KR101716534B1 - 미분된 이산화규소로의 처리에 의한 세린 프로테아제의 제거 - Google Patents

미분된 이산화규소로의 처리에 의한 세린 프로테아제의 제거 Download PDF

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KR101716534B1
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Abstract

본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물의 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 새로운 방법을 제공한다. 또한 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 또 다른 양태 중에서, 본 발명은 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 혈장 유래 단백질의 수성 및 동결건조된 조성물을 제공한다. 또 다른 양태는 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물의 투여를 포함하는, 질환을 치료, 관리 및/또는 예방하는 방법을 포함한다.

Description

미분된 이산화규소로의 처리에 의한 세린 프로테아제의 제거{REMOVAL OF SERINE PROTEASES BY TREATMENT WITH FINELY DIVIDED SILICON DIOXIDE}
본 출원은 2010년 5월 26일자로 출원되고 오스트레일리아 특허 제2010202125호로 공고된 오스트레일리아 특허 출원 제2010202125호, 2010년 5월 27일자로 출원된 미국 특허 출원 일련번호 제12/789,365호, 및 2010년 7월 23일자로 출원된 미국 특허 출원 일련번호 제12/842,944호에 대한 우선권을 주장하며, 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
혈장 유래 혈액 제제는 다양한 혈액 장애뿐만 아니라 기타 다른 기원의 질환을 치료하는데 사용된다. 예를 들어, 인간 혈장으로부터의 면역 글로불린(IgG) 생성물은 면역 결핍증을 치료하는데 1952년에 처음 사용되었다. 그 이후로, IgG 제조물은 적어도 3가지 의학적 병태의 주요 카테고리에서 광범위한 용도가 발견되었다: (1) 낮은 항체 수준을 특징으로 하는 면역 결핍증, 예를 들어 X-연관 무감마글로불린혈증, 저감마글로부민혈증(1차 면역 결핍증), 및 후천적 면역 저하 병태(acquired compromised immunity condition)(2차 면역 결핍증); (2) 염증 및 자가면역 질환; 및 (3) 급성 감염증.
마찬가지로, 인자 H는 여러 가지 인간 질환 상태, 예를 들어 노인황반변성(AMD), 용혈성요독증후군(aHUS) 및 막증식성사구체신염(MPGN)에 대한 잠재적인 치료제로서 관련되었음을 나타내어 왔다. 구체적으로, 인자 H의 보체 제어 단백질(CCP) 모듈 7에서 단일 염기 다형성(SNP)과 노인황반변성(AMD) 사이의 인과관계가 특징지어졌다.
연구는 여러 가지 패혈증이 있는 환자에서 인터-알파-억제제 단백질(IaIp)의 혈장 수준의 감소와 사망률 사이의 상관관계를 나타내었다(문헌[Lim et al., J Infect Dis. (2003) Sep 15;188(6):919-26] 및 [Opal et al., Crit Care Med. (2007) Feb;35(2):387-92]). 게다가, 여러 가지 연구는, IaIp의 투여가 패혈증 및 패혈성 쇼크와 연관된 사망률을 감소시킴을 나타내었다(문헌[Jourdain et al., Am J Respir Crit Care Med. (1997) Dec;156(6):1825-33]; [Yang et al., Crit Care Med. (2002) Mar;30(3):617-22]; [Lim et al., J Infect Dis. (2003) Sep 15;188(6):919-26]; 및 [Wu et al., Crit Care Med. (2004) Aug;32(8):1747-52]; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨).
혈장 유래 생물학적 치료제를 제조 및 제형화할 때 다양한 안전 예방책이 고려되어야 한다. 이는 수혈받은 혈장의 사용에 의해 발생하는 혈행성 병원체(예컨대, 바이러스 및 박테리아 병원체), 항보체 활성, 및 다른 원치않는 오염 물질을 제거 및/또는 불활성화하는 방법을 포함한다. 연구는, 높은 수준의 아마이드 분해(amidolytic) 활성의 투여가 원치않는 혈전 색전증 사건을 초래할 수 있음을 시사하였다(문헌[Wolberg AS et al ., Coagulation factor XI is a contaminant in intravenous immunoglobulin preparations. Am J Hematol 2000;65:30-34]; 및 [Alving BM et al., Contact-activated factors: contaminants of immunoglobulins preparations with coagulant and vasoactive properties. J Lab Clin Med 1980; 96:334-346]; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). 이러한 관심의 강조로, 혈전 색전증 사건의 보고가 증가된 후 최근 미국에서 octagam(등록상표)(Octapharma)의 자발적인 철수, 및 유럽연합 집행위원회에 의한 octagam(등록상표) 및 octagam 10%에 대한 마케팅 허가의 유예가 있었다. 혈전 색전증 사건의 증가는 생물학적으로 아마이드 분해 활성의 높은 수준에 의해 야기되고, 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐 불순물, 예를 들어 인자 XI, 인자 XIa, 인자 XII 및 인자 XIIa(FDA 공고: 자발적 시장 철수 - 2010년 9월 23일 Octagam [면역 글로불린 정맥주사용(인간)] 5% 액체 제조물; Octagam 50㎎/㎖, 관류용 용액 - Octapharma 프랑스 - 모든 항목을 검역함(Mise en quarantaine de tous les lots), AFSSAPS에 의해 2010년 9월 9일 온라인으로 공표됨; Octagam(인간 정상 면역글로불린 5% 및 10%)에 대한 마케팅 허가의 유예에 대한 질의응답, 유럽의약청에 의해 2010년 9월 23일 온라인으로 공표됨)에 의해 야기될 가능성이 있다.
일반적으로 응고 인자로서 알려진 전용 세린 프로테아제는 응고 연쇄반응의접촉 활성화 및 조직 인자 경로 모두의 필수적인 성분이다. 응고 경로의 자극시, 불활성 상태의 효소 전구체인 세린 프로테아제 지모겐은 다음 프로테아제 지모겐의 활성화를 촉진시키는 활성화된 프로테아제가 되고, 연쇄반응을 활성화시킨다. 이러한 응고 연쇄반응은 트롬빈(인자 IIa) 및 인자 XIIIa의 활성화에서 정점에 달하며, 이는 피브리노겐(인자 I)을 피브린(인자 Ia)으로 전환시키는 작용을 하고 피브린을 가교결합시켜 각각 피브린괴(fibrin clot)를 형성한다.
내인성 응고 경로로도 알려진 접촉 활성화 경로는 프리칼리크레인 및 인자 XII로부터 각각 칼리크레인 및 인자 XIIa(FXIIa)의 활성화로 시작한다. 활성화된 세린 프로테아제 FXIIa는 인자 XI(FXI)를 절단하고, 이는 인자 Xa(FXa)의 이후 활성화에 참여하는 활성화 상태의 세린 프로테아제인 인자 XIa(FXIa)로 지모겐을 전환시킨다.
혈장 유래 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 존재에 대하여 증가하는 관심으로 인하여, 이러한 오염 물질, 특히 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시키는 방법에 대한 필요성이 당업계에 남아 있다. 본 발명은 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 이와 같은 방법 및 혈장 유래 단백질 조성물을 제공함으로써 이들 및 다른 필요성을 충족시킨다.
하나의 양태에서, 본 발명은 미분된(finely divided) 이산화규소(SiO2)로의 처리에 의하여 혈장 유래 단백질 조성물로부터 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐, 구체적으로 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa를 제거할 수 있다는 놀라운 결과를 기초로 한다. 이러한 방식으로, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물의 세린 프로테아제 활성, 세린 프로테아제 함량, 및 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법을 제공한다. 또한 세린 프로테아제 활성, 세린 프로테아제 함량, 및 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 치료용 혈장 유래 단백질 조성물뿐만 아니라 상기 조성물의 투여에 의하여 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다.
제1 양태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제를 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다.
상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 또 다른 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 또 다른 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 크로마토그래피 풍부화 단계를 포함하는 방법의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 기술된 크로마토그래피 풍부화 단계를 포함하는 방법의 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 크기 및/또는 형상에 의해 표적 단백질로부터 적어도 하나의 불순물을 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택된다. 구체적인 실시형태에서, 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질 조성물은 제조용 중간체이다.
제2 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리되고 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제3 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제4 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 초과의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제5 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.0 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 6.5 초과의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0 초과의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 약 7.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 용액 조건은 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 10.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 9.0 이하의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 상기 기술된 방법의 또 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H가 결합하지 않는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
제6 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) IαI가 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제를 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
제7 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제가 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
제8 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
제9 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 활성이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제공하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하지만 인터-알파-트립신 억제제(IαI)에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 양태의 임의의 실시형태에서, 적어도 1g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 적어도 2g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 적어도 2.5g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 양태의 임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XI이다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 세린프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa이다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XII이다. 상기 기술된 양태의 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIIa이다.
제10 양태에서, 본 발명은 상기 기술된 양태 중 어느 하나에 따른 세린 프로테아제 활성을 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 의해 제조된 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 조성물은 개체에의 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 또는 피하 투여용으로 제형화된다. 하나의 실시형태에서, 조성물은 수성이다. 다른 실시형태에서, 조성물은 동결건조된다.
제11 양태에서, 본 발명은 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 상기 개괄된 양태에 따른 혈장 유래 단백질 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
제12 양태에서, 본 발명은 (a) 인자 H를 함유하는 현탁된 혈장 침전물 분획을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) SiO2를 낮은 pH가 및 낮은 전도도를 포함하는 세척 완충액으로 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 적어도 10mS/㎝의 전도도를 포함하는 용리 완충액으로 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함하는 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 혈장 침전물 분획은 콘(Cohn) 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만(Kistler/Nitschmann) 침전물 A, 또는 키슬러/니츠만 침전물 B이다. 임의의 실시형태에서, 방법은 (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시키고 제거하는 단계, (e) 풍부화된 조성물로부터 인자 H를 침전시키고 회수하는 단계, (f) 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 인자 H를 추가로 풍부화시키는 단계, (g) 헤파린 친화 크로마토그래피에 의해 인자 H를 추가로 풍부화시키는 단계, (h) 전용 바이러스 불활성화 단계, 및 (i) 한외여과/정용여과에 의해 풍부화된 인자 H 조성물을 농축시키는 단계로부터 선택된 하나 이상의 추가적인 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제를 제거하는 단계를 포함하며, 여기에서 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 다른 구체적인 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 상기 풍부화된 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이다. 구체적인 실시형태에서, 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 한외여과/정용여과 단계이다. 하나의 실시형태에서, 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 크로마토그래피 풍부화 단계이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 적어도 하나의 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 적어도 하나의 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 양이온 교환 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 소수성 상호작용 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 혼합형 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 하이드록시아파타이트 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 리간드 친화 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 면역친화 수지이다. 하나의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 크기 배제 크로마토그래피를 사용하여 크기 및/또는 형상에 의해 표적 단백질로부터 적어도 하나의 불순물을 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 면역글로불린(Ig)이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 알부민이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 알파-1-항트립신이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 뷰티릴콜린에스테라제이다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 보체계의 단백질이다. 하나의 실시형태에서, 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 인터-알파-트립신 억제제이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질 조성물은 제조용 중간체이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합한 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합한 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합한 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 적어도 6mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 적어도 11mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2와 결합된 상태로 있는 조건 하에서, 상기 용액 조건은 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하는 용액 조건은 7.0 미만의 pH 및 11mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2로부터 용리시키는 용액 조건은 4.5 내지 6.5의 pH 및 6mS/㎝ 미만의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하기에 적당한 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 0.5mS/㎝ 내지 5.0mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합한 상태로 있는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 적어도 11mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합한 상태로 있는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 적어도 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 5mS/㎝ 내지 6mS/㎝이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 14mS/㎝ 이하의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 9mS/㎝ 내지 14mS/㎝이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 SiO2에 결합하지 않는 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 적어도 11mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은 7.0 내지 8.0의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 4mS/㎝ 내지 7mS/㎝이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 5mS/㎝ 내지 6mS/㎝이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) SiO2를 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝의 전도도를 포함하는 용액으로 세척하는 단계; 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액으로 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 콘 분획 II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 키슬러/니츠만 침전물 A, 또는 이의 동등한 분획이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 함유하는 출발 조성물은 현탁된 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 회수된 인자 H 용액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시키지만, 인자 H는 침전되지 않는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 침전 단계는 PEG 침전이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도에서 PEG 4000을 이용한 침전을 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 회수된 인자 H 용액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 침전 단계는 PEG 침전이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도에서 PEG 4000을 이용한 침전을 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 12±0.5%이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 크로마토그래피에 의해 인자 H를 풍부화시키는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 음이온 교환 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 헤파린 친화 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 음이온 교환 크로마토그래피 후 헤파린 친화 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 적어도 하나의 전용 바이러스 제거 또는 불활성화 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 나노여과 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 한외여과/정용여과를 포함하는 인자 H 조성물을 농축시키는 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) IαI의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인터-알파-트립신 억제제(IαI)에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 및 적어도 하나의 세린 프로테아제를 함유하는 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 면역글로불린 G(IgG)를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10% 알코올을 이용하여 제1 침전 단계에서 냉동 불량(cryo-poor) 혈장 분획을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계; (b) 약 6.7 내지 약 7.3에서 pH에서 약 20% 내지 약 25% 알코올을 이용하여 제2 침전 단계에서 제1 상청액으로부터 IgG를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계; (c) 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; (d) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건 하에서 상기 현탁액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (e) 상기 현탁액으로부터 SiO2를 분리하여 청징된 현탁액을 형성하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 (f) 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 22% 내지 약 28% 알코올을 이용하여 제3 침전 단계에서 단계 (e)에서 형성된 청징된 현탁액으로부터 IgG를 침전시켜 제3 침전물을 형성하는 단계; (g) 제3 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; 및 (h) 단계 (e)에서 형성된 현탁액으로부터 가용성 분획을 분리하여 풍부화된 IgG 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 양이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 적어도 하나의 전용 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 용매/세제(S/D) 바이러스 불활성화 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 나노여과 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 방법은 낮은 pH에서 항온처리 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (b)는 약 -7℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 단계 (a)에서 형성된 제1 상청액의 에탄올 농도를 약 25%(v/v)로 조정하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 온도는 약 -9℃이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (c)는 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로 단계 (b)의 침전물을 재현탁하며, 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 300㎖ 내지 700㎖를 이용하여 조정하는 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (d)는 단계 (b)에서 형성된 침전물 g 당 약 0.02g 내지 단계 (b)에서 형성된 침전물 g 당 약 0.06g의 최종 농도로 SiO2의 추가를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 용액 조건은 4.5 내지 6.0의 pH 및 0.1mS/㎝ 내지 3mS/㎝의 전도도를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, pH는 4.9 내지 5.3이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 전도도는 0.5mS/㎝ 내지 2mS/㎝이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (e)는 (i) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로서 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 50㎖ 내지 200㎖로 조정하여 세척 용액을 형성하는 완충액 적어도 3 필터 프레스 불용 체적(dead volume)으로 필터 프레스를 세척하는 하위 단계; 및 (ii) 단계 (f)의 여과액을 단계 (g)의 세척 용액과 합하여 용액을 형성하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, (iii) 세제로 상기 용액을 처리하는 하위 단계를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (h)는 풍부화된 IgG 조성물의 용매 및 세제(S/D) 처리를 추가로 포함한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (h)에서 수득한 풍부화된 IgG 조성물은 단계 (a)에서 사용되는 냉동 불량 혈장 분획에서 발견되는 IgG 함량을 적어도 85%로 함유한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 단계 (h)에서 수득한 풍부화된 IgG 조성물은 단계 (a)에서 사용되는 냉동 불량 혈장 분획에서 발견되는 IgG 함량을 적어도 90%로 함유한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 95%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 98%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 99%까지 감소된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXIa이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 적어도 1g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 적어도 2g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 적어도 2.5g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 조성물을 SiO2와 접촉시킨다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XI이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XII이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIIa이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 상기 청구항 중 어느 하나의 항에 따른 세린 프로테아제 활성을 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 개체에의 투여용으로 제형화된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 정맥내, 근육내, 또는 피하 투여용으로 제형화된다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 수성이다.
상기 기술된 방법의 구체적인 실시형태에서, 조성물은 동결건조된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈장 단백질의 비정상적인 활성과 연관된 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 제124항 내지 제128항 중 어느 한 항에 따른 혈장 유래 단백질 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
도 1. 예시적인 혈장 분별 도식의 개요.
도 2. ELISA에 의해 측정된, 산업적 규모의 혈장 단백질 분별의 선택된 분획 중 인자 H의 함량.
도 3. 전도도를 변화시키면서 pH 7.5의 용액 조건 하에서 SiO2로부터 용리된 인자 H 및 아마이드 분해 활성의 예시(기질 CS2166을 사용하여 측정함).
I. 도입
치료용 혈장 유래 혈액 단백질 조성물, 예를 들어 면역 글로불린 조성물, 혈액 응고 인자, 응고 인자 억제제, 및 보체계의 단백질의 광범위한 용도를 고려할 때, 이러한 조성물의 안전성을 확보하는 것은 매우 중요하다. 혈장 유래 단백질 조성물이 투여되는 환자에서 혈전 색전증 사건의 발생과 병행하여 이러한 조성물의 아마이드 분해 함량에 대한 최근 관심은 이러한 생물학제의 제조 동안 세린 프로테아제(예컨대, FXIa 및 FXIIa) 및 세린 프로테아제 지모겐(예컨대, FXI 및 FXII)을 감소시키는 방법에 대한 당업계에서의 필요성을 강조하였다. 유리하게도, 본 발명은 적어도 부분적으로, 미분된 이산화규소(SiO2)가 혈장 유래 단백질 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 사용될 수 있다는 놀라운 결과를 기초로 한다. 이와 같이, 혈장 유래 단백질 조성물의 제조 동안 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 농도를 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
임의의 양태에서, 본 발명은 미분된 이산화규소(SiO2)가 혈장 유래 단백질 용액으로부터의 세린 프로테아제(예컨대, FXIa 및 FXIIa) 및 세린 프로테아제 지모겐(예컨대, FXI 및 FXII)의 상당한 양을 제거하는데 사용될 수 있다는 놀라운 결과를 기초로 하는 제조 방법을 제공한다. 이와 같이, 본원에 제공된 방법은 기존의 제조 절차, 예를 들어 차가운 곳에서 에탄올에 의한, 수집한 혈장 샘플, 바람직하게는 인간 혈장 샘플의 분별로 용이하게 통합될 수 있다(문헌[Schultze H E, Heremans J F; Molecular Biology of Human Proteins. Volume I: Nature and Metabolism of Extracellular Proteins 1966, Elsevier Publishing Company; p. 236-317]에서 검토됨). 그러나, 본원에 제공된 방법은 에탄올 분별을 포함하여 제조 방법에의 사용에서 결코 제한되지 않는다. 혈장 유래 단백질의 정제를 위한 기타 다른 방법론은 또한 본원에 제공된 방법, 예를 들어 중합체(예컨대, PEG) 분별 및 크로마토그래피 방법론(예컨대, 음이온 및/또는 양이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래피, 면역 친화 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 혼합형 크로마토그래피 등)과 양립 가능하다.
게다가, 숙주 세포주에서 DNA 벡터의 재조합 발현을 통하여 생성되는 다른 생물학제와 달리, 혈장 유래 단백질은 인간 혈액 및 혈장 분리 교환(plasma donation)으로부터 분별될 수 있다. 따라서, 이러한 제품의 공급은 단순히 생산 부피를 증가시키는 것에 의해 증가될 수 없다. 오히려 상업적으로 이용가능한 혈액 제품의 수준은 혈액 및 혈장 분리의 이용가능한 공급에 의해 제한된다. 이러한 동역학은, 보체 인자 H(CFH) 및 인터-알파-트립신 억제제 단백질(IαIp)을 포함하여, 확립된 상업적 시장이 더 적은 새로운 혈장 유래 혈액 인자의 제조에 있어서 원래 인간 혈장의 이용가능성에서의 부족을 야기한다.
새로운 혈장 유래 제품의 제조에 이용가능한 혈장의 부족으로 인하여, 이러한 제조는 혈장 유래 제품, 예를 들어 면역글로불린 및 알부민에 대한 확립된 제조 공정의 기존 구성에 통합되어야 한다. 병태 중에서도 AMD, aHUS, 및 MPGN에 대한 잠재적인 치료제로서 관련되는 인자 H는 의사의 관심을 얻고 있는 이러한 혈장 유래 혈액 제품이다. 그러나, 예를 들어 IgG 감마 글로불린 제조에 전념한 재료로 인하여, 방법은 기존의 제조 방식으로 도입될 수 있는 인자 H의 제조에 필요하다. 단지 이를 달성하기 위하여 여러 가지 방법이 제안되었지만, 그러나 다수의 이러한 제안된 해결책은 확립된 제품에 대한 기존의 제조 방식의 변형을 필요로 한다. 이러한 변화는 확립된 제품에 대한 새로운 규제 승인을 필요로 할 것이며 심지어 확립된 제품의 특징의 변경을 야기할 수도 있다.
예를 들어, WO 제2007/066017호는 동결침전제제의 상청액으로부터 인자 H 제조물의 생성에 대한 방법을 기술한다. 개시된 방법은 동결침전제제의 상청액을 제조하는 단계, 상청액에 대하여 음이온 교환 크로마토그래피(AEC)를 실행하는 단계, HAC로부터의 관련 용리액에 대하여 강한 양이온 교환 크로마토그래피(CEC)를 실행하는 단계, CEC로부터의 관련 용리액에 대하여 강한 음이온 교환 크로마토그래피(sAEC)를 실행하는 단계 및 sAEC로부터 인자 H를 용리시키는 단계로 이루어져 있다. 불리하게도, 동결침전제제 상청액은 다수의 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제품, 예를 들어 IgG 감마 글로불린(IVIG 및 피하) 및 알부민의 제조 공정에서 일반적인 중간체 분획물이다. 이러한 분획물에 크로마토그래피 단계를 실행하는 것은 동결침전제제 상청액을 변경시킬 것이며, 확립된 하류 혈액 제품의 제조 공정은 알려지지 않은 방식으로 적합화되는 것을 필요로 할 것이다. 이러한 제조 공정의 완전한 재허가 및 가능한 재설계를 필요로 하는 것에 더하여, 핵심 규제 기관으로부터의 제조 절차의 규제 재승인이 필요하다.
마찬가지로, WO 제2008/113589호는 인간 혈장으로부터의 인자 H 제조물의 생성을 위한 방법을 기술한다. 구체적으로 이 간행물은 3가지 공지된 혈장 처리 분획물, 즉 콘-온클레이(Cohn-Oncley) 분획 I 상청액, 콘-온클레이 분획 III 침전물, 및 키슬러/니츠만 침전물 B 분획물로부터의 인자 H의 정제를 기술한다. 첫번째 방법에 대하여, WO 제2008/113589호는 인자 H가 헤파린 친화 크로마토그래피 단계의 추가에 의하여 콘-온클레이 분획 I 상청액으로부터 제거될 수 있음을 개시한다. 불리하게도, 콘-온클레이 분획 I 상청액은 다수의 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제품, 예를 들어 IgG 감마 글로불린(IVIG 및 피하) 및 알부민의 제조 공정에서 일반적인 중간체 분획물이다. 유사하게, 다수의 면역글로불린(예컨대, IgG, IVIG 등) 제조 공정은 콘-온클레이 분획 III 침전물 또는 키슬러/니츠만 침전물 B 단계, 예를 들어 Gammagard(등록상표) Liquid 및 Kiovig(Baxter International Inc.)에 의존하지 않는다. 상기 개괄한 바와 같이 확립된 혈액 제품의 제조 방법에, 추가적인 단계, 예를 들어 헤파린 친화 크로마토그래피, 분획 III 침전물, 또는 침전물 B 단계의 도입의 불리한 점은 제조 절차의 재허가, 핵심 규제 기관으로부터의 제조 절차의 규제 재승인을 필요로 한다는 것이며, 달리 확립된 제품의 수율 및/또는 순도에 대하여 예상치 못한 결과를 추가로 가질 수 있다.
이와 같이, 추가적인 유입 혈장의 사용을 필요로 하지 않는 인자 H를 제조하는 방법 또는 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제품, 예를 들어 정맥주사(IVIG) 또는 피하 투여용 알부민 및 IgG 감마 글로불린에 대한 기존 제조 공정의 재설계 및 규제 재승인에 대한 필요성이 남아 있다. 유리하게, 본 발명은 적어도 부분적으로, 인자 H, 세린 프로테아제, 및 세린프로테아제 지모겐이 동시에 미분된 이산화규소(SiO2)와 결합되어, 결합되지 않은 관심의 제1 단백질(예컨대, IgG)로부터 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐을 분리한 다음, SiO2로부터 인자 H와 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐을 차별적으로 용리함으로써 분리할 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한다. 유사하게, 본 발명은 적어도 부분적으로 IαIp, 세린 프로테아제, 및 세린 프로테아제 지모겐이 동시에 미분된 이산화규소(SiO2)와 결합된 다음, SiO2로부터 IαIp와 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐을 차별적으로 용리함으로써 분리할 수 있다는 놀라운 발견을 기초로 한다.
II . 정의
본원에서 사용되는 "인자 H"는 보체 인자 H 유전자(예를 들어, CFH; NM000186; GeneID:3075; UniProt ID P08603; 문헌[Ripoche et al., Biochem. J. 249:593-602(1988)])에 의해 암호화되는 보체의 대안적인 경로의 단백질 성분을 말한다. 인자 H는 18개 아미노산 신호 펩티드의 제거에 의해 가공되는 1,213 아미노산 전구체 폴리펩티드로서 번역되며, 이는 성숙한 인자 H 단백질(아미노산 19-1231)을 만들어낸다. 본 발명에서 사용되는 바와 같이, 인자 H는 혈장 샘플, 예를 들어 인간 혈장 샘플에서 발견될 수 있는 임의의 천연 변형체, 대안적인 서열, 아형(isoform) 또는 변이 단백질을 포함한다. 인간 집단에서 발견되는 인자 H 돌연변이의 예로는 이에 제한되는 것은 아니지만 Y402H; V62I; R78G; R127L; △224; Q400K; C431S; T493R; C536R; I551T; R567G; C630W; C673S; C673Y; E850K; S890I; H893R; C915S; E936D; Q950H; Y951H; T956M; C959Y; W978C; N997T; V1007I; V1007L; A1010T; T1017I; Y1021F; C1043R; N1050Y; I1059T; Q1076R; R1078S; D1119G; V1134G; Y1142D; Q1143E; W1157R; C1163W; W1183L; W1183R; T1184R; L1189R; S1191L; G1194D; V1197A; E1198A; F1199S; R1210C; R1215G; R1215Q; YPTCAKR1225:1231FQS; 및 P1226S를 포함한다. 다수의 이러한 돌연변이는 다양한 질환 및 장애, 예를 들어 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS), 노인황반변성(AMD), 막증식성사구체신염(MPGNII), CFH 결핍증, 및 기저판 결정체(basal laminar drusen)와 연관된 것으로 밝혀졌다. 인자 H는 또한 번역후 변형을 함유하는 단백질을 포함한다. 예를 들어, 인자 H는 잔기 529, 718, 802, 822, 882, 911, 1029, 및 1095에서 N-아세틸글루코사민(GlcNAc)에 의해 변형되는 것으로 여겨진다.
본원에서 사용되는 "인터-알파-억제제 단백질" 또는 "IaIp"는 알파-1-마이크로글로불린/비쿠닌(bikunin) 전구체 유전자(AMBP; UniGene ID:231948, 비쿠닌 폴리펩티드), 인터-알파 (글로불린) 억제제 H1 유전자(ITIH1; UniGene ID:224173, H1 폴리펩티드), 인터-알파 (글로불린) 억제제 H2 유전자(ITIH2; Unigene ID:139782, H2 폴리펩티드), 인터-알파 (글로불린) 억제제 H3 유전자(ITIH3; UniGene ID:140017, H3 폴리펩티드), 또는 인터-알파 (글로불린) 억제제 H4(혈장 칼리크레인-민감성 당단백질, H4 폴리펩티드) 유전자(ITIH4; UniGene ID:3321613) 중 하나 이상에 의해 암호화되는 폴리펩티드로 구성된 혈장 프로테아제 억제제의 집단을 말한다. 예시적인 IaIp 프로테아제 억제제로는 이에 제한되는 것은 아니지만 IaI(비쿠닌, H1, 및 H2 폴리펩티드); PaI(비쿠닌 및 H3 폴리펩티드), IaLI(비쿠닌 및 H2 폴리펩티드), IaIH4P(H4 폴리펩티드), 및 비쿠닌(문헌[Salier, J, et al., 상기 참조])을 포함한다.
본원에서 사용되는 "냉동 불량 혈장"은 혈장을 해동시킴으로써 형성된 동결침전물의 제거 후에 형성되는 동결침전물의 제거 후에 형성되는 상청액 또는 동결하는 근처의 온도에서, 예컨대 약 10℃ 미만의 온도, 바람직하게는 약 6℃ 이하의 온도에서 수집한 혈장을 말한다. 본 발명의 내용에서, 혈장은 회수된 혈장(즉, 생체외에서 전혈로부터 분리한 혈장) 또는 공급 혈장(즉, 혈장분리교환법을 통해 수집한 혈장)을 상호교환적으로 말할 수 있다. 동결침전은, 신선한 혈장이 또한 사용될 수 있지만, 일반적으로 예를 들어 이미 안전성 및 품질 고려 사항에 대하여 분석한, 이미 동결된 수집한 혈장을 해동함으로써 실행된다. 저온에서 동결한 혈장의 완전한 해동 후에, 액체 상청액으로부터 고체 동결침전물의 분리는 저온에서(예컨대, 6℃ 이하) 여과물의 원심분리에 의해 실행된다.
본원에서 사용되는 "콘 집단"은 혈장 샘플 또는 혈장 샘플의 집단의 분별에 사용되는 출발 물질을 말한다. 콘 집단은 사전 가공 단계를 거칠 수 있거나 거치지 않을 수 있는 전체 혈장, 냉동 불량 혈장 샘플, 및 냉동 불량 혈장 샘플의 집단을 포함한다. 임의의 실시형태에서, 콘 집단은, 하나 이상의 혈액 인자가 사전 가공 단계, 예를 들어 고상에의 흡착(예컨대, 수산화알루미늄, 미분된 이산화규소 등), 또는 크로마토그래피 단계(예컨대, 이온 교환 또는 헤파린 친화 크로마토그래피)에서 제거된 냉동 불량 혈장 샘플이다. 이에 제한되는 것은 아니지만 인자 8 억제제 우회 활성(FEIBA), 인자 IX-복합체, 인자 VII-농축물, 또는 항트롬빈 III-복합체를 포함하여 다양한 혈액 인자가 냉동 불량 혈장 샘플로부터 분리되어 콘 집단을 형성할 수 있다.
본원에서 사용되는 "분획 II+III 여과 케이크"는 콘-온클레이 또는 동등한 분획 II+III 페이스트 현탁물의 여과 또는 원심분리 후에 회수된 고체 상을 말한다. 바람직한 실시형태에서, 분획 II+III 현탁액을 흡착 물질, 예를 들어 미분된 이산화규소로 처리하여 불순물, 예를 들어 지질, 피브리노겐, 아마이드 분해 활성, 프리칼리크레인 및 리포단백질을 제거할 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 원심분리 또는 여과 전에 분획 II+III 현탁액에 여과 보조제를 첨가할 수 있다. 가장 바람직한 실시형태에서, 원심분리 또는 여과 전에 분획 II+III 현탁액을 흡착 물질 및 여과 보조제 모두로 처리할 것이다. 청징된 분획 II+III 현탁액 상청액의 분리시, 회수된 고체 상 물질은 분획 II+III 여과 케이크로 언급된다.
본원에서 사용되는 "미분된 이산화규소" 또는 "미분된 실리카"는, 표면 상에 인자 H의 흡착을 가능하게 하는 방식으로 제조된, 화학식이 SiO2인 실리콘의 산화물을 말한다. 본 발명의 방법에의 사용에 적당한 미분된 이산화규소의 예시적인 형태는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 흄드(fumed) 실리카, 발열성 실리카, Aerosil(등록상표), Cab-O-Sil(상표), 콜로이드 실리카, 규조토 등을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 상업적 친수성 흄드 실리카 제품이 본원에서 제공되는 방법에 사용된다. 이들 제품의 비제한적인 예는 상표명 Aerosil(등록상표)(예컨대, Aerosil 90, Aerosil 130, Aerosil 150, Aerosil 200, Aerosil 300, Aerosil 380, Aerosil OX 50, Aerosil EG 50, Aerosil TT 600, Aerosil 200 SP, Aerosil 300 SP, and Aerosil 300/30) 하에서 Evonik Industries에 의해 시판되는 것들을 포함한다.
본원에서 사용되는 "인자 H 기능 장애와 연관된 질환 또는 장애"는 개체에서 인자 H 활성의 수준의 감소에 의해 야기되거나, 이를 특징으로 하거나, 또는 이를 초래하는 개체에서의 임의의 질환, 장애, 또는 병태를 말한다. 본 발명의 목적을 위하여, 인자 H 활성은 단백질 또는 리간드, 예를 들어 C3b, C3bBb, C3b2Bb, csbC3b, 보체 인자 B(CFB), C 반응성 단백질, 내피 세포, 글라이코사미노글라이칸(GAGs)에 결합하는 인자 H의 능력을 말하거나, 대안적으로 C3bBb 및 C3b2Bb의 비가역적 해리를 가속화하는 인자 H의 인자 I 보조인자 활성 또는 능력을 말할 수 있다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 기능 장애와 연관된 질환 또는 장애는 C3 결핍증 및 박테리아 감염에 대한 민감성을 초래한다. 일부 경우에서, 인자 H 기능 장애와 연관된 질환 또는 장애는 인자 H를 암호화하는 CFH 유전자에서의 돌연변이 및 다형성에 의해 야기되거나 이와 결합된 병태를 포함한다(검토를 위하여, 문헌[Barlow et al., Adv Exp Med Biol. 2008;632:117-42]을 참조, 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). CFH 유전자에서의 돌연변이 또는 다형성과 결합된 질환은, 이에 제한되는 것은 아니지만, 인자 H 결핍증, 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS), 노인황반변성(AMD), 막증식성사구체신염 II형(MPGNII; 문헌[de Cordoba 및 de Jorge, Clinical and Experimental Immunology 151, 1-13 (2008)]), 심근경색증(문헌[Kardys et al., Journal of the American College of Cardiology 47, 1568-1575 (2006)]; [Mooijaart et al., Experimental Gerontology 42, 1116-1122 (2007)]; [Nicaud et al., Journal of Molecular Medicine 85, 771-775 (2007)]; [Pai et al., European Heart Journal 28, 1297-1303 (2007)]; [Stark et al., Clinical Science (Lond) 113, 213-218 (2007)], 관동맥성 심장병/관상동맥 질환(CAD/CHD; (문헌[Meng et al., BMC Medical Genetics 8, 62 (2007)]; Pulido et al., Mayo Clinic Proceedings 82, 301-307 (2007)]; [Topol et al., Human Molecular Genetics 15 Spec No 2, R117-R123 (2006)]), 및 알츠하이머병(문헌[Hamilton et al., Neuromolecular Medicine 9, 331-334 (2007)]; [Zetterberg et al., American Journal of Ophthalmology 143, 1059-1060 (2007)])을 포함한다. 인자 H 기능 장애와 연관된 CFH 유전자 및 질환에서 돌연변이와 다형성 간의 연관성을 기술하는 상기 참고 문헌의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
본원에서 사용되는 "비정상적인 대체 경로 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애"는 보체의 대안적인 경로의 비제어 또는 비정상적인 활성화에서 초래된 질환, 장애, 또는 병태를 말한다. 일반적으로, 보체의 대안적인 경로의 비제어 또는 비정상적인 활성화는 숙주 세포 및 조직의 방관자 손상(bystander damage)뿐만 아니라 C3의 고갈 및 병원체 감염(예컨대, 진균, 박테리아, 바이러스 및 원생생물)에 대한 해당 민감성을 야기할 수 있다. 비정상적인 대체 경로 보체 활성과 연관된 질환 및 장애의 예는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 다양한 자가면역 질환(예를 들어, 류마티스 관절염, IgA 신증, 천식, 전신 홍반성 낭창, 다발성 경화증, 항인산화지질 증후군, ANCA-연관 혈관염, 천포창, 포도막염, 중증근무력증, 하시모토 갑상선염), 신장 질환(예를 들어 IgA 신증, 용혈성요독증후군, 막증식성사구체신염), 기타 다른 질환, 예를 들어 천식, 알츠하이머병, 성인 황반변성, 발작성 야간혈색소뇨증, 복부 대동맥류, 허혈, 및 패혈증을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "한외여과(UF)"는 반투막에 대하여 정수압이 액체에 가해지는 다양한 막 여과 방법을 포함한다. 고분자량의 현탁된 고체 및 용질은 남아 있는 반면, 물 및 저분자량 용질은 막을 투과한다. 분리 공정은 종종 고분자(103 ~ 106Da) 용액, 특히 단백질 용액을 정제하고 농축하는데 사용된다. 다수의 한외여과막이 분자가 남아 있는 분자의 크기에 따라서 이용가능하다. 한외여과막은 전형적으로 막 기공 크기가 1 내지 1000kDa이고 작동 압력이 0.01 내지 10bar임을 특징으로 한다.
본원에서 사용되는 용어 "정용여과"는 한외여과와 동일 또는 유사한 막을 이용하여 실행되며 전형적으로 접선류(tangential flow) 여과 방식으로 실행된다. 정용여과 동안, 여과액이 단위 조작으로부터 제거되는 동안, 완충액은 재순환 탱크 내로 도입된다. 생성물이 잔류물(retentate)(예를 들어, 인자 H)에 있는 공정에서, 정용여과는 설탕 및 소금과 같은 소분자로부터 단백질을 분리하는데 특히 유용하다. 임의의 경우에서, 정용여과는 완충계의 용액, 완충액, 또는 개별적인 성분을 교환하는데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "혼합"은 임의의 형태의 교반에 의하여 용액 또는 현탁액 중 둘 이상의 별개의 화합물 또는 물질의 동등한 분포를 야기하는 작용을 기술한다. 상기 용어가 본 출원에서 사용된 바와 같이, "혼합"의 결과로서 용액 또는 현탁액 중 모든 성분의 완전히 동등한 분포는 필요로 하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "용매"는 하나 이상의 다른 물질을 용해 또는 분산시킬 수 있는 임의의 약체 물질을 포함한다. 용매는 자연계에서 무기물, 예를 들어 물일 수 있거나, 유기 액체, 예를 들어 에탄올, 아세톤, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 헥산, 페트롤 에테르 등일 수 있다. 용어 "용매 세제 처리"에서 사용된 바와 같이, 용매는 유기 용매(예컨대, 트리-N-뷰틸 포스페이트)를 나타내며, 이는 용액에서 지질 피막형 바이러스를 불활성화시키는데 사용되는 용매 세제 혼합물 중 일부이다.
본원에서 사용되는 용어 "세제"는 본 출원에서 용어 "계면활성제" 또는 "표면 활성제"와 상호교환적으로 사용된다. 계면활성제는 전형적으로 양친매성, 즉 소수성 기("꼬리") 및 친수성 기("머리")를 모두 포함하여, 계면활성제가 유기용매 및 물 모두에서 용해성이 되게 하는 유기 화합물이다. 머리에 형식적으로 하전된 기의 존재에 의하여 계면활성제를 분류할 수 있다. 비이온성 계면활성제는 머리에 하전된 기를 가지지 않는 반면, 이온성 계면활성제는 머리에 순전하(net charge)를 보유한다. 쌍성이온성 계면활성제는 2가지의 반대로 하전된 기를 가지는 머리를 포함한다. 일반적인 계면활성제의 일부 예는 다음을 포함한다: 음이온성(설페이트, 술포네이트 또는 카복실레이트 음이온을 기반으로 함): 퍼플푸오로옥타노에이트(PFOA 또는 PFO), 퍼플루오로옥탄설포네이트(PFOS), 소듐 도데실 설페이트(SDS), 암모늄 라우릴 설페이트, 및 기타 다른 알킬 설페이트 염, 소듐 라우레스 설페이트(소듐 라우릴 에테르 설페이트, 또는 SLES로도 알려짐), 알킬 벤젠 설포네이트; 양이온성(4급 암모늄 양이온을 기반으로 함): 세틸 트리메틸암모늄 브로마이드(CTAB)(헥사데실 트리메틸 암모늄 브로마이드로도 알려짐), 및 기타 다른 알킬트리메틸암모늄 염, 세틸피리디늄 클로라이드(CPC), 폴리에톡시화 탈로우 아민(POEA), 벤잘코늄 클로라이드(BAC), 벤제토늄 클로라이드(BZT); 장쇄 지방산 및 이의 염: 카프릴레이트, 카프릴산, 헵타노에이트, 헥산산, 헵탄산, 노나논산, 데칸산 등; 쌍성이온성(양쪽성): 도데실 베타인; 코카미도프로필 베타인; 코코 암포 글라이시네이트; 비이온성: 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드), 알킬페놀 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴리(에틸렌 옥사이드) 및 폴리(프로필렌 옥사이드)의 공중합체(상업적으로 폴록사머(Poloxamer) 또는 폴록사민(Poloxamine)으로 알려짐), 알킬 폴리글루코사이드, 예를 들어 옥틸 글루코사이드, 데실 말토사이드, 지방 알코올(예컨대, 세틸 알코올 및 올레일 알코올), 코카마이드 MEA, 코카마이드 DEA, 폴리소르베이트(Tween 20, Tween 80 등), 트리톤(Triton) 세제, 및 도데실 디메틸아민 옥사이드를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료적으로 유효한 양 또는 용량" 또는 "충분한/유효한 양 또는 용량"은 투여되어 효과를 만들어내는 용량을 말한다. 정확한 용량은 치료의 목적에 따라 달라질 것이며, 공지된 기술을 사용하여 당업자에 의해 확인될 수 있다(예컨대, 문헌[Lieberman, Pharmaceutical Dosage Forms (vols. 1-3, 1992)]; [Lloyd, The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding (1999)]; [Pickar, Dosage Calculations (1999)]; 및 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, 2003, Gennaro, Ed., Lippincott, Williams & Wilkins] 참조; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨).
본 출원에서 사용된 용어 "분무"는, 예컨대 알코올 침전 단계, 예를 들어 콘 분별 I 또는 II+III 침전 단계 동안, 액체 물질의 미세 액적 또는 미스트의 형태로, 액체 물질을 시스템 내로 전달하는 수단을 말한다. 분무는, 스프레이 헤드 또는 노즐이 있는 임의의 가압 장치, 예를 들어 용기(예컨대, 분무기)에 의해 달성될 수 있으며, 수동으로 또는 자동으로 작동되어 액체로부터 미세 액적을 생성한다. 전형적으로, 시스템 내 액체의 빠르면서 균일한 분포를 보장하기 위하여 액체 물질을 수용하는 시스템이 연속적으로 교반되거나 다르게는 혼합되면서 분무가 실행된다.
본원에서 사용되는 용어 "약"은 명시된 값의 + 또는 -10%의 대략적인 범위를 의미한다. 예를 들어, 용어 "약 20%"는 18 내지 22%의 범위를 포함한다. 본원에서 사용되는 약은 또한 정확한 양을 포함한다. 따라서 "약 20%"는 "약 20%"와 또한 "20%"를 의미한다. 본원에서 사용되는 "약"은 명시된 값에서의 또는 그 근처에서의 범위를 말한다.
용어 "용량" 및 "투약량"은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 용량은 각각의 투여에서 개인에게 주어지는 유효 성분의 양을 말한다. 용량은 다수의 인자, 예를 들어 투여 빈도; 개인의 크기 및 내성; 병태의 중증도; 부작용의 위험; 및 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 당업자는 용량이 상기 인자에 따라서 또는 치료의 진행에 기초하여 변형될 수 있다. 용어 "투여형"은 제약의 특정 형태를 말하며, 투여 경로에 따라 다르다. 예를 들어, 투여형은 액체, 예컨대, 주사용 생리식염수일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "예방하다"는 혈액 단백질의 기능 결핍 또는 기능 장애와 연관된 병태에서 발생하는 증상의 가능성의 감소 또는 빈도의 감소를 말한다.
본원에서 사용되는 용어 "치료", "처치" 및 "호전"은 혈액 단백질의 기능의 결핍 또는 기능 장애와 연관된 병태에서 발생하는 증상의 중증도에서의 임의의 감소를 말한다. 본원에서 사용되는 용어 "치료하다" 및 "예방하다"는 절대 용어인 것으로 의도되지 않는다. 치료는 개시에 있어서의 임의의 지연, 증상의 호전, 환자 생존에 있어서의 개선, 생존 시간 또는 생존율의 증가 등을 말할 수 있다. 치료의 효과는 치료를 받지 않은 개인 또는 개인의 집단과 비교될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "상당한 분획"은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 10%를 말한다. 예를 들어, 조성물 중 세린 프로테아제의 상당한 분획을 말할 경우, 세린 프로테아제의 상당한 분획은 조성물에 존재하는 세린 프로테아제의 적어도 10%에 해당한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 10%, 또는 조성물 중 특정 단백질 집단의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99% 또는 그 이상을 말한다.
III . 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐 함량의 감소
제1 양태에서, 본 발명은, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 결합시키고 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 SiO2를 분리함으로써 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XI의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XI에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XI를 제거하는 단계를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XIa의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XIa에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XIa를 제거하는 단계를 포함한다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XII의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XII에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XII를 제거하는 단계를 포함한다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 단백질 조성물에서 인자 XIIa의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 XIIa에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 인자 XIIa를 제거하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 하나의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질에서 단백질을 부분적으로 침전시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 바람직한 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 한외여과 및/또는 정용여과함으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
또 다른 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 크로마토그래피 수지와 접촉시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 수지는 음이온 교환 수지, 양이온 교환 수지, 소수성 상호작용 수지, 혼합형 수지, 하이드록시아파타이트 수지, 리간드 친화 수지, 면역친화 수지, 및 크기 배제 수지로부터 선택된다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
제1 및 제2 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제1 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제2 풍부화 단계 Ppt Var. 1 Var. 11 Var. 21 Var. 31 Var. 41 Var. 51 Var. 61 Var. 71 Var. 81 Var. 91
UF/DF Var. 2 Var. 12 Var. 22 Var. 32 Var. 42 Var. 52 Var. 62 Var. 72 Var. 82 Var. 92
AEC Var. 3 Var. 13 Var. 23 Var. 33 Var. 43 Var. 53 Var. 63 Var. 73 Var. 83 Var. 93
CEC Var. 4 Var. 14 Var. 24 Var. 34 Var. 44 Var. 54 Var. 64 Var. 74 Var. 84 Var. 94
HIC Var. 5 Var. 15 Var. 25 Var. 35 Var. 45 Var. 55 Var. 65 Var. 75 Var. 85 Var. 95
HAC Var. 6 Var. 16 Var. 26 Var. 36 Var. 46 Var. 56 Var. 66 Var. 76 Var. 86 Var. 96
MMC Var. 7 Var. 17 Var. 27 Var. 37 Var. 47 Var. 57 Var. 67 Var. 77 Var. 87 Var. 97
LAC Var. 8 Var. 18 Var. 28 Var. 38 Var. 48 Var. 58 Var. 68 Var. 78 Var. 88 Var. 98
IAC Var. 9 Var. 19 Var. 29 Var. 39 Var. 49 Var. 59 Var. 69 Var. 79 Var. 89 Var. 99
SEC Var. 10 Var. 20 Var. 30 Var. 40 Var. 50 Var. 60 Var. 70 Var. 80 Var. 90 Var. 100
* Ppt: 침전
UF/DF: 한외여과/정용여과
AEC: 음이온 교환 크로마토그래피
CEC: 양이온 교환 크로마토그래피
HIC: 소수성 상호작용 크로마토그래피
HAC: 하이드록시아파타이트 크로마토그래피
MMC: 혼합형 크로마토그래피
LAC: 리간드 친화 크로마토그래피
IAC: 면역-친화 크로마토그래피
SEC: 크기 배제 크로마토그래피
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; (d) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 표적 단백질에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
제1 침전 풍부화 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 101 Var. 111 Var. 121 Var. 131 Var. 141 Var. 151 Var. 161 Var. 171 Var. 181 Var. 191
UF/DF Var. 102 Var. 112 Var. 122 Var. 132 Var. 142 Var. 152 Var. 162 Var. 172 Var. 182 Var. 192
AEC Var. 103 Var. 113 Var. 123 Var. 133 Var. 143 Var. 153 Var. 163 Var. 173 Var. 183 Var. 193
CEC Var. 104 Var. 114 Var. 124 Var. 134 Var. 144 Var. 154 Var. 164 Var. 174 Var. 184 Var. 194
HIC Var. 105 Var. 115 Var. 125 Var. 135 Var. 145 Var. 155 Var. 165 Var. 175 Var. 185 Var. 195
HAC Var. 106 Var. 116 Var. 126 Var. 136 Var. 146 Var. 156 Var. 166 Var. 176 Var. 186 Var. 196
MMC Var. 107 Var. 117 Var. 127 Var. 137 Var. 147 Var. 157 Var. 167 Var. 177 Var. 187 Var. 197
LAC Var. 108 Var. 118 Var. 128 Var. 138 Var. 148 Var. 158 Var. 168 Var. 178 Var. 188 Var. 198
IAC Var. 109 Var. 119 Var. 129 Var. 139 Var. 149 Var. 159 Var. 169 Var. 179 Var. 189 Var. 199
SEC Var. 110 Var. 120 Var. 130 Var. 140 Var. 150 Var. 160 Var. 170 Var. 180 Var. 190 Var. 200
* 표 1에 따름.
제1 한외여과/정용여과 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 201 Var. 211 Var. 221 Var. 231 Var. 241 Var. 251 Var. 261 Var. 271 Var. 281 Var. 291
UF/DF Var. 202 Var. 212 Var. 222 Var. 232 Var. 242 Var. 252 Var. 262 Var. 272 Var. 282 Var. 292
AEC Var. 203 Var. 213 Var. 223 Var. 233 Var. 243 Var. 253 Var. 263 Var. 273 Var. 283 Var. 293
CEC Var. 204 Var. 214 Var. 224 Var. 234 Var. 244 Var. 254 Var. 264 Var. 274 Var. 284 Var. 294
HIC Var. 205 Var. 215 Var. 225 Var. 235 Var. 245 Var. 255 Var. 265 Var. 275 Var. 285 Var. 295
HAC Var. 206 Var. 216 Var. 226 Var. 236 Var. 246 Var. 256 Var. 266 Var. 276 Var. 286 Var. 296
MMC Var. 207 Var. 217 Var. 227 Var. 237 Var. 247 Var. 257 Var. 267 Var. 277 Var. 287 Var. 297
LAC Var. 208 Var. 218 Var. 228 Var. 238 Var. 248 Var. 258 Var. 268 Var. 278 Var. 288 Var. 298
IAC Var. 209 Var. 219 Var. 229 Var. 239 Var. 249 Var. 259 Var. 269 Var. 279 Var. 289 Var. 299
SEC Var. 210 Var. 220 Var. 230 Var. 240 Var. 250 Var. 260 Var. 270 Var. 280 Var. 290 Var. 300
* 표 1에 따름.
제1 음이온 교환 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 301 Var. 311 Var. 321 Var. 331 Var. 341 Var. 351 Var. 361 Var. 371 Var. 381 Var. 391
UF/DF Var. 302 Var. 312 Var. 322 Var. 332 Var. 342 Var. 352 Var. 362 Var. 372 Var. 382 Var. 392
AEC Var. 303 Var. 313 Var. 323 Var. 333 Var. 343 Var. 353 Var. 363 Var. 373 Var. 383 Var. 393
CEC Var. 304 Var. 314 Var. 324 Var. 334 Var. 344 Var. 354 Var. 364 Var. 374 Var. 384 Var. 394
HIC Var. 305 Var. 315 Var. 325 Var. 335 Var. 345 Var. 355 Var. 365 Var. 375 Var. 385 Var. 395
HAC Var. 306 Var. 316 Var. 326 Var. 336 Var. 346 Var. 356 Var. 366 Var. 376 Var. 386 Var. 396
MMC Var. 307 Var. 317 Var. 327 Var. 337 Var. 347 Var. 357 Var. 367 Var. 377 Var. 387 Var. 397
LAC Var. 308 Var. 318 Var. 328 Var. 338 Var. 348 Var. 358 Var. 368 Var. 378 Var. 388 Var. 398
IAC Var. 309 Var. 319 Var. 329 Var. 339 Var. 349 Var. 359 Var. 369 Var. 379 Var. 389 Var. 399
SEC Var. 310 Var. 320 Var. 330 Var. 340 Var. 350 Var. 360 Var. 370 Var. 380 Var. 390 Var. 400
* 표 1에 따름.
제1 양이온 교환 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 401 Var. 411 Var. 421 Var. 431 Var. 441 Var. 451 Var. 461 Var. 471 Var. 481 Var. 491
UF/DF Var. 402 Var. 412 Var. 422 Var. 432 Var. 442 Var. 452 Var. 462 Var. 472 Var. 482 Var. 492
AEC Var. 403 Var. 413 Var. 423 Var. 433 Var. 443 Var. 453 Var. 463 Var. 473 Var. 483 Var. 493
CEC Var. 404 Var. 414 Var. 424 Var. 434 Var. 444 Var. 454 Var. 464 Var. 474 Var. 484 Var. 494
HIC Var. 405 Var. 415 Var. 425 Var. 435 Var. 445 Var. 455 Var. 465 Var. 475 Var. 485 Var. 495
HAC Var. 406 Var. 416 Var. 426 Var. 436 Var. 446 Var. 456 Var. 466 Var. 476 Var. 486 Var. 496
MMC Var. 407 Var. 417 Var. 427 Var. 437 Var. 447 Var. 457 Var. 467 Var. 477 Var. 487 Var. 497
LAC Var. 408 Var. 418 Var. 428 Var. 438 Var. 448 Var. 458 Var. 468 Var. 478 Var. 488 Var. 498
IAC Var. 409 Var. 419 Var. 429 Var. 439 Var. 449 Var. 459 Var. 469 Var. 479 Var. 489 Var. 499
SEC Var. 410 Var. 420 Var. 430 Var. 440 Var. 450 Var. 460 Var. 470 Var. 480 Var. 490 Var. 500
* 표 1에 따름.
제1 소수성 상호작용 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 501 Var. 511 Var. 521 Var. 531 Var. 541 Var. 551 Var. 561 Var. 571 Var. 581 Var. 591
UF/DF Var. 502 Var. 512 Var. 522 Var. 532 Var. 542 Var. 552 Var. 562 Var. 572 Var. 582 Var. 592
AEC Var. 503 Var. 513 Var. 523 Var. 533 Var. 543 Var. 553 Var. 563 Var. 573 Var. 583 Var. 593
CEC Var. 504 Var. 514 Var. 524 Var. 534 Var. 544 Var. 554 Var. 564 Var. 574 Var. 584 Var. 594
HIC Var. 505 Var. 515 Var. 525 Var. 535 Var. 545 Var. 555 Var. 565 Var. 575 Var. 585 Var. 595
HAC Var. 506 Var. 516 Var. 526 Var. 536 Var. 546 Var. 556 Var. 566 Var. 576 Var. 586 Var. 596
MMC Var. 507 Var. 517 Var. 527 Var. 537 Var. 547 Var. 557 Var. 567 Var. 577 Var. 587 Var. 597
LAC Var. 508 Var. 518 Var. 528 Var. 538 Var. 548 Var. 558 Var. 568 Var. 578 Var. 588 Var. 598
IAC Var. 509 Var. 519 Var. 529 Var. 539 Var. 549 Var. 559 Var. 569 Var. 579 Var. 589 Var. 599
SEC Var. 510 Var. 520 Var. 530 Var. 540 Var. 550 Var. 560 Var. 570 Var. 580 Var. 590 Var. 600
* 표 1에 따름.
제1 하이드록시아파타이트 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 601 Var. 611 Var. 621 Var. 631 Var. 641 Var. 651 Var. 661 Var. 671 Var. 681 Var. 691
UF/DF Var. 602 Var. 612 Var. 622 Var. 632 Var. 642 Var. 652 Var. 662 Var. 672 Var. 682 Var. 692
AEC Var. 603 Var. 613 Var. 623 Var. 633 Var. 643 Var. 653 Var. 663 Var. 673 Var. 683 Var. 693
CEC Var. 604 Var. 614 Var. 624 Var. 634 Var. 644 Var. 654 Var. 664 Var. 674 Var. 684 Var. 694
HIC Var. 605 Var. 615 Var. 625 Var. 635 Var. 645 Var. 655 Var. 665 Var. 675 Var. 685 Var. 695
HAC Var. 606 Var. 616 Var. 626 Var. 636 Var. 646 Var. 656 Var. 666 Var. 676 Var. 686 Var. 696
MMC Var. 607 Var. 617 Var. 627 Var. 637 Var. 647 Var. 657 Var. 667 Var. 677 Var. 687 Var. 697
LAC Var. 608 Var. 618 Var. 628 Var. 638 Var. 648 Var. 658 Var. 668 Var. 678 Var. 688 Var. 698
IAC Var. 609 Var. 619 Var. 629 Var. 639 Var. 649 Var. 659 Var. 669 Var. 679 Var. 689 Var. 699
SEC Var. 610 Var. 620 Var. 630 Var. 640 Var. 650 Var. 660 Var. 670 Var. 680 Var. 690 Var. 700
* 표 1에 따름.
제1 혼합형 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 701 Var. 711 Var. 721 Var. 731 Var. 741 Var. 751 Var. 761 Var. 771 Var. 781 Var. 791
UF/DF Var. 702 Var. 712 Var. 722 Var. 732 Var. 742 Var. 752 Var. 762 Var. 772 Var. 782 Var. 792
AEC Var. 703 Var. 713 Var. 723 Var. 733 Var. 743 Var. 753 Var. 763 Var. 773 Var. 783 Var. 793
CEC Var. 704 Var. 714 Var. 724 Var. 734 Var. 744 Var. 754 Var. 764 Var. 774 Var. 784 Var. 794
HIC Var. 705 Var. 715 Var. 725 Var. 735 Var. 745 Var. 755 Var. 765 Var. 775 Var. 785 Var. 795
HAC Var. 706 Var. 716 Var. 726 Var. 736 Var. 746 Var. 756 Var. 766 Var. 776 Var. 786 Var. 796
MMC Var. 707 Var. 717 Var. 727 Var. 737 Var. 747 Var. 757 Var. 767 Var. 777 Var. 787 Var. 797
LAC Var. 708 Var. 718 Var. 728 Var. 738 Var. 748 Var. 758 Var. 768 Var. 778 Var. 788 Var. 798
IAC Var. 709 Var. 719 Var. 729 Var. 739 Var. 749 Var. 759 Var. 769 Var. 779 Var. 789 Var. 799
SEC Var. 710 Var. 720 Var. 730 Var. 740 Var. 750 Var. 760 Var. 770 Var. 780 Var. 790 Var. 800
* 표 1에 따름.
제1 리간드 친화 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 801 Var. 811 Var. 821 Var. 831 Var. 841 Var. 851 Var. 861 Var. 871 Var. 881 Var. 891
UF/DF Var. 802 Var. 812 Var. 822 Var. 832 Var. 842 Var. 852 Var. 862 Var. 872 Var. 882 Var. 892
AEC Var. 803 Var. 813 Var. 823 Var. 833 Var. 843 Var. 853 Var. 863 Var. 873 Var. 883 Var. 893
CEC Var. 804 Var. 814 Var. 824 Var. 834 Var. 844 Var. 854 Var. 864 Var. 874 Var. 884 Var. 894
HIC Var. 805 Var. 815 Var. 825 Var. 835 Var. 845 Var. 855 Var. 865 Var. 875 Var. 885 Var. 895
HAC Var. 806 Var. 816 Var. 826 Var. 836 Var. 846 Var. 856 Var. 866 Var. 876 Var. 886 Var. 896
MMC Var. 807 Var. 817 Var. 827 Var. 837 Var. 847 Var. 857 Var. 867 Var. 877 Var. 887 Var. 897
LAC Var. 808 Var. 818 Var. 828 Var. 838 Var. 848 Var. 858 Var. 868 Var. 878 Var. 888 Var. 898
IAC Var. 809 Var. 819 Var. 829 Var. 839 Var. 849 Var. 859 Var. 869 Var. 879 Var. 889 Var. 899
SEC Var. 810 Var. 820 Var. 830 Var. 840 Var. 850 Var. 860 Var. 870 Var. 880 Var. 890 Var. 900
* 표 1에 따름.
제1 면역-친화 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 901 Var. 911 Var. 921 Var. 931 Var. 941 Var. 951 Var. 961 Var. 971 Var. 981 Var. 991
UF/DF Var. 902 Var. 912 Var. 922 Var. 932 Var. 942 Var. 952 Var. 962 Var. 972 Var. 982 Var. 992
AEC Var. 903 Var. 913 Var. 923 Var. 933 Var. 943 Var. 953 Var. 963 Var. 973 Var. 983 Var. 993
CEC Var. 904 Var. 914 Var. 924 Var. 934 Var. 944 Var. 954 Var. 964 Var. 974 Var. 984 Var. 994
HIC Var. 905 Var. 915 Var. 925 Var. 935 Var. 945 Var. 955 Var. 965 Var. 975 Var. 985 Var. 995
HAC Var. 906 Var. 916 Var. 926 Var. 936 Var. 946 Var. 956 Var. 966 Var. 976 Var. 986 Var. 996
MMC Var. 907 Var. 917 Var. 927 Var. 937 Var. 947 Var. 957 Var. 967 Var. 977 Var. 987 Var. 997
LAC Var. 908 Var. 918 Var. 928 Var. 938 Var. 948 Var. 958 Var. 968 Var. 978 Var. 988 Var. 998
IAC Var. 909 Var. 919 Var. 929 Var. 939 Var. 949 Var. 959 Var. 969 Var. 979 Var. 989 Var. 999
SEC Var. 910 Var. 920 Var. 930 Var. 940 Var. 950 Var. 960 Var. 970 Var. 980 Var. 990 Var. 1000
* 표 1에 따름.
제1 크기 배제 크로마토그래피 단계, 제2 및 제3 풍부화 단계의 조합에 대한 예시적인 실시형태.
제2 풍부화 단계*
Ppt UF/DF AEC CEC HIC HAC MMC LAC IAC SEC
제3풍부화 단계 Ppt Var. 1001 Var. 1011 Var. 1021 Var. 1031 Var. 1041 Var. 1051 Var. 1061 Var. 1071 Var. 1081 Var. 1091
UF/DF Var. 1002 Var. 1012 Var. 1022 Var. 1032 Var. 1042 Var. 1052 Var. 1062 Var. 1072 Var. 1082 Var. 1092
AEC Var. 1003 Var. 1013 Var. 1023 Var. 1033 Var. 1043 Var. 1053 Var. 1063 Var. 1073 Var. 1083 Var. 1093
CEC Var. 1004 Var. 1014 Var. 1024 Var. 1034 Var. 1044 Var. 1054 Var. 1064 Var. 1074 Var. 1084 Var. 1094
HIC Var. 1005 Var. 1015 Var. 1025 Var. 1035 Var. 1045 Var. 1055 Var. 1065 Var. 1075 Var. 1085 Var. 1095
HAC Var. 1006 Var. 1016 Var. 1026 Var. 1036 Var. 1046 Var. 1056 Var. 1066 Var. 1076 Var. 1086 Var. 1096
MMC Var. 1007 Var. 1017 Var. 1027 Var. 1037 Var. 1047 Var. 1057 Var. 1067 Var. 1077 Var. 1087 Var. 1097
LAC Var. 1008 Var. 1018 Var. 1028 Var. 1038 Var. 1048 Var. 1058 Var. 1068 Var. 1078 Var. 1088 Var. 1098
IAC Var. 1009 Var. 1019 Var. 1029 Var. 1039 Var. 1049 Var. 1059 Var. 1069 Var. 1079 Var. 1089 Var. 1099
SEC Var. 1010 Var. 1020 Var. 1030 Var. 1040 Var. 1050 Var. 1060 Var. 1070 Var. 1080 Var. 1090 Var. 1100
* 표 1에 따름.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 방법의 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지에 결합하지 않은 혈장 유래 표적 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
상기 기술된 방법의 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 보체계의 단백질(예컨대, 인자 H), 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI)로부터 선택된다. 구체적인 실시형태에서, 보체계의 단백질은 인자 H(FH), 인자 D, 보체 단백질 C3, 및 C4 결합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 바람직한 실시형태에서, 단백질 조성물은 제조용 중간체이다.
본원에서 제공되는 방법의 임의의 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 10%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 25%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 50%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 75%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%만큼 감소된다. 또 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 5%만큼, 또는 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%만큼, 또는 테스트 시스템의 검출 한계 미만의 수준으로 감소된다.
일반적으로, 본원에 기술되는 방법에 있어서 필요로 하는 미분된 이산화규소(SiO2)의 양은 여러 가지 인자, 예를 들어 이에 제한되는 것은 아니지만, 조성물에 존재하는 단백질의 전체 양, 조성물 중 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐(예컨대, FXI, FXIa, FXII, and FXIIa)의 농도, 표적 단백질, 및 용액 조건(예컨대, pH, 전도도 등)에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 1g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 2g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2.5g의 농도에서 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 표적 조성물에 첨가될 수 있다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도에서 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질 또는 적어도 0.02g/g 전체 단백질, 0.03g/g 전체 단백질, 0.04g/g 전체 단백질, 0.05g/g 전체 단백질, 0.06g/g 전체 단백질, 0.07g/g 전체 단백질, 0.08g/g 전체 단백질, 0.09g/g 전체 단백질, 0.1g/g 전체 단백질, 0.2g/g 전체 단백질, 0.3g/g 전체 단백질, 0.4g/g 전체 단백질, 0.5g/g 전체 단백질, 0.6g/g 전체 단백질, 0.7g/g 전체 단백질, 0.8g/g 전체 단백질, 0.9g/g 전체 단백질, 1.0g/g 전체 단백질, 1.5g/g 전체 단백질, 2.0g/g 전체 단백질, 2.5g/g 전체 단백질, 3.0g/g 전체 단백질, 3.5g/g 전체 단백질, 4.0g/g 전체 단백질, 4.5g/g 전체 단백질, 5.0g/g 전체 단백질, 5.5g/g 전체 단백질, 6.0g/g 전체 단백질, 6.5g/g 전체 단백질, 7.0g/g 전체 단백질, 7.5g/g 전체 단백질, 8.0g/g 전체 단백질, 8.5g/g 전체 단백질, 9.0g/g 전체 단백질, 9.5g/g 전체 단백질, 10.0g/g 전체 단백질, 또는 그 이상의 g/g 전체 단백질의 농도에서 첨가된다.
표적 단백질이 현탁된 혈장 침전물 분획으로부터 추출되는 임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물 내지 약 1.0㎏/㎏ 침전물, 약 0.02㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.8㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.03㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.7㎏/㎏ 침전물의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.07㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.06㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.03㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.05㎏/㎏ 침전물의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0㎏/㎏ 침전물의 최종 농도에서 첨가될 것이다.
A. 면역글로불린
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린(Ig) 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 Ig 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 Ig 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 하나의 실시형태에서, Ig 조성물은 IgG 조성물이다. 다른 실시형태에서, Ig 조성물은 IgA, IgM, IgG, 또는 이의 혼합 조성물이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 풍부화 Ig 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 Ig 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 Ig 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 Ig 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, Ig 조성물은 IgG 조성물이다. 다른 실시형태에서, Ig 조성물은 IgA, IgM, IgG, 또는 이의 혼합 조성물이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 제2 풍부화 Ig 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 Ig 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 Ig 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 Ig 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 Ig 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 하나의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, Ig 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, Ig 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 Ig 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 Ig 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 Ig 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7,표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, Ig 조성물은 제조용 중간체이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, Ig 조성물은 콘 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1946, 68(3): 459-475]; [J. Am. Chem. Soc. 72:465-474 (1950)]), 온클레이 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1949, 71(2): 541-550]), 도이치(Deutsch) 정제 절차(문헌[J. Biol. Chem. 164:109-118]), 호페(Hoppe) 정제 절차(문헌[Munch Med Wochenschr 1967 (34): 1749-1752]), 폭스베덴(Falksveden) 정제 절차(스웨덴 특허 제348942호), 폭스베덴 및 룬드블래드(Lundblad) 정제 절차(Methods of Plasma Protein Fractionation 1980), 레빙(Lebing) 정제 절차(문헌[Vox Sang 2003 (84):193-201]), 다나카(Tanaka) 정제 절차(문헌[Braz J Med Biol Res 2000 (33)37-30]), 테쉬너(Teschner) 정제 절차(문헌[Vox Sang, 2007 (92):42-55]), 니츠만 분별 절차(문헌[Helv. Chim. Acta 37:866-873]), 키슬러/니츠만 분별 절차(문헌[Vox Sang. 7:414-424 (1962)]), 바룬던(Barundern) 정제 절차(문헌[Vox Sang. 7:157-74 (1962)]), 코블레트(Koblet) 정제 절차(문헌[Vox Sang. 13:93-102 (1967)]), 미국 특허 제5,122,373호 또는 제5,177,194호에 개시된 정제 절차, 이의 변형 절차, 및 당업계에 공지된 유사 또는 동등한 정제 절차로부터의 IgG 제조용 중간체이다.
하나의 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 냉동 불량 콘 집단이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 콘 분획 I 상청액 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 콘 분획 III 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 콘 분획 II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 콘 분획 I+II+III 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 침전물 G 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다. 다른 특정 실시형태에서, IgG 조성물은 재현탁된 키슬러/니츠만 침전물 B 침전물, 또는 이의 동등한 분획물이다.
구체적인 실시형태에서, 본 발명은 재현탁된 IgG 분획 II+III 침전물에서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 유리하게, 재현탁된 IgG 분획 II+III 침전물에서 인자 XI, 인자 XII, 인자 Xia, 및/또는 인자 XIIa의 수준을 여과/원심분리 전에 전처리 단계의 추가에 의해 크게 감소될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 이러한 전처리 단계는 미분된 이산화규소(예컨대, 흄드 실리카, Aerosil(등록상표))의 첨가 후, 현탁액을 계속 혼합하는 동안 40 내지 80분의 항온처리를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 항온처리 기간은 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상일 수 있다. 일반적으로, 처리는 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행될 것이다. 임의의 실시형태에서, 처리는 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 또는 10℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 처리는 약 2℃ 내지 약 10℃에서 실행된다.
흄드 실리카 처리의 영향은 실시예 3, 6, 및 7에 나타낸 결과에 의해 예시된다. 이들 실시예에서, 분획 II+III 침전물은 재현탁되고 미분된 이산화규소의 양을 변화시키면서 처리된다. 표 22, 표 27, 표 28, 및 표 29에서 알 수 있는 바와 같이, 인자 XI 및 XII 세린 프로테아제 활성 및 지모겐 함량은 현탁액을 SiO2로 처리함으로써 적어도 90% 감소될 수 있다.
임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트 내지 약 100g/㎏ II+III 페이스트(즉, 1:15의 비율로 추출되는 변형된 분획 II+III 침전물에 대하여, 흄드 실리카는 약 20g/16㎏ II+III 현탁액 내지 약 100g/16㎏ II+III 현탁액의 농도에서, 또는 약 0.125%(w/w) 내지 약 0.625%(w/w)의 최종 농도에서 첨가되어야 함)의 농도에서 첨가된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100g/㎏ II+III 페이스트의 농도에서 첨가될 수 있다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카(예컨대, Aerosil 380 또는 동등물)는 최종 농도 약 40g/16㎏ II+III까지 변형된 분획 II+III 현탁액에 첨가된다. 혼합은 약 2 내지 8℃에서 적어도 50 내지 70분 동안 일어난다.
임의의 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 1g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2.5g의 농도에서 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질 또는 전체 단백질 g당 적어도 0.02g, 0.03g, 0.04g, 0.05g, 0.06g, 0.07g, 0.08g, 0.09g, 0.1g, 0.2g, 0.3g, 0.4g, 0.5g, 0.6g, 0.7g, 0.8g, 0.9g, 1.0g, 1.5g, 2.0g, 2.5g, 3.0g, 3.5g, 4.0g, 4.5g, 5.0g, 5.5g, 6.0g, 6.5g, 7.0g, 7.5g, 8.0g, 8.5g, 9.0g, 9.5g, 10.0g, 또는 그 이상의 농도에서 첨가된다.
임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.8㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.7㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 것이다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 분획 II+III 현탁액의 여과 또는 원심분리 청징 전에 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카 처리는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.04㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.08㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.09㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 0.1㎏/㎏ II+III 페이스트의 첨가를 포함할 것이고, 혼합물은 약 2℃ 내지 약 9℃의 온도에서 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상 동안 항온처리될 것이다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 잔여 피브리노겐, 아마이드 분해 활성, 및/또는 프리칼리크레인 활성제 활성의 수준을 감소시킨 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 구체적인 실시형태에서, 공정 개선은 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현되며, 이는 면역글로불린 제조물에서 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시킨다.
일반적으로, 면역글로불린 조성물로부터의 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 제거는, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2와 결합하는 pH 및 전도도의 용액 조건 하에서 면역글로불린 함유 용액을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처리함으로써 달성될 수 있다. 실시예에 나타낸 바와 같이, 적당한 조건은 낮은 pH 및 낮은 전도도를 포함한다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린 조성물에서 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 상기 조성물로부터 SiO2를 제거하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.6 내지 약 5.6의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.7 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.1의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 또는 약 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 이하 또는 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9 이하, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 3.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 상기 조성물로부터 SiO2를 제거하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.5mS/㎝ 내지 약 2.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 1.3mS/㎝ 내지 약 1.7mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.7mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.6mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.5mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.3mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.2mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.1mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.2mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.3mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.5mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝ 이하의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 이하 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝ 이하의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 면역글로불린 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 낮은 pH 및 낮은 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 상기 조성물로부터 SiO2를 제거하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 더 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태
pH
4.0-7.0 4.5-5.0 4.5-5.0 4.5-5.0 4.5-5.0 4.5-5.0 4.5-5.0 4.5-5.0 4.5-5.0
이온 강도(mS/㎝) 0.1-2.0 Var. 1222 Var. 1638 Var. 1638 Var. 1638 Var. 1638 Var. 1638 Var. 1638 Var. 1638 Var. 1638
0.1-1.9 Var. 1223 Var. 1639 Var. 1639 Var. 1639 Var. 1639 Var. 1639 Var. 1639 Var. 1639 Var. 1639
0.1-1.8 Var. 1224 Var. 1640 Var. 1640 Var. 1640 Var. 1640 Var. 1640 Var. 1640 Var. 1640 Var. 1640
0.1-1.7 Var. 1225 Var. 1641 Var. 1641 Var. 1641 Var. 1641 Var. 1641 Var. 1641 Var. 1641 Var. 1641
0.1-1.6 Var. 1226 Var. 1642 Var. 1642 Var. 1642 Var. 1642 Var. 1642 Var. 1642 Var. 1642 Var. 1642
0.1-1.5 Var. 1227 Var. 1643 Var. 1643 Var. 1643 Var. 1643 Var. 1643 Var. 1643 Var. 1643 Var. 1643
0.1-1.4 Var. 1228 Var. 1644 Var. 1644 Var. 1644 Var. 1644 Var. 1644 Var. 1644 Var. 1644 Var. 1644
0.1-1.3 Var. 1229 Var. 1645 Var. 1645 Var. 1645 Var. 1645 Var. 1645 Var. 1645 Var. 1645 Var. 1645
0.1-1.2 Var. 1230 Var. 1646 Var. 1646 Var. 1646 Var. 1646 Var. 1646 Var. 1646 Var. 1646 Var. 1646
0.1-1.1 Var. 1231 Var. 1647 Var. 1647 Var. 1647 Var. 1647 Var. 1647 Var. 1647 Var. 1647 Var. 1647
0.1-1.0 Var. 1232 Var. 1648 Var. 1648 Var. 1648 Var. 1648 Var. 1648 Var. 1648 Var. 1648 Var. 1648
0.1-0.9 Var. 1233 Var. 1649 Var. 1649 Var. 1649 Var. 1649 Var. 1649 Var. 1649 Var. 1649 Var. 1649
0.1-0.8 Var. 1234 Var. 1650 Var. 1650 Var. 1650 Var. 1650 Var. 1650 Var. 1650 Var. 1650 Var. 1650
0.2-2.0 Var. 1235 Var. 1651 Var. 1651 Var. 1651 Var. 1651 Var. 1651 Var. 1651 Var. 1651 Var. 1651
0.2-1.5 Var. 1236 Var. 1652 Var. 1652 Var. 1652 Var. 1652 Var. 1652 Var. 1652 Var. 1652 Var. 1652
0.2-1.0 Var. 1237 Var. 1653 Var. 1653 Var. 1653 Var. 1653 Var. 1653 Var. 1653 Var. 1653 Var. 1653
0.2-0.9 Var. 1238 Var. 1654 Var. 1654 Var. 1654 Var. 1654 Var. 1654 Var. 1654 Var. 1654 Var. 1654
0.2-0.8 Var. 1239 Var. 1655 Var. 1655 Var. 1655 Var. 1655 Var. 1655 Var. 1655 Var. 1655 Var. 1655
0.3-1.0 Var. 1240 Var. 1656 Var. 1656 Var. 1656 Var. 1656 Var. 1656 Var. 1656 Var. 1656 Var. 1656
0.3-0.9 Var. 1241 Var. 1657 Var. 1657 Var. 1657 Var. 1657 Var. 1657 Var. 1657 Var. 1657 Var. 1657
0.3-0.8 Var. 1242 Var. 1658 Var. 1658 Var. 1658 Var. 1658 Var. 1658 Var. 1658 Var. 1658 Var. 1658
0.4-1.0 Var. 1243 Var. 1659 Var. 1659 Var. 1659 Var. 1659 Var. 1659 Var. 1659 Var. 1659 Var. 1659
0.4-0.9 Var. 1244 Var. 1660 Var. 1660 Var. 1660 Var. 1660 Var. 1660 Var. 1660 Var. 1660 Var. 1660
0.4-0.8 Var. 1245 Var. 1661 Var. 1661 Var. 1661 Var. 1661 Var. 1661 Var. 1661 Var. 1661 Var. 1661
0.5-1.0 Var. 1246 Var. 1662 Var. 1662 Var. 1662 Var. 1662 Var. 1662 Var. 1662 Var. 1662 Var. 1662
0.5-0.9 Var. 1247 Var. 1663 Var. 1663 Var. 1663 Var. 1663 Var. 1663 Var. 1663 Var. 1663 Var. 1663
0.5-0.8 Var. 1248 Var. 1664 Var. 1664 Var. 1664 Var. 1664 Var. 1664 Var. 1664 Var. 1664 Var. 1664
0.6-1.0 Var. 1249 Var. 1665 Var. 1665 Var. 1665 Var. 1665 Var. 1665 Var. 1665 Var. 1665 Var. 1665
0.6-0.9 Var. 1250 Var. 1666 Var. 1666 Var. 1666 Var. 1666 Var. 1666 Var. 1666 Var. 1666 Var. 1666
0.6-0.8 Var. 1251 Var. 1667 Var. 1667 Var. 1667 Var. 1667 Var. 1667 Var. 1667 Var. 1667 Var. 1667
0.7-1.0 Var. 1252 Var. 1668 Var. 1668 Var. 1668 Var. 1668 Var. 1668 Var. 1668 Var. 1668 Var. 1668
0.7-0.9 Var. 1253 Var. 1669 Var. 1669 Var. 1669 Var. 1669 Var. 1669 Var. 1669 Var. 1669 Var. 1669
0.1 Var. 1254 Var. 1670 Var. 1670 Var. 1670 Var. 1670 Var. 1670 Var. 1670 Var. 1670 Var. 1670
0.2 Var. 1255 Var. 1671 Var. 1671 Var. 1671 Var. 1671 Var. 1671 Var. 1671 Var. 1671 Var. 1671
0.3 Var. 1256 Var. 1672 Var. 1672 Var. 1672 Var. 1672 Var. 1672 Var. 1672 Var. 1672 Var. 1672
0.4 Var. 1257 Var. 1673 Var. 1673 Var. 1673 Var. 1673 Var. 1673 Var. 1673 Var. 1673 Var. 1673
0.5 Var. 1258 Var. 1674 Var. 1674 Var. 1674 Var. 1674 Var. 1674 Var. 1674 Var. 1674 Var. 1674
0.6 Var. 1259 Var. 1675 Var. 1675 Var. 1675 Var. 1675 Var. 1675 Var. 1675 Var. 1675 Var. 1675
0.7 Var. 1260 Var. 1676 Var. 1676 Var. 1676 Var. 1676 Var. 1676 Var. 1676 Var. 1676 Var. 1676
0.8 Var. 1261 Var. 1677 Var. 1677 Var. 1677 Var. 1677 Var. 1677 Var. 1677 Var. 1677 Var. 1677
0.9 Var. 1262 Var. 1678 Var. 1678 Var. 1678 Var. 1678 Var. 1678 Var. 1678 Var. 1678 Var. 1678
1 Var. 1263 Var. 1679 Var. 1679 Var. 1679 Var. 1679 Var. 1679 Var. 1679 Var. 1679 Var. 1679
1.1 Var. 1264 Var. 1680 Var. 1680 Var. 1680 Var. 1680 Var. 1680 Var. 1680 Var. 1680 Var. 1680
1.2 Var. 1265 Var. 1681 Var. 1681 Var. 1681 Var. 1681 Var. 1681 Var. 1681 Var. 1681 Var. 1681
1.3 Var. 1266 Var. 1682 Var. 1682 Var. 1682 Var. 1682 Var. 1682 Var. 1682 Var. 1682 Var. 1682
1.4 Var. 1267 Var. 1683 Var. 1683 Var. 1683 Var. 1683 Var. 1683 Var. 1683 Var. 1683 Var. 1683
1.5 Var. 1268 Var. 1684 Var. 1684 Var. 1684 Var. 1684 Var. 1684 Var. 1684 Var. 1684 Var. 1684
1.6 Var. 1269 Var. 1685 Var. 1685 Var. 1685 Var. 1685 Var. 1685 Var. 1685 Var. 1685 Var. 1685
1.7 Var. 1270 Var. 1686 Var. 1686 Var. 1686 Var. 1686 Var. 1686 Var. 1686 Var. 1686 Var. 1686
1.8 Var. 1271 Var. 1687 Var. 1687 Var. 1687 Var. 1687 Var. 1687 Var. 1687 Var. 1687 Var. 1687
1.9 Var. 1272 Var. 1688 Var. 1688 Var. 1688 Var. 1688 Var. 1688 Var. 1688 Var. 1688 Var. 1688
2 Var. 1273 Var. 1689 Var. 1689 Var. 1689 Var. 1689 Var. 1689 Var. 1689 Var. 1689 Var. 1689
세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태
pH
5.0-7.0 5.0-6.5 5.0-6.0 5.0-5.5 4.6-5.6 4.7-5.5 4.8-5.4 4.9-5.3 5.0-5.2
이온 강도(mS/㎝) 0.1-2.0 Var. 1690 Var. 1742 Var. 1794 Var. 1846 Var. 1898 Var. 1950 Var. 2002 Var. 2054 Var. 2106
0.1-1.9 Var. 1691 Var. 1743 Var. 1795 Var. 1847 Var. 1899 Var. 1951 Var. 2003 Var. 2055 Var. 2107
0.1-1.8 Var. 1692 Var. 1744 Var. 1796 Var. 1848 Var. 1900 Var. 1952 Var. 2004 Var. 2056 Var. 2108
0.1-1.7 Var. 1693 Var. 1745 Var. 1797 Var. 1849 Var. 1901 Var. 1953 Var. 2005 Var. 2057 Var. 2109
0.1-1.6 Var. 1694 Var. 1746 Var. 1798 Var. 1850 Var. 1902 Var. 1954 Var. 2006 Var. 2058 Var. 2110
0.1-1.5 Var. 1695 Var. 1747 Var. 1799 Var. 1851 Var. 1903 Var. 1955 Var. 2007 Var. 2059 Var. 2111
0.1-1.4 Var. 1696 Var. 1748 Var. 1800 Var. 1852 Var. 1904 Var. 1956 Var. 2008 Var. 2060 Var. 2112
0.1-1.3 Var. 1697 Var. 1749 Var. 1801 Var. 1853 Var. 1905 Var. 1957 Var. 2009 Var. 2061 Var. 2113
0.1-1.2 Var. 1698 Var. 1750 Var. 1802 Var. 1854 Var. 1906 Var. 1958 Var. 2010 Var. 2062 Var. 2114
0.1-1.1 Var. 1699 Var. 1751 Var. 1803 Var. 1855 Var. 1907 Var. 1959 Var. 2011 Var. 2063 Var. 2115
0.1-1.0 Var. 1700 Var. 1752 Var. 1804 Var. 1856 Var. 1908 Var. 1960 Var. 2012 Var. 2064 Var. 2116
0.1-0.9 Var. 1701 Var. 1753 Var. 1805 Var. 1857 Var. 1909 Var. 1961 Var. 2013 Var. 2065 Var. 2117
0.1-0.8 Var. 1702 Var. 1754 Var. 1806 Var. 1858 Var. 1910 Var. 1962 Var. 2014 Var. 2066 Var. 2118
0.2-2.0 Var. 1703 Var. 1755 Var. 1807 Var. 1859 Var. 1911 Var. 1963 Var. 2015 Var. 2067 Var. 2119
0.2-1.5 Var. 1704 Var. 1756 Var. 1808 Var. 1860 Var. 1912 Var. 1964 Var. 2016 Var. 2068 Var. 2120
0.2-1.0 Var. 1705 Var. 1757 Var. 1809 Var. 1861 Var. 1913 Var. 1965 Var. 2017 Var. 2069 Var. 2121
0.2-0.9 Var. 1706 Var. 1758 Var. 1810 Var. 1862 Var. 1914 Var. 1966 Var. 2018 Var. 2070 Var. 2122
0.2-0.8 Var. 1707 Var. 1759 Var. 1811 Var. 1863 Var. 1915 Var. 1967 Var. 2019 Var. 2071 Var. 2123
0.3-1.0 Var. 1708 Var. 1760 Var. 1812 Var. 1864 Var. 1916 Var. 1968 Var. 2020 Var. 2072 Var. 2124
0.3-0.9 Var. 1709 Var. 1761 Var. 1813 Var. 1865 Var. 1917 Var. 1969 Var. 2021 Var. 2073 Var. 2125
0.3-0.8 Var. 1710 Var. 1762 Var. 1814 Var. 1866 Var. 1918 Var. 1970 Var. 2022 Var. 2074 Var. 2126
0.4-1.0 Var. 1711 Var. 1763 Var. 1815 Var. 1867 Var. 1919 Var. 1971 Var. 2023 Var. 2075 Var. 2127
0.4-0.9 Var. 1712 Var. 1764 Var. 1816 Var. 1868 Var. 1920 Var. 1972 Var. 2024 Var. 2076 Var. 2128
0.4-0.8 Var. 1713 Var. 1765 Var. 1817 Var. 1869 Var. 1921 Var. 1973 Var. 2025 Var. 2077 Var. 2129
0.5-1.0 Var. 1714 Var. 1766 Var. 1818 Var. 1870 Var. 1922 Var. 1974 Var. 2026 Var. 2078 Var. 2130
0.5-0.9 Var. 1715 Var. 1767 Var. 1819 Var. 1871 Var. 1923 Var. 1975 Var. 2027 Var. 2079 Var. 2131
0.5-0.8 Var. 1716 Var. 1768 Var. 1820 Var. 1872 Var. 1924 Var. 1976 Var. 2028 Var. 2080 Var. 2132
0.6-1.0 Var. 1717 Var. 1769 Var. 1821 Var. 1873 Var. 1925 Var. 1977 Var. 2029 Var. 2081 Var. 2133
0.6-0.9 Var. 1718 Var. 1770 Var. 1822 Var. 1874 Var. 1926 Var. 1978 Var. 2030 Var. 2082 Var. 2134
0.6-0.8 Var. 1719 Var. 1771 Var. 1823 Var. 1875 Var. 1927 Var. 1979 Var. 2031 Var. 2083 Var. 2135
0.7-1.0 Var. 1720 Var. 1772 Var. 1824 Var. 1876 Var. 1928 Var. 1980 Var. 2032 Var. 2084 Var. 2136
0.7-0.9 Var. 1721 Var. 1773 Var. 1825 Var. 1877 Var. 1929 Var. 1981 Var. 2033 Var. 2085 Var. 2137
0.1 Var. 1722 Var. 1774 Var. 1826 Var. 1878 Var. 1930 Var. 1982 Var. 2034 Var. 2086 Var. 2138
0.2 Var. 1723 Var. 1775 Var. 1827 Var. 1879 Var. 1931 Var. 1983 Var. 2035 Var. 2087 Var. 2139
0.3 Var. 1724 Var. 1776 Var. 1828 Var. 1880 Var. 1932 Var. 1984 Var. 2036 Var. 2088 Var. 2140
0.4 Var. 1725 Var. 1777 Var. 1829 Var. 1881 Var. 1933 Var. 1985 Var. 2037 Var. 2089 Var. 2141
0.5 Var. 1726 Var. 1778 Var. 1830 Var. 1882 Var. 1934 Var. 1986 Var. 2038 Var. 2090 Var. 2142
0.6 Var. 1727 Var. 1779 Var. 1831 Var. 1883 Var. 1935 Var. 1987 Var. 2039 Var. 2091 Var. 2143
0.7 Var. 1728 Var. 1780 Var. 1832 Var. 1884 Var. 1936 Var. 1988 Var. 2040 Var. 2092 Var. 2144
0.8 Var. 1729 Var. 1781 Var. 1833 Var. 1885 Var. 1937 Var. 1989 Var. 2041 Var. 2093 Var. 2145
0.9 Var. 1730 Var. 1782 Var. 1834 Var. 1886 Var. 1938 Var. 1990 Var. 2042 Var. 2094 Var. 2146
1 Var. 1731 Var. 1783 Var. 1835 Var. 1887 Var. 1939 Var. 1991 Var. 2043 Var. 2095 Var. 2147
1.1 Var. 1732 Var. 1784 Var. 1836 Var. 1888 Var. 1940 Var. 1992 Var. 2044 Var. 2096 Var. 2148
1.2 Var. 1733 Var. 1785 Var. 1837 Var. 1889 Var. 1941 Var. 1993 Var. 2045 Var. 2097 Var. 2149
1.3 Var. 1734 Var. 1786 Var. 1838 Var. 1890 Var. 1942 Var. 1994 Var. 2046 Var. 2098 Var. 2150
1.4 Var. 1735 Var. 1787 Var. 1839 Var. 1891 Var. 1943 Var. 1995 Var. 2047 Var. 2099 Var. 2151
1.5 Var. 1736 Var. 1788 Var. 1840 Var. 1892 Var. 1944 Var. 1996 Var. 2048 Var. 2100 Var. 2152
1.6 Var. 1737 Var. 1789 Var. 1841 Var. 1893 Var. 1945 Var. 1997 Var. 2049 Var. 2101 Var. 2153
1.7 Var. 1738 Var. 1790 Var. 1842 Var. 1894 Var. 1946 Var. 1998 Var. 2050 Var. 2102 Var. 2154
1.8 Var. 1739 Var. 1791 Var. 1843 Var. 1895 Var. 1947 Var. 1999 Var. 2051 Var. 2103 Var. 2155
1.9 Var. 1740 Var. 1792 Var. 1844 Var. 1896 Var. 1948 Var. 2000 Var. 2052 Var. 2104 Var. 2156
2 Var. 1741 Var. 1793 Var. 1845 Var. 1897 Var. 1949 Var. 2001 Var. 2053 Var. 2105 Var. 2157
세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태
pH
5.1 NMT 4.0 NMT 4.2 NMT 4.4 NMT 4.6 NMT 4.8 NMT 5.0 NMT 5.2 NMT 5.4
이온 강도(mS/㎝) 0.1-2.0 Var. 2158 Var. 2210 Var. 2262 Var. 2314 Var. 2366 Var. 2418 Var. 2470 Var. 2522 Var. 2574
0.1-1.9 Var. 2159 Var. 2211 Var. 2263 Var. 2315 Var. 2367 Var. 2419 Var. 2471 Var. 2523 Var. 2575
0.1-1.8 Var. 2160 Var. 2212 Var. 2264 Var. 2316 Var. 2368 Var. 2420 Var. 2472 Var. 2524 Var. 2576
0.1-1.7 Var. 2161 Var. 2213 Var. 2265 Var. 2317 Var. 2369 Var. 2421 Var. 2473 Var. 2525 Var. 2577
0.1-1.6 Var. 2162 Var. 2214 Var. 2266 Var. 2318 Var. 2370 Var. 2422 Var. 2474 Var. 2526 Var. 2578
0.1-1.5 Var. 2163 Var. 2215 Var. 2267 Var. 2319 Var. 2371 Var. 2423 Var. 2475 Var. 2527 Var. 2579
0.1-1.4 Var. 2164 Var. 2216 Var. 2268 Var. 2320 Var. 2372 Var. 2424 Var. 2476 Var. 2528 Var. 2580
0.1-1.3 Var. 2165 Var. 2217 Var. 2269 Var. 2321 Var. 2373 Var. 2425 Var. 2477 Var. 2529 Var. 2581
0.1-1.2 Var. 2166 Var. 2218 Var. 2270 Var. 2322 Var. 2374 Var. 2426 Var. 2478 Var. 2530 Var. 2582
0.1-1.1 Var. 2167 Var. 2219 Var. 2271 Var. 2323 Var. 2375 Var. 2427 Var. 2479 Var. 2531 Var. 2583
0.1-1.0 Var. 2168 Var. 2220 Var. 2272 Var. 2324 Var. 2376 Var. 2428 Var. 2480 Var. 2532 Var. 2584
0.1-0.9 Var. 2169 Var. 2221 Var. 2273 Var. 2325 Var. 2377 Var. 2429 Var. 2481 Var. 2533 Var. 2585
0.1-0.8 Var. 2170 Var. 2222 Var. 2274 Var. 2326 Var. 2378 Var. 2430 Var. 2482 Var. 2534 Var. 2586
0.2-2.0 Var. 2171 Var. 2223 Var. 2275 Var. 2327 Var. 2379 Var. 2431 Var. 2483 Var. 2535 Var. 2587
0.2-1.5 Var. 2172 Var. 2224 Var. 2276 Var. 2328 Var. 2380 Var. 2432 Var. 2484 Var. 2536 Var. 2588
0.2-1.0 Var. 2173 Var. 2225 Var. 2277 Var. 2329 Var. 2381 Var. 2433 Var. 2485 Var. 2537 Var. 2589
0.2-0.9 Var. 2174 Var. 2226 Var. 2278 Var. 2330 Var. 2382 Var. 2434 Var. 2486 Var. 2538 Var. 2590
0.2-0.8 Var. 2175 Var. 2227 Var. 2279 Var. 2331 Var. 2383 Var. 2435 Var. 2487 Var. 2539 Var. 2591
0.3-1.0 Var. 2176 Var. 2228 Var. 2280 Var. 2332 Var. 2384 Var. 2436 Var. 2488 Var. 2540 Var. 2592
0.3-0.9 Var. 2177 Var. 2229 Var. 2281 Var. 2333 Var. 2385 Var. 2437 Var. 2489 Var. 2541 Var. 2593
0.3-0.8 Var. 2178 Var. 2230 Var. 2282 Var. 2334 Var. 2386 Var. 2438 Var. 2490 Var. 2542 Var. 2594
0.4-1.0 Var. 2179 Var. 2231 Var. 2283 Var. 2335 Var. 2387 Var. 2439 Var. 2491 Var. 2543 Var. 2595
0.4-0.9 Var. 2180 Var. 2232 Var. 2284 Var. 2336 Var. 2388 Var. 2440 Var. 2492 Var. 2544 Var. 2596
0.4-0.8 Var. 2181 Var. 2233 Var. 2285 Var. 2337 Var. 2389 Var. 2441 Var. 2493 Var. 2545 Var. 2597
0.5-1.0 Var. 2182 Var. 2234 Var. 2286 Var. 2338 Var. 2390 Var. 2442 Var. 2494 Var. 2546 Var. 2598
0.5-0.9 Var. 2183 Var. 2235 Var. 2287 Var. 2339 Var. 2391 Var. 2443 Var. 2495 Var. 2547 Var. 2599
0.5-0.8 Var. 2184 Var. 2236 Var. 2288 Var. 2340 Var. 2392 Var. 2444 Var. 2496 Var. 2548 Var. 2600
0.6-1.0 Var. 2185 Var. 2237 Var. 2289 Var. 2341 Var. 2393 Var. 2445 Var. 2497 Var. 2549 Var. 2601
0.6-0.9 Var. 2186 Var. 2238 Var. 2290 Var. 2342 Var. 2394 Var. 2446 Var. 2498 Var. 2550 Var. 2602
0.6-0.8 Var. 2187 Var. 2239 Var. 2291 Var. 2343 Var. 2395 Var. 2447 Var. 2499 Var. 2551 Var. 2603
0.7-1.0 Var. 2188 Var. 2240 Var. 2292 Var. 2344 Var. 2396 Var. 2448 Var. 2500 Var. 2552 Var. 2604
0.7-0.9 Var. 2189 Var. 2241 Var. 2293 Var. 2345 Var. 2397 Var. 2449 Var. 2501 Var. 2553 Var. 2605
0.1 Var. 2190 Var. 2242 Var. 2294 Var. 2346 Var. 2398 Var. 2450 Var. 2502 Var. 2554 Var. 2606
0.2 Var. 2191 Var. 2243 Var. 2295 Var. 2347 Var. 2399 Var. 2451 Var. 2503 Var. 2555 Var. 2607
0.3 Var. 2192 Var. 2244 Var. 2296 Var. 2348 Var. 2400 Var. 2452 Var. 2504 Var. 2556 Var. 2608
0.4 Var. 2193 Var. 2245 Var. 2297 Var. 2349 Var. 2401 Var. 2453 Var. 2505 Var. 2557 Var. 2609
0.5 Var. 2194 Var. 2246 Var. 2298 Var. 2350 Var. 2402 Var. 2454 Var. 2506 Var. 2558 Var. 2610
0.6 Var. 2195 Var. 2247 Var. 2299 Var. 2351 Var. 2403 Var. 2455 Var. 2507 Var. 2559 Var. 2611
0.7 Var. 2196 Var. 2248 Var. 2300 Var. 2352 Var. 2404 Var. 2456 Var. 2508 Var. 2560 Var. 2612
0.8 Var. 2197 Var. 2249 Var. 2301 Var. 2353 Var. 2405 Var. 2457 Var. 2509 Var. 2561 Var. 2613
0.9 Var. 2198 Var. 2250 Var. 2302 Var. 2354 Var. 2406 Var. 2458 Var. 2510 Var. 2562 Var. 2614
1 Var. 2199 Var. 2251 Var. 2303 Var. 2355 Var. 2407 Var. 2459 Var. 2511 Var. 2563 Var. 2615
1.1 Var. 2200 Var. 2252 Var. 2304 Var. 2356 Var. 2408 Var. 2460 Var. 2512 Var. 2564 Var. 2616
1.2 Var. 2201 Var. 2253 Var. 2305 Var. 2357 Var. 2409 Var. 2461 Var. 2513 Var. 2565 Var. 2617
1.3 Var. 2202 Var. 2254 Var. 2306 Var. 2358 Var. 2410 Var. 2462 Var. 2514 Var. 2566 Var. 2618
1.4 Var. 2203 Var. 2255 Var. 2307 Var. 2359 Var. 2411 Var. 2463 Var. 2515 Var. 2567 Var. 2619
1.5 Var. 2204 Var. 2256 Var. 2308 Var. 2360 Var. 2412 Var. 2464 Var. 2516 Var. 2568 Var. 2620
1.6 Var. 2205 Var. 2257 Var. 2309 Var. 2361 Var. 2413 Var. 2465 Var. 2517 Var. 2569 Var. 2621
1.7 Var. 2206 Var. 2258 Var. 2310 Var. 2362 Var. 2414 Var. 2466 Var. 2518 Var. 2570 Var. 2622
1.8 Var. 2207 Var. 2259 Var. 2311 Var. 2363 Var. 2415 Var. 2467 Var. 2519 Var. 2571 Var. 2623
1.9 Var. 2208 Var. 2260 Var. 2312 Var. 2364 Var. 2416 Var. 2468 Var. 2520 Var. 2572 Var. 2624
2 Var. 2209 Var. 2261 Var. 2313 Var. 2365 Var. 2417 Var. 2469 Var. 2521 Var. 2573 Var. 2625
NMT = 이하
세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 SiO2와 결합시키는데 유용한 용액 조건의 예시적인 실시형태
pH
NMT 5.6 NMT 5.8 NMT 6.0 NMT 6.2 NMT 6.4 NMT 6.6 NMT 6.8 NMT 7.0
이온 강도(mS/㎝) 0.1-2.0 Var. 2626 Var. 2678 Var. 2730 Var. 2782 Var. 2834 Var. 2886 Var. 2938 Var. 2990
0.1-1.9 Var. 2627 Var. 2679 Var. 2731 Var. 2783 Var. 2835 Var. 2887 Var. 2939 Var. 2991
0.1-1.8 Var. 2628 Var. 2680 Var. 2732 Var. 2784 Var. 2836 Var. 2888 Var. 2940 Var. 2992
0.1-1.7 Var. 2629 Var. 2681 Var. 2733 Var. 2785 Var. 2837 Var. 2889 Var. 2941 Var. 2993
0.1-1.6 Var. 2630 Var. 2682 Var. 2734 Var. 2786 Var. 2838 Var. 2890 Var. 2942 Var. 2994
0.1-1.5 Var. 2631 Var. 2683 Var. 2735 Var. 2787 Var. 2839 Var. 2891 Var. 2943 Var. 2995
0.1-1.4 Var. 2632 Var. 2684 Var. 2736 Var. 2788 Var. 2840 Var. 2892 Var. 2944 Var. 2996
0.1-1.3 Var. 2633 Var. 2685 Var. 2737 Var. 2789 Var. 2841 Var. 2893 Var. 2945 Var. 2997
0.1-1.2 Var. 2634 Var. 2686 Var. 2738 Var. 2790 Var. 2842 Var. 2894 Var. 2946 Var. 2998
0.1-1.1 Var. 2635 Var. 2687 Var. 2739 Var. 2791 Var. 2843 Var. 2895 Var. 2947 Var. 2999
0.1-1.0 Var. 2636 Var. 2688 Var. 2740 Var. 2792 Var. 2844 Var. 2896 Var. 2948 Var. 3000
0.1-0.9 Var. 2637 Var. 2689 Var. 2741 Var. 2793 Var. 2845 Var. 2897 Var. 2949 Var. 3001
0.1-0.8 Var. 2638 Var. 2690 Var. 2742 Var. 2794 Var. 2846 Var. 2898 Var. 2950 Var. 3002
0.2-2.0 Var. 2639 Var. 2691 Var. 2743 Var. 2795 Var. 2847 Var. 2899 Var. 2951 Var. 3003
0.2-1.5 Var. 2640 Var. 2692 Var. 2744 Var. 2796 Var. 2848 Var. 2900 Var. 2952 Var. 3004
0.2-1.0 Var. 2641 Var. 2693 Var. 2745 Var. 2797 Var. 2849 Var. 2901 Var. 2953 Var. 3005
0.2-0.9 Var. 2642 Var. 2694 Var. 2746 Var. 2798 Var. 2850 Var. 2902 Var. 2954 Var. 3006
0.2-0.8 Var. 2643 Var. 2695 Var. 2747 Var. 2799 Var. 2851 Var. 2903 Var. 2955 Var. 3007
0.3-1.0 Var. 2644 Var. 2696 Var. 2748 Var. 2800 Var. 2852 Var. 2904 Var. 2956 Var. 3008
0.3-0.9 Var. 2645 Var. 2697 Var. 2749 Var. 2801 Var. 2853 Var. 2905 Var. 2957 Var. 3009
0.3-0.8 Var. 2646 Var. 2698 Var. 2750 Var. 2802 Var. 2854 Var. 2906 Var. 2958 Var. 3010
0.4-1.0 Var. 2647 Var. 2699 Var. 2751 Var. 2803 Var. 2855 Var. 2907 Var. 2959 Var. 3011
0.4-0.9 Var. 2648 Var. 2700 Var. 2752 Var. 2804 Var. 2856 Var. 2908 Var. 2960 Var. 3012
0.4-0.8 Var. 2649 Var. 2701 Var. 2753 Var. 2805 Var. 2857 Var. 2909 Var. 2961 Var. 3013
0.5-1.0 Var. 2650 Var. 2702 Var. 2754 Var. 2806 Var. 2858 Var. 2910 Var. 2962 Var. 3014
0.5-0.9 Var. 2651 Var. 2703 Var. 2755 Var. 2807 Var. 2859 Var. 2911 Var. 2963 Var. 3015
0.5-0.8 Var. 2652 Var. 2704 Var. 2756 Var. 2808 Var. 2860 Var. 2912 Var. 2964 Var. 3016
0.6-1.0 Var. 2653 Var. 2705 Var. 2757 Var. 2809 Var. 2861 Var. 2913 Var. 2965 Var. 3017
0.6-0.9 Var. 2654 Var. 2706 Var. 2758 Var. 2810 Var. 2862 Var. 2914 Var. 2966 Var. 3018
0.6-0.8 Var. 2655 Var. 2707 Var. 2759 Var. 2811 Var. 2863 Var. 2915 Var. 2967 Var. 3019
0.7-1.0 Var. 2656 Var. 2708 Var. 2760 Var. 2812 Var. 2864 Var. 2916 Var. 2968 Var. 3020
0.7-0.9 Var. 2657 Var. 2709 Var. 2761 Var. 2813 Var. 2865 Var. 2917 Var. 2969 Var. 3021
0.1 Var. 2658 Var. 2710 Var. 2762 Var. 2814 Var. 2866 Var. 2918 Var. 2970 Var. 3022
0.2 Var. 2659 Var. 2711 Var. 2763 Var. 2815 Var. 2867 Var. 2919 Var. 2971 Var. 3023
0.3 Var. 2660 Var. 2712 Var. 2764 Var. 2816 Var. 2868 Var. 2920 Var. 2972 Var. 3024
0.4 Var. 2661 Var. 2713 Var. 2765 Var. 2817 Var. 2869 Var. 2921 Var. 2973 Var. 3025
0.5 Var. 2662 Var. 2714 Var. 2766 Var. 2818 Var. 2870 Var. 2922 Var. 2974 Var. 3026
0.6 Var. 2663 Var. 2715 Var. 2767 Var. 2819 Var. 2871 Var. 2923 Var. 2975 Var. 3027
0.7 Var. 2664 Var. 2716 Var. 2768 Var. 2820 Var. 2872 Var. 2924 Var. 2976 Var. 3028
0.8 Var. 2665 Var. 2717 Var. 2769 Var. 2821 Var. 2873 Var. 2925 Var. 2977 Var. 3029
0.9 Var. 2666 Var. 2718 Var. 2770 Var. 2822 Var. 2874 Var. 2926 Var. 2978 Var. 3030
1 Var. 2667 Var. 2719 Var. 2771 Var. 2823 Var. 2875 Var. 2927 Var. 2979 Var. 3031
1.1 Var. 2668 Var. 2720 Var. 2772 Var. 2824 Var. 2876 Var. 2928 Var. 2980 Var. 3032
1.2 Var. 2669 Var. 2721 Var. 2773 Var. 2825 Var. 2877 Var. 2929 Var. 2981 Var. 3033
1.3 Var. 2670 Var. 2722 Var. 2774 Var. 2826 Var. 2878 Var. 2930 Var. 2982 Var. 3034
1.4 Var. 2671 Var. 2723 Var. 2775 Var. 2827 Var. 2879 Var. 2931 Var. 2983 Var. 3035
1.5 Var. 2672 Var. 2724 Var. 2776 Var. 2828 Var. 2880 Var. 2932 Var. 2984 Var. 3036
1.6 Var. 2673 Var. 2725 Var. 2777 Var. 2829 Var. 2881 Var. 2933 Var. 2985 Var. 3037
1.7 Var. 2674 Var. 2726 Var. 2778 Var. 2830 Var. 2882 Var. 2934 Var. 2986 Var. 3038
1.8 Var. 2675 Var. 2727 Var. 2779 Var. 2831 Var. 2883 Var. 2935 Var. 2987 Var. 3039
1.9 Var. 2676 Var. 2728 Var. 2780 Var. 2832 Var. 2884 Var. 2936 Var. 2988 Var. 3040
2 Var. 2677 Var. 2729 Var. 2781 Var. 2833 Var. 2885 Var. 2937 Var. 2989 Var. 3041
NMT = 이하
A. 변형된 알코올 침전/이온 교환 크로마토그래피 분별 방법
하나의 양태에서, 본 발명은 IVIG 요법에서의 사용에 적당한 IgG 조성물의 개선된 제조 방법을 제공한다. 일반적으로 이러한 방법은, 상업적인 IVIG 제품의 생산에 이용되는 현행 방법보다 순도가 더 높지 않다면 수율이 더 높고 동등한 유사한 IgG 제조물을 제공한다.
하나의 구체적인 양태에서, 본 발명은 혈장으로부터 농축된 IgG의 조성물, 예컨대 10% IVIG를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 적어도 하나의 알코올 침전 단계 및 적어도 하나의 이온 교환 크로마토그래피 단계를 실행하는 것을 포함한다. 특히, 개선된 상류 공정에서 여러 가지 단계는 이전 공정, 예컨대 저온에서 25% 에탄올의 사용, 분무에 의한 에탄올 첨가, 분무에 의한 pH 조정, 및 미분된 실리카 입자의 사용과 상이하다.
임의의 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 제1 침전 단계에서, 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 6% 내지 약 10%의 알코올을 이용하여 냉동 불량 혈장 분획을 침전시켜 IgG가 풍부화된 상청액을 수득하는 단계, (b) 약 20% 내지 약 30%의 알코올을 이용하여 저온에서 그리고 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 상청액으로부터 IgG를 침전시켜 제1 침전물을 형성하는 단계, (c) 단계 (b)에서 형성된 제1 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계, (d) 단계 (c)에서 형성된 현탁액을 세제로 처리하는 단계, (e) 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 20% 내지 약 30% 알코올을 이용하여 현탁액으로부터 IgG를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계, (f) 단계 (e)에서 형성된 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계, (g) 단계 (f)에서 형성된 현탁액을 용매 및/또는 세제로 처치하는 단계, 및 (h) 적어도 하나의 이온 교환 크로마토그래피 분별을 실행하여 농축된 IgG의 조성물을 제조하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 단계 (c)에서 형성된 현탁액을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처치하는 단계 및 단계 (d) 전에 용액을 여과하는 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시형태에서, 혈장으로부터 농축된 IgG 조성물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 냉동 불량 혈장 분획의 pH를 약 7.0으로 조정하는 단계, (b) 약 -5℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 단계 (a)의 냉동 불량 혈장 분획의 에탄올 농도를 25%(v/v) 또는 약 25%(v/v)로 조정하여 혼합물을 형성하는 단계(여기에서 에탄올 농도는 분무에 의해 조정될 수 있음), (c) 단계 (b)의 혼합물로부터 액체와 침전물을 분리하는 단계, (d) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액을 이용하여 단계 (c)의 침전물을 재현탁하여(여기에서 상기 완충액의 pH는 완충액 1000L당 빙초산 약 400 내지 약 700㎖를 이용하여 조정됨) 현탁액을 형성하는 단계, (e) 적어도 약 30분 동안 미분된 이산화규소단계(SiO2)를 (d)로부터의 현탁액과 혼합하는 단계, (f) 필터 프레스를 이용하여 상기 현탁액을 여과하여 여과액을 형성하는 단계, (g) 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액(완충액의 pH는 완충액 1000L당 빙초산 약 150㎖를 이용하여 조정됨)의 적어도 3 필터 프레스 불용 체적(dead volume)으로 필터 프레스를 세척하여 세척 용액을 형성하는 단계, (h) 단계 (f)의 여과액을 단계 (g)의 세척 용액과 합하여 용액을 형성하고, 상기 용액을 세제로 처리하는 단계, (i) 단계 (h)의 용액의 pH를 약 7.0으로 조정하고 25%(v/v) 또는 약 25%(v/v)의 최종 농도로 에탄올을 첨가하여 침전물을 형성하는 단계(여기에서 에탄올 농도 및/또는 pH는 분무에 의해 조정될 수 있음),(j) 단계 (i)의 혼합물로부터 액체와 침전물을 분리하는 단계, (k) 용매 및 세제를 포함하는 수용액 중에 침전물을 용해시키고 적어도 60분 동안 상기 용액을 유지하는 단계, (l) 단계 (k) 후 용액을 양이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 통과시키고 용리액 중으로 컬럼에 흡착된 단백질을 용리시키는 단계, (m) 단계 (l)로부터의 용리액을 음이온 교환 크로마토그래피 컬럼을 통과시켜 유출액(즉, 유체 흐름)을 생성하는 단계, (n) 단계 (m)으로부터의 유출액을 나노필터를 통과시켜 나노여과액을 생성하는 단계, (o) 단계 (n)으로부터의 나노여과액 한외여과막을 통과시켜 한외여과막을 생성하는 단계 및 (p) 단계 (o)로부터의 한외여과액을 정용여과 완충액에 대하여 정용여과하여 단백질 농도가 약 8%(w/v) 내지 약 22%(w/v)인 정용여과액을 생성하여 농축된 IgG의 조성물을 수득하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 단계 (b)의 온도는 -7℃ 또는 약 -7℃이다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 단계 (d)의 현탁액 완충액은 약 600㎖의 빙초산을 이용하여 조정된다.
임의의 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 약 8% 내지 약 12%, 예를 들어 약 8%, 또는 약 9%, 10%, 11%, 또는 12%일 것이다. 바람직한 실시형태에서, 정용여과약은 단백질 농도가 10% 또는 약 10%일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 11% 또는 약 11%일 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 12% 또는 약 12%일 것이다. 다른 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 약 13% 내지 약 17%, 예를 들어 약 13%, 또는 약 14%, 15%, 16%, 또는 17%일 것이다. 또 다른 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 약 18% 내지 약 22%, 예를 들어 약 18%, 또는 약 19%, 20%, 21%, 또는 22%일 것이다. 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 20% 또는 약 20%일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 21% 또는 약 21%일 것이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 정용여과액은 단백질 농도가 22% 또는 약 22%일 것이다.
본 발명의 임의의 실시형태에서, 본원에 제공된 방법은 상기 기술된 분별 공정 중 둘 이상에서 개선을 포함할 수 있다. 예를 들어, 실시형태는 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계, 및/또는 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 알코올의 첨가이다. 다른 실시형태에서, 제1 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 pH 조절제의 첨가이다. 또한 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH의 조정이다. 관련된 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 동안 pH의 유지이다. 다른 관련된 실시형태에서, 제1 침전 단계에서 이루어지는 개선은 용액의 pH의 계속적인 조정에 의한 침전 항온처리 동안 pH의 유지이다. 임의의 실시형태에서, 제1 침전 단계는 이들 개선 중 하나 초과를 이행함으로써 개선될 수 있다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 제1 침전 단계 - 변형된 분별 I에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소되고/되거나 감소된 분획의 IgG는 침전 단계 동안 비가역적으로 변성된다.
하나의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 알코올의 첨가이다. 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 분무에 의한 pH 조절제의 첨가이다. 또한 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH의 조정이다. 관련된 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 알코올의 첨가 동안 pH의 유지이다. 다른 관련된 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 이루어지는 개선은 용액의 pH의 계속적인 조정에 의한 침전 항온처리 동안 pH의 유지이다. 다른 양태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계는 알코올의 농도를 25% 또는 약 25%로 증가시킴으로써 개선된다. 또 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계는 항온처리 온도를 약 -7℃ 내지 -9℃로 낮춤으로써 개선된다. 임의의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 침전 단계는 이들 개선 중 하나 초과를 이행함으로써 개선될 수 있다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 제2 침전 단계 - 변형된 분별 II+III에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 감소된 양의 IgG는 변형된 분획 II+III 침전 단계의 상청액 분획에서 감소되고/되거나 감소된 분획의 IgG는 침전 단계 동안 비가역적으로 변성된다.
하나의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 이루어지는 개선은 용해 완충액의 빙초산 함량을 약 0.06%로 증가시킴으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 이루어지는 개선은 용액의 pH의 계속적인 조정에 의한 용해 항온처리 시간 동안용액의 pH를 유지함으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 이루어지는 개선은 여과 전에 미분된 이산화규소(SiO2)를 분획 II+III 현탁액과 혼합함으로써 달성된다. 임의의 실시형태에서, 변형된 분획 II+III 용해 단계는 이들 개선 중 하나 초과를 이행함으로써 개선될 수 있다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 변형된 분획 II+III 용해 단계 - 변형된 분획 II+III 침전물의 추출에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 증가된 양의 IgG는 분획 II+III 현탁액에서 회수되고/되거나 불순물의 양은 분획 II+III 현탁액에서 감소된다.
변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 이루어지는 예시적인 개선은 1000ℓ 당 빙초산 150㎖ 또는 약 150㎖를 함유하는 용해 완충액의 적어도 약 3.6 불용 체적을 이용하여 필터를 후세척함으로써 실현된다. 이 단계에서 실현될 수 있는 추가의 개선은 하기에 논의하는 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계 - 변형된 분획 II+III 현탁액의 전처리 및 여과에서 제공되는 섹션으로부터 명백할 것이다. 상기 기술된 개선 중 하나 이상을 이행함으로써 감소된 양의 IgG는 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계 동안 감소된다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 침전 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 용해 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 용해 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 변형된 분획 II+III 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계, 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
다른 실시형태에서, 상기 방법은 제1 침전 단계, 변형된 분획 II+III 침전 단계, 변형된 분획 II+III 용해 단계, 및 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계에서 개선을 포함할 수 있다.
임의의 실시형태에서, 본원에 제공된 IgG 정제 방법에서 하나의 공정 개선은, 다르게는 유동성 첨가에 의해 혈장 분획 내로 도입될 하나 이상의 용액의 분무 첨가를 포함한다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 분무에 의한 하나 이상의 단백질 종의 침전의 목적을 위하여 혈장 분획 내로 알코올(예컨대, 에탄올)의 첨가를 포함한다. 다른 실시형태에서, 분무에 의해 혈장 분획에 첨가될 수 있는 용액은 이에 제한되는 것은 아니지만 pH 조절 용액, 용매 용액, 세제 용액, 희석 완충액, 전도도 조절 용액 등을 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 하나 이상의 알코올 침전 단계는 분무에 의한 혈장 분획에의 알코올의 첨가에 의하여 실행된다. 제2 바람직한 실시형태에서, 하나 이상의 pH 조정 단계는 분무에 의한 혈장 분획에의 pH 조절 용액의 첨가에 의하여 실행된다.
임의의 실시형태에서, 임의의 다른 공정 개선과 조합될 수 있는 다른 공정 개선은 침전제(예컨대, 알코올 또는 폴리에틸렌 글라이콜)의 첨가 후 및/또는 이와 함께 침전될 혈장 분획의 pH의 조정을 포함한다. 일부 실시형태에서, 공정 개선은 능동적으로 침전될 혈장 분획의 pH가 전체 침전 항온 처리 또는 pH의 계속적인 모니터링 및 조정에 의한 유지 단계에 걸쳐서 유지된다. 바람직한 실시형태에서, pH의 조정은 pH 조절 용액의 분무 첨가에 의하여 실행된다.
다른 실시형태에서, 임의의 다른 공정 개선과 조합될 수 있는 다른 공정 개선은 불순물을 제거하기 위하여 미분된 실리카 처리 단계를 포함한다.
1. 냉동 불량 혈장의 침전
농축된 IgG 조성물의 제조에 사용된 출발 물질은 일반적으로 회수된 혈장(즉, 생체외에서 전혈로부터 분리한 혈장) 또는 공급 혈장(즉, 혈장분리교환법을 통해 수집한 혈장)으로 이루어진다. 정제 공정은 전형적으로 이미 안전성 및 품질 고려 사항에 대하여 분석한, 이미 동결된 수집한 혈장을 해동하는 것으로 시작한다. 해동은 전형적으로 6℃ 이하의 온도에서 수행된다. 저온에서 동결한 혈장의 완전한 해동 후에, 원심분리를 저온(예컨대, 6℃ 이하)에서 실행하여 액체 상청액으로부터 고체 동결침전물을 분리한다. 대안적으로, 분리 단계는 원심분리보다 여과에 의해 실행될 수 있다. 그 다음 액체 상청액(새로이 해동된 혈장으로부터 원심분리에 의해 저온 불용성 단백질이 제거된 후 "냉동 불량 혈장"으로도 불림)은 다음 단계에서 가공된다. 인자 8 억제제 우회 활성(FEIBA), 인자 IX-복합체, 인자 VII-농축물, 또는 항트롬빈 III-복합체의 분리를 위하여 다양한 추가 단계가 이러한 연결점에서 취해질 수 있다.
2. 제1 침전 사건 - 변형된 분별 I
이 단계에서, 냉동 불량 혈장은 전형적으로 약 0 ± 1℃로 냉각되고 pH는 약 7.0 내지 약 7.5, 바람직하게는 약 7.1 내지 약 7.3, 가장 바람직하게는 약 7.2이다. 하나의 실시형태에서, 냉동 불량 혈장의 pH는 7.2 또는 약 7.2의 pH로 조정된다. 그 다음 8% v/v에서 또는 약 8% v/v의 에탄올의 목표 농도로 혈장을 교반하면서 예비 냉각한 에탄올을 첨가한다. 동시에 온도는 약 -4 내지 약 0℃로 추가로 낮춘다. 바람직한 실시형태에서, 온도는 -2℃에서 또는 약 -2℃로 낮추어 오염 물질, 예를 들어 α2-마크로글로불린, β1A- 및 β1C-글로불린, 피브리노겐, 및 인자 VIII를 침전시킨다. 전형적으로, 더 짧거나 더 긴 유지 시간이 또한 이용될 수 있지만, 침전 사건은 적어도 약 1시간의 유지 시간을 포함할 것이다. 그 뒤에, 상청액(상청액 I)(이상적으로 냉동 불량 혈장에 존재하는 IgG 함량의 전부를 함유함)은 그 후에 원심분리, 여과, 또는 다른 적당한 방법에 의해 수집된다.
냉동 불량 혈장에 대한 제1 분별 단계로서 이용되는 통상적인 방법과 비교하여(문헌[Cohn et al ., 상기 참조]; [Oncley et al ., 상기 참조]), 여러 가지 실시형태에서 본 발명은 상청액 I 분획에서 IgG 수율의 개선을 가져오는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 분무에 의해 알코올을 첨가함으로써 달성된다. 다른 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 분무에 의해 pH 조절제를 첨가함으로써 달성된다. 또 다른 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH를 조정함으로써 달성된다. 관련된 실시형태에서, IgG 수율의 개선은 알코올의 첨가 동안 용액의 pH를 조정함으로써 달성된다.
하나의 구체적인 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 콘 방법 6 프로토콜의 제1 침전 단계에서 감소되는 IgG의 양과 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소된다.
임의의 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH를 약 7.0 내지 약 7.5로 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH는 약 7.1 내지 약 7.3으로 조정된다. 또 다른 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH는 약 7.0 또는 약 7.1, 7.2, 7,3, 7.4, 또는 7.5로 조정된다. 특정 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 용액의 pH는 약 7.2로 조정된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, 용액의 pH가 침전용 알코올의 첨가 후가 아닌 첨가 전에 조정되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, pH를 조정하는데 사용되는 알코올 및/또는 용액이 유동성 첨가에 의해 도입되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제1 침전 단계의 침전물 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
또 다른 임의의 실시형태에서, 개선은 용액의 pH를 약 7.0 내지 약 7.5로 조정함으로써 실현된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 약 7.1 내지 약 7.3으로 조정된다. 다른 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 그리고 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써, 용액의 pH는 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5 또는 약 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 또는 7.5로 조정된다. 특정 실시형태에서, 침전용 알코올의 첨가 후 그리고 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써, 용액의 pH는 7.2 또는 약 7.2로 조정된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
3. 제2 침전 사건 - 변형된 분별 II + III
분별의 IgG 함량 및 순도를 추가로 풍부화하기 위하여, 상청액 I은 제2 침전 단계에 처해지는데, 이는 변형된 콘-온클레이 분획 II+III 분별이다. 일반적으로, 용액의 pH는 약 6.6 내지 약 6.8의 pH로 조정된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 6.7 또는 약 6.7로 조정된다. 그 후에 분획에서 IgG를 침전시키기 위하여 약 20% 내지 약 25%(v/v)의 최종 농도로 알코올, 바람직하게 에탄올을 교반하면서 용액에 첨가한다. 바람직한 실시형태에서, 분획에서 IgG를 침전시키기 위하여 25%(v/v) 또는 약 25%(v/v)의 최종 농도로 알코올을 첨가한다. 일반적으로 오염 물질, 예를 들어 α1-리포단백질, α1-항트립신, Gc-글로불린, α1X-당단백질, 합토글로불린, 세롤로플라스민, 트랜스페린, 헤모펙신, 크리스마스 인자의 분획, 티록신 결합 글로불린, 콜린에스테라아제, 하이퍼텐시노겐, 및 알부민은 이러한 조건에 의해 침전되지 않을 것이다.
알코올 첨가 전 또는 첨가와 함께, 용액은 약 -7℃ 내지 약 -9℃로 추가로 냉각된다. 바람직한 실시형태에서, 용액은 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도로 냉각된다. 알코올 첨가의 완료 후, 용액의 pH는 약 6.8 내지 약 7.0으로 즉시 조정된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 6.9 또는 약 6.9로 조정된다. 전형적으로, 더 짧거나 더 긴 유지 시간이 또한 이용될 수 있지만, 침전 사건은 적어도 약 10시간의 유지 시간을 포함할 것이다. 그 뒤에, 침전물(변형된 분획 II+III)(이상적으로 냉동 불량 혈장에 존재하는 IgG 함량의 적어도 약 85%, 바람직하게는 적어도 약 90%, 보다 바람직하게는 적어도 약 95%를 함유함)은 원심분리, 여과, 또는 다른 적당한 방법에 의해 상청액으로부터 분리되고 수집된다. 냉동 불량 혈장에 대한 제2 분별 단계로서 이용되는 통상적인 방법과 비교하여(문헌[Cohn et al ., 상기 참조]; [Oncley et al ., 상기 참조]), 여러 가지 실시형태에서 본 발명은 변형된 분획 II+III 침전물에서 IgG 수율의 개선을 가져오는 방법을 제공한다. 관련된 실시형태에서, 본 발명은 변형된 II+III 상청액에서 IgG의 손실 감소를 가져오는 방법을 제공한다.
냉동 불량 혈장에 대한 제2 분별 단계로서 이용되는 통상적인 방법과 비교하여(문헌[Cohn et al ., 상기 참조]; [Oncley et al ., 상기 참조]), 여러 가지 실시형태에서 본 발명은 변형된 분획 II+III 침전물에서 IgG 수율의 개선을 가져오는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 개선은 분무에 의한 알코올의 첨가에 의해 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 분무에 의한 pH 조절제의 첨가에 의해 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 알코올의 첨가 후 용액의 pH를 조정함으로써 실현된다. 관련된 실시형태에서, 개선은 알코올의 첨가 동안 용액의 pH를 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 알코올(예컨대, 에탄올)의 농도를 약 25%(v/v)로 증가시킴으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 침전 단계의 온도를 약 -7℃ 내지 -9℃로 낮춤으로써 실현된다. 바람직한 실시형태에서, 개선은 알코올(예컨대, 에탄올)의 농도를 약 25%(v/v)로 증가시키고 온도를 약 -7℃ 내지 -9℃로 낮춤으로써 실현된다. 비교하면, 침전물에서 오염 물질의 수준을 감소시키기 위하여, Cohn et al . 및 Oncley et al . 모두 -5℃에서 침전을 실행하고 Oncley et al .은 20% 알코올을 사용한다. 유리하게, 본원에서 제공되는 방법은 최종 생성물에서 높은 수준의 오염 물질이 없는 최대 IgG 수율을 가능하게 한다.
부분적으로 단백질 침전으로 인하여 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 전에 약 6.9의 pH로 조정되고, 용액의 pH는 6.9로부터 7.4 내지 약 7.7까지로 변함을 발견하였다(도 8 참조). 용액의 pH가 6.9로부터 변하므로, IgG의 침전은 덜 유리하게 되며, 특정 오염 물질의 침전은 더 유리하게 된다. 유리하게도, 본 발명자들은 침전용 알코올의 첨가 후에 용액의 pH를 조정함으로써 IgG의 보다 높은 백분율이 분획 II+III 침전물에서 회수됨을 발견하였다.
따라서, 하나의 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 변형된 분획 II+III 침전 단계의 상청액 분획에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 다시 말해서, 증가된 백분율의 출발 IgG가 분획 II+III 침전물에 존재한다. 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1로 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 침전 항온처리 기간 동안 계속 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1로 유지함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.8 내지 약 7.0으로, 또는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 또는 7.1의 pH로 조정된다. 특정 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.9로 조정된다. 임의의 실시형태에서, 용액의 pH는 침전 항온처리 기간 동안 약 6.8 내지 약 7.0, 또는 침전 항온처리 기간 동안 계속 약 6.9의 pH로 유지된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, 용액의 pH가 침전용 알코올의 첨가 후가 아닌 첨가 전에 조정되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 또는 용액의 pH가 전체 침전 항온처리 기간 동안 유지되지 않는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제2 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, pH를 조정하는데 사용되는 알코올 및/또는 용액이 유동성 첨가에 의해 도입되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제2 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 약 -7℃ 내지 약 -9℃의 온도에서 침전 단계를 실행함으로써 실현된다. 하나의 실시형태에서, 침전 단계는 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 실행된다. 다른 실시형태에서, -8℃ 또는 약 -8℃의 온도에서 실행된다. 다른 실시형태에서, -9℃ 또는 약 -9℃의 온도에서 실행된다. 임의의 실시형태에서, 침전 단계의 알코올 농도는 약 23% 내지 약 27%이다. 바람직한 실시형태에서, 알코올 농도는 약 24% 내지 약 26%이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 알코올 농도는 25% 또는 약 25%이다. 다른 실시형태에서, 알코올 농도는 23%, 24%, 25%, 26% 또는 27%, 또는 약 23%, 24%, 25%, 26% 또는 27%일 수 있다. 특정 실시형태에서, 제2 침전 단계는 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 25% 또는 약 25%의 알코올 농도를 이용하여 실행된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
상기 문헌[Oncley et al ., 상기 참조]에서 사용되는 바와 같이 제2 침전의 알코올 농도를 20%에서 25%로 증가시키고 콘 및 온클레이 방법에서 사용되는 바와 같이 항온처리 온도를 -5℃에서 -7℃ 또는 약 -7℃로 낮추는 것의 효과는 변형된 분획 II+III 침전물의 IgG 함량을 5% 내지 6% 증가시킨다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1로, 바람직하게는 6.9 또는 약 6.9로 조정하고, 침전 항온처리 기간 동안 pH를 계속 조정함으로써 용액의 pH를 약 6.7 내지 약 7.1의 pH로, 바람직하게는 6.9 또는 약 6.9로 유지하며, 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 다른 특정 실시형태에서, 공정 개선은 약 약 -7℃ 내지 약 -9℃, 바람직하게는 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 침전 단계를 실행하고 약 23% 내지 약 27%, 바람직하게는 25% 또는 약 25%의 알코올 농도를 이용하여 IgG를 침전시킴으로써 실현된다. 또 다른 특정 실시형태에서, 공정 개선은 상기 제공된 변형된 분획 II+III 개선의 전부를 포함함으로써 실현된다. 바람직한 실시형태에서, 공정 개선은 분무에 의해 첨가되는 25% 또는 약 25% 에탄올을 이용하여 -7℃ 또는 약 -7℃의 온도에서 IgG를 침전시킨 다음, 침전용 알코올의 첨가 후에 6.9 또는 약 6.9로 용액의 pH를 조정함으로써 실현된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 전체 침전 항온처리 또는 유지 시간 동안 6.9 또는 약 6.9에서 유지된다.
4. 변형된 분획 II + III 침전물의 추출
변형된 분획 II+III 침전물의 IgG 내용물을 가용화하기 위하여, 차가운 추출 완충액을 침전물 1부 대 추출 완충액 15부의 전형적인 비율로 분별 II+III 침전물을 재현탁하는데 사용한다. 기타 다른 적당한 재현탁액 비율은 예를 들어 약 1:8 내지 약 1:30, 또는 약 1:10 내지 약 1:20, 또는 약 1:12 내지 약 1:18, 또는 약 1:13 내지 약 1:17, 또는 약 1:14 내지 약 1:16로 사용할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 재현탁액 비율은 약 1:8, 1:9, 1:10, 1:11, 1:12, 1:13, 1:14, 1:15, 1:16, 1:17, 1:18, 1:19, 1:20, 1:21, 1:22, 1:23, 1:24, 1:25, 1:26, 1:27, 1:28, 1:29, 1:30 또는 그보다 높을 수 있다.
변형된 II+III 침전물의 추출에 적당한 용액은 일반적으로 pH가 약 4.0 내지 약 5.5일 것이다. 임의의 실시형태에서, 용액은 pH가 약 4.5 내지 약 5.0일 것이고, 다른 실시형태에서, 추출 용액은 pH가 약 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 또는 5.5일 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추출 완충액의 pH는 4.5 또는 약 4.5일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 추출 완충액의 pH는 4.7 또는 약 4.7일 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 추출 완충액의 pH는 4.7 또는 약 4.9일 것이다. 일반적으로, 이러한 pH 요건은, 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 1염기 포스페이트, 2염기 포스페이트, 이의 혼합물 등으로부터선택된 완충제를 사용하여 충족시킬 수있다. 적당한 완충액 농도는 전형적으로 완충제 약 5 내지 약 100mM, 또는 약 10 내지 약 50mM, 또는 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100mM의 범위이다.
추출 완충액은 바람직하게 전도도가 약 0.5mS·cm-1 내지 약 2.0mS·cm-1일 것이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 추출 완충액의 전도도는 약 0.5mS·cm-1, 또는 약 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 또는 약 2.0mS·cm-1일 것이다. 당업자는 적절한 전도도를 가지는 추출 완충액을 생성하는 방법을 알 것이다.
하나의 특정 실시형태에서, 예시적인 추출 완충액은 4.5 ± 0.2 또는 4.5 ± 0.2의 pH 그리고 0.7 내지 0.9mS/㎝ 또는 약 0.7 내지 0.9mS/㎝의 전도도에서 5mM 또는 약 5mM 1염기 소듐 포스페이트 및 5Mm 또는 약 5mM 아세테이트를 함유할 수 있다.
일반적으로, 추출은 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행된다. 임의의 실시형태에서, 추출은 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 또는 10℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 추출은 약 2℃ 내지 약 10℃에서 실행된다. 전형적으로, 추출 공정은, 현탁액을 계속 교반하면서 약 60 내지 약 300분 동안, 또는 약 120 내지 240분 동안, 또는 약 150 내지 210분 동안 진행할 것이다. 임의의 실시형태에서, 추출 공정은 약 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 또는 약 300분 동안 진행할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추출 공정은 계속 교반하면서 적어도 160분 동안 진행할 것이다.
5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.051% 내지 0.06% 빙초산(v/v)을 함유하는 추출 완충액을 이용하여, 최종 생성물의 순도를 저하시키지 않고 최종 IgG 조성물에서의 수율 증가에 있어서 상당한 증가를 획득할 수 있다. 아세트산의 양 및 추출 완충액 pH의 상호 관계는 도 9에 설명되어 있다. 바람직한 실시형태에서, 분획 II+III 침전물은 4.5 ± 0.2 또는 약 4.5 ± 0.2의 pH에서 페이스트 대 완충액을 1:15 또는 약 1:15의 비율로 이용하여 추출한다.
유리하게, 5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.051% 빙초산(v/v)을 함유하는 추출 완충액을 이용하는 GAMMAGARD(등록상표) LIQUID(Baxter Healthcare)에 대한 현재 제조 공정과 비교하여 빙초산 함량을 0.06%(v/v) 내지 약 0.06%(v/v)으로 증가시킴으로써, 최종 IgG 조성물에서의 수율 증가에 있어서 상당한 증가를 획득할 수 있음을 발견하였다. 제2 침전 단계에 의해 형성된 침전물(GAMMAGARD(등록상표) LIQUID)의 추출에 대하여 이전에 이용된 방법과 비교하여, 몇몇 실시형태에서 본 발명은 변형된 분획 II+III 현탁액에서 개선된 IgG 수율을 초래하는 방법을 제공한다.
하나의 양태에서, 개선은 감소된 양의 IgG는 변형된 분획 II+III 침전물의 비가용화된 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.06% 빙초산(v/v)을 함유하는 용액을 이용하여 1:15(침전물 대 완충액)의 비율로 변형된 분획 II+III 침전물을 추출함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 추출 공정의 지속기간 동안 용액의 pH를 유지함으로써 실현된다. 하나의 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.1 내지 약 4.9에서 유지된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.2 내지 약 4.8에서 유지된다. 보다 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.3 내지 약 4.7에서 유지된다. 다른 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 약 4.4 내지 약 4.6에서 유지된다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 용액의 pH는 추출 공정의 지속기간 동안 4.5 또는 약 4.5에서 유지된다.
다른 양태에서, 개선은 증가된 양의 IgG가 분획 II+III 용해 단계에서 분획 II+III 침전물로부터 가용화되는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 1000ℓ 당 빙초산 600㎖를 함유하는 용해 완충액에서 분획 II+III 침전물을 가용화시킴으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 개선은 분획 II+III 침전물 중 IgG가 가용화된 후 불순물이 감소되는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 적어도 약 30분 동안 미분된 이산화규소(SiO2)를 분획 II+III 현탁액과 혼합함으로써 실현된다.
5. 변형된 분획 II + III 현탁액의 전처리 및 여과
변형된 분획 II+III 침전물(즉, 변형된 분획 II+III 여과 케이크)의 비가용화된 분획을 제거하기 위하여, 전형적으로 심층 여과를 사용하여 현탁액을 여과한다. 본원에서 제공되는 방법에서 이용될 수 있는 심층 필터는 금속, 유리, 세라믹, 유기(예를 들어 규조토) 심층 필터 등을 포함한다. 적당한 필터의 예는, 이에 제한되는 것은 아니지만, Cuno 50SA, Cuno 90SA, 및 Cuno VR06 필터(Cuno)를 포함한다. 대안적으로, 분리 단계는 여과보다 원심분리에 의해 실행될 수 있다.
상기 기술된 제조 공정 개선은 정제 공정의 초기 단계에서 IgG 손실을 최소화시키지만, PKA 활성, 아마이드 분해 활성, 및 피브리노겐 함량을 포함하여 중요한 불순물은, 추출이 약 4.9 내지 5.0의 pH에서 일어날 때와 비교하여, 예를 들어 II+III 페이스트가 pH 4.5 또는 4.6일 때 훨씬 더 높다(예컨대, 실시예 2 내지 5).
본원에서 제공되는 방법에서 추출되는 불순물에 대응하기 위하여, 현재 IgG 조성물의 순도는 여과/원심분리 전에 전처리 단계의 추가에 의해 크게 향상될 수 있음을 알게 되었다. 하나의 실시형태에서, 이러한 전처리 단계는 미분된 이산화규소(예컨대, 흄드 실리카, Aerosil(등록상표))의 첨가 후, 현탁액을 계속 혼합하는 동안의 40 내지 80분 항온처리 기간을 포함한다. 임의의 실시형태에서, 항온처리 기간은 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상일 것이다. 일반적으로, 처리는 약 0℃ 내지 약 10℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행될 것이다. 임의의 실시형태에서, 처리는 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 또는 10℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 처리는 약 2℃ 내지 약 10℃에서 실행된다.
흄드 실리카 처리의 효과는 실시예 17에서 확인되는 결과에 의해 예시된다. 이 실시예에서, 분획 II+III 침전물을 현탁하고 2개의 샘플로 나누며, 이 중 하나는 여과 전에만 여과 보조제를 이용하여 청징시키고(도 7A), 이 중 하나는 여과 보조제의 첨가 및 여과 전에 흄드 실리카를 이용하여 처리한다(도 7B). 크로마토그래피에서 및 정량화된 데이터에서 확인할 수 있는 바와 같이, 흄드 실리카를 이용하여 전처리된 여과액 샘플은 여과 보조제로만 처리된 샘플보다 IgG 순도가 훨씬 더 높았다(68.8% 대 55.7%; 각각 표 17 및 18을 비교).
임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트 내지 약 100g/㎏ II+III 페이스트의 농도에서 첨가된다(즉, 1:15의 비율에서 추출된 변형된 분획 II+III 침전물에 있어서, 흄드 실리카는 약 20g/16㎏ II+III 현탁액 내지 약 100g/16㎏ II+III 현탁액의 농도에서, 또는 약 0.125%(w/w) 내지 약 0.625%(w/w)의 최종 농도에서 첨가되어야 함). 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100g/㎏ II+III 페이스트의 농도에서 첨가될 수 있다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카(예컨대, Aerosil 380 또는 동등물)는 변형된 분획 II+III 현탁액에 약 40g/16㎏ II+III의 최종 농도까지 첨가된다. 혼합은 약 2 내지 8℃에서 적어도 50 내지 70분 동안 일어난다.
임의의 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도에서 IgG 조성물에 첨가된다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 1g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도에서 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2.5g의 농도에서 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질의 농도에서 또는 전체 단백질 g 당 적어도 0.02g, 0.03g, 0.04g, 0.05g, 0.06g, 0.07g, 0.08g, 0.09g, 0.1g, 0.2g, 0.3g, 0.4g, 0.5g, 0.6g, 0.7g, 0.8g, 0.9g, 1.0g, 1.5g, 2.0g, 2.5g, 3.0g, 3.5g, 4.0g, 4.5g, 5.0g, 5.5g, 6.0g, 6.5g, 7.0g, 7.5g, 8.0g, 8.5g, 9.0g, 9.5g, 10.0g, 또는 그 이상의 농도에서 첨가된다.
임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층 여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.8㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.7㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 다른 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 또는 1.0㎏/㎏ II+III 페이스트의 최종 농도에서 첨가될 것이다.
IgG의 상당한 분획은 GAMMAGARD(등록상표) LIQUID 제조 공정의 여과 단계 동안 감소되었다. 현탁액 완충액의 1.8 불용 체적을 사용하여 필터 프레스 프레임 및 배관을 퍼지하는 후여과 세척의 현재 방법은 이 단계에서 IgG의 최대 회수에는 불충분하였다. 놀랍게도, 변형된 분획 II+III 청징된 현탁액에서 전체 IgG의 효율적인 회수를 위하여, 현탁액 완충액의 적어도 3.0 불용 체적, 바람직하게 3.6 불용 체적을 필요로 함을 알게 되었다(실시예 12 및 도 1 참조). 임의의 실시형태에서, 필터 프레스는 임의의 적당한 현탁액 완충액으로 세척할 수 있다. 특정 실시형태에서, 세척 완충액은 예를 들어 5mM 1염기 소듐 포스페이트, 5mM 아세테이트, 및 0.015% 빙초산(v/v)을 포함할 것이다.
하나의 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 분획 II+III 현탁액 여과 단계 동안 감소되는 방법에 관한 것이다. 하나의 실시형태에서, 공정 개선은 1000ℓ 당 빙초산 150㎖를 함유하는 용해 완충액의 적어도 약 3.6 불용 체적을 이용하여 필터를 후세척함으로써 실현된다. 후세척 완충액 중 빙초산의 양과 pH 사이의 관계는 도 10에 나타내어져 있다. 하나의 실시형태에서, 후세척 추출 완충액의 pH는 약 4.6 내지 약 5.3이다. 바람직한 실시형태에서, 후세척 완충액의 pH는 약 4.7 내지 약 5.2이다. 다른 실시형태에서, 후세척 완충액의 pH는 약 4.8 내지 약 5.1이다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 후세척 완충액의 pH는 약 4.9 내지 약 5.0이다.
제2 침전 단계로부터 형성된 현탁액(GAMMAGARD(등록상표) LIQUID)의 청징에 이전에 이용된 방법과 비교하여, 몇몇 실시형태에서 본 발명은 청징된 분획 II+III 현탁액에서 개선된 IgG 수율 및 순도를 초래하는 방법을 제공한다. 하나의 양태에서, 개선은, 감소된 양의 IgG가 변형된 분획 II+III 여과 케이크에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 다른 양태에서, 개선은 감소된 양의 불순물이 청징된 분획 II+III 현탁액에서 발견되는 방법에 관한 것이다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 분획 II+III 현탁액의 여과 또는 원심분리 청징 전에 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카 처리는 약 0.01㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트 내지 약 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 약 0.02㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.03㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.04㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.05㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.06㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.07㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.08㎏/㎏ II+III 페이스트, 0.09㎏/㎏ II+III 페이스트, 또는 0.1㎏/㎏ II+III 페이스트의 첨가를 포함할 것이고, 혼합물은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상 동안 항온처리될 것이다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 잔여 피브리노겐, 아마이드 분해 활성, 및/또는 프리칼리크레인 활성제 활성의 수준을 감소시킨 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 구체적인 실시형태에서, 공정 개선은 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현되며, 이는 면역글로불린 제조물에서 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시킨다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 변형된 분획 II+III 현탁액 여과 단계를 완료한 후 약 3 내지 약 5 부피의 필터 불용 체적을 이용하여 심층 여과를 세척함으로써 실현된다. 임의의 실시형태에서, 필터는 필터 불용 체적의 약 3.5 부피 내지 약 4.5 부피, 또는 적어도 약 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0 부피를 이용하여 세척될 것이다. 특정 실시형태에서, 필터 프레스는 적어도 약 3.6 불용 체적의 현탁액 완충액을 이용하여 세척될 것이다.
6. 세제 처리
변형된 분획 II+III 여과액으로부터 추가적인 오염 물질을 제거하기 위하여, 그 다음에 샘플은 세제 처리를 실시한다. 혈장 유래 분획의 세제 처리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 일반적으로, 임의의 표준 비이온성 세제 처리는 본원에서 제공되는 방법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 세제 처리에 대한 예시적인 프로토콜은 하기에 제공되어 있다.
간단하게, 폴리소르베이트-80을 교반하면서 약 0.2%(w/v)의 최종 농도에서 변형된 분획 II+III 여과액 첨가하고, 샘플은 약 2 내지 8℃의 온도에서 적어도 30분 동안 항온처리된다. 그 다음 소듐 시트레이트 디하이드레이트를 약 8g/ℓ의 최종 농도에서 상기 용액에 혼합하고, 이 샘플을 약 2 내지 8℃의 온도에서 계속 교반하면서 추가적인 30분 동안 항온처리한다.
임의의 실시형태에서, 임의의 적당한 비이온성 세제를 사용할 수 있다. 적당한 비이온성 세제는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 옥틸글루코사이드, 디기토닌, C12E8, Lubrol, Triton X-100, Nonidet P-40, Tween-20(즉, 폴리소르베이트-20), Tween-80(즉, 폴리소르베이트-80), 알킬 폴리(에틸렌 옥사이드), Brij 세제, 알킬페놀 폴리(에틸렌 옥사이드), 폴록사머, 옥틸 글루코사이드, 데실 말토사이드 등을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 세제 시약(예컨대, 폴리소르베이트-80 및 소듐 시트레이트 디하이드레이트)을 첨가함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 첨가제의 빠른 분포를 보장하도록 샘플을 혼합하면서, 세제 시약을 변형된 분획 II+III 여과액에 고체로서 첨가할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과액의 비편재화된 표면 영역에 걸쳐서 고체를 살포함으로써 고체 시약을 첨가하여 예를 들어 유동성 첨가에서 국부적 과밀화가 일어나지 않도록 하는 것이 바람직하다.
7. 제3 침전 사건 - 침전 G
몇몇 잔류 작은 단백질, 예를 들어 알부민 및 트랜스페린을 제거하기 위하여, 25% 알코올의 농도에서 제3 침전을 실행한다. 간단하게, 세제 처리된 II+III 여과액의 pH을 적당한 pH 조절 용액(예컨대, 1M 소듐 하이드록사이드 또는 1M 아세트산)을 이용하여 약 6.8 내지 7.2, 바람직하게는 약 6.9 내지 약 7.1, 가장 바람직하게는 7.0으로 조정한다. 그 다음 약 25%(v/v)의 최종 농도에서 상기 용액에 차가운 알코올을 첨가하고, 적어도 1시간 동안 약 -6℃ 내지 약 -10℃에서 교반하면서 혼합물을 항온처리하여 제3 침전물(즉, 침전물 G)를 형성한다. 다른 실시형태에서, 혼합물을 적어도 2시간, 또는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간, 또는 그 이상 동안 항온처리한다. 바람직한 실시형태에서, 혼합물은 적어도 2시간 동안 항온처리한다. 보다 바람직한 실시형태에서, 혼합물은 적어도 4시간 동안 항온처리한다. 훨씬 더 바람직한 실시형태에서, 혼합물은 적어도 8시간 동안 항온처리한다.
하나의 양태에서, 공정 개선은 감소된 양의 IgG가 제3 침전 단계의 상청액 분획에서 감소되는 방법에 관한 것이다. 임의의 실시형태에서, 공정 개선은 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 용액의 pH를 약 6.8 내지 약 7.2로 조정함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 공정 개선은 침전 항온처리 기간 동안 계속 용액의 pH를 약 6.8 내지 약 7.2로 유지함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.9 내지 약 7.1로, 또는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 또는 7.2의 pH로 조정된다. 특정 실시형태에서, 용액의 pH는 침전용 알코올의 첨가 후 즉시 또는 첨가 동안 약 7.0으로 조정된다. 임의의 실시형태에서, 용액의 pH는 침전 항온처리 기간 동안 계속 약 6.9 내지 약 7.1, 또는 침전 항온처리 기간 동안 계속 약 7.0의 pH로 유지된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, 용액의 pH가 침전용 알코올의 첨가 후가 아닌 첨가 전에 조정되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 또는 용액의 pH가 전체 침전 항온처리 기간 동안 유지되지 않는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제3 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, pH는 용액의 pH를 계속 조정함으로써 침전 유지 또는 항온처리 시간 동안 원하는 pH에서 유지된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
다른 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 침전용 알코올 및/또는 용액을 첨가함으로써 실현된다. 이와 같이, 임의의 실시형태에서, pH를 조정하는데 사용되는 알코올 및/또는 용액이 유동성 첨가에 의해 도입되는 유사한 침전 단계와 비교하여, 감소된 양의 IgG는 제3 침전 단계의 상청액 분획에서 감소된다. 하나의 실시형태에서, 알코올은 에탄올이다.
8. 침전물 G( PptG )의 현탁액 및 여과
침전물 G의 IgG 내용물을 가용화시키기 위하여, 차가운 추출 완충액은 PptG를 재현탁하는데 사용된다. 간단하게, 침전물 G는 약 0℃ 내지 약 8℃에서 주사용 증류수(WFI) 중에 3.5로 용해하여 약 40 내지 95의 AU280 -320 값을 획득한다. 그 다음, 적어도 2시간 동안 교반한 용액의 최종 pH는 5.2 ± 0.2 또는 약 5.2 ±0.2으로 조정된다. 하나의 실시형태에서, 이러한 pH 조정은 1M 아세트산을 이용하여 실행된다. IgG의 용해도를 증가시키기 위하여, 현탁액의 전도도는 약 2.5 내지 약 6.0mS/㎝로 증가된다. 하나의 실시형태에서, 전도도는 염화 나트륨의 첨가에 의해 증가된다. 그 다음, 현탁된 PptG 용액은, 임의의 비용해된 입자를 제거하기 위하여, 공칭 공경(nominal pore size)이 약 0.1μm 내지 약 0.4μm인 적당한 심층 필터를 이용하여 여과된다. 하나의 실시형태에서, 청징된 여과액을 획득하기 위한 심층 필터의 공칭 공경은 약 0.2μm(예컨대, Cuno VR06 필터 또는 동등물)이다. 다른 실시형태에서, 현택된 PptG 용액은 청징된 상청액을 회수하기 위하여 원심분리된다. 필터의 후세척은 전도도가 약 2.5 내지 약 6.0mS/㎝인 염화나트륨 용액을 사용하여 실행된다. 전형적으로, 침전물 G의 추출에 적당한 용액은 WFI 및 전도도가 낮은 완충액을 포함한다. 하나의 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 10mS/㎝ 미만이다. 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 또는 1mS/㎝ 미만이다. 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 6mS/㎝ 미만이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 4mS/㎝ 미만이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 전도도가 낮은 완충액은 전도도가 약 2mS/㎝이다.
9. 용매 세제 처리
혈장 유래 생성물에 존재할 수 있는 다양한 바이러스 오염 물질을 불활성화시키기 위하여, 그 다음 청징된 PptG 여과액은 용매 세제(S/D) 처리를 실시한다. 혈장 유래 분획의 세제 처리 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(확인을 위하여, 문헌[Pelletier JP et al ., Best Pract Res Clin Haematol . 2006;19(1):205-42]을 참조). 일반적으로, 임의의 표준 S/D 처리는 본원에서 제공되는 방법과 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, S/D 처리에 대한 예시적인 프로토콜은 하기에 제공된다.
간단하게, Triton X-100, Tween-20, 및 트리(n-뷰틸)포스페이트(TNBP)가 각각 약 1.0%, 0.3%, 및 0.3%의 최종 농도에서 청징된 PptG 여과액에 첨가된다. 그 다음 혼합물은 적어도 약 1시간 동안 약 18℃ 내지 약 25℃의 온도에서 교반된다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기 보다는 분무에 의해 S/D 시약(예컨대, Triton X-100, Tween-20, 및 TNBP)을 첨가함으로써 실현된다. 다른 실시형태에서, 세제 시약은 청징된 PptG 여과액에 고체로서 첨가될 수 있으며, 이는 S/D 성분의 빠른 분포를 보장하기 위하여 혼합된다. 임의의 실시형태에서, 여과액의 비편재화된 표면 영역에 걸쳐서 고체를 살포함으로써 고체 시약을 첨가하여 예를 들어 유동성 첨가에서 국부적 과밀화가 일어나지 않도록 하는 것이 바람직하다.
10. 이온 교환 크로마토그래피
S/D 처리된 PptG 여과액으로부터 IgG를 추가로 정제하고 농축시키기 위하여, 양이온 교환 및/또는 음이온 교환 크로마토그래피가 이용될 수 있다. 이온 교환 크로마토크래피를 사용하여 IgG를 정제 및 농축하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 제5,886,154호는 분획 II+III 침전물이 낮은 pH(약 3.8 내지 4.5)에서 추출된 다음, 카프릴산을 사용하여 IgG을 침전시키고, 2가지의 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 이행하는 방법을 기술한다. 미국 특허 제6,069,236호는 알코올 침전에 전혀 의존하지 않는 크로마토그래피 IgG 정제 방식을 기술한다. WO 제2005/073252호는 분획 II+III 침전물의 추출, 카프릴산 처리, PEG 처리, 및 단일 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 수반하는 IgG 정제 방법을 기술한다. 미국 특허 제7,186,410호는 분획 I+II+III 또는 분획 II 침전물의 추출 후, 알칼리성 pH에서 실행되는 단일 음이온 교환 단계를 수반하는 IgG 정제 방법을 기술한다. 미국 특허 제7,553,938호는 분획 I+II+III 또는 분획 II+III 침전물의 추출, 카프릴레이트 처리, 및 1가지 또는 2가지 음이온 교환 크로마토그래피 단계를 수반하는 방법을 기술한다. 미국 특허 제6,093,324호는 약 6.0 내지 약 6.6의 pH에서 작동되는 다공성(macroporous) 음이온 교환 수지의 사용을 포함하는 정제 방법을 기술한다. 미국 특허 제6,835,379호는 알코올 분별의 부재하에서 양이온 교환 크로마토그래피에 의존하는 정제 방법을 기술한다. 상기 간행물의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
본 발명의 방법의 하나의 실시형태에서, S/D 처리된 PptG 여과액에 양이온 교환 크로마토그래피 및 음이온 교환 크로마토그래피 모두를 실시할 수 있다. 예를 들어, 하나의 실시형태에서, S/D 처리된 PptG 여과액은 양이온 교환 컬럼을 통과하고, 용액 중 IgG에 결합한다. 그 다음, S/D 시약은 흡수된 IgG와 분리하여 세척될 수 있으며, 그 이후에 pH가 약 8.0 내지 9.0인 pH가 높은 용리 완충액을 이용하여 컬럼으로부터 용리된다. 이러한 방식에서, 양이온 교환 크로마토그래피 단계는 S/D 시약을 제조물로부터 제거하거나, IgG 함유 용액을 농축하거나, 또는 둘 다에 사용될 수 있다. 임의의 실시형태에서, pH 용리 완충액은 pH가 약 8.2 내지 약 8.8, 또는 약 8.4 내지 약 8.6, 또는 pH가 약 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 또는 9.0일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 용리 완충액의 pH는 약 8.5 ± 0.1이다.
임의의 실시형태에서, 양이온 교환 컬럼으로부터의 용리액은 더 낮은 pH, 예를 들어 약 5.5 내지 약 6.5로 조정되고, 적절한 완충액을 이용하여 희석하여 용액의 전도도를 감소시킬 수 있다. 임의의 실시형태에서, 양이온 교환 용리액의 pH는 약 5.7 내지 약 6.3, 또는 약 5.9 내지 약 6.1의 pH, 또는 약 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 또는 6.5의 pH로 조정될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 용리액의 pH는 약 6.0 ± 0.1의 pH로 조정된다. 그 다음 용리액은 음이온 교환 컬럼 상에 로딩되고, 제조물에서 발견되는 몇몇 오염 물질에 결합한다. IgG 분획을 함유하는 컬럼 유체 흐름물은 컬럼 로딩 및 세척 동안 수집된다. 임의의 실시형태에서, 본 발명의 이온 교환 크로마토그래피 단계는 컬럼 방식, 배치 방식, 또는 이 2가지의 조합으로 실행될 수 있다.
임의의 실시형태에서, 공정 개선은 유동성 첨가에 의하기보다는 분무에 의해 pH를 조정하는데 사용되는 용액을 첨가함으로써 실현된다.
11. 나노여과 및 한외여과 / 정용여과
본원에서 제공되는 IgG 조성물의 바이러스 부하를 추가로 감소시키기 위하여, 음이온 교환 컬럼 유출액은 적당한 나노여과 장치를 사용하여 나노여과될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 나노여과 장치는 평균 기공 크기가 약 15nm 내지 약 200nm일 것이다. 이러한 사용에 적당한 나노필터의 예는 이에 제한되는 것은 아니지만 DVD, DV 50, DV 20(Pall), Viresolve NFP, Viresolve NFR(Millipore), Planova 15N, 20N, 35N, 및 75N(Planova)을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 나노필터는 평균 기공 크기가 약 15nm 내지 약 72nm, 또는 약 19nm 내지 약 35nm, 또는 약 15nm, 19nm, 35nm 또는 72nm일 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 나노필터는 평균 기공 크기가 약 35nm, 예를 들어 Asahi PLANOVA 35N 필터 또는 이의 동등물일 것이다.
선택적으로, 한외여과/정용여과를 실행하여 나노여과액을 추가로 농축시킬 수 있다. 하나의 실시형태에서, 열린 채널 막은 말단 근처에서 구체적으로 고안된 후세척 및 제형과 함께 사용되고, 제조 공정은 수율 및 저장 안정성에 영향을 주지 않고 당업계의 IVIG(예컨대, GAMMAGARD(등록상표) LIQUID)의 상태와 비교하여 생성된 IgG 조성물을 단백질 농도(200㎎/㎖)에서 약 2배 더 높게 만든다. 대부분의 상업적으로 이용가능한 한외여과 막을 이용하여, 200㎎/㎖의 IgG 농도는 주요 단백질의 손실 없이 도달될 수 없다. 이러한 막은 조기에 차단될 것이므로, 충분한 후세척은 달성하기 어렵다. 그러므로 열린 채널 막 구성이 사용되어야 한다. 열린 채널 막에도 불구하고, 구체적으로 고안돈 후세척 절차가 상당한 단백질 손실(2% 미만 손실) 없이 필요로 하는 농도를 획득하는데 사용되어야 한다. 훨씬 더 놀라운 것은 200㎎/㎖의 더 높은 단백질 농도는 낮은 pH 저장 단계의 바이러스 불활성화 능력에 영향을 미치지 않는다는 사실이다.
나노여과 다음에, 여과액은 한외여과/정용여과에 의해 추가로 농축될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 나노여과액은 한외여과에 의해 약 2% 내지 약 10%(w/v)의 단백질 농도로 농축될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 한외여과는 열린 채널 스크린이 있는 카세트에서 실행되고, 한외여과 막은 공칭 분획분자량(NMWCO)이 약 100kDa 미만 또는 약 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30kDa, 또는 그 이하이다. 바람직한 실시형태에서, 한외여과 막은 NMWCO가 50kDa 이하이다.
한외여과 단계의 완료시, 농축물은 정맥내 또는 근육내 투여에 적당한 용액에 대하여 정용여과를 통하여 추가로 농축될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 정용여과 용액은 안정화제 및/또는 완충제를 포함할 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 안정화제 및 완충제는, 예를 들어 약 0.20M 내지 약 0.30M, 또는 약 0.22M 내지 약 0.28M, 또는 약 0.24M 내지 약 0.26mM의 적절한 농도에서, 또는 약 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 또는 3.0의 농도에서 글라이신이다. 바람직한 실시형태에서, 정용여과 완충액은 0.25M 또는 약 0.25M 글라이신을 함유한다.
전형적으로, 최저 교환 부피는 원래 농축물 부피의 적어도 약 3배, 또는 원래 농축물 부피의 적어도 약 4, 5, 6, 7, 8, 9배, 또는 그 이상이다. IgG 용액은 약 5% 내지 약 25%(w/v), 또는 약 6% 내지 약 18%(w/v), 또는 약 7% 내지 약 16%(w/v), 또는 약 8% 내지 약 14%(w/v), 또는 약 9% 내지 약 12%의 최종 단백질 농도로, 또는 약 5%, 또는 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25% 또는 그 이상의 최농 농도로 농축될 수 있다. 하나의 실시형태에서, 적어도 약 23%의 최종 단백질 농도는 농축된 용액에 후세척 분획을 첨가함없이 달성된다. 다른 실시형태에서, 적어도 약 24%의 최종 단백질 농도는 농축된 용액에 후세척 분획을 첨가함없이 달성된다. 적어도 약 25%의 최종 단백질 농도는 농축된 용액에 후세척 분획을 첨가함없이 달성된다. 전형적으로, 농축 공정의 끝에서, 용액의 pH는 4.6 내지 5.1일 것이다.
예시적인 실시형태에서, IgG 조성물의 pH는 한외여과 전에 약 4.5로 조정된다. 용액은 한외여과를 통하여 5 ± 2% w/v의 단백질 농도로 농축된다. UF 막은 공칭 분획분자량(NMWCO)이 50,000달톤 이하이다(Millipore Pellicon 폴리에테르 설폰 막). 농축액은 0.25M 글라이신 용액(pH 4.5 ± 0.2)의 10 부피에 대하여 정용여과된다. 한외-정용여과 작동 동안 용액은 약 2℃ 내지 약 8℃의 온도에서 유지된다. 정용여과 후에, 용액은 적어도 11 %(w/v)의 단백질 농도로 농축된다.
12. 제형
정용여과 단계의 완료시, 용액의 단백질 농도는 정용여과 완충액을 이용하여 약 5% 내지 약 20%(w/v), 또는 약 6% 내지 약 18%(w/v), 또는 약 7% 내지 약 16%(w/v), 또는 약 8% 내지 약 14%(w/v), 또는 약 9% 내지 약 12%의 최종 농도로, 또는 약 5%, 또는 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 또는 20%의 최종 농도로 조정된다. 바람직한 실시형태에서, 용액의 최종 단백질 농도는 약 9% 내지 약 11%, 보다 바람직하게는 약 10%이다.
제형화된 벌크 용액(bulk solution)은 절대 기공이 약 0.22미크론, 예를 들어 약 0.2미크론 이하인 막 필터를 통하여 여과함으로써 추가로 멸균된다. 그 다음, 용액은, 테스트용으로 샘플을 취하면서, 적합한 밀봉에 대한 최종 용기 내로 무균 상태로 분배한다.
하나의 실시형태에서, IgG 조성물은 정용여과 완충액을 이용하여 약 10.2 ± 0.2%(w/v)의 농도로 추가로 조정된다. 필요하다면 pH는 약 4.4 내지 약 4.9로 조정된다. 마지막으로, 용액은 멸균 여과되고, 30℃ 또는 약 30℃에서 3주 동안 항온처리된다.
B. 인자 H
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 인자 H 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 인자 H 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 풍부화 인자 H 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 인자 H 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 인자 H 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 제2 풍부화 인자 H 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 인자 H 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 인자 H 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 인자 H 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 인자 H 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 인자 H 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 인자 H 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 인자 H 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
1. 혈장 유래 인자 H의 제조 방법
생성에 관하여, 인간 혈장으로부터 출발하는 청구하는 공정은 예컨대 차가운 곳에서 에탄올에 의한 분별 침전에 의해 획득된 전형적인 산업적 중간체의 하위 분별에 기초할 것이다(문헌[Schultze H E, Heremans J F; Molecular Biology of Human Proteins. Volume I: Nature and Metabolism of Extracellular Proteins 1966, Elsevier Publishing Company; p. 236-317]에서 검토됨). 이러한 정제의 바람직한 실시형태는, 면역글로불린과 같은 의약품 규제 기관의 통제 하에서, 확립되고 허가된 혈장 생성물의 제조 공정은 영향받지 않는 그러한 방식으로 산업적 규모의 혈장 분별의 부차적인 분획으로부터의 기능성 인자 H의 정제이다. 예를 들어, 분획 II+III 페이스트 현탁액(문헌[Teschner W et al., Vox Sang. 2007 Jan;92(1):42-55]), 분획 I 침전물(문헌[Cohn et al., (1946) 상기 참조]), 침전물 III(문헌[Schultze H E, Heremans J F; Molecular Biology of Human Proteins. Volume I: Nature and Metabolism of Extracellular Proteins 1966, Elsevier Publishing Company; p. 236-317 at p. 253]) 및 침전물 B(상기 문헌[Kistler 및 Nitschmann] p. 253의 방법)의 여과 후에 획득된 여과 케이크는 인자 H에 대한 한업적인 공급원의 예이다. 당업계에 공지된 부수적인 분획, 정제 절차로부터의 출발은 인자 H를 정제하는데 사용될 수 있다. 이들은 폴리에틸렌 글라이콜을 이용한 침전(문헌[Nagasawa S, Stroud R M; Mol Immunol 1980; 17:1365-72]), 고정화 헤파린을 통한 친화 크로마토그래피(앞서와 같이 언급함), 이온 교환 크로마토그래피(문헌[Crossley L G, Porter R R; Biochem J 1980; 191:173-82]) 및 소수성 상호작용 크로마토그래피(문헌[Ripoche J, Al Salihi A, Rousseaux J, Fontaine M; Biochem J 1984; 221, 89-96])에 기초로 할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 본 발명에 대한 출발 물질은 콘 분획을 사용하여 제조된다. 이러한 분별은, 공여자 혈청 또는 단일 클론 또는 재조합 면역글로불린으로부터 제조될 수 있는 면역글로불린 제조물의 제조에 대하여 사용되는 잘 알려진 분별이다. 전형적인 예에서, 혈액은 건강한 공여자로부터 수집된다. 보통, 혈액은 면역글로불린 제조물이 투여될 개체와 동일한 종의 동물로부터 수집된다(전형적으로 "동종" 면역글로불린으로 칭함). 면역글로불린은 적당한 절차, 예를 들어 콘 분별, 초원심분리, 전기영동 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래피, 면역친화 크로마토그래피, 폴리에틸렌 글라이콜 분별 등에 의하여 혈액으로부터 분리된다(예컨대, 문헌[Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68:459-75 (1946)]; [Oncley et al., J. Am. Chem. Soc. 71:541-50 (1949)]; [Barundern et al., Vox Sang. 7:157-74 (1962)]; [Koblet et al., Vox Sang. 13:93-102 (1967)]; 미국 특허 제5,122,373호 및 제5,177,194호 참조; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). 하나의 실시형태에서, 본 발명은 면역글로불린의 제조물로부터 폐기되는 분획을 사용한다. 특정 실시형태에서, 일단 분획 II+III 추출물이 여과된다면, 본 발명은 SiO2 여과 케이크에서 발견되는 분획을 사용한다.
일반적으로, 본 발명에 따른 인자 H 제조물은 임의의 적당한 출발 물질, 예를 들어 회수된 혈장 또는 공급 혈장으로부터 제조될 수 있다. 전형적인 예에서, 혈정 또는 혈장은 건강한 공여자로부터 수집된다. 보통, 혈액은 인자 H 제조물이 투여될 개체와 동일한 종의 동물로부터 수집된다(전형적으로 "동종" 면역글로불린으로 칭함). 인자 H는 적당한 절차, 예를 들어 침전(알코올 분별 또는 폴리에틸렌 글라이콜 분별), 크로마토그래피 방법(이온 교환 크로마토그래피, 친화 크로마토그래피, 면역친화 크로마토그래피 등), 초원심분리, 및 전기영동 제조 등에 의하여 혈액 또는 혈장으로부터 분리된다(예컨대, 문헌[Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 68:459-75 (1946)]; [Deutsch et al., J. Biol. Chem. 164:109-118]; [Oncley et al., J. Am. Chem. Soc. 71:541-50 (1949)]; [Cohn et al., J. Am. Chem. Soc. 72:465-474 (1950)]; [Cohn et al., Blood Cells and Plasma Proteins: Their State in Nature (J.L. Tullis, ed), pp. 1-58, Academic Press, NewYork and London (1953)]; [Nitschmann et al., Helv. Chim. Acta 37:866-873]; [Kistler 및 Nitschmann, Vox Sang. 7:414-424 (1962)]; [Barundern et al., Vox Sang. 7:157-74 (1962)]; [Koblet et al., Vox Sang. 13:93-102 (1967)]; 미국 특허 제5,122,373호 및 제5,177,194호 참조; 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨).
임의의 실시형태에서, 인자 H는 혈장 분별에 의해 다른 상업적으로 중요한 혈액 제제의 제조 동안 달리 폐기되는 물질로부터 회수된다. 예를 들어, 예시적인 실시형태에서, 인자 H는 재현탁된 분획 II+III 페이스트의 원심분리 또는 여과 후에 형성된 분획 I 침전물로부터 추출되고/되거나 여과 케이크로부터 추출된다. 유리하게, 본원에서 제공되는 방법에 따라서, 인자 H의 산업적 규모의 제조물은 추가적인 투입 혈장에 대한 필요 또는 다른 상업적으로 중요한 혈장 유래 혈액 제제, 예를 들어 정맥내(IVIG) 또는 피하 투여에 대한 IgG 감마 글로불린에 대한 기존의 제조 공정의 재설계 및 규제 재승인없이 달성될 수 있다.
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 SiO2 처리 방법을 이용하여 혈장 분획으로부터 인자 H를 추출하고 FXI, FXIa, FXII, 및/또는 FXIIa 함량을 감소시킴으로써 혈장으로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
하나의 실시형태에서, 혈장으로부터 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 (a) 제1 침전 단계에서, 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10%의 알코올을 이용하여 냉동 불량 혈장 분획으로부터 단백질을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계, (b) 제2 침전 단계에서, 약 6.7 내지 약 7.3의 pH에서 약 20% 내지 약 30%의 알코올을 이용하여 제1 상청액으로부터 인자 H를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계; (c) 제2 침전물을 재현탁하여 현탁액을 형성하는 단계; (d) 미분된 이산화규소단계(SiO2)를 단계 (c)로부터의 현탁액과 혼합하는 단계, (e) 현탁액을 분리하여 여과 케이크 및 상청액을 형성하는 단계; 및 (f) 최종 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 용액 조건 하에서 SiO2 여과 케이크로부터 인자 H를 추출하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 여과 케이크는 적당한 필터를 포함하는 필터 프레스를 통하여 현탁액을 여과함으로써 상청액으로부터 분리된다. 하나의 실시형태에서, 인자 H는 여과 케이크를 포함하는 필터 프레스를 통하여 추출 완충액을 재순환시킴으로써 추출될 수 있다.
제2 양태에서, 본 발명은 분획 I 침전물로부터 인자 H를 추출함으로써 혈장으로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다.
바람직한 실시형태에서, 혈장으로부터 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 (a) 제1 침전 단계에서, 약 7.0 내지 약 7.5의 pH에서 약 6% 내지 약 10%의 알코올을 이용하여 냉동 불량 혈장 분획으로부터 단백질을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계, (b) 인자 H 추출 완충액을 이용하여 침전물로부터 인자 H를 추출하는 단계; 및 (c) 본원에서 제공되는 적당한 방법을 사용하여 상기 조성물을 SiO2로 처리함으로써 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 단계를 포함한다.
하나의 양태에서, 제2 혈액 단백질, 예를 들어 IgG 감마 글로불린을 제공하도록 고안된 공정에 의해 형성된 부산물 분획을 제조하는 2가지 이상의 집단으로부터 인자 H를 추출함으로써, 혈장으로부터 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 IgG 감마 글로불린(예컨대, IVIG)의 제조 동안 형성된 분획 I 침전물 및 분획 II+III 여과 케이크를 수집하고 수집된 분획으로부터 인자 H를 추출하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 풍부화된 인자 H 조성물은 분획 I 침전물 및/또는 분획 II+III 여과 케이크로부터 추출 다음 추가로 정제될 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니지만 추가적인 침전 단계 또는 분별, 친화 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피, 용매/세제(S/D) 처리, 나노요과, 한외여과, 정용여과 등을 포함한 다양한 방법이 인자 H를 추가로 정제하는데 이용가능하다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 풍부화된 인자 H 조성물로부터 불순물을 침전시키는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 이 단계는 적어도 하나의 불순물, 예를 들어 지질 또는 단백질을 조성물로부터 침전시킨 다음 인자 H를 함유하는 상청액으로부터 침전물을 분리하는 단계를 포함한다. 선택적으로, 그 다음 인자 H는 별개의 침전에서 상청액으로부터 침전될 수 있다.
구체적인 실시형태에서, 혈장 분획(예컨대, 분획 I 침전물, 분획 II+III 침전물, 침전물 B 침전물 등)으로부터 추출된 인자 H 조성물은 약 2.5% 내지 약 7.5%의 최종 농도로 PEG를 사용하여 용액 중 적어도 하나의 불순물을 침전시킴으로써 추가로 풍부화된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 3% 내지 약 7%의 최종 농도로 사용된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 4% 내지 약 6%의 최종 농도로 사용된다. 또 다른 실시형태에서, PEG는 약 5%의 최종 농도로 사용된다.
다른 구체적인 실시형태에서, 혈장 분획(예컨대, 분획 I 침전물, 분획 II+III 침전물, 침전물 B 침전물 등)으로부터 추출된 인자 H 조성물은 약 9% 내지 약 15%의 최종 농도로 PEG를 사용하여 용액 중 인자 H를 침전시킴으로써 추가로 풍부화된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 10% 내지 약 14%의 최종 농도로 사용된다. 다른 실시형태에서, PEG는 약 11% 내지 약 13%의 최종 농도로 사용된다. 또 다른 실시형태에서, PEG는 약 12%의 최종 농도로 사용된다.
다른 구체적인 실시형태에서, 혈장 분획(예컨대, 분획 I 침전물, 분획 II+III 침전물, 침전물 B 침전물 등)으로부터 추출된 인자 H 조성물은 (a) 용액 중 적어도 하나의 불순물을 침전시키는 단계; (b) 용액 중 인자 H를 침전시키는 단계; 및 (c) 인자 H를 함유하는 침전물을 회수하는 단계에 의해 추가로 풍부화된다. 임의의 실시형태에서, 침전 단계는 알코올(예컨대, 메탄올 또는 에탄올), PEG, 또는 이의 조합을 이용하여 실행된다. 특정 실시형태에서, 침전 단계는 PEG를 이용하여 실행된다. 임의의 실시형태에서, 제1 침전 단계의 PEG 농도는 약 2.5% 내지 약 7.5%이고, 제2 침전 단계의 PEG 농도는 약 9% 내지 약 15%이다. 구체적인 실시형태에서, 제1 단계의 PEG 농도는 약 4% 내지 약 6%이고, 제2 단계의 PEG 농도는 약 11% 내지 약 13%이다. 보다 구체적인 실시형태에서, 제1 침전 단계의 PEG 농도는 약 5%이고, 제2 침전 단계의 PEG 농도는 약 12%이다. 또 다른 실시형태에서, 제1 및 제2 침전 단계의 PEG 농도는 표 16에 열거된 변형 Var. 1101 내지 Var. 1221로부터 선택된다.
인자 H 조성물의 풍부화에 대한 PEG 농도
PEG 농도 - 제1 침전
2.5% 3.0% 3.5% 4.0% 4.5% 5.0% 5.5% 6.0% 6.5% 7.0% 7.5%
PEG 농도 제2 침전 2.5% Var. 1101 Var. 1112 Var. 1123 Var. 1134 Var. 1145 Var. 1156 Var. 1167 Var. 1178 Var. 1189 Var. 1200 Var. 1211
3.0% Var. 1102 Var. 1113 Var. 1124 Var. 1135 Var. 1146 Var. 1157 Var. 1168 Var. 1179 Var. 1190 Var. 1201 Var. 1212
3.5% Var. 1103 Var. 1114 Var. 1125 Var. 1136 Var. 1147 Var. 1158 Var. 1169 Var. 1180 Var. 1191 Var. 1202 Var. 1213
4.0% Var. 1104 Var. 1115 Var. 1126 Var. 1137 Var. 1148 Var. 1159 Var. 1170 Var. 1181 Var. 1192 Var. 1203 Var. 1214
4.5% Var. 1105 Var. 1116 Var. 1127 Var. 1138 Var. 1149 Var. 1160 Var. 1171 Var. 1182 Var. 1193 Var. 1204 Var. 1215
5.0% Var. 1106 Var. 1117 Var. 1128 Var. 1139 Var. 1150 Var. 1161 Var. 1172 Var. 1183 Var. 1194 Var. 1205 Var. 1216
5.5% Var. 1107 Var. 1118 Var. 1129 Var. 1140 Var. 1151 Var. 1162 Var. 1173 Var. 1184 Var. 1195 Var. 1206 Var. 1217
6.0% Var. 1108 Var. 1119 Var. 1130 Var. 1141 Var. 1152 Var. 1163 Var. 1174 Var. 1185 Var. 1196 Var. 1207 Var. 1218
6.5% Var. 1109 Var. 1120 Var. 1131 Var. 1142 Var. 1153 Var. 1164 Var. 1175 Var. 1186 Var. 1197 Var. 1208 Var. 1219
7.0% Var. 1110 Var. 1121 Var. 1132 Var. 1143 Var. 1154 Var. 1165 Var. 1176 Var. 1187 Var. 1198 Var. 1209 Var. 1220
7.5% Var. 1111 Var. 1122 Var. 1133 Var. 1144 Var. 1155 Var. 1166 Var. 1177 Var. 1188 Var. 1199 Var. 1210 Var. 1221
임의의 실시형태에서, 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법은 적어도 1가지, 바람직하게는 2가지의 크로마토그래피 단계를 포함하여 조성물의 순도를 추가로 풍부화한다. 일반적으로, 임의의 적당한 크로마토그래피 방법은, 예를 들어 분획 I 침전물 또는 분획 II+III 여과 케이크로부터 추출된 인자 H 조성물을 추가로 풍부화하는데 이용될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 전에, 상기 기술된 바와 같이, 추출된 인자 H 조성물에 하나 이상의 추가적인 침전 단계를 실시하여 상기 조성물에 존재하는 불순물을 감소시키고, 크로마토그래피 단계에 대한 부하 부피를 감소시키고/시키거나 상기 조성물의 완충액을 교환할 것이다.
임의의 실시형태에서, 인자 H 조성물은 음이온 교환 크로마토그래피(AEC), 양이온 교환 크로마토그래피(CEC), 헤파린 친화 크로마토그래피, 소수성 교환 크로마토그래피(HIC), 하이드록시아파타이트 크로마토그래피(HAP), 면역친화 크로마토그래피, 크기 배제 크로마토그래피(즉, 겔 여과), 또는 기타 다른 적당한 크로마토그래피 단계를 포함하는 크로마토그래피 단계에 의해 추가로 풍부화될 수 있다. 크로마토그래피 단계는 배치 또는 컬럼 방식으로 실행될 수 있다.
바람직한 실시형태에서, 상기 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 및 헤파린 친화 크로마토그래피의 사용을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 풍부화된 인자 H 조성물의 제조에 대하여 본원에서 제공되는 방법은 적어도 1가지, 바람직하게는 적어도 2가지, 가장 바람직하게는 적어도 3가지의 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 추가로 포함할 것이다. 본원에서 제공되는 방법과 함께 이용될 수 있는 바이러스 불활성화 또는 제거 단계의 비제한적인 예는 용매 세제 처리(문헌[Horowitz et al ., Blood Coagul Fibrinolysis 1994 (5 Suppl 3):S21-S28] 및 [Kreil et al., Transfusion 2003 (43):1023-1028], 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 나노여과(문헌[Hamamoto et al ., Vox Sang 1989 (56)230-236] 및 [Yuasa et al., J Gen Virol. 1991 (72 (pt 8)):2021-2024], 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 고온에서 낮은 pH 항온처리(문헌[Kempf et al., Transfusion 1991 (31)423-427] 및 [Louie et al., Biologicals 1994 (22):13-19]), 및 동결건조된 인자 H 조성물의 열 처리(문헌 [Piszkiewicz et al ., Thromb Res. 1987 Jul 15;47(2):235-41]; [Piszkiewicz et al ., Curr Stud Hematol Blood Transfus. 1989;(56):44-54]; [Epstein 및 Fricke, Arch Pathol Lab Med. 1990 Mar;114(3):335-40])를 포함한다.
바람직한 실시형태에서, 본 발명은 (i) SiO2를 사용하여 분획 II+III 여과 케이크로부터 인자 H를 추출하는 단계, (ii) 제1 침전 단계를 실행하여 인자 H 조성물로부터 적어도 하나의불순물을 침전시키는 단계, (iii) 제2 침전 단계를 실행하여 상기 조성물로부터 인자 H를 침전시키는 단계, 및 (iv) 적어도 하나의 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 실행함으로써 바이러스 안전성 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 단계를 포함하여 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 감소된 바이러스 안정성 풍부화된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 침전 단계는 PEG 침전을 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 제1 및 제2 침전 단계의 PEG 농도는 표 16에 열거된 변형 Var. 1101 내지 Var. 1221로부터 선택된다.
2. 동시 결합 및 차별적인 용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 인자 H 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 제1 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계, 및 그 후 제2 용액 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 출발 조성물은 재현탁된 분획 II+III 침전물 또는 이의 동등한 침전물이다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 인자 H가 결합된 상태로 있는 용액 조건은, 인자 H의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 우선적으로 용리하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 인자 H의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 차별적인 용리는 연속적으로 SiO2에 결합 인자 H의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건(예컨대, 제1 용리 완충액), 및 SiO2로부터 결합된 인자 H의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건(예컨대, 제2 용리 완충액)과 접촉시키는 단계에 의해 달성된다.
다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 인자 H의 차별적인 용리는 결합된 인자 H의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건으로부터 SiO2로부터 결합된 인자 H의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건으로 용액 조건을 점진적으로 변화시킴으로써(즉, 용리 구배를 가짐) 달성된다. 이러한 방식으로, SiO2로부터 용리된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 인자 H 함량은 부분적으로 중복될 수 있다. 용리액을 분별하고 개별적인 분획을 특성화함으로써, 인자 H 집단은 인자 H 함량이 높고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 낮은 분획으로부터 형성될 수 있다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 10mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 적어도 20mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 적어도 2mS/㎝, 또는 적어도 3mS/㎝, 4mS/㎝, 5mS/㎝, 6mS/㎝, 7mS/㎝, 8mS/㎝, 9mS/㎝, 10mS/㎝, 11mS/㎝, 12mS/㎝, 13mS/㎝, 14mS/㎝, 15mS/㎝, 16mS/㎝, 17mS/㎝, 18mS/㎝, 19mS/㎝, 20mS/㎝, 21mS/㎝, 22mS/㎝, 23mS/㎝, 24mS/㎝, 25mS/㎝, 26mS/㎝, 27mS/㎝, 28mS/㎝, 29mS/㎝, 30mS/㎝, 31mS/㎝, 32mS/㎝, 33mS/㎝, 34mS/㎝, 35mS/㎝, 36mS/㎝, 37mS/㎝, 38mS/㎝, 39mS/㎝, 40mS/㎝, 41mS/㎝, 42mS/㎝, 43mS/㎝, 44mS/㎝, 45mS/㎝, 46mS/㎝, 47mS/㎝, 48mS/㎝, 49mS/㎝, 50mS/㎝, 55mS/㎝, 60mS/㎝, 65mS/㎝, 70mS/㎝, 75mS/㎝, 80mS/㎝, 85mS/㎝, 90mS/㎝, 95mS/㎝, 100mS/㎝, 또는 그 이상이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합되어 있는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 증가(예컨대, 6.0mS/㎝ 초과)하는 용액 조건의 사용은 SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 용리를 증가시키고, SiO2로부터 인자 H의 용리를 감소시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
3. 동시 결합 및 우선적인 인자 H 용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 인자 H 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 및 결합된 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 인자 H를 우선적으로 용리시키는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 이하이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 약 20mS/㎝ 이하, 또는 약 19mS/㎝, 18mS/㎝, 17mS/㎝, 16mS/㎝, 15mS/㎝, 14mS/㎝, 13mS/㎝, 12mS/㎝, 11mS/㎝, 10mS/㎝, 9mS/㎝, 8mS/㎝, 7mS/㎝, 6mS/㎝, 5mS/㎝, 4mS/㎝, 3mS/㎝, 2mS/㎝ 이하, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2로부터 용리하고 인자 H의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 감소(예컨대, 20mS/㎝ 미만)하는 용액 조건의 사용은 SiO2로부터 인자 H의 용리를 증가시키고, SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 용리를 감소시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2로부터 용리하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합된 상태로 있는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
4. 인자 H의 우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하지 않는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 인자 H가 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 10mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 적어도 20mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 적어도 2mS/㎝, 또는 적어도 3mS/㎝, 4mS/㎝, 5mS/㎝, 6mS/㎝, 7mS/㎝, 8mS/㎝, 9mS/㎝, 10mS/㎝, 11mS/㎝, 12mS/㎝, 13mS/㎝, 14mS/㎝, 15mS/㎝, 16mS/㎝, 17mS/㎝, 18mS/㎝, 19mS/㎝, 20mS/㎝, 21mS/㎝, 22mS/㎝, 23mS/㎝, 24mS/㎝, 25mS/㎝, 26mS/㎝, 27mS/㎝, 28mS/㎝, 29mS/㎝, 30mS/㎝, 31mS/㎝, 32mS/㎝, 33mS/㎝, 34mS/㎝, 35mS/㎝, 36mS/㎝, 37mS/㎝, 38mS/㎝, 39mS/㎝, 40mS/㎝, 41mS/㎝, 42mS/㎝, 43mS/㎝, 44mS/㎝, 45mS/㎝, 46mS/㎝, 47mS/㎝, 48mS/㎝, 49mS/㎝, 50mS/㎝, 55mS/㎝, 60mS/㎝, 65mS/㎝, 70mS/㎝, 75mS/㎝, 80mS/㎝, 85mS/㎝, 90mS/㎝, 95mS/㎝, 100mS/㎝, 또는 그 이상이다.
하나의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 50mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 증가(예컨대, 6.0mS/㎝ 초과)하는 용액 조건의 사용은 SiO2에 대한 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 친화력을 감소시키고, SiO2에 대한 인자 H의 친화력을 증가시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 인자 H가 SiO2에 결합하고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 약 10mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 적어도 20mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
5. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 인자 H 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 인자 H에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 인자 H가 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은, 인자 H의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 인자 H의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
상기 기술된 방법으로부터 원하는 결과를 달성하도록 변화될 수 있는 용액 조건은, 이에 제한되는 것은 아니지만 상기 방법에서 사용되는 용액의 pH, 용액의 전도도, 용액의 온도, 조성물 중 인자 H의 농도, 및 SiO2의 농도를 포함한다. 일반적으로, 인자 H가 풍부화된 조성물 중 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐 함량을 감소시키는 방법에 있어서 적당한 pH 범위는 약 3 내지 약 11의 범위이다. 상기 기술된 방법에 대한 적당한 전도도는 약 0.1mS/㎝ 내지 약 100mS/㎝의 범위이다. 상기 기술된 방법을 실행하는데 적당한 온도는 약 -10℃ 내지 약 90℃의 범위이다. 미분된 이산화규소는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 범위인 최종 농도로 사용될 수 있다. 마지막으로, 인자 H 조성물은 약 0.001㎎/㎖ 내지 약 100㎎/㎖의 농도로 변할 수 있다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 5.0 내지 약 11.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 6.0 내지 약 1.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 9.0이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 7.5 내지 약 8.5이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 7.0 내지 약 8.0이다.
특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 7.0의 pH를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, pH는 약 7.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 3.0 또는 약 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9, 8.0, 8.1, 8.2, 8.3, 8.4, 8.5, 8.6, 8.7, 8.8, 8.9, 9.0, 9.1, 9.2, 9.3, 9.4, 9.5, 9.6, 9.7, 9.8, 9.9, 10.0, 10.1, 10.2, 10.3, 10.4, 10.5, 10.6, 10.7, 10.8, 10.9, 또는 11.0이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 적어도 6.0의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 6.5이다. 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.0이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 적어도 7.5이다. 또 다른 실시형태에서, 용액의 pH는 적어도 3.0 또는 적어도 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0, 10.5, 또는 그 이상이다.
다른 실시형태에서, 상기 기술된 방법 중 임의의 것에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 11.0 이하의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, pH는 약 10.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 9.0 이하이다. 다른 실시형태에서, pH는 약 8.0 이하이다. 또 다른 실시형태에서, pH는 약 11.0 이하, 또는 10.5, 10.0, 9.5, 9.0, 8.5, 8.0, 7.5, 7.0, 6.5, 6.0, 5.5, 5.0, 4.5, 4.0, 3.5, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 이하이다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건의 전도도는 약 20mS/㎝ 이하, 또는 약 19mS/㎝, 18mS/㎝, 17mS/㎝, 16mS/㎝, 15mS/㎝, 14mS/㎝, 13mS/㎝, 12mS/㎝, 11mS/㎝, 10mS/㎝, 9mS/㎝, 8mS/㎝, 7mS/㎝, 6mS/㎝, 5mS/㎝, 4mS/㎝, 3mS/㎝, 2mS/㎝ 이하, 또는 그 이하이다.
하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 2mS/㎝ 내지 약 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 2mS/㎝ 내지 약 10mS/㎝이다. 다른 실시형태에서, 전도도는 약 20mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다. 또 다른 실시형태에서, 전도도는 약 10mS/㎝ 내지 약 6mS/㎝이다.
실시예 5에 나타내어지고 도 3에 예시되어 있는 바와 같이, pH가 6.0 초과(예컨대, 7.5)이고 전도도가 감소(예컨대, 20mS/㎝ 미만)하는 용액 조건의 사용은 SiO2에 대한 인자 H의 친화력을 증가시키고, SiO2에 대한 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 친화력을 감소시키게 됨을 발견하였다. 유리하게, 이러한 결과는 인자 H 조성물에 존재하는 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 수준을 감소시키는 방법을 제공하는데 사용될 수 있다. 상기 기술된 방법의 특정 실시형태에서, 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하고 인자 H의 상당한 분획이 결합하지 않는 용액 조건은 약 20mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 다른 특정 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 이하의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.0의 pH를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 용액 조건은 약 10mS/㎝ 내지 약 2mS/㎝의 전도도 및 적어도 7.5의 pH를 포함한다.
6. 혈장 침전물로부터의 인자 H 추출 방법
하나의 양태에서, 본 발명은 인자 H 조성물을 제조하는 방버을 제공하며, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 H 조성물로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시키는 것을 포함하며, 인자 H는 동시 침전되지 않는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, 및 (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시킴(인자 H는 침전되지 않음)으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 인자 H 조성물로부터 인자 H를 침전시키는 것을 포함하는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시혀애텡서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, 및 (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, 및 (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 인자 H 조성물과 함께 음이온 교환 크로마토그래피를 실행하는 것을 포함하는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, 및 (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 풍부화된 인자 H 조성물과 함께 헤파린 친화 크로마토그래피를 실행하는 것을 포함하는 풍부화 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (i) 음이온 교환 용리액에 존재하는 인자 H를 헤파린 친화 수지와 결합시키는 단계, 및 (j) 헤파린 친화 수지로부터 인자 H를 용리시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 인자 H 조성물에 전용 바이러스 제거 및/또는 불활성화 단계를 실시하는 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (i) 음이온 교환 용리액에 존재하는 인자 H를 헤파린 친화 수지와 결합시키는 단계, (j) 헤파린 친화 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, 및 (k) 나노여과, 용매/세제(S/D) 처리,열 처리, 및 낮은 pH에서의 항온처리로부터 선택된 전용 바이러스 제거 및/또는 불활성화 단계를 실행함으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은 한외여과/정용여과에 의하여 풍부화된 인자 H 조성물을 농축시키는 단계를 추가로 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 인자 H에 결합하는데 적당한 조건 하에서 인자 H 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 현탁된 혈장 침전물 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계, (b) 5.0 내지 7.0의 pH 및 4mS/㎝ 미만의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2를 세척하는 단계, (c) 7.0 내지 8.0의 pH 및 10mS/㎝ 초과의 전도도를 포함하는 용액을 이용하여 SiO2로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (d) 인자 H 용리액으로부터 적어도 하나의 불순물을 침전시켜 인자 H를 포함하는 상청액을 형성하는 단계, (e) 상청액으로부터 인자 H를 침전시키는 단계, (f) 인자 H를 포함하는 침전물을 재현탁시키는 단계, (g) 재현탁된 침전물에 존재하는 인자 H를 음이온 교환 수지와 결합시키는 단계, (h) 음이온 교환 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (i) 음이온 교환 용리액에 존재하는 인자 H를 헤파린 친화 수지와 결합시키는 단계, (j) 헤파린 친화 수지로부터 인자 H를 용리시키는 단계, (k) 나노여과, 용매/세제(S/D) 처리,열 처리, 및 낮은 pH에서의 항온처리로부터 선택된 전용 바이러스 제거 및/또는 불활성화 단계를 실행하는 단계, 및 (l) 한외여과/정용여과에 의하여 인자 H를 농축시킴으로써 풍부화된 인자 H 조성물을 제공하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa 중 하나 이상이다. 임의의 실시형태에서, 혈장 침전물은 콘 분획 I 침전물, 콘 분획 II+III 침전물, 콘 분획 I+II+III 침전물, 키슬러/니츠만 침전물 A, 키슬러/니츠만 침전물 B, 또는 이의 동등한 분획이다. 하나의 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 5.5 내지 6.5의 pH를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, SiO2를 세척하는데 사용되는 용액은 6.0±0.2의 pH를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 적어도 20mS/㎝의 전도도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H를 용리시키는데 사용되는 용액은 25mS/㎝ 내지 40mS/㎝의 전도도를 포함한다. 하나의 실시형태에서, 불순물 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 불순물 PEG 침전은 3% 내지 7%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 불순물 침전 단계에서 PEG 4000의 최종 농도는 5±0.5%이다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 침전 단계는 PEG 침전이다. 구체적인 실시형태에서, 인자 H PEG 침전은 10% 내지 15%의 최종 농도로 PEG 4000을 이용하는 침전을 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, PEG 4000의 최종 농도는 인자 H 침전 단계에서 12±0.5%이다.
C. 인터 -알파-트립신 억제제(IαI)
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 IαI 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 IαI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 IαI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 IαI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 IαI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 IαI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 IαI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, IαI 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, IαI 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 IαI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 IαI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 IαI 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 IαI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
1. 동시 결합 및 차별적인 용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 IαI 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 제1 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계, 및 그 후 제2 용액 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 출발 조성물은 재현탁된 분획 II+III 침전물 또는 이의 동등한 침전물이다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; (c) IαI가 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는 단계; 및 (d) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, IαI가 결합된 상태로 있는 용액 조건은, IαI의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 우선적으로 용리하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 IαI의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 차별적인 용리는 연속적으로 SiO2에 결합된 IαI의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건(예컨대, 제1 용리 완충액), 및 SiO2로부터 결합된 IαI의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건(예컨대, 제2 용리 완충액)과 접촉시키는 단계에 의해 달성된다.
다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 IαI의 차별적인 용리는 결합된 IαI의 상당한 분획이 아닌 대다수의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리시키는데 적당한 제1 용액 조건으로부터 SiO2로부터 결합된 IαI의 상당한 분획을 용리시키는데 적당한 제2 용액 조건으로 용액 조건을 점진적으로 변화시킴으로써(즉, 용리 구배를 가짐) 달성된다. 이러한 방식으로, SiO2로부터 용리된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 및 IαI 함량은 부분적으로 중복될 수 있다. 용리액을 분별하고 개별적인 분획을 특성화함으로써, IαI 집단은 IαI 함량이 높고 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐 함량이 낮은 분획으로부터 형성될 수 있다.
2. 동시 결합 및 우선적인 IαI 용리
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 단백질을 미분된 이산화규소(SiO2)에 결합시킴으로써 수집된 혈장으로부터 유래한 조성물로부터 IαI 및 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 동시 추출하는 단계, 및 결합된 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있는 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 출발 조성물은 재현탁된 분획 II+III 침전물 또는 이의 동등한 침전물이다.
구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 IαI와 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건 하에서 SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 결합된 상태로 있는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 SiO2에 결합된 상태로 있으면서 IαI를 우선적으로 용리시키는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 SiO2에 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
3. IαI의 우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) IαI에 결합하지만 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계; 및 (c) SiO2로부터 IαI를 용리시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 결합하지 않는 용액 조건은, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 IαI가 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
4. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 우선적인 결합
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양이 감소된 혈장 유래 IαI 조성물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하지만 IαI에 결합하지 않는데 적당한 조건 하에서 IαI 및 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 함유하는 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, IαI가 SiO2와 결합하지 않는 용액 조건은, IαI의 상당한 분획이 용액 중에서 결합되지 않은 상태로 있으면서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐이 SiO2에 우선적으로 결합할 수 있게 하는 조건을 말한다. 하나의 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 10%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 25%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 50%를 말한다. 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 75%를 말한다. 또 다른 실시형태에서, 상당한 분획은 출발 조성물 중 IαI의 적어도 10%, 또는 출발 조성물 중 IαI의 적어도 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99%, 또는 그 이상을 말한다.
D. 알파-1- 항트립신 (A1PI)
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 알파-1-항트립신(A1PI) 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 A1PI 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 A1PI 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이다.
하나의 실시형태에서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 A1PI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 방법은, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, A1PI 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함한다. 임의의 실시형태에서, A1PI 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
마찬가지로, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 (a) 제1 A1PI 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 Ig 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 A1PI 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 A1PI 조성물을 형성하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 및/또는 인자 XII(FXII)이다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다.
특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 제조용 중간체이다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, A1PI 조성물은 콘 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1946, 68(3): 459-475]; [J. Am. Chem. Soc. 72:465-474 (1950)]), 온클레이 분별 절차(문헌[J. Am. Chem. Soc., 1949, 71(2): 541-550]), 키슬러/니츠만 분별 절차(문헌[Vox Sang. 7:414-424 (1962)]), 미국 특허 제6,974,792호 또는 제7,807,435호에 개시된 정제 절차, 이의 변형 절차, 및 당업계에 공지된 유사 또는 동등한 정제 절차로부터의 제조용 중간체이다. 상기 언급된 참조 문헌은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
예를 들어, 폴리에틸렌 글라이콜 4000을 이용한 혈장의 분획된 침전물뿐만 아니라 다양한 혈장 분획의 처리를 포함하는 A1PI에 대한 다수의 제조 방법이 알려져 있다(콘 분획 IV-1-침전물 또는 키슬러 및 니츠만 상청액 A 또는 A+1)(문헌[Feldman 및 Winkelman, Blood Separation and Plasma Fractionation (1991), Wiley-Liss, Inc., pp. 341-383]). 보다 상술된 간행물에서, 각각의 혈액 분획은, 예컨대 (문헌[Basis et al. (Vopr. Med. Khim. 33 (1) (1987), 54-59)]) 친화 크로마토그래피 물질 또는 양이온 교환체 크로마토그래피 물질(유럽 특허 제0 698 615호 A1)로 처치된, DEAE 셀룰로오스에 의하여 정제되었다. 미국 특허 제6,974,792호는 콘 분획 V 침전물을 이용하여 비활성이 높은 A1PI를 수득하는 정제 공정을 기술한다. 미국 특허 제7,807,435호는 콘 분획 IV-1 및/또는 분획 IV-4 침전물을 이용하여 보다 높은 수율의 A1PI를 제공하는 정제 공정을 기술한다.
하나의 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 냉동 불량 콘 집단이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 재현탁된 콘 분획 V 침전물 또는 이의 동등한 분획이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 재현탁된 콘 분획 IV-1 침전물 또는 이의 동등한 분획이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 재현탁된 콘 분획 IV-4 침전물 또는 이의 동등한 분획이다. 다른 특정 실시형태에서, A1PI 조성물은 키슬러/니츠만 상청액 A, 또는 이의 동등한 분획이다.
일반적으로, A1PI 조성물로부터 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 제거는 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐은 SiO2와 결합하는 pH 및 전도도의 용액 조건 하에서 A1PI 함유 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처리함으로써 달성될 수 있다.
하나의 실시형태에서, 공정 개선은 A1PI을 포함하는 혈장 침전물의 여과 또는 원심분리 청징 전에 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현된다. 하나의 실시형태에서, SiO2 처리 단계는 미분된 이산화규소 입자(예컨대, 흄드 실리카, Aerosil(등록상표))의 첨가 후, 현탁액을 계속 혼합하는 동안 40분 내지 16시간의 항온처리 기간을 포함한다. 임의의 실시형태에서, 항온처리 기간은 약 50분 내지 약 70분, 또는 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80분, 또는 그 이상일 것이다. 다른 실시형태에서, 항온처리 기간은 적어도 1시간, 또는 적어도 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 또는 그 이상일 것이다. 특정 실시형태에서, 항온처리 기간은 적어도 15시간일 것이다. 일반적으로, 처리는 약 0℃ 내지 약 25℃, 또는 약 2℃ 내지 약 8℃에서 실행될 것이다. 임의의 실시형태에서, 처리는 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 10℃, 11℃, 12℃, 13℃, 14℃, 15℃, 16℃, 17℃, 18℃, 19℃, 20℃, 21℃, 22℃, 23℃, 24℃, 또는 25℃에서 실행될 수 있다. 특정 실시형태에서, 처리는 약 2℃ 내지 약 25℃에서 실행된다. 구체적인 실시형태에서, 공정 개선은 흄드 실리카 처리의 포함에 의해 실현되며, 흄드 실리카 처리는 면역글로불린 제조물에서 FXI, FXIa, FXII, 및 FXIIa의 수준을 감소시킨다.
임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ 침전물 내지 약 100g/㎏ 침전물의 농도로 첨가된다. 임의의 실시형태에서, 흄드 실리카는 약 20g/㎏ 침전물, 또는 약 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 100g/㎏ 침전물의 농도로 첨가될 수 있다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카(예컨대, Aerosil 380 또는 동등물)는 약 40g/㎏ 침전물의 최종 농도로 재현탁물을 침전시키도록 첨가된다.
임의의 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 10g/g 단백질의 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.01g/g 단백질 내지 약 5g/g 단백질의 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 다른 실시형태에서, SiO2는 약 0.02g/g 단백질 내지 약 4g/g 단백질의 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 전체 단백질 g당 적어도 0.1g의 최종 농도로 A1PI 조성물에 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.2g의 농도로 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 0.25g의 농도로 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 g당 적어도 2g의 농도로 첨가된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 흄드 실리카는 전체 단백질 1g당 적어도 2.5g의 농도로 첨가된다. 또 다른 구체적인 실시형태에서, 미분된 이산화규소는 적어도 0.01g/g 전체 단백질 또는 전체 단백질 g당 적어도 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 9.0, 9.5, 10.0g, 또는 그 이상의 농도로 첨가된다.
임의의 실시형태에서, 여과 보조제, 예를 들어 Celpure C300(Celpure) 또는 Hyflo-Supper-Cel(World Minerals)은 이산화규소 처리 후에 첨가되어 심층여과를 용이하게 할 것이다. 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물 내지 약 1.0㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.8㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.03㎏/㎏ 침전물 내지 약 0.7㎏/㎏ 침전물의 최종 농도로 첨가될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 적어도 0.01㎏/㎏ 침전물, 또는 적어도 0.02㎏/㎏, 0.03㎏/㎏, 0.04㎏/㎏, 0.05㎏/㎏, 0.06㎏/㎏, 0.07㎏/㎏, 0.08㎏/㎏, 0.09㎏/㎏, 0.1㎏/㎏, 0.2㎏/㎏, 0.3㎏/㎏, 0.4㎏/㎏, 0.5㎏/㎏, 0.6㎏/㎏, 0.7㎏/㎏, 0.8㎏/㎏, 0.9㎏/㎏, 또는 1.0㎏/㎏ 침전물의 최종 농도로 첨가될 것이다. 임의의 실시형태에서, 여과 보조제는 약 0.01㎏/㎏ 침전물, 또는 약 0.02㎏/㎏, 0.03㎏/㎏, 0.04㎏/㎏, 0.05㎏/㎏, 0.06㎏/㎏, 0.07㎏/㎏, 0.08㎏/㎏, 0.09㎏/㎏, 0.1㎏/㎏, 0.2㎏/㎏, 0.3㎏/㎏, 0.4㎏/㎏, 0.5㎏/㎏, 0.6㎏/㎏, 0.7㎏/㎏, 0.8㎏/㎏, 0.9㎏/㎏, 또는 1.0㎏/㎏ 침전물의 최종 농도로 첨가될 것이다.
따라서, 하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.5 내지 약 5.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 7.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.0의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.6 내지 약 5.6의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.7 내지 약 5.5의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.1의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 또는 약 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.0 이하 또는 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 또는 7.0 이하의 pH에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 2.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.7mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.6mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.5mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.3mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.2mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.1mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.2mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.3mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 내지 약 0.4mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.5mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 약 0.1mS/㎝ 이하 또는 0.2mS/㎝, 0.3mS/㎝, 0.4mS/㎝, 0.5mS/㎝, 0.6mS/㎝, 0.7mS/㎝, 0.8mS/㎝, 0.9mS/㎝, 1.0mS/㎝, 1.1mS/㎝, 1.2mS/㎝, 1.3mS/㎝, 1.4mS/㎝, 1.5mS/㎝, 1.6mS/㎝, 1.7mS/㎝, 1.8mS/㎝, 1.9mS/㎝, 2.0mS/㎝, 2.1mS/㎝, 2.2mS/㎝, 2.3mS/㎝, 2.4mS/㎝, 2.5mS/㎝, 2.6mS/㎝, 2.7mS/㎝, 2.8mS/㎝, 2.9mS/㎝, 또는 3.0mS/㎝ 이하의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 본 발명은 혈장 유래 A1PI 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 낮은 pH 및 낮은 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.8 내지 약 5.4의 pH에서 약 0.6mS/㎝ 내지 약 1.0mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 4.9 내지 약 5.3의 pH에서 약 0.7mS/㎝ 내지 약 0.9mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 보다 더 구체적인 실시형태에서, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 5.2의 pH에서 약 0.8mS/㎝의 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 상기 방법은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 단계를 포함한다.
1. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 결합 및 용리
하나의 양태에서, 본 발명은 A1PI을 포함하는 재현탁된 혈장 침전물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 일반적으로, 침전물은 수집된 혈장, 바람직하게는 인간 혈장의 분별 동안 임의의 침전물일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 제1 낮은 pH 용액 조건 하에서 A1PI을 불용성 상태로 포함하는 재현탁된 혈장 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 A1PI을 불용성 상태로 유지하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, A1PI의 상당한 분획을 불용성 상태로 유지하는데 적당한 제2 낮은 pH 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, 및 불용성 부분으로부터 A1PI을 추출하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 침전 반응전 또는 침전 반응 동안 혼합되고 침전물과 함께 회수된다. 구체적인 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-1 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-4 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 V 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 IV이다. 또 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 C이다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 4.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제2 낮은 pH 용액 조건은 4.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제2 낮은 pH 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 10mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함한다.
하나의 구체적인 실시형태에서, 본 발명은 A1PI을 포함하는 재현탁된 혈장 침전물에서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 약 5.0 내지 약 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함하는 제1 낮은 pH 용액 조건 하에서 A1PI을 불용성 상태로 포함하는 재현탁된 혈장 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 A1PI을 불용성 상태로 유지하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, 약 5.0 내지 약 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 초과의 이온 강도를 포함하여 A1PI의 상당한 분획을 불용성 상태로 유지하는 제2 낮은 pH 용액 조건 하에서 SiO2로부터 세린 및/또는 세린 프로테아제 지모겐을 용리하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, 및 불용성 부분으로부터 A1PI을 추출하는 단계를 포함한다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 침전 반응전 또는 침전 반응 동안 혼합되고 침전물과 함께 회수된다. 구체적인 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-1 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-4 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 V 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 IV이다. 또 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 C이다.
2. 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 결합 및 A1PI의 추출
다른 양태에서, 본 발명은 A1PI을 포함하는 재현탁된 혈장 침전물에서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법을 제공한다. 일반적으로, 침전물은 수집된 혈장, 바람직하게는 인간 혈장의 분별 동안 임의의 침전물일 수 있다. 하나의 실시형태에서, 상기 방법은 pH가 낮은 제1 용액 조건 하에서 A1PI을 불용성 상태로 포함하는 재현탁된 혈장 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하고 A1PI을 불용성 상태로 유지하는 단계, 현탁액의 가용성 및 불용성 부분을 분리하는 단계, pH가 높은 제2 용액 조건 하에서 불용성 부분으로부터 A1PI을 추출하는 단계, 및 불용성 부분으로부터 가용성 부분을 분리하는 단계를 포함하며, 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 상당한 분획은 불용성 부분으로부터의 A1PI의 추출 동안 SiO2와 결합된 상태로 있는다. 하나의 실시형태에서, SiO2는 침전 반응전 또는 침전 반응 동안 혼합되고 침전물과 함께 회수된다. 구체적인 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-1 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 IV-4 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 콘 분획 V 침전물이다. 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 IV이다. 또 다른 실시형태에서, 침전물은 키슬러/니츠만 침전물 C이다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제1 용액 조건은 4.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 7.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제1 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.0 내지 6.5의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 1.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 5.5 내지 6.0의 pH 및 약 0.5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 5.5±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 6.0±0.2의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 또 다른 실시형태에서, 제1 낮은 pH 용액 조건은 표 12, 표 13, 표 14, 및 표 15에 제시된 바와 같이, 변형 Var. 1222 내지 3041 중 임의의 하나에 따른 pH 및 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 하나의 실시형태에서, 제2 용액 조건은 7.0 내지 10.0의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 9.0의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.5의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 7.5±0.2의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 8.0±0.2의 pH 및 약 10.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제2 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 9.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 8.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 5.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 약 2.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.0 내지 8.5의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 이온 강도를 포함한다.
상기 제공되는 방법의 다른 실시형태에서, 제2 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 9.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 8.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 7.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 6.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 5mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 4.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 3.0mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.0의 pH 및 약 2mS/㎝ 미만의 이온 강도를 포함한다. 다른 실시형태에서, 용액 조건은 7.5 내지 8.5의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 이온 강도를 포함한다. 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 7.5±0.2의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝의 이온 강도를 포함한다. 다른 구체적인 실시형태에서, 용액 조건은 8.0±0.2의 pH 및 2mS/㎝ 내지 10mS/㎝ 의 이온 강도를 포함한다.
IV . 약학적 조성물
하나의 양태에서, 본 발명은 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질의 조성물을 제공하며, 이는 본원에서 기술되는 방법 중 임의의 것에 따라서 제조된다. 임의의 실시형태에서, 이러한 조성물은 약제 투여용(즉, 약학적 조성물)으로 제형화될 것이다. 일반적으로, 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조되는 혈장 유래 혈액 단백질 조성물은 감소된 아마이드 분해 활성을 가질 것이며, 기존의 현재 이용가능한 혈장 유래 생물제제보다 더 양호한 안전 프로파일을 제공할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 본원에서 제공되는 조성물은 감소된 인자 XI, 인자 XIa, 인자 XII, 및/또는 인자 XIIa 함량을 가질 것이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (b) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 조성물은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조된다. 임의의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질에서 단백질을 부분적으로 침전시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 한외여과 및/또는 정용여과함으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질을 포함하는 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 수집한 혈장으로부터 유래한 출발 물질을 크로마토그래피 수지와 접촉시킴으로써 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 부분적 침전은 알코올을 사용하여 달성된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 조성물은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조된다. 임의의 실시형태에서, 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; 및 (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 상기 기술된 조성물은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함하는 방법에 의해 제조된다. 임의의 실시형태에서, 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계(예컨대, 알코올 분별 단계), 한외여과/정용여과 단계, 및 크로마토그래피 단계로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (d) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 1에 나타낸 변형 Var. 1 내지 Var. 100 중 임의의 하나로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 혈액 단백질의 결핍 또는 기능 장애와 연관된 병태의 치료에 사용하기 위한 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질의 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (b) 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제2 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계; (c) 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제2 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계; (d) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐을 제거하는 단계; 및 (e) 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제3 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 형성하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 제1 및 제2 풍부화 단계의 조합은 표 2, 표 3, 표 4, 표 5, 표 6, 표 7, 표 8, 표 9, 표 10, 또는 표 11에 나타낸 변형 Var. 101 내지 Var. 1100 중 임의의 하나로부터 선택된다. 하나의 실시형태에서, 상기 조성물은 약제 투여용으로 제형화된다. 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 정맥내 투여용으로 제형화된다. 다른 구체적인 실시형태에서, 상기 조성물은 근육내 투여용으로 제형화된다. 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 피하 투여용으로 제형화된다. 또 다른 실시형태에서, 상기 조성물은 안내 투여용으로 제형화된다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
상기 기술된 조성물의 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 혈장 유래 표적 단백질에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 크로마토그래피 수지로부터 혈장 유래 표적 단백질을 용리시키는 하위 단계를 포함한다. 하나의 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지 않는다. 다른 구체적인 실시형태에서, 불순물은 하위 단계 (i)에서 크로마토그래피 수지에 결합하지만, 하위 단계 (ii)에서 크로마토그래피 수지로부터 용리되지 않는다.
상기 기술된 조성물의 다른 임의의 실시형태에서, 크로마토그래피 풍부화 단계는 (i) 적어도 하나의 불순물에 결합하는데 적당한 조건 하에서 상기 제1 풍부화 혈장 유래 표적 단백질 조성물을 크로마토그래피 수지와 접촉시키는 하위 단계; 및 (ii) 상기 하위 단계 (i)에서 혈장 유래 표적 단백질이 크로마토그래피 수지와 결합하지 않은 혈장 유래 단백질 조성물로부터 수지를 분리하는 하위 단계를 포함한다.
본원에서 제공되는 조성물의 임의의 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 10%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 25%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 50%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 75%만큼 감소된다. 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 90%만큼 감소된다. 또 다른 실시형태에서, 특정 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양은 적어도 5%만큼, 또는 적어도 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%만큼 감소된다. 하나의 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 감소는 개별적인 SiO2 처리 단계내에서 달성되는 감소를 말한다. 다른 실시형태에서, 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 감소는 SiO2 처리 단계를 제외하고 유사한 방식으로 제조된 조성물과 비교하여 최종 조성물 내 오염 물질의 수준을 말한다.
하나의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 본원에서 제공되는 방법을 사용하여 분리된 혈장 유래 단백질 조성물을 제형화함으로써 제조된다. 일반적으로, 제형화된 조성물에 적어도 1가지, 바람직하게는 적어도 2가지, 가장 바람직하게는 적어도 3가지의 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 실시할 것이다. 본원에서 제공되는 방법과 함께 이용할 수 있는 바이러스 불활성화 또는 제거 단계의 비제한적인 예는 용매 세제 처리(문헌[Horowitz et al., Blood Coagul Fibrinolysis 1994 (5 Suppl 3):S21-S28] 및 [Kreil et al., Transfusion 2003 (43):1023-1028], 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 나노여과(문헌[Hamamoto et al., Vox Sang 1989 (56)230-236] 및 [Yuasa et al., J Gen Virol. 1991 (72 (pt 8)):2021-2024]), 이들 둘다 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 명백하게 포함됨), 및 고온에서 낮은 pH 항온처리(문헌[Kempf et al., Transfusion 1991 (31)423-427] 및 [Louie et al., Biologicals 1994 (22):13-19])를 포함한다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 정맥내, 피하, 근육내, 및/또는 안내 투여에 적당한 하나 이상의 완충제 또는 pH 안정화제를 포함할 것이다. 본원에서 제공되는 혈장 유래 단백질 조성물을 제형화하는데 적당한 완충제의 비제한적인 예는 적절한 pH로 조정되는 글라이신, 시트레이트, 포스페이트, 아세테이트, 글루타메이트, 타르트레이트, 벤조에이트, 락테이트, 히스티딘 또는 기타 다른 아미노산, 글루코네이트, 말레이트, 석시네이트, 포메이트, 프로피오네이트, 카보네이트, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 일반적으로, 완충제는 확장된 기간 동안 제형에 적당한 pH를 유지하는데 충분할 것이다. 바람직한 실시형태에서, 완충제는 글라이신이다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 약학적 조성물은 조성물의 삼투압농도(osmolarity)를 조정하기 위한 제제를 선택적으로 추가로 포함할 수 있다. 삼투성 제제의 비제한적인 예는 만니톨, 솔비톨, 글라이세롤, 수크로스, 글루코스, 덱스트로스, 레불로스, 프럭토스, 락토스, 폴리에틸렌 글라이콜, 포스페이트, 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 칼슘 글루코노글루코헵톤에이트, 디메틸 설폰 등을 포함한다.
전형적으로, 본원에서 제공되는 제형은 생리적 삼투압 농도와 비슷한 삼투압농도, 즉 약 285 내지 295mOsmol/㎏ 을 가질 것이다(문헌[Lacy et al., Drug Information Handbook - Lexi-Comp 1999:1254]). 임의의 실시형태에서, 제형의 삼투압농도는 약 200mOsmol/㎏ 내지 약 350mOsmol/㎏, 바람직하게는 약 240 내지 약 300mOsmol/㎏일 것이다. 특정 실시형태에서, 제형의 삼투압농도는 약 200mOsmol/㎏, 또는 210mOsmol/㎏, 220mOsmol/㎏, 230mOsmol/㎏, 240mOsmol/㎏, 245mOsmol/㎏, 250mOsmol/㎏, 255mOsmol/㎏, 260mOsmol/㎏, 265mOsmol/㎏, 270mOsmol/㎏, 275mOsmol/㎏, 280mOsmol/㎏, 285mOsmol/㎏, 290mOsmol/㎏, 295mOsmol/㎏, 300mOsmol/㎏, 310mOsmol/㎏, 320mOsmol/㎏, 330mOsmol/㎏, 340mOsmol/㎏, 340mOsmol/㎏, 또는 350mOsmol/㎏일 것이다.
본원에서 제공되는 혈장 유래 제형은 일반적으로 확장된 기간 동안 액체 형태로 안정적이다. 임의의 실시형태에서, 제형은 실온에서 적어도 약 3개월 동안, 또는 실온에서 적어도 약 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 안정적이다. 제형은 또한 일반적으로 냉장 조건(전형적으로 약 2℃ 내지 약 8℃) 하에서 6개월 또는 적어도 약 18개월 동안, 또는 냉장 조건 하에서 적어도 약 21, 24, 27, 30, 33, 36, 39, 42, 또는 45개월 동안 안정적일 것이다.
V. 처리 방법
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조되는 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 투여함으로써 혈액 단백질 결핍 또는 기능장애와 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 혈액 단백질 결핍 또는 기능장애와 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 임의의 실시형태에서, 상기 조성물은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택되는 혈장 유래 단백질을 포함한다.
하나의 양태에서, 본 발명은 혈액 단백질 결핍 또는 기능장애와 연관된 병태의 치료에 사용하기 위한 약제의 제조에 있어서 세린 프로테아제 및/또는 세린 프로테아제 지모겐의 수준이 감소된 혈장 유래 단백질 조성물의 용도를 제공한다. 임의의 실시형태에서, 혈장 유래 단백질은 면역글로불린(Ig), 알부민, 알파-1-항트립신(A1PI), 뷰티릴콜린에스테라제, 인자 H, 보체계의 단백질, 및 인터-알파-트립신 억제제(IαI) 단백질로부터 선택된다.
A. 면역글로불린
현대 의학에서 일상적으로 실시되는 바와 같이, 농축된 면역글로불린(특히 IgG)의 멸균 제조물은 3가지 주요 부류, 즉 면역 결핍증, 염증 및 자가면역 질환, 및 급성 감염증에 속하는 의학적 병태를 치료하는데 사용된다. 또한 이러한 IgG 제조물은 다발성 경화증(특히 재발-이장성 다발성경화증 또는 RRMS), 알츠하이머병, 및 파킨슨병을 치료하는데 사용될 수 있다. 본 발명의 정제된 IgG 제조물은 이러한 목적뿐만 아니라 IgG 제조물의 기타 다른 임상적으로 인정되는 용도에 적당하다.
FDA는 다양한 징후, 예를 들어 동종 골수 이식, 만성 림프구성 백혈병, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 아동 HIV, 1차 면역결핍증, 가와사키병, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증(CIDP), 및 항체 수준이 높은 수혜자의 신장 이식 또는 ABO 부적합 공여자의 신장 이식을 치료하기 위한 IVIG의 사용을 승인하였다. 임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IVIG 조성물은 이러한 질환 및 병태의 치료 또는 관리에 유용하다.
게다가, 다양한 징후, 예를 들어 만성 피로 증후군, 클로스트리듐 디피실리균 대장염, 피부근염(dermatomyositis)과 다발성근염 및 피부근염(polymyositis), 그레이브스 안병증, 길랑-바레 증후군, 근육성이영양증, 포함체근육염, 램버트-이튼 증후군, 홍반성 낭창, 다초점성 운동신경병증, 다발성 경화증(MS), 중증근무력증, 신생아 동종면역성 혈소판 감소증, 파보바이러스 B19 감염, 천포창, 수혈후 자반증, 신장 이식 거부반응, 자연 유산(spontaneous Abortion/Miscarriage), 전신근강직증후군, 안구간대경련 근간대경련, 위독한 성인에서 중증패혈증 및 패혈성 쇼크, 독성표피용해, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, X-연관 무감마글로불린혈증 및 저감마글로부민혈증의 치료 또는 관리를 위하여 IVIG를 위한 인가되지 않은 약품의 사용(off-label)을 환자에게 일반적으로 제공한다. 임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IVIG 조성물은 이러한 질환 및 병태의 치료 또는 관리에 유용하다.
마지막으로, 1차 면역결핍증, RRMS, 알츠하이머병, 및 파킨슨병을 포함하는 질환의 치료 또는 관리를 위한 IVIG의 실험적 사용이 제안되었다(미국 특허 출원 공개 제 U.S. 2009/0148463호, 이는 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨). 임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IVIG 조성물은 1차 면역결핍증, RRMS, 알츠하이머병, 또는 파킨슨병의 치료 또는 관리에 유용하다. 매일 투여를 포함하는 임의의 실시형태에서, 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 질환 중증도, 투여 경로(예컨대, 정맥내 대 피하) 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 본 발명의 면역글로불린 제조물은 개체에 매일 약 5㎎/㎏ 내지 약 2000㎎/㎏으로 투여될 수 있다. 추가적인 실시형태에서, 면역글로불린 제조물은 적어도 약 10㎎/㎏, 적어도 15㎎/㎏, 적어도 20㎎/㎏, 적어도 25㎎/㎏, 적어도 30㎎/㎏, 또는 적어도 50㎎/㎏의 양으로 투여될 수 있다. 추가적인 실시형태에서, 면역글로불린은 개체에 매일 최대 약 100㎎/㎏, 최대 약 150㎎/㎏, 최대 약 200㎎/㎏, 최대 약 250㎎/㎏, 최대 약 300㎎/㎏, 최대 약 400㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 다른 실시형태에서, 면역글로불린 제조물의 용량은 더 많거나 더 적을 수 있다. 또한, 면역글로불린 제조물은 하루에 1번 이상의 용량으로 투여될 수 있다. IgG 제조물에 의해 치료되는 질환을 잘 아는 임상의는 당업계에 공지된 기준에 따라서 환자에레 적절한 용량을 결정할 수 있다.
본 발명에 따라서, 의사가 치료 과정을 완료하는데 필요한 시간을 결정할 수 있으며 하루만큼 짧은 시간 내지 1개월 초과의 시간의 범위일 수 있다. 임의의 실시형태에서, 치료 과정은 1 내지 6개월일 수 있다.
IVIG 제조물의 유효한 양은 정맥 수단에 의해 개체에 투여된다. 용어 "유효한 양"은 개체에서 질환 또는 병태의 개선 또는 교정을 가져오는 IVIG 제조물의 양을 말한다. 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 치료될 질환 또는 병태, 질환 중증도 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, IVIG 제조물은 개체에 투여당 약 5㎎/㎏ 내지 약 2000㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 용량은 적어도 약 5㎎/㎏, 또는 적어도 약 10㎎/㎏, 또는 적어도 약 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏, 1900㎎/㎏, 또는 적어도 약 2000㎎/㎏일 수 있다.
IVIG 치료의 투약량 및 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 또는 병태의 중증도에 좌우될 것이다. 일반적으로, 1차 면역결핍증에 있어서는, 약 3 내지 4주마다 약 100㎎/㎏ 체중 내지 약 400㎎/㎏ 체중의 용량이 투여될 것이다. 신경학적 및 자가면역 질환에 있어서는, 최대 2g/㎏ 체중이 1달에 1번 5일 과정으로 3 내지 6개월 동인 이행된다. 이는 일반적으로 약 3 내지 4주마다 1번 약 100㎎/㎏ 체중 내지 약 400㎎/㎏ 체중의 투여를 포함하는 유지 요법으로 보충된다. 일반적으로, 환자는 약 14 내지 35일마다 1번, 또는 약 21 내지 28일마다 1번 용량 또는 치료를 받을 것이다. 치료 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 및 병태의 중증도에 좌우될 것이다.
바람직한 실시형태에서, 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증의 치료를 필요로 하는 사람에서 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 발명의 약학적 IVIG 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 관련된 실시형태에서, 본 발명은, 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증의 치료를 필요로 하는 사람에서 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증의 치료를 위하여 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조되는 IVIG 조성물을 제공한다.
임의의 실시형태에서, 면역 결핍증, 자가면역 질환, 또는 급성 감염증은 동종 골수 이식, 만성 림프구성 백혈병, 특발성 혈소판 감소성 자반증(ITP), 아동 HIV, 1차 면역결핍증, 가와사키병, 만성 염증성 탈수초성 다발성신경병증(CIDP), 항체 수준이 높은 수혜자의 신장 이식 또는 ABO 부적합 공여자의 신장 이식, 만성 피로 증후군, 클로스트리듐 디피실리균 대장염, 피부근염(dermatomyositis)과 다발성근염 및 피부근염(polymyositis), 그레이브스 안병증, 길랑-바레 증후군, 근육성이영양증, 포함체근육염, 램버트-이튼 증후군, 홍반성 낭창, 다초점성 운동신경병증, 다발성 경화증(MS), 중증근무력증, 신생아 동종면역성 혈소판 감소증, 파보바이러스 B19 감염, 천포창, 수혈후 자반증, 신장 이식 거부반응, 자연 유산(spontaneous Abortion/Miscarriage), 전신근강직증후군, 안구간대경련 근간대경련, 위독한 성인에서 중증패혈증 및 패혈성 쇼크, 독성표피용해, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, X-연관 무감마글로불린혈증 및 저감마글로부민혈증, 1차 면역결핍증, RRMS, 알츠하이머병, 및 파킨슨병으로부터 선택된다.
B. 인자 H
하나의 양태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 방법에 따라서 제조된 인자 H 조성물의 치료적으로 유효한 양을 투여함으로써 인자 H의 기능장애 또는 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 인자 H의 기능장애 또는 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 I 침전물로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다. 다른 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 II+III 여과 케이크로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다.
임의의 실시형태에서, 인자 H의 기능장애와 연관된 질환 또는 장애는 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS), 노인황반변성(AMD), 막증식성사구체신염 II(MPGNII), 심근경색증, 관동맥성 심장병/관상동맥 질환(CAD/CHD), 및 알츠하이머병으로부터 선택된다. 하나의 특정 실시형태에서, 상기 질환은 비정형적인 용혈성요독증후군(aHUS)이다. 다른 특정 실시형태에서, 상기 질환은 노인황반변성(AMD)이다. 또 다른 특정 실시형태에서, 상기 질환은 막증식성사구체신염 II(MPGNII)이다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 인자 H 조성물의 치료적으로 유효한 양을 개체에 투여함으로써 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 제공된다. 하나의 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 I 침전물로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다. 다른 실시형태에서, 인자 H 조성물은 분획 II+III 여과 케이크로부터 인자 H를 추출함으로써 제조된다.
임의의 실시형태에서, 비정상적인 대안적 경로의 보체 활성과 연관된 질환 또는 장애는 자가면역 질환(예를 들어, 류마티스 관절염, IgA 신증, 천식, 전신 홍반성 낭창, 다발성 경화증, 항인산화지질 증후군, ANCA-연관 혈관염, 천포창, 포도막염, 중증근무력증, 하시모토 갑상선염), 신장 질환(예를 들어 IgA 신증, 용혈성요독증후군, 막증식성사구체신염), 천식, 알츠하이머병, 성인 황반변성, 발작성 야간혈색소뇨증, 복부 대동맥류, 허혈 재관류 손상, 및 패혈증으로부터 선택된다.
본 발명에 의해 제공되는 약학적 조성물은 단독으로 또는 기타 다른 치료제와 함께 투여될 수 있다. 이러한 치료제는 동일한 약학 조성물의 부분으로서 포함될 수 있다.
1. 투여
본 발명에 따라서, 의사가 치료 과정을 완료하는데 필요한 시간을 결정할 수 있으며 하루만큼 짧은 시간 내지 1개월 초과의 시간의 범위일 수 있다. 임의의 실시형태에서, 치료 과정은 1 내지 6개월일 수 있다.
인자 H 제조물의 유효한 양은 질환 또는 장애를 치료하는데 적당한 임의의 수단에 개체에 투여된다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, 인자 H는 정맥내, 안내, 피하, 및/또는 근육내 수단에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 환자에게 인자 H 조성물의 안내 투여를 포함하는, 노인황반변성의 치료를 필요로 하는 개체에서 노인황반변성을 치료하는 방법이 제공된다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 인자 H는 전신 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 전신 투여는 경구, 경피, 진피하(subdermal), 복강내, 피하, 경비, 설하, 또는 직장 투여를 포함한다. 가장 바람직한 전신 투여 경로는 경구이다. 안구 투여를 위한 국소 투여는 국부적, 유리체내, 안구주위, 경공막, 안구후부, 공막근처(juxtascleral), 테논낭하, 또는 안내 장치를 통하는 것을 포함한다. 국소 전달을 위한 바람직한 방법은 후부 공막근처 투여에 의해; 유리체내 주입을 통하여; 또는 캐뉼라(이는 예를 들어 미국 특허 제6,413,245호에 기술되어 있으며, 이의 개시 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함됨)를 통하여, 황반에의 경공막 전달을 포함한다. 대안적으로, 억제제는 유리체내 또는 경공막으로 이식된 지속형 전달 장치를 통해, 또는 국소 안구 투전달의 기타 다른 공지된 방법에 의해 전달될 수 있다.
임의의 실시형태에서, 용어 "유효한 양"은 개체에서 질환 또는 병태의 개선 또는 교정을 가져오는 인자 H 제조물의 양을 말한다. 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 치료될 질환 또는 병태, 질환 중증도 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, 인자 H 제조물은 개체에 투여당 5㎎/㎏ 내지 2000㎎/㎏ 또는 약 5㎎/㎏ 내지 2000㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 용량은 적어도 5㎎/㎏ 또는 약 5㎎/㎏, 적어도 10㎎/㎏ 또는 약 10㎎/㎏, 또는 적어도 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏, 1900㎎/㎏, 또는 2000㎎/㎏, 또는 약 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏, 1900㎎/㎏, 또는 2000㎎/㎏일 수 있다. 인자 H 치료의 투약량 및 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 또는 병태의 중증도에 좌우될 것이다.
2. 노인황반변성( AMD )
바람직한 실시형태에서, 본 발명은 본원에서 제공되는 인자 H 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 개체에 투여함으로써 노인황반변성의 치료를 필요로 하는 개체에서 노인황반변성을 치료하는 방법을 제공한다.
노인황반변성은 60세 이상의 노인 인구에 있어서 실명의 주원인이다. 오늘날, 75세 이상의 노인 인구의 35~40%가 어느 정도의 AMD를 가지는 것으로 추산된다. 전세계적으로 대략 5천만명의 사람이 발병되어 있으며, 미국에서만 1천만명이 발병되어 있다. 현재, 매년 약 155,000명이 새로이 AMD 진단을 받는다. 전세계적으로 인구가 계속 고령화하고 있으므로, 매년 진단되는 수는 2020년까지 3배가 될 것으로 예상된다. AMD는 발병된 개인에서 중심 시력을 파괴하여, 독서 및 운전과 같은 일상생활에 필요한 활동을 실행하는 개인의 능력을 빼앗는 파괴적인 질환이다.
AMD는 외부 망막층의 세포(광수용체 및 광수용체를 지지하는 망막 색소 상피를 포함함)뿐만 아니라, 맥랙막으로 알려진 눈의 인접한 혈관층의 세포를 수반하는 느린 진행성 질환이다. 황반변성은 높은 시력(high-acuity vision)을 담당하는 막망 중심부의 작은 부위(직경이 약 2mm)인 황반의 파괴를 특징으로 한다. 고령에 발생하는 황반변성(즉, AMD)은 일반적으로 "건성" 또는 "습성"으로 정의된다. AMD의 습성("삼출성") 신생혈관성 형태는 상기 질환이 있는 환자의 대략 10%에서 발병하고, RPE를 통한 맥락막모세혈관층으로부터 비정상적인 혈관이 성장하는 것을 특징으로 하며, 전형적으로 출혈, 삼출, 흉터, 및/또는 장액 망막 박리를 야기한다. AMD가 있는 환자의 대략 90%는 비신생혈관성, 또는 상기 질환의 건성 형태이며, 이는 RPE의 위축 및 황반 광수용체의 손실을 특징으로 한다.
AMD는, 기저 맥락막으로부터 RPE(망막의 최외곽층)을 분리하는 세포외 매트릭스 성분의 다층 복합물인 브루크막 상에 축적하는 파편 유사 물질("두루젠"이라 칭함)의 퇴적물의 존재를 특징으로 한다. 드루젠은 검안경 안구 검사에 의해 관찰될 수 있다. 이러한 퇴적물은 AMD가 있는 환자로부터의 공여자 안구의 현미경 연구에서 광범위하게 특징지어졌다. 임상 검사시 살아있는 안구에서 관찰되는 관찰되는 퇴적물은, 퇴적물의 상대적인 크기, 존재비, 및 형상을 포함한 여러 가지 기준에 따라서 연성 드루젠 또는 경성 드루젠으로 분류된다. 조직 화학 및 면역 세포 화학적 연구는 드루젠이 다양한 지질, 다당류, 글라이코사미노글라이칸 및 단백질을 함유함을 밝혔다.
현재, 여러 가지 유형의 치료법이 상기 질환을 관리하는데 효과적인 거승로 나타났지만, AMD에 대하여 공지된 치유법은 없다. 상기 질환의 습성 형태에 있어서 비정상적인 혈관의 레이저 광응고화는 표준 치료법이다. 이 치료법은 단지 잘 설명되어 있는 신생혈관성 병변만이 이러한 방법으로 치료될 수 있으며 환자의 50%는 혈관으로부터 누출되는 재발을 겪게 되는 사실에 의해 제한된다(문헌[Fine et al ., 2000]). 이 치료법에서 필요로 하는 레이저 에너지로 인하여, 치료되는 부분의 광수용체가 또한 죽게 될 것이고, 환자는 또한 종종 치료 직후 중신맹을 겪을 것이다. 결국 새로운 신생혈관성 병변이 발생하여 반복적인 치료를 필요로 할 것이다. 기타 다른 개입은 금연 및 항산화제를 이용한 치료의 시작에 의하여 생활방식을 변경하는 것을 포함한다. VEGF 억제제, 예컨대 라니비주맙 또는 베바시주맙의 유리체내 주입을 사용한 항혈관형성 치료법이 제안되었다.
최근, 개인의 약 35%가 인자 H 유전자의 하나 또는 모든 복제물에서 위험에 있는 단일염기다형성(SNP)을 보유하는 것으로 발견되었다. 동형접합성 개체는 노인황반변성이 발전할 가능성이 대략 7배 증가한 반면, 이형접합체는 상기 질환이 발전할 가능성이 2 내지 3배 증가한다. 인자 H의 CCP 모듈 7에 위치하는 이러한 SNP는, SNP 및 질환 사이의 인과 관계를 나타내는, C-반응성 단백질 및 헤파린 모두와 인자 H 사이에서의 상호작용에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 다형성은 Y420H 다형성이다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 하나의 실시형태에서, 개체는 AMD의 임의의 증상을 가지지 않는다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 드루젠을 가진다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 AMD가 발전할 위험이 증가된 상태에 있다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 투여는 정맥내 투여이다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 상기 방법은 AMD의 징후 및/또는 증상을 가지는 개체를 치료하는 단계를 추가로 포함한다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 AMD로 진단받았다.
다른 양태에서, 본 발명은 노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에서 제공되는 인자 H 제조물의 예방적 또는 치료적으로 유효한 양을 개체에게 투여하는 단계, 및 정기적으로 상기 투여를 반복하는 단계를 포함한다.
노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법의 하나의 실시형태에서, 상기 투여는 상기 개체에서 황반 변성의 발전의 진행 또는 개시를 지연시키는데 유효한 시간 동안 반복된다.
노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법의 다른 실시형태에서, 인간 개체는 노인황반변성의 발전과 연관된 하나 이상의 유전자 표지의 존재에 기초하여 확인된 바와 같이 노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단된다.
노인황반변성의 발전 위험에 있는 것으로 판단되는 인간 개체를 치료하는 방법의 다른 실시형태에서, 유전자 표지는 다형성이다.
개체에서 노인황반변성(AMD)의 발전의 진행 또는 개시의 지연을 야기하는 보체 활성화를 제한하는 방법의 다른 실시형태에서, 개체는 AMD로 진단받지 않았다.
C. 인터 -알파-트립신 억제제(IαI)
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 양을 투여함으로서 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 장애 및 질환을 치료하는 방법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 하나의 실시형태에서, 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 질환 또는 장애는 패혈증이다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 장애 및 질환의 치료를 필요로 하는 개체에서 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 장애 및 질환을 치료하는 방법에 있어서의 사용을 위하여 본원에서 개시되는 방법에 의해 제조되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 감소된 IaIp 기능 또는 IaIp 기능장애와 연관된 질환 또는 장애는 패혈증이다.
다른 양태에서, 본원에서 제공되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 양을 투여함으로서 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 및 장애를 치료하는 방법을 제공하는 것이 본 발명의 목적이다. 하나의 실시형태에서, 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 및 장애는 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 파종성 혈관내 응고, 섬유화증식, 탄저병 중독, 암 전이, 수술 동안의 기관 손상, 신장 질환, 혈관 질환, 응고, 당뇨병, 및 전신 염증 반응으로부터 선택된다.
하나의 실시형태에서, 본 발명은 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 개체에서 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 및 장애를 치료하는 방법에 있어서의 사용을 위하여 본원에서 개시되는 방법에 의해 제조되는 IaIp 조성물의 치료적으로 유효한 용량을 제공한다. 하나의 실시형태에서, 증가된 혈장 세린 프로테아제 활성과 연관된 질환 또는 장애는 패혈증, 패혈성 쇼크, 내독소성 쇼크, 파종성 혈관내 응고, 섬유화증식, 탄저병 중독, 암 전이, 수술 동안의 기관 손상, 신장 질환, 혈관 질환, 응고, 당뇨병, 및 전신 염증 반응으로부터 선택된다.
A. 투여
본 발명에 따라서, 의사가 치료 과정을 완료하는데 필요한 시간을 결정할 수 있으며 하루만큼 짧은 시간 내지 1개월 초과의 시간의 범위일 수 있다. 임의의 실시형태에서, 치료 과정은 1 내지 6개월일 수 있다.
IaIp 제조물의 유효한 양은 질환 또는 장애를 치료하는데 적당한 임의의 수단에 개체에 투여된다. 예를 들어, 임의의 실시형태에서, IaIp는 정맥내, 피하, 및/또는 근육내 수단에 의해 투여될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 환자에게 IaIp 조성물의 정맥내(IV) 투여를 포함하는, 패혈증의 치료를 필요로 하는 개체에서 패혈증을 치료하는 방법이 제공된다.
임의의 실시형태에서, 본원에서 제공되는 IaIp는 전신 또는 국소적으로 투여될 수 있다. 전신 투여는 경구, 진피하, 복강내, 피하, 경비, 설하, 또는 직장 투여 경로를 포함한다.
임의의 실시형태에서, 용어 "유효한 양"은 개체에서 질환 또는 병태의 개선 또는 교정을 가져오는 IaIp 제조물의 양을 말한다. 개체에 투여될 유효한 양은 의사가 연령, 체중, 치료될 질환 또는 병태, 질환 중증도 및 치료에 대한 반응에 있어서 개별적인 차이를 고려하여 결정할 수 있다. 임의의 실시형태에서, IaIp 제조물은 개체에 투여당 약 5㎎/㎏ 내지 약 2000㎎/㎏의 용량으로 투여될 수 있다. 임의의 실시형태에서, 용량은 적어도 약 5㎎/㎏, 또는 적어도 약 10㎎/㎏, 또는 적어도 약 20㎎/㎏, 30㎎/㎏, 40㎎/㎏, 50㎎/㎏, 60㎎/㎏, 70㎎/㎏, 80㎎/㎏, 90㎎/㎏, 100㎎/㎏, 125㎎/㎏, 150㎎/㎏, 175㎎/㎏, 200㎎/㎏, 250㎎/㎏, 300㎎/㎏, 350㎎/㎏, 400㎎/㎏, 450㎎/㎏, 500㎎/㎏, 550㎎/㎏, 600㎎/㎏, 650㎎/㎏, 700㎎/㎏, 750㎎/㎏, 800㎎/㎏, 850㎎/㎏, 900㎎/㎏, 950㎎/㎏, 1000㎎/㎏, 1100㎎/㎏, 1200㎎/㎏, 1300㎎/㎏, 1400㎎/㎏, 1500㎎/㎏, 1600㎎/㎏, 1700㎎/㎏, 1800㎎/㎏,, 1900㎎/㎏,, 또는 적어도 약 2000㎎/㎏일 수 있다. IaIp 치료의 투약량 및 빈도는 기타 다른 인자 중에서도 특히 환자에 있어서 치료될 질환 또는 병태 및 질환 또는 병태의 중증도에 좌우될 것이다.
VI . 실시예
실시예 1
혈장 유래 단백질 조성물에 존재하는 잔여 세린 프로테아제 함량 및 활성을 측정하기 위하여, SiO2 처리의 사용없이 제조된 상업적으로 이용가능한 2가지 IgG 제조물, 즉 OCTAGAM(등록상표)(5% 정맥주사용 면역 글로불린; Octapharma) 및 Subcuvia(16% 피하투여용 면역 글로불린; Baxter), SiO2 처리를 사용하여 제조된 상업적으로 이용가능한 IgG 제조물의 2가지 그룹의 Gammagard Liquid(10% 정맥주사용 면역 글로불린; Baxter), 및 현재 개발중인 인자 H 정제 방법에 대하여 아마이드 분해 활성 프로파일을 측정하였다. 특히, 인자 H 조성물은 결합시킨 다음 미분된 SiO2로부터 인자 H를 용리시킴으로서 상기 기술된 바와 같이 정제하였다.
간단하게, 각각의 혈장 유래 단백질 조성물에 대한 아마이드 분해 활성 프로파일은 상이한 효소 특이성을 가지는 다음의 발색 기질을 이용하여 분석함으로써 측정하였다: PL-1(넓은 스펙트럼), S-2288(넓은 스펙트럼), S-2266(FXIa, 선상(glandular) 칼리크레인), S-2222(FXa, 트립신), S-2251(플라스민), 및 S-2302(칼리크레인, FXIa, 및 FXIIa). 또한 프리칼리크레인 활성제 활성(PKKA) 및 인자 Xia 단위의 양을 측정하였다. 표 17에 나타낸 바와 같이, SiO2 흡착 단계의 사용없이 제조된 혈장 유래 IgG 조성물은 상당한 수준의 아마이드 분해 활성 및 FXIa 함량을 함유하였다. 반대로, Gammagard Liquid의 2가지 시험한 그룹 모두 최소한의 아마이드 분하 활성 및 FXIa 함량을 함유하였다. 이러한 결과와 일관되게, 결합하고 미분된 SiO2로부터 용리함으로써 제조된 인자 H 조성물은 매우 높은 수준의 아마이드 분해 활성 및 FXIa 함량을 함유한다.
Figure 112012107541847-pct00001
실시예 2
혈장 샘플로부터 인자 H의 제조에 있어서 경제적으로 유리하며, 동일한 혈장 샘플로부터 추가적인 혈액 인자의 회수를 가능하게 하는 도식을 결정하기 위하여, 도 1에 나타낸 흐름 도표에서 개괄된 도식에 따라서 다량의 수집한 사람 혈장을 분별화하였다. 도 2에 나타낸 바와 같이, 인간 혈장 냉동 불량 콘 집단에 존재하는 인자 H의 대부분(약 90%)은 분획 II+III 침전물에서 발견될 수 있다. 또한 인자 H의 더 작지만 상당한 양(약 10%)이 분획 I 침전물에서 발견될 수 있다. 이는 PCT 공개 WO 제2011/011753호에 나타낸 결과와 일관되며, 이의 내용은 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.
인자 H는, 필터 프레스를 통한 인자 H 추출 완충액을 재순환시킴으로써 "분획 II+III 여과액"인 조성물 6의 직접적인 상류에서 "Aerosil 처리" 조성물의 여과의 결과로서 형성되는 미분된 SiO2 여과 케이크 부산물로부터 추출하였다. 그다음 염 및 다양한 불순물은 15%의 최종 농도로 에탄올의 첨가 및 최소한 4시간 동안 -6℃에서의 항온처리를 통하여 pH 8.0에서 실행된 제1 침전 단계에 의해 여과 케이크 추출물로부터 제거하였다. 침전 반응의 pH는 1시간 항온처리 시간 후에 8.0으로 재조정하였다. 그 다음 침전물을 원심분리에 의하여 상청액으로부터 제거하였다. 25%의 최종 농도로 에탄올의 첨가 및 최소한 8시간 동안 -10℃에서의 항온처리를 통하여 pH 6.0에서 실행된 제2 침전 단계에 의해 인자 H를 추가로 풍부화하였다. 그 다음 인자 H를 함유하는 침전물은 원심분리에 의해 회수하였다.
제2 침전 단계에 의해 형성된 침전물을 지질 피막형 바이러스를 불활성화시키도록 처리된 낮은 이온 강도 용해 완충액 및 S/D에서 1:9의 비율로 용해하였다. 그 다음 인자 H를 DEAE-세파로스 FF 수지를 사용하여 음이온 교환 크로마토그래피에 의해 풍부화하였다. 간단하게, 낮은 이온 강도 조건 하에서 인자 H를 DEAE-세파로스 수지에 결합시키고 용액의 이온 강도를 증가시킴으로써 용리하였다. 그 다음 DEAE-세파로스 용리액의 전도도를 감소시키고, 헤파린 친화 크로마토그래피에 의해 인자 H를 추가로 풍부화하였다. 간단하게, 인자 H를 낮은 이온 강도 조건 하에서 헤파린-세파로스 FF 수지에 결합시키고 용액의 이온 강도를 증가시킴으로써 용리하였다. 표 18에 나타낸 바와 같이, 대다수의 인자 H가 DEAE 및 헤파린 수지에 결합하였다.
Figure 112012107541847-pct00002
그 다음 헤파린 수지로부터 용리한 인자 H에 표준 절차에 따라서 한외여과/정용여과를 실시한 다음, Superdex 200 컬럼 상에서 크기 배제 크로마토그래피를 실시하였다. 그다음 크기 배제 크로마토그래피로부터 회수된 인자 H를 한외여과에 의해 농축시키고, 멸균 여과한 다음, PBS-완충액 중에서 50㎎/㎖의 최종 단백질 농도로 제형화하였다.
그 다음 최종 인자 H 조성물(FH012)을 균질성, 불순물, 및 아마이드 분해 활성에 대하여 특성화하였다. 인자 H 조성물의 단분산성을 크기 배제 크로마토그래피에 의해 특성화하였다. 표 19에 나타낸 바와 같이, HP-SEC 컬럼 상에 로딩될 때, 인자 H 최종 조성물에 존재하는 대다수의 단백질은 400kDa의 추산 크기로 이동하였다.
Figure 112012107541847-pct00003
그 다음 내독소, pH, 시각적 외관, 및 최종 단백질 농도의 수준을 최종 인자 H 조성물에 대하여 측정하였다. 표 20에 나타낸 바와 같이, 상기 조성물은 리뮐루스 변형 세포 용해물(limulus amebocyte lysate, LAL) 분석에 의해 결정된 바와 같이, 낮은 내독소 수준(<0.5 EU/㎖)을 가졌다.
LAL, pH, 시각적 외관, 및 FH012 조성물의 단백질 농도
LAL <0.5 EU/㎖ (발열인자 없음)
pH 7.1
시각적 외관 무색 및 가시적 입자 없음
단백질 농도 4.54%
그 다음 최종 인자 H에서 다양한 단백지 불순물의 수준을 측정하였다. 표 21에 나타낸 바와 같이, 보체 단백질 및 IgG 면역글로불린은 인자 H 조성물에서 최종 단백질 농도의 1% 미만을 차지하였다.
최종 FH102 조성물 중 불순물
불순물 농도 전체 단백질의 백분율
IgG 51㎍/㎖ 0.11%
C3 321.5㎍/㎖ 0.71%
C3a 17.5㎍/㎖ 0.04%
C5a 3.7ng/㎖ <0.01%
C4 1.94㎍/㎖ <0.01%
EDTA 72㎍/㎖
마지막으로, 아마이드 분해 활성 및 프로테아제 함량의 수준은 실시예 1에 기록한 바와 같이 측정하였다. 표 17에 나타낸 바와 같이, 본 실시예에서 개괄된 도식에 따라 정제된 혈정 유래 인자 H는 높은 수준의 아마이드 분해 활성 및 FXIa 함량을 함유하였다.
실시예 3
혈장 유래 단백질 조성물로부터 아마이드 분해 활성을 제거하는 능력을 나태나기 위하여, 재현탁된 콘 분획 II+III 침전물을 미분된 이산화규소(SiO2)로 처리하였다. 간단하게, 수집된 냉동 불량 혈장을 본원에서 기술된 IgG 정제 도식에 따라서 분별하여 분획 II+III 침전물을 제공하였다. 분획 II+III 침전물 침전물을 0℃ 내지 8℃로 유지된 온도에서 낮은 전도도의 추출 완충액(pH 5.1±0.2; ~0.8mS/㎝) 중에 재현탁하였다. Aerosil(등록상표) 380(Evonik Industries AG)을 40 내지 60g/㎏ II+III 침전물의 최농 농도로 첨가하였다. 0.5㎏/㎏ II+III 침전물의 최종 농도로 CELPURE(등록상표) C300 여과 보조제(Advanced Minerals Corporation)의 추가 후, 심층 필터를 사용하여 현탁액을 여과하였다. 그 다음 여과액 중 면역글로불린 조성물을 FXI 지모겐 함량에 대하여 시험하였다. 표 22에 나타낸 바와 같이, 미분된 이산화규소(SiO2)를 이용한 분획 II+III 현탁액의 처리는 조성물의 인자 XI 지모겐 함량에서 거의 90% 감소를 가져왔다.
최종 FH012 조성물 중 불순물
분획 II+III 재현탁액 분획 II+III 추출물 Cuno 여과액
그룹 분획 II+III 페이스트 (㎏) 용해된 분획 II + III
(L) 		F- XI 지모겐
(U/ ㎖ ) 		F- XI 지모겐
(U 중 1000) 		F- XI 지모겐
(% ) 		Fr . II+III 여과액 부피
(L) 		F- XI 지모겐
(U/ ㎖ ) 		F- XI 지모겐 (U 중 1000) F- XI 지모겐
( II + III 재현탁액 중 %) 		% 제거
1 117 469 5.25 2460 100 2250 0.11 247 10.1% 89.9%
2 118 475 5.13 2435 100 2290 0.11 251 10.3% 89.7%
3 119 479 4.51 2162 100 2300 0.12 276 12.8% 87.2%
실시예 4
미분된 SiO2 여과 케이크로부터 세린 프로테아제의 용리를 평가하기 위하여, 실시예 3에서 제조한 바와 같이, 다양한 농도(100, 50, 25, 및 5mM)의 포스페이트 완충액을 함유하는 용리 완충액을 2가지의 상이한 pH(6.0, 7.5)에서 SiO2로부터 단백질을 용리하는데 사용하였다. 간단하게, 여과 케이크를 적절한 완충계에 1:5의 비율로 용해시키고 심층 필터(Cuno 50 SA)를 통하여 여과하였다. 그 다음 각각의 용리액의 아마이드 분해 활성 및 인자 H 조성물을 측정하였다(표 23 및 표 24). 표 23에 나타낸 바와 같이, 더 낮은 전도도 및 pH(즉, 6.0)에서, 기질 CS2166(FXIa, 활성화된 단백질 C)을 이용하여 측정한 아마이드 분해 활성의 용리가 감소하였다.
pH 7.5(표 24)에서의 용리 조건 하에서, 전도도 증가와 함께 인자 H 용리는 감소한 반면, 전도도 증가와함께 세린 프로테아제 용리는 증가하였다. 놀랍게도, 매우 낮은 전도도(5mM 포스페이트; 0.882mS/㎝)에서, 세린 프로테아제 용리는 상당히 증가한 반면, 인자 H 용리는 감소하였다. pH 7.5에서의 용리에 대하여 얻은 데이터는 도 3에 그래프로 나타내어져 있다.
pH 6.0에서 미분된 SiO2로부터의 인자 H 및 세린 프로테아제 활성의 용리
기질: CS2166 인자 H 단백질
완충계 : pH = 6.0 샘플 전체 nmol *분 [g/ℓ 혈장] [ nmol /g]
100mM 포스페이트 완충액; 전도도 11.88mS/㎝ 여과액 72745 0.27 61944
50mM 포스페이트 완충액; 전도도 6.55mS/㎝ 여과액 65055 0.19 64600
25mM 포스페이트 완충액; 전도도 3.48mS/㎝ 여과액 28591 0.05 63694
5mM 포스페이트 완충액: 전도도 0.882mS/㎝ 여과액 4816 0.0003 57331
pH 7.5에서 미분된 SiO2로부터의 인자 H 및 세린 프로테아제 활성의 용리
기질: CS2166 인자 H 단백질
완충계 : pH = 7.5 샘플 전체 nmol *분 [g/ℓ 혈장] [ nmol /g]
100mM 포스페이트 완충액; 전도도 18.81mS/㎝ 여과액 236456 0.21 156718
50mM 포스페이트 완충액; 전도도 10.91mS/㎝ 여과액 147829 0.29 109228
25mM 포스페이트 완충액; 전도도 6.08mS/㎝ 여과액 84622 0.39 57892
5mM 포스페이트 완충액: 전도도 1.524mS/㎝ 여과액 176685 0.33 134051
실시예 5
SiO2와 동시 결합된 세린 프로테아제와 인자 H를 차별적으로 용리하는 능력을 설명하기 위하여, 2단계의 용리 절차를 진행하였다. 간단하게, SiO2 처리 후에 형성되는 분획 II+III 여과 케이크를 앞에서와 같이 제조하였다. 그 다음 여과 케이크에 pH 6.0에서 0.882mS/㎝ 내지 11.88mS/㎝의 이온 강도를 포함하는 용액 조건 하에서 제1 용리를 실시하였다. 실시예 4에서 설명한 바와 같이, 낮은 pH(pH 6.0) 및 낮은 이온 강도(6.5mS/㎝ 미만)에서 결합된 SiO2의 처리는 세린 프로테아제(즉, FXIa)의 용리를 가져온 반면, 인자 H의 상당한 분획은 결합된 상태로 있는다. 높은 pH(pH 7.5) 및 높은 이온 강도에서의 이후 처리는 SiO2로부터 인자 H의 용리를 가져온다(표 25). 또한, 실시예 4에 제공된 결과와 일관되게, 높은 pH(7.5)에서 SiO2의 초기 용리는 인자 H의 용리를 가져온다(표 26). 나타낸 바와 같이, 더 낮은 전도도 및 pH 6.0에서의 초기 용리를 여과 케이크로부터 아마이드 분해 활성을 부분적으로 감소시키는데 사용할 수 있으며 그 다음 인자 H는 100mM 포스페이트 농도, 150mM NaCl, pH 7.6에서 용리할 수 있다. 이러한 절차는 추가 처리를 위하여 아마이드 분해 활성(CS2166)이 감소된 여과액인 인자 H를 0.31g/ℓ 혈장의 수율로 생성하였다.
pH 6.0/7.6에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및 인자 H의 2단계 차별적인 용리
제1 용리 완충계 pH 6.0 제2 용리 완충액 샘플 인자 H
[g/ℓ 혈장]
100mM 포스페이트 완충액; 전도도11.88mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.06
50mM 포스페이트 완충액; 전도도6.55mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.11
25mM 포스페이트 완충액; 전도도3.48mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.25
5mM 포스페이트 완충액: 전도도0.882 mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.31
pH 7.5/7.6에서 SiO2로부터 세린 프로테아제 및 인자 H의 2단계 차별적인 용리
제1 용리 완충계 pH 7.5 제2 용리 완충액 샘플 인자 H
[g/ℓ 혈장]
100mM 포스페이트 완충액; 전도도11.88mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.05
50mM 포스페이트 완충액; 전도도6.55mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.06
25mM 포스페이트 완충액; 전도도3.48mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.06
5mM 포스페이트 완충액: 전도도0.882 mS/㎝ 100mM 포스페이트 완충액 + 150mM NaCl, pH 7.6 여과액 제2 용리 0.07
실시예 6
혈장 유래 단백질 조성물로부터 세린 프로테아제 및 세린 프로테아제 지모겐의 효율적인 제거에 필요로 하는 미분된 SiO2의 양을 측정하기 위하여, 분획 II+III 침전물(즉, II+III 여과케이크)를 용해, 여과, SiO2로 처리하고, 여과 보조제를 혼합한 다음 제2 여과를 실시하였다. 간단하게, 먼저 분획 II+III 여과케이크를 150mM 염화 나트륨을 함유하는 0.1M 포스페이트 완충액(pH 7.5; 30mS/㎝)에 용해하였다.그다음 이 현탁액을 Cuno 50 SA 필터를 통해서 여과하고 여과액을 수집하였다. Aerosil 380을 1.0 또는 2.5g/g의 최종 농도에서 여과액과 혼합한 다음, 적어도 50분 동안 항온처리하였다. CELPURE 여과 보조제를 첨가하고 여과를 Cuno 50 SA 필터를 사용하여 실행하였다. 그 다음 표 27에 기록한 바와 같이, 생성된 여과액을 아마이드 분해 활성에 대하여 특성화하였다. 상당하게도, 결과는, 1.0g/g 단백질의 최종 농도에서 Aerosil을 이용하여 처리한 샘플과 비교하여 2.5g/g 단백질의 최종 농도에서 Aerosil의 첨가는 조성물 중 칼리크레인, FXIa, 및 FXIIa의 아마이드 분해 활성을 90% 초과로 감소시켰음을 나타낸다.
미분된 이산화규소를 이용한 처리 후 재현탁된 분획 II+III 침전물에 존재하는 아마이드 분해 활성
칼리크레인, FXIa , FXIIa 기질: S-2302 Aerosil 첨가의 증가에 의한 감소
샘플 전체: nmol*분 [%]
단백질 g당 Aerosil 1g의 첨가 후, FH027 Cuno 여과액 83347 -
단백질 g당 Aerosil 2.5g의 첨가 후, FH027 Cuno 여과액 6227 92.5
실시예 7
혈장 유래 단백질 조성물의 산업적 규모의 제조 동안 인자 XI 지모겐의 제고에 대한 SiO2 처리의 효율을 평가하기 위하여, 6개의 산업적 규모의 제조 배치의 FXI 지모겐 함량을 특성화하였다. 표 28 및 표 29는 동일한 제조 위치에서 실행된 3가지 정제로부터 각각의 상류 공정 단계의 평균적인 FXI 지모겐 함량을 나타낸다. 표 28 및 표 29의 데이터는 제조 규모 정제의 SiO2 처리는 조성물의 FXI 지모겐 함량을 적어도 90% 감소시킬 수 있음을 설명한다. 특히, 제조 위치 1은 50g/㎏ II+III 침전물의 최종 농도에서 Aerosil을 혼합한 반면, 위치 2는 40g/㎏ II+III 침전물의 최종 농도에서 Aerosil을 사용하였다. 놀랍게도, 사용한 aerosil의 양에서의 작은 차이가 aerosil 처리 후 여과액의 인자 XI지모겐 함량에서 상당한 차이를 가져왔다(위치 2에 있어서 콘 출발 그룹의 8.1% 대 위치 1에 있어서 콘 출발 그룹의 2.8%).
Figure 112012107541847-pct00004
Figure 112012107541847-pct00005
본원에서 기술된 실시예 및 실시형태는 단지 예시적인 목적을 위한 것으로서 이를 고려하여 다양한 변형 또는 변경이 당업자에게 시사될 것이며 본 출원의 사상 및 범위 및 첨부된 청구항의 범주 내에 포함되어야 함이 이해된다. 본원에서 인용된 모든 간행물, 특허, 및 특허 공개는 모든 목적을 위하여 본 명세서에 전문이 참조로 포함된다.

Claims (115)

  1. 혈장 유래 표적 단백질 조성물에서 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐의 양을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은
    (a) 제1 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하여 제1 풍부화 조성물을 형성하는 단계;
    (b) 4.5 내지 6.0의 pH 및 0.1mS/㎝ 내지 3.0mS/㎝의 전도도에서 상기 조성물을 미분된(finely divided) 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계; 및
    (c) 상기 조성물로부터 SiO2를 분리하여 결합된 세린 프로테아제를 제거하는 단계를 포함하되,
    상기 적어도 하나의 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 인자 XIa(FXIa), 인자 XIIa(FXIIa), 인자 XI(FXI), 또는 인자 XII(FXII)이고,
    상기 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 단백질 침전 단계이고,
    상기 단백질 침전 단계는 알코올 분별 단계이고,
    상기 혈장 유래 표적 단백질은 면역글로불린 G(IgG)인 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 방법은 상기 풍부화 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키기 전에, 제2 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 제2 표적 단백질 풍부화 단계는
    (i) 단백질 침전 단계;
    (ii) 한외여과/정용여과 단계; 또는
    (iii) 크로마토그래피 풍부화 단계인 것인 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 방법은 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시킨 후에, 제3 표적 단백질 풍부화 단계를 실행하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 제3 표적 단백질 풍부화 단계는 알코올 분별 단계인 것인 방법.
  6. 제2항에 있어서, 상기 제1 표적 단백질 풍부화 단계는 7.0 내지 7.5의 pH에서 6% 내지 10% (v/v) 알코올을 이용하여 제1 침전 단계에서 냉동 불량(cryo-poor) 혈장 분획을 침전시켜 제1 침전물 및 제1 상청액을 수득하는 단계를 포함하고,
    상기 제2 표적 단백질 풍부화 단계는 6.7 내지 7.3의 pH에서 20% 내지 30% (v/v) 알코올을 이용하여 제2 침전 단계에서 상기 제1 상청액으로부터 IgG를 침전시켜 제2 침전물을 형성하는 단계, 및 상기 제2 침전물을 현탁하여 제1 현탁액을 형성하는 단계를 포함하고,
    상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계는 4.5 내지 6.0의 pH 및 0.1mS/㎝ 내지 3.0mS/㎝의 전도도에서 상기 제1 현탁액을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시켜 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐에 결합하는 단계를 포함하고,
    상기 조성물로부터 SiO2를 분리하는 단계는 상기 현탁액으로부터 SiO2를 분리하여 청징된 현탁액을 형성하는 단계를 포함하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 단계는 상기 제2 침전 단계에서 형성된 침전물 g 당 0.02g 내지 상기 제2 침전 단계에서 형성된 침전물 g 당 0.06g의 최종 농도로 SiO2의 추가를 포함하는 것인 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 방법은
    (d) 6.7 내지 7.3의 pH에서 22% 내지 28% (v/v) 알코올을 이용하여 제3 침전 단계에서 상기 청징된 현탁액으로부터 IgG를 침전시켜 제3 침전물을 형성하는 단계;
    (e) 상기 제3 침전물을 현탁하여 제2 현탁액을 형성하는 단계; 및
    (f) 단계 (e)에서 형성된 제2 현탁액으로부터 가용성 분획을 분리하여 풍부화된 IgG 조성물을 형성하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 음이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계 및/또는 양이온 교환 크로마토그래피 풍부화 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 (i) 용매/세제(S/D) 바이러스 불활성화 단계; (ii) 나노여과 단계; 및 (iii) 낮은 pH에서 항온처리 단계에서 선택되는 적어도 하나의 전용 바이러스 불활성화 또는 제거 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  11. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 침전 단계는 -7℃ 내지 -9℃의 온도에서 단계 (a)에서 형성된 제1 상청액의 에탄올 농도를 25%(v/v)로 조정하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  12. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 침전물을 현탁하는 단계는 포스페이트 및 아세테이트를 함유하는 완충액으로 상기 제2 침전물을 현탁하는 단계를 포함하며, 상기 완충액의 pH는 완충액 1000ℓ 당 빙초산 300㎖ 내지 700㎖를 이용하여 조정되는 것인 방법.
  13. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 혈장 유래 표적 단백질 조성물은 제조용 중간체인 것인 방법.
  14. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 4.9 내지 5.3의 pH에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 0.5mS/㎝ 내지 2mS/㎝의 전도도에서 상기 조성물을 미분된 이산화규소(SiO2)와 접촉시키는 것인 방법.
  16. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세린 프로테아제 또는 세린 프로테아제 지모겐은 FXIa인 것인 방법.
  17. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1g SiO2/g 단백질의 최종 농도에서 상기 조성물을 SiO2와 접촉시키는 것인 방법.
  18. 제7항에 있어서, 제2 침전 단계는 상기 제1 상청액의 알코올 농도를 24% 내지 26% (v/v)로 조정하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  19. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 침전 단계는 -7℃ 내지 -9℃의 온도에서 수행되는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 미분된 이산화규소(SiO2)는 흄드(fumed) 실리카인 것인 방법.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI532498B (zh) 2008-03-17 2016-05-11 巴克斯特保健公司 供免疫球蛋白及玻尿酸酶之皮下投藥之用的組合及方法
WO2011034604A2 (en) * 2009-09-17 2011-03-24 Baxter Healthcare, S.A. Stable co-formulation of hyaluronidase and immunoglobulin, and methods of use thereof
US10787701B2 (en) 2010-04-05 2020-09-29 Prognosys Biosciences, Inc. Spatially encoded biological assays
AU2010202125B1 (en) * 2010-05-26 2010-09-02 Takeda Pharmaceutical Company Limited A method to produce an immunoglobulin preparation with improved yield
US8772462B2 (en) 2010-05-26 2014-07-08 Baxter International Inc. Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
AU2011280907B2 (en) * 2010-07-23 2016-02-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Manufacture of inter -alpha - inhibitor proteins (IaIp) from plasma
AU2011364724B2 (en) * 2011-04-08 2016-11-17 Universidad De Costa Rica Method for producing injectable formulations of blood-derived protein materials, and materials obtained using said method
HUE038441T2 (hu) 2011-12-13 2018-10-29 Baxalta GmbH Autoantitestek mérése alacsony vezetõképességû körülmények között
TWI629283B (zh) * 2012-02-23 2018-07-11 巴克斯歐塔公司 來自血漿中的免疫球蛋白之ｉ-ｉｖ-１部分沉澱
RU2487725C1 (ru) * 2012-03-15 2013-07-20 Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) Способ получения концентрированного иммуноглобулинового препарата для подкожного введения
AU2013203043B2 (en) * 2013-03-15 2016-10-06 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods to produce a human plasma-derived igg preparation enriched in brain disease-related natural iggs
CN103197053B (zh) * 2013-03-15 2015-02-18 上海市血液中心 一种抗IgA抗体检测试剂盒
CN104072601A (zh) * 2014-07-03 2014-10-01 成都蓉生药业有限责任公司 血液制品中fii沉淀的制备方法
CN104086642A (zh) * 2014-07-03 2014-10-08 成都蓉生药业有限责任公司 血液制品中fi+iii上清的制备方法
CN104086646B (zh) * 2014-07-03 2018-10-09 成都蓉生药业有限责任公司 血液制品中fv沉淀的制备方法
GB201413227D0 (en) * 2014-07-25 2014-09-10 Bioproducts Lab Ltd Process
US20170313767A1 (en) 2014-10-21 2017-11-02 The General Hospital Corporation Methods of diagnosis and treatment of tuberculosis and infection
CN204424090U (zh) 2014-11-28 2015-06-24 比亚迪股份有限公司 薄膜电容器
US10583179B2 (en) * 2015-04-02 2020-03-10 Kieu Hoang Method of manufacturing and purifying prothrombin complex concentrate from Fraction III for intravenous injection and a method of curing and preventing Hemophilia A with inhibitors or Hemophilia B in patients infected with HIV-1 and HIV-2
WO2016161423A1 (en) * 2015-04-02 2016-10-06 Kieu Hoang Process of cloning and further purification to make a recombinant intravenous immunoglobulin
US20160289300A1 (en) * 2015-04-02 2016-10-06 Kieu Hoang Method of manufacturing intravenous immunoglobulin from fraction iii
CN108495860A (zh) * 2015-09-29 2018-09-04 K·黄 一种从组分iii制备静脉注射免疫球蛋白的方法
US20170232079A1 (en) * 2015-10-06 2017-08-17 Kieu Hoang Method of manufacturing prothrombin complex concentrate from fraction iii and non-prothrombin complex concentrate from fraction iv
CN106800583A (zh) * 2015-11-26 2017-06-06 上海洲跃生物科技有限公司 一种速溶无析出的冻干人纤维蛋白原制备工艺
EP3275897A1 (en) 2016-07-27 2018-01-31 Biotest AG Process for preparing immunoglobulin compositions
US11510871B2 (en) 2016-09-16 2022-11-29 Leukocare Ag Method for producing low viscous and highly concentrated biopharmaceutical drug products in liquid formulation
WO2018050870A1 (en) * 2016-09-16 2018-03-22 Leukocare Ag A novel method for stabilization of a biopharmaceutical drug product during processing
US10259865B2 (en) 2017-03-15 2019-04-16 Adma Biologics, Inc. Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection
JP7275044B2 (ja) * 2017-04-21 2023-05-17 ツェー・エス・エル・ベーリング・アクチエンゲゼルシャフト 慢性炎症性脱髄性多発神経炎の治療における使用のための免疫グロブリン製品
EP3728287B1 (en) * 2017-12-19 2024-04-10 CSL Behring Lengnau AG Protein purification and virus inactivation with alkyl glycosides
AU2019250882A1 (en) * 2018-04-12 2020-11-05 Amgen Inc. Methods for making stable protein compositions
CN108733099B (zh) * 2018-05-31 2020-08-11 上海药明生物技术有限公司 低pH孵育和中和的自动调节系统及方法
EP4041774A4 (en) * 2019-10-11 2023-03-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited HEPARIN INSENSITIVE ASSAY FOR FACTOR XLA
EP4054597A4 (en) * 2019-11-04 2024-02-21 Alkahest, Inc. BLOOD PLASMA FRACTIONS FOR USE IN MUSCLE REGENERATION
KR20230024885A (ko) * 2020-04-10 2023-02-21 플라즈마 테크놀로지스, 엘엘씨 간소화된 고효율 단백질 단리를 위한 조성물 및 방법 (compositions and methods for simplified high efficiency isolation of proteins)
CN111961130B (zh) * 2020-08-31 2021-09-10 华兰生物工程重庆有限公司 一种从血浆中提取并分离IgM和IgG的方法
JP2023545948A (ja) * 2020-10-01 2023-11-01 武田薬品工業株式会社 噴霧乾燥ヒト血漿を利用した血漿分画プロセス
JP2024501025A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 プラズマ テクノロジーズ エルエルシー 免疫グロブリンｇのプロセススケールでの単離のためのシステム及び方法
CN112574296B (zh) * 2020-12-30 2023-05-19 中国医学科学院输血研究所 一种模拟IVIg的多人份混合人血浆IgG样品的分离纯化方法
AU2022317368A1 (en) 2021-07-29 2024-02-22 Csl Behring Ag Method of purifying immunoglobulin g and uses thereof
JP2024537490A (ja) 2021-10-27 2024-10-10 プラズマ テクノロジーズ エルエルシー タンパク質を単離するための構成及び方法
KR20230121373A (ko) * 2022-02-11 2023-08-18 주식회사 녹십자 인자 xiii의 정제방법
WO2023170553A1 (en) 2022-03-07 2023-09-14 Takeda Pharmaceutical Company Limited Affinity chromatographic production of clinical human igg products
AU2023232562A1 (en) 2022-03-08 2024-09-05 Equashield Medical Ltd Fluid transfer station in a robotic pharmaceutical preparation system
WO2023215722A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited Methods of preparing cohn pool concentrate from blood plasma through ultrafiltration
WO2023247736A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Ageronix SA Alpha1-antitrypsin for use in the treatment of diseases or disorders of the nervous system such as chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy
WO2024200757A1 (en) 2023-03-29 2024-10-03 Csl Behring Ag Methods of identifying immunoglobulin associated with adverse reactions

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007085626A1 (en) 2006-01-25 2007-08-02 Octapharma Ag Purification and use of a factor for supporting wound healing
US20090203580A1 (en) 2005-06-07 2009-08-13 Dinarello Charles A Compositions and methods of use for alpha-1 antitrypsin having no significant serine protease inhibitor activity
KR101593265B1 (ko) 2010-05-26 2016-02-11 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법

Family Cites Families (86)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2390074A (en) * 1942-02-09 1945-12-04 Research Corp Protein product and process
SE348942B (ko) 1970-06-02 1972-09-18 Statens Bakteriologiska Labor
US4056614A (en) 1972-09-22 1977-11-01 Marc Bonneau Immunity depressant medicine
US3998946A (en) * 1975-04-23 1976-12-21 The Regents Of The University Of Minnesota Fibrinogen-free plasminogen-plasmin-free plasma and method of preparing and using same
DE2801123C2 (de) * 1977-01-26 1986-01-02 Armour Pharma GmbH & Co KG, 3440 Eschwege Verfahren zur Herstellung eines intravenös applizierbaren Serumeiweiß-Präparates
US4136094A (en) 1977-08-31 1979-01-23 The Regents Of The University Of Minnesota Preparation of intravenous human and animal gamma globulins and isolation of albumin
US4296027A (en) 1977-08-31 1981-10-20 The Regents Of The University Of Minnesota Pure intravenous human and animal gamma globulins
US4357272A (en) * 1978-03-22 1982-11-02 The South African Inventions Development Corporation Recovering purified antibodies from egg yolk
US4550019A (en) * 1978-03-22 1985-10-29 South Africa Inventions Development Corporation Manufacture and use of fowl egg antibodies
DE2901822A1 (de) * 1979-01-18 1980-07-31 Biotest Serum Institut Gmbh Verfahren zur herstellung einer fuer die intravenoese applikation geeigneten immunglobulinloesung, die igm in ankonzentrierter form enthaelt
DE2902158A1 (de) 1979-01-20 1980-07-31 Biotest Serum Institut Gmbh Verfahren zur herstellung von fibrinogen, einem die gerinnungsfaktoren ii, vii, ix und x enthaltenden prothrombinkomplex, antithrombin iii und einer loesung von lagerstabilen serumproteinen
US4228154A (en) 1979-02-26 1980-10-14 Armour Pharmaceutical Company Purification of plasma albumin by ion exchange chromatography
US4378346A (en) * 1979-08-15 1983-03-29 Tankersley Donald L Intravenously injectable solution of plasma protein fraction free from bradykinin, kininogen and prekallikrein activators and processes for its production
US4499073A (en) * 1981-08-24 1985-02-12 Cutter Laboratories, Inc. Intravenously injectable immune serum globulin
JPS5855432A (ja) 1981-09-29 1983-04-01 Fujirebio Inc 静脈注射用免疫グロブリンの製法
US4439358A (en) 1982-06-17 1984-03-27 Miles Laboratories, Inc. Method of preparing alpha-1-proteinase inhibitor
US4624780A (en) 1982-06-28 1986-11-25 Alpha Therapeutic Corporation Fractionation of blood plasma
DE3247150A1 (de) 1982-12-21 1984-06-28 Biotest-Serum-Institut Gmbh, 6000 Frankfurt Gerinnungsaktive plasmaproteinloesung, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur behandlung von stoerungen des haemostasesystems
DK166763B1 (da) 1983-03-16 1993-07-12 Immuno Ag Immunoglobulin-g-holdig fraktion
US5061237A (en) 1985-07-02 1991-10-29 Cytomed Medizintechnik Gmbh Method of purifying whole blood
DE3523615A1 (de) 1985-07-02 1987-01-15 Cytomed Medizintechnik Medizinisches geraet, insbesondere kanuele, katheter oder implantat
JPH0742235B2 (ja) 1985-11-08 1995-05-10 三共株式会社 自己免疫性疾病の予防・治療剤
US5136094A (en) 1988-03-10 1992-08-04 Air Products And Chemicals, Inc. Process for the synthesis of secondary formamides
US5055447A (en) 1988-07-28 1991-10-08 Genentech, Inc. Method and compositions for the treatment and prevention of septic shock
JP2871709B2 (ja) 1988-11-21 1999-03-17 住友製薬株式会社 免疫グロブリンｇ結合活性を有する新規な蛋白質プロテインｈ、該蛋白質をコードする遺伝子及び該蛋白質の製造法
US5177194A (en) 1990-02-01 1993-01-05 Baxter International, Inc. Process for purifying immune serum globulins
EP0440509A3 (en) * 1990-02-02 1991-12-18 Common Services Agency Novel cell growth medium components and process for producing same
ATE122054T1 (de) * 1990-03-22 1995-05-15 Biotest Pharma Gmbh Verfahren zur herstellung eines intravenös verträglichen immunglobulin-g-präparates.
US5130451A (en) * 1991-03-28 1992-07-14 Amoco Corporation Process for preparing carboxyaryl phosphates
US5324425A (en) * 1992-08-26 1994-06-28 Ellison Billy L Method and apparatus for removing solids from aqueous wash solutions
FR2706466B1 (fr) 1993-06-14 1995-08-25 Aetsrn Concentré d'immunoglobulines G à usage thérapeutique et procédé de production dudit concentré.
FR2711371B1 (fr) 1993-10-18 1995-12-29 Aetsrn Procédé de préparation d'un concentré d'inter-alpha-trypsine inhibiteur à usage thérapeutique et concentré obtenu.
US5610285A (en) 1994-08-24 1997-03-11 Bayer Corporation Purification of α-1 proteinase inhibitor using novel chromatographic separation conditions
DE4435485C1 (de) 1994-10-04 1996-03-21 Immuno Ag Verfahren zur Gewinnung von hochreinem von Willebrand-Faktor
AUPN858596A0 (en) * 1996-03-08 1996-04-04 Csl Limited Filtration of plasma precipitates using cellulose filter aid
TW491855B (en) 1996-08-07 2002-06-21 Csl Ltd Purification of immunoglobulins
US5783640A (en) * 1997-03-04 1998-07-21 The Goodyear Tire & Rubber Company Rubber compositions containing a disodium salt of 2, 2'-dithiosalicyclic acid
US6124437A (en) 1997-03-19 2000-09-26 Welfide Corporation Immunoglobulin preparation and preparation process thereof
GB9705810D0 (en) 1997-03-20 1997-05-07 Common Services Agency Intravenous immune globulin
AT407114B (de) 1997-06-10 2000-12-27 Immuno Ag Alpha 1-antitrypsin-präparation sowie verfahren zu deren herstellung
US5886154A (en) 1997-06-20 1999-03-23 Lebing; Wytold R. Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies
US6159471A (en) 1997-10-23 2000-12-12 Yoshitomi Pharmaceutical Industries, Ltd. Room temperature storable immunoglobulin preparation for intravenous injection
US20020114802A1 (en) 1998-02-10 2002-08-22 Tjellstrom Bo Arthur Einar Oral immunoglobulin treatment for inflammatory bowel disease
AT406873B (de) 1998-02-25 2000-10-25 Immuno Ag Verfahren zur abreicherung von pathogenen aus proteinhaltigen lösungen
DE19932782A1 (de) * 1999-07-14 2001-01-18 Biotest Pharma Gmbh Verfahren zur chromatographischen Fraktionierung von Plasma oder Serum, so erhaltene Präparate und deren Verwendung
US6413245B1 (en) 1999-10-21 2002-07-02 Alcon Universal Ltd. Sub-tenon drug delivery
DE10008519C1 (de) 2000-02-21 2001-07-12 Dica Technologies Ag Verfahren und Kommunikationseinrichtungen zum Aufbau von gesicherten E-Mail-Verkehr zwischen Mail-Domains des Internet
DE10008619A1 (de) * 2000-02-24 2001-09-06 Immuno Vet As Lynge Mikroorganismenfreies IgG-Präparat, Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung in der Tieraufzucht und in der Tiermast
SE0001128D0 (sv) 2000-03-30 2000-03-30 Amersham Pharm Biotech Ab A method of producing IgG
US20020098182A1 (en) 2000-09-28 2002-07-25 Richard Weisbart Treatment of immune-mediated diseases by oral administration of plasma fractions enriched in immunoglobulin G
JP2004511492A (ja) 2000-10-13 2004-04-15 オクタファルマ　アクチェン　ゲゼルシャフト ビクニンを含む血漿画分、その調製方法、およびその使用
FR2824568B1 (fr) 2001-05-11 2004-04-09 Lab Francais Du Fractionnement Procede de preparation de concentres d'immunoglobulines humaines a usage therapeutique
WO2003028668A2 (en) 2001-10-04 2003-04-10 Protein Therapeutics, Inc. Gammaglobulin treatment of immune disorders
US6893639B2 (en) 2001-10-19 2005-05-17 Hemacare Corporation Method for high yield purification of immune globulins from blood plasma and blood plasma intermediates
US7777006B2 (en) * 2002-12-31 2010-08-17 Csl Behring L.L.C. Method for purification of alpha-1-antitrypsin
CA2525224A1 (en) * 2003-05-23 2004-12-02 Michael Bech Jensen Protein stabilization in solution
WO2005012354A1 (en) 2003-07-31 2005-02-10 Zlb Behring Gmbh Method for extending the half-life of fviii
US20050054003A1 (en) 2003-09-10 2005-03-10 Stenland Christopher J. Prion clearance using particulate metal oxides
EP1691820A4 (en) 2003-11-08 2010-03-03 Prothera Biolog PREPARATION AND COMPOSITION OF INTER-ALPHA INHIBITOR PROTEINS FROM HUMAN PLASMA FOR THERAPEUTIC USE
MXPA06008435A (es) 2004-01-30 2007-05-23 Suomen Punainen Risti Veripalvelu Proceso de manufactura de una inmunoglobulina libre de virus.
UA87836C2 (ru) 2004-02-27 2009-08-25 Октафарма Аг Способ получения очищенных, безопасных с вирусологической точки зрения препаратов антител
CN103920142A (zh) 2005-02-14 2014-07-16 爱荷华大学研究基金会 治疗和诊断年龄相关性黄斑变性的方法和试剂
US7807435B2 (en) 2005-08-11 2010-10-05 Baxter International Inc. Method for the purification of alpha-1 proteinase inhibitor (a1PI)
AU2006299293B2 (en) 2005-09-19 2011-08-18 Csl Behring Gmbh Factor H for the treatment of chronic nephropathies and production thereof
FR2894145B1 (fr) 2005-12-07 2008-10-17 Lab Francais Du Fractionnement Utilisation de facteur h du complement a titre de medicament
US8476234B2 (en) 2006-02-03 2013-07-02 Prolor Biotech Inc. Long-acting coagulation factors and methods of producing same
EP1852443A1 (en) * 2006-05-05 2007-11-07 Leukocare AG Biocompatible three dimensional matrix for the immobilization of biological substances
DE102007001521A1 (de) * 2007-01-10 2008-07-17 Matthias, Torsten, Dr. Verwendung von Cohn-Oncley-Fraktionen II und II/III zur Behandlung des systemischen Lupus erythematodes
WO2008113589A1 (en) 2007-03-20 2008-09-25 Csl Behring Gmbh Methods for industrial scale production of therapeutic complement factor h preparations from human plasma
DE202007004346U1 (de) 2007-03-21 2007-10-31 Rehau Ag + Co Rohranordnung
AU2008270951A1 (en) * 2007-04-20 2009-01-08 Regents Of The University Of Colorado Alpha-1 antitrypsin having no significant serine protease inhibitor activity
JP2010529155A (ja) 2007-06-13 2010-08-26 ツェー・エス・エル・ベーリング・ゲー・エム・ベー・ハー 出血性疾患の治療及び予防的処置における血管外投与のためのｖｗｆ安定化ｆｖｉｉｉ製剤及びｆｖｉｉｉなしのｖｗｆ製剤の使用
ES2477294T3 (es) 2007-08-13 2014-07-16 Baxter International Inc Modulación por IVIG de quimioquinas para el tratamiento de la esclerosis múltiple, la enfermedad de Alzheimer y la enfermedad de Parkinson
AU2008307144B2 (en) * 2007-10-02 2012-12-20 Csl Limited Therapeutic antibody purification method and method of use
EP3936116A1 (en) 2007-12-28 2022-01-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Rrecombinant vwf containing formulations
CN101249265B (zh) * 2008-04-11 2010-10-27 三九集团湛江开发区双林药业有限公司 静脉注射用人乙肝免疫球蛋白及其制备方法
DK2291654T3 (en) 2008-05-28 2018-06-14 Prothera Biologics Inc PREPARATION AND COMPOSITION OF BLOOD INTER-ALPHA INHIBITOR PROTEINS
CA2728012C (en) 2008-06-24 2017-10-31 Csl Behring Gmbh Factor viii, von willebrand factor or complexes thereof with prolonged in vivo half-life
CN201169579Y (zh) * 2008-06-30 2008-12-24 山东泰邦生物制品有限公司 一种人血白蛋白分离用乙醇雾化扩散装置
PT2349314E (pt) 2008-10-21 2013-05-28 Baxter Int Formulações de vwf recombinante liofilizado
CA2742994A1 (en) 2008-11-12 2010-05-20 Baxter International Inc. Purification of butyrylcholinesterase using membrane adsorption
SG176256A1 (en) 2009-05-27 2012-01-30 Baxter Int A method to produce a highly concentrated immunoglobulin preparation for subcutaneous use
WO2011011753A1 (en) 2009-07-23 2011-01-27 Baxter International Inc. Manufacture of factor h (fh) and fh-derivatives from plasma
US8772462B2 (en) 2010-05-26 2014-07-08 Baxter International Inc. Removal of serine proteases by treatment with finely divided silicon dioxide
IL286298B (en) 2010-07-08 2022-08-01 Baxalta Inc A method to generate high molecular weight substituted vwf in cell culture
AU2011280907B2 (en) * 2010-07-23 2016-02-04 Takeda Pharmaceutical Company Limited Manufacture of inter -alpha - inhibitor proteins (IaIp) from plasma

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090203580A1 (en) 2005-06-07 2009-08-13 Dinarello Charles A Compositions and methods of use for alpha-1 antitrypsin having no significant serine protease inhibitor activity
WO2007085626A1 (en) 2006-01-25 2007-08-02 Octapharma Ag Purification and use of a factor for supporting wound healing
KR101593265B1 (ko) 2010-05-26 2016-02-11 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법
KR101647617B1 (ko) 2010-05-26 2016-08-10 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 혈장으로부터 IgG가 풍부한 조성물을 준비하는 방법

Also Published As

Publication number Publication date
AU2016202973B2 (en) 2017-12-07
TW201542584A (zh) 2015-11-16
BR112012029893B1 (pt) 2022-09-06
MX337028B (es) 2016-02-09
HRP20150484T1 (hr) 2015-08-14
EP2803349A1 (en) 2014-11-19
IL223149A0 (en) 2013-02-03
JP6363676B2 (ja) 2018-07-25
JP2017014297A (ja) 2017-01-19
US20130101579A1 (en) 2013-04-25
DK2554160T3 (da) 2015-04-27
HUE064400T2 (hu) 2024-03-28
AU2018201371B2 (en) 2019-10-31
CN104958761A (zh) 2015-10-07
HK1183449A1 (en) 2013-12-27
CN104840946A (zh) 2015-08-19
HK1215931A1 (zh) 2016-09-30
BR112012029897A2 (pt) 2016-08-16
TWI543989B (zh) 2016-08-01
MX2012013682A (es) 2013-01-28
DK2575762T3 (da) 2014-10-13
JP6592120B2 (ja) 2019-10-16
EP2554160B1 (en) 2015-02-25
EA034602B1 (ru) 2020-02-25
US11136350B2 (en) 2021-10-05
AR121861A2 (es) 2022-07-20
AR082093A1 (es) 2012-11-14
KR20160014119A (ko) 2016-02-05
CN109180776B (zh) 2022-12-13
HK1170168A1 (en) 2013-02-22
CN103068365B (zh) 2015-07-08
PL2575762T3 (pl) 2015-01-30
EA034530B1 (ru) 2020-02-18
HK1203838A1 (en) 2015-11-06
EA201291367A1 (ru) 2013-09-30
EP2803349B1 (en) 2023-09-27
EA201500848A1 (ru) 2016-06-30
PL2445482T3 (pl) 2015-01-30
AU2021286395A1 (en) 2022-01-20
PT2445482E (pt) 2014-11-03
WO2011149472A1 (en) 2011-12-01
CN109180776A (zh) 2019-01-11
JP5866345B2 (ja) 2016-02-17
CN103068365A (zh) 2013-04-24
US20210403504A1 (en) 2021-12-30
ES2536093T3 (es) 2015-05-20
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