NL8802635A - Nieuwe alkoxyderivaten van ginkgoliden, hun bereiding en therapeutische preparaten die ze bevatten. - Google Patents

Description

Λ « *

Nieuwe alkoxyderivaten van Ginkgoliden, him bereiding en therapeutische preparaten die ze bevatten.

De uitvinding heeft betrekking op Ginkgo!ide derivaten, op methoden voor hun bereiding en op farmaceutische preparaten die ze bevatten.

De uitvinding verschaft 1-alkoxy-derivaten van 5 de Ginkgoliden A,B,C,J en M en verschaft verder 10-alkoxyderivaten van deze Ginkgoliden, De aanbevolen alkoxygroepen zijn de methoxy-en ethoxygroep.

De uitvinding verschaft eveneens een methode voor het bereiden van 1-alkoxyderivaten van de Ginkgoliden A,B,C,J en M 10 en van 10-alkoxyderivaten van deze Ginkgoliden, welke methode de reactie, in oplossing, van Ginkgolide A,B,C,J of M met een overmaat van een diazoalkaan en scheiding van het verkregen mengsel van 1-alkoxy-Ginkgolide en 10-alkoxy-Ginkgolide^omvat.

Volgens een voorkeurs.uitvoeringswerkwijze wordt 15 het gekozen Ginkgolide opgelost in dioxan, geschikt in een concentratie van 1 g per 100 ml en het gekozen diazoalkaan wordt opgelost in diethylether. De oplossing die het diazoalkaan bevat wordt langzaam toegevoegd aan die welke het Ginkgolide bevat, waarbij men er voor zorgt dat 10 equivalenten diazoalkaan per 20 equivalent Ginkgolide aanwezig zijn. Men laat de gemengde oplossing 3-8 uren staan bij de omgevingstemperatuur, waardoor een mengsel van 1-alkoxy-Ginkgolide en 10-alkoxy-Ginkgolide wordt verkregen. Het scheiden van de twee produkten van het overgebleven niet gereageerde Ginkgolide kan geschikt geschieden door de 25 oplosmiddelen te verdampen en het residu door een silicagelkolom onder toepassing van een mengsel van gelijke volumedelen ethyl-acetaat en hexaan als elutiemiddel te elueren. De verkregen oplossing wordt ingedampt en behandeld met chloroform, dat het 10-alkoxy-derivaat oplost. Het genoemde 10-alkoxyderivaat wordt' uit deze 50 chloroformoplossing gewonnen en de overblijvende oplossing wordt daarna behandeld met diethylether, waardoor het 1-alkoxyderivaat wordt verkregen.

De alkoxy-Ginkgoliden volgens de uitvinding zijn van belang voor het behandelen van door PAF-Acether geïnduceerde 35 ziekten en de uitvinding verschaft dientengevolge eveneens een farmaceutisch preparaat dat een 1-alkoxyderivaat van Ginkgolide •8802638 * -2-..

A,B,C,J of M of 1O-alkoxyderivaat van één van de genoemde Ginkgoliden of :een mengsel van twee of meer van deze 1-alkoxy en/of genoemde 10-alkoxyderivaten,desgewenst gemengd met een farmaceutisch aanvaardbaar verdunningsmiddel of drager,bevat.

5 voorbeeld 1 l-Methoxy-Ginkgolide_B en 1O-methoxy-Ginkgolide B.

Men voègde aan een oplossing van Ginkgolide B in dioxan (10g/l) langzaam 10 equivalenten van een oplossing van 1° diazomethaan in diethylether toe. Men liet het mengsel 4 uren bij de omgevingstemperatuur staan en scheidde het daarna volgens de hiervoor beschreven aanbevolen scheidingswerkwijze. Men verkreeg 1-methoxy-Ginkgolide B, waarvan de structuur werd bevestigd door HPLC, in een opbrengst van 66,1 % en 1O-methoxy-Ginkgolide B. in een opbrengst van 24,4% 1-methoxy 10-methoxy

Ginkgolide A 56,3 % 13,2 % 20 Ginkgolide C 49,1 % 16,7 %

Voorbeeld 2 1-Ethoxy-Ginkgolide B en 10-ethoxy-Ginkgolide B.

25 Volgens de methode beschreven in voorbeeld 1, echter onder toepassing van diazoethaan in plaats van diazomethaan, (duur 6 uren), werd 1-ethoxy-Ginkgolide B verkregen in een opbrengst van 63,2% en 10-ethoxy-Ginkgolide B in een opbrengst van 25,,7%. Op dezelfde wijze te werk gaande, doch nu met de Ginkgoliden A en C, 30 werden de volgende opbrengsten verkregén: 1-ethoxy 10-ethoxy

Ginkgolide A 72,8% 20,1%

Ginkgolide C 59,2 % 30,4 % .8802635 J* - 3 -

Toxiciteit

De toxiciteit van de verbindingen volgens de uitvinding werd bepaald op muizen, bij orale toediening.

Er werden geen dode dieren aangetroffen bij de 5 maximaal toegediende dosis aan muizen.

Farmacologie.

Een bewijs van het farmaceutische belang van de verbindingen volgens de uitvinding werd geleverd door de volgende farmaceutische proeven.

10 1) - Remming van de plaatjesaggregatie op Nieuw —

Zeelandse konijnen.

Het onderzoek werd uitgevoerd op plaatjes bij plasma van Nieuw-Zeelandse konijnen.

Bloedmonsters werden onttrokken via de auriculaire 15 arterie en gébracht in een citraatbuffer (3,8%; pH7,4), waarbij het bloed verder gedurende 15 minuten bij 1200 omwentelingen per minuut werd gecentrifugeerd.

Het onderzochte monster werd bereid in DMSO, daarna 1 minuut uitgegoten op plasma dat rijk aan plaatjes is en ver-20 volgens werd een dosis van 2,5 nM PAF toegevoegd.

De bepaling werd uitgevoerd met een Cronolog Coultronics inrichting, die het transmissiepercentage overeenkomende met de maximale hoogte van de piek voor de desaggregatie bepaalt.

25 Het percentage variatie van de remming ten opzichte van het transmissiepercentage werd berekend (controle: zuiver DMSO).

Deze methode is uitvoerig beschreven in LABORATORY INVESTIGATIONS, deel 41, no.3, biz. 275, 1979, JEAN-PIERRE CAZENAVE; Dr. MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND 30 J. FRASER MUSTARD, M.D. "Aggregation of Rabbits Platelets bij

Platelet-Activating Factor is independent of the Release Reaction and the Arachidonate Pathway and inhibited by Membrane-Active Drugs".

Uit de resultaten blijkt dat de verbindingen 35 de aggregatie geïnduceerd door 2,5 nM PAF remmen.

Vijf proeven uitgevoerd op vijf verschillende konijnen maken het mogelijk de IC^- waarde van de verschillende verbindingen onder toepassing van de lineaire regressieproef te bepalen.

.8802635

'K

- 4 -

De ICgQ-waarden op plaatjes bleken de volgende te zijn:

Ginkgolide-type -oen, en plaats van de 3 25 5 substitutie BI- 6,6 10'7 1,1 10~6 B 10- ' 2,9 10"7 7,2 10-6

Cl- 4,2 10"6 8,5 10-6 C 10- 3,0 10"6 9,3 10"6 10 A 1- 4,6 10”6 8,7 10"6 A 10- 1,3 10"5 6,2 10-4 2)-Anafylactische bronchoconstrictie van een passief gesensibiliseerd Guinees biggetje.

Passief_heteroloog_sensibiliseren.

15 Mannelijke (Hartley) guinese biggetjes (400-500 g) werden gesensibiliseerd door een intraveneuze injectie (IV) van een antiovalbumine immuunserum van konijnen (Cooper Biomedical, U.S.A.). Ter verkrijging van een bevredigende anafylactische respons, 24 uur later, werden de volgende toepassingsomstandig-20 heden ingesteld: Injectie in de penis van een verdund serum (tot de halve concentratie 0,05 ml/100g).

Bronchoconstrictie meting.

Guinese biggetjes werden geanesthetiseerd met urethaan (2g/kg IP), daarna getracheotomiseerd en geventileerd 25 met behulp van een ademhalingspomp (UGO BASILE): slagvolume lml/100 g, 60 slagen per minuut.

Een pneumothorax werd uitgevoerd teneinde de spontane ademhaling uit te schakelen. De beginweerstand werd bij een waterdruk van 10 cm volgens de methode van Konzett en 30 Rössler constant gehouden en de overmaat van het luchtvolume werd gemeten met een bronchospasmen transducer (UGO BASILE) .8802635 * * * - 5 - verbonden met een UGO BASILE recorder "Gemini”. De venajugularis werd gecatheteriseerd voor intraveneuse injecties. De anafylac- tische shock werd geinduceerd door een intraveneuze injectie van 0/75 mg/kg heteroloog passieve ovalbumine. De produkten werden 5 via orale weg toegediend, 1 uur voor de antigene stimulering in de vorm van een gomachtige waterige suspensie, in een dosis van 25 mg/kg.

Resultaten ^ De bronchoconstrictie geinduceerd door ovalbumine werd uitgedrukt in het percentage maximale bronchoconstrictie verkregen door de trachea af te klemmen. De resultaten zijn opgenomen in de volgende tabel: 15

Ginkgolide type en plaats van de -OCH^ -OC2H5 substitutie B 1- -49,7*** -38,3** 20 B 10- -54,9*** -36,2** C 1- -40,1** -39,8** C 10- -30,6* -23,1*

A 1- -32,0* -15,INS

25 A 10- -25,2 -12,2 NS

NS: niet significant *: significant **: erg significant 30 ***: zeer significant

Dosering.

Bij de humane therapie liggen gebruikelijk doses 35 voor orale toediening tussen 0,5 en 1 g per dag, in tabletten of gelatinecapsules gedurende een maand.

Bij intraveneuze toediening worden drie wekelijkse injectiesvan 0,05-0,2 g in een isotonische oplossing, gedurende 1 maand, aanbevolen.

.8802635

Claims (6)

1. Door 1-alkoxy of 10-alkoxy gesubstitueerde Ginkgoliden of mengsels daarvan.

2. Werkwijze voor het bereiden van Ginkgolide-derivaten, met het kenmerk, dat men Ginkgolidederivaten volgens 5 conclusie 1 bereidt door reactie van het gekozen Ginkgolide in dioxan bij kamertemperatuur gedurende 1-10 uren met een oplossing van een overmaat van een diazodlkaan in diethylether.

3. Therapeutisch preparaat voor de behandeling van door PAF-Acether geïnduceerde ziekten, met het kenmerk, 10 dat men één of een aantal verbindingen volgens conclusie 1 in een voor een dergelijke toepassing geschikte toedieningsvorm brengt.

4. Therapeutisch preparaat volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat men als essentieel bestanddeel een vol- 15 doende hoeveelheid van een verbinding volgens conclusie 1 tezamen met een geschikt verdunningsmiddel of drager, toepast.

5. Therapeutische preparaten en werkwijzen als beschreven in de beschrijving en/of voorbeelden.

6. Gevormde therapeutische preparaten volgens een 20 der voorgaande conclusies of die verkregen kunnen worden onder toepassing van een hiervoor beschreven werkwijze. o-o-o-o-o-o ^88 0 2 6 3 5