NO318696B1

NO318696B1 - Ernærings- eller mattilskuddsblanding samt anvendelse derav, for fremstilling av doseringsform.

Info

Publication number: NO318696B1
Application number: NO984591A
Authority: NO
Inventors: Mark Empie; Eric Gugger
Original assignee: Archer Daniels Midland Co
Priority date: 1997-10-02
Filing date: 1998-10-01
Publication date: 2005-04-25
Also published as: US6391309B1; US6395279B1; TWI241893B; US20020168433A1; AU748832B2; US20030064938A1; IL126433A; DE69825003T2; EP1466609A1; NZ332131A; CA2249501C; IL126433A0; ATE270894T1; JPH11221048A; NO984591L; AU8787998A; DE69825003D1; KR20010071086A; KR19990066785A; ATE443521T1

Abstract

Det fremstilles en blanding ved å ekstrahere fytokjemikalier fra plantemateriale. Denne blandingen anrikes fortrinnsvis med hensyn til isoflavoner, lignaner, saponiner, katekiner og fenolsyrer. Soya er den foretrukne kilde for disse kjemikaliene, men andre planter som feks. rødkløver, kudzu, lin og kakao, kan også benyttes. Blandingen utgjør et diettsupplement for behandling av forskjellige cancere,. pre- og post-menstruelle syndromer og diverse andre forstyrrelser.

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører ernærings- eller mattilskuddsblanding samt anvendelse derav, for fremstilling av doseringsform.

Oppfinnelse vedrører blandinger ekstrahert fra vegetabilsk materiale, nærmere bestemt fytokjemikalier, inklusive saponiner, lignaner, fenolsyrer, katekiner og isoflavoner, spesielt slike ekstrahert fra en plantefamilie som innbefatter soya, lin, te og kakao, samt anvendelse av disse forbindelsene som næringssupplement eller næringsmiddel-tilsetninger.

Det er kjent at plantematerialer inneholder en rekke klasser av lavmolekylære organiske forbindelser som bevirker bioaktivitet i forskjellige dyr. I historisk sammenheng har disse forbindelsene vært ansett å være av liten næringsverdi, men senere forskning tyder på at disse forbindelsene kan spille en viktig rolle ved opprettholdelse av helse, ved kjemoprevensjon og ved lindring av visse tilstander eller sykdommer assosiert med sirkulasjonen av kjønnshormoner, inklusivt søvnforstyrrelser og vaginal tørrhet.

Spiselige planter som normalt inngår i dietten, eller materialer benyttet som urtemedisin/diettsupplement, kan inneholde en samling av strukturelt beslektede forbindelser. Når ulike plantekilder sammenlignes, er disse beslektede substansene ofte unike med hensyn til mengder og fordeling. De mest bemerkelsesverdige grupper av forbindelser som oppviser bioaktivitet, er kjent som flavonoider, isoflavoner, saponiner, lignaner, alkaloider, katekiner og fenolsyrer.

Epidemiologiske studier hvor diett sammenholdes med sykdom, tyder på at komponenter i dietten kan gjøre populasjoner mindre risikoutsatt for enkelte sykdommer. Folk i det fjerne østen som bruker soya, har redusert forekomst av bryst-, prostata- og tykktarmskreft og av koronar hjertesykdom, mens folk i Finland har redusert forekomst av prostatakreft. Forskere studerer nå spesifikke forbindelser i dietten for å finne grunnlaget for de epidemiologiske observasjonene.

Blant de ulike planter som inngår i dietten er flere rike fytokjemikaliekilder. Soyaprodukter inneholder store mengder isoflavoner og saponiner. Uraffinerte korndietter innbefatter planter som hvete, psyllium, ris, lin og havre, som inneholder lignaner. Kakao inneholder katekiner og fenolsyrer. Enkelte planter som ikke inngår i dietten, så som lignaner og isoflavoner i kudzu-rot eller rødkløver, utgjør også kilder til de samme kjemiske molekylene. Isoflavoner og lignaner virker som svake østrogene substanser. Te er en plante som også er rik på fytokjemikalier, inklusivt katekiner og fenolsyrer.

Isoflavoner kan benyttes som sådanne for å behandle eller forhindre brystkreft, prostatakreft, hudkreft og tykktarmskreft, eller som mekanisme-inhibitorer. Isoflavoner som sådanne kan også redusere eller forhindre forskjellige symptomer relatert til inntreden og varighet av menopause, inklusivt hetetokter og osteoporose. Isoflavoner som sådanne kan også være virksomme ved enkelte kardiovaskulære anvendelser, inklusivt ved hjertesykdom, ved reduksjon av kolesterol-lipidnivået, ved modulering av angiogenese, og kan ha andre vaskulære virkninger. Dessuten kan isoflavoner som sådanne være implisert i reduksjon av hodepine, demens, inflammasjon og alkoholmisbruk, så vel som immunmodulasjon.

Lignaner så sådanne har vært antatt implisert i forhindring eller behandling av brystkreft, prostatakreft og tykktarmskreft, så vel som til å redusere hetetokter, forhindre osteoporose og ved å oppvise antivirale egenskaper. Lignaner har også anti-mitotisk og fungicid virkning. Et plantelignan, den katekoliske nordihydroguajaretinsyre, var i sin tid anvendt av næringsmiddelindustrien som en potent antioksydant.

Saponiner som sådanne har vært antatt implisert ved forhindring eller behandling av hudkreft og tykktarmskreft, ved reduksjon av serumkolesterol og ved immunmodulering og antiviral aktivitet. Saponiner oppviser også antioksydant-effekter og virker også som oppfangere av frie radikaler.

Fenolsyrer har vist seg å ha antioksydant virkning.

Folk som spiser soyarik kost oppviser reduksjon av mange av ovennevnte symptomer. Dette tyder på at inntak av en kombinasjon av disse fytokjemikaliene i et slikt forhold som det man finner i soya, kan resultere i en additiv eller synergistisk effekt. En soyarik diett har imidlertid enkelte uønskede virkninger, så som flatulens, ugunstig smak og en nølen blant konsumenter i vesten til å legge om livsstilen til å innlemme soya i kosten, selv for å oppnå de nevnte fordeler.

Isoflavoner, som er heterocykliske fenoler, innbefatter soyaforbindelsene genistin, daidzin og glycitein, så vel som biochanin A, equol, formononetin og o-desmetylangolensin og naturlige derivater derav. Disse forbindelsene og deres aglykon- eller demetylerte aglykon-former, så som genistein og daidzein, antas å ha lignende virkninger når de er inntatt. De omtales iblant som fytoøstrogener.

Lignaner defineres som forbindelser som har en 2,3-dibenzylbutanstruktur. De omfatter matairesinol, secoisolariciresinoi, lariciresinol, isolariciresinol, nordihydroguajaretinsyre, pinoresinol, olivil, andre forbindelser som kan være forløpere av enterolakton og enterodiol og modifikasjoner derav, inklusivt diglukosider.

Fenolsyrer innbefatter p-hydrobenzoesyre, protocatechuinsyre og vanillinsyre. Andre fenolsyrer er klorogensyre, koffeinsyre, ferulasyre, gallussyre, sennepsyre, syringinsyre, kumarinsyre, kanelsyre, genticinsyre, salisylsyre, hydroksybenzoesyre og hydroksyfenyleddiksyrer og derivater. Denne liste over fenolsyrer skal inkludere de ulike isomerer og derivater som forekommer i den naturlige vegetabilske kilde.

Katekiner, eller flavan-3-oler, innbefatter epigallokatekin, katekin, epikatekin og gallokatekin.

Saponogeniner er C-27-steroler, hvor sidekjeden har vært gjenstand for metabolske endringer slik at det dannes et spiroketal. Saponogeniner forekommer naturlig som saponiner, som er 3-O-glykosider av opphavssteroidet, eller triterpener. Digitonin fra Digitalis er et saponin. Saponiner innbefatter glukosider av sapogenin, så som triterpenoider eller steroider og sakkarider som glukose, arabinose, galaktose eller glukuronsyre. Typiske eksempler på legumin-saponiner er glyzyrrhizin (glycyrrhetinsyre + glukuronsyre) som finnes i Glycyrrhiza glabra, soyasaponin som finnes i soyabønne, og alfalfasaponin som finnes i Medicago sativa. Saponiner omfatter også kjemiske enheter identifisert som triterpenfenoler, så som tomatin, soyasapogenolene A, B, C, D, E og F, ginsengosid fraksjon 3 og 4, medikagensyre, hederagenin, giycyrrhizin, digitonin, quillaja saponin, lucernsyre og zahninsyre. De naturlige modifikasjonene av disse forbindelsene som finnes i de vegetabilske kildene, hører også inn her.

WO 97/32593 beskriver en blanding inneholdende isoflavonoider og lignaner fra soya.linfrø eller rug, men beskriver ikke noe mellom-fraksjonseringstrinn. Blandingen er heller anvendt til fremstilling av kjeks som har en totalvekt på 25-30 g og typisk tilveiebringer 20-30 mg isoflavonoider og 3-4 mg lignaner per dag til en pasient. Internasjonal patentsøknad WO 97/07811 beskriver soyamelasse fremstilt ved en vandig alkoholekstraksjon eller avfettet soyabønnemateriale og deres anvendelse som dyrefdringrediens. US patent 4 428 876 beskriver en fremgangsmåte for isolering av saponiner og flavonoider fra plantemateriale. Europeisk patentsøknad nr. 0 795 553 beskriver fremstilling av isoflavonanrikede fraksjoner fra soyaproteinekstrakt.

Disse referansene er motsatt av foreliggende oppfinnelse. For eksempel fremstilles blandingen ifølge foreliggende oppfinnelse ved fraksjonering av plantemateriale. Videre er mengdene av isoflavonoider spesifisert i WO 07/32593 (20 til 30 mg i en 25-30 g kjeks) langt under den nedre grensen av isoflavoner som trengs. Blandingen i henhold til WO 07/07811 inneholder fortsatt alle bestanddelene av melasse, inkludert karbohydrater slik som oligosakkaridene stachyose og raffinose, hvilke bestanddeler ikke er inneholdt i ernærings- eller mattilskuddsblandingen ifølge foreliggende oppfinnelse. Formålet med US patent nr. 4 428 876 er hovedsakelig å fremskaffe en fremgangsmåte for å separere og isolere saponiner og flavonoider. Dette oppnås ved en basisk ekstraksjon med etterfølgende adsorpsjon av de ekstraherte bestanddeler til en harpiks og ekstraksjon med organiske løsningsmidler. Den resulterende rest behandles med aceton for å separere saponiner og isoflavoner. Disse trinnene inkluderer behandling med kjemikalier som er inkompatible med fremstilling av matingredienser eller tilsetninger. Europeisk patent-søknad nr. 0 757 553 beskriver i hovedsak en fraksjoneringsmetode som er begrenset til fremstilling av isolfavoner alene, og som ikke inneholder noen informasjon om noen tilleggsfytokjemikalier. Kun den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer et ernærings- eller mattilskudd inneholdende i det minste to fytokjemikaliefraksjoner som beskrevet og krevet heri.

Det foreligger et behov for en forbedret blanding som i det vesentlige består av isoflavoner, lignaner, saponogeniner, saponiner og/eller fenolsyrer, som kan gi bedre resultater fremfor hver av disse tatt for seg. Det foreligger dessuten behov for en blanding hvor de fordelaktige fytokjemikaliene er anriket i forhold til den opphavelige kilde. Dette gjør det mulig lettvint å innta slike fytokjemikalier som næringssupplement, eller som tilsetningsstoff.

Et formål med denne oppfinnelse er å tilveiebringe en ernærings- eller mattilskuddsblanding, kjennetegnet ved at den omfatter i det minste to fytokjemikaliefraksjoner ekstrahert fra plantemateriale, hvor nevnte i det minste to fytokjemikaliefraksjoner omfatter i det minste en første fytokjemikaliefraksjon og en andre fytokjemikaliefraksjon , hvor nevnte i det minste første og den andre fytokjemikaliefraksjonen er forskjellige fra hverandre, og er valgt fra gruppen bestående av isoflavoner i en mengde på 5 vekt% til 90 vekt% av blandingen, lignaner i en mengde på 0 vekt% til 70 vekt% av blandingen, saponiner i en mengde på 5 vekt% til 70 vekt% av blandingen og fenolsyrer i en mengde på 1 vekt% til 70 vekt% av blandingen, hvor nevnte i det minste første og andre fytokjemikaliefraksjon er tilveiebrakt ved fraksjonering av plantemateriale som resulterer i fjerning av karbohydrater, proteiner og lipider, og hvor i det minste en av de valgte fytokjemikalier omfatter i det minste 10 vekt% av blandingen.

Et annet formål med denne oppfinnelse er å tilveiebringe en anvendelse av en blanding ifølge foreliggende oppfinnelse for fremstilling av en doseringsform for anvendelse i behandling av kreft valgt fra gruppen bestående av urinveiskreft, blærekreft, prostatakreft, brystkreft, hudkreft og tarmkreft. Doseringsformen inneholder en optimalisert ekstraktblanding av fytokjemikalier, som har tilstrekkelig konsentrasjon til å kunne gis som en lett konsumerbar dosering, som f.eks. en pille,

tablett, kapsel, næringsvæske eller -ingrediens.

Doseringsformene kan også anvendes i behandling av migrenehodepine, demens, alkoholisme, reduksjon av risiko for koronare hjertelidelser eller modulering av blodlipidprofiler, til forhindring av hetetokter, til behandling av menopausesymptomer, osteoporose, søvnlidelser, vaginal tørrhet eller premenstruelt syndrom. Fytokjemikalie-ekstrakt kan gis som lokal påføring i form av en krem eller lotion. I denne form dispergeres og suspenderes isoflavonene, lignanene, saponinene, katekinene og/eller fenolsyrene i en egnet væske eller gelmatriks for å gi en stabil krem eller lotion som bærer.

Blandingen ifølge oppfinnelsen tilveiebringes som et ekstraktkonsentrat som i kjemisk sammensetning er meget likt de kjemiske enheter som finnes i den naturlige plantekilde.

I henhold til dette aspekt ved oppfinnelsen, ekstraheres isoflavonene, lignanene, saponinene, katekinene og/eller fenolsyrene fra en egnet vegetabilsk kilde, for å frembringe en blanding som er vesentlig mer konsentrert enn det opprinnelige materialet, og mer enn fem ganger mer konsentrert med hensyn til én eller flere av de ønskede bioaktive komponentene.

Ifølge et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, kjennetegnes blandingen av at den er fremstilt ved fremgangsmåten som omfatter trinnene: a) ekstrahering av et avfettet vegetabilsk materiale valgt fra gruppen bestående av melasse og myse i et alkohol løsningsmiddel for å fremstille en slurry,

b) filtrering av slurryen i trinn a) for å fremstille en alkoholfraksjon,

c) fordampning av alkoholfraksjonen fra trinn b) for å fremstille en vandig

fraksjon,

d) ultrafiltrering av den vandige fraksjonen fra trinn c) for å fremstille et permeat, e) føde permeatet fra trinn d) gjennom en harpikskolonne for å fremstille en effluent,

f) oppsamle effluenten fra trinn e) fra kolonnen etter vasking,

g) fraksjonering av effluenten for å velge i det minste en første fytokjemisk fraksjon og en andre fytokjemisk fraksjon, nevnte i det minste første og andre

fytokjemiske fraksjoner er valgt fra gruppen bestående av isoflavoner,

lignaner, saponiner, katekiner og fenolsyrer, og

h) kombinere de fraksjonerte i det minste første og andre fytokjemiske fraksjoner for å danne en blanding.

Ekstraktet kan benyttes alene eller kombinert med én eller flere andre planteekstrakter for å produsere en optimalisert blanding. Denne ekstraktblandingen kan dessuten tilberedes med én eller flere andre diett-næringsstoffer, så som vitaminer, mineraler, aminosyrer, etc, for å gi et næringssupplement som er ytterligere optimalisert med hensyn til ønsket helseeffekt. Alle disse ingrediensene kan kombineres med nødvendige bindemidler, hjelpestoffer, konserveringsmidler, farvestoffer og lignende som innen denne industri er kjent for å gi passende tabletter, kapsler, piller, væsker, kremer, pulvere eller næringsingredienser.

Disse fytokjemikaliene kan pakkes og tilberedes i en endelig form på måter som er kjent innen næringssupplement- og næringsmiddelingrediens-industrien. Materialene er ment å gi helse- og velvære-fordeler.

Den forbedrede blanding oppnås ved å fraksjonere en plantekilde med høyt innhold av isoflavoner, lignaner og andre fytokjemikalier, så som avfettede soyabønnegryn, soya-melasse, soyamyse, rødkløver, alfalfa, lin, kakao, te eller kudzu-rot. Disse kan fraksjoneres sammen med eller i kombinasjon med disse andre planter som har høyt innhold av de ulike isoflavoner, lignaner, saponiner, katekiner og fenolsyrer. Fraksjoneringen resulterer i betydelig fjerning av vann, karbohydrater, proteiner og lipider fra utgangsmaterialet. Fraksjoneirngsmetoden kan med fordel være den som er omtalt i US-patent 5.702.752, eller en ekstraksjon hvor etylacetat eller n-butanol benyttes. US-patent 5.702.752 er overdratt til foreliggende søker.

Andre ekstraksjonsprosesser som kan benyttes alene eller i kombinasjon, er basert på løselighetsforskjeller, destillasjon, løsningsmiddelekstraksjon, adsorpsjons-teknikker, differensiell molekylær filtrering og presipitasjon.

Den foretrukne blanding er en forbedring fremfor kjente kommersielle materialer med hensyn til mengden av fytokjemikalium per gram substans og mengdene av de forskjellige fytokjemikaliene som påvirker den fysiologiske virkning.

Disse naturlige substansene har gjennom lang tid vært konsumert via næringsmidler og er nær beslektet med de konsumerte substanser som utgjør grunnlaget for de epidemiologiske undersøkelser som vitner om helsemessige fordeler. Andre fordeler kan oppnås gjennom forbedrede fysikalske egenskaper i forhold til fytokjemikalier som er kjemisk modifisert i forhold til deres opprinnelige nærings-kildeform.

De resulterende forbindelsene forventes i en foretrukket form å omfatte: mellom 5% og 90% isoflavoner, mellom 0% og 70% lignaner og mellom 5% og 70% saponiner og sapogeniner. I en mer foretrukket form vil blandingen bli ekstrahert fra soya. I en annen foretrukket form vil blandingen inneholde et forhold mellom saponiner (pluss saponogeniner) og isoflavoner fra 1:100 til 100:1, hvor isoflavonene hovedsakelig består av naturlig forekommende derivater av genistein og/eller dets forløper biochanin A og daidzein og/eller dets forløper formononetin, med et forhold mellom genistein-derivatene og daidzein-derivatene på fra 100:1 til 1:100. Fortrinnsvis er isoflavonene hovedsakelig glykosylerte derivater.

Blandingsforholdene kan lett varieres ved å endre plantekilden eller ved å ekstrahere en kombinasjon av flere plantekilder. Etter hvert som videre studier viser hvilke fytokjemiske kombinasjoner som er mest effektive for visse helsemessige effekter, vil også den aktuelle blandingen variere.

Det er kjent at isoflavoner, lignaner og saponiner med fordel kan benyttes til å behandle eller forhindre diverse cancere, inklusivt brystkreft, prostatakreft, hudkreft og tykktarmskreft.

Det forventes at den forbedrede blanding vil medføre større fordeler i form av kjemoprevensjon. Nylige eksperimenter synes å bekrefte denne antagelse.

EKSEMPEL 1

En rekke innledende forsøk på dyr ble foretatt for å vurdere virkningene av dietetiske soyaprodukter på veksten av subkutant (s.c.) implantert LNCaP i SCID-hannmus. Et soyaproteinisolat (SPI) med høyt isoflavoninnhold (2,0 mg isoflavoner/g SPI) ble levert av Protein Technology International (St. Louis, MO). Et fytokjemikalie-ekstrakt fra soya, et soya-fytokjemikaliekonsentrat (SPC) som inneholdt 28,5% total-isoflavoner fra soya og varierende mengder av andre soya-fytokjemikalier, ble levert av Archer Daniels Midland Company (Decatur, IL). Disse materialene ble benyttet for å fremstille seks forsøksdietter. Tabell 1 viser diettenes ingredienser.

Åtte uker gamle SCID-hannmus ble i høyre side s.c. injisert 2 x 10<6> LNCaP-celler fra verter, randomisert i seks grupper (n=10) og tilordnet én av forsøksdiettene. Forinntak, kroppsvekt og tumorvolum ble målt. Ved avslutning av forsøket ble det uttatt blodprøver og serum fraskilt for PSA-analyse. En alikvot av tumorvev ble formaiin-fiksert, innleiret i paraffin og kuttet i 4 |xm snitt for in situ histokjemisk påvisning av apoptotiske celler og immunhistokjemiske analyser av angiogenese og proliferasjon. En annen alikvot ble fremstillet av cellelysater for western blotting for å bestemme ekspresjonen av apoptose-relaterte genprodukter.

Tabell 2 sammenfatter virkningene av behandling på næringsinntak, kroppsvekt, isoflavoninntak og tumorvolum. Soyaprodukter endret ikke signifikant forinntak eller kroppsvekt. Sammenlignet med kaseinforede kontroller, ble tumorvolumene fra mus behandlet med SPI (20%), SPC (1,0%) og SPI og SPC (1,0%), redusert med henholdsvis 12%, 28% (P<0,04), eller 40% (P<0,005). Faktoranalyse tydet på at proteinkilden ikke hadde noen signifikant effekt på tumorvekst. Lineær regresjonsanalyse tydet på at tumorvolumene var omvendt korrelert med diettens totale isoflavoner

(tumorvolum (cm<3>) = -0,0008 + 2,121 x Isoflavoner (mg), R<2> = 0,76, p<0,03).

Tabell 3 viser virkningene av 1% SPC i dietten på apoptose, proliferasjon og

angiogenese av svulster i en pilotstudie. De indikerer at dietetisk supplering av soya-fytokjemikalier inhiberer veksten av LNCaP-tumorer in vivo ved å øke apoptosen og inhibere proliferasjonen av tumorceller. Den inhiberende effekt på tumorangiogenese er ikke signifikant, hvilket kan skyldes det lille prøveutvalg (n = 2). Resultater fra in vitro undersøkelser viste at genistein og soya-fytokjemikalie-konsentrat inhiberte sekresjonen av LNCaP-cellers PSA inn i media. PSA-konsentrasjonene ble redusert 68% og 74% ved behandling med henholdsvis 25 og 50 |iM genistein, og 31% og 42% ved behandling med henholdsvis 25 og 50 jaM soya-fytokjemikaliekonsentrat.

Verdier er gjennomsnitt ± SE.

Sammenfatningsvis tyder foreløpige resultater på at soyaprodukter inhiberer s.c. veksten av LNCaP-tumorer i SCID-mus, muligens via induksjon av apoptose og inhibering av angiogenese og proliferasjon.

Isoflavoner eller lignaner kan lindre slike menopause-relaterte symptomer som hetetokter og osteoporose og likeledes lindre symptomer assosiert med menstruasjon. Dette antas å skyldes deres østrogenvirkning. Det antas at den her beskrevne forbedrede blanding vil lindre disse symptomene enda mer effektivt.

I tillegg påvirker isoflavoner positivt forskjellige kardiovaskulært relaterte tilstander, inklusivt hjertesykdom, kolesterol (saponiner påvirker også kolesterol positivt), angiogenese og andre vaskulære virkninger. Det antas at den forbedrede blanding vil frembringe resultater for disse kardiovaskulære tilstandene som er minst like fordelaktig som de hittil kjente, og til en lavere pris.

Som forklart tidligere er det kjent at isoflavoner, lignaner og saponiner hver for seg positivt påvirker forskjellige nevrologiske og immunologiske symptomer. Det antas at den forbedrede blanding vil resultere i lindring av nevrologiske og immunologiske symptomer minst like godt som de hittil kjente forbindelser og til en lavere pris. Det vil dessuten være å forvente at det inntrer en viss synergisme gjennom den kombinasjon som her er beskrevet.

Den forbedrede blanding kan administreres peroralt, parenteralt, for eksempel subkutant, intravenøst, intramuskulært, intraperitonealt, ved intranasal instillasjon eller ved påføring av en aerosolspray på slimhinner, eller som en salve eller krem på huden.

Administrering av den forbedrede blandingen kan skje ved hjelp av en hvilken som helst passende bærer, i fast eller flytende doseringsform, som tabletter, kapsler, pulvere, myke gel, løsninger, suspensjoner, emulsjoner, salver eller kremer. Den forbedrede blanding kan også administreres som et næringsmiddelsupplement eller som næringsmiddelingrediens.

Den mengde av den forbedrede forbindelse som administreres vil avhenge av vedkommende person, administrasjonsmåte og det ønskede resultat. En effektiv mengde forventes å utgjøre fra 10 mg til 2000 mg/dose.

Eksempel 2 Tablettfremstilling

Blandingen tilveiebrakt gjennom foreliggende oppfinnelse kan benyttes til å fremstille tabletter eller andre doseringsformer. Et eksempel på en kapsel-tilberedning er gitt i Eksempel 2. Jo høyere konsentrasjon av virkestoff, dess lettere er det å danne en tablett eller emulsjon. Dette medfører en ytterligere mulighet til å inkorporere andre diett-næringsstoffer. Et eksempel ville være å fremstille en fytokjemikalietablett som inkorporerer et kalsium- og vitamin E-tilskudd for å opprettholde friskt benvev og/eller redusere postmenopausale symptomer, så som hetetokter. Som et eksempel på denne utførelsesform ble det fremstillet en 600 mg tørrpresset tablett inneholdende et konsentrat på totalt 125 mg isoflavoner (50 mg tsoflavon-forbindelse). I tablettformuleringen ble det også inkludert en kalsium- og magnesiumkilde.

Tørrkomprimerte tabletter ble produsert ved først å blande følgende ingredienser: 4 kg av den forbedrede blanding (39,83% isoflavoner), 1,91 kg sorbitol, 0,095 kg magnesium stea rat og 13,11 kg dikalsiumfosfat i en 110 liter Hobart mikser. Denne ingrediensblandingen ble deretter tørrkomprimert under et trykk på 1 tonn med en enkelt Stokes BB2-presse til tabletter som hadde en totalvekt på 600 mg og inneholdt 125,53 mg av den forbedrede blanding og således totalt 50 mg isoflavoner.

Alternativt kan det frembringes et fytokjemikaliekonsentrat i enhetsdoseform, som hudkrem eller som næringsmiddelingrediens tilsatt til alminnelig mat, i mengder på fra 10 mg til 2000 mg/dose, hvor formålet er å gi en positiv effekt på helse og velvære. Disse fordelene innbefatter kreftforebyggelse, lindring av østrogen- og kjønnshormon-relaterte lidelser, inhibering av hypofyse/thyroidea/gonadotropin-aksen, reduksjon av alkoholavhengighet, modulering av kardiovaskulær-, immun- og nervesystemet, antivirale og analgetiske virkninger.

Eksempel 3

Todelte gelatinkapsler ble fremstillet ved å fylle påfyllingsenden av den tomme, størrelse «0»-kapsel med 0,106 g av den forbedrede blanding (44,35% isoflavoner) og sette på lukkehylsen, hvilket ga en kapsel inneholdende 47,2 mg total-isoflavoner.

Eksempel 4

En sammenligning av forskjellige kilder av fytokjemikaliepreparater er angitt i Tabell 4. Det fremgår klart at fytokjemikaliekomponentene i blandingen av «isoflavonkonsentratet» ifølge oppfinnelsen, er betydelig høyere enn de tilsvarende mengder i de naturlige vegetabilske materialene. Spesielt er mengden av glykon-isoflavoner og saponiner over 100 ganger mer konsentrert enn i næringsmiddel-kildene, og over 20 ganger mer konsentrert enn i plantespirene som naturlig konsentrerer disse fytokjemikaliene. Sammenligning av «isoflavonkonsentratet» ifølge denne oppfinnelse med andre konsentrater viser at isoflavonfraksjonen dominerer i sistnevnte produkter, hvorved mengden av andre helsefremmende fytokjemikalier reduseres. I tillegg benytter ekstraksjonsmetodene for disse andre produktene, teknikker som endrer komponenten, særlig isoflavonene, slik at de ikke er identiske med de substanser som finnes i det naturlige vegetabilske materialet (US-patent 5.637.562).

En versjon av den forbedrede blanding ble sammenlignet med andre tidligere beskrevne blandinger. Resultatene er vist i Tabell 4.

15

Eksempel 5

Som ett aspekt har den forbedrede blanding som inneholder glykosidformene av isoflavoner, forbedret løselighet ved kroppstemperatur i

forhold til tidligere beskrevne blandinger som inneholder aglykosidformene.

5 Separate løsninger (0,02% i destillert vann) ble fremstillet av genistein, genistin, daidzein, daidzin og isoflavonkonsentrat ble fremstillet i målekolber. Prøvene ble deretter anbragt i et 37°C vannbad i 17 timer og deretter hurtig filtrert gjennom et 0,2 mikron filter av sprøytetype for å fjerne partikler. De filtrerte

prøvene ble deretter analysert med henblikk på isoflavonkonsentrasjon ved HPLC. o Resultatene er sammenfattet som vist i Tabell 5.

Glykosidformene genistin og daidzin forekommer i minst henholdsvis 4,57 og 13,32 ganger høyere konsentrasjon ved 37°C enn deres tilsvarende aglykonformer. Modifikasjonene av isoflavonene er foretatt for å fjerne karbohydratet bundet til isoflavondelen. Denne modifisering gjør isoflavonet mindre løselige i vann. Bibehold av den naturlige modifikasjon, glykosylering, øker løseligheten. Dette faktum er vist ved sammenligningen av løselighet i Tabell 5.

Tabellen viser at genistin-isoflavoninnholdet er 4,6 ganger høyere og daidzin-io isoflavoninnholdet 13,3 ganger høyere enn i den tilsvarende ikke-glykosylerte form. Høyere løselighet kan føre til bedre biotilgjengelighet i intestinale

organismer. Glykosyleringen inhiberer ikke absorpsjon i tarmen siden tarm-mikrofloraen omdanner glykonformen til aglykonformen før absorpsjon inntrer.

16

Eksempel 6 Ekstraksjon av lignaner fra lin

Lignaner kan lett ekstraheres fra lin ved å benytte følgende metode. 978 g avfettet linmel (F1) ble ekstrahert med 2000 g 85% etanol ved 40°C i 10 minutter under dannelse av en oppslemming. Den resulterende oppslemming

5 ble filtrert, og ekstraksjon ble gjentatt to ganger med totalt 6000 g etanol. Etanolfraksjonen ble deretter inndampet under vakuum ved 70°C, hvilket resulterte i en vandig fraksjon på 1186 g. Den vandige fraksjon ble kombinert med 1000 g vann og blandet. Prøven ble etter blandingen ultrafiltrert gjennom en

membran med en molekylvekt-grense på 5000, noe som resulterte i en 760 g o permeatfraksjon og en retentatfraksjon på 1283 g.

Retentatfraksjonen ble frysetørket og resulterte i 27,84 g prøve (F2). Permeatfraksjonen på 767 g, ble ved 50°C, avsatt på 35 mL XAD-4-harpiks i en kolonne med en hastighet på 10 mL/min. Kolonneutløpet ble oppsamlet og

tørket, hvilket resulterte i 14,8 g prøve (F3). XAD-4 er et varemerke for en

5 absorberende harpiks, tilgjengelig fra Rohm & Haas.

Kolonnen ble deretter eluert med fire kolonnevolumer (140 mL) 70% etanol ved 50°C. Eluatet ble inndampet under vakuum ved 70°C og tørket, hvilket resulterte i 1,79 g prøve (F4). De fire fraksjonene ble deretter analysert med

henblikk på deres lignaninnhold målt som vektkonsentrasjon av

:o secoisolariciresinol. Som vist i Tabell 6 anriker denne ekstraksjonsmetode lignankonsentrasjonen.

Claims

1. Ernærings eller mattilskuddsblanding, karakterisert ved at den omfatter i det minste to fytokjemikaliefraksjoner ekstrahert fra plantemateriale, hvor nevnte i det minste to fytokjemikaliefraksjoner omfatter i det minste en første fytokjemikaliefraksjon og en andre fytokjemikaliefraksjon , hvor nevnte i det minste første og den andre fytokjemikaliefraksjonen er forskjellige fra hverandre, og er valgt fra gruppen bestående av isoflavoner i en mengde på 5 vekt% til 90 vekt% av blandingen, lignaner i en mengde på 0 vekt% til 70 vekt% av blandingen, saponiner i en mengde på 5 vekt% til 70 vekt% av blandingen og fenolsyrer i en mengde på 1 vekt% til 70 vekt% av blandingen, hvor nevnte i det minste første og andre fytokjemikaliefraksjon er tilveiebrakt ved fraksjonering av plantemateriale som resulterer i fjerning av karbohydrater, proteiner og lipider, og hvor i det minste en av de valgte fytokjemikalier omfatter i det minste 10 vekt% av blandingen.

2. Blanding ifølge krav 1,karakterisert ved at nevnte blanding er mer enn tjue ganger anriket med hensyn til isoflavoner og saponiner, sammenlignet med kimen av nevnte plantemateriale.

3. Blanding ifølge krav 1,karakterisert ved at nevnte i det minste ene valgte fytokjemikalium omfatter minst 70 vekt% av blandingen.

4. Blanding ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at forholdet mellom isoflavoner og lignaner som er tilstede er i området fra 1000:1 til 1:50, forholdet mellom isoflavoner og saponiner som er tilstede er i området på fra 1:10 til 10:1, forholdet mellom isoflavoner og fenolsyrer som er tilstede er i området på fra 100:1 til 1:100, forholdet av lignaner og fenolsyrer er i området fra 100:1 til 1:100, forholdet av saponiner og fenolsyrer som er tilstede er i området fra 100:1 til 1:100 og forholdet av katekiner og fenolsyrer som er tilstede er i området fra 100:1 til 1:100.

5. Blanding ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at isoflavoner tilstede er valgt fra gruppen bestående av genistein, daidzein, glycitein, biochanin A, formononetin og naturlige derivater derav, enhver av lignanene som er tilstede er valgt fra gruppen bestående av mateiresinol, secoisolariciresinol, lariciresinol, isolariciresinol, nodihydro-guairiaretinsyre, pinoresinol, olivil, forløpere av enterolakton, forløpere av enterodiol og modifikasjoner derav, saponinene som er tilstede er valgt fra gruppen bestående avtomatin, soyaspogenol F, soyasaponin, alfaalfasaponin, ginsengosidfraksjon 3, ginsengosidfraksjon 4, medicageninsyre, hedragenin, glycyrrhizin, digitonin, quillajasaponin, lucerninsyre, zahninsyre of naturlige modifikasjoner derav, fenolsyrene er valgt fra gruppen bestående av klorogensyre, kaffeinsyre, ferulinsyre, gallinsyre, sinapinsyre, syringinsyre, vanillinsyre, kumerinsyre, cinnaminsyre, gentisinsyre, salisylsyrehydroksybenzosyre, hydroksyfenyleddiksyre og naturlige derivater derav, og et hvilket som helst katekin tilstede er valgt fra katekin, epikatekin, gallokatekin og epigallokatekin.

6. Blanding ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved a t plantemateriale er en eller flere valgt fra gruppen bestående av soya, rødkløver, kudzu, lin, alfaalfa, te og kakaoplantemateriale.

7. Blanding ifølge krav 6, karakterisert ved at soyaplantemateriale er soyamelasse eller soyamyse.

8. Blanding ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at nevnte isoflavoner er hovedsakelig glykosylerte isoflavoner.

9. Blanding ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at nevnte blanding er formulert for oral avlevering i form av en pille, kapsel, væske, konsentrat, pulver, en tilsatt matingrediens eller en tablett.

10. Blanding ifølge et hvilket som helst av de foregående krav, karakterisert ved at den ytterligere omfatter et fyllstoff valgt fra gruppen bestående av sorbitol, laktose, cellulose og dikalsiumfosfat.

11. Blanding ifølge krav 10, karakterisert ved a t den ytterligere omfatter et diett supplementernæringsstoff valgt fra gruppen bestående av magnesiumstearat, kalsiumcitrat, kalsiummalat, et vitamin eller et mineral.

12. Blanding ifølge krav 10, karakterisert ved at den omfatter mellom 15 vekt% til 25 vekt% av plantematerialblandingen og mellom 65 vekt% til 85 vekt% fyllstoff.

13. Blanding ifølge krav 12, karakterisert ved a t den omfatter mellom 15 vekt% til 25 vekt% av plantematerialblandingen og mellom 60 vekt% til 84 vekt% fyllstoff, og mellom 1 vekt% til 25 vekt% av diett supplementernæringsstoff.

14. Anvendelse av en blanding i følge kravene 1-13, for fremstilling av en doseringsform for anvendelse i behandling av kreft valgt fra gruppen bestående av urtnveiskreft, blærekreft, prostatakreft, brystkreft, hudkreft og tarmkreft.

15. Anvendelse av en blanding i følge krav 14, for fremstilling av en doseringsform for anvendelse i behandling av kreft valgt fra gruppen bestående av urinveiskreft, blærekreft og prostatakreft.

16. Anvendelse av en blanding ifølge kravene 1-13, for fremstilling av en doseringsform for anvendelse i behandling av migrenehodepine eller demens.

17. Anvendelse av en blanding ifølge kravene 1-13, for fremstill ing av en doseringsform for anvendelse i behandling av alkoholisme.

18. Anvendelse av en blanding ifølge kravene 1-13, for fremstilling av en doseringsform for anvendelse i reduksjon av risiko for koronare hjertelidelser eller modulering av blodlipidprofiler.

19. Anvendelse av en blanding ifølge kravene 1-13, for fremstilling av en doseringsform for anvendelse i reduksjon av, eller forhindring av hetetokter, eller behandling av menopausesymptomer, osteoporose, søvnlidelser, vaginal tørrhet eller premenstruelt syndrom.

20. Blanding ifølge kravene 1-13, karakterisert ved at den er fremstilt ved fremgangsmåten som omfatter trinnene: a) ekstrahering av et avfettet vegetabilsk materiale valgt fra gruppen bestående av melasse og myse i et alkohol løsningsmiddel for å fremstille en slurry, b) filtrering av slurryen i trinn a) for å fremstille en alkoholfraksjon, c) fordampning av alkoholfraksjonen fra trinn b) for å fremstille en vandig fraksjon, d) ultrafiltrering av den vandige fraksjonen fra trinn c) for å fremstille et permeat, e) føde permeatet fra trinn d) gjennom en harpikskolonne for å fremstille en effluent, f) oppsamle effluenten fra trinn e) fra kolonnen etter vasking, g) fraksjonering av effluenten for å velge i det minste en første fytokjemisk fraksjon og en andre fytokjemisk fraksjon, nevnte i det minste første og andre fytokjemiske fraksjoner er valgt fra gruppen bestående av isoflavoner, lignaner, saponiner, katekiner og fenolsyrer, og h) kombinere de fraksjonerte i det minste første og andre fytokjemiske fraksjoner for å danne en blanding.