KR101656592B1 - 디히드로-벤조-옥사진 및 디히드로-피리도-옥사진 유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 디히드로-벤조-옥사진 및 디히드로-피리도-옥사진 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물에 관한 것이다.
<화학식 I>
Figure 112014067144685-pct00414

상기 식에서, Y, V, W, U, Q, R1, R5, R7 및 R30은 발명의 설명에 정의된 바와 같다. 이러한 화합물은 PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 장애 또는 질환의 치료에 적합하다.

Description

디히드로-벤조-옥사진 및 디히드로-피리도-옥사진 유도체{DIHYDRO-BENZO-OXAZINE AND DIHYDRO-PYRIDO-OXAZINE DERIVATIVES}
본 발명은, 예를 들어 대사 안정성 및 적합한 약동학과 같은 유익한 약물유사 특성을 갖는 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태, 조절, 특히 포스포이노시티드 3' OH 키나제 패밀리 (이하 PI3K)의 활성 또는 기능의 억제를 위한 형태의 약물 후보로서의 신규 디히드로-벤조-옥사진 및 디히드로-피리도-옥사진 유도체의 제조 및 용도에 관한 것이다.
포스포이노시티드-3 키나제 (PI3K) 패밀리의 구성원은 수많은 다양한 유형의 세포에서의 세포 성장, 분화, 생존, 세포골격 재형성, 및 세포내 소기관의 트래픽킹에 관련된다 (문헌 [Okkenhaug and Wymann, Nature Rev. Immunol. 3:317 (2003)]).
현재까지, 8종의 포유동물 PI3K가 확인되었고, 이들은 그들의 유전자 서열, 구조, 어댑터 분자, 발현, 활성화 방식 및 바람직한 기질을 기초로 하여 3종의 주요 부류 (I, II 및 III)로 분류되었다.
PI3Kδ는 티로신 키나제-연결된 수용체의 하류에서 제2 메신저 신호를 생성하는 부류 I PI3K 패밀리 (PI3K α, β, γ 및 δ)에 속하는 지질 키나제이다.
PI3Kδ는 어댑터 단백질, 및 포스파티딜이노시톨-4,5-비스-포스페이트 (PtdInsP2)를 포스파티딜이노시톨-3,4,5-트리-포스페이트 (PtdInsP3)로 전환시키는 p110δ 촉매 서브유닛으로 구성된 이종이량체이다. 이펙터 단백질은 PtdInsP3과 상호작용하여 세포 활성화, 분화, 이동 및 세포 생존에 관련된 특이적 신호전달 경로를 유발한다.
p110δ 및 p110γ 촉매 서브유닛의 발현은 백혈구에 대해 우선적이다. 발현은 또한 평활근 세포, 근세포 및 내피 세포에서도 관찰된다. 대조적으로, p110α 및 p110β는 모든 세포 유형에 의해 발현된다 (문헌 [Marone et al. Biochimica et Biophysica Acta 1784:159 (2008)]).
PI3Kδ는 B 세포 발생 및 기능과 연관된다 (문헌 [Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002)]).
B 세포는 또한 수많은 자가면역 및 알레르기성 질환의 발병기전 뿐만 아니라 이식 거부의 과정에서 결정적인 역할을 한다 (문헌 [Martin and Chan, Annu. Rev. Immunol. 24:467 (2006)]).
화학주성은 수많은 자가면역 또는 염증성 질환, 혈관신생, 침습/전이, 신경변성 또는 상처 치유에 관련된다 (문헌 [Gerard et al. Nat. Immunol. 2:108 (2001)]). 케모카인에 반응한 백혈구 이동에서 일시적으로 구별되는 사건은 PI3Kδ 및 PI3Kγ에 전적으로 의존한다 (문헌 [Liu et al. Blood 110:1191 (2007)]).
PI3Kα 및 PI3Kβ는 항상성을 유지하는데 필수적인 역할을 하고, 이들 분자 표적의 약리학적 억제는 암 요법과 연관되어 있다 (문헌 [Maira et al. Expert Opin. Ther. Targets 12:223 (2008)]).
PI3Kα는 인슐린 신호전달 및 세포 성장 경로에 관련된다 (문헌 [Foukas et al. Nature 441:366 (2006)]). PI3Kδ 이소형-선택적 억제는 잠재적 부작용, 예컨대 고혈당증, 및 대사 또는 성장 조절이상을 회피할 것으로 예상된다.
기생충 감염은 여전히 전 세계적으로 이환율 및 사망률의 가장 중요한 원인 중 하나를 나타낸다. 인간 및 동물 병리상태를 야기하는 기생충 중에서 아피콤플렉사(apicomplexa) 문은, 말라리아, 리슈마니아증 및 트리파노소마증을 포함하나 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 심각한 질병의 원인인 매개체-감염 기생충의 군을 포함한다. 말라리아는 단독으로 5-10%의 인간을 감염시키고, 연간 약 2백만 명의 사망을 야기한다. 문헌 [Schofield et al, "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et al, "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al, "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011].
톨-유사 수용체 (TLR)는 미생물 병원체 내의 진화적으로 보존된 구조적 관련 분자 (병원체-연관 분자 패턴 (PAMP)으로 공지됨)를 인식하는 배선 코딩된 계통발생학적 고대 분자이다. 면역계의 세포를 비롯한 여러 가지의 다양한 세포 유형은 TLR을 발현함으로써 PAMP의 존재를 검출할 수 있다. 지금까지 10종의 기능적 TLR 패밀리 구성원 (TLR1-10)이 인간에서 설명되어 왔고, 이들 모두는 특이적 PAMP 분자를 인식한다. 이들 특이적 PAMP의 인식 후에 TLR은 박테리아, 바이러스, 진균 및 기생충에 의한 감염에 대한 숙주의 면역 반응을 유도하고 조정한다. 문헌 [Hedayat et al, "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", review, Lancet Infectious disease 2011], [Kwai et al, "TLRs and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity", review, Immunity May-2011].
감염된 숙주의 면역계는 주로 T-헬퍼 1 유형 (Th1)인 염증유발 시토카인의 TLR 유발 생산으로 감염에 반응한다. 적절한 양의 이들 시토카인은 유익하고 감염을 없애는데 필요한 반면, 이들 매개인자의 과다생산은 숙주에 유해하고 면역 매개 병리상태, 예컨대 중증이고 종종 치명적인 결과를 갖는 신경병리상태 및 조직 손상과 연관된다. 이러한 면역 매개 병리상태의 중요하고 고도로 관련된 하나의 예는, 중증의 임상적 증상을 야기하고 종종 치명적인 급성 뇌 말라리아 (CM)이다. 문헌 [Schofield et al, "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et al, "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al, "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011] [Hedayat et al, "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", review, Lancet Infectious disease 2011]. 말라리아의 치료 및 박멸에서 이루어진 진전에도 불구하고, CM을 비롯한 중증 말라리아와 연관된 사망률은 여전히 허용불가능하게 높다. 따라서, 숙주 내 기생충의 박멸에서 단독으로 지시된 전략은 CM의 모든 사례에서의 신경계 합병증 및 사망을 예방하는데 충분하지 않을 수 있다. 따라서, 부분적으로 숙주-매개 면역병리상태에 의해 야기되는 CM-연관 사망률 및 이환율을 효과적으로 감소시키는 혁신적인 신규 부가 치료 전략의 개발에 대한 긴급한 의학적 필요성이 남아있다. 문헌 [Higgins et al, "Immunopathogenesis of falciparum malaria: implications for adjunctive therapy in the management of severe and cerebral malaria", Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2011].
최근의 추가적 증거는 TLR9가 플라스모디움(Plasmodium), 리슈마니아(Leishmania), 트리파노소마(Trypanosoma) 및 톡소플라스마(Toxoplasma)를 포함하나 이에 제한되지는 않는 기생충에 대한 인식 및 반응에서 핵심적인 역할을 하고 (문헌 [Gowda et al, "The Nucleosome is the TLR9-specific Immunostimulatory component of plasmodium falciparum that activates DCs" PLoS ONE, June 2011], [Peixoto-Rangel et al, "Candidate gene analysis of ocular toxoplasmosis in Brazil: evidence for a role for TLR9", Mem Inst Oswaldo Cruz 2009], [Pellegrini et al, "The role of TLRs and adoptive immunity in the development of protective or pathological immune response triggered by the Trypanosoma cruzi protozoan", Future Microbiol 2011]) TLR9를 비롯한 TLR의 활성화에 대한 간섭은 중증 뇌 말라리아에서의 유해한 염증 반응을 예방하는 유망한 전략을 나타낸다 (문헌 [Franklin et al, "Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing TLRs prevents experimental cerebral malaria", PNAS 2011])는 것을 제공한 바 있다.
말라리아는 4종의 원충성 기생충: 플라스모디움 팔시파룸(Plasmodium falciparum); 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax); 플라스모디움 오발레(Plasmodium ovale); 및 플라스모디움 말라리아(Plasmodium malaria)에 의해 야기되는 감염성 질환이다. 이들 4종의 기생충은 전형적으로 감염된 암컷 아노펠레스 모기 교상에 의해 전달된다. 말라리아는 세계 여러 곳에서 문제를 일으키며, 최근 수십 년에 걸쳐 말라리아 부담은 꾸준히 증가하였다. 어림잡아 1-3백만 명의 사람들이 매년 말라리아로 사망하는데, 대부분 5세 미만의 소아이다. 말라리아 사망률의 이러한 증가는, 치명적인 말라리아 기생충인 플라스모디움 팔시파룸이 아르테미시닌 유도체를 제외하고는 거의 모든 이용가능한 항말라리아 약물에 대해 내성을 획득하였다는 사실에 일부 기인한다.
리슈마니아증은 리슈마니아 속에 속하는 20종 초과의 기생 원충에 의해 야기되며, 암컷 모래 파리 교상에 의해 전달된다. 리슈마니아증은 다수의 열대 및 아열대 지역을 비롯한 약 88개국에서의 풍토병이다. 4종의 주요 형태의 리슈마니아증이 있다. 칼라-아자르로도 불리는 내장 리슈마니아증은 가장 심각한 형태이고, 기생충 리슈마니아 도노바니(Leishmania donovani)에 의해 야기된다. 내장 리슈마니아증이 발병한 환자는 치료를 받지 않으면 수 개월 내에 사망할 수 있다. 내장 리슈마니아증에 대한 2종의 주요 요법은 안티모니 유도체 소듐 스티보글루코네이트 (펜토스탐(Pentostam)®) 및 메글루민 안티모니에이트 (글루칸팀(Glucantim)®)이다. 소듐 스티보글루코네이트는 약 70년 동안 사용되어 왔고, 이 약물에 대한 내성은 점점 문제가 되고 있다. 또한, 치료는 비교적 길고 고통스러우며, 바람직하지 않은 부작용을 야기할 수 있다.
수면병으로도 알려져 있는 인간 아프리카 트리파노소마증은 매개체-감염 기생충성 질환이다. 관련 기생충은 트리파노소마 속에 속하는 원충이다. 이들은 인간 병원성 기생충을 보유한 인간 또는 동물로부터 감염된 체체 파리 (글로시나 속) 교상에 의해 인간에게 전달된다.
샤가스병 (아메리카 트리파노소마증으로도 불림)은 아메리카 대륙의 빈곤 집단 중에서의 풍토병인 또 다른 인간 기생충성 질환이다. 상기 질환은 원충성 기생충인 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi)에 의해 야기되며, 이는 흡혈 곤충에 의해 인간에게 전달된다. 인간 질환은 감염 직후에 발생하는 급성 단계 및 수 년에 걸쳐 발병할 수 있는 만성 단계의 2가지 단계로 발생한다. 만성 감염은 치매, 심근 손상 및 때때로 소화관 팽창, 뿐만 아니라 체중 감소를 비롯한 다양한 신경계 장애를 유발한다. 치료되지 않은 만성 질환은 종종 치명적이다. 샤가스병을 치료하는데 현재 이용가능한 약물은 니푸르티목스 및 벤즈니다졸이다. 그러나, 이들 현행 요법의 문제는 그들의 다양한 부작용, 치료 기간, 및 치료 동안의 의료적 감독에 대한 요구를 포함한다. 또한, 치료는 실제로 질환의 급성 단계 동안에 제공된 경우에만 효과적이다. 2종의 제일선 약물에 대한 내성은 이미 발생하였다. 항진균제인 암포테리신 b가 2차 약물로 제안된 바 있지만, 이 약물은 고가이며 비교적 독성이다.
톡소플라스마증은 세계 대부분에 걸친 풍토병이고, 이는 성인 인구의 대다수를 감염시킬 수 있다.1,2 그러나 이의 유병률은 다양한 국가에서 상이하다.3 북부 온대성 국가에서의 성인 중 적어도 10% 및 지중해 및 열대성 국가에서의 성인 중 절반 초과를 감염시키는 것으로 추정된다.4 톡소플라스마 곤디이(Toxoplasma gondii)는 보편적인 편성 세포내 원충이고 인간에서의 감염성 망막염의 가장 흔한 원인인 것으로 간주되며, 이는 다양한 인자, 예컨대 기후, 위생 및 식습관에 의존한다.5-7 면역적격 성인에서의 질환의 경과는 통상적으로 무증상이고 자기-제한적이다. 감염이 발생하자마자, 기생충은 망막 및 신체의 다른 기관에서, 초기 감염의 수 년 후에 재활성화하여 급성 망막맥락막염 및 새로운 망막맥락막 병변을 일으킬 수 있는 잠재성 낭포를 형성한다. 문헌 [Arevalo et al, "Ocular Toxoplasmosis in the developing world", Internat. Ophthal. Clin 2010].
신경낭미충증은 타에니아 솔리움(Taenia solium)의 유충에 의해 야기되는 CNS의 가장 흔한 기생충성 질환이다 (전 세계적으로 ~250만 명 발생). 상기 질환은 인간에서 기생충 주위의 검출가능한 염증 반응의 부재를 특징으로 하는 긴 무증상 단계를 갖는다. 무증상 단계 동안의 전체 면역 반응은 Th2 표현형의 것이다. 그러나, 치유적 치료 또는 일반적 기생충 감소에 의한 유충의 파괴는, 종종 만성 육아종성 반응 및 질환의 전형적 증상의 징후로 이루어진 강한 염증 반응을 야기한다. 증상이 있는 환자의 CNS에서의 면역 반응은, 육아종의 부재 또는 존재에 따라 명확한 Th1 표현형 또는 혼합된 Th1, Th2 및 Th3 반응으로 이루어진다. CNS에서의 증상 단계 동안의 우세한 과다염증 반응은 신경낭미충증과 연관된 중증 신경병리상태 및 사망률의 원인이다. 문헌 [Mishra et al, "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009].
우수한 약물 후보인 신규 PI3K 억제제를 제공할 필요성이 존재한다. 특히, 본 발명의 화합물은 PI3K에 강력하게 결합하면서 다른 수용체에 대해서는 낮은 친화도를 나타내고, 억제제로서의 기능적 활성을 나타내야 한다. 이들은 위장관으로부터 잘 흡수되고, 대사적으로 안정적이고, 바람직한 약동학적 특성을 보유해야 한다. 중추 신경계 내의 수용체에 대해 표적화되는 경우, 이들은 자유롭게 혈액 뇌 장벽을 통과해야 하고, 말초 신경계 내의 수용체에 대해 선택적으로 표적화되는 경우, 이들은 혈액 뇌 장벽을 통과해서는 안 된다. 이들은 비-독성이고, 부작용이 거의 없는 것으로 입증되어야 한다. 또한, 이상적 약물 후보는 안정하고, 비-흡습성이고, 용이하게 제제화되는 물리적 형태로 존재할 것이다.
본 발명의 화합물은 다양한 파라로그 PI3K α, β, γ 및 δ에 대한 특정 수준의 선택성을 나타낸다. 특히, 이소형 PI3Kδ에 대한 특정 수준의 선택성을 나타낸다.
따라서, 본 발명의 화합물은 잠재적으로 광범위한 장애, 특히 자가면역 장애, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염, 기도 질환, 예컨대 천식 및 COPD, 이식 거부, 예를 들어 조혈 기원의 암 또는 고형 종양을 포함하나 이에 제한되지는 않는 장애의 치료에 유용하다.
본 발명은 또한 B 세포의 기능, 예컨대 항체 생산, 항원 제시, 시토카인 생산 또는 림프성 기관발생 중 하나 이상이 비정상적이거나 바람직하지 않은 상태, 질환 또는 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 심상성 천포창 및 관련 질환, 특발성 혈소판감소증 자반증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 만성 자가면역 두드러기, 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, AMR (항체-매개 이식 거부), B 세포-매개 초급성, 급성 및 만성 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 예컨대 비제한적으로 다발성 골수종; 급성 골수 백혈병; 만성 골수 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병; 비-호지킨 림프종; 림프종; 진성 다혈구혈증; 본태성 혈소판혈증; 골수 화생을 동반한 골수섬유증; 및 발덴스트룀병 뿐만 아니라 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염을 치료하는 방법을 포함하는, 단독 또는 1종 이상의 다른 약리학적 활성 화합물과 조합한 치료에 관한 것이다.
발명의 개요
본 발명은 하기 화학식 I의 디히드로-벤조-옥사진 및 디히드로-피리도-옥사진 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물에 관한 것이다.
<화학식 I>
Figure 112014067144685-pct00001
상기 식에서,
Y는 O 또는 NH로부터 선택되고;
V는 CR5 또는 N으로부터 선택되고;
W는 CH2 또는 O로부터 선택되고;
U는 N 또는 CH로부터 선택되고;
Q는 N 또는 CR6으로부터 선택되고;
여기서 U 및 Q가 둘 다 N인 것은 아니고;
R1은 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐,
또는
-X-R4로부터 선택되고,
여기서 X는 C(O), S(O)2 또는 CH2로부터 선택되고,
R4는 C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-옥시, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, C3-C12-시클로알킬-옥시, C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-옥시, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, 히드록시, C1-C8-알콕시, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬은 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬은 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'은 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자는 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
'헤테로아릴'은 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자는 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
R6은 수소, 할로겐, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시, C1-C4-알킬-술포닐, C1-C4-알킬-술피닐, C1-C4-알킬-술파닐, 할로-C1-C4-알콕시, C1-C4-알콕시-C1-C4-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고;
R7은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시, N(R8)2-술포닐, C1-C4-알킬-술포닐, C1-C4-알킬-술포닐-아미노, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되거나;
또는 R6 및 R7은 함께 CH=CH-CH=CH이고,
여기서 R8은 독립적으로 수소, C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시로부터 선택되거나 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 N, O, S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 4 내지 7원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 이는 비치환되거나 또는 C1-C4-알킬로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
R5는 독립적으로 H, D, F 또는 C1-C2-알킬로부터 선택되고;
R30은 독립적으로 H, D 또는 F로부터 선택된다.
도 1은 결정질 무수 형태인 실시예 F1의 X-선 분말 회절 패턴이다.
도 2는 결정질 무수 형태인 실시예 F1의 시차 주사 열량측정법 그래프이다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "본 발명의 화합물"은 화학식 I 및 그의 하위화학식의 화합물, 화합물의 염, 화합물 및/또는 염의 수화물 또는 용매화물, 뿐만 아니라 모든 입체이성질체 (부분입체이성질체 및 거울상이성질체 포함), 호변이성질체 및 동위원소 표지된 화합물 (중수소 치환 포함)을 지칭한다. 본 발명의 화합물은 추가로 화학식 I (또는 그의 하위화학식)의 화합물 및 그의 염의 다형체를 포함한다. 화학식 I의 화합물이 언급되는 경우에, 이는 또한 화학식 I의 화합물의 호변이성질체 및 N-옥시드를 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명은 하기 용어 해설 및 종결부 실시예를 비롯한 하기 설명을 참조로 보다 완전하게 인지될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "비롯한", "함유하는" 및 "포함하는"은 본원에서 그들의 개방적, 비제한적 의미로 사용된다.
호변이성질체, 예컨대 케토- 및 엔올 형태, 락탐- 및 락팀 형태, 아미드 형태 및 이미드산 형태 또는 엔아민 형태 및 이민 형태 사이의 호변이성질체는, 예를 들어 화학식 I의 화합물의 R1 부분에서 존재할 수 있다. 질소 함유 헤테로시클릴 및 헤테로아릴 잔기는 N-옥시드를 형성할 수 있다.
화합물, 염 등에 대해 복수형이 사용되는 경우에, 이는 또한 단일 화합물, 염 등을 의미하고자 하는 것이다.
본원의 상기 및 하기에 사용된 일반적 용어는, 달리 나타내지 않는 한, 바람직하게는 본 개시내용의 문맥 내에서 하기 의미를 갖는다:
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬"은 20개 이하의 탄소 원자를 갖는 완전 포화 분지형 (단일 또는 다중 분지화 포함) 또는 비분지형 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 달리 제공되지 않는 한, 알킬은 1 내지 16개의 탄소 원자, 1 내지 10개의 탄소 원자, 1 내지 7개의 탄소 원자 또는 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 탄화수소 모이어티를 지칭한다. 알킬의 대표적인 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, n-헥실, 3-메틸헥실, 2,2-디메틸펜틸, 2,3-디메틸펜틸, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 전형적으로, 알킬 기는 1-7개, 보다 바람직하게는 1-4개의 탄소를 갖는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "할로-알킬"은 본원에 정의된 바와 같은 1개 이상의 할로 기로 치환된 본원에 정의된 바와 같은 알킬을 지칭한다. 할로-알킬은 모노-할로-알킬, 디-할로-알킬, 또는 퍼-할로-알킬을 비롯한 폴리-할로-알킬일 수 있다. 모노-할로-알킬은 알킬 기 내에 1개의 아이오도, 브로모, 클로로 또는 플루오로를 가질 수 있다. 디-할로-알킬 및 폴리-할로-알킬 기는 알킬 내에 2개 이상의 동일한 할로 원자, 또는 상이한 할로 기의 조합을 가질 수 있다. 전형적으로 폴리-할로-알킬은 최대 12개 또는 10개 또는 8개 또는 6개 또는 4개 또는 3개 또는 2개의 할로 기를 함유한다. 할로-알킬의 비제한적 예는 플루오로-메틸, 디-플루오로-메틸, 트리-플루오로-메틸, 클로로-메틸, 디-클로로-메틸, 트리-클로로-메틸, 펜타-플루오로-에틸, 헵타-플루오로-프로필, 디-플루오로-클로로-메틸, 디-클로로-플루오로-메틸, 디-플루오로-에틸, 디-플루오로-프로필, 디-클로로-에틸 및 디클로로-프로필을 포함한다. 퍼-할로-알킬은 모든 수소 원자가 할로 원자로 대체된 알킬을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "헤테로시클릴" 또는 "헤테로시클릭"은 N, O 및 S로부터 선택된 적어도 1개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 모노시클릭 또는 7 내지 10원 포화 또는 부분 포화 고리 또는 고리계를 지칭하고, 여기서 N 및 S는 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있다. '헤테로시클릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있다. '헤테로시클릴'은 융합 또는 가교된 고리 뿐만 아니라 스피로시클릭 고리를 포함할 수 있다.
R4와 관련하여, 헤테로사이클의 예는 옥시라닐, 아지리디닐, 옥세타닐, 티에타닐, 아세티티닐, 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 2,3-디히드로푸라닐, 2,5-디히드로푸라닐, 2,3-디히드로티오페닐, 1-피롤리닐, 2-피롤리닐, 3-피롤리닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 옥사티아닐, 디옥사닐, 피페라지닐, 디히드로피라닐, 테트라히드로피리디닐, 디히드로티오피라닐, 아제파닐, 티에파닐 및 옥세파닐을 포함한다.
R8과 관련하여, 헤테로사이클의 예는 피롤리닐, 피페리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 피페라지닐, 테트라히드로피리디닐 및 아제파닐을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "헤테로아릴"은, 고리(들) 내에 가능한 최대 개수의 공액 이중 결합을 보유하고, N, O 및 S로부터 선택된 적어도 1개의 헤테로원자를 함유하는 4-, 5-, 6- 또는 7-원 모노시클릭, 7-, 8-, 9-, 10-, 11- 또는 12-원 비시클릭 또는 10-, 11-, 12-, 13-, 14- 또는 15-원 트리시클릭 불포화 고리 또는 고리계를 지칭하고, 여기서 N 및 S는 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있다. '헤테로아릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있다. '헤테로아릴'은 융합 또는 가교된 고리 뿐만 아니라 스피로시클릭 고리를 포함할 수 있다. 헤테로아릴의 예는 푸라닐, 티오페닐, 피롤릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-티아디아졸릴, 1,2,4-티아디아졸릴, 1,2,3-티아디아졸릴, 1,3,4-티아디아졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,5-트리아졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐 및 1,3,5-트리아지닐을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "시클로알킬"은 3-12개 탄소 원자의 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭, 비시클릭 또는 트리시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 달리 제공되지 않는 한, 시클로알킬은 3 내지 10개의 고리 탄소 원자 또는 3 내지 7개의 고리 탄소 원자를 갖는 시클릭 탄화수소 기를 지칭한다. 예시적인 비시클릭 탄화수소 기는 옥타히드로인딜, 데카히드로나프틸을 포함한다. 예시적인 트리시클릭 탄화수소는 비시클로[2.1.1]헥실, 비시클로[2.2.1]헵틸, 비시클로[2.2.1]헵테닐, 6,6-디메틸비시클로[3.1.1]헵틸, 2,6,6-트리메틸비시클로[3.1.1]헵틸, 비시클로[2.2.2]옥티이다. 예시적인 테트라시클릭 탄화수소 기는 아다만틸을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "옥시"는 -O- 연결기를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "카르복시" 또는 "카르복실"은 -COOH이다.
본원에 사용된 바와 같은 모든 치환기는 그들을 구성하는 관능기 (기)의 순서를 보여주는 방식으로 기재된다. 관능기는 상기 본원에 정의되어 있다.
본 발명의 다양한 열거된 실시양태가 본원에 기재된다. 각 실시양태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합되어 본 발명의 추가 실시양태를 제공할 수 있음이 인식될 것이다.
한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 I'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 I'>
Figure 112014067144685-pct00002
상기 식에서, R1, R5, R7, R30, Y, V, W, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ia의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ia>
Figure 112014067144685-pct00003
상기 식에서, R1, R5, R7, R30, Y, V, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
한 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ia'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ia'>
Figure 112014067144685-pct00004
상기 식에서, R1, R5, R7, R30, Y, V, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ib의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ib>
Figure 112014067144685-pct00005
상기 식에서, R1, R5, R7, R30, V, W, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ib'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ib'>
Figure 112014067144685-pct00006
상기 식에서, R1, R5, R7, R30, V, W, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ic의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ic>
Figure 112014067144685-pct00007
상기 식에서, R1, R5, R7, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ic'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ic'>
Figure 112014067144685-pct00008
상기 식에서, R1, R5, R7, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Id의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Id>
Figure 112014067144685-pct00009
상기 식에서, R1, R5, R7, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Id'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Id'>
Figure 112014067144685-pct00010
상기 식에서, R1, R5, R7, U 및 Q는 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ie의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ie>
Figure 112014067144685-pct00011
상기 식에서, R1, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ie'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ie'>
Figure 112014067144685-pct00012
상기 식에서, R1, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 If의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 If>
Figure 112014067144685-pct00013
상기 식에서, R1, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 If'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 If'>
Figure 112014067144685-pct00014
상기 식에서, R1, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ig의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ig>
Figure 112014067144685-pct00015
상기 식에서, X, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ig'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ig'>
Figure 112014067144685-pct00016
상기 식에서, X, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ih의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ih>
Figure 112014067144685-pct00017
상기 식에서, X, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ih'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ih'>
Figure 112014067144685-pct00018
상기 식에서, X, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ii의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ii>
Figure 112014067144685-pct00019
상기 식에서, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ii'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ii'>
Figure 112014067144685-pct00020
상기 식에서, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ij의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ij>
Figure 112014067144685-pct00021
상기 식에서, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 하기 화학식 Ij'의 화합물로부터 선택된 화학식 I의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
<화학식 Ij'>
Figure 112014067144685-pct00022
상기 식에서, R4, R5, R6 및 R7은 상기 정의된 바와 같다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
'헤테로아릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있는 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 피롤리디닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로티오페닐, 테트라히드로피라닐, 피페리디닐, 테트라히드로티오피라닐, 모르폴리닐, 디옥사닐 또는 디히드로피라닐로부터 선택되고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 옥소, C1-C8-알킬 또는 C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
'헤테로아릴'이 이미다졸릴, 피라졸릴, 티아졸릴, 옥사졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸로부터 선택되고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 C1-C8-알킬, 히드록실 또는 아미노로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있는 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R6이 할로겐, C1-C4-알콕시, C1-C4-알킬-술포닐 또는 할로-C1-C4-알콕시로부터 선택된 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R7이 수소, 할로겐, 시아노, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬 또는 C1-C4-알콕시로부터 선택된 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
'헤테로아릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
R6이 할로겐, C1-C4-알콕시, C1-C4-알킬-술포닐 또는 할로-C1-C4-알콕시로부터 선택된 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
'헤테로아릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
R7이 수소, 할로겐, 시아노, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬 또는 C1-C4-알콕시로부터 선택된 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은
R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
'헤테로시클릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
'헤테로아릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 또한 임의로 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
R6이 할로겐, C1-C4-알콕시, C1-C4-알킬-술포닐 또는 할로-C1-C4-알콕시로부터 선택되고,
R7이 수소, 할로겐, 시아노, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬 또는 C1-C4-알콕시로부터 선택된 것인, 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물 및/또는 그의 제약상 허용되는 염 및/또는 용매화물을 제공한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명에 따른 개별 화합물은 하기 실시예 섹션에 열거된 것들이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "광학 이성질체" 또는 "입체이성질체"는 주어진 본 발명의 화합물에 대해 존재할 수 있는 다양한 입체 이성질체 배위 중 임의의 것을 지칭하며, 기하 이성질체를 포함한다. 치환기는 탄소 원자의 키랄 중심에 부착될 수 있는 것으로 이해된다. 용어 "키랄"은 그의 거울상 파트너에 비-중첩가능한 특성을 갖는 분자를 지칭하는 한편, 용어 "비키랄"은 그의 거울상 파트너에 중첩가능한 분자를 지칭한다. 따라서, 본 발명은 화합물의 거울상이성질체, 부분입체이성질체 또는 라세미체를 포함한다. "거울상이성질체"는 서로 비-중첩가능한 거울상인 한 쌍의 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상이성질체의 1:1 혼합물은 "라세미" 혼합물이다. 이 용어는 적절한 경우에 라세미 혼합물을 지정하는데 사용된다. "부분입체이성질체"는 적어도 2개의 비대칭 원자를 갖지만 서로 거울상은 아닌 입체이성질체이다. 절대 입체화학은 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) R-S 시스템에 따라 특정된다. 화합물이 순수한 거울상이성질체인 경우에, 각 키랄 탄소에서의 입체화학은 R 또는 S로 특정될 수 있다. 절대 배위가 밝혀지지 않은 분해된 화합물은 그들이 나트륨 D 선의 파장에서 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-) (우선성 또는 좌선성)로 지정될 수 있다. 본원에 기재된 특정 화합물은 1개 이상의 비대칭 중심 또는 축을 함유하고, 따라서 거울상이성질체, 부분입체이성질체, 및 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로서 정의될 수 있는 다른 입체이성질체 형태를 생성할 수 있다.
출발 물질 및 절차의 선택에 따라, 화합물은 비대칭 탄소 원자의 개수에 따라, 가능한 이성질체 중 하나의 형태로 또는 그의 혼합물로서, 예를 들어 순수한 광학 이성질체로서 또는 이성질체 혼합물, 예컨대 라세미체 및 부분입체이성질체 혼합물로서 존재할 수 있다. 본 발명은 라세미 혼합물, 부분입체이성질체 혼합물 및 광학적으로 순수한 형태를 비롯한 모든 이러한 가능한 이성질체를 포함하는 것으로 의도된다. 광학 활성 (R)- 및 (S)- 이성질체는 키랄 합성단위체 또는 키랄 시약을 사용하여 제조할 수 있거나, 또는 통상의 기술을 사용하여 분해할 수 있다. 화합물이 이중 결합을 함유하는 경우에, 치환기는 E 또는 Z 배위일 수 있다. 화합물이 이치환된 시클로알킬을 함유하는 경우에, 시클로알킬 치환기는 시스- 또는 트랜스-배위를 가질 수 있다. 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "염" 또는 "염들"은 본 발명의 화합물의 산 부가염 또는 염기 부가염을 지칭한다. "염"은 특히 "제약상 허용되는 염"을 포함한다. 용어 "제약상 허용되는 염"은, 전형적으로 생물학적으로나 또는 달리 바람직하지 않은 것이 아닌, 본 발명의 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 염을 지칭한다. 수많은 경우에, 본 발명의 화합물은 아미노 및/또는 카르복실 기 또는 그와 유사한 기의 존재에 의해 산 및/또는 염기 염을 형성할 수 있다.
제약상 허용되는 산 부가염은 무기 산 및 유기 산을 사용하여 형성할 수 있고, 예를 들어 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드/히드로브로마이드, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 캄포르술포네이트, 클로라이드/히드로클로라이드, 클로르테오필로네이트, 시트레이트, 에탄디술포네이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히푸레이트, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우릴술페이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프토에이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 옥타데카노에이트, 올레에이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 술포살리실레이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염이다.
염이 유도될 수 있는 무기 산은, 예를 들어 염산, 브로민화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 산은, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 톨루엔술폰산, 술포살리실산 등을 포함한다. 제약상 허용되는 염기 부가염은 무기 및 유기 염기를 사용하여 형성할 수 있다.
염이 유도될 수 있는 무기 염기는, 예를 들어 암모늄 염 및 주기율표의 I 내지 XII족으로부터의 금속을 포함한다. 특정 실시양태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연 및 구리로부터 유도되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염을 포함한다.
염이 유도될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1급, 2급, 3급 아민, 자연 발생의 치환된 아민을 비롯한 치환된 아민, 시클릭 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 특정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.
본 발명의 제약상 허용되는 염은 통상의 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 모이어티로부터 합성할 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 형태를 화학량론적 양의 적절한 염기 (예컨대, Na, Ca, Mg 또는 K 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등)와 반응시키거나, 또는 이들 화합물의 유리 염기 형태를 화학량론적 양의 적절한 산과 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 이러한 반응은 전형적으로 물 또는 유기 용매, 또는 둘의 혼합물 중에서 수행한다. 일반적으로, 실행가능한 경우에 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올 또는 아세토니트릴과 같은 비-수성 매질의 사용이 바람직하다. 추가의 적합한 염의 목록은, 예를 들어 문헌 ["Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); 및 "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]에서 찾아볼 수 있다.
본원에 주어진 임의의 화학식은 또한 비표지된 형태 뿐만 아니라 동위원소 표지된 형태의 화합물을 나타내는 것으로 의도된다. 동위원소 표지된 화합물은 1개 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된 것을 제외하고는 본원에 주어진 화학식에 의해 도시된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 플루오린 및 염소의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 15N, 18F, 31P, 32P, 35S, 36Cl, 125I를 포함한다. 본 발명은 본원에 정의된 바와 같은 다양한 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어 그 내부에 방사성 동위원소, 예컨대 3H 및 14C가 존재하는 화합물, 또는 그 내부에 비-방사성 동위원소, 예컨대 2H 및 13C가 존재하는 화합물을 포함한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 대사 연구 (14C 사용), 반응 동역학적 연구 (예를 들어, 2H 또는 3H 사용), 검출 또는 영상화 기술, 예컨대 약물 또는 기질 조직 분포 검정을 비롯한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 또는 환자의 방사성 치료에 유용하다. 특히, 18F 또는 표지된 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다. 동위원소-표지된 화학식 I의 화합물은 기존에 사용된 비-표지된 시약 대신에 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 당업자에게 공지된 통상의 기술에 의해 또는 첨부하는 실시예 및 제조예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 제조할 수 있다.
추가로, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소 (즉, 2H 또는 D)로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건 또는 치료 지수의 개선으로 인한 특정의 치료 이점을 제공할 수 있다. 이러한 문맥에서 중수소는 화학식 I의 화합물의 치환기로서 간주되는 것으로 이해된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소의 농도는 동위원소 농축 계수에 의해 정의될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "동위원소 농축 계수"는 특정된 동위원소의 동위원소 존재비와 천연 존재비 사이의 비율을 의미한다. 본 발명의 화합물 내의 치환기가 표시된 중수소인 경우에, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대해 적어도 3500 (각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5% 중수소 혼입), 적어도 4000 (60% 중수소 혼입), 적어도 4500 (67.5% 중수소 혼입), 적어도 5000 (75% 중수소 혼입), 적어도 5500 (82.5% 중수소 혼입), 적어도 6000 (90% 중수소 혼입), 적어도 6333.3 (95% 중수소 혼입), 적어도 6466.7 (97% 중수소 혼입), 적어도 6600 (99% 중수소 혼입) 또는 적어도 6633.3 (99.5% 중수소 혼입)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.
본 발명에 따른 제약상 허용되는 용매화물은 결정화 용매가 동위원소 치환될 수 있는 것, 예를 들어 D2O, d6-아세톤, DMSO-d6인 것을 포함한다.
수소 결합에 대한 공여자 및/또는 수용자로서 작용할 수 있는 기를 함유하는 본 발명의 화합물, 즉 화학식 I의 화합물은 적합한 공-결정 형성제와 공-결정을 형성할 수 있다. 이들 공-결정은 공지된 공-결정 형성 절차에 의해 화학식 I의 화합물로부터 제조할 수 있다. 이러한 절차는 분쇄, 가열, 공-승화, 공-용융, 또는 결정화 조건 하에 화학식 I의 화합물을 공-결정 형성제와 용액 중에서 접촉시키고, 이에 의해 형성된 공-결정을 단리시키는 것을 포함한다. 적합한 공-결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것을 포함한다. 따라서, 본 발명은 화학식 I의 화합물을 포함하는 공-결정을 추가로 제공한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약상 허용되는 담체"는 당업자에게 공지된 바와 같은 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 계면활성제, 항산화제, 보존제 (예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장화제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 부형제, 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등 및 그의 조합물을 포함한다 (예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329] 참조). 임의의 통상의 담체가 활성 성분과 상용성이 아닌 경우를 제외하고는, 치료 또는 제약 조성물에서의 그의 사용이 고려된다.
본 발명의 화합물에 대한 용어 "치료 유효량"은 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 억제, 또는 증상의 개선, 상태의 완화, 질환 진행의 둔화 또는 지연, 또는 질환의 예방 등을 도출할 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 하나의 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 대상체에 투여되는 경우에, (1) (i) PI3K에 의해 매개되거나, 또는 (ii) PI3K 활성과 연관되거나, 또는 (iii) PI3K의 활성 (정상적 또는 비정상적)을 특징으로 하는 상태, 또는 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 완화, 억제, 예방 및/또는 개선시키는데 유효하거나 또는 (2) PI3K의 활성을 감소 또는 억제하는데 유효하거나 또는 (3) PI3K의 발현을 감소 또는 억제하는데 유효한 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 또 다른 비제한적 실시양태에서, 용어 "치료 유효량"은 세포, 또는 조직, 또는 비-세포 생물학적 물질, 또는 배지에 투여되는 경우에, PI3K의 활성을 적어도 부분적으로 감소 또는 억제하는데 유효하거나; 또는 PI3K의 발현을 적어도 부분적으로 감소 또는 억제하는데 유효한 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. PI3K에 대한 상기 실시양태에서 예시된 바와 같은 용어 "치료 유효량"의 의미는 또한 임의의 다른 관련 단백질/펩티드/효소에 동일한 의미로 적용된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로 동물은 포유동물이다. 대상체는 또한, 예를 들어 영장류 (예를 들어, 인간, 남성 또는 여성), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 래트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "억제하다", "억제" 또는 "억제하는"은 주어진 상태, 증상 또는 장애 또는 질환의 감소 또는 저해, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저 활성에서의 유의한 감소를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 임의의 질환 또는 장애에 대한 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는, 한 실시양태에서 질환 또는 장애의 개선 (즉, 질환 또는 그의 임상적 증상 중 적어도 하나의 발생의 둔화 또는 정지 또는 감소)을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 환자에 의해 식별가능하지 않을 수 있는 것들을 비롯한 적어도 하나의 물리적 파라미터의 완화 또는 개선을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 물리적 (예를 들어, 식별가능한 증상의 안정화), 생리학적 (예를 들어, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다의 조절을 지칭한다. 또 다른 실시양태에서, "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애의 발병 또는 발달 또는 진행의 예방 또는 지연을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이, 대상체가 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질에 있어 유익할 경우에, 이러한 대상체는 이러한 치료를 "필요로 한다".
본원에 사용된 바와 같이, 본 발명의 문맥에서 (특히, 특허청구범위의 문맥에서) 사용된 단수 용어 및 유사한 용어들은, 본원에 달리 나타내거나 또는 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포함하는 것으로 해석될 것이다.
본원에 기재된 모든 방법은, 본원에 달리 나타내거나 또는 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 임의의 적합한 순서로 수행할 수 있다. 본원에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어 (예를 들어, "예컨대")의 사용은 본 발명을 단지 보다 잘 설명하기 위한 의도이고, 달리 청구된 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.
본 발명의 화합물(들)의 임의의 비대칭 원자 (예를 들어, 탄소 등)는 라세미로 또는 거울상이성질체적으로 풍부하게, 예를 들어 (R)-, (S)- 또는 (R,S)- 배위로 존재할 수 있다. 특정 실시양태에서, 각각의 비대칭 원자는 (R)- 또는 (S)- 배위에서 적어도 50%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 60%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 70%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 80%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 90%의 거울상이성질체 과잉률, 적어도 95%의 거울상이성질체 과잉률 또는 적어도 99%의 거울상이성질체 과잉률을 갖는다. 불포화 이중 결합을 갖는 원자에서의 치환기는, 가능한 경우에 시스- (Z)- 또는 트랜스- (E)- 형태로 존재할 수 있다.
따라서, 본원에 사용된 바와 같은 본 발명의 화합물은 가능한 이성질체, 회전이성질체, 회전장애이성질체, 호변이성질체 또는 그의 혼합물 중 하나의 형태로, 예를 들어 실질적으로 순수한 기하 (시스 또는 트랜스) 이성질체, 부분입체이성질체, 광학 이성질체 (대장체), 라세미체 또는 그의 혼합물로서 존재할 수 있다.
이성질체의 임의의 생성된 혼합물은 구성성분의 물리화학적 차이에 기초하여, 예를 들어 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화에 의해 순수하거나 또는 실질적으로 순수한 기하 또는 광학 이성질체, 부분입체이성질체, 라세미체로 분리될 수 있다.
최종 생성물 또는 중간체의 임의의 생성된 라세미체는 공지된 방법에 의해, 예를 들어 광학 활성 산 또는 염기를 사용하여 수득한 그의 부분입체이성질체 염을 분리하고, 광학 활성 산성 또는 염기성 화합물을 유리시킴으로써 광학 대장체로 분해될 수 있다. 특히, 이에 따라 염기성 모이어티를 사용하여, 본 발명의 화합물을, 예를 들어 광학 활성 산, 예를 들어 타르타르산, 디벤조일 타르타르산, 디아세틸 타르타르산, 디-O,O'-p-톨루오일 타르타르산, 만델산, 말산 또는 캄포르-10-술폰산을 사용하여 형성된 염의 분별 결정화에 의해 그의 광학 대장체로 분해할 수 있다. 라세미 생성물은 또한 키랄 흡착제를 사용하여 키랄 크로마토그래피, 예를 들어 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 분해될 수 있다.
추가로, 본 발명의 화합물 (그의 염 포함)은 또한 그의 수화물 형태로 수득될 수 있거나, 또는 그의 결정화에 사용된 다른 용매를 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물은 본질적으로 또는 설계에 의해 제약상 허용되는 용매 (물 포함)와 용매화물을 형성할 수 있으며; 따라서 본 발명은 용매화 및 비용매화 형태 둘 다를 포괄하는 것으로 의도된다. 용어 "용매화물"은 본 발명의 화합물 (그의 제약상 허용되는 염 포함)과 하나 이상의 용매 분자의 분자 복합체를 지칭한다. 이러한 용매 분자는 제약 업계에서 통상적으로 사용되는 것이며, 이는 수용자에게 무해한 것으로 공지되어 있는, 예를 들어 물, 에탄올 등이다. 용어 "수화물"은 용매 분자가 물인 복합체를 지칭한다.
본 발명의 화합물 (그의 염, 수화물 및 용매화물 포함)은 본질적으로 또는 설계에 의해 다형체를 형성할 수 있다.
전형적으로, 화학식 I의 화합물은 하기 제공된 방법에 따라 제조할 수 있다.
반응식 A
Figure 112014067144685-pct00023
한 실시양태에서, 본 발명은 단계 a, b, c, d를 포함하는 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 A)에 관한 것이다.
화학식 I의 화합물은 PG1이 적합한 보호기, 예컨대 Boc 기를 나타내고, 다른 치환기가 상기 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 F의 화합물로부터 PG1을 탈보호하는 단계 c에 이어서, R1-Act1과의 커플링 반응 단계 d를 통해 수득한다.
<화학식 F>
Figure 112014067144685-pct00024
단계 c1: R1이 -C(O)-R4 또는 -S(O)2-R4이고, 여기서 R4가 상기 정의된 바와 같고, Act1이 활성화 기 또는 히드록시 기를 나타내는 경우: 커플링 반응은 아미드, 우레아, 카르밤산 에스테르 또는 술폰아미드 형성이다. 아미드, 우레아 카르밤산 에스테르 또는 술폰아미드를 제조하는 수많은 공지된 방식이 존재한다. 커플링 반응 단계는 활성화 기를 나타내는 Act1과 바람직하게는 1 단계 절차로, 또는 히드록시 기를 나타내는 Act1과 1 또는 2 단계 절차를 포함하여 수행할 수 있다. 아미드 결합 형성의 예에 대해서는, 문헌 [Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852] 및 그 안에 인용된 참고문헌을 참조한다. 우레아 합성의 예에 대해서는, 문헌 [Sartori, G.; Maggi, R. Acyclic and cyclic ureas, Science of Synthesis (2005), 18, 665-758; Gallou, Isabelle. Unsymmetrical ureas Synthetic methodologies and application in drug design, Organic Preparations and Procedures International (2007), 39(4), 355-383]을 참조한다. 카르바메이트 합성의 예에 대해서는, 문헌 [Adams, Philip; Baron, Frank A. Esters of carbamic acid, Chemical Reviews (1965), 65(5), 567-602]을 참조한다. 이에 따라 본원에 제공된 예는 배타적인 것으로 의도되지는 않으며, 단지 예시적이다.
단계 c2: R1이 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐 또는 1,3,5-트리아지닐로부터 선택되고, Act1이 할로겐, 특히 아이오도 또는 브로모를 나타내는 경우: 커플링 반응은 아민 염기, 예컨대 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 수행한다. 반응은 마이크로웨이브 가열 하에 유기 용매의 존재 하에 또는 용매 없이 수행한다. 대안적으로, 반응은 통상의 부흐발트-하르트비히(Buchwald-Hartwig) 조건, 예컨대 상기 기재된 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행한다.
화학식 F의 화합물은 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 적합한 Pd 촉매/리간드 조합, 예컨대 Pd2(dba)3/2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 또는 Pd2(dba)3/2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-비페닐, Pd2(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)-BINAP 또는 비스(트리-t-부틸포스핀)팔라듐 및 적합한 염기, 예컨대 NaOtBu, Cs2CO3 또는 K3PO4, 및 유기 용매, 예컨대 톨루엔, 디옥산 또는 THF를 사용하여, PG1이 적합한 보호기, 예컨대 Boc를 나타내고, 다른 치환기가 상기 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 C의 화합물을 X'가 할로겐, 예컨대 아이오도 또는 브로모를 나타내고, 다른 치환기가 상기에 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 D의 화합물과 커플링시키는 단계 b를 통해 수득한다.
<화학식 C>
Figure 112014067144685-pct00025
<화학식 D>
Figure 112014067144685-pct00026
반응물은 대략 60-140℃, 예를 들어 100℃ 내지 110℃의 온도에서 교반하고, 임의로 마이크로웨이브 반응기 내에서 수행한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행한다.
화학식 C의 화합물은 치환기가 상기 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 A의 화합물을 PG1이 적합한 보호기, 예컨대 Boc 기를 나타내고, Act2가 활성화 기 또는 H이고, 다른 치환기가 상기 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 B의 화합물과 커플링시키는 단계 a를 통해 수득한다.
<화학식 A>
Figure 112014067144685-pct00027
<화학식 B>
Figure 112014067144685-pct00028
단계 a1: Y가 O이고, Act2가 활성화 기, 예컨대 메실레이트를 나타내는 경우: 반응은 적합한 염기, 예컨대 수산화나트륨 (NaH), K2CO3 또는 칼륨 t-부톡시드 (tBuOK)의 존재 하에 적합한 극성 유기 용매, 예컨대 DMF, THF, 2-메틸테트라히드로푸란 또는 디옥산 중에서 적합한 온도, 예컨대 실온 - 100℃에서 실행한다.
단계 a2: Y가 O이고, Act2가 H를 나타내는 경우: 반응은 통상의 미츠노부(Mitsunobu) 조건, 예를 들어 Ph3P 및 DEAD를 사용하여 유기 용매, 예컨대 THF 중에서 불활성 기체 조건 하에서 승온, 예컨대 70℃에서 실행한다.
단계 a3: Y가 NH이고, Act2가 H를 나타내는 경우: 염기 촉진된 포스포늄 커플링 반응을 사용함으로써, 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴 중 화학식 A의 화합물을 염기, 예컨대 1,8-디아자-7-비시클로[5.4.0]운데센 (DBU)의 존재 하에 포스포늄 염, 예컨대 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP)와 반응시키고, 이어서 화학식 B의 화합물을 첨가한다. 반응 혼합물을 20℃ 내지 100℃의 온도에서 교반한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 PG1이 R1을 나타내는 것인 화학식 B의 화합물을 사용하는, 방법 A에 대해 상기 정의된 바와 같은 단계 a 및 b를 포함하는 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 A-a)에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 단계 e, b, f, a, c 및 d를 포함하는 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 B)에 관한 것이다.
화학식 I의 화합물은 화학식 F의 화합물로부터 방법 A에 대해 상기 기재된 바와 같은 단계 c 및 d를 통해 수득한다.
화학식 F의 화합물은 PG2가 적합한 보호기, 예컨대 실릴 보호기이고, 다른 치환기가 상기 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 E의 화합물로부터 PG2를 탈보호하는 단계 f에 이어서, 화학식 B의 화합물과의 방법 A에 대해 상기 기재된 바와 같은 커플링 반응 단계 a를 통해 수득한다.
<화학식 E>
Figure 112014067144685-pct00029
화학식 E의 화합물은 화학식 A의 화합물을 적합한 보호기 PG2로 보호하는 단계 e에 이어서, PG2가 적합한 보호기, 예컨대 실릴 보호기인 화학식 E의 화합물로부터, 화학식 D의 화합물과의 방법 A에 대해 상기 기재된 바와 같은 커플링 반응 단계 b를 통해 수득한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 PG1이 R1을 나타내는 것인 화학식 B의 화합물을 사용하는, 방법 B에 대해 상기 기재된 바와 같은 단계 e, b 및 f를 포함하는 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 B-a)에 관한 것이다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 X"가 할로겐을 나타내고, 다른 치환기가 상기 정의된 바와 같은 것인 하기 화학식 A'의 화합물을 사용하는, 화학식 B의 화합물을 사용하는 방법 B에 대해 상기 정의된 바와 같은 단계 b, c 및 d 및 변형된 단계 a4를 포함하는 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 C)에 관한 것이다.
<화학식 A'>
Figure 112014067144685-pct00030
단계 a4: Y가 NH이고, Act2가 H인 경우: 반응은 적합한 염기, 예컨대 예를 들어 탄산칼륨 또는 적합한 아민 염기, 예컨대 트리에틸아민 또는 N,N-디이소프로필에틸아민의 존재 하에 승온, 예컨대 100℃ 내지 140℃에서 실행한다. 대안적으로, 반응은 통상의 부흐발트-하르트비히 조건, 예컨대 상기 기재된 조건 하에 수행한다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 PG1이 R1을 나타내는 화학식 B의 화합물을 사용하는, 방법 B1에 대해 상기 정의된 바와 같은 단계 b, a4, c 및 d를 포함하는 화학식 I의 화합물을 제조하는 방법 (방법 C-a)에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "활성화 기"는 아민 모이어티와 커플링되어 각각 아미드, 우레아 또는 카르밤산 에스테르 모이어티를 형성하기 위한 카르복실산, 탄산 또는 카르밤산 유도체를 활성화할 수 있는 기 (Act1), 또는 또 다른 히드록시 모이어티와 커플링되어 에테르를 형성하기 위한 히드록시 기를 활성화할 수 있는 기 (Act2)에 관한 것이다.
아민 모이어티와 커플링되어 아미드, 우레아 또는 카르밤산 에스테르 모이어티를 형성하기 위한 카르복실산, 탄산 또는 카르밤산 유도체를 활성화할 수 있는 기는 클로라이드, 또는 활성화제와 산 유도체의 반응으로부터 생성된 기이다. 적합한 활성화제는 당업자에게 공지되어 있고, 이러한 활성화 시약의 예는 카르보디이미드 유도체, 펜타플루오로페닐 에스테르 유도체, 트리아졸 유도체, 이미다졸 유도체이다.
또 다른 히드록시 모이어티와 커플링되어 에테르를 형성하기 위한 히드록시 기를 활성화할 수 있는 기는 당업자에게 공지되어 있고, 이러한 활성화 기의 예는 메실레이트 및 토실레이트이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "보호기"는, 출발 물질에 존재하고 반응에 참여하는 것으로 의도되지 않는 관능기를 보호하는 기에 관한 것이다. 필요에 따라 수행되는 추가의 공정 단계에서, 반응에 참여해서는 안 되는 출발 화합물의 관능기는 비보호된 형태로 존재할 수 있거나, 또는 예를 들어 1개 이상의 보호기에 의해 보호될 수 있다. 이어서, 상기 보호기는 공지된 방법 중 하나에 따라 전부 또는 부분적으로 제거된다. 보호기, 및 그의 도입 및 제거 방식은, 예를 들어 문헌 ["Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York 1973, 및 "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/1, Georg--Thieme--Verlag, Stuttgart 1974 및 Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York 1981]에 기재되어 있다. 보호기의 특징은, 이들이 예를 들어 가용매분해, 환원, 광분해에 의해 또는 대안적으로는 생리학적 조건 하에 용이하게, 즉 바람직하지 않은 2차 반응의 발생 없이 제거될 수 있다는 것이다.
본 발명은 추가로 본 발명 방법의 임의의 변형을 포함하고, 여기서는 그의 임의의 단계에서 수득가능한 중간체 생성물이 출발 물질로서 사용되고 나머지 단계가 수행되거나, 또는 출발 물질이 반응 조건 하에 계내 형성되거나, 또는 반응 성분이 그의 염 또는 광학적으로 순수한 물질 형태로 사용된다.
본 발명의 화합물 및 중간체는 또한 당업자에게 일반적으로 공지된 방법에 따라 서로 전환될 수 있다.
중간체 및 최종 생성물은 표준 방법에 따라, 예를 들어 크로마토그래피 방법, 분배 방법, (재)결정화 등을 사용하여 후처리 및/또는 정제될 수 있다.
하기는 상기 및 하기 본원에 언급된 모든 공정에 일반적으로 적용된다.
상기 언급된 모든 공정 단계는 구체적으로 언급된 것을 비롯한 당업자에게 공지된 반응 조건 하에, 용매 또는 희석제 (예를 들어, 사용되는 시약에 대해 불활성이고 이를 용해시키는 용매 또는 희석제 포함)의 부재 하에 또는 통상적으로는 존재 하에 촉매, 축합제 또는 중화제, 예를 들어 이온 교환체, 예컨대 반응 및/또는 반응물의 성질에 따른 양이온 교환체 (예를 들어, H+ 형태)의 부재 또는 존재 하에 감소된 온도, 통상의 온도 또는 승온에서, 예를 들어 약 -100℃ 내지 약 190℃ (예를 들어, 대략 -80℃ 내지 대략 150℃, 예를 들어 -80 내지 -60℃, 실온, -20 내지 40℃, 또는 환류 온도 포함)의 온도 범위에서 대기압 하에 또는 밀폐된 용기 내에서, 적절한 경우에 가압 하에 및/또는 불활성 분위기 하에, 예를 들어 아르곤 또는 질소 분위기 하에 수행할 수 있다.
반응의 모든 단계에서, 형성된 이성질체의 혼합물은, 예를 들어 상기 본원에 기재된 방법과 유사하게 개별 이성질체, 예를 들어 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체로, 또는 이성질체의 임의의 바람직한 혼합물, 예를 들어 라세미체 또는 부분입체이성질체의 혼합물로 분리될 수 있다.
선택될 수 있는 임의의 특정한 반응에 적합한 용매로부터의 이들 용매는 구체적으로 언급된 것, 또는 공정의 설명에서 달리 나타내지 않는 한, 예를 들어 물, 에스테르, 예컨대 저급 알킬-저급 알카노에이트, 예를 들어 에틸 아세테이트, 에테르, 예컨대 지방족 에테르, 예를 들어 디에틸 에테르, 또는 시클릭 에테르, 예를 들어 테트라히드로푸란 또는 디옥산, 액체 방향족 탄화수소, 예컨대 벤젠 또는 톨루엔, 알콜, 예컨대 메탄올, 에탄올 또는 1- 또는 2-프로판올, 니트릴, 예컨대 아세토니트릴, 할로겐화 탄화수소, 예컨대 메틸렌 클로라이드 또는 클로로포름, 산 아미드, 예컨대 디메틸포름아미드 또는 디메틸 아세트아미드, 염기, 예컨대 헤테로시클릭 질소 염기, 예를 들어 피리딘 또는 N-메틸피롤리딘-2-온, 카르복실산 무수물, 예컨대 저급 알칸산 무수물, 예를 들어 아세트산 무수물, 시클릭, 선형 또는 분지형 탄화수소, 예컨대 시클로헥산, 헥산 또는 이소펜탄, 메틸시클로헥산 또는 이들 용매의 혼합물, 예를 들어 수용액을 포함한다. 이러한 용매 혼합물은 또한, 예를 들어 크로마토그래피 또는 분배에 의한 후처리에도 사용될 수 있다.
상기 화합물 (그의 염 포함)은 또한 수화물 형태로 수득될 수 있거나, 또는 그의 결정은 예를 들어 결정화에 사용된 용매를 포함할 수 있다. 다양한 결정질 형태가 존재할 수 있다.
본 발명은 또한, 임의의 공정 단계에서 중간체로서 수득가능한 화합물이 출발 물질로서 사용되고 나머지 공정 단계가 수행되거나, 또는 출발 물질이 반응 조건 하에 형성되거나 또는 유도체의 형태, 예를 들어 보호된 형태 또는 염의 형태로 사용되거나, 또는 본 발명에 따른 공정에 의해 수득가능한 화합물이 공정 조건 하에 생성되고 계내에서 추가로 처리되는 공정의 형태에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 제약 조성물은 특정 투여 경로, 예컨대 경구 투여, 비경구 투여 및 직장 투여 등을 위해 제제화될 수 있다. 또한, 본 발명의 제약 조성물은 고체 형태 (제한 없이 캡슐, 정제, 환제, 과립, 산제 또는 좌제 포함) 또는 액체 형태 (제한 없이 용액, 현탁액 또는 에멀젼 포함)로 제조될 수 있다. 제약 조성물은 통상의 제약 작업, 예컨대 멸균에 적용될 수 있고/거나, 통상의 불활성 희석제, 윤활제 또는 완충제, 뿐만 아니라 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다.
전형적으로, 제약 조성물은 활성 성분을
a) 희석제, 예를 들어 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신;
b) 윤활제, 예를 들어 실리카, 활석, 스테아르산, 그의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 정제의 경우에는 또한
c) 결합제, 예를 들어 규산알루미늄마그네슘, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 소듐 카르복시메틸셀룰로스 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우에
d) 붕해제, 예를 들어 전분, 한천, 알긴산 또는 그의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및/또는
e) 흡수제, 착색제, 향미제 및 감미제
와 함께 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다.
정제는 당업계에 공지된 방법에 따라 필름 코팅 또는 장용 코팅될 수 있다.
경구 투여에 적합한 조성물은 유효량의 본 발명의 화합물을 정제, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭시르의 형태로 포함한다. 경구 사용을 위한 조성물은 제약 조성물의 제조에 대해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조되고, 이러한 조성물은 제약상 우아하고 맛우수한 제제를 제공하기 위해 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 활성 성분을, 정제의 제조에 적합한 비독성의 제약상 허용되는 부형제와 혼합하여 함유할 수 있다. 이러한 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예를 들어 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예를 들어 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 활석이다. 정제는 코팅되지 않거나 또는 공지된 기술에 의해 코팅되어 위장관에서의 붕해 및 흡수를 지연시킴으로써 보다 장기간에 걸쳐 지속되는 작용을 제공한다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 사용될 수 있다. 경구 사용을 위한 제제는, 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어 땅콩 오일, 액상 파라핀 또는 올리브 오일과 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 존재할 수 있다.
특정 주사가능한 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액이고, 좌제는 지방 에멀젼 또는 현탁액으로부터 유리하게 제조된다. 상기 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 아주반트, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용해 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 또한, 이들은 다른 치료상 유익한 물질을 또한 함유할 수 있다. 상기 조성물은 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 각각 제조되고, 약 0.1-75%의 활성 성분을 함유하거나, 또는 약 1-50%의 활성 성분을 함유한다.
경피 적용에 적합한 조성물은 유효량의 본 발명의 화합물을 적합한 담체와 함께 포함한다. 경피 전달에 적합한 담체는 흡수가능한 약리학상 허용되는 용매를 포함하여 숙주의 피부를 통한 통과를 보조한다. 예를 들어, 경피 장치는 백킹 부재, 화합물을 임의로 담체와 함께 함유하는 저장소, 임의로 장기간에 걸쳐 제어된 예정 속도로 숙주의 피부에 화합물을 전달하기 위한 속도 제어 장벽, 및 장치가 피부에 부착되도록 하는 수단을 포함하는 붕대 형태이다.
예를 들어, 피부 및 눈에 대한 국소 적용에 적합한 조성물은 수용액, 현탁액, 연고, 크림, 겔, 또는 예를 들어 에어로졸 등에 의한 전달을 위한 분무가능한 제제를 포함한다. 이러한 국소 전달 시스템은, 예를 들어 피부암의 치료를 위해, 예를 들어 예방적 사용을 위해 선 크림, 로션, 스프레이 등으로 피부 적용하기에 특히 적절할 것이다. 이들은 따라서 당업계에 익히 공지된 국소 (화장품 포함) 제제에 사용하기에 특히 적합하다. 이들은 가용화제, 안정화제, 장성 증진제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 국소 적용은 또한 흡입 또는 비강내 적용에 관한 것일 수 있다. 이는 편리하게는 적합한 추진제를 사용하거나 또는 사용하지 않고, 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태로 (단독으로, 혼합물로서, 예를 들어 락토스와의 건조 블렌드로서, 또는 예를 들어 인지질과의 혼합 성분 입자로서) 또는 가압 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 제제 형태로 전달될 수 있다.
본 발명은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물을 포함하는 무수 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공하는데, 이는 물이 특정 화합물의 분해를 용이하게 할 수 있기 때문이다.
본 발명의 무수 제약 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 저수분 함유 성분, 및 저수분 또는 저습 조건을 사용하여 제조될 수 있다. 무수 제약 조성물은 그의 무수 특성이 유지되도록 제조 및 저장될 수 있다. 따라서, 무수 조성물은 그것이 적합한 규정 키트에 포함될 수 있도록, 물에 대한 노출을 방지하는 것으로 공지된 물질을 사용하여 포장된다. 적합한 포장의 예는 기밀 호일, 플라스틱, 단위 투여 용기 (예를 들어, 바이알), 블리스터 팩 및 스트립 팩을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명은 활성 성분으로서의 본 발명의 화합물이 분해되는 속도를 감소시키는 1종 이상의 작용제를 포함하는 제약 조성물 및 투여 형태를 추가로 제공한다. 본원에 "안정화제"로서 지칭된 이러한 작용제는 항산화제, 예컨대 아스코르브산, pH 완충제 또는 염 완충제 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
유리 형태 또는 염 형태의 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 다음 섹션에 제공된 바와 같은 시험관내 및 생체내 시험에 제시된 바와 같이 유익한 약리학적 특성, 예를 들어 PI3K 조절 특성을 나타내고, 따라서 요법을 위한 것 또는 연구 화학물질로서, 예를 들어 도구 화합물로서 사용하기 위한 것으로 제시된다.
본 발명의 화합물은 B 세포의 기능, 예컨대 항체 생산, 항원 제시, 시토카인 생산 또는 림프성 기관발생 중 하나 이상이 비정상적이거나 바람직하지 않은 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염을 비롯한 상태, 질환 또는 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 심상성 천포창 및 관련 질환, 특발성 혈소판감소증 자반증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 만성 자가면역 두드러기, 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, AMR (항체-매개 이식 거부), B 세포-매개 초급성, 급성 및 만성 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 예컨대 비제한적으로 다발성 골수종; 급성 골수 백혈병; 만성 골수 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병; 비-호지킨 림프종; 림프종; 진성 다혈구혈증; 본태성 혈소판혈증; 골수 화생을 동반한 골수섬유증; 및 발덴스트룀병의 치료에 유용할 수 있다.
본 발명은 호중구의 기능, 예컨대 슈퍼옥시드 방출, 자극된 세포외유출 또는 화학주성 이동 중 하나 이상이 비정상적이거나 또는 바람직하지 않은 상태, 질환 또는 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 패혈증, 폐 또는 호흡기 장애, 예컨대 천식, 염증성 피부병, 예컨대 건선, 뿐만 아니라 면역병리상태 등과 연관된 질환 또는 감염을 치료하는 방법을 포함한다.
본 발명은 호염기구 및 비만 세포의 기능, 예컨대 화학주성 이동 또는 알레르겐-IgE-매개 탈과립화 중 하나 이상이 비정상적이거나 또는 바람직하지 않은 상태, 질환 또는 장애, 예컨대 알레르기성 질환 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 뿐만 아니라 다른 장애, 예컨대 COPD, 천식 또는 기종을 치료하는 방법을 포함한다.
본 발명은 T 세포의 기능, 예컨대 시토카인 생산 또는 세포-매개 세포독성 중 하나 이상이 비정상적이거나 또는 바람직하지 않은 상태, 질환 또는 장애, 예컨대 류마티스 관절염, 다발성 경화증, 세포 조직 또는 기관 이식편의 급성 또는 만성 거부, 또는 조혈 기원의 암, 뿐만 아니라 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염을 치료하는 방법을 포함한다.
또한, 본 발명은 신경변성 질환, 심혈관 질환 및 혈소판 응집을 치료하는 방법을 포함한다.
또한, 본 발명은 피부 질환, 예컨대 만발성 피부 포르피린증, 다형 광 발진, 피부근염, 일광 두드러기, 구강 평편 태선, 지방층염, 경피증, 두드러기성 혈관염을 치료하는 방법을 포함한다.
또한, 본 발명은 만성 염증성 질환, 예컨대 사르코이드증, 환상 육아종을 치료하는 방법을 포함한다.
다른 실시양태에서, 상태 또는 장애 (예를 들어, PI3K-매개)는 진성 다혈구혈증, 본태성 혈소판혈증, 골수 화생을 동반한 골수섬유증, 천식, COPD, ARDS, 뢰플러 증후군, 호산구성 폐렴, 기생충 (특히, 후생동물) 침입 (열대성 호산구증가증 포함), 기관지폐 아스페르길루스증, 결절성 다발동맥염 (처그-스트라우스 증후군 포함), 호산구성 육아종, 약물-반응에 의해 발생하여 기도에 영향을 미치는 호산구-관련 장애, 건선, 접촉성 피부염, 아토피성 피부염, 원형 탈모증, 다형성 홍반, 포진성 피부염, 경피증, 백반증, 과민성 혈관염, 두드러기, 수포성 유천포창, 홍반성 루푸스, 천포창, 후천성 수포성 표피박리증, 자가면역 혈액 장애 (예를 들어, 용혈성 빈혈, 재생불량성 빈혈, 순수 적혈구 빈혈 및 특발성 혈소판감소증), 전신 홍반성 루푸스, 다발연골염, 경피증, 베게너 육아종증, 피부근염, 만성 활성 간염, 중증 근무력증, 스티븐-존슨 증후군, 특발성 스프루, 자가면역 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염 및 크론병), 내분비 안병증, 그레이브스병, 사르코이드증, 폐포염, 만성 과민성 폐렴, 다발성 경화증, 원발성 담즙성 간경변증, 포도막염 (전방 및 후방), 간질성 폐 섬유증, 건선성 관절염, 사구체신염, 심혈관 질환, 아테롬성동맥경화증, 고혈압, 심부 정맥 혈전증, 졸중, 심근경색, 불안정형 협심증, 혈전색전증, 폐 색전증, 혈전용해 질환, 급성 동맥 허혈, 말초 혈전성 폐쇄, 및 관상 동맥 질환, 재관류 손상, 망막병증, 예컨대 당뇨병성 망막병증 또는 고압 산소-유발 망막병증, 및 상승된 안내압 또는 안구 방수의 분비를 특징으로 하는 상태, 예컨대 녹내장으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 자가면역 질환 및 염증성 상태, 특히 자가면역 성분을 비롯한 병인을 갖는 염증성 상태, 예컨대 관절염 (예를 들어, 류마티스 관절염, 만성 진행성 관절염 및 변형성 관절염), 및 류마티스성 질환, 예컨대 염증성 상태, 및 골 손실을 포함하는 류마티스성 질환, 염증성 통증, 척추관절병증, 예컨대 강직성 척추염, 라이터 증후군, 반응성 관절염, 건선성 관절염, 및 장병증성 관절염, 과민증 (기도 과민증 및 피부 과민증 둘 다 포함) 및 알레르기의 치료, 예방 또는 개선에 유용하다. 본 발명의 항체가 사용될 수 있는 특정 자가면역 질환은 자가면역 혈액 장애 (예를 들어, 용혈성 빈혈, 재생불량성 빈혈, 순수 적혈구 빈혈 및 특발성 혈소판감소증 포함), 후천성 A형 혈우병, 한랭 응집소 질환, 한랭글로불린혈증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 쇼그렌 증후군, 전신 홍반성 루푸스, 염증성 근육 장애, 다발연골염, 경피증, 항-호중구 세포질 항체-연관 혈관염, IgM-매개 신경병증, 안진전 근간대성경련 증후군, 베게너 육아종증, 피부근염, 만성 활성 간염, 중증 근무력증, 건선, 스티븐-존슨 증후군, 심상성 천포창, 낙엽상 천포창, 특발성 스프루, 자가면역 염증성 장 질환 (예를 들어, 궤양성 결장염, 크론병 및 과민성 장 증후군 포함), 내분비 안병증, 그레이브스병, 사르코이드증, 다발성 경화증, 시신경척수염, 원발성 담즙성 간경변증, 소아 당뇨병 (제I형 당뇨병), 포도막염 (전방, 중간 및 후방 뿐만 아니라 범포도막염), 건성 각결막염 및 춘계 각결막염, 간질성 폐 섬유증, 건선성 관절염 및 사구체신염 (예를 들어, 특발성 신증후군 또는 미세 변화 신병증을 비롯한 신증후군을 동반하거나 또는 동반하지 않음), 종양, 피부 및 각막의 염증성 질환, 근염, 골 이식물의 이완, 대사 장애, 예컨대 아테롬성동맥경화증, 당뇨병 및 이상지혈증을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 원발성 피부 B-세포 림프종, 면역수포성 질환, 심상성 천포창, 낙엽상 천포창, 브라질 천포창 (포고 셀바젬병)의 풍토병성 형태, 부신생물성 천포창, 수포성 유천포창, 점막 유천포창, 후천성 수포성 표피박리증, 만성 이식편 대 숙주 질환, 피부근염, 전신 홍반성 루푸스, 혈관염, 소혈관 혈관염, 저보체혈증성 두드러기성 혈관염, 항호중구 세포질 항체-혈관염, 한랭글로불린혈증, 슈니츨러 증후군, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 혈관부종, 백반증, 전신 홍반성 루푸스, 특발성 혈소판감소성 자반증, 다발성 경화증, 한랭 응집소 질환, 자가면역 용혈성 빈혈, 항호중구 세포질 항체-연관 혈관염, 이식편 대 숙주 질환, 한랭글로불린혈증 및 혈전성 혈소판감소증으로 이루어진 군으로부터 선택된 상태 또는 장애의 치료에 유용하다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 요법에서의 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 요법은 PI3K의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 상기 언급한 목록으로부터, 적합하게는 자가면역 장애, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 기도 질환, 예컨대 천식 및 COPD, 이식 거부; 항체 생산, 항원 제시, 시토카인 생산 또는 림프성 기관발생이 비정상적이거나 또는 바람직하지 않은 것, 예컨대 류마티스 관절염, 심상성 천포창, 특발성 혈소판감소증 자반증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 만성 자가면역 두드러기, 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, AMR (항체-매개 이식 거부), B 세포-매개 초급성, 급성 및 만성 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 예컨대 비제한적으로 다발성 골수종; 백혈병; 급성 골수 백혈병; 만성 골수 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병; 비-호지킨 림프종; 림프종; 진성 다혈구혈증; 본태성 혈소판혈증; 골수 화생을 동반한 골수섬유증; 및 발덴스트룀병으로부터; 보다 적합하게는 류마티스 관절염 (RA), 심상성 천포창 (PV), 특발성 혈소판감소증 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 자가면역 용혈성 빈혈 (AIHA), 후천성 혈우병 유형 A (AHA), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증 (MG), 쇼그렌 증후군 (SS), ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 만성 자가면역 두드러기 (CAU), 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 뿐만 아니라 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염, 예를 들어 중증 뇌 말라리아, 트리파노소마증, 리슈마니아증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증으로부터 선택된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 치료상 허용되는 양의 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물의 투여를 포함하는 PI3K의 억제에 의해 치료되는 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 추가 실시양태에서, 질환은 상기 언급한 목록으로부터, 적합하게는 자가면역 장애, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 기도 질환, 예컨대 천식 및 COPD, 이식 거부; 항체 생산, 항원 제시, 시토카인 생산 또는 림프성 기관발생이 비정상적이거나 또는 바람직하지 않은 것, 예컨대 류마티스 관절염, 심상성 천포창, 특발성 혈소판감소증 자반증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 만성 자가면역 두드러기, 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, AMR (항체-매개 이식 거부), B 세포-매개 초급성, 급성 및 만성 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 예컨대 비제한적으로 다발성 골수종; 백혈병; 급성 골수 백혈병; 만성 골수 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병; 비-호지킨 림프종; 림프종; 진성 다혈구혈증; 본태성 혈소판혈증; 골수 화생을 동반한 골수섬유증; 및 발덴스트룀병으로부터; 보다 적합하게는 류마티스 관절염 (RA), 심상성 천포창 (PV), 특발성 혈소판감소증 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 자가면역 용혈성 빈혈 (AIHA), 후천성 혈우병 유형 A (AHA), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증 (MG), 쇼그렌 증후군 (SS), ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 만성 자가면역 두드러기 (CAU), 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 뿐만 아니라 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염, 예를 들어 중증 뇌 말라리아, 트리파노소마증, 리슈마니아증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증으로부터 선택된다.
따라서, 추가 실시양태로서, 본 발명은 의약의 제조를 위한 화학식 I, I', Ia, Ia', Ib, Ib', Ic, Ic', Id, Id', Ie, Ie', If, If', Ig, Ig', Ih, Ih', Ii, Ii', Ij 또는 Ij'의 화합물의 용도를 제공한다. 추가 실시양태에서, 의약은 PI3K의 억제에 의해 치료될 수 있는 질환의 치료를 위한 것이다. 또 다른 실시양태에서, 질환은 상기 언급된 목록으로부터, 적합하게는 자가면역 장애, 염증성 질환, 알레르기성 질환, 기도 질환, 예컨대 천식 및 COPD, 이식 거부; 항체 생산, 항원 제시, 시토카인 생산 또는 림프성 기관발생이 비정상적이거나 또는 바람직하지 않은 것, 예컨대 류마티스 관절염, 심상성 천포창, 특발성 혈소판감소증 자반증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 중증 근무력증, 쇼그렌 증후군, 자가면역 용혈성 빈혈, ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 혈전성 혈소판감소성 자반증, 만성 자가면역 두드러기, 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, AMR (항체-매개 이식 거부), B 세포-매개 초급성, 급성 및 만성 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 예컨대 비제한적으로 다발성 골수종; 백혈병; 급성 골수 백혈병; 만성 골수 백혈병; 림프구성 백혈병; 골수성 백혈병; 비-호지킨 림프종; 림프종; 진성 다혈구혈증; 본태성 혈소판혈증; 골수 화생을 동반한 골수섬유증; 및 발덴스트룀병으로부터; 보다 적합하게는 류마티스 관절염 (RA), 심상성 천포창 (PV), 특발성 혈소판감소증 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 자가면역 용혈성 빈혈 (AIHA), 후천성 혈우병 유형 A (AHA), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증 (MG), 쇼그렌 증후군 (SS), ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 만성 자가면역 두드러기 (CAU), 알레르기 (아토피성 피부염, 접촉성 피부염, 알레르기성 비염), 굿패스쳐 증후군, 이식 거부, 및 조혈 기원의 암, 뿐만 아니라 면역병리상태와 연관된 질환 또는 감염, 예를 들어 중증 뇌 말라리아, 트리파노소마증, 리슈마니아증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증으로부터 선택된다.
본 발명의 제약 조성물 또는 조합물은 약 50-70 kg의 대상체에 대해 약 1-1000 mg의 활성 성분(들), 또는 약 1-500 mg, 또는 약 1-250 mg, 또는 약 1-150 mg, 또는 약 0.5-100 mg, 또는 약 1-50 mg의 활성 성분의 단위 투여량으로 존재할 수 있다. 화합물, 그의 제약 조성물 또는 조합물의 치료 유효 투여량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료할 장애 또는 질환 또는 그의 중증도에 따라 달라진다. 통상의 의사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는데 필요한 각각의 활성 성분의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다.
상기 언급된 투여량 특성은 유리하게는 포유동물, 예를 들어 마우스, 래트, 개, 원숭이, 또는 단리된 기관, 조직 및 그의 시료를 사용하는 시험관내 및 생체내 시험에서 입증가능하다. 본 발명의 화합물은 용액, 예를 들어 수용액의 형태로 시험관내 적용될 수 있고, 경장으로, 비경구로, 유리하게는 정맥내로, 예를 들어 현탁액 또는 수용액으로서 생체내 적용될 수 있다. 시험관내 투여량은 약 10-3 몰 내지 10-9 몰 농도의 범위일 수 있다. 생체내 치료 유효량은 투여 경로에 따라 약 0.1-500 mg/kg 또는 약 1-100 mg/kg의 범위일 수 있다.
본 발명의 화합물은 1종 이상의 다른 치료제와 동시에, 또는 그 전에 또는 후에 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 동일하거나 또는 상이한 투여 경로에 의해 개별적으로 투여되거나, 또는 다른 작용제와 동일한 제약 조성물 내에서 함께 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 요법에서의 동시, 개별 또는 순차적 사용을 위한 조합 제제로서 화학식 I의 화합물 및 적어도 1종의 다른 치료제를 포함하는 생성물을 제공한다. 한 실시양태에서, 요법은 PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태의 치료이다. 조합 제제로서 제공되는 생성물은, 동일한 제약 조성물 내에 화학식 I의 화합물 및 다른 치료제(들)를 함께 포함하는 조성물, 또는 개별 형태로, 예를 들어 키트의 형태로 화학식 I의 화합물 및 다른 치료제(들)를 포함하는 조성물을 포함한다.
한 실시양태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 또 다른 치료제(들)를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 임의로, 제약 조성물은 상기 기재된 바와 같은 제약상 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명은 적어도 1개가 화학식 I의 화합물을 함유하는 것인 2종 이상의 개별 제약 조성물을 포함하는 키트를 제공한다. 한 실시양태에서, 키트는 상기 조성물을 개별적으로 보유하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 이러한 키트의 예는 정제, 캡슐 등의 포장에 전형적으로 사용되는 바와 같은 블리스터 팩이다.
본 발명의 키트는 상이한 투여 형태, 예를 들어 경구 및 비경구로 투여하기 위해, 개별 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하기 위해, 또는 개별 조성물을 서로에 대해 적정하기 위해 사용될 수 있다. 편의를 도모하기 위해, 본 발명의 키트는 전형적으로 투여 지침서를 포함한다.
본 발명의 조합 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 동일하거나 또는 상이한 제조업체에 의해 제조되고/거나 제제화될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 (i) 의사에게 조합 생성물로 배포되기 전에 (예를 들어, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우); (ii) 투여 직전에 의사 자신에 의해 (또는 의사의 지시 하에); (iii) 환자 자신에 의해, 예를 들어 본 발명의 화합물 및 다른 치료제의 순차적 투여 동안, 조합 요법으로 합해질 수 있다.
따라서, 본 발명은 의약이 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조되는 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 의약이 화학식 I의 화합물과 함께 투여되는 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 병태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공한다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물이 또 다른 치료제와 함께 투여하기 위해 제조되는 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한 다른 치료제가 화학식 I의 화합물과 함께 투여하기 위해 제조되는 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 또 다른 치료제를 제공한다. 본 발명은 또한 화학식 I의 화합물이 또 다른 치료제와 함께 투여되는 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물을 제공한다. 본 발명은 또한 다른 치료제가 화학식 I의 화합물과 함께 투여되는 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하는 방법에 사용하기 위한 또 다른 치료제를 제공한다.
본 발명은 또한 환자가 이전에 (예를 들어, 24시간 내에) 또 다른 치료제로 치료되었던 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 화학식 I의 화합물의 용도를 제공한다. 본 발명은 또한 환자가 이전에 (예를 들어, 24시간 내에) 화학식 I의 화합물로 치료되었던 것인, PI3K 효소의 활성에 의해 매개되는 질환 또는 상태를 치료하기 위한 또 다른 치료제의 용도를 제공한다.
화학식 I의 화합물은 단독 활성 성분으로 투여되거나, 또는 예를 들어 아주반트로서의 다른 약물, 예를 들어 면역억제제 또는 면역조절제 또는 다른 항염증제 (예를 들어, 동종이식편 또는 이종이식편 급성 또는 만성 거부 또는 염증성 또는 자가면역 장애의 치료 또는 예방을 위함), 또는 화학요법제, 예를 들어 악성 세포 항증식제와 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 화학식 I의 화합물은 칼시뉴린 억제제, 예를 들어 시클로스포린 A 또는 FK 506; mTOR 억제제, 예를 들어 라파마이신, 40-O-(2-히드록시에틸)-라파마이신, CCI779, ABT578, AP23573, TAFA-93, 비올리무스-7 또는 비올리무스-9; 면역억제 특성을 갖는 아스코마이신, 예를 들어 ABT-281, ASM981 등; 코르티코스테로이드; 시클로포스파미드; 아자티오프렌; 메토트렉세이트; 레플루노미드; 미조리빈; 미코페놀산 또는 염; 미코페놀레이트 모페틸; 15-데옥시스페르구알린 또는 그의 면역억제 동족체, 유사체 또는 유도체; 예를 들어 WO 02/38561 또는 WO 03/82859에 개시된 바와 같은 PKC 억제제, 예를 들어 실시예 56 또는 70의 화합물; JAK3 키나제 억제제, 예를 들어 N-벤질-3,4-디히드록시-벤질리덴-시아노아세트아미드 α-시아노-(3,4-디히드록시)-]N-벤질신남아미드 (티르포스틴 AG 490), 프로디지오신 25-C (PNU156804), [4-(4'-히드록시페닐)-아미노-6,7-디메톡시퀴나졸린] (WHI-P131), [4-(3'-브로모-4'-히드록실페닐)-아미노-6,7-디메톡시퀴나졸린] (WHI-P154), [4-(3',5'-디브로모-4'-히드록실페닐)-아미노-6,7-디메톡시퀴나졸린] WHI-P97, KRX-211, 3-{(3R,4R)-4-메틸-3-[메틸-(7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-일)-아미노]-피페리딘-1-일}-3-옥소-프로피오니트릴의 유리 형태 또는 제약상 허용되는 염 형태, 예를 들어 모노-시트레이트 (CP-690,550으로도 지칭됨), 또는 WO 04/052359 또는 WO 05/066156에 개시된 바와 같은 화합물; 면역억제 모노클로날 항체, 예를 들어 백혈구 수용체, 예를 들어 MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD52, CD58, CD80, CD86 또는 그의 리간드에 대한 모노클로날 항체; 다른 면역조절 화합물, 예를 들어 CTLA4의 세포외 도메인의 적어도 일부 또는 그의 돌연변이체를 갖는 재조합 결합 분자, 예를 들어 비-CTLA4 단백질 서열에 결합된 CTLA4의 적어도 세포외 부분 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어 CTLA4Ig (예를 들어, ATCC 68629로 지정됨) 또는 그의 돌연변이체, 예를 들어 LEA29Y; 부착 분자 억제제, 예를 들어 LFA-1 길항제, ICAM-1 또는 -3 길항제, VCAM-4 길항제 또는 VLA-4 길항제; 또는 항히스타민제; 또는 진해제, 또는 기관지확장제; 또는 안지오텐신 수용체 차단제; 또는 항감염제와 조합하여 사용될 수 있다.
화학식 I의 화합물이 다른 면역억제/면역조절 요법, 항염증 요법, 화학요법 또는 항감염 요법과 함께 투여되는 경우에, 공-투여되는 면역억제, 면역조절, 항염증, 화학요법 또는 항감염 화합물의 투여량은 물론 사용되는 공동-약물의 유형 (예를 들어, 이것이 스테로이드인지 또는 칼시뉴린 억제제인지의 여부), 사용되는 구체적 약물, 치료할 상태 등에 따라 달라질 것이다.
화학식 I의 화합물은 또한 서로 조합하거나 또는 다른 치료제, 특히 다른 항증식제와 조합하여 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 항증식제는 아로마타제 억제제; 항에스트로겐; 토포이소머라제 I 억제제; 토포이소머라제 II 억제제; 미세관 활성제; 알킬화제; 히스톤 데아세틸라제 억제제; 세포 분화 과정을 유도하는 화합물; 시클로옥시게나제 억제제; MMP 억제제; mTOR 억제제; 항신생물성 항대사물; 플라틴 화합물; 단백질 또는 지질 키나제 활성을 표적화하는/감소시키는 화합물 및 추가의 항혈관신생 화합물; 단백질 또는 지질 포스파타제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 고나도렐린 효능제; 항안드로겐; 메티오닌 아미노펩티다제 억제제; 비스포스포네이트; 생물학적 반응 조절제; 항증식성 항체; 헤파라나제 억제제; Ras 종양원성 이소형의 억제제; 텔로머라제 억제제; 프로테아솜 억제제; 혈액 악성종양의 치료에 사용되는 작용제; Flt-3의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; Hsp90 억제제; 테모졸로미드 (테모달(TEMODAL)®); 및 류코보린을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "아로마타제 억제제"는 에스트로겐 생산, 즉 기질 안드로스텐디온 및 테스토스테론의 에스트론 및 에스트라디올로의 각각의 전환을 억제하는 화합물에 관한 것이다. 상기 용어는 스테로이드, 특별히 아타메스탄, 엑세메스탄 및 포르메스탄; 및 특히 비-스테로이드, 특별히 아미노글루테티미드, 로글레티미드, 피리도글루테티미드, 트릴로스탄, 테스토락톤, 케토코나졸, 보로졸, 파드로졸, 아나스트로졸 및 레트로졸을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 엑세메스탄은, 예를 들어 상표명 아로마신(AROMASIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 포르메스탄은, 예를 들어 상표명 렌타론(LENTARON)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 파드로졸은, 예를 들어 상표명 아페마(AFEMA)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아나스트로졸은, 예를 들어 상표명 아리미덱스(ARIMIDEX)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 레트로졸은, 예를 들어 상표명 페마라(FEMARA) 또는 페마르(FEMAR)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아미노글루테티미드는, 예를 들어 상표명 오리메텐(ORIMETEN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아로마타제 억제제인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 조합물은 호르몬 수용체 양성 종양, 예를 들어 유방 종양의 치료에 특히 유용하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항에스트로겐"은 에스트로겐 수용체 수준에서 에스트로겐의 효과를 길항하는 화합물에 관한 것이다. 상기 용어는 타목시펜, 풀베스트란트, 랄록시펜 및 랄록시펜 히드로클로라이드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 타목시펜은, 예를 들어 상표명 놀바덱스(NOLVADEX)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 랄록시펜 히드로클로라이드는, 예를 들어 상표명 에비스타(EVISTA)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 풀베스트란트는 미국 특허 번호 4,659,516에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있거나, 또는 예를 들어 상표명 파슬로덱스(FASLODEX)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 항에스트로겐인 화학요법제를 포함하는 본 발명의 조합물은 에스트로겐 수용체 양성 종양, 예를 들어 유방 종양의 치료에 특히 유용하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항안드로겐"은 안드로겐 호르몬의 생물학적 효과를 억제할 수 있는 임의의 물질에 관한 것이고, 예를 들어 미국 특허 번호 4,636,505에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있는 비칼루타미드 (카소덱스(CASODEX))를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "고나도렐린 효능제"는 아바렐릭스, 고세렐린 및 고세렐린 아세테이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 고세렐린은 미국 특허 번호 4,100,274에 개시되어 있고, 예를 들어 상표명 졸라덱스(ZOLADEX)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 아바렐릭스는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,843,901에 개시된 바와 같이 제제화될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "토포이소머라제 I 억제제"는 토포테칸, 기마테칸, 이리노테칸, 캄프토테신 및 그의 유사체, 9-니트로캄프토테신 및 거대분자 캄프토테신 접합체 PNU-166148 (WO 99/17804의 화합물 A1)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 이리노테칸은, 예를 들어 상표명 캄프토사르(CAMPTOSAR)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 토포테칸은, 예를 들어 상표명 하이캄틴(HYCAMTIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "토포이소머라제 II 억제제"는 안트라시클린, 예컨대 리포솜 제제를 비롯한 독소루비신, 예를 들어 케릭스(CAELYX); 다우노루비신; 에피루비신; 이다루비신; 네모루비신; 안트라퀴논 미톡산트론 및 로속산트론; 및 포도필로톡신 에토포시드 및 테니포시드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 에토포시드는, 예를 들어 상표명 에토포포스(ETOPOPHOS)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 테니포시드는, 예를 들어 상표명 VM 26-브리스톨(VM 26-BRISTOL)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 독소루비신은, 예를 들어 상표명 아드리블라스틴(ADRIBLASTIN) 또는 아드리아마이신(ADRIAMYCIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 에피루비신은, 예를 들어 상표명 파르모루비신(FARMORUBICIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 이다루비신은, 예를 들어 상표명 자베도스(ZAVEDOS)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 미톡산트론은, 예를 들어 상표명 노반트론(NOVANTRON)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
용어 "미세관 활성제"는 미세관 안정화제, 미세관 탈안정화제 및 마이크로튜불린 중합 억제제, 예컨대 비제한적으로 탁산, 예를 들어 파클리탁셀 및 도세탁셀; 빈카 알칼로이드, 예를 들어 빈블라스틴, 특히 빈블라스틴 술페이트; 빈크리스틴, 특히 빈크리스틴 술페이트 및 비노렐빈; 디스코데르몰리드; 콜키신; 및 에포틸론 및 그의 유도체, 예를 들어 에포틸론 B 또는 D 또는 그의 유도체에 관한 것이다. 파클리탁셀은, 예를 들어 탁솔(TAXOL)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 도세탁셀은, 예를 들어 상표명 탁소테레(TAXOTERE)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 빈블라스틴 술페이트는, 예를 들어 상표명 빈블라스틴 R.P.(VINBLASTIN R.P.)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 빈크리스틴 술페이트는, 예를 들어 상표명 파르미스틴(FARMISTIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 디스코데르몰리드는, 예를 들어 미국 특허 번호 5,010,099에 개시된 바와 같이 수득될 수 있다. 또한, WO 98/10121, 미국 특허 번호 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 및 WO 00/31247에 개시된 에포틸론 유도체가 포함된다. 에포틸론 A 및/또는 B가 특히 바람직하다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "알킬화제"는 시클로포스파미드, 이포스파미드, 멜팔란 또는 니트로소우레아 (BCNU 또는 글리아델(Gliadel))를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 시클로포스파미드는, 예를 들어 상표명 시클로스틴(CYCLOSTIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 이포스파미드는, 예를 들어 상표명 홀록산(HOLOXAN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
용어 "히스톤 데아세틸라제 억제제" 또는 "HDAC 억제제"는 히스톤 데아세틸라제를 억제하고 항증식 활성을 보유하는 화합물에 관한 것이다. 이는 WO 02/22577에 개시된 화합물, 특히 N-히드록시-3-[4-[[(2-히드록시에틸)[2-(1H-인돌-3-일)에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드, N-히드록시-3-[4-[[[2-(2-메틸-1H-인돌-3-일)-에틸]-아미노]메틸]페닐]-2E-2-프로펜아미드 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다. 이는 추가로, 특히 수베로일아닐리드 히드록삼산 (SAHA)을 포함한다.
용어 "항신생물성 항대사물"은 5-플루오로우라실 또는 5-FU; 카페시타빈; 겜시타빈; DNA 탈메틸화제, 예컨대 5-아자시티딘 및 데시타빈; 메토트렉세이트 및 에다트렉세이트; 및 폴산 길항제, 예컨대 페메트렉세드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 카페시타빈은, 예를 들어 상표명 젤로다(XELODA)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 겜시타빈은, 예를 들어 상표명 겜자르(GEMZAR)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 또한, 예를 들어 상표명 헤르셉틴(HERCEPTIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있는 모노클로날 항체 트라스투주맙이 포함된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "플라틴 화합물"은 카르보플라틴, 시스-플라틴, 시스플라티눔 및 옥살리플라틴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 카르보플라틴은, 예를 들어 상표명 카르보플라트(CARBOPLAT)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. 옥살리플라틴은, 예를 들어 상표명 엘록사틴(ELOXATIN)으로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "단백질 또는 지질 키나제 활성; 또는 단백질 또는 지질 포스파타제 활성을 표적화하는/감소시키는 화합물; 또는 추가의 항혈관신생 화합물"은 단백질 티로신 키나제 및/또는 세린 및/또는 트레오닌 키나제 억제제 또는 지질 키나제 억제제, 예를 들어 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
a) 혈소판-유래 성장 인자-수용체 (PDGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 PDGFR의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 PDGF 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어 N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어 이마티닙, SU101, SU6668 및 GFB-111;
b) 섬유모세포 성장 인자-수용체 (FGFR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
c) 인슐린-유사 성장 인자 수용체 I (IGF-IR)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 IGF-IR의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 IGF-IR 수용체를 억제하는 화합물, 예컨대 WO 02/092599에 개시된 이들 화합물;
d) Trk 수용체 티로신 키나제 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
e) Axl 수용체 티로신 키나제 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
f) c-Met 수용체의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
g) Kit/SCFR 수용체 티로신 키나제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물;
h) C-kit 수용체 티로신 키나제 - (PDGFR 패밀리의 일부)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 c-Kit 수용체 티로신 키나제 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 c-Kit 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어 이마티닙;
i) c-Abl 패밀리의 구성원 및 그의 유전자-융합 생성물, 예를 들어 BCR-Abl 키나제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 c-Abl 패밀리 구성원 및 그의 유전자 융합 생성물의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예를 들어 N-페닐-2-피리미딘-아민 유도체, 예를 들어 이마티닙, PD180970, AG957, NSC 680410 또는 PD173955 (파크데이비스(ParkeDavis)로부터의 것);
j) 단백질 키나제 C (PKC), 및 세린/트레오닌 키나제의 Raf 패밀리의 구성원, MEK, SRC, JAK, FAK, PDK 및 Ras/MAPK 패밀리 구성원, 또는 PI(3) 키나제 패밀리, 또는 PI(3)-키나제-관련 키나제 패밀리의 구성원, 및/또는 시클린-의존성 키나제 패밀리 (CDK)의 구성원의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 미국 특허 번호 5,093,330에 개시된 스타우로스포린 유도체, 예를 들어 미도스타우린; 추가 화합물의 예는, 예를 들어 UCN-01; 사핀골; BAY 43-9006; 브리오스타틴 1; 페리포신; 일모포신; RO 318220 및 RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; 이소키놀린 화합물, 예컨대 WO 00/09495에 개시된 것들; FTI; PD184352; 또는 QAN697 (P13K 억제제)을 포함함;
k) 단백질-티로신 키나제 억제제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 이마티닙 메실레이트 (글리벡(GLEEVEC)) 또는 티르포스틴을 포함하는 단백질-티로신 키나제 억제제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물 (티르포스틴은 바람직하게는 저분자량 (Mr < 1500) 화합물, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 특히 벤질리덴말로니트릴 부류 또는 S-아릴벤젠말로니트릴 또는 이중기질 퀴놀린 부류의 화합물로부터 선택된 화합물, 보다 특히 티르포스틴 A23/RG-50810, AG 99, 티르포스틴 AG 213, 티르포스틴 AG 1748, 티르포스틴 AG 490, 티르포스틴 B44, 티르포스틴 B44 (+) 거울상이성질체, 티르포스틴 AG 555, AG 494, 티르포스틴 AG 556, AG957 및 아다포스틴 (4-{[(2,5-디히드록시페닐)메틸]아미노}-벤조산 아다만틸 에스테르, NSC 680410, 아다포스틴으로 이루어진 군으로부터 선택된 임의의 화합물임); 및
l) 수용체 티로신 키나제의 표피 성장 인자 패밀리 (동종이량체 또는 이종이량체로서의 EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예컨대 표피 성장 인자 수용체 패밀리의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 특히 EGF 수용체 티로신 키나제 패밀리의 구성원, 예를 들어 EGF 수용체, ErbB2, ErbB3 및 ErbB4를 억제하거나 또는 EGF 또는 EGF 관련 리간드와 결합하는 화합물, 단백질 또는 항체, 특히 WO 97/02266 (예를 들어, 실시예 39의 화합물) 또는 EP 0 564 409; WO 99/03854; EP 0520722; EP 0 566 226; EP 0 787 722; EP 0 837 063; 미국 특허 번호 5,747,498; WO 98/10767; WO 97/30034; WO 97/49688; WO 97/38983, 특히 WO 96/30347 (예를 들어, CP 358774로 공지된 화합물); WO 96/33980 (예를 들어, 화합물 ZD 1839) 및 WO 95/03283 (예를 들어, 화합물 ZM105180)에 일반적으로 및 구체적으로 개시된 화합물, 단백질 또는 모노클로날 항체, 예를 들어 트라스투주맙 (헤르셉틴), 세툭시맙, 이레사(Iressa), 타르세바(Tarceva), OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 또는 E7.6.3; 및 WO 03/013541에 개시된 7H-피롤로-[2,3-d]피리미딘 유도체.
추가의 항혈관신생 화합물은 그의 활성에 대해 또 다른 메카니즘을 갖는 화합물, 예를 들어 단백질 또는 지질 키나제 억제와 관련이 없는 화합물, 예를 들어 탈리도미드 (탈로미드(THALOMID)) 및 TNP-470을 포함한다.
단백질 또는 지질 포스파타제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은, 예를 들어 포스파타제 1, 포스파타제 2A, PTEN 또는 CDC25의 억제제, 예를 들어 오카다산 또는 그의 유도체이다.
세포 분화 과정을 유도하는 화합물은, 예를 들어 레티노산, α-, γ- 또는 δ-토코페롤, 또는 α-, γ- 또는 δ-토코트리에놀이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 시클로옥시게나제 억제제는, 예를 들어 Cox-2 억제제, 5-알킬 치환된 2-아릴아미노페닐아세트산 및 유도체, 예컨대 셀레콕시브 (셀레브렉스(CELEBREX)), 로페콕시브 (비옥스(VIOXX)), 에토리콕시브, 발데콕시브 또는 5-알킬-2-아릴아미노페닐아세트산, 예를 들어 5-메틸-2-(2'-클로로-6'-플루오로아닐리노)페닐 아세트산 또는 루미라콕시브를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "비스포스포네이트"는 에트리돈산, 클로드론산, 틸루드론산, 파미드론산, 알렌드론산, 이반드론산, 리세드론산 및 졸레드론산을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "에트리돈산"은, 예를 들어 상표명 디드로넬(DIDRONEL)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "클로드론산"은, 예를 들어 상표명 보네포스(BONEFOS)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "틸루드론산"은, 예를 들어 상표명 스켈리드(SKELID)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "파미드론산"은, 예를 들어 상표명 아레디아(AREDIA)™로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "알렌드론산"은, 예를 들어 상표명 포사맥스(FOSAMAX)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "이반드론산"은, 예를 들어 상표명 본드라나트(BONDRANAT)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "리세드론산"은, 예를 들어 상표명 악토넬(ACTONEL)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다. "졸레드론산"은, 예를 들어 상표명 조메타(ZOMETA)로 시판되는 것과 같은 형태로 투여될 수 있다.
용어 "mTOR 억제제"는 라파마이신의 포유동물 표적 (mTOR)을 억제하고 항증식 활성을 보유하는 화합물, 예컨대 시롤리무스 (라파뮨(Rapamune)®), 에베롤리무스 (세르티칸(Certican)™), CCI-779 및 ABT578에 관한 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "헤파라나제 억제제"는 헤파린 술페이트 분해를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 상기 용어는 PI-88을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "생물학적 반응 조절제"는 림포카인 또는 인터페론, 예를 들어 인터페론 γ를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "Ras 종양원성 이소형, 예를 들어 H-Ras, K-Ras 또는 N-Ras의 억제제"는 Ras의 종양원성 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물, 예를 들어 "파르네실 트랜스퍼라제 억제제", 예를 들어 L-744832, DK8G557 또는 R115777 (자르네스트라(Zarnestra))을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "텔로머라제 억제제"는 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 텔로머라제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은, 특히 텔로머라제 수용체를 억제하는 화합물, 예를 들어 텔로메스타틴이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "메티오닌 아미노펩티다제 억제제"는 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 메티오닌 아미노펩티다제의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은, 예를 들어 벤가미드 또는 그의 유도체이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "프로테아솜 억제제"는 프로테아솜의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 지칭한다. 프로테아솜의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은, 예를 들어 PS-341 및 MLN 341을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "매트릭스 메탈로프로테이나제 억제제" 또는 "MMP 억제제"는 콜라겐 펩티드모방체 및 비-펩티드모방체 억제제, 테트라시클린 유도체, 예를 들어 히드록사메이트 펩티드모방체 억제제 바티마스타트 및 그의 경구로 생체이용가능한 유사체 마리마스타트 (BB-2516), 프리노마스타트 (AG3340), 메타스타트 (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B 또는 AAJ996을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "혈액 악성종양의 치료에 사용되는 작용제"는 FMS-유사 티로신 키나제 억제제, 예를 들어 FMS-유사 티로신 키나제 수용체 (Flt-3R)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 인터페론, 1-b-D-아라비노푸란실시토신 (ara-c) 및 비술판; 및 ALK 억제제, 예를 들어 역형성 림프종 키나제를 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
FMS-유사 티로신 키나제 수용체 (Flt-3R)의 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은, 특히 Flt-3R 수용체 키나제 패밀리의 구성원을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예를 들어 PKC412, 미도스타우린, 스타우로스포린 유도체, SU11248 및 MLN518이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "HSP90 억제제"는 HSP90의 내인성 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물; 유비퀴틴 프로테아솜 경로를 통해 HSP90 클라이언트 단백질을 분해, 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. HSP90의 내인성 ATPase 활성을 표적화, 감소 또는 억제하는 화합물은, 특히 HSP90의 ATPase 활성을 억제하는 화합물, 단백질 또는 항체, 예를 들어 17-알릴아미노, 17-데메톡시겔다나마이신 (17AAG), 겔다나마이신 유도체, 다른 겔다나마이신 관련 화합물, 라디시콜 및 HDAC 억제제이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항증식성 항체"는 트라스투주맙 (헤르셉틴™), 트라스투주맙-DM1, 에를로티닙 (타르세바™), 베바시주맙 (아바스틴(Avastin)™), 리툭시맙 (리툭산(Rituxan)®), PRO64553 (항-CD40) 및 2C4 항체를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 항체는, 예를 들어 무손상 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 적어도 2종의 무손상 항체로부터 형성된 다중특이적 항체, 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 항체 단편을 의미한다.
급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료를 위해, 화학식 I의 화합물은 표준 백혈병 요법과 조합하여, 특히 AML의 치료에 사용되는 요법과 조합하여 사용될 수 있다. 특히, 화학식 I의 화합물은, 예를 들어 파르네실 트랜스퍼라제 억제제 및/또는 AML의 치료에 유용한 다른 약물, 예를 들어 다우노루비신, 아드리아마이신, Ara-C, VP-16, 테니포시드, 미톡산트론, 이다루비신, 카르보플라티눔 및 PKC412와 조합하여 투여될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 또한 서로 조합하거나 또는 다른 치료제, 특히 다른 항-말라리아제와 조합하여 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 항-말라리아제는 프로구아닐, 클로르프로구아닐, 트리메토프림, 클로로퀸, 메플로퀸, 루메판트린, 아토바쿠온, 피리메타민-술파독신, 피리메타민-답손, 할로판트린, 퀴닌, 퀴니딘, 아모디아퀸, 아모피로퀸, 술폰아미드, 아르테미시닌, 아르테플렌, 아르테메터, 아르테수네이트, 프리마퀸, 흡입용 NO, L-아르기닌, 디프로필렌트리-아민 NONOate (NO 공여자), 로시글리타존 (PPARγ 효능제), 활성탄, 에리트로포이에틴, 레바미솔 및 피로나리딘을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
화학식 I의 화합물은 또한 서로 조합하거나 또는 다른 치료제, 예컨대 리슈마니아증, 트리파노소마증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증의 치료에 사용되는 것과 조합하여 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 작용제는 클로로퀸 술페이트, 아토바쿠온-프로구아닐, 아르테메터-루메판트린, 퀴닌-술페이트, 아르테수네이트, 퀴닌, 독시시클린, 클린다마이신, 메글루민 안티모니에이트, 소듐 스티보글루코네이트, 밀테포신, 케토코나졸, 펜타미딘, 암포테리신 B (AmB), 리포솜-AmB, 파로모마이신, 에플로르니틴, 니푸르티목스, 수라민, 멜라르소프롤, 프레드니솔론, 벤즈니다졸, 술파디아진, 피리메타민, 클린다마이신, 트리메트로핌, 술파메톡사졸, 아지트로마이신, 아토바쿠온, 덱사메타손, 프라지콴텔, 알벤다졸, 베타-락탐, 플로오로퀴놀론, 마크롤리드, 아미노글리코시드, 술파디아진 및 피리메타민을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
코드 번호, 일반명 또는 상품명에 의해 확인되는 활성제의 구조는 표준 일람 ["The Merck Index"] 현행판 또는 데이터베이스, 예를 들어 페이턴츠 인터내셔널(Patents International), 예를 들어 IMS 월드 퍼블리케이션즈(IMS World Publications)로부터 얻을 수 있다.
화학식 I의 화합물과 조합하여 사용될 수 있는 상기 언급된 화합물은 당업계, 예컨대 상기 인용된 문헌에 기재된 바와 같이 제조 및 투여될 수 있다.
또한, 화학식 I의 화합물은 공지된 치료 과정, 예를 들어 호르몬 또는 특히 방사선의 투여와 조합하여 유리하게 사용될 수 있다.
화학식 I의 화합물은 특히 방사선증감제로서, 특히 방사선요법에 불량한 감수성을 나타내는 종양을 치료하는데 사용될 수 있다.
"조합물"은 하나의 투여 단위 형태의 고정 조합물, 또는 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 독립적으로 동시에 투여되거나 또는 특히 조합 파트너가 협력 효과, 예를 들어 상승작용 효과 또는 그의 임의의 조합을 나타내도록 하는 시간 간격을 두고 별개로 투여될 수 있는 것인 조합 투여를 위한 부분들의 키트를 의미한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "공-투여" 또는 "조합 투여" 등은 선택된 조합 파트너를 그를 필요로 하는 단일 대상체 (예를 들어, 환자)에 투여하는 것을 포함하는 것으로 의도되고, 작용제들이 반드시 동일한 투여 경로에 의해 또는 동시에 투여되지는 않는 것인 치료 요법을 포함하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "제약 조합물"은, 1종 초과의 활성 성분의 혼합 또는 조합으로부터 생성된 생성물을 의미하고, 활성 성분의 고정 및 비-고정 조합물 둘 다를 포함한다. 용어 "고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 둘 다 단일 실체 또는 투여 형태로 환자에게 동시에 투여되는 것을 의미한다. 용어 "비-고정 조합물"은 활성 성분, 예를 들어 화학식 I의 화합물 및 조합 파트너가 둘 다 별개의 실체로서 동시에, 공동으로, 또는 구체적 시간 제한 없이 순차적으로 환자에게 투여되는 것을 의미하고, 여기서 이러한 투여는 환자의 신체 내에 2종의 화합물의 치료상 유효한 수준을 제공한다. 후자는 또한 칵테일 요법, 예를 들어 3종 이상의 활성 성분의 투여에 적용된다.
실시예
실험 상세사항:
하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것으로 의도되고, 그에 대한 제한으로서 해석되어서는 안 된다. 온도는 섭씨 온도로 주어진다. 달리 언급되지 않는 경우, 모든 증발은 감압 하에, 전형적으로는 약 15 mm Hg 내지 100 mm Hg (= 20-133 mbar)에서 수행한다. 최종 생성물, 중간체 및 출발 물질의 구조는 표준 분석 방법, 예를 들어 미량분석 및 분광학적 특성, 예를 들어 MS, IR, NMR에 의해 확인한다. 사용된 약어는 당업계에 통상적인 것들이다.
본 발명의 화합물을 합성하는데 이용되는 모든 출발 물질, 빌딩 블록, 시약, 산, 염기, 탈수제, 용매 및 촉매는 상업적으로 입수가능하거나, 또는 당업자에게 공지된 유기 합성 방법 (문헌 [Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21])에 의해 제조할 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물은 하기 실시예에 나타낸 바와 같은 당업자에게 공지된 유기 합성 방법에 의해 제조할 수 있다.
약어
ACN 아세토니트릴
AcOH 아세트산
aq. 수성
Boc tert-부톡시카르보닐
Boc2O 디-tert-부틸 디카르보네이트
tBu tert-부틸
tBuOH tert-부탄올
브레트포스 2-(디시클로헥실포스피노)-3,6-디메톡시-2'-4'-6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐
br s 넓은 단일선
COMU (1-시아노-2-에톡시-2-옥소에틸리덴아미노옥시)디메틸아미노-모르폴리노-카르베늄 헥사플루오로포스페이트
conc. 진한
d 일
d 이중선
dd 이중선의 이중선
dba 디벤질리덴아세톤
DCM 디클로로메탄
DEA 디에틸아민
DEAD 디에틸 아조디카르복실레이트
DEAP 디에틸아미노피리딘
DIPEA 디이소프로필에틸아민
DMF 디메틸포름아미드
DMME 디메톡시메탄
DMSO 디메틸술폭시드
DPPA 디페닐포스포릴 아지드
DPPF 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센
EDC 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드
eq. 당량
ESI 전기분무 이온화
Et3N 트리에틸아민
Et2O 디에틸에테르
EtOAc 에틸 아세테이트
EtOH 에탄올
h 시간
HATU O-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HBTU O-(1H-벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
HMDS 헥사메틸디실라잔
HOBT 1-히드록시-벤즈트리아졸
HPLC 고성능 액체 크로마토그래피
IPA 이소프로판올
LCMS 질량 분광측정법을 동반하는 액체 크로마토그래피
mCPBA 메타-클로로퍼옥시벤조산
MeOH 메탄올
m 다중선
min 분
MS 질량 분광측정법
mw 마이크로웨이브
NMR 핵 자기 공명 분광측정법
NaOtBu 소듐 tert-부톡시드
NP 정상상
OBD 최적 베드 밀도
Pd2(dba)3 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐
PL-HCO3 MP SPE 산 제거를 위한 중합체-지지된 비카르보네이트 카트리지
prep. 정제용
PPh3 트리페닐포스핀
q 사중선
Rac-BINAP 라세미 2,2'-비스(디-p-톨릴포스피노)-1,1'-비나프틸
RP 역상
Rt 체류 시간
rt 실온
RuPhos 2-디시클로헥실포스피노-2',6'-디-이소프로폭시-1,1'-비페닐
sat. 포화
SCX-2 중합체 지지된 술폰산 거대다공성 폴리스티렌
soln. 용액
t 삼중선
TBME tert-부틸 메틸 에테르
TBAF 테트라부틸암모늄 플루오라이드
TBDMSCl tert-부틸디메틸실릴클로라이드
테트라메틸-t-부틸-XPhos 2-디-t-부틸포스피노-3,4,5,6-테트라메틸-2',4',6'-트리이소프로필비페닐
TFA 트리플루오로아세트산
THF 테트라히드로푸란
TLC 박층 크로마토그래피
UPLC 초고성능 액체 크로마토그래피
XPhos 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐
Pd[RuPhos] (2-디시클로헥실포스피노-2' 6'-디이소프로필-1 1'-비페닐)(2-(2-아미노에틸)페닐)팔라듐(II)
사용된 마이크로웨이브 장비는 바이오타지 이니시에이터(Biotage Initiator)®였다.
모든 화합물은 오토놈(AutoNom)을 사용하여 명명하였다.
실시예의 제조 - 일반적 절차
반응식 1
Figure 112014067144685-pct00031
a) (R)-피롤리딘-3-올 및 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산을 반응시켜 화학식 II의 아미드를 제조하였다. 당업자는 아미드를 제조하는 수많은 공지된 방식이 있음을 인지할 것이다. 예를 들어, 문헌 [Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852] 및 그 안에 인용된 참고문헌을 참조한다. 하기 일반적 방법 i - ii를 사용하였다.
i. DCM 중 카르복실산 및 DMF (1 당량)의 용액을 3℃에서 1시간 동안 옥살릴 클로라이드 (1.5 당량)로 처리하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, DCM 중에 용해시키고, 3℃에서 DCM 중 (R)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (1.0 당량) 및 Et3N (2.5 당량)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 3℃에서 격렬하게 교반하고, 이어서 감압 하에 농축시켰다. 잔기를 EtOAc로 처리하고, 여과하였다. 잔기를 EtOAc로 세척하고, 합한 여과물을 감압 하에 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다.
ii. DCM 중 상업적 산 클로라이드 (1.0 당량)의 용액을 3℃에서 DCM 중 (R)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (1.0 당량) 및 Et3N (2.5 당량)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 3℃에서 격렬하게 교반하고, 이어서 감압 하에 농축시켰다. 잔기를 EtOAc로 처리하고, 여과하였다. 잔기를 EtOAc로 세척하고, 합한 여과물을 감압 하에 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 아미드 결합 형성 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 B) 아미드 결합 형성 조건에 예시된다.
b) 화학식 II의 화합물의 메실레이트를 통상의 조건에 의해, 바람직하게는 0℃에서 II와 DCM 중 메탄 술포닐 클로라이드 (2 당량) 및 Et3N (2 당량)의 반응에 의해 제조하였다.
c) 화학식 V의 화합물을 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 (NaH) 및 극성 유기 용매, 예컨대 DMF의 존재 하에 불활성 기체 조건 하에 50℃에서 3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 IV를 화학식 III의 화합물과 반응시킴으로써 제조하였다. 이러한 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 C) 측쇄 도입 조건에 예시된다.
d) V와 X'=브로모 또는 아이오도인 화학식 R2-X'의 아릴 할로게나이드 사이의 부흐발트-하르트비히 교차-커플링을 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 또는 Pd2(dba)3/2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-비페닐 또는 비스(트리-t-부틸포스핀)팔라듐 및 염기, 예컨대 바람직하게는 NaOtBu, 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 톨루엔을 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 80-120℃, 바람직하게는 110℃의 온도에서 교반하고, 바람직하게는 마이크로웨이브 반응기 내에서 수행하였다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다. 최종 화합물을 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 부흐발트-하르트비히 교차-커플링 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 A) 부흐발트 아미노화 또는 히드록실화에 예시된다.
반응식 2
Figure 112014067144685-pct00032
a) (S)-tert-부틸 3-((3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (화합물 VIII)를 3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 IV를 화학식 VII의 화합물과 하기 방법 1) X=메실레이트인 경우에는, 화합물 IV 및 VII을 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 (NaH) 및 극성 유기 용매 DMF의 존재 하에 불활성 기체 조건 하에 실온에서 반응시키고 ii) X=H인 경우에는, 화학식 IV 및 VII의 화합물을 통상의 미츠노부 조건을 사용하여, 바람직하게는 Ph3P (1.4 당량) 및 DEAD (1.4 당량)를 사용하여 유기 용매, 예컨대 THF 중에서 불활성 기체 조건 하에, 바람직하게는 70℃의 온도에서 반응시키는 것 중 하나에 의해 반응시킴으로써 제조하였다. 이러한 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 C) 측쇄 도입 조건에 예시된다.
b) VIII과 X'=브로모 또는 아이오도인 화학식 R2-X'의 아릴 할로게나이드 사이의 부흐발트-하르트비히 교차-커플링을 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)-BINAP 또는 비스(트리-t-부틸포스핀)팔라듐 및 염기, 예컨대 바람직하게는 NaOtBu, Cs2CO3 또는 K3PO4 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 톨루엔, 디옥산 또는 THF를 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 60-120℃의 온도에서 교반하고, 바람직하게는 마이크로웨이브 반응기 내에서 수행하였다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다. 부흐발트-하르트비히 교차-커플링 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 A) 부흐발트 아미노화 또는 히드록실화에 예시된다.
c) 화학식 IX의 화합물의 N-BOC 탈보호를 가능한 산 중에서 바람직하게는 트리플루오로-아세트산 및 유기 용매, 바람직하게는 DCM을 사용하는 통상의 BOC 탈보호 조건 하에 수행하였다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행하였다.
d) 화학식 X의 화합물 및 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산을 통상의 아미드 커플링 조건: 반응식 1, 단계 a)에 기재된 방법 이외에, 바람직한 커플링 시약이 HBTU, HOBt/EDC, COMU/DIPEA인 것을 사용하여 반응시켜 화학식 VI의 아미드를 제조하였다. 커플링을 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 DMF 또는 DCM 중에서 수행하고, 최종 화합물을 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 아미드 결합 형성 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 B) 아미드 결합 형성 조건에 예시된다.
반응식 3
Figure 112014067144685-pct00033
a) 3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 IV를 실온에서 유기 용매, 바람직하게는 THF 중에서 실릴화 시약, 바람직하게는 TBDMSCl 및 염기, 바람직하게는 NaH를 사용하는 표준 실릴화 절차를 사용하여 O-보호하였다.
b) XI과 X'=브로모 또는 아이오도인 화학식 R2-X'의 아릴 할로게나이드 사이의 부흐발트-하르트비히 교차-커플링을 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 또는 비스(트리-t-부틸포스핀)-팔라듐 및 염기, 예컨대 바람직하게는 NaOtBu 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 톨루엔을 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 110-140℃의 온도에서 교반하고, 바람직하게는 마이크로웨이브 반응기 내에서 수행하였다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다. 부흐발트-하르트비히 교차-커플링 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 A) 부흐발트 아미노화 또는 히드록실화에 예시된다.
c) 화학식 XII의 화합물의 O-TBDMS 탈보호를, 바람직하게는 TBAF 및 유기 용매, 바람직하게는 THF를 사용하는 통상의 탈보호 조건 하에 수행하였다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행하였다.
d) 화학식 XIII의 화합물을 적합한 염기, 예컨대 바람직하게는 수소화나트륨 (NaH) 또는 K2CO3 및 극성 유기 용매, 예컨대 DMF를 사용하여 불활성 기체 조건 하에 실온 또는 100℃ 이하의 승온에서 화학식 III의 메실레이트와 커플링시켰다. 최종 화합물을 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 이러한 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 C) 측쇄 도입 조건에 예시된다.
반응식 4
Figure 112014067144685-pct00034
a) 화학식 XIII의 화합물 (반응식 3에 기재된 바와 같이 제조한 것)을 화학식의 화합물과 하기 방법 1) X=메실레이트인 경우에는, 화합물 XIII 및 VII을 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 (NaH) 및 극성 유기 용매 DMF의 존재 하에 불활성 기체 조건 하에 실온에서 반응시키고 ii) X=H인 경우에는, 화학식 XIII 및 VII의 화합물을 통상의 미츠노부 조건, 바람직하게는 Ph3P (1.4 당량) 및 DEAD (1.4 당량)를 사용하여 유기 용매, 예컨대 THF 중에서 불활성 기체 조건 하에, 바람직하게는 70℃의 온도에서 반응시키는 것 중 하나에 의해 반응시켰다. 이러한 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 C) 측쇄 도입 조건에 예시된다.
b) N-BOC 탈보호를 가능한 산 중에서 바람직하게는 트리플루오로-아세트산 및 유기 용매, 바람직하게는 CH2Cl2를 사용하는 통상의 BOC 탈보호 조건 하에 수행하였다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행하였다.
c) 아미드 결합 형성을 화학식 XV 및 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산을 사용하여 수행하여 화학식 VI의 아미드를 제조하였다; 반응식 1, 단계 a)에 기재된 바와 같은 통상의 아미드 결합 커플링 조건을 사용하였다. 반응식 1, 단계 a)에 기재된 방법 이외에, HOBt/EDC를 사용하는 카르복실산의 커플링 또는 클로로포르메이트 또는 카르밤산 클로라이드를 사용하는 커플링을 사용하였다. 커플링을 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 DMF 또는 DCM 중에서 수행하고, 최종 화합물을 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 아미드 결합 형성 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 B) 아미드 결합 형성 조건에 예시된다.
반응식 5
Figure 112014067144685-pct00035
a) 7-클로로-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 XVII을 7-클로로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-2-온 XVI으로부터, 환원제로서 바람직하게는 BH3 *THF, 및 용매로서 바람직하게는 THF를 사용하는 통상의 환원 방법에 의해 제조하였다. XVI은 2-클로로-5-(2-메톡시-2-옥소에톡시)피리딘-1-옥시드의 유동 니트로화, 이어서 환원 및 고리화를 통해 이용가능하다.
b) XVII과 X'=브로모 또는 아이오도인 화학식 R2-X'의 아릴 할로게나이드 사이의 교차-커플링을 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/X-Phos, 및 염기, 예컨대 바람직하게는 Cs2CO3 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 100℃의 온도에서 교반하였고, 마이크로웨이브 반응기 내에서 수행할 수 있었다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다. 부흐발트-하르트비히 교차-커플링 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 A) 부흐발트 아미노화 또는 히드록실화에 예시된다.
c) XVIII의 히드록실화를 수성 KOH 및 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/테트라메틸-tert-부틸-Xphos 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 100℃의 온도에서 교반하였다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다.
d) 화학식 XIX의 화합물과 화학식 VII의 화합물의 커플링을 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 (NaH, Cs2CO3, K2CO3) 및 극성 유기 용매, 예컨대 DMF를 사용하여 불활성 기체 조건 하에, 바람직하게는 60-80℃의 온도에서 수행하였다. 이러한 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 C) 측쇄 도입 조건에 예시된다.
e) N-BOC 탈보호를 가능한 산 중에서 바람직하게는 트리플루오로-아세트산 및 유기 용매, 바람직하게는 CH2Cl2를 사용하는 통상의 BOC 탈보호 조건 하에 수행하였다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행하였다.
f) 아미드 결합 형성을 화학식 XXI 및 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산을 사용하여 수행하여 화학식 XXII의 아미드를 제조하였다; 반응식 1, 단계 a)에 기재된 바와 같은 통상의 아미드 결합 커플링 조건을 사용하였고, 또한 HOBt/EDC를 사용하는 카르복실산의 커플링을 적용하였다. 커플링을 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 DMF 또는 DCM 중에서 수행하고, 최종 화합물을 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 아미드 결합 형성 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 B) 아미드 결합 형성 조건에 예시된다.
반응식 6
Figure 112014067144685-pct00036
a) 2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올 XXIII을 제공하기 위한 7-클로로-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 XVII의 히드록실화를 수성 KOH 및 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/테트라메틸-tert-부틸-Xphos 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산을 사용하여 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 100℃의 온도에서 교반하였다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다.
b) 화합물 XXIII과 메실레이트 VII의 커플링을 적합한 염기, 예컨대 수소화나트륨 (NaH) 및 극성 유기 용매, 예컨대 DMF를 사용하여 불활성 기체 조건 하에, 바람직하게는 80℃의 온도에서 실행하였다. 이러한 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 C) 측쇄 도입 조건에 예시된다.
c) XXIV와 X'=브로모 또는 아이오도인 화학식 R2-X'의 아릴 할로게나이드 사이의 교차-커플링을 Pd 촉매/리간드 조합물, 예컨대 바람직하게는 Pd2(dba)3/X-Phos 또는 Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, 및 염기, 예컨대 바람직하게는 Cs2CO3 또는 NaOtBu 및 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 디옥산 또는 톨루엔을 사용하는 통상의 부흐발트-하르트비히 조건 하에 수행하였다. 반응물을 바람직하게는 대략 100℃의 온도에서 교반하였고, 마이크로웨이브 반응기 내에서 수행할 수 있었다. 반응은 바람직하게는 불활성 기체, 예컨대 질소 또는 아르곤 하에 수행하였다. 부흐발트-하르트비히 교차-커플링 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 A) 부흐발트 아미노화 또는 히드록실화에 예시된다.
d) N-BOC 탈보호를 가능한 산 중에서 바람직하게는 트리플루오로-아세트산 및 유기 용매, 바람직하게는 CH2Cl2를 사용하는 통상의 BOC 탈보호 조건 하에 수행하였다. 반응은 바람직하게는 실온에서 수행하였다.
e) 아미드 결합 형성을 화학식 XXI의 화합물 및 화학식 R4C(O)Cl의 산 클로라이드 또는 화학식 R4C(O)OH의 카르복실산을 사용하여 수행하여 화학식 XXII의 아미드를 제조하였다; 반응식 1, 단계 a)에 기재된 바와 같은 통상의 아미드 결합 커플링 조건을 사용하거나 또는 HBTU, HOBt/EDC 또는 HATU를 사용하는 카르복실산의 커플링을 적용하였다. 커플링을 유기 용매, 예컨대 바람직하게는 DMF 또는 DCM 중에서 수행하고, 최종 화합물을 정상 또는 역상 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 아미드 결합 형성 반응에 대한 전형적 조건은 하기 섹션 B) 아미드 결합 형성 조건에 예시된다.
일반적 크로마토그래피 정보
LCMS 방법 M1 (RtM1)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 50 mm
HPLC-칼럼 유형: 액퀴티(Acquity) UPLC HSS T3, 1.8 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05 부피% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄 B) ACN + 0.04 부피% 포름산
HPLC-구배: 1.4분 내 2 - 98% B, 0.45분 98% B, 유량 = 1.2 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 50℃
LCMS 방법 M2 (RtM2)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스(Ascentis Express) C18, 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05 부피% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄 B) ACN + 0.04 부피% 포름산
HPLC-구배: 1.4분 내 2 - 98% B, 0.75분 98% B, 유량 = 1.2 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 50℃
LCMS 방법 M3 (RtM3)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18, 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05 부피% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄 B) ACN + 0.04 부피% 포름산
HPLC-구배: 8.5분 내 2 - 98% B, 1분 98% B, 유량 = 1.2 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 50℃
LCMS 방법 M4 (RtM4)
HPLC-칼럼 치수: 4.6 x 50 mm
HPLC-칼럼 유형: 선파이어(SunFire) C18, 5 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.1 부피% TFA, B) ACN + 0.1 부피% TFA
HPLC-구배: 8.0분 내 5 - 100% B, B 유량 = 2 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 40℃
LCMS 방법 M5 (RtM5)
HPLC-칼럼 치수: 0.46 x 25 cm
HPLC-칼럼 유형: 키랄셀(Chiralcel) OJ-H (1189)
HPLC-용리액: EtOH/MeOH 60:40
HPLC-구배: 등용매, 유량 = 0.5 ml/분
검출기: UV 220 nm
LCMS 방법 M6 (RtM6)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18, 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05% TFA, B) ACN + 0.04% TFA
HPLC-구배: 1.4분 내 2 - 98% B, 0.75분 98% B, 유량 = 1.2 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 50℃
LCMS 방법 M7 (RtM7)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18, 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05% TFA, B) ACN + 0.04% TFA
HPLC-구배: 3.0분 내 10 - 95% B, 1분 95% B, 유량 = 1.2 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 50℃
LCMS 방법 M8 (RtM8)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, B) 아세토니트릴 + 0.04% 포름산
HPLC-구배: 3.0분 내 10 - 95% B, 유량 = 1.2 ml/분
LCMS 방법 M9 (RtM9)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, B) 아세토니트릴 + 0.04% 포름산
HPLC-구배: 0.0에서 0.5분 10% B, 이어서 0.5분에서 3.0분 구배 10 - 95% B, 유량 = 1.2 ml/분
LCMS 방법 M10 (RtM10)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 50 mm
HPLC-칼럼 유형: 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.1 부피% 포름산, B) 아세토니트릴
HPLC-구배: 1.00분 내 20 - 25%, 이어서 3.20분 내 25 - 95% B, 이어서 0.10분 내 95 - 100% B, 이어서 0.20분 동안 100%, 유량 = 0.7 ml/분
LCMS 방법 M11 (RtM11)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 50 mm
HPLC-칼럼 유형: 액퀴티 UPLC BEH C18 1.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.1 부피% 포름산, B) 아세토니트릴
HPLC-구배: 1.00분 내 5 - 10% B, 이어서 3.00분 내 10 - 90% B, 이어서 0.10분 내 90 - 100% B, 이어서 0.40분 동안 100%, 유량 0.7 ml/분
LCMS 방법 M12 (RtM12)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.1 부피% TFA, B) 아세토니트릴
HPLC-구배: 1.7분에 걸쳐 10 - 95% B 및 용매 유량으로서 1.2 mL/분, 이어서 0.7분에 걸쳐 95 5 B, 유량 = 1.4 mL/분.
LCMS 방법 M13 (RtM13)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, B) 아세토니트릴 + 0.04% 포름산
HPLC-구배: 3.7분 내 10 - 95% B, 유량 = 1.2 ml/분
LCMS 방법 M14 (RtM14)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 30 mm
HPLC-칼럼 유형: 아센티스 익스프레스 C18, 2.7 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄, B) 아세토니트릴 + 0.04% 포름산
HPLC-구배: 1.5분 내 10 - 95% B, 1분 95% B, 유량 = 1.2 ml/분
LCMS 방법 M15 (RtM15)
HPLC-칼럼 치수: 0.46 x 25 cm
HPLC-칼럼 유형: 키랄셀 OD-H (1194)
HPLC-용리액: 헥산/EtOH 50:50 + 0.05% DEA
HPLC-구배: 등용매, 유량 = 0.5 ml/분
검출기: UV 220 nm
LCMS 방법 M16 (RtM16)
HPLC-칼럼 치수: 2.1 x 50 mm
HPLC-칼럼 유형: 액퀴티 UPLC HSS T3, 1.8 μm
HPLC-용리액: A) 물 + 0.05 부피% 포름산 + 3.75 mM 아세트산암모늄 B) ACN + 0.04 부피% 포름산
HPLC-구배: 1.4분 내 5 - 98% B, 0.4분 98% B, 유량 = 1.0 ml/분
HPLC-칼럼 온도: 60℃
X-선 분말 회절
기기분석:
방법 X1
기기 브루커(Bruker) D8 GADDS 디스커버(Discover)
조사 CuKα (40 kV, 40 mA)
검출기 HI-STAR 영역 검출기
스캔 범위 6° - 39° (2 세타 값)
융점 결정:
융점은 시차 주사 열량측정법 (DSC)에 의해 결정하였다. DSC는 10℃/분의 가열 속도를 사용하는 TA 인스트루먼츠(TA Instruments) DSC Q2000 상에 기록된 바와 같았다. 0.6 mg 샘플을 표준 알루미늄 팬 (팬 + 덮개, TA 900786.901, 900779.901) 내로 칭량해 넣었다. 써말 어드밴티지 Q-시리즈(Thermal Advantage Q-Series) 소프트웨어 V.2.6.0.367 및 써말 어드밴티지 소프트웨어 V4.6.9를 사용하여 기기를 작동시켰다. 유니버셜 어낼러시스(Universal Analysis) V4.3A 빌드 4.3.0.6을 사용하여 열적 사건을 특성화하였다. 샘플을 핀 홀이 없는 샘플 팬에 대해 측정하였다. 샘플을 하기 프로토콜에 따라 처리하였다:
단계 1: 0℃에서 평형화
단계 2: 300℃까지 10℃/분으로 램핑.
실시예의 제조
화합물을 상기 실시예에 대해 기재된 방식으로 제조한 것으로 언급된 경우에, 당업자는 반응 시간, 시약의 당량수 및 반응 온도를 각각의 구체적 반응을 위해 변경할 수 있다는 것, 및 그럼에도 불구하고 다양한 후처리 또는 정제 조건을 사용하는 것이 필요하거나 또는 바람직할 수 있다는 것을 인지할 것이다.
Figure 112014067144685-pct00037
실시예 A1: (S)-(3-((4-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논
(반응식 1에 따름)
a1) (R)-(3-히드록시피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논
DCM (3 ml) 중 테트라히드로-2H-피란-4-카르복실산 (CAS 등록번호 5337-03-1) (0.200 g, 1.537 mmol) 및 DMF (0.012 ml, 0.154 mmol)의 교반 용액을 3℃에서 옥살릴 클로라이드 (0.202 ml, 2.305 mmol)로 처리하였다. 3℃에서 1시간 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 DCM (2 ml) 중에 용해시키고, 3℃에서 DCM (3 ml) 중 (R)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (CAS 등록번호 104706-47-0) (0.190 g, 1.537 mmol), Et3N (0.535 ml, 3.84 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 3℃에서 1시간 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (10ml)로 처리하고, 여과하였다. 잔류물을 EtOAc로 세척하고, 합한 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / 메탄올 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00038
대안적 방법 a2: 계내에서 산 클로라이드를 제조하는 대신, 프로파노일 클로라이드 (CAS 등록번호 79-03-8)와 같은 상업적으로 입수가능한 산 클로라이드를 사용하였다.
b1) (R)-1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일 메탄술포네이트
DCM (10 ml) 중 (R)-(3-히드록시피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논 (0.245 g, 1.230 mmol)의 교반 용액을 0℃에서 Et3N (0.343 ml, 2.459 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드 (0.192 ml, 2.459 mmol)로 처리하였다. 0℃에서 1시간 후, 물 (20 ml)을 첨가하였다. 유기 층을 포화 NaCl 용액 (20 ml)으로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 디에틸 에테르를 사용한 연화처리에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00039
c1) (S)-(3-((3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논
DMF (3 ml) 중 3,4-디히드로-2H-벤족사진-6-올 (CAS 등록번호 26021-57-8) (0.140 g, 0.926 mmol)의 교반 용액을 실온에서 수소화나트륨 (광유 중 60%, 0.445 g, 1.111 mmol)으로 처리하였다. 실온에서 10분 후, (R)-1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일 메탄술포네이트 (0.283 g, 1.019 mmol)를 첨가하였다. 바이알을 마개로 막고, 50℃에서 3시간 동안 가열하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (50 ml) 중에 용해시키고, 물 (50 ml)을 첨가하였다. 유기 층을 포화 NaCl 용액 (20 ml)으로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / 메탄올 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물을 회색 무정형 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00040
d1) (S)-(3-((4-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논
톨루엔 (1 ml) 중 (S)-(3-((3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논 (0.050 g, 0.150 mmol)의 교반 용액을 실온에서 아르곤 하에 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (CAS 등록번호 760207-87-2) (0.030 g, 0.150 mmol), NaOtBu (0.022 g, 0.226 mmol), 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 (CAS 등록번호 247940-06-3) 및 Pd2(dba)3 (0.004 g, 0.005 mmol)으로 처리하였다. 반응 바이알을 마개로 막고, 마이크로웨이브 반응기 내에서 110℃로 3시간 동안 가열하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00041
대안적 방법 d2: 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 (CAS 등록번호 247940-06-3)을 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (CAS 등록번호 564483-18-7)로 대체하였다.
대안적 방법 d3: 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 (CAS 등록번호 247940-06-3) 및 Pd2(dba)3을 비스(트리-t-부틸포스핀)팔라듐 (CAS 등록번호 53199-31-8)으로 대체하였다.
실시예 A2 내지 A43: 표 1에 열거된 화합물은 실시예 A1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 1
Figure 112014067144685-pct00042
Figure 112014067144685-pct00043
Figure 112014067144685-pct00044
Figure 112014067144685-pct00045
Figure 112014067144685-pct00046
Figure 112014067144685-pct00047
Figure 112014067144685-pct00048
Figure 112014067144685-pct00049
Figure 112014067144685-pct00050
Figure 112014067144685-pct00051
Figure 112014067144685-pct00052
Figure 112014067144685-pct00053
Figure 112014067144685-pct00054
Figure 112014067144685-pct00055
Figure 112014067144685-pct00056
Figure 112014067144685-pct00057
실시예 B1: {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (반응식 2에 따름)
Figure 112014067144685-pct00058
a) (S)-3-(3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
DMF (150 ml) 중 3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (CAS 등록번호 26021-57-8) (4.0 g, 26.5 mmol)의 용액을 20분 동안 20℃에서 NaH (2.117 g, 52.9 mmol)로 처리하였다. (R)-3-메탄술포닐옥시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (9.13 g, 34.4 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 22시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 농축 건조시킨 다음, EtOAc로 녹이고, 하이플로를 통해 여과하고, 여과물을 포화 수성 Na2CO3 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (40분 내 시클로헥산 / 이소프로판올 100:0에서 85:15)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00059
b) (S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
디옥산 (3.5 ml) 중 (S)-3-(3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (2.12 g, 6.62 mmol), 5-브로모-2-메탄술포닐-3-메틸-피리딘 (중간체 IA1) (2.091 g, 7.94 mmol), NaOtBu (1.272 g, 13.23 mmol), XPhos 리간드 (0.158 g, 0.331 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.303 g, 0.331 mmol)의 혼합물을 탈기하고, 110℃에서 12시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 50:50)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00060
c) 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
DCM (15 ml) 중 (S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.5 g, 3.06 mmol) 및 TFA (0.236 ml, 3.06 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 포화 Na2CO3 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 표제 화합물을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00061
d) {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
DCM (4 ml) 중 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (0.085 g, 0.218 mmol), 테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐 클로라이드 (CAS 등록번호 40191-32-0) (0.049 mg, 0.327 mmol) 및 Et3N (0.046 ml, 0.327 mmol)의 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켰다. 조 생성물을 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18, 12분 내 H2O + 0.1% TFA / ACN + 0.1% TFA 90:10에서 30:70)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00062
실시예 B2 내지 B122: 표 2에 열거된 화합물은 실시예 B1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 2
Figure 112014067144685-pct00063
Figure 112014067144685-pct00064
Figure 112014067144685-pct00065
Figure 112014067144685-pct00066
Figure 112014067144685-pct00067
Figure 112014067144685-pct00068
Figure 112014067144685-pct00069
Figure 112014067144685-pct00070
Figure 112014067144685-pct00071
Figure 112014067144685-pct00072
Figure 112014067144685-pct00073
Figure 112014067144685-pct00074
Figure 112014067144685-pct00075
Figure 112014067144685-pct00076
Figure 112014067144685-pct00077
Figure 112014067144685-pct00078
Figure 112014067144685-pct00079
Figure 112014067144685-pct00080
Figure 112014067144685-pct00081
Figure 112014067144685-pct00082
Figure 112014067144685-pct00083
Figure 112014067144685-pct00084
Figure 112014067144685-pct00085
Figure 112014067144685-pct00086
Figure 112014067144685-pct00087
Figure 112014067144685-pct00088
Figure 112014067144685-pct00089
Figure 112014067144685-pct00090
Figure 112014067144685-pct00091
Figure 112014067144685-pct00092
Figure 112014067144685-pct00093
Figure 112014067144685-pct00094
Figure 112014067144685-pct00095
Figure 112014067144685-pct00096
Figure 112014067144685-pct00097
Figure 112014067144685-pct00098
Figure 112014067144685-pct00099
Figure 112014067144685-pct00100
Figure 112014067144685-pct00101
Figure 112014067144685-pct00102
Figure 112014067144685-pct00103
Figure 112014067144685-pct00104
Figure 112014067144685-pct00105
Figure 112014067144685-pct00106
Figure 112014067144685-pct00107
Figure 112014067144685-pct00108
Figure 112014067144685-pct00109
Figure 112014067144685-pct00110
Figure 112014067144685-pct00111
Figure 112014067144685-pct00112
Figure 112014067144685-pct00113
Figure 112014067144685-pct00114
Figure 112014067144685-pct00115
Figure 112014067144685-pct00116
Figure 112014067144685-pct00117
Figure 112014067144685-pct00118
Figure 112014067144685-pct00119
Figure 112014067144685-pct00120
Figure 112014067144685-pct00121
Figure 112014067144685-pct00122
Figure 112014067144685-pct00123
Figure 112014067144685-pct00124
실시예 C1: 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴 (반응식 3에 따름)
Figure 112014067144685-pct00125
a) 6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
아르곤 하에, NaH (2.96 g, 74.1 mmol)를 THF (200 ml) 중 3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (CAS 등록번호 26021-57-8) (5.60 g, 37.0 mmol)의 용액에 조금씩 첨가하였다. 실온에서 20분 동안 교반한 후, TBDMSCl (CAS 등록번호 18162-48-6) (7.26 g, 48.2 mmol)을 천천히 첨가하고, 교반을 1시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 Et2O로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (15분에 걸쳐 시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 60:40)를 한 후, 표제 화합물을 황색 오일 (9.20 g, 94% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00126
b) 5-[6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코티노니트릴
아르곤 하에, XPhos (CAS 등록번호 564483-18-7) (0.79 g, 1.7 mmol) 및 Pd2(dba)3 (CAS 등록번호 51364-51-3) (1.52 g, 1.7 mmol)을 톨루엔 (270 ml) 중 6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (9.00 g, 33.2 mmol), 5-브로모-2-메톡시-니코티노니트릴 (CAS 등록번호 941294-54-8) (7.79 g, 36.6 mmol), NaOtBu (4.79 g, 49.8 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 1시간 동안 교반하고, 농축시켜 갈색 고체를 수득하였으며, 이를 DCM/MeOH (8:2)의 혼합물로 세척하고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 수득한 잔류물을 DCM/MeOH (8:2) 중에 용해시키고, 하이플로 상에서 여과하고, 여과물을 농축시키고, MeOH로 연화처리하여 표제 화합물을 황색 고체 (10.14 g, 77% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00127
c) 5-(6-히드록시-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일)-2-메톡시-니코티노니트릴
TBAF (THF 중 1M) (37.7 ml, 37.7 mmol)를 THF (200 ml) 중에 용해시킨 5-[6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코티노니트릴 (10 g, 25.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 교반하고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액 및 염수로 희석하였다. 수성 층을 EtOAc로 역추출하고, MgSO4 상에서 건조시킨 후, 유기 상을 농축시켜 갈색 잔류물을 수득하였으며, 이를 DCM/MeOH (1:1) 중에 용해시키고, 하이플로 상에서 여과하였다. 여과물을 농축시키고, Et2O로 연화처리하여 표제 화합물을 갈색 고체 (6.63 g, 93% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00128
d) 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
아르곤 하에, NaH (31 mg, 0.78 mmol)를 DMF (2 ml) 중 5-(6-히드록시-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일)-2-메톡시-니코티노니트릴 (100 mg, 0.35 mmol)의 용액에 첨가하고, 실온에서 5분 동안 교반하였다. 메탄술폰산 (R)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일 에스테르 (중간체 IC1) (98.0 mg, 0.35 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, NaH (0.5 당량, 8.47 mg, 0.21 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄술폰산 (R)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일 에스테르 (중간체 IC1) (49.0 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 합한 분획을 염기성화시키고, EtOAc로 추출한 후, 농축시키고, 정제용 RP-HPLC (선파이어 정제용 C18 OBD 30x100mm, 5 μm; 용매 A: H2O+0.1 부피% TFA; 용매 B: CH3CN+0.1 부피% TFA)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 고체 (72 mg, 43% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00129
실시예 C2 내지 C26: 표 3에 열거된 화합물은 실시예 C1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 3
Figure 112014067144685-pct00130
Figure 112014067144685-pct00131
Figure 112014067144685-pct00132
Figure 112016003295471-pct00422
1
Figure 112014067144685-pct00134
Figure 112014067144685-pct00135
Figure 112014067144685-pct00136
Figure 112014067144685-pct00137
Figure 112014067144685-pct00138
Figure 112014067144685-pct00139
Figure 112014067144685-pct00140
Figure 112014067144685-pct00141
Figure 112014067144685-pct00142
Figure 112014067144685-pct00143
실시예 D1: (S)-2-메톡시-5-(6-((1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)피롤리딘-3-일)옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴 (반응식 4에 따름)
a1) 6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진
THF (200 ml) 중 3,4-디히드로-2H-1,4-벤족사진-6-올 (CAS 등록번호 226021-57-8) (6.00 g, 39.70 mmol)의 교반 용액을 실온에서 수소화나트륨 (광유 중 60%, 3.18 g, 79.00 mmol)으로 처리하였다. 실온에서 20분 후, TBDMSCl (7.78 g, 51.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 그 후, 디에틸 에테르 (500 ml) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (100 ml)을 첨가하였다. 수성 층을 디에틸 에테르로 추출하고, 합한 유기 추출물을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00144
b1) 5-(6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴
톨루엔 (270 ml) 중 6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진 (8.88 g, 32.80 mmol)의 교반 용액을 실온에서 아르곤 하에 5-브로모-2-메톡시니코티노니트릴 (CAS 등록번호 941294-54-8) (7.68 g, 36.10 mmol), NaOtBu (4.87 g, 49.2 mmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (CAS 등록번호 564483-18-7) (0.806 g, 1.64 mmol), 및 Pd2dba3 (1.501 g, 1.64 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (200 ml) 중에 용해시키고, 셀라이트(celite)의 패드를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고, 여러 번 초음파처리하여 황색/오렌지색 침전물을 수득하였다. 잔류물을 여과하고, 메탄올로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00145
대안적 방법 b2: 디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (CAS 등록번호 564483-18-7) 및 Pd2(dba)3을 비스(트리-t-부틸포스핀)팔라듐 (CAS 등록번호 53199-31-8)으로 대체하였다.
c1) 5-(6-히드록시-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴
THF (220 ml) 중 5-(6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴 (10.85 g, 27.30 mmol)의 교반 용액을 실온에서 TBAF (THF 중 1.0 M, 40.9 ml, 40.90 mmol)로 처리하였다. 실온에서 40분 후, EtOAc (300 ml) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (200 ml)을 첨가하였다. 유기 추출물을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 디에틸 에테르를 사용한 연화처리에 의해 정제하여 표제 화합물을 연갈색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00146
d1) (S)-tert-부틸 3-((4-(5-시아노-6-메톡시피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트
DMF (60 ml) 중 5-(6-히드록시-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)-2-메톡시니코티노니트릴 (3.70 g, 13.06 mmol)의 교반 용액을 실온에서 수소화나트륨 (광유 중 60%, 1.31 g, 32.70 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, (R)-1-Boc-3-메탄술포닐옥시피롤리딘 (CAS 등록번호 141699-57-2) (5.36 g, 19.59 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / 아세톤 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00147
대안적 방법 d2: 메실화 알콜, 수소화나트륨 및 DMF를 방법 CC4에 기재된 미츠노부 조건을 사용하여 상응하는 히드록시-이속사졸리딘, DEAD 및 THF로 대체하였다.
e1) (S)-2-메톡시-5-(6-(피롤리딘-3-일옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴
DCM (160 ml) 중 (S)-tert-부틸 3-((4-(5-시아노-6-메톡시피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-카르복실레이트 (4.35 g, 9.32 mmol)의 교반 용액을 실온에서 TFA (35.9 ml, 466 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (500 ml) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액 (500 ml)을 첨가하였다. 유기 추출물을 포화 수성 NaCl 용액 (50 ml)으로 세척하고, MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물 (표제 화합물, 황색 고체)을 후속 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014067144685-pct00148
f1) (S)-2-메톡시-5-(6-((1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)피롤리딘-3-일)옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴
DMF (40 ml) 중 1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 (CAS 등록번호 41716-18-1) (0.578 g, 4.45 mmol)의 교반 용액을 실온에서 HOBT (0.695 g, 4.45 mmol), EDC (0.870 g, 4.45 mmol) 및 Et3N (1.24 ml, 8.90 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 그 후, (S)-2-메톡시-5-(6-(피롤리딘-3-일옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴 (1.10 g, 2.97 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 15분 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 DCM (200 ml) 중에 용해시키고, 포화 수성 NaHCO3 용액 (200 ml)을 첨가하였다. 유기 추출물을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / 메탄올 구배) 및 정제용 HPLC (선파이어 C18 칼럼, CH3CN / H2O 중 1% TFA 구배, 순수한 분획을 DCM 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 처리함; 합한 유기 추출물을 MgSO4로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시킴)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00149
대안적 방법 f2: 카르복실산, HOBT, EDC 및 DMF를 카르복실산 클로라이드 및 DCM으로 대체하였다.
대안적 방법 f3: 카르복실산, HOBT, EDC 및 DMF를 클로로포르메이트 및 DCM으로 대체하였다.
대안적 방법 f4: 카르복실산, HOBT 및 EDC를 카르밤산 클로라이드로 대체하였다.
실시예 D2 내지 D40: 표 4에 열거된 화합물은 실시예 D1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 4
Figure 112014067144685-pct00150
Figure 112014067144685-pct00151
Figure 112014067144685-pct00152
Figure 112014067144685-pct00153
Figure 112014067144685-pct00154
Figure 112014067144685-pct00155
Figure 112014067144685-pct00156
Figure 112014067144685-pct00157
Figure 112014067144685-pct00158

Figure 112014067144685-pct00159
Figure 112014067144685-pct00160
Figure 112014067144685-pct00161
Figure 112014067144685-pct00162
Figure 112014067144685-pct00163
Figure 112014067144685-pct00164
Figure 112014067144685-pct00165
Figure 112014067144685-pct00166
Figure 112014067144685-pct00167
Figure 112014067144685-pct00168
Figure 112014067144685-pct00169
Figure 112014067144685-pct00170
실시예 E1: {(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논 (반응식 5에 따름)
Figure 112014067144685-pct00171
a) 7-클로로-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진
THF (20 ml) 중 7-클로로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-2-온 (CAS 등록번호 928118-43-8) (630 mg, 3.41 mmol) 및 BH3 *THF (THF 중 1 M) (10.2 ml, 10.2 mmol)의 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH로 켄칭하고, NaOH 수용액 1 M을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (12분 내 헵탄 / EtOAc 100:0에서 50:50)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (432 mg, 74% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00172
b) 7-클로로-1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]-옥사진
디옥산 (3.5 ml) 중 7-클로로-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (127 mg, 0.74 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (CAS 등록번호 760207-87-2) (0.196 g, 0.986 mmol), Cs2CO3 (534 mg, 1.64 mmol) 및 XPhos (28 mg, 0.06 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd2(dba)3 (27 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 100℃에서 3.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 하이플로 상에서 여과하고, 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (14분 내 헵탄 / EtOAc 95:5에서 40:60)에 의해 정제하여 표제 화합물을 연한색 고체 (190 mg, 87% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00173
c) 1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올
디옥산 (3 ml) 및 5M 수성 KOH 용액 (0.04 ml, 1.95 mmol) 중 7-클로로-1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (190 mg, 0.65 mmol), 테트라메틸-t-부틸-XPhos (13 mg, 0.03 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 탈기하고, Pd2(dba)3 (6 mg, 0.01 mmol)을 첨가하였다. 100℃에서 17.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 하이플로 상에서 여과하고, 여과물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (17분 내 EtOAc / MeOH 100:0에서 85:15)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (111 mg, 62% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00174
d) (S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
DMF (3 ml) 중 1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올 (111 mg, 0.41 mmol)의 용액을 20℃에서 10분 동안 NaH (33 mg, 0.81 mmol)로 처리하였다. (R)-3-메탄술포닐옥시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (162 mg, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 60℃에서 19시간 및 80℃에서 18시간 동안 교반한 후, 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 TBME로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (13.5분 내 헵탄 / EtOAc 93:7에서 40:60)에 의해 정제하여 표제 화합물을 연황색 오일 (107 mg, 59% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00175
e) 1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-7-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진
DCM (1.8 ml) 중 (S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]-옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (103 mg, 0.23 mmol) 및 TFA (0.179 ml, 2.33 mmol)의 용액을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 포화 수성 Na2CO3 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰고, 표제 화합물은 연황색 발포체 (72 mg, 90% 수율)였다.
Figure 112014067144685-pct00176
f) {(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논
DMF (0.6 ml) 중 1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 (CAS 등록번호 41716-18-1) (15 mg, 0.12 mmol), HBTU (53 mg, 0.14 mmol) 및 DIPEA (0.025 ml, 0.14 mmol)의 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. DMF (0.6 ml) 중 1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-7-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (0.037 g, 0.11 mmol)의 용액을 첨가하였다. 실온에서 20시간 동안 교반한 후, 물을 첨가하고, 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18, 16분 내 H2O + 0.1% TFA / ACN + 0.1% TFA 90:10에서 60:40)에 의해 정제하여 표제 화합물을 연황색 발포체 (24 mg, 49% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00177
실시예 E2 내지 11: 표 5에 열거된 화합물은 실시예 E1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 5
Figure 112014067144685-pct00178
Figure 112014067144685-pct00179
Figure 112014067144685-pct00180
Figure 112014067144685-pct00181
Figure 112014067144685-pct00182
Figure 112014067144685-pct00183
참조 실시예 E12 내지 E13: 표 5a에 열거된 화합물은 적절한 보호기 전략을 적용하여 실시예 E1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 5a
Figure 112014067144685-pct00184
실시예 F1: (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논 (반응식 6에 따름)
Figure 112014067144685-pct00185
a) 7-클로로-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진
THF (63 ml) 중 7-클로로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-2-온 (CAS 등록번호 928118-43-8) (3.70 g, 20 mmol)의 용액을 BH3 *THF (THF 중 1M, 47 ml, 47 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 75℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 메탄올 (24 ml, 600 mmol)로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 녹이고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 생성물을 연황색 고체 (3.3 g, 96% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00186
b) 2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올
디옥산 (32.5 ml) 중 7-클로로-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (1.08 g, 6.33 mmol), 수성 KOH 용액 (5.4 ml 물 중 1.07 g, 19 mmol KOH), 2-디-t-부틸포스피노-3,4,5,6-테트라메틸-2',4',6-트리-i-프로필비페닐 98% (0.30 g, 0.63 mmol) 및 Pd2(dba)3 (0.29 g, 0.32 mmol)의 혼합물을 질소로 3회 탈기하고, 튜브를 밀봉하고, 반응 혼합물을 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, EtOAc 및 메탄올로 헹구었다. 여과물을 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH, 98:2에서 75:25)를 한 후, 표제 화합물을 오렌지색 잔류물 (660 mg, 69% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00187
c) (S)-3-(2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
DMF (40 ml) 중 2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올 (0.66 g, 4.34 mmol) 및 (R)-3-메탄술포닐옥시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (1.73 g, 6.51 mmol)의 건조 용액을 수소화나트륨 (광유 중 60%, 0.21 g, 8.68 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 TBME로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 95:5에서 30:70)를 한 후, 표제 화합물을 황색 오일 (1.035 g, 75% 순도, 56% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00188
d) (S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
디옥산 (6 ml) 중 (S)-3-(2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (254 mg, 0.79 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (CAS 등록번호 760207-87-2) (208 mg, 1.03 mmol), XPhos (30 mg, 0.06 mmol), 및 NaOtBu (167 mg, 1.74 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (29 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 튜브를 아르곤으로 채우고, 밀봉하고, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고, 여과물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc로 2회 재추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc, 100:0에서 50:50)를 한 후, 표제 화합물을 투명한 검 (274 mg, 78% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00189
e) 1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-7-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진
DCM (6 ml) 중 (S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (364 mg, 0.82 mmol)의 용액을 TFA (0.63 ml, 8.23 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 생성물을 적색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다 (313mg, 90% 순도, 정량적 수율).
Figure 112014067144685-pct00190
f) (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
DMF (4 ml) 중 1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-카르복실산 (CAS 등록번호 64096-87-3) (106 mg, 0.59 mmol)의 용액을 HBTU (225 mg, 0.59 mmol) 및 DIPEA (0.24 ml, 1.37 mmol)로 처리하였다. 생성된 오렌지색 용액을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, DMF (2 ml) 중 1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-7-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (156 mg, 0.46 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 DCM으로 녹이고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지에 통과시킴으로써 건조시키고, 농축시키고, SFC 크로마토그래피 (칼럼 DEAP (250mm x 30mm, 60A, 5μm) 프린스턴(Princeton), 6분 내 초임계 CO2 중 메탄올의 구배 11 - 16%)를 한 후, 표제 화합물을 연한색 고체 (112 mg, 49% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00191
이소프로판올 / 디에틸 에테르 중에서의 가열 및 냉각에 의한 실시예 F1의 결정화
무정형 실시예 F1 474mg을 이소프로판올 1.4mL 중에 현탁시켰다. 혼합물을 70℃로 가열하고, 70℃에서 교반하여 실시예 F1이 완전히 용해되도록 하였다. 용액을 실온으로 냉각시켰고, 접착성 잔류물이 형성되었다. 디에틸 에테르 2mL를 첨가하고, 슬러리를 48시간 동안 교반하였다. 백색 현탁액이 형성되었다. 현탁액을 여과하고, 고체를 40℃, 15 mbar에서 건조시켰다. 미세한 백색 분말을 수득하였다. 이 물질은 약간의 잔류 용매 (<0.5%)만을 함유하였다. 148.77℃의 용융 개시점을 갖는 실시예 F1의 결정질 무수 형태를 수득하였다.
실시예 F1 무수 형태 (방법 M1)의 허용오차 ±0.5를 갖는 X-선 분말 회절 패턴으로부터의 가장 유의한 2-세타 피크 목록 (정보에 대한 낮은/약한 피크 포함). 주: 하기 피크 목록은 배타적인 것이 아니며, 단지 "특히"일 뿐이다.
Figure 112014067144685-pct00192
실시예 F2 내지 F15: 표 6에 열거된 화합물은 실시예 F1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 6
Figure 112014067144685-pct00193
Figure 112014067144685-pct00194
Figure 112014067144685-pct00195
Figure 112014067144685-pct00196
Figure 112014067144685-pct00197
Figure 112014067144685-pct00198
Figure 112014067144685-pct00199
Figure 112014067144685-pct00200
실시예 G1: 이미다조[2,1-b]티아졸-6-일-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
Figure 112014067144685-pct00201
a) 7-브로모-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진
THF (40 ml) 중 7-브로모-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-2-온 (CAS 등록번호 943995-72-0) (2.93 g, 12.79 mmol)의 용액을 BH3 *THF (THF 중 1M, 30 ml, 30 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 메탄올로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 녹이고, 수성 1M NaOH 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 생성물을 백색 고체 (2.48 g, 90% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00202
b) 7-브로모-2,3-디히드로-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카르복실산 벤질 에스테르
THF (50 ml) 중 7-브로모-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (1.85 g, 8.60 mmol)의 건조 용액을 0℃에서 광유 중 60% NaH (0.52 g, 12.90 mmol)로 조금씩 처리하고, 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 벤질 클로로포르메이트 (CAS 등록번호 501-53-1) (1.40 ml, 9.85 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 20시간 동안 교반하고, 메탄올로 최종적으로 켄칭하고, 이어서 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc, 100:0에서 60:40)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (2.06 g, 68% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00203
c) 2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올
디옥산 (16 ml) 중 7-브로모-2,3-디히드로-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카르복실산 벤질 에스테르 (1.27 g, 3.63 mmol), 수성 KOH 용액 (3.2 ml 물 중 0.90 g, 16 mmol KOH), 2-디-t-부틸포스피노-3,4,5,6-테트라메틸-2',4',6-트리-i-프로필비페닐 98% (0.26 g, 0.54 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (0.25 g, 0.27 mmol)을 첨가하였다. 튜브를 아르곤으로 채우고, 이어서 밀봉하고, 반응 혼합물을 100℃에서 19시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, EtOAc 및 메탄올로 헹구었다. 여과물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH, 95:5에서 60:40)를 한 후, 표제 화합물을 오렌지색 잔류물 (262 mg, 47% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00204
d) (S)-3-(2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
DMF (6 ml) 중 2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-올 (200 mg, 0.66 mmol) 및 (R)-3-메탄술포닐옥시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (262 mg, 0.99 mmol)의 건조 용액을 광유 중 수소화나트륨 60% (53 mg, 1.33 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 80℃에서 17시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 TBME로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc, 88:12에서 0:100)를 한 후, 표제 화합물을 오일 (140 mg, 66% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00205
e) (S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
디옥산 (2.5 ml) 중 (S)-3-(2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (115 mg, 0.36 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-트리플루오로메틸피리딘 (CAS 등록번호 1214377-42-0) (119 mg, 0.47 mmol), XPhos (14 mg, 0.03 mmol), 및 NaOtBu (76 mg, 0.79 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 5분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (13 mg, 0.01 mmol)을 첨가하였다. 튜브를 아르곤으로 채우고, 이어서 밀봉하고, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고, 여과물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc, 93:7에서 40:60)를 한 후, 표제 화합물을 투명한 검 (91 mg, 51% 수율)으로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00206
f) 1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-7-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진
DCM (1.3 ml) 중 (S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (88 mg, 0.18 mmol)의 용액을 TFA (0.14 ml, 1.77 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 Na2CO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (66 mg, 94% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00207
g) 이미다조[2,1-b]티아졸-6-일-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
DMF (0.45 ml) 중 이미다조[2,1-b]티아졸-6-카르복실산, 히드로브로마이드 (1:1) (CAS 등록번호 725234-39-9) (25 mg, 0.10 mmol)의 용액을 HBTU (41 mg, 0.11 mmol) 및 DIPEA (0.04 ml, 0.21 mmol)로 처리하였다. 생성된 오렌지색 용액을 실온에서 5분 동안 교반한 다음, DMF (0.45 ml) 중 1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-7-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진 (32 mg, 0.08 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하고, 이어서 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 녹이고, 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, RP 정제용 HPLC (선파이어 정제용 C18 30x100 mm, 5 μm; 용매 A: H2O+0.1 부피% TFA; 용매 B: CH3CN+0.1 부피% TFA, 16분 내 구배 15-45% B)를 한 후, 표제 화합물을 수득하였다. 애질런트(Agilent) PL-HCO3 MP SPE 카트리지 상에서 여과한 후, 표제 화합물을 고체 (23 mg, 52% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00208
실시예 G2 내지 G3: 표 7에 열거된 화합물은 실시예 G1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 7
Figure 112014067144685-pct00209
Figure 112014067144685-pct00210
실시예 H1 내지 H16: 표 8에 열거된 화합물은 크로마토그래피 부분입체이성질체 분리에 의해 제조하였다.
표 8
Figure 112014067144685-pct00211
Figure 112014067144685-pct00212
Figure 112014067144685-pct00213
Figure 112014067144685-pct00214
Figure 112014067144685-pct00215
Figure 112014067144685-pct00216
Figure 112014067144685-pct00217
Figure 112014067144685-pct00218
Figure 112014067144685-pct00219
실시예 I1: (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
Figure 112014067144685-pct00220
a) 5-플루오로-6-메톡시-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온
MeOH (10 ml) 중 6-브로모-5-플루오로-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (CAS 등록번호 1029421-36-0) (5.0 g, 20 mmol)의 용액을 소듐 메톡시드 용액 (MeOH 중 30%, 11.3 ml, 61 mmol) 및 CuI (0.4 g, 2 mmol)로 처리하였다. 80℃에서 20시간 동안 교반한 후, 반응물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 연황색 고체 (2.2 g, 92% 수율)를 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00221
b) 5-플루오로-6-히드록시-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온
DCM (50 ml) 중 5-플루오로-6-메톡시-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (2.0 g, 10 mmol)의 용액을 삼브로민화붕소 (9.6 ml, 101 mmol)로 0℃에서 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, 메탄올로 켄칭하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 녹이고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 10% 수성 Na2S2O4 용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100:0에서 60:40)를 한 후, 표제 화합물을 갈색 고체 (780 mg, 42% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00222
c) 5-플루오로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올
THF (10 ml) 중 5-플루오로-6-히드록시-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (780 mg, 4.2 mmol)의 용액을 BH3 *THF (THF 중 1M, 12.8 ml, 12.8 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반한 다음, 0℃로 냉각시키고, 메탄올 (30 ml)로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 갈색 오일 (720 mg, 정량적 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00223
d) (S)-3-(5-플루오로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
THF (20 ml) 중 트리페닐포스핀 (1.5 g, 5.7 mmol)의 용액을 DEAD (0.900 ml, 5.69)로 0℃에서 처리하였다. 오렌지색 용액을 10분 동안 실온에서 교반하고, 이어서 5-플루오로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (740 mg, 4.37 mmol) 및 (R)-tert-부틸 3-히드록시피롤리딘-1-카르복실레이트 (1065 mg, 5.69 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 19시간 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100:0에서 70:30)를 한 후, 표제 화합물을 무색 오일 (1.1 g, 74% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00224
e) (S)-3-[5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
디옥산 (2 ml) 중 (S)-3-(5-플루오로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (100 mg, 0.296 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (CAS 등록번호 760207-87-2, 179 mg, 0.887 mmol), RuPhos (6.90 mg, 0.015 mmol), NaOtBu (85 mg, 0.887 mmol) 및 (2-디시클로힐포스피노-2' 6'-디이소프로필-1 1'-비페닐)(2-(2-아미노에틸)페닐)팔라듐(II) (12.07 mg, 0.015 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 탈기한 다음, 밀봉하고, 반응 혼합물을 100℃에서 23시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고, 여과물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100:0에서 70:30)를 한 후, 표제 화합물을 황색 오일 (123 mg, 63% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00225
f) 5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
DCM (2 ml) 중 (S)-3-[5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (123 mg, 0.185 mmol)의 용액을 4N HCl/디옥산 (0.046 ml, 0.185 mmol)으로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반한 다음, 감압 하에 농축시켜 흑색 오일 (100 mg, 79% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00226
g) (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
DCM (2 ml) 중 1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-카르복실산 (CAS 등록번호 64096-87-3) (33.9 mg, 0.15 mmol)의 용액을 실온에서 Et3N (0.061 ml, 0.440 mmol) 및 HATU (55.7 mg, 0.147 mmol)로 처리하였다. 생성된 오렌지색 용액을 실온에서 20분 동안 교반한 다음, DCM (2 ml) 중 5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (100 mg, 0.147 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 정제용 RP-HPLC (선파이어 C18 칼럼 OBD 5 mm 30x100mm, 16분 내 구배 25%에서 45% ACN)를 한 후, 표제 화합물을 수득하였다. 분획을 동결건조시키고, PL-HCO3 MP SPE 카트리지 상에서 여과하여 갈색 고체 (54 mg, 71% 수율)를 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00227
실시예 I2 내지 I3: 표 9에 열거된 화합물은 실시예 I1에 사용된 것과 유사한 절차에 의해 제조하였다.
표 9
Figure 112014067144685-pct00228
Figure 112014067144685-pct00229
실시예 J: 5-{6-[(S)-1-((S)-1-아세틸-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]-옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00230
DCM (1 ml) 중 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((S)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴 (실시예 D39; 23 mg, 0.051 mmol)의 용액을 Et3N (0.014 ml, 10.4 mg, 0.102 mmol)으로 처리하였다. 용액을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, 아세틸 클로라이드 (0.0044 ml, 4.87 mg, 0.061 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 추가 2 당량의 Et3N (0.014 ml, 10.4 mg, 0.102 mmol) 및 1 당량의 아세틸 클로라이드 (0.0037 ml, 4.06 mg, 0.051 mmol)를 첨가하고, 교반을 실온에서 1.5시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 DCM 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석한 다음, 상 분리기에 통과시키고, 수성 층을 DCM으로 2회 추출하고, 합한 유기 층을 농축시켜 표제 화합물을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18, 20분 내 10-85% ACN)에 의해 정제하였다. 분획을 DCM/NaHCO3으로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 황색 발포체 (14 mg, 53% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00231
실시예 K: 5-{6-[(S)-1-((R)-1-아세틸-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00232
본 실시예는 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((R)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴 (실시예 D40)로부터 출발하여 실시예 J와 유사하게 제조하였다.
Figure 112014067144685-pct00233
실시예 L: 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((R)-1-메틸-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00234
MeOH (1 ml) 중 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((R)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴 (실시예 D40, 26 mg, 0.058 mmol)의 용액을 37% 수성 포름알데히드 용액 (0.043 ml, 46.9 mg, 0.578 mmol) 및 아세트산 (0.004 ml, 4.17 mg, 0.0069 mmol)으로 처리하였다. 용액을 아르곤 하에 실온에서 45분 동안 교반한 다음, NaBH3CN (90% 고체 5.65 mg, 0.081 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하고, DCM 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석하였다. 수성 층을 DCM으로 2회 재추출하고, 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18, 20분 내 구배 5-75% ACN)에 의해 정제하였다. 분획을 DCM/포화 수성 NaHCO3 용액으로 추출하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 황색 발포체 (20 mg, 72% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00235
실시예 M; 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-1-피리딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
Figure 112014067144685-pct00236
디옥산 (1 ml) 중 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-1-피리딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (실시예 B1에 기재된 바와 같이 제조함; 60 mg, 0.154 mmol), 2-클로로피리딘 (CAS 109-09-1, 0.017 ml, 21.0 mg, 0.185 mmol), Xphos (8.81 mg, 0.018 mmol) 및 Cs2CO3 (125 mg, 0.385 mmol)의 용액을 아르곤으로 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (7.05 mg, 0.0077 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 가열하고, XPhos (8.81 mg, 0.018 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 다시 아르곤으로 탈기하고, Pd2(dba)3 (7.05 mg, 0.0077 mmol)을 첨가하였다. 교반을 80℃에서 밤새 계속하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 NP-HPLC (칼럼 그레이스 그롬 사피르(Grace Grom Saphir) 65 Si, 12분 내 구배 헵탄:EtOAc:MeOH 68:30:2에서 0:65:35)에 의해 정제하여 32 mg (45%)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00237
실시예 N; 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-1-피리미딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
Figure 112014067144685-pct00238
ACN (1 ml) 중 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-1-피리딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (실시예 B1에 기재된 바와 같이 제조함; 60 mg, 0.154 mmol), 2-클로로피리미딘 (CAS 1722-12-9, 24.7 mg, 0.216 mmol) 및 DIPEA (0.054 ml, 39.8 mg, 0.308 mmol)의 용액을 마이크로웨이브 반응기 내에서 140℃로 30분 동안 가열하였다. 생성물을 포화 수성 NaHCO3 용액 및 EtOAc로 추출하고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 정제용 NP-HPLC (칼럼 그레이스 그롬 사피르 65 Si, 12분 내 구배 헵탄:EtOAc:MeOH 68:30:2에서 0:65:35)에 의해 정제하여 45 mg (63%)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00239
실시예 O1: 2-메톡시-5-{2-메틸-6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00240

Figure 112014067144685-pct00241
a) N-(5-벤질옥시-2-히드록시-페닐)-2-클로로-프로피온아미드
DMF (20 ml) 중 2-클로로-프로피온산 (CAS 등록번호 598-78-7) (0.914 ml, 7.53 mmol)의 용액을 Et3N (1.259 ml, 9.03 mmol) 및 HATU (3.05 g, 8.03 mmol)로 처리하였다. 생성된 용액을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 2-아미노-4-벤질옥시-페놀 (CAS 등록번호 102580-07-4) (1.08 g, 5.02 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, EtOAc로 희석하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 50:50)를 한 후, 표제 화합물을 오렌지색 고체 (617 mg, 40% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00242
b) 6-벤질옥시-2-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온
DMF (15 ml) 중 N-(5-벤질옥시-2-히드록시-페닐)-2-클로로-프로피온아미드 (617 mg, 2.0 mmol)의 건조 용액을 0℃에서 수소화나트륨 95% (58.1 mg, 2.4 mmol)로 처리하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 80:20)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (146 mg, 27% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00243
c) 6-벤질옥시-2-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
THF (4 ml) 중 6-벤질옥시-2-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (146 mg, 0.54 mmol)의 용액을 0℃에서 BH3 *THF (THF 중 1M, 0.813 ml, 0.813 mmol)로 처리하였다. 35℃에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 물 (0.5 ml) 및 수성 NaOH 4N 용액 (0.5 ml)으로 켄칭한 다음, EtOAc로 희석하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 표제 화합물을 백색 고체 (125 mg, 90% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00244
d) 2-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올
MeOH (10 ml) 중 6-벤질옥시-2-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (124 mg, 0.486 mmol)의 용액을 실온에서 포름산암모늄 (276 mg, 4.37 mmol) 및 Pd(OH)2 (68.2 mg, 0.486 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 15분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, DCM 및 MeOH로 헹구고, 이어서 여과물을 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH, 100:0에서 90:10)를 한 후, 표제 화합물을 갈색 고체 (69.4 mg, 87% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00245
e) [(S)-3-(2-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-일]-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
DMF (1.4 ml) 중 2-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (69 mg, 0.42 mmol) 및 (R)-1-(테트라히드로-2H-피란-4-카르보닐)피롤리딘-3-일 메탄술포네이트 (중간체 C1, 209 mg, 0.75 mmol)의 건조 용액을 광유 중 수소화나트륨 60% (15.8 mg, 0.63 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH, 100:0에서 95:5)를 한 후, 표제 화합물을 적색 오렌지색 점착성 고체 (128 mg, 88% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00246
f) 2-메톡시-5-{2-메틸-6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
톨루엔 (2.5 ml) 중 (S)-(3-(2-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논 (128 mg, 0.369 mmol), 5-브로모-2-메톡시니코티노니트릴 (CAS 등록번호 941294-54-8, IA12), (94 mg, 0.443 mmol), XPhos (8.81 mg, 0.018 mmol), NaOtBu (53.3 mg, 0.554 mmol) 및 Pd2(dba)3 (16.92 mg, 0.018 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 20분 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 하이플로를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고, 여과물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 정제용 RP-HPLC (선파이어 C18 칼럼 OBD 5 mm 30x100mm, 15분 내 구배 32%에서 67% ACN)를 한 후, 표제 화합물을 수득하였다. 분획을 동결건조시키고, PL-HCO3 MP SPE 카트리지 상에서 여과하여 갈색 고체 (39.1 mg, 22% 수율)를 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00247
실시예 O2 내지 O3: 표 10에 열거된 화합물은 크로마토그래피 부분입체이성질체 분리에 의해 제조하였다.
표 10
Figure 112014067144685-pct00248
Figure 112014067144685-pct00249
실시예 P: 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00250
a) (S)-tert-부틸 4-((3-(4-(5-시아노-6-메톡시피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일옥시)피롤리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-카르복실레이트
DCE (4.5 ml) 중 2-메톡시-5-[6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴 (유사체 B1, c) 참조, 95 mg, 0.270 mmol)의 용액을 tert-부틸 4-포르밀피페리딘-1-카르복실레이트 (60 mg, 0.281 mmol)로 처리하였다. 실온에서 2일 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 0:100)를 한 후, 표제 화합물을 수율 66 mg (40%)으로 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00251
b) (S)-2-메톡시-5-(6-(1-(피페리딘-4-일메틸)피롤리딘-3-일옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴
DCM (2 ml) 중 (S)-tert-부틸 4-((3-(4-(5-시아노-6-메톡시피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일옥시)피롤리딘-1-일)메틸)피페리딘-1-카르복실레이트) (66 mg, 0.120 mmol)의 용액을 TFA (0.093 ml, 1.20 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 Na2CO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 생성물 (36 mg, 67% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00252
c) (S)-2-메톡시-5-(6-(1-((1-메틸피페리딘-4-일)메틸)피롤리딘-3-일옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴
DCE (2 ml) 중 (S)-2-메톡시-5-(6-(1-(피페리딘-4-일메틸)피롤리딘-3-일옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴 (36 mg, 0.080 mmol)의 용액을 37% 수성 포름알데히드 용액 (8.94 μl, 0.120 mmol)으로 처리하였다. 용액을 아르곤 하에 실온에서 15분 동안 교반한 다음, NaBH3CN (50.9 mg, 0.240 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, DCM 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 희석하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18, 15분 내 구배 15-50% ACN)에 의해 정제한 후, 표제 화합물을 수득하였다. 분획을 DCM/포화 수성 NaHCO3 용액으로 추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 동결건조시켜 표제 화합물 (18 mg, 48% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00253
Figure 112014067144685-pct00254
실시예 Q: {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
Figure 112014067144685-pct00255
a) 6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온
DMF (8 ml) 중 6-히드록시-2H-벤조[b][1,4]옥사진-3(4H)-온 (CAS 등록번호 53412-38-7) (1076 mg, 6.52 mmol)의 용액을 실온에서 TBDMSCl (1080 mg, 7.17 mmol) 및 이미다졸 (532 mg, 7.82 mmol)로 처리하였다. 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 50:50)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (1.18 g, 65% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00256
b) 3,3-디듀테로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올
THF (100 ml) 중 6-(tert-부틸-디메틸-실라닐옥시)-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (8.34 g, 29.8 mmol)의 용액을 0℃에서 중수소화알루미늄리튬 (2.26 g, 59.7 mmol)으로 처리하였다. 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 차가운 수성 1 M 로쉘 염 용액에 첨가하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 0:100)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (1.40 g, 31% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00257
c) (S)-3-(3,3-디듀테로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
DMF (10 ml) 중 3,3-디듀테로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (1.44 g, 9.40 mmol) 및 (R)-3-메탄술포닐옥시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (5.49 g, 20.68 mmol)의 건조 용액을 광유 중 수소화나트륨 60% (0.752 g, 18.80 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 0:100)에 의해 정제하여 표제 화합물 4.12 g (정량적 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00258
d) (S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,3-디듀테로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
본 실시예는 실시예 G1, e)와 유사하게 제조하였다.
Figure 112014067144685-pct00259
e) 4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,3-디듀테로-6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조-[1,4]옥사진
본 실시예는 실시예 G1, f)와 유사하게 제조하였다.
Figure 112014067144685-pct00260
f) {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
본 실시예는 실시예 B1, d)와 유사하게 제조하였다.
Figure 112014067144685-pct00261
실시예 R: 5-{6-[(S)-1-(4-히드록시-시클로헥산카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00262
본 실시예는 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((S)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴로부터 출발하여 실시예 J와 유사하게 제조하였다.
Figure 112014067144685-pct00263
실시예 S: 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(2-피리딘-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00264
본 실시예는 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((S)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴로부터 출발하여 실시예 J와 유사하게 제조하였다.
Figure 112014067144685-pct00265
실시예 T: {(S)-3-[4-(5-아미노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논
a) 5-[6-((S)-1-tert-부톡시카르보닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코틴산 메틸 에스테르
Figure 112014067144685-pct00266
아르곤 하에, K3PO4 (815 mg, 2.00 mmol) 및 비스-(t-부틸포스핀)팔라듐 (29.4 mg 0.06 mmol)을 톨루엔 (6 ml) 중 (S)-3-(3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (실시예 B 단계 a)에 기재된 바와 같이 제조함) (615 mg, 1.92 mmol) 및 5-브로모-2-메톡시-니코틴산 메틸 에스테르 (IA 22, CAS 등록번호 122433-41-4) (614 mg, 1.30 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 15분 동안 탈기한 다음, 110℃에서 18시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc 90:10에서 0:100)에 의해 정제하여 황색 검 (474 mg, 51% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00267
b) 5-[6-((S)-1-tert-부톡시카르보닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코틴산
Figure 112014067144685-pct00268
디옥산 (5 ml) 중 5-[6-((S)-1-tert-부톡시카르보닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코틴산 메틸 에스테르 (483 mg, 0.99 mmol)의 용액을 물 (2 ml) 중 수산화나트륨 펠릿 (119mg, 2.98 mmol)의 용액으로 처리하였다. 용액을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 1N HCl 용액을 사용하여 pH3으로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc 100:0에서 0:100, 이어서 EtOAc/MeOH 90:10에서 80:20)를 한 후, 표제 화합물을 고체 (370mg, 79% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00269
c) (S)-3-[4-(5-tert-부톡시카르보닐아미노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
Figure 112014067144685-pct00270
tBuOH (5 ml) 중 5-[6-((S)-1-tert-부톡시카르보닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코틴산 (370 mg, 0.78 mmol) 및 Et3N (0.28 ml, 1.96 mmol)의 용액을 DPPA (CAS 등록번호 26386-88-9) (0.17 ml, 0.78 mmol)로 처리하고, 100℃에서 6시간 동안 교반하였다. DCM 및 포화 수성 NaHCO3 용액을 첨가하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통한 용리에 의해 분리하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc 100:0에서 50:50)를 한 후, 표제 화합물을 분홍색 검 (114 mg, 24%)으로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00271
d) 2-메톡시-5-[6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-피리딘-3-일아민
Figure 112014067144685-pct00272
DCM (2 ml) 중 (S)-3-[4-(5-tert-부톡시카르보닐아미노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (130 mg, 0.24 mmol)의 용액을 TFA (CAS 등록번호 76-05-1)로 처리하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 2 g 이솔루트(Isolute) SCX-2 카트리지 (용리액 MeOH, 이어서 2M NH3/MeOH)로부터 용리시킨 후, 표제 화합물을 황색 검 (88 mg, 정량적 조 물질)으로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00273
e) {(S)-3-[4-(5-아미노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논
Figure 112014067144685-pct00274
DMF (1 ml) 중 1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 (CAS 등록번호 41716-18-1) (36.0 mg, 0.26 mmol) 및 Et3N (0.11 ml, 0.78 mmol)의 용액을 HBTU (CAS 등록번호 94790-37) (107 mg, 0.28 mmol)로 처리하였다. 실온에서 20분 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 5℃로 냉각시키고, DMF (3 ml) 중 2-메톡시-5-[6-((S)-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-피리딘-3-일아민 (88 mg, 0.26 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 잔류물을 DCM (10 ml) 중에 녹이고, 포화 수성 NaHCO3 용액 (5 ml)으로 세척하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통한 용리에 의해 분리하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc 100:0에서 0:100)에 의해 정제하고, 합한 분획을 농축시키고, tBuOH/H2O 중에 용해시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 무색 고체 (21 mg, 37% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00275
실시예 U: N-(2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-피리딘-3-일)-메탄술폰아미드
Figure 112014067144685-pct00276
피리딘 (1ml) 중 {(S)-3-[4-(5-아미노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]-옥사지닐옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논 (22.9 mg, 0.05 mmol)의 용액을 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (0.08 ml, 0.97 mmol)로 처리하고, 50℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM 및 H2O로 희석하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통한 용리에 의해 분리하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc 100:0에서 0:100, 이어서 EtOAc/MeOH 90:10에서 80:20)에 의해 정제하고, 합한 분획을 농축시키고, tBuOH/H2O 중에 용해시키고, 동결건조시켜 표제 화합물을 무색 고체 (14 mg, 49%)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00277
실시예 V: (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
Figure 112014067144685-pct00278
a) 6-메톡시-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온
MeOH (8.1 ml) 중의 NaOMe 30% 중 6-브로모-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (CAS 등록번호 1154740-47-2) (1000 mg, 4.13 mmol) 및 CuI (79 mg, 0.41 mmol)의 용액을 130℃에서 5시간 동안 교반하였다. 오렌지색/갈색 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 고체를 수득하였다. 시클로헥산으로 연화처리하여 표제 화합물을 분홍색 고체 (647 mg, 70% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00279
b) 6-히드록시-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온
DCM (30 ml) 중 6-메톡시-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (647 mg, 3.35 mmol)의 현탁액을 아르곤 하에 실온에서 BBr3 (3.16 ml, 33.5 mmol)으로 처리하고, 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 투명한 용액이 얻어질 때까지 반응 혼합물을 0℃에서 MeOH의 적가에 의해 켄칭하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 얼음/포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물을 갈색 고체 (647 mg, 조 물질)로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014067144685-pct00280
c) 5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올
THF (20 ml) 중 6-히드록시-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (647 mg, 3.61 mmol)의 용액을 아르곤 하에 0℃에서 BH3 *THF (THF 중 1M, 10.83 ml, 10.83 mmol)로 처리하고, 18시간 동안 실온에서 교반하였다. MeOH를 첨가하고, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시켜 잔류물을 수득하고, 이를 THF (20 ml) 중에 용해시키고, BH3 *THF (THF 중 1M, 10.83 ml, 10.83 mmol)로 처리하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. MeOH를 첨가하고, 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 농축 건조시켜 표제 화합물을 갈색 고체 (600 mg, 조 물질)로서 수득하고, 이를 후속 단계에서 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014067144685-pct00281
d) (S)-3-(5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
THF (10 ml) 중 트리페닐포스핀 (1.33 g, 5.09 mmol)의 용액을 DEAD (0.8 ml, 5.09 mmol)에 이어서 (R)-3-히드록시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (1 g, 5.45 mmol) 및 5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (600 mg, 3.63 mmol)로 처리하였다. 생성된 적색/갈색 용액을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 갈색 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 90:10에서 40:60)에 의해 3회 정제하여 표제 화합물을 무색 오일 (130 mg, 11% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00282
e) (S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
디옥산 (2 ml) 중 (S)-3-(5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (120 mg, 0.36 mmol), 5-브로모-2-메톡시-3-메틸피리딘 (CAS 등록번호 760207-87-2) (145 mg, 0.72 mmol), NaOtBu (103 mg, 1.08 mmol), RuPhos (CAS 등록번호 787618-22-8) (8 mg, 0.02 mmol) 및 [RuPhos]팔라다사이클 (CAS 등록번호 787618-22-8) (15 mg, 0.02 mmol)의 용액을 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 오렌지색/갈색 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물로 세척하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 95:05에서 60:40)에 의해 3회 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (97 mg, 60% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00283
f) (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
DCM (3 ml) 중 (S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (97 mg, 0.21 mmol)의 용액을 아르곤 하에 실온에서 TFA (0.16 ml, 2.13 mmol)로 처리하고, 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 유기 용액을 상 분리 카트리지를 통해 분리하여 황색 용액을 수득하였다. 1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-카르복실산 (CAS 등록번호 64096-87-3) (49 mg, 0.28 mmol), Et3N (0.09 ml, 0.64 mmol), EDC (62 mg, 0.32 mmol), HOBT (49 mg, 0.32 mmol)를 황색 용액에 첨가하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 유기 층을 상 분리 카트리지에 통과시킴으로써 분리하고, 이어서 농축시키고, 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18 OBD 5 mm 30x100mm, 용매 A: H2O (0.1% TFA) 용매 B: CH3CN (0.1% TFA)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (76 mg, 70% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00284
실시예 W: {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
Figure 112014067144685-pct00285
a) 6-브로모-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
THF (9 ml) 중 6-브로모-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (CAS 등록번호 1154740-47-2) (425 mg, 1.56 mmol)의 용액을 아르곤 하에 0℃에서 BH3 *THF (THF 중 1M, 4.7 ml, 4.69 mmol)로 처리하고, 18시간 동안 실온에서 교반하였다. BH3.THF 1M (2 ml)을 첨가하고, 교반을 추가로 24시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 80:20)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (324 mg, 86% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00286
b) 6-브로모-4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
톨루엔 (13 ml) 중 6-브로모-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (324 mg, 1.42 mmol), 중간체 IA1 (391 mg, 1.56 mmol), Cs2CO3 (1018 mg, 3.13 mmol), BINAP (CAS 등록번호 98327-87-8) (44 mg, 0.07 mmol), Pd(OAc)2 (CAS 등록번호 3375-31-3) (32 mg, 0.14 mmol)의 용액을 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 촉매 및 리간드를 재로딩하고, 교반을 추가로 24시간 동안 100℃에서 계속하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물로 세척하였다. 유기 층을 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 97:03에서 40:60)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (345 mg, 58% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00287
c) 벤질-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-아민
디옥산 (16 ml) 중 6-브로모-4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (324 mg, 0.82 mmol), 벤질아민 (350 mg, 3.26 mmol), NaOtBu (157 mg, 1.63 mmol), RuPhos (CAS 등록번호 787618-22-8) (30 mg, 0.06mmol) 및 [브레트포스]팔라다사이클 (CAS 등록번호 1148148-01-9) (52 mg, 0.06 mmol)의 용액을 80℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 여과하고, 여과물을 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 88:12에서 35:65)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (228 mg, 66% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00288
d) 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일아민
MeOH/THF (2.5/2.5 ml) 중 벤질-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일]-아민 (228 mg, 0.53 mmol), 아세트산 (0.21 ml, 3.70 mmol), Pd/C의 용액을 실온에서 H2로 65시간 동안 수소화시켰다. 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물을 녹색 오일 (200 mg, 조 물질, 잔류 AcOH 포함)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00289
e) 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올
물 (3.5 ml) 및 H2SO4 (0.32 ml) 중 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일아민 (200 mg, 0.60 mmol)의 용액을 물 (10 ml) 중 아질산나트륨 (49.7 mg, 0.72 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 혼합물을 실온에서 3일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH 88:12에서 80:20)에 의해 정제하여 표제 화합물을 갈색 오일 (50 mg, 25% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00290
f) (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논
THF (2.5 ml) 중 트리페닐포스핀 (55 mg, 0.21 mmol)의 용액을 DEAD (0.03 ml, 0.21 mmol)에 이어서 (R)-3-히드록시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (33 mg, 0.18 mmol) 및 4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (50 mg, 0.15 mmol)로 처리하였다. 생성된 적색/갈색 용액을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시켰다. 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 90:10에서 40:60)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (44 mg, 58% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00291
g) {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
DCM (4 ml) 중 (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논 (44 mg, 0.09 mmol)의 용액을 아르곤 하에 실온에서 TFA (0.07 ml, 0.17 mmol)로 처리하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 유기 용액을 상 분리 카트리지를 통해 분리하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH 100:0에서 90:10)에 의해 정제하였다. 수득한 생성물을 DCM (4 ml) 중에 용해시키고, Et3N을 첨가하였다. 테트라히드로-피란-4-카르보닐 클로라이드 (CAS 등록번호 40191-32-0) (15 mg, 0.10 mmol)를 반응 혼합물에 0℃에서 첨가하고, 생성된 오렌지색 용액을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 유기 층을 상 분리 카트리지를 통한 용리에 의해 분리하고, 농축시키고, SFC (칼럼 NH2 (250 x 30mm (l x w), 60A, 5μm, 프린스턴, 초임계 CO2 중 메탄올의 구배)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (15 mg, 32% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00292
실시예 X: {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논
Figure 112014067144685-pct00293
a) 6-브로모-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
THF (50 ml) 중 6-브로모-5-메틸-4H-벤조[1,4]옥사진-3-온 (CAS 등록번호 1154740-47-2) (2.8 g, 11.56 mmol)의 용액을 아르곤 하에 BH3 *THF (THF 중 1M, 34.7 ml, 34.70 mmol)로 처리하고, 환류 하에 2시간 동안 가열하였다. MeOH를 첨가하고, 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 80:20)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (1.8 g, 68% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00294
b) 6-브로모-4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진
디옥산 (11 ml) 중 6-브로모-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (500 mg, 2.19 mmol), 중간체 IA6 (574 mg, 2.41 mmol), NaOtBu (421 mg, 4.38 mmol), 브레트포스 (CAS 등록번호 1070663-78-3) (59 mg, 0.11 mmol) 및 [브레트포스]팔라다사이클 (CAS 등록번호 1148148-01-9) (88 mg, 0.11 mmol)의 용액을 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 촉매 및 리간드를 재로딩하고, 교반을 100℃에서 48시간 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고 농축시켜 갈색 오일을 수득하였다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 80:20)에 의해 정제하여 표제 화합물을 갈색 오일 (150 mg, 18% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00295
c) 4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올
디옥산 (2 ml) 중 6-브로모-4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (150 mg, 0.39 mmol), 물 (0.33 ml) 중 KOH (65 mg, 1.17 mmol), 테트라메틸-t-부틸-XPhos (CAS 등록번호 857356-94-6) (18.72 mg, 0.04 mmol) 및 Pd2(dba)3 (17.83 mg, 0.02 mmol)의 혼합물을 질소로 탈기하고, 100℃에서 18시간 동안 가열하였다. 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 70:30)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 오일 (65 mg, 52% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00296
d) (S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
THF (2 ml) 중 트리페닐포스핀 (74 mg, 0.28 mmol)의 용액을 DEAD (0.04 ml, 0.28 mmol)에 이어서 (R)-3-히드록시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 127423-61-4) (45 mg, 0.24 mmol) 및 4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-올 (65 mg, 0.20 mmol)로 처리하였다. 생성된 적색/갈색 용액을 70℃에서 18시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 70:30)에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 고체 (51 mg, 42% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00297
e) {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논
DCM (3 ml) 중 (S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (51 mg, 0.10 mmol)의 용액을 아르곤 하에 실온에서 TFA (0.08 ml, 1.10 mmol)로 처리하고, 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, 유기 용액을 상 분리를 통해 분리하여 황색 용액을 수득하였다. 1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-카르복실산 (CAS 등록번호 64096-87-3) (25 mg, 0.14 mmol), Et3N (0.05 ml, 0.33 mmol), EDC (31 mg, 0.16 mmol) 및 HOBT (25 mg, 0.16 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지를 통한 용리에 의해 분리하고, 조 생성물을 SFC (칼럼 레프로실(Reprosil) NH2 (250 x 30mm (l x w), 60A, 5μm, 프린스턴, 초임계 CO2 중 메탄올의 구배) 상에서 정제하여 표제 화합물을 황색 오일 (19 mg, 30% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00298
실시예 Y: 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일아미노]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
Figure 112014067144685-pct00299
a) 5-아이오도-2-메톡시-니코티노니트릴
2-메톡시-니코티노니트릴 (CAS 등록번호 7254-34-4) (10 g, 74.6 mmol) 및 N-아이오도숙신이미드 (CAS 등록번호 516-12-1) (25.2 g, 112 mmol)의 혼합물을 트리플루오로아세트산 (CAS 등록번호 76-05-1) (68.9 ml, 895 mmol) 및 트리플루오로아세트산 무수물 (CAS 등록번호 407-25-0) (31.6 ml, 224 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, 얼음에 부었다. 혼합물을 30% 수성 NaOH 용액을 사용하여 천천히 염기성화시키고, 물로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 20% 수성 티오황산나트륨 용액 및 포화 수성 NaHCO3 용액으로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 20:80)에 의해 정제하여 표제 화합물을 고체 (12.2 g, 63% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00300
b) 5-(6-브로모-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일)-2-메톡시-니코티노니트릴
톨루엔 (50 ml) 중 6-브로모-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진 (CAS 등록번호 105655-01-4) (5.0 g, 23.36 mmol), 5-아이오도-2-메톡시-니코티노니트릴 (12.2 g, 46.7 mmol) 및 NaOtBu (2.69 g, 28.0 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 10분 동안 탈기한 다음, 비스(트리-tert-부틸포스핀)-팔라듐(0) (0.36 g, 0.70 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 110℃에서 18시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고, 여과물을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 50:50)에 의해 정제하여 표제 화합물 (4.2 g, 52% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00301
c) (S)-3-[4-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르
톨루엔 (10 ml) 중 5-(6-브로모-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일)-2-메톡시-니코티노니트릴 (300 mg, 0.87 mmol), (S)-3-아미노-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (CAS 등록번호 147081-44-5) (0.26 ml, 1.47 mmol), 2-(디시클로헥실포스피노)비페닐 (CAS 등록번호 247940-06-3) (18.2 mg, 0.05 mmol) 및 NaOtBu (100 mg, 1.04 mmol)의 혼합물을 아르곤으로 10분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (23.8 mg, 0.03 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 하에 110℃에서 1시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc로 헹구고, 여과물을 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc, 100:0에서 70:30)를 한 후, 표제 화합물을 황색 발포체 (150 mg, 37% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00302
d) 2-메톡시-5-[6-((S)-피롤리딘-3-일아미노)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴
CH2Cl2 (4 ml) 중 (S)-3-[4-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일아미노]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (144 mg, 0.32 mmol)의 용액을 TFA (0.49 ml, 6.38 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 표제 생성물을 황색 발포체 (120 mg, 100% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00303
e) 2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일아미노]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
0℃에서, CH2Cl2 (1 ml) 중 2-메톡시-5-[6-((S)-피롤리딘-3-일아미노)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴 (27 mg, 0.08 mmol)의 용액을 Et3N (0.02 ml, 0.12 mmol) 및 테트라히드로-피란-4-카르보닐 클로라이드 (CAS 등록번호 40191-32-0) (11 μl, 0.09 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 정제용 C18 OBD 30x100 mm, 5 μm; 용매 A: H2O+0.1 부피% TFA; 용매 B: CH3CN+0.1 부피% TFA, 20분 내 구배 5-60% B) 및 애질런트 PL-HCO3 MP SPE 카트리지 상에서의 여과 후, 표제 화합물을 황색 고체 (9 mg, 25% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00304
커플링 조건
A) 부흐발트 아미노화 또는 히드록실화
Figure 112014067144685-pct00305
B) 아미드 결합 형성 조건
Figure 112014067144685-pct00306
C) 측쇄 도입 조건
CC1) 메실레이트 사용
실온에서, DMF (0.17 M) 중 피리딘-2-올 중간체 (1 당량) 및 메실레이트 중간체 (1.1 - 2 당량)의 건조 용액을 광유 중 NaH (2 - 3 당량)로 처리하고, 반응 혼합물을 20-80℃에서 4 내지 72시간 동안 교반하였다.
CC2) 메실레이트 사용
실온에서, DMF (0.17M) 중 아릴-6-올 중간체 (1 당량) 및 메실레이트 중간체 (1.1 - 2 당량)의 건조 용액을 광유 중 NaH (2 - 3 당량)로 처리하고, 반응 혼합물을 50-80℃에서 4 내지 72시간 동안 교반하였다.
CC3) 메실레이트 사용
실온에서, DMF (0.06M) 중 아릴-6-올 중간체 (1 당량) 및 메실레이트 중간체 (2.5 당량)의 건조 용액을 K2CO3 (4 당량)로 처리하고, 반응 혼합물을 85°ZC 내지 100℃에서 4 내지 50시간 동안 교반하였다.
CC4) 미츠노부 사용
실온에서, DEAD (1.4 당량), (R)-3-히드록시-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.5 당량) 및 아릴-6-올 중간체 (1 당량)를 THF (0.30M) 중 트리페닐포스핀 (1.4 당량)의 용액에 첨가하였다. 적색/갈색 용액을 70℃에서 18시간 동안 교반하였다.
D) 키랄 분리 크로마토그래피에 대한 조건
Figure 112014067144685-pct00307
중간체의 제조
IA) 방향족 브로마이드
Figure 112014067144685-pct00308
Figure 112014067144685-pct00309
Figure 112014067144685-pct00310
Figure 112014067144685-pct00311
Figure 112014067144685-pct00312
Figure 112014067144685-pct00313
Figure 112014067144685-pct00314
Figure 112014067144685-pct00315
Figure 112014067144685-pct00316
중간체 IA1: 5-브로모-2-메탄술포닐-3-메틸-피리딘
DCM (83 ml) 중 5-브로모-2-메틸술파닐-3-메틸-피리딘 (9.04 g, 41.4 mmol)의 용액을 0℃에서 mCPBA (21.46 g, 124 mmol)로 처리하였다. 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 2N 수성 NaOH 용액에 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 시클로헥산으로 연화처리한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (9.25 g, 89% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00317
중간체 IA2: 5-브로모-3-플루오로2-메탄술포닐-피리딘
DCM (5 ml) 중 5-브로모-3-플루오로-2-메틸술파닐-피리딘 (222 mg, 1.0 mmol)의 용액을 0℃에서 mCPBA (518 mg, 3.0 mmol)로 처리하였다. 실온에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 2N 수성 NaOH 용액에 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 표제 화합물을 백색 고체 (241 mg, 95% 수율)로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014067144685-pct00318
중간체 IA3: 5-브로모-2-메탄술포닐-3-트리플루오로메틸-피리딘
DCM (30 ml) 중 5-브로모-2-메틸술파닐-3-트리플루오로메틸-피리딘 (1.40 g, 1.16 mmol)의 용액을 0℃에서 mCPBA (2.67 g, 15.48 mmol)로 처리하였다. 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 4N 수성 NaOH 용액에 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100:0에서 70:30)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (940 mg, 60% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00319
중간체 IA4: 5-브로모-3-디플루오로메틸-2-메탄술포닐-피리딘
a) 2,5-디브로모-3-디플루오로메틸-피리딘
DCM (40ml) 중 Et3N 트리플루오라이드 (1.80 ml, 11.3 mmol)의 용액을 0℃에서 엑스탈플로오르(Xtalfluor)-E (2.67 g, 15.5 mmol) 및 2,5-디브로모-피리딘-3-카르브알데히드 (1.0 g, 3.77 mmol)로 처리하였다. 실온에서 19시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 TBME로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 황색 오일 (950 mg, 88% 수율)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014067144685-pct00320
b) 5-브로모-3-디플루오로메틸-2-메탄술포닐-피리딘
DMF (10ml) 중 2,5-디브로모-3-디플루오로메틸-피리딘 (1400 mg, 1.16 mmol)의 용액을 0℃에서 소듐 메탄티올레이트 (348 mg, 4.97 mmol)로 처리하였다. 실온에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 0℃에서 냉각시키고, mCPBA (2857 mg, 16.56 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 4N 수성 NaOH 용액에 첨가하고, TBME로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100/0에서 80/20)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (498 mg, 53% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00321
중간체 IA5: 5-브로모-3-플루오로메틸-2-메탄술포닐-피리딘
a) 5-브로모-2-클로로-3-플루오로메틸-피리딘
DCM (20 ml) 중 Et3N 트리플루오라이드 (1.76 ml, 10.79 mmol)의 용액을 0℃에서 엑스탈플루오르-E (1.65 g, 7.19 mmol) 및 (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-메탄올 (0.80 g, 3.60 mmol)로 처리하였다. 실온에서 18시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 TBME로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100/0에서 90/10)를 한 후, 표제 화합물을 무색 오일 (286 mg, 35% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00322
b) 5-브로모-3-플루오로메틸-2-메탄술포닐-피리딘
DMF (10 ml) 중 2,5-디브로모-3-디플루오로메틸-피리딘 (1.4 g, 1.16 mmol)의 용액을 0℃에서 소듐 메탄티올레이트 (348 mg, 4.97 mmol)로 처리하였다. 실온에서 1.5시간 동안 교반한 후, 반응물을 0℃로 냉각시키고, mCPBA (2857 mg, 16.56 mmol)를 반응 혼합물에 도입하였다. 실온에서 1시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 4N 수성 NaOH 용액에 첨가하고, TBME로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산 / EtOAc, 100/0에서 80/20)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (498 mg, 53% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00323
중간체 IA7: 5-브로모-3-플루오로메틸-2-메톡시-피리딘
DCM (7 ml) 중 (5-브로모-2-메톡시-피리딘-3-일)-메탄올 (343 mg, 1.57 mmol)의 용액을 0℃에서 데옥소플루오르 (1.5 ml, 3.46 mmol) 및 EtOH (27.6 μl, 0.47 mmol)로 처리하였다. 반응 혼합물을 실온에서 교반하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헥산/EtOAc 80:20)를 한 후, 표제 화합물을 황색 오일 (80 mg, 23% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00324
중간체 IA24: 1-(5-브로모-2-메톡시-피리딘-3-술포닐)-4-메틸-피페라진
a) (5-브로모-2-메탄술포닐-피리딘-3-일)-메틸-아민
Figure 112014067144685-pct00325
DCM (20 ml) 중 5-브로모-2-클로로-피리딘-3-술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 1146290-19-8) (580 mg, 1.99 mmol) 및 Et3N (0.55 ml, 3.99 mmol)의 용액을 0℃에서 1-메틸-피페라진 (0.33 ml, 2.99 mmol)으로 처리하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM (30 ml)으로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH 100:0에서 90:10)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (420 mg, 59% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00326
b) 1-(5-브로모-2-메톡시-피리딘-3-술포닐)-4-메틸-피페라진
Figure 112014067144685-pct00327
THF (10 ml) 중 1-(5-브로모-2-클로로-피리딘-3-술포닐)-4-메틸-피페라진 (420 mg, 1.18 mmol)의 용액을 소듐 메톡시드 (192 mg, 3.55 mmol)로 조금씩 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물의 첨가에 의해 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (DCM / MeOH 100:0에서 90:10)에 의해 정제하여 표제 화합물 (358 mg, 85% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00328
중간체 IA30: 3-브로모-5-(프로판-2-술포닐)-피리딘
Figure 112014067144685-pct00329
NMP (5 ml) 중 3,5-디브로모-피리딘 (CAS 등록번호 625-92-3) (495 mg, 2.09 mmol)의 용액을 소듐 프로판-2-티올레이트 (CAS 등록번호 20607-43-6) (205 mg, 2.09 mmol)로 처리하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물 (2x)에 이어서 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 수득한 잔류물을 DCM (10 ml) 중에 용해시키고, mCPBA (1083 mg, 6.27 mmol)로 처리하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 10% 수성 아황산나트륨 용액을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상을 분리하고, 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 00:100)에 의해 정제하여 표제 화합물 (364 mg, 59% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00330
중간체 IA44: 5-브로모-2-에탄술피닐-피리딘
a) 5-브로모-2-에틸술파닐-피리딘
Figure 112014067144685-pct00331
DMSO (15 ml) 중 2,5-디브로모-피리딘 (CAS 등록번호 588729-99-1) (1.15 g, 4.85 mmol) 및 소듐 에탄티올레이트 (CAS 등록번호 811-51-8) (2.04 g, 24.27 mmol)의 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지에 통과시킴으로써 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 70:30)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 오일 (1.09 g, 92% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00332
b) 5-브로모-2-에탄술피닐-피리딘
Figure 112014067144685-pct00333
DCM (15 ml) 중 5-브로모-2-에틸술파닐-피리딘 (1.09 g, 4.49 mmol)의 용액을 mCPBA (1.55 g, 8.98 mmol)로 처리하였다. 생성된 용액을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 2M NaOH 용액의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 화합물을 정제용 RP-HPLC (칼럼 선파이어 C18 OBD, 15분 내 구배 5-60% ACN)에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색 오일 (490 mg, 45% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00334
중간체 IA45: 5-브로모-2-메탄술포닐-3-메톡시피리딘
a) 5-브로모-3-메톡시-2-메틸술파닐-피리딘
Figure 112014067144685-pct00335
DMSO (1.5 ml) 중 2,5-디브로모-3-메톡시-피리딘 (CAS 등록번호 1142191-57-8) (550 mg, 2.06 mmol) 및 소듐 메탄티올레이트 (CAS 등록번호 5188-07-8) (722 mg, 10.30 mmol)의 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 DCM으로 추출하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지에 통과시킴으로써 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물을 무색 오일 (1.50 g, 93% 수율, 조 물질)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00336
b) 5-브로모-2-메탄술포닐-3-메톡시피리딘
Figure 112014067144685-pct00337
DCM (10 ml) 중 5-브로모-3-메톡시-2-메틸술파닐-피리딘 (1.50 g, 2.24 mmol)의 용액을 mCPBA (1.55 g, 8.97 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 수성 2M NaOH 용액의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 상 분리 카트리지에 통과시킴으로써 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물 (조물질로서 400 mg, 33% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00338
중간체 IA51: (5-브로모-2-메탄술포닐-피리딘-3-일)-메틸-아민
a) (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-메틸-아민
Figure 112014067144685-pct00339
0℃에서 THF (4 ml) 중 5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일아민 (CAS 등록번호 588729-99-1) (565 mg, 2.72 mmol)의 용액을 헥산 중 BuLi 1.6M (0.17 ml, 0.17 mmol)로 처리하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 메틸 아이오다이드 (0.17 ml, 2.72 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 18시간 동안 교반하였다. 오렌지색/갈색 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 95:5에서 60:40)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (354 mg, 59% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00340
b) (5-브로모-2-메탄술포닐-피리딘-3-일)-메틸-아민
Figure 112014067144685-pct00341
DMF (2.6 ml) 중 (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-메틸-아민 (354 mg, 1.60 mmol)의 용액을 0℃에서 소듐 메탄티올레이트 (168 mg, 2.40 mmol)로 처리하였다. 생성된 용액을 실온에서 2일 동안 교반하고, 60℃에서 4일 동안 가열하였다. 혼합물을 0℃에서 수성 2M NaOH 용액의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였으며, 이를 DCM (5 ml) 중에 용해시키고, 0℃에서 mCPBA (CAS 등록번호 937-14-4) (827 mg, 4.79 mmol)로 처리하고, 18시간 동안 실온에서 교반하였다. 혼합물을 수성 NaOH 2M 용액의 첨가에 의해 0℃에서 켄칭하고, DCM으로 추출하였다. 합한 유기부를 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 92:8에서 32:68)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (174 mg, 41% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00342
중간체 IA52: (5-브로모-2-메탄술포닐-피리딘-3-일)-디메틸-아민
a) (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-메틸-아민
Figure 112014067144685-pct00343
0℃에서 THF (7 ml) 중 5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일아민 (CAS 등록번호 588729-99-1) (1 g, 4.82 mmol)의 용액을 헥산 중 BuLi 1.6M (6 ml, 9.64 mmol)로 처리하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반한 다음, 메틸 아이오다이드 (0.60 ml, 9.64 mmol)를 천천히 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 18시간 동안 교반하였다. 오렌지색/갈색 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 용액에 붓고, EtOAc로 추출하고, 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 95:05에서 70:30)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (182 mg, 17% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00344
b) (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-디메틸-아민
Figure 112014067144685-pct00345
DMF (4 ml) 중 (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-메틸-아민 (182 mg, 0.82 mmol)의 용액을 실온에서 NaH (23 mg, 0.99 mmol)로 처리하고, 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, 메틸 아이오다이드 (0.06 ml, 0.99 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 TBME로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하고, 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물을 오렌지색 오일 (174 mg, 90% 수율)로서 수득하였다. 이것을 추가 정제 없이 사용하였다.
Figure 112014067144685-pct00346
c) (5-브로모-2-메탄술포닐-피리딘-3-일)-메틸-아민
Figure 112014067144685-pct00347
DMF (5 ml) 중 (5-브로모-2-클로로-피리딘-3-일)-디메틸-아민 (174 mg, 0.74 mmol)의 용액을 실온에서 소듐 메탄티올레이트 (104 mg, 1.48 mmol)로 처리하고, 생성된 용액을 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 혼합물을 수성 2M NaOH 용액의 첨가에 의해 켄칭한 다음, TBME로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 오렌지색 오일을 수득하였으며, 이를 DCM (5 ml) 중에 용해시키고, 0℃에서 mCPBA (CAS 등록번호 937-14-4) (382 mg, 2.21 mmol)로 처리하고, 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 0℃에서, 혼합물을 수성 2M NaOH 용액의 첨가에 의해 켄칭한 다음, DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 88:12에서 00:100)에 의해 정제하여 표제 화합물을 오렌지색 고체 (50 mg, 24% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00348
중간체 IA65: 5-브로모-2,N-디메톡시-벤젠술폰아미드
Figure 112014067144685-pct00349
DCM (20 ml) 중 5-브로모-2-메톡시-벤젠술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 23095-05-8) (218 mg, 0.76 mmol) 및 Et3N (0.55 ml, 3.99 mmol)의 용액을 0℃에서 15분 동안 교반하고, O-메틸히드록실아민 (36 mg, 0.76 mmol)으로 처리하고, 생성된 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 용액으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 100:0에서 0:100)에 의해 정제하여 표제 화합물 (189 mg, 84% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00350
IB) 카르복실산 또는 산 클로라이드
Figure 112014067144685-pct00351
실시예 IB1/IB2: (S)-테트라히드로-푸란-3-카르복실산 / (R)-테트라히드로-푸란-3-카르복실산
a) 테트라히드로-푸란-3-카르복실산 벤질 에스테르
Figure 112014067144685-pct00352
DMF (20 ml) 중 테트라히드로-푸란-3-카르복실산 (CAS 등록번호 89364-31-8) (4.00 g, 34.40 mmol)의 용액을 100℃에서 18시간 동안 K2CO3 (9.52 g, 68.9 mmol) 및 벤질 브로마이드 (CAS 등록번호 100-39-0) (8.18 ml, 68.9 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (시클로헥산 / EtOAc 92:8에서 34:66)에 의해 정제하여 표제 화합물을 무색 오일 (6.93 g, 98% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00353
b) 테트라히드로-푸란-3-카르복실산 벤질 에스테르의 거울상이성질체 분리
Figure 112014067144685-pct00354
방법 정보:
칼럼: 키랄팩 AD-정제용
용매: 헵탄/EtOH/MeOH 95/2.5/2.5
유량: 1.0 ml/분
긴 파장: 210 nm
엔진: 애질런트 1200 DAD 마젤란(Magellan)
용액 EtOH
라세미체 6.347 g을 분리한 후, 피크 2개를 얻었다: 9.086분에 피크 1 (2.43 g, ee>99%) 및 10.584분에 피크 2 (2.19 g, ee>99%).
Figure 112014067144685-pct00355
c) (S)-테트라히드로-푸란-3-카르복실산 / (R)-테트라히드로-푸란-3-카르복실산
Figure 112014067144685-pct00356
EtOH (2 ml) 중 거울상이성질체적으로 순수한 테트라히드로-푸란-3-카르복실산 벤질 에스테르 (피크 1 또는 피크 2, 200 mg, 0.97 mmol), Pd/C (103 mg, 0.97 mmol)의 용액을 실온에서 H2로 18시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물을 무색 오일 (125 mg (피크 1), 111mg (피크 2), 조 물질)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00357
실시예 IB3): 5-tert-부톡시카르보닐아미노-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산
a) 5-디(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르
Figure 112014067144685-pct00358
THF (4 ml) 중 5-아미노-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르 (CAS 등록번호 54147-04-5) (82 mg, 0.49 mmol)의 용액을 -50℃에서 THF 중 1M LiHMDS 용액 (0.97 ml, 0.97 mmol)으로 처리하고, 반응 혼합물을 -50℃에서 10분 동안 교반한 다음, THF (1.5 ml) 중 Boc2O (237 mg, 1.07 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에 이어서 50℃로 천천히 가온되도록 하고, 15시간 동안 50℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, H2O로 켄칭하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (헵탄 / EtOAc, 85:15에서 0:100)를 한 후, 표제 화합물을 백색 고체 (140 mg, 78% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00359
b) 5-tert-부톡시카르보닐아미노-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산
Figure 112014067144685-pct00360
THF (2.2 ml) 및 H2O (2.2 ml) 중 5-디(tert-부톡시카르보닐)아미노-1-메틸-1H-이미다졸-4-카르복실산 에틸 에스테르 (167 mg, 0.452 mmol)의 용액을 LiOH (54.1 mg, 2.26 mmol)로 처리하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반한 다음, 1M 수성 HCl 용액으로 켄칭하여 pH 2에 도달되도록 하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 (70 mg, 65% 수율)을 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00361
IC) 피롤리디놀 유도체 또는 유사체
Figure 112014067144685-pct00362
중간체 IC1: 메탄술폰산 (R)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일 에스테르
a) ((R)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
Figure 112014067144685-pct00363
옥살릴 클로라이드 (0.20 ml, 3.84 mmol)를 테트라히드로-피란-4-카르복실산 (CAS 등록번호 5337-03-1) 및 DMF (0.012 ml, 0.15 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 3℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 (170 mbar) 하에 40℃ (수조)에서 농축시켜 아실 중간체를 무색 오일로서 수득하였다. 중간체를 DCM (2ml) 중에 용해시키고, DCM (3 ml) 중 (R)-피롤리딘-3-올 히드로클로라이드 (CAS 등록번호 104706-47-0) (190 mg, 1.54 mmol)의 용액에 첨가하고, 3℃로 냉각시키고, 형성된 백색 현탁액을 3℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고; EtOAc를 잔류물에 첨가하고, 이를 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (11분에 걸쳐 DCM/DCM:MeOH (9:1), 100:0에서 60:40)에 의해 정제하여 표제 화합물을 백색 고체 (250 mg, 82% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00364
b) 메탄술폰산 (R)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일 에스테르
Figure 112014067144685-pct00365
아르곤 하에, 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (3.52 ml, 45.2 mmol)를 -10℃에서 DCM (100 ml) 중 ((R)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (6 g, 22.6 mmol) 및 Et3N (6.30 ml, 45.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 용액을 0℃에서 1시간 동안 교반하고, H2O 및 DCM으로 희석하고, 유기 층을 H2O 및 염수로 2회 세척하고, MgSO4 상에서 건조시켰다. 생성된 오일을 농축시키고, 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물을 회백색 고체 (5.3 g, 84%)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00366
중간체 IC2: 메탄술폰산 (S)-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일 에스테르
a) ((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논
Figure 112014067144685-pct00367
DCM (2ml) 중 테트라히드로-피란-4-카르보닐 클로라이드 (CAS 등록번호 40191-32-0) (316 mg, 2.02 mmol)의 용액을 DCM (5 ml) 중 (S)-피롤리딘-3-올 (CAS 등록번호 100243-39-8) (250 mg, 2.02 mmol) 및 Et3N (0.62 ml, 4.45 mmol)의 용액에 적가하였다 (0℃ <T <10℃). 반응 혼합물을 3℃에서 1시간 동안 교반하였다. 휘발성 물질을 농축시키고, EtOAc를 잔류물에 첨가하고, 나머지 고체를 여과하고, EtOAc로 세척하고, 여과물을 농축시켜 표제 화합물을 백색 고체 (390 mg, 97% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00368
b) 메탄술폰산 (S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일 에스테르
Figure 112014067144685-pct00369
아르곤 하에, 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (0.23 ml, 2.94 mmol)를 -10℃에서 DCM (10 ml) 중 ((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 (0.39 g, 1.96 mmol) 및 Et3N (0.55 ml, 3.91 mmol)의 용액에 첨가하였다. 용액을 3℃에서 1시간 동안 교반하고, H2O 및 DCM으로 희석하고, 유기 층을 H2O 및 염수로 2회 세척한 다음, MgSO4 상에서 건조시켰다. 생성된 오일을 농축시키고, 디에틸 에테르로 연화처리하여 표제 화합물을 백색 고체 (0.45 g, 83% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00370
중간체 IC3: 메탄술폰산 (S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일 에스테르
a) 1-((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온
Figure 112014067144685-pct00371
프로피오닐 클로라이드 (CAS 등록번호 79-03-8) (4.78 ml, 54.8 mmol)를 5℃에서 15분의 기간에 걸쳐 (S)-피롤리딘-3-올 (CAS 등록번호 100243-39-8) (4.8 g, 55.9 mmol) 및 Et3N (8.74 ml, 63.1 mmol)의 용액에 적가하고, 용액을 실온으로 가온되도록 하고, 1시간 동안 교반하였다. H2O (10ml) 및 포화 수성 NaHCO3 용액 (10 ml)을 용액에 첨가하고, 유기 상을 염수 (10 ml) 및 0.25M 수성 HCl 용액 (20 ml)으로 세척하였다. 합한 수성 층을 농축시키고, EtOAc (2x 100ml)로 추출하고, 합한 유기 상을 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 표제 화합물을 연황색 오일 (4.80 g, 54% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00372
b) 메탄술폰산 (S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일 에스테르
Figure 112014067144685-pct00373
아르곤 하에, 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (1.36 ml 17.46 mmol)를 5℃에서 10분의 기간에 걸쳐 DCM (50 ml) 중 1-((S)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온 (2.5 g, 17.4 mmol) 및 Et3N (2.43 ml, 17.4 mmol)의 용액에 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온되도록 하고, 18시간 동안 교반하고, 이어서 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (1.36 ml, 17.46 mmol) 및 Et3N (2.43 ml, 17.4 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 이를 실온에서 48시간 동안 교반하였다. DCM 및 H2O를 용액에 첨가하고, 유기 상을 상 분리 카트리지를 통해 분리하고, 농축시키고, 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (40분에 걸쳐 EtOAc / MeOH 100:0에서 95:5)를 한 후, 표제 화합물을 무색 오일 (2.7 g, 66% 수율)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00374
중간체 IC4: 메탄술폰산 (R)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일 에스테르
a) 1-((R)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온
Figure 112014067144685-pct00375
프로피오닐 클로라이드 (CAS 등록번호 79-03-8) (7.06 ml, 81 mmol)를 15분의 기간에 걸쳐 DCM (150 ml) 중 ((R)-피롤리딘-3-올 (CAS 등록번호 2799-21-5) (10 g, 81 mmol) 및 Et3N (23.6 ml, 170 mmol)의 현탁액에 첨가하고 (0℃ <T <10℃), 이를 -10℃로 예비냉각시켰다. 회백색 현탁액을 0℃에서 2시간 동안 교반하고, MeOH (9.82 ml, 243 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반되도록 하였다. 잔류물을 농축시키고, Et2O (200 ml)로 희석하고, 여과하고, 여과물을 농축시킨 후, 표제 화합물을 황색 오일 (11.2 g, 95%)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00376
b) 메탄술폰산 (R)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일 에스테르
Figure 112014067144685-pct00377
아르곤 하에, 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (0.16 ml, 2.09 mmol)를 5분의 기간에 걸쳐 5℃에서 DCM (10ml) 중 1-((R)-3-히드록시-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온 (300 mg, 2.09 mmol) 및 Et3N (0.29 ml, 2.09 mmol)의 용액에 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반되도록 하였다. 이어서, 메탄술포닐 클로라이드 (CAS 등록번호 124-63-0) (0.16 ml, 2.09 mmol) 및 Et3N (0.29 ml, 2.09 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 이를 실온에서 48시간 동안 교반하였다. DCM 및 H2O를 용액에 첨가하고, 유기 상을 상 분리 카트리지를 통해 분리하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래쉬 크로마토그래피 (25분에 걸쳐 EtOAc / MeOH 100:0에서 95:5)를 한 후, 표제 화합물을 무색 오일 (420 mg, 86%)로서 수득하였다.
Figure 112014067144685-pct00378
ID) DBO 유도체 및 유사체
Figure 112014067144685-pct00379
생물학적 평가
본 발명에 따른 화합물의 활성은 하기 시험관내 & 생체내 방법에 의해 평가할 수 있다.
생물학적 검정
1 효소적 PI3K 알파 및 PI3K 델타 이소형 억제의 결정
1.1 지질 키나제 활성의 시험
PI3K 키나제 억제제로서의 실시예 1-117의 화합물의 효능은 하기와 같이 입증할 수 있다:
절반 면적 코스타(COSTAR) 96 웰 플레이트의 웰당 50 μl의 최종 부피로 키나제 반응을 수행하였다. 검정에서 ATP 및 포스파티딜 이노시톨의 최종 농도는 각각 5 μM 및 6 μg/mL였다. PI3 키나제, 예를 들어 PI3 키나제 δ를 첨가하여 반응을 개시하였다.
p110δ. 검정의 성분을 웰마다 하기와 같이 첨가하였다:
ㆍ 칼럼 2-1에 웰당 5% DMSO 중 10 μl 시험 화합물.
ㆍ 칼럼 1의 처음 4개 웰 및 칼럼 12의 마지막 4개 웰에 5% vol/vol DMSO 10 μl를 첨가하여 총 활성을 결정하였다.
ㆍ 칼럼 1의 마지막 4개 웰 및 칼럼 12의 처음 4개 웰에 10 μM 대조군 화합물을 첨가하여 배경값을 결정하였다.
ㆍ 플레이트당 2 mL '검정 믹스'를 제조하였다:
HEPES 검정 완충제 1.912 mL
웰당 5 μM의 최종 농도를 제공하는 ATP의 3 mM 원액 8.33 μl
활성일에 웰당 0.05 μCi를 제공하는 [33P]ATP 1 μl
웰당 6 μg/mL의 최종 농도를 제공하는 1 mg/mL PI 원액 30 μl
웰당 1 mM의 최종 농도를 제공하는 MgCl2의 1 M 원액 5 μl
ㆍ 웰당 검정 믹스 20 μl를 첨가하였다.
ㆍ 플레이트당 2 mL '효소 믹스'를 제조하였다 (키나제 완충제 2 mL 중 x* μl PI3 키나제 p110β). '효소 믹스'는 검정 플레이트에 첨가하는 동안 얼음 상에 유지하였다.
ㆍ 웰당 20 μl '효소 믹스'를 첨가하여 반응을 개시하였다.
ㆍ 이어서, 플레이트를 90분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ㆍ 웰당 50 μl WGA-SPA 비드 (밀 배아 응집소-코팅된 섬광 근접 검정 비드) 현탁액을 첨가하여 반응을 종결하였다.
ㆍ 탑실-S(TopSeal-S) (폴리스티렌 마이크로플레이트를 위한 가열 밀봉, 퍼킨엘머 LAS [도이칠란트] 게엠베하(PerkinElmer LAS [Deutschland] GmbH), 독일 로트가우)를 사용하여 검정 플레이트를 밀봉하고, 적어도 60분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ㆍ 이어서, 주앙(Jouan) 벤치 탑 원심분리기 (주앙 인크.(Jouan Inc.), 프랑스 낭트)를 사용하여 검정 플레이트를 2분 동안 1500 rpm에서 원심분리하였다.
ㆍ 팩커드 탑카운트(Packard TopCount)를 사용하여 검정 플레이트를 계수하였다 (각 웰을 20초 동안 계수함).
* 효소의 부피는 사용된 배치의 효소적 활성에 따라 달라진다.
보다 바람직한 검정에서는, 저 부피 비-결합 코닝(CORNING) 384 웰 흑색 플레이트 (카탈로그 번호 #3676)의 웰당 10 μl의 최종 부피로 키나제 반응을 수행하였다. 검정에서 ATP 및 포스파티딜 이노시톨 (PI)의 최종 농도는 각각 1 μM 및 10 μg/mL였다. ATP를 첨가하여 반응을 개시하였다.
검정의 성분을 웰마다 하기와 같이 첨가하였다:
칼럼 1-20에 웰당 90% DMSO 중 50 nl 시험 화합물, 단일로 8가지 농도 (1/3 및 1/3.33 연속 희석 단계).
ㆍ 저 대조군: 칼럼 23-24의 웰 절반에 90% DMSO 50 nl (최종 0.45%).
ㆍ 고 대조군: 칼럼 23-24의 다른 절반에 참조 화합물 (예를 들어, WO 2006/122806에서의 실시예 7의 화합물) 50 nl (최종 2.5 μM).
ㆍ 표준물: 칼럼 21-22에 시험 화합물로서 희석된 직전에 언급된 바와 같은 참조 화합물 50 nl.
ㆍ 검정당 20 mL '완충제'를 제조하였다:
1M 트리스 HCl pH 7.5 200 μl (최종 10 mM)
1M MgCl2 60 μl (최종 3 mM)
2M NaCl 500 μl (최종 50 mM)
10% CHAPS 100 μl (최종 0.05%)
100mM DTT 200 μl (최종 1mM)
나노퓨어 워터(nanopure water) 18.94 mL
ㆍ 검정당 10 mL 'PI'를 제조하였다:
3% 옥틸글루코시드 중에 제조된 1 mg/mL l-알파-포스파티딜이노시톨 (소의 간, 아반티 폴라 리피즈(Avanti Polar Lipids) 카탈로그 번호 840042C MW=909.12) 200 μl (최종 10 μg/mL)
'완충제' 9.8 mL
ㆍ 검정당 10 mL 'ATP'를 제조하였다:
웰당 1 μM의 최종 농도를 제공하는 ATP의 3 mM 원액 6.7 μl
'완충제' 10 mL
ㆍ 검정당 각각의 PI3K 구축물 2.5 mL를 'PI' 중에 하기 최종 농도로 제조하였다:
10 nM PI3K 알파 EMV B1075
25 nM 베타 EMV BV949
10 nM 델타 EMV BV1060
150 nM 감마 EMV BV950
ㆍ 웰당 'PI/PI3K' 5 μl를 첨가하였다.
ㆍ 웰당 5 μl 'ATP'를 첨가하여 반응을 개시하였다.
ㆍ 이어서, 플레이트를 60분 (알파, 베타, 델타) 또는 120분 (감마) 동안 실온에서 인큐베이션하였다.
ㆍ 10 μl 키나제-글로(Kinase-Glo) (프로메가(Promega) 카탈로그 번호 #6714)를 첨가하여 반응을 종결하였다.
ㆍ 10분 후에 시너지 2(Synergy 2) 판독기 (바이오텍(BioTek), 미국 버몬트)에서 100 밀리초의 통합 시간 및 191로 설정된 감도로 검정 플레이트를 판독하였다.
ㆍ 출력값: 고 대조군은 약 60,000 카운트였고, 저 대조군은 30,000 이하였다.
ㆍ 본 발광 검정은 0.4 내지 0.7의 유용한 Z' 비를 제공하였다.
Z' 값은 검정 견실성의 보편적인 척도이다. 0.5 내지 1.0의 Z'가 탁월한 검정으로 간주된다.
본 검정을 위해, 언급된 PI3K 구축물을 하기와 같이 제조하였다:
1.2 유전자 구축물의 생성
2개의 상이한 구축물 BV 1052 및 BV 1075를 사용하여 화합물 스크리닝을 위한 PI3 키나제 α 단백질을 생성하였다.
PI3Kα BV-1052 p85(iSH2)-Gly 링커-p110a(D20aa)-C-말단 His 태그
p85 서브유닛의 중간 SH2 도메인 (iSH2) 및 p110-a 서브유닛 (처음 20개 아미노산 결실)에 대한 PCR 생성물을 생성하고, 중복 PCR에 의해 융합시켰다.
먼저 프라이머
Figure 112014067144685-pct00380
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 iSH2 PCR 생성물을 생성하였다.
후속적으로, 2차 PCR 반응에서 게이트웨이(Gateway) (인비트로젠 아게(Invitrogen AG), 스위스 바젤) 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을, 프라이머
Figure 112014067144685-pct00381
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
또한, 먼저 프라이머
Figure 112014067144685-pct00382
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 p110-a 단편을 생성하였다.
후속적 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를, 프라이머
Figure 112014067144685-pct00383
를 사용하여 p110-a 단편의 5'말단 및 3'말단에 각각 부가하였다.
상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중복 히스티딘 태그 및 AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure 112014067144685-pct00384
를 사용하여, iSH2 단편의 3' 말단 및 p110-a 단편의 5' 말단에서 중복 링커에 의한 제3 PCR 반응으로 p85-iSH2/p110-a 융합 단백질을 조립하였다.
상기 최종 생성물을 (인비트로젠) OR 반응에서 공여자 벡터 pDONR201 내로 재조합시켜 ORF318 진입 클론을 생성하였다. 상기 클론을 서열분석에 의해 검증하고, 게이트웨이 LR 반응에서 삽입물을 바큘로바이러스 발현 벡터 LR410의 생성을 위한 게이트웨이 적합화 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터 내로 전달하는데 사용하였다.
PI3Kα BV-1075 p85(iSH2)-12 XGly 링커-p110a(D20aa)-C-말단 His 태그
벡터 pBlueBac4.5 내로 클로닝된 p85 단편 및 p110-a 단편으로 구성된 3-부분 라이게이션에 의해 바큘로바이러스 BV-1075에 대한 구축물을 생성하였다. Nhe/Spe로 소화시킨 플라스미드 p1661-2로부터 p85 단편을 유도하였다. SpeI/HindIII 단편으로서 LR410 (상기 참조)으로부터 p110-a 단편을 유도하였다. 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 Nhe/HindIII으로 소화시켰다. 이로써 구축물 PED 153.8을 생성하였다.
주형으로서의 ORF 318 (상기 기재된 것), 및 1개의 정방향 프라이머
Figure 112014067144685-pct00385
및 2개의 역방향 프라이머
Figure 112014067144685-pct00386
를 사용하여 PCR에 의해 p85 성분 (iSH2)을 생성하였다.
2개의 역방향 프라이머는 중복되고, 12x Gly 링커 및 p110a 유전자의 N-말단 서열을 SpeI 부위로 혼입시켰다. 12x Gly 링커는 BV1052 구축물에서의 링커를 대체하였다. PCR 단편을 pCR2.1 TOPO (인비트로젠) 내로 클로닝하였다. 생성된 클론 중 p1661-2가 정확한 것으로 결정되었다. 상기 플라스미드를 Nhe 및 SpeI로 소화시키고, 생성된 단편을 서브클로닝을 위해 겔-단리하고 정제하였다.
클론 LR410 (상기 참조)을 SpeI 및 HindIII으로 효소 소화시켜 p110-a 클로닝 단편을 생성하였다. SpeI 부위는 p110a 유전자의 코딩 영역에 존재하였다. 생성된 단편을 서브클로닝을 위해 겔-단리하고 정제하였다.
Nhe 및 HindIII으로 효소 소화시켜 클로닝 벡터 pBlueBac4.5 (인비트로젠)를 제조하였다. 절단 벡터를 퀴아젠(Qiagen) (퀴아젠 엔.브이(Quiagen N.V), 네덜란드 벤로) 칼럼으로 정제한 다음, 소 장 알칼리성 포스파타제 (CIP) (뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England BioLabs), 매사추세츠주 입스위치)로 탈인산화하였다. CIP 반응의 완료 후, 절단 벡터를 다시 칼럼 정제하여 최종 벡터를 생성하였다. 로슈 래피드(Roche Rapid) 리가제 및 판매자의 설명서를 사용하여 3-부분 라이게이션을 수행하였다.
PI3Kβ BV-949 p85(iSH2)-Gly 링커-p110b(전장)-C-말단 His 태그
p85 서브유닛의 중간 SH2 도메인 (iSH2) 및 전장 p110-b 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하고, 중복 PCR에 의해 융합시켰다.
먼저 프라이머
Figure 112014067144685-pct00387
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 iSH2 PCR 생성물을 생성하였다.
후속적으로, 2차 PCR 반응에서 게이트웨이 (인비트로젠) 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을, 프라이머
Figure 112014067144685-pct00388
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
또한, 먼저 링커 서열 및 p110-b의 5' 말단을 함유하는
Figure 112014067144685-pct00389
및 히스티딘 태그에 융합된 p110-b의 3' 말단의 서열을 함유하는
Figure 112014067144685-pct00390
프라이머를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 p110-b 단편을 생성하였다.
상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중복 히스티딘 태그 및 AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure 112014067144685-pct00391
를 사용하여, iSH2 단편의 3' 말단 및 p110-b 단편의 5' 말단에서 링커의 중복 PCR 반응에 의해 p85-iSH2/p110-b 융합 단백질을 조립하였다.
상기 최종 생성물을 (인비트로젠) OR 반응에서 공여자 벡터 pDONR201 내로 재조합시켜 ORF253 진입 클론을 생성하였다. 상기 클론을 서열분석에 의해 검증하고, 게이트웨이 LR 반응에서 삽입물을 바큘로바이러스 발현 벡터 LR280의 생성을 위한 게이트웨이 적합화 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터 내로 전달하는데 사용하였다.
PI3Kδ BV-1060 p85(iSH2)-Gly 링커-p110d(전장)-C-말단 His 태그
p85 서브유닛의 중간 SH2 도메인 (iSH2) 및 전장 p110-d 서브유닛에 대한 PCR 생성물을 생성하고, 중복 PCR에 의해 융합시켰다.
먼저 프라이머
Figure 112014067144685-pct00392
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 iSH2 PCR 생성물을 생성하였다.
후속적으로, 2차 PCR 반응에서 게이트웨이 (인비트로젠) 재조합 AttB1 부위 및 링커 서열을, 프라이머
Figure 112014067144685-pct00393
를 사용하여 p85 iSH2 단편의 5' 말단 및 3' 말단에 각각 부가하였다.
또한, 먼저 프라이머
Figure 112014067144685-pct00394
를 사용하여 제1 가닥 cDNA로부터 p110-a 단편을 생성하였다.
후속적 PCR 반응에서, 링커 서열 및 히스티딘 태그를, 프라이머
Figure 112014067144685-pct00395
를 사용하여 p110-d 단편의 5'말단 및 3'말단에 각각 부가하였다.
상기 언급된 gwG130-p03 프라이머, 및 중복 히스티딘 태그 및 게이트웨이 (인비트로젠) AttB2 재조합 서열을 함유하는 프라이머
Figure 112014067144685-pct00396
를 사용하여, iSH2 단편의 3' 말단 및 p110-d 단편의 5' 말단에서 중복 링커에 의한 제3 PCR 반응으로 p85-iSH2/p110-d 융합 단백질을 조립하였다.
상기 최종 생성물을 (인비트로젠) OR 반응에서 공여자 벡터 pDONR201 내로 재조합시켜 ORF319 진입 클론을 생성하였다. 상기 클론을 서열분석에 의해 검증하고, 게이트웨이 LR 반응에서 삽입물을 바큘로바이러스 발현 벡터 LR415의 생성을 위한 게이트웨이 적합화 pBlueBac4.5 (인비트로젠) 벡터 내로 전달하는데 사용하였다.
PI3Kγ BV-950 p110g(D144aa)-C-말단 His 태그
상기 구축물은 로저 윌리암스 랩(Roger Williams lab) (MRC 분자 생물학 실험실, 영국 캠브리지)으로부터 입수하였다 (2003년 11월). 구축물은 문헌 [Pacold M. E. et al. (2000) Cell 103, 931-943]에 기재되어 있다.
1.3 단백질 발현 및 정제
PI3K 이소형에 대한 재조합 바큘로바이러스 및 단백질의 생성 방법:
다양한 PI3 키나제 유전자를 함유하는 pBlue-Bac4.5 (a, b 및 d 이소형의 경우) 또는 pVL1393 (g의 경우) 플라스미드를, 판매자가 권장한 방법을 사용하여 바큘로골드(BaculoGold) WT 게놈 DNA (BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences), 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스)로 공-형질감염시켰다. 후속적으로, 형질감염으로부터 수득한 재조합 바큘로바이러스를 Sf9 곤충 세포 상에서 플라크-정제하여 재조합 단백질을 발현하는 몇몇 단리물을 수득하였다. 항-HIS 또는 항-이소형 항체 웨스턴에 의해 양성 클론을 선택하였다. PI3K 알파 및 델타 이소형의 경우에는, PI3K의 제1 클론 바이러스 원액에 대해 제2 플라크-정제를 수행하였다. 전체 바큘로바이러스 단리물의 증폭을 낮은 감염 다중도 (moi)로 수행하여 단백질 생산을 위한 고-역가, 저 계대 원액을 생성하였다. 바큘로바이러스를 BV1052 (α) 및 BV1075 (α), BV949 (β), BV1060 (δ) 및 BV950 (γ)으로 지정하였다.
단백질 생산은 2 l 유리 에를렌마이어(Erlenmyer) 플라스크 (110 rpm) 또는 웨이브-생물반응기 (22-25 rpm)에서 단백질-무함유 배지 중에 현탁된 Tn5 (트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)) 또는 TiniPro (익스프레션 시스템즈, 엘엘씨(Expression Systems, LLC), 미국 캘리포니아주 우드랜드) 세포를 2-10의 moi로 39-48시간 동안 감염시키는 것 (계대 3 이하)을 포함하였다. 먼저, 10 l 작업 부피 웨이브-생물반응기의 절반 용적 (5L)을 3e5개 세포/mL의 밀도로 시딩하였다. 반응기를 72시간의 세포 성장 단계 동안 15 rpm으로 요동시키고, 공기와 혼합한 5％ 산소로 보충하였다 (분당 0.2 l). 감염 직전에, 웨이브-반응기 배양물을 밀도, 생존율에 대해 분석하고, 대략 1.5e6개 세포/mL로 희석하였다. 100-500 mL의 고 역가, 저 계대 바이러스를 첨가한 후, 2-4시간 추가 배양하였다. 39-48시간의 감염 기간 동안 산소를 35%로 증가시키고, 요동 플랫폼 rpm을 25로 증가시켰다. 감염 동안에, 세포를 생존율, 직경 및 밀도에 대해 바이셀(Vicell) 생존율 분석기 (베크만 쿨터, 인크(Beckman Coulter, Inc), 미국 캘리포니아주 풀러톤) 생물공정에 의해 모니터링하였다. 다양한 파라미터 및 대사물 (pH, O2 포화도, 글루코스 등)의 노바(Nova) 생물분석기 (노바 바이오메디칼 코포레이션(NOVA Biomedical Corp.), 미국 매사추세츠주 월섬) 판독값을, 수확할 때까지 매 12-18시간마다 취하였다. 웨이브-생물반응기 세포를 감염 후 40시간 내에 수집하였다. 원심분리 (1500 rpm, 4℃)에 의해 세포를 수집하고, 후속적으로 용해 및 정제를 위해 펠릿을 풀링하는 동안 얼음 상에 유지하였다. 펠릿 풀을 소량의 비-보충된 저온의 그레이스(Grace) 배지 (프로테아제 억제제 무함유)를 사용하여 제조하였다.
HTS (BV1052)에 대한 PI3K 알파 정제 프로토콜
PI3K 알파를 3개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스(Ni Sepharose) 수지 (제너럴 일렉트릭 캄파니(General Electric Company) 소속의 지이 헬스케어(GE Healthcare), 미국 코네티컷주 페어필드) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피, 슈퍼덱스(Superdex) 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적인 SP-XL 칼럼 (지이 헬스케어) 상에서의 양이온 교환 단계. 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다.
전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시(Coomassie) 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. GFC 칼럼으로부터의 풀을 저염 완충제 중에 희석하고, 정제용 SP-XL 칼럼에 적용하였다. 안정한 A280 기준선 흡광도가 달성될 때까지 칼럼을 저염 완충제로 세척하고, 20 칼럼 부피 구배 0 mM NaCl → 500 mM NaCl을 사용하여 용리시켰다. 다시, SP-XL 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
HTS (BV949)에 대한 PI3K 베타 정제 프로토콜
PI3K 베타를 2개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (지이 헬스케어) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 슈퍼덱스 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과 (GFC). 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다.
전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
HTS (BV950)에 대한 PI3K 감마 정제 프로토콜
PI3K 감마를 2개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (지이 헬스케어) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피 (IMAC), 및 슈퍼덱스 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과 (GFC). 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다. 전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
HTS (BV1060)에 대한 PI3K 델타 정제 프로토콜
PI3K 델타를 3개의 크로마토그래피 단계로 정제하였다: Ni 세파로스 수지 (지이 헬스케어) 상에서의 고정화된 금속 친화성 크로마토그래피, 슈퍼덱스 200 26/60 칼럼 (지이 헬스케어)을 이용한 겔 여과, 및 최종적인 Q-HP 칼럼 (지이 헬스케어) 상에서의 음이온 교환 단계. 모든 완충제는 4℃로 냉각시키고, 얼음 상에서 냉각된 상태로 용해를 수행하였다. 칼럼 분획화는 실온에서 신속하게 수행하였다. 전형적으로, 동결된 곤충 세포를 고장성 용해 완충제 중에 용해시키고, 정제용 IMAC 칼럼에 적용하였다. 수지를 3-5 칼럼 부피의 용해 완충제에 이어서 45 mM 이미다졸을 함유하는 3-5 칼럼 부피의 세척 완충제로 세척하고, 이어서 표적 단백질을 250 mM 이미다졸을 함유하는 완충제로 용리시켰다. 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 정제용 GFC 칼럼에 적용하였다. GFC 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. GFC 칼럼으로부터의 풀을 저염 완충제 중에 희석하고, 정제용 Q-HP 칼럼에 적용하였다. 안정한 A280 기준선 흡광도가 달성될 때까지 칼럼을 저염 완충제로 세척하고, 20 칼럼 부피 구배 0 mM NaCl → 500 mM NaCl을 사용하여 용리시켰다. 다시, Q-HP 칼럼으로부터의 분획을 쿠마시 염색된 SDS-PAGE 겔에 의해 분석하고, 표적 단백질을 함유하는 분획을 풀링하였다. 최종 풀을 50% 글리세롤을 함유하는 저장 완충제 중에 투석하고, -20℃에서 저장하였다. 최종 풀을 포스포이노시톨 키나제 검정에서 활성에 대해 검정하였다.
IC50은 "엑셀 피트(excel fit)"와 함께 4-파라미터 곡선 피팅 루틴에 의해 결정하였다. 4-파라미터 로지스틱 방정식을 사용하여 8가지 농도 (일반적으로, 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 및 0.003 μM)에서의 각 화합물의 억제 백분율의 IC50 값 (IDBS XLfit)을 계산하였다. 대안적으로는, 4-파라미터 로지스틱 모델인 idbsXLfit 모델 204를 사용하여 IC50 값을 계산하였다.
대안적으로, ATP 고갈 검정의 경우에는, 시험되는 화학식 I의 화합물을 DMSO 중에 용해시키고, 웰당 0.5 μl로 백색 384-웰 플레이트에 직접 분배하였다. 반응을 개시하기 위해, 10 nM PI3 키나제 10 μl 및 5 μg/mL 1-알파-포스파티딜이노시톨 (PI)에 이어서 2 μM ATP 10 μl를 각 웰에 첨가하였다. 대략 50%의 ATP가 고갈될 때까지 반응을 수행하고, 이어서 20 μl의 키나제-글로 용액 (프로메가 코포레이션(Promega Corp.), 미국 위스콘신주 매디슨)을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 중지된 반응물을 5분 동안 인큐베이션하고, 이어서 남아있는 ATP를 발광을 통해 검출하였다. 이어서, IC50 값을 결정하였다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 효소적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 효소적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 100 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 효소적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 0.5 nM 내지 10 nM이다.
본 발명의 한 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 1000 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM이다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 이소형 중 1종 이상에 비해 적어도 10배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 이소형 중 1종 이상에 비해 적어도 20배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 파라로그 PI3K α 및 β에 비해 적어도 10배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 파라로그 PI3K α 및 β에 비해 적어도 20배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM이고, PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 파라로그 PI3K α 및 β에 비해 적어도 10배의 선택성을 나타낸다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, PI3K 이소형 델타에 대한 억제 작용을 갖는 PI3K 억제제는 세포적 PI3K 델타 검정에서 IC50으로 표현되는 활성의 범위가 1 nM 내지 500 nM이고, PI3K 이소형 델타에 대해, 다른 파라로그 PI3K α 및 β에 비해 적어도 20배의 선택성을 나타낸다.
2. 세포 검정
2.1 Rat-1 세포에서의 포스포이노시티드-3 키나제 (PI3K)-매개 Akt 1/2 (S473) 인산화
인간 포스포이노시티드-3 키나제 (PI3K) 알파, 베타 또는 델타의 촉매 서브유닛의 미리스토일화 형태를 안정하게 과다발현하는 Rat-1 세포를, 30 ul 완전 성장 배지 (10% (v/v) 태아 소 혈청, 1% (v/v) MEM 비 필수 아미노산, 10 mM HEPES, 2 mM L-글루타민, 10 μg/mL 퓨로마이신 및 1% (v/v) 페니실린/스트렙토마이신으로 보충된 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM 고 글루코스)) 중 7500개 (PI3K 알파), 6200개 (PI3K 베타) 또는 4000개 (PI3K 델타) 세포의 밀도로 384-웰 플레이트에 플레이팅하고, 37℃ / 5% CO2 / 95% 습도에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 화합물을 384-웰 화합물 플레이트에서 희석하여 90% DMSO 중 40종의 시험 화합물에 대한 8-지점 연속 희석물, 뿐만 아니라 4종의 참조 화합물 + 16종의 고 대조군 및 16종의 저 (억제) 대조군을 수득하였다. 허밍웰(Hummingwell) 나노리터 디스펜서를 사용하여 384-웰 폴리프로필렌 플레이트 내로 화합물 용액 250 nl를 피펫팅하여 분배함으로써 예비희석 플레이트를 제조하였다. 49.75 ul 완전 성장 배지를 첨가하여 화합물을 예비희석하였다. 예비희석된 화합물 용액 10 ul를 384-웰 피펫터를 사용하여 세포 플레이트로 옮김으로써, 0.11%의 최종 DMSO 농도를 생성하였다. 세포를 37℃ / 5% CO2 / 95% 습도에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상청액을 제거하고, 세포를 알파스크린(AlphaScreen)® 슈어파이어(SureFire)® 검출용 용해 완충제 20 ul 중에 용해시켰다.
p-AKT(Ser473)의 검출을 위해, 슈어파이어® p-Akt 1/2 (Ser473) 검정 키트 (퍼킨엘머, 미국)를 사용하였다. 세포 용해물 5 ul를 384-웰 피펫터를 사용하여 검출을 위한 384-웰 저 부피 프록시플레이트(Proxiplate)로 옮겼다. 알파스크린® 슈어파이어® 시약의 첨가를 제조업체의 프로토콜에 따라 수행하였다. 첫째로, 알파스크린® 수용자 비드를 함유하는 반응 완충제 + 활성화 완충제 믹스 5 ul를 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, 플레이트 진탕기 상에서 실온에서 2시간 동안 인큐베이션하였다. 둘째로, 알파스크린® 공여자 비드를 함유하는 희석 완충제 2 ul를 첨가하고, 플레이트를 추가로 2시간 동안 상기와 같이 플레이트 진탕기 상에서 인큐베이션하였다. 표준 알파스크린® 설정을 사용하여, 알파스크린® 호환 플레이트 판독기 상에서 플레이트를 판독하였다.
2.2 뮤린 B 세포 활성화의 결정
PI3Kδ는 B 세포가 B 세포 수용체 (BCR)를 통해 자극될 때 B 세포 기능을 조절하는 것으로 인식되어 있다 (문헌 [Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002)]). B 세포 활성화에 대한 화합물의 억제 특성을 평가하기 위해, 마우스 비장 항체로부터 유도된 뮤린 B 세포 상의 활성화 마커 CD86 및 CD69의 상향조절을 항-IgM으로의 자극 후에 측정하였다. CD69는 B 및 T 세포에 대한 익히 공지된 활성화 마커이다 (문헌 [Sancho et al. Trends Immunol. 26:136 (2005)]). CD86 (B7-2로도 공지되어 있음)은 B 세포를 비롯한 항원-제시 세포 상에서 주로 발현된다. 휴지기의 B 세포는 CD86을 낮은 수준으로 발현하지만, 예를 들어 BCR 또는 IL-4 수용체의 자극 후에는 이를 상향조절한다. B 세포 상의 CD86은 T 세포 상의 CD28과 상호작용한다. 이 상호작용은 최적 T 세포 활성화 및 최적 IgG1 반응의 생성을 위해 필요하다 (문헌 [Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)]).
Balb/c 마우스로부터 비장을 수집하고, 비장세포를 단리하여 10% 태아 소 혈청 (FBS), 10 mM HEPES, 100 유닛/mL 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 RPMI로 2회 세척하였다. 상기 방식으로 보충된 RPMI는 이하에서 배지로 지칭된다. 세포를 배지 중에서 2.5 X 106개 세포/mL로 조정하고, 200 μl 세포 현탁액 (5 x106개 세포)을 96 웰 플레이트의 적절한 웰에 첨가하였다.
이어서, 배지 중 항-IgM mAb 50 μl (최종 농도: 30 μg/mL)를 첨가함으로써 세포를 자극하였다. 37℃에서 24시간 동안 인큐베이션한 후, 세포를 하기 항체 칵테일로 염색하였다: B 세포의 평가를 위한 항-마우스 CD86-FITC, 항-마우스 CD69-PerCP-Cy5.5, 항-마우스 CD19-PerCP, 및 T 세포의 평가를 위한 항-마우스 CD3-FITC, 항-마우스 CD69-PE (각 항체 2 μl/웰). 암실에서 실온 (rt) 하에 1시간 후, 세포를 96 딥웰(Deepwell) 플레이트로 옮겼다. 세포를 2% FBS를 함유하는 1 mL PBS로 1회 세척하고, 200 μl 중에 재현탁시킨 후, 샘플을 FACS 칼리버(Calibur) 유동 세포측정기 상에서 분석하였다. 림프구를 크기 및 입도에 따라 FSC/SSC 도트 플롯에서 게이팅하고, CD19, CD3 및 활성화 마커 (CD86, CD69)의 발현에 대해 추가로 분석하였다. BD 셀퀘스트(BD CellQest) 소프트웨어를 사용하여, 도트 블롯으로부터 CD19+ 또는 CD3+ 집단 내에서 활성화 마커에 대해 양성적으로 염색된 세포의 백분율로서 데이터를 계산하였다.
화합물의 억제 특성을 평가하기 위해, 화합물을 먼저 DMSO 중에 용해시키고 희석한 다음, 배지 중에 1:50으로 희석하였다. Balb/c 마우스로부터 비장세포를 단리하고, 재현탁시키고, 상기 기재된 바와 같은 96 웰 플레이트로 옮겼다 (200 μl/웰). 희석된 화합물 또는 용매를 플레이트에 첨가하고 (25 μl), 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서, 배양물을 25 μl 항-IgM mAb/웰 (최종 농도 30 μg/mL)로 37℃에서 24시간 동안 자극하고, 항-마우스 CD86-FITC 및 항-마우스 CD19-PerCP로 염색하였다 (각 항체 2 μl/웰). CD19 양성 B 세포 상의 CD86 발현을 상기 기재된 바와 같은 유동 세포측정법에 의해 정량화하였다.
2.3 래트 B 세포 활성화의 결정
PI3Kδ는 B 세포가 B 세포 수용체 (BCR)를 통해 자극될 때 B 세포 기능을 조절하는 것으로 인식되어 있다 (문헌 [Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002)]). B 세포 활성화에 대한 화합물의 억제 특성을 평가하기 위해, 전혈로부터 유도된 래트 B 세포 상의 활성화 마커 CD86의 상향조절을 항-IgM 및 재조합 IL-4로의 자극 후에 측정하였다. CD86 분자 (B7-2로도 공지되어 있음)는 B 세포를 비롯한 항원-제시 세포 상에서 주로 발현된다. 휴지기의 B 세포는 CD86을 낮은 수준으로 발현하지만, 예를 들어 BCR 또는 IL-4 수용체의 자극 후에는 이를 상향조절한다. B 세포 상의 CD86은 T 세포 상의 CD28과 상호작용한다. 이 상호작용은 최적 T 세포 활성화 및 최적 IgG1 반응의 생성을 위해 필요하다 (문헌 [Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)]).
래트 혈액의 수집
헤파린나트륨으로 예비코팅된 피하 바늘을 갖는 10 ml 시린지를 사용하여 비만 성체 수컷 루이스(Lewis) 래트 (LEW/HanHsd) 복부 대동맥으로부터 전혈을 수집하였다. 혈액을 50 ml 팔콘(Falcon) 튜브 내로 옮기고, 항응고제 농도를 100 U/ml로 조정하였다.
래트 B 세포의 자극 및 특이적 억제제로의 처리
면역억제 약물의 시험관내 효과의 평가를 위해, 헤파린첨가 혈액을 배지를 사용하여 50%로 예비희석하였다. 배지로서, 100 U/ml 페니실린, 100 mg/ml 스트렙토마이신, 2 mM L-글루타민, 50 mg/ml 덱스트란 40 및 5% 소 태아 혈청 (FCS, 페타클론 I(Fetaclone I), 깁코(Gibco) #10270-106)으로 보충된 DMEM 고 글루코스 (아니메드(Animed) 카탈로그# 1-26F01-I)를 제공하였다. 이어서, 190 μl 예비희석된 혈액을 96 웰 U-바닥 마이크로타이터 플레이트 (눈크(Nunc))에서 예비희석된 시험 화합물 10 μl로 스파이킹하여 20 내지 0.0003 μM의 농도 범위를 갖는 3배 연속 희석물을 생성시켰다. 대조군 웰은 DMSO로 예비처리하여 0.5% DMSO의 최종 농도를 얻었다. 배양물을 2벌로 세팅하고, 플레이트 진탕기 (하이돌프 티트라맥스(Heidolph Titramax) 101; 30초, 속도 900) 상에서 교반에 의해 잘 혼합하고, 상하로 피펫팅하고, 다시 플레이트 진탕기 상에서 교반하였다. 배양물을 37℃, 5% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 폴리클로날 염소 항-래트 IgM Ab (세로텍(Serotec), 카탈로그# 302001) 20 μl 및 희석된 재조합 rIL-4 (이뮤노툴즈(Immunotools) # 340085) 10 μl를 첨가하여 각각 30 μg/ml 및 5 ng/ml의 최종 농도를 얻었다. 플레이트를 상기와 같이 플레이트 진탕기 상에서 교반에 의해 혼합하고, 37℃, 5% CO2에서 24시간 동안 인큐베이션하였다.
유동 세포측정법에 의한 B 세포 활성화의 결정
인큐베이션 후에, 웰당 25 mM EDTA 용액 15 μl를 첨가하고, 15분 동안 진탕하여 부착세포를 분리하였다. 표면 활성화 마커의 분석을 위해, 샘플을 이어서 PE-Cy5-표지된 항-래트CD45RA (BD 카탈로그# 557015)로 염색하여 FACS 분석에서 B 세포 상에 게이팅되도록 하였다. 또한, 샘플을 PE-표지된 항-래트 CD86 (BD 카탈로그# 551396)으로 염색하였다. 모든 염색 절차는 암실에서 30분 동안 실온에서 수행하였다. 인큐베이션 후에, 샘플을 BD 용해 용액 (BD # 349202) 2 ml/웰을 함유하는 96-딥 웰 V-바닥 마이크로타이터 플레이트 (코닝 # 396096)로 옮겼다. 적혈구의 용해 후에, 샘플을 셀워시(CellWASH) (BD # 349524) 2 ml로 세척하였다. 셀퀘스트 플러스 또는 디바(DIVA) (버전 6.1.1) 소프트웨어를 각각 사용하여 LSRII 또는 FACS칼리버 유동 세포측정기 (BD 바이오사이언시스) 상에서 데이터를 획득하였다. 림프구를 크기 및 입도에 따라 FSC/SSC 도트 블롯에서 게이팅하고, CD45RA 및 활성화 마커의 발현에 대해 추가로 분석하였다. 도트 블롯 또는 히스토그램으로부터 CD45RA+ 집단 내에서 활성화 마커에 대해 양성적으로 염색된 세포의 백분율로서 데이터를 계산하였다.
통계적 평가
약물에 대한 노출 후 B 세포 활성화의 억제 백분율을 하기 공식에 의해 계산하였다:
Figure 112014067144685-pct00397
오리진(ORIGIN) 7 소프트웨어 (오리진랩 코포레이션(OriginLab Corporation), 마이애미주 노샘프턴)를 비-선형 회귀 곡선 피팅에 대해 사용하였다. 힐(Hill) 방정식을 억제 데이터에 피팅하여 50% 억제를 생성하는 약물 농도 (IC50)를 얻었다.
2.4 마우스 비장세포에서의 TLR9-유도된 IL-6의 결정
마우스 비장으로부터의 단세포 현탁액의 제조
비장을 안락사 직후에 C57BL/6 마우스로부터 절제하였다. 과도한 지방을 비장으로부터 다듬은 후에, 5 ml 시린지로부터의 플런저를 사용하여 0.4 μM 세포 여과기를 통해 비장을 으깼다. 단세포 현탁액을 제조하고, 저온의 PBS를 사용하여 50 ml 팔콘 튜브에서 부피를 15 ml로 조정하였다. 세포를 1500 rpm으로 5분 동안 4℃에서 원심분리한 후에, 상청액을 제거하고, 비장당 적혈구 용해 완충제 5 ml 중에 재현탁시키고, 5분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 빙냉 PBS (30 ml)를 세포에 첨가한 후에, 1500 rpm으로 5분 동안 4℃에서 원심분리하였다. 상청액을 제거하고, 세포를 뮤린 비장세포 배양 배지 (MSCM) 40 ml로 2회 세척하였다. MSCM은 100 유닛/ml 페니실린 및 100 μg/ml 스트렙토마이신, 1 x 비필수 아미노산, 1 mM 피루브산나트륨, 0.05 mM β-메르캅토에탄올 및 10% 열-불활성화 태아 소 혈청 (FBS)으로 보충된 RPMI로 이루어졌다. 세포를 MSCM 10-20 ml 중에 재현탁시키고, 카운테스(Countess) 세포 계수기를 사용하여 계수하였다. 대략 60x106개 비장세포를 단일 C57BL/6 마우스 비장으로부터 수득하였다.
뮤린 비장세포의 자극 및 특이적 억제제로의 처리
비장세포를 96 웰 편평 바닥 플레이트에 100 μl 부피 중 2x105개 세포/웰의 최종 밀도로 플레이팅하고, 37℃ 가습 인큐베이터 내에서 2-4시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 이전에 제조한 화합물 원액 플레이트를 사용하여 시험되는 화합물을 자동화 액체 취급 기계를 사용하여 분배하였다. 원액 플레이트는 2 또는 3배 희석물을 사용하여 8-10 지점에 배열된 화합물 (90%/10% DMSO/ddH2O 중의 것)로 이루어졌다. 액체 취급 기계로 이전에 제조한 화합물 공급원 플레이트로부터의 각 희석물 1 μl를 96-웰 플레이트에 분배하였다. 세포 배양물 중 화합물의 최종 출발 농도는 10 μM이었다. 세포 배양물 중 DMSO의 최종 농도는 0.5%였다. 세포를 1시간 동안 화합물과 함께 인큐베이션한 후, TLR 리간드를 첨가하였다. 이어서, 10x EC80 농도의 CpG1826을 (200 μl의 최종 배양물 부피를 위해) 20 μl 부피로 첨가하고, 그 후 배양물을 37℃ 가습 인큐베이터 내에서 밤새 인큐베이션하였다.
ELISA에 의한 인터류킨-6의 결정
밤새 배양한 후에, 플레이트를 2000 rpm으로 5분 동안 실온에서 원심분리하였다. 후속적으로, 각 배양물 150 μl를 96-웰 V-바닥 플레이트에 옮기고, 상업적으로 입수가능한 마우스 IL-6 샌드위치 ELISA 키트를 사용하여 IL-6 수준을 측정하였다. 간략하게, 플레이트를 포획 항체로 밤새 코팅한 후, PBS/0.1% BSA로 1시간 동안 차단하였다. 샘플 및 표준물을 50 μl 부피로 첨가하고, 플레이트를 2시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 표준물/샘플의 제거 후에, 플레이트를PBS/0.05% 트윈(Tween)을 사용하여 세척한 후, 비오티닐화 검출 항체 50 μl를 첨가하고, 그 후 플레이트를 2시간 동안 실온에서 교반하면서 인큐베이션하였다. 플레이트를 다시 세척한 후, 웰당 50 μl 스트렙타비딘-양고추냉이 퍼옥시다제를 20분 동안 첨가하였다. 추가의 플레이트 세척 후에, 50 μl TMB 기질을 각 웰에 첨가하고, 플레이트를 20분 동안 인큐베이션한 후, 25 μl/웰 정지 용액을 첨가하였다. IL-6 수준을 스펙트라맥스(SpectraMax) 190 플레이트 판독기 (450 nm)를 사용하여 측정하고, 소프트맥스 프로(SoftMax Pro) 및 그래프패드 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어를 사용하여 분석하였다.
2.5 인간 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서의 TLR9-유도된 IFN알파의 결정
신선 인간 혈액으로부터의 PBMC의 제조
인간 혈액 (약 75 ml)을 헤파린을 함유하는 10개의 S-모노벳(S-Monovette) 튜브 (S-모노벳 7.5 mL NH 헤파린 16 IU/mL 혈액; 슈타르슈테트(Starstedt))에 수집하였다. 류코셉(Leucosep)™ 튜브 (30 mL #227290; 그라이너 바이오-원(Greiner Bio-one))를 튜브당 15 ml 림프구 분리 배지 LSM1077™ (#J15-004; PAA 래보러토리즈(PAA Laboratories))의 첨가 및 30초 동안 1000g로의 원심분리에 의해 제조하였다. 일부 25 ml 혈액을 류코셉™ 튜브로 옮긴 후, 동일한 부의 PBS (Ca2+/Mg2+ 무함유; #14190-094)로 희석하였다. 샘플을 에펜도르프(Eppendorf) 5810R 원심분리기를 사용하여 브레이크 없이 800g로 20분 동안 22℃에서 원심분리하였다. PBMC 층을 조심스럽게 혈장:분리 배지 계면으로부터 제거하고, 깨끗한 50 ml 튜브 내로 옮겼다. 세포를 PBS의 첨가 (45 ml 이하)에 의해 1회 세척하고, 에펜도르프 5810R을 사용하여 브레이크 (속도 9로 설정)를 포함하여 원심분리하였다 (1400rpm, 22℃에서 10분). 펠릿화된 세포를 조심스럽게 배지 (RPMI 1640+글루타맥스-I (GlutaMAX-I), 0.05 mM 2-메르캅토에탄올, 10 mM HEPES 및 5% v/v FCS) 중에 재현탁시키고, 샘플을 풀링하였다. 배지 성분 2-메르캅토에탄올 (#31350-010; 50 mM), Hepes (#15630-056, 1M) 및 RPMI 1640 (1x) + 글루타맥스-I (#61870-010)는 깁코로부터 입수하였다. FCS (#2-01F36-1)는 아미메드(Amimed)로부터 입수하였다. PBMC를 카운테스® 자동화 세포 계수기를 사용하여 계수하였다 (샘플을 배지 중에 1:10으로 예비희석한 후, 트리판 블루(Trypan Blue) 동등 부피 (10 μl)를 첨가하였음). 세포를 4 x 106개 세포/ml로 희석하고, 384-웰 플레이트 (#353962; 벡톤 디킨슨 AG(Becton Dickinson AG))에 시딩하여 최종부피 25 μl (즉, 1 x 105개 세포/웰)를 제공하였다.
PBMC의 자극 및 특이적 억제제로의 처리
화합물을 100% v/v DMSO (#41640-100 mL; 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)) 중에 예비희석하고, 이어서 배지로 옮겼다 (0.25%의 최종 DMSO 농도가 달성됨). 세포를 적절한 화합물 희석물 (5 μl) 또는 비히클 대조군 (5 μl)으로 처리하고, 가습 인큐베이터 내의 5% (v/v) CO2를 포함하는 공기 중에서 37℃로 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 CpG2216 (0.3 μM; #tlrl-hodna; 인비보젠(Invivogen)) 또는 비히클 대조군 (10 μl/웰)으로 자극하고, 20시간 동안 인큐베이션하였다. IFNα 수준의 정량화를 위해 플레이트를 간략하게 원심분리하고 (2분 동안 22℃에서 200 x g), 상청액 샘플 (30 μl)을 제거하였다.
알파리사(AlphaLisa) 기술을 사용한 IFNα의 정량화
IFN알파의 정량화를 위해, 퍼킨엘머로부터의 인간 인터페론 알파리사 키트 (#AL264F)를 사용하였다. 항-IFNα 수용자 비드 (최종 5 μg/ml) 및 비오티닐화 항체 항-IFNα (최종 0.5 nM)를 함유하는 항체 믹스를 새로이 제조하고, 384-웰 옵티플레이츠(Optiplates)™ (#6007299; 퍼킨엘머) 내로 분배하였다 (5 μl). 공지된 IFNα 표준물 (인간 IFNα B (2b))의 희석물을 제조하고, 세포 상청액 (5 μl)과 함께 상기 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 간략하게 원심분리하고 (200g로 펄스), 접착성 밀봉 필름으로 덮고, 와동시키고, 암실에서 1시간 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 스트렙타비딘-코팅된 공여자 비드 (최종 20 μg/ml)를 제조하고, 어두운 조명의 구역에서 (광 민감성 믹스) 각 웰 (5 μl)에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 인큐베이션하였다 (플레이트는 원심분리되거나 또는 덮이지 않아야 함). 인큐베이션 후에, 알파 옵션이 구비된 엔비전(EnVision)™ 다중플레이트 판독기를 기기 자체의 "알파스크린 표준 설정" (예를 들어, 총 측정 시간: 550 ms, 레이저 680 nm 여기 시간: 180 ms, 거울: D640 as, 방출 필터: M570w, 중심 파장 570 nm, 대역폭 100 nm, 투과율 75%)으로 사용하여 플레이트를 판독하였다. IFNα 수준의 분석 및 정량화를 위해 데이터를 수집하였다.
데이터 평가 및 분석
XLfit 애드-인 (IDBS; 버전 4.3.2)을 포함하는 엑셀 XLfit 4.0 (마이크로소프트(Microsoft))을 사용하여 데이터를 분석하였다. 인간 IFNα B (2b)를 사용한 표준 곡선에 대한 외삽에 따라 특정한 IFNα 농도를 결정하였다. 실험 데이터에 대한 곡선의 피팅 후 비선형 회귀에 의해 화합물의 개별 IC50 값을 결정하였다.
3 양 적혈구 (SRBC)에 대한 항체 생산의 결정.
간략하게, OFA 래트에 제0일에 양 적혈구를 정맥내 주사하고, 조사 하의 화합물로 연속 4일 동안 (제0일 내지 제3일) 경구로 처리하였다. 비장 세포 현탁액을 제4일에 제조하고, 림프구를 지표 세포 (SRBC) 및 보체의 존재 하에 연질 한천 상에 플레이팅하였다. SRBC-특이적 항체 (대부분 IgM 하위부류)의 분비 및 보체의 존재로 인한 지표 세포의 용해는 플라크를 생성하였다. 플레이트당 플라크의 개수를 계수하고, 비장당 플라크의 개수로서 표현하였다.
면역화: 5마리의 암컷 OFA 래트의 군을 제0일에 정맥내 주사에 의해 래트당 0.5 ml의 부피로 2x108개/ml SRBC (래보러토리 애니멀 서비시스 LAS(Laboratory Animal Services LAS), 노파르티스 파마 아게로부터 입수함)로 면역화시켰다.
화합물 처리: 동물을 면역화 당일에 시작하여 연속 4일 동안 (제0, 1, 2 및 3일) 0.5% CMC, 0.5% 트윈80 중에 현탁시킨 화합물로 처리하였다. 화합물을 5 ml/kg 체중의 적용 부피로 투여 사이에 12시간 간격을 두고 매일 2회 경구 투여하였다.
비장 세포 현탁액의 제조:
제4일에, 동물을 CO2로 안락사시켰다. 비장을 제거하고, 칭량하고, 각각의 래트 비장에 대해 저온의 (4℃) 행크 평형 염 용액 (HBSS; 깁코, pH 7.3, 1 mg 페놀레드(Phenolred)/100 ml 함유) 10 ml를 함유하는 플라스틱 튜브에 넣었다. 비장을 유리 포터로 균질화시키고, 5분 동안 얼음 상에 정치시키고, 1 ml 상청액을 새로운 튜브 내로 옮겼다. 세포를 4 ml HBSS로 1회 세척한 다음, 상청액을 버리고, 펠릿을 HBSS 1 ml 중에 재현탁시켰다. 비장당 림프구 개수를 자동화 세포 계수기에 의해 결정하고, 비장 세포 현탁액을 30x106개/ml의 세포 농도로 조정하였다.
플라크 형성 검정:
연질 한천 페트리 디쉬를 HBSS 중 0.7% 아가로스 (SERVA)를 사용하여 제조하였다.
또한, 0.7% 아가로스 1 ml를 플라스틱 튜브에서 제조하고, 수조에서 48℃로 유지시켰다. 30x106개/ml 비장 세포 현탁액 중의 일부 50 μl 및 40 x 108개/ml의 SRBC 50 μl을 첨가하고, 빠르게 혼합하고 (볼텍스(Vortex)), 제조된 아가로스 디쉬 상에 부었다. 페트리 디쉬를 약간 기울여, 아가로스 층 상에서 세포 혼합물의 균일한 분포를 달성하였다. 디쉬를 실온에서 15분 동안 정치시킨 다음, 37℃에서 60분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 1.4 ml 기니 피그 보체 (하를란(Harlan); 10%)를 첨가하고, 추가로 60분 동안 37℃에서 인큐베이션을 계속하였다. SRBC-특이적 항체가 항원 (SRBC)에 결합된 플레이팅된 B 세포에 의해 그의 부근에 방출되었다. 이들 항원-항체 복합체는 보체를 활성화시켜, 적색 적혈구 층 내에 밝은 반점 (플라크)을 남기는 SRBC의 용해를 유발하였다. 플라크를 현미경으로 계수하였다.
플라크 형성의 억제의 결정을 위해 하기 공식을 사용하였다: %억제 = C*100/V-100
상기 공식에서, V= 비히클 군에 대한 평균 플라크 개수/비장; C= 화합물 처리군에 대한 평균 플라크 개수/비장
참고문헌:
Figure 112014067144685-pct00398
생물학적 데이터
효소적 검정
Figure 112014067144685-pct00399
Figure 112014067144685-pct00400
Figure 112014067144685-pct00401
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Figure 112014067144685-pct00406
Figure 112014067144685-pct00407
세포적 검정
Figure 112014067144685-pct00408
SEQUENCE LISTING <110> Novartis AG <120> Dihydro-Benzo-Oxazine and Dihydro-Pyrido-Oxazine Derivatives <130> PAT054932P1 <160> 21 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 1 cgagaatatg atagattata tgaagaat 28 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 2 tggtttaatg ctgttcatac gtttgtcaat 30 <210> 3 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 3 gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctac gaaggagata tacatatgcg agaatatgat 60 agattatatg aagaat 76 <210> 4 <211> 66 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 4 taccataatt ccaccaccac caccggaaat tccccctggt ttaatgctgt tcatacgttt 60 gtcaat 66 <210> 5 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 5 ctagtggaat gtttactacc aaatgg 26 <210> 6 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 6 gttcaatgca tgctgtttaa ttgtgt 26 <210> 7 <211> 63 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 7 gggggaattt ccggtggtgg tggtggaatt atggtactag tggaatgttt actaccaaat 60 gga 63 <210> 8 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 8 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc gttcaatgca tgctgtttaa ttgtgt 56 <210> 9 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 9 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 10 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 10 gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42 <210> 11 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 11 gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 12 <211> 42 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 12 tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42 <210> 13 <211> 54 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 13 actgaagcat cctcctcctc ctcctcctgg tttaatgctg ttcatacgtt tgtc 54 <210> 14 <211> 57 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 14 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc agatctgtag tctttccgaa ctgtgtg 57 <210> 15 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 15 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 16 <211> 45 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 16 tcctcctcct cctcctcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 17 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 17 atgccccctg gggtggactg ccccat 26 <210> 18 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 18 ctactgcctg ttgtctttgg acacgt 26 <210> 19 <211> 53 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 19 attaaaccag gaggaggagg aggaggaccc cctggggtgg actgccccat gga 53 <210> 20 <211> 56 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 20 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc ctgcctgttg tctttggaca cgttgt 56 <210> 21 <211> 61 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> Primer <400> 21 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61

Claims (15)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 I>
    Figure 112016003295471-pct00417

    상기 식에서,
    Y는 O 또는 NH로부터 선택되고;
    V는 CR5 또는 N으로부터 선택되고;
    W는 CH2 또는 O로부터 선택되고;
    U는 N 또는 CH로부터 선택되고;
    Q는 N 또는 CR6으로부터 선택되고;
    여기서 U 및 Q가 둘 다 N인 것은 아니고;
    R1은 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐,
    또는
    -X-R4로부터 선택되고,
    여기서 X는 C(O), S(O)2 또는 CH2로부터 선택되고,
    R4는 C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-옥시, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, C3-C12-시클로알킬-옥시, C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-옥시, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, 히드록시, C1-C8-알콕시, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고,
    여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬은 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
    C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬은 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환될 수 있고;
    '헤테로시클릴'은 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자는 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
    '헤테로아릴'은 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'은 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자는 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
    R6은 수소, 할로겐, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시, C1-C4-알킬-술포닐, C1-C4-알킬-술피닐, C1-C4-알킬-술파닐, 할로-C1-C4-알콕시, C1-C4-알콕시-C1-C4-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되고;
    R7은 수소, 할로겐, 시아노, 니트로, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시, N(R8)2-술포닐, C1-C4-알킬-술포닐, C1-C4-알킬-술포닐-아미노, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노 또는 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노로부터 선택되거나;
    또는 R6 및 R7은 함께 CH=CH-CH=CH이고,
    여기서 R8은 독립적으로 수소, C1-C4-알킬, C1-C4-알콕시로부터 선택되거나 또는 2개의 R8은 이들이 부착되어 있는 질소와 함께 N, O, S로부터 선택된 1-2개의 헤테로원자를 함유하는 4 내지 7원 헤테로시클릭 고리를 형성하고, 이는 비치환되거나 또는 C1-C4-알킬로부터 선택된 1-3개의 치환기에 의해 치환되고;
    R5는 독립적으로 H, D, F 또는 C1-C2-알킬로부터 선택되고;
    R30은 독립적으로 H, D 또는 F로부터 선택된다.
  2. 제1항에 있어서, 하기 화학식 Ic'의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 Ic'>
    Figure 112014067238229-pct00418
  3. 제1항에 있어서, 하기 화학식 Id'의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 Id'>
    Figure 112014067238229-pct00419
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 하기 화학식 Ie'의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 Ie'>
    Figure 112014067238229-pct00420
  5. 제1항 또는 제3항에 있어서, 하기 화학식 If'의 화합물 또는 그의 염.
    <화학식 If'>
    Figure 112014067238229-pct00421
  6. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이 페닐, 피리딜, 피리미디닐, 피라지닐, 피리다지닐, 1,2,3-트리아지닐, 1,2,4-트리아지닐, 1,3,5-트리아지닐,
    또는
    -X-R4로부터 선택되고, 여기서
    R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
    C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
    '헤테로시클릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
    '헤테로아릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 다양한 산화 상태로 산화될 수 있는 것인 화합물 또는 그의 염.
  7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    R1이
    -X-R4로부터 선택되고, 여기서
    R4가 C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 시아노-C1-C8-알킬, N,N-디-C1-C4-알킬-아미노-C1-C8-알킬, C1-C4-알킬-술포닐-C1-C8-알킬, 페닐, 헤테로시클릴, 헤테로시클릴-C1-C8-알킬, C3-C12-시클로알킬, 헤테로아릴, 헤테로아릴-C1-C8-알킬, C1-C8-알콕시로부터 선택되고, 여기서 N-C1-C8-알킬-아미노 내 및 N,N-디-C1-C8-알킬-아미노 내의 C1-C8-알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고,
    C3-C12-시클로알킬 내 및 C3-C12-시클로알킬-C1-C8-알킬 내의 C3-C12-시클로알킬이 비치환되거나 또는 할로겐, 히드록시 또는 C1-C4-알콕시에 의해 치환될 수 있고;
    '헤테로시클릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 포화 또는 부분 불포화 모노시클릭 고리계이고, 이는 비치환되거나 또는 옥소, 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로시클릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고,
    '헤테로아릴'이 N, O 또는 S로부터 선택된 1 내지 3개의 헤테로원자를 함유하는 3 내지 7원 완전 불포화 모노시클릭 고리계, 또는 피라졸로[1,5-a]피리미딘 또는 이미다조[2,1-b]티아졸이고, 이들 각각은 비치환되거나 또는 할로겐, C1-C8-알킬, 할로-C1-C8-알킬, 히드록시-C1-C8-알킬, 히드록실, C1-C8-알콕시, C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬, 아미노, N-C1-C8-알킬-아미노, N,N-디-C1-C8-알킬-아미노, C1-C8-알킬-카르보닐, 할로-C1-C8-알킬-카르보닐, 히드록시-C1-C8-알킬-카르보닐 또는 C1-C8-알콕시-C1-C8-알킬-카르보닐로부터 선택된 1-5개의 치환기에 의해 치환되고; 여기서 '헤테로아릴'이 헤테로원자 또는 탄소 원자에서 부착될 수 있고, 여기서 N 및/또는 S 헤테로원자가 다양한 산화 상태로 산화될 수 있고;
    R6이 할로겐, C1-C4-알콕시, C1-C4-알킬-술포닐 또는 할로-C1-C4-알콕시로부터 선택되고;
    R7이 수소, 할로겐, 시아노, C1-C4-알킬, 할로-C1-C4-알킬 또는 C1-C4-알콕시로부터 선택된 것인 화합물 또는 그의 염.
  8. 제1항에 있어서,
    (S)-(3-((4-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논;
    5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-피리딘-3-술폰산 디메틸아미드;
    ((S)-3-{4-[5-(모르폴린-4-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메틸-5-니트로-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    (테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-[4-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    1-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    2-메톡시-5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴;
    1-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(6-아미노-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    2-메톡시-N,N-디메틸-5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-벤젠술폰아미드;
    1-{(S)-3-[4-(3-메탄술포닐-4-메톡시-페닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(6-아미노-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-((S)-3-{4-[6-메톡시-5-(4-메틸-피페라진-1-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(2-메틸-피리딘-4-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    (테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-[4-(2-트리플루오로메틸-피리딘-4-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(2-메톡시-피리딘-4-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-아미노-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    1-((S)-3-{4-[4-메틸-3-(피페리딘-1-술포닐)-페닐]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    1-((S)-3-{4-[4-메톡시-3-(모르폴린-4-술포닐)-페닐]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    1-((S)-3-{4-[5-(모르폴린-4-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    1-((S)-3-{4-[4-메톡시-3-(4-메틸-피페라진-1-술포닐)-페닐]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    1-((S)-3-{4-[5-(4-메틸-피페라진-1-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    2,N-디메톡시-N-메틸-5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-벤젠술폰아미드;
    5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-피리딘-3-술폰산 메톡시-메틸-아미드;
    2,N-디메톡시-5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-벤젠술폰아미드;
    5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[4-(5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-클로로-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(3,4-디메톡시-페닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-[(S)-3-(4-퀴놀린-3-일-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시)-피롤리딘-1-일]-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-피리딘-3-술폰산 디메틸아미드;
    2-메틸-5-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-벤조니트릴;
    1-{(S)-3-[4-(4-메톡시-3-트리플루오로메틸-페닐)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    (테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-에톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    4-[6-((S)-1-프로피오닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-피리딘-2-카르보니트릴;
    1-{(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-((S)-3-{4-[5-(프로판-2-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-프로판-1-온;
    ((S)-3-{4-[5-(프로판-2-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-에탄술피닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    (4,4-디플루오로-시클로헥실)-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    (1,1-디옥소-테트라히드로-1람다*6*-티오펜-3-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-푸란-3-일)-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-에톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    ({(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(5-에틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-피리딘-4-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-피리미딘-5-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    (2,2-디메틸-테트라히드로-피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-((S)-3-{4-[5-(프로판-2-술포닐)-피리딘-3-일]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시}-피롤리딘-1-일)-메타논;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-3,3-디듀테로-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-푸란-3-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메톡시-에타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메틸-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-페닐-메타논;
    (1,1-디옥소-테트라히드로-1람다*6*-티오펜-3-일)-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    [1,4]디옥산-2-일-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-메톡시-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-[1,4]디옥산-2-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-푸란-3-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-테트라히드로-1람다*6*-티오펜-3-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-3-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-3-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메톡시-에타논;
    1-{(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-메탄술포닐-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-메톡시-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    시클로헥실-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (4-히드록시-시클로헥실)-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-클로로-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-클로로-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(6-클로로-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-클로로-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-히드록시-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(6-클로로-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-클로로-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(6-클로로-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-클로로-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-히드록시-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(6-클로로-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    5-{(S)-3-[4-(6-클로로-5-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
    {(S)-3-[4-(6-클로로-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    5-{(S)-3-[4-(6-클로로-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-히드록시-시클로헥실)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-피리딘-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-피리딘-4-일-에타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로메틸-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-디플루오로메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-디플루오로메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-6-티오피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(R)-테트라히드로-푸란-3-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸아미노-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디메틸아미노-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-클로로-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    시클로프로필-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-술포닐)-피롤리딘-3-일옥시]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진;
    4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-[(S)-1-(프로판-2-술포닐)-피롤리딘-3-일옥시]-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진;
    6-((S)-1-시클로프로판술포닐-피롤리딘-3-일옥시)-4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진;
    6-((S)-1-에탄술포닐-피롤리딘-3-일옥시)-4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진;
    (S)-3-[4-(5-플루오로-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-에탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(3-메틸-3H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    1-(4-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피페리딘-1-일)-에타논;
    4-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
    5-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1H-피리딘-2-온;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    5-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-1-메틸-1H-피리딘-2-온;
    1-{(S)-3-[4-(6-에탄술포닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-푸란-3-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메톡시-에타논;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-4-일-메타논;
    (1,1-디옥소-테트라히드로-1람다*6*-티오펜-3-일)-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-피리미딘-5-일-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-테트라히드로-1람다*6*-티오펜-3-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-메탄술포닐-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-히드록시-프로판-1-온;
    {(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-옥사졸-5-일-메타논;
    3-{(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-옥소-프로피오니트릴;
    1-{(S)-3-[4-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메탄술포닐-에타논;
    1-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메탄술포닐-에타논;
    1-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-메탄술포닐-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-히드록시-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-메톡시-프로판-1-온;
    [1,4]디옥산-2-일-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    3-{(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-3-옥소-프로피오니트릴;
    {(S)-3-[4-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(4-히드록시-시클로헥실)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-6-티오피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[4-(6-에탄술피닐-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-((R)-3-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르보닐}-피롤리딘-1-일)-에타논;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(R)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    1-{(R)-3-[4-(6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    1-{(S)-3-[4-(6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-프로판-1-온;
    2-메톡시-5-{3-메틸-6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(푸라잔-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(2-메틸-2H-피라졸-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(이소옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(2-메탄술포닐-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(5-메틸-[1,3,4]옥사디아졸-2-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(피리미딘-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(티아졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(피라진-2-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(피리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(피리딘-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(1,3-디메틸-1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(5-옥소-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(2,4-디메틸-옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(6,6-디메틸-4-옥소-5,6-디히드로-4H-피란-2-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(피라졸로[1,5-a]피리미딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(5-옥소-피롤리딘-2-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-([1,4]디옥산-2-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    (S)-2-메톡시-5-(6-((1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)피롤리딘-3-일)옥시)-2H-벤조[b][1,4]옥사진-4(3H)-일)니코티노니트릴;
    1-{(S)-3-[4-(6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-모르폴린-4-일-에타논;
    2-디메틸아미노-1-{(S)-3-[4-(6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-에타논;
    5-{6-[(S)-1-(1-아세틸-피페리딘-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(2-디메틸아미노-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(2-모르폴린-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-[6-((S)-1-이소부티릴-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(3,3-디메틸-부티릴)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(3-메틸-부티릴)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    (S)-3-[4-(5-시아노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 메틸 에스테르;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(2-메톡시-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-[6-((S)-1-시클로헥산카르보닐-피롤리딘-3-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-피페리딘-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(2-히드록시-2-메틸-프로피오닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로-피리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(옥사졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로-피리딘-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(6-옥소-1,6-디히드로-피리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(2-옥소-1,2-디히드로-피리딘-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(R)-2-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-이소옥사졸리딘-4-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-[6-((R)-2-프로피오닐-이소옥사졸리딘-4-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-2-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-이소옥사졸리딘-4-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-[6-((S)-2-프로피오닐-이소옥사졸리딘-4-일옥시)-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일]-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(R)-2-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)-이소옥사졸리딘-4-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-1H-피라졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-푸란-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(3-메틸-3H-이미다졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(4-메틸-옥사졸-5-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(모르폴린-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(4-메톡시-시클로헥산카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-(6-{(S)-1-[2-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-아세틸]-피롤리딘-3-일옥시}-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일)-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(피페리딘-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((S)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((R)-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    (S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르;
    {(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(6-디플루오로메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(5-클로로-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(6-디플루오로메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(6-디플루오로메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    시클로프로필-{(S)-3-[1-(6-디플루오로메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(6-히드록시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(5-히드록시메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[1-(5-플루오로-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    2-메톡시-5-{7-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{7-[(S)-1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-일}-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[1-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[1-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[1-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메톡시-에타논;
    {(S)-3-[1-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    1-{(S)-3-[1-(5-디플루오로메틸-6-메탄술포닐-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-2-메톡시-에타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    5-{7-[(S)-1-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(R)-3-플루오로-4-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    이미다조[2,1-b]티아졸-6-일-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(R)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (5-아미노-1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-트리플루오로메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    (1,1-디옥소-테트라히드로-1람다*6*-티오펜-3-일)-{(S)-3-[1-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(5,6-디메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-푸란-2-일)-메타논;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[5-플루오로-4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-플루오로-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[5-플루오로-4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    5-{6-[(S)-1-((S)-1-아세틸-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]-옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    5-{6-[(S)-1-((R)-1-아세틸-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-((R)-1-메틸-피롤리딘-3-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-1-피리딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진;
    4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-6-((S)-1-피리미딘-2-일-피롤리딘-3-일옥시)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진;
    2-메톡시-5-{2-메틸-6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{(S)-2-메틸-6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    5-{6-[(S)-1-(4-히드록시-시클로헥산카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-2-메톡시-니코티노니트릴;
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(2-피리딘-4-일-아세틸)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴;
    {(S)-3-[4-(5-아미노-6-메톡시-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논;
    N-(2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(1-메틸-1H-이미다졸-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일옥시]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-피리딘-3-일)-메탄술폰아미드;
    (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[4-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논;
    {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논;
    {(S)-3-[4-(5-디플루오로메틸-6-메톡시-피리딘-3-일)-5-메틸-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-메타논; 및
    2-메톡시-5-{6-[(S)-1-(테트라히드로-피란-4-카르보닐)-피롤리딘-3-일아미노]-2,3-디히드로-벤조[1,4]옥사진-4-일}-니코티노니트릴
    로 이루어지는 군으로부터 선택된 화합물 또는 그의 염.
  9. 삭제
  10. (S)-(3-((4-(6-메톡시-5-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]옥사진-6-일)옥시)피롤리딘-1-일)(테트라히드로-2H-피란-4-일)메타논 또는 그의 염.
  11. {(S)-3-[4-(6-메탄술포닐-5-메틸-피리딘-3-일)-3,4-디히드로-2H-벤조[1,4]옥사진-6-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(테트라히드로-피란-4-일)-메타논 또는 그의 염.
  12. {(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-(1-메틸-1H-이미다졸-4-일)-메타논 또는 그의 염.
  13. (1,1-디옥소-헥사히드로-1람다*6*-티오피란-4-일)-{(S)-3-[1-(6-메톡시-5-메틸-피리딘-3-일)-2,3-디히드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-7-일옥시]-피롤리딘-1-일}-메타논 또는 그의 염.
  14. 치료 유효량의 제1항 내지 제3항, 제8항 및 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 1종 이상의 치료 활성 공동-작용제를 포함하는, 류마티스 관절염 (RA), 심상성 천포창 (PV), 브라질 천포창 (포고 셀바젬병)의 풍토병성 형태, 특발성 혈소판감소증 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 자가면역 용혈성 빈혈 (AIHA), 후천성 혈우병 유형 A (AHA), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증 (MG), 쇼그렌 증후군 (SS), ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 만성 자가면역 두드러기 (CAU), 알레르기, 굿패스쳐 증후군, 이식 거부, 조혈 기원의 암, 중증 뇌 말라리아, 트리파노소마증, 리슈마니아증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증으로부터 선택된 장애 또는 질환을 치료하기 위한 조합물.
  15. 치료 유효량의 제1항 내지 제3항, 제8항 및 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 1종 이상의 제약상 허용되는 담체를 포함하는, 류마티스 관절염 (RA), 심상성 천포창 (PV), 브라질 천포창 (포고 셀바젬병)의 풍토병성 형태, 특발성 혈소판감소증 자반증 (ITP), 혈전성 혈소판감소성 자반증 (TTP), 자가면역 용혈성 빈혈 (AIHA), 후천성 혈우병 유형 A (AHA), 전신 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증 (MS), 중증 근무력증 (MG), 쇼그렌 증후군 (SS), ANCA-연관 혈관염, 한랭글로불린혈증, 만성 자가면역 두드러기 (CAU), 알레르기, 굿패스쳐 증후군, 이식 거부, 조혈 기원의 암, 중증 뇌 말라리아, 트리파노소마증, 리슈마니아증, 톡소플라스마증 및 신경낭미충증으로부터 선택된 장애 또는 질환을 치료하기 위한 제약 조성물.
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