JP2016155798A - 微細二酸化シリコンを用いた処理によるセリンプロテアーゼ除去法 - Google Patents

微細二酸化シリコンを用いた処理によるセリンプロテアーゼ除去法 Download PDF

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Abstract

【課題】血漿由来タンパク質組成物のセリンプロテアーゼ及び／又はセリンプロテアーゼチモーゲンの含量を低減する方法の提供。【解決手段】組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させ，組成物からＳｉＯ２を分離し結合したセリンプロテアーゼを除去することによるセリンプロテアーゼ及び／又はセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低下した血漿由来タンパク質組成物の製造法，水性及び凍結乾燥組成物。更にセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低下した血漿由来タンパク質組成物の投与を含む、疾患の治療、管理、及び／又は予防のための方法。【選択図】図３

Description

関連出願の相互参照
本願は、２０１０年５月２６日に出願されてオーストラリア特許出願第２０１０２０２１２５号として刊行されたオーストラリア特許出願第２０１０２０２１２５号、および２０１０年５月２７日に出願された米国特許出願第１２／７８９，３６５号、２０１０年７月２３日に出願された米国特許出願第１２／８４２，９４４号に優先権を主張し、これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる。
発明の背景
血漿由来血液製剤は、様々な血液障害だけではなく、他に起点する疾患の治療にも使用されている。例えば、ヒト血漿由来の免疫グロブリン（ＩｇＧ）製剤は、１９５２年に免疫不全治療のために最初に使用された。以来、ＩｇＧ調製物は、医学的状態の少なくとも３つの主要分類：（１）Ｘ結合無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症（一次免疫不全）などの免疫不全、および低抗体レベルを特徴とする後天性免疫不全状態（二次免疫不全）；（２）炎症および自己免疫疾患；ならびに（３）急性感染において広い使用が見出されている。
同様に、Ｈ因子は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）および膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮ）を含むいくつかのヒト疾患状態のための潜在的治療薬として示唆されている。具体的には、Ｈ因子の補体制御タンパク質（ＣＣＰ）モジュール７中の単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）と加齢黄斑変性（ＡＭＤ）間の因果関係が特性化されている。
試験にて、血漿インター−α−インヒビタータンパク質（ＩαＩｐ）レベル低減と重度敗血症患者の死亡率間に相関関係が示されている（Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． （２００３） Ｓｅｐ １５；１８８（６）：９１９−２６（非特許文献１）およびＯｐａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （２００７） Ｆｅｂ；３５（２）：３８７−９２（非特許文献２））。さらに、いくつかの試験では、ＩαＩｐ投与は敗血症および敗血症性ショック関連の致死性を低減することが示されている（Ｊｏｕｒｄａｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （１９９７） Ｄｅｃ；１５６（６）：１８２５−３３（非特許文献３）； Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （２００２） Ｍａｒ；３０（３）：６１７−２２（非特許文献４）； Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． （２００３） Ｓｅｐ １５；１８８（６）：９１９−２６（非特許文献１）；およびＷｕ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （２００４） Ａｕｇ；３２（８）：１７４７−５２（非特許文献５）；これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。
血漿由来生物製剤治療薬の製造および製剤化時には、様々な安全性警告を考慮しなければならない。これらとしては、ドナー血漿の使用に起因した血液媒介病原菌（例えば、ウイルスおよび細菌の病原菌）、抗補体活性、ならびに他の望ましくない汚染物質の除去および／もしくは不活性化方法が挙げられる。試験にて、高レベルのアミド分解活性投与は、望ましくない血栓塞栓性事象を引き起こし得ることが示唆されている（Ｗｏｌｂｅｒｇ ＡＳ ｅｔ ａｌ．， Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＸＩ ｉｓ ａ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔ ｉｎ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ． Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０００；６５：３０−３４（非特許文献６）；およびＡｌｖｉｎｇ ＢＭ ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｎｔａｃｔ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒｓ： ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｏａｇｕｌａｎｔ ａｎｄ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｊ Ｌａｂ Ｃｌｉｎ Ｍｅｄ １９８０； ９６：３３４−３４６（非特許文献７）；これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。この懸念の強調として、最近の血栓塞栓性事象報告の増加後に、米国でＯｃｔａｇａｍ（登録商標）（Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ）が自主的に撤退され、欧州委員会によりＯｃｔａｇａｍ（登録商標）およびＯｃｔａｇａｍ１０％の市販権が停止された。増大した塞栓事象は、セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲン不純物（第ＸＩ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩ因子および第ＸＩＩａ因子など）により引き起こされた生物製剤中の高レベルのアミド分解活性により引き起こされた可能性が高い（ＦＤＡ通告：自主的な市場撤退−２０１０年９月２３日Ｏｃｔａｇａｍ［免疫グロブリン静脈内（ヒト）］５％液体調製；Ｏｃｔａｇａｍ５０ｍｇ／ｍＬ、潅流液−Ｏｃｔａｐｈａｒｍフランス−Ｍｉｓｅ ｅｎ ｑｕａｒａｎｔａｉｎｅ ｄｅ ｔｏｕｓ ｌｅｓ ｌｏｔｓ、ＡＦＳＳＡＰＳにより２０１０年９月９日にオンライン公開；ならびにＯｃｔａｇａｍの市販権停止に関する質疑応答（ヒト正常免疫グロブリン５％および１０％）、欧州医薬品庁により２０１０年９月２３日にオンライン公開）。
特定の目的のためのセリンプロテアーゼ（一般的に凝固因子として知られている）は、凝固カスケードの接触活性化と組織因子経路の両方に不可欠な構成要素である。凝固経路の刺激時、不活性酵素前駆体であるセリンプロテアーゼチモーゲンは、次のプロテアーゼチモーゲン活性化を触媒する活性化プロテアーゼとなり、活性化カスケードが引き起こされる。この凝固カスケードは、フィブリノーゲン（第Ｉ因子）をそれぞれフィブリン（第Ｉａ因子）および架橋フィブリンに変換してフィブリン塊を形成するように機能するトロンビン（第ＩＩａ因子）および第ＸＩＩＩａ因子の活性化を最大化する。
接触活性化経路（固有凝固経路としても知られている）は、プレカリクレインおよび第ＸＩＩ因子にそれぞれ由来するカリクレインおよび第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）の活性化から開始する。活性化セリンプロテアーゼＦＸＩＩａは第ＸＩ因子（ＦＸＩ）を切断し、後続の第Ｘａ因子（ＦＸａ）活性化に関与する活性セリンプロテアーゼである第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）にチモーゲンを変換する。
血漿由来タンパク質組成物中のセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンの存在に関する懸念が増大したため、当技術分野においてこれらの汚染物質、特にＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａレベルの低減のための方法が依然として必要とされている。本発明は、かかる方法ならびにセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンレベルの低下した血漿由来タンパク質組成物を提供することにより、これらおよび他の必要性を満たす。
Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ． （２００３） Ｓｅｐ １５；１８８（６）：９１９−２６ Ｏｐａｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （２００７） Ｆｅｂ；３５（２）：３８７−９２ Ｊｏｕｒｄａｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （１９９７） Ｄｅｃ；１５６（６）：１８２５−３３ Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （２００２） Ｍａｒ；３０（３）：６１７−２２ Ｗｕ ｅｔ ａｌ．， Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ． （２００４） Ａｕｇ；３２（８）：１７４７−５２ Ｗｏｌｂｅｒｇ ＡＳ ｅｔ ａｌ．， Ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＸＩ ｉｓ ａ ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔ ｉｎ ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ． Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ ２０００；６５：３０−３４ Ａｌｖｉｎｇ ＢＭ ｅｔ ａｌ．， Ｃｏｎｔａｃｔ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｆａｃｔｏｒｓ： ｃｏｎｔａｍｉｎａｎｔｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｃｏａｇｕｌａｎｔ ａｎｄ ｖａｓｏａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ． Ｊ Ｌａｂ Ｃｌｉｎ Ｍｅｄ １９８０； ９６：３３４−３４６
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲン、具体的には、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａは、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を用いた処理により血漿由来タンパク質組成物から除去できるという驚くべき所見に基づく。このようにして、本発明は、血漿由来タンパク質組成物のセリンプロテアーゼ活性、セリンプロテアーゼ含量、およびセリンプロテアーゼチモーゲン含量を低減する方法を提供する。また、セリンプロテアーゼ活性、セリンプロテアーゼ含量、およびセリンプロテアーゼチモーゲン含量が低下した治療的血漿由来タンパク質組成物、ならびに同一投与による疾患の治療または予防のための方法も提供する。
第１態様では、本発明は、血漿由来標的タンパク質組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、もしくは第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化組成物を形成する工程をさらに含む。１つの実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程である。具体的な実施形態では、タンパク質沈降工程は、アルコール分別工程である。別の実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である。
上記方法の他の実施形態では、本方法は、富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む。１つの実施形態では、第２標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程である。具体的な実施形態では、タンパク質沈降工程は、アルコール分別工程である。別の実施形態では、第２標的タンパク質富化工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である。さらに別の実施形態では、第２標的タンパク質富化工程は、クロマトグラフィー富化工程である。
上記方法の他の実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、第３標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む。１つの実施形態では、第３標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程である。具体的な実施形態では、タンパク質沈降工程は、アルコール分別工程である。別の実施形態では、第３標的タンパク質富化工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である。さらに別の実施形態では、第３標的タンパク質富化工程は、クロマトグラフィー富化工程である。
上記方法のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）血漿由来標的タンパク質への結合に適した条件下で、血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来標的タンパク質をクロマトグラフィー樹脂から溶出する副工程を含む。具体的な実施形態では、不純物は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。別の具体的な実施形態では、不純物は、副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合するが、副工程（ｉｉ）においてクロマトグラフィー樹脂から溶出されない。
上記方法の他のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）少なくとも１種の不純物への結合に適した条件下で、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来タンパク質組成物から樹脂を分離する副工程を含み、該血漿由来標的タンパク質は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。
上記クロマトグラフィー富化工程を含む方法のある実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、疎水性相互作用樹脂、混合様式樹脂、ヒドロキシアパタイト樹脂、リガンド親和性樹脂、免疫親和性樹脂、およびサイズ排除樹脂からなる群から選択される。
上記クロマトグラフィー富化工程を含む方法の他のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程はサイズ排除クロマトグラフィーを使用してサイズおよび／または形により標的タンパク質から少なくとも１種の不純物を分離することを含む。
上記方法のある実施形態では、血漿由来標的タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される。具体的な実施形態では、補体系のタンパク質は、Ｈ因子（ＦＨ）、Ｄ因子、補体タンパク質Ｃ３、およびＣ４結合タンパク質からなる群から選択される。
上記方法のさらに別の実施形態では、血漿由来標的タンパク質組成物は、製造中間体である。
第２態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；（ｃ）Ｈ因子が結合し続ける溶液条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに（ｄ）Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法のある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約６．０超のｐＨを含む。別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約６．５超のｐＨを含む。別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約７．０超のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、少なくとも約７．５のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、溶液条件は、１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、１０．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、９．０以下のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む。上記方法の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む。上記方法の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。上記方法のさらに別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子が結合し続ける溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
第３態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子および少なくとも１種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２に結合し続ける条件下で、Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法のある実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約６．０超のｐＨを含む。別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約６．５超のｐＨを含む。別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約７．０超のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、少なくとも約７．５のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、溶液条件は、１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、１０．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、９．０以下のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。上記方法の別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約２ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。上記方法のさらに別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件は、約２ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
第４態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子に結合するが、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法のある実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約６．０超のｐＨを含む。別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約６．５超のｐＨを含む。別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約７．０超のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、少なくとも約７．５のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、溶液条件は、１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、１０．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、９．０以下のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む。上記方法の別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む。上記方法の別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。上記方法のさらに別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合してセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは結合しない溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
第５態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種に結合するが、Ｈ因子には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程を含む。
上記方法のある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約６．０超のｐＨを含む。別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約６．５超のｐＨを含む。別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約７．０超のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、溶液条件は、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合し、Ｈ因子が少なくとも約７．５のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、溶液条件は、１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、１０．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、９．０以下のｐＨを含む。
上記方法のある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。上記方法の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約２ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。上記方法のさらに別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合してＨ因子は結合しない溶液条件は、約２ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
第６態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ活性の低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩおよび少なくとも１種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、ＩαＩと少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；（ｃ）ＩαＩが結合し続ける条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼを溶出する工程；ならびに（ｄ）ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
第７態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ活性の低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩおよび少なくとも１種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、ＩαＩと少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）セリンプロテアーゼがＳｉＯ２に結合し続ける条件下で、ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
第８態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ活性の低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩには結合するが、少なくとも１種のセリンプロテアーゼには結合しないために適した条件下で、ＩαＩと少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
第９態様では、本発明は、セリンプロテアーゼ活性の低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼに結合するが、インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）には結合しないために適した条件下で、インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）と少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程を含む。
上記態様のある実施形態では、組成物は、少なくとも１ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる。上記態様の別の実施形態では、組成物は、少なくとも２ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる。上記態様の別の実施形態では、組成物は、少なくとも２．５ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる。
上記態様のある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩ因子である。上記態様の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子である。上記態様の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩＩ因子である。上記態様のさらに別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩＩａ因子である。
第１０態様では、本発明は、上記の任意の１つの態様によるセリンプロテアーゼ活性の低減のための方法を含む方法により調製された血漿由来タンパク質組成物を提供する。１つの実施形態では、組成物は、対象への投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内、筋肉内、または皮下投与用に製剤化される。１つの実施形態では、組成物は、水性である。別の実施形態では、組成物は、凍結乾燥されている。
第１１態様では、本発明は、血漿タンパク質の異常活性に関連した疾患の治療のための方法を、それを必要としている対象に提供し、本方法は、上に概説した態様により、血漿由来タンパク質組成物を投与する工程を含む。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される。
第１２態様では、本発明は、（ａ）Ｈ因子を含む懸濁血漿沈降画分を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）低ｐＨおよび低伝導度を含む洗浄緩衝液でＳｉＯ２を洗浄する工程、ならびに（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む溶出緩衝液を用いてＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含むＨ因子組成物の調製のための方法を提供する。具体的な実施形態では、Ｈ因子を含む血漿沈降画分は、コーン（Ｃｏｈｎ）画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン（Ｋｉｓｔｌｅｒ／Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ）沈降物Ａ、またはキストラー／ニッチェマン沈降物Ｂである。ある実施形態では、本方法は、（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させて除去する工程、（ｅ）富化組成物からＨ因子を沈降させて回収する工程、（ｆ）陰イオン交換クロマトグラフィーによりＨ因子をさらに富化させる工程、（ｇ）ヘパリン親和性クロマトグラフィーによりＨ因子をさらに富化させる工程、（ｈ）特定の目的のためのウイルス不活性化工程、ならびに（ｉ）限外濾過／ダイアフィルトレーションにより、富化Ｈ因子組成物を濃縮する工程から選択される追加工程をさらに１つまたは複数含む。
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼを除去する工程を含み、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種は、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、もしくは第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化組成物を形成する工程をさらに含む。１つの実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程である。具体的な実施形態では、タンパク質沈降工程は、アルコール分別工程である。別の具体的な実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む。１つの実施形態では、第２標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程である。具体的な実施形態では、タンパク質沈降工程は、アルコール分別工程である。１つの実施形態では、第２標的タンパク質富化工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である。１つの実施形態では、第２標的タンパク質富化工程は、クロマトグラフィー富化工程である。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、第３標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む。１つの実施形態では、第３標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程である。具体的な実施形態では、タンパク質沈降工程は、アルコール分別工程である。１つの実施形態では、第３標的タンパク質富化工程は、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である。１つの実施形態では、第３標的タンパク質富化工程は、クロマトグラフィー富化工程である。
上記方法の具体的な実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）血漿由来標的タンパク質への結合に適した条件下で、血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来標的タンパク質をクロマトグラフィー樹脂から溶出する副工程を含む。１つの具体的な実施形態では、副工程（ｉ）において少なくとも１種の不純物はクロマトグラフィー樹脂に結合しない。別の具体的な実施形態では、副工程（ｉ）において少なくとも１種の不純物は、クロマトグラフィー樹脂に結合するが、副工程（ｉｉ）においてクロマトグラフィー樹脂から溶出されない。
上記方法の具体的な実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）少なくとも１種の不純物への結合に適した条件下で、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来タンパク質組成物から樹脂を分離する副工程を含み、該血漿由来標的タンパク質は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。
上記方法の具体的な実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、疎水性相互作用樹脂、混合様式樹脂、ヒドロキシアパタイト樹脂、リガンド親和性樹脂、免疫親和性樹脂、およびサイズ排除樹脂からなる群から選択される。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、陰イオン交換樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、陽イオン交換樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、疎水性相互作用樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、混合様式樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、ヒドロキシアパタイト樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、リガンド親和性樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、免疫親和性樹脂である。１つの実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、サイズ排除クロマトグラフィーを使用してサイズおよび／または形により標的タンパク質から少なくとも１種の不純物を分離する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、血漿由来標的タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）である。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質は、アルブミンである。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質は、α−１−抗トリプシンである。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質は、ブチリルコリンエステラーゼである。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質は、補体系のタンパク質である。１つの実施形態では、補体系のタンパク質は、Ｈ因子（ＦＨ）、Ｄ因子、補体タンパク質Ｃ３、およびＣ４結合タンパク質からなる群から選択される。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質は、インター−α−トリプシンインヒビターである。
上記方法の具体的な実施形態では、血漿由来標的タンパク質組成物は、製造中間体である。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；（ｃ）Ｈ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに（ｄ）Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とがＳｉＯ２に結合する溶液条件は、７．０未満のｐＨおよび１１ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とがＳｉＯ２に結合する溶液条件は、４．５〜６．５のｐＨおよび６ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とがＳｉＯ２に結合する溶液条件は、４．５〜６．５のｐＨおよび０．５ｍＳ／ｃｍ〜５ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出がＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件は、７．０未満のｐＨおよび１１ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件は、４．５〜６．５のｐＨおよび６ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび０．５ｍＳ／ｃｍ〜５ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出される溶液条件は、少なくとも６ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出される溶液条件は、少なくとも１１ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出される溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨを含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出される溶液条件は、７．０〜８．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ〜７ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子および少なくとも１種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ２に結合し続ける条件下で、Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とがＳｉＯ２に結合する溶液条件は、７．０未満のｐＨおよび１１ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件は、４．５〜６．５のｐＨおよび６ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した溶液条件は、５．０〜６．０のｐＨおよび０．５ｍＳ／ｃｍ〜５．０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分が結合し続ける溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨおよび少なくとも１１ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分が結合し続ける溶液条件は、７．０〜８．０のｐＨおよび２ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、溶液条件の伝導度は、４ｍＳ／ｃｍ〜７ｍＳ／ｃｍである。
上記方法の具体的な実施形態では、溶液条件の伝導度は、５ｍＳ／ｃｍ〜６ｍＳ／ｃｍである。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子に結合するがセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種の実質的な画分には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分はＳｉＯ２に結合しない溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨおよび１４ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、溶液条件の伝導度は、９ｍＳ／ｃｍ〜１４ｍＳ／ｃｍである。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種に結合するがＨ因子の実質的な画分には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合し、Ｈ因子の実質的な画分はＳｉＯ２に結合しない溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨおよび少なくとも１１ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合し、Ｈ因子の実質的な画分はＳｉＯ２に結合しない溶液条件は、７．０〜８．０のｐＨおよび２ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、溶液条件の伝導度は、４ｍＳ／ｃｍ〜７ｍＳ／ｃｍである。
上記方法の具体的な実施形態では、溶液条件の伝導度は、５ｍＳ／ｃｍ〜６ｍＳ／ｃｍである。
１つの実施形態では、本発明は、Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程；ならびに（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子を含む出発組成物は、懸濁コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、またはその等価画分である。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子を含む出発組成物は、懸濁キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、またはその等価画分である。
上記方法の具体的な実施形態では、Ｈ因子を含む出発組成物は、懸濁キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、回収したＨ因子溶液から少なくとも１種の不純物を沈降させ、Ｈ因子は沈降しない工程をさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。
上記方法の具体的な実施形態では、ＰＥＧ沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度３％〜７％で用いた沈降を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、回収したＨ因子溶液からＨ因子を沈降させる工程をさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。
上記方法の具体的な実施形態では、ＰＥＧ沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度１０％〜１５％で用いた沈降を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、１２±０．５％である。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、クロマトグラフィーによりＨ因子を富化する工程をさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は陰イオン交換クロマトグラフィーを含む。
上記方法の具体的な実施形態では、クロマトグラフィー富化工程はヘパリン親和性クロマトグラフィーを含む。
上記方法の具体的な実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は陰イオン交換クロマトグラフィー、続いてヘパリン親和性クロマトグラフィーを含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、特定の目的のためのウイルス除去または不活性化工程の少なくとも１つをさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、ナノ濾過工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、限外濾過／ダイアフィルトレーションを含むＨ因子組成物の濃縮工程をさらに含む。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩおよび少なくとも１種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、ＩαＩと少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；（ｃ）ＩαＩの実質的な画分が結合し続ける条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに（ｄ）ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩおよび少なくとも１種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、ＩαＩと少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ２に結合し続ける条件下で、ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩに結合するがセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種の実質的な画分には結合しないために適した条件下で、ＩαＩと少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンに結合するが、インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）には結合しないために適した条件下で、インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）と少なくとも１種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程を含む。
１つの実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）第１沈降工程中、約６％〜約１０％アルコールでｐＨ約７．０〜約７．５においてで脱寒冷（ｃｒｙｏ−ｐｏｏｒ）プラスミド画分を沈降させて、第１沈降物および第１上清を得る工程；（ｂ）第２沈降工程中、約２０％〜約２５％アルコールでｐＨ約６．７〜約７．３において第１上清からＩｇＧを沈降させて、第２沈降物を形成する工程；（ｃ）第２沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程；（ｄ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンへの結合に適した溶液条件下で、懸濁液を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｅ）懸濁液からＳｉＯ２を分離して精製懸濁液を形成する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法はさらに、（ｆ）第３沈降工程中、約２２％〜約２８％アルコールでｐＨ約６．７〜約７．３において、工程（ｅ）で形成された精製懸濁液からＩｇＧを沈降させて、第３沈降物を形成する工程；（ｇ）第３沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程；および（ｈ）工程（ｅ）において形成された懸濁液から可溶性画分を分離して、それにより、富化ＩｇＧ組成物を形成する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、陰イオン交換クロマトグラフィー富化工程をさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、陽イオン交換クロマトグラフィー富化工程をさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、特定の目的のためのウイルス不活性化または除去工程の少なくとも１つをさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、溶媒／清浄液（Ｓ／Ｄ）ウイルス不活性化工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、ナノ濾過工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、本方法は、低ｐＨのインキュベーション工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｂ）は工程（ａ）において形成される第１上清のエタノール濃度を約−７℃〜約−９℃の温度で約２５％（ｖ／ｖ）に調節する工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、温度は、約−９℃である。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｃ）はリン酸および酢酸を含む緩衝液を用いた工程（ｂ）の沈降物の再懸濁化を含み、緩衝液のｐＨは１０００Ｌ緩衝液当たり３００ｍＬ〜７００ｍＬの氷酢酸で調節される。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｄ）は、工程（ｂ）において形成される沈降物１ｇ当たり約０．０２ｇ〜工程（ｂ）において形成される沈降物１ｇ当たり約０．０６ｇの最終濃度となるようなＳｉＯ２の添加を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンへの結合に適した溶液条件が４．５〜６．０のｐＨおよび０．１ｍＳ／ｃｍ〜３ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、ｐＨは４．９〜５．３である。
上記方法の具体的な実施形態では、伝導度は、０．５ｍＳ／ｃｍ〜２ｍＳ／ｃｍである。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｅ）は、（ｉ）リン酸および酢酸を含む緩衝液のフィルタープレスデッドボリュームの少なくとも３容積でフィルタープレスを洗浄する副工程であって、緩衝液のｐＨを緩衝液１０００Ｌ当たり５０ｍＬ〜２００ｍＬの氷酢酸で調節し、それにより、洗浄溶液を形成する副工程；ならびに（ｉｉ）工程（ｆ）の濾液を工程（ｇ）の洗浄溶液と結合させることにより、溶液を形成する副工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、さらに、（ｉｉｉ）清浄液で溶液を処理する副工程を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｈ）が富化ＩｇＧ組成物の溶媒および清浄液（Ｓ／Ｄ）処理をさらに含む。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｈ）において得られた前記富化ＩｇＧ組成物は、工程（ａ）に使用される脱寒冷血漿画分に見られるＩｇＧ含量の少なくとも８５％を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、工程（ｈ）において得られた前記富化ＩｇＧ組成物は、工程（ａ）に使用される脱寒冷血漿画分に見られるＩｇＧ含量の少なくとも９０％を含む。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも９０％低下している。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも９５％低下している。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも９８％低下している。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも９９％低下している。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩａである。
上記方法の具体的な実施形態では、組成物は、少なくとも１ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる。
上記方法の具体的な実施形態では、組成物は、少なくとも２ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる。
上記方法の具体的な実施形態では、組成物は、少なくとも２．５ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩ因子である。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩＩ因子である。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子である。
上記方法の具体的な実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩＩａ因子である。
１つの実施形態では、本発明は、前記請求項のいずれか一項によるセリンプロテアーゼ活性の低減のための方法を含む方法により調製された血漿由来タンパク質組成物を提供する。
上記組成物の具体的な実施形態では、組成物は、対象への投与用に製剤化される。
上記組成物の具体的な実施形態では、組成物は、静脈内、筋肉内、または皮下投与用に製剤化される。
上記組成物の具体的な実施形態では、組成物は、水性である。
上記組成物の具体的な実施形態では、組成物は、凍結乾燥されている。
１つの実施形態では、本発明は、血漿タンパク質の異常活性に関連した疾患の治療のための方法を、それを必要としている対象に提供し、本方法は、請求項１２４〜請求項１２８のいずれか一項による血漿由来タンパク質組成物を投与する工程を含む。１つの実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される。
[本発明1001]
血漿由来標的タンパク質組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法であって、
（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種への結合に適した条件下で、該組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；ならびに
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離して、結合したセリンプロテアーゼを除去する工程
を含み、
該セリンプロテアーゼもしくは該セリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種が、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、もしくは第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である、方法。
[本発明1002]
前記組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程の前に、第1標的タンパク質富化工程を実施して、第1富化組成物を形成する工程をさらに含む、本発明1001の方法。
[本発明1003]
前記第1標的タンパク質富化工程が、タンパク質沈降工程である、本発明1002の方法。
[本発明1004]
前記タンパク質沈降工程が、アルコール分別工程である、本発明1003の方法。
[本発明1005]
前記第1標的タンパク質富化工程が、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である、本発明1002の方法。
[本発明1006]
前記富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程の前に、第2標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む、本発明1002〜本発明1005のいずれかの方法。
[本発明1007]
前記第2標的タンパク質富化工程が、タンパク質沈降工程である、本発明1006の方法。
[本発明1008]
前記タンパク質沈降工程が、アルコール分別工程である、本発明1007の方法。
[本発明1009]
前記第2標的タンパク質富化工程が、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である、本発明1006の方法。
[本発明1010]
前記第2標的タンパク質富化工程が、クロマトグラフィー富化工程である、本発明1006の方法。
[本発明1011]
前記組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程の後に、第3標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む、本発明1001〜本発明1010のいずれかの方法。
[本発明1012]
前記第3標的タンパク質富化工程が、タンパク質沈降工程である、本発明1011の方法。
[本発明1013]
前記タンパク質沈降工程が、アルコール分別工程である、本発明1012の方法。
[本発明1014]
前記第3標的タンパク質富化工程が、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である、本発明1012の方法。
[本発明1015]
前記第3標的タンパク質富化工程が、クロマトグラフィー富化工程である、本発明1012の方法。
[本発明1016]
前記クロマトグラフィー富化工程が、
（ｉ）血漿由来標的タンパク質への結合に適した条件下で、血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および
（ｉｉ）血漿由来標的タンパク質をクロマトグラフィー樹脂から溶出する副工程
を含む、本発明1010または本発明1015の方法。
[本発明1017]
副工程（ｉ）において少なくとも1種の不純物がクロマトグラフィー樹脂に結合しない、本発明1016の方法。
[本発明1018]
副工程（ｉ）において少なくとも1種の不純物が、クロマトグラフィー樹脂に結合するが、副工程（ｉｉ）においてクロマトグラフィー樹脂から溶出されない、本発明1016の方法。
[本発明1019]
前記クロマトグラフィー富化工程が、
（ｉ）少なくとも1種の不純物への結合に適した条件下で、第1富化血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および
（ｉｉ）血漿由来タンパク質組成物から該樹脂を分離する副工程
を含み、
該血漿由来標的タンパク質が副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない、本発明1010または本発明1015の方法。
[本発明1020]
前記クロマトグラフィー樹脂が、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、疎水性相互作用樹脂、混合様式樹脂、ヒドロキシアパタイト樹脂、リガンド親和性樹脂、免疫親和性樹脂、およびサイズ排除樹脂からなる群から選択される、本発明1015〜本発明1019のいずれかの方法。
[本発明1021]
前記クロマトグラフィー樹脂が、陰イオン交換樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1022]
前記クロマトグラフィー樹脂が、陽イオン交換樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1023]
前記クロマトグラフィー樹脂が、疎水性相互作用樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1024]
前記クロマトグラフィー樹脂が、混合様式樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1025]
前記クロマトグラフィー樹脂が、ヒドロキシアパタイト樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1026]
前記クロマトグラフィー樹脂が、リガンド親和性樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1027]
前記クロマトグラフィー樹脂が、免疫親和性樹脂である、本発明1020の方法。
[本発明1028]
前記クロマトグラフィー富化工程が、サイズ排除クロマトグラフィーを使用してサイズおよび／または形により標的タンパク質から少なくとも1種の不純物を分離する工程を含む、本発明1010または本発明1015の方法。
[本発明1029]
前記血漿由来標的タンパク質が、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−1−抗トリプシン（Ａ1ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される、本発明1001〜本発明1028のいずれかの方法。
[本発明1030]
前記血漿由来タンパク質が、免疫グロブリン（Ｉｇ）である、本発明1029の方法。
[本発明1031]
前記血漿由来タンパク質が、アルブミンである、本発明1029の方法。
[本発明1032]
前記血漿由来タンパク質が、α−1−抗トリプシンである、本発明1029の方法。
[本発明1033]
前記血漿由来タンパク質が、ブチリルコリンエステラーゼである、本発明1029の方法。
[本発明1034]
前記血漿由来タンパク質が、補体系のタンパク質である、本発明1029の方法。
[本発明1035]
前記補体系のタンパク質が、Ｈ因子（ＦＨ）、Ｄ因子、補体タンパク質Ｃ3、およびＣ4結合タンパク質からなる群から選択される、本発明1034の方法。
[本発明1036]
前記血漿由来タンパク質が、インター−α−トリプシンインヒビターである、本発明1029の方法。
[本発明1037]
前記血漿由来標的タンパク質組成物が、製造中間体である、本発明1001〜本発明1036のいずれかの方法。
[本発明1038]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法であって、
（ａ）Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程；
（ｃ）Ｈ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件下で、ＳｉＯ2からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに
（ｄ）Ｈ因子をＳｉＯ2から溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1039]
Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とがＳｉＯ2に結合する溶液条件が、7．0未満のｐＨおよび11ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む、本発明1038の方法。
[本発明1040]
Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とがＳｉＯ2に結合する溶液条件が、4．5〜6．5のｐＨおよび6ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む、本発明1038または本発明1039の方法。
[本発明1041]
Ｈ因子と少なくとも1つセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼのチモーゲンとがＳｉＯ2に結合する溶液条件が、4．5〜6．5のｐＨおよび0．5ｍＳ／ｃｍ〜5ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1040の方法。
[本発明1042]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ2から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件が、7．0未満のｐＨおよび11ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む、本発明1038〜本発明1041のいずれかの方法。
[本発明1043]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ2から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件が、4．5〜6．5のｐＨおよび6ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む、本発明1042の方法。
[本発明1044]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ2から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件が、5．0〜6．5のｐＨおよび0．5ｍＳ／ｃｍ〜5ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1042の方法。
[本発明1045]
Ｈ因子がＳｉＯ2から溶出される溶液条件が、少なくとも6ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む、本発明1038〜本発明1044のいずれかの方法。
[本発明1046]
Ｈ因子がＳｉＯ2から溶出される溶液条件が、少なくとも11ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む、本発明1038〜本発明1045のいずれかの方法。
[本発明1047]
Ｈ因子がＳｉＯ2から溶出される溶液条件が、5．0〜7．0のｐＨを含む、本発明1038〜本発明1046のいずれかの方法。
[本発明1048]
Ｈ因子がＳｉＯ2から溶出される溶液条件が、7．0〜8．0のｐＨおよび4ｍＳ／ｃｍ〜7ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む、本発明1038〜本発明1044のいずれかの方法。
[本発明1049]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製するための方法であって、
（ａ）Ｈ因子および少なくとも1種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程；ならびに
（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ2に結合し続ける条件下で、Ｈ因子をＳｉＯ2から溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1050]
Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とがＳｉＯ2に結合する溶液条件が、7．0未満のｐＨおよび11ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む、本発明1049の方法。
[本発明1051]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ2から溶出されかつＨ因子の実質的な画分が結合し続ける溶液条件が、4．5〜6．5のｐＨおよび6ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む、本発明1049または本発明1050の方法。
[本発明1052]
Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種への結合に適した溶液条件が、5．0〜6．0のｐＨおよび0．5ｍＳ／ｃｍ〜5．0ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1049の方法。
[本発明1053]
Ｈ因子がＳｉＯ2から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分が結合し続ける溶液条件が、5．0〜7．0のｐＨおよび少なくとも11ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1049〜本発明1052のいずれかの方法。
[本発明1054]
Ｈ因子がＳｉＯ2から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分が結合し続ける溶液条件が、7．0〜8．0のｐＨおよび2ｍＳ／ｃｍ〜10ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1049〜本発明1052のいずれかの方法。
[本発明1055]
前記溶液条件の伝導度が、4ｍＳ／ｃｍ〜7ｍＳ／ｃｍである、本発明1054の方法。
[本発明1056]
前記溶液条件の伝導度が、5ｍＳ／ｃｍ〜6ｍＳ／ｃｍである、本発明1054の方法。
[本発明1057]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製のための方法であって、
（ａ）Ｈ因子に結合するが、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種の実質的な画分には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程；ならびに
（ｃ）Ｈ因子をＳｉＯ2から溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1058]
Ｈ因子がＳｉＯ2に結合しかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ2に結合しない溶液条件が、5．0〜7．0のｐＨおよび14ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度を含む、本発明1057の方法。
[本発明1059]
前記溶液条件の伝導度が、9ｍＳ／ｃｍ〜14ｍＳ／ｃｍである、本発明1058の方法。
[本発明1060]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したＨ因子組成物の調製するための方法であって、
（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種に結合するが、Ｈ因子の実質的な画分には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；ならびに
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程
を含む、方法。
[本発明1061]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ2に結合しかつＨ因子の実質的な画分がＳｉＯ2に結合しない溶液条件が、5．0〜7．0のｐＨおよび少なくとも11ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1060の方法。
[本発明1062]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ2に結合しかつＨ因子の実質的な画分がＳｉＯ2に結合しない溶液条件が、7．0〜8．0のｐＨおよび2ｍＳ／ｃｍ〜10ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1060の方法。
[本発明1063]
前記溶液条件の伝導度が、4ｍＳ／ｃｍ〜7ｍＳ／ｃｍである、本発明1062の方法。
[本発明1064]
前記溶液条件の伝導度が、5ｍＳ／ｃｍ〜6ｍＳ／ｃｍである、本発明1062の方法。
[本発明1065]
Ｈ因子組成物の調製のための方法であって、
（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）5．0〜7．0のｐＨおよび4ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ2を洗浄する工程；ならびに
（ｃ）7．0〜8．0のｐＨおよび10ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ2から溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1066]
ＳｉＯ2を洗浄するために使用される溶液が5．5〜6．5のｐＨを含む、本発明1065の方法。
[本発明1067]
ＳｉＯ2を洗浄するために使用される溶液が6．0±0．2のｐＨを含む、本発明1065の方法。
[本発明1068]
Ｈ因子を溶出するために使用される溶液が、少なくとも20ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1065〜本発明1067のいずれかの方法。
[本発明1069]
Ｈ因子を溶出するために使用される溶液が25ｍＳ／ｃｍ〜40ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1068の方法。
[本発明1070]
Ｈ因子を含む前記出発組成物が、懸濁コーン（Ｃｏｈｎ）画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、またはその等価画分である、本発明1038〜本発明1069のいずれかの方法。
[本発明1071]
Ｈ因子を含む前記出発組成物が、懸濁キストラー／ニッチェマン（Ｋｉｓｔｌｅｒ／Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ）沈降物Ａ、またはその等価画分である、本発明1038〜本発明1069のいずれかの方法。
[本発明1072]
Ｈ因子を含む前記出発組成物が、懸濁キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である、本発明1038〜本発明1069のいずれかの方法。
[本発明1073]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法であって、
（ａ）ＩαＩおよび少なくとも1種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、ＩαＩと少なくとも1種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程；
（ｃ）ＩαＩの実質的な画分が結合し続ける条件下で、ＳｉＯ2からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに
（ｄ）ＳｉＯ2からＩαＩを溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1074]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法であって、
（ａ）ＩαＩおよび少なくとも1種のセリンプロテアーゼへの結合に適した条件下で、ＩαＩと少なくとも1種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程；ならびに
（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ2に結合し続ける条件下で、ＳｉＯ2からＩαＩを溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1075]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法であって、
（ａ）ＩαＩに結合するが、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも1種の実質的な画分には結合しないために適した条件下で、ＩαＩと少なくとも1種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程；ならびに
（ｃ）ＳｉＯ2からＩαＩを溶出する工程
を含む、方法。
[本発明1076]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下したインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）組成物の調製のための方法であって、
（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンに結合するが、インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）には結合しないために適した条件下で、インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）と少なくとも1種のセリンプロテアーゼとを含む溶液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；ならびに
（ｂ）該組成物からＳｉＯ2を分離する工程
を含む、方法。
[本発明1077]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）組成物の調製のための方法であって、
（ａ）第1沈降工程中、約6％〜約10％アルコールでｐＨ約7．0〜約7．5において脱寒冷（ｃｒｙｏ−ｐｏｏｒ）プラスミド画分を沈降させて、第1沈降物および第1上清を得る工程；
（ｂ）第2沈降工程中、約20％〜約25％アルコールでｐＨ約6．7〜約7．3において第1上清からＩｇＧを沈降させて、第2沈降物を形成する工程；
（ｃ）第2沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程；
（ｄ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンへの結合に適した溶液条件下で、懸濁液を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ2）と接触させる工程；ならびに
（ｅ）懸濁液からＳｉＯ2を分離して精製懸濁液を形成する工程
を含む、方法。
[本発明1078]
（ｆ）第3沈降工程中、約22％〜約28％アルコールでｐＨ約6．7〜約7．3において、工程（ｅ）で形成された精製懸濁液からＩｇＧを沈降させて、第3沈降物を形成する工程；
（ｇ）第3沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程；および
（ｈ）工程（ｅ）において形成された懸濁液から可溶性画分を分離して、それにより、富化ＩｇＧ組成物を形成する工程
をさらに含む、本発明1077の方法。
[本発明1079]
陰イオン交換クロマトグラフィー富化工程をさらに含む、本発明1077または本発明1078の方法。
[本発明1080]
陽イオン交換クロマトグラフィー富化工程をさらに含む、本発明1077〜本発明1079のいずれかの方法。
[本発明1081]
特定の目的のためのウイルス不活性化または除去工程の少なくとも1つをさらに含む、本発明1077〜本発明1080のいずれかの方法。
[本発明1082]
溶媒／清浄液（Ｓ／Ｄ）ウイルス不活性化工程を含む、本発明1081の方法。
[本発明1083]
ナノ濾過工程を含む、本発明1081または本発明1082の方法。
[本発明1084]
低ｐＨのインキュベーション工程を含む、本発明1081〜本発明1083のいずれかの方法。
[本発明1085]
工程（ｂ）が、工程（ａ）において形成される第1上清のエタノール濃度を約−7℃〜約−9℃の温度で約25％（ｖ／ｖ）に調節する工程を含む、本発明1078〜本発明1084のいずれかの方法。
[本発明1086]
前記温度が、約−9℃である、本発明1085の方法。
[本発明1087]
工程（ｃ）が、リン酸および酢酸を含む緩衝液を用いた工程（ｂ）の沈降物の再懸濁化を含み、該緩衝液のｐＨが1000Ｌ緩衝液当たり300ｍＬ〜700ｍＬの氷酢酸で調節される、本発明1078〜本発明1086のいずれかの方法。
[本発明1088]
工程（ｄ）が、工程（ｂ）において形成される沈降物1ｇ当たり約0．02ｇ〜工程（ｂ）において形成される沈降物1ｇ当たり約0．06ｇの最終濃度となるようなＳｉＯ2の添加を含む、本発明1078〜本発明1087のいずれかの方法。
[本発明1089]
セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンへの結合に適した溶液条件が、4．5〜6．0のｐＨおよび0．1ｍＳ／ｃｍ〜3ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む、本発明1078〜本発明1088のいずれかの方法。
[本発明1090]
前記ｐＨが、4．9〜5．3である、本発明1089の方法。
[本発明1091]
前記伝導度が、0．5ｍＳ／ｃｍ〜2ｍＳ／ｃｍである、本発明1089または本発明1090の方法。
[本発明1092]
工程（ｅ）が、
（ｉ）リン酸および酢酸を含む緩衝液のフィルタープレスのデッドボリュームの少なくとも3容積で、フィルタープレスを洗浄する副工程であって、該緩衝液のｐＨを、緩衝液1000Ｌ当たり50ｍＬ〜200ｍＬの氷酢酸で調節し、それにより、洗浄溶液を形成する副工程；ならびに
（ｉｉ）工程（ｆ）の濾液を工程（ｇ）の洗浄溶液と混合させることにより、溶液を形成する副工程
を含む、本発明1078〜本発明1091のいずれかの方法。
[本発明1093]
（ｉｉｉ）清浄液で溶液を処理する副工程
をさらに含む、本発明1092の方法。
[本発明1094]
工程（ｈ）が、富化ＩｇＧ組成物の溶媒および清浄液（Ｓ／Ｄ）処理をさらに含む、本発明1078〜本発明1093のいずれかの方法。
[本発明1095]
工程（ｈ）において得られた前記富化ＩｇＧ組成物が、工程（ａ）に使用される脱寒冷血漿画分に見られるＩｇＧ含量の少なくとも85％を含む、本発明1078〜本発明1093のいずれかの方法。
[本発明1096]
工程（ｈ）において得られた前記富化ＩｇＧ組成物が、工程（ａ）に使用される脱寒冷血漿画分に見られるＩｇＧ含量の少なくとも90％を含む、本発明1095の方法。
[本発明1097]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が、少なくとも90％低下している、本発明1077〜本発明1096のいずれかの方法。
[本発明1098]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が、少なくとも95％低下している、本発明1097の方法。
[本発明1099]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が、少なくとも98％低下している、本発明1097の方法。
[本発明1100]
セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が、少なくとも99％低下している、本発明1097の方法。
[本発明1101]
前記セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが、ＦＸＩａである、本発明1097〜本発明1100のいずれかの方法。
[本発明1102]
前記組成物を、少なくとも1ｇ ＳｉＯ2／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ2と接触させる、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1103]
前記組成物を、少なくとも2ｇ ＳｉＯ2／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ2と接触させる、本発明1102の方法。
[本発明1104]
前記組成物を、少なくとも2．5ｇ ＳｉＯ2／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ2と接触させる、本発明1102の方法。
[本発明1105]
前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩ因子である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1106]
前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩＩ因子である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1107]
前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩａ因子である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1108]
前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩＩａ因子である、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1109]
前記本発明のいずれかのセリンプロテアーゼ活性の低減のための方法を含む方法により調製された、血漿由来タンパク質組成物。
[本発明1110]
対象への投与用に製剤化される、本発明1109の血漿由来タンパク質組成物。
[本発明1111]
静脈内、筋肉内、または皮下投与用に製剤化される、本発明1109の血漿由来タンパク質組成物。
[本発明1112]
水性である、本発明1109〜本発明1111のいずれかの血漿由来タンパク質組成物。
[本発明1113]
凍結乾燥された、本発明1109〜本発明1111のいずれかの血漿由来タンパク質組成物。
[本発明1114]
それを必要としている対象における血漿タンパク質の異常活性に関連した疾患の治療のための方法であって、本発明1109〜本発明1113のいずれかの血漿由来タンパク質組成物を投与する工程を含む、方法。
[本発明1115]
血漿由来タンパク質を含む前記組成物が、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−1−抗トリプシン（Ａ1ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される、本発明1114の方法。
血漿画分スキーム例の概要である。 ＥＬＩＳＡにより測定した、工業規模の血漿タンパク質画分の選択画分中のＨ因子含量である。 各種伝導度、ｐＨ７．５の溶液条件下で、ＳｉＯ２から溶出したＨ因子およびアミド分解活性（基質ＣＳ２１６６を使用して測定）の図解である。
発明の詳細な説明
Ｉ．導入
治療的血漿由来血液タンパク質組成物（免疫グロブリン組成物、血液凝固因子、凝固因子インヒビター、および補体系のタンパク質など）の広範な使用を考慮すると、これらの組成物の安全性を確実にすることが最優先事項である。最近、血漿由来タンパク質組成物を投与した患者における血栓塞栓性事象の発現とあわせてこれら組成物のアミド分解活性含量に関する懸念により、当技術分野において、これら生物製剤の製造中のセリンプロテアーゼ（例えば、ＦＸＩａおよびＦＸＩＩａ）およびセリンプロテアーゼチモーゲン（例えば、ＦＸＩおよびＦＸＩＩ）の低減のための方法の必要性が強調されている。有利には、本発明は、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）は、血漿由来タンパク質組成物に存在するセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲン結合に使用できるという驚くべき所見に少なくとも部分的に基づく。それゆえ、血漿由来タンパク質組成物の製造中、セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンの濃度の低減のための方法を本明細書に提供する。
ある態様では、本発明は、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）は、血漿由来タンパク質溶液からの大量セリンプロテアーゼ（例えば、ＦＸＩａおよびＦＸＩＩａ）およびセリンプロテアーゼチモーゲン（例えば、ＦＸＩおよびＦＸＩＩ）の除去に使用できるという驚くべき所見に基づく製造法を提供する。それゆえ、本明細書に提供する方法は、冷エタノールにより、既存の製造手順、例えば、血漿試料（好ましくはヒト血漿試料）プール画分に容易に統合し得る（Ｓｃｈｕｌｔｚｅ Ｈ Ｅ， Ｈｅｒｅｍａｎｓ Ｊ Ｆ； Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｖｏｌｕｍｅ Ｉ： Ｎａｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９６６， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ； ｐ． ２３６−３１７に概説される）。しかしながら、本明細書に提供する方法の使用は、エタノール画分を含む製造法に決して限定されない。他の血漿由来タンパク質の精製法、例えば、ポリマー（例えば、ＰＥＧ）画分およびクロマトグラフ法（例えば、陰イオンおよび／または陽イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、混合様式クロマトグラフィーなど）も、本明細書に提供する方法と適合する。
さらに、宿主細胞系内ＤＮＡベクターの組換え発現を介して産生する他の生物製剤とは異なり、血漿由来タンパク質はヒト血液および献血血漿から分別される。したがって、これらの製剤の供給は、単純な製剤増量によって増大できない。むしろ、市販の血液製剤レベルは、血液および献血血漿の供給可能量によって制限される。このため、商業市場においてあまり確立されていない補体因子Ｈ（ＣＦＨ）およびインター−α−トリプシンインヒビタータンパク質（ＩαＩｐ）を含む新規血漿由来血液因子の製造に利用可能なヒト血漿原料が不足している。
新規血漿由来製剤の製造に利用可能な血漿不足欠如のために、それらの製造は、血漿由来製剤（免疫グロブリンおよびアルブミンなど）の確立された製造プロセスの既存フレームワーク内に統合されなければならない。他の状態の中でもとりわけ、ＡＭＤ、ａＨＵＳ、およびＭＰＧＮの潜在的治療として示唆されるＨ因子は、医師の注目を集めているかかる血漿由来血液製剤の１つである。しかしながら、該供給源は、例えば、ＩｇＧγグロブリン製造に役立つため、既存の製造スキームに導入できるＨ因子の製造法が必要とされている。いくつかの方法は、まさにこの必要性を満たすことが示唆されているが、これら提唱される溶液の多くにおいて、確立された製剤向けの既存の製造スキームを修正する必要がある。かかる変更は確立された製剤の新規規制認可を必要とし、確立された製剤の特徴の改変にすら至り得る。
例えば、ＷＯ２００７／０６６０１７号には、寒冷沈降物の上清からのＨ因子調製物の産生法について記載されている。開示された方法は、寒冷沈降物の上清の調製、陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＣ）への上清の付与、ヘパリン親和性クロマトグラフィー（ＨＡＣ）へのＡＥＣからの流出物の付与、強陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＣ）へのＨＡＣからの関連溶出物の付与、強陰イオン交換クロマトグラフィー（ｓＡＥＣ）へのＣＥＣからの関連溶出物の付与、およびｓＡＥＣからのＨ因子溶出からなる。不利なことに、寒冷沈降物上清は、ＩｇＧγグロブリン（ＩＶＩＧおよび皮下）およびアルブミンを含む、商業的に重要な血漿由来血液製剤の多くの製造プロセスにおける共通の中間画分である。この画分のクロマトグラフィー工程への付与は、寒冷沈降物上清を改変し、確立された下流血液製剤の製造プロセスの未知の形態への適応を必要とする。これらの製造プロセスの完全な再確認および可能な再設計を必要とする他に、主要規制当局からの製造手順の認可再承認が必要である。
同様に、ＷＯ２００８／１１３５８９号には、ヒト血漿からのＨ因子調製物の産生法について記載されている。具体的には、この刊行物には、３つの既知の血漿プロセス画分、つまりコーン−オンクレイ（Ｃｏｈｎ−Ｏｎｃｌｅｙ）画分Ｉ上清、コーン−オンクレイ画分ＩＩＩ沈降物、およびキストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ画分からのＨ因子の精製について記載されている。第１方法に関して、ＷＯ２００８／１１３５８９号には、ヘパリン親和性クロマトグラフィー工程の追加によりコーン−オンクレイ画分Ｉ上清からＨ因子を取り除くことができることが開示されている。不利なことに、コーン−オンクレイ画分Ｉ上清は、ＩｇＧγグロブリン（ＩＶＩＧおよび皮下）およびアルブミンを含む、商業的に重要な血漿由来血液製剤の多くの製造プロセスにおける共通の中間画分である。同様に、多くの免疫グロブリン（例えば、ＩｇＧ、ＩＶＩＧなど）製造プロセスはコーン−オンクレイ画分ＩＩＩ沈降またはキストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ工程、例えばＧａｍｍａｇａｒｄ（登録商標）ＬＩＱＵＩＤおよびＫｉｏｖｉｇ（Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ．）に依存しない。確立された血液製剤の製造スキームに追加工程（ヘパリン親和性クロマトグラフィー、画分ＩＩＩ沈降、または沈降物Ｂ工程など）を導入する欠点は、上に概説したように、製造手順の再確認、主要規制当局からの製造手順の認可再承認が必要であり、確立されていない製剤の収率および／または純度の予想外の結果をさらに有し得る。
それゆえ、当技術分野において、追加の投入血漿または商業的に重要な血漿由来血液製剤（静脈内（ＩＶＩＧ）または皮下投与用のアルブミンおよびＩｇＧγグロブリンなど）の既存の製造プロセスの再設計および認可再承認の使用が不要なＨ因子の製造法が依然として必要とされている。有利には、本発明は、Ｈ因子、セリンプロテアーゼ、およびセリンプロテアーゼチモーゲンは微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）へ同時に結合し、それにより、セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンを（例えば、ＩｇＧへ）結合していない興味の第１タンパク質から分離してから、Ｈ因子ならびにセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンのＳｉＯ２からの差次的溶出により分離できるという驚くべき発見に少なくとも部分的に基づく。同様に、本発明は、ＩαＩｐ、セリンプロテアーゼ、およびセリンプロテアーゼチモーゲンは、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）へ同時に結合してから、ＩαＩｐならびにセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲン差次的溶出によりＳｉＯ２から分離できるという驚くべき発見に少なくとも部分的に基づく。
ＩＩ．定義
本明細書で使用する「Ｈ因子」とは、補体因子Ｈ遺伝子によりコードされた補体第２経路のタンパク質成分を指す（例えば、ＣＦＨ； ＮＭ０００１８６； ＧｅｎｅＩＤ：３０７５； ＵｎｉＰｒｏｔ ＩＤ Ｐ０８６０３； Ｒｉｐｏｃｈｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ． ２４９：５９３−６０２（１９８８））。Ｈ因子は、１８個のアミノ酸シグナルペプチド除去によりプロセス化する１，２１３個のアミノ酸前駆体ポリペプチドとして翻訳され、成熟Ｈ因子タンパク質が得られる（アミノ酸１９〜１２３１）。本発明に使用されるＨ因子は、血漿試料（例えばヒト血漿試料）に見ることができる任意の自然変異体、代替配列、イソ型または突然変異体タンパク質を包含する。ヒト集団に見られるＨ因子突然変異の例としては、Ｙ４０２Ｈ；Ｖ６２Ｉ；Ｒ７８Ｇ；Ｒ１２７Ｌ；Δ２２４；Ｑ４００Ｋ；Ｃ４３１Ｓ；Ｔ４９３Ｒ；Ｃ５３６Ｒ；Ｉ５５１Ｔ；Ｒ５６７Ｇ；Ｃ６３０Ｗ；Ｃ６７３Ｓ；Ｃ６７３Ｙ；Ｅ８５０Ｋ；Ｓ８９０Ｉ；Ｈ８９３Ｒ；Ｃ９１５Ｓ；Ｅ９３６Ｄ；Ｑ９５０Ｈ；Ｙ９５１Ｈ；Ｔ９５６Ｍ；Ｃ９５９Ｙ；Ｗ９７８Ｃ；Ｎ９９７Ｔ；Ｖ１００７Ｉ；Ｖ１００７Ｌ；Ａ１０１０Ｔ；Ｔ１０１７Ｉ；Ｙ１０２１Ｆ；Ｃ１０４３Ｒ；Ｎ１０５０Ｙ；Ｉ１０５９Ｔ；Ｑ１０７６Ｒ；Ｒ１０７８Ｓ；Ｄ１１１９Ｇ；Ｖ１１３４Ｇ；Ｙ１１４２Ｄ；Ｑ１１４３Ｅ；Ｗ１１５７Ｒ；Ｃ１１６３Ｗ；Ｗ１１８３Ｌ；Ｗ１１８３Ｒ；Ｔ１１８４Ｒ；Ｌ１１８９Ｒ；Ｓ１１９１Ｌ；Ｇ１１９４Ｄ；Ｖ１１９７Ａ；Ｅ１１９８Ａ；Ｆ１１９９Ｓ；Ｒ１２１０Ｃ；Ｒ１２１５Ｇ；Ｒ１２１５Ｑ；ＹＰＴＣＡＫＲ１２２５：１２３１ＦＱＳ；およびＰ１２２６Ｓが挙げられるが、これらに限定されない。これらの突然変異の多くは、溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮＩＩ）、ＣＦＨ不全、および基底層ドルーゼを含む様々な疾患および障害に関することが見出されている。Ｈ因子はまた、翻訳後改良を含むタンパク質も含む。例えば、Ｈ因子は、残基５２９位、７１８位、８０２位、８２２位、８８２位、９１１位、１０２９位、および１０９５位にてＮ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）により改良されていると考えられる。
本明細書で使用する「インター−α−インヒビタータンパク質」または「ＩαＩｐ」とは、α−１−マイクログロブリン／ビクニン前駆体遺伝子（ＡＭＢＰ；ＵｎｉｇｅｎｅＩＤ：２３１９４８、ビクニンポリペプチド）、インター−α（グロブリン）インヒビターＨ１遺伝子（ＩＴＩＨ１；ＵｎｉｇｅｎｅＩＤ：２２４１７３、Ｈ１ポリペプチド）、インター−α（グロブリン）インヒビターＨ２遺伝子（ＩＴＩＨ２；ＵｎｉｇｅｎｅＩＤ：１３９７８２、Ｈ２ポリペプチド）、インター−α（グロブリン）インヒビターＨ３遺伝子（ＩＴＩＨ３；ＵｎｉｇｅｎｅＩＤ：１４００１７、Ｈ３ポリペプチド）、またはインター−α（グロブリン）インヒビターＨ４（血漿カリクレイン感受性糖タンパク質、Ｈ４ポリペプチド）遺伝子（ＩＴＩＨ４；ＵｎｉｇｅｎｅＩＤ：３３２１６１３）の１つまたは複数によりコードされたポリペプチドからなる血漿プロテアーゼインヒビターファミリーを指す。ＩαＩｐプロテアーゼインヒビターの例としては、ＩαＩ（ビクニン、Ｈ１、およびＨ２ポリペプチド）；ＰａＩ（ビクニンおよびＨ３ポリペプチド）、ＩａＬＩ（ビクニンおよびＨ２ポリペプチド）、ＩαＩＨ４Ｐ（Ｈ４ポリペプチド）、およびビクニン（上記Ｓａｌｉｅｒ， Ｊ， ｅｔ ａｌ．）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する「脱寒冷血漿」とは、凍結に近い温度、例えば、約１０℃未満の温度、好ましくは約６℃以下の温度で血漿または血漿プールを解凍して形成される寒冷沈降物の除去後に作製した上清を指す。本発明の文脈において、血漿は、回収した血漿（すなわち、全血からｅｘ ｖｉｖｏ分離された血漿）または血漿源（すなわち、血漿交換を介して回収した血漿）と同義的に言及し得る。寒冷沈降物は、新規血漿も使用し得るが、一般的に、安全性および品質考慮について分析済みの、例えば、凍結血漿プールの解凍により実施する。低温での凍結血漿の完全な解凍後、液体上清から固体寒冷沈降物の分離は、低温（例えば、≦６℃）で濾液を遠心分離して実施する。
本明細書で使用する「コーンプール」とは、血漿試料の画分または血漿試料のプールに使用される出発物質を指す。コーンプールとしては、前プロセス工程に供しても供さなくてもよい完全血漿、脱寒冷血漿試料、および脱寒冷血漿試料プールが挙げられる。ある実施形態では、コーンプールは、前プロセス工程中に血液因子が１つまたは複数除去されている脱寒冷血漿試料、例えば、固相上の吸着（例えば、水酸化アルミニウム、微細二酸化シリコンなど）、またはクロマトグラフ工程（例えば、イオン交換またはヘパリン親和性クロマトグラフィー）である。様々な血液因子（第８因子インヒビターバイパス活性（ＦＥＩＢＡ）、第ＩＸ因子複合体、第ＶＩＩ因子濃縮物、または抗トロンビンＩＩＩ複合体が挙げられるが、これらに限定されない）を脱寒冷血漿試料から単離してコーンプールを形成し得る。
本明細書で使用する「画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキ」とは、コーン−オンクレイまたは等価画分ＩＩ＋ＩＩＩペースト懸濁液の濾過または遠心後に回収された固相を指す。好ましい実施形態では、画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液を吸着物質（例えば、微細二酸化シリコン）で処理し、不純物（脂質、フィブリノーゲン、アミド分解活性、プレカリクレイン活性、およびリポタンパク質など）を除去する。別の好ましい実施形態では、濾過助剤は、遠心分離または濾過の前に画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液に添加し得る。最も好ましい実施形態では、画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液は、遠心分離または濾過の前に吸着物質と濾過助剤の両方で処理する。精製画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁上清の分離時、回収した固相物質は、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキと呼ばれる。
本明細書で使用する「微細二酸化シリコン」または「微細シリカ」とは、表面上にＨ因子を吸着させる形で製造される式ＳｉＯ２のシリコンオキシドを指す。本発明の方法における使用に適した微細二酸化シリコン形態の例としては、ヒュームドシリカ、発熱物質シリカ、アエロジル（登録商標）、Ｃａｂ−Ｏ−Ｓｉｌ（商標）、コロイダルシリカ、珪藻土などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、市販親水ヒュームドシリカ製剤は、本明細書に提供する方法に使用される。これらの製剤の例としては、Ｅｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ市販品商標名アエロジル（登録商標）（例えば、アエロジル９０、アエロジル１３０、アエロジル１５０、アエロジル２００、アエロジル３００、アエロジル３８０、アエロジルＯＸ５０、アエロジルＥＧの５０、アエロジルＴＴ６００、アエロジル２００ＳＰ、アエロジル３００ＳＰ、およびアエロジル３００／３０）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する「Ｈ因子機能障害関連の疾患または障害」とは、対象における低下レベルのＨ因子活性により引き起こされ、低下レベルのＨ因子活性を特徴とするか、または低下レベルのＨ因子活性を引き起こす、対象における任意の疾患、障害、または状態を指す。本発明の目的のため、Ｈ因子活性は、タンパク質またはリガンド、例えば、Ｃ３ｂ、Ｃ３ｂＢｂ、Ｃ３ｂ２Ｂｂ、ｃｓｂＣ３ｂ、補体因子Ｂ（ＣＦＢ）、Ｃ反応タンパク質、内皮細胞、グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）へのＨ因子の結合能を指し得、あるいは、その第Ｉ因子共因子活性またはそのＣ３ｂＢｂおよびＣ３ｂ２Ｂｂの不可逆的解離加速能を指し得る。１つの実施形態では、Ｈ因子機能障害関連の疾患または障害により、Ｃ３欠損症および細菌感染に対する感受性が引き起こされる。場合によっては、Ｈ因子機能障害関連の疾患または障害は、ＣＦＨ遺伝子コードＨ因子の突然変異および多型結合により引き起こされるかそれらに連関した状態を含む（総論については、Ｂａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ Ｅｘｐ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ． ２００８；６３２：１１７−４２参照、これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。ＣＦＨ遺伝子の突然変異または多型と連関している疾患としては、Ｈ因子不足、非定型的溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮＩＩ； ｄｅ Ｃｏｒｄｏｂａ ａｎｄ ｄｅ Ｊｏｒｇｅ， Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １５１， １−１３ （２００８））、心筋梗塞（Ｋａｒｄｙｓ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ４７， １５６８−１５７５ （２００６）； Ｍｏｏｉｊａａｒｔ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ４２， １１１６−１１２２ （２００７）； Ｎｉｃａｕｄ ｅｔ ａｌ．， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ８５， ７７１−７７５ （２００７）； Ｐａｉ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｈｅａｒｔ Ｊｏｕｒｎａｌ ２８， １２９７−１３０３ （２００７）； Ｓｔａｒｋ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ （Ｌｏｎｄ） １１３， ２１３−２１８ （２００７））、冠状動脈性心臓病／冠動脈疾患（ＣＡＤ／ＣＨＤ；（Ｍｅｎｇ ｅｔ ａｌ．， ＢＭＣ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ８， ６２ （２００７）； Ｐｕｌｉｄｏ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｙｏ Ｃｌｉｎｉｃ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ８２， ３０１−３０７ （２００７）； Ｔｏｐｏｌ ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５ Ｓｐｅｃ Ｎｏ ２， Ｒ１１７−Ｒ１２３ （２００６））、およびアルツハイマー病（Ｈａｍｉｌｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎｅｕｒｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ９， ３３１−３３４ （２００７）； Ｚｅｔｔｅｒｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．， Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ １４３， １０５９−１０６０ （２００７））が挙げられるが、これらに限定されない。ＣＦＨ遺伝子の突然変異および多型とＨ因子機能障害関連疾患間の関連が述べられている前述の参考文献の開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる。
本明細書で使用する「異常補体活性化第２経路関連の疾患または障害」とは、補体第２経路の制御不能または異常活性化に起因する疾患、障害、または状態を指す。一般に、補体第２経路の制御不能または異常活性化は、宿主細胞および組織のバイスタンダー損傷、ならびにＣ３減耗および相当する病原感染（例えば、真菌、細菌、ウイルス、および原生生物）に対する感受性を引き起こす可能性がある。異常補体活性化第２経路関連の疾患および障害の例としては、様々な自己免疫疾患（関節リウマチ、ＩｇＡ腎症、喘息、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連脈管炎、天疱瘡、ブドウ膜炎、重症筋無力症、橋本甲状腺炎など）、腎疾患（ＩｇＡ腎症、溶血性尿毒症症候群、膜性増殖性糸球体腎炎など）、他の疾患（喘息、アルツハイマー病、成体黄斑変性、近位夜間ヘモグロビン尿、腹部大動脈瘤、虚血、および敗血症など）が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書で使用する「限外濾過（ＵＦ）」という用語は、半浸透性膜に対して液体に静水圧が加圧される様々な膜濾過法を包含する。高分子量の懸濁固体および溶質は保持されつつ、水および低分子量溶質は膜を通過する。この分離プロセスは、高分子（１０３〜１０６Ｄａ）溶液、特にタンパク質溶液の純化および濃縮に頻繁に使用される。それらが保持する分子サイズに応じて、いくつかの限外濾過膜が利用可能である。限外濾過は、典型的には、膜孔径１〜１０００ｋＤａ、操作圧０．０１〜１０バールを特徴とする。
本明細書で使用する「ダイアフィルトレーション」という用語は、限外濾過膜と同等または類似の膜を用いて実施し、典型的に横流出濾過モードで実施する。ダイアフィルトレーション中、緩衝液を再利用タンクに導入しつつ、濾液は、単位操作から取り除く。製剤が残余分（例えば、Ｈ因子）にあるプロセスにおいて、ダイアフィルトレーションは、タンパク質を低分子（糖類および塩など）から分離するために特に有用である。ある場合は、ダイアフィルトレーションは、緩衝系の溶液、緩衝液、または各成分の交換に使用できる。
本明細書で使用する「混合」という用語は、任意の撹拌形態により溶液または懸濁液中の２つ以上の異なる化合物または物質の均等分配を引き起こす行為について記載する。溶液または懸濁液中のすべての成分の完全に均等な分配が、必ずしも本願に使用される「混合」という用語の結果である必要はない。
本明細書で使用する「溶媒」という用語は、他の物質を１つまたは複数溶解または分散可能な任意の液体物質を包含する。溶媒は天然無機物（水など）であってもよく、有機液体（エタノール、アセトン、酢酸メチル、酢酸エチル、ヘキサン、ガソリンエーテルなど）であってもよい。「溶媒清浄処理」という用語に使用されるように、溶媒とは、溶液中不活性脂質エンベロープウイルスに使用される溶媒清浄混合物の一部である有機溶媒（例えば、トリ−Ｎ−リン酸ブチル）を示す。
本明細書で使用する「清浄液」という用語は、本願において「界面活性剤」または「表面作用剤」という用語と同義的に使用される。界面活性剤は、典型的には両親媒性、すなわち、疎水基（「尾」）と親水基（「頭」）の両方を含む有機化合物であり、界面活性剤を有機溶媒と水の両方に溶解させる。界面活性剤は、その頭における形式的な荷電基の存在により分類できる。非イオン性界面活性剤は、頭に荷電基を有さないが、陰イオン性界面活性剤は頭に正味荷電を保有する。ツビッターイオン性界面活性剤は、２つの正反対に荷電した基を有する頭を含む。共通の界面活性剤の一部の例としては、陰イオン性（硫酸、スルホン酸またはカルボン酸陰イオンベース）：パーフルオロオクタン酸（ＰＦＯＡまたはＰＦＯ）、パーフルオロオクタンスルホン酸（ＰＦＯＳ）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、硫酸アンモニウムラウリル、および他のアルキル硫酸塩、ラウレス硫酸ナトリウム（ラウリルエーテル硫酸ナトリウム、またはＳＬＥＳとしても知られている）、スルホン酸アルキルベンゼン；陽イオン性（第四級アンモニウム陽イオンベース）：セチルトリメチルアンモニウムブロミド（ＣＴＡＢ）、別名ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、および他のアルキルトリメチルアンモニウム塩、塩化セチルピリジニウム（ＣＰＣ）、ポリエトキシ化獣脂アミン（ＰＯＥＡ）、塩化ベンザルコニウム（ＢＡＣ）、塩化ベンゼトニウム（ＢＺＴ）；長鎖脂肪酸およびそれらの塩：カプリン酸、カプリル酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、ノナン酸、デカン酸など；ツビッターイオン性（両性）：ドデシルベタイン；コカミドプロピルベタイン；ココアムホグリシネート；非イオン性：アルキルポリ（エチレンオキシド）、アルキルフェノールポリ（エチレンオキシド）、ポリ（エチレンオキシド）およびポリ（プロピレンオキシド）のコポリマー（商業的にポロキサマーまたはポロキサミンとして知られている）、アルキルポリグルコシド、オクチルグルコシド、デシルマルトシド、脂肪アルコール（例えば、セチルアルコールおよびオレイルアルコール）、コカミドＭＥＡ、コカミドＤＥＡ、ポリソルベート（Ｔｗｅｅｎ２０、ＴＷＥＥＮ８０など）、Ｔｒｉｔｏｎ清浄液、ならびにドデシルジメチルアミンオキシドが挙げられる。
本明細書で使用する「治療有効量または用量」または「十分／有効量または用量」という用語は、効果の生じる投与量を指す。正確な用量は治療目的に依存し、当業者によって既知の技術を使用して確認可能である（例えば、Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ， Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ （ｖｏｌｓ． １−３， １９９２）； Ｌｌｏｙｄ， Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇ （１９９９）； Ｐｉｃｋａｒ， Ｄｏｓａｇｅ Ｃａｌｃｕｌａｔｉｏｎｓ （１９９９）； ａｎｄ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ， ２０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， ２００３， Ｇｅｎｎａｒｏ， Ｅｄ．， Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ， Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓを参照されたい；これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。
本願で使用する「噴霧」という用語は、例えば、コーン画分ＩまたはＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程などのアルコール沈降工程中に、液体物質の微粒滴または噴霧状で液体物質を系内へ送達する方法を指す。噴霧は、スプレーヘッドまたはノズルを備える容器（例えば、スプレーボトル）など任意の加圧器により達し得、手動または自動で操作して液体から微霧を生成する。典型的には、噴霧は、液体物質を受ける系を継続的に撹拌あるいは混合して系内の液体の迅速かつ均等分配を確実にしつつ実施する。
本明細書で使用する「約」という用語は、特定値のほぼ±１０％の範囲を示す。例えば、「約２０％」という語句は、１８〜２２％の範囲を含む。本明細書で使用する約とは、正確な量も含む。したがって「約２０％」とは、「約２０％」を意味し、「２０％」も意味する。本明細書で使用する「約」とは、特定値または約特定値の範囲を指す。
「用量」および「投与量」という用語は、本明細書において同義的に使用される。用量とは、各投与で個人に投与される活性成分量を指す。用量は、いくつかの要因（投与頻度；個々のサイズおよび耐性；状態の重症度；副作用リスク；ならびに投与経路など）に応じて変更される。用量は、上の要因に応じてまたは治療進行に基づき修正できることを当業者は認識するであろう。「投与形態」という用語は、医薬の特定の型式を指し、投与経路に依存する。例えば、投与形態は、液体、例えば、注射用生理食塩溶液であることができる。
本明細書で使用する「予防」という用語は、血液タンパク質の機能欠如または機能障害関連状態に起因する症状の可能性低下または頻度低下を指す。
本明細書で使用する「療法」、「治療」、および「改善」という用語は、血液タンパク質の機能欠如または機能障害関連状態に起因する症状の重症度の任意の低下を指す。本明細書で使用する「治療」および「予防」という用語は、絶対用語を意図しない。治療は、任意の発現遅延化、症状改善、患者生存の改善、生存期間もしくは生存率の延長などを指すことができる。治療効果は、個体または未治療個体プールと比較できる。
本明細書で使用する「実質的な画分」という用語は、組成物中の特定タンパク質集団の少なくとも１０％を指す。例えば、組成物中のセリンプロテアーゼの実質的な画分について言及する場合、セリンプロテアーゼの実質的な画分は、組成物に存在するセリンプロテアーゼの少なくとも１０％に相当する。１つの実施形態では、実質的な画分とは、組成物中の特定タンパク質集団の少なくとも２５％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、組成物中の特定タンパク質集団の少なくとも５０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、組成物中の特定タンパク質集団の少なくとも７５％を指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、組成物中の特定タンパク質集団の少なくとも１０％、または組成物中の特定タンパク質集団の少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９％超を指す。
ＩＩＩ．セリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンの含量の低下
第１態様では、本発明は、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンを微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）に結合させて組成物からＳｉＯ２を分離することにより、血漿由来標的タンパク質組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。
１つの実施形態では、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来タンパク質組成物中の第ＸＩ因子量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第ＸＩ因子への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合第ＸＩ因子を除去する工程を含む。
別の実施形態では、本発明は、血漿由来タンパク質組成物中の第ＸＩａ因子量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第ＸＩａ因子への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合第ＸＩａ因子を除去する工程を含む。
別の実施形態では、本発明は、血漿由来タンパク質組成物中の第ＸＩＩ因子量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第ＸＩＩ因子への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合第ＸＩＩ因子を除去する工程を含む。
さらに別の実施形態では、本発明は、血漿由来タンパク質組成物中の第ＸＩＩａ因子量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第ＸＩＩａ因子への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合第ＸＩＩａ因子を除去する工程を含む。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法を提供し、本方法は、（ａ）血漿プール由来出発物質中のタンパク質を部分的に沈降させることにより第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。１つの実施形態では、部分的な沈降は、アルコールを使用して達する。好ましい実施形態では、アルコールは、エタノールである。別の好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
別の実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法を提供し、本方法は、（ａ）血漿プール由来出発物質の限外濾過および／もしくはダイアフィルトレーションにより第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
さらに別の実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法を提供し、本方法は、（ａ）血漿プール由来出発物質をクロマトグラフィー樹脂と接触させることにより、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。ある実施形態では、クロマトグラフィー樹脂は、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、疎水性相互作用樹脂、混合様式樹脂、ヒドロキシアパタイト樹脂、リガンド親和性樹脂、免疫親和性樹脂、およびサイズ排除樹脂から選択される。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法を提供し、本方法は、（ａ）第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
（表１）第１富化工程および第２富化工程の組み合わせのための例示的実施形態
Figure 2016155798
*Ｐｐｔ：沈降
ＵＦ／ＤＦ：限外濾過／ダイアフィルトレーション
ＡＥＣ：陰イオン交換クロマトグラフィー
ＣＥＣ：陽イオン交換クロマトグラフィー
ＨＩＣ：疎水性相互作用クロマトグラフィー
ＨＡＣ：ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー
ＭＭＣ：混合様式クロマトグラフィー
ＬＡＣ：リガンド親和性クロマトグラフィー
ＩＡＣ：免疫親和性クロマトグラフィー
ＳＥＣ：サイズ排除クロマトグラフィー
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む。ある実施形態では、標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法を提供し、本方法は、（ａ）第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｄ）第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
同様に、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来標的タンパク質中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法を提供し、本方法は、（ａ）第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｅ）第３標的タンパク質富化工程を実施して、第３富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、または表１１に見られるバリエーションＶａｒ．１０１〜Ｖａｒ．１１００の任意の１つから選択される。
（表２）第１沈降富化工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表３）第１限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表４）第１陰イオン交換クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表５）第１陽イオン交換クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表６）第１疎水性相互作用クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表７）第１ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表８）第１混合様式クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表９）第１リガンド親和性クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表１０）第１免疫親和性クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
（表１１）第１サイズ排除クロマトグラフィー工程、第２富化工程、および第３富化工程の組み合わせの例示的実施形態
Figure 2016155798
*表１のとおり。
上記方法のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）血漿由来標的タンパク質への結合に適した条件下で、血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来標的タンパク質をクロマトグラフィー樹脂から溶出する副工程を含む。１つの具体的な実施形態では、不純物は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。別の具体的な実施形態では、不純物は、副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合するが、副工程（ｉｉ）においてクロマトグラフィー樹脂から溶出されない。
上記方法の他のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）少なくとも１種の不純物への結合に適した条件下で、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来タンパク質組成物から樹脂を分離する副工程を含み、該血漿由来標的タンパク質は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。
上記方法のある実施形態では、血漿由来標的タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、補体系のタンパク質（例えば、Ｈ因子）、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される。具体的な実施形態では、補体系のタンパク質は、Ｈ因子（ＦＨ）、Ｄ因子、補体タンパク質Ｃ３、およびＣ４結合タンパク質からなる群から選択される。好ましい実施形態では、タンパク質組成物は、製造中間体である。
本明細書に提供する方法のある実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも１０％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも２５％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも５０％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも７５％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも９０％低下している。さらに他の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも５％低下しているか、または少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％低下しているか、または試験系の検出下限値未満である。
一般に、本明細書に記載の方法に必要な微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）の量は、いくつかの要因、限定しないが、組成物に存在するタンパク質総量、組成物中のセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲン（例えば、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａ）濃度、標的タンパク質、および溶液条件（例えば、ｐＨ、伝導度など）に依存して変わる。例えば、ＳｉＯ２は、標的組成物に約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質濃度で添加し得る。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、標的組成物に約１ｇ／ｇタンパク質〜約５ｇ／ｇタンパク質の濃度で添加し得る。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、標的組成物に約２ｇ／ｇタンパク質〜約４ｇ／ｇタンパク質の濃度で添加し得る。１つの実施形態では、ＳｉＯ２は、少なくとも１ｇ／ｇ総タンパク質の最終濃度となるように添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２．５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、標的組成物に約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約５ｇ／ｇタンパク質濃度で添加し得る。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、標的組成物に約０．０２ｇ／ｇタンパク質〜約４ｇ／ｇタンパク質濃度で添加し得る。１つの実施形態では、ＳｉＯ２は、少なくとも０．１ｇ／ｇ総タンパク質の最終濃度となるように添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。さらに他の具体的な実施形態では、微細二酸化シリコンは、少なくとも０．０１ｇ／ｇ総タンパク質または少なくとも０．０２ｇ、０．０３ｇ、０．０４ｇ、０．０５ｇ、０．０６ｇ、０．０７ｇ、０．０８ｇ、０．０９ｇ、０．１ｇ、０．２ｇ、０．３ｇ、０．４ｇ、０．５ｇ、０．６ｇ、０．７ｇ、０．８ｇ、０．９ｇ、１．０ｇ、１．５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇ、または１０．０ｇ／ｇ総タンパク質濃度超で添加する。
標的タンパク質を懸濁血漿沈降画分から抽出するある実施形態では、濾過助剤、例えばＣｅｌｐｕｒｅＣ３００（Ｃｅｌｐｕｒｅ）またはＨｙｆｌｏ−Ｓｕｐｐｅｒ−Ｃｅｌ（Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ）を二酸化シリコン処理後に添加して、深層濾過を促進する。濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約１．０ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０２ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．８ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０３ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．７ｋｇ／ｋｇ沈降物の最終濃度となるように添加することができる。他の実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．０７ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０２ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．０６ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０３ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．０５ｋｇ／ｋｇ沈降物の最終濃度となるように添加することができる。ある実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０２ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０３ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０４ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０５ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０６ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０７ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０８ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０９ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．１ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．２ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．３ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．４ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．５ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．６ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．７ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．８ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．９ｋｇ／ｋｇ沈降物、もしくは約１．０ｋｇ／ｋｇ沈降物の最終濃度となるように添加する。
Ａ．免疫グロブリン
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来免疫グロブリン（Ｉｇ）組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。１つの具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ｉｇ組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）ＳｉＯ２をＩｇ組成物から分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。１つの実施形態では、Ｉｇ組成物は、ＩｇＧ組成物である。他の実施形態では、Ｉｇ組成物は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、またはそれらの混合組成物である。
１つの実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１Ｉｇタンパク質富化工程を実施して、第１富化Ｉｇ組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１Ｉｇタンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。１つの実施形態では、Ｉｇ組成物は、ＩｇＧ組成物である。他の実施形態では、Ｉｇ組成物は、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＧ、またはそれらの混合組成物である。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２Ｉｇタンパク質富化工程を実施して、第２富化Ｉｇ組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１Ｉｇタンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｉｇ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ｉｇ富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程；（ｂ）第２Ｉｇ富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、Ｉｇ富化工程を実施する工程をさらに含む。ある実施形態では、Ｉｇ富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｉｇ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ｉｇ富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｄ）第２Ｉｇ富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
同様に、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｉｇ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ｉｇ富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程；（ｂ）第２Ｉｇ富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｅ）第３Ｉｇ富化工程を実施して、第３富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、または表１１に見られるバリエーションＶａｒ．１０１〜Ｖａｒ．１１００の任意の１つから選択される。
特定の実施形態では、Ｉｇ組成物は、製造中間体である。例えば、ある実施形態では、Ｉｇ組成物は、Ｃｏｈｎ分画法（Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １９４６， ６８（３）： ４５９−４７５； Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７２：４６５−４７４ （１９５０））、Ｏｎｃｌｅｙ分画法（Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １９４９， ７１（２）： ５４１−５５０）、Ｄｅｕｔｓｃｈ精製法（Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １６４：１０９−１１８）、Ｈｏｐｐｅ精製法（Ｍｕｎｃｈ Ｍｅｄ Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ １９６７ （３４）： １７４９−１７５２）、Ｆａｌｋｓｖｅｄｅｎ精製法（スウェーデン特許第３４８９４２号）、ＦａｌｋｓｖｅｄｅｎおよびＬｕｎｄｂｌａｄ精製法（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ １９８０）、Ｌｅｂｉｎｇ精製法（Ｖｏｘ Ｓａｎｇ ２００３ （８４）：１９３−２０１）、田中精製法（Ｂｒａｚ Ｊ Ｍｅｄ Ｂｉｏｌ Ｒｅｓ ２０００ （３３）３７−３０）、Ｔｅｓｃｈｎｅｒ精製法（Ｖｏｘ Ｓａｎｇ， ２００７ （９２）：４２−５５）、Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ分画法（Ｈｅｌｖ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ ３７：８６６−８７３）、Ｋｉｓｔｌｅｒ／Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ分画法（Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７：４１４−４２４ （１９６２））、Ｂａｒｕｎｄｅｒｎ精製法（Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７：１５７−７４ （１９６２））、Ｋｏｂｌｅｔ精製法（Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． １３：９３−１０２ （１９６７））、米国特許第５，１２２，３７３号もしくは同第５，１７７，１９４号に開示の精製法、それらの変法、ならびに当技術分野において既知である類似もしくは同等の精製法からのＩｇＧ製造中間体である。
１つの特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、脱寒冷コーンプールである。別の特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、コーン画分Ｉ上清またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、再懸濁コーン画分ＩＩＩ沈降物、またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、再懸濁コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、再懸濁コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、再懸濁沈降物Ｇ沈降物、またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、ＩｇＧ組成物は、再懸濁キストラー／ニッチェマン沈降Ｂ沈降物、またはその等価画分である。
具体的な実施形態では、本発明は、再懸濁ＩｇＧ画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。有利には、再懸濁ＩｇＧ画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中の第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子、第ＸＩａ因子、および／または第ＸＩＩａ因子レベルは濾過／遠心分離前の前処理工程の追加により大幅に低減できることが見出された。１つの実施形態では、この前処理工程は微細二酸化シリコン粒子（例えば、ヒュームドシリカ、アエロジル（登録商標））の添加、その後の懸濁液を定期的に混合中の４０〜８０分間のインキュベーション時間を含む。ある実施形態では、インキュベーション時間は、約５０分間〜約７０分間、または約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、もしくは約８０分間超である。一般に、処理は、約０℃〜約１０℃または約２℃〜約８℃で実施する。ある実施形態では、処理は、約０℃、約１℃、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、または約１０℃で実施し得る。特定の実施形態では、処理は、約２℃〜約１０℃で実施する。
ヒュームドシリカ処理の効果は、実施例３、６、および７に見られる結果により例示される。これらの実施例では、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物は、各種量の微細二酸化シリコンで再懸濁および処理する。表２２、表２７、表２８、および表２９に見ることができるように、第ＸＩ因子および第ＸＩＩ因子のセリンプロテアーゼ活性およびチモーゲン含量は、ＳｉＯ２を用いた懸濁液処理により少なくとも９０％低減できる。
ある実施形態では、ヒュームドシリカは、約２０ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約１００ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの濃度で添加する（すなわち、１：１５比で抽出した改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物において、ヒュームドシリカは約２０ｇ／１６ｋｇＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液〜約１００ｇ／１６ｋｇＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液、または最終濃度約０．１２５％（ｗ／ｗ）〜約０．６２５％（ｗ／ｗ）の濃度で添加するべきである）。ある実施形態では、ヒュームドシリカは約２０ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは１００ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの濃度で添加し得る。１つの具体的な実施形態では、ヒュームドシリカ（例えば、アエロジル３８０または等価物）は、最終濃度約４０ｇ／１６ｋｇＩＩ＋ＩＩＩの改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液に添加する。混合は約２〜８℃で少なくとも５０〜７０分間行う。
ある実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質濃度でＩｇＧ組成物に添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約５ｇ／ｇタンパク質濃度でＩｇＧ組成物に添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０２ｇ／ｇタンパク質〜約４ｇ／ｇタンパク質濃度でＩｇＧ組成物に添加する。１つの実施形態では、ＳｉＯ２は、少なくとも０．１ｇ／ｇ総タンパク質の最終濃度となるように添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。他の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも１ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２．５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。さらに他の具体的な実施形態では、微細二酸化シリコンは、少なくとも０．０１ｇ／ｇ総タンパク質または少なくとも０．０２ｇ、０．０３ｇ、０．０４ｇ、０．０５ｇ、０．０６ｇ、０．０７ｇ、０．０８ｇ、０．０９ｇ、０．１ｇ、０．２ｇ、０．３ｇ、０．４ｇ、０．５ｇ、０．６ｇ、０．７ｇ、０．８ｇ、０．９ｇ、１．０ｇ、１．５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇか、１０．０ｇ／ｇ超総タンパク質濃度で添加する。
ある実施形態では、濾過助剤、例えばＣｅｌｐｕｒｅＣ３００（Ｃｅｌｐｕｒｅ）またはＨｙｆｌｏ−Ｓｕｐｐｅｒ−Ｃｅｌ（Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ）を二酸化シリコン処理後に添加して、深層濾過を促進する。濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約１．０ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．８ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの最終濃度となるように添加することができる。他の実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０６ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０５ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの最終濃度となるように添加することができる。ある実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、もしくは１．０ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの最終濃度となるように添加する。
１つの実施形態では、プロセスは、画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過または遠心清澄前にヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。ある実施形態では、ヒュームドシリカ処理は、約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０６ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０５ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０４ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０５ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０６ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０８ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０９ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または０．１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの添加を含み、混合物は、約５０分間〜約７０分間、または約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、もしくは約８０分間超、約２℃〜約８℃の温度でインキュベートする。別の実施形態では、プロセスは、残りのフィブリノーゲン、アミド分解活性、および／またはプレカリクレイン活性因子レベルを低減するヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。具体的な実施形態では、プロセスは、免疫グロブリン調製物中のＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａレベルを低減するヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。
一般に、免疫グロブリン組成物からのセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲン除去は、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２に結合するｐＨおよび伝導度の溶液条件下で、免疫グロブリン含有溶液を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）で処理することにより達成することができる。実施例に示すように、適切な条件は、低ｐＨおよび低伝導度を含む。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来免疫グロブリン組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、約４．０〜約７．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させてセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させ、組成物からＳｉＯ２を除去する工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約６．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約６．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約５．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約７．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約６．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約６．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約５．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約７．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約６．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約６．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに別の実施形態では、本方法は、約４．６〜約５．６のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．７〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．８〜約５．４のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．９〜約５．３のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約５．２のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．１のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。他の実施形態では、本方法は、約４．０または約４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、もしくは７．０以下のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに他の実施形態では、本方法は、４．０以下または４．１以下、４．２以下、４．３以下、４．４以下、４．５以下、４．６以下、４．７以下、４．８以下、４．９以下、５．０以下、５．１以下、５．２以下、５．３以下、５．４以下、５．５以下、５．６以下、５．７以下、５．８以下、５．９以下、６．０以下、６．１以下、６．２以下、６．３以下、６．４以下、６．５以下、６．６以下、６．７以下、６．８以下、６．９以下、または７．０以下のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来免疫グロブリン組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約３．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させてセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合し、組成物からＳｉＯ２を除去する工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約２．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約１．３ｍＳ／ｃｍ〜約１．７ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．７ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．６ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．５ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．４ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．３ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．２ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．１ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約０．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約０．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．２ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約０．４ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．６ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．７ｍＳ／ｃｍ〜約０．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、組成物をＳｉＯ２と約０．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で接触させる工程を含む。他の実施形態では、本方法は、組成物をＳｉＯ２と約０．１ｍＳ／ｃｍまたは０．２ｍＳ／ｃｍ以下、０．３ｍＳ／ｃｍ以下、０．４ｍＳ／ｃｍ以下、０．５ｍＳ／ｃｍ以下、０．６ｍＳ／ｃｍ以下、０．７ｍＳ／ｃｍ以下、０．８ｍＳ／ｃｍ以下、０．９ｍＳ／ｃｍ以下、１．０ｍＳ／ｃｍ以下、１．１ｍＳ／ｃｍ以下、１．２ｍＳ／ｃｍ以下、１．３ｍＳ／ｃｍ以下、１．４ｍＳ／ｃｍ以下、１．５ｍＳ／ｃｍ以下、１．６ｍＳ／ｃｍ以下、１．７ｍＳ／ｃｍ以下、１．８ｍＳ／ｃｍ以下、１．９ｍＳ／ｃｍ以下、２．０ｍＳ／ｃｍ以下、２．１ｍＳ／ｃｍ以下、２．２ｍＳ／ｃｍ以下、２．３ｍＳ／ｃｍ以下、２．４ｍＳ／ｃｍ以下、２．５ｍＳ／ｃｍ以下、２．６ｍＳ／ｃｍ以下、２．７ｍＳ／ｃｍ以下、２．８ｍＳ／ｃｍ以下、２．９ｍＳ／ｃｍ以下、または３．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で接触させる工程を含む。さらに他の実施形態では、本方法は、組成物をＳｉＯ２と０．１ｍＳ／ｃｍ以下または０．２ｍＳ／ｃｍ以下、０．３ｍＳ／ｃｍ以下、０．４ｍＳ／ｃｍ以下、０．５ｍＳ／ｃｍ以下、０．６ｍＳ／ｃｍ以下、０．７ｍＳ／ｃｍ以下、０．８ｍＳ／ｃｍ以下、０．９ｍＳ／ｃｍ以下、１．０ｍＳ／ｃｍ以下、１．１ｍＳ／ｃｍ以下、１．２ｍＳ／ｃｍ以下、１．３ｍＳ／ｃｍ以下、１．４ｍＳ／ｃｍ以下、１．５ｍＳ／ｃｍ以下、１．６ｍＳ／ｃｍ以下、１．７ｍＳ／ｃｍ以下、１．８ｍＳ／ｃｍ以下、１．９ｍＳ／ｃｍ以下、２．０ｍＳ／ｃｍ以下、２．１ｍＳ／ｃｍ以下、２．２ｍＳ／ｃｍ以下、２．３ｍＳ／ｃｍ以下、２．４ｍＳ／ｃｍ以下、２．５ｍＳ／ｃｍ以下、２．６ｍＳ／ｃｍ以下、２．７ｍＳ／ｃｍ以下、２．８ｍＳ／ｃｍ以下、２．９ｍＳ／ｃｍ以下、または３．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で接触させる工程を含む。
ある実施形態では、本発明は、血漿由来免疫グロブリン組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、組成物をＳｉＯ２と低ｐＨおよび低イオン強度で接触させてセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させ、組成物からＳｉＯ２を除去する工程を含む。特定の実施形態では、本方法は、約４．８〜約５．４のｐＨで約０．６ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。より特定の実施形態では、本方法は、約４．９〜約５．３のｐＨで約０．７ｍＳ／ｃｍ〜約０．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに特定の実施形態では、本方法は、約５．０〜約５．２のｐＨで約０．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに他の実施形態では、本方法は、表１２、表１３、表１４、および表１５に示すバリエーションＶａｒ．１２２２〜３０４１の任意の１つによるｐＨおよびイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。
（表１２）セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンのＳｉＯ２に対する結合に有用な溶液条件の例示的実施形態
Figure 2016155798
（表１３）セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンのＳｉＯ２に対する結合に有用な溶液条件の例示的実施形態
Figure 2016155798
（表１４）セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンのＳｉＯ２に対する結合に有用な溶液条件の例示的実施形態
Figure 2016155798
ＮＭＴ＝以下（Ｎｏ Ｍｏｒｅ Ｔｈａｎ）
（表１５）セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンのＳｉＯ２に対する結合に有用な溶液条件の例示的実施形態
Figure 2016155798
ＮＭＴ＝以下
Ａ．改良アルコール沈降／イオン交換クロマトグラフィー分別方法
１つの態様では、本発明は、ＩＶＩＧ療法における使用に適したＩｇＧ組成物の改善された製造法を提供する。一般に、これらの方法は、現在使用されている市販ＩＶＩＧ製剤の産生法より高収率で、高純度でない場合は同等の純度のＩｇＧ調製物を提供する。
１つの具体的な態様では、本発明は、血漿由来の濃縮ＩｇＧ組成物、例えば、１０％ＩＶＩＧの調製のための方法を提供し、本方法は、少なくとも１つのアルコール沈降工程および少なくとも１つのイオン交換クロマトグラフィー工程を実施する工程を含む。特に、改善された上流プロセスにおけるいくつかの工程は、前プロセスと異なる（例えば、より低温での２５％エタノールの使用、スプレーによるエタノール添加、スプレーによるｐＨ調節、および微細シリカ粒子の使用）。
ある実施形態では、本方法は、（ａ）第１沈降工程中、約６％〜約１０％アルコールでｐＨ約６．７〜約７．３において脱寒冷プラスミド画分を沈降させて、ＩｇＧ中に富化した上清を得る工程、（ｂ）約２０％〜約３０％アルコールで、より低温およびｐＨ約６．７〜約７．３において上清からＩｇＧを沈降させて、第１沈降物を形成する工程、（ｃ）工程（ｂ）において形成された第１沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程、（ｄ）工程（ｃ）において形成された懸濁液の清浄処理工程、（ｅ）約２０％〜約３０％アルコールでｐＨ約６．７〜約７．３において懸濁液からＩｇＧを沈降させて、第２沈降物を形成する工程、（ｆ）工程（ｅ）において形成された第２沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程、（ｇ）工程（ｆ）において形成された懸濁液の溶媒および／もしくは清浄処理工程、ならびに（ｈ）少なくとも１つのイオン交換クロマトグラフィー分別を実施し、それにより、濃縮ＩｇＧ組成物を調製する工程を含む。１つの実施形態では、本方法はさらに、工程（ｃ）において形成された懸濁液を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を用いて処理する工程、および工程（ｄ）前に溶液を濾過する工程を含む。
１つの実施形態では、血漿から濃縮ＩｇＧ組成物を調製する方法を提供し、本方法は、（ａ）脱寒冷血漿画分ｐＨを約７．０に調節する工程、（ｂ）工程（ａ）の脱寒冷血漿画分のエタノール濃度を約−５℃〜約−９℃の温度で２５％（ｖ／ｖ）または約２５％（ｖ／ｖ）に調節して、それにより、混合物を形成する工程であって、該エタノール濃度をスプレーにより調節し得る工程、（ｃ）工程（ｂ）の混合物から液体と沈降物を分離する工程、（ｄ）工程（ｃ）の沈降物をリン酸および酢酸を含む緩衝液で再懸濁化し、緩衝液のｐＨを緩衝液１０００Ｌ当たり約４００〜約７００ｍＬの氷酢酸で調節し、それにより、懸濁液を形成する工程、（ｅ）微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を工程（ｄ）からの懸濁液と少なくとも約３０分間混合する工程、（ｆ）フィルタープレスを用いて懸濁液を濾過し、それにより、濾液を形成する工程、（ｇ）リン酸および酢酸を含む緩衝液のフィルタープレスデッドボリュームの少なくとも３容積でフィルタープレスを洗浄する工程であって、緩衝液のｐＨを緩衝液１０００Ｌ当たり約１５０ｍＬの氷酢酸で調節し、それにより、洗浄溶液を形成する工程、（ｈ）工程（ｆ）の濾液を工程（ｇ）の洗浄溶液と結合させることにより、溶液を形成し、清浄液で溶液を処理する工程、（ｉ）工程（ｈ）の溶液ｐＨを約７．０に調節し、最終濃度２５％または約２５％となるようにエタノールを添加し、それにより、沈降物を形成する工程であって、該エタノール濃度および／またはｐＨはスプレーにより調節し得る工程、（ｊ）工程（ｉ）の混合物から液体と沈降物を分離する工程、（ｋ）溶媒または清浄液を含む水溶液に沈降物を溶解させ、該溶液を少なくとも６０分間維持する工程、（ｌ）工程（ｋ）後の溶液を陽イオン交換クロマトグラフィーカラムに通過させて、溶出物中のカラム上に吸着したタンパク質を溶出する工程、（ｍ）工程（ｌ）からの溶出物を陰イオン交換クロマトグラフィーカラムに通過させて、流出物を生成する工程（すなわち、貫流）、（ｎ）工程（ｍ）からの流出物をナノフィルターに通過させて、ナノ濾液を生成する工程、（ｏ）工程（ｎ）からのナノ濾液を限外濾過膜に通過させて、限外濾液を生成する工程、ならびに（ｐ）工程（ｏ）からの限外濾液をダイアフィルトレーション緩衝液に対してダイアフィルトレーションし、タンパク質濃度が約８％（ｗ／ｖ）〜約２２％（ｗ／ｖ）であるダイアフィルトレーションを生成し、それにより、濃縮ＩｇＧ組成物を得る工程を含む。１つの実施形態では、工程（ｂ）の温度は−７℃または約−７℃である。１つの具体的な実施形態では、工程（ｄ）中の懸濁緩衝液は、約６００ｍＬ氷酢酸で調節される。
ある実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は約８％〜約１２％、例えば、約８％、または約９％、約１０％、約１１％、または約１２％である。好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は、１０％または約１０％である。別の好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は、１１％または約１１％である。さらに別の好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は、１２％または約１２％である。他の実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は約１３％〜約１７％、例えば、約１３％、または約１４％、約１５％、約１６％、または約１７％である。さらに他の実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は約１８％〜約２２％、例えば、約１８％、または約１９％、約２０％、約２１％、または約２２％である。好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は、２０％または約２０％である。別の好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は、２１％または約２１％である。さらに別の好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーションのタンパク質濃度は、２２％または約２２％である。
本発明のある実施形態では、本明細書に提供する方法は、２つ以上の上記画分プロセス工程における改善を含み得る。例えば、実施形態は、第１沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程、および／または改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
１つの実施形態では、第１沈降工程における改善は、スプレーによるアルコール添加である。別の実施形態では、第１沈降工程における改善は、スプレーによるｐＨ修正剤の添加である。さらなる実施形態では、第１沈降工程における改善は、アルコール添加後の溶液ｐＨ調節である。関連実施形態では、第１沈降工程における改善は、アルコール添加中のｐＨ維持である。別の関連実施形態では、第１沈降工程における改善は、沈降インキュベーション中の溶液ｐＨの継続的調節によるｐＨ維持である。ある実施形態では、第１沈降工程は複数のこれらの改善の実施により改善し得る。この工程において達成し得るさらなる改善は、第１沈降工程−改良画分Ｉについて論じる以下の項目から明らかであろう。上記改善の１つまたは複数の実施により、低下量ＩｇＧは、第１沈降工程の沈降画分中に紛れているおよび／または低下ＩｇＧ画分は、沈降工程中に不可逆的に変性している。
１つの実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程における改善は、スプレーによるアルコール添加である。別の実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程における改善は、スプレーによるｐＨ修正剤の添加である。さらなる実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程における改善は、アルコール添加後の溶液ｐＨ調節である。関連実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程における改善は、アルコール添加中のｐＨ維持である。別の関連実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程における改善は、沈降インキュベーション中の溶液ｐＨの継続的調節によるｐＨ維持である。別の態様では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程は、アルコール濃度を２５％または約２５％に増大することにより改善が達成される。さらに別の実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程は、インキュベーション温度を約−７℃〜−９℃に低減することにより改善が達成される。ある実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程は、複数のこれらの改善の実施により改善し得る。この工程において達成し得るさらなる改善は、第２沈降工程〜改良画分ＩＩ＋ＩＩＩについて論じる以下の項目から明らかであろう。上記改善の１つまたは複数の実施により、低下量ＩｇＧは、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程の上清画分中に紛れているおよび／または低下ＩｇＧ画分は、沈降工程中に不可逆的に変性している。
１つの実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程において、溶解緩衝液の氷酢酸含量を約０．０６％に増大することにより改善が達成される。別の実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程において、溶解インキュベーション中、溶液ｐＨの継続的調節によるｐＨ維持により改善が達成される。別の実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程において、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を濾過前に画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液と混合することにより改善が達成される。ある実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程は複数のこれらの改善の実施により改善し得る。この工程において達成し得るさらなる改善は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程〜改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の抽出について論じる以下の項目から明らかであろう。上記改善の１つまたは複数の実施により、画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液から回収されるＩｇＧ量は増大する、および／または画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液中の不純物量は低下する。
改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善例は、１０００Ｌ当たり１５０ｍＬ氷酢酸または約１５０ｍＬ氷酢酸を含む溶解緩衝液の少なくとも約３．６デッドボリュームを用いたフィルター後洗浄により達成される。この工程において達成し得るさらなる改善は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程〜改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の前処理および濾過について論じる以下の項目から明らかであろう。上記改善の１つまたは複数の実施により、低下量ＩｇＧは、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程中に紛れている。
１つの実施形態では、本方法は、第１沈降工程および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、第１沈降工程および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、第１沈降工程および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、第１沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程、および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、第１沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程、および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、第１沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程、および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程、および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程における改善を含み得る。
別の実施形態では、本方法は、第１沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程、および改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程のすべてにおける改善を含み得る。
ある実施形態では、本明細書に提供するＩｇＧ精製法の１つのプロセスは、流体添加により血漿画分中に導入されるところであった溶液の１つまたは複数のスプレー添加を含む。例えば、ある実施形態では、プロセスは、タンパク質種を１つまたは複数沈降させるための血漿画分中へのスプレーによるアルコール（例えば、エタノール）添加を含む。他の実施形態では、血漿画分にスプレーにより添加し得る溶液としては、ｐＨ調節剤、溶媒溶液、清浄液、希釈緩衝液、伝導度調節剤などが挙げられるが、これらに限定されない。好ましい実施形態では、１つまたは複数のアルコール沈降工程は、血漿画分へのスプレーによるアルコール添加により実施する。第２の好ましい実施形態では、１つまたは複数のｐＨ調節工程は、血漿画分へのスプレーによるｐＨ調節剤の添加により実施する。
ある実施形態では、別のプロセスは、任意の他のプロセス改善と併合し得、沈降剤（例えば、アルコールまたはポリエチレングリコール）の添加後および／または添加と同時に沈降した血漿画分のｐＨ調節を含む。いくつかの実施形態では、活動的に沈降している血漿画分のｐＨが連続モニタリングおよびｐＨ調節により完全沈降インキュベーションまたは保持工程全体を通して維持されるプロセス改善が提供する。好ましい実施形態では、ｐＨ調節はｐＨ調節剤のスプレー添加により実施する。
他の実施形態では、別のプロセスは、任意の他のプロセス改善と併合し得、微細シリカ処理工程の使用を含み、不純物を除去する。
１．脱寒冷血漿の調製
濃縮ＩｇＧ組成物の調製に使用される出発物質は、一般に回収した血漿（すなわち、全血からｅｘ ｖｉｖｏ分離された血漿）か血漿源（すなわち、血漿交換を介して回収した血漿）のいずれかからなる。精製プロセスは、典型的には、安全性および品質考慮について分析済みの凍結血漿プールの解凍から開始する。解凍は、典型的には６℃以下の温度で実行する。凍結血漿の低温での完全な解凍後、低温（例えば、≦６℃）で遠心分離を実施して液体上清から固体寒冷沈降物を分離する。あるいは、分離工程は、遠心分離ではなく濾過により実施できる。次いで、液体上清（遠心分離により新規の解凍血漿から冷不溶性タンパク質の除去後、「脱寒冷血漿」とも呼ばれる）を次工程に進める。この連結で、第８因子インヒビターバイパス活性（ＦＥＩＢＡ）、第ＩＸ因子複合体、第ＶＩＩ因子濃縮物、または抗トロンビンＩＩＩ複合体の単離のために様々な工程を追加できる。
２．第１沈降事象−改良画分Ｉ
この工程では、脱寒冷血漿は、典型的には約０±１℃に冷却し、ｐＨは約７．０〜約７．５、好ましくは約７．１〜約７．３、最も好ましくは約７．２に調節する。１つの実施形態では、脱寒冷血漿ｐＨは、ｐＨ７．２または約７．２に調節する。次いで、血漿を撹拌中に冷却前エタノールを添加し、標的エタノール濃度を８％ｖ／ｖまたは約８％ｖ／ｖとする。同時に温度を約−４〜約０℃にさらに低減する。好ましい実施形態では、温度を−２℃または約−２℃に低減して、汚染物質（α２マクログロブリン、β１Ａグロブリンおよびβ１Ｃグロブリン、フィブリノーゲン、ならびに第ＶＩＩＩ因子など）を沈降させる。典型的には、沈降事象は、少なくとも約１時間の保持時間を含むが、より短い保持時間を使用してもよいし、より長い保持時間も使用してもよい。続いて、上清（上清Ｉ、理想的には脱寒冷血漿に存在するＩｇＧ含量全体を含む）を次いで遠心分離、濾過、または別の適切な方法により回収する。
脱寒冷血漿の第１分別工程として使用される従来法（上記Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．；上記Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．）と比較して、本発明は、いくつかの実施形態において、上清Ｉ画分におけるＩｇＧ収率を改善する方法を提供する。１つの実施形態では、ＩｇＧ収率は、スプレーによるアルコール添加により改善される。別の実施形態では、ＩｇＧ収率は、スプレーによるｐＨ修正剤の添加により改善される。さらに別の実施形態では、ＩｇＧ収率は、アルコール添加後の溶液ｐＨ調節により改善される。関連実施形態では、ＩｇＧ収率は、アルコール添加中の溶液ｐＨ調節により改善される。
１つの具体的な態様では、改善は、低下量ＩｇＧが第１沈降工程の沈降画分中に紛れている方法に関する。例えば、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、Ｃｏｈｎ法６プロトコールの第１沈降工程中に紛れているＩｇＧ量と比較して、第１沈降工程の沈降画分中に紛れている。
ある実施形態では、プロセスは、沈降アルコール添加後に溶液ｐＨを約７．０〜約７．５に調節することにより改善される。他の実施形態では、沈降アルコール添加後に溶液ｐＨを約７．１〜約７．３に調節する。さらに他の実施形態では、沈降アルコール添加後に溶液ｐＨを約７．０または約７．１、７．２、７．３、７．４、もしくは７．５に調節する。特定の実施形態では、沈降アルコール添加後に溶液ｐＨを約７．２に調節する。それゆえ、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、沈降アルコール添加後ではなく添加前に溶液ｐＨを調節する類似沈降工程と比較して、第１沈降工程の沈降画分中に紛れている。１つの実施形態では、ｐＨは沈降保持またはインキュベーション時間、溶液ｐＨの継続的調節により、所望のｐＨで維持される。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
他のある実施形態では、プロセスは、沈降アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を流体としてではなくスプレーによって添加することにより改善される。それゆえ、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を流体添加により導入する類似沈降工程と比較して、第１沈降工程の沈降画分中に紛れている。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
さらに他のある実施形態では、溶液ｐＨを約７．０〜約７．５に調節することにより改善が達成される。好ましい実施形態では、溶液ｐＨを約７．１〜約７．３に調節する。他の実施形態では、沈降アルコール添加後に流体としてではなくスプレーによる添加によって沈降アルコールおよび／もしくはｐＨ調節に使用する溶液を添加することにより、溶液ｐＨを７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、もしくは７．５または約７．０、７．１、７．２、７．３、７．４、もしくは７．５に調節する。特定の実施形態では、沈降アルコール添加後に流体としてではなくスプレーによる添加によって沈降アルコールおよび／もしくはｐＨ調節に使用する溶液を添加することにより、溶液ｐＨを７．２または約７．２に調節する。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
３．第２沈降事象−改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ
画分のＩｇＧ含量および純度をさらに富化するため、上清Ｉを改良コーン−オンクレイ画分ＩＩ＋ＩＩＩ画分である第２沈降工程に供する。一般に、溶液ｐＨをｐＨ約６．６〜約６．８に調節する。好ましい実施形態では、溶液ｐＨを６．７または約６．７に調節する。次いで、アルコール、好ましくはエタノールを最終濃度約２０％〜約２５％（ｖ／ｖ）となるように撹拌しながら溶液に添加して、画分中ＩｇＧを沈降させる。好ましい実施形態では、アルコールは、最終濃度２５％（ｖ／ｖ）または約２５％（ｖ／ｖ）となるように添加して、画分中ＩｇＧを沈降させる。一般に、汚染物質（α１−リポタンパク質、α１−抗トリプシン、Ｇｃグロブリン、α１Ｘ−糖タンパク、結合グロブリン、セルロプラスミン、トランスフェリン、ヘモペキシン、クリスマス因子画分、チロキシン結合グロブリン、コリンエステラーゼ、ハイパーテンシノーゲン、およびアルブミンなど）はこれらの条件により沈降しない。
アルコールを添加前または添加と同時に、溶液を約−７℃〜約−９℃にさらに冷却する。好ましい実施形態では、溶液は、−７℃または約−７℃の温度に冷却する。アルコールを添加完了後、溶液ｐＨを迅速に約６．８〜約７．０に調節する。好ましい実施形態では、溶液ｐＨを６．９または約６．９に調節する。典型的には、沈降事象は、少なくとも約１０時間の保持時間を含むが、より短い保持時間を使用してもよいし、より長い保持時間も使用してもよい。続いて、脱寒冷血漿に存在する、理想的には少なくとも約８５％、好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％のＩｇＧ含量を含む沈降物（改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ）を、遠心分離、濾過、または別の適切な方法により上清から分離して、収集する。脱寒冷血漿の第２分別工程として使用される従来法（上記Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．；上記Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．）と比較して、本発明は、いくつかの実施形態において、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中のＩｇＧ収率を改善する方法を提供する。関連実施形態では、本発明は、改良ＩＩ＋ＩＩＩ上清におけるＩｇＧ損失を抑える方法を提供する。
脱寒冷血漿の第２分別工程として使用される従来法（上記Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．；上記Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．）と比較して、本発明は、いくつかの実施形態において、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中のＩｇＧ収率を改善する方法を提供する。１つの実施形態では、スプレーによるアルコール添加により改善が達成される。別の実施形態では、スプレーによるｐＨ修正剤の添加により改善が達成される。別の実施形態では、アルコール添加後の溶液ｐＨ調節により改善が達成される。関連実施形態では、アルコール添加中の溶液ｐＨ調節により改善が達成される。別の実施形態では、アルコール（例えば、エタノール）濃度を約２５％（ｖ／ｖ）に増大することにより改善が達成される。別の実施形態では、沈降工程温度を約−７℃〜−９℃に低減することにより改善が達成される。好ましい実施形態では、アルコール（例えば、エタノール）濃度を約２５％（ｖ／ｖ）に増大し、温度を約−７℃〜−９℃に低減することにより改善が達成される。対照的に、Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．とＯｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．は共に、−５℃で沈降を実施し、Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．は沈降物中の汚染物質レベルを低減するために２０％アルコールを使用する。有利には、本明細書に提供する方法は、最終製剤中に高レベルの汚染物なくＩｇＧ収率を最大化する。
沈降アルコール添加前に溶液ｐＨをｐＨ約６．９に調節時、部分的にタンパク質沈降に起因して溶液ｐＨが６．９から約７．４〜約７．７に移ることを発見した（図８を参照されたい）。溶液ｐＨが６．９から離れるにつれ、ＩｇＧ沈降の有利性は減り、特定の汚染物質沈降はより有利となる。有利には、本発明者らは、沈降アルコール添加後の溶液ｐＨ調節により、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中に、より高い割合のＩｇＧが回収されることを見出した。
したがって、１つの態様では、低下量ＩｇＧが改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降工程の上清画分中に紛れている方法に関する。すなわち、増大した出発ＩｇＧ％は、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物に存在する。ある実施形態では、プロセスは、沈降アルコール添加直後または添加中に溶液ｐＨを約６．７〜約７．１に調節することにより改善される。別の実施形態では、プロセスは、沈降インキュベーション時間に継続的に溶液ｐＨを約６．７〜約７．１に維持することにより改善される。他の実施形態では、沈降アルコール添加直後または添加中に溶液ｐＨを約６．８〜約７．０に、または沈降アルコール添加直後または添加中に、約６．７、６．８、６．９、７．０、もしくは７．１のｐＨに調節する。特定の実施形態では、沈降アルコール添加直後または添加中に溶液ｐＨを約６．９に調節する。ある実施形態では、沈降インキュベーション時間に継続的に溶液ｐＨを約６．８〜約７．０、または沈降インキュベーション時間に継続的にｐＨを６．９に維持する。それゆえ、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、沈降アルコール添加後ではなく添加前に溶液ｐＨを調節する類似沈降工程または沈降インキュベーション時間を通して溶液ｐＨを維持しない類似沈降工程と比較して、第２沈降工程の上清画分中に紛れている。１つの実施形態では、ｐＨは沈降保持またはインキュベーション時間の溶液ｐＨの継続的調節により、所望のｐＨで維持される。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
別の実施形態では、プロセスは、沈降アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を流体としてではなくスプレーによって添加することにより改善される。それゆえ、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を流体添加により導入する類似沈降工程と比較して、第２沈降工程の上清画分中に紛れている。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
別の実施形態では、プロセスは、約−７℃〜約−９℃の温度で沈降工程を実施することにより改善される。１つの実施形態では、沈降工程は、−７℃または約−７℃の温度で実施する。別の実施形態では、沈降工程は、−８℃または約−８℃の温度で実施する。別の実施形態では、沈降工程は、−９℃または約−９℃の温度で実施する。ある実施形態では、沈降工程のアルコール濃度は約２３％〜約２７％である。好ましい実施形態では、アルコール濃度は約２４％〜約２６％である。別の好ましい実施形態では、アルコール濃度は２５％または約２５％である。他の実施形態では、アルコール濃度は２３％、２４％、２５％、２６％、もしくは２７％または約２３％、約２４％、約２５％、約２６％、もしくは約２７％であり得る。特定の実施形態では、第２沈降工程は、−７℃または約−７℃の温度でアルコール濃度２５％または約２５％で実施する。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
上記Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．に使用されるように第２沈降のアルコール濃度を２０％から２５％に増大し、ＣｏｈｎおよびＯｎｃｌｅｙ法に使用されるようにインキュベーション温度を−５℃から−７℃または約−７℃に低下する効果は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物のＩｇＧ含量を５％〜６％増大する。
別の実施形態では、プロセスは、沈降インキュベーション時間に継続的にｐＨを調節して溶液ｐＨを約６．７〜約７．１、好ましくは６．９または約６．９に維持し、沈降アルコール添加直後または添加中、溶液ｐＨを約６．７〜約７．１、好ましくは６．９または約６．９に調節し、流体としてではなくスプレーによる添加によって沈降アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を添加することにより改善される。別の特定の実施形態では、プロセスは、約−７℃〜約−９℃の温度で、好ましくは−７℃または約−７℃で沈降工程を実施し、約２３％〜約２７％、好ましくは２５％または約２５％のアルコール濃度でＩｇＧを沈降させることにより改善される。さらに別の特定の実施形態では、プロセスは、上に提供したすべての改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ改善を組み込むことにより改善される。好ましい実施形態では、プロセスは、−７℃または約−７℃の温度で２５％または約２５％エタノールをスプレーにより添加してＩｇＧを沈降させ、次いで沈降アルコール添加後に溶液ｐＨを６．９または約６．９に調節することにより改善される。さらに別の好ましい実施形態では、沈降インキュベーションまたは保持時間全体で溶液ｐＨは６．９または約６．９で維持される。
４．改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の抽出
改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物のＩｇＧ含量を可溶化するために、冷抽出緩衝液を使用して、沈降物１パート対抽出緩衝液１５パートの典型的比率で画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を再懸濁する。他の適切な再懸濁液の比率は、例えば約１：８〜約１：３０、または約１：１０〜約１：２０、または約１：１２〜約１：１８、または約１：１３〜約１：１７、または約１：１４〜約１：１６で使用し得る。ある実施形態では、再懸濁液比率は約１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、１：２０、１：２１、１：２２、１：２３、１：２４、１：２５、１：２６、１：２７、１：２８、１：２９、１：３０、もしくは１：３０超であり得る。
改良ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の抽出に適した溶液ｐＨは、一般に約４．０〜約５．５である。ある実施形態では、溶液ｐＨは約４．５〜約５．０であり、他の実施形態では、抽出溶液ｐＨは、約４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、もしくは５．５である。好ましい実施形態では、抽出緩衝液のｐＨは４．５または約４．５である。別の好ましい実施形態では、抽出緩衝液のｐＨは４．７または約４．７である。別の好ましい実施形態では、抽出緩衝液のｐＨは４．９または約４．９である。一般に、これらのｐＨの必要条件は、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、第１リン酸、第２リン酸、それらの混合物などから選択される緩衝剤を使用して満たすことができる。適切な緩衝液濃度は、典型的には約５〜約１００ｍＭ、または約１０〜約５０ｍＭの範囲、または約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約５５ｍＭ、約６０ｍＭ、約６５ｍＭ、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約８５ｍＭ、約９０ｍＭ、約９５ｍＭ、もしくは１００ｍＭ緩衝剤である。
抽出緩衝液の伝導度は、好ましくは、約０．５ｍＳ・ｃｍ−１〜約２．０ｍＳ・ｃｍ−１である。例えば、ある実施形態では、抽出緩衝液の伝導度は、約０．５ｍＳ・ｃｍ−１、または約０．６、０．７、０．８、０．９、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、もしくは約２．０ｍＳ・ｃｍ−１である。当業者は、適切な伝導度の抽出緩衝液の生成法を知るであろう。
１つの特定の実施形態では、抽出緩衝液の例としては、ｐＨ４．５±０．２または約４．５±０．２および０．７〜０．９ｍＳ／ｃｍまたは約０．７〜０．９ｍＳ／ｃｍの伝導度の５ｍＭもしくは約５ｍＭリン酸一ナトリウムおよび５ｍＭもしくは約５ｍＭ酢酸を挙げ得る。
一般に、抽出は、約０℃〜約１０℃または約２℃〜約８℃で実施する。ある実施形態では、抽出は、約０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、または１０℃で実施し得る。特定の実施形態では、抽出は、約２℃〜約１０℃で実施する。典型的には、懸濁液を継続的に撹拌しつつ、抽出プロセスを約６０〜約３００分間、または約１２０〜２４０分間、または約１５０〜２１０分間進行させる。ある実施形態では、抽出プロセスを約６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００、２１０、２２０、２３０、２４０、２５０、２６０、２７０、２８０、２９０、または約３００分進行させる。好ましい実施形態では、継続的に撹拌しながら、抽出プロセスを少なくとも１６０分間進行させる。
５ｍＭリン酸一ナトリウム、５ｍＭ酢酸、および０．０５１％〜０．０６％氷酢酸（ｖ／ｖ）を含む抽出緩衝液の使用は、最終製剤の純度を損なわずに最終ＩｇＧ組成物の収率増大の実質的な増大を得ることができることが見出された。酢酸量と抽出緩衝液のｐＨの相関関係を図９に示す。好ましい実施形態では、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物は、緩衝液との比率１：１５または約１：１５のペーストで、ｐＨ４．５±０．２または約４．５±０．２で抽出する。
有利には、５ｍＭリン酸一ナトリウム、５ｍＭ酢酸、および０．０５１％氷酢酸（ｖ／ｖ）を含む抽出緩衝液を使用するＧＡＭＭＡＧＡＲＤ（登録商標）ＬＩＱＵＩＤ（Ｂａｘｔｅｒ健康ケア）の現在の製造プロセスと比較して、氷酢酸含量を０．０６％（ｖ／ｖ）または約０．０６％（ｖ／ｖ）に増大することにより、最終ＩｇＧ組成物中で増大した収率の実質的な増大を達成できることが見出された。第２沈降工程により形成される沈降物の抽出のためにすでに使用されている方法（ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ（登録商標）ＬＩＱＵＩＤ）と比較して、本発明は、いくつかの実施形態において、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液におけるＩｇＧ収率を改善する方法を提供する。
１つの態様では、改善は、低下量ＩｇＧが非溶画分の改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中に紛れている方法に関する。１つの実施形態では、プロセスは、５ｍＭリン酸一ナトリウム、５ｍＭ酢酸、および０．０６％氷酢酸（ｖ／ｖ）を含む溶液を用いて改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を１：１５比（沈降物対緩衝液）で抽出することにより改善される。別の実施形態では、溶液ｐＨを抽出プロセス時間に維持することにより改善が達成される。１つの実施形態では、溶液ｐＨは抽出プロセス時間に約４．１〜約４．９で維持される。好ましい実施形態では、溶液ｐＨは抽出プロセス時間に約４．２〜約４．８で維持される。より好ましい実施形態では、溶液ｐＨは抽出プロセス時間に約４．３〜約４．７で維持される。別の好ましい実施形態では、溶液ｐＨは抽出プロセス時間に約４．４〜約４．６で維持される。さらに別の好ましい実施形態では、溶液ｐＨは抽出プロセス時間に４．５または約４．５で維持される。
別の態様では、改善は、画分ＩＩ＋ＩＩＩ溶解工程における画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物から増大量ＩｇＧが可溶化する方法に関する。１つの実施形態では、プロセスは、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の１０００Ｌ当たり６００ｍＬ氷酢酸を含む溶解緩衝液への可溶化により改善される。別の実施形態では、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物中ＩｇＧの可溶化後に不純物を低減する方法に関する。１つの実施形態では、プロセスは、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液と少なくとも約３０分間混合することにより改善される。
５．改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の前処理および濾過
非溶画分の改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物（すなわち、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキ）除去のために、典型的には深層濾過を使用して懸濁液を濾過する。本明細書に提供する方法に適用し得るデプスフィルターとしては、金属製、ガラス製、セラミック、有機（珪藻土など）デプスフィルターなどが挙げられる。適切なフィルターの例としては、Ｃｕｎｏ ５０ＳＡ、Ｃｕｎｏ ９０ＳＡ、およびＣｕｎｏ ＶＲ０６フィルター（Ｃｕｎｏ）が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、分離工程は、濾過ではなく遠心分離により実施できる。
上記の製造プロセス改善は精製プロセス初回工程中のＩｇＧ損失を最小限に抑えるが、主な不純物（ＰＫＡ活性、アミド分解活性、およびフィブリノーゲン含量など）は、例えば、ＩＩ＋ＩＩＩペーストをｐＨ４．５または４．６で抽出時、ｐＨ約４．９〜５．０で抽出時よりも高い（実施例２〜５を参照されたい）。
本明細書に提供する方法において抽出した不純物を測定するため、ＩｇＧ組成物の純度は、濾過／遠心分離前の前処理工程の追加により非常に高まる可能性があることが見出された。１つの実施形態では、この前処理工程は、微細二酸化シリコン粒子（例えば、ヒュームドシリカ、アエロジル（登録商標））の添加、その後の懸濁液を定期的に混合中の４０〜８０分のインキュベーション時間を含む。ある実施形態では、インキュベーション時間は、約５０分間〜約７０分間、または約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、もしくは約８０分間超である。一般に、処理は、約０℃〜約１０℃または約２℃〜約８℃で実施する。ある実施形態では、処理は、約０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、または１０℃で実施し得る。特定の実施形態では、処理は、約２℃〜約１０℃で実施する。
ヒュームドシリカ処理の効果は、実施例１７に見られる結果により例示される。この実施例では、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を懸濁し、２つの試料に分け、１つを濾過前のみに濾過助剤で精製し（図７Ａ）、もう１つを濾過助剤の添加および濾過の前にヒュームドシリカ処理する（図７Ｂ）。クロマトグラフおよび定量データに見ることができるように、ヒュームドシリカで前処理した濾液試料のＩｇＧ純度は濾過助剤で処理しただけの試料よりずっと高い（６８．８％対５５．７％；それぞれ表１７と表１８を比較）。
ある実施形態では、ヒュームドシリカは、約２０ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約１００ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの濃度で添加する（すなわち、１：１５比で抽出される改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物のため、ヒュームドシリカを約２０ｇ／１６ｋｇＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液〜約１００ｇ／１６ｋｇＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液、または最終濃度約０．１２５％（ｗ／ｗ）〜約０．６２５％（ｗ／ｗ）の濃度で添加するべきである）。ある実施形態では、ヒュームドシリカは約２０ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、もしくは１００ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの濃度で添加し得る。１つの具体的な実施形態では、ヒュームドシリカ（例えば、アエロジル３８０または等価物）は、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液に添加して最終濃度約４０ｇ／１６ｋｇＩＩ＋ＩＩＩとする。混合は約２〜８℃で少なくとも５０〜７０分間行う。
ある実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質濃度でＩｇＧ組成物に添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約５ｇ／ｇタンパク質濃度でＩｇＧ組成物に添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０２ｇ／ｇタンパク質〜約４ｇ／ｇタンパク質濃度でＩｇＧ組成物に添加する。１つの実施形態では、ＳｉＯ２は、少なくとも０．１ｇ／ｇ総タンパク質の最終濃度となるように添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。他の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも１ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２．５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。さらに他の具体的な実施形態では、微細二酸化シリコンは、少なくとも０．０１ｇ／ｇ総タンパク質または少なくとも０．０２ｇ、０．０３ｇ、０．０４ｇ、０．０５ｇ、０．０６ｇ、０．０７ｇ、０．０８ｇ、０．０９ｇ、０．１ｇ、０．２ｇ、０．３ｇ、０．４ｇ、０．５ｇ、０．６ｇ、０．７ｇ、０．８ｇ、０．９ｇ、１．０ｇ、１．５ｇ、２．０ｇ、２．５ｇ、３．０ｇ、３．５ｇ、４．０ｇ、４．５ｇ、５．０ｇ、５．５ｇ、６．０ｇ、６．５ｇ、７．０ｇ、７．５ｇ、８．０ｇ、８．５ｇ、９．０ｇ、９．５ｇ、１０．０ｇ、または１０．０ｇ／ｇ超総タンパク質濃度で添加する。
ある実施形態では、濾過助剤、例えばＣｅｌｐｕｒｅＣ３００（Ｃｅｌｐｕｒｅ）またはＨｙｆｌｏ−Ｓｕｐｐｅｒ−Ｃｅｌ（Ｗｏｒｌｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ）を二酸化シリコン処理後に添加して、深層濾過を促進する。濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約１．０ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．８ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの最終濃度となるように添加することができる。他の実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０６ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０５ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの最終濃度となるように添加することができる。ある実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、もしくは１．０ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの最終濃度となるように添加する。
ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ（登録商標）ＬＩＱＵＩＤ製造プロセスの濾過工程中、著しいＩｇＧ画分が紛れていた。１．８デッドボリュームの懸濁緩衝液を使用してフィルタープレスフレームおよびラインを浄化する現在の後濾過洗浄法は、この工程のＩｇＧを最大限に回収するには不十分であったことが見出された。驚くべきことに、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ精製懸濁液中の総ＩｇＧの効率的回収のために少なくとも３．０デッドボリューム、好ましくは３．６デッドボリュームの懸濁緩衝液が必要であることが見出された（実施例１２および図１を参照されたい）。ある実施形態では、フィルタープレスは任意の適切な懸濁緩衝液で洗浄し得る。特定の実施形態では、洗浄緩衝液は、例えば、５ｍＭリン酸一ナトリウム、５ｍＭ酢酸、および０．０１５％氷酢酸（ｖ／ｖ）を含む。
１つの態様では、低下量ＩｇＧが画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程中に紛れている方法に関する。１つの実施形態では、プロセスは、１０００Ｌ当たり１５０ｍＬ氷酢酸を含む少なくとも約３．６デッドボリュームの溶解緩衝液を用いたフィルター後洗浄により改善される。氷酢酸量と後洗浄緩衝液のｐＨ間の関連を図１０に示す。１つの実施形態では、後洗浄抽出緩衝液のｐＨは、約４．６〜約５．３である。好ましい実施形態では、後洗浄緩衝液のｐＨは、約４．７〜約５．２である。別の好ましい実施形態では、後洗浄緩衝液のｐＨは、約４．８〜約５．１である。さらに別の好ましい実施形態では、後洗浄緩衝液のｐＨは、約４．９〜約５．０である。
第２沈降工程により形成される懸濁液の清澄のためにすでに使用されている方法（ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ（登録商標）ＬＩＱＵＩＤ）と比較して、本発明は、いくつかの実施形態において、精製画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液のＩｇＧ収率および純度を改善する方法を提供する。１つの態様では、改善は、低下量ＩｇＧが改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキ中に紛れている方法に関する。他の態様では、改善は、不純物量の低減が精製画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液に見られる方法に関する。
１つの実施形態では、プロセスは、画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過または遠心清澄前にヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。ある実施形態では、ヒュームドシリカ処理は、約０．０１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０６ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト〜約０．０５ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または約０．０２ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０３ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０４ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０５ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０６ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０７ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０８ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、０．０９ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペースト、または０．１ｋｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩペーストの添加を含み、混合物は、約５０分間〜約７０分間、または約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、もしくは約８０分間超、約２℃〜約８℃の温度でインキュベートする。別の実施形態では、プロセスは、残りのフィブリノーゲン、アミド分解活性、および／またはプレカリクレイン活性因子レベルを低減するヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。具体的な実施形態では、プロセスは、免疫グロブリン調製物中のＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａレベルを低減するヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。
別の実施形態では、プロセスは、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の濾過工程完了後にデプスフィルターをフィルターデッドボリュームの約３〜約５容積で洗浄することにより改善される。ある実施形態では、フィルターは、フィルターデッドボリュームの、約３．５容積〜約４．５容積、または少なくとも約２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０容積で洗浄する。特定の実施形態では、フィルタープレスは、デッドボリュームの少なくとも約３．６容積の懸濁緩衝液で洗浄する。
６．清浄処理
次いで、追加の汚染物質を改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾液から除去するため、試料を清浄処理する。血漿由来画分の清浄処理方法は当技術分野において周知である。一般に、任意の標準的な非イオン性清浄処理は本明細書に提供する方法と併用し得る。例えば、清浄処理プロトコールの例を以下に提供する。
簡単に述べると、ポリソルベート８０を改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾液に撹拌しながら添加して最終濃度約０．２％（ｗ／ｖ）とし、試料を少なくとも３０分間、約２〜８℃の温度でインキュベートする。次いで、クエン酸ナトリウム水和物を溶液に混合して最終濃度約８ｇ／Ｌとし、試料を約２〜８℃の温度で継続的に撹拌しながらさらに３０分間インキュベートする。
ある実施形態では、任意の適切な非イオン性清浄液を使用できる。適切な非イオン性清浄液の例としては、Ｏｃｔｙｌｇｌｕｃｏｓｉｄｅ、ジギトニン、Ｃ１２Ｅ８、Ｌｕｂｒｏｌ、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ＮｏｎｉｄｅｔＰ−４０、Ｔｗｅｅｎ２０（すなわち、ポリソルベート２０）、Ｔｗｅｅｎ８０（すなわち、ポリソルベート８０）、アルキルポリ（エチレンオキシド）、Ｂｒｉｊ清浄液、アルキルフェノールポリ（エチレンオキシド）、ポロキサマー、オクチルグルコシド、デシルマルトシドなどが挙げられるが、これらに限定されない。
１つの実施形態では、プロセスは、清浄試薬（例えば、ポリソルベート８０およびクエン酸ナトリウム水和物）を流体としてではなくスプレーによって添加することにより改善される。他の実施形態では、改良画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾液に清浄試薬を固体として、添加物の迅速な分配を確実にするように試料を混合しながら添加し得る。ある実施形態では、固体試薬の添加は、流体添加などのように局所濃度が過剰とならないように濾液の非局在表面領域上に固体を散布して行うことが好ましい。
７．第３沈降事象−沈降物Ｇ
残りのいくつかの小タンパク質（アルブミンおよびトランスフェリンなど）を除去するために、第３沈降を２５％アルコール濃度で実施する。簡単に述べると、清浄処理ＩＩ＋ＩＩＩ濾液ｐＨを、適切なｐＨ調節剤（例えば、１Ｍ水酸化ナトリウムまたは１Ｍ酢酸）を用いて、約６．８〜７．２、好ましくは約６．９〜約７．１、最も好ましくは約７．０に調節する。次いで、冷アルコールを溶液に添加して最終濃度約２５％（ｖ／ｖ）とし、混合物を約−６℃〜約−１０℃で撹拌しながら少なくとも１時間インキュベートして、第３沈降物（すなわち、沈降物Ｇ）を形成する。１つの実施形態では、混合物は、少なくとも２時間、または少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、少なくとも１７時間、少なくとも１８時間、少なくとも１９時間、少なくとも２０時間、少なくとも２１時間、少なくとも２２時間、少なくとも２３時間、少なくとも２４時間、もしくは２４時間超インキュベートする。好ましい実施形態では、混合物を少なくとも２時間インキュベートする。より好ましい実施形態では、混合物を少なくとも４時間インキュベートする。さらに好ましい実施形態では、混合物を少なくとも８時間インキュベートする。
１つの態様では、プロセス改善は、低下量ＩｇＧが第３沈降工程の上清画分中に紛れている方法に関する。ある実施形態では、プロセスは、沈降アルコール添加直後または添加中に溶液ｐＨを約６．８〜約７．２に調節することにより改善される。別の実施形態では、プロセスは、沈降インキュベーション時間に継続的に溶液ｐＨを約６．８〜約７．２に維持することにより改善される。他の実施形態では、沈降アルコール添加直後または添加中に溶液ｐＨを約６．９〜約７．１に、または沈降アルコール添加直後または添加中に約６．８、６．９、７．０、７．１、もしくは７．２のｐＨに調節する。特定の実施形態では、沈降アルコール添加直後または添加中に溶液ｐＨを約７．０に調節する。ある実施形態では、沈降インキュベーション時間に継続的に溶液ｐＨを約６．９〜約７．１に、または沈降インキュベーション時間に継続的にｐＨを約７．０に維持する。それゆえ、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、沈降アルコール添加後ではなく添加前に溶液ｐＨを調節する類似沈降工程または沈降インキュベーション時間を通して溶液ｐＨを維持しない類似沈降工程と比較して、第３沈降工程の上清画分中に紛れている。１つの実施形態では、ｐＨは沈降保持またはインキュベーション時間の溶液ｐＨの継続的調節により、所望のｐＨで維持される。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
別の実施形態では、プロセスは、沈降アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を流体としてではなくスプレーによって添加することにより改善される。それゆえ、ある実施形態では、低下量ＩｇＧは、アルコールおよび／またはｐＨ調節に使用する溶液を流体添加により導入する類似沈降工程と比較して、第３沈降工程の上清画分中に紛れている。１つの実施形態では、アルコールは、エタノールである。
８．沈降物Ｇ（ＰｐｔＧ）の懸濁および濾過
沈降物ＧのＩｇＧ含量を可溶化するために、冷抽出緩衝液を使用してＰｐｔＧを再懸濁した。簡単に述べると、沈降物Ｇは、約４０〜９５のＡＵ２８０−３２０値に達するように、約０℃〜約８℃で注射水（ＷＦＩ）に１対３．５で溶解する。次いで、少なくとも２時間撹拌した溶液の最終ｐＨを５．２±０．２または約５．２±０．２に調節する。１つの実施形態では、このｐＨ調節は、１Ｍ酢酸を用いて行う。ＩｇＧ可溶性を増大するため、懸濁液の伝導度を約２．５〜約６．０ｍＳ／ｃｍに増大する。１つの実施形態では、伝導度は、塩化ナトリウムの添加により増大する。次いで、任意の不溶粒子を除去するために、基準孔径約０．１μｍ〜約０．４μｍの適切なデプスフィルターを用いて懸濁ＰｐｔＧ溶液を濾過する。１つの実施形態では、精製濾液を得るために、デプスフィルターの基準孔径は、約０．２μｍである（例えば、Ｃｕｎｏ ＶＲ０６フィルターまたは等価物）。別の実施形態では、懸濁ＰｐｔＧ溶液を遠心分離して精製上清を回収する。フィルター後洗浄は、約２．５〜約６．０ｍＳ／ｃｍの伝導度の塩化ナトリウム溶液を使用して実施する。典型的には、沈降物Ｇの抽出に適した溶液は、ＷＦＩおよび低伝導度の緩衝液を含む。１つの実施形態では、低伝導度緩衝液の伝導度は、約１０ｍＳ／ｃｍ未満である。好ましい実施形態では、低伝導度緩衝液の伝導度は、約９、８、７、６、５、４、３、２、もしくは１ｍＳ／ｃｍ未満である。好ましい実施形態では、低伝導度緩衝液の伝導度は、約６ｍＳ／ｃｍ未満である。別の好ましい実施形態では、低伝導度緩衝液の伝導度は、約４ｍＳ／ｃｍ未満である。別の好ましい実施形態では、低伝導度緩衝液の伝導度は、約２ｍＳ／ｃｍ未満である。
９．溶媒清浄処理
次いで、血漿由来製剤に存在し得る様々なウイルス汚染物質を不活性化するため、精製ＰｐｔＧ濾液を溶媒清浄（Ｓ／Ｄ）処理する。血漿由来画分の清浄処理方法は、当技術分野において周知である（総論については、Ｐｅｌｌｅｔｉｅｒ ＪＰ ｅｔ ａｌ．， Ｂｅｓｔ Ｐｒａｃｔ Ｒｅｓ Ｃｌｉｎ Ｈａｅｍａｔｏｌ． ２００６；１９（１）：２０５−４２を参照されたい）。一般に、任意の標準的なＳ／Ｄ処理は本明細書に提供する方法と併用し得る。例えば、Ｓ／Ｄ処理プロトコールの例を以下に提供する。
簡単に述べると、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、Ｔｗｅｅｎ２０、およびリン酸トリ（ｎ−ブチル）（ＴＮＢＰ）を精製ＰｐｔＧ濾液に添加して、それぞれ最終濃度約１．０％、約０．３％、および約０．３％とする。次いで、混合物を約１８℃〜約２５℃の温度で少なくとも約１時間撹拌する。
１つの実施形態では、プロセスは、Ｓ／Ｄ試薬（例えば、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、Ｔｗｅｅｎ２０、およびＴＮＢＰ）を流体としてではなくスプレーによって添加することにより改善される。他の実施形態では、清浄試薬は固体として、Ｓ／Ｄ成分の迅速な分配を確実にするように混合された精製ＰｐｔＧ濾液に添加し得る。ある実施形態では、固体試薬は、局所過剰濃度が流体添加中などに生じないように濾液の非局在表面領域上に固体を散布して添加することが好ましい。
１０．イオン交換クロマトグラフィー
Ｓ／Ｄ処理ＰｐｔＧ濾液からのＩｇＧのさらなる純化および濃縮のために、陽イオン交換および／または陰イオン交換クロマトグラフィーを使用できる。イオン交換クロマトグラフィーを使用したＩｇＧの純化および濃縮方法は、当技術分野において周知である。例えば、米国特許第５，８８６，１５４号には、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物が低ｐＨ（約３．８〜約４．５）で抽出し、続いてカプリル酸を使用してＩｇＧを沈降し、最終的に２つの陰イオン交換クロマトグラフィー工程を実施する方法について記載されている。米国特許第６，０６９，２３６号には、アルコール沈降に全く依存しないクロマトグラフＩｇＧ精製スキームについて記載されている。ＰＣＴ公開ＷＯ２００５／０７３２５２号には、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の抽出、カプリル酸処理、ＰＥＧ処理、および単一陰イオン交換クロマトグラフィー工程に関与するＩｇＧ精製法について記載されている。米国特許第７，１８６，４１０号には、画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩか画分ＩＩ沈降物のいずれかの抽出、続いて、アルカリ性ｐＨで実施した単一陰イオン交換工程に関与するＩｇＧ精製法について記載されている。米国特許第７，５５３，９３８号には、画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩか画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物のいずれかの抽出、カプリル酸処理、および１つか２つの陰イオン交換クロマトグラフィー工程に関与する方法について記載されている。米国特許第６，０９３，３２４号には、約６．０〜約６．６のｐＨで操作したマクロ孔質陰イオン交換樹脂の使用を含む精製法について記載されている。米国特許第６，８３５，３７９号には、アルコール画分の不在下で陽イオン交換クロマトグラフィーに依存する精製法について記載されている。上の刊行物の開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる。
本発明の方法の１つの実施形態では、Ｓ／Ｄ処理ＰｐｔＧ濾液は陽イオン交換クロマトグラフィーと陰イオン交換クロマトグラフィーの両方に供し得る。例えば、１つの実施形態では、Ｓ／Ｄ処理ＰｐｔＧ濾液は、溶液中ＩｇＧに結合する陽イオン交換カラムを通過させる。次いで、吸着ＩｇＧからＳ／Ｄ試薬を洗い流し、続いて、約８．０〜９．０のｐＨの高ｐＨ溶出緩衝液カラムから溶出する。このようにして、陽イオン交換クロマトグラフィー工程は、調製物からのＳ／Ｄ試薬除去、ＩｇＧ含有溶液の濃縮、またはその両方に使用できる。ある実施形態では、溶出緩衝液のｐＨは、約８．２〜約８．８、または約８．４〜約８．６のｐＨ、または約８．０、８．１、８．２、８．３、８．４、８．５、８．６、８．７、８．８、８．９、もしくは９．０のｐＨであり得る。好ましい実施形態では、溶出緩衝液のｐＨは、約８．５±０．１である。
ある実施形態では、陽イオン交換カラムからの溶出物は、より低いｐＨ、例えば約５．５〜約６．５に調節し得、溶液の伝導度を低減するように適切な緩衝液で希釈し得る。ある実施形態では、陽イオン交換溶出物ｐＨは、ｐＨ約５．７〜約６．３、または約５．９〜約６．１、またはｐＨ約５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、もしくは６．５に調節され得る。好ましい実施形態では、溶出物ｐＨは、ｐＨ約６．０±０．１に調節される。次いで溶出物を、調製物中に見られるいくつかの汚染物質に結合する陰イオン交換カラム上に負荷する。ＩｇＧ画分を含むカラム流出全体を、カラム負荷および洗浄中に回収する。ある実施形態では、本発明のイオン交換クロマトグラフ工程は、カラムモードでも、バッチモードでも、２つの組み合わせでも実施できる。
ある実施形態では、プロセスは、ｐＨ調節に使用する溶液を流体としてではなくスプレーによって添加することにより改善される。
１１．ナノ濾過および限外濾過／ダイアフィルトレーション
本明細書に提供するＩｇＧ組成物のウイルス負荷をさらに低減するため、陰イオン交換カラム流出物は適切なナノ濾過機を使用してナノ濾過し得る。ある実施形態では、ナノ濾過機の平均孔径は、約１５ｎｍ〜約２００ｎｍである。この使用に適したナノフィルターの例としては、ＤＶＤ、ＤＶ５０、ＤＶ２０（Ｐａｌｌ）、Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ ＮＦＰ、Ｖｉｒｅｓｏｌｖｅ ＮＦＲ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、Ｐｌａｎｏｖａ １５Ｎ、２０Ｎ、３５Ｎ、および７５Ｎ（Ｐｌａｎｏｖａ）が挙げられるが、これらに限定されない。具体的な実施形態では、ナノフィルターの平均孔径は、約１５ｎｍ〜約７２ｎｍ、または約１９ｎｍ〜約３５ｎｍ、または約１５ｎｍ、１９ｎｍ、３５ｎｍ、または７２ｎｍであり得る。好ましい実施形態では、ナノフィルターの平均孔径は、約３５ｎｍである（Ａｓａｈｉ ＰＬＡＮＯＶＡ ３５Ｎフィルターまたはその等価物など）。
任意選択的に、限外濾過／ダイアフィルトレーションを実施して、ナノ濾液へさらに濃縮し得る。１つの実施形態では、産生プロセス終了間際の具体的に設計された後洗浄および製剤化と共にオープンチャネル膜を使用して、収率および保存安定性に影響を与えずに、当技術分野のＩＶＩＧ（例えば、ＧＡＭＭＡＧＡＲＤ（登録商標）ＬＩＱＵＩＤ）と比較してタンパク質濃度が約２倍高い（２００ｍｇ／ｍＬ）ＩｇＧ組成物を生成する。ほとんどの市販限外濾過膜は、タンパク質を大幅に失わずに濃度２００ｍｇ／ｍＬのＩｇＧに達することができない。これらの膜は、早期にブロックされるため、適切な後洗浄を達成することが困難である。したがってオープンチャネル膜構造を使用しなければならない。さらに、オープンチャネル膜を用いた場合、タンパク質を著しく失うことなく（損失２％未満）、必要な濃度を得るためには、具体的に設計された後洗浄方法を使用しなければならない。さらに驚くべきことに、より高いタンパク質濃度２００ｍｇ／ｍＬは低ｐＨ保存工程のウイルス不活性化能に作用しないという事実がある。
ナノ濾過後、限外濾過／ダイアフィルトレーションにより濾液をさらに濃縮し得る。１つの実施形態では、限外濾過によりナノ濾液をタンパク質濃度約２％〜約１０％（ｗ／ｖ）に濃縮し得る。ある実施形態では、限外濾過は、オープンチャネルスクリーンを備えるカセット内で実行し、限外濾過膜の基準分子量カットオフ（ＮＭＷＣＯ）は、約１００ｋＤａ未満または約９０ｋＤａ未満、約８０ｋＤａ未満、約７０ｋＤａ未満、約６０ｋＤａ未満、約５０ｋＤａ未満、約４０ｋＤａ未満、約３０ｋＤａ未満、もしくはそれより低い。好ましい実施形態では、限外濾過膜のＮＭＷＣＯは５０ｋＤａ以下である。
限外濾過工程の完了時、濃縮物は、静脈内または筋肉内投与に適した溶液に対するダイアフィルトレーションを介してさらに濃縮し得る。ある実施形態では、ダイアフィルトレーション溶液は、分解防止剤および／または緩衝剤を含み得る。好ましい実施形態では、分解防止剤および緩衝剤は、適切な濃度（例えば約０．２０Ｍ〜約０．３０Ｍ、または約０．２２Ｍ〜約０．２８Ｍ、または約０．２４Ｍ〜約０．２６ｍＭ、または約２．０ｍＭ、約２．１ｍＭ、約２．２ｍＭ、約２．３ｍＭ、約２．４ｍＭ、約２．５ｍＭ、約２．６ｍＭ、約２．７ｍＭ、約２．８ｍＭ、約２．９ｍＭ、もしくは約３．０ｍＭの濃度）のグリシンである。好ましい実施形態では、ダイアフィルトレーション緩衝液は、０．２５Ｍまたは約０．２５Ｍグリシンを含む。
典型的には、最小交換容量は、元の濃縮容量の少なくとも約３倍または元の濃縮容量の少なくとも約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、もしくは約９倍超である。ＩｇＧ溶液は、最終タンパク質濃度約５％〜約２５％（ｗ／ｖ）、または約６％〜約１８％（ｗ／ｖ）、または約７％〜約１６％（ｗ／ｖ）、または約８％〜約１４％（ｗ／ｖ）、または約９％〜約１２％、または最終濃度約５％、または約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、約２０％、約２１％、約２２％、約２３％、約２４％、約２５％もしくは約２５％超に濃縮し得る。１つの実施形態では、後洗浄画分を濃縮溶液に添加せずに少なくとも約２３％の最終タンパク質濃度に達する。別の実施形態では、後洗浄画分を濃縮溶液に添加せずに少なくとも約２４％の最終タンパク質濃度に達する。後洗浄画分を濃縮溶液に添加せずに少なくとも約２５％の最終タンパク質濃度に達する。典型的には、濃縮プロセス終了時の溶液ｐＨは約４．６〜５．１である。
例示的実施形態では、限外濾過前にＩｇＧ組成物ｐＨを約４．５に調節する。溶液は、限外濾過を通してタンパク質濃度５±２％ｗ／ｖに濃縮する。ＵＦ膜の基準分子量カットオフ（ＮＭＷＣＯ）は、５０，０００ダルトンまたは５０，０００ダルトン未満である（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎポリエーテルスルホン膜）。濃縮物は、１０容量の０．２５Ｍグリシン溶液、ｐＨ４．５±０．２に対してダイアフィルトレーションする。限外ダイアフィルトレーション操作全体を通して、溶液は、約２℃〜約８℃の温度に維持する。ダイアフィルトレーション後、溶液は、少なくとも１１％（ｗ／ｖ）のタンパク質濃度に濃縮する。
１２．製剤化
ダイアフィルトレーション工程完了時、溶液のタンパク質濃度は、ダイアフィルトレーション緩衝液で最終濃度約５％〜約２０％（ｗ／ｖ）、または約６％〜約１８％（ｗ／ｖ）、または約７％〜約１６％（ｗ／ｖ）、または約８％〜約１４％（ｗ／ｖ）、または約９％〜約１２％、または最終濃度約５％、または約６％、約７％、約８％、約９％、約１０％、約１１％、約１２％、約１３％、約１４％、約１５％、約１６％、約１７％、約１８％、約１９％、または約２０％に調節する。好ましい実施形態では、溶液の最終タンパク質濃度は約９％〜約１１％、より好ましくは約１０％である。
製剤化した大量溶液は、絶対孔径約０．２２ミクロン以下、例えば約０．２ミクロンの膜フィルターを通した濾過により、さらに滅菌する。次いで溶液を適切な密封最終容器内に滅菌分配し、試料を検査用に採取する。
１つの実施形態では、ＩｇＧ組成物の濃度は、ダイアフィルトレーション緩衝液を用いて約１０．２±０．２％（ｗ／ｖ）にさらに調節する。必要に応じて、ｐＨは約４．４〜約４．９に調節する。最終的に、溶液は、滅菌濾過し、３０℃または約３０℃で３週間インキュベートする。
Ｂ．Ｈ因子
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｈ因子組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。１つの具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ｈ因子組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）Ｈ因子組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
１つの実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１Ｈ因子タンパク質富化工程を実施し、第１富化Ｈ因子組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１Ｈ因子タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２Ｈ因子タンパク質富化工程を実施して、第２富化Ｈ因子組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１Ｈ因子タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｈ因子組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ｈ因子富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程；（ｂ）第２Ｈ因子富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、Ｈ因子富化工程を実施する工程をさらに含む。ある実施形態では、Ｈ因子富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｈ因子組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ｈ因子富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｄ）第２Ｈ因子富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
同様に、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ｈ因子組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ｈ因子富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程；（ｂ）第２Ｈ因子富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｅ）第３Ｈ因子富化工程を実施して、第３富化血漿由来Ｈ因子組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、または表１１に見られるバリエーションＶａｒ．１０１〜Ｖａｒ．１１００の任意の１つから選択される。
１．血漿由来Ｈ因子の製造法
産生に関して、ヒト血漿から開始する請求プロセスは、例えば、冷エタノールによる分別沈降により得られた典型的な産業中間体の副画分に基づくべきである（Ｓｃｈｕｌｔｚｅ Ｈ Ｅ， Ｈｅｒｅｍａｎｓ Ｊ Ｆ； Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｖｏｌｕｍｅ Ｉ： Ｎａｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９６６， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ； ｐ． ２３６−３１７に概説されている）。かかる精製の好ましい実施形態は、医薬規制当局の管理下にある血漿製剤（例えば、免疫グロブリン）の確立された公認製造プロセスが影響を受けない形で、工業規模の血漿画分の側画分から機能的Ｈ因子を精製することである。例えば、画分ＩＩ＋ＩＩＩペースト懸濁液の濾過後に得られた濾過ケーキ（Ｔｅｓｃｈｎｅｒ Ｗ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ２００７ Ｊａｎ；９２（１）：４２−５５）、画分Ｉ沈降物（上記Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．， （１９４６））、沈降物ＩＩＩ（Ｓｃｈｕｌｔｚｅ Ｈ Ｅ， Ｈｅｒｅｍａｎｓ Ｊ Ｆ； Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ． Ｖｏｌｕｍｅ Ｉ： Ｎａｔｕｒｅ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９６６， Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ； ｐ． ２３６−３１７ ａｔ ｐ． ２５３）および沈降物Ｂ（ＫｉｓｔｌｅｒおよびＮｉｔｓｃｈｍａｎｎの方法；上記ｐ．２５３）は、Ｈ因子のかかる産業的供給源の例である。それらの側画分から開始して、当技術分野において既知である精製法をＨ因子の純化に使用できる。それらは、ポリエチレングリコールを用いた沈降（Ｎａｇａｓａｗａ Ｓ， Ｓｔｒｏｕｄ Ｒ Ｍ； Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９８０； １７：１３６５−７２）、固定化ヘパリンを介した親和性クロマトグラフィー（前記引用）、陰イオン交換クロマトグラフィー（Ｃｒｏｓｓｌｅｙ Ｌ Ｇ， Ｐｏｒｔｅｒ Ｒ Ｒ； Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ １９８０； １９１：１７３−８２）および疎水性相互作用クロマトグラフィー（Ｒｉｐｏｃｈｅ Ｊ， Ａｌ Ｓａｌｉｈｉ Ａ， Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ Ｊ， Ｆｏｎｔａｉｎｅ Ｍ； Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ １９８４； ２２１， ８９−９６）に基づき得る。
１つの実施形態では、本発明の出発物質は、コーン画分を使用して調製する。この画分は、ドナー血清またはモノクローナルもしくは組換え免疫グロブリンから調製できる免疫グロブリン調製物の調製に使用される周知の画分である。典型例では、血液または血漿は、健常ドナーから回収する。通常、血液は、Ｈ因子調製物を投与する対象と同動物種から回収する（典型的には「相同」免疫グロブリンと呼ばれる）。免疫グロブリンは、適切な方法（例えば、コーン画分、超遠心分離法、電気泳動調製、イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィー、ポリエチレングリコール画分など）により、血液から単離する（例えば、Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ６８：４５９−７５ （１９４６）； Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７１：５４１−５０ （１９４９）； Ｂａｒｕｎｄｅｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７：１５７−７４ （１９６２）； Ｋｏｂｌｅｔ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． １３：９３−１０２ （１９６７）；米国特許第５，１２２，３７３号および同第５，１７７，１９４号を参照されたい；これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。１つの実施形態では、本発明は、免疫グロブリン調製物からの廃棄画分を使用する。特定の実施形態では、本発明は、画分ＩＩ＋ＩＩＩ抽出物を濾過後にＳｉＯ２濾過ケーキに見られる画分を使用する。
一般に、本発明によるＨ因子調製物は、任意の適切な出発物質、例えば、回収した血漿または血漿源から調製できる。典型例では、血液または血漿は、健常ドナーから回収する。通常、血液は、Ｈ因子調製物を投与する対象と同動物種から回収する（典型的には「相同」Ｈ因子と呼ばれる）。Ｈ因子は、適切な方法、例えば、沈降（アルコール画分またはポリエチレングリコール画分）、クロマトグラフ法（イオン交換クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、免疫親和性クロマトグラフィーなど）、超遠心分離法、および電気泳動調製などにより血液または血漿から単離される（例えば、Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ６８：４５９−７５ （１９４６）； Ｄｅｕｔｓｃｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １６４：１０９−１１８； Ｏｎｃｌｅｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７１：５４１−５０ （１９４９）； Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７２：４６５−４７４ （１９５０）； Ｃｏｈｎ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｐｌａｓｍａ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ｔｈｅｉｒ Ｓｔａｔｅ ｉｎ Ｎａｔｕｒｅ （Ｊ．Ｌ． Ｔｕｌｌｉｓ， ｅｄ）， ｐｐ． １−５８， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， ＮｅｗＹｏｒｋ ａｎｄ Ｌｏｎｄｏｎ （１９５３）； Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｈｅｌｖ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ ３７：８６６−８７３； Ｋｉｓｔｌｅｒ ａｎｄ Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７：４１４−４２４ （１９６２）； Ｂａｒｕｎｄｅｒｎ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７：１５７−７４ （１９６２）； Ｋｏｂｌｅｔ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． １３：９３−１０２ （１９６７）；米国特許第５，１２２，３７３号および同第５，１７７，１９４号を参照されたい；これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。
ある実施形態では、Ｈ因子は、血漿画分により、他の商業的に重要な血液製剤の製造中に廃棄されるところであった物質から回収する。例えば、例示的実施形態では、Ｈ因子は、画分Ｉ沈降物から抽出される、および／または再懸濁画分ＩＩ＋ＩＩＩペーストの遠心分離または濾過後に形成される濾過ケーキから抽出される。有利には、本明細書に提供する方法により、追加の投入血漿または既存の製造プロセスの再設計および認可再承認の必要性がなく、他の商業的に重要な血漿由来血液製剤（静脈内（ＩＶＩＧ）または皮下投与用ＩｇＧγグロブリンなど）のために工業規模のＨ因子調製を達成できる。
１つの態様では、本発明は、血漿画分からＨ因子を抽出して、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、および／またはＦＸＩＩａ含量を本明細書に提供するＳｉＯ２処理方法を用いて低下することにより、血漿由来のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低下した富化Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供する。
１つの実施形態では、本方法は、血漿からの富化Ｈ因子組成物調製のために提供し、本方法は、（ａ）第１沈降工程中、約６％〜約１０％アルコールでｐＨ約７．０〜約７．５において脱寒冷血漿画分からタンパク質を沈降させて、第１沈降物および第１上清を得る工程；（ｂ）第２沈降工程中、約２０％〜約３０％アルコールでｐＨ約６．７〜約７．３において第１上清からＨ因子を沈降させて、第２沈降物を形成する工程；（ｃ）第２沈降物を再懸濁化して、懸濁液を形成する工程；（ｄ）微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を工程（ｃ）からの懸濁液と混合する工程；（ｅ）懸濁液を分離して、濾過ケーキおよび上清を形成する工程；ならびに（ｆ）最終組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンレベルを低減する溶液条件下で、ＳｉＯ２濾過ケーキからＨ因子を抽出する工程を含む。好ましい実施形態では、濾過ケーキは、適切なフィルターを含むフィルタープレスを通した上清の濾過により懸濁液から分離する。１つの実施形態では、Ｈ因子は、濾過ケーキを含むフィルタープレスを通して抽出緩衝液を再利用することにより抽出できる。
第２態様では、本発明は、画分Ｉ沈降物からＨ因子を抽出することにより、血漿からセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低下した富化Ｈ因子組成物を調製する方法を提供する。
好ましい実施形態では、本方法は、血漿からの富化Ｈ因子組成物調製のために提供し、本方法は、（ａ）第１沈降工程中、約６％〜約１０％アルコールでｐＨ約７．０〜約７．５において脱寒冷血漿画分からタンパク質を沈降させて、第１沈降物および第１上清を得る工程；（ｂ）Ｈ因子抽出緩衝液を用いて沈降物からＨ因子を抽出する工程、ならびに（ｃ）本明細書に提供する適切な方法を使用して組成物をＳｉＯ２処理することによりセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンレベルを低減する工程を含む。
１つの態様では、本方法は、第２血液タンパク質、例えば、ＩｇＧγグロブリンを得るように設計されたプロセスにより作製した副産物画分を製造する２つ以上のプールからＨ因子を抽出することにより、血漿から富化Ｈ因子組成物を調製するために提供する。１つの実施形態では、本方法は、ＩｇＧγグロブリン（例えば、ＩＶＩＧ）の製造中に形成される画分Ｉ沈降物および画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキのプーリングならびに画分プールからのＨ因子抽出を含む。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低下した富化Ｈ因子組成物は、画分Ｉ沈降物および／または画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキからの抽出後に、さらに精製し得る。Ｈ因子をさらに純化する様々な方法（限定しないが、追加沈降工程または分別、親和性クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー、溶媒／清浄液（Ｓ／Ｄ）処理、ナノ濾過、限外濾過、ダイアフィルトレーションなど）が利用可能である。
１つの実施形態では、本方法は、富化Ｈ因子組成物から不純物を沈降させることをさらに含む。ある実施形態では、この工程は、少なくとも１種の不純物、例えば脂質またはタンパク質を組成物から沈降させ、次いでＨ因子を含む上清から沈降物を分離することを含む。次いで、任意選択的に、Ｈ因子を分離沈降物中の上清から沈降させる。
具体的な実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約２．５％〜約７．５％で使用して少なくとも１種の不純物を溶液から沈降させることにより、血漿画分から抽出したＨ因子組成物（例えば、画分Ｉ沈降物、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、沈降Ｂ沈降物など）をさらに富化する。別の実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約３％〜約７％で使用する。別の実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約４％〜約６％で使用する。さらに別の実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約５％で使用する。
別の具体的な実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約９％〜約１５％で使用して溶液からＨ因子を沈降させることにより血漿画分から抽出したＨ因子組成物（例えば、画分Ｉ沈降物、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、沈降Ｂ沈降物など）をさらに富化する。別の実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約１０％〜約１４％で使用する。別の実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約１１％〜約１３％で使用する。さらに別の実施形態では、ＰＥＧを最終濃度約１２％で使用する。
別の具体的な実施形態では、血漿画分から抽出したＨ因子組成物（例えば、画分Ｉ沈降物、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、沈降Ｂ沈降物など）は、（ａ）溶液から少なくとも１種の不純物を沈降させること；（ｂ）溶液からＨ因子を沈降させること；および（ｃ）Ｈ因子を含む沈降物を回収することによりさらに富化する。ある実施形態では、沈降工程は、アルコール（例えば、メタノールまたはエタノール）、ＰＥＧ、またはその組み合わせを用いて行う。特定の実施形態では、沈降工程は、ＰＥＧを用いて行う。ある実施形態では、第１沈降工程のＰＥＧ濃度は約２．５％〜約７．５％であり、第２沈降工程のＰＥＧ濃度は約９％〜約１５％である。具体的な実施形態では、第１工程のＰＥＧ濃度は約４％〜約６％であり、第２工程のＰＥＧ濃度は約１１％〜約１３％である。より具体的な実施形態では、第１沈降工程のＰＥＧ濃度は約５％であり、第２沈降工程のＰＥＧ濃度は約１２％である。さらに他の実施形態では、第１および第２沈降工程のＰＥＧ濃度は、表１６に列挙するバリエーションＶａｒ．１１０１およびＶａｒ．１２２１から選択される。
（表１６）Ｈ因子組成物の富化におけるＰＥＧ濃度
Figure 2016155798
ある実施形態では、富化Ｈ因子組成物の調製のための方法は、組成物の純度をさらに富化するために、少なくとも１つ、好ましくは２つのクロマトグラフ工程をさらに含む。一般に、例えば、画分Ｉ沈降物または画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキから抽出したＨ因子組成物をさらに富化するために任意の適切なクロマトグラフ法を適用し得る。ある実施形態では、クロマトグラフィー富化前、抽出したＨ因子組成物は、上記のとおり１つまたは複数の追加沈降工程に供して、組成物に存在する不純物を低減し、クロマトグラフ工程の負荷容量を減らし、および／または組成物の緩衝液を交換する。
ある実施形態では、陰イオン交換クロマトグラフィー（ＡＥＣ）、陽イオン交換クロマトグラフィー（ＣＥＣ）、ヘパリン親和性クロマトグラフィー、疎水性交換クロマトグラフィー（ＨＩＣ）、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー（ＨＡＰ）、免疫親和性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィー（すなわち、ゲル濾過）、または他の適切なクロマトグラフ工程を含むクロマトグラフ工程により、Ｈ因子組成物をさらに富化し得る。クロマトグラフ工程はバッチモードで実施してもよいしカラムモードで実施してもよい。
好ましい実施形態では、本方法は、陰イオン交換クロマトグラフィーおよびヘパリン親和性クロマトグラフィーの使用を含む。
ある実施形態では、本明細書に提供する富化Ｈ因子組成物の調製のための方法は、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、最も好ましくは少なくとも３つのウイルス不活性化または除去工程をさらに含む。本明細書に提供する方法と適用し得るウイルス不活性化または除去工程の例としては、溶媒清浄処理（Ｈｏｒｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ Ｃｏａｇｕｌ Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ １９９４ （５ Ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ２１−Ｓ２８ ａｎｄ Ｋｒｅｉｌ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ２００３ （４３）：１０２３−１０２８、これらは共に、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に明確に組み込まれる）、ナノ濾過（Ｈａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ １９８９ （５６）２３０−２３６ ａｎｄ Ｙｕａｓａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ． １９９１ （７２ （ｐｔ ８））：２０２１−２０２４、これらは共に、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に明確に組み込まれる）、低ｐＨインキュベーション、高温（Ｋｅｍｐｆ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ １９９１ （３１）４２３−４２７ ａｎｄ Ｌｏｕｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ １９９４ （２２）：１３−１９）、および凍結乾燥Ｈ因子組成物の熱処理（Ｐｉｓｚｋｉｅｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．， Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ． １９８７ Ｊｕｌ １５；４７（２）：２３５−４１； Ｐｉｓｚｋｉｅｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ Ｓｔｕｄ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｂｌｏｏｄ Ｔｒａｎｓｆｕｓ． １９８９；（５６）：４４−５４； Ｅｐｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｆｒｉｃｋｅ， Ａｒｃｈ Ｐａｔｈｏｌ Ｌａｂ Ｍｅｄ． １９９０ Ｍａｒ；１１４（３）：３３５−４０）が挙げられるが、これらに限定されない。
好ましい実施形態では、本発明は、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低下したウイルス的に安全な富化Ｈ因子組成物の調製法を提供し、（ｉ）ＳｉＯ２を使用して画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキからＨ因子を抽出する工程、（ｉｉ）第１沈降工程を実施して、Ｈ因子組成物から少なくとも１種の不純物を沈降させること、（ｉｉｉ）第２沈降工程を実施して、組成物からＨ因子を沈降させる工程、ならびに（ｉｖ）ウイルス不活性化もしくは除去工程の少なくとも１つを実施し、それにより、ウイルス的に安全な富化Ｈ因子組成物を調製する工程を含む。１つの実施形態では、沈降工程は、ＰＥＧ沈降を含む。具体的な実施形態では、第１および第２沈降工程のＰＥＧ濃度は、表１６に列挙するバリエーションＶａｒ．１１０１およびＶａｒ．１２２１から選択される。
２．共結合および差次的溶出
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、タンパク質を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）に結合させることにより、血漿プール由来の組成物からＨ因子とセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンとを共抽出する工程、第１溶液条件下でＳｉＯ２からセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程、続いて、第２溶液条件下でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。好ましい実施形態では、出発組成物は、再懸濁画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物またはその等価沈降物である。
具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；（ｃ）Ｈ因子が結合し続ける溶液条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに（ｄ）Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
ある実施形態では、Ｈ因子が結合し続ける溶液条件とは、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを選択的に溶出しつつ、Ｈ因子の実質的な画分が、ＳｉＯ２に結合し続ける条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合するＨ因子の少なくとも１０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合するＨ因子の少なくとも２５％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合するＨ因子の少なくとも５０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合するＨ因子の少なくとも７５％を指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合するＨ因子の少なくとも１０％、または少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または９９％超のＳｉＯ２に結合するＨ因子を指す。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンならびにＨ因子の差次的溶出は、大部分のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは溶出するが、結合Ｈ因子の実質的な画分は溶出しない条件に適した第１溶液条件（例えば、第１溶出緩衝液）、およびＳｉＯ２からの結合Ｈ因子の実質的な画分の溶出に適した第２溶液条件（例えば、第２溶出緩衝液）下でＳｉＯ２と継続的に接触させること（すなわち、段階的溶出）により達成される。
他の実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンならびにＨ因子の差次的溶出は、大部分のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは溶出するが、結合Ｈ因子の実質的な画分は溶出しない条件に適した第１溶液条件から、ＳｉＯ２からの結合Ｈ因子の実質的な画分の溶出に適した第２溶液条件に溶液条件を徐々に変化させること（すなわち、勾配溶出）により達成される。このようにして、ＳｉＯ２流出のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンならびにＨ因子含量は部分的に重複し得る。溶出分別および個々の分別の特性化により、Ｈ因子プールは、Ｈ因子含量が高くかつセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低い画分から作製し得る。
上記方法から所望の成果を得るために変更し得る溶液条件としては、溶液ｐＨ、溶液の伝導度、溶液の温度、組成物中のＨ因子濃度、および本方法に使用されるＳｉＯ２濃度が挙げられるが、これらに限定されない。一般に、Ｈ因子富化組成物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量の低減法に適したｐＨ範囲は、約３〜約１１の範囲である。上記方法に適した伝導度は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの範囲である。上記方法の実施に適した温度は、約−１０℃〜約９０℃の範囲である。微細二酸化シリコンは約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質の範囲の最終濃度で使用し得る。最終的に、Ｈ因子組成物は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で変更し得る。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約５．０〜約１１．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約６．０〜約１．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．５〜約８．５である。さらに別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約８．０である。
特定の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、ｐＨ約７．０を含む。別の具体的な実施形態では、ｐＨは約７．５である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約３．０または約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８．０、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、約９．２、約９．３、約９．４、約９．５、約９．６、約９．７、約９．８、約９．９、約１０．０、約１０．１、約１０．２、約１０．３、約１０．４、約１０．５、約１０．６、約１０．７、約１０．８、約１０．９、もしくは約１１．０である。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、少なくとも６．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも６．５である。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．０である。さらに別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．５である。さらに他の実施形態では、溶液ｐＨは少なくとも３．０または少なくとも３．５、少なくとも４．０、少なくとも４．５、少なくとも５．０、少なくとも５．５、少なくとも６．０、少なくとも６．５、少なくとも７．０、少なくとも７．５、少なくとも８．０、少なくとも８．５、少なくとも９．０、少なくとも９．５、少なくとも１０．０、少なくとも１０．５、もしくは１０．５超である。
任意の上記方法の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約１０．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約９．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０以下である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約１１．０以下、または１０．５以下、１０．０以下、９．５以下、９．０以下、８．５以下、８．０以下、７．５以下、７．０以下、６．５以下、６．０以下、５．５以下、５．０以下、４．５以下、４．０以下、３．５以下、または３．５未満である。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。別の実施形態では、伝導度は、少なくとも２０ｍＳ／ｃｍである。さらに他の実施形態では、溶液条件の伝導度は、少なくとも２ｍＳ／ｃｍ、または少なくとも３ｍＳ／ｃｍ、４ｍＳ／ｃｍ、５ｍＳ／ｃｍ、６ｍＳ／ｃｍ、７ｍＳ／ｃｍ、８ｍＳ／ｃｍ、９ｍＳ／ｃｍ、１０ｍＳ／ｃｍ、１１ｍＳ／ｃｍ、１２ｍＳ／ｃｍ、１３ｍＳ／ｃｍ、１４ｍＳ／ｃｍ、１５ｍＳ／ｃｍ、１６ｍＳ／ｃｍ、１７ｍＳ／ｃｍ、１８ｍＳ／ｃｍ、１９ｍＳ／ｃｍ、２０ｍＳ／ｃｍ、２１ｍＳ／ｃｍ、２２ｍＳ／ｃｍ、２３ｍＳ／ｃｍ、２４ｍＳ／ｃｍ、２５ｍＳ／ｃｍ、２６ｍＳ／ｃｍ、２７ｍＳ／ｃｍ、２８ｍＳ／ｃｍ、２９ｍＳ／ｃｍ、３０ｍＳ／ｃｍ、３１ｍＳ／ｃｍ、３２ｍＳ／ｃｍ、３３ｍＳ／ｃｍ、３４ｍＳ／ｃｍ、３５ｍＳ／ｃｍ、３６ｍＳ／ｃｍ、３７ｍＳ／ｃｍ、３８ｍＳ／ｃｍ、３９ｍＳ／ｃｍ、４０ｍＳ／ｃｍ、４１ｍＳ／ｃｍ、４２ｍＳ／ｃｍ、４３ｍＳ／ｃｍ、４４ｍＳ／ｃｍ、４５ｍＳ／ｃｍ、４６ｍＳ／ｃｍ、４７ｍＳ／ｃｍ、４８ｍＳ／ｃｍ、４９ｍＳ／ｃｍ、５０ｍＳ／ｃｍ、５５ｍＳ／ｃｍ、６０ｍＳ／ｃｍ、６５ｍＳ／ｃｍ、７０ｍＳ／ｃｍ、７５ｍＳ／ｃｍ、８０ｍＳ／ｃｍ、８５ｍＳ／ｃｍ、９０ｍＳ／ｃｍ、９５ｍＳ／ｃｍ、１００ｍＳ／ｃｍ、もしくは１００ｍＳ／ｃｍ超である。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。別の実施形態では、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度である。別の実施形態では、約２０ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの伝導度である。さらに別の実施形態では、約２０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度である。
実施例５に示し図３に例証するように、ｐＨ６．０超（例えば、７．５）および増大した伝導度（例えば、６．０ｍＳ／ｃｍ超）を有する溶液条件の使用は、ＳｉＯ２からのセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲン溶出を増大し、ＳｉＯ２からのＨ因子溶出を低減することが見出された。有利には、これらの所見を使用して、Ｈ因子組成物に存在するセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンレベルを低減する方法を提供することができる。上記方法の特定の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、少なくとも約１０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。別の特定の実施形態では、溶液条件は、少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、少なくとも２０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、溶液条件は、少なくとも２０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。
３．共結合および選択的Ｈ因子溶出
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、タンパク質を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）に結合させることにより、血漿プール由来の組成物からＨ因子とセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンとを共抽出する工程、結合したセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ２に結合し続ける条件下で、Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。好ましい実施形態では、出発組成物は、再懸濁画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物またはその等価沈降物である。
具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子およびセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件下で、Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件とは、Ｈ因子を選択的に溶出しつつ、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分はＳｉＯ２に結合し続ける条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも２５％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも５０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも７５％を指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１０％、またはＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９％超を指す。
上記方法から所望の成果を得るために変更し得る溶液条件としては、溶液ｐＨ、溶液の伝導度、溶液の温度、組成物中のＨ因子濃度、および本方法に使用されるＳｉＯ２濃度が挙げられるが、これらに限定されない。一般に、Ｈ因子富化組成物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量の低減法に適したｐＨ範囲は、約３〜約１１の範囲である。上記方法に適した伝導度は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの範囲である。上記方法の実施に適した温度は、約−１０℃〜約９０℃の範囲である。微細二酸化シリコンは約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質の範囲の最終濃度で使用し得る。最終的に、Ｈ因子組成物は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で変更し得る。
１つの実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約５．０〜約１１．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約６．０〜約１．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．５〜約８．５である。さらに別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約８．０である。
特定の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分が結合し続ける溶液条件は、ｐＨ約７．０を含む。別の具体的な実施形態では、ｐＨは約７．５である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約３．０または約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８．０、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、約９．２、約９．３、約９．４、約９．５、約９．６、約９．７、約９．８、約９．９、約１０．０、約１０．１、約１０．２、約１０．３、約１０．４、約１０．５、約１０．６、約１０．７、約１０．８、約１０．９、もしくは約１１．０である。
１つの実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分が結合し続ける溶液条件は、少なくとも６．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも６．５である。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．０である。さらに別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．５である。さらに他の実施形態では、溶液ｐＨは少なくとも３．０または少なくとも３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、または１０．５超である。
任意の上記方法の別の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約１０．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約９．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０以下である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約１１．０以下、または１０．５、１０．０、９．５、９．０、８．５、８．０、７．５、７．０、６．５、６．０、５．５、５．０、４．５、４．０、３．５、もしくは３．５未満である。
１つの実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度を含む。別の実施形態では、伝導度は、約１０ｍＳ／ｃｍ以下である。さらに他の実施形態では、溶液条件の伝導度は、約２０ｍＳ／ｃｍ以下、または約１９ｍＳ／ｃｍ以下、１８ｍＳ／ｃｍ以下、１７ｍＳ／ｃｍ以下、１６ｍＳ／ｃｍ以下、１５ｍＳ／ｃｍ以下、１４ｍＳ／ｃｍ以下、１３ｍＳ／ｃｍ以下、１２ｍＳ／ｃｍ以下、１１ｍＳ／ｃｍ以下、１０ｍＳ／ｃｍ以下、９ｍＳ／ｃｍ以下、８ｍＳ／ｃｍ以下、７ｍＳ／ｃｍ以下、６ｍＳ／ｃｍ以下、５ｍＳ／ｃｍ以下、４ｍＳ／ｃｍ以下、３ｍＳ／ｃｍ以下、２ｍＳ／ｃｍ以下、または２ｍＳ／ｃｍ未満である。
１つの実施形態では、溶液条件は、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２から溶出されかつＨ因子の著しい画分が結合し続ける溶液条件は、約２ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。別の実施形態では、伝導度は約２ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍである。別の実施形態では、伝導度は約２０ｍＳ／ｃｍ〜約６ｍＳ／ｃｍである。さらに別の実施形態では、伝導度は約１０ｍＳ／ｃｍ〜約６ｍＳ／ｃｍである。
実施例５に示し図３に例証するように、ｐＨ６．０超（例えば、７．５）および低下した伝導度（例えば、２０ｍＳ／ｃｍ未満）を有する溶液条件の使用は、ＳｉＯ２からのＨ因子溶出を増大し、ＳｉＯ２からのセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲン溶出を低減することが見出された。有利には、これらの所見を使用して、Ｈ因子組成物に存在するセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンレベルを低減する方法を提供することができる。上記方法の特定の実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２から溶出されかつセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分が結合し続ける溶液条件は、伝導度約２０ｍＳ／ｃｍ以下および少なくとも７．０のｐＨを含む。別の特定の実施形態では、溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。
４．Ｈ因子の選択的結合
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子に結合するがセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離すること；ならびに（ｃ）Ｈ因子をＳｉＯ２から溶出する工程を含む。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２に結合しない溶液条件とは、Ｈ因子をＳｉＯ２へ選択的に結合させつつ、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分は、溶液中で非結合を保つ条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも１０％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも２５％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも５０％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも７５％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも１０％のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲン、または出発組成物中の少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９％超のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。
上記方法から所望の成果を得るために変更し得る溶液条件としては、溶液ｐＨ、溶液の伝導度、溶液の温度、組成物中のＨ因子濃度、および本方法に使用されるＳｉＯ２濃度が挙げられるが、これらに限定されない。一般に、Ｈ因子富化組成物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量の低減法に適したｐＨ範囲は、約３〜約１１の範囲である。上記方法に適した伝導度は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの範囲である。上記方法の実施に適した温度は、約−１０℃〜約９０℃の範囲である。微細二酸化シリコンは約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質の範囲の最終濃度で使用し得る。最終的に、Ｈ因子組成物は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で変更し得る。
１つの実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、約５．０〜約１１．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約６．０〜約１．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．５〜約８．５である。さらに別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約８．０である。
特定の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、ｐＨ約７．０を含む。別の具体的な実施形態では、ｐＨは約７．５である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約３．０または約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８．０、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、約９．２、約９．３、約９．４、約９．５、約９．６、約９．７、約９．８、約９．９、約１０．０、約１０．１、約１０．２、約１０．３、約１０．４、約１０．５、約１０．６、約１０．７、約１０．８、約１０．９、もしくは約１１．０である。
１つの実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、少なくとも６．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも６．５である。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．０である。さらに別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．５である。さらに他の実施形態では、溶液ｐＨは少なくとも３．０または少なくとも３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６．０、６．５、７．０、７．５、８．０、８．５、９．０、９．５、１０．０、１０．５、または１０．５超である。
任意の上記方法の別の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、約１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約１０．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約９．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０以下である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約１１．０以下、または約１０．５以下、約１０．０以下、約９．５以下、約９．０以下、約８．５以下、約８．０以下、約７．５以下、約７．０以下、約６．５以下、約６．０以下、約５．５以下、約５．０以下、約４．５以下、約４．０以下、約３．５以下、または３．５未満である。
１つの実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。別の実施形態では、伝導度は、少なくとも２０ｍＳ／ｃｍである。さらに他の実施形態では、溶液条件の伝導度は、少なくとも２ｍＳ／ｃｍ、または少なくとも３ｍＳ／ｃｍ、４ｍＳ／ｃｍ、５ｍＳ／ｃｍ、６ｍＳ／ｃｍ、７ｍＳ／ｃｍ、８ｍＳ／ｃｍ、９ｍＳ／ｃｍ、１０ｍＳ／ｃｍ、１１ｍＳ／ｃｍ、１２ｍＳ／ｃｍ、１３ｍＳ／ｃｍ、１４ｍＳ／ｃｍ、１５ｍＳ／ｃｍ、１６ｍＳ／ｃｍ、１７ｍＳ／ｃｍ、１８ｍＳ／ｃｍ、１９ｍＳ／ｃｍ、２０ｍＳ／ｃｍ、２１ｍＳ／ｃｍ、２２ｍＳ／ｃｍ、２３ｍＳ／ｃｍ、２４ｍＳ／ｃｍ、２５ｍＳ／ｃｍ、２６ｍＳ／ｃｍ、２７ｍＳ／ｃｍ、２８ｍＳ／ｃｍ、２９ｍＳ／ｃｍ、３０ｍＳ／ｃｍ、３１ｍＳ／ｃｍ、３２ｍＳ／ｃｍ、３３ｍＳ／ｃｍ、３４ｍＳ／ｃｍ、３５ｍＳ／ｃｍ、３６ｍＳ／ｃｍ、３７ｍＳ／ｃｍ、３８ｍＳ／ｃｍ、３９ｍＳ／ｃｍ、４０ｍＳ／ｃｍ、４１ｍＳ／ｃｍ、４２ｍＳ／ｃｍ、４３ｍＳ／ｃｍ、４４ｍＳ／ｃｍ、４５ｍＳ／ｃｍ、４６ｍＳ／ｃｍ、４７ｍＳ／ｃｍ、４８ｍＳ／ｃｍ、４９ｍＳ／ｃｍ、５０ｍＳ／ｃｍ、５５ｍＳ／ｃｍ、６０ｍＳ／ｃｍ、６５ｍＳ／ｃｍ、７０ｍＳ／ｃｍ、７５ｍＳ／ｃｍ、８０ｍＳ／ｃｍ、８５ｍＳ／ｃｍ、９０ｍＳ／ｃｍ、９５ｍＳ／ｃｍ、１００ｍＳ／ｃｍ、もしくは１００ｍＳ／ｃｍ超である。
１つの実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。別の実施形態では、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度である。別の実施形態では、約２０ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの伝導度である。さらに別の実施形態では、約２０ｍＳ／ｃｍ〜約５０ｍＳ／ｃｍの伝導度である。
実施例５に示し図３に例証するように、ｐＨ６．０超（例えば、７．５）および増大した伝導度（例えば、６．０ｍＳ／ｃｍ超）を有する溶液条件の使用は、ＳｉＯ２に対するセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの親和性を低減し、ＳｉＯ２に対するＨ因子の親和性を増大することが見出された。有利には、これらの所見を使用して、Ｈ因子組成物に存在するセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンレベルを低減する方法を提供することができる。上記方法の特定の実施形態では、Ｈ因子はＳｉＯ２に結合し、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの著しい画分は結合しない溶液条件は、少なくとも約１０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。別の特定の実施形態では、溶液条件は、少なくとも１０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、少なくとも２０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、溶液条件は、少なくとも２０ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。
５．セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの選択的結合
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンには結合するが、Ｈ因子には結合しないために適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程を含む。
ある実施形態では、Ｈ因子がＳｉＯ２に結合しない溶液条件とは、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンをＳｉＯ２へ選択的に結合させつつ、Ｈ因子の実質的な画分が、溶液中で非結合を保つ条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中少なくとも１０％のＨ因子を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中少なくとも２５％のＨ因子を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中少なくとも５０％のＨ因子を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中少なくとも７５％のＨ因子を指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中少なくとも１０％のＨ因子、または少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または９９％超の出発組成物中のＨ因子を指す。
上記方法から所望の成果を得るために変更し得る溶液条件としては、溶液ｐＨ、溶液の伝導度、溶液の温度、組成物中のＨ因子濃度、および本方法に使用されるＳｉＯ２濃度が挙げられるが、これらに限定されない。一般に、Ｈ因子富化組成物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量の低減法に適したｐＨ範囲は、約３〜約１１の範囲である。上記方法に適した伝導度は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１００ｍＳ／ｃｍの範囲である。上記方法の実施に適した温度は、約−１０℃〜約９０℃の範囲である。微細二酸化シリコンは約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質の範囲の最終濃度で使用し得る。最終的に、Ｈ因子組成物は、約０．００１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの濃度で変更し得る。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、約５．０〜約１１．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約６．０〜約１．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約９．０である。別の実施形態では、ｐＨは約７．５〜約８．５である。さらに別の実施形態では、ｐＨは約７．０〜約８．０である。
特定の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、ｐＨ約７．０を含む。別の具体的な実施形態では、ｐＨは約７．５である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約３．０または約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、約３．６、約３．７、約３．８、約３．９、約４．０、約４．１、約４．２、約４．３、約４．４、約４．５、約４．６、約４．７、約４．８、約４．９、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．１、約７．２、約７．３、約７．４、約７．５、約７．６、約７．７、約７．８、約７．９、約８．０、約８．１、約８．２、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、約９．２、約９．３、約９．４、約９．５、約９．６、約９．７、約９．８、約９．９、約１０．０、約１０．１、約１０．２、約１０．３、約１０．４、約１０．５、約１０．６、約１０．７、約１０．８、約１０．９、もしくは約１１．０である。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、少なくとも６．０のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも６．５である。別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．０である。さらに別の実施形態では、ｐＨは少なくとも７．５である。さらに他の実施形態では、溶液ｐＨは少なくとも３．０または少なくとも３．５、少なくとも４．０、少なくとも４．５、少なくとも５．０、少なくとも５．５、少なくとも６．０、少なくとも６．５、少なくとも７．０、少なくとも７．５、少なくとも８．０、少なくとも８．５、少なくとも９．０、少なくとも９．５、少なくとも１０．０、少なくとも１０．５、または１０．５超である。
任意の上記方法の別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、約１１．０以下のｐＨを含む。別の実施形態では、ｐＨは約１０．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約９．０以下である。別の実施形態では、ｐＨは約８．０以下である。さらに他の実施形態では、ｐＨは約１１．０以下、または約１０．５以下、約１０．０以下、約９．５以下、約９．０以下、約８．５以下、約８．０以下、約７．５以下、約７．０以下、約６．５以下、約６．０以下、約５．５以下、約５．０以下、約４．５以下、約４．０以下、約３．５以下、または約３．５未満である。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度を含む。別の実施形態では、伝導度は、約１０ｍＳ／ｃｍ以下である。さらに他の実施形態では、溶液条件の伝導度は、約２０ｍＳ／ｃｍ以下、または約１９ｍＳ／ｃｍ以下、１８ｍＳ／ｃｍ以下、１７ｍＳ／ｃｍ以下、１６ｍＳ／ｃｍ以下、１５ｍＳ／ｃｍ以下、１４ｍＳ／ｃｍ以下、１３ｍＳ／ｃｍ以下、１２ｍＳ／ｃｍ以下、１１ｍＳ／ｃｍ以下、１０ｍＳ／ｃｍ以下、９ｍＳ／ｃｍ以下、８ｍＳ／ｃｍ以下、７ｍＳ／ｃｍ以下、６ｍＳ／ｃｍ以下、５ｍＳ／ｃｍ以下、４ｍＳ／ｃｍ以下、３ｍＳ／ｃｍ以下、２ｍＳ／ｃｍ以下、または２ｍＳ／ｃｍ未満である。
１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、約２ｍＳ／ｃｍ〜約２０ｍＳ／ｃｍの伝導度を含む。別の実施形態では、伝導度は約２ｍＳ／ｃｍ〜約１０ｍＳ／ｃｍである。別の実施形態では、伝導度は約２０ｍＳ／ｃｍ〜約６ｍＳ／ｃｍである。さらに別の実施形態では、伝導度は約１０ｍＳ／ｃｍ〜約６ｍＳ／ｃｍである。
実施例５に示し図３に例証するように、ｐＨ６．０超（例えば、７．５）および低下した伝導度（例えば、２０ｍＳ／ｃｍ未満）を有する溶液条件の使用は、ＳｉＯ２に対するＨ因子の親和性を増大し、ＳｉＯ２からのセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの親和性を低減することが見出された。有利には、これらの所見を使用して、Ｈ因子組成物に存在するセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンレベルを低減する方法を提供することができる。上記方法の特定の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンはＳｉＯ２に結合するが、Ｈ因子の著しい画分は結合しない溶液条件は、約２０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。別の特定の実施形態では、溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ以下の伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。別の実施形態では、溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．０のｐＨを含む。さらに別の実施形態では、溶液条件は、約１０ｍＳ／ｃｍ〜約２ｍＳ／ｃｍの伝導度および少なくとも７．５のｐＨを含む。
６．血漿沈降物からのＨ因子の抽出方法
１つの態様では、本発明は、Ｈ因子組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、ならびに（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２からＨ因子を溶出し、それにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。
ある実施形態では、上記方法は、富化Ｈ因子組成物から少なくとも１種の不純物を沈降させる工程を含む富化工程をさらに含み、ここでＨ因子は共沈降しない。具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程、ならびに（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させ、Ｈ因子は沈降させないことにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。１つの実施形態では、不純物沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、不純物ＰＥＧ沈降が最終濃度３％〜７％のＰＥＧ４０００を用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、不純物沈降工程のＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。
ある実施形態では、上記方法は、富化Ｈ因子組成物からＨ因子を沈降させる工程を含む富化工程をさらに含む。具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程、（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させて、Ｈ因子を含む上清を形成する工程、ならびに（ｅ）上清からＨ因子を沈降させることにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。１つの実施形態では、不純物沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、不純物ＰＥＧ沈降が最終濃度３％〜７％のＰＥＧ４０００を用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、不純物沈降工程のＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。１つの実施形態では、Ｈ因子沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、ＨＰＥＧ因子沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度１０％〜１５％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、Ｈ因子沈降工程中、１２±０．５％である。
ある実施形態では、上記方法は、富化Ｈ因子組成物を用いたイオン交換クロマトグラフィーを実施する工程を含む富化工程をさらに含む。具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程、（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させて、Ｈ因子を含む上清を形成する工程、（ｅ）上清からＨ因子を沈降させる工程、（ｆ）Ｈ因子を含む沈降物を再懸濁化する工程、（ｇ）再懸濁沈降物に存在するＨ因子を陰イオン交換樹脂に結合させる工程、ならびに（ｈ）陰イオン交換樹脂からＨ因子を溶出し、それにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。１つの実施形態では、不純物沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、不純物ＰＥＧ沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度３％〜７％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、不純物沈降工程のＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。１つの実施形態では、Ｈ因子沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、ＨＰＥＧ因子沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度１０％〜１５％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、Ｈ因子沈降工程中、１２±０．５％である。
ある実施形態では、上記方法は、富化Ｈ因子組成物を用いたヘパリン親和性クロマトグラフィーを実施する工程を含む富化工程をさらに含む。具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程、（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させて、Ｈ因子を含む上清を形成する工程、（ｅ）上清からＨ因子を沈降させる工程、（ｆ）Ｈ因子を含む沈降物を再懸濁化する工程、（ｇ）再懸濁沈降物に存在するＨ因子を陰イオン交換樹脂に結合させる工程、（ｈ）陰イオン交換樹脂からＨ因子を溶出する工程、（ｉ）陰イオン交換溶出物に存在するＨ因子をヘパリン親和性樹脂に結合させる工程、ならびに（ｊ）ヘパリン親和性樹脂からＨ因子を溶出し、それにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。１つの実施形態では、不純物沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、不純物ＰＥＧ沈降が最終濃度３％〜７％のＰＥＧ４０００を用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、不純物沈降工程のＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。１つの実施形態では、Ｈ因子沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、ＨＰＥＧ因子沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度１０％〜１５％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、Ｈ因子沈降工程中、１２±０．５％である。
ある実施形態では、上記方法は、Ｈ因子組成物を特定の目的のためのウイルス除去および／または不活性化工程に供する工程をさらに含む。具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程、（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させて、Ｈ因子を含む上清を形成する工程、（ｅ）上清からＨ因子を沈降させる工程、（ｆ）Ｈ因子を含む沈降物を再懸濁化する工程、（ｇ）再懸濁沈降物に存在するＨ因子を陰イオン交換樹脂に結合させる工程、（ｈ）陰イオン交換樹脂からＨ因子を溶出する工程、（ｉ）陰イオン交換溶出物に存在するＨ因子をヘパリン親和性樹脂に結合させる工程、（ｊ）ヘパリン親和性樹脂からＨ因子を溶出する工程、ならびに（ｋ）ナノ濾過、溶媒／清浄液（Ｓ／Ｄ）処理、熱処理、および低ｐＨでのインキュベーションから選択される特定の目的のためのウイルスの除去および／もしくは不活性化工程を実施し、それにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。１つの実施形態では、不純物沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、不純物ＰＥＧ沈降が最終濃度３％〜７％のＰＥＧ４０００を用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、不純物沈降工程のＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。１つの実施形態では、Ｈ因子沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、ＨＰＥＧ因子沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度１０％〜１５％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、Ｈ因子沈降工程中、１２±０．５％である。
ある実施形態では、上記方法は、限外濾過／ダイアフィルトレーションによる富化Ｈ因子組成物の濃縮工程をさらに含む。具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）Ｈ因子への結合に適した条件下で、Ｈ因子とセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種とを含む懸濁血漿沈降組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、（ｂ）５．０〜７．０のｐＨおよび４ｍＳ／ｃｍ未満の伝導度を含む溶液でＳｉＯ２を洗浄する工程、（ｃ）７．０〜８．０のｐＨおよび１０ｍＳ／ｃｍ超の伝導度を含む溶液でＨ因子をＳｉＯ２から溶出する工程、（ｄ）Ｈ因子溶出物から少なくとも１種の不純物を沈降させて、Ｈ因子を含む上清を形成する工程、（ｅ）上清からＨ因子を沈降させる工程、（ｆ）Ｈ因子を含む沈降物を再懸濁化する工程、（ｇ）再懸濁沈降物に存在するＨ因子を陰イオン交換樹脂に結合させる工程、（ｈ）陰イオン交換樹脂からＨ因子を溶出する工程、（ｉ）陰イオン交換溶出物に存在するＨ因子をヘパリン親和性樹脂に結合させる工程、（ｊ）ヘパリン親和性樹脂からＨ因子を溶出する工程、（ｋ）ナノ濾過、溶媒／清浄液（Ｓ／Ｄ）処理、熱処理、および低ｐＨでのインキュベーションから選択される特定の目的のためのウイルスの除去および／もしくは不活性化工程を実施する工程、ならびに（ｌ）限外濾過／ダイアフィルトレーションによりＨ因子を濃縮し、それにより、富化Ｈ因子組成物を提供する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、ＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａの１つまたは複数である。ある実施形態では、血漿沈降物は、コーン画分Ｉ沈降物、コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、コーン画分Ｉ＋ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物、キストラー／ニッチェマン沈降物Ａ、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｂ、またはその等価画分である。１つの実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは５．５〜６．５を含む。具体的な実施形態では、ＳｉＯ２を洗浄するために使用される溶液のｐＨは６．０±０．２を含む。１つの実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は少なくとも２０ｍＳ／ｃｍを含む。具体的な実施形態では、Ｈ因子を溶出するために使用される溶液の伝導度は２５ｍＳ／ｃｍ〜４０ｍＳ／ｃｍを含む。１つの実施形態では、不純物沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、不純物ＰＥＧ沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度３％〜７％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、不純物沈降工程のＰＥＧ４０００の最終濃度は、５±０．５％である。１つの実施形態では、Ｈ因子沈降工程は、ＰＥＧ沈降である。具体的な実施形態では、ＨＰＥＧ因子沈降は、ＰＥＧ４０００を最終濃度１０％〜１５％で用いた沈降を含む。より具体的な実施形態では、ＰＥＧ４０００の最終濃度は、Ｈ因子沈降工程中、１２±０．５％である。
Ｃ．インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来ＩαＩ組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。１つの具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、ＩαＩ組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）ＳｉＯ２をＩαＩ組成物から分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
１つの実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１ＩαＩタンパク質富化工程を実施し、第１富化ＩαＩ組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１ＩαＩタンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２ＩαＩタンパク質富化工程を実施し、第２富化ＩαＩ組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１ＩαＩタンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来ＩαＩ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１ＩαＩ富化工程を実施して、第１富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程；（ｂ）第２ＩαＩ富化工程を実施して、第２富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させた後にＩαＩ富化工程を実施する工程をさらに含む。ある実施形態では、ＩαＩ富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来ＩαＩ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１ＩαＩ富化工程を実施して、第１富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｄ）第２ＩαＩ富化工程を実施して、第２富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
同様に、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来ＩαＩ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１ＩαＩ富化工程を実施して、第１富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程；（ｂ）第２ＩαＩ富化工程を実施して、第２富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｅ）第３ＩαＩ富化工程を実施して、第３富化血漿由来ＩαＩ組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、または表１１に見られるバリエーションＶａｒ．１０１〜Ｖａｒ．１１００の任意の１つから選択される。
１．共結合および差次的溶出
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来ＩαＩ組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、タンパク質を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）に結合させることにより、血漿プール由来の組成物からＩαＩならびにセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを共抽出する工程、第１溶液条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程、続いて、第２溶液条件下で、ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。好ましい実施形態では、出発組成物は、再懸濁画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物またはその等価沈降物である。
具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）ＩαＩならびにセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、ＩαＩならびにセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種を含む組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；（ｃ）ＩαＩが結合し続ける溶液条件下で、ＳｉＯ２からセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを溶出する工程；ならびに（ｄ）ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
ある実施形態では、ＩαＩが結合し続ける溶液条件とは、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを選択的に溶出しつつ、ＩαＩの実質的な画分はＳｉＯ２に結合し続ける条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したＩαＩの少なくとも１０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したＩαＩの少なくとも２５％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したＩαＩの少なくとも５０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したＩαＩの少なくとも７５％を指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したＩαＩの少なくとも１０％、またはＳｉＯ２に結合したＩαＩの少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または９９％超を指す。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンならびにＩαＩの差次的溶出は、大部分のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは溶出するが結合ＩαＩの実質的な画分は溶出しない条件に適した第１溶液条件（例えば、第１溶出緩衝液）、ならびにＳｉＯ２からの結合ＩαＩの実質的な画分の溶出に適した第２溶液条件（例えば、第２溶出緩衝液）でＳｉＯ２と継続的に接触させること（すなわち、段階的溶出）により達成される。
他の実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンならびにＩαＩの差次的溶出は、大部分のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは溶出するが、ＩαＩの実質的な画分は溶出しない条件に適した第１溶液条件から、ＳｉＯ２からの結合ＩαＩの実質的な画分の溶出に適した第２溶液条件に溶液条件を徐々に変化させること（すなわち、勾配溶出）により達成される。このようにして、ＳｉＯ２流出のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンならびにＩαＩ含量は部分的に重複し得る。溶出分別および個々の画分の特性化により、ＩαＩプールは、ＩαＩ含量が高くかつセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの含量が低い画分から作製し得る。
２．ＩαＩの共結合および選択的溶出
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来ＩαＩ組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、タンパク質を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）に結合させて、結合したセリンプロテアーゼチモーゲンおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分結合がＳｉＯ２に結合し続ける条件下で、ＳｉＯ２からＩαＩを溶出することにより、血漿プール由来の組成物からＩαＩならびにセリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを共抽出する工程を含む。好ましい実施形態では、出発組成物は、再懸濁画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物またはその等価沈降物である。
具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）ＩαＩならびにセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、ＩαＩならびにセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種を含む組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件下で、ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンが結合し続ける溶液条件とは、ＩαＩを選択的に溶出しつつ、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分はＳｉＯ２に結合し続ける条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも２５％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも５０％を指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも７５％を指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、ＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１０％、またはＳｉＯ２に結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９％超を指す。
３．ＩαＩの選択的結合
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来ＩαＩ組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）ＩαＩには結合するが、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種には結合しないために適した条件下で、ＩαＩならびにセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種を含む組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程；ならびに（ｃ）ＳｉＯ２からＩαＩを溶出する工程を含む。
ある実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２に結合しない溶液条件とは、ＩαＩをＳｉＯ２へ選択的に結合させつつ、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分は、溶液中で非結合を保つ条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも１０％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも２５％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも５０％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも７５％のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも１０％のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲン、または出発組成物中の少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９％超のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを指す。
４．セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの選択的結合
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量が低下した血漿由来ＩαＩ組成物の調製のための方法を提供し、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼおよび／もしくはセリンプロテアーゼチモーゲンには結合するが、ＩαＩには結合しないために適した条件下で、ＩαＩならびにセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種を含む組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離する工程を含む。
ある実施形態では、ＩαＩがＳｉＯ２に結合しない溶液条件とは、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンをＳｉＯ２へ選択的に結合させつつ、ＩαＩの実質的な画分は、溶液中で非結合を保つ条件を指す。１つの実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも１０％のＩαＩを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも２５％のＩαＩを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも５０％のＩαＩを指す。別の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも７５％のＩαＩを指す。さらに他の実施形態では、実質的な画分とは、出発組成物中の少なくとも１０％のＩαＩ、または出発組成物中の少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、９９、もしくは９９％超のＩαＩを指す。
Ｄ．α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。１つの具体的な実施形態では、本方法は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、Ａ１ＰＩ組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）Ａ１ＰＩ組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。
１つの実施形態では、本方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１Ａ１ＰＩタンパク質富化工程を実施して、第１富化Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１Ａ１ＰＩタンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２Ａ１ＰＩタンパク質富化工程を実施して、第２富化Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程をさらに含む。ある実施形態では、第１Ａ１ＰＩタンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ａ１ＰＩ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程；（ｂ）第２Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
ある実施形態では、上記方法は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、Ａ１ＰＩ富化工程を実施する工程をさらに含む。ある実施形態では、Ａ１ＰＩ富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ａ１ＰＩ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｄ）第２Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。
同様に、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ａ１ＰＩ組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、（ａ）第１Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第１富化血漿由来Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程；（ｂ）第２Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第２富化血漿由来Ｉｇ組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｅ）第３Ａ１ＰＩ富化工程を実施して、第３富化血漿由来Ａ１ＰＩ組成物を形成する工程を含む。好ましい実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンは、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、および／または第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）である。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、または表１１に見られるバリエーションＶａｒ．１０１〜Ｖａｒ．１１００の任意の１つから選択される。
特定の実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、製造中間体である。例えば、ある実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、Ｃｏｈｎ分画法からの製造中間体（Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １９４６， ６８（３）： ４５９−４７５； Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． ７２：４６５−４７４ （１９５０））、Ｏｎｃｌｅｙ分画法（Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １９４９， ７１（２）： ５４１−５５０）、Ｋｉｓｔｌｅｒ／Ｎｉｔｓｃｈｍａｎｎ分画法（Ｖｏｘ Ｓａｎｇ． ７：４１４−４２４ （１９６２））、米国特許第６，９７４，７９２号もしくは同第７，８０７，４３５号に開示の精製法、それらの変法、ならびに当技術分野において既知である類似もしくは同等の精製法である。上記の参考文献は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる。
例えば、いくつかのＡ１ＰＩ産生法は、ポリエチレングリコール４０００だけではなく、様々な血漿画分プロセス（コーン画分ＩＶ−１沈降またはキストラー（Ｋｉｓｔｌｅｒ）およびニッチェマン上清ＡもしくはＡ＋１）（Ｆｅｌｄｍａｎ ａｎｄ Ｗｉｎｋｅｌｍａｎ， Ｂｌｏｏｄ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｌａｓｍａ Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ （１９９１）， Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ， Ｉｎｃ．， ｐｐ． ３４１−３８３）を用いた血漿の分別沈降も知られている。より複雑な精製では、例えば、親和性クロマトグラフ物質または陽イオン交換クロマトグラフ物質により処理した（欧州特許第０ ６９８ ６１５ Ａ１号）ＤＥＡＥセルロースを用いて各血液画分が精製されている（Ｂａｓｉｓ ｅｔ ａｌ． （Ｖｏｐｒ． Ｍｅｄ． Ｋｈｉｍ． ３３ （１） （１９８７）， ５４−５９））。米国特許第６，９７４，７９２号には、コーン画分Ｖ沈降物を利用する高度の特異的活性のＡ１ＰＩを得る精製プロセスについて記載されている。米国特許第７，８０７，４３５号には、コーン画分ＩＶ−１および／または画分ＩＶ−４沈降物を利用する、より高収率のＡ１ＰＩを得る精製プロセスについて記載されている。
１つの特定の実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、脱寒冷コーンプールである。別の特定の実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、再懸濁コーン画分Ｖ沈降物またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、再懸濁コーン画分ＩＶ−１沈降物、またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、再懸濁コーン画分ＩＶ−４沈降物、またはその等価画分である。別の特定の実施形態では、Ａ１ＰＩ組成物は、キストラー／ニッチェマン上清Ａ、またはその等価画分である。
一般に、Ａ１ＰＩ組成物からのセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲン除去は、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンがＳｉＯ２に結合するｐＨおよび伝導度の溶液条件下で微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を用いたＡ１ＰＩ含有組成物を処理することにより達成できる。
１つの実施形態では、プロセスは、Ａ１ＰＩを含む血漿沈降物の濾過または遠心清澄前にヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。１つの実施形態では、ＳｉＯ２処理工程は、微細二酸化シリコン粒子（例えば、ヒュームドシリカ、アエロジル（登録商標））の添加、その後の懸濁液を定期的に混合中の４０分〜１６時間のインキュベーション時間を含む。ある実施形態では、インキュベーション時間は、約５０分〜約７０分間、または約２０分間、約２５分間、約３０分間、約３５分間、約４０分間、約４５分間、約５０分間、約５５分間、約６０分間、約６５分間、約７０分間、約７５分間、約８０分間、もしくは約８０分間超である。他の実施形態では、インキュベーション時間は、少なくとも１時間、または少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも９時間、少なくとも１０時間、少なくとも１１時間、少なくとも１２時間、少なくとも１３時間、少なくとも１４時間、少なくとも１５時間、少なくとも１６時間、もしくは１６時間超である。特定の実施形態では、インキュベーション時間は、少なくとも１５時間である。一般に、処理は、約０℃〜約２５℃、または約２℃〜約８℃で実施する。ある実施形態では、処理は、約０℃、約１℃、約２℃、約３℃、約４℃、約５℃、約６℃、約７℃、約８℃、約９℃、約１０℃、約１１℃、約１２℃、約１３℃、約１４℃、約１５℃、約１６℃、約１７℃、約１８℃、約１９℃、約２０℃、約２１℃、約２２℃、約２３℃、約２４℃、または約２５℃で実施し得る。特定の実施形態では、処理は、約２℃〜約２５℃で実施する。具体的な実施形態では、プロセスは、免疫グロブリン調製物中のＦＸＩ、ＦＸＩａ、ＦＸＩＩ、およびＦＸＩＩａレベルを低減するヒュームドシリカ処理を含むことにより改善される。
ある実施形態では、ヒュームドシリカは、約２０ｇ／ｋｇ沈降物〜約１００ｇ／ｋｇ沈降物の濃度で添加する。ある実施形態では、ヒュームドシリカは約２０ｇ／ｋｇ沈降物、または約２５ｇ／ｋｇ沈降物、約３０ｇ／ｋｇ沈降物、約３５ｇ／ｋｇ沈降物、約４０ｇ／ｋｇ沈降物、約４５ｇ／ｋｇ沈降物、約５０ｇ／ｋｇ沈降物、約５５ｇ／ｋｇ沈降物、約６０ｇ／ｋｇ沈降物、約６５ｇ／ｋｇ沈降物、約７０ｇ／ｋｇ沈降物、約７５ｇ／ｋｇ沈降物、約８０ｇ／ｋｇ沈降物、約８５ｇ／ｋｇ沈降物、約９０ｇ／ｋｇ沈降物、約９５ｇ／ｋｇ沈降物、もしくは約１００ｇ／ｋｇ沈降物の濃度で添加し得る。１つの具体的な実施形態では、ヒュームドシリカ（例えば、アエロジル３８０または等価物）は、最終濃度約４０ｇ／ｋｇ沈降物になるように沈降物再懸濁液に添加する。
ある実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約１０ｇ／ｇタンパク質濃度でＡ１ＰＩ組成物に添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０１ｇ／ｇタンパク質〜約５ｇ／ｇタンパク質濃度でＡ１ＰＩ組成物に添加する。別の実施形態では、ＳｉＯ２は、約０．０２ｇ／ｇタンパク質〜約４ｇ／ｇタンパク質濃度でＡ１ＰＩ組成物に添加する。１つの実施形態では、ＳｉＯ２は、最終濃度少なくとも０．１ｇ／ｇ総タンパク質でＡ１ＰＩ組成物に添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも０．２５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。他の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも１ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。別の具体的な実施形態では、ヒュームドシリカは、少なくとも２．５ｇ／ｇ総タンパク質濃度で添加する。さらに他の具体的な実施形態では、微細二酸化シリコンは、少なくとも０．０１ｇ／ｇ総タンパク質または少なくとも０．０２ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０３ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０４ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０６ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０７ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０８ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．０９ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．１ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．２ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．３ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．４ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．６ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．７ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．８ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも０．９ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも１．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも１．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも２．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも２．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも３．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも３．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも４．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも４．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも５．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも５．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも６．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも６．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも７．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも７．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも８．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも８．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも９．０ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも９．５ｇ／ｇ総タンパク質、少なくとも１０．０ｇ／ｇ総タンパク質、もしくは１０．０ｇ／ｇ総タンパク質超の濃度で添加する。
ある実施形態では、濾過助剤、例えばＣｅｌｐｕｒｅＣ３００（Ｃｅｌｐｕｒｅ）またはＨｙｆｌｏ−Ｓｕｐｐｅｒ−Ｃｅｌ（Ｗｏｒｌｄミネラル）を二酸化シリコン処理後に添加して、深層濾過を促進する。濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約１．０ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０２ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．８ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０３ｋｇ／ｋｇ沈降物〜約０．７ｋｇ／ｋｇ沈降物の最終濃度となるように添加することができる。ある実施形態では、濾過助剤を少なくとも０．０１ｋｇ／ｋｇ沈降物、または少なくとも０．０２ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０３ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０４ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０５ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０６ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０７ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０８ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．０９ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．１ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．２ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．３ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．４ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．５ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．６ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．７ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．８ｋｇ／ｋｇ沈降物、少なくとも０．９ｋｇ／ｋｇ沈降物、または少なくとも１．０ｋｇ／ｋｇ沈降物の最終濃度となるように添加する。ある実施形態では、濾過助剤は約０．０１ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約０．０２ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０３ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０４ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０５ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０６ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０７ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０８ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．０９ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．１ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．２ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．３ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．４ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．５ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．６ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．７ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．８ｋｇ／ｋｇ沈降物、約０．９ｋｇ／ｋｇ沈降物、または約１．０ｋｇ／ｋｇ沈降物の最終濃度となるように添加する。
したがって、１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ａ１ＰＩ組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、約４．０〜約７．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させてセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約６．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約６．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．０〜約５．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約７．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約６．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約６．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．５〜約５．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約７．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約６．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約６．０のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに別の実施形態では、本方法は、約４．６〜約５．６のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．７〜約５．５のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．８〜約５．４のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約４．９〜約５．３のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．０〜約５．２のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約５．１のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。他の実施形態では、本方法は、約４．０または約４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、もしくは７．０以下のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに他の実施形態では、本方法は、４．０以下または４．１以下、４．２以下、４．３以下、４．４以下、４．５以下、４．６以下、４．７以下、４．８以下、４．９以下、５．０以下、５．１以下、５．２以下、５．３以下、５．４以下、５．５以下、５．６以下、５．７以下、５．８以下、５．９以下、６．０以下、６．１以下、６．２以下、６．３以下、６．４以下、６．５以下、６．６以下、６．７以下、６．８以下、６．９以下、または７．０以下のｐＨで組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。
１つの実施形態では、本発明は、血漿由来Ａ１ＰＩ組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約２．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させてセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．７ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．６ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．５ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．４ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．３ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．２ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．１ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約０．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約０．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．２ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．３ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍ〜約０．４ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．５ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．６ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、約０．７ｍＳ／ｃｍ〜約０．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。別の実施形態では、本方法は、組成物をＳｉＯ２と約０．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で接触させる工程を含む。他の実施形態では、本方法は、約０．１ｍＳ／ｃｍまたは０．２ｍＳ／ｃｍ以下、０．３ｍＳ／ｃｍ、０．４ｍＳ／ｃｍ、０．５ｍＳ／ｃｍ、０．６ｍＳ／ｃｍ、０．７ｍＳ／ｃｍ、０．８ｍＳ／ｃｍ、０．９ｍＳ／ｃｍ、１．０ｍＳ／ｃｍ、１．１ｍＳ／ｃｍ、１．２ｍＳ／ｃｍ、１．３ｍＳ／ｃｍ、１．４ｍＳ／ｃｍ、１．５ｍＳ／ｃｍ、１．６ｍＳ／ｃｍ、１．７ｍＳ／ｃｍ、１．８ｍＳ／ｃｍ、１．９ｍＳ／ｃｍ、２．０ｍＳ／ｃｍ、２．１ｍＳ／ｃｍ、２．２ｍＳ／ｃｍ、２．３ｍＳ／ｃｍ、２．４ｍＳ／ｃｍ、２．５ｍＳ／ｃｍ、２．６ｍＳ／ｃｍ、２．７ｍＳ／ｃｍ、２．８ｍＳ／ｃｍ、２．９ｍＳ／ｃｍ、または３．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに他の実施形態では、本方法は、０．１ｍＳ／ｃｍ以下または０．２ｍＳ／ｃｍ以下、０．３ｍＳ／ｃｍ、０．４ｍＳ／ｃｍ、０．５ｍＳ／ｃｍ、０．６ｍＳ／ｃｍ、０．７ｍＳ／ｃｍ、０．８ｍＳ／ｃｍ、０．９ｍＳ／ｃｍ、１．０ｍＳ／ｃｍ、１．１ｍＳ／ｃｍ、１．２ｍＳ／ｃｍ、１．３ｍＳ／ｃｍ、１．４ｍＳ／ｃｍ、１．５ｍＳ／ｃｍ、１．６ｍＳ／ｃｍ、１．７ｍＳ／ｃｍ、１．８ｍＳ／ｃｍ、１．９ｍＳ／ｃｍ、２．０ｍＳ／ｃｍ、２．１ｍＳ／ｃｍ、２．２ｍＳ／ｃｍ、２．３ｍＳ／ｃｍ、２．４ｍＳ／ｃｍ、２．５ｍＳ／ｃｍ、２．６ｍＳ／ｃｍ、２．７ｍＳ／ｃｍ、２．８ｍＳ／ｃｍ、２．９ｍＳ／ｃｍ、または３．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。
ある実施形態では、本発明は、血漿由来Ａ１ＰＩ組成物中のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、本方法は、低ｐＨおよび低イオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させてセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させる工程を含む。特定の実施形態では、本方法は、約４．８〜約５．４のｐＨで約０．６ｍＳ／ｃｍ〜約１．０ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。より特定の実施形態では、本方法は、約４．９〜約５．３のｐＨで約０．７ｍＳ／ｃｍ〜約０．９ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに特定の実施形態では、本方法は、約５．０〜約５．２のｐＨで約０．８ｍＳ／ｃｍのイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。さらに他の実施形態では、本方法は、表１２、表１３、表１４、および表１５に示すバリエーションＶａｒ．１２２２〜３０４１の任意の１つによるｐＨおよびイオン強度で組成物をＳｉＯ２と接触させる工程を含む。
１．セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの結合および溶出
１つの態様では、本発明は、Ａ１ＰＩを含む再懸濁血漿沈降物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。一般に、沈降物は、血漿（好ましくはヒト血漿）プールの分別中の任意沈降物であり得る。１つの実施形態では、本方法は、不溶状態のＡ１ＰＩを含む再懸濁血漿沈降物を第１低ｐＨ溶液条件下で、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させる工程、不溶状態のＡ１ＰＩを維持するために、懸濁液の溶解部分と不溶部分を分離する工程、不溶状態のＡ１ＰＩの実質的な画分の維持に適した第２低ｐＨ溶液条件下で、セリンおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンをＳｉＯ２から溶出する工程、懸濁液の溶解部分と不溶部分を分離する工程、ならびに不溶部分からＡ１ＰＩを抽出する工程を含む。１つの実施形態では、ＳｉＯ２は、沈降反応前または沈降反応中に混合し、沈降物と共に回収する。具体的な実施形態では、沈降物は、コーン画分ＩＶ−１沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、コーン画分ＩＶ−４沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、コーン画分Ｖ沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、キストラー／ニッチェマン沈降物ＩＶである。さらに別の実施形態では、沈降物は、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｃである。
上に提供した方法の１つの実施形態では、第１低ｐＨ溶液条件は、４．０〜７．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ５．５±０．２および約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ６．０±０．２および約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。
上に提供した方法の別の実施形態では、第１低ｐＨ溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約２．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約１．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約０．５ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約２．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約１．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約０．５ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ５．５±０．２および約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ６．０±０．２および約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。さらに他の実施形態では、第１低ｐＨ溶液条件は、表１２、表１３、表１４、および表１５に示すバリエーションＶａｒ．１２２２〜３０４１の任意の１つに応じたｐＨおよびイオン強度を含む。
上に提供した方法の１つの実施形態では、第２低ｐＨ溶液条件は、４．０〜７．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ５．５±０．２および約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ６．０±０．２および約５．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。
上に提供した方法の別の実施形態では、第２低ｐＨ溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約６．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約７．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約１０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約６．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約７．０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約１０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ５．５±０．２および約１０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ６．０±０．２および約１０ｍＳ／ｃｍ超のイオン強度を含む。
１つの具体的な実施形態では、本発明は、Ａ１ＰＩを含む再懸濁血漿沈降物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供し、約５．０〜約６．５のｐＨおよび５．０ｍＳ未満のイオン強度を含む第１低ｐＨ溶液条件下で、不溶状態のＡ１ＰＩを含む再懸濁血漿沈降物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させて、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させ、不溶状態のＡ１ＰＩを維持するために、懸濁液の溶解部分と不溶部分を分離し、不溶状態のＡ１ＰＩの実質的な画分を維持するために約５．０〜約６．５のｐＨおよび５．０ｍＳ超のイオン強度を含む第２低ｐＨ溶液条件下で、セリンおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンをＳｉＯ２から溶出して懸濁液の溶解部分と不溶部分を分離し、不溶部分からＡ１ＰＩを抽出する工程を含む。１つの実施形態では、沈降反応前または沈降反応中にＳｉＯ２を混合し、沈降物と共に回収する。具体的な実施形態では、沈降物は、コーン画分ＩＶ−１沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、コーン画分ＩＶ−４沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、コーン画分Ｖ沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、キストラー／ニッチェマン沈降物ＩＶである。さらに別の実施形態では、沈降物は、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｃである。
２．セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲン結合およびＡ１ＰＩ抽出
別の態様では、本発明は、Ａ１ＰＩを含む再懸濁血漿沈降物中のセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの量を低減する方法を提供する。一般に、沈降物は、血漿（好ましくはヒト血漿）プールの分別中の任意沈降物であり得る。１つの実施形態では、本方法は、不溶状態のＡ１ＰＩを含む再懸濁血漿沈降物を、低ｐＨを含む第１溶液条件下で、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させて、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンと結合させ、かつ不溶状態のＡ１ＰＩを維持する工程、懸濁液の溶解部分と不溶部分を分離する工程、高ｐＨを含む第２溶液条件下で、不溶部分からＡ１ＰＩを抽出する工程、ならびに溶解部分を不溶部分から分離する工程を含み、不溶部分からＡ１ＰＩの抽出中はセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンの実質的な画分がＳｉＯ２に結合し続ける。１つの実施形態では、沈降反応前または沈降反応中にＳｉＯ２を混合し、沈降物と共に回収する。具体的な実施形態では、沈降物は、コーン画分ＩＶ−１沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、コーン画分ＩＶ−４沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、コーン画分Ｖ沈降物である。別の実施形態では、沈降物は、キストラー／ニッチェマン沈降物ＩＶである。さらに別の実施形態では、沈降物は、キストラー／ニッチェマン沈降物Ｃである。
上に提供した方法の１つの実施形態では、第１溶液条件は、４．０〜７．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜７．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ５．５±０．２および約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ６．０±０．２および約５．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。
上に提供した方法の別の実施形態では、第１溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約２．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約１．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．０〜６．５のｐＨおよび約０．５ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約２．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約１．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、５．５〜６．０のｐＨおよび約０．５ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ５．５±０．２および約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ６．０±０．２および約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。さらに他の実施形態では、第１低ｐＨ溶液条件は、表１２、表１３、表１４、および表１５に示すバリエーションＶａｒ．１２２２〜３０４１の任意の１つに応じたｐＨおよびイオン強度を含む。
上に提供した方法の１つの実施形態では、第２溶液条件は、７．０〜１０．０のｐＨおよび約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜９．０のｐＨおよび約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．５のｐＨおよび約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ７．５±０．２および約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ８．０±０．２および約１０．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。
上に提供した方法の別の実施形態では、第２溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約９．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約８．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約７．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約６．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約５ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび約２ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．０〜８．５のｐＨおよび２ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。
上に提供した方法の別の実施形態では、第２溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約９．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約８．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約７．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約６．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約５ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約４．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約３．０ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．０のｐＨおよび約２ｍＳ／ｃｍ未満のイオン強度を含む。別の実施形態では、溶液条件は、７．５〜８．５のｐＨおよび２ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ７．５±０．２および２ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。別の具体的な実施形態では、溶液条件は、ｐＨ８．０±０．２および２ｍＳ／ｃｍ〜１０ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む。
ＩＶ．医薬組成物
１つの態様では、本発明は、セリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンレベルの低下した血漿由来タンパク質の組成物を提供し、これは本明細書に記載の任意の方法により調製する。ある実施形態では、これらの組成物は、医薬投与用に製剤化される（すなわち、医薬組成物）。一般に、本明細書に提供する方法により調製した血漿由来血液タンパク質組成物は、アミド分解活性が低下し、現在入手可能な既存の血漿由来生物製剤よりもより良好な安全性プロファイルを提供する。好ましい実施形態では、本明細書に提供する組成物の第ＸＩ因子、第ＸＩａ因子、第ＸＩＩ因子、および／または第ＸＩＩａ因子含量は低下している。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｂ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
ある実施形態では、上記の組成物は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化組成物を形成する工程をさらに含む方法により調製する。ある実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）血漿プール由来出発物質中のタンパク質を部分的に沈降させることにより第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。１つの実施形態では、部分的な沈降は、アルコールを使用して達成する。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）血漿プール由来出発物質の限外濾過および／もしくはダイアフィルトレーションにより第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。１つの実施形態では、部分的な沈降は、アルコールを使用して達成する。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）血漿プール由来出発物質をクロマトグラフィー樹脂と接触させることにより第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。１つの実施形態では、部分的な沈降は、アルコールを使用して達成する。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
ある実施形態では、上記の組成物は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化組成物を形成する工程をさらに含む方法により調製する。ある実施形態では、第１標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；ならびに（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
ある実施形態では、上記の組成物は、組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の後に、標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む方法により調製する。ある実施形態では、標的タンパク質富化工程は、タンパク質沈降工程（例えば、アルコール分別工程）、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程、およびクロマトグラフ工程から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第１富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｃ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｄ）第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表１に見られるバリエーションＶａｒ．１〜Ｖａｒ．１００の任意の１つから選択される。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
１つの態様では、本発明は、血液タンパク質不足または機能障害関連状態の治療に使用するためのセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンレベルの低下した血漿由来タンパク質組成物を提供する。ある実施形態では、血漿由来タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、（ａ）第１標的タンパク質富化工程を実施して、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｂ）第２標的タンパク質富化工程を実施して、第２富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程；（ｃ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、第２富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程；（ｄ）組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程；ならびに（ｅ）第３標的タンパク質富化工程を実施して、第３富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程を含む方法により調製する血漿由来タンパク質組成物を提供する。ある実施形態では、第１および第２富化工程の組み合わせは、表２、表３、表４、表５、表６、表７、表８、表９、表１０、または表１１に見られるバリエーションＶａｒ．１０１〜Ｖａｒ．１１００の任意の１つから選択される。１つの実施形態では、組成物は、医薬投与用に製剤化される。具体的な実施形態では、組成物は、静脈内投与用に製剤化される。別の具体的な実施形態では、組成物は、筋肉内投与用に製剤化される。別の実施形態では、組成物は、皮下投与用に製剤化される。さらに別の実施形態では、組成物は、眼内投与用に製剤化される。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
上記組成物のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）血漿由来標的タンパク質への結合に適した条件下で、血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来標的タンパク質をクロマトグラフィー樹脂から溶出する副工程を含む。１つの具体的な実施形態では、不純物は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。別の具体的な実施形態では、不純物は、副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合するが、副工程（ｉｉ）においてクロマトグラフィー樹脂から溶出されない。
上記組成物の他のある実施形態では、クロマトグラフィー富化工程は、（ｉ）少なくとも１種の不純物への結合に適した条件下で、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および（ｉｉ）血漿由来タンパク質組成物から樹脂を分離する副工程を含み、該血漿由来標的タンパク質は副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない。
本明細書に提供する組成物のある実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも１０％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも２５％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも５０％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも７５％低下している。別の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも９０％低下している。さらに他の実施形態では、特定のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量は、少なくとも５％低下しているか、または少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％低下している。１つの実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲン低下とは、個々のＳｉＯ２処理工程中に達した低下を指す。別の実施形態では、セリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲン低下とは、ＳｉＯ２処理工程を除いて類似形式で調製した組成物と比較した最終組成物中の汚染物レベルを指す。
１つの実施形態では、本明細書に提供する医薬組成物は、本明細書に提供する方法を使用して単離された血漿由来タンパク質組成物を製剤化することにより調製する。一般に、製剤化した組成物は、少なくとも１つ、好ましくは少なくとも２つ、最も好ましくは少なくとも３つのウイルス不活性化または除去工程に供する。本明細書に提供する方法と使用し得るウイルス不活性化または除去工程の例としては、溶媒清浄処理（Ｈｏｒｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ Ｃｏａｇｕｌ Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ １９９４ （５ Ｓｕｐｐｌ ３）：Ｓ２１−Ｓ２８ ａｎｄ Ｋｒｅｉｌ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ ２００３ （４３）：１０２３−１０２８、これらは共に、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に明確に組み込まれる）、ナノ濾過（Ｈａｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．， Ｖｏｘ Ｓａｎｇ １９８９ （５６）２３０−２３６ ａｎｄ Ｙｕａｓａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ． １９９１ （７２ （ｐｔ ８））：２０２１−２０２４、これらは共に、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に明確に組み込まれる）、低ｐＨインキュベーションおよび高温（Ｋｅｍｐｆ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ １９９１ （３１）４２３−４２７ ａｎｄ Ｌｏｕｉｅ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ １９９４ （２２）：１３−１９）が挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
１つの実施形態では、本明細書に提供する医薬組成物は、静脈内、皮下、筋肉内、および／または眼内投与に適した緩衝剤またはｐＨ分解防止剤を１つまたは複数含む。本明細書に提供する血漿由来タンパク質組成物の製剤化に適した緩衝剤の例としては、適切なｐＨに調節するグリシン、クエン酸塩、リン酸、酢酸塩、グルタミン酸塩、酒石酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、ヒスチジンもしくは他のアミノ酸、グルコン酸、リンゴ酸塩、コハク酸、ギ酸塩、プロピオン酸塩、炭酸塩、または任意のそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。一般に、緩衝剤は、製剤ｐＨを長期間適切に維持する上で十分である。好ましい実施形態では、緩衝剤は、グリシンである。ある実施形態では、組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される血漿由来タンパク質を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供する医薬組成物は、組成物の浸透圧調節剤を任意選択的にさらに含み得る。浸透圧剤の例としては、マンニトール、ソルビトール、グリセロール、ショ糖、グルコース、デキストロース、レブロース、フルクトース、ラクトース、ポリエチレングリコール、リン酸、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、グルコノグルコヘプトン酸カルシウム、ジメチルスルホンなどが挙げられるが、これらに限定されない。
典型的には、本明細書に提供する製剤は、生理的浸透圧、約２８５〜２９５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ相当の浸透圧である（Ｌａｃｙ ｅｔ ａｌ．， Ｄｒｕｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ − Ｌｅｘｉ−Ｃｏｍｐ １９９９：１２５４）。ある実施形態では、製剤の浸透圧は、約２００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ〜約３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは約２４０〜約３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。特定の実施形態では、製剤の浸透圧は、約２００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、または２１０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２４５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２５５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２６０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２６５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２７０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２７５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２８０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２８５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、２９５ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３００ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３１０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３２０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３３０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、３４０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇ、または３５０ｍＯｓｍｏｌ／ｋｇである。
本明細書に提供する血漿由来製剤は、一般に液体形態で長期間安定する。ある実施形態では、製剤は、少なくとも約３ヶ月間室温で、または少なくとも約４ヶ月間、５ヶ月間、６ヶ月間、７ヶ月間、８ヶ月間、９ヶ月間、１０ヶ月間、１１ヶ月間、１２ヶ月間、１３ヶ月間、１４ヶ月間、１５ヶ月間、１６ヶ月間、１７ヶ月間、１８ヶ月間、１９ヶ月間、２０ヶ月間、２１ヶ月間、２２ヶ月間、２３ヶ月間、もしくは２４ヶ月間室温で安定する。製剤はまた、一般に６ヶ月間または少なくとも約１８ヶ月間冷凍条件（典型的には約２℃〜約８℃）下で、または少なくとも約２１ヶ月間、２４ヶ月間、２７ヶ月間、３０ヶ月間、３３ヶ月間、３６ヶ月間、３９ヶ月間、４２ヶ月間、もしくは４５ヶ月間冷凍条件下で安定する。
Ｖ．治療法
１つの態様では、本発明は、本明細書に提供する方法により調製されたセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンレベルの低下した血漿由来タンパク質組成物を治療有効量投与することにより、血液タンパク質不足または機能障害関連の疾患または障害の治療のための方法を、それを必要としている対象に提供する。ある実施形態では、血漿由来タンパク質を含む組成物は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
１つの態様では、本発明は、血液タンパク質不足または機能障害関連状態の治療に使用するための薬品製造のためのセリンプロテアーゼおよび／またはセリンプロテアーゼチモーゲンレベルの低下した血漿由来タンパク質組成物の使用を提供する。ある実施形態では、血漿由来タンパク質は、免疫グロブリン（Ｉｇ）、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、ブチリルコリンエステラーゼ、Ｈ因子、補体系のタンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）タンパク質から選択される。
Ａ．免疫グロブリン
近代医学で日常的に実践されているように、濃縮免疫グロブリン（特にＩｇＧ）の滅菌調製物は、これらの３つの主要クラス：免疫不全、炎症および自己免疫疾患、ならびに急性感染に属す医学的状態の治療に使用される。これらのＩｇＧ調製物は、多発性硬化症（特に再発寛解型多発性硬化症またはＲＲＭＳ）、アルツハイマー病、およびパーキンソン病治療にも有用であり得る。本発明の精製ＩｇＧ調製物は、これらの目的、ならびに他の臨床的に承認されたＩｇＧ調製物の使用に適している。
ＦＤＡは、様々な適応（同種骨髄移植、慢性リンパ性白血病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、小児ＨＩＶ、一次免疫不全、川崎病、慢性炎症脱髄ポリニューロパシー（ＣＩＤＰ）、ならびに高抗体レシピエントもしくはＡＢＯ不適合ドナーとの腎移植など）を治療するためのＩＶＩＧの使用を承認した。ある実施形態では、本明細書に提供するＩＶＩＧ組成物は、これらの疾患および状態の治療または管理に有用である。
さらに、ＦＤＡ認可外のＩＶＩＧ使用は、一般的に、患者に様々な適応（例えば、慢性疲労症候群、クロストリジウムディフィシレ大腸炎、皮膚筋炎および多発性筋炎、グレーブス眼症、ギラン・バレー症候群、筋肉ジストロフィー、封入体筋炎、ランバート・イートン症候群、エリテマトーデス、多発性運動性ニューロパシー、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、同種免疫性新生児血小板減少症、パルボウイルスＢ１９感染、天疱瘡、輸血後紫斑病、腎移植拒絶反応、自然流産／流産、スティッフパーソン症候群、オプソクローヌス・ミオクローヌス、成人の重度疾患における重度の敗血症および敗血症性ショック、中毒性表皮壊死、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、ならびに低ガンマグロブリン血症）の治療または管理を提供する。ある実施形態では、本明細書に提供するＩＶＩＧ組成物は、これらの疾患および状態の治療または管理に有用である。
最後に、疾患（一次免疫不全、ＲＲＭＳ、アルツハイマー病、およびパーキンソン病を含む）の治療または管理のためのＩＶＩＧの経験的使用が提唱されている（米国特許出願公開第２００９／０１４８４６３号、これは、参照することによりその全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）。ある実施形態では、本明細書に提供するＩＶＩＧ組成物は、一次免疫不全、ＲＲＭＳ、アルツハイマー病、またはパーキンソン病の治療または管理に有用である。連日投与を含むある実施形態では、対象に投与する有効量は、年齢、体重、疾患重症度、投与経路（例えば、静注対皮下）および治療反応の個人差を考慮して医師が決定できる。ある実施形態では、本発明の免疫グロブリン調製物は、約５ｍｇ／キログラム〜約２０００ｍｇ／キログラムを毎日対象に投与できる。追加の実施形態では、免疫グロブリン調製物は、少なくとも約１０ｍｇ／キログラム、少なくとも１５ｍｇ／キログラム、少なくとも２０ｍｇ／キログラム、少なくとも２５ｍｇ／キログラム、少なくとも３０ｍｇ／キログラム、または少なくとも５０ｍｇ／キログラムの量で投与できる。追加の実施形態では、免疫グロブリン調製物は、最大約１００ｍｇ／キログラム、最大約１５０ｍｇ／キログラム、最大約２００ｍｇ／キログラム、最大約２５０ｍｇ／キログラム、最大約３００ｍｇ／キログラム、最大約４００ｍｇ／キログラムの用量を毎日対象に投与できる。他の実施形態では、免疫グロブリン調製物の用量は、より多いこともより少ないこともできる。さらに、免疫グロブリン調製物は、１日１回用量で投与することもでき、１日複数回用量で投与することもできる。ＩｇＧ調製物による該疾患治療の熟練臨床医は、当技術分野において既知である基準に準じて患者に適した用量を決定することができる。
本発明により、治療過程の完了に必要な期間は医師が決定でき、１日程度の短期間から１ヶ月超の範囲であり得る。ある実施形態では、治療過程は、１〜６ヶ月である可能性がある。
有効量のＩＶＩＧ調製物を、静脈内方法により対象に投与する。「有効量」という用語は、対象の疾患または状態の改善または救済に至るＩＶＩＧ調製物量を指す。対象に投与する有効量は、年齢、体重、治療する疾患もしくは状態、疾患重症度および治療反応の個人差を考慮して医師が決定できる。ある実施形態では、ＩＶＩＧ調製物は、約５ｍｇ／キログラム〜約２０００ｍｇ／キログラム／投与の用量で対象に投与できる。ある実施形態では、用量は少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１１００ｍｇ／ｋｇ、１２００ｍｇ／ｋｇ、１３００ｍｇ／ｋｇ、１４００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、１６００ｍｇ／ｋｇ、１７００ｍｇ／ｋｇ、１８００ｍｇ／ｋｇ、１９００ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約２０００ｍｇ／ｋｇであり得る。
ＩＶＩＧ治療の投与量および投与頻度は、他の要因の中でもとりわけ、治療する疾患もしくは状態ならびに患者における疾患もしくは状態の重症度に依存する。一般に、一次免疫機能障害において、用量約１００ｍｇ／ｋｇ〜約４００ｍｇ／ｋｇ体重で約３〜４週間ごと投与する。神経および自己免疫疾患において、最大２ｇ／ｋｇ体重を月１回５日間コースで３〜６ヶ月間実施する。これは一般に、約１００ｍｇ／ｋｇ〜約４００ｍｇ／ｋｇ体重で約３〜４週間ごとに１回投与を含む維持療法で補充する。一般に、患者は、約１４〜３５日間ごと、または約２１〜２８日間ごとに１回投与または治療する。治療頻度は、他の要因の中でもとりわけ、治療する疾患もしくは状態ならびに患者における疾患もしくは状態の重症度に依存する。
好ましい実施形態では、免疫不全、自己免疫疾患、または急性感染の治療法を、それを必要としているヒトに提供し、本方法は、本発明の医薬ＩＶＩＧ組成物を投与する工程を含む。関連実施形態では、本発明は、本明細書に提供する方法により製造されるＩＶＩＧ組成物を、それを必要としているヒトにおける免疫不全、自己免疫疾患、または急性感染の治療のために提供される。
ある実施形態では、免疫不全、自己免疫疾患、または急性感染は、同種骨髄移植、慢性リンパ性白血病、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、小児ＨＩＶ、一次免疫不全、川崎病、慢性炎症脱髄ポリニューロパシー（ＣＩＤＰ）、高抗体レシピエントもしくはＡＢＯ不適合ドナーとの腎移植、慢性疲労症候群、クロストリジウムディフィシレ大腸炎、皮膚筋炎および多発性筋炎、グレーブス眼症、ギラン・バレー症候群、筋肉ジストロフィー、封入体筋炎、ランバート・イートン症候群、エリテマトーデス、多発性運動性ニューロパシー、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、同種免疫性新生児血小板減少症、パルボウイルスＢ１９感染、天疱瘡、輸血後紫斑病、腎移植拒絶反応、自然流産／流産、スティッフパーソン症候群、オプソクローヌス・ミオクローヌス、成人の重度疾患における重度の敗血症および敗血症性ショック、中毒性表皮壊死、慢性リンパ性白血病、多発性骨髄腫、Ｘ連鎖無ガンマグロブリン血症、低ガンマグロブリン血症、一次免疫不全、ＲＲＭＳ、アルツハイマー病、およびパーキンソン病から選択される。
Ｂ．Ｈ因子
１つの態様では、本発明は、本明細書に提供する方法により調製されたＨ因子組成物を治療有効量投与することにより、Ｈ因子機能障害または異常補体活性化第２経路関連の疾患または障害の治療のための方法を、それを必要としている対象に提供する。１つの実施形態では、Ｈ因子組成物は、画分Ｉ沈降物からＨ因子を抽出することにより調製する。別の実施形態では、Ｈ因子組成物は、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキからＨ因子を抽出することにより調製する。
ある実施形態では、Ｈ因子機能障害関連の疾患または障害は、非定型的溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮＩＩ）、心筋梗塞、冠状動脈性心臓病／冠動脈疾患（ＣＡＤ／ＣＨＤ）、およびアルツハイマー病から選択される。１つの特定の実施形態では、疾患は、非定型的溶血性尿毒症症候群（ａＨＵＳ）である。別の特定の実施形態では、疾患は、加齢黄斑変性（ＡＭＤ）である。さらに別の特定の実施形態では、疾患は、ＩＩ型膜性増殖性糸球体腎炎（ＭＰＧＮＩＩ）である。
ある実施形態では、本方法は、本明細書に提供するＨ因子組成物を対象に治療有効量投与することにより、異常補体活性化第２経路関連の疾患または障害治療のために、それを必要としている対象に提供される。１つの実施形態では、Ｈ因子組成物は、画分Ｉ沈降物からＨ因子を抽出することにより調製する。別の実施形態では、Ｈ因子組成物は、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキからＨ因子を抽出することにより調製する。
ある実施形態では、異常補体活性化第２経路関連の疾患または障害は、自己免疫疾患（関節リウマチ、ＩｇＡ腎症、喘息、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連脈管炎、天疱瘡、ブドウ膜炎、重症筋無力症、橋本甲状腺炎など）、腎疾患（ＩｇＡ腎症、溶血性尿毒症症候群、膜性増殖性糸球体腎炎など）、喘息、アルツハイマー病、成体黄斑変性、近位夜間ヘモグロビン尿、腹部大動脈瘤、虚血再潅流損傷、および敗血症から選択される。
本発明により提供する医薬組成物は、単独投与してもよいし他の治療薬と併用投与してもよい。これらの薬剤は、同一医薬品の一部として組み込み得る。
１．投与
本発明により、治療過程の完了に必要な期間は医師が決定でき、１日程度の短期間から１ヶ月超の範囲であり得る。ある実施形態では、治療過程は、１〜６ヶ月である可能性がある。
有効量のＨ因子調製物を、疾患または障害の治療に適した任意の方法により対象に投与する。例えば、ある実施形態では、Ｈ因子は静脈内、眼内、皮下、および／または筋肉内投与方法により投与し得る。好ましい実施形態では、それを必要としている対象における加齢黄斑変性の治療のための方法は、Ｈ因子組成物を患者に眼内投与する工程を含んで提供する。
ある実施形態では、本明細書に提供するＨ因子組成物は、全身投与もでき、局所投与もできる。全身投与は、経口、経皮、皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）、腹腔内、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経鼻、舌下、または直腸内を含む。最も好ましい全身性投与経路は、経口である。眼内投与の局所投与としては、局所、硝子体内、眼周囲、経強膜、球後、強膜近傍、テノン嚢下、または眼内機器を介す投与が挙げられる。局所送達に好ましい方法としては、後強膜近傍投与により；硝子体内注射を介して；またはカニューレを介しての斑へ経強膜的送達（米国特許第６，４１３，２４５号（これらの開示は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）に記載されているものなど）が挙げられる。あるいは、インヒビターは、移植した持続送達機器を介して硝子体内ｌｙもしくは経強膜的に送達してもよく、他の既知の局所眼内送達方法により送達してもよい。
ある実施形態では、「有効量」という用語は、対象の疾患または状態の改善または救済に至るＨ因子調製物量を指す。対象に投与する有効量は、年齢、体重、治療する疾患もしくは状態、疾患重症度および治療反応の個人差を考慮して医師が決定できる。ある実施形態では、Ｈ因子調製物は、５ｍｇ／キログラム〜２０００ｍｇ／キログラム／投与または約５ｍｇ／キログラム〜２０００ｍｇ／キログラム／投与の用量で対象に投与できる。ある実施形態では、用量は少なくとも約５ｍｇ／ｋｇまたは約５ｍｇ／ｋｇ、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇまたは約１０ｍｇ／ｋｇ、あるいは少なくとも２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１１００ｍｇ／ｋｇ、１２００ｍｇ／ｋｇ、１３００ｍｇ／ｋｇ、１４００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、１６００ｍｇ／ｋｇ、１７００ｍｇ／ｋｇ、１８００ｍｇ／ｋｇ、１９００ｍｇ／ｋｇ、もしくは２０００ｍｇ／ｋｇまたは約２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１１００ｍｇ／ｋｇ、１２００ｍｇ／ｋｇ、１３００ｍｇ／ｋｇ、１４００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、１６００ｍｇ／ｋｇ、１７００ｍｇ／ｋｇ、１８００ｍｇ／ｋｇ、１９００ｍｇ／ｋｇ、もしくは２０００ｍｇ／ｋｇであり得る。Ｈ因子治療の投与量および投与頻度は、他の要因の中でもとりわけ、治療する疾患もしくは状態ならびに患者における疾患もしくは状態の重症度に依存する。
２．加齢黄斑変性（ＡＭＤ）
好ましい実施形態では、本発明は、本明細書に提供するＨ因子組成物を対象に治療有効量投与することにより、それを必要としている対象における加齢黄斑変性の治療法を提供する。
加齢黄斑変性（ＡＭＤ）は、６０歳を超す高齢人口の失明の第一原因である。現在、７５歳を超す者の３５〜４０％がある程度のＡＭＤと推定されている。世界約５千万人が罹患しており、米国のみで１千万と推定されている。現在、毎年約１５５，０００人が新たにＡＭＤと診断されている。世界人口が高齢化し続けているため、年間診断数は２０２０年までに３倍になることが予想される。ＡＭＤは罹患した個体の中心視を破壊する壊滅的疾患であり、日常生活に必要な活動（読解および運転など）を行う能力を奪う。
ＡＭＤは、網膜外網層細胞（光受容体および光受容体を支える網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞など）、ならびに脈絡膜として知られている眼の隣接血管層内細胞に関与する緩慢進行性疾患である。黄斑変性は、高視力視覚において役割を果たす中枢網膜のごく一部（直径約２ｍｍ）である斑の崩壊を特徴とする。後発黄斑変性（すなわち、ＡＭＤ）は、「乾燥」か「湿潤」のいずれかとして一般に定義される。ＡＭＤの湿潤（「滲出性」）新生血管形成は、該疾患患者の約１０％に影響し、ＲＰＥを通して脈絡毛細管枝から成長する異常血管を特徴とし、典型的には出血、滲出、瘢痕環、および／または漿液性網膜剥離に至る。ＡＭＤ患者の約９０％は、該疾患の非新生血管、または乾燥形態を呈し、これはＲＰＥ萎縮および黄斑光受容体喪失を特徴とする。
ＡＭＤは、ＲＰＥ（網膜色素上皮細胞）を基底脈絡膜から分離する細胞外基質成分の多層複合物であるブルッフ膜上に蓄積する「ドルーゼ」と称される破片様物質沈着の存在を特徴とする。ドルーゼは、眼底検査により観察できる。これらの沈着は、ＡＭＤ患者のドナー眼の顕微鏡検査において広く特性化されている。臨床的検査時に生眼に観察された沈着は、いくつかの基準（沈降物の相対的サイズ、豊富さ、および形状など）に応じて軟ドルーゼか硬ドルーゼのいずれかに分類される。組織化学的かつ免疫細胞化学的検査により、ドルーゼは様々な脂質、多糖類、グリコサミノグリカンおよびタンパク質を含むことが示されている。
現在、ＡＭＤ疾患の管理にはいくつかの種類の治療が効果的であることが示されているが、既知のＡＭＤ治療法はない。該疾患の湿潤形態の異常血管のレーザー光凝固術は、標準的な治療である。この治療は、このようにして治療できるのは十分に輪郭がはっきりしている新生血管病巣のみであり、患者５０％において血管漏出が再発するという事実により限定される（Ｆｉｎｅ ｅｔ ａｌ．， ２０００）。この治療にはレーザーエネルギーが必要であるため、治療領域の光受容体も死滅し、治療直後に患者において中枢盲も頻発する。新規の新生血管病巣が最終的に発現し、反復治療が必要とされる。他の治療介入としては、喫煙の中止および抗酸化剤を用いた療法開始による生活様式の変化が挙げられる。ＶＥＧＦインヒビター（例えば、ラニビズマブまたはベバシズマブの硝子体内注射）を使用した抗血管新生療法も示唆されている。
最近、個体約３５％がＨ因子遺伝子複製の片方または両方に単一ヌクレオチド多型（ＳＮＰ）リスクを保因することが発見された。同種接合の個体では、加齢黄斑変性発現の可能性は約７倍増加しており、対して、異型接合体では、該疾患発現の可能性は２〜３倍増加している。Ｈ因子のＣＣＰモジュール７に位置するこのＳＮＰは、Ｈ因子と、Ｃ反応タンパク質およびヘパリンの両方の間の相互作用に影響を与えることが示されており、ＳＮＰと疾患間の因果関係が示される。多型は、Ｙ４２０Ｈ多型である。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の１つの実施形態では、対象は、任意のＡＭＤ症状を呈さない。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の別の実施形態では、対象は、ドルーゼを呈する。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の別の実施形態では、対象のＡＭＤ発現リスクは増大している。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の別の実施形態では、投与は、静脈内である。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の別の実施形態では、本方法は、ＡＭＤの徴候および／または症状を呈する対象の治療をさらに含む。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の別の実施形態では、対象は、ＡＭＤと診断されている。
別の態様では、本発明は、本明細書に提供するＨ因子調製物を対象へ予防または治療有効量投与し、前記投与を定期的に反復する工程を含む、加齢黄斑変性の発現リスクにあると判断されるヒト対象の治療法を提供する。
加齢黄斑変性の発現リスクにあると判断されるヒト対象の治療法の１つの実施形態では、投与は、前記対象における黄斑変性発現の進行または開始の遅延化に効果的な時間反復される。
加齢黄斑変性の発現リスクにあると判断されるヒト対象の治療法の別の実施形態では、ヒト対象は、加齢黄斑変性の発現に関する遺伝的マーカーの１つまたは複数の存在に基づき同定されて加齢黄斑変性の発現リスクにあると判断される。
加齢黄斑変性の発現リスクにあると判断されるヒト対象の治療法の別の実施形態では、遺伝的マーカーは、多型である。
対象における加齢黄斑変性（ＡＭＤ）発現の進行または開始の遅延化に至る補体活性化の制限方法の別の実施形態では、対象は、ＡＭＤと診断されていない。
Ｃ．インター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）
さらに他の態様では、本明細書に提供するＩαＩｐ組成物を治療有効量投与することにより、ＩαＩｐ機能低下またはＩαＩｐ機能障害関連の障害および疾患の治療のための方法を提供することが本発明の目的である。１つの実施形態では、ＩαＩｐ機能低下またはＩαＩｐ機能障害関連の疾患または障害は、敗血症である。
１つの実施形態では、本発明は、ＩαＩｐ機能低下またはＩαＩｐ機能障害関連の疾患または障害の治療のための方法における使用のための治療有効量の本明細書に開示の方法により調製されたＩαＩｐ組成物を、それを必要としている対象に提供する。１つの実施形態では、ＩαＩｐ機能低下またはＩαＩｐ機能障害関連の疾患または障害は、敗血症である。
別の態様では、本明細書に提供するＩαＩｐ組成物を治療有効量投与することにより、増大した血漿セリンプロテアーゼ活性に関連した疾患および障害の治療のための方法を提供することが本発明の目的である。１つの実施形態では、増大した血漿セリンプロテアーゼ活性に関連した疾患または障害は、敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、播種性血管内凝固、線維性増殖、炭疽中毒、癌転移、外科手術中組織損傷、腎疾患、血管疾患、凝固、糖尿病、および全身性炎症から選択される。
１つの実施形態では、本発明は、増大した血漿セリンプロテアーゼ活性に関連した疾患または障害の治療のための方法における使用のための治療有効量の本明細書に開示の方法により調製されたＩαＩｐ組成物を、それを必要としている対象に提供する。１つの実施形態では、増大した血漿セリンプロテアーゼ活性に関連した疾患または障害は、敗血症、敗血症性ショック、内毒素性ショック、播種性血管内凝固、線維性増殖、炭疽中毒、癌転移、外科手術中組織損傷、腎疾患、血管疾患、凝固、糖尿病、および全身性炎症から選択される。
Ａ．投与
本発明により、治療過程の完了に必要な期間は医師が決定でき、１日程度の短期間から１ヶ月超の範囲であり得る。ある実施形態では、治療過程は、１〜６ヶ月である可能性がある。
有効量のＩαＩｐ調製物を、疾患または障害の治療に適した任意の方法により対象に投与する。例えば、ある実施形態では、ＩαＩｐは静脈内、皮下、および／または筋肉内投与方法により投与し得る。好ましい実施形態では、それを必要としている対象における敗血症の治療のための方法は、ＩαＩｐ組成物を患者に静脈内（ＩＶ）投与する工程を含んで提供する。
ある実施形態では、本明細書に提供するＩαＩｐ組成物は、全身投与もでき、局所投与もできる。全身投与としては、経口、皮下（ｓｕｂｄｅｒｍａｌ）、腹腔内、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、経鼻、舌下、または直腸内が挙げられる。局所投与としては、局所、皮下、筋肉内、および腹腔内投与経路が挙げられる。
ある実施形態では、「有効量」という用語は、対象の疾患または状態の改善または救済に至るＩαＩｐ調製物量を指す。対象に投与する有効量は、年齢、体重、治療する疾患もしくは状態、疾患重症度および治療反応の個人差を考慮して医師が決定できる。ある実施形態では、ＩαＩｐ調製物は、約５ｍｇ／キログラム〜約２０００ｍｇ／キログラム／投与の用量で対象に投与できる。ある実施形態では、用量は少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇ、９０ｍｇ／ｋｇ、１００ｍｇ／ｋｇ、１２５ｍｇ／ｋｇ、１５０ｍｇ／ｋｇ、１７５ｍｇ／ｋｇ、２００ｍｇ／ｋｇ、２５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、３５０ｍｇ／ｋｇ、４００ｍｇ／ｋｇ、４５０ｍｇ／ｋｇ、５００ｍｇ／ｋｇ、５５０ｍｇ／ｋｇ、６００ｍｇ／ｋｇ、６５０ｍｇ／ｋｇ、７００ｍｇ／ｋｇ、７５０ｍｇ／ｋｇ、８００ｍｇ／ｋｇ、８５０ｍｇ／ｋｇ、９００ｍｇ／ｋｇ、９５０ｍｇ／ｋｇ、１０００ｍｇ／ｋｇ、１１００ｍｇ／ｋｇ、１２００ｍｇ／ｋｇ、１３００ｍｇ／ｋｇ、１４００ｍｇ／ｋｇ、１５００ｍｇ／ｋｇ、１６００ｍｇ／ｋｇ、１７００ｍｇ／ｋｇ、１８００ｍｇ／ｋｇ、１９００ｍｇ／ｋｇ、または少なくとも約２０００ｍｇ／ｋｇであり得る。ＩαＩｐ治療の投与量および投与頻度は、他の要因の中でもとりわけ、治療する疾患もしくは状態ならびに患者における疾患もしくは状態の重症度に依存する。
ＶＩ．実施例
実施例１
血漿由来タンパク質組成物に存在する残りのセリンプロテアーゼ含量および活性を決定するため、ＳｉＯ２処理を使用せずに製造された２つの市販ＩｇＧ調製物：ＯＣＴＡＧＡＭ（登録商標）（５％静脈内免疫グロブリン；Ｏｃｔａｐｈａｒｍａ）およびＳｕｂｃｕｖｉａ（１６％皮下免疫グロブリン；Ｂａｘｔｅｒ）；ＳｉＯ２処理を使用して製造された２つの多くの市販ＩｇＧ調製物：Ｇａｍｍａｇａｒｄ Ｌｉｑｕｉｄ（１０％静脈内免疫グロブリン；Ｂａｘｔｅｒ）のアミド分解活性プロファイルならびに現在開発中のＨ因子精製法を決定した。とりわけ、上記のとおり、結合させてから、Ｈ因子を微細ＳｉＯ２から溶出することによりＨ因子組成物を精製した。
簡単に述べると、各血漿由来タンパク質組成物のアミド分解活性プロファイルを、異なる酵素特異性を有する以下の発色基質：ＰＬ−１（広域スペクトル）、Ｓ−２２８８（広域スペクトル）、Ｓ−２２６６（ＦＸＩａ、腺カリクレイン）、Ｓ−２２２２（ＦＸａ、トリプシン）、Ｓ−２２５１（プラスミン）、およびＳ−２３０２（カリクレイン、ＦＸＩａ、およびＦＸＩＩａ）を用いた分析により決定した。前カリクレイン活性因子（ＰＫＫＡ）および第ＸＩａ因子単位量も決定した。表１７に示すように、ＳｉＯ２吸着工程を使用せずに製造した血漿由来ＩｇＧ組成物は、著しいレベルのアミド分解活性およびＦＸＩａ含量を含んだ。対して、両試験ロットのＧａｍｍａｇａｒｄ Ｌｉｑｕｉｄは、最小限のアミド分解活性およびＦＸＩａ含量を含んだ。これらの結果と一致し、微細ＳｉＯ２と結合させ微細ＳｉＯ２から溶出させて調製したＨ因子組成物は、非常に高いレベルのアミド分解活性およびＦＸＩａ含量を含む。
（表１７）様々な血漿由来タンパク質組成物のアミド分解活性
Figure 2016155798
実施例２
血漿試料からＨ因子の製造に経済的に有益であり、同じ血漿試料から追加の血液因子を回収させるスキームを決定するため、図１に示すフロー図解に概説するスキームに準じて多くのヒト血漿プールを画分に供した。図２に示すように、ヒト血漿脱寒冷コーンプールに存在する大部分のＨ因子（約９０％）を画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物に見ることができる。少ないが有意な量のＨ因子（約１０％）も画分Ｉ沈降物に見ることができる。これはＰＣＴ公開ＷＯ２０１１／０１１７５３号（これらの内容は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる）に示される結果と一致する。
「アエロジル処理」組成物の濾過の結果として形成される微細ＳｉＯ２濾過ケーキ副産物からＨ因子を、フィルタープレスを通してＨ因子抽出緩衝液を再利用することにより、組成物６「画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾液」の上流から直接抽出した。次いで、最終濃度１５％となるようにエタノールを添加し、−６℃で最小４時間のインキュベーションを介してｐＨ８．０で実施した第１沈降工程により、濾過ケーキ抽出物から塩および様々な不純物を除去した。１時間のインキュベーション時間後、沈降反応のｐＨを８．０に再調節した。次いで、沈降物を遠心分離により上清から除去した。Ｈ因子を第２沈降工程によりさらに富化し、最終濃度２５％となるようにエタノールを添加し、−１０℃で最小８時間のインキュベーションを介してｐＨ６．０で実施した。次いで、Ｈ因子を含む沈降物を遠心分離により回収した。
第２沈降工程により形成された沈降物を、低イオン強度溶解緩衝液に１：９比で溶解させ、不活性脂質エンベロープウイルスをＳ／Ｄ処理した。Ｈ因子を続いてＤＥＡＥセファロースＦＦ樹脂を使用した陰イオン交換クロマトグラフィーにより富化した。簡単に述べると、Ｈ因子は、低イオン強度条件下で、ＤＥＡＥセファロース樹脂に結合し、溶液のイオン強度を増大することにより溶出した。次いで、ＤＥＡＥセファロース溶出物の伝導度を低減して、ヘパリン親和性クロマトグラフィーによりＨ因子をさらに富化した。簡単に述べると、Ｈ因子は、低イオン強度条件下で、ヘパリンセファロースＦＦ樹脂に結合し、溶液のイオン強度を増大することにより溶出した。表１８に示すように、大部分のＨ因子がＤＥＡＥおよびヘパリン樹脂に結合した。
（表１８）クロマトグラフィー樹脂へのＨ因子結合
Figure 2016155798
次いで、ヘパリン樹脂から溶出したＨ因子を標準的な方法に準じて限外濾過／ダイアフィルトレーション、続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム上のサイズ排除クロマトグラフィーに供した。次いで、サイズ排除クロマトグラフィーから回収したＨ因子を限外濾過により濃縮し、滅菌濾過し、ＰＢＳ緩衝液中の最終タンパク質濃度５０ｍｇ／ｍＬで製剤化した。
次いで、最終Ｈ因子組成物（ＦＨ０１２）の同質、不純物、およびアミド分解活性を特性化した。Ｈ因子組成物の単分散性はサイズ排除クロマトグラフィーにより特性化した。表１９に示すように、大部分のタンパク質は、ＨＰ−ＳＥＣカラム上に負荷時に推測サイズ４００ｋＤａで移動したＨ因子最終組成物に存在する。
（表１９）ＨＰ−ＳＥＣにより決定した最終ＦＨ０１２組成物の分子サイズ分配
Figure 2016155798
次いで、最終Ｈ因子組成物の内毒素レベル、ｐＨ、外観、および最終タンパク質濃度を決定した。表２０に示すように、カブトガニ血球抽出成分（ＬＡＬ）分析により決定された組成物の内毒素レベルは低かった（＜０．５ＥＵ／ｍＬ）。
（表２０）最終ＦＨ０１２組成物のＬＡＬ、ｐＨ、外観、およびタンパク質含量
Figure 2016155798
次いで、最終Ｈ因子組成物中の様々なタンパク質不純物レベルを決定した。表２１に示すように、補体タンパク質およびＩｇＧ免疫グロブリンは、Ｈ因子組成物中の最終タンパク質濃度１％未満と測定された。
（表２１）最終ＦＨ０１２組成物中の不純物
Figure 2016155798
最終的に、実施例１に報告するように、アミド分解活性レベルおよびプロテアーゼ含量を決定した。表１７に示すように、この実施例に概説するスキームに準じて精製した血漿由来Ｈ因子には、高レベルのアミド分解活性およびＦＸＩａ含量が含まれた。
実施例３
血漿由来タンパク質組成物のアミド分解活性除去能を示すために、再懸濁コーン画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）で処理した。簡単に述べると、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を得るために、脱寒冷ヒト血漿プールを本明細書に記載のＩｇＧ精製スキームに準じて分別した。画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を、０℃〜８℃に維持した温度で、低伝導度の抽出緩衝液（ｐＨ５．１±０．２；〜０．８ｍＳ／ｃｍ）に再懸濁した。ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の最終濃度が４０〜６０ｇ／ｋｇとなるようにアエロジル（登録商標）３８０（Ｅｖｏｎｉｋ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ＡＧ）を添加した。ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物の最終濃度が０．５ｋｇ／ｋｇとなるようにＣＥＬＰＵＲＥ（登録商標）Ｃ３００濾過助剤（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｍｉｎｅｒａｌｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を添加後、デプスフィルターを使用して懸濁液を濾過した。次いで、濾液中の免疫グロブリン組成物のＦＸＩチモーゲン含量を試験した。表２２に示すように、画分ＩＩ＋ＩＩＩ懸濁液の微細ＳｉＯ２を用いた処理により、組成物の第ＸＩ因子チモーゲン含量はほぼ９０％低下した。
（表２２）最終ＦＨ０１２組成物中の不純物
Figure 2016155798
実施例４
微細ＳｉＯ２濾過ケーキからのセリンプロテアーゼの溶出を評価するため、実施例３において調製したように、各種濃度のリン酸緩衝液（１００、５０、２５、および５ｍＭ）を含む溶出緩衝液を使用して２つの異なるｐＨ（６．０、７．５）でタンパク質をＳｉＯ２から溶出した。簡単に述べると、濾過ケーキを適切な緩衝系で１：５比で溶解し、デプスフィルター（Ｃｕｎｏ ５０ＳＡ）を通して濾過した。次いで、各溶出物のアミド分解活性およびＨ因子組成物を決定した（表２３および表２４）。表２３に示すように、基質ＣＳ２１６６（ＦＸＩａ、活性化タンパク質Ｃ）で測定したアミド分解活性の溶出はより低い伝導度およびｐＨ（すなわち、６．０）で低下した。
ｐＨ７．５の溶出条件下で（表２４）、Ｈ因子溶出物は伝導度増大時に低下しつつ、セリンプロテアーゼ溶出物は伝導度増大時に増大した。驚くべきことに、非常に低伝導度（５ｍＭリン酸；０．８８２ｍＳ／ｃｍ）で、セリンプロテアーゼ溶出物は実質的に増大しつつ、Ｈ因子溶出物は低下した。ｐＨ７．５で得られた溶出データを図３に図示する。
（表２３）ｐＨ６．０での微細ＳｉＯ２からのＨ因子溶出物およびセリンプロテアーゼ活性
Figure 2016155798
（表２４）ｐＨ７．５での微細ＳｉＯ２からのＨ因子溶出物およびセリンプロテアーゼ活性
Figure 2016155798
実施例５
ＳｉＯ２へ共結合したセリンプロテアーゼおよびＨ因子の差次的溶出能を示すために、２段階溶出法を開発した。簡単に述べると、ＳｉＯ２処理後に形成される画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキを前記のように調製した。次いで、濾過ケーキを、ｐＨ６．０で０．８８２ｍＳ／ｃｍ〜１１．８８ｍＳ／ｃｍのイオン強度を含む溶液条件下で、第１溶出に供した。実施例４に示すように、低ｐＨ（ｐＨ６．０）および低イオン強度（６．５ｍＳ／ｃｍ未満）での結合ＳｉＯ２処理はセリンプロテアーゼ（例えば、ＦＸＩａ）溶出に至りつつ、Ｈ因子の実質的な画分は結合し続ける。高ｐＨ（ｐＨ７．５）および高イオン強度での後続処理は、ＳｉＯ２からのＨ因子溶出に至る（表２５）。さらに、実施例４に提供する結果と一致して、高ｐＨ（７．５）での初回ＳｉＯ２処理はＨ因子溶出に至る（表２６）。図示のように、低伝導度およびｐＨ６．０での初回溶出を使用して濾過ケーキから部分的にアミド分解活性を低下することができ、次いで１００ｍＭリン酸濃度、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．６でＨ因子を溶出することができる。この手順により、濾液中、さらなるプロセス用に低下したアミド分解活性で収率０．３１ｇ／Ｌ血漿のＨ因子（ＣＳ２１６６）が得られた。
（表２５）ｐＨ６．０／７．６でのＳｉＯ２からのセリンプロテアーゼおよびＨ因子の２段階差次的溶出
Figure 2016155798
（表２６）ｐＨ７．５／７．６でのＳｉＯ２からのセリンプロテアーゼおよびＨ因子の２段階差次的溶出
Figure 2016155798
実施例６
血漿由来タンパク質組成物からセリンプロテアーゼおよびセリンプロテアーゼチモーゲンを効率的に除去するために必要な微細ＳｉＯ２の量を決定するため、画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物（すなわち、ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキ）を溶解させ、濾過し、ＳｉＯ２処理し、濾過助剤を混合し、第２濾過に供した。簡単に述べると、画分ＩＩ＋ＩＩＩ濾過ケーキをまず１５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５；３０ｍＳ／ｃｍ）に溶解した。次いで、この懸濁液をＣｕｎｏ ５０ＳＡフィルターを介して濾過し、濾液を収集した。アエロジル３８０を１．０ｇ／ｇタンパク質か２．５ｇ／ｇタンパク質のいずれかの最終濃度で濾液と混合し、次いで少なくとも５０分間インキュベートした。ＣＥＬＰＵＲＥ濾過助剤を添加して、Ｃｕｎｏ ５０ＳＡフィルターを使用して濾過を実施した。次いで、表２７に報告するように、生成濾液のアミド分解活性を特性化した。注目すべきことに、結果は、最終濃度２．５ｇ／ｇタンパク質でのアエロジル添加は、組成物中のカリクレイン、ＦＸＩａ、およびＦＸＩＩａのアミド分解活性を、最終濃度１．０ｇ／ｇタンパク質のアエロジルで処理した試料と比較して９０％超低下したことを示す。
（表２７）微細二酸化シリコンを用いた処理後の再懸濁画分ＩＩ＋ＩＩＩ沈降物に存在するアミド分解活性
Figure 2016155798
実施例７
血漿由来タンパク質組成物の工業規模の製造中に第ＸＩ因子チモーゲンを除去するためのＳｉＯ２処理の有効性を評価するため、６つの工業規模の製造バッチのＦＸＩチモーゲン含量を特性化した。表２８および表２９は、同製造現場で実施した３つの精製から各上流プロセス工程の平均ＦＸＩチモーゲン含量を示す。表２８および表２９のデータは、製造規模精製のＳｉＯ２処理は組成物のＦＸＩチモーゲン含量を少なくとも９０％低減できることを示す。とりわけ、製造現場１はアエロジルを最終濃度５０ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩ沈降物を混合しつつ現場２はアエロジルを最終濃度４０ｇ／ｋｇＩＩ＋ＩＩＩ沈降物で使用した。驚くべきことに、このアエロジル使用量の僅差は、アエロジル処理後の濾液の第ＸＩ因子チモーゲン含量の大差に至った（現場２の８．１％コーン出発プール対現場１の２．８％コーン出発プール）。
（表２８）現場１にて進めた３つの大規模製造バッチの各画分の第ＸＩ因子チモーゲン含量平均値
Figure 2016155798
（表２９）現場２にて進めた３つの大規模製造バッチの各画分の第ＸＩ因子チモーゲン含量平均値
Figure 2016155798
本明細書に記載の実施例および実施形態は例証目的のみであり、それらに照らした様々な修正または変更が当業者に示唆され、本願の真意および範囲ならびに添付の特許請求の範囲内に含まれることが理解される。本明細書に引用したすべての刊行物、特許、および特許出願は、参照することによりそれらの全体がすべての目的のために本明細書に組み込まれる。

Claims (42)

  1. （ａ）コーンプールのアルコール画分を含む第１標的タンパク質富化工程において、血漿由来標的タンパク質を富化し、その結果、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物を形成する工程
    （ｂ）セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件下で、該第１富化血漿由来標的タンパク質組成物またはそれをさらに富化した組成物を、微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程であって、該条件が、０．１ｍＳ／ｃｍ〜３．０ｍＳ／ｃｍの伝導度および４．０〜７．０のｐＨを含む、工程；ならびに
    （ｃ）工程（ｂ）の該富化血漿由来標的タンパク質組成物からＳｉＯ２を分離して、結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去する工程
    を含む、血漿由来標的タンパク質組成物中のセリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの量の低減のための方法であって、
    該セリンプロテアーゼもしくは該セリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種が、第ＸＩａ因子（ＦＸＩａ）、第ＸＩＩａ因子（ＦＸＩＩａ）、第ＸＩ因子（ＦＸＩ）、もしくは第ＸＩＩ因子（ＦＸＩＩ）であり、さらに、該血漿由来標的タンパク質が、アルブミン、α−１−抗トリプシン（Ａ１ＰＩ）、Ｈ因子（ＦＨ）、Ｄ因子、補体タンパク質Ｃ３、Ｃ４結合タンパク質、およびインター−α−トリプシンインヒビター（ＩαＩ）から選択される、前記方法。
  2. 前記富化組成物を微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）と接触させる工程の前に、第２標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記第２標的タンパク質富化工程が、タンパク質沈降工程である、請求項２に記載の方法。
  4. 前記タンパク質沈降工程が、アルコール分別工程である、請求項３に記載の方法。
  5. 前記第２標的タンパク質富化工程が、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である、請求項２に記載の方法。
  6. 前記第２標的タンパク質富化工程が、クロマトグラフィー富化工程である、請求項２に記載の方法。
  7. 微細二酸化シリコン（ＳｉＯ２）を前記富化血漿由来標的タンパク質組成物から分離して、結合したセリンプロテアーゼまたはセリンプロテアーゼチモーゲンを除去した後に、第３標的タンパク質富化工程を実施する工程をさらに含む、請求項２〜請求項６のいずれか一項に記載の方法。
  8. 前記第３標的タンパク質富化工程が、タンパク質沈降工程である、請求項７に記載の方法。
  9. 前記タンパク質沈降工程が、アルコール分別工程である、請求項８に記載の方法。
  10. 前記第３標的タンパク質富化工程が、限外濾過／ダイアフィルトレーション工程である、請求項８に記載の方法。
  11. 前記第３標的タンパク質富化工程が、クロマトグラフィー富化工程である、請求項８に記載の方法。
  12. 前記クロマトグラフィー富化工程が、
    （ｉ）血漿由来標的タンパク質への結合に適した条件下で、血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および
    （ｉｉ）血漿由来標的タンパク質をクロマトグラフィー樹脂から溶出する副工程
    を含む、請求項６または請求項１１に記載の方法。
  13. 副工程（ｉ）において少なくとも１種の不純物がクロマトグラフィー樹脂に結合しない、請求項１２に記載の方法。
  14. 副工程（ｉ）において少なくとも１種の不純物が、クロマトグラフィー樹脂に結合するが、副工程（ｉｉ）においてクロマトグラフィー樹脂から溶出されない、請求項１２に記載の方法。
  15. 前記クロマトグラフィー富化工程が、
    （ｉ）少なくとも１種の不純物への結合に適した条件下で、第１富化血漿由来標的タンパク質組成物をクロマトグラフィー樹脂と接触させる副工程；および
    （ｉｉ）血漿由来タンパク質組成物から該樹脂を分離する副工程
    を含み、
    該血漿由来標的タンパク質が副工程（ｉ）においてクロマトグラフィー樹脂に結合しない、請求項６または請求項１１に記載の方法。
  16. 前記クロマトグラフィー樹脂が、陰イオン交換樹脂、陽イオン交換樹脂、疎水性相互作用樹脂、混合様式樹脂、ヒドロキシアパタイト樹脂、リガンド親和性樹脂、免疫親和性樹脂、およびサイズ排除樹脂からなる群から選択される、請求項１２〜請求項１５のいずれか一項に記載の方法。
  17. 前記クロマトグラフィー樹脂が、陰イオン交換樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記クロマトグラフィー樹脂が、陽イオン交換樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  19. 前記クロマトグラフィー樹脂が、疎水性相互作用樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  20. 前記クロマトグラフィー樹脂が、混合様式樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  21. 前記クロマトグラフィー樹脂が、ヒドロキシアパタイト樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  22. 前記クロマトグラフィー樹脂が、リガンド親和性樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  23. 前記クロマトグラフィー樹脂が、免疫親和性樹脂である、請求項１６に記載の方法。
  24. 前記クロマトグラフィー富化工程が、サイズ排除クロマトグラフィーを使用してサイズおよび／または形により標的タンパク質から少なくとも１種の不純物を分離する工程を含む、請求項６または請求項１１に記載の方法。
  25. 前記血漿由来タンパク質が、アルブミンである、請求項１〜請求項２４のいずれか一項に記載の方法。
  26. 前記血漿由来タンパク質が、α−１−抗トリプシンである、請求項１〜請求項２４のいずれか一項に記載の方法。
  27. 前記血漿由来タンパク質が、Ｈ因子である、請求項１〜請求項２４のいずれか一項に記載の方法。
  28. 前記血漿由来タンパク質が、インター−α−トリプシンインヒビターである、請求項１〜請求項２４のいずれか一項に記載の方法。
  29. 前記血漿由来標的タンパク質組成物が、血漿プールのＣｏｈｎ分画法、Ｏｎｃｌｅｙ分画法、またはＫｉｓｔｌｅｒおよびＮｉｔｓｃｈｍａｎｎ分画法の中間産物である、請求項１〜請求項２８のいずれか一項に記載の方法。
  30. 前記組成物を、少なくとも１ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の方法。
  31. 前記組成物を、少なくとも２ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる、請求項３０に記載の方法。
  32. 前記組成物を、少なくとも２．５ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度でＳｉＯ２と接触させる、請求項３０に記載の方法。
  33. 前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩ因子である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  34. 前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩＩ因子である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  35. 前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩａ因子である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記セリンプロテアーゼまたは前記セリンプロテアーゼチモーゲンが第ＸＩＩａ因子である、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の方法。
  37. 前記組成物を、１ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質〜５ｇ ＳｉＯ２／ｇタンパク質の最終濃度のＳｉＯ２と接触させる、請求項１〜３６のいずれか一項に記載の方法。
  38. セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件が、０．１ｍＳ／ｃｍ〜２．０ｍＳ／ｃｍの伝導度および４．０〜７．０のｐＨを含む、請求項１〜３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. セリンプロテアーゼもしくはセリンプロテアーゼチモーゲンの少なくとも１種への結合に適した条件が、０．５ｍＳ／ｃｍ〜２．０ｍＳ／ｃｍの伝導度および４．５〜６．５のｐＨを含む、請求項１〜３８のいずれか一項に記載の方法。
  40. コーンプールが脱寒冷血漿である、請求項１〜３９のいずれか一項に記載の方法。
  41. アルコールがエタノールである、請求項１〜４０のいずれか一項に記載の方法。
  42. 微細二酸化シリコンがヒュームドシリカである、請求項１〜４１のいずれか一項に記載の方法。
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