JPS62294695A - トリペプチド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 本発明は、蛋白分解酵素、特に酵素部類Ｅ。

Ｃ，３，４，２１−の酵素、例えば器官又は腺カリクレ
ーン、トロンビン及びプラズミンを定量分析する九めの
基質として有用な新規のトリペプチド誘導体に関する。

所謂器官カリクレーン又は腺カリクレイ／は、種々の器
官及び腺、例えば分泌腺、唾液腺、腎臓、消化管粘膜等
によって得られ、前酵素の形又は活性形で分泌される。

これらの器官又は腺カリクレーンは、化学的及び生理学
的に血漿カリクレーンとは異なるものである。一定の病
理学的条件下で器官カリクレーン分泌物濃度は、正常値
よりも低下するか又は正常値よりも上昇する。すなわち
、例えば尿のカリクレーン分泌は、腎臓疾病の患者の正
常値よりも実質的に減少する。腎臓硬化症の患者におい
てカリクレーン分泌は、殆んど完全に抑圧されている。

特発性高血圧症の患者において、２４時間−尿のカリク
レーン分泌は、正常値の５０％平均として有効に減少さ
れている（例えば、　Ｈ，Ｓ、Ｍａｒｇｏｌｌｕａ著、
”　Ｃｈｅｍｌａｔｒｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏ
ｆ　ｔｈｅＫａｌｌｉｋｒｅｌｎ−Ｋｌｎｉｎ　Ｓｙｓ
ｔｅｍ　ｉｎ　Ｈｅａｌｔｈ　ａｎｄＤｉｓｅａｓｅ　
”、１９７４年、第３９９〜４０９頁、参照）。それ故
、簡単な処理方法で器官カリクレーンを迅速に定ｉｔ分
析することは重要である。

例えば、一定のアルギニンエステル、例エバトシルーア
ルギニンメチルエステル（ＴＡＭＥ）　’ｉｉエステル
分解することによって尿カリクレーンを分析することば
、公知である。改善され次エステル分解法では、三重水
素で標識され九トノルーアルギニンメチルエステルヲ使
用し、エステル分解によって放出されるメタノールの放
射能と測定する。しかし、これらのエステル分解法は、
該方法がカリクレーンがエステル分解によらずアミド分
解により天然のペプチド鎖を分解する蛋白分解酵素であ
る程度に非生理学的であるという欠点を有する。更に、
エステル基質は、該基質が多数の他の酵素によって分解
されている。

すなわちカリクレーンよよって不明確に分解されている
という欠点を有する。三重水素で標識されたＴＡＭＥ　
’ｉ用いる方法は、三重水素で標識されたメタノールの
放射能測定よりも前に、エステル分解混合物中になお存
在する三重水素で標識され念残留ＴＡＭＥが測定を邪魔
するのでメタノールをエステル分解混合物から水と不混
和性の液体で抽出しなければならない程度に複雑である
。

審査されずに公告された西ドイツ国特許出願公開第２５
２７９３２号明細書には、式：Ｒ’−Ｐｒｏ−Ｘ−Ａｒ
ｇ−ＮＨ−Ｒ２（但し、Ｒ１は深護基を表わし、−ＮＨ
−Ｒは発色団を表わし、Ｘはフェニルアラニル基、β−
７クロヘキシルアラニル眉、）エニルグリシル基又はチ
ロシル基金表わす）で示される基質が記載されている。

該基質は、血漿カリクレーンによって極めて簡単に分解
され、有色の分解生成物Ｒ−ＮＨ２を生じ、この場合こ
の分解生成物の一缶は、測光法、分光測光法又は螢光測
光法によって測定することができる。ま九、器官又は腺
カリクレーンを分析する几めに該基質を使用することも
試みられた。しかし、意外なことに、該基質は、器官又
は腺カリクレーンに対して敏感でない、すなわち５官又
は腺カリクレーンによって分解されないか又は少量が分
解されるにすぎな−ことが判明した。

審査されずに公告された西ドイツ国特許出願公開第２６
２９０６７号明細書には、特定の蛋白分解Ｉ９１素、例
えば腺又は器官カリクレーン及びプラグミンを分析する
ための基質として有用なトリ４ゾチド誘導体が記載され
ている。すなわち、Ｈ−Ｄ−パリルーロイシル−アルイ
ニル−ｐ−二トロアニリドノヒドロクロリド及び）ｌ−
Ｄ−ノクリルーロイシルーリノルーｐ−ニトロアニリド
ジヒドロクロリト９が２つの例として挙げられている。

第１のトリペプチド誘導体は、腺カリクレーンの丸めの
基質でちゃ、第２のトリペプチド誘導体ンよ、ノラズミ
／のための基質である。

これら２つの化合物は、該＋９索によって分解され、ｐ
−ニトロアニリンを生じ、この場合このｐ−ニトロアニ
リンの電は、測光法又は分光測光法によシ測定すること
ができる。しかしながう、Ｈ−１）−ｉ４１）ルーロイ
シル−アルギニル−ｐ−ニトロアニリドゝジヒドロクロ
リドの感受率は、′／Ｉｋｌａされてない尿中の尿カリ
クレーンを正確に分析するのに必要な限界値に到達する
。しかし、該アミド基質を濃縮された尿中で使用する場
澄には、ｐ−ニトロアニリンの測光法による測定は、尿
の独自の色によって強固にｊ阻止される。

前記の西ドイツ国特許明細書に記載された２つのトリペ
プチド誘導体のトリー！′グチド鎖中の第１の２つのア
ミノ酸は、α−又はβ位に阻水性イソプロピル基を有す
る。この阻水性全増大させ、その後に腺カリクレーンに
対する感受性を増大させるために、ゾベプチド鎖の基本
構造を維持しながら、イソプロピル基を芳香族基、例え
ばフェニル基に代えることが試みられた。

しかし、この試みは失敗した。芳香族基を装入すること
によって得られるトリベプチ）−４基質は、腺カリクレ
ーンによって全く分解されないか又は多くの場合極めて
少量が分解されるにすぎな”ｏＬかし、芳香族基全有す
るこれらのトリペプチド基質は、プラズミンに対して驚
異的に高い感受性を有する。更に、意外なことに、該ト
リ被プチドグラズミン基質における芳香族基の水素添加
は、器官又は腺カリクレーンに対して驚異的に高い感受
性を有する新規部類のトリペプチド基質を生じることが
見い出された。トリ。

ペプチド鎖を増加させるには、蛋白分解酵素によって分
解される基質を得るために天然に生じるアミノ酸だけを
使用することができることが判明してい念。それ故、シ
クロヘキシル基を含有しかつ天然に生じないアミノ酸と
使用することにより、器官又は懐カリクレーン及びその
他の蛋白分解酵素、例えば血漿カリクレーンによって簡
単に分解される発色団基質を得ることができることが見
い出されたことは意外なことであつ念。

本発明は、特定の蛋白分解酵素、特に＃索部類ｇ、ｃ、
３．４．２１　、の酵素、例えば器官又は腺カリクレー
ン、グラズミン及びトロンビンに対して高い感受性を有
し、したがって該酵素全定量分析する几めの基質として
有用な新規の発色団基質に関する。該基５Ｘは、一般式
Ｉ：Ｈ−Ｄ−Ｘ−Ｙ−Ａｒｇ−Ｆ、１ 〔式中、 Ｘはシクロヘキシルグリシル基、シクロへをジルアラニ
ル基又はシクロヘキシル基ｋ　’１％　ｂ　Ｌ、ノルバ
リル基、α−アミノブチＩｆ基、アラニル基、グロリル
基又はビベコリノイ／ｌ／基を曵わ踵 ＲＵｐ−ニトロフェニルアミノ、２−ナフテルアミノ、
４−メトキシ−２−ナフチルアミノ、牛−メチル−クマ
リル−７−アミノま之は１，３−−、ｙ（ｔトキシカル
ボニル）−フェニル−δ−アミノ基金表わす〕で示され
るトリペプチド誘導体である。

式Ｉのトリ被グチド誘導体は、水性媒体に対して難溶性
であり、したがってその酸との塩の形で、殊に鉱酸、例
えばＭＣｌ−、ＨＢｒ　−Ｈ２ＳＯ４、Ｈ３ＰＯ４等、
又は有機酸、例えば蟻酸、酢酸、プロピオン酸、トリメ
チル酢酸、メトキシ酢酸、トリクロル−又はトリプルオ
ル酢酸のよ５４ハロケ゛ン化酢酸、アミノ酢酸、乳酸、
ｇ酸、マロン酸、クエン酸、安息香酸、核中で置換され
た芳香族酸、例えばトルイル酸、クロル−又はブロム安
息香酸、メトキシ安息香酸及びアミノ安息香酸、フタル
酸等との塩の形で有利に使用される。核酸の性質は、核
酸が基質と酵素との間の反応に関与しないので重要では
ない。

式■の基質及びその酸との塩は、特定の蛋白分解酵素、
特に酵素部類Ｅ、Ｃ，３，４，２１、の酵素（”　Ｅｎ
ｚｙｍｅ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ　　’　、Ｅｌｓ
ｅｖｌｅｒＳｅｌｅｎｔｉｆｉａ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎ
ｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ（Ａｍａｔａｒｄａｍ）社刊、１９
７３年、第２３８頁以降、参照）、例えは器官カリクレ
ーン及び腺カリクレーン、グラズミ／及びトロンビンの
作用によって加水分解により分解され、その結果式：　
Ｒ−ＮＨ２の有色性又は螢光性分解生成物が形成され、
この場合この分解生成物の量は、測光法、分光測光法、
螢光分光測光法又は電気化学的方法によって測定するこ
とができる。従って、この新規の基質は、蛋白分解酵素
、殊にアルだ二ンのカルボキシル側鎖上の天然のペプチ
ド鎖を分解する酵素部類ｇ、ｃ、３．４．２１．の酵素
、例えば器官又は腺カリクレーン、プラズミン、血漿カ
リクレーン、トロンビンないしはそれらの抑制因子及び
前酵素、ならびに該酵素の形成又は抑御に関与するその
他の因子を定量分析するのに有用である。

次の実施例２．３．４，５，７．８．１５に記載のトリ
ペプチド誘導体は、殊に尿カリクレイ／を分析するため
の基質として有用である。

ヒトの１客痰中のカリクレーンを分析するには、次の実
施例１．２．３．４，５，８，９，１５，１７゜１８．
１９，２０，２１．２２．及び２３に記載のトリ（グチ
ド訪導体を使用することができる。

次の実施例１．７．８，１３，１７．１８に記載のトリ
４グチド誘導体は、プラズミンを分析するのに使用する
こと２ウニできる１＃の基質ｔ　ｔＳ成する。

次の実施例７，８，９，１０．１１，１２，１３．１＋
。

１５．１６．１８，１９，２０，２１．２２及び２３に
記載のトリペプチド誘導体は、トロンビンを分析するた
めの極めて敏感な基質である。

本発明は、蛋白分解酵素、殊にアルギニンのカルボキシ
ル側鎖上の天然のペプチド鎖を分解する酵我部類ｇ、ｃ
、３．４．２１−の酵素、例えば器官又は腺カリクレー
ン、グラズミン及びトロンビンを定：１分析する方法に
も関する。本発明による方法は、前記酵素？含有するか
又は該酵素を形成又は消費する物質を、式【のトリペプ
チド誘導体と反応させ、このトリペプチド誘導体におけ
る酵素の加水分解作用によって形成される有色又は螢光
分解生成物Ｒ−ＮＨ２の量を、測光法、分光測光法、螢
光分光測光法又は電気化学的方法によって測定すること
よシなる。本発明方法は、例えば酵素標本の酵素含量又
はヒトの体液及び噌乳動物の体液、例えば尿、膵液、腸
粘液、乳腺分泌物、汗腺分泌物、喀痰及び血液中の酵素
濃度を分析することができる。本発明方法は、殊に前記
体液中の器官又は腺カリクレーン及び血漿カリクレーン
を定量分析するのに有用である。この方法によれば、遊
離器官カリクレーン及び粘膜カリクレーンないしはプレ
カリクレーンから形成されたカリクレーン、さらにカリ
クレーンの生理学的又は非生理学的抑制因子及びプレカ
リクレーンの生理学的又は非生理学的賦活体を分析する
ことができる。

式Ｉのトリペプチド誘導体は、以下に記載した方法によ
シ製造することができる； （１）　　Ｒを、Ｃ−末端アルギニンのカルがキシル基
に結合させ、その際にα−アミノ基金保護基、例えばカ
ルボベンゾキシ基又はｔ−グトキシカルゲニル基によっ
て呆護し、アルギニンの場合にはδ−グアニジル基を、
例えばＨＣｌを用いるプロトン化、ニトロ化又はトシル
化によって保護する。また、Ｃ−末端Ｒ−ＮＨ基は、ペ
グチド鎖を段階的に合成する間保護基として役立つ。

その他の保護基は、必要な場合には所望のペグチド鎖が
完全に合成されるまで他のアミノ酸誘導体を結合させる
ために選択的に除去することができる。最後に、残留す
る保護基金、Ｒ−ＮＨ−基を作用させることなしに完全
に分解する（例えば、Ｍｉｋｌｏｓ　Ｂｏｄａｎａｋｙ
他、”　ＰｅｐｔはｅＳｙｎｔｈｅｓｉｇ　”、Ｉｎｔ
ａｒｓｃｌｅｎｃｅ　Ｐｕｂｌｉａｈｅｒｓ社刊、１９
６６年、第１６３〜１６５頁）。

（２）　　第１に被グチド鎖を（Ｅｏｄａｎｓｋｙ他に
よる方法、上記引用文中、により）合成するが、その際
にアルギニンのＣ−末端力ルゴキシル基金常用のエステ
ル基、例えばメトキン基、エトキシ基又はペンノルオキ
シ基によって保護する。

該エステル基は、トリフルオル酢酸によυＪ［的に分解
しなければならないｔ−ブトキシ基金除いて、アルカリ
加水分解によって除去することができる。アルギニンの
δ−グアニジル基をプロトン化する場合には、該エステ
ル基をトリプシンを用いて酵素により除去し、この場合
ラセミ化は起こらない。次に、発色団Ｒ−ＮＨ−を結合
させる。アルギニンのδ−グアニゾノ基をニトロ基又は
トシル基によって医謹し、トリペプチド誘導体のＮ−末
端α−アミノ基をカルボベンゾキシ基又はｐ−メチル−
１ｐ−メトキシ−又はｐ−クロルベンジルオキ７カルボ
ニル基又はｔ−ブトキシ基によって保護する場合には、
全ての保護基を同時に除去する。この除去は、保護され
ているトリペプチド誘導体を無水ＨＦで室温で処理する
ことによって実施することができ、シ九がってこの場合
にはアミノ基及びδ−グア＝ツノ基の全ての前記保護基
が除去される。−ま九、この除去は、保護されているト
リペプチド誘導体が保護ニトロ基又はトシル基を含有し
ない場合、氷酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒで室温で処理する
ことによって実施することもできる。

本発明によるト＋）−ｅプチド誘導体の製造は、次の実
施例に詳記されている。

実施例によって得られ次溶出液及び生成物の分析は、シ
リカダルで被覆されたガラス板（Ｍｅｒｃｋ社、Ｆ’２
５４）を用いて薄層クロマトグラフィーによって行なわ
れ念。薄層クロマトグラムは、次の溶剤系によって展開
した： Ａ　クロロホルム／メタノ−Ａ／（９：１）Ｂｎ−プロ
／？ノール／酢酸エチル／水（７：１：２）Ｃｎ−ブタ
ノール／酢酸／水（３：１：１）次の略語を使用する： ＡｃＯＨ＝酢酸 Ａｌｔ　　＝アラニン Ａｒｇ　　＝アルギニン ＢＯＣ＝ｔ−ブトキシカルボニル Ｂｕｔ　　　＝α−アミノ酪酸 Ｃｂｏ　　＝カルボベンゾキシ ＣＩＡ　　＝シクロヘキシルアラニン ＣＨＧ　　＝’／クロヘキシルグリシンＣＲＴ　　＝シ
クロヘキフルチロシン＝ｐ−ヒドロキシシクロへキシル
アラニン ＤＭＦ　　＝ジメチルホルムアミド ＤＰＡ　　＝１．３−＆（メトキシカルゲニル）−フェ
ニル−（５）−アミド ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー Ｅｔ、Ｎ　　＝トリエチルアミノ ＨＭＰＴＡ　＝燐酸Ｎ　Ｉ　Ｎ　、　Ｎ’　、　Ｎ’　
、　Ｎ”、Ｎ”−へキサメチルトリアミド ｌｉｅ　　＝イソロイシン Ｌｅｕ　　＝ロイシン ＳＳ　　　＝溶剤系 Ｌｙｓ　　　＝リジン ＭＣＡ　　＝４−メチル−クマリル−（７）−アミドＭ
ｅＯＨ”メタノール Φ−ＭｅＯ−２−ＮＡ　＝専一メトキシー２−ナフチル
アミドＮ１ａｕ　　＝ノルロイシン Ｎｖａｌ　　＝ノルパリ１ ０ｐＮＰ　　＝ｐ−ニトロフエノキシ Ｐｈｅ　　＝フェニルアラニン Ｐｈ’Ｇ１ｙ＝フェニルグリシン Ｐｌｐ　　　＝ピペコリン酸 ｐＮＡ　　＝］）−ニトロアニリド Ｐｒｏ　　　＝グロリン ＴＨＦ　　＝テトラヒドロフラン Ｔｙｒ　　＝チロシン Ｖａｌ　　＝バリン 特に記載しない限シ、ペプチド鎖中のアミノ酸はＬ−形
を有する。

例　　１ ２５０ゴの三首フラスコ中で（真空中でＰ２Ｏ５上で乾
燥した）　Ｃｂｏ−Ａｒｇ−ＯＨ，ＨＣｌ２６．Ｏｇ（
４７，０ミリモル）を２０℃で無水ＨＭＰＴＡ　９０　
ｍｔ　Ｋ　ｍ解し、この場合フラスコ中の雰囲気は湿分
を含まないように保持し九。得られた溶液に室温でま−
ｊ’）ｆＭＰＴＡ　Ｉ　ＱＩＬｔ中ノＥｔ５Ｎ　４．７
４ｇ（４７，０ミリモル）の溶液を添加し、次に（１０
０％過１１の）ｐ−ニトロフェニルイソシアネ−）１６
．４ｇ（１００ミリモル）を簡加した。２０℃での２４
時間の反応時間後、ＨＭＰＴＡの大部分を真空中で蒸留
することによって除去した。この残滓を３　Ｑ　％　Ａ
ｃＯＨで数回抽出した。この残滓全廃采した。會した酢
酸抽出液を３０％ＡｃＯＨで平衡させかつ３　Ｑ　％　
ＡｃＯＨで溶解せしめる１セフアｒツクス（８ａｐｈａ
ｄｅｘ　）　Ｇ　−、！、　５　’　（登録藺標）のカ
ラムを通すことによってさらに精製し九。ｐ−二トロア
ニリンの遊離下にトリプシンで処理することによって分
解されたＡｃＯＨ溶出液の画分を凍結乾燥した。こうし
て、ＴＬＣによって示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一な
無定形粉末１２．６ｇが得られた。元素分析及び実験式
Ｃ２Ｑ）１２５Ｎ６０５Ｃ２からの計算によシ次の値が
得られ九（実験式からの１直は括弧内のものである）：
　Ｃ＝５１．２９％（５１，６７チ）、Ｈ−５，４８％
（５，４２％）、Ｎ＝１７．９２％（１８，０８％）、
Ｃ２−７，５０％（７，６３％）。

ｌｂ、　２ＨＢｒ、Ｈ−Ａｒｇ−ｐＮＡ化合物１　ｍ４
．６５ｇ（ＩＱミリモル）を攪拌下で氷酢酸中の２　Ｎ
　ＨＢｒ　４０ｍｌで２０’Ｃで湿分の不在下に４５分
間処理した。アミノ酸誘導体はＣＯ□の発生下に溶解し
た。この反応溶液を強力攪拌下で無水エーテル２５０．
ｄｌｃＭ加した。

この溶液は、２ＨＢｒ　、Ｈ−Ａｒｇ−ｐＮＡの沈殿物
を生じた。

エーテル相を吸引濾過し、その上固体相を副生成物とし
て形成され次臭化ベンジルならびに過剰のＨＢｒ及びＡ
ｃＯＨを除去するために無水エーテル１００Ｍの量で手
回洗浄した。この残滓全メタノール５０工１ｔｌｃ浴解
し、その−をＥｔ５Ｎを添加することによって４．５に
調節し、この溶液を真空中で３０℃で濃縮乾燥した。得
られた生底物をＭ＠ＯＨ７３ゴに溶解し、Ｍ・ＯＨで平
素させた“セファデックス（５ｅｐｈａｄ＊ｘ　）　Ｌ
Ｈ−２０”（架橋デキストラングル）のカラムを通した
。この溶出液の両分から、ＴＬＣによって示されるよう
にＳＳ　Ｃ中で均一な無定形化合物１ｂ４．１８Ｆ（ｊ
ｆｆｉ論値の９１．６％）が得られた。元素分析及び実
験式Ｃｌ２ＨＩＮ６０５”２からの計算により次の値が
得られた：Ｃ＝３１．１５チ（３１，６０％〕、Ｈ−養
、３５％（４，４２％）、Ｎ　−１８，８４％（１８，
４３％）及びＢｒ＝３４．８１％（３５，０３％）。

ｌｃ　、　Ｃｂｏ−Ｃ）ＬＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡ、ＨＢｒ
化合物１ｂ４．５６１１０ミリモル）を新しく蒸留した
ＤＭＦ　３０　ｍｌに溶解し、この溶液を一１０℃に冷
却した。この浴液に攪拌下でＥｔ５Ｎ１．４０扉ｔ（１
０ミリモル）ｆｊ！：添加した。形成したＥ　ｔ　ｓＮ
　−ＨＢ　ｒを濾過することによって除去し、冷たいＤ
ＭＦの少量で洗浄した。このＰ液に一１０℃でＣｂｏ−
ＣＨＡ−ＯｐＮＰ　４．６９９　（１１ミリモル）を添
加し、反応を湿分の不在下に２〜３時間継続させ、この
場合反応溶液の温度は次第に約２０℃に到達した。この
溶液を再び一１ｏ℃に冷却し、ａｔ５Ｎ０．７０Ｍ（５
ミリモル）で緩衝し、−１０℃で約２時間反応させ、水
温で約３時間反応させ念。この方法をＩ（ｔ　５Ｎ　Ｑ
、　７　Ｑ　ａｔを用いて繰シ返し、１６時間この反応
溶液を真空中で５０℃で濃縮乾燥した。この残滓を５０
俤Ａｃ０Ｈ７５ゴに浴解し、５０チＡｃＯＨで平衡させ
た１セフアｆソクス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１
５”のカラムでグル濾過することによってネ肯製した。

ｐ−二トロアニリンの遊離下でトリプシンで処理するこ
とによって分解されたＡｃＯＨ＠出液の主画分を真空中
で４０℃で＠縮乾燥した。この残滓をＭｅＯＨ１５０Ｍ
に溶解し、再び濃忽して乾燥した。

得られた残滓全真空デシケータ−中で６０℃でＰ２Ｏ５
上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳ　Ｃ中
で均一な無定形化合物１ｃ５．８５ｇ（理論値の８８．
３９６）を得た。元素分析及び実験式Ｃ２ｑＨ４０Ｎ７
０６　Ｂ　ｒからの計算により次の値が得られた：Ｃ−
５２２８チ（５２，５７俤）、Ｈ−６，１６％（６，０
９％）、Ｎ−１５，０９％（１４，８０％）及びＢｒ＝
１１．８５％（１２０ｅ１％）。

ｌｄ、　２ＨＢｒ、Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡ化合物
１ｃ５．３０９（８ミＩＪモル）を攪拌下で氷酢酸中の
２ＮＨＢｒ３２ｍで２０℃で４０分間処理した。ジ（プ
チド訪導体は、ＣＯ□の発生下に次第に溶解した。この
反応溶液を強力攪拌下で無水エーテル２５０ゴに滴加し
た。この溶液は、２ＨＢｒ　、Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐ
ＮＡの沈ｔｔＳ物を生じた。

エーテル相を吸引濾過し、その上固体相を副生成物とし
て形成した臭化ペンノルならびＶＣ過剰０ＨＢｒ及びＡ
ｃＯＨｔ−除去する次めに無水エーテル１００Ｌ／の量
で４回洗浄した。この残滓をＭｅＯＨ３５０−に溶解し
た。ＰＨをＥｔ３Ｎを用いて４．５に調節し、この溶液
を真空中で３０℃でａ縮乾保した。得られた残滓ｔ−Ｍ
ｅＯＨ５０ｍｌ　Ｋ溶解し、　ＭｅＯＨで平衡させた”
セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）ＬＨ−２０１の
カラムでｆｌｌ＃した。ｐ−ニトロアニリ／の遊離下で
トリプシンで処理することによって分解されたＭｅＯＨ
溶出液の両分を真空中で３０℃で濃縮乾燥した。得られ
九残滓を真壁デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾
燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一
な無定形化合物１ｄ４．４８ｇ（理論値の９１．９％）
を得た。元素分析及び実１羨式Ｃ７１Ｈ５５Ｎ７０４Ｂ
ｒからの計算によう次の値が得られｆｃ：Ｃ＝４１．８
０％（＋１．３９慢）、Ｈ＝　５．８６％（５，７９％
）、Ｎ＝１６．３１％（１６，０９％）及びＢｒ＝２５
．８５％（２６，２３％）。

ｌｅ　、　Ｃｂｏ−Ｄ−ＣＨＧ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮ
Ａ、）ＩＢｒ化合物１ｄ３．０５ｇ（５ミリモル）金新
しく蒸留したＤＭＦ　２　Ｑ　ｍｅに溶解し、この浴液
ｋ　−１０℃に冷却した。この浴液にＥｔ５ＮＯ，’７
　ＱＩｎＡ　（５ミリモル）全攪拌下で添加した。形成
したＥｔ５Ｎ。

ＨＢｒ　ｋ　濾過することＶこよって除去し、冷たいＤ
ＭＦの少量で洗浄した。このＰ液に一１０℃でＣｂｏ−
Ｄ−ＣＨＧ、０ｐＮＰ　２．２７　ｇ（５，５ミリモル
）ｆｔ攪拌下で添加した。この反応混合物を湿分の不妊
下で２〜３時間反応させ、この場合この反応浴液の温度
は次第に約２０℃に到達した。この溶液を再び一１０℃
に冷却し、Ｅｔ５Ｎｏ、３．５ｙ（２，５ミリモル）で
緩衝し、−１０℃で約２時間反応させ、室温でさらに３
時間反応させた。

この方法−＠　Ｅｔ５Ｎ　Ｏ，３５ｍｌを用いて燥υ返
し、１６時１４浸この反応塔液を真空中で５０℃で濃縮
乾燥した。この残滓を５０チＡｃＯＨ５０、＊ｌに俗で 解し、５ｏ％ＡｃＯＨス平衡させた”セファデックス（
５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”のカラムでケ゛ル
濾過することによって梢襄した。ｐ−ニトロアニリンの
遊離下でトリプシンで処理することによって分離された
ＡｃＯＨ出出液の主画分を真空中で４０℃で震縮乾燥し
た。この残滓上ＭｅＯＨ１００ｔｎｌ　Ｋ溶解し、この
浴′に！ｉを再び嫁縮して乾燥した。

得られた残滓を真空デシクーター中で６０℃でＰ２Ｏ５
上で乾燥し、ＴＬＣによって示さ几るようにＳＳ　Ｃ中
で均一な無定形化合物１・３．２４ｇ（理論値の８０．
８％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ５７Ｈ５５ＮＢ０
７　Ｂ　ｒからの計算によフ次の値が得られ九：Ｃ−５
５，７２％（５５，＋３チ）、Ｈ＝　６．７３チ（６，
６６俤）、Ｎ−１４，２５％（１３，９８％）及びＢｒ
＝９．８６％（９，９７％）。

Ｉｆ、　２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−ＣＨＧ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−
ｐＮＡ化合物１ｅ２．４１Ｊｉ’（３ミリモル）を攪拌
下で氷酢酸中の２ＮＨＢｒ１２Ｍ！で２０℃で湿分の不
在下に４０分間処理した。トリペプチド誘導体は、脱カ
ル？キシル化下及びＣ０２の発生下で次第に溶解した。

この反応溶液を強力攪拌下で無水エーテル１２ｃｌ／に
満願した。この溶液は、２ＨＢ　ｒ　、Ｈ−Ｄ−ＣＨＧ
−ＣＨＡ−Ａ　ｒ　ｇ−ｐＮＡの沈殿物を生じた。

エーテル相を濾過棒を通して吸引濾過し、次に固体相’
Ｉｔ：ｇ水エーテル５０ｍの墓で４回洗浄した。得られ
た残滓全ＭｅＯＨ４０ゴに溶解した。戸をＥｔ３Ｎを用
いて４．５に調節し、この溶液を真空中で３０℃で濃縮
乾燥した。この残滓ｔ−ＭｅＯＨ３Ｑ　ｍｌに浴解し、
Ｍ・ＯＨで平向させた“セファデックｘ　（５ｅｐｈａ
ｄｅｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムで精製シ次。ｐ−ニ
トロアニリンの遊離下でトリプシンで処理することによ
って分解されたＭｅＯＨ溶出液の両分を真空中で３０℃
で濃縮乾燥した。

後精製するなめに、予備精製された残滓を３３％　Ａａ
ＯＨ３Ｑｄに溶解し、３３％ＡｃＯＨで平衡させた“セ
ファデックス（Ｓ＠ｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”の
カラムでグル濾過することによって精製した。ｐ−ニト
ロアニリンの遊離下でトリプシンで処理することによっ
て分解されたＡｃＯＨ溶出液の主画分を真空中で４０℃
で濃縮乾燥した。得られた残滓を真空デシケータ−中で
４０℃でＰ７Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示される
ようにＳＳ　Ｃ中で均一な無定形化合物１ｆ１．６８９
（理論値の７４．８％）全得た。元素分析及び実験式Ｃ
２？Ｈ４１３Ｎ８０５Ｂｒ２からの計算によシ次の値が
得られた：Ｃ−４６．１８％（４６，５３％）、Ｈ−６
，５５％（６，４６％）、Ｎ　−１５，１８チ（１４Ｑ
７チ）及びＢｒ−２１，１２％（２１，３５１゜アミノ
酸分析により次の正確な比率で所望のアミノ酸の存在が
確認された： 例　　２ 市販のＣｂｏ−Ａｒｇ−ＭＣＡ、ＨＣｌ２３．０９　（
２５，９ミリモル）を氷酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒの溶液
１０４ｍ（２０８ミＩＪモル）を用いて例１ｂによシ屏
封鎖した。この乾燥残滓をＭ・Ｏｆ（４００ｍ／に溶解
し、この溶［ｅセファデックス（５ｅｐｈａｄ＠ｘ　）
　ＬＨ−２０＃のカラムでＮ展した。Φ−メチル−７−
アミノ−クマリンの遊離下でトリプシンで処理すること
によって分解されたＭ・ＯＨ溶出液の両分を真空中で３
０℃で濃縮乾燥した。得られた残滓を真空デシケータ−
中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示さ
れるようにＳＳ　Ｃ中で均一な無定形化合物３ｂ１１．
２ｇ（理論値の８７．７％）を得た。元素分析及び実験
式Ｃ１６Ｈ２５Ｎ５０５Ｂｒ７からの計算により、次の
値が得られ九：Ｃ−３９，４０チ（３８，９６チ）、Ｈ
−養、６１チ（＋、７０％）％Ｎ−１４，４８俤（１４
，２０チ）及びＢｒ−３１，９０％（３２，４０％）。

２０、Ｃｂｏ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ＭＣＡ、ＨＢｒ化合物
２ｂ４．９３．ＦＣ１０ミリモル）及びＣｂｏ−ＣＨＡ
−ＯｐＮＰ　４．６９　ｇ（１１ミリモル）を新しく蒸
留したＤ擬”７５ｒｎｌ！に添加した。−１０℃への冷
却後、攪拌下でＥｔ、Ｎをまず１．４０ゴ（１０ミリモ
ル）、次に０．７０７ｄ（５ミリモル）添加した。この
混合ｖｌＪを、湿分の不在下で、まず−１０℃で３時間
反応させ、次に室温で４時間反応させた。この反応溶液
を再び一１０℃に冷却し、Ｅｔ５Ｎ０．７０ゴで緩衝し
、かつ２０℃で１晩攪拌した。この反応混合物をＸ仝中
で５０℃で濃縮乾燥し、この残滓を５０％ＡｃＯＨ２０
Ｑ　ｙｔｌに溶解し、この溶液を６セフアデツクス（５
ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５’のカラムで桔裏した
。

キーメチル−７−アミノ−クマリンの遊離下でトリプシ
ンで処理することによって分解されたＡｃＯＨ溶出液の
画分を真空中で４０℃で機縮乾燥した。こうして得られ
た残滓を真空デシケータ−中で００℃でＰ２Ｏ５上で乾
燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一
な結晶性化合物５．９５＆（理論値の８５．０％）を得
九。元素分析及び実験式Ｃ５５Ｈ４５Ｎ６０６Ｂｒから
の計算によシ、次の値が得られた：Ｃ＝５６．３３％（
５６，６５％）、Ｈ＝６．２８％（６，１９ｃｓ）、Ｎ
　＝　１２．２５％（１２，０１％）及びＢｒ　−１１
，３０％　（１１，４２％）。

２ｄ、　２ＨＢｒ、Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ＭＣＡ化合物
２ｃ５．６０ｇ（８ミＩＪモル）を氷酢酸中の２ＮＨＥ
ｒ３２Ｍを用いて例１ｄによシ解封鎖した。得られ九粗
製生成物をＭ・０ＨＩＱＱｒＩＬｌに溶解し、この溶液
’ｔ″セファデックス（Ｓ＠ｐｈｄｅｘ）ＬＨ−２０”
のカラムで精製した。キーメチル−７−アミノ−クマリ
ンの遊離下でトリプシンで処理することに上って分解さ
れたＭｅＯＨＲ出液の両分を真空中で３０℃でｄＪＩａ
乾燥した。得られた残滓を真空デシケータ−中で壬０℃
でＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるように
ＳＳＣ中で均一な無定形化合物２ｄ４．７６ｇ（理論値
の９２．１％）ｔ−得た。元素分析及び実験式Ｃ２５Ｈ
５８Ｎ６０４１３ｒ２からのＫｔ算により、次ノ１直カ
得られ７’ｈ：Ｃ−４７，０２％（４６，４５％）、Ｈ
＝０．０２％（５，９３％）、Ｎ−１３，２１％（１３
，００％）及びＢｒ＝２４．４８％（２４，７２％）。

２ｅ　、Ｃｂ　ｏ−Ｄ−’ｌ／ａ　１−ＣＨＡ−Ａｒ　
ｇ−ＭＣＡ　、ｔ（Ｂ　ｒ化合物２ｄ３．２３１（５ミ
リモル）全９１１１ｅによ、り　Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｌ−
ＯｐＮＰ　２０５１！　（５，５ミリモル）と反応させ
た。得られた粗製生ＪＪＸ、物を５０チＡｃＯＨ７５ｍ
ｌ　Ｋ溶解し、この溶液“セファデックス（５ｓｐｈａ
ｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”のカラムで精製した。

キーメチル−７−アミノ−クマリンの遊離下でトリプシ
ンで処理することＶこよって分解さｎたＡｃＯＨ浴出液
の両分全Ｊｉｃ空中で＋０℃で濃縮乾燥し友。この残滓
をＪｃ臣デシケータ−甲で６０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し
、ＴＬＣ、＋（よって示さｎるようにＳＳ　Ｃ中で均一
な無定形化合物２＊３．２１＆（理−値の８０．１１を
伶九。元素分析及び実績式Ｃ５ａ）ｉｓ。Ｎ７０７　Ｂ
　ｒからの計算により、次の値が得られ九：Ｃ＝５７．
０５％（５７，１４％）、Ｊ（−６，６１％（６，５ｅ
１％）、Ｎ−１２，４９％（１２２８％　）及ヒＢｒ　
−９，８２％　（１０，００％）。

２ｆ、２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−Ｍａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−Ｍ
ＣＡ化合８勿３ｄ２．４（１（３ミリモル）を氷酢酸中
の２？ＪＨＨｒ１２−を用いて例１ｆにより解封鎖した
。得られた粗製生成物ｆｒ、ＭｅＯＨ５０ｆｌＬＩ　Ｋ
溶解し、この溶液を“セファデックス（Ｓｅｐｈａｄ・
Ｘ）ＬＨ−２０”のカラムで精製した。壬−メチル−７
−アミノ−クマリンの遊離下でトリプシンで処理するこ
とによって分解されｆｃＭｅＯＨ済出穎の画分金真窒中
で３０℃で績帰乾燥した。更に、絹製するために、予備
精製された生成ｖＩＪを５０％ＡｃＯＨ４０（ＩＩＷこ
溶解し、この浴液を“セファデック、ｘ、　（５ｅｐｈ
ａｄａｘ）　Ｇ　−１５’のカラムでｒル濾過すること
によって絹製した。壬−メチル−７−アミツークマリ／
のｙｆｔｍ下でトリプシンで処理することＶこよって分
解されたＡｃ０ＨＦ’＆出販の土画分をＡ空中で４０℃
で磯婦乾燥した。この残Ｒ−全Ａ臣デシケークー中で牛
０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるよ
５１’（：ＳＳＣ中で均一な無定形化合物２ｒ１．７３
ｇ（理論値の７７．３％）ｆ：得た。元素分析及び実験
式Ｃ３ｇＨ４７Ｎ７０５Ｂｒｚからの計算によシ、次の
直が得られた：Ｃ＝４８．１２％（４８，３３％）、Ｈ
＝６．４３チ（ａ３５％）、Ｎヰ１３．３８チ（１３，
１５％）及びＢｒ＝２１．１８％（２１，４４％）。

アミノ酸分析により正確な比率で所望のアミノぽの存在
が確認された： Ｖａｌ　：　１．００−Ａｒｇ　：　１．０２−Ｄ−Ｃ
ＨＡ　：　０．９７゜Ｒｆ直：０．４２゜ 例　　３ 無水Ｃｂｏ−Ａｒｇ−ＯＨ，ＨＣ２３４，４８１（０，
ｌモＡ／）を１０００ｆｎｔＯ三首フラスコ中で新しく
蒸留した無水ＤＭＦ　ｌ　５　Ｑ　＠ｔと無水ＴＨＦ　
３００　ｍｌとの混合物に２０“Ｃで溶解した。−１０
’Ｃに冷却した該溶液に攪拌下でＥｔ、Ｎ　１０．２１
　（０，１モル）を湿分の不在下で添加した。更に、Ｔ
ＨＦ　５　Ｑ　ｄ中のクロル蟻酸イソジチル１３．６５
ｇ（０，１モル）の浴液′ｊｋ２０分間で滴加し、その
後に反応温度は一５℃金決して越えないようにした。−
１０℃〜−５℃の温度で１０分間の付加的な反応時間後
、ＤＭＦ　７５　ｍｌ中のジメチル５−アミノ−イソフ
タレート２０．９２Ｎ　（０，１モル）の浴液を３０分
間で滴加し、その後に反応温度はいつも一５℃以下に保
持した。この反応混合物を一５℃でさらに１時間反応で
せた。この反応混合物を、Ｅｔ、Ｎ、ｆＩＣＬを晶出さ
せるために、２０°Ｃで１晩攪拌し、次に一１５℃に冷
却した。形成したＥｔＢＮ、ＨＣＬｔＦ別し、冷たいＤ
ＭＦの少量で洗浄した。この涙液と洗浄液を一緒に真空
中で５０　’Ｃで濃縮乾燥した。この残滓を５０％Ａｃ
ＯＨｌ○００ゴに溶解し、この溶液を５０％Ａ　ｃ　Ｏ
ｌｌで平衡させた“セファデックス（５ａｐｈａｄｅｘ
　）　Ｇ　−１５’のカラムでグル濾過することによっ
て精製した。

ジメチル５−アミノ−イソフタレートの遊離下でトリプ
シンで処理することによって分解され九ＡｃＯＨ浴出液
の主画分全真空中で専○°Ｃで濃縮乾燥し九。この残滓
を真空デシケータ−中で５０”ＣでＰ２Ｏ５上で乾燥し
、ＴＬＣによって示されるようにＳＳＣ中で均一な無定
形化合物３ａ２４．６ｇ（理論値の４５．９係）を得た
。元素分析及び実験式〇２４Ｉ（３ＯＮ５０．Ｃｔから
の計算によシ、次の値が得られた：　Ｃ＝　５３．２１
％　（５３，７８０Ｉ）’）、Ｈ＝５．７１係（５，６
ｔ４係）、Ｎ−１３，２０係（１３，０７係）及びＣＬ
−６，５２係（６，６２％）。

３ｂ、　２１（Ｂｒ、　Ｈ−Ａｒｇ−ＤＰＡ化合物３　
ａ　２１．４４．９　（４０ミリモル）を例１ｂによシ
解封鎖した。普通の処理後、得られた粗製生成物をＭａ
ＯＨ２５０−に溶解し、この浴液を“セファデックス（
５ａｐｈａｄｅｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムでグル濾
過することによって精製した。ジメチル５−アミノ−イ
ソフタレートの遊離下でトリプシンで処理することによ
って分解されたＭａｉｌ溶出液の画分を真空中で濃縮乾
燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４０℃でＰ２
Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳＣ
中で均一か無定形化合物５ｂ１９．６３％（理論値の９
３．１％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ１６Ｈ２５Ｎ
５０５Ｂｒ２からの計算により、次の値が得られた：　
ｃ＝３６．８２％（３６，４５％）　、Ｈ−４，６７係
（４，７８％）、Ｎ−１３，４５係（１３，２８幅）及
びＢｒ　＝　２９．８５％　（３０，３１％　）。

よりＣｂｏ−ＣＨＡ−ＯｐＮＰ　４．６９　ｇ（１１ミ
リモル）と反応させた。普通の処理後に得られた粗製生
成物を５０幅ＡｃＯＨ２００艷に溶解し、この浴液を”
セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”
のカラムで精製した。ジメチル５−アミノ−イソフタレ
ートの遊離下でトリプシンで処理することによって分解
されたＡｃＯＨ浴出液の両分を真空中で４０℃で濃縮乾
燥した。この残滓を真空デシケータ−中で６０℃でＰ２
Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるようＫＳＳＣ
中で均一な無定形化合物３ａ６．０６Ｊｉ’（理論値の
８２．６％）’ｅ得た。

元素分析及び実験式ＣあＨ，Ｎ６０８Ｂｒからの計算に
より、次の値が得られた：Ｃ−５３．７４係（５４，０
２係）、１（−６，２８ｑｂ（６，１８％）、Ｎ＝１１
．９０％（１１，４６＝Ｚ）及びＢｒ−１０，６８％　
（１０，８９％　）。

３ｄ　、２ＨＢｒ　、Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ＤＰＡ化合
物３ａ５．８７！！（８ミリモル）を氷酢酸中で２　Ｎ
　ＨＢｒ　３２　ｍｌｋ用いて例１ｄにより解封鎖した
。普通の処理後に得られた粗製生成物音Ｍ＠ＯＨ１００
ｍｌに爵解し、この溶液を°ゝセファデックス（５ｅｐ
ｈａｄ＠ｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムで精製した。ジ
メチル５−アミノ−イソ７タレートの遊離下でトリプシ
ンで処理することによって分解嘔れ之ＭｅＯＨ浴出液の
画分全真空中で３０℃で濃縮乾燥した。この残滓を真空
デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣ
によって示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一な無定形化合
物３　ｄ　４．７９．９（理論値の８８．０係）全書た
。元素分析及び実験式Ｃ２５ＨゎＮ６０６Ｂｒからの計
算によシ、次の値が得られた：　Ｃ−４３，７５係（４
屯１３係）、Ｈ−５，８８％（５，９３係）、Ｎ−１２
，６９係（１２，３５係）及びＢｒ　−２３，２２％　
（２３，４９％　）。

３ｅ、Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ＤＰＡ、
ＨＢｒ化合物３ｄ３゜４０ｇ（５ミリモル）を例１・に
よｌ）　Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯｐＮＰ　２．０５１　
（５，５ミリモル）と反応させた。普通の処理後に得ら
れた粗製生成物を５０妬Ａｃ０Ｈ１００−に浴解し、こ
の浴液を６セフアデツクス（５ｅｐｈａｄ＊ｘ　）　Ｇ
　−１５’のカラムで精製し念。ジメチル５−アミノ−
イソフタレートの遊離下でトリプシンで処理することに
よって分解されたＡｅＯＨ浴出液の両分を真空中で４０
℃で濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で６
０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるよ
うにＳＳＣ中で均一な無定形化合物３ｅ３．２５Ｆ（理
論値の７８．１　％　）　ｋ得九。元素分析及び実験式
Ｃ３８ＨＳ４Ｎ、Ｏ、Ｂ　ｒからの計算により、次の値
が得られた：　Ｃ−５３，９５ｃｌ）（５４，８０係）
、Ｈ−６，６５係（６，５４幅）、Ｎ−１２，０７％　
（１１，７７％）及びＢｒ−９，３８％（９，５９係）
。

３ｆ−２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｃ１（Ａ−Ａｒｇ−
ＤＰＡ化合物３６２．５０１３ミ１７モル）を氷酢酸中
の２ＮＨＢｒ１２−を用いて例１ｆにより解封鎖した。

普通の処理後に得られた粗製生成物音Ｍ＠０Ｈ５０ゴに
溶解し、この溶液全６セフアデツクス（５ｅｐｈａｄｅ
ｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムで予備精製した。ジメチ
ル５−アミノ−イソフタレートの遊離下でトリプシンで
処理することによって分解されたＭｅＯＨ溶出液の画分
を真空中で３０℃で＃に縮乾燥した。この予備精製され
た生成物を５ｏ係ＡａＯＨ５０−に浴解し、この浴液全
゛セファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５
’のカラムでグルｐ過することによって精製した。ツメ
チル５−アミノ−イソフタレートの遊離下でトリプシン
で処理することによって分解されたＡｃ０Ｈｆｉ出液の
主画分を真空中で４０℃で濃縮乾燥した。

この残滓を真空デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５上で
乾燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳＣ中で均一
な無定形化合物３ｒ１．９３．９（理論値の８２．６％
）”ｋ得た。元素分析及び実験式Ｃ３０”４９Ｎ７０７
”２からの計算によシ、次の値が得られた：　Ｃ−４６
，８４係（４６，２２係）、Ｈ−６，４２係（０，３１
１、Ｎ＝１２．１６係（１２，５８係）及びＢｒ　＝　
２０．２２％　（２０，５０係）。

アミノ酸分析によし正確な比率で所望のアミノ酸の存在
が確認された： Ｄ−Ｖａｌ　：　１．００−Ａｒｇ　：　０．９８−Ｃ
ＨＡ　：　１．０２゜Ｒｆ値：０．４２゜ 例　　ヰ 市販のＣｂｏ−Ａｒｇ−２−ＮＡ、ＨＣｌ２．４０　ｆ
！　（２０ミリモル）を例１ｂによシ氷酢酸中の２ＮＨ
Ｂｒ８０−の浴液と反応させた。普通の処理後に得られ
た生成物をＭｒＯＨ１５０−に溶解し、この溶液を６セ
フアデツクス（５ａｐｈａｄ＠ｘ　）　ＬＨ−２０’の
カラムで′ｎＩ製し九。２−ナフチルアミ／の遊離下で
トリプシンで処理することによって分解されたＭ＠ＯＨ
溶出液の画分全真空中で３０’Ｃでａ縮乾燥した。この
残滓を真空デシケータ−中で４０”ＣでＰ２Ｏ５上で乾
燥し、ＴＬＣによって示されるようにＳＳ　Ｃ中で均一
な無定形化合物４　ｂ　８．６０　＆　（ｑ論値の９３
．２％）ｆｆｉ得た。元素分析及び実験式〇１６１４２
３Ｎ５０Ｂｒ２からの計算により、次の値が得られた：
　Ｃ−４２，０８％（４１，６７％）、Ｈ−５，１２係
（５，０３％）、Ｎ−１４，６８妬（１５，１９％　）
及びＢｒ＝３３．９６％　（３４，６５％　）。

４ｃ、Ｃｂｏ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−２−ＮＡ、Ｉ（Ｂｒ化
合物＋ｂ４．６＃（１０ミリモル）ｆＣ例ＩＣによｐ　
Ｃｂｏ−ＣＨＡ−ＯｐＮＰ　４．６９１　（１１ミリモ
ル）と反応させた。普通の処理後に得らｔした粗製生成
物を５０係ＡＯＯＨ１５０−に芯解し、このｍ液？“セ
ファデックス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５”の
カラムでＮ製した。２−ナフチルアミノの遊離下でトリ
プシンで処理することによって分解されたＡａＯＨ溶出
液の画分を真空中で４０’Ｃで濃縮乾燥した。この残滓
を真空デシケータ−中で６０℃でＰ２Ｏ，上で乾燥し、
ＴＬＣによって示されるようにＳＳＣ中で均一な無定形
化合物＋　６５．３１１（理論値の７９．５係）を得た
。元素分析及び実験式ＣあＨ４３Ｎ６０４Ｂｒからの計
算によ）、次の値が得られた：　Ｃ−５９，１８幅（５
９，３７係）、Ｈ−６，５８係（６，４９％）、Ｎ−１
２，８７係（１２，５９係）及びＢｒ−１１，５５％（
１１，９’ｌ）。

４ｄ、２ＨＢｒ、Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−２−ＮＡ化合物
４ｃ４．６７、！ｉ’（７ミＪモル）を氷酢酸中の２Ｎ
ＨＢｒ２８ｍ′ｔ−用いて例１ｄによシ解封鎖した。普
通の処理後に得られた粗製生成物をＭｅＯＨｌｏｏ−に
溶解し、この溶液ｔ−“セファデックス（５ａｐｈａｄ
ｅｘ　）　ＬＨ−２０１のカラムで精製した。２−す７
チルアミノの遊離下でトリプシンで処理することによっ
て分解されたＭａＯＨ溶出液の画分を真空中で３０℃で
濃縮乾燥した。この残滓を真空デシケータ−中で４０°
ＣでＰ２Ｏ５上で乾燥し、ＴＬＣによって示されるよう
にＳＳＣ中で均一な無定形化合物４ａ３．９５！ｉ（理
論値の９１．８％）を得た。元素分析及び実験式Ｃ２５
Ｈ３８Ｎ６０□Ｂｒ２からの計算によシ、次の値が得ら
れた：　Ｃ−４９，２２％（４８，８７％）、Ｈ−６，
３０％（６，２３％）、　Ｎ−１３，６１％（１３，６
８％）及びＢｒ＝２５．８４％　（２６，０１％）。

４ｓ、Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−２−ＮＡ
、ＨＢｒ化合物＋ｄ３．０７＃（５ミリモル）を例１ｅ
によｌ）　Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｌ−ＯｐＮＰ　２．０５　
ｊ’　（５，５ミリモル）と反応させ次。普通の処理後
に得られ次粗裂生成物ｔ−５０％ＡｃＯＨ１００−に浴
解し、この浴液ヲ“セファデックス（５ａｐｈａｄ＠ｘ
　）　Ｇ　−１５’のカラムで精製した。２−ナフチル
アミノの遊離下でトリプシンで処理することによって分
解されたＡｃＯＨ溶出液の第１の主画分を真空中で４０
℃で濃縮乾燥し、真空デシケータ−中で６０℃でＰ２Ｏ
５上で乾燥した。こうして、ＴＬＣによって示されるよ
うにＳＳＣ中で均一な無定形化合物４ｅ３．１４１（理
論値の８　Ｌ９％）が得られた。元素分析及び実験式Ｃ
３ＢＨ５２Ｎ７０５　Ｂ　Ｆからの計算にょ９１次の値
が得られ念：Ｃ−５８，９２％（５９，５２係）、Ｈ−
６，９３係（６，８４係）　、Ｎ　−１３，０２％　（
１２，７９％）及びＢｒ−１０，１８％　（１０，４２
％　）。

４ｆ、　　２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−Ｖａｌ−ＣＨＡ、Ａｒｇ
−２−Ｎ人化合物４ｅ１．５３９（２ミ’Ｊモル）を氷
酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒ　８　ｍｌｋ用いて例１ｆによ
シ解封鎖した。普通の処理後に得られた粗製生成物をＭ
ｏｏｔ−１４０艷に溶解し、この酊ｉ全°゛セファデッ
クス（５ｅｐｈａｄａｘ　）　ＬＨ−２０’のカラムで
精製した。２−ナフチルアミノの形成下でトリプシンで
処理することによって分解されたＭｅＯＨ５出液の主画
分を真空中で３０℃で濃縮乾燥した。この生成物を５０
茄ＡａＯＨ５０−に浴解し、この溶液を”１セフアデツ
クス（５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５’のカラムで
￥＊製した。２−ナフチルアミノの形成下でトリプシン
で処理することによって分解された人ｃＯＨ浴出液の主
画分を真空中で４０　’Ｃで濃縮乾燥した。この残滓を
真空ｒジケーター中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥し、Ｔ
ＬＣによって示されるようにＳＳＣ中で均一な無定形化
合物４ｆ１．０５．９（理論値の７３．６％）を得た。

元素分析及び実験式０３　ｏＨ４，Ｎ７０３Ｂｒ　２か
らの計算によう次の値が得られた：　ｃ−５０，１６係
（５０，５０係）、）Ｉ−６，７１係（６，６４幅）　
、　Ｎ−１４，００係（１３，７牛係）及びＢｒ　＝２
２．０５’３６　（２２，４０％　）。

アミノ酸分析によシ正確な比率で所望のアミノ酸の存在
が確認された： Ｄ−Ｖａｌ　：　１．００−Ａｒｇ　：　０．９８−Ｃ
ＨＡ　：　０．９７゜Ｒｆ値：０．４２゜ 例　　５ 市販のＣｂｏ−Ａｒｇ−４−ＭｅＯ−２−ＮＡ、ＨＣｔ
ｌｏ、０　ｇ（２０ミリモル）を氷酢酸中の２ＮＨＢｒ
８０ｍｌ！に用いて例１ｂにより解封鎖した。普通の処
理後に得られ几粗製生成物’ｃ　ＭｅＯＨ１５０−に溶
解し、この溶液ヲ°′セファデックス（５ｅｐｈａｄｅ
ｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムでｆｉ＃製した。壬−メ
トキシ−２−ナフチルアミノの遊離下でトリプシンで処
理することによって分解されたＭｅＯＨ俗出液の主画分
を真空中で３０℃で濃縮乾燥した。この残滓を真空デシ
ケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥した後、ＴＬＣ
によって示てれるようにＳＳＣ中で均一な無定形化合物
５ｂａ、９８ｇ（理論値の９１．４係）が得られた。元
素分析及び実験式Ｃ４，Ｈ２５Ｎ５０□Ｂｒｚからの計
算によシ、次の値が得られた：Ｃ＝４１．２２％（４１
，５７％）、Ｈ−５，１９係（５，１３係）、Ｎ−１４
，４０％（１４，２６％）及びＢｒｍ３２．０１％（３
２，５３％）。

５ａ、　Ｃｂｏ−ＣＨＡ−Ａｒ　−４−ＭｅＯ−２−Ｎ
ａ、ＨＢｒ化合物５ｂ４．９１．９（１０ミリモル）を
例ＩＣにより　Ｃｂｏ−ＣＨＡ−ＯｐＮＰ　　４．６９
　ｇ（１１ミリモル）と反応はせ友。普通の処理後に得
られた粗製生成物ｔ−５０妬Ａｃ０Ｈ１５０−に溶解し
、この浴［１セフアデツクス（５ｅｐｈａｄ＠ｘ　）　
Ｇ　−１５’のカラムで精製した。↓−メトキシー２−
ナフチルアミノの遊離下でトリプシンで処理することに
よって分解され九ＡｃＯＨ１ｇ出液の第１の主画分を真
壁中で４０℃で濃縮乾燥し念。この残滓を真空デシケー
タ−中で６０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥した後、ＴＬＣによ
って示されるようにＳＳＣ中で均一な無定形化合物５ｃ
５．３６ｊ’（理論値の７６．８％）が得られ九。元素
分析及び実験式Ｃ３４Ｈ４５Ｎ６ｏ５Ｂｒからの計算に
よシ、次の値が得られ友：　Ｃ−５８，８５幅（５８，
５３係）、Ｈキロ、５９％（６，５０％）　、　Ｎ　−
１１，９１％　（１２，０５’？６　）　及びＢｒ　−
１１，３２％（１１，４５％　）。

５ｄ、２ＨＢｒ、Ｈ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−４−ＭｅＯ−２
−ＮＡ化合物５ｃ４．８８１１（７ミリモル）を氷酢酸
中の２ＮＨＢｒ２８ｄ１ｒ用いて例１ｄによシ解封鎖し
九。普通の処理後に得られた粗製生成物音Ｍ・０Ｈ１０
０ＩＲｔに浴解し、この溶液全″セファデックス（Ｓ＠
ｐｈａｄ＠ｘ　）　ＬＨ−２０”のカラムで精製した。

養−メトキシー２−ナフチルアミノの形成下でトリプシ
ンで逃場することによって分解されたＭｅＯＨ浴出液の
主画分を真空中で凸○℃で濃縮乾燥した。この残滓を真
空デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ，上で乾燥した後、
ＴＬＣによって示されるようにＳＳＣ中で均一な無定形
化合物５ｄ４．１２．Ｆ（理論値の９１．３係）が得ら
れた。元素分析及び実験式Ｃ２６Ｈ４ｏＮ６０３Ｂｒ２
からの計算によシ、次の値が得られた：　Ｃ−４８，９
２％（４８，４６係）、Ｈ−６，３６係（６，２６係）
、Ｎ−１２，８４％（１３，０４％）及びＢｒ　−２４
，３３％（２４，８０９６）。

５ｅ　、　Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｔ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−４−
ＭａＯ−２−ＮＡ、ＨＢｒ化合物５ａ３．２２Ｉｉ（５
ミリモル）金側１ｅによｌ）　Ｃｂｏ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｏ
ｐＮＰ　２．０５　ｇ　（５，５ミリモル）と反応はせ
る。普通の処理後に得られた粗製生成物を５０係Ａｃ０
Ｈ１２５ゴに俗解し、この浴液全６セフアデツクス（５
ａｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ　−１５’のカラムで精製した
。壬−メトキシ−２−ナフチルアミノの遊離下でトリプ
シンで処理することによって分解されたＡｃＯＨ浴出液
の第１の主画分を真空中で４０℃で濃縮乾燥した。この
残滓を真空デシケータ−中で６０°ＣでＰ２Ｏ５上で乾
燥した後、ＴＬＣＫよって示されるようにＳＳＣ中で均
一な無定形化合物５ｅ３．１５．９（理論値の７９．１
幅）が得られた。元素分析及び実験式 ｃ、Ｈ，Ｎ、０６Ｂｒからの計算により、次の値が得ら
れ九：　Ｃ−５８，３５係＜５８．７９係）、Ｈ−６，
７８％（６，８３％）、Ｎ　−１２，６８％　（１２，
３１％　）及びＢｒｍ９．８２％（ｌｏ、０３％　）。

５ｆ、２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−Ｖａｔ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−４
−ＭｓＯ−２−ＮＡ化合物５ｅ１．５９Ｎ（２ミ！Ｊモ
ル）を氷酢酸中の２　Ｎ　ＨＢｒ　８　ｍｌ’に、用い
て例１ｆにより解封鎖し友。普通の処理後に得られた粗
製生成物をＭｅＯＨ４０ｍｌに溶解し、この溶液を°′
セファデックス（５ａｐｈａｄａｘ　）　ＬＨ−２０’
のカラムで予備７消製した。各−メトキシー２−ナフチ
ルアミノの形成下でトリプシンで処理することによって
分解されたＭｅＯＨｆｉ出液の主画分を真空中で３０°
Ｃで濃縮した。この予備精製された生成物を５０％Ａａ
ＯＨ６０−に俗解し、この溶液全゛′セファｒツクス（
５ｅｐｈａｄｅｘ　）　Ｇ−１５”のカラムで精製した
。養−メトキシ−２−ナフチルアミノの形成下でトリプ
シンで処理することによって分解されたＡｃＯＨ浴出液
の主画分′ｔ−真空中で４０゛Ｃで濃縮乾燥した。この
残滓全真空デシケータ−中で４０℃でＰ２Ｏ５上で乾燥
した後、ＴＬＣによって示されるようにＳＳＣ中で均一
な無定形化合物５ｆ１．０９．Ｆ（理論値の７３．３係
）が得られ九。元素分析及び実験式Ｃ３１Ｈ４９Ｎ７０
４Ｂｒ２からの計算によシ、次の値が得られ７ｔ：　Ｃ
−４９，６３係（，５０，０７妬）、Ｈ−６，Ｔｏ係（
６，６４係）　、Ｎ　−１３，４２％（１３，１９Ｕ及
びＢｒ　−２１，２２％　（２１，４９’；ｂ　）。

アミノ酸分析によ）正確な比率で所望のアミノ酸の存在
が確認された： Ｄ−Ｖａｔ　：　１．ｏｏ−Ａｒｇ　：　１．０ｌ−Ｄ
−ＣＨＡ　：　０．９８゜Ｒｆ値二〇、４＼。

一連の他のトリペプチド誘導体を前記実施例に記載の方
法によシ製造した。こＪしらのトリペプチド誘導体は１
次の第１表に纒められている。

第１表に示したトリペプチド誘導体の製造に使用された
ノ悶ノテド中間体及びトリペプチド誘導体は、第２表及
び第３表に記載されている。

−−−−一′　、い・、、、　、ｕ＋ ψ〕− 例２４ ２ＡｃＯＨ，Ｈ−Ｄ−Ｎｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮ
Ａ２ＨＢｒ、Ｈ−Ｄ−Ｎｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮ
Ａ　（例３８によシ裂造）７．０９．！ｉ’（１０ｊリ
モル）を６０　％　Ｍ＠ＯＨ水溶液７５−に溶解し念。

この溶液を酢酸塩の形で１アンバーライト（Ａｍｂｅｒ
ｌｉｔ・）”（登碌商榎）　Ｊｖ、　−４０１のカラム
に充填した。このカラムを６０％ＭｅＯＨ水溶液で溶離
し、その後にＨＢｒをイオン交換することによってＡｃ
ＯＨに代え念。この溶出液を真空中で４０’Ｃで濃縮乾
燥し九〇この残滓を真空デシケータ−中で４０℃でＰ２
Ｏ５上で乾燥し念後、臭化物不含の２ＡｃＯＨ，Ｈ−Ｄ
−Ｎｖａｌ−ＣＨＡ−Ａｒｇ−ｐＮＡ　６．３３１　（
理論値の９８．５％）が得られ九。

上記方法によれば、有機酸、例えば蟻酸、プロピオン酸
、蓚酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、安息香酸、クロル安
息香酸、サリチル酸又はフタル酸との他の塩は、前記の
トリペプチド肪導体から製造することができる。イオン
交換体、例えば塩酸塩の形の”アンバーライ）　（Ａｍ
ｂｅｒｌｉｔｅ）’ＪＲＡ　−４０１を使用することが
でき、これは苛性ソーダ液で処理することによって該イ
オン交換体を塩基性ＯＨ形に変換し、次に該塩基性イオ
ン交換体を６０％ＭｅＯＨ水溶液中の所望の有機酸とそ
のナトリウム塩との１；１混合物の溶液で処理すること
によって所望の酸塩の形に変換することができる。

本発明によるトリペプチド基質を用いての酵素の定量分
析は、次のようにして実施することができる： １、尿カリクレーン分析 尿１ｄならびにｐＨ７，９及びイオン強度１．０を有す
るＴＲｌ５−イミダゾール緩衝液ｌ　ａｔを３７℃で５
分間恒温保持し、次に沈殿物を除去するため釦遠心分離
する。

３７℃に加熱した蒸留水１．４ｄと遠心分離物０．４ｄ
をプラスチック製キュベツト中で充分に混合する。この
混合物に２　Ｘ　１０−’モルの基質水溶液０．２　ｍ
ｌを添加し、成分を迅速に混合する。

この混合物を３７℃で正確に１５分間恒温保持する０次
に、この反応混合物を酵素反応を停止させるために氷酢
酸０．２　ｍと混合する。色を計測する念めには、同じ
成分からなるが、酵素反応ｔ−ｔＳｒｉ止するための基
質添加前に添加され九氷酢酸を有する空試料を使用する
。次Ｋ、形成さｎた有色化合物Ｒ−ＮＨ２の量を空試料
と試験試料との差から＋Ｏ５ｎｍで測光法又は分光測光
法により測定する。得られる値から尿における尿カリク
レーン活量を次式によシ測定する：Δ０Ｄ＝１５分間の
各Ｏ５ｎｍでの光学濃度の増加分Ｖ＝試験混合物の全容
量＝２．２ｍ １０００＝ＵをｍＵに変換するための変換係数Ｆ＝尿（
２）の稀釈係数 Ｖ＝試料の容ｔ＝０．４１ｎ１ ｇ＝ｌ○００で割つ念吸光係数＝　１０．４尿における
尿カリクレーン含量の計算は、形成される生成物Ｒ−Ｎ
Ｈ２（例えば、ｐ−ニドロア＝　ＩＪン）を連続的に測
定することによって実施することもできる。この方法を
喀痰中の腺カリクレーンの分析に適用するように後記す
る。

尿カリクレーン以外に、尿も本発明による基質を少量で
はあるが分解することもできる蛋白分解酵素としてのウ
ロキナーゼを含有する。前記分析方法においては、尿カ
リクレーンとウロキナーゼとの活量の合計が測定される
。尿カリクレーン活量の正確な値を得るためには、ウロ
キナーゼ活量は差し引かなければならない。このウロキ
ナーゼ活量は、比較試験において尿カリクレーン活量を
完全に抑制するために緩衝液１ゴ当ｂトリグシン抑制因
子（牛の肺からのトリプシン抑制因子）０．０７５単位
を添加し、かつ単独にウロキナーゼ活量を測定すること
によって１１定することができる。

２、４痰における腺カリクレーン分析：喀痰０．５づを
ＴＲＩ　８−イミダゾール緩衝液（イオン強度１．０）
２ｄと混合し、この混合物を３７℃で５分間予め恒温保
持する。この恒温保持物を遠心分離する。試験キュベツ
トに３７ＣＬ７）蒸留水１．５ゴを充填し、これに遠心
分離物０．２５１１１を添加する。これらの成分を充分
に混合する。更に、２×１０　モルの基質水溶液０、２
　ｔｔｔｌを添加する。次に、４０５　ｎｍでの吸光変
化全記録装置を用いて５〜１００間連続的に追跡する。

毎分のΔＯＤの測定値から４痰１　ｍｌｌクシカリクレ
ーン活量は、ｍＵで次式によシ計算される： ｖＸε Ｆ＝５ Ｖ＝１．９５ マ＝０．２５ ＩＵ（単位）＝　ｐＨ，イオン強度、温度及び基質濃度
の最適条件下又は他に規定され る条件下に１分間で基質１マイク ロモルを分解することのできる酵 素置。

膵液において膵臓カリクレーンは、主はプレカリクレー
ンの形で存在し、活性化後でのみ、例えばトリプシンを
用ｒて分析することができる。７Ｄレカリクレーンの活
性後、トリｆ７ンは、大豆トリグシン抑制因子（，５Ｂ
ＴＩ　）によ〕抑制されて論る。この活性化混合物中の
カリクレーン含量は、前記方法の１′）ＶＣよって測定
することができる。

３、　プラズミン分析： ＴＲＺＳ−イミダゾールＲ衝液（−７，６、イオン強度
０．２）１．７１１／を２５％グリセＣＪ　−に中のグ
ラズミン溶ＨＯ，ｌ　ａｕと３７℃で混合し、この混合
物を３７℃で１分間恒温保持する。この混合物１ｃ３７
℃の２　Ｘ　１０−’モルの基質水溶液０．２Ｍを添加
し、成分を迅速に混合する。次に、単位時間自りの基質
から分離される分解生成物Ｒ−ＮＨ２の量を連続的に測
定する。試料１ゴ当シのプラズミン活量は、毎分測定さ
れる値からｍＵで次式によシ計算される： ｖ　Ｘ　＃ ΔＥ＝毎分分離される分解生成物の量 ■＝試験混合物の全容量 マ＝試料の容量 ｇ＝１０００で割った吸光係数 ４、　ヒトの血漿における抗グラズミン分析二１：２０
の比率でＴＲｌ５−イきダゾール緩衝液で稀釈された血
漿０．１　ＦＩｔｌを、２５％グリセロール１１Ｌｌ当
りのヒトグラズミン（ＡＢＫａｂｌ（Ｓｔｏａｋｈｏｌ
ｍ　、　Ｓｗ＠ｄｅｎ）社ｆｆ）１．２５ｃｔｒ及びヒ
ルジン（Ｐｅｎｔｉｐｈａｒｍ　ｉＧ、　（Ｂａｇｌｅ
　。

５ｖｒｌｔｚｅｒｌ＆ｎｄ　）社製）　５０　ＡＴＵの
溶液０．０２　＋ｎｌと混合する。この混合物を３７℃
で９０秒間恒温保持する。この恒温保持物に３７℃のＴ
Ｒｌ５−イミダゾール緩衝液（…７．５、イオン強度０
．２）１．７ｍｌを混合し、さらに２　Ｘ　１０−５モ
ルの基質水溶液０．２　ｄ　′！！−混合する。次Ｋ、
単位時間当りの基質から分離される分解生成物Ｒ−ＮＨ
２の揄を連続的に測定する。残留グラズミン活量は、測
定値から前記方法によジ計算される。

空試験では、血漿は緩衝液の相当量に代えるが、それ以
外はこの試験は前記方法によシ実施される。測定される
グラズミン活量は、開始グラズミン量に相当する。抗グ
ラズミン活量は、空試験で測定されるゾラズミン活量と
、血漿を用いる試験で測定される残留プラズミン活量と
の差から次式により計算される： ｖＸ＆ 血漿のｍＩＵｚ包量 Ｆ；血漿（２０）の稀釈係数。

本発明による基質は、血漿中に存在するグラ、ｃ’　ミ
／　シｘンを緩衝系中のウロキナーゼ又ハストレプトキ
ナーゼを用いて変換しかつ形成されるプラズミンの憧を
前記ノラズミン分析法により本発明による基質の１つを
用いて測定することによってヒトの血漿中のグラズミノ
ノエンを分析するのに使用することもできる。血漿ψに
元来存在するグラズミノジエンの童は、活性下でグラズ
ミン１分子がデラズミノジエン１分子から形成されるの
でゾラズミンに対する測定値から誘導される。

次に第４表には、器官又は腺カリクレーン、グラズミン
及びトロンビンに対する本発明による若干の基質の感受
性が示されている。

／″ 基質の酵素加水分解によって形成される分解生成物Ｒ−
ＮＨ２の測定は、この分解生成物が基質の紫外スペクト
ルとは異々る紫外ス（クトルを有しかつよシ高い波長に
向って移動するという前提条件に基づく。＋Ｏ５ｎｍに
おける基質の吸収は、実際に皆無である。分解生成物と
してのｐ−ニトロアニリンは、３８０ｎｍでの吸収最高
及びモル吸光係数１３．２００を示す。しかし、該吸光
係数は４０５ｎｍで僅かに低下する、すなわち９６５０
になる。分離されるｐ−＝）ロアニリン臓に比例する基
質の酵素加水分解による葉は、４０５ｎｍで分光測光法
によシ測定することによって測定することができる。過
剰の基質の存在下であっても４０５ｎｍにおける測定に
は支障がない。

分解生成物Ｒ−ＮＨ２の着は、２−ナフチルアミノ基、
キーメトキシ−２−ナフチルアミノ基。

Φ−メチルークマリルー（７）−アミノ基又は１．３−
　シ（メトキシカル？ニル）−フェニル−（５）−アミ
ノ基を含有する基質を用いて螢光公党側光法によシ測定
される。酵素、緩衝液及び基質からなる試験系において
、低エネルギー量の幅射線は、形成された螢光性分解生
成物が高エネルギー量の光線によって励起され次後、４
００”４７０ｎｍで連続的に測定さｎる。単位時間当Ｊ
Ｋ影形成れる分解生成物の量は、存在する酵素活量に対
して測定される。前記のように、毎分の分解生成物１ミ
クロンモルは、所定の基質に基づく１酵素単位に相当す
る。

、−゛二

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 I ： Ｈ−Ｄ−Ｘ−Ｙ−Ａｒｇ−Ｒ　 I 〔式中、 Ｘはシクロヘキシルグリシル基、シクロヘキシルアラニ
   ル基又はシクロヘキシルチロシル基を表わし、 Ｙはロイシル基、ノルロイシル基、バリル基、ノルバリ
   ル基、α−アミノブチリル基、アラニル基、プロリル基
   又はピペコリノイル基を表わし、 Ｒはｐ−ニトロフェニルアミノ、２−ナフチルアミノ、
   ４−メトキシ−２−ナフチルアミノ、４−メチル−クマ
   リル−７−アミノまたは１，３−ジ（メトキシカルボニ
   ル）−フェニル−５−アミノ基を表わす〕で示されるト
   リペプチド誘導体及びその酸との塩。 ２、鉱酸、例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、Ｈ＿２ＳＯ＿４又は
   Ｈ＿３ＰＯ＿４、又は有機酸、例えば蟻酸、酢酸、プロ
   ピオン酸、トリメチル酢酸、メトキシ酢酸、トリクロル
   −又はトリフルオル酢酸のようなハロゲン化酢酸、アミ
   ノ酢酸、乳酸、蓚酸、マロン酸、クエン酸、安息香酸、
   核中で置換された芳香族酸、例えばトルイル酸、クロル
   −又はブロム安息香酸、メトキシ安息香酸及びアミノ安
   息香酸、又はフタル酸でプロトン化されている、特許請
   求の範囲第１項に記載のトリペプチド誘導体。 ３、アルギニンの媒体中に蛋白分解酵素を含有するか又
   はその媒体中で該蛋白分解酵素を形成又は消費するアル
   ギニンのカルボキシル側鎖上の天然のペプチド鎖を分解
   する蛋白分解酵素、殊に酵素部類Ｅ．Ｃ．３．４．２１
   ．の酵素を定量分析する方法において、該媒体を、一般
   式 I ： Ｈ−Ｄ−Ｘ−Ｙ−Ａｒｇ−Ｒ　 I 〔式中、 Ｘはシクロヘキシルグリシル基、シクロヘキシルアラニ
   ル基又はシクロヘキシルチロシル基を表わし、 Ｙはロイシル基、ノルロイシル基、バリル基、ノルバリ
   ル基、α−アミノブチリル基、アラニル基、プロリル基
   又はピペコリノイル基を表わし、 Ｒはｐ−ニトロフェニルアミノ、２−ナフチルアミノ、
   ４−メトキシ−２−ナフチルアミノ、４−メチル−クマ
   リル−７−アミノまたは１，３−ジ（メトキシカルボニ
   ル）−フェニル−５−アミノ基を表わす〕で示されるト
   リペプチド誘導体と反応させ、トリペプチド誘導体上の
   酵素の加水分解作用によつて形成された有色又は螢光性
   分解生成物Ｒ−ＮＨ＿２の量を、測光法、分光測光法、
   螢光分光測光法又は電気化学的方法により測定すること
   を特徴とする、蛋白分解酵素を定量分析する方法。 ４、ヒトの体液、例えば尿、膵液、腸粘液、乳腺分泌物
   、汗腺分泌物、喀痰又は血液中の器官又は腺カリクレー
   ンを分析する、特許請求の範囲第３項記載の方法。 ５、血液又は血漿中のプラズミンを分析する、特許請求
   の範囲第３項前載の方法。 ６、血液又は血漿中のトロンビンを分析する、特許請求
   の範囲第３項記載の方法。