JPS5863399A - 新規なプラスミン測定用基質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、プラスミン及びプラスミン様酵素に対する新
規発色性且つ螢光性基質に関する。本発明の基質は従来
報告されている基質に比して、きわめて選択性よく、且
つ高感度にプラスミンの定量を行う事が出来、プラスミ
ンが形成、阻害又は消費される反応の研究、又はそれ等
に関与する因子の測定、例えばプラスミノ−ビン、α、
−Ｐ工（プラスミン・インヒビター）及びプラスミンの
測定に特に適している。

凝固・線溶反応に於ける合成基質の導入は、１９５４年
８．８ｈｅｒｎ７等（Ｊ、Ｂ、Ｏ，、２０８９５〜１０
６（１９５４）　）　　の合成したＴＡＭｅ　（Ｔｏａ
−ムｒｇ−ＯＭｅ）　　等のアルヤニンエステルが、基
質としてトロンビンのエステラーゼ活性の測定に使用さ
れたのに始まるが、エステル氷解活性が凝固活性と一致
せず、基質の特異性や感度が低い等の問題があった。し
かし、最近のペプチド化学の進歩から、フィブリノビン
のトロンビンによる解裂部のアミノ酸栴造に類似したペ
プチド基質Ｂｍ−Ｐｈ・−Ｖａｔ−Ａｒｇ−ＰＮＡ（８
−２１６０）がＢ１６ｍ１ｔａｃｈ　（Ｔｈｒｏｍｂ、
　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１２６７〜２７８　（１９７２）
　）　　らにより合成され、酵素反応を受けて遊離した
バラニトロアニリン（ＰＮＡ）の黄色の発色による酵素
化学的分光分析の容易な事、試薬調整の容易さなどから
しだいに、研究検査に用いられるに至った。更にプラス
ミン用として引継きＴｏｅ−Ｇ１７−Ｐｒ０７Ｌ７１１
−ＰＮＡ　（ＯＨＲ，ＰＬ−Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ社）
〔特開昭５２〜３４９４）、歳はＨ−Ｄ−ｖａｔ−Ｌｅ
ｕ−Ｌｙｓ−ＰＮＡ　（ｓ　−２２５１，Ｋａｂｉ　）
　（特開昭５２−２４５８１　）が開発され、続いて、
同様に遊離すると螢光を発するＴミノメチルクマリン（
ムＭＳ）を結合させた螢光性ペプチド基質も老木等（１
９７７）（：ｒ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、、　８２．１４９５
〜１４９８　（１９７７）　）により開発されている。

一方、酵素測定用合成基質は、酵素に対する高感度、及
び特異性、水又は生物学的試験液に対する良好な溶解性
及び、分解物の易検出性の４点を満足される事が重要で
ある。

このうちでも測定、Ｌようとする酵素に対する、高い特
異性及び反応性は特に重要である。

一方、プラスミン用として、現在まで開発されている基
質の酵素に対する反応性は、トロンビン用に比して低く
、酵素と基質との反応性の指標になるミバエリス定数（
Ｋｍ）　を比べてみても、Ｓ−２２３８（トロンビン用
）　Ｑ、７　）ｃ　１０−５　ｍｏ１ｅ／ｚ（Ｈｕｍａ
ｎ　Ｔｈｒｏｍｂｉｎ　）　　に対し、８−２２５１．
６ｘ　１Ｑ−’　ｍｏｌｅ／ｌ（Ｈｕｍａｎ　Ｐｌａｓ
ｍｉｎ　）と１ケタ以上の大きさのちがいがあるが反応
による基質濃度変化による影響を少なくするために、実
際に測定に利用する場合一般には反応系の基質濃度はＫ
ｍ値よりかなり大きく（望ましくは５馳以上）する必要
があるが、ＩＬｒａ値が大きいとこれを満たす事が困難
になる為より小さなＸｍ値をもった基質の開発が望まれ
ている。

一般に血漿中のプラスミン或はゾラスミノーデン等を発
色性基質を利用して測定しようきする場合、血漿中に存
在すると子側されるプラスミン以外の凝固、線溶関連酵
素であるトロンビン、ＦＸａφロキナーゼ（ＵＫ）等と
交差反応を起すと正確な測定が期しがたい。

従来開発されて来た最良のプラスミン用基質としては上
記の０ＨＲ−ＰＬ及びＥｌ−２２５１があげられるが、
基質特異性及び反応性に於いて必ずしも満足できるもの
ではない。

即ち例えば０ＨＲ−ＰＬは、Ｋｍ値は８−２２５１より
小さいが凝固、線溶系関連酵素のうちプラスミン以外に
トロン、ビン、Ｆａｃｔｏｒ　Ｘａ　１ＵＫ等と可成り
反応するし、又比較的選択性の良好と言われている８−
２２５１に於いても、反応性（ｂ１Ｖｍ！ＬＸ／　ＫＥ
ｌｌ　）　　は、必ずしも満足いくものでない。

本発明者等は以上の様な点を改良゛すべく１）反応性が
良好（恥が小さく　、’Ｖｍａｘが大でＶｍａｘ／Ｋｍ
が大） ２）選択性が良好（交差反応が少ない）６）溶解性がよ
い ４）検出方法が容易で高感度な発色が可能で且つ血勢威
分の影替はうけない 等の条件を満足する様プラスミン用基質のアミノ酸配列
、発色基及びアミノ酸の保膜基等について詳細に検討し
た結果、基質のＮ末端のアミノ酸の側鎖の官能基（例え
ば、リジンの場合、ω−アミノ基）を、他の化合物（例
えばトシルクロライド）と反応させ鎖長を延長する事に
より、プラスミンとの反応性が著しく改良される事を見
出した。

−例を示すと本願化合物であるＮＰＮ−２Ｈ−Ｄ−Ｌｙ
ｓ（Ｔａ２）−Ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＰＨムの場合Ｐｏｒａ
ｉｎｅ　Ｐｌａｓｍｉｎ　（豚ゾラスミン）との反応性
をｏＨＲ−ｐＬ、　Ｅｌ−２２５１ト比較してみると、
下記に示す如く、 １１ＰＨ−２（本願化合物）　　　１．６　　　　４．
８　　　３０３．１１ＳＯＥＲ−ＰＬ　　　　　　　２
７．８　　　６．Ｑ　　　２１，６Ｂ−２２５１３４，
８４，０１１，４ ム及びＶ／ｂ共著しく改良されたプラスミン測定用基質
の合成に成功した。即ち８−２２５１の鴎値で実に鴇、
Ｖｍａｘ　　１，２倍、反応性の指標となるＶ／Ｋｍａ
値では２６．７倍となり、本基質が従来のものと比較し
て、非常に優れている事が解る。

同様に発色基を３−カルボキシ８−２４−ヒドロキシア
ニリドに変えて、アミノ酸配列による効果を実験してみ
ると、実施例３第２表に示す如く、本発明のアミノ酸配
列が旧来のアミノ酸配列Ｈ−Ｄ−Ｖ’ａｌ−Ｌｅｕ−Ｌ
ｙｓ−Ｃ；Ｈムと比して著しく向上している事が解る。

本発明による新規な発色性又は螢光性基質は、次の一般
式 ％式％ （式中 ｍ　＝　ｊ〜４ ０　　　　０　　　　　０ −ＭＨ８０２Ｒ１１ であり、 −（’Ｈａ）ｎ−ＯＨ（’Ｈｓ）ｓ＋　、　　（ｎ＝Ｑ
〜６）Ｒｓ＝−（”ｓ）ｎ＋１−ＣＨ３（ｎ＝ｏ〜３　
）又は である） の化合物またはその塩で！る。

本発明の化合物の用途は既に述べた通り、活性測定用の
基質であるが、その場合当該基質を−７，２〜７．６間
の緩衝液中でプラスミンに作用させ、生成する。Ｐ−ニ
トロアニリン又は、３−カルボキシ−４−ヒドロキシア
ニリドを、前者はそのま７４０５　ｎｍにて又、後者の
場合は適当なカプラーと酸化縮合させて着色物質に導き
これを比色定量することによるが、又励起３２８　ｎｍ
螢光５４０ｎｍにて螢光分析法により定量することによ
り活性を測定する。

カプラーとしては酸性側での発色の場合は、アニリン系
化合物例えばＮ、Ｎ−ジエチルアニリン、又アルカリ性
側ではフェノール、ナフトール系化合物例えば、２．５
−キシレノール、２．６−キシレノール、２，６−キシ
レノール、チモール、０−クレゾール、０−エチルフェ
ノール等が用いられる。

又、酸化組合の酸化剤として過酸化水素、過硫酸塩等種
々のものが用いられるが、メタ過ヨウ素敵が好適である
。

６−カルポキシー４−ヒドロキシアニリンと上記カプラ
ーとの酸化縮合により生成する色素はカプラーにより極
大吸収波長が５６０〜７７０　ｎｍに巾広く分布するが
呈色の温度による変動は極めて少く安定で、プラスミン
活性測定に適している。

更に発色感度を比べてみても、Ｐ−ニトロアニリンの場
合一般測定使用波長４０５　ｎｍにてＣ＝１０６００で
あるのに対し、０−エチルフェノールと、５−アミノサ
リチル酸による発色に於て−まλ＝　６４５　ｎｍで２
９０００又２，６−キシレツー、ルの場合はλ＝６１５
！ｌ！１１で２１６００で極めて吸光度が大きく、この
点に於いても測定上極めて有利である。更に発色基に５
−アミノサリチル酸をもった基質は、親水性の官能基を
有するので、水に対する溶解性は、非常に良好であり、
界面活性剤、有機溶媒等の溶解補助剤を特に必要としな
いため試薬調整あるいは測定操作において非常に管理し
易く、且つ反応に必要十分な基質濃度を使用出来るとい
う長所を有している。

以上の通り本発明の化合物は、プラスミン活性用基質と
して、従来のものに比べて、非常に優れていることが明
らかである。

式〔１〕で表わされる本発明の化合物はペプチド化学に
おいてよく、知られる方法により合成される。

α−アミノ保護基としては、カルざベンゾ″キシする基
、例えばＰ−メトキシ−Ｐ−二トロ、又は、Ｐ−メトキ
シフェニルアゾールカルボベンゾキシ等を用いるのが有
利である。

２個のアミノ、酸カップリング又はジペプチドとアミノ
酸のカップリングは、α−カルボキシル基の活性化によ
り行われる。例えばＮ−ヒドロキシサクシロソイミド、
Ｐ−ニトロフェノール、４．６−シメチルビリミジルー
２−チオ等である事が出来る。前述のエステル誘導体へ
の活性化はカルボジイミド例えばＮ、Ｎ−ジシクロへキ
シルカルボジイミド（Ｄ、Ｏ，Ｏ）の存在下で行うのが
有利であるＯ 基質合成は最初発色量をリジル基に結合させ、遂次的に
カップリングしていく方法によることが出来る。

本発明を以下実施例により詳細に説明するが本発明はこ
れら実施例に限定されるものではない。

■略号 Ｇｌｙ　＝グリジン Ｌ＠ｕ　　＝ロイシン Ｌｙｍ　　＝リジン Ｆｈ・＝フェニルアラニン Ｐｒｏ　　＝プロリン Ｔｈｒ　　＝スレオニン Ｔｙｒ　＝チロシン ’Ｖａｊ−バリン ２　　＝ベンジルオキシカルボニル ｎｏｃ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル Ｚ（ＯＭｅ）＝ｐ−メトキシベンジルオキシカルポニル
Ｔｏ日　；ｐ−トリルスルホニル ”ｔ＝２　ｍ　４　ｍ　６−　）リメチルーベンゼンス
ルホニルム０　ニアセチル ＮａＯ＝β−ナフチルカルボニル ＤＭ’？　　＝ジメチルホルムアミド ＭｅＯＨ＝メタノール ＴＨ７＝テトラハイドロフラン 組Ｉ　＝Ｎ−エチルモルホリン Ｂ８ム　＝　エタンスルホン酸 ’［’ＲＡ　　＝ｌ−リエチルアミン。

ＴｉＰＡ　　＝＝　　トリフルオロ酢酸ＤＣＨｕニジシ
クロヘキシル尿素 Ｄ（３Ｇ　　＝ジシクロへキシルカルがジイミド−ＰＭ
人＝Ｐ−ニトロアニリド 一０ＨＪ＝　　３−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリ
ド−５Ｄｐ−４，６−ジメチルぎりミジン−２−チオＢ
ｚ１＝ベンジル ＴＬＯ＝薄層クロマトグラフィー ＧＰＣ＝　デル濾過クロマトグラフィーＮａ８　＝　　
β−ナフチルセスホニルＴＯＯ＝４−メチルベンゾイル ＣＨＮ＝シクロヘキシルエステル 八〇〇Ｈ＝酢酸 ム０ＯＢｔ＝酢酸エチル ■　薄層クロマトグラフィー ＴＬＣ分析はシリカゲル’１２ｓ４（メルり社製）プレ
ートを使用溶媒は ａｔ、　　　：　　０ＨＯＬ、：ＭｅＯＨ：ムｃｏｎ：
ｕ２ｏ＝８０：２０二ｚ５：５Ｒｆｌ　；ｎ−ＢｕＯＨ
：ム００１１：Ｈ１０＝４：１　二１Ｒｆ、　；ｎ−Ｂ
ｕＯＨ：ＡＣＯＨ：Ｈ，Ｏ！　４：１：５■　ｒル濾過
にはＰｈａｒｍａｏｉａ　］Ｆｉｎ＠Ｏｈｅｍｉｏａｌ
ｓ社（スエーデン）のヒドロキシプロピル化交叉結合デ
キス°トランｒルＢａｐｂ＆６ｅｘ　ＩＪ、Ｈ−２０（
商品名）を使用した。

実施例　１ ２ＨＯＬ−Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ
−Ｌｙｅ−ＯＨムの合成（ＮＰＣ−７） １１（０４−Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−０ＨＡ　（分子量４５
１．９）ｍｏｘりをＴＨＩＦ　２００−に溶解しこれを
５−アミノサリチル酸（分子量１５３．１４）２１．ｌ
ｒ（０，１４！ｎｏ’ｌｅ　’）を１．５　Ｍ　−１１
１ｃＭ、　ＤＭＦ　溶液１８７―になるまで濃縮しこれ
にエーテル／酢酸エチｋ　（”ｖ／ａｏｖ　）　１６０
０１１ｊヲ加、ｊ冷５１１　ＨＯＬ１０００ｍ１７にて
６回飽和食塩水１ｏ００−にて２回洗浄し活性炭を加え
硫酸マグネシウム上にて乾燥後溶媒を留去し、エーテル
／イソゾロビ、９ｒ　（０，０１ｍｃｌｌｅ　）を、２
Ｍ　−ＨＯｔ／酢酸２５ｍ　（Ｑ、Ｑ　５　ｍｏｌｅ　
）に溶解しＢｏｏ脱離を行う。

２器反応後、反応液にエーテル１ｔを加え結晶を析出さ
せＰ取乾燥を行う。

ＢＯＯ−ＬＪ”ｈｅ−Ｌ−Ｌｙｅ（Ｚ）−ＯＨム（分子
量６６２．７４　）ＨＯ４−Ｈ−Ｌ−Ｌｙｅ（Ｚ）−０
Ｈム（分子量４５１．９　）６５．５．９ｒ　（０，１
４１ＥＩＯＩＪ　）を１．５　Ｎ　−ＮＫＭ／ＤＭＩＦ
２８０１に浴解し、この溶液にＢｏｏ−Ｐｈ・−８ＤＰ
（分子量（５８７，５０４）　５４．５１１ｒＣＱ、１
４ｍｏｌｅ）をＤＭＦ２ＱＯ＋７に溶解した液を０〜５
℃にで滴下させる。

一夜反応後、ＤＭＦを留去しム００１１１１？１０００
ｉｌを加え、冷５チＨＯＡ１ＱＱＱＮｌにて２回飽和食
塩水５００ｄにて洗浄後硫酸マグネシウム上乾燥後ムｃ
ｏＮｔを留去し酢酸エチル／ｎ−ヘキサンよｍ、ｐ　　
　１５１〜１５５℃ 〔α）　　−５，７（０１，ＤＭＦ） ＊　　ＨＯＡ、Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｚ）−０Ｈム（分
子量５９９．１）Ｂｏｏ−ｐＭ−Ｌｙｅ（Ｚ）−０ＨＡ
　（分子量６６２．７４７）’　６０．２　ｇｒ　（０
，０９０８ｎｏｂｌｅ　）に１．５Ｎ−ＨＯＬ／酢酸２
５０−を加え、常温にて反応を行う。析出した結晶をＰ
取、乾燥する。

収ｉｔ　　４９．９９ｒ（８９，１嘔）ｍ、ｐ　　２２
２〜２６０℃ 〔α）　　−１２，３（ｏｘ、ｕ・ＯＨ）Ｒｆｌｏ、１
７ ｆｄ　　Ｚ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌｙｓ（
Ｚ）−０Ｈム（１１９７９，１）ＨＯＡ−Ｂ−Ｐｈｅ−
Ｌ＋ｙａ（Ｚ）−０ＨＡ　（分子量５９９．１　）　１
５．５９ｒ（０，０２２５ｍ０１ｅ）をＤＭＩＦ　４５
−に溶解し、これにｐＭｙ４５ｉ１に溶解したＺ−Ｄ−
Ｌｙｓ（Ｔｏｅ）−８ＤＰ（分子量５５６．７０８　）
　１２．５１１１　（０，０２２５後、酢酸Ｘチ／ｌ　
５００Ｍを加え冷ｓ　＊　Ｈａｔ８００１にて２回飽和
食塩水６００ｄにて洗浄、乾燥濃縮後Ｍ＠ＯＨより再結
晶１２．９　＃ｒ　（５８，６Ｓ） ｍ、ｐ　　１８８〜１９５°Ｃ （α）　　　−８，９（Ｃ１，ＤＭＩＦ）ａｔ、　　０
．４９ Ｖ　　２ＨＯｔ−Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｔｏｅ）−：Ｌ＋−
Ｐｈａ−Ｌ−Ｌｙｓ−ＯＨム（父子ｉｔ　７８５．８　
’） Ｚ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−Ｌ−Ｐｈｅ−Ｌ−Ｌｙｓｉ
（Ｔｏｅ）−０Ｈム（分子ｆｆ１９７９．１２８）１．
９６．９ｒ（２ｍｍＯ１１１）を５％　ＨＣｊ−ＭｅＯ
Ｈ５−及びｇｅＯＨ１２ＱｗＬｌに溶解しＰ％１　＆ｒ
を加え、接触還元を４時間行う。反応終了後ＭｅＯＨを
留去し、エーテルにて結晶化させ、許取乾燥すると２Ｈ
Ｏｔ−１ｌ−Ｄ−Ｌｙｅ　（Ｔｏｅ　）−Ｌ−ｐｈｅ−
Ｌ−（ａ）　　　−２６，１（ＯＸ、ＭｅＯＨ）Ｒｆｒ
３０．３３ Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｔｏｅ）−Ｐｈｅ−ＬｙｓＰＮム−）
ＨＢｒの合成＜ＮＰＮ−２＞］　　　ＢＯＣ−Ｌｙｅ（
Ｚ）ＰＮＡ　　　　（分子量　５００．５５７　＞防湿
下Ｂｏｏ−Ｌｙｓ（Ｚ）−ＯＨ（がＦｔ３８０．４４４
　＞　５６．５９”　（０，１４８ｍｏｌｅ　）とバラ
ニトロアニリン（分子１１１３８．１３）２０．４ＪＪ
１”（０，１４８ｍ０１ｅ）を酢酸エチル６４８ｄに溶
解ｏ℃に冷却、そこにＤＯＯ１５，３ｐｒ　（０，０７
４ｍ０１６　）酢酸エチル７４ｄ溶液をゆっくり滴下、
その後ｏ℃で２〜６時間反応後その才ま室温才で自然昇
温−晩攪拌反応する。

上記反応液、を再び０〜５°ＣｔＣ冷却更１１ＣＤＯＯ
７，６５ｇ　（０，０５７ｍｏｌｅ　）　ｈ酸エチル３
７ａｌｆｔｊ液’ｉｔｍ下０℃２〜３時間室温で一晩攪
拌反応する。

後処理はＤＯＨｕをＰ別しエーテル２００１１Ｊにて２
回、酢酸エチル層と合わせ冷５　％　Ｈｏｚ　４５０　
ｇにて２回、Ｈ２Ｏ４５０ｄＫて１回、５　％　ＭａＨ
ＯＯ３４５Ｑｉｕにて２回、飽和食塩水４５０１にて２
回各々洗浄する。無水Ｍｇ８０４、活性炭上で一晩乾燥
後、３５℃で酢酸エチルを減圧留去すると油状の粗製Ｂ
ＯＯ−ｂｙｓ（ｚ）−ｐｎムロ　６．４　Ｊｉｌｒ　（
８９，６％　）を得る。これを８＠ｐｈａｄｅｘ　ＬＨ
−２０にて精製すると、Ｂｏｏ−Ｌｙｅ（Ｚ）−ＰＮＡ
３３．２．９ｒ　（４４，８％　”）を得るＯｍ、ｐ　
　、’　　　１０６〜１０９°ＧＲｆ　　　　：　　　
　肌６６　　（ａｕｃｚ３二Ｍ・０１１　　Ｗ　　９：
１　）１　１８Ａ−Ｈ−Ｌｙｅｏ（Ｚ）−ＰＮＡ　　（
分子ｔｔ５１０．６）防湿下ＢＯＯ−Ｌｙｅ（Ｚ）−Ｐ
ＮＡ（分子量５００．６）　１５．９ｒ（０，０５０ｍ
ｏｌｅ　）に２ｌ−Ｉｓム／酢酸７５ｉ１を加え２０℃
で１時間攪拌脱離する。

反応液は１．５ｔの無水エーテルにおとし、結晶化−晩
、冷却放置後、炉取、酢酸エチル洗浄後Ｐ２０．　ＫＯ
Ｈ上−晩減圧乾燥するとＥ８Ａ、Ｈ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｐ
ＮＡ１４．７　＃ｒ　Ｃ９６，１１＞を得る。

ｍ、ｐ　　：　　１００〜１０６°Ｃ Ｒｆ、　　：　　０．５５ １　　　Ｂｏｏ−Ｐｈｅ−Ｌｙｅ（Ｚ）ＰＮＡ　　（分
子量　６４７．７５　）］］１８Ａ−Ｈ−ＬｙｅＺ）Ｐ
ＮＡ　（分子１１５１０．６　’）　７．７．９ｒ（１
５ｍ　ｍｏｌｅ　）をＭＩＩｉＭ　１９．５−及びＤＭ
？３８ｍに溶解し、０℃に冷却、Ｂｏｏ−ｐｈｅ＝８Ｄ
Ｐ　（分子量６８７．５　）　６．１２　Ｉｉｒ　（１
５，７５ｍ　ｍ０１１１１　）を粉末で加え、０〜５℃
で２〜３時間反応、そのまま室温まで自然昇温−晩攪拌
反応する。

反応液に酢酸エチル３８〇−加え冷５　％　ＨＯｔ１５
０−にて２回、飽和食塩水１５０１にて１回、１０　％
　１１１ＬＨＣＯ３１５０ｍにて２回飽和食塩水１５〇
−にて２助各々洗浄後、酢酸エチルに無水Ｍｇ８０４活
性炭を加え脱色、乾燥後酢酸エチルを減圧留去すると粗
結晶のＢｏｏ−’１ｈｅ−Ｌｙｅ（Ｚ）ＰＩム１０，１
ｉｉｒを得るＯ 酢酸エチル−ｎ−へキサンにより再結晶を行うと、Ｂｏ
ｏ−ｐｈｅ−Ｌｙｓ（Ｚ）−Ｉ’ｌｌム８．８．９ｒ　
（９０，５％　’）を得る。

ｍ、ｐ　　：　　　１５７〜１６０°ＣＲｔ　　　　：
　　　　０．８０（ムｃＯＦｆｔ　　二ｍ−ヘキサン＝
８：　２’）ｐｉ　　Ｋ８Ａ−Ｈ−ｐｈｅ−Ｌｙｅ（Ｚ
）−ＰＮＡ（分子量６５７．７）防湿下Ｂｏｏ−ｐｈａ
−Ｌｙｅ（Ｚ）ＰＮＡ（分子量６４７．７　）　８．７
ｆｌｒ　（１３，５ｍ　ｍｏｌｅ）　　に２Ｎ−Ｉｃｅ
ム／酢酸３３．８１１７を加え１５〜２０℃で１時間攪
拌脱離する。

反応液を無水エーテル７００−におとし、沈殿結晶化す
る。−晩冷却放置後Ｆ取、酢酸エチル洗浄後、Ｐ２Ｏ，
ＫＯＨ上二日間減圧乾燥するとＥ８ム・Ｈ・ｐｈｅ−Ｌ
ｙｓ（Ｚ）−ＰＮＡ　７．１３４　、ｆｒ　（８０，５
ｆｂ　）を得る。

ｍ、ｐ　　　　　＝　　　１９０〜１９８℃Ｒｆ３　　
　　　二　　　　〇。８６ Ｖ　　　Ｂｏｏ−Ｄ−Ｌｙｓ（、Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌ
ｙｅ（Ｚ）ＰＮＡ　（分子量９６０．１）Ｂｏｏ−Ｄ−
Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−０Ｈ（分子量４００．５　）　０．
５９９９ｒ（１，５ｍ　ｍｏｌｅ）、ｉｓム−Ｈ−ｐｈ
ｅ−Ｌｙｓ（Ｚ）ＰＮＡ（分子量６５７、ハ、０．９８
７１／ｒ　（１，５ｍ　ｍｏｌす、ＨｏＢｔ　Ｏ，２０
３，Ｆｒ（１，５ｍ　ｍｏｌｅ）　　を各々はかりとり
、防湿下、０．５Ｎ−ＩＢＭ／　ＤＭＦ　６ｍに溶解、
０℃に冷却し、ＤＯＯＯ，３１０９ｒ（１，５ｍ　ｍｏ
ｌｅ）を粉末で加え、０℃で２〜６時間攪拌そのまま室
温まで自然昇温し、−晩攪拌反応する。

次に、反応液に酢酸エチル６０−を加え、析出するＤＯ
Ｈｕを除き、酢飯エチル層に冷５％１０ｔ／飽和食塩水
２０１にて２回、飽和食塩水２０１にて１回、１Ｑ　ｅ
ｌｋ　ＮｇＢＣｏｗ　２０−にて２回、飽和食塩水２０
−にて２ｒＢＪ各々・洗浄後、無水Ｍｇ８０．、活性炭
上、乾燥脱色後、酢酸エチルを６０℃で減圧留去すると
、粗結晶のＢｏｏ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｔｏｅ）すｈ・−Ｌｙ
ｓ（Ｚ）Ｐ）ｉＡ１．１４１５．９ｒ（８１，８囁）を
得る。

メタノール・酢酸エチル・ｎ−ヘキサンにより再結晶を
行うとＢｏ（１−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−”Ｌ
ｙｓ（Ｚ）ＰＮＮＯ３８１７、Ｖｒ　（５８，６ＬｆＩ
ｋ’）を得る・ｍ、ｐ：１６５〜１６９．５℃ ａｔ　　　：　　　０．５６（ムｃｏｌｔ：ｎ−ヘキサ
ン＝７：３）ＶＩ　　　Ｈ−Ｄ−Ｌｙａ（Ｔｏｅ）−ｐ
ｈｅ−ＩＪｙｓ（Ｚ）Ｐｌｉム・２ＨＢｒ　（分子量８
５７．７） 防湿下ＢＯＣ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ
（Ｚ）ＰＩム（分子量　９５０．１　　）　Ｏ，色１７
９ｒ　（Ｑ、３７８ｍ　ｍｏｌｅ　）を１０〜１５℃に
保ちながら冷２５　％　ＨＢｒ／酢酸３５１１１を加え
攪拌しながら１時間脱離する。

反応液に酢酸エチルを少量加え、増量後、無水エーテル
１５０−におとし、結晶化する。結晶化物を炉取し、？
、０３ＫＯＩＩ上減圧乾燥すると粗結晶のＨ−Ｄ−Ｌｙ
ｅ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌｙ＠（Ｚ）Ｉ’Ｎム−２ＨＢ
ｒ　Ｏ，７１３９ｒ（９４，７％）を得る。これをａｓ
ｐ門ａｅｘ　ＬＨ−２０にて精製すると、目的とする（
Ｖｌ）　０．４４９ｒ　（６１，５ｔｓ）を得る。

ｍ、Ｐ、：　　１４８〜１５８℃ 】ヨ（ｆ　　二　　０．５８ （”）　　：　　　２４．５　　（００，５ＭｅＯＨ）
実施例６ 実施例１及び２の方法に従って下記基質の合成を行った
。

実施例４ 前記実施例により製造した基質を、下記のとおりプラス
ミン測定に用いる。この測定原理は、酵素加水分解によ
り生じる分解生成物のｐ−ニトロアニリンスは５−アミ
ノサリチル酸をｐ−ニトロアニリンは、４０５ｎｍにて
そのまま又５−アミノサリチル酸の場合は、酸化剤存在
下、２．６−キシレノールと縮合発色させ、６１５ｎｌ
ｎにてその吸光度（０，Ｄ、　）を測定する事により、
各々形成されたｐ−ニトロアニリン或は５−アミノサリ
チル散を定量する方法である。

次表は本発明のプラスミン基質及び前述の８−２２５１
　、０Ｈｚ−ＰＬ並びに関連基質のＫｍ値、Ｖｍａｘ及
びＫｍ、／’ｌｒｍａｘ値を比較した表である。

酵素による加水分解反応は次のような図式で表わすこと
ができる。

ｍ＋　ｐ。

２；酵素 ８＝基質 ！５Ｗ酵素−基質−複合体 Ｐｌ及びＰｌｌ−生成物 に１・Ｘ畠・ＩＣ３及びｘ４二速度定数］１ｉＥｌの解
難定数＝士門Ｉｃｍ（ミバエリス定数）（８）　＞　（
ｍ）及びに４　＜−の場合、式が有効である。

Ｐｌが形成される速度定数は次の通りである。

Ｖ　繻　Ｋ３　・　〔１日〕 Ｅが完全に８に結合している場合は次の通りである。

（ｍｓ）　　＝、　（１） Ｖ＝ＶＨ１＆Ｘ　＝に５−　（１）　　　　　　　　　
＜３）ラインライ−パー・パーク式： （２）式から、定数Ｋｍｌ及びに、は所与の酵素に対す
る基質の効力を決定することになる。これらの定数の測
定には、次の方法を適用する： 緩衝溶液沖で＃素と基質を混合しかつ、３０秒間、加水
分解反応を行なう。基質の濃度〔８〕を変え、酵素線度
を一定に保持する。吸光度（０，Ｄ　）を測定する事に
より、加水分解の初速度を確定することができる。Ｔを
閏の関数としてプロットする場合に、ラインライ−パー
・パーク線図が得られ、これからグラフにより’Ｖｍａ
ｘ及びＫｍを確定することができる・ Ｋｍ及びＶｍａｘ並びにＶｍａｘ　／　Ｋｍをプラスミ
ン（シタ）Ｋついて一定した結果を第１表、第２表に総
括した。

表　　　　１ 番　号　　　　　　　基　　　質　　　　　　　　　　
　　Ｋｍ（Ｘｌ　０−ｉ　　８−２２５１　　４　１ｌ
−Ｄ−Ｖａｊ−Ｌｅｕ−Ｌｙｅ−ＰＩム−２”８１　　
　　　５４．８３６ＩＰＭ−１，Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏ
ｅ　）−Ｌｅｕ−Ｌｙａ−ＰＩム、２ＨＢ１−　　１８
．９１４　　ＮＰＭ−２、Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏ日）−
ｐｈｅ−Ｌｙａ−ＰＩム、２ＨＢｒ　　　１．５８・５
　　ＭＰＮ−！Ｉ　　　ＩＨ−Ｄ−Ｇｌｕ（ＯＨＭ）−
ｐｈｅ−Ｌｙａ−ＰＨム−２１１Ｂ！−３，２１５）　
　Ｖ（ｘｌｏ−’）　　Ｖ／ｋｍ（ｘｌｏ−’）　　相
ｔ４比Ｄ　　　　５９．８７６　　　１１．４４９　　
　１．０００６０．０６７　　　２１．ｄ２８−　　　
１．８８９７　　６３．６００　　　５５．６２１２．
９３７１　　　４７．９６Ｂ　　　５０３．５９５　　
２６．５１７７　　６５．２８７　　２０２．９４３１
７．７２６番号　　　　　基　質 ６ＮＰＣ−１１ｌ−Ｄ−Ｖａｌ−ＩＪｅｕ−Ｌｙｅ−Ｏ
ＨＡ−２ＨＢｒ７　　ＮＰＣ−２Ｈ−Ｄ−Ｖａｔ−ｐｈ
ｉ−Ｌｙｓ−ＣＨＡ、２Ｈｃｌｆ３　　ＩＦ（３−３１
（−Ｄ−Ｌｙｅ−ｐｈｉ−Ｌｙｓ−ＣＨＡ、５ＨＯｔ９
　　ＮＰＣ−４Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ（ム０）−ｐｈｅ−Ｌｙ
ｅ−ＣＨＡ、２Ｈ（３ｔｌＱ　　ＮＰＯ−５Ｈ−Ｌ−Ｌ
ｙｅ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＯＨＡ、２ＨＯＡｊ
ｊ　　ＮＰＯ−６Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏｏ）−ｐｈｉ−
Ｌｙａ−Ｃ！Ｈム、２ＨＯ１１２ＮＰｃ−７Ｈ−Ｄ−Ｌ
ｙｅ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＣＨＡ、２ｕｃｚ１
５　　ＮＰＣ−８４１−Ｄ−Ｌ７ａ（Ｎａ８）−ｐｈｅ
−Ｌ＋７トＯＨム、２ａｃｚ１４　　ＭＰＣ−９Ｈ−Ｄ
−Ｌｙａ（ＮａＯ）−ｐｈｉ−’Ｄｙｅ−ＯＨム、２ｕ
ｃｚ１５　　ＮＰＣ−ｊ　［３〜ＩＸ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｍ
ａｔ）−ｐｈｅ−Ｌｙａ−ＯＨＡ−２ＨＯｔ１６ＮＰＣ
−ｉｌ　　）１−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｔｏｅ）−ｐｈｅ−Ｌｙ
ａ−ＣＨＡ、２ＨＯｔ１７　　ａＰ（３−１２１ｉ−Ｄ
−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｅ−０）１ム・２Ｈ
Ｂｒ１８　　ＮＰＣ−１３１−Ｄ−Ｔｙｒ（Ｔｏｅ）−
Ｌｅｕ−Ｌｙａ−ＣＨＡ、２ｕｃｚ相対比はａ　−２２
５１（Ｖ／ｌ” Ｋｍ（ｘｌｕ−５）　　Ｖ（ｘｌ　０−））　　Ｖｂ（
ｘＩＤ−’）　　相対比３２１．０２７　　５．５５６
　　　　０．１１１　　　　　１．０００６５．０６６
　　８．２６’６　　　　１．！１１１　　　１１．８
１１２２．２２２　　７．５０６　　　　３．５７８　
　　　　り０．４３２２５．０４５　　１０．９４０　
　　　　４．３６Ｂ　　　　　３９．３５１２９．２３
２　　６．１５９　　　　１．０８１　　　　　９．７
３９７．６２０　　１１．６７０　　　　１５．３１５
　　　１５７．９７５２０．６２９　２９．４１７　　
　　１４．２６０　　　１２８．４６８１７．９５９　
　５０．８１４　　　１７．１７７　　　１５４．７４
８３２．５４６　　１５．８２７　　　　４．２４８　
　　　３Ｂ、２７０２７．１５５　２８．４４５　　　
　１０．４７５　　　　９４．３６９１５．４０４　１
７．０１８　　　　１１．０４８　　　　９９．５５２
１００．０００　　２５．６７９　　　　２．５６Ｂ　
　　　　２３．１３５１４４．３４０　１７．９９１　
　　　１．２４６　　　１１．２２５）を１．０として
比較 実施例５ 新規に合成した基質の特異性を各穐酵素と反応させる事
により試験した。

試験方法： １）基質液、濃度；　３５　ｍｍｏｌｅ／ｚ　）１．。

を使用し、反応−は酵素により次の通りとした。

ｉ！Ｉ　　　素　　　　　　−（２５℃）トロンビン（
Ｔ　Ｈ）　　　　　　　　８．４ゾラスミン（Ｐ　Ｌ　
）　　　　　　　　７．４カリクレイン（ｘＬ）　　　
　　　　　７．９Ｐ−Ｘａ（ＩＦＸａ）　　　　　　　
　　８．４ウロキナーゼ（ＵＫ）　　　　　　　８．２
唖　　　　　　　　　　　　　　　臂　　　り測定方法
； 緩衝液０．５−と酵素試薬０．０５−をシリコン処理硬
寒ガラス製試験’１！ｘは、ゾ？スチツク製試験管に採
取し、６７℃恒温権中にて５分間予加温する。次いで基
質液０．１ｄを加えて酵素反応を３７℃で１０分間実施
する。正確に、１０分後反応停止液又は停止発色試液２
，５１１１７を加えて酵素反応を停止した後、２５℃で
１０分放置後４０５　ｎｍ又は６４５　ｎｍの吸光度を
測定、 但しＨ２Ｎぺ一＞Ｈｏｇ　　　＃Ｈ１０，５Ｘ１０３．
λ４ＱＩ５表　　　６ 番　号　　　　　　　基　　質　　　　　　　　　　　
　　　ＴＩ（ｉ、８−２２５ｉ　　　、Ｈ−Ｄ−Ｖａｚ
−Ｌｅｕ−Ｌｙｓｉ−ＰＮＡ−２ＨＯｔＯ，０５、ＮＰ
Ｍ−１３ｉｌ−Ｄ−Ｌｙｅ（ＴｏＢ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｅ
−ＰＮＡ−２ＨＢｒ　　　　Ｑ４　ＭＰＭ−２Ｊｉ−Ｄ
−Ｌｙｓ（ＴｏＥｌ）−ｐｈｅ−Ｌｙａ−ＰＮＡ、２Ｈ
Ｂｒ　　　　Ｑ５、　ＩＢＭ−’）　　　ＩＨ−Ｄ−Ｇ
ｌｙ（（３ＨＮ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ｐＨム−２ＨＢｒ
　　　　Ｏ初期基質績Ｋ　８０　Ｗ　Ｏ，５４ｍ　ｍｏ
ｔ／ｌ′　測定数値は４０５　ｎｍにおける吸光度ＰＬ
　　　　　ＫＩ、　　　　　？Ｘａ　　　　　ＵＫｏｌ
　　　０．４８６　０．０１７　０．００７　０．００
１０．６４７　　０．００４　０．０２６　　０．０６
９０．７２６　　０．００（Ｓ　　Ｏ，００３０，００
１０，６０８０，００４０，００３０，００１０，７４
００，００９０，００３０，００１（０，Ｄ、　）を表
わす 表　　　　４ 査　号　　　　　　　　　基　　質　　　　　　　　　
　　　　　ＴＨｌ＞　ＩＰ（３−１ＪＩ−Ｄ−ＶＩＬｊ
−Ｌｅｕ−′Ｌ７ａ−ＯＨＡ＠２ＨＢｒ　　　　　　Ｑ
７、ＮＰＣ−２’１ｌ−Ｄ−ＶａＡ−ｐｈｓ−Ｌｙｅ−
（３ＨＡ−２）１０Ａ　　　　０．００２３　ＮＰＣ−
３Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＯＨＡ、３ＨＯＬ
Ｑ９、ＭＰＱ−４Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ（ムｃ）−ｐＭ−Ｌｙ
ｅ−ＯＨＡ、２ｍａｔ　　　　Ｏ，００１１Ｑ、ＭＰＣ
−５１ｌ−Ｌ−Ｌｙｅ（ＴｏＢ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−Ｏ
ＨＡ、２ＨＯｔＱ１１、ＮＰＣ−６ａ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔ
ｏｏ）−ｐｈｅ−Ｌｙａ−ＯＨＡ、２ＨＣ７：、　　Ｑ
１２、　ＮＰＣ−７Ｊ（−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｔｏｅ）−ｐｈ
ｅ−Ｌｙａ−ＯＨＡ、２ＨＱｌ　　Ｑ１３、　ＭＰ（３
−Ｊ３　　　、Ｈ−Ｄ−Ｌｙｓ（Ｎａ８）−ｐｈｅ−Ｌ
ｙｅ−ＯＨＡ−２１（ＯｔＱ１４、ＮＰＣ−９１ｌ−Ｄ
−Ｌｙｓ（ｌｉａｏ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＯＨＡ−２）
１０ｔＯｉ５．ＮＰＣ−１Ｑ　　　Ｈ−Ｄ−Ｌｙｅ（Ｍ
ａｔ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ−ＯＨＡ−２ＨＯｔ０１６、Ｎ
ＰＣ−１１旦−Ｄ−Ｔｙｒ（ＴｏＢ）−ｐｈｅ−Ｌｙｅ
−ＯＨＡ、２に１ａｔ　　　　　　Ｏ，００１１乙ＮＰ
Ｏ−１２月−Ｄ−Ｌｙｅ（ＴｏＢ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｅ−
ＯＨＡ、２ＨＢｒ　　　　Ｏ，００１１ａ　ＮＰＯ−１
３Ｈ−Ｄ−Ｔｙｒ（ＴｏＢ）−Ｌｅｕ−Ｌｙｅ−ＯＨＡ
−２Ｈｃｔ　　　　　　　　０．００２初期基質濃度８
ｏ　＝　Ｑ、５４　ｍ 測定数値は６１５ｎｍにおけ・ ＰＬ　　　　　　　ＫＩａ　　　　　　　　ＩＰ：Ｉａ
　　　　　　　　ＵＫＯ，０１３０，００２０，００２
０ ０，０９００，００，６０，００４０，００２０，０９
６０，００４０，００２０ ０，１４４０，００６０，００２０ ０，０５１０，００１０，００２０ ０，１４７０，００７０，００１０ ０，４２００，００７０゜００１０ ０．４９８　　　０．０１１　　　　０．００２　　　
　０．００２０．１２０　　　　０．０２７　　　０．
ＯＯｊ　　　　　００．３４４　　　　０．０１０　　
　０．００２　　　　０．００１０．２７７　　　　０
．０１２　　　０．００３　　　　０．００３０．０５
１　　　　０．００７　　　０．００２　　　　０．０
０１０．０４１　　　　０．００４　　　０．００１　
　　　０．００１ｍｏ４／ｌ る吸光度（０，Ｄ、）を表わす 手続補正書輸発） 昭和５７年５月２１日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１６５６４９号 ２、発明の名称 新規なプラスミン測定用基質 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　　所 氏　名　　　　（３９７）　　日東紡績株式会社（名　
称） ４、代理人 昭和　　年　　月　　日 ６、補正により増加する発明の数 ８、補正の内容　　別紙のとおり （２）明細書、５頁１ｏ行の「Ｓｈ＠ｒｎｙ　Ｊをｆ　
８ｈ＠ｒｒｙ　Ｊに訂正する。

（３）同書、４頁５行４Ｆ）　「ＯＨＲ，ＰＬ−Ｊ　ヲ
「０ＨＲ−ＰＬ　Ｊに訂正する。

（４）同書、７負４行の「（Ｔｏｌｌ）−Ｐｈ・−Ｌｙ
ｅ−ＰＮＡ　Ｊをｊ　（Ｔｏｍ）−Ｐｈ・−Ｌ７ａｌ　
−ＰＭＡ　Ｊに訂正する。

削除する。

（７）同書、１２頁８行の「サクシロソイミｒ」を「サ
クシニックイミＰＪｋ訂正する。

：： （８）同書、１６真下から５行と下から４行との間に改
行して、ｊＮａ８＝β−ナフチルスルホニル」を加入す
る。

（９）　　ｆｉｉ１３１．２１　ＩＩ　１０　行ノｒ−
Ｌ７Ｅｌ（Ｚ）−ＰＭＡ」をｊ−Ｌｙｅ（Ｚ）−ＰＭＡ
」に訂正する。

Ｑｌ　　同書、２２頁５行および６行の［−Ｌｙｓ（Ｔ
ｏ日）−」をｆ−Ｌｙｓ（Ｔｏリ−」に訂正する。

αυ　同書、２６頁６行、７行、９行および１６行の［
−Ｌｙｓ（Ｔａ２）−Ｊをｊ　−Ｌｙｓ（Ｔｏｇ）−Ｊ
に訂正する。

鰺　同書、２９頁の表１を下記の表１とさし変える。

αＱ−同書、３５ｊｔの表４を下記の表４とさし変える
。

特開昭５８−６３３９９　（１６） ２、特許請求の範囲 一般式 Ｃ式中 ｍ　＝　１〜４ であり。

−（ＯＨｇ　）ｎ−ＯＨ（’Ｈａ　）＊　（”　”　Ｏ
〜３　）Ｒｓ＋＝−（ＯＨｓ）ｎ＋ｘ−’Ｂｓ　　（！
Ｌ＝＝（１−３）である） の化合物またはその塩で表わされる事を特徴とするプラ
スミン又はプラスミン様酵素に対して、発色性又は螢光
性を有する新規なプラスミン測定用基質。

手続補正書（、え） 昭和５７年　６月１７日 特許庁長官殿 １、事件の表示 昭和５６年特許願第１６５６４９％ ２、発明の名称 新規なプラスきン測定用基質 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 住　　所 氏　　名 侶　称）（３９７）　　日東紡績株式会社４、代理人 昭和　　年　　月　　日 ６、補正により増加する発明の数 ７、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 表１、（ト））欄のうち試料番号ＮＰＮ−１、ＮＰＮ−
２、ＮＰＮ−１０およびＮＰＮ−１１の化学式を次のご
とく訂正する。

（２１同書、５頁の表２、俤）欄、試料番号ＮＰＣ−４
〜ＮＰＣ−１５の化学式を次のごとく訂正する。

（３３同書、６頁の表２のつづぎ、（ｅ）欄、試料番号
ＮＰＣ！−１４〜ＮＰＣ−２０およびＮＰＣ’−２５〜
ＮＰＣ−２５の化学式を次のごとく訂正する。

（４）　　同書、８頁の１［３、（Ｂ）欄ｆ）５チ試料
書−ｊ）　ＮＰＮ−１、Ｎｐ＊−２、ＮＰＮ−１０およ
びＮＰＮ−１１の化学式を次のごとく訂正する。

（５）同書、１０頁の表４、偉）欄、試料番号ＮＰＣ−
４〜ＮＰＣ’−１３の化学式を次のごとく訂正する。

（６）　　同書、１１頁の！ｌ！４のつづき、（Ｂ）欄
、試料番号ＮＰＣ−１４〜ＮＰＣ−２０およびＮＰＣ−
２３〜ＮＰＣ−２５１：／ｙ化学式を次のごとく訂正す
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 （式中 −ＭＩＩ８０．Ｒ。 （ＯＨｓ）　−０Ｈ（ＯＨｓ）ｓ（ｎ−０〜５）Ｒ１１
   ＝　（ＯＨＩＩ）ｎ＋１−”３　　（ｎ＝ｏ〜５）又は である） の化合物またはその塩で表わされる事を特徴とするプラ
   スミン又はプラスミン様酵素に対して、発色性又は螢光
   性を有する新規なプラスミン測定用１ｓ　’Ｘ　＠