AT397097B - Neue alkoxyderivate der ginkgolide, ihre herstellung und sie enthaltende therapeutische zusammensetzungen - Google Patents

Description

AT 397 097 B

Die Erfindung betrifft Ginkgolidderivate, Verfahren zu ihrer Herstellung und pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten.

Die Erfindung liefert 1-Alkoxyderivate der A, B und C Ginkgolide und liefert ferner 10-Alkoxyderivate dieser Ginkgolide. Die bevorzugten Alkoxygruppen sind Methoxy und Äthoxygruppen. 5 Die Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Herstellung der 1-Alkoxyderivate der A, B und C Ginkgolide sowie der 10 Alkoxyderivate dieser Ginkgolide. Das Verfahren umfaßt das Reagieren der A, B und C Ginkgolide in Lösung mit einem Überschuß von Diazoalkan und Trennen der daraus resultierenden Mischung der 1-Alkoxy-Ginkgolideund 10-Alkoxy-Ginkgolide. ln einem bevorzugten Verfahren wird das ausgewählte Ginkgolid in Dioxan gelöst, passenderweise in einer 10 Konzentration von 1 g/100 ml und das ausgewählte Diazoalkan wird in Diäthyläther gelöst. Die diazoalkanhältige Lösung wird langsam der Ginkgolidlösung zugefügt, bis zum Erreichen von 10 Äquivalenten Diazoalkan pro Äquivalent Ginkgolid. Die gemischte Lösung wird bei Umgebungstemperatur für 3 bis 8 h stehen gelassen und führt zu einer Mischung von 1-Alkoxy-Ginkgolid und 10-Alkoxy-Ginkgolid. Das Trennen der beiden Produkte vom restlichen, nicht an der Reaktion teilgenommenen Ginkgolid kann passenderweise durch 15 Abdampfen der Lösungsmittel und Durchspülen des Rückstandes durch eine Silikagelsäule unter Verwendung von Äthylacetat: Hexan, im Volumen 1:1, als Eluent erfolgen. Die erhaltene Lösung wird abgedampft und mit Chloroform behandelt, welches das 10-Alkoxyderivat löst. Das 10-Alkoxyderivat wird aus dieser chloroformigen Lösung gewonnen und die verbleibende Lösung mit Diäthyläther behandelt, wodurch man das 1-Alkoxyderivat erhält 20 Die Alkoxy-Ginkgolide der Erfindung sind für die Behandlung von Krankheiten von Interesse, die durch die PAF-Acether hervorgerufen werden und die Erfindung liefert in Übereinstimmung damit pharmazeutische Zusammensetzungen, die 1-Alkoxyderivate der A, B, C Ginkgolide oder 10-Alkoxyderivate eines dieser Ginkgolide oder eine Mischung von zwei oder mehreren der 1-Alkoxy und/oder 10-Alkoxyderivate, gemischt mit einem pharmazeutisch akzeptierbaren Lösungsmittel oder Träger enthalten. 25 Die Erfindung wird an Hand der folgenden Beispiele erläutert:

Beispiel 1

1-Methoxv-Ginkgolid B und 10-Methoxv-GinkgolidB

Zu einer Lösung des Ginkgolids B in Dioxan (10 g/l) wurden langsam 10 Äquivalente einer Lösung von 30 Diazomethan in Diäthyläther zugegeben. Die Mischung wurde bei Umgebungstemperatur für 4 h stehen gelassen und dann gemäß dem oben beschriebenen, bevorzugten Trennverfahren getrennt 1 -Methoxy-Ginkgolid B, dessen Struktur durch HPLC bestätigt wurde, wurde mit 66,1 % Ausbeute und 10-Methoxy-Ginkgolid B in 24,4 % Ausbeute «halten.

Unter Verwendung des gleichen Verfahrens, aber mit den Ginkgoliden A und C wurden die folgenden 35 Ausbeuten erhalten: 1-Methoxy 10-Methoxy Ginkgolid A 53,3 % 132% Ginkgolid C 49,1 % 16,7 % 45 Beispiel 2

1 -Äthoxv-Ginkgolid B und 10-Äthoxv-Ginkgolid B

Gemäß dem in Beispiel 1 beschriebenen Verfahren, aber unter Verwendung von Diazoäthan anstelle von Diazomethan (Dauer: 6 h) wurde 1-Äthoxy-Ginkgolid B mit 63,2 % Ausbeute und 10-Äthoxy-Ginkgolid B mit 25,7 % Ausbeute erhalten. 50 Unter Verwendung des gleichen Verfahrens, aber mit den Ginkgoliden A und C wurden die folgenden Ausbeute «halten: -2- AT 397 097 B 1-Äthoxy ' 10-Äthoxy Ginkgolid A 72,8 % 20,1% Ginkgolid C 59,2 % 30,4%

Toxizität 10 Die Toxizität der erfindungsgemäßen Verbindungen wurde an Mausen durch orale Verabreichung überprüft

Es wurde bei maximal»' Verabieichungsdosis keine Letalität festgestellt

Pharmakologie

Ein Nachweis der pharmazeutischen Wirksamkeit der erfindungsgemäßen Verbindungen wurde durch die 15 folgenden Experimente geführt 11 - Verhinderung der Blutplättchenaggregation bei Neuseelandkaninchen.

Die Versuche wurde an Plättchen mit Plasma von Neuseelandkaninchen durchgefiihrt Blutproben wurden von der Auriculararterie genommen und in einen Zitratpuffer (3,8 %; pH 7,4) eingebracht Das Blut wurde 15 min bei 20 1200 U/min zentrifugiert.

Die getesteten Proben wurden in DMSO hergerichtet, dann für 1 min auf plättchenreiches Plasma geleert worauf eine Dosis von 2,5 nM PAF gegeben wurde.

Die Bestimmung wurde mittels eines Cronolog Coultronics Gerätes durchgefiihrt, welches den Übergangsprozentsatz bestimmt der der maximalen Höhe des Ausschlages entspricht bevor die Zersetzung beginnt 25 Der Prozentsatz der Varänderung der Verhinderung bezüglich des Übergangsprozentsatzes wird berechnet (Kontrolle: reine DMSO).

Dieses Verfahren wurde detailliert in LABORATORYINVESTIGATIONS, Vol. 41, No. 3, Seite 275,1979, JEAN-PIERRE CAZENAVE, Dr. MED., JACQUES BENVENISTE, Dr. MED., AND J. FRASER MUSTARD, M. D., "Aggregation of Rabbits Platelets by Platelet-Activating Factor is independent od the 30 Release Reaction and the Arachidonate Pathquay and inhibited by Membrane-Active Drugs".

Die Resultate zeigen, daß die Verbindungen die durch 2,5 nM PAF induzierte Plättchenaggregation verhindern. Fünf Tests an fünf verschiedenen Kaninchen erlauben es, den K^g-Wert der verschiedenen Verbindungen unter Verwendung des linearen Regressionstests zu berechnen.

Als IC5o-Werte für Plättchen wurden die folgenden bestimmt* 35 40 45 Ginkgolidart und Substitutionsstelle -OCH3 -oc2h5 B 1- 6,6 10-7 11,1 10-6 B i0- 2,9 10-7 7,2 10-6 C 1- 4,2 10-7 8,5 10-6 C 10- 3,0 10-7 9,3 10-6 A 1- 4,6 ΙΟ"6 8,7 IO*6 A 10- 1,3 IO*5 6,2 IO4 -3- 50

AT 397 097 B 21 - Anaphylaktische Bronchokonstriktion passiv sensirivierter Meerschweinchen '

Passive heterologe Sensitivierung Männliche Meerschweinchen (400-500 g) wurden durch eine intravenöse Injektion (TV) eines Kaninchen-5 Antiovalbumin-Immunserums (Cooper Biomedical, U.S.A) sensitivierL Um eine genügende anaphylaktische Antwort nach 24 h zu erhalten, wurden die folgenden Anwendungsbedingungen fixiert; Injektion eines verdünnten Serums (auf halbe Konzentration auf 0,05 ml/100 g in den Penis).

Messung der Bronchökonstriktion 10 Meerschweinchen wurden mit Urethan (2 g/kg IP) anästhesiert, dann tracheotomiert und mit einer Beatmungspumpe (UGO BASELE) beatmet, Volumen pro Hub 1 ml/100 g, 60 Hübe/min.

Sodann wurde ein Pneumothorax induziert, um spontane Atmung zu verhindern. Der Ausgangswiderstand wurde konstant auf 10 cm Wasserdruck gemäß dem Verfahren von Konzett und Rössler gehalten und der Überschuß des Luftvolumens wurde mit einem bronchospastischen Übertrager (UGO BASELE), verbunden mit 15 einem UGO BASILE-Aufhehmer "Gemini" gemessen. Die Halsvene wurde für intravenöse Injektion mit einem Katheder versehen. Der anaphylactische Schock wurde durch intravenöse Injektion von 0,75 mg/kg heterolog passivem Ovalbumin durchgeführt. Die Produkte wurden oral verabreicht, 1 h vor der antigenischen Stimulation in Form einer Gummi-Wasserlösung bei einer Dosis von 25 mg/kg. 20 Resultate

Die durch Ovalbumin bewirkte Bronchokonstriktion wurde als Prozentsatz der maximalen Bronchokonstriktion erhalten durch Abklemmen der Trache angegeben. Die Resultate sind in der folgenden Tabelle angegeben: 25 30 35

Ginkgolidart und Substitutionssteüe -OCH3 -OC2H5 B 1- -49,7+++ -38,3++ B 10- -54,9+++ -36,2++ C 1- -40,1++ -39,8++ C 10- -30,6+ -23,1+ A 1- -32,0+ -15,1 NS A 10- -25,2+ -12,2 NS 40 NS: Nicht signifikant ++: sehr signifikant +: signifikant +++: höchst signifikant

Verabreichung 45 In der Humantherapie liegen übliche Dosen für die AS-Administration zwischen 0,5 und 1 g pro Tag, in Tabletten oder Gelatinkapseln für die Dauer eines Monats.

Bei LV. Verabreichung sind drei wöchentliche Injektionen mit 0,05 bis 0,2 g in isotonischer Lösung einen Monat lang empfohlen. -4- 50

Claims (3)

1. 5 AT 397 097 B PATENTANSPRÜCHE 1.1-Alkoxy oder 10-Alkoxy substituierte Ginkgolide A, B oder C oder Mischungen dieser Verbindungen.
2. 2. Verfahren zur Herstellung von Ginkgolidderivaten gemäß Anbruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Dioxanlösung des ausgewählten Ginkgolides mit einer Diäthylätherlösung des Diazoalkans in Überschuß bei Zimmertemperatur während 1 bis 10 h reagieren läßt.
3. 3. Therapeutisch wirksame Zusammensetzung für die Behandlung von Krankheiten, die durch PAF-Acether 13 bewirkt werden, die als wesentlichen Bestandteil eine genügende Menge einer Verbindung nach Anspruch 1, gemeinsam mit einem passenden Verdünnungsmittel oder Träger aufweist. -5-