JP2560058B2 - 新規なペプチド誘導体 - Google Patents
新規なペプチド誘導体Info
- Publication number
- JP2560058B2 JP2560058B2 JP62502039A JP50203987A JP2560058B2 JP 2560058 B2 JP2560058 B2 JP 2560058B2 JP 62502039 A JP62502039 A JP 62502039A JP 50203987 A JP50203987 A JP 50203987A JP 2560058 B2 JP2560058 B2 JP 2560058B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- arg
- gly
- group
- pna
- derivative according
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/06—Dipeptides
- C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/06026—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atom, i.e. Gly or Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
- C07K5/0817—Tripeptides with the first amino acid being basic the first amino acid being Arg
Description
【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明はセリンプロテアーゼの測定に有用な新規トリ
ペプチド誘導体に関する。この新規な誘導体は第Xa因子
（E.C.3.4.21.6）の測定に特に適するしあるいは反応中
に存在する他の酵素および／または阻害剤の定量を可能
にするFXaが形成、阻害または消費される反応の分析
に、特に適している。
ペプチド誘導体に関する。この新規な誘導体は第Xa因子
（E.C.3.4.21.6）の測定に特に適するしあるいは反応中
に存在する他の酵素および／または阻害剤の定量を可能
にするFXaが形成、阻害または消費される反応の分析
に、特に適している。
発明の背景 第X a因子は血液凝固に至る反応カスケードにおける
重要な物質である。色原体基質を用いるF X aの測定に
基づくいくつかの方法は血液凝固系における障害を説明
する上で臨床診断上かなり価値があることが示されてい
る〔Hemker H.C.著「Handbook of Synthetic Substrate
s」（1983年）Martinus Nijhoff社発行参照〕。
重要な物質である。色原体基質を用いるF X aの測定に
基づくいくつかの方法は血液凝固系における障害を説明
する上で臨床診断上かなり価値があることが示されてい
る〔Hemker H.C.著「Handbook of Synthetic Substrate
s」（1983年）Martinus Nijhoff社発行参照〕。
従来技術 色原体テトラペプチド誘導体は、Aurell,L.氏他の（H
aemostasis７，（1978）92〜94）により報告されてお
り、またその場合にかなり価値があることが分つてい
る。これらの基質は、天然の基質であるプロトロンビン
中の開裂部位に先行するアミノ酸配列（−Ile−Glu−Gl
y−Arg）を基礎としている。それらテトラペプチド基質
は高い選択性を特徴としている、すなわち、その他の酵
素、特にトロンビン、が第X a因子の測定を乱すことは
ない。しかしながら、溶解度に限りがあり、そして合成
が数工程にわたるという欠点がある。EP34122は、トリ
ペプチド誘導体がF X a基質として有用でありうること
を示している。しかしながらこれらのトリペプチドもト
ロンビンに対して敏感である。前記テトラペプチドの高
い選択性はこれらのトリペプチドによつては得られな
い。
aemostasis７，（1978）92〜94）により報告されてお
り、またその場合にかなり価値があることが分つてい
る。これらの基質は、天然の基質であるプロトロンビン
中の開裂部位に先行するアミノ酸配列（−Ile−Glu−Gl
y−Arg）を基礎としている。それらテトラペプチド基質
は高い選択性を特徴としている、すなわち、その他の酵
素、特にトロンビン、が第X a因子の測定を乱すことは
ない。しかしながら、溶解度に限りがあり、そして合成
が数工程にわたるという欠点がある。EP34122は、トリ
ペプチド誘導体がF X a基質として有用でありうること
を示している。しかしながらこれらのトリペプチドもト
ロンビンに対して敏感である。前記テトラペプチドの高
い選択性はこれらのトリペプチドによつては得られな
い。
発明の記述 本発明のトリペプチドは、高い感度及び溶解度を示す
と同時に、従来技術のテトラペプチドと同等の選択性を
示す。これら、新規基質は、次式 R1−Ｘ−Ｄ−Arg−Ａ−Arg−NH−R2 〔式中、 R1は水素、α−もしくはβ−ナフチル基、低級アルキ
ル基（該基はカルボキシル基で置換されていてもよ
い）、未置換もしくは置換フエニル−もしくはフエニル
アルキル基（そのアルキル基は１〜４個の炭素原子を有
し、また好ましくは、置換基は、フエニル環のパラ位に
あり、そして置換基は、低級アルキル、低級アルコキ
シ、ハロゲンまたはニトロ基である）であり； 低級アルキルは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖状
または分岐鎖状アルキル基、好ましくはメチル、エチ
ル、またはtert−ブチルであり； 低級アルコキシ基は、１〜４個の炭素原子を有するア
ルコキシ基、好ましくはメトキシであり； ハロゲンは塩素、臭素、弗素または沃素、好ましくは
塩素であり； Ｘは または単結合であるが、ただしR1が水素である場合にの
みＸは単結合であり； ＡはGlyまたはSarであり； R2は酵素による加水分解によりR2−NH2化合物を生ず
る芳香族または複素環残基である〕 またはそれらの無機または有機酸とのジ−およびトリ−
塩によつて特徴付けられる。
と同時に、従来技術のテトラペプチドと同等の選択性を
示す。これら、新規基質は、次式 R1−Ｘ−Ｄ−Arg−Ａ−Arg−NH−R2 〔式中、 R1は水素、α−もしくはβ−ナフチル基、低級アルキ
ル基（該基はカルボキシル基で置換されていてもよ
い）、未置換もしくは置換フエニル−もしくはフエニル
アルキル基（そのアルキル基は１〜４個の炭素原子を有
し、また好ましくは、置換基は、フエニル環のパラ位に
あり、そして置換基は、低級アルキル、低級アルコキ
シ、ハロゲンまたはニトロ基である）であり； 低級アルキルは、１〜４個の炭素原子を有する直鎖状
または分岐鎖状アルキル基、好ましくはメチル、エチ
ル、またはtert−ブチルであり； 低級アルコキシ基は、１〜４個の炭素原子を有するア
ルコキシ基、好ましくはメトキシであり； ハロゲンは塩素、臭素、弗素または沃素、好ましくは
塩素であり； Ｘは または単結合であるが、ただしR1が水素である場合にの
みＸは単結合であり； ＡはGlyまたはSarであり； R2は酵素による加水分解によりR2−NH2化合物を生ず
る芳香族または複素環残基である〕 またはそれらの無機または有機酸とのジ−およびトリ−
塩によつて特徴付けられる。
これらR2−NH2化合物は、開裂されたマーカーを直接
または誘導体形成後に測定することによりセリンプロテ
アーゼの定量を可能にする色原体性か、螢光原性かまた
は電気化学的特性を有する従来から知られている化合物
である（Hemker H.C.,前掲書およびそこに引用されてい
る文献）。
または誘導体形成後に測定することによりセリンプロテ
アーゼの定量を可能にする色原体性か、螢光原性かまた
は電気化学的特性を有する従来から知られている化合物
である（Hemker H.C.,前掲書およびそこに引用されてい
る文献）。
R2−NH2化合物の例としては次のものが挙げられる:p
−ニトロアニリン、３−カルボキシ−４−ヒドロキシア
ニリン、３−スルホ−４−ニトロアニリン、３−アルコ
キシ−４−ニトロアニリン、３−カルボキシ−４−ニト
ロアニリン、４−メトキシ−β−ナフチルアミン、４−
（Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロキシエチル）アミノアニリ
ン、５−アミノ−イソフタル酸ジメチルエステル、５−
アミノ−８−ニトロキノリン、７−アミノ−４−トリフ
ルオロメチルクマリン、７−アミノ−４−メチルクマリ
ン、４−アミノジフエニルアミン。
−ニトロアニリン、３−カルボキシ−４−ヒドロキシア
ニリン、３−スルホ−４−ニトロアニリン、３−アルコ
キシ−４−ニトロアニリン、３−カルボキシ−４−ニト
ロアニリン、４−メトキシ−β−ナフチルアミン、４−
（Ｎ−エチル−Ｎ−ヒドロキシエチル）アミノアニリ
ン、５−アミノ−イソフタル酸ジメチルエステル、５−
アミノ−８−ニトロキノリン、７−アミノ−４−トリフ
ルオロメチルクマリン、７−アミノ−４−メチルクマリ
ン、４−アミノジフエニルアミン。
強塩基性側鎖を有する２個のアミノ酸を含有する新規
誘導体は、無機または有機酸とジ塩、あるいはR1が水素
である場合にはトリ塩を形成することができる。高い水
溶解性をもつことから無機または有機酸のジ塩が塩とし
ては好ましい。特に好適なのは塩酸塩である。
誘導体は、無機または有機酸とジ塩、あるいはR1が水素
である場合にはトリ塩を形成することができる。高い水
溶解性をもつことから無機または有機酸のジ塩が塩とし
ては好ましい。特に好適なのは塩酸塩である。
測定に適した酵素による基質の開裂は、Ｌ型アルギニ
ンのカルボン酸側で起こり、従つてＮ未満アルギニンは
Ｄ−異性体として存在しなければならない。驚くべきこ
とに、生物学的pHにおいて、テトラペプチド基質の負に
荷電した部分または中性の親脂質部分を、高い選択性と
より強い感受性を保持した正荷電強塩基性アミノ酸に変
化させることができた。
ンのカルボン酸側で起こり、従つてＮ未満アルギニンは
Ｄ−異性体として存在しなければならない。驚くべきこ
とに、生物学的pHにおいて、テトラペプチド基質の負に
荷電した部分または中性の親脂質部分を、高い選択性と
より強い感受性を保持した正荷電強塩基性アミノ酸に変
化させることができた。
セリンプロテアーゼの定量および／または定性的測
定、またはセリンプロテアーゼまたはその酵素前駆体
形、例えば第X a因子に活性化される第Ｘ因子、と相互
作用し得る成分の定量および／または定性的測定への本
発明のペプチド誘導体の使用は重要な適用である。
定、またはセリンプロテアーゼまたはその酵素前駆体
形、例えば第X a因子に活性化される第Ｘ因子、と相互
作用し得る成分の定量および／または定性的測定への本
発明のペプチド誘導体の使用は重要な適用である。
この新規第X a基質は、それらの感度、高い溶解度お
よび良好な選択性の故に、第X a因子の測定に基づく診
断上の分析を確立するにあたつての価値ある付加物であ
る。選択性が高いかどうかは血漿中のF X aの測定にお
ける重要な基準である。何故ならば、選択性が良くない
と、最初から存在するかあるいはアツセイ中に形成され
る可能性のあるトロンビンから影響を受ける危険がある
からである。重要な適用例は、ラツセルマムシ（RVV−
Ｘ）からのプロテアーゼで活性化した後のヒト血漿中F
X aの測定、抗第X a因子の測定、ヘパリンの測定および
血友病におけるF VIII:Cの測定である（Hemker H.C.,前
掲、S.Rosn,Scand.J.Haematol.補遺40,33，（1984）
（39−145）。特に重要な適用例は、伝統的な血餅を基
礎とする方法を使用できない、低分子量ヘパリン画分を
用いた抗凝血処理に関連した分析である（Walenga J.M.
氏他、Seminars in Thrombosis and Hemostatis,11，
（no.2）、1985,100−107）。詳細にはF Xa 活性の測定
に依拠し、そしてF XおよびF Xa の直接測定にまたはF
VII、F VII a、F VIII:C、F VIII:Ca、F IX、F IX a、
アンチトロンビンIII、血小板第４因子、ヘパリン、低
分子量ヘパリンおよびヘパリノイドの間接測定に用いら
れる方法が包含される。新規基質のこれら性質ゆえにこ
れらの基質は自動分析器における使用に対し特に適す
る。
よび良好な選択性の故に、第X a因子の測定に基づく診
断上の分析を確立するにあたつての価値ある付加物であ
る。選択性が高いかどうかは血漿中のF X aの測定にお
ける重要な基準である。何故ならば、選択性が良くない
と、最初から存在するかあるいはアツセイ中に形成され
る可能性のあるトロンビンから影響を受ける危険がある
からである。重要な適用例は、ラツセルマムシ（RVV−
Ｘ）からのプロテアーゼで活性化した後のヒト血漿中F
X aの測定、抗第X a因子の測定、ヘパリンの測定および
血友病におけるF VIII:Cの測定である（Hemker H.C.,前
掲、S.Rosn,Scand.J.Haematol.補遺40,33，（1984）
（39−145）。特に重要な適用例は、伝統的な血餅を基
礎とする方法を使用できない、低分子量ヘパリン画分を
用いた抗凝血処理に関連した分析である（Walenga J.M.
氏他、Seminars in Thrombosis and Hemostatis,11，
（no.2）、1985,100−107）。詳細にはF Xa 活性の測定
に依拠し、そしてF XおよびF Xa の直接測定にまたはF
VII、F VII a、F VIII:C、F VIII:Ca、F IX、F IX a、
アンチトロンビンIII、血小板第４因子、ヘパリン、低
分子量ヘパリンおよびヘパリノイドの間接測定に用いら
れる方法が包含される。新規基質のこれら性質ゆえにこ
れらの基質は自動分析器における使用に対し特に適す
る。
合成の記述 新規F X a基質の合成にあたつては、ペプチド化学に
おいて通常用いられる保護基およびカツプリング方法
（M.Bodansky:“Principles of Peptide Synthesis",Sp
ringer Verlag1984）、例えばマーカーを付与したＣ末
端アミノ酸にアミノ酸を段階的に付加する方法、あるい
はＮ未満ペプチド断片を合成し次いでそれをマーカーを
付与したＣ末端アミノ酸にカツプリングさせる方法など
が用いられる。
おいて通常用いられる保護基およびカツプリング方法
（M.Bodansky:“Principles of Peptide Synthesis",Sp
ringer Verlag1984）、例えばマーカーを付与したＣ末
端アミノ酸にアミノ酸を段階的に付加する方法、あるい
はＮ未満ペプチド断片を合成し次いでそれをマーカーを
付与したＣ末端アミノ酸にカツプリングさせる方法など
が用いられる。
有用なアミノ保護基は、ベジルオキシカルボニル−、
９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−またはｔ−
ブチルオキシ−カルボニル基である。アルギニンのグア
ニジノ基の保護には、プロトン化、ニトロ保護基または
ｐ−トルエンスルホニル保護基が用いられる。アミノ酸
間のカツプリングは、α−カルボン酸基の活性化（例え
ば活性エステル、対称または非対称無水物、アジド、DC
CIまたは関連試薬）により行われる。
９−フルオレニルメチルオキシカルボニル−またはｔ−
ブチルオキシ−カルボニル基である。アルギニンのグア
ニジノ基の保護には、プロトン化、ニトロ保護基または
ｐ−トルエンスルホニル保護基が用いられる。アミノ酸
間のカツプリングは、α−カルボン酸基の活性化（例え
ば活性エステル、対称または非対称無水物、アジド、DC
CIまたは関連試薬）により行われる。
本発明を以下、本発明の様々な基質の製造を示す実施
例で説明するが、本発明はこれら実施例により限定され
るものではない。
例で説明するが、本発明はこれら実施例により限定され
るものではない。
中間体および最終生成物の精製は、沈殿、結晶化、ま
たはゲル過クロマトグラフイーにより行われる。精製
された最終精製物は、凍結乾燥される。TLC分析では予
め製作されたシリカゲルF254のガラスプレートが用いら
れる。クロマトグラフイー終了後プレートをUV光（254n
m）で検査し、次いでニンヒドリンおよび塩基／ジカル
ボキシジン試薬で発色させる。示されるRf値は単一クロ
マトグラフイーの結果である。
たはゲル過クロマトグラフイーにより行われる。精製
された最終精製物は、凍結乾燥される。TLC分析では予
め製作されたシリカゲルF254のガラスプレートが用いら
れる。クロマトグラフイー終了後プレートをUV光（254n
m）で検査し、次いでニンヒドリンおよび塩基／ジカル
ボキシジン試薬で発色させる。示されるRf値は単一クロ
マトグラフイーの結果である。
TLCに用いられる溶媒系を次表に示す。
HPLC分析はMerck RPカラム（Hibar LiChraCart）にて
0.5％トリエチルアミノホスフエート（pH＝2.35）中の4
0％MeOHを溶離剤（1ml/分）として用いて行つた。最終
生成物の光学活性は50％酢酸中0.4〜1.0g/100ml濃度お
よび＋25℃で589nmで測定した。
0.5％トリエチルアミノホスフエート（pH＝2.35）中の4
0％MeOHを溶離剤（1ml/分）として用いて行つた。最終
生成物の光学活性は50％酢酸中0.4〜1.0g/100ml濃度お
よび＋25℃で589nmで測定した。
以下において記載される略記は次の意味を有する：
（IUPAC表示が存在する場合にはそれを用いてある） アミノ酸:Arg＝アルギニン D−Arg＝Ｄ−アルギニン Gly＝グリシン Sar＝サルコシン（Ｎ−メチルグリシン） 基質中のすべてのアミノ酸は、他に何の表示もなけれ
ばＬ−配置を有する。
（IUPAC表示が存在する場合にはそれを用いてある） アミノ酸:Arg＝アルギニン D−Arg＝Ｄ−アルギニン Gly＝グリシン Sar＝サルコシン（Ｎ−メチルグリシン） 基質中のすべてのアミノ酸は、他に何の表示もなけれ
ばＬ−配置を有する。
遊離アミノ酸またはペプチドは、Ｎ末端アミノ基のＨ
−およびカルボキシル末端基の−OHにより示される。ア
ミノ基は常に左方に与えられ、そしてカルボキシル基は
右方に示される。
−およびカルボキシル末端基の−OHにより示される。ア
ミノ基は常に左方に与えられ、そしてカルボキシル基は
右方に示される。
省略形 Ac ＝アセチル AcOH ＝酢酸 AMC ＝７−アミノ−４−メチルクマリン Boc ＝ｔ−ブチルオキシカルボニル Bs ＝ベンゼンスルホニル Bz ＝ベンゾイル Bzls ＝ベンジルスルホニル CHA ＝３−カルボキシ−４−ヒドロキシアニリド ４−ClBs＝４−クロロベンゼンスルホニル DCCI ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド DCU ＝ジシクロヘキシル尿素 DMF ＝ジメチルホルムアミド Eoc ＝エチルオキシカルボニル EtOAc ＝酢酸エチル EtOH ＝エタノール Et3N ＝トリエチルアミン Ets ＝エタンスルホニル HOBT ＝１−ヒドロキシベンゾトリアゾール HPLC ＝高性能液体クロマトグラフイー I ＝イオン強度 Mbs ＝４−メトキシベンゼンスルホニル MeOH ＝メタノール Mes ＝メタンスルホニル Moz ４−メトキシベンジルオキシカルボニル ４−Nbs ＝４−ニトロベンゼンスルホニル NEM ＝４−エチルモルホリン ４−Nz ＝４−ニトロベンジルオキシカルボニル Ns ＝β−ナフタレンスルホニル ONp ＝ｐ−ニトロフエニルエステル pNA ＝ｐ−ニトロアニリン Suc ＝スクシニル TFA ＝トリフルオロ酢酸 TLC ＝薄層クロマトグラフイー Tos ＝ｐ−トルエンスルホニル Tris ＝トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン Z ＝ベンジルオキシカルボニル 製造例 実施例 １ Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝714.
62 1a） Boc−Gly−Arg−pNA・HBr 分子量＝532.40 120mlのDMFに溶解した43ミリモルのＨ−Arg−pNA・2H
BrをEt3Nを用いて冷却（−10℃）下に中和する。形成さ
れたEt3N・HBrを去後、43ミリモルのBoc−Gly−OH、4
5ミリモルのHOBTおよび50ミリモルのDCCIを添加する。
冷却外に１時間次に室温で一夜撹拌して反応を進行させ
る。形成されたDCUを去しそしてその溶液を真空外に
蒸発させて得られる油状物を160mlのEtOAcに溶解し、２
％NaHCO3、H2O、２％KHSO4およびH2Oで洗浄する。Na2SO
4で乾燥後、EtOAc相を蒸発させそしてシエチルエーテル
で沈殿させる。
62 1a） Boc−Gly−Arg−pNA・HBr 分子量＝532.40 120mlのDMFに溶解した43ミリモルのＨ−Arg−pNA・2H
BrをEt3Nを用いて冷却（−10℃）下に中和する。形成さ
れたEt3N・HBrを去後、43ミリモルのBoc−Gly−OH、4
5ミリモルのHOBTおよび50ミリモルのDCCIを添加する。
冷却外に１時間次に室温で一夜撹拌して反応を進行させ
る。形成されたDCUを去しそしてその溶液を真空外に
蒸発させて得られる油状物を160mlのEtOAcに溶解し、２
％NaHCO3、H2O、２％KHSO4およびH2Oで洗浄する。Na2SO
4で乾燥後、EtOAc相を蒸発させそしてシエチルエーテル
で沈殿させる。
収率:71％ TLC :Rf＝0.23（Pa6） 1b） Ｈ−Gly−Arg−pNA・TFA・HBr 分子量＝546.36 55mlのTFAを55mlのメチレンクロライドに溶解した30
ミリモルのBoc−Gly−Arg−pNA・HBr（実施例1aに従つ
て製造）に添加する。その混合物を室温で30分間撹拌し
た後ジエチルエーテルで沈殿させる。
ミリモルのBoc−Gly−Arg−pNA・HBr（実施例1aに従つ
て製造）に添加する。その混合物を室温で30分間撹拌し
た後ジエチルエーテルで沈殿させる。
収率：〜100％ TLC:Rf＝0.28（Ａ） 1. Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量71
4.62 25mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）でEt3Nを
用いて中和した2.5ミリモルのＨ−Gly−Arg−pNA・TFA
・HBr（実施例1bに従つて製造）中に2.5ミリモルのＺ−
Ｄ−Arg−OH・HCl、３ミリモルのHOBTおよび３ミリモル
のDCCIを添加する。その混合物を冷却下に１時間次に室
温で48時間撹拌する。形成されたDCUを去し、そして
その溶液を真空下に蒸発させて油状物とし、30mlの水を
添加し、そしてその溶液を２×20mlのEtOAcを用いて洗
浄する。水相を真空蒸発させ、そして生成物を50％EtOH
を溶離剤として用いるクロライド型のSephadex（商標
名）QAE−25カラムにてイオン交換し、そして最後にMer
ck Lobar（商標名）を予め充填したカラム（Lichroprep
（商標名）・RP−８−Ｂ）にて30％MeOHを溶離剤（2ml/
分）として用いる精製する。精製された生成物を凍結乾
燥する。
4.62 25mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）でEt3Nを
用いて中和した2.5ミリモルのＨ−Gly−Arg−pNA・TFA
・HBr（実施例1bに従つて製造）中に2.5ミリモルのＺ−
Ｄ−Arg−OH・HCl、３ミリモルのHOBTおよび３ミリモル
のDCCIを添加する。その混合物を冷却下に１時間次に室
温で48時間撹拌する。形成されたDCUを去し、そして
その溶液を真空下に蒸発させて油状物とし、30mlの水を
添加し、そしてその溶液を２×20mlのEtOAcを用いて洗
浄する。水相を真空蒸発させ、そして生成物を50％EtOH
を溶離剤として用いるクロライド型のSephadex（商標
名）QAE−25カラムにてイオン交換し、そして最後にMer
ck Lobar（商標名）を予め充填したカラム（Lichroprep
（商標名）・RP−８−Ｂ）にて30％MeOHを溶離剤（2ml/
分）として用いる精製する。精製された生成物を凍結乾
燥する。
収率:37％ TCL :Rf＝0.11（Pa6） HPLC:98.5％純度 〔α〕＝−18.1゜（ｃ＝0.5％） 実施例 ２ Ｎα−Boc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝68
0.59 2.5ミリモルのＨ−Gly−Arg−pNA・TFA−HBrおよび2.
5ミリモルのBoc−Ｄ−Arg−OH HClを実施例１と同じカ
ツプリング方法および反応条件を用いて処理する。
0.59 2.5ミリモルのＨ−Gly−Arg−pNA・TFA−HBrおよび2.
5ミリモルのBoc−Ｄ−Arg−OH HClを実施例１と同じカ
ツプリング方法および反応条件を用いて処理する。
収率:35％ TLC :Rf＝0.55（Ｍ） HPLC:96％純度 〔α〕＝−25.5゜（ｃ＝0.4％） 実施例 ３ Ｈ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl 分子量＝616.96 22mlのメチレンクロライドに溶解した12ミリモルのＮ
α−Boc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl（実施例２に
従つて製造）に22mlのTFAを添加する。その混合物を30
分間室温で撹拌し、次いでジエチルエーテルで沈殿させ
る。その生成物を実施例１と同様にしてイオン交換し精
製する。
α−Boc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl（実施例２に
従つて製造）に22mlのTFAを添加する。その混合物を30
分間室温で撹拌し、次いでジエチルエーテルで沈殿させ
る。その生成物を実施例１と同様にしてイオン交換し精
製する。
収率:38％ TLC :Rf＝0.30（Ｍ） HPLC:98％純度 〔α〕＝−62.4゜（ｃ＝0.5％） 実施例 ４ Ｎα−Ets−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝67
2.62 10mlのDMFに溶解しそして（−10℃）で80μのEt3N
を用いて中和した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg
−pNA・3HCl（実施例３に従つて製造）に0.5ミリモルの
エタンスルホニルクロライドおよび80μのEt3Nを添加
する。冷却下に１時間、そして室温で２時間撹拌する間
に反応が進行する。その混合物を真空蒸発させる。生成
物を実施例１と同じ方法でイオン交換しそして精製す
る。
2.62 10mlのDMFに溶解しそして（−10℃）で80μのEt3N
を用いて中和した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg
−pNA・3HCl（実施例３に従つて製造）に0.5ミリモルの
エタンスルホニルクロライドおよび80μのEt3Nを添加
する。冷却下に１時間、そして室温で２時間撹拌する間
に反応が進行する。その混合物を真空蒸発させる。生成
物を実施例１と同じ方法でイオン交換しそして精製す
る。
収率:44％ TLC :Rf＝0.5（Ｍ） HPLC:97％純度 〔α〕＝−15.6゜（ｃ＝0.65％） 実施例 ５ Ｎα−Bs−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝720.
66 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのベンゼ
ンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法および同
じ反応条件下に処理する。
66 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのベンゼ
ンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法および同
じ反応条件下に処理する。
収率:37％ TLC :Rf＝0.53（Ｍ） HPLC:98％純度 〔α〕＝＋11.6゜（ｃ＝0.45％） 実施例 ６ Ｎα−４−Nz−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝
759.64 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−ニ
トロベンジルオキシカルボニルクロライドを実施例４と
同じ方法および同じ反応条件下で処理する。
759.64 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−ニ
トロベンジルオキシカルボニルクロライドを実施例４と
同じ方法および同じ反応条件下で処理する。
収率:57％ TLC :Rf＝0.3（Ａ） HPLC:99％純度 〔α〕＝−20.2℃（ｃ＝0.45％） 実施例 ７ Ｎα−４−Nbs−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量
＝765.66 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−ニ
トロベンゼンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方
法および同じ反応条件下で処理する。
＝765.66 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−ニ
トロベンゼンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方
法および同じ反応条件下で処理する。
収率:25％ TLC :Rf＝0.28（Ａ） HPLC:97％純度 〔α〕＝−0.8゜（ｃ＝0.6％） 実施例 ８ Ｎα−Tos−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝73
4.69 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのｐ−ト
ルエンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法およ
び同じ反応条件下で処理する。
4.69 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのｐ−ト
ルエンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法およ
び同じ反応条件下で処理する。
収率:45％ TLC :Rf＝0.25（Ａ） HPLC:98％純度 〔α〕＝＋23.1゜（ｃ＝0.45％） 実施例 ９ Ｎα−Moz−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝74
4.66 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−メ
チルオキシベンジルオキシカルボニルアジドを実施例４
と同じ方法および同じ反応条件下で処理する。
4.66 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−メ
チルオキシベンジルオキシカルボニルアジドを実施例４
と同じ方法および同じ反応条件下で処理する。
収率:31％ TLC :Rf＝0.22（Ａ） HPLC:97％純度 〔α〕＝−15.9゜（ｃ＝0.4％） 実施例 10 Ｎα−Mbs−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝75
0.69 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−メ
ントキシベンゼンスルホニルクロライドを実施例４と同
じ方法および同じ反応条件下で処理する。
0.69 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−メ
ントキシベンゼンスルホニルクロライドを実施例４と同
じ方法および同じ反応条件下で処理する。
収率:45％ TLC :Rf＝0.31（Ａ） HPLC:99％純度 〔α〕＝＋22.8゜（ｃ＝0.4％） 実施例 11 Ｎα−４−ClBs−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量
＝755.12 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−ク
ロロベンゼンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方
法および同じ反応条件下で処理する。
＝755.12 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの４−ク
ロロベンゼンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方
法および同じ反応条件下で処理する。
収率:31％ TLC :Rf＝0.38（Ａ） HPLC:99％純度 〔α〕＝＋10.9゜（ｃ＝0.4％） 実施例 12 Ｎα−Ns−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝770.
73 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのβ−ナ
フタレンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法お
よび同じ反応条件下で処理する。
73 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのβ−ナ
フタレンスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法お
よび同じ反応条件下で処理する。
収率:25％ TLC :Rf＝0.29（Ａ） HPLC:99％純度 〔α〕＝−21.5゜（ｃ＝0.4％） 実施例 13 Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−AMC・2HCl分子量＝751.
70 30mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）でEt3Nを
用いて中和した２ミリモルのＨ−Arg−AMC・2HClに２ミ
リモルのＺ−Ｄ−Arg−Gly−OH・HCl、2.5ミリモルのHO
BTおよび2.5ミリモルのDCCIを添加する。冷却下に１時
間、次に室温で24時間撹拌しながら反応を行う。形成さ
れたDCUを去しそしてその溶液を真空蒸発させて得ら
れる油状物を実施例１と同じ方法でイオン交換しそして
精製する。
70 30mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）でEt3Nを
用いて中和した２ミリモルのＨ−Arg−AMC・2HClに２ミ
リモルのＺ−Ｄ−Arg−Gly−OH・HCl、2.5ミリモルのHO
BTおよび2.5ミリモルのDCCIを添加する。冷却下に１時
間、次に室温で24時間撹拌しながら反応を行う。形成さ
れたDCUを去しそしてその溶液を真空蒸発させて得ら
れる油状物を実施例１と同じ方法でイオン交換しそして
精製する。
収率:39％ TLC :Rf＝0.7（“3"） HPLC:99％純度 〔α〕＝−28.6゜（ｃ＝0.5％） 実施例 14 Ｎα−Ac−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝622.
54 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの無水酢
酸を実施例４と同じ方法および同じ反応条件下で処理す
る。
54 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの無水酢
酸を実施例４と同じ方法および同じ反応条件下で処理す
る。
収率:43％ TLC :Rf＝0.45（Ｍ） HPLC:97％純度 〔α〕＝−27.9゜（ｃ＝0.4％） 実施例 15 Ｎα−Suc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝68
0.57 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの無水コ
ハク酸を実施例４と同じ方法および同じ反応条件下に処
理する。
0.57 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルの無水コ
ハク酸を実施例４と同じ方法および同じ反応条件下に処
理する。
収率:40％ TLC :Rf＝0.23（Ａ） HPLC:98％純度 〔α〕＝−21.4゜（ｃ＝0.5％） 実施例 16 Ｎα＝Bzls−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝73
4.69 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのベンジ
ルスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法および同
じ反応条件下に処理する。
4.69 0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・3HCl
（実施例３に従つて製造）および0.5ミリモルのベンジ
ルスルホニルクロライドを実施例４と同じ方法および同
じ反応条件下に処理する。
収率:38％ TLC :Rf＝0.26（Ａ） HPLC:98％純度 〔α〕＝−7.8゜（ｃ＝0.4％） 実施例 17 Ｎα−Bz−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量＝684.
61 17a） Ｚ−Gly−Arg（NO2）−pNA 分子量＝530.51 750mlのDMFに溶解した0.35モルのＨ−Arg−（NO2）pN
A・HBrを冷却下（−10℃）にEt3Nを用いて中和する。形
成されたEt3N・HBrを去した後、0.35モルのＺ−Gly−
OH、0.35モルのHOBTおよび0.38モルのDCCIを添加する。
冷却下に１時間そして室温で一夜撹拌しながら反応を行
う。形成されたDCUを去し、そしてその溶液を真空蒸
発させて得られる油状物を３×400mlの２％NaHCO3およ
び500mlの水で摩砕する。生成物を3.5のMeOHから再結
晶する。
61 17a） Ｚ−Gly−Arg（NO2）−pNA 分子量＝530.51 750mlのDMFに溶解した0.35モルのＨ−Arg−（NO2）pN
A・HBrを冷却下（−10℃）にEt3Nを用いて中和する。形
成されたEt3N・HBrを去した後、0.35モルのＺ−Gly−
OH、0.35モルのHOBTおよび0.38モルのDCCIを添加する。
冷却下に１時間そして室温で一夜撹拌しながら反応を行
う。形成されたDCUを去し、そしてその溶液を真空蒸
発させて得られる油状物を３×400mlの２％NaHCO3およ
び500mlの水で摩砕する。生成物を3.5のMeOHから再結
晶する。
収率:80％ TLC :Rf＝0.6（Pa6） 17b） Ｈ−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl分子量＝432.72 0.3モルのＺ−Gly−Arg（NO2）−pNA（実施例17aに従
つて製造）を630mlのAcOH中に懸濁する。AcOH中の5.6M
HBr415mlを撹拌しながら添加する。その混合物を室温で
45分間撹拌し、そして7.5の乾燥ジエチルエーテル中
に撹拌しながら注入する。沈殿を過し、ジエチルエー
テルで洗浄しそして真空乾燥する。
つて製造）を630mlのAcOH中に懸濁する。AcOH中の5.6M
HBr415mlを撹拌しながら添加する。その混合物を室温で
45分間撹拌し、そして7.5の乾燥ジエチルエーテル中
に撹拌しながら注入する。沈殿を過し、ジエチルエー
テルで洗浄しそして真空乾燥する。
収率:90％ 生成物3gを実施例１と同じ方法でイオン交換する。
収率:73％ TLC :Rf＝0.15（Pa6） 17c） Ｎα−Boc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）
−pNA 分子量＝697.69 25mlのDMFに溶解した４ミリモルのＨ−Gly−Arg（N
O2）−pNA・HCl（実施例17bに従つて製造）を冷却下
（−10℃）にEt3Nを用いて中和する。形成されたEt3N・
HClを去後、４ミリモルのα−Boc−Ｄ−Arg（NO2）−
OH、４ミリモルのHOBTおよび4.2ミリモルのDCCIを添加
する。冷却下に１時間次に室温で一夜撹拌しながら反応
させる。形成されたDCUを去しそして溶液を真空蒸発
させて得られる油状物を２％NaHCO3、水、２％KHSO4、
水およびジエチルエーテルで懸濁させる。
−pNA 分子量＝697.69 25mlのDMFに溶解した４ミリモルのＨ−Gly−Arg（N
O2）−pNA・HCl（実施例17bに従つて製造）を冷却下
（−10℃）にEt3Nを用いて中和する。形成されたEt3N・
HClを去後、４ミリモルのα−Boc−Ｄ−Arg（NO2）−
OH、４ミリモルのHOBTおよび4.2ミリモルのDCCIを添加
する。冷却下に１時間次に室温で一夜撹拌しながら反応
させる。形成されたDCUを去しそして溶液を真空蒸発
させて得られる油状物を２％NaHCO3、水、２％KHSO4、
水およびジエチルエーテルで懸濁させる。
収率:73％ TLC :Rf＝0.32（Pa6） 17d） Ｈ−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・H
Cl 分子量＝634.04 ３ミリモルのＮα−Boc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg
（NO2）−pNa（実施例17cに従つて製造）を11mlのAcOH
に懸濁し、11mlのTFAを添加し、そしてその混合物を室
温で４時間撹拌する。生成物をジエチルエーテルで沈殿
させ、そして実施例１と同じ方法でイオン交換する。
Cl 分子量＝634.04 ３ミリモルのＮα−Boc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg
（NO2）−pNa（実施例17cに従つて製造）を11mlのAcOH
に懸濁し、11mlのTFAを添加し、そしてその混合物を室
温で４時間撹拌する。生成物をジエチルエーテルで沈殿
させ、そして実施例１と同じ方法でイオン交換する。
収率:72％ TLC :Rf＝0.61（Ｍ） 17e） Ｎα−Bz−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）−
pNA 分子量＝701.68 20mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）に70μ
のEt3Nを用いて中和した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg（NO
2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl（実施例17dに従つて
製造）に0.6ミリモルの安息香酸無水物および70μのE
t3Nを添加する。冷却下に１時間そして室温で２時間撹
拌しながら反応させる。その混合物を真空蒸発させ、そ
して水で沈殿させる。生成物を30mlの温MeOHを用いて懸
濁させ、過しそして乾燥する。
pNA 分子量＝701.68 20mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）に70μ
のEt3Nを用いて中和した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg（NO
2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl（実施例17dに従つて
製造）に0.6ミリモルの安息香酸無水物および70μのE
t3Nを添加する。冷却下に１時間そして室温で２時間撹
拌しながら反応させる。その混合物を真空蒸発させ、そ
して水で沈殿させる。生成物を30mlの温MeOHを用いて懸
濁させ、過しそして乾燥する。
収率:68％ TLC :Rf＝0.31（Pa6） 17. Ｎα−Bz−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量
＝684.61 0.35ミリモルのＮα−Bz−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg
（NO2）−pNA（実施例17eに従つて製造）を、Sakakibar
aの報告（S.Sakakibara氏他、Bull.Chem.Soc.,Japan 24
0,7164−67（1967））に従い適切な装置で0.5mlのアニ
ソールの存在下に15mlの乾燥HFと60分間０℃で反応させ
ることにより脱保護する。反応終了後、すべてのHFを留
去し、粗生成物を実施例１と同じ方法でイオン交換しそ
して精製する。
＝684.61 0.35ミリモルのＮα−Bz−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg
（NO2）−pNA（実施例17eに従つて製造）を、Sakakibar
aの報告（S.Sakakibara氏他、Bull.Chem.Soc.,Japan 24
0,7164−67（1967））に従い適切な装置で0.5mlのアニ
ソールの存在下に15mlの乾燥HFと60分間０℃で反応させ
ることにより脱保護する。反応終了後、すべてのHFを留
去し、粗生成物を実施例１と同じ方法でイオン交換しそ
して精製する。
収率:36％ TLC :Rf＝0.55（Ｍ） HPLC:98％純度 〔α〕＝−24.4゜（ｃ＝0.6％） 実施例 18 Ｎα−Eoc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝65
2.57 18a） Ｎα−Eoc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）
−pNa 分子量＝669.63 20mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）に70μ
のEt3Nを用いて中和した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg（NO
2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl（実施例17dに従つて
製造）に0.6ミリモルのエチルクロロホルメートおよび7
0μのEt3Nを添加する。冷却下に１時間そして室温で
２時間撹拌する間に反応を進行させる。その混合物を真
空蒸発させ、そして水で沈殿させ、過し、そして水お
よびジエチルエーテルで洗浄する。
2.57 18a） Ｎα−Eoc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）
−pNa 分子量＝669.63 20mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）に70μ
のEt3Nを用いて中和した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg（NO
2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl（実施例17dに従つて
製造）に0.6ミリモルのエチルクロロホルメートおよび7
0μのEt3Nを添加する。冷却下に１時間そして室温で
２時間撹拌する間に反応を進行させる。その混合物を真
空蒸発させ、そして水で沈殿させ、過し、そして水お
よびジエチルエーテルで洗浄する。
収率:89％ TLC :Rf＝0.26（Pa6） 18. Ｎα−Eoc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量
＝652.57 0.45ミリモルのＮα−Eoc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Ar
g（NO2）−pNA（実施例18に従つて製造）を実施例17と
同じ方法で0.5mlのアニソールの存在下に20mlの乾燥HF
と反応させることにより脱保護する。
＝652.57 0.45ミリモルのＮα−Eoc−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Ar
g（NO2）−pNA（実施例18に従つて製造）を実施例17と
同じ方法で0.5mlのアニソールの存在下に20mlの乾燥HF
と反応させることにより脱保護する。
収率:41％ TLC :Rf＝0.55（Ｍ） HPLC:98％純度 〔α〕＝−25.2゜（ｃ＝0.35％） 実施例 19 Ｎα−Mes−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl 分子量＝65
8.60 19a） Ｎα−Mes−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）
−pNA 分子量＝675.66 20mlのDMFに溶解した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg（N
O2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl（実施例17dに従つて
製造）と0.6ミリモルのメタンスルホニルクロライドと
を実施例17eと同じ方法および同じ反応条件下に処理す
る。
8.60 19a） Ｎα−Mes−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Arg（NO2）
−pNA 分子量＝675.66 20mlのDMFに溶解した0.5ミリモルのＨ−Ｄ−Arg（N
O2）−Gly−Arg（NO2）−pNA・HCl（実施例17dに従つて
製造）と0.6ミリモルのメタンスルホニルクロライドと
を実施例17eと同じ方法および同じ反応条件下に処理す
る。
収率:70％ TLC :Rf＝0.47（Ａ） 19. Ｎα−Mes−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HCl分子量
＝658.60 0.35ミリモルのＮα−Mes−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Ar
g（NO2）−pNA（実施例19aに従つて製造）を実施例17と
同じ方法で脱保護しそして精製する。
＝658.60 0.35ミリモルのＮα−Mes−Ｄ−Arg（NO2）−Gly−Ar
g（NO2）−pNA（実施例19aに従つて製造）を実施例17と
同じ方法で脱保護しそして精製する。
収率:43.5％ TLC :Rf＝0.48（Ｍ） HPLC:97％純度 〔α〕＝−17.6゜（ｃ＝0.5％） 実施例 20 Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Sar−Arg−pNA・2HCl分子量＝728.
66 20a） Ｈ−Sar−Arg−pNA・2HCl 分子量＝438.33 25mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）にEt3Nを
用いて中和した５ミリモルのＨ−Arg−pNA・2HClに５ミ
リモルのBoc−SarOH、５ミリモルのHOBTおよび６ミリモ
ルのDCCIを添加する。その混合物を冷却下に１時間そし
て室温で一夜撹拌する。形成されたDCUを去し、そし
て溶液を真空蒸発させて得られた油状物を100mlのｎ−
ブタノールに溶解し、２％NaHCO3、H2O、２％KHSO4およ
びH2Oで洗浄する。Na2SO4で乾燥後、ｎ−タノール相を
蒸発させ、そしてジエチルエーテルで沈殿させる。沈殿
を過し、ジエチルエーテルで洗浄し、そして乾燥す
る。物質をHCl溶液（AcOH中1.5M）25ml中に懸濁し、室
温で２時間撹拌し、ジエチルエーテルで沈殿させ、そし
て実施例１と同じ方法でイオン交換する。
66 20a） Ｈ−Sar−Arg−pNA・2HCl 分子量＝438.33 25mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）にEt3Nを
用いて中和した５ミリモルのＨ−Arg−pNA・2HClに５ミ
リモルのBoc−SarOH、５ミリモルのHOBTおよび６ミリモ
ルのDCCIを添加する。その混合物を冷却下に１時間そし
て室温で一夜撹拌する。形成されたDCUを去し、そし
て溶液を真空蒸発させて得られた油状物を100mlのｎ−
ブタノールに溶解し、２％NaHCO3、H2O、２％KHSO4およ
びH2Oで洗浄する。Na2SO4で乾燥後、ｎ−タノール相を
蒸発させ、そしてジエチルエーテルで沈殿させる。沈殿
を過し、ジエチルエーテルで洗浄し、そして乾燥す
る。物質をHCl溶液（AcOH中1.5M）25ml中に懸濁し、室
温で２時間撹拌し、ジエチルエーテルで沈殿させ、そし
て実施例１と同じ方法でイオン交換する。
収率:63.5％ TLC :Rf＝0.15（Ａ） 20. Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Sar−Arg−pNA・2HCl 分子量
＝728.66 30mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）にEt3Nを
用いて中和した３ミリモルのSar−Arg−pNA・2HCl（実
施例20aに従つて製造）に３ミリモルのＺ−Ｄ−ArgOH・
HCl、３ミリモルのHOBTおよび3.5ミリモルのDCCIを添加
する。その混合物を冷却下に１時間および室温で72時間
撹拌する。形成されたDCUを去しそしてその溶液を真
空蒸発させる。生成物を実施例１と同じ方法でイオン交
換しそして精製する。
＝728.66 30mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）にEt3Nを
用いて中和した３ミリモルのSar−Arg−pNA・2HCl（実
施例20aに従つて製造）に３ミリモルのＺ−Ｄ−ArgOH・
HCl、３ミリモルのHOBTおよび3.5ミリモルのDCCIを添加
する。その混合物を冷却下に１時間および室温で72時間
撹拌する。形成されたDCUを去しそしてその溶液を真
空蒸発させる。生成物を実施例１と同じ方法でイオン交
換しそして精製する。
収率:43％ TLC :Rf＝0.2（Ａ） HPLC:99％純度 〔α〕＝−24.7゜（ｃ＝0.55％） 実施例 21 Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−CHA・2HCl分子量＝729.
65 21a） Boc−Arg−CHA・HCl 10mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）に中和し
た3.0ミリモルのBoc−Arg−CHA・HClに3.2ミリモルのイ
ソブチルクロロホルメートを添加する。その反応混合物
を冷却下に15分間撹拌し、そして３ミリモルの３−カル
ボキシ−４−ヒドロキシアニリン、３ミリモルのNEMお
よび10mlのDMFからなる混合物を添加する。冷却下に２
時間そして室温で一夜撹拌する間に反応が進行する。溶
液を真空蒸発させて油状物とし、50mlのｎ−ブタノール
を添加し、そしてその混合物を室温で３時間撹拌する。
形成されたBoc−Arg−CHA・HClを取する。
65 21a） Boc−Arg−CHA・HCl 10mlのDMFに溶解しそして冷却下（−10℃）に中和し
た3.0ミリモルのBoc−Arg−CHA・HClに3.2ミリモルのイ
ソブチルクロロホルメートを添加する。その反応混合物
を冷却下に15分間撹拌し、そして３ミリモルの３−カル
ボキシ−４−ヒドロキシアニリン、３ミリモルのNEMお
よび10mlのDMFからなる混合物を添加する。冷却下に２
時間そして室温で一夜撹拌する間に反応が進行する。溶
液を真空蒸発させて油状物とし、50mlのｎ−ブタノール
を添加し、そしてその混合物を室温で３時間撹拌する。
形成されたBoc−Arg−CHA・HClを取する。
収率:50％ TLC :Rf＝0.5（Ａ） 21b） Ｈ−Arg−CHA・HCl 分子量＝382.25 AcOH中の2N HCl8mlを２ミリモルのBoc−Gly−Arg−CH
A・HClに添加する。室温で45分反応を進行させる。反応
混合物を真空蒸発させて得られる油状物をイソプロパノ
ールに溶解し、そしてEtOAcで沈殿させる。
A・HClに添加する。室温で45分反応を進行させる。反応
混合物を真空蒸発させて得られる油状物をイソプロパノ
ールに溶解し、そしてEtOAcで沈殿させる。
収率:97％ TLC :Rf＝0.15（Ａ） 21c） Boc−Gly−Arg−CHA・HCl 分子量＝502.95 12mlDMFに溶解した２ミリモルのＨ−Arg−CHA.2HClを
冷却下（−10℃）にNEMを用いて中和後、2.1ミリモルの
Boc−Gly−ONpを添加する。冷却下に１時間そして室温
で一夜撹拌しながら反応を進行させる。その溶液を真空
蒸発させて得られる油状物を10mlのMeOHに溶解しそして
EtOAcで沈殿させる。
冷却下（−10℃）にNEMを用いて中和後、2.1ミリモルの
Boc−Gly−ONpを添加する。冷却下に１時間そして室温
で一夜撹拌しながら反応を進行させる。その溶液を真空
蒸発させて得られる油状物を10mlのMeOHに溶解しそして
EtOAcで沈殿させる。
収率:88％ TLC :Rf＝0.4（Ａ） 21d） Ｈ−Gly−Arg−CHA・2HCl 分子量＝439.30 AcOH中の2N HCl10mlを２ミリモルのBoc−Gly−Arg−C
HA・HClに添加する。その反応混合物を室温で45分間撹
拌し次いでEtOAc中で沈殿させる。
HA・HClに添加する。その反応混合物を室温で45分間撹
拌し次いでEtOAc中で沈殿させる。
収率:98％ TLC :Rf:0.15（Ａ） 21. Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−CHA・2HCl 分子量
＝729.65 10mlのDMFに溶解した１ミリモルのＨ−Gly−Arg−CHA
・2HClを冷却下（−10℃）にNEMを用いて中和後、1.1ミ
リモルのＺ−Ｄ−Arg−ONp・HNO3を添加する。冷却下に
１時間そして室温で２時間反応を進行させる。その溶液
を真空蒸発させて得られる油状物をEtOAcを用いて沈殿
させる。生成物をSephadex（商標名）カラムにて10％Ac
OHを溶離剤として用いて精製し、そしてクロライド型の
Sephadex（商標名）QAE−25カラムにて50％EtOHを溶離
剤として用いてイオン交換する。
＝729.65 10mlのDMFに溶解した１ミリモルのＨ−Gly−Arg−CHA
・2HClを冷却下（−10℃）にNEMを用いて中和後、1.1ミ
リモルのＺ−Ｄ−Arg−ONp・HNO3を添加する。冷却下に
１時間そして室温で２時間反応を進行させる。その溶液
を真空蒸発させて得られる油状物をEtOAcを用いて沈殿
させる。生成物をSephadex（商標名）カラムにて10％Ac
OHを溶離剤として用いて精製し、そしてクロライド型の
Sephadex（商標名）QAE−25カラムにて50％EtOHを溶離
剤として用いてイオン交換する。
収率:57％ TLC :Rf＝0.21（Ａ） HPLC:99％純度 〔α〕＝−18.6゜（ｃ＝0.3％） 実 験 酸素反応速度特性の測定 様々な基質濃度（Si）および一定の酵素濃度（Eo）で
加水分解初速度（Vi）を測定することにより基質に対す
る反応速度データーをしらべる。結合定数（Km）および
最大速度（Vmax）をLineweaver−Burk−プロツトから既
知の方法で得た後、Kcatを算出する（Hemker H.C.前掲
書）。
加水分解初速度（Vi）を測定することにより基質に対す
る反応速度データーをしらべる。結合定数（Km）および
最大速度（Vmax）をLineweaver−Burk−プロツトから既
知の方法で得た後、Kcatを算出する（Hemker H.C.前掲
書）。
方 法 酵素と基質を＋37℃で緩衝溶液中で混合する。１分間
あたりの吸光度変化を、405nmで分光光度計を用いて（p
NA基質の場合）、あるいは380nmの励起波長および440nm
の発光波長で分光螢光計を用いて（AMC基質の場合）測
定する。
あたりの吸光度変化を、405nmで分光光度計を用いて（p
NA基質の場合）、あるいは380nmの励起波長および440nm
の発光波長で分光螢光計を用いて（AMC基質の場合）測
定する。
次の商業的に入手し得る標準基質を試験に用いる。
標準基質 Ｓ−2222:Bz−Ile−Glu−（γ−OR）−Gly−Arg−pNA・
HCl R:H＝50％;CH3＝50％ KabiVitrum AB社、ストツクホルム、スエーデン CBS 31.39:CH3SO2−Ｄ−Leu−Gly−Arg−pNA・AcOH Diagnostica Stago社、Asnieres s/Seine、フランス 試験1. ウシF X aに対する反応速度定数の測定 一定の酵素濃度、すなわち Eo＝４ナノモル／（pNA−基質） Eo＝２ナノモル／（AMC−基質） を有するウシF X a（KabiVitrum社）と、0.01〜0.4ミリ
モル／濃度（Si）の基質を37℃でトリス緩衝溶液（0.
05モル／、pH8.3、Ｉ＝0.25（NaCl）中で混合する。
１分間あたりの吸光度変化をpNA−基質の場合には405nm
で分光光度計を用いて、あるいはAMC−基質の場合は440
nmの発光波長で螢光光度計を用いてそれぞれ測定する。
次いでこれらの値から、KmおよびKcatを算出し、それら
を第Ｉ表に示す。
HCl R:H＝50％;CH3＝50％ KabiVitrum AB社、ストツクホルム、スエーデン CBS 31.39:CH3SO2−Ｄ−Leu−Gly−Arg−pNA・AcOH Diagnostica Stago社、Asnieres s/Seine、フランス 試験1. ウシF X aに対する反応速度定数の測定 一定の酵素濃度、すなわち Eo＝４ナノモル／（pNA−基質） Eo＝２ナノモル／（AMC−基質） を有するウシF X a（KabiVitrum社）と、0.01〜0.4ミリ
モル／濃度（Si）の基質を37℃でトリス緩衝溶液（0.
05モル／、pH8.3、Ｉ＝0.25（NaCl）中で混合する。
１分間あたりの吸光度変化をpNA−基質の場合には405nm
で分光光度計を用いて、あるいはAMC−基質の場合は440
nmの発光波長で螢光光度計を用いてそれぞれ測定する。
次いでこれらの値から、KmおよびKcatを算出し、それら
を第Ｉ表に示す。
第Ｉ表は、本発明のトリペプチド基質がウシ酵素F X
aに対して高い親和性を有すると同時にその大部分が高
い速度を有することを示している。選択性定数Kcat/km
からは、新規基質がＳ−2222よりも優れた対ウシF X a
選択性を示すこと、そして大部分の新規模基質にあつて
はCBS31.39を凌いでさえいることがわかる。
aに対して高い親和性を有すると同時にその大部分が高
い速度を有することを示している。選択性定数Kcat/km
からは、新規基質がＳ−2222よりも優れた対ウシF X a
選択性を示すこと、そして大部分の新規模基質にあつて
はCBS31.39を凌いでさえいることがわかる。
試験2. ヒトF X aに対する反応速度定数の測定 0.1〜0.7ミリモル／濃度（Si）の基質をヒト結晶F
X aと混合し、そしてAurell;L.氏他（Perspectives in
Homostasis,Ed.Fareed J et al,New York,Pergamon Pre
ss1981,P.382〜388）により報告された方法に従つて処
理する。
X aと混合し、そしてAurell;L.氏他（Perspectives in
Homostasis,Ed.Fareed J et al,New York,Pergamon Pre
ss1981,P.382〜388）により報告された方法に従つて処
理する。
供試血漿、対照または標準物の10μを200μのト
リス緩衝溶液（トリス0.05モル／、pH7.0、Ｉ＝0.25
（NaCl））、ポリブレン（polybrene）（0.1g/）を混
合し、そして37℃で２〜４分間インキユベートする。前
述のようにして調製されたトリス緩衝溶液中に溶解され
た0.1〜0.7ミリモル／濃度の基質（37℃）200μを
添加する。この混合物を十分撹拌し、そして30秒内にRV
V＋CaCl2（20〜25℃）200μを添加し、そしてその混
合物を撹拌する。直ちに、405nmおよび37℃で分光光度
計を用いて吸光度変化を測定する。
リス緩衝溶液（トリス0.05モル／、pH7.0、Ｉ＝0.25
（NaCl））、ポリブレン（polybrene）（0.1g/）を混
合し、そして37℃で２〜４分間インキユベートする。前
述のようにして調製されたトリス緩衝溶液中に溶解され
た0.1〜0.7ミリモル／濃度の基質（37℃）200μを
添加する。この混合物を十分撹拌し、そして30秒内にRV
V＋CaCl2（20〜25℃）200μを添加し、そしてその混
合物を撹拌する。直ちに、405nmおよび37℃で分光光度
計を用いて吸光度変化を測定する。
結果を第II表に示す。
第II表は、新規トリペプチド基質が標準基質に比較し
てヒトF X a酵素に対して優れた親和性を有すると同時
に高い速度を有することを示しており、それゆえこれら
新規ペプチドは商業的に入手し得る基質よりも優れてい
る。
てヒトF X a酵素に対して優れた親和性を有すると同時
に高い速度を有することを示しており、それゆえこれら
新規ペプチドは商業的に入手し得る基質よりも優れてい
る。
試験3. トロンビン感受性の測定 血漿中のF Xを測定する場合、そのF X a測定を妨害す
る活性トロンビンが形成される危険が常に存在する。
る活性トロンビンが形成される危険が常に存在する。
一定濃度（Eo＝1.3ナノモル／）のウシトロンビン
（KabiVitrum社）と0.1〜0.4ミリモル／濃度（Si）の
基質を37℃で、トリス緩衝溶液（0.05モル／、pH＝8.
3、Ｉ＝0.25（NaCl））中で混合する。この試験は試験
１と同様にして行う。
（KabiVitrum社）と0.1〜0.4ミリモル／濃度（Si）の
基質を37℃で、トリス緩衝溶液（0.05モル／、pH＝8.
3、Ｉ＝0.25（NaCl））中で混合する。この試験は試験
１と同様にして行う。
１分間あたりの吸光度変化を405nmで分光光度計を用
いて測定し、そしてKmおよびKcat値を第III表に示され
るとおり算出する。
いて測定し、そしてKmおよびKcat値を第III表に示され
るとおり算出する。
第III表は、新規トリペプチド基質が対ウシF X a選択
性定数のトロンビンに対する比においてテトラペプチド
に匹敵し、またウシF X aの感受性をトロンビンと比較
した場合に既知のトリペプチドよりも優れていることを
示している。
性定数のトロンビンに対する比においてテトラペプチド
に匹敵し、またウシF X aの感受性をトロンビンと比較
した場合に既知のトリペプチドよりも優れていることを
示している。
試験4. 溶解度 いくつかの新規基質についてそれぞれ25℃における水
およびトリス緩衝溶液（0.05モル／、pH＝8.3、Ｉ＝
0.25（NaCl））への溶解度をテトラペプチド基質Ｓ−22
22と比較したものを第IV表に示す。
およびトリス緩衝溶液（0.05モル／、pH＝8.3、Ｉ＝
0.25（NaCl））への溶解度をテトラペプチド基質Ｓ−22
22と比較したものを第IV表に示す。
この表は新規トリペプチド基質が水および緩衝溶液の
いずれにおいてもテトラペプチドＳ−2222よりも明らか
に高い溶解度を有していることを示している。
いずれにおいてもテトラペプチドＳ−2222よりも明らか
に高い溶解度を有していることを示している。
Claims (16)
- 【請求項１】一般式 R1−Ｘ−Ｄ−Arg−Ａ−Arg−NH−R2 〔式中、 R1は水素、α−もしくはβ−ナフチル基、低級アルキル
基（該基はカルボキシル基で置換されていてもよい）、
未置換もしくは置換フェニル−もしくはフェニルアルキ
ル基（そのアルキル基は１〜４個の炭素原子を有し、ま
た好ましくは置換基はフェニル環のパラ位にありそして
置換基は低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンまた
はニトロ基である）であり、 Ｘは または単結合であるがただしR1が水素である場合にのみ
Ｘは単結合であり、 ＡはGlyまたはSarであり、 R2は定量的に測定されうる酵素的加水分解によりR2−NH
2化合物を生ずる芳香族または複素環残基である〕 を有するトリペプチド誘導体またはその無機または有機
酸とのジ塩およびトリ塩。 - 【請求項２】ＡがGlyである請求の範囲第１項記載のト
リペプチド誘導体。 - 【請求項３】Ｘがオキシカルボニル−またはスルホニル
基である請求の範囲第１項または第２項記載のトリペプ
チド誘導体。 - 【請求項４】NH2−R2が色原体性または蛍光原性の基で
ある請求の範囲第１〜３項のいずれかに記載のトリペプ
チド誘導体。 - 【請求項５】NH2−R2がpNA、AMCまたはCHAである請求の
範囲第４項記載のトリペプチド誘導体。 - 【請求項６】R1がエチル、ベンジルまたはtert−ブチル
である請求の範囲第１〜５項のいずれかに記載のトリペ
プチド誘導体。 - 【請求項７】ジ塩の形態の請求の範囲第１〜６項のいず
れかに記載のトリペプチド誘導体。 - 【請求項８】Ｎα−Bzls−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2H
Clである請求の範囲第１項記載のトリペプチド誘導体。 - 【請求項９】Ｎα−Mos−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2HC
lである請求の範囲第１項記載のトリペプチド誘導体。 - 【請求項１０】Ｎα−Ets−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2
HClである請求の範囲第１項記載のトリペプチド誘導
体。 - 【請求項１１】Ｎα−Ｚ−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2H
Clである請求の範囲第１項記載のトリペプチド誘導体。 - 【請求項１２】Ｎα−Boc−Ｄ−Arg−Gly−Arg−pNA・2
HClである請求の範囲第１項記載のトリペプチド誘導
体。 - 【請求項１３】−NH−R2を有するかまたは後に−NH−R2
により交換される脱保護可能なカルボキシル保護基を有
するArgに対するカップリングにより段階的に、あるい
はR1−Ｘ−Ｄ−Arg−ＡをArg−NH−R2にカップリングさ
せることにより、合成を行うことを特徴とする一般式 R1−Ｘ−Ｄ−Arg−Ａ−Arg−NH−R2 〔式中、 R1は水素、α−もしくはβ−ナフチル基、低級アルキル
基（該基はカルボキシル基で置換されていてもよい）、
未置換もしくは置換フェニル−もしくはフェニルアルキ
ル基（そのアルキル基は１〜４個の炭素原子を有し、ま
た好ましくは置換基はフェニル環のパラ位にありそして
置換基は低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンまた
はニトロ基である）であり、 Ｘは または単結合であるがただしR1が水素である場合にのみ
Ｘは単結合であり、 ＡはGlyまたはSarであり、 R2は定量的に測定されうる酵素的加水分解によりR2−NH
2化合物を生ずる芳香族または複素環残基である〕 を有するトリペプチド誘導体の製造方法。 - 【請求項１４】一般式 R1−Ｘ−Ｄ−Arg−Ａ−Arg−NH−R2 〔式中、 R1は水素、α−もしくはβ−ナフチル基、低級アルキル
基（該基はカルボキシル基で置換されていてもよい）、
未置換もしくは置換フェニル−もしくはフェニルアルキ
ル基（そのアルキル基は１〜４個の炭素原子を有し、ま
た好ましくは置換基はフェニル環のパラ位にありそして
置換基は低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンまた
はニトロ基である）であり、 Ｘは または単結合であるがただしR1が水素である場合にのみ
Ｘは単結合であり、 ＡはGlyまたはSarであり、 R2は定量的に測定されうる酵素的加水分解によりR2−NH
2化合物を生ずる芳香族または複素環残基である〕 を有するトリペプチド誘導体を使用することを特徴とす
るセリンプロテアーゼの測定方法。 - 【請求項１５】セリンプロテアーゼがF Xaである請求の
範囲第14項記載の測定方法。 - 【請求項１６】一般式 R1−Ｘ−Ｄ−Arg−Ａ−Arg−NH−R2 〔式中、 R1は水素、α−もしくはβ−ナフチル基、低級アルキル
基（該基はカルボキシル基で置換されていてもよい）、
未置換もしくは置換フェニル−もしくはフェニルアルキ
ル基（そのアルキル基は１〜４個の炭素原子を有し、ま
た好ましくは置換基はフェニル環のパラ位にありそして
置換基は低級アルキル、低級アルコキシ、ハロゲンまた
はニトロ基である）であり、 Ｘは または単結合であるがただしR1が水素である場合にのみ
Ｘは単結合であり、 ＡはGlyまたはSarであり、 R2は定量的に測定されうる酵素的加水分解によりR2−NH
2化合物を生ずる芳香族または複素環残基である〕 を有するトリペプチド誘導体を使用することを特徴とす
る、F X、F VII、F VII a、F VIII:C、F VIII:Ca、F I
X、F IX a、抗トロンビンIII、血小板第４因子、ヘパリ
ン、低分子量ヘパリン類およびヘパリノイドから選択さ
れたセリンプロテアーゼまたはその酵素前駆体形態のも
のと相互作用し得る成分の測定方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8601327A SE8601327D0 (sv) | 1986-03-21 | 1986-03-21 | Nya peptidderivat |
| SE8601327-3 | 1986-03-21 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63502897A JPS63502897A (ja) | 1988-10-27 |
| JP2560058B2 true JP2560058B2 (ja) | 1996-12-04 |
Family
ID=20363926
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62502039A Expired - Lifetime JP2560058B2 (ja) | 1986-03-21 | 1987-03-19 | 新規なペプチド誘導体 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0262191B1 (ja) |
| JP (1) | JP2560058B2 (ja) |
| AT (1) | ATE70068T1 (ja) |
| AU (1) | AU590836B2 (ja) |
| FI (1) | FI875151A (ja) |
| SE (1) | SE8601327D0 (ja) |
| WO (1) | WO1987005608A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9340820B2 (en) | 2009-08-26 | 2016-05-17 | Queen's University Of Belfast | Compounds and methods for protease detection |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2658519B1 (fr) * | 1990-02-19 | 1995-07-07 | Serbio | Substrats peptidiques pour identification du facteur xa. |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1161432A (en) * | 1980-02-12 | 1984-01-31 | Lars G. Svendsen | Tripeptide derivatives and their application in assaying enzymes |
| DE3244030A1 (de) * | 1982-11-27 | 1984-05-30 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Chromogene verbindungen, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| JPS60241900A (ja) * | 1984-05-16 | 1985-11-30 | Nitto Boseki Co Ltd | 新規な第Ｘａ因子活性測定用基質 |
| DE3428543A1 (de) * | 1984-08-02 | 1986-02-13 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Neue p-phenylendiamin-peptide und diese enthaltende reagenzien zur bestimmung von proteasen des blutgerinnungssystems |
-
1986
- 1986-03-21 SE SE8601327A patent/SE8601327D0/xx unknown
-
1987
- 1987-03-19 WO PCT/SE1987/000141 patent/WO1987005608A1/en active IP Right Grant
- 1987-03-19 JP JP62502039A patent/JP2560058B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-03-19 AT AT87902173T patent/ATE70068T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-03-19 EP EP87902173A patent/EP0262191B1/en not_active Expired
- 1987-03-19 AU AU71697/87A patent/AU590836B2/en not_active Ceased
- 1987-11-20 FI FI875151A patent/FI875151A/fi not_active Application Discontinuation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9340820B2 (en) | 2009-08-26 | 2016-05-17 | Queen's University Of Belfast | Compounds and methods for protease detection |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE70068T1 (de) | 1991-12-15 |
| FI875151A0 (fi) | 1987-11-20 |
| SE8601327D0 (sv) | 1986-03-21 |
| JPS63502897A (ja) | 1988-10-27 |
| WO1987005608A1 (en) | 1987-09-24 |
| FI875151A (fi) | 1987-11-20 |
| EP0262191A1 (en) | 1988-04-06 |
| AU590836B2 (en) | 1989-11-16 |
| AU7169787A (en) | 1987-10-09 |
| EP0262191B1 (en) | 1991-12-04 |
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