CN116096385A - 利用喷雾干燥人血浆的血浆分馏工艺 - Google Patents

利用喷雾干燥人血浆的血浆分馏工艺 Download PDF

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Y·巴杜尔
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Abstract

本发明提供了一种分馏人血浆的方法，在一些实施方案中，使用Cohn分馏程序。改进包括使用具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆作为所述分馏程序的起始材料。

Description

利用喷雾干燥人血浆的血浆分馏工艺
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年10月1日提交的标题为“PLASMA FRACTIONATION UTILIZINGSPRAY-DRIED HUMAN PLASMA”的美国临时专利申请号63/086,335的优先权，所述申请特此以引用方式整体并入。
技术领域
本发明属于从血浆中分离治疗活性蛋白质的血浆分馏领域。
背景技术
为了便于血浆的储存和运输直至分馏，血浆通常在其从供体收集后不久通过冷冻保存。新鲜冰冻血浆(FFP)是通过一系列步骤获得的，所述步骤涉及将全血离心以分离血浆，然后在收集全血后不到8小时内冷冻收集的血浆。或者，使用血浆置换设备从供体收集血浆，其中将血细胞从血浆分离并返回供体。在美国，美国血库协会(AABB)储存FFP的标准是储存在-18℃或更低的温度下时，从收集起多至12个月。如果保持在-65℃或更低的温度下，FFP也可以从收集起储存多至7年。欧洲标准规定，如果储存在-18℃至-25℃之间的温度下，则FFP具有3个月的保质期，并且如果储存在-25℃以下，则保质期多至36个月。根据欧洲标准，解冻的血浆必须立即输血或储存在1℃至6℃下并在24小时内输血。如果储存超过24小时，则血浆必须重新贴上标签用于其他用途或丢弃。
因此，FFP在其整个储存期间必须保持在温度受控的环境中以防止某些血浆蛋白降解，增加了储存和运输的难度和成本。此外，FFP必须在使用前解冻，导致从冷藏库中取出后延迟30-80分钟才可以被使用。显然，一种不需要血浆分馏前的冷藏链的方法将代表在每年2300至2800万升血浆分馏方面的重大进步。Burnouf,Transfus.Med.Rev.(2007)；21(2):101-117。
用于消除将血浆维持在冷冻状态的需要的可能解决方案依赖于冻干血浆。干燥的血液产品在本领域中是已知的，并且用于获得干燥产品的主要技术是冻干(冷冻干燥)。例如，Brinkhous等人的美国专利号4,287,087和4,145,185公开了已用交联试剂诸如甲醛固定的干燥血小板。美国专利号5,656,498；5,651,966；5,891,393；5,902,608；以及5,993,804公开了另外的干燥血液产品。此类产品可用于治疗目的，因为它们稳定、保质期长，并且可能以粉末形式使用来为经受严重创伤的患者止血。然而，这些参考文献中并未建议分馏重构的冻干血浆。
将喷雾干燥血浆引入分馏过程有可能消除对分馏前冷链的需要。喷雾干燥是溶液在流动气流中雾化以进行快速溶剂蒸发(例如，脱水)的技术。结果是在亚秒时间尺度上形成由残留溶质组成的微粒。几十年来，喷雾干燥被用作材料、食品和制药行业中的工业过程。最近，喷雾干燥促进了蛋白质治疗剂作为用于吸入的微粒的制备(Maltesen等人,Eur JPharm Biopharm 70,828-838(2008))。
可重构的、喷雾干燥的全血浆已用于创伤环境和战场。虽然不太理想，但它在没有冷柜或冰箱的多种环境中的可储存性、它供急救人员在初始护理点使用的可用性，以及它可在几分钟内输血而不会有与解冻冷冻血浆有关的30-45分钟延迟使其存在实用性。
尽管是一种潜在的有吸引力的权宜之计，但在某些条件和参数下，喷雾干燥过程可破坏血浆蛋白。喷雾干燥使血浆蛋白在雾化过程中受到高应力，因为血浆被迫通过暴露于高速气流的狭窄孔口，这是产生用于干燥的合适大小的液滴所必需的。第二，喷雾干燥过程使血浆蛋白暴露于迫使水离开雾化液滴所需的高温。第三，由于干燥过程中CO2的快速释放，喷雾干燥过程使血浆蛋白的pH值急剧且快速升高。
根据参数，喷雾干燥过程可减少某些大的多聚体蛋白(例如，血管性假血友病因子(vWF))的量、将大的蛋白质降解成较小的蛋白质片段，和/或影响蛋白质的活性/功能性。由于血浆分馏的目标是将具有生理功能的血浆蛋白分离(或富集)成不同的馏分，本领域的普通技术人员不会在喷雾干燥或冻干领域中寻找或发现关于结合喷雾干燥的血浆作为用于血浆分馏的起始材料以制备完整的、具有生理活性的蛋白质药物制剂的建议或动机。
因此，直到本文所述的发明，才清楚可通过分馏重构的喷雾干燥血浆来回收各种馏分(例如，冷乙醇馏分)中的蛋白质，所述蛋白质的量足够有意义，使得分馏重构的具有生理活性的血浆的花费是值得的。此外，尚不清楚重构的具有生理活性的喷雾干燥血浆是否会在Cohn分馏(或其已知的改进)中起到与新鲜冷冻血浆类似的作用。发明人发现此分馏路线确实可行，并设计了经济上可行的Cohn分馏或Kistler-Nitschman分馏或从重构的喷雾干燥血浆开始的其他方法(例如Gerlough、Hink和Mulford方法)。参见，例如，Kistler等人,Vox.Sang.(1962)；7(4),第414-424页；Graham等人Subcellular Fractionation,aPractical Approach.Oxford University Press.1997。
发明内容
鉴于治疗性血浆来源的血液蛋白组合物(诸如免疫球蛋白组合物、白蛋白、蛋白酶抑制剂、凝血因子、凝血因子抑制剂和补体系统的蛋白质)的广泛使用，确保足够、经济、环境友好和可持续获取的有效且安全的血浆来源的血液蛋白组合物至关重要。
2019年，预计血浆产品市场将以6.8％的CAGR增长，从2018年的$20.5B达到2023年的$28.5B。2016年，全球年分馏产能为约7070万升。冷冻血浆从供体中心运输到分馏中心。2020年，估计血浆分馏行业所属的生物制药冷链支出由2019年的$15.7B增加为约$17.2B。“2020Biopharma Cold Chain Sourcebook forecasts a$17.2-billion logisticsmarket”-Pharmaceutical Commerce，2020年4月27日。显然，储存和运输数百万升维持在冷藏条件下的冷冻血浆的经济和环境影响仍然是血浆行业的重要考虑因素。参见例如，发布于2017年12月1日的Robert P,Hotchko M.Worldwide 2016Plasma Protein Sales-Marketing Research Bureau,Inc。
本发明通过提供源于具有生理活性的喷雾干燥血浆的血浆分馏工艺来改善这些问题和其他问题。除了提供有效和安全的组合物之外，本发明还提供了一种使用较少需要冷链组件并且从供体中心到分馏设施的运输比液体血浆更简单和更经济的血浆来源分离重要血浆蛋白的工艺。
对于本发明，非常令人惊讶地发现具有生理活性的喷雾干燥且重构的血浆是用于通过分馏具有生理活性的重构血浆来制备蛋白质治疗剂的有效起始材料。在各种实施方案中，发现通常存在于具有生理活性的喷雾干燥血浆下游的各种Cohn馏分中的蛋白质在这些馏分中的产量和纯度与存在于从冷冻血浆开始的工艺中的相应馏分中的那些相当。
本发明的示例性方法包括：提供通过在重构液体中重构具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末制备的具有生理活性的重构血浆溶液；和将具有生理活性的重构血浆递送至一个或多个血浆分馏过程(例如，冷乙醇分馏)。
具有生理活性的喷雾干燥血浆具有以下优点：在室温或标准冷藏下储存期长；由于其重量和体积减小方便储存和运输；具有通用性、耐用性和简单性，并且其可在分馏点简单快速地重构并使用。具有生理活性的喷雾干燥血浆可优选地在几乎任何温度(例如，-180℃至40℃)下储存至少约2-3年。美国公布2019/0298765。因为与冷冻血浆相比重量更轻，且温度耐受范围更广，具有生理活性的喷雾干燥血浆储存和运输相关成本显著低于液体血浆的储存和运输相关成本。
可以分批(单个单位)或连续(例如，合并的单位)工艺模式生产用于本发明的具有生理活性的喷雾干燥血浆。
本发明还提供血浆处理系统，优选cGMP兼容系统，其尤其用于通过重构的喷雾干燥的具有生理活性的血浆粉末溶液来分馏引入到分馏工艺中的血浆。起始的具有生理活性的喷雾干燥血浆可由血浆直接干燥到最终的、连接的无菌容器中，随后可将其转移到重构罐中，在重构罐中干燥的血浆快速且容易地重构为适合于分馏的状态和浓度。在分馏点，具有生理活性的喷雾干燥血浆可快速重构。
附图说明
图1是示例性Cohn分馏程序的一般流程图。
图2是用于实施本发明的示例性喷雾干燥装置的示意图。
图3是显示来源于FFP的解冻血浆的几种凝血因子的凝血因子活性的表格。本文所述类型的具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末对一种或多种或所有所列因子可表现出基本类似的凝血活性。(2019/0298765)。
图3提供了模型喷雾干燥运行中的示例性步骤，和来源于本发明组合物的重构和分析的数据。
图4是血浆样品的示例性喷雾干燥运行的参数列表。
图5A和图5B一起是来自诸如实施例2中所述的重构后分析的结果的列表。
图6是从喷雾干燥血浆起始材料开始的两种不同分馏工艺测试1和测试2的示例性流程图，其在实施例3和图7A至图7D中详述。
图7A至图7D是来自测试1、测试2和测试3(从馏分V开始)的结果的列表。
具体实施方式
I.介绍
血浆是一种全血组分，约占全血总体积的55％，其中悬浮有血细胞和全血的其他成分。血浆还含有超过700种蛋白质和其他物质的混合物，所述物质执行身体健康必要的功能，包括凝血、蛋白质储存和电解质平衡等。当从全血中提取血浆时，血浆可用于替代体液、抗体和凝血因子。因此，血浆广泛用于医学治疗。
目前，每年有数百万升血浆被分馏，分馏的工艺需要从收集中心到分馏点的血浆冷链，其中冷冻血浆储存在冷柜中，并在分馏前立即解冻。在将血浆从收集点运输到分馏点的过程中，冷链的维护是血浆分馏工艺和业务中物流复杂、资源密集、成本昂贵的环节，这可通过注重可持续性的创新加以改进。消除冷链或冷链的一个组成部分会导致技术和经济效率的提高，以及“更绿色”、更可持续的工艺。
如以下部分所述，本发明通过用重构的具有生理活性的喷雾干燥血浆开始分馏，赋予分馏工艺许多效率优点和其他优点。
现将详细参考如附图所说明的本公开示例性实施方案的实施。在整个附图和以下具体实施方式中将使用相同的参考标记来指代相同或相似的部分。本领域普通技术人员将理解以下具体实施方式仅是说明性的而不旨在以任何方式进行限制。受益于本公开的此类技术人员将容易地想到本公开的其他实施方案。
为了清楚起见，并未显示和描述本文所述实施的所有常规特征。应当理解，在任何此类实际实施的开发中，为了实现血浆产品生产商的特定目标，诸如遵守与应用和业务相关的约束，做出了许多特定于实施的决定，并且这些特定目标将因实施而异且因血浆产品生产商而异。此外，应理解，此类开发努力可能是复杂的且耗时的，但是仍将是受益于本公开的本领域一般技术人员的常规工程任务。
在不脱离示例性实施方案的精神和范围的情况下，可对本公开中阐述的示例性实施方案进行许多修改和改变，这对本领域技术人员来说是显而易见的。本文所述的具体示例性实施方案仅作为示例提供，并且本公开仅受所附权利要求的条款以及此类权利要求所享有的等同权利的全部范围限制。
II.缩写和定义
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语通常具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。通常，本文使用的命名法和有机化学、药物制剂和医学成像中的实验室程序是本领域众所周知和常用的那些。
a.缩写
如本文所用，“aPTT”是指活化部分凝血活酶时间，是本领域已知的测量“内源性”(有时也称为接触活化途径)和普通凝血途径两者的功效的性能指标。
如本文所用，“PT”是指凝血酶原时间，是外源性凝血途径领域已知的性能指标。
如本文所用，“FGN”是指纤维蛋白原(在本领域中也称为因子I)，是一种不溶性血浆糖蛋白，由肝脏合成，在凝血过程中被凝血酶转化为纤维蛋白。
如本文所用，“PC”是指蛋白质C，也称为自凝血酶原HA和凝血因子XIV。
如本文所用，“PS”是指蛋白质S，是一种在内皮细胞中合成的维生素K依赖性血浆糖蛋白。在循环中，蛋白质S以两种形式存在：游离形式和与补体蛋白C4b结合的复合形式。在人类中，蛋白质S由PROS1基因编码。
如本文所用，“因子”后接罗马数字是指一系列通过酶催化反应的复杂级联相关的血浆蛋白，所述酶催化反应涉及大蛋白质分子产生肽的顺序裂解，每个肽将无活性的酶原前体转化为活性酶，导致纤维蛋白凝块的形成。它们包括：因子I(纤维蛋白原)、因子II(凝血酶原)、因子III(组织凝血活酶)、因子IV(钙)、因子V(促凝血球蛋白原)、因子VI(不再被认为具有止血活性)、因子VII(前转变素)、因子VIII(抗血友病因子)、因子IX(血浆促凝血酶原激酶组分；血友病因子(Christmas factor))、因子X(斯图尔特因子(Stuartfactor))、因子XI(血浆促凝血酶原激酶前体)、因子XII(哈格曼因子(hageman factor))和因子XIII(纤维蛋白稳定因子)。
“FP24”是指由全血集合制备的冷冻血浆，并且必须在全血收集后24小时内分离并置于-18℃或以下。使用的抗凝剂溶液和组分体积注明于标签。平均来说，单位含有200至250mL。此血浆组分是非不稳定血浆蛋白的来源。与FFP相比，因子VIII的水平显著降低，并且因子V和其他不稳定血浆蛋白的水平是可变的。此血浆组分可作为用于缺乏血浆蛋白或具有有缺陷的血浆蛋白的患者的血浆蛋白来源。凝血因子水平可能低于FFP的凝血因子水平，尤其是不稳定的凝血因子V和VIII。
b.定义
冠词“一个(种)”在本文中用于指冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法对象。例如，“一种蛋白质”是指一种蛋白质或多于一种蛋白质。
“Cohn工艺”和“Cohn分馏”在本文中可互换使用，并且如通常理解的那样，是指通过一系列步骤分离人血浆的方法，所述步骤包括导致某些血浆蛋白富集的馏分的不同浓度的乙醇沉淀、pH变化、温度变化、离子强度变化。参见例如美国专利号2,390,074。图1提供了Cohn工艺的示例性流程图。如本文所用，术语“Cohn工艺”和“Cohn分馏”也指此开创性工艺的许多变化和改进，例如，Kistler-Nitschmann工艺(Kistler等人(1952),Vox Sang,7,414-424)。在本发明的方法中使用的其他工艺包括在美国专利号8,940,877中阐述的分离IgG的方法。
“血浆”是血液经过离心(例如)去除细胞物质诸如红细胞、白细胞和血小板后残留的液体。血浆通常呈黄色，并且为透明至不透明。捐献并经过处理以将血浆与其他某些血液组分分离且未冷冻的血液被称为“未冷冻”血浆。在8小时内冷冻至本文所述温度的血浆在本文中被称为“新鲜冷冻血浆”(“FFP”)。它含有血液溶解的成分，诸如蛋白质(6-8％；例如，血清白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原等)、葡萄糖、凝血因子(凝血蛋白)、电解质(Na+、Ca2+、Mg2+、HCO3 -、Cl-等)、激素等。全血(WB)血浆是在除抗凝剂外没有添加其他剂的情况下，从全血中分离的血浆。顾名思义，柠檬酸磷酸葡萄糖(CPD)血浆含有柠檬酸盐、磷酸钠和糖(通常是右旋糖)，它们是作为抗凝剂添加的。
“液体血浆”是指除喷雾干燥血浆之外的血浆。
“回收的血浆”是指在全血失效日期后不迟于5天分离的血浆，并将其储存在1至6℃下。在液体血浆中血浆蛋白的轮廓表征较差。液体血浆中凝血蛋白的水平和活化状态取决于与细胞接触的时间以及储存条件和持续时间，并随之变化。此组分用作血浆蛋白的来源。凝血蛋白的水平和活化状态是可变的并且随时间变化。
“解冻的血浆”是指来源于FFP或FP24，使用无菌技术(封闭系统)制备，在30至37℃下解冻，并在最初的解冻后24小时时间段后在1至6℃下保持至多4天的血浆。解冻的血浆含有稳定的凝血因子，诸如因子II和纤维蛋白原，其浓度与FFP的所述凝血因子的浓度类似，但其他因子的量有不同程度的减少。
“新鲜冰冻血浆”(“FFP”)是指由全血或单采收集制备，并在用于相关血液收集、处理和储存系统的说明书中规定的时间范围内冷冻(例如，在抽取后八小时内冷冻)在-18℃或更低温度下的血浆。平均而言，单位含有200至250mL，但单采来源的单位可能含有多达400至600mL。FFP含有血浆蛋白，包括所有凝血因子。FFP含有高水平的不稳定凝血因子V和VIII。
如本文所用，术语“喷雾干燥血浆”是指具有生理活性的血浆粉末，其在重构时包括未被破坏至基本上失去其所有生理活性的程度的蛋白质。重构形式的血浆粉末的生理活性可由本领域已知的许多参数表示，包括但不限于：凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、纤维蛋白原水平、蛋白质C水平和蛋白质S水平。重构形式的血浆粉末的生理活性可通过凝血因子水平或本领域已知的其他蛋白质活性表示，包括但不限于：因子II、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、和因素X；纤维蛋白原活性；IgG抗原结合活性；A1PI活性；抗凝血酶III活性；α-2-抗纤溶酶活性；以及α-1-抗胰蛋白酶因子活性。这些参数可使用本领域已知的技术来测量，例如使用市售仪器。示例性喷雾干燥血浆通过美国专利号8,601,712；8,595,950；8,533,972；8,533,971；8,434,242；和8,407,912中描述的方法干燥。
如本文所用，术语“具有生理活性的重构血浆”和此术语的变体是指重构的具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末，其包括在治疗方案中未因喷雾干燥和/或重构而被破坏至基本上失去它们所有的生理功效的程度的蛋白质，在所述治疗方案中，蛋白质被施用以治疗需要此类治疗的受试者的疾病。在示例性实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆保留喷雾干燥和重构前的血浆凝血因子活性的至少约30％、至少约40％或至少约50％。在一些实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆保留喷雾干燥和重构前的血浆凝血因子活性的约30％至约70％、约40％至约60％。在各种实施方案中，具有生理活性的重构血浆的IgG活性不低于喷雾干燥前血浆IgG活性的50％、不低于60％、不低于70％、不低于80％、不低于90％、不低于95％、不低于99％。
重构形式的喷雾干燥血浆粉末的一个或多个组分的生理活性由标准测试确定，并由一些本领域已知的参数表示，包括但不限于：凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(aPTT)、纤维蛋白原水平、蛋白质C水平和蛋白质S水平。重构形式的血浆粉末的生理活性可通过凝血因子水平或本领域已知的其他蛋白质活性表示，包括但不限于：因子II、因子V、因子VII、因子VIII、因子IX、和因素X；纤维蛋白原活性；IgG抗原结合活性；A1PI活性；抗凝血酶III活性；α-2-抗纤溶酶活性；以及α-1-抗胰蛋白酶因子活性。
“重构液体”是一种水性液体，具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末与所述液体接触以使粉末进入溶液/悬浮液，形成“重构血浆”(即，具有生理活性的重构血浆)。重构溶液可包含一种或多种盐、一种或多种缓冲液、一种或多种氨基酸、一种或多种悬浮剂等，以及任何有用的组合。选择重构液体中的示例性添加剂是因为它们能够稳定液体中的蛋白质并防止、减少或延迟在重构过程中对蛋白质的破坏和/或蛋白质活性的丧失。示例性重构液体包括注射用水、磷酸钠缓冲液、醋酸盐缓冲液、包含一种或多种生理上可接受的表面活性剂(例如，聚山梨酯80)的水性溶液，以及在美国公布2017/0370952；2017/0370952；和2010/0273141中描述的那些。
“疾病”是动物的一种健康状态，其中动物不能维持内稳态，并且其中如果疾病没有得到改善，则动物的健康状态继续恶化。在各种实施方案中，来自经分馏重构的具有生理活性的喷雾干燥血浆的一种或多种蛋白质用于治疗一种或多种疾病。
III.实施方案
A.组合物和装置
本公开的实施方案涉及分馏从喷雾干燥血浆重构的具有生理活性的血浆的方法，以及通过此分馏制备的蛋白质制剂。
在示例性实施方案中，本发明提供了一种或多种血浆馏分，其是从重构的具有生理活性的喷雾干燥血浆开始的血浆分馏工艺的产物。在示例性实施方案中，所述馏分是Cohn馏分，如此术语在本领域中所理解的那样。在另一个实施方案中，本发明提供了具有生理活性的血浆的溶液，所述具有生理活性的血浆使用选择以允许、有利于或促进重构血浆的后续分馏的重构液体由喷雾干燥血浆重构。在各种实施方案中，具有生理活性的重构血浆溶液被置于重构罐中，所述重构罐符合血浆分馏中使用的一种或多种额外组分。在示例性实施方案中，重构罐中重构的具有生理活性的血浆是分馏系统的组成部分。在示例性实施方案中，分馏系统是Cohn分馏系统，或此系统的已知变型。
在各种实施方案中，本发明在具有生理活性的重构干燥血浆起始材料下游提供一种、两种、三种、四种、五种或更多种独特的血浆馏分组合物。在示例性实施方案中，组合物是冷糊剂和/或冷贫血浆。在各种实施方案中，组合物是馏分I糊剂并且包含纤维蛋白原或馏分I上清液。在各种实施方案中，组合物是馏分II+III糊剂并且包含IgG或馏分II+III上清液。在一些实施方案中，组合物是馏分IV-1糊剂并且包含A1PI和/或AT-III或馏分IV-1上清液。在示例性实施方案中，组合物是馏分IV-4糊剂和/或馏分IV-4上清液。在各种实施方案中，组合物是馏分V糊剂并且包含白蛋白或馏分V上清液。在各种实施方式中，本发明的馏分主要含有FVIII和/或血管性假血友病因子。在一些实施方案中，本发明的馏分主要包括凝血酶原和/或因子VII，和/或FIX和/或FX。在一些实施方案中，本发明的馏分主要含有IgG。在示例性实施方案中，本发明的馏分主要包括A1PI和/或AT-III。在一些实施方案中，本发明的馏分主要包括白蛋白。在示例性实施方案中，一个或多个馏分是一个或多个Cohn馏分。
在示例性实施方案中，本发明提供了通过本发明的方法产生的凝血因子的制剂。在各种实施方案中，凝血因子的制剂选自因子VIII、因子IX、凝血酶原复合物、血管性假血友病因子、纤维蛋白原及其任意两种或更多种的组合。
在一些实施方案中，本发明提供通过本发明的方法制备的多价和/或超免疫免疫球蛋白(IgG)的制剂。在各种实施方案中，IgG选自抗RhO超免疫免疫球蛋白、抗乙型肝炎超免疫免疫球蛋白、抗狂犬病超免疫免疫球蛋白、抗破伤风IgG超免疫免疫球蛋白及其任意两种或更多种的组合。
在示例性实施方案中，本发明提供了通过本发明的方法制备的蛋白酶抑制剂的制剂。在各种实施方案中，蛋白酶抑制剂选自α1-抗胰蛋白酶、C1-抑制剂等及其组合。
在示例性实施方案中，本发明提供了通过本发明的方法制备的一种或多种抗凝剂的制剂。在各种实施方案中，制剂包含抗凝血酶，例如，AT-III。
在示例性实施方案中，本发明提供了通过本发明的方法制备的白蛋白的制剂。
在示例性实施方案中，根据本发明分离的馏分具有与使用本领域公认的方法以相同方式从冷冻血浆中分离的相同馏分的特性基本相同的特性。在各种实施方案中，馏分的特性不同于使用本领域公认的方法以相同方式从冷冻血浆中分离的相同馏分的特性。在优选的实施方案中，变化的特性对应于一个或多个监管相关参数，并且特性在这样的一个或多个参数的范围内变化的量被认为对所述馏分的相关监管要求无关紧要，即包含馏分或从馏分中分离的蛋白质的药物制剂不需要新的监管考虑或上市许可。
在示例性实施方案中，所述方法提供了一种水性白蛋白溶液，其含有至少5体积％或至少25体积％的白蛋白并适用于静脉内注射，所述溶液在暴露于45℃的温度一个月后保持稳定而没有白蛋白沉淀。此溶液通过分馏从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆溶液中分离出来。
在示例性实施方案中，本发明提供了从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆分离的冷糊剂中的蛋白质的制剂，所述蛋白质选自因子VIII、因子IX及其组合。所述制剂包含的蛋白质的量不少于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。在各种实施方案中，所述蛋白质的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的蛋白质的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在示例性实施方案中，本发明提供了从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆分离的IgG的制剂。所述制剂包含的IgG的量不少于存在于从新鲜冷冻血浆中分离IgG的相同制剂中的量的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。在各种实施方案中，所述IgG的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的IgG的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在示例性实施方案中，本发明提供了一种从分馏的具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的馏分IV-1中分离的选自A1PI、AT-III及其组合的蛋白质，其分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。在各种实施方案中，从馏分IV-1中的具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的蛋白质具有的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的蛋白质的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在一些实施方案中，本发明提供了一种方法，其中从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的馏分V中分离的白蛋白分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。在各种实施方案中，从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的白蛋白具有的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的白蛋白的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在各种实施方案中，本发明提供了一种药物制剂，所述药物制剂包含本发明的馏分中的一种，或进一步从此类馏分中纯化的一种或多种这样的馏分的蛋白质组分。各种药物制剂还包含药学上可接受的载体，其中配制了馏分(或进一步纯化的下游)中的蛋白质。
在各种实施方案中，本发明提供了包装在用于将药物制剂施用于需要此类施用的受试者的装置(例如，注射器、输液袋等)中的本发明的药物制剂。在各种实施方案中，装置含有用于施用于需要此类施用的受试者的活性蛋白的单位剂量制剂。在示例性实施方案中，单位剂量是用于受试者的本领域认可的单位剂量。
B.方法
本发明提供了一种新的血浆分馏方法，所述方法以具有生理活性的重构喷雾干燥血浆作为起始材料开始。本发明的示例性方法包括：提供通过在重构液体中重构具有生理活性的血浆粉末制备的具有生理活性的血浆溶液；和将如此重构的具有生理活性的血浆递送至一个或多个分馏工艺。示例性分馏工艺是Cohn分馏、Kistler Nitchman分馏及其变型。图1。
用于本发明方法的喷雾干燥血浆可在合并后或逐个单位干燥。合并多个血浆单位有一些好处。例如，在等体积的基础上，任何因子回收的不足都可通过将池中的体积添加到成品中来弥补。也有负面的特征。从池中补充体积以提高因子回收率是成本昂贵的。重要的是，必须不断地对合并的血浆进行病原体检测，因为任何从例如单个供体进入池的病原体如果未被检测到，就有风险伤害数百或数千名患者。
在各种实施方案中，喷雾干燥血浆以任何方便的形式进入工厂进行进一步加工，例如分馏。在示例性实施方案中，喷雾干燥血浆在密封容器例如密封塑料袋中进入工厂。容器中的内容物被转移到重构罐中。在示例性实施方案中，转移在洁净室中或在其他无菌条件下进行。在一些实施方案中，容器被配置成使得它可连接到重构罐上的端口并且喷雾干燥血浆直接转移到重构罐而不暴露于环境工厂大气。在此配置中，转移可以在洁净室中或此环境外进行。可通过各种粉末转移方式促进转移，包括机械(例如，螺钉、振动器)、气动和真空方式。
在示例性实施方案中，血浆在喷雾干燥之前与一种或多种抗凝剂接触。示例性抗凝剂是柠檬酸盐，例如柠檬酸钠。
通过使粉末与重构液体接触，具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末在重构罐中重构。可以任何有用的形式(即，添加顺序、温度、稀释、搅拌等)进行接触。
蛋白质可能会通过多种机制(例如，剪切、氧化、去折叠、聚集、不溶性颗粒形成)发生物理降解。许多蛋白质在溶液中结构不稳定，并且由于纯化、加工和储存过程中遇到的各种应力而容易发生构象变化。这些应力包括温度改变、暴露于pH变化和极端pH、剪切应力、表面吸附/界面应力等等。示例性重构液体对喷雾干燥血浆中的一种或多种蛋白质发挥保护作用，防止或减少重构过程中的降解、聚集或其他负面结果，从而保持生理活性。
在一个实施方案中，将至少一部分具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末添加到重构罐中，所述重构罐先前装有至少一部分重构液体。在一些实施方案中，将至少一部分重构液体添加到至少一部分已经装载到重构罐中的具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末中。在这些形式的任一种中，罐的内容物可在粉末与重构液体接触之前、期间或之后的任何时间点通过任何方便的方式搅动。在示例性实施方案中，通过搅拌来搅动重构罐的内容物。
将重构混合物的一种组分(喷雾干燥血浆或重构液体)以确定的速率和体积添加到另一种组分中以在重构中提供有用的结果。因此，可将一种组分缓慢地、快速地或整体推注地添加到留在重构罐中的另一种组分中。
在各种实施方案中，通过使罐中搅拌的重构液体与具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末接触，在罐中重构血浆。可搅拌或以其他方式搅动重构液体。可将具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末快速地、缓慢地或整体推注地添加到液体中。
在一些实施方案中，重构罐装有至少一部分待重构的具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末，并且搅拌或以其他方式搅动所述粉末。或者，不搅拌或不以其他方式搅动具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末。将重构液体添加到罐中的粉末中。可使用多种添加方式，例如，将液体直接添加到粉末中，或通过沿罐的侧壁倾倒将液体添加到具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末中。可快速地、缓慢地或以一次或多次剂量的形式添加液体。
在各种实施方案中，将至少一部分具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末和至少一部分重构液体基本上同时添加到重构罐中，所述重构罐可以是空的或可以已经含有具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末、重构液体或其组合。
如本领域技术人员所理解的，这些接触模式中的任何一种都可单独或以任何组合或顺序进行。
示例性重构液体是生理相容的液体。
重构液体是水性流体，能够重构喷雾干燥的血浆并最小化对血浆蛋白质组分的破坏(例如，变性、聚集、活性丧失)和关键血浆特性和活性的丧失和减少。
示例性重构液体是注射用水(WFI)或盐水。在各种实施方案中，调节重构液体的pH。如本领域技术人员所理解的，重构液体的pH很容易通过添加酸和碱例如HCl、碳酸氢钠等来调节。在各种实施方案中，重构液体是这些液体中的一种并且它在不调节pH的情况下使用。
在一些实施方案中，重构液体包含至少一种缓冲液。示例性缓冲液是但不限于磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、柠檬酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐和通常被认为与血浆蛋白相容的其他此类缓冲液。
在各种实施方案中，重构液体包含至少一种氨基酸。示例性氨基酸是甘氨酸。
在示例性实施方案中，重构液体包含一种或多种抗凝剂。示例性抗凝剂是柠檬酸盐，例如柠檬酸钠。
本发明的方法提供的另一个优点是能够通过以比天然血浆中存在的蛋白质浓度更高的蛋白质浓度重构血浆来减少被处理的液体量。在示例性实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至其原始体积的约100％。在一些实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至其原始体积的约75％。在一些实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至其原始体积的约50％。在一些实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至其原始体积的约25％。在一些实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至其原始体积的约25％至约50％，例如约30％至约40％。在一些实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至其原始体积的约50％至约75％，例如约60％至约70％。在各种实施方案中，喷雾干燥血浆用重构液体重构至约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约100％。
在各种实施方案中，具有生理活性的重构血浆占至少约2％、5％、7％、10％、12％、14％、16％、18％或者20％。在一些实施方案中，当以0.09克粉末比1mL重构液体的比例重构时，重构的生理血浆具有约48mg/mL，例如在45-55mg/mL范围内的蛋白质浓度。
考虑到本发明的方法所提供的不需要使用冷冻/解冻血浆的便利，重构过程可在任何可用的温度下发生。示例性重构发生在室温(例如，约22℃至约25℃)下、冷藏(约10℃至约20℃)下。在示例性实施方案中，重构过程在约2℃至约28℃的温度下进行。
在示例性实施方案中，重构后，将重构血浆的温度降低以促进冷沉淀并且分离冷沉淀物和上清液。在各种实施方案中，将重构血浆的温度降低至低于约6℃以实现冷沉淀。在示例性实施方案中，将重构血浆溶液冷却至约1℃至约6℃之间。图6。
在各种实施方案中，在冷沉淀后，血浆被分离成冷沉淀物和冷上清液。任选地将冷上清液递送至下一分馏步骤。分离可以任何可用的方式完成，诸如但不限于离心、过滤或其组合。
在需要冷却具有生理活性的重构血浆的那些实施方案中，可使用任何可用的冷却方式。在各种实施方案中，含有重构血浆的容器或管线带有夹套的冷却装置。在示例性实施方案中，冷却血浆溶液保留在容器例如夹套容器中，并且在一些实施方案中，血浆溶液在管线内流动期间被冷却(“散热器方法”)。
在各种实施方案中，如上所述冷却具有生理活性的重构血浆导致纤维蛋白原沉淀。沉淀的纤维蛋白原可从上清液中分离出来。在一些实施方案中，纤连蛋白在冷却重构血浆时沉淀并且可与上清液分离。在一些实施方案中，FVIII在冷却具有生理活性的重构血浆时沉淀，并且可与上清液分离。在各种实施方案中，血管性假血友病因子在冷却具有生理活性的重构血浆时沉淀并且可与上清液分离。
在示例性实施方案中，将具有生理活性的重构血浆在被分馏之前递送至一个或多个测试程序以确认一个或多个活性。具有生理活性的重构血浆中查询的促凝和抗凝蛋白的活性包括但不限于以下测试：i.凝血酶原时间(PT)或国际标准化比值(INR)；ii.活化部分凝血活酶时间(aPTT)；iii.热不稳定蛋白(例如，因子V、因子VIII)的活性；iv.抗凝蛋白(例如蛋白质S、蛋白质C)的活性；v.易于聚集和降解的大凝血蛋白(例如，纤维蛋白原、血管性假血友病因子)的抗原和活性；vi.凝血活化的标志物(例如，凝血酶-抗凝血酶复合物、纤维蛋白降解产物)
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆粉末在重构时表现出与解冻血浆、液体血浆、FP24或FFP基本等同的生理活性。在各种实施方案中，血浆粉末在起始天然血浆与具有生理活性的重构血浆之间表现出至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％等的血浆蛋白回收率。在一些实施方案中，具有生理活性的重构血浆具有与FFP或FP24相当或更优的蛋白质水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为约65秒或更短的aPTT、约31秒或更短的PT以及至少约100mg/dL的纤维蛋白原水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为约35秒或更短的aPTT、约15秒或更短的PT以及至少约223mg/dL的纤维蛋白原水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为在28-66秒范围内的aPTT，在14-31秒范围内的PT以及在100-300mg/dL范围内的纤维蛋白原水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为在30-35秒范围内的aPTT，在10-15秒范围内的PT以及在223-500mg/dL范围内的纤维蛋白原水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：至少约10IU/dL的因子VII水平、至少约10IU/dL的因子IX水平、至少约10IU/dL的蛋白质C水平和至少约10IU/dL的蛋白质S水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：至少约30IU/dL的因子VII水平、至少约25IU/dL的因子IX水平、至少约55IU/dL的蛋白质C水平和至少约54IU/dL的蛋白质S水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：至少约54IU/dL的因子VII水平、至少约70IU/dL的因子IX水平、至少约74IU/dL的蛋白质C水平和至少约61IU/dL的蛋白质S水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：30-110IU/dL范围内的因子VII水平、25-135IU/dL范围内的因子IX水平、55-130IU/dL范围内的蛋白质C水平和55-110IU/dL范围内的蛋白质S水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：34-172IU/dL范围内的因子VII水平、70-141IU/dL范围内的因子IX水平、74-154IU/dL范围内的蛋白质C水平和61-138IU/dL范围内的蛋白质S水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：至少约10IU/dL的因子V水平和至少约为10IU/dL的因子VIII水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：至少约30IU/dL的因子V水平和至少约为25IU/dL的因子VIII水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：至少约63IU/dL的因子V水平和至少约为47IU/dL的因子VIII水平。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆在重构时的特征为至少以下之一：63-135IU/dL范围内的因子V水平、47-195IU/dL的因子VIII水平。
参见图3。
vWF通常难以回收，已成为所有因子保存的一个指标。本发明包括回收具有生理活性的重构喷雾干燥血浆中的一定量的活性/未变性vWF，所述量与分馏前天然血浆中活性/未变性vWF的量相比至少约60％、约70％、至少约80％、约90％或更多。如本领域技术人员已知，vWF活性通常使用称为血管性假血友病因子:瑞斯托霉素辅助因子(Ristocetincofactor)[vWF:RCo]测定的测定进行测定。vWF:RCo测定测量患者血浆在存在抗生素瑞斯托菌素的情况下凝集血小板的能力。瑞斯托霉素诱导的凝集率与血浆血管性假血友病因子的浓度和功能活性有关。另一种测定，即vWF抗原测定，测量样品中存在的vWF蛋白的量。
在一些实施方案中，生理重构喷雾干燥血浆含有约3.5至约5.5g/dL的量的白蛋白。在各种实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆的白蛋白浓度为具有生理活性的重构喷雾干燥血浆的总血浆蛋白含量的约40％至约70％，例如约50％至约60％。
在各种实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆中的白蛋白保留血浆中每单位白蛋白活性的至少约80％、85％、90％或至少约95％。
在一些实施方案中，生理重构喷雾干燥血浆含有约50-300mg/dL，例如，约100至约200mg/dL的量的A1PI。
在各种实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆中的A1PI保留血浆中每单位A1PI活性的至少约80％、85％、90％或至少约95％。
在各种实施方案中，生理重构的喷雾干燥血浆含有约500至约1600mg/dL，例如，约700至约1500mg/dL的量的IgG。
在各种实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆中的IgG保留血浆中每单位IgG活性的至少约80％、85％、90％或至少约95％。
在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆具有约30微米或更小的平均粒度。在一些实施方案中，具有生理活性的喷雾干燥血浆具有约100微米或更小的最大粒度。
在一些实施方案中，具有生理活性的重构血浆包含以重量计至少30％的血浆蛋白。
在一些实施方案中，当用每0.09克粉末1mL液体重构时，具有生理活性的重构血浆具有在35mg/mL至60mg/mL范围内的蛋白质浓度。
在一些实施方案中，具有生理活性的重构血浆是无菌的。
重构具有生理活性的喷雾干燥血浆后，将所得溶液进行分馏。示例性分馏模式是Cohn分馏及其变型。
在示例性实施方案中，本发明提供了一种使用Cohn分馏程序(例如，美国专利号2,390,074中阐述的程序)分馏具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的方法，其中即时改进包括使用具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆作为分馏程序的起始材料。图1提供了Cohn分馏方法的示例性过程图。
因此，例如，将具有生理活性的喷雾干燥重构血浆递送至通过从含有多种蛋白质馏分的溶液中沉淀来分馏蛋白质的方法，所述溶液具有高于待沉淀的所需馏分的等电点的pH，所述方法包括降低溶液的pH以使溶液的pH接近待沉淀的所需馏分的等电点，使溶液的离子强度达到0.1与0.2之间，将溶液温度降低至大约0℃与溶液的凝固点之间，向蛋白质溶液中添加蛋白质的有机沉淀，添加的沉淀剂的量使得在所述温度下仅从蛋白质溶液中沉淀所需馏分，以及从溶液中分离沉淀物。
在各种实施方案中，提供了一种通过从含有多种蛋白质馏分的具有生理活性的重构人血浆溶液中沉淀来分馏蛋白质的方法，所述方法包括使溶液的pH接近待沉淀的所需蛋白质馏分的等电点，使溶液的离子强度达到0.01与0.2之间，将溶液温度降低至大约0℃与溶液的凝固点之间，向蛋白质溶液中添加蛋白质的有机沉淀剂，添加的沉淀剂的量、pH、离子强度和温度使得从蛋白质溶液中仅沉淀所需馏分，以及从溶液中分离沉淀物。
在各种实施方案中，在用于从重构的具有生理活性的人血浆溶液中分馏蛋白质的方法中，步骤包括将蛋白质溶液与蛋白质有机沉淀剂混合，将温度调节为0与-15℃之间，沉淀剂的量在10％与40％之间，pH在4.4与7之间，并且离子强度在0.05与0.2之间，以及从所得液体系统中分离出沉淀的不溶于其中的蛋白质。
在一些实施方案中，在用于从重构的具有生理活性的人血浆溶液中分馏蛋白质的方法中，步骤包括将蛋白质溶液与蛋白质有机沉淀剂混合，将温度调节并维持在高于其凝固点但不高于0℃，沉淀剂的量在10％与40％之间，pH在4.4与7之间，并且离子强度在0.05与0.2之间，以及从所得液体系统中分离出沉淀的不溶于其中的蛋白质。
在一些实施方案中，在用于从重构人血浆溶液中分馏蛋白质的方法中，步骤包括向含有蛋白质混合物的溶液添加电解质和蛋白质有机沉淀剂两者，添加的电解质的量足以使离子强度达到0.01与0.2之间，并且添加的沉淀剂的量仅引起所需蛋白质馏分的沉淀，将溶液的pH调节并维持在4.4与7之间，并且其温度在0与-15℃之间，以及由此从所得系统中沉淀蛋白质。
在示例性实施方案中，本发明提供了一种从重构人血浆溶液中纯化并结晶白蛋白的方法，所述方法包括将不纯的白蛋白溶解在含有15％至40％乙醇的乙醇溶液中，所述溶液的pH为大约5.5至6.0，离子强度为0.05至0.5，并且温度为0℃至-5℃，以及将所述溶液维持在所述温度范围内直至纯化的白蛋白结晶出来。
在示例性实施方案中，在一种在受控温度和氢离子浓度下从重构人血浆溶液中分馏具有不同溶解度的物质的方法中，除去由此形成的沉淀物并通过一种或多种因素的变化沉淀所述物质的多种连续馏分。
通过修饰通常会导致变性的试剂来防止蛋白质变性的方法，包括通过透过半透膜的扩散将试剂添加到重构人血浆的蛋白质溶液中。
在一个实施方案中，提供了一种用于从具有生理活性的重构人血浆溶液中分馏蛋白质的方法，所述方法包括使具有生理活性的重构人血浆与有机沉淀剂接触。示例性实施方案包括控制溶液中沉淀剂的量、温度、氢离子浓度和离子强度中的一种或多种，从蛋白质溶液中分离所得沉淀物，以及通过改变影响其溶解度的多个所述因素来分离连续蛋白质馏分。
在示例性实施方案中，有机沉淀剂在0℃或低于0℃的温度下添加。
在示例性实施方案中，有机沉淀剂是乙醇。在各种实施方案中，其在0℃或低于0℃的温度下添加。
在示例性实施方案中，提供了从具有生理活性的重构人血浆溶液中分馏蛋白质的方法，所述方法包括以下步骤：用有机沉淀剂并通过改变所述血浆的温度从血浆中沉淀出多种不同的蛋白质馏分，逐渐降低温度并增加血浆的乙醇浓度，随着连续蛋白质馏分的沉淀，温度和乙醇的百分比非常有关，使得用于沉淀任何给定蛋白质馏分的温度接近但高于其中存在乙醇百分比的血浆的凝固点。
示例性有机沉淀剂包括乙醇、丙酮、二恶烷及其组合。
在示例性实施方案中，从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆分离的冷糊剂中的选自因子VIII、因子IX及其组合的蛋白质分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。在各种实施方案中，所述蛋白质的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的蛋白质的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在示例性实施方案中，从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的IgG分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。在各种实施方案中，所述IgG的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的IgG的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在示例性实施方案中，从分馏的具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的馏分IV-1中分离的选自A1PI、AT-III及其组合的蛋白质分离的产量不低于从新鲜冷冻血浆中分离的此蛋白质产量的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。在各种实施方案中，从馏分IV-1中的具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的蛋白质具有的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的蛋白质的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
在一些实施方案中，本发明提供了一种方法，其中从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的馏分V中分离的白蛋白分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。在各种实施方案中，从具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的白蛋白具有的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的白蛋白的活性的60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％。
本文提供的方法允许制备具有非常高水平纯度的A1PI组合物。例如，在一个实施方案中，本文提供的A1PI组合物中总蛋白质的至少约95％是A1PI。在其他实施方案中，此组合物中至少约96％的蛋白质是A1PI，或组合物的总蛋白质的至少约97％、98％、99％、99.5％或更多是A1PI。
类似地，本文提供的方法允许制备含有极低水平的污染剂的A1PI组合物。例如，在某些实施方案中，提供了含有小于约10mg/L污染物的A1PI组合物。在其他实施方案中，A1PI组合物将含有小于约5mg/L的污染物，优选地小于约3mg/L的污染物，最优选地小于约2mg/L的污染物。
在各种实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆中的A1PI保留血浆中每单位A1PI活性的至少约80％、85％、90％或至少约95％。
在一个实施方案中，本发明提供了包含的蛋白质浓度在约150g/L至约250g/L之间的水性IgG组合物。在某些实施方案中，IgG组合物的蛋白质浓度在约175g/L与约225g/L之间，或在约200g/L与约225g/L之间，或在这些范围内的任何合适的浓度，例如为或为约150g/L、155g/L、160g/L、165g/L、170g/L、175g/L、180g/L、185g/L、190g/L、195g/L、200g/L、205g/L、210g/L、215g/L、220g/L、225g/L、230g/L、235g/L、240g/L、245g/L、250g/L或更高。在优选的实施方案中，水性IgG组合物包含的蛋白质浓度为或为约200g/L。在特别优选的实施方案中，水性IgG组合物包含的蛋白质浓度为或为约204g/L。
本文提供的方法允许制备具有非常高水平纯度的IgG组合物。例如，在一个实施方案中，本文提供的IgG组合物中总蛋白的至少约95％将是IgG。在其他实施方案中，至少约96％的蛋白质是IgG，或组合物中总蛋白的至少约97％、98％、99％、99.5％或更多将是IgG。
类似地，本文提供的方法允许制备含有极低水平的污染剂的IgG组合物。例如，在某些实施方案中，提供了含有小于约100mg/L IgA的IgG组合物。在其他实施方案中，IgG组合物将含有小于约50mg/L的IgA，优选地小于约35mg/L的IgA，最优选地小于约20mg/L的IgA。
在一些实施方案中，本发明提供通过本发明的方法制备的多价和/或超免疫免疫球蛋白(IgG)的制剂。在各种实施方案中，IgG选自抗RhO超免疫免疫球蛋白、抗乙型肝炎超免疫免疫球蛋白、抗狂犬病超免疫免疫球蛋白、抗破伤风IgG超免疫免疫球蛋白及其任意两种或更多种的组合。
在各种实施方案中，具有生理活性的重构喷雾干燥血浆中的IgG保留血浆中每单位IgG活性的至少约80％、85％、90％或至少约95％。
喷雾干燥器和喷雾干燥工艺
在喷雾干燥器系统中通过喷雾干燥将重构并随后分馏的具有生理活性的干燥血浆进行干燥。通常，提供喷雾干燥器系统(喷雾干燥器装置)用于喷雾干燥液体样品诸如血浆。在一个实施方案中，用于喷雾干燥血浆以通过本公开的溶液重构的喷雾干燥器系统包括喷雾干燥器装置和喷雾干燥器组件。在一方面，喷雾干燥器装置适于接收来自各个来源的雾化气体、干燥气体和血浆液体的流并且与喷雾干燥器组件耦接。喷雾干燥器装置可进一步将接收到的雾化气体、干燥气体和血浆传输至喷雾干燥器组件。血浆的喷雾干燥在喷雾干燥器装置的控制下在喷雾干燥器组件中进行。可使用任何合适的喷雾干燥系统来干燥用于本发明的血浆。为举例说明，下面描述了合适的喷雾干燥器。
用于本发明的示例性喷雾干燥设备提供于图2。示例性喷雾干燥工艺参数提供于图4。
在某些实施方案中，喷雾干燥器组件包括无菌、气密密封的外壳体和附接外壳体的框架。框架限定组件的第一、第二和第三部分，由各自的过渡区隔开。干燥气体入口设置在组件的第一部分内，邻近外壳体的第一端。
喷雾干燥头在组件的第一部分与第二部分之间的过渡区内进一步附接到框架。此位置也位于组件内干燥气体的初始流动路径内。在喷雾干燥过程中，喷雾干燥头接收雾化气体和血浆的流，并用雾化气体对血浆进行雾化以形成雾化血浆。干燥气体另外通过喷雾干燥头以与组件的第二部分内的雾化血浆混合以进行干燥。在组件的用作干燥室的第二部分中，雾化血浆与干燥气体之间的接触导致水分从雾化血浆转移到干燥气体，产生干燥血浆和潮湿的干燥气体。
在另选的实施方案中，雾化气体可省略并且喷雾干燥器组件头可包括接收并雾化血浆流的雾化器。雾化器的实例可包括但不限于超声雾化换能器、超声加湿换能器和压电超声雾化器。有利地，此种构造消除了对雾化气体的需要，简化了喷雾干燥器装置和组件的设计并降低了喷雾干燥器系统的成本。
一个实施方案中的喷雾干燥头适于引导干燥室内的干燥气体流。例如，喷雾干燥头包括由翅片隔开的开口，所述开口接收来自干燥气体入口的干燥气体流。翅片的方向允许将干燥气体引导到选定的流动路径(例如，螺旋形)中。有利地，通过控制干燥气体的流动路径，增加了干燥气体与雾化血浆在干燥室内接触的路径长度，从而减少了干燥血浆的时间。
具有生理活性的干燥血浆和潮湿的干燥气体随后流入组件的第三部分，此部分装有收集室。在收集室中，将干燥血浆与潮湿的干燥气体分离，并使用过滤器收集。例如，一个实施方案中的过滤器在一侧打开以接收潮湿空气流和干燥血浆流并且在其余侧关闭。潮湿的干燥气体通过过滤器并从喷雾干燥器组件中排出。
在另选的实施方案中，过滤器适于将收集室分成两部分。收集室的第一部分与干燥室相接并接收潮湿干燥气体流和干燥血浆流。干燥血浆被收集在收集室的第一部分中，而潮湿的空气通过过滤器并经由与喷雾干燥器组件的第二部分流体连通的排气口从喷雾干燥器组件中排出。
在收集具有生理活性的干燥血浆后，将收集室与喷雾干燥器组件分离并气密密封。以这种方式，密封的收集室用于储存干燥血浆直至使用。收集室包括多个端口，允许将本发明的重构溶液添加到收集室中以重构血浆并允许取出重构血浆以供使用。收集室可进一步连接至含有用于重构的重构溶液的密封容器。
处理输血产品诸如血浆时，输血产品在收集、储存和输血过程中不得暴露于任何污染物。因此，在一个实施方案中，喷雾干燥器组件适于与喷雾干燥器装置可逆地耦接。例如，喷雾干燥器组件在干燥气体入口附近耦接到喷雾干燥器装置。有利地，如此配置的喷雾干燥器组件适应重复或单次使用。例如，在一个实施方案中，喷雾干燥器组件和喷雾干燥头由可高压灭菌的材料(例如，抗菌钢、抗菌合金等)形成，所述材料在每次喷雾干燥操作之前进行灭菌。在另选的实施方案中，喷雾干燥器头和喷雾干燥室由一次性材料(例如，聚合物)形成，所述材料在每次喷雾干燥操作之前进行高压灭菌并且在每次喷雾干燥操作之后被丢弃。
用于喷雾干燥的设备和方法是本领域已知的。喷雾干燥方法和设备进一步描述于美国专利号8,469,202、8,533,971、8,407,912、8,595,950、8,601,712、8,533,972、8,434,242、美国专利公布号2016/0082044、20160084572、2010/0108183、2011/0142885、2013/0000774、2013/0126101、2014/0083627、2014/0083628和2014/0088768，所述专利的全部教导内容出于所有目的通过引用并入本文。
提供以下实施例来说明本发明的示例性实施方案，并且不限定或限制其范围。
实施例
实施例1
喷雾干燥的完整工艺包括一系列四个过程。分散是通过压力喷嘴、二流体喷嘴、转盘雾化器或超声喷嘴实现的。雾化器类型的选择取决于进料的性质和量以及干燥产品的所需特性。用于分散的能量越高，生成的液滴越小。喷雾接触干燥空气的方式是喷雾干燥的一个重要因素，因为这会通过影响干燥过程中的液滴行为对干燥产品的特性产生重大影响。在一个实施例中，材料以与通过设备的热空气流相同的方向喷射。液滴在最潮湿时与热干燥气体接触。在另一个实施例中，材料以与热气流相反的方向喷射。热气体向上流动，并且产品通过越来越热的空气落入收集盘。残留的水分被消除，并且产品变得非常热。此方法仅适用于热稳定产品。在又一个实施方案中，结合了两种喷射方法的优点。产品向上喷射，仅在热区停留较短时间，以消除残留水分。然后重力将产品拉入冷却区。此实施方案特别有利，因为产品仅在热区停留较短时间，并且不太可能受热的影响。
在喷雾干燥方法中，主要使用空气作为干燥介质，但也可使用其他气体诸如氮气。气流被电加热或在燃烧器中加热，并在此过程之后被排放到大气中。如果加热介质被回收和再利用，通常使用惰性气体诸如氮气代替空气。当处理易燃溶剂、有毒产品或氧气敏感产品时，使用氮气是有利的。
在喷雾干燥过程中，一旦喷雾液滴与干燥气体接触，在液滴表面迅速形成的饱和蒸汽膜就会发生蒸发。由于高比表面积和现有的温度和湿度梯度，热量和质量传递导致高效干燥。蒸发导致液滴冷却，从而导致小的热负荷。干燥室设计和空气流速提供了液滴在室内的停留时间，使得在产品温度可上升到出口干燥空气温度之前完成所需的液滴水分去除并将产品从干燥器中取出。因此，产品被热破坏的可能性很小。
两个系统用于将产品与干燥介质分离。首先，干燥产品的初级分离发生在干燥室的底部，其次，干燥产品在分离设备中完全回收。在一个实施方案中，使用旋风分离器来收集材料。基于惯性力，颗粒作为下行物被分离到旋风分离器壁上并被移除。其他系统，诸如静电除尘器、织物(袋)过滤器或湿式集尘器如洗涤器，也可用于收集干燥产品。
如在本发明中使用的，喷雾干燥提供优于其他干燥方法诸如冻干(冷冻干燥)的优点。与冷冻干燥方法相比，使用喷雾干燥产生的产品更稳定、结块更少，并且分散性更好。喷雾干燥产生的高度分散的颗粒还允许快速复水速率，这可能是更大可用表面积的结果。相比之下，冷冻干燥产品的结块性质导致在本发明的方法中干燥的血液产品的复水时间明显更长。由于许多输血和血液产品的其他用途可能对时间高度敏感，因此这种较高复水速率在战场或紧急治疗情况下可能是一个显著优势。如下文更详细地解释，本发明的喷雾干燥的固定血小板可复水以形成复水的固定血小板组合物，并且所述组合物的浊度(A.sub.500)值低于相当的固定血小板的复水冻干组合物的浊度值。
实施例2
1.使用的喷雾干燥设备
4M8-Trix喷雾干燥器(ProCepT,Zelzate,Belgium)
●干燥室尺寸：
○直通式干燥室：高60cm，dm 18.4cm
■1层或2层直通式干燥室
○锥形干燥室：高75cm，dm 18.4cm
○干燥室总长度：±135cm–195cm
●二流体喷嘴
○流体通过带有
Figure BDA0004105862110000321
MHLL管(内径：1.14mm或2.79mm)的有12个辊轴的蠕动泵进入喷雾干燥器顶部，所述管带有Isamprene外涂层
●并流气流
●在连接到旋风分离器的储液器中收集粉末
●水蒸发量：最高3L/h
●工艺参数
●气流：0.2m3/min–1m3/min
●进入温度(℃)：最高200℃
●二流体喷嘴端(mm)：0.2–0.4–0.6–0.8–1.0–1.2mm
●空气/液体比率：
○喷嘴空气流量(L/min)：最高25L/min
○喷速(g/min)：0.1-15g/min
2.实验
60L冷冻血浆储存在-20℃。
a.喷雾干燥前的等离子预处理
将含有待喷雾干燥的血浆的血浆袋从冷柜(-20℃)中取出后，使用水浴将血浆袋快速解冻至28-30℃。接下来，合并解冻的血浆。合并的血浆在连续搅拌下储存在8℃下。所需的合并血浆可在5-8℃下保留3天。使用水浴将喷雾干燥运行进料所需的池中的血浆量调至28℃，并在喷雾干燥过程中轻轻搅拌，确保没有泡沫。所述血浆具有与新鲜血浆相当的粘度。
使用Haake Mars III流变仪(Thermo Scientific,MA,USA)测定血浆池的粘度。还测量了血浆池的浊度。在28℃下测量血浆池的粘度和浊度。
b.喷雾干燥
第1阶段喷雾干燥分为几个连续的方案，如表1所示。总共30L(60L中的)用于方案1和1.5。
表1：工艺因素及其范围
Figure BDA0004105862110000341
在此实施例中，喷雾干燥所需量的血浆通过合并(如上所述)来汇集，确保在整个方案中使用均匀的血浆。喷雾干燥工艺参数及其使用2级部分析因方法(即，24-1+3个中心点实验＝11个实验)变化的范围列于下表2：
表2：概述2级部分析因设计实验
Figure BDA0004105862110000342
Figure BDA0004105862110000351
此方案包括3次平行测定实验。在实验开始时运行一次平行测定，在实验中间运行一次平行测定，并且在实验结束时运行一次平行测定，使得可以评估合并血浆的时间效应。
这些工艺参数范围是根据文献信息1,2选择的。在此文献中，血浆在特定工艺设置下使用Buchi喷雾干燥系统进行喷雾干燥。这些设置被转化为适用于此研究中使用的4M8-Trix喷雾干燥器(ProCepT,Zelzate,Belgium)的工艺参数范围。
评估的响应是：可加工性、产量、残留含水量、溶解度/重悬和测试板。为测量这些响应，每次实验运行使用5.25g喷雾干燥粉末(即，3.75g用于测试板；1.50g用于2次残留水分测量)。
考虑到潜在的最大喷雾干燥产量损失25％并考虑到1L血浆含有50g蛋白质，这意味着每次实验运行140mL血浆被喷雾干燥，产生至少5.25g喷雾干燥粉末(75％(140ml(50g/1000ml))＝5.25g)。经过11次实验运行，大约1600mL的血浆池用于喷雾干燥实验。此外，每天在喷雾干燥前分离140mL合并的血浆用于参考分析(即，总共大约280mL合并的血浆用于参考分析)。制备大约1900mL(即，3个血浆袋)的血浆池。11次运行(每次运行140ml合并的血浆)的喷雾干燥需要2天(即，大约1小时/运行)。
图3提供了示例性喷雾干燥运行的细节以及关于喷雾干燥血浆和重构血浆的重构和特性的数据。
c.参考文献
1 https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3891503/
2 http://patft.uspto.gov/netacgi/nph-Parser？Sect1＝PTO2&Sect2＝HITOFF& p＝1&u＝％2Fnetahtml％2FPTO％2Fsearch-adv.htm&r＝4&f＝G&l＝50&d＝PTXT&S1＝％ 22dried+human+plasma％22&OS＝％22dried+human+plasma％22&RS＝％22dried+human+ plasma％22
d.喷雾干燥粉末评价
对于每个喷雾干燥实验，分析喷雾干燥粉末的可加工性、产量和残留含水量。喷雾干燥粉末的剩余部分通过本领域通常认可的方法进行重构和表征。图3。根据各种本领域认可的标准对喷雾干燥的血浆进行的表征提供了示于图4A和图4B的结果。
值得注意的是，喷雾干燥血浆(PptG)糊剂在颜色和质地上与来自对照的PptG糊剂相当。此过程展示了II+III提取物与对照相当的IgG回收率。喷雾干燥的血浆在28℃或1℃悬浮时示出合理的沉淀物率。对照样品和喷雾干燥悬浮液在离心前和离心后都示出类似的纤维蛋白原结果。喷雾干燥悬浮液示出比对照显著更低的浊度值。所有条件在离心前和离心后都示出类似的IgG结果。
实施例3
此实施例为本发明的示例性过程(诸如图6中阐述的过程)提供了条件。
3.1材料和方法
Figure BDA0004105862110000361
      
Figure BDA0004105862110000371
  
Figure BDA0004105862110000381
Figure BDA0004105862110000391
      
Figure BDA0004105862110000401
3.2结果
此研究的结果列于图7A至图7D。
在示例性实验运行中，喷雾干燥血浆的馏分I糊剂回收率高于对照的回收率。这是由于冷沉淀的回收率较低(冷沉淀被转移到馏分I沉淀)。浓缩的喷雾干燥血浆(大约25％)，在一个步骤中的冷沉淀与Fr I沉淀和分离(CRP直接到Fr1的步骤)–此测试产生的Ppt G与对照冷冻源血浆相当。这证明此过程具有将冷沉淀和馏分I去除结合在一起的能力。
已经参考各种示例性实施方案和示实施例说明了本发明。正如对本领域技术人员显而易见的，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，本发明的其他实施方案和变型可由本领域其他技术人员设计。所附权利要求应被理解为包括所有此类实施方案和等效变型。
本文引用的每个专利、专利申请和公布通过引用整体并入本文。

Claims (18)

1.一种使用Cohn分馏程序分馏人血浆的方法，其中改进包括使用具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆作为所述分馏程序的起始材料。
2.根据权利要求1所述的方法，其中从所述具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离出冷糊剂，并且选自因子VIII、因子IX及其组合的蛋白质从所述冷糊剂中分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述蛋白质的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的蛋白质的活性的80％。
4.根据权利要求1所述的方法，其中从所述具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的IgG分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述IgG的活性不低于从新鲜冷冻血浆中分离的IgG的活性的80％。
6.根据权利要求1所述的方法，其中从分馏的具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的馏分IV-1中分离的选自A1PI、AT-III及其组合的蛋白质分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。
7.根据权利要求6所述的方法，其中从所述具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆中分离的IgG分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。
8.根据权利要求1所述的方法，其中从所述具有生理活性的重构喷雾干燥人血浆的馏分V中分离的白蛋白分离的产量不低于此蛋白质从新鲜冷冻血浆中分离的产量的80％。
9.一种组合物，所述组合物包含通过根据权利要求1所述的方法制备的选自冷糊剂和冷贫血浆的成员。
10.一种组合物，所述组合物包含选自根据权利要求1所述的方法制备的选自馏分I糊剂和馏分1上清液的成员。
11.一种组合物，所述组合物包含选自根据权利要求1所述的方法制备的选自馏分II+III糊剂和馏分II+III上清液的成员。
12.一种组合物，所述组合物包含选自根据权利要求1所述的方法制备的选自馏分IV-1糊剂和馏分IV-1上清液的成员。
13.一种组合物，所述组合物包含选自根据权利要求1所述的方法制备的选自馏分IV-4糊剂和馏分IV-4上清液的成员。
14.一种组合物，所述组合物包含选自根据权利要求1所述的方法制备的选自馏分V糊剂和馏分V上清液的成员。
15.一种通过根据权利要求1所述的方法产生的凝血因子的制剂。
16.一种通过根据权利要求1所述的方法产生的IgG的制剂。
17.一种通过根据权利要求1所述的方法产生的选自A1PI、AT-III及其组合的成员的制剂。
18.一种通过根据权利要求1所述的方法产生的白蛋白的制剂。
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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US11841189B1 (en) * 2022-09-15 2023-12-12 Velico Medical, Inc. Disposable for a spray drying system
US11975274B2 (en) 2022-09-15 2024-05-07 Velico Medical, Inc. Blood plasma product
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Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8407912B2 (en) * 2010-09-16 2013-04-02 Velico Medical, Inc. Spray dried human plasma
AU2010202125B1 (en) * 2010-05-26 2010-09-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US20140083627A1 (en) * 2012-09-27 2014-03-27 Velico Medical, Inc. Automated spray drier

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