JPH0798838B2 - ペプチド誘導体 - Google Patents
ペプチド誘導体Info
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- JPH0798838B2 JPH0798838B2 JP19123486A JP19123486A JPH0798838B2 JP H0798838 B2 JPH0798838 B2 JP H0798838B2 JP 19123486 A JP19123486 A JP 19123486A JP 19123486 A JP19123486 A JP 19123486A JP H0798838 B2 JPH0798838 B2 JP H0798838B2
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- JP
- Japan
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- phe
- thr
- boc
- pro
- bzl
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- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なペプチド誘導体に関し、更に詳細には血
液中の凝血系蛋白のひとつであるプロテインＣを測定す
るための新規な発色性合成ペプチド基質に関する。
液中の凝血系蛋白のひとつであるプロテインＣを測定す
るための新規な発色性合成ペプチド基質に関する。
プロテインＣ（以下「PC」と略称する）は、血液の凝血
系蛋白の一つであり、凝固系の抑制及び線溶系の賦活に
関係している。またこの蛋白の遺伝的欠損患者は血栓症
にかかりやすいことが知られており、該蛋白の血中濃度
の測定は臨床上極めて重要である。これまで本蛋白の測
定は部分トロンボプラスチン時間法といわれる血液凝固
時間の測定でなされてきた。しかしながら、近年、凝固
・線溶検査に酵素特異的合成ペプチド基質が導入され、
PCの測定においてもその活性型であるプロテインCa（以
下APCと略する）の酵素反応を受けるpyro-Glu-Pro-Arg-
pNAやBoc-Leu-Ser-Thr-Arg-MCA等の合成基質の利用が紹
介・導入されている。
系蛋白の一つであり、凝固系の抑制及び線溶系の賦活に
関係している。またこの蛋白の遺伝的欠損患者は血栓症
にかかりやすいことが知られており、該蛋白の血中濃度
の測定は臨床上極めて重要である。これまで本蛋白の測
定は部分トロンボプラスチン時間法といわれる血液凝固
時間の測定でなされてきた。しかしながら、近年、凝固
・線溶検査に酵素特異的合成ペプチド基質が導入され、
PCの測定においてもその活性型であるプロテインCa（以
下APCと略する）の酵素反応を受けるpyro-Glu-Pro-Arg-
pNAやBoc-Leu-Ser-Thr-Arg-MCA等の合成基質の利用が紹
介・導入されている。
しかしながら、これらの合成基質は、例えば、既に他の
酵素に特異的であるとして臨床的に使用されているもの
の転用であり、そのために充分に特異的ではなかつた
り、測定系に交叉反応を防止する特殊な薬剤を添加する
ことによつて測定を可能にするなど、非経済的、煩雑な
操作を必要とする。従つて臨床的には他の酵素との交叉
反応性が小さい、すなわち特異性の高い合成基質が要望
されていた。
酵素に特異的であるとして臨床的に使用されているもの
の転用であり、そのために充分に特異的ではなかつた
り、測定系に交叉反応を防止する特殊な薬剤を添加する
ことによつて測定を可能にするなど、非経済的、煩雑な
操作を必要とする。従つて臨床的には他の酵素との交叉
反応性が小さい、すなわち特異性の高い合成基質が要望
されていた。
本発明者らは種々のペプチドを合成し、その特異性につ
いて検討をおこなつていたところ、特定のアミノ酸配列
を有するペプチドはAPCに特異的であることを見出し本
発明を完成した。
いて検討をおこなつていたところ、特定のアミノ酸配列
を有するペプチドはAPCに特異的であることを見出し本
発明を完成した。
すなわち、本発明は次の式（Ｉ） で表わされるペプチド誘導体を提供するものである。
本発明のペプチド誘導体は、ペプチド合成の常法に従つ
て合成することができる。例えば、アミノ酸を式で示さ
れる順序に反応させる方法、及びいくつかのアミノ酸か
らなるオリゴマーを調製しこれらを最終的に結合させる
方法等により製造される。
て合成することができる。例えば、アミノ酸を式で示さ
れる順序に反応させる方法、及びいくつかのアミノ酸か
らなるオリゴマーを調製しこれらを最終的に結合させる
方法等により製造される。
具体的に本発明のペプチド誘導体を合成する方法を挙げ
れば次の通りである。すなわち、グアニジノ基を保護ま
たは無保護のアルギニルｐ−ニトロアニリドと、アミノ
基を保護し、水酸基を保護または無保護のプロリルフエ
ニルアラニルスレオニルフエニルアラニンとを反応さ
せ、その反応生成物の保護基を脱離することによつて目
的とする化合物を製造する。
れば次の通りである。すなわち、グアニジノ基を保護ま
たは無保護のアルギニルｐ−ニトロアニリドと、アミノ
基を保護し、水酸基を保護または無保護のプロリルフエ
ニルアラニルスレオニルフエニルアラニンとを反応さ
せ、その反応生成物の保護基を脱離することによつて目
的とする化合物を製造する。
この反応を実施するには、アルギニルｐ−ニトロアニリ
ド２塩酸塩とアミノ基を保護したプロリルフエニルアラ
ニルスレオニルフエニルアラニンとを適当な不活性溶
媒、たとえばテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミ
ドなどに溶解せしめ、適当な縮合剤、例えばジシクロヘ
キシルカルボジイミドなど、望ましくはジフエニルリン
酸アジドを用いれば良い。この際の反応温度は−20℃な
いしは40℃が適当であるが望ましくは０℃ないしは室温
である。反応終了後粗生成物は通常の精製手段である再
結晶、再沈澱、カラムクロマトグラフイー、プレパラテ
イヴ薄層クロマトグラフイーなどの方法により精製を行
い、前記一般式で表わされるアミノ基を保護した化合物
が得られる。
ド２塩酸塩とアミノ基を保護したプロリルフエニルアラ
ニルスレオニルフエニルアラニンとを適当な不活性溶
媒、たとえばテトラヒドロフラン、ジメチルホルムアミ
ドなどに溶解せしめ、適当な縮合剤、例えばジシクロヘ
キシルカルボジイミドなど、望ましくはジフエニルリン
酸アジドを用いれば良い。この際の反応温度は−20℃な
いしは40℃が適当であるが望ましくは０℃ないしは室温
である。反応終了後粗生成物は通常の精製手段である再
結晶、再沈澱、カラムクロマトグラフイー、プレパラテ
イヴ薄層クロマトグラフイーなどの方法により精製を行
い、前記一般式で表わされるアミノ基を保護した化合物
が得られる。
これらの化合物のアミノ基の保護基は、保護基の通常の
脱離手段を用い除去することができる。例えばｔ−ブチ
ルオキシカルボニル基は、有機溶媒中塩化水素あるいは
トリフルオロ酢酸などで処理することにより除去しう
る。また、水酸基、グアニジノ基が保護されている場
合、例えば、ベンジル基、ｐ−メトキシベンゼンスルホ
ニル基はフツ化水素あるいはトリフルオロメタンスルホ
ン酸などの処理により除去しうる。
脱離手段を用い除去することができる。例えばｔ−ブチ
ルオキシカルボニル基は、有機溶媒中塩化水素あるいは
トリフルオロ酢酸などで処理することにより除去しう
る。また、水酸基、グアニジノ基が保護されている場
合、例えば、ベンジル基、ｐ−メトキシベンゼンスルホ
ニル基はフツ化水素あるいはトリフルオロメタンスルホ
ン酸などの処理により除去しうる。
本発明のペプチド誘導体を構成するアミノ酸は、Ｌ体、
Ｄ体のいずれであつても良い。また、本発明のペプチド
誘導体はその製造条件により遊離型もしくは酸付加塩と
して得られるが、所望に応じ、遊離型のものまたは酸付
加塩のものにそれぞれ変換することができる。この酸付
加塩の例としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩
などの無機酸塩、あるいは酢酸塩、シユウ酸塩、酒石酸
塩、コハク酸塩、クエン酸塩、パラトルエンスルホン酸
塩などの有機酸塩が挙げられる。
Ｄ体のいずれであつても良い。また、本発明のペプチド
誘導体はその製造条件により遊離型もしくは酸付加塩と
して得られるが、所望に応じ、遊離型のものまたは酸付
加塩のものにそれぞれ変換することができる。この酸付
加塩の例としては、塩酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩
などの無機酸塩、あるいは酢酸塩、シユウ酸塩、酒石酸
塩、コハク酸塩、クエン酸塩、パラトルエンスルホン酸
塩などの有機酸塩が挙げられる。
叙上の如くして得られた本発明のペプチド誘導体は従来
のPC測定用基質よりもトロンビンとの交叉反応性が優れ
ており、交叉反応性が1/50〜1/30に低減した。
のPC測定用基質よりもトロンビンとの交叉反応性が優れ
ており、交叉反応性が1/50〜1/30に低減した。
以下、実施例により本発明を説明するが、これら実施例
のみに限定されるものではない。なお、実施例中に記載
の略号は次の意味を有する。
のみに限定されるものではない。なお、実施例中に記載
の略号は次の意味を有する。
BOC:t−ブチルオキシカルボニル Bzl:ベンジル Phe:L−フエニルアラニン Ｄ−Phe:D−フエニルアラニン Thr:L−スレオニン Arg:L−アルギニン Pro:L−プロリン Ｄ−Pro:D−プロリン DMF:N−N,−ジメチルホルムアミド TEA:トリエチルアミン DDPA:ジフエニルリン酸アジド DEPC:ジエチルリン酸アニド TsOH:トルエンスルホン酸 AcOEt:酢酸エチル Z:ベンジルオキシカルボニル pNA:p−ニトロアニリン MeOH:メタノール OMe:メチルエステル OBzl:ベンジルエステル 実施例１ Ｈ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HClの合成 （１） BOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Thr（Bzl）−OH21.65g及びＨ−Phe-OBzl・TsOH32.9
1gをDMF150mlに溶解せしめ０℃に冷却した。攪拌下その
溶媒にDEPC12.56g、次いでTEA15.58gを０℃で添加し、
０℃で４時間、その後室温にて一夜攪拌した。反応液に
AcOEt600ml、ベンゼン150mlを加えて希釈した後、10％
クエン酸水溶液150mlで２回、水150mlで１回、飽和食塩
水150mlで２回、飽和重そう水150mlで２回、水150mlで
１回、飽和食塩水150mlで２回洗浄し無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。溶媒を減圧残留して粗生成物を得て、
これをAcOEtより再結晶化してBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBz
l36.0g（収率94.0％）を得た。
1gをDMF150mlに溶解せしめ０℃に冷却した。攪拌下その
溶媒にDEPC12.56g、次いでTEA15.58gを０℃で添加し、
０℃で４時間、その後室温にて一夜攪拌した。反応液に
AcOEt600ml、ベンゼン150mlを加えて希釈した後、10％
クエン酸水溶液150mlで２回、水150mlで１回、飽和食塩
水150mlで２回、飽和重そう水150mlで２回、水150mlで
１回、飽和食塩水150mlで２回洗浄し無水硫酸マグネシ
ウムで乾燥した。溶媒を減圧残留して粗生成物を得て、
これをAcOEtより再結晶化してBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBz
l36.0g（収率94.0％）を得た。
融点138〜139℃、▲〔α〕20 D▼＋3.04°（Ｃ＝１、DM
F）。
F）。
（２） Ｈ−Thr（Bzl）−Phe-OBzl・HCl BOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl21.6gに19.5％塩化水素/AcOE
t148mlを加え、１時間攪拌する。減圧濃縮し、残渣にベ
ンゼンを加え再度濃縮した。この操作を３回繰り返し粗
生成物を得る。これをAcOEt-MeOHより再結晶化してＨ−
Thr（Bzl）−Phe-OBzl・HCl17.2g（収率90.1％）を得
る。
t148mlを加え、１時間攪拌する。減圧濃縮し、残渣にベ
ンゼンを加え再度濃縮した。この操作を３回繰り返し粗
生成物を得る。これをAcOEt-MeOHより再結晶化してＨ−
Thr（Bzl）−Phe-OBzl・HCl17.2g（収率90.1％）を得
る。
融点164〜165℃，▲〔α〕20 D▼−5.02°（Ｃ＝１、MeO
H） （３） BOC-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Phe-OH2.65g、Ｈ−Thr（Brl）−Phe-OBzl・HCl4.83
gをDMF25mlに溶解し、DEPC1.79g、TEA2.23gを使用し、
上記（１）のBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl合成と同様の操
作により反応、後処理を行い、粗生成物を得た。これを
AcOEtより再結晶化してBOC-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl
6.09g（収率87.8％）を得た。
H） （３） BOC-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Phe-OH2.65g、Ｈ−Thr（Brl）−Phe-OBzl・HCl4.83
gをDMF25mlに溶解し、DEPC1.79g、TEA2.23gを使用し、
上記（１）のBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl合成と同様の操
作により反応、後処理を行い、粗生成物を得た。これを
AcOEtより再結晶化してBOC-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl
6.09g（収率87.8％）を得た。
融点144〜145℃，▲〔α〕20 D▼＋8.79°（Ｃ＝１、DM
F） （４） HCl−Ｈ−Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl5.00gに27.6％塩化水素/
AcOEt20mlを加え、（２）のHCl−Ｈ−Thr（Bzl）−Phe-
OBzl合成と同様の操作により粗生成物を得た。これをAc
OEt-MeOHより再結晶化して、HCl−Ｈ−Phe-Thr（Bzl）
−Phe-OBzl3.94g（収率86.8％）を得た。
F） （４） HCl−Ｈ−Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl5.00gに27.6％塩化水素/
AcOEt20mlを加え、（２）のHCl−Ｈ−Thr（Bzl）−Phe-
OBzl合成と同様の操作により粗生成物を得た。これをAc
OEt-MeOHより再結晶化して、HCl−Ｈ−Phe-Thr（Bzl）
−Phe-OBzl3.94g（収率86.8％）を得た。
融点209〜211℃、▲〔α〕20 D▼＋16.5°（Ｃ＝１、DM
F） （５） BOC-Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Pro-OH215.2mg、CHl−Ｈ−Phe-Thr（Bzl）−Phe-OB
zl630.2mgをDMF11mlに溶解し、DEPC179.4mg、TEA222.6m
gを使用し、（１）のBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl合成と
同様の操作により反応、後処理を行つて粗生成物を得
た。これをAcOEt−ヘキサンより再結晶化して、BOC-Pro
-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl762.7mg（収率96.4％）を得
た。
F） （５） BOC-Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl BOC-Pro-OH215.2mg、CHl−Ｈ−Phe-Thr（Bzl）−Phe-OB
zl630.2mgをDMF11mlに溶解し、DEPC179.4mg、TEA222.6m
gを使用し、（１）のBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl合成と
同様の操作により反応、後処理を行つて粗生成物を得
た。これをAcOEt−ヘキサンより再結晶化して、BOC-Pro
-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl762.7mg（収率96.4％）を得
た。
融点90〜93℃▲〔α〕20 D▼−8.3°（Ｃ＝１、DMF） （６） BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-OH BOC-Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl600mgを液体アンモ
ニア20mlに溶解し、金属ナトリウムを溶液が青色を呈す
るまで加えた。NH4Clを加え反応を停止させ、アンモニ
アを留去し、残査に水20mlを加え溶解し、０℃に冷却し
た。5NHClを加え、pH2とした後、冷却下AcOEt20ml×
２、10ml×１で抽出し、抽出液はまとめて飽和食塩水30
ml×２で洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶媒を留去し、残
査にヘキサンを加え固化させ、BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-OH
392.4mg（収率84.6％）を得た。
ニア20mlに溶解し、金属ナトリウムを溶液が青色を呈す
るまで加えた。NH4Clを加え反応を停止させ、アンモニ
アを留去し、残査に水20mlを加え溶解し、０℃に冷却し
た。5NHClを加え、pH2とした後、冷却下AcOEt20ml×
２、10ml×１で抽出し、抽出液はまとめて飽和食塩水30
ml×２で洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶媒を留去し、残
査にヘキサンを加え固化させ、BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-OH
392.4mg（収率84.6％）を得た。
アモルフアス状▲〔α〕20 D▼−12.2°（Ｃ＝１、DMF） （７） Ｚ−Arg-pNA・HCl ｐ−ニトロアニリン22.7gをピリジン250mlに溶解し、−
40℃に冷却した後、三塩化リン7.02mlを加えて冷却下30
分間攪拌する。さらに室温にて30分間攪拌した後、Ｚ−
Agr-OH50.0gを添加し、４時間加熱還流攪拌する。減圧
濃縮し、残査にトルエンを加え、共沸を３回繰り返す。
1NHCl500mlを加え固化し、粗生成物63.0gを得た。これ
をアセトンより精製してＺ−Arg-pNA・HCl30.0g（収率4
0％）を得た。
40℃に冷却した後、三塩化リン7.02mlを加えて冷却下30
分間攪拌する。さらに室温にて30分間攪拌した後、Ｚ−
Agr-OH50.0gを添加し、４時間加熱還流攪拌する。減圧
濃縮し、残査にトルエンを加え、共沸を３回繰り返す。
1NHCl500mlを加え固化し、粗生成物63.0gを得た。これ
をアセトンより精製してＺ−Arg-pNA・HCl30.0g（収率4
0％）を得た。
融点174〜180℃▲〔α〕20 D▼＋11.0°（Ｃ＝１、MeO
H） （８） Ｈ−Arg-pNA・2HCl Ｚ−Arg-pNA・HCl30.0gに30％臭化水素／酢酸300mlを加
え室温にて１時間攪拌する。減圧濃縮し、残査はエーテ
ルで処理して粗生成物を得た。これを水300mlに溶解
し、イオン交換樹脂IRA-410（Cl型、200ml）にて処理
し、減圧濃縮する。残査をアセトンにて処理して固化
し、水−アセトンより再結晶化してＨ−Arg-pNA・2HCl
7.0g（収率29％）を得た。
H） （８） Ｈ−Arg-pNA・2HCl Ｚ−Arg-pNA・HCl30.0gに30％臭化水素／酢酸300mlを加
え室温にて１時間攪拌する。減圧濃縮し、残査はエーテ
ルで処理して粗生成物を得た。これを水300mlに溶解
し、イオン交換樹脂IRA-410（Cl型、200ml）にて処理
し、減圧濃縮する。残査をアセトンにて処理して固化
し、水−アセトンより再結晶化してＨ−Arg-pNA・2HCl
7.0g（収率29％）を得た。
融点240〜250℃，▲〔α〕20 D▼＋52.4°（Ｃ＝１、MeO
H） （９） BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-OH305.3mg、Ｈ−Arg-pNA・2HCl18
3.6mgをDMF1.5mlに溶解し、DPPA151.4mg、TEA101.2mgを
使用し、（１）のBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl合成と同様
の操作により反応、後処理を行い、粗生成物を得た。こ
れにエーテルを加え固化させ、BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-Ar
g-pNA・HCl385.0mg（収率83.4％）を得た。
H） （９） BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-OH305.3mg、Ｈ−Arg-pNA・2HCl18
3.6mgをDMF1.5mlに溶解し、DPPA151.4mg、TEA101.2mgを
使用し、（１）のBOC-Thr（Bzl）−Phe-OBzl合成と同様
の操作により反応、後処理を行い、粗生成物を得た。こ
れにエーテルを加え固化させ、BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-Ar
g-pNA・HCl385.0mg（収率83.4％）を得た。
アモルフアス状，▲〔α〕20 D▼−20.2°（Ｃ＝１、DM
F） （10） Ｈ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HCl BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl200mgに、４％塩化
水素／ギ酸2mlを加え、室温で30分攪拌した。反応液に
エーテル50mlを加え、沈澱物を得た。これを集めエーテ
ルで洗浄し、乾燥した後、セフアデツクスＧ−10カラム
（φ１×20cm）で精製し、Ｈ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pN
A・2HC136.7g（収率73.4％）を得た。
F） （10） Ｈ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HCl BOC-Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl200mgに、４％塩化
水素／ギ酸2mlを加え、室温で30分攪拌した。反応液に
エーテル50mlを加え、沈澱物を得た。これを集めエーテ
ルで洗浄し、乾燥した後、セフアデツクスＧ−10カラム
（φ１×20cm）で精製し、Ｈ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pN
A・2HC136.7g（収率73.4％）を得た。
アモルフアス状，▲〔α〕20 D▼−37.2°（Ｃ＝１、Ｈ2
Ｏ） 実施例２ Ｈ−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HClの合成 （１） BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr（Brl）−Phe-OBzl BOC−Ｄ−Pro-OH215.2mg、Ｈ−Phe-Thr（Bzl）−Phe-OB
zl・HCl630.2mgをDMF11mlに溶解し、DEPC179.4mg、TEA2
22.6mgを使用し、実施例１、（１）のBOC-Thr（Bzl）−
Phe-OBzl合成と同様の操作により、反応、後処理を行つ
て粗生成物を得た。。これをAcOEtより再結晶化してBOC
−Ｄ−Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl650.0mg（収率82.
2％）を得た。
Ｏ） 実施例２ Ｈ−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HClの合成 （１） BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr（Brl）−Phe-OBzl BOC−Ｄ−Pro-OH215.2mg、Ｈ−Phe-Thr（Bzl）−Phe-OB
zl・HCl630.2mgをDMF11mlに溶解し、DEPC179.4mg、TEA2
22.6mgを使用し、実施例１、（１）のBOC-Thr（Bzl）−
Phe-OBzl合成と同様の操作により、反応、後処理を行つ
て粗生成物を得た。。これをAcOEtより再結晶化してBOC
−Ｄ−Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl650.0mg（収率82.
2％）を得た。
融点142〜144℃，▲〔α〕20 D▼＋34.7°（Ｃ＝１、DM
F） （２） BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-OH BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl500.0gを液体
アンモニア15mlに溶解し、実施例１（６）のBOC-Pro-Ph
e-Thr-Phe-OH合成と同様の操作により、反応、後処理を
行い、BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-OH243.1mg（収率63.0
％）を得た。
F） （２） BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-OH BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr（Bzl）−Phe-OBzl500.0gを液体
アンモニア15mlに溶解し、実施例１（６）のBOC-Pro-Ph
e-Thr-Phe-OH合成と同様の操作により、反応、後処理を
行い、BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-OH243.1mg（収率63.0
％）を得た。
アモルフアス状，▲〔α〕20 D▼＋30.8°（Ｃ＝１、DM
F） （３） BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-OH305.3mg、Ｈ−Arg-pNA・H
Cl183.6mgをDMF1.5mlに溶解し、DPPA151.4mg、TEA101.2
mgを使用して、実施例１（１）のBOC-Thr−（Bzl）−Ph
e-OBzl合成と同様の操作により、反応、後処理を行いBO
C−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl382.0mg（収率8
2.7％）を得た。
F） （３） BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-OH305.3mg、Ｈ−Arg-pNA・H
Cl183.6mgをDMF1.5mlに溶解し、DPPA151.4mg、TEA101.2
mgを使用して、実施例１（１）のBOC-Thr−（Bzl）−Ph
e-OBzl合成と同様の操作により、反応、後処理を行いBO
C−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl382.0mg（収率8
2.7％）を得た。
アモルフアス状，▲〔α〕20 D▼＋4.1°（Ｃ＝１、DM
F） （４） Ｈ−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HCl BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl200mgに、４％
塩化水素／ギ酸2mlを加え、実施例１（10）のＨ−Pro-P
he-Thr-Phe-Arg-pNA・2HCl合成と同様の操作により、反
応、後処理、精製を行つてＨ−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Ar
g-pNA・2HC120.6mg（収率64.8％）を得た。
F） （４） Ｈ−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・2HCl BOC−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Arg-pNA・HCl200mgに、４％
塩化水素／ギ酸2mlを加え、実施例１（10）のＨ−Pro-P
he-Thr-Phe-Arg-pNA・2HCl合成と同様の操作により、反
応、後処理、精製を行つてＨ−Ｄ−Pro-Phe-Thr-Phe-Ar
g-pNA・2HC120.6mg（収率64.8％）を得た。
アモルフアス状，▲〔α〕20 D▼−19.7°（Ｃ＝１、Ｈ2
Ｏ） 実施例３ 実施例１及び２で合成した基質ならびに従来の基質につ
いて次の条件で各酵素との交叉反応性を試験した。この
結果を表１に示す。
Ｏ） 実施例３ 実施例１及び２で合成した基質ならびに従来の基質につ
いて次の条件で各酵素との交叉反応性を試験した。この
結果を表１に示す。
（１） 基質液;2mMの精製水溶液とした。
（２） 緩衝液;APCの測定には50mMトリス−150mM NaCl
-2mM CaCl2-0.1％牛血清アルブミン（pH8.0）を使用し
た。またトロンビン、凝固第Xa因子の測定には、50mMト
リス−175mM NaCl-10mM EDTA（pH8.4）を使用した。
-2mM CaCl2-0.1％牛血清アルブミン（pH8.0）を使用し
た。またトロンビン、凝固第Xa因子の測定には、50mMト
リス−175mM NaCl-10mM EDTA（pH8.4）を使用した。
（３） 使用酵素；すべてヒト由来のものを使用した。
なお、濃度はAPC0.41単位/ml、トロンビン0.2単位/ml、
第Xa因子0.39単位/mlに調製した。
なお、濃度はAPC0.41単位/ml、トロンビン0.2単位/ml、
第Xa因子0.39単位/mlに調製した。
（４） 反応停止液;50％酢酸を使用した。
（５） 測定方法；緩衝液0.6mlと酵素試液0.1mlをプラ
スチツク製試験管に採取し、37℃の恒温槽中で３〜５分
予備加温した。ついで、予め37℃に加温しておいた基質
液の各々を0.1mlずつ各試験管に加え、37℃で正確に５
分間酵素反応を行わせた。５分後に反応停止液0.2mlを
各々の試験管に加え、直ちに水をブランクとして405nm
の吸光度を各々測定した。
スチツク製試験管に採取し、37℃の恒温槽中で３〜５分
予備加温した。ついで、予め37℃に加温しておいた基質
液の各々を0.1mlずつ各試験管に加え、37℃で正確に５
分間酵素反応を行わせた。５分後に反応停止液0.2mlを
各々の試験管に加え、直ちに水をブランクとして405nm
の吸光度を各々測定した。
なお、PCはそれ自体は非活性型であり、測定にはこれを
活性型にする必要がある。この目的では活性化剤として
トロンビンを用いることが一般的である。従つて比較す
る酵素活性としてはトロンビンが最も重要である。表中
APC/トロンビンはその比が大きければ大きい程基質とし
て優位性が高いことを示し、本発明基質は優れているこ
とを示している。また、本発明化合物を用いると活性化
に使用したトロンビンの活性を特殊な操作で除く必要性
が極めて小さくなり、臨床的に使用する場合の操作性が
簡易化される。
活性型にする必要がある。この目的では活性化剤として
トロンビンを用いることが一般的である。従つて比較す
る酵素活性としてはトロンビンが最も重要である。表中
APC/トロンビンはその比が大きければ大きい程基質とし
て優位性が高いことを示し、本発明基質は優れているこ
とを示している。また、本発明化合物を用いると活性化
に使用したトロンビンの活性を特殊な操作で除く必要性
が極めて小さくなり、臨床的に使用する場合の操作性が
簡易化される。
Claims (1)
- 【請求項１】次の式（Ｉ） で表わされるペプチド誘導体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19123486A JPH0798838B2 (ja) | 1986-08-15 | 1986-08-15 | ペプチド誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19123486A JPH0798838B2 (ja) | 1986-08-15 | 1986-08-15 | ペプチド誘導体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6348296A JPS6348296A (ja) | 1988-02-29 |
| JPH0798838B2 true JPH0798838B2 (ja) | 1995-10-25 |
Family
ID=16271132
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19123486A Expired - Lifetime JPH0798838B2 (ja) | 1986-08-15 | 1986-08-15 | ペプチド誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0798838B2 (ja) |
-
1986
- 1986-08-15 JP JP19123486A patent/JPH0798838B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6348296A (ja) | 1988-02-29 |
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