RS59124B1

RS59124B1 - Stabilni, produženi koagonisti glp-1/glukagonskih receptora za medicinsku upotrebu

Info

Publication number: RS59124B1
Application number: RS20191031A
Authority: RS
Inventors: Ulrich Sensfuss; Thomas Kruse; Jesper F Lau
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 2013-04-18
Filing date: 2014-04-22
Publication date: 2019-09-30
Also published as: JP6594856B2; BR112015025464A2; AU2014255608B2; ZA201507010B; MX2015014408A; AU2014255608A1; EP2986313B1; US9474790B2; US20150374794A1; SI2986313T1; US20160355562A1; CN105307672A; WO2014170496A1; CA2909581A1; EP2986313A1; CN105307672B; MX362275B; PL2986313T3; JP2016526012A; US9751927B2

Description

OBLAST PRONALASKA

Pronalazak se odnosi na nove stabilne i produžene koagoniste GLP-1/glukagonskih receptora, na njihovu upotrebu u terapiji, na postupke lečenja koji obuhvataju njegovo davanje pacijentima, kao i na njihovu upotrebu u proizvodnji lekova.

LISTING SEKVENCI

Listing sekvenci napravljen 17. aprila 2013. je 3.390 bajtova i ovde je uključen kao referenca.

STANJE TEHNIKE

Povećanje incidencije gojaznosti dostiglo je razmere epidemije u zapadnom svetu, a u novije vreme i u zemljama u razvoju. Gojaznost je povezana sa značajnim komorbiditetima kao što su kardiovaskularne bolesti i dijabetes tipa 2. Trenutno, jedini tretman koji eliminiše gojaznost sa visokom efikasnošću je bariatrična hirurgija, ali ovaj tretman je skup i rizičan. Farmakološka intervencija je generalno manje efikasna i povezana sa neželjenim dejstvima. Stoga postoji očigledna potreba za efikasnijim farmakološkim intervencijama sa manje neželjenih dejstava i pogodnom primenom.

Brojni gastrointestinalni peptidni hormoni su navodno uključeni u regulaciju unosa hrane, bilo anoreksigeni (npr. CCK, GLP-1, PYY, sekretin) ili oreksigenski (npr. grelin) [Moran TH: Crevni peptidi u kontroli unosa hrane; Int. J. Obes. (Lond). 2009 33 S7-10]. Nedavno je prikazano da oksintomodulin, proizvod iz proglukagonskog gena u intestinalnim L-ćelijama, izaziva zasićenost i smanjuje telesnu težinu i kod glodara i kod ljudi [Cohen MA et al: Oksintomodulin suzbija apetit i smanjuje unos hrane kod ljudi; J. Clin. Endokrinol.] Metab. 200388 4696-4701;

Dakin CL i drugi: Oksintomodulin inhibira unos hrane kod pacova; Endokrinologija 2001 142 4244-4250]. Oksintomodulin je dvostruki agonist koji aktivira i GLP-1 i glukagonske receptore, iako sa smanjenom potentnošću u odnosu na GLP-1 i glukagon, respektivno. Anoreksigeni efekat oksintomodulina prethodno je spekulisano da je posredovan receptorom GLP-1, iako brojne stare studije ukazuju na uključenost glukagona pankreasa u kontrolu telesne težine. Dva nedavna rada navodno pokazuju glukagon kao atraktivnu metu i demonstriraju snagu simultanog ciljanja GLP-1/glukagonskh receptora konstruisanjem dvojnih agonista i upoređujući efekat snižavanja težine u knock-out modelima [Pocai i drugi; Glucagon-Like Peptide 1/Glucagon Receptor Dual Agonism Reverses Obesity in Mice; Diabetes, 2009, 58, 2258-2266; Day i drugi; A new GLP-1 co-agonist eliminates obesity in rodents; Nat. Chem. Biol., 2009, 5, 749-757].

Jedan fiziološki efekat glukagona je povećanje nivoa glukoze u krvi u hipoglikemijskim stanjima stimulacijom glikogenolize i glukoneogeneze. Međutim, čini se da je akutni efekat glukagona na nivo glukoze u krvi skroman kada se glukagon unosi na skoro fiziološkim nivoima [Sherwin RS i drugi: Hyperglucagonemia and blood glucose regulation in normal, obese and diabetic subjects; N. Engl. J. Med. 1976, 294, 455-461]. Aktivacija glukagonskog receptora je, takođe, prikazana da povećava potrošnju energije i smanjuje unos hrane i kod glodara i kod ljudi [Habegger KM i drugi: The metabolic actions of glucagon revisited; Nat. Rev.

Endocrinol. 2010 6 689-697] i ovi efekti su robusni i održavani kod glodara. Rizik povećanja nivoa glukoze u krvi usled agonizma glukagona može se sprečiti odgovarajućim nivoima GLP-1 agonizma. GLP-1/glucR koagonist sa uravnoteženim efektom na dva receptora može dovesti do poboljšanog gubitka težine u poređenju sa čistim GLP-1 agonistom bez ugrožavanja tolerancije glukoze. Međutim, postoji nekoliko prepreka u razvijanju takvog koagonista za farmaceutski proizvod, koji se odnosi na poluživot, stabilnost, rastvorljivost i aktivnost receptora. Na primer, ako se glukagon koristi kao polazna tačka za takav koagonist, aktivnost GLP-1 receptora se mora uspostaviti bez uništavanja aktivnosti na receptoru glukagona. Dalje, pošto je glukagon inherentno nerastvorljiv pri neutralnom pH, on je hemijski i fizički nestabilan i njegov polu-život in vivo je samo nekoliko minuta.

U struci je poznato nekoliko patentnih prijava koje opisuju različite agoniste GLP-1/glukagonskih receptora, npr. WO 2008/101017, WO 2010/070255, WO 2012/150503, and WO 2012/169798.

Ukratko, postoji nekoliko prepreka u razvoju takvog koagonista u farmaceutske proizvode, posebno:

i) Aktivnost receptora - Potencijal glukagona i GLP-1 receptora i/ili odnos afiniteta vezivanja koagonista treba da budu uravnoteženi kako bi favorizovali značajno smanjenje telesne težine, bez ugrožavanja ravnoteže glukoze;

ii) Produženi profil dejstva, tj. in vivo poluživota koji omogućava doziranje, na primer, jednom dnevno ili jednom nedeljno; i

iii) Prihvatljiva rastvorljivost, hemijska i fizička stabilnost.

Kada se glukagon koristi kao polazna tačka za takav koagonist, aktivnost i/ili afinitet receptora GLP-1 se moraju ustanoviti bez uništavanja aktivnosti glukagona. Nativni glukagon je inherentno nerastvorljiv pri neutralnom pH, hemijski je i fizički nestabilan i njegov poluživot in vivo je samo nekoliko minuta.

KRATAK OPIS PRONALASKA

Pronalazak se odnosi na nove stabilne i produžene koagoniste GLP-1/glukagonskih receptora (koji se, takođe, ovde nazivaju „peptidi“ ili „derivati“, naročito se nazivaju „derivati glukagona“ u ovom tekstu), na upotrebu datih peptida u terapiji, postupcima tretmana koji uključuju davanje datih peptida pacijentima i upotrebu datih peptida u proizvodnji lekova za upotrebu u medicini, uključujući lečenje dijabetesa, gojaznosti i srodnih bolesti i stanja.

U prvoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona koji sadrži sekvencu amino-kiseline Formule I (koja odgovara SEQ ID NO: 4 i SEQ ID NO: 5):

His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-Ala-X20-X21-Phe-Val-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30[I], pri čemu,

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, Ala ili Lys;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu, Ser, ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys;

X29predstavlja Thr, Gly, Ser, Gln, Ala, Glu ili Lys; X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan;

čija sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30; i

pri čemu navedeni derivat glukagona sadrži supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, pri čemu jedna od pomenutih negativno naelektrisanih grupa je distalno od datog lipofilnog dela, i pri čemu je navedeni supstituent vezan za epsilon poziciju ostatka lizina u jednoj od aminokiselinskih pozicija 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30; i pri čemu je navedeni derivat glukagona C-terminalni amid; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili predlekovi.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži derivat glukagona prema pronalasku i opciono jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata.

U jednoj realizaciji pronalazak se odnosi na međuproizvod u obliku glukagonskog peptida koji sadrži C-terminalni amid i bilo koju od modifikacija a) do ppp) kako je ovde definisano u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, amide ili estre.

U jednoj realizaciji pronalazak se odnosi na derivat glukagona iz pronalaska, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u medicini.

Pronalazak može da reši sledeće probleme koji će biti očigledni iz opisa realizacija datih kao primeri.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Pronalazak obezbeđuje nove derivate glukagona koji su koagonisti GLP-1/glukagonskih receptora sa novom aminokiselinskom mutacijom, koja u kombinaciji sa drugim mutacijama i supstituentom sa negativno naelektrisanim grupama, obezbeđuje derivate glukagona koji aktiviraju i GLP-1 i glukagon receptore. Pronalazači su otkrili da, na primer, uvođenje leucina u poziciji 10, u analozima sa supstituentom sa najmanje tri negativna naelektrisanja, pored drugih supstitucija, dovodi do koagonista GLP-1/glukagonskih receptora sa poboljšanom fizičkom stabilnošću. tj. analozi ne pokazuju nikakvu ili odloženu fibrilaciju u testu koji se koristi za procenu fizičke stabilnosti i oporavak peptida je uopšteno poboljšan. Osim toga, pronalazači su iznenađujuće pronašli da derivati glukagona iz pronalaska teže da redukuju vezivanje glukagonskih receptora i istovremeno poboljšavaju vezivanje receptora GLP-1. Prema tome, nova mutacija (mutacije) može se koristiti kao sredstvo za podešavanje odnosa afiniteta između glukagona i GLP-1 koji je ključan za dobijanje željenog efekta na telesnu težinu i održavanje nivoa glukoze u krvi.

Pronalazači su otkrili da jedinjenja prema pronalasku imaju adekvatnu rastvorljivost u vodi pri neutralnom pH ili blago baznom pH i sa poboljšanom hemijskom stabilnošću, tj. smanjena je hemijska degradacija analoga. Pronalazači su otkrili da jedinjenja prema pronalasku imaju poboljšana farmakokinetička svojstva, tj. imaju produženi poluživot in vivo. Dalje, jedinjenja prema pronalasku indukuju značajno smanjenje telesne težine posle s.c. primene.

Derivati glukagona prema pronalasku se mogu posebno okarakterisati kao derivat glukagona koji sadrži sekvencu amino-kiseline Formule I (koja odgovara SEQ ID NO: 4 i SEQ ID NO: 5):

His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-Ala-X20-X21-Phe-Val-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30[I] pri čemu

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, Ala ili Lys;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu, Ser ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys;

1

čija sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30; i pri čemu navedeni derivat glukagona sadrži supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, pri čemu je jedna od datih negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, je vezan na položaju epsilon ostatka lizina na jednoj od amino-kiselinskih pozicija 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30; i pri čemu je dati derivat glukagona C-terminalni amid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili predlek.

U jednoj realizaciji derivat glukagona sadrži sekvencu amino-kiseline Formule I (koja odgovara SEQ ID NO: 2 i SEQ ID NO: 3):

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu, Ile ili Val;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, Ala ili Lys;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys; X29predstavlja Thr, Gly, Ser, Gln, Ala, Glu ili Lys;

X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan;

čija sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30; i pri čemu dati derivat glukagona sadrži supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, pri čemu je jedna od datih negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, vezan je na položaju epsilon ostatka lizina na jednoj od aminokiselinskih pozicija 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30; i gde je dati derivat glukagona C-terminalni amid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili predlek.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na peptidne derivate glukagona, pri čemu dati peptidi derivata glukagona su koagonisti GLP-1 i glukagonskih receptora.

Glukagonski peptid

Peptid derivata glukagona prema pronalasku može biti opisan uz upućivanje na i) broj aminokiselinskih ostataka u humanom glukagonu (SEQ ID NO: 1) koji odgovara aminokiselinskom ostatku koji je modifikovan (tj. odgovarajućoj poziiji u glukagonu (SEQ ID NO: 1)), i na ii) stvarnu modifikaciju. Što se tiče obeležavanja brojevima pozicija u jedinjenjima glukagona: za sadašnje svrhe je naznačena bilo koja supstitucija amino-kiseline, delecija i/ili dodavanje u odnosu na sekvence nativnog humanog glukagona (1-29) (SEQ ID NO: 1). Pozicije amino-kiselina humanog glukagona 1-29 su ovde iste kao i aminokiselinske pozicije X1to X29. Sekvenca humanog glukagona (1-29) je His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr (SEQ ID NO:1). Glukagon(1-30) označava humani glukagon sa ekstenzijom jedne amino-kiseline na C-terminalnom kraju, glukagon(1-31) označava humani glukagon sa ekstenzijom dve amino-kiseline na C-terminalnom kraju i glukagon(1-32) označava humani glukagon sa ekstenzijom tri amino-kiseline na C-terminalnom kraju.

Drugim rečima, peptid derivata glukagona je peptid glukagona koji ima brojne modifikacije amino-kiselinskih ostataka u poređenju sa humanim glukagonom (SEQ ID NO: 1). Ove modifikacije mogu predstavljati, nezavisno, jednu ili više amino-kiselinskih supstitucija, dodataka i/ili delecija. Na primer, „[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20, Leu27,Ser28]-Glukagon amid“ označava glukagon (SEQ ID NO: 1), pri čemu je amino-kiselina na poziciji 2 supstituisana

1

sa Aib, amino-kiselina na položaju 10 je supstituisan sa Leu, amino-kiselina na položaju 16 je supstituisana sa Lys, amino-kiselina na poziciji 20 je supstituisana sa Arg, amino-kiselina na položaju 27 je supstituisana sa Leu, amino-kiselina na položaju 28 je je supstituisana sa Ser, a C-terminalna karboksilna kiselina je zamenjena sa C-terminalnim amidom.

Analozi „koji sadrže“ određene specificirane promene mogu obuhvatiti dalje promene, kada se porede sa SEQ ID NO: 1. U posebnoj realizaciji, analog „ima“ specifikovane promene.

U jednoj realizaciji, izrazi „peptid“ i „analog“ (uključujući npr. „peptid glukagona“, „peptidni analog“ i „analog glukagona“) ovde se koriste naizmenično i odnose se na sekvencu amino-kiselina derivata glukagona prema pronalasku.

Izrazi „položaj“ ili „odgovarajući položaj“ mogu da se koriste za karakterizaciju mesta promene u sekvenci amino-kiseline upućivanjem na glukagon (SEQ ID NO: 1).

Položaj, kao i broj promena, lako se zaključuju, npr. jednostavnim rukopisom i pregledom očima.

Izraz „analog glukagona“, kako je ovde upotrebljen, odnosi se na sekvencu glukagona gde je jedan ili više amino-kiselinskih ostataka nativnog peptida supstituisano sa drugim amino-kiselinskim ostacima i/ili gde je jedan ili više amino-kiselinskih ostataka izbrisan iz sekvence glukagona i/ili gde je jedan ili više amino-kiselinskih ostataka dodato peptidu. Takvo dodavanje ili delecija amino kiselinskih ostataka može da bude na N-terminalu peptida i/ili na C-terminalu peptida. Jednostavan sistem koristi se za opisivanje analoga. Formule peptidnih analoga i njihovih derivata su nacrtane korišćenjem standardnih pojedinačnih slova ili skraćenica od tri slova za amino-kiseline koje se koriste prema IUPAC-IUB nomenklaturi. Izraz „analog“, kako se ovde koristi, upućivanjem na polipeptid, podrazumeva modifikovani peptid, pri čemu su jedan ili više amino kiselinskih ostataka supstituisani drugim ostacima amino kiselina i/ili gde je jedan ili više amino kiselinskih ostataka izostavljen iz peptida i/ili gde je jedan ili više amino kiselinskih ostataka dodat peptidu. Takvo dodavanje ili delecija amino kiselinskih ostataka može da bude na N-terminalu peptida i/ili na C-terminalu peptida.

Izraz „polipeptid“ i „peptid“, kako se ovde koristi, označava jedinjenje sastavljeno od najmanje pet konstitutivnih amino-kiselina povezanih peptidnim vezama. Konstitutivne amino-kiseline mogu biti iz grupe aminokiselina kodiranih genetskim kodom i mogu biti prirodne amino-kiseline koje nisu kodirane genetskim kodom, kao i sintetske amino-kiseline. Prirodne amino kiseline koje nisu kodirane genetskim kodom su npr. hidroksiprolin, γ-

1

karboksiglutamat, ornitin, fosfoserin, D-alanin i D-glutamin. Sintetske amino-kiseline sadrže amino-kiseline proizvedene hemijskom sintezom, tj. D-izomere aminokiselina kodiranih genetskim kodom kao što su D-alanin i D-leucin, Aib (α-amino-izobubiratna kiselina), Acb (1-Aminociklobutankarboksilna kiselina), Acpr (1-Aminociklopropankarboksilna kiselina), Abu (α-amino-butirna kiselina), Tle (terc-butilglicin), β-alanin, 3-amino-metil benzoeva kiselina, antranilna kiselina.

Kao što je očigledno iz gornjih primera, aminokiselinski ostaci mogu biti identifikovani njihovim punim imenom, njihovim jednoslovnim kodom i/ili njihovim troslovnim kodom. Ova tri načina su potpuno ekvivalentna. U jednoj realizaciji, peptidni analozi i njihovi derivati su nacrtani korišćenjem standardnih jednoslovih ili troslovnih kodova prema IUPAC-IUB nomenklaturi. U ovom kontekstu, primenjuju se zajednička pravila za nomenklaturu peptida koja se zasnivaju na kodu amino-kiselina od tri ili jednog slova. Ukratko, centralni deo strukture amino-kiselina je predstavljen sa tri slova (npr. Ala, Lys) ili je slovo jednog koda (npr. A, K) i L-konfiguracija se pretpostavlja, osim ako je D-konfiguracija posebno naznačena sa „D-“ i sledi kod s tri slova (npr. D-Ala, D-Lys). Supstituent na amino grupi zamenjuje jedan atom vodonika i njegovo ime se postavlja ispred koda sa tri slova, dok C-terminalni

1

sup stituent zamenj uje karboksilnu hidrok si grupu i njeg ovo ime se pojavljuje nakon troslovno g koda. Na primer, „ac etil-Gly -Gly-NH2” preds tavlja C H3-C(=O )-NH-CH2-C(=O)- NH-CH2-C(=O)-N H2. Ukoliko nije druga čije naz načeno, aminokis eline su poveza ne sa svojim susednim grupama sa amid nim vez ama formiranim na atomu N-2 (α-azota) i C-1 (C = O) ato ma ugljenika.

Skrać enice amino-kis elina koje se koriste u ovom kon tekstu imaju sl edeća značenja:

1

1 Skraćenice amino-kiselina koje počinju sa D- praćene sa troslovnim kodom, kao što su D-Ser, D-His i tako dalje, odnose se na D-enantiomer odgovarajuće amino-kiseline, na primer D-serin, D-histidin i tako dalje.

Izraz „amid glukagona“ označava glukagon gde je C-terminalna karboksilna kiselina zamenjena sa C-terminalnim amidom.

Derivat glukagona može sadržati sekvencu aminokiseline Formule I koja ima ukupno do 15 aminokiselinskih razlika (ovde se, takođe, označavaju kao modifikacije) u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1), na primer, jedan ili više dodataka, jedna ili više delecija i/ili jedna ili više supstitucija. U jednoj realizaciji, sekvenca aminokiseline Formule I sadrži 3-15 modifikacija ostataka aminokiselina, kao što su supstitucije ili dodaci, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1). U jednoj realizaciji, sekvenca amino-kiseline Formule I sadrži 4-15 ili 5-15 modifikacija ostataka amino-kiselina, kao što su supstitucije ili dodaci, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1). U jednoj realizaciji, sekvenca amino-kiseline Formule I sadrži do 14, kao što je do 13 ili do 12, modifikacija ostataka amino-kiselina, kao što su supstitucije ili dodaci, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1). U jednoj realizaciji, sekvenca amino-kiseline

2

Formule I sadrži do 11, kao što su do 10 ili do 9, modifikacija ostataka amino-kiselina, kao što su supstitucije ili dodaci, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1). U jednoj realizaciji, sekvenca amino-kiseline Formule I sadrži do 8, kao što su do 7 ili do 6, modifikacija ostataka amino-kiselina, kao što su supstitucije ili dodaci, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1).

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, ili Ala;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, ili Lys;

X29predstavlja Thr, Gly, ili Lys; i

X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan.

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, ili Lys; X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, ili Ala;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, ili Lys;

X29predstavlja Thr, Gly, ili Lys; i

X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X2predstavlja Aib. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X2predstavlja Acb. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X2predstavlja Acpr. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X3predstavlja Gln ili His. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X3predstavlja Gln. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X3predstavlja His. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X10predstavlja Leu, Ile ili Val. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X10predstavlja Leu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu je X10Ile. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X10predstavlja Val. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X12predstavlja Lys ili Arg. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X12predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X12predstavlja Arg. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X15predstavlja Asp ili Glu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X15predstavlja Asp. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je kao što je ovde opisano,

2

pri čemu X15predstavlja Glu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Ala, Leu, Thr, Glu ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Ser. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Ala. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Leu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Thr. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Glu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X16predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X17predstavlja Arg ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X17predstavlja Arg. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X17predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X18predstavlja Arg ili Ala. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X18predstavlja Arg. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X18predstavlja Ala. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I, kao što je ovde opisano, pri čemu X20predstavlja Gln, Arg, Glu ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I, kao što je ovde opisano, pri čemu X20predstavlja Gln. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X20predstavlja Arg. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X20predstavlja Glu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X20predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X21predstavlja Asp, Glu ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X21predstavlja Glu ili Lys. U

2

jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X21predstavlja Asp. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X21predstavlja Glu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X21predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X24predstavlja Gln, Ala, Arg ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X24predstavlja Gln. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X24predstavlja Ala. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X24predstavlja Arg. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X24predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X27predstavlja Met, Leu ili Val. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X27predstavlja Leu ili Val. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X27predstavlja Met. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde

2

opisano, pri čemu X27predstavlja Leu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X27predstavlja Val. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X28predstavlja Asn, Ser ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X28predstavlja Asn. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X28predstavlja Ser. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X28predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X29predstavlja Thr, Gli, Ser, Gln, Ala, Glu ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X29predstavlja Thr, Gli ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X29predstavlja Gly ili Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X29predstavlja Thr. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X29predstavlja Gly. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde

2

opisano, pri čemu X29predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X30predstavlja Lys, ili pri čemu X30je odsutan. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X30predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X30je odsutan. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, pri čemu X2predstavlja Aib; X20predstavlja Arg; i X21predstavlja Glu.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu aminokiseline sa bilo kojom od sledećih supstitucija aminokiselina:

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27];

[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27];

[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29];

2

[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29];

[Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27 ];

[Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]; [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27];

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28 ];

[Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27];

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27,Lys28] ;

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27, Ser28];

[Acb2,His3,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28];

2

[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; [Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; [Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28]; i [Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27];

[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27];

[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od

1

sledećih supstitucija amino-kiselina: [Aib2, Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27, Lys28];

[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]; i [Aib2,Leu10,Lys16, Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27];

[Aib2,Leu10,Glu15, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina: [Aib2,Leu10, Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21, Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina: [Aib2,His3,

2

Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28, Gly29]; i [Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27,Lys28]; i [Aib2,His3,Leu10,Glu15, Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27,Ser28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Acb2,His3,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]; [Acb2,Leu10, Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina: [Aib2, Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28];

[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]; i [Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20, Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Leu16, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina: [Acb2,Leu10,

Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

4

[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]; i [Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; i [Aib2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina: [Aib2,Leu10,Ala16, Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21, Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17, Arg20,Ser21,Leu27,Lys28]. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiselina sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Val10,Ala16,Leu27,Lys28].

U jednoj realizaciji derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30. U jednoj realizaciji derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, sekvenca amino-kiseline sadrži ostatak lizina na jednoj, dve ili tri pozicije 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29, i/ili 30. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili dve pozicije 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na dve pozicije 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30; posebno na pozicijama 12 i 28. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je Formule I kao što je ovde opisano, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na položaju 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30.

U jednoj realizaciji, sekvenca amino-kiseline Formule I se sastoji od Formule I. U jednoj realizaciji, X2je Aib, Acb ili Acpr. U jednoj realizaciji, X3predstavlja His. U jednoj realizaciji, X10predstavlja Leu ili Val. U jednoj realizaciji, X12predstavlja Arg. U jednoj realizaciji, X15predstavlja Glu. U jednoj realizaciji, X16predstavlja Ala, Glu, Leu, Lys, Thr ili Aib, kao što su Ala, Glu ili Leu, ili kao što su Lys, Thr ili Aib. U jednoj realizaciji, X17predstavlja Lys. U jednoj realizaciji, X18predstavlja Ala. U jednoj realizaciji, X20predstavlja Arg, Lys ili Glu. U jednoj realizaciji, X21predstavlja Lys, Glu ili Ser. U jednoj realizaciji, X24predstavlja Ala, Arg ili Lys. U jednoj realizaciji, X27predstavlja Leu ili Val. U jednoj realizaciji, X28predstavlja Lys ili Ser. U jednoj realizaciji, X29predstavlja Lys ili Gly. U jednoj realizaciji, X30predstavlja Lys ili X30je odsutan.

Derivat glukagona

Pronalazak se odnosi na derivate glukagona. Izraz „derivat glukagona“, kako je ovde upotrebljen, označava hemijski modifikovani glukagon ili njegov analog, pri čemu najmanje jedan supstituent nije prisutan u nemodifikovanom peptidu ili njegovom analogu, tj. pri čemu je glukagon kovalentno modifikovan. Uobičajene modifikacije su amidi, ugljeni hidrati, alkil grupe, akil grupe, estri i slično. Izraz „derivat“ kako je ovde upotrebljen u vezi sa peptidom označava hemijski modifikovani peptid ili njegov analog, pri čemu najmanje jedan supstituent nije prisutan u nemodifikovanom peptidu ili njegovom analogu, tj. peptid koji je kovalentno modifikovan. Uobičajene modifikacije su amidi, ugljeni hidrati, alkil grupe, akil grupe, estri i slično. U jednoj realizaciji, izraz „derivat glukagona“, kako je ovde upotrebljen, označava derivat glukagona, jedinjenje glukagona, jedinjenje prema pronalasku, jedinjenje pronalaska, jedinjenje Formule I, analog glukagona, derivat glukagona ili derivat analoga glukagona humanog glukagona, humani glukagon(1-29), glukagon(1-30), glukagon(1-31), glukagon(1-32) kao i analoge, i njihove fuzione peptide, koji održavaju aktivnost glukagona.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona sadrži supstituent kovalentno vezan za analog glukagona preko bočnog lanca lizina. Izraz „supstituent“, kako je ovde upotrebljen, označava hemijski deo ili grupu koja zamenjuje vodonik.

Izraz „distalni“, kako je ovde upotrebljen, označava najudaljeniji (terminalni) od tačke vezivanja.

U jednoj realizaciji, izraz „negativno naelektrisana grupa“, kako je ovde upotrebljen, označava negativno naelektirsanu hemijsku grupu, kao što je, ali bez ograničenja, karboksilna kiselina (npr. Glu, gama-Glu, Asp ili beta-Asp), sulfonska kiselina ili tetrazolna grupa. U jednoj realizaciji, izraz „negativno naelektrisana grupa“, kako je ovde upotrebljen, označava negativno naelektirsanu hemijsku grupu, kao što je, ali bez ograničenja, karboksilna kiselina, sulfonska kiselina ili tetrazolna grupa. U jednoj realizaciji, supstituent ima tri do deset negativno naelektrisanih delova. U jednoj realizaciji, supstituent ima 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 negativno naelektrisanih grupa. U jednoj realizaciji, supstituent je negativno naelektrisan na fiziološkom pH. U jednoj realizaciji, broj „negativno naelektrisanih grupa“ je određen na fiziološkom pH (pH 7,4). U jednoj realizaciji, „negativno naelektrisana grupa“ je grupa karboksilne kiseline.

Izraz „lipofilna grupa“, kako je ovde upotrebljen, označava alifatičnu ili cikličnu ugljovodoničnu grupu sa više od 6 i manje od 30 atoma ugljenika, pri čemu data ugljovodonična grupa može da sadrži dodatne supstituente.

Izraz „albumin vezujući ostatak“, kako je ovde upotrebljen, označava ostatak koji se nekovalentno vezuje za humani serumski albumin. Ostatak vezivanja albumina vezan za terapeutski polipeptid uobičajeno ima afinitet ispod 10 µM za humani serumski albumin i poželjno ispod 1 µM. Poznat je niz albumin vezujućih ostataka među linearnim i razgranatim lipofilnim grupama koje sadrže 4-40 atoma ugljenika.

Izraz „produženi efekat“ jedinjenja pronalaska znači da je period vremena u kome ona vrše biološku aktivnost produžen.

U sadašnjem kontekstu, izraz „agonist“ treba da označi supstancu (ligand) koja aktivira tip receptora o kome je reč.

U jednoj realizaciji, simbol “*” kada se ovde koristi na crtežu hemijske strukture predstavlja tačku vezivanja za susednu poziciju u derivatu.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona Formule I, kao što je ovde opisan, pri čemu supstituent sadrži lipofilnu grupu i tri ili više negativno naelektrisanih grupa, pri čemu je jedna od datih negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilne grupe, i pri čemu je dati supstituent vezan za epsilon položaj Lys-a na jednoj od sledećih aminokiselinskih pozicija datog derivata glukagona: 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30. U jednoj realizaciji, supstituent koji sadrži lipofilni deo i najmanje tri negativno naelektrisane grupe je vezan na epsilon položaju lizinskog ostatka u položaju 16, 21, 24, 28, 29 ili 30. U jednoj realizaciji, supstituent koji sadrži lipofilni deo i najmanje tri negativno naelektrisane grupe je vezan na epsilon položaju lizinskog ostatka u položaju 16, 21, 24, 28, 29 ili 30. U jednoj realizaciji, supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri

4

neg ativno naelektr isane grupe je vezan na epsilo n pozic iju liz inskog ostatka na poziciji 16, 24, 28, 29 ili 30. U jed noj realizaciji , supstituent koji sadrži lipo filnu grupu i najmanje tri neg ativno naelektr isane grupe je vezan na eps ilon poziciju lizinsko g ostatk a na poziciji 24, 28, 29 ili 30. U jednoj realizac iji, sup stituen t koji sadrži lip ofilnu grupu i najmanj e tri negativno naelekt risane gru pe je vezan na epsilon pozicij u lizinskog ostatka na poz iciji 28, 29 i 30. U jednoj realizaci ji, sups tituent koj i sadrži lipofi lnu grupu i najmanje tri negat ivno nae lektrisa ne grup e je vezan na epsilon poziciju lizins kog ost atka na pozicij i 28.

U jednoj rea lizaciji , supst ituent k oji sadrži

lip ofilnu grupu i tri ili više negativno naelekt risane gru pe je supstitue nt Formule II: Z<1>-Z<2>-Z<3>-Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10>- (II), pri čemu,

<1>Z-predstavlja strukturu Formule II a;

pri čemu n je 6-20; i simbol * predstavlja tačku vez ivanja za azot susedne vezujuć e grupe; i

Z<2>-Z<3>- Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10>- predstavl ja vezuj uću grupu, gde je svaki od Z2to Z10pojedina čno predstavlje n bilo koj im od sledećih ostatak a amino- kiselin a: Glu, γGlu, Gly, Ser , Ala, Thr ili Ado; ili su jedan ili više ostataka Z<2>to Z<10>odsutni; pod uslovom, međutim, da su prisutna najman je dva ostatka Z<2>do Z<10>; i

pri čemu Z<1>-Z<2>-Z<3>-Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10>- zajed no sadrže naj manje tri negat ivna naelektris anja; i pri čemu je nav edeni supstitue nt vezan za epsilon položaj Lys ostat ka pre ma Formuli I.

U jednoj rea lizaciji , deriv at gluka gona je Formul e I, kao što je ovde opisano, pri čemu Z<1>Formule II predsta vlja str ukturu prema Fo rmuli IIa:

pri čemu n predstavl ja ceo broj u opsegu od 6 do 20; sim bol * predstavl ja tačku veziva nja za azot susedne gr upe; i pri čemu su Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10pojedinačno pre dstavlje ni sled ećim amino-kise linama: Glu, γGlu, Gly , Ser , Ala, Thr i Ado; ili jedan ili više od Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10može da bude odsutan; pod uslovom, međ utim, da su najmanje dva od ostataka Z2do Z10prisut na; pri čemu Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9- Z10zajedno sadrže najm anje tri negativ na nael ektrisa nja; i pri čemu je navedeni sup stituent vezan za epsilon pozi ciju Lys ostatk a prema For muli I, ovde datoj.

U jednoj rea lizaciji , n u Z<1>Formule IIa je (tj. pre dstavlja ) 14, 16 ili 18. U jednoj realizaciji , n u Z1 For mule IIa je 14. U jednoj reali zaciji, n u Z<1>Formule IIa je 16. U jednoj realizaci ji, n u Z<1>Formule IIa je 18.

U jednoj realizaciji , Z<2>-Z<3>-Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10>- predst avlja vezujuću grupu, pri čemu svaki od Z2do Z10pojedin ačno je predsta vljen bilo kojim od sledećih ami nokiseli nskih ostataka : Glu, γGlu, Gly, Ser ili Ado (kao što su γGlu , Gly, ili Gly, ili kao Ser, ili Ado); ili su jed an ili više ostataka Z<2>do Z<10>odsutni; pod uslovom, međ utim, da su najmanje dva od ostataka Z<2>to Z<10>prisutna.

U jednoj realizaciji , supstituent predstav lja

str ukturu prema bilo kojo j od sledećih devet for mula (Hem.A - Hem.I), gde * označava tačku ve zivanja za atom azota na poz iciji ep silona Lys ost atka For mule I:

4

(He m.B);

(He m.F);

(He m.I).

U jednoj realizaciji , supstituent predstav lja str ukturu prema formuli Hem.J, gd e * označava ta čku vez ivanja za atom azota na pozici ji epsilon Lys ostatka For mule I:

4

(Hem.J).

U jednoj realizaciji , supst ituent predstav lja

strukturu prema bi lo kojoj od formula Hem.A - Hem.I, ka o što je ovde opisan o, gde * označava tačku veziva nja za atom azota polož aja eps ilon Lys ostatk a prema Formuli I. U jednoj real izaciji , supstituent predstav lja stru kturu p rema formuli Hem .J, kao što je ovde opisano, gde * označava tačku veziv anja za atom azota na pozicij i epsilo n Lys ostatka u skladu s a Formulom I. U jednoj realiza ciji, supstituent predst avlja strukturu prema formuli Hem.B, Hem.C, ili Hem.H, koje su ovde opisane, pri čemu * ozna čava tačku veziv anja za atom azota na pozicij i epsilo n Lys ostatka pre ma Form uli I.

U jednoj realizaciji Z1predstavlja struktu ru prem a Formuli IIa ;

pri čemu je n u Formuli IIa 6-20, a simbol *

predstavlja tačku vezivan ja za azot susedne grup e i pri

4

čem u Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10pojedinačn o su pre dstavlje ni sled ećim amino-kise linama: Glu, γGlu, Gly , Ser , Ala, Thr, Ado ili su odsutni. U jednoj realizaciji , Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10pojedinačno su

pre dstavlje ni sled ećim amino-kise linama: Glu, γGlu, Gly , Ser , Ado ili su odsutni.

U jednoj rea lizaciji , jedna od pome nutih negativn o nae lektrisa nih gru pa je distalno od lipofilne grupe. U jed nom realizaciji , supstituent se nekovalentno vezuje za alb umin.

U jednoj rea lizaciji , deriv at gluka gona je N<ε16>-[(4S)-4-k arboksi- 4-[[(4S )-4-kar boksi-4- [[2-[2- [2-[[2-[ 2-[2-[[( 4S)-4-ka rboksi- 4-(17-kar boksihep tadekan oilamin o)butano il]

ami no]etoks i]etoks i]aceti l]amino] etoksi] etoksi]a cetil]a mino ]bu tanoil]a mino]bu tanoil] -[Ai b2,Leu10 ,Lys16, Arg20,L eu27,Ser 28]-Glu kagon amid

4

U jednoj realizaci ji, derivat glu kagona je N<ε21>-(4S)-4-kar boksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ 2-[2-[2 -[[2-[2- [2-[[(4 S)-4-k arboksi- 4-(17-kar boksihep tadekan oilamin o)butano il]amin o]etoksi ]

eto ksi]acet il]amin o]etoks i]etoksi ]acetil ]amino]b utanoil ]ami no] butanoil ]-[Aib2 ,Leu10, Arg20,Ly s21,Leu 27,Ser28 ]-Gluka gon ami d

. U jednoj realiza ciji, derivat glukagon a je N<ε24>-[(4S)- 4-kar boksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ 2-[2-[2 -[[2-[2- [2-[[(4 S)-4-k arboksi- 4-(17-k arboksi heptadek anoilam ino)buta noil]am ino] eto ksi]etok si]acet il]amin o]etoksi ]etoksi ]acetil] amino]b utan oil ]amino]b utanoil ]-[Aib2 ,Leu10, Arg20,Ly s24,Leu2 7,Ser28 ]-Glu kagon amid

4

. U jednoj realiza ciji, derivat g lukagon a je N<ε28>-[(4S)-4-kar boksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ 2-[2-[2 -[[2-[2- [2-[[(4 S)-4-k arboksi- 4-(17-k arboksi heptadek anoilam ino)buta noil]am ino] eto ksi]etok si]acet il]amin o]etoksi ]etoksi ]acetil] amino]b utan oil ]amino]b utanoil ]-[Aib2 ,Leu10, Arg20,Le u27,Lys2 8]-Gluk agon ami d

4

. U jednoj realiza ciji, d erivat glukagon a je N<ε29>-[(4S)-4-kar boksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ 2-[2-[2 -[[2-[2- [2-[[(4 S)-4-k arboksi- 4-(17-k arboksi heptadek anoilam ino)buta noil]am ino] eto ksi]etok si]acet il]amin o]etoksi ]etoksi ]acetil] amino]b utan oil ]amino]b utanoil ]-[Aib2 ,Leu10, Arg20,Le u27,Ser2 8,Lys29 ]-Glu kagon am id

. U jednoj realiza ciji, d erivat glukagon a je N<α>-([A ib2,Leu1 0,Arg20 ,Leu27, Ser28]-G lukagon yl)-N{E psilon}[ (4S)-4- karboks i-4-[[(4 S)-4-ka rboksi-4 -[[2-[2 -[2-[[2 -[2-[2-[ [(4S)-4 -karbok si-4-(17 -kar boksihep tadekan oilamin o)butano il]amin o]etoksi ]etoksi ] ace til]amin o]etoks i]etoks i]acetil ]amino] butanoil ]amino] buta noi l]Lys am id

. U jednoj realiza ciji, derivat g lukagon a je N<ε16>-[(4S)-4-kar boksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ 2-[2-[2 -[[2-[2- [2-[[(4 S)-4-k arboksi- 4-(17-k arboksi heptadek anoilam ino)buta noil]am ino] eto ksi]etok si]acet il]amin o]etoksi ]etoksi ]acetil] amino]b utan oil ]amino]b utanoil ]-[Aib2 ,Leu10,L ys16,Ly s17,Glu2 1,Leu27 ]-Glu kagon am id

. U jednoj realiza ciji, derivat g lukagon a je N<ε29>-[(4S)-4-kar boksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ 2-[2-[2 -[[2-[2- [2-[[(4 S)-4-k arboksi- 4-(17-k arboksi heptadek anoilam ino)buta noil]am ino] eto ksi]etok si]acet il]amin o]etoksi ]etoksi ]acetil] amino]b utan

1

oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-

2

4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan

4

oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28]-glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)

4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-

1

3-hidroskipropanoil]amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]-acetil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21, Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Gluka on amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17

karboksiheptadekanoilamino)butanoil] amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil] amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil] amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

4

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]-

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil] amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etok si]acetil]amino]butanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27,Ser28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil] amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3hidroskipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,His3,Leu10,Glu15, Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3hidroski-propanoil]amino]acetil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15, Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid . U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan

1

oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

4

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroskipropanoil] amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroskipropanoil] amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroskipropanoil] amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

<ε28>. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N -[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] acetil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]

butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

<H>H Aib

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino] butanoil] amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

1

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butanoil]amino]butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino] butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

4

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroskipropanoil]amino]butanoil]amino]-3

hidroskipro panoil] amino]b utanoil] amino] butanoil ]-[Aib2,Leu10 ,Glu15, Arg20,G lu21,Leu 27,Lys2 8]-Gluka gon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagon a je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ (2S)-2- [[(2S)-4 -karbok si-2-[[(2S)-2- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ (4S)-4- karboksi -4-(17-karboksihep tadekan oilamin o)butano il]amin o]butano il] amino]-3-hidroskip ropanoi l]amino ]butanoi l]amino ]-3-hidroskipro panoil] amino]b utanoil] amino] butanoil ]-[Acb2,Leu10 ,Glu15, Lys17,A rg20,Glu 21,Leu2 7,Lys28] -Glukag on amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagon a je N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ (2S)-2- [[(2S)-4 -karbok si-2-[[(2S)-2- [[(4S)- 4-karbo ksi-4-[[ (4S)-4- karboksi -4-(17

karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroskipropanoil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Val10,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Val10,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Val10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]et oksi]etoksi]acetil]-[Aib2,Val10,Arg12,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

.

Farmaceutski prihvatljive soli. amid, ili estar Derivati, analozi i međuproizvodi pronalaska mogu biti u obliku farmaceutski prihvatljive soli, amida ili estra.

Soli su npr. formirane hemijskom reakcijom između baze i kiseline, npr: 2NH3+ H2SO4→ (NH4)2SO4.

So može biti bazna so, kisela so, ili ona ne mora biti ni jedna (tj. neutralna so). Bazične soli proizvode hidroksidne jone i kisele soli hidronijumskih jona u vodi.

Soli derivata ili analoga prema pronalasku mogu biti formirane sa dodatim katjonima ili anjonima između anjonskih ili katjonskih grupa, redosledno. Ove grupe mogu biti smeštene u peptidnom ostatku i/ili u bočnom lancu analoga prema pronalasku.

Neograničavajući primeri anjonskih grupa derivata ili analoga prema pronalasku uključuju slobodne karboksilne grupe u bočnom lancu, ako ih ima, kao i u peptidnom ostatku. Peptidna grupa često uključuje slobodne karboksilne grupe na unutrašnjim kiselim amino-kiselinskim ostacima kao što su Asp i Glu.

Neograničavajući primeri katjonskih grupa u peptidnom ostatku uključuju slobodnu amino grupu na N-kraju, ako je prisutna, kao i bilo koju slobodnu amino grupu unutrašnjih baznih amino-kiselinskih ostataka kao što su His, Arg i Lys.

Estar derivata ili analoga pronalaska može npr. da se formira reakcijom slobodne grupe karboksilne kiseline sa alkoholom ili fenolom, što dovodi do zamene najmanje jedne hidroksilne grupe sa alkoksi ili ariloksi grupom Formiranje estra može uključivati slobodnu karboksilnu grupu na C-kraju peptida, i/ili bilo koju slobodnu karboksilnu grupu u bočnom lancu.

Amid derivata ili analoga pronalaska može npr. da se formira reakcijom slobodne grupe karboksilne kiseline sa aminom ili supstituisanim aminom, ili reakcijom slobodne ili supstituisane amino grupe sa karboksilnom kiselinom.

Formiranje amida može uključiti slobodnu karboksilnu grupu na C-kraju peptida, bilo koju slobodnu karboksilnu grupu u bočnom lancu, slobodnu amino grupu na N-kraju peptida, i/ili bilo koju slobodnu ili supstituisanu amino grupu peptida u peptidu i/ili bočnom lancu.

U jednoj realizaciji, derivat ili peptid je u obliku farmaceutski prihvatljive soli. U još jednoj realizaciji, derivat ili peptid je u obliku farmaceutski prihvatljivog amida, poželjno sa amidnom grupom na C-kraju peptida. U još daljoj realizaciji, derivat ili peptid je u obliku farmaceutski prihvatljivog estra.

Izraz „farmaceutska kompozicija“, kako je ovde upotrebljena, označava proizvod koji sadrži aktivno jedinjenje, npr. derivat glukagona iz pronalaska, ili njegovu so, zajedno sa farmaceutskim ekscipijentima kao što su pufer, konzervans i opciono modifikator tonusa i/ili stabilizator. Stoga je farmaceutska kompozicija u tehnici, takođe, poznata kao farmaceutska formulacija.

U sadašnjem kontekstu, izraz „farmaceutski prihvatljiva so“ je namenjen da označi so koja nije štetna za pacijenta. Takve soli uključuju farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli, farmaceutski prihvatljive soli metala, amonijum i alkilovane amonijumove soli. Kisele adicione soli obuhvataju soli neorganskih kiselina kao i organske kiseline.

1

Izraz „ekscipijent", kako je ovde upotrebljen, označava hemijska jedinjenja koja se normalno dodaju farmaceutskim kompozicijama, npr. pufere, agense za toničnost, konzervanse i slično.

Kako je ovde upotrebljen, izraz „terapeutski efikasna količina“ jedinjenja, npr. derivat glukagona iz pronalaska, odnosi se na količinu koja je dovoljna da izleči, ublaži ili delimično zaustavi kliničke manifestacije određene bolesti i/ili njenih komplikacija. Količina dovoljna da se to i postigne definisana je kao „terapeutski efikasna količina”. Efikasne količine za svaku namenu zavisiće od težine bolesti ili povrede, kao i ozbiljnosti i opšteg stanja subjekta. Treba razumeti da se određivanje odgovarajuće doze može postići primenom rutinskih eksperimenata, kreiranjem matrice vrednosti i testiranjem različitih tačaka u matrici, što je sve uobičajeno za edukovanog lekara ili veterinara.

Izrazi „tretman“, „lečenje“ i druge njihove varijante, kako se ovde koriste, podrazumevaju vođenje i negu pacijenta u svrhu suzbijanja stanja, kao što je bolest ili poremećaj. Izrazi su predviđeni da obuhvate ceo spektar tretmana za dato stanje od kojeg pacijent pati, kao što je davanje aktivnog(ih) jedinjenja koja su u pitanju da ublaže simptome ili njihove komplikacije, da odlože napredovanje bolesti, poremećaja ili stanja, da se izleči ili eliminiše

2

bolest, poremećaj ili stanje, i/ili da se spreči stanje, a prema tome se prevencija treba shvatiti kao vođenje i briga o pacijentu u cilju borbe protiv bolesti, stanja ili poremećaja, i uključuje davanje aktivnog(ih) jedinjenja koja su u pitanju da bi se sprečio nastanak simptoma ili komplikacija. Pacijent koji se tretira je poželjno sisar, naročito ljudsko biće, ali lečenje drugih životinja, kao što su psi, mačke, krave, konji, ovce, koze ili svinje, spada u obim ovog pronalaska.

Izraz „dijabetes“ ili „dijabetes melitus“ uključuje dijabetes tipa 1, dijabetes tipa 2, gestacijski dijabetes (tokom trudnoće) i druga stanja koja uzrokuju hiperglikemiju. Izraz se koristi za metabolički poremećaj u kome pankreas proizvodi nedovoljne količine insulina, ili u kojima ćelije organizma ne reaguju na odgovarajući način na insulin, sprečavajući tako ćelije da apsorbuju glukozu. Kao rezultat, glukoza se nakuplja u krvi.

Dijabetes tipa 1, koji se naziva i insulin zavisni dijabetes melitus (IDDM) i dijabetes koji se javlja kod maloletnika, izazvan je razaranjem beta-ćelija, što obično dovodi do apsolutnog nedostatka insulina.

Dijabetes tipa 2, takođe, poznat kao dijabetes melitus koji ne zavisi od insulina (NIDDM) i dijabetes koji se javlja kod odraslih, povezan je sa preddominantnom rezistencijom na insulin i stoga relativnim nedostatkom insulina i/ili pretežno defektom u lučenju insulina sa insulinskom rezistencijom.

Izraz „euglikemija“, kako je ovde upotrebljen, označava normalnu koncentraciju glukoze u krvi. Ovo se, takođe, naziva i normoglikemija.

Izraz „gojaznost“ podrazumeva višak masnog tkiva.

Kada unos energije premašuje potrošnju energije, višak kalorija se skladišti u masnom tkivu, i ako je taj neto pozitivan saldo produžen, rezultat je gojaznost, tj. postoje dve komponente za ravnotežu težine i abnormalnost sa bilo koje strane (unos ili potrošnja) može dovesti do gojaznosti. U ovom kontekstu, gojaznost se najbolje vidi kao bilo koji stepen viška masnog tkiva koji predstavlja zdravstveni rizik. Razlika između normalnih i gojaznih pojedinaca može se samo približno odrediti, ali zdravstveni rizik koji uzrokuje gojaznost je verovatno kontinuum sa povećanjem masnog tkiva. Međutim, u kontekstu pronalaska, pojedinci sa indeksom telesne mase (BMI = telesna težina u kilogramima podeljena sa kvadratom visine u metrima) iznad 25 se smatraju gojaznim.

U slučaju davanja derivata glukagona iz pronalaska, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja ili supstanci kao što je gore opisano, u svrhu koja se odnosi na lečenje ili prevenciju gojaznosti ili prekomerne težine, tj. u vezi sa

4

smanjenjem viška masnih naslaga, može biti od značaja da se primeni takva primena u kombinaciji sa hirurškom intervencijom u cilju postizanja gubitka težine ili sprečavanja dobijanja težine, npr. u kombinaciji sa bariatričnom hirurškom intervencijom. Primeri često korišćenih bariatričnih hirurških tehnika uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće: gastroplastika sa vertikalnom trakom (takođe, poznata kao „gastrični povez“), gde je deo želuca spojen da bi se stvorila manja pred-stomačna kesica koja služi kao novi stomak; gastrično povezivanje, npr. korišćenjem podesivog sistema gastričnih traka (kao što je Swedish Adjustable Gastric Band (SAGB), LAP-BAND ™ ili MIDband ™), pri čemu se pravi mala pred-stomačna kesica koja služi kao novi želudac pomoću elastomerne (npr. silikonske) trake koju pacijent može podesiti u veličini; i operacija želudačnog bajpasa, npr. „Roux-en-Y“ zaobilaznica u kojoj se mala torbica želuca pravi pomoću uređaja za heftanje i povezana je sa distalnim tankim crevom, pri čemu je gornji deo tankog creva ponovo spojen u Y-oblik.

Davanje derivata glukagona prema pronalasku (opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja ili supstanci kao što je gore opisano) može se odvijati tokom perioda pre sprovođenja date barijatrijske hirurške intervencije i/ili u periodu nakon toga. U mnogim slučajevima, može biti poželjno da se započne sa davanjem jedinjenja iz pronalaska nakon bariatrične hirurške intervencije.

Jedinjenja prema pronalasku i sredstva protiv gojaznosti ili antidijabetici, kao što je definisano u ovoj specifikaciji, mogu se davati istovremeno ili sekvencijalno. Faktori se mogu davati obliku jednostruke doze, pri čemu oblik jednostruke doze sadrži oba jedinjenja, ili u obliku kompleta delova koji sadrže preparat jedinjenja prema pronalasku kao oblik prve jedinice doze i preparat sredstva protiv gojaznosti ili antidijabetičkog sredstva kao oblik druge jedinice doze. Kad god se prva ili druga ili treća, itd. jedinica doza spomene u ovoj specifikaciji, to ne ukazuje na željeni redosled primene, već se samo radi u svrhu pogodnosti.

Pod „simultanim“ doziranjem preparata jedinjenja prema pronalasku i preparata sredstava protiv gojaznosti ili antidijabetičkih sredstava podrazumeva se davanje jedinjenja u obliku pojedinačne doze, ili davanje prvog sredstva praćeno davanjem drugog sredstva sa vremenskim razmakom od ne više od 15 minuta, poželjno 10, poželjnije 5, poželjnije 2 minuta. Bilo koji od ovih faktora se može primeniti kao prvi.

Pod „sekvencijalnim“ doziranjem podrazumeva se davanje prvog sredstva nakon čega sledi davanje drugog sredstva sa vremenskim razmakom od više od 15 minuta. Bilo koja od dve pojedinične doze može se primeniti prva.

Poželjno, oba proizvoda se ubrizgavaju kroz isti intravenski pristup.

Kao što je već naznačeno, u svim gore pomenutim terapeutskim postupcima ili indikacijama, jedinjenje prema pronalasku može se primenjivati samostalno. Međutim, može se, takođe, primenjivati u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih sredstava, supstanci ili jedinjenja, bilo sekvencijalno ili istovremeno.

Uobičajena doza jedinjenja prema pronalasku kada se koristi u postupku prema pronalasku je u opsegu od oko 0,0001 do oko 100 mg/kg telesne težine dnevno, poželjno od oko 0,001 do oko 10 mg/kg telesne težine, poželjnije od oko 0,001 do oko 5 mg/kg telesne težine dnevno, npr. od oko 0,001 do oko 10 mg/kg telesne težine dnevno ili od oko 0,001 do oko 5 mg/kg telesne težine dnevno primenjeno u jednoj ili više doza, kao što je od 1 do 3 doze. Tačno doziranje će zavisiti od učestalosti i načina davanja, pola, starosti, težine i opšteg stanja tretiranog subjekta, prirode i ozbiljnosti tretiranog stanja, svih pratećih bolesti koje se leče i drugih faktora koji su očigledni onima koji su stručnjaci u tehnici.

Jedinjenja iz predmetnog pronalaska obuhvataju jedinjenja za koja se veruje da su dobro prilagođena primeni sa dužim intervalima nego, na primer, jednom dnevno, tako da odgovarajuće formulisana jedinjenja pronalaska mogu biti pogodna za npr. davanje dva puta nedeljno ili jednom nedeljno pomoću pogodnog puta primene, kao što je jedan od puteva ovde opisan.

Kao što je gore opisano, jedinjenja prema pronalasku mogu se davati ili primenjivati u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja ili supstanci, a pogodna dodatna jedinjenja ili supstance mogu biti izabrane, na primer, od antidijabetičkih sredstava, antihiperlipidemijskih sredstava, sredstava protiv gojaznosti, antihipertenzivnih sredstava i sredstava za lečenje komplikacija koje su rezultat ili su povezane sa dijabetesom.

Priprema derivata peptida glukagona

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za dobijanje derivata glukagona prema pronalasku. Derivat prema pronalasku može biti pripremljen postupkom opisanim u daljem tekstu.

SPPS Opšti postupci

Derivati Fmoc-zaštićenih amino-kiselina za korišćenje mogu biti preporučenog standarda: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-GlyOH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(BOC)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH and Fmoc-Lys(Mtt)-OH, koji se nabavljaju od npr. Anaspec, Bachem, Iris Biotech, ili NovabioChem. Ako ništa drugo nije naznačeno, koristi se prirodni L-oblik amino-kiselina. N-terminalna aminokiselina je Boc zaštićena na alfa amino-grupi (npr. Boc-His(Boc)-OH, ili Boc-His(Trt)-OH za peptide sa His na N-kraju). SPPS se može izvesti korišćenjem hemije zasnovane na Fmoc-u na Prelude Solid Phase Peptide Synthesizer-u od Protein Technologies-a (Tucson, AZ 85714 U.S.A.). Pogodna smola za dobijanje C-terminalnih peptidnih amida je H-Rink Amid-ChemMatrix smola (punjenje npr. 0,52 nmol/g) ili Rink Amid AM polistirenska smola (Novabiochem, punjenje npr. 0,62 mmol/g) ili slično. Fmoc-deprotekcija se postiže sa 20% piperidina u NMP. Peptidne veze se izvode korišćenjem DIC/HOAt/kolidina ili DIC/Oxyma Pure/kolidina bez prethodne aktivacije. Amino-kiselina/HOAt ili amino-kiselina/Oxyma Pure rastvori (0,3 M/0,3 M u NMP u molarnom višku od 3-10 puta) dodaju se u smolu praćenu istim molarnim ekvivalentom DIC (3 M u NMP) nakon čega sledi kolidin (3 M u NMP). Na primer, sledeće količine 0,3 M amino-kiseline/HOAt rastvora mogu da se koriste po kuplovanju za sledeće reakcijske skale: Skala/mL, 0,05 mmol/1,5 mL, 0,10 mmol/3,0 mL, 0,25 mmol/7,5 mL. Mtt grupa se može ukloniti ispiranjem smole sa HFIP/DCM (75:25) (2 x 2 min), ispiranjem sa DCM i suspendovanjem smole u HFIP/DCM (75:25) (2 x 20 min) i zatim ispiranjem u nizu sa Piperidin/NMP (20:80), DCM (1x), NMP (1x), DCM (1x), NMP (1x).

Vezivanje supstituenta

Supstituent može biti uveden postupnim postupkom pomoću Prelude peptidnog sintetizatora kao što je gore opisano upotrebom pogodno zaštićenih gradivnih blokova, kao što su standardne amino-kiseline opisane gore, Fmoc-8-amino-3,6-dioksaoktanska kiselina i Fmoc-Glu-OtBu. Uvođenje grupe masne kiseline može se postići upotrebom gradivnog bloka, kao što je, ali ne ograničavajući se na, mono-tercbutil-estar oktadekandioinske kiseline. Posle svakog koraka kuplovanja, nereagovani peptidni intermedijer može biti zatvoren anhidridom sirćetne kiseline i kolidinom u višku (> 10 ekv.).

Uvođenje supstituenta na epsilon-azotu lizina se postiže korišćenjem Lizina zaštićenog sa Mtt (Fmoc-Lys(Mtt)-OH). MTT grupa se može ukloniti standardnom procedurom kao što je Alternativno, epsilon-azot lizina može biti zaštićen sa ivDde grupom (Fmoc-Lys(ivDde)-OH). Inkorporacija gama-Glu grupa u supstituentu može se postići spajanjem sa amino-kiselinom Fmoc-Glu-OtBu.

1

Uvođenje svake grupe u supstituent može da se postigne korišćenjem produženog vremena spajanja (1 x 6 sati), a zatim prekrivanje anhidridom sirćetne kiseline ili alternativno sirćetnom kiselinom/DIC/HOAt/kolidinom.

Odvajanje od smole

Posle sinteze, smola je isprana sa DCM, a peptid je odvojen od smole tretmanom u trajanju od 2-3 sata sa TFA/TIS/vodom (95/2,5/2,5) praćeno taloženjem sa dietiletrom. Talog se ispira dietiletrom.

Prečišćavanje i kvantifikacija

Sirovi peptid se rastvara u pogodnoj mešavini vode i MeCN, kao što je voda/MeCN (4:1), i prečisti preparativnom HPLC reverzne faze (Waters Deltaprep 4000 ili Gilson) na koloni koja sadrži C18-silika gel. Eluiranje se izvodi uz povećanje gradijenta MeCN u vodi koja sadrži 0,1% TFA.

Relevantne frakcije se proveravaju pomoću analitičke HPLC ili UPLC. Frakcije koje sadrže čisti ciljni peptid su pomešane i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni rastvor se analizira (HPLC, LCMS) i proizvod (tj. derivat) se kvantifikuje korišćenjem HPLC detektora hemiluminiscencije specifične za azot (Antek 8060 HPLC-CLND) ili merenjem UV-apsorpcije na 280 nm. Proizvod se dozira u staklene bočice. Bočice su zatvorene Millipore

1 1

predfiltrima od staklenih vlakana. Sušenje zamrzavanjem daje peptid trifluoroacetata kao belu čvrstu supstancu.

FUNKCIONALNA SVOJSTVA

U prvoj funkcionalnoj realizaciji, peptidi iz pronalaska su u stanju da se vezuju i za GLP-1 receptor i za glukagonski receptor sa dobrim afinitetom. U drugoj funkcionalnoj realizaciji, peptidi iz pronalaska su poželjno GLP-1 i agonisti receptora glukagona, što se odražava njihovom potentnošću na oba receptora. Takođe, u trećoj funkcionalnoj realizaciji, oni imaju poboljšana farmakokinetička svojstva. Takođe, ili alternativno, u četvrtoj funkcionalnoj realizaciji, oni imaju dobra biofizička svojstva.

U jednoj realizaciji, pronalazak obezbeđuje nove GLP-1/glukagonR koagoniste sa poboljšanom potentnošću receptora i/ili afinitetom prema GLP-1 receptoru ili glukagonskom receptoru ili prema oba receptora. U još jednoj realizaciji, pronalazak obezbeđuje nove GLP-1/glukagonR koagoniste sa poboljšanom stabilnošću. U još jednoj realizaciji, pronalazak obezbeđuje nove GLP-1/glukagonR koagoniste sa poboljšanom rastvorljivošću. U još jednoj realizaciji, pronalazak obezbeđuje nove GLP-1/glukagonR koagoniste sa povećanim poluživotom.

1 2

Potentnost (tj. aktivacija receptora) i afinitet (tj. vezivanje receptora) prema glukagon i GLP-1 receptorima može se odrediti prema testovima ovde opisanim u Primerima 74-75.

Rastvorljivost jedinjenja pronalaska pri različitim pH vrednostima može se meriti kao što je ovde opisano u odeljku Funkcionalna svojstva.

Fizička stabilnost jedinjenja prema pronalasku može se meriti testom fibrilacije tioflavinom (ThT) ovde opisanim u Primeru 76.

Hemijska stabilnost derivata glukagona ili analoga iz pronalaska može se odrediti kao što je ovde opisano u Primeru 79.

Peptidi prema pronalasku, takođe, imaju produženi in vivo polu-život. Polu-život derivata glukagona ili analoga iz pronalaska može se odrediti u farmakokinetičkoj studiji na različitim vrstama, uključujući miševe (kao što je ovde opisano u Primeru 78), pacove i patuljaste svinje.

Efekat derivata glukagona prema pronalasku na smanjenje telesne težine može se odrediti u DIO miševima kao što je ovde opisano u Primeru 77.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska je selektivan za receptor glukagona kao za GLP-1 receptor.

1

Agonisti GLP-1/glukagonskih receptora

U jednoj realizaciji, pronalazak obezbeđuje nove stabilne i produžene koagoniste GLP-1/glukagonskih receptora. Koagonist GLP-1/glukagon skihreceptora može se definisati kao peptid koji je u stanju da aktivira i GLP-1 i glukagonske receptore.

Derivati pronalaska pokazuju EC50ispod 1 nM na GLP-1 receptoru i EC50ispod 10 nM na glukagonskom receptoru, ili ispod 100 pM na GLP -1 receptoru i ispod 100 pM na glukagonskom receptoru, ili ispod 50 pM na GLP-1 receptoru i ispod 100 pM na glukagonskom receptoru, ili ispod 10 pM na GLP-1 receptoru i ispod 50 pM na glukagonskom receptoru. Kao što je pomenuto, potentnost receptora se može odrediti korišćenjem testa ovde opisanog u Primeru 74.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 100 pM i EC50< 1 nM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 50 pM i EC50< 1 nM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 10 pM i EC50< 1 nM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 50 pM i EC50< 100 pM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 10 pM i EC50< 100 pM na receptoru glukagona. U jednoj

1 4

realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 10 pM i EC50< 50 pM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 1 pM i EC50< 50 pM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora sa EC50< 10 pM i EC50< 10 pM na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je koagonist GLP-1/glukagona sa EC50na GLP-1 receptoru < the EC50na receptoru glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je koagonist GLP-1/glukagona sa EC50na GLP-1 receptoru (npr. u pM) većem od EC50na receptoru glukagona (npr. u pM).

Agonist receptora glukagona

Agonist receptora može se definisati kao peptid koji se vezuje za receptor i izaziva odgovor uobičajen za prirodni ligand. Izraz „agonist glukagona“, kako je ovde upotrebljen, odnosi se na bilo koji derivat glukagona koji se vezuje i potpuno ili delimično aktivira receptor humanog glukagona. U jednoj realizaciji, „agonist glukagona“ je bilo koji derivat glukagona koji aktivira receptor glukagona, sa potentnošću (EC50) ispod 10 nM ili ispod 1 nM ili 100 pM ili ispod 10 pM, mereno testom ovde opisanim u Primeru 74.

1

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist receptora glukagona. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist receptora glukagona, sa EC50< 10 nM. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist receptora glukagona, sa EC50< 1 nM. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist receptora glukagona, sa EC50< 100 pM. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist receptora glukagona, sa EC50< 10 pM. Potentnost, tj. EC50, derivata glukagona na receptoru glukagona može se odrediti testom ovde opisanim u Primeru 74.

agonist GLP-1 receptora

Agonist receptora može se definisati kao peptid koji se vezuje za receptor i izaziva odgovor uobičajen za prirodni ligand. Tako, na primer, „agonist GLP-1 receptora“ ili „peptid agonista GLP-1 receptora“ može da se definiše kao jedinjenje koje je sposobno da se veže za GLP-1 receptor i koje ga može aktivirati.

Peptidi koagonista predmetnog pronalaska imaju aktivnost GLP-1. Ovaj izraz odnosi se na sposobnost vezivanja za receptor GLP-1 i početak putanje transdukcije signala koji dovodi do insulinotropnog dejstva ili drugih fizioloških efekata, kao što je poznato u tehnici. Derivati prema pronalasku pokazuju EC50ispod 1 nM ili ispod 100 pM

1

ili ispod 50 pM ili ispod 10 pM koristeći test ovde opisan u Primeru 74.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora. U jednom aspektu, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora, sa EC50< 100 pM. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora, sa EC50< 50 pM. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je agonist GLP-1 receptora, sa EC50< 10 pM. Potentnost, tj. EC50, derivata glukagona na GLP-1 receptoru može se odrediti testom ovde opisanim u Primeru 74.

Biološka aktivnost - in vitro afinitet i potentnost

U jednoj realizaciji, afinitet se odnosi na afinitet vezivanja in vitro, tj. učinak u testu afiniteta za vezivanje receptora za GLP-1 i u testu afiniteta za vezivanje receptora glukagona, više u odnosu na sposobnost vezivanja humanog GLP-1 receptora i humanog glukagonskog receptora. Afinitet vezivanja humanog GLP-1 receptora može se meriti u testu vezivanja, npr. u stabilno transfektovanoj BHK ćelijskoj liniji koja eksprimuje humani GLP-1 receptor. Radioaktivno obeleženi GLP-1 vezuje se za receptor i može biti kompetitivno zamenjen jedinjenjem. Vezivanje radioliganda može se odrediti u prisustvu kuglica scintilacionog proksimalnog testa (SPA) koje se vezuju za ćelijske membrane i kada je radioaktivnost blizu kuglice,

1

ona proizvodi svetlost koja se meri i predstavlja meru in vitro afinitet vezivanja. Jedan neograničavajući primer takvog testa je opisan ovde u Primeru 75. Afinitet vezivanja humanog receptora glukagona može se meriti u testu afiniteta vezivanja, npr. u stabilno transfektovanoj BHK ćelijskoj liniji koja eksprimuje humani glukagonski receptor. Radioaktivno obeleženi glukagon se vezuje za receptor i može biti kompetitivno zamenjen jedinjenjem. Vezivanje radioliganda može se odrediti u prisustvu nkuglica scintilacionih proksimalnih testova (SPA), koje se vezuju za ćelijske membrane i kada je radioaktivnost blizu kuglice, ona proizvodi svetlost koja se meri i predstavlja meru in vitro afinitet vezivanja.

Izraz polumaksimalna inhibitorna koncentracija (IC50) uglavnom se odnosi na koncentraciju kompetitivnog jedinjenja koja zamenjuje 50% specifičnog vezivanja radioligandskog vezivanja koje odgovara polovini puta između osnovne linije i maksimuma, uz upućivanje na krivu odgovora na dozu. IC50se koristi kao merilo afiniteta vezivanja jedinjenja i predstavlja koncentraciju gde se uočava 50% njenog maksimalnog vezivanja.

In vitro vezivanje peptida iz pronalaska može se odrediti kao što je gore opisano, i odrediti IC50datog peptida. Što je niža vrednost IC50, to je veći afinitet vezivanja.

1

Afinitet, tj. IC50, derivata glukagona prema GLP-1 receptoru može se odrediti testom ovde opisanim u Primeru 75. U još jednoj realizaciji, peptid prema predmetnom pronalasku ima afinitet in vitro vezivanja na GLP-1 receptor koji je određen primenom postupka iz Primera 75, koji odgovara IC50na ili ispod 100 nM, poželjnije ispod 10 nM, još poželjnije ispod 5 nM, ili najpoželjnije ispod 1 nM.

Afinitet, tj. IC50, derivata glukagona na glukagonskom receptoru može se odrediti testom ovde opisanim u Primeru 75. U još jednoj realizaciji, peptid prema predmetnom pronalasku ima afinitet vezivanja in vitro na receptor glukagona određen primenom postupka iz Primera 75, koji odgovara IC50na ili ispod 100 nM, ili ispod 50 nM ili ispod 10 nM

U jednoj realizaciji, potentnost se odnosi na in vitro potenciju, tj. na performanse na testu funkcionalnog GLP-1 receptora i na testu glukagonskog receptora, naročito na sposobnost aktiviranja humanog GLP-1 receptora i humanog glukagonskog receptora. Odgovor humanog GLP-1 receptora može se meriti u testu reporterskog gena, npr. u stabilno transfektovanoj BHK ćelijskoj liniji koja eksprimuje humani GLP-1 receptor i sadrži DNK za element odgovora cAMP (CRE) vezan za promotor i gen za luciferazu svitaca (CRE luciferaza). Kada se cAMP proizvodi kao rezultat aktivacije

1

GLP-1 receptora, to rezultira eksprimovanjem luciferaze. Eksprimovanje luciferaze se može odrediti dodavanjem luciferina, koji se pomoću enzima konvertuje u oksiluciferin i proizvodi bioluminiscenciju, koja se meri i predstavlja meru in vitro potentnosti. Jedan neograničavajući primer takvog testa je opisan ovde u Primeru 74. Odgovor receptora humanog glukagona može se meriti u testu reporterskog gena, npr. u stabilno transfektovanoj BHK ćelijskoj liniji koja eksprimuje receptor humanog glukagona i sadrži DNK za cAMP element odgovora (CRE) vezan za promotor i gen za luciferazu svitaca (CRE luciferaza). Kada se cAMP proizvodi kao rezultat aktivacije glukagonskog receptora, to rezultira eksprimovanjem luciferaze. Eksprimovanje luciferaze se može odrediti dodavanjem luciferina, koji se pomoću enzima konvertuje u oksiluciferin i proizvodi bioluminiscenciju, koja se meri i predstavlja meru in vitro potentnosti. Jedan neograničavajući primer takvog testa je opisan ovde u Primeru 74.

Izraz polumaksimalna efektivna koncentracija (EC50) generalno se odnosi na koncentraciju koja indukuje odgovor na pola puta između osnovne linije i maksimuma, pozivanjem na krivu odgovora na dozu. EC50se koristi kao mera jačine jedinjenja i predstavlja koncentraciju gde se uočava 50% njenog maksimalnog efekta.

11

Može se in vitro potentnost peptida prema pronalasku odrediti kao što je gore opisano, i određen EC50dotičnog peptida. Što je niža vrednost EC50, to je bolja potentnost.

Biološka aktivnost - in vivo farmakologija

U sledećoj realizaciji, derivati peptida iz pronalaska (ili njihovi analozi) su potentni in vivo, koji se mogu odrediti kao što je poznato u stanju tehnike u bilo kom pogodnom životinjskom modelu, kao i u kliničkim ispitivanjima.

Ishranom indukovani gojazni (DIO) miš je jedan primer pogodnog životinjskog modela i uticaja na telesnu težinu, unos hrane i toleranciju glukoze može se proceniti tokom subhroničnog doziranja u ovom modelu. Uticaj na telesnu težinu i glukozu u krvi može se odrediti kod takvih miševa in vivo, npr. kao što je ovde opisano u Primeru 77. Unos hrane može se proceniti na pojedinačnim životinjama i vaganjem hrane koja se konzumira dnevno. Ovaj model se, takođe, može koristiti za procenu efekata na toleranciju na glukozu izvođenjem oralnog ili i.p. testa tolerancije na glukozu (OGTT ili IPGTT). Ovi testovi se izvode davanjem količine glukoze oralno ili i.p. polugladnim životinjama i naknadno se meri glukoza u krvi do tri sata.

Farmakokinetički profil

Prema trećoj funkcionalnoj realizaciji, peptidi prema pronalasku imaju poboljšana farmakokinetička svojstva, kao što je povećani terminalni poluživot.

Farmakokinetička svojstva peptida prema pronalasku mogu biti pogodno određena in vivo u farmakokinetičkim (PK) studijama. Takve studije se sprovode da bi se procenilo kako se farmaceutska jedinjenja apsorbuju, distribuiraju i eliminišu u organizmu, i kako ovi procesi utiču na koncentraciju jedinjenja u telu tokom vremena.

U otkriću i predkliničkoj fazi razvoja farmaceutskog leka, životinjski modeli kao što su miš, pacov, majmun, pas ili svinja mogu se koristiti za izvođenje ove karakterizacije. Svaki od ovih modela može se koristiti za testiranje farmakokinetičkih svojstava peptida prema pronalasku.

U takvim studijama, životinjama se obično daje jedna doza leka, ili intravenozno (i.v.), supkutano (s.c.), ili oralno (p.o.) u relevantnoj formulaciji. Uzorci krvi su uzeti u unapred definisanim vremenskim tačkama posle doziranja, a uzorci su analizirani na koncentraciju leka sa odgovarajućim kvantitativnim testom. Na osnovu ovih merenja crtaju se profili koncentracije vremenske plazme za ispitivano jedinjenje i vrši se takozvana farmakokinetička analiza podataka bez pregrada.

Kod većine jedinjenja terminalni deo profila za koncentraciju u plazmi će biti linearan kada se nacrta u polulogaritamskoj plotici, što reflektuje da se nakon početne apsorpcije i raspodele lek odstrani iz tela konstantnom frakcionom stopom. Brzina (lambda Z ili λz) je jednaka minus nagib terminalnog dela krive. Iz ove brzine, takođe se može izračunati i polu-život, T1⁄2= ln(2) / λz(videti, npr., Johan Gabrielsson i Daniel Weiner:

Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis.

Concepts & Applications, 3rd Ed., Swedish Pharmaceutical Press, Stockholm (2000)).

Klirens se može odrediti nakon i.v. primene i definiše se kao doza (D) podeljena sa površinom ispod krive (AUC) koncentracije plazme u odnosu na vremenski profil (Rowland, M and Tozer TN: Clinical Pharmacokinetics:

Concepts and Applications, 3<rd>edition, 1995 Williams Wilkins).

Procena terminalnog poluživota i/ili klirensa je relevantna za procenu režima doziranja i važan je parametar u razvoju leka, u proceni novih jedinjenja leka.

Farmakokinetički profil – poluživot in vivo kod pacova Prema trećoj funkcionalnoj realizaciji, peptidi iz pronalaska imaju poboljšana farmakokinetička svojstva u poređenju sa hGLP-1 ili hglukagonom. Poželjno je da peptidi

11

iz pronalaska imaju farmakokinetička svojstva pogodna za davanje jednom dnevno ili ređe.

U jednoj realizaciji, farmakokinetička svojstva se mogu odrediti kao terminalni poluživot (T1⁄2) in vivo kod pacova posle i.v. i s.c. primene. U dodatnim realizacijama, terminalni poluživot je najmanje 1 sat, poželjno najmanje 3 sata, poželjno najmanje 4 sata, još poželjnije najmanje 5 sati, ili najpoželjnije najmanje 6 sati.

Farmakokinetički profil – poluživot in vivo kod miševa Prema trećoj funkcionalnoj realizaciji, peptidi iz pronalaska imaju poboljšana farmakokinetička svojstva u poređenju sa hGLP-1 ili hglukagonom. Poželjno je da peptidi iz pronalaska imaju farmakokinetička svojstva pogodna za davanje jednom dnevno ili ređe.

U jednoj realizaciji, farmakokinetička svojstva mogu se odrediti kao terminalni poluživot (T1⁄2) in vivo kod miševa nakon i.v. i s.c. primene. U dodatnim realizacijama, terminalni poluživot je najmanje 1 sat, poželjno najmanje 3 sata, poželjno najmanje 4 sata, još poželjnije najmanje 5 sati, ili najpoželjnije najmanje 6 sati. Pogodan test za određivanje terminalnog poluživota kod miševa nakon s.c. primene je opisan ovde u Primeru 78.

Farmakokinetički profil – poluživot in vivo kod patuljastih svinja

Prema trećoj funkcionalnoj realizaciji, peptidi iz pronalaska imaju poboljšana farmakokinetička svojstva u poređenju sa hGLP-1 (tj. humanim GLP-1) ili hglukagonom (tj. humanim glukagonom) i ima prednost da je pogodan za davanje jednom dnevno ili jednom nedeljno. U jednoj realizaciji farmakokinetička svojstva mogu se odrediti kao terminalni poluživot (T1⁄2) in vivokod patuljastih svinja posle i.v. primene, npr. kao što je dole opisano.

U jednoj realizaciji, terminalni poluživot kod patuljastih svinja je najmanje 5 sati, poželjno najmanje 10 sati, još poželjnije najmanje 15 sati, ili najpoželjnije najmanje 20 sati.

Poluživot in vivo kod patuljastih svinja derivata glukagona može se odrediti prema sledećem postupku:

Svrha ove studije je da se odrede farmakokinetička svojstva in vivo derivata glukagona nakon i.v. davanja patuljastim svinjama. Ovo je učinjeno u farmakokinetičkoj (PK) studiji, gde je, između drugih parametara, određen terminalni poluživot i klirens dotičnog derivata. Povećanje terminalnog poluživota i smanjenje klirensa znači da se jedinjenje iz studije sporije eliminiše iz tela. Za derivate glukagona ili analoge ovo podrazumeva produženo trajanje farmakološkog efekta.

11

Ženke patuljastih svinja Gottingen se dobijaju od Ellegaard Gottingen patuljastih svinja (Dalmose, Danska), a koriste se približno od 7-14 meseci starosti i težine od oko 16-35 kg u istraživanjima. Patuljaste svinje su smeštene ili pojedinačno (svinje sa trajnim kateterom) ili u grupi, i hranjene su ograničeno jednom ili dva puta dnevno sa SDS ishranom za patuljaste svinje (Special Diets Services, Essex, UK).

U nekim studijama posle minimalno 2 nedelje aklimatizacije dva stalna centralna venska katetera se stavljaju u venu cava caudalis ili cranialis kod svake životinje. Životinjama je dozvoljen oporavak od 1 nedelje nakon operacije, a zatim se koriste za ponovljene farmakokinetičke studije sa pogodnim periodom ispiranja između uzastopnih doziranja glukagona. U drugim studijama, životinje se aklimatizuju 1 nedelju, nakon čega se koriste za ponovljena farmakokinetička ispitivanja sa pogodnim periodom ispiranja između uzastopnih doziranja derivata glukagona. U svakoj prilici doziranja ove svinje su instrumentirane sa venflon kanilom u jednoj veni uha kroz koju su dozirani derivati. Uzimanje uzoraka krvi vrši se venopunkturom u v. jugularis ili v. cava cranialis Životinje ili nisu gladne ili gladuju približno 18 sati pre doziranja i od 0 do 4 sata posle doziranja, ali imaju ad neograničen pristup vodi tokom celog perioda.

11

Derivati glukagona se obično rastvore u 50 mM natrijum fosfata, 145 mM natrijum hlorida, 0,05% tween (polisorbat) 80, pH 7,4 do koncentracije obično od 20-60 nmol/ml. Intravenozne injekcije (zapremina koja odgovara obično 2-3 nmol/kg, na primer 0,1 ml/kg) jedinjenja se daju kroz jedan kateter ili kroz venflon kanilu, a krv se uzorkuje u unapred određenim vremenskim tačkama do 13 dana posle doziranja (poželjno preko drugog katetera ili venopunkturom). Uzorci krvi (na primer 0,8 ml) sakupljeni su u epruvete sa EDTA puferom (8 mM) (ponekad je dodat aprotinin 500 KIU/ml krvi) i zatim centrifugirani na 4°C i 1942 G tokom 10 minuta. Plazma se pipetira u Micronic epruvete na suvom ledu i čuva se na -20°C dok se ne analizira koncentracija odgovarajućeg derivata glukagona u plazmi korišćenjem odgovarajućeg kvantitativnog testa kao što je ELISA ili LC-MS.

Na osnovu ovih merenja, ucrtani su profili koncentracije vremena i plazme za jedinjenje iz studije i takozvana nekompartmentalna farmakokinetička analiza podataka je izvršena u WinNonlin v. 5.0 ili Phoenix v. 6.2 (Pharsight Inc., Mountain View, CA, USA) ili drugom relevantnom softveru za PK analizu. Kod većine jedinjenja, terminalni deo profila za koncentraciju u plazmi će biti linearan kada se nacrta u polulogaritamskoj plotici, što reflektuje da se, nakon početne raspodele, lek odstrani iz

11

tela konstantnom frakcionom stopom. Brzina (lambda Z ili λz) je jednaka minus nagib terminalnog dela plotice. Iz ove brzine, takođe se može izračunati i terminalni polu-život, kao t1⁄2= ln(2) / λz (videti, npr., Johan Gabrielsson i Daniel Weiner: Pharmacokinetics and Pharmacodynamic Data Analysis. Concepts & Applications, 3rd Ed., Swedish Pharmaceutical Press, Stockholm (2000)). Klirens se definiše kao doza (D) podeljena površinom ispod krive (AUC) profila plazmakoncentracije u odnosu na vreme (Rowland, M and Tozer TN: Clinical Pharmacokinetics: Concepts and Applications, 3rd edition, 1995 Williams Wilkins).

Fizičko-hemijske osobine

Prema četvrtoj realizaciji, peptidi iz pronalaska imaju povoljna fizičko-hemijska svojstva. Ova svojstva uključuju, ali nisu ograničena na, fizičku stabilnost, hemijsku stabilnost i/ili rastvorljivost. Ova i druga fizičko-hemijska svojstva mogu se meriti korišćenjem standardnih postupaka poznatih u oblasti proteinske hemije. U jednoj realizaciji, ova svojstva su poboljšana u poređenju sa nativnim glukagonom (SEQ ID NO: 1). Izraženije samovezivanje peptida kod samovezujućih svojstava peptida može biti barem delomično odgovorno za poboljšanu fizičku stabilnost i/ili rastvorljivost.

11

Neograničavajući primeri testova za ispitivanje biofizičkih svojstava opisani su ovde u Primeru 76 i Primeru 79.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz predmetnog pronalaska ima više od 70% prinosa u ThT fibrilacionom testu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz ovog pronalaska ima više od 90% prinosa u ThT fibrilacionom testu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima oko 100% prinosa u ThT fibrilacionom testu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz predmetnog pronalaska ima više od 7 sati zaostajanja u ThT fibrilacionom testu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz ovog predmetnog ima više od 20 sati zaostajanja u ThT fibrilacionom testu. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima 45 sati zaostajanja ili više u ThT fibrilacionom testu. Derivat glukagona, kako je ovde opisan, pri čemu je pomenuti ThT fibrilacioni test je kao što je ovde opisan u Primeru 76.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 14% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 13% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 12% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima

11

manje od 10% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 9% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 7% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 5% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 3% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska ima manje od 2% degradacije na testu hemijske stabilnosti. U jednoj realizaciji, ispitivanje hemijske stabilnosti je kao što je opisano ovde u Primeru 79.

Stabilnost

Izraz „fizička stabilnost“ preparata agonista peptida GLP-1 receptora se odnosi na sklonost proteina da formira biološki neaktivne i/ili nerastvorljive agregate proteina kao rezultat izlaganja proteina termomehaničkom naprezanju i/ili interakciji sa destabilizujućim interfejsima i površinama, kao što su hidrofobne površine i interfejsi. Fizička stabilnost vodenih proteinskih preparata se procenjuje pomoću vizuelne inspekcije i/ili merenja zamućenosti nakon izlaganja preparata ispunjenog u pogodnim posudama (npr. patronama ili bočicama) mehaničkom/fizičkom

12

naprezanju (npr. mešanju) na različitim temperaturama tokom različitog vremenskeog trajanja. Vizuelna kontrola preparata vrši se na oštrom usmerenom svetlu sa tamnom pozadinom. Zamućenost preparata je okarakterisana vizuelnim rezultatom koji određuje stepen zamućenosti, na primer na skali od 0 do 3 (preparat koji ne pokazuje zamućenost odgovara vizuelnoj oceni 0, a preparat koji pokazuje vizuelnu zamućenost na dnevnoj svetlosti odgovara vizuelnom rezultatu 3). Preparat je klasifikovan kao fizički nestabilan u pogledu agregacije proteina, kada pokazuje vizuelnu zamućenost na dnevnom svetlu. Alternativno, zamućenost preparata može se proceniti jednostavnim merenjem zamućenosti koji je dobro poznat stručnjaku.

Fizička stabilnost vodenih proteinskih preparata može se, takođe, proceniti korišćenjem spektroskopskog agensa ili probe konformacionog statusa proteina. Proba je poželjno mali molekul koji se preferentno vezuje za nenativni konformer proteina. Jedan primer male molekularne spektroskopske probe proteinske strukture je tioflavin T. Tioflavin T je fluorescentna boja koja se široko koristi za detekciju amiloidnih fibrila. U prisustvu fibrila, a možda i drugih proteinskih konfiguracija, tioflavin T dovodi do novog maksimuma ekscitacije na oko 450 nm i pojačane emisije na oko 482 nm kada se vezuje za oblik fibrilnog proteina. Nevezani tioflavin T je u suštini nefluorescentan na talasnim dužinama.

Izraz „hemijska stabilnost“ proteinskog preparata, kako je ovde upotrebljen, odnosi se na promene u kovalentnoj strukturi proteina, što dovodi do stvaranja hemijskih proizvoda degradacije sa potencijalno manjom biološkom potentnošću i/ili potencijalno povećanim imunogenim svojstvima u poređenju sa strukturom prirodnog proteina. Različiti proizvodi hemijske degradacije mogu da se formiraju u zavisnosti od tipa i prirode prirodnog proteina i sredine kojoj je protein izložen. Povećane količine hemijskih proizvoda degradacije se često vide tokom skladištenja i upotrebe proteinskih preparata. Većina proteina je podložna deamidaciji, procesu u kome se amidna grupa bočnog lanca u glutaminilnim ili asparaginilnim ostacima hidrolizuje da bi se formirala slobodna karboksilna kiselina ili asparaginilni ostaci da bi se formirao IsoAsp derivat. Drugi putevi degradacije uključuju stvaranje proizvoda visoke molekulske mase gde su dva ili više proteinskih molekula kovalentno vezani jedan za drugi preko transamidacije i/ili interakcije disulfida što dovodi do stvaranja kovalentno vezanih dimera, oligomera i polimerskih proizvoda degradacije (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahern. T.J. & Manning M.C., Plenum Press, New York 1992). Oksidacija (npr. metioninskih ostataka) može se pomenuti kao druga varijanta hemijske degradacije. Hemijska stabilnost preparata proteina može se proceniti merenjem količine proizvoda hemijske degradacije u različitim vremenskim tačkama nakon izlaganja različitim uslovima okoline (formiranje proizvoda degradacije se često može ubrzati, na primer, povećanjem temperature). Količina svakog pojedinačnog proizvoda degradacije se često određuje razdvajanjem proizvoda degradacije u zavisnosti od veličine i/ili naelektrisanja molekula korišćenjem različitih tehnika hromatografije (npr. SEC-HPLC i/ili RP-HPLC). Pošto su HMVP proizvodi potencijalno imunogeni i nisu biološki aktivni, niski nivoi HMVP su prednost.

Izraz „stabilizovani preparat“ se odnosi na preparat sa povećanom fizičkom stabilnošću, povećanom hemijskom stabilnošću ili povećanom fizičkom i hemijskom stabilnošću. Uopšteno, preparat mora biti stabilan tokom upotrebe i skladištenja (u skladu sa preporučenom upotrebom i uslovima skladištenja) do isteka roka trajanja.

Rastvorljivost

U ovom kontekstu, ako nije drugačije navedeno, izrazi „rastvorljivi“, „rastvorljivost“, „rastvorljivi u vodenom rastvoru“, „rastvorljivost u vodi“, „rastvorljivi u vodi“, „rastvorljivi u vodi“, „rastvorljivosti u vodi“ i „vodorastvorljivost“ se odnose na rastvorljivost jedinjenja

12

u vodi ili u vodenom slanom rastvoru ili vodenom rastvoru pufera, na primer 10 mM rastvora fosfata, ili u vodenom rastvoru koji sadrži druga jedinjenja. Rastvorljivost se može proceniti korišćenjem sledećeg testa.

Test rastvorljivosti koji zavisi od pH

Rastvorljivost peptida i proteina zavisi od pH rastvora. Često se protein ili peptid taloži na ili blizu njegove izoelektronske tačke (pI), pri čemu je njeno neto naelektrisanje nula. Na niskom pH (tj. nižem od pl) proteini i peptidi su obično pozitivno naelektrisani, pri pH višem od pl oni su negativno naelektrisani.

Pogodno je za terapeutski peptid da je rastvorljiv u dovoljnoj koncentraciji pri datom pH, koji je pogodan i za formulisanje stabilnog leka i za davanje leka pacijentu, npr. supkutanom injekcijom.

Krive rastvorljivosti u odnosu na pH se mere kako je opisano: priprema se formulacija ili rastvor peptida u vodi i alikvoti se podešavaju na pH vrednosti u željenom opsegu dodavanjem HCl i NaOH. Ovi uzorci su ostavljeni da se uravnoteže na sobnoj temperaturi tokom 2 - 4 dana. Zatim se uzorci centrifugiraju. Mali alikvot svakog uzorka je uzet za reverznu HPLC analizu za određivanje koncentracije proteina u rastvoru. PH svakog uzorka se meri nakon centrifugiranja, a koncentracija svakog proteina je prikazana u odnosu na izmerenu pH vrednost.

Dok su određene karakteristike pronalaska ilustrovane i opisane ovde, mnoge modifikacije, zamene, promene i ekvivalenti će se biti očigledni prosečnom stručnjaku.

Stoga se podrazumeva da su priloženi patentni zahtevi namenjeni da pokriju sve takve modifikacije i promene koje spadaju u stvarni duh pronalaska.

Jedinjenja pronalaska mogu biti rastvorljivi koagonisti glukagonskog/GLP-1 receptora, na primer sa rastvorljivošću od najmanje 0,1 mmol/1, 0.2 mmol/l, najmanje 0,5 mmol/1, najmanje 2 mmol/l, najmanje 4 mmol/l, najmanje 8 mmol/l, najmanje 10 mmol/l, ili najmanje 15 mmol/l.

DPP-IV stabilnost

U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska je zaštićen protiv DPP-IV. Izraz „zaštićen protiv DPP-IV“, kako je ovde korišćen, koji se odnosi na polipeptid, označava polipeptid koji je hemijski modifikovan da bi se dato jedinjenje učinilo otpornim na peptidazu plazme dipeptidil aminopeptidaze-4 (DPP-IV). Poznato je da je DPP-IV enzim u plazmi uključen u degradaciju nekoliko peptidnih hormona, npr. glukagona, GLP-1, GLP-2, oksintomodulina, itd. Stoga, ulažu se značajni napori da se razviju analozi

12

i derivati polipeptida koji su podložni hidrolizi posredovanoj DPP-IV da bi se smanjila brzina degradacije pomoću DPP-IV. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je jedinjenje zaštićeno protiv DPPIV. U jednoj realizaciji, derivat glukagona je stabilizovan protiv DPPIV.

U jednoj realizaciji, jedinjenja iz pronalaska mogu biti stabilizovana protiv DPP-IV cepanja u testu bez albumina:

10 µM peptida se inkubira sa DPP-IV (2 µg/ml) u duplikatu na 37°C u HEPES puferu na koji se dodaje 0,005% Tween20. U eksperimentu se kao pozitivna kontrola koristi humani GLP-1. Uzorci se uzimaju na 3, 15, 30, 60, 120 i 240 min i dodaju se tri zapremine etanola da se zaustavi reakcija. Uzorci su analizirani pomoću LC-MS za matični peptid. Podaci su iscrtani u skladu sa 1. kinetikom i stabilnost je prikazana kao poluživot.

KOMBINACIJE

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona kao što je ovde opisano u kombinaciji sa GLP-1 jedinjenjem ili sa jedinjenjem insulina. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona, kao što je ovde opisano, u kombinaciji sa GLP-1 jedinjenjem. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat

12

glukagona kako je ovde opisan u kombinaciji sa jedinjenjem insulina.

U jednoj realizaciji, GLP-1 jedinjenje kombinacije je N-epsilon26-((S)-4-karboksi-4-heksadekanoilaminobutiril)[Arg34]GLP-1- (7-37):

(Jedinjenje G1); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar. U jednoj realizaciji, GLP-1 jedinjenje iz kombinacije je N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-({trans-4-[(19-karboksinonadekanoilamino) methil]kikloheksankarbonil}amino)butirilamino]etoksi}etoksi )acetilamino]etoksi}etoksi)acetil][DesaminoHis7,Glu22,Arg26

(Jedinjenje G2); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar. U jednoj realizaciji GLP-1 jedinjenje je kombinacija N-epsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-

12

[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino] etoksi}etoksi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1(7-37):

(Jedinjenje G3); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar. U jednoj realizaciji, GLP-1 jedinjenje kombinacije je N-epsilon-37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil] [Aib8,22,35, Lys37] GLP-1- (7-37):

(Jedinjenje G4); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar.

U jednoj realizaciji, jedinjenje insulina u kombinaciji je N-epsilon-B29-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksipentadekanoilamino)butiril] desB30 humani insulin

12

(Jedin jenje G5).

FARMACEU TSKE KOM POZICIJ E

U jednoj rea lizaciji , prona lazak se odnosi na

far maceutsk u kompo ziciju koja sad rži derivat prema

pro nalasku i jedan ili više farma ceutski prihvat ljivih eks cipijena ta. U jednoj realizaci ji, kompozicija je pog odna za parenter alnu pr imenu, kao što je primena SC, IM ili IV. Izr azi „far maceuts ka komp ozicija“ i „kompozicija “ se ovde kor iste naizmeničn o.

Farma ceutske kompozi cije koje sadrž e derivate iz pre dmetnog pronala ska mogu se dobiti konvenciona lnim teh nikama, npr. ka o što je opisano u Remingtonov im

Pha rmaceuti cal Sci ences, 1985 ili u Remingtononi m: The Sci ence and Practi ce of Pharmacy, 19th edition, 1995.

U jednoj rea lizaciji , farma ceutska kompozi cija u obl iku pojedinačne doze sadrži od oko 0,01 mg do oko 1000 mg, kao što je od oko 0,1 mg do oko 500 mg, od oko 0,5 mg

12

do oko 5 mg, npr. od oko 0,5 mg do oko 200 mg, derivata glukagona kao što je ovde opisano. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži derivat prema pronalasku, pri čemu je dati derivat prisutan u koncentraciji od oko 0,01 mg/mL do oko 25 mg/mL, kao što je od oko 0,05 mg/mL do oko 5 mg/mL i od oko 0,1 mg/mL do oko 2 mg/mL, i pri čemu data kompozicija ima pH od 2,0 do 10,0. Farmaceutska kompozicija može da sadrži derivat iz pronalaska, pri čemu je dati derivat prisutan u koncentraciji od oko 0,01 mg/mL do oko 50 mg/mL, i pri čemu data kompozicija ima pH od 2,0 do 10,0.

U jednoj realizaciji, farmaceutska kompozicija sadrži vodeni rastvor derivata iz pronalaska, i pufer, pri čemu je dati derivat prisutan u koncentraciji od 0,01 mg/mL ili više, i pri čemu data kompozicija ima pH od oko 2,0 do oko 10,0 . U drugoj realizaciji, farmaceutska kompozicija sadrži vodeni rastvor derivata iz pronalaska i pufer, pri čemu je dati derivat prisutan u koncentraciji od 0,01 mg/mL ili više, i prii čemu data kompozicija ima pH od oko 6,5 do oko 8,5.

U jednoj realizaciji, kompozicija iz pronalaska ima pH od oko 2,0 do oko 10,0. U još jednoj realizaciji, kompozicija ima pH od oko 6,5 do oko 8,5. U još jednoj realizaciji, kompozicija ima pH od oko 7,0 do oko 8,5, kao što je od oko 7,2 do oko 8,2.

1

Kompozicija može dalje da sadrži sistem pufera, konzervanse, sredstva za izotoničnost, sredstva za heliranje, stabilizatore i surfaktante. U jednoj realizaciji, farmaceutska kompozicija je vodeni kompozicija, tj. kompozicija koja sadrži vodu. Takva kompozicija je uobičajeno rastvor ili suspenzija. U sledećoj realizaciji pronalaska, farmaceutska kompozicija je vodeni rastvor. Izraz „vodeni preparat“ je definisan kao kompozicija koja sadrži najmanje 50% w/w vode. Slično tome, izraz „vodeni rastvor“ je definisan kao rastvor koji sadrži najmanje 50% w/w vode. U jednoj realizaciji, kompozicija sadrži organski rastvarač koji nije voda.

U sledećoj realizaciji, farmaceutska kompozicija je zamrzavanjem sušena kompozicija u koju se rastvarači i/ili razblaživači dodaju pre upotrebe, npr. od strane lekara ili pacijenta.

U sledećoj realizaciji, farmaceutska kompozicija je osušena kompozicija (npr. sušena smrzavanjem ili osušena raspršivanjem) spremna za upotrebu bez prethodnog rastvaranja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na kompoziciju koja sadrži derivat iz pronalaska i jedan ili više drugih aktivnih sastojaka, kao što su GLP-1, insulin ili njihovi analozi i/ili derivati. U jednoj realizaciji pronalazak se odnosi na kompoziciju koja sadrži derivat iz

1 1

pronalaska i GLP-1 ili njegove analoge i/ili derivate. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na kompoziciju koja sadrži derivat iz pronalaska i insulin ili njegove analoge i/ili derivate. Kompozicija koja sadrži derivat prema predmetnom pronalasku i jedan ili više drugih aktivnih sastojaka može se označiti kao „koformulacija“. U jednoj realizaciji, takve koformulacije su fizički stabilne i/ili hemijski stabilne kompozicije.

Činjenica da derivati pronalaska mogu biti rastvorljivi pri neutralnom pH, može omogućiti koformulaciju sa insulinom i omogućiti stabilnije nivoe glukoze u krvi i smanjen broj epizoda hipoglikemije, kao i smanjen rizik od komplikacija povezanih sa dijabetesom. U jednoj realizaciji, farmaceutska kompozicija dalje sadrži jedno ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja ili supstanci. U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je GLP-1 jedinjenje ili jedinjenje insulina. U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je GLP-1 jedinjenje. U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je jedinjenje insulina. U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je GLP-1 jedinjenje N-epsilon26-((S)-4-karboksi-4-heksadekanoilamino-butiril) [Arg34]GLP-1- (7-37):

1 2

(Jedinjenje G1); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar. U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je GLP-1 jedinjenje N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-({trans-4-[(19-karboksimonadekanoilamino)metil]cikloheksankarbonil}amino)b utirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino]etoksi}etoksi)aacetil

(Jedinjenje G2); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar. U jednoj realizaciji dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je GLP-1 jedinjenje N-epsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino]etoksi}etoksi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37):

1

(Jedinjenje G3); ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, amid, alkil ili estar. U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je GLP-1 jedinjenje N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksipentadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil][Aib8,22,35,Lys37]GLP-

U jednoj realizaciji, dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je inzulinsko jedinjenje N-epsilon-B29-[(S)-4-karboksi-4- (15-karboksipentadekanoilamino)butiril]desB30 humani insulin

1 4

(Jedi njenje G5). U jednoj realizaci ji, dodatno ter apeutski aktivn o jedinjenje je farmaceutski prihvatl jiva so, amid, alkil, ili estar jedinj enja G5.

FARMAC EUTSKA PRIMENA

Deriv at prem a pronalasku može se davati pacijentu par enteraln o. Put primene derivat a može biti

int ramuskul arni (I M), supkutani (SC) ili intrave nozni (IV). Pre poručuje se da dozu preparata koji sadrži derivat pro nalaska koja se daje pacijentu , bira lekar.

Paren teralno davanje može biti izve deno supkutano m, int ramuskul arnom, intrape ritoneal nom ili intrave nskom inj ekcijom pomoću šprica, opciono šprica nalik olovci. U jed noj realizaciji , kompozicije koje sadrže deri vat pro nalaska mogu se korist iti u uređajima poput olovke koji su spremni za upot rebu za davanje glukag ona. Alternativ no, par enteraln a prime na može biti izvedena pomoću infuzion e

1

pumpe. U jednoj realizaciji, kompozicije koje sadrže derivat pronalaska mogu se koristiti u pumpama za davanje glukagona. Parenteralna primena može biti nazalna primena. Kao dodatna opcija, preparati glukagona koji sadrže derivat pronalaska mogu se, takođe, prilagoditi transdermalnoj primeni, npr. Primenu injekcijom bez igle ili iz flastera, opciono jontoforeznog flastera, ili transmukoznog, npr. bukalno.

Uobičajena doza derivata ili kompozicije prema pronalasku kada se koristi u postupku prema predmetnom pronalasku je u opsegu od oko 0,0001 do oko 1 mg/kg telesne težine dnevno, poželjno od oko 0,001 do oko 1 mg/kg telesne težine, poželjnije od oko 0,005 do oko 0,02 mg/kg tela. Kao što je gore opisano, derivati pronalaska mogu se davati ili primenjivati u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja ili supstanci, a pogodna dodatna jedinjenja ili supstance mogu biti izabrane, na primer, iz antidijabetičkih sredstava, antihiperlipidemijskih sredstava, sredstava protiv gojaznosti, antihipertenzivnih sredstava i sredstva za lečenje komplikacija koje su rezultat ili su povezane sa dijabetesom.

Pogodna antidijabetička sredstava uključuju insulin, derivate insulina ili analoge, derivate GLP-1 (glukagonu sličan peptid-1) ili analoge [kao što su oni opisani u WO

1

98/08871 (Novo Nordisk A/S), ili druge GLP-1 analoge kao što su eksenatid Byetta, Eli Lilly/Amylin; AVE0010, Sanofi-Aventis), taspoglutid (Roche), albiglutid (Syncria, GlaxoSmithKline)], amilin, analoge amilina (npr.

Simlin/Pramlintid) kao i oralno aktivna hipoglikemijska sredstva.

FARMACEUTSKE INDIKACIJE

Pronalazak se, takođe, odnosi na derivat pronalaska, za upotrebu u medicini. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u terapiji. U jednoj realizaciji, izrazi „derivat glukagona“ i „derivat“ se ovde koriste naizmenično u vezi sa medicinskom upotrebom i odnose se na derivat glukagona iz pronalaska. U jednoj realizaciji, izrazi „lek“ i „terapija“ se ovde koriste naizmenično. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje ili prevenciju bolesti ili poremećaja, npr. jednu ili više bolesti ili poremećaja pomenutih u vezi sa specifičnom medicinskom upotrebom. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za dobijanje leka za upotrebu u terapiji, npr. u specifičnoj medicinskoj upotrebi koja je ovde definisana.

1

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona iz pronalaska, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u medicini.

U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje i/ili prevenciju hipoglikemije. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje i/ili prevenciju hipoglikemije, koji se sastoji od davanja terapeutski efikasne količine derivata pronalaska pacijentu kome je to potrebno.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u lečenju ili prevenciji dijabetesa tipa 2. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska se koristi u lečenju intolerancije na glukozu. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u odlaganju ili sprečavanju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona iz pronalaska, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin, za upotrebu kod regulisanja apetita, za upotrebu u sprečavanju vraćanja težine posle uspešnog gubitka težine, za upotrebu u izazivanju sitosti, za upotrebu u sprečavanju ponovnog dobijanja težine posle

1

uspešnog gubitka težine, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u odlaganju napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u odlaganju napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje ili prevenciju hipoglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema pronalasku, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u lečenju ili prevenciji hipoglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u lečenju gojaznosti ili prevenciji prekomerne težine. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje gojaznosti ili prevenciju prekomerne težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona

1

prema pronalasku, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u smanjenju telesne težine, za upotrebu u regulisanju apetita, za upotrebu u povećanju potrošnje energije, za upotrebu u izazivanju sitosti, za upotrebu u sprečavanju povraćanja težine posle uspešnog gubitka težine, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja koje je povezano sa prekomernom težinom ili gojaznošću, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema pronalasku, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u smanjenju unosa hrane. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u povećanju potrošnje energije. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u smanjenju telesne težine. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u regulaciji apetita. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u izazivanju sitosti. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u sprečavanju ponovnog dobijanja težine posle uspešnog gubitka težine. U jednoj realizaciji, pronalazak

14

se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u lečenju bulimije. U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na derivat glukagona za upotrebu u lečenju prejedanja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na upotrebu derivata glukagona prema pronalasku, za pripremu leka.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na upotrebu derivata glukagona prema pronalasku, za dobijanje leka za lečenje ili prevenciju hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska je za upotrebu u lečenju ili prevenciji hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, poremećaja tolerancije glukoze, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti.

U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska je za upotrebu u lečenju ili prevenciji ateroskleroze. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska se koristi u lečenju hipertenzije. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska se koristi u lečenju dislipidemije. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz pronalaska se koristi u lečenju koronarne bolesti srca. U jednoj realizaciji, derivat glukagona iz ovo g pronalaska se koristi u lečenju hepatične steatoze.

U jednoj realizaciji pronalazak se odnosi na postupak za smanjenje unosa hrane, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona, kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u povećanju energetske potrošnje, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj varijanti pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u smanjenju telesne težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u odlaganju napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2, koji obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u odlaganju napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u regulisanju apetita, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za primenu u izazivanju sitosti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u sprečavanju ponovnog dobijanja težine posle uspešnog gubitka težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine

14

derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje bulimije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje prejedanja, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u lečenju ateroskleroze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za upotrebu u lečenju hipertenzije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje intolerancije na glukozu, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje dislipidemije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u

14

kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje koronarne bolesti srca, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na postupak za lečenje hepatične steatoze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona kao što je ovde opisano, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na upotrebu derivata glukagona kao što je ovde opisano, za dobijanje leka za odlaganje ili prevenciju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2, lečenje gojaznosti ili sprečavanje prekomerne težine, za smanjenje unosa hrane, povećanje energetske potrošnje, smanjenje telesne težine, odlaganje napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2; odlaganje napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin; regulisanje apetita; izazivanje sitosti; sprečavanje vraćanja težine posle uspešnog gubitka težine; lečenje bolesti ili stanja u

14

vezi sa prekomernom težinom ili gojaznošću; lečenje bulimije; lečenje prejedanja; lečenje ateroskleroze, hipertenzije, dijabetesa tipa 2, IGT, dislipidemija, koronarne bolest srca, hepatične steatoza, lečenje trovanja beta-blokatorima, upotrebu za inhibiciju motiliteta gastrointestinalnog trakta, korisnu u vezi sa istraživanjima gastrointestinalnog trakta primenom tehnika kao rendgen, snimanja CT i NMR.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na nove stabilne i produžene koagoniste GLP-1/glukagonskih receptora, na upotrebu datih peptida u terapiji, na postupke tretmana koji obuhvataju davanje datih peptida pacijentima, i na upotrebu peptida u proizvodnji lekova za upotrebu u lečenju dijabetesa, gojaznosti i srodnih bolesti i stanja.

U jednoj realizaciji, derivat pronalaska se koristi za lečenje ili prevenciju hipoglikemije, insulinski indukovane hipoglikemije, reaktivne hipoglikemije, dijabetske hipoglikemije, nedijabetske hipoglikemije, izgladnjujuće hipoglikemije, hipoglikemije izazvane lekovima, hipoglikemije izazvane gastričnim bajpasom, hipoglikemije u trudnoći, alkoholom izazvane hipoglikemije, insulinoma i/ili Von Girkeove bolesti.

U jednoj realizaciji, derivati pronalaska su za upotrebu u inhibiciji motiliteta gastrointestinalnog

14

trakta, što je korisno u vezi sa istraživanjima gastrointestinalnog trakta korišćenjem tehnika kao što su rendgen, snimanja CT i NMR.

U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje trovanja beta-blokatorima. U jednoj realizaciji, derivat je za upotrebu u lečenju ili prevenciji hepatične steatoze. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat je za upotrebu u lečenju ili prevenciji insulinom izazvane hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju reaktivne hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju dijabetesne hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju nedijabetesne hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju izgladnjujuće hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju hipoglikemije izazvane lekom. U jednoj realizaciji, derivat je za upotrebu u lečenju ili prevenciji hipoglikemije izazvane gastričnim bajpasom. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju hipoglikemije u trudnoći. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju alkoholom izazvane hipoglikemije. U jednoj realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju insulinoma. U jednoj

14

realizaciji, derivat se koristi za lečenje ili prevenciju Von Girkeove bolesti.

U jednoj realizaciji, derivat se daje u režimu doziranja koji obezbeđuje terapeutski efikasnu količinu datog derivata. Kako je ovde upotrebljen, izraz „terapeutski efikasna količina“ derivata pronalaska se odnosi na količinu dovoljnu da izleči, ublaži ili delimično zaustavi kliničke manifestacije date bolesti i/ili njenih komplikacija. Količina dovoljna da se to i postigne definisana je kao „terapeutski efikasna količina”. Efikasne količine za svaku namenu zavisiće od težine bolesti ili povrede, kao i ozbiljnosti i opšteg stanja pacijenta. Treba razumeti da se određivanje odgovarajuće doze može postići primenom rutinskih eksperimenata, kreiranjem matrice vrednosti i testiranjem različitih tačaka u matrici, što je sve uobičajeno za edukovanog lekara ili veterinara.

Izrazi „tretman“, „lečenje“ i druge njihove varijante, kako se ovde koriste, podrazumevaju vođenje i negu pacijenta u svrhu suzbijanja stanja, kao što je bolest ili poremećaj. Izrazi su predviđeni da obuhvate ceo spektar tretmana za dato stanje od kojeg pacijent pati, kao što je davanje datog(ih) aktivnog(ih) jedinjenja da ublaže simptome ili njihove komplikacije, da odlože napredovanje bolesti, poremećaja ili stanja, da se izleči ili eliminiše bolest, poremećaj ili stanje, i/ili da se spreči stanje,

14

pri tome se prevencija treba shvatiti kao upravljanje i briga o pacijentu u cilju borbe protiv bolesti, stanja ili poremećaja, i uključuje davanje datog(ih) aktivnog(ih) jedinjenja da bi se sprečio nastanak simptoma ili komplikacija. Pacijent koji se tretira je poželjno sisar, naročito ljudsko biće, ali lečenje drugih životinja, kao što su psi, mačke, krave, konji, ovce, koze ili svinje, spada u obim ovog pronalaska.

INTERMEDIJARNI PROIZVODI

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na intermedijarni proizvod u obliku glukagonskog peptida koji sadrži C-terminalni amid i bilo koju od sledećih modifikacija u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1): a) [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28];

b) [Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28];

c) [Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28];

d) [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28];

e) [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29];

f) [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28];

g) [Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27];

h) [Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]; i) [Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; j) [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27];

1

k) [Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]; l) [Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

m) Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]; n) [Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]; o) [Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]; p) [Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28]; q) [Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27];

r) [Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27] ;

s) [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]; t) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; u) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; v) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

w) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; x) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28];

y) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

z) [Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

æ) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,L ys28];

ø) [Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29];

1 1

å) [Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27];

aa) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ee) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27,L ys28];

cc) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,L eu27,Ser28];

dd) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ee) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,L ys28];

ii) [Acb2,His3,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28];

gg) [Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] kk) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]; ii) [Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; jj) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; kk) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; ll) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; mm) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; nn) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; oo) [Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; pp) [Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

qq) [Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]; rr) [Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

ss) [Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

1 2

tt) [Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; uu) [Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; vv) [Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ww) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

xx) [Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28];

yy) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

zz) [Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

ææ) [Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

øø) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28];

åå) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28];

aaa) [Acb2.Leu10.Arg12.Glu15.Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

bbb) [Aib2.Leu10.Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ccc) [Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ddd) [Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]; eee) [Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28];

fff) [Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28];

ggg) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29];

hhh) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; iii) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; jjj) [Aib2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

1

kkk) [Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ;

lll) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28] ;

mmm) [Aib2,Val10,Ala16,Leu27,Lys28];

nnn) [Aib2,Val10,Leu16,Leu27,Lys28];

uuu) [Aib2,Val10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]; or

ppp) [Aib2,Val10,Arg12,Leu16,Leu27,Lys28];

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, amid ili estar.

U jednoj realizaciji, pronalazak se odnosi na intermedijarni proizvod u obliku glukagonskog peptida koji ima C-terminalni amid i koji se sastoji od jedne od modifikacija a) do ppp), kao što je definisano u prethodnom tekstu, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, amida ili estra.

Derivati glukagona prema pronalasku mogu biti pripremljeni sledećim postupnim postupkom sinteze koji sadrži (i) pripremanje intermedijera glukagon peptida praćeno (ii) vezivanjem supstituenta. Korak (i) ovog postupka može se postići korišćenjem standardne sinteze na čvrstoj fazi, kao što je opisano u eksperimentalnom odeljku upotrebom zaštićene aminokiseline; nakon odvajanja od smole, peptid glukagona može biti podvrgnut prečišćavanju pomoću preparativne HPLC kao što je ovde opisano u

1 4

eksperimentalnom odeljku da bi se dobio intermedijarni proizvod. Alternativno, korak (i) ovog postupka, priprema intermedijarnog proizvoda, može se izvesti upotrebom semirekombinantne sinteze kao što je opisano u WO2009/083549. Korak (ii) ovog postupka, tj. vezivanje supstituenta na intermedijarni proizvod koji vodi do finalnog proizvoda, kao i sam preparat supstituenta može se postići upotrebom postupaka opisanih u WO2009/083549.

REALIZACIJE

Derivati glukagona mogu dalje biti okarakterisani jednom ili više sledećih neograničavajućih realizacija:

1. Derivat glukagona koji sadrži sekvencu aminokiseline Formule I (koja odgovara SEQ ID NO: 4 i SEQ ID NO: 5):

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu, Ile ili Val;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

1

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, Ala ili Lys;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu, Ser ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys;

čija sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30; i pri čemu dati derivat glukagona sadrži supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, pri čemu je jedna od datih negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, vezana za epsilon položaj ostatka lizina u jednoj od aminokiselinskih pozicija 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30; i pri čemu je dati derivat glukagona C-terminalni amid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili predlek.

2. Derivat glukagona koji sadrži sekvencu aminokiseline Formule I (koja odgovara SEQ ID NO: 2 i SEQ ID NO: 3):

1

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu, Ile ili Val;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, Ala ili Lys;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys;

čija sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30; i pri čemu dati derivat glukagona sadrži supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, pri čemu je jedna od datih

1

negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, vezana za epsilon položaj ostatka lizina u jednoj od pozicija amino-kiseline 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30; i pri čemu je navedeni derivat glukagona C-terminalni amid, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili predlek.

3. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, pri čemu

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, ili Ala;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, ili Lys;

X29predstavlja Thr, Gly, ili Lys; and

X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan.

4. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, pri čemu supstituent sadrži lipofilnu grupu i tri ili

1

više negativno naelektrisanih grupa, pri čemu je jedna od pomenutih negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, i pri čemu je dati supstituent vezan za epsilonsku poziciju Lys-a na jednoj od sledećih aminokiselinskih pozicija datog derivata glukagona: 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29, i/ili 30.

5. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, pri čemu

X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr;

X3predstavlja Gln ili His;

X10predstavlja Leu;

X12predstavlja Lys ili Arg;

X15predstavlja Asp ili Glu;

X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, ili Lys;

X17predstavlja Arg ili Lys;

X18predstavlja Arg, ili Ala;

X20predstavlja Gln, Arg, Glu, ili Lys;

X21predstavlja Asp, Glu ili Lys;

X24predstavlja Gln, Ala, Arg, ili Lys;

X27predstavlja Met, Leu ili Val;

X28predstavlja Asn, Ser, ili Lys;

X29predstavlja Thr, Gly, ili Lys; i

X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan.

6. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr.

1

7. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X2predstavlja Aib.

8. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X2predstavlja Acb.

9. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X2predstavlja Acpr.

10. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X3predstavlja Gln ili His.

11. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X3predstavlja Gln.

12. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X3predstavlja His.

13. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X10predstavlja Leu, Ile ili Val.

14. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X10predstavlja Leu.

15. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X10is Ile.

16. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X10predstavlja Val.

17. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X12predstavlja Lys ili Arg.

18. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X12predstavlja Lys.

1

19. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X12predstavlja Arg.

20. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X15predstavlja Asp ili Glu.

21. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X15predstavlja Asp.

22. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X15predstavlja Glu.

23. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys.

24. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, ili Lys.

25. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu ili Lys.

26. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Ala, Leu, Thr, Glu ili Lys.

27. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Ser.

28. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Ala.

1 1

29. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Leu.

30. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Thr.

31. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Glu.

32. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X16predstavlja Lys.

33. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X17predstavlja Arg ili Lys.

34. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X17predstavlja Arg.

35. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X17predstavlja Lys.

36. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X18predstavlja Arg, ili Ala.

37. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X18predstavlja Arg.

38. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X18predstavlja Ala.

39. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys.

40. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X20predstavlja Gln, Arg, Glu, ili Lys.

1 2

41. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X20predstavlja Gln.

42. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X20predstavlja Arg.

43. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X20predstavlja Glu.

44. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X20predstavlja Lys.

45. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X21predstavlja Asp, Glu ili Lys.

46. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X21predstavlja Glu ili Lys.

47. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X21predstavlja Asp.

48. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X21predstavlja Glu.

49. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X21predstavlja Lys.

50. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys.

51. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X24predstavlja Gln, Ala, Arg, ili Lys.

52. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X24predstavlja Gln.

1

53. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X24predstavlja Ala.

54. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X24predstavlja Arg.

55. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X24predstavlja Lys.

56. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X27predstavlja Met, Leu ili Val.

57. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X27predstavlja Leu ili Val.

58. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X27predstavlja Met.

59. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X27predstavlja Leu.

60. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X27predstavlja Val.

61. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys.

62. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X28predstavlja Asn, Ser, ili Lys.

63. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X28predstavlja Asn.

64. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X28predstavlja Ser.

1 4

65. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X28predstavlja Lys.

66. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X29predstavlja Thr, Gly, Ser, Gln, Ala, Glu ili Lys.

67. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X29predstavlja Thr, Gly, ili Lys.

68. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X29predstavlja Gly ili Lys.

69. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X29predstavlja Thr.

70. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X29predstavlja Gly.

71. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X29predstavlja Lys.

72. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X30predstavlja Lys, ili wherein X30je odsutan.

73. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X30predstavlja Lys.

74. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu X30je odsutan.

75. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, pri čemu

X2predstavlja Aib;

1

X20predstavlja Arg; i

X21predstavlja Glu.

76. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, koji obuhvata sekvencu amino-kiseline sa bilo kojom od sledećih aminokiselinskih supstitucija:

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28];

[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27];

[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27];

[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29];

[Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29];

[Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27 ];

1

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29];

[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27];

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27,Lys28] ;

[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27, Ser28];

[Acb2,His3,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

1

[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29];

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; and [Aib2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. 77. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiseline sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28];

[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]. 78. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiseline sa bilo kojom od sledećih supstitucija amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28];

1

[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; i [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28].

79. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiseline sa sledećim supstitucijama amino-kiselina:

[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28].

80. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, koji sadrži sekvencu amino-kiseline sa sledećim supstitucijama amino-kiselina:

[Aib2,Val10,Ala16,Leu27,Lys28].

81. Derivat glukagona Formule I kao što je gore opisano, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30.

82. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj, dve ili tri pozicije 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30.

83. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili dve pozicije 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30.

84. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na

1

dve pozicije 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i / ili 30; posebno na pozicijama 12 i 28.

85. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na poziciji 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 ili 30.

86. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, vezan na epsilon poziciji lizinskog ostatka na poziciji 16, 21, 24, 28, 29 ili 30.

87. Derivat glukagona formule I, kao što je opisano gore, pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, vezan na epsilon poziciji lizinskog ostatka na poziciji 16, 21, 24, 28, 29 ili 30.

88. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, vezan na epsilon poziciji lizinskog ostatka na poziciji 16, 24, 28, 29 ili 30.

89. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, vezan na epsilon poziciji lizinskog ostatka na poziciji 24, 28, 29 ili 30.

1

90. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, vezan na epsilon poziciji lizinskog ostatka na poziciji 28, 29 i 30.

91. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, vezan na epsilon poziciji lizinskog ostatka na poziciji 28.

92. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore pri čemu je supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe supstituent formule II:

Z<1>-Z<2>-Z<3>-Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10->

pri čemu,

<1>Z-predstavlja strukturu Formule IIa;

O O H O<(>)

n*

pri čemu n je 6-20; i simbol * predstavlja tačku vezivanja za azot susedne vezujuće grupe; i

Z<2>-Z<3>-Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10>- - predstavlja vezujuću grupu, pri čemu je svaki od Z2do Z10pojedinačno predstavljen bilo kojim od sledećih amino-kiselinskih ostataka: Glu, γGlu, Gly, Ser, Ala, Thr ili Ado; ili su jedan ili više ostataka Z<2>do Z<10>odsutni; pod uslovom, međutim, da su prisutna najmanje dva ostatka Z<2>do Z<10>; i

1 1

pri čemu Z<1>-Z<2>-Z<3>-Z<4>-Z<5>-Z<6>-Z<7>-Z<8>-Z<9>-Z<10>- zajedno sadrži najmanje tri negativna naelektrisanja; i

pri čemu je dati supstituent vezan za epsilon poziciju Lys ostatka prema Formuli I.

93. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, pri čemu Z<1>Formule II predstavlja strukturu prema Formuli IIa:

O O H O<(>)

n*

gde n predstavlja ceo broj u opsegu od 6 do 20; simbol * predstavlja tačku vezivanja za azot susedne grupe; i

pri čemu su Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10pojedinačno predstavljeni sledećim amino-kiselinama: Glu, γGlu, Gly, Ser, Ala, Thr i Ado; ili jedan ili više od Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10može da bude odsutan; pod uslovom, međutim, da su prisutna najmanje dva od ostataka Z2do Z10;

pri čemu Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10zajedno sadrže najmanje tri negativna naelektrisanja; i

pri čemu je dati supstituent vezan za epsilon poziciju Lys ostatka prema Formuli I, datoj gore.

94. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, gde n u Z<1>Formule IIa predstavlja 14, 16 ili 18.

1 2

95. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, gde n u Z<1>Formule IIa predstavlja 14.

96. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, gde n u Z<1>Formule IIa predstavlja 16.

97. Derivat glukagona formule I, kao što je opisano gore, gde n u Z<1>Formule IIa predstavlja 18.

98. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, pri čemu dati supstituent predstavlja strukturu prema bilo kojoj od sledećih devet formula (Hem.A- Hem.I), gde * označava tačku vezivanja za atom azota na poziciji epsilona Lys ostatka Formule I:

1

(Hem.F);

14

(Hem.I).

99. Derivat glukagona Formule I, kao što je opisano gore, pri čemu dati supstituent predstavlja strukturu prema sledećoj formuli (Hem.J), gde * označava tačku vezivanja za atom azota epsilon pozicije Lys ostatka Formule I:

1

(Hem.J) .

100. Deriva t glukagona For mule I kao što je opisano gor e, gde dati supstituen t predst avlja strukturu prema bilo koj oj od formula Hem.A- Hem.I ili Hem.J, kao što je opisano gor e, gde * označava tačku veziva nja za atom azota epsi lon poz icije Lys ostat ka prema Formul i I.

101. Deriva t glukagona for mule I kao što je opisano gor e, gde dati supstituen t predst avlja strukturu prema for muli Hem.B, Hem .C, ili Hem.H, ili prema formu li Hem. J, opi sanoj gore, gde * označava tač ku vezivanja za atom azota eps ilon pozicije Lys ostatka pre ma Formuli I.

102. Deriva t glukagona iz pronalas ka izabr an iz gru pe koja se sastoji od:

N<ε16>-[(4S)-4- karboksi -4-[[(4 S)-4-kar boksi-4 -[[2-[2 -[2-[[2 -[2-[2-[ [(4S)-4 -karbok si-4-(17 -kar boksihep tadekan oilamin o)butano il]amin o]etoksi ]etoksi ]ace til ]amino]e toksi]e toksi]

ace til]amin o]butan oil]ami no]butan oil]-[Ai b2,Leu10 ,Lys16, Arg20,L eu27,Ser 28]-Glu kagon amid;

N<ε21>-(4S)-4-k arboksi- 4-[[(4S )-4-karb oksi-4- [[2-[2- [2-[[2 -[2-[2-[ [(4S)-4 -karbok si-4-(17 -

1

karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28]-Glukagon amid;

N<ε24>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid;

N<α>-([Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28]-Glukagonil)-N<ε>[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace

1

til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]Lys amid;

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]

1

acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]

1

acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15, Glu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27]-Glukagon amid;

1

acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27] -Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

1 1

acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Glu15, Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]-

1 2

acetil]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid;

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28, Gly29]-Glukagon amid;

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi

1

l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27, Lys28]-Glukagon amid;

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27,Ser28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu

1 4

tanoil]-[Aib2,His3,Leu10, Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,His3,Leu10, Glu15,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15, Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,His3,Leu10, Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino] butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

1

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino] butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino] butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]

1

acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10, Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10, Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-

1

[Acb2,Leu10, Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Leu16, Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10, Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

1

acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-

1

karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil] amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27, Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami

1

no]butanoil]-[Acb2,Leu10, Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Aib2,Leu10, Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10, Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,Leu10,Arg12, Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu

1 1

tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid;

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid; i

1 2

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid.

103. Derivat glukagona, pri čemu je navedeni derivat glukagona izabran iz grupe koju čine:

N<ε28>-[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboski-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-(17-karboskiheptadekanoilamino)butanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28]- Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-(17-karboskiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Leu16,Leu27,Lys28]- Glukagon amid;

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-(17-karboskiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu

1

tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]- Glukagon amid; i N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-[[(4S)-4-karboski-4-(17-karboskiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Arg12,Leu16,Leu27,Lys28]- Glukagon amid.

104. Derivat glukagona, pri čemu je navedeni derivat glukagona N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Ala16,Leu27,Lys28]- Glukagon amid.

Dalje realizacije odnose se na:

105. Derivat glukagona Formule I kao što je opisano gore, pri čemu je dati derivat glukagona GLP-1 i koagonist receptora glukagona.

106. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu se dati supstituent nekovalentno vezuje za albumin.

107. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je supstituent negativno naelektrisan na fiziološkom pH.

1 4

108. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je - derivat glukagona jedinjenje zaštićeno na DPPIV.

109. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona stabilizovan na DPPIV.

110. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je - derivat glukagona agonist receptora glukagona.

111. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50<10 nM.

112. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50<1 nM.

113. Derivat glukagona u skladu sa bilo kojim od prethodnih izvođenja, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50<100 pM.

114. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50<10 pM.

115. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora.

1

116. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora, sa EC50<100 pM.

117. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora, sa EC50<50 pM.

118. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora, sa EC50<10 pM.

119. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<100 pM i EC50< 1 nM na receptoru glukagona.

120. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<50 pM i EC50< 1 nM na receptoru glukagona.

121. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<10 pM i EC50< 1 nM na receptoru glukagona.

122. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<50 pM i EC50< 100 pM na receptoru glukagona.

1

123. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<10 pM i EC50< 100 pM na receptoru glukagona.

124. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<10 pM i EC50< 50 pM na receptoru glukagona.

125. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<1 pM i EC50< 50 pM na receptoru glukagona.

126. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50<10 pM i EC50< 10 pM na receptoru glukagona.

127. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona koagonist GLP-1/glukagona sa EC50na GLP-1 receptoru < EC50na receptoru glukagona.

128. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona koagonist GLP-1/glukagona sa EC50na GLP-1 receptoru (npr. u pM) većom od EC50na receptoru glukagona (npr. u pM).

1

Dalje realizacije pronalaska se odnose na kombinacije:

129. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, u kombinaciji sa GLP-1 jedinjenjem ili sa jedinjenjem insulina.

130. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, u kombinaciji sa GLP-1 jedinjenjem.

131. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, u kombinaciji sa jedinjenjem insulina.

132. Derivat glukagona prema bilo kojoj od realizacija 123-125, pri čemu je GLP-1 jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

N-epsilon26-((S)-4-Karboksi-4-heksadecanoilaminobutiril)[Arg34]GLP-1-(7-37):

(Jedinjenje G1);

N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-({trans-4-[(19-karboksinonadekanoilamino)methil]cikloheksankarbonil}amino) butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino]etoksi}etoksi)acetil ][DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37):

1

( Jedinjenje G2);

N-epsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino] etoksi}etoksi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1(7-37):

(Jedinjenje G3); i

N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksi-pentadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil] [Aib8,22,35,Lys37]GLP-

( Jedinjenje G4);

i njihove farmaceutski prihvatljive soli, amidi, alkili ili estri.

1

133. Deriva t glukagona pre ma bilo kojoj od

rea lizacija 129-13 2, pri čemu je jedinjenje insu lina:

N-eps ilon-B2 9-[(S)-4 -Karbok si-4-(15 -kar boksipen tadekan oilamin o)butiri l] desB30 human i insul in

(Je dinjenje G5).

Druge realiz acije predmetno g pronal aska se odnose na far maceutsk e kompo zicije:

134. Farmac eutska kompozic ija koja sadrži deriva t glu kagona prema bi lo kojoj od realizacij a 1-128, i

opc ionalnog jedan ili više farmac eutski prihvatl jivih eks cipijena ta.

135. Farmac eutska kompozic ija prema realiz aciji 134, koj a dalje sadrži jedno ili više dodatni h terape utski akt ivnih jedinjenj a ili supstanci .

136. Farmac eutska kompozic ija prema realiz aciji 135, pri čemu je dato dodatno terapeut ski aktivno jedinjenje GLP -1 jedinjenje ili jedinjenje insulina .

2

137. Farmaceutska kompozicija prema realizaciji 136, pri čemu je dato dodatno terapeutski aktivno jedinjenje GLP-1 jedinjenje.

138. Farmaceutska kompozicija prema realizaciji 136 ili 137, pri čemu dodatno terapeutski aktivno jedinjenje je jedinjenje insulina.

139. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojoj realizaciji 136-138, pri čemu je GLP-1 jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

N-epsilon26-((S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilaminobutiril)[Arg34]GLP-1-(7-37):

(Jedinjenje G1);

N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-({trans-4-[(19-karboksinonadekanoilamino)metil]cikloheksankarbonil}amino)b utirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino]etoksi}etoksi)acetil] [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37):

2 1

(Jedinjenje G2);

N-epsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino] etoksi}etoksi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1(7-37:

( Jedinjenje G3); i

( Jedinjenje G4);

i njihove farmaceutski prihvatljive soli, amidi, alkili ili estri.

2 2

140. Farmac eutska kompozic ija prema bilo kojoj o d rea lizacija 130-13 3, pri čemu je insulin jedinje nje:

(Je dinjenje G5).

141. Farmac eutska kompozic ija prema bilo kojoj o d rea lizacija 128-13 4, u obliku pojedinačn e doze koja sad rži od oko 0,01 mg do oko 1000 mg, kao što je od oko 0,1 mg do oko 500 mg, od oko 0,5 mg do oko 5 mg, npr. od oko 0,5 mg do oko 200 mg, derivata glukagona prema bilo kojoj

rea lizaciji 1-128.

142. Farmac eutska kompozic ija prema bilo kojoj rea lizaciji 126-13 8, koja je pogodna za parenter alnu pri menu.

143. Deriva t glukagona pre ma bilo kojoj od

rea lizacija 1-128, opcion o u kombinaciji sa jednim ili više dod atnih terapeuts ki aktivnih jed injenja , za upotrebu u ter apiji.

2

Dalje realizacije se odnose na sledeće:

144. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju ili prevenciji hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti.

145. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju ili prevenciji napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2.

146. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju gojaznosti ili sprečavanju prekomerne težine.

147. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u smanjenju unosa hrane.

148. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u povećanju potrošnje energije.

149. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih

2 4

terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u smanjenju

telesne težine.

150. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih

terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju

napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do

dijabetesa tipa 2.

151. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih

terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju

napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji

zahteva insulin.

152. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih

terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u regulaciji apetita.

153. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih

terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u izazivanju sitosti.

154. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih

terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u sprečavanju povratka težine posle uspešnog gubitka težine.

2

155. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću.

156. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju bulimije.

157. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju prejedanja.

158. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju ateroskleroze.

159. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju hipertenzije.

160. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju dijabetesa tipa 2.

2

161. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju intolerancije na glukozu.

162. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju dislipidemije.

163. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju koronarne bolesti srca.

164. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju hepatične steatoze.

Dalje realizacije se odnosa na sledeće postupke:

165. Postupak za lečenje ili prevenciju hipoglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

2

166. Postupak za odlaganje ili prevenciju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

167. Postupak za lečenje gojaznosti ili prevenciju prekomerne težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

168. Postupak za smanjenje unosa hrane, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

169. Postupak za upotrebu u povećanju potrošnje energije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

170. Postupak za upotrebu u smanjenju telesne težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo

2

kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

171. Postupak za odlaganje napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

172. Postupak za upotrebu u odlaganju napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivna jedinjenja.

173. Postupak za regulaciju apetita, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

174. Postupak za upotrebu u izazivanju sitosti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

2

175. Postupak za upotrebu u sprečavanju povratka težine posle uspešnog gubitka težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

176. Postupak za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutskih aktivna jedinjenja.

177. Postupak za lečenje bulimije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

178. Postupak za lečenje prejedanja, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

179. Postupak za upotrebu u lečenju ateroskleroze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj

21

realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

180. Postupak za upotrebu u lečenju hipertenzije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

181. Postupak za upotrebu u lečenju dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

182. Postupak za lečenje poremećaja tolerancije glukoze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

183. Postupak za lečenje dislipidemije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

184. Postupak za tretman koronarne srčane bolesti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

185. Postupak za upotrebu u lečenju hepatične steatoze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-128, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

Dalja realizacija se odnosi na sledeće upotrebe:

186. Upotreba derivata glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-128, za dobijanje leka.

187. Upotreba derivata glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-128, za dobijanje leka za lečenje ili prevenciju hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti.

188. Upotreba derivata glukagona u skladu sa bilo kojom od realizacija 1-128, za dobijanje leka za odlaganje ili prevenciju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2, lečenje gojaznosti ili sprečavanje prekomerne težine, za smanjenje unosa hrane, povećanje potrošnje energije, smanjenje tela težinu, odlaganje napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) na dijabetes tipa 2; odlaganje napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin; regulisanje apetita; izazivanje sitosti; sprečavanje vraćanja težine posle uspešnog gubitka težine; lečenje bolesti ili stanja u vezi sa prekomernom težinom ili gojaznošću; lečenje bulimije; lečenje prejedanja; lečenje ateroskleroze, hipertenzije, dijabetesa tipa 2, IGT, dislipidemije, koronarne bolest srca, hepatične steatoze, lečenje trovanja beta-blokatorima, upotrebu za inhibiciju motiliteta gastrointestinalnog trakta, korisnog u vezi sa istraživanjima gastrointestinalnog trakta primenom tehnika kao rendgen, snimanje CT i NMR.

Dalje realizacije se odnose na sledeće:

189. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 70% prinosa u ThT fibrilacionom testu.

190. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 90% prinosa u ThT fibrilacionom testu.

191. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu navedeni derivat glukagona ima oko 100% prinosa u ThT fibrilacionom testu.

192. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 7 sati zaostajanja u ThT fibrilacionom testu.

193. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 20 sati zaostajanja u ThT fibrilacionom testu.

21

194. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima 45 sati ili više zaostajanja u ThT fibrilacionom testu.

195. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je ThT fibrilacioni test ovde opisan u Primeru 76.

196. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 14% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

197. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 13% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

198. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 12% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

199. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 10% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

200. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 9% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

201. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 7% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

202. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 5% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

203. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 3% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

204. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 2% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

205. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je hemijski test stabilnosti ovde opisan u Primeru 79.

206. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona selektivan za receptor glukagona kao i za GLP-1 receptor.

207. Derivat glukagona definisan u bilo kojoj od prethodnih realizacija, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u medicini.

208. Derivat glukagona prema realizaciji 207, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za i) lečenje gojaznosti, sprečavanje prekomerne težine, i/ili smanjenje telesne težine, i/ili ii) lečenje ili prevenciju hiperglikemije,

21

dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu i/ili dijabetesa tipa 1.

Dalje realizacije

Među daljim realizacijama su sledeće:

1. Derivat glukagona koji sadrži (Formula I) (SEQ ID NO:

2 i SEQ ID NO: 3):

His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-Ala-X20-X21-Phe-Val-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30(formula I), pri čemu

X2je Aib, Acb ili Acpr,

X3je Gln ili His,

X10je Leu, Ile ili Val,

X12je Lys ili Arg,

X15je Asp ili Glu

X16je Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys, X17je Arg ili Lys,

X18je Arg, Ala ili Lys,

X20je Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys,

X21je Asp, Glu ili Lys,

X24je Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys,

X27je Met, Leu ili Val,

X28je Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys,

X29je Thr,Gly, Ser, Gln, Ala, Glu ili Lys,

X30je odsutan ili je Lys,

21

i supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i tri ili više negativno naelektrisanih grupa, pri čemu je jedna od datih negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, i pri čemu je supstituent vezan na epsilon položaju Lys-a na jednoj od sledećih aminokiselinskih pozicija derivata glukagona: 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29 i/ili 30, pri čemu je navedeni derivat glukagona C-terminalni amid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili predlek.

2. Derivat glukagona prema realizaciji 1, pri čemu je derivat glukagona koagonist GLP-1 i glukagonskog receptora.

3. Derivat glukagona prema realizaciji 2, pri čemu X2je Aib.

4. Derivat glukagona prema realizaciji 2, pri čemu X2je Acb.

5. Derivat glukagona prema realizaciji 2, pri čemu X2je Acpr.

6. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X3je Gln.

7. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X3je His.

8. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X10je Leu.

9. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X10je Ile.

21

10. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X10je Val.

11. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X12je Lys.

12. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X12je Arg.

13. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X15je Asp.

14. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X15je Glu.

15. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X16je Ser, Ala, Leu, Thr, Glu ili Lys.

16. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Ser.

17. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Ala, Leu, Thr, Glu ili Lys.

18. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Ala.

19. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Leu.

20. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Thr.

21. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Glu.

21

22. Derivat glukagona prema realizaciji 15, pri čemu X16je Lys.

23. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X17je Arg.

24. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X17je Lys.

25. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X18je Arg ili Ala.

26. Derivat glukagona prema realizaciji 25, pri čemu X18je Arg.

27. Derivat glukagona prema realizaciji 25, pri čemu X18je Ala.

28. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X20je Gln, Arg, Glu or Lys.

29. Derivat glukagona prema realizaciji 28, pri čemu X20je Gln.

30. Derivat glukagona prema realizaciji 28, pri čemu X20je Arg.

31. Derivat glukagona prema realizaciji 28, pri čemu X20je Glu.

32. Derivat glukagona prema realizaciji 28, pri čemu X20je Lys.

33. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X21je Asp.

21

34. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X21je Glu or Lys.

35. Derivat glukagona prema realizaciji 34, pri čemu X21je Glu.

36. Derivat glukagona prema realizaciji 34, pri čemu X21je Lys.

37. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X24je Gln, Ala, Arg or Lys.

38. Derivat glukagona prema realizaciji 37, pri čemu X24je Gln.

39. Derivat glukagona prema realizaciji 37, pri čemu X24je Ala.

40. Derivat glukagona prema realizaciji 37, pri čemu X24je Arg.

41. Derivat glukagona prema realizaciji 37, wherein X24je Lys.

42. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X27je Met, Leu or Val.

43. Derivat glukagona prema realizaciji 42, pri čemu X27je Met.

44. Derivat glukagona prema realizaciji 42, pri čemu X27je Leu.

45. Derivat glukagona prema realizaciji 42, pri čemu X27je Val.

22

46. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X28je Asn, Ser or Lys.

47. Derivat glukagona prema realizaciji 46, pri čemu X28je Asn.

48. Derivat glukagona prema realizaciji 46, pri čemu X28je Ser.

49. Derivat glukagona prema realizaciji 46, pri čemu X28je Lys.

50. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X29je Thr, Gly or Lys.

51. Derivat glukagona prema realizaciji 50, pri čemu X29je Gly or Lys.

52. Derivat glukagona prema realizaciji 50, pri čemu X29je Thr.

53. Derivat glukagona prema realizaciji 50, pri čemu X29je Gly.

54. Derivat glukagona prema realizaciji 50, pri čemu X29je Lys.

55. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X30je absent.

56. Derivat glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-54, pri čemu X30je Lys.

57. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu X2predstavlja Aib, X20predstavlja Arg i X21predstavlja Glu.

58. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu su supstitucije amino-kiselina: (i) 2Acb, 10L, 12R, 16L, 20R, 27L, 28K;

(ii) 2Acb, 10L, 15E, 16E, 20R, 27L 28K;

(iii) 2Acb, 10L, 15E, 17K, 20R, 21E, 27L, 28K;

(iv) 2Acb, 10L, 15E, 20R, 21E, 27L,28K;

(v) 2Acb, 10L, 16L, 17K, 20R, 21E, 27L, 28K;

(vi) 2Acb, 10L, 16L, 20R, 21E, 27L, 28K;

(vii) 2Acb, 10L, 16L, 20R, 27L, 28K;

(viii) 2Acb, 3H, 10L, 15E, 27L, 28K;

(ix) 2Acpr, 10L, 15E, 20R, 21E, 27L, 28K;

(x) 2Aib, 10L, 15E, 17K, 18A, 20R, 21E, 27L, 28K; (xi) 2Aib, 10L, 15E, 17K, 20R, 21E, 27L, 28K;

(xii) 2Aib, 10L, 15E, 20R, 21E, 27L, 28K;

(xiii) 2Aib, 10L, 16A, 20R, 21E, 27L, 28K;

(xiv) 2Aib, 10L, 16E, 20K, 27L, 28S, 29K;

(xv) 2Aib, 10L, 16K, 17K, 18A, 20R, 21E, 24A, 27L; (xvi) 2Aib, 10L, 16K, 17K, 21E, 27L;

(xvii) 2Aib, 10L, 16K, 18A, 20R, 21E, 24A, 27L; (xviii) 2Aib, 10L, 16K, 20E, 27L, 28S, 29K;

(xix) 2Aib, 10L, 16K, 20R, 21E, 24A, 27L;

(xx) 2Aib, 10L, 16K, 20R, 21E, 27L;

(xxi) 2Aib, 10L, 16K, 20R, 27L, 28S;

(xxii) 2Aib, 10L, 16K, 21E, 27L;

(xxiii) 2Aib, 10L, 16K, 21E, 27V, 28K, 29G;

(xxiv) 2Aib, 10L, 16L, 17K, 20R, 21E, 27L, 28K; (xxv) 2Aib, 10L, 16L, 20R, 21E, 27L, 29K;

(xxvi) 2Aib, 10L, 16T, 20K, 27L, 28S, 29K;

(xxvii) 2Aib, 10L, 16T, 24R, 27L, 28S, 29K;

(xxviii) 2Aib, 10L, 17K, 18A, 21E, 27L, 29K;

(xxix) 2Aib, 10L, 18A, 20R, 21E, 27L, 29K;

(xxx) 2Aib, 10L, 20R, 21E, 23I, 27L, 29K;

(xxxi) 2Aib, 10L, 20R, 21E, 27L, 29K;

(xxxii) 2Aib, 10L, 20R, 21K, 27L, 28S;

(xxxiii) 2Aib, 10L, 20R, 24K, 27L, 28S;

(xxxiv) 2Aib, 10L, 20R, 27L, 28K;

(xxxv) 2Aib, 10L, 20R, 27L, 28S, 29K;

(xxxvi) 2Aib, 10L, 20R, 27L, 28S, 30K;

(xxxvii) 2Aib, 3H, 10L, 15E, 16K, 20R, 21E, 24A, 27L, 28S;

(xxxviii) 2Aib, 3H, 10L, 15E, 17K, 20R, 21E, 27L, 28K; (xxxix) 2Aib, 3H, 10L, 15E, 20R, 21E, 24A, 27L, 28K; (xl) 2Aib, 3H, 10L, 15E, 20R, 21E, 27L, 28K ili (xli) 2Aib, 3H, 10L, 15E, 20R, 27L, 28K.

59. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu supstituent ima formulu II:

Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II]

pri čemu,

Z1predstavlja strukturu prema formuli IIa;

22

H O<(>)

n*

gde je n u formuli IIa 6-20,

simbol * u formuli Z1predstavlja tačku vezivanja za azot susedne grupe i pri čemu su Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10pojedinačno predstavljeni sledećim amino-kiselinama; Glu, γGlu, Gly, Ser, Ala, Thr, Ado ili su odsutni,

gde su najmanje dva Z2to Z10ostatka prisutna,

pri čemu je dati supstituent vezan za epsilon poziciju Lys formule I i pri čemu Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10zajedno sadrže najmanje tri negativna naelektrisanja.

60. Derivat glukagona prema realizaciji 59, pri čemu n u Z1 formule II je 14, 16 ili 18.

61. Derivat glukagona prema realizaciji 59, pri čemu n u Z1 formule II je 14.

62. Derivat glukagona prema realizaciji 59, pri čemu n u Z1 formule II je 16.

63. Derivat glukagona prema realizaciji 59, pri čemu n u Z1 formule II je 18.

64. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu supstituent predstavlja strukturu prema jednoj od formula i gde * označava tačku vezivanja za azot na epsilon poziciji Lys-a formule I:

22

65. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu se supstituent nekovalentno vezuje za albumin.

66. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je supstituent negativno naelektrisan na fiziološkom pH.

67. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, izabran iz grupe koja se sastoji od: Hem.1; Hem.2; Hem.3; Hem.4; Hem.5; Hem.6; Hem.7; Hem.8; Hem.9; Hem.10; Hem.11; Hem.12; Hem.13; Hem.14; Hem.15; Hem.16; Hem.17; Hem.18; Hem.19; Hem.20; Hem.21; Hem.22; Hem.23; Hem.24; Hem.25; Hem.26; Hem.27; Hem.28; Hem.29; Hem.30; Hem.31; Hem.32; Hem.33; Hem.34; Hem.35; Hem.36; Hem.37; Hem.38; Hem.39; Hem.40; Hem.41; Hem.42; Hem.43; Hem.44; Hem.45; Hem.46; Hem.47; Hem.48; Hem.49 i Hem.50.

Dalje realizacije se odnose na:

22

68. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona jedinjenje zaštićeno protiv DPPIV.

69. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona stabilizovan protiv DPPIV.

70. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona.

71. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50 <10 nM.

72. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50 <1 nM.

73. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50 <100 pM.

74. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist receptora glukagona, sa EC50 <10 pM.

75. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora.

22

76. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je navedeni derivat glukagona agonist GLP-1 receptora, sa EC50 <100 pM.

77. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora, sa EC50 <50 pM.

78. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora, sa EC50 <10 pM.

79. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <100 pM i EC50 <1 nM na receptoru glukagona.

80. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <50 pM i EC50 <1 nM na receptoru glukagona.

81. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <10 pM i EC50 <1 nM na receptoru glukagona.

82. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <50 pM i EC50 <100 pM na receptoru glukagona.

22

83. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <10 pM i EC50 <100 pM na receptoru glukagona.

84. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <10 pM i EC50 <50 pM na receptoru glukagona.

85. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona agonist GLP-1 receptora sa EC50 <10 pM i EC50 <10 pM na receptoru glukagona.

86. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona koagonist GLP-1/glukagona sa EC50 na receptoru GLP-1 < EC50 na receptoru glukagona.

Dalje realizacije pronalaska se odnose na kombinacije:

87. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, u kombinaciji sa GLP-1 jedinjenjem ili sa jedinjenjem insulina.

88. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, u kombinaciji sa GLP-1 jedinjenjem.

2

89. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, u kombinaciji sa jedinjenjem insulina.

90. Derivat glukagona prema realizaciji 88, pri čemu je GLP-1 jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

N<ε26>-((S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilaminobutiril)[Arg34]GLP-1-(7-37):

(jedinjenje G1);

N<ε37>-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-({trans-4-[(19-karboksinonadekanoilamino)metil]cikloheksankarbonil}amino)b utirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino]etoksi}etoksi)acetil] [DesaminoHis7,Glu22,Arg26,Arg34,Lys37]GLP-1-(7-37):

(jedinjenje G2);

N[g1]ε26[/g1]-[[2-(2-{2-[[2-(2-{2-[[(S)-4-Carboxy-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)

2 1

butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino] etoksi}etoksi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1(7-37):

(jedinjenje G3);

N<ε37>-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksipentadekanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil] [Aib8,22,35,Lys37]GLP-

(jedinjenje G4);

i njihove farmaceutski prihvatljive soli, amidi, alkili ili estri.

91. Derivat glukagona prema realizaciji 89, pri čemu je jedinjenje insulina: N-epsilon-B29-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksipentadekanoilamino)butiril] desB30 humani insulin

2 2

(jedinjenje G5);

Druge reali zacije predmet nog pron alaska se odnos e na farmaceutsk e kompozicije:

92. Farma ceutska kompozi cija ko ja sadrži deriv at glukagona prema bilo kojo j od realizacij a 1-91.

93. Farma ceutska kompozi cija pr ema realizaciji 92, koja dalje sadrž i jedno ili više dodat nih terapeutski aktivn ih jedinjenja ili supstanci.

94. Farma ceutska kompozi cija pr ema realizaciji 93, pri čemu je dato dodatno tera peutski aktivno jedinje nje GLP-1 jedinjenje ili jedinjenje insulin a.

95. Farma ceutska kompozi cija pr ema realizaciji 94, pri čemu je dodatno terapeuts ki aktiv no jedinjenje GLP-1 jedinjenje.

96. Farma ceutska kompozi cija pr ema realizaciji 94, pri čemu je dodatno terapeuts ki aktiv no jedinjenje jedinjen je insulina.

2

97. Farmaceutska kompozicija prema realizaciji 95, pri čemu je GLP-1 jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od:

N-epsilon26-((S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilaminobutiril)[Arg34]GLP-1-(7-37):

(jedinjenje G1);

N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-Karboksi-4-({trans-4-[(19-karboksinonadekanoilamino)metil]cikloheksankarbonil}amino)b utirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino]etoksi}etoksi)acetil]

(jedinjenje G2);

N-epsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)

2 4

(jedinjenje G3);

N-epsilon37-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksi-pentadecanoilamino)-butirilamino]-etoksi}-etoksi)-acetilamino]-etoksi}-etoksi)-acetil] [Aib8,22,35,Lys37]GLP-

(jedinjenje G4);

i njihove farmaceutski prihvatljive soli, amidi, alkili ili estri.

98. Farmaceutska kompozicija prema realizaciji 96, pri čemu je jedinjenje insulina: N-epsilon-B29-[(S)-4-karboksi-4-(15-karboksipentadekanoilamino)butiril]desB30 humani insulin

2

(jedinjenje G5).

99. Farma ceutska kompozi cija pr ema bilo kojoj od

realizacija 92-98, u obliku pojed inačne doze, sa drži od oko 0,01 mg do oko 1000 mg, kao što je od oko 0,1 mg do oko 500 mg, od oko 0,5 mg do oko 5 mg, npr. od oko 0,5 mg do oko 200 mg, derivata glukagon a prema bilo kojoj real izaciji 1-91.

100. Farma ceutska kompozi cija pr ema bilo kojoj od

realizacija 92-99, koja je pogodn a za parenteral nu primenu.

101. Deriv at glukagona prema bil o kojoj od realizacija 1-91, za upotrebu u terapij i.

Dalje reali zacije se odno se na sledeće:

102. Deriv at glukagona prema bil o kojoj realiza ciji 1-91, opciono u kombinac iji sa jednim ili više dodatni h

terapeutski aktivn ih jedi njenja, za upotrebu u lečenju ili

2

prevenciji hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti.

103. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju ili sprečavanju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2.

104. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju gojaznosti ili sprečavanju prekomerne težine.

105. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u smanjenju unosa hrane.

106. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u povećanju potrošnje energije.

107. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u smanjenju telesne težine.

108. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju

2

napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2.

109. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u odlaganju napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin.

110. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u regulisanju apetita.

111. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu izazivanja sitosti.

112. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u sprečavanju povratka težine posle uspešnog gubitka težine.

113. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću.

2

114. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju bulimije.

115. Derivat glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju prejedanja.

116. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju ateroskleroze.

117. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju hipertenzije.

118. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju dijabetesa tipa 2.

119. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju intolerancije na glukozu.

2

120. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju dislipidemije.

121. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju koronarne bolesti srca.

122. Derivat glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja, za upotrebu u lečenju hepatične steatoze.

Dalje realizacije se odnose na sledeće postupke:

123. Postupak za lečenje ili prevenciju hipoglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

124. Postupak za odlaganje ili prevenciju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u

24

kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

125. Postupak za lečenje gojaznosti ili prevenciju prekomerne težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja. 126. Postupak za smanjenje unosa hrane, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

127. Postupak za upotrebu u povećanju potrošnje energije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

128. Postupak za upotrebu u smanjenju telesne težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

129. Postupak za primenu u odlaganju napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

130. Postupak za upotrebu u odlaganju napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

131. Postupak za regulaciju apetita, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

132. Postupak za primenu u izazivanju sitosti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

133. Postupak za upotrebu u sprečavanju povratka težine posle uspešnog gubitka težine, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

134. Postupak za upotrebu u lečenju bolesti ili stanja povezanih sa prekomernom težinom ili gojaznošću, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona u skladu sa bilo kojom od realizacija 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

135. Postupak za upotrebu u lečenju bulimije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

136. Postupak za upotrebu u lečenju prejedanja, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

137. Postupak za upotrebu u lečenju ateroskleroze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

138. Postupak za upotrebu u lečenju hipertenzije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-

24

91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

139. Postupak za upotrebu u lečenju dijabetesa tipa 2, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

140. Postupak za lečenje intolerancije na glukozu, naznačen time što se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja. 141. Postupak za lečenje dislipidemije, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

142. Postupak za lečenje koronarne srčane bolesti, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

143. Postupak za lečenje hepatične steatoze, koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno, efikasne količine derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 191, opciono u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapeutski aktivnih jedinjenja.

Dalje realizacije se odnose na sledeće upotrebe:

144. Upotreba derivata glukagona prema bilo kojoj realizaciji 1-91, za dobijanje leka.

145. Upotreba derivata glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-91, za dobijanje leka za lečenje ili prevenciju hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu, dijabetesa tipa 1 i gojaznosti.

146. Upotreba derivata glukagona prema bilo kojoj od realizacija 1-91, za dobijanje leka za odlaganje ili prevenciju napredovanja bolesti kod dijabetesa tipa 2, lečenje gojaznosti ili prevenciju prekomerne težine, za smanjenje unosa hrane, povećanje potrošnje energije, smanjenje telesne težine, odlaganje napredovanja od intolerancije na glukozu (IGT) do dijabetesa tipa 2; odlaganje napredovanja od dijabetesa tipa 2 do dijabetesa koji zahteva insulin; regulisanje apetita; izazivanje sitosti; sprečavanje vraćanja težine posle uspešnog gubitka težine; lečenje bolesti ili stanja u vezi sa prekomernom težinom ili gojaznošću; lečenje bulimije; lečenje prejedanja; lečenje ateroskleroze, hipertenzije, dijabetesa tipa 2, IGT, dislipidemije, koronarne bolest srca, hepatične steatoze, lečenje trovanja beta-blokatorima,

24

upotreba za inhibiciju motiliteta gastrointestinalnog trakta, korisna u vezi sa istraživanjima gastrointestinalnog trakta primenom tehnika kao rendgen, snimanje CT i NMR.

Dalje realizacije se odnose na sledeće:

147. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 70% prinosa u ThT fibrilacionom testu.

148. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 90% prinosa u ThT fibrilacionom testu.

149. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima oko 100% prinosa u ThT fibrilacionom testu.

150. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 7 sati zaostajanja u ThT fibrilacionom testu.

151. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima više od 20 sati zaostajanja u ThT fibrilacionom testu.

152. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima 45 sati zaostajanja ili više u ThT fibrilacionom testu.

24

153. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 14% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

154. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 13% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

155. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 12% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

156. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 10% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

157. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 9% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

158. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 7% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

159. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 5% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

160. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 3% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

24

161. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu derivat glukagona ima manje od 2% degradacije na testu hemijske stabilnosti.

162. Derivat glukagona prema bilo kojoj od prethodnih realizacija, pri čemu je derivat glukagona selektivan za receptor glukagona kao i za GLP-1 receptor.

PRIMERI

Pronalazak je dalje ilustrovan uz upućivanje na sledeće primere, koji nisu ni na koji način ograničeni obimom pronalaska u zahtevima.

Lista skraćenica

BOC: terc-butiloksikarbonil

DCM: Dihlorometan

DIC: Diizopropilkarbodiimid

Fmoc: 9-fluorenilmetiloksikarbonil

HOAt: 1-hidroksi-7-azabenzotriazol

HPLC: Tečna hromatografija visokih performansi LCMS: Tečna hromatografija - masena spektrometrija

MeCN: Acetonitril

Mtt: 4-Metiltritil

NMP: N-metil pirrolidon

24

Oxyma Pure: Etil estar cijano-hidroksiimino-sirćetne kiseline

RP: Reverzna faza

RP-HPLC: Tečna hromatografija visokih performansi sa reverznim fazama

RT: Sobna temperatura

Rt: Vreme zadržavanja

SPPS: Čvrsta faza sinteze peptida

TFA: Trifluoroacetatna kiselina

TIPS: Triizopropilsilan

UPLC: Tečna hromatografija ultra performansi

Opšti postupci

Ovaj odeljak se odnosi na postupke za sintezu peptidno vezanog peptida (SPPS postupci, uključujući postupke za uklanjanje zaštite sa amino-kiselina, postupke za odcepljenje peptida iz smole i za njegovo prečišćavanje), kao i postupke za detekciju i karakterizaciju nastalog peptida. (LCMS i UPLC postupci).

Jedinjenja u Primerima 1-73 ovde su pripremljena, prečišćena i analizirana u skladu sa procedurama opisanim u daljem tekstu.

SPPS opšti postupci

24

Derivati Fmoc-zaštićenih amino-kiselina koji su korišćeni bili su preporučeni standard: Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Asn(Trt)-OH, Fmoc-Asp(OtBu)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Gln(Trt)-OH, Fmoc-Glu(OtBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(Trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Lys(BOC)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Trp(BOC)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Val-OH and Fmoc-Lys(Mtt)-OH. koji se nabavljaju od npr. Anaspec, Bachem, Iris Biotech ili NovabioChem.

N-terminalna amino-kiselina je Boc zaštićena na alfa amino-grupi (npr. Boc-His(Trt)-OH za peptide sa His na N-kraju).

Uvođenje supstituenta na epsilon-azotu lizina je postignuto korišćenjem lizina zaštićenog sa Mtt (Fmoc-Lys(Mtt)-OH). Pogodno zaštićeni gradivni blokovi kao što su Fmoc-8-amino-3,6-dioksaoktanska kiselina, Fmoc-Glu-OtBu, kao i zaštićene standardne amino-kiseline opisane gore, su korišćene za uvođenje supstituenta. Uvođenje grupe masne kiseline postignuto je korišćenjem mono-terc-butil-estra oktadekanidioinske kiseline.

SPPS je izveden na Prelude Solid Phase Peptide Synthesizer-u od Protein Technologies-a (Tucson, AZ 85714 USA) na 100 ili 250-mmol skali korišćenjem šest puta više Fmoc-amino-kiseline (300 mM u NMP sa 300 mM HOAt ili Oxyma

2

Pure®) u odnosu na opterećenje smolom. H-Rink Amide-ChemMatrix smola (punjenje npr. 0,52 nmol/g) ili Rink Amide AM polistirenska smola (Novabiochem, punjenje npr. 0,62 mmol/g) je korišćena kao čvrsta podloga. Fmoc-deprotekcija je izvedena upotrebom 20% piperidina u NMP. Kuplovanje je izvedeno upotrebom 3 : 3 : 3 : 4 amino-kiseline/(HOAt ili Oxima Pure®) /DIC/kolidina u NMP. NMP i DCM top ispiranja (7 ml, 0,5 min, 2 x 2 svaki) su izvedeni između deprotekcije i koraka kuplovanja. Vremena kuplovanja su obično 60 minuta. Neke amino-kiseline koje uključuju, ali nisu ograničene na Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Aib-OH ili Boc-His(Trt)-OH kao i na gradivne blokove koji vode do supstituenta su „dvostruko povezani“, što znači da nakon prvog spajanja (npr. 60 min), smola se isušuje i dodaje se više reagensa (amino-kiselina, (HOAt ili Oxyma Pure®), DIC i kolidin), i smeša se ostavi da ponovo reaguje (npr. 60 min). Mtt grupa je uklonjena ispiranjem smole sa HFIP/DCM (75:25) (2 x 2 min), isprana sa DCM i suspendovanje smole u HFIP/DCM (75:25) (2 x 20 min) i zatim isprana u sekvenca sa Piperidin/NMP (20:80), DCM (1 x), NMP (1 x), DCM (1 x), NMP (1 x).

Čišćenje od smole

Posle sinteze, smola je isprana sa DCM, a peptid je otcepljen sa smole tretmanom u trajanju od 2-3 sata sa

2 1

TFA/TIS/vodom (95/2,5/2,5) nakon čega je sledilo taloženje sa dietiletrom. Talog je ispran dietiletrom.

Prečišćavanje i kvantifikacije

Sirovi peptid je rastvoren u pogodnoj mešavini vode i MeCN kao što je voda/MeCN (4:1) i prečišćen preparativnom HPLC reverzne faze (Waters Deltaprep 4000 ili Gilson) na koloni koja sadrži C18-silika gel. Eluiranje je izvedeno sa povećanjem gradijenta MeCN u vodi koja sadrži 0,1% TFA. Relevantne frakcije se proveravaju pomoću analitičke HPLC ili UPLC. Frakcije koje sadrže čisti ciljni peptid su sakupljene i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Dobijeni rastvor je analiziran (HPLC, LCMS) i proizvod je kvantifikovan korišćenjem hemiluminiscentnog HPLC detektora specifičnog na azot (Antek 8060 HPLC-CLND) ili merenjem UV apsorpcije na 280 nm. Proizvod se dozira u staklene bočice. Bočice su zatvorene Millipore predfiltrima of staklenih vlakana. Suvo zamrzavanje daje peptid trifluoroacetata kao belu čvrstu supstancu.

Postupci za detekciju i karakterizaciju

LCMS postupci

Postupak: LCMS 4

2 2

LCMS_4 je izveden na postrojenju koje se sastoji od Waters Acquity UPLC sistema i LCT Premier XE masenog spektrometra od Micromass-a.

Eluenti:

A: 0,1% mravlja kiselina u vodi

B: 0.1% Mravlja kiselina u acetonitrilu

Analiza je izvedena na sobnoj temperaturi ubrizgavanjem odgovarajuće zapremine uzorka (poželjno 2-10µl) na kolonu koja je eluirana gradijentom A i B. UPLC uslovi, podešavanja detektora i podešavanja masenog spektrometra su bili: Kolona: Waters Acquity UPLC BEH, C-18, 1,7µm, 2,1mm x 50mm. Gradijent: Linearni 5% - 95% acetonitril tokom 4,0 min (alternativno 8,0 min) na 0,4ml/min. Detekcija: 214 nm (derivatni/analogni rezultat iz TUV (podesivi UV detektor)) MS jonizacioni režim: API-ES Skan: 100-2000 amu (alternativno 500-2000 amu), korak 0,1 amu.

Postupak: LCMS01v01

2

24

Postupak: LCMS13v01

2

UPLC postupak

Postupak: 04 A9 1

RP-analiza je izvedena korišćenjem Waters UPLC sistema opremljenog sa detektorom sa dvostrukim opsegom. UV detekcije na 214 nm i 254 nm su sakupljene korišćenjem ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, C18, 1,7um, 2,1 mm x 150 mm kolona, 60°C.

2

UPLC sistem je povezan sa dva eluentna rezervoara koji sadrže:

A: 200 mM Na2SO4 20 mM Na2HPO4 20 mM NaH2PO4 u 90% H2O/10% CH3CN, pH 7,2;

B: 70% CH3CN, 30% H2O.

Sledeći postupni gradijent je korišćen: 90% A, 10% B do 80% A, 20% B preko 3 minuta, 80% A, 20% B do 50% A, 50% B preko 17 minuta pri brzini protoka od 0,40 ml/min.

Postupak: 09 B2 1

RP-analiza je izvedena korišćenjem Waters UPLC sistema opremljenog sa detektorom sa dvostrukim opsegom. UV detekcije na 214nm i 254nm su sakupljene korišćenjem ACQUITY UPLC BEH130, C18, 130Å, 1,7um, 2,1 mm x 150 mm kolona, 40°C.

UPLC sistem je povezan sa dva eluentna rezervoara koji sadrže:

A: 99,95% H2O, 0,05% TFA;

B: 99,95% CH3CN, 0,05% TFA.

Sledeći linearni gradijent je upotrebljen: 95% A, 5% B do 40% A, 60% B preko 16 minuta pri brzini protoka od 0,40 ml/min.

Postupak: 09 B4 1

2

UPLC sistem je povezan sa dva eluentna rezervoara koji sadrže:

A: 99,95% H2O, 0,05% TFA;

B: 99,95% CH3CN, 0,05% TFA

Sledeći linearni gradijent je upotrebljen: 95% A, 5% B do 5% A, 95% B preko 16 minuta pri brzini protoka od 0,40 ml/min.

Postupak: 10 B4 1

RP-analiza je izvedena korišćenjem Waters UPLC sistema opremljenog sa detektorom sa dvostrukim opsegom. UV detekcije na 214nm i 254nm su sakupljene korišćenjem ACQUITY UPLC BEHC18, 1,7um, 2,1 mm x 150 mm kolona, 40°C.

UPLC sistem je povezan sa dva eluentna rezervoara koji sadrže:

A: 99,95%H2O, 0,05% TFA;

B: 99,95% CH3CN, 0,05% TFA.

2

Postupak: UPLC01v01

Postupak: UPLC02v01

2

Primer 1

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 15,8 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,3 min; m/3: 1429; m/4: 1108; m/5: 887

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt= 8,2 min

Primer 2

N<ε21>-(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28]-Glukagon amid

2 1

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt= 8,18 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 17,4 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,29; m/3:1468; m/4: 1101; m/5: 885

Primer 3

N<ε24>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28]-Glukagon amid

2 2

UPLC postupak: 09_B4_1; Rt= 8,4 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 17,4 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,4 min; m/3:1464; m/4: 1098; m/5: 879

Primer 4

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt= 8,2 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 16,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,3 min; m/3:1477; m/4: 1108; m/5: 887

Primer 5

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

2 4

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt= 8,3 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 15,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,3 min; m/3:1473; m/4: 1105; m/5: 884

Primer 6

N<α>-([Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28]-Glucagonil)-N{Epsilon}[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]Lys amid

2

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt= 8,0 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 14,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,3 min; m/4:1130; m/5: 904; m/6: 754

Primer 7

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt = 8,3 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 15,3 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1472; m/4:1104; m/5:883

Primer 8

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt = 8,9 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 16,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1439; m/4: 1079; m/5: 863

Primer 9

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt = 8,6 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 16,7 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1458; m/4: 1093; m/5: 875

Primer 10

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

UPLC postupak: 10_B4_1; Rt = 8,0 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 16,6 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,2 min, m/3: 1491; m/4: 1118; m/5: 895

2

Primer 11

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,5min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,28 min; m/6: 734

Primer 12

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B4_1; Rt = 8,0 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,7 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,2 min, m/3: 1486; m/4: 1115; m/5: 892

Primer 13

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

2 1

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt= 12,4 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,2 min; m/6: 739

Primer 14

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

2 2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt= 12,5 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 13,4 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,3 min; m/3: 1108; m/4:

1006; m/5: 886

Primer 15

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt= 12,4 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt= 16,1 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt=2,3 min; m/3: 1477; m/4:

1108; m/5: 886

2

Primer 16

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: Rt=7,9 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt=2,1 min; m/3: 1499; m/4: 1124; m/5: 900

Primer 17

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27]-Glukagon amid

2 4

UPLC postupak: 09_B4_1; Rt = 8,5 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 15,6 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1433; m/4: 1075; m/5: 860

Primer 18

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B4_1; Rt = 8,4 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 16,0 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1443; m/4: 1082; m/5: 866

Primer 19

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et

2

oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC01v01: Rt = 12,2 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 1,9 min,m/3 1471; m/4 1103; m/5 882

Primer 20

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC01v01: Rt = 12,3 min

LC-MS postupak: LCMS01v01:Rt = 1,8 min, m/31485; m/4 1114; m/5 891

2

Primer 21

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC01v01: Rt= 12,1 min

LC-MS postupak: Rt = 1,8 min, m/31490; m/4 1117; m/5 894

Primer 22

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,5 min

UPLC postupak: 04_A10_1; Rt = 9,7 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,6 min, m/3: 1476; m/4: 1107; m/5: 886

Primer 23

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,5 min

UPLC postupak: 04_A10_1; Rt = 9,7 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,6 min, m/3: 1486; m/4: 1114; m/5: 892

Primer 24

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 13,4 min

UPLC postupak: 04_A10_1; Rt = 10,1 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,8 min, m/3: 1448; m/4: 1086; m/5: 869

Primer 25

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2 1

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,6 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 12,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 1,7 min, m/3: 1475; m/4: 1107; m/5: 885

Primer 26

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]-acetil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21, Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2 2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 13,3 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 17,5 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 1,8 min, m/3: 1481; m/4: 1111; m/5: 889

Primer 27

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,6 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 12,7 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 1,7 min, m/3: 1479; m/4: 1110; m/5: 888

Primer 28

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil] amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29]-Glukagon amid

2 4

UPLC postupak: UPLC02v01; Rt= 7,7 min

LC-MS postupak: LCMS13v01; Rt = 2,1 min, m/3: 1461; m/4: 1096

Primer 29

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: UPLC02v01; Rt= 8,1 min

LC-MS potupak: LCMS13v01; Rt = 2,2 min, m/3: 1476;

m/4: 1107

Primer 30

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,1 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,3 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,1 min, m/3: 1489; m/4: 1117; m/5: 893

Primer 31

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27, Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,2 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,2 min, m/4: 1102; m/5: 882

Primer 32

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27,Ser28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,1 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,1 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,1 min, m/4: 1102; m/5: 882

Primer 33

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,2 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 15,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,0 min, m/3: 1489; m/4: 1117; m/5: 893

Primer 34

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,2 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,9 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,0 min, m/3: 1383; m/4: 1037; m/5: 830

Primer 35

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,His3,Leu10,Glu15,

Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2 1

UPLC postupak: UPLC02v01 Rt= 8,14 min

LC-MS postupak: LCMS01v01; Rt=2,1; m/3:1478;

m/5:1109; m/6:887

Primer 36

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,

Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: Rt=7,9 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt=2,1; m/3: 1480; m/4:

1110; m/5: 888

Primer 37

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-

2 2

hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15, Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: Rt=7,8 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt=2,1; m/3: 1484; m/4: 1113; m/5: 891

Primer 38

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,8 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 18,6 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,9 min, m/3: 1446; m/4: 1084; m/5: 868

Primer 39

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,3 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 16,0 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,8 min, m/3: 1432; m/4: 1074; m/5: 859

2 4

Primer 40

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,2 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 13,9 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,7 min, m/3: 1442; m/4: 1081; m/5: 865

Primer 41

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,3 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 15,1 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1389; m/4: 1042; m/5: 834

Primer 42

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,2 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,7 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1486; m/4: 1114; m/5: 892

Primer 43

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,4 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 17,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,4 min, m/3: 1476; m/4: 1107; m/5: 886

Primer 44

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,3 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 15,2 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,3 min, m/3: 1490; m/4: 1117; m/5: 894

Primer 45

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

2

UPLC postupak: UPLC02v01 Rt= 8,4 min

LC-MS postupak: LCMS01v01; Rt=2,7 min; m/3:1532; m/5:1150; m/6:920

Primer 46

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01 Rt= 8,4 min

LC-MS postupak: LCMS01v01; Rt=2,7 min; m/3:1542; m/5:1157; m/6:925

Primer 47

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

1

UPLC postupak: UPLC02v01: Rt=8,4 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt=2,7 min; m/3: 1528;

m/4: 1146; m/5: 917

Primer 48

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,

Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: Rt=8,3 min

2

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt=2,1 min; m/3: 1484; m/4: 1113; m/5: 891

Primer 49

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,4 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14,5 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,4 min, m/3: 1485; m/4: 1114; m/5: 891

Primer 50

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: 09_B2_1; Rt = 12,4 min

UPLC postupak: 04_A9_1; Rt = 14.5 min

LC-MS postupak: LCMS_4; Rt = 2,4 min, m/3: 1485; m/4: 1114; m/5: 891

Primer 51

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace

4

til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC01v01: Rt = 12,7 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,7 min; m/3 = 1480; m/4 = 1110; m/5 = 888

Primer 52

N<ε28>(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: Rt = 8,0 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,6 min; m/1 = 4570; m/3 = 1524; m/4 = 1143; m/5 = 915

Primer 53

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,5 min

LC-MS postupak:LCMS01v01: Rt = 2,8 min; m/1 = 4569; m/3 = 1523; m/4 = 1143; m/5 = 915

Primer 54

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,0 min

LC-MS postupak:LCMS01v01: Rt = 2,5 min; m/3 = 1524; m/4 = 1143; m/5 = 915; m/z = 4571

Primer 55

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,4 min

LC-MS postupak:LCMS01v01: Rt = 2,8 min; m/3 = 1466; m/4 = 1100; m/5 = 880; m/z = 4395

Primer 56

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC01v01: RT = 12,386 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: m/3 = 1481,4; m/4 = 1111,03; m/5 = 889,3

Primer 57

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,0 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1480,8; m/4 = 1111,04

Primer 58

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

1

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,7 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1471,05; m/4 = 1103,69

Primer 59

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,0 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: m/3 = 1542; m/4 = 1157; m/5 = 926; m/z = 4626

11

Primer 60

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 7,9 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,0 min; m/1 = 4587; m/3 = 1529; m/4 = 1147; m/5 = 918

Primer 61

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

12

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,2 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,1 min; m/1 = 4598; m/4 = 1150; m/5 = 920

Primer 62

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

1

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,2 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,3 min; m/3 = 1384,04; m/4 = 1038,14

Primer 63

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,3 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1476,15; m/4 = 1107,36

Primer 64

14

tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,3 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1471,27; m/4 = 1103,76

Primer 65

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

1

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,1 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1476;

m/4 = 1107; m/5 = 886

Primer 66

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,2 min

1

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1467; m/4 = 1100; m/5 = 880

Primer 67

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,0 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,1 min; m/3 = 1533; m/4 = 1150; m/5 = 920

Primer 68

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-

1

karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 7,9 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,0 min; m/3 = 1528; m/4 = 1146; m/5 = 917

Primer 69

1

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-

3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,1 min

LC-MS postupak: LCMS01v01: Rt = 2,6 min; m/3 = 1133; m/4 = 906; m/5 = 756

Primer 70

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

1

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,4 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,2 min; m/3 = 1457; m/4 = 1093; m/5 = 874

Primer 71

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,5 min

2

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,3 min; m/3 = 1471; m/4 = 1104

Primer 72

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,4 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,3 min; m/3 = 1467; m/4 = 1100

Primer 73

N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Val10,Arg12,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

21

UPLC postupak: UPLC02v01: RT = 8,5 min

LC-MS postupak: LCMS13v01: Rt = 2,3 min; m/3 = 1481; m/4 = 1111

Primer 74: Potentnost GLP-1 and glukagonskih receptora Svrha ovog primera je da testira potentnost derivata glukagona iz pronalaska, in vitro. In vitro potentnost je mera aktivacije humanog GLP-1 receptora ili receptora glukagona, redosledno, u testu celih ćelija.

Načelo

In vitro potentnost je određen merenjem odgovora humanog GLP-1 receptora ili receptora glukagona, respektivno, u testu reporterskog gena. Test je izveden u stabilno transfektovanoj ćelijskoj liniji BHK koja eksprimira ili humani GLP-1 receptor ili humani receptor glukagona i sadrži DNK za element odgovora cAMP (CRE) kuplovan za promotor i gen za luciferazu svica (CRE

22

luciferaza)). Kada je aktiviran humani GLP-1 receptor ili receptor glukagona, respektivno, to je rezultiralo proizvodnjom cAMP-a, što je, za uzvrat, rezultiralo ekspresijom luciferaznog proteina. Kada je inkubacija testa završena, dodat je supstrat luciferaze (luciferin) i enzim je konvertovao luciferin u oksiluciferin i proizvodi bioluminiscenciju. Luminiscencija je merena kao očitavanje za test.

(a) Aktivacija GLP-1 receptora

Uzgoj i priprema ćelija

Ćelije korišćene u ovom testu (klon FCW467-12A/KZ10-1) bile su BHK ćelije sa BHKTS13 kao matičnom ćelijskom linijom. Ćelije su izvedene iz klona (FCW467-12A) koji eksprimuje humani GLP-1 receptor i ustanovljene su daljim transfektovanjem sa CRE luciferazom da bi se dobio trenutni klon.

Ćelije su uzgajane na 5% CO2u DMEM medijumu sa 10% FBS, 1xGlutaMAKS, 1 mg/ml G418, 240 nM MTX (metotreksat) i 1% pen/strep (penicilin/streptomicin). Oni su alikvotirani i skladišteni u tečnom azotu. Pre svakog ispitivanja, alikvot je uzet i ispran tri puta u PBS pre nego što je suspendovan u željenoj koncentraciji u medijumu za ispitivanje. Za ploče sa 96 ležišta, suspenzija je

2

napravljena da bi se dobila konačna koncentracija 5x10EE3 ćelija/ležištu.

Materijali

Sledeće hemikalije su korišćene u analizi: Pluronic F-68 (10%) (Gibco 2404), ovalbumin (Sigma A5503), DMEM w/o fenol crveno Gibco 11880-028), 1 M Hepes (Gibco 15630), Glutamax 100x (Gibco 35050) i Steadylite plus (PerkinElmer 6016757).

Medijum za ispitivanje se sastojao od DMEM w/o fenola crveno, 10 mM Hepes, 1 x GlutaMAKS, 2% Ovalbumina i 0,2% Pluronic F-68.

Procedura

Ćelijski štokovi su odmrznuti u vodenom kupatilu od 37°C. Ćelije su tri puta ispirane u PBS-u. Ćelije su prebrojane i podešene na 5x10EE3 ćelija/50 µl (1x10EE5 ćelija/ml) u medijumu za ispitivanje. Alikvot od 50 µl ćelija je prebačen u svako ležište na ploči za ispitivanje.

Zalihe ispitivanih jedinjenja i referentnih jedinjenja su razblažene do koncentracije od 0,2 µM u medijumu za ispitivanje. Jedinjenja su razblažena 10 puta da bi se dobile sledeće koncentracije: 2x10EE-6 M, 2x10EE-7 M, 2x10EE-8 M; 2x10EE-9 M, 2x10EE-10 M, 2x10EE-11 M,

24

2x10EE-12 M and 2x10EE-13 M. Za svako jedinjenje kontrolna sredina za slepu analizu je, takođe, uključena.

Alikvot od 50 µl jedinjenja ili slepa proba je prebačena sa ploče za razblaživanje na ploču za ispitivanje. Jedinjenja su testirana u sledećim finalnim koncentracijama: 1x10EE-6 M, 1x10EE-7 M, 1x10EE-8 M;

1x10EE-9 M, 1x10EE-10 M, 1x10EE-11 M i 1x10EE-12 M i 1x10EE-13 M.

Ploča za testiranje je inkubirana 3 sata u 5% CO2inkubatoru na 37°C. Ploča za ispitivanje je uklonjena iz inkubatora i ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi tokom 15 min. 100 µl alikvota Steadylite plus reagensa je dodato u svako ležište test ploče (reagens je osetljiv na svetlost). Svaka test ploča je prekrivena aluminijumskom folijom da bi se zaštitila od svetlosti i mućkana 30 minuta na sobnoj temperaturi. Svaka ploča za ispitivanje je očitana u Perkin Elmer TopCount NXT instrumentu.

Proračuni

Podaci iz TopCount instrumenta su prebačeni u GraphPad Prism softver. Softver je izvršio nelinearnu regresiju (log(agonist) vs odgovor - promenljivi nagib (četiri parametra)). Vrednosti EC50su izračunate pomoću softvera i prikazane u pM. Podaci su prikazani u Tabeli 6.

2

(b) Aktivacija receptora glukagona

Ćelijska kultura i priprema

Ćelije korišćene u ovom testu (klon pLJ6’-4-25) bile su BHK ćelije sa BHK570 kao roditeljskom ćelijskom linijom koja eksprimuje CRE luciferazni gen (klon BHK/KZ10-20-48) i ustanovljene su daljim transfekovanjem sa receptorom humanog glukagona (klon pLJ6’ u pHZ-1 vektoru).

Ćelije su uzgajane na 5% CO2u DMEM medijumu sa 10% FBS, 1xGlutaMAX, 1 mg/ml G418, 240 nM MTX (metotreksat) i 1% pen/strep (penicilin/streptomicin). Alikvotirane su i uskladištene u tečnom azotu. Pre svakog ispitivanja, alikvot je uzet i ispran tri puta u PBS-u pre nego što je suspendovan u željenoj koncentraciji u medijumu za ispitivanje. Za ploče sa 96 ležišta, suspenzija je napravljena da bi se dobila konačna koncentracija 5x10EE3 ćelija/ležište.

Materijali

Sledeće hemikalije su korišćene u analizi: Pluronic F-68 (10%) (Gibco 2404), ovalbumin (Sigma A5503), DMEM w/o fenol crveno (Gibco 11880-028), 1 M Hepes (Gibco 15630), Glutamax 100x (Gibco 35050) i Steadylite plus (PerkinElmer 6016757).

2

Medijum za ispitivanje se sastojao od DMEM w/o fenola crveno, 10 mM Hepes, 1x GlutaMAX, 2% Ovalbumina i 0,2% Pluronic F-68.

Procedura

Ćelijski štokovi su odmrznuti u vodenom kupatilu od 37°C. Ćelije su tri puta ispirane u PBS-u. Ćelije su prebrojane i podešene na 5x10EE3 ćelije/50 µl (1x10EE5 ćelija/ml) u medijumu za ispitivanje. Alikvot od 50 µl ćelija je prebačen u svako ležište na ploči za ispitivanje.

Štokovi ispitivanih jedinjenja i referentnih jedinjenja su razblaženi do koncentracije od 0,2 µM u sredstvu za ispitivanje. Jedinjenja su razblažena 10 puta da bi se dobile sledeće koncentracije: 2x10EE-6 M, 2x10EE-7 M, 2x10EE-8 M; 2x10EE-9 M, 2x10EE-10 M, 2x10EE-11 M, 2x10EE-12 M and 2x10EE-13 M. Za svako jedinjenje kontrolna sredina za slepu analizu je, takođe, uključena.

Alikvot od 50 µl jedinjenja ili slepa proba je prebačen sa ploče za razblaživanje na ploču za ispitivanje. Jedinjenja su testirana u sledećim finalnim koncentracijama: : 1x10EE-6 M, 1x10EE-7 M, 1x10EE-8 M;

1x10EE-9 M, 1x10EE-10 M, 1x10EE-11 M i 1x10EE-12 M i 1x10EE-13 M.

Ploča za ispitivanje je inkubirana 3 sata u 5% CO2inkubatoru na 37°C. Ploča za ispitivanje je uklonjena iz

2

inkubatora i ostavljena da stoji na sobnoj temperaturi tokom 15 min. 100 µl alikvota Steadylite plus reagensa je dodato u svako ležište ploče (reagens je osetljiv na svetlost). Svaka ploča za ispitivanje je prekrivena aluminijumskom folijom da bi se zaštitila od svetlosti i mućkana 30 minuta na sobnoj temperaturi. Svaka ploča za ispitivanje je očitana u Perkin Elmer TopCount NXT instrumentu.

Proračuni

Primer 75: Vezivanje receptora GLP-1 i glukagona

(a) Vezivanje receptora GLP-1

Svrha ovog ispitivanja je da se testira in vitro aktivnost vezivanja receptora derivata glukagona iz pronalaska. Vezivanje receptora je mera afiniteta jedinjenja za humani GLP-1 receptor.

Načelo

2

Vezivanje receptora svakog jedinjenja za humani GLP-1 receptor je mereno u testu izmeštenog vezivanja. U ovom tipu testa, obeleženi ligand (u ovom slučaju 125I-GLP-1) je vezan za receptor. Svaki derivat je dodavan u seriji koncentracija izolovanim membranama koje sadrže humani GLP-1 receptor i praćeno je izmeštanje obeleženog liganda. Vezivanje receptora je prijavljeno kao koncentracija na kojoj je polovina obeleženog liganda izmeštena iz receptora, IC50vrednost.

Da bi se testiralo vezivanje derivata za albumin, test se može izvesti u veoma niskoj koncentraciji serumskog albumina (maks. 0,001% konačne koncentracije testa) kao i u prisustvu veće koncentracije serumskog albumina (2,0% konačne koncentracije testa). Povećanje vrednosti IC50, u prisustvu serumskog albumina, ukazuje na afinitet prema serumskom albuminu i predstavlja metod za predviđanje produženog farmakokinetičkog profila ispitivane supstance u životinjskim modelima.

Materijali

U analizi su korišćene sledeće hemikalije: DMEM w/o fenol crveni (Gibco 11880-028), Pen/strep (Invitrogen 15140-122), G418 (Invitrogen 10131-027), 1 M Hepes (Gibco 15630), EDTA (Invitrogen 15575-038), PBS (Invitrogen 14190-094), fetalni teleći serum Invitrogen 16140-071), EGTA,

2

MgCl2(Merck 1.05832.1000), Tween 20 (Amresco 0850C335), SPA čestice (aglutinin pšenične klice (WGA) SPA beads, Perkin Elmer RPNQ0001), [125I]-GLP-1]-(7-36)NH2 (proizveden interno), OptiPlateTM-96 (Perkin Elmer).

Pufer 1 se sastojao od 20 mM Na-HEPES-a plus 10 mM EDTA i pH je podešen na 7,4.

Pufer 2 se sastojao od 20 mM Na-HEPES-a plus 0,1 mM EDTA i pH je podešen na 7,4.

Pufer za ispitivanje se sastojao od 50 mM HEPES-a dopunjenog sa 5 mM EGTA, 5 mM MgCl2, 0,005% Tween-a 20 i pH je podešen na 7,4.

Uzgoj ćelija i priprema membrane

Ćelije korišćene u ovom testu (klon FCW467-12A) bile su BHK ćelije sa BHKTS13 kao roditeljskom ćelijskom linijom. Ćelije eksprimuju humani GLP-1 receptor.

Ćelije su rasle na 5% CO2u DMEM, 10% fetalnog telećeg seruma, 1% Pen/Strep (Penicilin/ Streptomicin) i 1,0 mg/ml selekcionog markera G418. Da bi se pripremio membranski preparat, ćelije su rasle do približno 80% konfluencije. Ćelije su isprane dva puta u slanom rastvoru fosfatnog pufera i sakupljene. Ćelije su peletirane korišćenjem kratkog centrifugiranja i ćelijski pelet je držan na ledu. Ćelijski pelet je homogenizovan sa ULTRA-THURRAX disperzivnim instrumentom 20-30 sekundi u pogodnoj količini pufera 1 (npr. 10 ml). Homogenat je centrifugiran 15 min. Pelet je ponovo suspendovan (homogenizovan) u 10 ml pufera 2 i centrifugiran. Ovaj korak je ponovljen još jednom. Dobijeni pelet je ponovo suspendovan u puferu 2 i određena je koncentracija proteina. Membrane su alikvotirane i čuvane na minus 80 ºC.

Procedura

1. Za test vezivanja receptora, 50 µl pufera za ispitivanje je dodato svakom ležištu ploče za ispitivanje.

2. Testirana jedinjenja su serijski razblažena da bi se dobile sledeće koncentracije: 8x10EE-7 M, 8x10EE-8 M, 8x10EE-9 M, 8x10EE-10 M, 8x10EE-11 M, 8x10EE-12 M and 8x10EE-13 M. Dvadeset pet µl je dodato u odgovarajuća ležišta na ploči za ispitivanje.

3. Alikvoti ćelijske membrane su odmrznuti i razblaženi do njihove radne koncentracije. Pedeset µl je dodato svakom ležištu ploče za ispitivanje.

4. WGA SPA kuglice su suspendovane u puferu za ispitivanje na 20 mg/ml. Suspenzija je razblažena do 10 mg/ml u puferu za ispitivanje neposredno pre dodavanja na ploču za ispitivanje. Pedeset µl je dodato svakom ležištu ploče za ispitivanje.

5. Inkubacija je započeta dodavanjem 25 µl 480 pM rastvora [125I]-GLP-1]-(7-36)NH2svakom ležištu ploče za

1

ispitivanje. Alikvot od 25 µl je rezervisan za merenje ukupnog broja/ležišta.

6. Ploča za ispitivanje je inkubirana 2 sata na 30°C.

7. Ploča za ispitivanje je centrifugirana 10 min.

8. Ploča za ispitivanje je očitana u Perkin Elmer TopCount NXT instrumentu.

Proračuni

Podaci iz TopCount instrumenta su prebačeni u GraphPad Prism softver. Softver je prosečno izračunao vrednosti za replikacije i izvršio nelinearnu regresiju. IC50vrednosti su izračunate od strane softvera i prikazane u nM. Podaci su prikazani u Tabeli 6.

(b) Vezivanje receptora glukagona

Svrha ovog testa je bila da se testira in vitro aktivnost receptorskog vezivanja (tj. afinitet) derivata glukagona iz pronalaska. Aktivnost vezivanja receptora je mera afiniteta derivata za receptor humanog glukagona.

Načelo

Receptorsko vezivanje svakog jedinjenja za receptor humanog glukagona je mereno u testu izmeštenog vezivanja. U ovom tipu testa, obeleženi ligand (u ovom slučaju 125I-

2

glukagon) je vezan za receptor. Svaki derivat je dodavan u seriji koncentracija izolovanim membranama koje sadrže receptor humanog glukagona i praćeno je izmeštanje obeleženog liganda. Vezivanje receptora je prijavljeno kao koncentracija u kojoj je polovina obeleženog liganda zamenjena sa receptora, IC50vrednost.

Da bi se testiralo vezivanje derivata za albumin, test se može izvesti u veoma niskoj koncentraciji serumskog albumina (maks. 0,001% konačne koncentracije testa), kao i u prisustvu veće koncentracije serumskog albumina (0,2% konačne koncentracije testa). Povećanje vrednosti IC50u prisustvu serumskog albumina, ukazuje na afinitet prema serumskom albuminu i predstavlja metod za predviđanje produženog farmakokinetičkog profila ispitivane supstance u životinjskim modelima.

Materijali

U analizi su korišćene sledeće hemikalije: DMEM w Glutamax (Gibco 61965-026), Pen/strep (Invitrogen 15140-122), G418 (Invitrogen 10131-027), Versene (Gibco 15040), 1 M Hepes (Gibco 15630), PBS (Invitrogen 14190-094), fetalni teleći serum (Invitrogen 16140-071), MgCl2(Merck 1.05832.1000), EDTA (Invitrogen 15575-038), CaCl2(Sigma, C5080), Tween 20 (Amresco 0850C335), ovalbumin (Sigma A5503), SPA čestice (kuglice pšenične klice (VGA) SPA kuglice, Perkin Elmer RPNQ0001), [125I]-glukagon (proizveden interno), OptiPlateTM-96 (Packard 6005290).

HME pufer se sastojao od 25 mM HEPES-a, 2 mM MgCl2i 1 mM EDTA, i pH je podešen na 7,4. Pufer za ispitivanje se sastojao od 50 mM HEPES-a dopunjenog sa 5 mM MgCl2, 1 mM CaCl2, 0,02% Tween-om 20 i 0,1% Ovalbumina, i pH je podešen na 7,4. Uzgoj ćelija i priprema membrane

Ćelije korišćene u ovom testu (klon BHK hGCGR A3*25) bile su BHK ćelije stabilno transfektovane ekspresionim plazmidom koji sadrži cDNK koja kodira receptor humanog glukagona.

Ćelije su rasle na 5% CO2u DMEM, 10% fetalnog telećeg seruma, 1% Pen/Strep (Penicilina/Streptomicina) i 1,0 mg/ml selekcionog markera G418. Da bi se pripremio membranski preparat, ćelije su rasle do približno 80% konfluencije. Ćelije su isprane dva puta u slanom rastvoru sa fosfatnim puferom i sakupljene. Ćelije su peletirane korišćenjem kratkog centrifugiranja i ćelijski pelet je držan na ledu. Lizovati ćelije dodavanjem približno 5 ml HME pufera, promešati pipetiranjem i zamrznuti u tečnom azotu. Otopiti brzo i dodati HME pufer u 10 ml. Ćelijski pelet je homogenizovan sa ULTRA-THURRAX disperzivnim instrumentom tokom 20-30 sekundi. Homogenat je centrifugiran na 20.000xG, 4°C tokom 10 min. Pelet je resuspendovana (homogenizovana) u 1-2 ml HME puferu.

4

Određena je koncentracija proteina. Membrane su alikvotirane i zamrznute u tečnom azotu i uskladištene na minus 80 ºC.

Procedura

1. Za test vezivanja receptora, 50 µl pufera za ispitivanje je dodato svako m ležištu na ploči za ispitivanje.

3. Alikvoti ćelijske membrane su odmrznuti i razblaženi do njihove radne koncentracije. Pedeset µl je dodato svakom ležištu na ploči za ispitivanje.

4. WGA SPA kuglice su suspendovane u puferu za ispitivanje na 20 mg/ml. Suspenzija je razblažena do 10 mg/ml u puferu za analizu neposredno pre dodavanja na ploču za ispitivanje. Pedeset µl je dodato svakom ležištu na ploči za ispitivanje.

5. Inkubacija je započeta dodavanjem 25 µl 480 pM rastvora [125I]-glukagona u svako ležište ploče za ispitivanje. Alikvot od 25 µl je rezervisan za merenje ukupnog broja/ležišta.

6. Ploča za ispitivanje je inkubirana 2 sata na 25°C.

7. Test ploča je centrifugirana 10 min na 1500 rpm.

8. Testna ploča je očitana u Perkin Elmer TopCount NXT instrumentu.

Proračuni

Podaci iz TopCount instrumenta su prebačeni u GraphPad Prism softver. Softver je izračunao prosečne vrednosti za replikacije i izvršio nelinearnu regresiju. IC50vrednosti su izračunate od strane softvera i prikazane u nM. Podaci su prikazani u Tabeli 6.

Primer 76: Test fibrilacije za Tioflavin T (ThT) za procenu fizičke stabilnosti peptidnih formulacija

Svrha ovog ispitivanja je bila da se proceni fizička stabilnost derivata glukagona iz predmetnog pronalaska u vodenim rastvorima.

Niska fizička stabilnost peptida može dovesti do stvaranja amiloidne fibrile, koja se primećuje kao dobro uređena, makromolekularna strukture nalik na konac u uzorku, što na kraju može dovesti do stvaranja gela. Ovo se tradicionalno meri vizuelnom inspekcijom uzorka. Međutim, ta vrsta merenja je veoma subjektivna i zavisi od posmatrača. Zbog toga je primena indikatorske probe malog molekula mnogo povoljnija. Tioflavin T (ThT) je takva proba i ima jasan potpis fluorescencije kada se veže za fibrile [Naiki et al; Anal. Biochem. 1989 177 244-249; LeVine;

Methods. Enzymol. 1999 309 274-284].

Vremenski tok za formiranje fibrila može se opisati sigmoidnom krivom sa sledećim izrazom [Nielsen et al;

Biochemistry 2001 40 6036-6046]:

Ovde, F je ThT fluorescencija u vremenu t. Konstanta t0je vreme potrebno da se dostigne 50% maksimalne fluorescencije. Dva važna parametra koji opisuju formiranje fibrila su vreme kašnjenja izračunato pomoću

prividna konstantna brzina kapp

Formiranje delimično presavijenog intermedijera peptida je predloženo kao opšti mehanizam inicijacije fibrilacije. Nekoliko tih intermedijera se nukleiraju da bi formirali šablon na kojem mogu da se sklapaju novi intermedijeri i fibrilacija se nastavlja. Vreme kašnjenja odgovara intervalu u kome je izgrađena kritična masa nukleusa i prividna konstanta brzine je brzina kojom se formira sam fibril.

Uzorci su pripremljeni sveže pre svakog ispitivanja. Svaki sastav uzorka opisan je u legendama. PH uzorka je podešen na željenu vrednost pomoću odgovarajućih količina koncentrovanog NaOH i HCl. Tioflavin T je dodat u uzorke iz matičnog rastvora u H2O do konačne koncentracije 1 μM.

Uzorci alikvota od 200 l (250 µM derivata/analoga glukagona u 10 mM HEPES puferu, pH 7,5) stavljeni su na mikrotitarsku ploču sa 96 ležišta (Packard OptiPlate ™-96, beli polistiren). Obično, četiri ili osam replika svakog uzorka (koje odgovaraju jednom uslovu testa) su postavljene u jednu kolonu ležišta. Ploča je zapečaćena sa Scotch Padom (Qiagen).

Inkubacija na datoj temperaturi, mućkanje i merenje ThT fluorescentne emisije je urađeno u Fluoroskan Ascent FL fluorescentnom čitaču ploča (Thermo Labsystems).

Temperatura je podešena na 37°C i ploča je inkubirana sa orbitalnim mućkanjem podešenim na 960 rpm sa amplitudom od 1 mm. Merenje fluorescencije je izvršeno korišćenjem ekscitacije kroz 444 nm filter i merenje emisije kroz 485 nm filter.

Svako izvođenje je započeto inkubacijom ploče na temperaturi testa tokom 10 min. Ploča je merena svakih 20 minuta tokom željenog vremenskog perioda. Između svakog merenja, ploča se mućka i zagreva kako je opisano.

Nakon završetka ThT testa, četiri ili osam replika svakog uzorka su sakupljene i centrifugirane na 20000 rpm tokom 30 minuta na 18°C. Supernatant je filtriran kroz 0,22 µm filter i alikvot je prebačen u HPLC bočicu.

Koncentracija peptida u početnom uzorku i u filtriranom supernatantu je određena HPLC reverznom fazom koristeći odgovarajući standard kao referencu. Procenat frakcija koncentracije filtriranog uzorka sastavljenog od početne koncentracije uzorka je prikazan kao prinos.

Tačke merenja su sačuvane u Majkrosoft Excel formatu za dalju obradu, a crtanje krive i postavljanje je izvršeno pomoću GraphPad Prism-a. Pozadinska emisija iz ThT u odsustvu fibrila bila je zanemarljiva. Tačke podataka su tipično srednja vrednost od četiri ili osam uzoraka.

Skup podataka se može postaviti na Eq. (1). Međutim, vreme zakašnjenja pre fibrilacije može se proceniti vizuelnom inspekcijom krive koja identifikuje vremensku tačku u kojoj se ThT fluorescencija značajno povećava iznad nivoa pozadine. Podaci, kao što je prikazano u Tabeli 6, snažno potvrđuju poboljšanu fizičku stabilnost jedinjenja predmetnog pronalaska.

Primer 77: In vivo test kod miševa čija je gojaznost izazvana ishranom (DIO)

Svrha ovog eksperimenta je da se ispita efekat koagonista glukagona-GLP-1R iz Primera 8 i Primera 12 na telesnu težinu i glukozu u krvi in vivo kod DIO miševa. Liraglutid (humani GLP-1 analog prodavan od strane Novo Nordisk A/S pod markom Victoza™) je uključen za poređenje.

Mužjaci c57bl/6J miševa dobijeni iz Jackson Lab-a (USA) su hranjeni ishranom bogatom mastima (Research Diets D12451, 45% kcal masti) da bi se dobilo približno 50% prekomerne težine u poređenju sa mršavim kontrolnim miševima koji su iste starosti. DIO miševe karakterišu normoglikemija, insulinska rezistencija i gojaznost. DIO miševi sa telesnom težinom od oko 40g su dodeljeni grupama od 8 životinja da bi se dobila uporediva telesna težina i proporcija telesne masti između grupa.

Koagonisti, tj. derivati glukagona, rastvoreni su u 50 mM Na2HPO4, 145 mM NaCl og 0.05% Tween 80, pH 7,4, dok je liraglutid razblažen 6 mg/ml Victoza ™ olovkom u DPBS puferu (Invitrogen) koji sadrži 0,5% serumskog albumina

4

pacova. Životinje koje su tretirane sa nosačem primile su 50 mM Na2HPO4, 145 mM NaCl og 0,05% Tween 80, pH 7,4.

Jedinjenja i nosač su dozirani (1 ml/kg) tokom 5 nedelja s.c. jednom dnevno neposredno pre gašenja svetla. Tokom prve polovine studije, koagonisti su davani u dozi od 5 nmol/kg i tokom druge polovine studije koagonisti su davani u dozi od 10 nmol/kg. Kao poređenje, liraglutid u dozi od 100 nmol/kg, takođe doziran s.c. jednom dnevno, je uključen. Telesna težina je praćena pre doziranja, dnevno tokom perioda doziranja. Nivo glukoze u krvi bez gladovanja je meren na dan početka doziranja i nedeljno tokom perioda doziranja, pre doziranja. Krv za merenje glukoze u krvi je uzeta iz kapilara na vrhu repa i glukoza u krvi je merena korišćenjem analizatora glukoze (Biosen 5040) na bazi metode glukozne oksidaze.

Smanjenje telesne težine/telesna težina na kraju 5-nedeljnog perioda lečenja i površine ispod krive glukoze u krvi tokom petonedeljnog perioda tretmana date su u tabelama u daljem tekstu.

Tabela 1

Normalizzovana telesna težina nakon 5 nedelja tretmana

41

* p <0,05; ** p <0.001 vs nosač, Jednosmerna ANOVA, Bonferoni post-hoc test

Tabela 2

Oblast ispod krive glukoze u krvi merene tokom trajanja 5-nedeljnog tretmana

42

***p <0,001 vs nosač, Jednosmerna ANOVA, Bonferoni post-hoc test

Rezultati u tabelama 1 i 2 pokazuju da su derivati koagonista glukagona-GLP-1R prema pronalasku biološki aktivni in vivo, sa efektivnim snižavanjem telesne težine, koje kod jedinjenja iz primera 12 ima tendenciju da bude superiornije od samog liraglutida, dok glukoza u krvi ostaje poboljšana u poređenju sa životinjama koje su tretirane nosačem i uporedno sa životinjama koje su tretirane liraglutidom.

Primer 78: Farmakokinetički profil kod miševa

Svrha ovog ispitivanja je bila da se procene farmakokinetički profili derivata glukagona iz predmetnog pronalaska kod miševa.

Farmakokinetički profil koagonista glukagona-GLP1 je testiran na normalnim mužjacima c57/BL6 miševa (približno telesne težine: 30 grama), u dizajnu sa retkim uzorkom sa, na primer, 3 miša predstavljena u svakoj vremenskoj tački (na primer: t= 0,25, 0,5, 1, 3, 6, 10, 24, 30 i 48 sati). Jedinjenje je dozirano kao pojedinačna supkutana doza od 10 nmol/kg pri t=0.

Nivoi plazme koagonista glukagona-GLP1 jedinjenja su određeni korišćenjem ELISA/LOCI testa (vidi ovde Primer

4

80). Farmakokinetički proračuni kao što je maksimalna koncentracija (Cmaks) poluživota (T1⁄2) i vreme maksimalne koncentracije (Tmaks) jedinjenja su određeni korišćenjem softvera za PC, Phoenix (WinNonLin verzija 6,3 od Pharsight, Certara).

Rezultati su snažno potvrdili produženi efekat koagonista glukagona-GLP1 iz predmetnog pronalaska.

Tabela 3

Srednja vrednost poluživota (T1⁄2), maksimum koncentracije (Cmaks) i vreme za maksimum koncentracije (Tmaks)

Primer 79: Procena hemijske stabilnosti

Svrha ovog testa je da se proceni hemijska stabilnost derivata glukagona iz predmetnog pronalaska u vodenim rastvorima.

Hemijska stabilnost derivata ili analoga glukagona ispitivana je RP-UPLC separacijom i UV detekcijom.

44

Liofilizirani uzorci su rastvoreni u 8 mM fosfatnom puferu pH 8,6, praćeno podešavanjem na pH 7,3 uz upotrebu HCl do konačne koncentracije od 333 µM. Uzorci su inkubirani 14 dana na 5°C i 37°C nakon čega sledi RP-UPLC analiza.

Čistoća je definisana kao procenat površine glavnog vrha u odnosu na ukupnu površinu svih integrisanih vrhova na svakom hromatogramu. Gubitak čistoće nakon 14 dana na 37°C je određen kao razlika u čistoći između uzoraka inkubiranih na 5°C i 37°C, podeljenih sa čistoćom uzorka nakon inkubacije tokom 14 dana na 5°C.

RP-UPLC analiza je izvedena korišćenjem Waters BEH130 2,1 mm x 150 mm, 1,7 µm koja je radila na 50°C i pri brzini protoka od 0,4 mL/min korišćenjem sistema mobilne faze koji se sastoji od A: 0.05% TFA u MQ-vodi B: 0,05% TFA u acetonitrilu. UV-detekcija je sprovedena na 215 nm.

Uobičajeni gradijentni profil korišćen za većinu uzoraja je prikazan u daljem tekstu.

Tabela 4

Uobičajeni gradijentni profil korišćen za RP-UPLC analizu

4

Za neke pojedinačne derivate ili analoge koji se eluiraju pri bitno različitim vremenima zadržavanja u poređenju sa većinom derivata ili analoga, napravljena su određena prilagođavanja profila gradijenta kako bi se bolje omogućilo poređenje čistoće u uzorcima. Podaci su potvrdili poboljšanu hemijsku stabilnost derivata glukagona iz pronalaska.

Tabela 5

Hemijska stabilnost koagonista GLP-1/glucagonskih receptora Prikazani podaci su gubitak čistoće nakon 14 dana na 37°C u procentima (%)

4

Primer 80: ELISA/LOCI test za određivanje peptida u krvnoj plazmi

Svrha ovog testa je bila da se odredi sadržaj koagonista GLP-1/glukagonskog receptora u krvnoj plazmi.

Uzorci su analizirani na nivoe peptita pomoću imunotesta Luminescence Oksygen Channeling Immunoassay (LOCI). Kuglice donora su obložene sa streptavidinom.

Akceptorske kuglice su konjugirane sa monoklonskim antitelom specifičnim za gGlu u linkeru (NN454-1F31) dok je drugo monoklonsko antitelo (1F120) specifično za glukagon biotinilovano. Tri reaktanta su kombinovana sa analitom i

4

formirana su dvostruki imunokompleks. Osvetljenjem kompleksa oslobođeni su pojedinačni atomi kiseonika iz kuglica donora. Oni su kanalisani u akceptorske kuglice i izazvali hemiluminescenciju koja je merena u EnVision čitaču ploča. Količina emitovane svetlosti je proporcionalna koncentraciji peptida.

Jedan μL uzorka/kalibratora/kontrole je primenjen na ležišta LOCI ploča sa 384 ležišta praćeno sa 15 μL smeše akceptorskih kuglica obloženih antitelima (0,5 μg/ležištu) i biotinilovanog antitela. Ploče su inkubirane preko noći na 21-22°C. Nakon inkubacije, 30 µL donorskih zrnaca obloženih streptavidinom (2 µg/ležištu) je dodato u svako ležište i inkubirano 30 minuta na 21-22 ºC. Ploče su očitavane u Envision čitaču ploča na 21-22 ºC sa filterom koji ima propusni opseg od 520-645 nm nakon ekscitacije pomoću 680 nm lasera. Ukupno vreme merenja po ležištu bilo je 210 ms, uključujući vreme ekscitacije od 70 ms.

Sledeća tabela prikazuje podatke o derivatima glukagona iz pronalaska dobijenim kako je opisano u gorenavedenim primerima.

Tabela 6

EC50(test ovde opisan u Primeru 74) i IC50(ovde opisan u Primeru 75) vrednosti za koagoniste GLP-1/glucagonskog

4

receptora i podaci o fizičkoj stabilnosti (ovde opisan u Primeru 76)

1

Stoga, podrazumeva se da priloženi patentni zahtevi

2

obuhvataju sve takve modifikacije i promene kao i da one spadaju u suštinski smisao pronalaska.

4

1

2

4

Claims

PATENTNI ZAHTEVI 1. Derivat glukagona koji sadrži sekvencu aminokiseline Formule I (koja odgovara SEQ ID NO:4 i SEQ ID NO:5): His-X2-X3-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-Tyr-Leu-X15-X16-X17-X18-Ala-X20-X21-Phe-Val-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30 [I], naznačen time što, X2predstavlja Aib, Acb ili Acpr; X3predstavlja Gln ili His; X10predstavlja Leu; X12predstavlja Lys ili Arg; X15predstavlja Asp ili Glu; X16predstavlja Ser, Ala, Leu, Thr, Glu, Aib, Ile, Val ili Lys; X17predstavlja Arg ili Lys; X18predstavlja Arg, Ala ili Lys; X20predstavlja Gln, Arg, Glu, Aib ili Lys; X21predstavlja Asp, Glu, Ser, ili Lys; X24predstavlja Gln, Ala, Arg, Glu, Aib ili Lys; X27predstavlja Met, Leu ili Val; X28predstavlja Asn, Ser, Thr, Gln, Ala, Gly, Glu ili Lys; X29predstavlja Thr,Gly, Ser, Gln, Ala, Glu ili Lys; X30predstavlja Lys, ili X30je odsutan; čija sekvenca amino-kiseline sadrži lizinski ostatak na jednoj ili više pozicija 12, 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29, i/ili 30; i i što derivat glukagona sadrži supstituent koji sadrži lipofilnu grupu i najmanje tri negativno naelektrisane grupe, naznačen time što je jedna od negativno naelektrisanih grupa distalno od lipofilnog dela, i time što supstituent je vezan za epsilon poziciju ostatka lizina na jednoj od aminokiselinskih pozicija 16, 17, 18, 20, 21, 24, 28, 29, ili 30; i što je dati derivat glukagona C-terminalni amid; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so ili prolek.
2. Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što derivat glukagona je agonist receptora glukagona i agonist GLP-1 receptora.
3. Derivat glukagona prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačen time što supstituent ima Formulu II: Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10- [II] i što Z1predstavlja strukturu prema Formuli IIa; O O [IIa] H O<(>) n* 25 1 I što n u Formuli IIa je 6-20, i simbol * predstavlja tačku vezivanja azota za susednu grupu i naznačen time što Z2, Z3, Z4, Z5, Z6, Z7, Z8, Z9, Z10su pojedinačno predstavljeni sledećim amino-kiselinama: Glu, γGlu, Gly, Ser, Ala, Thr, Ado ili je odsutan, i što su najmanje dva ostatka Z2do Z10prisutna, i što je supstituent vezan za epsilon poziciju Lys-a Formule I i naznačen time što Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10zajedno sadrže najmanje tri negativna naelektrisanja.
4. Derivat glukagona prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačen time što derivat glukagona sadrži 3-15 modifikacija ostataka amino-kiselina, kao što su supstitucije ili dodaci, u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1).
5. Derivat glukagona prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačen time što supstituent predstavlja strukturu prema bilo kojoj od sledećih devet formula (Hem.A - Hem.I), naznačenu time što * označava tačku vezivanja atoma azota za epsilon poziciju Lys ostatka Formule I: 2

(Hem.D);

4 (Hem.H); i

(Hem.I).
6. Derivat glukagona prema bilo kom od prethodnih zahteva izabran iz grupe koja se sastoji od: N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28]-Glukagon amid

; N<ε21>-(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17 karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28]-Glukagon amid

; N<ε24>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28]-Glukagon amid

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17 karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

; N<α>-([Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28]-Glukagonil)-N{Epsilon}[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]Lys amid

; N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

; 1 N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

; 2 N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27]-Glukagon amid

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]-Glukagon amid 4

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid

N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]-acetil]amino]etoksi] etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21, Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]-Glukagon amid

; N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil] amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29]-Glukagon amid

; N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi] acetil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27]-Glukagon amid

N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27, Lys28]-Glukagon amid 1

; N<ε16>-[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27,Ser28]-Glukagon amid

; 2 N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,His3,Leu10,Glu15, Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid 4

; N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,His3,Leu10,Glu15, Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid 4

; N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] acetil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17, Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami 4 1 no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; 4 2 N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

4 N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

4 4 N<ε28>-[2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino] butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]acetil]-[Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

4 N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

4 N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino ]butanoil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid 4

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino] etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butan oil]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu 4 tanoil]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu 4 tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε29>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17 karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid

; i N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]butanoil]-[Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid
7. Derivat glukagona prema bilo kom od prethodnih zahteva, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid:
8. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]- 41 [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid:
9. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]etoksi]etoksi]ace til]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]amino]butanoi l]-[Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glucagon amide:
10. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoi l]amino]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid:
11. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]bu tanoil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]aceti l]-[Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid: 41
12. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]-Glukagon amid
41 13. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[2-[2-[2-[[2-[2-[2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil]amino]et oksi] etoksi]acetil]amino]etoksi]etoksi]acetil]amino]butanoil]ami no]butanoil]-[Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid
14. :Derivat glukagona prema zahtevu 1, naznačen time što je derivat glukagona N<ε28>-[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(2S)-2-[[(2S)-4-karboksi-2-[[(2S)-2-[[(4S)-4-karboksi-4-[[(4S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino)butanoil]amino]butanoil] amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil]amino]-3-hidroksipropanoil]amino]butanoil] amino]butanoil]- 41 [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28]-Glukagon amid
15. Intermedijarni proizvod u obliku peptida glukagona koji sadrži C-terminalni amid i bilo koju od sledećih modifikacija u poređenju sa glukagonom (SEQ ID NO: 1): a) [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Leu27,Ser28]; b) [Aib2,Leu10,Arg20,Lys21,Leu27,Ser28]; c) [Aib2,Leu10,Arg20,Lys24,Leu27,Ser28]; d) [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Lys28]; e) [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; f) [Aib2,Leu10,Arg20,Leu27,Ser28]; g) [Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Glu21,Leu27]; h) [Aib2,Leu10,Lys17,Ala18,Glu21,Leu27,Lys29]; i) [Aib2,Leu10,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; j) [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Leu27]; k) [Aib2,Leu10,Thr16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]; l) [Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; 41 m) Aib2,Leu10,Glu16,Lys20,Leu27,Ser28,Lys29]; n) [Aib2,Leu10,Lys16,Glu20,Leu27,Ser28,Lys29]; o) [Aib2,Leu10,Thr16,Arg24,Leu27,Ser28,Lys29]; p) [Acb2,Leu10,Glu15,Glu16,Arg20,Leu27,Lys28]; q) [Aib2,Leu10,Lys16,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24, Leu27]; r) [Aib2,Leu10,Lys16,Ala18,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27] ; s) [Aib2,Leu10,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27]; t) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; u) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; v) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; w) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; x) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Ala18,Arg20,Glu21,Leu27, Lys28]; y) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; z) [Aib2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; æ) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,L ys28]; ø) [Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Val27,Lys28,Gly29]; å) [Aib2,Leu10,Lys16,Glu21,Leu27]; aa) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; 41 ee) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Ala24,Leu27,L ys28]; cc) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys16,Arg20,Glu21,Ala24,L eu27,Ser28]; dd) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ee) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,L ys28]; ii) [Acb2,His3,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]; gg) [Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] kk) [Aib2,His3,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]; ii) [Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; jj) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; kk) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys29]; ll) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; mm) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; nn) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; oo) [Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; pp) [Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]; qq) [Acb2,Leu10,Arg12,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]; rr) [Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; ss) [Acb2,Leu10,Leu16,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; tt) [Acb2,Leu10,Leu16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; uu) [Acpr2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; 42 vv) [Aib2,Leu10,Aib16,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ww) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; xx) [Aib2,Leu10,Leu16,Leu27,Lys28]; yy) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; zz) [Aib2,Leu10,Leu16,Arg20,Leu27,Lys28]; ææ) [Aib2,Leu10,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; øø) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Leu27,Lys28]; åå) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]; aaa) [Acb2.Leu10.Arg12.Glu15.Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; bbb) [Aib2.Leu10.Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ccc) [Acb2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; ddd) [Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Arg20,Leu27,Lys28]; eee) [Acb2,Leu10,Glu15,Leu27,Lys28]; fff) [Aib2,Leu10,Arg12,Ala16,Leu27,Lys28]; ggg) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Lys29]; hhh) [Aib2,Leu10,Ala16,Arg20,Leu27,Ser28,Lys29]; iii) [Aib2,Leu10,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28]; jjj) [Aib2,Leu10,Arg12,Glu15,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; kkk) [Acb2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Glu21,Leu27,Lys28] ; ili lll) [Aib2,Leu10,Glu15,Lys17,Arg20,Ser21,Leu27,Lys28] ; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, amid ili estar.
16. Derivat glukagona prema bilo kom od zahteva 1-14, u kombinaciji sa jedinjenjem GLP-1 ili sa insulinskim jedinjenjem.
17. Derivat glukagona prema zahtevu 16, naznačen time što je jedinjenje GLP-1 izabrano iz grupe koja se sastoji od: N-epsilon26-((S)-4-Karboksi-4-heksadekanoilaminobutiril)[Arg34]GLP-1-(7-37)

(Jedinjenje G1); i N-epsilon26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-karboksi-4-(17-karboksiheptadekanoilamino) butirilamino]etoksi}etoksi)acetilamino] etoksi}etoksi)acetil][Aib8,Arg34]GLP-1(7-37):

(Je dinjenje G3); i njihovih farmaceut ski pri hvatljiv ih soli, amida , alk ila i estara.
18. Derivat glukagon a prema zahtevu 16 ili 17, naz načen time što je insulinsko jedinjen je: N-ep silon-B 29-[(S )-4-Karb oksi-4- (15-kar boksipen tadekan oilamino )butiri l] des B30 humani insu lin

(Jedinje nje G5).
19. Farmaceu tska kompozicij a koja sadrži derivat glu kagona kako je definic ano u jednom od zahteva 1-14 ili 16- 18 i opciono jedan ili više farmaceut ski prih vatljiv ih eks cipijena ta. 42
20. Derivat glukagona kako je definisan u bilo kom of zahteva 1-14, opciono u kombinaciji sa jednim ili više terapeutski aktivnih jedinjenja za upotrebu u medicini.
21. Derivat glukagona prema zahtevu 20, za upotrebu u lečenju gojaznosti i/ili smanjenju telesne težine.
22. Derivat glukagona prema zahtevu 20, za upotrebu u prevenciji hiperglikemije, dijabetesa tipa 2, intolerancije na glukozu i/ili dijabetesa tipa 1.
23. Upotreba derivata glukagona prema zahtevu 20 u prevenciji prekomerne težine i/ili kao neterapeutski pokazatelj za smanjenje telesne težine. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5