NO135245B - - Google Patents

Download PDF

Info

Publication number
NO135245B
NO135245B NO1790/73A NO179073A NO135245B NO 135245 B NO135245 B NO 135245B NO 1790/73 A NO1790/73 A NO 1790/73A NO 179073 A NO179073 A NO 179073A NO 135245 B NO135245 B NO 135245B
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
mmol
phe
arg
val
pna
Prior art date
Application number
NO1790/73A
Other languages
English (en)
Other versions
NO135245C (no
Inventor
G E B Blombaeck
M Blombaeck
K G Claeson
L-G Svendsen
Original Assignee
Kabi Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kabi Ab filed Critical Kabi Ab
Publication of NO135245B publication Critical patent/NO135245B/no
Publication of NO135245C publication Critical patent/NO135245C/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C271/06—Esters of carbamic acids
    • C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
    • C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C271/22—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06043—Leu-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/37—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving peptidase or proteinase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
    • C12Q2337/10—Anilides
    • C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/968—Plasmin, i.e. fibrinolysin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/974—Thrombin
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/976—Trypsin; Chymotrypsin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/802—Chromogenic or luminescent peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S930/00—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/01—Peptide or protein sequence
    • Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse angår peptider for anvendelse
som diagnostiske substrater med høy spesifisitet overfor proteolytiske enzymer av typen peptidyl-peptidhydrolaser, som f.éks. thrombin, trypsin, plasmin, "Reptilase", "Arvin" og det hittil uklassifiserte, enzym "Brinase". Substratene ifølge oppfinn-
elsen er beregnet på kvantitativ bestemmelse av klassifiserte og hittil uklassifiserte enzymer av typen E. C. 3-4.4.,
spesielt slike som spalter peptider eller proteiner i peptid-
kjeden ved carboxylsiden av arginin eller lysin. Dessuten kan substratene anvendes ved studium av reaksjoner, hvor enzymer dannes, hemmes eller forbrukes, samt også for bestemmelse av faktorer som innvirker på eller deltar i slike reaksjoner,
f.eks. for bestemmelse av proenzymer, aktivatorer, antienzymer og enzyminhibitorer.
Ved klassifisering av enzymene er anvendt den av The Inter-national Union of Biochemistry anbefalte Enzyme Nomenclature, Elsevier, Amsterdam, 1965. Blant de hittil uklassifiserte
enzymer kan spesielt nevnes "Reptilase" og "Arvin".
I bl.a. Methoden der enzymatischen Analyse, bind 1,
side 1023 (Ed. Bergmeyer, H. U. Verlag Chemie, 1970) er omtalt forbindelser som har vært anvendt for kvantitativ bestemmelse av de ovenfor omtalte enzymer. Prinsipielt kan disse syntetiske substrater inndeles i to hovedgrupper, estersubstrater og amidsubstrater, som tillater bestemmelse av tilsvarende esterolytiske eller amidolytiske reaksjoner. Den største gruppe av syntetiske substrater som hittil er kommet til anvendelse, er ester-substratene, hvilket beror på at disse omsettes meget
hurtigere av peptidyl-peptidhydrolsater enn de hittil fremstilte amidsubstrat er. Den hovedsakelige biologiske funksjon hos enzymene som er klassifisert som peptidyl-peptidhydrolaser, er imidlertid, som navnet sier, å spalte peptid- eller amidbindinger i naturlige substrater og ikke esterbindingene. I litteraturen (Blood Clotting Enzymology, s. 36 og 42 - 44, Ed.: Seegers, W. H. Academic Press, 1967) angies at den esterolytiske og den amidolytiske katalyse hos disse enzymer ikke står i et konstant forhold til hverandre under ulike reaksjonsbetingelser. Man har derfor efterstrebet syntetiske amidsubstrater som har meget større susceptibilitet til de aktuelle enzymer og dessuten ved den enzymatiske hydrolyse hurtigere kan spaltes til målbare produkter enn de hittil kjente. Særlig vel egnet for å studere og følge reaksjonsforløpet ved den enzymatiske hydrolyse er amidsubstrater som gir kromofore produkter, som er lette å måle spektrofotomet risk og har lysabsorpsjonsmaksima som ikke faller sammen med amidsubstratenes lysabsorpsjonsmaksima, eller fluoriserende produkter som er egnet til å måles ved fluoricens-spektrofotometri, og også produkter som efter kobling med passende reagenser gir koblingsprodukter som med høy følsomhet kan måles foto-metrisk. Noen syntetiske amidsubstrater med avspaltbare kromofore grupper er kommet til anvendelse. De er først og fremst av typene Na<->usubstituerte og Na-substituerte monoaminosyre-p-nitroanilid-derivater samt monoaminos.yre-p-nafthylamidderivater. Blant disse forbindelser kan N CL-benzoyl-DL-arginin-p-nitroanilid-hydroklorid (BAPNA) nevnes som et reagens på trypsin (E. C. 3.4-4.) eller andre reaksjoner hvor trypsin deltar. Ved den enzymatiske hydrolyse av dette substrat dannes det kromofore produkt p-nitroanilin, som lett
' 1
kan måles spektrofotpmet risk.
Disse tidligere kjente amidsubstrater har imidlertid ikke den ønskede spe sif is it et ;; og følsomhet. Dette er en stor ulempe, som kan innebære en vanskeliggjort prøvetagning, da en stor mengde bio-logisk prøve trenges.<:>Selve enzymreaksjonen tar dessuten lang tid, og nøyaktigheten i enzymbéstemmelsen kan bli utilfredsstillende.
For spesielt thrombin; finnes intet amidsubstrat som virker bra.
BAPNA anvendes f.eks. hovedsakelig for trypsin og egner seg ikke godt f or thrombinbestemmelée, da det har lav spesifisitet overfor dette enzym.
De nye substrater av amidtypen ifølge oppfinnelsen med meget høy spesifisitet overfor thrombin og andre peptidyl-peptidhydrolaser kjennetegnes av følgende generelle formel:
eller salter derav, hvor R^ er hydrogen, acyl med 2-8 carbonatomer , cu-aminoacyl med 2-6 carbonatomer, cyclohexylcarbonyl, uu-cyclohexyl-acetyl, 4-aminomethyl-cyclohexylcarbonyl,
benzoyl, benzoyl substituert med methyl- eller aminogrupper, oi-fenyl-acyl med 2 eller 3 carbonatomer i acyldelen, som eventuelt er substituert med en aminogruppe i fenylringen, 4-toluensulfonyl, Na<->benzoyl-fenylalanyl eller fenylalanyl,
# 2 er fenyl, benzyl eller 4-hydroxybenzyl,
R^er forgrenet alkyl med 3 eller 4 carbonatomer,
n er 3 eller 4,
R^er hydrogen eller guanyl, og
R^er nitrofenyl, nafthyl eller nitronafthyl.
De nye substrater kan fremstilles ved i prinsippet to forskjellige metoder.
1. Den ene metode er basert på at den kromofore gruppe R^ kobles til den aktuelle aminosyre og at derefter den ønskede peptidstruktur bygges opp trinnvis ved suksessiv påkobling av øvrige aminosyrer. Den kromofore gruppe tjenestegjør derved som beskyttelsesgruppe for C-ende-carboxylgruppen i den første aminosyre. 2. Den annen metode er basert på trinnvis oppbygning av den ønskede peptidstruktur og først derefter avspaltes anvendte beskyttelsesgrupper, og den kromofore gruppe R^ påkobles.
Ved den trinnvise oppbygning av peptidderivatene anvendes vanligvis i peptidkjemien lenge kjente og anvendte koblingsmetoder. Som a-amino-beskyttelsesgrupper kan benyttes de vanlige i peptidkjemien kjente beskyttelsesgrupper som f.eks. Cbo (carbobenzoxy), MeOCbo (p-methoxycarbobenzoxy), NC^Cbo (p-nitrocarbobenzoxy), MCbo (p-methoxyfenylazo-carbobenzoxy), BOC (t-butyloxycarbonyl), TFA (tri-fluoracetyl) eller formyl. a-carboxylgruppen kan aktiveres ved at den overføres til forskjellige aktiverte, i peptidkjemien kjente og ofte anvendte, derivater, som enten kan isoleres eller genereres in situ, som f.eks. p-nitrofenylester, triklorfenylester, pentaklor-fenylester, N-hydroxysuccinimidester, syreazid, syreanhydrid, som enten kan være symmetrisk eller usymmetrisk, eller også kan den aktiveres med et carbodiimid som N,N'-dicyclohexylcarbodiimid. C-ende-carboxylgruppen i ;.aminopeptidderivatet eller aminosyrederivatet kan beskyttes ved at den forestres til f .eks. methyl-, ethyl-eller isopropylesfef: eller ved at den overføres til det kromofore anilinderivat, som virker som beskyttelsesgruppe under oppbygningen av peptidkjeden. Frie funksjonelle grupper, som ikke deltar i reaksjonen, kan ved oppbygningen av peptidene eller peptidderivatene beskyttes på følgende måte: Til blokkering .av arginylrestens $-guanidogruppe eller lysyl-■ restens £-aminogruppe anvendes vanlige, i peptidkjemien anvendte aminobeskyttelsesgrupjper , som f.eks. N02eller Tos (p-toluensulf onyl) som beskyttelse for guanidogruppen og Cbo (carbobenzoxy), BOC (t-butyloxycarbonyl) eller Tos for£-aminogruppen. Som beskyttelse for hydroxylgruppen i'tyrosin anvendes vanlige i peptidkjemien anvendte beskyttelsesgrupper som f.eks. benzyl- og t-butylbeskyttelses-grupper.
Forbindelsene vil-bl i beskrevet mere detaljert i de følgende eksempler, som viser fremstilling av forskjellige substrater ifølge oppfinnelsen ved trinnvis syntese.
Ved den tynnskiktskromatografiske analyse av eluat og produkter anvendes glassplater med Kiselgel F254Merck) som absorpsjjons-middel.
Anvendte oppløsningsmiddelsystemer er betegnet ifølge den følgende tabell.
Efter tynnskiktskromatografering studeres platene først i UV-lys (254 nm), og derefter anvendes klor/toluidinreaksjonen (litt: G. Pataki: DUnnschichtchromatografie in der AminosSure- und Peptid-Chemie, Walter de Gruyter&Co. Berlin, 1966, side 125) som frem-kallingsmetode.
De nedenfor anførte forkortelser har følgende betydning:
Aminosyrer:
Forkortelsene betegner aminosyrerester. Den frie aminosyre eller peptid angies av H- ved aminogruppen og -0H ved carboxylgruppen. Aminogruppen angies alltid til venstre og carboxylgruppen til høyre.
Alle aminosyrer i forbindelsene har L-konfigurasjon hvor annet ikke er angitt.
Eksempel 1: Na- Bz- Phe- Val- Arg- pNA- HCl
Eksempel Ia: Cbo-Arg(N02)-pNA
1) 35,3 g (0,1 mol) tørr Cbo-Arg(N02)-OH ble oppløst i 200 ml tørr nydestillert HMPTA ved værelsetemperatur, hvorefter 10,1 g (0,1 mol) Et^N og 24,6 g (0,15 mol) p-nitrofenylisocyanat ble tilsatt under omrøring og vannfrie betingelser. Efter et døgns reaksjonstid ved værelsetemperatur ble reaksjonsoppløsningen helt i 2 1 2%-ig natriumbicarbonatoppløsning under god omrøring. Den dann-, ede felning ble frafiltrert og vasket 3 ganger med 0,5 1 2%-ig natriumbicarbonatoppløsning, 2 ganger med 0,2 1 destillert vann, derefter 2 ganger méd 0,5 1 0,5 N saltsyre og til slutt 5 ganger med 0,2 1 destillert vann. Det tørrede råprodukt ble ekstrahert med varm methanol, hvorved det ønskede produkt og noen biprodukter ble oppløst. Den i methanol uoppløselige rest som utgjordes av N,N<*->bis-p-nit rof enylcarbåmid, ble frafiltrert og filtratet renset på en kolonne med "Sephadex" LH-20 brakt i likevekt med methanol.
Man fikk 29,89(63,0%) Ia' med smp. 185 - 188°C, enhetlig ifølge TLC i 'P1 og C og [a]^ = -1,3° (C = 1,1; AcOH) . 2) 35,39(0,1 mmol) Cbo-Arg(N02)-0H (tørret) ble oppløst i 600 ml tetrahydrofuran-.DMF (1:1). 10,1 g (0,1 mol) Et^ ble tilsatt, hvorefter oppløsningen ble nedkjølt til -10°C under vannfrie betingelser. Til den nedkjølte blanding ble i løpet av 10 minutter tildryppet
13,79(0,1 mol) klormaursyreisobutylester oppløst i 50 ml tetra-hydrofuran, og efter ytterligere 10 minutter ble der tilsatt 16,49(0,1 mol) p-nitroanilin. Reaksjonsoppløsningen fikk lov til å anta værelsetemperatur og ble hensatt ved denne temperatur i ett døgn. Reaksjonsoppløsningen ble derefter inndampet til tørrhet i vakuum, digerert 3 - 5 ganger hver gang med destillert vann, 5%-ig natrium-bicarbonatoppløsning og destillert vann, hvorefter residuet ble tørret i vakuum.
Rensning: Omkrystallisasjon 2 ganger fra MeOH.
Morluten ble gelfiltrert på "Sephadex<»>LH-20 i MeOH.
Man fikk 23,0 g (48,5%) Ia med samme fysikalske data som i foregående eksempel.
3) 35,3 g (0,1 mol) Cbo-Arg(<N0>2)<->0H ble oppløst i DMF, oppløs-ningen ble avkjølt til -10°C hvorefter 20,6 g (0,1 mol) DCCI og
16,4 g (0,1 mol) p-nitroanilin ble tilsatt. Efter 1 døgns reaksjonstid ved værelsetemperatur ble reaksjonsoppløsningen inndampet til tørrhet og digerert 3-5 ganger hver gang med destillert vann, 5%-ig natriumbicarbonatoppløsning, destillert vann, 0,5 N HC1 og destillert vann. Digereringsresiduet ble tørret i vakuum.
Rensning: Gelfilt rering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 14,79(34,0%} Ia med smp. 186 - 188°C, enhetlig ifølge TLC i PJLog C og [a]^ = -1,38° (C = 1,0; AcOH).
Eksempel Ib: Cbo-Val-Arg(N02)-pNA
Til 20,6 g (43,5 mmol) Ia ble tilsatt HO ml AcOH og 110 ml
4 N HBr i AcOH under tørre betingelser. Blandingen ble omrørt ved værelsetemperatur i 60 minutter, hvorefter den under kraftig omrør-ing langsomt ble helt i 750 ml tørr ether, hvorved
1,5 HBr-H-Arg(N02)-pNA falt ut. Etherfasen ble fradekantert, fel-ningen ble vasket ytterligere 4 ganger med 250 ml tørr ether for å fjerne dannet benzylbromid samt overskudd av HBr og AcOH. Efter tørring i vakuum over P20^ fikk man aminosyrederivatets hydrobromid-salt i kvantativt utbytte (20,O g).
20,0 g (43,5 mmol) 1,5 HBr•H-Arg(N02)-pNA ble oppløst i 150 ml DMF og avkjølt til -10°C. 6,60 g (65,2 mmol) Et^N ble tilsatt for å frigjøre H-Arg(N02)-pNA fra hydrobromidsaltet. Dannet Et'HBr ble frafiltrert og til det, til -10°C avkjølte filtrat, ble tilsatt 20,3 g (54,3 mmol) Cbo-Va1-OpNP. Da reaksjonsoppløsningen efter noen timers reaksjonstid hadde antatt værelse.temperatur, ble den på ny nedkjølt og pufret med 2,2 g (21,7 mmol) Et^N. Pufringen ble gjentatt ytterligere en gang efter ca. 3 timer. Efter tilsammen ca. 24 timers reaksjonstid ble reaksjonsoppløsningen inndampet i vakuum ved 40°C til tørrhet. Residuet ble digerert 3 ganger med 100 ml destillert vann og derefter tørret i vakuum.
Rensning: Omkrystallisasjon av råproduktet fra MeOH 2 ganger
ga 12,4 g (50%) rent materiale. Morluten ble renset ved gelfiltrering på en kolonne med "Sephadex" LH-20 brakt i likevekt med MeOH. Av eluatet fikk man en fraksjon som ga ytterligere 10,89rent stoff.
Man fikk 23,2 g (93,3%) Ib med smp. 200 - 202°C, enhetlig ifølge TLC i P1og C og [a]^ = +5,8° (C = 1,0; DMF).
Eksempel lc: Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 28,6 g (50 mmol) Ib og 31,5 g (75 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Omkrystallisasjon av råproduktet 3 ganger fraMeOH
ga 14,4 g ren forbindelse ifølge TLC. Morluten ble renset ved gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH, hvilket ga 19,6 g ren forbindelse ifølge TLC.
Man fikk 34,0 g (94,4%) Ic med smp. 219,5 - 222°C, enhetlig ifølge TLC i P^^og [a]D<3>= -17,1° (c = 1,0; DMF-AcOH; 99:1).
Eksempel Id: Na<->Bz-Phe-Val-Arg(N02)-OMe
Utgangsmateriale: 30,79(50 mmol) Cbo-Phe-Arg(N02)-OMe og
16,0 g (75 mmol) Bz20.
Syntesemetode: Decarbobenzoxylering av Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-OMe ble utført analogt med eksempel Ib.
30,0 g (50 mmol) 1,5 HBr-H-Phe-Val-Arg(N02)-OMe ble oppløst i 350 ml DMF og avkjølt til -10°C, hvorefter 7,6 g (75 mmol) Et^N ble tilsatt. Oppløsningen ble' omrørt under tørre betingelser i 1 time, hvorefter det dannede Et^N-HBr ble frafiltrert. Filtratet ble av-
kjølt til -10°C, og 16,0 g (75 mmol) Bz20 ble tilsatt. Efter ca.
3 timers reaksjonstid da oppløsningen hadde antatt værelsetemperatur, ble den på ny avkjølt og pufret med 2,5 g (25 mmol) EtgN. Pufringen ble gjentatt enda en gang efter ca. 3 timer. Efter tilsammen ca. 24 timers reaksjonstid ble oppløsningen inndampet til tørrhet i vakuum. Residuet ble digerert og tørret ved fremgangsmåten beskrevet under eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 26,0 g (88,9%) Id med smp. 138 - l4l°C, enhetlig ifølge TLC i P^ og D og [a]^ = -39,8° (c = 1; MeOH).
Eksempel le: Na<->Bz-Phe-Val-Arg(N02)-0H
11,7 g (20 mmol) Id ble oppløst i 200 ml 50%-ig EtOH, og 200 ml 1 N KOH/95% EtOH ble tilsatt. Efter 75 minutters omrøring ved værelsetemperatur ble C02-gass innledet til pH 7. Oppløsningen ble inndampet i vakuum til ca. 25 ml volum og derpå fortynnet med vann til et totalvolum på 500 ml. Oppløsningen ble ekstrahert 4 ganger med EtOAc, hvorefter vannfasen ble gjort sur med 1 N HC1 til pH 2,8-Den frigjorte benzoyl-tripeptidsyre som utfeltes ved surgjøringen, ble frafiltrert og vasket gjentatte ganger med destillert vann. Forbindelsen ble tørret i vakuum.
Rensning: Omkryst allisasjon 2 ganger fra MeOH:H20.
Morluten ble renset ved gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 10,1 g (88,5%) le i amorf form med E. v. 555,7 og enhetlig ifølge TLC i A og C.
Eksempel If: Na<->Bz-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
1)Utgangsmateriale: 7,2 g (10 mmol) Ic og 3,4 g (15 mmol) Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 5,2 g (75,5%) If med smp. 236 - 237°C, enhetlig ifølge TLC i ?Y og D og [aj^= -23,0° (c = 1; DMF). 2) Utgangsmateriale: 5,79(10 mmol) le og 2,46 g (15 mmol) p-nitrofenylisocyanat.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ia - 1.
Rensning: Gelfilt rering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 5,2 g (75,5%) If med smp. 235 - 237°C, enhetlig ifølge
TLC i P og D og [a]^ = -22,5° (c = 1; DMF).
I: Na- Bz- Phe- Va1- Arg- pNA• HC1
345 mg (0,5 mmol) If ble anbrakt i et rør i et Sakakibara-apparat. 5 ml tørt hydrogenfluorid ble kondensert i røret. Efter 1 times reaksjonstid ved 0°C og omrøring var nitrogruppen, som be-skyttet guanidinfunksjonen, og Cbo-gruppen avspaltet. Hydrogen-fluoridet ble avdestillert under vakuum, og det tørre residuum ble oppløst i DMF. For å overføre hydrofluoridderivatet av peptidet til dets hydrokloridsalt ble der tilsatt 0,25 ml konsentrert HC1 til DMF-oppløsningen. Oppløsningen ble inndampet under vakuum til tørr-het. Overføringsprosessen ble gjentatt ytterligere en gang.
Residuet ble oppløst i 33%-ig AcOH.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk efter frysetørring 275 mg (80,7%) I i amorf form medCl-innhold 5,12%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^3<=><->43,5°
(c = 0,69; 50% AcOH).
Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,2; Arg: 0,99-
Eksempel II: Na- 3- fenylpropionyl- Phe- Val- Arg- pNA• HC1
Eksempel Ila: "Na-3-f enyIpropionyl-Phe-Val-Arg(N02)-OMe
Utgangsmateriale: 30,7 g (50 mmol) Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-OMe og 16,3 g (60 mmol) 3-fenylpropionyl-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
.Rensning:_Gel-f-iltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 25,2 ,g (82,5%) Ila enhetlig ifølge TLC i P1og C.
Eksempel Ilb: Na-34f;enylpropionyl-Phe-Val -Arg(N02) -0H
Utgangsmateria-le: 7,1 g (11,5 mmol) Ila. Syntesemetode ^Analogt med eksempel le.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 6,5 g|.(93,7%) Hb med EV 584,1, enhetlig ifølge TLC i [a]^ = -9',3°
Eksempel lic: Na-3_f é.nylpropionyl -Phe-Val -Arg (N02 ) -pNA
Utgangsmateriale: 3 g (5 mmol) Hb og 1,23 (7,5 mmol) p-nitrofenylisocyanat.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ia - 1.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 2,65 g (66,3%) He, enhetlig ifølge TLC i P1.
II: Na- 3- fenylpropionyl- Phe- Val- Arg- pNA• HCl Utgangsmateriale: 179 mg (0,25 mmol) lic.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfilt rering på "Sephadex" G-I5 i 33% AcOH.
Man fikk efter frysetørring 45 mg (26,5%) II i amorf form med Cl-innhold 4,91%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -36,7°
(c = 0,71; 50% iAcOH).
Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 0,99.
Eksempel III: H- Phe- Val- Arg- pNA- 2 HCl
Utgangsmateriale: 198 mg((0,28 mmol) Ic.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 170 mg (61,0%) amorf, frysetørret III med Cl-innhold 11,37%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -26,3° (c = 0,6l; 50% AcOH).
Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 0,95; Arg: 1,0.
Eksempel IV: H- Phe- Phe- Val- Arg- pNA- 2 HCl
Eksempel IVa: Cbo-Phe-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 335 mg (0,46 mmol) Ic og 317 mg (0,75 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i DMF.
Man fikk 282 mg (70,0%) IVa med smp. 201 - 204°C, enhetlig ifølge TLC i P- L og [a]D<5>= -1,02° (c =0,98; DMF).
IV: H- Phe- Phe- Val- Arg- pNÅ• 2 HCl
Utgangsmateriale: 92,9 mg (0,107 mmol) IVa. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 59,5 mg (73,1%) amorf, frysetørret IV med Cl-innhold 9,18%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -19,7° (c = 0,76;
50% AcOH) .
Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 2,2; Arg: 0,98-
Eksempel V: p- M e- Bz- Phe - Va1- Arq- pNA• HC1
Eksempel Va: p-Me-Bz-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 155 mg (0,216 mmol) Ic og 83,2 mg (0,324 mmo p-Me-Bz-OpNP, smp. 169 - 172°.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 69,5 mg (45%) amorf Va, enhetlig ifølge TLC iP^ og [a]p3 = -26,1° (c = 0,69; DMF).
V: p- Me- Bz- Phe- Val- Arg- pNA• HCl
Utgangsmateriale: 68,98 mg (0,0965 mmol) Va.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 44,5 mg (66%) amorf, frysetørret V med Cl-innhold 5,01%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -40,8° (c = 0,70;
50% AcOH).
Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 1,0.
Eksempel VI: Na- Ac- Phe- Val- Arg- pNA- HCl
Eksempel Via: Na<->Ac-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 233 mg (0,33 mmol) Ic. og 4l mg (0,40 mmol)Ac20. I
Syntesemetode: rAnalogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 118 mq; (66%) amorf Via, enhetlig ifølge TLC i P-j^og [a]p3 -3,6° (c = l£6; DMF).
VI: Na- Ac- Phe- Val- Arg- pNA- HCl
Utgangsmateriale: 116 mg (0,185 mmol) Via.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: GelfiTtrering på "Sephadex" G-15 i 20% AcOH.
Man fikk 90 mg "(79%) amorf, frysetørret VI med Cl-innhold 5,59%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -21,0° (c =0,62; 50%AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,2; Arg: 1,1.
Eksempel VII: Na- n- octanoyl- Phe- Val- Arg- pNA' HCl
Eksempel Vila: Na<->n-oetanoyl-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 207 mg (0,288 mmol) Ic og 109 mg (0,4-1 mmol) caprylsyre-p-nitrofenylester, smp. *w 24°C.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 172 mg (84%) amorf Vila, enhetlig ifølge TLC i P^og [a]p<3>= -6,6° (c = 0,5; DMF).
VII: Na- n- oetanoyl- Phe- Val- Arg- pNA- HCl
Utgangsmateriale: 129,4 mg (0,182 mmol) Vila.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH og "Sephadex"G-l5 i 33% AcOH.
Man fikk 109 mg (85%) amorf, frysetørret VII med Cl-innhold 4,96%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -29,5° (c = 0,7; 50% AcOH).
Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 0,95-
Eksempel VIII: Na- cyclohexylearbony1- Phe- Va1- Arg- pNA»HC1
Eksempel Villa: Na<->cyclohexylcarbonyl-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 233 mg (0,33 mmol) Ic og 100 mg (0,40 mmol) cyclohexylcarbonsyre-p-nitrofenylester.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 117 mg (ca. 50%) amorf Villa, enhetlig ifølge TLC i P-j^og [a]p<3>= -10,9° (c = 0,2-3; DMF).
VIII: NQ- cyclohexylearbony1- Phe- Val- Arg- pNA- HCl Utgangsmateriale: 48,02 mg (0,069 mmol) Villa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 50% AcOH.
Man fikk 33,7 mg (71%) amorf, frysetørret VIII med Cl-innhold 5,11%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -32,8° (c = 0,69; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe; 1,3; Arg: 1,0.
Eksempel IX: Na- Tos- Phe- Val- Arg- pNA- HCl
Eksempel IXa: Na<->Tos-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 360 mg (0,5 mmol) Ic og 180 mg (0,95 mmol)
p-toluensulfoklorid.
Syntesemetode: 360 mg Ic ble oppløst i 1 ml AcOH og 1 ml
5,6 N HBr/AcOH under tørre betingelser og ble omrørt i 1 time ved værelsetemperatur. Reaksjonsoppløsningen ble derefter dryppet i destillert ether under kraftig omrøring, hvorved 350 mg 1,5 HBr"H-PHe-Val-Arg(N02)-pNA utfeltes. Etherfasen ble fradekantert, og bunn-fallet ble vasket ytterligere 3 ganger med ether. Efter tørring i vakuum over P20^ fikk man HBr-saltet av aminosyrederivatet i kvantitativt utbytte. HBr-derivatet ble oppløst i 4 ml DMF. Oppløsningen ble avkjølt til -10°C, og 75 mg (0,75 mmol) Et^N ble tilsatt for å frigjøre H-Phe-Val-Arg(N02)-pNA fra hydrobromidsaltet. Reaksjonen fikk lov til å forløpe i 1 time under tørre betingelser. Dannet Et^N-HBr ble frafiltrert, og filtratet ble avkjølt til -10°C. 180 mg p-toluensulfoklorid ble tilsatt, og oppløsningen fikk langsomt lov til å anta værelsetemperatur, hvorpå den efter ca. 3 timer ble avkjølt til -10°C og pufret med 25 mg (0,25 mmol) Et^N. Pufringen ble gjentatt ytterligere en gang efter ca. 2 - 3 timer. Efter ca. 24 timers reaksjonstid ble oppløsningen inndampet i vakuum ved 40°C til tørr-het. Residuet ble digerert 3 ganger med destillert vann og derefter tørret i vakuum. Residuet ble oppløst i MeOH og renset.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 135 mg (3.6,5%) amorf IXa, enhetlig ifølge TLC i P±og
[a]p<3>= Jo° (c 1,0; Ep) .
IX: Na- Tos- Phe- Val- Arg- pNA >HC1
Utgangsmateriale: 81,43 mg (0,11 mmol) IXa.
Syntesemetode?Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltréring på "Sephadex" G-15 i 20% AcOH.
Man fikk 63 mg. (78,4%) amorf, frysetørret IX med Cl-innhold 4,79%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= ± O (c = 0,73; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,2; Arg: 1,0.
Eksempel X: N a- p- amino- Bz- Phe- Va1- Arg- pNA• 2 HCl
Eksempel Xa: Cbo-p-amino-Bz-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 233 mg (0,33 mmol) Ic og 170 mg (0,44 mmol)
Cbo-p-amino-Bz-OpNP, smp. 169 - 172°C.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 55 mg (20%) amorf Xa, enhetlig ifølge TLC i P-j^ og [a]p<3>= -30,2° (c = 0,53; DMF).
X: Na- p- amino- Bz- Phe- Va1- Arg- pN A• 2 HCl
Utgangsmateriale: 46,81 mg (0,056 mmol) Xa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 20% AcOH.
Man fikk 15 mg (37%) amorf, frysetørret X med Cl-innhold 9,42%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -46,7° (c = 0,74; 50% AcOH).Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 0,95.
Eksempel XI: Na- 6- aminohexanoy1- Phe- Va1- Arg- pNA• 2 HCl
Eksempel Xla: Cbo- 6- aminohexanoy1- Phe- Va1- Arg( NO^)- pNA
Utgangsmateriale: 36o mg (0,5 mmol) Ic og 290 mg (0,75 mmol) Cbo-6-aminocapronsyre-p-nit rofenylester.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 398 mg (95,5%) amorf Xla, enhetlig ifølge TLC i Pj^ og [a]p5 =-5,7° (c = 1,1; DMF).
XI: Na- 6- aminohexanoy1- Phe- Va1- Arg- pNA• 2 HCl Utgangsmateriale: 300 mg (0,36l mmol) Xla.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH og "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 127 mg (48%) amorf, frysetørret XI med Cl-innhold 9,68%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -32,0° (c = 0,72; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XII: H- Phe- Leu- Arq- pNA' 2 HCl
Eksempel XHa : Cbo- Leu- Arg( N02) - pNa
Utgangsmateriale: 5 g (10,6 mmol) Ia og 4,92 g (12,7 mmol) Cbo-Leu-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 6,1 g (98%) amorf Xlla, enhetlig ifølge TLC i P±og [a]p<5>-33,5° (c = 1,0; MeOH).
Eksempel XIIb: Cbo- Phe- Leu- Arg( N02)- PNA
Utgangsmateriale: 3,6 g (6,5 mmol) XHa og 3,27 (7,8 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 2,95 g (69,0%) amorf XHb, enhetlig ifølge TLC i P-j, og [a]p<5>=-6,2° (c = 1,0; DMF).
XII: H- Phe- Leu- Arq- pNA- 2 HCl
Utgangsmateriale: 124,9 mg (0,17 mmol) XHb. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 65 mg (6l%) amorf, frysetørret XII med Cl-innhold 11,15%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -24,4° (c = 0,63; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Leu: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XIII: NQ- Bz- Phe- Leu- Arg- pNA- HCl
Eksempel XHIa: Na<->Bz-Phe-Léu-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 734 mg (1 mmol) XHb og 272 mg (1,2 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 589 mg (84%) XHIa med smp. 196 - 197°C, enhetlig ifølge TLC P-,^og D og [a]^<5>= -19,1° (c = 1,01;DMF).
XIII: N- Bz- Phe- Leu- Arg- pNA• HCl
Utgangsmateriale: 198,5 mg (0,282 mmol) XHIa. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 188 mg (96%) amorf, frysetørret XIII med Cl-innhold 4,96%, enhetlig iføLge TLC i A og [a]^ = -38,3° (c = 0,69; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Leu: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 1,0.
Eksempel XIV: H- Phe- Ile- Arg- pNA- 2 HCl
Eksempel XlVa: Cbo-Ile-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 1 g (2,1 mmol) Ia og 0,989(2,46 mmol) Cbo-Ile-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 1,12 g (91%) med smp. 195 - 202°C, enhetlig ifølge TLC i P og [a]p<5>+2,8° (c'=
Eksempel XlVb: Cbo-Phe-Ile-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 0,89(1,36 mmol) XlVa og 0,69 g (1,63 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 445 mg (4l%) XlVb med smp. 219 - 222°, enhetlig ifølgeTLC i Pxog [a]p<5>= -7,1° (c = 1; DMF).
XIV: XIV: H- Phe- Ile- Arg- pNA• 2 HCl
Utgangsmateriale: 166,43 mg (0,226 mmol) XlVb.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 95,3 mg (67%) amorf, frysetørret XIV med Cl-innhold 11,17%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -32,0° (c =0,63;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Ile: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XV: Na- Bz- Phe- Ile- Arg- pNA- HCl
Eksempel XVa: Na<->Bz-Phe-Ile-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 250 mg (0,34 mmol) XlVb og 92 mg (0,4 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 210 mg (88%) XVa med smp. 244 - 245°C, enhetlig ifølge TLC i P-,^og [a]p<5>= -22,3 (c = 1; DMF).
XV: Na- Bz- Phe- Ile- Arq- pNA- HCl
Utgangsmateriale: 182,7 mg (0,26 mmol) XVa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 176,9 mg (97%) amorf, frysetørret XV med Cl-innhold 4,98%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^ = -41,5° (c = 0,69;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Ile: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,1.
Eksempel XVI: H- Phe- Phe- Arg- pNA- 2 HCl
Eksempel XVIa : Cbo -Phe -Arg (NC>2) -pNA
Utgangsmateriale: lg (2,1 mmol) Ia og 1,06 g (2,46 mmol)
Cbo-Phe-OpNp.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib..
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 1,25 g (96,0%) XVIa med smp. 198 - 204°C, enhetlig ifølge TLC i P- L og [a]^ = +4,2° (c = 1,0; DMF).
Eksempel XVIb: Cbo-Phe-Phe-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 0,9 (1,45 mmol) XVIa og 0,7379(1,74 mmol)
Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 635 mg (58%) XVIb med smp. 201 - 203°C, enhetlig
ifølge TLC iP±og [a]^5 = -23,0° (c = 1,0; DMF).
XVI: H- Phe- Phe- Arq- pNA- 2 HCl
Utgangsmateriale: 196,9 mg (0,257 mmol) XVIb. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 75,8 mg (46%) amorf, frysetørret XVI med Cl-innhold 10,65%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]p<3>= -6,7° (c = 0,65; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Phe: 2,0; Arg: 1,1.
Eksempel XVII: Na- Bz- Phe- Phe- Arq- pNA- HCl
Eksempel XVIIa: Na<->Bz-Phe-Phe-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 250 mg (0,325 mmol) XVIb og 90 mg (0,312 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 220 mg (92%) amorf XVIIa, enhetlig ifølge TLC i P^^ og [ct]^<5>= -36,6° (c = 0,95; DMF).
XVII: Na- Bz- Phe- Arg- pNA- HCl
Utgangsmateriale: 114,6 mg (0,156 mmol) XVIIa. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 77,4 mg (68%) amorf, frysetørret XVII ned Cl-innhold 4,81%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]<j>^ = -25,5° (c = 0,72; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Phe: 2^0; Arg: 0,97-
Eksempel XVIII: H- D- Phe- Val- Arg- pNA- 2 HCl
Eksempel XVIIIa: Cbo-D-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 480 mg (0,83 mmol) Ib og 530 mg (1,25 mmol) Cbo-D-Phe-OpNP med smp. 126,2 - 126,6° C; [a]^ = +24,75° (c = 1,0;
DMF) .
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex"LH-20 i MeOH.
Man fikk 587 mg (98%) amorf XVIIIa, enhetlig ifølge TLC i Pj^og[a]p<3>= +18,9° (c = 2,0; DMF).
XVIII: H- D- Phe- Val- Arg- pNA- 2 HCl
Utgangsmateriale: 153,8 mg (0,212 mmol) XVIIIa. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 20% AcOH.
Man fikk 36,3 mg (28%) amorf, frysetørret XVIII med Cl-innhold 11,34%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -70,3° (c = 0,6l;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XIX: Na- Bz- D- Phe- Val- Arq- pNA- HCl
Eksempel XlXa: Na<->Bz-D-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 244 mg (0,34 mmol) XVIIIa og 92 mg (0,4l mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 181 mg (77%) XlXa med smp. 211 - 215°C, enhetlig ifølge TLC i P^^ og [a]D<3>= -1,36° (c =0,8; DMF).
XIX: Na- Bz- D- Phe- Va1- Arg- pNA- HCl
Utgangsmateriale: 128,3 mg (0,186 mmol) XlXa. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-25 i 50% AcOH.
Man fikk 103,8 mg (81%) amorf, frysetørret XIX med Cl-innhold 5,15%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]J<3>= -36,9° (c = 0,68; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 0,9; Arg: 0,9.
Eksempel XX: H- Tyr- Val- Arg- pNA- 2 HCl
Eksempel XXa: Cbo-Tyr(OBz)-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 480 mg (0,83 mmol) Ib og 66o mg (1,25 mmol)Cbo-Tyr(OBz)-OpNP med smp. 147,5 - l49,0°C og [a]^<5>= -8,5°
(c = 2,0; DMF).
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 460 mg (65%) amorf XXa, enhetlig ifølge TLC i P-j^ og [a]p3 = -9,66° (c = 1,0; DMF).
XX: H- Tyr- Val- Arq- pNA- 2 HCl
Utgangsmateriale: 144,7 mg (0,169 mmol) XXa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 20% AcOH.
Man fikk 65,4 mg (62%) amorf, frysetørret XX med Cl-innhold 11,20% enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -29,8° (c = 0,63;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Tyr: 1,2; Arg: 1,0.
Eksempel XXI: Na- Bz- Tyr- Val- Arg- pNA- HCl
Eksempel XXIa: N<a>Bz-Tyr-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 246 mg (0,287 mmol) XXa og 65 mg (0,29 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Under HBr-behandlingen spaltes delvis Bz-gruppen som beskytter tyrosin-OH. Utbyttet blir derfor lavt, og antagelig får man både XXIa og Na<->Bz-Tyr(OBz)-Val-Arg(N02)-pNA.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 193 mg (81%) amorft produkt som viser to forbindelser ved TLC i P1 (se ovenfor).
XXI: N°- Bz- Ty r- Val- Arg- pNA• HCl
Utgangsmateriale: 138,9 mg XXIa og Na<->Bz-Tyr(OBz)-Val-Arg(N02)-pNA.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 50% AcOH.
Man fikk 75,4 mg amorf, frysetørret XXI med Cl-innhold 5,03% enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -34,7° (c = 0,7; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Tyr: 1,2; Arg: 1,0.
Eksempel XXII: Na<->4-aminomethylcyclohexylcarbonyl-Phe-Val-Arg-pNA- 2 HCl Eksempel XXIIa: Cbo- 4- aminomethylcyclohexylearbonyl- Phe- Val- Arg-pNA
Utgangsmateriale: 268 mg (0,65 mmol) Cbo-4-arainomethylcyclo-hexylcarbonyl-OpNP og 360 mg (0,5 mmol) Ic.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 265 mg (62%) amorf XXIIa, enhetlig ifølge TLC i Px og [u]^3 = -8,5° (c = o,51; DMF).
XXII: Na- 4- aminomethylcyclohexylea rbony1- Phe- Va1- Arg- pNA. 2 HCl Utgangsmateriale: 137 mg (0,l6 mmol) XXIIa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 82,2 mg (68,5%) amorf, frysetørret XXII med Cl-innhold 9,37%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<5>= -35,2° (c = 0,73, 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XIII: Na- 2- cyclohexylacetyl- Phe- Val- Arg- pNA' HCl
Eksempel XXIIIa: Na-2-cyclohexylacet yl-Phe-Va1-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 197 mg (0,75 mmol) cyclohexylacetyl-OpNP
og 331 mg (0,46 mmol) Ic.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 205 mg (63%) amorf XXIIIa, enhetlig ifølge TLC i P1og [a]^<3>= -5,0° (c = 0,5; DMF).
XXIII: Na- 2- cyclohexylacet yl- Phe- Va1- Arg- pNA- HClUtgangsmateriale: 173 mg (O,244 mmol) XXIIIa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 139 mg (81%) amorf, frysetørret XXIII med Cl-innhold 5,01%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -32,0° (c = 0,35; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XXIV: 4- aminobutyry1- Phe- Va1- Arg- pNA' 2 HCl
Eksempel XXIVa: Cbo-4-aminobutyryl-Phe-Val-Arg (N02)-pNA
Utgangsmateriale: 234 mg (0,65 mmol) Cbo-4-aminobutyryl-OpNP
og 360 mg (0,5 mmol) Ic.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 297 mg (74%) amorf XX IVa, enhetlig ifølge TLC iPJlog [a]p3 = -5,0° (c = 0,6; DMF).
XXIV: 4- aminobutyry 1 - Phe- Va 1 - Arq- pNA• 2' HCl Utgangsmateriale: 291 mg (0,362 mmol) XXIVa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 167 mg (66%) amorf, frysetørret XXIV med Cl-innhold 10,05%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -35,3° (c = 0,72;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,0; Arg: 1,1.
Eksempel XXV: 2-( 4- aminofenyl)- acetyl- Phe- Val- Arq- pNA- 2 HCl Eksempel XXVa: 2-(4-Cbo-aminofenyl)-acetyl-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 200 mg (0,278 mmol) Ic og 152 mg (0,371 mmol) 2-(4-aminofenyl)-acetyl-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 201 mg (85%) amorf XXVa, enhetlig ifølge TLC i P1og
[a,]^ = -4,3° (c = 0,5; DMF).
XXV: 2-( 4- aminofenyl)- acety1- Phe- Val- Arg- pNA• 2 HClUtgangsmateriale: 97,5 mg (0,114 mmol) XXVa.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 43,5 mg (51%) amorf, frysetørret XXV med Cl-innhold 9,47%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^<3>= -33,0° (c = 0,75;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,1.
Eksempel XXVI: Na- Bz- C- PH- Gly- Val- Arg- pNA' HCl
Eksempel XXVIa: Cbo-C-Ph-Gly-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 230 mg (0,568 mmol) Cbo-C-Ph«Gly-OpNP og 250 mg (0,437 mmol) Ib.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ic.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 292 mg (95%) amorf XXVIa , enhetlig ifølge TLC i P^^og
[a]<24>= +8)2° (c = 0,50; DMF).
Eksempel XXVIb: Na<->Bz-Ph-Gly-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 290 mg (0,4l mmol) XXVIa og 130 mg (0,575 mmo])
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 211 mg (76%) amorf XXVIb, enhetlig ifølge TLC i P^^ og [a]J3 = +10,4° (c = 0,51; DMF).
XXVI: Na- Bz- C- Ph' Gly- Val- Arg- pNA• HCl
Utgangsmateriale: 200 mg (0,296 mmol) XXVIb.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelf ilt rering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.. ,.
Man fikk 186 mg (95%) amorf, frysetørret XXVI med Cl-innhold 5,25%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]^5 = -27,0° (c = 0,67,
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; C-Ph-Gly: 1,2; Arg: 0,9-Eksempel XXVII: Na- Bz- Phe- Val- Arq- pNA- HCl
Eksempel XXVIIa: Na<->Bz-Phe-Phe-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 141 mg (0,163 mmol) IVa og 90 mg (0,4 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 114 mg (84%) amorf XXVIIa, enhetlig ifølge TLC i P-^og [a]p<4>= -0,75° (c = 1,2; DMF) .
XXVII: Na- Bz- Phe- Phe- Va1- Arq- pNA• HCl
Utgangsmateriale: 71 mg (ca. 0,087 mmol) XXVIIa. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfilt rering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 47 mg (69%) amorf, frysetørret XXVII med Cl-innhold 4,23%, enhetlig ifølge TLC i A. Aminosyreanalyse ga Val: 1,0;
Phe: 2,3; Arg: 1,0.
Ek sempel XXVIII: Na- Bz- DL- C- Ph• Gly- Va1- Arg- pNA- HCl
Eksempel XXVIIIa: Cbo-DL-C-Ph-Gly-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 286 mg (0,5 mmol) Ib og 285 mg (0,7 mmol) Cbo-DL-C-Ph-Gly-OpNP med smp. 107 - 108°C.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ic.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 353 mg (81%) amorf XXVIIIa, enhetlig ifølge TLC i P1.
Eksempel XXVIIIb: Na<->Bz-DL-C-Ph-Gly-Val-Arg(N02)-pNA
Utgangsmateriale: 285 mg (0,403 mmol) XXVIIIa og 181 mg
(0,8 mmol) Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 226 mg (83%) amorf XXVIIIb, enhetlig ifølge TLC i P±.
XXVIII: Na- Bz- DL- C- Ph• Gly- Va1- Arg- pNA• HCl
Utgangsmateriale: 101 mg (0,15 mmol) XXVIIIb.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 6l mg (6l%) amorf, frysetørret XXVIII med Cl-innhold 5,21%, enhetlig ifølge TLC i A. Aminosyreanalyse ga Val: 1,0;
C-Ph-Gly: 1,2; Arg: 0,9-
Eksempel XXIX: Na- Bz- Phe- Val- Arq- 2- NA- HCl
Eksempel XXIXa: Cbo-Arg(N02)-2-NA
Utgangsmateriale: 3,6 g (10 mmol) Cbo-Arg(N02)-OH og 1,72 g (1-2 mmol) 2-nafthylamin .
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ia - 2.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 4,05 g (84%) amorf XXIXa, enhetlig ifølge TLC i P^^ og [a]p3 = +7,4° (c = 1,0; DMF).
Eksempel XXIXb: Cbo- Val- Arg( N02)- 2- NA
Utgangsmateriale: 1,5 g (3,1 mmol) XXIXa og 1,389(3,7 mmol) Cbo-Val-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 1,66 g (95%) delvis krystallinsk XXIXb, enhetlig ifølge TLC i P- L og [a]D<2>= -6,0° (c = 1,01;DMF).
Eksempel XXIXc: Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-2-NA
Utgangsmateriale: 1,65 g (2,84 mmol) XXIXb og 1,43 g (3,4 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ic.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 1,55 g (75%) amorf XXIXc, enhetlig ifølge TLC i P±og [a]<22>= -10,9° (c =1,1; DMF).
Eksempel XXIXd: Na<->Bz-Phe-Val-Arg(N02)-2-NA
Utgangsmateriale: 1,15 g (1,58 mmol) XXIXc og 465 mg (2,05 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfilt rering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 0,89 g (80,3%) delvis krystallinsk XXIXd, enhetlig ifølge TLC i P og [a]^° = -31,1° (c = 1,01; DMF).
XXIX: Na- Bz- Phe- Val- Arg- 2- NA• HCl
Utgangsmateriale: 620 mg (0,89 mmol) XXIXd. Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 50% AcOH.
Man fikk 385 mg (63%) amorf, frysetørret XXIX med Cl-innhold 5,12%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]<22>= -53,8° (c = 0,71;
50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 1,0.
Eksempel XXX: . Na- Bz- Phe- Val- Arg- 1- nitro- 2- NA• HCl
Eksempel XXXa: Cbo-Arg(N02)-1-nit ro-2-NA
Utgangsmateriale: 3,6 g (10 mmol) Cbo-Arg(NO^)-OH og 2,26 g (12 mmol) 1-nitro-2-nafthylamin.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ia - 2.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 3,85 g (73,1%) amorf XXXa, enhetlig ifølge TLC i P± og [a]<*9>= -11,8° (c = 1,0; DMF).
Eksempel XXXb: Cbo- Val- Arg( NOp)- 1- nitro- 2- NA
Utgangsmateriale: 950 mg (1,8 mmol)XXXa og 825 mg (2,2 mmol) Cbo-Val-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 0,9 g (80%) delvis krystallinsk XXXb, enhetlig ifølge TLC i P1og [a]D = +1,05 (c = 1,0; DMF).
Eksempel XXXc: Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-1-nitro-2-NA
Utgangsmateriale: 800 mg (1,27 mmol) XXXb og 640 mg (1,52 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ic.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 785 mg (79,9%) amorf XXXc, enhetlig ifølge TLC iP1og [a]22 = -7,0° (c = 1,02; DMF).
Eksempel XXXd: N<Q->Bz-Phe-Val-Arg(N02)-1-nitro-2-NA
Utgangsmateriale: 680 mg (0,88 mmol) XXXc og 260 mg (1,15 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 480 mg (73%) amorf XXXd, enhetlig ifølge TLC iP1og [a]24 = -31,4° (c = 0,9; DMF).
XXX: Na- Bz- Phe- Va1- Arg- 1- nit ro- 2- NA- HCl
Utgangsmateriale: 480mg (0,65 mmol) XXXd.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 33% AcOH.
Man fikk 268 mg (57%) amorf, frysetørret XXX med Cl-innhold 4,80%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]D = -39,7 (c = 0,73, 50% AcOH).
Eksempel XXXI: Na- Bz- Phe- Val- Arq- 4- nitro- l- Na- HCl
Eksempel XXXIa: Cbo-Arg(N02)-4-nitro-l-NA
Utgangsmateriale: 3,6 g (10 mmol) Cbo-Arg(N02)-0H og 2,26 g
(12 mmol) 4-nitro-l-nafthylamin.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ia - 2.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 3,6l g (69%) delvis krystallinsk XXXIa, enhetlig ifølge TLC i P±og [a]<22>= -11,4° (c = 1,01;DMF).
Eksempel XXXIb: Cbo-Val-Arg(N02)-4-nitro-l-NA
Utgangsmateriale: 650 mg (1,23 mmol) XXXIa og 550 mg (1,45 mmol) Cbo-Val-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ib.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 460 mg (60%) amorf XXXIb, enhetlig ifølge TLC i P-,^ og [a]<23>= +0,9° (c = 0,55; DMF).
Eksempel XXXIc: Cbo-Phe-Val-Arg(N02)-4-nitro-l-NA
Utgangsmateriale: 450 mg (0,72 mmol) XXXIb og 365 mg (0,86 mmol) Cbo-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Ic.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 500 mg (90%) delvis krystallinsk XXXIc, enhetlig ifølge TLC i P1og [a]^ = -6,0° (c = 1,0; DMF).
Eksempel XXXId: Na<->Bz-Phe-Val-Arg(N02)-4-nitro-l-NA
Utgangsmateriale: 490 mg (0,633 mmol) XXXIc og 180 mg (0,80 mmol)
Bz20.
Syntesemetode: Analogt med eksempel Id.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 400 mg (84,7%) amorf XXXId, enhetlig ifølge TLC i Px og [a]<20>= -31,0° (c = 1,0; DMF).
XXXI: Na- Bz- Phe- Val- Arg- 4- nitro- l- NA- HCl
Utgangsmateriale: 380 mg (0,51 mmol) XXXId.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfilt rering på "Sephadex" G-15 i 50% AcOH.
Man fikk 303 mg (81%) amorf, frysetørret XXXI med Cl-innhold 4,79%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]<22>= -37,7° (c = 0,74; 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe: 1,1; Arg: 0,9-
Eksempel XXXII: Na- Bz- Phe- Va1- Lys- pNA• HCl
Eksempel XXXIIa: Na- BOC- Lys(€- Cbo)- pNA
6,3 g (11,2 mmol) Na<->BOC-Lys(£-Cbo)-0H:DCHA ble oppløst i 40 ml tørr nydestillert HMPTA ved værelsetemperatur, hvorefter 5 Q
(30,5 mmol) p-nitrofenylisocyanat ble tilsatt porsjonsvis under om-røring og tørre betingelser. Efter et døgn ved værelsetemperatur
ble reaksjonsblandingen opparbeidet ifølge beskrivelsen i eksempel Ia. Biprodukter ved reaksjonen utgjordes av N,N'-bis-p-nitrofenylearbamid og N-p-nitrofenyl-N',N'-dicyclohexylearbamid som var tungtoppløselige i MeOH. Den del av reaksjonsproduktet som var oppløselig i MeOH, ble renset ved gelfiltrering på en kolonne med "Sephadex" LH-20 i likevekt med MeOH.
Man fikk 4,179(74,5%) delvis krystallinsk XXXIIa, enhetlig ifølge TLC i P±og [a]^ = +1,7° (c = 1,0; DMF).
Eksempel XXX IIb: Na- BOC- Va1- Lys( g- Cbo)- pNA
Til 2,20 g (4,4 mmol) XXXIIa tilsattes 10 ml nydestillert tri-fluoreddiksyre under tørre betingelser. Efter omrøring i 6o minutter ved værelsetemperatur ble reaksjonsblandingen helt i 150 ml tørr ether under kraftig omrøring, hvorved CF^COOH-H-Lys (£-Cbo)-pNA falt ut som en olje som størknet ved avkjøling. Etherfasen ble fradekantert og feiningen behandlet nok 3 ganger med 75 ml tørr ether. Efter tørring i vakuum over NaOH-tabletter og P20^fikk man lysin-derivatets trifluoracetatsalt i kvantitativt utbytte (2,25 g).
2,25 g (4,4 mmol) CF^COOH-H-Lys (£-Cbo)-pNA ble oppløst i
IO ml DMF og avkjølt til -10°C. 0,78 ml (5,5 mmol) Et^N ble tilsatt f or å frigjøre aminosyrederivatet fra trifluoracetatsaltét, og derpå ble 2,0 g (5,5 mmol) BOC-Val-OpNP tilsatt. Da reaksjonsopp-løsningen hadde antatt værelsetemperatur efter noen timer, ble opp-løsningen på ny avkjølt og pufret med 0,31 ml (2,2 mmol) Et^N. Pufringsbehandlingen ble gjentatt ytterligere en gang efter ca. 2 timer. Efter et døgns reaksjonstid ble oppløsningen inndampet i vakuum ved ca. 40°C til tørrhet. Inndampningsresiduet ble digerert
3 ganger med 20 ml destillert vann og tørret i vakuum.
Råproduktet ble oppløst i MeOH og renset ved gelfiltrering på en kolonne med "Sephadex" LH-20 i likevekt med MeOH. Av eluatet fikk man en fraksjon som ga 2,12 g (80.,3%) XXXIIb som var enhetlig ifølge TLC i P1og C og med [a]<22>= -1,9° (c = 1,0; DMF).
Eksempel XXXIIc: BOC- Phe- Val- Lys( g- Cbo)- pNA
Utgangsmateriale: 0,85 g (1,42 mmol) XXXIIb og 0,77 g (2,0 mmol)
BOC-Phe-OpNP.
Syntesemetode: Analogt med eksempel XXXIIb.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" LH-20 i MeOH.
Man fikk 0,84 g (79,3%) amorf XXXIIc, enhetlig ifølge TLC i P1og [a]<23>= -9,3° (c = 1,02; DMF).
Eksempel XXXIId: N- Bz- Phe- Val- Lys( £- Cbo)- pNA
Utgangsmateriale: 600 mg (0,804 mmol) XXXIIc og 280 mg
(1,25 mmol) Bz20.
Syntesemetode: Decarbobutyloxylering av XXXIIc ble utført analogt med eksempel XXXIIb.
608 mg CFgCOOH-H-Phe-Val-Lys(£ -Cbo)-pNA ble oppløst i IO ml DMF og avkjølt til -10°C, hvorefter 113 ml (0,8 mmol) Et^N ble tilsatt for å frigjøre peptidaminet fra saltet. 280 mg (1,25 mmol) Bz20 ble tilsatt til oppløsningen ved -10°C, hvorefter pufringen og opp-arbeidelsen ble utført i henhold til eksempel XXXIIb. Gelfiltrering av råproduktet på en kolonne med "Sephadex" LH-20 i MeOH ga 460 mg (76,7%) delvis krystallinsk XXXIId som var enhetlig ifølge TLC i P^-og C og med [a]<2Zf>= -22,8° (c = 0,99; DMF).
XXXII: Na- Bz- Phe- Val- Lys- pNA' HCl
Utgangsmateriale: 280 mg (0,373 mmol) XXXIId.
Syntesemetode: Analogt med eksempel I.
Rensning: Gelfiltrering på "Sephadex" G-15 i 50% AcOH.
Man fikk 172 mg (71%) amorf, frysetørret XXXII med Cl-innhold 5,39%, enhetlig ifølge TLC i A og [a]<22>= -36,2° (c = 0,67, 50% AcOH). Aminosyreanalyse ga Val: 1,0; Phe; 0,9; Lys: 1,1.
De ifølge eksemplene fremstilte substrater ble anvendt for å bestemme forskjellige enzymer som følgende: Prinsippet for bestemmelsen er basert på at det ved enzymatisk hydrolyse dannede spaltningsprodukt oppviser et UV-spektrum som er helt forskjellig fra substratets. Således har substratet ifølge eksempel lg, Na<->Bz-Phe-Val-Arg-pNA-HCl, et absorpsjonsmaksimum ved 303 nm med den molare ekstinksjonskoeffisient 12.900. Ved 405 nm er substratets absorpsjon nesten helt opphørt. p-nitroanilin (pNA),
som dannes av substratet under den enzymatiske hydrolyse, har et absorpsjonsmaksimum ved 380 nm med en molar ekstinksjonskoeffisient 13.20O, som ved 405 nm bare har avtatt til 9.620.
Ved spektrofotometrisk å måle ved 4o5 nm kan man derfor lett følge graden av den enzymatiske hydrolyse, som er proporsjonal med mengden av dannet p-nitroanilin. Det tilstedeværende substratover-skudd forstyrrer ikke målingen ved denne bølgelengde. For de øvrige substrater ifølge oppfinnelsen hersker der nærmest identiske forhold, hvorfor de spektrofotometriske målinger gjennomgående er utført ved 405 nm.
Den enzymatiske reaksjon kan skjematisk skrives:
E = enzym
S = substrat
E_S = enzym-subst ratkompleks
P1 og P2= produkter
k^, k2, k^og k^= hastighetskonstanter
Dissosiasjonskonst. for
(Michaelis konst.)
Når (S)>> (E) og k^ < < k^gjelder:
Hastigheten med hvilken kromofor P 1 dannes: v = k3(ES) Når alt E er bundet til S, er (ES) = (E) og
Lineweaver - Burk ligning:
Som det fremgår av ligning (2), bestemmer konstantene K og k^effektiviteten av enzymsubstratet .overfor et gitt enzym. For å bestemme disse konstanter går man i prinsippet frem på følgende måte. Enzym og substrat blandes i puffer, og reaksjonen følges spektrofotometrisk i 5 minutter. Konsentrasjonen av substratet (S) varieres, mens enzymkonsentrasjonen (E) for hvert substrat holdes konstant. Ekstinksjonen (OD) avsettes mot tiden og av den således erholdte kurves tangent (= forskjell i ekstinksjon pr. min A OD/min, hvorav antallet (imol dannet p-NA/min (v), kan beregnes) fåes initialhastig-heten v. — 1 avsettes mot —1. og av diagrammet fåes K og v - Mfr.
v (S) m 3 max vJ
ligning (4))•
for thrombin og forskjellige
enzymsubstrater er angitt i tabell 1 og for trypsin i tabell 2. Hvor data for K og k„ mangler, er disse verdier ikke bestemt eller har
m j
ikke kunnet beregnes p.g.a'. at man ikke har fått rettlinjet sammen-heng mellom - og i
v (S)
En grov anslåelse av enzym-substratforholdet for forskjellige substrater kan fåes ved å sammenligne mengden av dannet p-nitroanilin pr. tids- og enzymenhet, ved samme molare subst ratmengde. I tabell 3 er dette samlet for thrombin , og i tabell 4 for trypsin, i tabell 5 for enzymet "Reptilase", et med thrombin beslektet enzym fra Bothrops Atrox, og i tabell 6 for plasmin.
Optimale betingelser for amidolyse av substratet ifølge eksempel I, med thrombin fåes ved pH 8>2 med ionestyrke 0,13 - 0,15 og ved en temperatur på 37 - 4o°C.
Den i tabellene anvendte betegnelse NIH angir enheter National Institute of Health.
En trypsin-enhet er den mengde enzym som hydrolyserer 1 mmol TAME pr. min ved 25°C og pH = 8>1 i nærvær av 0,001 M Ca<++->ioner. Trypsinet var fra Worthington Biochemical Corporation, Freehold,
N. J., U.S.A. Plasminet var fra AB Kabi, Stockholm, Sverige, og inneholdt 3 case inhibitor pr. mg.
Av tabell 1-6 fremgår tydelig fordelene med enzymsubstratene ifølge oppfinnelsen sammenlignet med det tidligere anvendte amidsubstrat for trypsin (BAPNA). De nye substrater gir ved sin større følsomhet mulighet for å bestemme små mengder enzym uten å gi avkall på nøyaktigheten ved bestemmelsen. Klinisk har dette stor betydning da det innebærer at prøvetagningen kan forenkles.
Blodets koagulasjon er en meget komplisert prosess, hvor omvandlingen av fibrinogen til fibrin reguleres enzymatisk av thrombin. Flere av blodets andse koagulasjonsfaktorer er ved reaksjoner på et eller annet vis koblet til thrombin. Med enzymsubstratene ifølge oppfinnelsen åpnes her en mulighet for å bestemme disse koagulasjonsfaktorer. Denne bestemmelse grunner seg i prinsippet på at en kjent mengde thrombin i overskudd tilsettes til ,. en plasmaprøve. Det frie antithrombin i blodet bindes til det til-satte thrombin, og overskuddet av thrombin bestemmes så ved hjelp av enzymsubstratet, hvorefter den reagerende antithrombinmengde kan ut regnes.
Bestemmelse av antithrombin
Veneblod defibrinogeneres og sentrifugeres. Av dette taes 0,5 ml plasma som fortynnes med 2 ml trisimidazol-pufferoppløsning. 0,1 ml thrombinoppløsning i vann (10 NIH) inkuberes så med 0,25 ml av denne plasmafortynning i nøyaktig 5 minutter ved 37 - 40°C. Derefter tilsettes 2 ml forvarmet pufferoppløsning og 0,25 ml enzym-subst ratoppløsning i vann (1 mg/ml), og blandingen inkuberes i nøy-aktig 1 minutt ved 37 - 4o°C. Reaksjonen avbrytes så med 0,25 ml konsentrert eddiksyre, og ekstinksjonen avleses ved 4o5 nm på spekt rofotometer.

Claims (1)

  1. Peptider for anvendelse som diagnostiske substrater med høy spesifisitet overfor thrombin og andre proteolytiske enzymer av typen peptidyl-peptidhydrolaser,
    karakterisert vedat de har den generelle formel:
    eller salter derav, hvor R^er hydrogen, acyl med 2-8 carbonatomer, u>-aminoacyl med 2-6 carbonatomer, cyclohexylcarbonyl, uj-cyclohexyl-racetyl, 4-aminomethyl-cyclohexylcarbonyl, benzoyl, benzoyl substituert med methyl- eller aminogrupper, uj-fenyl-acyl med 2 eller 3 carbonatomer i acyldelen, som eventuelt er substituert med en aminogruppe i fenylringen, 4-toluensulfonyl, Na<->benzoyl-fenylalanyl eller fenylalanyl, R2er f en<y>l., benzyl eller 4-hydroxybenzyl, R^er forgrenet alkyl med 3 eller 4 carbonatomer, n er 3 eller 4, R^er hydrogen eller guanyl, ogR^er nitrofenyl, nafthyl eller nitronafthyl.
NO1790/73A 1972-05-02 1973-04-30 NO135245C (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE7205757A SE380257B (sv) 1972-05-02 1972-05-02 Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO135245B true NO135245B (no) 1976-11-29
NO135245C NO135245C (no) 1977-03-09

Family

ID=20267168

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO1790/73A NO135245C (no) 1972-05-02 1973-04-30

Country Status (23)

Country Link
US (1) US3884896A (no)
JP (1) JPS559199B2 (no)
AT (1) AT324557B (no)
AU (1) AU475377B2 (no)
BE (1) BE798916A (no)
CA (1) CA1010849A (no)
CH (1) CH590476A5 (no)
CS (1) CS187376B2 (no)
DD (1) DD108281A5 (no)
DE (1) DE2322116B2 (no)
ES (1) ES414252A1 (no)
FI (1) FI56828C (no)
FR (1) FR2183188B1 (no)
GB (1) GB1428039A (no)
HU (1) HU170670B (no)
IL (1) IL42123A (no)
IT (1) IT1050662B (no)
NL (1) NL7306085A (no)
NO (1) NO135245C (no)
PL (1) PL90746B1 (no)
SE (1) SE380257B (no)
SU (1) SU671721A3 (no)
ZA (1) ZA732976B (no)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS50139215U (no) * 1974-04-30 1975-11-17
DE2527932C2 (de) * 1974-07-02 1983-04-21 Pentapharm AG, 4052 Basel Säureadditionssalze von Tripeptidderivaten und deren Verwendung als Substrate zur Bestimmung von Plasmakallikrein
US4016259A (en) * 1974-07-26 1977-04-05 Research Corporation Contraceptive polypeptides
SE407058B (sv) * 1974-12-05 1979-03-12 Kabi Ab Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser
US4162941A (en) * 1974-12-05 1979-07-31 Ab Kabi Method for determining a proteolytic enzyme
CH622286A5 (no) * 1975-06-23 1981-03-31 Pentapharm Ag
US4061625A (en) * 1975-07-11 1977-12-06 Ab Kabi Novel chromogenic thrombin substrates
US4169015A (en) * 1975-07-11 1979-09-25 Ab Kabi Novel chromogenic thrombin substrates
SE407571B (sv) * 1975-07-11 1979-04-02 Kabi Ab Nya kromogena enzymsubstrat for serinproteaser
SE407405B (sv) * 1975-07-11 1979-03-26 Kabi Ab Nya kromogena trombinsubstrat
SE407115B (sv) * 1975-10-06 1979-03-12 Kabi Ab Forfarande och metelektroder for studium av enzymatiska och andra biokemiska reaktioner
SE419871B (sv) * 1975-12-01 1981-08-31 Pharmacia Ab Sett att bestemma aktiviteten hos faktor xa-inhibitor i blod
CH634662A5 (de) * 1976-05-28 1983-02-15 Pentapharm Ag Verwendung von tripeptidderivaten zur quantitativen bestimmung von plasminogen-aktivatoren.
FR2416883A2 (fr) * 1977-02-18 1979-09-07 Delalande Sa Nouveaux oligopeptides trifluoromethyles, leur procede de preparation et leur application en therapeutique
JPS5415797A (en) * 1977-06-14 1979-02-05 Seikagaku Kogyo Co Ltd Detection and measurement of toxin in cells
CA1087075A (en) * 1977-08-05 1980-10-07 Robert J. Gargiulo Composition and method for determining transferase and protease activity
DE2757992A1 (de) * 1977-12-24 1979-06-28 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur prothrombin-bestimmung
SE7801373L (sv) * 1978-02-07 1979-08-08 Kabi Ab Lett spjelkbara substrat for kvantifiering av proteaser
DE2812943C3 (de) * 1978-03-23 1981-05-14 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und Reagens zur Bestimmung der biologischen Aktivität von Heparin im Plasma
US4302538A (en) * 1978-03-27 1981-11-24 Ortho Diagnostics Inc. Buffer system in an anti-thrombin III test
IL60888A (en) * 1978-06-16 1984-07-31 Yeda Res & Dev Substrates and process for the quantitative assay of enzymes
EP0009010B1 (en) * 1978-07-18 1983-03-02 Kabi AB Bradykinin inhibiting tripeptide derivatives, process for their preparation and pharmaceutical preparations containing them
US4336186A (en) * 1978-08-03 1982-06-22 Gargiulo Robert J Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes
US4275153A (en) * 1978-08-03 1981-06-23 American Hospital Supply Corporation Analytical fluorogenic substrates for proteolytic enzymes
US4161488A (en) * 1978-08-17 1979-07-17 Abbott Laboratories Enzymatic substrates
US4166825A (en) * 1978-08-17 1979-09-04 Abbott Laboratories Chromogenic substrates
JPS5559150A (en) * 1978-10-30 1980-05-02 Torii Yakuhin Kk Aminoacid derivative
JPS5559149A (en) * 1978-10-30 1980-05-02 Torii Yakuhin Kk Aminoacid derivative
JPS59499B2 (ja) * 1978-11-02 1984-01-07 味の素株式会社 ペプチド誘導体
US4289498A (en) * 1979-01-08 1981-09-15 Ortho Diagnostics, Inc. One-stage prothrombin assay and compositions useful therein
US4217269A (en) * 1979-03-23 1980-08-12 Abbott Laboratories Dipeptide chromogenic substrates
US4219497A (en) 1979-04-06 1980-08-26 Abbott Laboratories Chromogenic substrates
US4409140A (en) * 1979-04-23 1983-10-11 Smith Robert E Substrates and method for determining enzymes
EP0018002B1 (de) * 1979-04-24 1983-02-09 Marcel Jozefonvicz Neues Bestimmungsverfahren für Proteasen und Antiproteasen
CA1161431A (en) * 1979-05-11 1984-01-31 Lars G. Svendsen Tripeptide derivatives
US4221706A (en) * 1979-06-14 1980-09-09 Abbott Laboratories Chromogenic substrates
DE2936543A1 (de) * 1979-09-10 1981-04-09 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Chromogene verbindungen
US4308202A (en) * 1979-10-25 1981-12-29 Torii & Co., Ltd. Prolylphenylalanylarginine derivatives, process for producing same and method for measuring activity of enzymes using same
JPS5661339A (en) * 1979-10-26 1981-05-26 Ajinomoto Co Inc Arginine derivative
US4318904A (en) * 1980-04-25 1982-03-09 Research Corporation Peptide affinity labels for thrombin and other trypsin-like proteases
DK155051C (da) * 1980-05-06 1989-07-03 Pentapharm Ag Tripeptidderivater samt fremgangsmaade til kvantitativ analyse for proteolytiske enzymer under anvendelse deraf
WO1982000641A1 (en) * 1980-08-25 1982-03-04 Ab Kabivitrum Peptide substrates for determination of protease activity
US4568636A (en) * 1981-03-25 1986-02-04 Pentapharm Ag Tripeptide derivatives
US4388233A (en) * 1981-05-15 1983-06-14 The Regents Of The University Of California Synthetic substrates for enzyme analysis
US4434096A (en) 1981-06-30 1984-02-28 E. I. Du Pont De Nemours And Company Substrates for the quantitative determination of proteolytic enzymes
JPS5856695A (ja) * 1981-09-28 1983-04-04 Nitto Boseki Co Ltd 新規なトロンビン測定用基質
JPS5863399A (ja) * 1981-10-14 1983-04-15 Nitto Boseki Co Ltd 新規なプラスミン測定用基質
DE3268329D1 (en) * 1981-11-02 1986-02-13 Pentapharm Ag Process for the quantitative determination of the blood clotting factor xii in human plasma
US4448715A (en) * 1981-11-02 1984-05-15 University Of Miami Tagged pyroglu-L-Phe-L-Arg derivatives, substrates and assays for kallikrein
SE8203887D0 (sv) * 1982-06-23 1982-06-23 Kabivitrum Ab Nya trombininhiberande foreningar
DE3244030A1 (de) * 1982-11-27 1984-05-30 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
JPS6117956A (ja) * 1984-07-04 1986-01-25 Nitto Boseki Co Ltd 新規な尿中カリクレイン測定用基質
US4897444A (en) * 1985-05-31 1990-01-30 The Research Foundation Of The State University Of New York Immobilized fluorogenic substrates for enzymes; and processes for their preparation
JPH0413880Y2 (no) * 1985-08-22 1992-03-30
US5187069A (en) * 1990-08-06 1993-02-16 Henry Ford Health System Active site labelling of plasminogen
EP0535485B1 (en) * 1991-10-03 1997-07-16 Bayer Corporation Device and method of separating and assaying whole blood
US5580744A (en) * 1992-04-27 1996-12-03 Avocet Medical, Inc. Test article and method for performing blood coagulation assays
EP0638127B1 (en) * 1992-04-27 2000-08-23 Avocet Medical, Inc. Test article and method for performing blood coagulation assays
US5399487A (en) * 1993-03-04 1995-03-21 Haematologic Technologies, Inc. 6-peptidylamino-1-naphthalenesulfonamides useful as fluorogenic proteolytic enzyme substrates
US6297024B1 (en) 1998-10-15 2001-10-02 Cell Activation, Inc. Methods for assessing complement activation
US6235494B1 (en) 1999-02-08 2001-05-22 The Scripps Research Institute Substrates for assessing mannan-binding protein-associated serine protease activity and methods using the substrates

Also Published As

Publication number Publication date
AU5503873A (en) 1974-11-07
GB1428039A (en) 1976-03-17
DE2322116B2 (de) 1980-01-10
JPS4949695A (no) 1974-05-14
FR2183188B1 (no) 1977-02-11
CA1010849A (en) 1977-05-24
FR2183188A1 (no) 1973-12-14
AT324557B (de) 1975-09-10
AU475377B2 (en) 1976-08-19
CH590476A5 (no) 1977-08-15
DD108281A5 (no) 1974-09-12
IT1050662B (it) 1981-03-20
IL42123A (en) 1978-01-31
NL7306085A (no) 1973-11-06
JPS559199B2 (no) 1980-03-08
CS187376B2 (en) 1979-01-31
ES414252A1 (es) 1976-05-01
DE2322116A1 (de) 1973-11-22
SU671721A3 (ru) 1979-06-30
BE798916A (fr) 1973-08-16
SE380257B (sv) 1975-11-03
IL42123A0 (en) 1973-06-29
PL90746B1 (no) 1977-01-31
NO135245C (no) 1977-03-09
ZA732976B (en) 1974-11-27
HU170670B (no) 1977-08-28
FI56828C (fi) 1980-04-10
US3884896A (en) 1975-05-20
FI56828B (fi) 1979-12-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO135245B (no)
NO135362B (no)
US4016042A (en) Substrate for the quantitative determination of enzymes
US4070245A (en) Substrate for the quantitative determination of proteolytic enzymes
SU1277904A3 (ru) Способ получени трипептидов
US4440678A (en) Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes
US4314936A (en) Substrates for the quantitative assay of enzymes and such assay
US4457866A (en) Chromogenic compounds and their use as enzyme substrates
WO1982000641A1 (en) Peptide substrates for determination of protease activity
NO142074B (no) Nye kromogene enzymsubstrater for serinproteaser
US4190574A (en) Substrate for the quantitative determination of plasminogen activators
US4221706A (en) Chromogenic substrates
US4428874A (en) Tripeptide derivatives
DK155333B (da) Tetrapeptider til anvendelse som specifikt, chromogent substrat for serinproteaser samt laboratorieanvendelse af samme
US4568636A (en) Tripeptide derivatives
US4217269A (en) Dipeptide chromogenic substrates
US4244865A (en) α hydroxy tripeptide substrates
GB2126720A (en) A method for determination of enzyme activity
NO142576B (no) Nye diagnostisk aktive kromogene substrater med hoey spesifisitet for thrombin og thrombinlignende ensymer
DK168574B1 (da) Peptidderivater og salte deraf med mineralsyrer eller organiske syrer samt anvendelsen heraf som substrat til kvantitativ bestemmelse af C1-esterase
US4569907A (en) Thiopeptolide substrates for vertebrate collagenase
JPH0755942B2 (ja) 酵素活性測定用ペプチド誘導体及びその使用法
JPH0244518B2 (ja) Tanpakubunkaikosooteiryobunsekisuruhoho
JPH0776232B2 (ja) ペプチド誘導体及びその使用方法