JPS62294696A - トリペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ６　発明の詳細な説明 本発明は、蛋白分解酵素、特に酵素部類Ｅ、Ｃ。

３、４．２１．の酵素、例えに器官又は腺カリクレーン
、トロンビン及びプラズミンを定量分析するための基質
として有用な新規のトリペプチド誘導体に関する。

７ｊｒｉ１Ｍ器１カリクレーン又は腺カリクレーンは、
種々の器官及び腺、例えば分泌腺、号液腺、腎臓、消化
管粘に等によって得らｌシ、前酵素の形又は活性形で分
泌される。これらの器官又は腺カリクレーンは、化学的
及び生理学的に血漿カリクレーンとは異なるものである
。一定の病理学的条件下で器官カリクレーン分泌物濃度
は、正常値よシも低下するか又は正常値よシも上昇する
。すなわち、例えば尿のカリクレーン分泌は、腎臓疾病
の患者の正常値よシも実質的に減少する。′Ｐ＃臓硬化
症の患者においてカリクレーン分泌は、殆んど完全に抑
圧さＩしている。特発性高加圧症の患者において、２４
時間−尿のカリクレーン分泌は、正常値の５０チ平均と
して有効に減少されている（例えば、Ｈ，Ｓ　、Ｍａｒ
ｇｏｌｉｕｓ著、”　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｋａｌｌｉｋｒｅｉｎ−
Ｋｉｎｉｎ　Ｓｙｓｔｅｍ　ｉｎ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎ
ｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　”、１９７４年、第６９９〜４０
９頁、診照）。それ故、簡単な処理方法で器官カリクレ
ーンを迅速に定量分析することは重要である。例えば、
一定のアルギニンエステル、例工ばトシル−アルキ゛ニ
ンメチルエステル（ＴＡＭＥ　）　ｋエステル分解する
ことによって族カリクレーンを分析することは、公知で
ある。改善されたエステル分解法では、三重水素で標識
されたトジルーアルヤニンメテルエステルを使用し、エ
ステル分解によって放出されるメタノールの放射能を測
定する。しかし、こＩしらのエステル分解法は、該方法
がカリクレーンがエステル分解によらずアミド分解によ
シ天然のペプチド鎖を分解する蛋白分解酵素である程度
に非生理学的であるという欠点を有する。更に、エステ
ル基質は、該基質が多数の他の酵素によって分解゛さｔ
している、すなわちカリクレイ／によって不明確に分解
されているという欠点を廟する。三重水素で標識された
ＴＡＭＥを用いる方法は、三重水素で標識さ２’したメ
タノールの放射能測定よりも前に、エステル分解混合物
中になお存在する三重水素で標識さＩした残留ＴＡＭＥ
が測定を邪魔するのでメタノールをエステル分解混合物
から水と不混和性の液体で抽出しなければならない程度
に抄雑である。

審査されずに公告さ汎た西ドイツ国特許出願公開第２５
２７９３２号明細省には、式：Ｒ”−Ｐｒｏ−Ｘ−Ａｒ
ｇ−ＮＨ−Ｒ２（但し、ＲＪは保護基を表わし、−ＮＨ
−１（２は発色団を貴わし、Ｘはフェニルアラニル基、
β−シクロヘキシルアラニル基、フェニルグリシル基又
はチロシル基を表わす）で示される基質が記載さ扛てい
る。該基質は、血漿カリクレーンによって極めて藺単に
分解さ扛、有色の分解生成物Ｒ２−ＮＨ２を生じ、この
場合この分解生成物の量は、副光法、分光測光法又は螢
光測光法によって測定することができる。

また、器官又は腺カリクレーンを分析するために該基質
を使用することも試みらｒした。しかし、意外なことに
、該基質は、器官又は腺カリクレーンに対し一敏感でな
い、すなわち器官又は腺カリクレーンによって分解され
ないか又は少量が分解さｎるにすぎないことが判明した
。

審査されずに公告された西ドイツ国特許出願公開１２６
２９０６７号明Ｉｖ１ｉＩＩＦ　ＶＣハ、特定ノ蛋白分
解酵素、例えば腺又は器官カリクレーン及びプラズミン
を分析するための基質として有用なトリペプチド誘導体
が記載さ才している。すな）：＋ち、Ｈ−Ｄ−バリル−
ロイシル−アルギニル−ｐ−ニトロアニリＰジヒドロク
ロリド及びＨ−Ｄ−パリルーロイシル−リゾルーｐ−ニ
トロアニリｒジヒドロクロリＰが２つの例として挙げら
１している。第１のトリペプチド誘導体は、腺カリクレ
ーンのための基質であシ、第２のトリペプチド誘導体は
、プラズミンのための基質である。こｔしら２つの化合
物は、該酵素によって分解さ１’Ｓ　ｐ−ニトロアニリ
ンを生じ、この場合このｐ−ニトロアニリンの量は、測
光法又は分光側光法により測定することができる。しカ
シながら、Ｈ−Ｄ−バリルーロイシルーアルヂニルーｐ
−ニトロアニリドジヒドロクロリｒの感受率は、画線さ
れてない尿中の尿カリクレーンを正確に分析するのに必
要な限界値に到達する。しかし、該アミｈ（ｌ基質を濃
縮された尿中で使用する場合には、ｐ−ニトロアニリン
の測光法による測定は、尿の独自の色によって強固に阻
止される。

前記の西ドイツ国特許明細書に記載さス′シた２つのト
リペプチド誘導体のトリペプチド鎖中の第１の２つのア
ミノ酸は、α−又はβ位に阻水性イソプロピル基をＭす
る。この阻水性を増大させ、その後に腺カリクレーンに
対する感受性を増大させるために、ジペプチド鎖の基本
構造を維持しながら、イソプロピル基を芳香族基、例え
ばフェニル基に代えることが試みらｎた。

し〃１し、この試みは失敗した。芳香族基を装入するこ
とによって得られるトリペプチド基質は、腺カリクレー
ンによって全く分解されないか又は多くの場合極めて少
量が分解されるにすぎない。しかし、芳香族基を有する
こ九らのトリペプチド基質は、プラズミンに対して驚異
的に高い感受性を有する。更に、意外なことに、該トリ
ペプテドプラズミン基質における芳香族基の水素添加は
、器官又は腺カリクレーンに対して驚異的に高い感受性
を有する新規部類のトリペプチド基質を生じることが見
い出さ１した。トリペプチド鎖を増加させるにに、蛋白
分解酵素によって分解さτしる基質を得るために天然に
生じるアミノ酸だけを使用することができることが判明
していた。；ｔ″ｒＬ故、シクロヘキシル基を含有しか
つ天然に生じないアミノ酸を使用することにより、器官
又は脈カリクレーン及びその他の蛋白分解酵素、例えば
血漿カリクレーンによって簡単に分解される発色団基質
を得ることができることが見い出されたことは意外なこ
とであった。

本発明は、特定の蛋白分解酵素、特に酵素部類Ｅ、　Ｃ
，３，４，２１，の酵素、例えば器官又は腺カリクレー
ン、プラズミン及びトロンビンｆこ対して高い感受性を
鳴し、したがって該酵素を定量分析するための基質とし
て有用な新規の発色団基質に関する。該基質は、一般式
１：％式％ 〔式中、 Ｘはアラニル基、α−アミノブチリル基、ロイシル基、
ノルロイフル基、イソロイシル基、バリル基又はノルバ
リル基を表わし、Ｙはシクロヘキシルアラニル基又はシ
クロヘギシルナロシル基をｆｆワＬ、Ｒはｐ−ニトロフ
ェニルアミノ基、２−ナフチルアミノ基、４−メトキシ
−２−ナフチルアミノ基、４−メナルークマリル−７−
７ミノ基又は１，３−ジ（メトキシカルボニル）−フェ
ニル−５−アミノ基を表わす〕で示さ扛るトリペプチド
誘導体又は酸とのその塩である。

式Ｉ中でＨによって表わされる発色団は、例えばｐ−ニ
トロフェニルアミノ基、２−ナフチルアミノ基、４−メ
トキシ−２−ナフチルアミノ基、４−メチル−クマリル
−（７）−アミノ基又は１，６−ジ（メトキシカルボニ
ル）−フェニル−（５）−アミノ基であることができる
。

式Ｉのトリペプチド誘導体は、水性媒体に対して難溶性
であシ、シたがってその酸との塩の形で、殊に鉱酸、例
えばＨＣｊ　、　ＨＢｒ　、　Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３Ｐ０．
等、又は有機酸、例えば＠酸、酢酸、ゾロピオン酸、ト
リメチル酢酸、メトキシ酢酸、トリクロル−又はトリフ
ルオル酢酸のようなハロゲン化酢酸、アミノ酢酸、乳酸
、蓚酸、マロン酸、クエン酸、安息香酸、核中で置換さ
れた芳香族酸、例えばトルイル酸、クロル−又はブロム
安息香酸、メトキシ安息香酸及びアミノ安息香酸、フタ
ル酸等との塩の形で有利に使用される。核酸の性質は、
核酸が基質と酵素との間の反応に関与しないので重要で
はない。

式Ｉの基質及びその酸との塩は、特定の蛋白分解酵素、
特に酵素部類Ｅ、　Ｃ，３，４，２１，の酵素（”　Ｅ
ｎｚｙｍｅ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ”、Ｅｌｓｅｖ
ｉｅｒＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　
Ｃｏｍｐａｎｙ　（Ａｍｓｔｅｒｄａｍ）社有、１９７
３年、第２３８頁以降、参照）、例えば器官カリクレー
ン及び腺カリクレーン、プラズミン及びトロンビンの作
用によって加水分解によシ分解され、その結果式：　Ｒ
−１（Ｈ２の有色性又は螢光性分解生成物が形成さｆＬ
、この場合この分解生成物のｆは、測光法、分光測光法
、螢光分光側光法又μ電気化学的方法によって測定する
ことができる。従って、この新規の基質は、蛋白分解酵
素、殊にアルギニンないしはリジンのカルボキシル側鎖
上の天然のペプチド鎖を分解する酵素部類Ｅ、　Ｃ，３
，４，２１，の酵素、例えば器官又は腺カリクレーン、
プラズミン、血漿カリクレーン、トロンビンないしはそ
れらの抑制因子及び前酵素、ならひに該酵素の形成又は
抑御に関与する七の他の因子全定量分析するのに有用で
ある。

トリペプチド誘導体の浸れた群は、 Ｙがシクロヘキシルアラニル基、シクロヘキシルチロシ
ル基、を表わし、 Ｘがアラニル基、α−アミノブチリル基、バリル基、ノ
ルバリル基、ロイシル基、ノルロイシル基又はイソロイ
シル基又はプロリル基を表わす式Ｉの化合物からなる。

次の実施例７．８．９．１０．１１に記載のトリペプチ
ド誘導体は、殊に族カリクレーンを分析するだめの基質
とし１有用である。

ヒトの略痰中のカリクレーンを分析するには、次の実施
例８．９．１０．１１に記載のトリペプチド誘導体を使
用することができる。

次の実施例２．４．６．８．１０．１１及び１２に記載
のトリペプチド誘導体は、プラズミンを分析するのに使
用することができる１群の基質を構成する。

本発明は、蛋白分解酵素、殊に１ルギニンないしはリジ
ンのカルボキシル側鎖上の天然のペプチド鎖を分解する
酵素部類Ｅ、　Ｃ，３，４，２１゜の酵素、例えば器官
又は腺カリクレーン、プラズミン及びトロンビンを定量
分析する方法にも関する。本発明による方法は、前記酵
素を含有するか又は該酵素を形成又は消費する物質を、
式Ｉのトリペプチド誘導体と反応させ、このトリペプチ
ド誘導体における酵素の加水分解作用によって形成され
る有色又は螢光分解生成物Ｒ−ＮＨ２の一３ｔ’ｋ、測
光法、分光測光法、螢光分光測光法又は電気化学的方法
によって測定することよりなる。本発明方法は、例えば
酵素標本の酵素含量又はヒトの体液及び＋ｌｉ乳動物の
体液、例えば尿、膵液、腸粘液、乳腺分泌物、汗腺分泌
物、喀痰及び血液中の酵素娘度を分析することができる
。本発明方法は、殊に前記体液中の器官又はｊ尿カリク
レーン及び血漿カリクレーンを定ｌ°分析するのに有用
である。この方法によれは、遊離器官カリクレーン及び
粘膜カリクレーンないしはプレカリクレーンから形成さ
れたカリクレーン、さらにカリクレーンの生理学的又は
非生理学的抑制因子及びプレカリクレーンの生理学的又
は非生理学的賦活体を分析することができる。

式ｌのトリペプチド誘導体は、以下に記載した方法によ
シ製造することができる： （１）発色団Ｒを、Ｃ−末端リジンのカルざキシル基に
結合させ、その際にα−アミノ基を保護基、例えばカル
ざベンゾキシ基又はｔ−ブトキシカルボニル基によって
保護し、リジンの場合にはＣ−アミノ基を、カルボベン
ゾキシ基、又はｐ−メチル−１ｐ−メトキシ−又はｐ−
クロルベンジルオキシカルボニル基、又はｔ−ブトキシ
カルボニル基によって保護する。また、Ｃ−末端Ｒ−Ｎ
Ｈ基は、ペプチｆ＠を段階的に合成する間保護基として
役立つ。その他の保護基は、必要な場合には所望のベプ
デド鎖が完全に合成されるまで他のアミノ酸誘導体を結
合させるために選択的に除去することができる。最後に
、残留する保護基ｋ、Ｒ−ＮＨ−基を作用させることな
しに完全に分解する（例えば、ＭｉｋｌｏｓＢｏｄａｎ
ｓｋｙ他、”　Ｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ”
、Ｉｎｔｅｒａｃｉｅｎｃｅ　Ｐｕｅ＋１ｉＳＭｒ８社
刊、１９６６年、第１６６〜１６５頁）。

（２）第１にペゾテｒ鎖を（Ｂｏｄａｎｓｋｙ他による
方法、上記引用文中、によシ）合成するが、その際にリ
ジンのＣ−末端力ルボキシル基を常用のエステル基、例
えばメトキシ基、エトキシ基又はベンジルオキシ基（ア
ルギニンの場合）、又はｔ−シトキシ基（リジンの場合
）によって保護する。該エステル基は、トリフルオル酢
酸によシ選択的に分解しなけれはならないｔ−ブトキシ
基を除いて、アルカリ加水分解によって除去することが
できる。アルｒニンのδ−グア＝ジル基をプロトン化す
る場合には、該エステル基をトリプシンを用いて酵素に
よシ除去し、この場合ラセミ化は起こらない。次に、発
色団Ｒ−ＮＨ−ｔｌ−［合させる。アルギニンのδ−グ
アニゾノ基をニトロ基又はトシル基によって保護するか
又はリジンのε−アミノ基をカルボベンゾキシ基又はｔ
、−ブトキシ基によって保護し、トリペプチド誘導体の
Ｎ−末端α−アミノ基をカルボベンゾキシ基又はｐ−メ
チル−１ｐ−メトキシ−又はｐ−クロルベンジルオキシ
カルボニル基又はｔ−ブトキシ基によって保護する場合
には、全ての保護基を同時に除去する。この除去は、保
護されているトリペプチド誘導体を無水ＨＦで室温で処
理することによって実施することができ、したがってこ
の場合にはアミノ基及びδ−グアニゾノ基の全ての前記
保護基が除去される。また、この除去は、保論さｎてい
るトリペプチド誘導体が保護ニトロ基又はトシル基を含
有しない場合、氷酢歌中の２Ｎ　ＨＢｒで室温で処理す
ることによって実施することもできる。

本発明によるトリペプチド誘導体の製造は、次の実施例
に詳記されている。

実施例によって得られた溶出液及び生成物の分析は、シ
リカゾルで被覆さ扛たガラス板（Ｍｅｒｃｋ社、Ｆ２５
４）を用いて薄層クロマトグラフィーによって行なわＩ
した。薄層クロマトグラムは、次の溶剤系によって展開
した二Ａ　クロロホルム／メタノール（９：１）Ｂｎ−
プロパツール／酢酸エテル／水（７：１　：２）Ｃｎ−
ブタノール／酢酸／水（３：１：１）次の略飴を使用す
る： ＡｃＯＨ＝酢酸 Ａｌａ　　＝アラニン Ａｒｇ　　＝１ルギニン ＢＯＣ＝ｔ−シトキシカルボニル Ｂｕｔ　　＝α−アミノ酪酸 Ｃｂｏ　　＝カルボベンゾキシ ＣＨＡ　　＝シクロヘキシルアラニン ＣＨＣ）　　＝シクロへキシルグリジンＣＨＴ　　＝シ
クロへキシルチロシン＝ｐ−ヒｒロキシシクロへキシル
アラニン ＤＭＦ　　＝ジメチルホルムアミド ＤｐＡ　＝１．３−ジ（メトキシカルボニル）−フェニ
ル−（５）−アミド ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー Ｂｔ３Ｎ＝トリエチルアミン Ｉ（ＭＰＴＡ　＝燐酸Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’、頴、Ｗ−へ
キサメチルトリアミド 工１ｅ　　＝インロイシン Ｌｅｕ　　＝ロイシン ＳＳ　　　＝溶剤糸 Ｌｙｓ　　＝リジン ＭＣＡ＝４−メチル−クマリル−（７）−アミドＭｅＯ
Ｈ＝メタノール ４−Ｍ８Ｏ−２−ＮＡ　＝　４−メトキシ−２−ナフチ
ルアミ　　Ｐ Ｎｌｅｕ　−ノルロイシン Ｎｖａｌ　　＝ノルバリン ０ｐＮＰ　　＝ｐ−ニトロフェノキシ Ｐｈｅ　　＝フェニルアラニン Ｐｈ’Ｇｌｙ　＝フェニルグリジン Ｐｉｐ　　＝ピペコリン酸 ｐＮＡ＝ｐ−ニトロアニリド Ｐｒｏ　　−＝プロリン ＴＨ）Ｉ”　　＝テトラヒドロフラン Ｔｙｒ　　−チロシン Ｍａｌ　　＝バリン 特に記載しない限シ、ペプチド鎖中のアミノ酸はＬ−形
を有する。

例　１　（参考例） ２５０ｍの三首フラスコ中で（真空中でＰ２Ｏ５上で乾
燥した）　ＣｂＯ−Ａｒｇ−ＯＨ，ＨＣｊ　１６．Ｏ，
！ｉ＋（４７，０ミリモル）ｉ−２０℃で無水ＨＭＰＴ
Ａ　９０Ｍに溶解し、この場合フラスコ中の雰囲気は湿
分を含まないように保持した。得られた深液に室温でま
すＨＭＰＴＡ　１Ｑ−中のＥｔ３Ｎ　４−７４　ｇ　（
４７，０ミリモル）の溶液を添加し、次に（１００％過
剰の）ｐ−ニトロフェニルインシアネート１６．４、！
１ｌｃｉｏｏミリモル）を満願した。２０°Ｃでの２４
時間の反応時間後、ＨＭＰＴＡの大部分を真空中で蒸留
することによって除去した。この残滓を６０％ＡｃＯＨ
で数回抽出した。この残滓を廃棄した。合した酢酸抽出
液を３０％Ａｃ　ＯＨで平衡させかつ３０　％　ＡｃＯ
Ｈで溶離せしめる６セフアデツクス（５ｅｐｈａｄｅｘ
　）　Ｇ　−１５”（登録商標）のカラムを通すことＫ
よってさらに精製した。ｐ−ニトロアニリンの遊離下に
トリプシンで処理することによって分解されたＡｃＯＨ
溶出液の画分を凍結乾燥した。こうして、ＴＬＣによっ
て示さＩＬるように８８　Ｃ中で均一な無定形粉末１２
．６．！７が得られた。元素分析及び実験式０２０Ｈ２
’５Ｎ６０３０ノからの計算によシ次の値が得られた（
実験式からの値は括弧内のものである）二〇＝５１．２
９チＣ５１，６７％）、Ｈ＝　５．．４８チ（５，４２
％）、Ｎ＝１７．９２％（、１８，０８チ）、Ｃノ　＝
　　７．５　０　　％　＜　　７．６　３　　％　）。

化合物１　ａ４．６５．９　（１０ミ’Ｊモル）ｔ：［
拌下で氷酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒ　４　Ｑｍ／で２０°
Ｃで湿分の不在下に４５分間処理した。アミノ酸誘導体
はＣＯ２の発生下に溶解した。この反応溶液を強力攪拌
下で無水エーテル２５０Ｍに簡加した。

この溶液は、２ＨＢｒ、　Ｈ−Ａｒｇ−ｐＮＡの沈殿物
を生じた。エーテル相を吸引濾過し、その上固体相を側
生成物として形成された臭化ベンジルならびに過剰のＨ
Ｂｒ及びＡｃＯＨを除去するために無水エーテル１００
−の童で４回洗浄した。この残滓をメタノール５０！！
Ｌｌに溶解し、その−をＥｔ３Ｎ　１に添加することに
よって４．５に胱節し、この溶液を真空中で３０’Ｃで
濃縮乾燥した。得らｎた生成物をＭｅＯＨ７５ゴに溶解
し、Ｍｅ　ＯＨで平衡させた１セフアデツクス（５ｅｐ
ｈａｄｅｘ　）　ＬＨ−２０′″（架橋デキストランデ
ル）のカラムラ通した。この溶出液の画分から、ＴＬｅ
によって示されるようにＳＳＣ中で均一な無定形化合物
１ｂ４．１８．９　（理論値の９１．６％）が得られた
。元素分析及び実験式Ｃｌ２Ｈ２ＯＮ６０３Ｂｒ２から
の計算によシ次の値が得ら１した：ｃ＝３１．１５％（
３１，６０％）、Ｈ＝　４．３５％（、４，４２チ）、
Ｎ＝　１８．８４％　（１８，４３％）及びＢｒ　＝　
３４．８１％（３５，０３％）。

化合物１ｂ４．５６．１１０ミリモル）を新しく蒸留し
たＤＭｂ”　３０　ｄにｉ６解し、この溶液を−ｉｏ’
ｃに冷却した。この溶液に攪拌下でＥｔ３Ｎ１．４０ｄ
（１０ミリモル）を添加した。形成したＥｔ３Ｎ、　Ｈ
Ｂｒを’ａｌｔ遇することによって除去し、冷たいＤＭ
Ｆの少量で洗浄した。この濾液に一１０℃でＣｂｏ−Ｃ
臥−０ｐＮＰ４．６９ｇ（１１ミリモル）を飽加し、反
応を湿分の不在下に２〜３時間継続させ、この場合反応
溶液の温度は次第に約２０゛０に到達した。この溶液を
再び一１０°Ｃに冷却し、Ｅｔ３ＮＯ，７０ｄ　（５ミ
リモル）で緩衝し、−ｉｏ’ｃで約２時間反応させ、室
温で約６時間反応させた。この方法をＨｔ３Ｎ　Ｏ，７
０ｍＡ！を用いて繰シ返し、１６時間この反応溶液を真
空中で５０℃で濃縮乾燥した。この残滓を５０チＡｃＯ
Ｈ７５ｒｒｔｌに溶解し、５０％Ａｃ　ＯＨで平衡させ
た”セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１
５″のカラムでケ９ル濾過することによって精製した。

ｐ−ニトロアニリンの遊離下でトリプシンで処理するこ
とによって分解されたＡｃ　ＯＨ溶出液の主画分を真空
中で４０°Ｃで濃縮乾燥した。この残滓をＭｅＯＨ１５
０ａｔＪに溶解し、再び濃縮して乾燥した。得られた残
滓を真空デシケータ−中で６０’ＯでＰ２Ｏ５上で乾燥
し、ＴＬＣによって示されるように８ＳＣ中で均一な無
定形化合物１Ｃ５，８５ｇ（理論値の８８．３％）を得
た。元素分析及び実験式Ｃ２９Ｈ４゜Ｎ　７０６Ｂｒか
らの計算によ９次の値が祷られた：　Ｃ＝　５２．２８
％（５２，５７％）、）１＝６．１６％　（６，０９％
）、Ｎ　＝　１５．０９％　（１４，８０％）及びＢｒ
＝１１．８５％（１２６口６チ）。

ｉｄ、　２　ＨＢｒ、　Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡ化
合物１ｃ５−３０．９（８ミ！Ｊモル）を撹拌下で氷酢
酸中の２　Ｎ　ＨＢｒ　３２ｒｐｔで２０°Ｃで４０分
間処理した。ジペプチド誘導体は、ＣＯ２の発生下に次
第に溶解した。この反応溶液を強力攪拌下で無水エーテ
ル２５０−に濁加した。この溶液は、２　ＨＢｒ、　Ｈ
−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡの沈殿物を生じた。エーテル
相を吸引濾過し、その上固体相を副生成物として形成し
た臭化ベンジルならびに過剰のＨＢｒ及びＡｃＯＨを除
去するために無水エーテル１０（）ｔＪの量で４回洗浄
した。この残滓をＭｅＯＨｂＯｙｎｌに溶解した。−を
Ｂｔ３Ｎを用いて４．５に調節し、この溶液を真空中で
３０℃で濃縮乾燥した。得ら１した残滓をＭｅＯＨ５Ｑ
　ｍｌに溶解し、ＭｅＯＨで平衡させ九〇セファデック
ス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２３”のカラムで
精製した。ｐ−ニトロアニリンの遊離下でトリプシンで
処理することによって分解されたＭｅＯＨ溶出液の画分
を真空中で３０℃で＠靴乾燥した。得らｎた残滓ｒ真空
デシケーター中で４０°Ｃでｐ２ｏ、上で乾燥し、ＴＬ
Ｃによって示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一な無定形化
合物１ｄ４．４８．！ｉｉ’（理論値の９１．９％）を
得た。元素分析及び実験式Ｃ２１Ｈ３５Ｎ７０４Ｂｒか
らの計算により次の値が得られた：ｃ＝４１．８０チ（
４１，３９チ）、Ｈ＝　５．８６％（５，７９チ）、Ｎ
＝１６．３１チ（１６，０９％）及びＢｒ　＝　２５．
８５％（２６，２３％）。

１ｅ、　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡ
、　ＨＢｒ化合物１．ａ３．０５１！（５ミリモル）を
新しく蒸留したＤＭ）ｉ’　２０　ｍＪに溶解し、この
溶液を−１０００に冷却したにＯ溶液Ｋ　Ｅｔ３Ｎ　Ｏ
，７３ｍ／　（５ミリモル）を攪拌下で添加した。形成
したＥ１３Ｎ。

ＨＢｒ　’ｔ：濾過することによって除去し、冷たいＤ
ＭＦの少量で洗浄した。この濾液に一１０℃でＣｔ）Ｏ
−Ｄ−ＣＨＧ、　　○ｐＮＰ　　２．２　７　９　　（
５。５　ミ　リ　モ　ル　）　を攪拌下で添加した。こ
の反応混合物を湿分の不在下で２〜６時間反応させ、こ
の場合この反応溶液の温度に次第に約２０℃に到達した
。この溶液を再ひ一１０℃に冷却し、Ｅｔ３Ｎ　Ｏ，３
５ｍｌ（２，５ミリモル）で緩衝し、−１ｏ−ｃで約２
時間反応させ、室温でさらに６時間反応させた。

この方法をＥｔ３Ｎ　９．３５　ｍｌを用いて繰り返し
、１６時間後この反応溶准を真空中で５０’Ｏで濃縮乾
燥した。この残滓を５０％Ａ、ｃＯＨ５Ｑ廐に溶解し、
５０％ＡｃＯＨで平衡させた”セファデックス（５ｅｐ
ｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”のカラムでｒルｌ！Ｊ過
することによって精製した。ｐ　−ニトロアニリンの遊
離下でトリプシンで処理することによって分解されたＡ
ｃ　ＯＨ溶出液の主画分を真空中で４０°Ｃで濃縮乾燥
した。この残滓をＭｅＯＨｌｏｏｄに溶解し、この溶液
を再び濃縮して乾燥した。得られた残滓を真空デシケー
タ−中で６０°ＣでＰ２Ｏ３上で乾燥し、ＴＬＣによっ
て示さＩしるようにＳＳＣ中で均一な無定形化合物１ｅ
３．２４．９　（理論値の８０．８％）を得た。元素分
析及び実験式Ｃ３７Ｈ５３ＮＢＯ７Ｂｒからの計算によ
り次ｏｆｌ（得られた：ｃ＝５５．７２％（５５，４３
％＞、Ｈ＝６．７３％　（６，６６％　）、Ｎ　＝　１
４．２５％　（１３，９８％）及びＢｒ　＝９．８６％
（９，９７％）。

化合物１　ｅ　２，４１　＆　（３ミＩＪモル）を攪拌
下で氷酢酸中の２ＮＨＢｒ１２ｍＪで２０°Ｃで湿分の
不在下に４０分間処理し次。トリペプテＰ誘導体は、脱
カルボキシル化下及びＣＯ２の発生下で次第に溶解した
。この反応溶液を強力攪拌下で無水エーテル１２０１ｉ
ｌに満願した。この溶液は、’ｌ　ＨＢｒ、　Ｈ−Ｄ−
ＣＨＧ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡの沈殿物を生じ丸。エ
ーテル相を濾過棒を通して吸引濾過し、次に固体相を無
水エーテル５０ｍの量で４回洗浄した。得られた残滓Ｊ
！ｃＭｅＯＨ４Ｑｌｊに溶解した。−をＥｔ３Ｎを用い
て４．５に調節し、この溶液を真空中で６０℃でａｍ乾
燥した。この残滓をＭθ０Ｈ３０−に溶解し、ＭｅＯＨ
で平衡させた”セファデックス（８ｅｐｈａｄｅｙ：　
）　Ｌ　Ｈ−２０’のカラムで精製した。ｐ−ニトロア
ニリンの遊離下でトリプシンで処理することによって分
解されたＭｅｏｎ溶出液の両分を真空中で３０°Ｃで製
動乾燥した。後精衾するために、予４ａ精製さｎた残滓
’ｋ　３３　％　ＡｃＯＨ３０１ＲＩＫ　ｆｌｊ’Ｎ４
　Ｌ、３６％　ＡｃＯＨで平衡させ九〇セファデックス
（８ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”のカラムでｒル
濾過することによって精製した。ｐ−二）ロアニリンの
遊離下でトリプシンで処理することによって分触された
Ａｃ　ＯＨ溶出液の主画分を真空中で４０℃で濃縮乾燥
した。得られた残滓を真空デシケータ−中で４０℃でＰ
２Ｏ３上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるように８８
　Ｃ中で均一な無定形化合物１ｒ１．６８１＜理論値の
７４．８％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ２９Ｈ４８
Ｎ８０ｆ５Ｂｒ２からの計算によシ次の値が得られた：
Ｃ＝４６．１８％（４６，５３％）、Ｈ＝　６．５５チ
（６，４６％）、Ｎ＝１５．１８％（１４，９７％）及
びＥｒ　＝　２１．１２％（２１，３５％）。Ｒｆ値：
０．４６アミノ酸分析により次の正確な比率で所望のア
ミン酸の存在が確屹され九二 Ａｒｇ　：　１．０Ｏ−ＣＨＡ　：　０．９６−Ｄ−ｃ
Ｈｏ　：　０．９８゜例　　２ ５００１ｄの三首フラスコ中でＢＯＣ−Ｌｙｓ（ε−ｃ
ｂｏ）−ＯＨノ乾性油３８．０５　、！ｉ’　（０，１
モル）を無水ＨＭＰＴＡ　１５　Ｑ　ｍｌに２０°０で
湿分の不在下に溶解した。得らＩした浴液に室温でまず
ＨＭＰＴＡ　２５　ｍｌ中のＥｔ３Ｎ　’Ｉ　１１−１
２　、！ｉ’　（０，１モル）の溶液を添加し、次に（
５０％過剰の）ｐ−ニトロフェニルイソシアネート２４
．６２　、Ｆ　（０，１５モル）を簡加し、この場合そ
のつと強力なＣＯ２の発生が起こった。２０’Ｃでの２
４時間の反応時間後、）ｉＭＰＴＡの大部分を真空中で
蒸留することによって除去した。この残滓を’ｌ　％　
ＮａＨＣＯ３溶液で数回抽出し、次に蒸留Ｈ２０で浸漬
した。得らＩした残滓を真空中で４ｏ’ｃで乾燥し、次
にこの残滓が難溶性副生成物Ｎ、Ｎ−ビス（ｐ−ニトロ
フェニル）尿素を殆んど含まなくなるまで熱いＭｅＯＨ
で数回抽出した。このＭｅＯＨ抽出液を濃縮して３００
１ｄにし、この場合若干の不純物は、凝集沈殿物を形成
した。濾過後、濾液（６６０ｉｕ）をＭｅＯＨで平衡さ
せた”セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ
−２３”のカラムで精製した。ＭｅＯＨ溶出液の主画分
を真空中で３０’Ｃで濃縮して少量にし、この場合針状
物質が晶出した。得らハた結晶を濾別し、水冷却したＭ
ｅＯＨ５Ｑｄで少量ずつ洗浄した。真空デシケータ−中
で４０°ＣでＰ２Ｏ３上での乾燥後、ＴＬＣによって示
されるように８８　Ａ及びＢ中で均一な結晶化合物２ａ
３１．１＆（理論値の６２．１％）が得らＩした。母液
は、ＴＬＣによって示さくＬるように８８　Ａ及びＢ中
で均一な物！２ａ５．８５’（理論値１１．６％）の他
の収量を生じた。元素分析及び実験式Ｃ２１５Ｈ３１ｔ
Ｎ４０？からの計算によシ次の値が得られた二〇　＝　
６　Ｕ、２３％（５９，９９％）、Ｈ＝　６．５０％（
６，４４％）及びＮ＝１１．３チ（１１，１９チ）。

化合物２　ａ　２５．０３　ｇ（５０ミリモル）１ｒ：
強力攪拌下で新しく蒸留した無水トリフルオル酢酸５０
１１Ｌｌで２０°Ｃで湿分の不在下で６０分間処理した
。ＢＯＣ基をＣＯ２の発生下及びインゾデレンの退離下
で選択的に分解した。この反応溶液を強力攪拌下で無水
エーテル７５０ＩＩｌに満願し、この場合凝集ＣＦ３Ｃ
ＯＯＨ，Ｈ−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ）−ｐＮＡが沈殿した
。エーテル相を濾過棒を通し１吸引濾過した。固体相を
無水エーテル１００ｍ１の量で４回処理した。得られた
残滓をＭｅＯＨ２００ゴに溶解した。−をＥｔ３Ｎを用
いて４．５に調節し、この溶？［ｔ−ＪＩＪＩ−空中で
６０℃で＆縮乾燥した。この残滓をＭｅＯＨ２Ｑ　［１
ｍｌに溶解し、ＭｅＯＨで平衡させた１セフアデツクス
（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　ＬＨ−’Ｉ　Ｏ”のカラムで
精製した。ＴＬＣＫ、よって示されるように８８　Ｃ中
で均一なＭｅＯＨ溶出液の主画分を真空中で６０°Ｃで
良縮した。得られた残滓を真空デシケータ−中で４０℃
でＰ２Ｏ，上で乾燥し、無定形化合物２　ｂ　２２．６
４１　（理論値の８８．０％）を得た。元素分析及び実
験式０２２Ｈ２！１Ｎ４０７１’３からの計算によ）次
の値が得らｒした：　Ｃ＝５１．６６％（５１，３６％
’）、Ｈ＝　４．８８％（４，９０％）及びＮ＝１１．
０８％Ｃ１０，８９％）。

化合物２ｂ７．７２Ｉ（１５ミリモル）を新しく蒸留し
たＤ励’５Ｑｄに溶加し、−１０°Ｃに冷却した。この
溶液に攪拌下でＢＯＣ−Ｐｈｅ−○ｐＮＰ６．３８　、
！Ｆ　（１６，５ミリモル）及びｇｔ３Ｎ　２．０９ｄ
（１５ミ！ｊモル）を添加した。この混合物を湿分の不
在下で６時間反応させ、この場合反応温度は、次第に室
温に到達した。この溶液を再び一１０℃に冷却し、Ｅｔ
３Ｎ　１．０５　ｍｌ　（７，５ミリモル）で緩衝した
。５時間の反応時間後、この方法をＥｔ３Ｎ　１．［ｌ
　５　ｍｌを用いて繰シ返した。

２　Ｄ　’Ｃでの１６時間の反応時間後、この反応溶液
を真空中で５０°Ｃで凝縮乾燥した。この残滓をＭｅｏ
Ｈ１５０ゴに溶解し、ＭｅＯＨで平衡させ九〇セファデ
ックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２０”のカラ
ムでｒル濾過することによって精製した。

ＴＬＣによつ１示さ！しるように３３　Ａ及びＢ中で均
一なＭｅ　Ｏｉ（溶出液の第１の主画分を真空中で６０
℃で濃縮して少量にし、この場合所望の物質が晶出した
。この結晶を濾別し、水冷却したＭｅＯＨ３Ｑ　ｒｎｌ
で少■すつ洗浄した。母液は、結晶性物質１．０ｇの付
加量を生じた。真空デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５
上での乾燥後、ＴＬＣによって示されるように３８　Ａ
及びＢ中で均一な化合物２　ｃ７．７２　＆　（理論値
の７９．５％）が得ら扛た。元素分析及び実験式Ｃ３４
Ｈ４１Ｎ５０Ｂからの計３ＩＶこよジ次の値が得ら扛た
：　ｃ　＝　６２．８８％（６３，０５％）、Ｈ＝　６
．４２チ（６，３８％）及びＮ＝１１．０６％（１０，
８１％）。

２ｄ、　ＣＦ３ＣＯＯＨ，Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ
）−ｐＮＡ化合物２Ｃ３，２４，１５ミｌＪモル）を強
力攪拌下で新しく蒸留した無水トリフルオル酢酸１ＯＮ
で２０℃で湿分の不在下に６０分間処理した。この反応
溶液を強力攪拌下で無水エーテル１００ｒ！Ｉｌに満願
し、七の後に無定形ＣＦ’３ＣＯＯＨ。

エトＰｈｅ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−ｐＮＡが沈殿した
。エーテル相を吸引濾過した。固体残滓を３回無水エー
テル５（ＪＪｎｌの意で洗浄した。得らＩした残滓をＭ
ａ　０Ｈ５０ゴに溶解した。−をＥｔ３Ｎを用いて４．
５に調節し、この溶液を真空中で６０°Ｃで濃縮乾葉し
た。残滓をＭｅＯＨ７５ｍｌに浴解し、この溶液をＭｏ
　ＯＨで平衡させた“セファデックス（Ｓ−ａｐｈａ−
ｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２Ｑ”のカラムで精製した。ＴＬ
Ｃによって示されるようにＳＳＣ中で均一なＭｅＯＨ溶
出液の主画分を真空中で３０°Ｃで濃縮した。

この残滓を真空デシケータ−中で４０−ｃで２２０５上
で乾燥した後、無定形化合物２　ｄ　２．９５　Ｎ（理
論値の８９．２％）が得られた。元素分析及び実験式Ｃ
３１Ｈ３４ＮｓＯａＦ３からの計算によシ、次の値が得
ら１した：ＣＣ５０６，８２％（５６，２７％）、Ｈ＝
５．１６％（５，１８％）及びＮ＝１１］、６３％（１
０，５９％）。

２ｅ、　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃ
ｂｏ）−ｐＮＡ化合ｖ！Ｊ２ｄｌ、９９１３ミリモル）
を新しく蒸留したＤ励゛１５Ｍに溶解し、−１０℃に冷
却した。この溶液に撹拌下でＣｂｏ−Ｄ−ＣＨ（）−〇
ｐＮＰ１．３６　ｆＩ（５，３ミリモル）及びＥｔ３Ｎ
　Ｑ、４２ａｔ（６ミリモル）を添加した。この混合物
を湿分の不在下で６時間反応させ、その後に温度は次第
に２０℃に到達した。この反応溶液を再び一１０℃に冷
却し、Ｅｔ３ＮＯ，２１ｍｌ　（１，５ミリモル）で緩
衝した。−１０℃で５時間の反応時間後、この反応混合
物の温度は、次第に室温に到達した。この方法をＥｔ３
Ｎ　Ｏ，２１ａｔを用いてＤＤ返し、その後に約１６時
間反応させた。この反応混合物を真空中で５０°Ｃで濃
縮乾燥し、この残滓をＭｅＯＨ５０ゴに溶解し、この溶
液をＭｅＯＨで平衡させた“セファデックス（Ｓｅｐｈ
ａｄｅｘ）ＬＨ−２０”のカラムでデル濾過することに
よって精製した。ＴＬＣ’によって示さ７１．るように
ＳＳＡ及びＢ中で均一な）ｌθＯＨ溶出液の第１の主画
分を真空中で６０°Ｃで濃縮乾燥した。この残滓を真空
デシケータ−中で４ｏ’ａでＰ２Ｏ５上で乾燥し、部分
的に結晶の化合物２　ｅ　２．０３　ｆｌ　（理論値の
８２．４％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ４１Ｈ５２
Ｎ６０９からの計算によシ、次の値が得られた：Ｃ＝（
５６，２２％＜　６５．８４チ）、Ｈ＝６．３２饅（６
，３８チ）及びＮ＝１０．４９チ（１０，２４％）。

２ｆ、　２　ＨＢｒ、　Ｈ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙ
ｓ−ｐＮＡ化合物２ｅ１．６４ｙ（２ミ！Ｊモル）を攪
拌下で氷酢酸中の２ＮＨＢｒｉ２＋ｕで２０℃で湿分の
不在下に４０分間処理した。トリペプチド訪導体が同時
に２つの保麹基Ｃｂｏ及びＥＯＣの分解下及びＣ０２の
発生下に次第に溶解した。この反応浴液を強力攪拌下で
無水エーテル１００ｒｎｌに滴加し、その後に紫状２　
ＨＢｒ、　Ｈ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ｐＮＡが
沈殿した。６０分後、このエーテル相を吸引濾過し、固
体相を４回無水エーテル２５ｍ１の童で洗浄した。得ら
れた残滓をＭａＯＨ４Ｑ　Ｉｎｌに溶解した。−をＥｔ
３Ｎを用いて４．５に調節し、この溶液を真空中で３０
℃で濃縮乾燥した。この残滓ｅＭｅＯＨ３Ｑｍに溶解し
、この溶液をＭｅＯＨで平衡させた“セファデックス（
８ｅｐｈａｄｅｘ　）ＬＨ−２０’のカラムで精製した
。ｐ−二）ロアニリンの遊離下でトリプシンで処理する
ことによって分解されたＭｅＯＨ溶出液の主画分を真空
中で６０°０で濃縮乾燥した。更に、ａｍするために、
予備精製された生成物を６６チＡｃ０Ｈ２５ｄに溶解し
、この浴液を６３チＡｃ　ＯＨで平衡させた”セファデ
ックス（３６ｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５″のカラノ
、でデル濾過することによって精製した。ｐ−ニトロア
ニリンの遊離下でトリプシンで処理することによって分
解されたＡｃ　ＯＨ溶出液の画分を真空中で４０’Ｃで
濃縮乾燥した。

得ら扛た残滓を真空デシケータ−中で４０°ＣでＰ２Ｏ
５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳ　Ｃ
中で均一な無定形物１２　ｆ　１．１３．！ｉ＋（理論
（直の７９．１％）を得た。元素分析及び実験式０２９
Ｈ４□Ｎ６０５Ｂｒ２からの計算によシ、次の値が得ら
れた：Ｃ＝４８．４１チ（４８，７５チ）、Ｈ＝６．０
２チ（５，９３チ）、Ｎ＝１２．１１　チ（１１，７６
チ）及びＢｒ　＝　２２．０２％（２２，３７％　）　
。Ｒ４値：０．旬゛アミノ酸分析により、正確な比率で
所望のアミノ酸の存在が確認された； ｐｈ８　：　１．０Ｏ−ＬＹｓ　：　０．９８−Ｄ−Ｃ
ＨＧ　：　１．０２゜例　　６ 無水ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−０Ｈ３８，０５１
１（０−１モル）ｔ−，１０００ｆｆｉ／の三首フラス
コ中で新しく蒸留した無水、ＤＭＦ’　５　［１ｄと無
水ＴＨＦ　３０　Ｄ　ａｔとの混合物に２０℃で溶解し
た。−１０°Ｃに冷却した該溶液に、攪拌下でＴＨＦ　
７５　ｄ中のＥｔ３Ｎ１０．２　、！ｉ’　（Ｌｌ、１
モル）の溶液を湿分の不在下で添加した。更に、ＴＨＦ
５Ｄ／ｌＩｊ中のクロル蟻酸イソブチル１ろ、６５．９
　（０，１モル）の溶液を２０分間で滴加し、その彼に
反応温度は、−５８Ｃを決して越えないようにした。−
１０°Ｃ〜−５℃の温度で約１０分の反応時間後、ＤＭ
Ｆ　７５ｍｌ中の４−メチル−７−アミノ−クマリン１
７．５２９（Ｌｌ、１モル）の溶液を２５分間で満願し
、その後に温度が一５°Ｃを決して越えないようにした
。次に、この反応混合物を一５℃で１時間攪拌し、呈温
で１晩攪拌し、さらに再び一１０℃に冷却した。晶出し
たＥｔ３Ｎ、　ＨＣｊを濾別した。

この濾液を真空中で５０’Ｃで濃縮乾燥した。この残滓
をＭｅＯＨ５００ｒｄに溶解し、この溶液を“セファデ
ックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−’ｌ　Ｑ　”
のカラムでデル濾過することによって精製した。

所望の生成物ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ）−ＭＣＡ以
外に、このＭｅ　ＯＨ溶出液は、副生成物イソブチルＮ
　−（４−メチル−クマリル−（７））−カルバミネー
ト及び開始剤組成物ＢＯＣ−Ｌｙｓ　（ε−Ｃｂｏ）−
ＯＨ及び７−アミノ−４−メチル−クマリンをそれぞれ
含有する６抛類の他の画分を生じた。ＢＯＣ−Ｌｙｓ　
（ε−ＣｂＯ）−ＭＣＡを含有する画分を真空中で３０
℃で濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中でｓ
ｏ’ｃでＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示される
ように８８　Ａ及びＢ中で均一な部分的に結晶の化合物
３　ａ　２６−３　ｇ　（理論値の４８．９チ）を得た
。元素分析及び実験式Ｃ２９Ｈ３５Ｎ３０フからの計算
により、次の値が得らｎた：　Ｃ＝　６４．９０％（６
４，７９％）、Ｈ＝　６．５２俤（６，５６％）及びＮ
　＝　７．８８チ（７，８２％）。

６ｂ、　ＣＦ３ＣＯＯＨ，Ｈ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−
ＭＣＡ化合物３ａ２１．５，９（４０ミリモル）をトリ
フルオル酢酸６ＱｍＪを用いて例２ｂによシ解封鎖した
。得らＩした粗製生成物をＭｅＯＨ２５０ｍｌに醇息し
、この溶液上”セファデックス（５ｅｐｈａ−ｄｅｘ　
）　Ｌ　Ｈ−’Ｉ　Ｏ”のカラムでデル濾過することに
よってｌ／１１製した。ＴＬＣによって示さＩしるよう
にＳＳ　Ｃ中で均一なＭｅｏｎ溶出液の第１の主画分を
真空中７ｃ３０’ｃで濃縮乾燥し之。この残滓金＾空デ
シケーター中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、無定形化
合物６ｂ１９．５ｇ（理論値の８８．４鋒）を得た。元
素分析及び実験式〇２６Ｈ２８Ｎ３０７Ｆ３からの計算
によシ、次の値が得られた：Ｃ＝５７．０２％（５６，
６２％）、Ｈ＝５．２０％（５，１２％）及びＮ　＝　
７．５８％（７，６２％）。

３ｃ、　　Ｂｏｃ−ｐｈｅ−ｒ、ｙｓ（ε−Ｃｂｏ）−
ＭＣＡ化合物３ｂ５．５２ｇ（１０ミリモル）金側２Ｃ
により　ＥＯＣ−Ｐｈｅ−ＯｐＮＰ　４．２５　、！ｉ
＋　（１１ミリモル）と反応させた。得られた粗製生成
物をＭｅＯＨ１００ｍ１　ｙＣ溶解し、この溶液を６セ
フアデツクス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２０”
のカラムで）ｆｌＬ、濾過することによってｆＩ！ｍし
た。ＴＬＣによって示されるように８８　Ａ及びＢ中で
均一なＭｅ　ＯＨ溶出液の主画分を７４空中で３０°Ｃ
で濃縮乾燥した。

この残滓を＾空デシケーター中で５０°ＣでＰ２Ｏ５上
で乾燥し、部分的に結晶の生成物３　ｃ　ｂ、７８ｙ（
理論値の８４．４％）を得た。元素分析及び実験式〇３
８Ｈ４４Ｎ４０Ｂからの計算により、次の値が伶ら１し
た：Ｃ＝６６．０９％（６６，６５％）、Ｈ＝６．４４
％（６，４８％）及びＮ　＝　８．３２％（８，１８％
）、。

３ｄ、　ＣＦ３ＣＯＯＨ，Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（４−Ｃ
ｂｏ）−ＭＣＡ化合物３Ｃ３，４２，９（５ミリモル）
（１？トリフルオル酢は１５成を用いて例２ｄＫよシ解
封鎖した。得らｔした粗製生成物をＭｅＯＨ７５ｒｎｌ
に溶帛し、この溶液を”セファデックス（Ｓｅｐｈａｄ
ｅｘ）ＬＨ−２０″のカラムでデル濾過することによっ
て和製した。ＴＬＣによって示さＩＬるようにＳＳＣ中
で均一なＭｅＯＨ溶出液の主画分を真空中で３Ｃ）−Ｕ
で娘縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４０
’ＣでＰ２Ｏ５上で乾燥し、無定形化合物３　ｄ３．４
１　＆　（理論値の９７．６チ）を得た。元素分析及び
実験式Ｃ３５ＨｚｔＮ４０ｓ）’”３からの１ｔｒ／Ｊ
！＃によシ、次の１直が％　らｎた：Ｃ＝５９．５４％
（６０，１６％）、Ｈ＝　５．３１％（５，３４％）及
びＮ　＝　８．３３％（８，０２％）。

化合物３　ｄ　２．１０　ｇ（３ミリモル）を例２ｅに
よシ　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−ＯｐＮＰ　　１．３　６　
＆　　（３，６ミ　リモル）と反応させた。得らｒした
粗製生成物をＭｅＯＨ４０１！Ｌｔに溶解し、この溶液
を”セファデックス（８ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−
２［］　”のカラムで）ｙ’ル濾過することによって精
製した。ＴＬＣによつ１示されるようＫ　ＳＳ　Ａ及び
Ｂ中で均一なＭｅＯＨ浴出液の謁１の主画分を真空中で
３０℃でｎ縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中
で６０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、無定形化合物３　ｅ　
２．１２ｇ（理論値の８２．４％）を得た。元素分析及
び実験式Ｃ４９Ｈ５５Ｎ５０９からの計算によシ、次の
値が得りノした：　ｃ　＝　６９．０３　ｑｌｂ　（６
８，５９チ）、Ｈ＝　６．４９チ（６，４６チ）及びＮ
　＝　８．３２％（８，１６％）。

３ｆ、　２ＨＢｒ、　Ｈ−Ｄ−ＣＨ（）−Ｐｈｅ−Ｌｙ
ｓ−ＭＣＡ化合物３ｅ１．７２．ｌｉ’（２ミｌＪモル
）を氷酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒ　１２１１１を用いて例
２ｆによシ解封鎖した。得らｔした粗製生成物をＭｅＯ
Ｈ３Ｑ　ｍｌに溶解し、この溶液を１セフアデツクス（
Ｓｅｐｈａｄｅｘ）ＬＨ−２０”のカラムで精製した。

４−メチル−７−アミノ−クマリンの遊離下でトリプシ
ンで処理することによって分解されたＭｅ　ＯＨ溶出液
の両分を真空中で６０℃で濃縮乾燥した。更に、精製す
るために、予備精製された生成物を５０％ＡｃＯＨ４Ｑ
　ｍｌに溶解し、この溶液を”セファデックス（５ｓｐ
ｈａｄｅｘ　）　Ｃ）　−１５”のカラムでデル濾過す
ることによって精製した。４−メゾルー７−アミノ−ク
マリンの遊離下でトリプシンで処理することによって分
解さｒしたＡｃ　ＯＨ溶出液の主画分を真空中で４０°
Ｃで濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４
０°ＣでＰ、０５上で乾燥し、ＴＬＣ’によつ１示され
るようにＳＳ　Ｃ中で均一な無定形化合物３ｆ１．１０
ｆ！（理論値の７３．２　％　）を得た。元素分析及び
実験式Ｃ３３Ｈ４５ＮＩ５０１ＳＢｒ２からの計算によ
シ、次の値が得ら扛た：Ｃ＝５３．２０％（５２，７４
チ）、）１＝６．１２チ（６，０４％）、Ｎ＝９．１８
％（９，３２ｔｓ）及び５ｒ＝２１−１６　％　（２１
，２６％　）　ｏＲ，値：０．４０アミノ酸分析によシ
正確な比率で所望のアミノ酸の存在が確認された二 Ｐｈｅ　：　１．ＤＯ−Ｌｙｓ　：　０．９９−Ｄ−Ｃ
Ｈ（）　：　０−９７゜例　　４ 無水ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−０Ｈ３８，０５、
！ｉ＋　（０，１モル）’！−１０００ｍｊの三首フラ
スコ中で新シく蒸留した無水ＤＭＦと無水ＴＨＦ　３０
０　ｍとの混合物に２０℃で溶解した。−１０°Ｃに除
動し丸鉄溶液に攪拌下でＴＨＦ　７５ゴ中のＥｔ３Ｎ１
０．２　、！ｉ’　（０−１モル）の溶液を湿分の不在
下で添加した。更に、’ｌ’Ｈ１＋’　５　Ｑ　ｄ中の
クロム蟻酸イソブチル１３．６５！９（Ｌｌ、１モル）
の溶液を２０分間で滴加し、その後に反応温度は一５８
Ｃを越えないようにした。

−１０°Ｃ〜−５℃で約１０分の反応時間後、ＤＭＦ　
７５　ｒＬｌ中のジメチル５−アミノ−イソ７タレー）
　２０．９２．９　（０，１モル）の溶液を６０分間で
滴加しｆｃ、、、更に、この反応混合物を例６ａによ逆
処理した。タチらｒした残滓をＭｅＯＨ５Ｑ　ＱｒＩＬ
ｔに浴解し、この溶液を１セフアデツクス（５ｓｐｈａ
ｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２’０　”のカラムでデル濾過す
ることによって精製した。所望の生成物ＢＯＣ−Ｌｙｓ
（ｇ−Ｃｂｏ）−ＤＰＡ以外に、このＭｅＯＨ溶出液は
、６独類の他の生成物、すなわち副生成物インブチルＮ
−（１ｙ　３−ジメトキシカルボニル−フェニル−（５
））−カルパミネートなラヒに２徨類の開始剤組成物Ｂ
ＯＣ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−０Ｈ及びジメチル５−ア
ミノ−インフタレートをそ扛ぞｎ３種類の異なる画分と
して含有していた。

ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−ＤＰＡを含有する両分
を真空中で６０゛Ｃで製編乾燥した。この残滓を真空デ
シケータ−中で５０℃でｐ２ｏ、上で乾燥し、ＴＬＣ’
によって示さ扛るように３ＳＡ及びＢ中で均一な結晶性
化合物４　ａ　２７．４　Ｊｉ’　（理論値の４７．９
　％）を得た。７′ｃ素分析及び実験式Ｃ２９Ｈ３７Ｎ
３０．からの計算によシ、次の値が得らＩした：　ｃ　
＝　６０．５８％（６０，９３％）、Ｈ二６．５３％（
６，５２チ）及びＮ＝７．４８チ（７，３５％）。

化合物４　ａ　２２．８７１　（４０ミリモル）をトリ
フルオル酢酸７０１１４’を用いて例２ｂにより解封鎖
した。普通の処理後に得られた粗製生成物をＭｅＯＨ２
５０ａ（Ｋ溶解し、この溶液を”セファデックス（５ｅ
ｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−’Ｉ　Ｑ”のカラムでデル
濾過することによって精製した。ＴＬＣによって示され
るようにＳＳＣ中で均一なＭｅＯＨ溶出液の主画分全真
空デシケータ−中で４０°ＣでＰ２Ｏ５上で微細乾燥し
、無定形化合物４ｂ２０．７Ｉ（理論値の８８．４チ）
を得た。元素分析及び実験式〇２６Ｈ３ＯＮ３０９Ｆ３
からのｇ１算により、次の値が得ら１した：Ｃ＝５２．
７７％（５３，３３％）、Ｈ＝５．２５％　（５，１６
’１６　）及ヒＮ＝７．０２ｔｓ（７，１８％）。

４ｃ、　ＢＯＣ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ　）−Ｄ
ＰＡ化合物４ｂ５．８６．！ｉ’（１０ミリモル）を例
２Ｃにより　ＢＯＣ−Ｐｈｅ−ＯｐＮＰ　４．２５９　
（１１ミリモル）と反応させた。普通の処理後に得られ
た粗製生成？！ＩをＭｓＯＨ１Ｑ　Ｑ　ａｔに溶解し、
この溶液を”セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　
Ｌ　Ｈ−２０”のカラムでｒル濾過することによって和
製した。

ＴＬＣによって示されるように８８　Ａ及びＢ中で均一
なＭｅ　ＯＨ俗出出液第１の主画分を真空中で３０“Ｃ
で濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−で５０℃
でＰ２Ｏ５上で乾燥し、結晶性化合物４　ｃ　５．８７
　ｇ（理論値の８１．７チ）を得た。

元素公刊「及び実験式〇５８Ｈ４６Ｎ４０１ｏからの計
算によシ、次の値が得らｒｔ、ｆｃ：ｃ＝６３．８２％
（６３，５０％）、Ｈ＝　６．４９チ（６，４５Ｔｏ　
）及びＮ＝７．６４％Ｃ７，８０％）。

化合物４　ｃ　３．５９　ｇ　（５ミリモル）をトリフ
ルオル酢酸１５ｆｆｉ／を用いて例２ｄによシ解封鎖し
た。普通の処理後に得られた粗製生成物をＭｅＯＨ（５
Ｑ　ｍｌに溶解し、この溶液を６セフアデツクス（８ｅ
ｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２０”のカラムでＪｙ”　
ｋ　ｍ遇することによって精製した。ＴＬＣによって示
されるように１３８　Ｃ中で均一なＭｅ　ＯＨ溶出液の
主画分を真空中で３０℃で濃縮乾燥した。

この残滓を真空デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５上で
乾燥し、無定形化合物４　ａ　３．４０１！　（理論値
の９２．８％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ３５Ｈ３
９Ｎ４０１０Ｆ３からの計算により、次の値が得られた
：Ｃ＝５７．１１％（５７，３７チ）、Ｈ＝５．４０％
（５，３６チ）及びＮ　＝　７．７９％（７，６５％）
。

４ｅ、　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ε−Ｃ
ｂｏ）−ＤＰＡ化合物４　ｄ２．２０１／　（３ミリモ
ル）を例２ｅによシＣｂＯ−Ｄ−ＣＨＧ−ＯｐＮＰ　１
．３６　ｊｉ　（３，３ミリモル）と反応させた。普通
の処理後に得らｎた粗製生成物をＭｅＯＨ（５Ｑ　ｎｌ
に溶解し、この溶液を”セファデックス（５ｅｐｈａｄ
ｅｘ）　Ｌ　Ｈ−２０’のカラムでｒル濾過することに
よって精製した。

ＴＬＣによって示されるよプに８８　Ａ及びＢ中で均一
なＭｅＯＨ溶出液の第１の主画分を真空中で６０゛Ｃで
濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で６０°
ＣでＰ２Ｏ５上で乾燥し、部分的ＶＣ結晶の化合物４　
ｅ　２．０７　！ｌ　（理論値の７７．４％）を得た。

元素分析及び実験式Ｃ４９Ｈ５７Ｎ５０工、からの計算
により、次の値が得られた二〇＝６６．１８チ（６５，
９８チ）、Ｈ＝　６．５２チ＜　６．４４％）及びＮ　
＝　７．５９％（７，８５％）。

４ｆ、　’ｌ　ＨＢｒ、　Ｈ−Ｄ−ＣＨ（）−Ｐｈｅ−
Ｌｙｓ−ＤＰＡ化合物１８９２＃Ｉ＆（１ミｌＪモル）
を氷酢酸中の２ＮＨ８ｒ６！ＩＬｔを用いて例２ｆによ
り解封鎚した。普通の処理後に得られた粗製生成物をＭ
ｅＯＨ２Ｑ　ｙに溶解し、この溶液を１セフアデツクス
（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｌ　Ｈ−２０”のカラムで予
備精製した。ジメチル５−アミノ−インフタレートの遊
離下でトリプシンで処理することによって分解さ１した
ＭｅＯＨ溶出液の画分を３０°Ｃで濃縮乾燥した。史に
、精製するために、予備ｆｉｎさｔした生成物を５０チ
ＡｃＯＨ３［］ゴに溶解し、この溶液を６セフアデツク
ス（５ｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ−１５”のカラムでｒル濾過
することによって布製した。ジメチル５−アミノ−イソ
フタレートの遊離下でトリプシンで処理ブることによっ
て分解さｎたＡｃＯＨ浴出液の主画分を真空中で４０℃
で濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４０
℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるよう
にＳＳＣ中でメノーな無定形化合物６ｆ６０２ｍ９（理
論値の７６．６　％　）を得た。元素分析及び実験式〇
３３Ｈ４７ＮＩＯ’ＦＢｒ２からの計３１Ｋよシ、次の
値が得られに：ｃ＝４９．７９％　（５０，４５％　’
）、Ｈ＝６．１０％＜　６．０３％）、Ｎ　＝　９．０
９　Ｔｏ　（８，９２％）及びＢｒ＝１９．８７チ（２
０，３４％）。Ｒｆ値＋０．４５アミノ酸分析によシ正
薙な比率で所望のアミノ酸の存在が確認された： Ｐｈｅ　：　１．０［１−Ｌｖｓ　：　１．［］］１−
Ｄ−ＣＨＧ：　０．９７　、。

例５ ＢＯＣ−Ｌｙｅ（ε−Ｃｂｏ）−ＯＨ３８，０５＆　（
（Ｌ１モル）を例４ａにより２−ナフチルアミン１４．
３２．９（０，１モル）と反応させた。普通の処理後に
得られた残滓をＭｅＯＨ５００１ＩＩＩｅ　Ｋ　ＨＭし
、コノ溶液を１セフアデツクス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）
　ＬＨ−２０”のカラムで精製した。所望の生成物ＢＯ
Ｃ−Ｌｙｓ（ε−ＣＩ）Ｏ）−２−ＮＡ以外に、ＭｅＯ
Ｈ溶出液は、３ａＬ類の他の生成物、すなわち副生成物
インブチルＮ−〔１，３−ジメトキシーフエニルー（５
）〕−力ルパミネートならびに２種類の開始削徂成物Ｂ
ＯＣ−Ｌｙｓ　（ε−Ｃｂｏ　）−ＯＨ及び２−ナフチ
ルアミン全それぞれ６種類の異なる自分として生じた。

ＢＯＣ−Ｌ７日（ｇ−Ｃｂｏ　）−２−ＮＡを含有する
両分をＸ空中で６０℃で濃縮した。この残滓を真空デシ
ケーター中で５０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥した後、ＴＬＣ
によって示されるようにＳＳＡ及びＢ中で均一な結晶性
化合物５　ａ　２６．９１　（環９＋ｉｆｆ値の５３．
２チ）が得られた。元素分析及び実験式 ０２＋１Ｈ！１Ｎｆｆ０５からの計算により、次の値が
得られた：Ｃ＝６８．２３チ（６８，８９係）、Ｈ＝７
．０７俤（６，９８チ）及びＮ　＝　８．５２％（８，
３１チ）。

５ｂ、　ＣＦ’３ＣＯＯＨ，Ｈ−Ｌｙａ（ｚ−Ｃｂｏ）
−２−ＮＡ化合物５ａ２０．２２．Ｆ（４０ミリモル）
ｉ）リフルオル酢酸７５Ｍを用いて例２ｔ）Ｋより屏封
鎖した。普通の処理後に得られた＠袈生成物をＭｅＯＨ
２５０ｒｎｌに溶解し、この浴液を”セファデックス（
５ｅｐｈａｃＬａｘ　）　ＬＨ−２［］″のカラムでＦ
＃裂した。ＴＬＣによって示されるように８８Ｃ中で均
一なＭｅＯＨｍ出液の主歯分子ｃＸ空中で６０゛Ｃで講
縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４０°Ｃ
でＰ２Ｏ５上で乾燥した鎌、無定形化合物５ｂ１８−２
９１（理論値の８８．０％）が得られた。元素分析及び
実験式Ｃ２，Ｎ２．Ｎ３０．Ｆ’３からの計算により、
次の値が得られた：Ｃ＝５９．７０チ（６０，１１チ）
、Ｈ＝５．３’８％（５，４３係）及びＮ＝８．２６％
（８，０９φ）。

５ｃ、　　ＢＯＣ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−２
−ＮＡ化合物５　ｂ　５．２０　ｇ（１０ミリモル〕を
例２ＣによりＢＯＣ−Ｐｈｅ−０１）ＮＰ　４．２５　
！ｌ　（１１ミリモル）と反応させた。普通の処理後に
得られた粗製生成物をＭｅＯＨＩ　Ｑ　Ｑ　ｒａｔに溶
解し、この溶液を”セファデックス（Ｅｌｅｐｈａｄｅ
ｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムで１ＩＩ−ｆｉした。Ｔ
ＬＣによって示されるように１９Ｓ　Ａ及びＢ中で均一
なＭｅＯＨ溶出液の粛１の主画分を真空中で６０゛Ｃで
最湘ｄ乾燥した。こうして部分的に結晶の化合物５ｃ５
．４８ｇ（理論値の８３．９　％　）が得らｎた。元素
分析及び実験式Ｃ３ａＨ４ｖＮ４０６からの計算により
、次の値が得られた二〇＝７０．４１チ（６９，９２％
Ｌ　Ｈ＝　６．７４係（６，７９％）及びＮ＝８．６９
係（８，５８％）。

５ａ、　ＣＦ’３ＣＯＯＨ，Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ε−
Ｃｂｏ）−２−ＮＡ化合物５　ｃ　３．２６　ｊ！　（
５ミリモル）をトリフルオル酢（Ｗ　１７　ｍｌを用い
て列２ｄにより解封鎖した。普通の処］Ｊ４麦に得られ
た粗製生成物をＭｅＯＨ７５，７ｇに６屏し、この浴ｉ
夜を１セフアデツクｘ　（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　ＬＨ
−２Ｑ″のカラムで精製した。ＴＬＣによって示される
ように８８　Ｃ中で均一なＭｅＯＨｉＲｍ出液主画分を
真空中で６０°Ｃで濃縮乾燥した。この残滓を真空デシ
ケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ，上で乾、桑し１、浜定形
化合物５ｄ３．１８ｇ（塩６値の９５．４係）を得た。

元素分析及び実験式〇３５Ｈ３７Ｎ４０６Ｆ３かもの計
算により、次の値が得られた：Ｃ＝６２．６３％（６３
，０５チ）、Ｈ＝５．６６％（５，５９係）及びＮ＝８
．１９％（８，４０％）。

５ｅ、　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙａ（ε−ｃ
ｂｏ　）−２−ＭＡ化合物５　ａ　１．６７．！ｉｉ’
　（２，５ミリモル〕を例２ｅによジＣｂｏ−Ｄ−ＣＨ
Ｇ−○ｐＮＰ　１．１４９　（２，７６ミリモル）と反
応させた。普通の処理後に得ろよした粗製生成物をＭｅ
ＯＨ５３ｍｌ　Ｋ高屏し、この浴液を”セファデックス
（５ｅｐｈａａｅｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムで精製
した。ＴＬＣによって示されるようにＢＢ　Ａ及びＢ中
で均一なＭｅＯＨｍ出液の第１の主画分を真空中で６０
゛Ｃで濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で
６０℃でｐ２ｏ。

上で乾燥した。こうして無定形化合物５０１．５８ｇ（
理論値の７６．５％）が得られた。元素分析及び実験式
Ｃ４ＤＨ５５Ｎ５０’Ｆかもの計算により、次の値が得
られた；Ｃ＝７０．９１％（７１，２５％）、Ｈ＝　６
．６６％（６，７１チ〕及びＮ＝８．６９チ（８，４８
俤）。

５ｆ、　２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−
２−ＮＡ化合物５８１．２４＆（１，５ミリモル）を氷
酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒ　９　ｍｌを用いて例２ｆによ
り屏封鎖した。普通の処理後に得られた粗製生成物ｔＭ
ｅＯ［４２５ｇｅＫ　Ｍ屏し、この暦ｉ１ビセ７アデツ
クス（５ｅｐｈａｄ’ａ：ｃ　）　ＬＨ−２０”のカラ
ムで予備精製した。２−ナフチルアミンの遊離下でトリ
プシンで処理することによ・つτ分解されたＭθＯＨ尋
出液の主画分をＸ空中で３０’Ｃで濃縮乾燥した。この
予備精製された生成物を５０慢ＡｃＯＨＫ溶解し、この
４液をさらに”セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ）　
Ｇ　−１５”のカラムで精製した。トリプシンの作用下
で２−ナフチルアミンを形成したＡｃＯＨＭ出液の主画
分を真空中で４０℃で接縮乾燥した。この残滓を乾燥ア
ンケータ−中で４０℃で２２０．上で乾燥し、ＴＬＣに
よって示されるようにＳＥＴ　Ｃ中で均一な無定形化合
物！１８０５η（理論値の７４．６チ）を得た。元素分
析及び実験式Ｃ３３Ｈ４５Ｎ５０３Ｂｒ２からの計算に
より、次の値が得られｆｃ：　Ｃ＝　５４．７３チ（５
５，０８悌〕、Ｈ＝　６．３８俤（６，３０係）、Ｎ＝
１０．０５　％　（９，７３％）及びＢｒ＝２１．８８
チ（、２２，２１％）。Ｒｆ値：０．４４アミノ酸分析
により正確な比率で所望のアミノ酸の存在がｅｉ昭され
た： ｐｈθ：　１．０Ｏ−Ｌｙｓ　：　０．９９−Ｄ−ＣＨ
Ｇ　：　０．９８゜例　　６ ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−ＯＨ９，５１ｇ　　　
（２５ミ　　’）　　　％　　ル　）を例６ａにより４
−メトキシ−２−ナフチルアミン４．３３Ｉ！（２５ミ
リモル）と反応させた。

普通の処理後、この残滓をＭｅＯＨ１７５ｍｌに府解し
、この溶液を０セフアデツクス（Ｓθｐｈａｄｅｘ）Ｌ
Ｅ（−２０’のカラムで精製した。所望の生成物ＢＯＣ
−Ｌｙｓ　（ε−ＣｂＯ）−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ以外
に、このＭｅＯＴ（ｍ出液は、３種類の他の生成物、す
なわち副生成物イソブチルＮ−（４−メトキシ−２−ナ
フチル）−力ルバミネー・トならびに２種類の開始剤組
成物ＢＯＣ−Ｌｙｓ（ｇ−Ｃｂｏ）−ＯＨ及び４−メト
キシ−２−ナフチルアミンをそれぞれ３種類の異なる画
分として生じた。所望の生成物を含有する内分をＸ空中
で６０℃でｉｇ組した。このＩＡ滓をに、空デシケータ
ー中で５０℃でｐ２ｏ、上で乾燥した後、ＴＬＣによっ
て示されるようにＳＳＡ及びＢ中で均一な部分的に結晶
の化合物６ａ６．２８　＆　（理論値の４６．９　％　
＞が得られた。元素分析及び実験式Ｃ５ｏＥｂｔＮ３０
ｅからの計昇により、矢の値が得られた：Ｃ＝６６−８
３チ（６７，２７嗟）、Ｈ＝７．０４係（６，９６％）
及びＮ＝８．０９係（７，８５％）。

６ｂ、　ＣＦ３ＣＯＯＨ，Ｈ−Ｌｙｓ（ε−Ｃｂｏ　）
−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ化合物６ａ５．３６．Ｙ（１０
ミリモル）をトリフルオル酢１稜２　Ｏｈｌｌを用いて
例２ｂによＩ）屏封鎖した。普通の処理後に得られた粗
製生成物上ＭｅＯＨ７５ｍｌに溶解し、この溶液を６セ
フアデツクｘ　（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　ＬＨ−２０”
のカラムで精製した。ＴＬＣによって示されるようにＳ
Ｓ　Ｃ中で均一なＭｅＯＨ直出液の主画分を真空中で６
０″ＣでＬＩｋ縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ
−中で４０°ＣでＰ２Ｏ，上で乾燥した吸、無定形化合
物６ｂ５．１ＤＩ（理論値の９２．８係）が得られた。

元素分析及び実験式Ｃ２ｔＨ３ＱＮ３０６Ｆからの計算
により、矢の値が得られた：Ｃ＝５８．６６％（、５９
，０１％　）、Ｈ＝５．６１％（５，５０％）及びＮ＝
７．９２係（７，６５係）。

６ｃ、　ＢＯＣ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ｇ−ｃｂｏ）−４−
ＭｅＯ−２−ＮＡ化合物６ｂ４．４０．９（８ミリモル
）を例２ＣによジＢＯＣ−Ｐｈθ−０ｐＮＰ　３．４０
　（Ｓ’　（８，８ミリモル）と反応させた。普通の処
理後に得られた粗製生成物をＭｅＯＨ７５ｒｎｌに洛解
し、この静１ビセファデツクス（５ｅｐｈａａｅｘ　）
　ＬＨ−２０″のカラムで精製した。ＴＬＣによって示
されるようにＳＳ　Ａ及びＢ中で均一なＭｅＯＨ％出液
の第１の主両分を真空中で３０°Ｃでａ縮乾燥した。こ
の残滓を真空デシケータ−中で５０℃でＰ２Ｏ５上で乾
燥した後、無定形化合物６ａ４．５４ｇ（理論値の８３
．１１　）が得られた。元素分析及び実験式Ｃ３９Ｈ４
６Ｎ４０？からの計算により、次の値が得ろａ＆　：Ｃ
’＝６８．２４％（６８，６０％）、Ｈ＝６．８５幅（
６，７９係）及びＮ＝８．４１俤（＆２１チ）。

６ｄ、　　　ＣＦ２ＣＯＯＨ，Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌ７日（ａ
−ｃｂｏ）−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ化合物６　ｃ　３．
４１　！！（５ミリモル）をトリフルオル酢ｒ９２０ｍ
ｌ′ｔｃ用いて例２ｄによす屏封鎖した。普通の処理後
に得られた粗製生成物をＭｅＯＨ８０ｍｌ　Ｋ　尋解し
、この溶液を”セファデックｘ　（５ｅｐｈａｄｅｘ　
）　ＬＨ−２０”のカラムで精製し念。ＴＬＣによって
示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一なＭｅＯＨ溶出液の主
画分を真空中で３０”Ｃで譲縮乾燥した。この残滓を真
空デシケータ−中で４０°ＣでＰ２Ｏ５上で乾燥した後
、無定形化合物６ａ３．２９．ｒ（理論値の９４．４係
）が得られた。元素分析及び実験式Ｃ３６Ｈ３９”４０
７？３からの計算により、次の値が得られた：Ｃ＝６１
．８２チ（６２，０６チ）、Ｈ＝５．６３俤（５，６４
チ）及びＮ＝８．２１係（８，０４俤）。

６ｅ、　　　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ（ｇ
−Ｃｂｏ）−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ化合物６ｄ　１．７
４！！（２，５ミリモル）を列２ｅによｊ）　Ｃｂｏ　
−Ｄ−ＣＦ（Ｇ−ＯｐＮＰ　１．１４　ｆ！　（２，７
６ミリモル）と反応させた。普通の処理後に得られた粗
製生成物′ｔ−ＭｅＯＨ６０・Ｒ２に酊屏し、この浴液
を”セファデックス（５ｅｐｈａｄａｘ　）　ＬＨ−２
０”のカラムで精製した。ＴＬＣによって示されるよう
に８８　Ａ及びＢ中で均一なＭｅＯＨ俗出液の第１の主
画分を真空中で３０°Ｃで℃縮乾燥した。この残滓を真
空デシケータ−中で６０℃ｒ　ｐ２ｏ５上で乾燥した後
、無定形化合物６ｅ’１．７６ｊｉ（理論値の８２．２
％）が得られた。元素分析及び実験式Ｃ３０Ｈ５７Ｎ！
１０１３からの計算により、次の値が得られた：Ｃ＝６
９．７６係（７０，１５裂）、Ｈ＝　６．８２係（６，
７１％）及びＮ　＝　８．２８チ（８，１８俤）。

化合物６ｆ８５６！ｎ９（１ミリモル）を氷酢酸中の２
　Ｎ　ＨＢｒ　６　ｍｌを用いて例２ｆＫより解封鎖し
た。普通の処理後に得られた粗製生成物をＡｃＯＨ２Ｑ
　Ｉｎｌに溶解し、この溶液を１セフアデツクス（５ｅ
ｐｈａｄｅｃ　）　ＬＨ−２Ｑ　”のカラムで予備精製
した。４−メトキシ−２−ナフチルアミンの遊離下でト
リプシンで処理することによって分解されたＡＣＯＨＣ
ＯＨ浴出−分金真空中で３０’Ｃで濃縮乾燥した。この
予備精製された生成物を５０俤ＡｃＯＨ３Ｑ　ｒｎｌに
溶解し、この溶液を９セフアデツクス（５ｅｐｈａｄｅ
ｘ　）　Ｇ　−１５”のカラムで精製した。トリプシン
の作用下で４−メトキシ−２−ナフチルアミンを形成さ
せるＡｃＯＨ爵出液の主画分を真空中で４０℃で一縮乾
燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４０℃でＰ２
Ｏ，上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるようにＢＢ　
Ｃ中で均一な無定形化合物６ｆ５５？ｌ（理論値の７６
．８％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ３４Ｈ４７Ｎ５
０４Ｂｒ２かもの計算により、次の値が得られた：ｃ＝
５４．０９％（５４，４８俤）　、Ｈ＝　６−３１　　
係（６，３２チ）、　Ｎ　＝　９．５２％（９，３４％
　）及びＢｒ＝　２０．８６　％　（、２１，３２優〕
。Ｒ２値：Ｏ，＋ａ アミノ酸分析により正確な比率で所望のアミノ識の存在
が確認された； ｐｈθ：　ｌ−００−Ｌｙｓ：　１．０２−Ｄ−ＣＨＧ
　：　０．９９゜一連の他のトリペプチド＠導体を前記
実列列に記載の方法により製造した。これ、らのトリペ
プチド誘導体は、次の第１表に纒めろルでいる。

第１表に示したトリペプチド誘導体の製造に使用された
ジペプチド中間体及びトリペプチド中間体は、第２表及
び４６表に記載されている。

例１４ ２ＡｃＯＨ，Ｈ−Ｄ−Ｎｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮ
Ａ２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−Ｎｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮ
Ａ　（例２により製造）７．０９．Ｖ（１０ミリモル）
を（５３％　ＭｅＯＨ水浴液７５　ｒｎｌに溶解した。

この浴液を酢酸塩の形で”アンバーライト（Ａｍｂｅｒ
ｌｉｔｅ　）”（登録商ｍ）ＪＲＡ−４０１のカラムに
充填した。このカラムを６０％ＭｅｏＥ（＊　ｆｄ　Ｑ
でｄ離し、その後にＨＢｒをイオン変換することによっ
てＡｃ　ＯＨに代えた。この溶出液を真空中で４０゛Ｃ
でＪｆｆＪ乾桑した。この残滓を真空デシケータ−中で
４０°ＣでＰ２Ｏ５上で乾燥した麦、臭化物不含の２Ａ
ｃＯＨ，Ｈ−Ｄ−Ｎｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡ　
６．３３　ｇ（理論値の９８．５俤）が得られた。

上記方法によれば、有機酸、例えば蟻酸、プロピオン酸
、蓚酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、安息香酸、クロル安
息香酸、サリチル酸又はフタル酸との１也のＬ益は、前
５己のトリペプチド誘導体から製造することができる。

イオン交換体、例えば塩酸塩の形の”アンバーライ）　
（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）”ＪＲＡ　−４Ｑ　１を使用す
ることができ、これは苛性ソーダ液で処理することによ
って該イオン交換体を塩基性ＯＨ形に変換し、次に該塩
基性イオン交換体全６０係ＭｅＯＨ水溶液中の所望の有
機酸とそのナトリウム塩との１：１混合物の溶液で処理
することによって所望の酸塩の形に変換することができ
る。

本発明によるトリペプチド基質を用いての酵素の定憧分
析は、次のようにして実乙僅することができる： １、　尿カリクレーン分析： 尿１ｒｎｔならびにｐＨ７，９及びイオン強度１．０を
Ｗ　ｆ　ルＴＲｌ５−　イミｌ”　ｆ　　”　Ｂ　ｗｉ
７６１　ｋｌ’を３７゛Ｃで５分間恒温保持し、次（て
沈殿物を除去するために遠心分離する。

３７°Ｃに加熱した蒸留水１．４ｍｌと遠心分離物０．
４ｍｅＱプラスチック製キュベツト中で充分に混合する
。この混合物に２　Ｘ　１０−３モルの基質水’ｍｕ　
０．２　”を添加し、成分を迅速に混合する。

この混合物を６７゛Ｃで正確に１５分［１４］恒温保持
する。次に、この反応混合物を酵素反応を停止させるた
めに氷酢酸Ｑ、２ｍｌと混合する。色を１１則するため
には、同じ成分からなるが、酵素反応を阻止するだめの
基質添加前に添加された氷酢酸を有する全試料を便用す
る。次に、形成された暮色化合物Ｒ−ＮＨ２の量を空試
料と試験試料との差から４０５　ａｍで測光法又は分光
副光法により測定する。得られる値から尿における尿カ
リクレーン活量を次式によ＃）測定する＝１５夕欄Ｘｖ
Ｘ＃ Δ０Ｄ＝１５分間の４０５　ｎｍでの７’ｆ２学濃度の
増加分ｖ＝Ｂ験混合物の全容ｆ＝　２．２　ｍ１１００
りＵをｍＵに変換するための変換係数Ｆ＝尿（２）の稀
釈係数 Ｖに試料の芥−＠＝０．４ｍｅ ＃＝１０００で割った吸光糸数＝１０．４尿における尿
カリクレーン含量の＃箕は、形成される生成物Ｒ−ＮＴ
（２（例えば、ｐ−ニトロアニリン）を連続的に測定す
ることによって実施することもできる。この方法を喀痰
中の腺カリクレーンの分析に適用するように後記する。

尿カリクレーン以外に、尿も本発明による基質を少Ｓ上
ではあるが分解することもできる蛋白分＃酵累としての
ウロキナーゼを含有する。前記分析方法においては、尿
カリクレーントウロキナーゼとの活量の合計が測定され
る。尿カリクレーン活量の正確な値を得るためには、ウ
ロキナーゼｌ占址は差し引かなければならない。このウ
ロキナーゼ活量は、比較試験において尿カリクレーン活
量を完全に抑制するために緩衝液１ｒｎｌ当りトリプシ
ン抑制因子（牛の肺からのトリプシン抑制因子）　０．
０７５単位を添加し、かつ小独にウロキナーゼｆｆ１ｆ
金測定することシてよって測定することができる。

２、　喀痰における腺カリクレーン分析：喀痰Ｑ、５　
ｍｌ　ｔ−ＴＲｌ５−イミダゾール緩衝液（イオン強度
１．０）２ｍｌと混合し、この混合′吻を３７℃で５分
間予め恒温保持する。この恒温保持物を遠心分離する。

試験キュベツトに５７℃の蒸留水ｊ　、　５　ｔｎｌを
充填し、これに遠心分離物Ｑ、２５ｒｎｌを添加する。

これらの成分を充分に混合する。更に、２Ｘ１０−３モ
ルの基質水浴液Ｑ　、　２　：ｎｌを添加する。次に、
４０５　ａｍでの吸光変化を記録装置ｌを用いて５〜１
０分間連続的に追跡する。毎分のΔＯＤの測定値から喀
痰ｉ　ｍｌ当りのカリクレーン活量は、ｍＵで次式によ
り計算される： Ｘｇ ？＝５ Ｖ＝１．９５ ｖ＝０．２５ ＩＵ（単位）−ｐＥｆ、イオン強度、温度及び基質−就
の最適条件下又は他に規定され る条件下に１分間で基質１マイク ロモル七分解することのできる酵 素Ｊユ。

膵液において膵臓カリクレーンは、主【プレカリクレー
ンの形で存在し、活性化後でのみ、例えばトリプシンを
用いて分析することができる。プレカリクレーンの活性
後、トリプシンは、大豆トリプシン抑制因子（ＳＢＴ工
〕ンζよジ抑制されている。この活性化混合物中のカリ
クレーン言置は、前記方法の１つにより″′Ｃ測定する
ことができる。

３．７°ラズミン分析： ＴＲ工Ｓ−イミダゾール緩衝−夜（ｐＨ７，５、イオン
強度０．２　）　１．７１１１／！を２５％グリセロー
ル中のプラズミン溶孜Ｑ、１ｒｎｌと３７”Ｃで混合し
、この混合物を６７゛Ｃで１分間恒諷１呆持する。この
混合物に６７°Ｃの２×１０−３モルの）Ａ質水Ｉｊ、
夜［１，２ｍｌ　ｋ添加し、成分を迅速に混合する。次
に、単位時間当りの基′ぽから分離さ九る分解生、・ズ
物Ｒ−ＮＨ２の量を連続的に４１１１定する。試料１ｒ
ｎｌ当りのプラズミン活′ｋ（・ま、毎分測定される！
！ｄからｍ［Ｊで次式により計ｇＪ、される： ｖ、Ｘｇ ΔＥ；毎分分離される分解生成物の惜 ■に試験混合物の全容量 Ｖ＝試料の容量 ξ＝１０００で割った吸光係数 ４、　ヒトの血漿における抗プラズミン分析：１：２０
の比率でＴＲ工Ｓ−イミダゾール緩衝液で稀釈された血
漿０．１１ＩＩｌを、２５チグリセロ一ル１ｍｌ　”ｊ
ｒ　’）のヒトプラズミン（ＡＢ　Ｋａｂｉ（日ｔｏｃ
ｋｈｏｈｎ、Ｓｗｅｄｅｎ　）社［）　１．２５　Ｃ［
７及びヒルジン（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ　Ａ、Ｇ、　（
Ｂａ５１．ｅ　、　　５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ　）社製
）　５０　ＡＴＯの溶液Ｑ、０２ｔｎｌと混合する。こ
の混合物を６７°Ｃで９０秒間恒温保詩才る。この恒温
保持物に３７°ＣのＴＲ工Ｓ−イミダゾール４１衝液（
ｐＨ７，５、イオン強度０．２　）　１．７属を混合し
、さらに２Ｘ１０−３モルの基質水溶液０．２ｍｌを混
合する。次に、単位時間当りの基質から分離される分解
生成物Ｒ−ＮＨ２の量を連α的に測定する。残留プラズ
ミン活量は、ｆ［１１定値から前記方法により計算され
る。

空試験では、血漿は緩衝液の相肖量に代えるが、それ以
外はこの試験は前記方法により実施される。測定される
プラズミン活貴は、開始プラズミン量に相轟する。抗プ
ラズミン活址は、空試験で測定されるプラズミン活社と
、血漿を用いる試験で測定される残留プラズミン活量と
の差から次式によジ計算される： ｖ　×　ε 血漿のｍ工σ／ｄ量 ？＝血漿（２０）の稀釈糸数。

本発明による基質は、血漿中に存在するプラスミノジエ
ンを緩衝系中のウロキナーゼ又はストレプトキナーゼを
用いて変換しかつ形成されるプラズミンの量を前記ゾラ
ズミン分析法によジ本発明による基質の１つを用いて測
定することによってヒトの血漿中のプラスミノジエンを
分析するのに使用することもできる。血漿中に元来存在
するプラスミノジエンの量は、活性下でプラズミン１分
子がプラスミノジエフ１分子から形成されるのでプラズ
ミンに対する測定値かう誘導さルる。

次の第４表には、器官又は腺カリクレーン、プラズミン
及びトロンビンに対する本発明による若干の基質の感受
性が示されている。

／′ 基質の酵素加水分解によって形成される分解生成物Ｒ−
ＮＨ，の測定は、この分解生成物が基質の紫外スペクト
ルとは異なる紫外スペクト、ルを有しかつより高い波長
に向って移動するという前提条件に基づく。４０５　ｎ
ｍにおける基質の吸収は、実際に皆無である。分解生成
物としてのｐ−ニトロアニリンは、３８０ｎｍでの吸収
最高及びモル吸光係数１３，２００を示す。しかし、該
吸光係数は４０５　ｎｍで僅かに低下する、すなわち９
６５０になる。分離されるｐ−二トロアニリン址に比例
する基質の＃累加水分）祥による量は、４０５　ｎｍで
分光測光法により測定することによって測定することが
できる。

過剰の基質の存在下であっても４０５　ｎｍにおける６
１１１定には支障がない。

分解生成物Ｒ−ＮＨ２の債は、２−ナフチルアミノ基、
４−メトキシ−２−ナフチルアミノ塾、４−メチル−ク
マリル−（７）−アミノ基又は１．３−ゾ（メトキシカ
ルボニル２−フェニル−（５）−アばノ基を含有する基
質を用いて螢光分光側光法により測定される。酵素、緩
衝液及び基質からなる試験系において、低エネルギー量
の輻射線は、形成された螢光性分解生成物が高エネルギ
ー量の光線によって励起された仮、４０［］〜４７０　
ｎｍで連１売的に測定される。単位時間当りに形成され
る分解生成物の址は、存在する酵素活址に対して測定さ
れる。前記のように、毎分の分解生成物１ミクロンモル
は、所定の１質に基づく１酵素単位に相当する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 I ： Ｈ−Ｄ−Ｘ−Ｙ−Ｌｙｓ−Ｒ　 I 〔式中、 Ｘはアラニル基、α−アミノブチリル基、 ロイシル基、ノルロイシル基、イソロイシル基、バリル
   基又はノルバリル基を表わし、 Ｙはシクロヘキシルアラニル基又はシクロヘキシルチロ
   シル基を表わし、 Ｒはｐ−ニトロフェニルアミノ基、２−ナフチルアミノ
   基、４−メトキシ−２−ナフチルアミノ基、４−メチル
   −クマリル−７−アミノ基又は１，３−ジ（メトキシカ
   ルボニル）−フェニル−５−アミノ基を表わす〕で示さ
   れるトリペプチド誘導体又は酸とのその塩。 ２、鉱酸、例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ＿２ＳＯ＿４又は
   Ｈ＿３ＰＯ＿４、又は有機酸、例えば蟻酸、酢酸、プロ
   ピオン酸、トリメチル酢酸、メトキシ酢酸、トリクロル
   −又はトリフルオル酢酸のようなハロゲン化酢酸、アミ
   ノ酢酸、乳酸、蓚酸、マロン酸、クエン酸、安息香酸、
   核中で置換された芳香族酸、例えばトルイル酸、クロル
   −又はブロム安息香酸、メトキシ安息香酸及びアミノ安
   息香酸、又はフタル酸でプロトン化されている、特許請
   求の範囲第１項に記載のトリペプチド誘導体。 ６、アルギニンないしはリジンの媒体中に蛋白分解酵素
   を含有するか又はその媒体中で該蛋白分解酵素を形成又
   は消費するアルギニンないしはリジンのカルボキシル側
   鎖上の天然のペプチド鎖を分解する蛋白分解酵素、殊に
   酵素部類Ｅ．Ｃ．６．４．２１．の酵素を定量分析する
   方法において、該媒体を、一般式 I ： Ｈ−Ｄ−Ｘ−Ｙ−Ｌｙｓ−Ｒ　 I 〔式中、 Ｘはアラニル基、α−アミノブチリル基、 ロイシル基、ノルロイシル基、イソロイシル基、バリル
   基又はノルバリル基を表わし、Ｙはシクロヘキシルアラ
   ニル基又はシクロヘキシルチロシル基を表わし、Ｒはｐ
   −ニトロフェニルアミノ基、２−ナフチルアミノ基、４
   −メトキシ−２−ナフチルアミノ基、４−メチル−クマ
   リル−７−アミノ基又は１，３−ジ（メトキシカルボニ
   ル）−フェニル−５−アミノ基を表わす〕で示されるト
   リペプチド誘導体又は酸とのその塩反応させ、トリプペ
   チド誘導体上の酵素の加水分解作用によつて形成された
   有色又は螢光性分解生成物Ｒ−ＮＨ＿２の量を、測光法
   、分光測光法、螢光分光測光法又は電気化学的方法によ
   り測定することを特徴とする、蛋白分解酵素を定量分析
   する方法。 ４、ヒトの体液、例えば尿、膵液、腸粘液、乳腺分泌物
   、汗腺分泌物、喀痰又は血液中の器官又は腺カリクレー
   ンを分析する、特許請求の範囲第６項記載の方法。 ５、血液又は血漿中のプラズミンを分析する、特許請求
   の範囲第３項記載の方法。 ６、血液又は血漿中のトロンビンを分析する、特許請求
   の範囲第３項記載の方法。