KR20130109016A - 미분된 이산화규소로의 처리에 의한 세린 프로테아제의 제거 - Google Patents
미분된 이산화규소로의 처리에 의한 세린 프로테아제의 제거 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20130109016A KR20130109016A KR1020127033759A KR20127033759A KR20130109016A KR 20130109016 A KR20130109016 A KR 20130109016A KR 1020127033759 A KR1020127033759 A KR 1020127033759A KR 20127033759 A KR20127033759 A KR 20127033759A KR 20130109016 A KR20130109016 A KR 20130109016A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- var
- serine protease
- sio
- composition
- factor
- Prior art date
Links
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 title claims abstract description 701
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 title claims abstract description 701
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 271
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 title claims description 108
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 title claims description 105
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title claims description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 598
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 439
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 307
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 305
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 94
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 16
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 claims description 410
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 claims description 341
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 claims description 336
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 191
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 163
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 139
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 claims description 134
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 79
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 claims description 57
- 108010080805 Factor XIa Proteins 0.000 claims description 56
- 108010074864 Factor XI Proteins 0.000 claims description 55
- 108010080865 Factor XII Proteins 0.000 claims description 54
- 102000000429 Factor XII Human genes 0.000 claims description 53
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 49
- 239000012539 chromatography resin Substances 0.000 claims description 47
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 46
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 43
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 42
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 39
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 39
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 38
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 38
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 36
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 36
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 34
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 34
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 32
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 32
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 claims description 31
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 claims description 31
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 31
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 31
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims description 31
- 230000006920 protein precipitation Effects 0.000 claims description 28
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 claims description 25
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 25
- 108010093564 inter-alpha-inhibitor Proteins 0.000 claims description 25
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 23
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 22
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 20
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 17
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 claims description 16
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 claims description 16
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 16
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 15
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 13
- 230000004154 complement system Effects 0.000 claims description 13
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 12
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 10
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims description 10
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 10
- 108010053652 Butyrylcholinesterase Proteins 0.000 claims description 9
- 102000021944 Butyrylcholinesterase Human genes 0.000 claims description 9
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 claims description 9
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 9
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 claims description 9
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 claims description 9
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 8
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 8
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 7
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 7
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 claims description 7
- 239000003729 cation exchange resin Substances 0.000 claims description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 6
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 4
- 101710137943 Complement control protein C3 Proteins 0.000 claims description 4
- 108090000059 Complement factor D Proteins 0.000 claims description 4
- 102000003706 Complement factor D Human genes 0.000 claims description 4
- 101710132632 Protein C4 Proteins 0.000 claims description 4
- 101710136899 Replication enhancer protein Proteins 0.000 claims description 4
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 4
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 4
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 288
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 207
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 178
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 101
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 72
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 43
- 229910021485 fumed silica Inorganic materials 0.000 description 37
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 32
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 32
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 28
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 23
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 21
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 19
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 18
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 16
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 16
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 16
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 15
- 239000012065 filter cake Substances 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 13
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 12
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 9
- 239000012471 diafiltration solution Substances 0.000 description 9
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 9
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 9
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 9
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 8
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 8
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 8
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 8
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 8
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 7
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 7
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 7
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 7
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 7
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 7
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 7
- 208000035913 Atypical hemolytic uremic syndrome Diseases 0.000 description 6
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 6
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 6
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 6
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 6
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 6
- 229940009600 gammagard Drugs 0.000 description 6
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 6
- 229940013982 octagam Drugs 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 6
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 6
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 6
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 5
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 5
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 5
- 101800001691 Inter-alpha-trypsin inhibitor light chain Proteins 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 5
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 102100032859 Protein AMBP Human genes 0.000 description 5
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 5
- 230000009969 flowable effect Effects 0.000 description 5
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 5
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 5
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 229940045641 monobasic sodium phosphate Drugs 0.000 description 5
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 5
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 5
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 description 4
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 4
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 4
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 4
- 239000012538 diafiltration buffer Substances 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 4
- 201000008171 proliferative glomerulonephritis Diseases 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 4
- 238000002305 strong-anion-exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910002018 Aerosil® 300 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910002019 Aerosil® 380 Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 3
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 3
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 3
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100035432 Complement factor H Human genes 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108050001049 Extracellular proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 3
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 3
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 3
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 3
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 3
- 229960000182 blood factors Drugs 0.000 description 3
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 3
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 3
- HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N octyl beta-D-glucopyranoside Chemical compound CCCCCCCCO[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O HEGSGKPQLMEBJL-RKQHYHRCSA-N 0.000 description 3
- 238000010979 pH adjustment Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 3
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 3
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 3
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- YFSUTJLHUFNCNZ-UHFFFAOYSA-M 1,1,2,2,3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-heptadecafluorooctane-1-sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F YFSUTJLHUFNCNZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229910002016 Aerosil® 200 Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 101150030967 CFH gene Proteins 0.000 description 2
- 108700017374 Complement Factor H Deficiency Proteins 0.000 description 2
- 101710184994 Complement control protein Proteins 0.000 description 2
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 2
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 description 2
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 2
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 2
- 208000032759 Hemolytic-Uremic Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 101000609406 Homo sapiens Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3 Proteins 0.000 description 2
- 101000609413 Homo sapiens Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 Proteins 0.000 description 2
- 101000797623 Homo sapiens Protein AMBP Proteins 0.000 description 2
- 208000010159 IgA glomerulonephritis Diseases 0.000 description 2
- 206010021263 IgA nephropathy Diseases 0.000 description 2
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 2
- 102100039457 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 Human genes 0.000 description 2
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 2
- 108090000113 Plasma Kallikrein Proteins 0.000 description 2
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 2
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 2
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 2
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 2
- 229960003872 benzethonium Drugs 0.000 description 2
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- -1 carboxylate anion Chemical class 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 229960001927 cetylpyridinium chloride Drugs 0.000 description 2
- YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M cetylpyridinium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+]1=CC=CC=C1 YMKDRGPMQRFJGP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- WOQQAWHSKSSAGF-WXFJLFHKSA-N decyl beta-D-maltopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OCCCCCCCCCC)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 WOQQAWHSKSSAGF-WXFJLFHKSA-N 0.000 description 2
- 238000000280 densification Methods 0.000 description 2
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N nonanoic acid Chemical compound CCCCCCCCC(O)=O FBUKVWPVBMHYJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 2
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 229940024790 prothrombin complex concentrate Drugs 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 150000003355 serines Chemical class 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 2
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000013621 viresolve pro solution Substances 0.000 description 2
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 2
- ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N (9Z)-octadecen-1-ol Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCO ALSTYHKOOCGGFT-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 1-benzothiophene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2SC(C(=O)N)=CC2=C1 GYSCBCSGKXNZRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AWQSAIIDOMEEOD-UHFFFAOYSA-N 5,5-Dimethyl-4-(3-oxobutyl)dihydro-2(3H)-furanone Chemical compound CC(=O)CCC1CC(=O)OC1(C)C AWQSAIIDOMEEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002014 Aerosil® 130 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002015 Aerosil® 150 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002013 Aerosil® 90 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002020 Aerosil® OX 50 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002021 Aerosil® TT 600 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000004881 Angiotensinogen Human genes 0.000 description 1
- 108090001067 Angiotensinogen Proteins 0.000 description 1
- 208000002267 Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 201000010717 Bruton-type agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 1
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 1
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100030563 Coagulation factor XI Human genes 0.000 description 1
- 108010032597 Cohn fraction II Proteins 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102220580139 Complement factor H_C1043R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580109 Complement factor H_C1163W_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593375 Complement factor H_C630W_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593359 Complement factor H_C673S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593354 Complement factor H_C673Y_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593331 Complement factor H_C915S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580098 Complement factor H_D1119G_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580055 Complement factor H_E1198A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593356 Complement factor H_E850K_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580058 Complement factor H_F1199S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580130 Complement factor H_G1194D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593333 Complement factor H_H893R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593290 Complement factor H_N997T_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580071 Complement factor H_P1226S_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220592797 Complement factor H_Q400K_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580061 Complement factor H_R1215Q_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593374 Complement factor H_R567G_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220592819 Complement factor H_R78G_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580126 Complement factor H_T1184R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220592793 Complement factor H_T493R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593288 Complement factor H_V1007I_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580099 Complement factor H_V1134G_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580120 Complement factor H_W1157R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580077 Complement factor H_W1183L_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580127 Complement factor H_W1183R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593292 Complement factor H_W978C_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580141 Complement factor H_Y1021F_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220580100 Complement factor H_Y1142D_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220592822 Complement factor H_Y402H_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102220593298 Complement factor H_Y951H_mutation Human genes 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N Decanoic acid Natural products CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108010029144 Factor IIa Proteins 0.000 description 1
- 108010000196 Factor XIIIa Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101150072436 H1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150008307 H2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 description 1
- 102000013271 Hemopexin Human genes 0.000 description 1
- 108010026027 Hemopexin Proteins 0.000 description 1
- 101000976697 Homo sapiens Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1 Proteins 0.000 description 1
- 101000609396 Homo sapiens Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2 Proteins 0.000 description 1
- 102100023490 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039440 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039460 Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H3 Human genes 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- 208000031951 Primary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M Propionate Chemical compound CCC([O-])=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 206010054979 Secondary immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- 102000009488 Thyroxine-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048889 Thyroxine-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 206010046851 Uveitis Diseases 0.000 description 1
- 102000050760 Vitamin D-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 101710179590 Vitamin D-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 208000016349 X-linked agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 208000002223 abdominal aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N acetic acid trimethyl ester Natural products COC(C)=O KXKVLQRXCPHEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 150000004996 alkyl benzenes Chemical class 0.000 description 1
- 125000005211 alkyl trimethyl ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N ammonium lauryl sulfate Chemical compound [NH4+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O BTBJBAZGXNKLQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940063953 ammonium lauryl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 description 1
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 description 1
- 208000007474 aortic aneurysm Diseases 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229910052785 arsenic Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 208000009964 basal laminar drusen Diseases 0.000 description 1
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003130 blood coagulation factor inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000008364 bulk solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 229940023913 cation exchange resins Drugs 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 239000000701 coagulant Substances 0.000 description 1
- 230000006448 coagulant property Effects 0.000 description 1
- MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N cocamidopropyl betaine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)NCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O MRUAUOIMASANKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073507 cocamidopropyl betaine Drugs 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 201000008560 complement component 3 deficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001010 compromised effect Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- SMVRDGHCVNAOIN-UHFFFAOYSA-L disodium;1-dodecoxydodecane;sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O.CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC SMVRDGHCVNAOIN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N dodecyldimethylamine N-oxide Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)[O-] SYELZBGXAIXKHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000020764 fibrinolysis Effects 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 208000013210 hematogenous Diseases 0.000 description 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 1
- MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N heptanoic acid Chemical compound CCCCCCC(O)=O MNWFXJYAOYHMED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002011 hydrophilic fumed silica Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002706 hydrostatic effect Effects 0.000 description 1
- XJFQCYIFOWHHFN-PLKCGDGVSA-N hypertensinogen Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 XJFQCYIFOWHHFN-PLKCGDGVSA-N 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000013462 industrial intermediate Substances 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011344 liquid material Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 150000004668 long chain fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028417 myasthenia gravis Diseases 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical compound CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N octaethyleneglycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCOCCO YYELLDKEOUKVIQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940055577 oleyl alcohol Drugs 0.000 description 1
- XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N oleyl alcohol Natural products CCCCCCC=CCCCCCCCCCCO XMLQWXUVTXCDDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- SNGREZUHAYWORS-UHFFFAOYSA-N perfluorooctanoic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F SNGREZUHAYWORS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000001470 plasma protein fractionation Methods 0.000 description 1
- 229920001987 poloxamine Polymers 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 102200031812 rs1065489 Human genes 0.000 description 1
- 102200031964 rs11539862 Human genes 0.000 description 1
- 102200031708 rs121913051 Human genes 0.000 description 1
- 102200031822 rs121913052 Human genes 0.000 description 1
- 102200031961 rs121913053 Human genes 0.000 description 1
- 102200031972 rs121913055 Human genes 0.000 description 1
- 102200031829 rs121913056 Human genes 0.000 description 1
- 102200031795 rs121913058 Human genes 0.000 description 1
- 102200031710 rs121913059 Human genes 0.000 description 1
- 102200031950 rs121913062 Human genes 0.000 description 1
- 102200031959 rs145975787 Human genes 0.000 description 1
- 102200031815 rs149474608 Human genes 0.000 description 1
- 102200031954 rs15809 Human genes 0.000 description 1
- 102200031957 rs34362004 Human genes 0.000 description 1
- 102200031949 rs35274867 Human genes 0.000 description 1
- 102200031948 rs35343172 Human genes 0.000 description 1
- 102200031825 rs35453854 Human genes 0.000 description 1
- 102200031973 rs460184 Human genes 0.000 description 1
- 102200031971 rs460897 Human genes 0.000 description 1
- 102200031821 rs515299 Human genes 0.000 description 1
- 102200031965 rs534399 Human genes 0.000 description 1
- 102200031793 rs800292 Human genes 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 229940057950 sodium laureth sulfate Drugs 0.000 description 1
- SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M sodium;2-[2-(2-dodecoxyethoxy)ethoxy]ethyl sulfate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOS([O-])(=O)=O SXHLENDCVBIJFO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000012437 strong cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M sulfonate Chemical compound [O-]S(=O)=O BDHFUVZGWQCTTF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 238000010977 unit operation Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 1
- 239000002888 zwitterionic surfactant Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/55—Protease inhibitors
- A61K38/57—Protease inhibitors from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39516—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum from serum, plasma
- A61K39/39525—Purification
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
- A61K9/0026—Blood substitute; Oxygen transporting formulations; Plasma extender
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/02—Ophthalmic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
- B01D15/12—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the preparation of the feed
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/362—Cation-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/363—Anion-exchange
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
- B01D15/424—Elution mode
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
- B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
- B01J20/02—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material
- B01J20/10—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising inorganic material comprising silica or silicate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/36—Extraction; Separation; Purification by a combination of two or more processes of different types
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/34—Extraction; Separation; Purification by filtration, ultrafiltration or reverse osmosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Virology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
Abstract
본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물의 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 새로운 방법을 제공한다. 또한 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태 중에서, 본 발명은 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 혈장 유래 단백질의 수성 및 동결건조된 조성물을 제공한다. 또 다른 양태는 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물의 투여를 포함하는, 질환을 치료, 관리 및/또는 예방하는 방법을 포함한다.
Description
본 출원은 2010년 5월 26일자로 출원되고 오스트레일리아 특허 제2010202125호로 공고된 오스트레일리아 특허 출원 제2010202125호, 2010년 5월 27일자로 출원된 미국 특허 출원 일련번호 제12/789,365호, 및 2010년 7월 23일자로 출원된 미국 특허 출원 일련번호 제12/842,944호에 대한 우선권을 주장하며, 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
혈장 유래 혈액 제제는 다양한 혈액 장애뿐만 아니라 기타 다른 기원의 질환을 치료하는데 사용된다. 예를 들어, 인간 혈장으로부터의 면역 글로불린(IgG) 생성물은 면역 결핍증을 치료하는데 1952년에 처음 사용되었다. 그 이후로, IgG 제조물은 적어도 3가지 의학적 병태의 주요 카테고리에서 광범위한 용도가 발견되었다: (1) 낮은 항체 수준을 특징으로 하는 면역 결핍증, 예를 들어 X-연관 무감마글로불린혈증, 저감마글로부민혈증(1차 면역 결핍증), 및 후천적 면역 저하 병태(acquired compromised immunity condition)(2차 면역 결핍증); (2) 염증 및 자가면역 질환; 및 (3) 급성 감염증.
마찬가지로, 인자 H는 여러 가지 인간 질환 상태, 예를 들어 노인황반변성(AMD), 용혈성요독증후군(aHUS) 및 막증식성사구체신염(MPGN)에 대한 잠재적인 치료제로서 관련되었음을 나타내어 왔다. 구체적으로, 인자 H의 보체 제어 단백질(CCP) 모듈 7에서 단일 염기 다형성(SNP)과 노인황반변성(AMD) 사이의 인과관계가 특징지어졌다.
연구는 여러 가지 패혈증이 있는 환자에서 인터-알파-억제제 단백질(IaIp)의 혈장 수준의 감소와 사망률 사이의 상관관계를 나타내었다(문헌[Lim et al., J Infect Dis. (2003) Sep 15;188(6):919-26] 및 [Opal et al., Crit Care Med. (2007) Feb;35(2):387-92]). 게다가, 여러 가지 연구는, IaIp의 투여가 패혈증 및 패혈성 쇼크와 연관된 사망률을 감소시킴을 나타내었다(문헌[Jourdain et al., Am J Respir Crit Care Med. (1997) Dec;156(6):1825-33]; [Yang et al., Crit Care Med. (2002) Mar;30(3):617-22]; [Lim et al., J Infect Dis. (2003) Sep 15;188(6):919-26]; 및 [Wu et al., Crit Care Med. (2004) Aug;32(8):1747-52]; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨).
혈장 유래 생물학적 치료제를 제조 및 제형화할 때 다양한 안전 예방책이 고려되어야 한다. 이는 수혈받은 혈장의 사용에 의해 발생하는 혈행성 병원체(예컨대, 바이러스 및 박테리아 병원체), 항보체 활성, 및 다른 원치않는 오염 물질을 제거 및/또는 불활성화하는 방법을 포함한다. 연구는, 높은 수준의 아마이드 분해(amidolytic) 활성의 투여가 원치않는 혈전 색전증 사건을 초래할 수 있음을 시사하였다(문헌[Wolberg AS et al ., Coagulation factor XI is a contaminant in intravenous immunoglobulin preparations. Am J Hematol 2000;65:30-34]; 및 [Alving BM et al., Contact-activated factors: contaminants of immunoglobulins preparations with coagulant and vasoactive properties. J Lab Clin Med 1980; 96:334-346]; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). 이러한 관심의 강조로, 혈전 색전증 사건의 보고가 증가된 후 최근 미국에서 octagam(등록상표)(Octapharma)의 자발적인 철수, 및 유럽연합 집행위원회에 의한 octagam(등록상표) 및 octagam 10%에 대한 마케팅 허가의 유예가 있었다. 혈전 색전증 사건의 증가는 생물학적으로 아마이드 분해 활성의 높은 수준에 의해 야기되고, 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐 불순물, 예를 들어 인자 XI, 인자 XIa, 인자 XII 및 인자 XIIa(FDA 공고: 자발적 시장 철수 - 2010년 9월 23일 Octagam [면역 글로불린 정맥주사용(인간)] 5% 액체 제조물; Octagam 50㎎/㎖, 관류용 용액 - Octapharma 프랑스 - 모든 항목을 검역함(Mise en quarantaine de tous les lots), AFSSAPS에 의해 2010년 9월 9일 온라인으로 공표됨; Octagam(인간 정상 면역글로불린 5% 및 10%)에 대한 마케팅 허가의 유예에 대한 질의응답, 유럽의약청에 의해 2010년 9월 23일 온라인으로 공표됨)에 의해 야기될 가능성이 있다.
일반적으로 응고 인자로서 알려진 전용 세린 프로테아제는 응고 연쇄반응의접촉 활성화 및 조직 인자 경로 모두의 필수적인 성분이다. 응고 경로의 자극시, 불활성 상태의 효소 전구체인 세린 프로테아제 지모겐은 다음 프로테아제 지모겐의 활성화를 촉진시키는 활성화된 프로테아제가 되고, 연쇄반응을 활성화시킨다. 이러한 응고 연쇄반응은 트롬빈(인자 IIa) 및 인자 XIIIa의 활성화에서 정점에 달하며, 이는 피브리노겐(인자 I)을 피브린(인자 Ia)으로 전환시키는 작용을 하고 피브린을 가교결합시켜 각각 피브린괴(fibrin clot)를 형성한다.
내인성 응고 경로로도 알려진 접촉 활성화 경로는 프리칼리크레인 및 인자 XII로부터 각각 칼리크레인 및 인자 XIIa(FXIIa)의 활성화로 시작한다. 활성화된 세린 프로테아제 FXIIa는 인자 XI(FXI)를 절단하고, 이는 인자 Xa(FXa)의 이후 활성화에 참여하는 활성화 상태의 세린 프로테아제인 인자 XIa(FXIa)로 지모겐을 전환시킨다.
혈장 유래 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 존재에 대하여 증가하는 관심으로 인하여, 이러한 오염 물질, 특히 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시키는 방법에 대한 필요성이 당업계에 남아 있다. 본 발명은 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 이와 같은 방법 및 혈장 유래 단백질 조성물을 제공함으로써 이들 및 다른 필요성을 충족시킨다.
하나의 양태에서, 본 발명은 미분된(finely divided) 이산화규소(SiO2)로의 처리에 의하여 혈장 유래 단백질 조성물로부터 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐, 구체적으로 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa를 제거할 수 있다는 놀라운 결과를 기초로 한다. 이러한 방식으로, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물의 세린 프로테아제 활성, 세린 프로테아제 함량, 및 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법을 제공한다. 또한 세린 프로테아제 활성, 세린 프로테아제 함량, 및 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 치료용 혈장 유래 단백질 조성물뿐만 아니라 상기 조성물의 투여에 의하여 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
제1 양태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제를 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다.
상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 또 다른 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 또 다른 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 크로마토그래피 풍부화 단계를 포함하는 방법의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 기술된 크로마토그래피 풍부화 단계를 포함하는 방법의 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 크기 및/또는 형상에 의해 표적 단백질로부터 적어도 하나의 불순물을 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택된다. 구체적인 실시형태에서, 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질 조성물은 제조용 중간체이다.
제2 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제3 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제4 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제5 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제6 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) IαI가 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제를 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
제7 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제가 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
제8 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
제9 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하지만 인터-알파-트립신 억제제(IαI)에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 양태의 임의의 실시형태에서, 적어도 1g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 적어도 2g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 적어도 2.5g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 양태의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XI이다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 세린프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa이다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XII이다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIIa이다.
제10 양태에서, 본 발명은 상기 기술된 양태 중 어느 하나에 따른 세린 프로테아제 활성을 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 의해 제조된 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 조성물은 개체에의 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 또는 피하 투여용으로 제형화된다. 하나의 실시형태에서, 조성물은 수성이다. 다른 실시형태에서, 조성물은 동결건조된다.
제11 양태에서, 본 발명은 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 개괄된 양태에 따른 혈장 유래 단백질 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
제12 양태에서, 본 발명은 (a) 인자 H를 함유하는 현탁된 혈장 침전물 분획을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) SiO2를 낮은 pH가 및 낮은 전도도를 포함하는 세척 완충액으로 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 적어도 10mS/㎝의 전도도를 포함하는 용리 완충액으로 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함하는 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 혈장 침전물 분획은 콘(Cohn) 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만(Kistler/Nitschmann) 침전물 A, 또는 키슬러/니츠만 침전물 B이다. 임의의 실시형태에서, 방법은 (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시키고 제거하는 단계, (e) 풍부화된 조성물로부터 인자 H를 침전시키고 회수하는 단계, (f) 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 인자 H를 추가로 풍부화시키는 단계, (g) 헤파린 친화 크로마토그래피에 의해 인자 H를 추가로 풍부화시키는 단계, (h) 전용 바이러스 불활성화 단계, 및 (i) 한외여과/정용여과에 의해 풍부화된 인자 H 조성물을 농축시키는 단계로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제를 제거하는 단계를 포함하며, 여기에서 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 구체적인 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 상기 풍부화된 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 적어도 하나의 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 적어도 하나의 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 양이온 교환 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 소수성 상호작용 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 혼합형 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 하이드록시아파타이트 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 리간드 친화 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 면역친화 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 크기 및/또는 형상에 의해 표적 단백질로부터 적어도 하나의 불순물을 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 면역글로불린(Ig)이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 알부민이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 알파-1-항트립신이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 뷰티릴콜린에스테라제이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 보체계의 단백질이다. 하나의 실시형태에서, 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 인터-알파-트립신 억제제이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질 조성물은 제조용 중간체이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합한 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합한 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합한 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 적어도 6mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 적어도 11mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2와 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하는 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2로부터 용리시키는 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하기에 적당한 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5.0mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합한 상태로 있는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 적어도 11mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합한 상태로 있는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 적어도 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 5mS/㎝ 내지 6mS/㎝이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 14mS/㎝ 이하의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 9mS/㎝ 내지 14mS/㎝이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 SiO2에 결합하지 않는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 적어도 11mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 5mS/㎝ 내지 6mS/㎝이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) SiO2를 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝의 전도도를 포함하는 용액으로 세척하는 단계; 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액으로 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 콘 분획 II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 키슬러/니츠만 침전물 A, 또는 이의 동등한 분획이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 회수된 인자 H 용액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시키지만, 인자 H는 침전되지 않는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 침전 단계는 PEG 침전이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도에서 PEG 4000을 이용한 침전을 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 회수된 인자 H 용액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 침전 단계는 PEG 침전이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도에서 PEG 4000을 이용한 침전을 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 12±0.5%이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 크로마토그래피에 의해 인자 H를 풍부화시키는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 음이온 교환 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 헤파린 친화 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 음이온 교환 크로마토그래피 후 헤파린 친화 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 적어도 하나의 전용 바이러스 제거 또는 불활성화 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 나노여과 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 한외여과/정용여과를 포함하는 인자 H 조성물을 농축시키는 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) IαI의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인터-알파-트립신 억제제(IαI)에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 면역글로불린 G(IgG)를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10% 알코올을 이용하여 제1 침전 단계에서 냉동 불량(cryo-poor) 혈장 분획을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계; (b) 약 6.7 내지 약 7.3에서 pH에서 약 20% 내지 약 25% 알코올을 이용하여 제2 침전 단계에서 제1 상청액으로부터 IgG를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계; (c) 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; (d) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건 하에서 상기 현탁액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (e) 상기 현탁액으로부터 SiO2를 분리하여 청징된 현탁액을 형성하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 (f) 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 22% 내지 약 28% 알코올을 이용하여 제3 침전 단계에서 단계 (e)에서 형성된 청징된 현탁액으로부터 IgG를 침전시켜 제3 침전물을 형성하는 단계; (g) 제3 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; 및 (h) 단계 (e)에서 형성된 현탁액으로부터 가용성 분획을 분리하여 풍부화된 IgG 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 양이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 적어도 하나의 전용 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 용매/세제(S/D) 바이러스 불활성화 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 나노여과 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 낮은 pH에서 항온처리 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (b)는 약 -7℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 단계 (a)에서 형성된 제1 상청액의 에탄올 농도를 약 25%(v/v)로 조정하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 온도는 약 -9℃이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (c)는 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로 단계 (b)의 침전물을 재현탁하며, 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 300㎖ 내지 700㎖를 이용하여 조정하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (d)는 단계 (b)에서 형성된 침전물 g 당 약 0.02g 내지 단계 (b)에서 형성된 침전물 g 당 약 0.06g의 최종 농도로 SiO2의 추가를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건은 4.5 내지 6.0의 pH 및 0.1mS/㎝ 내지 3mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, pH는 4.9 내지 5.3이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 전도도는 0.5mS/㎝ 내지 2mS/㎝이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (e)는 (i) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로서 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 50㎖ 내지 200㎖로 조정하여 세척 용액을 형성하는 완충액 적어도 3 필터 프레스 불용 체적(dead volume)으로 필터 프레스를 세척하는 하위 단계; 및 (ii) 단계 (f)의 여과액을 단계 (g)의 세척 용액과 합하여 용액을 형성하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, (iii) 세제로 상기 용액을 처리하는 하위 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (h)는 풍부화된 IgG 조성물의 용매 및 세제(S/D) 처리를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (h)에서 수득한 풍부화된 IgG 조성물은 단계 (a)에서 사용되는 냉동 불량 혈장 분획에서 발견되는 IgG 함량을 적어도 85%로 함유한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (h)에서 수득한 풍부화된 IgG 조성물은 단계 (a)에서 사용되는 냉동 불량 혈장 분획에서 발견되는 IgG 함량을 적어도 90%로 함유한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 95%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 98%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 99%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXIa이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 적어도 1g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 적어도 2g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 적어도 2.5g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XI이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XII이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIIa이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 상기 청구항 중 어느 하나의 항에 따른 세린 프로테아제 활성을 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 개체에의 투여용으로 제형화된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 또는 피하 투여용으로 제형화된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 수성이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 동결건조된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 제124항 내지 제128항 중 어느 한 항에 따른 혈장 유래 단백질 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
도 1. 예시적인 혈장 분별 도식의 개요.
도 2. ELISA에 의해 측정된, 산업적 규모의 혈장 단백질 분별의 선택된 분획 중 인자 H의 함량.
도 3. 전도도를 변화시키면서 pH 7.5의 용액 조건 하에서 SiO2로부터 용리된 인자 H 및 아마이드 분해 활성의 예시(기질 CS2166을 사용하여 측정함).
도 2. ELISA에 의해 측정된, 산업적 규모의 혈장 단백질 분별의 선택된 분획 중 인자 H의 함량.
도 3. 전도도를 변화시키면서 pH 7.5의 용액 조건 하에서 SiO2로부터 용리된 인자 H 및 아마이드 분해 활성의 예시(기질 CS2166을 사용하여 측정함).
I. 도입
치료용 혈장 유래 혈액 단백질 조성물, 예를 들어 면역 글로불린 조성물, 혈액 응고 인자, 응고 인자 억제제, 및 보체계의 단백질의 광범위한 용도를 고려할 때, 이러한 조성물의 안전성을 확보하는 것은 매우 중요하다. 혈장 유래 단백질 조성물이 투여되는 환자에서 혈전 색전증 사건의 발생과 병행하여 이러한 조성물의 아마이드 분해 함량에 대한 최근 관심은 이러한 생물학제의 제조 동안 세린 프로테아제(예컨대, FXIa 및 FXIIa) 및 세린 프로테아제 지모겐(예컨대, FXI 및 FXII)을 감소시키는 방법에 대한 당업계에서의 필요성을 강조하였다. 유리하게도, 본 발명은 적어도 부분적으로, 미분된 이산화규소(SiO2)가 혈장 유래 단백질 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 사용될 수 있다는 놀라운 결과를 기초로 한다. 이와 같이, 혈장 유래 단백질 조성물의 제조 동안 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 농도를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
임의의 양태에서, 본 발명은 미분된 이산화규소(SiO2)가 혈장 유래 단백질 용액으로부터의 세린 프로테아제(예컨대, FXIa 및 FXIIa) 및 세린 프로테아제 지모겐(예컨대, FXI 및 FXII)의 상당한 양을 제거하는데 사용될 수 있다는 놀라운 결과를 기초로 하는 제조 방법을 제공한다. 이와 같이, 본원에 제공된 방법은 기존의 제조 절차, 예를 들어 차가운 곳에서 에탄올에 의한, 수집한 혈장 샘플, 바람직하게는 인간 혈장 샘플의 분별로 용이하게 통합될 수 있다(문헌[Schultze H E, Heremans J F; Molecular Biology of Human Proteins. Volume I: Nature and Metabolism of Extracellular Proteins 1966, Elsevier Publishing Company; p. 236-317]에서 검토됨). 그러나, 본원에 제공된 방법은 에탄올 분별을 포함하여 제조 방법에의 사용에서 결코 제한되지 않는다. 혈장 유래 단백질의 정제를 위한 기타 다른 방법론은 또한 본원에 제공된 방법, 예를 들어 중합체(예컨대, PEG) 분별 및 크로마토그래피 방법론(예컨대, 음이온 및/또는 양이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래피, 면역 친화 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 혼합형 크로마토그래피 등)과 양립 가능하다.
게다가, 숙주 세포주에서 DNA 벡터의 재조합 발현을 통하여 생성되는 다른 생물학제와 달리, 혈장 유래 단백질은 인간 혈액 및 혈장 분리 교환(plasma donation)으로부터 분별될 수 있다. 따라서, 이러한 제품의 공급은 단순히 생산 부피를 증가시키는 것에 의해 증가될 수 없다. 오히려 상업적으로 이용가능한 혈액 제품의 수준은 혈액 및 혈장 분리의 이용가능한 공급에 의해 제한된다. 이러한 동역학은, 보체 인자 H(CFH) 및 인터-알파-트립신 억제제 단백질(IαIp)을 포함하여, 확립된 상업적 시장이 더 적은 새로운 혈장 유래 혈액 인자의 제조에 있어서 원래 인간 혈장의 이용가능성에서의 부족을 야기한다.
새로운 혈장 유래 제품의 제조에 이용가능한 혈장의 부족으로 인하여, 이러한 제조는 혈장 유래 제품, 예를 들어 면역글로불린 및 알부민에 대한 확립된 제조 공정의 기존 구성에 통합되어야 한다. 병태 중에서도 AMD, aHUS, 및 MPGN에 대한 잠재적인 치료제로서 관련되는 인자 H는 의사의 관심을 얻고 있는 이러한 혈장 유래 혈액 제품이다. 그러나, 예를 들어 IgG 감마 글로불린 제조에 전념한 재료로 인하여, 방법은 기존의 제조 방식으로 도입될 수 있는 인자 H의 제조에 필요하다. 단지 이를 달성하기 위하여 여러 가지 방법이 제안되었지만, 그러나 다수의 이러한 제안된 해결책은 확립된 제품에 대한 기존의 제조 방식의 변형을 필요로 한다. 이러한 변화는 확립된 제품에 대한 새로운 규제 승인을 필요로 할 것이며 심지어 확립된 제품의 특징의 변경을 야기할 수도 있다.
예를 들어, WO 제2007/066017호는 동결침전제제의 상청액으로부터 인자 H 제조물의 생성에 대한 방법을 기술한다. 개시된 방법은 동결침전제제의 상청액을 제조하는 단계, 상청액에 대하여 음이온 교환 크로마토그래피(AEC)를 실행하는 단계, HAC로부터의 관련 용리액에 대하여 강한 양이온 교환 크로마토그래피(CEC)를 실행하는 단계, CEC로부터의 관련 용리액에 대하여 강한 음이온 교환 크로마토그래피(sAEC)를 실행하는 단계 및 sAEC로부터 인자 H를 용리시키는 단계로 이루어져 있다. 불리하게도, 동결침전제제 상청액은 다수의 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제품, 예를 들어 IgG 감마 글로불린(IVIG 및 피하) 및 알부민의 제조 공정에서 일반적인 중간체 분획물이다. 이러한 분획물에 크로마토그래피 단계를 실행하는 것은 동결침전제제 상청액을 변경시킬 것이며, 확립된 하류 혈액 제품의 제조 공정은 알려지지 않은 방식으로 적합화되는 것을 필요로 할 것이다. 이러한 제조 공정의 완전한 재허가 및 가능한 재설계를 필요로 하는 것에 더하여, 핵심 규제 기관으로부터의 제조 절차의 규제 재승인이 필요하다.
마찬가지로, WO 제2008/113589호는 인간 혈장으로부터의 인자 H 제조물의 생성을 위한 방법을 기술한다. 구체적으로 이 간행물은 3가지 공지된 혈장 처리 분획물, 즉 콘-온클레이(Cohn-Oncley) 분획 I 상청액, 콘-온클레이 분획 III 침전물, 및 키슬러/니츠만 침전물 B 분획물로부터의 인자 H의 정제를 기술한다. 첫번째 방법에 대하여, WO 제2008/113589호는 인자 H가 헤파린 친화 크로마토그래피 단계의 추가에 의하여 콘-온클레이 분획 I 상청액으로부터 제거될 수 있음을 개시한다. 불리하게도, 콘-온클레이 분획 I 상청액은 다수의 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제품, 예를 들어 IgG 감마 글로불린(IVIG 및 피하) 및 알부민의 제조 공정에서 일반적인 중간체 분획물이다. 유사하게, 다수의 면역글로불린(예컨대, IgG, IVIG 등) 제조 공정은 콘-온클레이 분획 III 침전물 또는 키슬러/니츠만 침전물 B 단계, 예를 들어 Gammagard(등록상표) Liquid 및 Kiovig(Baxter International Inc.)에 의존하지 않는다. 상기 개괄한 바와 같이 확립된 혈액 제품의 제조 방법에, 추가적인 단계, 예를 들어 헤파린 친화 크로마토그래피, 분획 III 침전물, 또는 침전물 B 단계의 도입의 불리한 점은 제조 절차의 재허가, 핵심 규제 기관으로부터의 제조 절차의 규제 재승인을 필요로 한다는 것이며, 달리 확립된 제품의 수율 및/또는 순도에 대하여 예상치 못한 결과를 추가로 가질 수 있다.
이와 같이, 추가적인 유입 혈장의 사용을 필요로 하지 않는 인자 H를 제조하는 방법 또는 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제품, 예를 들어 정맥주사(IVIG) 또는 피하 투여용 알부민 및 IgG 감마 글로불린에 대한 기존 제조 공정의 재설계 및 규제 재승인에 대한 필요성이 남아 있다. 유리하게, 본 발명은 적어도 부분적으로, 인자 H, 세린 프로테아제, 및 세린프로테아제 지모겐이 동시에 미분된 이산화규소(SiO2)와 결합되어, 결합되지 않은 관심의 제1 단백질(예컨대, IgG)로부터 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐을 분리한 다음, SiO2로부터 인자 H와 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐을 차별적으로 용리함으로써 분리할 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한다. 유사하게, 본 발명은 적어도 부분적으로 IαIp, 세린 프로테아제, 및 세린 프로테아제 지모겐이 동시에 미분된 이산화규소(SiO2)와 결합된 다음, SiO2로부터 IαIp와 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐을 차별적으로 용리함으로써 분리할 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한다.
II
. 정의
본원에서 사용되는 "인자 H"는 보체 인자 H 유전자(예를 들어, CFH; NM000186; GeneID:3075; UniProt ID P08603; 문헌[Ripoche et al., Biochem. J. 249:593-602(1988)])에 의해 암호화되는 보체의 대안적인 경로의 단백질 성분을 말한다. 인자 H는 18개 아미노산 신호 펩티드의 제거에 의해 가공되는 1,213 아미노산 전구체 폴리펩티드로서 번역되며, 이는 성숙한 인자 H 단백질(아미노산 19-1231)을 만들어낸다. 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 인자 H는 혈장 샘플, 예를 들어 인간 혈장 샘플에서 발견될 수 있는 임의의 천연 변형체, 대안적인 서열, 아형(isoform) 또는 변이 단백질을 포함한다. 인간 집단에서 발견되는 인자 H 돌연변이의 예로는 이에 제한되는 것은 아니지만 Y402H; V62I; R78G; R127L; △224; Q400K; C431S; T493R; C536R; I551T; R567G; C630W; C673S; C673Y; E850K; S890I; H893R; C915S; E936D; Q950H; Y951H; T956M; C959Y; W978C; N997T; V1007I; V1007L; A1010T; T1017I; Y1021F; C1043R; N1050Y; I1059T; Q1076R; R1078S; D1119G; V1134G; Y1142D; Q1143E; W1157R; C1163W; W1183L; W1183R; T1184R; L1189R; S1191L; G1194D; V1197A; E1198A; F1199S; R1210C; R1215G; R1215Q; YPTCAKR1225:1231FQS; 및 P1226S를 포함한다. 다수의 이러한 돌연변이는 다양한 질환 및 장애, 예를 들어 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS), 노인황반변성(AMD), 막증식성사구체신염(MPGNII), CFH 결핍증, 및 기저판 결정체(basal laminar drusen)와 연관된 것으로 밝혀졌다. 인자 H는 또한 번역후 변형을 함유하는 단백질을 포함한다. 예를 들어, 인자 H는 잔기 529, 718, 802, 822, 882, 911, 1029, 및 1095에서 N-아세틸글루코사민(GlcNAc)에 의해 변형되는 것으로 여겨진다.
본원에서 사용되는 "인터-알파-억제제 단백질" 또는 "IaIp"는 알파-1-마이크로글로불린/비쿠닌(bikunin) 전구체 유전자(AMBP; UniGene ID:231948, 비쿠닌 폴리펩티드), 인터-알파 (글로불린) 억제제 H1 유전자(ITIH1; UniGene ID:224173, H1 폴리펩티드), 인터-알파 (글로불린) 억제제 H2 유전자(ITIH2; Unigene ID:139782, H2 폴리펩티드), 인터-알파 (글로불린) 억제제 H3 유전자(ITIH3; UniGene ID:140017, H3 폴리펩티드), 또는 인터-알파 (글로불린) 억제제 H4(혈장 칼리크레인-민감성 당단백질, H4 폴리펩티드) 유전자(ITIH4; UniGene ID:3321613) 중 하나 이상에 의해 암호화되는 폴리펩티드로 구성된 혈장 프로테아제 억제제의 집단을 말한다. 예시적인 IaIp 프로테아제 억제제로는 이에 제한되는 것은 아니지만 IaI(비쿠닌, H1, 및 H2 폴리펩티드); PaI(비쿠닌 및 H3 폴리펩티드), IaLI(비쿠닌 및 H2 폴리펩티드), IaIH4P(H4 폴리펩티드), 및 비쿠닌(문헌[Salier, J, et al., 상기 참조])을 포함한다.
본원에서 사용되는 "냉동 불량 혈장"은 혈장을 해동시킴으로써 형성된 동결침전물의 제거 후에 형성되는 동결침전물의 제거 후에 형성되는 상청액 또는 동결하는 근처의 온도에서, 예컨대 약 10℃ 미만의 온도, 바람직하게는 약 6℃ 이하의 온도에서 수집한 혈장을 말한다. 본 발명의 내용에서, 혈장은 회수된 혈장(즉, 생체외에서 전혈로부터 분리한 혈장) 또는 공급 혈장(즉, 혈장분리교환법을 통해 수집한 혈장)을 상호교환적으로 말할 수 있다. 동결침전은, 신선한 혈장이 또한 사용될 수 있지만, 일반적으로 예를 들어 이미 안전성 및 품질 고려 사항에 대하여 분석한, 이미 동결된 수집한 혈장을 해동함으로써 실행된다. 저온에서 동결한 혈장의 완전한 해동 후에, 액체 상청액으로부터 고체 동결침전물의 분리는 저온에서(예컨대, 6℃ 이하) 여과물의 원심분리에 의해 실행된다.
본원에서 사용되는 "콘 집단"은 혈장 샘플 또는 혈장 샘플의 집단의 분별에 사용되는 출발 물질을 말한다. 콘 집단은 사전 가공 단계를 거칠 수 있거나 거치지 않을 수 있는 전체 혈장, 냉동 불량 혈장 샘플, 및 냉동 불량 혈장 샘플의 집단을 포함한다. 임의의 실시형태에서, 콘 집단은, 하나 이상의 혈액 인자가 사전 가공 단계, 예를 들어 고상에의 흡착(예컨대, 수산화알루미늄, 미분된 이산화규소 등), 또는 크로마토그래피 단계(예컨대, 이온 교환 또는 헤파린 친화 크로마토그래피)에서 제거된 냉동 불량 혈장 샘플이다. 이에 제한되는 것은 아니지만 인자 8 억제제 우회 활성(FEIBA), 인자 IX-복합체, 인자 VII-농축물, 또는 항트롬빈 III-복합체를 포함하여 다양한 혈액 인자가 냉동 불량 혈장 샘플로부터 분리되어 콘 집단을 형성할 수 있다.
본원에서 사용되는 "분획 II+III 여과 케이크"는 콘-온클레이 또는 동등한 분획 II+III 페이스트 현탁물의 여과 또는 원심분리 후에 회수된 고체 상을 말한다. 바람직한 실시형태에서, 분획 II+III 현탁액을 흡착 물질, 예를 들어 미분된 이산화규소로 처리하여 불순물, 예를 들어 지질, 피브리노겐, 아마이드 분해 활성, 프리칼리크레인 및 리포단백질을 제거할 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 원심분리 또는 여과 전에 분획 II+III 현탁액에 여과 보조제를 첨가할 수 있다. 가장 바람직한 실시형태에서, 원심분리 또는 여과 전에 분획 II+III 현탁액을 흡착 물질 및 여과 보조제 모두로 처리할 것이다. 청징된 분획 II+III 현탁액 상청액의 분리시, 회수된 고체 상 물질은 분획 II+III 여과 케이크로 언급된다.
본원에서 사용되는 "미분된 이산화규소" 또는 "미분된 실리카"는, 표면 상에 인자 H의 흡착을 가능하게 하는 방식으로 제조된, 화학식이 SiO2인 실리콘의 산화물을 말한다. 본 발명의 방법에의 사용에 적당한 미분된 이산화규소의 예시적인 형태는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 흄드(fumed) 실리카, 발열성 실리카, Aerosil(등록상표), Cab-O-Sil(상표), 콜로이드 실리카, 규조토 등을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 상업적 친수성 흄드 실리카 제품이 본원에서 제공되는 방법에 사용된다. 이들 제품의 비제한적인 예는 상표명 Aerosil(등록상표)(예컨대, Aerosil 90, Aerosil 130, Aerosil 150, Aerosil 200, Aerosil 300, Aerosil 380, Aerosil OX 50, Aerosil EG 50, Aerosil TT 600, Aerosil 200 SP, Aerosil 300 SP, and Aerosil 300/30) 하에서 Evonik Industries에 의해 시판되는 것들을 포함한다.
본원에서 사용되는 "인자 H 기능 장애와 연관된 질환 또는 장애"는 개체에서 인자 H 활성의 수준의 감소에 의해 야기되거나, 이를 특징으로 하거나, 또는 이를 초래하는 개체에서의 임의의 질환, 장애, 또는 병태를 말한다. 본 발명의 목적을 위하여, 인자 H 활성은 단백질 또는 리간드, 예를 들어 C3b, C3bBb, C3b2Bb, csbC3b, 보체 인자 B(CFB), C 반응성 단백질, 내피 세포, 글라이코사미노글라이칸(GAGs)에 결합하는 인자 H의 능력을 말하거나, 대안적으로 C3bBb 및 C3b2Bb의 비가역적 해리를 가속화하는 인자 H의 인자 I 보조인자 활성 또는 능력을 말할 수 있다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 기능 장애와 연관된 질환 또는 장애는 C3 결핍증 및 박테리아 감염에 대한 민감성을 초래한다. 일부 경우에서, 인자 H 기능 장애와 연관된 질환 또는 장애는 인자 H를 암호화하는 CFH 유전자에서의 돌연변이 및 다형성에 의해 야기되거나 이와 결합된 병태를 포함한다(검토를 위하여, 문헌[Barlow et al., Adv Exp Med Biol. 2008;632:117-42]을 참조, 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). CFH 유전자에서의 돌연변이 또는 다형성과 결합된 질환은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 인자 H 결핍증, 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS), 노인황반변성(AMD), 막증식성사구체신염 II형(MPGNII; 문헌[de Cordoba 및 de Jorge, Clinical and Experimental Immunology 151, 1-13 (2008)]), 심근경색증(문헌[Kardys et al., Journal of the American College of Cardiology 47, 1568-1575 (2006)]; [Mooijaart et al., Experimental Gerontology 42, 1116-1122 (2007)]; [Nicaud et al., Journal of Molecular Medicine 85, 771-775 (2007)]; [Pai et al., European Heart Journal 28, 1297-1303 (2007)]; [Stark et al., Clinical Science (Lond) 113, 213-218 (2007)], 관동맥성 심장병/관상동맥 질환(CAD/CHD; (문헌[Meng et al., BMC Medical Genetics 8, 62 (2007)]; Pulido et al., Mayo Clinic Proceedings 82, 301-307 (2007)]; [Topol et al., Human Molecular Genetics 15 Spec No 2, R117-R123 (2006)]), 및 알츠하이머병(문헌[Hamilton et al., Neuromolecular Medicine 9, 331-334 (2007)]; [Zetterberg et al., American Journal of Ophthalmology 143, 1059-1060 (2007)])을 포함한다. 인자 H 기능 장애와 연관된 CFH 유전자 및 질환에서 돌연변이와 다형성 간의 연관성을 기술하는 상기 참고 문헌의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
본원에서 사용되는 "비정상적인 대체 경로 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애"는 보체의 대안적인 경로의 비제어 또는 비정상적인 활성화에서 초래된 질환, 장애, 또는 병태를 말한다. 일반적으로, 보체의 대안적인 경로의 비제어 또는 비정상적인 활성화는 숙주 세포 및 조직의 방관자 손상(bystander damage)뿐만 아니라 C3의 고갈 및 병원체 감염(예컨대, 진균, 박테리아, 바이러스 및 원생생물)에 대한 해당 민감성을 야기할 수 있다. 비정상적인 대체 경로 보체 활성과 연관된 질환 및 장애의 예는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 다양한 자가면역 질환(예를 들어, 류마티스 관절염, IgA 신증, 천식, 전신 홍반성 낭창, 다발성 경화증, 항인산화지질 증후군, ANCA-연관 혈관염, 천포창, 포도막염, 중증근무력증, 하시모토 갑상선염), 신장 질환(예를 들어 IgA 신증, 용혈성요독증후군, 막증식성사구체신염), 기타 다른 질환, 예를 들어 천식, 알츠하이머병, 성인 황반변성, 발작성 야간혈색소뇨증, 복부 대동맥류, 허혈, 및 패혈증을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "한외여과(UF)"는 반투막에 대하여 정수압이 액체에 가해지는 다양한 막 여과 방법을 포함한다. 고분자량의 현탁된 고체 및 용질은 남아 있는 반면, 물 및 저분자량 용질은 막을 투과한다. 분리 공정은 종종 고분자(103 ~ 106Da) 용액, 특히 단백질 용액을 정제하고 농축하는데 사용된다. 다수의 한외여과막이 분자가 남아 있는 분자의 크기에 따라서 이용가능하다. 한외여과막은 전형적으로 막 기공 크기가 1 내지 1000kDa이고 작동 압력이 0.01 내지 10bar임을 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 용어 "정용여과"는 한외여과와 동일 또는 유사한 막을 이용하여 실행되며 전형적으로 접선류(tangential flow) 여과 방식으로 실행된다. 정용여과 동안, 여과액이 단위 조작으로부터 제거되는 동안, 완충액은 재순환 탱크 내로 도입된다. 생성물이 잔류물(retentate)(예를 들어, 인자 H)에 있는 공정에서, 정용여과는 설탕 및 소금과 같은 소분자로부터 단백질을 분리하는데 특히 유용하다. 임의의 경우에서, 정용여과는 완충계의 용액, 완충액, 또는 개별적인 성분을 교환하는데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "혼합"은 임의의 형태의 교반에 의하여 용액 또는 현탁액 중 둘 이상의 별개의 화합물 또는 물질의 동등한 분포를 야기하는 작용을 기술한다. 상기 용어가 본 출원에서 사용된 바와 같이, "혼합"의 결과로서 용액 또는 현탁액 중 모든 성분의 완전히 동등한 분포는 필요로 하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "용매"는 하나 이상의 다른 물질을 용해 또는 분산시킬 수 있는 임의의 약체 물질을 포함한다. 용매는 자연계에서 무기물, 예를 들어 물일 수 있거나, 유기 액체, 예를 들어 에탄올, 아세톤, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 헥산, 페트롤 에테르 등일 수 있다. 용어 "용매 세제 처리"에서 사용된 바와 같이, 용매는 유기 용매(예컨대, 트리-N-뷰틸 포스페이트)를 나타내며, 이는 용액에서 지질 피막형 바이러스를 불활성화시키는데 사용되는 용매 세제 혼합물 중 일부이다.
본원에서 사용되는 용어 "세제"는 본 출원에서 용어 "계면활성제" 또는 "표면 활성제"와 상호교환적으로 사용된다. 계면활성제는 전형적으로 양친매성, 즉 소수성 기("꼬리") 및 친수성 기("머리")를 모두 포함하여, 계면활성제가 유기용매 및 물 모두에서 용해성이 되게 하는 유기 화합물이다. 머리에 형식적으로 하전된 기의 존재에 의하여 계면활성제를 분류할 수 있다. 비이온성 계면활성제는 머리에 하전된 기를 가지지 않는 반면, 이온성 계면활성제는 머리에 순전하(net charge)를 보유한다. 쌍성이온성 계면활성제는 2가지의 반대로 하전된 기를 가지는 머리를 포함한다. 일반적인 계면활성제의 일부 예는 다음을 포함한다: 음이온성(설페이트, 술포네이트 또는 카복실레이트 음이온을 기반으로 함): 퍼플푸오로옥타노에이트(PFOA 또는 PFO), 퍼플루오로옥탄설포네이트(PFOS), 소듐 도데실 설페이트(SDS), 암모늄 라우릴 설페이트, 및 기타 다른 알킬 설페이트 염, 소듐 라우레스 설페이트(소듐 라우릴 에테르 설페이트, 또는 SLES로도 알려짐), 알킬 벤젠 설포네이트; 양이온성(4급 암모늄 양이온을 기반으로 함): 세틸 트리메틸암모늄 브로마이드(CTAB)(헥사데실 트리메틸 암모늄 브로마이드로도 알려짐), 및 기타 다른 알킬트리메틸암모늄 염, 세틸피리디늄 클로라이드(CPC), 폴리에톡시화 탈로우 아민(POEA), 벤잘코늄 클로라이드(BAC), 벤제토늄 클로라이드(BZT); 장쇄 지방산 및 이의 염: 카프릴레이트, 카프릴산, 헵타노에이트, 헥산산, 헵탄산, 노나논산, 데칸산 등; 쌍성이온성(양쪽성): 도데실 베타인; 코카미도프로필 베타인; 코코 암포 글라이시네이트; 비이온성: 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드), 알킬페놀 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 옥사이드) 및 폴리(프로필렌 옥사이드)의 공중합체(상업적으로 폴록사머(Poloxamer) 또는 폴록사민(Poloxamine)으로 알려짐), 알킬 폴리글루코사이드, 예를 들어 옥틸 글루코사이드, 데실 말토사이드, 지방 알코올(예컨대, 세틸 알코올 및 올레일 알코올), 코카마이드 MEA, 코카마이드 DEA, 폴리소르베이트(Tween 20, Tween 80 등), 트리톤(Triton) 세제, 및 도데실 디메틸아민 옥사이드를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료적으로 유효한 양 또는 용량" 또는 "충분한/유효한 양 또는 용량"은 투여되어 효과를 만들어내는 용량을 말한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 따라 달라질 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다(예컨대, 문헌[Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992)]; [Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999)]; [Pickar, Dosage Calculations (1999)]; 및 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins] 참조; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨).
본 출원에서 사용된 용어 "분무"는, 예컨대 알코올 침전 단계, 예를 들어 콘 분별 I 또는 II+III 침전 단계 동안, 액체 물질의 미세 액적 또는 미스트의 형태로, 액체 물질을 시스템 내로 전달하는 수단을 말한다. 분무는, 스프레이 헤드 또는 노즐이 있는 임의의 가압 장치, 예를 들어 용기(예컨대, 분무기)에 의해 달성될 수 있으며, 수동으로 또는 자동으로 작동되어 액체로부터 미세 액적을 생성한다. 전형적으로, 시스템 내 액체의 빠르면서 균일한 분포를 보장하기 위하여 액체 물질을 수용하는 시스템이 연속적으로 교반되거나 다르게는 혼합되면서 분무가 실행된다.
본원에서 사용되는 용어 "약"은 명시된 값의 + 또는 -10%의 대략적인 범위를 의미한다. 예를 들어, 용어 "약 20%"는 18 내지 22%의 범위를 포함한다. 본원에서 사용되는 약은 또한 정확한 양을 포함한다. 따라서 "약 20%"는 "약 20%"와 또한 "20%"를 의미한다. 본원에서 사용되는 "약"은 명시된 값에서의 또는 그 근처에서의 범위를 말한다.
용어 "용량" 및 "투약량"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 용량은 각각의 투여에서 개인에게 주어지는 유효 성분의 양을 말한다. 용량은 다수의 인자, 예를 들어 투여 빈도; 개인의 크기 및 내성; 병태의 중증도; 부작용의 위험; 및 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 당업자는 용량이 상기 인자에 따라서 또는 치료의 진행에 기초하여 변형될 수 있다. 용어 "투여형"은 제약의 특정 형태를 말하며, 투여 경로에 따라 다르다. 예를 들어, 투여형은 액체, 예컨대, 주사용 생리식염수일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "예방하다"는 혈액 단백질의 기능 결핍 또는 기능 장애와 연관된 병태에서 발생하는 증상의 가능성의 감소 또는 빈도의 감소를 말한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료", "처치" 및 "호전"은 혈액 단백질의 기능의 결핍 또는 기능 장애와 연관된 병태에서 발생하는 증상의 중증도에서의 임의의 감소를 말한다. 본원에서 사용되는 용어 "치료하다" 및 "예방하다"는 절대 용어인 것으로 의도되지 않는다. 치료는 개시에 있어서의 임의의 지연, 증상의 호전, 환자 생존에 있어서의 개선, 생존 시간 또는 생존율의 증가 등을 말할 수 있다. 치료의 효과는 치료를 받지 않은 개인 또는 개인의 집단과 비교될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "상당한 분획"은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 10%를 말한다. 예를 들어, 조성물 중 세린 프로테아제의 상당한 분획을 말할 경우, 세린 프로테아제의 상당한 분획은 조성물에 존재하는 세린 프로테아제의 적어도 10%에 해당한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 10%, 또는 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99% 또는 그 이상을 말한다.
III
. 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제
지모겐
함량의 감소
제1 양태에서, 본 발명은, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 결합시키고 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 SiO2를 분리함으로써 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XI의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XI에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XI를 제거하는 단계를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XIa의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XIa에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XIa를 제거하는 단계를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XII의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XII에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XII를 제거하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XIIa의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XIIa에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XIIa를 제거하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질에서 단백질을 부분적으로 침전시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 바람직한 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 한외여과 및/또는 정용여과함으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 크로마토그래피 수지와 접촉시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로부터 선택된다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
| 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제1 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제2 풍부화 단계 | Ppt | Var. 1 | Var. 11 | Var. 21 | Var. 31 | Var. 41 | Var. 51 | Var. 61 | Var. 71 | Var. 81 | Var. 91 |
| UF/DF | Var. 2 | Var. 12 | Var. 22 | Var. 32 | Var. 42 | Var. 52 | Var. 62 | Var. 72 | Var. 82 | Var. 92 | |
| AEC | Var. 3 | Var. 13 | Var. 23 | Var. 33 | Var. 43 | Var. 53 | Var. 63 | Var. 73 | Var. 83 | Var. 93 | |
| CEC | Var. 4 | Var. 14 | Var. 24 | Var. 34 | Var. 44 | Var. 54 | Var. 64 | Var. 74 | Var. 84 | Var. 94 | |
| HIC | Var. 5 | Var. 15 | Var. 25 | Var. 35 | Var. 45 | Var. 55 | Var. 65 | Var. 75 | Var. 85 | Var. 95 | |
| HAC | Var. 6 | Var. 16 | Var. 26 | Var. 36 | Var. 46 | Var. 56 | Var. 66 | Var. 76 | Var. 86 | Var. 96 | |
| MMC | Var. 7 | Var. 17 | Var. 27 | Var. 37 | Var. 47 | Var. 57 | Var. 67 | Var. 77 | Var. 87 | Var. 97 | |
| LAC | Var. 8 | Var. 18 | Var. 28 | Var. 38 | Var. 48 | Var. 58 | Var. 68 | Var. 78 | Var. 88 | Var. 98 | |
| IAC | Var. 9 | Var. 19 | Var. 29 | Var. 39 | Var. 49 | Var. 59 | Var. 69 | Var. 79 | Var. 89 | Var. 99 | |
| SEC | Var. 10 | Var. 20 | Var. 30 | Var. 40 | Var. 50 | Var. 60 | Var. 70 | Var. 80 | Var. 90 | Var. 100 | |
| * Ppt: 침전 UF/DF: 한외여과/정용여과 AEC: 음이온 교환 크로마토그래피 CEC: 양이온 교환 크로마토그래피 HIC: 소수성 상호작용 크로마토그래피 HAC: 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 MMC: 혼합형 크로마토그래피 LAC: 리간드 친화 크로마토그래피 IAC: 면역-친화 크로마토그래피 SEC: 크기 배제 크로마토그래피 |
|||||||||||
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; (d) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
| 제1 침전 풍부화 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 101 | Var. 111 | Var. 121 | Var. 131 | Var. 141 | Var. 151 | Var. 161 | Var. 171 | Var. 181 | Var. 191 |
| UF/DF | Var. 102 | Var. 112 | Var. 122 | Var. 132 | Var. 142 | Var. 152 | Var. 162 | Var. 172 | Var. 182 | Var. 192 | |
| AEC | Var. 103 | Var. 113 | Var. 123 | Var. 133 | Var. 143 | Var. 153 | Var. 163 | Var. 173 | Var. 183 | Var. 193 | |
| CEC | Var. 104 | Var. 114 | Var. 124 | Var. 134 | Var. 144 | Var. 154 | Var. 164 | Var. 174 | Var. 184 | Var. 194 | |
| HIC | Var. 105 | Var. 115 | Var. 125 | Var. 135 | Var. 145 | Var. 155 | Var. 165 | Var. 175 | Var. 185 | Var. 195 | |
| HAC | Var. 106 | Var. 116 | Var. 126 | Var. 136 | Var. 146 | Var. 156 | Var. 166 | Var. 176 | Var. 186 | Var. 196 | |
| MMC | Var. 107 | Var. 117 | Var. 127 | Var. 137 | Var. 147 | Var. 157 | Var. 167 | Var. 177 | Var. 187 | Var. 197 | |
| LAC | Var. 108 | Var. 118 | Var. 128 | Var. 138 | Var. 148 | Var. 158 | Var. 168 | Var. 178 | Var. 188 | Var. 198 | |
| IAC | Var. 109 | Var. 119 | Var. 129 | Var. 139 | Var. 149 | Var. 159 | Var. 169 | Var. 179 | Var. 189 | Var. 199 | |
| SEC | Var. 110 | Var. 120 | Var. 130 | Var. 140 | Var. 150 | Var. 160 | Var. 170 | Var. 180 | Var. 190 | Var. 200 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 한외여과/정용여과 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 201 | Var. 211 | Var. 221 | Var. 231 | Var. 241 | Var. 251 | Var. 261 | Var. 271 | Var. 281 | Var. 291 |
| UF/DF | Var. 202 | Var. 212 | Var. 222 | Var. 232 | Var. 242 | Var. 252 | Var. 262 | Var. 272 | Var. 282 | Var. 292 | |
| AEC | Var. 203 | Var. 213 | Var. 223 | Var. 233 | Var. 243 | Var. 253 | Var. 263 | Var. 273 | Var. 283 | Var. 293 | |
| CEC | Var. 204 | Var. 214 | Var. 224 | Var. 234 | Var. 244 | Var. 254 | Var. 264 | Var. 274 | Var. 284 | Var. 294 | |
| HIC | Var. 205 | Var. 215 | Var. 225 | Var. 235 | Var. 245 | Var. 255 | Var. 265 | Var. 275 | Var. 285 | Var. 295 | |
| HAC | Var. 206 | Var. 216 | Var. 226 | Var. 236 | Var. 246 | Var. 256 | Var. 266 | Var. 276 | Var. 286 | Var. 296 | |
| MMC | Var. 207 | Var. 217 | Var. 227 | Var. 237 | Var. 247 | Var. 257 | Var. 267 | Var. 277 | Var. 287 | Var. 297 | |
| LAC | Var. 208 | Var. 218 | Var. 228 | Var. 238 | Var. 248 | Var. 258 | Var. 268 | Var. 278 | Var. 288 | Var. 298 | |
| IAC | Var. 209 | Var. 219 | Var. 229 | Var. 239 | Var. 249 | Var. 259 | Var. 269 | Var. 279 | Var. 289 | Var. 299 | |
| SEC | Var. 210 | Var. 220 | Var. 230 | Var. 240 | Var. 250 | Var. 260 | Var. 270 | Var. 280 | Var. 290 | Var. 300 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 음이온 교환 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 301 | Var. 311 | Var. 321 | Var. 331 | Var. 341 | Var. 351 | Var. 361 | Var. 371 | Var. 381 | Var. 391 |
| UF/DF | Var. 302 | Var. 312 | Var. 322 | Var. 332 | Var. 342 | Var. 352 | Var. 362 | Var. 372 | Var. 382 | Var. 392 | |
| AEC | Var. 303 | Var. 313 | Var. 323 | Var. 333 | Var. 343 | Var. 353 | Var. 363 | Var. 373 | Var. 383 | Var. 393 | |
| CEC | Var. 304 | Var. 314 | Var. 324 | Var. 334 | Var. 344 | Var. 354 | Var. 364 | Var. 374 | Var. 384 | Var. 394 | |
| HIC | Var. 305 | Var. 315 | Var. 325 | Var. 335 | Var. 345 | Var. 355 | Var. 365 | Var. 375 | Var. 385 | Var. 395 | |
| HAC | Var. 306 | Var. 316 | Var. 326 | Var. 336 | Var. 346 | Var. 356 | Var. 366 | Var. 376 | Var. 386 | Var. 396 | |
| MMC | Var. 307 | Var. 317 | Var. 327 | Var. 337 | Var. 347 | Var. 357 | Var. 367 | Var. 377 | Var. 387 | Var. 397 | |
| LAC | Var. 308 | Var. 318 | Var. 328 | Var. 338 | Var. 348 | Var. 358 | Var. 368 | Var. 378 | Var. 388 | Var. 398 | |
| IAC | Var. 309 | Var. 319 | Var. 329 | Var. 339 | Var. 349 | Var. 359 | Var. 369 | Var. 379 | Var. 389 | Var. 399 | |
| SEC | Var. 310 | Var. 320 | Var. 330 | Var. 340 | Var. 350 | Var. 360 | Var. 370 | Var. 380 | Var. 390 | Var. 400 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 양이온 교환 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 401 | Var. 411 | Var. 421 | Var. 431 | Var. 441 | Var. 451 | Var. 461 | Var. 471 | Var. 481 | Var. 491 |
| UF/DF | Var. 402 | Var. 412 | Var. 422 | Var. 432 | Var. 442 | Var. 452 | Var. 462 | Var. 472 | Var. 482 | Var. 492 | |
| AEC | Var. 403 | Var. 413 | Var. 423 | Var. 433 | Var. 443 | Var. 453 | Var. 463 | Var. 473 | Var. 483 | Var. 493 | |
| CEC | Var. 404 | Var. 414 | Var. 424 | Var. 434 | Var. 444 | Var. 454 | Var. 464 | Var. 474 | Var. 484 | Var. 494 | |
| HIC | Var. 405 | Var. 415 | Var. 425 | Var. 435 | Var. 445 | Var. 455 | Var. 465 | Var. 475 | Var. 485 | Var. 495 | |
| HAC | Var. 406 | Var. 416 | Var. 426 | Var. 436 | Var. 446 | Var. 456 | Var. 466 | Var. 476 | Var. 486 | Var. 496 | |
| MMC | Var. 407 | Var. 417 | Var. 427 | Var. 437 | Var. 447 | Var. 457 | Var. 467 | Var. 477 | Var. 487 | Var. 497 | |
| LAC | Var. 408 | Var. 418 | Var. 428 | Var. 438 | Var. 448 | Var. 458 | Var. 468 | Var. 478 | Var. 488 | Var. 498 | |
| IAC | Var. 409 | Var. 419 | Var. 429 | Var. 439 | Var. 449 | Var. 459 | Var. 469 | Var. 479 | Var. 489 | Var. 499 | |
| SEC | Var. 410 | Var. 420 | Var. 430 | Var. 440 | Var. 450 | Var. 460 | Var. 470 | Var. 480 | Var. 490 | Var. 500 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 소수성 상호작용 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 501 | Var. 511 | Var. 521 | Var. 531 | Var. 541 | Var. 551 | Var. 561 | Var. 571 | Var. 581 | Var. 591 |
| UF/DF | Var. 502 | Var. 512 | Var. 522 | Var. 532 | Var. 542 | Var. 552 | Var. 562 | Var. 572 | Var. 582 | Var. 592 | |
| AEC | Var. 503 | Var. 513 | Var. 523 | Var. 533 | Var. 543 | Var. 553 | Var. 563 | Var. 573 | Var. 583 | Var. 593 | |
| CEC | Var. 504 | Var. 514 | Var. 524 | Var. 534 | Var. 544 | Var. 554 | Var. 564 | Var. 574 | Var. 584 | Var. 594 | |
| HIC | Var. 505 | Var. 515 | Var. 525 | Var. 535 | Var. 545 | Var. 555 | Var. 565 | Var. 575 | Var. 585 | Var. 595 | |
| HAC | Var. 506 | Var. 516 | Var. 526 | Var. 536 | Var. 546 | Var. 556 | Var. 566 | Var. 576 | Var. 586 | Var. 596 | |
| MMC | Var. 507 | Var. 517 | Var. 527 | Var. 537 | Var. 547 | Var. 557 | Var. 567 | Var. 577 | Var. 587 | Var. 597 | |
| LAC | Var. 508 | Var. 518 | Var. 528 | Var. 538 | Var. 548 | Var. 558 | Var. 568 | Var. 578 | Var. 588 | Var. 598 | |
| IAC | Var. 509 | Var. 519 | Var. 529 | Var. 539 | Var. 549 | Var. 559 | Var. 569 | Var. 579 | Var. 589 | Var. 599 | |
| SEC | Var. 510 | Var. 520 | Var. 530 | Var. 540 | Var. 550 | Var. 560 | Var. 570 | Var. 580 | Var. 590 | Var. 600 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 601 | Var. 611 | Var. 621 | Var. 631 | Var. 641 | Var. 651 | Var. 661 | Var. 671 | Var. 681 | Var. 691 |
| UF/DF | Var. 602 | Var. 612 | Var. 622 | Var. 632 | Var. 642 | Var. 652 | Var. 662 | Var. 672 | Var. 682 | Var. 692 | |
| AEC | Var. 603 | Var. 613 | Var. 623 | Var. 633 | Var. 643 | Var. 653 | Var. 663 | Var. 673 | Var. 683 | Var. 693 | |
| CEC | Var. 604 | Var. 614 | Var. 624 | Var. 634 | Var. 644 | Var. 654 | Var. 664 | Var. 674 | Var. 684 | Var. 694 | |
| HIC | Var. 605 | Var. 615 | Var. 625 | Var. 635 | Var. 645 | Var. 655 | Var. 665 | Var. 675 | Var. 685 | Var. 695 | |
| HAC | Var. 606 | Var. 616 | Var. 626 | Var. 636 | Var. 646 | Var. 656 | Var. 666 | Var. 676 | Var. 686 | Var. 696 | |
| MMC | Var. 607 | Var. 617 | Var. 627 | Var. 637 | Var. 647 | Var. 657 | Var. 667 | Var. 677 | Var. 687 | Var. 697 | |
| LAC | Var. 608 | Var. 618 | Var. 628 | Var. 638 | Var. 648 | Var. 658 | Var. 668 | Var. 678 | Var. 688 | Var. 698 | |
| IAC | Var. 609 | Var. 619 | Var. 629 | Var. 639 | Var. 649 | Var. 659 | Var. 669 | Var. 679 | Var. 689 | Var. 699 | |
| SEC | Var. 610 | Var. 620 | Var. 630 | Var. 640 | Var. 650 | Var. 660 | Var. 670 | Var. 680 | Var. 690 | Var. 700 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 혼합형 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 701 | Var. 711 | Var. 721 | Var. 731 | Var. 741 | Var. 751 | Var. 761 | Var. 771 | Var. 781 | Var. 791 |
| UF/DF | Var. 702 | Var. 712 | Var. 722 | Var. 732 | Var. 742 | Var. 752 | Var. 762 | Var. 772 | Var. 782 | Var. 792 | |
| AEC | Var. 703 | Var. 713 | Var. 723 | Var. 733 | Var. 743 | Var. 753 | Var. 763 | Var. 773 | Var. 783 | Var. 793 | |
| CEC | Var. 704 | Var. 714 | Var. 724 | Var. 734 | Var. 744 | Var. 754 | Var. 764 | Var. 774 | Var. 784 | Var. 794 | |
| HIC | Var. 705 | Var. 715 | Var. 725 | Var. 735 | Var. 745 | Var. 755 | Var. 765 | Var. 775 | Var. 785 | Var. 795 | |
| HAC | Var. 706 | Var. 716 | Var. 726 | Var. 736 | Var. 746 | Var. 756 | Var. 766 | Var. 776 | Var. 786 | Var. 796 | |
| MMC | Var. 707 | Var. 717 | Var. 727 | Var. 737 | Var. 747 | Var. 757 | Var. 767 | Var. 777 | Var. 787 | Var. 797 | |
| LAC | Var. 708 | Var. 718 | Var. 728 | Var. 738 | Var. 748 | Var. 758 | Var. 768 | Var. 778 | Var. 788 | Var. 798 | |
| IAC | Var. 709 | Var. 719 | Var. 729 | Var. 739 | Var. 749 | Var. 759 | Var. 769 | Var. 779 | Var. 789 | Var. 799 | |
| SEC | Var. 710 | Var. 720 | Var. 730 | Var. 740 | Var. 750 | Var. 760 | Var. 770 | Var. 780 | Var. 790 | Var. 800 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 리간드 친화 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 801 | Var. 811 | Var. 821 | Var. 831 | Var. 841 | Var. 851 | Var. 861 | Var. 871 | Var. 881 | Var. 891 |
| UF/DF | Var. 802 | Var. 812 | Var. 822 | Var. 832 | Var. 842 | Var. 852 | Var. 862 | Var. 872 | Var. 882 | Var. 892 | |
| AEC | Var. 803 | Var. 813 | Var. 823 | Var. 833 | Var. 843 | Var. 853 | Var. 863 | Var. 873 | Var. 883 | Var. 893 | |
| CEC | Var. 804 | Var. 814 | Var. 824 | Var. 834 | Var. 844 | Var. 854 | Var. 864 | Var. 874 | Var. 884 | Var. 894 | |
| HIC | Var. 805 | Var. 815 | Var. 825 | Var. 835 | Var. 845 | Var. 855 | Var. 865 | Var. 875 | Var. 885 | Var. 895 | |
| HAC | Var. 806 | Var. 816 | Var. 826 | Var. 836 | Var. 846 | Var. 856 | Var. 866 | Var. 876 | Var. 886 | Var. 896 | |
| MMC | Var. 807 | Var. 817 | Var. 827 | Var. 837 | Var. 847 | Var. 857 | Var. 867 | Var. 877 | Var. 887 | Var. 897 | |
| LAC | Var. 808 | Var. 818 | Var. 828 | Var. 838 | Var. 848 | Var. 858 | Var. 868 | Var. 878 | Var. 888 | Var. 898 | |
| IAC | Var. 809 | Var. 819 | Var. 829 | Var. 839 | Var. 849 | Var. 859 | Var. 869 | Var. 879 | Var. 889 | Var. 899 | |
| SEC | Var. 810 | Var. 820 | Var. 830 | Var. 840 | Var. 850 | Var. 860 | Var. 870 | Var. 880 | Var. 890 | Var. 900 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 면역-친화 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 901 | Var. 911 | Var. 921 | Var. 931 | Var. 941 | Var. 951 | Var. 961 | Var. 971 | Var. 981 | Var. 991 |
| UF/DF | Var. 902 | Var. 912 | Var. 922 | Var. 932 | Var. 942 | Var. 952 | Var. 962 | Var. 972 | Var. 982 | Var. 992 | |
| AEC | Var. 903 | Var. 913 | Var. 923 | Var. 933 | Var. 943 | Var. 953 | Var. 963 | Var. 973 | Var. 983 | Var. 993 | |
| CEC | Var. 904 | Var. 914 | Var. 924 | Var. 934 | Var. 944 | Var. 954 | Var. 964 | Var. 974 | Var. 984 | Var. 994 | |
| HIC | Var. 905 | Var. 915 | Var. 925 | Var. 935 | Var. 945 | Var. 955 | Var. 965 | Var. 975 | Var. 985 | Var. 995 | |
| HAC | Var. 906 | Var. 916 | Var. 926 | Var. 936 | Var. 946 | Var. 956 | Var. 966 | Var. 976 | Var. 986 | Var. 996 | |
| MMC | Var. 907 | Var. 917 | Var. 927 | Var. 937 | Var. 947 | Var. 957 | Var. 967 | Var. 977 | Var. 987 | Var. 997 | |
| LAC | Var. 908 | Var. 918 | Var. 928 | Var. 938 | Var. 948 | Var. 958 | Var. 968 | Var. 978 | Var. 988 | Var. 998 | |
| IAC | Var. 909 | Var. 919 | Var. 929 | Var. 939 | Var. 949 | Var. 959 | Var. 969 | Var. 979 | Var. 989 | Var. 999 | |
| SEC | Var. 910 | Var. 920 | Var. 930 | Var. 940 | Var. 950 | Var. 960 | Var. 970 | Var. 980 | Var. 990 | Var. 1000 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
| 제1 크기 배제 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태. | |||||||||||
| 제2 풍부화 단계* | |||||||||||
| Ppt | UF/DF | AEC | CEC | HIC | HAC | MMC | LAC | IAC | SEC | ||
| 제3풍부화 단계 | Ppt | Var. 1001 | Var. 1011 | Var. 1021 | Var. 1031 | Var. 1041 | Var. 1051 | Var. 1061 | Var. 1071 | Var. 1081 | Var. 1091 |
| UF/DF | Var. 1002 | Var. 1012 | Var. 1022 | Var. 1032 | Var. 1042 | Var. 1052 | Var. 1062 | Var. 1072 | Var. 1082 | Var. 1092 | |
| AEC | Var. 1003 | Var. 1013 | Var. 1023 | Var. 1033 | Var. 1043 | Var. 1053 | Var. 1063 | Var. 1073 | Var. 1083 | Var. 1093 | |
| CEC | Var. 1004 | Var. 1014 | Var. 1024 | Var. 1034 | Var. 1044 | Var. 1054 | Var. 1064 | Var. 1074 | Var. 1084 | Var. 1094 | |
| HIC | Var. 1005 | Var. 1015 | Var. 1025 | Var. 1035 | Var. 1045 | Var. 1055 | Var. 1065 | Var. 1075 | Var. 1085 | Var. 1095 | |
| HAC | Var. 1006 | Var. 1016 | Var. 1026 | Var. 1036 | Var. 1046 | Var. 1056 | Var. 1066 | Var. 1076 | Var. 1086 | Var. 1096 | |
| MMC | Var. 1007 | Var. 1017 | Var. 1027 | Var. 1037 | Var. 1047 | Var. 1057 | Var. 1067 | Var. 1077 | Var. 1087 | Var. 1097 | |
| LAC | Var. 1008 | Var. 1018 | Var. 1028 | Var. 1038 | Var. 1048 | Var. 1058 | Var. 1068 | Var. 1078 | Var. 1088 | Var. 1098 | |
| IAC | Var. 1009 | Var. 1019 | Var. 1029 | Var. 1039 | Var. 1049 | Var. 1059 | Var. 1069 | Var. 1079 | Var. 1089 | Var. 1099 | |
| SEC | Var. 1010 | Var. 1020 | Var. 1030 | Var. 1040 | Var. 1050 | Var. 1060 | Var. 1070 | Var. 1080 | Var. 1090 | Var. 1100 | |
| * 표 1에 따름. | |||||||||||
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 방법의 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질(예컨대, 인자 H), 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택된다. 구체적인 실시형태에서, 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직한 실시형태에서, 단백질 조성물은 제조용 중간체이다.
본원에서 제공되는 방법의 임의의 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 10%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 25%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 50%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 75%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%만큼 감소된다. 또 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 5%만큼, 또는 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%만큼, 또는 테스트 시스템의 검출 한계 미만의 수준으로 감소된다.
일반적으로, 본원에 기술되는 방법에 있어서 필요로 하는 미분된 이산화규소(SiO2)의 양은 여러 가지 인자, 예를 들어 이에 제한되는 것은 아니지만, 조성물에 존재하는 단백질의 전체 양, 조성물 중 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐(예컨대, FXI, FXIa, FXII, and FXIIa)의 농도, 표적 단백질, 및 용액 조건(예컨대, pH, 전도도 등)에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 1g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 2g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2.5g의 농도에서 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도에서 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질 또는 적어도 0.02g/g 전체 단백질, 0.03g/g 전체 단백질, 0.04g/g 전체 단백질, 0.05g/g 전체 단백질, 0.06g/g 전체 단백질, 0.07g/g 전체 단백질, 0.08g/g 전체 단백질, 0.09g/g 전체 단백질, 0.1g/g 전체 단백질, 0.2g/g 전체 단백질, 0.3g/g 전체 단백질, 0.4g/g 전체 단백질, 0.5g/g 전체 단백질, 0.6g/g 전체 단백질, 0.7g/g 전체 단백질, 0.8g/g 전체 단백질, 0.9g/g 전체 단백질, 1.0g/g 전체 단백질, 1.5g/g 전체 단백질, 2.0g/g 전체 단백질, 2.5g/g 전체 단백질, 3.0g/g 전체 단백질, 3.5g/g 전체 단백질, 4.0g/g 전체 단백질, 4.5g/g 전체 단백질, 5.0g/g 전체 단백질, 5.5g/g 전체 단백질, 6.0g/g 전체 단백질, 6.5g/g 전체 단백질, 7.0g/g 전체 단백질, 7.5g/g 전체 단백질, 8.0g/g 전체 단백질, 8.5g/g 전체 단백질, 9.0g/g 전체 단백질, 9.5g/g 전체 단백질, 10.0g/g 전체 단백질, 또는 그 이상의 g/g 전체 단백질의 농도에서 첨가된다.
표적 단백질이 현탁된 혈장 침전물 분획으로부터 추출되는 임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물 내지 약 1.0㎏/㎏ 침전물, 약 0.02㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.8㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.03㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.7㎏/㎏ 침전물의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.07㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.06㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.03㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.05㎏/㎏ 침전물의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0㎏/㎏ 침전물의 최종 농도에서 첨가될 것이다.
A. 면역글로불린
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린(Ig) 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 Ig 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 Ig 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 하나의 실시형태에서, Ig 조성물은 IgG 조성물이다. 다른 실시형태에서, Ig 조성물은 IgA, IgM, IgG, 또는 이의 혼합 조성물이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 풍부화 Ig 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 Ig 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 Ig 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 Ig 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, Ig 조성물은 IgG 조성물이다. 다른 실시형태에서, Ig 조성물은 IgA, IgM, IgG, 또는 이의 혼합 조성물이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 제2 풍부화 Ig 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 Ig 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 Ig 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 Ig 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 Ig 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 하나의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, Ig 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, Ig 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 Ig 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 Ig 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7,표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, Ig 조성물은 제조용 중간체이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, Ig 조성물은 콘 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1946, 68(3): 459-475]; [J. Am. Chem. Soc. 72:465-474 (1950)]), 온클레이 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1949, 71(2): 541-550]), 도이치(Deutsch) 정제 절차(문헌[J. Biol. Chem. 164:109-118]), 호페(Hoppe) 정제 절차(문헌[Munch Med Wochenschr 1967 (34): 1749-1752]), 폭스베덴(Falksveden) 정제 절차(스웨덴 특허 제348942호), 폭스베덴 및 룬드블래드(Lundblad) 정제 절차(Methods of Plasma Protein Fractionation 1980), 레빙(Lebing) 정제 절차(문헌[Vox Sang 2003 (84):193-201]), 다나카(Tanaka) 정제 절차(문헌[Braz J Med Biol Res 2000 (33)37-30]), 테쉬너(Teschner) 정제 절차(문헌[Vox Sang, 2007 (92):42-55]), 니츠만 분별 절차(문헌[Helv. Chim. Acta 37:866-873]), 키슬러/니츠만 분별 절차(문헌[Vox Sang. 7:414-424 (1962)]), 바룬던(Barundern) 정제 절차(문헌[Vox Sang. 7:157-74 (1962)]), 코블레트(Koblet) 정제 절차(문헌[Vox Sang. 13:93-102 (1967)]), 미국 특허 제5,122,373호 또는 제5,177,194호에 개시된 정제 절차, 이의 변형 절차, 및 당업계에 공지된 유사 또는 동등한 정제 절차로부터의 IgG 제조용 중간체이다.
하나의 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 냉동 불량 콘 집단이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 콘 분획 I 상청액 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 콘 분획 III 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 콘 분획 II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 콘 분획 I+II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 침전물 G 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 키슬러/니츠만 침전물 B 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명은 재현탁된 IgG 분획 II+III 침전물에서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 유리하게, 재현탁된 IgG 분획 II+III 침전물에서 인자 XI, 인자 XII, 인자 Xia, 및/또는 인자 XIIa의 수준을 여과/원심분리 전에 전처리 단계의 추가에 의해 크게 감소될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 이러한 전처리 단계는 미분된 이산화규소(예컨대, 흄드 실리카, Aerosil(등록상표))의 첨가 후, 현탁액을 계속 혼합하는 동안 40 내지 80분의 항온처리를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 항온처리 기간은 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상일 수 있다. 일반적으로, 처리는 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행될 것이다. 임의의 실시형태에서, 처리는 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 또는 10℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 처리는 약 2℃ 내지 약 10℃에서 실행된다.
흄드 실리카 처리의 영향은 실시예 3, 6, 및 7에 나타낸 결과에 의해 예시된다. 이들 실시예에서, 분획 II+III 침전물은 재현탁되고 미분된 이산화규소의 양을 변화시키면서 처리된다. 표 22, 표 27, 표 28, 및 표 29에서 알 수 있는 바와 같이, 인자 XI 및 XII 세린 프로테아제 활성 및 지모겐 함량은 현탁액을 SiO2로 처리함으로써 적어도 90% 감소될 수 있다.
임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트 내지 약 100g/㎏ II+III 페이스트(즉, 1:15의 비율로 추출되는 변형된 분획 II+III 침전물에 대하여, 흄드 실리카는 약 20g/16㎏ II+III 현탁액 내지 약 100g/16㎏ II+III 현탁액의 농도에서, 또는 약 0.125%(w/w) 내지 약 0.625%(w/w)의 최종 농도에서 첨가되어야 함)의 농도에서 첨가된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100g/㎏ II+III 페이스트의 농도에서 첨가될 수 있다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카(예컨대, Aerosil 380 또는 동등물)는 최종 농도 약 40g/16㎏ II+III까지 변형된 분획 II+III 현탁액에 첨가된다. 혼합은 약 2 내지 8℃에서 적어도 50 내지 70분 동안 일어난다.
임의의 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 1g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2.5g의 농도에서 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질 또는 전체 단백질 g당 적어도 0.02g, 0.03g, 0.04g, 0.05g, 0.06g, 0.07g, 0.08g, 0.09g, 0.1g, 0.2g, 0.3g, 0.4g, 0.5g, 0.6g, 0.7g, 0.8g, 0.9g, 1.0g, 1.5g, 2.0g, 2.5g, 3.0g, 3.5g, 4.0g, 4.5g, 5.0g, 5.5g, 6.0g, 6.5g, 7.0g, 7.5g, 8.0g, 8.5g, 9.0g, 9.5g, 10.0g, 또는 그 이상의 농도에서 첨가된다.
임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.8㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.7㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 것이다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 분획 II+III 현탁액의 여과 또는 원심분리 청징 전에 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카 처리는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.04㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.08㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.09㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 0.1㎏/㎏ II+III 페이스트의 첨가를 포함할 것이고, 혼합물은 약 2℃ 내지 약 9℃의 온도에서 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상 동안 항온처리될 것이다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 잔여 피브리노겐, 아마이드 분해 활성, 및/또는 프리칼리크레인 활성제 활성의 수준을 감소시킨 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 구체적인 실시형태에서, 공정 개선은 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현되며, 이는 면역글로불린 제조물에서 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시킨다.
일반적으로, 면역글로불린 조성물로부터의 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 제거는, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하는 pH 및 전도도의 용액 조건 하에서 면역글로불린 함유 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처리함으로써 달성될 수 있다. 실시예에 나타낸 바와 같이, 적당한 조건은 낮은 pH 및 낮은 전도도를 포함한다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린 조성물에서 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 상기 조성물로부터 SiO2를 제거하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.6 내지 약 5.6의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.7 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.1의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 또는 약 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 이하 또는 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 3.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 상기 조성물로부터 SiO2를 제거하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.5mS/㎝ 내지 약 2.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 1.3mS/㎝ 내지 약 1.7mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.7mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.6mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.5mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.3mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.2mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.1mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.2mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.3mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.5mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝ 이하의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 이하 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝ 이하의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 낮은 pH 및 낮은 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 상기 조성물로부터 SiO2를 제거하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 더 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
| 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태 | ||||||||||
| pH | ||||||||||
| 4.0-7.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | 4.5-5.0 | ||
| 이온 강도(mS/㎝) | 0.1-2.0 | Var. 1222 | Var. 1638 | Var. 1638 | Var. 1638 | Var. 1638 | Var. 1638 | Var. 1638 | Var. 1638 | Var. 1638 |
| 0.1-1.9 | Var. 1223 | Var. 1639 | Var. 1639 | Var. 1639 | Var. 1639 | Var. 1639 | Var. 1639 | Var. 1639 | Var. 1639 | |
| 0.1-1.8 | Var. 1224 | Var. 1640 | Var. 1640 | Var. 1640 | Var. 1640 | Var. 1640 | Var. 1640 | Var. 1640 | Var. 1640 | |
| 0.1-1.7 | Var. 1225 | Var. 1641 | Var. 1641 | Var. 1641 | Var. 1641 | Var. 1641 | Var. 1641 | Var. 1641 | Var. 1641 | |
| 0.1-1.6 | Var. 1226 | Var. 1642 | Var. 1642 | Var. 1642 | Var. 1642 | Var. 1642 | Var. 1642 | Var. 1642 | Var. 1642 | |
| 0.1-1.5 | Var. 1227 | Var. 1643 | Var. 1643 | Var. 1643 | Var. 1643 | Var. 1643 | Var. 1643 | Var. 1643 | Var. 1643 | |
| 0.1-1.4 | Var. 1228 | Var. 1644 | Var. 1644 | Var. 1644 | Var. 1644 | Var. 1644 | Var. 1644 | Var. 1644 | Var. 1644 | |
| 0.1-1.3 | Var. 1229 | Var. 1645 | Var. 1645 | Var. 1645 | Var. 1645 | Var. 1645 | Var. 1645 | Var. 1645 | Var. 1645 | |
| 0.1-1.2 | Var. 1230 | Var. 1646 | Var. 1646 | Var. 1646 | Var. 1646 | Var. 1646 | Var. 1646 | Var. 1646 | Var. 1646 | |
| 0.1-1.1 | Var. 1231 | Var. 1647 | Var. 1647 | Var. 1647 | Var. 1647 | Var. 1647 | Var. 1647 | Var. 1647 | Var. 1647 | |
| 0.1-1.0 | Var. 1232 | Var. 1648 | Var. 1648 | Var. 1648 | Var. 1648 | Var. 1648 | Var. 1648 | Var. 1648 | Var. 1648 | |
| 0.1-0.9 | Var. 1233 | Var. 1649 | Var. 1649 | Var. 1649 | Var. 1649 | Var. 1649 | Var. 1649 | Var. 1649 | Var. 1649 | |
| 0.1-0.8 | Var. 1234 | Var. 1650 | Var. 1650 | Var. 1650 | Var. 1650 | Var. 1650 | Var. 1650 | Var. 1650 | Var. 1650 | |
| 0.2-2.0 | Var. 1235 | Var. 1651 | Var. 1651 | Var. 1651 | Var. 1651 | Var. 1651 | Var. 1651 | Var. 1651 | Var. 1651 | |
| 0.2-1.5 | Var. 1236 | Var. 1652 | Var. 1652 | Var. 1652 | Var. 1652 | Var. 1652 | Var. 1652 | Var. 1652 | Var. 1652 | |
| 0.2-1.0 | Var. 1237 | Var. 1653 | Var. 1653 | Var. 1653 | Var. 1653 | Var. 1653 | Var. 1653 | Var. 1653 | Var. 1653 | |
| 0.2-0.9 | Var. 1238 | Var. 1654 | Var. 1654 | Var. 1654 | Var. 1654 | Var. 1654 | Var. 1654 | Var. 1654 | Var. 1654 | |
| 0.2-0.8 | Var. 1239 | Var. 1655 | Var. 1655 | Var. 1655 | Var. 1655 | Var. 1655 | Var. 1655 | Var. 1655 | Var. 1655 | |
| 0.3-1.0 | Var. 1240 | Var. 1656 | Var. 1656 | Var. 1656 | Var. 1656 | Var. 1656 | Var. 1656 | Var. 1656 | Var. 1656 | |
| 0.3-0.9 | Var. 1241 | Var. 1657 | Var. 1657 | Var. 1657 | Var. 1657 | Var. 1657 | Var. 1657 | Var. 1657 | Var. 1657 | |
| 0.3-0.8 | Var. 1242 | Var. 1658 | Var. 1658 | Var. 1658 | Var. 1658 | Var. 1658 | Var. 1658 | Var. 1658 | Var. 1658 | |
| 0.4-1.0 | Var. 1243 | Var. 1659 | Var. 1659 | Var. 1659 | Var. 1659 | Var. 1659 | Var. 1659 | Var. 1659 | Var. 1659 | |
| 0.4-0.9 | Var. 1244 | Var. 1660 | Var. 1660 | Var. 1660 | Var. 1660 | Var. 1660 | Var. 1660 | Var. 1660 | Var. 1660 | |
| 0.4-0.8 | Var. 1245 | Var. 1661 | Var. 1661 | Var. 1661 | Var. 1661 | Var. 1661 | Var. 1661 | Var. 1661 | Var. 1661 | |
| 0.5-1.0 | Var. 1246 | Var. 1662 | Var. 1662 | Var. 1662 | Var. 1662 | Var. 1662 | Var. 1662 | Var. 1662 | Var. 1662 | |
| 0.5-0.9 | Var. 1247 | Var. 1663 | Var. 1663 | Var. 1663 | Var. 1663 | Var. 1663 | Var. 1663 | Var. 1663 | Var. 1663 | |
| 0.5-0.8 | Var. 1248 | Var. 1664 | Var. 1664 | Var. 1664 | Var. 1664 | Var. 1664 | Var. 1664 | Var. 1664 | Var. 1664 | |
| 0.6-1.0 | Var. 1249 | Var. 1665 | Var. 1665 | Var. 1665 | Var. 1665 | Var. 1665 | Var. 1665 | Var. 1665 | Var. 1665 | |
| 0.6-0.9 | Var. 1250 | Var. 1666 | Var. 1666 | Var. 1666 | Var. 1666 | Var. 1666 | Var. 1666 | Var. 1666 | Var. 1666 | |
| 0.6-0.8 | Var. 1251 | Var. 1667 | Var. 1667 | Var. 1667 | Var. 1667 | Var. 1667 | Var. 1667 | Var. 1667 | Var. 1667 | |
| 0.7-1.0 | Var. 1252 | Var. 1668 | Var. 1668 | Var. 1668 | Var. 1668 | Var. 1668 | Var. 1668 | Var. 1668 | Var. 1668 | |
| 0.7-0.9 | Var. 1253 | Var. 1669 | Var. 1669 | Var. 1669 | Var. 1669 | Var. 1669 | Var. 1669 | Var. 1669 | Var. 1669 | |
| 0.1 | Var. 1254 | Var. 1670 | Var. 1670 | Var. 1670 | Var. 1670 | Var. 1670 | Var. 1670 | Var. 1670 | Var. 1670 | |
| 0.2 | Var. 1255 | Var. 1671 | Var. 1671 | Var. 1671 | Var. 1671 | Var. 1671 | Var. 1671 | Var. 1671 | Var. 1671 | |
| 0.3 | Var. 1256 | Var. 1672 | Var. 1672 | Var. 1672 | Var. 1672 | Var. 1672 | Var. 1672 | Var. 1672 | Var. 1672 | |
| 0.4 | Var. 1257 | Var. 1673 | Var. 1673 | Var. 1673 | Var. 1673 | Var. 1673 | Var. 1673 | Var. 1673 | Var. 1673 | |
| 0.5 | Var. 1258 | Var. 1674 | Var. 1674 | Var. 1674 | Var. 1674 | Var. 1674 | Var. 1674 | Var. 1674 | Var. 1674 | |
| 0.6 | Var. 1259 | Var. 1675 | Var. 1675 | Var. 1675 | Var. 1675 | Var. 1675 | Var. 1675 | Var. 1675 | Var. 1675 | |
| 0.7 | Var. 1260 | Var. 1676 | Var. 1676 | Var. 1676 | Var. 1676 | Var. 1676 | Var. 1676 | Var. 1676 | Var. 1676 | |
| 0.8 | Var. 1261 | Var. 1677 | Var. 1677 | Var. 1677 | Var. 1677 | Var. 1677 | Var. 1677 | Var. 1677 | Var. 1677 | |
| 0.9 | Var. 1262 | Var. 1678 | Var. 1678 | Var. 1678 | Var. 1678 | Var. 1678 | Var. 1678 | Var. 1678 | Var. 1678 | |
| 1 | Var. 1263 | Var. 1679 | Var. 1679 | Var. 1679 | Var. 1679 | Var. 1679 | Var. 1679 | Var. 1679 | Var. 1679 | |
| 1.1 | Var. 1264 | Var. 1680 | Var. 1680 | Var. 1680 | Var. 1680 | Var. 1680 | Var. 1680 | Var. 1680 | Var. 1680 | |
| 1.2 | Var. 1265 | Var. 1681 | Var. 1681 | Var. 1681 | Var. 1681 | Var. 1681 | Var. 1681 | Var. 1681 | Var. 1681 | |
| 1.3 | Var. 1266 | Var. 1682 | Var. 1682 | Var. 1682 | Var. 1682 | Var. 1682 | Var. 1682 | Var. 1682 | Var. 1682 | |
| 1.4 | Var. 1267 | Var. 1683 | Var. 1683 | Var. 1683 | Var. 1683 | Var. 1683 | Var. 1683 | Var. 1683 | Var. 1683 | |
| 1.5 | Var. 1268 | Var. 1684 | Var. 1684 | Var. 1684 | Var. 1684 | Var. 1684 | Var. 1684 | Var. 1684 | Var. 1684 | |
| 1.6 | Var. 1269 | Var. 1685 | Var. 1685 | Var. 1685 | Var. 1685 | Var. 1685 | Var. 1685 | Var. 1685 | Var. 1685 | |
| 1.7 | Var. 1270 | Var. 1686 | Var. 1686 | Var. 1686 | Var. 1686 | Var. 1686 | Var. 1686 | Var. 1686 | Var. 1686 | |
| 1.8 | Var. 1271 | Var. 1687 | Var. 1687 | Var. 1687 | Var. 1687 | Var. 1687 | Var. 1687 | Var. 1687 | Var. 1687 | |
| 1.9 | Var. 1272 | Var. 1688 | Var. 1688 | Var. 1688 | Var. 1688 | Var. 1688 | Var. 1688 | Var. 1688 | Var. 1688 | |
| 2 | Var. 1273 | Var. 1689 | Var. 1689 | Var. 1689 | Var. 1689 | Var. 1689 | Var. 1689 | Var. 1689 | Var. 1689 | |
| 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태 | ||||||||||
| pH | ||||||||||
| 5.0-7.0 | 5.0-6.5 | 5.0-6.0 | 5.0-5.5 | 4.6-5.6 | 4.7-5.5 | 4.8-5.4 | 4.9-5.3 | 5.0-5.2 | ||
| 이온 강도(mS/㎝) | 0.1-2.0 | Var. 1690 | Var. 1742 | Var. 1794 | Var. 1846 | Var. 1898 | Var. 1950 | Var. 2002 | Var. 2054 | Var. 2106 |
| 0.1-1.9 | Var. 1691 | Var. 1743 | Var. 1795 | Var. 1847 | Var. 1899 | Var. 1951 | Var. 2003 | Var. 2055 | Var. 2107 | |
| 0.1-1.8 | Var. 1692 | Var. 1744 | Var. 1796 | Var. 1848 | Var. 1900 | Var. 1952 | Var. 2004 | Var. 2056 | Var. 2108 | |
| 0.1-1.7 | Var. 1693 | Var. 1745 | Var. 1797 | Var. 1849 | Var. 1901 | Var. 1953 | Var. 2005 | Var. 2057 | Var. 2109 | |
| 0.1-1.6 | Var. 1694 | Var. 1746 | Var. 1798 | Var. 1850 | Var. 1902 | Var. 1954 | Var. 2006 | Var. 2058 | Var. 2110 | |
| 0.1-1.5 | Var. 1695 | Var. 1747 | Var. 1799 | Var. 1851 | Var. 1903 | Var. 1955 | Var. 2007 | Var. 2059 | Var. 2111 | |
| 0.1-1.4 | Var. 1696 | Var. 1748 | Var. 1800 | Var. 1852 | Var. 1904 | Var. 1956 | Var. 2008 | Var. 2060 | Var. 2112 | |
| 0.1-1.3 | Var. 1697 | Var. 1749 | Var. 1801 | Var. 1853 | Var. 1905 | Var. 1957 | Var. 2009 | Var. 2061 | Var. 2113 | |
| 0.1-1.2 | Var. 1698 | Var. 1750 | Var. 1802 | Var. 1854 | Var. 1906 | Var. 1958 | Var. 2010 | Var. 2062 | Var. 2114 | |
| 0.1-1.1 | Var. 1699 | Var. 1751 | Var. 1803 | Var. 1855 | Var. 1907 | Var. 1959 | Var. 2011 | Var. 2063 | Var. 2115 | |
| 0.1-1.0 | Var. 1700 | Var. 1752 | Var. 1804 | Var. 1856 | Var. 1908 | Var. 1960 | Var. 2012 | Var. 2064 | Var. 2116 | |
| 0.1-0.9 | Var. 1701 | Var. 1753 | Var. 1805 | Var. 1857 | Var. 1909 | Var. 1961 | Var. 2013 | Var. 2065 | Var. 2117 | |
| 0.1-0.8 | Var. 1702 | Var. 1754 | Var. 1806 | Var. 1858 | Var. 1910 | Var. 1962 | Var. 2014 | Var. 2066 | Var. 2118 | |
| 0.2-2.0 | Var. 1703 | Var. 1755 | Var. 1807 | Var. 1859 | Var. 1911 | Var. 1963 | Var. 2015 | Var. 2067 | Var. 2119 | |
| 0.2-1.5 | Var. 1704 | Var. 1756 | Var. 1808 | Var. 1860 | Var. 1912 | Var. 1964 | Var. 2016 | Var. 2068 | Var. 2120 | |
| 0.2-1.0 | Var. 1705 | Var. 1757 | Var. 1809 | Var. 1861 | Var. 1913 | Var. 1965 | Var. 2017 | Var. 2069 | Var. 2121 | |
| 0.2-0.9 | Var. 1706 | Var. 1758 | Var. 1810 | Var. 1862 | Var. 1914 | Var. 1966 | Var. 2018 | Var. 2070 | Var. 2122 | |
| 0.2-0.8 | Var. 1707 | Var. 1759 | Var. 1811 | Var. 1863 | Var. 1915 | Var. 1967 | Var. 2019 | Var. 2071 | Var. 2123 | |
| 0.3-1.0 | Var. 1708 | Var. 1760 | Var. 1812 | Var. 1864 | Var. 1916 | Var. 1968 | Var. 2020 | Var. 2072 | Var. 2124 | |
| 0.3-0.9 | Var. 1709 | Var. 1761 | Var. 1813 | Var. 1865 | Var. 1917 | Var. 1969 | Var. 2021 | Var. 2073 | Var. 2125 | |
| 0.3-0.8 | Var. 1710 | Var. 1762 | Var. 1814 | Var. 1866 | Var. 1918 | Var. 1970 | Var. 2022 | Var. 2074 | Var. 2126 | |
| 0.4-1.0 | Var. 1711 | Var. 1763 | Var. 1815 | Var. 1867 | Var. 1919 | Var. 1971 | Var. 2023 | Var. 2075 | Var. 2127 | |
| 0.4-0.9 | Var. 1712 | Var. 1764 | Var. 1816 | Var. 1868 | Var. 1920 | Var. 1972 | Var. 2024 | Var. 2076 | Var. 2128 | |
| 0.4-0.8 | Var. 1713 | Var. 1765 | Var. 1817 | Var. 1869 | Var. 1921 | Var. 1973 | Var. 2025 | Var. 2077 | Var. 2129 | |
| 0.5-1.0 | Var. 1714 | Var. 1766 | Var. 1818 | Var. 1870 | Var. 1922 | Var. 1974 | Var. 2026 | Var. 2078 | Var. 2130 | |
| 0.5-0.9 | Var. 1715 | Var. 1767 | Var. 1819 | Var. 1871 | Var. 1923 | Var. 1975 | Var. 2027 | Var. 2079 | Var. 2131 | |
| 0.5-0.8 | Var. 1716 | Var. 1768 | Var. 1820 | Var. 1872 | Var. 1924 | Var. 1976 | Var. 2028 | Var. 2080 | Var. 2132 | |
| 0.6-1.0 | Var. 1717 | Var. 1769 | Var. 1821 | Var. 1873 | Var. 1925 | Var. 1977 | Var. 2029 | Var. 2081 | Var. 2133 | |
| 0.6-0.9 | Var. 1718 | Var. 1770 | Var. 1822 | Var. 1874 | Var. 1926 | Var. 1978 | Var. 2030 | Var. 2082 | Var. 2134 | |
| 0.6-0.8 | Var. 1719 | Var. 1771 | Var. 1823 | Var. 1875 | Var. 1927 | Var. 1979 | Var. 2031 | Var. 2083 | Var. 2135 | |
| 0.7-1.0 | Var. 1720 | Var. 1772 | Var. 1824 | Var. 1876 | Var. 1928 | Var. 1980 | Var. 2032 | Var. 2084 | Var. 2136 | |
| 0.7-0.9 | Var. 1721 | Var. 1773 | Var. 1825 | Var. 1877 | Var. 1929 | Var. 1981 | Var. 2033 | Var. 2085 | Var. 2137 | |
| 0.1 | Var. 1722 | Var. 1774 | Var. 1826 | Var. 1878 | Var. 1930 | Var. 1982 | Var. 2034 | Var. 2086 | Var. 2138 | |
| 0.2 | Var. 1723 | Var. 1775 | Var. 1827 | Var. 1879 | Var. 1931 | Var. 1983 | Var. 2035 | Var. 2087 | Var. 2139 | |
| 0.3 | Var. 1724 | Var. 1776 | Var. 1828 | Var. 1880 | Var. 1932 | Var. 1984 | Var. 2036 | Var. 2088 | Var. 2140 | |
| 0.4 | Var. 1725 | Var. 1777 | Var. 1829 | Var. 1881 | Var. 1933 | Var. 1985 | Var. 2037 | Var. 2089 | Var. 2141 | |
| 0.5 | Var. 1726 | Var. 1778 | Var. 1830 | Var. 1882 | Var. 1934 | Var. 1986 | Var. 2038 | Var. 2090 | Var. 2142 | |
| 0.6 | Var. 1727 | Var. 1779 | Var. 1831 | Var. 1883 | Var. 1935 | Var. 1987 | Var. 2039 | Var. 2091 | Var. 2143 | |
| 0.7 | Var. 1728 | Var. 1780 | Var. 1832 | Var. 1884 | Var. 1936 | Var. 1988 | Var. 2040 | Var. 2092 | Var. 2144 | |
| 0.8 | Var. 1729 | Var. 1781 | Var. 1833 | Var. 1885 | Var. 1937 | Var. 1989 | Var. 2041 | Var. 2093 | Var. 2145 | |
| 0.9 | Var. 1730 | Var. 1782 | Var. 1834 | Var. 1886 | Var. 1938 | Var. 1990 | Var. 2042 | Var. 2094 | Var. 2146 | |
| 1 | Var. 1731 | Var. 1783 | Var. 1835 | Var. 1887 | Var. 1939 | Var. 1991 | Var. 2043 | Var. 2095 | Var. 2147 | |
| 1.1 | Var. 1732 | Var. 1784 | Var. 1836 | Var. 1888 | Var. 1940 | Var. 1992 | Var. 2044 | Var. 2096 | Var. 2148 | |
| 1.2 | Var. 1733 | Var. 1785 | Var. 1837 | Var. 1889 | Var. 1941 | Var. 1993 | Var. 2045 | Var. 2097 | Var. 2149 | |
| 1.3 | Var. 1734 | Var. 1786 | Var. 1838 | Var. 1890 | Var. 1942 | Var. 1994 | Var. 2046 | Var. 2098 | Var. 2150 | |
| 1.4 | Var. 1735 | Var. 1787 | Var. 1839 | Var. 1891 | Var. 1943 | Var. 1995 | Var. 2047 | Var. 2099 | Var. 2151 | |
| 1.5 | Var. 1736 | Var. 1788 | Var. 1840 | Var. 1892 | Var. 1944 | Var. 1996 | Var. 2048 | Var. 2100 | Var. 2152 | |
| 1.6 | Var. 1737 | Var. 1789 | Var. 1841 | Var. 1893 | Var. 1945 | Var. 1997 | Var. 2049 | Var. 2101 | Var. 2153 | |
| 1.7 | Var. 1738 | Var. 1790 | Var. 1842 | Var. 1894 | Var. 1946 | Var. 1998 | Var. 2050 | Var. 2102 | Var. 2154 | |
| 1.8 | Var. 1739 | Var. 1791 | Var. 1843 | Var. 1895 | Var. 1947 | Var. 1999 | Var. 2051 | Var. 2103 | Var. 2155 | |
| 1.9 | Var. 1740 | Var. 1792 | Var. 1844 | Var. 1896 | Var. 1948 | Var. 2000 | Var. 2052 | Var. 2104 | Var. 2156 | |
| 2 | Var. 1741 | Var. 1793 | Var. 1845 | Var. 1897 | Var. 1949 | Var. 2001 | Var. 2053 | Var. 2105 | Var. 2157 | |
| 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태 | ||||||||||
| pH | ||||||||||
| 5.1 | NMT 4.0 | NMT 4.2 | NMT 4.4 | NMT 4.6 | NMT 4.8 | NMT 5.0 | NMT 5.2 | NMT 5.4 | ||
| 이온 강도(mS/㎝) | 0.1-2.0 | Var. 2158 | Var. 2210 | Var. 2262 | Var. 2314 | Var. 2366 | Var. 2418 | Var. 2470 | Var. 2522 | Var. 2574 |
| 0.1-1.9 | Var. 2159 | Var. 2211 | Var. 2263 | Var. 2315 | Var. 2367 | Var. 2419 | Var. 2471 | Var. 2523 | Var. 2575 | |
| 0.1-1.8 | Var. 2160 | Var. 2212 | Var. 2264 | Var. 2316 | Var. 2368 | Var. 2420 | Var. 2472 | Var. 2524 | Var. 2576 | |
| 0.1-1.7 | Var. 2161 | Var. 2213 | Var. 2265 | Var. 2317 | Var. 2369 | Var. 2421 | Var. 2473 | Var. 2525 | Var. 2577 | |
| 0.1-1.6 | Var. 2162 | Var. 2214 | Var. 2266 | Var. 2318 | Var. 2370 | Var. 2422 | Var. 2474 | Var. 2526 | Var. 2578 | |
| 0.1-1.5 | Var. 2163 | Var. 2215 | Var. 2267 | Var. 2319 | Var. 2371 | Var. 2423 | Var. 2475 | Var. 2527 | Var. 2579 | |
| 0.1-1.4 | Var. 2164 | Var. 2216 | Var. 2268 | Var. 2320 | Var. 2372 | Var. 2424 | Var. 2476 | Var. 2528 | Var. 2580 | |
| 0.1-1.3 | Var. 2165 | Var. 2217 | Var. 2269 | Var. 2321 | Var. 2373 | Var. 2425 | Var. 2477 | Var. 2529 | Var. 2581 | |
| 0.1-1.2 | Var. 2166 | Var. 2218 | Var. 2270 | Var. 2322 | Var. 2374 | Var. 2426 | Var. 2478 | Var. 2530 | Var. 2582 | |
| 0.1-1.1 | Var. 2167 | Var. 2219 | Var. 2271 | Var. 2323 | Var. 2375 | Var. 2427 | Var. 2479 | Var. 2531 | Var. 2583 | |
| 0.1-1.0 | Var. 2168 | Var. 2220 | Var. 2272 | Var. 2324 | Var. 2376 | Var. 2428 | Var. 2480 | Var. 2532 | Var. 2584 | |
| 0.1-0.9 | Var. 2169 | Var. 2221 | Var. 2273 | Var. 2325 | Var. 2377 | Var. 2429 | Var. 2481 | Var. 2533 | Var. 2585 | |
| 0.1-0.8 | Var. 2170 | Var. 2222 | Var. 2274 | Var. 2326 | Var. 2378 | Var. 2430 | Var. 2482 | Var. 2534 | Var. 2586 | |
| 0.2-2.0 | Var. 2171 | Var. 2223 | Var. 2275 | Var. 2327 | Var. 2379 | Var. 2431 | Var. 2483 | Var. 2535 | Var. 2587 | |
| 0.2-1.5 | Var. 2172 | Var. 2224 | Var. 2276 | Var. 2328 | Var. 2380 | Var. 2432 | Var. 2484 | Var. 2536 | Var. 2588 | |
| 0.2-1.0 | Var. 2173 | Var. 2225 | Var. 2277 | Var. 2329 | Var. 2381 | Var. 2433 | Var. 2485 | Var. 2537 | Var. 2589 | |
| 0.2-0.9 | Var. 2174 | Var. 2226 | Var. 2278 | Var. 2330 | Var. 2382 | Var. 2434 | Var. 2486 | Var. 2538 | Var. 2590 | |
| 0.2-0.8 | Var. 2175 | Var. 2227 | Var. 2279 | Var. 2331 | Var. 2383 | Var. 2435 | Var. 2487 | Var. 2539 | Var. 2591 | |
| 0.3-1.0 | Var. 2176 | Var. 2228 | Var. 2280 | Var. 2332 | Var. 2384 | Var. 2436 | Var. 2488 | Var. 2540 | Var. 2592 | |
| 0.3-0.9 | Var. 2177 | Var. 2229 | Var. 2281 | Var. 2333 | Var. 2385 | Var. 2437 | Var. 2489 | Var. 2541 | Var. 2593 | |
| 0.3-0.8 | Var. 2178 | Var. 2230 | Var. 2282 | Var. 2334 | Var. 2386 | Var. 2438 | Var. 2490 | Var. 2542 | Var. 2594 | |
| 0.4-1.0 | Var. 2179 | Var. 2231 | Var. 2283 | Var. 2335 | Var. 2387 | Var. 2439 | Var. 2491 | Var. 2543 | Var. 2595 | |
| 0.4-0.9 | Var. 2180 | Var. 2232 | Var. 2284 | Var. 2336 | Var. 2388 | Var. 2440 | Var. 2492 | Var. 2544 | Var. 2596 | |
| 0.4-0.8 | Var. 2181 | Var. 2233 | Var. 2285 | Var. 2337 | Var. 2389 | Var. 2441 | Var. 2493 | Var. 2545 | Var. 2597 | |
| 0.5-1.0 | Var. 2182 | Var. 2234 | Var. 2286 | Var. 2338 | Var. 2390 | Var. 2442 | Var. 2494 | Var. 2546 | Var. 2598 | |
| 0.5-0.9 | Var. 2183 | Var. 2235 | Var. 2287 | Var. 2339 | Var. 2391 | Var. 2443 | Var. 2495 | Var. 2547 | Var. 2599 | |
| 0.5-0.8 | Var. 2184 | Var. 2236 | Var. 2288 | Var. 2340 | Var. 2392 | Var. 2444 | Var. 2496 | Var. 2548 | Var. 2600 | |
| 0.6-1.0 | Var. 2185 | Var. 2237 | Var. 2289 | Var. 2341 | Var. 2393 | Var. 2445 | Var. 2497 | Var. 2549 | Var. 2601 | |
| 0.6-0.9 | Var. 2186 | Var. 2238 | Var. 2290 | Var. 2342 | Var. 2394 | Var. 2446 | Var. 2498 | Var. 2550 | Var. 2602 | |
| 0.6-0.8 | Var. 2187 | Var. 2239 | Var. 2291 | Var. 2343 | Var. 2395 | Var. 2447 | Var. 2499 | Var. 2551 | Var. 2603 | |
| 0.7-1.0 | Var. 2188 | Var. 2240 | Var. 2292 | Var. 2344 | Var. 2396 | Var. 2448 | Var. 2500 | Var. 2552 | Var. 2604 | |
| 0.7-0.9 | Var. 2189 | Var. 2241 | Var. 2293 | Var. 2345 | Var. 2397 | Var. 2449 | Var. 2501 | Var. 2553 | Var. 2605 | |
| 0.1 | Var. 2190 | Var. 2242 | Var. 2294 | Var. 2346 | Var. 2398 | Var. 2450 | Var. 2502 | Var. 2554 | Var. 2606 | |
| 0.2 | Var. 2191 | Var. 2243 | Var. 2295 | Var. 2347 | Var. 2399 | Var. 2451 | Var. 2503 | Var. 2555 | Var. 2607 | |
| 0.3 | Var. 2192 | Var. 2244 | Var. 2296 | Var. 2348 | Var. 2400 | Var. 2452 | Var. 2504 | Var. 2556 | Var. 2608 | |
| 0.4 | Var. 2193 | Var. 2245 | Var. 2297 | Var. 2349 | Var. 2401 | Var. 2453 | Var. 2505 | Var. 2557 | Var. 2609 | |
| 0.5 | Var. 2194 | Var. 2246 | Var. 2298 | Var. 2350 | Var. 2402 | Var. 2454 | Var. 2506 | Var. 2558 | Var. 2610 | |
| 0.6 | Var. 2195 | Var. 2247 | Var. 2299 | Var. 2351 | Var. 2403 | Var. 2455 | Var. 2507 | Var. 2559 | Var. 2611 | |
| 0.7 | Var. 2196 | Var. 2248 | Var. 2300 | Var. 2352 | Var. 2404 | Var. 2456 | Var. 2508 | Var. 2560 | Var. 2612 | |
| 0.8 | Var. 2197 | Var. 2249 | Var. 2301 | Var. 2353 | Var. 2405 | Var. 2457 | Var. 2509 | Var. 2561 | Var. 2613 | |
| 0.9 | Var. 2198 | Var. 2250 | Var. 2302 | Var. 2354 | Var. 2406 | Var. 2458 | Var. 2510 | Var. 2562 | Var. 2614 | |
| 1 | Var. 2199 | Var. 2251 | Var. 2303 | Var. 2355 | Var. 2407 | Var. 2459 | Var. 2511 | Var. 2563 | Var. 2615 | |
| 1.1 | Var. 2200 | Var. 2252 | Var. 2304 | Var. 2356 | Var. 2408 | Var. 2460 | Var. 2512 | Var. 2564 | Var. 2616 | |
| 1.2 | Var. 2201 | Var. 2253 | Var. 2305 | Var. 2357 | Var. 2409 | Var. 2461 | Var. 2513 | Var. 2565 | Var. 2617 | |
| 1.3 | Var. 2202 | Var. 2254 | Var. 2306 | Var. 2358 | Var. 2410 | Var. 2462 | Var. 2514 | Var. 2566 | Var. 2618 | |
| 1.4 | Var. 2203 | Var. 2255 | Var. 2307 | Var. 2359 | Var. 2411 | Var. 2463 | Var. 2515 | Var. 2567 | Var. 2619 | |
| 1.5 | Var. 2204 | Var. 2256 | Var. 2308 | Var. 2360 | Var. 2412 | Var. 2464 | Var. 2516 | Var. 2568 | Var. 2620 | |
| 1.6 | Var. 2205 | Var. 2257 | Var. 2309 | Var. 2361 | Var. 2413 | Var. 2465 | Var. 2517 | Var. 2569 | Var. 2621 | |
| 1.7 | Var. 2206 | Var. 2258 | Var. 2310 | Var. 2362 | Var. 2414 | Var. 2466 | Var. 2518 | Var. 2570 | Var. 2622 | |
| 1.8 | Var. 2207 | Var. 2259 | Var. 2311 | Var. 2363 | Var. 2415 | Var. 2467 | Var. 2519 | Var. 2571 | Var. 2623 | |
| 1.9 | Var. 2208 | Var. 2260 | Var. 2312 | Var. 2364 | Var. 2416 | Var. 2468 | Var. 2520 | Var. 2572 | Var. 2624 | |
| 2 | Var. 2209 | Var. 2261 | Var. 2313 | Var. 2365 | Var. 2417 | Var. 2469 | Var. 2521 | Var. 2573 | Var. 2625 | |
| NMT = 이하 | ||||||||||
| 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태 | |||||||||
| pH | |||||||||
| NMT 5.6 | NMT 5.8 | NMT 6.0 | NMT 6.2 | NMT 6.4 | NMT 6.6 | NMT 6.8 | NMT 7.0 | ||
| 이온 강도(mS/㎝) | 0.1-2.0 | Var. 2626 | Var. 2678 | Var. 2730 | Var. 2782 | Var. 2834 | Var. 2886 | Var. 2938 | Var. 2990 |
| 0.1-1.9 | Var. 2627 | Var. 2679 | Var. 2731 | Var. 2783 | Var. 2835 | Var. 2887 | Var. 2939 | Var. 2991 | |
| 0.1-1.8 | Var. 2628 | Var. 2680 | Var. 2732 | Var. 2784 | Var. 2836 | Var. 2888 | Var. 2940 | Var. 2992 | |
| 0.1-1.7 | Var. 2629 | Var. 2681 | Var. 2733 | Var. 2785 | Var. 2837 | Var. 2889 | Var. 2941 | Var. 2993 | |
| 0.1-1.6 | Var. 2630 | Var. 2682 | Var. 2734 | Var. 2786 | Var. 2838 | Var. 2890 | Var. 2942 | Var. 2994 | |
| 0.1-1.5 | Var. 2631 | Var. 2683 | Var. 2735 | Var. 2787 | Var. 2839 | Var. 2891 | Var. 2943 | Var. 2995 | |
| 0.1-1.4 | Var. 2632 | Var. 2684 | Var. 2736 | Var. 2788 | Var. 2840 | Var. 2892 | Var. 2944 | Var. 2996 | |
| 0.1-1.3 | Var. 2633 | Var. 2685 | Var. 2737 | Var. 2789 | Var. 2841 | Var. 2893 | Var. 2945 | Var. 2997 | |
| 0.1-1.2 | Var. 2634 | Var. 2686 | Var. 2738 | Var. 2790 | Var. 2842 | Var. 2894 | Var. 2946 | Var. 2998 | |
| 0.1-1.1 | Var. 2635 | Var. 2687 | Var. 2739 | Var. 2791 | Var. 2843 | Var. 2895 | Var. 2947 | Var. 2999 | |
| 0.1-1.0 | Var. 2636 | Var. 2688 | Var. 2740 | Var. 2792 | Var. 2844 | Var. 2896 | Var. 2948 | Var. 3000 | |
| 0.1-0.9 | Var. 2637 | Var. 2689 | Var. 2741 | Var. 2793 | Var. 2845 | Var. 2897 | Var. 2949 | Var. 3001 | |
| 0.1-0.8 | Var. 2638 | Var. 2690 | Var. 2742 | Var. 2794 | Var. 2846 | Var. 2898 | Var. 2950 | Var. 3002 | |
| 0.2-2.0 | Var. 2639 | Var. 2691 | Var. 2743 | Var. 2795 | Var. 2847 | Var. 2899 | Var. 2951 | Var. 3003 | |
| 0.2-1.5 | Var. 2640 | Var. 2692 | Var. 2744 | Var. 2796 | Var. 2848 | Var. 2900 | Var. 2952 | Var. 3004 | |
| 0.2-1.0 | Var. 2641 | Var. 2693 | Var. 2745 | Var. 2797 | Var. 2849 | Var. 2901 | Var. 2953 | Var. 3005 | |
| 0.2-0.9 | Var. 2642 | Var. 2694 | Var. 2746 | Var. 2798 | Var. 2850 | Var. 2902 | Var. 2954 | Var. 3006 | |
| 0.2-0.8 | Var. 2643 | Var. 2695 | Var. 2747 | Var. 2799 | Var. 2851 | Var. 2903 | Var. 2955 | Var. 3007 | |
| 0.3-1.0 | Var. 2644 | Var. 2696 | Var. 2748 | Var. 2800 | Var. 2852 | Var. 2904 | Var. 2956 | Var. 3008 | |
| 0.3-0.9 | Var. 2645 | Var. 2697 | Var. 2749 | Var. 2801 | Var. 2853 | Var. 2905 | Var. 2957 | Var. 3009 | |
| 0.3-0.8 | Var. 2646 | Var. 2698 | Var. 2750 | Var. 2802 | Var. 2854 | Var. 2906 | Var. 2958 | Var. 3010 | |
| 0.4-1.0 | Var. 2647 | Var. 2699 | Var. 2751 | Var. 2803 | Var. 2855 | Var. 2907 | Var. 2959 | Var. 3011 | |
| 0.4-0.9 | Var. 2648 | Var. 2700 | Var. 2752 | Var. 2804 | Var. 2856 | Var. 2908 | Var. 2960 | Var. 3012 | |
| 0.4-0.8 | Var. 2649 | Var. 2701 | Var. 2753 | Var. 2805 | Var. 2857 | Var. 2909 | Var. 2961 | Var. 3013 | |
| 0.5-1.0 | Var. 2650 | Var. 2702 | Var. 2754 | Var. 2806 | Var. 2858 | Var. 2910 | Var. 2962 | Var. 3014 | |
| 0.5-0.9 | Var. 2651 | Var. 2703 | Var. 2755 | Var. 2807 | Var. 2859 | Var. 2911 | Var. 2963 | Var. 3015 | |
| 0.5-0.8 | Var. 2652 | Var. 2704 | Var. 2756 | Var. 2808 | Var. 2860 | Var. 2912 | Var. 2964 | Var. 3016 | |
| 0.6-1.0 | Var. 2653 | Var. 2705 | Var. 2757 | Var. 2809 | Var. 2861 | Var. 2913 | Var. 2965 | Var. 3017 | |
| 0.6-0.9 | Var. 2654 | Var. 2706 | Var. 2758 | Var. 2810 | Var. 2862 | Var. 2914 | Var. 2966 | Var. 3018 | |
| 0.6-0.8 | Var. 2655 | Var. 2707 | Var. 2759 | Var. 2811 | Var. 2863 | Var. 2915 | Var. 2967 | Var. 3019 | |
| 0.7-1.0 | Var. 2656 | Var. 2708 | Var. 2760 | Var. 2812 | Var. 2864 | Var. 2916 | Var. 2968 | Var. 3020 | |
| 0.7-0.9 | Var. 2657 | Var. 2709 | Var. 2761 | Var. 2813 | Var. 2865 | Var. 2917 | Var. 2969 | Var. 3021 | |
| 0.1 | Var. 2658 | Var. 2710 | Var. 2762 | Var. 2814 | Var. 2866 | Var. 2918 | Var. 2970 | Var. 3022 | |
| 0.2 | Var. 2659 | Var. 2711 | Var. 2763 | Var. 2815 | Var. 2867 | Var. 2919 | Var. 2971 | Var. 3023 | |
| 0.3 | Var. 2660 | Var. 2712 | Var. 2764 | Var. 2816 | Var. 2868 | Var. 2920 | Var. 2972 | Var. 3024 | |
| 0.4 | Var. 2661 | Var. 2713 | Var. 2765 | Var. 2817 | Var. 2869 | Var. 2921 | Var. 2973 | Var. 3025 | |
| 0.5 | Var. 2662 | Var. 2714 | Var. 2766 | Var. 2818 | Var. 2870 | Var. 2922 | Var. 2974 | Var. 3026 | |
| 0.6 | Var. 2663 | Var. 2715 | Var. 2767 | Var. 2819 | Var. 2871 | Var. 2923 | Var. 2975 | Var. 3027 | |
| 0.7 | Var. 2664 | Var. 2716 | Var. 2768 | Var. 2820 | Var. 2872 | Var. 2924 | Var. 2976 | Var. 3028 | |
| 0.8 | Var. 2665 | Var. 2717 | Var. 2769 | Var. 2821 | Var. 2873 | Var. 2925 | Var. 2977 | Var. 3029 | |
| 0.9 | Var. 2666 | Var. 2718 | Var. 2770 | Var. 2822 | Var. 2874 | Var. 2926 | Var. 2978 | Var. 3030 | |
| 1 | Var. 2667 | Var. 2719 | Var. 2771 | Var. 2823 | Var. 2875 | Var. 2927 | Var. 2979 | Var. 3031 | |
| 1.1 | Var. 2668 | Var. 2720 | Var. 2772 | Var. 2824 | Var. 2876 | Var. 2928 | Var. 2980 | Var. 3032 | |
| 1.2 | Var. 2669 | Var. 2721 | Var. 2773 | Var. 2825 | Var. 2877 | Var. 2929 | Var. 2981 | Var. 3033 | |
| 1.3 | Var. 2670 | Var. 2722 | Var. 2774 | Var. 2826 | Var. 2878 | Var. 2930 | Var. 2982 | Var. 3034 | |
| 1.4 | Var. 2671 | Var. 2723 | Var. 2775 | Var. 2827 | Var. 2879 | Var. 2931 | Var. 2983 | Var. 3035 | |
| 1.5 | Var. 2672 | Var. 2724 | Var. 2776 | Var. 2828 | Var. 2880 | Var. 2932 | Var. 2984 | Var. 3036 | |
| 1.6 | Var. 2673 | Var. 2725 | Var. 2777 | Var. 2829 | Var. 2881 | Var. 2933 | Var. 2985 | Var. 3037 | |
| 1.7 | Var. 2674 | Var. 2726 | Var. 2778 | Var. 2830 | Var. 2882 | Var. 2934 | Var. 2986 | Var. 3038 | |
| 1.8 | Var. 2675 | Var. 2727 | Var. 2779 | Var. 2831 | Var. 2883 | Var. 2935 | Var. 2987 | Var. 3039 | |
| 1.9 | Var. 2676 | Var. 2728 | Var. 2780 | Var. 2832 | Var. 2884 | Var. 2936 | Var. 2988 | Var. 3040 | |
| 2 | Var. 2677 | Var. 2729 | Var. 2781 | Var. 2833 | Var. 2885 | Var. 2937 | Var. 2989 | Var. 3041 | |
| NMT = 이하 | |||||||||
A. 변형된 알코올 침전/이온 교환 크로마토그래피 분별 방법
하나의 양태에서, 본 발명은 IVIG 요법에서의 사용에 적당한 IgG 조성물의 개선된 제조 방법을 제공한다. 일반적으로 이러한 방법은, 상업적인 IVIG 제품의 생산에 이용되는 현행 방법보다 순도가 더 높지 않다면 수율이 더 높고 동등한 유사한 IgG 제조물을 제공한다.
하나의 구체적인 양태에서, 본 발명은 혈장으로부터 농축된 IgG의 조성물, 예컨대 10% IVIG를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 적어도 하나의 알코올 침전 단계 및 적어도 하나의 이온 교환 크로마토그래피 단계를 실행하는 것을 포함한다. 특히, 개선된 상류 공정에서 여러 가지 단계는 이전 공정, 예컨대 저온에서 25% 에탄올의 사용, 분무에 의한 에탄올 첨가, 분무에 의한 pH 조정, 및 미분된 실리카 입자의 사용과 상이하다.
임의의 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 제1 침전 단계에서, 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 6% 내지 약 10%의 알코올을 이용하여 냉동 불량 혈장 분획을 침전시켜 IgG가 풍부화된 상청액을 수득하는 단계, (b) 약 20% 내지 약 30%의 알코올을 이용하여 저온에서 그리고 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 상청액으로부터 IgG를 침전시켜 제1 침전물을 형성하는 단계, (c) 단계 (b)에서 형성된 제1 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계, (d) 단계 (c)에서 형성된 현탁액을 세제로 처리하는 단계, (e) 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 20% 내지 약 30% 알코올을 이용하여 현탁액으로부터 IgG를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계, (f) 단계 (e)에서 형성된 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계, (g) 단계 (f)에서 형성된 현탁액을 용매 및/또는 세제로 처치하는 단계, 및 (h) 적어도 하나의 이온 교환 크로마토그래피 분별을 실행하여 농축된 IgG의 조성물을 제조하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 단계 (c)에서 형성된 현탁액을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처치하는 단계 및 단계 (d) 전에 용액을 여과하는 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시형태에서, 혈장으로부터 농축된 IgG 조성물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 냉동 불량 혈장 분획의 pH를 약 7.0으로 조정하는 단계, (b) 약 -5℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 단계 (a)의 냉동 불량 혈장 분획의 에탄올 농도를 25%(v/v) 또는 약 25%(v/v)로 조정하여 혼합물을 형성하는 단계(여기에서 에탄올 농도는 분무에 의해 조정될 수 있음), (c) 단계 (b)의 혼합물로부터 액체와 침전물을 분리하는 단계, (d) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액을 이용하여 단계 (c)의 침전물을 재현탁하여(여기에서 상기 완충액의 pH는 완충액 1000L당 빙초산 약 400 내지 약 700㎖를 이용하여 조정됨) 현탁액을 형성하는 단계, (e) 적어도 약 30분 동안 미분된 이산화규소단계(SiO2)를 (d)로부터의 현탁액과 혼합하는 단계, (f) 필터 프레스를 이용하여 상기 현탁액을 여과하여 여과액을 형성하는 단계, (g) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액(완충액의 pH는 완충액 1000L당 빙초산 약 150㎖를 이용하여 조정됨)의 적어도 3 필터 프레스 불용 체적(dead volume)으로 필터 프레스를 세척하여 세척 용액을 형성하는 단계, (h) 단계 (f)의 여과액을 단계 (g)의 세척 용액과 합하여 용액을 형성하고, 상기 용액을 세제로 처리하는 단계, (i) 단계 (h)의 용액의 pH를 약 7.0으로 조정하고 25%(v/v) 또는 약 25%(v/v)의 최종 농도로 에탄올을 첨가하여 침전물을 형성하는 단계(여기에서 에탄올 농도 및/또는 pH는 분무에 의해 조정될 수 있음),(j) 단계 (i)의 혼합물로부터 액체와 침전물을 분리하는 단계, (k) 용매 및 세제를 포함하는 수용액 중에 침전물을 용해시키고 적어도 60분 동안 상기 용액을 유지하는 단계, (l) 단계 (k) 후 용액을 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 통과시키고 용리액 중으로 컬럼에 흡착된 단백질을 용리시키는 단계, (m) 단계 (l)로부터의 용리액을 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 통과시켜 유출액(즉, 유체 흐름)을 생성하는 단계, (n) 단계 (m)으로부터의 유출액을 나노필터를 통과시켜 나노여과액을 생성하는 단계, (o) 단계 (n)으로부터의 나노여과액 한외여과막을 통과시켜 한외여과막을 생성하는 단계 및 (p) 단계 (o)로부터의 한외여과액을 정용여과 완충액에 대하여 정용여과하여 단백질 농도가 약 8%(w/v) 내지 약 22%(w/v)인 정용여과액을 생성하여 농축된 IgG의 조성물을 수득하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 단계 (b)의 온도는 -7℃ 또는 약 -7℃이다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 단계 (d)의 현탁액 완충액은 약 600㎖의 빙초산을 이용하여 조정된다.
임의의 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 약 8% 내지 약 12%, 예를 들어 약 8%, 또는 약 9%, 10%, 11%, 또는 12%일 것이다. 바람직한 실시형태에서, 정용여과약은 단백질 농도가 10% 또는 약 10%일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 11% 또는 약 11%일 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 12% 또는 약 12%일 것이다. 다른 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 약 13% 내지 약 17%, 예를 들어 약 13%, 또는 약 14%, 15%, 16%, 또는 17%일 것이다. 또 다른 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 약 18% 내지 약 22%, 예를 들어 약 18%, 또는 약 19%, 20%, 21%, 또는 22%일 것이다. 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 20% 또는 약 20%일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 21% 또는 약 21%일 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 22% 또는 약 22%일 것이다.
본 발명의 임의의 실시형태에서, 본원에 제공된 방법은 상기 기술된 분별 공정 중 둘 이상에서 개선을 포함할 수 있다. 예를 들어, 실시형태는 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계, 및/또는 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 알코올의 첨가이다. 다른 실시형태에서, 제1 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 pH 조절제의 첨가이다. 또한 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH의 조정이다. 관련된 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 동안 pH의 유지이다. 다른 관련된 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 용액의 pH의 계속적인 조정에 의한 침전 항온처리 동안 pH의 유지이다. 임의의 실시형태에서, 제1 침전 단계는 이들 개선 중 하나 초과를 이행함으로써 개선될 수 있다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 제1 침전 단계 - 변형된 분별 I에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소되고/되거나 감소된 분획의 IgG는 침전 단계 동안 비가역적으로 변성된다.
하나의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 알코올의 첨가이다. 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 pH 조절제의 첨가이다. 또한 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH의 조정이다. 관련된 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 동안 pH의 유지이다. 다른 관련된 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 용액의 pH의 계속적인 조정에 의한 침전 항온처리 동안 pH의 유지이다. 다른 양태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계는 알코올의 농도를 25% 또는 약 25%로 증가시킴으로써 개선된다. 또 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계는 항온처리 온도를 약 -7℃ 내지 -9℃로 낮춤으로써 개선된다. 임의의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계는 이들 개선 중 하나 초과를 이행함으로써 개선될 수 있다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 제2 침전 단계 - 변형된 분별 II+III에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 감소된 양의 IgG는 변형된 분획 II+III 침전 단계의 상청액 분획에서 감소되고/되거나 감소된 분획의 IgG는 침전 단계 동안 비가역적으로 변성된다.
하나의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 이루어지는 개선은 용해 완충액의 빙초산 함량을 약 0.06%로 증가시킴으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 이루어지는 개선은 용액의 pH의 계속적인 조정에 의한 용해 항온처리 시간 동안용액의 pH를 유지함으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 이루어지는 개선은 여과 전에 미분된 이산화규소(SiO2)를 분획 II+III 현탁액과 혼합함으로써 달성된다. 임의의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계는 이들 개선 중 하나 초과를 이행함으로써 개선될 수 있다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 변형된 분획 II+III 용해 단계 - 변형된 분획 II+III 침전물의 추출에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 증가된 양의 IgG는 분획 II+III 현탁액에서 회수되고/되거나 불순물의 양은 분획 II+III 현탁액에서 감소된다.
변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 이루어지는 예시적인 개선은 1000ℓ 당 빙초산 150㎖ 또는 약 150㎖를 함유하는 용해 완충액의 적어도 약 3.6 불용 체적을 이용하여 필터를 후세척함으로써 실현된다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계 - 변형된 분획 II+III 현탁액의 전처리 및 여과에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 감소된 양의 IgG는 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계 동안 감소된다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 용해 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계, 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계, 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
임의의 실시형태에서, 본원에 제공된 IgG 정제 방법에서 하나의 공정 개선은, 다르게는 유동성 첨가에 의해 혈장 분획 내로 도입될 하나 이상의 용액의 분무 첨가를 포함한다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 분무에 의한 하나 이상의 단백질 종의 침전의 목적을 위하여 혈장 분획 내로 알코올(예컨대, 에탄올)의 첨가를 포함한다. 다른 실시형태에서, 분무에 의해 혈장 분획에 첨가될 수 있는 용액은 이에 제한되는 것은 아니지만 pH 조절 용액, 용매 용액, 세제 용액, 희석 완충액, 전도도 조절 용액 등을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 하나 이상의 알코올 침전 단계는 분무에 의한 혈장 분획에의 알코올의 첨가에 의하여 실행된다. 제2 바람직한 실시형태에서, 하나 이상의 pH 조정 단계는 분무에 의한 혈장 분획에의 pH 조절 용액의 첨가에 의하여 실행된다.
임의의 실시형태에서, 임의의 다른 공정 개선과 조합될 수 있는 다른 공정 개선은 침전제(예컨대, 알코올 또는 폴리에틸렌 글라이콜)의 첨가 후 및/또는 이와 함께 침전될 혈장 분획의 pH의 조정을 포함한다. 일부 실시형태에서, 공정 개선은 능동적으로 침전될 혈장 분획의 pH가 전체 침전 항온 처리 또는 pH의 계속적인 모니터링 및 조정에 의한 유지 단계에 걸쳐서 유지된다. 바람직한 실시형태에서, pH의 조정은 pH 조절 용액의 분무 첨가에 의하여 실행된다.
다른 실시형태에서, 임의의 다른 공정 개선과 조합될 수 있는 다른 공정 개선은 불순물을 제거하기 위하여 미분된 실리카 처리 단계를 포함한다.
1. 냉동 불량 혈장의 침전
농축된 IgG 조성물의 제조에 사용된 출발 물질은 일반적으로 회수된 혈장(즉, 생체외에서 전혈로부터 분리한 혈장) 또는 공급 혈장(즉, 혈장분리교환법을 통해 수집한 혈장)으로 이루어진다. 정제 공정은 전형적으로 이미 안전성 및 품질 고려 사항에 대하여 분석한, 이미 동결된 수집한 혈장을 해동하는 것으로 시작한다. 해동은 전형적으로 6℃ 이하의 온도에서 수행된다. 저온에서 동결한 혈장의 완전한 해동 후에, 원심분리를 저온(예컨대, 6℃ 이하)에서 실행하여 액체 상청액으로부터 고체 동결침전물을 분리한다. 대안적으로, 분리 단계는 원심분리보다 여과에 의해 실행될 수 있다. 그 다음 액체 상청액(새로이 해동된 혈장으로부터 원심분리에 의해 저온 불용성 단백질이 제거된 후 "냉동 불량 혈장"으로도 불림)은 다음 단계에서 가공된다. 인자 8 억제제 우회 활성(FEIBA), 인자 IX-복합체, 인자 VII-농축물, 또는 항트롬빈 III-복합체의 분리를 위하여 다양한 추가 단계가 이러한 연결점에서 취해질 수 있다.
2. 제1 침전 사건 - 변형된 분별 I
이 단계에서, 냉동 불량 혈장은 전형적으로 약 0 ± 1℃로 냉각되고 pH는 약 7.0 내지 약 7.5, 바람직하게는 약 7.1 내지 약 7.3, 가장 바람직하게는 약 7.2이다. 하나의 실시형태에서, 냉동 불량 혈장의 pH는 7.2 또는 약 7.2의 pH로 조정된다. 그 다음 8% v/v에서 또는 약 8% v/v의 에탄올의 목표 농도로 혈장을 교반하면서 예비 냉각한 에탄올을 첨가한다. 동시에 온도는 약 -4 내지 약 0℃로 추가로 낮춘다. 바람직한 실시형태에서, 온도는 -2℃에서 또는 약 -2℃로 낮추어 오염 물질, 예를 들어 α2-마크로글로불린, β1A- 및 β1C-글로불린, 피브리노겐, 및 인자 VIII를 침전시킨다. 전형적으로, 더 짧거나 더 긴 유지 시간이 또한 이용될 수 있지만, 침전 사건은 적어도 약 1시간의 유지 시간을 포함할 것이다. 그 뒤에, 상청액(상청액 I)(이상적으로 냉동 불량 혈장에 존재하는 IgG 함량의 전부를 함유함)은 그 후에 원심분리, 여과, 또는 다른 적당한 방법에 의해 수집된다.
냉동 불량 혈장에 대한 제1 분별 단계로서 이용되는 통상적인 방법과 비교하여(문헌[Cohn et al ., 상기 참조]; [Oncley et al ., 상기 참조]), 여러 가지 실시형태에서 본 발명은 상청액 I 분획에서 IgG 수율의 개선을 가져오는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 분무에 의해 알코올을 첨가함으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 분무에 의해 pH 조절제를 첨가함으로써 달성된다. 또 다른 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH를 조정함으로써 달성된다. 관련된 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 알코올의 첨가 동안 용액의 pH를 조정함으로써 달성된다.
하나의 구체적인 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 콘 방법 6 프로토콜의 제1 침전 단계에서 감소되는 IgG의 양과 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소된다.
임의의 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH를 약 7.0 내지 약 7.5로 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH는 약 7.1 내지 약 7.3으로 조정된다. 또 다른 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH는 약 7.0 또는 약 7.1, 7.2, 7,3, 7.4, 또는 7.5로 조정된다. 특정 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH는 약 7.2로 조정된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, 용액의 pH가 침전용 알코올의 첨가 후가 아닌 첨가 전에 조정되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, pH를 조정하는데 사용되는 알코올 및/또는 용액이 유동성 첨가에 의해 도입되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
또 다른 임의의 실시형태에서, 개선은 용액의 pH를 약 7.0 내지 약 7.5로 조정함으로써 실현된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 약 7.1 내지 약 7.3으로 조정된다. 다른 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 그리고 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써, 용액의 pH는 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5 또는 약 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5로 조정된다. 특정 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 그리고 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써, 용액의 pH는 7.2 또는 약 7.2로 조정된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
3. 제2 침전 사건 - 변형된 분별
II
+
III
분별의 IgG 함량 및 순도를 추가로 풍부화하기 위하여, 상청액 I은 제2 침전 단계에 처해지는데, 이는 변형된 콘-온클레이 분획 II+III 분별이다. 일반적으로, 용액의 pH는 약 6.6 내지 약 6.8의 pH로 조정된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 6.7 또는 약 6.7로 조정된다. 그 후에 분획에서 IgG를 침전시키기 위하여 약 20% 내지 약 25%(v/v)의 최종 농도로 알코올, 바람직하게 에탄올을 교반하면서 용액에 첨가한다. 바람직한 실시형태에서, 분획에서 IgG를 침전시키기 위하여 25%(v/v) 또는 약 25%(v/v)의 최종 농도로 알코올을 첨가한다. 일반적으로 오염 물질, 예를 들어 α1-리포단백질, α1-항트립신, Gc-글로불린, α1X-당단백질, 합토글로불린, 세롤로플라스민, 트랜스페린, 헤모펙신, 크리스마스 인자의 분획, 티록신 결합 글로불린, 콜린에스테라아제, 하이퍼텐시노겐, 및 알부민은 이러한 조건에 의해 침전되지 않을 것이다.
알코올 첨가 전 또는 첨가와 함께, 용액은 약 -7℃ 내지 약 -9℃로 추가로 냉각된다. 바람직한 실시형태에서, 용액은 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도로 냉각된다. 알코올 첨가의 완료 후, 용액의 pH는 약 6.8 내지 약 7.0으로 즉시 조정된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 6.9 또는 약 6.9로 조정된다. 전형적으로, 더 짧거나 더 긴 유지 시간이 또한 이용될 수 있지만, 침전 사건은 적어도 약 10시간의 유지 시간을 포함할 것이다. 그 뒤에, 침전물(변형된 분획 II+III)(이상적으로 냉동 불량 혈장에 존재하는 IgG 함량의 적어도 약 85%, 바람직하게는 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%를 함유함)은 원심분리, 여과, 또는 다른 적당한 방법에 의해 상청액으로부터 분리되고 수집된다. 냉동 불량 혈장에 대한 제2 분별 단계로서 이용되는 통상적인 방법과 비교하여(문헌[Cohn et al ., 상기 참조]; [Oncley et al ., 상기 참조]), 여러 가지 실시형태에서 본 발명은 변형된 분획 II+III 침전물에서 IgG 수율의 개선을 가져오는 방법을 제공한다. 관련된 실시형태에서, 본 발명은 변형된 II+III 상청액에서 IgG의 손실 감소를 가져오는 방법을 제공한다.
냉동 불량 혈장에 대한 제2 분별 단계로서 이용되는 통상적인 방법과 비교하여(문헌[Cohn et al ., 상기 참조]; [Oncley et al ., 상기 참조]), 여러 가지 실시형태에서 본 발명은 변형된 분획 II+III 침전물에서 IgG 수율의 개선을 가져오는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 개선은 분무에 의한 알코올의 첨가에 의해 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 분무에 의한 pH 조절제의 첨가에 의해 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH를 조정함으로써 실현된다. 관련된 실시형태에서, 개선은 알코올의 첨가 동안 용액의 pH를 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 알코올(예컨대, 에탄올)의 농도를 약 25%(v/v)로 증가시킴으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 침전 단계의 온도를 약 -7℃ 내지 -9℃로 낮춤으로써 실현된다. 바람직한 실시형태에서, 개선은 알코올(예컨대, 에탄올)의 농도를 약 25%(v/v)로 증가시키고 온도를 약 -7℃ 내지 -9℃로 낮춤으로써 실현된다. 비교하면, 침전물에서 오염 물질의 수준을 감소시키기 위하여, Cohn et al . 및 Oncley et al . 모두 -5℃에서 침전을 실행하고 Oncley et al .은 20% 알코올을 사용한다. 유리하게, 본원에서 제공되는 방법은 최종 생성물에서 높은 수준의 오염 물질이 없는 최대 IgG 수율을 가능하게 한다.
부분적으로 단백질 침전으로 인하여 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 전에 약 6.9의 pH로 조정되고, 용액의 pH는 6.9로부터 7.4 내지 약 7.7까지로 변함을 발견하였다(도 8 참조). 용액의 pH가 6.9로부터 변하므로, IgG의 침전은 덜 유리하게 되며, 특정 오염 물질의 침전은 더 유리하게 된다. 유리하게도, 본 발명자들은 침전용 알코올의 첨가 후에 용액의 pH를 조정함으로써 IgG의 보다 높은 백분율이 분획 II+III 침전물에서 회수됨을 발견하였다.
따라서, 하나의 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 변형된 분획 II+III 침전 단계의 상청액 분획에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 다시 말해서, 증가된 백분율의 출발 IgG가 분획 II+III 침전물에 존재한다. 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1로 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 침전 항온처리 기간 동안 계속 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1로 유지함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.8 내지 약 7.0으로, 또는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 또는 7.1의 pH로 조정된다. 특정 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.9로 조정된다. 임의의 실시형태에서, 용액의 pH는 침전 항온처리 기간 동안 약 6.8 내지 약 7.0, 또는 침전 항온처리 기간 동안 계속 약 6.9의 pH로 유지된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, 용액의 pH가 침전용 알코올의 첨가 후가 아닌 첨가 전에 조정되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 또는 용액의 pH가 전체 침전 항온처리 기간 동안 유지되지 않는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제2 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, pH를 조정하는데 사용되는 알코올 및/또는 용액이 유동성 첨가에 의해 도입되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제2 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 약 -7℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 침전 단계를 실행함으로써 실현된다. 하나의 실시형태에서, 침전 단계는 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 실행된다. 다른 실시형태에서, -8℃ 또는 약 -8℃의 온도에서 실행된다. 다른 실시형태에서, -9℃ 또는 약 -9℃의 온도에서 실행된다. 임의의 실시형태에서, 침전 단계의 알코올 농도는 약 23% 내지 약 27%이다. 바람직한 실시형태에서, 알코올 농도는 약 24% 내지 약 26%이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 알코올 농도는 25% 또는 약 25%이다. 다른 실시형태에서, 알코올 농도는 23%, 24%, 25%, 26% 또는 27%, 또는 약 23%, 24%, 25%, 26% 또는 27%일 수 있다. 특정 실시형태에서, 제2 침전 단계는 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 25% 또는 약 25%의 알코올 농도를 이용하여 실행된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
상기 문헌[Oncley et al ., 상기 참조]에서 사용되는 바와 같이 제2 침전의 알코올 농도를 20%에서 25%로 증가시키고 콘 및 온클레이 방법에서 사용되는 바와 같이 항온처리 온도를 -5℃에서 -7℃ 또는 약 -7℃로 낮추는 것의 효과는 변형된 분획 II+III 침전물의 IgG 함량을 5% 내지 6% 증가시킨다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1로, 바람직하게는 6.9 또는 약 6.9로 조정하고, 침전 항온처리 기간 동안 pH를 계속 조정함으로써 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1의 pH로, 바람직하게는 6.9 또는 약 6.9로 유지하며, 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 다른 특정 실시형태에서, 공정 개선은 약 약 -7℃ 내지 약 -9℃, 바람직하게는 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 침전 단계를 실행하고 약 23% 내지 약 27%, 바람직하게는 25% 또는 약 25%의 알코올 농도를 이용하여 IgG를 침전시킴으로써 실현된다. 또 다른 특정 실시형태에서, 공정 개선은 상기 제공된 변형된 분획 II+III 개선의 전부를 포함함으로써 실현된다. 바람직한 실시형태에서, 공정 개선은 분무에 의해 첨가되는 25% 또는 약 25% 에탄올을 이용하여 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 IgG를 침전시킨 다음, 침전용 알코올의 첨가 후에 6.9 또는 약 6.9로 용액의 pH를 조정함으로써 실현된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 전체 침전 항온처리 또는 유지 시간 동안 6.9 또는 약 6.9에서 유지된다.
4. 변형된 분획
II
+
III
침전물의 추출
변형된 분획 II+III 침전물의 IgG 내용물을 가용화하기 위하여, 차가운 추출 완충액을 침전물 1부 대 추출 완충액 15부의 전형적인 비율로 분별 II+III 침전물을 재현탁하는데 사용한다. 기타 다른 적당한 재현탁액 비율은 예를 들어 약 1:8 내지 약 1:30, 또는 약 1:10 내지 약 1:20, 또는 약 1:12 내지 약 1:18, 또는 약 1:13 내지 약 1:17, 또는 약 1:14 내지 약 1:16로 사용할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 재현탁액 비율은 약 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 1:20, 1:21, 1:22, 1:23, 1:24, 1:25, 1:26, 1:27, 1:28, 1:29, 1:30 또는 그보다 높을 수 있다.
변형된 II+III 침전물의 추출에 적당한 용액은 일반적으로 pH가 약 4.0 내지 약 5.5일 것이다. 임의의 실시형태에서, 용액은 pH가 약 4.5 내지 약 5.0일 것이고, 다른 실시형태에서, 추출 용액은 pH가 약 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 또는 5.5일 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추출 완충액의 pH는 4.5 또는 약 4.5일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 추출 완충액의 pH는 4.7 또는 약 4.7일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 추출 완충액의 pH는 4.7 또는 약 4.9일 것이다. 일반적으로, 이러한 pH 요건은, 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 1염기 포스페이트, 2염기 포스페이트, 이의 혼합물 등으로부터선택된 완충제를 사용하여 충족시킬 수있다. 적당한 완충액 농도는 전형적으로 완충제 약 5 내지 약 100mM, 또는 약 10 내지 약 50mM, 또는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100mM의 범위이다.
추출 완충액은 바람직하게 전도도가 약 0.5mS·cm-1 내지 약 2.0mS·cm-1일 것이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 추출 완충액의 전도도는 약 0.5mS·cm-1, 또는 약 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 또는 약 2.0mS·cm-1일 것이다. 당업자는 적절한 전도도를 가지는 추출 완충액을 생성하는 방법을 알 것이다.
하나의 특정 실시형태에서, 예시적인 추출 완충액은 4.5 ± 0.2 또는 4.5 ± 0.2의 pH 그리고 0.7 내지 0.9mS/㎝ 또는 약 0.7 내지 0.9mS/㎝의 전도도에서 5mM 또는 약 5mM 1염기 소듐 포스페이트 및 5Mm 또는 약 5mM 아세테이트를 함유할 수 있다.
일반적으로, 추출은 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행된다. 임의의 실시형태에서, 추출은 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 또는 10℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 추출은 약 2℃ 내지 약 10℃에서 실행된다. 전형적으로, 추출 공정은, 현탁액을 계속 교반하면서 약 60 내지 약 300분 동안, 또는 약 120 내지 240분 동안, 또는 약 150 내지 210분 동안 진행할 것이다. 임의의 실시형태에서, 추출 공정은 약 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 또는 약 300분 동안 진행할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추출 공정은 계속 교반하면서 적어도 160분 동안 진행할 것이다.
5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.051% 내지 0.06% 빙초산(v/v)을 함유하는 추출 완충액을 이용하여, 최종 생성물의 순도를 저하시키지 않고 최종 IgG 조성물에서의 수율 증가에 있어서 상당한 증가를 획득할 수 있다. 아세트산의 양 및 추출 완충액 pH의 상호 관계는 도 9에 설명되어 있다. 바람직한 실시형태에서, 분획 II+III 침전물은 4.5 ± 0.2 또는 약 4.5 ± 0.2의 pH에서 페이스트 대 완충액을 1:15 또는 약 1:15의 비율로 이용하여 추출한다.
유리하게, 5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.051% 빙초산(v/v)을 함유하는 추출 완충액을 이용하는 GAMMAGARD(등록상표) LIQUID(Baxter Healthcare)에 대한 현재 제조 공정과 비교하여 빙초산 함량을 0.06%(v/v) 내지 약 0.06%(v/v)으로 증가시킴으로써, 최종 IgG 조성물에서의 수율 증가에 있어서 상당한 증가를 획득할 수 있음을 발견하였다. 제2 침전 단계에 의해 형성된 침전물(GAMMAGARD(등록상표) LIQUID)의 추출에 대하여 이전에 이용된 방법과 비교하여, 몇몇 실시형태에서 본 발명은 변형된 분획 II+III 현탁액에서 개선된 IgG 수율을 초래하는 방법을 제공한다.
하나의 양태에서, 개선은 감소된 양의 IgG는 변형된 분획 II+III 침전물의 비가용화된 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.06% 빙초산(v/v)을 함유하는 용액을 이용하여 1:15(침전물 대 완충액)의 비율로 변형된 분획 II+III 침전물을 추출함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 추출 공정의 지속기간 동안 용액의 pH를 유지함으로써 실현된다. 하나의 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.1 내지 약 4.9에서 유지된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.2 내지 약 4.8에서 유지된다. 보다 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.3 내지 약 4.7에서 유지된다. 다른 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.4 내지 약 4.6에서 유지된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 4.5 또는 약 4.5에서 유지된다.
다른 양태에서, 개선은 증가된 양의 IgG가 분획 II+III 용해 단계에서 분획 II+III 침전물로부터 가용화되는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 1000ℓ 당 빙초산 600㎖를 함유하는 용해 완충액에서 분획 II+III 침전물을 가용화시킴으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 분획 II+III 침전물 중 IgG가 가용화된 후 불순물이 감소되는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 적어도 약 30분 동안 미분된 이산화규소(SiO2)를 분획 II+III 현탁액과 혼합함으로써 실현된다.
5. 변형된 분획
II
+
III
현탁액의 전처리 및 여과
변형된 분획 II+III 침전물(즉, 변형된 분획 II+III 여과 케이크)의 비가용화된 분획을 제거하기 위하여, 전형적으로 심층 여과를 사용하여 현탁액을 여과한다. 본원에서 제공되는 방법에서 이용될 수 있는 심층 필터는 금속, 유리, 세라믹, 유기(예를 들어 규조토) 심층 필터 등을 포함한다. 적당한 필터의 예는, 이에 제한되는 것은 아니지만, Cuno 50SA, Cuno 90SA, 및 Cuno VR06 필터(Cuno)를 포함한다. 대안적으로, 분리 단계는 여과보다 원심분리에 의해 실행될 수 있다.
상기 기술된 제조 공정 개선은 정제 공정의 초기 단계에서 IgG 손실을 최소화시키지만, PKA 활성, 아마이드 분해 활성, 및 피브리노겐 함량을 포함하여 중요한 불순물은, 추출이 약 4.9 내지 5.0의 pH에서 일어날 때와 비교하여, 예를 들어 II+III 페이스트가 pH 4.5 또는 4.6일 때 훨씬 더 높다(예컨대, 실시예 2 내지 5).
본원에서 제공되는 방법에서 추출되는 불순물에 대응하기 위하여, 현재 IgG 조성물의 순도는 여과/원심분리 전에 전처리 단계의 추가에 의해 크게 향상될 수 있음을 알게 되었다. 하나의 실시형태에서, 이러한 전처리 단계는 미분된 이산화규소(예컨대, 흄드 실리카, Aerosil(등록상표))의 첨가 후, 현탁액을 계속 혼합하는 동안의 40 내지 80분 항온처리 기간을 포함한다. 임의의 실시형태에서, 항온처리 기간은 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상일 것이다. 일반적으로, 처리는 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행될 것이다. 임의의 실시형태에서, 처리는 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 또는 10℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 처리는 약 2℃ 내지 약 10℃에서 실행된다.
흄드 실리카 처리의 효과는 실시예 17에서 확인되는 결과에 의해 예시된다. 이 실시예에서, 분획 II+III 침전물을 현탁하고 2개의 샘플로 나누며, 이 중 하나는 여과 전에만 여과 보조제를 이용하여 청징시키고(도 7A), 이 중 하나는 여과 보조제의 첨가 및 여과 전에 흄드 실리카를 이용하여 처리한다(도 7B). 크로마토그래피에서 및 정량화된 데이터에서 확인할 수 있는 바와 같이, 흄드 실리카를 이용하여 전처리된 여과액 샘플은 여과 보조제로만 처리된 샘플보다 IgG 순도가 훨씬 더 높았다(68.8% 대 55.7%; 각각 표 17 및 18을 비교).
임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트 내지 약 100g/㎏ II+III 페이스트의 농도에서 첨가된다(즉, 1:15의 비율에서 추출된 변형된 분획 II+III 침전물에 있어서, 흄드 실리카는 약 20g/16㎏ II+III 현탁액 내지 약 100g/16㎏ II+III 현탁액의 농도에서, 또는 약 0.125%(w/w) 내지 약 0.625%(w/w)의 최종 농도에서 첨가되어야 함). 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100g/㎏ II+III 페이스트의 농도에서 첨가될 수 있다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카(예컨대, Aerosil 380 또는 동등물)는 변형된 분획 II+III 현탁액에 약 40g/16㎏ II+III의 최종 농도까지 첨가된다. 혼합은 약 2 내지 8℃에서 적어도 50 내지 70분 동안 일어난다.
임의의 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 1g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2.5g의 농도에서 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질의 농도에서 또는 전체 단백질 g 당 적어도 0.02g, 0.03g, 0.04g, 0.05g, 0.06g, 0.07g, 0.08g, 0.09g, 0.1g, 0.2g, 0.3g, 0.4g, 0.5g, 0.6g, 0.7g, 0.8g, 0.9g, 1.0g, 1.5g, 2.0g, 2.5g, 3.0g, 3.5g, 4.0g, 4.5g, 5.0g, 5.5g, 6.0g, 6.5g, 7.0g, 7.5g, 8.0g, 8.5g, 9.0g, 9.5g, 10.0g, 또는 그 이상의 농도에서 첨가된다.
임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층 여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.8㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.7㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 것이다.
IgG의 상당한 분획은 GAMMAGARD(등록상표) LIQUID 제조 공정의 여과 단계 동안 감소되었다. 현탁액 완충액의 1.8 불용 체적을 사용하여 필터 프레스 프레임 및 배관을 퍼지하는 후여과 세척의 현재 방법은 이 단계에서 IgG의 최대 회수에는 불충분하였다. 놀랍게도, 변형된 분획 II+III 청징된 현탁액에서 전체 IgG의 효율적인 회수를 위하여, 현탁액 완충액의 적어도 3.0 불용 체적, 바람직하게 3.6 불용 체적을 필요로 함을 알게 되었다(실시예 12 및 도 1 참조). 임의의 실시형태에서, 필터 프레스는 임의의 적당한 현탁액 완충액으로 세척할 수 있다. 특정 실시형태에서, 세척 완충액은 예를 들어 5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.015% 빙초산(v/v)을 포함할 것이다.
하나의 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 분획 II+III 현탁액 여과 단계 동안 감소되는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 1000ℓ 당 빙초산 150㎖를 함유하는 용해 완충액의 적어도 약 3.6 불용 체적을 이용하여 필터를 후세척함으로써 실현된다. 후세척 완충액 중 빙초산의 양과 pH 사이의 관계는 도 10에 나타내어져 있다. 하나의 실시형태에서, 후세척 추출 완충액의 pH는 약 4.6 내지 약 5.3이다. 바람직한 실시형태에서, 후세척 완충액의 pH는 약 4.7 내지 약 5.2이다. 다른 실시형태에서, 후세척 완충액의 pH는 약 4.8 내지 약 5.1이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 후세척 완충액의 pH는 약 4.9 내지 약 5.0이다.
제2 침전 단계로부터 형성된 현탁액(GAMMAGARD(등록상표) LIQUID)의 청징에 이전에 이용된 방법과 비교하여, 몇몇 실시형태에서 본 발명은 청징된 분획 II+III 현탁액에서 개선된 IgG 수율 및 순도를 초래하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 변형된 분획 II+III 여과 케이크에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 다른 양태에서, 개선은 감소된 양의 불순물이 청징된 분획 II+III 현탁액에서 발견되는 방법에 관한 것이다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 분획 II+III 현탁액의 여과 또는 원심분리 청징 전에 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카 처리는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.04㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.08㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.09㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 0.1㎏/㎏ II+III 페이스트의 첨가를 포함할 것이고, 혼합물은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상 동안 항온처리될 것이다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 잔여 피브리노겐, 아마이드 분해 활성, 및/또는 프리칼리크레인 활성제 활성의 수준을 감소시킨 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 구체적인 실시형태에서, 공정 개선은 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현되며, 이는 면역글로불린 제조물에서 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시킨다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계를 완료한 후 약 3 내지 약 5 부피의 필터 불용 체적을 이용하여 심층 여과를 세척함으로써 실현된다. 임의의 실시형태에서, 필터는 필터 불용 체적의 약 3.5 부피 내지 약 4.5 부피, 또는 적어도 약 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0 부피를 이용하여 세척될 것이다. 특정 실시형태에서, 필터 프레스는 적어도 약 3.6 불용 체적의 현탁액 완충액을 이용하여 세척될 것이다.
6. 세제 처리
변형된 분획 II+III 여과액으로부터 추가적인 오염 물질을 제거하기 위하여, 그 다음에 샘플은 세제 처리를 실시한다. 혈장 유래 분획의 세제 처리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 일반적으로, 임의의 표준 비이온성 세제 처리는 본원에서 제공되는 방법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 세제 처리에 대한 예시적인 프로토콜은 하기에 제공되어 있다.
간단하게, 폴리소르베이트-80을 교반하면서 약 0.2%(w/v)의 최종 농도에서 변형된 분획 II+III 여과액 첨가하고, 샘플은 약 2 내지 8℃의 온도에서 적어도 30분 동안 항온처리된다. 그 다음 소듐 시트레이트 디하이드레이트를 약 8g/ℓ의 최종 농도에서 상기 용액에 혼합하고, 이 샘플을 약 2 내지 8℃의 온도에서 계속 교반하면서 추가적인 30분 동안 항온처리한다.
임의의 실시형태에서, 임의의 적당한 비이온성 세제를 사용할 수 있다. 적당한 비이온성 세제는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 옥틸글루코사이드, 디기토닌, C12E8, Lubrol, Triton X-100, Nonidet P-40, Tween-20(즉, 폴리소르베이트-20), Tween-80(즉, 폴리소르베이트-80), 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드), Brij 세제, 알킬페놀 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴록사머, 옥틸 글루코사이드, 데실 말토사이드 등을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 세제 시약(예컨대, 폴리소르베이트-80 및 소듐 시트레이트 디하이드레이트)을 첨가함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 첨가제의 빠른 분포를 보장하도록 샘플을 혼합하면서, 세제 시약을 변형된 분획 II+III 여과액에 고체로서 첨가할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과액의 비편재화된 표면 영역에 걸쳐서 고체를 살포함으로써 고체 시약을 첨가하여 예를 들어 유동성 첨가에서 국부적 과밀화가 일어나지 않도록 하는 것이 바람직하다.
7. 제3 침전 사건 - 침전 G
몇몇 잔류 작은 단백질, 예를 들어 알부민 및 트랜스페린을 제거하기 위하여, 25% 알코올의 농도에서 제3 침전을 실행한다. 간단하게, 세제 처리된 II+III 여과액의 pH을 적당한 pH 조절 용액(예컨대, 1M 소듐 하이드록사이드 또는 1M 아세트산)을 이용하여 약 6.8 내지 7.2, 바람직하게는 약 6.9 내지 약 7.1, 가장 바람직하게는 7.0으로 조정한다. 그 다음 약 25%(v/v)의 최종 농도에서 상기 용액에 차가운 알코올을 첨가하고, 적어도 1시간 동안 약 -6℃ 내지 약 -10℃에서 교반하면서 혼합물을 항온처리하여 제3 침전물(즉, 침전물 G)를 형성한다. 다른 실시형태에서, 혼합물을 적어도 2시간, 또는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간, 또는 그 이상 동안 항온처리한다. 바람직한 실시형태에서, 혼합물은 적어도 2시간 동안 항온처리한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 혼합물은 적어도 4시간 동안 항온처리한다. 훨씬 더 바람직한 실시형태에서, 혼합물은 적어도 8시간 동안 항온처리한다.
하나의 양태에서, 공정 개선은 감소된 양의 IgG가 제3 침전 단계의 상청액 분획에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 용액의 pH를 약 6.8 내지 약 7.2로 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 침전 항온처리 기간 동안 계속 용액의 pH를 약 6.8 내지 약 7.2로 유지함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.9 내지 약 7.1로, 또는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 또는 7.2의 pH로 조정된다. 특정 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 7.0으로 조정된다. 임의의 실시형태에서, 용액의 pH는 침전 항온처리 기간 동안 계속 약 6.9 내지 약 7.1, 또는 침전 항온처리 기간 동안 계속 약 7.0의 pH로 유지된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, 용액의 pH가 침전용 알코올의 첨가 후가 아닌 첨가 전에 조정되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 또는 용액의 pH가 전체 침전 항온처리 기간 동안 유지되지 않는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제3 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, pH를 조정하는데 사용되는 알코올 및/또는 용액이 유동성 첨가에 의해 도입되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제3 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
8. 침전물 G(
PptG
)의 현탁액 및 여과
침전물 G의 IgG 내용물을 가용화시키기 위하여, 차가운 추출 완충액은 PptG를 재현탁하는데 사용된다. 간단하게, 침전물 G는 약 0℃ 내지 약 8℃에서 주사용 증류수(WFI) 중에 3.5로 용해하여 약 40 내지 95의 AU280 -320 값을 획득한다. 그 다음, 적어도 2시간 동안 교반한 용액의 최종 pH는 5.2 ± 0.2 또는 약 5.2 ±0.2으로 조정된다. 하나의 실시형태에서, 이러한 pH 조정은 1M 아세트산을 이용하여 실행된다. IgG의 용해도를 증가시키기 위하여, 현탁액의 전도도는 약 2.5 내지 약 6.0mS/㎝로 증가된다. 하나의 실시형태에서, 전도도는 염화 나트륨의 첨가에 의해 증가된다. 그 다음, 현탁된 PptG 용액은, 임의의 비용해된 입자를 제거하기 위하여, 공칭 공경(nominal pore size)이 약 0.1μm 내지 약 0.4μm인 적당한 심층 필터를 이용하여 여과된다. 하나의 실시형태에서, 청징된 여과액을 획득하기 위한 심층 필터의 공칭 공경은 약 0.2μm(예컨대, Cuno VR06 필터 또는 동등물)이다. 다른 실시형태에서, 현택된 PptG 용액은 청징된 상청액을 회수하기 위하여 원심분리된다. 필터의 후세척은 전도도가 약 2.5 내지 약 6.0mS/㎝인 염화나트륨 용액을 사용하여 실행된다. 전형적으로, 침전물 G의 추출에 적당한 용액은 WFI 및 전도도가 낮은 완충액을 포함한다. 하나의 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 10mS/㎝ 미만이다. 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1mS/㎝ 미만이다. 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 6mS/㎝ 미만이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 4mS/㎝ 미만이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 2mS/㎝이다.
9. 용매 세제 처리
혈장 유래 생성물에 존재할 수 있는 다양한 바이러스 오염 물질을 불활성화시키기 위하여, 그 다음 청징된 PptG 여과액은 용매 세제(S/D) 처리를 실시한다. 혈장 유래 분획의 세제 처리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(확인을 위하여, 문헌[Pelletier JP et al ., Best Pract Res Clin Haematol . 2006;19(1):205-42]을 참조). 일반적으로, 임의의 표준 S/D 처리는 본원에서 제공되는 방법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, S/D 처리에 대한 예시적인 프로토콜은 하기에 제공된다.
간단하게, Triton X-100, Tween-20, 및 트리(n-뷰틸)포스페이트(TNBP)가 각각 약 1.0%, 0.3%, 및 0.3%의 최종 농도에서 청징된 PptG 여과액에 첨가된다. 그 다음 혼합물은 적어도 약 1시간 동안 약 18℃ 내지 약 25℃의 온도에서 교반된다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 S/D 시약(예컨대, Triton X-100, Tween-20, 및 TNBP)을 첨가함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 세제 시약은 청징된 PptG 여과액에 고체로서 첨가될 수 있으며, 이는 S/D 성분의 빠른 분포를 보장하기 위하여 혼합된다. 임의의 실시형태에서, 여과액의 비편재화된 표면 영역에 걸쳐서 고체를 살포함으로써 고체 시약을 첨가하여 예를 들어 유동성 첨가에서 국부적 과밀화가 일어나지 않도록 하는 것이 바람직하다.
10. 이온 교환 크로마토그래피
S/D 처리된 PptG 여과액으로부터 IgG를 추가로 정제하고 농축시키기 위하여, 양이온 교환 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피가 이용될 수 있다. 이온 교환 크로마토크래피를 사용하여 IgG를 정제 및 농축하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,886,154호는 분획 II+III 침전물이 낮은 pH(약 3.8 내지 4.5)에서 추출된 다음, 카프릴산을 사용하여 IgG을 침전시키고, 2가지의 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 이행하는 방법을 기술한다. 미국 특허 제6,069,236호는 알코올 침전에 전혀 의존하지 않는 크로마토그래피 IgG 정제 방식을 기술한다. WO 제2005/073252호는 분획 II+III 침전물의 추출, 카프릴산 처리, PEG 처리, 및 단일 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 수반하는 IgG 정제 방법을 기술한다. 미국 특허 제7,186,410호는 분획 I+II+III 또는 분획 II 침전물의 추출 후, 알칼리성 pH에서 실행되는 단일 음이온 교환 단계를 수반하는 IgG 정제 방법을 기술한다. 미국 특허 제7,553,938호는 분획 I+II+III 또는 분획 II+III 침전물의 추출, 카프릴레이트 처리, 및 1가지 또는 2가지 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 수반하는 방법을 기술한다. 미국 특허 제6,093,324호는 약 6.0 내지 약 6.6의 pH에서 작동되는 다공성(macroporous) 음이온 교환 수지의 사용을 포함하는 정제 방법을 기술한다. 미국 특허 제6,835,379호는 알코올 분별의 부재하에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의존하는 정제 방법을 기술한다. 상기 간행물의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
본 발명의 방법의 하나의 실시형태에서, S/D 처리된 PptG 여과액에 양이온 교환 크로마토그래피 및 음이온 교환 크로마토그래피 모두를 실시할 수 있다. 예를 들어, 하나의 실시형태에서, S/D 처리된 PptG 여과액은 양이온 교환 컬럼을 통과하고, 용액 중 IgG에 결합한다. 그 다음, S/D 시약은 흡수된 IgG와 분리하여 세척될 수 있으며, 그 이후에 pH가 약 8.0 내지 9.0인 pH가 높은 용리 완충액을 이용하여 컬럼으로부터 용리된다. 이러한 방식에서, 양이온 교환 크로마토그래피 단계는 S/D 시약을 제조물로부터 제거하거나, IgG 함유 용액을 농축하거나, 또는 둘 다에 사용될 수 있다. 임의의 실시형태에서, pH 용리 완충액은 pH가 약 8.2 내지 약 8.8, 또는 약 8.4 내지 약 8.6, 또는 pH가 약 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 또는 9.0일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 용리 완충액의 pH는 약 8.5 ± 0.1이다.
임의의 실시형태에서, 양이온 교환 컬럼으로부터의 용리액은 더 낮은 pH, 예를 들어 약 5.5 내지 약 6.5로 조정되고, 적절한 완충액을 이용하여 희석하여 용액의 전도도를 감소시킬 수 있다. 임의의 실시형태에서, 양이온 교환 용리액의 pH는 약 5.7 내지 약 6.3, 또는 약 5.9 내지 약 6.1의 pH, 또는 약 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 또는 6.5의 pH로 조정될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 용리액의 pH는 약 6.0 ± 0.1의 pH로 조정된다. 그 다음 용리액은 음이온 교환 컬럼 상에 로딩되고, 제조물에서 발견되는 몇몇 오염 물질에 결합한다. IgG 분획을 함유하는 컬럼 유체 흐름물은 컬럼 로딩 및 세척 동안 수집된다. 임의의 실시형태에서, 본 발명의 이온 교환 크로마토그래피 단계는 컬럼 방식, 배치 방식, 또는 이 2가지의 조합으로 실행될 수 있다.
임의의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 용액을 첨가함으로써 실현된다.
11. 나노여과 및
한외여과
/
정용여과
본원에서 제공되는 IgG 조성물의 바이러스 부하를 추가로 감소시키기 위하여, 음이온 교환 컬럼 유출액은 적당한 나노여과 장치를 사용하여 나노여과될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 나노여과 장치는 평균 기공 크기가 약 15nm 내지 약 200nm일 것이다. 이러한 사용에 적당한 나노필터의 예는 이에 제한되는 것은 아니지만 DVD, DV 50, DV 20(Pall), Viresolve NFP, Viresolve NFR(Millipore), Planova 15N, 20N, 35N, 및 75N(Planova)을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 나노필터는 평균 기공 크기가 약 15nm 내지 약 72nm, 또는 약 19nm 내지 약 35nm, 또는 약 15nm, 19nm, 35nm 또는 72nm일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 나노필터는 평균 기공 크기가 약 35nm, 예를 들어 Asahi PLANOVA 35N 필터 또는 이의 동등물일 것이다.
선택적으로, 한외여과/정용여과를 실행하여 나노여과액을 추가로 농축시킬 수 있다. 하나의 실시형태에서, 열린 채널 막은 말단 근처에서 구체적으로 고안된 후세척 및 제형과 함께 사용되고, 제조 공정은 수율 및 저장 안정성에 영향을 주지 않고 당업계의 IVIG(예컨대, GAMMAGARD(등록상표) LIQUID)의 상태와 비교하여 생성된 IgG 조성물을 단백질 농도(200㎎/㎖)에서 약 2배 더 높게 만든다. 대부분의 상업적으로 이용가능한 한외여과 막을 이용하여, 200㎎/㎖의 IgG 농도는 주요 단백질의 손실 없이 도달될 수 없다. 이러한 막은 조기에 차단될 것이므로, 충분한 후세척은 달성하기 어렵다. 그러므로 열린 채널 막 구성이 사용되어야 한다. 열린 채널 막에도 불구하고, 구체적으로 고안돈 후세척 절차가 상당한 단백질 손실(2% 미만 손실) 없이 필요로 하는 농도를 획득하는데 사용되어야 한다. 훨씬 더 놀라운 것은 200㎎/㎖의 더 높은 단백질 농도는 낮은 pH 저장 단계의 바이러스 불활성화 능력에 영향을 미치지 않는다는 사실이다.
나노여과 다음에, 여과액은 한외여과/정용여과에 의해 추가로 농축될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 나노여과액은 한외여과에 의해 약 2% 내지 약 10%(w/v)의 단백질 농도로 농축될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 한외여과는 열린 채널 스크린이 있는 카세트에서 실행되고, 한외여과 막은 공칭 분획분자량(NMWCO)이 약 100kDa 미만 또는 약 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30kDa, 또는 그 이하이다. 바람직한 실시형태에서, 한외여과 막은 NMWCO가 50kDa 이하이다.
한외여과 단계의 완료시, 농축물은 정맥내 또는 근육내 투여에 적당한 용액에 대하여 정용여과를 통하여 추가로 농축될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 정용여과 용액은 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 안정화제 및 완충제는, 예를 들어 약 0.20M 내지 약 0.30M, 또는 약 0.22M 내지 약 0.28M, 또는 약 0.24M 내지 약 0.26mM의 적절한 농도에서, 또는 약 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 또는 3.0의 농도에서 글라이신이다. 바람직한 실시형태에서, 정용여과 완충액은 0.25M 또는 약 0.25M 글라이신을 함유한다.
전형적으로, 최저 교환 부피는 원래 농축물 부피의 적어도 약 3배, 또는 원래 농축물 부피의 적어도 약 4, 5, 6, 7, 8, 9배, 또는 그 이상이다. IgG 용액은 약 5% 내지 약 25%(w/v), 또는 약 6% 내지 약 18%(w/v), 또는 약 7% 내지 약 16%(w/v), 또는 약 8% 내지 약 14%(w/v), 또는 약 9% 내지 약 12%의 최종 단백질 농도로, 또는 약 5%, 또는 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25% 또는 그 이상의 최농 농도로 농축될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 적어도 약 23%의 최종 단백질 농도는 농축된 용액에 후세척 분획을 첨가함없이 달성된다. 다른 실시형태에서, 적어도 약 24%의 최종 단백질 농도는 농축된 용액에 후세척 분획을 첨가함없이 달성된다. 적어도 약 25%의 최종 단백질 농도는 농축된 용액에 후세척 분획을 첨가함없이 달성된다. 전형적으로, 농축 공정의 끝에서, 용액의 pH는 4.6 내지 5.1일 것이다.
예시적인 실시형태에서, IgG 조성물의 pH는 한외여과 전에 약 4.5로 조정된다. 용액은 한외여과를 통하여 5 ± 2% w/v의 단백질 농도로 농축된다. UF 막은 공칭 분획분자량(NMWCO)이 50,000달톤 이하이다(Millipore Pellicon 폴리에테르 설폰 막). 농축액은 0.25M 글라이신 용액(pH 4.5 ± 0.2)의 10 부피에 대하여 정용여과된다. 한외-정용여과 작동 동안 용액은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 유지된다. 정용여과 후에, 용액은 적어도 11 %(w/v)의 단백질 농도로 농축된다.
12. 제형
정용여과 단계의 완료시, 용액의 단백질 농도는 정용여과 완충액을 이용하여 약 5% 내지 약 20%(w/v), 또는 약 6% 내지 약 18%(w/v), 또는 약 7% 내지 약 16%(w/v), 또는 약 8% 내지 약 14%(w/v), 또는 약 9% 내지 약 12%의 최종 농도로, 또는 약 5%, 또는 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 또는 20%의 최종 농도로 조정된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 최종 단백질 농도는 약 9% 내지 약 11%, 보다 바람직하게는 약 10%이다.
제형화된 벌크 용액(bulk solution)은 절대 기공이 약 0.22미크론, 예를 들어 약 0.2미크론 이하인 막 필터를 통하여 여과함으로써 추가로 멸균된다. 그 다음, 용액은, 테스트용으로 샘플을 취하면서, 적합한 밀봉에 대한 최종 용기 내로 무균 상태로 분배한다.
하나의 실시형태에서, IgG 조성물은 정용여과 완충액을 이용하여 약 10.2 ± 0.2%(w/v)의 농도로 추가로 조정된다. 필요하다면 pH는 약 4.4 내지 약 4.9로 조정된다. 마지막으로, 용액은 멸균 여과되고, 30℃ 또는 약 30℃에서 3주 동안 항온처리된다.
B. 인자 H
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 인자 H 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 인자 H 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 풍부화 인자 H 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 인자 H 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 인자 H 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 제2 풍부화 인자 H 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 인자 H 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 인자 H 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 인자 H 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 인자 H 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
1. 혈장 유래 인자 H의 제조 방법
생성에 관하여, 인간 혈장으로부터 출발하는 청구하는 공정은 예컨대 차가운 곳에서 에탄올에 의한 분별 침전에 의해 획득된 전형적인 산업적 중간체의 하위 분별에 기초할 것이다(문헌[Schultze H E, Heremans J F; Molecular Biology of Human Proteins. Volume I: Nature and Metabolism of Extracellular Proteins 1966, Elsevier Publishing Company; p. 236-317]에서 검토됨). 이러한 정제의 바람직한 실시형태는, 면역글로불린과 같은 의약품 규제 기관의 통제 하에서, 확립되고 허가된 혈장 생성물의 제조 공정은 영향받지 않는 그러한 방식으로 산업적 규모의 혈장 분별의 부차적인 분획으로부터의 기능성 인자 H의 정제이다. 예를 들어, 분획 II+III 페이스트 현탁액(문헌[Teschner W et al., Vox Sang. 2007 Jan;92(1):42-55]), 분획 I 침전물(문헌[Cohn et al., (1946) 상기 참조]), 침전물 III(문헌[Schultze H E, Heremans J F; Molecular Biology of Human Proteins. Volume I: Nature and Metabolism of Extracellular Proteins 1966, Elsevier Publishing Company; p. 236-317 at p. 253]) 및 침전물 B(상기 문헌[Kistler 및 Nitschmann] p. 253의 방법)의 여과 후에 획득된 여과 케이크는 인자 H에 대한 한업적인 공급원의 예이다. 당업계에 공지된 부수적인 분획, 정제 절차로부터의 출발은 인자 H를 정제하는데 사용될 수 있다. 이들은 폴리에틸렌 글라이콜을 이용한 침전(문헌[Nagasawa S, Stroud R M; Mol Immunol 1980; 17:1365-72]), 고정화 헤파린을 통한 친화 크로마토그래피(앞서와 같이 언급함), 이온 교환 크로마토그래피(문헌[Crossley L G, Porter R R; Biochem J 1980; 191:173-82]) 및 소수성 상호작용 크로마토그래피(문헌[Ripoche J, Al Salihi A, Rousseaux J, Fontaine M; Biochem J 1984; 221, 89-96])에 기초로 할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 본 발명에 대한 출발 물질은 콘 분획을 사용하여 제조된다. 이러한 분별은, 공여자 혈청 또는 단일 클론 또는 재조합 면역글로불린으로부터 제조될 수 있는 면역글로불린 제조물의 제조에 대하여 사용되는 잘 알려진 분별이다. 전형적인 예에서, 혈액은 건강한 공여자로부터 수집된다. 보통, 혈액은 면역글로불린 제조물이 투여될 개체와 동일한 종의 동물로부터 수집된다(전형적으로 "동종" 면역글로불린으로 칭함). 면역글로불린은 적당한 절차, 예를 들어 콘 분별, 초원심분리, 전기영동 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래피, 면역친화 크로마토그래피, 폴리에틸렌 글라이콜 분별 등에 의하여 혈액으로부터 분리된다(예컨대, 문헌[Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68:459-75 (1946)]; [Oncley et al., J. Am. Chem. Soc. 71:541-50 (1949)]; [Barundern et al., Vox Sang. 7:157-74 (1962)]; [Koblet et al., Vox Sang. 13:93-102 (1967)]; 미국 특허 제5,122,373호 및 제5,177,194호 참조; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). 하나의 실시형태에서, 본 발명은 면역글로불린의 제조물로부터 폐기되는 분획을 사용한다. 특정 실시형태에서, 일단 분획 II+III 추출물이 여과된다면, 본 발명은 SiO2 여과 케이크에서 발견되는 분획을 사용한다.
일반적으로, 본 발명에 따른 인자 H 제조물은 임의의 적당한 출발 물질, 예를 들어 회수된 혈장 또는 공급 혈장으로부터 제조될 수 있다. 전형적인 예에서, 혈정 또는 혈장은 건강한 공여자로부터 수집된다. 보통, 혈액은 인자 H 제조물이 투여될 개체와 동일한 종의 동물로부터 수집된다(전형적으로 "동종" 면역글로불린으로 칭함). 인자 H는 적당한 절차, 예를 들어 침전(알코올 분별 또는 폴리에틸렌 글라이콜 분별), 크로마토그래피 방법(이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래피, 면역친화 크로마토그래피 등), 초원심분리, 및 전기영동 제조 등에 의하여 혈액 또는 혈장으로부터 분리된다(예컨대, 문헌[Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68:459-75 (1946)]; [Deutsch et al., J. Biol. Chem. 164:109-118]; [Oncley et al., J. Am. Chem. Soc. 71:541-50 (1949)]; [Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 72:465-474 (1950)]; [Cohn et al., Blood Cells and Plasma Proteins: Their State in Nature (J.L. Tullis, ed), pp. 1-58, Academic Press, NewYork and London (1953)]; [Nitschmann et al., Helv. Chim. Acta 37:866-873]; [Kistler 및 Nitschmann, Vox Sang. 7:414-424 (1962)]; [Barundern et al., Vox Sang. 7:157-74 (1962)]; [Koblet et al., Vox Sang. 13:93-102 (1967)]; 미국 특허 제5,122,373호 및 제5,177,194호 참조; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨).
임의의 실시형태에서, 인자 H는 혈장 분별에 의해 다른 상업적으로 중요한 혈액 제제의 제조 동안 달리 폐기되는 물질로부터 회수된다. 예를 들어, 예시적인 실시형태에서, 인자 H는 재현탁된 분획 II+III 페이스트의 원심분리 또는 여과 후에 형성된 분획 I 침전물로부터 추출되고/되거나 여과 케이크로부터 추출된다. 유리하게, 본원에서 제공되는 방법에 따라서, 인자 H의 산업적 규모의 제조물은 추가적인 투입 혈장에 대한 필요 또는 다른 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제제, 예를 들어 정맥내(IVIG) 또는 피하 투여에 대한 IgG 감마 글로불린에 대한 기존의 제조 공정의 재설계 및 규제 재승인없이 달성될 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 SiO2 처리 방법을 이용하여 혈장 분획으로부터 인자 H를 추출하고 FXI, FXIa, FXII, 및/또는 FXIIa 함량을 감소시킴으로써 혈장으로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
하나의 실시형태에서, 혈장으로부터 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 (a) 제1 침전 단계에서, 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10%의 알코올을 이용하여 냉동 불량 혈장 분획으로부터 단백질을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계, (b) 제2 침전 단계에서, 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 20% 내지 약 30%의 알코올을 이용하여 제1 상청액으로부터 인자 H를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계; (c) 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; (d) 미분된 이산화규소단계(SiO2)를 단계 (c)로부터의 현탁액과 혼합하는 단계, (e) 현탁액을 분리하여 여과 케이크 및 상청액을 형성하는 단계; 및 (f) 최종 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 용액 조건 하에서 SiO2 여과 케이크로부터 인자 H를 추출하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 여과 케이크는 적당한 필터를 포함하는 필터 프레스를 통하여 현탁액을 여과함으로써 상청액으로부터 분리된다. 하나의 실시형태에서, 인자 H는 여과 케이크를 포함하는 필터 프레스를 통하여 추출 완충액을 재순환시킴으로써 추출될 수 있다.
제2 양태에서, 본 발명은 분획 I 침전물로부터 인자 H를 추출함으로써 혈장으로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
바람직한 실시형태에서, 혈장으로부터 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 (a) 제1 침전 단계에서, 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10%의 알코올을 이용하여 냉동 불량 혈장 분획으로부터 단백질을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계, (b) 인자 H 추출 완충액을 이용하여 침전물로부터 인자 H를 추출하는 단계; 및 (c) 본원에서 제공되는 적당한 방법을 사용하여 상기 조성물을 SiO2로 처리함으로써 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 단계를 포함한다.
하나의 양태에서, 제2 혈액 단백질, 예를 들어 IgG 감마 글로불린을 제공하도록 고안된 공정에 의해 형성된 부산물 분획을 제조하는 2가지 이상의 집단으로부터 인자 H를 추출함으로써, 혈장으로부터 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 IgG 감마 글로불린(예컨대, IVIG)의 제조 동안 형성된 분획 I 침전물 및 분획 II+III 여과 케이크를 수집하고 수집된 분획으로부터 인자 H를 추출하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 풍부화된 인자 H 조성물은 분획 I 침전물 및/또는 분획 II+III 여과 케이크로부터 추출 다음 추가로 정제될 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니지만 추가적인 침전 단계 또는 분별, 친화 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 용매/세제(S/D) 처리, 나노요과, 한외여과, 정용여과 등을 포함한 다양한 방법이 인자 H를 추가로 정제하는데 이용가능하다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 풍부화된 인자 H 조성물로부터 불순물을 침전시키는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 이 단계는 적어도 하나의 불순물, 예를 들어 지질 또는 단백질을 조성물로부터 침전시킨 다음 인자 H를 함유하는 상청액으로부터 침전물을 분리하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 그 다음 인자 H는 별개의 침전에서 상청액으로부터 침전될 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 혈장 분획(예컨대, 분획 I 침전물, 분획 II+III 침전물, 침전물 B 침전물 등)으로부터 추출된 인자 H 조성물은 약 2.5% 내지 약 7.5%의 최종 농도로 PEG를 사용하여 용액 중 적어도 하나의 불순물을 침전시킴으로써 추가로 풍부화된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 3% 내지 약 7%의 최종 농도로 사용된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 4% 내지 약 6%의 최종 농도로 사용된다. 또 다른 실시형태에서, PEG는 약 5%의 최종 농도로 사용된다.
다른 구체적인 실시형태에서, 혈장 분획(예컨대, 분획 I 침전물, 분획 II+III 침전물, 침전물 B 침전물 등)으로부터 추출된 인자 H 조성물은 약 9% 내지 약 15%의 최종 농도로 PEG를 사용하여 용액 중 인자 H를 침전시킴으로써 추가로 풍부화된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 10% 내지 약 14%의 최종 농도로 사용된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 11% 내지 약 13%의 최종 농도로 사용된다. 또 다른 실시형태에서, PEG는 약 12%의 최종 농도로 사용된다.
다른 구체적인 실시형태에서, 혈장 분획(예컨대, 분획 I 침전물, 분획 II+III 침전물, 침전물 B 침전물 등)으로부터 추출된 인자 H 조성물은 (a) 용액 중 적어도 하나의 불순물을 침전시키는 단계; (b) 용액 중 인자 H를 침전시키는 단계; 및 (c) 인자 H를 함유하는 침전물을 회수하는 단계에 의해 추가로 풍부화된다. 임의의 실시형태에서, 침전 단계는 알코올(예컨대, 메탄올 또는 에탄올), PEG, 또는 이의 조합을 이용하여 실행된다. 특정 실시형태에서, 침전 단계는 PEG를 이용하여 실행된다. 임의의 실시형태에서, 제1 침전 단계의 PEG 농도는 약 2.5% 내지 약 7.5%이고, 제2 침전 단계의 PEG 농도는 약 9% 내지 약 15%이다. 구체적인 실시형태에서, 제1 단계의 PEG 농도는 약 4% 내지 약 6%이고, 제2 단계의 PEG 농도는 약 11% 내지 약 13%이다. 보다 구체적인 실시형태에서, 제1 침전 단계의 PEG 농도는 약 5%이고, 제2 침전 단계의 PEG 농도는 약 12%이다. 또 다른 실시형태에서, 제1 및 제2 침전 단계의 PEG 농도는 표 16에 열거된 변형 Var. 1101 내지 Var. 1221로부터 선택된다.
| 인자 H 조성물의 풍부화에 대한 PEG 농도 | ||||||||||||
| PEG 농도 - 제1 침전 | ||||||||||||
| 2.5% | 3.0% | 3.5% | 4.0% | 4.5% | 5.0% | 5.5% | 6.0% | 6.5% | 7.0% | 7.5% | ||
| PEG 농도 제2 침전 | 2.5% | Var. 1101 | Var. 1112 | Var. 1123 | Var. 1134 | Var. 1145 | Var. 1156 | Var. 1167 | Var. 1178 | Var. 1189 | Var. 1200 | Var. 1211 |
| 3.0% | Var. 1102 | Var. 1113 | Var. 1124 | Var. 1135 | Var. 1146 | Var. 1157 | Var. 1168 | Var. 1179 | Var. 1190 | Var. 1201 | Var. 1212 | |
| 3.5% | Var. 1103 | Var. 1114 | Var. 1125 | Var. 1136 | Var. 1147 | Var. 1158 | Var. 1169 | Var. 1180 | Var. 1191 | Var. 1202 | Var. 1213 | |
| 4.0% | Var. 1104 | Var. 1115 | Var. 1126 | Var. 1137 | Var. 1148 | Var. 1159 | Var. 1170 | Var. 1181 | Var. 1192 | Var. 1203 | Var. 1214 | |
| 4.5% | Var. 1105 | Var. 1116 | Var. 1127 | Var. 1138 | Var. 1149 | Var. 1160 | Var. 1171 | Var. 1182 | Var. 1193 | Var. 1204 | Var. 1215 | |
| 5.0% | Var. 1106 | Var. 1117 | Var. 1128 | Var. 1139 | Var. 1150 | Var. 1161 | Var. 1172 | Var. 1183 | Var. 1194 | Var. 1205 | Var. 1216 | |
| 5.5% | Var. 1107 | Var. 1118 | Var. 1129 | Var. 1140 | Var. 1151 | Var. 1162 | Var. 1173 | Var. 1184 | Var. 1195 | Var. 1206 | Var. 1217 | |
| 6.0% | Var. 1108 | Var. 1119 | Var. 1130 | Var. 1141 | Var. 1152 | Var. 1163 | Var. 1174 | Var. 1185 | Var. 1196 | Var. 1207 | Var. 1218 | |
| 6.5% | Var. 1109 | Var. 1120 | Var. 1131 | Var. 1142 | Var. 1153 | Var. 1164 | Var. 1175 | Var. 1186 | Var. 1197 | Var. 1208 | Var. 1219 | |
| 7.0% | Var. 1110 | Var. 1121 | Var. 1132 | Var. 1143 | Var. 1154 | Var. 1165 | Var. 1176 | Var. 1187 | Var. 1198 | Var. 1209 | Var. 1220 | |
| 7.5% | Var. 1111 | Var. 1122 | Var. 1133 | Var. 1144 | Var. 1155 | Var. 1166 | Var. 1177 | Var. 1188 | Var. 1199 | Var. 1210 | Var. 1221 | |
임의의 실시형태에서, 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법은 적어도 1가지, 바람직하게는 2가지의 크로마토그래피 단계를 포함하여 조성물의 순도를 추가로 풍부화한다. 일반적으로, 임의의 적당한 크로마토그래피 방법은, 예를 들어 분획 I 침전물 또는 분획 II+III 여과 케이크로부터 추출된 인자 H 조성물을 추가로 풍부화하는데 이용될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 전에, 상기 기술된 바와 같이, 추출된 인자 H 조성물에 하나 이상의 추가적인 침전 단계를 실시하여 상기 조성물에 존재하는 불순물을 감소시키고, 크로마토그래피 단계에 대한 부하 부피를 감소시키고/시키거나 상기 조성물의 완충액을 교환할 것이다.
임의의 실시형태에서, 인자 H 조성물은 음이온 교환 크로마토그래피(AEC), 양이온 교환 크로마토그래피(CEC), 헤파린 친화 크로마토그래피, 소수성 교환 크로마토그래피(HIC), 하이드록시아파타이트 크로마토그래피(HAP), 면역친화 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피(즉, 겔 여과), 또는 기타 다른 적당한 크로마토그래피 단계를 포함하는 크로마토그래피 단계에 의해 추가로 풍부화될 수 있다. 크로마토그래피 단계는 배치 또는 컬럼 방식으로 실행될 수 있다.
바람직한 실시형태에서, 상기 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 및 헤파린 친화 크로마토그래피의 사용을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 풍부화된 인자 H 조성물의 제조에 대하여 본원에서 제공되는 방법은 적어도 1가지, 바람직하게는 적어도 2가지, 가장 바람직하게는 적어도 3가지의 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 추가로 포함할 것이다. 본원에서 제공되는 방법과 함께 이용될 수 있는 바이러스 불활성화 또는 제거 단계의 비제한적인 예는 용매 세제 처리(문헌[Horowitz et al ., Blood Coagul Fibrinolysis 1994 (5 Suppl 3):S21-S28] 및 [Kreil et al., Transfusion 2003 (43):1023-1028], 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 나노여과(문헌[Hamamoto et al ., Vox Sang 1989 (56)230-236] 및 [Yuasa et al., J Gen Virol. 1991 (72 (pt 8)):2021-2024], 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 고온에서 낮은 pH 항온처리(문헌[Kempf et al., Transfusion 1991 (31)423-427] 및 [Louie et al., Biologicals 1994 (22):13-19]), 및 동결건조된 인자 H 조성물의 열 처리(문헌 [Piszkiewicz et al ., Thromb Res. 1987 Jul 15;47(2):235-41]; [Piszkiewicz et al ., Curr Stud Hematol Blood Transfus. 1989;(56):44-54]; [Epstein 및 Fricke, Arch Pathol Lab Med. 1990 Mar;114(3):335-40])를 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (i) SiO2를 사용하여 분획 II+III 여과 케이크로부터 인자 H를 추출하는 단계, (ii) 제1 침전 단계를 실행하여 인자 H 조성물로부터 적어도 하나의불순물을 침전시키는 단계, (iii) 제2 침전 단계를 실행하여 상기 조성물로부터 인자 H를 침전시키는 단계, 및 (iv) 적어도 하나의 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 실행함으로써 바이러스 안전성 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 단계를 포함하여 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 바이러스 안정성 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 침전 단계는 PEG 침전을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 제1 및 제2 침전 단계의 PEG 농도는 표 16에 열거된 변형 Var. 1101 내지 Var. 1221로부터 선택된다.
2. 동시 결합 및 차별적인
용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 인자 H 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 제1 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계, 및 그 후 제2 용액 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 출발 조성물은 재현탁된 분획 II+III 침전물 또는 이의 동등한 침전물이다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은, 인자 H의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 우선적으로 용리하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 차별적인 용리는 연속적으로 SiO2에 결합 인자 H의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건(예컨대, 제1 용리 완충액), 및 SiO2로부터 결합된 인자 H의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건(예컨대, 제2 용리 완충액)과 접촉시키는 단계에 의해 달성된다.
다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 인자 H의 차별적인 용리는 결합된 인자 H의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건으로부터 SiO2로부터 결합된 인자 H의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건으로 용액 조건을 점진적으로 변화시킴으로써(즉, 용리 구배를 가짐) 달성된다. 이러한 방식으로, SiO2로부터 용리된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 인자 H 함량은 부분적으로 중복될 수 있다. 용리액을 분별하고 개별적인 분획을 특성화함으로써, 인자 H 집단은 인자 H 함량이 높고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 낮은 분획으로부터 형성될 수 있다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 10mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 적어도 20mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 적어도 2mS/㎝, 또는 적어도 3mS/㎝, 4mS/㎝, 5mS/㎝, 6mS/㎝, 7mS/㎝, 8mS/㎝, 9mS/㎝, 10mS/㎝, 11mS/㎝, 12mS/㎝, 13mS/㎝, 14mS/㎝, 15mS/㎝, 16mS/㎝, 17mS/㎝, 18mS/㎝, 19mS/㎝, 20mS/㎝, 21mS/㎝, 22mS/㎝, 23mS/㎝, 24mS/㎝, 25mS/㎝, 26mS/㎝, 27mS/㎝, 28mS/㎝, 29mS/㎝, 30mS/㎝, 31mS/㎝, 32mS/㎝, 33mS/㎝, 34mS/㎝, 35mS/㎝, 36mS/㎝, 37mS/㎝, 38mS/㎝, 39mS/㎝, 40mS/㎝, 41mS/㎝, 42mS/㎝, 43mS/㎝, 44mS/㎝, 45mS/㎝, 46mS/㎝, 47mS/㎝, 48mS/㎝, 49mS/㎝, 50mS/㎝, 55mS/㎝, 60mS/㎝, 65mS/㎝, 70mS/㎝, 75mS/㎝, 80mS/㎝, 85mS/㎝, 90mS/㎝, 95mS/㎝, 100mS/㎝, 또는 그 이상이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합되어 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 증가(예컨대, 6.0mS/㎝ 초과)하는 용액 조건의 사용은 SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 용리를 증가시키고, SiO2로부터 인자 H의 용리를 감소시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
3. 동시 결합 및 우선적인 인자 H
용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 인자 H 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 및 결합된 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 인자 H를 우선적으로 용리시키는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 이하이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 약 20mS/㎝ 이하, 또는 약 19mS/㎝, 18mS/㎝, 17mS/㎝, 16mS/㎝, 15mS/㎝, 14mS/㎝, 13mS/㎝, 12mS/㎝, 11mS/㎝, 10mS/㎝, 9mS/㎝, 8mS/㎝, 7mS/㎝, 6mS/㎝, 5mS/㎝, 4mS/㎝, 3mS/㎝, 2mS/㎝ 이하, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 감소(예컨대, 20mS/㎝ 미만)하는 용액 조건의 사용은 SiO2로부터 인자 H의 용리를 증가시키고, SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 용리를 감소시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
4. 인자 H의 우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하지 않는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 인자 H가 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 10mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 적어도 20mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 적어도 2mS/㎝, 또는 적어도 3mS/㎝, 4mS/㎝, 5mS/㎝, 6mS/㎝, 7mS/㎝, 8mS/㎝, 9mS/㎝, 10mS/㎝, 11mS/㎝, 12mS/㎝, 13mS/㎝, 14mS/㎝, 15mS/㎝, 16mS/㎝, 17mS/㎝, 18mS/㎝, 19mS/㎝, 20mS/㎝, 21mS/㎝, 22mS/㎝, 23mS/㎝, 24mS/㎝, 25mS/㎝, 26mS/㎝, 27mS/㎝, 28mS/㎝, 29mS/㎝, 30mS/㎝, 31mS/㎝, 32mS/㎝, 33mS/㎝, 34mS/㎝, 35mS/㎝, 36mS/㎝, 37mS/㎝, 38mS/㎝, 39mS/㎝, 40mS/㎝, 41mS/㎝, 42mS/㎝, 43mS/㎝, 44mS/㎝, 45mS/㎝, 46mS/㎝, 47mS/㎝, 48mS/㎝, 49mS/㎝, 50mS/㎝, 55mS/㎝, 60mS/㎝, 65mS/㎝, 70mS/㎝, 75mS/㎝, 80mS/㎝, 85mS/㎝, 90mS/㎝, 95mS/㎝, 100mS/㎝, 또는 그 이상이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 증가(예컨대, 6.0mS/㎝ 초과)하는 용액 조건의 사용은 SiO2에 대한 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 친화력을 감소시키고, SiO2에 대한 인자 H의 친화력을 증가시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
5. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제
지모겐의
우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은, 인자 H의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 이하이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 약 20mS/㎝ 이하, 또는 약 19mS/㎝, 18mS/㎝, 17mS/㎝, 16mS/㎝, 15mS/㎝, 14mS/㎝, 13mS/㎝, 12mS/㎝, 11mS/㎝, 10mS/㎝, 9mS/㎝, 8mS/㎝, 7mS/㎝, 6mS/㎝, 5mS/㎝, 4mS/㎝, 3mS/㎝, 2mS/㎝ 이하, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 감소(예컨대, 20mS/㎝ 미만)하는 용액 조건의 사용은 SiO2에 대한 인자 H의 친화력을 증가시키고, SiO2에 대한 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 친화력을 감소시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
6. 혈장 침전물로부터의 인자 H 추출 방법
하나의 양태에서, 본 발명은 인자 H 조성물을 제조하는 방버을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 H 조성물로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시키는 것을 포함하며, 인자 H는 동시 침전되지 않는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, 및 (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시킴(인자 H는 침전되지 않음)으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 인자 H 조성물로부터 인자 H를 침전시키는 것을 포함하는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시혀애텡서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, 및 (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 인자 H 조성물과 함께 음이온 교환 크로마토그래피를 실행하는 것을 포함하는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, 및 (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 인자 H 조성물과 함께 헤파린 친화 크로마토그래피를 실행하는 것을 포함하는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (i) 음이온 교환 용리액에 존재하는 인자 H를 헤파린 친화 수지와 결합시키는 단계, 및 (j) 헤파린 친화 수지로부터 인자 H를 용리시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 인자 H 조성물에 전용 바이러스 제거 및/또는 불활성화 단계를 실시하는 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (i) 음이온 교환 용리액에 존재하는 인자 H를 헤파린 친화 수지와 결합시키는 단계, (j) 헤파린 친화 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, 및 (k) 나노여과, 용매/세제(S/D) 처리,열 처리, 및 낮은 pH에서의 항온처리로부터 선택된 전용 바이러스 제거 및/또는 불활성화 단계를 실행함으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 한외여과/정용여과에 의하여 풍부화된 인자 H 조성물을 농축시키는 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (i) 음이온 교환 용리액에 존재하는 인자 H를 헤파린 친화 수지와 결합시키는 단계, (j) 헤파린 친화 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (k) 나노여과, 용매/세제(S/D) 처리,열 처리, 및 낮은 pH에서의 항온처리로부터 선택된 전용 바이러스 제거 및/또는 불활성화 단계를 실행하는 단계, 및 (l) 한외여과/정용여과에 의하여 인자 H를 농축시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
C.
인터
-알파-트립신 억제제(IαI)
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 IαI 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 IαI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 IαI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 IαI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 IαI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 IαI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 IαI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, IαI 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, IαI 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 IαI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
1. 동시 결합 및 차별적인
용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 IαI 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 제1 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계, 및 그 후 제2 용액 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 출발 조성물은 재현탁된 분획 II+III 침전물 또는 이의 동등한 침전물이다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) IαI가 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, IαI가 결합된 상태로 있는 용액 조건은, IαI의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 우선적으로 용리하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 차별적인 용리는 연속적으로 SiO2에 결합된 IαI의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건(예컨대, 제1 용리 완충액), 및 SiO2로부터 결합된 IαI의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건(예컨대, 제2 용리 완충액)과 접촉시키는 단계에 의해 달성된다.
다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 IαI의 차별적인 용리는 결합된 IαI의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건으로부터 SiO2로부터 결합된 IαI의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건으로 용액 조건을 점진적으로 변화시킴으로써(즉, 용리 구배를 가짐) 달성된다. 이러한 방식으로, SiO2로부터 용리된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 IαI 함량은 부분적으로 중복될 수 있다. 용리액을 분별하고 개별적인 분획을 특성화함으로써, IαI 집단은 IαI 함량이 높고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 낮은 분획으로부터 형성될 수 있다.
2. 동시 결합 및 우선적인 IαI
용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 IαI 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 및 결합된 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 출발 조성물은 재현탁된 분획 II+III 침전물 또는 이의 동등한 침전물이다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 IαI를 우선적으로 용리시키는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
3. IαI의 우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하지 않는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 IαI가 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
4. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제
지모겐의
우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 IαI에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, IαI가 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은, IαI의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 IαI의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
D. 알파-1-
항트립신
(A1PI)
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 알파-1-항트립신(A1PI) 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 A1PI 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 A1PI 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 A1PI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, A1PI 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, A1PI 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 제조용 중간체이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, A1PI 조성물은 콘 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1946, 68(3): 459-475]; [J. Am. Chem. Soc. 72:465-474 (1950)]), 온클레이 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1949, 71(2): 541-550]), 키슬러/니츠만 분별 절차(문헌[Vox Sang. 7:414-424 (1962)]), 미국 특허 제6,974,792호 또는 제7,807,435호에 개시된 정제 절차, 이의 변형 절차, 및 당업계에 공지된 유사 또는 동등한 정제 절차로부터의 제조용 중간체이다. 상기 언급된 참조 문헌은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
예를 들어, 폴리에틸렌 글라이콜 4000을 이용한 혈장의 분획된 침전물뿐만 아니라 다양한 혈장 분획의 처리를 포함하는 A1PI에 대한 다수의 제조 방법이 알려져 있다(콘 분획 IV-1-침전물 또는 키슬러 및 니츠만 상청액 A 또는 A+1)(문헌[Feldman 및 Winkelman, Blood Separation and Plasma Fractionation (1991), Wiley-Liss, Inc., pp. 341-383]). 보다 상술된 간행물에서, 각각의 혈액 분획은, 예컨대 (문헌[Basis et al. (Vopr. Med. Khim. 33 (1) (1987), 54-59)]) 친화 크로마토그래피 물질 또는 양이온 교환체 크로마토그래피 물질(유럽 특허 제0 698 615호 A1)로 처치된, DEAE 셀룰로오스에 의하여 정제되었다. 미국 특허 제6,974,792호는 콘 분획 V 침전물을 이용하여 비활성이 높은 A1PI를 수득하는 정제 공정을 기술한다. 미국 특허 제7,807,435호는 콘 분획 IV-1 및/또는 분획 IV-4 침전물을 이용하여 보다 높은 수율의 A1PI를 제공하는 정제 공정을 기술한다.
하나의 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 냉동 불량 콘 집단이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 재현탁된 콘 분획 V 침전물 또는 이의 동등한 분획이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 재현탁된 콘 분획 IV-1 침전물 또는 이의 동등한 분획이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 재현탁된 콘 분획 IV-4 침전물 또는 이의 동등한 분획이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 키슬러/니츠만 상청액 A, 또는 이의 동등한 분획이다.
일반적으로, A1PI 조성물로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 제거는 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐은 SiO2와 결합하는 pH 및 전도도의 용액 조건 하에서 A1PI 함유 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처리함으로써 달성될 수 있다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 A1PI을 포함하는 혈장 침전물의 여과 또는 원심분리 청징 전에 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 하나의 실시형태에서, SiO2 처리 단계는 미분된 이산화규소 입자(예컨대, 흄드 실리카, Aerosil(등록상표))의 첨가 후, 현탁액을 계속 혼합하는 동안 40분 내지 16시간의 항온처리 기간을 포함한다. 임의의 실시형태에서, 항온처리 기간은 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상일 것이다. 다른 실시형태에서, 항온처리 기간은 적어도 1시간, 또는 적어도 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 또는 그 이상일 것이다. 특정 실시형태에서, 항온처리 기간은 적어도 15시간일 것이다. 일반적으로, 처리는 약 0℃ 내지 약 25℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행될 것이다. 임의의 실시형태에서, 처리는 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 10℃, 11℃, 12℃, 13℃, 14℃, 15℃, 16℃, 17℃, 18℃, 19℃, 20℃, 21℃, 22℃, 23℃, 24℃, 또는 25℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 처리는 약 2℃ 내지 약 25℃에서 실행된다. 구체적인 실시형태에서, 공정 개선은 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현되며, 흄드 실리카 처리는 면역글로불린 제조물에서 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시킨다.
임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ 침전물 내지 약 100g/㎏ 침전물의 농도로 첨가된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ 침전물, 또는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100g/㎏ 침전물의 농도로 첨가될 수 있다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카(예컨대, Aerosil 380 또는 동등물)는 약 40g/㎏ 침전물의 최종 농도로 재현탁물을 침전시키도록 첨가된다.
임의의 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도로 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도로 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도로 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 1g당 적어도 2.5g의 농도로 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질 또는 전체 단백질 g당 적어도 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0g, 또는 그 이상의 농도로 첨가된다.
임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물 내지 약 1.0㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.8㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.03㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.7㎏/㎏ 침전물의 최종 농도로 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 적어도 0.01㎏/㎏ 침전물, 또는 적어도 0.02㎏/㎏, 0.03㎏/㎏, 0.04㎏/㎏, 0.05㎏/㎏, 0.06㎏/㎏, 0.07㎏/㎏, 0.08㎏/㎏, 0.09㎏/㎏, 0.1㎏/㎏, 0.2㎏/㎏, 0.3㎏/㎏, 0.4㎏/㎏, 0.5㎏/㎏, 0.6㎏/㎏, 0.7㎏/㎏, 0.8㎏/㎏, 0.9㎏/㎏, 또는 1.0㎏/㎏ 침전물의 최종 농도로 첨가될 것이다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02㎏/㎏, 0.03㎏/㎏, 0.04㎏/㎏, 0.05㎏/㎏, 0.06㎏/㎏, 0.07㎏/㎏, 0.08㎏/㎏, 0.09㎏/㎏, 0.1㎏/㎏, 0.2㎏/㎏, 0.3㎏/㎏, 0.4㎏/㎏, 0.5㎏/㎏, 0.6㎏/㎏, 0.7㎏/㎏, 0.8㎏/㎏, 0.9㎏/㎏, 또는 1.0㎏/㎏ 침전물의 최종 농도로 첨가될 것이다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.6 내지 약 5.6의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.7 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.1의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 또는 약 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 이하 또는 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 2.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.7mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.6mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.5mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.3mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.2mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.1mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.2mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.3mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.5mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 이하 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝ 이하의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 낮은 pH 및 낮은 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 더 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
1. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제
지모겐의
결합 및
용리
하나의 양태에서, 본 발명은 A1PI을 포함하는 재현탁된 혈장 침전물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 일반적으로, 침전물은 수집된 혈장, 바람직하게는 인간 혈장의 분별 동안 임의의 침전물일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 낮은 pH 용액 조건 하에서 A1PI을 불용성 상태로 포함하는 재현탁된 혈장 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 A1PI을 불용성 상태로 유지하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, A1PI의 상당한 분획을 불용성 상태로 유지하는데 적당한 제2 낮은 pH 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, 및 불용성 부분으로부터 A1PI을 추출하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 침전 반응전 또는 침전 반응 동안 혼합되고 침전물과 함께 회수된다. 구체적인 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-1 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-4 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 V 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 IV이다. 또 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 C이다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 4.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제2 낮은 pH 용액 조건은 4.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제2 낮은 pH 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다.
하나의 구체적인 실시형태에서, 본 발명은 A1PI을 포함하는 재현탁된 혈장 침전물에서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함하는 제1 낮은 pH 용액 조건 하에서 A1PI을 불용성 상태로 포함하는 재현탁된 혈장 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 A1PI을 불용성 상태로 유지하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, 약 5.0 내지 약 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함하여 A1PI의 상당한 분획을 불용성 상태로 유지하는 제2 낮은 pH 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, 및 불용성 부분으로부터 A1PI을 추출하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 침전 반응전 또는 침전 반응 동안 혼합되고 침전물과 함께 회수된다. 구체적인 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-1 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-4 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 V 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 IV이다. 또 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 C이다.
2. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제
지모겐의
결합 및 A1PI의 추출
다른 양태에서, 본 발명은 A1PI을 포함하는 재현탁된 혈장 침전물에서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 일반적으로, 침전물은 수집된 혈장, 바람직하게는 인간 혈장의 분별 동안 임의의 침전물일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 pH가 낮은 제1 용액 조건 하에서 A1PI을 불용성 상태로 포함하는 재현탁된 혈장 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 A1PI을 불용성 상태로 유지하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, pH가 높은 제2 용액 조건 하에서 불용성 부분으로부터 A1PI을 추출하는 단계, 및 불용성 부분으로부터 가용성 부분을 분리하는 단계를 포함하며, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획은 불용성 부분으로부터의 A1PI의 추출 동안 SiO2와 결합된 상태로 있는다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 침전 반응전 또는 침전 반응 동안 혼합되고 침전물과 함께 회수된다. 구체적인 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-1 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-4 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 V 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 IV이다. 또 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 C이다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제1 용액 조건은 4.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제1 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제2 용액 조건은 7.0 내지 10.0의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 9.0의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.5의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 7.5±0.2의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 8.0±0.2의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제2 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 9.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 8.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제2 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 9.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 8.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 2mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.5의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 7.5±0.2의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 8.0±0.2의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝ 의 이온 강도를 포함한다.
IV
. 약학적 조성물
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질의 조성물을 제공하며, 이는 본원에서 기술되는 방법 중 임의의 것에 따라서 제조된다. 임의의 실시형태에서, 이러한 조성물은 약제 투여용(즉, 약학적 조성물)으로 제형화될 것이다. 일반적으로, 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조되는 혈장 유래 혈액 단백질 조성물은 감소된 아마이드 분해 활성을 가질 것이며, 기존의 현재 이용가능한 혈장 유래 생물제제보다 더 양호한 안전 프로파일을 제공할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 본원에서 제공되는 조성물은 감소된 인자 XI, 인자 XIa, 인자 XII, 및/또는 인자 XIIa 함량을 가질 것이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 조성물은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조된다. 임의의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질에서 단백질을 부분적으로 침전시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 한외여과 및/또는 정용여과함으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질을 포함하는 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 크로마토그래피 수지와 접촉시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 조성물은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조된다. 임의의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 조성물은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조된다. 임의의 실시형태에서, 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 혈액 단백질의 결핍 또는 기능 장애와 연관된 병태의 치료에 사용하기 위한 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질의 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
상기 기술된 조성물의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 조성물의 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지와 결합하지 않은 혈장 유래 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
본원에서 제공되는 조성물의 임의의 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 10%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 25%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 50%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 75%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%만큼 감소된다. 또 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 5%만큼, 또는 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%만큼 감소된다. 하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 감소는 개별적인 SiO2 처리 단계내에서 달성되는 감소를 말한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 감소는 SiO2 처리 단계를 제외하고 유사한 방식으로 제조된 조성물과 비교하여 최종 조성물 내 오염 물질의 수준을 말한다.
하나의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 본원에서 제공되는 방법을 사용하여 분리된 혈장 유래 단백질 조성물을 제형화함으로써 제조된다. 일반적으로, 제형화된 조성물에 적어도 1가지, 바람직하게는 적어도 2가지, 가장 바람직하게는 적어도 3가지의 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 실시할 것이다. 본원에서 제공되는 방법과 함께 이용할 수 있는 바이러스 불활성화 또는 제거 단계의 비제한적인 예는 용매 세제 처리(문헌[Horowitz et al., Blood Coagul Fibrinolysis 1994 (5 Suppl 3):S21-S28] 및 [Kreil et al., Transfusion 2003 (43):1023-1028], 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 나노여과(문헌[Hamamoto et al., Vox Sang 1989 (56)230-236] 및 [Yuasa et al., J Gen Virol. 1991 (72 (pt 8)):2021-2024]), 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 및 고온에서 낮은 pH 항온처리(문헌[Kempf et al., Transfusion 1991 (31)423-427] 및 [Louie et al., Biologicals 1994 (22):13-19])를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 정맥내, 피하, 근육내, 및/또는 안내 투여에 적당한 하나 이상의 완충제 또는 pH 안정화제를 포함할 것이다. 본원에서 제공되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제형화하는데 적당한 완충제의 비제한적인 예는 적절한 pH로 조정되는 글라이신, 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 글루타메이트, 타르트레이트, 벤조에이트, 락테이트, 히스티딘 또는 기타 다른 아미노산, 글루코네이트, 말레이트, 석시네이트, 포메이트, 프로피오네이트, 카보네이트, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 일반적으로, 완충제는 확장된 기간 동안 제형에 적당한 pH를 유지하는데 충분할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 완충제는 글라이신이다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 조성물의 삼투압농도(osmolarity)를 조정하기 위한 제제를 선택적으로 추가로 포함할 수 있다. 삼투성 제제의 비제한적인 예는 만니톨, 솔비톨, 글라이세롤, 수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 레불로스, 프럭토스, 락토스, 폴리에틸렌 글라이콜, 포스페이트, 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 칼슘 글루코노글루코헵톤에이트, 디메틸 설폰 등을 포함한다.
전형적으로, 본원에서 제공되는 제형은 생리적 삼투압 농도와 비슷한 삼투압농도, 즉 약 285 내지 295mOsmol/㎏ 을 가질 것이다(문헌[Lacy et al., Drug Information Handbook - Lexi-Comp 1999:1254]). 임의의 실시형태에서, 제형의 삼투압농도는 약 200mOsmol/㎏ 내지 약 350mOsmol/㎏, 바람직하게는 약 240 내지 약 300mOsmol/㎏일 것이다. 특정 실시형태에서, 제형의 삼투압농도는 약 200mOsmol/㎏, 또는 210mOsmol/㎏, 220mOsmol/㎏, 230mOsmol/㎏, 240mOsmol/㎏, 245mOsmol/㎏, 250mOsmol/㎏, 255mOsmol/㎏, 260mOsmol/㎏, 265mOsmol/㎏, 270mOsmol/㎏, 275mOsmol/㎏, 280mOsmol/㎏, 285mOsmol/㎏, 290mOsmol/㎏, 295mOsmol/㎏, 300mOsmol/㎏, 310mOsmol/㎏, 320mOsmol/㎏, 330mOsmol/㎏, 340mOsmol/㎏, 340mOsmol/㎏, 또는 350mOsmol/㎏일 것이다.
본원에서 제공되는 혈장 유래 제형은 일반적으로 확장된 기간 동안 액체 형태로 안정적이다. 임의의 실시형태에서, 제형은 실온에서 적어도 약 3개월 동안, 또는 실온에서 적어도 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 안정적이다. 제형은 또한 일반적으로 냉장 조건(전형적으로 약 2℃ 내지 약 8℃) 하에서 6개월 또는 적어도 약 18개월 동안, 또는 냉장 조건 하에서 적어도 약 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 또는 45개월 동안 안정적일 것이다.
V. 처리 방법
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조되는 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 투여함으로써 혈액 단백질 결핍 또는 기능장애와 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈액 단백질 결핍 또는 기능장애와 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 혈액 단백질 결핍 또는 기능장애와 연관된 병태의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물의 용도를 제공한다. 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택된다.
A. 면역글로불린
현대 의학에서 일상적으로 실시되는 바와 같이, 농축된 면역글로불린(특히 IgG)의 멸균 제조물은 3가지 주요 부류, 즉 면역 결핍증, 염증 및 자가면역 질환, 및 급성 감염증에 속하는 의학적 병태를 치료하는데 사용된다. 또한 이러한 IgG 제조물은 다발성 경화증(특히 재발-이장성 다발성경화증 또는 RRMS), 알츠하이머병, 및 파킨슨병을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 정제된 IgG 제조물은 이러한 목적뿐만 아니라 IgG 제조물의 기타 다른 임상적으로 인정되는 용도에 적당하다.
FDA는 다양한 징후, 예를 들어 동종 골수 이식, 만성 림프구성 백혈병, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 아동 HIV, 1차 면역결핍증, 가와사키병, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증(CIDP), 및 항체 수준이 높은 수혜자의 신장 이식 또는 ABO 부적합 공여자의 신장 이식을 치료하기 위한 IVIG의 사용을 승인하였다. 임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IVIG 조성물은 이러한 질환 및 병태의 치료 또는 관리에 유용하다.
게다가, 다양한 징후, 예를 들어 만성 피로 증후군, 클로스트리듐 디피실리균 대장염, 피부근염(dermatomyositis)과 다발성근염 및 피부근염(polymyositis), 그레이브스 안병증, 길랑-바레 증후군, 근육성이영양증, 포함체근육염, 램버트-이튼 증후군, 홍반성 낭창, 다초점성 운동신경병증, 다발성 경화증(MS), 중증근무력증, 신생아 동종면역성 혈소판 감소증, 파보바이러스 B19 감염, 천포창, 수혈후 자반증, 신장 이식 거부반응, 자연 유산(spontaneous Abortion/Miscarriage), 전신근강직증후군, 안구간대경련 근간대경련, 위독한 성인에서 중증패혈증 및 패혈성 쇼크, 독성표피용해, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, X-연관 무감마글로불린혈증 및 저감마글로부민혈증의 치료 또는 관리를 위하여 IVIG를 위한 인가되지 않은 약품의 사용(off-label)을 환자에게 일반적으로 제공한다. 임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IVIG 조성물은 이러한 질환 및 병태의 치료 또는 관리에 유용하다.
마지막으로, 1차 면역결핍증, RRMS, 알츠하이머병, 및 파킨슨병을 포함하는 질환의 치료 또는 관리를 위한 IVIG의 실험적 사용이 제안되었다(미국 특허 출원 공개 제 U.S. 2009/0148463호, 이는 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). 임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IVIG 조성물은 1차 면역결핍증, RRMS, 알츠하이머병, 또는 파킨슨병의 치료 또는 관리에 유용하다. 매일 투여를 포함하는 임의의 실시형태에서, 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 질환 중증도, 투여 경로(예컨대, 정맥내 대 피하) 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 본 발명의 면역글로불린 제조물은 개체에 매일 약 5㎎/㎏ 내지 약 2000㎎/㎏으로 투여될 수 있다. 추가적인 실시형태에서, 면역글로불린 제조물은 적어도 약 10㎎/㎏, 적어도 15㎎/㎏, 적어도 20㎎/㎏, 적어도 25㎎/㎏, 적어도 30㎎/㎏, 또는 적어도 50㎎/㎏의 양으로 투여될 수 있다. 추가적인 실시형태에서, 면역글로불린은 개체에 매일 최대 약 100㎎/㎏, 최대 약 150㎎/㎏, 최대 약 200㎎/㎏, 최대 약 250㎎/㎏, 최대 약 300㎎/㎏, 최대 약 400㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 다른 실시형태에서, 면역글로불린 제조물의 용량은 더 많거나 더 적을 수 있다. 또한, 면역글로불린 제조물은 하루에 1번 이상의 용량으로 투여될 수 있다. IgG 제조물에 의해 치료되는 질환을 잘 아는 임상의는 당업계에 공지된 기준에 따라서 환자에레 적절한 용량을 결정할 수 있다.
본 발명에 따라서, 의사가 치료 과정을 완료하는데 필요한 시간을 결정할 수 있으며 하루만큼 짧은 시간 내지 1개월 초과의 시간의 범위일 수 있다. 임의의 실시형태에서, 치료 과정은 1 내지 6개월일 수 있다.
IVIG 제조물의 유효한 양은 정맥 수단에 의해 개체에 투여된다. 용어 "유효한 양"은 개체에서 질환 또는 병태의 개선 또는 교정을 가져오는 IVIG 제조물의 양을 말한다. 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 치료될 질환 또는 병태, 질환 중증도 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, IVIG 제조물은 개체에 투여당 약 5㎎/㎏ 내지 약 2000㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 용량은 적어도 약 5㎎/㎏, 또는 적어도 약 10㎎/㎏, 또는 적어도 약 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏, 1900㎎/㎏, 또는 적어도 약 2000㎎/㎏일 수 있다.
IVIG 치료의 투약량 및 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 또는 병태의 중증도에 좌우될 것이다. 일반적으로, 1차 면역결핍증에 있어서는, 약 3 내지 4주마다 약 100㎎/㎏ 체중 내지 약 400㎎/㎏ 체중의 용량이 투여될 것이다. 신경학적 및 자가면역 질환에 있어서는, 최대 2g/㎏ 체중이 1달에 1번 5일 과정으로 3 내지 6개월 동인 이행된다. 이는 일반적으로 약 3 내지 4주마다 1번 약 100㎎/㎏ 체중 내지 약 400㎎/㎏ 체중의 투여를 포함하는 유지 요법으로 보충된다. 일반적으로, 환자는 약 14 내지 35일마다 1번, 또는 약 21 내지 28일마다 1번 용량 또는 치료를 받을 것이다. 치료 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 및 병태의 중증도에 좌우될 것이다.
바람직한 실시형태에서, 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증의 치료를 필요로 하는 사람에서 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 발명의 약학적 IVIG 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 관련된 실시형태에서, 본 발명은, 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증의 치료를 필요로 하는 사람에서 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증의 치료를 위하여 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조되는 IVIG 조성물을 제공한다.
임의의 실시형태에서, 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증은 동종 골수 이식, 만성 림프구성 백혈병, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 아동 HIV, 1차 면역결핍증, 가와사키병, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증(CIDP), 항체 수준이 높은 수혜자의 신장 이식 또는 ABO 부적합 공여자의 신장 이식, 만성 피로 증후군, 클로스트리듐 디피실리균 대장염, 피부근염(dermatomyositis)과 다발성근염 및 피부근염(polymyositis), 그레이브스 안병증, 길랑-바레 증후군, 근육성이영양증, 포함체근육염, 램버트-이튼 증후군, 홍반성 낭창, 다초점성 운동신경병증, 다발성 경화증(MS), 중증근무력증, 신생아 동종면역성 혈소판 감소증, 파보바이러스 B19 감염, 천포창, 수혈후 자반증, 신장 이식 거부반응, 자연 유산(spontaneous Abortion/Miscarriage), 전신근강직증후군, 안구간대경련 근간대경련, 위독한 성인에서 중증패혈증 및 패혈성 쇼크, 독성표피용해, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, X-연관 무감마글로불린혈증 및 저감마글로부민혈증, 1차 면역결핍증, RRMS, 알츠하이머병, 및 파킨슨병으로부터 선택된다.
B. 인자 H
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조된 인자 H 조성물의 치료적으로 유효한 양을 투여함으로써 인자 H의 기능장애 또는 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 인자 H의 기능장애 또는 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 I 침전물로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다. 다른 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 II+III 여과 케이크로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다.
임의의 실시형태에서, 인자 H의 기능장애와 연관된 질환 또는 장애는 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS), 노인황반변성(AMD), 막증식성사구체신염 II(MPGNII), 심근경색증, 관동맥성 심장병/관상동맥 질환(CAD/CHD), 및 알츠하이머병으로부터 선택된다. 하나의 특정 실시형태에서, 상기 질환은 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS)이다. 다른 특정 실시형태에서, 상기 질환은 노인황반변성(AMD)이다. 또 다른 특정 실시형태에서, 상기 질환은 막증식성사구체신염 II(MPGNII)이다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 인자 H 조성물의 치료적으로 유효한 양을 개체에 투여함으로써 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 제공된다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 I 침전물로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다. 다른 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 II+III 여과 케이크로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다.
임의의 실시형태에서, 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애는 자가면역 질환(예를 들어, 류마티스 관절염, IgA 신증, 천식, 전신 홍반성 낭창, 다발성 경화증, 항인산화지질 증후군, ANCA-연관 혈관염, 천포창, 포도막염, 중증근무력증, 하시모토 갑상선염), 신장 질환(예를 들어 IgA 신증, 용혈성요독증후군, 막증식성사구체신염), 천식, 알츠하이머병, 성인 황반변성, 발작성 야간혈색소뇨증, 복부 대동맥류, 허혈 재관류 손상, 및 패혈증으로부터 선택된다.
본 발명에 의해 제공되는 약학적 조성물은 단독으로 또는 기타 다른 치료제와 함께 투여될 수 있다. 이러한 치료제는 동일한 약학 조성물의 부분으로서 포함될 수 있다.
1. 투여
본 발명에 따라서, 의사가 치료 과정을 완료하는데 필요한 시간을 결정할 수 있으며 하루만큼 짧은 시간 내지 1개월 초과의 시간의 범위일 수 있다. 임의의 실시형태에서, 치료 과정은 1 내지 6개월일 수 있다.
인자 H 제조물의 유효한 양은 질환 또는 장애를 치료하는데 적당한 임의의 수단에 개체에 투여된다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 인자 H는 정맥내, 안내, 피하, 및/또는 근육내 수단에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 환자에게 인자 H 조성물의 안내 투여를 포함하는, 노인황반변성의 치료를 필요로 하는 개체에서 노인황반변성을 치료하는 방법이 제공된다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 인자 H는 전신 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 전신 투여는 경구, 경피, 진피하(subdermal), 복강내, 피하, 경비, 설하, 또는 직장 투여를 포함한다. 가장 바람직한 전신 투여 경로는 경구이다. 안구 투여를 위한 국소 투여는 국부적, 유리체내, 안구주위, 경공막, 안구후부, 공막근처(juxtascleral), 테논낭하, 또는 안내 장치를 통하는 것을 포함한다. 국소 전달을 위한 바람직한 방법은 후부 공막근처 투여에 의해; 유리체내 주입을 통하여; 또는 캐뉼라(이는 예를 들어 미국 특허 제6,413,245호에 기술되어 있으며, 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨)를 통하여, 황반에의 경공막 전달을 포함한다. 대안적으로, 억제제는 유리체내 또는 경공막으로 이식된 지속형 전달 장치를 통해, 또는 국소 안구 투전달의 기타 다른 공지된 방법에 의해 전달될 수 있다.
임의의 실시형태에서, 용어 "유효한 양"은 개체에서 질환 또는 병태의 개선 또는 교정을 가져오는 인자 H 제조물의 양을 말한다. 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 치료될 질환 또는 병태, 질환 중증도 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 인자 H 제조물은 개체에 투여당 5㎎/㎏ 내지 2000㎎/㎏ 또는 약 5㎎/㎏ 내지 2000㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 용량은 적어도 5㎎/㎏ 또는 약 5㎎/㎏, 적어도 10㎎/㎏ 또는 약 10㎎/㎏, 또는 적어도 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏, 1900㎎/㎏, 또는 2000㎎/㎏, 또는 약 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏, 1900㎎/㎏, 또는 2000㎎/㎏일 수 있다. 인자 H 치료의 투약량 및 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 또는 병태의 중증도에 좌우될 것이다.
2. 노인황반변성(
AMD
)
바람직한 실시형태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 인자 H 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 개체에 투여함으로써 노인황반변성의 치료를 필요로 하는 개체에서 노인황반변성을 치료하는 방법을 제공한다.
노인황반변성은 60세 이상의 노인 인구에 있어서 실명의 주원인이다. 오늘날, 75세 이상의 노인 인구의 35~40%가 어느 정도의 AMD를 가지는 것으로 추산된다. 전세계적으로 대략 5천만명의 사람이 발병되어 있으며, 미국에서만 1천만명이 발병되어 있다. 현재, 매년 약 155,000명이 새로이 AMD 진단을 받는다. 전세계적으로 인구가 계속 고령화하고 있으므로, 매년 진단되는 수는 2020년까지 3배가 될 것으로 예상된다. AMD는 발병된 개인에서 중심 시력을 파괴하여, 독서 및 운전과 같은 일상생활에 필요한 활동을 실행하는 개인의 능력을 빼앗는 파괴적인 질환이다.
AMD는 외부 망막층의 세포(광수용체 및 광수용체를 지지하는 망막 색소 상피를 포함함)뿐만 아니라, 맥랙막으로 알려진 눈의 인접한 혈관층의 세포를 수반하는 느린 진행성 질환이다. 황반변성은 높은 시력(high-acuity vision)을 담당하는 막망 중심부의 작은 부위(직경이 약 2mm)인 황반의 파괴를 특징으로 한다. 고령에 발생하는 황반변성(즉, AMD)은 일반적으로 "건성" 또는 "습성"으로 정의된다. AMD의 습성("삼출성") 신생혈관성 형태는 상기 질환이 있는 환자의 대략 10%에서 발병하고, RPE를 통한 맥락막모세혈관층으로부터 비정상적인 혈관이 성장하는 것을 특징으로 하며, 전형적으로 출혈, 삼출, 흉터, 및/또는 장액 망막 박리를 야기한다. AMD가 있는 환자의 대략 90%는 비신생혈관성, 또는 상기 질환의 건성 형태이며, 이는 RPE의 위축 및 황반 광수용체의 손실을 특징으로 한다.
AMD는, 기저 맥락막으로부터 RPE(망막의 최외곽층)을 분리하는 세포외 매트릭스 성분의 다층 복합물인 브루크막 상에 축적하는 파편 유사 물질("두루젠"이라 칭함)의 퇴적물의 존재를 특징으로 한다. 드루젠은 검안경 안구 검사에 의해 관찰될 수 있다. 이러한 퇴적물은 AMD가 있는 환자로부터의 공여자 안구의 현미경 연구에서 광범위하게 특징지어졌다. 임상 검사시 살아있는 안구에서 관찰되는 관찰되는 퇴적물은, 퇴적물의 상대적인 크기, 존재비, 및 형상을 포함한 여러 가지 기준에 따라서 연성 드루젠 또는 경성 드루젠으로 분류된다. 조직 화학 및 면역 세포 화학적 연구는 드루젠이 다양한 지질, 다당류, 글라이코사미노글라이칸 및 단백질을 함유함을 밝혔다.
현재, 여러 가지 유형의 치료법이 상기 질환을 관리하는데 효과적인 거승로 나타났지만, AMD에 대하여 공지된 치유법은 없다. 상기 질환의 습성 형태에 있어서 비정상적인 혈관의 레이저 광응고화는 표준 치료법이다. 이 치료법은 단지 잘 설명되어 있는 신생혈관성 병변만이 이러한 방법으로 치료될 수 있으며 환자의 50%는 혈관으로부터 누출되는 재발을 겪게 되는 사실에 의해 제한된다(문헌[Fine et al ., 2000]). 이 치료법에서 필요로 하는 레이저 에너지로 인하여, 치료되는 부분의 광수용체가 또한 죽게 될 것이고, 환자는 또한 종종 치료 직후 중신맹을 겪을 것이다. 결국 새로운 신생혈관성 병변이 발생하여 반복적인 치료를 필요로 할 것이다. 기타 다른 개입은 금연 및 항산화제를 이용한 치료의 시작에 의하여 생활방식을 변경하는 것을 포함한다. VEGF 억제제, 예컨대 라니비주맙 또는 베바시주맙의 유리체내 주입을 사용한 항혈관형성 치료법이 제안되었다.
최근, 개인의 약 35%가 인자 H 유전자의 하나 또는 모든 복제물에서 위험에 있는 단일염기다형성(SNP)을 보유하는 것으로 발견되었다. 동형접합성 개체는 노인황반변성이 발전할 가능성이 대략 7배 증가한 반면, 이형접합체는 상기 질환이 발전할 가능성이 2 내지 3배 증가한다. 인자 H의 CCP 모듈 7에 위치하는 이러한 SNP는, SNP 및 질환 사이의 인과 관계를 나타내는, C-반응성 단백질 및 헤파린 모두와 인자 H 사이에서의 상호작용에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 다형성은 Y420H 다형성이다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 하나의 실시형태에서, 개체는 AMD의 임의의 증상을 가지지 않는다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 드루젠을 가진다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 AMD가 발전할 위험이 증가된 상태에 있다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 투여는 정맥내 투여이다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 상기 방법은 AMD의 징후 및/또는 증상을 가지는 개체를 치료하는 단계를 추가로 포함한다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 AMD로 진단받았다.
다른 양태에서, 본 발명은 노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에서 제공되는 인자 H 제조물의 예방적 또는 치료적으로 유효한 양을 개체에게 투여하는 단계, 및 정기적으로 상기 투여를 반복하는 단계를 포함한다.
노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법의 하나의 실시형태에서, 상기 투여는 상기 개체에서 황반 변성의 발전의 진행 또는 개시를 지연시키는데 유효한 시간 동안 반복된다.
노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법의 다른 실시형태에서, 인간 개체는 노인황반변성의 발전과 연관된 하나 이상의 유전자 표지의 존재에 기초하여 확인된 바와 같이 노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단된다.
노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법의 다른 실시형태에서, 유전자 표지는 다형성이다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 AMD로 진단받지 않았다.
C.
인터
-알파-트립신 억제제(IαI)
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 양을 투여함으로서 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 장애 및 질환을 치료하는 방법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 하나의 실시형태에서, 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 질환 또는 장애는 패혈증이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 장애 및 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 장애 및 질환을 치료하는 방법에 있어서의 사용을 위하여 본원에서 개시되는 방법에 의해 제조되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 질환 또는 장애는 패혈증이다.
다른 양태에서, 본원에서 제공되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 양을 투여함으로서 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 및 장애를 치료하는 방법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 하나의 실시형태에서, 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 및 장애는 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 파종성 혈관내 응고, 섬유화증식, 탄저병 중독, 암 전이, 수술 동안의 기관 손상, 신장 질환, 혈관 질환, 응고, 당뇨병, 및 전신 염증 반응으로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 및 장애를 치료하는 방법에 있어서의 사용을 위하여 본원에서 개시되는 방법에 의해 제조되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 또는 장애는 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 파종성 혈관내 응고, 섬유화증식, 탄저병 중독, 암 전이, 수술 동안의 기관 손상, 신장 질환, 혈관 질환, 응고, 당뇨병, 및 전신 염증 반응으로부터 선택된다.
A. 투여
본 발명에 따라서, 의사가 치료 과정을 완료하는데 필요한 시간을 결정할 수 있으며 하루만큼 짧은 시간 내지 1개월 초과의 시간의 범위일 수 있다. 임의의 실시형태에서, 치료 과정은 1 내지 6개월일 수 있다.
IaIp 제조물의 유효한 양은 질환 또는 장애를 치료하는데 적당한 임의의 수단에 개체에 투여된다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, IaIp는 정맥내, 피하, 및/또는 근육내 수단에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 환자에게 IaIp 조성물의 정맥내(IV) 투여를 포함하는, 패혈증의 치료를 필요로 하는 개체에서 패혈증을 치료하는 방법이 제공된다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IaIp는 전신 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 전신 투여는 경구, 진피하, 복강내, 피하, 경비, 설하, 또는 직장 투여 경로를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 용어 "유효한 양"은 개체에서 질환 또는 병태의 개선 또는 교정을 가져오는 IaIp 제조물의 양을 말한다. 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 치료될 질환 또는 병태, 질환 중증도 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, IaIp 제조물은 개체에 투여당 약 5㎎/㎏ 내지 약 2000㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 용량은 적어도 약 5㎎/㎏, 또는 적어도 약 10㎎/㎏, 또는 적어도 약 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏,, 1900㎎/㎏,, 또는 적어도 약 2000㎎/㎏일 수 있다. IaIp 치료의 투약량 및 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 또는 병태의 중증도에 좌우될 것이다.
VI
.
실시예
실시예
1
혈장 유래 단백질 조성물에 존재하는 잔여 세린 프로테아제 함량 및 활성을 측정하기 위하여, SiO2 처리의 사용없이 제조된 상업적으로 이용가능한 2가지 IgG 제조물, 즉 OCTAGAM(등록상표)(5% 정맥주사용 면역 글로불린; Octapharma) 및 Subcuvia(16% 피하투여용 면역 글로불린; Baxter), SiO2 처리를 사용하여 제조된 상업적으로 이용가능한 IgG 제조물의 2가지 그룹의 Gammagard Liquid(10% 정맥주사용 면역 글로불린; Baxter), 및 현재 개발중인 인자 H 정제 방법에 대하여 아마이드 분해 활성 프로파일을 측정하였다. 특히, 인자 H 조성물은 결합시킨 다음 미분된 SiO2로부터 인자 H를 용리시킴으로서 상기 기술된 바와 같이 정제하였다.
간단하게, 각각의 혈장 유래 단백질 조성물에 대한 아마이드 분해 활성 프로파일은 상이한 효소 특이성을 가지는 다음의 발색 기질을 이용하여 분석함으로써 측정하였다: PL-1(넓은 스펙트럼), S-2288(넓은 스펙트럼), S-2266(FXIa, 선상(glandular) 칼리크레인), S-2222(FXa, 트립신), S-2251(플라스민), 및 S-2302(칼리크레인, FXIa, 및 FXIIa). 또한 프리칼리크레인 활성제 활성(PKKA) 및 인자 Xia 단위의 양을 측정하였다. 표 17에 나타낸 바와 같이, SiO2 흡착 단계의 사용없이 제조된 혈장 유래 IgG 조성물은 상당한 수준의 아마이드 분해 활성 및 FXIa 함량을 함유하였다. 반대로, Gammagard Liquid의 2가지 시험한 그룹 모두 최소한의 아마이드 분하 활성 및 FXIa 함량을 함유하였다. 이러한 결과와 일관되게, 결합하고 미분된 SiO2로부터 용리함으로써 제조된 인자 H 조성물은 매우 높은 수준의 아마이드 분해 활성 및 FXIa 함량을 함유한다.
실시예
2
혈장 샘플로부터 인자 H의 제조에 있어서 경제적으로 유리하며, 동일한 혈장 샘플로부터 추가적인 혈액 인자의 회수를 가능하게 하는 도식을 결정하기 위하여, 도 1에 나타낸 흐름 도표에서 개괄된 도식에 따라서 다량의 수집한 사람 혈장을 분별화하였다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 인간 혈장 냉동 불량 콘 집단에 존재하는 인자 H의 대부분(약 90%)은 분획 II+III 침전물에서 발견될 수 있다. 또한 인자 H의 더 작지만 상당한 양(약 10%)이 분획 I 침전물에서 발견될 수 있다. 이는 PCT 공개 WO 제2011/011753호에 나타낸 결과와 일관되며, 이의 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
인자 H는, 필터 프레스를 통한 인자 H 추출 완충액을 재순환시킴으로써 "분획 II+III 여과액"인 조성물 6의 직접적인 상류에서 "Aerosil 처리" 조성물의 여과의 결과로서 형성되는 미분된 SiO2 여과 케이크 부산물로부터 추출하였다. 그다음 염 및 다양한 불순물은 15%의 최종 농도로 에탄올의 첨가 및 최소한 4시간 동안 -6℃에서의 항온처리를 통하여 pH 8.0에서 실행된 제1 침전 단계에 의해 여과 케이크 추출물로부터 제거하였다. 침전 반응의 pH는 1시간 항온처리 시간 후에 8.0으로 재조정하였다. 그 다음 침전물을 원심분리에 의하여 상청액으로부터 제거하였다. 25%의 최종 농도로 에탄올의 첨가 및 최소한 8시간 동안 -10℃에서의 항온처리를 통하여 pH 6.0에서 실행된 제2 침전 단계에 의해 인자 H를 추가로 풍부화하였다. 그 다음 인자 H를 함유하는 침전물은 원심분리에 의해 회수하였다.
제2 침전 단계에 의해 형성된 침전물을 지질 피막형 바이러스를 불활성화시키도록 처리된 낮은 이온 강도 용해 완충액 및 S/D에서 1:9의 비율로 용해하였다. 그 다음 인자 H를 DEAE-세파로스 FF 수지를 사용하여 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 풍부화하였다. 간단하게, 낮은 이온 강도 조건 하에서 인자 H를 DEAE-세파로스 수지에 결합시키고 용액의 이온 강도를 증가시킴으로써 용리하였다. 그 다음 DEAE-세파로스 용리액의 전도도를 감소시키고, 헤파린 친화 크로마토그래피에 의해 인자 H를 추가로 풍부화하였다. 간단하게, 인자 H를 낮은 이온 강도 조건 하에서 헤파린-세파로스 FF 수지에 결합시키고 용액의 이온 강도를 증가시킴으로써 용리하였다. 표 18에 나타낸 바와 같이, 대다수의 인자 H가 DEAE 및 헤파린 수지에 결합하였다.
그 다음 헤파린 수지로부터 용리한 인자 H에 표준 절차에 따라서 한외여과/정용여과를 실시한 다음, Superdex 200 컬럼 상에서 크기 배제 크로마토그래피를 실시하였다. 그다음 크기 배제 크로마토그래피로부터 회수된 인자 H를 한외여과에 의해 농축시키고, 멸균 여과한 다음, PBS-완충액 중에서 50㎎/㎖의 최종 단백질 농도로 제형화하였다.
그 다음 최종 인자 H 조성물(FH012)을 균질성, 불순물, 및 아마이드 분해 활성에 대하여 특성화하였다. 인자 H 조성물의 단분산성을 크기 배제 크로마토그래피에 의해 특성화하였다. 표 19에 나타낸 바와 같이, HP-SEC 컬럼 상에 로딩될 때, 인자 H 최종 조성물에 존재하는 대다수의 단백질은 400kDa의 추산 크기로 이동하였다.
그 다음 내독소, pH, 시각적 외관, 및 최종 단백질 농도의 수준을 최종 인자 H 조성물에 대하여 측정하였다. 표 20에 나타낸 바와 같이, 상기 조성물은 리뮐루스 변형 세포 용해물(limulus amebocyte lysate, LAL) 분석에 의해 결정된 바와 같이, 낮은 내독소 수준(<0.5 EU/㎖)을 가졌다.
| LAL, pH, 시각적 외관, 및 FH012 조성물의 단백질 농도 | |
| LAL | <0.5 EU/㎖ (발열인자 없음) |
| pH | 7.1 |
| 시각적 외관 | 무색 및 가시적 입자 없음 |
| 단백질 농도 | 4.54% |
그 다음 최종 인자 H에서 다양한 단백지 불순물의 수준을 측정하였다. 표 21에 나타낸 바와 같이, 보체 단백질 및 IgG 면역글로불린은 인자 H 조성물에서 최종 단백질 농도의 1% 미만을 차지하였다.
| 최종 FH102 조성물 중 불순물 | ||
| 불순물 | 농도 | 전체 단백질의 백분율 |
| IgG | 51㎍/㎖ | 0.11% |
| C3 | 321.5㎍/㎖ | 0.71% |
| C3a | 17.5㎍/㎖ | 0.04% |
| C5a | 3.7ng/㎖ | <0.01% |
| C4 | 1.94㎍/㎖ | <0.01% |
| EDTA | 72㎍/㎖ | |
마지막으로, 아마이드 분해 활성 및 프로테아제 함량의 수준은 실시예 1에 기록한 바와 같이 측정하였다. 표 17에 나타낸 바와 같이, 본 실시예에서 개괄된 도식에 따라 정제된 혈정 유래 인자 H는 높은 수준의 아마이드 분해 활성 및 FXIa 함량을 함유하였다.
실시예
3
혈장 유래 단백질 조성물로부터 아마이드 분해 활성을 제거하는 능력을 나태나기 위하여, 재현탁된 콘 분획 II+III 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처리하였다. 간단하게, 수집된 냉동 불량 혈장을 본원에서 기술된 IgG 정제 도식에 따라서 분별하여 분획 II+III 침전물을 제공하였다. 분획 II+III 침전물 침전물을 0℃ 내지 8℃로 유지된 온도에서 낮은 전도도의 추출 완충액(pH 5.1±0.2; ~0.8mS/㎝) 중에 재현탁하였다. Aerosil(등록상표) 380(Evonik Industries AG)을 40 내지 60g/㎏ II+III 침전물의 최농 농도로 첨가하였다. 0.5㎏/㎏ II+III 침전물의 최종 농도로 CELPURE(등록상표) C300 여과 보조제(Advanced Minerals Corporation)의 추가 후, 심층 필터를 사용하여 현탁액을 여과하였다. 그 다음 여과액 중 면역글로불린 조성물을 FXI 지모겐 함량에 대하여 시험하였다. 표 22에 나타낸 바와 같이, 미분된 이산화규소(SiO2)를 이용한 분획 II+III 현탁액의 처리는 조성물의 인자 XI 지모겐 함량에서 거의 90% 감소를 가져왔다.
| 최종 FH012 조성물 중 불순물 | ||||||||||
| 분획 II+III 재현탁액 | 분획 II+III 추출물 Cuno 여과액 | |||||||||
| 그룹 | 분획 II+III 페이스트 (㎏) |
용해된 분획
II
+
III
(L) |
F-
XI
지모겐
(U/ ㎖ ) |
F-
XI
지모겐
(U 중 1000) |
F-
XI
지모겐
(% ) |
Fr
. II+III 여과액 부피
(L) |
F-
XI
지모겐
(U/ ㎖ ) |
F- XI 지모겐 (U 중 1000) |
F-
XI
지모겐
( II + III 재현탁액 중 %) |
% 제거 |
| 1 | 117 | 469 | 5.25 | 2460 | 100 | 2250 | 0.11 | 247 | 10.1% | 89.9% |
| 2 | 118 | 475 | 5.13 | 2435 | 100 | 2290 | 0.11 | 251 | 10.3% | 89.7% |
| 3 | 119 | 479 | 4.51 | 2162 | 100 | 2300 | 0.12 | 276 | 12.8% | 87.2% |
실시예
4
미분된 SiO2 여과 케이크로부터 세린 프로테아제의 용리를 평가하기 위하여, 실시예 3에서 제조한 바와 같이, 다양한 농도(100, 50, 25, 및 5mM)의 포스페이트 완충액을 함유하는 용리 완충액을 2가지의 상이한 pH(6.0, 7.5)에서 SiO2로부터 단백질을 용리하는데 사용하였다. 간단하게, 여과 케이크를 적절한 완충계에 1:5의 비율로 용해시키고 심층 필터(Cuno 50 SA)를 통하여 여과하였다. 그 다음 각각의 용리액의 아마이드 분해 활성 및 인자 H 조성물을 측정하였다(표 23 및 표 24). 표 23에 나타낸 바와 같이, 더 낮은 전도도 및 pH(즉, 6.0)에서, 기질 CS2166(FXIa, 활성화된 단백질 C)을 이용하여 측정한 아마이드 분해 활성의 용리가 감소하였다.
pH 7.5(표 24)에서의 용리 조건 하에서, 전도도 증가와 함께 인자 H 용리는 감소한 반면, 전도도 증가와함께 세린 프로테아제 용리는 증가하였다. 놀랍게도, 매우 낮은 전도도(5mM 포스페이트; 0.882mS/㎝)에서, 세린 프로테아제 용리는 상당히 증가한 반면, 인자 H 용리는 감소하였다. pH 7.5에서의 용리에 대하여 얻은 데이터는 도 3에 그래프로 나타내어져 있다.
| pH 6.0에서 미분된 SiO2로부터의 인자 H 및 세린 프로테아제 활성의 용리 | ||||
| 기질: CS2166 | 인자 H | 단백질 | ||
| 완충계 : pH = 6.0 | 샘플 | 전체 nmol *분 | [g/ℓ 혈장] | [ nmol /g] |
| 100mM 포스페이트 완충액; 전도도 11.88mS/㎝ | 여과액 | 72745 | 0.27 | 61944 |
| 50mM 포스페이트 완충액; 전도도 6.55mS/㎝ | 여과액 | 65055 | 0.19 | 64600 |
| 25mM 포스페이트 완충액; 전도도 3.48mS/㎝ | 여과액 | 28591 | 0.05 | 63694 |
| 5mM 포스페이트 완충액: 전도도 0.882mS/㎝ | 여과액 | 4816 | 0.0003 | 57331 |
| pH 7.5에서 미분된 SiO2로부터의 인자 H 및 세린 프로테아제 활성의 용리 | ||||
| 기질: CS2166 | 인자 H | 단백질 | ||
| 완충계 : pH = 7.5 | 샘플 | 전체 nmol *분 | [g/ℓ 혈장] | [ nmol /g] |
| 100mM 포스페이트 완충액; 전도도 18.81mS/㎝ | 여과액 | 236456 | 0.21 | 156718 |
| 50mM 포스페이트 완충액; 전도도 10.91mS/㎝ | 여과액 | 147829 | 0.29 | 109228 |
| 25mM 포스페이트 완충액; 전도도 6.08mS/㎝ | 여과액 | 84622 | 0.39 | 57892 |
| 5mM 포스페이트 완충액: 전도도 1.524mS/㎝ | 여과액 | 176685 | 0.33 | 134051 |
실시예
5
SiO2와 동시 결합된 세린 프로테아제와 인자 H를 차별적으로 용리하는 능력을 설명하기 위하여, 2단계의 용리 절차를 진행하였다. 간단하게, SiO2 처리 후에 형성되는 분획 II+III 여과 케이크를 앞에서와 같이 제조하였다. 그 다음 여과 케이크에 pH 6.0에서 0.882mS/㎝ 내지 11.88mS/㎝의 이온 강도를 포함하는 용액 조건 하에서 제1 용리를 실시하였다. 실시예 4에서 설명한 바와 같이, 낮은 pH(pH 6.0) 및 낮은 이온 강도(6.5mS/㎝ 미만)에서 결합된 SiO2의 처리는 세린 프로테아제(즉, FXIa)의 용리를 가져온 반면, 인자 H의 상당한 분획은 결합된 상태로 있는다. 높은 pH(pH 7.5) 및 높은 이온 강도에서의 이후 처리는 SiO2로부터 인자 H의 용리를 가져온다(표 25). 또한, 실시예 4에 제공된 결과와 일관되게, 높은 pH(7.5)에서 SiO2의 초기 용리는 인자 H의 용리를 가져온다(표 26). 나타낸 바와 같이, 더 낮은 전도도 및 pH 6.0에서의 초기 용리를 여과 케이크로부터 아마이드 분해 활성을 부분적으로 감소시키는데 사용할 수 있으며 그 다음 인자 H는 100mM 포스페이트 농도, 150mM NaCl, pH 7.6에서 용리할 수 있다. 이러한 절차는 추가 처리를 위하여 아마이드 분해 활성(CS2166)이 감소된 여과액인 인자 H를 0.31g/ℓ 혈장의 수율로 생성하였다.
| pH 6.0/7.6에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및 인자 H의 2단계 차별적인 용리 | |||
| 제1 용리 완충계 pH 6.0 | 제2 용리 완충액 | 샘플 |
인자 H
[g/ℓ 혈장] |
| 100mM 포스페이트 완충액; 전도도11.88mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.06 |
| 50mM 포스페이트 완충액; 전도도6.55mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.11 |
| 25mM 포스페이트 완충액; 전도도3.48mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.25 |
| 5mM 포스페이트 완충액: 전도도0.882 mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.31 |
| pH 7.5/7.6에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및 인자 H의 2단계 차별적인 용리 | |||
| 제1 용리 완충계 pH 7.5 | 제2 용리 완충액 | 샘플 |
인자 H
[g/ℓ 혈장] |
| 100mM 포스페이트 완충액; 전도도11.88mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.05 |
| 50mM 포스페이트 완충액; 전도도6.55mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.06 |
| 25mM 포스페이트 완충액; 전도도3.48mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.06 |
| 5mM 포스페이트 완충액: 전도도0.882 mS/㎝ | 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 | 여과액 제2 용리 | 0.07 |
실시예
6
혈장 유래 단백질 조성물로부터 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 효율적인 제거에 필요로 하는 미분된 SiO2의 양을 측정하기 위하여, 분획 II+III 침전물(즉, II+III 여과케이크)를 용해, 여과, SiO2로 처리하고, 여과 보조제를 혼합한 다음 제2 여과를 실시하였다. 간단하게, 먼저 분획 II+III 여과케이크를 150mM 염화 나트륨을 함유하는 0.1M 포스페이트 완충액(pH 7.5; 30mS/㎝)에 용해하였다.그다음 이 현탁액을 Cuno 50 SA 필터를 통해서 여과하고 여과액을 수집하였다. Aerosil 380을 1.0 또는 2.5g/g의 최종 농도에서 여과액과 혼합한 다음, 적어도 50분 동안 항온처리하였다. CELPURE 여과 보조제를 첨가하고 여과를 Cuno 50 SA 필터를 사용하여 실행하였다. 그 다음 표 27에 기록한 바와 같이, 생성된 여과액을 아마이드 분해 활성에 대하여 특성화하였다. 상당하게도, 결과는, 1.0g/g 단백질의 최종 농도에서 Aerosil을 이용하여 처리한 샘플과 비교하여 2.5g/g 단백질의 최종 농도에서 Aerosil의 첨가는 조성물 중 칼리크레인, FXIa, 및 FXIIa의 아마이드 분해 활성을 90% 초과로 감소시켰음을 나타낸다.
| 미분된 이산화규소를 이용한 처리 후 재현탁된 분획 II+III 침전물에 존재하는 아마이드 분해 활성 | ||
| 칼리크레인, FXIa , FXIIa | 기질: S-2302 | Aerosil 첨가의 증가에 의한 감소 |
| 샘플 | 전체: nmol*분 | [%] |
| 단백질 g당 Aerosil 1g의 첨가 후, FH027 Cuno 여과액 | 83347 | - |
| 단백질 g당 Aerosil 2.5g의 첨가 후, FH027 Cuno 여과액 | 6227 | 92.5 |
실시예
7
혈장 유래 단백질 조성물의 산업적 규모의 제조 동안 인자 XI 지모겐의 제고에 대한 SiO2 처리의 효율을 평가하기 위하여, 6개의 산업적 규모의 제조 배치의 FXI 지모겐 함량을 특성화하였다. 표 28 및 표 29는 동일한 제조 위치에서 실행된 3가지 정제로부터 각각의 상류 공정 단계의 평균적인 FXI 지모겐 함량을 나타낸다. 표 28 및 표 29의 데이터는 제조 규모 정제의 SiO2 처리는 조성물의 FXI 지모겐 함량을 적어도 90% 감소시킬 수 있음을 설명한다. 특히, 제조 위치 1은 50g/㎏ II+III 침전물의 최종 농도에서 Aerosil을 혼합한 반면, 위치 2는 40g/㎏ II+III 침전물의 최종 농도에서 Aerosil을 사용하였다. 놀랍게도, 사용한 aerosil의 양에서의 작은 차이가 aerosil 처리 후 여과액의 인자 XI지모겐 함량에서 상당한 차이를 가져왔다(위치 2에 있어서 콘 출발 그룹의 8.1% 대 위치 1에 있어서 콘 출발 그룹의 2.8%).
본원에서 기술된 실시예 및 실시형태는 단지 예시적인 목적을 위한 것으로서 이를 고려하여 다양한 변형 또는 변경이 당업자에게 시사될 것이며 본 출원의 사상 및 범위 및 첨부된 청구항의 범주 내에 포함되어야 함이 이해된다. 본원에서 인용된 모든 간행물, 특허, 및 특허 공개는 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
Claims (115)
- 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된(finely divided) 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제를 제거하는 단계를 포함하되, 상기 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)인 방법. - 제1항에 있어서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계인 것인 방법.
- 제3항에 있어서, 상기 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계인 것인 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계인 것인 방법.
- 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계인 것인 방법.
- 제7항에 있어서, 상기 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계인 것인 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계인 것인 방법.
- 제6항에 있어서, 상기 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계인 것인 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계인 것인 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계인 것인 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계인 것인 방법.
- 제12항에 있어서, 상기 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계인 것인 방법.
- 제10항 또는 제15항에 있어서, 상기 크로마토그래피 풍부화 단계는
(i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및
(ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함하는 것인 방법. - 제16항에 있어서, 적어도 하나의 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는 것인 방법.
- 제16항에 있어서, 적어도 하나의 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는 것인 방법.
- 제10항 또는 제15항에 있어서, 상기 크로마토그래피 풍부화 단계는
(i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및
(ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함하는 것인 방법. - 제15항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 양이온 교환 수지인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 소수성 상호작용 수지인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 혼합형 수지인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 하이드록시아파타이트 수지인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 리간드 친화 수지인 것인 방법.
- 제20항에 있어서, 상기 크로마토그래피 수지는 면역친화 수지인 것인 방법.
- 제10항 또는 제15에 있어서, 상기 크로마토그래피 풍부화 단계는 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 크기 및/또는 형상에 의해 표적 단백질로부터 적어도 하나의 불순물을 분리하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택되는 것인 방법.
- 제29항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig)인 것인 방법.
- 제29항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 알부민인 것인 방법.
- 제29항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 알파-1-항트립신인 것인 방법.
- 제29항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 뷰티릴콜린에스테라제인 것인 방법.
- 제29항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 보체계의 단백질인 것인 방법.
- 제34항에 있어서, 상기 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
- 제29항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질은 인터-알파-트립신 억제제인 것인 방법.
- 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물은 제조용 중간체인 것인 방법.
- 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계;
(c) 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및
(d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 제38항에 있어서, 상기 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하는 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 또는 제39항에 있어서, 상기 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하는 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제40항에 있어서, 상기 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하는 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제42항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제42항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2로부터 용리되는 용액 조건은 적어도 6mS/㎝의 이온 강도를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2로부터 용리되는 용액 조건은 적어도 11mS/㎝의 이온 강도를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2로부터 용리되는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2로부터 용리되는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝의 이온 강도를 포함하는 것인 방법.
- 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및
(c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 제49항에 있어서, 상기 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하는 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제49항 또는 제50항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제49항에 있어서, 상기 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5.0mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2로부터 용리되고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 적어도 11mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2로부터 용리되고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제54항에 있어서, 상기 용액 조건의 전도도는 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝인 것인 방법.
- 제54항에 있어서, 상기 용액 조건의 전도도는 5mS/㎝ 내지 6mS/㎝인 것인 방법.
- 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및
(c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 제57항에 있어서, 상기 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 14mS/㎝ 이하의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제58항에 있어서, 상기 용액 조건의 전도도는 9mS/㎝ 내지 14mS/㎝인 것인 방법.
- 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함하는 방법. - 제60항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 적어도 11mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제60항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제62항에 있어서, 상기 용액 조건의 전도도는 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝인 것인 방법.
- 제62항에 있어서, 상기 용액 조건의 전도도는 5mS/㎝ 내지 6mS/㎝인 것인 방법.
- 인자 H 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액으로 상기 SiO2를 세척하는 단계; 및
(c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액으로 상기 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 제65항에 있어서, 상기 SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함하는 것인 방법.
- 제65항에 있어서, 상기 SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함하는 것인 방법.
- 제65항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제68항에 있어서, 상기 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제38항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 콘 분획 II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획인 것인 방법.
- 제38항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 키슬러/니츠만 침전물 A, 또는 이의 동등한 분획인 것인 방법.
- 제38항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획인 것인 방법.
- 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계;
(c) IαI의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및
(d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및
(c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2와 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계;
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및
(c) 상기 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함하는 방법. - 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은
(a) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제에 결합하지만 인터-알파-트립신 억제제(IαI)에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및
(b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함하는 방법. - 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 면역글로불린 G(IgG) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은
(a) 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10% 알코올을 이용하여 제1 침전 단계에서 냉동 불량(cryo-poor) 혈장 분획을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계;
(b) 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 20% 내지 약 25% 알코올을 이용하여 제2 침전 단계에서 제1 상청액으로부터 IgG를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계;
(c) 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계;
(d) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건 하에서 상기 현탁액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및
(e) 상기 현탁액으로부터 SiO2를 분리하여 청징된 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 방법. - 제77항에 있어서, 상기 방법은
(f) 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 22% 내지 약 28% 알코올을 이용하여 제3 침전 단계에서 단계 (e)에서 형성된 청징된 현탁액으로부터 IgG를 침전시켜 제3 침전물을 형성하는 단계;
(g) 제3 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; 및
(h) 단계 (e)에서 형성된 현탁액으로부터 가용성 분획을 분리하여 풍부화된 IgG 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법. - 제77항 또는 제78항에 있어서, 상기 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제77항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 양이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제77항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 적어도 하나의 전용 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제81항에 있어서, 상기 방법은 용매/세제(S/D) 바이러스 불활성화 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제81항 또는 제82항에 있어서, 상기 방법은 나노여과 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 낮은 pH에서 항온처리 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제78항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)는 약 -7℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 단계 (a)에서 형성된 제1 상청액의 에탄올 농도를 약 25%(v/v)로 조정하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제85항에 있어서, 상기 온도는 약 -9℃인 것인 방법.
- 제78항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (c)는 인포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로 단계 (b)의 침전물을 재현탁하며, 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 300㎖ 내지 700㎖를 이용하여 조정하는 단계를 포함하는 것인 방법.
- 제78항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (d)는 단계 (b)에서 형성된 침전물 g 당 약 0.02g 내지 단계 (b)에서 형성된 침전물 g 당 약 0.06g의 최종 농도로 SiO2의 추가를 포함하는 것인 방법.
- 제78항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건은 4.5 내지 6.0의 pH 및 0.1mS/㎝ 내지 3mS/㎝의 전도도를 포함하는 것인 방법.
- 제89항에 있어서, pH는 4.9 내지 5.3인 것인 방법.
- 제89항 또는 제90항에 있어서, 상기 전도도는 0.5mS/㎝ 내지 2mS/㎝인 것인 방법.
- 제78항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (e)는
(i) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로서 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 50㎖ 내지 200㎖로 조정하여 세척 용액을 형성하는 완충액 적어도 3 필터 프레스 불용 체적으로 필터 프레스를 세척하는 하위 단계; 및
(ii) 단계 (f)의 여과액을 단계 (g)의 세척 용액과 합하여 용액을 형성하는 하위 단계를 포함하는 것인 방법. - 제92항에 있어서, (iii) 세제로 상기 용액을 처리하는 하위 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제78항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (h)는 풍부화된 IgG 조성물의 용매 및 세제(S/D) 처리를 추가로 포함하는 것인 방법.
- 제78항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (h)에서 수득한 풍부화된 IgG 조성물은 단계 (a)에서 사용되는 냉동 불량 혈장 분획에서 발견되는 IgG 함량을 적어도 85%로 함유하는 것인 방법.
- 제95항에 있어서, 단계 (h)에서 수득한 풍부화된 IgG 조성물은 단계 (a)에서 사용되는 냉동 불량 혈장 분획에서 발견되는 IgG 함량을 적어도 90%로 함유하는 것인 방법.
- 제77항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%까지 감소되는 것인 방법.
- 제97항에 있어서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 95%까지 감소되는 것인 방법.
- 제97항에 있어서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 98%까지 감소되는 것인 방법.
- 제97항에 있어서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 99%까지 감소되는 것인 방법.
- 제97항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXIa인 것인 방법.
- 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 1g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시키는 것인 방법.
- 제102항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 2g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시키는 것인 방법.
- 제102항에 있어서, 상기 조성물은 적어도 2.5g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시키는 것인 방법.
- 제1항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XI인 것인 방법.
- 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XII인 것인 방법.
- 제1항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa인 것인 방법.
- 제1항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIIa인 것인 방법.
- 제1항 내지 제108항 중 어느 한 항에 따라서 세린 프로테아제 활성을 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물.
- 제109항에 있어서, 상기 조성물은 개체에의 투여용으로 제형화되는 것인 혈장 유래 단백질 조성물.
- 제109항에 있어서, 상기 조성물은 정맥내, 근육내, 또는 피하 투여용으로 제형화되는 것인 혈장 유래 단백질 조성물.
- 제109항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 수성인 것인 혈장 유래 단백질 조성물.
- 제109항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 동결건조되는 것인 혈장 유래 단백질 조성물.
- 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제109항 내지 제113항 중 어느 한 항에 따른 혈장 유래 단백질 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
- 제114항에 있어서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함하는 것인 방법.
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AU2010202125A AU2010202125B1 (en) | 2010-05-26 | 2010-05-26 | A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| AU2010202125 | 2010-05-26 | ||
| US12/789,365 | 2010-05-27 | ||
| US12/789,365 US8993734B2 (en) | 2010-05-26 | 2010-05-27 | Method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| US12/842,944 US8304524B2 (en) | 2009-07-23 | 2010-07-23 | Manufacture of factor H (FH) and FH-derivatives from plasma |
| US12/842,944 | 2010-07-23 | ||
| PCT/US2011/038247 WO2011150284A2 (en) | 2010-05-26 | 2011-05-26 | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20130109016A true KR20130109016A (ko) | 2013-10-07 |
| KR101716534B1 KR101716534B1 (ko) | 2017-03-14 |
Family
ID=42727304
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020127033758A KR101593265B1 (ko) | 2010-05-26 | 2010-05-27 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
| KR1020167002347A KR101647617B1 (ko) | 2010-05-26 | 2010-05-27 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
| KR1020127033759A KR101716534B1 (ko) | 2010-05-26 | 2011-05-26 | 미분된 이산화규소로의 처리에 의한 세린 프로테아제의 제거 |
Family Applications Before (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020127033758A KR101593265B1 (ko) | 2010-05-26 | 2010-05-27 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
| KR1020167002347A KR101647617B1 (ko) | 2010-05-26 | 2010-05-27 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US8993734B2 (ko) |
| EP (6) | EP2445482B1 (ko) |
| JP (6) | JP5876474B2 (ko) |
| KR (3) | KR101593265B1 (ko) |
| CN (5) | CN102970975B (ko) |
| AR (4) | AR076800A1 (ko) |
| AU (7) | AU2010202125B1 (ko) |
| BR (2) | BR112012029893B1 (ko) |
| CA (2) | CA2800155A1 (ko) |
| CL (3) | CL2012003291A1 (ko) |
| CO (2) | CO6660438A2 (ko) |
| DK (3) | DK2554160T3 (ko) |
| EA (4) | EA034602B1 (ko) |
| ES (4) | ES2959234T3 (ko) |
| HK (6) | HK1170168A1 (ko) |
| HR (3) | HRP20140944T1 (ko) |
| HU (1) | HUE064400T2 (ko) |
| IL (2) | IL223150A0 (ko) |
| MX (4) | MX364252B (ko) |
| MY (3) | MY173299A (ko) |
| PL (4) | PL2554160T3 (ko) |
| PT (3) | PT2445482E (ko) |
| SG (3) | SG185724A1 (ko) |
| TW (3) | TWI531577B (ko) |
| WO (1) | WO2011149472A1 (ko) |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| TWI532498B (zh) | 2008-03-17 | 2016-05-11 | 巴克斯特保健公司 | 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法 |
| AU2010296017C1 (en) * | 2009-09-17 | 2013-09-19 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Stable co-formulation of hyaluronidase and immunoglobulin, and methods of use thereof |
| US10787701B2 (en) | 2010-04-05 | 2020-09-29 | Prognosys Biosciences, Inc. | Spatially encoded biological assays |
| US8772462B2 (en) | 2010-05-26 | 2014-07-08 | Baxter International Inc. | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide |
| AU2010202125B1 (en) * | 2010-05-26 | 2010-09-02 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield |
| US8841248B2 (en) * | 2010-07-23 | 2014-09-23 | Baxter International Inc. | Manufacture of inter-alpha-inhibitor (IaIp) from plasma |
| HUE029232T2 (en) * | 2011-04-08 | 2017-02-28 | Univ Costa Rica | A method for preparing injectable formulations of protein derived from blood, and materials obtained using said method |
| PL2791675T3 (pl) | 2011-12-13 | 2018-10-31 | Baxalta GmbH | Pomiar autoprzeciwciał w warunkach niskiej przewodności |
| TWI629283B (zh) * | 2012-02-23 | 2018-07-11 | 巴克斯歐塔公司 | 來自血漿中的免疫球蛋白之ｉ-ｉｖ-１部分沉澱 |
| RU2487725C1 (ru) * | 2012-03-15 | 2013-07-20 | Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) | Способ получения концентрированного иммуноглобулинового препарата для подкожного введения |
| CN103197053B (zh) * | 2013-03-15 | 2015-02-18 | 上海市血液中心 | 一种抗IgA抗体检测试剂盒 |
| AU2013203043B2 (en) * | 2013-03-15 | 2016-10-06 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Methods to produce a human plasma-derived igg preparation enriched in brain disease-related natural iggs |
| CN104072601A (zh) * | 2014-07-03 | 2014-10-01 | 成都蓉生药业有限责任公司 | 血液制品中fii沉淀的制备方法 |
| CN104086646B (zh) * | 2014-07-03 | 2018-10-09 | 成都蓉生药业有限责任公司 | 血液制品中fv沉淀的制备方法 |
| CN104086642A (zh) * | 2014-07-03 | 2014-10-08 | 成都蓉生药业有限责任公司 | 血液制品中fi+iii上清的制备方法 |
| GB201413227D0 (en) * | 2014-07-25 | 2014-09-10 | Bioproducts Lab Ltd | Process |
| WO2016064955A1 (en) | 2014-10-21 | 2016-04-28 | The General Hospital Corporation | Methods of diagnosis and treatment of tuberculosis and infection |
| CN204424090U (zh) | 2014-11-28 | 2015-06-24 | 比亚迪股份有限公司 | 薄膜电容器 |
| US20160289301A1 (en) * | 2015-04-02 | 2016-10-06 | Kieu Hoang | Process of cloning and further purification to make a recombinant intravenous immunoglobulin |
| WO2016161422A1 (en) * | 2015-04-02 | 2016-10-06 | Kieu Hoang | A method of manufacturing and purifiying prothrombin complex concentrate from fraction iii for intraveneous injection and a method of curing and preventing hemophilia a with inhibitors or hempophilia b patients infected with hiv-1 and hiv-2 |
| US20160289300A1 (en) * | 2015-04-02 | 2016-10-06 | Kieu Hoang | Method of manufacturing intravenous immunoglobulin from fraction iii |
| US20170233458A1 (en) * | 2015-09-29 | 2017-08-17 | Kieu Hoang | Method of manufacturing intravenous immunoglobulin from fraction iii |
| US20170232079A1 (en) * | 2015-10-06 | 2017-08-17 | Kieu Hoang | Method of manufacturing prothrombin complex concentrate from fraction iii and non-prothrombin complex concentrate from fraction iv |
| CN106800583A (zh) * | 2015-11-26 | 2017-06-06 | 上海洲跃生物科技有限公司 | 一种速溶无析出的冻干人纤维蛋白原制备工艺 |
| EP3275897A1 (en) | 2016-07-27 | 2018-01-31 | Biotest AG | Process for preparing immunoglobulin compositions |
| WO2018050873A1 (en) | 2016-09-16 | 2018-03-22 | Leukocare Ag | A novel method for producing low viscous and highly concentrated biopharmaceutical drug products in liquid formulation |
| RU2744630C2 (ru) * | 2016-09-16 | 2021-03-12 | Льюкокэар Аг | Новый способ стабилизации биофармацевтического лекарственного продукта при производстве |
| US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
| JP7275044B2 (ja) * | 2017-04-21 | 2023-05-17 | ツェー・エス・エル・ベーリング・アクチエンゲゼルシャフト | 慢性炎症性脱髄性多発神経炎の治療における使用のための免疫グロブリン製品 |
| AU2018390797A1 (en) * | 2017-12-19 | 2020-07-02 | CSL Behring Lengnau AG | Protein purification and virus inactivation with alkyl glycosides |
| MX2020010724A (es) * | 2018-04-12 | 2020-11-06 | Amgen Inc | Metodos para preparar composiciones proteicas estables. |
| CN108733099B (zh) * | 2018-05-31 | 2020-08-11 | 上海药明生物技术有限公司 | 低pH孵育和中和的自动调节系统及方法 |
| JP2022551566A (ja) * | 2019-10-11 | 2022-12-12 | 武田薬品工業株式会社 | 第ＸＩａ因子のヘパリン非感受性アッセイ |
| AU2020378245A1 (en) * | 2019-11-04 | 2022-04-07 | Alkahest, Inc. | Blood plasma fractions for use in muscle regeneration |
| KR20230024885A (ko) | 2020-04-10 | 2023-02-21 | 플라즈마 테크놀로지스, 엘엘씨 | 간소화된 고효율 단백질 단리를 위한 조성물 및 방법 (compositions and methods for simplified high efficiency isolation of proteins) |
| CN111961130B (zh) * | 2020-08-31 | 2021-09-10 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 一种从血浆中提取并分离IgM和IgG的方法 |
| KR20230078629A (ko) * | 2020-10-01 | 2023-06-02 | 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤 | 분무-건조 인간 혈장을 활용하는 혈장 분획 공정 |
| CA3203540A1 (en) | 2020-12-28 | 2022-07-07 | Eugene ZURLO | Systems and methods for process scale isolation of immunoglobulin g |
| CN112574296B (zh) * | 2020-12-30 | 2023-05-19 | 中国医学科学院输血研究所 | 一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法 |
| AU2022317368A1 (en) | 2021-07-29 | 2024-02-22 | Csl Behring Ag | Method of purifying immunoglobulin g and uses thereof |
| KR20230121373A (ko) * | 2022-02-11 | 2023-08-18 | 주식회사 녹십자 | 인자 xiii의 정제방법 |
| WO2023170553A1 (en) | 2022-03-07 | 2023-09-14 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Affinity chromatographic production of clinical human igg products |
| WO2023170680A1 (en) | 2022-03-08 | 2023-09-14 | Equashield Medical Ltd | Fluid transfer station in a robotic pharmaceutical preparation system |
| WO2023215722A1 (en) | 2022-05-02 | 2023-11-09 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Methods of preparing cohn pool concentrate from blood plasma through ultrafiltration |
| WO2023247736A1 (en) | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Ageronix SA | Alpha1-antitrypsin for use in the treatment of diseases or disorders of the nervous system such as chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007085626A1 (en) * | 2006-01-25 | 2007-08-02 | Octapharma Ag | Purification and use of a factor for supporting wound healing |
| US20090203580A1 (en) * | 2005-06-07 | 2009-08-13 | Dinarello Charles A | Compositions and methods of use for alpha-1 antitrypsin having no significant serine protease inhibitor activity |
| KR101593265B1 (ko) * | 2010-05-26 | 2016-02-11 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
Family Cites Families (86)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2390074A (en) * | 1942-02-09 | 1945-12-04 | Research Corp | Protein product and process |
| SE348942B (ko) | 1970-06-02 | 1972-09-18 | Statens Bakteriologiska Labor | |
| US4056614A (en) | 1972-09-22 | 1977-11-01 | Marc Bonneau | Immunity depressant medicine |
| US3998946A (en) * | 1975-04-23 | 1976-12-21 | The Regents Of The University Of Minnesota | Fibrinogen-free plasminogen-plasmin-free plasma and method of preparing and using same |
| DE2801123C2 (de) * | 1977-01-26 | 1986-01-02 | Armour Pharma GmbH & Co KG, 3440 Eschwege | Verfahren zur Herstellung eines intravenös applizierbaren Serumeiweiß-Präparates |
| US4296027A (en) * | 1977-08-31 | 1981-10-20 | The Regents Of The University Of Minnesota | Pure intravenous human and animal gamma globulins |
| US4136094A (en) | 1977-08-31 | 1979-01-23 | The Regents Of The University Of Minnesota | Preparation of intravenous human and animal gamma globulins and isolation of albumin |
| US4357272A (en) * | 1978-03-22 | 1982-11-02 | The South African Inventions Development Corporation | Recovering purified antibodies from egg yolk |
| US4550019A (en) * | 1978-03-22 | 1985-10-29 | South Africa Inventions Development Corporation | Manufacture and use of fowl egg antibodies |
| DE2901822A1 (de) * | 1979-01-18 | 1980-07-31 | Biotest Serum Institut Gmbh | Verfahren zur herstellung einer fuer die intravenoese applikation geeigneten immunglobulinloesung, die igm in ankonzentrierter form enthaelt |
| DE2902158A1 (de) | 1979-01-20 | 1980-07-31 | Biotest Serum Institut Gmbh | Verfahren zur herstellung von fibrinogen, einem die gerinnungsfaktoren ii, vii, ix und x enthaltenden prothrombinkomplex, antithrombin iii und einer loesung von lagerstabilen serumproteinen |
| US4228154A (en) | 1979-02-26 | 1980-10-14 | Armour Pharmaceutical Company | Purification of plasma albumin by ion exchange chromatography |
| US4378346A (en) * | 1979-08-15 | 1983-03-29 | Tankersley Donald L | Intravenously injectable solution of plasma protein fraction free from bradykinin, kininogen and prekallikrein activators and processes for its production |
| US4499073A (en) * | 1981-08-24 | 1985-02-12 | Cutter Laboratories, Inc. | Intravenously injectable immune serum globulin |
| JPS5855432A (ja) | 1981-09-29 | 1983-04-01 | Fujirebio Inc | 静脈注射用免疫グロブリンの製法 |
| US4439358A (en) | 1982-06-17 | 1984-03-27 | Miles Laboratories, Inc. | Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor |
| US4624780A (en) | 1982-06-28 | 1986-11-25 | Alpha Therapeutic Corporation | Fractionation of blood plasma |
| DE3247150A1 (de) | 1982-12-21 | 1984-06-28 | Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt | Gerinnungsaktive plasmaproteinloesung, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur behandlung von stoerungen des haemostasesystems |
| DK166763B1 (da) | 1983-03-16 | 1993-07-12 | Immuno Ag | Immunoglobulin-g-holdig fraktion |
| US5061237A (en) | 1985-07-02 | 1991-10-29 | Cytomed Medizintechnik Gmbh | Method of purifying whole blood |
| DE3523615A1 (de) | 1985-07-02 | 1987-01-15 | Cytomed Medizintechnik | Medizinisches geraet, insbesondere kanuele, katheter oder implantat |
| JPH0742235B2 (ja) | 1985-11-08 | 1995-05-10 | 三共株式会社 | 自己免疫性疾病の予防・治療剤 |
| US5136094A (en) | 1988-03-10 | 1992-08-04 | Air Products And Chemicals, Inc. | Process for the synthesis of secondary formamides |
| US5055447A (en) | 1988-07-28 | 1991-10-08 | Genentech, Inc. | Method and compositions for the treatment and prevention of septic shock |
| JP2871709B2 (ja) | 1988-11-21 | 1999-03-17 | 住友製薬株式会社 | 免疫グロブリンｇ結合活性を有する新規な蛋白質プロテインｈ、該蛋白質をコードする遺伝子及び該蛋白質の製造法 |
| US5177194A (en) | 1990-02-01 | 1993-01-05 | Baxter International, Inc. | Process for purifying immune serum globulins |
| EP0440509A3 (en) * | 1990-02-02 | 1991-12-18 | Common Services Agency | Novel cell growth medium components and process for producing same |
| DE59009020D1 (de) * | 1990-03-22 | 1995-06-08 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates. |
| US5130451A (en) * | 1991-03-28 | 1992-07-14 | Amoco Corporation | Process for preparing carboxyaryl phosphates |
| US5324425A (en) * | 1992-08-26 | 1994-06-28 | Ellison Billy L | Method and apparatus for removing solids from aqueous wash solutions |
| FR2706466B1 (fr) | 1993-06-14 | 1995-08-25 | Aetsrn | Concentré d'immunoglobulines G à usage thérapeutique et procédé de production dudit concentré. |
| FR2711371B1 (fr) | 1993-10-18 | 1995-12-29 | Aetsrn | Procédé de préparation d'un concentré d'inter-alpha-trypsine inhibiteur à usage thérapeutique et concentré obtenu. |
| US5610285A (en) | 1994-08-24 | 1997-03-11 | Bayer Corporation | Purification of α-1 proteinase inhibitor using novel chromatographic separation conditions |
| DE4435485C1 (de) | 1994-10-04 | 1996-03-21 | Immuno Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor |
| AUPN858596A0 (en) * | 1996-03-08 | 1996-04-04 | Csl Limited | Filtration of plasma precipitates using cellulose filter aid |
| TW491855B (en) | 1996-08-07 | 2002-06-21 | Csl Ltd | Purification of immunoglobulins |
| US5783640A (en) * | 1997-03-04 | 1998-07-21 | The Goodyear Tire & Rubber Company | Rubber compositions containing a disodium salt of 2, 2'-dithiosalicyclic acid |
| CA2232420A1 (en) | 1997-03-19 | 1998-09-19 | The Green Cross Corporation | Immunoglobulin preparation and preparation process thereof |
| GB9705810D0 (en) | 1997-03-20 | 1997-05-07 | Common Services Agency | Intravenous immune globulin |
| AT407114B (de) | 1997-06-10 | 2000-12-27 | Immuno Ag | Alpha 1-antitrypsin-präparation sowie verfahren zu deren herstellung |
| US5886154A (en) | 1997-06-20 | 1999-03-23 | Lebing; Wytold R. | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies |
| CN1149100C (zh) | 1997-10-23 | 2004-05-12 | 三菱制药株式会社 | 可室温贮存的免疫球蛋白静脉注射制剂 |
| US20020114802A1 (en) | 1998-02-10 | 2002-08-22 | Tjellstrom Bo Arthur Einar | Oral immunoglobulin treatment for inflammatory bowel disease |
| AT406873B (de) | 1998-02-25 | 2000-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen |
| DE19932782A1 (de) * | 1999-07-14 | 2001-01-18 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur chromatographischen Fraktionierung von Plasma oder Serum, so erhaltene Präparate und deren Verwendung |
| AU775149B2 (en) | 1999-10-21 | 2004-07-22 | Alcon Inc. | Sub-tenon drug delivery |
| DE10008519C1 (de) | 2000-02-21 | 2001-07-12 | Dica Technologies Ag | Verfahren und Kommunikationseinrichtungen zum Aufbau von gesicherten E-Mail-Verkehr zwischen Mail-Domains des Internet |
| DE10008619A1 (de) * | 2000-02-24 | 2001-09-06 | Immuno Vet As Lynge | Mikroorganismenfreies IgG-Präparat, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung in der Tieraufzucht und in der Tiermast |
| SE0001128D0 (sv) | 2000-03-30 | 2000-03-30 | Amersham Pharm Biotech Ab | A method of producing IgG |
| US20020098182A1 (en) | 2000-09-28 | 2002-07-25 | Richard Weisbart | Treatment of immune-mediated diseases by oral administration of plasma fractions enriched in immunoglobulin G |
| US20030190732A1 (en) | 2000-10-13 | 2003-10-09 | Djuro Josic | Plasma fraction containing bikunin, method for the production thereof and use of the same |
| FR2824568B1 (fr) | 2001-05-11 | 2004-04-09 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation de concentres d'immunoglobulines humaines a usage therapeutique |
| MXPA04003156A (es) | 2001-10-04 | 2005-01-25 | Protein Therapeutics Inc | El uso de gammaglobulina para el tratamiento de enfermedades mediadas inmunes . |
| US6893639B2 (en) | 2001-10-19 | 2005-05-17 | Hemacare Corporation | Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates |
| US7777006B2 (en) * | 2002-12-31 | 2010-08-17 | Csl Behring L.L.C. | Method for purification of alpha-1-antitrypsin |
| RU2364609C2 (ru) * | 2003-05-23 | 2009-08-20 | Ново Нордиск Хелт Кэр Аг | Стабилизация белка в растворе |
| WO2005012354A1 (en) | 2003-07-31 | 2005-02-10 | Zlb Behring Gmbh | Method for extending the half-life of fviii |
| US20050054003A1 (en) | 2003-09-10 | 2005-03-10 | Stenland Christopher J. | Prion clearance using particulate metal oxides |
| CA2544816A1 (en) | 2003-11-08 | 2005-05-26 | Prothera Biologics, Llc | Preparation and composition of inter-alpha inhibitor proteins from human plasma for therapeutic use |
| BRPI0507298A (pt) | 2004-01-30 | 2007-07-03 | Suomen Punainen Risti Veripalv | processo para a produção de imunoglobulina segura a vìrus |
| BRPI0508096B8 (pt) | 2004-02-27 | 2021-05-25 | Octapharma Ag | método de preparação de um preparado de anticorpo seguro purificado contra vírus e vírus inativado |
| NZ595305A (en) | 2005-02-14 | 2013-06-28 | Univ Iowa Res Found | Methods and reagents for treatment and diagnosis of age-related macular degeneration |
| US7807435B2 (en) | 2005-08-11 | 2010-10-05 | Baxter International Inc. | Method for the purification of alpha-1 proteinase inhibitor (a1PI) |
| EP1928483B1 (en) | 2005-09-19 | 2016-12-28 | CSL Behring GmbH | Factor h for the treatment of tubulointerstitial fibrosis and progressive renal failure |
| FR2894145B1 (fr) | 2005-12-07 | 2008-10-17 | Lab Francais Du Fractionnement | Utilisation de facteur h du complement a titre de medicament |
| US8476234B2 (en) | 2006-02-03 | 2013-07-02 | Prolor Biotech Inc. | Long-acting coagulation factors and methods of producing same |
| EP1852443A1 (en) * | 2006-05-05 | 2007-11-07 | Leukocare AG | Biocompatible three dimensional matrix for the immobilization of biological substances |
| DE102007001521A1 (de) * | 2007-01-10 | 2008-07-17 | Matthias, Torsten, Dr. | Verwendung von Cohn-Oncley-Fraktionen II und II/III zur Behandlung des systemischen Lupus erythematodes |
| ES2595059T3 (es) * | 2007-03-20 | 2016-12-27 | Csl Behring Gmbh | Métodos para la producción a escala industrial de preparados terapéuticos del Factor H del complemento a partir de plasma humano |
| DE202007004346U1 (de) | 2007-03-21 | 2007-10-31 | Rehau Ag + Co | Rohranordnung |
| AU2008270951A1 (en) * | 2007-04-20 | 2009-01-08 | Regents Of The University Of Colorado | Alpha-1 antitrypsin having no significant serine protease inhibitor activity |
| DK2167117T3 (da) | 2007-06-13 | 2012-11-19 | Csl Behring Gmbh | Anvendelse af VWF-stabiliserede FVIII-præparater til ekstravaskulær administration til terapeutisk og profylaktisk behandling af blødningsforstyrrelser |
| ES2477294T3 (es) | 2007-08-13 | 2014-07-16 | Baxter International Inc | Modulación por IVIG de quimioquinas para el tratamiento de la esclerosis múltiple, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson |
| US8466265B2 (en) * | 2007-10-02 | 2013-06-18 | Csl Limited | Therapeutic antibody purification method and method of use |
| CN105816858A (zh) | 2007-12-28 | 2016-08-03 | 巴克斯特国际公司 | 重组vwf配方 |
| CN101249265B (zh) * | 2008-04-11 | 2010-10-27 | 三九集团湛江开发区双林药业有限公司 | 静脉注射用人乙肝免疫球蛋白及其制备方法 |
| BRPI0913949A2 (pt) | 2008-05-28 | 2015-10-20 | Pro Thera Biolog Llc | preparação e composição de proteínas inibidoras inter-alfa a partir de sangue |
| KR101648734B1 (ko) | 2008-06-24 | 2016-08-18 | 체에스엘 베링 게엠베하 | 연장된 생체내 반감기를 갖는 인자 ｖｉｉｉ, 폰 빌레브란트 인자 또는 이들의 복합체 |
| CN201169579Y (zh) * | 2008-06-30 | 2008-12-24 | 山东泰邦生物制品有限公司 | 一种人血白蛋白分离用乙醇雾化扩散装置 |
| AU2009307648C1 (en) | 2008-10-21 | 2016-12-08 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Lyophilized recombinant VWF formulations |
| WO2010056909A1 (en) | 2008-11-12 | 2010-05-20 | Baxter International Inc. | Purification of butyrylcholinesterase using membrane adsorption |
| EA023382B1 (ru) | 2009-05-27 | 2016-05-31 | Бакстер Интернэшнл Инк. | Способ получения высококонцентрированного препарата иммуноглобулина для подкожного применения |
| AT516600B1 (de) | 2009-07-23 | 2016-07-15 | Baxter Int | Herstellung von faktor h (fh) und fh-derivaten aus plasma |
| US8772462B2 (en) | 2010-05-26 | 2014-07-08 | Baxter International Inc. | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide |
| JP5953502B2 (ja) | 2010-07-08 | 2016-07-20 | バクスアルタ ゲーエムベーハー | 細胞培養による組換え型高分子量ｖＷＦ産生方法 |
| US8841248B2 (en) * | 2010-07-23 | 2014-09-23 | Baxter International Inc. | Manufacture of inter-alpha-inhibitor (IaIp) from plasma |
-
2010
- 2010-05-26 AU AU2010202125A patent/AU2010202125B1/en active Active
- 2010-05-27 ES ES14176511T patent/ES2959234T3/es active Active
- 2010-05-27 AR ARP100101844A patent/AR076800A1/es active IP Right Grant
- 2010-05-27 WO PCT/US2010/036470 patent/WO2011149472A1/en active Application Filing
- 2010-05-27 KR KR1020127033758A patent/KR101593265B1/ko active IP Right Grant
- 2010-05-27 PL PL12190138T patent/PL2554160T3/pl unknown
- 2010-05-27 MY MYPI2015002952A patent/MY173299A/en unknown
- 2010-05-27 EP EP10727539.8A patent/EP2445482B1/en active Active
- 2010-05-27 CN CN201080067929.6A patent/CN102970975B/zh active Active
- 2010-05-27 CN CN201510158213.1A patent/CN104958761B/zh active Active
- 2010-05-27 KR KR1020167002347A patent/KR101647617B1/ko active IP Right Grant
- 2010-05-27 HU HUE14176511A patent/HUE064400T2/hu unknown
- 2010-05-27 PL PL10727539T patent/PL2445482T3/pl unknown
- 2010-05-27 SG SG2012086245A patent/SG185724A1/en unknown
- 2010-05-27 ES ES10727539.8T patent/ES2525492T3/es active Active
- 2010-05-27 MX MX2014006981A patent/MX364252B/es unknown
- 2010-05-27 MY MYPI2012005077A patent/MY160551A/en unknown
- 2010-05-27 DK DK12190138T patent/DK2554160T3/da active
- 2010-05-27 ES ES12190138.3T patent/ES2536093T3/es active Active
- 2010-05-27 CA CA2800155A patent/CA2800155A1/en not_active Abandoned
- 2010-05-27 PT PT107275398T patent/PT2445482E/pt unknown
- 2010-05-27 PL PL14176511.5T patent/PL2803349T3/pl unknown
- 2010-05-27 BR BR112012029893-3A patent/BR112012029893B1/pt active IP Right Grant
- 2010-05-27 EA EA201500848A patent/EA034602B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-05-27 EP EP12190138.3A patent/EP2554160B1/en active Active
- 2010-05-27 US US12/789,365 patent/US8993734B2/en active Active
- 2010-05-27 PT PT121901383T patent/PT2554160E/pt unknown
- 2010-05-27 TW TW099117123A patent/TWI531577B/zh active
- 2010-05-27 DK DK10727539.8T patent/DK2445482T3/da active
- 2010-05-27 JP JP2013512585A patent/JP5876474B2/ja active Active
- 2010-05-27 EP EP14176511.5A patent/EP2803349B1/en active Active
- 2010-05-27 MX MX2012013682A patent/MX349815B/es active IP Right Grant
- 2010-05-27 EA EA201291355A patent/EA023446B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-05-27 SG SG10201505161SA patent/SG10201505161SA/en unknown
- 2010-09-29 AU AU2010224461A patent/AU2010224461B2/en active Active
-
2011
- 2011-05-26 AR ARP110101811A patent/AR082093A1/es active IP Right Grant
- 2011-05-26 PL PL11729200T patent/PL2575762T3/pl unknown
- 2011-05-26 MX MX2012013689A patent/MX337028B/es active IP Right Grant
- 2011-05-26 BR BR112012029897A patent/BR112012029897A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-05-26 TW TW100118581A patent/TWI504607B/zh active
- 2011-05-26 KR KR1020127033759A patent/KR101716534B1/ko active IP Right Grant
- 2011-05-26 PT PT117292003T patent/PT2575762E/pt unknown
- 2011-05-26 DK DK11729200.3T patent/DK2575762T3/da active
- 2011-05-26 EP EP22164436.2A patent/EP4039249A1/en active Pending
- 2011-05-26 MY MYPI2012005078A patent/MY161617A/en unknown
- 2011-05-26 JP JP2013512262A patent/JP5866345B2/ja active Active
- 2011-05-26 CN CN201180036374.3A patent/CN103068365B/zh active Active
- 2011-05-26 EA EA201691558A patent/EA034530B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-05-26 TW TW104127086A patent/TWI543989B/zh active
- 2011-05-26 ES ES11729200.3T patent/ES2505465T3/es active Active
- 2011-05-26 EA EA201291367A patent/EA025826B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2011-05-26 AU AU2011258111A patent/AU2011258111B2/en active Active
- 2011-05-26 CN CN201810967589.0A patent/CN109180776B/zh active Active
- 2011-05-26 SG SG2012086252A patent/SG185725A1/en unknown
- 2011-05-26 EP EP11729200.3A patent/EP2575762B1/en not_active Revoked
- 2011-05-26 EP EP20140166189 patent/EP2796128A1/en active Pending
- 2011-05-26 CN CN201510171065.7A patent/CN104840946A/zh active Pending
- 2011-05-26 CA CA2800272A patent/CA2800272A1/en not_active Abandoned
-
2012
- 2012-10-16 US US13/653,332 patent/US8940877B2/en active Active
- 2012-10-31 HK HK12110936.2A patent/HK1170168A1/xx unknown
- 2012-11-20 IL IL223150A patent/IL223150A0/en unknown
- 2012-11-20 IL IL223149A patent/IL223149A/en active IP Right Grant
- 2012-11-23 CO CO12212751A patent/CO6660438A2/es unknown
- 2012-11-23 CL CL2012003291A patent/CL2012003291A1/es unknown
- 2012-11-23 CL CL2012003290A patent/CL2012003290A1/es unknown
- 2012-11-23 CO CO12212759A patent/CO6660439A2/es unknown
- 2012-11-26 MX MX2019004482A patent/MX2019004482A/es unknown
-
2013
- 2013-08-06 HK HK13109199.5A patent/HK1181682A1/xx unknown
- 2013-09-25 HK HK13110932.5A patent/HK1183449A1/xx unknown
-
2014
- 2014-06-19 US US14/309,668 patent/US20150133644A1/en not_active Abandoned
- 2014-09-30 HR HRP20140944AT patent/HRP20140944T1/hr unknown
- 2014-11-14 HR HRP20141109AT patent/HRP20141109T1/hr unknown
- 2014-12-17 CL CL2014003430A patent/CL2014003430A1/es unknown
-
2015
- 2015-05-04 HR HRP20150484TT patent/HRP20150484T1/hr unknown
- 2015-05-15 HK HK15104607.0A patent/HK1203838A1/xx unknown
- 2015-08-14 JP JP2015160018A patent/JP2016053016A/ja active Pending
-
2016
- 2016-01-04 JP JP2016000025A patent/JP2016155798A/ja active Pending
- 2016-02-18 HK HK16101817.1A patent/HK1213790A1/zh unknown
- 2016-04-06 HK HK16103905.0A patent/HK1215931A1/zh unknown
- 2016-05-09 AU AU2016202973A patent/AU2016202973B2/en active Active
- 2016-10-27 JP JP2016210160A patent/JP6363676B2/ja active Active
-
2017
- 2017-11-08 US US15/807,512 patent/US11136350B2/en active Active
-
2018
- 2018-02-01 JP JP2018016073A patent/JP6592120B2/ja active Active
- 2018-02-26 AU AU2018201371A patent/AU2018201371B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-23 AR ARP190100147A patent/AR114228A2/es unknown
-
2020
- 2020-01-19 AU AU2020200373A patent/AU2020200373B2/en active Active
-
2021
- 2021-04-16 AR ARP210101010A patent/AR121861A2/es unknown
- 2021-09-13 US US17/473,910 patent/US20210403504A1/en active Pending
- 2021-12-16 AU AU2021286395A patent/AU2021286395B2/en active Active
-
2023
- 2023-12-19 US US18/545,528 patent/US20240117009A1/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20090203580A1 (en) * | 2005-06-07 | 2009-08-13 | Dinarello Charles A | Compositions and methods of use for alpha-1 antitrypsin having no significant serine protease inhibitor activity |
| WO2007085626A1 (en) * | 2006-01-25 | 2007-08-02 | Octapharma Ag | Purification and use of a factor for supporting wound healing |
| KR101593265B1 (ko) * | 2010-05-26 | 2016-02-11 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
| KR101647617B1 (ko) * | 2010-05-26 | 2016-08-10 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법 |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20240117009A1 (en) | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide | |
| US11891431B2 (en) | Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| A302 | Request for accelerated examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E701 | Decision to grant or registration of patent right | ||
| GRNT | Written decision to grant |