MX2010013453A - Agonistas mezclados basados en gip para el tratamiento de desordenes metabolicos y obesidad. - Google Patents

Abstract

Se proporcionan péptidos de glucagón que exhiben actividad agonista de GIP además de actividad de glucagón y/o de GLP-1. También se proporcionan composiciones farmacéuticas que comprenden tales péptidos de glucagón y métodos terapéuticos para usar tales péptidos.

Description

AGONISTAS MEZCLADOS BASADOS EN 61P PARA EL TRATA DESÓRDENES METABOLICOS Y OBESIDAD TECEDENTES El pre-proglucagón es un polipéptido pr 8 aminoácidos que se procesa en diferentes te rmar una variedad de diferentes péptidos de oglucagón, incluyendo glucagon, péptido similar (GLP-1) , péptido similar a glucagón-2 intomodulina (OXM) , que están involucrados en riedad de funciones fisiológicas, que incluyen la glucosa, secreción de insulina, vaciado g ecimiento intestinal, asi también la regulación alimento. El glucagon es un péptido de 29 amin rresponde a los aminoácidos 33 hasta 61 oglucagón, mientras que el GLP-1 se produce como 37 aminoácidos que corresponde a los aminoácid - ucagón, e inhibición del consumo de alimento. E mostrado que reduce la hiperglucemia (niveles evados) en diabéticos. La exendina-4, un péptid lagarto que comparte aproximadamente 50% de i inoácidos con GLP-1, activa el receptor de G smo modo se ha mostrado que reduce la hiperg abéticos .

El péptido insulinotrópico dependiente IP) es un péptido regulador gastrointestin inoácidos que estimula la secreción de insul lulas beta pancreáticas en presencia de glucosa. r el procesamiento proteolitico de un precur iinoácidos, preproGIP.

EVE DESCRIPCIÓN Como se divulga en la presente, se p ptidos de glucagón que son análogos del gluca uivalente a o mejor que la actividad de GIP nat : 4), y/o actividad de GLP-1 potente equivalente e la actividad de GLP-1 nativo. La GLP-1 (7-36) NO: 3) o GLP-1 (7-37) (ácido) (SEQ ID NO: 2) ológicamente potentes de GLP-1, que demuestran l encialmente equivalente en el receptor de GLP-1.

Los datos descritos en la presente muest ptidos que tienen tanto actividad de GIP como a P-1 son particularmente ventajosos para inducir peso o prevenir la ganancia de peso, asi como t atar hiperglucemia, incluyendo diabetes. Los dat vulgados en la presente demuestran que la combin tividad del agonista de GIP con la actividad d GLP-1 produce un mayor efecto en la reducción GLP-1 solo. Esta actividad es particularmente vista de las enseñanzas en la técnic ciente en necesidad del mismo una cantidad efec mpuesto, por. ejemplo, un péptido de glucagón, tividad en tanto el receptor de GIP como el r P-1, y que también exhibe opcionalmente activ ceptor de glucagón. Tales compuestos incluye onistas de GIP/GLP-1 y los triagon ucagón/GIP/GLP-1 descritos en la presente.

La actividad incrementada en el receptor oporciona por una modificación de aminoácido en Por ejemplo, His en la posición 1 se sustit inoácido aromático, grande, opcionalmente Tyr, ino-Phe, nitro-Phe, cloro-Phe, sulfo-Phe, 4-p til-Tyr, o 3-amino-Tyr.

Se proporciona la actividad increment ceptor de GIP por modificaciones que esta tructura alfa-hélice de la porción C-terminal { - gativamente cargados en estas posiciones. Altern r ejemplo, la estabilización de la estructura la porción C-terminal del péptido de glucagón los aminoácidos 12-29) se logra a trav trodücción determinada de uno o más aminoáci sustituidos en las posiciones que retienen la seada. En algunas modalidades, una, dos, tres, c las posiciones 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24 o ptido de glucagón o análogo del mismo se sustit inoácido , a-disustituido. Por ejemplo, . la sus posición 16 de un péptido de glucagón o análog n ácido amino iso-butirico (AIB) proporciona lice estabilizada en ausencia de un puente ctama. Estos péptidos se consideran en la prese ptido que carece de un puente intramolecular. pecificos, la estabilización de la alfa-hélice s siciones 27 y/o 28, y opcionalmente en la posic emplo, el Met en la posición 27 se sustitu inoácido alifático grande, opcionalmente Leu, el sición 28 se sustituye con un aminoácido alifáti cionalmente Ala, y el Thr en la posición 29 s >n un aminoácido alifático pequeño, opcionalmente La actividad incrementada en el recep mbién se proporciona por una modificación de am posición 12. Por ejemplo, la posición 12 se su aminoácido grande, alifático, no polar, opciona La actividad incrementada en el recep mbién se proporciona por una modificación de am s posiciones 17 y/o 18. Por ejemplo, la posi stituye con un residuo polar, opcionalmente jsición 18 se sustituye con un aminoácido alifáti >cionalmente Ala. 1 ha reducido por las modificaciones de aminoác siciones 1 y/o 2 se proporciona por las modific tabilizan la estructura alfa-hélice de la rminal (aminoácidos 12-29) del péptido de álogo del mismo. Por ejemplo, -un puente intram ede formar por un enlace covalente entre l terales de dos aminoácidos en las posiciones tre las posiciones j y j+3, o entre las posicion otras modalidades, las interacciones no coval mo los puentes de sal se puede formar entre los sitiva y negativamente cargados en estas posi davía otras modalidades, uno o más de , a-sustituidos se insertan o se sustituyen dent rción C-terminal (aminoácidos 12-29) en las pos tienen la actividad deseada. Por ejemplo, uno, das las posiciones 16, 20, 21 o 24 se sustitu smo. En algunas modalidades, un puente intram ede formar por un enlace covalente entre l terales de dos aminoácidos en las posiciones tre las posiciones j y j+3, o entre las posicion otras modalidades, las interacciones no coval rno los puentes de sal, se pueden formar inoácidos positivamente y negativamente cargado siciones. En todavía otras modalidades, u inoácidos , -disustituidos se insertan o se ntro de esta porción Oterminal (aminoácidos 12 iciones que retienen la actividad deseada. P 0, dos, tres o todas las posiciones 16, 20 , stituyen con un aminoácido , a-disustituido, p B.

La actividad incrementada en el recepto proporciona por una modificación de aminoác iP-1 se proporciona al modificar en la posición residuo de aminoácido aromático, grande, op p .

Se proporciona una actividad reduci ceptor de GLP-1, por ejemplo, mediante una modi inoácido en la posición 7, una supresión de la i (los) aminoácido ( s ) al aminoácido en la posició oduciendo un péptido de 27 o 28 aminoácid >mbinación de los mismos, como se describe en la La conservación de la actividad desp gilación se proporciona por la adición de GPSS NO: 95) a la C-terminal.

Como se demuestra en la presente, la ntenida o incrementada en cada uno del r ucagón, el receptor de GLP-1, y el receptor mparación con el análogo basado en glucagón, GIP donde n es 1 a 16, o l a 10, o 1 a 7, o' 1 a 6, o 3 o 4 o 5, cada . uno de Ri y f½ se dependientemente del grupo que consiste de H, -Cie, (alquilo de Ci-Ci8)OH, (alquilo de Ci-Ci8)NH Ci-CisJSH, (alquilo de C0-C4 ) (C3-C6) cicloalquil C0-C4) (heterociclico de C2-C5) , (alquilo de C0-C -Cio)R , y (alquilo de C1-C4) (heteroarilo C3-C9) , H u OH, y la cadena lateral del aminoácido de comprende un grupo amino libre, y (ii) una sus inoácido del Glu en la posición 20 con un amino fa-disustituido, por ejemplo, AIB. En algunas m aminoácido en la posición 16 es Lys y el amino sición 20 es AIB.

La actividad en cada uno del receptor d ceptor de GLP-1, y receptor de GIP del a mprenden un aminoácido de la Fórmula IV en la po - - geramente polar, pequeño. En modalidades alter terminal se extiende por fusión a GPSSGAPPPS ( ) y 1-11 aminoácidos (por ejemplo, 1-5, o 1, 2, 8, 9, 10, 11 aminoácidos) se. fusionan a la C- SSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) . El 1-11 aminoácidos >rminal de GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) pueden comp emplo, uno o más aminoácidos- alifáticos pequeño a o Gly. En este aspecto, la extensión C-ter r, por ejemplo, GPSSGAPPPSXm, en donde m es 1 emplo, 1 a 5) y X es Ala o Gly. Alternativamente or ejemplo, 1 a 5) aminoácidos fusionados a la SEQ ID NO: 95 puede ser una combinación de linoácidos alifáticos pequeños. Por ejemplo, el 1 emplo, 1 a 5) aminoácidos puede ser una comb siduos de Ala y Gly.

La mejora de la actividad de cada u , por ejemplo, cualquiera- de las posiciones 30 , 34, 35, 36, 37,. 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, , 49, y 50. En algunas modalidades, el aminoác ila o alquila se localiza en la posición 37, 3 , 42, o 43. En algunas modalidades, el aminoácid quilado es un lys el cual se une a un gru quilo, por ejemplo C10-C22. En ciertas modalida localiza en la C-terminal a una extensión que secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 95, tal localiza en la posición 40 del análogo. Opciona ptidos acilados, C-terminalmente extendidos gilan, por ejemplo en la posición 24.

La mejora de la actividad en cada ceptores de glucagón, GLP-1, y G.IP del análogo ucagón, GIP activo, por otra parte se puede logr acilación o alquilación de un aminoácido por l valentemente a un grupo acilo o alquilo, se inoácido de la extensión en una posición que co a . de las posiciones 37-43 relativas a SEQ ID ertas modalidades, el espaciador es 3 a 10 gitud. En aspectos específicos, la longitud paciador y el grupo acilo o alquilo es de apro a aproximadamente 28 átomos en longitud. Los e ecuados para propósitos de incrementar la activ más de los receptores de glucagón, GLP-1, scriben adicionalmente en la presente.

Cualquiera de las modificaciones teriormente las cuales incrementan o dis tividad de GIP, las cuales incrementan o dis tividad del receptor de glucagón, y las cuales disminuyen la actividad del receptor de GLP-1 licar individualmente o en combinación. Cualqui troducir uno, dos, tres o más aminoácido ( s ) car rción C-terminal del glucagón nativo, preferir a posición C-terminal a la posición 27., Tal rgado se puede introducir al sustituir un aminoá n un aminoácido cargado, por ejemplo en la posi , o alternativamente al adicionar un aminoáci r ejemplo, después de la posición 27, 28 dalidades ejemplares, uno, dos, tres o inoácidos cargados se cargan negativamente. dalidades, uno, dos, tres o todos los aminoácid cargan positivamente. Tales modificaciones inc lubilidad, por ejemplo proporcionan por lo menos ces, 10 veces, 15 veces, 25 veces, 30 veces lubilidad relativas con el glucagón nativo en tre aproximadamente 5.5 y 8, por ejemplo, pH 7, den después de 24 horas a 25°C. incipio de la acción mediante la acilación o i péptido de glucagon, como se describe en la pr (D) Incrementar la duración de acción o circulación a través de introducir resiste cisión de la dipeptidil-peptidasa IV (DPP IV) dificación del aminoácido en la posición 1 o scribe en la presente.

(E) -Incrementar la estabilidad me dificación del Asp en la posición 15, por ejempl supresión o sustitución con ácido glutám moglutámico, ácido cisteico o ácido homociste dificaciones pueden reducir la degradación o esc dentro del intervalo de 5.5 a 8, por ejemplo, r lo menos 75%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% o 0% del péptido original después de 24 horas a dificaciones reducen la escisión del enlace - tabilidad también se puede incrementar me dificación del Gln en la posición 20 o 24, p diante la sustitución con Ala, Ser, Thr, o dificaciones pueden reducir la degradación qu avés de la des amidación de Gln. La estabilida crementar mediante la modificación Asp en la p r ejemplo mediante la sustitución con G dificaciones pueden reducir la degradación qu avés de la deshidratación de Asp para termediario de succinimida cíclico seguid omerización al iso-aspartato.

(H) Sustituciones no conservativas o con iciones o supresiones que no afectan sustanci tividad, por ejemplo, sustituciones conservativa s de las posiciones 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 1 18, 19, 20, 21 , 24, 27, 28 o 29; sustitució nos, o aproximadamente 75, 50, 25, 10, 8, 6, 5, i o menor. En algunas modalidades, los péptidos scritos en; la presente exhiben una EC50 en el P que es de aproximadamente 0.001 nM, 0.01 nM, o gunas modalidades, los péptidos de glucagón desc esente exhiben una EC50 en el receptor de GIP qu e aproximadamente 1 nM , 2 nM , 3 nM , 4 nM , 5 nM , nM , 15 nM , 20 nM , 25 nM , 30 nM , 40 nM , 50 nM , 7 [. En algunas modalidades, los péptidos de gluca a EC50 para la activación del receptor de g roximadamente 100 nM o menos, o aproximadamente ' , 8, 6, 5, 4, 3, 2 o 1 nM o menor. En algunas m s péptidos de glucagón descritos en la presente 50 en el receptor de glucagón que es aproximada [, 0.01 nM , o 0.1 nM . En algunas modalidades, la ceptor de glucagón no es más que aproximadamen s que aproximadamente 1 nM , 2 nM , 3 nM , 4 nM , 5 , 10 nM , 15 nM , 20 nM , 25 nM , 30 nM , 40 nM , 50 n O nM . La activación del receptor¦ se puede medir vitro que miden la inducción de cAMP en células breexpresan el receptor, por ejemplo sometiend s células HEK293 co-transfectadas con DNA que ceptor y un gen - de luciferasa enlazado a un spuesta a cAMP como se describe en el Ejemplo 16.

En algunas modalidades, los péptidos d hiben por lo menos aproximadamente 0.1%, 0.2%, 5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 5%, 10%, 20%, %, 60%, 75%, 100%, 125%, 150%, 175% o 200% o tividad en el receptor de GIP relativo con el otencia GIP) . En algunas modalidades, los p ucagón descritos en la presente exhiben no más ,000%, 100,000%, o 1,000,000% de actividad en ' gunas modalidades, los péptidos de glucagón exhi nos aproximadamente 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0 7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 0%, 125%, 150%, 175% o 200% o más alto de acti ceptor de GLP-1 relativo con el GLP-1 nativo ( P-1). En algunas modalidades, los péptidos, d scritos en la presente exhiben no más que 1000 0,000%, o 1,000,000% de actividad en el recepto lativo con el GLP-1. Una actividad del péptido el receptor relativo con un ligando nativo del lcula como la relación inversa de EC50s para el ucagón vs ligando nativo.

De esta manera, un aspecto de la oporciona péptidos de glucagón que exhiben ' ac nto el receptor de glucagón como el receptor de onistas glucagón/GIP") . Estos péptidos de gluc ás alto o más bajo) de su potencia de glucagón. alidades, la relación de la EC50 del péptido el receptor de GIP dividido¦ por la EC5.0 del ucagón en el receptor de glucagón es roximadamente 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, gunas modalidades, la relación de la EC50 en el P dividida por la EC50 en el receptor de gluc roximadamente 1 o menor que aproximadamente 1 (p roximadamente 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 067, 0.1, 0.2). En algunas modalidades, la rela tencia GIP del péptido de glucagón compara tencia de glucagón en el péptido de glucagón es roximadamente 500, 450, 400, 350, 300, 250, 200, , 60, 50, 40, 30, 20, 15, 10, o 5. En algunas m relación de la potencia en el receptor de GIP d potencia en el receptor de glucagón es de apro glucagón que exhiben actividad en los rec ucagón, GIP y GLP-1 ( "triagonistas de glucagón/G tos péptidos de glucagón tienen pérdida la selec ucagón nativo para el receptor de glucagón co s receptores GLP-1 y GIP. En algunas modalidade i péptido de glucagón en el receptor de GIP es roximadamente 50-veces, 40-veces, 30-veces o ferente (más alto o más bajo) de su EC50s res S receptores de glucagón y GLP-1. En algunas ra potencia GIP del péptido de glucagón en roximadamente 500-, 450-, 400-, 350-, 300-, 2 0-, 100-, 75-, 50-, 25-, 20-, 15-, 10-, o 5-vece ás alta o más baja) de sus potencias de glucag algunas modalidades, la relación de la iagonista en el receptor de GIP dividida por l iagonista en el receptor de GLP-1 es la potencia en el receptor de GIP dividida por el receptor de GLP-1 es de aproximadamente 1 o roximadamente 1 (por ejemplo, aproximadamente 0. 0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, dalidades relacionadas, la relación de la iagonista en el receptor de GIP dividida por l iagonista en el receptor de glucagón es roximadamente 100, 75, 60, 50, 40, 30, 20, 15, gunas modalidades, la relación de la EC50 en el ? dividida por la EC50 en el receptor de glucag roximadamente 1 o menor que aproximadamente 1 (p roximadamente 0.01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 067, 0.1, 0.2). En algunas modalidades, la rela tencia GIP del triagonista comparada con la p ucagón del triagonista es menor que aproximada 0, 400, 350, 300, 250, 200, 150, 100, 75, 60, 5 lación de la EC50 en el receptor de GLP-1 divid 50 en el receptor de glucagón es de aproximad nor que aproximadamente 1 (por ejemplo, apro 01, 0.013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0 2). En algunas modalidades, la relación de la po del triagonista comparada con la potencia de g iagonista es menor que aproximadamente 100, 75, , 20, 15, 10, o 5. En algunas modalidades, la potencia en el receptor de GLP-1 dividida por , el receptor de glucagón es de aproximadamente e aproximadamente 1 (por ejemplo, aproximadam 013, 0.0167, 0.02, 0.025, 0.03, 0.05, 0.067, 0.1, Todavía otro aspecto de la invención ptidos de glucagón que exhiben actividad en los P-1 y GIP, pero en los cuales la actividad de reducido o destruido significativamente ("c " e aproximadamente 25-, 20-, 15-, 10-, o 5-vece ás alta o más baja) de su potencia GLP-1. dalidades estos péptidos de glucagón tienen apro % o menor de la actividad del glucagón nat ceptor de glucagón, por ejemplo aproximadament roximadamente 0.1-10%, o mayor que aproximada ro menor que aproximadamente 10%. En algunas m relación de la EC50 del péptido de glucagón en GIP dividida por la EC50 del péptido de gluc ceptor de GLP-1 es de menor que aproximadament , 50, 40, 30, 20, 15, 10, o 5, y no menor que 1. alidades, la relación de la potencia GIP del ucagón comparada con la potencia GLP-1 del ucagón es menor que aproximadamente 100, 75, 6 , 20, 15, 10, o 5· y no menor que 1.

Un aspecto¦ adicional de la invención 5%, o 1% pero menor que aproximadamente 1%, 5%, gunas modalidades estos péptidos de glucagón tam roximadamente 10% o menor de la actividad de G el receptor de GLP-1, por ejemplo aproximadamen roximadamente 0.1- 10%, o mayor que aproximada 5%, o 1% pero menor que aproximadamente 1%, 5%, De acuerdo con algunas modalidades de la análogo de glucagón (SEQ ID NO: 1) que tiene un agonista GIP comprende SEQ ID NO: 1 co dificación de aminoácido en la posición 1 que tividad de agonista GIP, (b) una modifi tabiliza la estructura alfa-hélice de porción minoácidos 12-29) del análogo, y (c) opcionalme or ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, dificaciones de aminoácido adicionales. E dalidades, el análogo exhibe por lo menos apro upo que consiste de: (i) un puente de a lactáma denas laterales, de aminoácidos en las posiciones tre las cadenas laterales de aminoácidos en las y j+3 en donde i es 12, 13, 16, 17,. 20 o 24, y . 17, y (ii) uno, dos, tres o todos los aminoác siciones 16, 20, 21 y 24 del análogo se sustituy inoácido, a aminoácidos sustituido. Tales a ucagón que tienen actividad de agonista GIP s icionalmente en la presente.

En algunas modalidades, la invención pro álogo de glucagón (SEQ ID NO: 1) que tiene a ionista GIP, con las siguientes modificaciones: (a) una modificación de aminoácido en la posi (b) (i) un puente de lactama entre l laterales de aminoácidos en las posicion o entre las cadenas laterales de los ami adicionales, en donde la EC50 del análogo para la act receptor de GIP es de aproximadamente menor.

En modalidades ejemplares, (a) la modificación de aminoácido en la pos una sustitución de His en la posición aminoácido aromático, grande, opcional Phe, Trp, amino-Phe, nitro-Phe, cloro-P Phe, 4-piridil-Ala, metil-Tyr, o 3-amino (b) (i) el puente de lactama está entre los en las posiciones 16 y 20, en donde aminoácidos en las posiciones 16 y 20 s con Glu, y la otra de los aminoácid posiciones 16 y 20 se sustituyen con Lys, aminoácido, , a-disustituido es AIB, (a) una modificación -de aminoácido en la p opcionalmente una sustitución con lie, (b) modificaciones de aminoácido en las ppsi 18, opcionalmente la sustitución, con posición 17 y A en la posición 18, (c) adición de GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) terminal, o cualquier combinación de los En análogo puede alternativamente mprender modificaciones adicionales, que in mitación: (a) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly, N-metil-Ser, AIB, Val, o ácido butírico; (b) Tyr en la posición 10 sustituido con Trp Glu, Phe, o Val; (c) enlace de un grupo acilo a un Lys en (h) Gln en la posición 20 sustituido con Ala, Lys, Citrulina, Arg, Orn, o AIB; (i) Asp en . la posición 21 sustituido con homoglutámico, ácido homocisteico; (j) Val en la posición 23 sustituido con lie; (k) Gln en la posición 24 sustituido con Asn, Thr, Glu, Lys, o AIB; y (1) una sustitución conservativa en cualqui posiciones 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, • 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, y 29, cualquier combinación de las mismas.

En algunas modalidades, cuando el ucagón no se pegila, la EC50 del análogo para la l receptor de GIP es de aproximadamente 4, 2, 1 el análogo tiene por lo menos aproximadamente 1 o 5% de la actividad de GIP nativo en el recep ucagón. En algunas modalidades, el análogo n ene menor que aproximadamente 1% de l act ucagón nativo en el receptor de glucagón. dalidades, en análogo no pegilado tienen roximadamente 10%, 5% o 1% de la actividad; de G el receptor de GLP-1.

En algunas modalidades, el péptido de laza covalentemente a una porción hidrofilica en las posiciones de aminoácidos 16, 17, 20, 21, spués de la posición 29 en un aminoácido adic emplo, posición 30) dentro de una extensión C- el aminoácido C-terminal. En modalidades ejemp sición hidrofilica se enlaza covalentemente a u n, homocisteina, o residuo de acetil-fenil alquiera de estas posiciones. Las porciones h emplares incluyen polietilenglicol (PEG) , por de aproximadamente 10 nM o menor, o el análog menos aproximadamente 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, o tividad de GIP nativo en el receptor de GIP. En lacionadas, la EC50 de un análogo pegilad tivación del receptor de GLP-1 es de aproximada menor o tiene por lo menos aproximadamente 3%, 0.4% o 0.5% de la actividad de GLP-1 na ceptor de GLP-1. En todavía otras modalidades re EC50 de un análogo pegilado para la acti ceptor de glucagon es de aproximadamente 10 nM r lo menos aproximadamente 0.5%, 1%, 1.5% o tividad del glucagon nativo en el receptor de g gunas modalidades, el análogo tiene roximadamente 1% de la actividad del glucagon n ceptor de glucagon. En otras modalidades, el an nor que aproximadamente 10%, 5% o 1% de la a - dalidades , el enlazador es PEG, por ejemplo, u a, PEG de 20 kDa. En algunas modalidades, el e enlace de disulfuro. Por ejemplo, cada monómero ede comprender un residuo de Cys (por ejempl rminal o internamente posicionados) y el átomo d da residuo de Cys participa en la formación del sulfuro. En algunos aspectos de la invención, lo conectan por la via de aminoácidos termi emplo, N-terminal o C-terminal) , por la v inoácidos internos, o por la via de una aminoáci por lo menos un monómero y un aminoácido intern nos otro monómero. Es aspectos específicos, lo se conectan por la vía de aminoácido N-te gunos aspectos, los monómeros del multímer njuntamente en una orientación de "cola a cola" s aminoácidos C-terminales de cada monómero ucagón individualmente o en combinación. dalidades, los péptidos de glucagón son solub ncentración de por lo menos 1 mg/mL en un pH ent tre 6 y 9, o entre 7 y 9 (por ejemplo pH 7), cionalmente por lo menos 95%. del péptido ori emplo 5% o menos del péptidos original se de iza) . después de 24 horas a 25°C.

Se proporcionan composiciones fa tériles que comprenden un portador farmac eptable o diluyente y equipos que compr spositivos. Se proporcionan métodos para nancia de peso o inducir la pérdida de peso, que ministrar un paciente en necesidad del m mposiciones farmacéuticas en una cantidad efe ducir la ganancia de peso o inducir la pérdida oporcionan métodos para tratar diabetes, que La breve descripción anterior no se pr finir cada aspecto de la invención, y se dalidades adicionales en otras secciones, ta scripción detallada. El Documento complete se p r relacionado como una descripción unificada, tender que todas las combinaciones po racterísticas descritas en la presente ntemplar, aun si la combinación de las carácte encuentran con untamente en la misma oración, o cción de este documento.

Por otra parte, la invención incluye c das las modalidades de la invención que son má alcance de cualquier manera que las variacione r los párrafos específicos en la presente. P0 nde ciertos aspectos de la invención se describ nero, se debe entender que cada miembro de un iamantes abiertos) , agonista GIP AIB2 Cys24 GIP K (triángulos verticales abiertos con linea p a hormona de péptido no relacionada (triángulos mbreados) .

La Figura 2 representa una gráfica de el imento (en gramos) por ratones como una fun empo después de la administración del veh riángulos invertidos abiertos), quimera 2 AIB2 K (cuadro cerrado) , antagonista GIP Pro3 Cys24 ) PRG 40K (diamantes abiertos), agonista GIP A1B -42) PEG 40K (triángulos verticales abiertos nteada) , o una hormona de péptido no riángulos invertidos sombreados) .

La Figura 3 representa una gráfica del s niveles de glucosa en la sangre (mg/dL) en ra a 7 después de la administración del vehículo iertos) f quimera 2 ???2· lactama (triángulos ptido triagonista MT-170 ' (cuadros abiertos) , p onistá de GlP/glucagón MT-182 (diamantes cerrado -agonista GLP-1/GIP MT-178 (triángulos sombreado nteada) , o péptido co-agonista de GIP/gluca uadro cerrado) . Observar que el MT-179 pegilado triagonista.

La Figura 5 es una gráfica del % de ca so corporal en ratones como una función de ti spués de la administración del vehículo · solo rechos cerrados) , agonista GLP-1 E 16 en riángulos invertidos cerrados) o 35 nmol/k iertos), péptido triagonista MT-170 en 1 riángulos invertidos abiertos) o 35 nmol/kg rrado) , o péptido co-agonista GLP-1/GIP MT-ol/kg (triángulos invertidos grises) o en quiérela) o en 35 nmol/kg (barra con lineas quierda-derecha ) .

La Figura 7 representa una gráfica de glucosa en la sangre (mg/dL) como una función tes y después de la inyección de glucosa (admi punto de tiempo 0) de los ratones inyectados nto de tiempo -60) con un control de vehículo, péptido agonista GLP-1, un -análogo de glucag tivo, pegilado, que contiene lactama (cíclico) , uri análogo de glucagón GIP activo, pegilado, que ctama (lineal), ("mt-274") a 1, 3, o 10 nmol/kg/ tos de esta Figura excluyen los datos de cuatro e estos ratones exhibieron un comportamiento rdida de peso sustancia .

La Figura 8 representa una gráfica de la sangre (mg/dL) como una función de tiem la inyección con un -control de vehículo, un ptido agonista GLP-1, mt-178, o mt-274 en 1 ol/kg/semana . Los datos de esta Figura excluyen . cuatro ratones, ya que estos ratones exh mportamiento agresivo y pérdida de peso sustanci La Figura 10 representa una gráfica del cambio en el peso corporal de ratones 0, 1, 3, spués de de la inyección con un control de v ntrol de péptido agonista GLP-1, mt-178, o mt-2 10 nmol/kg/semana . Los datos de esta Figura e tos de cuatro ratones, ya que estos ratones ex mportamiento agresivo y pérdida de peso sustanci La Figura 11 representa una gráfica de glucosa en la sangre (mg/dL) de ratones 0 o 7 d la inyección con un control de vehículo, un ptido agonista GLP-1, mt-178, mt-178 (TE) , mt- X " as después de la inyección con un control d4e v ntrol de péptido agonista GLP-1, mt-178, mt-17 4, o mt-274 (TE) en 10 o 35 nmol /kg/semana . "TE" upo PEG unido al Cys en la posición 40.

La Figura 14 representa una gráfica del cambio en el peso corporal de ratones 7 días de yección con un control de vehículo, un control onista GLP-1 , mt-178, mt-178 (TE) , mt-274, o mt- o 35 nmol/kg/semana . "TE" indica un grupo PEG u la posición 40.

La Figura 15 representa una gráfica de glucosa en la sangre (mg/dL) de ratones 0 o 7 d la inyección con un control de vehículo, un ptido agonista GLP-1, mt-178, mt-274, un ilado, no pegilado, lineal ("mt-311") , un pépt ilado graso C14 ("mt-309") , un péptido lineal ac " " yección con un control de vehículo, un control onista GLP-1, mt-178, mt-274, mt-31 1, mt-309, -310 en 10 nmol/kg.

La Figura 18 representa una gráfica del s niveles de glucosa en la sangre (mg/dL) de rat as después de las inyecciones QD durante 7 d ntrol de vehículo, liraglutide (un análogo GLP-. péptido lineal no pegilado, acilado graso C14 péptido lineal no pegilado, acilado graso C16 un péptido lineal no pegilado, acilado graso C18 25 o 125 nmol/kg.

La Figura 19 representa una gráfica del cambio en el peso corporal de ratones 0, 1, 3, spués de la inyección con un control de raglutide, mt-260, mt-261, o mt-262 es 25 o 125 n La Figura 20 representa una gráfica del asa de los . ratones 7 días después de la primer m un control de vehículo, liraglutide (30 nmol -261 (0.3, 1, 3, 10, o 30 nmol/kg/día).

La Figura 23 representa una gráfica de glucosa en la sangre (mg/dL) de ratones 0 y 7 d la primera inyección con un control de raglutide (30 nmol/kg/día), o mt-261 (0.3, 1, 3 ol/kg/día ) .

La Figura 24 representa una gráfica de mbio en el peso corporal {% cambios) como una empo de ratones inyectados con mt-263, Exendí ntrol de vehículo en la dosis (nmol/kg/día) indi La Figura 25 representa una. gráfica de mbio total en el peso corporal (%) (como es m a 7 en comparación con el Día 0) de los ratones n mt-263, Exendina-4, o un control de vehículo e -277, mt-278, o mt-279.

La Figura 28 representa una gráfica de glucosa en la sangre (mg/dL) de ratones 0 y 7 d la primera inyección con un control .de raglutide, mt-277, mt-278, o mt-279.

La Figura 29 representa una gráfica tal en el peso corporal (%) de ratones como e as después de la administración de mt-331, mt ntrol de vehículo. Las dosis (nmol/kg) se indica La Figura 30 representa una gráfica del imento total (g) por ratones como es medido 7 d la administración de mt-331, mt-311, o un hículo. Las dosis (nmol/kg) se indican en ().

La Figura 31 representa una gráfica tal en los niveles de glucosa en la sangre de r medido 7 días después de la administración de vehículo en la dosis indicada (nmol/kg) mostrad La Figura 34 representa una gráfica del S niveles de glucosa en la sangre (mg/dL) de r medido 7 días después de la administración de 3, o un control de vehículo en la dosis indicad strada en ( ) .

La Figura 35 representa una gráfica tal en el' peso corporal (%) de ratones como e as después de la primera administración de mt-2 -279, o un control de vehículo.

La Figura 36 representa una gráfica tal en el peso corporal (%) de ratones como e as después de la primera administración de mt-2 un control de vehículo.

La Figura 37 representa una gráfica de glucosa en la sangre (mg/dL) de ratones como a de administración) de "ratones inyectados con i vehículo o mt-261 como se describe adicionalm esente.

SCRIPCIÓN DETALLADA DEFINICIONES En la descripción y reclamación de la in ará la siguiente terminología de acuerdo finiciones expuestas enseguida.

El término "aproximadamente" como se esente significa mayor o menor que el valor o i lores establecidos por 10 por ciento,- pero no ra designar ningún valor o intervalo de icamente esta definición más amplia. Cada valor valores precedidos por el término "aprox mbién se propone para abarcar la modalidad soluto establecido o intervalo de valores.

S Estados Unidos para el uso en animales, maños.

Como se usa en la presente el té rmacéuticamente aceptable" se refiere' a sales de e retienen la actividad biológica del compuesto los cuales no son biológicamente o de o deseables. Muchos de los compuestos divulga esente son capaces de formar ácido y/o sales bas la presencia de grupos amino y/o carboxilo milares a los mismos.

Las sales de adición bases farmac eptables se pueden preparar de bases ino gánicas. Las sales derivadas de bases inorgánica manera de ejemplo únicamente, sales de sodio tio, amonio, calcio y magnesio. Las sales de ses orgánicas incluyen, pero no se limitan a, iáo maleico, ácido fumárico, ácido tartár trico, ácido benzoico, ácido cinámico, ácido ido metanosulfónico, ácido etanosulfónico, ácido lfónico, ácido salicilico y los similares.

Como se usa en la presente, el térmi cluye profilaxis del desorden o condición es joramiento de los síntomas asociados con un ndición especifica ' y/o prevenir o eliminar lo r ejemplo, como se usa en la presente el térm abetes" se referirá en general a alterar los ucosa en la sangre en la dirección de los nivel pueden incluir incrementar o disminuir los ucosa en la sangre dependiendo de una situación Como se usa en' la presente una cantidad una "cantidad terapéuticamente efectiva" de un ucagón se refiere a una cantidad no toxica. pero 'elido por la reducción en el peso corporal, o ducir un incremento de peso corporal, o nor stribución de grasa corporal. La cantidad que es riará de sujeto a sujeto,, dependiendo de ndición general del individuo, modo de admini S similares. De esta manera, no siempre pecificar una "cantidad efectiva" exacta. Sin e ntidad "efectiva" en cualquier caso individua terminar por una persona de experiencia ordin cnica usando experimentación de rutina.

El término, "parenteral" significa no a nal alimentario si no por otra via tal como tramuscular , intraespinal o intravenosa.

Como se usa en la presente, el término términos similares se relacionan al aislamie lécula o compuesto en una forma que esta sust El término "aislado" se refiere al ferido que se remueve de su medio ambiente ori emplo, el medio ambiente natural si el de. orige r ejemplo, un polinucleótido de origen natural a animal vivo no se aisla, sino el mismo poli parado de alguno o todo los materiales existe stema natural, se aisla.

Como se usa en la presente, el términ arca una secuencia de 3 a más aminoácidos y nor que 50 aminoácidos, en donde los aminoáci igen natural o aminoácidos no de origen iinoácidos no de origen natural se refiere a amin ocurren naturalmente in vivo pero los cuales, n pueden incorporar dentro de las estructuras scritas en la presente- Como se usa en la presente, los " " " stituciones ele aminoácidos, adiciones, supr dificaciones post-traduccionales (por ejemplo, ilación, alquilación, ubiquitinacion, enlace tramolecular tal como formación de puente d Gilación, y los similares) del péptido-, en donde timula la actividad del receptor del glucagón ?, como es medida por una producción de cAMP sayo descrito en el Ejemplo 16.

El término "antagonista de glucagón" se complejo que comprende un péptido de glucagón q actividad del receptor de glucagón, por ejempl dida por una producción de cAMP usando el ensa el Ejemplo 16.

Como se usa en la presente una modifi inoácidos se refiere a una sustitución, adición un aminoácido, e incluye una sustitución con o rrespondiente para un análogo de glucagón en imer aminoácido de SEQ ID NO: 1 ha sido milarmente, una referencia en la presente a "p gnificaría la posición 29 correspondiente para glucagón en la cual un aminoácido se ha adici la N-terminal de SEQ ID NO: 1. Las fuentes com inoácidos atipicos incluyen Sigma-Aldrich (Milw emPep Inc. (Miami, FL) , y Genzyme Phar ambridge, MA) . Los aminoácidos atipicos se pue proveedores comerciales, sintetizados de dificados o de derivatizados químicamente inoácidos.

Como se usa en la presente el término tivo" se refiere a un péptido que consiste de l SEQ ID NO: 1, el término "GIP nativo" se re ptido que consiste de la secuencia de SEQ ID N " - " Como se usa en la presente una "sust inoácidos se refiere al reemplazo de un inoácido por un residuo de aminoácido diferente.

Como se usa en la presente, el término " aminoácido conservativa" se define en la pr tercambios dentro de uno de los siguientes, cinco I. Residuos alifáticos, no polares o polares pequeños: Ala, Ser, Thr, Pro, Gly; II. Residuos negativamente cargados, po amidas y ésteres: Asp, Asn, Glu, Glu, ácido cistei homocisteico; III Residuos positivamente cargados, po His, Arg, Lys; Ornitina (Orn) IV Residuos grandes, alifáticos, no po sente de cualquier caracterización adicional, el opone para incluir etilen glicol con un peso tal promedio seleccionado del intervalo de 50 ltons. "Cadena de polietilenglicol" o "cadena combinación con sufijo numérico para indic lecular promedio aproximado de la misma. Por ej 000 se refiere a la cadena de polietilenglicol q omedio de peso molecular toral de aproximadament Como se usa en la presente el término " rminos similares se refiere a una composición dificado de su estado nativo al enlazar una lietilenglicol al compuesto. Un "péptido d gilado" es un péptido de glucagón que tiene una valentemente enlazada al péptido de glucagón.

Como se usa en la presente una referenci péptido se propone para abarcar péptidos ede suministrar adicionalmente un enlace lábil e las dos entidades se separen entre si. L biles incluyen grupos fotoescindibles, porciones ido, porciones lábiles base y grupos d cindibles.

Como se usa en la presente un "dime mplejo que comprende dos unidades enlazadas cov tre si por la via de un enlazador. El térmi ando se usa ausente de cualquier lenguaje de ca arca tanto homodimeros como heterodimeros . Un mprende dos sub-unidades idénticas, . mientra terodimero comprende dos sub-unidades que difie s dos sub-unidades son sustancialmente similares Como se usa en la presente el término rgado" se refiere a un aminoácido que comprende teral que se carga negativamente (es decir, se manas, asi como también aminoácidos atipicos o n tural.

Como se usa en la presente el término ídico" se refiere a un aminoácido que comprende rción ácida, que incluye, por ejemplo, un ácido grupo ácido sulfónico.

Como se usa en la presente, e electividad" de una molécula par un prime lativo con un segundo receptor se refiere a l lación: la EC50 de la molécula en el segun vidida por la EC50 de la molécula en el prime r ejemplo, una molécula que tiene una EC50 de imer receptor y una EC50 de 100 nM en un segun ene 100 veces de selectividad para el prime lativo con el segundo receptor.

Como se usa en la presente, potencia d lécula en el receptor de GLP-1 dividida por 1 P-1 nativo en el receptor de GLP-1.

Como se usa en la presente, el término " fiere a un hidrocarburo lineal o ramificado que mero indicado de átomos de carbono. Alquilos cluyen metilo, etilo y grupos propilo lineal.

Como se usa en la presente, e eteroalquilo" se refiere a un hidrocarburo mificado que contiene el número indicado de rbono y por lo menos un heteroátomo en la caden la estructura. Heteroátomos adecuados para pr presentes incluyen pero no se limitan a N, S, 0 Como se usa en la presente, e icloalquilo" se refiere a un grupo hidrocarburo ntiene el número indicado de átomos de ca emplo, ciclopropilo, ciclobutilo, cicloh Como se usa en la presente, el término fiere a un grupo aromático monociclico o p eferiblemente un grupo aromático monociclico o r ejemplo fenilo o naftilo, que contiene el núme átomos de carbono. A menos que se indique de o grupo arilo puede estar insustituido o sustitui Como se usa en la presente, e eteroarilo" se refiere a un grupo aromático mo liciclico , que contiene el número indicado de rbono y por lo menos un heteroátomo seleccionad e consiste de oxigeno, nitrógeno y azufre. A m dique de otra manera, un grupo arilo p sustituido o sustituido.

DALIDADES Las modificaciones divulgadas en l rmiten la manipulación del glucagón (SEQ ID N emplo, incremento de la actividad GIP) se pue dividualmente o en combinación. Cualquiera de njuntos de combinaciones que confieren j oradas se pueden aplicar individualmente o en c r ejemplo actividad GIP y/ GLP-1 incrementad mbinar con la vida media incrementada.

En modalidades ejemplares, el péptido ede comprender un total de 1, hasta 2, hasta sta 5, hasta 6, hasta 7, hasta 8, hasta 9, o dificaciones de aminoácido relativos con la s ucagón nativo. En algunas modalidades, estos ucagón retienen por lo menos 22, 23, 24, 25, 26, s aminoácidos de origen natural en las rrespondientes en el glucagón nativo (por ejempl , 1 -5 o 1-3 modificaciones relativas con el igen natural) . En modalidades relacionadas, 1, tas posiciones. En algunas modalidades, 1, dificaciones de aminoácido se llevan a cabo de inoácidos en las posiciones 1-16, y 1, 2 o 3 mod aminoácido se Llevan a cabo dentro de los ami s posiciones 17-26.' difi caciones que afectan la actividad de GIP La actividad mejorada en el receptor oporciona por una modificación de aminoácido en Por ejemplo, His en la posición 1 se sustit inoácido grande, aromático, opcionalmente Tyr, ino-Phe, nitro-Phe, cloro-Phe, sulfo-Phe, 4-py til-Tyr, o 3-amino Tyr. Inesperadamente, la com r en la posición 1 con la estabilización de la ntro de la región que corresponden los aminoá oporcionaron un péptido de glucagón que activa GIP asi como también el receptor de GLP-1 y el emplo, el Met en la posición 27 se sustit inoácido alifático grande, opcionalmente Leu, e sición 28 se sustituye con un aminoácido alifáti cionalmente Ala, y el Thr en la posición.29 s n un aminoácido alifático pequeño, opcionalmen stitución con LAG en las posiciones 27-29 prop tividad GIP incrementada relativa con la se tiva en esas posiciones.

La actividad mejorada en el receptor de proporciona por una modificación de aminoá sición 12. Por ejemplo, la posición 12 se susti inoácido no polar, alifático, grande, opcionalme actividad mejorada en el receptor de GIP se r una modificación de aminoácido en las posici . Por ejemplo, la posición 17 se sustituye con lar, opcionalmente Gln; y la posición 18 se su neralmente una actividad GIP más alta que cu les modificaciones tomadas solas. dificaciones que afectan la actividad de glucago En algunas modalidades, se proporcionan ucagón que tienen potencia mejorada y op lubilidad y estabilidad mejoradas. En una mo tencia del glucagon mejorada se proporcion dificación de aminoácido en la posición 16 d tivo (SEQ ID NO: 1) . A manera de ejemplo no lim tencia mejorada se puede proporcionar al su rina de origen natural en la posición 16 utámico o con otro aminoácido negativamente ene una cadena lateral con una longitud de 4 ternativamente con cualquiera de la glutam moglutámico, o ácido homocisteico . O un aminoác e tiene una cadena lateral que contiene por l drofóbico. Por ejemplo la sustitución en la pos ido glutámico, ornitina, o norleucina reduce stancialmente la actividad del receptor de gluca La actividad mantenida o mejorada en el ucagón se puede lograr al modificar el Gln en la n un análogo de glutamina. Por ejemplo, un ucagón que comprende un análogo de glutamina en puede exhibir aproximadamente 5%, aproximada roximadamente 20%, aproximadamente 50%, o apro % o mayor la actividad del glucagón nativo (SE el receptor de glucagón.. En algunas modalidade glucagón que comprende un análogo de gluta sición 3 puede exhibir de aproximadam roximadamente 50%, aproximadamente 75%, apro 0%, aproximadamente 200% o aproximadamente 500% actividad de un péptido de glucagón correspo rrespondiente que tiene la misma secuencia de rno el péptido que comprende el análogo de cepto para el aminoácido modificado en la posici En algunas modalidades, el análogo de g aminoácido de origen natural o no de origen mprende una cadena lateral de la Estructura I, I O -^R1-CH2-X-"-R2 Estructura I O •|-R1-CH2-"-Y Estructura II O - -R1-CH2-S-CH2-R Estructura III en donde R1 es alquilo C0. 3 o heteroalqu 4 3 4 etildiaminobutanóico, Dab(Ac)); R1 es alquilo C0 es NHR4, y R4 es H (ácido carbamoildiamino p(urea)'); o. R1 es CH2-CH2, X es NH, y cetilornitina, Orn{Ac)). Modalidades ejemp oporciona un aminoácido que comprende una cadena Estructura II donde, R1 es CH2, Y es NHR4, etilglutamina, Q(Me)). En modalidades ejem oporciona un aminoácido que comprende una cadena Estructura III sonde, R1 es C¾ y R4 es H lfóxido, M(0)); En modalidades especificas, el la posición 3 se sustituye con Dab(Ac). Por e onistas de glucagón pueden .comprender la se inoácidos de cualquiera de SEQ ID NOs: 243-248, ' 3-256. dificaciones que afectan la actividad de GLP-1 La actividad mejorada en el receptor d rededor de las posiciones 12-29 con un tabilizante de la alfa-hélice (por ejemplo, un a-sustituido) . Las cadenas laterales de estos pueden enlazar a otro a través de enlace de teracciones iónicas, tal como la formación de l, o mediante enlaces covalentes. En algunas m puente se forma entre los aminoácidos que se es aminoácidos de intervención, es decir, un am posición i" y un aminoácido en la posición nde i es cualquier número entero de 12 a 25 (p , 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 2 dalidades ejemplares, las cadenas laterales de l inoácidos 12 y 16, 13 y 17, 16 y 20, 17 y 21, 2 28 (pares de aminoácidos en los cuales i = 12, ) se enlazan entre si y estabilizan de esta mane lice del glucagon. sición " k" y un aminoácido en la posición "k+7", cualquier número entero de 12 a 22 (por ejemp , 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 o 22). En una moda .

En algunas modalidades, el puente o enla roximadamente 8 (o aproximadamente 7-9) átomos e rticularmente cuando el puente está entre las p i+4. En algunas modalidades, el puente o enla roximadamente 6 (o aproximadamente 5-7) átomos e rticularmente cuando el puente está entre las p j+3.

En algunas modalidades, los tramoleculares se forman al (a) sustituir la igen natural en la posición 16 con ácido glut ro aminoácido negativamente cargado que tiene teral con una longitud de 4 átomos, o alternati roximadamente 4-6) átomos en longitud, por ejemp trulina, arginina u ornitina. Las cadenas la les aminoácidos en las posiciones 16 y 20 puede ente de sal ose pueden enlazar covalentemente.

En una modalidad, los dos aminoácidos tre si para formar un anillo de lactama. El illo de lactama puede variar dependiendo de la s cadenas laterales de aminoácidos, y en una m ctama se forma al enlazar las cadenas later inoácido de lisina a una cadena lateral de ácido orden del enlace de amida en el anillo de lacta vertir (por ejemplo, un anillo de lactama se p tre las cadenas laterales de un Lysl2 y un ternativamente entre un Glu 12 y a Lysl6) .

En algunas modalidades, la estabiliza tructura alfa-hélice en la porción C-terminal La potencia en el receptor de GLP-1 jorar adicionalmente por una sustitución de a ginina receptor nativa en la posición 18.

Cualquiera de las modificaciones teriormente las cuales incrementan la act ceptor de GLP-1 se pueden aplicar individual mbinación. Las combinaciones de las modifica crementan la actividad del receptor de GLP-1 p neralmente una actividad de GLP-1 superior que tales modificaciones tomadas solas. Por- e vención proporciona péptidos de glucagón que dificaciones en la posición 16 en la posición upo de ácido carboxilico C-terminal, opcionalm lace de covalente entre los aminoácidos en las y 20; péptidos de glucagón que comprenden mod la posición 16 y el grupo de ácido carb a supresión del (los) aminoácidos ( s ) C-terminal a la posición 27 o 28 (por ejemplo, supresión del la posició 28, supresión del aminoácido en las y 29) para producir un péptido de 27 o 28 ami ngitud, o (iv) una combinación de los mismos. dificaciones Que Afectan La Actividad En Cada ceptores De Glucagon , GLP-1 Y GIP La actividad mejorada en cada uno del ucagón, receptor de GLP-1 receptor y GIP se prop ) una sustitución de aminoácido de Ser en la n un aminoácido de la Fórmula IV: (CH2)n mprende un grupo amino libre, y (ii) una sus inoácido del Gln en la posición 20 con un alfa fa aminoácido y sustituido, por ejemplo, AIB. dalidades, el aminoácido en la posición 16 es s, u homoLys, y al aminoácido en la posición 20 s modalidades especificas, el aminoácido en la Lys y el aminoácido en la posición 20 es AIB.

La actividad en cada uno del receptor d ceptor de GLP-1, y receptor de glucagón del mprende un aminoácido de la Fórmula IV en la po n alfa aminoácido, alfa aminoácido di-sustit Dsición 20 se puede mejorar adicionalmente al Dngitud del péptido, por ejemplo, por fusión a un ¦tensión C-terminal, por ejemplo de aproximada Droximadamente 9.a 21, aproximadamente 6-18, apro -12, o aproximadamente 10 u 11 aminoácidos en l inoácidos adicionales en la C-terminal de SEQ s 1-11 aminoácidos adicionales pueden ser, por inoácido alifático pequeño, tal como Ala. En es extensión C-te minal puede, por ejemplo, cor cuencia de aminoácidos de GPSSGAPPPSAm, en dond .

.La mejora de la actividad en cada ceptores de glucagón, GLP-1, y GIP de un análog ucagón, con GIP-activo, que incluye un a mprende un aminoácido de la Fórmula IV en la po alfa aminoácido, alfa aminoácido y disusti posición 20, se puede lograr adicionalmente en l Lquilación de un aminoácido localizado dent ^tensión C-terminal o en aminoácidos C-ter jemplo, un aminoácido que se adiciona a la C-ter ^tensión C-terminal) . La acilación o alquilació emplo C10-C22. En ciertas modalidades, el Lys terminal a una extensión C-terminal que consist : 95, tal como el Lys, Dab, Orn, u homoLys se posición 40 del análogo. Opcionalmente, los rminalmente extendidos también se pegilan, por alquiera de las posiciones descritas en la pr emplo, posición 24).

La mejora de la actividad en cada ceptores de glucagón, GLP-1, y GIP de un análog ucagón, con GlP-activo, se puede lograr por diante la acilación o alquilación de un aminoá a de un espaciador (por ejemplo, un aminoácido, ipéptido, espaciador bifuncional hidrofilico, funcional hidrofóbico) . En algunas modalidades, sado en glucagón, con GlP-activo comprende un gr quilo por la via de un espaciador, el espaciador paciador se une al aminoácido en la posición n SEQ ID NO: 1. En ciertas modalidades, el espa 10 átomos en longitud. En aspectos específicos, tal del espaciador y el grupo acilo o alq roximadamente 14 a aproximadamente 28 átomos e r ejemplo, el espaciador puede ser un amino cluye, pero no se limita a, cualquiera d scritos en la presente. También, por ejemplo, el ede ser un dipéptido o tripéptido que comprende scritos en la presente. El espaciador e pecífieos es uno de los siguientes dipéptido o YGlu-yGlu. Los espaciadores iicionales para propósitos de incrementar la a O o más de los receptores de glucagón, GLP-1, escriben adicionalmente en la presente. edificaciones que mejoran la resistencia a DPP-IV ido imidazol acético, o alfa, ácido alfa-dimet ético (DMIA) .

Se observó que las modificaciones en la or ejemplo AIB en la posición 2) y en algunos dificaciones en la posición 1 (por ejemplo, ' sición 1) puede reducir la actividad del glucag ces significativamente; sorprendentemente, est actividad de glucagón se puede restaurar al est tructura alfa-hélice en la porción C-terminal d lrededor de los aminoácidos 12-29), por ejempl la formación de un enlace covalente entre terales de dos aminoácidos, como se descr resente. En algunas modalidades, el enlace cov itre los aminoácidos en las posiciones "i" y " ^siciones "j" y "j+3", por ejemplo, entre las po 16, 16 y 20, 20 y 24, 24 y 28, o 17 y 20. Las ataduras de a, ?-diaminoalcano, la formación de omos de metal, y otros medios de ciclización de dificaciones que reducen la degradación En modalidades ejemplares todavía a alquiera de los péptidos de glucagón se puede icionalmente para mejorar la estabilidad al m inoácido en la posición 15 y/o 16 de SEQ ID ducir la degradación del péptido a través pecialmente en soluciones amortiguadoras calinas. Estas modificaciones reducen la es lace de péptido Aspl5-Serl6. En modalidades eje dificación de aminoácido en la posición 15 es un sustitución de Asp con ácido glutámi moglutámico, ácido cisteico o ácido homocisteic dalidades ejemplares, la modificación de amino sición 16 es una supresión o sustitución de Se ptido. En algunas modalidades, en la posic stituye con leucina, isoleucina o norleucina. dalidades especificas, Met en la posición 27 s n leucina o norleucina.

En algunas modalidades, el Gln en la o 24 se modifica, por ejemplo mediante la stitución . Tales modificaciones pueden r gradación que ocurre a través de la desamidación gunas modalidades, el Gln en la posición 20 astituye con Ala o AIB. En algunas modalidades e sición 20 y/o 24 se sustituye con Lys, Ar Ltrulina .

En algunas modalidades, el Asp en la pos Edifica, por ejemplo mediante ,1a supresión o s iles modificaciones pueden reducir la degradación través de la deshidratación de Asp para nsiguiente, los solicitantes anticipan que uno o inoácidos localizados en las posiciones 2, 5, , 14, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28 o 29 stituir con un aminoácido diferente de aquel pre ptido de glucagón nativo, y aún retienen acti ceptor de glucagón.

En algunas modalidades, la posición 18 s n un aminoácido seleccionado del grupo que consi r, o Thr. En algunas modalidades el aminoá sición 20 se sustituye con Ser, Thr, Lys, trulina o AIB. En algunas modalidades, la posi stituye con Glu, ácido homoglutámico o ácido ho algunas modalidades, el péptido de glucagón co modificaciones de aminoácido seleccionada siciones 16, 17, 18, 20, 21, 23, 24, 27, 28 dalidades ejemplares, las modificaciones son icionan a la carboxi terminal del péptido de g inoácido se selecciona típicamente de uno inoácidos comunes, y en algunas modalidades el ene un grupo amida en lugar del ácido carbo inoácido nativo. En modalidades ejemplares el icionado se selecciona del grupo que consist utámico y ácido aspártico y glicina.

Otras modificaciones que no destruyen cluyen W10 o R20.

En algunas modalidades, los péptidos vulgados en la presente se modifican me uncamiento de la C-terminal por uno o más r inoácido que retienen todavía la actividad tencia en los receptores de glucagón, GLP-1 y te aspecto, el aminoácido en la posición 29 y/o primir. rededor de las posiciones 12-29 con un tabilizante de alfa-hélice (por ejemplo, un ami sustituido) .

En algunas modalidades, un puente intram rma entres dos cadenas laterales de aminoá tabilizar la estructura tridimensional de rboxi terminal (por ejemplo, aminoácidos 12-29) glucagón. Las dos cadenas laterales de ami eden enlazar entre si a través de los enlaces no r ejemplo, enlace de hidrógeno, interacciones i rno la formación de puentes de sal, o median valentes. Cuando las dos cadenas laterales de enlazan entre si a través de uno o más enlaces péptido se puede considerar en la presente por puente intramolecular covalente. Cuando las terales de aminoácidos se enlazan entre si a tr rticularmente, las cadenas laterales de los inoácidos 12 ¦ y 16, 16 y 20, 20 y 24 o 24 y 2 inoácidos en los cuales i = 12, 16, 20, o 24) tre si y estabilizan de esta manera la alfa ucagón. Alternativamente, i puede ser 17.

En algunas modalidades especificas, en inoácidos en las posiciones i e i+4 se unen po tramolecular, el tamaño del enlazadores de apro átomos, o aproximadamente 7-9 átomos .

En otras modalidades, el puente intram rma entre los aminoácidos que son dos parados, por. ejemplo, aminoácidos en la posicion donde j es cualquier número entero ,entre 12 emplo, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, , y 26) . En algunas modalidades especificas, j e En algunas modalidades especificas, en , o 17. En una modalidad ejemplar, k es 17.

Ejemplos de pareamientos de aminoácid paces de enlazarse covalentemente para formar u lace de seis átomos incluyen Orn y Asp, Glu y un la Fórmula I, en donde n es 2, y ácido homoglu inoácido de la Fórmula I, ' en donde n es 1, e rmula I es: H en donde n = 1 a 4 [Fórmula I] Ejemplos de emparejamientos de aminoáci paces de enlazarse covalentemente para formar u lace de siete átomos incluyen Orn-Glu (anillo d - - icionalmente con grupos químicos adicionales, ando la estructura tridimensional del alfa-hé terrumpa. Una persona de experiencia ordina cnica puede idear pareamientos alternativos o inoácidos alternativos, que incluyen derivados q dificados, que crearían una estructura estábi maño similar y efecto deseado. Por ejemplo, un sulfuro de homocisteína-homocisteina es de 6 ngitud y se puede modificar adicionalm oporcionar el efecto deseado. Aún sin el enlace s pareamientos de aminoácidos descritos ante reamientos similares que ' una persona de dinaria en la técnica puede idear tamb oporcionar estabilidad adicionada a la alfa-héli enlace no covalentes, por ejemplo, a tra rmación de fuentes de sal o interacciones de u en la posición 16; Glu en la posición 16 con sición 20; Lys en la posición 16 con Glu en la p u en la posición 20 con Lys en la posición 24; sición 20 con Glu en la posición. 24; Glu en la n Lys en la posición 28; Lys en la posición 24 posición 28. Alternativamente, el orden del ida en el anillo de lactama es puede revertir (p anillo de lactama se puede formar entre 1 terales de un Lys 12 y un Glu 16 o alternativa Glu.12 y un Lys 16) .

Los puentes intramoleculares diferentes lactama se pueden usar para estabilizar la alf s péptidos análogos de glucagón. En una mod ente intramolecular es un puente hidrofobico. En puente intramolecular está opcionalmente entre terales de dos aminoácidos que son parte d terales de olefina de longitud variante y confi sea la estereoquímica R o S en las posiciones 7. Por ejemplo, el lado olefínico puede compren donde n es cualquier número entero entre 1 a dalidad, n es 3 para una longitud de retícul omos. Métodos adecuados para formar tale tramoleculares se describen en la técnica, emplo, Schafmeister y colaboradores, J. Am. Chem 91-5892 (2000) y Walensky y colaboradores, S 66-1470 (2004) . Alternativamente, el péptido ede comprender residuos de O-alil Ser localizada eltas helicoidales adyacentes, la cuales s njuntamente por la vía de la metátesis de cierr talizado con rutenio. Tales procedimientos de r describen en, por ejemplo, Blackwell y col gew, Chem., Int. Ed. 37: 3281- 3284 (1998). d. Chem. 40: 2241-2251 (1997); Fukase y col ll. Chem. Soc. Jpn. 65: 2227-2240 (1992); laboradores, J. Org. Chem. 36: 73-80 (1971); ao, Puré Appl . Chem. 68: 1303-1308 (1996); odman, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 1599-1600 (19 En algunas modalidades, las ataduras aminoalcano , por ejemplo, 1 , 4 -diaminopropan aminopentano) entre dos residuos Glu en las pos 7 se usan para estabilizar la alfa-hélice del ucagón. Tales ataduras conducen a la formación d 9 átomos o más en longitud, dependiendo de la atadura de diaminoalcano . Métodos adecuados pa ptidos reticulados con tales ataduras se descr cnica. Ver, por ejemplo, Phelan y colaborador em. Soc. 119: 455-460 (1997).

En todavía otra modalidad de la inv 991) y Rudinger y Jost, Experientia 20: 570-571 · En todavía otra modalidad, la alfa-ptido de glucagón se estabiliza por la vía del omo de metal por dos residuos His o un par sicionado en i e i+4. El átomo de metal pued emplo, Ru(III), Cu(II), Zn(II), o Cd(II). Tales tabilización del alfa-hélice basada en el enla conocen en la técnica. Ver, por ejemplo, Andre trahedron 55: 11711-11743 (1999); Ghadiri y col Am. Chem. Soc. 112: 1630-1632 (1990); y laboradores, J. Am. Chem. Soc. 119: 9063-9064 (1 La alfa-hélice del péptido de glucagó tabilizar alternativamente a través de otros clización de péptidos, los medios que se r vies, J. Péptido. Sci. 9: 471-501 (2003). La alf ede estabilizar por la vía de la formación de u tanodioico) , etc., puede introducir un enlace upos funcionales de una cadena lateral de amino rno un grupo amino, hidroxilo, tiol libre y co l mismo.

De acuerdo con una modalidad, la alfa ptido de glucagón se estabiliza a trav corporación de aminoácidos hidrofobicos en las p i+4. Por ejemplo, i puede ser Tyr e i+4 puede l o Leu; i puede ser Phe e i+4 puede ser Cys o M r Cys e i+4 puede ser Met; o i puede ser Phe r lie. Se debe entender que, para propósi esente, los pareamientos de aminoácidos ant eden revertir, tal que el aminoácido indic sición i se podría localizar alternativament entras que el aminoácido i+4 puede ser local sición i. sustituido con el mismo grupo o un grupo leccionado de metilo, etilo, propilo, y n-butil clooctano o cicloheptano (por ejemplo, rtinociclooctano-l-carboxílico) . En algunas modali s, tres, cuatro o más de las posiciones 16, 17, , 24 o 29 del péptido de glucagón se sustitu inoácido , a-disustituido. En una modalidad o, dos, tres o todas las posiciones 16, 20, 2 stituyen con un. aminoácido , a-disustituido, p B. Por ejemplo, el péptido de glucagón puede com stitución de la posición 16 con AIB en ause ente intramolecular, por ejemplo, un puente int covalente (por ejemplo, un puente de sal) o tramolecular covalente (por ejemplo, una lact ptidos que carecen de un puente intramol ntaj osamente fáciles de preparar. ilo o alquilo no es nativo al aminoácido en la p les péptidos de glucagón acilados o alquilados un puente intramolecular exhiben actividad mejo ceptores GLP-1 y de glucagón como es compara ptidos contrapartes no acilados. La mejora adic tividad de los receptores GLP-1 y de glucagó grar por los péptido de glucagón acilados que ca ente intramolecular al incorpora un espaciado upo acilo o alquilo y la cadena lateral del am s posiciones 10 o 40 del péptido. La a quilación, , con o sin espaciadores de incorp scriben adicionalmente en la presente.

En modalidades especificas, el péptido ilado o alquilado, o análogo del mismo, compr a modificación que reduce selectivamente la ac ceptor de GLP-1. Por ejemplo, el péptido d dalidades, la posición 20 se sustituye con un am disustituido, por ejemplo, AIB. En ciertas moda sición 20 se sustituye con un aminoácido , a-di r ejemplo, AIB, y la posición position 16 se su aminoácido de la Fórmula IV [Fórmula IV] donde n es 1 a 16, o l a 10, o 1 a 7, o 1 a 6, o 3 o 4 o 5, cada uno de Ri y R2 se dependientemente del grupo que consiste de H, , (alquilo Cj-CielOH, (alquilo Ci-Ci8)NH2f (alquil lquilo C0-C4) (C3-C ) cicloalquilo, (alquilo terociclico) , (alquilo C0-C4) (arilo C6-Ci0) R7, y ( lace de porciones hidrofilicas En otra modalidad la solubilidad de los ucagón divulgados en la presente se mejoran po válente de una porción hidrofilica al pé rciones hidrofilicas se pueden unir a los ucagón bajo cualquiera de las condiciones adecú ra hacer reaccionar una proteina con una m limero activada. Cualquier medio conocido en la ede usar, incluyendo por la via de la quilación reductiva, adición de Michael, alquila ros métodos de conjugación/ligación quimios avés de ' un grupo reactivo de la porción PEG (p grupo aldehido, amino, áster, tiol, a-h leimido o hidrazino) a un grupo reactivo sobre e jetivo (por ejemplo, un grupo aldehido, amino, é haloacetilo, maleimido o hidrazino) . Los laboradores, Adv. Drug. Delivery Rev. 54: 477-berts y colaboradores, Adv. Drug Delivery Rev. 002) ; y Zalipsky y colaboradores, Adv. Drug De : 157-182 (1995) .

En un aspecto específico de la invención aminoácido en el péptido de glucagón que tiene difica con una porción hidrofilica tal como PEG. dalidades, el tiol se modifica con PEG ac leimida en una reacción de adición de Michael sultado un péptido PEGilado que comprende el oéter mostrado a continuación: En algunas modalidades, el tiol se modif tivado por haloacetilo en una reacción de · lioxialquilenos, propionaldehído de poliet polimeros de etilenglicol/propilenglicol, lietilenglicol, mono- (C1-C10 ) alcoxi- o lietilenglicol, carboximetilcelulosa, poliacetal livinilico (PVA) , polivinilpirrolidona , poli-1,3 li-1, 3, ß-trioxano, copolimero de etileno/anhidri li (. beta . -aminoácidos ) (ya sea homopolimeros o eatorios) , poli (n-vinilpirrolidona) poliet mopolimeros de propilenglicol (PPG) y otros lialquileno, copolimeros de óxido de lipropileno/óxido de etileno, ácidos colónico limeros de polisacáridos, ficol o dextrano y mez smos .

La porción hidrofilica, por ejemplo, lietilenglicol de acuerdo con algunas modalidad so molecular seleccionado del intervalo de apro ,000 a aproximadamente 40,000 Daltons.

En una modalidad los dextranos se us rción hidrofilica. Los dextranos son pol lisacáridos de subunidades de glucosa, edominantemente por los enlaces 1-6. El d sponible en muchos intervalos de peso mole emplo, aproximadamente 1 kD a aproximadamente 1 roximadamente 5, 10, 15 o 20 kD a aproximadame , 50, 60, 70, 80 o 90 kD.

Se contemplan polímeros lineales o ramif eparaciones resultantes de los conjugados se spersar o polidispersar esencialmente, y pu roximadamente 0.5, 0.7, 1, 1.2, 1.5 o 2 de p límero por péptido.

En una modalidad la porción hidrofil dena de polietilenglicol (PEG) , enlazada opció sustituye con Lys, Cys, Orn, homocisteina , o etil-fenilalanina . En otras modalidades, un dificado que comprende un grupo hidrofilico se ptido en la C-terminal. ras modificaciones que mejoran la solubilidad En otra modalidad la solubilidad de cu s péptidos de glucagón se puede mejora stituciones y/o adiciones de aminoácidos que in inoácido cargado dentro de la porción C-te ptido preferiblemente en la posición C-term sición 27 de SEQ ID NO: 1. Opcionalmente , uno, inoácidos cargados se pueden introducir den rción C-terminal, preferiblemente C-terminal a . En algunas modalidades el (los) aminoácido { s ) s posiciones 28 y/o 29 se sustituyen con inoácidos cargados, y/o en una modalidad adici -njugados y fusiones La presente descripción también aba njugados en los cuales los péptidos de gluca vención se enlazan, opcionalmente por la vía valente y opcionalmente por la via de un enlaza rción de conjugado. El enlace se puede logra laces químicos covalentes, fuerzas físicas teracciones electrostáticas, de hidrógeno, iónic r Waals, o hidrofóbicas o hidrofílicas . .Se pued riedad de sistemas de acoplamiento no coval cluyen biotina-avidina, ligando/receptor, enzim ido nucleico/proteína de enlace de ácido pido/proteína de enlace de lípido, socios de hesión celular; o cualquiera de los socios d agmentos de los mismos que tienen afinidad entre El péptido se puede enlazar a las po lfosuccinimida maleimidobenzólico (conjugación a s residuos de cisteina) , N-hidroxisuccinimida (a s residuos de lisina) , glutaraldehído, anhídrido otros agentes conocidos en la técnica. Altern s porciones de conjugado se pueden enlazar directamente a través de los portadores interm ino portadores de polisacárido o polipéptido. E rtadores de polisacáridos incluyen aminodextrano portadores de polipéptido adecuados incluyen ido poliglutámico, ácido poliaspártico, co-polím smos, y polímeros mezclados de estos aminoácid r ejemplos, serinas, para conferir propi ubilidad deseadas sobre el portador cargado resu Los residuos de cisteinilo se hacen rea múnmente con -haloacetatos (y aminas corresp l como ácido cloroacético, cloroacetamida te - agente es relativamente específico para teral de histidilo. El bromuro de para-br mbién es útil; la reacción se realiza preferi codilato de sodio 0.1 M en pH 6.0.

Los residuos de lisinilo y amino-termin accionar con anhídridos de ácido succínic rboxílico. La derivatización con esos agentes ecto de revertir en la carga de los residuos d ros reactivos adecuados para derivatizar los r ntienen alfa-amino incluyen imidoésteres colinimidato de metilo, fosfato de piridoxal, oroborohidruro, ácido trinitrobencensulfó tilisourea, 2, 4-pentanodiona, y una reacción cat ansaminasa con glioxilato.

Los residuos de arginilo se modifican acción con uno o varios reactivos convenciona - - iquetas espectrales dentro de los residuos d diante la reacción con compuestos de diazonio a tranitrometano . Más comúnmente, N-acetilim tranitrometano se usan para formar la especie d rosilo y derivados de 3-nitro, respectivamente.

Los grupos laterales de carboxilo (a utamilo) se modifican selectivamente por la re rbodiimidas (R-N . dbd . C . dbd . N-R' ) , donde R y R' quilo diferentes, tal como l-ciclohexil-3- (2-mo il ) carbodiimida o l-etil-3- ( -azonia-4 , 4-dim rbodiimida. Adicionalmente, los residuos de a utamilo se convierten a residuos de aspar utaminilo mediante la reacción con iones de amo dificaciones incluyen hidroxilación de la prolin sforilación de grupos hidroxilo de residuos d eonilo, metilación de los grupos alfa-amino de 1 upos carboxilo libres, (c)¦ grupos sulfhidrilo l mo aquellos de cisteína, (d) grupos hidroxilo 1 mo aquellos de serina, treonina, o hidroxipr siduos aromáticos tales como aquellos de t iptófano, o (f) el grupo amida de glutamina. Es describen en el documento WO87/05330 publicad ptiembre de 1987, y en Aplin y Wriston, CRC ochem., pp. 259-306 (1981).

Porciones de conjugado ejemplar que lazar a cualquiera de los péptidos de glucagon d presente incluyen pero no se limitan a terólogo o polipéptido (que incluye por ej oteina plasmática), un agente objetivo, una inmu porción de la misma (por ejemplo región variab gión Fe) , una etiqueta de diagnóstico tal dioisótopo, etiqueta de fluoróforo o enzi átomos de largo. En algunas modalidades, los dena son todos los átomos de carbono. dalidades, los átomos de cadena en la cadena pr lazador se seleccionan del grupo que consiste de Los átomos de cadena y los enlazadores leccionar de acuerdo con su solubilidad idrofilicidad) para proporcionar un conjugado algunas modalidades, el enlazador proporcion ncional que se somete a la escisión por una en talizador o condiciones hidroliticas encontra jido objetivo u órgano o célula. En algunas moda ngitud del enlazador es suficientemente larga p potencial para el impedimento estérico. Si el e enlace covalente o un enlace de peptidilo y e un polipéptido, el conjugado completo pued oteina de fusión. Tales enlazadores de peptidilo emplo, fusionados a una inmunoglobulina o por sma (por ejemplo región variable, CDR, o región nocidos de inmunoglobulinas (Ig) incluyen IgG, o IgM. La región Fe es una región C-termi dena pesada Ig la cual es responsable para el e ceptores Fe que Llevan a cabo actividades cidado (lo cual da por resultado vida media p totoxicidad mediada por células dependientes de DCC) , y citotoxicidad dependiente de complemento Por ejemplo, de acuerdo con algunas defi gión Fe de cadena pesada IgG humana se estira C-terminal de la cadena pesada. La "región tiende generalmente de Glu216 a Pro230 de la egiones bisagra de otros isotipos IgG se pueden secuencio IgGl al alinear las cisteinas impli lace de cisteína) . La región Fe de un IgG i dalidades relacionadas, la región Fe puede compr s regiones constantes nativas o modificadas de sada de inmunoglobulina, diferente a CH1, por ej giones CH2 y CH3 de las regiones IgG e IgA, o C E.

Las porciones de conjugado adecuada rciones de la secuencia de inmunoglobulinas que tio de enlace FcRn. El FcRn, un receptor de re responsable para reciclar inmunoglobulinas y re circulación en la sangre. La región de la por G que se enlaza al receptor FcRn se ha descrito cristalografía de rayos X (Burmeister y co 94, Nature 372:379). El área de contacto princi n el FcRn está cerca de la unión de los dominios S contactos Fc-FcRn todos están dentro de una ca individual. Los sitios de contacto principale /G) bucle (Sondermann y colaboradores, Nature 40 00) . La región bisagra inferior del IgE tam plicado en el enlace FcRI (Henry y col ochemistry 36, 15568-15578, 1997). Los residuos el enlace del receptor IgA se describen p laboradores, (J Immunol. 175:66594-701, 2005). L aminoácido implicados en el enlace del recep scriben por Sayers y colaboradores (J B 9(34) :35320-5, 2004) .

Las modificaciones de aminoácido se pue región Fe de una inmunoglobulina. Tales r riantes comprenden por lo menos una modif inoácido en el dominio CH3 de la región Fe (re 7) y/o por lo menos una modificación de aminoá minio CH2 de la región Fe (residuos 231 taciones creídas para impartir una afinidad i mbién el enlace reducido a FcyRs (Routledge y co 95, Transplantation 60:847; Friend y colaborad ansplantation 68: 1632; Shields y colaboradore ol. Chem. 276:6591). Se han hecho modific inoácido en las posiciones 233-236 del IgGl que lace a FcyRs (Ward y Ghetie 1995, Therapeutic 77 y Armour y colaboradores 1999, Eur. J :2613). Algunas sustituciones de aminoácidos ej scriben en las patentes norteamericanas 7, 381, 408, cada una incorporada a manera de refer talidad.

La presente descripción también abarca sión del glucagón o proteínas en donde un segú ha fusionado a una terminal, por ejemplo, rminal del péptido de glucagón. En algunas mod gundo péptido adicionado a la carboxi terminal tensiones de C-terminal mejoran la solubilidad eden mejorar la actividad GIP o GLP-1. dalidades en donde ^el péptido de glucagon compr a extensión de carboxi terminal, el aminoáci rminal de la extensión termina en un grupo ami upo éster antes que un ácido carboxilico.

En algunas modalidades, por ejemplo ptidos de glucagon que comprenden la extensión treonina en la posición 29 del péptido de gluc reemplaza con una glicina. Por ejemplo, un ucagón que tiene una sustitución de glicina pa ra treonina en la posición 29 y que comprende l terminal de GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) es cuatr tente en el receptor de GLP-1 como el gluca dificado para comprender la misma extensión ta sustitución T29G puede ser usar en conjunció upo que consiste de ácido glutámico, ácido, a lecciona del grupo que consiste de ácido r pártico y glicina.

La presente descripción también abarca los polipéptidos de glucagón modificados divul esente. Dos o más péptidos de glucagón modi eden enlazar conjuntamente usando agente tándares y procedimientos conocidos por aquell pertas en la técnica. Por ejemplo, los dimeros rmar entre dos péptidos de glucagón modificado i uso de reticuladores de tiol bifunc ticuladores de amina bifuncionales, particular s péptidos de glucagón que se han sustituido co sina, ornitina, homocisteina o residuos d nilalanina. ilación y alquilación sistencia a las proteasas tal como DPP-IV y/o jorada. La actividad de los receptores de glucag y/o GIP del péptido de glucagón se puede mante la acilación. En algunas modalidades, la poten ptidos de glucagón acilados es comparable a la aciladas de los péptidos de glucagón. En ternativas , la potencia de los péptidos d ilados se incrementa como es comparado con a rsión no acilada de los péptidos de glucagón.

En algunas modalidades, la invención pro ptido de glucagón modificado para comprender un grupo alquilo enlazado covalentemente al aminoá sición 10 del péptido de glucagón. El péptido ede comprender además un espaciador entre el am posición 10 del péptido de glucagón y el gru upo alquilo. En algunas modalidades, el grupo a dalidac.es , . el espaciador se selecciona del nsiste de: Trp, Glu, Asp, Cys y un espaciados qu (CH2CH20) n {CH2)mCOOH, en donde m es cualquier n 1 a 6 y n es cualquier número entero de 2 a ptidos de glucagón acilados o alquilados tamb mprender adicionalmente una porción h cionalmente un polietilenglicol . Cualquiera de l glucagón anteriores puede comprender dos grup s grupos alquilo, o una combinación de los mismo La acilación se puede llevar a cabo e sición dentro del péptido de glucagón, q alquiera de las posiciones 1-29, una posición de tensión C-terminal, o el aminoácido N- o C-termi ndición de que la actividad GIP (y opcion tividad de GLP-1 y/o de glucagón) se reteng jora. La acilación puede ocurrir, por ejemplo, e posiciona entre el aminoácido del péptido de gl upo acilo. Los péptidos de glucagón se pueden a sma posición de aminoácidos donde una porción enlaza, o en una posición de aminoácidos emplos no limitantes incluyen la acilación en o posición 40 y la pegilación en una o más po porción C-terminal del péptido de glucagón, p sición 24, 28 o 29, dentro de una extensión C- la C-terminal (por ejemplo, a través de la ad s C-terminal) .¦ En algunas modalidades, el péptido de difica para comprender una extensión de aproxima roximadamente 21 aminoácidos C-terminal al ucagón de SEQ ID NO: 1 o un análogo del mism nos uno de los aminoácidos de la extensión se quila. Por ejemplo, el péptido de glucagón modif tensión C-terminal puede ser, por ejemplo, cua S aminoácidos en la posición 28, 29, 30, 31, , 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47 del péptido de glucagón C-terminalmente ext tensión C-terminal en algunas modalidades co cuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 95 o 96. dalidades, el péptido de glucagón comprende un terminal que comprende la secuencia de aminoáci NO: 95 y 1 a 11 aminoácidos adicionales en la SEQ ID NO: 95, el (los) aminoácido ( s ) adicion /son acilan o se alquilan, como se describe en l modalidades especificas, el aminoácido acilado un residuo Dab, Orn, Lys, u homoLys y se loca sición 40 del péptido de glucagón C-terminalment análogo del mismo.

De acuerdo con una modalidad, el tiol de una cadena lateral de un aminoácido del ucagón. En algunas modalidades, el péptido de ila directamente a través de la amina de cade droxilo o tiol de un aminoácido. En algunas moda ilación está en la posición 10, 20, 24, 29, o pecto, el péptido de glucagón acilado puede co cuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:l, o una s inoácidos modificada de la misma que comprende u s modificaciones de aminoácido descritas en l 'n por lo menos uno de los aminoácidos en las pos , 24, 29, y 40 modificadas a cualquier amin mprende una amina de cadena lateral, hidroxilo gunas modalidades especificas de la invención, l recta del péptido de glucagón ocurre a través cadena lateral, hidroxilo o tiol del aminoá sición 10 o 40, Fórmula I, es el aminoácido en donde n es 4 (Ly rn) .

En otras modalidades, el aminoácido qu hidroxilo de cadena lateral es un aminoácido de : H en donde n = 1 a 4 [Fórmula II] En algunas modalidades ejemplares, el am Fórmula II es el aminoácido en donde n es 1 davia otras modalidades, el aminoácido que co dena lateral de tiol es un aminoácido de la Fórm H H2N C COOH inoácido disustituido que comprende la misma es Fórmula I, Fórmula II, o Fórmula III, exce drógeno enlazado al alfa carbono del aminoác rmula I, Fórmula II, o Fórmula III se reempla gunda cadena lateral.

En una modalidad el péptido de glucag mprende un espaciador entre el péptido y el grup gunas modalidades, el péptido de glucagón valentemente al espaciador, el cual valentemente al grupo acilo.

El aminoácido el cual el espaciado se un alquier aminoácido (por ejemplo, un aminoácido a dividual o doble) que comprende una porción la c enlace al espaciador. Por ejemplo, un amin mprende una cadena lateral NH2, -OH, o -COOH (p s, Orn, Ser, Asp, o Glu) es adecuado. En este En algunas modalidades, el espaciad inoácido que comprende una amina de caden droxilo, o tiol, o un dipéptido o tripéptido qu aminoácido que comprende una amina de caden droxilo, o tiol.

Cuando ocurre la acilación a través d ina de un espaciador la acilación puede ocurrí l alfa-amina del aminoácido o una amina de cade el caso en la cual el alfa-amina se asila, el paciador puede ser cualquier aminoácido. Por inoácido espaciador puede ser un aminoácido h r ejemplo, Gly, Ala, Val, Leu, lie, Trp, Met, Ído ß-amino hexanóico, ácido 5-amino valérico, iño heptanóico y ácido 8-amino optanóico. Altern aminoácido espaciador puede ser un residuo emplo, Asp y Glu.

Cuando ocurre la acilación a través d droxilo de un espaciador, el aminoácido o u inoácidos del dipéptido o tripéptido pued iinoácido de la Fórmula II. En una modalida pecifica, el aminoácido es Ser.

Cuando ocurre la acilación a través d ol de un espaciador, el aminoácido o uno de los l dipéptido o tripéptido puede ser un aminoá rmula III. En. una modalidad ejemplar espe inoácido es Cys .

En algunas modalidades, " el espaciad paciador bifuncional hidrofilico. En ciertas m espaciador bifuncional hidrofilico comprende upos reactivos, por ejemplo, un grupo amina, ol y carboxilo o cualquier combinación de los ertas modalidades, el espaciador bifuncional r ejemplo, ácido 8-amino-3 , 6-dioxaoctanoico, mercialmente disponible de Peptides Internati ouisville, KY) .

En algunas modalidades, el espaciad paciador bifuncional hidrofóbico. Los e funcionales hidrofóbicos son conocidos en la té r ejemplo, Bioconjugate Techniques, G. T. cademic Press, San Diego, CA, 1996) , la cual se ñera de referencia en su totalidad. En ciertas m espaciador bifuncional hidrofóbico comprende upos reactivos, por ejemplo, un grupo amina, LOI y carboxilo o cualquier combinación de los Lertas modalidades, el espaciador bifuncional emprende un grupo hidroxilo un carboxilato. )dalidades, el espaciador bifuncional hidrofóbic i grupo amina y un carboxilato. En otras moda rboxilato. En algunas modalidades , el funcional es un ácido dicarboxilico que cor tileno no ramificado de 1-7 átomos de carbono upos carboxilato.

El espaciador (por ejemplo, aminoácido, ipéptido, espaciador hidrofilico bifuncional o funcional) en modalidades especificas es 3 a 10 emplo, 6 a 10 átomos, (por ejemplo, 6, 7, 8 omos) en longitud. En modalidades más espec paciador es aproximadamente 3 a 10 átomos (por e átomos) en longitud y el grupo acilo es un aso de C 12 a C 18, por ejemplo, grupo acilo gr upo acilo graso de C16, tal que la longitud del l grupo acilo es de 14 a 28 átomos, po roximadamente 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, , 26, 27, o 28 átomos. En algunas modalidades, inooctanóico) . Alternativamente, el espaciador p paciador dipéptido o tripéptido que tiene incipal de péptido que es 3 a 10 átomos (por ej átomos) en longitud. Cada aminoácido del es péptido o tripéptido puede ser el mismo como l otro(s) aminoácido (s) del dipéptido o tripé ede seleccionar independientemente del grupo q : aminoácidos de origen natural y/o no de orig e incluyen, por ejemplo, cualquiera de los isóm de los aminoácidos de origen natural (Ala, Cys, e, Gly, His, lie, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Arg, l, Trp, Tyr) , o cualquiera de los isómeros D inoácidos no de origen natural seleccionados de nsiste de: ß-alanina (ß-Ala), N-a-metil-alanin ido aminobutirico (Abu) , ácido y-aminobutiric ido aminohexanoico (e-???), ácido aminoisobuti metiltiazolidina (DMTA), ácido ?-Glutámico moserina (Hse) , hidroxiprolina (Hyp) , amida de metoxi-N-metil , metil-isoleucina (Melle) onipecótico (Isn), metil-leucina (MeLeu) , me metil-lisina, trimetil-lisina, metanoprolina, lfóxido (Met(O)), metionina-sulfona (Met(02)), Tle) , metil-norleucina (Me-Nle) , norvalina (Nva) rn) , ácido para-aminobenzoico (PABA) , penicila tilfenilalanina (MePhe) , 4-Clorofenilalanina ( fluorofenilalanina (Phe(4-F)), 4-nitrofenilalan 2) ) , 4-cianofenilalanina. ( ( Phe ( 4-CN) ) , fenilgli peridinilalanina, piperidinilglicina, 3, 4-dei rrolidinilalanina, sarcosina (Sar) , selenociste Benzil-fosfoserina, ácido 4-araino-3 tilheptanoico (Sta) , ácido 4-amino-5-ci droxipentanoico (ACHPA) , ácido 4-amino-3- inoácidos negativamente cargados. En algunas m dipéptido no es cualquiera de los dipéptidos de neral A-B, en donde A se selecciona de grupo q Gly, Gln, Ala, Arg, Asp, Asn, lie, Leu, Val, donde B selecciona del grupo que consiste de p. En algunas modalidades, el espaciador del d lecciona de grupo que 1 consiste de: Ala-Ala, ß-u-Leu, Pro-Pro, ácido ?-aminobutirico, inobutírico, y y-Glu- y-Glu.

En algunas modalidades ejemplares, el ucagón se codifica para comprender de un g diante la acilación de una amina, hidroxilo, o paciador, el espaciador que se une a una cadena aminoácido en la posición 10, 20, 24, 29, ' o inoácido C- terminal del péptido del glucagón.

En todavía modalidades más especificas o o más aminoácidos alfa, alfa-disustituido, p B, para estabilizar la alfa-hélice del péptid iestra en la presente, tales péptidos que corrí paciador acilado unidos covalentemente a la cad i aminoácido en la posición 40 exhiben un jorada en los receptores GIP, GLP-1 y de glucagó Métodos adecuados de acilación de pépt a de aminas, hidr filos, y tioles son conoc cnica. Ver, por ejemplo, Ejemplo 19 (para ilación a través de una amina) , Miller, Biochem mmun 218: 377-382 (1996) ; Shimohigashi y Stam pt Protein Res 19: 54-62 (1982) ; y P laboradores, Biochim Biophys Acta 263: 7-13 ( stodos de acilación a través de un hidroxilo) lvius, J Pept Res 66: 169-180 (2005) (para ilación a través de un tiol; Bioconjugate Chem emplo, el grupo acilo puede ser cualquiera d aso C4, ácido graso C6, ácido graso C8, ácido iáo graso C12, ácido graso C14, ácido graso aso C18, ácido graso C20, ácido graso C22, ácido ido graso C26, ácido graso C28, o ácido gra gunas modalidades, el. grupo acilo es un ácido gr O, por ejemplo, un ácido graso C14 o un ácido gr En una modalidad alternativa, el grupo ido biliar. El ácido biliar puede ser un ácido cluye, pero no se limita a, ácido cól enodeoxicólico, ácido deoxicólico, ácido litocó rocólico, ácido glicocólico, y ácido de coleste Én algunas modalidades de la invención, 5 glucagón se modifica para comprender un g idiante la acilación de un alcano de cadena la iptido de glucagón. En aspectos específicos, el En ciertas modalidades, el péptido de difica para comprender un grupo acilo mediante l l alcano de cadena larga por un espaciador el péptido de glucagón. En aspectos específicos, e dena larga comprende un grupo amina, hidroxilo al reacciona con un grupo carboxilo, o forma a smo, o el espaciador. Espaciadores adecuados que grupo carboxilo, o forma activada de los scriben en la presente e incluyen, por paciadores bifuncionales, por ejemplo, espac inoácidos, péptidos, tripéptidos, h funcionales y espaciadores hidrofóbicos bifuncio Como se usa en la presente el térm tivada de un grupo carboxilo" se refiere a rboxilo con la fórmula general R(O0)X, en donde liente y R es el péptido del glucagón y el espa cadena de carbono. El alcano de cadena larga neal o ramificado. En ciertos aspectos, el alcan rga es un alcano de C4 a C30. Por ejemplo, el dena larga puede ser cualquiera de un alcano cano de C6, un alcano de C8, un alcano de CIO, u 2, un alcano de C14, un alcano de C16, un alcano cano de C20, un alcano de C22, un alcano de C24 C26, un alcano de C28, o un alcano de C30. dalidades, el alcano de cadena larga comprende u a C20, por ejemplo, un alcano de C14, un alcan alcano de C18.

También, en algunas modalidades, un g droxilo o tiol del péptido de glucagón se ac ido de colesterol. En modalidades especificas, glucagón se enlaza al ácido de colesterol a t paciador Cys modificado. dificaciones descritas en la presente, en las cu nos uno de los aminoácidos en la posición 10, 20 comprende un grupo acilo y por lo menos u inoácidos en la posición .16, 17, 21 , 24, 29, sición dentro de la extensión C-terminal, o el terminal se modifica a un Cys, Lys, ¦ Orn, homo-e, la cadena lateral del aminoácido valentemente a una porción hidrofilica (por eje algunas modalidades, el grupo acilo se une a o 40, opcionalmente por la vía de un espa mprende Cys, Lys, Orn, homo-Cys, o Ac-Phe, drofilica se incorpora en un residuo Cys en la p Alternativamente, el péptido de glucag ede comprender . un espaciador, en donde el es nto acilado como modificado para comprender drofilica. Ejemplos no limitantes de espaciadore De acuerdo con algunas modalidades , el ucagón se modifica para comprender un grupo a emplo un grupo alquilo que no es de origen na inoácido (por ejemplo, un grupo alquilo que no i aminoácido de origen natural) . Sin que se mant orla particular, se cree que la alquilacion de l glucagón lograran efectos similares, si no mo la acilación de los péptidos de glucagón, p a vida media prolongada en circulación, un trasado de acción, una duración prolongada de asistencia mejorada a proteasas, tal como DPP-IV, crementada en los receptores GLP-1, GIP y glucag La alquilacion se puede llevar a cabo en ? las posiciones dentro del péptido de glucagón, lalquiera de las posiciones 1-29, una posición de .tensión C-terminal, o el aminoácido N o C-termi recta a un aminoácido del péptido de g directamente a un aminoácido del péptido de gluc a de un espaciador, en donde el espaciador s tre el aminoácido del péptido de glucagón quilo. Los péptidos de glucagón se pueden alqu sma posición de aminoácidos donde se enlaza drofilica, o en una posición de aminoácidos emplos no limitantes incluyen la alquilación en o 40 y la pegilación en una o más posiciones en terminal del péptido de glucagón, por ejemplo, p 29, o 40, dentro de una extensión C-terminal, rminal (por ejemplo, a través de adicionar rminal) .

En un aspecto especifico de la inv ptido de glucagón se modifica para comprende quilo mediante la acilación directa de una amina menos uno de los aminoácidos en las posiciones , y '40 modificadas para cualquier aminoácido qu a amina de cadena lateral, hidróxido, o tiol. dalidades especificas de la invención, la recta del péptido de glucagón ocurre a través cadena lateral, hidroxilo o tiol del aminoá sición 10.

En algunas modalidades, el aminoácido qu a amina de cadena lateral es un aminoácido de Fó gunas modalidades ejemplares, el aminoácido de es el aminoácido en donde n es 4 (Lys) o n es 3 En otras modalidades, el aminoácido qu hidroxilo de cadena lateral es un aminoácido de . En algunas modalidades ejemplares, el aminoá rmula II es el aminoácido en donde n es 1 (Ser) .

En todavía otras modalidades, el amin rmula I, Fórmula II, o Fórmula III se reempla gunda cadena lateral.

En una modalidad de la invención, el ucagón comprende un espaciador entre el péptido quilo. En algunas modalidades, el péptido de iaza covalentemente al espaciador, el cual valentemente al grupo alquilo. En algunas emplares, el péptido de glucagón se modi mprender un grupo alquilo mediante la alquila ina, hidroxilo, o tiol de un espaciador, el esp une a una cadena lateral de un aminoácido en , 20, 24, 29, o 40 del péptido de glucagón. El cual el espaciador se une puede ser cualquier or ejemplo, un aminoácido -sustituido indivi inoácido OÍ, a-disustituido) que¦ comprende una al permite que se enlace al espaciador. Por inoácidos que comprendé una amina de caden rboxilo o carboxilato.

En algunas modalidades, el espacia inoácido que comprende una amina de caden droxilo, tiol, o un dipéptido o tripéptido que c inoácido que comprende una amina, hidroxilo, dena lateral .

Cuando ocurre la alquilación a través ina de un espaciador la alquilación puede ocurr 1 alfa-amina del aminoácido o una amina de cade el caso en la cual el alfa-amina se alquila, el paciador puede ser cualquier aminoácido. Por inoácido espaciador puede ser un aminoácido h :>r ejemplo, Gly, Ala, Val, Leu, lie, Trp, Met, ido 6-amino hexanóico, ácido 5-amino valérico ainoheptanóico, y ácido 8-aminooctanóico . Altern quila, tal que el péptido del glucagón se dalidades de la invención incluyen tales alquiladas.

Cuando ocurre la . alquilación a través droxilo de un espaciador, el aminoácido o u inoácidos de dipéptido o tripéptido puede ser un la Fórmula II. En una modalidad ejemplar esp inoácido es Ser.

Cuando ocurre la acilación a través d ol del espaciador, el aminoácido o uno de los l dipéptido o tripéptido puede ser un aminoá rmula III. En una modalidad ejemplar espe inoácido es Cys.

En algunas modalidades, el espaciad paciador bifuncionales hidrofilico. En ciertas m espaciador bifuncional hidrofilico comprende este aspecto, el espaciador puede comprender, p 2 (CH2CH29) n (CH2) mCOOH, en donde m es cualquier nú 1 a 6 y n es cualquier número entero de 2 a 12 r ejemplo, ácido 8-amino-3, ß-dioxaoctanoico, mercialmente disponible de Peptides Internati ouisville, KY) .

En algunas modalidades, el espaciad paciador bifuncional hidrofóbico. En ciertas m espaciador bifuncional hidrofóbico comprende upos reactivos, por ejemplo, un grupo amina, ol y carboxilo o cualquiera de las combinacio smos. En ciertas modalidades, el espaciador drofóbico comprende un grupo hidroxilo y un carb ras modalidades, el espaciador bifuncional mprende un grupo amina y un carboxilato. dalidades, el espaciador bifuncional hidrofóbic ngitud. En modalidades más especificas, el espac roximadamente de 3 a 10 átomos (por ejemplo, 6 a longitud y el alquilo es un grupo alquilo C12 emplo, grupo alquilo C14, grupo alquilo C16, ngitud total del espaciador y el grupo alquilo átomos, por ejemplo, aproximadamente 14, 15, 1 , 20, 21 , 22, 23, 24, 25, 26, 27, o 28 átomos, dalidades, la longitud del espaciador y el alqui 28 (por ejemplo, 19 a 26, 19 a 21) átomos.

De acuerdo con ciertas modalidades ant paciador bifuncional puede ser un aminoácido sin origen natural que comprende una cadena pr inoácidos que es de 3 a 10 átomos en longitud (p ido 6-amino hexanóico, ácido 5-amino valérico, inoheptanóico, y ácido 8-aminooctanóico) . Altern espaciador puede ser un espaciador de d lecciona de grupo que consiste de: Ala-Ala, ß- u-Leu, Pro-Pro, ácido ?-aminobutírico, iinobutirico y ?-Glu-y-Glu.

Métodos adecuados de la alquilación de p via de aminas, hidroxilos, y tioles son conoc cnica. Por ejemplo, se puede usar una síntesis lliamson para formar un enlace de éter entr droxilo del péptido de glucagón y el grup mbién, una reacción de sustitución nucleofilica n un haluro de alquilo puede dar por resultado un enlace de éter, tioéter o amino.

El grupo alquilo del péptido de glucagó = cualquier tamaño, por ejemplo, cualquier l idena de carbono, y puede ser lineal o rami Lgunas modalidades de la invención, el grupo al .quilo de C4 a C30. Por ejemplo, el grupo alquil ido desoxicólico, ácido litocólico, ácido t ido glicocólico, y ácido de colesterol.

En algunas modalidades el péptido de difica para comprender un grupo alquilo al hace alcano de cadena larga, nucleofilico con el ucagón, en donde el péptido de glucagón compren liente adecuado para la sustitución nucleo pectos específicos, el grupo nucleofílico del dena larga comprende un grupo amina, hidroxilo emplo, octadecilamina, tetradecanol, y hexadeca upo saliente del péptido de glucagón puede ser p dena lateral de un aminoácido o puede ser p dena principal de péptido. Los grupos saliente cluyen, por ejemplo, N-hidroxisuccinimida , ha teres de sulfonato.

En ciertas modalidades, el péptido de paciadores hidrofóbicos bifuncionales que compre grupo saliente adecuado.

En relación con estos aspectos de la in s cuales un alcano de cadena larga se alqu ptido de glucagón o el espaciador, el alcano rga puede ser de cualquier tamaño y puede alquier longitud de la cadena de carbono. El dena larga puede ser lineal o ramificado. pectos, el alcano de cadena larga es un alcano d r ejemplo, el alcano de cadena larga puede ser un alcano C4, alcano C6, alcano C8, alcano _ 2, alcano C14, alcano C 16, alcano C18, alcano 2, alcano C24, alcano C26, alcano C28, o un alc gunas modalidades, el alcano de cadena larga c cano de C8 a C20, por ejemplo, un alcano C14, al alcano C18. porción hidrofilica puede comprender una lietilenglicol (PEG) . La incorporación de u drofilica se puede lograr a través de cual ecuado, tal como cualquiera de los. métodos desc esente. En este aspecto, el péptido de glucagó ede comprender SEQ ID NO: 1, o una secuencia de dificada de la misma que comprende una o dificaciones de aminoácido descritas en la prese iales por lo menos uno de los aminoácidos en la p , 24, 29, y 40 comprende un grupo alquilo y p ?? de los aminoácidos en la posición 16, 17, 21 ), una posición dentro de una extensión C-ter ninoácido C-terminal se modifica a Cys, Lys, Orn Ac-Phe, y la cadena lateral del aminoácido )valentemente a una porción hidrofilica (por eje i algunas modalidades, el grupo alquilo se une a s, y Ac-Phe. dalidades ejemplares De acuerdo con algunas modalidades de la análogo de glucagón (SEQ ID NO: 1) que tien onista GIP comprende SEQ ID NO: 1 con. (a) una m aminoácido en la posición 1 que confiere a onista GIP, (b) una modificación que est tructura alfa-hélice de la porción C-terminal { -29) del análogo, y (c) opcionalmente, 1 a 10 (p 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10) modificaciones de iicionales. En algunas modalidades, el análogo ex snos aproximadamente 1% de actividad de GIP na sceptor de GIP o cualquier otro nivel de ac sceptor de GIP descrito en la presente.

En ciertas modalidades, la modifi stabiliza la estructura alfa-hélice es una ede ser uno el cual está entre las cadenas later inoácidos en las posiciones i e i+4 o entre terales de los aminoácidos en las posiciones j nde i es 12, 13, 16, 17, 20 o 24, y en donde j ertas modalidades, el puente de lactama puede s aminoácidos en las posiciones 16 y 20, en do s aminoácidos de las posiciones 16 y 20 se su u y el otro de los aminoácidos en las posiciones stituye con Lys.

En modalidades alternativas, la modifi tabiliza la estructura alfa-hélice es la intr o, dos, tres, o cuatro aminoácidos , a-disu (s) posición(es) 16, 20, 21, y 24 del análogo, dalidades, el aminoácido , a-disustituido e ertos aspectos, el aminoácido , a-disusti emplo, AIB) está en la posición 20 y el aminoá ande (por ejemplo, Tyr) .

En ciertos aspectos, el análogo d mprende modificaciones de aminoácido en uno, d s posiciones 27, 28 y 29. Por ejemplo, el sición 27 se puede sustituir con un aminoácid rgo, opcionalmente Leu, el Asn en la posición stituir con un aminoácido alifático pequeño, op a, el Thr en la posición 29 se puede sustit inoácido alifático pequeño, opcionalmente G mbinación de dos o tres de los anteriores. En pecificas, el análogo de glucagón comprende sición 27, Ala en la posición 28, y Gly o sición 29.

En ciertas modalidades de la invención glucagón comprende una extensión de 1 a 21 ami rminal al aminoácido en la posición 29. La exte grupo acilo o alquilo se puede unir al ucagón, con o sin un espaciador, en la posición álogo, como se describe adicionalmente en la p álogo se puede modificar adicional o alternativ mprender una porción hidrofilica como se icionalmente en la presente. Adicionalmente, dalidades,. el análogo comprende cualquier mbinación de las siguientes modificaciones: (a) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly, N-metil-Ser, AIB, Val, o ácido butírico; (b) Tyr en la posición 10 sustituido con Trp Glu, Phe, o Val; (c) enlace de un grupo acilo a un Lys en 10; (d) Lys en la posición 12 sustituido con Arg; homoglutámico, ácido homocisteico; (j) Val en la posición 23 sustituido con lie; (k) Gln en la posición 24 sustituido con Asn Ala, o AIB; (1) y una sustitución conservativa en cualqu posiciones 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, y 29.

En modalidades ejemplares, el análogo EQ ID NO: 1) que tiene actividad del agoni mprende las siguientes modificaciones: (a) una modificación de aminoácido en la pos confiere actividad del agonista de GIP, (b) un puente de lactama entre las cadenas l los aminoácidos en las posiciones i e las cadenas laterales de los aminoác posiciones j y j+3, en donde i es 12, de aproximadamente 10 nM o. menor.

El puente de lactama, del análogo dalidades puede ser un puente de lactama como la presente. Ver, por ejemplo, las enseñan entes de lactama bajo la sección "Estabiliza tructura Alfa-Hélice". Por ejemplo, el puente ede estar entre los aminoácidos en las posicion i donde uno de los aminoácidos en las posiciones stituye con Glu y la otra de los aminoáci siciones 16 y 20 se sustituye con Lys .

De acuerdo con estas modalidades, el an mprender, por ejemplo, la secuencia de amin alquiera de SEQ ID NOs: 5-94.

En otras modalidades ejemplares, el ucagón (SEQ ID NO: 1) que tiene actividad del G? comprende las siguientes modificaciones: (d) 1-9 o 1-6 modificaciones de aminoácido a por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 modificaciones de aminoácido adicionales, la EC50 del análogo para la activación del rece de aproximadamente 10 nM o menor.

El aminoácido , a-disustituido del tas modalidades, puede ser cualquier aminoác sustituido, que incluye, pero no se limita a, o-butirico (AIB) , un aminoácido disustituido c upo o un diferente grupo seleccionado del mis ferente grupo seleccionado de metilo, etilo, pr tilo, o con un ciclooctano o cicloheptano (p ido 1-aminociclooctano-l-carboxilico) . En dalidades, el aminoácido , a-disustituido e ertas modalidades, el aminoácido en la posi stituye con un aminoácido , a-disustituido, p (b). una sustitución de aminoácido de Ser en 16 con un aminoácido de la Fórmula IV: [Fórmula IV] en donde n es 1 a 16, o l a 10, o 1 a 7, o 1 6, cada uno de Ri y R2 se independientemente del grupo que cons alquilo de Ci-Ci8, (alquilo de Ci-Ci8)OH, Ci-Ci8)NH2, (alquilo de Ci-Ci8)SH, (alqu 4 ) (C3-C6) cicloalquilo, (alquilo C4) (heterociclico de C2-C5) , (alquilo de de C6-Cio)R7, y (alquilo de C1-C4) (heteroa 28, y (e) 1-9 o 1-6 modificaciones de aminoácido a por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5, 6, - 7 modificaciones de aminoácido adicionales, la EC50 del análogo para la activación del rec aproximadamente 10 nM o menor.

El aminoácido de la Fórmula IV del anál dalidades puede ser cualquier aminoácido, tal emplo, el aminoácido de la Fórmula IV, en donde 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, o 16. dalidades, n es 2, 3, 4, o 5, en cuyo caso, el - Dab, Orn, Lys, u homoLys respectivamente.

El aminoácido alfa, alfa-disustituido esta modalidades puede ser cualquier aminoá fa-disustituido, que incluye, pero no se imit ino iso-butirico (AIB) , un aminoácido disustit GIP comprende: (a) una modificación de aminoácido en la pos confiere actividad del agonista de GIP, (b) una extensión de aproximadament aproximadamente 21 aminoácidos C-te aminoácido en la posición 29, en donde p uno de los aminoácidos de la extensión alquila, donde la EC50 del análogo para la activación d GIP es de aproximadamente 10 nM o menor.

En algunas modalidades, el aminoácido quilado es un aminoácido de la Fórmula I, II, dalidades más especificas, el aminoácido de la F b, Orn, Lys, u homoLys . También, en algunas moda tensión de aproximadamente 1 a aproxima inoácidos comprende la secuencia de amin quilado se localiza en la posición 37, 38, 39, 43 del análogo C-terminalmente extendido. dalidades, el aminoácido acilado o alqui calizado en la posición 40 del análogo C-te tendido.

En algunas modalidades, el análogo tividad del agonista de GIP comprende además mod aminoácido en una, dos o todas las posiciones 2 r ejemplo, modificaciones de aminoácido en la o 28.

En cualquiera de . las modalidades iteriores, la modificación de aminoácido en la e confiere actividad del .agonista de GIP pue stitución de His con un aminoácido que carece de teral de imidazol. La modificación de aminoá sición 1 puede, por ejemplo, ser una sustitución posición 28 se puede sustituir con un aminoácid queño, opcionalmente Ala, y/o el Thr en la pos ede sustituir con un aminoácido alifáti cionalmente Gly. Alternativamente, el aná mprender tales modificaciones de aminoácido en y/o 28.

El análogo de las modalidades ejemplares ede comprender adicionalmente 1-9 o 1-6, modifi inoácido adicionales, por ejemplo 1, 2, 3, 4, 5 modificaciones de aminoácido adicionales, po alquiera de las modificaciones descritas en la p crementan o disminuyen la actividad de cualqui ceptores GIP, GLP-1, y de glucagón, mejoran la s joran la duración de acción o vida media en c trasan el principio de acción, o incr stabilidad. El análogo puede comprender además, p (i) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly, N-metil-Ser, AIB, Val, o u amino-N-butirico ; (ii) Tyr en la posición 10 sustituido con Trp Glu, Phe, o Val; (iii) Enlace un grupo acilo a un Lys en la po (iv) Lys en la posición 12 sustituido con Arg; (v) Ser en la posición 16 sustituido con Glu, homoglutámico, ácido homocisteico, Thr, (vi) Arg en la posición 17 sustituido con Gln (vii) Arg en la posición 18 sustituido con Thr, o Gly; (viii) Gln en la posición 20 sustituido co Thr, Lys, Citrulina, Arg, Orn, o AIB; (ix) Asp en la posición 21 sustituido con homoglutámico, ácido homocisteico; dificación de aminoácido en la posición 3 (por e stitución de aminoácido de Gln con Glu) , e álogo tiene menor que 1% de actividad del glu ceptor de glucagón. Alternativa o adiciona álogo puede comprender una modificación de amino sición 7 (por ejemplo, una sustitución de aminoá n un aminoácido que carece - de un grupo hid emplo Abu o lie) , en donde el análogo tiene roximadamente 10% de la actividad de GLP-1 en GLP-1.

Con respecto a las modalidades ejem álogo se puede enlazar covalentemente a u drofilica. En algunas modalidades, el análogo valentemente a la porción hidrofilica en cualqu siciones aminoácidos 16, 17, 20, 21, 24, 29, 4 rminal. En ciertas modalidades, el análogo co e es nativo a la secuencia de glucagón (SEQ I ede ser un aminoácido el cual se reempla inoácido nativo de SEQ ID NO: 1. En algunas moda nde la porción hidrofílica se une a un Cys, el rción hidrofílica puede comprender la estructura o Péptido o Con respecto a los análogos que comp rción hidrofílica, la porción hidrofílica alquiera de aquellas descritas en la presente emplo, las enseñanzas bajo la sección "Enla " quilo (por ejemplo, un grúpo acilo o alquilo el tivo a un aminoácido de origen natural) . El anál alquilado puede ser de acuerdo con los péptidos quilados descritos en las sección "Ac quilación". En algunas modalidades, el grupo a upo acilo graso de C4 a C30, tal como, por upo acilo o alquilo graso CIO, un grupo acilo caso C12, un grupo acilo o alquilo graso C14, un alquilo grado C16, uri grupo acilo o alquilo gr :upo acilo o alquilo C20, o un grupo acilo o alqu :upo acilo o alquilo se puede unir covalen lalquier aminoácido del análogo, que incluye, Lmita al aminoácido en la posición 10 o 40, o el -terminal. En ciertas modalidades, el análogo co [tensión C-terminal (por ejemplo, una se únoácidos de SEQ ID NO: 95) y una adición de un Q ID NO: 1 seguido por SEQ ID NO: 95' (en 1 rminal)- o se puede enlazar a un aminoácid emplaza un aminoácido nativo, por ejemplo, el sición 10 de SEQ ID NO: 1.

En las modalidades ejemplares anteriore análogo comprende un grupo acilo o alquilo, el ede unir al grupo acilo o alquilo por la paciador, como se describe en la presente. El r ejemplo, puede ser de 3 a 10 átomos en longi r, por ejemplo un aminoácido (por ejemplo, áci xanóico, cualquier aminoácido descrito en la) , u or ejemplo, Ala-Ala, pAla-pAla, Leu-Leu, Pro lu) , un tripéptido, o un espaciador bifuncional hidrofóbico. En ciertos aspectos, la longitud paciador y el grupo acilo o alquilo es de apro a aproximadamente 28 átomos. aproximadamente 21 aminoácidos C-te aminoácido en la posición 29, en donde p uno de los aminoácidos de la extensión alquila, y (d) hasta 6 modificaciones de aminoácido adi donde la EC50 del análogo para la activación d GIP es de aproximadamente 10 nM o menor.

En algunos aspectos, el acilado o alqu inoácido de la Fórmula I, II, o III. En moda pecificas, el aminoácido de la Fórmula I es Dab homoLys . También, en algunas modali roximadamente 1 a aproximadamente 21 aminoácidos secuencia de aminoácidos de GPSSGAPPPS (SEQ I PSSGAPPPS (SEQ ID NO: 96), en donde X es inoácido, o GPSSGAPPPK (SEQ ID NO: 170) o XGPSS NO: 171) o XGPSSGAPPPSK (SEQ ID NO: 172), en l análogo C-terminalmente extendido.

En cualquiera de las modalidades teriores, el aminoácido en la posición 1 qu tividad del agonista de GI.P puede ser un ami rece de una cadena lateral de imidazol. El amino sición 1 puede, por ejemplo, ser un aminoácido ande. En algunas modalidades, el aminoácido ande es cualquiera de aquellos descritos en l e incluyen, por ejemplo Tyr.

El análogo de las modalidades ejemplares ede comprender adicionalmente 1-6 modific inoácido adicionales, tal como, por ejemplo, cu s modificaciones descritas en la presente icrementan o disminuyen la actividad de cualqui Bceptores GIP, GLP-1, y de glucagón, mejoran la s =joran la duración de acción o la vida media en c sición 27 se puede sustituir con un aminoácid ande {por ejemplo, Leu, lie o norleucina) sición 28 se puede sustituir con otro aminoácid queño (por ejemplo, Gly o Ala) o Asn, y/o la pos ede sustituir con otro aminoácido alifático p emplo, Ala o Gly) o Thr . Alternativamente, el an mprender tales modificaciones de aminoácido en y/o 28.

El análogo puede comprender adicionalm s de las siguientes modificaciones adicionales: (i) el aminoácido en la posición 2 es cualq Ser, Ala, D-Ala, Gly, N-metil-Ser, A ácido -amino-N-butirico; (ii) el aminoácido en la posición 10 es Tyr, Orn, Glu, Phe, o Val; (iii) enlace de un grupo acilo a. un Lys en Ala, Ser, Thr, Lys, Citrulina, Arg, Or otro aminoácido alfa, alfa-disustituido; (ix) el aminoácidos en la posición 21 es cu Glu, Asp, ácido homoglutámico, ácido hom (x) el aminoácido en la posición 23 es Val o (xi) el aminoácidos en la posición 24 es cu Gln, Asn, Ala, Ser, Thr, o AIB; y (xii) una o más sustituciones conser cualquiera de las posiciones 2, 5, 9, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 , 24 29.

El análogo en algunas modalidades co mposición de las modificaciones (i) has ternativa o adicionalmente, el análogo puede com dificación de aminoácido en la posición 3 (por e stitución de aminoácido de Gln con Glu) , e ogo se puede enlazar covalentemente a u drofílica. En algunas modalidades, el análogo valentemente a la porción hidrofílica en cualqu siciones de aminoácidos 16, 17, 20, 21, 24, 29, rminal. En ciertas modalidades, el análogo co rción hidrofílica enlazada covalentemente al an sición 2 .

En algunas modalidades, la porción hid laza covalentemente a un Lys, Cys, Orn, homo etil-fenilalanina del análogo. El Lys, mocisteína, o acetil-fenilalanina puede ser un e es nativo a SEQ ID NO: 1, 227, 228, 229 o 230 aminoácido sustituido. En algunas modalidades, rción hidrofílica se enlaza a un Cys, el e mprender la estructura Péptido señañzas bajo la sección "Enlace de las drofilicas" . En algunas modalidades, la porción un polietilenglicol (PEG) . El PEG en ciertas ene un peso molecular de aproximadamente 1,000 roximadamente 40,000 Daltons, por ejemplo, apro ,000 Daltons a aproximadamente 40,000 Daltons .

Con respecto a las modalidades ejem álogo puede comprender un aminoácido modificado extensión C-terminal en la cual la cadena laza covalentemente a un grupo acilo o alquilo, ilado o alquilado puede ser de acuerdo con l ilados o alquilados descritos en la sección " quilación". En algunas modalidades, el grupo a upo acilo graso de C4 a C30, tal como, por upo acilo o alquilo graso CIO, un grupo acilo aso C12, un grupo acilo o alquilo graso C14, un inoácido que es nativo a SEQ ID NO: 1, 227, 228 se puede enlazar a un aminoácido sustituido. El alquilo se enlaza covalentemente a un aminoácido tivo a SEQ ID NO: 95, 96, 171 o 172, o se pued aminoácido sustituido.

En las modalidades ejemplares anteriore análogo comprende un grupo acilo o alquilo, el ede unir al grupo acilo o alquilo por la paciador, como se describe en la presente. El r ejemplo, puede ser de 3 a 10 átomos en longi r, por ejemplo, un aminoácido' (por ejemplo, ác xanóico, cualquier aminoácido descrito en la pr péptido (por ejemplo, Ala-Ala, Ala-pAla, Leu-Le lu-yGlu) , un tripéptido, o un espaciador d drofilico o hidrofóbico .' En ciertos aspectos, tal del espaciador y el grupo acilo o alq En aun modalidades ejemplares adici álogo de glucagón que tiene actividad del agon mprende un grupo acilo o alquilo (por ejemplo ilo o alquilo el cual no es nativo a un am igen natural) , en donde el grupo acilo o alquil espaciador, en donde (i) el espaciador se une teral del aminoácido en la posición 10 del anál análogo comprende una extensión de 1 a 21 ami rminal al aminoácido en la posición 29 y el es e a la cadena lateral de un aminoácido que co a de las posiciones 37-43 relativas a SEQ ID nde la EC50 del análogo para la activación del P es aproximadamente 10 nM ó menor.

En tales modalidades, el análogo puede a secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 c dificación de aminoácido en la posición 1 q siciones 16, 20, 21, y 24 del análogo se susti inoácido , a-disustituido; o (C) el análogo comprende (i) una sus inoácido de Ser en la posición 16 con un amino rmula IV: [Fórmula IV] donde n es 1 a 7, en donde cada uno de R lecciona independientemente del grupo que cons quilo de Ci-Cia, (alquilo de Ci-Ci8)OH, (alquilo d lquilo de Ci-Ci8)SH, (alquilo de C0-C4 ) (C3-C6) ci lquilo de C0-C4) (heterociclico C2-C5) , (alqui ) (arilo de C6-Cio)R?; y (alquilo de C1-C4) (heteroa ino iso-butirico (AIB) , un aminoácido disustit smo grupo o diferente seleccionado de meti opilo, y n-butilo, o con un ciclooctano o cicloh eraplo, ácido 1-aminociclooctano-l-carboxílico) . dalidades, el aminoácido alfa, alfa-disustituido El aminoácido de la Fórmula IV del análo dalidades puede ser cualquier aminoácido, tal emplo, el aminoácido de la Fórmula IV, en donde 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, o 16. dalidades, n es 2, 3, 4, o 5, en cuyo caso, el Dab, Orn, Lys, u homoLys respectivamente.

En cualquiera de las modalidades teriores, la modificación de aminoácido en la e confiere actividad del agonista de GIP pue stitución de His con un aminoácido que carece de teral de imidazol. La modificación de aminoá aminoácido alifático grande, opcionalmente Leu, posición 28 se puede sustituir con un aminoácid queño, opcionalmente Ala, y/o el Thr en la pos ede sustituir con aminoácido alifático cionalmente Gly. Alternativamente, el anál mprender tales modificaciones de aminoácido en y/o 28.

El análogo de las modalidades ejemplares ede comprender adicionalmente 1-9 o 1-6, modifi inoácido adicionales posteriores, por ejemplo 1 6, 7, 8 o 9 modificaciones de aminoácido adici rno, por ejemplo, cualquiera de las modificacione la presente las cuales incrementan o dis tividad en cualquiera de los receptores de GIP ucagón, mejoran la solubilidad, mejoran la dur ción o vida media en circulación, retrasan el p mprender una o más de las siguientes modificació (i) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly, N-metil-Ser, AIB, Val, o un áci N-butirico; (ii) Tyr en la posición 10 sustituido con Tip Glu, Phe, o Val; (iii) enlace de un grupo acilo a un Lys en 10; (iv) Lys en la posición 12 sustituido con Arg; (v) Ser en la posición 16 sustituido con Glu, homoglutámico, ácido homocisteico, Thr, AIB; (vi) Arg en la posición 17 sustituido con Gln; (vii)- Arg en la posición 18 sustituido con Thr, o Gly; (viii) Gln en la posición 20 sustituido con El análogo en algunas modalidades co mposición de las modificaciones (i) has ternativa o adicionalmente, el análogo puede com dificación de aminoácido en la posición 3 (por e stitución de aminoácido de Gln con Glu) , e álogo tiene menor que 1% de la actividad de glu ceptor de glucagón. Alternativa o adiciona álogo puede comprender una modificación de amino sición 7 (por ejemplo, una sustitución de aminoá n un aminoácido que carece de un grupo hid emplo, Abu o lie) , una supresión del aminoá rminal al aminoácido en la posición 27 o 28, que ptido de 27 o 28 aminoácidos, o una combinac smos, en donde el análogo tiene menor que apro % de la actividad de GLP-1 en el receptor de GLP Con respecto a las modalidades ejem En algunas modalidades, la porción hid laza covalentemente a un Lys, Cys, Orn, homo etil-fenilalanina del análogo. El Lys, mocisteina, o acetil-fenilalanina puede ser un e es nativo, a la secuencia de glucagón (SEQ I ede ser un aminoácido en el cual está reem iinoácido nativo de SEQ ID NO: 1. En algunas moda nde la porción hidrofilica se une a un Cys, el rción hidrofilica puede comprender la estructura En las modalidades ejemplares, en donde mprende un grupo acilo o alquilo, el cual se une r la vía de un espaciador, el espaciador alquier espaciador como se describe en la p paciador, por ejemplo, puede ser de 3 a 10 ngitud y puede ser de, por ejemplo, un amin emplo, ácido 6-amino-hexanoico, cualquier scrito en la presente) , un dipéptido (por ejempl la^Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, yGlu-yGlu) , un tripé paciador bifuncional hidrofilico o hidrofóbico. pectos, la longitud total del espaciador y el gr quilo es de aproximadamente 14 a aproximadamente El grupo acilo o alquilo es cualquier gr quilo como se describe en la presente, tal co ilo o alquilo el cual no es nativo a un am igen natural. El grupo acilo o alquilo roximadamente 1 a aproximadamente 21 amin rminal al aminoácido en la posición .29 d mprende la secuencia de aminoácidos de GPSSGAP : 95) o XGPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 96), en alquier aminoácido, o GPSSGAPPPK (SEQ ID N PSSGAPPPK ( SEQ ID NO: 171) o XGPSSGAPPPSK (SEQ I donde X es Gly o un aminoácido alifático o geramente polar, pequeño. En algunas modal roximadamente 1 a aproximadamente 21 aminoáci mprender secuencias que contienen una o más su nservativas relativas a SEQ ID NO: 95, 96, 170, algunas modalidades, el aminoácido acilado o a caliza en las posiciones 37, 38, 39, 40, 41, 4 álogo C-terminalmente extendido. En ciertas moda inoácido acilado o alquilado se localiza en la l análogo C-terminalmente extendido. menos A, en donde A es 0.001 mg/ml, 0.01 mg/ml, 5 mg/ml, 1 mg/ml, 2 mg/ml, 3 mg/ml, 4 mg/ml, /ml, 7 mg/ml, 8 mg/ml, 9 mg/ml, 10 mg/ml, 11 /ml, 13 mg/ml, 14 mg/ml, 15 mg/ml, 16 mg/ml, 1 /ml, 19 mg/ml, 20 mg/ml, 21 mg/ml, 22 mg/ml, 2 /ml, 25 mg/ml o más alta. En otras modalida mposiciones pueden contener un péptido de gluc ncentracion de a lo sumo B, en donde B es 30 /ml, 24 mg/ml, 23, mg/ml, 22 mg/ml, 21 mg/ml, 2 /ml, 18 mg/ml, 17 mg/ml, 16 mg/ml, 15 mg/ml, 1 /ml, 12 · mg/ml, 11 mg/ml 10 mg/ml, 9 mg/ml, /ml, 6 mg/ml, 5 mg/ml, 4 mg/ml, 3 mg/ml, 2 mg/m 0.1 mg/ml. En algunas modalidades, las composici ntener un péptido de glucagón en un in ncentración de A a B mg/ml, por ejemplo, 0. /ml. En una modalidad las composiciones fa ntenedores o equipos se pueden etiqu macenamiento a temperatura ambiente o a frigerada .

Los péptidos de glucagón se pueden admin ciente usando cualquier via de administración es cluye parenteralmente, tal como i traperitoneal , subcutánea o intramuscularmente, ansdérmica, rectal, oral, nasalmente o mediante una modalidad la composición se administra tramuscularmente .

En una modalidad el equipo se proporci spositivo para administrar la composición de gl ciente, por ejemplo, aguja de jeringa, disp uma, inyector a chorro y otro inyector sin aguja ede alternativamente o además incluir u ntenedores, por ejemplo, frasquitos, tubos, dalidad el equipo comprende una jeringa y un ana modalidad la composición de glucagón estér paca con la jeringa.

De acuerdo con una modalidad se propo mposición farmacéutica en donde la composición c álogo de glucagón activo GIP de la presente des a sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y rmacéuticamente aceptable. La composición f ede comprender cualquier ingrediente farmac eptable, que incluye, por ejemplo, agentes aci itivos, adsorbentes, propelentes de aerosol, splazamiento de aire, agentes alcalinizantes , ag lutinantes, anticoagulantes, conservadores antim tioxidantes , antisépticos, bases, aglutinante iortiguadores, agentes quelantes, agentes de rec entes de coloración, desecantes, detergentes, cuestrantes , penetrantes de la piel, lubilizantes, solventes, agentes estabilizantes positorio, agentes activos superficiales, su entes de suspensión, agentes edulcorantes rapéuticos, agentes espesantes, agentes de entes de toxicidad, agentes de incremento de entes absorbentes de agua, co-solventes miscibl landadores de agua o agentes humectantes.

En algunas modalidades, la composición f mprende cualquiera o una combinación de los mponentes: acacia, acesulfame potasio, c etiltributilo, citrato de acetiltrietilo, agar, cohol, alcohol deshidratado, alcohol desna cohol diluido, .ácido aleuritico, ácido Üésteres alifáticos, alúmina, hidróxido de tearato de aluminio, amilopectina, cc-amil calcio, silicato de calcio, sorbato de calcio calcio, sulfato de calcio, hemihidrato de lcio, aceite de cañóla, carbómero, dióxido d lcio de carboxiraetil celulosa, sodio de c lulosa, ß-caroteno, carragenano, aceite de ric ricino hidrogenado, cera emulsionante catióni celulosa, ftalato de acetato de celulosa, eti lulosa microcristalina, celulosa pulverizada crocristalina silicificada, carboximetil celulos cohol cetoestearilico, cetrimida, alcohol orhexidina, clorobutanol, clorocresol, colester clorhexidina, gluconato de clorhexidina, clo orhexidina, clorodifluoroetano (HCFC) , clorodifl orofenoxietanol de clorofluorocarburo (CFC) , el lidos de jarabe de maiz, ácido cítrico anhidro, ácido cítrico, mantequilla de cacao, agentes sodio, docusato de calcio, docusato de potasio, dio, galato de dodecilo, bromuro de dodeciltrim entato de calcio disódico, ácido edtico, eglumi ilico, etilcelulosa, galato de etilo, laurato ltol de etilo, oleato de etilo, etilparabeno, ilparabeno, sodio de etilparabeno, vainillina uctosa, fructosa liquida, fructosa molida, f rógeno, fructosa pulverizada, ácido fumárico, ucosa, glucosa liquida, micas de glicéridos asos vegetales saturados, glicerina, behenato de nooleato de glicerilo, monoestearato de noestéarato de glicerilo autoemulsionante, palmi glicerilo, glicina, glicoles, glicofurol, gom ptafluoropropano (HFC) , bromuro de hexadeciltrim rabe con alto contenido de fructuosa, albúm mano, hidrocarburos (HC) , ácido clorhídrico dilu hidra, lecitina, silicato de aluminio de rbonato de magnesio, carbonato de magnes rbonato de magnesio anhidro, hidróxido de ca gnesio, hidróxido de magnesio, lauril sulfato d ido de magnesio, silicato de magnesio, es gnesio, trisilicato de magnesio, trisilicato hidro, ácido málico, malta, maltitol, solución d ltodextrina, maltol, maltosa, manitol, trigli dena media, meglumina, mentol, metilcelulosa, metilo, oleato de metilo, metilparabeno, tilparabeno, sodio de metilparabeno, ce crocristalina y sodio de carboximetilcelulo neral, aceite mineral ligero, aceite mineral nolinicos, aceite, aceite de oliva, monoe ntmorilonita, galato de octilo, ácido ole lmitico, parafina, aceite de cacahuate, lioxietileno, estearato de polioxietileno livinilico, polivinil pirrolidona, alginato d nzoato de potasio, bicarbonato de potasio, b tasio, cloruro de potasio, citrato de potasio, tasio anhidro, fosfato de hidrógeno de tabisulfito de potasio, fosfato de potasio tropionato de potasio, sorbato de potasio, ropanol, ácido propiónico, carbonato de ropilenglicol, alginato de propilenglicol, ropilo, propilparabeno, potasio de propilparaben ropilparabeno, sulfato de protamina, aceite de )lza, solución de Ringer, sacarina, amonio d ilcio de sacarina, sodio de sacarina, aceite de .no, saponita, proteínas de suero, aceite de .lice coloidal, dióxido de silicio coloidal, )dio, ascorbato de sodio, benzoato de sodio, bic rbitol, solución de sorbitol al 70¾, aceite de ya, cera de esperma de ballena, almidón, almid midón de papa, almidón pregelatinizado, almid terilizable, ácido esteárico, ácido esteárico cohol estearilico, sacarosa, azucares, azúcar c úcar de confitería, esferas de azúcar, azúcar gartab, Amarillo FCF Sunset, parafina sintét ido tartárico, tartrazina, tetrafluoroetano (H teobroma, timerosal, dióxido de titanio, alfa etato de tocoferilo, succinato de ácido alfa de ta-tocoferol, delta-tocoferol, gamma-tocoferol , iacetina, citrato de tributilo, trietanolamina, ietilo, trimetil-p-ciclodextrina, brom imetiltetradecilamonio, solución amortiguad entato de trisodio, vainillina, aceite vegetal tipo I, agua, agua blanda, agua dura, agua sin .·. -¦'¦ ... .. 180 cipients, Third Edition, A. ?. Kibbe (Pharmaceut ndon, UK, 2000) , los cuales se incorporan a ferencia en su totalidad. Remington Pha iences, Sixteenth Edition, E. W. Martin (Mack , Easton, Pa . , 1980), la' cual se incorpora a ferencia en su totalidad, divulga varios compone la formulación de composiciones farmacéuticas a cnicas conocidas para la preparación de las mism la medida ni que cualquier agente conven mpatible con las composiciones farmacéuticas, su mposiciones farmacéuticas es contemplado. Los i plementarios activos también se pueden incorpo mposiciones .

Las formulaciones farmacéuticas divulg esente se pueden diseñar para ser de cor beración rápida, larga acción, o liberación sos cluye, por ejemplo, diario (1 vez al día, 2 vece ces al día, 4 veces al día, 5 veces al día 6 vec da dos días, cada tres días, cada, cuatro días, as, cada seis días, semanalmente, bisemanal manas, mensualmente o bimensual.

En algunas modalidades, el (los) co terior (es) puede estar presente en la rmacéutica en cualquier concentración, tal emplo, por lo menos A, en donde A es 0.0001% v, 0.01% p/, 0.1% p/v, 1% p/v, 2% p/v, 5% p/v, 1 v, 30% p/v, 40% p/v, 50% p/v, 60% p/v, 70% p/v, % p/v. En algunas modalidades, el (los) co terior (es) pueden estar presentes en la rmacéutica en cualquier concentración, tal emplo, a los humo B, en donde B es 90% p/v, 8 v, 60% p/v, 50% p/v, 40% p/v, 30% p/v, 20% p/v, r lo menos 5, por lo menos 5.5, por lo menos nos 6.5, por lo menos 7, por lo menos 7.5, por r lo menos 8.5, por lo menos 9, por lo menos nos 10/ o por lo menos 10.5 e incluyendo pH 11, la formulación y via de administración. dalidades, las composiciones farmacéutic mprender agentes amortiguadores para logr mpatible fisiológico. Los agentes amortiguad cluir cualquiera de los compuestos capaces de am pH desead tal como, por ejemplo, amortiguadores or ejemplo PBS) , trietanolamina, Tris, bic icina, HEPES, TES, MOPS, PIPES, cacodilato, ME ciertas modalidades, la consistencia de l aortiguadora es por lo menos 0.5 mM, por lo meno menos 5 mM, por lo menos 10 mM, por lo menos 20 enos 30 mM, por lo menos 40 mM, por lo menos 50 Los péptidos de glucagón que son co-a P/GLP-1 co-agonistas de glucagón/GIP y triag ucagón/GIP/GLP-1 se pueden usar en cualquier ind cual cada uno de sus actividades se h eviamente como · útiles. Por ejemplo, la act ucagón puede incrementar los niveles de gluco ortiguamiento de insulina, o para disminuir la m s intestinos durante la · examinación radio tividad de GLP-1 puede disminuir los niveles a actividad útil para tratar hiperglucemia, abetes. La actividad de GLP-1 también inducir la so o prevenir la ganancia de peso, por ejemplo disminución del apetito. La actividad de GIP ta sminuir los niveles de glucosa, una actividad atar hiperglucemia, por ejemplo diabetes.

Los co-agonistas de GIP/GLP-1 y tria ra reducir el consumo de alimento diario y espes e incrementa la sensibilidad a la insulina y ergia. (Irwin y colaboradores, Diabetologia 50 007); y Althage y colaboradores, J Biol Chem, ectrónica el 17 de Abril de 2008) .

Los datos in vivo divulgados en la prese muestran que la combinación de la actividad del IP o la actividad del agonista de GLP-1 produce 2 glucosa.

De esta manera, los péptidos de glucagó la presente se esperan que se use para reducir L peso corporal, o para tratar hiperglucemia, o p L nivel de glucosa en la sangre, o para nor stabilizar en nivel de glucosa en la sangre.

En algunas modalidades, se proporciona ira tratar hiperglucemia, o un método para Tales métodos para tratar hiperglucemia e sean útiles para una variedad de tipos de hip cluyendo diabetes, diabetes mellitus tipo I llitus tipo II, o diabetes gestacional, ya sea insulina o no dependiente de insulina, y mplicaciones de diabetes qué incluyen tinopatia y enfermedad vascular.

Los métodos para reducir el apetito o ardida de peso corporal se espera que sean útiles L peso corporal, prevenir la ganancia de peso, :>esidad de varias causas, que incluyen obesidad i írmacos, y reducir complicaciones asociadas con íe incluyen enfermedad vascular (enfermedad de >ronaria, apoplejía enfermedad vascular ^perfusión isquémica, etc.)/ hipertensión, pr .abetes tipo II, hiperlipidemia y e e incluyen triglicéridos altos, colesterol H lesterol LDL alto que aumenta la acumulación de s paredes arteriales) , (3) presión sanguínea e sistencia a la insulina o intolerancia a la g tado protrombótico (por ejemplo inhibidor-1 de fibrinógeno o plasminógeno alto en la sang tado pre-inflamatorio (por ejemplo proteína r evada en la sangre) . Otros factores de rie tcluir envejecimiento, desequilibrio ho edisposición genética.

El Síndrome Metabólico se asocial con crementado de enfermedad cardiaca coronaria fermedades relacionadas con la acumulación scular, tal como apoplejía y enfermedad riférica, referida como enfermedad car eroesclerótica (ASCVD) . Los pacientes con Sponibiliclad debido a estrés oxidante m ormalidades en las hormonas derivadas de adip mo adiponectina (Lteif and Mather, Can. J. C uppl. B):66B-76B (2004)).

De acuerdo con 2001 National Cholesterol ogram Adult Treatment Panel (ATP III), cualqui es atributos siguientes en mismo individuo c iterios para el Síndrome Metabólico: (a) obesida na circunferencia de la cadera arriba de 102 cm arriba de 88 cm en mujeres); (b) triglicéridos 50 mg/dl o arriba) ; (c) colesterol HDL (40 mg/dl mbres y 50 mg/dl o abajo en mujeres); (d) presió 30/85 o más) ; y (e) glucosa en la sangre en a /dl o arriba) . De Acuerdo con la Organización d ndial (WHO) , un individuo que tiene niveles d tos (una glucosa en la sangre en ayunas ele esión sanguínea alta) . (Máthur, Ruchi, "Metaboli . Shiel, Jr., illiam C, MedicineNet.com, May 11, Para propósitos en la presente, si un mple los criterios de cualquiera o ambos de las puestos por 2001 National. Cholesterol Educati ult Treatment Panel o el WHO, el individuo se mo afectado con el Síndrome Metabólico.

Sin que se limite a ninguna teoria part ptidos de glucagón descritos en la presente son atar el Síndrome Metabólico. Por consiguiente, l oporciona un método para prevenir o tratar e tabólico o reducir' uno, dos, tresno más factores l mismo, en un sujeto, que comprende administra péptido de glucagón descrito en la presen ntidad efectiva para prevenir o tratar el tabólico o el factor de riesgo del mismo. flamación o cicatrización. En la NASH, la acu asa se asocia con varios grados de inflamación cicatrización (fibrosis) del hígado. La flamatorias pueden destruir las células d ecrosis hepatocelular ) . En los términos esteoh stanonectosis", estrato se refiere a la infiltra patitis se refiere a la inflamación en el crosis se refiere a las células del hígado des SH puede conducir finalmente a la cicatrización ibrosis) y luego, cicatrización avanzada i irrosis) . L cirrosis que es causada por la tima etapa más grave en el espectro NAFLD. chel, "Fatty LIVer: Nonalcoholic Fatty Liv FLD) and Nonalcoholic Steatohepatitis (?? hoenfield, Leslie J. , MedicineNet.com, August 29, La enfermedad del hígado alcohólico, o isfunción neurológica causada por insuficiencia citis (acumulación de fluido en el abdomen ofágicas sangrantes (venas varicosas en el agulación sanguínea anormal y coma. Histológic patitis alcohólica tiene una aparición carácte a degeneración globo de hepatocitos, infla utrófilos y algunas veces cuerpos de Mallory (a ormales de proteínas de filamentos intermedios cirrosis se caracterizas anatómicamente p tendidos en el hígado combinados con fibrosi ward J., "Alcoholic LIVer Disease", Columbia dical Center webs'ite) .

Sin que se limite a ninguna teoría part ptidos de glucagón descritos en la presente son tratamiento de la Enfermedad del Hígado Alcohól cualquier etapa de la misma, que incluye, p o, dos, tres o más de los siguiente: contenido hígado, incidencia o progresión de cirrosis, in rcinoma hepatocelular, signos de inflamación, p veles de enzimas hepáticas anormales (por partato aminotransferasa AST y/o alanina . amino T, O LDH) , ferritina en suero elevado, bilirrubi evado, y/o signos de fibrosis, por ejemplo, ni ta elevados. En modalidades preferidas, los p ucagón se usan para tratar pacientes quienes han s allá del hígado graso simple (esteatosis) gnos de inflamación o hepatitis. Tales métodos ? resultado, por ejemplo, la reducción de los o ALT.

Los péptidos de glucagón de la invenció ministrar solos o en combinación con otros ag abéticos o de anti-obesidad. Los agentes anti oglitazona (Rezulin) , u otros inhibidores hibidores de alfa glucosidasa que inhiben la di rbohidratos, tal como miglitol (Gliset) , recose/Glucobay) ; exenatida (Bietta) o p hibidores de Dipeptidil peptidasa-4 (DPP-4) ldagliptina o sitagliptina; inhibidores ransportador 1 de glucosa dependiente d tivadores de glucosinasa (GKA) ; antagonistas de glucagón (GRA) ; o inhibidores de FBPasa (fru sfosfatasa) .

Los agentes anti-obesidad conocidos en l jo investigación incluyen, Leptina y Fact ecimiento de Fibroblastos (FGF-21), supresores d l como estimulantes de tipo de fenetilaminá, pcionalmente con fenfluramina o dexfen etilpropion (Tenuate®) , fendimetrazina cientes hipoglucémicos se pueden usar para poglucemia, por ejemplo, previniendo o tr poglucemia aguda, periódica o nocturna. Tales ucagón también se pueden administrar en conj sulina para amortiguar las acciones de la insuli mantener los niveles de glucosa en la sangre s personas diabéticas. En tales modalidades se método para regular los niveles de glucosa en l S pacientes dependientes de insulina. Los p ucagón de la presente descripción se pueden co-n insulina como una composición sola, adi multáneamente como soluciones separ ternativamente, la insulina y el péptido de g eden administrar en diferente tiempo relativo c algunas modalidades, el método comprende las ministrar insulina en una cantidad terap e el nivel de glucosa en la sangre se regresa a or ejemplo, disminuir el nivel de glucosa en la más alto que el normal, o elevar el nivel de gl gre si es más bajo que el normal) . EstabilÍ vel de glucosa en la sangre significa reducir l xima en el nivel de glucosa en la sangre durante tiempo, por ejemplo, 8 horas, 16 horas, 2.4 hor días, 4 dias, 5 dias, 6 dias o 1 semana. Por ministración del péptido de glucagón causa que ucosa en la sangre a través del tiempo se mante intervalo normal de valores de glucosa que e sencia de la administración del péptido de glucag Los péptidos de glucagón 'de la inv tienen la actividad deseada se pueden usar pa rálisis temporal de los intestinos para usos ra para tratar otras enfermedades metabólicas que i agonista del receptor de GIP y una molécula d GLP-1 en cantidades efectivas para reducir la so o inducir la pérdida de peso o disminuir el a S moléculas pueden estar juntas en la misma c ternativamente, una molécula que activa los nto de GIP como GLP-1 se puede administrar todos. La combinación de varios agonistas de re cir, activación, propiedades proporciona un efe sinérgico inesperado, u otro beneficio esperado. La administración con una dosis conv'e sulina, una dosis reducida de insulina, o sin ntempla de acuerdo con tales métodos. Las mol onista del receptor de GIP ejemplar incluyen GIP GIP, por ejemplo, que retienen por lo menos 50%, 80% de identidad de secuencia en la inspecc spués de la alineación para maximizar las coi tividades incluyen péptidos de glucagon de la álogos de GLP-1 que activan tanto los receptore P, fusiones de GIP y GLP-1 o fusiones de análogo álogos de GLP-1, o derivados químicamente modi s mismos.

Los métodos de tratamiento de acuer esente invención que incluyen pero no se atamiento de hipoglucemia, pueden comprender las ministrar los péptidos de glucagon actualmente d paciente que usa cualquier via de administració e incluye parenteralmente, tal como i traperitoneal, subcutánea o intramuscularmente, ansdérmica, rectal, oral, nasalmente o por inhala De acuerdo con algunas modalidades, ex les métodos, sobre una base de enfermedad por n cualquiera de los análogos de glucagon o análo eía., 44: 3109-31 16 (2001), y Sapse y colabora d. , 8(5):251-262 (2002). En algunas modal intomodulina o un péptido de glucagón que cont inoácidos C-terminal de oxintomodulina (SEQ ID eden excluir.

La oxintomodulina, una hormona digestiv tural encontrada en el intestino delgado, induce peso (ver Diabetes 2005; 54:2390-2395). La oxi un péptido de 37 aminoácidos que contiene la s aminoácidos de glucagón (es decir SEQ ID NO: r una extensión carboxi terminal de 8 aminoácido : 97 (KRNRNNIA) . Mientras que la presente ntempla que los péptidos de glucagón descri esente se pueden unir opcionalmente a esta rboxi terminal de 8 aminoácidos (SEQ ID NO vención en algunas modalidades también ida C-terminal; el péptido de SEQ ID N stituciones [Argl2 , Lys20] y con un amida C-te ptido de SEQ ID NO: 1 con sustituciones [Argl2,L a amida C-terminal; el péptido de SEQ ID stituciones [Argl 2,Lys29] y con una amida C-t ptido de SEQ ID NO: 1 con una sustitución ptido de SEQ ID NO: 1 sin His 1, con sustituci u 16, Lys29] y amida C-terminal; el péptido de S n sustituciones [Glu9, Glu 16f Lys29] y con uñ rminal; el péptido de SEQ ID NO: 1 con su ysl3, Glu 17] enlazada por la vía del puente d n una amida C-terminal; SEQ ID NO: 1 con su ysl7, Glu21] enlazada por la vía del puente de n una amida C-terminal; el péptido de SEQ ID sl, con sustituciones [Glu20, Lys24] enlazada l puente de lactama; los péptidos divulga Los compuestos de la invención también eparar mediante métodos sintéticos estándares, A recombinante, o cualquiera de otros métodos pa ptidos y proteínas de fusión. Aunque ciertos ami túrales no' se pueden expresar mediante técnic combinante estándares, se conocen en el campo l ra su preparación. Los compuestos de la inv arcan porciones no de péptidos se pueden diante reacciones químicas orgánicas estándares, s reacciones químicas de péptidos estándares Ücables. Los datos adicionales sobre la ac ucagón y GLP-1 de los péptidos de glucagón vulgan en el documento PCT/US2008/053857 , presen Febrero del 2008, incorporado a manera de refer esente en su totalidad.

EMPLO 1 p(CHO). El grupo protector de cadena lateral so terminal fue Boc.

Cada resina de peptidilo completa se tr lución de piperidina al 20% en dimetilform mover el grupo formilo del triptófano. Las esc uoruro de hidrogeno líquido se realizaron en p cresol y sulfuro de dimetilo. La escisión se cor hora en un baño de hielo usando un aparato HF bs) . Después de la evaporación del HF, el spendió en éter dietílico y se filtraron los lidos. Cada péptido se extrajo en 30-70ml de ác uoso y se analizó una alícuota diluida por HP stem Gold, 0.46x5cm Zorbax C8, 1 ml/min, 4 lución amortiguadora ? = TFA al 0.1%, B = T cetonitrilo al 90%, gradiente de 10% a 80% B n . ] .

Típicamente, el análogo de Cys glucagón solución salina amortiguada con fosfato (5- 10 iciona ácido tetracético de etilendiamina 0.0 1M lumen total) . Se adiciona reactivo de me leimido de exceso {2 veces) (Néctar) y la reacci temperatura ambiente mientras que se supervisa la reacción por HPLC. Después de 8-24 horas, l acción, se acidifica y se carga sobre una colu versa preparativa para la purificación usando e . TFA/acetonitrilo al 0.1%. Las fracciones ap mbinaron y se liofilizaron para dar los análogo seados .

EMPLO 3 ntesis de Análogos de Glucagón Cys17 (1-29) milares 0.2mmol de resina Boc Thr(OBzl) Pam (S ato con piperidina/dimetilformamida al 20% para otección de formilo Trp luego se transfirió a un reacción HF y se secó in vacuo. 1. Oml de p-cres sulfuro de dimetilo se adicionaron junto con u itación magnética. El recipiente se unió al ennisula Labs), se enfrio en un baño de hielo s evacuó, y aproximadamente 10ml de fluoruro d quido se condensaron. La reacción se agitó en elo ' durante ul hora luego el HF' se removió in siduo . se suspendió en éter etílico; los ltraron, se lavaron con éter, y el péptido se ex de ácido acético acuoso. Se corrió una H-PL .46 x 5· cm Zorbax C8, 1 ml/min, 45C, 214n iortiguadora A de TFA al 0.1%, solución amortig A al 0.1% /ACN al 90%, gradiente B al 10% rante 10 min.] con una muestra pequeña del .lmg. Un análisis HPLC del producto demostró un 0% y el análisis espectral de masas MALDI demos seada de 3429.7. El Glucagón Cys21, el Glucagón ucagón Cys29 se prepararon similarmente .

EMPLO 4 ntesis del Glucagón-Cex y Otros Análogos Ext rminal . 285mg (0.2mmol) de resina de metoxiben idwest Biotech) se colocaron en un recipiente 60ml y la siguiente secuencia se ingresó y se c sintetizador de péptidos Applied Biosy dificado usando acoplamientos solos activados stBoc.

HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNTGPSSGAPPPS Se usaron' los siguientes grupos pro dena lateral: Arg(Tos), Asp(OcHex), Asn(Xan), C quido se condensaron. La reacción se agitó en elo durante lhr luego el HF se removió in vacuo, suspendió en éter etílico; los sólidos se fi varon con éter, y el péptido se extrajo en 50 ético acuoso. Se corrió una HPLC analítica [0 rbax C8, 1 ml/min, 45C, 214nm, solución amortig A al 0.1%, solución amortiguadora B de TFA al %, gradiente=B al 10% a B al 80% durante lOmin. ícuota de extracto de escisión. El extracto se a columna de fase inversa preparativa Kromasil C cm y un gradiente de acetonitrilo se corrió p ando un sistema Pharmacia FPLC. Se recolectaron 5min mientras que se supervisa el UV en 21 TFA al 0.1%, B=TFA al 0.1%/acetonitrilo al 50%. al 30% a B al 100% durante 450min. Las fraccion mbinaron, se congelaron y se liofilizaron para ucagón Cys17 Mal-PEG-5K 15.1 mg de Glucagón Cys17 ( 1 -29) y 27.3m li (etilenglicol ) maleimida de M. W.5000 de prom l-5000, Nektar Therapeutics ) se disolvieron e lución salina amortiguada con fosfato (PBS) ido tetracético de etilendiamina 0.01 M icionaron. La reacción se agitó a temperatura am ogreso de la reacción se supervisó por en an .46 x 5 cm Zorbax C8, 1 ml/min,45C, 214nm (0.5A 1%, B-TFA al 0.1%/ACN al 90%, gradiente=B al 10% rante lOmin.]. Después de 5 horas, la muestra cargó sobre una columna de fase inversa omasil C18 de 2.2 x 25 cm. Un gradiente de acet rrió sobre una Pharmacia FPLC mientras que s ngitud de onda UV a 214nm y se recolectan fr iin. A=TFA al 0.1%, B= FA al 0. l%/acetonitri sas (típico de los derivados de PEG) de 8700 a estra una adición a la masa del péptido de rtida (3429) de aproximadamente 5,000 a.m.u.

EJEMPLO 6 ucagón Cys21 Mal-PEG-5K 21.6 mg de Glucagón Cys17 (1-29) y 24 mg d 00 (Nektar Therapeutics ) se disolvieron en lución salina amortiguada con fosfato (P icionaron 0.5 mi de ácido etilen diamin tetracét reacción se agitó a temperatura ambiente. De ras, se adicionaron otros 12.7 mg de mPEG-MAL-50 8 horas, la mezcla de reacción se cargó sobre fase inversa preparativa Vydac C18 de 2.2 x adíente de acetonitrilo se corrió sobre un Pharm ml/min mientras que se recolectan las fraccione = TFA al 0.1%, B = TFA al 0.1%/ACN al 50%. Gradi istida por matriz) mostró un amplio interval ipico de los análogos de PEG) de 8700 a 9700. E a adición a la masa del péptido de glucagón 470) de aproximadamente 5,000 a.m.u.

EMPLO 7 ucagón Cys24 al-PEG-5K 20.1mg de Glucagón C2 (l-29) y 39.5mg d 00 (Nektar Therapeutics ) se disolvieron en 3.5ml itación y se adicionaron 0.5 mi de EDTA 0.01 M. agitó a temperatura ambiente durante 7 hrs, icionaron otros 40 mg de mPEG-Mal-5000. roximadamente 15 hrs, la mezcla de reacción se a columna de fase inversa preparativa Vydac C18 y un gradiente de acetonitrilo se corrió armacia FPLC. Se recolectaron fracciones de 5 m e se supervisa la UV a 214nm (2.0A). Solución am 25.7mg de Glucagón Cys24(l-29) y 40.7mg d K (Nektar Therapeutics ) se disolvieron en 3.5ml itación a temperatura ambiente y se adicionaron TA 0.01M. Después de 6hrs, la relación del rtida al producto fue de aproximadamente 60: termina por la HPLC. Se adicionaron otros 25.1 l-20K y la reacción se dejo agitar otras 16hrs. producto no se mejoró significativamente, de zcla de reacción se cargó sobre una columna de f eparativa Kromasil C18 de a 2.2 x 25 cm y se pur Pharmacia FPLC usando un gradiente de B al 30% rante 450min. Solución amortiguadora A = TF lución amortiguadora B = TFA al 0.1%/ACN al 50 l/min, y se recolectaron fracciones de 5 min m supervisa la UV a 214nm (2.0A). Las frac ntienen el producto homogéneo se combinaron, se S con agitación a temperatura ambiente y se adic de EDTA 0.01M. Después de 4 hrs, otros 15.6 l-5000 se adicionaron para conducir la reac rminación. Después de 8 hrs, la mezcla de reacci bre una columna de fase inversa preparativa Vyda cm y un gradiente de acetonitrilo se corri stema Pharmacia FPLC. Se recolectaron fraccione entras que se supervisa la UV a 214nm (2.0A). 1%, B = TFA al 0.1%/ACN al 50%. Las fraccione mbinaron, se congelaron y se liofilizaron para i producto que es diferente que el material cuperado sobre la HPLC (fracciones 58-63) . El a oducto por la HPLC analítica [0.46 x 5 cm Zo /min, 45C, 214nm (0.5A), A=TFA al 0.1%, B=TFA L 90%, gradiente=B al 10% a B al 80% durante lOm la pureza mayor que 95%. El análisis espectra OOul en 900ul de acetonitrilo) . Después d itacion a temperatura ambiente, se adicionaron o solución de lactona a la mezcla de reacción itó otras 15hrs. La mezcla de reacción se diluyó ido acético acuoso al ¡0% y se cargó sobre una se inversa preparativa Kromasil C18 de 2.2 x adíente de acetonitrilo (B al 20% a B al 8 Omin) se corrió sobre un Pharmacia FPLC mient colectan las fracciones de 5min y se supervi 4nm (2.0A). Flujo =4ml/min, A=TFA al 0.1%, 1%/ACN al 50%. Las fracciones 74-77 se comb ngelaron y se liofilizaron para dar 7.5mg. El an stro una pureza de 95% y el análisis espectra LDI mostró una masa de 3540.7 o 84 unidades de ta material de partida. Esto resulta consiste ición de una porción de butirolactona sola. solución de ácido bromóacético . La reacción se min luego se acidifico con ácido acético acuoso bre una columna de fase inversa preparativa Krom 2 x 25cm para purificación. Un gradiente de acet rrió sobre un Pharmacia FPLC (flujo = 4ml/min) m recolectan fracciones de 5min y se supervisa .0A). A=T FA al 0.1%, B=T FA al 0.1% A/ACN a acciones 26-29 se combinaron, se congela ofilizaron para dar varios mg del producto alitica mostró una pureza de 90% y el análisis e sas MALDI confirmó una masa de 3515 para e seado .

EMPLO 12 ucagón Cys24 maleimido, PEG-3.4K-dimero 16mg de Glucagón Cys24 y 1.02mg de Mal-PE li (etilenglicol) - bis-maleimida de M. W. 3400 TFA al 0.1%/ACN al 50%. Las fracciones 69-74 se congelaron y se liofilizaron para dar 10.4m alitica mostró una pureza de 90% y el análisis e sas MALDI muestra un componente en el interval ,000 lo cual es consistente con el dimero desead EMPLO 13 ntesis de Lactama de Glucagón 285 mg (0.2 mmol) de resina de metoxiben lidwest Biotech) se adicionaron a unos reci acción de 60 mL y la siguiente frecuencia se ens sintetizador de péptido Applied Biosystems 430a ando acoplamiento solos activos con DEPBT Boc. la remoción por una prueba de ninhidrina p sina se lavó con dimetilformamida, se clorometano y luego nuevamente con dimetilfor sina se trató con ,520 mg (1 mmol) hexafluor nzotriazol-l-il-oxi-tris-pirrolidino-fosfonio ( P metilformamida y diisopropiletilamina (DIEA) . ocedió durante 8-10 horas y la ciclización se c a reacción de ninhidrina negativa. La resina s metilformamida, seguido por diclorometano y bsecuentemente con ácido fluoracético durante remoción del grupo Boc se confirmó por una nhidrina positiva. La resina se lavó con dimetil clorometano y se secó antes de ser transfe cipiente de reacción de ácido fluorhídrico (HF) . -cresol se adicionaron junto con una barra d agnética. El recipiente se unió al aparato HF érra C8, 1.50 mL/min, 220 nm, solución amortigu 0.1% /ACN al 10%, solución amortiguadora B T FA 100%, gradiente B 5-95% durante 15 minutos] . El luyó dos veces con agua y se cargó sobre una se inversa preparativa Vydac C4 de 2.2 X 25 cm ando un gradiente de acetonitrilo sobre un sis LC (solución amortiguadora A de FA al 0.1% /A lución amortiguadora B de TFA al 0.1% /CAN al adíente de B al 0-100% durante 120 minutos en .00 ml/min. El análisis HPLC del péptido mostró mayor que 95% de pureza y el análisis e sas de ionización de electro roció confirmó u 0-6 Da para la lactama 12-16. Las lactamas de 16 24-28 se prepararon similarmente .

EMPLO 14 sayos de la Solubilidad del Glucagón: La lectura de la absorbencia inicial ra el incremento en el volumen y se usa guiente para establecer el porcentaje de solubil sorbencia Final X 100 = porcentaje soluble sorbencia Inicial EMPLO 15 sayo de Enlace del Receptor de Glucagón La afinidad de los péptidos al receptor midió en un ensayo de enlace de competic cnologia de ensayo de proximidad de centelleo, 3 veces en serie de los péptidos hechos en ortiguadora de ensayo de proximidad de centelle 05 M, pH 7.5, NaCl 0.15 M, albúmina de suero bov v) se mezclaron en una placa de fondo blanco/ vidades (Corning Inc., Acton, MA) con glucagón 5 - contador de centelleo liquido MicroBetal450 {Pe llesley, MA) . La radiactividad no especificamen SB) se midió en las cavidades con una concent ces mayor del ligando nativo "frió" que la co s alta en las muestras de prueba y se dioactividad enlazada en las cavidades sin com rcentaje de enlace especifico se calculó com lace Especifico = ( (NSB Enlazado)*/ (NSB enlazad 0. Se determinaron los valores IC50 al usar igin (OriginLab, Northampton, MA) .

EMPLO 16 sayo Funcional - Síntesis de cAMP La capacidad de. los análogos de glucagón cAMP se midió en un ensayo reportero basado en luciérnaga. Células HEK293 co-transfectada ceptor (receptor de glucagón, receptor de GLP-1 ' miniscencia LucLite ( Perkin-Elmer, Wellesley icion'aron a cada cavidad. La placa se agito bre cubó 10 minutos en la oscuridad y el rendimient dió sobre el contador de centelleo liquido Mic erkin-Elmer, Wellesley, MA) . Se calcularon conc 50% efectivas al usar el software Origin rthampton, MA) .

EMPLO 17 sayo de Estabilidad para los Análogos de Gl leimido PEG Cada análogo de glucagón se disolvió en se condujo un análisis HPLC inicial. Después de (4, 5, 6, 7) , las muestras se incubaron durante tiempo especificado a 37 °C y se volvieron diante HPLC para determinar la integridad del terminó la concentración del péptido especifico hnolzer y colaboradores, Int. J. Péptido Prote 0-193 (1992).' Para los péptidos adiadas, el inoácido objetivo que se acila (por ejemplo, p sustituye con un residuo de N e -FMOC de atamiento del péptido protegido con BOC N-te rmiñado con piperidina al 20% en DMF durante mueve los grupos FMOC/ ormilo . El acoplamiento e-amino Lys libre se logra al acoplar un exce ez veces de ya sea un aminoácido espaciador pr OC (por ejemplo FMOC- (N-BOC) -Triptófano-OH) o ilo (por ejemplo C17-COOH) y reactivo de acoplam DEPBT en DMF/DIEA. La remoción subsecuente del i aminoácido espaciador se sigue por la . rep oplamiento con una cadena de acilo. El tratam n TFA al 100% da por resultado la remoción de cu S grupos protectores de cadena lateral y el g oteinas Vydac C18 de 22 mm x 250 mm para la ?? s análogos del péptido acilado terminan gene ución por una relación de solución amortiguador s porciones se agrupan conjuntamente, y se ver reza sobre una RP-HPLC analítica. Las fraccion ofilizan produciendo péptidos sólidos, blancos.

Si un péptido comprende un puente de la siduos objetivo que se acilan, la acilación se 1 rno se describe anteriormente en la adici inoácido a la cadena principal del péptido.

Para la pegilación del péptido, 40 kDa Ü (etilenglicol ) -maleimido-propionamida chnology Ltd. ) se hace reaccionar con un equiva E; péptido en Urea 7M, solución amortiguadora )mM usando la cantidad mínima del solvente nec Ísolver tanto el péptido como el PEG en una sol acciones del péptido PEGilado puro se recol ofilizan.

Los péptidos se someten a ensayo para l ológica como se describe anteriormente en el s péptidos acilados pueden exhibir potencia incr receptor de GLP-1. La inclusión de un esp iptófano puede proporcionar mejor potencia en glucagón.

Mientras que la acilación puede prolon dia de un péptido a horas o más, la PEGi peticiones en decenas de intervalos de kDa lo n más. Se preparan péptidos que comprenden amb dificaciones . Estos péptidos se espera que e dia prolongada en circulación, asi como también DPP-IV y otras proteasas.

E PLO 20 (B) Un antagonista de GIP pegilado (Pr (1-42) 40K PEG, los cuales son los aminoácid P (la secuencia del GIP nativo es SEQ ID NO: 4) un Pro en .la posición 3, un Cys en la posic al se une a un grupo 40K PEG, y una amida en rboxilato C-terminal) ; (C) Un agonista de GIP (AIB2 C24 GIP G, los cuales son los aminoácidos 1-42 de GIP (l GIP nativo es SEQ ID NO: 4) modificado con sición 2 y un Cys en la posición 24, el cual s upo 40K PEG) ; y Los péptidos se sometieron a prueba i yectar subcutáneamente ratones obesos inducidos I0) con varios péptidos, o vehículo solo, QW ol/kg/semana) . Cada grupo contuvo 8 ratones, ca peso corporal promedio inicial de 50 g. El pes MPLO 21 ividad de GIP, GLP-1 y glucagón de los péptidos Los péptidos de SEQ ID NOs : 5-94 (cada les comprendió una amida en lugar del carb minal) se sintetizaron como se describe esenci anterior y es sometieron a prueba in vitr ividad en el receptor de GIP, receptor de eptores de glucagón por el Ejemplo 16. La EC5 tido se muestra en la Tabla 1. relativa a la hormona nativa del Con base en estos datos, se determin tidos mt-140, mt-147, mt-151, mt-152, mt-1'58, m 5, mt-166, mt-169, mt-170, mt-172, mt-175, y mt- tidos triagonistas de GLP-l/GIP/glucagón entras que los péptidos mt-148, mt-149, mt-162, 8, mt-201, y mt-204 fueron péptidos co-agonist GIP ejemplares, y los Péptidos mt-1 16, mt-176, -182 fueron péptidos co-agonistas de GI emplares .¦ EMPLO 22 Un péptido triagonista 'de GLP-l/GIP/glu 0), péptido co-agonista de GLP-1/GIP (mt-178 tidos de co-agonista de GlP/glucagón (mt-182 y emplo 21 se sometieron a prueba in vivo a cutáneamente ratones obesos inducidos por dieta os péptidos, un péptido co-agonista de glu denas laterales de Glu 16 y Lys 20) , o el vehícu o 210 nmol/kg/semana) . Cada grupo contuvo 8 ra o con un peso corporal promedio inicial de 50 rporal se determinó periódicamente.

Como se muestra en la Figura 4, el triag -agonista de GLP-1/GIP fueron muy poco efectivos peso corporal en los ratones como la Quimera 2 tan efectivos como la Quimera 2 AIB2 lactam mostró la mejor habilidad para reducir el peso c ntraste, tanto los co-agonistas de GIP/gl pecialmente mt-182, fueron menos efectivos en so corporal.

EMPLO 23 Un péptido triagonista de GLP-l/GIP/glu 0) y un péptido co-agonista de GLP-1/GIP (i metieron a prueba in vivo al inyectar subc so corporal y los niveles de glucosa en la san onista de GLP-1.

EMPLO 24 El efecto de estabilización de la alfa s análogos basados en glucagón con un aminoá fa-disustituido in lieu en una lactama es in emplazar la lactama de mt-165 (SEQ ID NO: 64) EQ ID NO: 69) con un AIB en la posición 16. El mprende la secuencia de mt-165 con un AIB en la lieu de la lactama se llamó "mt-241" y tubo l aminoácidos de SEQ ID NO: 167 , mientras que el mprende la secuencia de mt-170 con un AIB en la lieu de la lactama se llamó "mt-248"" y tuvo l aminoácidos de SEQ ID NO: 173.

Los péptidos lineales adicionales que ca ente de lactama y que comprenden AIB en la posi TABLA 2 Como es evidente por los resultados en l péptidos lineales que no contienen un porcionaron actividad en el receptor de GIP, bién los receptores de glucagón y/o G ecificamente, mt-242, mt-248, mt-249, mt-250, m 5, mt-258, y mt-259 exhibieron actividades de tr glucagón/GLP-l/GIP, mientras que el mt-25 ividad de un co-agonista de GLP-1/GIP. El pépti cual tuvo un Lys en la posición 16 y un AIB en 1 r exhibió potencia en los receptores de glucagón ibió una actividad mejorada en el receptor de GI PLO 25 Los péptidos lineales que carecen de un tama y que comprenden un Lys o residuo simi sición 16 y AIB en la posición 20 se hiciero scribe esencialmente en lo anterior. Los péptido Como se muestra en la Tabla 3, los neales fueron activos en el receptor de GIP y, sos, el péptido se activó adicionalmente en el ucagón y/o el receptor de GLP-1. Más especifícam los mt-252, mt-255, mt-257, mt-260, mt-261 , m 5, mt-266, mt-267, mt-275, mt-276, mt-277, mt-27 -280, mt-286, mt-287, mt-288, mt-289, mt-290, m 2, mt-293, mt-295, mt-296, mt-297, rnt-299, mt-30 -310, mt-323, mt-324, y mt-345 exhibieron activi ceptores de GIP, GLP-1, y glucagón, mientras que ptidos de la Tabla 3 exhibieron actividad en los GIP y GLP-1 (excepto para mt-285, el cu tividad en solamente el receptor de GIP, y mt-32 hibió actividad en los receptores de glucagón y en el receptor de GLP-1) .

Al comparar los datos para mt-252, s podría ser reemplazado con un residuo similar a Además, al comparar los datos de mt-25 prende un Gln en la posición 3, a los datos d -274, los péptidos que comprenden un Glu .en la evidente que la sustitución de Gln en la posici siduo Glu logró una selectividad para los rec P-1 y GIP sobre el receptor de glucagon.

El efecto de la acilación con ácidos g 6, y C18 fue evidente de los datos de mt-260 a m 5 a mt-272. A partir de estos datos, fue evide ilación con ácidos grasos C16 y C18 proporcionó crementada en los receptores de GLP-1 y GIP. La estos péptidos permitió aun una actividad incre receptor de glucagon aunque los péptidos compre stitución Gln3Glu. La actividad incrementada en glucagon podría ser observada a partir de lo yectaron intraperitonealmente los ratones en el o 10 nmol /kg/semana .

Una prueba de tolerancia a la glucosa TT) se realizo en los ratones al traperitonealmente con una solución salina de % (p/v) en · los ratones una hora después de la in o de los péptidos o control de vehículo. La solu glucosa se administro al ratón en una dosis de de peso corporal de ratón. Los niveles de glu ngre se midieron en el momento de la inyección el control de vehículo (-60 min) , en el mom yección de solución salina de glucosa (0 min), o , o 120 minutos después de la inyección con 1 liña de glucosa. Los resultados de la GTT de u estran en la Figura 7.

Una GTT de 24 horas también se reali Además, el peso corporal de cada ratón 1, 3, 5, y 7 días después de la inyección con trol de vehículo. El % de cambio en el peso s ratones se muestra en la Figura 10.

Como se muestra en la Figura 10, l yectados con mt-178 y mt-274 en ya sea la dosis o1/kg/semana perdieron peso al mismo, o mayor gr tones inyectados con el péptido de control de P (una dosis de 10 nmol/kg/semanas) .

Como se muestran en las Figuras 7 y 8, yectados con mt-178, mt-274, o el control de P-1 exhibieron niveles disminuidos de glucosa en mo son comparados con los ratones inyectados con vehículo. La potencia de mt-178 y mt-274 pareci e aquella del péptido de control de agonista de -178 y mt-274 en 3 nmol/kg/semana lograron el m tidos se inyectaron subcutáneamente en los ra tidos adicionales también se sometieron a prueb sis: un péptido que tiene la misma estructura c ro que comprende un grupo PEG unido al Cys en l por la vía de un enlace de tioéter más estable rmado por una sustitución nucleofilica como es o lace de tioéter tradicional formado por malenimi via de la adición de Michael como se encuentra un segundo péptido que tiene la misma estructur 4 pero que comprende un grupo PEG unido al sición 40 por la via del enlace de tioéter rmado por la sustitución nucleofilica. Estos pé feridos en la presente como mt-178 (TE) y n spectivamente .

Los niveles de glucosa en la sangre tota tones se midieron 0 y 7 dias después de la inyec , mientras que los cambios totales en el peso c s ratones como es medido 7 días después de la in péptido o control de vehículo se muestran en la Como se muestra en la Figura 12, el ca la glucosa en la sangre disminuyo en todos l yectados con cualquiera de los péptidos sometidos o es comparado con los ratones inyectados con vehículo. Los cambios más notables en la glu ngre se observaron en los ratones inyectad ol/kg/semana de mt-274 o mt-178 (TE) .

Como se muestra en la Figura 14, el cambi peso corporal disminuyo en todos los ratones n cualquiera de los péptidos sometidos a prueb parado con los ratones inyectados con el hículo. Similar al cambio total en la glucosa en s cambios más notables el peso corporal se obs ilo graso C16, un grupo acilo graso C14, o un g aso C18. Estos péptidos son referidos en la pre -298, mt-309, y mt-310, respectivamente. Similar cursor, mt-274, los péptidos acilados prendieron un grupo 40 kDa PEG. Sin embargo, el los péptidos acilados se unió covalentemente a teral de un residuo de Cys en la posición tidos. Las secuencias de aminoácidos de lo ilados mt-298, mt-309, y mt-310 se proporció esente como SEQ ID NOs : 101-103, respectivamente.

Una versión no acilada de mt-298, mt-209 partir de ahora referida como mt-311) se hizo y prueba. El péptido mt-311 diferente de mt-274 en unió covalentemente a un grupo PEG a través de teral de un residuo de Cys en la posición 24 uesto a un residuo de Cys en la C-termina - - spués de la inyección con el péptido o el hiculo. El % de cambios en el peso corporal de l o una función de tiempo se muestran en la entras que los cambios totales en el peso corpo tones como es medido 7 dias después de la inyecc ptido o el control de vehículo se muestran en la Como se muestra en la Figura 17, l yectados con cualquiera · de los péptidos exhi sminución en el peso corporal como es compara tones inyectados con el control de vehículo. L yectados con el péptido que contiene lactama gilado (mt-178) demostró la perdida más grand rporal 7 días después de la inyección.

Como se muestra en la Figura 15, los ucosa en la sangre de los. ratones inyectados c -274, mt-311, o versiones aciladas C14 o C16 de pecíficamente, mt-260 que comprende un grupo a sobre el aminoácidos C-terminal (SEQ ID NO: ¦ 10 e comprende un grupo acilo graso C16 sobre el terminal (SEQ ID NO: 105) y mt-262 que comprend ilo graso C18 sobre el aminoácidos C-terminal ( 6) se hicieron. Las estructuras de cada uno ptidos fueron similares a aquellas de mt-298, mt 0, pero difirieron en que mt-260, mt-261, mprendieron un residuo de Asn en lugar de un res gilado en la posición 24.

Los péptidos, mt-260, mt-261, o mt-262, control (Liraglutide, un análogo de GLP-1 acil ntrol de vehículo se inyectaron QD en ratones en 25 o 125 nmol/kg durante 7 dias.

Los niveles de glucosa en la sangre de midieron 0 y 7 dias después de la inyección con s péptidos lineales, no pegilados, acilados (m 1, y mt-262) tuvieron sobre los niveles de glu ngre fueron notables. En 25 nmol/kg, estos usaron aproximadamente un 50% de disminución en 1 glucosa en la sangre, y en la dosis más alta, l usaron una disminución en los niveles de gluc ngre que fue mayor que el 50%.

Como se muestra en la Figura 19, cada ptidos lineales, no pegilados, acilados (ya se ja o alta) causaron una disminución en el peso al fue más potente que la disminución en el pes grada por el Liraglutide la dosis baja. El pes ntinúo disminuyendo durante el curso de los 7 sayo .

Estos resultados sugieren que los péptid glucagón lineales no pegilados, acilados que s i s ratones se inyectaron subcutáneamente QD d ana con vehículos solamente, liraglutide (30 SO corporal) o mt-261 (0.3, 1, 3, 10 o 30 nmol/ rporal) .

El peso corporal de los ratones se midi y 7 días después de la primera inyección. Como la Figura 21, la inyección con mt-261 o liragl pérdida de peso en los ratones. El péptido mt-2 a potencia mayor que liraglutide, ya que 3 nmol 1 lograron esencialmente el mismo efecto como raglutide (Figure 21) .

La masa de grasa de los ratones se mi spués de la primera inyección mediante la fo ágenes de resonancia magnética nuclear. Como se Figura 22, la dosis de incremento de rrelacionó generalmente con la disminución de s niveles de glucosa en la sangre. Consistent sultados de los ensayos de masa de grasa y peso disminución en los niveles de glucosa en la san tones inyectados con 3 nmol/kg de mt-261 fue si sminución de los niveles de glucosa en la san tones inyectados con 30 nmol/kg liraglutide, dem tencia más alta de mt-261 como es compara raglutide.

En un experimento separado, la versión mt-261, principalmente, mt-263 (SEQ ID NO: 111) prueba en nueve grupos de ratones de C57BI/6 (8 upo) para sus efectos in vivo en el peso corpora alimento, niveles de glucosa en la sangre y mas s ratones fueron de' 11 meses de edad y habían es eta diabetogena durante 9 meses en el momento de peso corporal promedio de los ratones fue de rmanente en espeso corporal .durante el periodo d días. El efecto en el peso corporal también pare pendiente de dosis ya que el cambio total e rporal (mostrada en la Figura 25) se incr crementar la dosis del péptido mt-263. Además estra en la Figura 25, los cambios totales e rporal logrados por cualquiera de las tres dosis eron sustancialmente más que el cambio total rporal logrado por la inyección con Exendin-4 (e sis) .

Los efectos ín vivo en el consumo de ali grasa, y glucosa en la sangre también se deter sumo de alimento total y la masa de grasa como el Día 7 de los ratones inyectados, con dujeron como es comparado con el control de veh endin-4. Además, los cambios totales en los imento, y niveles de glucosa en la sangre del 3 también se compararon a aquellos de los pépt EQ ID NO: 262), mt-280, mt-356, y mt-357, y de vehículo. A los ratones se les dio 30 nmol/kg/ los péptidos durante 1 semana. Todos los pépt ectivos en reducir el peso corporal en los rato mparado con el control de vehículo.

EMPLO 31 Los efectos in vivo de los péptidos ucagón acilados, lineales mt-277, mt-278, y metieron a prueba y se compararon con aq raglutide. Los ratones DIO (8 ratones por g rporal inicial promedio = 51.4g) se inyectaron bcutánea diariamente durante 1 semana con un hículo o 10 nmol/kg de liraglutide, mt-277, mt-9. 9 causó una disminución significativa en los ucosa en la sangre, la disminución que fue mucho e aquella observada en los ratones inyec raglutide.

EMPLO 32 Un análogo basado en glucagón, de rece GLP-1 se modificó para comprender una extensión la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 95 y icionalmente para comprender un Lys en la C-term NO: 95. El residuo de Lys el cual se loca sición 4o del análogo se afiló con un grupo 4. Este análogo afilado se sometió a prueb tividad in vitro en el los receptores de glucagó ? como se describe esencialmente en el Ejem tividad in vitro se comparó a aquella del análog ucagón, de receptor activo de GLP-1 precursor qu MPLO 33 Los péptidos del análogo de glucagón aci de los cuales comprendió una amida en lu rboxilato C-terminal) se sintetizaron como s encialmente en lo anterior. Los péptidos mt-35 -368, y mt-369 fueron monómeros adiados, mientr -354, mt-376, y mt-377 fueron dimeros acilados, da dimero comprendió dos monómeros enlazados por s residuos Cys C-terminal. Los péptidos mt-367, -369 " comprendieron un espaciador de dipéptido ra propósitos de unir el grupo acilo, mientras aciló en la ausencia de un espaciador. Los pé 5, mt-227, y mt-294 fueron monómeros pegi mprendieron un puente de lactama entre el ácido la posición 16 y la lisina en la posición 20. L -225 y mt-227 comprendieron un espaciador de dip 5 I> n- o 03 c ? rt ?-? £u 0) P Oí 1-9 a disulfuro, en la cual cada monómero de péptido se une por la via de un enlace ra A a PEG, en la cual cada monómero de péptido se une por la via de un PEG como se acicn en la posición 40 del monómero (en donde la posición i es el aminoácido N- Dii&ero de Disulfuro hibida por el mt-368 se mejoró notablemente parada con aquella demostrada por el mt-3 tividad en el receptor de GIP de mt-368 encialmente en comparación con mt-358, sugirie ilación de un péptido de glucagón por la paciador pueden xmplementar la actividad en el r P-1, mientras que mantiene una actividad consist ceptor de GIP. La acilación por la vía de un es posición 10 del análogo de glucagón apareció se ana posición como en la posición 40 del ucagón, . puesto que las actividades relativa ceptores de GLP-1 y GIP fueron aproximadamente ra mt-367 y mt-369.

EMPLO 34 Dos péptidos de análogo de glucagón ac eñen la misma secuencia de aminoácidos pero difi Los dos péptidos o un control de v ministraron por la vía de la inyección sub rante una semana a múltiples grupos ' de raton tones por grupo; peso corporal promedio = 64. ptidos se administraron en una dosis de ya se ol/kg .

Los pesos corporales de los ratones se 3, 5, y 7 dias después de la administraci ptidos o el control de vehículo. El peso corpo tones se inyectados con la dosis más alta de ya mt-331 disminuyó permanentemente durante el c mana. El cambio total en el peso corporal (%) se Figura 29. Como se muestra en esta figura, el c Los niveles de glucosa en la sangre de ratones , se midieron 0 y 7 dias despu ministración de los péptidos o el control de ve veles de glucosa en la sangre de los ratones di ministración de la dosis más alta de ya sea mt-1. Como se muestra en la Figura 31, la disminuc veles de glucosa en la sangre fue mayor en l yectados con 35 nmol/kg de mt-331.

Se midió la masa de grasa de cara grupo administración de los péptidos no apareció qu ecto sobre la masa de grasa, sin embargo.

EMPLO 35 Los efectos in vivo de dos péptidos d cuencia de aminoácidos pero que difieren por la grupo acilo unido al Lys en la posición 40 (mt- 153)) o la presencia de un grupo acilo graso spués de la administración del péptido o hículo. Como se muestra en la Figura 32, el camb peso corporal fue más significativo para l yectados con 10 nmol/kg de ya sea mt-331 o mt-353 El consumo de alimento por los ratones s 3, 5, y 7 días después de la administración de trol de vehículo. Como se muestra en la Fig nsumo de alimento total por los" ratones inyectad nmol/kg de ya sea mt-331 o mt-353 se di mparación con los ratones administrados con el hículo.

Se supervisaron también los niveles de sangre de los ratones. Como se muestra en la Fi -331 causó una disminución en los niveles de gl ngre en una manera dependiente de dosis. Las do -353 causaron adicionalmente que los niveles de tones por grupo) . Los péptidos tuvieron la misma aminoácidos píero difirieron en el tamaño del g aso al cual se unió. El liraglutide en la conce nM/kg se uso como un control. Los péptidos o un hiculo se administraron mediante inyección ariamente durante una semana.

Las actividades in vitro en los rec ucagón, GLP-1, y GIP se sometieron a prueba tividad de cada péptido relativo con la hormona estra a continuación en la Tabla 5.

TABLA 5 Péptido % de actividad % de actividad % de en el receptor en el receptor en e de GLP-1 de glucagón Liraglutide 138 0.04 Mt-277 224 235 tones inyectados con uno de los péptidos t ilados fue de aproximadamente -15%, mientra raglutide logró menos de una disminución del 5% rporal .

E PLO 37 El efecto de la frecuencia de dosificaci icacia de un péptido acilado, ' pegilado (mt-309; ' 2) y un péptido acilado, no pegilado (mt-261; 5) se sometió a prueba en 7 grupos de raton tones por grupo) que tienen un peso corporal pro Los péptidos se inyectaron subcutáneamente en l en una dosis de 5 nmol/kg, cada segundo dia en 2o. dia 10 nmol/kg, o QW en una dosis de 30 n tudio duro 6 dia, tal que cada grupo de ratones nmol/kg por el final del periodo del estudi rporal en los niveles de glucosa en la sangre se ptido.

Las mismas tendencias en el peso corpor drian ser observadas con los niveles de gluc ngre (Figura 37): una inyección QW de mt-309 log sminución en los niveles de glucosa en la sangr yección QD de este péptido, y una inyección QD gró la misma disminución en los niveles de glu ngre como una inyección cada 2o. día de este pépt EMPLO 38 El efecto en la frecuencia de dosificaci icacia se sometió a prueba para un péptido a ucagón acilado, mt-261 (SEQ ID NO: 105) a bcutáneamente 8 grupos de ratones DIO (8 ratones e tienen un peso corporal inicial de 56 g con 5 a, 10 nmol/kg cada 2o. día, 15 nmol/kg cada 3er ol/kg durante un día, tal que cada grupo recibió as exhibieron casi la misma disminución en rporal .

EMPLO 39 Los siguientes péptidos del análogo de g enen una actividad agonista apreciable en so ceptor de glucagón y no en el receptor de mprenden una cadena principal del Péptido J HS-X-GTFTSDYSKYLDTRRAAEFVAAWL (NIe) DE (SEQ ID NO: 240) Péptido K HS-X-GTFTSDYSKYLD (Aib) RRAADFVAWLMDE (SEQ ID NO: 241) la modificación adicional en la posición 3 S diante las síntesis de péptidos de ' fase sóli scribe esencialmente en presente. Los péptidos s ueba para la actividad in vitro en el receptor J C (Acm) 243 0.18 J Dab{Ac) . 244 0.31 J Dap (urea) 245 0.48 J Q(Me) 246 0.48 J M(0) 247 0.91 J Orn (Ac) 248 0.92 K Q 249 0.39 K Dab (Ac) 250 0.07 K Q(Me) 251 0.11 = glutamina; C (Acm) = acetamidometil-cisteína; ido acetildiaminobutanoico; . Dap (urea) rbamoldiaminopropanoico; Q(Me) = metilglutamin tionina-sulfóxido; Om(Ac) = acetilornitina .

Como se muestra en la Tabla 6, inoácidos podrían reemplazar el Gln en la posi a pérdida sustancial de actividad en el r metió a prueba la actividad in vitro en el r ucagón. Las estructuras y actividades de cada estran en la Tabla 7.

TABLA 7 Secuencia de aminoácidos SEQ EC50 (nM) e ID el Recepto NO: de Glucagó Glucagón de Tipo Silvestre 1 0.026 HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQ LMDT 252 0.015 HSDab (Ac) GTFTSDYSKYLDAibRRAADFVAWLLDE 253 0.069 Dab (Ac) GTFTSDYSKYLDAibRRAADFVAWLLDTGPSSGAPPPS 254 0.023 amida HSDab (Ac) GTFTSDYSKYLDAibRRASDFVSWLLDE 255 0.048 HSDab (Ac) GTFTSDYSKYLDAibRRATDFVTWLLDE 256 0.057 EMPLO Los análogos de glucagón que tienen un péptido y-Glu-y-Glu, y lie en la posición 12, sición 16, Gln en la posición 17, Ala en la po B en la posición 20, Glu en la posición 21, sición 24, Leu en la posición 27, Ala en la pos y en la posición 29, seguido por el aminoácido : 95 C-terminal a la posición de aminoácidos 29. -385 comprendió la misma estructura como el Pép cepto que el Thr en la posición 7 se cambio a un 5.

Los análogos se sometieron a prueba tividad in vitro en cada uno de los receptores d P-1, y GIP como se describe esencialmente en l s resultados se muestran en la Tabla 8.

TABLA 8 Péptido % de actividad relativa en el Rece Glucagón GLP-1 tones fueron de aproximadamente de 10 meses de e tado en una dieta con alto contenido de gra roximadamente 8 meses.

El cambio total en el peso corporal se a 7. Todos los ratones inyectados con un pép bla 8 demostraron una disminución en el peso co comparado con el control de vehículo. Los rato yectaron con mt-369 demostraron la cantidad más rdida de peso (-25% de disminución), seguid tones que se inyectaron con mt-368 (~22% de dis s ratones que se inyectaron con mt-384 sminución) . Los ratones que se inyectaron con m 5 exhibieron una pérdida de peso más baja gnificativa (mt-367: -18% de disminución y mt-38 sminución) .

Todas las referencias, que incluyen pub ngular como el plural a menos que se indique de la presente o se contradiga claramente por e S términos "que comprende", "que tiene", "que ue contiene" se van a considerar como términos s decir, significan "que incluyen, pero que n ) menos que se observe de otra manera.

La cita de los intervalos de valores en proponen meramente para servir como un métod ra referirse individualmente a cada valor separ ntro del alcance y cada punto final, a menos que otra manera en la presente, y cada valor separ nal se incorpora dentro de la especificación citaran individualmente en la presente.

Todos los métodos descritos en la p eden realizar en cualquier orden adecuado a me dique de otra manera en la presente o se scriben en la presente, incluyendo el mejor mo ra los inventores de llevar a cabo la inve riaciones de aquellas modalidades preferidas identes para aquellas personas de experiencia o técnica al leer la descripción anterior. Los peran que los artífices expertos empleen tales mo sea apropiado, y los inventores propon venciórí se practique de otra manera . que como pecíticamente en la presente. Por consigui vención incluye todas las modificaciones y equiv ma citado en las reivindicaciones adjuntas a la ¡ permitido por la ley aplicable. Por otra parte >mbinación de los elementos descritos anteriormen LS variaciones posibles de los mismos se aba Lvención a menos que se indique de otra man •esente o se contradiga claramente de otra man

Claims (1)

1. REIVINDICACIONES 1. Un análogo de glucagón {SEQ ID N ene actividad agonista de GIP, caracterizad guientes modificaciones: (a) una modificación de aminoácido en la pos confiere actividad agonista de GIP, (b) una modificación seleccionada del consiste de: (i) un puente de lactama entre la laterales de aminoácidos en las posición o entre las cadenas laterales de los ami las posiciones j y j+3, en donde i es 1 17, 20 o 24, y en donde j es 17, y (ii) uno, dos, tres, o todos los aminoác posiciones 16, 20, 21, y 24 del sustituido con un aminoácido , a-disusti c 1-10 modificaciones de aminoácido adición rece de una cadena lateral de imidazol es un omático, grande. 4. El análogo de conformidad ivindicación 3, caracterizado porque el omático, grande es Tyr. 5. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 1 a 4, caracterizado porque e ctama está entre los aminoácidos en las posicion donde uno de los aminoácidos en las posiciones stituye con Glu, y el otro de los aminoácid siciones 16 y 20 se sustituye con Lys. 6. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 1 a 4, caracterizado inoácido , a-disustituido es AIB. 7. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 1 a 4, y 6, caracterizado inoácido en la osición 16 o osición 20 se su [Fórmula IV] en donde n es 1 a 7, en donde cada uno de selecciona independientemente del consiste de H, alquilo de Ci-Cie,. (alq Ci8) OH, (alquilo de Ci-Ci8)NH2, (alqu Cis)SHf (alquilo de C0-C4) (cicloalquilo (alquilo de C0.-C4) (heterociclico (alquilo de C0-C4) (arilo de C6-Ci0)R7, de C1-C4) (heteroarilo de C3-C9) , en do u OH, y la cadena lateral del aminoá Fórmula IV comprende un grupo amino li 10. El análo o de conformidad ivindicación 11, caracterizado porque (a) el Met en la posición 27 se sustitu aminoácido alifático grande, opcionalment (b) el Asn en la posición 28 se sustitu aminoácido alifático pequeño, opcionalmen (c) el Thr en la posición 29 se sustitu aminoácido alifático pequeño, opcionalmen (d) una combinación de dos o todos de (a) , (b 13. El análogo de conformidad ivindicación 12, caracterizado porque comprende sición 27, Ala en la posición 28, y Gly o sición 29. 14. El análogo de conformidad con cua is reivindicaciones 1 a 13, caracterizado porqu ía extensión de 1 a 21 aminoácidos C-terminal al i la posición 29. 15. El análo o de conformidad rgados positivos son de la fórmula [Fórmula IV] en donde n es 1 a 7, en donde cada uno de selecciona independientemente del consiste de H, alquilo de Ci-Cie, (alq Cíe) OH, (alquilo de Ci-Ci8)NH2, (alqu Ci8)SH, (alquilo de C0-C4) (cicloalqu Ce) r (alquilo de C0-C4) (heterociclico (alquilo de C0-C4) (arilo de C6-Cio)R7, de C1-C4) (heteroarilo de C3-C9) , en do u OH, y la cadena lateral del amino F rmul V m un 20. El análogo de conformidad ivindicación 19, caracterizado porque el lazado al grupo acilo o alquilo es un aminoá rmula I, Fórmula II, o Fórmula III. 21. El análogo de conformidad ivindicación 19, caracterizado porque el aminoá rmula I es Lys . 22. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 19 a 21, caracterizado inoácido enlazado al grupo acilo o alquilo se posición 10 del análogo relativo con SEQ ID NO: 23. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 19 a 21, caracterizado porqu álogo comprende una extensión de 1 a 21 amin rminal al aminoácido en la posición 29, el lazado al grupo acilo o alquilo se localiza en u e corresponde a cual uiera de las osiciones 37- 26. El análogo de conformidad vindicación 25, caracterizado porque el espacia átomos en longitud. 27. El análogo de conformidad ivindicación 26, caracterizado porque el espaci inoácido o dipéptido. 28. El análogo de conformidad ivindicación 27, caracterizado porque el espaci ido 6-amino hexanoico. 29. El análogo de conformidad ivindicación 27, caracterizado porque el espaci péptido seleccionado del grupo que consiste de: a-p-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, y ?-Glu-y-Glu. 30. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 25 a 29, caracterizado ngitud total del espaciador y el grupo ac roximadamente 14 a a roximadamente 28 átomos en modificación seleccionada del grupo que consist (a) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly, N-metil-Ser, AIB, Val, o ácido butírico; (a) Tyr en la posición 10 sustituido con Trp, Glu, Phe, o Val; (b) Enlace de un grupo acilo a un Lys en 10; (c) Lys en la posición 12 sustituido con Arg (d) Ser en la posición 16 sustituido con ácido homoglutámico, ácido homocisteico, o AIB; (e) Arg en la posición 17 sustituido con Gln; (f) Arg en la posición 18 sustituido con Ala o Gly; (g) Gln en la posición 20 sustituido con Ser L s Citrulina Ar Orn o AIB '34. Un análogo de glucagón (SEQ I racterizado porque tiene actividad agonista mprende un grupo acilo, en donde el grupo acilo paciador, en donde: (i) el espaciador se une a la cadena l aminoácido en la posición 10 del análogo; (ii) el análogo comprende una extensión d aminoácidos C-terminal al aminoácido en 29 y el espaciador se une a la cadena la aminoácido que corresponde a una de las 37-43 relativas a SEQ ID NO: 1; donde el análogo exhibe por lo menos 1% de ac !P en el receptor de GIP. 35. El análogo de conformidad iivindicación 34, caracterizado porque comp icuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 co )dificación de aminoácido en la osición 1 u inoácido , -disustituido; - (iii) hasta 6 modificaciones de aminoácido adici 36. El análogo de conformidad ivindicación 35, caracterizado, porque el análog ) una sustitución de aminoácido de Ser en la >n un aminoácido de la Fórmula IV: [Fórmula IV] donde n es. 1 a 7, en donde cada uno de R lecciona independientemente del grupo que cons quilo de Ci-Ci8, (alquilo de Ci-Ci8)OH, (alqu 8)NH2/ (alquilo de Ci-Ci8)SH, (alquilo de C0-C4) (c C -C al uilo de C -C heterociclico de C -C siciones 21, 28, y 29. - 38. El análogo de conformidad ivindicación 37, caracterizado porque comprende sición 21, Ala en la posición 28, y Gly o sición 29. 39. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 34 a 38, caracterizado tensión comprende la secuencia de aminoácidos de o 96. 40. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 34 a 39, caracterizado paciador se une a la cadena lateral de un amino rmula I, Fórmula II, o Fórmula III. 41. El análogo de conformidad ivindicación 40, caracterizado porque el amino rmula I es Lys . 42. El análo o de conformidad con cu 45. El análogo de conformidad ivindicación 43, caracterizado porque el espaci péptido seleccionado del grupo que consiste de: a- ß-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, y ?-Glu-y-Glu. 46. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 34 a 45, caracterizado ngitud total del espaciador y el grupo ac roximadamente 14 a aproximadamente 28 átomos en 47. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 34 a 46, caracterizado porqu ilo es un ácido graso de C12 a C18. 48. El análogo de conformidad ivindicación 47, caracterizado porque el grupo a C16. 49. Un análogo de glucagón (SEQ I racterizado porque tiene la actividad agonista s si uientes modificaciones: las posiciones 27, 28 y 29, y (el) 1-6 modificaciones de aminoácido adiciona donde la EC50 del análogo para la activación d P es de aproximadamente 10 nM o menor. 50. El análogo de conformidad ivindicación 49, caracterizado porque la modif inoácido en · la posición 1 es una sustitución de inoácido que carece de una cadena lateral de imi 51. El análogo de conformidad ivindicación 49 o 50, caracterizado porque (a) la modificación de aminoácido en la pos una sustitución de His con un aminoácido grande, opcionalmente Tyr, (b) el puente de lactama está entre los ami las posiciones 16 y 20, en donde u aminoácidos en las posiciones 16 y 20 se con Glu l tr d 52. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 49 a 51 caracterizado porqu a o más de las siguientes modificaciones: (a)- una modificación de aminoácido en la p opcionalmente una sustitución con lie, (b) modificaciones de aminoácido en las posi 18, opcionalmente la sustitución con posición 17 y A en la posición 18, (c) adición de GPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) terminal . 53. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 49 a 52 caracterizado porqu o o más de las siguientes modificaciones: (1) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly', N-metil-Ser, AIB, Val, o ácido butírico; (m) T r en la osición 10 sustituido con Tr o Gly; (s) Gln en la posición 20 sustituido con Citrulina, Arg, Orn, o AIB; (t) Asp en la posición 21 sustituido con homoglutámico, ácido homocisteico; (u) Val en la posición 23 sustituido con lie; (v) Gln en la posición 24 sustituido con AIB; y (w) una sustitución conservativa en cualqui posiciones 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, y 29. cualquier combinación de las mismas. 54. Un análogo de glucagón (SEQ I racterizado porque tiene la actividad agonista s siguientes modificaciones: (a) una modificación de aminoácido en la pos confiere actividad a onista de GIP 55. El análogo cié conformidad ivindicación 54, caracterizado porque la modi inoácido en la posición 1 es una sustitución de inoácido que carece de una cadena lateral de imi 56. El análogo de conformidad ivindicación 54 o 55, caracterizado porque (a) la modificación de aminoácido en la pos una sustitución de His con un aminoácido grande, opcionalmente Tyr, (b) el aminoácido a, a-disustituido es AIB, (c) el Met en la posición 27 se sustit aminoácido alifático, grande, opcionalme (d) el Asn en la posición 28 se sustit aminoácido alifático pequeño, opcionalme (e) el Thr en la posición 29 se sustit aminoácido alifático pequeño, opcionalme 57. El análogo de conformidad con cu terminal . 58. El análogo de conformidad con cu reivindicaciones 54 a 57, caracterizado porqu o más de las siguientes modificaciones: (a) Ser en la posición 2 sustituido con D-S Ala, Gly, N-metil-Ser, AIB, Val, o ácido butírico; (b) Tyr en la posición 10 sustituido con Trp Glu, Phe, o Val; (c) Enlace de un grupo acilo a un Lys en 10; (d) Lys en la posición 12 sustituido con Arg; (e) Ser en la posición 16 sustituido con ácido homoglutámico, ácido homocisteico, o AIB; (f) Arg en la posición 17 sustituido con Gln; ( ) Ar en la osición 18 sustituido con Ala (1) una sustitución conservativa en cualqui posiciones 2, 5, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, y 29, cualquier combinación de las mismas. 59. Un análogo de glucagón (SEQ I racterizado porque actividad agonista de GIP guientes modificaciones: (a) una modificación de aminoácido en la pos confiere Actividad agonista de GIP, (b) una sustitución de aminoácido of Ser en 16 con un aminoácido de la Fórmula IV: [Fórmula IV] en donde n es 1 a 7 en dond cada no Fórmula IV comprende un grupo amino cadena lateral del aminoácido de la comprende un grupo amino libre, (c) una sustitución de aminoácido del posición 20 con un aminoácido al disustituidó, (d) modificaciones de aminoácido en uno, d las posiciones 27, 28 and 29, y (e) 1-6 modificaciones de aminoácido adicion donde la EC50 del análogo para la activación d GIP es aproximadamente 10 nM o menor. 60. El análogo de conformidad ivindicación 59, caracterizado porque la modi inoácido en la posición 1 es una sustitución de inoácido que carece de una cadena lateral de imi 61. El análogo de conformidad ivindicación 60 caracterizado or ue el ami ido 2 , 4-diaminobutírico (Dab) . 64. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 59 a 63, caracterizado inoácido alfa, alfa-sustituido es AIB. 65. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 59 a 64, caracterizado porque la posición 27 se sustituye se sustituye con un ifático, grande, opcionalmente Leu, (ii) el sición 28 se sustituye con aminoácido alifáti cionalmente Ala, o (iii) el Thr en la posi stituye con aminoácido alifático pequeño, op y, o en donde el análogo comprende una combinac i) , y (iii) . 66. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 59 a 65, caracterizado po mprende la secuencia de aminoácidos de GPSSGAP : 95 o XGPSSGAPPPS SE ID NO: 96 C-t (c) sustitución del aminoácido Tyr en la con un aminoácido que comprende una cad enlazada covalentemente a un grupo aci alquilo; (d) adición de un aminoácido que comprende lateral enlazada covalentemente a un gr grupo alquilo como el aminoácido C-t análogo; (e) Lys en la posición 12 sustituido con lie; (f) Arg en la posición 17 sustituido con Gln (g) Arg en la posición 18 sustituido con Ala; (h) Asp en la. posición 21 sustituido con Glu (i) Gln en la posición 24 sustituido con Asn. 68. El análogo de conformidad ivindicación 66, caracterizado porque compren dificación de aminoácido en la posición 2 q sistencia a DPP-IV b un amin ci o n la confiere Actividad agonista de GIP, y (b) una extensión de 1 a 21 aminoácidos C- aminoácido en la posición 29, en donde p uno de los aminoácidos de la exte corresponde a cualquiera de las posic relativas a SEQ ID NO: 1, se acila o se donde la EC50 del análogo para la activación d GIP es de aproximadamente 10 nM o menor. 71. El análogo de conformidad ivindicación 70, caracterizado porque el análog emás una de las siguientes modificaciones: (A) el análogo comprende un puente de la s cadenas laterales de los aminoácidos en las p i+4 o entre las cadenas laterales de los aminoác siciones j y j+3, en donde i es 12, 13, 16, 17, donde j es 17; (B) uno, dos, tres, o todos los aminoác [Fórmula IV] donde n es l a 7, en donde cada uno de R lecciona independientemente del grupo que cons quilo de Ci-Cie, (alquilo de Ci-Ci8)OH, (alqu 8)NH2, (alquilo de Ci-Ci8)SH, (alquilo de C0-C4) (c C3-C6) f (alquilo de C0-C4) (heterociclico de C2-C5 C0-C4) (arilo de C6-Ci0) R7, y (alquilo de C1-C4) ( C3-C9) , en donde R7 es H u OH, y la cadena inoácido de la Fórmula IV comprende un grupo ami i) una sustitución de aminoácido del Gln en la n un aminoácido alfa, alfa-disustituido. 72. El análogo de conformidad sivindicación 70 o 71, caracterizado porque ademá edificaciones de aminoácido adicionales en una as posiciones 27 y 28. 73. El análogo de conformidad con cu as reivindicaciones 70 a 72 caracterizado ivindicación 74, caracterizado porque el omático, grande es Tyr. 76. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 70 a 75, caracterizado porqu inoácidos comprende la secuencia de amin SSGAPPPS (SEQ ID NO: 95), o XGPSSGAPPPS (SEQ ID nde X es un aminoácido o una secuencia de amin ntiene una o más sustituciones conservativas Q ID NO: 95 o 96. 77. El análogo de conformidad ivindicación 76, caracterizado porque el 1 a 21 mprende la secuencia de aminoácidos de GPSSGAP : 95), o XGPSSGAPPPS (SEQ ID NO: 96), en alquier aminoácido. 78. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 70 a 77, caracterizado inoácido acilado o al uilado es un aminoácido de 81. El análogo de conformidad ivindicación 80, caracterizado porque el aminoác alquilado se localiza en la posición 40 del anál 82. El análogo de conformidad con cu s . reivindicaciones 70 a 81, caracterizado porque mprende un puente de lactama entre los aminoác siciones 16 y 20, en donde uno de los aminoác siciones 16 y 20 se sustituye con Glu, y el inoácidos en las posiciones 16. and 20 se sustitu 83. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 70 a 81, caracterizado porque mprende una sustitución en uno, dos, tres o inoácidos en las posiciones 16, 20, 21 o inoácido , a-disustituido es AIB. 84. El análogo de conformidad ivindicación 83, caracterizado porque el análog AIB en la osición 20. Ala, Gly, N- metil-Ser, AIB, Val, o áci N-butirico; (b) Gln en la posición 3 sustituido con Glu; (c) sustitución del aminoácido Tyr en la con un aminoácido que comprende una cad enlazada covalentemente a un grupo aci alquilo; (e) Lys en la posición 12 sustituido con lie (f) Arg en la posición 17 sustituido con Gln (g) Arg en la posición 18 sustituido con Ala (h) Asp en la posición 21 sustituido con Glu (i) Gln en la posición 24 sustituido con Asn. 87. El análogo de conformidad con cu as reivindicaciones 70 a 86, caracterizado porqu la modificación de aminoácido en la posición 2 q ssistencia a D.PP-IV. 88. El análo o de conformidad raprende la secuencia de aminoácidos de cualquier S: 227, 228, 229 o 230 y una extensión d inoácidos C-terminal al aminoácido en la posició donde la EC50 del análogo para la activación d GIP es de aproximadamente 10 nM o menor. 91. El análogo de conformidad ivindicación 90, caracterizado porque la extens aminoácidos comprende la secuencia de amin SSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) o XGPSSGAPPPS (SEQ ID nde X es cualquier aminoácido, o una se inoácidos que contiene o más sustituciones co lativas a SEQ ID NO: 95 o 96. 92. El análogo de conformidad ivindicación 90, caracterizado porque la extens aminoácidos comprende la secuencia de amin SSGAPPPS (SEQ ID NO: 95) o XGPSSGAPPPS (SEQ ID nde X es cual uier aminoácido. 95. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 90 a 94, caracterizado porque glucagón se enlaza covalentemente a u drofilica en la posición de aminoácido 24. 96. El análogo de conformidad ivindicación 95, caracterizado porque l drofilica se enlaza covalentemente a Lys, mocisteina, o acetil-fenilalanina . 97. El análogo de conformidad ivindicación 95 o 96, caracterizado porque drofilica es un polietilenglicol (PEG) . 98. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 90 a 97, caracterizado po mprende hasta 6 modificaciones de aminoácido adí 99. El análogo de conformidad ivindicación 98, caracterizado porque comprende las si uientes modificaciones: Ser, Glu, Gln, ácido homoglutámi homocisteico, Thr, Gly, o AIB; (e) el aminoácido en la posición 17 es Gln o (f) el aminoácido en la posición 18 es cu Ala, Arg, Ser, Thr, o Gly; (g) el aminoácido en la posición 20 es cu Ala, Lys, Citrulina, Arg, Orn, o A aminoácido alfa, alfa-disustituido; (h) el aminoácido en la posición 21 es cu Glu, Asp, ácido homoglutámico, ácido horn (i) el aminoácido en la posición 23 es Val o (j) el aminoácido en la posición 24 es cu Gln, Asn, Ala, o AIB; y (k) uno o más sustituciones conservativas en de las posiciones 2, 5, 9, 10, 11, 12, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 24, 27, 28, y 29. 100. Un análo o caracterizado or ue co 103. El análogo de conformidad ivindicación 53 o 58, caracterizado porque el enlaza a Lys por la via de un espaciador. 104. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 67 a 69, 86, y 99, caracteri grupo acilo o el grupo alquilo se enlaza a teral del aminoácido por la via de un espaciador 105. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 70, 93, y 94, caracterizado inoácido acilado o alquilado en cualquier siciones 37-43 relativas a SEQ ID NO: valentemente a un grupo acilo o alquilo por la paciador. 106. El análogo de conformidad ^vindicación 105, caracterizado porque el rilado o alquilado se localiza en la posición 40 5 ID NO: 1. ivindicación 108, caracterizado porque el espac inoácido o dipéptido. 110. El análogo de conformidad ivindicación 109, caracterizado porque el esp ido 6-amino-hexanoi.co . 111. El análogo de conformidad ivindicación 109, caracterizado porque el espac péptido seleccionado del grupo que consiste de: a- ß-Ala, Leu-Leu, Pro-Pro, y ?-Glu-y-Glu. 112. El análogo de conformidad con c s reivindicaciones 103 a 111, caracterizado ngitud total del espaciador y el grupo ac roximadamente 14 a aproximadamente 28 átomos en 113. El análogo de conformidad ivindicación 103 a 112, caracterizado porque el un grupo acilo graso de C12 a C18. 114. El análo o de conformidad álogo tiene por lo menos aproximadamente 4% de l l GIP de tipo silvestre (SEQ ID NO: 4) en el P. 117. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores, caracterizado por l análogo para la activación del receptor G roximadamente 1 nM o menor. 118. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores, caracterizado álogo tiene por lo menos aproximadamente 4% de l GLP-1 (SEQ ID NO: 2) en el receptor de GLP-1. 119. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores, caracterizado por i análogo para la activación del receptor de glu roximadamente 1 nM o menor. 120. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores caracterizado s reivindicaciones anteriores que exc ivindicaciones 117 y 118, caracterizado porque mprende una modificación de aminoácido en la p ene menor que aproximadamente 10% de la activid el receptor de GLP-1. 123. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores, caracterizado ptido de glucagón se enlaza covalentemente a drofilica en cualquiera de las posiciones de , 20, 23, 24, 27, 32, 43 o la C-terminal. 124. El análogo de conformidad ivindicación 123, caracterizado porque el ucagón se enlaza covalentemente a una porción la posición de aminoácidos 27 o 43. 125. El análogo de conformidad sivindicación 123 o 124, caracterizado porque drofilica se enlaza covalentemente a L s 128. El análogo de conformidad ivindicación 126, caracterizado porque el PEG ti lecular de aproximadamente 20,000 Daltons a apro ,000 Daltons. 129. El análogo de conformidad con cua s reivindicaciones 123 a 128, caracterizado por l análogo para la activación del receptor roximadamente 10 nM o menor. 130. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 123 a 128, caracterizado álogo tiene por lo menos aproximadamente 0.4% d l GIP de tipo silvestre (SEQ ID- NO: 4) en el P. 131. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 123 a 130, caracterizado por i análogo para la activación del receptor de roximadamente 10 nM o menor. 134. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 123 a 133, caracterizado álogo tiene por lo menos 2% de la actividad del receptor de glucagón. 135. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores excluyendo la 2, caracterizado porque la potencia de GIP del a ntro de aproximadamente 15 veces de la potenci álogo . 136. El análogo de conformidad con cu s reivindicaciones anteriores excluyendo 121, ca rque la potencia de GIP del análogo está roximadamente 15 veces de la potencia de gl álogo. 137. Un dimero, caracterizado porque co ptidos enlazados por la via de un enlazador, e menos uno de los dos é tidos es un análo o de valentemente a un análogo de conformidad ivindicaciones 1 a 136, un dimero de cualqui ivindicaciones 137 a 139, o una combinación de l 141. Un péptido de fusión, caracteriz mprende un análogo de conformidad con cualqui ivindicaciones 1 a 136 o un dimero de cualqui ivindicaciones 137 a 136 fusionado a un segundo 142. Una composición farmacéutica, ca rque comprende el análogo de conformidad con cu s reivindicaciones 1 a 136, un dimero de cualqu ivindicaciones 137 a 139, un conjugado de la rei 0, un péptido de fusión de la reivindicación mbinación de los mismos, y un portador farmac eptable . 143. Un equipo, caracterizado porque co mposición farmacéuticamente de conformidad ivindicación 142 y un dispositivo para admi 2 en una cantidad efectiva para reducir la ganan inducir la pérdida de peso. 146. Un método para tratar diabetes, ca rque comprende administrar a un paciente en ne smo una composición farmacéutica de conformi ivindicación 142 en una cantidad efectiva, par s niveles de glucosa en la sangre. 147. Un método para inducir parálisis t acto intestinal, caracterizado porque comprende un paciente en necesidad del mismo una rmacéutica de conformidad con la reivindicación ntidad efectiva para inducir parálisis temporal testinal .