MXPA02010375A

MXPA02010375A - Inhibidores macrociclicos de la ns3-serina proteasa del virus de la hepatitis c que comprenden porciones alquil y arilalanina p2.

Info

Publication number: MXPA02010375A
Application number: MXPA02010375A
Authority: MX
Inventors: Viyyoor M Girijavallabhan
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 2000-04-19
Filing date: 2001-04-17
Publication date: 2003-04-25
Also published as: HUP0302957A2; NO20025030L; EP1274724A2; WO2001081325A2; US6914122B2; HK1048479A1; PL358591A1; JP2003531199A; AR030558A1; NO20025030D0; SK14952002A3; ZA200208014B; IL151935A0; WO2001081325A3; RU2002131163A; CZ20023473A3; BR0110104A; US20020016294A1; CN1935833A; PE20011288A1

Abstract

La presente invencion describe novedosos compuestos macrociclicos que tienen actividad inhibitoria de la proteasa del VHC asi como metodos para la preparacion de dichos compuestos; en otra modalidad, la invencion describe composiciones farmaceuticas que comprenden dichos macrociclicos asi como metodos para su uso en el tratamiento de trastornos asociados con la proteasa de VHC.

Description

INHIBIDORES MACROCICLICOS DE LA NS3-SERINA PROTEASA DEL VIRUS DE LA HEPATITIS C QUE COMPRENDEN PORCIONES ALQUIL Y ARILALANINA P2 CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a novedosos inhibidores de la proteasa del virus de la hepatitis C ("VHC"), a composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de dichos inhibidores, y a métodos para preparar dichos inhibidores y métodos para utilizar dichos inhibidores para tratar la hepatitis C y los trastornos relacionados. La presente invención revela específicamente novedosos compuestos macrocíclicos en calidad de inhibidores de la serina proteasa VHC NS3/NS4a. La presente descripción se refiere a la solicitud de patente pendiente Serie No. , presentada el 5 de abril de 2000.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El virus de la hepatitis C (VHC) es un virus de ARN monofilamento (+)- sentido que ha sido acusado de ser el principal agente causante de la hepatitis no-A, no-B (NANBH), particularmente en la NANBH asociada con la sangre (BB-NANBH) (ver, Publicación de Patente Internacional No. WO 89/04669 y Solicitud de Patente Europea No. EP 381 216). El NANBH ha de ser distinguido de otros tipos de enfermedades hepáticas inducidas por virus, tales como el virus de la hepatitis A (VHA), virus de la hepatitis B (VHB), virus de la hepatitis delta (VHD), citomegalovirus (CMV) y virus de Epstein-Barr (VEB), como también otras formas de enfermedades hepáticas tales como el alcoholismo y la cirrosis biliar primaria. Recientemente se ha identificado, clonado y expresado un VHC proteasa necesario para el procesamiento de polipéptidos y replicación viral (ver por ejemplo la Patente Estadounidense No. 5,712,145). La poliproteína, de 3000 aminoácidos, contiene, desde el terminal amino al terminal carboxi, una proteína nucleocápsido (C), proteínas de envoltura (E1 y E2), y varias proteínas no estructurales (NS1 , 2, 3, 4a, 5a y 5b). NS3 es una proteína de aproximadamente 68 kda, codificado por aproximadamente 1893 nucleótidos del genoma del HVC, y tiene dos dominios distintos: (a) un dominio serina proteasa consistente en aproximadamente 200 de los aminoácidos N-terminales; y: (b) un dominio ATPasa ARN-dependiente en la terminal-C de la proteína. La NS3 proteasa es considerada como un miembro de la familia de las quimotripsinas debido a similitudes en la secuencia de las proteínas, estructura tridimensional general y mecanismo de catálisis. Entre las otras enzimas similares a la quimiotripsina tenemos la elastasa, el factor Xa, la trombina, tripsina, plasmina, uroquinasa, tPA y PSA. La serina proteasa VHC NS3 es responsable de la proteólisis del polipéptido (poliproteína) en las uniones NS3/NS4a, NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b, por lo que es responsable de la generación de cuatro proteínas virales durante la replicación viral. Esto ha hecho que la serina proteasa HCV NS3 sea un objetivo atractivo para la quimioterapia antiviral. Se ha determinado que la proteína NS4a, que es un polipéptido con una longitud de aproximadamente 6 kda, es un co-factor para la actividad de serina proteasa, del NS3. El autodesdoblamiento de la unión NS3/NS4a por la serina proteasa NS3/NS4a tiene lugar a nivel intramolecular (es decir, cis), mientras que los otros sitios de desdoblamiento son procesados a nivel ¡ntermolecular (es decir, trans). El análisis de los sitios de desdoblamiento natural para la VHC proteasa reveló la presencia de cisteina en P1 y de serina en P1\ y que dichos residuos se conservan estrictamente en las uniones NS4a/NS4b, NS4b/NS5a y NS5a/NS5b. La unión NS3/NS4a contiene una treonina en P1 y una serina en P1'. Se considera que la sustitución Cys? Thr en NS3/NS4a explica la necesidad del procesamiento del cis en lugar del trans en esta unión. Ver por ejemplo Pizzi y otros, (1994), Proa Nati. Acad. Sci. (EE.UU): 91: 888-892, Failla y otros., (1996), Foldina & Pesian i; 35-42. El sitio de desdoblamiento NS3/NS4a es también mas tolerante a la mutagénesis que los otros sitios. Ver por ejemplo Kollykhalov y otros (1994) J. VÍG?I. 68: 7525-7533. También se ha descubierto que los residuos ácidos en la región corriente arriba del sitio de desdoblamiento son necesarios para un desdoblamiento eficiente. Ver por ejemplo Komoda y otros (1994) J. Virol. 68: 7351- 7357. Los inhibidores de las proteasas de VHC que han sido objeto de informes incluyen los antioxidantes (ver la Publicación de la Solicitud de Patente No WO 98/14181), determinados péptidos y análogos de péptidos (ver la Publicación de Solicitud de Patente No, WO 98/17679, Landro y otros (1997), Biochem 36: 9340-9348, Ingalinnella y otros, (1998), Biochem 37; 8906-8914, Limas-Brunet y otros (1998) Bioora. Med. Chem. Lett.: 8:1713-1718), los inhibidores basados en el polipéptido eglin c de 70 aminoácidos (Martin y otros, (1998), Biochem 37:11459- 11468, de inhibidores de afinidad seleccionados de entre el grupo consistente en el inhibidor de la tripsina secretoria del páncreas humano (hPSTI-C3) y los repertorios de minicuerpos (MBip) (Dimasi y otros, (1997) J. Virol. 71:7461-7469). cVHE2 (un fragmento de anticuefo de dominio variable, "camelizado") (Martin y otros, (1997) Protein Ena. 10: 607-614), y la a1-antiquimotripsina (ACT) (Elzouki y otros) (1997) J. Hepat. 27: 42-28). Ha sido recientemente revelada una ribozima diseñada para destruir de manera selectiva el ARN del virus de la hepatitis C (ver: BioWorid Todav 9(217): 4 (noviembre 10,1998)). También se hace referencia a las publicaciones PCT, No. WO 98/17679, publicado el 30 de abril de 1998 (Vértex Pharmaceuticals Incorporated); WO 98/22496, publicado el 28 de mayo de 1998 (F. Hoffman- La Roche AG); y WO 99/07734, publicado el 18 de febrero de 1999 (Boehringer Ingelheim Canadá Ltd). El VHC ha sido implicado en la cirrosis del hígado y en la inducción del carcinoma hepatocelular. La prognosis de pacientes que sufren de una infección de VHC es actualmente pobre. La infección por VHC es más difícil de tratar que otras formas de hepatitis debido a la falta de inmunidad o remisión asociados con la infección por VHC. Los datos actuales indican un índice de supervivencia de menos del 50 % a los cuatro años después del diagnostico de la cirrosis. Los pacientes con un diagnóstico de carcinoma hepatocelular localizado reseccionable tienen un índice de supervivencia a los 5 años, del 10-30%, mientras que aquellos pacientes con un carcinoma hepatocelular localizado no reseccionable tienen un índice de supervivencia a los cinco años, de menos del 1 %. Se hace referencia a A. Marchetti y otros, Synlett. SI., 1000-1002 (1999) que descríbe la síntesis de análogos bicíclicos de un inhibidor de proteasa NS3 de VCH. Un compuesto descrito en el presente tiene la fórmula: También se hace referencia al documento WO 00/09558 (cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; Publicado el 24 de enero de 2000), que revela derivados péptidos de la siguiente fórmula: en la cual los diversos elementos son como se define en la presente. Un compuesto ilustrativo de dicha serie es el siguiente: Se hace referencia al documento WO 99/09543 (Cesionario: Boehringer Ingelheim Limited; publicado el 24 de febrero de 2000), en el cual se revelan derivados péptidos de la fórmula: en la cual los diversos elementos son como se define en la presente. Un compuesto ilustrativo de dicha serie es el siguiente: Las terapias actuales para la hepatitis C incluyen el interferon-a (TNFa) y la terapia de combinación con ribavirina e interferon. Ver por ejemplo Beremguer y otros, (1998) Proc. Assoc. Am. Phvsicians 110(2): 98-112. Dichas terapias sufren de un bajo índice de respuesta sostenido y de frecuentes efectos colaterales. Ver por ejemplo: Hoofnagle y otros, (1997) Enal. J. Med. 336: 347. En la actualidad no hay ninguna vacuna disponible contra la infección por VHC. La solicitud de patente en trámite, Acta No. , presentada el 5 de abril de 2000 describe ciertos compuestos macrocíclicos como inhibidores de la proteasa de VHC así como composiciones farmacéuticas que contienen dichos compuestos. Existe una necesidad de nuevos tratamientos y terapias para la infección por VHC. Por ello uno de los objetos de la presente intención es el de proveer compuestos que sean útiles en el tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Otros objetos de la presente es el de proveer métodos de tratamiento o prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. Y otro objeto mas de la presente intención, es el de proveer métodos para modular la actividad de las serina proteasas, particularmente de la serina proteasa VHC NS3/NS4a, mediante la utilización de los compuestos provistos en la presente. Otro de los objetos de la presente, es el de prever métodos para modular el procesamiento del polipéptido del VHC mediante los compuestos provistos en la presente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN En sus diversas modalidades, la presente invención provee una novedosa clase de inhibidores macrocíclicos de la VHC proteasa, composiciones farmacéuticas que contienen uno o más de los compuestos, métodos para preparar formulaciones farmacéuticas que comprenden uno o más de dichos compuestos, y métodos para el tratamiento, prevención o mejora de uno o más síntomas de la hepatitis C. También se proveen métodos para modular la interacción de un polipéptido de HVC con la proteasa de VHC. Entre los compuestos provistos en la presente, se prefieren aquellos compuestos que inhiben la actividad de la serina proteína VHC NS3/NS4a. Los compuestos revelados en la presente contienen por lo general tres o más residuos aminoácidos y menos de aproximadamente 12 residuos aminoácidos. En su modalidad principal, la presente invención provee un compuesto macrocíclico de la Fórmula I: Fórmula I en la cual: E, X e Y, pueden estar independientemente presentes o ausentes, y si están presentes, son seleccionados independientemente de entre el grupo consistente en las siguientes partes alquilo, arilo, alquil-arilo, heteroalquilo, heteroarilo, aril-heteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil-éter, alquil-aril éter, aril éter, alquil amino, aril amino, alquil-aril amino, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, aril sulfona, alquil- alquil sulfóxido, alquil-aril sulfóxido, alquil amida, alquil-aril amida, aril amida, alquil suifonamida, alquil-aril sulfonamida, aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, aril urea, alquil carbamato, alquil-aril carbamato, arilcarbamato, alquil-hidrazida, alquilaril hidrazida, alquil hidroxamida, alquil-aril hidroxamida, alquil sulfonilo, ariisulfonilo, heteroalquilsulfonilo, heteroaril sulfonilo, alquil carbonilo, arilcarbonilo, heteroalquilcarbonilo, heteroaril carbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, hetero ariloxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo o una combinación de los mismos, con la condición que E, X e Y pueden estar opcionalmente sustituidos por partes seleccionadas de entre el grupo consistente en aromático, alquilo, alquilarilo, heteroalquilo, aril-heteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil éter, alquil-aril éter, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, alquil amida, alquil-aril amida, alquil sulfonamida, alquil aminas, alquil-aril aminas, alquil-aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, alquil carbamato y alquil-aril carbamato, halógeno, hidroxilamino, alquilcarbazto, arilcarbazato; R1= COR5 ó B(OR)2, en lo cual R5 = H, OH, OR8, NR9R10, CF3, C2F5, C3F7, CF2R6, R6, COR7, siendo R7 = H, OH, OR8, CHR9R10, ó NR9R10, siendo R6, R8, R9 y R10, independientemente entre sí, seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo; CH(R1')COOR11, CH(R1')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')COOR11, CH(R1')CONH-CH(R2')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')R11, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')COOR11, CH(R1')CONHCH(R1')CONHCH(R3')CONR12R13, CH(Rr)CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')COOCR11, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')COHR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')CONHCH(R5')CONR12R13, en lo cual R1', R2', R3', R4', R5', R11, R12, R13 y .R' son independientemente entre si seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo y heteroaralquilo; Z es seleccionado de entre O, N ó CH; W puede estar presente o ausente, y en caso de estar presente, W es seleccionado de entre C=0, C=S, S02 o C=NR; Q es (NR)P , O, S, CH2, CHR, CRR' o un enlace doble hacia V; A es o CH2, (CHR)pf (CHR-CHR')p, (CRR')P, NR, S, SO2 o un enlace; G es (CH2)P, (CHR)P, o (CRR')P, NR, O, S, S02, S(0)2NH, C=O o un enlace doble hacia E o V; V es CH, CR o N; p es un número de 0 a 6 y R, R', R2, R3 y R4 son independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en H, alquilo 0,-0,0, alquenilo C2-C10, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo C3-C8, arilo, alcoxi, airloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, heteroarilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, (cicloalquil)alquilo y (heterocicloalquil)alquilo, donde dicho cicloalquilo se compone de tres a ocho átomos de carbono y de cero a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo y dicho alquilo es de uno a seis átomos de carbono; donde dichas porciones alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, arilo, heteroarilo cicloalquilo y heterocicloalquilo pueden estar optativamente sustituidas y donde dicho término "sustituido" se refiere a una sustitución optativa y adecuada con una o más porciones seleccionadas entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, heterocicico, halógeno, hidroxi, tio, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, sulfonamida, sulfóxido, sulfona, sulfonilurea, hidrazida e hidroxamato y tiourea. A menos que se indique lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente tienen el mismo significado que los expertos en la técnica a la cual se refiere la presente invención des dan comúnmente. Así por ejemplo la expresión alquilo (que incluye las porciones alquilo de alcoxi) se refiere a un grupo monovalente derivado de un hidrocarburo saturado de cadena lineal o ramificada mediante la remoción de un único átomo, que tiene de 1 a 8 átomos de carbono, preferiblemente de 1 a 6; arilo- representa un grupo carbocíclico que tiene de 6 a 14 átomos de carbono y que tiene por lo menos un anillo benzenoide, estando todos los átomos de carbono aromáticos sustituibles disponibles destinados como posibles puntos de fijación. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo, 1 -naftilo, 2-naftilo e indanilo, y especialmente fenilo y fenilo sustituido; aralquilo - representa una parte que contiene una parte que contiene un grupo arilo vinculado mediante un alquilo inferior, alquilarilo - representa una parte que contiene un alquilo inferior vinculado mediante un grupo arilo; cicloalquilo - representa un anillo carbocíclico saturado que tiene de 3 a 8 átomos de carbono, preferiblemente 5 ó 6, -opcionalmente sustituidos; heterocíclico -representa, además de los grupos heteroarilo definidos en lo que sigue, grupos orgánicos cíclicos saturados y no saturados que tienen por lo menos un átomo de O, S, y/o N que interrumpe una estructura de anillo carbocíclico que consiste en un anillo o en dos anillos fusionados, teniendo cada uno de los anillos de 3 a 9 miembros que pueden o no tener enlaces dobles que carecen de electrones pi deslocalizados, la cual estructura anillo tiene de 2 a 8, preferiblemente de 3 a 5, átomos de carbono, por ejemplo 2 - ó 3- piperidinilo, 2 - ó 3-piperazinilo, 2- ó 3- morfolinilo, ó 2 - ó 3-tiormorfolinilo; halógeno - representa flúor, cloro, bromo, y yodo; heteroarilo- representa un grupo orgánico cíclico que tiene por lo menos un átomo de oxigeno, azufre y/o nitrógeno que interrumpe una estructura anillo carbocíclico y que tiene una cantidad suficiente de electrones pi deslocalizados, para proveer un carácter aromático, teniendo el grupo heterocíclico de 2 a 14, preferiblemente 4 ó 5 átomos de carbono, por ejemplo, 2-, 3- ó 4-piridilo, 2- ó 3- furilo, 2- ó 3-tienilo, 2-, 4- ó 5-tiazolilo, 2-o 4-imidazolilo, 2-, 4- ó 5-pirimidinilo, 2-pirazinilo, o 3- o 4-piridazinilo, etc. Los grupos heteroarilo preferidos son 2-, 3- y 4- piridilo. Dichos grupos heteroarilo también pueden estar opcionalmente sustituidos. La presente invención también incluye los tautómeros, rotámeros, enantiómeros y otros isómeros ópticos de los compuestos de la Fórmula I, como también las sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de los mismos. Otro de los aspectos de la invención está dado por las composiciones farmacéuticas que contienen a título de ingrediente activo un compuesto de la fórmula I (o su sal, solvato o isómeros) junto con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. La presente invención también provee métodos para preparar los compuestos de la Fórmula I, como también métodos para tratar enfermedades tales como por ejemplo el VCH y los trastornos relacionados. Los métodos para tratar comprenden la administración a un paciente que sufre de dicha enfermedad, o enfermedades, una cantidad terapéuticamente efectiva de un compuesto de la Fórmula I, o composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la Fórmula I. En la presente invención también se revela la utilización de un compuesto de la Fórmula I para la manufactura de un medicamento para tratar el VHC y los trastornos relacionados.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS En una modalidad, la presente invención revela compuestos de la Fórmula I en calidad de inhibidores de la VHC proteasa, especialmente la serina proteasa RCV NS3/NS4a. en la cual las diversas porciones son como se definiera anteriormente. Algunas de las realizaciones preferidas incluyen, aunque no se limitan a las siguientes definiciones de las diversas funcionalidades en la fórmula general I antes citada; se pueden encontrar otras definiciones convenientes para las mismas y otras funcionalidades en las estructuras y reivindicaciones de esta solicitud que también están dentro del alcance de la presente invención. Entre las realizaciones preferidas, R2 de la fórmula I puede ser seleccionado entre las siguientes porciones: E puede ser un alquilo sustituido o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido o heteroalquilo sustituido o no sustituido heteroarilo sustituido o no sustituido o cicloalquilo sustituido o no sustituido, siendo las representaciones preferidas de E: Las modalidades preferidas para R3 incluyen las porciones: en las cuales R30 = H, CH3 u otros grupos alquilo; R31 = OH, O-alquilo, NH2, N-alquilo; y R32 y R33 pueden ser iguales o diferentes y son independientemente seleccionados de entre el grupo consistente en H, F, Cl, Br y CH3. Las modalidades preferidas para la porción X-Y son las siguientes estructuras: En la sección de reivindicaciones de la presente solicitud se consignan varias profundizaciones adicionales de las diversas definiciones antes citadas para los compuestos representados por la fórmula I. Esta también están representadas por los diversos compuestos enumerados en la memoria descriptiva y las reivindicaciones. Tales profundizaciones, definiciones y restricciones deben ser consideradas representativas de la totalidad de la invención presentada en esta solicitud. A continuación se enumeran los compuestos representativos de la presente invención, que exhiben excelente actividad inhibitoria de la proteasa de VHC: 10 15 16 18 19 20 23 25 27 20 29 30 31 32 33 34 36 37 38 39 40 41 43 44 50 51 20 La actividad de algunos de los compuestos se presentan en el Cuadro 1 como intervalos de valores de K¡ en nanomoles (nM). Los números de los Ejemplos en el Cuadro 1 se refieren a los números de las diferentes estructuras en la sección de Ejemplos encontrada en las partes subsiguientes de esta solicitud.

CUADRO 1 Resultados de los Ensavos Continuos de la VHC Proteasa Intervalo de Kj* de ensayo continuo sobre VHC: Categoría A= 0.001-1.0 µM, Categoría B=1.1 µM. Más adelante en esta sección se describen algunos métodos para sintetizar los diversos tipos de los compuestos de la invención, y también se describen esquemáticamente, para proceder luego a los Ejemplos ilustrativos. Dependiendo de la estructura, los compuestos de la invención pueden formar sales farmacéuticamente aceptables junto ácidos orgánicos o inorgánicos, o bases orgánicas e inorgánicas. Los ejemplos de ácidos adecuados para la formación de dichas sales abarcan los siguientes ácidos: ácido clorhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, cítrico, oxálico, malónico, salicílico, málico, fumárico, succínico, ascórbico, maleico, metanosulfónico y otros ácidos minerales y carboxílicos bien conocidos para las personas con pericia en el arte. Para la formación de sales con bases, las bases adecuadas ¡ncluyen por ejemplo el NaOH, KOH, NH4OH, el hidróxido de tetraalquilamonio, y similares. En otra modalidad, la presente invención provee composiciones 5 farmacéuticas que comprenden los macrociclos incentivos anteriormente descritos en calidad de ingrediente activo. Las composiciones farmacéuticas por lo general comprenden un vehículo diluyente, excipiente o vehículo, farmacéuticamente aceptables (que en la presente reciben colectivamente la designación de materiales vehículo). Debido a su actividad inhibidora sobre el •10 VHC, dichas composiciones farmacéuticas poseen una utilidad en el ¡ tratamiento de la hepatitis C y enfermedades relacionadas. En otra modalidad más, en la presente invención se revelan métodos para preparar composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos macrociclos inventivos a título de ingrediente activo. En las 15 composiciones farmacéuticas y métodos de la presente invención, los ingredientes típicos serán típicamente administrados en forma de una mezcla junto con materiales vehículo adecuados adecuadamente seleccionados con respecto en base a la forma de administración prevista, por ejemplo tabletas orales, cápsulas (sean llenas de un sólido, sea llenas con un semisólido, sea 20 llenas con un líquido), polvos para reconstitución, geles orales, elixires, granulos dispersibles, jarabes, suspensiones, y similares, y compatibles con las prácticas farmacéuticas convencionales. Por ejemplo, para la administración oral en forma de tabletas o cápsulas, el componente de fármaco activo se puede combinar con cualesquiera vehículos inertes no tóxicos farmacéuticamente aceptables, tales como lactosa, almidón, sucrosa, celulosa, estearato de magnesio, fosfato dicálcico, sulfato de calcio, talco, manitol, alcohol etílico (formas líquidas), y similares. Más aun, cuando se desea o necesita, se pueden incorporar a la mezcla ligantes, lubricantes, agentes de desintegración y agentes de coloración, adecuados. Los polvos y tabletas pueden integrar la composición inventiva en una cantidad de aproximadamente 5 a aproximadamente 95%. Los ligantes adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares naturales, edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como acacia, alginato de sodio, carboximetilcelulosa, polietilenglicol y ceras. Entre los lubricantes pueden mencionarse para ser utilizados en estas formas de dosificación, el ácido bórico, benzoato de sodio, acetato de sodio, cloruro de sodio, y similares. Los desintegrantes incluyen almidón, metil celulosa y similares. Los agentes edulcorantes, saborizantes y preservativos también pueden ser incluidos cuando sea adecuado. Algunos de los términos mencionados en lo que precede, en especial los desintegrantes, lubricantes, ligantes y similares, son comentados con más al detalle en lo que sí. Adicionalmente, las composiciones de la presente intención pueden ser formuladas en una forma de liberación sostenida a efectos de proveer la liberación de velocidad controlada de uno ó más componentes o de ingredientes activos, a efecto de optimizar sus efectos terapéuticos, es decir su actividad inhibidora sobre el VHC y similares. Las formas de dosificación adecuadas para la liberación sostenida incluyen tabletas estratificadas que contienen capas de distintas velocidades de desintegración con matrices 5 poliméricas de liberación controlada impregnadas con los componentes activos y configuradas en forma de tabletas o cápsulas que contienen dichas matrices poliméricas porosas impregnadas o encapsuladas. Las preparaciones en forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo pueden mencionarse las •10 soluciones de agua o de agua, propilenglicol para soluciones parenterales o la , adición de edulcorantes o opacificadores para soluciones, suspensiones y emulsiones orales. Las preparaciones en formas liquidas ponen también incluir soluciones para la administración intranasal. Las preparaciones tipo aerosol adecuadas para la inhalación, 15 pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvos, que pueden estar en combinación con un vehículo farmacéuticamente aceptable tal como un gas comprimido inerte, por ejemplo nitrógeno. Para preparar supositorios, se empieza por fundir una cera de bajo punto de fusión tal como una mezcla de glicéridos de ácidos grasos tales 20 como manteca de cacao, y el ingrediente activo es dispersado homogéneamente en la misma mediante su agitación o mediante un mezclado similar. La mezcla homogéneo fundida es seguidamente vertida en moldes de dimensiones adecuadas, se deja enfriar y con ello se solidifica. También se incluyen las preparaciones en forma sólida que están destinadas a ser convertidas, poco antes de su uso, en forma de preparaciones líquidas para la administración ya sea oral o parenteral. Dichas formas líquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los compuestos de la invención buena también son entregados transdérmicamente. Las composiciones transdérmicas pueden tomar la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden ser incluidos en un parche transdémicas de tipo matriz o reservorio, tal como es convencional en el arte para esta finalidad. Es preferible que el compuesto sea administrado oralmente. Es preferible que la preparación farmacéutica se halle en forma de dosis unitaria. En dicha forma, la preparación es subdividida en forma de unidades adecuadamente dimensionadas que contienen cantidades adecuadas de los componente activos, por ejemplo una cantidad efectiva, para lograr el objetivo deseado La cantidad de la composición activa inventiva presente en una dosis unitaria de preparación puede ser generalmente variada o ajustada de aproximadamente 1.0 miligramos a aproximadamente 1,000 miligramos, preferentemente de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 950 miligramos, más preferentemente de aproximadamente 1.0 a aproximadamente 500 miligramos, y típicamente de aproximadamente 1 a aproximadamente 250 miligramos, de acuerdo con aplicación particular prevista. Las dosis real utilizada puede ser variada en función de la edad del paciente, su sexo, peso corporal y gravedad de la condición que se desea tratar. Dicha técnicas son bien conocidas por las personas con pericia en la técnica. Por lo general, la forma de dosis oral para personas, que contienen los ingredientes activos, puede ser administrada 1 ó 2 veces por día. La cantidad y frecuencia de la administración será regulada de acuerdo con el criterio del médico clínico a cargo. Un régimen de dosificación diaria generalmente recomendado para la administración oral puede variar entre aproximadamente 1.0 miligramos y aproximadamente 1,000 miligramos por día, en una dosis simple o en dosis divididas. A continuación se describen algunos términos útiles: Cápsula- se refiere a un contenedor o cerramiento especial hecho de metil celulosa, alcoholes polivinílicos, o gelatinas o almidones desnaturalizados para contener o sostener composiciones que comprenden los ingredientes activos. Las cápsulas de corteza dura son por lo general conformadas de mezclas de gelatina de hueso de alta resistencia y de piel de cerdo. La cápsula propiamente dicha puede contener pequeñas cantidades de tintes, agentes opacificantes, plastificantes y preservativos.

Tableta- se refiere a una forma de dosis sólida, comprimida o moldeada, que contiene los ingredientes activos junto con diluyentes adecuados. La tableta puede ser preparada por compresión de mezclas de granulaciones obtenidas por granulación en húmero, granulación en secó, o 5 por compactación. Gel oral- se refiere a los ingredientes activos dispersados o solubilizados en una matriz hidrófila semisólida. Polvo para reconstitución- se refiera a mezclas de polvo que contienen los ingredientes activos y diluyentes adecuados que puedan ser •10 suspendidos en agua o zumos. • Diluyente - se refiere a sustancias que usualmente constituyen la porción principal de la composición o forma de dosificación. Los diluyentes adecuados incluyen azúcares tales como la lactosa, sucrosa, manitol y sorbitol; los almidones derivados del trigo, maíz, arroz y la papa; y las 15 celulosas tales como, la celulosa microcristalina. La cantidad de diluyente en la composición puede variar de aproximadamente 10 a aproximadamente 90% en peso de la composición total preferentemente de aproximadamente 25 aproximadamente 75%, más preferentemente de aproximadamente 30 a aproximadamente 60 por ciento en peso, y más preferentemente aún de 20 aproximadamente 12 a aproximadamente 60 por ciento. Desintegrante - se refiere a los materiales adicionados a la composición para ayudarle a desintegrar y liberar los medicamentos. Los desintegrantes adecuados incluyen los almidones, los almidones modificados solubles en agua fría tal como el almidón carboximetil sodio; las gomas naturales y sintéticas tales como la algarroba, la carayá, guar, tragacanto y agar; los derivados de celulosa tales como la metil celulosa y la carboximetilcelulosa; las celulosas microcristalinas y las celulosas microcristalinas reticuladas tales como la croscarmelosa de sodio; los alginatos tales como el ácido algínico y el alginato de sodio; las arcillas tales como las bentonitas; y las mezclas efervescentes. La cantidad desintegrante en la composición puede variar de aproximadamente 2 a aproximadamente 15% por peso de la composición, más preferentemente de aproximadamente 4 a aproximadamente 10% en peso. Ligante - se refiere a sustancias que ligan o "encolan" los polvos entre sí y que los hacen cohesivos mediante la formación de granulos, con lo cual sirven como "adhesivo" en la formación. Los ligantes agregan una resistencia cohesiva ya disponible en el agente diluyente o de masa. Los ligantes adecuados incluyen los azucares tales como la sucrosa; los almidones derivados del trigo, maíz, arroz y papa; las gomas naturales tales como la acacia, gelatina y tragacanto; los derivados de algas marinas tales como el ácido algínico, alginato de sodio y el alginato de amonio calcio; los materiales celulósicos tales como la metilcelulosa y la carboximetilcelulosa de sodio y la hidroxipropilmetilcelulosa de sodio; la polivinilpirrolidona; y los inorgánicos tales como el silicato de magnesio aluminio. La cantidad de ligante en la composición puede variar de aproximadamente 2 a aproximadamente 20% en peso de la composición, más preferentemente de aproximadamente 3 a aproximadamente 10% en peso, y más preferentemente aún de aproximadamente 3 a aproximadamente 6 por ciento en peso. Lubricantes- se refiere a una sustancia adicionada a la forma de dosificación a efecto de permitir que la tableta, granulos, etc., liberen del molde o tinte mediante la reducción de la fricción o desgaste. Los lubricantes adecuados incluyeron los estearatos metálicos tales como el estearato de magnesio, el ácido esteárico, las ceras de alto punto de fusión; y los lubricantes solubles en agua tales como el cloruro de sodio, benzoato de sodio, acetato de sodio, oleato de sodio, poiietilenglicoles y leucina I. Los lubricantes son usualmente adicionados justo en eluyente último pasó antes de la compresión, ya que deben hallarse presentes en las superficies de los granulos y entre los mismos y las partes de la prensa de tabletas. La cantidad de lubricantes en la composición puede variar entre aproximadamente 0.2 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2%, más preferentemente de aproximadamente 0.3 a aproximadamente 1.5% en peso. Deslizante- material que impide la formación de tortas y mejora las características de flujo de las granulaciones, de manera tal que flujo sea lisa y uniforme. Los deslizantes adecuados incluyen el dióxido de silicio y el talco. La cantidad de deslizante en la composición puede variar entre aproximadamente 0.1 % y aproximadamente 5% en peso de la composición total, preferentemente de aproximadamente 0.5 a aproximadamente 2% en peso. Agentes colorantes- excipientes que proveen una coloración a la composición o a la forma de dosificación. Dichos excipientes pueden incluir tintes de calidad alimenticia y tintes de calidad alimenticia absorbidos por sobre un absorbente adecuado tal como una arcilla u óxido de aluminio. La cantidad de agente colorantes puede variar entre próximamente 0.1 y aproximadamente 5% en peso de la composición, preferentemente de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 1 %. Biodisponibilidad - se refiere a la velocidad y extensión con las cuales el ingrediente droga o parte terapéutica es absorbida en la circulación sistémica a partir de una forma de dosificación administrada, en comparación con una normal o control. Se conocen métodos convencionales para preparar tabletas. Dichos métodos incluyen métodos secos tales como la compresión directa y la compresión de granulación producida por compactación, o métodos húmedos u otros procedimientos especiales. Los métodos convencionales para preparar otras formas de administración tales como por ejemplo, cápsulas, supositorios y similares, también son muy conocidos.

En otra modalidad de la invención se revela la utilización de las composiciones farmacéuticas recién descritas para el tratamiento de enfermedades tales como por ejemplo la hepatitis C y similares. El método comprende la administración terapéuticamente efectiva de la composición farmacéutica inventiva a un paciente que tiene dicha enfermedad o dichas enfermedades y que necesite un tratamiento de este tipo. Tal como se mencionó antes, la invención también incluye los tautómeros, enantiómeros y otros estereoisómeros, de la invención. Por lo tanto, como lo sabe alguien experto en la técnica, algunos de los compuestos de ia invención pueden existir en forma isómera.. Dichas variaciones también se han incluidas dentro de los alcances de la invención. En otra modalidad de la invención, se revela un método para preparar los compuestos macrocíclicos revelados en la presente. Los compuestos pueden ser preparados mediante varias térmicas conocidas en el arte. Los procedimientos ilustrativos representativos se destacan en los siguientes esquemas reactivos. Debe entenderse que si bien en los siguientes esquemas ilustrativos se describe la preparación de macrociclos predominantemente derivados de la meta-tirosina o lisina en la posición P2. La sustitución adecuada de cualquiera de los aminoácidos, naturales o no, tendrá como resultado la formación de los macrociclos basados en dicha sustitución.

Siguen las abreviaturas utilizadas en las descripciones de los esquemas, preparaciones y ejemplos: THF: tetrahidrofurano DMF: ?/,?/-dimetilformamida EtOAc: acetato de etilo AcOH: Acido acético HOOBt 3-hidroxi-1 ,2,3-benzotriazin-4(3H)-ona EDCI: clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida NMM: ?-metilmorfolina ADDP: 1 ,1'-(azodicarbon¡ DEAD: azodicarboxilato d MeOH: metanol EtOH: etanol Et20: éter dietílico Bn: bencilo Boc: ter-butiloxicarbonil Cbz: benciloxicarbonilo Cp: ciclopentildienilo Ts: p-toluensulfonilo Me: metilo HATU: hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilamonio Chg: cicllohexilglicina Tyr: tirosina G: glicerol TG: tioglicerol alloc: aliloxicarbonilo FMOC: 9-fluorenilmetiloxicarb< Dde: N-1-(4,4-dimet¡l-2,6-di< tBu: terc-butilo equiv: equivalente ¡nt. reí.: intensidad relativa ac: acuoso ta: temperatura ambiente sat: saturado Hex: hexano(s) ANB: ácido nitrobenzoico PyBrOP: hexafluorfosfato de tris(pirol¡dino)bromofosfonio DMSO: sulfóxido de dimetilo TFA: ácido trifluoracético HOBt: hidroxibenzotriazol Base de Hünigs: diisopropiletil amina BOP: hexafluorofosfato de benzotriazol-1 - ¡loxitris(dimetilamino)fosfonio LDA: düsopropil amida de litio Ph3P: trifenilfosfina LAH: hidruro de litio y aluminio DMAP: 4-dimetil aminopiridina DCC: diciciohexilcarbodiimida MCPBA: ácido meta-cloroperbenzoico BINAP: 2,2'-bis(difenilfosfino)-1 ,1 '-binaftol MeCN: acetonitrilo Pr: propilo Ac: acetilo Ph: fenilo Esquemas generales para la síntesis de los compuestos de la invención En los siguientes esquemas, n representa un número de 1 a 6.

ESQUEMA 1 1d 1e La síntesis de los compuestos del tipo 1e, en los cuales R\ R2, R3, R' son como se los definiera anteriormente, donde R4 es amida, carbamato o hidrógeno, R es alquilo, arilo o arilalquilo, comenzó con el acoplamiento de 1a con el dipéptido 1b mediante el uso de NMM, HOBt y EDCI para obtener el intermediario 1c. Se trató al intermediario 1c con Cs2CO3 en DMF seguido por fotolisis para obtener el compuesto 1d. Se hidrolizó el éster macrocíclico 1d y se acopló a un intermediario amínico adecuado para generar los compuestos del tipo 1e.

ESQUEMA 2 2e En el Esquema 2 se resume la preparación del compuesto de la fórmula 2e en la cual R1, R2, R3 y n son como se los definiera anteriormente, R' es alquilo, heteroalquilo (OR", SR"' NR"R"' donde R" y R,n son grupos alquilo), el sustituyente halógeno en la posición orto, meta o para con respecto al átomo de oxígeno, R representa grupos alquilo, arilo o alquilarilo y n es de cero a cinco. Se acopla el dipéptido meta-tirosina 2a a un ácido alquenilcarboxílíco en presencia de HOOBt, EDGI.HCI y NMM. La hídroboración del producto resultante produce el compuesto 2c. Se obtiene la macrociclación en condiciones de Mitsunobu utilizando trifenilfosfina y ADDP.

(La reacción de Mitsunobu ha sido revisada por D. L. Hughes, Org. Reactions, 42 (1992) 335, John Wiley & Sons, Nueva York, L. Paquette, edit.). Una vez hidrolizado el éster a un ácido con hidróxido de litio, se acopla a un intermediario amínico para dar 2e.

ESQUEMA 3 3d 3e 20 La preparación de compuestos de la fórmula 3e en la cual R', R , R2, R , R y n son como se los definiera en el Esquema 1 y PG es Cbz, Boc o alloc. Se acopló al compuesto 3a con un derivado de histidina sustituido utilizando DCC. Este compuesto 3b fue desprotegido y tratado también con ?-bromo ácidos para obtener un compuesto del tipo 3c. Se logró la ciclación de 3c con Nal y Na2CO3 en metilvinil cetona en ebullición para dar 3d. Se convirtió el compuesto 3d a compuestos del tipo 3e por medio de la hidrólisis del éster seguida por acoplamiento con el intermediario amínico apropiado.

ESQUEMA 4 él Se dio comienzo a la preparación de los compuestos del tipo 4f en los que R', R\ R2, R3, R, n y PG son como se los definiera en el Esquema 1 a partir del compuesto del tipo 4a. Se convirtió al alcohol de 4a a 4b mediante tratamiento con fosfeno. Se convirtió a 4b a 4c mediante acoplamiento con 1 b protegido con alloc y Et3N. El grupo alloc de 4c fue desprotegido utilizando Pd(PPh3)4 para obtener 4d, que sufrió la ciclación en condiciones de Mitsunobu para dar 4e. Se hidrolizó el éster 4e y luego se acopló con una amina utilizando EDCI, HOOBt para obtener los compuestos del tipo 4f.

ESQUEMA 5 Se dio comienzo a la preparación de los compuestos del tipo 5h en los que R1, R2, R3, R', PG y n son como se los definiera en los Esquemas 1-3 y donde PG1 es CBz o Boc y PG2 es alloc, a partir del compuesto del tipo 5a. Se convirtió al ácido 5a al éster llevándolo a reflujo con ROH y TsOH. Se convirtió al oxígeno fenólico de 5b al grupo alloc mediante tratamiento con alloc-cloruro y trietilamina para dar 5c. Se convirtió al alcohol secundario de 5c a los compuestos del tipo 5d mediante acoplamiento con ciclohexilglicina protegida utilizando DCC y HOBt. Se desprotegió al grupo alloc del compuesto 5d usando Pd(Ph3P)4 y dimedona. Se desprotegió a 5e y se trató con EDCI, HOOBt y un complejo de rutenio debidamente activado para obtener los compuestos de la fórmula 5f. Los compuestos del tipo 5f fueron convertidos a compuestos cíclicos de la fórmula 5g mediante el uso de Cs2CO3 y posterior remoción fotolítica del rutenio. Se hidrolizó al grupo éster de 5g y se acopló a un intermediario amínico para obtener los compuestos del tipo 5h.

ESQUEMA 6 6e 6f 15 En el Esquema 6 se describe la preparación del compuesto de la fórmula 6f en la cual R\ R2, R3 son como se los definiera anteriormente, R' es alquilo, heteroalquilo (OR", SR'", NR"R"' donde R" y R'" son grupos alquilo), el sustituyente halógeno en la posición orto, meta o para, R representa grupos alquilo, arilo o alquilarilo, PG es Cbz o Boc y n es de cero a cinco. Se 20 convierte la meta-yodofenilglicina 6a a su éster en las condiciones habituales de esterificación (ROK, HCl). Luego se acopla al producto a un aminoácido N- protegido en presencia de HOOBt, EDCI-HCI y NMM. Después de la desprotección, se vuelve a acoplar la amina producida a un ácido alquenilcarboxílico terminal para dar el producto 6d. La reacción de Heck intramolecular con un catalizador de paladio produce el compuesto macrocíclico buscado 6e. (La reacción de Heck ha sido describeda en detalle por R. F. Heck, Org., React., 27 (1989) 345-390) Una vez hidrolizado el éster a un ácido con hidróxido de litio, se acopla a un intermediario amínico para producir 6f.

ESQUEMA 7 •10 7b 20 En el Esquema 7 se descríbe la preparación del compuesto de la fórmula 7b en la cual R\ R2, R3 son como se los definiera anteriormente, R' es alquilol heteroalquilo (OR", SR,M NR"R"' donde R" y R"' son grupos alquilo), el sustituyente halógeno en la posición orto, meta o para, R representa grupos alquilo, arilo o alquilarilo y n es de cero a cinco. La hidrogenación del doble enlace de 6e dio el macrociclo 7a. La hidrólisis del éster a ácido y el posterior acoplamiento con un intermediario amínico produjo 7b.

ESQUEMA 8 8e Sí En el Esquema 8 se describe la preparación del compuesto de la fórmula 8f en la cual R\ R2, R3 son como se los definiera anteriormente, R' es alquilo, heteroalquilo (OR", SR"\ NR"R"' donde R" y Rm son grupos alquilo), el sustituyente halógeno en la posición orto, meta o para con respecto al átomo de oxígeno, R representa grupos alquilo, arilo o alquilarilo. PG es Boc y n es de cero a cinco. Se acopla el meta-tirosina-dipéptido 8a a un alcohol amínico N-protegido terminal 8b en condiciones de Mitsunobu (trifenilfosfina y ADDP). Se eliminan los grupos protectores para dar el clorhidrato de diamina 8d. Se obtiene la macrociclación formando el ligamiento de urea por medio del uso de fosgeno o carbonildiimidazol. Luego se hidroliza el éster resultante a un ácido con hidróxido de litio y seguidamente se acopla a un intermediario amínico para dar el producto deseado 8f.

ESQUEMA 9 Se dio inicio a la síntesis de los compuestos del tipo 9d en los cuales los sustituyentes R\ R2, R3, R', R y PG son como se los definiera en el Esquema 1 , mediante la desprotección de 9a con HCl en dioxano y acoplamiento con ?-hidroxiácido utilizando EDCI, HOOBt para dar los compuestos del tipo 9b. Los compuestos del tipo 9b fueron adicionalmente ciclados utilizando Ph3P, ADDP para generar los compuestos del tipo 9c. Se desprotegió al compuesto cíclico 9c y se acopló con un intermediario amínico apropiado para generar el compuesto del tipo 9d.

ESQUEMA 10 10d 10e 10f O R ß 533 H " J o> R ¿,' O » s Rv' H « 10g 10h 10¡ La síntesis de los compuestos del tipo 10i en los cuales R2', R1', R\ R3 se definen en el Esquema 1. pG1 y PG2 se definen como grupos protectores a saber Fmoc y Dde. P se define como soporte polimérico en el cual se inmoviliza el compuesto y n es un número de 1-6. La metodología empleada para la síntesis de las moléculas del tipo 10i es una síntesis de péptidos en fase sólida normal con un grupo protector Fmoc. En primer lugar se desprotege una resina Sasarin protegida con Fmoc 10a mediante tratamiento de piperidina seguido por acoplamiento con el aminoácido protegido con Fmoc utilizando HATU para obtener el compuesto del tipo 10b. Se retira el grupo protector de 10b y se acopla a éste con aminoácido para usar HATU a in de obtener 10c. Se desprotegió a 10c inmovilizado en un soporte polimérico mediante tratamiento con piperidina y se acopla con un hidroxiácído para obtener la hidroxiamida del tipo 10d. Se escindió el grupo protector de 10d y se acopló a éste con un derivado de lisina utilizando HATU para obtener los compuestos del tipo 10e. Una vez más de desprotegió al grupo protector de 10e y se acopló con un aminoácido protegido con Fmoc para obtener el compuesto del tipo 10g. Se eliminaron los grupos protectores PG1 y PG2 y los ciclizó utilizando un diácido y HATU para obtener el macrociclo 10g. Se oxidó al compuesto 10g utilizando reactivo de Dess-Martin y por último se separó de la resina utilizando ATF para obtener el compuesto 10i.

ESQUEMA 11 !1s Se dio comienzo a la síntesis de los compuestos del tipo 11e en los cuales R\ R2, R3, R4 y n fueran definidos en el Esquema 1 y PG2 es Cbz, PG1 es Bn y PG es Boc, a partir del ácido protegido 11a. Se convirtió a 11a a los compuestos del tipo 11b mediante acoplamiento con un derivado de lisina utilizando metodología con EDCI, HOOBt. El grupo éster de 11b fue hidrolizado empleando LiOH.H20 seguido por acoplamiento con un intermediario amínico apropiado para obtener el compuesto 11c. Este fue tratado además con HCl en dioxano y acoplado con el intermediario lisina utilizando EDCI, HOOBt para formar los compuestos del tipo 11d. Los compuestos del tipo 11d fueron desprotegidos y ciclados empleando EDCI, HOOBt para formar los compuestos del tipo 11e.

Preparación de los intermediarios Intermediario A Paso 1 '10 A una solución agitada de 1-nitrobutano (16.5 g, 0.16 moles) y ácido glicólico en H2O (28.1 g, 0.305 moles) y MeOH (122 ml) a 0°C-5°C, se agregó por goteo trietilamina (93 ml, 0.667 moles) en el curso de 2 horas. La solución fue calentada a temperatura ambiente, agitada durante la noche y 15 concentrada a sequedad para dar un aceite. Luego se disolvió el aceite en H2O y se acidificó a pH = 1 con HCl al 10 %, seguido por extracción con EtOAc. La solución orgánica combinada fue lavada con solución salina, secada sobre Na2SO4, filtrada y concentrada a sequedad para dar el producto ii (28.1 g, 99 % de rendimiento).

Paso 2 A una solución agitada del material de partida ii (240 g, 1.35 moles) en ácido acético ii (1.25 1) se agregó PDIC al 10 % (37 g). La solución resultante fue hidrogenada a 59 psi (406 kpa) por espacio de 3 h y luego a 60 psi (413.6 kpa) durante la noche. A continuación se evaporó el ácido acético y se azeotropizó 3 veces con tolueno, luego se trituró con MeOH o éter. Seguidamente, la solución fue filtrada y azeotropizada dos veces con tolueno para dar iii en forma de sólido blanquecino (131 g, 0.891 moles, 66 %).

Paso 3 A una solución agitada del aminoácido iii (2.0 g, 0.136 mmoles) en dioxano (10 ml) y H2O (5 ml) a DCC, se agregó una solución de NaOH 1N (4.3 ml, 14.0 mmoles). La solución resultante fue agitada por espacio de 10 minutos, tras lo cual se agregó di-t-butildicarbonato (0.110 g, 14.0 mmoles) y se agitó a 0°C por un lapso de 15 minutos. A continuación, la solución fue calentada a temperatura ambiente, agitada durante 45 minutos y mantenida en el refrigerador durante la noche y concentrada a sequedad para dar un material crudo. A la solución de este material crudo en EtOAc (100 ml) y hielo, se agregó KHS04 (3.36 g) y H2O (32 ml) y se agitó durante 45 minutos. Luego se separó la capa orgánica y se extrajo la capa acuosa dos veces con EtOAc y la capa orgánica combinada fue lavada con agua, solución salina, secada sobre Na2SO4, filtrada y concentrada a sequedad para dar el producto iv en forma de goma traslúcida (3.0 g, 89 % de rendimiento).

Paso 4 BocHN w P IV A una solución agitada de iv (3.00 g, 12.0 mmoles) en DMF (15 ml) y CH2CI2 (15 ml) a -20°C se agregó HOOBt (1.97 g, 12.0 mmoles), N-metilmorfolina (4.0 ml, 36 mmoles) y EDCI (2.79 g, 14.5 mmoles) y se agitó por espacio de 10 minutos, tras lo cual se agregó HCI.H2N-Gly-OBn (2.56 g, 13.0 mmoles). La solución resultante fue agitada durante 2 horas, luego guardada en el refrigerador durante la noche y concentrada a sequedad, para luego diluiría con EtOAc (150 ml). Seguidamente se lavó la solución de EtOAc dos veces con NaHCO3 saturado, H2O, H3PO4 al 5 %, solución salina, se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró a sequedad para dar el producto v (4.5 g, 94 %) LRMS m/z MH+ = 395.1.

Paso 5 v vi La solución del material de partida v (7.00 g, 17.8 mmoles) en etanol absoluto (300 ml) fue agitada a temperatura ambiente bajo atmósfera de hidrógeno en presencia de Pd-C (300 mg, 10 %). Se monitoreó el proceso de la reacción mediante CLF. Al cabo de 2 h, la mezcla fue filtrada a través de una plancha de celite y la solución resultante fue concentrada al vacío para dar el producto vi (5.40 g, cuantitativo). LRMS m/z MH+ = 305.1.

Paso 6 iii A una solución de clorhidrato de dimetilamina (1.61 g, . 19.7 mmoles), N-Boc-feniglicina (4.50 g, 17.9 mmoles), HOOBt (3.07 g, 18.8 mmoles) y EDCI (4.12 g, 21.5 mmoles) en DMF anhidra (200 ml) y CH2CI2 (150 ml) a -20°C se agregó NMM (5.90 ml, 53.7 mmoles). Después de ser agitada a esta temperatura por espacio de 30 minutos, la mezcla de reacción fue guardada en un congelador durante la noche (18 h). Luego se dejó entibiar a temperatura ambiente, y se agregó EtOAc (450 ml), solución salina (100 mi) y H3P04 al 5 % (100 ml). Una vez separadas las capas, la solución orgánica fue lavada con K3PO4 al 5 % (100 ml), una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 x 150 ml), agua (150 ml) y solución salina (150 ml), secada (MgSO4), filtrada y concentrada al vacío para dar el producto crudo viii (4.86 g) en forma de sólido blanco, que fue utilizado sin más purificación.

Paso 7 Se disolvió la N-Boc-fenilglicina dimetilamida viii (4.70 g, cruda) en HCl 4 N (60 ml, 240 mmoles) y la solución resultante fue agitada a temperatura ambiente. Se monitoreó el progreso de la reacción por CLF. Al cabo de 4 h, la solución fue concentrada al vacío para dar ix en forma de sólido blanco que fue utilizado en la siguiente reacción sin más purificación. LRMS m/z MH+ = 179.0.

Paso 8 vi IX Se preparó el compuesto buscado x de acuerdo con los procedimientos de acoplamiento descritos en el Paso 4. LRMS m/z MH+ = 465.1.

Paso 9 Se preparó el intermediario propuesto A, a partir del tripéptido x de acuerdo con los procedimientos descritos en el Paso 7. LRMS m/z MH+ = 365.1.

Intermediario B Paso 1 Se obtuvo el producto buscado xii mediante el procedimiento descrito para el intermediario A, paso 8 utilizando xi adquirido en el comercio como adjunto de acoplamiento. El material crudo era suficientemente puro para continuar los estudios. Una porción del producto fue purificada por cromatografía instantánea utilizando diclorometano/MeOH 97/3 HRMS (FAB) Cale, para C^H^O,: 494.2866 (M+H)+. Encontrado: 494.2863.

Paso 2 Se obtuvo el producto buscado B mediante el procedimiento 20 descrito para el Intermediario A, Paso 7 Se utilizó el material crudo sin más purificación.

Intermediario C Paso 1 víi xiii Se preparó el compuesto deseado xiii de acuerdo con los procedimientos de acoplamiento descritos en el Paso 6 para el Intermediario A. Paso 2 Se preparó el compuesto deseado xiv de acuerdo con los procedimientos descritos en el Paso 7 para el intermediario A.

Paso 3 XIV VI Se preparó el compuesto deseado xv de acuerdo con los procedimientos de acoplamiento descritos en el Paso 6 para el intermediario A. LRMS m/z MH+ =451.1.

Paso 4 BocHN Se preparó el compuesto intermedio C de acuerdo con los procedimientos descritos en el Paso 7 para el Intermediario A. LRMS m/z MH+ = 351.1. Se utilizó sin más purificación.

Intermediario D Se preparó el intermediario D deseado a partir del compuesto D de acuerdo con los procedimientos descritos en el paso 7 para el intermediario A. Se utilizó sin más purificación.

Intermediario E Paso 1 iv XVII xvfii Se obtuvo el producto buscado xviii mediante el procedimiento descrito para el intermediario A, Paso 8, utilizando xvii adquirido en el comercio como adjunto de acoplamiento. El material crudo fue suficientemente puro para continuar los estudios.

Paso 2 XVIII Se obtuvo el producto deseado E mediante el procedimiento descrito para el intermediario A, Paso 7. El material crudo fue utilizado sin más purificación.

Intermediario F Paso 1 Se obtuvo el producto deseado xx mediante el procedimiento descrito para el intermediario A, Paso 4, utilizando xix adquirido en el comercio como adjunto de acoplamiento. El material crudo era suficientemente puro para continuar los estudios.

Paso 2 Se obtuvo el producto deseado F mediante el procedimiento descrito para el intermediario D.

Intermediario G Paso 1 iv G Se obtuvo el producto deseado G mediante el procedimiento descrito para el intermediario A, Paso 4, utilizando alilglicina como adjunto de acoplamiento. El material crudo era suficientemente puro El producto crudo fue tratado con HCl 4N/dioxano y agitado a ta. durante 50 mm. La mezcla de reacción fue concentrada a sequedad para dar el intermediario G que fue utilizado sin más purificación.

EJEMPLOS EJEMPLO 1 Preparación del Compuesto de la Fórmula 1 Paso A Una solución de ácido 4-cloropropiónico (2.0 g, 10.8 mmoles) de la en dicloroetano (200 ml) fue tratada con CpRu(CH3CN)3 PF6 (4.7 g, 10.8 mmoles, 10 equiv.) y calentada a reflujo durante 2 h. La mezca de reacción fue enfriada a ta., cuando se precipitaron del producto 1c cristales incoloros.

Los cristales fueron filtrados y lavados con una mezcla 1 :1 de Et2O/CH2CI2 y secados al vacío. Los cristales incoloros (3.3 g) eran analíticamente puros. RMN ? (CD3C(O)CD3, 400 MHz, ppm, d, J) 6.77 (d, 2 H, J = 7.0 Hz), 6.53 (d, 2H, J = 7 Hz), 5.64 (s, 4H), 2.87 (t, 2H, J = 7.0 Hz), 2.74 (t, 2H, J = 7.0 Hz) EM: (Electroatomización, intensidad relativa m/z): 350.9 (C14H14CIRu+, M+, 100); CHN cale, para C14H14CIF602PRu C=33.92 %, H =2.85 %, Cl =8.15 %, P =6.25 %. Encontrado: C =34.04 %, H =3.04 %, Cl =7.09 %, P =5.71 %.

Paso B Una solución de Boc-ciclohexilglicina monohidrato 1d (6.17 g, 24.00 mmoles) en CH2CI2 seco (50.0 ml) fue tratada con 4-metilmorfolina (2.64 g, 26.0 mmoles, 1.1 equiv.) y enfriada a -10°C. A esta mezcla se agregó cloroformiato de isobutilo (3.62 g, 3.5 ml, 1.1 equiv.) y la suspensión blanca fue agitada hasta que la temperatura del baño llegó a -5°C. Se disolvió la sal de clorhidrato del éster metílico de meta-tirosina (6.5 g, 26.5 mmoles, 1.1 equiv.) en DMF (30 ml) en un vaso separado y se trató con 4-metilmorfolína (2.64 g, 26.0 mmoles), 1.1 equiv.) y se agitó a ta. durante 15 min. Esta mezcla fue agregada a la reacción que estuvo acompañada por la evolución de CO2. La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 1 h y diluida con HCl ac. 1 M (100 ml). La capa acuosa fue extraída con acetato de etilo (3 x 200 ml) y la capa orgánica combinada fue extraída con HCl 1 M (1 x 100 ml), NaOH ac. (1 x 100 ml), solución salina (1 x 100 ml), secada (Na2SO4), concentrada al vacío y purificada por cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 3/7) para dar 5.3 g (53 %) del compuesto acoplado 1f en forma de espuma incolora.

Paso C Una solución de 1f (10 g, 23.04 mmoles) fue disuelta en HCl (solución 4M en dioxano, 100 ml) y agitada a ta. durante 24 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el sólido resuspendido en éter. Este fue filtrado y el sólido lavado con éter, al que se secó para dar un sólido incoloro, 1 g (8.2 g, 96 %). RMN 1H (CD3C(0)CD3, 400 MHz, d, ppm) 7.09 (t, 1 H, J = 8.0 Hz), 6.71-6.36 (m, 3H), 4.69 (dd, 1 H; J = 6.0 Hz, 3.2 Hz), 3.69 (s, 3H), 3.66 (d, 1 H, J = 5.2Hz), 3.15-3.10 (dd, 1 H; J = 5.6 Hz, 4.0 Hz), 1.87 1.69 (m, 6H), 3.66 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 3.15-3.10 (dd, 1H, J = 5.6Hz, 4.0Hz), 1.87- 1.69 (m, 6H), 1.32-1.10 (m, 5H).

Paso D Una solución de ácido ciclopentadien-?6-4-clorofenilpropiónico-hexansafluorofosfato de rutenio 1c (2.0 g, 4.0 mmoles) en DMF (20 ml) fue tratada con HOBt (810 mg, 6.0 mmoles, 1.5 equiv.) y base de Hünigs (2.6 g, 16.0 mmoles, 4.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a DCC y tratada con EDCI.HCI (888 mg, 5.0 mmoles, 1.25 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a DCC durante 30 min, y se agregó sal de amina 1 g (1.48 g, 4.0 mmoles) a la mezcla y se agitó a ta. durante 121 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo diluido con H2O (200 ml) y extraído con CH2CI2 (3 x 100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con KCl ac. (1 x 100 ml), NaHCO3 (1 x 100 ml), solución salina (1 x 100 ml) y secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y el sólido marrón 1 h fue utilizado para la ciclación sin más purificación. Paso E 1 h 1i Una solución de ácido ciclopentadien-?6-4-clorofenilpropiónico-ciclohexilglicina-meta-tirosina-OCH3 1h (1.47 g cruda) en DMF seca (150 ml) fue tratada con Cs2CO3 (2.40 g, 7.37 mmoles, 5.0 equiv.) y desgasificada mediante el burbujeo de N2 seco en la mezcla de reacción. La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 16 h y el exceso de DMF fue separado por destilación. Se disolvió el residuo en H2O (200 ml) y se extrajo con CH2CI2 (3 x 100 ml). La capa orgánica combinada fue extraída con solución salina (100 ml), secada (Na2S04), filtrada, concentrada al vacío y el residuo utilizado para la separación fotolítica del rutenio sin más purificación. Se disolvió el complejo de rutenio crudo en acetonitriloacetonitrilo (35 ml), se desgasificó y fotolizó en un Raynot (?=350 nM) durante 48 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 7:3) para dar 360 mg (52 %) de un sólido incoloro 1 i.

Paso F 1 i 1j Una solución de éter bifenílico 1i (300 mg, 0.65 mmoles) en CH3OH (10 ml), CH2CI2 (20 ml) y H2O (5 ml) fue tratada con LiOH.H2O (90 mg, 2.2 mmoles, 3.4 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 2 h. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl ac. (6 M) y extraída en CH2CI2 (3 x 30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas al vacío para dar el ácido incoloro 1j (200 mg, 66 %).

Paso G Una solución del ácido Ij (100 mg, 0.22 mmoles) en DMF seco (2.5 ml) fue tratada con HOOBt (45 mg, 0.33 mmoles) y base de Hünigs (141 mg, 1.1 mmoles, 5.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (63 mg, 0.33 mmoles, 1.5 equiv.) y agitada durante 20 min. La mezcla de reacción fue tratada con la amina B (118 mg, 0.27 mmoles, 1.22 equiv.) y agitada durante 12 h. a ta. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H20 (30 ml). Se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (3 x 50 ml) y EtOAc (3 x 50 mi). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con HCl ac (2M), NaOH ac. (2M), se secaron (Na2SO4), filtró, concentró al vacío para obtener un sólido incoloro 1k (79 mg) que fue utilizado para la oxidación. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 826 [(M+1)+, 100], 494 (20), 94 (30).

Paso H Una solución de la hidroxiamida 1k (130 mg, 0.16 mmoles) en DMF (2.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (130 mg, 0.32 mmoles, 2.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante de 2 h y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH(CH2CI2 1 :49) para dar él producto oxidado 1 (55 mg, 42 %) en forma de sólido incoloro. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 858 [(M+CH3OH+1 )+, 109], 824 [(M+1)+, 63]. • EJEMPLO 2 Preparación del Compuesto de la Fórmula 2 Paso A Una solución del éster terc-butílico 1(50.0 mg, 60.0 µmoles) fue tratada con ATF/CH2CI2 (1 :1.4 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 2 h. La desprotección del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2 1 :24). Una vez completada la desprotección, la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo tratado reiteradamente con heptanos (4.0 ml) y concentrado para dar un sólido blanco 2 (49 mg, 100 %). EM (Electroatomización, int. reí, m/z): 768 [(M+1 )+, 100).

EJEMPLO 3 Preparación del Compuesto de la Fórmula 3 Paso A 3a Una solución del ácido 1j (100 mg, 0.22 mmoles) en DMF seco (2.5 ml) fue tratada con HOOBt (45 mg, 0.33 mmoles) y base de Hünigs (141 mg, 1.1 mmoles, 5.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (63 mg, 0.33 mmoles, 1.5 equiv.) y agitada durante 20 mm. La mezcla de reacción fue tratada con la amina E (79 mg, 0.27 mmoles, 1.22 equiv.) y agitada durante 12 h a ta. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H2O (30 ml). Se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (3 x 50 ml). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con HCl ac (1M, 30 ml), NaOH sc (1M, 30 ml), se secaron (Na2SO4), filtró, concentró al vacío para obtener un sólido incoloro 3a (58 mg) que fue utilizado para la oxidación. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 693 [(M+1)+, 100], 637 (41), 494(55), 394(51 ), 338(13).

Paso B Una solución del alcohol 3a (95 mg, 0.14 mmoles) en CH2CI2 (2.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (116 mg, 0.28 mmoles, 2.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 2 h y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH/CH2CI2 1 :32) para dar el producto oxidado 3 (47 mg, 42 %) en forma de sólido incoloro. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 691 (M+1)\ EJEMPLO 4 Preparación del Compuesto de la Fórmula 4 Paso A Una solución del éster terc-butílico 3 (47.0 mg, 68.0 µmoles) fue tratada con HCl (Dioxano 4M, 5 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 25 h. La desprotección del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2 1:24). Una vez completada la desprotección, la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo tratado reiteradamente con heptanos (5.0 ml) y concentrado para dar un sólido blanco 4 (43 mg, 100 %). EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 635 [(M+1)+, 100), 465(62), 336 (62).

EJEMPLO 5 Preparación del Compuesto de la Fórmula 5 Paso A H Una solución del ácido 4-clorobutírico 5a (3.0 g, 15.10 mmoles) en dicloroetano (200 ml) fue tratada con CpRu(CH3CN)3PF6 1b (6.6 g, 15.10 mmoles, 1.0 equiv.) y calentada a reflujo durante 2.5 h. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y filtrada. El filtrado fue concentrado al vacío y disuelto en CH3CN (10 ml) y tratado con un gran exceso de Et2O. La goma que se separaba fue desprendida mediante decantación del éter y el residuo fue disuelto en CH2CI2/CH3OH (1 :1 , 100 ml) y concentrado al vacío para obtener 5b en forma de goma que solidifica (3.5 g, 46 %).

Paso B 5c Una solución del ácido carboxílico 5b (3.12 g, 5.95 mmoles) en DMF seca (20 ml) fue tratada con base de Hünigs (3.07 g, 24.0 mmoles, 4.0 equiv, 4.4 ml) y HOBt (1.2 g, 8.93 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (1.35 g, 7.43 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 1h. A esta mezcla de reacción se agregó el clorohidrato de amina 1g (2.65 g, 7.14 mmoles, 1.2 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 12 h. La DMF fue separada por destilación y el residuo diluido con agua y la capa acuosa fue extraída con CH2CI2. Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con NaHCO3 ac. HCl, solución salina, secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y el producto crudo 5c (4.3 g) fue utilizado para la ciclación sin más purificación RMN 1H (d4-CD3OD, 400 MHz, d, ppm) 7.35 (t, 1 H), 6.72- 6.60 (m, 5 H), 6.33-6.29 (dd, 2 H), 5.51 (s, 5 H), 4.19 (d, 1 H), 3.68 (s, 3 H), 3.19-2.83 (m, 2H), 2.51-2.40 (m, 2 H), 2.40-2.25 (m, 2H), 1.99-1.59 (m, 8H), 1.35-0.98 (m, 5H), EM (FAB, NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z) 695.3 ([M-PFJ+, 100), 232 (20), 171(30); HRMS cale, para 034^2^0,501 Ru+ (M-PF6)+ 695.1832: encontrado 695.1845.

Paso C 5c 5d Una solución del compuesto cloro 5c (3.0 g, 3.6 mmoles) en DMF seca (300 ml) fue desgasificada con N2 seco y Cs2CO3 (5.2 g, 16 mmoles, 4.0 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 16 h. La DMF solvente fue separada por destilación y el residuo diluido con agua y extraído con CH2CI2 (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas), filtradas, concentradas al vacío y secadas al vacío durante la noche. Se utilizó para la remoción fotolítica del Ru sin más purificación. EM FAB (NBA-G/TG-DM50 695 ([M-PF6]*, 100].

Se disolvió el compuesto ciclado del paso anterior en CH3CN (35 ml) y se fotolizó en un Raynot (d=350 nm) durante 48 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografia (Si02, EtOAc/Hexanos 1 :1) para dar un sólido de color tostado 5d (600 mg, 34 %). RMN 1H (CDCI3, 400 MHz, d, ppm) 7.58 (d, 1 H, J = 2.4, 5.6 Hz), 7.14 (t, 1 H, J = 8.0 Hz), 6.94 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 6.87 (dd, 1 H; J 2.4 Hz, 5.6 Hz), 6.73 (d, 1 H, J = 7.2 Hz), 6.59 (s,1 H), 6.57 (5, 2H), 6.39 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 4.51 (dt, 1 H, J = 2.8, 8.0 Hz), 3.80-3.62 (m, H), 3.62 (s, 3H), 3.05-3.00 (dd, 1 H; J = 2.8 Hz, 11.6 Hz), 2.85 (dd, 1 H), J = 8.4, 6.0 Hz), 2.76-2.72 (m, 1 H), 2.36-2.19 (m, 3H), 2.02 (dd, 1H, J =6.4, 9.2 Hz), 1.8-1.73 (m, 1 H), 1.61- 1.34 (m, 7H), 1.41-1.71 (m, 7H). MS (FAB, NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z) 493 [(M+1)+, 100] 465 (20), 232 (30), 171 (40). HRMS cale, para (M+1)+ 493.2702; encontrado 493.2699.

Paso D 5d 5e Una solución del éter 5d (200 mg, 0.42 mmoles) en CH3OH (5 ml), CH2CI2 (10 ml) y H20 (0.5 ml) fue tratada con LiOH.H2O (18 mg, 0.44 mmoles, 1.1 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl ac. (12 M, 1 ml) y concentrada al vacío para dar el ácido 5e que fue utilizado directamente para el acoplamiento sin más purificación.

Paso E Una solución del ácido 5e en DMF seca (5.0 ml) fue tratada con KOOBt (103 mg, 0.63 mmoles, 1.5 equiv.), base de Hünigs (216 mg, 1.68 mmoles, 4.0 equiv.) y la amina B (270 mg, 0.63 mmoles, 1.47 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 000 y tratada con EDCI (101 mg, 0.52 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 12 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H2O (30 ml). Se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (3 x 50 ml) y EtOAc (3 x 50 ml). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con HCl ac (2M), NaOH ac. (2M), se secaron (Na2SO4), filtró, concentró al vacío para obtener un sólido incoloro 5f (177 mg) que fue utilizado para la oxidación. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 840 [(M+1)*, 100], 394(100).

Paso F Una solución del alcohol 5f (177 mg, 0.21 mmoles) en CH2CI2 (10.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (178 mg, 0.42 mmoles, 2.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 3 h y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH/CH2CI2 1 :49) para dar el producto oxidado 5 (23 mg, 13 %) en forma de sólido incoloro. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 870 [(M+CH3OH+1 )+, 50], 838 [(M+1)+, 100).

EJEMPLO 6 Preparación del Compuesto de la Fórmula 6 Paso A Una solución del éster terc-butílico 5 (50.0 mg, 60.0 µmoles) fue tratada con ATF/CH2CI2 (1 :1.4 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 7 h. La desaparición del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2 1 :24). Una vez completada la desprotección, la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo tratado reiteradamente con heptanos (4.0 ml) y concentrado para dar un sólido blanco 6 (14 mg, 100 %).

EM (Electroatomización, int. reí. m(z): 782 [(M+1)+, 100).

EJEMPLO 7 Preparación del Compuesto de la Fórmula 7 Paso A 7a 7b Una solución del alcohol 7a (9.2 g, 54.1 mmoles) en CH2CI2 seco (200 ml) fue tratada con DMSO (35 ml) y Et3N (16.4 g, 16.3 mmoles, 23.4 ml). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con Py.S03 (12.9 g, 81.2 mmoles, 1.50 equiv.) disuelta en DMSO (30 ml). La mezcla de reacción fue agitad a 0°C durante 0.5 h y a ta. durante 6 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con Et2O (100 ml) y H2O (200 ml). Se separaron las capas y se extrajo la capa acuosa con Et2O (3x100 ml). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con HCl (2M, 3x100 ml), solución salina (ixiGO mi), se concentraron al vacío y se purificaron por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 1 :7) para dar el aldehido 7b que solidificó tomándose un sólido céreo al reposar (7.1 g, 77 %). CHN cale, para C9H9CIO: C= 64.11%, H =5.38%. Encontrado: C = 64.08 % H = 5.30%.

Paso B 7b 7c Se trató una solución de trietilfosfonoacetato (6.72 g, 30 mmoles, 15 1.2 equiv.) en THF seco (100 ml) con NaH (dispersión al 60 %, 1.5 g, 35 mmoles, 1.4 equiv.) a 0°C. La mezcla de reacción fue agitada a 25°C durante 1 h hasta que la evolución de H2 hubo cesado. Se agregó una solución del aldehido 7b (4.2 g, 25.0 mmoles) en THF seco y la mezcla de reacción fue agitada durante 36 h. La mezcla de reacción fue diluida con H2O (100 ml) y 20 extraída con Et20 (3x70 ml). La capa orgánica fue secada (MgSO4), filtrada, concentrada al vacío y cromatografiada para dar el éster a, ß-insaturado 7c (4.2 g, 71 %), que fue utilizado para la reducción.

Paso C 7c 7d Se trató una solución del éster a, ß-insaturado 7c (4.2 g, 8.0 mmoles) en EtOAc (50 ml) con Pd/C (10 % p/p, 500 mg) y se hidrógeno a 50 psi (34.7 kPa) durante 12 h. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un cilindro de celite y el filtrado concentrado al vacío para dar el compuesto reducido 7d (3.9 g, 93 %).

Paso D 7d 7e Una solución del éter 7d (3.9 g, 16.2 mmoles) en CH3OH THF/H2O (1:1:0.1, 110 ml) fue tratada con LiOH.H2O (1.2 mg, 30 mmoles, 2.0 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo diluido con H2O (100 ml) y extraído en Et2O (3x50 ml). La capa acuosa fue acidificada a pH 1 (HCl 13M) y la capa acuosa turbia fue extraída con Et2O (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (MgSO4), filtradas, concentradas al vacío para dar un sólido incoloro 7e (3.1 g, 96 %). CHN cale, para C11H13CIO2: C=62.12 % H =6.16 % Encontrado: C = 62.27 % H = 6.23 %.

Paso E Una solución del ácido clorofenilpentanoico 7e (3.0 g, 14.15 mmoles) en dicloroetano (150 ml) fue tratada con CpRu(CH3CN)3PF6 1b (6.75 g, 15.10 mmoles, 1.0 equiv.) y calentada a reflujo durante 2.5 h. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y filtrada. El filtrado fue concentrado al vacío y disuelto en CH3CN (20 ml) y tratado con un gran exceso de Et2O. La goma que se separaba fue desprendida mediante decantación del éter y el residuo fue disuelto en (1:1, 100 ml) y concentrado al vacío para obtener 7f en forma de goma marrón que solidifica (4.36 g, 58 %). EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 379 [(M-Pf6)+, 100].

Paso F Una solución del ácido carboxílico 7f (3.12 g, 5.95 mmoles) en DMF seca (20 ml) fue tratada con base de Hünigs (3.07 g, 24.0 mmoles, 4.0 equiv., 4.4 ml) y HOBt (1.2 g, 8.93 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (1.35 g, 7.43 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 1 h. A esta mezcla de reacción se agregó el clorhidrato de amina 1g (2.65 g, 7.14 mmoles, 1.2 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a ta durante 12 h. La DMF fue separada por destilación y el residuo diluido con agua y la capa acuosa fue extraída con CH2CI2. Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con NaHCO3 ac. HCl, solución salina, secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío y el producto crudo 7g (4.3 g) fue utilizado para la ciclación posterior sin más purificación. RMN 1H (d4- CD3OD, 400 MHz, d, ppm) 7.35 (t, 1H), 6.72 -6.60 (m, 5H), 6.33~,29 (dd, 2H), 5.51 (s, 5H), 4.19 (d, 1 H), 3.68(s, 3H), 3.19-2.83 (m, 2H), 2.51-2.40 (m, 2H), 2.40-2.25 (m, 2H), 1.99-1.59 (m, 8H), 1.35-0.98 (m, 5H). EM (FAB, NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z) 695.3 ([M-PF6]+, 100), 232 (20), 171(30). HRMS cale, para (M-PF6)+ 695.1832. Encontrado 695.1845.

Paso G 7g 7h Una solución del compuesto cloro 7g (3.0 g, 3.6 mmoles) en DMF seca (300 ml) fue desgasificada con N2 seco y Cs2C03 (5.2 g, 16 mmoles, 4.0 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 16 h. La DMF solvente fue separada por destilación y el residuo diluido con agua y extraído con CH2CI2 (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y secadas al vacío durante la noche. Se utilizaron para la remoción fotolítica del Ru sin más purificación. EM FAB (NBA-G/TG-DMSO 695 ([M-PFJ+, 100]. Se disolvió el compuesto ciclado del paso anterior en CH3CN (35 ml) y se fotolizó en un Raynot (?=350 nm) durante 48 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 1 :1) para dar un sólido de color tostado 7h (600 mg, 34 %). RMN 1H (CDCI3, 400 MHz, d, ppm) 7.58 (d, 1 H, J = 7.6 Hz), 7.14 (t, 1 H, J = 8.0 Hz), 6.94 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 6.87 (dd, 1 H; J = 2.4 Hz, 5.6 Hz), 6.73 (d, 1 H, J = 7.2 Hz), 6.59 (s, 1 H), 6.57 (s, 2H), 6.39 (d, 1 H, J = 8.0 Hz), 4.51 (dt, 1 H, J = 2.8, 8.0 Hz), 3.80-3.62 (m, 1 H), 3.62 (s, 3H), 3.05-3.00 (dd, 1 H; J = 2.8 Hz, 11.6 Hz), 2.85 (dd, 1 H), J = 8.4, 6.0 Hz), 2.76-2.72 (m, 1 H), 2.36-2.19 (m, 3H), 2.02 (dd, 1 H, J = 6.4, 9.2 Hz), 1.8-1.73 (m, 1 H), 1.61-1.34 (m, 7H), 1.41-1.71 (m, 7H). EM (FAB, NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z) 493 [(M+1)+, 100] 465 (20), 232 (30), 171(40). RMS cale, para (M+1)+ 493.2702. Encontrado 493.2699.

Paso H 7h 7i Una solución del éter 7h (220 mg, 0.46 mmoles) en CH3OH (3 ml), CH2CI2 (10 ml) y H2O (0.5 ml) fue tratada con LiOH.H2O (18 mg, 0.44 mmoles, 1.1 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl ac. (13 M, 1 ml) y concentrada al vacío para dar el ácido 7i que fue utilizado directamente para el acoplamiento sin más purificación.

Paso I Una solución del ácido 7i en DMF seca (3.0 ml) fue tratada con HOOBt (94 mg, 0.75 mmoles, 1.6 equiv.), base de Hünigs (237 mg, 1.84 mmoles, 4.0 equiv.) y la amina B (246 mg, 0.58 mmoles, 1.47 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (110 mg, 0.58 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada a 0°C durante 25 min, 12 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H2O (30 ml). Se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (3 x 30 ml). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con HCl ac. (1 M, 60 ml), NaOH ac. (60 ml), se secaron (Na2SO4), filtró, concentró al vacío para obtener un sólido incoloro 7j (230 mg) que fue utilizado para la oxidación. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 854 [(M+1)+, 100], 479(70), 327(50), 2.71.1(100).

Paso J Una solución del alcohol 7j (220 mg, 0.26 mmoles) en CH2CI2 (3.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (218 mg, 0.51 mmoles, 2.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. y la mezcla fue concentrada al vacío El residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH/CH2CI2 1 :24) para dar el producto oxidado 7 (23 mg, 13 %) en forma de sólido incoloro. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 852 [(M+ 1)+, 43], 796 (100), 768 (20), 461(20), 433 (50), 405 (40), 336 (30), 294 (50).

EJEMPLO 8 Preparación del Compuesto de la Fórmula 8 Paso A Una solución del éster terc-butílico 7 (32.0 mg, 37.0 µmoles) fue tratada con ATF/CH2CI2 (1:1, 5.0 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 4 h. La desaparición del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2 1:24). Una vez completada la desprotección, la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo tratado reiteradamente con heptanos/CH3OH (4.0 ml) y concentrado para dar un sólido tostado 8 (29.0 mg, 100 %). EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 796 [(M+1)+, 100).

EJEMPLO 9 Preparación del Compuesto de la Fórmula 9 Paso A Una solución de Boc-Glicina 9a (1.75 g, 10.0 mmoles) en DMF seca (50 ml) fue tratada con HOOBt (2.65 g, 15 mmoles, 1.5 equiv.) y EDCI (2.86 g, 15.0 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla de reacción fue tratada con base de Hünigs (5.16 g, 40 mmoles, 4.0 equiv., 7.3 ml). La mezcla de reacción fue agitada durante 1 h y se agregó meta-tirosina-OCH3.HCI 1e (2.5 g, 11.5 mmoles, 1.1 equiv.), agitando a 25°C durante 12 h La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo diluido con NaHCO3 y extraído en CH2CI2. La capa orgánica combinada fue concentrada y el residuo purificado por cromatografía (Si02, EtOAc/Hexanos 1 :1) para dar un sólido incoloro 9b (3.4 g, 90 %).

Paso B BocHN" ?' " 9b 9c Una solución de 9b (4.6 g, 13.06 mmoles) en HCl (solución 4M en dioxano, 50 ml) fue agitada a temperatura ambiente durante 3 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo secado en alto vacío para dar 9c en forma de polvo fino que fue utilizado para el siguiente paso. RMN ? (d4-CD3OD, 400 MHz, d, ppm) 8.67 (d, 1H, J = 7.9 Hz), 7.10-7.07 (m, 1 H), 6.68-6.64 (m, 2H), 4.75-4.70 (m, 1H), 3.75-3.61 (m, 2 H), 3.66 (s, 3H), 3.10 (dd, 1H, J = 5.2, 8.5 Hz), 2.90 (dd, 1 H, J = 8.8, 5.0 Hz).

Paso C Una solución de CpRu(ácido ?6-clorofenilpropiónico)-PF6 1c (3.0 g, 46.01 mmoles) en DMF seca (60 ml) fue tratada con HOBt (1.3 g, 9.16 mmoles), 1.5 equiv.) y base de Hünigs (3.22 g, 4.60 mmoles, 4.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C por un lapso de 30 minutos y tratada con EDCI (1.75 g, 9.16 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 30 min.y se agregó la sal de glicina amonio 9c (1.75 g, 6.06 mmoles, 1.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 12 h y la DMF fue separada por destilación al vacío. El residuo fue diluido con HCl ac (1M, 100 ml) y extraída en CH2CI2 (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con NaHCO3 ac. (1 x 100 ml), solución salina (50 ml) y secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío para dar un sólido marrón 9d (1.5 g, 34 %) que fue utilizado para la ciclación.

EM (Electroatomización, intensidad relativa m/z) 585 ([M-PF6]+, 100], 459(30), 373 (30), 198 (20).

Paso D Una solución del compuesto rutenio 9d (1.5 g, 2.05 mmoles) en DMF seca (100 ml) fue desgasificada con N2 a ta. seco y se agregó Cs2C03 (5.0 g, 15 mmoles, 7.5 equiv.) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La DMF del solvente fue separada por destilación y el residuo diluido con agua (100 ml) y extraído con CH2CI2 (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con solución salina (100 ml), secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío y secadas al vacío durante la noche. Se utilizaron para la remoción fotolítica del Ru sin más purificación. Se disolvió el compuesto ciclado del paso anterior en CH3CN (30 ml) y se filtró, introduciéndolo en un tubo de cuarzo. La solución fue desgasificada y fotolizada en un Raynot (?=350 nm) durante 48 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 1 :1) para dar un sólido de color tostado 9e (230 mg, 30 %)- RMN 1H (CDCI3, 400 MHz, d, ppm) 7.23-7.18 (m, 2H), 7.09-7.01 (s, 3H), 6.76 (dd, 1 H, J = 2.4 8.8 Hz), 6.66 (d, 1 H; J = 7.6 Hz), 6.47 (d, 1 H; J = 5.6 Hz), 6.17 (s, 1 H), 5.64 (s, 1 H), 4.69 (q, 1 H, J = 4.4 Hz), 3.77 (s, 3H), 3.68- 3.51 (m, 2H), 3.35 (dd, 1 H, J = 4.0, 10.8 Hz), 3.05 (dd, 1 H; J = 5.2, 9.2 Hz), 2.96-2.92 (m, 2H), 2.61-2.56 (m, 1 H), 2.30-2.29 (m, 1 H). RMN 13C (CDCI3. 100 MHz, d ppm: 172.3, 171.4, 168.1 , 159.9, 155.4, 137.6, 136.4, 131.0, 130.0, 129.5, 123.3, 122.4, 121.0, 117.7, 117.1 , 53.6, 53.0, 43.6, 39.9, 36.1 , 32.3. (Electroatomización, intensidad relativa m/z) 383 [(M+1]+, 100] 279 (20).

Paso E 9e 9f Una solución del compuesto cíclico 9e (150 mg, 0.4 mmoles) en THF (4.0 ml), H20 (4.0 ml) fue agitada a ta. con LiOH.H20 (41.0 mg, 1.0 mmoles, 2.5 equiv.) durante 3 h. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl conc. (2.0 ml) y concentrada al vacío. El sólido 9f fue secado al vacío y utilizado para el posterior acoplamiento sin más purificación.

Paso F Una solución del ácido hidrolizado 9f en DMF seca (4.0 ml) y CH2CI2 (4.0 ml) fue tratada con HOOBt (103 mg, 0.58 mmoles, 1.5 equiv.) y enfriada a 0°C y se agregó base de Hünigs (206 mg, 1.60 mmoles, 4.0 equiv, 295 µl). A esta mezcla se agregó EDCI (112 mg, 0.58 mmoles, 1.5 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 0.4 h y tratada con el clorhidrato de amina 8 (206 mg, 0.48 mmoles, 1.2 equiv.). La mezcla de reacción fue guardada en un congelador durante 48 h y concentrada al vacío para eliminar la DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con HCl ac. (2M) y extraído con CH2CI2 (3x50 ml). La capa orgánica combinada fue extraída con HCl ac (1 M; 3x50 ml), NaOH ac. (2M); solución salina (100 ml), secada (Na2SO4) y concentrada al vacío. El residuo 9g (200 mg) fue oxidado sin más purificación.

Paso G Una solución del alcohol 9g (200 mg, 0.27 mmoles) en CH2CI2 (3.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (342 mg, 0.81 mmoles, 3.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 3 h y diluida con NaHCO3 acuoso y Na2S203 ac. La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 20 min, y se extrajo la mezcla de reacción con CH2CI2 (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con solución salina (50 ml), secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3QH (NH3 2M)/CH2CI2 1:19) para dar la cetoamida 9 (100 mg, 50 %) en forma de sólido incoloro. EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 742 [(M+ 1)+, 100), 686 (80).

EJEMPLO 10 Preparación del Compuesto de la Fórmula 10 10 Paso A 10 Una solución del éster terc-butílico 9 (100 mg, 0.3 mmoles) en CH2CI2 seco (4.0 ml) fue tratada con ATF (4.0 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo disuelto reiteradamente en tolueno/CH2CI2 y concentrado al vacío varias veces para dar un fino sólido incoloro 10. EM (FAB, NBN/DMSO intensidad relativa m z), 686 [(M+ 1)+, 40], 460 (20), 307 (100), 289 (60). HRMS cale, para (M+1)+: 686.2825. Encontrado 686.2840.

EJEMPLO 11 Preparación del Compuesto de la Fórmula 11 11 Paso A 19 11a A una solución del clorhidrato de amina 1g (1.20 g, 3.23 mmoles), ácido 6-heptenoico (0.610 g, 4.68 mmoles), HOOBt (0.765 g, 4.69 mmoles) y EDCI (1.07 g, 5.58 mmoles) en DMF anhidra (50 ml) y CH2CI2 (50 ml) a -20°C se agregó NMM (1.55 ml, 14.1 mmoles). Después de agitar a esta temperatura durante 30 min, se guardó la mezcla de reacción en un congelador durante 18 h. Luego se dejó entibiar a ta. y se agregó EtOAc (150 ml), solución salina (50 ml) y H3PO4 al 5 % (50 ml). Tras la separación, se lavó la solución orgánica con H3PO4 al 5 % (80 ml), una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (2 x 80 ml), agua (80 ml) y solución salina (80 ml), se secó con sulfato de magnesio, se filtró y concentró al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH 2 a 5 %-CH2CI2) dio 11a (1.46 g, 3.28 mmoles, cuant.) en forma de sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, d6-DMSO) d 9.25 (s, 1 H), 8.31 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.70 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.05-7.01 (m, 1 H), 6.62-6.58 (m, 3H), 5.82-5.72 (m, 1 H), 5.02-4.91 (m, 1 H), 4.43-4.38 (m, 1 H), 4.23-4.19 (m, 1 H), 3.55 (s, 3 H), 2.93-2.80 (m, 2 H), 2.51-1.97 (m, 2 H), 1.66-0.86 (m, 15H). RMN 3C (d6-DMSO, 125 MHz), d 171.9, 171.8, 171.1 , 157.2, 138.6, 138.4, 129.1 , 119.5, 115.8, 114.6, 113.5, 56.5, 53.5, 51.6, 36.5, 34.8, 32.8, 29.0, 28.0, 27.8, 25.8, 25.5, 24.8. HRMS cale, para 02^36^0,5445.2702, error: 4 ppm).

Paso B 11a 11b A una solución de 11 a (1.46 g, 3.28 mmoles) en THF anhidro (60 ml) bajo nitrógeno a 0°C se agregó una solución de borano-THF (12 ml, 1.0 M, 12 mmoles), cuidadosamente. La solución resultante fue agitada a 0°C bajo nitrógeno durante 1 h 40 min. Luego se agregó etanol (4 ml) y solución reguladora de pH 7 (8 ml), seguido por una solución de H2O2 al 30 % (7.5 ml). Después de agitar a 0°C durante 20 min, se calentó a ta. y se agitó durante 2 h. Se agregó EtOAc (200 ml) y solución salina (100 ml) y se separaron las capas. Se extrajo la solución acuosa con EtOAc (2 x 150 ml). La solución orgánica combinada fue secada con sulfato de magnesio, filtrada y concentrada al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH de 2 a 5 %-CH2CI2) dio 11 b (1.05 g, 2.18 mmoles, 68 %) en forma de sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, d6 DMSO) d 9.25 (s, H), 8.30 (d, J = 7.2 Hz, 1 H), 7.68 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.05- 7.01 (m, 1 H), 6.62-6.58 (m, 3H), 4.43-4.18 (m, 3 H), 3.55 (s, 3H), 3.37-3.33 (m 2 H), 2.93-2.80 (m, 2 H), 2.20-2.03 (m, 2 H), 1.66-0.87 (m, 19H). RMN 13C (d6- DMSO, 125MHz) d 172.1 , 171.8, 171.2.157.2.138.4, 138.4, 129.1 , 119.5, 115.8, 113.5, 56.5, 53.5, 51.7, 36.5, 35.1 , 32.6, 32.4, 29.0, 28.5, 28.0, 25.8, 25.6, 25.2. HRMS cale: para 463.2808, error: 1 ppm).

Paso C 11b 11c A una solución del alcohol fenólico 11 b (1.00 g, 2.16 mmoles) y tri-n-butilfosfina (1.10 ml, 4.28 mmoles) en CH2CI2 anhidro (100 ml) y THF (40 ml) a DCC se agregó ADDP (1.08 g, 4.28 mmoles). Después de agitar a 0°C durante 1 h, la solución fue calentada a ta y agitada durante 3 h bajo nitrógeno. La CLF indicó el consumo total del material de partida. Tras la eliminación del solvente al vacío, el residuo fue parcialmente purificado por cromatografía instantánea (MeOH de 0 a 3 % en CH2CI2) para dar el macrociclo 11c (650 mg, 1.46 mmoles, 68 %). RMN 1H (400 MHz, d6-DMSO) d 8.58 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.76 (d, J = 9.2 Hz, 1 H), 7.18-7.14 (m, H), 6.76-6.65 (m, 3H), 4.77-4.71 (m, 1 H), 4.32 (t, J = 8.5 Hz, 1 H), 3.97- 3.93 (m, 1 H), 3.82-378 (m, 1 H), 3.18-3.14 (m, 1 H), 2.98-2.92 (m, 2 H), 2.32-2.25 (m, 1 H). 1.99-0.87 (m, 19H). RMN 13C (d6-DMSO, 125 MHz) d 172.1 , 171.6, 171.4, 160.1 , 158.8, 139.0, 129.1 , 121.1 , 113.0, 111.9, 66.4, 56.1 , 52.0, 50.1 , 40.6, 34.9, 34.2, 28.7, 28.3, 26.8, 26.3, 25.9, 25.5, 25.2, 24.2.

HRMS m/z 445.2685 cale, para CggHaeNgOg 445.2702, error: 4 PPm).

Paso D 11c 11d Se agregó una solución acuosa de hidróxido de litio (70 mg, 15 ml, H2O, 292 mmoles) a una solución del éster metílico 11c (330 mg, 0.742 mmoles) en THF (20 ml) y etanol (10 ml) a ta. La mezcla fue agitada a ta durante 3 h. Se monitoreó el progreso de la reacción por CLF. Una vez concentrada la solución al vacío, se agregó EtOAc (100 ml), una solución de HCl 6N (10 ml) y agua (50 ml) y se separaron las capas. Se extrajo la solución acuosa con EtOAc (2 x 80 ml). Se combinaron las soluciones orgánicas, éstas fueron secadas con sulfato de magnesio, filtradas y concentradas al vacío para dar 11 d (260 mg, 0.604 mmoles, 81 %) en forma de sólido blanco. RMN 1H (400 MHz, d6-DMSO) d 8.43 (d, J = 8.3 Hz, 1 H), 7.73 (d, J = 9.3 Hz, 1 H), 7.17-7.13 (m, H), 6.77-6.66 (m, 3H), 4.67- 4.62 (m, 1H), 4.32- 4.28 (m, H), 3.98-3.93 (m, H), 3.81-375 (m, H), 3.17-3.13 (m, H), 2.97-2.90 (m, 1 H), 2.32-2.26 (m, 1 H). 2.01-1.97 (m, 1 H), 1.67-0.85 (m, 19H). RMN 13C (d6-DMSO, 125MHz) d 173.2, 171.6, 171.3, 160.1 , 158.8, 139.3, 129.0, 121.1 , 113.1 , 111.9, 66.4, 56.1 , 50.8, 35.1 , 34.3, 28.8, 28.3, 26.9, 26.3, 25.9, 25.6, 25.5, 25.2, 24.2. HRMS m/z 431.2564 (cale, para CggHaeNzOg: 431.2546, error: 4 ppm).

Paso E B 11d 11e A una solución del ácido lid (0.140 g, 0.325 mmoles), la amina B (0.140 g, 0.325 mmoles), HOOBt (56 mg, 0.343 mmoles) y EDCI (75 mg, 0.391 mmoles) en DMF anhidra (40 ml) y CH2CI2 (20 ml) a -20°C se agregó NMM (0.107 ml, 0.873 mmoles). Después de agitar a esta temperatura durante 30 min, se guardó la mezcla de reacción en un congelador durante 18 h. Luego se agregó EtOAc, solución salina y H3PO4 al 5 %. Se lavó la solución orgánica separada sucesivamente con H3PO4 al 5 %, una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio, agua y solución salina, se secó con sulfato de magnesio, se filtró y concentró al vacío La cromatografía instantánea (MeOH 2 a 5 %-CH2CI2) dio 11e como mezcla de diastereómeros (0170 g, 0.211 mmoles, 65 %) en forma de sólido blanco, que fue utilizado en la reacción siguiente sin más purificación.

Paso F 11e 11 A la mezcla de la hidroxiamida 11e (0.29 g, 0.36 mmoles) y reactivo de Dess-Martin (0.45 g, 1.06 mmoles) a ta. se agregó CH2CI2 anhidro (60 ml) DMF (3 ml) y DMSO (3 ml). La solución resultante fue agitada vigorosamente durante 2.5 h a temperatura ambiente, se agregó más reactivo Dess-Martin (300 mg, 0.71 mmoles) y se agitó la mezcla de reacción durante una hora más. Se agregó una solución saturada acuosa de bicarbonato de sodio y una de bisulfito de sodio (40 ml de cada una) y se agitó vigorosamente la mezcla durante 10 min, antes de la adición de EtOAc (200 ml) y agua (30 ml) y de la separación de las capas. Se lavó la solución orgánica con una solución de H3PO4 al 5 % (2 x 100 ml) y una solución saturada de NaHCO3 (100 ml), se secó con sulfato de magnesio, se filtró y concentró al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH 1 a 5 %-CH2CI2) dio 11 (100 mg, 0.134 mmoles, 35 %) en forma de sólido. RMN 1H (400 MHz, d6-DMSO) d 8.79-8.69 (m, 2 H), 8.36-8.16 (m, 2 H), 7.72-7.68 (m, 1 H), 7.42-7.33 (m, 5 H), 7.17-7.13 (m, H), 6.77-6.63 (m, 3H), 5.30-5.27 (m, 1 H), 5.09-5.04 (m, 1 H), 4.85-8.76 (m, 1 H), 4.29-4.25 (m, H), 3.98-3.74 (m, 1 H) 3.02-2.85 (m, 2 H), 2.32-2.27 (m, 1 H). 2.04-1.96 (m, 1 H), 1.72-0.81 (m, 35 H). RMN 13C (d6-DMSO, 125 MHz) d 196.5, 196.2, 171.5, 171.14, 171.07, 169.4, 157.6, 160.7, 158.94, 158.79, 139.5, 139.3, 136.6, 136.5, 128.92, 128.90, 128.7 128.6.128.1 , 127.7, 127.4, 124.9, 121.34, 121.28, 113.1 , 112.9, 111.9, 81.3, 66.34, 66.30, 56.92, 56.87, 56.3, 56.2, 53.4, 53.3, 51.5, 50.9, 41.5, 41.4, 40.8, 40.7, 36.6, 36.1 , 25.59, 25.55, 25.0, 24.2, 18.74, 18.66, 13.5, 13.4. HRMS m/z 804.4542 (cale, para C^H^Os 804.4548, error: 1 ppm).

EJEMPLO 12 Preparación del compuesto de la Fórmula 12 Paso H 11 12 Una solución del éster t-butílico 11 (56.8 mg, 0.0706 mmoles) en ácido trifluoroacético (15 ml) y CH2CI2 (15 ml) fue agitada a ta durante 4 h. Una vez eliminados todos los volátiles al vacío, se disolvió el residuo en MeOH al 50 %-CH2CI2 (3 ml) y se concentró a sequedad al vacío para dar origen a un sólido blancuzco 12 (50 mg, 0.0669 mmoles, 95 %). RMN ? (400 MHz, d6-DMSO) d 8.75-8.71 (m, 2 H), 8.36-8.16 (m, 2 H), 7.72-7.69 (m, 1 H), 739-7.31 (m, 5 H), 7.17-7.13 (m, 1 H), 6.76-6.63 (m, 3 H), 5.37-5.35 (m, H), 5.07-5.04 (m, 1 H), 4.85-4.76 (m, H), 4.29-4.25 (m, 1 H), 3.97-3.74 (m, 4 H), 3.02-2.86 (m, 2 H), 2.32-2.26 (m, 1 H), 2.01-1.97 (m, 1 H), 1.70-0.82 (m, 26 H). 13C NMR (d6-DMSO, 125 MHz), d 196.5, 196.2, 171.63, 171.59, 171.52, 171.48, 171.1 , 171.06, 167.4, 160.6, 158.82, 158.78, 153.4, 139.4.137.1, 137.0, 128.91, 128.88, 128.7, 128.65, 128.61 128.5, 128.43, 128.39, 128.33, 128.32, 128.14, 128.12, 128.0, 127.7, 128.7, 127.63, 127.59, 127.5, 127.4, 126.8, 121.3, 115.9, 113.1 , 112.9, 112.8, 112.0, 111.9, 111.88, 66.33, 66.29, 56.3, 56.2, 56.7, 53.34, 53.31 , 53.27, 51.1 , 50.9, 41.5, 40.84, 40.77, 40.7, 40.6, 40.56, 40.53, 40.5, 38.7, 38.6, 38.56, 38.53, 36.6, 36.1 , 34.4, 34.3, 31.8, 31.6, 29.4, 29.1 , 29.0, 28.9, 28.4, 28.3, 28.2, 26.9, 26.8, 26.79, 26.20, 26.16, 25.88, 25.86, 25.79, 25.75, 25.71 , 25.66, 25.57, 25.54, 25.4, 25.0, 24.2, 18.7, 18.6, 13.5, 13.4. HRMS, m/z 748.3947 (cale para 748.3922, error: 3 ppm).

EJEMPLO 13 Preparación del Compuesto de la Fórmula 13 Paso A Se preparó el compuesto buscado 13a de acuerdo con el método del Ejemplo 11, Paso A, excepto que se sustituyó el ácido 6-heptenoico por ácido 6- hidroxihexanoico (39 %).

Paso B 13a 13b Se preparó el compuesto buscado 1 3b de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso C con 74 % de rendimiento.

Paso C 13b 13c Se preparó el ácido macrocíclico deseado 13c a partir de su éster metílico correspondiente de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso D con 88 % de rendimiento, en forma de sólido blanco.

Paso D 13d Se preparó el compuesto deseado 13d a partir de 13c y B de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso E con 48 % de rendimiento.

Paso E 13d 13 Se preparó el compuesto deseado 13 a partir de 13d de acuerdo del Ejemplo 11 , Paso F con 70 % de rendimiento.

EJEMPLO 14 Preparación del Compuesto de la Fórmula 14 14 Paso A 13 Se preparó el compuesto deseado 14 a partir de 13 de acuerdo del Ejemplo 12, Paso A con rendimiento cuantitativo.

EJEMPLO 15 Preparación del Compuesto de la Fórmula 15 15 Paso A 15a 15b Una solución de 3-yodo-fenilalanina 15a (2.50 g, 8.59 mmoles) y ácido clorhídrico concentrado (2 ml, 24 mmoles) en metanol fue calentada a reflujo durante 18 h. La eliminación de los solventes al vacío dio un sólido blanco 15b, que fue utilizado en el Paso B sin más purificación.

Paso B 15c Se preparó el compuesto deseado 15c con 84 % de rendimiento a partir de 15b de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso A. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso C 15c 15d Se preparó el compuesto deseado 15d a partir de 15c de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso A (cuantitativo). Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso D 15d 15e Se preparó el compuesto deseado 15e con 68 % de rendimiento a partir de 15d de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso A. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso E 15e 15f Una solución de 15e (1.16 g, 2.04 mmoles), trietilamina (2.90 m, 20.6 mmoles) en acetonitrilo anhidro (25 ml) y DMF (20 ml) en un tubo de paredes gruesas fue insuflado con argón por un lapso de 5 minutos. A esta solución a ta. se le agregó rápidamente tetra-His(trífenilfosfina)paladio (0) (235 mg, 0.203 mmoles). El tubo fue cerrado herméticamente con una tapa a rosca de teflón y calentado a 85-90°C en un baño de aceite. Después de agitar durante 3 h, se enfrió a ta., se abrió con cuidado y se vertió su contenido sobre EtOAc (100 ml). La solución fue lavada con H3P04 al 5 % (4 x 50 ml) y agua (50 ml). Se secó la capa orgánica con sulfato de magnesio, se filtró, se concentró al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH 1 a 4 %-CH2CI2) dio el macrociclo 15f (330 mg, 0.749 mmoles, 37 %).

Paso F 15f 15g Se preparó el compuesto deseado 15g cuantitativamente a partir de 15f de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso D. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso G 1dh Se preparó el compuesto deseado 15h con 78 % de rendimiento a partir de 15g de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso F. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso H 15h 15 Se preparó el compuesto deseado 15 con 55 % de rendimiento a partir de 15h de acuerdo con el método del Ejemplo 1 , Paso H.

EJEMPLO 16 Preparación del Compuesto de la Fórmula 16 16 Paso A Se preparó el compuesto deseado 16 cuantitativamente a partir erdo con el método del Ejemplo 12, Paso A.

EJEMPLO 17 Preparación del Compuesto de la Fórmula 17 17 Paso A 15f 17a A la solución de 15f (150 mg, 0.340 mmoles) en EtOH (10 ml) y EtOAc (5 ml) se agregó paladio sobre carbón al 10 % (20 mg). La suspensión fue agitada bajo hidrógeno durante 8 h, lapso durante el cual se monitoreó el progreso de la reacción por CLF. Después de la filtración a través de una plancha de celite, los solventes fueron eliminados al vacío para dar el producto en forma de sólido blanco 17a (150 mg, 0.339 mmoles, cuantitativo). Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso B 17a 17b Se preparó el compuesto deseado 17b a partir de 17a de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso D. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso C 17c Se preparó el compuesto deseado 17c con 73 % de rendimiento (Pasos B y C) a partir de 17b de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso E. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso D 17c 17 Se preparó el compuesto deseado 17 con 46 % de rendimiento a partir de 17c de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso F.

EJEMPLO 18 Preparación del Compuesto de la Fórmula 18 Paso A 18 Se preparó el compuesto deseado 18 cuantitativamente a partir erdo con el método del Ejemplo 12, Paso A.

EJEMPLO 19 Preparación del Compuesto de la Fórmula 19 19 Paso A ig 19b Se preparó el compuesto deseado 19b con 64 % de rendimiento a partir de 1g de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso C.

Paso B 19c Se preparó el compuesto deseado 19c a partir de 19b de acuerdo con el método del Ejemplo 1 , Paso C. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso C 19c 19d A una suspensión de la sal de diamina 19c (75 mg, 1.52 mmoles) y carbonildiimidazol (260 mg, 1.60 mmoles) en acetonitrilo (400 ml) a ta., se agregó trietilamina (0.26 ml, 1.85 mmoles). La mezcla fue agitada durante un período de 3 días. Se eliminó el solvente al vacío. Se disolvió el residuo en EtOAc/THF (100/50 ml) y se lavó la solución con H3P04 al 5 %, se secó con sulfato de magnesio, se filtró y concentró al vacío. La cromatografía instantánea (MeOH 2 a 10 %, CH2CI2) dio 19d (290 mg, 0.651 mmoles, 34 %) en forma de sólido blanco.

Paso D 19d 19e Se preparó el compuesto deseado 19e con 97 % de rendimiento a partir de 19d de acuerdo con el método del Ejemplo 11, Paso D. Se utilizó en la siguiente reacción sin más purificación.

Paso E 19f Se preparó el compuesto deseado 19f con 66 % de rendimiento a partir de 19e y B de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso E.

Paso F 19f 19 Se preparó el compuesto deseado 19 con 66 % de rendimiento a partir de 19f de acuerdo con el método del Ejemplo 11 , Paso F. Se separaron parcialmente dos productos por medio de cromatografía instantánea (MeOH 0 a 5 %-CH2CI2).

EJEMPLO 20 Preparación del Compuesto de la Fórmula 20 20 Paso A 19 20 Se preparó el compuesto deseado 20 a partir de 19 de acuerdo o del Ejemplo 12, Paso A.

EJEMPLO 21 Preparación del Compuesto de la Fórmula 21 Paso A 21a 21b Una solución de S-hexen-1-ol 21a (10 g, 50 mmoles) en éter dietílico (100 ml) fue tratada con trietilamina (10.1 g, 100 mmoles, 2.0 equiv.) y enfriada a 0°C. Se agregó por goteo una solución de fosgeno en benceno (20 %, 100 ml, 20 g, 300 mmoles, 4.0 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 12 h. El clorhidrato de trietilamina que se separó fue eliminado por filtración y el filtrado fue concentrado al vacío. El residuo 21b fue utilizado directamente para otros estudios sin purificación.

Paso B 1f 21c Una solución de 1f (8.0 g, 18.43 mmoles) en CH2CI2 (100 ml) fue tratada con trietilamina (2.43 g, 24.0 mmoles, 1.3 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a -78°C y se agregó por goteo alilcloroformiato (2.9 g, 24 mmoles, 13 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante 12 h y diluida con H2O (100 ml) y HCl acuoso (2M 200 ml) Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3x200 ml). La capa combinada de EtOAc fue extraída con solución salina secada (Na2SO4), filtrada, concentrada al vacío y el residuo 21c fue utilizado directamente para la desprotección del Boc. RMN 1H (CDCI3, 300 MHz, d ppm) 7.29 (t, 1 H, J = 8.0 Hz), 6.94 (d, 2 H, J = 6.0 Hz), 7.06-6.98 (m 3 H), 6.41 (d, 1 H, = 5.4 Hz), 6.05-5.95 (m, 1 H), 5.42 (dd, 1 H, J = 1.2.13.2), 5.31 (dd, 1 H, J =1.2, 13.2), 5.10 (d, 1 H, J = 6.6 Hz), 4.91-4.87 (q, 1 H), 4.74 (d, 1 H, J = 4.5 Hz), 3.95-3.92 (m, 1 H), 3.70 (s, 3 H), 3.12 (d, 1 H J= 4.2Hz), 1.81-1.51 (m, 6H), 1.43 (s, 9H), 1.21-0.91 (m, 6 H).

Paso C 21c 21d Una solución de 21c (1.5 g) en HCl (4M en dioxano, 100 ml) fue agitada a temperatura ambiente durante de 3 h. La desaparición del material de partida fue seguida por CLF y una vez desaparecido dicho material la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo 21 d fue secado en una bomba. Se utilizó para el acoplamiento sin más purificación.

Paso D e Una solución del clorhidrato de amina 21 d (4.0 g, 8.9 mmoles) en CH2CI2 (50 ml) fue tratada con trietilamina (2.73 g, 27.0 mmoles, 3 equiv., 3.6 ml) y enfriada a -78°C. Se agregó por goteo una solución del cloroformiato 21b (2.3 g, 13.3 mmoles, 1.5 equiv.) en CH2CI2 (30 ml). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente durante la noche y diluida con HCl acuoso (1M, 150 ml). Se extrajo la capa acuosa con EtOAc (3x100 ml). La capa combinada de acetato de etilo fue extraída con H2O (100 ml), solución salina (100 ml), secada (Na2S04), filtrada, concentrada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 3:7) para dar 21 e en forma de sólido incoloro (5 g, 80 %).

Paso E Una solución del compuesto protegido con alloc 31 e (4.0 g, 7.2 mmoles) en THF seco (60.0 ml) fue tratada con dimediona (2.01 g, 14.4 mmoles, 2.0 equiv.), Pd(PPh3)4 (830 mg, 0.71 mmoles, 10 % en moles) a 0°C y agitada a ta. durante 1 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/hexanos, 3:7) para dar un alcohol desprotegido 21 f en forma de sólido incoloro (2.7 g, 79 %). RMN ? (CDCI3) 8 ppm, 7.44 (bs, 1 H), 7.09 (s, 1 H; J=6.0 Hz), 6.75-6.72 (m, 2 H), 6.58-6.48 (m, 2 H), 5.81-5.71 (m, 1 H), 5.55 (d, 1 H; J=7.2 Hz, 4.98 (ddd, 1 H, J=1.5, 1.2, 9 Hz), 4.92 (dd, 1 H, J=4.5, 0.9 Hz), 4.88-4.83 (m, 1 H), 4.12-3.97 (m, 1 H), 3.71 (s, 3 H), 3.09-2.98 (m, 2 H), 2.08- 2.03 (m, 2 H), 1.722-1.40 (m, 10 H), 1.24-0.94 (m, 5 H). RMN 13C (100 MHz, d) 171.6, 157.3, 156.6, 138.3, 136.6, 129.8, 132.5, 120.6, 117.0, 114.9, 114.6, 65.7, 60.1 , 53.2, 52.5, 40.4, 37.1 , 33.3, 29.6, 28.6, 28.3, 26.0, 25.9, 25.1 : CHN: cale, para C=65.20 %, H=7.88 %, N=6.08 %. Encontrado: C=64.90 %, H=7.98 %, N=6.01 %.

Paso F Una solución del alqueno 21 f (650 mg, 1.4 mmoles) en THF anhidro (5.2 ml) fue enfriada a 0°C y tratada con BH3.THF (sol.1 M en THF, 4.2 ml, 4.2 mmoles, 3.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a 4a durante 2 h y se agregó EtOH (2.0 ml) con cuidado por la evolución de gas hidrógeno. Una vez completada la evolución de H2, la mezcla de reacción fue tratada con solución reguladora a pH 7 y tratada con H2O2 (30 %, 5.0 ml) a 0°C. Se retiró el baño helado y la mezcla fue agitada a ta. durante 34 h La mezcla de reacción fue extraída con EtOAc (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con H2O, solución salina, secadas (MgSO4), filtradas, concentradas al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (Si02, EtOAc/hexanos, 3:7) para dar el producto hidroborado en forma de sólido incoloro 21 g (400 mg, 60 %). [a]D 86.4 (c 0.3 CHCI3, 25°C); RMN 1H (CDCI3, 400 MHz, d) 7.26 (s, 1 H), 7.08 (t, 1 H, J=5.7 Hz), 6.83 (d, 1 H, j=6.0 Hz), 6.71 (dd, 1 11 , J=1.2, 4.5Hz), 6.57 (bs, 1 H), 6.54 (d, 1 H, J=5.7 Hz), 5.68 (d, 1 H; J=6.9 Hz), 4.85(dq, 1 H, J=4.2.1.8 Hz), 4.05-3.97 (m, 3 H), 3.69 (s, 3 H), 3.60 (t, 2 H, J=4.8 Hz), 3.08-2.97 (m, 2 H), 1.77-1.53 (m, 10H), 1.42-1.25 (m, 4 H), 1.24-0.92 (m, 5 H); RMN 13C (CDCI3, 100 MHz, d) 171.8, 181.8, 157.6, 156.9, 136.9, 130.0, 120.8, 117.0, 114.8, 65.7, 62.7, 60.3, 53.3, 52.7, 40.5, 37.4, 32.5, 29.7, 29.0, 28.8, 26.2, 26.0, 25.6, 25.4, EM (FAB, NBA/DMSO, intensidad relativa m z), 479 ([M+1]+, 100), 296 (40), 196 (25), 156 (25), 136 (25), 112 (20) HRMS cale para 02^39^07 (M+1 )+: 479.2760; encontrado 479.2757.

Paso G 21g 21h Se trató una solución de PPh3 (385 mg, 1.47 mmoles, 1.75 equiv.), en CH2CI2 (10 ml) con el compuesto 21 g (400 mg, 0.85 mmoles) y se enfrió a 0°C. Se agregó por goteo una solución de DEAD (220 mg, 1.26 mmoles, 1.5 equiv.) en CH2CI2 (10 ml) y se agitó a ta. durante de 3 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/hexanos, 1 :9) para dar el producto cíclico 21 h en forma de sólido incoloro (110 mg, 25 %).

Paso H 21h 21 i 15 Una solución del carbamato cíclico 21 h (200 mg, 0.44 mmoles) en dioxano (30 ml), CH3OH (20 ml) y CH2CI2 (20 ml) fue tratada con LiOH.H2O (80 mg, 2.0 mmoles, 4.5 equiv.) y agitada a ta. durante 4 h. La reacción fue concentrada al vacío y diluida con HCl (sol. 4M en dioxano, 10 ml). El agua fue eliminada por liofilización para dar el ácido cristalino 21 i que fue utilizado directamente para el acoplamiento.

Paso I 21] Una solución del ácido hidrolizado 21 i (210 mg, 0.47 mmoles) en DMF seca (5.0 ml) y CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con HOOBt (125 mg, 0.70 mmoles, 1.5 equiv.) y enfriada a 0°C y se agregó base de Hünigs (258 mg, 2.0 mmoles, 4.0 equiv, 369 µl). A esta mezcla se agregó EDCI (134 mg, 0.70 mmoles, 1.5 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 0.5 h y tratada con el clorhidrato de amina B (253 mg, 0.58 mmoles, 1.25 equiv.). La mezcla de reacción fue guardada en un congelador durante 24 h y concentrada al vacío para eliminar la DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con HCl ac. (2M, 30 ml) y extraído con CH2CI2 (3x50 ml). La capa orgánica combinada fue extraída con HCl ac (2M; 30 ml), NaOH ac. (1 M); solución salina (2x50 ml), secada (MgS04) y concentrada al vacío. El residuo 21j (220 mg) fue oxidado sin más purificación.

Paso J 21 Una solución del alcohol 21j (220 mg, 0.26 mmoles) en CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (200 mg, 0.47 mmoles, 1.8 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 1 h y diluida con NaHCO3 acuoso (15 ml) y Na2S2O3 ac (15 ml). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 20 min, y se extrajo la mezcla de reacción con CH2CI2 (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con Na2CO3, secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH (NH3 2M)/CH2CI2 1 :20) para dar la cetoamida 21 (60 mg, 27 %) en forma de sólido incoloro.

EJEMPLO 22 Preparación del Compuesto de la Fórmula 22 22 Paso A 22 Una solución del éster terc-butílico 21 (50 mg, 0.059 mmoles) en CH2CI2 seco (2.0 ml) fue tratada con ATE (2.0 ml) y agitada a ta. durante 4 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo disuelto reiteradamente en heptanos/CH2CI2 y concentrado al vacío varias veces para dar un fino sólido tostado 22 (47 mg), que fue secado al vacío.

EJEMPLO 23 Preparación del Compuesto de la Fórmula 23 23 Paso A 23a Una solución del ácido 1d (255 mg, 1.0 mmoles) en DME (2.0 ml) fue tratada con HOBt (202 mg, 1.5 equiv.) y base de Hünigs (517 mg, 4.0 mmoles, 4.0 equiv, 738 µl). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con DCC (258 mg; 1.25 mmoles, 1.25 equiv.). Después de agitar la mezcla durante 1 h, se agregó histidina-OCH3.2HCI 23a (242.0 mg, 1.0 mmoles) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y extraída en EtOAc (3x50 ml) y NaHCO3 ac. (50 ml). La capa orgánica concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH-CH2CI2 1 :19) para dar el dipéptido 23b en forma de sólido incoloro (380 mg, 93 %).

RMN ? (d6-DMSO 400 MHz, d, ppm) 8.17 (d, 1 H, J=7.2 Hz), 7.48 (s, 1 H), 6.77 (s, 1 H), 6.57 (bs, 1 H), 5.54 (d, 1 H, J=7.6 Hz), 4.47 (q, 1 H, J=7.2 Hz), 3.79 (t, 1 H, J=8.4 hz), 3.55 (s, 3 H), 3.36-3.20 (m, 2 H), 2.94-2.82 (m, 2 H), 1.70-1.47 (bm, 6H), 1.35 (s, 9 H), 1.46-0.85 (m, 5 H); RMN 13C (d6-DMSO, 100 MHz, d ppm) 172.5, 171.9, 157.3, 155.9, 135.4, 78.6, 59.5, 52.9, 52.3, 34.1, 29.6, 28.9, 28.6, 28.6, 26.5, 26.3, 26.0, 25.2. EM FAB: (NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z) 409. [(M+1 )+, 100], 353 (10), 170 (20), HRMS cale, para C2oH33N406 409.2451, encontrado 409.2466; CHN cale, para C20H32N4O5 C=58.81 %, 11=7.90 %, N=13.72 %; Encontrado: C=58.70 %, 11=7.78 % N=13.43 %.

Paso B Una solución de ácido ?-bromoheptenoico (223 mg, 1.0 mmoles) en DMF (3.0 ml) fue tratada con clorhidrato de amina desprotegido 23b (380 mg, 1.0 mmoles, 1.0 equiv.) y se agregó base de Hünigs (387 mg, 3.0 mmoles, 3.0 equiv.) La mezcla de reacción fue tratada con PyBroP (465 mg, 1.0 mmoles) y agitada a ta. durante 3 h La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (Si02, CH3OH/CH2CI2, 1/19) para dar un sólido incoloro (220 mg, 50 %) EM (FAB) 415.2 [(M+1)+, 100], 513.2 [(M+1)+, 95)], 469 (60), 433 (20), 170 (40). HRMS cale, para 513.2076, encontrado 513.2073.

Paso C Una solución del compuesto bromo 23c (100 mg, 0.23 mmoles) en 2- butanona (4.0 ml) fue tratada con Na2CO3 (31.0 mg, 0.29 mmoles, 1.25 equiv.) y con Lil (50 mg, 0.37 mmoles, 1.3 equiv.) y calentada a reflujo durante 24 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo diluido con agua. El residuo fue extraído con CH2CI2 (3x30 ml). La capa orgánica combinada fue secada (Na2SO4) y purificada por cromatografía (SiO2, CH3OH:CH2CI2 1 :19) para dar el compuesto ciclado 23d (25 mg, 31 %); Rf: 0.68 (NH32M en CH3OH:CH2CI2: 1 :19): RMN ? (CDCI3, 400 MHz, 5, ppm) 8.17 (d, 1 H, J=8.8 Hz), 7.33 (s, 1H), 6.48 (d, 1 H, J=8.4 Hz), 4.90-4.85 (m, 1 H). 4.26 (t, 1 H, J=8.0 Hz), 3.82-3.74 (m, 2 H), 3.69 (s, 3 H), 3.16-3.11 (m, 2 H), 2.91-2.84 (m, 1 H), 2.30-2.01 (m, 2H), 1.65-1.59 (m, 11 H), 1.18-0.96 (m, 11H); RMN 13C (CDCI3, 100 MHz, 5 ppm): 172.8, 172.4, 171.9, 138.2, 136.8, 57.6, 52.5, 51.7, 46.6, 36.0, 30.9, 29.5, 28.8, 27.3, 26.7, 26.4, 26.3, 26.2, 25.2, 14.8. EM: (Electroatomización, intensidad relativa m/z) 433 [(M+1 )+, 100] HRMS cale, para C23H37N4O4433.2815. Encontrado 433.2822.

Paso D 23d 23e Una solución del éster metílico 23d (200 mg, 0.46 mmoles) en CH3OH (5.0 ml), H20 (0.5 ml) fue tratada con LiOH.H2O (30 mg, 0.75 mmoles, 1.6 equiv:). La mezcla de reacción fue agitada a ta durante 15 h y concentrada al vacío y secada en bomba para dar el compuesto hidrolizado 23e que fue utilizado directamente para el acoplamiento.

Paso E 23e 23f Una solución del ácido 23e en CH2CI2 (3.0 ml), DMF (5.0 ml) fue tratada con HOOBt (115 mg, 0.70 mmoles, 1.50 equiv.) y EDCI (113 mg, 0.60 mmoles, 1.25 equiv.): La mezcla de reacción fue tratada con Et3N (190 mg, 1.88 mmoles, 271 µl, 4.0 equiv.) y el clorhidrato de amina B (201 mg, 0.5 mmoles, 1.1 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. por un lapso de 13 h y diluida con H2O. La capa acuosa fue extraída con CH2CI2 (3x50 ml) y las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con NaOH ac. (1M, 50 ml) y secadas (Na2S04) La capa orgánica seca fue filtrada y concentrada al vacío para dar un residuo incoloro 23f (442 mg) que fue secado al vacío y utilizado directamente para la posterior oxidación.

EM (Electroatomización, intensidad relativa m/z) 794 [(M+1]+, 100].

Paso F Una solución de la hidroxiamida 25f (50 mg, 0.064 mmoles) en CH2CI2 (3.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (53 mg, 0.13 mmoles, 2.0 equiv.) y agitada a ta. durante 3h. La mezcla de reacción fue diluida con Na2S2O3 ac sat. (20 ml) y agitada durante 15 mm. La capa acuosa fue extraída con CH2CI2 (3x30 ml). La capa orgánica fue secada (Na2SO4), filtrada, concentrada al vacío y purificada por cromatografía (Si02, CH3OH/CH2CI2 1:15) para dar la cetoamida 23 (20 mg, 40 %).

EM (FAB, NBA-G/TG-DMSO, int. reí. m/z): 824 [(M+ CH3OH)+, +1)+, 60], 447 (20). HRMS cale, para C42H62N7O8 (M+1 )+ 792.4660. Encontrado 792.4659.

EJEMPLO 24 Preparación del Compuesto de la Fórmula 24 Paso A Una Solución del éster terc-butilíco 23 (17 mg, 21.5 µmoles) en CH2CI2 seco (2.0 ml) fue tratada con ATE (2.0 ml) y agitada a ta. durante 8 h La desaparición del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2, 1 :19). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue repetidamente disuelto en CH3OH/heptanos/CH2CI2 y concentrado al vacío varías veces para dar 24 en forma de fino sólido incoloro (7 mg). EM: (Electroatomización, intensidad relativa m/z) 768 [(M+CH3OH)+, 100], 736 [(M+1 )+, 60], 46 (10).

EJEMPLO 25 Preparación del Compuesto de la Fórmula 25 25 Paso A 25a 1b 25b Una solución de Boc-4-clorofenilalanina 25a (523 mg, 175 mmoles) en dicloroetano (37 ml) fue tratada con CpRu(CH3CN)3PF6 1b (760 mg, 175 mmoles, 1.0 equiv.) y calentada a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y filtrada. El filtrado fue concentrado al vacío y disuelto en mínimo CH3CN y tratado con un gran exceso de Et20. El sólido que se separó fue desprendido y disuelto en CH2CI2/CH3OH (1 :1 , 50 ml) y concentrado al vacío para obtener 25b en forma de espuma marrón (640 mg 69 %).

Paso B 25c Una solución del ácido carboxílico 25b (2.4 g, 3.80 mmoles) en DMF seca (15 ml) fue tratada con base de Hünigs (1.64 g, 12.64 mmoles, 4.0 equiv., 2.9ml) y HOBt (661 mg, 4.38 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y luego tratada con EDCI (699 mg, 3.95 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 15 mm. A esta mezcla de reacción se agregó el clorohidrato de amina 1g (1.50 g, 4.00 mmoles, 1.2 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 12 h. La DMF fue separada por destilación y el residuo diluido con agua (30 ml) y la capa acuosa fue extraída con CH2CI2 (3x50 ml). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con NaHCO3 ac. (30 ml) HCl ac. (30 ml), solución salina, secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío y el producto crudo 25c (2.5 g, 69 %) fue utilizado para la ciclación posterior sin purificación.

Paso C 25c 25d Una Solución del compuesto 25c (100 mg, 0.11 mmoles) en DMF seca (10 ml) fue desgasificada con N2 seco y tratada con Cs2C03 (170 mg, 0.5 mmoles, 5.0 equiv.) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. La DME solvente fue separada por destilación y el residuo fue diluido con agua (35 ml) y extraído con CH2CI2 (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y secadas al vacío durante la noche. Se utilizaron para la remoción fotolítica del Ru sin más purificación. Se disolvió el compuesto ciclado del paso anterior en CH3CN y se fotolizó en un Raynot (?=350 nm) durante 48 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/hexanos 2:1) para dar 25d en forma de sólido de color tostado (29 mg, 46%). EM (FAB, NBA-G TG-DMSO, intensidad relativa m/z ) 580 [(M+1)+, 80] 524 (100), 418 (40), 462 (30), 452 (20), 313 (60), 253 (20).

Paso D 25d 25e Una solución del éster 25d (150 mg, 0.26 mmoles) en THF (3 ml), CH3OH (3.0 ml) y H2O (3.0 ml) fue tratada con LiOHeH2O (18 mg, 0.43 mmoles, 1.65 equiv.) y agitada a ta. durante 35 min. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl conc. (13 M, 1 ml) y extraída con CH2CI2 (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2S04), filtradas y concentradas al vacío para dar el ácido 25e que fue utilizado directamente para el acoplamiento sin más purificación.

Paso E Una solución del ácido 25e (150 mg, 0.27 mmoles) en CH2CI2 (2.0 ml) fue tratada con HOBt (62 mg, 0.40 mmoles) y base de Hünigs (139 mg, 1.1 mmoles, 4.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (53 mg, 0.34 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 30 min. La mezcla de reacción fue tratada con la amina F (88 mg, 0.29 mmoles, 1.22 equiv.) y guardada en un congelador durante 12 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con gel de sílice (50 ml). Se extrajo la capa acuosa con CH2CI2 (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con HCl ac. (1M, 3x20 ml), NaOH (1M, 3x20 ml), secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío para obtener un sólido incoloro 25f (138 mg) que fue utilizado para la oxidación.

Paso F 25 Una solución del alcohol 25f (140 mg, 0.143 mmoles) en CH2CI2:THF (1 :1, 5.0 ml) fue tratada con reactivo Dess-Martin (121 mg, 0.42 mmoles, 3.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 2 h y la mezcla fue concentrada al vacío El residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, CH3OH/CH2CI2 1:32) para dar el producto oxidado 25 (57 mg, 41 % en forma de sólido incoloro.- EJEMPLO 26 Preparación del Compuesto de la Fórmula 26 Paso A Una solución del éster bencílico 25 (30 mg, 38.0 µmoles) en CH3OH/THF (1:1, 4.0 ml) fue tratada con Pd/C (20 mg, 10 %) y se insufló 112 a través de la misma. Se agregó una gota de ácido acético para acelerar la reducción. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un cilindro de ceiite y el filtrado fue concentrado al vacío. El residuo 26 fue analizado sin más purificación.

EJEMPLO 27 Preparación del Compuesto de la Fórmula 27 27 Paso A 27a Una solución del ácido 25e (100 mg, 0.17 mmoles) en CH2CI2 seco fue tratada con HOOBt (41 mg, 0.26 mmoles) y base de Hünigs (91 mg, 0.70 mmoles, 4.0 equiv.): La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (35 mg, 0.22 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 30 mm. La mezcla de reacción fue tratada con la amina D (71 mg, 0.22 mmoles, 1.22 equiv.) y guardada en un congelador durante 12 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H2O (30 ml). Las capas acuosas fueron extraídas con CH2CI2 (3x30 ml). Las capas orgánicas fueron extraídas con HCl ac. (1 M, 30 ml), Na2CO3 ac (1M, 30 ml), secadas (Na2SO4) filtradas, concentradas al vacío para obtener 27a en forma de sólido incoloro (119 mg) que fue utilizado para la oxidación. EM: (FAB), 842 [(M+1)+ 100] 765 (20) 735 (10) 657 (20) 575 (10), 492 (10), 464 (20), 446 (30). HRMS cale, para (M+1)+ 862.4339. Encontrado 842.4336.

Paso B 27 Una solución del alcohol 27a (120 mg, 0.143 mmoles) en CH2CI2:THF (1 :1 , 3.0 ml) fue tratada con reactivo Dess-Martin (180 mg, 0.42 mmoles, 3.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 2 h y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía (Si02, CH3OH/CH2CI2 1 :32) para dar el producto oxidado 27 en forma de sólido incoloro EM (FAB, NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z) 840 [(M+1)+, 50]. HRMS cale, para (M+1)+ 840.4184. Encontrado 840.4199.

EJEMPLO 28 Preparación del Compuesto de la Fórmula 28 28 Paso A Una solución del éster bencílico 27 (40 mg, 47.0 µmoles) en CH3OH/THF (1:1 , 60 ml) fue tratada con Pd/C (30 mg, 10%) y se insufló H2 a través de la misma. Se agregó una gota de ácido acético para acelerar la reducción. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un cilindro de celite y el filtrado fue concentrado al vacío para dar 28.

EJEMPLO 29 Preparación del Compuesto de la Fórmula 29 29 Paso A 29a 29b Una solución de 4-clorofenilalanina 29a (1.5 g, 7.5 mmoles) en THF (20 ml) y H2O (20 ml) fue tratada con NaOH (900 mg, 22.5 mmoles, 3.0 equiv.) y enfriada a 0°C. Se agrego por goteo una solución de cloruro de acetilo (707 mg, 9.00 mmoles, 1.25 mmoles) en THF (10 ml) y la mezcla de reacción fue agitada durante la noche a ta. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl ac. (1 M, 10 ml) y extraída con CH2CI2 (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío para dar 29b, que fue utilizado en el paso siguientes sin purificación.

Paso B Una solución de N-acetil-4-clorofenilalanina 29b (1.39 g, 5.75 mmoles) en dicloroetano (118 ml) fue tratada con CpRu(CH3CN)3PFß 1 b (2.5 g, 5.8 mmoles, 1.0 equiv.) y calentada a reflujo durante 2 h. La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y filtrada. El filtrado fue concentrado al vacío y disuelto en CH3CN (15 ml) y tratado con Et20 (150 ml). La goma que se separó fue retirada por decantación del éster y el residuo fue disuelto en CH2CI/CH3OH (1 :1 , 50 ml) y concentrado al vacío para obtener 29c en forma de espuma marrón (2.2 g, 69 %). EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 408 [(M-PF6)+, 100].

Paso C ig Una solución del ácido carboxílico 29c (2.0 g, 4.00 mmoles) en DMF seca (20 ml) fue tratada con base de Hünigs (2.06 g, 16.0 mmoles, 4.0 equiv., 2.9 ml) y HOBt (810 mg, 6.0 mmoles, 1.5 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y luego tratada con EDCI (888 mg, 5.0 mmoles, 1.25 equiv.) y agitada durante 0.5 h. A esta mezcla de reacción se agregó el clorohidrato de amina 1g (1.48 g, 7.14 mmoles, 1.2 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 12 h. La DMF fue separada por destilación y el residuo diluido con agua y la capa acuosa fue extraída con CH2CI2 (3x100 m.). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con NaHCO3 ac. (200 ml) HCl ac (100 ml), solución salina, secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío. El producto crudo 29d (1.2 g, 38 %) fue utilizado para la ciclación sin purificación.

Paso D 29d 29e Una solución del compuesto cloro 29d (1.2 g, 1.5 mmoles) en DMF seca (120 ml) fue desgasificada con N2 seco, tratada con Cs2CO3 (2.4 g, 7.4 mmoles, 5.0 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 23 h. La DMF solvente fue separada por destilación y el residuo fue diluido con agua (300 ml) y extraído con propionitrilo (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío y secadas al vacío durante la noche. Se utilizaron para la remoción fotolítica del Ru sin más purificación. Se disolvió el compuesto ciclado del paso anterior en CH3CN (40 ml) y se fotolizó en un Raynot (?=350 nm) durante 48 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 4:1) para dar un sólido de color canela 29e (240 mg, 38 %). EM (FAB NBA-G/TG-DMSO, intensidad relativa m/z y 522 [(M+1)+, 100].

Paso E 29e 29f Una solución del éster 29e (200 mg, 0.42 mmoles) en CH3OH (5 ml) CH2CI2 (13 ml) y H2O (2.0 ml) fue tratada con LiOH.H2O (41 mg, 1.0 mmoles, 2.4 equiv.) y agitada a ta. durante 3 h. La mezcla de reacción fue acidificada con HCl conc (13 M, 1 ml) y extraída con CH2CI2 (3x50 ml) y EtOAc (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron secadas (Na2SO4), filtradas y concentradas al vacío para dar el ácido 29f (178 mg) que fue utilizado directamente para el acoplamiento sin más purificación.

Paso F Una solución del ácido 29f (90 mg, 0.18 mmoles) en DMF seca (1.0 ml) fue tratada con HOBt (45 mg, 0.33 mmoles, 1.6 equiv.) y base de Hünigs (142 mg, 1.1 mmoles, 5.0 equiv.) y la amina B (118 mg, 0.28 mmoles, 1.47 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDOI (63 mg, 0.33 mmoles, 16 equiv.) y agitada a 0°C durante 20 min, durante 12 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H2O (30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con CH2CI2 (3x30 ml) y EtOAc (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con NaOH ac. (2M, 30 ml), secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío para obtener un sólido incoloro 29g (50 mg, 32 %) que fue utilizada para la oxidación. EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 883 [(M+1)+, 100] 522 (30), 394 (60).

Paso G 29 Una suspensión del alcohol 29g (50 mg, 60.0 µmoles) en CH2CI2 (2.0 ml) fue tratada con reactivo Dess-Martin (40 mg, 0.94 mmoles, 2.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 3 h y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía (Si02, CH3OH/CH2CI2: 1.32) para dar el producto oxidado 29 (41 mg, 80 %) en forma de sólido incoloro. EM. (FAB, int. reí. m/z) 881 [(M+1)+, 100), 825 (170), 248 (100).

EJEMPLO 30 Preparación del Compuesto de la Fórmula 30 30 30 Una solución del éster terc-butílico 29 (23.0 mg, 26.0 µmoles) fue tratada con ATF/CH2CI2 (1:1, 2.0 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 4 h. La desaparición del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2 1 :24). Una vez completada la desprotección, la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo tratado reiteradamente con heptanos/CH2CI2 (4.0 ml) y concentrado para dar un sólido tostado 30 (13.0 mg, 100 %). EM (Electroatomización, ¡nt. reí. m/z): 825 f(M+1)+, 100).

EJEMPLO 31 Preparación del Compuesto de la Fórmula 31 31 Paso A Una solución del ácido 29f (150 mg, 0.29 mmoles) en DMF seca (4.0 ml), CH2CI2 (3.0 ml) fue tratada con HOBt (58 mg, 0.44 mmoles) y base de Hünigs (149 mg, 1.1 mmoles, 4.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (82 mg, 0.44 mmoles, 1.5 equiv.) y agitada durante 30 min. La mezcla de reacción fue tratada con la amina E (88 mg, 0.29 mmoles, 1.22 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 12 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y diluida con H2O (30 ml). La capa acuosa fue extraída con CH2CI2 (3x30 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con HCl ac. (1 M, 3x20 ml), NaOH ac. (1 M, 3x20 ml), secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío para obtener un sólido incoloro 31 a (56 mg) que fue utilizado para la oxidación. EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 750 [(M+1)+, 20], 663 (10), 522 (10), 416 (20), 247(30).

Paso B 31 Una suspensión del alcohol 31a (56 mg, 75 µmoles) en CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con reactivo Dess-Martin (93 mg, 0.22 mmoles, 3.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 4 h y la mezcla fue concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía (Si02, CH3OH/CH2CI2: 1 :19) para dar el producto oxidado 31 (34 mg, 60 %) en forma de sólido incoloro. EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 748 [(M+1)+, 35] 692 (5), 279 (100).

EJEMPLO 32 Preparación del Compuesto de la Fórmula 32 32 Paso A Una solución del éster terc-butílico 31 fue tratada con ATF/CH2CI2 (1 :1 , 4.0 ml) y agitada a temperatura ambiente durante 4 h. La desaparición del éster hasta la línea de base fue seguida por CLF (CH3OH/CH2CI2 1 :24). Una vez completada la desprotección, la mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo tratado reiteradamente con heptanos/CH3OH (4.0 ml) y concentrado para dar un sólido tostado 32 en forma de sólido tostado.

EJEMPLO 33 Preparación del Compuesto de la Fórmula 33 33 Paso A 33a 33b Una solución del ácido 33a (4.5 g, 25.0 mmoles) en dioxano (30 ml) y benceno (80 ml) fue tratada con BnOH (8.0 g, 74 mmoles, 3.0 equiv.) y TsOH.H2O (713 mg, 3.75 mmoles, 10 % en moles). La mezcla de reacción fue calentada a reflujo durante 5 h, tras lo cual se separó el agua utilizando un aparato de Dean-Stark. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 3:7) para dar el éster bencílico 33b en forma de aceite incoloro (4.2 g, 62 %); Rf: 0.22 (EtOAc/hexanos 3:7). RMN 13C (CH3OD, 75 MHz, d): 175.1 , 158.2, 139.7, 13G.3, 129.5, 129.3, 121.7, 117.4, 114.6, 73.1 , 67.6, 41.6. EM (FAB, G/TO-DMSO, intensidad relativa): 351 (HRMS cale. para C16H17O4 (M+1)+ 272.1049. Encontrado 272.1054.

Paso B 33b 33c Una solución del éster bencílico 33b (3.8 g, 12.9 mmoles) en CH2CI2 (100 ml) fue tratada con Et3N (1.55 g, 15.4 mmoles, 1.1 equlv.), enfriada a -78°C (2-PrOH, hielo seco) y se le agregó por goteo una solución de cloroformiato de alilo (1.84 g, 15.36 mmoles, 1.1 equiv.) en CH2CI2 (10 ml).

Se dejó que la mezcla de reacción entibiara a ta. y se diluyo con HCl ac. (1M, 100 ml). La mezcla de reacción fue extraída con EtOAc (3x100 ml). La capa orgánica combinada se lavó con HCl ac. (100 ml, 1 M), solución salina (200 ml), secada (MgSO4) concentrada al vacío para dar 330 que fue utilizado en el siguiente paso sin más purificación. Rf: 0.43 (EtOAc/Hex. 7.13); RMN 13C (CH3OD, 75 MHz, 6): 174.8, 162.5, 155.0, 152.5, 140.3, 137.1, 132.8, 130.3, 129.6, 129.5, 129.4, 123.2, 120.3, 119.4, 72.7, 70.1 , 67.7, 41.2, 29.9.

Paso C 33c 33d Una solución de Boc-ciclohexilglicina monohidrato 1d (6.02 9, 23.4 mmoles, 2.0 equiv.) fue disuelta en CH2CI2 y secada (MgSO4). Se filtró la mezcla y posteriormente se secó el residuo azeotrópicamente con tolueno. Se disolvió el residuo en CH2CI2 y se trató con HOBt (4.73 g, 35.1 mmoles, 2.9 equiv.) EDCI (6.7 g, 35.1 mmoles, 2.9 equiv.) y base de Hünigs (8.31 g, 64.3 mmoles, 11 ml). Se agitó a ta. durante 30 min y se agregó el alcohol protegido con alloc 330 (4.3 g, 12.04 mmoles). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 36 h y diluida con HCl ac. (1M, 100 ml) y extraída con EtOAc (3x100 ml). Se extrajeron las capas orgánicas combinadas con NaOH ac. (1M, 100 ml), solución salina (100 ml), se secaron, concentró al vacío y purificó por cromatografía (SiO2, EtOAc/hex 1:4) para dar el depsipéptido 33d (7.1 g, 100 %). Rf: 0.18 (EtOAc/Hex 1:4). RMS cale, para C28H34?7 (M-Boc)+ 496.2335. Encontrado 496.2333.

Paso D 33d 33e Una solución del depsipéptido protegido con alloc 33d (7.8 g, 13.0 mmoles) en THF seco (200 ml) fue tratada bajo N2 con dimediona (3.27 g, 23.4 mmoles, 2.0 equiv.) y Pd(PPh3)4 (780 mg, 0.67 mmoles, 5 % en moles). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 1 h y la desaparición del reactivo fue seguida por CLF (EtOAc/Hex 1 :4). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/hexanos, 1 :4) para dar el fenol 33e (5.2 g, 78 %) en forma de espuma incolora. Rf: 0.52 (EtOAc/hexanos 3:7). RMN 1H (d4-CD3OD, 300 MHz, d) 7.4-719 (m, 5 H), 7.15-6.99 (m, 1 H), 6.68-6.55 (m, 4 H), 5.4-5.01 (m, 3 H), 4.6 (bs, 2H), 4.11-4.00 (m, H), 3.18-2.91 (m, 2 H), 1.80-1.55 (bs, 6 H), 1.39 (s, 9H), 1.21-0.89 (m, 6H). RMN 13C (CD3OD, 75 MHz, d, mezcla de diastereómeros) 171.6, 169.4, 169.3, 161.1 , 157.1.157.0.137.2, 136.9, 135.3, 129.2, 129.1 , 128.2, 128.2, 128.0, 120.3, 120.1 , 116.0, 115.9, 113.6, 94.8, 79.3, 73.6, 73.5, 66.7, 66.6, 58.6, 58.5, 40.0, 29.9, 26.8, 29.1 , 27.7, 27.3, 25.5. EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 1023 ([2M+1]+, 20) 512 ([M+1]+, 20), 412 ([M-Boc]+, 100), 202 (40). HRMS cale, para Cz?NOg (M-Boc)+ 412.2123. Encontrado: 412.2119.

Paso E 33e 33f Una solución de la amina protegida con Boc 33e (5.2 g, 10.7 mmoles) fue agitada con HCl (4M, dioxano, 200 ml, 800 mmoles, 80 equiv.) hasta que el material de partida hubo desaparecido hasta la línea de base según lo indicado por CLF (EtOAc/Hex 3:7). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y secada con alto vacío y el residuo 33f fue utilizado directamente en el paso siguiente. RMN 1H (d4-CD3OD, 300 MHz, d) 7.40-3.23 (m, 5 H), 7.07 (q, 1 H; J=13 Hz), 6.77-6.6 (m, 3 H), 5.33-5.41 (m, 1 H), 5.3-5.05 (2 AB, 2 H), 3.99-3.85 (m, 1 H), 3.35-22 (m, 2 H), 2.00-1.5 (m, 5 H), 1.50-0.80 (m, 6 H): EM (FAB; G/TG-DMSO, m/z, intensidad relativa): 412 ([M+1]+, 100): HRMS: cale, para M+ 412.2123. Encontrado: 412.2139.

Paso F Una solución de [CpRu(ácido ?6-4-clorofenilpropiónico)]PF6 1c (2.0 g, 4.03 mmoies) en DMF seca (20 ml) fue tratada con HOBt (835 mg, 6.0 mmoles, 1.5 equiv.) y base de Hünigs (2.06 g, 2.95 ml, 16 mmoles, 4.0 equiv.). La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con EDCI (1.15 g, 6.0 mmoles, 1.5 equiv.) La mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 30 min y se le agregó el clorhidrato de amina 33f (1.8 g, 4.03 mmoles, 1.9 equiv.) en DME seca (10 ml). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 12 h y la DMF fue eliminada por destilación al vacío El residuo fue diluido con HCl ac (1 M, 100 ml) y extraído con CH2CI2 (3x100 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con NaHC03 (3x50 ml), solución salina (100 ml), secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío para dar un sólido marrón 33g (3.5 g) que fue utilizado para la ciclación. EM: (Electroatomización, int. reí. m/z): 743 [(M-PF6)+, 100], 304 (60). HRMS: cale, para (M-PF6)+ 744.1666. Encontrado: 744.1694.

Paso G 33h Una solución del complejo ?6-rutenio 33g (3.5 g, 3.93 mmoles) en DMF seca (300 ml) fue desgasificada con N2 seco tratada con Cs2CO3 (6.5 g, 19.95 mmoles, 5.0 equiv.) y agitada a temperatura ambiente durante 16 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío para eliminar la DMF y el residuo fue diluido con H2O (100 ml). La mezcla de reacción fue extraída con CH2CI2 (3x100 ml). Las capas combinadas de CH2CI2 fueron extraídas con solución salina, secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío para dar 33h que fue utilizado directamente para la fotolisis.. EM (Electroatomización, intensidad relativa m/z) 708 [(M-PFß)+, 100]. HRMS: cale, para C38H40NO61O2Ru(M-PF6)+:708.1892. Encontrado: 708.1918.

Paso H Una solución del complejo rutenio ciclado 33h (3.5 g, 3.9 mmoles) en CH3CN (60 ml) fue desgasificada y fotolizada en un tubo de cuarzo a ?=350 nm en dos lotes durante 48 horas cada uno. La mezcla de reacción fue acumulada y purificada por cromatografía (SiO2, CH2CI2/Et2O 911 ) para dar el depsipépsido cíclico en forma de mezcla de diastereómeros (700 mg, 34 %). Se separaron los diastereómeros por medio de una cromatografía adicional (Hexanos/CH2Cl2/Et2O 6:3:1 ) para dar los dos diastereómeros 33i (370 mg, 18 %) y 33j (216 mg, 11 %) en forma de sólido incoloro. Rf 0.28 (Hexanos: EtOAc: 3:2): [a]D=25 (c 0.15 CHCI3, 20°C); IR (puro, cm 1) 3329 (w), 2960 (m) 2926 (s), 2854 (s), 1745 (s), 1680 (m), 1589(m), 1506 (m), 1446 (m), 1365 (w), 1259 (s), 1099 (m), 1030 (s), 800 (s), 752 (m), 6.98 (w), 619(w). RMN 1H (CDCI3, 300MHz, d) 7.36-7.23 (m, 5 H), 7.18-6.99 (m 4 H), 6.81 (d, 1 H, J=7.5 Hz), 6.74 (dd, 1 H, J=2.7, 5.7 Hz), 6.30 (s, 1 H), 5.75 (d, 1 H, J=7.2 Hz), 5.61 (dd, 1 H; J=2.4 Hz, 5.4Hz), 5.18, 5.14 (AB, 2 H, J=12.3 Hz), 4.23 (dd, 1 11 , J=4.2 Hz, 3.3 Hz), 326-3.01 (m, 2 H), 2.98-2.85 (m, 2 H), 2.68-2.64 (m, 1 H), 2.38-2.34 (m, H), 1.96-1.51 (m, 6 H), 1.51-0.96 (M, 5H). RMN 13C (CDCI3, 75 MHz, d, ppm) 177.3, 171.1 , 159.8, 155.3, 138.6, 135.4, 134.9.131.2, 129.7, 129.2, 128.7, 126.6, 126.1, 123.3, 120.8, 120.8, 117.5.114.2, 71.8, 57.5, 56.9, 41.5, 39.0, 35.7, 32.6, 31.3, 290, 27.6, 26.0, 25.9. FAB (NBA/DMSO, intensidad relativa m/e) 542 [(M+1)+, 100], 514 (15), 450 (5), 307 (8), 232 (5), 154.1 (17), 136 (14). HRMS cale, para C^H^NOs (M+1 )+: 542.2543. Encontrado 542.2541. CHN cale, para C33H3gNO6.0.5 H20 C 71.98 %, 11 6.59 %, N 2.54 %. Encontrado: C 72.56 %, H 7.05 % N 2.63 %.

Paso 33k Una solución del éster bencílico 33i (360 mg, 0.66 mmoles) en CH3OH/EtOAc (1 :1 50 ml), fue tratada con Pd(OH)2 e hidrogenada (50 psi, 344.7 KPa) durante 12 h. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un cilindro de celite y la torta enjuagada con CH3OH/CH2CI2 (1 :1 , 50 ml). El filtrado fue concentrado al vacío y el residuo 33k (330 mg,) fue utilizado para el acoplamiento sin purificación. Rf: 0.58 (CH3OH/CH2CI2 1:19).

EM (Electroatomización int. reí. m/z): 827.2 [(M+1)+, 100] 694(20), 539(40), 466(10), 174(70). HRMS cale, para (M+1)+ 827.4231. Encontrado: 827.4215.

Paso J Una solución del ácido 33k (165 mg, 0.31 mmoles) en DMF seca (5.0 ml) y CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con HOBt (83 mg, 0.46 mmoles, 1.5 equiv.) y enfriada a 0°C, tras lo cual se agregó base de Hünigs (159 mg, 1.23 mmoles, 4.0 equiv, 229 µl). A esta mezcla se agregó EDCI (89 mg, 0.47 mmoles, 1.5 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 1 h y tratada con el clorhidrato de amina B (159 mg, 0.372 mmoles, 1.2 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por un lapso de 48 h y concentrada ai vacío para eliminar la DME y el CH2CI2 El residuo fue diluido con agua y extraído con CH2CI2 (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con HCl ac. (1 M, 3x50 ml), NaOH ac (1M, 3x50 ml), solución salina (100 ml) y concentradas al vacío. El residuo 331 fue oxidado sin más purificación.

Paso K Una solución del alcohol 331 (330 mg, 0.4 mmoles) en CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (424 mg, 1.00 mmoles, 2.5 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 1 h y diluida con NaHCO3 acuoso (15 ml) y Na2S2O3 ac (50 ml). La mezcla de reacción fue agitada a ta, durante 20 min, y se extrajo la mezcla de reacción con CH2CI2 (3x50 ml) Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con solución salina (50 ml), secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/Hexanos 1 :1 ) para dar la cetoamida 33 (180 mg, 55%) en forma de sólido incoloro. Rf. 0.63 (CH3OH/CH2CI2 1 :19). EM (Electroatomización, int. reí. m/z): 857.2 ([M+CH3OH]+, 40), 825.2 ([M +1]+100).

EJEMPLO 34 Preparación del Compuesto de la fórmula 34 34 Paso A 34 Una solución del depsipéptido oxidado 33 (160 mg, 0.2 mmoles) en CH2CI2 seco (5.0 ml) fue tratada con ATE (5.0 ml) y agitada a ta. durante 7 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo disuelto reiteradamente en CH3OH/CH2Cl2/Hexanos (1 :1 :1 ) y concentrado varias veces al vacío para dar un sólido de color tostado 34 (133 mg, 86 %) que fue secado al vacío. EM (Electroatomización, ¡nt. reí. m/z):769.2 [(M+1)+, 100], 481(5), 269(25)191 (90).

EJEMPLO 35 Preparación del Compuesto de la Fórmula 35 Paso A Una solución del ácido 33k (165 mg, 0.31 mmoles) en DMF seca (5.0 ml) y CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con HOBt (83 mg, 0.46 mmoles, 1.5 equiv.) y enfriada a 0°C, tras lo cual se agregó base de Hünigs (159 mg, 1.23 mmoles, 4.0 equiv., 229 µl). A esta mezcla se agregó EDCI (89 mg, 0.47 mmoles, 1 5 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 1 h y tratada con el clorhidrato de amina A (159 mg, 0.372 mmoles, 1.2 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por un lapso de 48 h. y concentrada al vacío para eliminar la DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con agua y extraído con CH2CI2 (3x50 ml) Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con HCl sc (1 M, 3x50 ml), NaOH ac. (1 M, 3x50 ml), solución salina (100 ml) y concentradas al vacío. El residuo 35a fue oxidado sin más purificación. EM (Electroatomización, int. reí. m/z):798.2 [(M+1)+, 30], 479 (10), 391 (20), 180 (100).

Paso B Una solución del alcohol 35a (190 mg, 0.24 mmoles) en CH2CI2 (10.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (423 mg, 1.0 mmoles, 4.0 equiv.) y agitada a ta. durante 1 h. La mezcla de reacción fue diluida con NaHC03 acuoso (50 ml) y extraída con Na2S2O3 ac sat., solución salina (3x50 ml), secadas (Na2S04), filtradas, concentradas al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2l EtOAc/hexanos 3:7->1 :1 ) para dar el producto oxidado 35 (163 mg, 86 %) en forma de sólido incoloro. EM (Electroatomización, ¡nt. reí. m/z); 796 ([M+l)+, 100], 508 (20), 269 (20).

EJEMPLO 36 Preparación del Compuesto de la Fórmula 36 36 Paso A 36a 36b Una solución de BH3.THF (1 M en THF, 100 mmoles, 100 ml, 3.0 equiv.) fue adicionada por goteo a una solución de alqueno (5.0 g, 35 mmoles) en THF (100 ml) a 0°C y agitada durante 1 h. La mezcla de reacción fue tratada por goteo con etanol. Una vez completada la evolución de gas hidrogeno, la mezcla de reacción fue tratada con solución reguladora a pH 7 (100 mi)y con H202 (30 volúmenes, 100 ml). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 4 h y apagada con HCl ac (100 ml). Se extrajo la capa acuosa con Et2O (3x100 ml). Las capas de éter combinadas fueron extraídas con NaOH ac. (1M, 100 ml), solución salina (100 ml), secadas (MgSO4), filtradas, concentradas al vacío y purificadas por cromatografía (5i02, EtOAc/hexanos, 2/3) para dar un alcohol en forma de liquido incoloro 2.9 g, 52 %). Una solución del éster hidroxilado en THF/H2O/CH3OH (100 ml, 1 :1 :1) fue tratada con LiOH. H2O (2.1 g, 51.2 mmoles, 3.0 equiv.) y agitada a ta. durante 3 d. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y la capa acuosa fue extraída con éter (2x40 ml). La capa acuosa fue acidificada a pH 1 y extraída en EtOAc (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con solución salina (100 ml), secadas (MgSO4), filtradas, concentradas al vacío y se utilizó el residuo 36b como tal para el acoplamiento en el paso B.

RMN 1H (300 MHz, CD3OD, d) 3.53 (t, 2 H, J=6.6 Hz), 2.72 (t, 2 H, J =7.2 Hz), 1.59 (t, 2 H, J =7.5Hz), 1.5 (t, 2 H, J =7.5 Hz), 1.38-1.33 (m, 6H).

Paso B 33f Una solución del ácido ?-hidroxilheptanoico 36b (1.01 g, 6.93 mmoles) en CH2CI2 (40 ml) fue tratada con base de Hünigs (1.97 g, 15.24 mmoles, 2.2 equiv, 2.81 ml) y el clorhidrato de amina 33f (3.1 g, 6.93 mmoles, 1.0 equiv.) La mezcla de reacción fue enfriada a 0°C y tratada con PyBrOP (3.22 g, 6.93 mmoles, 1.0 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada durante la noche a temperatura ambiente y concentrada al vacío. El residuo fue purificado por cromatografía ((EtOAc/hexanos 1 :1) para dar el depsipéptido 36c (2.5 g, 66 %) en forma de aceite viscoso. RMN 1H (CD3OD, 400 MHz, d, ppm) 8.07 (t, 1 H) 7.33-7.21 (m, 4 H), 7.09-7.02 (m, H), 6.67-6.63 (m, 3 H), 5.25-5.06 (m, 1 H), 5.08 (q, 2 11, J=7.5 Hz), 4.36-4.33 (m, 1 H), 3.51 (dd, 2 11 , J=5.4 Hz, 0.9 Hz), 3.11-2.96 (m, 2 H), 2.22- 2.17 (m, 1 H), 1.99-0.90 (m, 14 H).

RMN 13C (CD3OD, 75 MHz, d, ppm, mezcla de diastereómeros): 172.1 , 172.0, 171.8, 171.1 , 170.9, 169.5, 169.3, 157.1 , 157.90, 137.3, 137.0, 135.3, 135.2, 129.2, 129.1 , 128.2, 128.0, 127.9, 120.3, 120.0, 116.0, 115.9, 113.6, 94.8, 73.6, 73.4, 66.8, 66.7, 60.2, 57.3, 39.6, 36.7, 28.9, 28.0.25.6, 20.9, 19.5, 13. EM (FAB, NBA DMSO, int. reí. m/z): 562, [(M+Na)+, 20], 540 [(M+1 )+, 100), 412(15), 240(50), 112(80).

Paso C 36c 36d Una solución del alcohol 36c (2.5 g, 4.63 mmoles) en CH2CI2 seco (50 ml) fue tratada con trifenilfosfina (2.67 g, 10.2 mmoles, 2.2 equiv.) bajo N2 y enfriada a 0°C. La mezcla de reacción fue tratada con DEAD (1.61 g, 9.26 mmoles, 2.0 equiv.) en CH2CI2 (30 ml). La mezcla de reacción fue calentada a ta. y agitada durante 2 h. Se concentró al vacío y se purificó por cromatografía (Et20/ Hex 1 :3) para dar el producto cíclico 36d (530 mg, 21 %) en forma de sólido incoloro.

EM (FAB, NBA, DMSO, ¡nt. reí. m/z), 522 [(M+1)+, 100], 494 (60), 268 (20), 222 (20); HRMS cale, para C^H^NOe (M+1 )+ 522.2856. Encontrado: 522.2864.

Paso D Una solución del éster bencílico (242 mg, 0.47 mmoles) en metanol (30 ml) fue tratada con Pd/C (10 % en peso) e hidrogenada en un Parra 40 psi (276 KPa), durante un período de 14 h. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un cilindro de ceiite y el filtrado fue concentrado al vacío para dar un sólido incoloro 36e (181 mg, 93 %) que fue utilizado para el acoplamiento.

Paso E 36f Una solución del ácido hidrolizado 36e (167 mg, 0.39 mmoles) en CH2CI2 (4.0 ml) fue tratada con HOOBt (95 mg, 0.58 mmoles, 1.5 equiv.) y enfriada a 0°C y se agregó base de Hünigs (202 mg, 1.56 mmoles, 4.0 equiv, 288 µl). A esta mezcla se agregó EDCI (111 mg, 0.58 mmoles, 1.5 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 0.5 h y tratada con el clorhidrato de amina (186 mg, 0.47 mmoles, 120 equiv.). La mezcla de reacción fue guardada en un congelador durante 24 h y concentrada al vacío para eliminar la DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con HCl ac. (2M, 30 ml) y extraído con CH2CI2 (3x50 ml). La capa orgánica combinada fue extraída con HCl ac (2M; 30 ml), NaOH ac. (1M); solución salina (2x50 ml), secada (MgS04) y concentrada al vacío. El residuo 361(100 mg) fue oxidado sin más purificación. HRMS cale, para C42H60NgO9 (M+1)+ 778.4391. Encontrado: 778.4399.

Paso F 36 Una solución del alcohol 36f (100 mg, 0.13 mmoles) en CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (100 mg, 0.0.23 mmoles, 1.8 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 2 h y diluida con NaHCO3 acuoso (15 ml) y Na2S2O3 ac (15 ml). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, acetona/Hexanos 3:7) para dar la cetoamida 36 (61 mg, 61 %) en forma de sólido incoloro.

EM (FAB, NBA/DMSO, int. reí. m/z), 776 [(M+1 )+ 100], 731(10), 598 (25), 570 (15), 485 (20), 358 (20), 247 (50).

EJEMPLO 37 Preparación del Compuesto de la Fórmula 37 37 Paso A 33] 37a Una solución del éster bencílico 33j (230 mg, 0.42 mmoles) en CH3OH/EtOAc (1 :1 50 ml), fue tratada con Pd(OH)2 e hidrogenada (50 psi, 344.7 Kpa) durante 12 h. La mezcla de reacción fue filtrada a través de un cilindro de celite y la torta enjuagada con CH3OH/CH2CI2 (121 , 50 ml). La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo 37a (177 mg, 93 %) fue utilizado para el acoplamiento sin purificación.

Paso B Una solución del ácido 37a (177 mg, 0.33 mmoles) en DMF seca (5.0 ml) y CH2CI2 (5.0 ml) fue tratada con HOBt (88 mg, 0.49 mmoles, 1.5 equiv.) y enfriada a 0°C, tras lo cual se agregó base de Hünigs (175 mg, 1.35 mmoles, 4.0 equiv, 25 µl). A esta mezcla se agregó EDCI (95 mg, 0.49 mmoles, 15 equiv.) y la mezcla de reacción fue agitada a 0°C durante 1 h y tratada con el clorhidrato de amina A (170 mg, 0.39 mmoles, 1.2 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a temperatura ambiente por un lapso de 48 h y concentrada al vacío para eliminar la DMF y el CH2CI2. El residuo fue diluido con agua y extraído con CH2CI2 (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con NaOH ac. (1M, 2x50 ml), solución salina (100 ml) y concentradas al vacío. El residuo 37b (315 mg) fue oxidado sin más purificación.

Paso C Una solución del alcohol 37b (315 mg, 0.4 mmoles) en CH2CI2 (5.0 mi) fue tratada con reactivo de Dess-Martin (424 mg, 1.00 mmoles, 2.5 equiv.). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 1 h y diluida con NaHC03 ac (50 ml) y Na2S2O3 ac (50 ml). La mezcla de reacción fue agitada a ta. durante 20 min, y extraída con CH2CI2 (3x50 ml). Las capas orgánicas combinadas fueron extraídas con solución salina, secadas (Na2SO4), filtradas, concentradas al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (Si02, EtOAc/hexanos 1:1) para dar la cetoamida 37 (210 mg, 66 %) en forma de sólido incoloro.

Rf: 0.63 (CH3OH/CH2CI2 1 :19). EM (Electroatomización, int. reí. m/z), 857 [(M+CH3OH]+, 33), 825 ([M+1]+ 40), 91 (100).

EJEMPLO 38 Preparación del Compuesto de la Fórmula 38 38 Una solución del depsipéptido oxidado 37 (200 mg, 0.24 mmoles) en CH2CI2 seco (5.0 ml) fue tratada con ATE (5.0 ml) y agitada a ta. durante 7 h. La mezcla de reacción fue concentrada al vacío y el residuo disuelto reiteradamente en CH3OH/CH2CI2/Hexanos (1 :1 :1) y concentrado varias veces al vacío para dar un sólido de color tostado 38 (130 mg, 86 %) que fue secado al vacío. EM (Electroatomización, int. reí. m/z):769 [(M+1 )+, 45), 294 (45), 191(100).

EJEMPLO 39 Preparación del Compuesto de la Fórmula 39 Una solución del ácido 22 (40 mg, 0.06 mmoles) en CH2CI2 (0.5 ml) y DMF (0.5 ml) fue enfriada a 0°C y tratada con Me2NM.HCI (15 mg, 0.18 mmoles, 3.0 equiv.) y base de Hünigs (31 mg, 0.24 mmoles, 44 µl, 4.0 equiv.). A continuación se trató a la mezcla de reacción con PyBrOP (55 mg, 0.12 mmoles, 2.0 equiv.) y se guardó en el congelador durante 12 h. La mezcla de reacción amarilla fue concentrada al vacío y el residuo fue purificado por cromatografía (SiO2, EtOAc/hexanos gradiente de 3.2 ? 1 :0) para obtener un producto impuro que fue purificado una vez más utilizando (acetona/hexanos 1.6) para dar la dimetilamida 39 en forma de sólido incoloro (14 mg, 35 %). EM (Eletroatomización, int. reí. m/z): 791 , [(M+1)+, 50], 391 (40), 276 (50)176(100).

EJEMPLO 40 Preparación del Compuesto de la Fórmula 40 40 Procedimiento General para las reacciones de acoplamiento en fase sólida Se llevó a cabo la síntesis en un recipiente de reacción que fue construido con un cartucho de jeringa de polipropileno equipado con un disipador de polipropileno en el fondo. Los aminoácidos protegidos con Fmoc fueron acopiados por técnicas normales de fase sólida. Se cargó cada recipiente de reacción con 100 mg de la resina Fmoc-Sieber de partida (aproximadamente 0.035 mmoles). Se lavó la resina con porciones de 2 ml de DMF (2 veces). El grupo protegido con Fmoc fue eliminado mediante tratamiento con 2 ml de una solución al 20 % v/v de piperidina en DME durante 20 mm. Se lavó la resina con porciones de 2 ml de DME (4 veces). El acoplamiento se llevó a cabo en DMF (2 ml), utilizando 0.12 mmoles de Emoc-aminoácido, 0.12 mmoles de HATU y 0.24 mmoles de DIPEA. Después de agitar durante 2 h, se drenó el recipiente de reacción y se lavó la resina porciones de 2 ml de DME (4 veces). Se repitió el ciclo de acoplamiento el siguiente Fmoc-aminoácido o grupo de casquete. ESQUEMA 10 Se trató a la resina Sieber con Emoc 40a (0.0365 mmoles) con 2 ml de una solución al 20 % v/v de piperidina en DMF durante 20 min, tras lo cual se lavó con porciones de 2 ml de DMF (4 veces). Se adicionó DMF (2 ml) a la resina, seguida por Fmoc-fenilglicina (0.12 mmoles), HATU (0.12 mmoles) y DIPEA (0.24 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, se lavó la resina con porciones de 2 ml de DME (4 veces) para producir un compuesto unido a la resina 40b. El compuesto unido a la resina 40b fue tratado con 2 ml de una solución al 20 % v/v de piperidina en DMF durante 20 min, seguida por lavado con porciones de 2 ml de DME (4 veces). Se adicionó DMF a la resina, seguida por Fmoc-glicina (0.12 mmoles), HATU (0.12 mmoles) y DIPEA (0.24 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 h, la resina fue lavada con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40c. Se trató al compuesto unido a la resina 40c con 2 ml de una solución al 20 % vlv de piperidina en DMF durante 20 min, seguido por lavado con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) Se adicionó DMF (2 ml) a la resina, seguida por N-Emoc-propilisoserina (0.12 mmoles), HATU (0.12 mmoles) y DIPEA (0.24 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 12 h, se lavó la resine con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40d. Se trató al compuesto unido a la resine 40d con 2 ml de una solución al 20 % v/v de piperidina en DMF durante 20 min, seguido por lavado con porciones de 2 ml de DMF (4 veces). Se adicionó DME (2 ml) a la resina, seguida por Emoc-lisina (Dde) (0.12 mmoles), HATU (0.12 mmoles) y DIPEA (0.24 mmoles). Después de agitar a temperatura ambiente durante 12 h, se lavó la resina con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) para producir el compuesto unido a la resine 40e. Se trató al compuesto unido a la resina 40e con 2 ml de una solución al 20 % vlv de piperidina en DMF durante 20 min, seguido por lavado con porciones de 2 ml de DMF (4 veces). Se adicionó DMF (2 ml) a la resina, seguida por Emoc-ciclohexilglicina (0.12 mmoles), HATU (0.12 mmoles) y DIPEA (0.24 mmoles) Después de agitar a temperatura ambiente durante 12 h, se lavó la resina con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40f Se trató al compuesto unido a la resina 40f con 2 ml de una solución al 20 % v/v de piperidina en DME durante 20 min, Se lavó la resina con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40g. Se trató al compuesto unido a la resina 40g con porciones de 2 ml de una solución al 2 % v/v de hidrazina en DME durante 5 min,(3 veces). Se lavó la resina con porciones de 2 ml de DMF (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40h. Se trató al compuesto unido a la resina 40h con ácido glutárico 0.035 mmoles, HATU 0.07 mmoles y DIPEA 0.14 mmoles en 2 ml de DMF a temperatura ambiente durante 16 h. Se lavó la resina con porciones de 2 ml de DMF (4 veces), THF (4 veces) y DCM (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40i. Se trató al compuesto unido a la resina 40i con una solución de periodinano de Dess-Martin 0.14 mmoles y t-BuOH 0.14 mmoles en 2 ml de DCM a temperatura ambiente durante 4 h. Se lavó la resina con porciones de 2 ml de una solución al 20 % v/v de iPrOH en DCM, THF, una solución al 50 % v/v de THF en agua (4 veces), THF (4 veces) y DCM (4 veces) para producir el compuesto unido a la resina 40j. El compuesto unido a la resina 40j fue tratado con 4 ml de una solución al 2 % v/v de ATF en DCM durante 5 min. Se adicionó el filtrado a 1 ml de AcOH y la solución fue concentrada por centrifugación al vacío para dar el compuesto 40 (0.0117 g, 48 % de rendimiento). EM (LCMS-Electroatomización) 698.2 MH+.

EJEMPLO 41 -53 Preparación de los Compuestos de las Fórmulas 41 a 53 43 44 48 50 51 Los compuestos 41 - 53 fueron sintetizados utilizando una metodología en fase sólida similar al procedimiento descrito para la síntesis del Ejemplo 40.

EJEMPLO 54 Preparación del Compuesto de la Fórmula 54 Paso A A una solución agitada de Boc-Ciclohexilglicina-OH (2.33 g, 9.07 mmoles) en DMF (20 ml) y CH2CI2 (20 ml) se adicionó HOBT (1.48 g, 9.07 mmoles), EDCI (1.91 g, 9.97 mmoles) y NMM (2.99 ml, 27.2 mmoles). La solución fue agitada a -20°C durante 10 minutos, para luego adicionar H-Lys(Z)-OMe.HCI y agitar durante media hora a -20°C y mantener en el congelador durante la noche. Luego se concentró la solución a sequedad, y luego se extrajo con EtOAc, NaHCO3, saturado. Se lavó la capa orgánica combinada con H2O, se secó sobre Na2SO4, y se concentró a sequedad para dar un sólido blanco (4.83 g, MH+ = 534.1).

Paso B A una solución agitada de 54b (4.86 g, 8.76 mmoles) en MeOH (10 ml) y H20 (7 ml) se adicionó LiOH (70 mg, 11.4 mmoles). Se formó un precipitado blanco y se dejó agitar la solución a temperatura ambiente durante la noche y luego se concentró a sequedad. Luego se repartió el material crudo entre CH2CI2 y agua. Se separó la capa orgánica y se lavó con solución salina, se secó sobre Na2SO4, se filtró y concentró a sequedad para dar 54c (4.55 g, MH+ = 520.1).

Paso C A una solución agitada al frío de 54c (4.3 g, 8.27 mmoles) en DMF (40 ml) y CH2CI2 (40 ml) a -20°C se adicionó HOBT (1.35 g, 8.27 mmoles), EDCI (1.74 g-, 9.1 mmoles) y NMM (2.73 ml, 8.27 mmoles). La solución resultante fue agitada a -20°C durante 10 minutos, para luego adicionar la amina G (2.32 g, 8.27 mmoles) y agitar durante media hora a -20°C y mantener en el congelador durante la noche. Se siguió el procedimiento de estimulación del proceso del paso A para dar 54d (6.21 g, MH+ = 746.2).

Paso D 54e Se agitó la solución de 54d (6.16 g, 8.26 mmoles) en HCI/Dioxano 4N (40 ml) a temperatura ambiente por espacio de 1 b y se concentró a sequedad para dar un producto crudo 54e (5.70 g, 100 % de rendimiento, MH+ = 646.3).

Paso E A una solución enfriada por agitación de Boc-Glu(OBn)-OH en DMF (25 ml) y CH2CI2 (25 ml) a -20°C se adicionó HOBT (1.29 g, 7.92 mmoles), EDCI (1.66 g, 8.71 mmoles) y NMM (2.61 ml, 23.7 mmoles). La solución resultante fue agitada a -20°C durante 10 minutos, para luego adicionar 54e (5.4 g, 7.916 mmoles) y agitar durante media hora a -20°C y mantener en el congelador durante la noche. Se siguió el procedimiento de estimulación del proceso del paso A para dar un producto crudo (7.14 g, 93.5 % de rendimiento).

Paso F A una solución agitada de 54f (6.9 g, 7.15 mmoles) en EtOH absoluto (350 ml) se agregó Pd/C al 10 % (2.8 g) en 50 % de H2O (p/p). La solución resultante fue purgada con H2 y agitada bajo un balón de H2 durante la noche. Luego se filtró la solución a través de celite y se lavó el filtrado con EtOH/CH2CI2 y luego se concentró a sequedad para dar un sólido blanco (1.44 g). Se lavó el sólido con H2O al 25 %/MeOH y se filtró a través de un embudo de vidrio sinterizado, luego se congeló y liofilizó para dar 54g (4.12 g, 77.5 % de rendimiento, MH+ = 743.2).

Paso G A una solución enfriada por agitación de 54g (0.5 g, 6.7 mmoles) en DMF (50 ml) y CH2CI2 (50 ml) a -20°C se adicionó HOBT (0.219 g, 1.34 mmoles), EDCI (0.271 g, 1.41 mmoles) y NMM (0.296 ml, 2.69 mmoles). La solución resultante fue agitada a - 20°C durante 25 minutos y luego se guardó en el congelador durante la noche. La solución fue concentrada a sequedad, y luego se extrajo con EtOAc y NaHC03 saturado A continuación se concentró a sequedad la capa orgánica combinada para dar 54h (254 mg, MH+ = 725.2).

Paso H A una solución agitada de 54h (0.2 g, 0.27 mmoles) en CH2CI2 anhidro (20 ml) se adicionó periodinano de Dess-Martin (0.234 g, 0.55 mmoles). La solución resultante fue agitada a temperatura ambiente durante 1 h. A esta solución se agregó por goteo, en el curso de media hora, la solución de H20 (0.010 ml) en CH2CI2 (20 ml) y se agitó vigorosamente durante 2 horas más. A continuación se agitó la solución durante media hora con 50 % de Na2S2O3 y 50 % de NaHCO3 saturado. Se separó la capa orgánica, que fue lavada con H2O, solución salina, secada sobre Na2SO4, filtrada, concentrada a sequedad y purificada por cromatografía en columna sobre gel de silice, eluyendo con MeOH al 10 %/ CH2CI2 para dar 54 (17 mg, 62 % MH+ = 723.2).

Ensavo para Determinar la Actividad Inhibitoria de la Proteasa de VHC Análisis Espectrofotométrico Se llevaron a cabo análisis espectrofotométricos para la serina proteasa de VHC en los compuestos de la presente invención siguiendo el procedimiento descrito por R. Zhang y otros, Analytical Biochemistry, 270 (1999) 268-275, la descripción de la cual se incofora a la presente como referencia. El análisis basado en la proteólisis de los sustratos de éster cromogénico es adecuado para ei monitoreo continuo de la actividad de la proteasa de VHC NS3. Los sustratos fueron obtenidos del extremo P de la secuencia de empalme NS5A-NS5B (Ac-DTEDWX(Nva) donde X = A o P) cuyos grupos carboxilo C-terminales se esterifican con uno de cuatro alcoholes cromofóricos diferentes (3- o 4-nitrofenol, 7-hidroxi-4-metil-cumarina o 4-fenilazofenol). Más adelante se presenta la síntesis, caracterización y aplicación de estos novedosos sustratos éster espectrofotométricos al rastreo de alto rendimiento y la evaluación cinética detallada de los inhibidores de la proteasa del VHC NS3.

Materiales v Métodos Materiales Los reactivos químicos para las soluciones reguladoras relacionados con el ensayo fueron obtenidos de Sigma Chemical Company (St. Louis, Missouri). Los reactivos para la síntesis de péptidos eran de Aldrich Chemicals, Novabiochem (San Diego, California), Applied Biosystems (Foster City, California) y Perseptive Biosystems (Framingham, Massachussets). Los péptidos fueron sintetizados a mano o en un sintetizador automático de péptidos ABI modelo 431 A (de Applied Biosystems). El Espectrómetro UV/VIS modelo LAMBDA 12 era de Perkin Elmer (Norwaik, Connecticut) y las placas de UV de 96 pozos fueron adquiridas a Corning (Corning, Nueva York). El bloque de precalentamiento era de USA Scientific (Ocala, Florida) y el generador de vórtice con placa de 96 pozo era de Labline Instruments (Melrose Park, Illinois). Se obtuvo un lector de placas microtituladoras Spectramax Plus con nomocrómetro de Molecular Devices (Sunnyvale, California).

Preparación de las Enzimas Se preparó proteasa de VHC NS3/NS4A heterodimérica recombinante (cepa 1a) utilizando los procedimientos publicados anteriormente (D. L. Sali y otros, Biochemistry, 37 (1998) 3392-3401). Se determinaron las concentraciones proteicas por medio del método de tinción de Biorad utilizando patrones de proteasa de VHC recombinante previamente cuantificada por análisis de aminoácidos. Antes de dar comienzo al ensayo, se intercambió la solución reguladora de almacenamiento de enzimas (fosfato de sodio pH 8.0, 300 min, NaCI, 50 min, glicerol al 10 %, lauril maltósido al 0.05 % y DTT 10 mM) por la solución reguladora de ensayo (MOPS pH 6.5, 25 mM, NaCI 300 mM, glicerol al 10 %, lauril maltósido al 0.05 %, EDTA 5 µM y DTT 5 µM) utilizando una columna preempaquetada Biorad Bio-Spin P-6S.

Síntesis y Purificación de los Sustratos La síntesis de los sustratos se llevó a cabo de la manera dada a conocer por R. Zhang y otros {ibid.) y la misma se inició mediante el anclaje de Fmoc-Nva-OH a una resina de cloruro de 2-clorotritilo utilizando un protocolo normal (H. Barios y otros, Int. J. Pept. Protein Res. 37 (1991), 513-520). Seguidamente, los péptidos fueron acoplados, ya sea manualmente o en un sintetizador automático de péptidos ABI modelo 431. Los fragmentos peptídicos N-acetilados y completamente protegidos fueron escindidos de la resina con ácido acético al 10 % (HOAC) y trifluoroetanol (TFE) al 10 % en diclorometano (DCM) por espacio de 30 min, o bien con ácido trifluoroacético (ATF) al 2 % en DCM durante 10 min. El filtrado combinado y el lavado con DOM fueron evaporados azeotrópicamente (o extraídos repetidamente con una solución acuosa de Na2CO3) para eliminar el ácido utilizado en la escisión. Se secó la fase de DOM sobre Na2SO4, y se evaporó.

Los sustratos de esteres fueron acoplados utilizando procedimientos de acoplamiento normal de ácido-alcohol (K. Holmber y otros, Acta Chem. Scand., B33 (1979) 410-412). Los fragmentos peptídicos fueron disueltos en piridina anhidro (30-60 mg/ml) a la cual se agregaron 10 equivalentes molares de cromóforo y una cantidad catalítica (0.1 eq) de ácido para-toluensulfónico (pTSA). Se adicionó diciciohexilcarbodiimida (DCC, 3 eq.) para iniciar las reacciones de acoplamiento. La formación de productos fue monitoreada por CLAR y se encontró que se había completado después de 12-72 horas de reacción a temperatura ambiente. Se evaporó el solvente piridina al vacío y se eliminó más a fondo por evaporación azeotrópica con tolueno. El éster peptídico fue desprotegido con ARF al 95 % en DCM durante dos horas y se extrajo tres veces con éter etílico anhidro para eliminar el exceso de cromóforo. El sustrato desprotegido fue purificado por CLAR de fase inversa en una columna C3 o C8 con un gradiente de acetonitrilo de 30 % a 60 % (utilizando seis volúmenes de columna). El rendimiento general después de la purificación por CLAR fue de aproximadamente 20-30 %. Se confirmó la masa molecular por espectroscopia de masa por ionización por electroatomización. Los sustratos fueron almacenados desecados en forma de polvo seco.

Espectros de los Sustratos v los Productos Se obtuvieron los espectros de los sustratos y los correspondientes productos cromofóricos en la solución reguladora de ensayo de pH 6.5. Se determinaron los coeficientes de extinción a la longitud de onda óptima alejada de los picos en cubetas de 1 cm (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) utilizando diluciones múltiples. La longitud óptima alejada de los picos se definió como la longitud de onda que da la máxima diferencia fraccionaria de absorbancia entre el sustrato y el producto (OD producto - OD del sustrato)/ OD del sustrato).

Ensavo de la Proteasa Se realizaron ensayos de proteasa de VHC a 30°C utilizando una mezcla de reacción en una placa microtituladora de 96 pozos. Las condiciones de la solución reguladora de ensayo (MOPS 25 mM, pH 6.5, NaCI 300 mM, glicerol 10 %, lauril maltósido 0.05 %, EDTA 5 µM y DTT 5 µM) fueron optimizadas para el heterodímero NS3/NS4A (D. L. Sali y otros, ibid.)). Típicamente, se colocaron 150 µl de mezclas de solución reguladora, sustrato e inhibidor en los pozos (concentración final de DMSO 4 % v/v) y se dejaron preincubar a 30°C por espacio de aproximadamente 3 minutos. Luego se utilizaron cincuenta µl de proteasa precalentada (12 nM, 30°C) en solución reguladora de ensayo para dar comienzo a la reacción (volumen final 200 µl). Las placas fueron monitoreadas durante toda la duración del ensayo (60 minutos) para detectar los cambios de absorbancia a la longitud de onda indicada (340 nm para 3-Np y HMC, 370 nm para PAP y 400 nm para 4-Np) utilizando un lector de placas microtituladoras Spectromax Plus equipado con un monocrometro (se pueden obtener resultados aceptables con lectores de placas que utilizan filtros de corte). La escisión proteolítica de la unión de esteres entre el Nva y el cromóforo fue monitoreada a la longitud de onda apropiada contra un testigo sin enzima como control para determinar la hidrólisis no enzimática. La evaluación de los parámetros cinéticos del sustrato se llevó a cabo en un rango de concentraciones de sustrato de 30 veces (-6-200 µM). Se determinaron las velocidades iniciales utilizando regresión lineal y constantes cinéticas ajustando los datos a la ecuación de Michaelis-Menten empleando un análisis de regresión no lineal (Mac Curve Fit 1.1 , k. Raner). Los números de recambio (K^) fueron calculados sobre la presunción de que la enzima era totalmente activa.

Evaluación de los inhibidores e inactivadores Se determinaron las constantes de inhibición (Kj) para los inhibidores competitivos Ac-D-(D-Gla)-L-l-(Cha)-C-OH (27), Ac-DTEDWA(Nva)-OH y Ac-DTEDWP(Nva)-OH experimentalmente en concentraciones fijas de enzima y sustrato representando v^v, versus la concentración del inhibidor ([l]0) de acuerdo con la ecuación reordenada de Michaelis-Menten para determinar la cinética de inhibición competitiva: v^v, = 1 + [l]c (Kj (1 + [SJo/KJ), en la cual v0 es la velocidad inicial sin inhibición, v es la velocidad inicial en presencia de un inhibidor en cualquier concentración de inhibidor dada ([l]0) y [S]0 es la concentración del sustrato utilizado. Los datos así obtenidos fueron ajustados utilizando regresión lineal y se utilizó la pendiente resultante, 1/(Kj(1 +[S]0/Km) para calcular el valor k¡. Los valores K¡ obtenidos para los diversos macrociclos de la presente invención están consignados en el Cuadro 1 antes mencionada, donde los compuestos han sido dispuestos en el orden de progresión de valores Kj. De estos resultados de los ensayos, resultaría evidente a la persona capacitada en la técnica que los compuestos de la presente invención son de gran utilidad como inhibidores de la serina proteasa NS3.

Método de Bioensavo Celular Los bioensayos celulares para detectar la serina proteasa de VHC se llevaron a cabo sobre los compuestos de la invención siguiendo el procedimiento descrito por 5. Agrawal y otros, "Development and Characterization of Hepatitis C Virus Serme Portease Cell-based Trans-Cleavage Assay", Hepatology Suplemento del Tomo 30 (No. 4, Parte 2, octubre de 1999), Extracto No. 615 (Acta de la 50ava. Reunión Anual de AASLD, Dallas, Texas, 5-9 de noviembre de 1999), descripciones que se incoforan a la presente como referencia El ensayo se llevó a cabo en células HeLa/Huh7 que habían sido co-transfectadas con un plásmido que expresa un sustrato proteico reportero que contenía una secuencia de reconocimiento de segmentación NS5NSB y un vector de expresión 1 BNS4A21.32-GS-GSNS3_ 81I17K y YFPnl como proteína patrón interno para el control de la citotoxicidad. Se midió la actividad de proteasa por medio de SDS-PAGE de los lisados celulares completos seguida por detección por transferencia Western utilizando un anticuefo monoclonal dirigido contra el sustrato reportero. La cuantificación de la segmentación de los sustratos se realizó por barrido de la inmunotransferencia en el representador de imágenes de fósforo.

Materiales ADN Plásmidos PBFP-5N5B-GFP El gen reportero que expresa el sustrato codifica una proteína de fusión compuesta por un dominio de proteína fluorescente azul N' terminal (BFP) y un dominio de proteína fluorescente verde C terminal (GFP), separados por 25 aminoácidos, derivados de la secuencia de reconocimiento de segmentación NS5A/5B. La GFP y la BFP son proteínas autofluorescentes esencialmente homologas que emiten luz verde o azul respectivamente, cuando son excitadas por luz UV de la longitud de onda apropiada. Cuatro sustituciones de aminoácidos en el cromóforo de GFP alteran la longitud de onda de emisión y convierten la proteína a BFP.

Se puede detectar el sustrato, así como los productos GFP y BFP obtenidos en los lisados celulares por métodos inmunológicos empleando un anticuerpo monoclonal que reconoce a ambas proteínas. El gen reportero BFP-5A/5B-GFP contiene las secuencias codificadoras de las proteínas autofluorescentes BFP y GFP (Ouantum Biotechnologies, Inc., Montreal, Canadá) separadas por la secuencia de reconocimiento de segmentación NS5A/5B, donada entre los sitios de endonucleasa de restricción Nhe I y Bam Hl del vector de donación pQBI25 (Quantum Biotechnologies, Inc.). La expresión de la proteína de fusión está bajo el control del promotor intensificador del CMV IE. La secuencia de la hormona de crecimiento bovina p (A) del vector produce la señal de poliadenilación para el ARNm. La secuencia de segmentación NS5A/5B es.

SSGADTEDWCCSMSYTWTGALVTP. Se utilizó la secuenciación de ADN para validar el clon.

P1 BOQ2: 1 bNS4A21-32GS-GS NS 3-81 I17K Se clonó el subtipo de proteasa 1 b como fragmento Xba1/Not1 detrás del promotor CMV del vector pC1 neo.

YFPnl Se adquirió YFPnl a CLONTECH (Palo Alto, California). La adición del tercer plásmido a la transfección otorga una proteína patrón interno para controlar la citotoxicidad y no afecta el porcentaje de escisión de proteasa. Los ADN plásmidos se mantuvieron y propagaron en células DH5a (obtenidas de Life Technologies) en medio LB bajo la selección apropiada de antibióticos, y fueron purificados utilizando QIAfilter Plasmid Kits (Qiagen, Valencia, California).

Cultivo Celular Las células HeLa fueron mantenidas y propagadas en Medio Esencial Mínimo de Eagle (EMEM, BioWhitaker, Walkersville, Maryland) suplementado con suero fetal bovino al 10 % (SFB), glutamina 2 mM y 100 u/ml de penicilina- estreptomicina (BioWhitaker), NaHC03 al 2 %. Las células Huh7 fueron mantenidas y propagadas en medio Eagle Modificado de Dulbecco (DMEM, BioWhitaker) suplementado con suero fetal bovino al 10 % (SFB), 100 u/ml de penicilina-estreptomicina (BioWhitaker) y NEAA 5 ml (100x BioWhitaker)/L.

Procedimiento SOP Día anterior a la transfección Se sembraron células HeLa en placas de 24 pozos (placas Falcon a una densidad de 6 x 104 células /pozo y se las cultivó durante la a 37°C en un incubador con 5 % de C02.

Día de la transfección Se diluyeron ADN plásmidos hasta una concentración final de 0.05 µg/µl en agua sin nucleasa (Promega, Madison, Wisconsin, # cat P119C). Se combinó 0.75 µg de BFP-5A/5B-GFP y se lo mezcló con 0.175 µg de P1B002 (0.23X) y 0.02 µg de YFPnl. Se llevó a los ADN a un volumen final de 60 µl con EMEM sin SFB, glutamina y antibióticos. Se adicionó una proporción de volúmenes de 5 µl de Reactivo SuperFect (Qiagen, # cat 301305) por µg totales de ADN y se sometió a la mezcla a vórtice durante aproximadamente 10 segundos y se la incubó durante 10 min a temperatura ambiente para dar lugar a la formación del complejo. Mientras tenía lugar la formación del complejo, se aspiró el medio de cultivo de las placas de cultivo celular y se lavó a las células IX co 1 ml de PBS sin Ca2+, Mg2+ (Bio Whitaker). Se agregaron 350 µl de EMEM (suplementado con el medio de suplemento-terminación) al tubo que contenía los complejos de transfección y se pipeteó la mezcla con movimiento recíproco 2-3 veces. Se transfirió el volumen total a uno de los 24 pozos de una placa de cultivo. Las células HeLa fueron incubados con los complejos de transfección por espacio de aproximadamente 3 h a 370C y con 5 % de C02. Se retiraron de los pozos los medios que contenían los complejos de transfección por aspiración. Las células fueron lavadas una vez en alrededor de 1 ml de PBS, se aspiró el PBS y se agregaron 495 µl de EMEM completo y luego 5 µl del compuesto por pozo. Las células fueron incubadas durante 22-24 h a 37°C y con 5 % de C02.

Preparación de los Lisados Celulares Se aspiró el medio de cada pozo y se lo lavó una vez con DPBS.

Las células fueron cosechadas en 100 µl de Ix solución reguladora de muestreo Tris-SDS-BME (sistema de separación OWL, Portsmouth, Nueva Hampshire, # cat ER33) y transferidas a tubos de microcentrífugas. Luego se hirvieron durante 3-5 min. para lisar las células. Se realizó la carga a razón de 10 µl/pozo en gel SOS PAGE. Los lisados fueron resueltos por electroforesis en SDS-PAGE al 12.5 % de 10 cm x 10 cm (Owl Scientific, # cat. OG-0125B) operando a 30 mamp en solución reguladora de Tris-Glicina-SOS (Owl Scientific). Antes de su uso, se empapó una membrana PVDF (Immobilon-P; tamaño de poro 45 µm; Millipore, Bedford, Massachussets) en metano al 100 % durante 10 segundos y luego se colocó la transferencia en agua destilada. Las proteínas fueron transferidas a membranas de filtro PVDF (0.45 µm, Millipore) a 108 mamp por gel por espacio de 90 minutos utilizando una membrana de electrotransferencia semiseca.

Detección de Proteínas por Western Blot ECF (Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, Inglaterra), # catálogo RPN 5780) Las membranas de filtro PVDF fueron bloqueadas por reactivo de bloqueo al 5 % (del equipo) en 10 ml de PBS que contenía Tween 20, pH 7.4 (Sigma Chemicals, St. Louis, Missouri, # cat. 3563) durante la noche en un refrigerador a 2-4°C. Al día siguiente, las membranas fueron enjuagadas brevemente dos veces con TPBS que contenía 0.05 % de solución reguladora de lavado Tween 20, luego se las lavó tres veces durante 5 mm por vez en PBS que contenía 0.05 % de Tween 20, pH 7.4. Las membranas fueron incubadas en 12 ml de una solución 1 :3000 de anticuerpo monoclonal anti- GFP durante 30 minutos (Clontech, Palo Alto, California) en PBS que contenía 0.05 % de Tween 20, pH 7.4 en tanto que, al mismo tiempo, se agregó 1 % de BSA (Seroalbúmina bovina, # cat A-2153 de Sigma) para reducir el fondo. Las membranas fueron lavadas dos veces brevemente con TPBS, luego tres veces durante 5 mm por vez en solución reguladora de lavado TPBS. Las membranas fueron incubadas en 12 ml de Ig anti-ratón anti-fluoresceína en una dilución de 1 :6000 en TPBS por espacio de 30 minutos. Las membranas fueron lavadas brevemente dos veces con TPBS, luego durante 5 min. en solución reguladora de lavado TPBS tres veces. Para la amplificación de señal con sustrato ECF, las membranas fueron incubadas en 10 ml de conjugado anti-fluoresceína fosfatasa alcalina durante 30 minutos. Las membranas fueron enjuagadas brevemente dos veces con TPBS, luego tres veces durante 5 mm en solución reguladora de lavado TPBS. La solución de sustrato ECF fue preparada de acuerdo con las instrucciones del fabricante (alícuotas y congelación). Las membranas fueron incubadas durante 2-3 minutos, se drenó el exceso de reactivos, luego se las escurrió con papeles de filtro, se las secó en aire durante 9-10 minutos y luego se las sometió a exploración.

Exploración (barrido) de la membrana Se colocó la gráfica de puntos sobre el vidrio de un representador de imágenes de fósforo Storm 860. Se encendió el quimioluminiscente azul, de 200 píxeles de tamaño, un voltaje de 700 PMT. Se abrió el archivo en ImageQuant y se lo cuantificó generando cuadrados alrededor de las bandas que representaban el sustrato (S), el producto (P) y el control interno (IC). Se midió el % de escisión del sustrato como P/(S+P)X100. Se midió la inhibición de segmentación debido al fármaco en comparación doble con controles farmacológicos incluidos en cada gráfica de puntos. Se creó un informe en Excel. A continuación se consignan los resultados para algunos de los compuestos: Compuesto del Ejemplo 36: CE^F 9 µm Compuesto del Ejemplo 35: CE5o= 20 µm De estos resultados de los ensayos, la persona con capacitación en la técnica consideraría evidente que los compuestos de la presente invención tienen excelente aptitud como inhibidores de la serina proteasa NS3.

Claims

NOVEDAD DE LA INVENCIÓN REIVINDICACIONES

1. Un compuesto macrocíclico, incluyendo los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros y tautómeros de dicho compuesto, así como las sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de dicho compuesto, que tiene la estructura general expuesta en la Fórmula I: en la cual: E, X e Y, pueden estar independienternente presentes o ausentes, y si están presentes, son seleccionados independientemente de entre el grupo consistente en • las siguientes partes alquilo, arilo, alquil-arilo, heteroalquilo, heteroarilo, aril-heteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil-éter, alquil-aril éter, aril éter, alquil amino, aril amino, alquil-aril amino, alquil sulfuro, alquil-arii sulfuro, aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, aril sulfona, alquil- alquil sulfóxido, alquil-aril sulfóxido, alquil amida, alquil-aril amida, aril amida, alquil suifonamida, alquil-aril sulfonamida, aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, aril urea, alquil carbamato, alquil-aril carbamato, arílcarbamato, alquil-hidrazida, alquilaril hidrazida, alquil hidroxamida, alquil-aril hidroxamida, alquil sulfonilo, ariisulfonilo, heteroalquilsulfonilo, heteroaril sulfonilo, alquil carbonilo, arilcarbonilo, heteroalquilcarbonilo, heteroaril carbonilo, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, hetero ariloxicarbonilo, alquilaminocarbonilo, arilaminocarbonilo, heteroarilaminocarbonilo o una combinación de los mismos, con la condición que E, X e Y pueden estar opcionalmente sustituidos por partes seleccionadas de entre el grupo consistente en aromático, alquilo, alquilarilo, heteroalquilo, aril-heteroarilo, alquil-heteroarilo, cicloalquilo, alquil éter, alquil-aril éter, alquil sulfuro, alquil-aril sulfuro, alquil sulfona, alquil-aril sulfona, alquil amida, alquil-aril amida, alquil sulfonamida, alquil aminas, alquil-aril aminas, alquil-aril sulfonamida, alquil urea, alquil-aril urea, alquil carbamato y alquil-aril carbamato, halógeno, hidroxilamino, alquilcarbazto, arilcarbazato; R1= COR5 ó B(OR)2, en lo cual R5 = H, OH, OR8, NR9R10, CF3, C2F5, C3F7, CF2R6, R6, COR7, siendo R7 = H, OH, OR8, CHR9R10, ó NR9R10, siendo R6, R8, R9 y R10, independientemente entre sí, seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, cicloalquilo, arilalquilo, heteroarilalquilo; CH(R1')COOR11, CH(R1')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2)COOR11,

CH(R1')CONH-CH(R2')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')R11, CHÍR^CONHCHÍR^CONHCHÍR^COOR11, CH(R1')CONHCH(R1')CONHCH(R3')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')COOCR11,

CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')COHR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')CONHCH(R3')CONHCH(R4')CONHCH(R5')CONR12R13, en lo cual R1', R2', R3', R4', R5', R11, R 2, R13 y .R' son independientemente entre si seleccionados de entre el grupo consistente en H, alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, cicloalquilo, alquil-arilo, alquil-heteroarilo, aril-alquilo y heteroaralquilo; Z es seleccionado de entre O, N ó CH; W puede estar presente o ausente, y en caso de estar presente, W es seleccionado de entre C=0, C=S, S02 o C=NR; Q es (NR)P , O, S, CH2, CHR, CRR' o un enlace doble hacia V; A es o CH2, (CHR)P, (CHR-CHR')P, (CRR')P, NR, S, S02 o un enlace; G es (CH2)P, (CHR)p, o (CRR')P, NR, O, S, S02, S(0)2NH, C=0 o un enlace doble hacia E o V; V es CH, CR o N; p es un número de 0 a 6 y R, R', R2, R3 y R4 son independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en H, alquilo C^C^, alquenilo C2-C10, cicloalquilo C3-C8, heterocicloalquilo C3-C8, arilo, alcoxi, airloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, heteroarilo, alquilarilo, alquilheteroarilo, (cicloalquil)alquilo y (heterocicloalquil)alquilo, donde dicho cicloalquilo se compone de tres a ocho átomos de carbono y de cero a seis átomos de oxígeno, nitrógeno, azufre o fósforo y dicho alquilo es de uno a seis átomos de carbono; donde dichas porciones alquilo, heteroalquilo, alquenilo, heteroalquenilo, arilo, heteroarilo cicloalquilo y heterocicloalquilo pueden estar optativamente sustituidas y donde dicho término "sustituido" se refiere a una sustitución optativa y adecuada con una o más porciones seleccionadas entre el grupo que consiste en alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, cicloalquilo, heterocicico, halógeno, hidroxi, tio, alcoxi, ariloxi, alquiltio, ariltio, amino, amido, éster, ácido carboxílico, carbamato, urea, cetona, aldehido, ciano, nitro, sulfonamida, sulfóxido, sulfona, sulfonilurea, hidrazida e hidroxamato y tiourea. 2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R1=COR5 y R5 es H, OH, CoOR8 o CONR9R10. 3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 2, caracterizado además porque R1=COCONR9R10 y R9 es H, R10 es H,

CCH(R1')COOR11, CH(R1')CONR12R13, CH(R1')CONHCH(R2')COOR11,

CH(Rr)CONHCH(R2')CONR12R13 o CHí 'JCONHCHfR^XR'). 4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 3, caracterizado además porque R10=CH(R1')CONHCH(R2')COOR11, CH(R1 )CONHCH(R2')CONR1 R13, CH(R1')CONHCH(R ')(R') donde R' es H alquilo, y R2' es seleccionado entre el grupo que consiste de fenilo, fenilo sustituido, fenilo sustituido con heteroátomo, tiofenilo, ciciohexilo, ciclopentilo, ciclopropilo, piperidilo, piridilo y 2-¡nanilo. 5. El compuesto de confopnidad con la reivindicación 4, caracterizado además porque R1' es H.

6. El compuesto de conformidad con la reivindicación 5, caracterizado además porque R2'=fenilo, tiofenilo, ciciohexilo, 2-indanilo, ciclopentilo, piridilo, fenil(4-HNS02NH2), R11 es H o terc-butilo, R12 y R13 son metilo y R' es hidroximetilo o tec-butoximetilo.

7. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado además porque R2 se selecciona entre el grupo que consiste de las siguientes porciones:

8. El compuesto de conformidad con la reivindicación 7, caracterizado además porque R1 = COR5 y R5 es H, COOR8 o CONR9R10.

9. El compuesto de conformidad con la reivindicación 8, caracterizado además porque V es CH.

10. El compuesto de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado además porque Q es NR u O.

11. El compuesto de conformidad con la reivindicación 10, caracterizado además porque G es CH2.

12. El compuesto de conformidad con la reivindicación 11, caracterizado además porque A es O, NR, CH=CH o CH2.

13. El compuesto de conformidad con la reivindicación 12, caracterizado además porque E es alquilo, arilo, heteroalquilo, heteroarilo, alquilo, arilo o cicloalquilo.

14. El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque E se selecciona entre el grupo que consiste de las porciones:

15. El compuesto de conformidad con la reivindicación 13, caracterizado además porque R3 se selecciona entre el grupo que consiste de las porciones: en las cuales R^H, CH3 u otros grupos alquilo; R31=OH, O-alquilo, NH2, N-alquilo y R32 y R33 pueden ser iguales o diferentes y son seleccionados independientemente entre H, F, Cl, Br y CH3.

16. El compuesto de conformidad con la reivindicación 15, caracterizado además porque Z=N y R4=H.

17. El compuesto de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado además porque W es C=0.

18. El compuesto de conformidad con la reivindicación 17, caracterizado además porque la porciónX-U se selecciona entre el grupo que consiste de alquilo C C10, alquilo, cicloalquilo, heteroalquilo, arilalquilo, arilo, heteroarilo y alquilarilo.

19. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque es: donde Rb está directamente conectado a A y Rc está directamente conectado a W; y la porción U1, U2, U3, U4, U5 y U6 forma un anillo de carbonos de seis miembros o un anillo de cinco o seis miembros con uno o más heteroátomos; Ra = H, alquilo, alcoxi, hidroxi, alquiltio, halógeno, nitro, ciano, ácido carboxílico, éster, amida, amino, nitrilo o CF3; Rb es un enlace, alquilo C Cg, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, O, S, S02, NR, O(alquilo), S(alquilo), S02(alquilo) o N(alquilo) y Rc es un enlace, alquilo C C6, alquenilo C2-C6, alquinilo C2-C6, O, S, S02, NH, O (alquilo), S(alquilo), S02(alquilo), N(alquilo) o CH2-N(alquilo), estando CH2 ligado al anillo aromático.

20. El compuesto de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado además porque la porción X-Y es seleccionada entre el grupo que consiste en las siguientes estructuras:

21. Una composición farmacéutica caracterizada porque comprende, como ingrediente activo, un compuesto de conformidad con la reivindicación 1.

22. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizada además porque comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

23. El uso de un compuesto como se reclama en la reivindicación 1 , para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de trastornos asociados con la proteasa del VHC.

24. Un compuesto que exhibe actividad inhibitoria de la proteasa de VRC, incluyendo los enantiómeros, estereoisómeros, rotámeros y tautómeros de dicho compuesto, así como las sales o solvatos farmacéuticamente aceptables de dicho compuesto, el compuesto caracterizado porque es seleccionado entre el grupo de compuestos que tienen las estructuras enumeradas a continuación: 20 20 > 20 *$•• 20

25. Una composición farmacéutica para el tratamiento de trastornos asociados con la proteasa del VHC, composición caracterizada porque comprende una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más compuestos de la reivindicación 24 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.

26. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 24, caracterizada además porque contiene un agente antiviral.

27. La composición farmacéutica de conformidad con con la reivindicación 24 o la reivindicación 25, caracterizada además porque por añadidura contiene un interferón.

28. La composición farmacéutica de conformidad con la reivindicación 27, caracterizada además porque dicho agente antiviral es la ribavirina y dicho interferón es a-interferón.