FI90081B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva ginkgolidderivat - Google Patents

Description

1 90081

Terapeuttisesti aktiivisten ginkgolidien johdannaisten valmistusmenetelmä - Förfarande för framställning av terapeutiskt aktiva ginkgolidderivat 5 Keksintö koskee erilaisten ginkgolidien johdannaisten valmistusmenetelmää.

Keksintö koskee menetelmää ginkgolidien λ, B, C, J ja M

l-Cj^alkoksi- ja lO-C^^alkoksijohdannaisten valmistami-10 seksi. Edulliset alkoksiryhmät ovat metoksi- ja etoksiryh-mät.

Keksintö tarjoaa menetelmän ginkgolidien A, B, C, J ja M

1-alkoksi- ja 10-alkoksijohdannaisten valmistamiseksi 15 menetelmän käsittäessä ginkgolidin A, B, C, J tai M saattamisen reagoimaan - johonkin ei-polaariseen liuottimeen liuotettuna - ylimäärän diatsoalkaania kanssa sekä saadun 1-alkoksiginkgolidin ja 10-alkoksiginkgolidin seoksen erottamisen.

20

Edullisessa menettelyssä valittu ginkgoli liuotetaan diok-saaniin, jolloin sopiva pitoisuus on 1 g/100 ml, ja valittu diatsoalkaani liuotetaan dietyylieetteriin. Diatsoalkaania sisältävä liuos lisätään hitaasti ginkgolidin sisältävään 25 liuokseen, jolloin määrinä käytetään 10 ekvivalenttia diatsoalkaania yhtä ginkgolidi-ekvivalenttia kohden. Sekoitettuna liuosta pidetään ympäristön lämpötilassa 3-8 tunnin ajan, jolloin saadaan 1-alkoksiginkgolidin ja 10-alkoksiginkgolidin seos. Saadun kahden tuotteen erottaminen jäl-30 jelle jäävästä ei-reagoineesta ginkgolidista voidaan sopivasti suorittaa poistamalla liuottimet haihduttamalla ja eluoimalla jäännöstä silikageelikolonnissa etyyliasetaat-ti/heksaani-seosta tilavuussuhteessa 1:1 eluenttina käyttäen. Saatu liuos haihdutetaan kuiviin, minkä jälkeen jään-35 nöstä käsitellään kloroformilla, joka liuottaa 10-alkoksi-johdannaisen. Sanottu 10-alkoksijohdannainen otetaan talteen tästä kloroformiliuoksesta, minkä jälkeen jäljelle 2 90081 jäänyttä liuosta käsitellään dietyylieetteri11ä, mikä tuottaa 1-alkoksijohdannaisen.

Keksinnön mukaisilla aikoksiginkgolidei11 a on merkitystä 5 PAF-asteri-indusoitujen sairauksien hoidossa ja täten keksintö tarjoaa niinikään farmaseuttisen kokoonpanon, joka käsittää ginkgolidin A, B, C, J tai M 1-alkoksijohdannaisen tai jonkin sanotuista ginkgolideista 10-alkoksijohdannaisen tai kahden tai useamman sanotuista 1-alkoksi- ja/tai sano-10 tuista 10-alkoksijohdannaisista seoksen yhdistettynä seokseksi johonkin farmaseuttisesti hyväksyttävään laimentimeen tai kantajaan.

MYRKYLLISYYS

15

Keksinnön mukaisten yhdisteiden myrkyllisyys määritettiin antamalla niitä hiirille suun kautta.

Kuolemia ei esiintynyt hiirille annetulla maksimiannoksel-20 la.

FARMAKOLOGIA

Todiste keksinnön mukaisten yhdisteiden farmaseuttisesta 25 kiinnostavuudesta todettiin seuraavien farmaseuttisten kokeiden avulla.

1) Verihiutaleaggreaaation esto Uuden-Seelannin kaneissa ‘ 30 Kokeet suoritettiin Uuden-Seelannin kaneista saadusta plasmasta peräisin olevilla verihiutaleilla. Verinäytteet otettiin korvavaltimosta ja sijoitettiin sitraattipuskuriin (3,8-prosenttinen; pH 7,4), minkä jälkeen verta sentrifu-goitiin 15 minuutin ajan 1200 kierr./min kierrosnopeudella. 35 Tutkittava näyte valmistettiin DMSO:hon, minkä jälkeen se kaadettiin verihiutalepitoiseen plasmaan, jolloin 1 minuutin kuluttua lisättiin annos 2,5 nMN PAF-liuosta. Määritys 3 90081 suoritettiin valmistajan Cronolog Coultronics-1 aitteella, joka määrittää hajaantumista edeltävää maksimipiikkikor-keutta vastaavan transmissio-%:n.

a 5 Lasketaan estovaikutusvaihtelu-% suhteessa transmis- sio-%:iin (kontrol1i:puhdas DMSO). Tätä menetelmää kuvataan yksityiskohtaisesti artikkelissa: Laboratory Investigations 41:3 (1979) 275, Jean-Pierre Cazenave, Dr.Med., Jacques Benveniste; Dr.Med., ja J.Fraser Mustard, M.D., 10 'Aggregation of Rabbits Platelets by Platelet-Actibating Factor is indepedent of the Release Reaction and the Arachidonate Pathway and inhibited by Membrane-Active Drugs' ('Verihiutaleita aktivoivan tekijän aiheuttama kaniinin verihiutaleiden aggregaatio ei ole riippuvainen 15 liittyvästä vapautumisreaktiosta tai arakidoni happosyklis-tä ja sitä inhiboivat membraania aktivoivat lääkeaineet').

Tulokset osoittavat, että yhdisteet estävät 2,5 nM PAF-liuoksen indusoimaa aggregaatiota. Suorittamiemme 5 kokeen 20 5 eri kanin avulla pystyimme laskemaan eri yhdisteiden IC5o~arvot lineaarisen regressioanalyysin avulla.

Totesimme IC5Q-arvot verihiutaleiden suhteen seuraaviksi: ·· 25

Ginkgo1idi tyyppi ia substituutioasema_-OCH3_-QCoHg___ B 1 - 6,6 10-7 1,1 10"6 B 10 - 2,9 10"7 7,2 10"6 • 30 C 1 - 4,2 10-6 8,5 10-6 c 10 - 3,0 10~6 9,3 10-6 A 1 - 4,6 10~6 8,7 10"6 ' A 10 - 1,3 10~5 6,2 10“4 4 90081

Vastaavat arvot 1ähtöaine-ginkgolidiini11 e samoissa olosuhteissa : 5 ginkgolidi A 8,32 x 10-6 ginkgolidi B 1,88 x 10-6 ginkgolidi C 1,53 x 10-5 ginkgolidi M 1,22 x 10-4 10 Tuloksista ilmenee, että substituointi on parantanut yhdisteiden farmakologisia ominaisuuksia.

2) Yliherkkyyden tuottama keuhkoputkenkouristus passiivisesti herkistetyssä marsussa 15

Passiivinen vieras 1 aji-herkistäminen

Urospuolisia Hartely-marsuja (400 - 500 g) herkistettiin ruiskuttamalla laskimonsisäisesti (i.v.) kaniinin ovalbu-20 miinivastaista immuuniseerumia (Cooper Biomedical, USA). Tyydyttävän yliherkkyysvasteen saamiseksi asetettiin 24 tunnin kuluttua seuraavat olosuhteet: laimennetun seerumin (puoleen alkuperäisestä pitoisuudesta: 0,05 ml/100 g) ruiskutus penikseen.

25

Keuhkoputkenkouristuksen mittaus

Marsut nukutettiin uretaanilla (2 g/kg, i.p.), minkä jälkeen niiden henkitorvi avattiin ja hengitystä ylläpidettiin 30 keinotekoisesti hengityspumpun avulla (UGO BASILE): iskuti-lavuus 1 ml/100 g, 60 iskua/min.

Spontaanin hengityksen estämiseksi tuotettiin ilmarinta. Lähtövastus pidettiin vakiona, 10 cm:n vesipaineena 35 Konzettin ja Rösslerin menetelmän mukaan ja ilmatila- vuusylimäärä mitattiin keuhkoputkenkouristus-transduktorin (UGO BASILE) avulla, joka oli yhdistetty UGO BASILE-rekis- 5 90081 teröimislaitteeseen 'Gemini'. Kaulaiaskimoon asetettiin katetri 1askimonsisäisiä ruiskeita varten. Yliherkkyysshok-ki indusoitiin ruiskuttamalla laskimonsisäisesti 0,75 mg/kg * ovalbumiinin passiivista vieras lajiherkistettä. Yhdisteet 5 annettiin suun kautta tuntia ennen antigeeniherkistettä kumimaisena vesisuspensiona annoksen ollessa 25 mg/kg.

Tulokset 10 Ovalbumiinin indusoima keuhkoputkenkouristus ilmaistiin prosentteina maksimikeuhkoputkenkouristuksesta, joka oli saatu puristamalla henkitorvi kokonaan kiinni. Tulokset on esitetty seuraavassa taulukossa.

15 Ginkgolidityyppi ja substituutioasema -OCH^ -OC2H5 B 1 - - 49,7*** - 38,3** B 10 - - 54,9*** - 36,2** C 1 - - 40,1** - 39,8** 20 C 10 - - 30,6* - 23,1*

A 1 - - 32,0* - 15,1 NS

A 10 - - 25,2* - 12,2 NS

NS : ei merkitsevä 25 * : merkitsevä ** : huomattavan merkitsevä *** : erittäin merkitsevä

ANNOSTUS

30

Ihmisiä hoidettaessa tavanomaisesti annettavat annokset ovat 0,5 - 1 g päivässä tabletteina tai gelatiinikapseleina yhden kuukauden ajan.

35 Käytettäessä i.v. -annostelua suositellaan kolmea 0,5 - 0,2 g:n viikottaista ruisketta isotonisessa liuoksessa yhden kuukauden ajan.

6 Ui 081

Keksintöä havainnollistavat seuraavat esimerkit:

Esimerkki 1

5 l-Metoksiginkgolidi-B ia 10-metoksiginkoolidi-B

Liuokseen, jossa oli ginkgolidi-B:tä dioksaanissa (10 g/litra), lisättiin hitaasti 10 ekvivalenttia diatsome-taaniliuosta dietyylieetterissä. Seosta pidetään ympäristön 10 lämpötilassa 4 tunnin ajan, minkä jälkeen se erotettiin käyttäen edellä kuvattua edullista erotusmenettelyä. 1-me-toksi-ginkgolidi-B:tä, jonka rakenne varmistettiin HPLC-ajon avulla, saatiin 66,1 %:n saanto ja 10-metoksiginkgoli-di-B:tä saatiin 24 %:n saanto.

15

Samalla ylläkuvatulla menetelmällä, mutta käyttämällä ginkgolidi-A:ta, C:tä, J:tä ja M:ä saatiin seuraavat saannot .

20 1-metoksi 10-metoksi ginkgolidi-A 56,3 % 13,2 % ginkgolidi-C 49,1 % 16,7 % ginkgolidi-J 46,2 % 41,3 % ginkgolidi-H 37,5 % 62,0 % 25

Esimerkki 2

1-etoksiginkgolidi-B ja 10-etoksiginkgolidi-B

30 Esimerkeissä 1 kuvattua menettelyä käyttäen mutta korvaten diatsometaani diatsoetaanilla saatiin (6 tunnissa) 1-etoksiginkgolidi-B:tä 63,2 %:n saanto ja 10-etoksiginkgo-lidi-B:tä 25,7 %:n saanto.

35 Menetellen kuten edellä ginkgolideja A, C, ja M lähtöaineina käyttäen saatiin seuraavat saannot: 1 90081 1-etoksi 10-etoksi ginkgolidi-A 72,8 % 20,1 % ginkgolidi-C 59,2 % 30,4 % 5 ginkgolidi-J 66,6 % 15,3 % ginkgolidi-M 58,3 % 30,5 %

Tuotteiden sulamispisteet ovat: 10 Johdannaisten sulamispisteet (°C) Lähtö- ginkgolidi l-metoksi 10-metoksi 1-etoksi 10-etoksi A 240 212 271 207 B 252 224 282 220 15 C 263 205 259 195 J 293 239 288 237 M 244 258 273 248

Claims (1)

1. 8. O o 81 Patenttivaatimus Menetelmä valmistaa terapeuttisesti aktiivista 1-alempi-5 alkoksi- tai 10-alempi-a 1koksisubstituoituja ginkgolidi-johdannaisia, tunnettu siitä, että valitun gink-golidin liuos dioksaanissa saatetaan reagoimaan ylimäärän kanssa diatsoalkaanin liuosta dietyylieetterissä huoneen lämpötilassa 1-10 tunnin ajan. 10 Förfarande för framstäl1ning av terapeutiskt aktiv 1-lägre-alkoxi- tai 10-lägre-alkoxisubstituerade ginkgolidderivat, 15 kännetecknat därav, att den utvalda ginkgoli-dens lösning i dioxan omsätts med ett överskott av diazo-alkanlösning i dietyleter i rumstemperatur under 1-10 timmar. 20