JPH0360837B2 - - Google Patents

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JPH0360837B2
JPH0360837B2 JP11109884A JP11109884A JPH0360837B2 JP H0360837 B2 JPH0360837 B2 JP H0360837B2 JP 11109884 A JP11109884 A JP 11109884A JP 11109884 A JP11109884 A JP 11109884A JP H0360837 B2 JPH0360837 B2 JP H0360837B2
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cbo
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gly
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Gundoro Suensen Rarusu
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    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/44—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving esterase

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Description

【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野 人間の血液中にはC1−エステラーゼプロ酵素
という名前で知られている作用物質が含まれ、こ
れは抗体と抗原との結合作用下に活性酵素C1−
エステラーゼに活性化される。この酵素は補体系
でカスケード状に他のプロ酵素を活性酵素に活性
化する。これらの活性化された酵素は細菌又は死
滅した赤血球の細胞膜を溶解し、それ故免疫学的
な防御の際に重要な役割を果たす。血しようは
C1−エステラーゼを抑制しかつC1−エステラー
ゼインヒビターと呼ばれる重要なインヒビターも
含有する。炎症の場合、C1−エステラーゼが活
性化され、その際に血液のエステラーゼインヒビ
ター濃度に応じて補体系は迅速に又は緩慢に活性
化される。臨床の立場からは、そのような場合に
血液中のC1−エステラーゼ濃度もC1−エステラ
ーゼインヒター濃度も測定することが望ましい。 従来の技術 現在この測定は煩雑で殆んど正確ではない免疫
学的及び滴定による方法で実施される〔W.J.
Canady及びその他共著、“Immunochemistry”、
13巻、229〜233頁（1976年）：D.Ogston及びその
他共著、“Thrombosis Research”、９巻、217〜
222頁（1976年）参照〕。 発明が解決しようとする問題点 本発明の課題はC1−エステラーゼの測定をよ
り迅速にかつ正確に実施することである。 問題点を解決するための手段 ところで、本発明の目的である一定の簡単なペ
プチド誘導体を基質として使用する場合に、前記
の課題が解決されることが判明した。 本発明は、式： 〔式中 R1は酵素加水分解により着色又は螢光化合物
の形成下に脱離可能であり、芳香族基又はヘテロ
環式基で置換されている色素形成アミノ基を表わ
し、 R2は水素を表わすか又は ａ 炭素原子２〜６個を有する直鎖状又は分枝鎖
状のアルカノイル基、 ｂ シクロヘキシルカルボニル基、 ｃ アルカノイル中に炭素原子２〜４個を有する
ω−カルボキシル−、ω−メトキシカルボニル
−又はω−エトキシカルボニル−アルカノイル
基、 ｄ アルコキシ中に炭素原子１〜４個を有する直
鎖状又は分枝鎖状のアルコキシカルボニル基、 ｅ アルキル中に炭素原子１又は２個を有するア
ルキルスルホニル基もしくはフエニル−又はｐ
−トルイル−スルホニル基、 ｆ 置換されていないか又は置換されているベン
ゾイル基、又は ｇ 核が置換されていないか又は置換されている
ベンジルオキシカルボニル基を表わし、 R3は核が置換されていないか又は置換されて
いるベンジル基を表わし、 Ｘはグリシル基又はアラニル基を表わし、 Ｙは単結合であるか又は式：
【式】（式中R4はベン ジル基、フエニル基、シクロヘキシル基、シクロ
ヘキシルメチル基、４−ヒドロキシベンジル基、
４−ヒドロキシシクロヘキシルメチル基を表わし
かつｍは数値ゼロでありかつＹにより定義される
アミノ酸はＬ−又はＤ−配置を有するかあるいは
R4は水素を表わしかつｍは数値０，１又は２を
表わす）の基を表わす〕のペプチド誘導体もしく
は鉱酸又は有機酸とのその塩に関するが、ただし
C2H5CO−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNAを除
く。 例えばR1はｐ−ニトロフエニルアミノ基、１
−又は２−ナフチルアミノ基、４−メトキシ−２
−ナフチルアミノ基、４−メチル−７−クマリル
アミノ基又は１，３−ジ（メトキシカルボニル）
−５−フエニルアミノ基であつてよい。 例えばR3はベンジル基、４−メチルベンジル
基、４−メトキシベンジル基、もしくは２−、３
−又は４−クロルベンジル基であつてよい。 R2が炭素原子２〜６個を有するアルカノイル
基又は炭素原子数１〜４個を有するアルコキシカ
ルボニル基を表わしかつＹが単結合を表わし、 R3がベンジル基を表わしかつR1及びＸが前記
のものを表わすペプチド誘導体がC1−エステラ
ーゼに対して特に高い敏感さを有する。 前記の一般式のペプチド誘導体の例として次の
化合物が挙げられる： BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.
AcOH，2AcOH.H−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg
−pNA，Ac−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−
pNA.AcOH，CH3OCO−Lys（ε−Cbo）−Gly−
Arg−pNA.AcOH，C2H5OCO−Lys（ε−Cbo）
−Gly−Arg−pNA.AcOH，iso−ButOCO−Lys
（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH，
CH3CH2CO−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.
AcOH，CH3（CH2）2CO−Lys（ε−Cbo）−Gly−
Arg−pNA.AcOH，CH3CH2OCO−CH2−CO−
Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH，BOC
−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−pNA.AcOH，Ｈ
−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−
pNA.2CF3COOH，Ac−Lys（ε−Cbo）−Ala−
Arg−pNA.AcOH，CH3OCO−Lys（ε−Cbo）−
Ala−Arg−pNA.AcOH，BOC−Gly−Lys（ε
−Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH，2CF3COOH.
H−Gly−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA，
CH3O−CO−GlyLys（ε−Cbo）−Gly−Arg−
pNA.AcOH，CH3−CH2−CO−Gly（ε−Cbo）
−Gly−Arg−pNA.AcOH。 本発明によるペプチド誘導体はペプチド合成で
常用の方法で、例えば次に記載の方法により製造
することができる： １ 色素形成基R1をＣ−末端アルギニンのカル
ボキシ基に結合させ、その際にアルギニンのα
−アミノ基は保護基、例えばカルボベンゾキシ
基又はｔ−ブトキシカルボニル基により及びア
ルギニンのδ−グアニジル基は例えばHClによ
るプロトン化、ニトロ化又はトシル化により保
護する。Ｃ−末端基R1も段階的なペプチド鎖
の形成の際に保護基として有用である。他の保
護基は、所望のペプチド鎖が完全に構成される
まで他のアミノ酸誘導体を結合させるために必
要に応じて選択的に脱離することができる。最
後に、R1に作用を及ぼさずに、残留している
保護基を完全に脱離することができる〔例えば
Miklos及びその他共著、“Peptide
Synthesis”、163〜165頁（1966年）、
Interscience Publishers出版参照〕。 ２ 初めにペプチド鎖（Bodanskyによる前記文
献）を構成するが、その際アルギニンのＣ−末
端カルボキシル基を常用のエステル基、例えば
メトキシ基、エトキシ基又はベンジルオキシ基
で保護する。エステル基はアルカリ性加水分解
により脱離することができ、但しｔ−ブトキシ
基は選択的にトリフルオロ酢酸を用いて脱離し
なければならない。アルギニンのδ−グアニジ
ル基がプロトン化されている場合には、前記の
エステル基はトリプシンにより脱離し、その際
ラセミ化は起らない。これに次いで、色素形成
基R1を結合させる。アルギニンのδ−グアニ
ジノ基がニトロ基又はトシル基により及びペプ
チド誘導体のＮ−末端α−アミノ基がカルボベ
ンゾキシ基、ｐ−メチル−、ｐ−メトキシ−又
はｐ−クロルベンジルオキシカルボニル基もし
くはｔ−ブトキシ基により保護されている場合
これらの保護基も同時に脱離する。脱離は保護
されたペプチド誘導体を室温で無水HFで処理
することにより実施することができ、その際に
前記のすべてのアミノ−もしくはδ−グアニジ
ノ保護基は脱離する。脱離は、保護されたペプ
チド誘導体がニトロ−又はトシル保護基を含ま
ない場合には、氷酢酸中の2N−HBrを用いて
室温で処理しても実施することができる。 実施例 次の実施例で本発明によるペプチド誘導体の製
造を詳説する。温度はセツ氏である。 実施例で得られた溶出液及び生成物の分析は二
酸化珪素ゲルで塗布したガラス板（Merck社、
F254）を使つて薄層クロマトグラフイにより行
なつた。薄層クロマトグラムは次の溶剤系で展開
させた：ｎ−ブタノール／酢酸／水（３：１：
１）。 次の略語を使つた： Ac＝アセチル AC2O＝アセトアンヒドリド AcOH＝酢酸 Ala＝Ｌ−アラニン β−Ala＝β−アラニン Arg＝Ｌ−アルギニン BOC＝ｔ−ブトキシカルボニル γ−But＝４−アミノ酪酸 BZ＝ベンゾイル BZ2O＝無水安息香酸 CHA＝Ｌ−３−シクロヘキシルアラニン CHG＝Ｌ−２−シクロヘキシルグリシン Ｄ−CHG＝Ｄ−２−シクロヘキシルグリシン CHT＝Ｌ−３−（４−トビロキシシクロヘキシ
ル）アラニン＝核水素化チロシン Cbo＝カルボベンゾキシ DMF＝ジメチルホルムアミド DPA＝５−アミド−イソフタル酸−ジメチルエ
ステル DSC＝薄層クロマトグラムもしくは−グラフイ Et＝エチル EtO＝エトキシ Et3N＝トリエチルアミン Gly＝グリシン HMPTA＝Ｎ，Ｎ，N′，N′，N″，N″−ヘキシ
ルメチルリン酸トリアミド iso−BuO＝イソブトキシ LMS＝溶剤系 Lys＝Ｌ−リジン MCA＝７−アミド−４−メチルクマリン MeO＝メトキシ MeOH＝メタノール NA＝ナフチルアミド OpNP＝ｐ−ニトロフエノキシ pNA＝ｐ−ニトロアニリド Ph′Gly＝Ｌ−２−フエニルグリシン Phe＝Ｌ−フエニルアラニン Ｄ−Phe＝Ｄ−フエニルアラニン Suc＝スクシニル THF＝テトラヒドロフラン Tos＝ｐ−トルエンスルホニル 特に記載のない限りアミノ酸はＬ形である。 例 １ BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH 1a Cbo−Arg−pNA.HCl 内容積250mlの三首丸底フラスコ中で、P2O5上
で真空乾燥させた、無水HMPTA90ml中のCbo−
Arg−OH.HCl16.0ｇ（47.0ミリモル）を湿気の
遮断下に20゜で溶解した。室温で得られた溶液に
初めにHMPTA10ml中のEt3N4.74ｇ（47.0ミリ
モル）の溶液を、次にｐ−ニトロフエニルイソシ
アネート（100％の過剰）16.4ｇ（100ミリモル）
を少量ずつ添加した。20℃で24時間の反応後に
HMPTAを真空中で殆んど留去させた。残渣を
数回30％−AcOHで抽出した。残渣を廃棄した。
合したAcOH抽出物を更に精製するために30％−
AcOHで平衡化した“セフアデツクス”−Ｇ−15
−カラム上に施しかつ30％−AcOHで溶離した。
トリプシン処理によりｐ−ニトロアニリンの遊離
下に脱離し得るAcOH溶出液の画分を凍結乾燥さ
せた。無定形粉末12.6ｇが得られ、これはDSCに
おいてLMS中で均一であつた。元素分析及び実
験式C20H25N6O5Clからの計算により次の数値が
得られた：Ｃ＝51.29％（51.67％）、Ｈ＝5.48％
（5.42％）、Ｎ＝17.92％（18.08％）、Cl＝7.50％
（7.63％）。カツコ内の数値は計算値である。 1b 2HBr.H−Arg−pNA 湿分の遮断下に化合物1a4.65ｇ（10ミリモル）
を氷酢酸中の2N−HBr40mlで20゜45分間撹拌下に
処理した。その際に、アミノ酸誘導体はCO2発生
下に溶解した。反応溶液を激しい撹拌下に無水エ
ーテル250mlに滴加した。その際に2HBr.H−
Arg−pNAが沈殿した。エーテル相を吸引濾別
し、次に固相を１回当り100mlの無水エーテルで
４回洗浄して、副生成物として形成した臭化ベン
ジル並びに過剰分のHBr及びAcOHを除去した。
残渣をMeOH50ml中に溶かし、Et3NでPH4.5に調
節しかつ真空中30℃で濃縮乾固した。そのように
して得られた生成物をMeOH75ml中に溶かしか
つMeOHで平衡化した“セフアデツクス”LH−
20（架橋デキストランゲル）カラム中を流動させ
た。溶出液の１つの画分から、DSCにおいて
LMS中で均一であつた無定形化合物1b4.18ｇ
（理論量の91.6％）が得られた。元素分析及び実
験式：C12H20N6O3Br2からの計算から次の数値
が得られた：Ｃ＝31.15％（31.60％）、Ｈ＝4.35％
（4.42％）、Ｎ＝18.84％（18.43％）、Br＝34.81％
（35.03％） 1c Cbo−Gly−Arg−pNA.HBr 化合物1b4.5ｇ（10ミリモル）を新しく蒸留し
たDMF30ml中に溶解しかつ−10゜に冷却後撹拌下
にEt3N1.40ml（10ミリモル）を加えた。形成し
たEt3N.HBrを濾取しかつ少量の冷いDMFで洗
つた。濾液に撹拌下に−10でCbo−Gly−
OpNP3.65ｇ（11ミリモル）を添加しかつこの混
合物を水分の遮断下に２〜３時間反応させた。そ
の際反応溶液の温度は徐々に約20に上昇した。こ
の溶液を再び−10に冷却しかつEt3N0.70ml（５
ミリモル）で緩衝させた。反応溶液を−10゜で約
２時間及び室温で３時間反応させた。この処理を
もう一度Et3N0.70mlで繰返し、更に16時間後に
反応溶液を真空中50゜で濃縮乾固させた。残渣を
50％−酢酸75ml中に溶かしかつ50％−AcOHで平
衡化した“セフアデツクス”Ｇ−15のカラム上で
ゲル濾過により精製した。トリプシン処理により
ｐ−ニトロアニリンの遊離下に分離するAcOH溶
出液の画分を真空中40゜で濃縮乾固した。残渣を
MeOH150ml中に溶かしかつ再び濃縮乾固した。
得られた残渣を真空乾燥箱中でP2O5上で60゜で乾
燥後、DSCにおいてLMS中で均一であつた無定
形化合物1c5.85ｇ（理論量の88.3％）が得られ
た。元素分析及び実験式：C22H28N7O6Brからの
計算により次の数値が得られた：Ｃ＝46.33％
（46.65％）、Ｈ＝5.04％（4.98％）、Ｎ＝17.88％
（17.31％）及びBr＝14.20％（14.11％） 1d 2HBr.H−Gly−Arg−pNA 化合物1c4.56ｇ（８ミリモル）を水分遮断下に
2N−HBr32mlと氷酢酸32ml中で撹拌下に40分間
20゜で処理した。その際に、このペプチド誘導体
は徐々にCO2発生下に溶けた。反応溶液を激しい
撹拌下に無水エーテル250mlに滴加すると、
2HBr.H−Gly−Arg−pNAが沈殿した。エーテ
ル相を吸引濾別し、次いで固相を無水エーテル１
回当り100mlで４回洗浄して、副生成物として形
成した臭化ベンジル並びに過剰分のHBr及び
AcOHを殆んど除去した。残渣をMeOH50ml中
に溶解した。Et3NでPH4.5に調節後、溶液を真空
中30゜で濃縮乾固した。このようにして得られた
残渣をMeOH50ml中に溶解しかつMeOHで平衡
化した“セフアデツクス”LH−20のカラム上で
精製した。トリプシン処理によりｐ−ニトロアニ
リンの遊離下に分離するMeOH溶出液の画分を
真空中30゜で濃縮乾固した。得られた残渣を真空
乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後、DSCにおいてLMS
中均一である無定形化合物1d3.78ｇ（理論量の
92.1％）が得られた。元素分析及び実験式：
C14H23N7O4Br2からの計算により次の数値が得
られた：Ｃ＝32.31％（32.77％）、Ｈ＝4.59％
（4.52％）、Ｎ＝19.47％（19.11％）及びBr＝30.78
％（31.14％）。 1e BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.
HBr 化合物1d2.57ｇ（５ミリモル）を新しく蒸留し
たDMF20ml中に溶解しかつ−10゜に冷却後撹拌下
にEt3N0.70ml（５ミリモル）を加えた。形成し
たEt3N.HBrを濾取しかつ冷い少量DMFで後洗
浄した。濾液に−10゜で撹拌下にBOC−Lys（ε−
Cbo）−OpNP2.76ｇ（5.5ミリモル）を添加した。
反応混合物を水分遮断下に２〜３時間反応させ、
次いで反応溶液の温度が徐々に約20゜に上昇した。
この溶液を再び−10゜に冷却しかつEt3N0.35ml
（2.5ミリモル）で緩衝させた。反応溶液を−20゜
で２時間及び室温で３時間反応させた。この処理
を再度Et3N0.35mlで繰返し、更に16時間後に反
応溶液を真空中50℃で濃縮乾固した。残渣を50％
−AcOH50ml中に溶かしかつ50％−AcOHで平衡
化した“セフアデツクス”Ｇ−15のカラム上でゲ
ル濾過により精製した。トリプシン処理によりｐ
−ニトロアニリンの遊離下に分離するAcOH溶出
液の画分を真空中40゜で濃縮乾固した。残渣を
MeOH100ml中に溶かし、次いでこの溶液を再度
濃縮乾固した。得られた残渣を真空乾燥箱中
P2O5上60゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で均一
である無定形化合物1e3.57ｇ（理論量の89.8％）
が得られた。元素分析及び実験式：
C33H48N9O9Brからの計算により次の数値が得ら
れた：Ｃ＝49.38％（49.87％）、Ｈ＝6.00％（6.09
％）、Ｎ＝16.03％（15.86％）及びBr＝9.85％
（10.05％）。 アミノ酸分析により所期のアミノ酸が正しい比
で得られた： Gly1.00：Lys0.99：Arg0.97 1f BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.
AcOH 1eにより製造したBOC−Lys（ε−Cbo）−Gly
−Arg−pNA.HBr7.95ｇ（10ミリモル）を60％
−水性MeOH75ml中に溶解した。この溶液をア
セテート型の“アンバーライト”JRA−401のカ
ラム上に加えた。カラムを60％−水性MeOHを
用いて溶離すると、イオン交換によりHBrが
AcOHに代えられた。溶出液を真空中40゜で濃縮
乾固した。真空乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後に、
臭化物を含まないBOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−
Arg−pNA.AcOH7.58ｇ（理論量の97.9％）が得
られた。 この方法により、前記のトリペプチド誘導体か
ら有機酸、例えばギ酸、プロピオン酸、シユウ
酸、酒石酸、クエン酸、乳酸、安息香酸、クロロ
安息香酸、サリチル酸又はフタル酸で他の塩を製
造することができる。イオン交換体として例えば
ヒドロクロリド型の“アンバーライト”JRA−
401を使用し、かつ前記のイオン交換体をカセイ
ソーダで処理して塩基性OH型に変換し、その後
で60％−水性MeOH中の所望の有機酸とそのナ
トリウム塩との１：１混合物の溶液で処理するこ
とにより所望の酸塩形に変換することができる。 例 ２ BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−MCA.AcOH 2b 2HBr.H−Arg−MCA 市販のCbo−Arg−MCA.HCl13.0ｇ（25.9ミリ
モル）を例1bにより氷酢酸中の2N−HBr溶液
104ml（208ミリモル）で脱ブロツクした。乾燥残
渣をMeOH400ml中に溶解しかつ“セフアデツク
ス”LH−20のカラム上で精製した。トリプシン
処理により４−メチル−７−アミノ−クマリンの
遊離下に分離したMeOH溶出液の画分を真空中
30゜で濃縮乾固した。得られた残渣を真空乾燥箱
中P2O5上40で乾燥後、DSCにおいてLMS中で均
一な無定形化合物2bが得られた。元素分析及び
実験式：C16H23N5O3Br2からの計算から次の数
値が得られた：Ｃ＝39.40％（38.96％）、Ｈ＝4.61
％（4.70％）、Ｎ＝14.48％（14.20％）及びBr＝
31.90％（32.40％） 2c Cbo−Gly−Arg−MCA.HBr 化合物2bとCbo−Gly−OpNP3.65ｇ（11ミリ
モル）を新しく蒸留したDMF75mlに添加した。−
10゜に冷却後、撹拌下にEt3Nを初めに1.40ml（10
ミリモル）、次いで0.70ml（５ミリモル）を添加
した。混合物を水分の遮断下に初めに−10゜で３
時間、次に室温で４時間反応させた。反応溶液を
再び−10゜に冷却し、Et3N0.70mlで緩衝しかつ一
晩20℃で撹拌した。反応混合物を真空中50℃で濃
縮乾固し、次に残渣を50％−AcOH200ml中に溶
解しかつ“セフアデツクス”Ｇ−15のカラム上で
精製した。トリプシン処理により４−メチル−７
−アミノ−クマリンの遊離下に分離したAcOH溶
出液の画分を真空中40゜で濃縮乾固した。得られ
た残渣を真空乾燥箱中P2O5上60゜で乾燥後、DSC
においてLMS中で均一であつた無定形化合物
2c4.98ｇ（理論量の82.5％）が得られた。元素分
析及び実験式：C26H31N6O6Brからの計算により
次の数値が得られた：Ｃ＝51.48％（51.75％）、
Ｈ＝5.24％（5.18％）、Ｎ＝13.70％（13.93％）及
びBr＝13.14％（13.24％） 2d 2HBr.H−Gly−Arg−MCA 化合物2c4.83ｇ（８ミリモル）を例1dにより氷
酢酸中2N−HBr32mlで脱ブロツクした。得られ
た粗製生成物をMeOH100ml中に溶かしかつ“セ
フアデツクス”LH−20のカラム上で精製した。
トリプシン処理により４−メチル−７−アミノ−
クマリンの遊離下に分離するMeOH溶出液の画
分を真空中30゜で濃縮乾固した。得られた残渣を
真空乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後、DSCにおいて
LMS中で均一であつた無定形化合物2d4.05ｇ
（理論量の92.0％）が得られた。元素分析及び実
験式：C10H26N6O4Br2からの計算により次の数
値が明らかになつた：Ｃ＝39.02％（39.29％）、
Ｈ＝4.78％（4.76％）、Ｎ＝15.39％（15.27％）及
びBr＝28.72％（29.04％） 2e Boc−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−MCA.
HBr 化合物2d2.75ｇ（５ミリモル）を例1eにより
BOC−Lys−（ε−Cbo）−OpNP2.76ｇ（5.5ミリ
モル）と反応させた。得られた粗製生成物を50％
−AcOH75ml中に溶かしかつ“セフアデツクス”
Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプシン処理に
より４−メチル−７−アミノ−クマリンの遊離下
に分離したAcOH溶出液の画分を真空中40゜で濃
縮乾固した。残渣を真空乾燥箱中P2O5上60゜で乾
燥後、DSCにおいてLMS中で均一であつた無定
形化合物2e3.41ｇ（理論量の82.0％）が得られ
た。元素分析及び実験式：C37H51N8O9Brからの
計算により次の数値が明らかとなつた：Ｃ＝
53.13％（53.43％）、Ｈ＝6.24％（6.18％）、Ｎ＝
13.76％（13.47％）及びBr＝9.45％（9.61％） アミノ酸分析により所期のアミノ酸が正しい比
で得られた： Gly1.00：Lys1.02：Arg0.98 2f Boc−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−MCA.
AcOH 化合物2e8.32ｇ（10ミリモル）を例1fにより相
応するアセテート塩に変換した。該生成物7.95ｇ
（理論量の98.0％）が得られた。 例 ３ BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−DPA.AcOH 3a Cbo−Arg−DPA.HCl 内容積1000mlの三首丸底フラスコ中で乾燥Cbo
−Arg−OH.HCl34.48ｇ（0.1モル）を新しく蒸
留した無水DMF150ml及び無水THF300mlの混合
物中に20゜で溶解した。−10゜に冷却した溶液を撹
拌及び水分遮断下にEt3N10.2ｇ（0.1モル）を添
加した。その後、この混合物に20分間でTHF50
ml中のクロル蟻酸イソブチルエステル13.65ｇ
（0.1モル）の溶液を、反応温度が−5゜を上廻らな
いように滴加した。更に−10〜−5゜で10分間反応
させた後で、反応混合物にDMF75ml中の５−ア
ミノ−イソフタル酸−ジメチルエステル20.92ｇ
（0.1モル）の溶液を30分間で滴加し、その際に反
応温度は常に−5゜を下廻るようにした。反応混合
物を−5゜で更に１時間反応させた。その後、20゜
で一晩撹拌し、次に−15゜に冷却してEt3N.HClを
結晶させた。形成したEt3N.HClを濾取しかつ冷
い少量のDMFで後洗浄した。濾液を洗浄溶液と
一縮に真空中50゜で濃縮乾固した。残渣を50％−
AcOH1000ml中に溶かしかつ50％−AcOHで平衡
化した“セフアデツクス”Ｇ−15のカラム上でゲ
ル濾過することにより精製した。トリプシン処理
により５−アミノ−イソフタル酸−ジメチルエス
テルの遊離下に分離したAcOH溶出液の画分を真
空中40゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥箱中
P2O5上50゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で均一
な無定形化合物3a24.6ｇ（理論量の45.9％）が得
られた。元素分析及び実験式：C24H30N5O7Clか
らの計算により次の数値が明らかになつた：Ｃ＝
53.21％（53.78％）、Ｈ＝5.71％（5.64％）、Ｎ＝
13.20％（13.07％）及びCl＝6.52％（6.62％） 3b 2HBr.H−Arg−DPA 化合物3a21.44ｇ（40ミリモル）を例1bにより
脱ブロツクした。後処理後、得られた粗製生成物
をMeOH250ml中に溶解しかつ“セフアデツク
ス”LH−20のカラム上でゲル濾過することによ
り精製した。トリプシン処理により５−アミノ−
イソフタル酸−ジメチルエステルの遊離下に分離
したMeOH溶出液の画分を真空中で濃縮乾固し
た。残渣を真空乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後、
DSCにおいてLMS中で均一な無定形化合物
3b19.63ｇ（理論量の93.1％）が得られた。元素
分析及び実験式：C16H25N5O5Br2からの計算に
より次の数値が明らかになつた：Ｃ＝36.82％
（36.45％）、Ｈ＝4.67％（4.78％）、Ｎ＝13.45％
（13.28％）及びBr＝29.85％（30.31％） 3c Cbo−Gly−Arg−DPA.HBr 化合物3b5.27ｇ（10ミリモル）を例1cにより
Cbo−Gly−OpNP3.65ｇ（11ミリモル）と反応
させた。後処理後に得られた粗製生成物を50％−
AcOH200ml中に溶解しかつ“セフアデツクス”
Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプシン処理に
より５−アミノ−イソフタル酸−ジメチルエステ
ルの遊離下に分離したAcOH溶出液の画分を真空
中40゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥箱中P2O5
上60゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で均一な無
定形化合物3c5.29ｇ（理論量の83.0％）が得られ
た。元素分析及び実験式：C26H33N6O8Brからの
計算により次の数値が得られた：Ｃ＝48.50％
（48.99％）、Ｈ＝5.28％（5.22％）、Ｎ＝12.92％
（13.18％）及びBr＝12.33％（12.53％） 3d 2HBr.H−Gly−Arg−DPA 化合物3c5.10ｇ（８ミリモル）を例1dにより氷
酢酸中の2N−HBr32mlで脱ブロツクした。得ら
れた粗製生成物の後処理後、MeOH100ml中に溶
解しかつ“セフアデツクス”LH−20のカラム上
で精製した。トリプシン処理により５−アミノ−
イソフタル酸−ジメチルエステルの遊離下に分離
したMeOH溶出液の画分を真空中30゜で濃縮乾固
した。残渣を真空乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後、
DSCにおいてLMS中で均一であつた無定形化合
物3d4.25ｇ（理論量の90.9％）が得られた。元素
分析及び実験式：C18H28N6O6Br2からの計算に
より次の数値が明らかになつた：Ｃ＝36.85％
（37.00％）、Ｈ＝4.90％（4.83％）、Ｎ＝14.72％
（14.38％）及びBr＝26.95％（27.35％） 3e BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−DPA.
HBr 化合物3d2.92ｇ（５ミリモル）を例1eにより
BOC−Lys（ε−Cbo）−OpNP2.76ｇ（5.5ミリモ
ル）と反応させ、後処理後に得られた粗製生成物
を50％−AcOH100ml中に溶かしかつ“セフアデ
ツクス”Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプシ
ン処理により５−アミノ−イソフタル酸−ジメチ
ルエステルの遊離下に分離したAcOH溶出液の画
分を真空中40゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥
箱中P2O5上60゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で
均一な無定形化合物3e3.64ｇ（理論量の84.1％）
が得られた。元素分析及び実験式：
C37H53N8O11Brからの計算により次の数値が得
られた：Ｃ＝51.05％（51.33％）、Ｈ＝6.25％
（6.17％）、Ｎ＝13.26％（12.94％）及びBr＝9.10
％（9.23％） アミノ酸分析により正しい比の所期のアミノ酸
が認められた： Gly1.00：Lys1.00：Arg0.97 3f BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−DPA.
AcOH 化合物3e8.66ｇ（10ミリモル）を例1fにより相
応するアセテート塩に変換した。生成物8.24ｇ
（理論量の97.5％）が得られた。 例 ４ BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−２−NA.
AcOH 4b 2HBr.H−Arg−２−NA 市販のCbo−Arg−２−NA.HCl9.40ｇ（20ミ
リモル）を例1bにより氷酢酸中の2N−HBr80ml
の溶液で脱ブロツクした。後処理後に得られた生
成物をMeOH150ml中に溶かしかつ“セフアデツ
クス”LH−20のカラム上で精製した。トリプシ
ン処理により２−ナフチルアミンの遊離下に分離
したMeOH溶出液の画分を真空中30゜で濃縮乾固
した。残渣を真空乾燥箱P2O5上40゜で乾燥後、
DSCにおいてLMS中で均一な無定形化合物
4b8.60ｇ（理論量の93.2％）が得られた。元素分
析及び実験式：C16H23N5OBr2からの計算から次
の数値が明らかになつた：Ｃ＝42.08％（41.67
％）、Ｈ＝5.12％（5.03％）、Ｎ＝14.68％（15.19
％）及びBr＝33.96％（34.65％）。 4c Cbo−Ala−Arg−２−NA.HBr 化合物4d4.6ｇ（10ミリモル）を例1cにより
Cbo−Ala−OpNP3.80ｇ（11ミリモル）と反応
させた。後処理後得られた粗製生成物を50％−
AcOH150ml中に溶かしかつ“セフアデツクス”
Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプシン処理に
より２−ナフチルアミンの遊離下に分離した
AcOH溶出液の画分を真空中40℃で濃縮乾固し
た。残渣を真空乾燥箱中P2O5上60゜で乾燥後DSC
においてLMS中で均一な無定形化合物4c4.95ｇ
（理論量の84.5％）が得られた。実験式：元素分
析及びC27H33N6O4Brからの計算から次の数値が
明らかになつた：Ｃ＝55.72％（55.39％）、Ｈ＝
6.73％（5.68％）、Ｎ＝14.68％（14.35％）及びBr
＝13.42％（13.65％）。 4d 2HBr.H−Ala−Arg−２−NA 化合物4c4.68ｇ（８ミリモル）を例1dにより氷
酢酸中の2N−HBr28mlで脱ブロツクした。後処
理して得られた精製生成物をMeOH100ml中に溶
かしかつ“セフアデツクス”LH−20のカラム上
で精製した。トリプシン処理により２−ナフチル
アミンの遊離下に分離したMeOH溶出液の画分
を真空中30゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥箱
中P2O5上40゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で均
一な無定形化合物4d4.08ｇ（理論量の95.8％）が
得られた。元素分析及び実験式：
C19H28N6O2Br2からの計算から次の数値が明ら
かになつた：Ｃ＝43.9％（42.87％）、Ｈ＝5.32％
（5.30％）、Ｎ＝16.02％（15.79％）及びBr＝29.68
％（30.02％） 4o BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−２−
NA.HBr 化合物4d2.66ｇ（５ミリモル）を例1eにより
BOC−Lys（ε−Cbo）−OpNP2.76ｇ（5.5ミリモ
ル）と反応させた。後処理して得られた粗製生成
物を50％−AcOH100ml中に溶かしかつ“セフア
デツクス”Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプ
シン処理により２−ナフチルアミンの遊離下に分
離したAcOH溶出液の最初の主要主画分を真空中
40゜で濃縮乾固し、その後真空乾燥箱中P2O5上60゜
で乾燥させた。DSCにおいてLMS中で均一な無
定形の化合物4e3.45ｇ（理論量の84.8％）が得ら
れた。元素分析及び実験式：C38H53N8O7Brから
の計算により次の数値が得られた：Ｃ＝55.88％
（56.08％）、Ｈ＝6.63％（6.56％）、Ｎ＝14.02％
（13.77％）及びBr＝9.80％（9.82％） アミノ酸分析により正しい比の所期のアミノ酸
が認められた： Ala1.00、Lys1.02、Arg0.97 4fBOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−2NA.
AcOH 化合物4e8.14ｇ（10ミリモル）を例1fにより相
応するアセテート塩に変換した。この生成物7.65
ｇ（理論量の96.5％）が得られた。 例 ５ BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−１−Na.
AcOH 5a Cbo−Arg−１−NA.HCl 十分に乾燥したCbo−Arg−OH.HCl3.45ｇ
（10ミリモル）を乾燥HMPTA100ml中で水分遮
断下に溶解した。−10゜に冷却後、Et3N1.39ml（10
ミリモル）をその溶液に溶かしかつその後で
HMPTA20ml中のクロル蟻酸イソブチルエステ
ル1.35ｇ（10ミリモル）を15分間滴加し、その際
温度は−10〜−5゜に保持した。その後、得られた
溶液にHMPTA15ml中の１−ナフチルアミン1.72
ｇ（12ミリモル）を滴加し、その際前記の温度を
保持した。反応混合物を80゜で真空中で濃縮乾固
した。残渣をMeOH100ml中に溶かしかつMeOH
中の“セフアデツクス”LH−20のカラムでゲル
濾過することにより精製した。トリプシン処理に
より１−ナフチルアミンの遊離下に分離した溶出
液の画分がDSCにおいてLMS中で均一であるこ
とが明らかになつた。この画分を濃縮乾固した。
無定形化合物5a2.82ｇ（理論量の60.1％）が得ら
れた。 元素分析及び実験式：C24H28N5O3Clからの計
算により次の数値が明らかになつた：Ｃ＝61.07
％（61.33％）、Ｈ＝6.10％（6.01％）、Ｎ＝15.05
％（14.90％）及びCl＝7.38％（7.54％） 5b 2HBr.H−Arg−１−NA 化合物5a9.40ｇ（20ミリモル）を例1bにより氷
酢酸中の2N−HBr80mlの溶液で脱ブロツクした。
後処理して得られた生成物をMeOH150ml中に溶
かしかつ“セフアデツクス”LH−20のカラム上
で精製した。トリプシン処理により１−ナフチル
アミンの遊離下に分離した。MeOH溶出液の画
分を真空中30゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥
箱中P2O5上40゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で
均一な無定形化合物5b8.40ｇ（理論量の90.8％）
が得られた。元素分析及び実験式：
C16H23N5OBr2からの計算により次の数値が明ら
かになつた：Ｃ＝42.20％（41.67％）、Ｈ＝5.08％
（5.03％）、Ｎ＝15.33％（15.19％）及びBr＝34.10
％（34.65％）。 5c Cbo−Ala−Arg−１−NA.HBr 化合物5b4.6ｇ（10ミリモル）を例1cにより
Cbo−Ala−OpNP3.80ｇ（11ミリモル）と反応
させた。後処理して得られた粗製生成物を50％−
AcOH150ml中に溶かしかつ“セフアデツクス”
Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプシン処理に
より１−ナフチルアミンの遊離下に分離した
AcOH−溶出液の画分を真空中40゜で濃縮乾固し
た。残渣を真空乾燥箱中P2O5上60゜で乾燥後に、
DSCにおいてLMS中で均一な無定形化合物
5c4.80ｇ（理論量の82.1％）が得られた。元素分
析及び実験式：C27H33N6O4Brからの計算により
次の数値が得られた：Ｃ＝55.62％（55.39％）、
Ｈ＝6.70％（5.68％）、Ｎ＝14.63％（14.35％）及
びBr＝13.35％（13.65％）。 5d 2HBr.H−Ala−Arg−１−NA 化合物5c4.68ｇ（８ミリモル）を例1dにより氷
酢酸中の2N−HBr28mlで脱ブロツクした。後処
理して得られた粗製生成物をMeOH100ml中に溶
かしかつ“セフアデツクス”LH−20のカラム上
で精製した。トリプシン処理により１−ナフチル
アミンの遊離下に分離したMeOH溶出液の画分
を真空中30゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥箱
中P2O5上40゜で乾燥後にDSCにおいてLMS中で均
一な無定形化合物5dが得られた。実験式：元素
分析及びC19H28N6O2Br2からの計算により次の
数値が得られた：Ｃ＝43.09％（42.87％）、Ｈ＝
5.38％（5.30％）、Ｎ＝16.10％（15.79％）及びBr
＝29.80％（30.02％） 5e BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−１−
NA.HBr 化合物5d2.66ｇ（５ミリモル）を例1eにより
BOC−Lys（ε−Cbo）−OpNP2.76ｇ（5.5ミリモ
ル）と反応させた。後処理して得られた粗製生成
物を50％−AcOH100ml中に溶解しかつ“セフア
デツクス”Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプ
シン処理により１−ナフチルアミンの遊離下に分
離したAcOH溶出液の最初の主要画分を真空中
40゜で濃縮乾固し、その後真空乾燥箱中P2O5上60゜
で乾燥させた。DSCにおいてLMS中で均一な無
定形化合物5e3.46ｇ（理論量の85％）が得られ
た。元素分析及び実験式：C38H53N8O7Brからの
計算により次の数値が得られた：Ｃ＝55.98％
（56.08％）、Ｈ＝6.68％（6.56％）、Ｎ＝13.02％
（13.77％）及びBr＝9.80％（9.82％）。 アミノ酸分析により正しい比の所期のアミノ酸
が得られた： Ala1.00：Lys1.01：Arg0.97 5f BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−１−
NA.AcOH 化合物5e8.14ｇ（10ミリモル）を例1fにより相
応するアセテート塩に変換した。この生成物7.77
ｇ（理論量の98.0％）が得られた。 例 ６ BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−４−MeO−
２−NA.HBr 6b 2HBr.H−Arg−４−MeO−２−NA 市販のCbo−Arg−４−MeO−２−NA.
HCl10.0ｇ（20ミリモル）を例1bにより氷酢酸中
の2N−HBr80mlで脱ブロツクした。後処理して
得られた粗製生成物をMeOH150ml中に溶解しか
つ“セフアデツクス”LH−20のカラム上で精製
した。トリプシン処理により４−メトキシ−２−
ナフチルアミンの遊離下に分離したMeOH溶出
液の主要フラクシヨンを真空中30゜で濃縮乾固し
た。残渣を真空乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後、
DSCにおいてLMS中で均一な無定形化合物
6b8.98ｇ（理論量の91.4％）が得られた。元素分
析及び実験式：C17H25N5O2Br2からの計算によ
り次の数値が得られた：Ｃ＝41.22％（41.57％）、
Ｈ＝5.19％（5.13％）、Ｎ＝14.40％（14.26％）及
びBr＝32.01％（32.53％） 6c Cbo−Ala−Arg−４−MeO−２−NA.HBr 化合物6b4.91ｇ（10ミリモル）を例1cにより
Cbo−Ala−OpNP3.80ｇ（11ミリモル）と反応
させた。後処理後、得られた粗製生成物を50％−
AcOH150ml中に溶解しかつ“セフアデツクス”
Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプシン処理に
より４−メトキシ−２−ナフチルアミンの遊離下
に分離したAcOH溶出液の最初の主要フラクシヨ
ンを真空中40゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾燥
箱中P2O5上60゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中で
均一な無定形化合物6c4.86ｇ（理論量の79.0％）
が得られた。元素分析及び実験式：
C28H35N6O5Brからの計算により次の数値が明ら
かになつた：Ｃ＝54.38％（54.64％）、Ｈ＝5.81％
（5.73％）、Ｎ＝13.93％（13.65％）及びBr＝12.75
％（12.98％） 6d 2HBr.H−Ala−Arg−４−MeO−２−NA 化合物6c4.31ｇ（７ミリモル）を例1dにより氷
酢酸中の2N−HBr28mlで脱ブロツクした。後処
理して得られた粗製生成物をMeOH100ml中に溶
かしかつ“セフアデツクス”LH−20のカラム上
で精製した。トリプシン処理により４−メトキシ
−２−ナフチルアミンの形成下に分離した
MeOH溶出液の主要画分を真空中30゜で濃縮乾固
した。残渣を真空乾燥箱中P2O5上40゜で乾燥後、
DSCにおいてLMS中で均一な無定形化合物
6b3.74ｇ（理論量の95.0％）が得られた。元素分
析及び実験式：C20H30N6O3Br2からの計算によ
り次の数値が明らかになつた：Ｃ＝43.01％
（42.72％）、Ｈ＝5.44％（5.38％）、Ｎ＝15.25％
（14.95％）及びBr＝28.03％（28.42％） 6e BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−４−
MeO−２−NA.HBr 化合物6d2.81ｇ（５ミリモル）を例1eにより
BOC−Lys（ε−Cbo）−OpNP2.76ｇ（5.5ミリモ
ル）と反応させた。後処理して得られた粗製生成
物を50％−AcOH125ml中に溶かしかつ“セフア
デツクス”Ｇ−15のカラム上で精製した。トリプ
シン処理により４−メトキシ−２−ナフチルアミ
ンの遊離下に分離したAcOH溶出液の最初の主要
画分を真空中40゜で濃縮乾固した。残渣を真空乾
燥箱中P2O5上60゜で乾燥後、DSCにおいてLMS中
で均一な無定形化合物6e3.31ｇ（理論量の78.5
％）が得られた。元素分析及び実験式：
C39H55N8O8Brからの計算により次の数値が得ら
れた：Ｃ＝55.05％（55.51％）、Ｈ＝6.63％（6.57
％）、Ｎ＝13.40％（13.28％）及びBr＝9.30％
（9.47％） 6f BOC−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−４−
MeO−２−NA.AcOH 化合物6e8.44ｇ（10ミリモル）を例1fにより相
応するアセテート塩に変換した。この生成物8.05
ｇ（理論量の97.8％）が得られた。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】 次表には、本発明によるペプチド誘導体のC1
−エステラーゼによる分解性についての数値デー
タが掲載されている。記載の数値は次のように測
定した：トリスイミダゾール緩衝液1.8mlと、溶
液１ml当り800トシルチロシンエチルエステル単
位（TTEE）C1−エステラーゼを含有する溶液
0.015mlの混合物に、２×10-3モルのペプチド誘
導体溶液0.2mlを37゜で添加した。その後、ペプチ
ド誘導体の分解の際に生成する脱離生成物（例え
ばｐ−ニトロアニリン、４−メトキシ−２−ナフ
チルアミン又は４−メチル−７−アミノクマリ
ン）により５分間の短時間で惹起された光学密度
△ODの増加を405nmで測定した。螢光性脱離生
成物（例えば１−又は２−ナフチルアミン又は
１，３−ジ（メトキシカルボニル）−５−アミノ
−ベンゼン）の場合、光学密度の増加は相応する
発光波長で測定した。単位時間当りの光学密度の
増加の測定値からモル吸光係数に基いて１分間当
りに1TTEE単位C1−エステラーゼにより形成さ
れた分解生成物の量をナノモルで計算する。
【表】
【表】 この分解性は１分間当りに1TTEEC1−エステ
ラーゼにより形成された分解生成物（ナノモル）
で表わす。 血しよう中のC1−エステラーゼインヒビター
濃度の測定は次のように実施することができる：
PH7.4、イオン濃度0.2のトリスイミダゾール緩衝
液1.6ml及びチトレート血しよう0.1mlの混合物を
精製C1−エステラーゼ0.1mlと37゜で４分間恒温保
持する。培養物に本発明による基質の２×10-3モ
ルの水溶液0.2mlを添加した。基質が色原体の基
（R1）としてｐ−ニトロアニリノ基を有する場
合、１分間当りに遊離する分解生成物ｐ−ニトロ
アニリン（R1−Ｈ）の量を405nmで分光光度法
により測定する。血しようを含有しないが、その
他は同じ組成の試験系で１分間当りに遊離するｐ
−ニトロアニリンの量を前記のように測定する。
両者の測定値の差から血しようのC1−エステラ
ーゼインヒビター濃度が計算される。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ 式： 〔式中 R1は酵素加水分解により着色又は螢光化合物
    の形成下に脱離可能であり、芳香族基又はヘテロ
    環式基で置換されている色素形成アミノ基を表わ
    し、 R2は水素を表わすか又は ａ 炭素原子２〜６個を有する直鎖状又は分枝鎖
    状のアルカノイル基、 ｂ シクロヘキシルカルボニル基、 ｃ アルカノイル中に炭素原子２〜４個を有する
    ω−カルボキシル−、ω−メトキシカルボニル
    −又はω−エトキシカルボニル−アルカノイル
    基、 ｄ アルコキシ中に炭素原子１〜４個を有する直
    鎖状又は分枝鎖状のアルコキシカルボニル基、 ｅ アルキル中に炭素原子１〜２個を有するアル
    キルスルホニル基もしくはフエニル−又はｐ−
    トルイル−スルホニル基、 ｆ 置換されていないか又は置換されているベン
    ゾイル基、又は ｇ 核が置換されていないか又は置換されている
    ベンジルオキシカルボニル基を表わし、 R3は核が置換されていないか又は置換されて
    いるベンジル基を表わし、 Ｘはグリシル基又はアラニル基を表わし、Ｙは
    単結合であるか又は式：
    【式】（式中R4はベン ジル基、フエニル基、シクロヘキシル基、シクロ
    ヘキシルメチル基、４−ヒドロキシベンジル基、
    ４−ヒドロキシシクロヘキシルメチル基を表わし
    かつｍは数値ゼロでありかつＹにより定義される
    アミノ酸はＬ−又はＤ−配置を有するかあるいは
    R4は水素を表わしかつｍは数値０，１又は２を
    表わす）の基を表わす〕のペプチド誘導体（ただ
    しC2H5CO−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNAを
    除く）もしくは鉱酸又は有機酸とのその塩。 ２ R1がｐ−ニトロフエニルアミノ基、１−又
    は２−ナフチルアミノ基、４−メトキシ−２−ナ
    フチルアミノ基、４−メチル−７−クマリルアミ
    ノ基又は１，３−ジ（メトキシカルボニル）−５
    −フエニルアミノ基である特許請求の範囲第１項
    記載の誘導体。 ３ R3がベンジル基、４−メチルベンジル基、
    ４−メトキシベンジル基、もしくは２−，３−又
    は４−クロルベンジル基である特許請求の範囲第
    １項又は第２項記載の誘導体。 ４ R2が炭素原子２〜６個を有するアルカノイ
    ル基又はアルコキシ中に炭素原子１〜４個を有す
    るアルコキシカルボニル基を表わしかつＹが単結
    合を表わしかつR3がベンジル基を表わす〕特許
    請求の範囲第１項又は第２項記載の誘導体。 ５ BOC−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.
    AcOH，2AcOH.H−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg
    −pNA，Ac−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−
    pNA.AcOH，CH3OCO−Lys（ε−Cbo）−Gly−
    Arg−pNA.AcOH，C2H5OCO−Lys（ε−Cbo）
    −Gly−Arg−pNA.AcOH，iso−ButOCO−Lys
    （ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH，CH3
    （CH2）2CO−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.
    AcOH，CH3CH2OCO−CH2−CO−Lys（ε−
    Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH，BOC−Lys（ε
    −Cbo）−Ala−Arg−pNA.AcOH，Ｈ−Lys（ε
    −Cbo）−Ala−Arg−pNA.2CF3COOH，Ac−
    Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−pNA.AcOH，
    CH3OCO−Lys（ε−Cbo）−Ala−Arg−pNA.
    AcOH，BOC−Gly−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg
    −pNA.AcOH，2CF3COOH.H−Gly−Lys（ε−
    Cbo）−Gly−Arg−pNA，CH3O−CO−Gly−
    Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNA.AcOH，CH3
    −CH2−CO−Gly−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−
    pNA.AcOHである特許請求の範囲第１項から第
    ４項までのいずれか１項に記載の誘導体。 ６ 酵素C1−エステラーゼを含有する培地か又
    は中で前記酵素が生成するか又は消費されるその
    培地中の前記酵素を定量測定する方法において、
    前記培地を式： 〔式中 R1は酵素加水分解により着色又は螢光化合物
    の形成下に脱離可能であり、芳香族基又はヘテロ
    環式基で置換されている色素形成アミノ基を表わ
    し、 R2は水素を表わすか又は ａ 炭素原子２〜６個を有する直鎖状又は分枝鎖
    状のアルカノイル基、 ｂ シクロヘキシルカルボニル基、 ｃ アルカノイル中に炭素原子２〜４個を有する
    ω−カルボキシル−、ω−メトキシカルボニル
    −又はω−エトキシカルボニル−アルカノイル
    基、 ｄ アルコキシ中に炭素原子１〜４個を有する直
    鎖状又は分枝鎖状のアルコキシカルボニル基、 ｅ アルキル中に炭素原子１又は２個を有するア
    ルキルスルホニル基もしくはフエニル−又はｐ
    −トルイル−スルホニル基、 ｆ 置換されていないか又は置換されているベン
    ゾイル基、又は ｇ 核が置換されていないか又は置換されている
    ベンジルオキシカルボニル基を表わし、 R3は核が置換されていないか又は置換されて
    いるベンジル基を表わし、 Ｘはグリシル基又はアラニル基を表わし、Ｙは
    単結合であるか又は式：
    【式】（式中R4はベン ジル基、フエニル基、シクロヘキシル基、シクロ
    ヘキシルメチル基、４−ヒドロキシベンジル基、
    ４−ヒドロキシシクロヘキシルメチル基を表わし
    かつｍは数値ゼロでありかつＹにより定義される
    アミノ酸はＬ−又はＤ−配置を有するかあるいは
    R4は水素を表わしかつｍは数値０，１又は２を
    表わす）の基を表わす〕のペプチド誘導体（ただ
    しC2H5CO−Lys（ε−Cbo）−Gly−Arg−pNAを
    除く）と反応させかつ前記酵素のペプチド誘導体
    への接触的加水分解作用により単位時間当りに遊
    離する脱離生成物R1−Ｈの量を測光法、分光測
    光法、螢光分光測光法又は電気化学的方法により
    測定することを特徴とする酵素C1−エステラー
    ゼ測定法。
JP59111098A 1983-06-03 1984-06-01 ペプチド誘導体及び酵素ｃ↓１―エステラーゼの測定法 Granted JPS6034992A (ja)

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SEMIN THROMB.HEMOSTASIS=1983 *

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