KR20230078629A

KR20230078629A - 분무-건조 인간 혈장을 활용하는 혈장 분획 공정

Info

Publication number: KR20230078629A
Application number: KR1020237005656A
Authority: KR
Inventors: 조르즈 파타탄얀; 로히트 무르티; 야세르 바도우르; 알렉산더 자이덴베르크
Original assignee: 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤
Priority date: 2020-10-01
Filing date: 2021-10-01
Publication date: 2023-06-02
Also published as: IL300384A; WO2022069945A1; AU2021354979A1; BR112023003010A2; CO2023001489A2; CN116096385A; MX2023003483A; EP4222161A1; JP2023545948A; US20220106357A1; CA3189976A1

Abstract

본 발명은, 일부 구현예에서, 콘 분획 절차를 사용하여 인간 혈장을 분획하는 방법을 제공한다. 개선은 분획 절차를 위한 출발 물질로서 상기 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 사용을 포함한다.

Description

분무-건조 인간 혈장을 활용하는 혈장 분획 공정

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2020년 10월 1일자로 출원된 "분무-건조 인간 혈장을 활용하는 혈장 분획"이라는 명칭의 미국 가특허 출원 제63/086,335호에 대한 우선권을 주장하며, 이는 그 전체가 참조로 본원에 포함된다.

발명의 분야

본 발명은 혈장으로부터 치료학적으로 활성적인 단백질을 분리하기 위한 혈장 분획의 분야에 속한다.

분획까지 혈액 혈장의 보관 및 수송을 용이하게 하기 위해, 혈장은 전형적으로 공여자로부터 수집한 직후 동결함으로써 보존된다. 신선한-동결 혈장(Fresh-Frozen Plasma, FFP)은 전혈을 원심분리하여 혈장을 분리한 다음 전혈 수집 후 8시간 이내에 수집된 혈장의 동결을 수반하는 일련의 단계를 통해 수득하였다. 대안적으로, 혈액 세포가 혈장으로부터 분리되고 공여자에게 되돌아가는 혈장분리교환술 장비를 사용하여 공여자로부터 혈장을 수집한다. 미국에서, FFP를 보관하기 위한 미국혈액은행협회(AABB) 기준은 -18℃ 이하의 온도에서 보관될 때 수집으로부터 최대 12개월이다. FFP는 또한 -65℃ 이하의 온도에서 유지되는 경우 수집으로부터 최대 7년 동안 보관될 수 있다. 유럽 기준은 FFP가 -18℃ 내지 -25℃ 사이의 온도에서 보관되는 경우 3개월, 그리고 -25℃ 이하에서 보관되는 경우 최대 36개월 동안의 저장 기간을 가짐을 지시한다. 유럽 기준 하에 해동된 혈장은 즉시 수혈하거나 1℃ 내지 6℃에서 보관하고 24시간 이내에 수혈해야 한다. 24시간 이상 보관된 경우, 혈장을 다른 용도로 다시 라벨링하거나 폐기해야 한다.

따라서, FFP는 특정 혈장 단백질의 분해를 방지하기 위해 이의 보관 기간 내내 온도-제어된 환경에서 유지되어야 하며, 이는 보관 및 수송의 어려움과 비용 및 어려움을 가중시킨다. 뿐만 아니라, FFP는 사용 전에 해동되어야 하며, 이는 냉장 보관으로부터 제거 후에 사용될 수 있기 전에 30-80분의 지연을 야기한다. 분명히, 혈장 사전-분획을 위한 냉장-보관 체인의 필요성을 없애는 방법은 매년 분획되는 2,300만 내지 2,800만 리터의 혈장 분획에서 상당한 진전을 나타낼 것이다. Burnouf, Transfus. Med. Rev. (2007); 21(2): 101-117.

혈장을 동결 상태로 유지하기 위한 필요성을 제거하기 위한 가능한 해결책은 동결건조된 혈장에 의존해 왔다. 건조된 혈액 생성물은 당업계에 공지되어 있고, 건조된 생성물을 달성하기 위한 주된 기술은 동결건조(냉장-건조)이다. 예를 들어, Brinkhous 등의 미국등록특허 제4,287,087호 및 제4,145,185호는 가교 시약, 예컨대 포름알데히드로 고정된 건조된 혈액 혈소판을 개시한다. 미국등록특허 제5,656,498호; 제5,651,966호; 제5,891,393호; 제5,902,608호; 및 제5,993,804호는 추가 건조된 혈액 생성물을 개시한다. 이러한 생성물은 안정적이고 긴 저장 기간을 가지기 때문에 치료 목적에 유용하며, 심각한 트라우마를 겪고 있는 환자의 출혈을 멈추기 위해 잠재적으로 분말 형태로 사용될 수 있다. 그러나, 재구성된 동결건조된 혈장의 분획은 이러한 참조에서 제시되지 않는다.

분무 건조 혈장을 분획 공정으로 도입하는 것은 사전-분획 콜드-체인의 필요성을 제거할 가능성을 갖는다. 분무-건조는 신속한 용매 기화(예를 들어, 탈수)를 위해 유입되는 가스 스트림에서 용액을 미립화하는 기술이다. 그 결과는 잔여 용질로 구성된 극미립자의 1초 미만의 시간 척도에서 형성된다. 분무-건조는 수십 년 동안 물질, 식품 및 제약 산업에서 산업 공정으로 사용되었다. 보다 최근에, 분무-건조는 흡입을 위한 극미립자로서 단백질 치료제의 제조를 용이하게 하였다(Maltesen 등., Eur J Pharm Biopharm 70, 828-838 (2008)).

재구성 가능한, 분무 건조된 전체 혈장은 트라우마 환경 및 전장(battlefield)에서 사용되어 왔다. 이상적이지는 않지만, 냉동고나 냉장고가 없는 다양한 환경에서 보관할 수 있고 초기 치료 시점에서 최초 대응자가 사용할 수 있다는 점에서 유용성을 발견하고, 이는 동결 혈장의 해동과 관련된 30-45분 지연 없이 몇 분 안에 수혈할 수 있다.

잠재적으로 매력적인 방편이지만, 분무 건조 공정은, 특정 조건 및 매개변수 하에서 혈장 단백질에 해를 끼칠 수 있다. 혈장이 건조를 위해 적합하게 크기의 액적을 생성하는 데 필요한 높은 속도의 공기 유입에 노출된 좁은 오리피스를 통과하도록 강제됨에 따라 분무 건조는 에어로졸화 공정 동안 혈장 단백질에 높은 응력을 가한다. 둘째, 분무 건조 공정은 혈장 단백질을 에어로졸화된 액적에서 물을 밀어내는 데 필요한 고온으로 노출시킨다. 셋째, 분무 건조 공정은 건조 중 CO₂의 급속한 방출의 결과로서 혈장 단백질의 pH가 극적으로 그리고 급격하게 증가하도록 한다.

분무 건조 공정은, 매개변수에 따라 특정 대형 다량체 단백질 (예를 들어, 폰 빌레브란트 인자(vWF))의 양을 감소시키고, 대형 단백질을 더 작은 단백질 단편으로 분해하고/하거나 단백질의 활성/기능성에 영향을 미칠 수 있다. 혈장 분획의 목표는 생리학적 기능을 하는 혈장 단백질을 다양한 분획으로 분리 (또는 농축)하는 것이므로, 당업자는 온전한 생리학적으로 활성적인 단백질 약리학적 제제를 제조하기 위해 혈장 분획을 위한 출발 물질로서 분무 건조 혈장을 혼입하는 것과 관련하여 분무 건조 또는 동결건조 기술에서 제안 또는 동기를 찾지 않을 것이다.

따라서, 본원에 기술된 발명 전까지, 이는 다양한 분획(예를 들어, 냉장 에탄올 분획) 내 단백질이 재구성된 생리학적으로 활성적인 혈장을 분획하는 비용을 가치있게 만들기에 충분히 의미 있는 양으로 재구성된 분무 건조 혈장을 분획함에 의해 회수될 수 있음이 명백하지 않았다. 추가로, 재구성된 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장이 콘(Cohn) 분획 (또는 알려진 이들의 변형)에서 신선한 동결 혈장과 유사하게 작용하는지 여부는 알려지지 않았다. 본 발명자들은 이 분획 경로가 실제로 실현 가능하다는 것을 발견하였고 경제적으로 실행 가능한 콘 분획 또는 키스틀러 니츠만(Kistler Nitchman) 분획, 또는 재구성된 분무 건조 혈장으로 시작하는 다른 방법(예를 들어, Gerlough, Hink 및 Mulford 방법)을 고안하였다. 예를 들어, Kistler 등, Vox. Sang. (1962); 7(4), pp.414-424; Graham 등, Subcellular Fractionation, a Practical Approach. Oxford University Press. 1997을 참조한다.

발명의 간단한 요약

치료용 혈장-유래 혈액 단백질 조성물, 예컨대 면역 글로불린 조성물, 알부민, 프로테아제 억제제, 혈액 응고 인자, 응고 인자 억제제 및 보체 시스템의 단백질의 광범위한 사용을 고려할 때, 효과적이고 안전한 혈장-유래 혈액 단백질 조성물에 대한 적절하고 경제적이며 환경 친화적이고 지속가능한 접근을 보장하는 것이 가장 중요하다.

2019년에는 혈액 혈장 생성물 시장이 6.8%의 연평균 성장률(CAGR)로 성장하여 2018년에 205억 달러에서 2023년에 285억 달러에 도달할 것으로 예측되었다. 전세계 연간 분획 용량은 2016년에 약 7,070만 리터였다. 동결 혈장은 공여자 센터에서 분획 센터로 수송된다. 혈장 분획 산업이 한 부문인 바이오제약의 콜드체인(cold chain) 지출이 2019년에 157억 달러에서 2020년에 약 172억 달러로 증가한 것으로 추정되었다. "2020 Biopharma Cold Chain Sourcebook forecasts a $17.2-billion logistics market" - 파마슈티컬 커머스(Pharmaceutical Commerce), 2020년 4월 27일. 분명히, 냉장 하에 유지되는 수백만 리터의 동결 혈장을 보관하고 수송하는 것의 경제적 및 환경적 영향은 혈장 산업에서 계속 중요한 고려 사항이다. 예를 들어, 2017년 12월 1일에 발행된 Robert P, Hotchko M. Worldwide 2016 Plasma Protein Sales - Marketing Research Bureau, Inc.를 참조한다.

본 발명은 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장에서 유래하는 혈장 분획 공정을 제공함으로써 이들 및 다른 문제를 개선한다. 효과적이고 안전한 조성물을 제공하는 것 외에도, 본 발명은 콜드체인의 구성요소에 덜 집중적으로 접근하는 혈장 공급원을 사용하여 필수적인 혈장 단백질을 분리하기 위한 공정을 제공하며, 이는 액체 혈장보다 공여자 센터에서 분획 시설로 수송하는 것이 더 간단하고 더 경제적이다.

본 발명에 따르면, 매우 놀랍게도 생리학적으로 활성적인 분무 건조 및 재구성된 혈장이 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장을 분획함에 의해 단백질 치료제를 제조하기 위한 효과적인 출발 물질이라는 것이 밝혀졌다. 다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장으로부터 다양한 콘 분획 다운스트림에서 전형적으로 발견되는 단백질은 동결 혈장으로 시작하는 공정에서 상응하는 분획에서 발견되는 것과 필적할 만한 수율 및 순도로 이들 분획에서 발견된다.

본 발명의 예시적인 방법은 하기를 포함한다: 재구성 액체에 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말을 재구성함으로써 제조된 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장 용액을 제공하는 단계; 및 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장을 하나 이상의 혈장 분획 공정 (예를 들어, 냉장 에탄올 분획)에 제공하는 단계.

생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 실온 또는 기준 냉장에서 긴 보관 수명의 이점; 이의 감소된 중량 및 부피로 인한 용이한 보관 및 운송; 다양성, 내구성 및 단순성을 가지며; 이는 분획 부위에서 쉽고 빠르게 재구성되어 사용될 수 있다. 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 바람직하게는 실질적으로 임의의 온도(예를 들어, -180℃ 내지 40℃)에서 적어도 약 2-3년 동안 보관될 수 있다. 미국공개특허 제2019/0298765호. 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장의 보관 및 운송과 관련된 비용은 동결 혈장과 비교하여 더 가벼운 중량 및 더 광범위한 온도 허용 범위로 인해 액체 혈장보다 현저하게 낮다.

본 발명에 사용되는 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 배치 (단일 단위) 또는 연속 (예를 들어, 풀링된 단위) 공정 모드로 생성될 수 있다.

본 발명은 또한 혈장 처리 시스템, 바람직하게는 cGMP 호환 시스템을 제공하며, 이는 특히 재구성된 분무 건조된, 생리학적으로 활성적인 혈장 분말 용액에 의해 분획 공정으로 도입된 혈장을 분획하는데 사용된다. 출발 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 혈장으로부터 최종 부착된 무균 용기로 직접 건조될 수 있고, 이는 나중에 재구성 탱크로 전달될 수 있으며, 이때 상기 건조된 혈장은 빠르고 쉽게 분획에 적합한 상태 및 농도로 재구성된다. 분획 부위에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 신속하게 재구성될 수 있다.

도 1은 예시적인 콘 분획 절차의 일반화된 흐름도이다.
도 2는 본 발명을 실시하는데 사용되는 예시적인 분무 건조 장치의 다이어그램이다.
도 3은 여러 응고 인자에 대해 FFP로부터 유래된 해동 혈장의 응고 인자 활성을 나타내는 표이다. 본원에 기술된 유형의 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말은 열거된 인자 중 하나 이상 또는 모두에 대해 실질적으로 유사한 응고 활성을 나타낼 수 있다. (2019/0298765).
도 3은 모델 분무 건조 실행의 예시적인 단계, 및 본 발명의 조성물의 재구성 및 분석으로부터 유도된 데이터를 제공한다.
도 4는 혈장 샘플의 예시적인 분무 건조 실행에 대한 매개변수의 표이다.
도 5a 및 도 5b는 실시예 2에 기술된 것과 같은 재구성 후 분석으로부터의 결과 표이다.
도 6은 실시예 3 및 도 7a-7d에 상세히 기술된, 분무 건조 혈장 출발 물질인 테스트 1 및 테스트 2로 시작하는 2개의 상이한 분획 공정에 대한 예시적인 흐름도이다.
도 7a-7d는 테스트 1, 테스트 2 및 테스트 3 (분획 V에서 시작됨)으로부터의 결과 표이다.

I. 개요

전혈 총 부피의 약 55%를 차지하는, 혈액 혈장은 혈액 세포와 전혈의 다른 성분이 부유하는 전혈 성분이다. 혈액 혈장은 700개 이상의 단백질 및 응고, 단백질 보관, 전해질 균형 등 신체 건강에 필요한 기능을 수행하는 첨가 물질의 혼합물을 추가로 함유한다. 전혈로부터 추출될 때, 혈액 혈장은 체액, 항체 및 응고 인자를 대체하기 위해 사용될 수 있다. 따라서 혈액 혈장은 의학적 치료에 광범위하게 사용된다.

현재 수백만 리터의 혈장이 수집 센터에서 분획 현장까지 혈장에 대한 콜드체인을 필요로 하는 공정에서 연간 분획되고, 동결된 혈장은 냉동고에 저장되고 분획 직전에 해동된다. 수집 현장에서 분획 현장으로 혈장을 운송하는 동안 콜드-체인의 유지는 지속가능성에 초점을 맞춘 혁신으로 개선할 수 있는 혈장 분획 공정 및 비즈니스의 물류적으로 복잡하고, 자원 집약적이며, 고가의 요소이다. 콜드-체인 또는 콜드-체인의 구성 요소의 제거는 기술적 및 경제적 효율성의 증가를 야기하고, "더 친환경"적이고 보다 지속가능한 공정이다.

하기 섹션에 제시된 바와 같이, 본 발명은 재구성된 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장으로 분획을 시작함으로써, 분획 공정에 수많은 효율성 및 다른 이점을 부여한다.

이제 첨부된 도면에 예시된 바와 같이 본 개시의 예시적인 구현예의 구현에 대해 상세히 참조될 것이다. 동일하거나 유사한 부품을 지칭하기 위해 도면 및 하기 상세한 설명 전체에 걸쳐 동일한 참조 표시가 사용될 것이다. 당업자는 하기 상세한 설명이 예시일 뿐이며 임의의 방식으로 제한하려는 의도가 아님을 이해할 것이다. 본 개시의 다른 구현예는 본 개시의 이점을 갖는 당업자에게 쉽게 제안될 것이다.

명확성을 위해, 본원에 기술된 구현의 모든 정례적인 특징을 나타내고 기술하는 것은 아니다. 임의의 해당 실제 구현의 개발에서, 애플리케이션 및 비즈니스 관련 제약 조건 준수와 같은 혈장 제품 생산자의 특정 목표를 달성하기 위해 수많은 구현 관련 결정이 이루어진다는 점과 이러한 특정 목표가 구현마다, 혈장 제품 생산자마다 다를 수 있음을 인식할 것이다. 더욱이, 이러한 개발 노력은 복잡하고 시간이 많이 소요될 수 있지만, 그럼에도 불구하고 본 개시의 이점을 갖는 당업자에게는 엔지니어링의 정례적인 작업이 될 것임을 인식할 것이다.

본 개시에 제시된 예시적인 구현예의 많은 수정 및 변형은 당업자에게 명백한 바와 같이, 예시적인 구현예의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다. 본원에 기술된 특정 예시적인 구현예는 단지 예로서 제공되며, 본 개시는 청구범위가 부여하는 등가물의 전체 범주와 함께, 첨부된 청구범위의 조건에 의해서만 제한된다.

II. 약어 및 정의

달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어는 일반적으로 본 발명이 속하는 당업계의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본원에 사용된 명명법 및 유기 화학에서 실험실 절차, 약제학적 제형 및 의료 영상은 당업계에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것들이다.

a. 약어

본원에 사용된 바와 같이, "aPTT"는 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간을 지칭하며, 이는 "내인성" (때때로 접촉 활성화 경로로 지칭됨) 및 공통 응고 경로 모두의 효능을 측정하는 당업계에 공지된 성능 지표이다.

본원에 사용된 바와 같이, "PT"는 프로트롬빈 시간을 지칭하며, 이는 응고의 외인성 경로의 당업계에 공지된 성능 지표이다.

본원에 사용된 바와 같이, "FGN"은 피브리노겐 (당업계에서 인자 I로도 지칭됨)을 지칭하며, 이는 응고 동안 트롬빈에 의해 피브린으로 전환되는 간에 의해 합성된 불용성 혈장 당단백질이다.

본원에 사용된 바와 같이, "PC"는 단백질 C를 지칭하며, 이는 자가프로트롬빈 HA 및 혈액 응고 인자 XIV로도 알려져 있다.

본원에 사용된 바와 같이, "PS"는 단백질 S를 지칭하며, 이는 내피에서 합성되는 비타민 K-의존성 혈장 당단백질이다. 순환에서, 단백질 S는 하기 두 가지 형태로 존재한다: 자유 형태 및 보체 단백질 C4b에 결합된 복합체 형태. 인간에서, 단백질 S는 PROS1 유전자에 의해 암호화된다.

본원에 사용된 바와 같이, 로마 숫자가 뒤따르는 "인자"는 펩티드를 생성하기 위한 큰 단백질 분자의 순차적 절단을 수반하는 효소-촉매 반응의 복잡한 캐스케이드를 통해 관련된 일련의 혈장 단백질을 지칭하며, 이들 각각은 비활성 자이모겐 전구체를 활성 효소로 전환시켜 피브린 응고를 형성한다. 이들은 하기를 포함한다: 인자 I(피브리노겐), 인자 II(프로트롬빈), 인자 III(조직 트롬보플라스틴), 인자 IV(칼슘), 인자 V(프로악셀레린), 인자 VI(더 이상 지혈에서 활성으로 간주되지 않음), 인자 VII(프로콘버틴), 인자 VIII(항혈우병 인자), 인자 IX(혈장 트롬보플라스틴 성분; 크리스마스 인자), 인자 X(스튜어트 인자), 인자 XI(혈장 트롬보플라스틴 전구물질), 인자 XII(하게만 인자), 및 인자 XIII(피브린 안정화 인자).

"FP24"는 전혈 수집으로부터 제조된 동결 혈장을 지칭하며, 전혈 수집으로부터 24시간 이내에 -18℃ 이하에서 분리되고 배치되어야 한다. 사용된 항응고제 용액과 성분 부피는 라벨에 표시되어 있다. 평균적으로, 단위는 200 내지 250 mL을 함유한다. 이 혈장 성분은 비-불안정한 혈장 단백질의 공급원이다. 인자 VIII의 수준은 현저하게 감소되고 인자 V 및 기타 불안정한 혈장 단백질의 수준은 FFP와 비교하여 가변적이다. 이 혈장 성분은 혈장 단백질이 부족하거나 결함이 있는 환자를 위한 혈장 단백질의 공급원 역할을 한다. 응고 인자 수준은 FFP, 특히 불안정한 응고 인자 V 및 VIII보다 낮을 수 있다.

b. 정의

관사 "하나의(a)" 및 "한(an)"은 본원에서 관사의 문법적 대상 중 하나 또는 하나 이상 (즉, 적어도 하나)을 지칭하는 데 사용된다. 예를 들어, "단백질"은 하나의 단백질 또는 하나 이상의 단백질을 의미한다.

"콘 공정" 및 "콘 분획"은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 일반적으로 이해되는 바와 같이, 다양한 농도에서의 에탄올 침전, pH 변화, 온도 변화, 이온 강도 변화를 포함하는 일련의 단계를 통해 인간 혈장을 분리하는 방법을 지칭하며, 이는 특정 혈장 단백질이 풍부한 분획으로 이어진다. 예를 들어, 미국등록특허 제2,390,074호를 참조한다. 도 1은 콘 공정에 대한 예시적인 흐름도를 제공한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "콘 공정" 및 "콘 분획"은 또한 이 선구적인 공정, 예를 들어, 키스틀러-니츠만(Kistler-Nitchman) 공정에 대한 많은 변형 및 개선을 지칭한다(Kistler 등 (1952), Vox Sang, 7, 414-424). 본 발명의 방법에 사용되는 다른 공정은 미국등록특허 제8,940,877호에 제시된 IgG 분리 방법을 포함한다.

"혈장"은 세포 물질, 예컨대 적혈구, 백혈구 및 혈소판을 제거하기 위해 (예를 들어) 혈액을 원심분리한 후에 남아 있는 유체이다. 혈장은 일반적으로 황색을 띠며 투명하거나 불투명하다. 혈장을 다른 특정 혈액 성분과 분리하기 위해 기증되고 처리되는 동결되지 않은 혈액을 "동결되지 않은(never-frozen)" 혈장으로 지칭한다. 본원에 기술된 온도로 8시간 이내에 동결된 혈장은 본원에서 "신선한 동결 혈장" ("FFP")으로 지칭된다. 이는 혈액 예컨대 단백질(6-8%; 예를 들어, 혈청 알부민, 글로불린, 피브리노겐 등), 포도당, 응고 인자(응고 단백질), 전해질(Na⁺, Ca²⁺, Mg²⁺, HCO₃ ^-, Cl^- 등), 호르몬 등의 용해된 성분을 함유한다. 전혈(WB) 혈장은 항응고제를 제외하고는 첨가된 제제 없이 전혈로부터 분리된 혈장이다. 구연산 인산 덱스트로스(CPD) 혈장은 명칭으로 나타낸 바와 같이 구연산, 인산 나트륨 및 당, 일반적으로 덱스트로스가 함유되어 있으며, 이는 항응고제로 첨가된다.

"액체 혈장"은 분무 건조된 혈장 이외의 혈장을 지칭한다.

"회수된 혈장"은 전혈의 유효 기간 5일 이내에 분리하고 이를 1 내지 6℃에서 보관한 혈장을 지칭한다. 액체 혈장 내 혈장 단백질의 프로파일은 불량하게 특성화된다. 액체 혈장 내 응고 단백질의 수준 및 활성화 상태는 세포와 접촉하는 시간, 뿐만 아니라 보관 조건 및 기간에 따라 달라진다. 이 성분은 혈장 단백질의 공급원 역할을 한다. 응고 단백질의 수준 및 활성화 상태는 가변적이며 시간이 지남에 따라 변화한다.

"해동된 혈장"은 FFP 또는 FP24로부터 유도된 혈장을 지칭하며, 이는 무균 기술(폐쇄형 시스템)을 사용하여 제조되고 30 내지 37℃에서 해동되며, 초기 해동 후 24시간 경과 후 최대 4일 동안 1~6℃로 유지된다. 해동된 혈장은 FFP와 유사한 농도의 안정적인 응고 인자, 예컨대 인자 II 및 피브리노겐을 함유하지만, 다른 인자의 양은 가변적으로 감소한다.

"신선한 동결 혈장" ("FFP")은 전혈 또는 성분채혈 수집으로부터 제조되고 관련 혈액 수집, 처리, 및 보관 시스템에 대한 사용 지침에 명시된 바와 같은 시간 프레임 이내에 -18℃ 또는 그 이하에서 동결된(예를 들어, 채혈 8시간 이내에 동결된) 혈장을 지칭한다. 평균적으로, 단위는 200 내지 250 mL를 함유하나, 성분채혈 유도된 단위는 400 내지 600 mL 정도 함유할 수 있다. FFP는 모든 응고 인자를 포함하는 혈장 단백질을 함유한다. FFP는 높은 수준의 불안정한 응고 인자 V 및 VIII를 함유한다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "분무 건조 혈장"은 생리학적으로 활성적인 혈장 분말을 지칭하며, 이는 재구성될 때 실질적으로 이들의 모든 생리학적 활성을 잃을 정도로 손상되지 않은 단백질을 포함한다. 재구성된 형태의 혈장 분말의 생리학적 활성은 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 당업계에 공지된 다수의 매개변수에 의해 표시될 수 있다: 프로트롬빈 시간(PT), 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT), 피브리노겐 수준, 단백질 C 수준 및 단백질 S 수준. 재구성된 형태의 혈장 분말의 생리학적 활성은 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 당업계에 공지된 응고 인자 수준 또는 다른 단백질 활성에 의해 표시될 수 있다: 인자 II, 인자 V, 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX 및 인자 X; 피브리노겐 활성; IgG 항원 결합 활성; A1PI 활성; 항트롬빈 III 활성; 알파-2-항플라스민 활성; 및 알파-1-항-트립신 활성. 이들 매개변수는 당업계에 공지된 기술을 사용하여, 예를 들어, 상업적으로 입수가능한 기기를 사용하여 측정할 수 있다. 예시적인 분무 건조 혈장은 미국등록특허 제8,601,712호; 제8,595,950호; 제8,533,972호; 제8,533,971호; 제8,434,242호; 및 제8,407,912호에 기술된 방법에 의해 건조된다.

본원에 사용된 바와 같이, 용어 "생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장" 및 이 용어의 변형은 재구성된 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말을 지칭하며, 이는 분무 건조 및/또는 재구성에 의해 치료가 필요한 대상체의 질병을 치료하기 위해 단백질(들)이 투여되는 치료 요법에서 실질적으로 이들의 모든 생리학적 효능을 잃을 정도로 손상되지 않은 단백질을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장은 분무 건조 및 재구성 전에 혈장의 응고 인자 활성의 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%를 유지한다. 일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장은 분무 건조 및 재구성 전 혈장의 응고 인자 활성의 약 30% 내지 약 70%, 약 40% 내지 약 60%를 유지한다. 다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장의 IgG 활성은 분무 건조 전 혈장의 IgG 활성의 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 99% 이상이다.

재구성된 형태의 분무 건조 혈장 분말의 하나 이상의 성분의 생리학적 활성은 기준 테스트에 의해 결정되고 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 당업계에 공지된 다수의 매개변수에 의해 표시될 수 있다: 프로트롬빈 시간(PT), 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT), 피브리노겐 수준, 단백질 C 수준 및 단백질 S 수준. 재구성된 형태의 혈장 분말의 생리학적 활성은 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 당업계에 공지된 응고 인자 수준 또는 다른 단백질 활성에 의해 표시될 수 있다: 인자 II, 인자 V, 인자 VII, 인자 VIII, 인자 IX 및 인자 X; 피브리노겐 활성; IgG 항원 결합 활성; A1PI 활성; 항트롬빈 III 활성; 알파-2-항플라스민 활성; 및 알파-1-항-트립신 활성.

"재구성 액체"는 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말과 접촉하여 분말을 용액/현탁액으로 만들어 "재구성된 혈장"(즉, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장)을 형성하는 수성 액체이다. 재구성 용액은 하나 이상의 염, 하나 이상의 버퍼, 하나 이상의 아미노산, 하나 이상의 현탁제 등을 임의의 유용한 조합으로 포함할 수 있다. 재구성 액체 중의 예시적인 첨가제는 액체 중의 단백질을 안정화시키고 재구성 공정 동안 단백질 손상 및/또는 단백질 활성의 손실을 방지, 감소 또는 지연시키는 능력에 대해 선택된다. 예시적인 재구성 액체는 주사용수, 인산나트륨 버퍼, 아세테이트 버퍼, 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 계면활성제 (예를 들어, 폴리소르베이트 80)를 포함하는 수용액, 및 미국공개특허 제2017/0370952호; 제2017/0370952호; 및 제2010/0273141호에 기술된 것들을 포함한다.

"질병"은 동물이 항상성을 유지할 수 없는 동물의 건강 상태이며, 질병이 개선되지 않는 경우 동물의 건강은 계속 악화된다. 다양한 구현예에서, 분획된 재구성된 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장으로부터의 하나 이상의 단백질을 사용하여 하나 이상의 질병을 치료한다.

III. 구현예

A. 조성물 및 장치

본 개시의 구현예는 분무 건조 혈장으로부터 재구성된 생리학적으로 활성적인 혈장을 분획하는 방법, 및 이러한 분획에 의해 제조된 단백질 제제에 관한 것이다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 재구성된 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장으로 시작하는 혈장 분획 공정의 생성물인, 하나 이상의 혈장 분획을 제공한다. 예시적인 구현예에서, 상기 분획은 본 용어가 당업계에서 이해되는 바와 같은 콘 분획이다. 또 다른 구현예에서, 본 발명은 재구성된 혈장의 후속 분획을 허용하거나, 용이하게 하거나, 촉진하도록 선택되는 재구성 액체를 사용하여 분무 건조 혈장으로부터 재구성된 생리학적으로 활성적인 혈장의 용액을 제공한다. 다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장 용액은 혈장 분획에 사용되는 하나 이상의 추가 성분과 일치하는 재구성 탱크에 배치된다. 예시적인 구현예에서, 재구성 탱크 내 재구성된 생리학적으로 활성적인 혈장은 분획 시스템의 성분이다. 예시적인 구현예에서, 분획 시스템은 콘 분획 시스템, 또는 이 시스템의 공지된 변형이다.

다양한 구현예에서, 본 발명은 생리학적으로 활성적인 재구성된 건조 혈장 출발 물질로부터 다운스트림에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 그 이상의 독특한 혈장 분획 조성물(들)을 제공한다. 예시적인 구현예에서, 조성물은 저온 페이스트(cryopaste) 및/또는 저온 불량 혈장이다. 다양한 구현예에서, 조성물은 분획 I 페이스트이고, 피브리노겐, 또는 분획 I 상층액을 포함한다. 다양한 구현예에서, 조성물은 분획 II +III 페이스트이고, IgG, 또는 분획 II+III 상층액을 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 분획 IV-1 페이스트이고, A1PI 및/또는 AT-III, 또는 분획 IV-1 상층액을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 조성물은 분획 IV-4 페이스트 및/또는 분획 IV-4 상층액이다. 다양한 구현예에서, 조성물은 분획 V 페이스트이고, 알부민, 또는 분획 V 상층액을 포함한다. 다양한 구현예에서, 본 발명의 분획은 주로 FVIII 및/또는 폰 빌레브란트 인자를 함유한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 분획은 주로 프로트롬빈 및/또는 인자 VII, 및/또는 FIX 및/또는 FX를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 분획은 주로 IgG를 함유한다. 예시적인 구현예에서, 본 발명의 분획은 주로 A1PI 및/또는 AT-III를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 분획은 주로 알부민을 포함한다. 예시적인 구현예에서, 분획 또는 분획들은 하나 이상의 콘 분획이다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 생성된 응고 인자의 제제를 제공한다. 다양한 구현예에서, 응고 인자의 제제는 인자 VIII, 인자 IX, 프로트롬빈 복합체, 폰 빌레브란트 인자, 피브리노겐 및 이들 중 임의의 둘 이상의 조합으로부터 선택된다.

일부 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 다가 및/또는 과면역 면역글로불린(IgG)의 제제를 제공한다. 다양한 구현예에서, IgG는 항-RhO 과면역 면역글로불린, 항-B형 간염 과면역 면역글로불린, 항-광견병 과면역 면역글로불린, 항-파상풍 IgG 과면역 면역글로불린 및 이들 중 임의의 둘 이상의 조합으로부터 선택된다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 프로테아제 억제제의 제제를 제공한다. 다양한 구현예에서, 프로테아제 억제제는 알파 1-항트립신, C1-억제제 등) 및 이들의 조합으로부터 선택된다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 하나 이상의 항응고제의 제제를 제공한다. 다양한 구현예에서, 제제는 항트롬빈, 예를 들어 AT-III를 포함한다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 의해 제조된 알부민 제제를 제공한다.

예시적인 구현예에서, 본 발명에 따라 분리된 분획은 당업계에서 인정된 방법을 사용하여 동결 혈장으로부터 동일한 방식으로 분리된 동일한 분획의 특성과 실질적으로 똑같은 특성을 갖는다. 다양한 구현예에서, 상기 분획의 특성은 당업계에서 인정된 방법을 사용하여 동결 혈장으로부터 동일한 방식으로 분리된 동일한 분획의 특성과 다르다. 바람직한 구현예에서, 변화하는 특성은 규제 관련성의 하나 이상의 매개변수에 상응하고 상기 특성은 해당 부분에 대한 관련 규제 요구 사항에 중요하지 않은 양에 의해 해당 하나 이상의 매개변수의 범위 내에서 변하며, 즉, 분획 또는 분획으로부터 분리된 단백질을 포함하는 약제학적 제형은 새로운 규제 고려사항이나 시판 승인을 필요로 하지 않다.

예시적인 구현예에서, 상기 방법은 적어도 5% 또는 적어도 25% 부피의 알부민을 함유하고 정맥주사에 적합한 알부민 수용액을 제공하며, 이 용액은 1개월 기간 동안 45℃의 온도에 노출된 후 알부민의 침전 없이 안정하게 유지된다. 이 용액은 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 용액으로부터의 분획에 의해 분리된다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 인자 VIII, 인자 IX 및 이들의 조합으로부터 선택되는 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 저온 페이스트 내 단백질 제제를 제공한다. 상기 제제는 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 양으로 단백질을 포함한다. 다양한 구현예에서, 단백질의 활성은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 단백질 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상이다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 IgG 제제를 제공한다. 상기 제제는 IgG가 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 똑같은 제제에서 발견된 양의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 양으로 IgG를 포함한다. 다양한 구현예에서, IgG의 활성은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 IgG 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 이상이다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 A1PI, AT-III 및 이들의 조합으로부터 선택되는 분획된 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 분획 IV-1로부터 분리된 단백질을 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 이상의 수율 또는 95% 수율로 분리된 단백질을 제공하며, 이 단백질은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된다. 다양한 구현예에서, 분획 IV-1의 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 단백질은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 단백질 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 이상의 활성을 갖는다.

일부 구현예에서, 본 발명은 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 분획 V로부터 분리된 알부민이 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 수율의 80% 이상의 수율로 분리되는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 알부민은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 알부민 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 활성을 갖는다.

다양한 구현예에서, 본 발명은 본 발명의 분획 중 하나, 또는 해당 분획으로부터 추가로 정제된 하나 이상의 해당 분획의 단백질 성분을 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 다양한 약제학적 제형은 또한 분획 (또는 추가로 정제된 다운스트림)의 단백질이 제형화되는 약제학적으로 허용가능한 비히클을 포함한다.

다양한 구현예에서, 본 발명은 해당 투여를 필요로 하는 대상체에게 약제학적 제형을 투여하기 위한 장치, 예를 들어 주사기, 주입 백 등에 포장된 본 발명의 약제학적 제형을 제공한다. 다양한 구현예에서, 장치는 해당 투여를 필요로 하는 대상체에게 투여하기 위한 활성적인 단백질의 단위 투여 제형을 함유한다. 예시적인 구현예에서, 단위 투여량은 대상체에 대해 당업계에 인지된 단위 투여량이다.

B. 방법

본 발명은 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장을 출발 물질로 시작하는 신규한 혈장 분획의 방법을 제공한다. 본 발명의 예시적인 방법은 하기를 포함한다: 재구성 액체에 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말을 재구성함으로써 제조된 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장 용액을 제공하는 단계; 및 따라서 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장을 하나 이상의 분획 공정에 제공하는 단계. 예시적인 분획 공정은 콘 분획, 키스틀러 니츠만 분획, 및 이들의 변형이다. 도 1.

본 발명의 방법에 사용되는 분무 건조 혈장은 풀링 후 또는 단위-단위로 건조될 수 있다. 다수의 혈장 단위의 풀링은 일부 이점을 갖는다. 예를 들어, 동등한 부피 기준으로 인자 회수에 있어서 임의의 부족량은 풀로부터 완성된 생성물에 부피를 추가함에 의해 이루어질 수 있다. 부정적인 특징도 존재한다. 인자 회수를 개선하기 위해 풀로부터 부피를 구성하는 것은 비용이 많이 든다. 중요하게는, 예를 들어, 단일 공여자로부터 풀로 들어오는 임의의 병원균이 검출되지 않으면 수백 또는 수천 명의 환자에게 해를 끼칠 위험이 있기 때문에 풀링된 혈장은 병원균에 대해 지속적으로 테스트되어야 한다.

다양한 구현예에서, 분무 건조 혈장은 임의의 편리한 형태로 추가 처리, 예를 들어 분획을 위해 플랜트에 유입된다. 예시적인 구현예에서, 분무 건조 혈장은 밀봉된 용기, 예를 들어 밀봉된 플라스틱 백에서 플랜트로 유입된다. 용기의 내용물은 재구성 탱크로 전달된다. 예시적인 구현예에서, 전달은 클린룸에서 또는 다른 무균 조건 하에서 수행된다. 일부 구현예에서, 용기는 재구성 탱크 상의 포트에 부착될 수 있고 분무 건조 혈장이 주변 플랜트 대기에 노출되지 않고 재구성 탱크로 직접 전달되도록 구성된다. 이러한 구성에서, 전달은 클린룸 또는 이 환경 외부에서 수행될 수 있다. 전달은 기계적 (예를 들어, 나사, 진동기), 공압 및 진공 수단을 포함하는 다양한 분말 전달 수단에 의해 촉진될 수 있다.

예시적인 구현예에서, 혈장은 분무 건조 전에 하나 이상의 항응고제와 접촉된다. 예시적인 항-응고제는 구연산 염, 예를 들어 구연산 나트륨이다.

생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말은 재구성 액체와 분말을 접촉시킴으로써 재구성 탱크에서 재구성된다. 접촉은 임의의 유용한 형식(즉, 첨가 순서, 온도, 희석, 교반 등)으로 수행될 수 있다.

단백질은 잠재적으로 다수의 메커니즘 (예를 들어, 클리핑, 산화, 풀림, 응집, 불용성 미립자 형성)에 의해 물리적 분해를 겪는다. 많은 단백질은 구조적으로 용액에서 불안정하고, 정제, 처리 및 보관 중에 직면하는 다양한 응력으로 인해 구조적 변화에 취약하다. 이러한 응력은 온도 변화, pH 변화 및 극단적인 pH에 대한 노출, 전단 응력, 표면 흡착/계면 응력 등을 포함한다. 예시적인 재구성 액체는 분무 건조 혈장 내 하나 이상의 단백질에 보호 효과를 발휘하며, 재구성 동안 분해, 응집 또는 기타 부정적인 결과를 방지하거나 감소시키고, 이에 따라 생리학적 활성을 유지한다.

일 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말의 적어도 일부는 재구성 액체의 적어도 일부로 이전에 충전된 재구성 탱크에 첨가된다. 일부 구현예에서, 재구성 액체의 적어도 일부는 재구성 탱크에 적재된 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말의 적어도 일부에 첨가된다. 이러한 형식 중 하나에서 탱크의 내용물은 분말과 재구성 액체를 접촉하기 전, 도중 또는 후에 임의의 지점에서 임의의 편리한 수단에 의해 진탕될 수 있다. 예시적인 구현예에서, 재구성 탱크의 내용물은 교반에 의해 진탕된다.

재구성 혼합물(분무 건조 혈장 또는 재구성 액체)의 한 성분은 상기 재구성에 유용한 결과를 제공하도록 결정된 속도 및 부피로 다른 성분에 첨가된다. 따라서, 하나의 성분을 재구성 탱크 내에 있는 다른 성분에 천천히, 빠르게 또는 벌크 볼루스로 첨가될 수 있다.

다양한 구현예에서, 혈장은 탱크 내의 교반된 재구성 액체와 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말과 접촉시킴으로써 탱크 내에서 재구성된다. 재구성 액체는 교반되거나 그렇지 않으면 진탕될 수 있다. 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말은 빠르게, 천천히 또는 벌크 볼루스로 액체에 첨가될 수 있다.

일부 구현예에서, 재구성 탱크는 재구성되는 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말의 적어도 일부로 충전되고, 분말은 교반되거나 그렇지 않으면 진탕된다. 대안적으로, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말은 교반되지 않거나 그렇지 않으면 진탕된다. 재구성 액체는 탱크 내 분말에 첨가된다. 다양한 첨가 모드가 사용되며, 예를 들어, 액체를 분말에 직접 첨가하거나 탱크의 측벽을 따라 부어 액체를 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말에 첨가한다. 액체는 빠르게, 천천히 또는 하나 이상의 볼루스로 추가될 수 있다.

다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말의 적어도 일부 및 재구성 액체의 적어도 일부가 본질적으로 동시에 재구성 탱크에 첨가되고, 이는 비어 있을 수 있거나, 이미 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말, 재구성 액체 또는 이들의 조합을 함유할 수 있다.

당업자에 의해 인식될 수 있는 바와 같이, 이러한 접촉의 임의의 모드는 단독으로 또는 임의의 조합 또는 순서로 수행될 수 있다.

예시적인 재구성 액체는 생리학적으로 호환가능한 액체이다.

재구성 유체는 분무 건조된 혈장을 재구성할 수 있고, 혈장의 단백질 성분에 대한 손상(예를 들어, 변성, 응집, 활성의 손실) 및 주요 혈장 특성 및 활성(들)의 손실 또는 감소를 최소화할 수 있는 수성 유체이다.

예시적인 재구성 액체는 주사용수(WFI) 또는 식염수이다. 다양한 구현예에서, 재구성 액체의 pH가 조정된다. 당업자에 의해 인식되는 바와 같이, 재구성 액체의 pH는 산 및 염기, 예를 들어 HCl, 중탄산나트륨 등의 첨가에 의해 쉽게 조절된다. 다양한 구현예에서, 재구성 액체는 이들 액체 중 하나이며, 이는 pH 조절 없이 사용된다.

일부 구현예에서, 재구성 액체는 적어도 하나의 버퍼를 포함한다. 예시적인 버퍼는 제한 없이, 인산염, 인산수소염, 아세트산염, 구연산염, 탄산염, 중탄산염 및 일반적으로 혈장 단백질과 호환가능한 것으로 인식되는 기타 해당 버퍼이다.

다양한 구현예에서, 재구성 액체는 적어도 하나의 아미노산을 포함한다. 예시적인 아미노산은 글리신이다.

예시적인 구현예에서, 재구성 액체는 하나 이상의 항응고제를 포함한다. 예시적인 항-응고제는 구연산 염, 예를 들어 구연산 나트륨이다.

본 발명의 방법에 의해 제공된 추가의 이점은 천연 혈장에서 발견되는 것보다 더 높은 단백질 농도로 혈장을 재구성함으로써 처리되는 액체의 양을 감소시키는 능력이다. 예시적인 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 원래 부피의 약 100%로 재구성된다. 일부 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 원래 부피의 약 75%로 재구성된다. 일부 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 원래 부피의 약 50%로 재구성된다. 일부 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 원래 부피의 약 25%로 재구성된다. 일부 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 원래 부피의 약 25% 내지 약 50%, 예를 들어 약 30% 내지 약 40%로 재구성된다. 일부 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 원래 부피의 약 50% 내지 약 75%, 예를 들어 약 60% 내지 약 70%로 재구성된다. 다양한 구현예에서, 분무 건조 혈장은 재구성 액체로 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%로 재구성된다.

다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장은 적어도 약 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 14%, 16%, 18%, 또는 20%로 구성된다. 일부 구현예에서, 0.09 g의 분말 대 1 mL의 재구성 유체의 비율로 재구성될 때, 재구성된 생리학적 혈장은 약 48 mg/mL, 예를 들어 45-55 mg/mL 범위의 단백질 농도를 갖는다.

동결/해동된 혈장의 사용을 필요로 하지 않는 본 발명의 방법에 의해 제공되는 편리함을 고려할 때, 재구성 공정은 임의의 유용한 온도에서 일어날 수 있다. 예시적인 재구성은 실온(예를 들어, 약 22℃ 내지 약 25℃)에서, 냉장(약 10℃ 내지 약 20℃) 하에서 일어난다. 예시적인 구현예에서, 재구성 공정은 약 2℃ 내지 약 28℃의 온도에서 수행된다.

예시적인 구현예에서, 재구성 후, 재구성된 혈장의 온도가 낮아져 저온침전이 촉진되고 저온침전물 및 상층액이 분리된다. 다양한 구현예에서, 재구성된 혈장의 온도가 약 6℃ 미만으로 낮아져 저온침전에 영향을 미친다. 예시적인 구현예에서, 재구성된 혈장 용액은 약 1℃ 내지 약 6℃로 냉각된다. 도 6.

다양한 구현예에서, 저온침전 후 혈장은 저온침전물 및 저온상층액으로 분리된다. 저온상층액은 추가 분획 단계에 선택적으로 제공된다. 분리는 임의의 유용한 방식, 예컨대, 제한 없이, 원심분리, 여과 또는 이들의 조합으로 달성될 수 있다.

생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장의 냉각이 요구되는 그러한 구현예에서, 임의의 유용한 냉각 수단이 활용될 수 있다. 다양한 구현예에서, 재구성된 혈장을 함유하는 용기 또는 라인은 냉각 장치로 재킷화된다. 예시적인 구현예에서, 냉각 및/또는 혈장 용액은 용기, 예를 들어, 재킷형 용기에 유지되고, 일부 구현예에서, 혈장 용액은 인라인 유입 ("라디에이터 방법") 동안 냉각된다.

다양한 구현예에서, 상기 논의된 바와 같이 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장을 냉각시키는 것은 피브리노겐 침전을 초래한다. 침전된 피브리노겐은 상층액으로부터 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, 피브로넥틴은 재구성된 혈장을 냉각 시 침전시키고, 상층액으로부터 분리될 수 있다. 일부 구현예에서, FVIII는 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장을 냉각 시 침전시키고, 상층액으로부터 분리될 수 있다. 다양한 구현예에서, 폰 빌레브란트 인자는 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장을 냉각 시 침전시키고, 상층액으로부터 분리될 수 있다.

예시적 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장은 분획되기 전에 하나 이상의 활성을 확인하기 위해 하나 이상의 시험 절차에 제공된다. 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장에서 제기되는 응고 촉진 및 항-응고 단백질의 활성은 이에 제한되지는 않으나, 하기 테스트를 포함한다: i. 프로트롬빈 시간(PT) 또는 국제 정규화 비율(INR); ii. 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간(aPTT); iii. 열-불안정성 단백질(예를 들어, 인자 V, 인자 VIII)의 활성; iv. 항응고 단백질(예를 들어, 단백질 S, 단백질 C)의 활성; v. 응집 및 분해되기 쉬운 대형 응고 단백질의 항원 및 활성(예를 들어, 피브리노겐, 폰 빌레브란트 인자); vi. 응고 활성화 마커(예를 들어, 트롬빈-항트롬빈 복합체, 피브린 분해 생성물)

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장 분말은, 재구성될 때 해동 혈장, 액체 혈장, FP24, 또는 FFP와 실질적으로 동등한 생리학적 활성을 나타낸다. 다양한 구현예에서, 혈장 분말은 출발 천연 혈장과 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장 간에 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 등의 혈장 단백질에 대한 회수율을 나타낸다. 일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장은 FFP 또는 FP24와 비슷하거나 더 나은 단백질 수준을 갖는다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 약 65초 이하의 aPTT, 약 31초 이하의 PT, 및 적어도 약 100 mg/dL의 피브리노겐 수준을 특징으로 한다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 약 35초 이하의 aPTT, 약 15초 이하의 PT, 및 적어도 약 223 mg/dL의 피브리노겐 수준을 특징으로 한다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 28-66초 범위의 aPTT, 14-31초 범위의 PT, 및 100-300 mg/dL 범위의 피브리노겐 수준을 특징으로 한다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 30-35초 범위의 aPTT, 10-15초 범위의 PT, 및 223-500 mg/dL 범위의 피브리노겐 수준을 특징으로 한다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 적어도 약 10 IU/dL의 인자 VII 수준, 적어도 약 10 IU/dL의 인자 IX 수준, 적어도 약 10 IU/dL의 단백질 C 수준, 및 적어도 약 10 IU/dL의 단백질 S 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 적어도 약 30 IU/dL의 인자 VII 수준, 적어도 약 25 IU/dL의 인자 IX 수준, 적어도 약 55 IU/dL의 단백질 C 수준, 및 적어도 약 54 IU/dL의 단백질 S 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 적어도 약 54 IU/dL의 인자 VII 수준, 적어도 약 70 IU/dL의 인자 IX 수준, 적어도 약 74 IU/dL의 단백질 C 수준, 및 적어도 약 61 IU/dL의 단백질 S 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 30-110 IU/dL 범위의 인자 VII 수준, 25-135 IU/dL 범위의 인자 IX 수준, 55-130 IU/dL 범위의 단백질 C 수준, 및 55-110 IU/dL 범위의 단백질 S 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 34-172 IU/dL 범위의 인자 VII 수준, 70-141 IU/dL 범위의 인자 IX 수준, 74-154 IU/dL 범위의 단백질 C 수준, 및 61-138 IU/dL 범위의 단백질 S 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 적어도 약 10 IU/dL의 인자 V 수준, 및 적어도 약 10 IU/dL의 인자 VIII 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 적어도 약 30 IU/dL의 인자 V 수준, 및 적어도 약 25 IU/dL의 인자 VIII 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 적어도 약 63 IU/dL의 인자 V 수준, 및 적어도 약 47 IU/dL의 인자 VIII 수준.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은, 재구성될 때 하기 중 적어도 하나를 특징으로 한다: 63-135 IU/dL 범위의 인자 V 수준, 47-195 IU/dL 범위의 인자 VIII 수준.

도 3을 참조한다.

vWF는 일반적으로 회수하기 어려웠으며 모든 인자의 보존을 위한 하나의 지표가 되었다. 본 발명은 분획 전에 활성/비변성 vWF를 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장의 양으로 회수하는 것을 포함하며, 이는 천연 혈장에서 활성/비변성 vWF의 양과 비교할 때 적어도 약 60%, 약 70%, 적어도 약 80%, 약 90% 또는 그 이상이다. vWF 활성은 전형적으로 당업자에게 공지된 바와 같이 폰 빌레브란트 인자: 리스토세틴 보조인자 [vWF:RCo] 분석으로 불리는 분석으로 분석된다. vWF:RCo 분석은 환자의 혈장이 항생제 리스토세틴의 존재하에서 혈소판을 응집시키는 능력을 측정한다. 리스토세틴 유도 응집의 속도는 혈장 폰 빌레브란트 인자의 농도 및 기능적 활성과 관련이 있다. 또 다른 분석인, vWF 항원 분석은 샘플 내 존재하는 vWF 단백질의 양을 측정한다.

일부 구현예에서, 생리학적 재구성된 분무 건조 혈장은 약 3.5 내지 약 5.5 g/dL의 양으로 알부민을 함유한다. 다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장의 알부민 농도는 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장의 총 혈장 단백질 함량의 약 40% 내지 약 70%, 예를 들어 약 50% 내지 약 60%이다.

다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장 내 알부민은 단위당 기준으로 혈장 내 알부민 활성의 적어도 약 80%, 85%, 90%, 또는 적어도 약 95%를 유지한다.

일부 구현예에서, 생리학적 재구성된 분무 건조 혈장은 약 50-300 mg/dL, 예를 들어 약 100 내지 약 200 mg/dL의 양으로 A1PI를 함유한다.

다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장 내 A1PI은 단위당 기준으로 혈장 내 A1PI 활성의 적어도 약 80%, 85%, 90%, 또는 적어도 약 95%를 유지한다.

다양한 구현예에서, 생리학적 재구성된 분무 건조 혈장은 약 500 내지 약 1600 mg/dL, 예를 들어 약 700 내지 약 1500 mg/dL의 양으로 IgG를 함유한다.

다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장 내 IgG는 단위당 기준으로 혈장 내 IgG 활성의 적어도 약 80%, 85%, 90%, 또는 적어도 약 95%를 유지한다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 약 30 미크론 이하의 평균 입자 크기를 갖는다. 일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장은 약 100 미크론 이하의 최대 입자 크기를 갖는다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장은 적어도 30 중량%의 혈장 단백질을 포함한다.

일부 구현예에서, 분말 0.09 g당 유체 1 mL로 재구성될 때, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장은 35 mg/mL 내지 60 mg/mL 범위의 단백질 농도를 갖는다.

일부 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 혈장은 무균이다.

생리학적으로 활성적인 분무 건조 혈장의 재구성 후, 생성된 용액을 분획에 제공한다. 분획의 예시적인 모드는 콘 분획 및 이의 변형이다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 콘 분획 절차, 예를 들어, 미국등록특허 제2,390,074호에 제시된 절차를 사용하여 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장을 분획하는 방법을 제공하며, 여기서 즉각적인 개선은 분획 절차를 위한 출발 물질로서 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 사용을 포함한다. 도 1은 콘 분획의 방법에 대한 예시적인 공정 다이어그램을 제공한다.

따라서, 예를 들어, 생리학적으로 활성적인 분무 건조 재구성된 혈장은 복수의 단백질 분획을 함유하는 용액으로부터 침전에 의해 단백질을 분획하는 방법에 제공되며, 상기 용액은 침전시키고자 하는 목적한 분획의 등전점보다 높은 pH를 가지며, 이는 용액의 pH를 낮추어 침전시키고자 하는 목적한 분획의 등전점과 대략적으로 동일하게 유도하고, 용액의 이온 강도를 0.1 내지 0.2로 유도하고, 용액의 온도를 대략 0℃와 용액의 어는점 사이로 낮추고, 단백질 용액에 단백질을 위한 유기 침전물을 첨가하고, 첨가된 침전물의 양을 상기 온도의 단백질 용액으로부터 목적한 분획만의 침전이 야기되는 정도로 하고, 용액으로부터 침전물을 분리하는 것을 포함한다.

다양한 구현예에서, 복수의 단백질 분획을 함유하는 생리학적으로 활성적인 재구성된 인간 혈장의 용액으로부터 침전에 의해 단백질을 분획하는 방법이 제공되며, 이는 용액의 pH를 침전시키고자 하는 목적한 단백질 분획의 등전점으로 대략적으로 유도하고, 용액의 이온 강도를 0.01 내지 0.2로 유도하고, 용액의 온도를 대략 0℃와 용액의 어는점 사이로 낮추고, 단백질 용액에 단백질을 위한 유기 침전물을 첨가하고, 첨가된 침전물의 양, pH, 이온 강도 및 온도를 단백질 용액으로부터 목적한 분획만의 침전이 야기되는 정도로 하고, 용액으로부터 침전물을 분리하는 것을 포함한다.

다양한 구현예에서, 재구성된 생리학적으로 활성적인 인간 혈장으로부터 단백질을 분획하는 방법에 있어서, 단계는 단백질을 위한 유기 침전물을 단백질 용액과 혼합하고, 0 내지 -15℃의 온도, 10% 내지 40%의 침전물의 양, 4.4 내지 7의 pH 및 0.05 내지 0.2의 이온 강도를 조정하고, 생성된 액체 시스템으로부터 그 안에 불용성인 침전된 단백질을 분리하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 생리학적으로 활성적인 인간 혈장의 용액으로부터 단백질을 분획하는 방법에 있어서, 단계는 단백질을 위한 유기 침전물을 단백질 용액과 혼합하고, 어는점 이상이지만 0℃ 이상이 아닌 온도, 10% 내지 40%의 침전물의 양, 4.4 내지 7의 pH 및 0.05 내지 0.2의 이온 강도를 조정 및 유지하고, 생성된 액체 시스템으로부터 그 안에 불용성인 침전된 단백질을 분리하는 것을 포함한다.

일부 구현예에서, 재구성된 인간 혈장의 용액으로부터 단백질을 분획하는 방법에 있어서, 단계는 단백질을 위한 전해질 및 유기 침전물 모두를 함유하는 단백질 혼합물에 첨가하고, 이온 강도를 0.01 내지 0.2로 유도하기에 충분한 양으로 전해질을 첨가하고, 목적한 단백질 분획만의 침전이 야기되는 정도의 양으로 침전물을 첨가하고, 4.4 내지 7의 용액 pH 및 0 내지 -15℃의 온도를 조정 및 유지하고, 이에 따라 생성된 시스템으로부터 단백질을 침전시키는 것을 포함한다.

예시적인 구현예에서, 본 발명은 재구성된 인간 혈장의 용액으로부터 알부민을 정제하고 결정화하는 방법을 제공하며, 이는 대략 5.5 내지 6.0의 pH, 0.05 내지 0.5의 이온 강도 및 0℃ 내지 -5℃의 온도에서 15 내지 40% 알코올을 함유하는 알코올 용액에 불순한 알부민을 용해시키는 단계 및 정제된 알부민이 결정화될 때까지 상기 온도 범위 내에서 상기 용액을 유지하는 단계를 포함한다.

예시적인 구현예에서, 제어된 온도 및 수소 이온 농도로 재구성된 인간 혈장의 용액과 상이한 용해도를 갖는 물질을 분획하는 방법에 있어서, 이렇게 하여 형성된 침전물을 제거하고 하나 이상의 인자의 변형에 의해 상기 물질의 복수의 연속적인 분획을 침전시킨다.

일반적으로 변성을 초래하는 시약을 변형함에 의해 단백질의 변성을 방지하는 방법으로서, 이는 반-투과성 막을 통한 확산에 의해 재구성된 인간 혈장의 단백질 용액에 시약을 첨가하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 인간 혈장을 유기 침전물과 접촉시키는 것을 포함하는, 생리학적으로 활성적인 재구성된 인간 혈장의 용액으로부터 단백질을 분획하는 방법이 제공된다. 예시적인 구현예는 용액 내 침전물의 양, 온도, 수소 이온 농도 및 이온 강도 중 하나 이상을 제어하고, 단백질 용액으로부터 생성된 침전물을 분리하고, 이들의 용해도에 영향을 미치는 복수의 상기 인자를 변화시킴으로써 연속적인 단백질 분획을 분리하는 것을 포함한다.

예시적인 구현예에서, 유기 침전물은 0℃ 또는 0℃ 미만의 온도를 부가한다.

예시적인 구현예에서, 유기 침전물은 알코올이다. 다양한 구현예에서, 0℃ 또는 0℃ 미만의 온도를 부가한다.

예시적인 구현예에서, 유기 침전물을 갖는 혈장에 의해 그리고 상기 혈장의 온도를 변화시킴에 의해 혈장으로부터 복수의 상이한 단백질 분획을 침전시키는 단계를 포함하는, 생리학적으로 활성적인 재구성된 인간 혈장의 용액으로부터 단백질을 분획하는 방법이 제공되며, 상기 온도는 연속적인 단백질 분획의 침전과 더불어, 점진적으로 낮아지고 혈장의 알코올 농도가 증가하며, 온도 및 알코올의 백분율은 상관관계가 있어서 임의의 주어진 단백질 분획의 침전에 사용되는 온도는 혈장 내 존재하는 알코올의 백분율에서 혈장의 어는점에 가깝지만 그 이상이다.

예시적인 유기 침전물은 에탄올, 아세톤, 디옥산 및 이들의 조합을 포함한다.

예시적인 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리되고 인자 VIII, 인자 IX 및 이들의 조합으로부터 선택되는 저온 페이스트의 단백질은 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 분리된다. 다양한 구현예에서, 단백질의 활성은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 단백질 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상이다.

예시적인 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 IgG는 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 수율로 분리된다. 다양한 구현예에서, IgG의 활성은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 IgG 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상이다.

예시적인 구현예에서, 분획된 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 분획 IV-1로부터 분리되고 A1PI, AT-III 및 이들의 조합으로부터 선택되는 단백질은 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 수율로 분리된다. 다양한 구현예에서, 분획 IV-1의 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 단백질은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 단백질 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 활성을 갖는다.

일부 구현예에서, 본 발명은 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 분획 V로부터 알부민이 분리되고 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 분리되는 방법을 제공한다. 다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 알부민은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 알부민 활성의 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 활성을 갖는다.

본원에 제공된 방법은 매우 높은 수준의 순도를 갖는 A1PI 조성물의 제제를 허용한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본원에 제공된 A1PI 조성물 중 총 단백질의 적어도 약 95%는 A1PI이다. 다른 구현예에서, 이 조성물 중 단백질의 적어도 약 96%는 A1PI이거나, 조성물 중 총 단백질 중 적어도 약 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 그 이상은 A1PI이다.

유사하게, 본원에 제공된 방법은 극히 낮은 수준의 오염 물질을 함유하는 A1PI 조성물의 제제를 허용한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 약 10 mg/L 미만의 오염 물질을 함유하는 A1PI 조성물이 제공된다. 다른 구현예에서, A1PI 조성물은 약 5 mg/L 미만의 오염 물질, 바람직하게는 약 3 mg/L 미만의 오염 물질, 가장 바람직하게는 약 2 mg/L 미만의 오염 물질을 함유할 것이다.

다양한 구현예에서, 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 혈장 내 A1PI는 단위당 기준으로 혈장 내 A1PI 활성의 적어도 약 80%, 85%, 90%, 또는 적어도 약 95%를 유지한다.

일 구현예에서, 본 발명은 약 150 g/L 내지 약 250 g/L의 단백질 농도를 포함하는 수성 IgG 조성물을 제공한다. 특정 구현예에서, IgG 조성물의 단백질 농도는 약 175 g/L 내지 약 225 g/L, 또는 약 200 g/L 내지 약 225 g/L, 또는 이들 범위 내 임의의 적합한 농도, 예를 들어, 150 g/L 또는 약 150 g/L, 155 g/L 또는 약 155 g/L, 160 g/L 또는 약 160 g/L, 165 g/L 또는 약 165 g/L, 170 g/L 또는 약 170 g/L, 175 g/L 또는 약 175 g/L, 180 g/L 또는 약 180 g/L, 185 g/L 또는 약 185 g/L, 190 g/L 또는 약 190 g/L, 195 g/L 또는 약 195 g/L, 200 g/L 또는 약 200 g/L, 205 g/L 또는 약 205 g/L, 210 g/L 또는 약 210 g/L, 215 g/L 또는 약 215 g/L, 220 g/L 또는 약 220 g/L, 225 g/L 또는 약 225 g/L, 230 g/L 또는 약 230 g/L, 235 g/L 또는 약 235 g/L, 240 g/L 또는 약 240 g/L, 245 g/L 또는 약 245 g/L, 250 g/L 또는 약 250 g/L, 또는 그 이상이다. 바람직한 구현예에서, 수성 IgG 조성물은 200 g/L 또는 약 200 g/L의 단백질 농도를 포함한다. 특히 바람직한 구현예에서, 수성 IgG 조성물은 204 g/L 또는 약 204 g/L의 단백질 농도를 포함한다.

본원에 제공된 방법은 매우 높은 수준의 순도를 갖는 IgG 조성물의 제제를 허용한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 본원에 제공된 IgG 조성물 중 총 단백질의 적어도 약 95%는 IgG일 것이다. 다른 구현예에서, 단백질의 적어도 약 96%는 IgG이거나, 조성물 중 전체 단백질의 적어도 약 97%, 98%, 99%, 99.5% 또는 그 이상은 IgG일 것이다.

유사하게, 본원에 제공된 방법은 극히 낮은 수준의 오염 물질을 함유하는 IgG 조성물의 제제를 허용한다. 예를 들어, 특정 구현예에서, 약 100 mg/L 미만의 IgA를 함유하는 IgG 조성물이 제공된다. 다른 구현예에서, IgG 조성물은 약 50 mg/L 미만의 IgA, 바람직하게는 약 35 mg/L 미만의 IgA, 가장 바람직하게는 약 20 mg/L 미만의 IgA를 함유할 것이다.

분무 건조기 및 분무 건조 공정

재구성되고 후속적으로 분획되는 생리학적으로 활성적인 건조된 혈장은 분무 건조기 시스템에서 분무 건조에 의해 건조된다. 일반적으로, 액체 샘플 예컨대 혈액 혈장을 분무 건조하기 위해 분무 건조기 시스템(분무 건조기 장치)이 제공된다. 일 구현예에서, 본 개시의 용액에 의한 재구성을 위해 건조 혈장을 분무하는 데 사용되는 분무 건조기 시스템은 분무 건조기 장치 및 분무 건조기 조립체를 포함한다. 분무 건조기 장치는, 일 측면에 있어서, 각각의 공급원으로부터의 에어로졸화 가스, 건조 가스 및 혈장 액체의 유입을 수용하고, 분무 건조기 조립체와 결합되도록 구성된다. 분무 건조기 장치는 수용된 에어로졸화 가스, 건조 가스 및 혈장을 분무 건조기 조립체로 추가로 전달할 수 있다. 혈장의 분무 건조는 분무 건조기 장치의 제어 하에 분무 건조기 조립체에서 수행된다. 임의의 적합한 분무 건조 시스템을 사용하여 본 발명에 사용하기 위한 혈장을 건조시킬 수 있다. 예시를 위해, 적합한 분무 건조기를 하기에 기술한다.

본 발명에 사용되는 예시적인 분무 건조 장치는 도 2에 제공된다. 예시적인 분무 건조 공정 매개변수는 도 4에 제공된다.

특정 구현예에서, 분무 건조기 조립체는 무균, 완전 밀봉된 엔클로저 본체(enclosure body) 및 엔클로저 본체가 부착되는 프레임을 포함한다. 프레임은 조립체의 제1, 제2 및 제3 부분을 정의하며, 각각의 전이 영역으로 분리된다. 엔클로저 본체의 제1 단부에 인접한, 조립체의 제1 부분 내에 건조 가스 유입구가 제공된다.

분무 건조 헤드는 조립체의 제1 및 제2 부분 사이의 전이 구역 내에서 프레임에 추가로 부착된다. 이 위치는 또한 조립체 내에서 건조 가스의 초기 유입 경로 내에 있다. 분무 건조 동안, 분무 건조 헤드는 에어로졸화 가스 및 혈장의 유입을 수용하고, 혈장을 에어로졸화 가스로 에어로졸화시켜 에어로졸화된 혈장을 형성한다. 건조 가스는 추가적으로 분무 건조 헤드를 통과하여 건조를 위해 조립체의 제2 부분 내에서 에어로졸화된 혈장과 혼합된다. 건조 챔버로서 기능하는 조립체의 제2 부분에 있어서, 에어로졸화된 혈장과 건조 가스 사이의 접촉은 수분이 에어로졸화된 혈장으로부터 건조 가스로 이동하도록 하여, 건조된 혈장 및 습한 건조 가스를 생성한다.

대안적인 구현예에서, 에어로졸화 가스는 생략될 수 있고 분무 건조기 조립체 헤드는 혈장의 유입을 수용하고 미립화하는 분무기(aerosolizer)를 포함할 수 있다. 분무기의 예는 이에 제한되지는 않으나, 초음파 미립화 변환기, 초음파 가습기 변환기 및 피에조-초음파 미립화기를 포함할 수 있다. 유리하게, 이러한 구성은 에어로졸화 가스에 대한 필요성을 제거하고, 분무 건조기 장치 및 조립체의 설계를 단순화하고 분무 건조기 시스템의 비용을 낮춘다.

일 구현예에서 분무 건조 헤드는 건조 챔버 내에서 건조 가스의 유입을 유도하도록 구성된다. 예를 들어, 분무 건조 헤드는 건조 가스 유입구로부터 건조 가스의 유입을 수용하는 핀에 의해 분리된 개구부를 포함한다. 핀의 방향은 건조 가스가 선택되는 유입 경로(예를 들어, 나선형)로 향하도록 한다. 유리하게, 건조 가스의 유입 경로를 제어함으로써, 건조 챔버 내에서 건조 가스 및 에어로졸화된 혈액 혈장이 접촉하는 경로 길이가 증가되어, 혈장을 건조시키는 시간이 단축된다.

생리학적으로 활성적인 건조된 혈장 및 습한 건조 가스는 후속적으로 수집 챔버를 수용하는 조립체의 제3 부분으로 유입된다. 수집 챔버에서, 건조된 혈장은 습한 건조 가스로부터 분리되고 필터를 사용하여 수집된다. 예를 들어, 일 구현예에서 필터는 습한 공기 및 건조된 혈장의 유입을 수용하기 위해 일 측에서 개방되고 나머지 측에서 폐쇄된다. 습한 건조 가스는 필터를 통과하고 분무 건조기 조립체로부터 배출된다.

대안적인 구현예에서, 필터는 수집 챔버를 두 부분으로 분리하도록 구성된다. 수집 챔버의 제1 부분은 건조 챔버와 인접해 있으며, 습한 건조 가스 및 건조된 혈장의 유입을 수용한다. 건조된 혈장은 수집 챔버의 상기 제1 부분에 수집되는 반면, 습한 공기는 필터를 통과하고 분무 건조기 조립체의 제2 부분과 유체 연통하는 배출구를 통해 분무 건조기 조립체로부터 배출된다.

생리학적으로 활성적인 건조된 혈장을 수집한 후, 수집 챔버를 분무 건조기 조립체로부터 분리하고 완전히 밀봉한다. 이러한 방식으로, 밀봉된 수집 챔버는 사용할 때까지 건조된 혈장을 보관하는 데 사용된다. 수집 챔버는 혈액 혈장의 재구성 및 사용을 위해 재구성된 혈액 혈장의 제거를 위한 수집 챔버에 본 발명의 재구성 용액의 첨가를 허용하는 복수의 포트를 포함한다. 수집 챔버는 재구성을 위한 재구성 용액을 함유하는 밀봉된 용기에 추가로 부착될 수 있다.

수혈 제품 예컨대 혈액 혈장을 취급할 때, 수혈 제품은 수집, 보관 및 수혈 중에 임의의 오염 물질에 노출되지 않아야 한다. 따라서, 분무 건조기 조립체는, 일 구현예에서, 분무 건조기 장치와의 가역적 결합에 적합하다. 예를 들어, 분무 건조기 조립체는 건조 가스 유입구 부근에서 분무 건조기 장치에 연결된다. 유리하게, 이렇게 구성된 분무 건조기 조립체는 반복되거나 단일 사용을 수용한다. 예를 들어, 일 구현예에서, 분무 건조기 조립체 및 분무 건조 헤드는 각각의 분무 건조 작업 이전에 멸균되는 고압증기멸균 가능 재료(예를 들어, 항균 강, 항균 합금 등)로 형성된다. 대안적인 구현예에서, 분무 건조기 헤드 및 분무 건조 챔버는 각각의 분무 건조 작업 이전에 고압증기멸균되고 각각의 분무 건조 작업 후에 폐기되는 일회용 재료(예를 들어, 중합체)로 형성된다.

분무 건조를 위한 장치 및 방법은 당업계에 공지되어 있다. 분무 건조 방법 및 장치는 미국등록특허 제8,469,202호, 제8,533,971호, 제8,407,912호, 제8,595,950호, 제8,601,712호, 제8,533,972호, 제8,434,242호, 미국공개특허 제2016/0082044호, 제20160084572호, 제2010/0108183호, 제2011/0142885호, 제2013/0000774호, 제2013/0126101호, 제2014/0083627호, 제2014/0083628호, 및 제2014/0088768호에 추가로 기술되어 있으며, 이의 전체 교시는 모든 목적을 위해 참조로 본원에 포함된다.

하기 실시예는 본 발명의 예시적인 구현예를 예시하기 위해 제공되며, 그 범위를 정의하거나 제한하지 않는다.

실시예

실시예 1

분무 건조의 완전한 공정은 일련의 4개의 공정을 포함한다. 분산은 압력 노즐, 2개의 유체 노즐, 회전식 디스크 미립화기 또는 초음파 노즐로 이루어진다. 미립화기 유형의 선택은 공급의 특성 및 양과 건조된 생성물의 목적한 특성에 따라 달라진다. 분산에 대한 에너지가 더 높을수록, 더 작은 액적이 생성된다. 분무가 건조 공기와 접촉하는 방식은 분무 건조에서 중요한 인자이며, 이는 건조 중 액적 거동의 영향에 의해 건조된 생성물 특성에 큰 영향을 미치기 때문이다. 일 실시예에서, 물질은 장치를 통과하는 고온 공기의 유입과 동일한 방향으로 분무된다. 상기 액적이 가장 촉촉한 경우 고온 건조 가스와 접촉하게 된다. 다른 실시예에서, 물질은 고온 가스의 유입 반대 방향으로 분무된다. 고온 가스는 위쪽으로 유입되고 생성물은 점점 더 고온의 공기를 통해 수집 트레이 내로 떨어진다. 잔여 수분이 제거되고, 생성물은 매우 고온이 된다. 이 방법은 열적으로 안정적인 생성물에만 적합하다. 또 다른 구현예에서, 두 분무 방법의 이점이 조합된다. 생성물은 위쪽으로 분무되고 잔여 수분을 제거하기 위해 단시간 동안만 고온 영역에 유지된다. 이후 중력은 생성물을 냉각기 영역으로 끌어당긴다. 이 구현예는 생성물이 단시간 동안만 고온 영역에 있고, 이는 열에 의해 영향을 덜 받기 때문에 특히 유리하다.

분무 건조 방법에서는, 공기가 주로 건조 매질로서 사용되지만, 다른 가스 예컨대 질소 또한 사용될 수 있다. 가스 스트림은 전기적으로 또는 버너에서 가열되고, 공정 후에 이는 대기로 배출된다. 가열 매질이 재순환되고 재사용되는 경우, 전형적으로 불활성 가스 예컨대 질소가 공기 대신에 사용된다. 질소의 사용은 가연성 용매, 독성 생성물 또는 산소 민감성 생성물이 처리될 때 유리하다.

분무 건조 공정 동안, 분무의 액적이 건조 가스와 접촉하자마자, 액적 표면에 빠르게 형성되는 포화 증기막으로부터 증발이 일어난다. 높은 비표면적과 기존의 온도 및 수분 구배로 인해, 열 및 물질 전달은 효율적인 건조를 초래한다. 증발은 액적의 냉각으로 이어지고 따라서 작은 열부하로 이어진다. 건조 챔버 설계 및 공기 유량은 챔버에서 액적 체류 시간을 제공하며, 이는 목적한 액적 수분 제거가 완료되고 생성물 온도가 출구 건조 공기 온도로 상승할 수 있기 전에 건조기로부터 생성물이 제거되도록 한다. 따라서, 생성물에 열 손상의 가능성이 거의 없다.

건조 매질로부터 생성물을 분리하기 위해 2개의 시스템이 사용된다. 먼저, 건조 생성물의 1차 분리는 건조 챔버의 바닥에서 이루어지며, 두번째로, 분리 장비에서 건조된 생성물의 전체 회수가 이루어진다. 일 구현예에서, 사이클론을 사용하여 물질을 수집한다. 관성력을 기반으로, 입자는 하향-진행(down-going) 변형으로 사이클론 벽으로 분리되고 제거된다. 다른 시스템, 예컨대 전기 집진기, 직물(백) 필터 또는 스크러버와 같은 습식 수집기도 건조된 생성물을 수집하는 데 사용될 수 있다.

본 발명에 사용된 바와 같이, 분무 건조는 다른 건조 방법 예컨대 동결건조(냉동 건조)에 비해 이점을 제공한다. 분무 건조의 사용은 동결 건조 방법보다 더 일관되고 덜 응집되며, 더 잘 분산되는 생성물이 생성된다. 분무 건조에 의해 생성된 고도로 분산된 입자는 또한 빠른 재수화 속도를 허용하며, 이는 더 큰 가용 표면적의 결과일 수 있다. 대조적으로, 동결 건조된 생성물의 응집된 특성은 본 발명의 방법에서 건조되는 혈액 생성물에 대해 실질적으로 더 긴 재수화 시간을 야기한다. 혈액 생성물의 많은 수혈 및 기타 용도는 시간에 매우 민감할 수 있으므로, 이러한 높은 재수화 속도는 전장 또는 응급 치료 상황에서 상당한 이점이 될 수 있다. 하기 보다 상세히 설명되는 바와 같이, 본 발명의 분무 건조 고정된 혈액 혈소판은 재수화되어 재수화된 고정된 혈액 혈소판 조성물을 형성할 수 있고, 상기 조성물은 고정된 혈액 혈소판의 필적할 만한 재수화된 동결건조된 조성물보다 낮은 탁도(A.sub.500) 값을 갖는다.

실시예 2

1. 사용되는 분무-건조 장비

4M8-Trix 분무 건조기 (ProCepT, Zelzate, Belgium)

· 건조 챔버의 치수:

o 직선형 건조 챔버: 높이 60 cm, dm 18.4 cm

■ 1 단 또는 2 단의 직선형 건조 챔버

o 원추형 건조 챔버: 높이 75 cm, dm 18.4 cm

o 건조 챔버의 총 길이: + 135 cm - 195 cm

· 2-유체 노즐

o 유체는 이삼프렌(Isamprene) 외부 코팅이 있는 Tygon® MHLL 튜브(내경: 1.14 mm 또는 2.79 mm)를 가진 12 롤러 연동 펌프에 의해 분무 건조기 상단으로 들어간다.

· 병류(Co-current) 공기유입

· 사이클론에 부착된 저장소 내 분말 수집

· 물 증발 용량: 최대 3 L/h

· 공정 매개변수

· 공기유입: 0.2 m³/분 - 1 m³/분

· 내부 온도(℃): 최대 200℃

· 이중유체 노즐 팁 (mm): 0.2 - 0.4 - 0.6 - 0.8 - 1.0 - 1.2 mm

· 공기/액체 비율:

o 노즐 공기 속도 (L/분): 최대 25 L/분

o 분무 속도 (g/분): 0.1 - 15 g/분

2. 실험

60 L의 동결 혈장은 -20℃에서 보관된다.

a. 분무 건조 전 혈장 사전-처리

냉동고(-20℃)로부터 분무 건조되는 혈장을 포함하는 혈장 백을 취한 후, 혈장 백을 워터 베스를 사용하여 28-30℃로 빠르게 해동한다. 다음으로, 해동된 혈장을 풀링한다. 풀링된 혈장을 연속 교반하면서 8℃에서 보관한다. 필요한 풀링된 혈장은 3일 동안 5-8℃로 유지될 수 있다. 분무 건조 실행의 인피드(infeed)에 필요한 풀(pool)로부터의 혈장의 양은 워터 베스를 사용하여 28℃로 만들고 분무 건조 중에 거품을 일으키지 않음을 확인하면서 부드럽게 교반한다. 상기 혈장은 신선한 혈장과 필적할 만한 점도를 갖는다.

혈장 풀의 점도는 Haake Mars III 레오미터(Thermo Scientific, MA, USA)를 사용하여 결정한다. 또한 혈장 풀의 탁도를 측정한다. 혈장 풀의 점도 및 탁도는 28℃에서 측정한다.

b. 분무-건조

단계 1 분무 건조는 표 1에 나타낸 바와 같이 여러 연속 프로토콜로 나누어진다. (60 L 중) 총 30 L가 프로토콜 1 및 1.5에 사용된다.

표 1: 공정 인자 및 이들의 범위

본 실시예에서, (상기 약술된 바와 같이) 분무-건조를 위해 요구된 양의 혈장은 풀링에 의해 조립되어, 전체 프로토콜에 균질한 혈장이 사용되도록 보장하였다. 분무 건조 공정 매개변수 및 2-단계 부분 요인 접근법 (즉, 2^4-1 + 3 중심점 실험 = 11 실험)을 사용하여 변경되는 그 범위는 하기 표 2에 열거되어 있다:

표 2: 2-단계 부분 요인 설계 실험의 개요

이 프로토콜은 3회 반복 실험을 포함한다. 1회 반복은 시작 시에, 중간에 1회 및 실험 종료 시에 1회 실행되었으며, 풀링된 혈장의 시간 영향의 평가를 허용한다.

이러한 공정 매개변수 범위는 문헌 정보를 기반으로 선택되었다^1,2. 이 문헌에서, 혈장은 특정 공정 설정 하에 부치(Buchi) 분무 건조 시스템을 사용하여 분무 건조하였다. 이러한 설정은 본 연구에 사용된 4M8-Trix 분무 건조기(ProCepT, Zelzate, Belgium)에 적용가능한 공정 매개변수 범위로 변환되었다.

평가된 반응은 가공성, 수율, 잔류 수분 함량, 용해도/재현탁 및 테스트 패널이었다. 이러한 반응을 측정하기 위해, 실험 실행당 5.25 g의 분무 건조 분말을 사용하였다 (즉, 테스트 패널의 경우 3.75 g; 2회 잔여 수분 측정의 경우 1.50 g).

잠재적인 최대 분무 건조 수율 손실 25%를 고려하고 1L의 혈장이 50 g의 단백질을 함유한다는 것을 고려하면, 이는 실험 실행당 140 mL의 혈장이 분무 건조되어, 적어도 5.25 g의 분무 건조 분말(75% (140 ml(50 g/1000 ml)) = 5.25 g)이 생성됨을 의미한다. 11의 실험 실행과 더불어, 대략 1600 mL의 혈장 풀(pool)이 분무 건조 실험에 사용된다. 또한, 140 mL의 풀링된 혈장은 기준 분석을 위한 분무 건조 전에 하루에 분리된다 (즉, 기준 분석을 위해 총 대략 280 mL의 풀링된 혈장). 대략 1900 mL의 혈장 풀이 준비된다 (즉, 3개의 혈장 백(bag)). 11 실행의 분무 건조 (실행당 140 ml의 풀링된 혈장)는 2일이 소요된다 (즉, 대략 1시간/실행).

도 3은 예시적인 분무 건조 실행에 대한 세부사항 및 재구성에 대한 데이터 및 분무 건조 혈장 및 재구성된 혈장의 특성을 제공한다.

c. 참조

¹ https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3891503/

² http://patft.uspto.gov/netacgi/nph-Parser?Sect1=PTO2&Sect2=HITOFF&p=1&u=%2Fnetahtml%2FPTO%2Fsearch-adv.htm&r=4&f=G&l=50&d=PTXT&S1=%22dried+human+plasma%22&OS=%22dried+human+plasma%22&RS=%22dried+human+plasma%22

d. 분무 건조 분말 평가

각각의 분무 건조 실험의 경우, 분무 건조 분말의 가공성, 수율 및 잔류 수분 함량을 분석한다. 분무 건조 분말의 나머지는 일반적으로 당업계에서 인정되는 방법에 의한 재구성 및 특성화를 위해 제공된다. 도 3. 당업계에서 인정되는 다양한 기준에 따른 분무 건조 혈장의 특성화는 도 4a 및 도 4b에 도시된 결과를 제공하였다.

특히, 분무 건조 혈장(PptG) 페이스트는 대조군으로부터의 PptG 페이스트와 색상 및 질감에 있어서 필적할 만하다. 이 공정은 II+III 추출물 대 대조군에서 필적할 만한 IgG 회수를 입증하였다. 분무 건조 혈장은 28℃ 또는 1℃에서 현탁되었을 때 합리적인 침전물 비율을 나타내었다. 대조군 샘플 및 분무 건조 현탁액은 원심분리 전후에 유사한 피브리노겐 결과를 나타내었다. 분무 건조 현탁액은 대조군보다 현저하게 낮은 탁도 값을 나타내었다. 모든 조건은 원심분리 전후에 유사한 IgG 결과를 나타내었다.

실시예 3

본 실시예는 본 발명의 예시적인 공정, 예컨대 도 6에 제시된 공정에 대한 조건을 제공한다.

3.1 물질 및 방법

3.2 결과

본 연구로부터의 결과는 도 7a-7d에 표로 나타낸다.

예시적인 실험 실행에서, 분무 건조 혈장에 대한 분획 I 페이스트 회수는 대조군에 대한 것보다 더 높았다. 이는 저온-침전의 더 낮은 회수 때문이었다 (저온은 분획 I 침전으로 이어짐). 한 단계에서 저온 및 Fr I 침전과 분리로 (CRP에서 직접적으로 Fr1 단계로) 농축된 분무 건조 혈장 (대략 25%) - 이 테스트로부터 생성된 Ppt G는 대조군 동결 공급원 혈장과 유사하였다. 이는 공정이 저온 및 분획 I 제거를 함께 조합하는 능력을 갖는다는 것을 입증한다.

본 발명은 다양한 예시적인 구현예 및 실시예를 참조하여 예시되었다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 본 발명의 다른 구현예 및 변형은 본 발명의 진정한 사상 및 범위를 벗어나지 않고 당업자에 의해 고안될 수 있다. 첨부된 청구범위는 모든 해당 구현예 및 등가 변형을 포함하는 것으로 해석된다.

본원에 인용된 각각의 특허 및 모든 특허, 특허 출원, 및 간행물의 개시내용은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.

Claims

콘(Cohn) 분획 절차를 사용하여 인간 혈장을 분획하는 방법으로서, 개선은 분획 절차를 위한 출발 물질로서 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 사용을 포함하는, 방법.
제1항에 있어서, 저온 페이스트는 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리되고, 인자 VIII, 인자 IX 및 이들의 조합으로부터 선택되는 단백질은 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 상기 저온 페이스트로부터 분리되는 것인, 방법.
제2항에 있어서, 상기 단백질의 활성은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 단백질 활성의 80% 이상인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 IgG는 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 분리되는 것인, 방법.
제2항에 있어서, 상기 IgG의 활성은 신선한 동결 혈장으로부터 분리된 IgG 활성의 80% 이상인, 방법.
제1항에 있어서, 분획된 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 분획 IV-1로부터 분리되고 A1PI, AT-III 및 이들의 조합으로부터 선택되는 단백질은 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 분리되는 것인, 방법.
제6항에 있어서, 상기 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장으로부터 분리된 IgG는 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 분리되는 것인, 방법.
제1항에 있어서, 상기 생리학적으로 활성적인 재구성된 분무 건조 인간 혈장의 분획 V로부터 분리된 알부민은 이 단백질이 신선한 동결 혈장으로부터 분리되는 수율의 80% 이상의 수율로 분리되는 것인, 방법.
제1항에 따른 방법에 의해 제조된 저온 페이스트 및 저온 불량 혈장으로부터 선택되는 부재(member)를 포함하는 조성물.
제1항에 따른 방법에 의해 제조된 분획 I 페이스트 및 분획 1 상층액으로부터 선택되는 부재를 포함하는 조성물.
제1항에 따른 방법에 의해 제조된 분획 II+III 페이스트 및 분획 II+III 상층액으로부터 선택되는 부재를 포함하는 조성물.
제1항에 따른 방법에 의해 제조된 분획 IV-1 페이스트 및 분획 IV-1 상층액으로부터 선택되는 부재를 포함하는 조성물.
제1항에 따른 방법에 의해 제조된 분획 IV-4 페이스트 및 분획 IV-4 상층액으로부터 선택되는 부재를 포함하는 조성물.
제1항에 따른 방법에 의해 제조된 분획 V 페이스트 및 분획 V 상층액으로부터 선택되는 부재를 포함하는 조성물.
제1항에 따른 방법에 의해 생성된 응고 인자의 제제.
제1항에 따른 방법에 의해 생성된 IgG의 제제.
제1항에 따른 방법에 의해 생성된 A1PI, AT-III 및 이들의 조합으로부터 선택되는 부재의 제제.
제1항에 따른 방법에 의해 생성된 알부민의 제제.