KR20080005199A - 생리활성 조성물의 고압 처리 방법 - Google Patents

생리활성 조성물의 고압 처리 방법 Download PDF

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미구엘 알레잔드로 곤잘레스-마르틴
제임스 윌리엄 데커
마이클 안토니 콜레트
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Abstract

본 발명은 1 이상의 원치 않는 미생물의 성장을 방지하고 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하기 위해서 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 생리활성 조성물을 가압 처리하는 방법에 관한 것이다. 상기 생리활성 성분은 1 이상의 단백질 또는 단백질 가수분해물, 1 이상의 지방 또는 지방 가수분해물, 1 이상의 탄수화물, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 상기 가압 처리는 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력에서 실시된다.

Description

생리활성 조성물의 고압 처리 방법{HIGH PRESSURE PROCESSING OF BIOACTIVE COMPOSITIONS}
본 발명은 생리활성(bioactive) 조성물의 고압 처리 방법, 특히 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하고 1 이상의 원치 않는 미생물의 성장을 방지하기위해서 생리활성 조성물을 가압-처리하는 방법에 관한 것이다.
식품 또는 기타 섭취가능한 제품내 생리활성 성분들[예컨대, 단백질, 지방 또는 이의 가수분해물, 및 프로바이오틱(probiotic) 미생물]의 송달은 안전한 생성물에 유용한 저장 수명을 제공하면서 생리활성을 유지하는 것이 요구된다. 유용한 저장 수명을 갖는 생성물은 양호한 품질 보존성을 가지며 덜 손상되는 것을 말한다.
생리활성 성분의 송달은 상기 성분이 섭취되는 경우에 생리학적 활성을 나타내고 긍정적인 건강 이익[이에 한정되는 것은 아니지만, 뼈 건강, 면역 이익, 항염증 활성, 심장 건강 및 암 치료에서의 효율성을 포함함]을 갖기 때문에 바람직하다.
유용한 품질 보존성을 유지시키는 종래의 수단은 식품 등의 생리활성에 부정 적인 영향을 주었다. 특히, 상업적 멸균 생리활성 생성물의 제조에 열처리는 통상 적당하지 않다. 예를들면, 상업적 유제품에서 면역글로불린 단백질의 분석은 면역글로불린의 60~75 %가 저온살균(pasteurisation)을 통해 유지하더라도, UHT 또는 통조림된 (증발) 우유[canned (evaporated) milk]내 수준은 무시할 수 있다는 것을 알았다(Li-Chan et al, 1995). 산성 식품내 상업적 멸균은 캔에서 사용되는 것보다 더 낮은 온도의 가열을 채용함으로써 달성될 수 있지만, 가열하에 변성에 대한 면역글로불린의 민감성(sensitivity)은 산성화(acidification)에 의해서 악화된다(Dominguez et al, 2001).
프로바이오틱 미생물(probiotic microorganism)은 적당한 양으로 투여되는 경우 숙주(host)에 건강상의 이점을 제공한다는 것이다. 생(生) 프로바이오틱 미생물은 생리활성 효과를 나타내면서, 불활성화된 프로바이오틱 미생물은 생리활성에 안정성을 제공하며, 사용 및 분배(distribution)에 대한 기술적으로 덜 제한된 포맷(format)을 제공한다. 원치 않는 활성(예컨대, 효소 또는 산 분비)때문에 생 미생물을 갖는 바람직하지 않은 용도에서, 불활성화된 미생물은 이들의 생육성(viability)으로부터 기인된 원치 않는 활성을 갖지 않으며 생리활성을 제공하는 잇점이 있다. 국제 PCT 출원 WO 2004/032655에서는 식품에서 미생물에 의한 손상을 감소시키고/시키거나 식품을 소비시에 안전하도록 만들며 생육이능한 목적하는 배양을 유지하기위해 고압 처리 방법을 사용하는 것이 기술되어 있다.
생리활성 제품, 성분 및 식품을 제조하는 많은 공정이 있으며, 생리활성이 일부 또는 전부 손실될 수 있다. 우유계(dairy-based) 성분 및 식품의 경우에, 생 리활성에 영향을 줄 수 있는 가열 단계를 포함하는 공정으로는 가열 저온살균법(thermal pasteurisation), 균질화(homogenisation), 열처리(thermalisation), 증발(evaporation) 및 건조(drying)를 포함한다. 식품 처리의 경우에, 생리활성에 영향을 줄 수 있는 가열 단계의 예로는 발효 이후에 열처리, UHT-처리, 레토르트 처리(retorting), 고온 충전(hot filling) 및 고온 패킹(hot packing)을 포함한다. 상기 생리활성 성분은 식품을 제조하는 동안 1 이상의 가열 단계로 전형적으로 처리될 수 있다. 이는 특히 처리 단계가 항상 초기 저온살균 단계를 포함하며, 전형적으로 포장 및 판매 이전에 추가의 가열 단계를 포함하는 유제품이다. Korhonen et al (1998)은 60 ℃ 내지 90 ℃ 범위의 온도로 가열하면 단백질을 변성시키므로 생리활성 단백질의 활성을 감소시킨다는 것을 보고하였다.
저온살균된 우유를 사용하여 제조된 생성물의 건조는 면역글로불린의 40% 까지 손실된 품질 보존을 향상시키는데 사용될 수 있지만(Li-Chan, 1995), 그러나 상업적 용도는 건조된 생리활성 성분이 연이어 다시 가열되지 않는 직접 소비(예컨대, 정제) 또는 후레쉬 생성물(예컨대, 요거트)에 한정된다. 건조 및 가열에 의한 손실은 중간물 또는 최종 생성물에 관심 있는 생리활성 성분을 공급함으로써 보충되며 이는 최종 소비자에게 비용을 증가시킬 수 있다.
약 350 MPa 이상의 압력에 의한 가압-처리는 고기, 채소 및 과일계 제품(가령, 조리된 햄, 아보카도 제품 및 주스)에 대한 품질 보존성에 있어서 상업적으로 유용한 개선을 달성할 수 있다고 보고되었다. 그러나, Huppertz et al (2002)는 고압으로 우유내 유장 단백질을 변성시킨다고 보고하였다. 또한, Korhonen et al (1998)은 약 500 MPa 이상의 압력에서의 가압-처리는 대부분의 경우에 단백질을 비가역적으로 변성시킨다고 보고하였다. Felipe et al (1997)은 면역글로불린 변성의 상당한 수준이 500 MPa의 압력에서 염소 우유에서 발생되는 것을 보고하였다.
Masuda et al (2000)에서는 400 MPa 이상의 압력이 면역글로불린 단백질을 변성시키기때문에 소의 초유(bovine colostrum)의 품질 보존을 향상시키는데 400 MPa 이상의 압력이 사용될 수 없다고 보고하였다.
Tonello et al (1992)에서는 초유의 미생물 부하가 2-log 사이클 이하로 감소될지라도 2시간동안 적용된 200 MPa의 압력은 면역글로불린 활성의 적어도 85%를 유지하는데 사용될 수 있다는 것을 보고하였다. 63 ℃에서 동일 방법은 검출 한계 이하로 미생물 부하를 감소시키지만(7-log 사이클 이상), 면역글로불린 활성의 적어도 50%가 손상된다.
식품 또는 다른 섭취가능한 제품과 같은 생리활성 제품에 대해 상업적으로 유용한 품질 보존을 제공하고 적어도 하나의 생리활성 성분의 생리활성을 유지하는 방법이 요구된다.
그러므로, 본 발명의 목적은 원치않는 미생물의 성장을 방지하고 적어도 하나의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하는 개선되거나 또는 선택된 방법을 제공하거나 또는 대중에게 유용한 선택권을 적어도 제공하는데 있다.
발명의 요약
본 발명은 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키고 조성물내 존재하는 적어도 하나의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하는 방 법에 관한 것이다.
따라서, 하나의 측면에서, 본 발명은 생리활성 조성물의 품질 보존 특성을 유지하거나 또는 증가시키기위해 하기의 단계를 포함하는 생리활성 조성물을 처리하는 방법에 관한 것이다:
(a) 1 이상의 단백질, 1 이상의 지방, 1 이상의 단백질 가수분해물, 1 이상의 지방 가수분해물, 1 이상의 탄수화물, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 생리활성 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력 및 약 3.0 내지 약 8.0의 pH에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
(b) 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하고 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하기위해 선정된 압력 및 pH에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
다른 측면에서, 본 발명은 생리활성 조성물의 품질 보존 특성을 유지하거나 또는 증가시키기위해 하기의 단계를 포함하는 생리활성 조성물을 처리하는 방법에 관한 것이다:
(a) 1 이상의 단백질, 1 이상의 지방, 1 이상의 단백질 가수분해물, 1 이상의 지방 가수분해물, 1 이상의 탄수화물, 또는 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 생리활성 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선 정된 압력, 약 3.0 내지 8.0의 pH 및 약 0분 내지 5분의 유지 시간에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
(b) 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하고 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하기위해 선정된 압력, pH 및 유지 시간에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
다른 측면에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 프로바이오틱 조성물의 처리 방법에 관한 것이다:
(a) 1 이상의 프로바이오틱 인자를 갖는 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주를 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 프로바이오틱 인자는 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
(b) 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주의 성장을 방지하고 1 이상의 프로바이오틱 인자의 목적하는 활성 수준을 유지하기위해 선정된 압력에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
다른 측면에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 프로바이오틱 조성물의 처리 방법에 관한 것이다:
(a) 1 이상의 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus) 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus) 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스(Bifidiobacterium animalis subsp. lactis) 균주 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주를 포함하 는 조성물을 선택하는 단계(1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주는 1 이상의 프로바이오틱 인자를 가지며, 프로바이오틱 인자는 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
(b) 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주의 성장을 방지하고 1 이상의 프로바이오틱 인자의 목적하는 활성 수준을 유지하기위해 선정된 압력에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
하기의 실시양태는 상기 또는 하기에 기술된 측면들에 관한 것이다.
상기 조성물은 액체내 고체의 현탁액을 포함하는 액체일 수 있다. 상기 조성물은 생성물 또는 성분일 수 있다. 바람직하게, 품질 보존을 유지하거나 또는 향상시키기위해 조성물을 처리하는 단계는 1 이상의 원치않는 미생물, 바람직하게는 모든 원치않는 미생물의 성장을 감소, 지연, 방지 또는 제거하도록 처리하는 단계를 포함한다.
하나의 실시양태에서, 후처리 호기성 세균수(aerobic plate count, APC)는 밀리리터당 약 100,000, 75,000, 50,000, 25,000, 10,000, 5,000, 1,000, 100, 또는 10 콜로니 형성 유닛(cfu/ml), 바람직하게는 약 50,000 cfu/ml 이하이다.
하나의 실시양태에서, 1 이상의 단백질은 재조합, 합성 또는 자연 발생 단백질, 또는 이들의 혼합물일 수 있다.
하나의 실시양태에서, 1 이상의 생리활성 성분은 락토페린(lactoferrin), 리소자임(lysozyme), 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 성장인자로부터 유래된 1 이상의 우유, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 1 이상의 생리활성 성분은 1 이상의 프로바이오틱 인자를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 우유계 단백질(dairy protein) 조성물을 포함한다. 바람직하게 상기 실시양태에서, 1 이상의 생리활성 성분은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 성장인자로부터 유래된 1 이상의 우유, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 상기 생리활성 조성물은 초유(colostrum) MPC, 초유 MPI, 초유 WPC, 초유 WPI, MPC, MPI, WPC, WPI, 초면역(hyperimmune) MPC, 초면역 MPI, 초면역 WPC, 초면역 WPI, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 바람직하게 상기 실시양태에서, 1 이상의 생리활성 성분은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 면역글로불린(1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함함), 글리코마크로펩티드, 1 이상의 성장 인자(성장 인자로부터 유래된 1 이상의 우유를 포함함), TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 1 이상의 비극성 지방, 또는 1 이상의 극성 지방(예컨대, 1 이상의 포스포리피드, 스핑고리피드, 강 글리오사이드, 세라마이드, 또는 이들의 혼합물), 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 바람직한 실시양태에서, 생리활성 성분은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장 인자, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 1 이상의 비극성 지방, 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 스핑고리피드, 1 이상의 강글리오사이드, 1 이상의 세라마이드, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 선택적으로 바람직한 실시양태에서, 생리활성 성분은 락토페린, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 면역글로불린(1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함함), 글리코마크로펩티드, 1 이상의 성장 인자(성장 인자로부터 유래된 우유를 포함하고, TGF βl 및 TGF β2를 포함함), 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 생리활성 성분을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나 또는 구성된다.
또 다른 실시양태에서, 상기 조성물은 1 이상의 비극성 지방, 1 이상의 극성 지방, 가령 포스포리피드, 스핑고리피드, 강글리오사이드 또는 세라마이드, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 생리활성 성분을 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 또는 구성된다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 면역글 로불린(1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함함), 글리코마크로펩티드, 성장 인자(성장 인자로부터 유래된 우유를 포함하고, TGF βl 및 TGF β2를 포함함), 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 생리활성 성분을 적어도 약 0.01 중량%, 0.05 중량%, 0.1 중량%, 0.5 중량%, 1 중량%, 5 중량%, 10 중량%, 15 중량%, 20 중량%, 25 중량%, 30 중량%, 35 중량%, 40 중량%, 45 중량%, 50 중량%, 55 중량%, 60 중량%, 65 중량%, 70 중량%, 75 중량%, 80 중량%, 85 중량%, 90 중량%, 95 중량%, 99 중량%, 99.5 중량% 또는 100 중량%를 포함하거나, 본질적으로 이루어지거나, 또는 구성된다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 면역글로불린(1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함함), 글리코마크로펩티드, 성장 인자(성장 인자로부터 유래된 우유를 포함하고, TGF βl 및 TGF β2를 포함함)로부터 선택된 생리활성 성분으로 본질적으로 이루어지거나 또는 구성된 조성물, 적어도 약 1 중량%의 면역글로불린을 포함하는 조성물, 항체 수준을 증가시키기위해 동물에 접종시킴으로써 제조된 생성물, 면역 우유, 또는 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로 풍부하게 한다. 즉, 락토페린, 리소자임, 1 이상의 면역글로불린(1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함함), 글리코마크로펩티드, 성장 인자(성장 인자로부터 유래된 우유를 포함하고, TGF βl 및 TGF β2를 포함함)와 같은 생리활성 성분, 적어도 약 1 중량%의 면역글로불린을 포함하는 조성물, 항체 수준을 증가시키기위해 동물에 접종시킴으로써 제조된 생성물(초면역 우유 또는 초면역 초유), 면역 우유, 또는 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로 본질적으로 이루어지거나 또는 구성된 조성물을 생리활성 성분의 농도를 증가시키기위해서 상기 조성물에 첨가한다.
하나의 실시양태에서, 프로바이오틱 인자는 1 이상의 박테리아 DNA 모티프(motif), 1 이상의 박테리아 표면 단백질, 1 이상의 박테리아 작은 유기산, 또는 1 이상의 박테리아 세포벽 성분, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다.
하나의 실시양태에서, 원치 않는 생물체는 1 이상의 박테리아(프로바이오틱 박테리아를 포함함), 1 이상의 진균류(fungi), 1 이상의 곰팡이(molds) 또는 1 이상의 효모(yeasts) 및 1 이상의 조류(algae), 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 하나의 실시양태에서, 원치 않는 생물체는 1 이상의 박테리아, 1 이상의 진균류, 1 이상의 곰팡이, 1 이상의 효모 또는 1 이상의 조류, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 부패 생물체(spoilage organism)이다. 하나의 실시양태에서, 원치 않는 생물체는 1 이상의 박테리아, 1 이상의 진균류, 1 이상의 곰팡이, 1 이상의 효모 또는 1 이상의 조류, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 병원체(pathogen)이다. 선택적 실시양태에서, 원치 않는 생물체는 프로바이오틱 생물체 및 선택적 및 부가적으로 원치 않는 생물체를 포함한다.
하나의 실시양태에서, 원치 않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바 실러스(Lactobacillus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 락토코커스(Lactococcus), 루코노스톡(Leuconostoc), 페디오코커스(Pediococcus), 비피도박테리움(Bifidobacterium), 프로피오니박테리움(Propionibacterium), 엔테로코커스(Enterococcus) 또는 바실러스(Bacillus), 또는 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택된다. 또다른 실시양태에서, 상기 미생물은 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠스(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 비피도박테리움 비피듐(Bifidiobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidiobacterium breve), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스(Bifidiobacterium animalis subsp. lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum), 또는 스트렙토코커스 써모필루스(Streptococcus thermophilus), 또는 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 원치않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus) HN001 (AGAL NM 97/09514), 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스(Bifidobacterium animalis subsp. lactis) HN019 (AGAL NM 97/09513), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus) HN017 (AGAL NM 97/09515), 락토바실러스 람노수스 HN067 (AGAL NM 97/01925) (이 모두는 US 6,379,663에 기술되어 있음), 락토바실러스 존소니 NCC533 (La1) (CNCM I-1225), 락토바실러스 람노수스 GG (ATCC 53103), 락토바실러스 카세이 시로타(Lactobacillus casei Shirota) (FERM-P4751), 락토바실러스 아시도필루스 NCFM (ATCC 700396), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum) 299v (DSMZ 9843), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei) DN114001 (CNCM I-1518), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius) UCC4331 (NCIMB 40829), 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 BB12 (ATCC 27536 및 DSMZ 10140), 또는 비피도박테리움 인판티스 35624 (NCIMB 41003), 또는 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택된다. 바람직한 원치 않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 또는 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물을 포함한다.
하나의 실시양태에서, 프로바이오틱 미생물은 불활성화된 프로바이오틱 미생물이다. 불활성화된 프로바이오틱 미생물은 비생육성(non-viable), 대사적으로 활성 상태이지만 비생육성(non-viable but still metabolically active), 또는 사멸되었을 수도 있다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 1 이상의 원치 않는 미생물, 가령 1 이상의 박테리아(1 이상의 프로바이오틱 박테리아를 포함함), 1 이상의 진균류, 1 이 상의 곰팡이, 1 이상의 효모, 또는 1 이상의 조류, 또는 이의 혼합물을 포함한다. 하나의 실시양태에서, 여기에 유용한 방법은 1 이상의 원치 않는 미생물의 성장을 방지하는 것으로 이해되어야 한다. 그러나, 상기 방법은 예방적으로 실시될 수 있으며, 사실상 원치 않는 생물체가 존재하지 않는다. 상기 경우에, 상기 방법은 품질 보존을 유지하거나 또는 향상시키거나 또는 식품 안전 요건, 현재 양호한 제조 실시 또는 규제적 요건을 따르도록 실시된다. 원치 않는 미생물의 존재 여부와는 무관하게, 여기에 유용한 가압-처리 방법은 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하고 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키는데 유용하다.
그러므로, 상기 방법은 바람직하게 1 이상의 원치 않는 미생물의 성장을 방지하고 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지한다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 우유이고, 양, 염소, 돼지, 쥐, 물소, 낙타, 야크, 말, 당나귀, 라마, 소 또는 사람 우유, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 상기 우유는 소의 우유가 바람직하다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 우유계 단백질을 포함하거나 또는 우유계 성분이다. 바람직하게, 상기 우유계 단백질 조성물 또는 우유계 성분은 재조합 또는 후레쉬(fresh) 전유(whole milk), 재조합 또는 후레쉬 탈지유(skim milk), 환원(reconstituted) 전지분유(whole milk powder) 또는 탈지분유(skim milk powder), 탈지유 농축물(skim milk concentrate), 탈지유 분리물(skim milk isolate), 전지분유 또는 탈지분유, 탈지유 투석유물(skim milk retentate), 농축유(concentrated milk), 버터우유(buttermilk), 한외여과된 우유 투석유 물(ultrafiltered milk retentate), 우유 단백질 농축물(milk protein concentrate, MPC), 우유 단백질 분리물(milk protein isolate, MPI), 칼슘 결핍된 우유 단백질 농축물(calcium depleted milk protein concentrate), 칼슘 결핍된 우유 단백질 분리물(calcium depleted milk protein isolate), 저지방 우유, 저지방 우유 단백질 농축물, 저지방 우유 단백질 분리물, 초유, 초유 분획물(colostrum fraction), 초유 단백질 농축물(CPC), 초유 우유 단백질 농축물, 초유 우유 단백질 분리물, 초유 유장, 초유 유장 단백질 농축물, 초유 유장 단백질 분리물, 초유로부터의 면역글로불린 분획물, 유장, 유장 단백질 농축물(WPC), 유장 단백질 분리물(WPI), 스위트 유장(sweet whey), 락트산 유장(lactic acid whey), 미네랄산 유장(mineral acid whey), 환원 유장 분말(reconstituted whey powder), 초면역 우유(hyperimmune milk), 초면역 우유 단백질 농축물, 초면역 우유 단백질 분리물, 초면역 유장, 초면역 유장 단백질 농축물, 초면역 유장 단백질 분리물, 초면역 초유, 초면역 초유 우유 단백질 농축물, 초면역 초유 우유 단백질 분리물, 초면역 초유 유장, 초면역 초유 유장 단백질 농축물, 초면역 초유 유장 단백질 분리물, 상기 우유 또는 초유 공정 스트림으로부터 유래된 조성물, 우유 또는 초유 공정 스트림의 한외여과 또는 미세여과에 의해서 수득된 투석유물(retentate) 또는 투과물(permeate)로부터 유래된 조성물, 또는 우유 또는 초유 공정 스트림의 크로마토그래피 분리에 의해서 수득된 분해 또는 흡수 분획물로부터 유래된 조성물, 또는 상기 조성물의 전부 또는 일부 가수분해물, 또는 이들의 혼합물이 있다.
바람직하게, 우유계 단백질 조성물 또는 우유계 성분은 소, 양, 염소, 돼지, 쥐, 물소, 낙타, 야크, 말, 당나귀, 라마 또는 사람 또는 이들의 혼합으로부터 유래된다.
또다른 실시양태에서, 프로바이오틱 조성물은 우유계 조성물, 예컨대 상기에 기술된 것이다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 가압-처리를 실시하기 이전에 저온살균, 건조, 증발 또는 여과(막 여과를 포함)된다.
또다른 실시양태에서, 목적하는 활성 수준은 비처리 대조군의 적어도 약 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%이며, 유용한 범위는 상기 값(예컨대, 약 35% 내지 약 100%, 약 50% 내지 약 100%, 약 60% 내지 약 100%, 약 70% 내지 약 100%, 약 80% 내지 약 100%, 및 약 90% 내지 약 100%)에서 선택될 수 있다. 바람직하게, 적어도 하나의 생리활성 성분은 단백질이며, 보유된 활성은 ELISA, 유세포분석기(flow cytometry), HPLC 또는 비아코어(BiaCore)에 의해서 분석된다. 바람직하게, 1 이상의 생리활성 성분은 지방이고, 보유된 활성은 유세포분석기, 가스 크로마토그래피(GC) 또는 HPLC에 의해 분석된다. 바람직하게, 프로바이오틱 활성은 유세포분석기 또는 PBMC 사이토킨 분비 분석(cytokine secretion assay)에 의해 분석된다. 바람직하게, 목적하는 활성 수준은 비처리 대조군의 활성의 적어도 약 35%, 비처리 대조군의 활성의 적어도 약 50%, 비처리 대조군의 활성의 적어도 약 60%, 비처리 대조군의 활성의 적어도 약 70%, 비처리 대조군의 활성의 적어도 약 80%, 또는 비처리 대조군의 활성의 적어도 약 90%, 95%, 99% 또는 100%이다.
하나의 실시양태에서, 처리 압력은 적어도 약 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690, 700, 750, 800, 850, 900, 950 및 1000 MPa 이상으로부터 선택되며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 350 내지 약 400 MPa, 약 350 내지 약 450 MPa, 약 350 내지 약 500 MPa, 약 350 내지 약 550 MPa, 약 350 내지 약 600 MPa, 약 350 내지 약 650 MPa, 약 350 내지 약 700 MPa, 약 350 내지 약 750 MPa, 약 350 내지 약 800 MPa, 약 350 내지 약 850 MPa, 약 350 내지 약 900 MPa, 약 350 내지 약 950 MPa, 및 약 350 내지 약 1000 MPa, 약 400 내지 약 1000 MPa, 약 450 내지 약 1000 MPa, 약 500 내지 약 1000 MPa, 약 550 내지 약 1000 MPa, 약 600 내지 약 1000 MPa, 약 650 내지 약 1000 MPa, 약 700 내지 약 1000 MPa, 약 750 내지 약 1000 MPa, 약 800 내지 약 1000 MPa, 약 850 내지 약 1000 MPa, 약 900 내지 약 1000 MPa, 약 950 내지 약 1000 MPa, 약 500 내지 약 550 MPa, 약 500 내지 약 600 MPa, 약 500 내지 약 650 MPa, 약 500 내지 약 700 MPa, 약 500 내지 약 750 MPa, 약 500 내지 약 800 MPa, 약 550 내지 약 800 MPa, 약 600 내지 약 800 MPa, 약 650 내지 약 800 MPa, 약 700 내지 약 800 MPa, 약 750 내지 약 800 MPa, 약 400 내지 약 800 MPa, 약 400 내지 약 750 MPa, 약 400 내지 약 700 MPa, 약 400 내지 약 650 MPa, 약 400 내지 약 600 MPa, 약 450 내지 약 800 MPa, 약 450 내지 약 750 MPa, 약 450 내지 약 700 MPa, 약 450 내지 약 650 MPa, 약 450 내지 약 600 MPa, 약 500 내지 약 800 MPa, 약 500 내지 약 750 MPa, 약 500 내지 약 700 MPa, 약 500 내지 약 650 MPa, 약 500 내지 약 600 MPa, 약 525 내지 약 675 MPa, 약 550 내지 약 650 MPa 및 약 575 내지 약 625 MPa)사이에서 선택될 수 있다. 바람직하게, 상기 처리 압력은 적어도 약 350, 400, 450, 500 또는 600 MPa이다.
상기 조성물이 프로바이오틱 생물체를 포함하는 선택적 실시양태에서, 상기 처리 압력은 적어도 약 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 610, 620, 630, 640, 650, 660, 670, 680, 690 및 700 MPa로부터 선택되며, 유용한 범위는 상기 값들(예컨대, 약 500 내지 약 550 MPa, 약 500 내지 약 600 MPa, 약 500 내지 약 650 MPa, 약 500 내지 약 700 MPa, 약 550 내지 약 700 MPa, 약 600 내지 약 700 MPa, 약 650 내지 약 700 MPa 및 약 550 내지 약 650 MPa)사이에서 선택될 수 있다. 바람직하게, 처리 압력은 적어도 약 550, 600 또는 650 MPa이다.
하나의 실시양태에서, 가압 처리되는 경우 조성물의 pH는 약 5.0 이하, 바람직하게는 약 4.6 이하, 더 바람직하게는 약 3.0 내지 약 4.6, 가장 바람직하게는 약 3.5 내지 약 4.1이다.
또다른 실시양태에서, 가압 처리되는 경우 조성물의 pH는 적어도 약 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5, 7.6, 7.7, 7.8, 7.9 또는 8.0 이상이며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 pH 3.0 내지 약 4.5, 약 pH 3.0 내지 약 5.0, 약 pH 3.0 내지 약 5.5, 약 pH 3.0 내지 약 6.0, 약 pH 3.0 내지 약 6.5, 약 pH 3.0 내지 약 7.O, 약 pH 3.0 내지 약 7.5, 약 pH 3.0 내지 약 8.0, 약 pH 3.1 내지 약 4.9, 약 pH 3.2 내지 약 4.8, 약 pH 3.3 내지 약 4.7, 약 pH 3.4 내지 약 4.6, 약 pH 3.5 내지 약 4.5, 약 pH 3.6 내지 약 4.4, 약 pH 3.7 내지 약 4.3, 약 pH 3.8 내지 약 4.2, 및 약 pH 3.9 내지 약 4.1)사이에서 선택될 수 있다. 선택적으로 또다른 실시양태에서, 상기 조성물의 pH는 가압-처리 이전에 상기에 기술된 pH 또는 pH 범위내로 조정된다.
하나의 실시양태에서, 상기 방법은 실온에서 실시된다. 바람직하게, 가압 처리는 적어도 약 0, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 또는 60 ℃의 온도에서 실시되며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 5 내지 약 40 ℃)사이에서 선택될 수 있다. 하나의 실시양태에서, 상기 온도는 약 0 ℃ 내지 약 40 ℃이다. 또다른 실시양태에서, 상기 온도는 약 4 ℃ 내지 약 25 ℃이다.
하나의 실시양태에서, 처리 압력은 약 1초 내지 약 30분의 처리 시간동안 적용될 수 있다. 바람직하게, 처리 시간은 약 1, 5, 10, 20, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270 또는 300초 또는 약 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55 또는 60분으로부터 선택되며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 1 내지 약 10분, 약 1 내지 약 5분, 또는 약 2 내지 약 4분)사이에서 선택될 수 있다.
또다른 실시양태에서, 처리 압력은 실질적으로 처리 시간동안 일정하게 유지한다. 또다른 실시양태에서, 압력은 실내 압력(통상, 대기압)에서 처리 압력으로 증가시킨 후 처리 시간 이내에 실내 압력으로 되돌린다. 실내 압력은 통상 대기압일 수 있다.
하나의 실시양태에서, 상기에 기술된 기간의 처리 시간은 대기압에서 처리 압력으로 압력을 증가시킨 후 다시 대기압으로 압력을 되돌리는데 걸리는 시간인 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 하나의 실시양태에서, 1분의 처리 시간은 1분 이내에 압력을 대기압에서 처리 압력으로 증가시킨 후 다시 대기압으로 되돌리는 것을 의미한다.
또다른 실시양태에서, 상기에 기술된 기간의 처리 시간은 압력이 처리 압력에서 유지된 시간("유지 시간")인 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 하나의 실시양태에서, 1분의 처리 시간은 압력을 1분동안 처리 압력에서 유지하는 것을 의미한다. 그러므로, 상기 실시양태에서 0의 처리 시간(또는 "유지 시간 없음")은 압력을 처리 압력으로 올리지만 유지 시간은 없고, 그후 압력을 대기압으로 되돌리는 것을 의미한다. 상기 실시양태에서, 바람직한 처리 시간은 0 (유지시간 없음), 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 및 10분을 포함한다. 바람직하게, 상기 압력은 약 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 또는 5분, 또는 약 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3분, 또는 약 0분동안 유지된다.
하나의 선택적 실시양태에서, 전체 처리 시간은 약 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10분 이하이다. 즉, 압력을 올리고 다시 실내 압력(통상, 대기압)으로 되돌리는데 걸리는 시간은 약 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 또는 10분 이하이다. 바람직하게, 약 8분 이하, 바람직하게 약 7분 이하, 바람직 하게 약 6분 이하, 또는 바람직하게 약 5분 이하이다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 추가로 가압-처리될 수 있다. 처리 압력은 먼저 대기압으로 되돌리지 않고 하나의 처리 압력에서 다른 처리 압력으로 변경될 수 있다. 각각의 가압-처리는 개별의 처리 시간동안 실시될 수 있다. 따라서, 하나의 실시양태에서, 압력은 제1 처리 시간동안 실내 압력에서 제1 처리 압력으로 증가시키고, 그후 압력은 제2 처리 시간동안 제2 처리 압력으로 변경시킨다. 바람직하게, 제1 처리 시간은 제2 처리 시간보다 더 길다. 바람직하게, 제1 처리 시간은 제2 처리 시간보다 더 짧다. 또다른 실시양태에서, 압력은 제1 처리 압력으로 증가시키고 그후 처리 시간내에 제2 처리 압력으로 변경시킨다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 생성물로 혼입되기 이전에 가압-처리한다. 또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 생성물로 혼입된 이후에 가압-처리한다. 따라서, 상기 방법은 생성물로 상기 조성물을 혼입시키기 이전 또는 이후에 상기 조성물을 가압-처리하는 단계를 추가로 포함한다. 또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 포장 이전에 가압-처리한다. 또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 포장 이후에 가압-처리한다. 따라서, 상기 방법은 포장 이전 또는 이후에 상기 조성물을 가압-처리하는 단계를 추가로 포함한다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 안정화제를 추가로 포함한다. 바람직한 안정화제는 로커스트콩검(locust bean gum), 구아검, 크산탄검, 계피 검(cassia gum), 곤약가루(konjac flour), β-글루칸, 타라검(tara gum), 아라비아 고무(gum arabic), 젤란검(gellan gum), 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로 필 메틸셀룰로스, 트라가칸트 검, 카라야검(karaya gum), 아카시아검, 키토산, 아라비노글락틴스(arabinoglactins), 알지네이트, 펙틴, 카라기난, 실리움(psyllium), 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 검이다. 바람직하게, 상기 안정화제는 펙틴, 카르복시메틸셀룰로스(CMC), 또는 이들의 혼합물이다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 소수성 리간드를 추가로 포함한다. 바람직하게, 상기 소수성 리간드는 팔미트산, 미리스트산, 리놀레산, 콘쥬게이트 리놀레산(conjugated linoleic acid, CLA), 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 포스파티딜콜린, 1 이상의 스핑고마이엘린, 1 이상의 강글리오사이드, 부티르산, 1 이상의 오메가-3 지방산[이에 한정되는 것은 아니지만, 에이코사펜타에노산(EPA) 및 도코사헥사에노산(DHA)을 포함함], 1 이상의 피토스테롤, 1 이상의 피토스테롤 에스테르, 1 이상의 피토스테롤 아세테이트, 1 이상의 오메가-6 지방산[이에 한정되는 것은 아니지만, 어유(fish oil)를 포함함], 지용성 소수성 비타민(비타민 A[레티놀] 및 비타민 D를 포함함), 리코펜, 또는 소듐 도데실 설페이트, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된다. 바람직하게, 상기 실시양태에서 조성물의 pH는 약 5.0 내지 8.0이다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 이에 한정되는 것은 아니지만 상기에 기술된 우유계 단백질 조성물 또는 우유계 성분을 포함하는 생리활성 단백질, 지방, 단백질 가수분해물, 지방 가수분해물, 탄수화물 또는 이들의 혼합물의 1 이상의 부가의 공급원을 추가로 포함한다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 면역글 로불린(1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함함), 글리코마크로펩티드, 성장 인자(성장 인자로부터 유래된 우유를 포함하고, TGF β1 및 TGF β2를 포함함)로부터 선택된 1 이상의 부가의 생리활성 성분, 약 1 중량% 이상의 면역글로불린을 포함하는 조성물, 항체 수준을 증가시키기위해 동물에 접종하여 제조된 생성물(초면역 우유 또는 초면역 초유), 면역 우유, 또는 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 1 이상의 비극성 지방, 1 이상의 극성 지방, 예컨대 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 스핑고리피드, 1 이상의 강글리오사이드, 또는 1 이상의 세라마이드, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 부가의 생리활성 성분을 추가로 포함한다.
또다른 실시양태에서, 상기 조성물은 약 1 중량% 이상의 면역글로불린을 추가로 포함하며, 상기 면역글로불린은 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM, 또는 이들의 혼합물, 또는 상이한 에피토프에 대해 특이적인 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM의 다수를 포함한다.
하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 식품이다. 바람직하게, 상기 식품은 음료, 바람직하게는 산성 음료, 또는 탄산 음료이다. 바람직하게, 상기 식품은 경질, 교반된, 풍미된, 과일 및 프로바이오틱 요거트를 포함하는 요거트, 프로마주 프레(fromage frais), 쁘티 쉬세(petit suisse), 쿼그(quarg), 발효 식품 또는 음료, 산성 음료 또는 유제품이다. 바람직하게, 상기 식품은 젤리이다.
하나의 실시양태에서, 처리 압력은 약 400, 500, 600 또는 700 MPa이고, 처리 시간은 유지 시간이 없음, 약 1, 2 또는 3분이다. 또다른 실시양태에서, 처리 압력은 약 350 내지 약 500 MPa이고, 처리 시간은 약 0분 내지 약 5분이다. 바람직하게, 상기 조성물 또는 제품은 요거트이다.
또다른 실시양태에서, 처리 압력은 약 400 내지 약 700 MPa이고, 처리 시간은 약 0분 내지 약 5분이다. 바람직하게, 상기 조성물 또는 제품은 발효 음료이다.
또다른 실시양태에서, 처리 압력은 약 400 내지 약 700 MPa이고, 처리 시간은 약 0분 내지 약 10분이다. 바람직하게, 상기 조성물 또는 제품은 산 음료, 액체 농축물(겔을 포함함) 또는 요거트이다.
또다른 실시양태에서, 처리 압력은 약 350 내지 약 800 MPa이고, 처리 시간은 약 0분 내지 약 10분이며, 상기 조성물 또는 제품의 pH는 약 pH 3.0 내지 약 pH 7.0이다.
하나의 실시양태에서, 생리활성 성분은 면역글로불린 또는 락토페린이며; 상기 제품 또는 조성물의 pH는 약 pH 3.0 내지 약 5.0, 바람직하게 약 pH 3.8 내지 약 4.5, 바람직하게 약 pH 4.1이고; 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게 600 MPa이며; 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 락토페린이며, 상기 제품 또는 조성물의 pH는 약 pH 3.5 내지 4.5, 바람직하게 pH 4.1이고, 상기 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게 600 MPa이며, 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또 는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 MPC 또는 초유 WPC이며; 생리활성 성분은 면역글로불린, 바람직하게는 IgG이고; 상기 제품 또는 조성물의 pH는 약 pH 3.5 내지 7.0, 바람직하게는 pH 3.5 내지 5.0, 바람직하게는 pH 4.1이며; 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게는 600 MPa이고; 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 MPC 또는 초유 WPC이며; 생리활성 성분은 락토페린이고; 상기 제품 또는 조성물의 pH은 약 pH 3.5 내지 7.0, 바람직하게 pH 3.5 내지 5.0, 바람직하게 pH 4.1이며; 상기 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게는 600 MPa이고; 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 면역 우유 또는 면역 우유 단백질 농축물 또는 면역 우유 유장 단백질 농축물이며, 상기 제품 또는 조성물의 pH는 약 pH 3.5 내지 7.0, 바람직하게 pH 3.5 내지 5.0, 바람직하게 pH 4.1이고; 상기 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게 600 MPa이며; 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 면역 우유 또는 면역 우유 단백질 농축물 또는 면역 우유 유장 단백질 농축물이며; 생리활성 성분은 면역글로불린, 바람직하게는 IgG이고; 상기 제품 또는 조성물의 pH는 약 pH 3.5 내지 4.5, 바람직하게 pH 4.1이며; 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게 600 MPa이고; 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 면역 우유 또는 면역 우유 단백질 농축물 또는 면역 우유 유장 단백질 농축물이며; 생리활성 성분은 락토페린이고; 상기 제품 또는 조성물의 pH는 약 pH 3.5 내지 4.5, 바람직하게 pH 4.1이며; 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa, 바람직하게 600 MPa이고; 처리 시간은 유지시간 없음, 1분, 2분 또는 3분으로부터 선택된다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 1 이상의 IgG이며, 처리 압력은 약 550 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
하나의 실시양태에서, 생리활성 조성물은 생리활성 우유계 단백질 조성물이며, 생리활성 성분은 IgG 또는 락토페린이고, 압력은 약 350 내지 650 MPa, 바람직하게는 350 내지 550 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 4.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 상기 생리활성 조성물은 초유 MPC이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 350 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 4.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 MPC이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.8이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 MPC이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 7.0이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 탈지분유이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 350 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 5.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
추가의 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 탈지분유이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 5.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 유장이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 350 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 5.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 유장이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 5.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 초유 유장 UF 투석유물이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 5.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 과면역 우유, 과면역 우유 단백질 농축물 또는 과면역 유장 단백질 농축물 과면역 초유, 과면역 초유 우유 단백질 농축물 또는 과면역 초유 유장 단백질 농축물이며, 생리활성 성분은 IgA, IgG, IgM 또는 락토페린이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.2 내지 5.5이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 락토페린이며, 압력은 약 550 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 7.5이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 성분은 TGF-βl 또는 TGF-β2이며, 압력은 약 550 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 8.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 요거트이며, 생리활성 성분은 락토페린이고, 압력은 약 450 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.5 내지 5.0이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
추가의 실시양태에서, 생리활성 조성물은 음료이며, 생리활성 성분은 IgG이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.0 내지 5.0이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 실시양태에서, 생리활성 조성물은 젤리이며, 생리활성 성분은 락토페린이고, 압력은 약 550 내지 650 MPa이며, pH는 약 3.0 내지 5.0이고, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 처리되거나 또는 제조될 조성물에 관한 것이다. 또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 처리되거나 또는 제조될 프로바이오틱 조성물에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 식용 제품, 예컨대 식품, 음료, 식품 첨가제, 음료 첨가제, 식이보조제(dietary supplement), 영양 제품(nutritional product), 의료용 식품(medical food), 식품의약(nutraceutical), 약물(medicament) 또는 의약품(pharmaceutical)의 제조에 사용되는 본 발명의 방법에 따라 처리되거나 또는 제조된 조성물의 용도에 관한 것이다.
부가적 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 처리되고, 1 이상의 락토바실러스 아시도필러스 균주, 1 이상의 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠스 균주, 1 이상의 락토바실러스 카세이 균주, 1 이상의 락토바실러스 크리스파투스 균주, 1 이상의 락토바실러스 존소니 균주, 1 이상의 락토바실러스 플란타룸 균주, 1 이상의 락토바실러스 루테리 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스 균주, 1 이상의 락토바실러스 살리바리우스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 비피듐 균주, 1 이상의 비피도박테리움 브레베 균주, 1 이상의 비피도박테리움 인판티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 론검 균주, 또는 1 이상의 스트렙토코커스 써모필루스 균주, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물을 포함하거나 또는 본질적으로 이루어지는 조성물에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 처리되고, 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 또는 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물을 포함하거나 또는 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 처리되고, 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장 인자, TGF βl, 또는 TGF β2, 또는 이들의 혼합물을 포함하거나 또는 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다. 또다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 방법에 따라 처리되고, 락토페린, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, 또는 TGF β2, 또는 이들의 혼합물을 포함하거나 또는 본질적으로 이루어진 조성물에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 식품, 음료, 식품 첨가제, 음료 첨가제, 식이보조제, 영양 제품, 의료용 식품, 식품의약, 약물 또는 의약품의 제조에 사용되는 본 발명의 조성물의 용도에 관한 것이며, 바람직하게 이를 필요로 하는 질환자를 치료하는데 사용되며, 바람직하게는 이를 필요로 하는 질환자의 면역계를 자극하는데 사용되는 것이다. 따라서, 또다른 측면에서, 본 발명은 이를 필요로 하는 질환자의 면역계를 자극하는 방법에 관한 것이며, 이는 본 발명의 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명의 다른 측면은 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 젤리; 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 요거트; 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 음료; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 젤리; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 요거트; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 음료; 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 젤리: 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 요거트; 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 음료; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 젤리; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 요거트; 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 음료에 관한 것이다. 상기 조성물의 pH 및 상기 조성물이 처리되는 압력은 상기에 기술된 범위로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 1 이상의 비생육성(non-viable) 프로바이오틱 미생물 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 1 이 상의 락토바실러스 아시도필루스 균주, 1 이상의 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠스 균주, 1 이상의 락토바실러스 카세이 균주, 1 이상의 락토바실러스 크리스파투스 균주, 1 이상의 락토바실러스 존소니 균주, 1 이상의 락토바실러스 플란타룸 균주, 1 이상의 락토바실러스 루테리 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스 균주, 1 이상의 락토바실러스 살리바리우스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 비피둠 균주, 1 이상의 비피도박테리움 브레베 균주, 1 이상의 비피도박테리움 인판티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 론검 균주, 1 이상의 스트렙토코커스 써모필러스 균주, 또는 이들의 혼합물로 구성된 그룹으로부터 선택된 1 이상의 비생육성 프로바이오틱 미생물 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 또는 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 비생육성 프로바이오틱 미생물 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물; 및 락토바실러스 람노수스 HN001의 비생육성 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물의 pH 및 상기 조성물이 처리되는 압력은 상기에 기술된 범위로부터 선택될 수 있다.
모든 출원, 특허 및 공보, 상기 및 하기에 인용된 문헌은 참고문으로 본원에 통합될 수 있다.
본원에 기술된 수치들의 범위에 대한 참조(예를들면, 1 내지 10)는 상기 범 위안에서(예를들면, 1, 1.1, 2, 3, 3.9, 4, 5, 6, 6.5, 7, 8, 9 및 10) 모든 유리수, 상기 범위(예를들면, 2 내지 8, 1.5 내지 5.5 및 3.1 내지 4.7)안에서 유리수의 범위, 및 그러므로 본원에 기술된 모든 범위의 하위 범위에 대한 참고문도 통합되는 것으로 이해된다. 특별히 한정된 실시예 및 수치의 하한과 상한사이의 수치의 모든 가능한 조합은 유사한 방법으로 본 출원에 명시된 것으로 고려한다.
도 1은 3분동안 600 MPa의 처리 압력과 비교하여 3분동안 83.5 ℃의 열처리 이후에 산성 우유계 음료(pH 3.5에서 3.6% 단백질)내에 남아있는 면역글로불린 분획물(HPLC에 의해서 측정됨)을 나타내는 그래프이다.
도 2는 (A) 6 % w/v의 초유 유장 조성물, (B) 6 % w/v 초유 유장 UF 투석유물 조성물(10 kDa에서 한외여과), (C) 6 % w/v의 초유 탈지분유 조성물, 및 (D) 6 % w/v의 초유 MPC 조성물의 IgG 성분에 있어서 가변 pH에서 가열 처리(85℃/10분) 및 가압 처리(600 MPa/3분 유지)의 효과를 나타내는 4개의 그래프이다.
도 3은 가압 처리된(600 MPa/유지시간 없음 및 600 MPa/3 분) 및 가열-처리된(85℃/10 분) (A) 7% w/v의 HI-MPC 조성물 및 (B) 7% w/v의 HI-WPC 조성물의 시료에 있어서 잔류하는 IgA, IgG, IgM 및 락토페린(LF) 수준(%)을 나타내는 2개의 그래프이다. 결과는 비처리 대조군 시료의 IgA, IgG, IgM 및 락토페린 수준의 백분율로서 표시된다.
도 4는 처리되지 않은 7% w/v의 WPC 조성물 시료, 가압-처리된(600 MPa/3분) 7% w/v의 WPC 조성물 시료, 및 가열-처리된(75 ℃/5 분) 7% w/v의 WPC 조성물 시료 에서 잔류하는 IgG 및 락토페린(LF) 수준을 나타내는 2개의 그래프를 나타낸다.
도 5는 하기와 같이 가압-처리된 6 % w/v의 락토페린 용액의 시료에서 잔류하는 LF 수준을 나타내는 그래프이다: (1) 대조군, (2) 600 MPa/5 분, (3) 600 MPa/15 분, (4) 600 MPa/ 30 분, (5) 600 MPa/ 45 분, (6) 75℃/ 5 분, (7) 85℃/ 5 분, 및 (8) 90℃/ 5분.
도 6은 하기와 같이 가변 pH에서 가압-처리되거나 또는 가열-처리된 6 % w/v의 락토페린 용액의 시료내 잔류하는 LF 수준(%)을 나타내는 그래프이다: 600 MPa/5 분, 600 MPa/15 분, 600 MPa/ 30 분, 600 MPa/ 45 분, 또는 85℃/ 5 분. 결과는 비처리 대조군 시료의 락토페린 수준의 백분율로서 표시된다.
도 7은 가열-처리되거나 또는 가압-처리된 7 % w/v의 HI-WPC 용액의 시료에서 잔류하는 성장 인자(TGF β1 및 TGF β2) 수준을 나타내는 2개의 그래프를 나타낸다.
도 8은 대조군 LF 요거트, 가열-처리된 LF 요거트 및 HPP 처리된 LF 요거트를 제조하는 방법을 요약한 흐름도이다.
도 9는 대조군, 가열-처리된 것 및 HPP 처리된 LF 요거트에서 잔류하는 LF 수준을 나타내는 그래프이다.
도 10은 표준(가열-처리) 산성 음료, 미처리된(대조군) 산성 음료 및 HPP 처리된 산성 음료를 제조하는 방법을 요약한 흐름도이다.
도 11은 대조군 산성 음료, 가열-처리된 산성 음료 및 HPP 처리된 음료 산성 음료에서 잔류하는 IgG 수준을 나타내는 그래프이다.
도 12는 대조군(비처리된) LF 젤리 및 HPP 처리된 LF 젤리를 제조하는 방법을 요약한 흐름도이다.
도 13은 대조군 및 HPP 처리된 LF 젤리내 잔류하는 LF 수준을 나타내는 그래프이다.
도 14는 락토바실러스 람노수스 HN001 (HN001) 처리에 반응하는 사람의 생체외(ex vivo) PBMC에 의한 IFN-γ 제조를 나타내는 박스 플롯(box plot)이며, 각 박스는 중간값(수평선)의 상하 4분위수(quartile)를 나타내며, 수직선은 전체 범위를 나타내고, 별표는 외좌 결과(outlier results)를 나타내며, 결과는 HN001가 없이(배지만) 배양된 PBMC, 생 HN001을 갖는 (HN001 live) PBMC, 가열 불활성화된 HN001를 갖는(HN001 heat) PBMC, 또는 UHP 불활성화된 HN001를 갖는(HN001 UHP) PBMC을 나타낸다.
도 15는 HN001 처리에 대한 반응으로 사람의 생체외(ex vivo) PBMC에 의한 IL-10 제조를 나타내는 박스 플롯이다.
도 16은 생 HN001 (생) 또는 가열-불활성화된 HN001 (가열)과 비교하여 pH 7.4 (UHP - pH 7.4)에서 PBS 완충액 또는 pH 5.0 (UHP - pH 5.0)에서 아세테이트 완충액에서 UHP (600 MPa/3 분)에 의해 불활성화된 HN001에 반응하여 사람의 생체외(ex vivo) PBMC에 의한 IL-10 제조를 나타내는 박스 플롯이다.
도 17은 소수성 리간드가 보충된 가열-처리된(90 ℃/1분 내지 4분-상한) 또는 가압-처리된(600 MPa/ 1분 내지 4분-하한) 7 % w/v의 WPC 시료의 PAGE 겔의 10개의 사진을 나타낸다. 각 겔에서, 각 레인(lane)은 하기와 같은 처리 시간에 해 당한다: 레인 1: 미처리된 대조군; 레인 2: 1 분; 레인 3: 2 분; 레인 4: 3 분; 및 레인 5: 4 분. 고분자량 응집물은 "(i)"로 표시하며, IgG는 "(ii)"로 표시하고, 락토페린은 "(ⅲ)"로 표시한다.
1. 정의
생리활성 성분의 "활성(activity)"은 섭취되는 경우 생리활성 성분이 생리학적으로 활성을 가지며, 수단, 바람직하게는 경구를 통해 동물, 특히 사람을 포함하는 포유류에 투여되는 경우 건강에 유익한 것을 의미한다. 다양한 생리활성 성분의 활성 평가는 하기에서 기술되었다.
활성을 보유하는 것은 가압-처리된 생리활성 성분은 비처리된 대조군 활성의 적어도 약 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 또는 100%로 보유하는 것을 의미하며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 35 내지 약 100%, 약 50 내지 약 100%, 약 60 내지 약 100%, 약 70 내지 약 100%, 약 80 내지 약 100%, 및 약 90 내지 약 100%) 사이에서 선택될 수 있다.
다수의 예에서, 단백질 활성은 적당한 단백질 폴딩(folding)과 연관된다. UHT(ultra heat treated) 우유내 천연 및 철-하중된 LF의 변성은 다양한 박테리아종과 결합할 수 있고, 이의 반응 용량을 감소시킬 수 있다는 것이 연구에서 밝혀졌다(Paulsson et al., 1993). 그러므로, 활성 평가는 흥미 있는 단백질의 구조적 견고성의 표시를 제공하는 분석 기술을 사용하여 실시될 수 있다. 면역 분석, 예컨대 래디얼 면역확산(radial immunodiffusion, RID), 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance, SPR), 및 친화성 HPLC-MC(affinity HPLC-MC)는 측정하기 이전에 온전한 IgG를 요구한다. 효소-연결된 면역흡수 분석(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)에서, 적당하게 폴딩된 IgG 또는 LF는 항체에 의해서 결합되며, 효소-연결된 색측제(enzyme-linked colorimetric agents)를 사용하여 검출 및 가시화될 수 있다. 가열-처리된 과면역 유제품의 생리활성의 손실에 대한 정보는 Li, et al., 2003에서 제공된다. 그러므로, 몇가지의 실시양태에서, 가압-처리 이전 및 이후에 적당하게 폴딩된 단백질의 양을 평가하는 것은 보유된 활성의 평가를 제공한다. 바람직하게, 생리활성 성분은 단백질이며, 보유된 활성은 하기에 기술된 바와 같이 ELISA, 유세포분석, HPLC 또는 BiaCore에 의해서 평가된다.
지방의 생리활성은 본래의 지방 또는 지방산 분자와 연관된다.
레토르팅(retorting) 지방 조성물(15분동안 120 ℃에서 가열-처리)은 포스포리피드의 분해에 의해서 조성물의 과도한 갈변(색상 변화)을 일으킨다. 예를들면, 100 g의 NZMP 포스포리피드(PC 500) 및 200 g의 무수 유지방의 시료는 0분동안 600 MPa, 3분동안 600 MPa, 15분동안 600 MPa에서 가압-처리되거나 또는 20분동안 120 ℃에서 레토르트된다. 포스포리피드를 레토르팅한 이후에, 시료는 색상이 암갈색으로 변한다(데이터를 개시하지 않음). 대조적으로, 가압-처리된 시료는 영향받지 않고 남아 있다(데이터를 개시하지 않음). 바람직하게, 생리활성 성분은 지방이며, 보유된 활성은 기체 크로마토그래피(GC) 또는 HPLC에 의해서 평가된다.
가수분해물의 보유된 생리활성은 하기에서 기술된 바와 같이 ELISA, 유세포분석, HPLC 또는 BiaCore를 사용하거나 또는 실험관내(in vitro) 또는 생체내(in vivo) 분석을 사용하여 목적하는 펩티드 존재를 평가함으로써 평가될 수 있다.
하나의 실시양태에서, 활성은 프로바이오틱 활성이다. 프로바이오틱 활성은 하기에 기술되었다. 바람직하게, 생리활성 성분은 프로바이오틱이며, 프로바이오틱 활성은 PBMC 사이토킨 분비 분석에 의해서 평가된다.
본 명세서 및 청구의 범위에서 사용된 "포함하는(comprising)"이라는 용어는 "적어도 일부로 구성된(consisting at least in part of)" 것을 의미한다. 상기 용어를 포함하는 명세서 및 청구의 범위에서 상기 내용을 해석하는 경우, 각 명세에서 용어에 의한 특징은 모두 존재할 수 있지만, 다른 특징이 또한 존재할 수 있다. 연관된 용어, 가령 "포함한다(comprise)" 및 "포함된(comprised)"이라는 용어는 동일한 방법으로 해석된다.
본원에 사용된 용어 "생리활성 조성물(bioactive composition)" 또는 "생리활성 생성물(bioactive product)" 또는 "생리활성 성분(bioactive ingredient)"은 생리활성 성분의 존재 때문에 생리활성이며, 식품 및 식품 성분을 포함하는 조성물 또는 생성물 또는 성분을 의미한다. 바람직한 실시양태의 촛점은 식품 및 식품 성분, 특히 유제품 및 우유계 성분이며, 본 발명은 식품은 아니며; 예를들면 경구용 또는 비경구용으로 투여되는 의료용 제품인 의료용 제품을 포함하는 생리활성 성분을 포함하는 조성물 또는 생성물 또는 성분을 처리하는데 유용한 것으로 이해된다. 몇가지 실시양태에서, 생리활성 생성물은 다른 생성물로 혼입되는 성분인 것으로 이해된다. 유용한 식품 또는 유용한 성분은 음료(산성 음료, 탄산 음료, 소모액 및 겔을 포함함), 식품의약, 및 상기 제품에 사용되는 성분을 포함하는 식용 제품 또는 성분을 포함한다. 몇가지 실시양태에서, 식품은 다른 생성물로 혼입되는 성분인 것으로 이해된다. 생리활성 조성물은 약학적 조성물일 수 있다.
상기 조성물은 액체내 고체의 현탁액을 포함하는 액체(페효모 또는 슬러리를 포함함)일 수 있다. 상기 조성물의 예로는 액체 농축물(겔을 포함함), 음료(산성 및 탄산 음료를 포함함), 젤리 또는 요거트를 포함한다.
생리활성 조성물의 예로는 우유계 단백질 조성물 및 우유계 성분, 가령 상기에 기술된 것과 같은 것을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "생리활성 성분(bioactive component)"은 섭취하는 경우 생리학적으로 활성이고, 수단, 바람직하게는 경구로 동물, 특히 사람을 포함하는 포유류에 투여되는 경우 건강상 유익한 영향을 주는, 1 이상의 단백질(자연적으로 발생된 단백질 또는 이의 변형제, 가령 재조합, 합성 및 변형된 단백질을 포함함), 1 이상의 지방(변형된 지방을 포함함), 1 이상의 단백질 가수분해물, 1 이상의 지방 가수분해물, 또는 1 이상의 탄수화물(변형된 탄수화물을 포함함), 또는 이의 혼합물을 의미한다. 재조합 단백질의 제조는 Sambrook, et al., (1989)에 기술되었다.
생리활성 단백질의 예로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 락토페린, 리소자임, 면역글로불린(IgA, IgD, IgE, IgG 또는 IgM를 포함함), 글리코마크로펩티드, 및 성장 인자(TGF βl 및 TGF β2를 포함하는 성장 인자로부터 유래된 우유를 포함함)를 포함한다.
생리활성 단백질 가수분해물의 예로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 카제인 가수분해물, 가수분해된 유장을 포함하는 유장 단백질 가수분해물, 가수분해된 유장 단백질 농축물(WPC), 가수분해된 유장 단백질 분리물(WPI) 또는 개별의 가수분해된 유장 단백질, 가령 α-락트알부민, β-락토글로불린, 프로테오스 펩톤, 면역글로불린(IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM를 포함함), 글리코마크로펩티드, 성장인자(가령, TGF βl 및 TGF β2), 소혈청 알부민, 락토페린 및 락토퍼옥시다제를 포함한다. 다른 실시예는 WO 99/65326 및 WO 02/19837에 기술된 것, 유장 가수분해물로부터 분리된 ACE 펩티드(가령, WO 02/19837에 기술된 것)를 포함한다. 단백질 가수분해물은 하기에 기술된 것과 같이 제조될 수 있다.
생리활성 지방의 예로는 이에 한정되는 것은 아니지만 비극성 지방 및 극성 지방, 예컨대 포스포리피드, 스핑고리피드, 강글리오사이드 및 세라마이드를 포함한다.
적어도 하나의 생리활성 단백질, 지방, 단백질 가수분해물, 지방 가수분해물, 탄수화물 또는 이들의 혼합물을 포함하는 생리활성 조성물의 예로는 상기에 기술된 바와 같은 우유계 단백질 조성물 및 우유계 성분을 포함한다.
생리활성 조성물의 추가의 예로는 이에 한정되는 것은 아니지만, 약 1% w/w 이상의 면역글로불린을 포함하며, 상기 면역글로불린은 1 이상의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM; 항체 수준을 증가시키기위해 동물에 접종하여 제조된 제품; 및 면역 우유를 포함한다.
용어 "유지 시간(hold time)"은 처리 시간은 압력이 처리 압력에서 유지되는 시간인 바람직한 실시양태를 나타낸다. 예를들면, 1분의 유지 시간의 의미는 압력이 1분동안 처리 압력에서 유지되는 것을 의미한다. 0분의 유지 시간(또는 "유지 시간 없음")은 압력을 처리 압력으로 올리지만, 유지하지 않고 다시 실내 압력(통상 대기압)으로 되돌리는 것을 의미한다. 상기 실시양태에서, 바람직한 처리 시간은 0분(또는 "유지 시간 없음"), 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 및 10분을 포함한다. 압력이 처리 압력에서 의도적으로 유지되지 않음에도 불구하고, 사용된 장치의 특성에 의해서 매우 짧은 유지 시간(가능한 수 밀리초)일 수 있다. 상기 매우 짧은 유지 시간은 상기 방법을 실시하는데 실질적으로 영향을 주지 않는다.
본원에 사용되는 용어 "품질 보존(keeping quality)"은 경시적으로 원치 않는 미생물의 성장을 저항할 수 있는 조성물의 역량을 의미한다. 가열-처리되지 않은 조성물 또는 본원에서 제공되는 것과 같은 허용가능한 대체물은 상업적으로 허용가능한 품질 보존성을 갖지 않는다. 품질 보존을 유지하는 방법은 본 발명의 방법은 가압-처리된 조성물의 저장 수명을 확장시에 가열-처리된 대조군만큼 효과적인 것을 의미한다. 품질 보존을 증가하거나 또는 증가되는, 또는 향상하거나 또는 향상되는 것은 경시적으로 원치 않는 미생물의 성장을 저항하는 조성물의 역량이 처리되지 않은 조성물과 비교하여 개선된 것을 의미한다. 향상된 품질 보존은 예를들면 특성, 가령 연장된 저장 수명 및 온도 변화에 저항하는 개선된 역량을 유도한다. 온도 변화(가령, 저온 저장고로부터 제거되는 경우)는 잔류 박테리아의 성장을 유도할 수 있다.
바람직하게, 품질 보존은 호기성 세균수(APC)를 참고로 평가된다. APC는 시료내 박테리아 밀도를 측정하는데 사용된 박테리아 계수 절차이며, 달리 전체 평판 계수(Total Plate Count), 표준 평판 계수(Standard Plate Count) 또는 전체 생균 계수(Total Viable Count)로서 알려져 있다. 시료가 수집되고, 혼합되고, 희석되고 및 연구된 박테리아를 검출하기에 적당한 아가 배지내 도포된다[예를들면, 식품 또는 우유계 오염물, 가령 에스케리치아 콜리(Escherichia coli), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 살모넬라(Salmonellae), 시겔라(Shigellae), 콜리폼(coliforms), 효모(yeasts) 및 곰팡이(molds), 중온성 포자(mesophilic spores), 고온성 포자(thermophilic spores)]. APC 결과는 도포되고, 32 ℃에서 72시간동안 배양된 시료 1밀리리터당 콜로니 형성 유닛의 수(cfu/ml)이다. 50,000 cfu/ml 이하의 APC는 살아있는 배양액을 포함하도록 의도되지 않은 후레쉬 유제품에 매우 바람직하다. APC 50,000 cfu/ml 이상을 포함하는 제품은 허용가능한 품질 보존을 갖지 않으며, 생물체의 존재는 제품에 특히 적당하지 않으며, 후자의 예로서 제품의 부류는 살아있는 배양액이 바람직한 요거트 또는 발효된 제품을 포함한다.
따라서, 하나의 실시양태에서, 바람직한 방법은 처리 이후에 호기성 세균수(APC)가 밀리리터당 약 100,000, 75,000, 50,000, 25,000, 10,000, 5,000, 1,000, 100, 또는 10 콜로니 형성 유닛(cfu/ml) 이하인 것이다. 바람직하게, 상기 APC는 약 50,000 cfu/ml 이하이다.
용어 "락토페린(lactoferrin)"은 비글리코실화(non-glycosylated) 또는 글리코실화(glycosylated) 야생형(wild-type) 포유류, 바람직하게 소 또는 사람, 락토페린 아미노산 서열 또는 이의 변형체를 나타낸다.
용어 "우유계 성장 인자(milk derived growth factor)"는 포유류 우유 또는 초유, 바람직하게는 소 우유 또는 초유에서 발견되는 성장 인자, 가령 인슐린 유사 성장 인자-I(Insulin- Like Growth Factor-I, IGF-I), 인슐린 유사 성장 인자-II(Insulin-Like Growth Factor-II, IGF-II), 형질전환 성장 인자-β1(Transforming Growth Factor-βl, TGF-βl), 형질전환 성장 인자-β2(Transforming Growth Factor-β2, TGF-β2), 혈소판-유도 성장 인자(Platelet-Derived Growth Factor, PDGF) 및 헤파린-결합 성장 인자(Heparin-Binding Growth Factors)를 포함한다. 또한, 표피 성장 인자(Epidermal Growth Factor)를 포함한다.
용어 "가압-처리(pressure treatment)"는 초고압(UHP) 처리를 나타낸다. 상기 처리는 100 MPa 이상의 압력을 사용하여 통상 허용된다. 이는 "고압" 처리, "고정수압(high hydrostatic pressure, HHP)" 또는 "고압 처리(high pressure processing, HPP)"로 알려져 있다. "가압-처리된" 생성물은 UHP 처리된 것, 즉 100 MPa 이상의 압력에서 가압-처리, 바람직하게는 약 350, 400, 450, 500, 600, 700 또는 800 MPa 이상의 압력에서 가압-처리 (또는 그렇지 않다면 상기에 기술된 범위 내에서)된 것이다.
용어 "프로바이오틱 활성(probiotic activity)" 은 면역계를 자극하기위한 특정 미생물의 역량을 나타낸다. 프로바이오틱 미생물의 활성 타입 및 수준을 측정하는 것은 당분야의 통상의 지식을 가진 사람에게 알려져 있다: 예를들면 Mercenier et al. (2004), Leyer et al. (2004), 또는 Cummings et al. (2004) 참조. 바람직하게, 프로바이오틱 활성은 PBMC 사이토킨 분비 분석에 의해서 평가된다.
프로바이오틱 활성을 보유하는 것은 약화되거나 또는 사멸된 프로바이오틱 미생물은 유용한 프로바이오틱 활성을 갖는 것을 의미한다. 프로바이오틱 활성을 매개하는 박테리아 분자는 분명하게 식별되지 않으며, 가능한 후보 분자는 박테리아 DNA 모티프, 표면 단백질, 작은 유기산, 및 세포벽 성분, 가령 리포테이코산 및 펩티도글리칸을 포함한다. 상기는 면역-조절 효과(immuno-modulatory effect)를 제공하기위해 숙주 면역계의 성분과 반응하는 것이 추정된다. 바람직하게, 보유된 활성은 비처리된 대조군 활성의 적어도 약 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 99 또는 100%이며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 35 내지 약 100%, 약 50 내지 약 100%, 약 60 내지 약 100%, 약 70 내지 약 100%, 약 80 내지 약 100%, 및 약 90 내지 약 100%) 사이에서 선택될 수 있다.
용어 "프로바이오틱 인자(probiotic factor)"는 프로바이오틱 활성을 매개하는 박테리아 분자이며, 이에 한정되는 것은 아니지만 박테리아 DNA 모티프, 표면 단백질, 작은 유기산, 또는 세포벽 성분, 가령 리포테이코산 및 펩티도글리칸, 또는 이들의 혼합물이다. 상기에 언급된 바와 같이, 상기 분자는 분명하게 식별되지 않으며, 상기 분자는 프로바이오틱 생물체가 존재한다면 존재할 것이다.
용어 "피험자(subject)"는 동물, 바람직하게 포유류, 더 바람직하게 포유류 동반 동물 또는 사람을 나타낸다. 바람직한 동반 동물은 고양이, 개 및 말을 포함한다.
용어 "원치 않는 미생물(unwanted microorganisms)"은 가압-처리 이전에 조성물내에서 성장할 수 있는 모든 미생물을 나타낸다. 상기 성장은 바람직하지 않으며, 성장하지 않고, 비생육성을 포함하며, 약화되거나 또는 사멸된 미생물인 미생물의 존재는 결과적으로 존재하지 않거나 또는 바람직할 수 있다.
원치 않는 미생물의 성장을 방지하는 것은 미생물, 가령 박테리아(프로바이오틱 박테리아를 포함함), 진균류, 곰팡이, 효모 및 조류의 성장은 실질적으로 감소되거나, 지연되거나 또는 제거되는 것을 의미한다. 미생물은 손상시키거나 또는 병원체(pathogen)일 필요는 없다. 원치 않는 미생물의 성장은 육안 관찰에 의해서 평가하거나 또는 당분야의 통상의 지식을 가진 사람에게 알려져 있는 표준 기술[이에 한정되는 것은 아니지만, 현미경, 염색, PCR, 세포 소팅(cell sorting) 등]을 사용함으로써 평가될 수 있다(Lund, et al., 2000 참조). 바람직하게, 가압-처리 이후에 조성물의 APC는 약 100,000, 75,000, 50,000, 25,000, 10,000, 5,000, 1,000, 100, 또는 10 cfu/ml 이하, 바람직하게는 약 50,000 cfu/ml 이하이다.
상기에 기술된 바와 같이, 가열-처리 또는 가압-처리되지 않은 조성물은 상업적으로 허용가능한 품질 보존을 갖지 않는다. 즉, 처리되지 않은 조성물의 품질 보존은 원치 않는 미생물의 성장을 방지하는데 단계가 필요하지 않기 때문에 통상 허용가능하지 않다. 상기 단계를 포함하면, 품질 보존은 향상될 것이다. 밀리리터당 약 100,000, 75,000, 50,000, 25,000, 10,000, 5,000, 1,000, 100, 또는 10 콜로니 형성 유닛(cfu/ml), 바람직하게 약 50,000 cfu/ml 이하인 처리후 호기성 세균수(APC)는 품질 보존에 있어서 영향을 주는 존재하는 생물체의 역량을 감소시키거나, 지연시키거나 또는 제거할 것이다. 낮은 pH 또는 냉장(약 0℃ 이하, 바람직하게는 약 4℃이하의 온도에서 저장), 또는 두가지 처리의 조합에서, 품질 보존에 영향을 주는 역량은 추가적으로 감소되거나, 지연되거나 또는 제거될 것이다.
프로바이오틱 미생물을 사용하는 실시양태에서, 프로바이오틱 미생물 성장은 원하지 않지만, 프로바이오틱 미생물의 존재는 바람직하다. 따라서, 상기 실시양태에서 원치 않는 미생물의 성장을 방지하는 것은 프로바이오틱 미생물의 성장이 실질적으로 감소되거나, 지연되거나 또는 제거되는 것을 의미한다. 바람직하게, 가압-처리는 프로바이오틱 미생물을 약화시키거나, 더 바람직하게는 프로바이오틱 미생물을 사멸시키고, 프로바이오틱 활성의 적어도 목적하는 수준을 유지한다.
하나의 실시양태에서, 상기 프로바이오틱 미생물은 적어도 목적하는 수준의 프로바이오틱 활성을 보유하는 불활성화된 프로바이오틱 미생물이다. 불활성화된 프로바이오틱 미생물은 비생육성일 수 있거나, 대사적으로 활성이지만 비생육성일 수 있거나 또는 사멸될 수 있으며, 모든 경우에 적어도 목적하는 수준의 프로바이오틱 활성을 보유한다.
또다른 실시양태에서, 프로바이오틱 미생물은 가압-처리 이전에 불활성화된 프로바이오틱 미생물이다. 본 실시양태에서 가압-처리는 다른 원치 않는 미생물의 성장을 방지하고 존재하는 프로바이오틱 인자의 프로바이오틱 활성을 보유한다.
용어 "변이체(variant)"는 1 이상의 아미노산의 추가, 결실 또는 치환에 의해서 단백질의 우세한 야생형 아미노산 서열로부터 변형시켜서 자연적으로 발생하는 [예를들면, 대립유전자 변형(allelic variant)] 또는 비자연적으로 발생하는 (예를들면, 인공적으로 발생하는 변이체) 단백질을 나타낸다.
통상, 단백질 변이체는 하기의 실시예에 따라 분석되는 경우 통상 성질상의 생물학적 활성을 포함한다. 또한, 상기 변이체는 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성(sequence identity)을 공유할 수 있다. 또한, 용어 "변이체"의 의미 안에서 동족체(homologues)를 포함한다. 동족체는 전형적으로 다른 종으로부터의 단백질이지만, 개시 단백질과 동일한 생물학적 기능 또는 활성을 실질적으로 공유한다.
바람직한 변이체 단백질은 야생형 서열에 대해 바람직하게 적어도 약 70, 75, 80, 85, 90, 95 또는 99% 동일성, 바람직하게 적어도 약 90, 95 또는 99% 동일성을 갖는다. 동일성은 프로그램의 BLAST 스위트(BLAST suite)를 사용하여 후보 아미노산 서열과 비교함으로써 결정되며(version 2.2.12; 28 August 2005) (Tatusova, et al. (1999); McGinnis, et al. (2004)), 즉 NCBI로부터 이용할 수 있다(ftp://ftp.ncbi.nih.gov/blast/).
생물학적 활성의 상당한 대체없이 1 이상의 아미노산의 보존성 치환(conservative substitutions)이 또한 유용한다. 당분야의 통상의 지식을 가진 사람은 표현형 실런트 아미노산 치환을 제조하는 방법을 알 것이다[예를들면, Bowie et al., (1990) 참조].
2. 생리활성 조성물의 가압-처리
본 발명자들은 생리활성 성분들의 생리활성을 유지하고 상업적으로 유용한 품질 보존을 달성하는 조건하에 생리활성 성분을 포함하는 생리활성 조성물을 가압-처리할 수 있는 것이 개시되어 있다. 하기 실시예 1에서, 열 처리 이후에 활성의 50% 이상이 손실되는 것과 비교하여, 생리활성 생성물(초유계 음료)을 가압-처리한 이후에 생리활성 성분의 생리활성의 4%만이 손실된다.
실시예에 의하면, 본 발명에 따라 처리된 생리활성 조성물은 가압-처리된 생성물 또는 성분내에서 송달될 수 있거나; 연이어 가열-처리되지 않은 생성물 또는 성분으로 첨가되거나; 또는 연이어 가압-처리된 생성물 또는 성분으로 첨가된다.
또한, 본 발명자들은 가압-처리된 프로바이오틱 미생물이 면역계를 자극할 수 있는 역량을 보유하는 것을 보여준다. 그러므로, 가압-처리는 상기 성장이 바람직하지 않을 수 있는 적용에서 프로바이오틱 미생물의 성장을 방지하는 유용한 도구이다.
본 발명자들은 소수성 리간드를 사용하여 생리활성 성분은 약 pH 7.0, 바람직하게는 약 pH 5.0 내지 8.0에서 생리활성 성분이 UHP 처리되도록 할 수 있으며, 리간드가 존재하지 않는 경우 쉽게 수득될 수 있는 것보다 더 높은 활성 수준을 보유한다.
따라서, 본 발명자들은 생리활성 조성물의 품질 보존성을 유지하거나 또는 증가시키면서 본원에 기술된 바와 같이 조성물내 존재하는 적어도 하나의 생리활성 성분의 적어도 목적하는 활성 수준을 보유하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 프로바이오틱 미생물의 성장을 방지하고 프로바이오틱 활성의 적어도 목적하는 수준을 유지하기위해 프로바이오틱 조성물을 처리하는 방법에 관한 것이다.
이에 한정되지 않고, 본 발명의 방법에 유용한 가압-처리는 하기의 단계들을 포함한다:
(i) 가압 용기 챔버로 가압-처리될 조성물을 넣고 상기 챔버를 밀봉하는 단계;
(ii) 챔버내 압력을 선정된 설정 압력("처리 압력")으로 상승시키는 단계;
(iii) 선정된 시간(1분 이하를 포함함)동안("유지 시간") 상기 챔버를 상기 압력에서 유지하는 단계;
(iv) 상기 챔버로부터 압력을 방출시키는 단계; 및
(v) 상기 가압-처리된 조성물을 제거하는 단계.
상기 프로토콜은 배치(batch) 또는 연속 처리 장치를 사용하여 실시될 수 있다.
가압-처리는 처리하는 동안 조성물 또는 생성물 또는 성분내에서 온도의 변동을 일으킬 수 있는 것을 이해해야 한다. 이와 같이, 가압-처리 동안 바람직한 온도에 대한 참고문헌은 압력이 상승되기 이전의 조성물의 온도를 나타낸다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 처리 압력을 선정하는 한가지 방법은 생리활성 조성물을 선택하고, 1 이상의 원치 않는 미생물을 조절하기에 적당한 처리 압력으로 상기를 처리한다. 필요하다면, 상기 조성물은 평가를 위해서 원치않는 생물체를 접종할 수 있다. 그 후 생리활성 성분의 보유된 생리활성은 하기에 기술된 바와 같이 평가될 수 있다.
본 발명에 따라 사용하기 위한 처리 압력을 선정하는 또다른 방법은 생리활성 조성물을 선택하고, 1 이상의 생리활성 성분의 적어도 목적하는 활성 수준을 보유하는 처리 압력으로 상기를 처리한다. 그 후, 원치 않는 미생물의 성장, 또는 생리활성 성분의 활성, 또는 원치 않는 미생물의 성장 및 생리활성 성분의 활성이 본원에 기술된 바와 같이 후처리 호기성 세균수를 평가함으로써 평가된다. 예를들면 미생물 성장을 평가하는 방법에 대한 Lund, et al. (2000)을 참조한다. 상기 평가 방법은 또한 원치 않는 미생물의 성장이 방지되고 적어도 목적하는 생리활성 수준이 보유되는 조합을 결정하기위해서 pH 및 유지 시간을 변화시킴으로써 사용할 수 있다.
3. 생리활성 성분의 생리활성
본 발명의 방법에 따라 처리되거나 또는 제조된 생리활성 조성물은 1 이상의 생리활성 성분의 적어도 목적하는 활성 수준을 보유하는 것이 바람직하다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 목적하는 활성 수준은 생리활성 조성물이 가열-처리되는 경우에 보유할 수 있는 활성 수준과 동일하거나 또는 더 크다. 예를들면 실시예 1에 기술된 바와 같이, 생리활성 조성물의 가열-처리는 처리되지 않은 대조군에서 생리활성 성분의 활성과 비교하여 1 이상의 생리활성 성분의 활성의 34%까지 보유되도록 한다. 대조적으로, 본 발명의 방법은 실시예 1에 기술된 바와 같이, 생리활성 성분의 적어도 약 34% 이상의 활성이 보유된 생리활성 조성물을 제공할 수 있다. 몇가지 생리활성 성분에 있어서, 가열-처리가 좀 더 유해할 수 있다.
그러므로, 하나의 실시양태에서 용도에 따라, 처리되지 않은 대조군에서 생리활성 성분의 활성과 비교하여 1 이상의 생리활성 성분의 약 35% 이상의 활성이 보유된다. 바람직하게, 1 이상의 생리활성 성분의 활성의 적어도 약 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100%가 보유되며, 바람직한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 70% 내지 약 100%)사이에서 선택될 수 있다.
선택적 실시양태에서, 바람직하게 생리활성 성분은 가열-처리된 생리활성 성분보다 적어도 약 10, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 600, 700, 800, 900 또는 1000 % 이상의 활성을 보유하며, 바람직한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 100% 내지 약 400%)사이에서 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 가압-처리 이전 및 가압-처리 이후에 생리활성 성분의 생리활성은 상기 및 하기에 기술된 바와 같이 선택된 생리활성 성분의 선택된 활성을 분석하는 공지된 방법에 의해서 측정할 수 있다.
생리활성을 측정하는 허용된 방법의 예로는 이에 한정되는 것은 아니지만, HPLC, 세포계 분석(cell-based assays), 효소계 분석(enzyme-based assays), ELISA 분석, 유세포 분석(이는 ELISA에 대해 허용된 대체예임), 라디오-면역 분석(radio-immune assays) 및 동물 모델을 사용한 생체내(in vivo) 분석을 포함한다.
예를들면, 락토페린의 생리활성을 측정하는 허용된 방법은 이에 한정되는 것은 아니지만, 크로마토그래피 방법(Palmano et al, 2002), ELISA를 포함하는 면역 기술(Desmazeaud, 1993) 및 바이오센서 면역분석(biosensor immunoassays)(Indyk et al, 2005)을 포함한다.
면역글로불린 및 성장 인자의 생리활성은 하기 실시예에서 기술된 바와 같이 측정될 수 있다.
프로바이오틱 미생물의 타입 및 생리활성 수준을 측정하는 것은 당분야의 통상의 지식을 가진 사람에게 공지되어 있다. 예를들면 Mercenier et al. (2004), Leyer et al. (2004), Cummings et al. (2004), 및 하기에 기술된 PBMC 사이토킨 분비 분석을 참조한다.
4. 생리활성 조성물
우유는 신생아에게 있어서 완전 영양 공급원일뿐만 아니라 생리학적 생리활성 성분의 풍부한 공급원을 제공하므로, 천연 의약품(natures' pharmacy)이라 한다. 완전한 영양을 제공하는 것 뿐만 아니라, 우유는 유아의 성장, 보호 및 회복에서 중요한 역할을 갖는다. 통상 건강한 성인은 우유의 영양 잇점을 필요로 하지만, 만성 질환의 상태에서, 우유로부터 유래된 생리활성은 질병의 예방 및 치료에 있어서 제공한다. 바람직하게, 우유는 양, 염소, 돼지, 쥐, 물소, 낙타, 야크, 말, 당나귀, 라마, 소 또는 사람의 우유이며, 가장 바람직한 것은 소의 우유이다. 우유계 단백질은 면역-자극인 것이 알려져 있다.
초유는 출생 직후 표준의 우유 제조가 시작되기 이전에 제조되는 프리밀크(pre-milk)이다. 젖소로부터의 최초의 초유는 송아지를 낳은 후 최초 6시간내에 수득되지만, 초유는 송아지를 낳고 최초 2일내에 수집된다. 최초의 초유는 전형적으로 약 48시간 이후부터 수득되는 동일한 젖소로부터 나오는 우유에서 발견된 것보다 2배 이상의 우유 고형물 및 4배 이상의 단백질을 포함한다. 소화 효소, 면역글로불린(IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 포함함), 사이토킨, 인터페론, 성장 인자, 글리코프로테인, 프롤린-풍부 펩티드 및 비타민 A, D, E 및 K의 농도가 표준 우유와 비교하여 최초의 초유에서 모두 더 높았다. 초유 우유 단백질 농축물(MPC) 및 초유 유장 단백질 농축물(WPC)은 Elfstrand et al., 2002에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다.
우유 및 초유 유도체, 및 이들을 제조하는 방법은 당 분야에 공지되어 있다. 상기 유도체는 통상 (지방 제거를 위한) 콤비네이션 원심분리, (산 또는 효소에 의한) 카제인 침전, (락토스, 미네랄 및 물를 제거하거나, 또는 선택적으로 단백질을 제거하기 위한) 여과, (단백질 성분을 정제하기 위한) 크로마토그래피에 의해서 통상 수득되며, 재조합 또는 후레쉬 전유, 재조합 또는 후레쉬 탈지유, 재구성 전유 또는 탈지유 분말, 탈지유 농축물, 탈지유 분리물, 전유 또는 탈지유 분말, 탈지유 투석유물, 농축 우유, 버터우유, 한외여과된 우유 투석유물, 우유 단백질 농축물(MPC), 우유 단백질 분리물(MPI), 칼슘 결핍된 우유 단백질 농축물, 칼슘, 결핍된 우유 단백질 분리물, 저지방 우유, 저지방 우유 단백질 농축물, 저지방 우유 단백질 분리물, 초유, 초유 분획물, 초유 단백질 농축물(CPC), 초유 우유 단백질 농축물, 초유 우유 단백질 분리물, 초유 유장, 초유 유장 단백질 농축물, 초유 유장 단백질 분리물, 초유로부터 유래된 면역글로불린 분획물, 유장, 유장 단백질 농축물(WPC), 유장 단백질 분리물(WPI), 스위트 유장, 락트산 유장, 미네랄산 유장, 재구성 유장 분말, 우유 또는 초유 공정 스트림으로부터 유래된 조성물, 우유 또는 초유 공정 스트림의 한외여과 또는 미세여과에 의해서 수득된 투석유물 또는 투과액(permeate)으로부터 유래된 조성물, 또는 우유 또는 초유 공정 스트림의 크로마토그래피 분리에 의해 수득된 분해 또는 흡수된 분획물로부터 유래된 조성물, 또는 상기 조성물의 전부 또는 일부 가수분해물, 및/또는 이들의 혼합물을 포함한다. 예를들면 the Dairy Processing Handbook (Tetra Pak Processing Systems, Lund, Sweden, 1995)을 참조한다. 다른 상기 유도체는 상기에 기술된 바와 같은 우유계 단백질 조성물 및 우유계 성분을 포함한다.
우유에서 발견된 단백질은 면역글로불린(IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 포함함), 성장 인자, 소 혈철 알부민(BSA), 알파-락트알부민, 베타-락토글로불린 및 다수의 카제인을 포함하며, 이들 모두는 포스포프로테인이다. 카제인을 제외한 상기 단백질이 유장내에 존재할 수 있다. 우유는 다양한 미토제닉 단백질 및 뼈 리모델링(bone remodeling)에 직접 관여할 수 있는 단백질을 포함하는 것이 알려져 있다. 성장 인자(IGF - 인슐린 유사 성장 인자, TGF - 형질전환 성장 인자 등), 면역글로불린(IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 포함함), BSA 및 약간의 베타 락토글로불린은 양이온 교환 크로마토그래피에 의해서 우유 또는 유장으로부터 회수된다. 몇가지 성장 인자는 중성 단백질로서 회수된다. 카제이노글리코마크로펩티드(CGMP)는 음이온 교환에 의해서 회수가능한 산성 단백질 분획물이다. 오스테오폰틴(Osteopontin)은 모든 체액(우유 포함)에서 발견되는 높은 포스포릴화 및 글리코실화 단백질이다.
CGMP는 치즈 제조 공정 중 (키모신의 작용을 통해) 렌넷-매개 카제인 응고 단계 동안 카파-카제인으로부터 분비된 펩티드이며, 스위트 유장 또는 치즈 유장으로 알려져 있는 유장 분획물내에서 발견된다. CGMP는 때때로 간단히 GMP(글리코마크로펩티드)라 한다. 치즈 유장 단백질은 15% 내지 20%의 CGMP로 구성된다. CGMP는 WO 00/49885에 보고된 바와 같이 우유의 뼈 건강 촉진 성분(bone health promoting components) 중 하나로서 제시되었다.
락트산 유장은 카제이네이트(caseinate) 또는 코티지(cottage) 및 리코타 치즈(ricotta cheeses)의 제조 중에 락트산의 직접 첨가 또는 락트산 박테리아에 의한 발효에 의해서 제조된다. 미네랄 산 유장은 카제이네이트 제조 중에 미네랄 산의 첨가에 의해서 제조된다. 락트산 유장 및 미네랄 산 유장은 CGMP를 포함하지 않는다. 상기 2개 공정 중의 근거는 침전을 일으키는 키모신의 작용을 사용하는 것과는 반대로 카제인을 침전시키기위해서 pH를 약 4.6으로 더 낮춘다. 그러므로, 키모신에 노출되지 않은 우유 생성물은 CGMP를 포함하지 않는다.
유장은 치즈 또는 카제인 제조의 부산물이며, 유장으로부터 유래된 단백질 생성물은 이들 단백질 함량을 기준으로 하여 30% 이상의 단백질을 포함하는 유장 단백질 농축물(WPC)과 90% 이상의 단백질을 포함하는 유장 단백질 분리물(WPI)로 분류될 수 있다(Huffman, 1996; IDF, 1998). 막 한외여과(ultrafiltration) 및 정용여과(diafiltration)는 건조되기 이전에 유장 단백질을 25-35%의 고형물로 농축 및 정제하기위해서 상기 생성물의 제조시에 전형적으로 사용되며, 막 여과 단계로부터 유래된 단백질 농축물은 투석유물로서 당분야에 공지되어 있다. 유장 단백질은 수개의 개별의 단백질[이에 한정되는 것은 아니지만, 알파-락트알부민, 베타-락토글로불린, 프로테오스 펩톤, 면역글로불린(IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 포함함), 글리코마크로펩티드, 성장 인자(예컨대, TGF βl 및 TGF β2), 소 혈청 알부민, 락토페린 및 락토퍼옥시다제를 포함함]을 포함하는 포괄적인 용어이며, 본 발명에서 이의 포괄적인 유장 단백질 또는 분획물을 포함할 수 있다. 유장을 상업적으로 제조하기에 적당한 방법은 Zadow(1992) 및 Sienkiewicz et al(1990)에 기술되어 있다. WPCs 및 WPIs를 제조하는 방법은 당분야에 공지되어 있으며, US Dairy Export Council Reference Manual for U.S. Whey and Lactose Products, Chapter 7: Whey Products - Definition, Composition, Functions; Page, J., Meyer, D., Haines, B., Lagrange, V., and Kenney, A. (Eds), American Dairy Products Institute, Elmhurst, IL, USA, (June 2004) (also available on-line at http://www.usdec.org/files/pdfs/US08D_04.pdf)에 기술되어 있다. 또한, the Dairy Processing Handbook (Tetra Pak Processing Systems, Lund, Sweden, 1995)를 참조한다. 유장 단백질은 면역-자극(immuno-stimulatory)이 있는 것으로 알려져 있다.
초면역 우유 및 초면역 초유는 초유 및 우유내 특정 항체를 상승시키기위해서 병인체로부터 항체로 임신중인 우유 생성 포유 동물을 면역화시킴으로써 제조된다(Korhonen, et al., 2000 for a review of such methods 참조). 초면역 생성물의 단백질 농축물은 상기 참고문헌에 공지된 방법에 따라 제조될 수 있다. 초면역 우유 및 초면역 초유는 면역-자극이 있는 것으로 알려져 있다(Korhonen, et al., 2000). 초면역 우유 및 초면역 초유는 통상의 우유 및 초유와 같이 가공되어 유도체, 예컨대 초면역 우유 단백질 농축물, 초면역 우유 단백질 분리물, 초면역 유장, 초면역 유장 단백질 농축물, 초면역 유장 단백질 분리물, 초면역 초유, 초면역 초유 우유 단백질 농축물, 초면역 초유 우유 단백질 분리물, 초면역 초유 유장, 초면역 초유 유장 단백질 농축물, 또는 초면역 초유 유장 단백질 분리물, 또는 이들의 혼합물을 제조할 수 있다.
락토페린은 포유동물의 우유 및 초유에 존재하는 80 kDa의 철-결합 글리코프로테인이다. 소의 우유 및 초유 중에 락토페린 농도는 각각 0.2 mg/ml 및 1.5 mg/ml이다. 철 대사, 면역 기능 및 태아 발생의 조절을 포함하는 다수의 추정되는 생물학적 역할을 갖는다. 락토페린은 그람 양성 및 그람 음성 박테리아, 효모, 및 진균류를 포함하는 병원균의 범위에 대항하여 항미생물 활성을 갖는다. 락토페린의 항미생물 효과는 철을 결합할 수 있는 능력에 근거하며, 병원균의 성장에 필수적이다. 또한, 락토페린은 수개의 바이러스의 복재를 억제하며, 박테리아 막상에 리포폴리사카라이드의 리피드 A 성분에 결합함으로써 항생제 및 리소자임에 대한 몇가지 박테리아의 감수성(susceptibility)을 증가시킨다.
락토페린은 양이온 교환 크로마토그래피, 연이어 한외여과 및 정용여과에 의해서 우유로부터 분리될 수 있다. 야생형 락토페린 자체 뿐만아니라, 유용한 변이체는 소 락토페린 변이체 bLf-a 및 bLf-b를 포함한다(Tsuji, et al. (1989); Yoshida, et al. (1991)). 추가로 유용한 변이체는 락토페린의 글리코실화 및 비(非)글리코실화 형태(Pierce, et al. (1991); Metz-Boutigue, et al. (1984); van Veen, et al. (2004)) 및 글리코실화 변이체(glycosylation mutants)(변성 글리코실화도 또는 변성 글리코실 측쇄를 가짐)를 포함한다. 유용한 락토페린 분획물은 N-로브(N-lobe) 및 C-로브(C-lobe) 분획물(Baker, et al., 2002) 및 절단된 락토페린 폴리펩티드(truncated lactoferrin polypeptides)와 같은 락토페린 결합 포켓을 보유하는 다른 락토페린 폴리펩티드를 포함한다. 변이체 또는 락토페린 분획물은 공지된 합성 방법에 의해서 제조될 수 있다(예를들면, Kimmerlin, et al., 2005 참조). 선택적으로, 락토페린 폴리펩티드 또는 이의 기능적 변이체 또는 분획물은 사람 칼리오신-1(kaliocin-1) 및 Viejo-Diaz et al.(2003)에 의해 락토페린 유래 펩티드; 및 Nguyen et al.(2005)에 의해서 기술된 소 락토페린 펩티드; 및 van der Kraan et al.(2004)에 의해서 기술된 락토페라핀 및 더 짧은 분획물에 대해서 기술된 바와 같이 잘 설정된 합성 Fmoc 화학에 의해서 제조될 수 있다.
하기는 소 우유로부터 락토페린을 분리하는 예시적 방법이다. 후레쉬 탈지유(7 L, pH 6.5)는 유속 5 ml/분 및 4 ℃에서 밀리 Q 워터(milli Q water)에서 평형인 S 세파로스 패스트 플로우(S Sepharose Fast Flow)의 300 ml 컬럼을 통과시킨다. 결합되지 않은 단백질은 2.5 베드 부피의 물로 세척하고, 결합된 단백질은 단계적으로 각 0.1 M, 0.35 M, 및 1.0 M 염화나트륨의 약 2.5 베드 부피로 용리시킨다. 1 M의 염화나트륨에서 별개의 핑크 밴드로서 용리된 락토페린은 단일 분획물로서 수집되며, 밀리 Q 워터에 대해서 투석하여 동결-건조한다. 동결 건조된 분말은 25 mM 인산나트륨 완충액, pH 6.5에 용해시키고, 상기 완충액내 1M로 염화나트륨 준위 및 3ml/분의 유속으로 S 세파로스 패스트 플로우상에서 크로마토그래피한다. 겔 전기영동 및 가역상 HPLC에 의해서 측정되는 경우 충분한 순도의 락토페린을 포함하는 분획물을 조합하고, 투석하고, 동결-건조한다. 락토페린의 최종 정제는 0.15 M의 염화칼륨을 포함하는 80 mM 디포타슘 포스페이트 pH 8.6내 세파크릴 300상에서 겔 여과에 의해서 달성된다. 선택된 분획물을 조합하고, 밀리 Q 워터에 대해서 투석하고, 동결-건조한다. 상기 조제의 순도는 락토페린의 철이 포화된 형태에 대해서 ~19 이하의 스펙트럼 비율 값(280 nm/465 nm)에 의해서 및 HPLC 분석에 의해서 개시된 바와 같이 95% 이상이다.
가수분해물은 공지된 분해 특이성, 예컨대 트립신 또는 키모트립신을 갖는 적당한 효소를 선택하고, pH, 온도, 배양 시간 및 효소 대 기질의 비율에 의해 단백질 가수분해(proteolysis)를 조절/제한함으로써 제조될 수 있다. 상기 분리된 펩티드의 정제는 특이적 엔도펩티다아제(endopeptidases)를 사용하여 제조될 수 있다. 통상, SDS-PAGE는 분자량 표준에 대한 가수분해물의 비교에 의해서 가수분해도를 측정하기위해서 사용될 수 있다. 크기 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography)가 사용되어 가수분해물내에서 다양한 종을 분리하고, 분자량 분포 프로필을 측정한다. 단백질 가수분해물, 특히 우유계 단백질 가수분해물은 면역-자극이 있는 것으로 알려져 있다.
실시예에 의하면, 본 발명에 따라 제조된 조성물 또는 생성물은 가압-처리된 생성물 또는 성분내에 송달되고; 연이어 가열-처리되지 않은 생성물 또는 성분에 첨가되거나; 또는 연이어 가압-처리된 생성물 또는 성분에 첨가될 수 있다.
본 발명에 따라 처리된 조성물내 존재하는 단백질에 있어서 원치 않는 효과를 감소시키기위하여, 안정화제를 첨가하기위하여, 예를들면 조성물내 존재하는 카제인을 안정화시키기위하여 조성물이 액체인 몇가지 실시양태가 바람직할 수 있다. 따라서, 하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 안정화제, 가령 로커스트콩검, 구아검, 크산탄검, 카시아검, 곤약 가루, 베타-글루칸, 타라검, 아라비아검, 젤란검, 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 트라가간트검, 카라야검, 아카시아검, 키토산, 아라비노글락틴, 알지네이트, 펙틴, 카라기난, 또는 실리움(psyllium) 또는 이의 혼합물로부터 선택된 검을 추가로 포함한다. 바람직하게, 안정화제는 펙틴 또는 카르복시메틸셀룰로스(CMC)이다. 바람직하게, 본 발명의 방법에 따라 처리될 조성물은 필요에 따라 안정화제의 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35 % w/v 이상을 포함한다.
몇가지 실시양태에서 약 중성 pH에서 생리활성 성분을 안정화시키기위해서, 조성물내 1 이상의 소수성 리간드를 포함하는 것이 바람직할 수 있다. 소수성 리간드의 존재는 약 pH 7.0, 바람직하게는 약 pH 5.0-8.0에서 생리활성 성분을 가압-처리하고, 리간드가 존재하지 않는 경우에 용이하게 수득될 수 있는 것보다 더 높은 활성 수준을 유지한다. 이론에 의해서 한정되지 않고, 상기 리간드는 생리활성 성분에서 소수성 포켓을 결합하고, 가압-처리하는 동안 이들의 변성에 대한 민감성을 감소시키는 것으로 사료된다. 따라서, 몇가지 실시양태에서, 상기 조성물은 팔미트산, 미리스트산, 리놀레산, 콘쥬게이트 리놀레산(CLA), 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 포스파티딜콜린, 1 이상의 스핑고마이엘린, 1 이상의 강글리오사이드, 부티르산, 1 이상의 오메가-3 지방산[이에 한정되는 것은 아니지만, 에이코사펜타에노산(EPA) 및 도코사헥사에노산(DHA)을 포함함], 1 이상의 피토스테롤, 1 이상의 피토스테롤 에스테르, 1 이상의 피토스테롤 아세테이트, 1 이상의 오메가-6 지방산[이에 한정되는 것은 아니지만 어유(fish oil)를 포함함], 지용성 소수성 비타민[비타민 A [레티놀] 및 비타민 D를 포함함), 리코펜, 또는 소듐 도데실 설페이트, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것이 바람직하다. 바람직하게, 상기 실시양태에서 조성물의 pH는 약 5.0 내지 8.0이다.
본원에서 유용한 생성물 제제의 예로는 음료(산성 음료 및 탄산 음료를 포함함), 요거트 및 젤리를 포함한다. 상기 생성물은 하기에 기술된 바와 같이 제제화될 수 있으며, 상기 및 실시예에 기술된 바와 같이 평가된다. 따라서, 본 발명은 또한 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물, 및 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물, 및 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 가압-처리된 젤리, 가압-처리된 요거트, 또는 가압-처리된 음료일 수 있다. 락토페린 또는 IgG 농도 및 미생물 수는 본원에 기술된 방법에 의해서 결정될 수 있다.
본 발명은 상기에 기술된 바와 같이 1 이상의 비생육성 프로바이오틱 미생물 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 가압-처리된 조성물에 관한 것이다. 미생물 수는 본원에 기술된 방법에 의해서 결정될 수 있다. 하나의 실시양태에서, 상기 조성물은 적어도 약 0.1 mg/ml, 바람직하게 약 0.1, 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 200, 400, 500, 600, 700, 800, 900, or 1000 mg/ml의 생리활성 성분을 포함하며, 유용한 범위는 상기 값들(예를들면, 약 0.1 내지 1000 mg/ml, 약 1 내지 1000 mg/ml, 약 2 내지 1000 mg/ml, 약 3 내지 1000 mg/ml, 약 4 내지 1000 mg/ml, 약 5 내지 1000 mg/ml, 및 약 10 내지 1000 mg/ml)사이에서 선택될 수 있다.
본 발명의 다양한 측면은 하기 실시예에 참고로 비제한적인 방법으로 설명될 것이다.
모든 유제품은 뉴질랜드의 Fonterra Co-operative Group Limited에서 수득된다. 열 처리를 위해서, 4 ml의 시료를 8 ml의 Wheaton 유리 스크류 마개의 바이알(glass screw-capped vials)로 옮기고, 약 5-10분 동안 30 ℃에서 평형화시킨 후 75 ℃ 또는 85 ℃에서 유지된 오일 배스에 침지시키고, 10분동안 진탕하고, 10분동안 아이스에서 급속 냉각시킨다. 상기 시료를 분석할 때까지 4 ℃에서 저장한다.
시료 분석
가열 또는 가압-처리의 결과로서 IgG, IgM, IgA, 성장 인자 또는 LF에서의 정성적 및 정량적 변화는 육안 관찰, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(PAGE), HPLC, BiaCore 또는 ELISA로부터 선택된 1 이상의 기술을 사용하여 분석된다. 또한, 시료는 가압-처리 이전 및 이후에 다양한 미생물의 존재가 시험된다[호기성 세균수, 대장균 수, 효모 및 곰팡이 계수, 중온성 포자 계수(mesophilic spore count), 고온성 포자 계수(thermophilic spore count) 등을 포함함].
1. ELISA: 제조자의 지시에 따라 실시함.
2. HPLC-MC: 시료는 Copestake, et al., 2006에 의해서 기술된 HPLC-MC 방법에 의해서 희석 및 분석된다. 카제인은 HPLC에 의해서 분석된 IgG의 정확도를 방해할 수 있다. 초유 생성물에 있어서 IgG 분석의 더 정확하고 재현가능한 방법을 확립하기위해서, 종래의 카제인 제거를 포함하는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC-마이너스 카제인 또는 HPLC-MC)가 사용된다. 상기는 측정된 IgG 농도가 RID, SPR 및 다른 면역분석 방법에 의한 측정을 반영한다.
3. BiaCore: 시료는 PBS 완충액에서 희석하고, Indyk & Filonzi (2005)에 의해서 기술된 바와 같이 BiaCore 장치를 사용하여 분석된다. 고순도 소 락토페린 또는 IgG를 사용하여 제조된 표준 곡선을 참고하여 정량분석을 수득한다.
4. PAGE: 선택된 시료의 소듐 도데실 설페이트(SDS) PAGE(환산 및 비환산)는 Manderson et al (1998)에 의해서 기술된 바와 같은 방법을 사용하여 실시된다.
5. 미생물 분석: 미생물 분석은 국제 낙농 연방 및 AOAC 국제 방법(International Dairy Federation and AOAC International methods)에 근거하여, NZTM2 43.1 - APC (호기성 세균수); NZTM2 48.1 - 대장균 계수; NZTM2 60.1 - 고온성 포자 계수; NZTM2 59.1 - 중온성 포자 계수; 및 NZTM2 61.1 - 효모 및 곰팡이 계수에 따라 실시되며, 모두는 NZTM 2로부터 유래되며: New Zealand Dairy Industry Microbiological Methods Manual (Publishing Solutions Limited, P.O. Box 983, Wellington, New Zealand)이다.
실시예 1: 초유 성분을 포함하는 용액
80%의 단백질(및 6.6%의 면역글로불린)을 포함하는 초유 우유 단백질 농축 분말(Fonterra Co-operative Group Limited제)에 물을 보충하고, 락트산으로 pH를 3.5로 조정하여 3.6%의 단백질 용액을 수득한다. 그 후, 용액 시료를 83.5 ℃ 또는 600 MPa에서 가열-처리하거나 또는 가압-처리하여, 3분동안 유지하며, 처리된 음료중에 면역글로불린의 양은 HPLC로 측정되며, 처리되지 않은 용액내 정량과 비교한다. 그 결과는 도 1에 개시되어 있다. 영국의 Stansted Fluid Power Ltd.제의 HPP 유닛은 모든 실시예에 대해서 사용된다.
실시예 2: 초유 MPC 성분을 포함하는 용액
초유 MPC는 0.3% w/v의 펙틴 용액내 용해시켜서 6% w/v의 초유 MPC 원료 용액을 제조한다. 상기 초유 원료 용액의 시료는 pH 값의 범위로 산성화하여 하기에 기술된 바와 같이 85 ℃에서 가열-처리하고 10분동안 유지하거나 또는 가압-처리한다. 동일 pH에서 처리되지 않은 대조군과 비교하여 각각의 가열-처리되고 가압-처리된 시료의 잔류 면역글로불린 G(IgG)는 HPLC-MC로 측정된다. 또한 상기 용액을 대장균, 효모 및 곰팡이로 면역성 검사를 하고, 상기 생물체에 대해 계수한 후 600 MPa에서 가압-처리한다.
pH 3.3에서, 400 MPa에서 가압-처리하고 3분 동안 유지시킨 초유 시료는 가열-처리된 초유가 2%인 것과 비교하여 67%의 잔류하는 IgG를 갖는다.
pH 4.1에서, 600 MPa에서 가압-처리하고 3분 동안 유지시킨 초유 시료는 가열-처리된 초유가 2%인 것과 비교하여 37%의 잔류하는 IgG를 갖는다.
pH 3.5에서, 600 MPa에서 가압-처리하고 3분 동안 유지시킨 초유 시료는 가열-처리된 초유가 2%인 것과 비교하여 34%의 잔류하는 IgG를 갖는다.
pH 4.1에서, 500 MPa에서 가압-처리하고 1분 동안 유지시킨 초유 시료는 가열-처리된 초유가 2%인 것과 비교하여 91%의 잔류하는 IgG를 갖는다.
pH 4.1에서, 유지 시간 없이 400 MPa, 500 MPa 및 600 MPa에서 가압-처리된 초유 시료는 하기 표 1A에 요약된 바와 같이 가열-처리된 초유가 2%인 것과 비교하여 잔류하는 IgG는 400 MPa에서 100%, 500 MPa에서 91% 및 600 MPa에서 48%를 갖는다. 상기 시료 중의 미생물의 양이 비교되며, 표 1A에 요약된다. 처리되지 않은 대조군 조제는 호기성 세균수(APC)에 있어서 9×103 cfu/mL 대장균, 측정된 100 cfu/mL 중온성 포자 및 1×106 cfu/mL 이상의 효모/곰팡이 및 군체(colony)를 계수했다. 비교에서, 유지 시간 없이 500 MPa 또는 600 MPa에서 가압-처리된 시료는 대장균 또는 효모/곰팡이가 검출되지 않았다. 600 MPa에서, 중온성 포자 또는 APC가 검출되지 않았다. 500 MPa에서, 20 cfu/mL의 중온성 포자 및 27 cfu/mL의 APC가 측정되었다. 400 MPa에서, 40 cfu/mL의 중온성 포자 및 2100 cfu/mL의 APC가 측정되었다.
pH 범위에 있어서 600 MPa에서 잔류 면역글로불린 활성 및 대장균 및 효모 및 곰팡이 계수는 하기 표 1B에 나타내었다.
Figure 112007071666489-PCT00001
Figure 112007071666489-PCT00002
실시예 3: 다양한 pH에서 초유 MPC 성분
실시예 2의 원료 용액으로부터의 초유 시료가 pH 3.5에서 pH 4.1로 산성화되고, 400 MPa에서 600 MPa로 가압되어(유지 시간 없음) 가열-처리된 조제와 비교된다. 모든 경우에, 약 2%의 잔류 IgG가 가열-처리된 이후에 보유되며, 가압-처리된 이후에 보유된 잔류 IgG 45-100 %와 비교되며, 더 높은 pH에서 가장 높은 잔류 IgG를 갖는다. 결과는 하기 표 2에 요약하였다.
Figure 112007071666489-PCT00003
실시예 4: 다양한 성분의 효과
다양한 pH 값에서 초유 성분의 섹션으로부터 제조되고 가열(85℃/10분) 및 가압(600 MPa/3분 유지) 처리된 초유 용액은 HPLC-MC에 의해서 잔류 IgG 활성에 대해서 분석한다. 결과는 도 2에서 (A) 초유 유장(CW), (B) 초유 유장 UF 투석유물(CWUFR)(10 kDa 분자량 커트 오프를 갖는 UF 막으로 한외여과 처리된 렌넷 유장), (C) 초유 탈지분유, 및 (D) 초유 MPC에 대해서 나타내었다. 가열-처리된 조제내 잔류 IgG의 양은 일관되게 10% 이하이다.
초유 유장 UF 투석유물 성분(도 2B)은 다른 성분으로부터 제조된 용액보다 가압-처리된 이후에 IgG의 손실이 더 큰 것을 보여준다. 그러나, pH 5.2 이하에서, 가압-처리된 초유 탈지 분유 조제내 유용한 IgG 수준이 여전히 보유되었다.
pH 5.2 이하에서, 모든 다른 가압-처리된 조제내 IgG가 실질적으로 보유되어 있다. 특히, 초유 탈지 분유(도 2C) 및 초유 MPC(도 2D)로부터의 조제에 대해 pH 4.1 이하에서 및 초유 유장(도 2A)으로부터 조제에 대해 pH 3.8에서, 잔류 IgG는 약 90% 이상이다. 초유 유장(도 2A)에 대해 pH 6.7에서 잔류 IgG 수준은 유용한 수준(약 70%)에 있다.
실시예 5: 초면역(HI) 초유로부터의 성분
과면역 초유 우유 단백질 농축물(HI-MPC)로부터의 것과 초면역 초유 유장 단백질 농축물(HI-WPC)로부터의 것인 2개의 7% w/v 과면역(HI) 초유 원료 용액이 제제화된다. 상기 원료 용액들의 시료가 pH 4.6으로 조정되며, 10분동안 85 ℃에서 가열-처리되거나 또는 유지 시간 없이 600 MPa 또는 3분 동안 600 MPa에서 가압-처리된다. 미생물을 계수하기위해서, 시료는 처리 이전에 실온에서 1주일 동안 저장되고 계수된다. 상기에 기술된 바와 같이, 생리활성 단백질의 선택의 잔류 수준이 측정되며, ELISA에 의해서 면역글로불린 IgG, IgA 및 IgM이 측정되고, BiaCore에 의해서 락토페린이 측정된다. 미생물은 호기성 세균수(APC)로 계수되고 표 3에 개시하였다. 유지시간 없이 400 MPa에서 처리 이후에, APC가 HI-MPC에 대해서 4 logs까지 감소되고, HI-WPC에 대해서 3 logs까지 감소된다. 3분동안 600 MPa에서 처리한 이후에, APC는 HI-MPC에 대해서 5.8 logs까지 감소되고, HI-WPC에 대해서 >5.6 logs까지 감소된다.
그후, 처리된 시료는 20 ℃에서 6주동안 유지된 이후에 추가로 계수하여 오염된 미생물의 부산물을 평가한다. 상기 결과는 표 4에 개시되었다. 잔류 생리활성 단백질 수준은 도 3에 개시하였다(모두 pH 4.1에서 나타낸다).
매우 적은(2-3 %) 잔류 IgA가 85 ℃에서 10분동안 가열-처리된 시료 중에 남아 있다. 대조적으로, 가압-처리된 시료는 더 높은 잔류 IgA 활성(80-85 %의 잔류 IgA)을 갖는다.
거의 유사한 경향이 IgM에서 보였으며, 유지시간 없이 600 MPa 또는 3분동안 600 MPa에서 가압-처리된 시료 중에 잔류 IgM 활성 95% 이상과 비교하여 가열-처리된 시료내 잔류 IgM 활성(남아 있는 ~1 %의 잔류 IgM)의 양은 무시할 수 있음을 보여준다.
Figure 112007071666489-PCT00004
Figure 112007071666489-PCT00005
실시예 6: 생리활성에 있어서 낮은 pH의 효과
7 % w/v의 시판용 유장 단백질 농축물(WPC)의 용액은 Milli-Q 워터내 WPC 분말의 적당한 양을 용해시킴으로써 제조된다. 각 용액의 pH는 개별적으로 3.8, 5.2, 6.0, 6.7 및 7.5로 조정한 후, 상기 용액을 3분동안 600 MPa에서 가압-처리하거나 또는 5분동안 75 ℃에서 가열-처리하고, 상기에 기술된 바와 같이 BiaCore 방법을 사용하여 잔류 IgG 및 락토페린 함량을 분석하였다. 결과는 도 4에 나타내었다.
잔류 IgG 활성은 가열-처리된 시료내 5%와 35%의 범위내에 있다. 대조적으로, 3분동안 600 MPa에서 가압-처리된 시료(도 4A)는 50-95%의 잔류 IgG를 나타낸다. 더 낮은 pH에서 가압-처리된 시료는 더 높은 pH(예컨대, pH 6.7 이상)에서 가압-처리된 시료와 비교하여 비교적 더 높은 잔류 IgG를 나타낸다. 유사하게, 가열-처리된 WPC 용액내 잔류 락토페린 활성은 3분동안 600 MPa에서 가압-처리된 시료내 60-90%와 비교하여 5 및 70이다(도 4B). 더 낮은 pH에서 가압-처리된 시료는 더 높은 pH에서 가압-처리된 시료와 비교하여 비교적 더 높은 잔류 LF(%)를 보여준다(예컨대, pH 6.0 이상).
실시예 7: pH 4.0에서 가압-처리에 매우 안정한 락토페린
5분 내지 50분동안 400 MPa에서 가압-처리된 희석된 LF 용액(0.2 % w/v, pH 4.0)의 비환원된 SDS PAGE가 도 5에 개시되어 있다(레인 1 : 비처리 대조군; 레인 2: 400 MPa/5분; 레인 3: 400 MPa/10분; 레인 4: 400 MPa/20분; 레인 5: 400 MPa/30분; 레인 6: 400 MPa/40분; 레인 7: 400 MPa/50분). 상기 겔은 400 MPa 에서 연장된 가압-처리되기 이전 및 이후에 LF의 밴드 세기가 대부분 변화하지 않고 남아 있음을 나타낸다. 상기 결과는 연장된 시간 동안 상기 용액이 가압-처리된 경우 조차도 LF가 상기 압력에서 높은 압력 저항성이 있음을 나타낸다.
실시예 8: 다양한 pH에서 락토페린을 포함하는 용액
락토페린 용액(6% w/v)이 milli-Q 워터내 용해된 락토페린 분말로부터 제조되며, 2-3 시간 동안 온화하게 교반한다. 상기 용액은 pH 3.3, 3.8, 4.1 또는 7.0으로 조정되며, 가압-처리(45분동안 600 MPa) 또는 가열-처리(5분동안 85℃)된다. 잔류 락토페린은 BiaCore 방법에 의해서 측정되며, 도 6에 개시된다. 락토페린 용액의 색상은 단백질 철-결합 용량의 지표이며, 처리에 의해서 악영향을 줄 수 있다. 6%의 네이티브 락토페린 용액은 약 15%의 철-포화되며, 진한 오렌지 색상이며, 반면에 0%의 철-포화된 아포-락토페린(apo-lactoferrin) 용액은 무색이다. 가압-처리(5분 또는 30분 동안 600 MPa) 및 가열-처리(10분동안 85 ℃ 또는 90 ℃)된 용액은 pH 3.8, 4.8 및 7.0에서 환원 및 비환원 SDS-PAGE에서 비교된다.
pH 7.0에서, 5분동안 75 ℃ 이상에서 가열-처리한 이후에 잔류 락토페린이 거의 없다. pH 3.3-4.1의 범위상에서 가열된 시료는 더 높은 잔류 락토페린을 갖지만(도 6), 그러나 실질적 유지 시간 동안 600MPa에서 가압-처리한 이후에 동일한 pH 값에서 잔류 락토페린은 일관되게 더 높다.
5분동안 75 ℃에서 가열-처리하면 pH 3.8-7.0에 대해서 색상이 손실되면 비처리된 대조군과 비교하여 락토페린내 철 또는 배향된 철-결합의 손실을 나타낸다(표 5). pH 3.3에서, 락토페린은 철 결합에 대한 감소된 용량을 갖는다. 5분동안 85 ℃ 이상에서 가열-처리하면 pH 범위에 대해서 광범위한 색상 손실이 일어난다. 농후한 침전물이 pH 7.0에서 형성되며, 이는 락토페린의 광범위한 변성을 나타낸다.
Figure 112007071666489-PCT00006
대조적으로, 45분 동안 600 MPa에서 가압-처리는 pH 3.8 및 4.0에서 처리되는 것을 제외하고 비처리된 대조군과 비교하여 색상 변화 또는 흐려짐(turbidity)가 없었으며, 색상은 더 높은 pH에서 상기 용액에 필적한다(표 6).
Figure 112007071666489-PCT00007
상기에 언급된 SDS-PAGE 겔의 견해에 있어서(개시되지 않음), 가열-처리된 용액은 스태킹 겔내에서 용해 겔의 개시시에 캐치업 또는 겔에 진입되지 않는 매우 큰 폴리머로서 중합화 및 응고의 증거를 보여준다. pH 3.8 및 4.8에서, 비환원 겔로 침투되지 않고 환원 겔내 존재하지 않는 응고된 물질이 있다. 이는 응고가 열-유발 중합화에 기인한 것을 나타낸다. pH 7에서, 측정가능한 락토페린이 거의 남아 있지 않다. 대조적으로, 가압-처리된 용액은 처리되지 않은 대조군으로부터 거의 변화되지 않음을 나타낸다.
pH 3.3, 3.8, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0 및 8.0에서 조정된 락토페린 용액(6 % w/v)은 효모 및 곰팡이로 면역성 검사를 한 후 0분, 5분 및 15분 동안 600 MPa에서 가압-처리된다. 처리되지 않은 대조군 및 가압-처리된 시료중 효모 및 곰팡이의 계수는 처리되지 않은 대조군이 190,000의 효모 및 곰팡이 계수(cfu/ml)를 가지며, 반면에 연구된 모든 가압-처리 및 모든 pH 범위에서 가압-처리된 시료내에서 효모 및 곰팡이가 검출되지 않았다.
실시예 9: 성장 인자를 포함하는 용액
HI-WPC (7 % w/v) 용액이 pH 6.9에서 Milli-Q 워터 중에 HI-WPC 분말을 용해시킴으로써 제조된다. 그 후, 상기 용액을 유지 시간 없이 600 MPa에서 가압-처리하거나 또는 3분 동안 600 MPa에서 가압-처리하거나, 또는 10분동안 85 ℃에서 가열-처리한다. 가압-처리 및 가열-처리된 시료들은 미처리된 대조군과 비교하여 2개의 주요 소 초유 성장 인자 TGF β1 및 TGF β2에 대해서 분석한다. 결과는 도 7에서 (A) TGF β1 및 (B) TGF β2에 나타내었다. 가열-처리된 시료는 27%의 잔류 TGF β1 성장 인자를 가지며, TGF β2 성장 인자는 검출가능하지 않다. 대조적으로, 3분 동안 가압-처리된 시료는 93-99 %의 성장 인자를 갖는다.
실시예 10: 락토페린을 포함하는 요거트
락토페린 요거트가 도 8에 개시된 바와 같은 3개의 상이한 방법에 의해서 제조된다. 첫번째(표준 요거트)에서 락토페린이 가열-처리 이전에 우유에 첨가되며, 두번째(대조군)에서 락토페린이 발효 이후에 요거트로 첨가되고, 세번째(HPP 방법)에서 락토페린이 발효이후에 요거트로 첨가되며, 강화된 요거트가 유지 시간 없이 500 MPa에서 가압-처리된다. 요거트의 최종 pH는 4.50인 것으로 측정되었다. 요거트내 락토페린은 BiaCore에 의해서 측정되며, 결과는 도 9에 나타내었다. 표준 가열-처리된 락토페린 요거트는 1-2%의 잔류 락토페린 활성(대조 방법과 비교함)을 갖는다. 대조적으로, 가압 방법에 의해서 수득된 잔류 락토페린은 80%이다. 가압-처리된 요거트는 4 ℃에서 130일 동안 저장한 이후에 손상된 미생물에 대해서 분석한다. 검출가능한 대장균은 없으며, 중온성 포자는 60개이고, 검출가능한 스타필로코시(staphylococci), 효모 또는 곰팡이는 없으며, 대략 10개의 호기성 세균을 갖는다. 대조적으로, 미처리된 대조군 제품을 제조후 21일 이후에 광범위하게 분해되며, 이는 가스 생성 및 냄새에 의해서 입증되었다.
실시예 11: 면역글로불린을 포함하는 음료
면역글로불린(3% IgG)을 포함하는 산성 음료(pH 4.0)가 도 10에 개시된 바와 같이 초유 유장 농축물로부터 제조된다. 음료는 10분동안 85 ℃에서 가열-처리되거나 또는 3분동안 600 MPa에서 가압처리되고 잔류 IgG는 미처리된 대조군에 대해서 HPLC-MC 방법에 의해서 측정된다. 결과는 도 11에 나타내었다. 가열-처리 절차에 의해서 제조된 드링크(drink)는 검출 한계 이하의 잔류 IgG를 갖는다. 대조적으로, 가압-처리에 의해서 제조된 드링크는 대조군과 비교하여 ~90%의 잔류 IgG(%)를 보유한다. 유지시간 없이 500 MPa에서 가압 처리된 생성물은 4 ℃에서 130일 동안 저장된 이후에 분해된 미생물을 분석하였다. 검출가능한 대장균은 없으며, 중온성 포자는 2개의 군이 있고, 스타필로코시, 효모 또는 곰팡이, 호기성 세균군이 없다. 대조적으로, 미처리된 대조군 생성물은 제조후 21일 이내에 광범위하게 분해되었으며, 이는 가스 생성 및 냄새로 입증되었다.
실시예 12: 락토페린을 포함하는 젤리
pH 3.8에서 과일향 젤리 생성물이 도 12에 기술된 바와 같이 락토페린 분말로부터 제조된다. 젤리가 3분동안 600 MPa에서 가압-처리되고, 잔류 락토페린은 BiaCore 방법에 의해서 미처리 대조군 시료와 비교된다. 결과는 도 13에 개시되어 있다. 가압-처리된 젤리는 미처리된 대조군 젤리와 비교하여 90% 이상의 잔류 락토페린을 갖는다. 상기 생성물은 130일 동안 냉장 저장된 이후에 분해된 미생물을 분석하였다. 대장균, 중온성 포자, 스타필로코시, 효모 또는 곰팡이, 또는 호기성 세균 군체가 검출가능하지 않다. 대조적으로, 미처리 대조군 생성물은 제조하고 21일 이내에 광범위하게 분해되며, 이는 가스 발생 및 냄새로 입증되었다.
실시예 13: 프로바이오틱 미생물의 가압 처리
불활성화된 프로바이오틱 박테리아의 제조
락토바실러스 람노수스 HN001의 배양액(AGAL 기탁 번호 NM97/09514, 18 August 1997; Cross et al., 2002)은 1:100 접종액으로부터 37 ℃에서 1리터의 스태틱(static) MRS 브로스(broth)에서 18시간 동안 배양한다. 배양액을 성장시킨 이후에, 모든 단계는 달리 언급하지 않는 한 아이스(ice)에서 실시한다. 상기 배양액은 차가운 멸균 PBS내에서 한번 세척하고, 150 ml의 최종 전체 부피에서 상기에 재현탁시켜서 대략 2×1010 cfu/ml의 측정된 농도를 제공한다. 그 후 상기는 50 ml의 스텐스테드 폴리프로필렌 원심분리 튜브내에 5개의 균등한 30 ml의 분취량(aliquot)으로 분획하고 이중 3개는 하기와 같이 처리된다:
가열 불활성화된 HN001 - 30 ml의 세포 분취량을 30분동안 70 ℃ 수조에서 배양한 이후에 얼음조로 옮긴다. 상기 가열 처리된 세포의 500μl 분취량을 PBS내에서 추가로 희석하여 측정된 농도는 1×108 cfu/ml을 제공하며, 상기의 400μl 분취량을 Nalgene cryogenic 바이알로 분산시키고, 액체 질소에서 급속 냉동시키고, PBMC 사이토킨 분비 분석에 요구될 때까지 -80 ℃에서 저장한다.
생 HN001 - 30 ml의 세포 분취량을 가열-처리되지 않은 것에 제외하고 가열-처리된 세포에 대해서 정확하게 처리된다.
UHP 불활성화된 HN001 - 30 ml의 세포 분취량을 Beckman 원심분리 튜브로 추가로 분획하고, 밀봉하고, 3분동안 600 MPa에서 가압-처리한다. 처리한 이후에, 가압 처리된 세포를 후레쉬 스텐스테드 50 ml의 원심분리 튜브로 붓고, 혼합한다. 500 μl의 세포 분취량을 PBS에서 추가로 희석하고 측정된 1×108 cfu/ml 농도를 제공하며, 이중 400 μl 분취량을 Nalgene cryogenic 바이알로 분산시키고, 액체 질소에서 순간 동결시키고, PBMC 사이토킨 분비 분석에 요구될 때까지 -80 ℃에서 저장한다.
사람의 말초혈액 단핵세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC) 제조
전체 혈액 시료가 지원자가 습득된 정보에 동의한 이후에 지원자로부터 수집된다. 혈액을 항응고제로서 헤파린을 포함하는 튜브로 수집된다. 20 ml의 분취량을 멸균 50 ml 튜브로 옮기고 멸균 PBS에 의해 35 ml로 희석시킨다. 희석된 혈액을 약 15 ml의 Ficoll-Hypaque(d = 1.077)을 기초로 하고, 실온에서 20분동안 1500 g에서 원심분리한다. PBMC가 계면으로부터 수집되며, 반면에 적혈구 및 호중구가 펠렛으로 침전된다. 수집된 PBMC가 PBS에서 적어도 2배로 희석된 이후에 원심분리에 의해서 펠렛화시킨다(400 g에서 5분). 상청액을 흡인시킨 이후에, PBMC가 50 ml의 PBS에서 재현탁시키고, 분취량을 계수를 위해서 제거된다. 세포 계수에 기초하여, 남아 있는 PBMC가 RPMI 1640/10% FCS에서 희석되어 1×106 세포/ml의 최종 농도를 제공하며, 2 ml의 세포 현탁액 분취량을 멸균 Falcon 2054 튜브에 넣는다.
박테리아/PBMC 공배양액
제조된 박테리아 조제가 해동되고 거칠게 교반한다. 박테리아를 PBS에서 희석시키고, 20μl의 분취량으로서 PBMC 배양액으로 첨가하여 불활성화된 박테리아 조제에 있어서 1×106 cfu/ml 또는 1 x 106 불활성화된 cfu/ml의 최종 농도를 제공한다. 사이토킨 생성에 있어서 포지티브 대조군으로서, 1 ㎍/ml 박테리아성 리포폴리사카라이드(LPS) 또는 25 ng/ml 포르볼(phorbol) 12-미리스테이트 13-아세테이트(PMA) 및 1 ㎍/ml 아이오노마이신(Ionomycin)을 PBMC에 첨가한다. 네가티브 대조군으로서, PBMC 튜브에서는 첨가제를 넣지 않는다. 모든 튜브는 37 ℃에서 24시간 동안 배양하고, 상청액을 원심분리에 의해서 수집한다. 상청액은 ELISA에 의해서 사이토킨 수준의 분석 이전에 -20 ℃에서 간단하게 저장한다.
상청액은 제조자의 지시에 따라 매치된 캡쳐 및 검출 항체 쌍을 사용하여 ELISA에 의해서 인터페론-γ(Ifn-γ) 및 인터루킨-10(IL-10)의 수준을 평가한다(R&D Systems Inc., Minneapolis, MN). 적당하게, 상청액은 시약 희석제내에서 희석하고 특정 사이토킨의 수준은 ELISA 표준 곡선의 검출 범위내에 남아 있다.
HN001 불활성화의 평가
가열 또는 UHP 처리에 의한 불활성화도를 측정하기위해서, 평판 계수는 PBS내 희석하기 이전에 미처리 및 처리된 HN001 세포에서 실시된다. 표 7에 개시된 바와 같이, UHP는 가열 처리 보다 사멸에서 약간 더 효율적인 것을 보여준다. 그럼에도 불구하고, 2가지 방법은 큰 사멸율을 나타내며, 배양가능한 세포수는 초기 배양액의 세포수보다 더 낮은 적어도 5 logs인 것으로 평가된다.
Figure 112007071666489-PCT00008
불활성화된 HN001에 대한 PBMC의 사이토킨 반응
프로바이오틱 생리활성의 마커로서, 상기에 기술된 바와 같이 생체외(ex vivo) PBMC에 의한 IFN-γ 및 IL-10의 제조가 조사되었다. PBMC가 건강한 개체의 패널(n=13)로부터 수득된 말초 혈액 시료로부터 분리되고, PBMC 분취량은 사멸된 박테리아의 균등량 또는 생 박테리아의 1:1 비율로 배양된다. 24시간 이후에, 배양 상청액을 제거하고, ELISA에 의해서 IFN-γ 및 IL-10의 수준에 대해서 분석한다. 각각의 개체에 대한 각 처리의 결과가 다중 비교를 위해서 ANOVA 및 Bonferroni 시험에 의해서 분석된다(여기서, p < 0.05는 통계적으로 중요한 것으로 고려됨).
Cross et al. 2002의 연구 등은 IFN-γ가 프로바이오틱 박테리아의 생리활성을 매개하는데 역할을 하는 것을 나타낸다. 도 14에 개시된 바와 같이, 배지에서 성장한 PBMC는 24시간 이후에 IFN-γ가 거의 검출되지 않는다. 그러나, UHP-불활성화된 HN001에 노출시킨 PBMC는 배지만(p = 0.006)에서 PBMC보다 상당한 더 많은 IFN-γ를 생성하거나, 또는 가열-불활성화된 HN001(p = 0.013)으로 공배양하지만, 생 HN001(p = 0.91)로 PBMC 처리된 것과 IFN-γ 수준이 유사하다. 배지 및 가열-불활성화된 HN001 처리와 비교하여 생 HN001에 대한 반응에서 IFN-γ 생성이 증가되는 경향이 있다고 하더라도, 상기 결과는 통계적으로 중요하지 않다(각각, p = 0.23 및 p = 0.45).
IL-10은 IFN-γ를 포함하는 수 많은 사이토킨의 제조 및 TH1 T 세포 발현을 억제하는 항염증 사이토킨인 것으로 고려된다. 최근에, IL-10은 과민성 장증후군(irritable bowel syndrome, IBS)을 포함하는 만성 염증 질환을 경감시키는데 가능한 역할에 대해서 수많은 임상 연구의 촛점이 되고 있다. 도 15에 개시된 바와 같이, 배지만에서 성장된 PBMC는 소량의 IL-10을 생성한다. HN001로 공배양된 PBMC는 배지 단독내 PBMC(p = 0.0001)와 비교하여 상당히 증가된 IL-10 제조를 이끈다. 가열-불활성화된 HN001의 사용은 생 HN001(p = 0.12)에 대해서 통계적으로 중요한 경계인 감소된 IL-10을 유도하지만, UHP-불활성화된 HN001의 사용은 가열-불활성화된 HN001(p=0.003)으로 배양된 PBMC 및 배지 단독 PBMC(p < 0.0000)보다 상당히 더 높지만, 생 HN001(p = 0.97)로 배양된 PBMC와 유사한 수준이다. 따라서, 프로바이오틱 인자는 가압 처리 이후에 활성이 남아 있다.
모크-처리된(mock-treated) UHP HN001(예컨대, 증가된 압력에 노출시킨 것 이외에 UHP-처리된 HN001과 동일한 방법으로 처리된 HN001 세포)은 생체외(ex vivo) PBMC에 의해서 사이토킨 생성을 자극하기위한 이들의 역량에 있어서 생 HN001과 큰 차이를 보이지 않는다.
실시예 14: HN001의 불활성화에 있어서 pH의 영향
2개의 HN001 배양액은 1/100 접종액으로부터 37 ℃에서 18 시간동안 성장한다. 하나의 배양액을 아세트산나트륨, 아세트산 완충액 pH 5.0(Perrin & Dempsey, 1974에 따라 제조됨)으로 한번 세척한 이후에, 동일한 용액에 1.6×1011 cfu/ml 농도로 재현탁시킨다. 다른 배양액을 동일하게 처리하지만, 단 PBS pH 7.4가 아세트산나트륨, 아세트산 완충액 pH 5.0 대신에 사용된다. 각 세포의 2중 분취량 세트를 Beckman 원심분리 튜브에 넣고, 밀봉하고, 3분동안 가압 처리하여, 4 ℃에서 한밤동안 저장한 이후에 평판 계수로 불활성화도를 측정한다(표 8).
Figure 112007071666489-PCT00009
실시예 15: HN001에서 HPP 처리 동안 pH의 영향
HN001 박테리아 세포 배양액이 PBS (pH 7.4) 또는 아세테이트 완충액(pH 5.0)에서 재현탁시키고, 가압 처리(600 MPa/3분)에 의해서 불활성화되며, 상기에 기술된 바와 같이 사람의 생체외(ex vivo) PBMC에 의해서 IL-10 생성을 자극하기위한 역량을 측정함에 의해서 살아있고 가열 불활성화된 HN001과 비교하여 생리활성을 측정하였다.
도 16은 3개의 개체로부터의 조합된 결과를 나타낸다. pH 7.4 또는 pH 5.0에서 가압 처리에 의해서 불활성화된 HN001에 반응에 의해서 생성된 IL-10 수준은 살아있는 HN001에 대해서 관찰된 것과 상당히 다르지 않지만, 가열 불활성화된 HN001에 대한 것과 비교하여 상당히 더 높다(각각, p = 0.043 및 p = 0.037).
실시예 16: 리간드 결합에 의해서 향상된 생리활성 보유
2% 용액은 pH 6.8에서 물내 유장 단백질 농축물(WPC)(Alacen 342, Fonterra Co-operative Group Ltd.)로서 제조된다. 하기의 소수성 리간드가 WPC 용액(단백질에 대한 1:1의 몰비)으로 개별적으로 첨가된다: 콘쥬게이트된 리놀레산, 나트륨 도데실 설페이트, 레티놀 및 팔미트산. 그 후, 상기 용액을 1분, 2분, 3분 또는 4분동안 600 MPa에서 가압-처리하거나 또는 1분, 2분, 3분 또는 4분동안 90 ℃에서 가열-처리된다. IgG, 락토페린 및 고분자량 단백질 응고물의 수준이 SDS-PAGE 겔에서 평가되고, 도 17에서 미처리 대조군 용액과 리간드가 첨가되지 않은 2% WPC 용액을 비교한다.
밴드 세기는 용액내 존재하는 단백질 모노머의 양을 나타낸다. 미처리된 대조군 시료(레인 1)에서, 표시된 영역(i)은 고분자량 응고물이며, 표시된 밴드(ii)는 IgG이고, 표시된 밴드(iii)는 락토페린이다. 가열-처리된 시료에서(상부), IgG 및 락토페린 밴드의 세기는 실질적으로 감소되며, 이는 단백질 응고물 및 모노머 단백질의 손실을 나타낸다. 이는 단백질 변성 및 응고 결과이다. 상기 응고는 소수성 리간드가 존재하거나(B-E) 또는 존재하지 않는(A)것과는 관계없이 가열 처리된 시료에서 볼 수 있다.
대조적으로, 리간드를 갖지 않은 가압-처리된 WPC 용액은 감소된 세기를 나타내며(A, 레인 2-5), 반면에 다양하게 첨가된 소수성 리간드(B-E)를 갖는 가압-처리된 WPC 용액은 실질적으로 더 큰 세기를 나타낸다.
생리활성-함유 용액으로 소수성 리간드의 첨가는 중성 pH 부근에서 가압-처리하여 생리활성 보유를 향상시킨다.
실시예 17
ACE-I(Angiotensin-Converting Enzyme Inhibitory) 활성을 갖는 유장 단백질 가수분해물의 용액(6% w/v)이 제조되며, pH 3.5, 4.5 또는 7.0으로 조정된다. 시료는 가압-처리(3분동안 600 MPa 또는 10분동안 600 MPa)되거나 또는 가열-처리(10분동안 85 ℃ 또는 10분동안 90 ℃)되고, ACE-I 활성 및 미생물 함량은 미처리된 대조군과 비교하여 평가한다. ACE-I 활성은 D. W. Cushman & H. S. Cheung (1971)의 방법에 따라 기질(Product 305-10 ex Sigma Chemical Corporation, St Louis, MP, USA)로서 FAPGG를 사용하여 측정한다.
상기 결과는 미처리된 대조군과 비교하여 가압 처리되고 가열 처리된 시료에 있어서 대장균 계수, 효모 및 곰팡이, 호기성 세균수, 중온성 포자 및 고온성 포자 계수에서 3 log 이상 감소하는 것을 보여준다. 가압 및 가열 처리된 시료의 ACE-I 활성은 미처리 대조군의 ACE-I 활성의 +/- 2 표준 편차내에 있으며, 통계적으로 다르지 않다.
본 발명의 방법은 식품 및 건강 산업에서 사용되는 조성물내에 원치 않는 미생물의 성장을 방지하기위해서 사용될 수 있으며, 존재할 수 있는 생리활성 성분에 있어서의 영향을 회피하거나 최소화시킬 수 있다.
당분야의 통상의 지식을 가진 사람은 상기 상세한 설명은 설명을 위해서 제공되며, 본 발명을 여기에 한정시키는 것은 아니라는 것을 이해할 것이다.
참고문헌
Figure 112007071666489-PCT00010
Figure 112007071666489-PCT00011
Figure 112007071666489-PCT00012

Claims (119)

  1. 생리활성 조성물의 품질 보존(keeping quality)을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 1 이상의 단백질, 1 이상의 지방, 1 이상의 단백질 가수분해물, 1 이상의 지방 가수분해물, 1 이상의 탄수화물, 1 이상의 프로바이오틱 인자(probiotic factor), 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력 및 약 3.0 내지 8.0의 pH에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력 및 pH에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  2. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 1 이상의 단백질, 1 이상의 지방, 1 이상의 단백질 가수분해물, 1 이상의 지방 가수분해물, 1 이상의 탄수화물, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들 의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력, 약 3.0 내지 8.0의 pH 및 약 0분 내지 5분의 유지 시간에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력, pH 및 유지 시간에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 생리활성 성분은 락토페린(lactoferrin), 리소자임(lysozyme), 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 1 이상의 비극성 지방, 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 스핑고리피드, 1 이상의 강글리오사이드, 1 이상의 세라마이드, 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 생리활성 성분은 락토페린, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 조성물은 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 비극성 지방, 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 스핑고리피드, 1 이상의 강글리오사이드, 1 이상의 세라마이드, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 생리활성 성분을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
    상기 조성물은 1 이상의 프로바이오틱 인자를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력 및 약 3.0 내지 8.0의 pH에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력 및 pH에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  8. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 1 이상의 프로바이오틱 인자, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력, 약 3.0 내지 8.0의 pH, 및 약 0분 내지 5분의 유지 시간에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력, pH 및 유지 시간에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  9. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 1 이상의 프로바이오틱 인자로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력 및 약 3.0 내지 8.0의 pH에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력 및 pH에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  10. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 1 이상의 프로바이오틱 인자로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력, 약 3.0 내지 8.0의 pH, 및 약 0분 내지 5분의 유지 시간에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력, pH 및 유지시간에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  11. 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서,
    상기 원치않는 생물체는 프로바이오틱 생물체 및 선택적으로 1 이상의 부가의 원치 않는 생물체를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 프로바이오틱 인자는 1 이상의 박테리아성 DNA 모티프(motif), 1 이상의 박테리아 표면 단백질, 1 이상의 박테리아 작은 유기산, 1 이상의 박테리아 세포벽 성분, 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 우유계 단백질 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력 및 약 3.0 내지 8.0의 pH에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력 및 pH에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  14. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는 우유계 단백질 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력, 약 3.0 내지 8.0의 pH 및 약 0분 내지 5분의 유지 시간에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력, pH 및 유지 시간에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  15. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는, 초유(colostrum) MPC, 초유 MPI, 초유 WPC, 초 유 WPI, MPC, MPI, WPC, WPI, 초면역(hyperimmune) MPC, 초면역 MPI, 초면역 WPC, 초면역 WPI, 또는 이들의 혼합물로부터 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력 및 약 3.0 내지 8.0의 pH에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력 및 pH에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  16. 생리활성 조성물의 품질 보존을 유지하거나 또는 증가시키기 위해 생리활성 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 생리활성 성분을 포함하는, 초유 MPC, 초유 MPI, 초유 WPC, 초유 WPI, MPC, MPI, WPC, WPI, 초면역 MPC, 초면역 MPI, 초면역 WPC, 초면역 WPI, 또는 이들의 혼합물로부터 조성물을 선택하는 단계(상기 1 이상의 생리활성 성분은 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력, 약 3.0 내지 8.0의 pH 및 약 0분 내지 5분의 유지 시간에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 생리활성 성분의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 조성물내 존재할 수 있는 원치 않는 생물체의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력, pH 및 유 지시간에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 원치않는 생물체는 1 이상의 박테리아, 1 이상의 진균류, 1 이상의 곰팡이, 1 이상의 효모, 1 이상의 조류, 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 프로바이오틱 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 1 이상의 프로바이오틱 인자를 갖는 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주를 포함하는 조성물을 선택하는 단계(상기 프로바이오틱 인자는 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 프로바이오틱 인자의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  19. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    원치않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠 스(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 존소니(Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노수스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 비피도박테리움 비피듐(Bifidiobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidiobacterium breve), 비피도박테리움 인판티스(Bifidobacterium infantis), 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스(Bifidiobacterium animalis subsp. lactis), 비피도박테리움 론검(Bifidobacterium longum), 스트렙토코커스 써모필루스(Streptococcus thermophilus), 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 원치 않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 락토바실러스 람노수스 HN067, 락토바실러스 존소니 NCC533 (La1), 락토바실러스 람노수스 GG, 락토바실러스 카세이 시로타, 락토바실러스 아시도필루스 NCFM, 락토바실러스 플란타룸 299v, 락토바실러스 카세이 DNl14001, 락토바실러스 살리바리우스 UCC4331, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 BB12, 비피도박 테리움 인판티스 35624, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 프로바이오틱 조성물을 처리하는 방법으로서,
    상기 방법은 하기 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법:
    (a) 1 이상의 락토바실러스 아시도필루스 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 균주 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주를 포함하는 조성물을 선택하는 단계(1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주는 1 이상의 프로바이오틱 인자를 가지며, 프로바이오틱 인자는 약 350 MPa 내지 1000 MPa의 선정된 압력에서 가압-처리한 후에 목적하는 활성 수준을 유지할 수 있음); 및
    (b) 1 이상의 프로바이오틱 인자의 목적하는 활성 수준을 유지하면서 1 이상의 프로바이오틱 미생물 균주의 성장을 방지하기 위해 선정된 압력에서 상기 조성물을 가압-처리하는 단계.
  22. 제 1 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 원치 않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 원치 않는 생물체 또는 프로바이오틱 미생물은 락토바실러스 람노수스 HN001인 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제 18 항 또는 제 21 항에 있어서,
    압력은 약 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5 및 10분동안 유지하는 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 350 MPa 내지 850 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 350 MPa 내지 800 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 350 MPa 내지 750 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 350 MPa 내지 700 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 400 MPa 내지 800 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 400 MPa 내지 700 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 400 MPa 내지 600 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 500 MPa 내지 800 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 500 MPa 내지 700 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 500 MPa 내지 600 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 550 MPa 내지 650 MPa인 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물의 pH는 약 3.0 내지 7.0인 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물의 pH는 약 3.0 내지 6.0인 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물의 pH는 약 3.0 내지 5.0인 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물의 pH는 약 3.2 내지 4.8인 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    조성물의 pH는 약 4.6 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    목적하는 활성 수준은 비처리 대조군 활성의 약 35% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    목적하는 활성 수준은 비처리 대조군 활성의 약 50% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    목적하는 활성 수준은 비처리 대조군 활성의 약 60% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  45. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    목적하는 활성 수준은 비처리 대조군 활성의 약 70% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  46. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    목적하는 활성 수준은 비처리 대조군 활성의 약 80% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  47. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    목적하는 활성 수준은 비처리 대조군 활성의 약 90%, 95%, 99% 또는 100% 이상인 것을 특징으로 하는 방법.
  48. 제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5 또는 5분동안 유지하는 것을 특징으로 하는 방법.
  49. 제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 0, 0.5, 1, 1.5, 2, 2.5 또는 3분동안 유지하는 것을 특징으로 하는 방법.
  50. 제 1 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서,
    압력은 약 0분동안 유지하는 것을 특징으로 하는 방법.
  51. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 조성물을 가압 처리한 후에 상기 조성물을 생성물로 혼입하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  52. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 조성물을 생성물로 혼입한 후 상기 생성물을 가압 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  53. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 조성물을 가압 처리한 후에 상기 조성물을 포장하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  54. 제 1 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 조성물을 포장한 후에 상기 포장된 조성물을 가압 처리하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  55. 제 1 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 안정화제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  56. 제 55 항에 있어서,
    상기 안정화제는 로커스트콩검(locust bean gum), 구아검, 크산탄검, 계피 검(cassia gum), 곤약가루(konjac flour), β-글루칸, 타라검(tara gum), 아라비아 고무(gum arabic), 젤란검(gellan gum), 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 트라가칸트 검, 카라야검(karaya gum), 아카시아검, 키토산, 아라비노글락틴스(arabinoglactins), 알지네이트, 펙틴, 카라기난, 실리 움(psyllium), 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  57. 제 1 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 소수성 리간드를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  58. 제 57 항에 있어서,
    상기 소수성 리간드는 팔미트산, 미리스트산, 리놀레산, 콘쥬게이트 리놀레산(conjugated linoleic acid), 1 이상의 포스포리피드, 1 이상의 포스파티딜콜린, 1 이상의 스핑고마이엘린, 1 이상의 강글리오사이드, 부티르산, 1 이상의 오메가-3 지방산, 1 이상의 피토스테롤, 1 이상의 피토스테롤 에스테르, 1 이상의 피토스테롤 아세테이트, 1 이상의 오메가-6 지방산, 비타민 A, 비타민 D, 리코펜, 소듐 도데실 설페이트, 또는 이들의 혼합물로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  59. 제 57 항 또는 제 58 항에 있어서,
    상기 조성물의 pH는 약 5.0 내지 8.0인 것을 특징으로 하는 방법.
  60. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 음료인 것을 특징으로 하는 방법.
  61. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 산성 음료인 것을 특징으로 하는 방법.
  62. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 요거트인 것을 특징으로 하는 방법.
  63. 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 젤리인 것을 특징으로 하는 방법.
  64. 제 1 항에 있어서,
    상기 성분은 1 이상의 IgG이며, 처리 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  65. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 초유 MPC이고, 성분은 IgG이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  66. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 초유 MPC이고, 성분은 IgG이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  67. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 초유 탈지분유이고, 성분은 IgG이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  68. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 초유 유장이고, 성분은 IgG이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  69. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 초유 유장 UF 투석유물(retentate)이고, 성분은 IgG이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  70. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 과면역 우유, 과면역 우유 단백질 농축물 또는 과면역 유장 단백질 농축물 과면역 초유, 과면역 초유 우유 단백질 농축물 또는 과면역 초유 유장 단백질 농축물이고, 성분은 IgA, IgG, IgM 또는 락토페린이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.2 내지 5.5이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  71. 제 1 항에 있어서,
    상기 성분은 락토페린이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 7.5이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  72. 제 1 항에 있어서,
    상기 성분은 TGF-β1 또는 TGF-β2이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 8.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  73. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 요거트이고, 성분은 락토페린이며, 압력은 약 350 MPa 내지 500 MPa이고, pH는 약 3.5 내지 4.6이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  74. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 음료이고, 성분은 IgG이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  75. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물은 젤리이고, 성분은 락토페린이며, 압력은 약 350 MPa 내지 650 MPa이고, pH는 약 3.0 내지 5.0이며, 유지 시간은 약 0분, 1분, 2분 또는 3분인 것을 특징으로 하는 방법.
  76. 제 1 항 내지 제 75 항 중 어느 한 항에 있어서,
    가압 처리 이후에 조성물의 호기성 세균수(aerobic plate count)는 약 50,000 cfu/ml 이하인 것을 특징으로 하는 방법.
  77. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리된 조성물.
  78. 제 77 항에 있어서,
    음료, 젤리 또는 요거트인 것을 특징으로 하는 조성물.
  79. 제 78 항에 있어서,
    음료인 것을 특징으로 하는 조성물.
  80. 제 78 항에 있어서,
    젤리인 것을 특징으로 하는 조성물.
  81. 제 78 항에 있어서,
    요거트인 것을 특징으로 하는 조성물.
  82. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되는 것을 특징으로 하는 프로바이오틱 조성물.
  83. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    1 이상의 락토바실러스 아시도필루스 균주, 1 이상의 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠스 균주, 1 이상의 락토바실러스 카세이 균주, 1 이상의 락토바실러스 크리스파터스 균주, 1 이상의 락토바실러스 존소니 균주, 1 이상의 락토바실러스 플란타룸 균주, 1 이상의 락토바실러스 루테리 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스 균주, 1 이상의 락토바실러스 살리바리우스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 비피듐 균주, 1 이상의 비피도박테리움 브레베 균주, 1 이상의 비피도박테리움 인판티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 론검 균주, 1 이상의 스트렙토코커스 써모필루스 균주, 또 는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  84. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    1 이상의 락토바실러스 아시도필루스 균주, 1 이상의 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠스 균주, 1 이상의 락토바실러스 카세이 균주, 1 이상의 락토바실러스 크리스파터스 균주, 1 이상의 락토바실러스 존소니 균주, 1 이상의 락토바실러스 플란타룸 균주, 1 이상의 락토바실러스 루테리 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스 균주, 1 이상의 락토바실러스 살리바리우스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 비피듐 균주, 1 이상의 비피도박테리움 브레베 균주, 1 이상의 비피도박테리움 인판티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 론검 균주, 1 이상의 스트렙토코커스 써모필루스 균주, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물로 본질적으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  85. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  86. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물로부터 선택된 1 이상의 프로바이오틱 미생물로 본질적으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  87. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  88. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    락토페린, 리소자임, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgD, 1 이상의 IgE, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, 1 이상의 성장인자, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로 본질적으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  89. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    락토페린, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  90. 제 1 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항의 방법에 따라 처리되고,
    락토페린, 1 이상의 IgA, 1 이상의 IgG, 1 이상의 IgM, TGF βl, TGF β2, 또는 이들의 혼합물로 본질적으로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
  91. 제 77 항 내지 제 90 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식품, 음료, 식품 첨가제, 음료 첨가제, 식이보조제(dietary supplement), 영양 제품(nutritional product), 의료용 식품(medical food), 식품의약(nutraceutical), 약물(medicament) 또는 의약품(pharmaceutical)의 제조에 사용되는 것을 특징으로 하는 조성물의 용도.
  92. 제 77 항 내지 제 90 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식품, 음료, 식품 첨가제, 음료 첨가제, 식이보조제, 영양 제품, 의료용 식품, 식품의약, 약물 또는 의약품을 필요로 하는 질환자를 치료하기 위해 이들을 제조하는데 사용하는 것을 특징으로 하는 조성물의 용도.
  93. 제 77 항 내지 제 90 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 식품, 음료, 식품 첨가제, 음료 첨가제, 식이보조제, 영양 제품, 의료용 식품, 식품의약, 약물 또는 의약품을 필요로 하는 질환자의 면역계를 자극하기 위해 이들을 제조하는데 사용하는 것을 특징으로 하는 조성물의 용도.
  94. 제 77 항 내지 제 90 항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 질환자에게 투여하는 단계를 포함하는 이를 필요로 하는 질환자의 면역계를 자극하는 방법.
  95. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  96. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 젤리.
  97. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 요거트.
  98. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 음료.
  99. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  100. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물 을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 젤리.
  101. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 요거트.
  102. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 락토페린 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 음료.
  103. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  104. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 젤리.
  105. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 요거트.
  106. 약 0.1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 음료.
  107. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  108. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 젤리.
  109. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 요거트.
  110. 약 1 mg/ml 내지 1000 mg/ml의 IgG 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 음료.
  111. 1 이상의 비생육성(non-viable) 프로바이오틱 미생물 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  112. 1 이상의 락토바실러스 아시도필루스 균주, 1 이상의 락토바실러스 델브루에키 subsp. 불가리쿠스 균주, 1 이상의 락토바실러스 카세이 균주, 1 이상의 락토바실러스 크리스파터스 균주, 1 이상의 락토바실러스 존소니 균주, 1 이상의 락토바실러스 플란타룸 균주, 1 이상의 락토바실러스 루테리 균주, 1 이상의 락토바실러스 람노수스 균주, 1 이상의 락토바실러스 살리바리우스 균주, 1 이상의 비피도박 테리움 비피듐 균주, 1 이상의 비피도박테리움 브레베 균주, 1 이상의 비피도박테리움 인판티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 균주, 1 이상의 비피도박테리움 론검 균주, 1 이상의 스트렙토코커스 써모필루스 균주, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1 이상의 비생육성 프로바이오틱 미생물 배양액, 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  113. 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 락토바실러스 람노수스 HN067, 락토바실러스 존소니 NCC533 (La1), 락토바실러스 람노수스 GG, 락토바실러스 카세이 시로타, 락토바실러스 아시도필루스 NCFM, 락토바실러스 플란타룸 299v, 락토바실러스 카세이 DNl14001, 락토바실러스 살리바리우스 UCC4331, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 BB12, 비피도박테리움 인판티스 35624, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1 이상의 비생육성 프로바이오틱 미생물 배양액, 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  114. 락토바실러스 람노수스 HN001, 비피도박테리움 아니말리스 subsp. 락티스 HN019, 락토바실러스 아시도필루스 HN017, 락토바실러스 람노수스 HN067, 또는 이들의 혼합물로 이루어진 그룹으로부터 선택된 1 이상의 비생육성 프로바이오틱 미생물 배양액, 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  115. 락토바실러스 람노수스 HN001의 비생육성 배양액 및 약 50,000 cfu/ml 이하의 미생물을 포함하는 것을 특징으로 하는 가압-처리된 조성물.
  116. 제 95 항 내지 제 115 항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 350 MPa 내지 850 MPa의 압력에서 가압 처리되는 것을 특징으로 하는 조성물.
  117. 제 95 항 내지 제 115 항 중 어느 한 항에 있어서,
    약 3.0 내지 8.0의 pH를 갖는 것을 특징으로 하는 조성물.
  118. 제 95 항 내지 제 115 항 중 어느 한 항에 있어서,
    락토페린, IgG 또는 비생육성 프로바이오틱 미생물은 비처리 대조군 활성의 약 35% 이상을 보유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  119. 제 95 항 내지 제 115 항 중 어느 한 항에 있어서,
    락토페린, IgG 또는 비생육성 프로바이오틱 미생물은 비처리 대조군 활성의 약 70% 이상을 보유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101233805B1 (ko) * 2011-01-18 2013-02-18 고려대학교 산학협력단 고정수압을 이용한 공액 리놀레인산의 생산 방법

Families Citing this family (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080166466A1 (en) * 2005-03-08 2008-07-10 Fonterra-Co-Operative Group Limited High Pressure Processing of Metal Ion Lactoferrin
JP2007185134A (ja) * 2006-01-12 2007-07-26 Asama Chemical Co Ltd 容器詰飲料およびそれらの製造方法
NZ555163A (en) * 2007-05-14 2010-05-28 Fonterra Co Operative Group Methods of immune or hematological enhancement, inhibiting tumour formation or growth, and treating or preventing cancer, cancer symptoms, or the symptoms of cancer treatments
US9055752B2 (en) 2008-11-06 2015-06-16 Intercontinental Great Brands Llc Shelf-stable concentrated dairy liquids and methods of forming thereof
EP2251020A1 (en) * 2009-05-11 2010-11-17 Nestec S.A. Short-time high temperature treatment generates microbial preparations with anti-inflammatory profiles
ITMI20090836A1 (it) * 2009-05-14 2010-11-15 Prodotti Formenti Srl Uso di lattoferrina in associazione ad eritropoietina nella terapia dell'anemia in pazienti neoplastici sottoposti a chemioterapia e in pazienti con insufficienza renale dializzati
JP2011172506A (ja) * 2010-02-24 2011-09-08 Glico Dairy Products Co Ltd プロバイオティクス用のビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス菌株及びこれを用いたプロバイオティクス乳酸菌発酵食品又はその他のプロバイオティクス経口食品。
JP2013526872A (ja) * 2010-05-28 2013-06-27 カーギル・インコーポレイテッド 全筋肉肉の高圧殺菌
UA112972C2 (uk) 2010-09-08 2016-11-25 Інтерконтінентал Грейт Брендс ЛЛС Рідкий молочний концентрат з високим вмістом сухих речовин
WO2012057636A1 (en) * 2010-10-27 2012-05-03 Fonterra Corporate Research And Development Limited Modulation of th1 and th2 immune response by lactic acid whey
SG191162A1 (en) * 2010-12-22 2013-07-31 Starbucks Corp Dba Starbucks Coffee Co Dairy containing beverages with enhanced flavors and method of making same
CN102600459B (zh) * 2011-01-20 2015-09-23 上海转基因研究中心 乳铁蛋白在预防和治疗肿瘤转移中的用途
MX2013013480A (es) * 2011-05-20 2014-02-06 Kowa Co Metaloproteina innovadora y proceso para producir la misma y agente profilactico o terapeutico para enfermedades corneales y conjuntivales que comprende dicha metaloproteina.
US8183227B1 (en) 2011-07-07 2012-05-22 Chemo S. A. France Compositions, kits and methods for nutrition supplementation
EP2543254A1 (en) 2011-07-08 2013-01-09 Nestec S.A. Pulsed electric field treatment process and dairy product comprising bioactive molecules obtainable by the process
US8168611B1 (en) 2011-09-29 2012-05-01 Chemo S.A. France Compositions, kits and methods for nutrition supplementation
JP5899773B2 (ja) * 2011-10-05 2016-04-06 株式会社Ｎｒｌファーマ 更年期障害改善用医薬組成物ならびに飲食物
US20130323314A1 (en) * 2011-12-30 2013-12-05 University Of Hyderabad Novel Nanoparticles of Lactoferrin Useful for Preparing a Pharmaceutical Composition Facilitating Easy Delivery of the Drug and a Process for Preparing the Same
CN105247329A (zh) * 2013-05-31 2016-01-13 利乐拉瓦尔集团及财务有限公司 判定液体产品的热处理程度
CN105338819A (zh) * 2013-06-27 2016-02-17 星巴克公司，贸易用名星巴克咖啡公司 用于饮料和其他食品的生物保存方法
FR3023718B1 (fr) * 2014-07-16 2018-10-12 Pierre Fabre Medicament Compositions pharmaceutique et/ou cosmetique decontaminees par haute pression
SK7218Y1 (sk) * 2014-12-04 2015-08-04 Aspin A S Mlieko alebo mliečny výrobok na báze kravského, kozieho, ovčieho, byvolieho alebo kobylieho mlieka
CA2991071C (en) * 2015-07-03 2023-08-15 Naturo Pty Ltd A process for treating milk
CA2999784A1 (en) * 2015-09-29 2017-04-06 Cbh Fresh Pty Ltd Hpp process for dairy foods
EP3397075A1 (en) * 2015-12-29 2018-11-07 N.V. Nutricia Nutritional formula with non-digestible oligosaccharides and non-replicating lactic acid producing bacteria
KR101907743B1 (ko) * 2016-08-05 2018-10-12 씨제이제일제당 (주) 마이크로파 가열 전처리를 포함하는 가공 식품의 살균방법
US10966440B2 (en) * 2019-01-05 2021-04-06 Foremost Technologies and Products, Inc. High pressure processing of foods and food supplements
CN110041424A (zh) * 2019-03-22 2019-07-23 新疆大学 一种驼乳乳清抗肿瘤活性蛋白及其制备方法和应用
CN112574295A (zh) * 2019-12-13 2021-03-30 天津科技大学 一种提高乳铁蛋白热稳定性的方法
CN114246246B (zh) * 2021-12-29 2023-08-18 湖南营养树生物科技有限公司 一种含乳铁蛋白的分离乳清蛋白的脱敏方法
CN115976032B (zh) * 2022-10-11 2023-09-12 天益健康科学研究院（镇江）有限公司 一种用于表达骆驼乳铁蛋白抑菌肽的基因、抑菌肽及应用

Family Cites Families (31)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2564185B2 (ja) * 1988-10-11 1996-12-18 森永乳業株式会社 生物活性組成物
JPH0391467A (ja) * 1989-09-02 1991-04-17 Nichiro Corp 食品の殺菌法
JPH03290172A (ja) * 1990-04-09 1991-12-19 Toyo Seikan Kaisha Ltd 食品の殺菌保存方法
JP2702590B2 (ja) * 1990-06-26 1998-01-21 森永乳業株式会社 チロシナーゼ活性阻害剤
JP2941093B2 (ja) * 1990-06-26 1999-08-25 森永乳業株式会社 ラクトフェリン分解物を有効成分とするチロシナーゼ活性阻害剤及びラクトフェリン分解物を用いる物品の処理方法
JPH0475574A (ja) * 1990-07-17 1992-03-10 Ajinomoto Co Inc 殺菌方法
JP3092935B2 (ja) 1990-10-26 2000-09-25 雪印乳業株式会社 ラクトフェリン含有調製物の殺菌方法
JP3173858B2 (ja) * 1991-04-24 2001-06-04 森永乳業株式会社 抗菌性ペプチドおよび抗菌剤
JP2792278B2 (ja) * 1991-07-31 1998-09-03 不二製油株式会社 大豆蛋白ゲルの製造法
JPH05252922A (ja) * 1991-08-29 1993-10-05 Shokuhin Sangyo Chokoatsu Riyou Gijutsu Kenkyu Kumiai 加工食品の製造方法
JPH05168445A (ja) * 1991-12-24 1993-07-02 Taiyo Fishery Co Ltd 食品の製造方法
JPH05252921A (ja) * 1992-03-09 1993-10-05 Toppan Printing Co Ltd 高圧殺菌方法及び該方法に用いる処理条件の決定方法
JPH07170955A (ja) * 1993-12-21 1995-07-11 Yakult Honsha Co Ltd 飲食物の殺菌方法
US6086936A (en) * 1995-12-14 2000-07-11 Kal Kan Foods, Inc. High temperature/ultra-high pressure sterilization of foods
JPH09235209A (ja) * 1995-12-27 1997-09-09 Ueno Seiyaku Oyo Kenkyusho:Kk 抗菌性固体組成物
WO1999029187A1 (en) * 1997-12-05 1999-06-17 Meyer Richard S Ultra high pressure, low temperature food preservation process
DE19801031C2 (de) 1998-01-07 2000-06-15 Fritz Kortschack Verfahren zur Erhöhung der Lebensmittelsicherheit von Naturdärmen, die als Wursthüllen vorgesehen sind
MXPA00007428A (es) * 1998-01-30 2002-08-20 Flow Int Corp Metodo para la inactivacion a presion ultra alta de microrganismos en productos de jugo.
US6270723B1 (en) 1998-06-15 2001-08-07 Bbi Bioseq, Inc. Rapid cryobaric sterilization and vaccine preparation
US6696019B2 (en) * 1998-06-15 2004-02-24 Bbi Bioseq, Inc. Rapid cryobaric sterilization and vaccine preparation
JP3821981B2 (ja) * 1999-04-09 2006-09-13 森永乳業株式会社 未変性ラクトフェリン入り殺菌乳及びその製造法
CA2396103A1 (en) * 2000-01-11 2001-07-19 Mcgill University Hyperbaric pressurization of proteins and therapeutical uses of pressurized proteins thereof
FR2804326B1 (fr) * 2000-01-27 2002-10-18 Ellipse Pharmaceuticals Procede de sterilisation par traitement sous hautes pressions de principes actifs sensibles
JP2003009760A (ja) 2001-06-26 2003-01-14 Isao Hayakawa 生畜肉食品の処理方法及び同処理方法によって処理された生畜肉食品
EP1401287B1 (en) * 2001-07-03 2009-01-21 S.p.A. Egidio Galbani Process for pasteurizing cheese products, and cheese products formed thereby
JP4218360B2 (ja) 2002-04-24 2009-02-04 東京エレクトロン株式会社 熱処理装置及び熱処理方法
JP2003319769A (ja) * 2002-05-02 2003-11-11 Asama Chemical Co Ltd 食品用保存剤及び食品の保存方法
NZ521836A (en) 2002-10-08 2005-07-29 New Zealand Dairy Board High pressure treatment to reduce microbial spoilage in cultured dairy foods, cooked meats, vegetables and the like
US20040126480A1 (en) * 2002-12-26 2004-07-01 Unilever Bestfoods North America Food process
JP2005027588A (ja) * 2003-07-08 2005-02-03 Asama Chemical Co Ltd 食品用保存剤および食品の保存方法
US20080166466A1 (en) * 2005-03-08 2008-07-10 Fonterra-Co-Operative Group Limited High Pressure Processing of Metal Ion Lactoferrin

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101233805B1 (ko) * 2011-01-18 2013-02-18 고려대학교 산학협력단 고정수압을 이용한 공액 리놀레인산의 생산 방법

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