g, 83,4 mmol) i løpet av 10 minutter ved 0<o>C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time, deretter ved 60<o>C i 2 timer og ble deretter omrørt ved romtemperatur natten over. Blandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur og ble hellet forsiktig i 6,0 N vandig HCL (100 ml). Den vandige fasen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 300 ml). De samlede organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester som en oransje olje (4,6 g, 80 %), som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 233,0 (M+1).
Trinn 4: Fremstilling av 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (4,60 g, 19,77 mmol) i metanol (32 ml) og vann (32 ml) ble tilsatt litiumhydroksid (1,10 g, 26,22 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 3 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble deretter surgjort forsiktig med 6,0 N vandig HCl. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre som et hvitt, fast stoff (1,27 g, 31 %). Massespektrum: m/z: 205,3 (M+1).
Trinn 5: Fremstilling av trans-5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (1,270 g, 6,207 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (5 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (6 ml). Løsningen ble tilsatt diisopropyletylamin (9,0 ml, 51,67 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (2,30 g, 7,64 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-4-amino-adamantan-1-olhydroklorid (fremstilt i Mellomprodukt 2, 1,30 g, 6,382 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av etylacetat til 10% metanol/etylacetat), hvilket ga trans-5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (0,756 g, 34,5%). ES-HRMS m/e beregnet for C17H24ClN3O3(M+H<+>) 353,1579, funnet 353,1576.
Trinn 6: Fremstilling av trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-acetylamino-adamantan-2-yl-amid
En løsning av 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (0,177 g, 0,500 mmol) og pyrazol (0,280 g, 4,113 mmol) i tørr N,N-dimetylformamid (26 ml), ble tilsatt 60% natriumhydrid (0,160 g, 4 mmol). Løsningen ble oppvarmet til 120<o>C i et foroppvarmet oljebad i 20 timer. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og ble behandlet med vann (1 ml) og vandig NH4Cl (1 ml). Siden ingen utfelling skjedde, ble den vandige fasen ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum og oppvarming (~100<o>C) for å fjerne overskudd av N,N-dimetylformamid.
Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med 5% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-hydroksy-adamantan-2-yl-amid som et hvitt, fast stoff (0,125 g, 65%). ES-HRMS m/e beregnet for C20H27N5O3 (M+H<+>) 408,2006, funnet 408,2003.
Eksempel 74
Trans-1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Fremstilling av (2-metoksyetyl)-hydrazin
En løsning av hydrazin-monohydrat (22 ml, 453,5 mmol) i etanol (7 ml) ved 0<o>C i et is/vann-bad, ble tilsatt 1-brom-2-metoksyetan (4,0 ml, 42,44 mmol) dråpevis i løpet av 20 minutter. Reaksjonen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur, ble omrørt i 40 minutter og ble deretter oppvarmet til 45<o>C i et foroppvarmet oljebad i 12 timer. Reaksjonen ble deretter avkjølt til romtemperatur og ble konsentrert for å fjerne etanolen. Det gjenværende vandige lag ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 100 ml) og dietyleter (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert, hvilket ga (2-metoksyetyl)-hydrazin som fargeløs olje (2,35 g, 61%).
Trinn 2: Fremstilling av 1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester
En løsning av (2-metoksyetyl)-hydrazin (0,104, 1,15 mmol) i etanol (2 ml), ble tilsatt etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat (Mellomprodukt 4, 0,261 mg, 1,09 mmol). Den resulterende løsningen ble mikrobølgebehandlet ved 160<o>C i 0,5 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Residuet ble oppløst i metylenklorid (50 ml) og ble vasket med vann (20 ml) og saltløsning (10 ml). Det organiske laget ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (296,1 mg, 99%) som en brun olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: Fremstilling av 1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre En løsning av 1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (0,291 g, 1,09 mmol) i metanol (3 ml) og vann (3 ml), ble tilsatt litiumhydroksid (0,072 g, 1,73 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 2 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble deretter surgjort forsiktig med 6,0 N vandig HCl. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 25 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket med vannfritt MgSO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl1H-pyrazol-4-karboksylsyre som en oransje olje (0,183 g, 71%), som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 239,0 (M+1).
Trinn 4: Fremstilling av trans-1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (0,180 g, 0,756 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (4 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (1 ml). Løsningen ble tilsatt diisopropyletylamin (1,1 ml, 6,31 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (0,280 g, 0,93 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-4-amino-adamantan-1-olhydroklorid (Mellomprodukt 2, 0,160 g, 0,785 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet og vasket med vann (2 x 20 ml) og saltløsning (20 ml) og ble tørket med vannfritt MgSO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale som en oransje olje. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av metylenklorid til 5% til 10% metanol/etylaceat), hvilket ga trans-1-(2-metoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff. (0,073 g, 25%). ES-HRMS m/e beregnet for C18H24F3N3O3(M+H<+>) 410,1662, funnet 410,1662.
Eksempel 75
Trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-acetylaminoadamantan-2-yl-amid
Trinn 1: (2-metoksyetyl)-hydrazin
En løsning av hydrazin-monohydrat (89,4 ml, 8,00 mol) i etanol (120 ml) ved 0<o>C i et is/vann-bad, ble tilsatt 1-brom-2-metoksyetan (18,8 ml, 0,20 mol) dråpevis i løpet av 20 minutter. Reaksjonen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur, ble omrørt i 40 minutter og ble deretter oppvarmet til 45<o>C i et foroppvarmet oljebad i 12 timer. Reaksjonen ble deretter avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Det gjenværende vandige lag ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 100 ml) og dietyleter (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert, hvilket ga (2-metoksyetyl)-hydrazin som en fargeløs olje (8,0 g, 50%).
Trinn 2: 5-amino-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En løsning av (2-metoksyetyl)-hydrazin (9,0 g, 99,9 mmol) i etanol (170 ml), ble tilsatt etyl(etoksymetylen)cyanoacetat (14,36 g, 84,9 mmol). Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i et foroppvarmet oljebad (90<o>C) i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Residuet ble oppløst i metylenklorid (~100 ml) og vasket med vann (10 ml) og saltløsning (10 ml). Det organiske laget ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-amino-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4 karboksylsyre-etylester (17,8 g, 98%) som en rød olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 214,0 (M+1).
Trinn 3: 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av t-butylnitritt (17,6 ml, 133,4 mmol), vannfritt kobber(I)klorid (13,55 g, 136,9 mmol) og vannfritt acetonitril (160 ml), ble tilsatt 5-amino-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (17,8 g, 83,4 mmol) i løpet av 10 minutter ved 0<o>C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 70<o>C i 2 timer.
Blandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur og ble hellet forsiktig i 6,0 N vandig HCL (85 ml). Den vandige fasen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 150 ml). De samlede organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale som en grønn olje. Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med etylacetat/heksaner, ved anvendelse av en gradient av 3:7 til 1:0), hvilket ga 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester som en lysegul olje (8,51 g, 44%). Massespektrum: m/z: 233,0 (M+1).
Trinn 4: 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (8,51 g, 36,6 mmol) i metanol (37 ml) og vann (37 ml), ble tilsatt litiumhydroksid (1,21 g, 50,4 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 3 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble deretter surgjort forsiktig med 6,0 N vandig HCl. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre som et hvitt, fast stoff (6,93 g, 92%). Massespektrum: m/z: 205,3 (M+1).
Trinn 5: Trans-5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (178 mg, 0,870 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (1 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (3,5 ml). Løsningen ble tilsatt N,N-diisopropyletylamin (1,21 ml, 7,00 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (289 mg, 0,960 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 4 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (fremstilt i Eksempel 43, 200 mg, 0,960 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av metylenklorid til 4% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et gråhvitt, fast stoff (174 mg, 50%). ES-HRMS m/e beregnet for C19H27ClN4O3(M+H<+>) 395,1842, funnet 395,1845.
Trinn 6: Trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-acetylaminoadamantan-2-yl-amid
En løsning av trans-5-klor-1-(2-metoksyetyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid (116 mg, 0,300 mmol) og pyrazol (61 mg, 0,90 mmol) i N-metylpyrolidinon (1,5 ml), ble tilsatt vandig natriumhydroksid (0,100 ml, 1,20 mmol, 50% vekt/vekt). Løsningen ble oppvarmet til 120<o>C i et foroppvarmet oljebad i 12 timer.
Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og ble behandlet med vann (1 ml) og vandig NH4Cl (1 ml). Siden ingen utfelling skjedde, ble den vandige fasen ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum og oppvarming (~100<o>C) for å fjerne overskudd av NMP. Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med 5% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H
[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-acetylamino-adamantan-2-yl-amid som et hvitt, fast stoff (77 mg, 60%). I noen tilfeller ble gjenværende NMP fjernet ved oppvarming til 100<o>C under høyvakuum eller ved oppløsning av residuet i etylacetat, vasking med vann, tørking med vannfritt Na2SO4, filtering og konsentrering under vakuum. ES-HRMS m/e beregnet for C22H30N6O3 (M+H<+>) 427,2452, funnet 427,2451.
Eksempel 76
Trans-2’-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-2’H-[1,3’]bipryazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: [2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-hydrazin
En løsning av hydrazin-monohydrat (44,0 ml, 1,00 mol) i etanol (75 ml) ved 0<o>C i et is/vann-bad, ble tilsatt 1-(2-brometoksy)-2-metoksyetan (13,6 ml, 0,100 mol) dråpevis i løpet av 20 minutter. Reaksjonen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur, ble omrørt i 5 minutter og ble deretter oppvarmet til 40<o>C i et foroppvarmet oljebad i 12 timer.
Reaksjonen ble deretter avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Det gjenværende vandige lag ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 100 ml) og dietyleter (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert, hvilket ga [2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-hydrazin som en lysegul olje (10,29 g, 85%).
Trinn 2: 5-amino-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester En løsning av [2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-hydrazin (6,0 g, 44,7 mmol) i etanol (77 ml), ble tilsatt etyl(etoksymetylen)cyanoacetat (6,43 g, 37,99 mmol). Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i et foroppvarmet oljebad (90<o>C) i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Residuet ble oppløst i metylenklorid (~100 ml) og vasket med vann (20 ml) og saltløsning (10 ml). Det organiske laget ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-amino-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (10,38 g, 99%) som en oransje olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 258,0 (M+1).
Trinn 3: 5-klor-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av t-butylnitritt (8,5 ml, 64,5 mmol), vannfritt kobber(I)klorid (6,54 g, 66,1 mmol) og vannfritt acetonitril (80 ml), ble tilsatt 5-amino-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (10,38 g, 40,3 mmol) i løpet av 10 minutter ved 0<o>C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 70<o>C i 2 timer. Blandingen ble deretter avkjølt til romtemperatur og ble hellet forsiktig i 6,0 N vandig HCl (45 ml). Den vandige fasen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 150 ml). De samlede organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale som en olje. Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med etylacetat/heksaner, ved anvendelse av en gradient av 1:3 til 1:0), hvilket ga 5-klor-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester som en lysegul olje (3,43 g, 30%). Massespektrum: m/z: 277,0 (M+1).
Trinn 4: 5-klor-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-klor-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (3,43 g, 12,39 mmol) i metanol (12 ml) og vann (12 ml), ble tilsatt litiumhydroksid (415 mg, 17,3 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 3 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble deretter surgjort forsiktig med 6,0 N vandig HCl. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med metylenklorid (3 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre som et hvitt, fast stoff (2,65 g, 86%). Massespektrum: m/z: 249,0 (M+1).
Trinn 5: Trans-5-klor-1-[2-(metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (497 mg, 2,00 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (2 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (8 ml).
Løsningen ble tilsatt N,N-diisopropyletylamin (2,8 ml, 16,0 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (722 mg, 2,40 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-4-amino-adamantan-1-olhydroklorid (Mellomprodukt 2, 489 mg, 2,40 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet og vasket med vann (2 x 20 ml) og saltløsning (20 ml) og ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av etylacetat til 5% og deretter til 10% metanol/etylacetat), hvilket ga trans-5-klor-1-[2-(metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (460 mg, 58%). ES-HRMS m/e beregnet for C19H28ClN3O4 (M+H<+>) 398,1841, funnet 398,1842.
Trinn 6: Trans-2’-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid.
En løsning av 5-klor-1-[2-(metoksyetoksy)-etyl]-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (200 mg, 0,500 mmol) og pyrazol (103 mg, 1,5 mmol) i N-metylpyrrolidinon (3 ml), ble tilsatt vandig natriumhydroksid (0,200 ml, 3,79 mmol, 50% vekt/vekt). Løsningen ble oppvarmet til 120<o>C i et foroppvarmet oljebad i 24 timer.
Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og ble behandlet med vann (2 ml) og vandig NH4Cl (2 ml). Siden ingen utfelling skjedde, ble den vandige fasen ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum og oppvarming (~100<o>C) for å fjerne overskudd av NMP. Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med 5% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-2’-[2-(2-metoksyetoksy)-etyl]-2’H-[1,3’]bipryazolyl-4’-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid som en fargeløs olje (142 mg, 66%). ES-HRMS m/e beregnet for C22H31N5O4 (M+H<+>) 430,2449, funnet 430,2449.
Eksempel 77
Trans-1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: 2-(2-brometoksy)-2-metylpropan
2-brometanol (14,1 ml, 200 mmol), metylenklorid (35 ml) og konsentrert svovelsyre (1 ml) ble hatt i en høytrykkskolbe med rørestav. Kolben ble avkjølt til -78<o>C i et tørris/acetonbad. I en separat kolbe avkjølt til -78<o>C, ble det hatt kondensert 2-metylpropen (~50 ml). Dette ble deretter satt til kolben som inneholdt 2-brometanol. Kolben ble lukket og omrørt ved romtemperatur i 48 timer. Deretter ble kolben avkjølt til -78<o>C i et tørris/aceton-bad. Kolben ble åpnet og forsiktig hellet i mettet, vandig natriumbikarbonat-løsning (100 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml) og heksaner (1 x 50 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt natriumsulfat, filtrert og konsentrert, hvilket ga 2-(2-brometoksy)-2-metylpropan som en fargeløs olje (35 g, 97%).
Trinn 2: (2-tert-butoksyetyl)-hydrazin
En løsning av hydrazin-monohydrat (36,0 ml, 0,750 mol) i etanol (70 ml) ved 0<o>C i et is/vann-bad, ble tilsatt 2-(2-brometoksy)-2-metylpropan (12,1 ml, 0,075 mol) dråpevis i løpet av 20 minutter. Reaksjonen fikk deretter oppvarmes til romtemperatur, ble omrørt i 5 minutter og ble deretter oppvarmet til 40<o>C i et foroppvarmet oljebad i 4 timer.
Reaksjonen ble deretter avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Kolben ble tilsatt vann (20 ml), og det vandige laget ble ekstrahert med dietyleter (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert, hvilket ga (2-tert-butoksyetyl)-hydrazin som en fargeløs olje (6,05 g, 61%).
Trinn 3: 1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester En løsning av (2-tert-butoksyetyl)-hydrazin (260 mg, 1,96 mmol) i etanol (4 ml), ble tilsatt etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat (Mellomprodukt 4, 400 mg, 1,67 mmol). Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i et foroppvarmet oljebad (90<o>C) i 24 timer.
Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Residuet ble oppløst i metylenklorid (50 ml) og ble vasket med vann (20 ml) og saltløsning (10 ml). Det organiske laget ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester (620 mg, >99%) som en oransje olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 309,2 (M+1).
Trinn 4: 1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (620 mg, 2,0 mmol) i metanol (2 ml) og vann (2 ml), ble tilsatt litiumhydroksid (67 mg, 2,8 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 4 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble deretter surgjort forsiktig med 6,0 N vandig HCl. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 30 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre som en rød olje (425 mg, 75%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 5: Trans-1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (425 mg, 1,51 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (1,5 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (6 ml). Løsningen ble tilsatt N,N-diisopropyletylamin (2,1 ml, 12,0 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (548 mg, 1,82 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-4-amino-adamantan-1-olhydroklorid (Mellomprodukt 2, 370 mg, 1,82 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet og vasket med vann (2 x 20 ml) og saltløsning (20 ml) og ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av metylenklorid til 5% til 10% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-1-(2-tert-butoksyetyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff. Det hvite, faste stoffet ble omkrystallisert fra varm dietyleter, metylenklorid og metanol (99/1/0,1), hvilket ga det ønskede produkt som et hvitt, fast stoff (135 mg, 21%). ES-HRMS m/e beregnet for C21H30F3N3O3 (M+H<+>) 430,2312, funnet 430,2314.
Eksempel 78
Trans-2’-(3-metoksypropyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4-‘karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester
En løsning av tert-butylkarbazat (10,0 g, 75,6 mmol) i aceton (75 ml, 1,0 mol), ble tilsatt vannfritt magnesiumsulfat (~2,0 g) og 10 dråper iseddik. Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i et foroppvarmet oljebad (~85<o>C) i 1 time. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga hydrazinkarboksylsyre-tertbutylester som et hvitt, fast stoff (12,0 g, 92%). Massespektrum: m/z: 173,3 (M+1).
Trinn 2: N’-isopropyliden-N-(3-metoksypropyl)-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester En løsning av hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (4,67 g, 27,16 mmol) i toluen (90 ml), ble tilsatt pulverisert kaliumhydroksid (1,98 g, 35,3 mmol) og tetrabutylammoniumhydrogensulfat (904 mg, 2,72 mmol). Løsningen ble oppvarmet til 50<o>C i et foroppvarmet oljebad, og 1-brom-3-metoksypropan (3,67 ml, 32,6 mmol) ble tilsatt dråpevis i løpet av 45 minutter. Løsningen ble deretter oppvarmet til 80<o>C i 3 timer. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og vasket med vann (3 x 150 ml) inntil vannlaget var nøytralt. Det organiske laget ble tørket med vannfritt magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga N’-isopropyliden-N-(3-metoksypropyl)-hydrazinkarboksylsyre-tertbutylester som en viskøs olje (6,49 g, 98%), som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 245,4 (M+1).
Trinn 3: (3-metoksypropyl)-hydrazin -dihydroklorid
En løsning av N’-isopropyliden-N-(3-metoksypropyl)-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (6,49 g, 26,6 mmol) i tetrahydroufuran (50 ml) ble tilsatt 2,0N saltsyre (27 ml). Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp (~80<o>C) i et foroppvarmet oljebad i 3 timer. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert under vakuum for å fjerne tetrahydrofuranet. Det vandige laget ble tilsatt toluen (200 ml), og vannet ble fjernet ved konsentrering under vakuum (dette ble gjentatt 2 ganger til), hvilket ga (3-metoksypropyl)-hydrazindihydroklorid (4,65 g, 96%) som et lysegult, klebrig, fast stoff, som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 4: 5-amino-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En løsning av (3-metoksypropyl)-hydrazin-dihydroklorid (4,5 g, 25,4 mmol) og natriumacetat (4,6 g, 56,0 mmol) i etanol (38 ml), ble tilsatt etyl(etoksymetylen)-cyanoacetat (3,89 g, 23,0 mmol). Løsningen ble oppvarmet til tilbakeløp i et foroppvarmet oljebad (90<o>C) i 24 timer. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og konsentrert for å fjerne etanolen. Residuet ble oppløst i metylenklorid (~100 ml) og vasket med vann (30 ml). Det organiske laget ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-amino-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (5,01 g, 96%) som en oransje olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing. Massespektrum: m/z: 228,4 (M+1).
Trinn 5: 5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av 5-amino-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (5,22 g, 23,0 mmol) i tørr acetonitril (46 ml), ble tilsatt vannfritt kobber(I)klorid (3,73 g, 37,7 mmol) og eddiksyre (2,6 ml, 46,0 mmol). Blandingen ble avkjølt til 0<o>C i et is/vann-bad, og tertbutylnitritt (4,9 ml, 36,8 mmol) ble tilsatt i løpet av 10 minutter. Løsningen fikk oppvarmes til romtemperatur og ble omrørt i 4 timer. Løsningen ble forsiktig tilsatt 6,0N saltsyre (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 100 ml). De organiske lag ble samlet, tørket med vannfritt natriumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med etylacetat/heksaner, 1:1), hvilket ga 5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,71 g, 30%) som en oransje olje. Massespektrum: m/z: 247,3 (M+1).
Trinn 6: 5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (1,71 g, 7,0 mmol) i metanol (7 ml) og vann (7 ml), ble tilsatt litiumhydroksid (235 mg, 9,8 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 3 timer, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble deretter surgjort forsiktig med 6,0 N vandig HCl. Den resulterende blandingen ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De samlede organiske ekstrakter ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre som et oransje, fast stoff (1,35 g, 88%). Massespektrum: m/z: 219,3 (M+1).
Trinn 7: Trans-5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (500 mg, 2,29 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (2,3 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (9 ml). Løsningen ble tilsatt N,N-diisopropyletylamin (3,2 ml, 18,32 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (827 mg, 2,75 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-4-amino-adamantan-1-olhydroklorid (Mellomprodukt 2, 606 mg, 2,97 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet og vasket med vann (2 x 20 ml) og saltløsning (20 ml) og ble tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av 75% etylacetat/heksaner til etylacetat), hvilket ga trans-5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydrox-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (452 mg, 53%). ES-HRMS m/e beregnet for C18H26ClN3O3(M+H<+>) 368,1736, funnet 368,1733.
Trinn 8: Trans-2’-(3-metoksypropyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4-‘karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
En løsning av 5-klor-1-(3-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (200 mg, 0,544 mmol) og pyrazol (74 mg, 1,09 mmol) i N-metylpyrrolidinon (3,5 ml), ble tilsatt natriumhydroksid (87 mg, 2,18 mmol) og vann (0,1 ml). Løsningen ble oppvarmet til 120<o>C i et foroppvarmet oljebad i 16 timer. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og ble behandlet med vann (1 ml) og vandig NH4Cl (1 ml).
Siden ingen utfelling skjedde, ble den vandige fasen ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum og oppvarming (~100<o>C) for å fjerne overskudd av NMP.
Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med 5% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-2’-(3-metoksypropyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4-‘karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (108 mg, 50%). I noen tilfeller ble gjenværende NMP fjernet ved oppvarming til 100<o>C under høyvakuum eller ved oppløsning av residuet i etylacetat, vasking med vann, tørking med vannfritt Na2SO4, filtering og konsentrering under vakuum. ES-HRMS m/e beregnet for C21H29N5O3(M+H<+>) 400,2343, funnet 400,2342.
Eksempel 79
Trans-2’-(3-metoksypropyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Trans-5-klor-1-(2-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-(2-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (fremstilt i Eksempel 78, Trinn 6; 190 mg, 0,872 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr metylenklorid (1 ml) og tørr N,N-dimetylformamid (4 ml). Løsningen ble tilsatt diisopropyletylamin (1,4 ml, 8,00 mmol) og O-(N-succinimidyl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborat (290 mg, 0,960 mmol). Løsningen ble omrørt ved romtemperatur i 3 timer, og deretter ble en prøve analysert ved LC-MS, hvilket viste fullstendig omdanning til den aktiverte ester. Deretter ble trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (fremstilt i Eksempel 43, 200 mg, 0,960 mmol) tilsatt. Løsningen ble omrørt i 24 timer, og reaksjonen ble stanset med vann (20 ml). Det vandige laget ble ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum, hvilket ga rått materiale. Det rå materialet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med en gradient av metylenklorid til 5% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-5-klor-1-(2-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et dunaktig, hvitt, fast stoff (200 mg, 56%). ES-HRMS m/e beregnet for C20H29ClN4O3 (M+H<+>) 409,2001, funnet 409,2002.
Trinn 2: Trans-2’-(3-metoksypropyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
En løsning av 5-klor-1-(2-metoksypropyl)-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid (232 mg, 0,57 mmol) og pyrazol (155 mg, 2,27 mmol) i N-metylpyrolidinon (2,5 ml), ble tilsatt vandig natriumhydroksid (0,300 ml, 5,68 mmol, 50% vekt/vekt). Løsningen ble oppvarmet til 120<o>C i et foroppvarmet oljebad i 24 timer.
Løsningen ble avkjølt til romtemperatur og ble behandlet med vann (1 ml) og vandig NH4Cl (1 ml). Siden ingen utfelling skjedde, ble den vandige fasen ekstrahert med metylenklorid (2 x 50 ml). De organiske ekstrakter ble samlet, tørket med vannfritt Na2SO4, filtrert og konsentrert under vakuum og oppvarming (~100<o>C) for å fjerne overskudd av NMP. Produktet ble renset ved kolonnekromatografi gjennom silikagel (ved eluering med 5% metanol/metylenklorid), hvilket ga trans-2’-(3-metoksypropyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (170 mg, 69%). I noen tilfeller ble gjenværende NMP fjernet ved oppvarming til 100<o>C under høyvakuum eller ved oppløsning av residuet i etylacetat, vasking med vann, tørking med vannfritt Na2SO4, filtering og konsentrering under vakuum. ES-HRMS m/e beregnet for C23H32N6O3 (M+H<+>) 441,2609, funnet 441,2609.
Eksempel 80
Trans-1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Mellomprodukt 6, 291 mg, 1,33 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (12 ml) og tørr DMF (3 ml), og TSTU (481 mg, 1,6 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (1,4 ml, 8 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble trans-4-amino-adamantan-1-ol (268 mg, 1,6 mmol, Mellomprodukt 2) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-100% acetonitril/ vann, hvilket ga trans-1-cyklopropyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (254 mg, 52%). LRMS m/z beregnet for C18H22F3N3O2(M+H) 370,2, funnet 370,2.
Eksempel 81
Trans-5-klor 1-cyklopropyl -1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Syntese av en blanding av 5-amino-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester og 3-amino-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding som inneholdt cyklopropylhydrazin-hydroklorid (Mellomprodukt 5 uten ytterligere rensing; 3,65 g, 33,67 mmol), etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (5,69 g, 33,67 mmol) og vannfritt natriumacetat (2,03 g, 33,67 mmol) i 60 ml etanol, ble omrørt og tilbakeløpskokt natten over. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur, og vann og diklormetan ble tilsatt. Den fraseparerte vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble vasket suksessivt med vann og saltløsning og ble tørket med natriumsulfat og filtrert. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum, og det rå residuet ble renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-2% metanol/diklormetan, hvilket ga en blanding av 5-amino-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert først) og 3-amino-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert litt senere) (to isomerer: totalt 2,03 g, 31%), som ble anvendt som en blanding uten ytterligere separering. LRMS m/z beregnet for C9H13N3O2 (M+H) 196,1, funnet 196,1.
Trinn 2: Syntese av en blanding av 5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester og 3-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av t-butylnitritt (2,03 ml, 15,38 mmol), kobber(I)klorid (1,52 g, 15,38 mmol) og vannfritt acetonitril (30 ml), ble tilsatt løsningen av 5-amino-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester og 3-amino-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (fra forrige trinn) i vannfritt acetonitril (20 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 60°C i 2 timer. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og ble hellet i 6N HCl (20 ml) og ekstrahert med diklormetan. Den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. Etter at de samlede organiske faser var konsentrert under vakuum, ble det rå residuet renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 10-20% etylacetat/heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner, hvilket ga 5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert først, 296 mg, 13%) og 3-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert senere, 159 mg, 7%). LRMS m/z beregnet for C9H11ClN2O2(M+H) 215,1, funnet 215,1.
Trinn 3: Syntese av 5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (296 mg, 1,38 mmol) i metanol (15 ml) og vann (15 ml), ble tilsatt LiOH (40 mg, 1,66 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over og ble deretter konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, surgjort til pH=2 med konsentrert HCl og ekstrahert med etylacetat. De organiske ekstrakter ble inndampet under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (242 mg, 93%) som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 4: Syntese av trans-5-klor-1-cyklopropyl -1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
5-klor-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (242 mg, 1,3 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (8 ml) og tørr DMF (2 ml), og TSTU (318 mg, 1,56 mmol) ble tilsatt. DIPEA (1,4 ml, 7,8 mmol) ble satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (318 mg, 1,56 mmol, Mellomprodukt 2) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann, hvilket ga trans-5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (200 mg, 46%). LRMS m/z beregnet for C17H22ClN3O2(M+H) 336,1, funnet 336,1.
Eksempel 82
Trans-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% dispersjon i mineralolje; 115 mg, 2,86 mmol) ble satt til en løsning av pyrazol (195 mg, 2,86 mmol) i tørr DMF (25 ml) under nitrogen ved 0°C i et is/vann-bad, og blandingen ble oppvarmet til 40 °C i 1 time. Trans-5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (120 mg, 0,36 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110°C i 48 timer og ble deretter avkjølt. Etter at DMF var avdampet under vakuum, ble vann og etylacetat tilsatt. Det organiske laget ble fraseparert, og den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med etylacetat. De samlede organiske faser ble konsentrert under vakuum, og residuet ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-60% acetonitril/vann, hvilket ga trans-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (126 mg, 95%). LRMS m/z beregnet for C20H25N5O2 (M+H) 368,2, funnet 368,2.
Eksempel 83
Trans-4-klor-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% i olje; 57 mg, 1,43 mmol) ble satt til en løsning av 4-klor-pyrazol (148 mg, 1,43 mmol) i tørr DMF (25 ml) under nitrogen ved 0 °C i et is/vann-bad, og blandingen ble oppvarmet til 40 °C i 1 time. Trans-5-klor-1-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (60 mg, 0,18 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110 °C natten over og ble deretter avkjølt. Etter at DMF var avdampet under vakuum, ble vann og diklormetan tilsatt. Det organiske laget ble fraseparert, og den vandige fasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De samlede organiske faser ble konsentrert under vakuum, og residuet ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann, hvilket ga trans-4-klor-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (56 mg, 77%). LRMS m/z beregnet for C20H24ClN5O2(M+H) 402,2, funnet 402,2.
Eksempel 84
Trans-1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Syntese av cyklopropylmetyl-hydrazin
Brommetyl-cyklopropan (7,5 g, 55,6 mmol) ble satt dråpevis til hydrazinhydrat (13,9 g, 277 mmol) ved romtemperatur og under omrøring i løpet av 20 minutter. Omrøringen ble fortsatt ved romtemperatur i 1 time. Deretter ble blandingen oppvarmet til 50<o>C og omrørt i 1 time. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur og ble ekstrahert tre ganger med eter. Eterlaget ble samlet og konsentrert under vakuum, hvilket ga cyklopropylmetylhydrazin (3,2 g, 67%) som en fargeløs olje, som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Syntese av 1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester
Trietylamin ( 0,35 ml, 2,52 mmol) og cyklopropylmetyl-hydrazin (72 mg, 0,84 mmol) ble satt sekvensielt til en løsning av etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat (Mellomprodukt 4, 200 mg, 0,84 mmol) i etanol (4 ml) i et 10 ml Personal Chemistry mikrobølgerør (Biotage AB, Sverige). Røret ble lukket med et septum og ble underkastet 150 W mikrobølgebestråling ved anvendelse av et Personal Chemistry-system for mikrobølgesyntese (Biotage AB, Sverige) ved 160°C i 30 minutter. Etanolen ble avdampet under redusert trykk. Den gjenværende blandingen ble fordelt mellom diklormetan og vann, og vannfasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De organiske fasene ble samlet, konsentrert under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann, hvilket ga 1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (120 mg, 54%). LRMS m/z beregnet for C11H14F3N2O2(M+) 263,1, funnet 263,1.
Trinn 3: Syntese av 1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (120 mg, 0,46 mmol) i metanol (5 ml) og vann (5 ml), ble tilsatt LiOH (13 mg, 0,54 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH=2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat tre ganger. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (100 mg, 93%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 4: Syntese av trans-1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (100 mg, 0,43 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (12 ml) og tørr DMF (3 ml), og TSTU (151 mg, 0,52 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (0,45 ml, 2,58 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble trans-4-amino-adamantan-1-ol (87 mg, 0,53 mmol, Mellomprodukt 2) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 2-60% acetonitril/vann, hvilket ga trans-1-cyklopropylmetyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (26 mg, 16%). LRMS m/z beregnet for C19H24F3N3O2 (M+H) 384,2, funnet 384,2.
Eksempel 85
Trans-1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Syntese av N'-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-hydrazinkarboksylsyre-tertbutylester
En løsning av N-(tert-butoksykarbonyl)-3-(4-cyanofenyl)-oksaziridin (CAS #: 150884-56-3, anskaffet fra Acros, 5,17 g, 21 mmol) i vannfri dietyleter (20 ml), ble satt til en løsning av 2-amino-2-metyl-propan-1-ol (1,78 g, 20 mmol) i vannfri dietyleter (20 ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Dietyleter ble avdampet under redusert trykk, og residuet ble renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 3-5% metanol/diklormetan, hvilket ga N'-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (1,63 g, 40%) som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Syntese av 2-hydrazino-2-metyl-propan-1-ol-trifluoreddiksyresalt
Trifluoreddiksyre (4 ml) ble satt til en løsning av N'-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (490 mg, 2,4 mmol) i diklormetan (4 ml). Blandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble konsentrert under vakuum, hvilket ga trifluoreddiksyresaltet av 2-hydrazino-2-metyl-propan-1-ol (520 mg, kvantitativt) som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: Syntese av 1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
Trietylamin (1,6 ml, 12 mmol) og trifluoreddiksyresalt av 2-hydrazino-2-metyl-propan-1-ol (520 mg, 2,4 mmol) ble satt sekvensielt til en løsning av etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat (Mellomprodukt 4, 574 mg, 2,4 mmol) i etanol (8 ml) i et 25 ml Personal Chemistry mikrobølgerør (Biotage AB, Sverige). Røret ble lukket med et septum og ble underkastet 150 W mikrobølgebestråling ved anvendelse av et Personal Chemistry-system for mikrobølgesyntese (Biotage AB, Sverige) ved 160 °C i 1 time.
Etanolen ble avdampet under redusert trykk. Den gjenværende blandingen ble fordelt mellom diklormetan og vann, og vannfasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De organiske lag ble samlet, konsentrert under vakuum og renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 0-40% etylacetat/heksaner, deretter 40% etylacetat/heksaner, hvilket ga 1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester (328 mg, 49%). LRMS m/z beregnet for C11H15F3N2O3(M+H) 281,1 , funnet 281,1.
Trinn 4: Syntese av 1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester (328 mg, 1,17 mmol) i metanol (5 ml) og vann (5 ml), ble tilsatt LiOH (34 mg, 1,4 mmol). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH=2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat tre ganger. De samlede organiske ekstrakter ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (280 mg, 95%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 5: Syntese av trans-1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (280 mg, 1,1 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (12 ml) og tørr DMF (3 ml), og TSTU (403 mg, 1,3 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (1,2 ml, 6,6 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble trans-4-amino-adamantan-1-ol (217 mg, 1,3 mmol, Mellomprodukt 2) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-40% acetonitril/vann, hvilket ga trans-1-(2-hydroksy-1,1-dimetyl-etyl)-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (230 mg, 52%). LRMS m/z beregnet for C19H26F3N3O3(M+H) 402,2 , funnet 402,2.
Eksempel 86
Trans-1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Syntese av 2-cyklopropankarbonyl-3-dimetylamino-akrylsyre-metylester
Blandingen av 3-cyklopropyl-3-okso-propionsyre-metylester (15 g, 106 mmol) og N,N-dimetylformamid-dimetylacetal (14,7 ml, 111 mmol) ble oppvarmet ved 75<o>C i 2 timer.
Den urensede blandingen ble konsentrert under høyvakuum, hvilket ga rå 2-cyklopropankarbonyl-3-dimetylamino-akrylsyre-metylester (20,4 g, 91%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Syntese av 1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester Trietylamin (4,8 ml, 34,2 mmol) og tert-butylhydrazin-hydroklorid (1,4 g, 11,4 mmol) ble satt sekvensielt til en løsning av rå 2-cyklopropankarbonyl-3-dimetylamino-akrylsyremetylester (2,4 g, 11,4 mmol) i etanol (24 ml). Den resulterende suspensjonen ble blandet godt og ble fordelt i to 25 ml Personal Chemistry mikrobølgerør (Biotage AB, Sverige). Rørene ble lukket med et septum og ble underkastet 150 W mikrobølgebestråling ved anvendelse av et Personal Chemistry-system for mikrobølgesyntese (Biotage AB, Sverige) ved 160°C i 30 minutter. Reaksjonsblandingene i de to rørene ble samlet, og etanol ble avdampet under redusert trykk. Den gjenværende blandingen ble fordelt mellom diklormetan og vann, og vannfasen ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De organiske fasene ble samlet, konsentrert under vakuum og renset ved silika-kromatografi ved eluering med en gradient av 10-20% etylacetat/heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner, hvilket ga 1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyremetylester (921 mg, 36%). LRMS m/z beregnet for C12H18N2O2 (M+H) 223,1 , funnet 223,1.
Trinn 3: Syntese av 1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-metylester (921 mg, 4,14 mmol) i metanol (15 ml) og vann (15 ml), ble tilsatt LiOH (119 mg, 4,97 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH 2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat tre ganger. De samlede organiske ekstrakter ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (789 mg, 92%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 4: Syntese av trans-1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid
Tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (200 mg, 0,96 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (8 ml) og tørr DMF (2 ml), og TSTU (349 mg, 1,16 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (1 ml, 5,76 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (236 mg, 1,16 mmol, Mellomprodukt 2) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble tørket under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 2-70% acetonitril/vann, hvilket ga trans-1-tert-butyl-5-cyklopropyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (trans-5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (129 mg, 38%). LRMS m/z beregnet for C21H31N3O2 (M+H) 358,3 , funnet 358,2.
Eksempel 87
Trans-1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Syntese av N'-cyklobutyliden-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester Reaksjonsblandingen av cyklobutanon (15 g, 214 mmol) og hydrazinkarboksylsyre-tertbutylester (28,3 g, 214 mmol) i heksan (225 ml), ble oppvarmet til tilbakeløp i 2 timer. Etter avkjøling ble et presipitat dannet, og det faste stoffet ble frafiltrert under vakuum.
Isopropanol (10 ml) og heksan (100 ml) ble satt til det faste stoffet, og blandingen ble konsentrert på en rotasjonsinndamper under vakuum inntil en oppslemming ble dannet. Etter filtrering ble det faste stoffet vasket med heksan to ganger og tørket under vakuum, hvilket ga N'-cyklobutyliden-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (32 g, 81%) som hvitt, fast stoff, som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Syntese av cyklobutylhydrazin-hydroklorid
En blanding av N'-cyklobutyliden-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (2 g, 10,8 mmol) i vannfri metanol (12 ml) og vannfri THF (9 ml), ble tilsatt natriumcyanoborhydrid (860 mg, 13 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 30 minutter og ble deretter avkjølt til romtemperatur og omrørt i 20 minutter.6N HCl (4,6 ml) ble satt dråpevis til reaksjonsblandingen. Deretter ble blandingen tilbakeløpskokt i 30 minutter. Blandingen ble avkjølt, og saltene ble fjernet ved filtrering. Det resulterende filtrat ble konsentrert under vakuum. Residuet ble oppslemmet i isopropanol og avkjølt i is/vann-bad. Deretter ble heksanet tilsatt, og blandingen ble konsentrert på en rotasjonsinndamper under vakuum inntil en oppslemming ble dannet. Etter filtrering og vasking med heksan ble cyklobutylhydrazin-hydroklorid (1,26 g, 95%) oppnådd som et hvitt, fast stoff, som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 3: Syntese av 1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
Trietylamin (0,35 ml, 2,52 mmol) og cyklobutylhydrazin-hydroklorid (200 mg, 0,84 mmol) ble satt sekvensielt til en løsning av etyl-3-N,N-dimetylamino-2-trifluoracetylakrylat (Mellomprodukt 4, 200 mg, 0,84 mmol) i etanol (4 ml) i et 10 ml Personal Chemistry mikrobølgerør (Biotage AB, Sverige). Røret ble lukket med et septum og ble underkastet 150 W mikrobølgebestråling ved anvendelse av et Personal Chemistry-system for mikrobølgesyntese (Biotage AB, Sverige) ved 160°C i 30 minutter. Etanolen ble avdampet under redusert trykk. Den gjenværende blandingen ble fordelt mellom diklormetan og vann, og vannlaget ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De organiske lag ble samlet, konsentrert under vakuum og renset ved C-18 omvendt fase HPLC med en gradient av 40-80% acetonitril/vann, hvilket ga 1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (117 mg, 53%). LRMS m/z beregnet for C11H14F3N2O2(M+) 263,1 , funnet 263,1.
Trinn 4: Syntese av 1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (117 mg, 0,45 mmol) i metanol (5 ml) og vann (5 ml), ble tilsatt LiOH (13 mg, 0,54 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp natten over, og deretter ble løsningen konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, og løsningen ble surgjort til pH=2 med konsentrert HCl. Den resulterende blandingen ble deretter ekstrahert med etylacetat tre ganger. De samlede organiske ekstrakter ble konsentrert under vakuum, hvilket ga 1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (93 mg, 89%), som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 5: Trans-1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (73 mg, 0,31 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (8 ml) og tørr DMF (2 ml), og TSTU (205 mg, 0,68 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (0,32 ml, 1,86 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2 timer, ble trans-4-amino-adamantan-1-ol-hydroklorid (77 mg, 0,38 mmol, Mellomprodukt 2) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-75% acetonitril/vann, hvilket ga trans-1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (54 mg, 45%). LRMS m/z beregnet for C19H24F3N3O2(M+H) 384,2 , funnet 384,2.
Eksempel 88
Trans-1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (Eksempel 87, Trinn 4, 100 mg, 0,43 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (8 ml) og tørr DMF (2 ml), og TSTU (285 mg, 0,95 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (0,45 ml, 2,58 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 3 timer, ble trans-N-(4-aminoadamantan-1-yl)-acetamid (107 mg, 0,51 mmol fremstilt i Eksempel 43) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann, hvilket ga trans-1-cyklobutyl-5-trifluormetyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (104 mg, 57%). LRMS m/z beregnet for C21H27F3N4O2 (M+H) 425,2 , funnet 425,2.
Eksempel 89
Trans-5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
Trinn 1: Syntese av cyklobutyl-hydrazin
En blanding av N'-cyklobutyliden-hydrazinkarboksylsyre-tert-butylester (24 g, 130 mmol) i vannfri metanol (180 ml) og vannfri THF (120 ml), ble tilsatt natriumcyanoborhydrid (10,3 g, 156 mmol). Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til tilbakeløp i 1 time og ble deretter avkjølt til romtemperatur og omrørt i 30 minutter.6N HCl (56 ml) ble satt dråpevis til reaksjonsblandingen. Deretter ble blandingen tilbakeløpskokt i 1 time. Blandingen ble avkjølt, og de faste stoffene ble fjernet ved filtrering. Det resulterende filtrat ble konsentrert under vakuum. Residuet ble behandlet med trietylamin for å danne en svakt basisk blanding, og blandingen ble fortynnet vann og ekstrahert med etylacetat. Det fraseparerte vandige lag ble ekstrahert tre ganger med etylacetat. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum, hvilket ga rått cyklobutyl-hydrazin (11 g, 98%) som en olje som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 2: Syntese av en blanding av 5-amino-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyreetylester og 3-amino-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding som inneholdt rått cyklobutyl-hydrazin (fra forrige trinn, uten ytterligere rensing; 3,5 g, 40,8 mmol) og etyl-(etoksymetylen)-cyanoacetat (6,9 g, 40,8 mmol) i etanol (140 ml), ble omrørt og tilbakeløpskokt natten over. Løsningen ble avkjølt til romtemperatur, og blandingen ble fortynnet med vann og diklormetan. Det fraseparerte vandige lag ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble vasket med vann og saltløsning og ble deretter tørket med natriumsulfat og filtrert.
Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum, og det rå residuet ble renset ved flashkromatografi ved eluering med en gradient av 0-2% metanol/diklormetan, hvilket ga en blanding av 5-amino-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert først) og 3-amino-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert litt senere) (to isomerer: totalt 5,4 g, 63 %), som ble anvendt som en blanding uten ytterligere separering. LRMS m/z beregnet for C10H15N3O2 (M+H) 210,1 , funnet 210,1.
Trinn 3: Syntese av 5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester og 3-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester
En blanding av tert-butylnitritt (5,1 ml, 38,7 mmol), kobber(I)klorid (3,8 g, 38,7 mmol) og vannfritt acetonitril (100 ml), ble tilsatt en blanding av 5-amino-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester og 3-amino-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (fra forrige trinn, uten ytterligere rensing) i vannfritt acetonitril (50 ml) ved 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ved 60°C i 2 timer.
Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og ble deretter hellet i 6N HCl (50 ml) og ekstrahert med diklormetan. Det vandige laget ble ekstrahert tre ganger med diklormetan. Etter at de samlede organiske lag var konsentrert under vakuum, ble det rå residuet renset ved flash-kromatografi ved eluering med en gradient av 10-20% etylacetat/ heksaner, deretter 20% etylacetat/heksaner. De ønskede fraksjoner ble konsentrert under vakuum og tørket under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert først, 610 mg, 10,3%) og 3-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (eluert senere, 147 mg, 2,5%). LRMS m/z beregnet for C10H13ClN2O2(M+H) 229,1 , funnet 229,1.
Trinn 4: Syntese av 5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre
En løsning av 5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-etylester (182 mg, 0,79 mmol) i metanol (8 ml) og vann (8 ml), ble tilsatt LiOH (23 mg, 0,96 mmol).
Reaksjonsblandingen ble omrørt ved tilbakeløp i 4 timer og ble deretter konsentrert under redusert trykk for å fjerne metanolen. Residuet ble fortynnet med vann, surgjort til pH 2 med konsentrert HCl og ekstrahert med etylacetat. Det organiske laget ble inndampet under vakuum, hvilket ga 5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (148 mg, 94%) som ble anvendt uten ytterligere rensing.
Trinn 5: Syntese av trans-5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre (74 mg, 0,37 mmol) ble oppløst i en blanding av tørr diklormetan (8 ml) og tørr DMF (2 ml), og TSTU (245 mg, 0,81 mmol) ble tilsatt. Deretter ble DIPEA (0,39 ml, 2,22 mmol) satt til blandingen ovenfor. Etter at blandingen var omrørt i 2,5 timer, ble trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (92 mg, 0,44 mmol, fremstilt i Eksempel 43) tilsatt. Etter omrøring natten over ble vann tilsatt, og det organiske laget ble fraseparert. Det vandige laget ble ekstrahert to ganger med diklormetan. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum. Den urensede blandingen ble renset ved C-18 omvendt fase prepative-HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann, hvilket ga trans-5-klor-1-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (120 mg, 83%). LRMS m/z beregnet for C20H27ClN4O2 (M+H) 391,2 , funnet 391,2.
Eksempel 90
Trans-2'-cyklobutyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% dispersjon i mineralolje; 58 mg, 1,44 mmol) ble satt til en løsning av pyrazol (98 mg, 1,44 mmol) i tørr DMF (18 ml) under nitrogen ved 0°C i et is/vann-bad, og blandingen ble oppvarmet til 40°C i 1 time. Trans-1-5-klor-cyklobutyl-1H-pyrazol-4 karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (70 mg, 0,18 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110°C i 48 timer og ble deretter avkjølt til romtemperatur. Etter at DMF var avdampet under vakuum, ble vann og etylacetat tilsatt. Det organiske laget ble fraseparert, og det vandige laget ble ekstrahert tre ganger med etylacetat. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum, og residuet ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann. De ønskede fraksjoner ble konsentrert under vakuum og tørket under vakuum, hvilket ga trans-2'-cyklobutyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (38 mg, 50%). LRMS m/z beregnet for C23H30N6O2(M+H) 423,3 , funnet 423,2.
Eksempel 91
Trans-2'-tert-butyl-4-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% dispersjon i mineralolje; 180 mg, 4,6 mmol) ble langsomt satt til en løsning av 4-metylpyrazol (380 ul, 4,6 mmol) i tørr DMF (30 ml) ved 0°C i et is/vann-bad. Blandingen ble omrørt under argon i 10 minutter, og blandingen ble deretter oppvarmet til 40°C i 1,5 timer. Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid (Eksempel 34, 200 mg, 0,57 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110°C natten over i 3 dager og ble deretter avkjølt. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Den resulterende blandingen ble fortynnet med vann og ekstrahert med kloroform (2X). De organiske lag ble samlet og vasket 3X med vann, fulgt av mettet, vandig natriumklorid-løsning. Det organiske laget ble tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Den resulterende blandingen ble
renset ved kolonnekromatografi ved anvendelse av silikagel og ved eluering med 60-70%
etylacetat i petroleter. De ønskede fraksjoner ble konsentrert under vakuum, hvilket ga
trans-2'-tert-butyl-4-metyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-
yl)-amid som et hvitt, fast stoff (53 mg, 23%); ES(+)-HRMS m/z beregnet for C22H31N5O2
(M+H) 398,2551, funnet 398,2546.
Eksempel 92
Trans-2'-tert-butyl-4-klor-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Denne forbindelsen ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i Eksempel 91 (tidligere
eksempel), bortsett fra at 4-klorpyrazol ble anvendt istedenfor 4-metylpyrazol, hvilket ga
trans-2'-tert-butyl-4-klor-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-
yl)-amid (53%) som et gråhvitt, fast stoff; LRMS m/z beregnet for C21H28ClN5O2(M+H)
418,20, funnet 418,33.
Eksempel 93
Trans-4-brom-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksyadamantan-2-yl)-amid
Denne forbindelsen ble fremstilt på lignende måte som beskrevet i Eksempel 91, bortsett fra at 4-brompyrazol ble anvendt istedenfor 4-metylpyrazol , hvilket ga trans-4-brom-2'-tert-butyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (23%) som et hvitt, fast stoff; ES(+)-HRMS m/z beregnet for C21H28BrN5O2(M+H) 462,1499, funnet 462,1497.
Eksempel 94
Trans-2'-tert-butyl-4-klor-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% i olje; 220 mg, 5,5 mmol) ble langsomt satt til en løsning av 4-klorpyrazol (710 mg, 6,9 mmol) i tørr DMF (40 ml) ved 0°C i et is/vann-bad. Blandingen ble omrørt under argon i 10 minutter, og blandingen ble deretter oppvarmet til 40 °C i 2 timer. Trans-1-tert-butyl-5-klor-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid ( 270 mg, 0,69 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110°C natten over i 2 dager og ble deretter avkjølt. Løsningsmidlet ble fjernet under vakuum. Den resulterende blandingen ble fortynnet med vann og ekstrahert med etylacetat (2X). De organiske lag ble samlet og tørket med magnesiumsulfat, filtrert og konsentrert under vakuum. Det faste stoffet ble oppslemmet i eter, filtrert og tørket under høyvakuum, hvilket ga trans-2'-tert-butyl-4-klor-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid som et hvitt, fast stoff (237 mg, 74%); ES(+)-HRMS m/z beregnet for C23H31ClN6O2 (M+H) 459,2270, funnet 459,2268.
Eksempel 95
Trans-4-klor-2'-cyklobutyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylaminoadamantan-2-yl)-amid
Natriumhydrid (60% i olje; 49 mg, 1,23 mmol) ble satt til en løsning av 4-klor-pyrazol (126 mg, 1,23 mmol) i tørr DMF (16 ml) under nitrogen ved 0°C i et is/vann-bad, og blandingen ble oppvarmet til 40°C i 1 time. Trans-1-5-klor-cyklobutyl-1H-pyrazol-4-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (60 mg, 0,15 mmol) ble tilsatt, og blandingen ble oppvarmet ved 110°C i 48 timer og ble deretter avkjølt til romtemperatur. Etter at DMF var avdampet under vakuum, ble vann og etylacetat tilsatt. Det organiske laget ble fraseparert, og det vandige laget ble ekstrahert tre ganger med etylacetat. De samlede organiske lag ble konsentrert under vakuum, og residuet ble renset ved C-18 omvendt fase preparativ HPLC med en gradient av 10-90% acetonitril/vann. De ønskede fraksjoner ble konsentrert under vakuum og tørket under vakuum, hvilket ga trans-4-klor-2'-cyklobutyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid (42 mg, 62%). LRMS m/z beregnet for C23H29ClN6O2 (M+) 456,2 , funnet 456,2.
Eksempel 96
Trans-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-acetylamino -adamantan-2-yl)-amid
Denne forbindelsen blir fremstilt analogt med trans-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (Eksempel 82), bortsett fra at Mellomprodukt 2 blir erstattet med trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (fremstilt i Eksempel 43).
Eksempel 97
Trans- 4-klor-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-ac etylamino-adamantan-2-yl)-amid
Denne forbindelsen blir fremstilt analogt med trans-4-klor-2'-cyklopropyl-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre-(5-hydroksy-adamantan-2-yl)-amid (Eksempel 83), bortsett fra at Mellomprodukt 2 blir erstattet med trans-N-(4-amino-adamantan-1-yl)-acetamid (fremstilt i Eksempel 43).
Eksempel 98
Trans- 4-klor-2'-(2-metoksy-etyl)-2'H-[1,3']bipyrazolyl-4'-karboksylsyre
(5-acetylamino-adamantan-2-yl)-amid
Denne forbindelsen blir fremstilt analogt med trans-2’-(2-metoksyetyl)-2’H-[1,3’]bipyrazolyl-4’-karboksylsyre(5-acetylamino-adamantan-2-yl-amid (Eksempel 75), bortsett fra at pyrazol blir erstattet med 4-klorpyrazol.
Eksempel 99
Testing av forbindelser ifølge oppfinnelsen in vitro
In vitro inhibering av 11β-HSD1 med forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, ble demonstrert ved hjelp av de følgende protokoller for celleforsøk:
Humant Hek-forsøk:
HEK-293-celler som var stabilt transfektert med humant 11betaHSD1-cDNA av full lengde, ble formert i DMEM-media med høyt innhold av glukose (Invitrogen kat.nr.11995-065), supplert med 10% FCS (Invitrogen kat.nr.10082-147), pen/strep (10 µg/ml) og geneticin (10 µg/ml). Én dag før forsøket ble cellene løsnet fra kolben ved anvendelse av trypsin/EDTA og ble sentrifugert og vasket med utplatingsmedia (DMEM med høyt innhold av glukose, uten fenolrødt; Invitrogen kat.nr.21063-029, supplert med 2% trekull-strippet FCS; Gemini kat.nr. A22311P). Fra en suspensjon på 250.000 celler/ml i utplatingsmedia ble 200 µl celler podet i hver brønn i en 96-brønners, belagt plate (BioCoat kat.nr.356461) og ble dyrket natten over ved 37 °C. Neste dag ble seriefortynnede 11betaHSD-1-inhibitorforbindelser oppløst i DMSO, satt til utplatingsmedia supplert med BSA (endelig konsentrasjon på 2 mg/ml). Den endelige DMSO-konsentrasjon var 1%. Media ble sugd opp fra platene, og forbindelser i media ble satt til hver brønn. Platene ble inkubert ved 37 grader C i 1 time for å tillate celleopptak av forbindelser.10 µl substrat (kortison) ble deretter satt til hver brønn (endelig konsentrasjon på 100 nM) og ble inkubert i 1 time ved 37 ̊C. Platene ble deretter overført til is, og 80 µl media ble overført til en 96-brønners plate og lagret ved -30°C.
Kvantifisering av kortisol i cellemedia ble utført ved kompetitiv ELISA ved anvendelse av ELISA-Light (Tropix kat.nr. T10206/EL100S4), anti-kortisol-EIA-antistoff (Assay Designs, Inc. kat.nr.80-1148) og kortisol-enzym-konjugat (Assay Designs, Inc. kat.nr.80-1147).
384-brønners plater (Falcon kat.nr.3988) ble forhåndsbelagt med anti-mus-IgG (Sigma kat.nr. M-1397) oppslemmet i 0,9% NaCl (5 mg/ml), 50 µl pr. brønn, natten over ved 4 ⁰C. Platene ble vasket med PBS, 0,1% Tween-20, og ble deretter vasket med kun PBS.
Platene ble blokkert med Blocking Buffer (Tropix kat.nr. AI075) i 2 timer ved romtemperatur. Platene ble deretter vasket som tidligere beskrevet. Forsøksprøver ble tint, fortynnet 1:4 i DMEM, 2 mg/ml BSA, 1% DMSO, og 24 µl ble overført til brønner i en forhåndsbelagt, 384-brønners plate, samt varierende mengder av kortisol-standard. Hver brønn ble tilsatt 12 µl kortisol-konjugat og 12 µl anti-kortisol-EIA antistoff og ble inkubert i 2 timer ved romtemperatur på en orbital platerister. Brønnene ble deretter tømt ved inversjon og ble deretter vasket tre ganger med 100 µl Washing Buffer (Tropix) og 2 ganger med 100 µl Assay Buffer (Tropix).60 µl CDP-STAR (Tropix) ble satt til hver brønn, som ble inkubert i 10 minutter ved romtemperatur. Kjemiluminescens ble målt ved anvendelse av en leser av typen Victor V (Perkin Elmer). Kortisol i hver prøve ble interpolert fra en standardkurve dannet med kjente mengder kortisol. IC50-verdier ble beregnet ved anvendelse av en programvare for kurvetilpasning XLFit3 (IDBS).
Humant H4IIE-forsøk:
Celler:
H4IIe-celler som var stabilt transfektert med det humane 11-β-HSD1-cDNA (humH4IIe), ble oppbevart i Dulbecco’s Modified Essential Medium (DMEM) 10% føtalt bovint serum (FBS) som inneholdt penicillin (100 IU/ml) og streptomycin (100 µg/ml), geneticin (800µg/ml) og L-glutamin (2 mM), ved 37<o>C i en fuktig atmosfære (95% luft, 5% CO2).
Preparering av cellene før forsøket:
HumH4IIe-celler ved 80% konfluens i en 225 cm<2>kolbe, ble vasket med PBS og ble deretter løsnet med varm trypsin/EDTA. Cellene ble tellet og oppslemmet i Dulbecco’s Modified Essential Medium uten fenolrødt (DMEM) som inneholdt 2% strippet serum, i en konsentrasjon på 100.000 celler pr.200 3 µl, og ble platet i en 96-brønners cellekulturplate (forhåndsbelagt med polylysin). Cellene ble inkubert natten over ved 37<o>C i en fuktig atmosfære (95% luft, 5% CO2).
Forsøk med steroidomdanning:
Omdanningsforsøk ble utført én dag etter poding i 96-brønners plater. Media ble fjernet og erstattet med 100 ul Dulbecco’s Modified Essential Medium uten fenolrødt (DMEM) som inneholdt 2 mg/ml bovint serumalbumin (BSA) 1% DMSO eller testforbindelse oppløst i DMSO.
Cellene ble inkubert med testforbindelse i 60 minutter ved 37<o>C i en fuktig atmosfære (95% luft, 5% CO2). Etter 60 minutter ble kortison tilsatt til en endelig konsentrasjon på 200 nM, og cellene ble inkubert i 120 minutter ved 37<o>C i en fuktig atmosfære (95% luft, 5% CO2).
Reaksjonen ble stanset ved overføring av 80 µl media til en tom 96-brønners plate. Prøver ble lagret ved -20<o>C inntil de ble undersøkt med hensyn til kortisol-konsentrasjon ved anvendelse av en ELISA-metode.
Resultatene fra celleforsøket beviser in vitro inhibering av 11β-HSD1 ved representative forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse og er vist i følgende tabell:
NO20083863A 2006-03-22 2008-09-09 Pyrazoler, farmasøytisk preparat inneholdende samme, slike forbindelser som terapeutisk aktive substanser samt slike forbindelser for anvendelse i behandling av sykdommer NO341746B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US78483106P 2006-03-22 2006-03-22
US87527406P 2006-12-15 2006-12-15
PCT/EP2007/052269 WO2007107470A2 (en) 2006-03-22 2007-03-12 Pyrazoles as 11-beta-hsd-1

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20083863L NO20083863L (no) 2008-12-03
NO341746B1 true NO341746B1 (no) 2018-01-15

Family

ID=38430507

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20083863A NO341746B1 (no) 2006-03-22 2008-09-09 Pyrazoler, farmasøytisk preparat inneholdende samme, slike forbindelser som terapeutisk aktive substanser samt slike forbindelser for anvendelse i behandling av sykdommer

Country Status (30)

Country Link
US (1) US7728029B2 (no)
EP (2) EP1999114B1 (no)
JP (1) JP5031817B2 (no)
KR (2) KR20110007258A (no)
CN (1) CN101405270B (no)
AR (1) AR059983A1 (no)
AU (1) AU2007228887B2 (no)
BR (1) BRPI0708974A2 (no)
CA (1) CA2645856C (no)
CR (1) CR10288A (no)
DK (1) DK1999114T3 (no)
EC (1) ECSP088747A (no)
ES (1) ES2548002T3 (no)
HK (1) HK1130780A1 (no)
HR (1) HRP20151078T1 (no)
HU (1) HUE026011T2 (no)
IL (1) IL193900A (no)
MA (1) MA30344B1 (no)
MX (1) MX2008012017A (no)
MY (1) MY149622A (no)
NO (1) NO341746B1 (no)
NZ (1) NZ570973A (no)
PL (1) PL1999114T3 (no)
PT (1) PT1999114E (no)
RS (1) RS54216B1 (no)
RU (2) RU2402517C2 (no)
SG (1) SG155961A1 (no)
SI (1) SI1999114T1 (no)
TW (2) TW201103916A (no)
WO (1) WO2007107470A2 (no)

Families Citing this family (48)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102659659B (zh) 2005-11-21 2014-07-23 盐野义制药株式会社 具有I型11β羟基类固醇脱氢酶抑制活性的杂环化合物
EP2610241A1 (en) * 2006-11-02 2013-07-03 Shionogi & Co., Ltd. Process for production of hydroxyadamantaneamine
TW200827346A (en) 2006-11-03 2008-07-01 Astrazeneca Ab Chemical compounds
US20100144717A1 (en) * 2006-12-15 2010-06-10 Janelle Comita-Prevoir 2-quinolinone and 2-quinoxalinone-derivatives and their use as antibacterial agents
TW200836719A (en) 2007-02-12 2008-09-16 Astrazeneca Ab Chemical compounds
CA2689659C (en) * 2007-05-18 2012-10-23 Shionogi And Co., Ltd. Nitrogen-containing heterocyclic derivative having 11.beta.-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 inhibitory activity
EP2178845B1 (en) * 2007-07-17 2013-06-19 F. Hoffmann-La Roche AG Inhibitors of 11b-hydroxysteroid dehydrogenase
EP2025674A1 (de) 2007-08-15 2009-02-18 sanofi-aventis Substituierte Tetrahydronaphthaline, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung als Arzneimittel
EP2072497A1 (de) * 2007-12-21 2009-06-24 Bayer CropScience AG Verfahren zum Herstellen von 2-Fluoracyl-3-amino-acrylsäure-Derivaten
AU2009211215B2 (en) * 2008-02-04 2011-11-03 Astrazeneca Ab Novel crystalline forms of 4- [4- (2-adamantylcarbam0yl) -5-tert-butyl-pyrazol-1-yl] benzoic acid
CN102300851A (zh) * 2009-01-30 2011-12-28 阿斯利康(瑞典)有限公司 制备含羧基的吡唑酰氨基化合物597的新方法
EP2243479A3 (en) 2009-04-20 2011-01-19 Abbott Laboratories Novel amide and amidine derivates and uses thereof
US8871208B2 (en) * 2009-12-04 2014-10-28 Abbvie Inc. 11-β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 (11β-HSD1) inhibitors and uses thereof
JP5686413B2 (ja) * 2009-12-22 2015-03-18 塩野義製薬株式会社 アダマンタンアミン誘導体
CN102127583A (zh) * 2010-01-19 2011-07-20 上海博康精细化工有限公司 一种反式对氨基金刚烷醇的制备方法
WO2011107494A1 (de) 2010-03-03 2011-09-09 Sanofi Neue aromatische glykosidderivate, diese verbindungen enthaltende arzneimittel und deren verwendung
US8680098B2 (en) 2010-03-05 2014-03-25 Janssen Pharmaceutica, Nv Substituted aza-bicyclic imidazole derivatives useful as TRPM8 receptor modulators
US8933024B2 (en) 2010-06-18 2015-01-13 Sanofi Azolopyridin-3-one derivatives as inhibitors of lipases and phospholipases
US8530413B2 (en) 2010-06-21 2013-09-10 Sanofi Heterocyclically substituted methoxyphenyl derivatives with an oxo group, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
TW201215387A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Aventis Spirocyclically substituted 1,3-propane dioxide derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as a medicament
TW201215388A (en) 2010-07-05 2012-04-16 Sanofi Sa (2-aryloxyacetylamino)phenylpropionic acid derivatives, processes for preparation thereof and use thereof as medicaments
TW201221505A (en) 2010-07-05 2012-06-01 Sanofi Sa Aryloxyalkylene-substituted hydroxyphenylhexynoic acids, process for preparation thereof and use thereof as a medicament
US8901316B2 (en) 2010-08-09 2014-12-02 Shionogi & Co., Ltd. Process for preparing aminoadamantyl carbamate derivatives
JP5605104B2 (ja) * 2010-09-10 2014-10-15 セントラル硝子株式会社 ピラゾール化合物の製造方法
US8901114B2 (en) 2011-03-08 2014-12-02 Sanofi Oxathiazine derivatives substituted with carbocycles or heterocycles, method for producing same, drugs containing said compounds, and use thereof
WO2012120056A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Tetrasubstituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
WO2012120055A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Di- und trisubstituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
WO2012120054A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Di- und trisubstituierte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
WO2012120053A1 (de) 2011-03-08 2012-09-13 Sanofi Verzweigte oxathiazinderivate, verfahren zu deren herstellung, ihre verwendung als medikament sowie sie enthaltendes arzneimittel und deren verwendung
US8471027B2 (en) 2011-04-06 2013-06-25 Hoffmann-La Roche Inc. Adamantyl compounds
JP5915004B2 (ja) * 2011-06-22 2016-05-11 セントラル硝子株式会社 ピラゾール化合物の製造方法
US9012657B2 (en) 2011-06-22 2015-04-21 Central Glass Company, Limited Method for producing pyrazole compound
JP2013023476A (ja) * 2011-07-22 2013-02-04 Sagami Chemical Research Institute ５−フルオロ−１ｈ−ピラゾール−４−カルボン酸類の製造方法
WO2013037390A1 (en) 2011-09-12 2013-03-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-styryl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
EP2760862B1 (en) 2011-09-27 2015-10-21 Sanofi 6-(4-hydroxy-phenyl)-3-alkyl-1h-pyrazolo[3,4-b]pyridine-4-carboxylic acid amide derivatives as kinase inhibitors
WO2013080141A1 (en) 2011-11-29 2013-06-06 Novartis Ag Pyrazolopyrrolidine compounds
JP2015504442A (ja) * 2011-11-30 2015-02-12 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌性ｎ−ビシクロアルキルおよびｎ−トリシクロアルキル（チオ）カルボキサミド誘導体
CN102633659B (zh) * 2012-02-23 2013-12-04 浙江普洛康裕制药有限公司 一种反式4-氨基-1-羟基金刚烷盐酸盐的合成方法
CA2900029C (en) 2013-02-06 2021-03-02 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Halogen-substituted pyrazol derivatives as pest-control agents
CA2917987C (en) 2013-07-24 2018-07-17 Volvo Construction Equipment Ab Hydraulic circuit for construction machine
EP3083565B1 (en) 2013-11-27 2020-12-23 Bayer Animal Health GmbH Process for the preparation of 5-fluoro-1h-pyrazoles
BR112016011890B1 (pt) 2013-11-27 2021-11-16 Bayer Animal Health Gmbh Processo para preparação de 5-fluoro-1h-pirazóis
RU2016131792A (ru) 2014-01-03 2018-02-06 Байер Энимэл Хельс ГмбХ Новые пиразолил-гетероариламиды в качестве средств для борьбы с вредителями
CN105315284A (zh) * 2014-07-23 2016-02-10 上海医药工业研究院 阿拉格列汀中间体的制备方法
CN104961698A (zh) * 2015-07-13 2015-10-07 佛山市赛维斯医药科技有限公司 末端硝基取代的三氮唑亚砜类化合物、其制备方法及其用途
KR101759874B1 (ko) * 2015-08-07 2017-07-21 코스맥스 주식회사 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 1의 활성을 저해하는 화합물을 포함하는 화장료 조성물 또는 피부 외용제 조성물
WO2020242946A1 (en) * 2019-05-24 2020-12-03 Fmc Corporation Pyrazole-substituted pyrrolidinones as herbicides
WO2024118348A1 (en) * 2022-11-29 2024-06-06 Mirati Therapeutics, Inc. Processes and intermediates for synthesis of mrtx0902

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004089896A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-21 Novo Nordisk A/S 11β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE TYPE 1 ACTIVE COMPOUNDS
NO20074872L (no) * 2005-04-05 2007-10-30 Hoffmann La Roche Pyrazoler

Family Cites Families (55)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CH307629A (de) 1952-05-23 1955-06-15 Ag J R Geigy Verfahren zur Herstellung eines monosubstituierten Hydrazins.
DE2635841C2 (de) 1976-08-10 1983-02-24 Dynamit Nobel Ag, 5210 Troisdorf Verfahren zur Herstellung von Alkoxymethylenmalonsäurenitrilen
US4620865A (en) 1983-11-07 1986-11-04 Eli Lilly And Company Herbicidal and algicidal 1,5-disubstituted-1H-pyrazole-4-carboxamides
US4742074A (en) 1984-10-29 1988-05-03 Sumitomo Chemical Company, Limited Pyrazolecarboxamide derivative and fungicide containing it as active ingredient
US4792565A (en) 1986-04-24 1988-12-20 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Pyrazolecarbonylamine derivatives and agricultural and horticultural fungicides containing said compounds
DE4010797A1 (de) 1990-04-04 1991-10-10 Hoechst Ag Substituierte azole, verfahren zu deren herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung
US6020121A (en) 1995-09-29 2000-02-01 Microcide Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of regulatory pathways
DE19615976A1 (de) 1996-04-22 1997-10-23 Basf Ag Mittel und Verfahren zur Bekämpfung von Schadpilzen
WO1998041519A1 (en) 1997-03-18 1998-09-24 Smithkline Beecham Corporation Novel cannabinoid receptor agonists
BR9813669B1 (pt) 1997-12-18 2014-01-14 Mistura fungicida, e, processo para controlar fungos nocivos
WO1999067235A1 (fr) 1998-06-25 1999-12-29 Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. Composes cycliques a cinq elements
GB9824310D0 (en) 1998-11-05 1998-12-30 Univ London Activators of soluble guanylate cyclase
DE19853827A1 (de) 1998-11-21 2000-05-25 Aventis Cropscience Gmbh Kombinationen aus Herbiziden und Safenern
US20010044445A1 (en) 1999-04-08 2001-11-22 Bamaung Nwe Y. Azole inhibitors of cytokine production
US6331539B1 (en) 1999-06-10 2001-12-18 3M Innovative Properties Company Sulfonamide and sulfamide substituted imidazoquinolines
IL136360A (en) 1999-06-18 2004-08-31 Mitsui Chemicals Inc History 5 - Aminopyrazole-4 - Carboxylate and processes for their preparation
PL206415B1 (pl) 1999-07-20 2010-08-31 Dow Agrosciences Llc Heterocykliczny amid aromatyczny, kompozycja grzybobójcza heterocyklicznego amidu aromatycznego oraz sposób zwalczania lub zapobiegania zakażeniom grzybami
CZ2002487A3 (cs) 1999-08-20 2002-06-12 Dow Agrosciences Llc Fungicidní heterocyklické aromatické amidy, prostředky na jejich bázi, způsoby jejich pouľití a přípravy
CA2387892A1 (en) 1999-10-18 2001-04-26 University Of Connecticut Pyrazole derivatives as cannabinoid receptor antagonists
US6096898A (en) 1999-10-22 2000-08-01 Dow Agrosciences Llc One pot synthesis of 1,2,4-triazoles
US6569885B1 (en) 1999-12-23 2003-05-27 Icos Corporation Cyclic AMP-specific phosphodiesterase inhibitors
JP2002003410A (ja) 2000-06-27 2002-01-09 Fuji Photo Film Co Ltd 芳香族ハロゲン化物の製造方法。
EP1337508A1 (en) 2000-11-28 2003-08-27 Pfizer Products Inc. Preparation of sodium-hydrogen exchanger type-1 inhibitors
TWI243164B (en) 2001-02-13 2005-11-11 Aventis Pharma Gmbh Acylated indanyl amines and their use as pharmaceuticals
PE20020856A1 (es) 2001-02-13 2002-11-11 Aventis Pharma Gmbh 1,2,3,4-tetrahidronaftil aminas aciladas
PE20020870A1 (es) 2001-02-13 2002-11-18 Aventis Pharma Gmbh 6,7,8,9-tetrahidro-5h-benzocicloheptenil aminas aciladas
CA2460594A1 (en) 2001-10-01 2003-04-10 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. Mch receptor antagonists
ES2338539T3 (es) 2001-11-01 2010-05-10 Icagen, Inc. Pirazolamidas para uso en el tratamiento del dolor.
DE10161978A1 (de) 2001-12-17 2003-06-26 Bayer Ag Verfahren zur Herstellung von 2-Halogenacyl-3-amino-acrylsäure-derivate
EP1456181A1 (en) 2001-12-19 2004-09-15 Pfizer Products Inc. Methods for preparing sodium-hydrogen exchanger type-1 inhibitors
US6818772B2 (en) 2002-02-22 2004-11-16 Abbott Laboratories Antagonists of melanin concentrating hormone effects on the melanin concentrating hormone receptor
WO2003070244A1 (en) 2002-02-22 2003-08-28 Abbott Laboratories Antagonist of melanin concentrating hormone and their uses
US20030236287A1 (en) 2002-05-03 2003-12-25 Piotrowski David W. Positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholine receptor
EP1388535A1 (en) 2002-08-07 2004-02-11 Aventis Pharma Deutschland GmbH Acylated arylcycloalkylamines and their use as pharmaceuticals
AU2003265398A1 (en) 2002-08-09 2004-02-25 Transtech Pharma, Inc. Aryl and heteroaryl compounds and methods to modulate coagulation
RU2360910C2 (ru) * 2002-12-20 2009-07-10 Мерк Энд Ко., Инк. Производные триазола как ингибиторы 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы-1
ATE340782T1 (de) 2003-02-17 2006-10-15 Hoffmann La Roche Piperidinbenzolsulfonamidderivate
WO2004089416A2 (en) 2003-04-11 2004-10-21 Novo Nordisk A/S Combination of an 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 inhibitor and an antihypertensive agent
WO2004089415A2 (en) 2003-04-11 2004-10-21 Novo Nordisk A/S COMBINATIONS OF AN 11β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE TYPE 1 INHIBITOR AND A GLUCOCORTICOID RECEPTOR AGONIST
US20040220170A1 (en) 2003-05-01 2004-11-04 Atkinson Robert N. Pyrazole-amides and sulfonamides as sodium channel modulators
PT1618092E (pt) 2003-05-01 2010-11-22 Bristol Myers Squibb Co Compostos de pirazol-amida substituídos com arilo úteis enquanto inibidores de cinase
WO2005000793A1 (ja) 2003-06-26 2005-01-06 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. ２位置換シクロアルキルカルボン酸誘導体
ATE517872T1 (de) 2003-06-26 2011-08-15 Novartis Ag Fünfgliedrige p38-kinaseinhibitoren auf heterocyclusbasis
CN1832741A (zh) 2003-08-07 2006-09-13 默克公司 作为11－β－羟甾类脱氢酶－1抑制剂的吡唑甲酰胺类
WO2005020897A2 (en) 2003-08-22 2005-03-10 Dendreon Corporation Compositions and methods for the treatment of disease associated with trp-p8 expression
CA2545711A1 (en) 2003-11-13 2005-06-02 Ambit Biosciences Corporation Urea derivatives as kinase modulators
KR100857312B1 (ko) 2004-01-28 2008-09-05 미쓰이 가가쿠 가부시키가이샤 아미드 유도체 및 그 제조 방법 및 그의 살충제로서의 사용 방법
US20090036448A1 (en) 2004-03-30 2009-02-05 Taisho Pharmecutical Co., Ltd. Pyrimidine derivatives and methods of treatment related to the use thereof
DE102004023635A1 (de) 2004-05-10 2006-04-13 Grünenthal GmbH Heteroarylsubstituierte Cyclohexyl-1,4-diamin-Derivate
WO2006007864A1 (en) 2004-07-17 2006-01-26 Max Planck Geselllschaft Zur Förderung Der Wissenschaft Treating neurodegenerative conditions
GB0417910D0 (en) 2004-08-11 2004-09-15 Novartis Ag Organic compounds
US20060100226A1 (en) 2004-09-10 2006-05-11 Sikorski James A 2-Thiopyrimidinones as therapeutic agents
US20080090863A1 (en) 2004-09-30 2008-04-17 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. Pyridine Derivatives and Their Use as Medicaments for Treating Diseases Related to Mch Receptor
GB0506133D0 (en) 2005-03-24 2005-05-04 Sterix Ltd Compound
CN102659659B (zh) * 2005-11-21 2014-07-23 盐野义制药株式会社 具有I型11β羟基类固醇脱氢酶抑制活性的杂环化合物

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2004089896A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-21 Novo Nordisk A/S 11β-HYDROXYSTEROID DEHYDROGENASE TYPE 1 ACTIVE COMPOUNDS
NO20074872L (no) * 2005-04-05 2007-10-30 Hoffmann La Roche Pyrazoler

Also Published As

Publication number Publication date
HK1130780A1 (en) 2010-01-08
PT1999114E (pt) 2015-10-16
CA2645856C (en) 2011-09-20
KR20090005015A (ko) 2009-01-12
HRP20151078T1 (hr) 2015-11-20
EP1999114A2 (en) 2008-12-10
BRPI0708974A2 (pt) 2011-06-21
EP2295411A1 (en) 2011-03-16
DK1999114T3 (en) 2015-08-03
TW201103916A (en) 2011-02-01
US20070225280A1 (en) 2007-09-27
MA30344B1 (fr) 2009-04-01
JP5031817B2 (ja) 2012-09-26
RU2010119648A (ru) 2011-11-27
EP1999114B1 (en) 2015-07-22
MY149622A (en) 2013-09-13
RU2470016C2 (ru) 2012-12-20
SI1999114T1 (sl) 2015-10-30
NO20083863L (no) 2008-12-03
MX2008012017A (es) 2008-10-01
US7728029B2 (en) 2010-06-01
AR059983A1 (es) 2008-05-14
ES2548002T3 (es) 2015-10-13
CN101405270A (zh) 2009-04-08
WO2007107470A2 (en) 2007-09-27
KR20110007258A (ko) 2011-01-21
PL1999114T3 (pl) 2015-12-31
KR101077366B1 (ko) 2011-10-26
WO2007107470A3 (en) 2007-11-08
IL193900A (en) 2013-08-29
JP2009530343A (ja) 2009-08-27
RU2008141434A (ru) 2010-04-27
HUE026011T2 (en) 2016-05-30
RS54216B1 (en) 2015-12-31
RU2402517C2 (ru) 2010-10-27
ECSP088747A (es) 2008-10-31
TWI351403B (en) 2011-11-01
NZ570973A (en) 2011-11-25
SG155961A1 (en) 2009-10-29
CN101405270B (zh) 2013-01-16
CA2645856A1 (en) 2007-09-27
AU2007228887B2 (en) 2012-02-02
CR10288A (es) 2008-10-06
AU2007228887A1 (en) 2007-09-27
TW200806651A (en) 2008-02-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO341746B1 (no) Pyrazoler, farmasøytisk preparat inneholdende samme, slike forbindelser som terapeutisk aktive substanser samt slike forbindelser for anvendelse i behandling av sykdommer
EP1928840B1 (en) 1H-Pyrazole-4-carboxamides, their preparation and their use as 11-beta-hydroxysteroid dehydrogenase inhibitors
EP2178845B1 (en) Inhibitors of 11b-hydroxysteroid dehydrogenase

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees