NO142576B - Nye diagnostisk aktive kromogene substrater med hoey spesifisitet for thrombin og thrombinlignende ensymer - Google Patents
Nye diagnostisk aktive kromogene substrater med hoey spesifisitet for thrombin og thrombinlignende ensymer Download PDFInfo
- Publication number
- NO142576B NO142576B NO762407A NO762407A NO142576B NO 142576 B NO142576 B NO 142576B NO 762407 A NO762407 A NO 762407A NO 762407 A NO762407 A NO 762407A NO 142576 B NO142576 B NO 142576B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- thrombin
- arg
- tlc
- pna
- analysis
- Prior art date
Links
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 title claims description 15
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 title claims description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 9
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 title claims description 9
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 title claims description 5
- 230000002345 thrombinlike Effects 0.000 title claims description 3
- -1 methoxynaphthyl Chemical group 0.000 claims description 13
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 32
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 27
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 26
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 3
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- YDMBNDUHUNWWRP-VJBWXMMDSA-N (2s)-1-[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]piperidine-2-carboxamide Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCCC1)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)C1=CC=CC=C1 YDMBNDUHUNWWRP-VJBWXMMDSA-N 0.000 description 2
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 2
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 2
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010039286 S 2238 Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 2
- GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N hexamethylphosphoric triamide Chemical compound CN(C)P(=O)(N(C)C)N(C)C GNOIPBMMFNIUFM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 2
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- RNVCVTLRINQCPJ-UHFFFAOYSA-N o-toluidine Chemical compound CC1=CC=CC=C1N RNVCVTLRINQCPJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GFNKTLQTQSALEJ-UHFFFAOYSA-N 1-isocyanato-4-nitrobenzene Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C(N=C=O)C=C1 GFNKTLQTQSALEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 2-methylpropyl carbonochloridate Chemical compound CC(C)COC(Cl)=O YOETUEMZNOLGDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 2-naphthylamine Chemical compound C1=CC=CC2=CC(N)=CC=C21 JBIJLHTVPXGSAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000008574 D-amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 125000001711 D-phenylalanine group Chemical group [H]N([H])[C@@]([H])(C(=O)[*])C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N L-pipecolic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]1CCCC[NH2+]1 HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 1
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 1
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 description 1
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IADUEWIQBXOCDZ-UHFFFAOYSA-N azetidine-2-carboxylic acid Chemical group OC(=O)C1CCN1 IADUEWIQBXOCDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N butan-1-amine Chemical compound CCCCN HQABUPZFAYXKJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 description 1
- 230000005588 protonation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- NRTLTGGGUQIRRT-UHFFFAOYSA-N triethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CC[NH+](CC)CC NRTLTGGGUQIRRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/064—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for omega-amino or -guanidino functions
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/30—Naphthyl amides, e.g. beta-NA, 2-NA, 4-methoxy-beta-naphthylamine, i.e. 4MNA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse angår nye kromogene substrater for thrombin og thrombinlignende enzymer. Substratene i henhold til oppfinnelsen er særlig egnet for en kvantitativ bestemmelse av thrombin eller for å studere reaksjoner i hvilke thrombin dannes r inhiberes eller forbrukes, eller for å bestemme fak-torene som utøver en innflytelse eller tar del i slike reaksjoner, f.eks. for bestemmelse av anti-thrombin, prothrombin og heparin.
Syntetiske substrater for enzymbestemmelser har store for-deler sammenlignet med de naturlige, forutsatt at de oppfyller visse betingelser, som stor sensitivitet og spesifisitet for enzymet, en god oppløselighet i vann eller den biologiske forsøksvæske og lett påvisbarhet av noen av spaltningsproduktene.
Et av de hittil beste substrater for thrombinbestemmelse er beskrevet i norsk patent 135 245, og består av det kromogene tripeptidderivat:
(med hensyn til forkortelsene, se side 4)•
Dette har stor sensitivitet for thrombin og gir ved enzymatisk hydrolyse det kromofore produkt p-nitroanilin som lett kan bestemmes spektrofotometrisk. S-2l6o har imidlertid en begrensning på grunn av dets relativt lave oppløselighet (1 mg/ml). En lav oppløselighet medfører den ulempe at man må arbeide meget nær metningsgrensen for substratet for å oppnå en tilfredsstillende substratkonsentrasjon. I enzymbestemmelser i forskjellige biologiske systemer kan en feining av substratet som sådan inntre, eller en kombinert protein/substratfeining. Disse felninger vil bevirke feilaktige' spektrofotometeravlesninger og således feilaktige enzymbestemmelser. Enzymsubstratet S-2l6o blir betraktelig mere oppløselig hvis benzoylgruppen erstattes med hydrogen, slik:
Den nå frie protoniserte aminogruppe på Phe øker oppløse-ligheten, men bevirker også at hastigheten med hvilken thrombin spalter substratet, øker sterkt, ca. 30 ganger (se tabell I). Videre kan substratet, i en biologisk forsøksoppløsning, spaltes på en uønsket måte fra den N-avsluttede ende av amino-pept idaser.
I henhold til foreliggende oppfinnelse er substratet i henhold til formel B blitt modifisert ved å utbytte Val med en cyclisk iminosyre (Aze, Pro eller Pip), og L-Phe er utbyttet med D-Phe. Som ventet er de således erholdte substrater fremdeles meget oppløselige, men helt forbausende har aktiviteten overfor thrombin ikke avtatt, men istedet er den 30 - 50 ganger høyere enn aktiviteten for det tilsvarende substrat med bare L-aminosyrer (tabell I). Videre er de nye substrater ca. 400% mere aktive enn S-2l60. Den N-endeavsluttende D-aminosyre forhindrer også et uønsket angrep av aminopeptidaser da de sistnevnte er spesifikke for L-aminosyrer. De nye kromogene substrater ifølge oppfinnelsen kjennetegnes ved den generelle formel:
eller salter derav, hvor R er hydrogen eller hydroxy, R2 er nitrofenyl, nafthyl eller methoxynafthyl, og n er 1, 2 eller 3.
Med syntesen av de nye kromogene enzymsubstrater anvendes konvensjonelle beskyttende grupper og koblingsmetoder som alle er velkjente i peptidkjemien.
Som en a-aminobeskyttende gruppe kan med fordel anvendes carboxybenzoxy- eller t-butyloxycarbonylgrupper eller en hvilken som helst dermed beslektet gruppe som f.eks. p-methoxy-,
p-nitro- eller p-methoxyfenylazo-carbobenzoxy.
Som en beskyttelse for &-guanidogruppen i arginylgruppen er det fordelaktig å anvende protonisering, en nitrogruppe eller en p-toluensulfonylgruppe.
Som beskyttelse for hydroxygruppen i tyrosingruppen er det fordelaktig å anvende en t-butyl- eller benzylgruppe. Som en avspaltbar carboxy-beskyttende gruppe er det passende å anvende methyl-, ethyl- eller benzylester.
Koblingen mellom to aminosyrer eller et dipeptid og en aminosyre oppnåes ved aktivering av a-carboxygruppen. Det aktiverte derivat kan enten isoleres eller dannes in situ, og kan f.eks. være p-nitrofenyl-, triklorfenyl-, pentaklorfenyl-eller N-hydroxysuccinimid-ester, symmetrisk eller asymmetrisk anhydrid, syreazid, eller N-hydroxybenzotriazol-ester.
Prinsippet for syntesen kan være en trinnvis kobling av aminosyrene til den carbonavsluttende arginylgruppe, som enten allerede er forsynt med en koblet kromofor gruppe som virker som en carboxybeskyttende gruppe eller forsynt med en avspaltbar carboxy-beskyttende gruppe, og den kromofore gruppe kobles så til det beskyttede tripeptidderivat, eller alternativt er det mulig å syntetisere selve det N-endeavsluttende dipeptidfragment som så kobles til arginylgruppen med eller uten en kromofor gruppe i henhold til det ovenfor anførte.
Uavhengig av det valgte prinsipp er en rensning av mellom-og sluttprodukter ved gelfilt reringskromatografi egnet da dette vil muliggjøre et hurtig syntesearbeide og gi maksimale utbytter.
TLC-analyse har vært utført delvis av eluater fra GPC og delvis av inndampede og tørrede slutt- og mellomprodukter.
Oppfinnelsen er beskrevet mere detaljert i de følgende, ikke-begrensende, spesifikke eksempler.
Forkortelser
Aminosyrer (hvor annet ikke er anført menes L-formen):
Arg = arginin
Aze = 2-azetidin-carboxylsyre
Phe = fenylalanin
Pip = pipecolinsyre
Pro = prolin
Val = valin
AcOH = eddiksyre
Bz = benzoyl Cbo- = carbobenzoxy-
DMF = dimethylformamid
Et„N = triethylamin
5
EtOAc = ethylacetat
HMPTA = N,N,N',N<*>,N",N"-hexamethylfosforsyre-triamid
GPC = gelfiltreringskromatografi
MeOH = methanol
-OpNP = p-nitrofenoxy
-pNA = p-nitroanilid
TLC = tynnskiktskromatografi
Tynnskiktskromatografi
For TLC-analyse anvendes preparerte glassplater med silicagtl F^^^ (Merck) som absorpsjonsmiddel. De anvendte opp-løsningsmiddelsystemer er følgende:
P-j^: kloroform/MeOH 9:1 (volumforhold)
A : n-butanol/AcOH/vann 3:2:1 (volumforhold)
Efter avsluttet kromatografi undersøkes platen i UV-lys (254 nm), og fremkallingen utføres derpå med klor/o-toluidin-reagens i henhold til vanlig praksis. Når et "homogent produkt i henhold til TLC" er anført, er analysen utført på en mengde på ^g. De anførte R^-verdier er resultatet av separate kromatografiske metoder.
Gelen Sephadex G-15 anvendt for gelfiltreringen er en tverrbunden dextrangel. Gelen Sephadex<®> LH-20 er en hydroxy-propylert tverrbundet dextrangel. Den anvendte ionebytter
Sephadex<®> QAE-25 er en tverrbunden dextrangel med diethyl-(2-hydroxypropyl)-aminoethyl som funksjonell gruppe. Disse geler er fra Pharmacia Pine Chemicals, Uppsala, Sverige.
Beskrivelse av syntesen
I. Cbo-Arg(N02)pNA
35,3 g (IO mmol) tørr Cbo-Arg(N02)-OH oppløses i 200 ml tørt, friskt destillert HMPTA ved værelsetemperatur, hvorpå 10,1 g (100 mmol) Et^N °9 24,6 g (150 mmol) p-nitrofenylisocyanat tilsettes under omrøring og fuktighetsfrie betingelser. Efter en reaksjonstid på 24 timer helles oppløsningen i 2 1 2%-ig
natriumbicarbonatoppløsning under omrøring. Det dannede bunnfall fjernes ved filtrering og vaskes med 2%-ig bicarbonatopp-løsning, vann, 0,5 N vandig saltsyre og vann, og tørres til slutt. Råproduktet ekstraheres med varm methanol, og vanskelig oppløselige biprodukter frafiltceres, Filtratet renses ved kromatografi på en kolonne av Sephadex<®> LH-20, svellet i og eluert med methanol.
Utbytte: 29,8 g (63%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P.. (Rf: 0,34)
II. Cbo-Pro-Arg(N02)-pNA
4,8 g (IO mmol) Cbo-Arg(N02)-pNA oppslemmes i 25 ml AcOH, hvorpå 15 ml 5,6 N HBr i AcOH tilsettes. Efter en reaksjonstid på 50 minutter ved værelsetemperatur helles oppløsningen under kraftig omrøring i 300 ml tørr ether. Etherfasen suges fra det erholdte bunnfall, og bunnfallet vaskes med 2 x 100 ml ether. Det således erholdte HBr-H-Arg(NO )-pNA tørres i vakuum over natriumhydroxyd ved 40 C i 16 timer. Det oppløses så i 25 ml DMF, og oppløsningen avkjøles til -10°C. Nå tilsettes Et3<_>N i en mengde tilstrekkelig til å gi et fuktig pH-papir holdt llfC©©Ver overflaten av oppløsningen en svakt basisk reaksjon (1,9 ml).
Utfelt triethylamin-hydrobromid fjernes ved filtrering, og 4,1 g (11 mmol) Cbo-Pro-OpNP tilsettes. Efter 1 time tilsettes ytterligere 0,7 ml triethylamin og likeledes efter 4 timer. Oppløs-ningen får lov til å anta værelsetemperatur over natten. For å unngå at overskuddet av Cbo-Pro-OpNP forurenser sluttproduktet under GPC da de har lignende elueringsvolumer i det anvendte kromatografiske system, tilsettes 0,5 ml (5 mmol) n-butylamin. Efter 30 minutter tilsettes IO mmol fortynnet saltsyre, reak-sjonsoppløsningen inndampes på en roterende inndamper, omrøres med et par porsjoner vann som fjernes ved dekantering. Residuet oppløses i methanol og kromatograferes på en kolonne av "Sephadex" LH-20 svellet i og eluert med methanol. Det erholdte produkt er homogent i henhold til TLC.
Utbytte: 5,5 g (96%)
Analyse: TLC i P (Rf: 0,28)
III. Cbo-Pip-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til II.
Utbytte: 5,1 9 (86%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P, (R,: 0,30)
IV. Cbo-Phe-Pip-Arg(N02)-pNA
2,9 g (5 mmol) Cbo-Pip-Arg(N02)-pNA dicarbobenzoxyleres i hydro-genbromid i eddiksyre, felles og vaskes med ether og tørres i henhold til II. HBr-H-Pip-Arg(N02)-pNA oppløses så i 15 ml DMR. Oppløsningen avkjøles til -10 C, gjøres svakt alkalisk med 0,9 ml triethylamin og filtreres. 3,0 g (7,15 mmol) Cbo-Phe-OpNP tilsettes og derpå 0,65 g (5 mmol) N-hydroxybenzotriazol som kata-lysator. Efter 1 time tilsettes ytterligere 0,35 ml triethylamin, og den samme behandling gjentaes efter 4 timer. Reaksjons-oppløsningen tillates å anta værelsetemperatur over natten. Oppløsningen inndampes til tørrhet på en roterende tørrer. Residuet oppløses i ethylacetat og behandles med 2%-ig natrium-bicarbonatoppløsning og vann og inndampes så. Residuet opp-løses nå i methanol og kromatograferes på Sephadex<®>LH-20 svellet og eluert med methanol. Det erholdte produkt er homogent. i henhold til TLC.
Utbytte: 2,7 9 (73%)
Analyse: TLC i P, (Rf: 0,35)
V. Cbo-D-Phe-Pip-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 2,6 g (70%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P, (Rf: 0,44)
VI. Cbo-Phe-Pro-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 2,9 g (80%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P^ (Rf: 0,38)
VII. Cbo-D-Phe-Pro-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 3,1 g (86%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P 0,46)
VIII. H-D-Phe-Pro-Arg-pNA-2HCl
175 mg (0,246 mmol Cbo-D-Phe-Pro-Arg(N02)-pNA befries for beskyttende grupper ved omsetning med 5 ml tørt HF i nærvær av 0,3 ml anisol i et apparat beregnet på dette formål i henhold til Sakakibara i 60 minutter ved 0°C. Efter avsluttet reaksjon og efter avdestillering av alt HF renses råproduktet og under-kastes ionebytte i to trinn: a) GPC på en kolonne av Sephadex G-15, svellet i 33%-ig vandig eddiksyre, med det samme medium som oppløsnings- og
elueringsmedium. Det rene produkt frysetørres fra vandig eddiksyre .
b) Ionebytte på en kolonne av Sephadex<®> QAE-25 i klorid-formen, svellet i methanol-.vann (95:5) med det samme medium som
oppløsnings- og elueringsmedium. Det rene produkt ble fryse-tørret fra vann..
Utbytte: 120 mg fflrø)
Analyse: homogent i henhold til TLC i A (R^: 0,29)
Kloridinnhold 11,53% (teoretisk 11,6%)
IX. H-Phe-Pro-Arg-pNA-2HCl
Utført i henhold til VIII.
Utbytte: (71%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i A (Rf: 0,22)
Kloridinnhold 11,0% (teoretisk 11,6%)
X. H-D-Phe-Pip-Arg-pNA-2HCl
Utført i henhold til VIII.
Utbytte: (72%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i" A (Rf: 0,44)
Kloridinnhold 11,4% (teoretisk 11,3%)
XI. H-Phe-Pip-Arg-pNA-2HCl
Utført i henhold til VIII. ~~"~~
Utbytte: (55%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i A (Rf: 0,4l)
Kloridinnhold 11,3% (teoretisk 11,3%)
XII. Cbo-D-Tyr(OBzl)-Pip-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 3,2 g (75%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P1 (Rf: 0,50)
XIII. H-D-Tyr-Pip-Arg-pNA
Utført i henhold til VIII.
Utbytte: (68%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P (Rf: 0,44))
Kloridinnhold IO,8% (teoretisk 11,1%)
XIV. Cbo-Aze-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til II.
Utbytte: 4,2 g(75%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P1 ( Rf: 0,27)
XV. Cbo-D-Phe-Aze-Arg(N02)-pNA
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 2,4 g (69%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P± (Rf: 0,47)
XVI. H-D-Phe-Aze-Arg-pNA-2HCl
Utført i henhold til VIII.
Utbytte: (71%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i A (R^: 0,21)
Kloridinnhold 11,6% ("teoretisk 11,9%)
XVII. Cbo-Arg(N02)-PNA
7,2 g (20 mmol) tørr Cbo-Arg(N02)-0H oppløses i 400 ml THF.
2,0 g (20 mmol) triethylamin tilsettes, og derpå avkjøles oppløs-ningen til -10°C under helt fuktighetsfrie betingelser. 2,7 g (20 mmol) isobutylklorformiat oppløst i 20 ml THF tilsettes til den avkjølte oppløsning i løpet av 10 minutter, og efter ytterligere 10 minutter tilsettes 344 g (20 mmol) (3-naf thylamin. Reaksjonsblandingen får lov til å anta værelsetemperatur og hen-settes ved denne temperatur i 24 timer. Reaksjonsblandingen inndampes til tørrhet i vakuum, behandles 3 - 5 ganger med destillert vann, 3 - 5 ganger med 5%-ig natriumbicarbonatoppløs-ning og igjen 3 - 5 ganger med destillert vann, hvorefter den tørres i vakuum. Produktet oppløses i methanol og kromato-graf eres på en kolonne av Sephadex<®> LH-20, svellet i og eluert med methanol. Det erholdte produkt er homogent i henhold til TLC i P .
Utbytte: 8,1 9 (84%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P^ (Rf: 0,40)
XVIII. Cbo-Pip-Arg(N02) -|3NA
Utført i henhold til II.
Utbytte: 4,8 9 (82%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P^^ (Rf: 0,36)
XIX. Cbo-D-Phe-Pip-Arg(N02)-PNA
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 2,6 g(7l%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i Px (Rf: 0,48)
XX. H-D-Phe-Pip-Arg-|3NA-2HC1
Utført i henhold til VIII.
Utbytte: (68%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i A (Rf: 0,44)
Kloridinnhold 11,2% (teoretisk 11,3%)
XXI. Cbo-Arg(N02)-pNA (4-OMe)
Utført i henhold til XVII.
Utbytte: 7.1 9 (70%)
Analyse: homogent i henhold til XLC-^i P-^ (Rf: 0,42)
XXII. Cbo-Pip-Arg(N02)-pNA (4-OMe)
Utført i henhold til II.
Utbytte: 4,9 9 (79%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P^ (Rf: 0,38)
XXIII. Cbo-D-Phe-Pip-Arg(N02)-|3NA (4-OMe)
Utført i henhold til IV.
Utbytte: 2, 7 9 (70%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i P± ( Rf: 0,51)
XXIV. H-D-Phe-Pip-Arg-pNA (4-OMe)-2HC1
Utført i henhold til VIII.
Utbytte: (64%)
Analyse: homogent i henhold til TLC i A (Rf: 0,44)
Kloridinnhold IO,4% (teoretisk 10,7%)
Bestemmelse av thrombin med kromogene substrater: Substratene fremstilt i henhold til eksemplene ble anvendt for å bestemme thrombin som anført nedenfor. Bestemmelsesprinsippet bygger på det forhold at spaltnings-produktet dannet ved enzymatisk hydrolyse, har et UV-spektrum som er vesentlig forskjellig;<f>ra det for substratet. Således har substratet i henhold til eksempel X, H-D-Phe-Pip-Arg-pNA,
et absorpsjonsmaksimum ved 315 nm og den molare ekstinksjons - koeffisient på 12.500. Ved 405 nm er absorpsjonen av substratet nesten fullstendig stanset. p-nitroanilin, avspaltet fra substratet under den enzymatiske hydrolyse, har et absorpsjonsmaksimum ved 380 nm og en molar ekstinksjonskoeffisient på 13.200 som ved 405 nm bare har avtatt til 9.620. Ved spektrofotometrisk bestemmelse ved 405 nm er det således mulig lett å følge mengden av dannet p-nitroanilin, som er porporsjonal med graden av enzymatisk hydrolyse som i sin tur bestemmes av den aktive mengde thrombin. For andre substrater i henhold til oppfinnelsen eksisterer temmelig identiske forhold, og av denne grunn er bestemmelsene konsekvent blitt utført ved 405 nm.
Tabell I viser en sammenligning av de relative reaksjon»;-hastigheter mellom det tidligere nevnte thrombinsubstrat S-2l60, dets ikke-benzoylerte form og substratet i henhold til oppfinnelsen. Denne tabell viser klart overlegenheten av substratene i henhold til oppfinnelsen. De reagerer 4 ganger hurtigere med thrombin enn det beste tidligere kjente substrat, S-2160, og er videre ca. 10 ganger mere oppløselig i vann enn S-2l60.
Tabell I
Relative reaksjonshastigheter mellom thrombin (0,4 NIH/ml) og substrat (0,1 umol/ml).
Claims (1)
- Nye diagnostisk aktive kromogene substrater med høy spesifisitet for thrombin og thrombinlignende enzymer,karakterisert ved den generelle formel:og salter derav, hvor R^ er hydrogen eller hydroxy, R^ er nitrofenyl, nafthyl eller methoxynafthyl, og n er 1, 2 eller 3.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE7507975-6A SE407405B (sv) | 1975-07-11 | 1975-07-11 | Nya kromogena trombinsubstrat |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO762407L NO762407L (no) | 1977-01-12 |
| NO142576B true NO142576B (no) | 1980-06-02 |
| NO142576C NO142576C (no) | 1980-09-10 |
Family
ID=20325116
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO762407A NO142576C (no) | 1975-07-11 | 1976-07-09 | Nye diagnostisk aktive kromogene substrater med hoey spesifisitet for thrombin og thrombinlignende ensymer |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5224590A (no) |
| AT (1) | AT348686B (no) |
| AU (1) | AU497547B2 (no) |
| BE (1) | BE843970A (no) |
| CA (1) | CA1068261A (no) |
| CH (1) | CH622287A5 (no) |
| CS (1) | CS196314B2 (no) |
| DD (1) | DD128691A5 (no) |
| DE (1) | DE2629195C3 (no) |
| DK (1) | DK145799C (no) |
| ES (1) | ES449739A1 (no) |
| FI (1) | FI56525C (no) |
| FR (1) | FR2317280A1 (no) |
| GB (1) | GB1510926A (no) |
| IL (1) | IL49829A (no) |
| IT (1) | IT1062605B (no) |
| NL (1) | NL188355C (no) |
| NO (1) | NO142576C (no) |
| PL (1) | PL103003B1 (no) |
| SE (1) | SE407405B (no) |
| SU (1) | SU719492A3 (no) |
| ZA (1) | ZA763586B (no) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5255593A (en) * | 1975-10-30 | 1977-05-07 | Ajinomoto Kk | Measuring method of enzyme activity |
| DE2757992A1 (de) * | 1977-12-24 | 1979-06-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur prothrombin-bestimmung |
| DE2812943C3 (de) * | 1978-03-23 | 1981-05-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und Reagens zur Bestimmung der biologischen Aktivität von Heparin im Plasma |
| US4289498A (en) * | 1979-01-08 | 1981-09-15 | Ortho Diagnostics, Inc. | One-stage prothrombin assay and compositions useful therein |
| FR2471410A2 (fr) * | 1979-12-17 | 1981-06-19 | Jozefonvicz Marcel | Perfectionnements apportes a un procede de dosage des proteases et des anti-proteases et notamment des proteases et antiproteases des systemes de la coagulation et du complement |
| EP0018002B1 (de) * | 1979-04-24 | 1983-02-09 | Marcel Jozefonvicz | Neues Bestimmungsverfahren für Proteasen und Antiproteasen |
| DE3005540A1 (de) * | 1980-02-14 | 1981-08-20 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und reagens zur bestimmung der biologischen aktivitaet von heparin im plasma |
| DK155051C (da) * | 1980-05-06 | 1989-07-03 | Pentapharm Ag | Tripeptidderivater samt fremgangsmaade til kvantitativ analyse for proteolytiske enzymer under anvendelse deraf |
| JPS5856695A (ja) * | 1981-09-28 | 1983-04-04 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規なトロンビン測定用基質 |
| DE3211254A1 (de) * | 1982-03-26 | 1983-09-29 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zum nachweis des vorliegens einer allergie und zum spezifischen nachweis des fuer die allergie verantwortlichen allergens |
| DK201084A (da) * | 1983-04-28 | 1984-10-29 | Kimberly Clark Co | Fremgangsmaade til bestemmelse af cathepsin b i naervaerelse af andre proteolytiske enzymer, og forbindelser til anvendelse ved fremgangsmaaden |
| US20090075298A1 (en) | 2005-05-20 | 2009-03-19 | Mitsubishi Kagaku Iatron, Inc. | Method of analyzing enzyme |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE380258B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trypsin och andra enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
| SE380257B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
-
1975
- 1975-07-11 SE SE7507975-6A patent/SE407405B/xx not_active IP Right Cessation
-
1976
- 1976-06-16 ZA ZA763586A patent/ZA763586B/xx unknown
- 1976-06-17 IL IL49829A patent/IL49829A/xx unknown
- 1976-06-21 GB GB25580/76A patent/GB1510926A/en not_active Expired
- 1976-06-25 AU AU15305/76A patent/AU497547B2/en not_active Expired
- 1976-06-25 AT AT463976A patent/AT348686B/de not_active IP Right Cessation
- 1976-06-29 NL NLAANVRAGE7607104,A patent/NL188355C/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-06-29 DE DE2629195A patent/DE2629195C3/de not_active Expired
- 1976-07-06 CA CA256,417A patent/CA1068261A/en not_active Expired
- 1976-07-08 CS CS764544A patent/CS196314B2/cs unknown
- 1976-07-09 ES ES449739A patent/ES449739A1/es not_active Expired
- 1976-07-09 NO NO762407A patent/NO142576C/no unknown
- 1976-07-09 FI FI762010A patent/FI56525C/fi not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 BE BE168774A patent/BE843970A/xx not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 PL PL1976191068A patent/PL103003B1/pl unknown
- 1976-07-09 FR FR7621196A patent/FR2317280A1/fr active Granted
- 1976-07-09 SU SU762379659A patent/SU719492A3/ru active
- 1976-07-09 DK DK312676A patent/DK145799C/da not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 DD DD7600193785A patent/DD128691A5/xx unknown
- 1976-07-09 CH CH887476A patent/CH622287A5/de not_active IP Right Cessation
- 1976-07-09 IT IT50364/76A patent/IT1062605B/it active
- 1976-07-10 JP JP51082442A patent/JPS5224590A/ja active Granted
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4061625A (en) | Novel chromogenic thrombin substrates | |
| NO142074B (no) | Nye kromogene enzymsubstrater for serinproteaser | |
| NO142812B (no) | Nye diagnostisk aktive kromogene enzymsubstrater | |
| US4440678A (en) | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes | |
| SU1277904A3 (ru) | Способ получени трипептидов | |
| US4137225A (en) | Novel chromogenic enzyme substrates | |
| NO135245B (no) | ||
| NO135362B (no) | ||
| NO147212B (no) | Kormogent h.h.v. fluorescerende tripeptid for kvantitativ bestemmelse av proteolytiske enzymer | |
| NO142576B (no) | Nye diagnostisk aktive kromogene substrater med hoey spesifisitet for thrombin og thrombinlignende ensymer | |
| US4247454A (en) | Novel chromogenic thrombin substrates | |
| US4450105A (en) | Substrates for measuring thrombin | |
| US4568636A (en) | Tripeptide derivatives | |
| US4169015A (en) | Novel chromogenic thrombin substrates | |
| DE3045430A1 (de) | (alpha)-hydroxy-tripeptid-substrate | |
| EP0167980B1 (en) | Novel substrates for use in measuring the concentration of kallikrein in urine | |
| US4162941A (en) | Method for determining a proteolytic enzyme | |
| AU602527B2 (en) | Chromogenic compounds, a process for their preparation and their use | |
| JPH0755942B2 (ja) | 酵素活性測定用ペプチド誘導体及びその使用法 | |
| JPH0776232B2 (ja) | ペプチド誘導体及びその使用方法 | |
| NITECKI | SYNTHESIS OF CYCLO-L-TYROSYLGLYCYLGLYCYLGLYCYL L-HISTIDYLGLYCYL | |
| JPH0244518B2 (ja) | Tanpakubunkaikosooteiryobunsekisuruhoho |