BR112014015103A2 - derivados de di-hidro-benzo-oxazina e di-hidro-pirido-oxazina, seus usos, combinação e composição farmacêutica - Google Patents

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Abstract

derivados de di-hidro-benzo-oxazina e di-hidro-pirido-oxazina, seus usos, combinação e composição farmacêutica. a invenção refere-se a compostos de di-hidro-benzo- oxazina e di-hidro-pirido-oxazina de fórmula (i) e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos dos mesmos (i) em que y, v, w, u, q, r1, r5, r7 e r30 são conforme definidos na descrição. tais compostos são adequados para tratamento de uma doença ou distúrbio o qual é medi ado por atividade de enzimas pi3k.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE DI-HIDRO-BENZO-OXAZINA E DI-HIDRO-PIRIDO-OXAZINA, SEUS USOS, COMBINAÇÃO E COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA".
CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A invenção refere-se ao preparo e uso de novos derivados de di-hidro-benzo-oxazina e di-hidro-pirido-oxazina como candidatos a fármaco na forma livre ou na forma de sal farmaceuticamente aceitável com propriedades do tipo fármaco valiosas tais como, por exemplo, estabilidade metabólica e farmacocinética adequada, forma para a modulação, isto é, a inibição da atividade ou função da família de quinase 3' OH de fosfoinositídeo (daqui em diante PI3K).
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] Membros da família de quinase de fosfoinositídeo-3 (PI3SK) estão envolvidos em crescimento celular, diferenciação, sobrevivência, remodelagem de citoesqueleto e tráfego de organelas intracelulares em muitos tipos diferentes de células (Okkenhaug e Wymann, Nature Rev. Immunol. 3: 317 (2003).
[003] Até o momento, oito PI3Ks de mamífero foram identificadas, divididas em três classes principais (|, Il e Ill) com base em sua sequência genética, estrutura, moléculas adaptadoras, expressão, modo de ativação e substrato preferido.
[004] PI3Kô é uma quinase de lipídio que pertence à família de PI3K de classe | (PI3K a, B, y e ô) que gera sinais de mensageiros secundários a jusante de receptores ligados à quinase de tirosina. PISKô é um heterodímero composto de uma proteína adaptadora e uma subunidade catalítica p1108, a qual converte fosfatidilinositol-4,5- bis-fosfato (PtdlnsP2) em fosfatidilinositol-3,4,5-tri-fosfato (PtdlnsP3). Proteínas efetuadoras interagem com PtdInsP3 e dispara vias de sinalização específicas envolvidas em ativação celular, diferenciação, migração e sobrevivência celular.
[005] Expressão das subunidades catalíticas p1108 e p110y é preferencial para leucócitos. Expressão também é observada em células de músculo liso, miócitos e células endoteliais. Em contraste, p110a e p110B são expressas por todos os tipos de células (Marone et al. Biochimica et Biophysica Acta 1784: 159 (2008)).
[006] PI3Kd está associada ao desenvolvimento e função de células B (Okkenhaug et a/. Science 297: 1031 (2002)).
[007] Células B desempenham também um papel crítico na patogênese de uma série de doenças autoimunes e alérgicas, bem como no processo de rejeição de transplante (Martin e Chan, Annu. Rev. Immunol. 24: 467 (2006)).
[008] Quimiotaxia está envolvida em muitas doenças autoimunes ou inflamatórias, em angiogênese, invasão/metástase, neurodegeneração ou cura de feridas (Gerard et al. Nat. Immunol. 2: 108 (2001)) Eventos temporariamente distintos em migração de leucócitos em resposta à quimiocinas são totalmente dependentes de PI3Kô e PI3Ky (Liu et a/. Blood 110: 1191 (2007)).
[009] Pl3Ka e PISKB desempenham um papel fundamental em manutenção de homeostase e inibição farmacológica destes alvos moleculares foi associada à terapia de câncer (Maira et al. Expert Opin. Ther. Targets 12: 223 (2008)).
[0010] Pl3Ka está envolvida em sinalização à insulina e vias de crescimento celular (Foukas et a/. Nature 441: 366 (2006)). Espera-se que inibição seletiva da isoforma PI3Kô evite efeitos colaterais potenciais, tais como hiperglicemia e desregulação metabólica ou de crescimento.
[0011] Infecções parasíticas representam ainda uma das causas mais importantes de morbidade e mortalidade em todo o mundo. Dentre os parasitas que causam patologia humana e animal, o filo apicomplexa compreende um grupo de parasitas transmitidos por vetores que é responsável por uma ampla variedade de doenças graves incluindo, porém sem limitações, malária, leishmaniose e tripanossomíase. A malária infecta apenas 5-10% da humanidade e causa em torno de dois milhões de mortes por ano [Schofield et al., "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et a/., "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al, "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011].
[0012] Receptores de tipo Toll (Toll-Like Receptors - TLRs) são moléculas filogeneticamente antigas, codificadas pela linhagem germinativa que reconhecem moléculas estruturais relevantes evolutivamente conservadas (conhecidas como padrões moleculares associados a patógenos (Pathogen-Associated Molecular Patterns - PAMPs)) dentro de patógenos microbianos. Vários tipos de células diferentes, incluindo células do sistema imune, expressam TLRs e, assim, são capazes de detectar a presença de PAMPs. Até o momento, 10 membros funcionais da família TLR (TLR1-10) foram descritos em seres humanos, todos os quais reconhecem moléculas de PAMP específicas. Após reconhecimento destes PAMPs específicos, TLRs induzem e orquestram a resposta imune do hospedeiro às infecções por bactérias, vírus, fungos e parasitas [Hedayat et al., "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", revisão, Lancet Infectious Disease 2011], [Kwai et al., "TLRs and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity", revisão, Immunity, Maio de 2011].
[0013] O sistema imune do hospedeiro infectado responde à infecção com a produção de citocinas pró-inflamatórias induzida por TLR, principalmente T-auxiliar de tipo 1 (Th1). Embora quantidades adequadas dessas citocinas sejam benéficas e requeridas para eliminar a infecção, uma superprodução desses mediadores é prejudicial para o hospedeiro e está associada à patologia imune mediada, incluindo neuropatologia e danos teciduais, com consequências graves e muitas vezes fatais. Un exemplo proeminente e altamente relevante de tal patologia imune mediada é malária cerebral (Cerebral Malaria - CM) e aguda, a qual causa sintomas clínicos graves e muitas vezes é fatal [Schofield et al., "IMmunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ- specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra et a/., "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau et al., "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011], [Hedayat et a/., "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", revisão, Lancet Infectious Disease 2011]. Apesar dos progressos registrados no tratamento e erradicação da malária, a taxa de mortalidade associada à malária grave, incluindo CM, continua inaceitavelmente alta. Estratégias voltadas unicamente à erradicação do parasita no hospedeiro, portanto, poderiam não ser suficientes para evitar complicações neurológicas e morte em todos os casos de CM. O desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas adjuntas inovadoras para reduzir eficazmente a mortalidade e morbidade associadas à CM as quais são causadas, em parte, por imunopatologia mediada pelo hospedeiro, portanto, continuam uma necessidade médica urgente [Higgins et al, "Immunopathogenesis of falciparum malaria: implications for adjunctive therapy in the management of severe and cerebral malaria", Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2011].
[0014] Recentemente, evidência adicional foi fornecida de que o TLR9 desempenha um papel fundamental no reconhecimento e resposta a parasitas incluindo, porém sem limitações, Plasmodium,
Leishmania, Trypanosoma e Toxoplasma [Gowda et al, "The Nucleosome is the TLR9-specific Immunostimulatory component of plasmodium falciparum that activates DCs", PLoS ONE, Junho de 20111, [Peixoto-Rangel et al. "Candidate gene analysis of ocular toxoplasmosis in Brazil: evidence for a role for TLR9", Mem Inst Oswaldo Cruz 2009], [Pellegrini et al., "The role of TLRs and adoptive immunity in the development of protective or pathological immune response triggered by the Trypanosoma cruzi protozoan", Future Microbiol 2011] e que a interferência com a ativação de TLRs, incluindo TLR9, representa uma estratégia promissora para evitar as respostas inflamatórias prejudicials em malária cerebral e grave [Franklin et a/., "Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing TLRs prevents experimental cerebral malaria", PNAS 2011].
[0015] A malária é uma doença infecciosa causada por quatro parasitas protozoários: Plasmodium falciparum; Plasmodium vivax; Plasmodium ovale; e Plasmodium malariae. Estes quatro parasitas normalmente são transmitidos pela picada de uma fêmea infectada do mosquito Anopheles. A malária é um problema em muitas partes do mundo e, ao longo das últimas décadas, a incidência de malária aumentou de forma constante. Estima-se que 1-3 milhões de pessoas morrem a cada ano em virtude de malária - a maioria crianças com idade abaixo de 5 anos. Esse aumento na mortalidade por malária se deve, em parte, ao fato de que o Plasmodium falciparum, o parasita da malária mais mortal, adquiriu resistência contra quase todos os fármacos antimalária disponíveis, com a exceção dos derivados de artemisinina.
[0016] A leishmaniose é causada por um ou mais de 20 variedades de parasitas protozoários que pertencem ao gênero Leishmania e é transmitida pela picada de fêmeas de flebotomíneos. À leishmaniose é endêmica em cerca de 88 países, incluindo muitas áreas tropicais e subtropicais. Há quatro formas principais de leishmaniose. A leishmaniose visceral, também denominada de kala- azar, é a forma mais grave e é causada pelo parasita Leishmania donovani. Os pacientes que desenvolvem leishmaniose visceral podem morrer dentro de meses se não receberem tratamento. As duas principais terapias para leishmaniose visceral são os derivados de antimônio estibogluconato de sódio (PentostamO) e antimoniato de meglumina (GlucantimO). O estibogluconato de sódio tem sido usado durante mais de 70 anos e a resistência a este fármaco é um problema crescente. Além disso, o tratamento é relativamente longo e doloroso e pode causar efeitos colaterais indesejáveis.
[0017] A tripanossomíase humana Africana, também conhecida como doença do sono, é uma doença parasítica transmitida por vetor. Os parasitas em questão são protozoários pertencentes ao gênero Trypanosoma. Eles são transmitidos ao homem por picadas de moscas tsé-tsé (gênero Glossina), as quais adquiriram sua infecção de seres humanos ou de animais portadores dos parasitas patogênicos humanos.
[0018] A doença de Chagas (também denominada tripanossomíase Americana) é outra doença parasitária humana que é endêmica entre as populações pobres do continente Americano. A doença é causada pelo protozoário parasita Trypanosoma cruzi, transmitida aos seres humanos por insetos sugadores de sangue. A doença humana ocorre em dois estágios: o estágio agudo, o qual ocorre logo após a infecção, e o estágio crônico, o qual pode se desenvolver ao longo de muitos anos. As infecções crônicas resultam em vários distúrbios neurológicos, incluindo demência, danos do músculo cardíaco e, algumas vezes, dilatação do trato digestivo, bem como perda de peso. Se não for tratada, a doença crônica é muitas vezes fatal. Os medicamentos atualmente disponíveis para o tratamento da doença de Chagas são Nifurtimox e benzonidazol. No entanto, problemas com estas terapias atuais incluem seus diversos efeitos colaterais, a duração de tratamento e o requisito de supervisão médica durante tratamento. Além disso, o tratamento só é realmente eficaz quando administrado durante a fase aguda da doença. Resistência aos dois fármacos de linha de frente já ocorreu. O agente antifúngico anfotericina B foi proposto como um medicamento de segunda linha, mas este fármaco é relativamente caro e tóxico.
[0019] A toxoplasmose é endêmica na maior parte do mundo, a qual pode infectar uma grande proporção da população adulta. No entanto, sua prevalência varia em diferentes países. Estima-se que ela infecta pelo menos 10% dos adultos em países de clima temperado do norte e mais da metade dos adultos nos países tropicais e Mediterrâneo. Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular abundante e é considerado como sendo a causa mais comum de retinite infecciosa em seres humanos, a qual depende de uma variedade de fatores, incluindo clima, higiene e hábitos alimentares. O curso da doença em adultos imunocompetentes normalmente é assintomático e autolimitado. Assim que a infecção tenha ocorrido, o parasita forma cistos latentes na retina e em outros órgãos do corpo, os quais podem reativar anos após a infecção inicial, dando origem à retinocoroidite aguda e formação de novas lesões retinocoroideanas [Arevalo et al., "Ocular Toxoplasmosis in the developing world", Internat. Ophthal. Clin 2010].
[0020] A neurocisticercose é a doença parasítica mais comum do CNS (incidência — 2,5 milhões mundialmente) causada pela larva da Taenia solium. A doença tem uma longa fase assintomática em seres humanos, caracterizada pela ausência de uma resposta inflamatória detectável pelo parasita. A resposta imune global durante a fase assintomática é do fenótipo Th2. No entanto, a destruição das larvas por tratamento terapêutico ou por eventos normais do parasita provoca uma resposta inflamatória forte, geralmente consistindo em uma reação granulomatosa crônica e manifestação de sintomas típicos da doença. A resposta imune no CNS de pacientes sintomáticos consiste em um fenótipo Th1 evidente ou uma resposta mista do tipo Th1, Th2 e Th3, dependendo da ausência ou presença de granulomas. A resposta hiperinflamatória prevalecente durante a fase sintomática no CNS é responsável pela neuropatologia grave e mortalidade associadas à neurocisticercose [Mishra et a/., "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009].
[0021] Há uma necessidade de proporcionar novos inibidores de PISK que são bons candidatos a fármacos. Em particular, os compostos da invenção se ligarão de forma potente à PI3K, ao mesmo tempo em que mostram pouca afinidade por outros receptores e mostram atividade funcional como inibidores. Eles devem ser bem absorvidos a partir do trato gastrintestinal, ser metabolicamente estáveis e ter propriedades farmacocinéticas favoráveis. Quando dirigidos contra receptores no sistema nervoso central, eles devem atravessar a barreira hematoencefálica livremente e, quando seletivamente dirigidos contra receptores no sistema nervoso periférico, não devem atravessar a barreira hematoencefálica. Eles devem ser atóxicos e demonstrar poucos efeitos colaterais. Além disso, o fármaco candidato ideal deverá existir em uma forma física que seja estável, não higroscópica e facilmente formulada.
[0022] Os compostos da invenção mostram um determinado nível de seletividade contra os diferentes parálogos de PI3K a, B, ye 3. Em particular, eles mostram um determinado nível de seletividade pela isoforma PI3Kô.
[0023] Os compostos da presente invenção são, portanto, potencialmente úteis no tratamento de uma ampla variedade de distúrbios, particularmente distúrbios incluindo, porém sem limitações, doenças autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doença ou infecção associada às imunopatologias, doenças das vias respiratórias, tals como asma e COPD, rejeição de transplantes, cânceres, por exemplo, de origem hematopoiética ou tumores sólidos.
[0024] A invenção refere-se também ao tratamento, quer isoladamente ou em combinação, com um ou mais de outros compostos farmacologicamente ativos, inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios nos quais uma ou mais das funções das células B, tais como produção de anticorpos, apresentação de antígeno, produção de citocinas ou organogênese linfoide, estão anormais ou são indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar e doenças relacionadas, púrpura trombocitopênica idiopática, lupus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, miastenia gravis, síndrome de Sjôgren, anemia hemolítica autoimune, vasculites ANCA-associadas, crioglobulinemia, púrpura trombocitopênica trombótica, urticária crônica autoimune, alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, rejeição de transplante mediada por anticorpos (Antibody-Mediated transplant Rejection - AMR), rejeição de transplante hiperaguda, aguda e crônica mediada por células B e cânceres de origem hematopoiética incluindo, porém sem limitações, mieloma múltiplo; leucemia mieloide aguda; leucemia mieloide crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem, bem como em doença ou infecção associada à imunopatologia.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0025] A invenção refere-se a compostos de di-hidro-benzo- oxazina e di-hidro-pirido-oxazina da fórmula (|) e/ou sais farmaceuticamente aceitáveis e/ou solvatos do mesmo, VS Rº R N Y. RÃOo Na R * O)
[0026] em que
[0027] Y é selecionado de O ou NH;
[0028] V é selecionado de CR*º ou N;
[0029] W é selecionado de CH, ou O;
[0030] U é selecionado de N ou CH;
[0031] Q é selecionado de N ou CR;
[0032] em que U e Q não são ambos N;
[0033] R' é selecionado de fenila, piridila, pirimininila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2 ,4-triazinila, 1,3,5-triazinila,
[0034] ou
[0035] — -XRº
[0036] em que X é selecionado de C(O), S(O); ou CH,
[0037] e
[0038] Rº é selecionado de Ci-Cs-alquila, halo-C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cs-alquila, Ci-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, ciano-C,-Cz-alquila, N,N-di-C1-C,-alquil-amino-C,-Cs-alquila, C1-Ca-alquil-sulfonil-C1-Ca- alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-óxi, heterociclil-C,-Cs-alquila, C3-Ca-cicloalquila, — Ca-Cia-cicloalquil-óxi, — Ca-Cia-cicloalquil-C,-Ca- alquila, heteroarila, heteroaril-óxi, heteroaril-C,-Cg-alquila, hidróxi, C1- Cg-alcóxi, amino, N-C,-Cz-alquil-amino ou N,N-di-C,-C;-alquil-amino,
[0039] em que C,-Cs-alquila em N-C,-C;z-alquil-amino e em N N-di- C,-Cz-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C,-C,-alcóxi,
[0040] em que C;3-Ci>-cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3-
Ca-cicloalquil-C,-Cg-alquila pode ser substituída ou não substituída por 1 a 5 substituintes selecionados de halogênio, hidróxi ou C1-Ca- alcóxi;
[0041] em que 'heterociíclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de oxo, halogênio, C,-Cz-alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, Ci-Cs-alcóxi, Ci-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C;-C;g- alquil-amino, N,N-di-C,-Cz-alquil-amino, C,-Cg-alquil-carbonila, halo- C,-Cz-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cs-alquil-carbonila ou Ci -C;a-alcóxi- C,-Cz-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
[0042] em que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de halogênio, C,-Cg- alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Ca-alquila, hidroxila, C,-Cg-alcóxi, C1-Ca-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,-Ca-alquil-amino, N,N-di-C,-Cg- alquil-amino, C1-C;-alquil-carbonila, halo-C,-C;z-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que a 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação;
[0043] Rº é selecionado de hidrogênio, halogênio, C,-C,-alquila, halo-C,-C,-alquila, Ci-Ca-alcóxi, Ci-C,-alquil-sulfonila, Ci-Ca-alquil- sulfinila, C,-C,-alquil-sulfanila, halo-C,-C,-alcóxi, Cyi-Ca-alcóxi-Ci-Ca-
alquila, amino, N-C,-Cs-alquil-amino, N,N-di-C,-Cz-alquil-amino;
[0044] R' é selecionado de hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, C1- C,-alquila, halo-C,-C,-alquila, Ci-C,-alcóxi, N(Rº)>sulfonila, CC alquil-sulfonila, C,-C,-alquil-sulfonil-amino, C,-Cg-alcóxi-C,-C;z-alquila, amino, N-C,-Cs-alquil-amino ou N,N-di-C,-C;-alquil-amino;
[0045] ou Rº e R' unidos são CH=CH-CH=CH,
[0046] em que Rº é, independentemente, selecionado de hidrogênio, C,-C,-alquila, Cy-Ca-alcóxi ou dois Rº juntos com o nitrogênio ao qual eles estão presos formam um anel heterocíclico de 4 a 7 elementos contendo 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, O, S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 3 substituintes selecionados de C,-C,-alquila;
[0047] Rº é, independentemente, selecionado de H, D, F ou C1-C7 alquila;
[0048] R*” é, independentemente, selecionado de H, D ou F.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0049] A Figura 1 é o padrão de difração de pó por raios X do Exemplo F1, forma cristalina anidra.
[0050] A Figura 2 é o gráfico de calorimetria de varredura diferencial do Exemplo F1, forma cristalina anidra.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[0051] A menos que de outro modo especificado, o termo "compostos da presente invenção" refere-se a compostos de fórmula (1) e subfórmulas da mesma, sais dos compostos, hidratos ou solvatos dos compostos e/ou sais, bem como todos os estereoisômeros (incluindo — diastereoisômeros e enantiômeros), tautômeros e compostos isotopicamente marcados (incluindo substituições por deutério).. Compostos da presente invenção compreendem ainda polimorfos dos compostos de fórmula (1) (ou subfórmulas da mesma) e sais dos mesmos. Onde compostos de fórmula (|) são mencionados,
isto se destina a incluir também os tautômeros e N-óxidos dos compostos de fórmula (|).
[0052] A invenção pode ser mais completamente apreciada por meio de referência à descrição a seguir, incluindo o glossário de termos a seguir e exemplos finais. Conforme usado aqui, os termos "incluindo", "contendo" e "compreendendo" são usados aqui em seu sentido aberto, não limitativo.
[0053] Tautômeros, tais como tautômeros entre as formas de ceto e enol, formas de lactama e lactima, formas de amido e ácido imídico ou forma de enamina ou forma de imina, podem estar presentes, por exemplo, na porção R' dos compostos de fórmula (|). Resíduos de heterociclila e heteroarila contendo nitrogênio podem formar N-óxidos.
[0054] Onde a forma no plural é usada para compostos, sais e similares, isto pretende se destina a significar também um único composto, sal ou similar.
[0055] Os termos gerais usados aqui anteriormente e a seguir têm, de preferência, dentro do contexto da presente descrição, os significados a seguir, salvo indicação em contrário.
[0056] Conforme usado aqui, o termo "alquila" refere-se a uma porção hidrocarboneto ramificada ou não ramificada totalmente saturada, incluindo uma única ou múltiplas ramificações, tendo até 20 átomos de carbono. Salvo indicação em contrário, alquila refere-se à porções hidrocarboneto tendo 1 a 16 átomos de carbono, 1 a 10 átomos de carbono, 1 a 7 átomos de carbono ou 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos representativos de alquila incluem, porém sem limitações, metila, etila, n-propila, iso-propila, n-butila, sec-butila, iso- butila, terc-butila, n-pentila, isopentila, neopentila, n-hexila, 3-metil- hexila, 2,2- dimetilpentila, 2,3-dimetilpentila, n-heptila, n-octila, n- nonila, n-decila e similares. Tipicamente, grupos alquila têm 1 a 7, mais preferivelmente 1 a 4 carbonos.
[0057] Conforme usado aqui, o termo "halo-alquila" refere-se a uma alquila, conforme definido aqui, a qual é substituída por um ou mais grupos halo, conforme definido aqui. A halo-alquila pode ser mono- halo-alquila, di-halo-alguila ou poli-halo-alquila, incluindo per-halo- alquila. Uma mono-halo-alquila pode ter um iodo, bromo, cloro ou flúor dentro do grupo alquila. Grupos di-halo-alquila e poli-halo-alquila podem ter dois ou mais dos mesmos átomos de halo ou uma combinação de diferentes grupos halo dentro da alquila. Tipicamente, a poli-halo-alquila contém até 12 ou 10 ou 8 ou 6 ou 4 ou 3 ou 2 grupos halo. Exemplos não limitativos de halo-alquila incluem fluoro- metila, di-fluoro-metila, tri-fluoro-metila, cloro-metila, di-cloro-metila, tri- cloro-metila, penta-fluoro-etila, hepta-fluoro-propila, di-fluoro-cloro- metila, di-cloro-fluoro-metila, di-fluoro-etila, di-fluoro-propila, di-cloro- etila e dicloro-propila Uma per-halo-alquila refere-se a uma alquila tendo todos os átomos de hidrogênio substituídos por átomos de halo.
[0058] Conforme usado aquiiy o termo "heterociíclla" ou "heterocíclico" refere-se a um sistema de anel ou anel parcialmente saturado ou saturado de 7 a 10 elementos ou monocíclico de 3 a 7 elementos, o qual contém pelo menos um heteroátomo selecionado de N,OeS, onde Ne S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação. 'Heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono. 'Heterociclila'! podem incluir anéis fundidos ou ligados em ponte, bem como anéis espirocíclicos.
[0059] No contexto de R$, exemplos de heterociclos incluem oxiranila, aziridinila, oxetanila, tietanila, acetitinila, pirrolidinila, tetra- hidrofuranoíla, tetra-hidrotiofenila, 2,3-di-hidrofuranila, 2,5-di- hidrofuranila, 2,3-di-hidrotiofenila, 1-pirrolinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, tetra-hidropiranila, — piperidinila, — tetra-hidrotiopiranila, — morfolinila, tiomorfolinila, oxatianila, dioxanila, piperazinila, di-hidropiranila, tetra- hidropiridinila, di-hidrotiopiranila, azepanila, tiepanila e oxepanila.
[0060] No contexto de Rº, exemplos de heterociclos incluem pirrolinila, piperidinila, morfolinila, tiomorfolinila, piperazinila, tetra- hidropiridinila e azepanila.
[0061] Conforme usado aquii o termo "heteroarila ou "heteroarílico" refere-se a uma sistema de anel ou anel monocíclico de 4, 5, 6 ou 7 elementos, bicíclico de 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 elementos ou tricíclico de 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 elementos - trazendo o maior número possível de ligações duplas no(s) anel(éis), o qual contém pelo menos um heteroátomo selecionado de N, O e S emque Ne S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação. 'Heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono. 'Heteroarila' pode incluir anéis fundidos ou ligados em ponte, bem como anéis espirocíclicos. Exemplos de heteroarila incluem furanila, tiofenila, pirrolila, imidazolila, pirazolila, tiazolila, isotiazolila, oxazolila, isoxazolila, 1,2,5-0xadiazolila, 1,2,4-0xadiazolila, 1,2,3-oxadiazolila, 1,3,4-0xadiazolila, 1,2,5-tiadiazolila, 1,2,4- tiadiazolila, 1,2,3-tiadiazolila, 1,3,4-tiadiazolila, 1,2,3-triazolila, 1,2,4- triazolila, 1,2,5-triazolila, piridila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila e 1,3,5-triazinila.
[0062] Conforme usado aqui, o termo "cicloalquila" refere-se grupos hidrocarboneto tricíclicos, bicíclicos, monocíclicos saturados ou parcialmente insaturados de 3 a 12 átomos de carbono. Salvo indicação em contrário, cicloalquila refere-se a grupos hidrocarboneto cíclicos tendo entre 3 e 10 anéis de átomos de carbono ou entre 3 e 7 de átomos de carbono no anel. Grupos hidrocarboneto bicíclicos exemplificativos incluem octa-hidroindila, deca-hidronaftila. Grupos hidrocarboneto tricíclicos exemplificativos incluem biciclo[2.1.1]hexila, biciclo[2.2.1]heptila, biciclo[2.2.1]heptenila, 6,6- dimetilbiciclo[3.1.1]heptila, 2,6,6-trimetilbiciclo[3.1.1]heptila, biciclo[2.2.2]octila. Grupos hidrocarboneto tetracíclicos exemplificativos incluem adamantila.
[0063] Conforme usado aqui, o termo "óxi" refere-se a um grupo de ligação -O-.
[0064] Conforme usado aqui, o termo "carbóxi" ou "carboxila" é — COOH.
[0065] Conforme usado aqui, todos os substituintes são escritos de maneira a mostrar a ordem de grupos funcionais (grupos) que os compõem. Os grupos funcionais são conforme definido aqui acima.
[0066] Diversas modalidades enumeradas da invenção são descritas aqui. Será reconhecido que as características especificadas em cada modalidade podem ser combinadas com outras características especificadas para fornecer outras modalidades da presente invenção.
[0067] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (|"): xs R O, Rr Rº R$ N. Y. Roo W " (1),
[0068] em que R', Rà, R/, Rº, Y, V, W, U e Q são conforme definido acima.
[0069] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (la): Ss R : R Ro ço SE nO * (la),
[0070] em que R', Rº, R/, Rº, Y, V, U e Q são conforme definido acima.
[0071] Em uma modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (la'): a R vi SN | Prá ; R Ro go x ns Í à SS Io NA Ns R (la),
[0072] em que R', Rº, R/, Rº, Y, V, U e Q são conforme definido acima.
[0073] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (lb): a. R vi SR | Prá ; RÉ Ro go R N o. E Dx =) | PA a. Rº o ; No R (Ib),
[0074] em que R', R, R/, Rº, V, W, U e Q são conforme definido acima.
[0075] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (Ib'): Os R RÍí O. R$ go N O. RÉ Dx EL | AV Yo Roo No R (1b),
[0076] em que R', R, R/, Rº, V, W, U e Q são conforme definido acima.
[0077] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (lc): ao. R vº NR O.
R
CO o N ; * (lo),
[0078] em que R', Rº, R/, U e Q são conforme definido acima.
[0079] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (Ic'); 2a R vº SR O,
R
CO o N 1 * (lo),
[0080] em que R', Rº, R/, U e Q são conforme definido acima.
[0081] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (Id): vs Rº | O . (CÁIX O o PA) N ; R (Id),
[0082] em que R', Rº, R/, U e Q são conforme definido acima.
[0083] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (Id'): Os R 2
CCR
NAN N R (Id),
[0084] em que R', Rº, R/, U e Q são conforme definido acima.
[0085] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (le): Rô Or 2
CS o N ' R (le),
[0086] em que R', Rº, Rº e Rº são conforme definido acima.
[0087] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (le"):
R 7 | À.
R C : O o N R (le,
[0088] em que R', Rº, Rº e R' são conforme definido acima.
[0089] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (If): Rº
R " Ds 2
CO o Cd N 1 (1),
[0090] em que R', Rº, Rº e R são conforme definido acima.
[0091] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (If): Rº 7
NÓS R | > “
CR o A" N 1 R (IP),
[0092] em que R', Rº, Rº e Rº são conforme definido acima.
[0093] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (lg); Rº
R " > 2X
DA Ç ; o ND (lg),
[0094] em que X, Rº, Rº, Rº e R são conforme definido acima.
[0095] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (Ig'): Rº
NOS R | 2? N O.
CO º (9),
[0096] em que X, Rº, Rº, Rº e R' são conforme definido acima.
[0097] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (lh):
R NOS R CX
AN N o NR (hn),
[0098] — em queX, Rº,Ró,Rº e R' são conforme definido acima.
[0099] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (Ih'): Rº
NOS R | 2 x
IDAS Ç | AD Ng: (IA,
[00100] em que X, Rº, Rº, Rº e R' são conforme definido acima.
[00101] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (li):
R ç Prá N. O.
ÇO R o Rº . (1),
[00102] em que R$, R”, Rº e R' são conforme definido acima.
[00103] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (li):
R & Pá N. O. CO. (3,
[00104] em que R$, Ró, Rº e R são conforme definido acima.
[00105] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (lj): Rº
NOS R
O N. DS O. q. Sl),
[00106] em que Ri, R$, Rº e R' são conforme definido acima.
[00107] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmula (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo selecionado de um composto de fórmula (lj'): Rº
NOS R O
OR NAN v º (1),
[00108] em que R”,R”,Rº e R' são conforme definido acima.
[00109] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la), (Ib), (Ib') (lo), (IC), (Id), (Id'), (le), (le'), (If), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00110] Rºé selecionado de C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Cg-alquila, C1- Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, ciano-C,-Cg-alquila, N,N-di-C1-C,-alquil-amino- C,-Cz-alquila, C1-Ca-alquil-sulfonil-C,-Ca-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C -Ca-alquila, C3a-Ci2-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,- Cz-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-Cs-alquila em N-C,-C;-alquil-amino e em NN-di-C,-Cz-alguil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C,1-C,-alcóxi,
[00111] em que C3-Ci>-cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3- Caz-cicloalquil-C,-Cg-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C,-Ca-alcóxi;
[00112] em que 'heterociclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de oxo, halogênio, C,-Cz-alquila, halo-C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C;-Ca- alcóxi, C-Ca-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,1-C;z-alquil-amino, N,N-di- C,-Cz-alquil-amino, C,-Cz-alquil-carbonila, halo-C,-Cg-alquil-carbonila,
hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou Ci-Csg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
[00113] em que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S ou pirazolo[1,5-a]lpirimidina ou imidazo[2,1-bJtiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de halogênio, C,-Cg- alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Ca-alquila, hidroxila, C-Cg-alcóxi, C,1-Ca-alcóxi-C,-Ca-alquila, amino, N-C,-Cg-alquil-amino, N,N-di-C,-Cg- alquil-amino, C,-C;z-alquil-carbonila, halo-C,-C;z-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou Ci-Csa-alcóxi-C,-Cs-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação.
[00114] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la'), (Ib), (Ib') (Io), (IC), (Id), (Id'), (le), (le'), (IN), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00115] Rº é selecionado de C,-Cg-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, C1- Cg-alcóxi-C,-Cz-alquila, ciano-C,-Cg-alquila, N,N-di-C1-C,-alquil-amino- C,1-C;-alquila, C1-Ca-alquil-sulfonil-C,-Cs-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C,-Ca-alquila, Ca-Ci2-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,- Cz-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-Cz-alquila em N-C;,-C;-alquil-amino e em NN-di-C,-Csz-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi,
[00116] em que C3-Ci7cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3- Caa-cicloalquil-C,-Cg-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi;
[00117] em que 'heterociclila' é selecionada de pirrolidinila, tetra- hidrofuranoíla, tetra-hidrotiofenila, tetra-hidropiranila, piperidinila, tetra- hidrotiopiranila, morfolinila, dioxanila ou di-hidropiranila, cada uma das quais é substituída ou não substituída por 1 a 3 substituintes selecionados de oxo, C,-Cs-alquila ou C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
[00118] em que 'heteroarila' é selecionada de imidazolila, pirazolila, tiazolila, oxazolila, 1,2,5-oxadiazolila, 1,3,4-oxadiazolila, piridila, pirimidinila, pirazinila, pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazol, cada uma das quais é substituída ou não substituída por 1 a 3 substituintes selecionados de C,-Cs-alquila, hidroxila ou amino; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação.
[00119] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la'), (Ib), (Ib') (Io), (IC), (Id), (Id'), (le), (le'), (IN), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00120] Rº é selecionado de halogênio, C,-C,-alcóxi, Ci-C,-alquil- sulfonila ou halo-C,-Ca,-alcóxi.
[00121] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la), (Ib), (Ib') (lc), (Ic'), (Id), (Id'), (le), (le'), (IN), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00122] Ré selecionado de hidrogênio, halogênio, ciano, C1-Ca1- alquila, halo-C,-C,-alquila ou C1-Ca-alcóxi.
[00123] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la), (Ib), (Ib') (lo), (IC), (Id), (Id'),
(le), (le'), (If), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00124] Rº é selecionado de C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cs-alquila, C1- Cg-alcóxi-C,-Cz-alquila, ciano-C,-Cg-alquila, N,N-di-C1-C,-alquil-amino- C,1-Cz-alquila, C1-Ca-alquil-sulfonil-C,-Cs-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C,-Ca-alquila, C3a-Ci2-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,- Cz-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-C;-alquila em N-C,-C;-alquil-amino e em NN-di-C,-Cs-algquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-C,-alcóxi,
[00125] em que C3-Ci>cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3- Caz-cicloalquil-C,-Csg-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi;
[00126] em que 'heterocíclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de oxo, halogênio, C,-Cz-alquila, halo-C,-C;g-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C1-Cg- alcóxi, C,-Cg-alcóxi-C,-Cg-alquila, amino, N-C,-C;g-alquil-amino, N,N-di- C1-Cz-alquil-amino, C,-Cz-alquil-carbonila, halo-C,-Cs-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cs-alquil-carbonila ou Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
[00127] em que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-bltiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de halogênio, C,-Cz- alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C,-Cg-alcóxi, C,1-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquila, amino, N-C,-Cz-alquil-amino, N,N-di-C,-Cg-
alquil-amino, C,-C;-alquil-carbonila, halo-C,-C;z-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação;
[00128] eRºé selecionado de halogênio, Cr-Ca-alcóxi, C1-C,-alquil- sulfonila ou halo-C,-C,-alcóxi.
[00129] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (!'), (la), (la), (Ib), (Ib') (lc), (Ic'), (Id), (Id'), (le), (le'), (IN), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00130] Rºé selecionado de C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cs-alquila, C1- Cg-alcóxi-C,-Cz-alquila, ciano-C,-Cg-alquila, N,N-di-C1-C,-alquil-amino- C,-Cz-alquila, C1-Ca-alquil-sulfonil-C,-Cs-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C,-Ca-alquila, Ca-Ci2-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,- Cz-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-Czg-alquila in N-C,-Cs-alquil-amino e em N,N-di-C,-C;z-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi,
[00131] em que C3-Ci>cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3- Caz-cicloalquil-C,-Cg-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi;
[00132] em que 'heterociclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de oxo, halogênio, C,-Cz-alquila, halo-C,-C-alquila, hidróxi-C,-Cs-alquila, hidroxila, C,-Cg- alcóxi, C-Cg-alcóxi-C,-Cg-alquila, amino, N-C,-C;z-alquil-amino, N,N-di- C1-Cz-alquil-amino, C,-Cz-alquil-carbonila, halo-C,-Cs-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Csg-alquil-carbonila ou Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
[00133] em que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-bltiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de halogênio, C,-Cg- alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Ca-alquila, hidroxila, C-Cg-alcóxi, C1-Ca-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,-Ca-alquil-amino, N,N-di-C,-Ca- alquil-amino, C1-C;z-alquil-carbonila, halo-C,-C;z-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação;
[00134] eR' é selecionado de hidrogênio, halogênio, ciano, C1-Ca- alquila, halo-C,-C,-alquila ou C1-Ca-alcóxi.
[00135] Em outra modalidade, a invenção proporciona um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la'), (Ib), (Ib') (Io), (IC), (Id), (Id'), (le), (le'), (IN), (If), (Ig), (Ig), (Ih), (Ih), (li), (li), (1) ou (1) e/ou um sal farmaceuticamente aceitável e/ou um solvato do mesmo em que:
[00136] Rº é selecionado de C,-Cg-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, C1- Cg-alcóxi-C,-Cz-alquila, ciano-C,-Cg-alquila, N,N-di-C1-C,-alquil-amino- C,1-C;-alquila, C1-Ca-alquil-sulfonil-C,-Cs-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C,-Ca-alquila, Ca-Ci2-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,- Cz-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-Cg-alquila in N-C,-Cg-alquil-amino e em N,N-di-C,-C;z-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi,
[00137] em que C3-Ci7>cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3- Caa-cicloalquil-C,-Cg-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi;
[00138] em que 'heterociclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de oxo, halogênio, C,1-Cz-alquila, halo-C,-Ca-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C;-Ca- alcóxi, C-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,-C;z-alquil-amino, N,N-di- C,-Cz-alquil-amino, C,-Cg-alquil-carbonila, halo-C,-Cg-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cs-alquil-carbonila ou Ci-Csa-alcóxi-C,-Cs-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
[00139] em que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, O ou S ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-bltiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados de halogênio, C,-Cg- alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C,-Cg-alcóxi, C,-Cg-alcóxi-C,-Cg-alquila, amino, N-C,-Cg-alquil-amino, N,N-di-C,-Cg- alquil-amino, C1-C;-alquil-carbonila, halo-C,-C;z-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cs-alquil-carbonila ou Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação;
[00140] R$º é selecionado de halogênio, Ci-Ca-alcóxi, C1-Ca-alquil- sulfonila ou halo-C,-C,-alcóxi
[00141] eR' é selecionado de hidrogênio, halogênio, ciano, C1-C1- alquila, halo-C,-C,-alquila ou C1-Ca-alcóxi.
[00142] Em outra modalidade, compostos individuais de acordo com a invenção são aqueles listados na seção Exemplos abaixo.
[00143] Conforme usado aqui, o termo "um isômero óptico" ou "um estereoisômero" refere-se a qualquer um das diversas configurações estereoisoméricas as quais podem existir para um composto proporcionado pela presente invenção e incluem qualquer uma das várias configurações isoméricas as quais podem existir para qualquer dado composto da presente invenção e isômeros geométricos. Deverá ser entendido que um substituinte pode estar preso em um centro quiral de um átomo de carbono. O termo "quiral" refere-se às moléculas as quais têm a propriedade de não serem sobrepostas a seu parceiro de imagem de espelho, enquanto que o termo "aquiral" refere-se às moléculas as quais são sobrepostas sobre seu parceiro de imagem de espelho. Portanto, a invenção inclui enantiômeros, diastereômeros ou racematos do composto. "Enantiômeros" são um par de estereoisômeros que são imagens de espelho não sobrepostas uns dos outros. Uma mistura a 1:1 de um par de enantiômeros é uma mistura "racêmica". O termo é usado para designar uma mistura racêmica onde apropriado.
[00144] "“Diastereoisômeros" são estereoisômeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens de espelho uns dos outros. A estereoquímica absoluta está especificada de acordo com o Sistema R-S de Cahn-lngold-Prelog. Quando um composto é um enantiômero puro, a estereoquímica de cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Compostos decompostos cuja configuração absoluta é desconhecida podem ser designados (+) ou (- ), dependendo da direção (dextro- ou levo-rotatória) na qual eles giram no plano da luz polarizada no comprimento de onda da linha D de sódio. Determinados compostos descritos aqui contêm um ou mais centros ou eixos assimétricos e podem, assim, dar origem a enantiômeros, diastereômeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos da estereoquímica absoluta, como (R)- ou (S)-.
[00145] “Dependendo da escolha dos materiais de iniciação e procedimentos, os compostos podem estar presentes na forma de um dos possíveis isômeros ou como misturas dos mesmos, por exemplo, como isômeros ópticos puros ou como misturas de isômeros, tais como racematos e misturas de diastereoisômeros, dependendo do número de átomos de carbono assimétricos. A presente invenção se destina a incluir todos de tais possíveis isômeros, incluindo misturas racêmicas, misturas diastereoméricas e formas opticamente puras. Isômeros opticamente ativos (R)- e (S)- podem ser preparados usando synthons quirais ou reagentes quirais ou decompostos usando técnicas convencionais. Se o composto contém uma ligação dupla, o substituinte pode ser de configuração E ou Z. Se o composto contém uma cicloalquila di-substituída, o substituinte cicloalquila pode ter uma configuração trans ou cis. Todas as formas tautoméricas também se destinam a ser incluídas.
[00146] Conforme usado aqui, os termos "sal" ou "sais" referem-se a um sal de adição de base ou adição de ácido de um composto da invenção. "Sais" incluem, em particular, "sais farmaceuticamente aceitáveis". O termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se aos sais que retêm a eficácia biológica e propriedades dos compostos da presente invenção e os quais, tipicamente, não são biologicamente ou de outro modo indesejáveis. Em muitos casos, os compostos da presente invenção são capazes de formar sais de base e/ou de ácidos em virtude da presença de grupos amino e/ou carboxila ou grupos similares aos mesmos.
[00147] Saisde adição ácidos farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, por exemplo, sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/bromidrato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, cânforssulfonato, cloreto/cloridrato, clorteofilonato, citrato e tandissulfonato, fumarato,
gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, hidroiodeto/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilssulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilssulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogeno — fosfato/di-hidrogeno — fosfato, —poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfossalicilato, tartrato, tosilato e trifluoroacetato.
[00148] Ácidos inorgânicos a partir dos quais sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares.
[00149] Ácidos orgânicos a partir dos quais sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido toluenossulfônico, ácido sulfossalicílico e similares. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser formados com bases orgânicas e inorgânicas.
[00150] Bases inorgânicas a partir das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, sais de amônio e metal das colunas | a XIl da tabela periódica. Em determinadas modalidades, os sais são derivados de sódio, potássio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco e cobre; sais particularmente adequados incluem sais de amônio, sódio, potássio, magnésio e cálcio.
[00151] Bases orgânicas a partir das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas, incluindo aminas substituídas que ocorrem naturalmente, aminas cíclicas, resinas de troca iônica básicas e similares. Determinadas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina,
piperazina e trometamina.
[00152] Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente Invenção podem ser sintetizados a partir de uma porção ácida ou básica por meio de métodos químicos convencionais. Geralmente, tais sais podem ser preparados pela reação de formas de ácido livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na, Ca, Mg ou K ou similares) ou pela reação das formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são, tipicamente, realizadas em água ou em um solvente orgânico ou em uma mistura dos dois. Geralmente, o uso de meios não aquosos, tais como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrilo é desejável, onde praticável. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, por exemplo, em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20º ed, Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); e em "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002).
[00153] Qualquer fórmula fornecida aqui também se destina a representar formas não marcadas, bem como formas isotopicamente marcadas dos compostos. Compostos isotopicamente marcados têm estruturas representadas pelas fórmulas indicadas aqui, exceto que um ou mais átomos são substituídos por um átomo tendo um número de massa ou massa atômica selecionada. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, carbono, nitrogênio, oxigênio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H, HH, "Ee, BE, "o, "SN, 18E p, 32p, Ss, O), 125] respectivamente. A invenção inclui diversos compostos isotopicamente marcados conforme definido aqui, por exemplo, aqueles nos quais isótopos radioativos, tais como *H e **C, ou aqueles nos quais isótopos não radioativos, tais como *H e "ºC, estão presentes. Tais compostos isotopicamente marcados são úteis ems estudos metabólicos (com 140), estudos de reações cinéticas (por exemplo, com ?H ou *H), técnicas de detecção ou imagiologia, tais como tomografia por emissão de positrons (Positron Emission Tomography - PET) ou tomografia computadorizada por emissão de um único fóton (Single- Photon Emission Computed Tomography - SPECT), incluindo ensaios de distribuição tecidual de fármaco ou substrato ou em tratamento radioativo em pacientes. Em particular, um composto marcado com **F pode ser particularmente desejável para estudos de PET ou SPECT. Compostos isotopicamente marcados de fórmula (|) podem, em geral, ser preparados por meio de técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica ou através de processos análogos àqueles descritos nos Exemplos e Preparados incluídos usando um reagente isotopicamente marcado apropriado em vez de um reagente não marcado previamente empregado.
[00154] Ainda, substituição por isótopos mais pesados, em particular deutério (isto é, ?H ou D), pode conferir determinadas vantagens terapêuticas resultantes de maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia-vida aumentada in vivo ou requisitos de dosagem reduzida ou uma melhora no índice terapêutico. Deverá ser entendido que o deutério, neste contexto, é considerado como um substituinte de um composto de fórmula (1). A concentração de tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento isotópico. O termo "fator de enriquecimento isotópico", conforme usado aqui, significa a proporção entre a abundância isotópica e a abundância natural de um isótopo especificado. Se um substituinte em um composto da presente invenção é denotado deutério, tal composto tem um fator de enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo menos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deutério), pelo menos 6000 (90 % de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério) ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorporação de deutério).
[00155] Solvatos farmaceuticamente aceitáveis, de acordo com a invenção, incluem aqueles nos quais o solvente de cristalização pode ser isotopicamente substituído, por exemplo, D2O, ds;-acetona, DMSO- de.
[00156] Compostos da invenção, isto é, compostos de fórmula (1) que contêm grupos capazes de atuar como doadores e/ou receptores para ligações de hidrogênio podem ser capazes de formação de co- cristais com formadores de co-cristal adequados. Estes co-cristais podem ser preparados a partir de compostos de fórmula (1) por meio de procedimentos de formação de co-cristal conhecidos. Tais procedimentos incluem trituração, aquecimento, co-sublimação, co- fusão ou contato de compostos de fórmula (|) em solução com o formador de co-cristal sob condições de cristalização e isolamento de co-cristais assim formados. Formadores de co-cristal adequados incluem aqueles descritos no documento WO 2004/078163. Assim, a invenção proporciona ainda co-cristais compreendendo um composto de fórmula (l).
[00157] Conforme usado aqui, o termo "veículo farmaceuticamente aceitável" inclui quaisquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensoativos, antioxidantes, conservantes (por exemplo, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotônicos,
agentes de retardo de absorção, sais, conservantes, medicamentos estabilizantes, aglutinantes, excipientes, agentes de desintegração, lubrificantes, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, corantes e similares e combinações dos mesmos, conforme será conhecido por aqueles versados na técnica (vide, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18º Ed. Mack Printing Company, 1990, páginas 1289-1329). Exceto na medida em que qualquer veículo convencional é incompatível com o ingrediente ativo, seu uso nas composições farmacêuticas ou terapêuticas é considerado.
[00158] O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente invenção refere-se a uma quantidade do composto da presente invenção que desencadeará a resposta médica ou biológica em um indivíduo, por exemplo, inibição ou redução de atividade de uma enzima ou proteína ou melhora sintomas, alivia condições, diminui ou retarda a progressão da doença ou previne uma doença, etc. Em uma modalidade não limitativa, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrada a um indivíduo, é eficaz para (1) aliviar, inibir, prevenir e/ou melhorar pelo menos parcialmente uma condição, um distúrbio ou uma doença (i) mediada por PI3K ou (ii) associada à atividade de PI3K ou (iii) caracterizada por atividade (normal ou anormal) de PI3K ou (2) reduzir ou inibir a atividade de PI3K ou (3) reduzir ou inibir a expressão de PISK. Em outra modalidade não limitativa, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade de composto da presente invenção que, quando administrada a uma célula, a um tecido, a um material biológico não celular ou um meio, é eficaz para reduzir ou inibir pelo menos parcialmente a atividade de PI3K; ou reduzir ou inibir pelo menos parcialmente a expressão de PISK. O significado do termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz", conforme ilustrado na modalidade acima para PISK, também se aplica da mesma forma a quaisquer outras proteínas/peptídeos/enzimas relevantes.
[00159] Conforme usado aqui, o termo "indivíduo" refere-se a um animal. Tipicamente, o animal é um mamífero. Um indivíduo refere-se também, por exemplo, a primatas, (por exemplo, seres humanos, do sexo masculino ou feminino), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos, peixes, aves e similares. Em determinadas modalidades, o indivíduo é um primata. Em ainda outras modalidades, o indivíduo é um ser humano.
[00160] Conforme usado aqui, o termo "inibir" ou "inibição" refere-se à supressão ou redução de uma determinada condição, sintoma ou distúrbio ou doença ou uma diminuição significativa na atividade de linha de base de uma atividade ou processo biológico.
[00161] Conforme usado aqui, o termo "tratar" ou "tratamento" de qualquer distúrbio ou doença refere-se, em uma modalidade, a amenizar o distúrbio ou doença (isto é, retardar ou interromper ou reduzir o desenvolvimento da doença ou pelo menos um dos sintomas clínicos da mesma). Em outra modalidade "tratar" ou "tratamento" refere-se a aliviar ou melhorar pelo menos um parâmetro físico, incluindo aqueles que podem não ser perceptíveis pelo paciente. Em ainda outra modalidade, "tratar" ou "tratamento" refere-se à modulação da doença ou distúrbio, seja fisicamente (por exemplo, estabilização de um sintoma perceptível), fisiologicamente, (por exemplo, estabilização de um parâmetro físico) ou ambos. Em ainda outra modalidade, "tratar" ou "tratamento" refere-se a prevenir ou retardar o surgimento, desenvolvimento ou progressão da doença ou distúrbio.
[00162] Conforme usado aqui, um indivíduo "precisa de" um tratamento se tal indivíduo se beneficia biologicamente, medicamente ou na qualidade de vida de tal tratamento.
[00163] Conforme usado aqui, os termos "um", "uma", "o" e"a" e termos similares usados no contexto de presente invenção (especialmente no contexto das reivindicações) devem ser interpretados de forma a abranger tanto o singular quanto o plural, a menos que de outra forma indicado aqui ou claramente contradito pelo contexto.
[00164] Todos os métodos descritos aqui podem ser realizados em qualquer ordem apropriada, a menos que de outra forma indicado aqui ou de outra forma claramente contradito pelo contexto. O uso de quaisquer e todos os exemplos ou linguagem exemplificativa (por exemplo, "tal como") fornecida aqui se destina apenas a esclarecer melhor a invenção e não representa uma limitação no escopo da invenção de outra maneira reivindicada.
[00165] Qualquer átomo assimétrico (por exemplo, carbono ou similar) do(s) composto(s) da presente invenção pode estar presente em uma mistura racêmica enantiomaricamente enriquecida, por exemplo, a configuração (R)-, (S)- ou (R,S)-. Em determinadas modalidades, cada átomo assimétrico tem pelo menos 50% de excesso enantiomérico, pelo menos 60% de excesso enantiomérico, pelo menos 70% de excesso enantiomérico, pelo menos 80% de excesso enantiomérico, pelo menos 90% de excesso enantiomérico, pelo menos 95% de excesso enantiomérico ou pelo menos 99% de excesso enantiomérico na configuração (R)- ou (S)-. Substituintes em átomos com ligações duplas insaturadas podem, se possível, estar presentes na forma cis- (Z)- ou trans- (E)-.
[00166] Consequentemente, conforme usado aqui, um composto da presente invenção pode estar na forma de um dos possíveis isômeros, rotâmeros, atropisômeros, tautômeros ou misturas dos mesmos, por exemplo, como isômeros geométricos substancialmente puros (cis ou trans), diastereômeros, isômeros ópticos (antípodas), racematos ou misturas dos mesmos.
[00167] Quaisquer misturas resultantes de isômeros podem ser separadas, com base das diferenças físico-químicas dos constituintes, nos isômeros ópticos ou geométricos puros ou substancialmente puros, diastereômeros, racematos, por exemplo, através de cromatografia e/ou cristalização fracionada.
[00168] “Quaisquer racematos resultantes de produtos finais ou intermediários podem ser decompostos nos antípodas ópticos por meio de métodos conhecidos, por exemplo, através de separação dos sais diastereoméricos dos mesmos, obtidos com uma base ou ácido opticamente ativo e liberação do composto ácido ou básico opticamente ativo. Em particular, uma porção básica pode, assim, ser empregada para decompor os compostos da presente invenção em seus antípodas ópticos, por exemplo, por meio de cristalização fracionada de um sal formado com um ácido opticamente ativo, por exemplo, ácido tartárico, ácido dibenzoil tartárico, ácido di-O,O"-p- toluoil tartárico, ácido mandélico, ácido málico ou ácido cânfor-10- sulfônico. Produtos racêmicos também podem ser decompostos através de cromatografia quiral, por exemplo, cromatografia de líquido de alta pressão (High Pressure Liquid Chromatography - HPLC) usando um adsorvente quiral.
[00169] Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo seus sais, também podem ser obtidos na forma de seus hidratos ou incluir outros solventes usados para sua cristalização. Os compostos da presente invenção podem, inerentemente ou por design, formar solvatos com solventes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo água); portanto, pretende-se que a invenção abranja formas solvatadas e não solvatadas. O termo "solvato" refere-se a um complexo molecular de um composto da presente invenção (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo) com uma ou mais moléculas de solventes. Tais moléculas de solventes são aquelas comumente usadas na técnica farmacêutica, as quais são conhecidas por serem inócuas para o recipiente, por exemplo, água, etanol e similares. O termo "hidrato" refere-se ao complexo onde a molécula de solvente é água.
[00170] Os compostos da presente invenção, incluindo sais, hidratos e solvatos do mesmo podem, inerentemente ou por design, formar polimorfos.
[00171] Tipicamente, os compostos de fórmula (l) podem ser preparados de acordo com os métodos fornecidos infra. Esquema A ne N—pG' N oH et ISP o > 1) etapa e) (8) 7 mo A a) 5 2) etapa b) (A) º q , | Ê Ro qo Pr R Rx | Y | x im Í Si É Ca RÉ (D) R Vv ã OO O a pe NM As pç Gs Rn | q (c) Re o & Ss Rg (E) vs >) D etapa f)
AR x v bs 2) etapa a) (D) o g ff R RR? " wW Ex Y 2 dp! R Í à A act. EE 9 . PG'
R (F) 1) etapa c) atas R— Act"
AR " Ex s O, A go Fá N See XL Ds Fá Ro a RR é 0)
[00172] Em uma modalidade, a invenção refere-se a um processo para fabricação de um composto de fórmula (1) (Método A) compreendendo etapas a, b, c, d.
[00173] O composto de fórmula (1) é obtido via uma etapa c de desproteção de PG'* do composto de fórmula (F), em que PG' representa um grupo de proteção adequado, tal como um grupo Boc, e os outros substituintes são conforme definido acima. vn R
RN Y XL o Cr Ré Aq N Roo Ne ds PG (F)
[00174] seguido pela reação de acoplamento da etapa d com:
[00175] R'-Act
[00176] etapa c1: Onde R' é -C(O)-Rº ou -S(O)x-R$, em que R é definido acima e Act” representa um grupo de ativação ou um grupo hidróxi: A reação de acoplamento é uma formação amida, ureia, éster carbâmico ou sulfonamida. Há muitas maneiras de preparo de amidas, ureia, éster carbâmico ou sulfonamidas. A etapa de reação de acoplamento pode ser realizada com Act' representando um grupo de ativação, de preferência em um procedimento de uma etapa ou com Act' representando um grupo hidróxi ou envolvendo um procedimento de uma ou duas etapas. Para exemplos de formações de ligações amida vide Mantalbetti, C.A.G.N e Falque, V., Amide Bond Formation and Peptide Coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), páginas 10827- 10852 e referências citadas no mesmo. Para exemplos de sínteses de ureia vide Sartori, G.; Maggi, R. Aciclic and Ciclic Ureas, Science of Synthesis (2005), 18, 665-758; Gallou, Isabelle. Unsymmetrical Ureas Synthetic Methodologies and Aplication In Drug Design, Organic
Preparations and Procedures International (2007), 39(4), 355-383. Para exemplos de síntese de carbamato vide Adams, Philip; Baron, Frank A. Esters of Carbamic Acid, Chemical Reviews (1965), 65(5), 567-602. Os exemplos fornecidos aqui, assim, não se destinam a ser exaustivos, mas meramente ilustrativos;
[00177] etapa c2: Onde R' é selecionado de fenila, pirídila, pirimidinila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila ou 1,3,5-triazinila e Act! representa halogênio, particularmente iodo ou bromo: A reação de acoplamento é realizada na presença de uma base de amina, tal como N N-di-isopropiletilamina. A reação é realizada na presença um solvente orgânico ou sem um solvente sob aquecimento de micro-ondas. Alternativamente, a reação é realizada sob condições rotineiras de Buchwald-Hartwig, tais como as condições descritas acima. A reação é, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio.
[00178] O composto de fórmula (F) é obtido via uma etapa b de acoplamento do composto de fórmula (C), em que PG'* representa um grupo de proteção adequado, tal como Boc, e os outros substituintes são conforme definido acima,
R RN Y
OO RÃ Ó N 1 às PG (C)
[00179] com um composto de fórmula (D), em que X' representa halogênio, tal como iodo ou bromo, e os outros substituintes são conforme definido acima,
PES Rº
O x (D)
[00180] sob condições rotineiras de Buchwald-Hartwig usando uma combinação de ligante/catalisador de Pd adequada, tal como Pd2(dba)3/2-(diciclo-hexilfosfofino)bifenila ou Pd2(dba)3/2-diciclo- hexilfosfofino-2',4',6'-tri-isopropil-bifenila, Pd2(dba)3/X-Phos, Pd>(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)-BINAP ou bis(tri-t- butilfosfina)paládio e uma base adequada, tal como NaOtBu, Cs,CO; ou K3PO;,, e um solvente orgânico, tal como tolueno, dioxano ou THF. A reação é agitada em uma temperatura de aproximadamente 60- 140, por exemplo a 100º a 110€ e é, opcionalmen te, realizada em um reator de micro-ondas. A reação é, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio.
[00181] O composto de fórmula (C) é obtido via a etapa a de acoplamento do composto de fórmula (A), em que os substituintes são conforme definido acima com um composto de fórmula (B), em que PG” representa um grupo de proteção adequado, tal como um grupo Boc, e Act? é um grupo de ativação ou H e os outros substituintes são conforme definido acima, Rº & DO =. | PA Ré o
R (A) Rº Rº w AR e Nro
Y (B)
[00182] etapa ai: Onde Y é O e Act? representa um grupo de ativação, tal como um mesilato: A reação ocorre na presença uma base adequada, tal como hidróxido de sódio (NaH), KCO; ou t- butóxido de potássio (tBuOK), em um solvente orgânico polar adequado, tal como DMF, THF, 2-metiltetra-hidrofuranoo ou Dioxano, em uma temperatura adequada, tal como uma temperatura ambiente de - 100T.
[00183] etapa a2: Onde Y é O e Act? representa H: A reação ocorre usando condições de Mitsunobu rotineiras, por exemplo, usando Ph;3P e DEAD em um solvente orgânico, tal como THF, sob condições de gás inerte em uma temperatura elevada, tal como 70ºC.
[00184] etapa a3: Onde Y é NH e Act? representa H: uma reação de acoplamento de fosfônio promovida por uma base é empregada, de modo que um composto de fórmula (A) em um solvente adequado, tal como acetonitrilo, é reagido com um sal de fosfônio, tal como hexafluorofosfato — de — benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfônio (BOP) na presença de uma base, tal como 1,8-diaza-7- biciclo[5.4.0Jundeceno (DBU), seguido pela adição de um composto de fórmula (B). A mistura de reação é agitada em uma temperatura de a 100T.
[00185] Em outra modalidade, a invenção refere-se ao processo para fabricação de um composto de fórmula (1) (Método A-a) compreendendo etapas a e b conforme definido acima para o Método A, usando um composto de fórmula (B), em que PG'* representa R'.
[001868] Em outra modalidade, a invenção refere-se ao processo para fabricação de um composto de fórmula (1) (Método B) compreendendo etapas e, b, f, a, ced.
[00187] O composto de fórmula (1) é obtido via as etapas c e d, conforme descrito acima para o Método A do composto de fórmula (F).
[00188] O composto de fórmula (F) é obtido via uma etapa f de deSproteção DE PG? do composto de fórmula (E), em que PG? é um grupo de proteção adequado, tal como um grupo de proteção silila, e os outros substituintes são conforme definido acima: vu | «
C RN o Ré WE PE? Ré o
R (E) ;
[00189] seguido pela reação de acoplamento da etapa a, conforme descrito acima para o Método A, com o composto de fórmula (B).
[00190] O composto de fórmula (E) é obtido via uma etapa e de proteção do composto de fórmula (A) com um grupo de proteção PG? adequado, seguido pelo composto de fórmula (E), em que PG? é um grupo de proteção adequado, tal como um grupo de proteção silila, seguido pela reação de acoplamento da etapa b, conforme descrito acima para o Método A com o composto de fórmula (D).
[00191] Em outra modalidade, a invenção refere-se ao processo para fabricação de um composto de fórmula (1) (Método B-a) compreendendo etapas e, b e f conforme definido acima para o Método B, usando um composto de fórmula (B) em que PG' representa R*.,
[00192] Em outra modalidade, a invenção refere-se ao processo para fabricação de um composto de fórmula (1) (Método C) usando um composto de fórmula (A) em que X" representa halogênio e os outros substituintes são conforme definido acima
Ré XL | AV Ré o
RÉ (A)
[00193] “compreendendo etapas b, c e d conforme definido acima para o Método B, usando um composto de fórmula (B) e uma etapa a4 modificada:
[00194] etapa a4: Onde Y é NH e Act? é H: A reação ocorre na presença uma base adequada tal como, por exemplo, carbonato de potássio ou base de amina adequada, tal como trietilamina ou N,N-di- isopropiletilamina, em temperatura elevada, tal como 100% a 140C. Alternativamente, a reação é realizada sob condições rotineiras de Buchwald-Hartwig, tal como as condições descritas acima. A reação é, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio.
[00195] Em outra modalidade, a invenção refere-se ao processo para fabricação de um composto de fórmula (1) (Método C-a) compreendendo etapas b, a4, c e d conforme definido acima para o Método B', usando um composto de fórmula (B), em que PG' representa R*.
[00196] O termo "grupo de ativação", conforme usado aqui, refere- se a um grupo que pode ativar um ácido carboxílico, ácido carbônico ou um derivado de ácido carbâmico, para acoplamento com uma porção amina para formar uma porção amida, ureia ou éster de carbamato, respectivamente (Act1) ou um grupo que pode ativar um grupo hidróxi para acoplamento com outra porção hidróxi para formar um éter (Act2).
[00197] Grupos que podem ativar um ácido carboxílico, ácido carbônico ou derivado de ácido carbâmico para acoplamento com uma porção amina para formar uma porção amida, ureia ou éster carbâmico são cloretos ou grupos que resultam da reação do derivado ácido com um agente de ativação. Agentes de ativação adequados são conhecidos por aqueles versados na técnica, exemplos de tais reagentes de ativação são derivados de carbodi-imida, derivados de pentafluorofenil éster, derivados de triazol, derivados de imidazol.
[00198] Grupos que podem ativar um grupo hidróxi para acoplamento com outra porção hidróxi para formar um éter são grupos conhecidos por aqueles versados na técnica, exemplos de tais grupos de ativação sendo mesilatos e tosilatos.
[00199] O termo "grupo de proteção", conforme usado aqui, refere- se a um grupo que protege um grupo funcional que está presente nos materiais de iniciação e não se destinam a tomar parte na reação. Em etapas de processo adicionais, realizadas conforme desejado, os grupos funcionais dos compostos de iniciação que não devem tomar parte na reação podem estar presentes na forma desprotegida ou podem ser protegidos, por exemplo, por um ou mais grupos de proteção. Os grupos de proteção são, então, total ou parcialmente removidos de acordo com um dos métodos conhecidos. Grupos de proteção e a maneira pela qual eles são introduzidos e removidos são descritos, por exemplo, em "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, Londres, New York 1973 e em "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4º edição, vol. 15/1, Georg- Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 e em Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York 1981. Uma característica de grupos de proteção é que eles podem ser removidos facilmente, isto é, sem a ocorrência de reações secundárias indesejadas, por exemplo, por meio de solvólise, redução, fotólise ou, alternativamente, sob condições fisiológicas.
[00200] A invenção inclui ainda qualquer variante dos presentes processos na qual um produto intermediário obtenível em qualquer estágio do mesmo é usado como material de iniciação e as etapas restantes são realizadas ou na qual os materiais de iniciação são formados in situ sob as condições de reação ou na qual os componentes da reação são usados na forma de seus sais ou material opticamente puro.
[00201] Os compostos da invenção e intermediários podem também ser convertidos uns aos outros de acordo com métodos geralmente conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00202] Os intermediários e produtos finais podem ser processados e/ou purificados de acordo com métodos convencionais, por exemplo, usando métodos cromatográficos, métodos de distribuição, (re- cristalização e similares.
[00203] O seguinte se aplica, em geral, a todos os processos mencionados aqui antes e daqui em diante.
[00204] Todas as etapas de processo mencionadas acima podem ser realizadas sob condições de reação que são conhecidas por aqueles versados na técnica, incluindo aquelas mencionadas especificamente, na ausência ou, comumente, na presença de solventes ou diluentes incluindo, por exemplo, solventes ou diluentes que são inertes em relação aos reagentes usados e dissolvem os mesmos, na ausência ou presença de catalisadores, agentes de condensação ou neutralização, por exemplo, permutadores de íons, tais como permutadores de cátions, por exemplo, na forma H+, dependendo da natureza da reação e/ou dos reagentes em temperatura reduzida, normal ou elevada, por exemplo, em uma faixa de temperatura de cerca de -100 € a cerca de 190 º C incluindo, por exemplo, de aproximadamente -80 ºC a cerca de 150 ºC, por exemplo, de -80 a -60 ºC, em temperatura ambiente, de -20 a 40 ºC ou na temperatura de refluxo, sob pressão atmosférica ou em um recipiente fechado, quando apropriado sob pressão, e/ou em uma atmosfera inerte, por exemplo, sob uma atmosfera de argônio ou nitrogênio.
[00205] Em todos os estágios das reações, misturas de isômeros que são formadas podem ser separadas nos isômeros individuais, por exemplo, diastereoisômeros ou enantiômeros, ou em quaisquer misturas de isômeros desejadas, por exemplo, racematos ou misturas de diastereoisômeros, por exemplo, analogamente aos métodos descritos aqui acima.
[00206] Os solventes a partir dos quais aqueles solventes que são apropriados para qualquer reação particular podem ser selecionados incluem aqueles mencionados especificamente ou, por exemplo, água, ésteres, tais como alcanoatos inferiores de alquila inferior, por exemplo, acetato de etila, éteres, tais como éteres alifáticos, por exemplo, dietil éter, ou éteres cíclicos, por exemplo, tetra-hidrofurano ou dioxano, hidrocarbonetos aromáticos líquidos, tais como benzeno ou tolueno, álcoois, tais como metanol, etanol ou 1- ou 2-propanol, nitrilos, tal como acetonitrilo, hidrocarbonetos halogenados, tais como cloreto de metileno ou clorofórmio, amidas ácidas, tais como dimetilformamida ou dimetil acetamida, bases, tais como bases heterocíclicas de nitrogênio, por exemplo, piridina ou N-metilpirrolidin- 2-ona, anidridos de ácidos carboxílicos, tais como anidridos de ácidos alcanoicos inferiores, por exemplo anidrido acético, hidrocarbonetos cíclicos, lineares ou ramificados, tais como ciclo-hexano, hexano ou isopentano, metilciclo-hexano ou misturas desses solventes, por exemplo, soluções aquosas, a menos que indicado em contrário na descrição dos processos. Tais misturas de solventes também podem ser usadas em processamento, por exemplo, para cromatografia ou divisão.
[00207] Os compostos, incluindo seus sais, também podem ser obtidos na forma de hidratos ou seus cristais podem, por exemplo,
incluir o solvente usado para cristalização. Diferentes formas cristalinas podem estar presentes.
[00208] A invenção refere-se também àquelas formas de processo nas quais um composto obtenível como um intermediário em qualquer estágio do processo é usado como material de iniciação e as etapas restantes do processo são realizadas ou nas quais um material de iniciação é formado sob as condições de reação ou é usado na forma de um derivado, por exemplo, na forma protegida ou na forma de um sal, ou um composto obtenível por meio do processo de acordo com a invenção é produzido sob as condições de processo e ainda processado in situ.
[00209] Em outro aspecto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica compreendendo um composto da presente invenção ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo e um veículo farmaceuticamente aceitável. A composição farmacêutica pode ser formulada para vias particulares de administração, tais como administração oral, parenteral e retal, etc. Além disso, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser feitas em uma forma sólida (incluindo, sem limitação, cápsulas, comprimidos, pílulas, grânulos, pós ou supositórios) ou em uma forma líquida (incluindo, sem limitação, soluções, suspensões ou emulsões). As composições farmacêuticas podem ser submetidas às operações farmacêuticas convencionais, tal como esterilização, e/ou podem conter diluentes inertes, agentes lubrificantes ou agentes de tamponamento convencionais, bem como adjuvantes, tais como conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes e tampões, etc.
[00210] Tipicamente, as composições farmacêuticas são comprimidos ou cápsulas de gelatina compreendendo o ingrediente ativo juntamente com:
[00211] diluentes, por exemplo, lactose, dextrose, sacarose,
manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina;
[00212] lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico, seu sal de magnésio ou cálcio e/ou polietileno glicol; para comprimidos também
[00213] —aglutinantes, por exemplo, silicato de alumínio e magnésio, pasta de amido, gelatina, tragacanto, metil celulose, carbóxi metil celulose e/ou polivinilpirrolidona de sódio; se desejado
[00214] agentes de desintegração, por exemplo, amidos, agar, ácido algínico ou seu sal de sódio ou misturas efervescentes; e/ou
[00215] absorventes, colorantes, aromatizantes e edulcorantes.
[00216] Os comprimidos podem ser revestidos com filme ou revestidos entericamente de acordo com métodos conhecidos na técnica.
[00217] “Composições adequadas para administração oral incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção na forma de comprimidos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveis ou grânulos, emulsão, cápsulas duras ou moles ou xaropes ou elixires. Composições destinadas a uso oral são preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes e agentes conservantes, a fim de proporcionar preparados farmaceuticamente elegantes e saborosos. Comprimidos podem conter o ingrediente ativo em mistura com excipientes não tóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipientes são, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Comprimidos não são revestidos ou revestidos por meio de técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrintestinal e, assim, conferir uma ação sustentada durante um período mais longo. Por exemplo, um material de retardo com o tempo, tal como monoestearato de ou diestearato glicerila, pode ser empregado. Formulações para uso oral podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras nas quais o ingrediente ativo está misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina mole, nas quais o ingrediente ativo está misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite.
[00218] Determinadas composições injetáveis são soluções ou suspensões isotônicas aquosas e supositórios são, vantajosamente, preparados a partir de emulsões ou suspensões graxas. As referidas composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, tais como agentes conservantes, estabilizantes, umectantes ou emulsificantes, promotores de solução, sais para regulação da pressão osmótica e/ou tampões. Além disso, elas também podem conter outras substâncias terapeuticamente valiosas. As referidas composições são preparadas de acordo com métodos de mistura, granulação ou revestimento convencionais, respectivamente, e contêm cerca de 0,1- 75% ou contêm cerca de 1-50% do ingrediente ativo.
[00219] “Composições apropriadas para aplicação transdérmica incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção com um veículo adequado. Veículos adequados para administração transdérmica incluem solventes absorvíveis farmacologicamente aceitáveis para auxiliar a passagem através da pele do hospedeiro. Por exemplo, dispositivos transdérmicos estão na forma de uma bandagem compreendendo um elemento de suporte, um reservatório contendo o composto opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreira para controle de velocidade para distribuição do composto à pele do hospedeiro em uma taxa controlada e predeterminada ao longo de um período de tempo prolongado, e meios para fixar o dispositivo à pele.
[00220] “Composições apropriadas para aplicação tópica, por exemplo, à pele e olhos, incluem soluções aquosas, suspensões, pomadas, cremes, géis ou formulações pulverizáveis, por exemplo, para distribuição por aerossol ou similar. Tais sistemas de liberação tópica serão, em particular, adequados para aplicação dérmica, por exemplo, para o tratamento de câncer da pele, por exemplo, para uso profilático em protetores solares, loções, sprays e similares. Elas são, portanto, particularmente adequadas para uso em formulações tópica, incluindo cosméticas, bem conhecidas na técnica. Essa pode conter solubilizantes, estabilizantes, agentes para aumento de tonicidade, tampões e conservantes.
[00221] Conforme usado aqui, uma aplicação tópica pode também referir-se a uma aplicação por inalação ou intranasal. Elas podem ser convenientemente — apresentadas na forma de um pó seco (isoladamente, como uma mistura, por exemplo, uma mistura seca com lactose, ou como uma partícula de componentes mistos, por exemplo, com fosfolipídios) a partir de um inalador de pó seco ou uma apresentação de spray aerossol a partir de um recipiente pressurizado, bomba, pulverizador, atomizador ou nebulizador, com ou sem o uso de um propelente adequado.
[00222] A presente invenção proporciona ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem anidras que compreendem os compostos da presente invenção como ingredientes ativos, uma vez que a água pode facilitar a degradação de determinados compostos.
[00223] “Composições farmacêuticas e formas de dosagem anidras da invenção podem ser preparadas usando ingredientes contendo baixa umidade ou anidros e condições de baixa umidade ou sem umidade. Uma composição farmacêutica anidra pode ser preparada e armazenada de modo que sua natureza anidra seja mantida. Deste modo, as composições anidras são embaladas usando materiais conhecidos por prevenir a exposição à água, de modo que elas possam ser incluídas em kits de formulação adequados. Exemplos de embalagens adequadas incluem, porém sem limitações, folhas hermeticamente seladas, plásticos, recipientes de doses unitárias (por exemplo, frascos), embalagens de blister e embalagens de tiras.
[00224] —Ainvenção proporciona ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem um ou mais agentes que reduzem a taxa na qual o composto da presente invenção, como um ingrediente ativo, se decomporá. Tais agentes, os quais são referidos aqui como "estabilizantes" incluem, porém sem limitações, antioxidantes, tal como ácido ascórbico, tampões de pH ou tampões de sal, etc.
[00225] Os compostos de fórmula | na forma livre ou na forma de sal exibem propriedades farmacológicas valiosas, por exemplo, propriedades de modulação de PI3K, por exemplo, conforme indicado em testes in vitro e in vivo, conforme fornecido nas próximas seções e, portanto, são indicados para terapia ou uso como produtos químicos de pesquisa tal como, por exemplo, como compostos utilitários.
[00226] Os compostos da invenção podem ser úteis no tratamento de condições, doenças ou distúrbios, incluindo doença ou infecção associada à imunopatologia na qual uma ou mais das funções das células B, tais como produção de anticorpos, apresentação de antígeno, produção de citocina ou organogênese linfoide, são anormais ou indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar e doenças relacionadas, púrpura trombocitopênica idiopática, lupus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, miastenia gravis, síndrome de Sjógren, anemia hemolítica autoimune, vasculites ANCA- associadas, crioglobulinemia, púrpura trombocitopênica trombótica, urticária crônica autoimune, alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), rejeição de transplante hiperaguda, aguda e crônica mediada por células B e cânceres de origem hematopoiética incluindo, porém sem limitações, mieloma múltiplo; leucemia mieloide aguda; leucemia mieloide crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem.
[00227] A invenção inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios nos quais uma ou mais das funções de neutrófilos, tais como liberação de superóxido, exocitose estimulada ou migração quimioatrativa, são anormais ou indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, sepsia, distúrbios pulmonares ou respiratórios, tais como asma, dermatoses inflamatórias, tal como psoríase, bem como em doença ou infecção associada à imunopatologia e outros.
[00228] A invenção inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios nos quais uma ou mais das funções de basófilos e mastócitos, tais como migração quimioatrativa ou desgranulação de IgE mediada por alérgeno, são anormais ou indesejáveis, incluindo doenças alérgicas (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), bem como outras doenças, tais como COPD, asma ou enfisema.
[00229] A invenção inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios nos quais uma ou mais das funções de células T, tais como produção de citocina ou citotoxicidade mediada por células, são anormais ou indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, esclerose múltipla, rejeição aguda ou crônica de tecidos e células ou enxertos de órgãos ou cânceres de origem hematopoiética, bem como em doença ou infecção associada à imunopatologia.
[00230] Além disso, a invenção inclui métodos para tratamento de doenças neurodegenerativas, doenças cardiovasculares e agregação de plaquetas.
[00231] Além disso, a invenção inclui métodos de tratamento de doenças da pele, tais como porfiria cutânea tardia, erupção polimorfa pela luz, dermatomiosite, urticária solar, líquen plano oral, paniculite, esclerodermia, urticária e vasculite.
[00232] Além disso, a invenção inclui métodos de tratamento de doenças inflamatórias crônicas, tais como sarcoidose, granuloma anular.
[00233] Em outras modalidades, a condição ou distúrbio (por exemplo, mediada por PI3K) é selecionado do grupo que consiste em: policitemia vera, trombocitemia essencial, mielofibrose com metaplasia mieloide, asma, COPD, ARDS, síndrome de Loffler, pneumonia eosinofílica, infestação parasítica (em particular metazoário) (incluindo eosinofíilia tropical), aspergilose broncopulmonar, poliartrite nodosa (incluindo síndrome de Churg-Strauss), granuloma eosinofílico, distúrbios relacionados a eosinófilos que afetam as vias respiratórias ocasionadas por reação a fármacos, psoríase, dermatite de contato, dermatite atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatite herpetiforme, esclerodermia, vitiligo, angiíte de hipersensibilidade, urticária, penfigóide bolhoso, lupus eritematoso, pênfigo, epidermólise bolhosa adquirida, doenças autoimunes (por exemplo anemia hemolítica hematológica, anemia aplástica, anemia de células vermelhas pura e trombocitopenia idiopática), lupus eritematoso sistêmico, policondrite, esclerodermia, granulomatose de Wegener,
dermatomiosite, hepatite crônica ativa, miastenia gravis, síndrome de Steven-Johnson, psilose idiopática, doença intestinal inflamatória autoimune (por exemplo, colite ulcerativa e doença de Crohn), oftalmopatia endócrina, doença de Grave, sarcoidose, alveolite, pneumonite de hipersensibilidade crônica, esclerose múltipla, cirrose biliar primária, uveite (anterior e posterior), fibrose pulmonar intersticial, artrite psoriática, glomerulonefrite, doenças cardiovasculares, aterosclerose, hipertensão, trombose venosa profunda, acidente vascular cerebral, infarto do miocárdio, angina instável, tromboembolismo, embolia pulmonar, doenças trombolíticas, isquemia arterial aguda, oclusões trombóticas periféricas e doença arterial coronariana, lesões de reperfusão, retinopatia, tal como retinopatia diabética ou retinopatia induzida por oxigênio hiperbárico, e condições caracterizadas por uma pressão intraocular elevada ou secreção de humor aquoso ocular, tal como glaucoma.
[00234] Em outra modalidade, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento, prevenção ou melhora de doença autoimune e condições inflamatórias, em particular condições inflamatórias com uma etiologia incluindo um componente autoimune, tal como artrite (por exemplo, artrite reumatoide, artrite crônica progressiva e artrite deformante) e doenças reumáticas, incluindo condições inflamatórias e doenças reumáticas envolvidas em perda de massa óssea, dor inflamatória, incluindo espondilite anquilosante, espondiloartropatias, síndrome de Reiter, artrite reativa, artrite psoriática, artrite enteropática, hipersensibilidade (incluindo hipersensibilidade das vias aéreas e hipersensibilidade cutânea) e alergias. Doenças autoimunes específicas para as quais os anticorpos da invenção podem ser usados incluem distúrbios hematológicos autoimunes (incluindo, por exemplo, anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia pura dos glóbulos vermelhos e trombocitopenia idiopática), hemofilia A adquirida, doença de aglutinina em resfriado, crioglobulinemia, púrpura trombocitopênica trombótica, síndrome de Sjógren, lupus eritematoso sistêmico, — distúrbios — musculares inflamatórios, — policondrite, esclerodermia, vasculite associada a anticorpos citoplasmáticos antineutrófilos, neuropatia mediada por IgM, mioclonus opsoclonus, granulomatose de Wegener, dermatomiosite, hepatite crônica ativa, miastenia gravis, psoríase, síndrome de Steven-Johnson, pênfigo vulgar, pênfigo foliáceo, psilose idiopática, doença inflamatória autoimune do intestino (incluindo, por exemplo, colite ulcerativa, doença de Crohn e síndrome do intestino irritável), oftalmopatia endócrina, doença de Graves, sarcoidose, esclerose múltipla, neuromielite óptica, cirrose biliar primária, diabetes juvenil (diabetes mellitus de tipo |), uveite (anterior, intermediária e posterior, bem como panuveite), ceratoconjuntivite seca e ceratoconjuntivite vernal, fibrose pulmonar intersticial, artrite psoriática e glomerulonefrite (com e sem síndrome nefrótica, por exemplo, incluindo síndrome nefrótica idiopática ou nefropatia de alteração mínima), tumores, doença inflamatória da pele e da córnea, miosite, afrouxamento de implantes de osso, distúrbios metabólicos, tais como aterosclerose, diabetes e dislipidemia.
[00235] Em outra modalidade, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de condições ou distúrbios selecionados do grupo que consiste em linfoma primário cutâneo de células B, doença imunobolhosa, pênfigo vulgar, foliáceo, forma endêmica de pênfigo Brasileiro (fogo selvagem), pênfigo paraneoplásico, penfigoide bolhoso, penfigoide da membrana mucosa, epidermólise bolhosa adquirida, doença enxerto versus hospedeiro crônica, dermatomiosite, lupus eritematoso sistêmico, vasculite, vasculite de pequenos vasos, vasculite por urticária hipocomplementêmica, vasculite por anticorpo citoplásmico antineutrófilos, crioglobulinemia, síndrome de Schnitzler,
macroglobulinemia de Waldenstrom, angioedema, vitiligo, lupus eritematoso sistêmico, púrpura trombocitopênica idiopática, esclerose múltipla, doença de aglutinina em resfriado, anemia hemolítica autoimune, — vasculite associada a anticorpo citoplásmico antineutrófilos, doença enxerto versus hospedeiro, crioglobulinemia e trombocitopênica trombótica.
[00236] Assim, como outra modalidade, a presente invenção proporciona o uso de um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la'), (Ib), (Ib') (lc), (le), (Id), (Id), (le), (le), (11), (If), (lg), (lg), (Ih), (IR), (li), (Ii), (lj) ou (lj) em terapia. Em outra modalidade, a terapia é selecionada para uma doença que pode ser tratada pela inibição de PI3K. Em outra modalidade, a doença é selecionada da lista mencionada acima, adequadamente de distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doenças das vias respiratórias, tais como asma e DPOC, rejeição de transplantes; produção de anticorpos, apresentação de antígeno, produção de citocina ou organogênese linfoide são anormais ou indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar, púrpura trombocitopênica idiopática, lupus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, miastenia grave, síndrome de Sjógren, anemia — hemolítica — autoimune, —vasculite —ANCA-associada, crioglobulinemia, púrpura trombocitopênica trombótica, urticária crônica autoimune, alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), Rejeição de transplante hiperaguda, aguda ou crônica mediada por células B e câncer de origem hematopoiética incluindo, porém sem limitações, mieloma múltiplo; leucemia; leucemia mieloide aguda; leucemia mieloide crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem; mais apropriadamente de artrite reumatoide (AR), pênfigo vulgaris (PV), trombocitopenia púrpura idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), anemia hemolítica autoimune (AHAI), hemofilia de tipo A adquirida (AHA), lupus eritematoso sistêmico (LES), esclerose múltipla (EM), miastenia grave (MG), síndrome de Sjôógren (SS), vasculite — ANCA-associada, —crioglobulinemia, urticária crônica autoimune (UCA), (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica) alergia, síndrome de Goodpasture, rejeição de transplantes e cânceres de origem hematopoiética, bem como em doença ou infecção associada à imunopatologia, por exemplo, em casos de malária cerebral grave e tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
[00237] Em outra modalidade, a invenção proporciona um método de tratamento de uma doença que é tratada pela inibição de PISK compreendendo administração de uma quantidade terapeuticamente aceitável de um composto de fórmulas (1), (I'), (la), (la'), (Ib), (Ib') (lc), (le), (1d), (Id), (le), (le"), (11), (If), (Ig), (1g'), (Ih), (1h), (li), (1), (li) ou (1j). Em outra modalidade, a doença é selecionada da lista mencionada acima, adequadamente de distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doenças das vias respiratórias, tais como asma e DPOC, rejeição de transplantes; produção de anticorpos, apresentação de antígeno, produção de citocina ou organogênese linfoide são anormais ou indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar, púrpura trombocitopênica idiopática, lupus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, miastenia grave, síndrome de Sjôgren, anemia hemolítica autoimune, vasculite ANCA-associada, crioglobulinemia, púrpura trombocitopênica trombótica, urticária crônica autoimune, alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), Rejeição de transplante hiperaguda, aguda ou crônica mediada por células B e câncer de origem hematopoiética incluindo, porém sem limitações, mieloma múltiplo; leucemia; leucemia mieloide aguda; leucemia mieloide crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem; mais apropriadamente de artrite reumatoide (AR), pênfigo vulgaris (PV), trombocitopenia púrpura idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), anemia hemolítica autoimune (AHAI), hemofilia de tipo A adquirida (AHA), lupus eritematoso sistêmico (LES), esclerose múltipla (EM), miastenia grave (MG), síndrome de Sjógren (SS), vasculite — ANCA-associada, —crioglobulinemia, urticária crônica autoimune (UCA), (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica) alergia, síndrome de Goodpasture, rejeição de transplantes e cânceres de origem hematopoiética, bem como em doença ou infecção associada à imunopatologia, por exemplo, em casos de malária cerebral grave e tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
[00238] Assim, como outra modalidade, a presente invenção proporciona o uso de um composto de fórmulas (1), (1), (la), (la'), (Ib), (1b') (lo), (le), (Id), (Id), (le), (le), (1f), (If), (lg), (la), (Ih), (Ih), (li), (Ii), (lj) ou (ll) para a fabricação de um medicamento. Em outra modalidade, o medicamento é para o tratamento de uma doença que pode ser tratada por meio de inibição de PI3SK. Em outra modalidade, a doença é selecionada da lista mencionada acima, adequadamente de distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doenças das vias respiratórias, tais como asma e DPOC, rejeição de transplantes; produção de anticorpos, apresentação de antígeno, produção de citocina ou organogênese linfoide são anormais ou indesejáveis, incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar, púrpura trombocitopênica idiopática, lupus eritematoso sistêmico, esclerose múltipla, miastenia grave, síndrome de Sjógren, anemia hemolítica autoimune, vasculite ANCA-associada, crioglobulinemia, púrpura trombocitopênica trombótica, urticária crônica autoimune, alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), Rejeição de transplante hiperaguda, aguda ou crônica mediada por células B e câncer de origem hematopoiética incluindo, porém sem limitações, mieloma múltiplo; leucemia; leucemia mieloide aguda; leucemia mieloide crônica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma —não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem; mais apropriadamente de artrite reumatoide (AR), pênfigo vulgaris (PV), trombocitopenia púrpura idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), anemia hemolítica autoimune (AHAI), hemofilia de tipo A adquirida (AHA), lupus eritematoso sistêmico (LES), esclerose múltipla (EM), miastenia grave (MG), síndrome — de Sjógren (SS) vasculite ANCA-associada, crioglobulinemia, urticária crônica autoimune (UCA), (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica) alergia, síndrome de Goodpasture, rejeição de transplantes e cânceres de origem hematopoiética, bem como em doença ou infecção associada à imunopatologia, por exemplo, em casos de malária cerebral grave e tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
[00239] A composição farmacêutica ou combinação da presente invenção pode estar em uma dose unitária de cerca de 1-1000 mg de ingrediente ativo(s) para um indivíduo de cerca de 50-70 kg ou cerca de 1-500 mg ou cerca de 1-250 mg ou cerca 1-150 mg ou cerca de 0,5-100 mg ou cerca de 1-50 mg de ingredientes ativos. A dosagem terapeuticamente eficaz de um composto, composição farmacêutica ou combinações das mesmas é dependente da espécie do indivíduo, peso corporal, idade e condição individual, do distúrbio ou doença a ser tratada ou sua gravidade. Um médico, clínico ou veterinário pode determinar prontamente a quantidade eficaz de cada um dos ingredientes ativos necessários para prevenir, tratar ou inibir a progressão do distúrbio ou doença.
[00240] As propriedades de dosagem citadas acima são demonstráveis in vitro e in vivo usando, vantajosamente, mamíferos, por exemplo, camundongos, ratos, cães, macacos ou órgãos isolados, tecidos e preparados dos mesmos. Os compostos da presente invenção podem ser aplicados in vitro na forma de soluções, por exemplo, soluções aquosas, e in vivo entericamente, parenteralmente, de forma vantajosa intravenosamente, por exemplo, como uma suspensão ou em solução aquosa. A dosagem in vitro pode variar de concentrações entre cerca de 10º molar e 10º molar. Uma quantidade terapeuticamente eficaz in vivo pode variar, dependendo da via de administração, entre cerca de 0,1-500 mg/kg ou entre cerca de 1-100 mg/kg.
[00241] O composto da presente invenção pode ser administrado simultaneamente com ou antes ou depois de um ou mais de outros agentes terapêuticos. O composto da presente invenção pode ser administrado — separadamente, pela mesma ou uma via de administração diferente ou juntos na mesma composição farmacêutica, tal como com outros agentes.
[00242] Em uma modalidade, a invenção fornece um produto que compreende um composto de fórmula (1) e pelo menos outro agente terapêutico como um preparado combinado para uso simultâneo, separado ou sequencial em terapia. Em uma modalidade, a terapia é o tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3K. Os produtos fornecidos como um preparado combinado incluem uma composição que compreende o composto de fórmula (|) e outro(s) agente(s) terapêutico(s) juntos na mesma composição farmacêutica ou o composto de fórmula (Il) e outro(s) agente(s) terapêutico(s) na forma separada, por exemplo, na forma de um kit.
[00243] Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula (1) e outro(s) agente(s) terapêutico(s). Opcionalmente, a composição farmacêutica pode compreender um veículo farmaceuticamente aceitável, conforme descrito acima.
[00244] Em uma modalidade, a invenção proporciona um Kit compreendendo duas ou mais composições farmacêuticas distintas, pelo menos uma das quais contém um composto de fórmula (1). Em uma modalidade, o kit compreende meios para reter separadamente as ditas composições, tais como um recipiente, garrafa com divisória ou folha de alumínio com divisória. Um exemplo de tal kit é uma embalagem de blisteri, conforme tipicamente usado para o acondicionamento de comprimidos, cápsulas e similares.
[00245] O KkKit da invenção pode ser usado para administrar diferentes formas de dosagem, por exemplo, oral e parenteral, para administração das composições separadas em intervalos de dosagem diferentes ou para titulação das composições separadas uma contra a outra. Para auxiliar o cumprimento, o kit da presente invenção compreende, tipicamente, instruções para administração.
[00246] Nas terapias combinadas da invenção, o composto da invenção e o outro agente terapêutico podem ser fabricados e/ou formulados pelo mesmo ou por diferentes fabricantes. Além disso, o composto da invenção e o outro terapêutico podem ser reunidos em uma terapia combinada: (i) antes de liberação do produto combinado para os médicos (por exemplo, no caso de um kit que compreende o composto da invenção e o outro agente terapêutico); (ii) pelo médico em si (ou sob a orientação do médico) pouco antes de administração; (ili) no paciente em si, por exemplo, durante administração sequencial do composto da invenção e outro agente terapêutico.
[00247] —Consequentemente, a invenção proporciona o uso de um composto de fórmula (1) para o tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PISK, em que o medicamento é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também proporciona o uso de outro agente terapêutico para o tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3K, em que o medicamento é administrado com um composto de fórmula (1).
[00248] A invenção também fornece um composto de fórmula (1) para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3SK, em que o composto de fórmula (1) é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção proporciona também outro agente terapêutico para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PISK, em que o outro agente terapêutico é preparado para administração com um composto de fórmula (1). A invenção também fornece um composto de fórmula (1) para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3K, em que o composto de fórmula (1) é administrado com outro agente terapêutico. A invenção proporciona também outro agente terapêutico para uso em um método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3K, em que o outro agente terapêutico é administrado com um composto de fórmula (1).
[00249] A invenção também proporciona o uso de um composto de fórmula (1) para o tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3K, em que o paciente foi anteriormente tratado (por exemplo, dentro de 24 horas) com outro agente terapêutico. A invenção também proporciona o uso de outro agente terapêutico para o tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade de enzimas PI3K, em que o paciente foi anteriormente tratado (por exemplo, dentro de 24 horas) com um composto de fórmula (1).
[00250] Os compostos de fórmula | podem ser administrados como o único ingrediente ativo ou em conjunto, por exemplo, como adjuvante a outros fármacos, por exemplo, agentes imunossupressores ou imunomoduladores ou outros agentes anti- inflamatórios, por exemplo, para o tratamento ou prevenção de rejeição aguda ou crônica a alo- ou xeno-enxerto ou doenças inflamatórias ou autoimunes, ou um agente quimioterapêutico, por exemplo, um agente antiproliferativo de células malignas. Por exemplo, os compostos de fórmula | podem ser usados em combinação com um inibidor de calcineurinay por exemplo, ciclosporina A ou FK 506; um inibidor de mMTOR, por exemplo, rapamicina, — 40-O-(2-hidroxietil)-rapamicina, CCI779, ABT578, AP23573, TAFA-93, biolimus-7 ou biolimus-9; uma ascomicina tendo propriedades imunossupressoras, por exemplo, ABT-281, ASM981, etc.; corticosteroides; ciclofosfamida; azatioprenoy metotrexato; leflunomida; mizoribina; ácido micofenólico ou sal; micofenolato de mofetila; 15-desoxispergualina ou um homólogo, análogo ou derivado imunossupressor da mesma; um inibidor de PKC, por exemplo, conforme descrito no documento WO 02/38561 ou WO 03/82859, por exemplo, o composto do Exemplo 56 ou 70; um inibidor de quinase JAKS, por exemplo, N-benzil-3,4-di-hidróxi-benzilideno- cianoacetamida, ar-ciano-(3,4-di-hidróxi)-]N-benzilcinamamida (Tyrphostin AG 490), prodigiosina 25-C (PNU156804), [4-(4"- hidroxifenil)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] (WHI-P131), [4-(3'-bromo-
4'-hidroxilfenil)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] (WHI-P154), [4-(3',5"- dibromo-4'-hidroxilfenil)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] WHI-P97, KRX-211, — 3X(SRAR)-4-metil-3-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-i1)- amino]-piperidin-1-il)-3-oxo-propionitrilo, na forma livre ou em uma forma de sal farmaceuticamente aceitável, por exemplo, monocitrato (também denominado CP-690.550) ou um composto conforme descrito no documento WO 04/052359 ou WO 05/066156; anticorpos monoclonais imunossupressores, por — exemplo, anticorpos monoclonais a receptores de leucócitos, por exemplo, MHC, CD?2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD52, CD58, CD80, CD86 ou seus ligantes; outros compostos imunomoduladores, por exemplo, uma molécula de ligação recombinante tendo pelo menos uma porção do domínio extracelular de CTLA4 ou um mutante do mesmo, por exemplo, pelo menos uma porção extracelular de CTLAA4 ou um mutante do mesmo unido a uma sequência de proteína não-CTLA4, por exemplo, CTLA41I/g (por exemplo, designado por ATCC 68629) ou um mutante do mesmo, por exemplo, LEA29Y; inibidores de moléculas de adesão, por exemplo, LFA-1, antagonistas de ICAM-1 ou -3, antagonistas de VCAM-4 ou antagonistas de VLA-4; ou anti-histamínicos; ou antitussígenos ou um agente broncodilatador; ou um bloqueadores de receptores da angiotensina; ou um agente anti-infeccioso.
[00251] Onde os compostos de fórmula | são administrados em conjunto com outra terapia imunossupressora/imunomoduladora, anti- inflamatória, quimioterapêutica ou antiiinfecciosa, dosagens do composto — imunossupressor, — imunomodulador, —anti-inflamatório, quimioterapêutico ou anti-infeccioso — coadministrado — podem, naturalmente, variar dependendo do tipo de cofármaco empregado, por exemplo, se ele é um esteroide ou um inibidor de calcineurina, do fármaco específico empregado, da condição a ser tratada e assim por diante.
[00252] Um composto da fórmula (|) também pode ser usado com vantagem em combinação uns com os outros ou em combinação com outros “agentes terapêuticos, especialmente outros agentes antiproliferativos. Tais agentes antiproliferativos incluem, porém sem limitações, inibidores de aromatase; antiestrogênios; inibidores de topoisomerase |; inibidores de topoisomerase |l; agentes microtúbulo ativos; agentes de alquilação; inibidores de deacetilase de histona; compostos que induzem a processos de diferenciação celular; inibidores de ciclo-oxigenase; inibidores de MMP; inibidores de mTOR; antimetabólitos antineoplásicos; compostos de platina; compostos que objetivam/diminuem a atividade de uma quinase de proteína ou lipídio e outros compostos antiangiogênicos; compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de uma fosfatase de proteína ou lipídio; agonistas de gonadorelina; antiandrogênios; inibidores de aminopeptidase de metionina; bisfosfonatos; modificadores de resposta biológica; anticorpos antiproliferativos; inibidores de heparanase; inibidores de isoformas oncogênicas de Ras; inibidores de telomerase; inibidores de proteassomo; agentes usados no tratamento de malignidades hematológicas; compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de FIt-3; inibidores de Hsp90; temozolomida (TEMODALº); e leucovorina.
[00253] O termo "inibidor de aromatase", conforme usado aqui, refere-se a um composto que inibe a produção de estrogênios, isto é, a conversão dos substratos androstenediona e testosterona em estrona e estradiol, respectivamente. O termo inclui, porém sem limitações, esteroides, especialmente atamestano, exemestano e formestano; e, em particular, não esteroides, especialmente aminoglutetimida, roglethimida, piridoglutetimida, trilostano, testolactona, cetoconazol, vorozola, fadrozola, anastrozola e letrozola.
Exemestano pode ser administrado, por exemplo, na forma como é ele comercializado, por exemplo, sob a marca comercial AROMASIN. Formestano pode ser administrado, por exemplo, na forma como é ele comercializado, por exemplo, sob a marca comercial Lentaron. Fadrozola pode ser administrada, por exemplo, na forma como é ela comercializada, por exemplo, sob a marca comercial AFEMA. Anastrozola pode ser administrada, por exemplo, na forma como é ela comercializada, por exemplo, sob a marca comercial ARIMIDEX. Letrozola pode ser administrada, por exemplo, na forma como é ela comercializada, por exemplo, sob a marca comercial FEMARA ou FEMAR. Aminoglutetimida pode ser administrada, por exemplo, na forma como é ela comercializada, por exemplo, sob a marca comercial ORIMETEN. Uma combinação da invenção compreendendo um agente quimioterapêutico o qual é um inibidor da aromatase é particularmente útil para o tratamento de tumores positivos para receptores hormonais, por exemplo, tumores de mama.
[00254] O termo "antiestrogênio", conforme usado aqui, refere-se a um composto que antagoniza o efeito de estrogênios ao nível do receptor de estrogênio. O termo inclui, porém sem limitações, tamoxifeno, fulvestrant, raloxifeno e cloridrato de raloxifeno. Tamoxifeno pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial NOLVADEX. Cloridrato de raloxifeno pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial EVISTA. Fulvestrant pode ser formulado conforme descrito na Patente dos Estados Unidos Nº 4.659.516 ou pode ser adminis trado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial FASLODEX. Uma combinação da invenção compreendendo um agente quimioterapêutico o qual é um antiestrogênio é particularmente útil para o tratamento de tumores positivos para o receptor de estrogênio, por exemplo, tumores de mama.
[00255] O termo "antiandrogênio", conforme usado aqui, refere-se à qualquer substância a qual é capaz de inibir os efeitos biológicos de hormônios androgênicos e inclui, porém sem limitações, bicalutamida (CASODEX), a qual pode ser formulada, por exemplo, conforme descrito na Patente dos Estados Unidos Nº 4.636.505.
[00256] O termo "agonista de gonadorelina", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, abarelix, goserelina e acetato de goserelina. Goserelina é descrita na Patente dos Estados Unidos Nº
4.100.274 e pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial ZOLADEX. Abarelix pode ser formulado, por exemplo, conforme descrito na Patente dos Estados Unidos Nº 5.843.901.
[00257] O termo "inibidor de topoisomerase |", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, topotecano, gimatecano, irinotecano, camptotecina e seus análogos, 9-nitrocamptotecina e o conjugado de camptotecina — macromolecular PNU-166148 (composto Al no documento WO 99/17804). Irinotecano pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial CAMPTOSAR. Topotecano pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial HYCAMTIN.
[00258] O termo "inibidor de topoisomerase II", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, as antraciclinas, tal como doxorrubicina, incluindo formulação lipossômica, por exemplo, CAELYX; daunorrubicina; epirrubicina; idarrubicina; nemorubicina; as antraquinonas mitoxantrona e losoxantrona; e as podofilotoxinas etoposídeo e teniposídeo. Etoposídeo pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial NEXVEP. Teniposídeo pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial VM 26-BRISTOL. Doxorrubicina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial ADRIBLASTIN ou ADRIAMYCIN. Epirubicina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial FARMORUBICIN. Idarrubicina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial ZAVEDOS. Mitoxantrona pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial NOVANTRON.
[00259] O termo "agente microtúbulo ativo" refere-se à agentes de estabilização de microtúbulos, agentes de desestabilização de microtúbulo e inibidores de polimerização de microtubulina incluindo, porém sem limitações, taxanos, por exemplo, paclitaxel e docetaxel; vinca alcaloides, por exemplo, vinblastina, especialmente sulfato de vinblastina; vincristina, especialmente sulfato de vincristina e vinorelbina; discodermolidas; cochicina; e epotilonas e derivados das mesmas, por exemplo, epotilona B ou D ou derivados das mesmas. Paclitaxel pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemploy TAXOL. Docetaxel pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial TAXOTERE. Sulfato de vinblastina pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial VINBLASTIN R.P. Sulfato de vincristina pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial FARMISTIN. Discodermolida pode ser obtida, por exemplo, conforme descrito na Patente dos Estados Unidos Nº 5.010.099 . Também estão incluídos derivados de epotilona, os quais são descritos no documento
WO 98/10121, Patente dos Estados Unidos Nº 6.194.181, documentos WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 e WO 00/31247. Especialmente preferidas são epotilona A e/ou B.
[00260] O termo "agente de alquilação", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalano ou nitrosoureia (BCNU ou Gliadel). A ciclofosfamida pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial CYCLOSTIN. A ifosfamida pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial HOLOXAN.
[00261] O termo "inibidores de deacetilase de histona" ou "inibidores de HDAC" refere-se a compostos os quais inibem a deacetilase de histona e que possuem atividade antiproliferativa. Isto inclui “compostos descritos no documento WO 02/22577, especialmente N-hidróxi-3-[4-[[(2-hidroxietil)[2-(1H-indol-3-il )etil]- amino]metil]fenil]|-2E-2-propenamida, N-hidróxi-3-[4-[[[2-(2-metil-1 H- indol-3-il)-etil]--amino]metil]fenil]-2E-2-propenamida e sais farmaceuticamente — aceitáveis dos mesmos. Ele ainda inclui especialmente inclui ácido suberoilanilida hidroxâmico (SAHA).
[00262] O termo "antimetabólito antineoplásico" inclui, porém sem limitações, 5-fluorouracila ou 5-FU; capecitabina; gemcitabina; agentes de desmetilação de DNA, tais como 5-azacitidina e decitabina; metotrexato e edatrexato; e antagonistas de ácido fólico, tal como pemetrexed. A capecitabina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial XELODA. A gemrcitabina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial GEMZAR. Também incluído é o anticorpo monoclonal trastuzumab, o qual pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial HERCEPTIN.
[00263] O termo "composto de platina", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, carboplatina, cis-Platina, cisplatina e oxaliplatina. A carboplatina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial CARBOPLAT. A oxaliplatina pode ser administrada, por exemplo, na forma como ela é comercializada, por exemplo, sob a marca comercial ELOXATIN.
[00264] O termo "compostos que objetivam/diminuem a atividade de quinase de proteína ou lipídio; ou uma atividade de fosfatase de proteína ou lipídio; ou outros compostos antiangiogênicos", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, inibidores de tirosina quinase de proteína e/ou quinase de serina e/ou treonina ou inibidores de quinase de lipídios, por exemplo:
[00265] — compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de receptores do fator de crescimento derivado de plaquetas (Platelet- Derived Growth Factor-Receptor - PDGFR), tais como compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de PDGFR, especialmente compostos que inibem o receptor de PDGF, por exemplo, um derivado de N-fenil-2-pirimidina-amina, por exemplo, imatinib, SU101, SU6668 e GFB-111;
[00266] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de receptores de fator de crescimento de fibroblastos (Fibroblast Growth Factor-Receptor - FGFR);
[00267] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade do receptor de fator de crescimento | similar à insulina (IGF-IR), tal como compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de IGF-IR, especialmente compostos que inibem o receptor de IGF-IR, tais como os compostos descritos no documento WO 02/092599;
[00268] “compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade da família de tirosina quinase de receptor Trk;
[00269] — compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade da família de tirosina quinase de receptor Axl;
[00270] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade do receptor c-Met;
[00271] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de tirosina quinase do receptor Ki/SCFR;
[00272] — compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de quinases de tirosina do receptor C-kit - (parte da família PDGFR), tais como compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade da família de tirosina quinase do receptor c-Kit, especialmente compostos que inibem o receptor c-kit, por exemplo, imatinib;
[00273] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de membros da família c-Abl e seus produtos de fusão gênica, por exemplo, quinase BCR-AblI, tais como compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de membros da família c-ABI e os produtos de fusão gênica, por exemplo, um derivado de N-fenil-2- pirimidina-amina, por exemplo, imatinib, PD180970, AG957, NSC 680410 ou PD173955 da ParkeDavis;
[00274] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de membros da família de quinase de proteína C (PKC) e Raf de quinases de serina/treonina, membros das famílias MEK, SRC, JAK, FAK, PDK e Ras/MAPK ou a família de quinases PI(3) ou da família de quinases relacionada à quinase PI(3) e/ou membros da família de quinases dependentes de ciclina (CDK) e são, especialmente, aqueles derivados de estaurosporina descritos na Patente dos Estados Unidos Nº 5.093.330, por exemplo, midostaurina; exemplos de outros compostos incluem, por exemplo, UCN-01; safingol; BAY 43-9006; Briostatina 1; perifosina; ilmofosina; RO 318220 e RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; compostos de isoquinolina, tais como aqueles descritos no documento WO 00/09495; FTIls;
PD184352; ou QAN697 (um inibidor de P13K);
[00275] compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de inibidores de tirosina quinase de proteína, tais como compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de inibidores de tirosina quinase de proteína, incluindo mesilato de imatinib (GLEEVEC) ou tirfostina. Uma tirfostina é, de preferência, um composto de baixo peso molecular (Mr < 1500) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, especialmente um composto selecionado da classe benzilidenomalonitrilo ou da classe de compostos de bisubstrato de S- arilbenzenomalonitrilo ou quinolina,y, mais especialmente qualquer composto selecionado do grupo que consiste em Tirfostina A23/RG- 50810, AG 99, Tirfostina AG 213, Tirfostina AG 1748, Tirfostina AG 490, Tirfostina B44, enantiômero (+) de Tirfostina B44, Tirfostina AG 555, AG 494, Tirfostina AG 556, AG957 e adamantil éster de ácido (44[(2,5-di-hidroxifenil)]metilJamino)-benzóico, NSC 680410, adafostina; e
[00276] “compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade da família de quinases de tirosina do fator de crescimento epidérmico (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 como hetero- ou homodímeros), tais como compostos os quais objetivam, diminuem ou inibem a atividade da família do receptor do fator de crescimento epidérmico, especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem membros da família de tirosina quinase do receptor de EGF, por exemplo, receptor de EGF, ErbB2, ErbB3 e ErbB4 ou se ligam ao EGF ou ligantes relacionados ao EGF e são, em particular, aqueles compostos, proteínas ou anticorpos monoclonais genérica e especificamente descritos no documento WO 97/02266, por exemplo, o composto do Exemplo 39, ou nos documentos EP O 564 409; WO 99/03854; EP 0520722; EP O 566 226; EP O 787 722; EP O 837 063; Patente dos Estados Unidos Nº 5.747.498; WO 98/10767; WO
97/30034; WO 97/49688; WO 97/38983 e, especialmente, documento WO 96/30347, por exemplo, o composto conhecido como CP 358774; documento WO 96/33980, por exemplo, composto ZD 1839; e documento WO 95/03283, por exemplo, o composto ZM105180, por exemplo, trastuzumab (HERCEPTIN), cetuximab, Iressa, Tarceva, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E64, E2.11, E6.3 ou E7.6.3; e derivados de 7H-pirrolo-[2,3-d]pirimidina, os quais são descritos no documento WO 03/013541.
[00277] Outros compostos antiangiogênicos incluem compostos tendo outro mecanismo para sua atividade, por exemplo, sem relação com a inibição de quinase de proteína ou de lipídio, por exemplo, talidomida (THALOMID) e TNP-470.
[00278] “Compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de uma fosfatase de proteína ou lipídio são, por exemplo, inibidores de fosfatase 1, fosfatase 2A, PTEN ou CDC25, por exemplo, ácido ocadaico ou um derivado do mesmo.
[00279] “Compostos que induzem a processos de diferenciação celular são, por exemplo, ácido retinoico, a- 7- ou ô-tocoferol ou a- y- ou ô-tocotrienol.
[00280] O termo inibidor de ciclo-oxigenase, conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, por exemplo, inibidores de Cox-2, ácido 2-arilaminofenilacético 5-alquil-substituídos e derivados, tais como celecoxib (CELEBREX), rofecoxib (VIOXX), etoricoxib, valdecoxib ou um ácido 5-alquil-2-arilaminofenilacético, por exemplo, ácido 5-metil-2- (2'-cloro-6'-fluoroanilino)fenil acético ou lumiracoxib.
[00281] O termo "bisfosfonatos", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, ácido etridônico, clodrônico, tiludrônico, pamidrônico, alendrônico, ibandrônico, risedrônico e zoledrônico. "Ácido etridônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial DIDRONEL.
77I374 "Ácido clodrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial BONEFOS. "Ácido tiludrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial SKELID. "Ácido pamidrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial AREDIATY, "Ácido alendrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial FOSAMAX. "Ácido ibandrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial BONDRANAT. "Ácido risedrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial ACTONEL. "Ácido zoledrônico" pode ser administrado, por exemplo, na forma como ele é comercializado, por exemplo, sob a marca comercial ZOMETA.
[00282] O termo "inibidores de mMTOR" refere-se a compostos os quais inibem o alvo de rapamicina em mamíferos (mMTOR) e os quais possuem atividade antiproliferativa, tais como sirolimus (Rapamuneº), everolimus (Certican'"), CCI-779 e ABT578.
[00283] O termo "inibidor de heparanase", conforme usado aqui, refere-se a compostos que objetivam, diminuem ou inibem a degradação de sulfato de heparina. O termo inclui, porém sem limitações, PI-88.
[00284] O termo "modificador de resposta biológica", conforme usado aqui, refere-se a uma linfocina ou interferons, por exemplo, interferon y.
[00285] O termo "inibidor de isoformas oncogênicas de Ras", por exemplo, H-Ras, K-Ras ou N-Ras, conforme usado aqui, refere-se a compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade oncogênica de Ras, por exemplo, um "inibidor de farnesil transferase", por exemplo, L-744832, DK8G557 ou R115777 (Zarnestra).
[00286] O termo "inibidor de telomerase", conforme usado aqui, refere-se a compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade da telomerase. Compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de telomerase são especialmente compostos que inibem o receptor de telomerase, por exemplo, telomestatina.
[00287] O termo "inibidor de aminopeptidase de metionina ", conforme usado aqui, refere-se a compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de aminopeptidase de metionina. Compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de aminopeptidase de metionina são, por exemplo, bengamida ou um derivado da mesma.
[00288] O termo "inibidor de proteassomo", conforme usado aqui, refere-se a compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de proteassomo. Compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de proteassomo incluem, por exemplo, PS-341 e MLN 341.
[00289] O termo "inibidor de metaloproteinase da matriz" ou "inibidor de MMP", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, inibidores peptidomiméticos não peptidomiméticos de colágeno, derivados de tetraciclina, por exemplo, o inibidor peptidomimético de hidroxamato batimastat e seu análogo oralmente biodisponível marimastat (BB-2516), prinomastat (AG3340), metastat (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B ou AAJ996.
[00290] O termo "agentes usados no tratamento de malignidades hematológicas", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, inibidores de tirosina quinase de tipo fms, por exemplo, compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de receptores de tirosina quinase de tipo FMS (FIt-3R); interferon, 1-b-D-arabinofuransilcitosina (ara-c) e bisulfan; e inibidores de ALK, por exemplo, compostos que objetivam, diminuem ou inibem a quinase de linfoma anaplástico.
[00291] Os compostos os quais objetivam, diminuem ou inibem a atividade de receptores de tirosina quinase de tipo fms (FIt-3R) são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem membros da família de receptores de quinase FIt-3R, por exemplo, PKC412, midostaurina, um derivado de estaurosporina, SU11248 e MLNB518.
[00292] O termo "inibidores de HSP90", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de ATPase intrínseca de HSP90; degradam, objetivam, diminuem ou inibem as proteínas clientes HSP90 através da via proteassômica de ubiquitina. Compostos que objetivam, diminuem ou inibem a atividade de ATPase intrínseca de HSP90 são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem a atividade de ATPase de HSP90, por exemplo, 17-alilamino, 17-demetoxigeldanamicina (17AAG), um derivado de geldanamicina, outros compostos relacionados à geldanamicina, radicicol e inibidores de HDAC.
[00293] O termo "anticorpos antiproliferativos", conforme usado aqui inclui, porém sem limitações, trastuzumab (HerceptinTY), Trastuzumab- DM1, erlotinib (Tarceva'"), bevacizumab (Avastin'Y), rituximab (RituxanO), PRO64553 (anti-CD40) e anticorpo 2C4. Por anticorpos entenda-se, por exemplo, anticorpos monoclonais intactos, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos formados a partir de pelo menos dois anticorpos intactos e fragmentos de anticorpos, contanto que eles exibam a atividade biológica desejada.
[00294] Para o tratamento de leucemia mieloide aguda (Acute Myeloid Leukemia - AML), os compostos de fórmula (|) podem ser usados em combinação com terapias padrão para leucemia, especialmente em combinação com terapias usadas para o tratamento de AML. Em particular, os compostos de fórmula (1) podem ser administrados em combinação, por exemplo, com inibidores de farnesil-transferase e/ou outros fármacos úteis para o tratamento de
AML, tais como Daunorrubicinay Adriamicina,y, Ara-C, VP-16, Teniposídeo, Mitoxantrona, idarrubicina, Carboplatina e PKC412.
[00295] Um composto da fórmula (|) também pode ser usado com vantagem em combinação uns com os outros ou em combinação com outros “agentes terapêuticos, especialmente outros agentes antimalária. Tais agentes antimalária incluem, porém sem limitações, proguanil, — cloroproguanil, trimetoprim, —cloroquinay mefloquina, lumefantrina, atovacona, pirimetamina-sulfadoxina, pirimetamina- dapsona, halofantrina, quinina, quinidina, amodiaquina, amopiroquina, sulfonamidas, — artemisinina, — artefleno, — artemether, — artesunato, primaquina, NO inalado, L-arginina, nonoato de dipropilenotriamina (doador de NO), Rosiglitzona (agonista de PPARy), carvão ativado, eritropoietina, Levamisola e pironaridina.
[00296] Um composto da fórmula (|) também pode ser usado com vantagem em combinação uns com os outros ou em combinação com outros agentes terapêuticos, tais como aqueles usados para o tratamento de leishmaniose, tripanossomíase, toxoplasmose e neurocisticercose. Tais agentes incluem, porém sem limitações, sulfato de cloroquina, atovaquona-proguanil, artemether-lumefantrina, sulfato de quinina, artesunato, quinina, doxiciclina, clindamicina, antimoniato de meglumina, estibogluconato de sódio, miltefosina, cetoconazol, pentamidina, anfotericina B (AMB), AmB lipossômico, paromomicina, eflornitina, nifurtimox, — suramina, melarsoprol, — prednisolona, benzonidazol, sulfadiazina, pirimetamina, clindamicina, trimetropim, sulfametoxazol, azitromicina, atovacona, dexametasona, praziquantel, albendazol, beta-lactâmicos, fluoroquinolonas, macrolídeos, aminoglicosídeos, sulfadiazina e pirimetamina.
[00297] A estrutura dos agentes ativos identificada por números de código, nomes genéricos ou comerciais pode ser retirada da edição atual do compêndio padrão "The Merck Index" ou de bancos de dados,
por exemplo, Patentes Internacionais, por exemplo, IMS Weorld Publications.
[00298] Os compostos mencionados acima, os quais podem ser usados em combinação com um composto da fórmula (1), podem ser preparados e administrados conforme descrito na técnica, tal como nos documentos citados acima.
[00299] Um composto da fórmula (|) também pode ser usado com vantagem em combinação com processos terapêuticos conhecidos, por exemplo, a administração de hormônios ou especialmente radiação.
[00300] Um composto de fórmula (1) pode, em particular, ser usado como um radiossensibilizador, especialmente para o tratamento de tumores que exibem uma fraca sensibilidade à radioterapia.
[00301] Por "combinação", entenda-se uma combinação fixa de uma forma de unidade de dosagem ou um Kkit de partes para administração combinada, em que um composto da fórmula (|) e um parceiro de combinação podem ser administrados independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro de intervalos de tempo que permitem especialmente que os parceiros da combinação mostrem um efeito cooperativo, por exemplo, sinergístico, ou qualquer combinação dos mesmos. Os termos "coadministração" ou "administração conjunta" ou similar, conforme usado aqui, se destinam a abranger a administração do parceiro de combinação selecionado a um único indivíduo que precisa do mesmo (por exemplo, um paciente) e se destinam a incluir regimes de tratamento nos quais os agentes não são administrados necessariamente pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo. O termo "combinação farmacêutica", conforme usado aqui, significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais de um ingrediente ativo e inclui tanto combinações fixas quanto não fixas de ingredientes ativos. O termo "combinação fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um composto de fórmula | e um parceiro de combinação, são ambos administrados a um paciente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. O termo "combinação não fixa" significa que os ingredientes ativos, por exemplo, um composto de fórmula (1) e um parceiro de combinação, são ambos administrados a um paciente como entidades distintas, quer simultânea, concorrente ou sequencialmente, sem limites de tempo específicos, em que tal administração confere níveis terapeuticamente eficazes dos dois compostos no corpo do paciente. Este último também se aplica à terapia de coquetel, por exemplo, a administração de três ou mais ingredientes ativos.
EXEMPLOS Detalhes experimentais:
[00302] Os exemplos a seguir se destinam a ilustrar a invenção e não devem ser interpretados como limitativos da mesma.
[00303] As temperaturas são fornecidas em graus Celsius. A menos que de outro modo mencionado, todas as evaporações são realizadas sob pressão reduzida, tipicamente entre cerca de 15 mm Hg e 100 mm Hg (= 20-133 mbar). A estrutura dos produtos finais, intermediários e materiais de iniciação é confirmada através de métodos analíticos padrões, por exemplo, microanálise e características espectroscópicas, por exemplo, MS, IR, RMN. As abreviaturas usadas são aquelas convencionais na técnica.
[00304] Todos os materiais de iniciação, blocos de construção, reagentes, ácidos, bases, agentes de desidratação, solventes e catalisadores usados para síntese dos compostos da presente invenção estão comercialmente disponíveis ou podem ser produzidos por meio de métodos de síntese orgânica conhecidos por aqueles versados na técnica (Houben-Weila 4º Ed. 1952, Methods of Organic
Synthesis, Thieme, Volume 21). Além disso, os compostos da presente invenção podem ser produzidos por meio de métodos de síntese orgânica conhecidos por aqueles versados na técnica, conforme mostrado nos exemplos a seguir.
Abreviações ACN acetonitrila AcOH ácido acético aq. aquoso Boc terc-butoxicarbonila Boc2O dicarbonato de di-terc-butila tBu terc-butila tBuOH terc-butanol BrettPhos 2-(Diciclo-hexilfosfofino)-3,6-dimetóxi-2'-4"- 6'-tri-isopropil- 1,1'-bifenila brs simples amplo COMU hexafluorofosfato de (1I-ciano-2-etóxi-2- oxoetilidenamino-óxi)dimetilamino- morfolino-carbênio conc. concentrado d dia(s) d dupla dd dupla de duplas dba dibenzilidenoacetona DCM diclorometano DEA dietilamina DEAD azodicarboxilato de dietila DEAP dietilaminopiridina DIPEA di-isopropiletilamina DMF dimetilformamida DMME dimetóximetano DMSO sulfóxido de dimetila DPPA azida de difenilfosforila
DPPF 1,1'-bis(difenilfosfofino)ferroceno
EDC cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodi-imida eq. equivalente(s)
ES! ionização por eletropulverização
Et;N trietilamina
Et;O dietil éter
EtOAc acetato de etila
EtoH etanol h hora(s)
HATU hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol- 1-il)-N, N, N', N'-tetrametilurônio
HBTU hexafluorofosfato de O-(1H-benzotriazol-1- i)-N, N, N', N'-tetrametilurônio
HMDS hexametildi-silazano
HOBT 1-hidróxi-benztriazo|
HPLC cromatografa —de líquido de alto desempenho
IPA isopropanol
LCMS cromatografia de líquido com espectrometria de massa mCPBA ácido meta-cloroperoxibenzóico
MeOH metanol m múltiplo min minuto(s)
MS espectrometria de massa mw micro-ondas
RMN espectrometria de ressonância magnética nuclear
NaOtBu terc-butóxido de sódio
NP fase normal
OBD densidade ótima de leito
Pd>2(dba);3 tris(dibenzilidenoacetona)dipaládio
PL-HCO;3 MP SPE cartucho de bicarbonato suportado em polímero para remoção de ácido prep. preparativa PPh3 trifenilfosfina q quarteto Rac-BINAP 2,2'-bis(di-p-tolilfosfofino)-1,1"-binaftil racêmico RP fase reversa Rt tempo de retenção rt temperatura ambiente RuPhos 2-diciclo-hexilfosfofino-2',6'-di-isopropóxi- 1,1'-bifenil sat. saturado SCX-2 poliestireno macroporoso de ácido sulfônico suportado em polímero soln. solução t tripla TBME metil terc-butil éter TBAF fluoreto de tetrabutilamônio TBDMSCI cloreto de terc-butildimetil-silila Tetrametil-t-butila-XPhos 2-di-t-butilfosfofino-3,4,5,6-tetrametil-2',4',6"- tri-isopropilbifenila TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano TLC cromatografia de camada fina UPLC cromatograffa de líquido de ultra desempenho XPhos 2-diciclo-hexilfosfofino-2',4',6'-tri- isopropilbifenila Pa[RuPhos] (2-diciclo-hexilfosfofino-2',6'-di-isopropil- 1,1'-bifenil)(2-(2-aminoetil)feni!)paládio(!1|)
[00305] Equipamento de micro-ondas usado é um Biotage Initiatorº.
[00306] “Todos os compostos são nomeados usando AutoNom.
EXEMPLOS DE PREPARO — PROCEDIMENTOS GERAIS ESQUEMA 1 | Ho. ã Ho. o h 0:27 õ TO mnA—, TIA, Tm—, OA, (R)-pirrolidin-3-o] " " é H o. Ra ã 5 Rn E CX OX, E CI CA, DS V Re AR vm ' D TE
[00307] (R)-pirrolidin-3-0l e um cloreto ácido de fórmula RC(O)CI ou ácido carboxílico de fórmula RC(O)JOH foram reagidos para preparar uma amida de fórmula geral Il. Aqueles versados na técnica apreciarão que existem muitas formas conhecidas de preparo de amidas. Por exemplo, vide Mantalbetti, C.A.G.N e Falque, V., Amide Bond Formation and Peptide Coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), páginas 10827-10852 e referências citadas no mesmo. Os métodos gerais i — ii a seguir foram usados.
[00308] Uma solução de ácido carboxílico e DMF (1 eq.) em DCM foi tratada com cloreto de oxalila (1,5 eq.) durante 1 h a 3T. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em DCM e adicionada a uma solução de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-ol (1,0 eq.) e Et;N (2,5 eq.) em DCM a 3T. A mistura resultante foi agitada vigorosamente a 3C durante 1h e, então, concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com EtOAc e filtrado. O resíduo foi lavado com EtOAc e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida e purificados por meio de cromatografia rápida.
[00309] “Uma solução de um cloreto ácido comercial (1,0 eq.) em DCM foi adicionada a uma solução de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-ol
(1,0 eq.) e Et;N (2,5 eq.) em DCM a 3T. A mistura resultante foi agitada vigorosamente a 3 durante 1 h e, então, concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com EtOAc e filtrado. O resíduo foi lavado com EtOAc e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida e purificados por meio de cromatografia rápida. Condições típicas para reações de formação de amida são exemplificas na seção B) Condições para formação de ligação de amida abaixo.
[00310] Os mesilatos dos compostos de fórmula geral Il foram preparados através de condições de rotina, de preferência, por meio de reação de de Il com cloreto de metanossulfonila (2 eq.) e Et;N (2 eq.) em DCM a OC.
[00311] “Compostos de fórmula geral V foram preparados por meio de reação de de 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-0l IV com compostos de fórmula geral Ill na presença uma base adequada, tal como hidreto de sódio (NaH) e solvente orgânico polar, tal como DMF, sob condições de gás inerte a 50º. Condições normais para tais reações são exemplificadas na seção C) Condições para introdução de cadeia lateral abaixo.
[00312] — Acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig entre V e um halogeneto de arila de fórmula geral R-X', onde X'=bromo ou iodo, foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais usando uma combinação de ligante/catalisador de Pd tal como, de preferência, Pd2(dba)3/2-(diciclo-hexilfosfofino)bifenila ou Pd>2(dba)z3/2-diciclo- hexilfosfofino-2',4' 6"-tri-isopropil-bifenila ou bis(tri-t-butilfosfina)paládio e uma base tal como, de preferência, NaOtBu, e solvente orgânico tal como, de preferência, tolueno. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 80-120T, de pre ferência 110C e foi, de preferência, realizada em um reator de micro-ondas. A reação foi, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio. Os compostos finais foram purifcados por meio de cromatografia de fase normal ou reversa. Condições típicas para reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na seção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo. ESQUEMA 2
H H CO” a COMA o o Ro o vm " vI TAL R'=Ms,H ú o , o” c vn LO Tie — Re AAR x R? 2 N o, q R R CO [ON — CONTA, x vI
[00313] 3-((3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)óxi)pirrolidina-1- carboxilato de (S)-terc-butila (composto VII) foi preparado por meio de reação de 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-0l IV com um composto de fórmula geral VIl através de um dos métodos a seguir 1) para X=mesilato, compostos IV e VII foram reagidos na presença uma base adequada, tal como hidreto de sódio (NaH) e um solvente orgânico polar DMF sob condições de gás inerte em temperatura ambiente ii) para X = H, compostos de fórmula geral IV e VII foram reagidos usando condições de Mitsunobu habituais, de preferência usando Ph3P (1,4 eq.) e DEAD (1,4 eq.) em solvente orgânico, tal como THF, sob condições de gás inerte em uma temperatura, de preferência, de
TOC. Condições típicas para tais reações são exemp lificadas na seção C) Condições para introdução de cadeia lateral abaixo.
[00314] —Acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig entre VIII e um halogeneto arila de fórmula geral R2X', onde X'=bromo ou iodo, foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais usando uma combinação de ligante/catalisador de Pd tal como, de preferência, Pd>(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)//(rac)-BINAP ou bis(tri-t-butilfosfina)paládio e uma base tal como, de preferência, NaOtBu, Cs,CO; ou K3PO,, e um solvente orgânico tal como, de preferência, tolueno, dioxano ou THF. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 60-120UT e foi, de preferência, realizada em um reator de micro-ondas. A reação foi, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio. Condições típicas para reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na seção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo.
[00315] Desproteção de N-BOC de compostos de fórmula geral IX foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais usando, dentre os ácidos possíveis, de preferência, ácido trifluoroacético e solvente orgânico, de preferência, DCM. A reação foi, de preferência, realizada em temperatura ambiente.
[00316] Um composto da fórmula geral X e um cloreto ácido de fórmula R(C(O)CI ou um ácido carboxílico de fórmula R(C(O)OH foram reagidos para preparar uma amida de fórmula geral VI usando condições de acoplamento de amida habituais: além dos métodos descritos no Esquema 1, etapa a), reagentes de acoplamento preferidos foram HBTU, HOBVEDC, COMU/DIPEA. Os acoplamentos foram realizados em um solvente orgânico tal como, de preferência, DMF ou DCM e os compostos finais foram purificados por meio de cromatografia de fase normal ou reversa. Condições típicas para reações de formação de ligação de amida são exemplificadas na seção B) Condições para formação de ligação de amida abaixo. ESQUEMA 3 NM OH a o Sã OD — O Ww xl b o. / c OH —b QN <S e Zon RX" CO S Y ÇÃO R= SO x xm ue d Á O, o SS O Cr º é Cx v
[00317] 3,4-Di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-0l IV foi O-protegido usando procedimentos padrões de sililação usando um reagente de sililação, de preferência TBDMSCI, e uma base, de preferência NaH, em um solvente orgânico, de preferência THF, em temperatura ambiente.
[00318] —Acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig entre Xl e um halogeneto arila de fórmula geral R2X, onde X'=bromo ou iodo, foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais usando uma combinação de ligante/catalisador de Pd tal como, de preferência, Pd2(dba)3/X-Phos, Pd>2(dba)3/diciclo-hexilfosfofino-2",4',6"-tri- isopropilbifenila ou bis(tri-t-butilfosfina)-paládio e uma base tal como, de preferência, NaOtBu, e um solvente orgânico tal como, de preferência, tolueno. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 110-140%C e foi, de preferência, realizada em um reator de micro-ondas. A reação foi, de preferência,
realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio. Condições típicas para reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na seção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo.
[00319] “Desproteção de O-TBDMS de compostos de fórmula geral XII foi realizada sob condições de desproteção habituais usando, de preferência, TBAF e um solvente orgânico, de preferência THF. A reação foi, de preferência, realizada em temperatura ambiente.
[00320] Compostos de fórmula geral XIIl foram acoplados com mesilatos de fórmula geral Ill usando uma base adequada tal como, de preferência, hidreto de sódio (NaH) ou K2CO;, e um solvente orgânico polar, tal como DMF, sob condições de gás inerte em temperatura ambiente ou temperaturas elevadas até 100º. Os com postos finais foram purificados por meio de cromatografia de fase normal ou reversa. Condições típicas para tais reações são exemplificadas na seção C) Condições para introdução de cadeia lateral abaixo. ESQUEMA 4 R? RR N OH a N O, o O O O Te xIm ROO 4 xIv ur W o W=O, CH, , R'=Ms, H Ri = Ae ve Rº RR b N O, e N o o — OO Coe, o o w R xVvV VI
[00321] “Compostos de fórmula geral XIIll (preparados conforme descrito no Esquema 3) foram reagidos com compostos de fórmula geral VII por meio de um dos métodos a seguir 1) para X=mesilato, compostos XIII e VII foram reagidos na presença uma base adequada, tal como hidreto de sódio (NaH), e um solvente orgânico polar DMF sob condições de gás inerte em temperatura ambiente; ii) para X = H, compostos de fórmula geral XIll e VII foram reagidos usando condições de Mitsunobu habituais, de preferência usando Ph;3P (1,4 eq.) e DEAD (1,4 eq.) em um solvente orgânico, tal como THF, sob condições de gás inerte em uma temperatura, de preferência, de 70C. Condições típicas para tais reações são exemplificadas na seção C) Condições para introdução de cadeia lateral abaixo.
[00322] Desproteção de N-BOC foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais usando, dentre os ácidos possíveis, de preferência, ácido trifluoroacético, e um solvente orgânico, de preferência CH2.Cli. A reação foi, de preferência, realizada em temperatura ambiente.
[00323] Formação de ligação de amida foi realizada usando compostos de fórmula geral XV e um cloreto ácido de fórmula RºC(O)CI ou ácido carboxílico de fórmula R'C(O)JOH para preparar uma amida de fórmula geral VI; condições de acoplamento para ligação de amida habituais, conforme descrito no Esquema 1, etapa a), foram usadas. Além dos métodos descritos no Esquema 1, etapa a), acoplamento de ácidos carboxílicos usando HOBVEDC ou acoplamento usando cloroformatos ou cloretos carbâmicos foi usado. Os acoplamentos foram realizados em um solvente orgânico tal como, de preferência, DMF ou DCM, e os compostos finais foram purificados por meio de cromatografia de fase normal ou reversa. Condições típicas para reações de formação de ligação de amida são exemplificadas na seção B) Condições para formação de ligação de amida abaixo. ESQUEMA 5
H CO = O T — o RN E RN RX XVI XVI Rà= O vue
R R NAC c N OH O = OO o o 2 XVII XxX
R S C Se CO A e V o Dr N < — 8-0, 2N o oO o o Al xXx vII
R R 7 NRO, f NAO», p CO O: CO O o o XXI xxII
[00324] 7-Cloro-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina XVII foi preparada a partir de 7-cloro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4Joxazin-2-o0na XVI por meio de métodos de redução habituais usando, como agente de redução, de preferência BH3*THF e, como solvente, de preferência THF. XVI está disponível via nitração de fluxo de 2-cloro-5-(2-metóxi-2- oxoetóxi)piridina-1-óxido, seguido por redução e ciclização.
[00325] —Acoplamento cruzado entre XVII e um halogeneto de arila de fórmula geral RºX', onde X'=bromo ou iodo, foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais usando uma combinação de ligante/catalisador de Pd, tal como, de preferência, Pd2-(dba)3/X-Phos,
e uma base tal como, de preferência, Cs.CO;z, e um solvente orgânico tal como, de preferência, dioxano. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 100º e poderia ser realizada em um reator de micro-ondas. A reação foi, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio. Condições típicas para reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na seção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo.
[00326] Hidroxilação de XVIII foi realizada usando KOH aquoso e uma combinação de ligante/catalisador de Pd tal como, de preferência, Pd>(dba);3/tetrametil-terc-butil-Xphos e um solvente orgânico tal como, de preferência, dioxano. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 100. A reação foi, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio.
[00327] —Acoplamento de um composto de fórmula geral XIX com um composto de fórmula geral VII foi realizado usando uma base adequada, tal como hidreto de sódio (NaH, Cs.CO3, K2CO;3) e um solvente orgânico polar, tal como DMF, sob condições de gás inerte em uma temperatura, de preferência, de 60-80ºC. Con dições típicas para tais reações são exemplificadas na seção C) Condições para introdução de cadeia lateral abaixo.
[00328] Desproteção de N-BOC foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais usando, dentre os ácidos possíveis, de preferência, ácido trifluoroacético, e um solvente orgânico, de preferência, CH.Cl.. A reação foi, de preferência, realizada em temperatura ambiente.
[00329] Formação de ligação de amida foi realizada usando compostos de fórmula geral XXI e um cloreto ácido de fórmula RÍC(OJCI ou ácido carboxílico de fórmula RÍC(O)JOH para preparar uma amida de fórmula geral XXIl; condições de acoplamento para ligação de amida habituais, conforme descrito no Esquema 1, etapa a) foram usadas. Além disso, acoplamento de ácidos carboxílicos usando HOBtUEDC foi realizado. Os acoplamentos foram feitos em um solvente orgânico tal como, de preferência, DMF ou DCM, e os compostos finais foram purificados por meio de cromatografia de fase normal ou reversa. Condições típicas para reações de formação de ligação de amida são exemplificadas na seção B) Condições para formação de ligação de amida abaixo. ESQUEMA 6 N AA a “ > OH b GO O a xvI xx o Or
VI N RO». A e STA P CO oteTo OOo XXXIV 2 : 7 R=/ CY xx uv” d É W o SA COMO" EA COMO, xx xxI
[00330] Hidroxilação de 7-cloro-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4)Oxazina — XVIl para fornecer 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,4]oxazin-7-0l XXIII foi realizada usando KOH aquoso e uma combinação de ligante/catalisador de Pd tal como, de preferência, Pd>(dba);3/tetrametil-terc-butil-Xphos e um solvente orgânico tal como, de preferência, dioxano. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 100. A reação foi, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio.
[00331] —Acoplamento do composto XXIIl com mesilato VII foi realizado usando uma base adequada, tal como hidreto de sódio (NaH), e um solvente orgânico polar, tal como DMF, sob condições de gás inerte em uma temperatura, de preferência, de 80º. Condições típicas para tais reações são exemplificadas na seção C) Condições para introdução de cadeia lateral abaixo.
[00332] — Acoplamento cruzado entre XXIV e um halogeneto de arila de fórmula geral R*-X', onde X'=bromo ou iodo, foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais usando uma combinação de ligante/catalisador de Pd tal como, de preferência, Pd2(dba)3/X-Phos ou Pd>2(dba)3/(rac)-BINAP, e uma base tal como, de preferência, Cs;CO; ou NaOtBu, e um solvente orgânico tal como, de preferência, dioxano ou tolueno. A reação foi, de preferência, agitada em uma temperatura de aproximadamente 100 e poderia ser realizada em um reator de micro- ondas. A reação foi, de preferência, realizada sob um gás inerte, tal como nitrogênio ou argônio. Condições típicas para reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na seção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo.
[00333] Desproteção de N-BOC foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais usando, dentre os ácidos possíveis, de preferência, ácido trifluoroacético, e solvente orgânico, de preferência CH2Clz. A reação foi, de preferência, realizada em temperatura ambiente.
[00334] Formação de ligação de amida foi realizada usando compostos de fórmula geral XXI e um cloreto ácido de fórmula RÍC(OJ)CI ou ácido carboxílico de fórmula RÍC(O)JOH para preparar uma amida de fórmula geral XXIlI; condições de acoplamento para ligação de amida habituais, conforme descrito no Esquema 1, etapa a), foram usadas ou acoplamento de ácidos carboxílicos usando HBTU, HOBt/EDC ou HATU foi aplicado. Os acoplamentos foram realizados em um solvente orgânico tal como, de preferência, DMF ou DCM, e os compostos finais foram purificados por meio de cromatografia de fase normal ou reversa. Condições típicas para reações de formação de ligação de amida são exemplificadas na seção B) Condições para formação de ligação de amida abaixo.
INFORMAÇÃO GERAL PARA CROMATOGRAFIA LCMS método M1 (Rtv1) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x50 mm Modelo da coluna de HPLC: Acquity UPLC HSS T3, 1,8 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% em vol. + acetato de amônio a 3,75 mM B) ACN + ácido fórmico a 0,04% em vol. Gradiente de HPLC: 2 - 98% de B em 1,4 min, 98% de B 0,45 min, fluxo = 1,2 ml/min Temperatura da coluna de HPLC: 50 CT LCMS método M2 (Rtv2) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x30mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18, 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% em vol. + acetato de amônio a 3,75 mM B) ACN + ácido fórmico a 0,04% em vol. Gradiente HPLC: 2 - 98% de B em 1,4 min, 0,75 min 98% de B, fluxo = 1,2 ml/min Temperatura da coluna de HPLC: 50 T LCMS método M3 (Rtv;3) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 30 mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18, 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% em vol. + acetato de amônio a 3,75 mM B) ACN + ácido fórmico a 0,04% em vol. Gradiente HPLC: 2-98% de B em 8,5 min, 1 min 98% de B, fluxo = 1,2 ml/min Temperatura da coluna de HPLC: 50 T
LCMS método M4 (Rtv.) Dimensões da coluna de HPLC: 4,6x50mm Modelo da coluna de HPLC: SunFire C18, 5 um Eluente de HPLC: A) água + TFA a 0,1% em vol., B) ACN + TFA a 0,1% em vol.
Gradiente HPLC: 5 - 100% de B em 8,0 min B, fluxo = 2 ml/min Temperatura da coluna de HPLC: 40 CT LCMS método M5 (Rtv5) Dimensões da coluna de HPLC: 0,46x25cm Modelo da coluna de HPLC: Quiralcel OJ-H (1189) Eluente de HPLC: EtoH/MeOH a 60:40 Gradiente HPLC: isocrático, fluxo=0,5 ml/min Detector: UV 220 nm LCMS método M6 (Rtvs) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x30mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18, 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + TFA a 0,05%, B) ACN + TFA a 0,04% Gradiente HPLC: 2 - 98% de B em 1,4 min, 0,75 min 98% de B, fluxo = 1,2 ml/min Temperatura da coluna de HPLC: 50 CT LCMS método M7 (Rtv;) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x30mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18, 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + TFA a 0,05%, B) ACN + TFA a 0,04% Gradiente HPLC: 10 - 95% de B em 3,0 min, 1 min 95% de B, fluxo = 1,2 ml/min Temperatura da coluna de HPLC: 50 CT LCMS método M8 (Rtvs)
Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 30 mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% + acetato de amônio a 3,75 mM B) acetonitrilo + ácido fórmico a 0,04% Gradiente HPLC: 10 - 95% de B em 3,0 min, fluxo = 1,2 ml/min LCMS método M9 (Rtvs) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 30 mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% + acetato de amônio a 3,75 mM B) acetonitrilo + ácido fórmico a 0,04% Gradiente HPLC: 10% de B de 0,0 a 0,5 min e, então, de 0,5 min a 3,0 min gradiente de 10 - 95% de B, fluxo = 1,2 ml/min LCMS método M10 (Rtv10) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 50 mm Modelo da coluna de HPLC: Acquity UPLC BEH C18 1,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,1% em vol., B) acetonitrilo Gradiente HPLC: 20 - 25% de B em 1,00 min e, então, 25 - 95% de B em 320 min e, então, 95 -100% de B em 0,10 min e, então, 100% durante 0,20 min, fluxo = 0,7 ml/min LCMS método M11 (Rtv11) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 50 mm Modelo da coluna de HPLC: Acquity UPLC BEH C18 1,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,1% em vol.B) acetonitrilo Gradiente HPLC: 5 - 10% de B em 1,00 min e, então, - 90% de B em 3,00 min e, então,
90 -100% de B em 0,10 min e, então, 100% durante 0,40 min, fluxo = 0,7 ml/min LCMS método M12 (Rtv12) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 30 mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + TFA a 0,1% em vol., B) acetonitrilo Gradiente HPLC: 10 -95% de B durante 1,7 min e 1,2 mL/min como solvente fluxo e, então, 95% de B durante 0,7 min, fluxo = 1,4 mL/min.
LCMS método M13 (Rtv13) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 30 mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18 2,7 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% + acetato de amônio a 3,75 mM B) acetonitrilo + ácido fórmico a 0,04% Gradiente HPLC: 10 - 95% de B em 3,7 min, fluxo = 1,2 ml/min LCMS método M14 (Rtuv14) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 30 mm Modelo da coluna de HPLC: Ascentis Express C18, 2,7 um Eluente de HPLC A) água + ácido fórmico a 0,05% + acetato de amônio a 3,75 mM B) acetonitrilo + ácido fórmico a 0,04% Gradiente HPLC: 10 - 95% de B em 1,5 min, 1 min 95% de B, fluxo = 1,2 ml/min LCMS método M15 (Rtv15) Dimensões da coluna de HPLC: 0,46 x 25 cm Modelo da coluna de HPLC: Quiralcel OD-H (1194) Eluente de HPLC Hexano/EtOH a 50:50 + DEA a 0,05%
Gradiente HPLC: isocrático, fluxo = 0,5 ml/min Detector: UV 220 nm LCMS método M16 (Rtv16) Dimensões da coluna de HPLC: 2,1 x 50 mm Modelo da coluna de HPLC: Acquity UPLC HSS 13, 1,8 um Eluente de HPLC: A) água + ácido fórmico a 0,05% em vol. + acetato de amônio a 3,75 mM B) ACN + ácido fórmico a 0,04% em vol. Gradiente HPLC: 5 - 98% de B em 1,4 min, 98% de B 0,4 min, fluxo = 1,0 ml/min Temperatura da coluna de60%C HPLC:
DIFRAÇÃO DE PÓ POR RAIOS X INSTRUMENTAÇÃO: MÉTODO X1 Instrumento Bruker D8 GADDS Discover Irradiação CuKo (40 kV, 40 mA) Detector Detector HI-STAR Area Faixa de varredura 639º (valor de 2 teta) DETERMINAÇÃO DE PONTO DE FUSÃO:
[00335] O ponto de fusão foi determinado através de calorimetria de varredura diferencial (Differential Scanning Calorimetry - DSC). DSC foi registrada sobre um TA Instruments DSC Q2000 usando uma taxa de aquecimento de 10CT/min. Uma amostra 0,6 mg foi pesada dentro de uma panela de alumínio padrão (panela + tampa, TA 900786.901,
900779.901). O instrumento foi operado usando o programa Thermal Advantage Q-Series V.2.6.0.367 e o programa Thermal Advantage V4.6.9. Os eventos térmicos foram caracterizados usando Universal Analysis V4.3A Build 4.3.0.6. As amostras foram medidas contra a panela de amostra sem furos. A amostra foi tratada de acordo com o protocolo abaixo:
[00336] Etapa1: EQUILIBRAR A 0€C
[00337] Etapa2: ELEVAR 10T/mina300CT
EXEMPLOS DE PREPARO
[00338] Onde é afirmado que os compostos foram preparados da mesma maneira descrita para um exemplo anterior, aqueles versados na técnica apreciarão que os tempos de reação, número de equivalentes de reagentes e temperaturas da reação podem ser modificadas para cada reação específica e, contudo, pode ser necessário ou desejável empregar diferentes condições de processamento ou purificação. o”
NS
AS OA Exemplo A1: (S)-(3-((4-(6-metóxi-5-metilpiridin-3-i1)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)óxi)pirrolidin-1-il) (tetra-hidro-2H- pirano-4-il)metanona (de acordo com o Esquema 1) a1) (R)-(3-hidroxipirrolidin-1-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il) mnetanona
[00339] Uma solução agitada de ácido tetra-hidro-2H-pirano-4- carboxílico (Registro CAS 5337-03-1) (0,200 g, 1,537 mmol) e DMF (0,012 ml, 0,454 mmol) em DCM (3 ml) foi tratada com cloreto de oxalila (0,202 ml, 2,305 mmol) a 3€. Após 1 ha 3º C, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi, então, dissolvido em DCM (2 ml) e adicionado a uma solução agitada de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-o0l (Registro CAS 104706-47-0) (0,190 9, 1,537 mmol) e t;N (0,535 ml, 3,84 mmol) em DCM (3 ml) a 3T. Após 1 h a 3C, a mistura de reação foi concentrada sob pr essão reduzida. O resíduo foi tratado com EtOAc (10ml) e filtrado. O resíduo foi lavado com EtOAc e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Gradiente de DCM/metanol) para proporcionar o composto do título como um sólido branco.
[00340] —ESIMS: 200 [(M+H)"].
[00341] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 4,61-4,50 (m, 1H), 4,10-4,02 (m, 2H), 3,77-3,40 (m, 6H), 2,70-2,53 (m, 1H), 2,20-1,85 (m, 4H), 1,75- 1,69 (m, 3H).
[00342] “Método alternativo a2: Em vez de preparar o cloreto ácido in situ, um cloreto ácido comercialmente disponível, tal como cloreto de propanoíla (Registro CAS 79-03-8), foi usado. b1) Metanossulfonato de (R)-1-(tetra-hidro-2H-pirano-4-carbonil) pirrolidin-3-ila
[00343] Uma solução agitada de (R)-(3-hidroxipirrolidin-1-il)(tetra- hidro-2H-pirano-4-il)metanona (0,245 g, 1,230 mmol) em DCM (10 ml) foi tratada com Et;N (0,343 ml, 2,459 mmol) e cloreto de metanossulfonila (0,192 ml, 2459 mmol) a O T. Após 1 ha O T, águ a (20 ml) foi adicionada. A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de NaCl (20 ml), seca com MgSO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado através de trituração com dietil éter para proporcionar o composto do título como um sólido branco.
[00344] —ESIMS: 278 [(M+H)'].
[00345] —H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 5,40-.5,29 (m, 1H), 4,10-4,02 (m, 2H), 3,94-3,87 (m, 1H), 3,82-3,56 (m. 3H), 3,52-3,41 (m, 2H), 3,11- 3,04 (m, 3H), 2,70-2,10 (m, 3H), 2,02-2,87 (m, 2H), 1,72-1,57 (m, 2H). c1) (S)-(3-((3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)óxi)pirrolidin-1- iN(tetra-hidro-2H-pirano-4-il) netanona
[00346] Uma solução agitada de 3,4-di-hidro-2H-benzoxazin-6-ol (Registro CAS 26021-57-8) (0,140 g, 0,926 mmol) em DMF (3 ml) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 0,445 g, 1,111 mmol) em temperatura ambiente. Após 10 min em temperatura ambiente, — metanossulfonato — de — (R)1-(tetra-hidro-2H-pirano-4- carbonil)pirrolidin-3-ila (0,283 g, 1,019 mmol) foi adicionado. O frasco foi tampado e aquecido para 50 durante 3 h. Após esse tempo, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (50 ml) e água (50 ml) foi adicionada. A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de NaCl (20 ml), seca com MgSO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Gradiente de DCM/metanol) para proporcionar o composto do título como um sólido amorfo cinza.
[00347] HPLC Rtvio=2,07 min; ESIMS: 333 [(M+H)'].
[00348] 'H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,55-6,50 (m, 1H), 6,15- 6,11 (m, 1H), 6,07-6,00 (m, 1H), 5,77 (br s, 1H), 4,88-4,74 (m, 1H), 4,06-4,01 (m, 2H), 3,90-3,22 (m, 10H), 2,75-2,58 (m, 1H), 2,15-1,95 (m, 2H), 1,65-1,45 (m, 4H). d1) (S)-(3-((4-(6-metóxi-5-metilpiridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo|[b] [1,4]oxazin-6-il) óxi)pirrolidin-1-il) (tetra-hidro-2H-pirano-4- i)metanona
[00349] Uma solução agitada de (S)-(3-((3,4-di-hidro-2H- benzo[b][1,4]oxazin-6-il)óxi)pirrolidin-1-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4- il)metanona (0,050 g, 0,150 mmol) em tolueno (1 ml) foi tratada com 5- bromo-2-metóxi-3-metilpiridina (Registro CAS 760207-87-2) (0,030 9, 0,150 mmol) NaOtBu (0,022 g, 0,226 mmol), 2-(diciclo- hexilfosfofino)bifenila (Registro CAS 247940-06-3) e Pd2(dba)3 (0,004 g, 0,005 mmol) em temperatura ambiente sob argônio. A reação foi colocada em um frasco tampado e aquecida para 110% em um reator de micro-ondas durante 3 h. Após este tempo, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (gradiente de ciclo- hexano/EtOAc) para proporcionar o composto do título como um sólido esbranquiçado.
[00350] — HPLC Rtvio= 2,85 min; ESIMS: 454 [(M+H)"].
[00351] *H RMN (400 MHz, CD;OD): 5 7,90-7,85 (m, 1H), 7,49-7,44 (m, 1H), 6,76-6,69 (m, 1H), 6,32-6,24 (m, 1H), 6,07-6,02 (m, 1H), 4,86- 4,73 (m, 1H), 4,29-4,23 (m, 2H), 4,02-3,92 (m, 5H), 3,80-3,40 (m, 8H), 2,85-2,60 (m, 1H), 2,25-1,91 (m, 5H), 1,85-1,50 (m, 4H).
[00352] “método alternativo d2: 2-(diciclo-hexilfosfofino)bifenila (Registro CAS 247940-06-3) foi substituída por 2-diciclo-hexilfosfofino- 2' 4' 6"-tri-cisopropilbifenila (Registro CAS 564483-18-7)
[00353] método alternativo d3: 2-(diciclo-hexilfosfofino)bifenila (Registro CAS 247940-06-3) e Pd2(dba); foi substituída por bis(tri-t- butilfosfina)paládio (Registro CAS 53199-31-8) Exemplos A2 a A43: Os compostos listados na Tabela 1 foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no Exemplo A1. TABELA 1 Temperatura Composto Ambiente de o P HPLC [min] am (método) 1 ho
ANE O o
SS CO X
N AI Oo dimetilamida de ácido 5-(6-[(S)-1-(Tetra- 2,50 (M10) st hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-piridina-3- sulfônico Via sintética usada: a1, b1, c1, d1 (intermediário IA13)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o o CT o
ES
NS ÇO Oo 1,10 (M12) 560 ((S)-3-(4-[5-(Morfolina-4-sulfonil)-piridin-3-il]- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-iloxi)- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d1 (intermediário IA14) o” -N o O o
SS N O, P
CO TO A4 o 1,78 (M10) 469 1(S)-3-[4-(6-Metil-5-nitro-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d1 (intermediário IA15) O º Ss N O, V CI Oro o 1,03 (M10) 425 1(S)-3-[4-(6-Metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra- hidro-pirano-4-il)-netanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d1 (intermediário IA16)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método)
F F CÃA
DD CAI Oro o 1,21 (M12) 479 (Tetra-hidro-pirano-4-il)-[((S)-3-[4-(5- trifluorometil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d1 (intermediário IA18) Nã Dx
DS N O, VP CAI Oto AT o 2,44 (M10) 435 5-(6-[(S)-1-(Tetra-hidro-pirano-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1, c1, d2 (intermediário IA17) | O=S=O N >> > N O,
N CO O YO 1,46 (M8) | 432 o 1-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-piridin-3-i1)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA40)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) 2 Nã ? > RW N | Z N O, o
CO OA o 2,80 (M10) 409 2-metóxi-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3- ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- nicotinonitrilo Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA12) FE o
F
F Í SN Pra N O, o CO o A1O o 2,74 (M11) 452 1-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-trifluorometil-piridin-3- 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il--propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA21) o
F VN = N O, o
CO OL o 2,86 (M10) 402 1-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA10)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o” cl ( SN d N O, o
ÇO O o 3,00 (M10) 418 1-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il--propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA11) o
SN | A N O... o
ÇO O A13 o 2,93 (M10) 398 1-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il--propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA9) | NH, o *N | ” N O, o
CO O A14 o 1,98 (M10) 399 1-((S)-3-[4-(6-Amino-S-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4])oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA46)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) Z2 [98o)] ! > No Ko) N O, P
CO OA o 2,76 (M10) 490 2-metóxi-N N-dimetil-5-[6-((S)-1-propionil- pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]|-benzenossulfonamida Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA6O) o o. so o N O, o COOL. o 2,56 (M10) 461 1-4(S)-3-[4-(3-Metanossulfonil-4-metóxi-fenil)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il--propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA59) ef Nº
F Í SN ” N O, o CO o ATT o 2,67 (M10) 437 1-((S)-3-[4-(6-Amino-5S-trifluorometil-piridin-3- i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d2 (intermediário IA23)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) |
O
NDA O=S=O Oo o Jr Nã | N lo 1,60 (M9) 546 1-((8)-3-(4-[6-metóxi-5-(4-metil-piperazina-1- sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidin-1-il)- propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA24) o O: o 2
N Lo 1,32 (M9) 424 1(S)-3-[4-(2-Metil-piridin-4-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra- hidro-pirano-4-il)-mnetanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA61) o o o
N 2 O 0
N Lo 1,47 (M9) 454 1(S)-3-[4-(6-metoximetil-piridin-3-il)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 1-il-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA25)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o Ee EO F o F o
NÉ SS 9º
N Lo 1,61 (M9) 478 (Tetra-hidro-pirano-4-il)-[((S)-3-[4-(2- trifluorometil-piridin-4-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i)- metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA63)
O 2 O o o O o
ON Lo 1,43 (M9) 440 1(S)-3-[4-(2-metóxi-piridin-4-i1)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA62) o
O o H,N ZN FER | o
F L F o 1,57 (M9) 493 1(S)-3-[4-(6-Amino-5S-trifluorometil-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4])oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-i1)- metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA23)
Temperatura ms Composto Ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) Ch. ED o, N Ss o Oo N ' Lo 2,04 (M9) 514 1-((S)-3-(4-[4-Metil-3-(piperidina-1-sulfonil)- fenil]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- iloxi)pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA31) folia H o LON o ? e Ss o Oo
N (o 1,83 (M9) 532 1-((S8)-3-(4-[4-Metóxi-3-(Morfolina-4-sulfonil)- fenil]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- iloxi)pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA32) folia H o LON o é NR Ss o O
É Na N lo 1,83 (M9) 503 1-((S)-3-(4-[5-(Morfolina-4-sulfonil)-piridin-3- i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-iloxi)- pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA33)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) NO Ds Oo Ot EO Sx o o
N (o A27 2,22 (M9) 545 1-((8)-3-(4-[4-Metóxi-3-(4-metil-piperazina-1- sulfonil)-fenil]-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidin-1-il)- propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA34) NO HO o LONso o ? me “Oo
O (o 2,08 (M9) 516 1-((S8)-3-(4-[5-(4-Metil-piperazina-1-sulfonil)- piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-iloxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA35)
NX ho OA Ss o o “AO
N (o 2,82 (M9) 506 2, N-dimetóxi-N-metil-5-[6-((S)-1-propionil- pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]|-benzenossulfonamida Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA36)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) Do o Oo Ao EMA Sax o o
É Na N Lo 2,69 (M9) 477 metóxi-metil-amida de ácido 5-[6-((S)-1- Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-3- sulfônico Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA37) = o o o EO HS o
N As lo 2,72 (M9) 492 2, N-dimetóxi-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3- ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- benzenossulfonamida Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA65) o WO: VU o
É Na N A32 (o 2,49 (M9) 379 5-[6-((S)-1-Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di- hidro-benzo[1 ,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo Via sintética usada: a2, b1, c1, d3 (intermediário IA17)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o o o o) Na N º A33 Lo 1,54 (M9) 440 1(S)-3-[4-(5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)- netanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA38)
O
O Cl o = O o
SN A3A4 Lo 1,76 (M9) 444 1(S)-3-[4-(5-Cloro-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra- hidro-pirano-4-il)-netanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA39) o
CÇOO
N A35 o f 1,24 (M6) 413 1-((S)-3-[4-(3,4-dimetóxi-fenil)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- propan-1-ona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA66)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método)
SN | ”
CO O
N A3S6 o ás 1,02(M6) 404 1-[(8)-3-(4-Quinolin-3-il-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il]- propan-1-ona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA54) o Ss NOS vo >
ÇO O
N AsT o ço 1,03 (M6) 432 1-((S)-3-[4-(5-Metanossulfonil-piridin-3-i1)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il--propan-1-ona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA5S5)
FF ” N O, ÇT Ex A38 o o 1,24 (M6) 422 1-((S)-3-[4-(5-Trifluorometil-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 1-il)-propan-1-ona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA18)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) |
O Nx Prá N O,
CO OS o o 1,13 (M6) 461 dimetilamida de ácido 5-[6-((S)-1-Propionil- pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-3-sulfônico Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA13)
JAN N o,
ÇO OS A40 o o 1,33 (M6) 392 2-Metil-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3-ilóxi)- 2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- benzonitrilo Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IAS6)
OF F
CS N O, C OD — As o o 1,44 (M6) 451 1-((S)-3-[4-(4 -Metóxi-3-trifluorometil-fenil)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il--propan-1-ona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA57)
Temperatura ms Composto Ambiente de Im/z; HPLC [min] ue 1 (método)
F FA-F
NS | 2 o N O,
CO OX o 1,82 (M6) 478 (Tetra-hidro-pirano-4-il)-((S)-3-[4-(6- trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA26) | O=S=O
NS | Z o N O,
CO O A43 o o 1,44 (M6) 488 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona Via sintética usada: a1, b1, c1, d3 (intermediário IA40) | O=S=O
NS > N O, Pp
ÇO OA o o Exemplo B1: ((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro- pirano-4-il)-metanona (de acordo com o Esquema 2)
o o 4h Ao R o N OH Nnak,DMF bi ho N o. Pp jaH,DMF temperatura ambiente, 22! ONA
QUO US OS OS =N 9 Pd,(dba),, XPhos, NaOtBu, Ds dioxano, 110ºC, 12h ie >) N o, o
NA XI Ss ok cl o:$:0 >» o=d=o NOS á NS TFA, DCM, | > Et,N, DCM, | e emperatura ambiente, 1h N o. RE Ma My õ o e) NH E : CO O CSA, o a) terc-butil éster de ácido (S)-3-(3,4-Di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico
[00354] Uma solução de 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-ol (Registro CAS 26021-57-8) (4,0 g, 26,5 mmol) em DMF (150 ml) foi tratada com NaH (2,117 g, 52,9 mmol) durante 20 min a 20 OC. Terc- butil éster de ácido (R)-3-Metanossulfonilóxi-pirrolidina-1- carboxílico (Registro CAS 127423-61-4) (9,13 g, 34,4 mmol) foi adicionado. Após agitação durante 22 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi concentrada até secagem e, então, captada com EtOAc, filtrada através de hyflo e o filtrado foi lavado com solução de NaCO; saturada aquosa. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na-sSO,, filtradas e evaporadas. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/isopropanol a 100:0 a 85:15 em 40 min) para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo.
[00355] — HPLC Rtvs=1,84 min; ESIMS: 321 [(M+H)"].
[00356] HRMN (400 MHz, DMSO): 6,52 (d, 1H), 6,12 (d, 1H), 6,02 (m, 1H), 5,76 (m, 1H), 4,75 (br s, 1H), 4,01-40,5 (m, 2H), 3,27-3,50 (m, 4H), 3,22-3,26 (m, 2H), 1,95-2,08 (m, 2H), 1,39 (m, 9H). b) terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil- piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carboxílico
[00357] “Uma mistura de terc-butil éster de ácido (S)-3-(3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico (212 g, 6,62 mmol), 5-bromo-2-Metanossulfonil-3-metil-piridina (Intermediário 1IA1) (2,091 g, 7,94 mmol), NaOtBu (1,272 g, 13,23 mmol), ligante XPhos (0,158 g, 0,331 mmol) e Pd2(dba)3 (0,303 g, 0,331 mmol) em dioxano (3,5 ml) foi desgaseificada e agitada durante 12 h a 110 CT. Solução de NaHCO; saturada aquosa foi adicionada e a mistura de reação foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na7sSO;, filtradas e evaporadas. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre Sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 100:0 a 50:50) para proporcionar o composto do título.
[00358] HPLC Rtmi4=1,25 min; ESIMS: 490 [(M+H)'].
[00359] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,33 (d, 1H), 7,43 (d, 1H), 6,86 (d, 1H), 6,59 (d, 1H), 6,47 (m, 1H), 4,69-4,73 (m,12H), 4,23-4,28 (m, 2H), 3,73-3,78 (m, 2H), 3,41-3,58 (m, 4H), 3,34 (s, 3H), 2,69 (s, 3H), 1,96-2,17 (m, 2H), 1,46 (s, 9H). c) 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00360] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(6-
Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidina-1-carboxílico (1,5 g, 3,06 mmol) e TFA (0,236 ml, 3,06 mmol) em DCM (15 ml) foi agitada durante 1 h em temperatura ambiente. A mistura de reação foi resfriada para 0ºC, solução de Na7zCO; saturada foi adicionada e a mistura de reação foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre NasSO;,, filtradas e evaporadas para proporcionar o composto do título.
[00361] HPLC Rth2=0,66 min; ESIMS: 390 [(M+H)'].
[00362] 'H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,33 (d, 1H), 7,43 (d, 1H), 6,86 (d, 1H), 6,58 (d, 1H), 6,47 (m, 1H), 4,68 (m, 1H), 4,22-4,27 (m, 2H), 3,73-3,78 (m, 2H), 3,33 (s, 3H), 3,12-3,22 (m, 2H), 2,86-3,04 (m, 2H), 2,68 (s, 3H), 1,88-2,08 (m, 2H).
d) ((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-11)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona
[00363] Uma mistura de 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6- ((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4)Oxazina — (0,085 Og, 0,218 mmol), cloreto de tetra-hidro-2H-pirano-4-carbonila (Registro CAS 40191-32-0) (0,049 mg, 0,327 mmol) e Et;N (0,046 ml, 0,327 mmol) em DCM (4 ml) foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min. A mistura de reação foi concentrada até secagem. O produto bruto foi purificado por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18, HO + TFA a 0,1%/ACN + TFA a 0,1% a 90:10 a 30:70 em 12 min) para proporcionar o composto do título como um sólido branco.
[00364] HPLC Rtv;=1,62 min; ESIMS: 502 [(M+H)'].
[00365] —H RMN (400 MHz, DMSO): 5 8,38-8,42 (m, 1H), 7,72 (m, 1H), 6,84 (d, 1H), 6,67 (m, 1H), 6,50-6,57 (m, 1H), 4,82-4,94 (m, 1H), 4,20 (m, 2H), 3,31 (s, 3H), 3,28-3,88 (m, 10H), 2,59-2,73 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 1,95-2,13 (m, 2H), 1,44-1,62 (m, 4H).
Exemplos B2 a B122: Os compostos listados na Tabela 2 foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no Exemplo B1. TABELA 2 Temperatura | MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1
A
SN | o
A
CAI O o o su didi ao ; 2,00 1(S)-3-[4-(6-etóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- 468 hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- (M8) il(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 ,127423- 61-4, IA19, 40191-32-0
PO | o NE |
ON Lo 1,53 4-[6-((S)-1-Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di- (Vs) 379 hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-2- carbonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA12 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-4, IA30, 79-03-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
DO N DK
DR N Lo Vi nindin a ; 1,58 1-f(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4Joxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- (M9) il-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-4, IA31,79-03-8 o
DO 7 N
QAÃ N ALII
SO ON o o lo 1-((8)-3-[4-[5-(Propano-2-sulfonil)-piridin-3-il]- 2,61 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)- (M10) pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 ,127423- 614, IA30, 79-03-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1
O
O o
N OO e o.
SOS ON To ((8S)-3-(4-[5-(Propano-2-sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidin- 1,50 1) (Mo) -(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-4, IA30, 40191-32-0 Lo
NS > N o Pp
CS O o o 1,37 B7 1(S)-3-[4-(6-Etanossulfinil-piridin-3-i1)-3,4-di- (MB) 486 hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA13 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-44, IA58, 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 “sã
NS > N O, o
O TÁ o Na NT 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 1,27 B8 3,4-di-hidro-2H-benzo(1 4Joxazin-6-ilóxi]- (Vs) 498 pirrolidin-1-il)-(1-metil-1 H-imidazol-4-1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA14 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-4, IA1, 41716-18-1 “so
NOSSO > (9) N O, CON,
DO OO 1(8S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metóxi-piridin-3- 1,34 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- (M8) pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA14 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-4, IA45, 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o são
NRO > N o, Pp
CX O o
F
F (4 ,4-Difluoro-ciclo-hexil)-((S)-3-[4-(6- 1,68 Metanossulfonil-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- (M8) hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA14 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8 127423- 61-4, IA45, 122665-97-8 o nO Í Je N o, Pp
CO O o $-o o (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- 11)-((S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi-piridin-3-11)-3,4-di- 1,67 (MB) 506 hidro-2 H-benzo[1,4])oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o ne > N o, Pl o $=0 o 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1 AJoxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- | + gonv8 | 52 i(1, 524 1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA11/64096-87-3 o
NS > N o P C DD DA Oo o Ss: o (1, 1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- 1(8)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- B13 hidro-2 1,74 (M8) 488 H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA16 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA9 /4785-67-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 - 0 FL
NOS F > N o, P C DD 2a o 3-O o (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- B14 i)-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-trifluorometil-piridin-3- 1,95 (M8) 556 i)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA21/64096-87-3 o
NS > o N O, |
COOOC o 1(8)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- 1,89 (M7) 440 il-(tetra-hidro-furano-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA9/89364-31-8 Separação quiral: CD9
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS > Oo N O,, Í
CO OPCC o 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- 1,89 (M7) 440 il-(tetra-hidro-furano-3-il)-mnetanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 614/IA9/89364-31-8 Separação quiral: CD9 » CT % e) ” N O, VP
ÇO O o O (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- B17 | in[(S)-3-[4-(6-etóxi-5-metil-piridin-3-i)-3,4-di- | 1.88 (M8) | S16 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB7 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA19/64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NOS E | > N O, ? o o (1(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- B18 hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- 1,86 (M7) 458 il-(te tra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/40191-32-0 H LO o o ON | O NO Fe (o (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- iI)-((S)-3-[4-(5-etil-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- B19 hidro-2H 1,04 (M2) 516 -benzo[1 ,4]Joxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA48/64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o” ( Prá N O, o
ÇO o / no | 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- | 1.70 (M8) | 450 i-(1- metil-1H-pirazol-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA9/5952-92-1 o (> e N O, Oo
O O o Nº 1
N | 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,87 (M8) 450 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- i-(1- metil-1H-pirazol-3-il)-mnetanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A9/25016-20-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 ? —Ss-Oo
NS > N O, o
CO SS o / N =N 1(S)-3-[4-(8-Metanossulfonil-S-metil-piridin-3-11)- 0,85 (M6) 495 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- ' pirrolidin-1 “il)-piridin-4-il-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A1/55-22-1 ? —S=O
NS > N O, o CON, o V. n=/ 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-11)- 0,92 (M6) 496 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1 il)-pirimidin-5-il-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/4595-61-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o n —S-O
NÓS > N O, o
CO O
N o // y Oo 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- 0,95 (M6) 485 pirrolidin-1 -il-oxazol-4-il-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A1/23012-13-7 o n —S-=O
NOS > N O, o OO, o o // À
N 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- 0,94 (M6) 485 pirrolidin-1 -il)-oxazol-5-il-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/118994-90-4
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 ? —S=O
NOS > N O, o
CO O o Ty
O (2,2-Dimetil-tetra-hidro-pirano-4-i1)-((S)-3-[4-(6- Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-| — 1,01 (M6) | 530 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A1/52916-16-2 o
FF N o! o O ErAno o (1, 1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- hidro-2 B27 H-benzo[1 4Joxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-iN)- 1,62 (M2) | 488 metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A9 /4785-67-5 Separação quiral : CD8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 - o
NS : Prá N o Pp
CD O o seo o (1, 1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- B28 hidro-2 1,62(M2) | 488 H-benzo[1,4])oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA9/4785-67-5 Separação quiral: CD8
O
O o
N o. = SO SON o To (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- i1)-((S)-3-(4-[5-(propano-2-sulfonil)-piridin-3-il]- 3,4-dihyd 1,53 (M6) 564 ro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA30/ 64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1
É O AN
NS | A” PN O, o TT O. o A »
N | 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4- 1,50 (M9) | 464 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-3,3-dideutero-2,3-di- hidro-benzo[1,4]oxazin4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA15 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: ID1, CAS 127423-61-4, IA12, CAS 41716-18-1 | O=S-O
NS > N O, o
CO O o o 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)- | /- 0,94 (M6) 488 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-furano-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA1, CAS 89364-31-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O
NÓS > N O, o
N CO DX, o v B32 1-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-S5-metil-piridin-3- | 9,92 (M6) 462 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxil- pirrolidin-1-il)-2-metóxi-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA1, CAS 625-45-6 | O=S=O
NOS > N O, o
CO O o 1-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3- 1,01 (M6) 460 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-2-metil-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA1, CAS 79-31-2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ENS (método) 1 | O=S=O
NÓS > N O, o OO,
TO 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 1,05 (M6) 494 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-fenil-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA1, CAS 65-85-0 | O=S-=O
NOS | ” N O, o
O O DI Vos (1 1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda”“6*-tiofen-3-1)- 0,87 (M2) 536 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA1, CAS 4785-67-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S-O
NS > N O, o
CSO o o o [1 4]Dioxan-2-i-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5- | 9882) 504 metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- ' benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA1, CAS 89364-41-0 | O=S=O
NOS > N O, o COMA, Oo o B37 1-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3- 0,88 (M2) 476 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxil- pirrolidin-1-il)-3-metóxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-44, IA1, CAS 2544-06-1
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NOSSO > N O, o
OO o o B38 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 0,93 (M2) 470 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, CAS 127423-61-4, IA29, cloreto de acila 40191-32-0 Do
NOS O > N o o
CO O o o » 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro- | 0,91 (M2) 472 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i1)- [1 A]dioxan-2-il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/89364-41-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Oo
NOSSOS > N o o
ÇO E o Oo B40 1(S8)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 0,92 (M2) 456 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- (tetra-hidro-furano-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/89364-31-8 o NS o > N O,, o LIA, o o Sto 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- B41 | 25H4.penzo(1 A4Joxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-in-(1,1-|/ 9,91 (M2) | 504 dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/4785-67-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O
NOS > N o o OO. o o 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 0,91 (M2) 502 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-piran-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/873397-34-3 Do
NOS O > N o o
ÇO E o o 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 0,96 (M2) 470 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i1)- (tetra-hidro-piran-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A29/873397-34-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ENS (método) ] Do NOS o > N o Y o
N CO O. B4s 1 ((8)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-11)-3,4-di- 0,90 (M2) 1430 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- ' il--2-metóxi-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A29/625-45-6 Do NS Os > N o o
COTA Oo so ão 1-((S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-1)-3,4-di- 0,89 (M2) 492 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il)-3-Metanossulfonil-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/645-83-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Do
NAS > N oY o CSA, o o” 1-((S8)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- B46 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- 0,92 (M2) 4 il-3-metóxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/2544-06-1 Oo
NOSSOS > N ok o
O O o são
O B47 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 0,90 (M2) 518 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il-(1,1- dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Do NOS o > N o o
ÇO E
N o // DI
N | B48 | [(8)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-iI)-3,4-di-hidro- | 0,85 (M2) | 466 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il-(1- metil-1H-imidazol-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/41716-18-1 | O=S=O
NS | ” N O, o
CO O o B49 | Ciclo-hexil-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil- | 1,06 (M2) 500 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-ilt-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/98-89-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O
NOS > N O, o
O O
PO “oH (4-Hidróxi-ciclo-hexil)-((S)-3-[4-(6- 0,86 (M2) 516 Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/3685-26-5 | O=S=O
NS > N O, o
O OS o q
OH (4-Hidróxi-ciclo-hexil)-((S)-3-[4-(6- 0,89 (M2) 516 Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/3685-22-1
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) ] | O=S=O
SN | Prá N o o CO DA: o o 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 0,88 (M2) dich, - EK in-Bsilóxil , 488 i 34 di hidro 2H benzo[1,Aloxazin 6-ilóxi]. 15,13 (CD10) pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-furano-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/89364-31-8 Separação quiral: CD4 | O=S-=O
SN | ” N o o CO O: º o 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 0,88 (M2) 3,4-di-hidro-2H-benzo[1 Aloxazin-6-ilóxil- | 18 70 (cp1o) | pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-furano-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/89364-31-8 Separação quiral: CD4
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ERES (método) 1 Cl NOS o > N O, P
C DD DS o o 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-11)-3,4-di- 3,21 (M3) 474, hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- 476 il-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA49/Cloreto de acila : 40191-32-0 [o NS o >
O
ÇO OA o 1-((8)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-)-3,4-0i-| | 3 39 3) 418, hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- 420 il-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA49/Cloreto de acila : 79-03-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1
CI NS o | N fa P
CO O 9º Fo)
S 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 522, hidro-2H-benzo[1 A4Joxazin-B-ilóxil-pirrolidin-1- || 3-02(M3) | 55, iI-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano- 4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA49/64096-87-3 Cl NS o > o N O,
CO OA o OH 1-((S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 434 B57 hidro-2H-benzo[1 A4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- 0,88 (M2) 436 il--3-hidróxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A49/503-66-2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ERES (método) 1 Cl
NS > N O, P
C DD DS o o S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- 458, 858 hidro oe nSOIa Alonasin 6 Ion picelanA- 3,36 (M3) 460 il(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA50/Cloreto de acila : 40191-32-0 Cl
NS > o
ÇO O o 1-((S)-3-[4-(6-Cloro-S5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- 402 hidro-2H-benzo[1 A4]Joxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- 3,47 (M3) 404 il-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA50/Cloreto de acila : 79-03-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Cl
NS | N O, P
CO O º g=O
S 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- 506, B60 | pidro-aH-benzo(1 Aloxazin-6-ilóxil-pirroliain-1- || 317 (M3) | 5og iI-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano- 4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA50/64096-87-3 [O
NÓS > o N O, CO o o OH 1-((S)-3-[4-(6-Cloro-S5-metil-piridin-3-il)-3,4-di- 418 hidro-2H-benzo[1 A4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- 0,91 (M2) 420 il--3-hidróxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA50/503-66-2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Cl NS o | N O, Pp C DD Cú o LES
N | 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 2,59 (M3) 469 hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA49/41716-18-1 Cl
NAAS > N O, ?
CO O o 5-((S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- 482 hidro-2H-benzo[1 AJoxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1-| 2.85 (M3) | >; carbonil)-1H-piridin-2-ona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA49/5006-66-6
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Cl
NS > N fo Pp CO O: o ES
N | B64 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- 2,71 (M3) 453 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- in-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)-mnetanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA50/41716-18-1 Cl
NS > N O, P
ÇO E
NH º N o 466, 5-1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- || 297 (M3) | 153 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carbonil)-1H-piridin-2-ona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA50/5006-66-6
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 Do NOSSOS o H > N O,
ÇO O o Oo B66 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro- 0.88 (Ma 184 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(4- 88 (M2) hidróxi-ciclo-hexil)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA8 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA29/3685-26-5 | O-=S-O
NS
N > EN N O, -
ÇO O o o B67 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 0,86 (M2) 509 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- ' pirrolidin-1-il)-(3-metil-piridin-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/4021-12-9
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O
NS > a
O N O, —
ÇT O o o B68 1-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3- 0,77 (M2) 509 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-2-piridin-4-il-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA1/6622-91-9 o=b=o -=S-O F F
NS DE > N O,,, o
CO O o o 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-trifluorometil- B69 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- 0,93 (M1) 556 ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: abreviado : CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA3/Cloreto de acila : 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) ] o=$-0 F
NOS F É rá N O. Pp
CX O o o 1(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-Metanossulfonil- B7oO piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- 0,91 (M1) 538 ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- ' metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA4/Cloreto de acila : 40191-32-0 o-$=o
NS F ! Ke N O. P
AI O o o 1(S)-3-[4-(5-Fluorometil-6-Metanossulfonil- B71 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- 0,88 (M1) 520 ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- ' metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA5/Cloreto de acila : 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1
E e
NÓS
Í KM N. O,,, o
CO O o o 1(S)-3-[4-(6-Difluorometóxi-5-metil-piridin-3-il)- B72 3,4-di-hidro-2H-benzo[1 A]Joxazin-6-ilóxi]- 1,07 (M1) 490 pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA8/Cloreto de acila : 40191-32-0
F e
NS À Fe N O, o
CO O o Po o 1(8)-3-[4-(6-Difluorometóxi-5-metil-piridin-3-il)- B73 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- 1,01 (M1) 538 pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexa-hidro-6-tiopirano- 4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB3 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA8/64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o-$=0 F ! DZ N O. P
ONA o / y
N | 1(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- B74 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- 0,81 (M1) 534 pirrolidin-1-il)-(1-metil-1 H-imidazol-4-1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB3 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA4/41716-18-1 o
Q F —S=-O
F Í SN N 2 OQ Co Oo 1(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-Metanossulfonil- B75 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- 0,88 (M1) S24 ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(R)-tetra-hidro-furano-3-il- metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA4/IB1
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ERES (método) 1 o 2 F —S-O ?
ÚD Y N o
IS 1(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-Metanossulfonil- B76 |) piridin-3-1)-3,4-dichidro-2H-benzo[1,4Joxazin-e- | 09-88 (M1) | S24 ilóxil-pirrolidin-1-il)-(S)-tetra-hidro-furano-3-il- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA1O Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: Cc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA4/IB2 | O=S-O ns Ns Lz N O, P Oo Oo B77 | 1(S5)-3-14-(6-Metanossulfonil-S-metilamino- 0,85 (M1) 517 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ' ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA51/Cloreto de acila : 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O | NS No > N o P
DSO
O Oo B78 1(S)-3-[4-(5-Dimetilamino-6-Metanossulfonil- 0,86 (M1) 531 piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6- ' ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: Cc4 Precursores usados: CAS 26021-57-8/109431- 87-0/IA52/Cloreto de acila : 40191-32-0 | O=S=O ns Cc! - N O, o
CO O
MO B79 º 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-Metanossulfonil-piridin-3-iI)- | 0,98 (M1) 522 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA53, cloreto de acila 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O
NS > N O, p
ÇO O
O B80 Ciclopropil-((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil- 0,94 (M1) 458 piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA1, cloreto de acila 4023-34-1 | O=S=O
NÓS >
CS OE º Q o B81 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-6-[(S)- | / 0,95 (M1) 538 1-(tetra-hidro-pirano-4-sulfonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4Joxazina Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-44, IA1, cloreto de sulfonila 338453-21-7
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O N Dx > N O, Q.
COSMOS o Fr B82 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-[(S)- 0,99 (M1) 496 1-(propano-2-sulfonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-3,4-di- hidro-2H-benzo[1 ,4]Oxazina Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA1, cloreto de sulfonila 10147-37-2 | O=S-O
NS > N O, q CS o& o > B83 6-((S)-1-Ciclopropanosulfonil-pirrolidin-3-ilóxi)- 0,96 (M1) 494 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA1, cloreto de sulfonila 139631-62-2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S-=O
NÓS > N O, Ro
CO EE o B84 6-((S)-1 Etanossulfonil-pirrolidin-3-lóxi)-4-(6- 0,94 (M1) 182 Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4)Oxazina Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA1, cloreto de sulfonila 594-44-5 | O=S=O
NOS E > o
CO TAL o o B85 terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5-Fluoro-6- 1,08 (M1) 494 Metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carboxílico Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 | O=S=O nO E > N O, o ESA, Oo o 1(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-Metanossulfonil-piridin-3- B86 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4])oxazin-6-ilóxi]- 0,80 (M1) 506 pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CAIO Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA2, cloreto de acila 40191-32-0 Clivagem BOC com HCl em dioxano no lugar de TFA o-Eo
NS > N O, P
CIÃ o o B87 | [(S)-3-[4-(6-Etanossulfonil-piridin-3-i)-3,4-di- | 1,57 (M7) | 502 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA13 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA58, cloreto de acila 40191-32-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS > o N O, COMO: o A S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i)-3,4-di- 888 RAPINA ANNA 1,45 (M8) 450 in-(3-metil-38H-imidazol-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA9, 41806-40-0 o”
NS > N o " " N
SONS o N
À B89 | ((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- | 152018) | 450 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- iN-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 614, 1A9, 41716-18-1
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS > o N O,
DON o N
T B90 1-(4-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i)-3,4- 1,69 (M8) 495 di-hidro-2H-benzo[1,4])oxazin-6-ilóxil-pirrolidina- 1-carbonil)-piperidin-1-il)-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 614, IA9, 25503-90-6 o”
NS > N O, "
O OC o 4-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,53 (M8) 463 hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carbonil)-1H-piridin-2-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, 1A9, 22282-72-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o”
NS > o N O,
COTA o não 5-1(S)-3-[4-(6-metóxi-5S-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,54 (M8 463 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1- 54 (Mê) carbonil)-1H-piridin-2-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA9, 5006-66-6 o
NOS > o N O, ON, o S=O o (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- iN)-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- || 1,71 (M8) 502 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 614, IA9, 64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS > o N O,
COD o 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di- B94 | pnidro-a2H-benzo[(14Joxazin-G-ilóxil-pirrolidin-1- || 1.88 (M8) | 440 il-(tetra-hidro-furano-3-il)-mnetanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA9, 89364-31-8 o
NOS > o N O,
CS ON o nº So | 5-f(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-11)-3,4-di- | 1,59 (M8) 477 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carbonil)-1-metil-1H-piridin-2-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA9, 3719-45-7
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 O=S=O
NS > o N O, C DD Cro o B96 1-((S)-3-[4-(6-Etanossulfonil-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,50 (M7) 446 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA13 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA58, cloreto de acila 79-03-8 | O=S=O
NS >
O N O, ( DD Cr o Bo7 1-1(8)-3-14-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3- 1,53 (M8) 446 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxil- pirrolidin-1-il)-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, 127423- 61-4, IA1, cloreto de acila 79-03-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS F > N O, Pp
CO O O Oo Bo8 1(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,83 (M7) 444 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- ' il)-(tetra-hidro-furano-3-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/89364-31-8 o
NS F > o N O, ( o Cro, o B99 1-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4- 17 07 2418 di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 77 (M7) 1-i1)-2-metóxi-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/625-45-6
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NOS F > N fo Pp
CD O fe] Na O B100 | ((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,87 (M7) 441 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- ' il-oxazol-4-il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/23012-13-7 o
NOS E > N O, Pp
CO O o s2O o (1, 1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- 1(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- 1,81 (M7) 492 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/4785-67-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o nO E > N O, P
O TA o (ES
N
À 1(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- 1,48 (M7) 453 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/41716-18-1 o
NOS F > N o, Pp
ÇO TA o oo 1(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-11)-3,4-di- 1,80 (M7) 441 hidro-2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-oxazol-5-il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/118994-90-4
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o”
NOS E > N o, Pp
COS o / N ne) B104 | ((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 1,75 (M7) 452 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-pirimidin-5-il-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/4595-61-3 o NS Cl | > N fo P
CO O o seo o 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 508 hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- 1,84 (M8) 510 il-(1,1-dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA11/4785-67-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ENS (método) 1 o ns Cc! > N o, P OOM, o e Ss. 7"o B106 | 1-f(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- | 1,78 (M8) Ps hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il)-3-Metanossulfonil-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA11/645-83-0 o NES Cl N O, C C XD Cro o 1-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- B107 rol DonseM loan 6 O eioida - 1,67 (M8) . il)-3-hidróxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A11/503-66-2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Rm ITA ENS (método) 1 o
O | >” No
Y N O, ÇA Ee o S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 457, B108 so 2 Denis oa E TóLoiratin1 - 1,84 (8) 459 il-oxazol-5-il-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA11/118994-90-4 o NES Cl
SA N O, rs
CO O o 3-1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 429, B109 aa a Deao PANA - 1,88 (M8) 431 i1--3-oxo-propionitrilo Condição para aminação de Buchwald: CAG6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A11/372-09-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o Ns Cl > o N O, o COMO te o DN 1-1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1 4]Joxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- | 1,90 (M8) | 482 il--2-Metanossulfonil-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/1A11/2516-97-4 o
NOS > o N O, o
ÇO OA o o 1-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4- 1,70 WNs 466 di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- TO (N8) 1-il)-2-Metanossulfonil-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/2516-97-4
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS F | > N o, Pp Como.
o õ Ss 1-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,A4]Joxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 1,77 (M8) 480 1-il)-3-Metanossulfonil-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/645-83-0 o
NS F > N o, Pp C DS Cr o OH 1-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4- 1.57(M8 418 di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- S7(M8) 1-il)-3-hidróxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/503-66-2
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NOS F > N O, P COMOA- o o” 1-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4- 1,84 (M8 432 di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 84 (Mô) 1-il)-3-metóxi-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/2544-06-1 o
NESSA > N o ? COMA. o ” [1 4]Dioxan-2-il-[(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi- 1,83 (M8) 459 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/89364-41-0
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NOS F > Oo N O, CO OAa o 3-((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4- 1,85 (M8 413 di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin- 85 (M8) 1-il)-3-0x0-propionitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/372-09-8 o
NOS F > N O, Pp
CAIS O o “oH B117 | ((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 3,13 (M3) 472 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-(4-hidróxi-ciclo-hexil)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/3685-26-5
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NOS E > N o, P CON, oH B118 | ((S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- 3,40 (M3) 472 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-(4-hidróxi-ciclo-hexil)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4/IA10/3685-22-1 o F = N O, o
DP o
PO o 1(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- 0,97 (M1) 538 pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexa-hidro-6-tiopirano- 4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB3 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA6/ 64096-87-3
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o F = N O. Pp
DA o o 1(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- 1,03 (M1) 490 pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA6/Cloreto de acila 40191-32-0 Lo
NS > o
CO O o 1-((S)-3-[4-(6-Etanossu!finil-piridin-3-il)-3,4-di- 1,42 (M8) 430 hidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1- il-propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA14 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4, IA4ZA4, cloreto de acila CAS 79-03-8
Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) 1 o
NS | > o N O, o
CO SAA o 1-((R)-3(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilóxi]- pirrolidina-1-carbonil)-pirrolidin-1-il)-etanona 1,66 (M8) 481 Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: [007 Precursores usados: CAS 26021-57-8/127423- 61-4, IA9, CAS 72925-16-7, Produto obtido após reação Deboc usando TFA em CH2CIl, feito de maneira convencional e acilação final em analogia ao exemplo J o hr N
NÓS > N O, Oo
ÇO O o o Exemplo C1: 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo (de acordo com o Esquema 3)
NaH, TBDMSCI, fio dica CO THF, 1 h, temperatura COP x RGE o o a o o » s à [E O o "O SÊ TBAF, THF. OS NaH, DMF OS 2 SO min, Fnoessral 5h, 50ºC 0 N o. c N o d CI "x CS o Ps N o. d"R
MEEITAI o a) 6-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00366] Sob argônio, NaH (2,96 g, 74,1 mmol) foi adicionado gota a gota a uma solução de 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (Registro CAS 26021-57-8) (5,60 g, 37,0 mmol) em THF (200 ml). Após agitação em temperatura ambiente durante 20 min, TBDMSCI (Registro CAS 18162-48-6) (7,26 g, 48,2 mmol) foi lentamente adicionado e agitação foi continuada durante 1 h. A mistura de reação foi diluída com Et,O, lavada com uma solução de NaHCO; saturada aquosa e salmoura. À fase orgânica foi seca sobre MgSO,, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo- hexano/EtOAc a 100:0 a 60:40 durante 15 min) como um óleo amarelo (9,20 g, rendimento de 94%).
[00367] HPLC Rtvio=3,65 min; ESIMS: 266 [(M+H)"].
[00368] 'HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,46 (d, 1H), 6,08 (d, 1H), 5,91 (m, 1H), 5,71 (br s, 1H), 3,91-4,12 (m, 2H), 3,12-3,28 (m, 2H), 0,87-1,01 (s, 9H), 0,03-0,21 (s, 3H). b) 5-[6-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-
4-i1])-2-metoxi nicotinonitrila
[00369] Sob argônio, XPhos (Registro CAS 564483-18-7) (0,79 9, 1,7 mmol) e Pd2(dba)3; (Registro CAS 51364-51-3) (1,52 g, 1,7 mmol) foram adicionados a uma suspensão de 6-(terc-butil-dimetil-silanilóxi)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina (9,00 g, 33,2 mmol), 5-bromo-2- metóxi-nicotinonitrilo (Registro CAS 941294-54-8) (7,79 g, 36,6 mmol), NaOtBu (4,79 g, 49,8 mmol) em tolueno (270 ml). A mistura de reação foi agitada a 110 durante 1 h e foi concentrada p ara proporcionar um sólido marrom, o qual foi lavado com uma mistura de DCM/MeOH (8:2) e filtrado. O filtrado foi concentrado, o resíduo obtido foi dissolvido em DCM/MeOH (8:2), filtrado sobre hyflo, o filtrado foi concentrado e triturado com MeOH para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo (10,14 g, rendimento de 77%).
[00370] HPLC Rtv1,=3,89 min; ESIMS: 398 [(M+H)'].
[00371] H RMN (400 MHz, DMSO-d; ): 5 8,35-8,51 (m, 1H), 8,16- 8,31 (m, 1H), 6,60-6,79 (m, 1H), 6,15-6,32 (m, 1H), 5,92-6,09 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,51-3,74 (m, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,07 (s, 6H). c) 5-(6-hidróxi-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi- nicotinonitrila
[00372] TBAF (1M em THF) (37,7 ml, 37,7 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-[6-(terc-butil-dimetil-silanilóxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-i1]-2-metóxi-nicotinonitrio (10 g, 25,2 mmol) dissolvida em THF (200 ml). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, diluída com EtOAc, lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa e salmoura. As camadas aquosas foram re- extraídas com EtOAc. Concentração da fase orgânica após secagem sobre MgSO, proporcionou um resíduo marrom, o qual foi dissolvido em DCM/MeOH (1:1) e filtrado sobre hyflo. Concentração e trituração com Et,O do filtrado proporcionou o composto do título como um sólido marrom (6,63 g, rendimento de 93%).
[00373] HPLC Rtvi0=2,56 min; ESIMS: 284 [(M+H)'].
[00374] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,70 (br. s, 1H), 8,44 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 6,62 (d, 1H), 6,12 (m, 1H), 6,01 (d, 1H), 4,11-4,32 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 3,54-3,68 (m, 2H). d) 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo
[00375] Sob argônio, NaH (31 mg, 0,78 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-(6-hidróxi-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi- nicotinonitrila (100 mg, 0,35 mmol) em DMF (2 ml) e agitada em temperatura ambiente durante 5 min. (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4- carbonil)-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico (intermediário IC1) (98,0 mg, 0,35 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada a 50 durante 4 h. Após esfriar, NaH (0,5 eq., 8,47 mg, 0,21 mmol) foi adicionado, a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 5 min e (R)1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)- pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico (intermediário IC1) (49,0 mg, 0,18 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 50º durante 1 h. Concentração e purificação por meio de RP-HPLC preparativa (Sunfire PrepC18 OBD 30 x 100 mm, 5 um; solvente A: H2O+TFA a 0,1% em vol.; solvente B;: CH;CN +TFA a 0,1% em vol.) proporcionou, após basificação das frações combinadas e extração com EtOAc, o composto do título como um sólido amarelo (72 mg, rendimento de 43%).
[00376] HPLC Rtvi0=2,72 min; ESIMS: 465 [(M+H)'].
[00377] H RMN (400 MHz, CD;OD): 5 8,36 (d, 1H), 8,06 (t, 1H), 6,78 (m, 1H), 6,37 (m, 1H), 6,17 (m, 1H), 4,81 (br s, 1H), 4,17-4,37 (m, 2H), 4,08 (s, 3H), 3,90-4,03 (m, 2H), 3,56-3,81 (m, 5H), 3,39-3,54 (m, 3H), 2,59-2,89 (m, 1H), 1,87-2,29 (m, 2H), 1,48-1,87 (m, 4H). Exemplos C2 a C26: Os compostos listados na Tabela 3 foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no
Exemplo C1. TABELA 3 Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; P UPLC [min] (MI) (método) Pr NS 1
E ” ATO % ( N o o c2 2,71 (M10) 465 2-metóxi-5-(6-[(R)-1-(tetra-hidro-pirano-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 ,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: IC2 >o
O
AS N fo) P
AI TOA o c3 2,71 (M10) 384 1-((R)-3-[4-(6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA7 Condição para introdução de cadeia lateral: cc3 Precursores usados: IC3
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) >o CC)
SS N Ou, P
AXIS TOA o Cc4 2,71 (M10) 384 1-((S8)-3-[4-(6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- propan-1-ona Condição para aminação de Buchwald: CA7 Condição para introdução de cadeia lateral: cc3 Precursores usados: IC4 ” o N&
E Do, o ” N O, VP TD Oo o 2,83 (M10) | 2-metóxi-5-(3-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-| * 16.981 479 4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-di-hidro- (M5) benzo[1 ,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 704879-75-4, IC1 Separação quiral: CD3
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método)
É o N&
E “O o ” N O, VP
TD O o 2,83 (M10) 6 ) 2-metóxi-5-(3-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-| * 19.957 479 4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-di-hidro- (M5) benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 704879-75-4, IC1 Separação quiral : CD3 N. o
SS Dx = N & N O, o O D+ —=N o RN o
N e7 5-(6-[(S)-1-(Furazan-3-carbonil)-pirrolidin-3- 4,13 (M4) 449 ilóxil-2,3-di-hidro-benzo[1 ,4])oxazin-4-11)-2- metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/IA12/88598-08-7
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) N o
NW
SAN Ss J N O, o CSA, o —N. Z
N 8 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-metil-2H-pirazol-3- 4,11 (M4) 461 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- enzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/IA12/16034-46-1 N o
NR
SA S&S N O, o GO TC, o (ON cs 5-(6-[(S)-1-(Isoxazol-5-carbonil)-pirrolidin-3- 4,17 (M4) 448 ilóxil-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2- metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/1A12/21169-71-1
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) N o
NR Ss J N O, o CS O, o % NH
N eo 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(1H-pirazol-4-carbonil)- 3,60 (M4) 47 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/IA12/37718-11-9 N. o
NR
SA N &S N O, o 1 o
N
CO CAL o C11 | 5-(6-[(S)-1-(2-Metanossulfonil-acetil)-pirrolidin-| 3,73 (M4) 473 3-ilóxil-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2- metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/1A12/2516-97-4
Temperatura ms Composto ambiente de [m/z; UPLC [min] (MH) (método) Nã O Dx Pá N
O N O, o COTA, 9º Sá c12 4,02 (M4) 463 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol- 2-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4])oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Cce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/IA12/518048-06-1 Nã& "
SA
O N O. o
WO O o 4 n=/ es 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(pirimidina-S-carbonil)- 3,72 (M4) 459 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57- 8/127423-61-4/IA12/4595-61-3
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) o”
JAN nó ;
SS N O, o
ÇO E Ss o / DP
N eu 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tiazol-5-carbonil)- 4,02 (M4) 464 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 14527-41-4 o
JAN NÓ ]
DS N O, o CS Ss. o 1 n/ eis 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(pirazina-2-carbonil)- 4,03 (M3) 459 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 1339899-95-4
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) o”
JAN NÓ ;
DS N O, o
O O o 1 N e186 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(piridina-3-carbonil)- 3,27 (MS) 458 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Cce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 59-67-6 Pr o AN DN ;
DS N O, o
CO o / NX =N c17 3,20 (M3 458 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(piridina-4-carbonil)- 120 (MS) pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 5-22-1
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) o
JAN NÓ |
W N O, o
CO O o VN
N e18 B5-(6-[(S)-1-(1,3-Dimetil-1 H-pirazol-4-carbonil)- 3,91 (M3) 475 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-2-metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 78703-53-4
É o AN NÓ |
SW N O, o OO, º N o c1s 3,44 (M3) 464 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(5-oxo-pirrolidina-3- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Cce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 7268-43-1
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método)
Ó o
JAN NÓ ;
DS N O, o CO Ox o A C20 5-(6-[(S)-1-(2,4-Dimetil-oxazol-5-carbonil)- 4,27 (3) 476 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-2-metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 2510-37-4 o
JAN NÓ ;
DS N O, P COI E. o / o 21 5-(6-[(S)-1-(6,6-Dimetil-1-0x0-5,6-di-hidro-aH- || PS (N3) Sos piran-2-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 80866-93-9
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método)
É o
JAN NÓ ;
SS N O, o CX Da o | N nº > Cc22 3,87 (M3) 498 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(pirazolo[1,5-a]pirimidina- 3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 25940-35-6 o
AN NÓ |
W N O,,, o
CO O o N o c23 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(5-oxo-pirrolidina-2- 3,47 (M3) 464 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 149-87-1
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; UPLC [min] (MH) (método) Pa o AN NE |
DS N O, o CO o: o o 2 5-(6-[(S)-1-([1,4]Dioxano-2-carbonil)-pirrolidin- | 2,68 (M10) TC24 | 3ilóxi-2,3-di-hidro-benzo[1,AJoxazin-4-i-2- | 22 58 epr7) | metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 89364-41-0 Separação quiral : CD7 o o AN NÓ ;
DS N O, o Cr
CIO o) 2,68 (M10 5-(6-[(S)-1-([1 4]Dioxano-2-carbonil)-pirrolidin- 68 ( ) C25 | 3ilóxil-2,3-di-hidro-benzo[1 AJoxazin-4-il-2- 33,80 467 metóxi-nicotinonitrilo (CD7) Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 89364-41-0 Separação quiral : CD7
Temperatura Composto ambiente de So P UPLC [min] a 1 (método) o AN
NÓS
DA N O, o
SO o o 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-piran-3- c26 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- 1,57 (M9) 465 benzo[1,4]Joxazin-4-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: CAS 26021-57-8, IA12, 127423-61-4, 873397-34-3 o N& 2X >N
O N O, o CO oÁA. o NaN Exemplo D1: (S)-2-metóxi-5-(6-((1-(1-metil-1H-imidazo|-4- carbonil)pirrolidin-3-il)óxi)-2H-benzo[b][1,4]Joxazin-4(3H)- iN)nicotinonitrila (de acordo com o Esquema 4) a1) 6-((terc-butildimetil-silil) óxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]Oxazina
[00378] Uma solução agitada de 3,4-di-hidro-2H-1,4-benzoxazin-6- ol (Registro CAS 226021-57-8) (6,00 g, 39,70 mmol) em THF (200 ml) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 3,18 g, 79,00 mmol) em temperatura ambiente. Após 20 min em temperatura ambiente, TBDMSCI (7,78 g, 51,6 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 h. Após este tempo, dietil éter (500 ml) e uma solução de NaHCO; saturada aquosa
(100 ml) foram adicionados. A camada aquosa foi extraída com dietil éter e os extratos orgânicos combinados foram secos com MgSO,, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (gradiente de ciclo-hexano/EtOAc) para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo.
[00379] HPLC Rtv1=3,37 min; ESIMS: 266 [(M+H)"].
[00380] 'H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,48-6,44 (m, 1H), 6,09- 6,05 (m, 1H), 5,94-5,89 (m, 1H), 5,76-5,70 (m, 1H), 4,06-4,00 (m, 2H), 3,25-3,19 (m, 2H), 0,92 (s, 9H), 0,12 (s, 6H). b1) 5-(6-((terc-butildimetil-silil)óxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)- il)-2-metoxinicotinonitrila
[00381] Uma solução agitada de 6-((terc-butildimetil-silil)óxi)-3,4-di- hidro-2H-benzo[b][1,4]Oxazina (8,88 g, 32,80 mmol) em tolueno (270 ml) foi tratada com 5-bromo-2-metoxinicotinonitrila (Registro CAS 941294-54-8) (7,68 g, 36,10 mmol), NaOtBu (4,87 g, 49,2 mmol), 2- diciclo-hexilfosfofino-2',4',6"-tri-isopropilbifenila (Registro CAS 564483- 18-7) (0,806 g, 1,684 mmol) e Pdadbaz (1,501 g, 1,684 mmol) em temperatura ambiente sob argônio. A mistura de reação foi aquecida para 110% durante 1,5 h. Após este tempo, a mistur a de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (200 mil), filtrado através de uma almofada de celite e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em MeOH e sonicado várias vezes para proporcionar um precipitado amarelo/laranja. O resíduo foi filtrado, lavado com metanol e seco sob vácuo para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo.
[00382] “HPLC Rtv,=3,90 min; ESIMS: 398 [(M+H)"].
[00383] 'H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,45-8,42 (m, 1H), 8,28- 8,24 (m, 1H), 6,72-6,68 (m, 1H), 6,24-6,19 (m, 1H), 6,06-6,03 (m, 1H), 4,24-4,18 (m, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,66-3,61 (m, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,07
(s, 6H).
[00384] método alternativo b2: diciclo-hexilfosfofino-2',4',6"-tri- isopropilbifenila (Registo CAS 564483-18-7) e Pd>(dba); foram substituídos por bis(tri-t-butilfosfina)paládio (Registro CAS 53199-31-8). c1) 5-(6-hidróxi-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)-2- metoxinicotinonitrila
[00385] “Uma solução agitada de 5-(6-((terc-butildimetil-silil)óxi)-2H- benzo[b][1,4]Joxazin-4(3H)-il)-2-metoxinicotinonitrila (10,85 g, 27,30 mmol) em THF (220 ml) foi tratada com TBAF (1,0 M em THF, 40,9 ml, 40,90 mmol) em temperatura ambiente. Após 40 min em temperatura ambiente, EtOAc (300 ml) e uma solução de NaHCO; saturada aquosa (200 ml) foram adicionados. Os extratos orgânicos foram secos com MgSO:,, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado através de trituração com dietil éter para proporcionar o composto do título como um sólido marrom-ciaro.
[00386] HPLC Rtv1,=2,00 min; ESIMS: 284 [(M+H)"].
[00387] HRMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,71 (s, 1H), 8,44 (d, 1H), 8,29 (d, 1H), 6,61 (d, 1H), 6,12 (dd, 1H), 6,01 (d, 1H), 4,21-4,16 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 3,64-3,59 (m, 2H). di) 3-((4-(5-ciano-6-metoxipiridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H- benzo[b][1,4]oxazin-6-il)óxi)pirrolidina-1-carboxilato de (S)-terc- butila
[00388] Uma solução agitada de 5-(6-hidróxi-2H- benzol[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)-2-metoxinicotinonitrila (3,70 g, 13,06 mmol) em DMF (60 ml) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 1,31 g, 32,70 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min. Após este tempo, (R)-1-Boc-3-Metanossulfoniloxipirrolidina (Registro CAS 141699-57-2) (5,386 g, 19,59 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 50 durante 3 h. Após este te mpo, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (gradiente de ciclo-hexano/acetona) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo.
[00389] HPLC Rtv11=3,13 min; ESIMS: 453 [(M+H)"].
[00390] H RMN (400 MHz, CDCIs): 5 8,31 (d, 1H), 7,81 (d, 1H), 6,82 (d, 1H), 6,32 (dd, 1H), 6,14 (d, 1H), 4,74-4,68 (m, 1H), 4,32-4,28 (m, 2H), 4,09 (s, 3H), 3,67-3,62 (m, 2H), 3,59-3,39 (m, 4H), 2,17-1,92 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
[00391] método alternativo d2: o álcool mesilado, hidreto de sódio e DMF foram substituídos por hidróxi-isoxazolidina, DEAD e THF correspondentes usando condições de Mitsunobu descritas no método CCA4. ei) (S)-2-metóxi-5-(6-(pirrolidin-3-ilóxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin- 4(3H)-il)nicotinonitrilo
[00392] “Uma solução agitada de 3-((4-(5-ciano-6-metoxipiridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)Óóxi)pirrolidina-1-carboxilato de (S)-terc-butila (4,35 g, 9,82 mmol) em DCM (160 ml) foi tratada com TFA (35,9 ml, 466 mmol) em temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h. Após este tempo, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (500 ml) e uma solução de NaHCO; saturada aquosa (500 ml) foi adicionada. Os extratos orgânicos foram lavados com uma solução de NaCl saturada aquosa (50 ml), secos com MgSO,, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto (composto do título, sólido amarelo) foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00393] “HPLC Rtvio= 2,06 min; ESIMS: 353 [(M+H)'].
[00394] 'H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,31 (d, 1H), 7,82 (d, 1H), 6,82 (d, 1H), 6,32 (dd, 1H), 6,12 (d, 1H), 4,71-4,65 (m, 1H), 4,32-4,27
(m, 2H), 4,09 (s, 3H), 3,67-3,62 (m, 2H), 3,22-2,90 (m, 4H), 2,08-1,88 (m, 2H). f1) (S)-2-metóxi-5-(6-((1-(1-metil-1H-imidazol-4-carbonil)pirrolidin- 3-il)óxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo
[00395] Uma solução agitada de ácido 1-metil-IH-imidazol-4- carboxílico (Registro CAS 41716-18-1) (0,578 g, 4,45 mmol) em DMF (40 ml) foi tratada com HOBT (0,695 g, 4,45 mmol) e DC (0,870 g, 4,45 mmol) e EtN (1,24 ml, 8,90 mmol) em temperatura ambiente. À mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min. Após este tempo, (S)-2-metóxi-5-(6-(pirrolidin-3-ilóxi)-2H- benzol[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrila (1,10 g, 2,97 mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi agitada durante 3 h e 15 min em temperatura ambiente. Após este tempo, a mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (200 ml) e uma solução de NaHCO; saturada aquosa (200 ml) foi adicionada. Os extratos orgânicos foram secos com MgSO,;, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Gradiente de DCM/metanol) e HPLC preparativa (Coluna SunFire C18, gradiente de CH3;CN/TFA a 1% em HO, frações puras foram tratadas com DCM e uma solução de NaHCO; saturada aquosa; os extratos orgânicos combinados foram secos com MgSO;,, filtrados e concentrados sob pressão reduzida) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo.
[00396] HPLC Rtvio=2,27 min; ESIMS: 461 [(M+H)'].
[00397] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,46-8,41 (m, 1H), 8,30- 8,26 (m, 1H), 7,66-7,59 (m, 2H), 6,77-6,72 (m, 1H), 6,37-6,29 (m, 1H), 6,14-6,07 (m, 1H), 4,90-4,79 (m, 1H), 4,25-4,11 (m, 3H), 3,99 (s, 3H), 3,98-3,78 (m, 1H), 3,70-3,41 (m, 7H), 2,10-1,93 (m, 2H).
[00398] “método alternativo f2: o ácido carboxílico, HOBT e DC e
DMF foram substituídos por cloreto ácido carboxílico e DCM.
[00399] “método alternativo f3: o ácido carboxílico, HOBT e DC e DMF foram substituídos por um cloroformato e DCM.
[00400] “método alternativo f4: o ácido carboxílico, HOBT e EDC foram substituídos por cloreto carbâmico. Exemplos D2 a D40: Os compostos listados na Tabela 4 foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no Exemplo D1. TABELA 4 Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; P HPLC [min] | pr 44 (método) Do
É N Ss | N O, o i NÃ do
COTAS A da a 2,07 (M10) 455 1-((S)-3-[4-(6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-2- morfolin-4-il-etanona Via sintética usada: a1, b2 (intermediário: Registro CAS 163129-79-1), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 89531-58-8) “o ZF>N Ss | N O, o CO Or o NY P3 | >.Dimetilamino-1-((S)-3-[4-(6-metóxi-piridin-3-] 2:08 (M10) | 413 11)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)etanona Via sintética usada: a1, b2 (intermediário: Registro CAS 163129-79-1), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 1118-68-9)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o Ns Ás Rs N o, P
CS O o o 2,72 (M10) 465 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b2 (intermediário IA12),) c1,d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 40191-32-0) o N&
ÉN O N O, P
CO O o > o 2,61 (M10) 506 5-(6-[(S)-1-(1-Acetil-piperidina-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-2-metóxi-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 25503-90-6) N o
SB N A | N O, P CO Or o x 2,22 (M10) 438 5-(6-[(S)-1-(2-Dimetilamino-acetil)-pirrolidin-3- ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]Joxazin-4-11)-2- metóxi-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 1118-68-9)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) N o SR > N A | N O, o Cooto No D7 o 2,14 (M10) | 480 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-morfolin-4-il-acetil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 89531-58-8) N o
SD N Ss N O,,, o
COOL o 2,14 (M10) 480 5-[6-((S)-1-Isobutiril-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di- hidro-benzo[1,4]oxazin4-i1]-2-metóxi- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 89531-58-8) N Dx
NR
SA N S&S N O, jo Cook. º 3,19 (M10) 451 5-(6-[(S)-1-(3,3-Dimetil-butiril)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-di-hidro-benzo[1,4]Joxazin-4-i1)-2-metóxi- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 7065-46-5)
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) N o
NR SAy Ss | N O, o
O TUA o 3,06 (M10) 437 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(3-metil-butiril)-pirrolidin-3- ilóxil-2,3-di-hidro-benzo[1 ,4])oxazin-4-il)- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 108-12-3) N. a
S RA, Ss | N O, o
CO OX o fe) Éster de metil ácido (S)-3-[4-(5-Ciano-6- 2,96 (M10) 411 metóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1- carboxílico Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1,f3 (intermediário: Registro CAS 79-22-1) N o
NR SR Ay Ss | N o. P
N CO Ts 2,63 (M10) 425 2-metóxi-5-16-[(S)-1-(2-metóxi-acetil)-pirrolidin- 3-ilóxil-2,3-di-hidro-benzo[1,4]Joxazin-4-il)- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 38870-89-2)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) N Di SÁ, A | N O, o
DI O o D13 3,22 (M10) 463 5-[6-((S)-1-Ciclo-hexanocarbonil-pirrolidin-3- ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2- metóxi-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 2719-27-9) o Nã
É N
O N O, o
CD O o
N > 2,23 (M10) 478 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-piperidina-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 68947-43-3) N a
SR N Ss | N O, o COOL e o 2,67 (M10) 439 B5-(6-[(S)-1-(2-Hidróxi-2-metil-propionil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4Joxazin- 4-il)-2-metóxi-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 594-61-6)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o AN Ns
SÓ N. O, Pp C DD Sá o S=O0 3 5-(6-[(S)-1-(1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-| — 1,62 (M8) 513 tiopirano-4-carbonil)-p4irolidin-3-ilóxi]-2,3-di- hidro-benzo[1 ,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 64096-87-3) o AN
NS o N O, Pp
CO O o /
N / o PIT | 2.metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-6-0x0-1,6-di-hidro] 1.55 (M13) | 488 piridina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di- hidro-benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1,d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 3719-45-7) o” NÓS o > o N. O, Ns
CSA 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(oxazol-4-carbonil)- 1,75 (M13) | 448 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), cC1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 23012-13-7)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) 7
A
NS Ss o
ON o Nx o . 1 1,56 (M13) 488 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-2-0x0-1,2-di-hidro- piridina-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di- hidro-benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 33972-97-3) o "JP
NÓS
A N O,,, q ÇO Or o RW o 1,60 (M8) 474 2-metóxi-5-6-[(S)-1-(6-0x0-1,6-di-hidro- piridina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di- hidro-benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 5006-66-6) .
NOS PP É Pra o
SONTAÇA o NH 1,50 (M13) 474 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-0x0-1,2-di-hidro- piridina-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di- hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), cC1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 22282-72-0)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) oo HJ] N | sd
ON
Z N DE Lo 2-metóxi-5-(6-[(R)-2-(tetra-hidro-pirano-4- 3,01 (M10) 467 carbonil)-isoxazolidin-4-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d2 (intermediário Registro CAS 878385-72-9) e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 40191-32-0) o o
HJ N | CO
ON | N to 2-metóxi-5-[6-((R)-2-propionil-isoxazolidin-4- | 311 (M10) 411 ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d2 (intermediário Registro CAS 878385-72-9) e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 79-03-8) o o
H N | DO
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NÊ SO Lo 2-metóxi-5-(6-[(S)-2-(tetra-hidro-pirano-4- 1,63 (M9) 467 carbonil)-isoxazolidin-4-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d2 (intermediário Registro CAS 1092454-84-6) e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 40191-32-0)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o o
H N SO
ON N Lo 2-metóxi-5-[6-((S)-2-propionil-isoxazolidin-4- 1,66 (M9) 411 ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d2 (intermediário Registro CAS 1092454-84-6) e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 79-03-8) o o nro ". N | o Ás
OR N Ne Lo 2-metóxi-5-(6-[(R)-2-(1-metil-1H-imidazol-4- || 2:31 (M10) | 463 carbonil)-isoxazolidin-4-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 41716-18-1) o
O | º =
ON SS
GG N N lo D27 2,62 (M10) 461 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-1H-pirazol-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 5952-92-1)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) q“ Ns. ) N RS) N O, o
CO o o 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-furano-3- 2,68 (M10) 451 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 89364-31-8). Isômero 1 o N&
É N
O N Oo, o
CO O o o 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-furano-3- 2,68 (M10) 451 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 89364-31-8). Isômero 2 Po Fo Rs N O,, P
CI O o o 2,63 (M10) 440 1(S)-3-[4-(6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra- hidro-pirano-4-il)-metanona Via sintética usada: a1, b2 (intermediário Registro CAS 163129-79-1), c1, d1 e 1, f2 (intermediário: Registro CAS 40191-32-0)
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) Do Nã ÀÂx Ss | N O, P
ÇO º NON 2,24 (M10) 461 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(3-metil-3H-imidazol-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 41806-40-0) o N Pr
NS > o N O, AO C DD O Ss D32 o 1,69 (M13) 448 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(oxazol-5-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 118994-90-4) 2 o
JAN
NES |] Prá 3 N O, = 7 N
N CO Ou D33 o 1,80 (M13) 462 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(4-metil-oxazol-5-carbonil). pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 2510-32-9)
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) o
N Ns. É | > o N o» IN G NÃo 1,77 (M13 466 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(Morfolina-4-carbonil)- TT ) pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1,f4 (intermediário: Registro CAS 15159-40-7) ff AN nã o o N. O,
N
OS TO o J 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(4-metóxi-ciclo- 1,90 (M13 493 hexanocarbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- 90 ( ) benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 95233-12-8) Isômero 1 o AN
NS - o N O,
COMO o t 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(4-metóxi-ciclo- hexanocarbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- 2,01 (M13) 493 benzo[1 4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 95233-12-8) Isômero 2
Temperatura ms Composto ambiente de [Im/z; HPLC [min] (MH) (método) - o AN
NS Ss o N O,
COTA o NO D37 NA 1,28(M13) | 475 2-metóxi-5-(6-((S)-1-[2-(1-metil-1 H-imidazol-4- il)-acetil]-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 (intermediário Registro CAS 941294-54-8), c1, d1 e 1, f1 (intermediário: Registro CAS 2625-49-2) N o
NR Dx Je N
NS Í N O,,, o
O E o N 21º 464 (M10) 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(piperidina-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 intermediário IA12, c1, d1 Registro CAS 127423-61-4, f1 Registro CAS 84358-134 última etapa : remoção do grupo de proteção Boc usando TFA de maneira convencional.
Temperatura ms Composto ambiente de Im/z; HPLC [min] (MH) (método) Na o
FN
O o, Pp Co o o Cm 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-((S)-pirrolidina-3-carbonil)-| 2.24 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1 ,4]oxazin- 450 nani (M10) 4-il) -nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 intermediário Registro CAS IA12, c1, d1 Registro CAS 127423-61-4, f1 Registro CAS 140148-70-5 última etapa : remoção do grupo de proteção Boc usando TFA de maneira convencional. Do ns. nv Rs N O, o
CAI TA º N 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3-carbonil)-| 2,24 450 pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- (M10) 4-il)-nicotinonitrilo Via sintética usada: a1, b1 intermediário IA12, c1, d1 Registro CAS 127423-61-4, f1 Registro CAS 72925-16-7, última etapa : remoção do grupo de proteção Boc usando TFA de maneira convencional. o
NS | ra NAO, Pp
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N
Í Exemplo E1: 4(S)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro- 1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-11)-(1-metil-1H-
imidazol-4-il)-metanona (de acordo com o Esquema 5) o” o of o BETETHO No É dane aa ADE LO! 2E=S (IT VA o” o” O KOH aq, Pd.(dba), tetramethil- es eaao! tbutil-X Phos, dioxano, 17.5 h, 100ºC Les NO! | No OH CX Cor 4d o Oo o*%o, º TA e nO hm Fa UV,676 f TFA, DCM, 18 h, treta N o o ambiente — E FU NAÁA —— —. 9 CI O o ) “o o so kh Ho O . O N o ' te f o e O temperatura NO, CIO (Ou HBTU, DIPEA, DMF, 20 h, ambiente Ú Tr Sa” n o 6 ' a) 7-Cloro-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina
[00401] Uma mistura de 7-cloro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-2-ona (Registro CAS 928118-43-8) (630 mg, 3,41 mmol) e BH;*THF (1 Mem THF) (10,2 ml, 10,2 mmol) em THF (20 ml) foi agitada durante 2h a 80%. A mistura de reação foi dissipada com MeOH, s olução aquosa de NaOH a 1 M foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na7SO,, filtradas e evaporadas. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 100:0 a 50:50 em 12 min) para proporcionar o composto do título como um sólido branco (432 mg, rendimento de 74%).
[00402] — HPLC Rtv,=0,47 min; ESIMS: 171 [(M+H)'].
[00403] 'H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,74 (s, 1H), 6,46 (s, 1H),
4,43 (br s, 1H) 4,21-4,25 (m, 2H), 3,48-3,51 (m, 2H). b) 7-Cloro-1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-11)-2,3-di-hidro-1H- pirido[3,4-b][1,4]-Oxazina
[00404] Uma mistura de 7-cloro-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,4]Oxazina (127 mg, 0,74 mmol), 5-bromo-2-metóxi-3-metilpiridina (Registro CAS 760207-87-2) (0,196 g, 0,986 mmol), Cs.CO;3 (534 mg, 1,64 mmol) e XPhos (28 mg, 0,06 mmol) em dioxano (3,5 ml) foi desgaseificada com argônio e Pd2(dba); (27 mg, 0,038 mmol) foi adicionado. Após agitação durante 3,5 h a 100 CTC a mistura de reação foi filtrada sobre hyflo, solução de NaHCO; saturada aquosa foi adicionada e a mistura foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre NasSO,, filtradas e evaporadas. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 95:5 a 40:60 em 14 min) para proporcionar o composto do título como um sólido de cor clara (190 mg, rendimento de 87%).
[00405] — HPLC Rtv,=1,04 min; ESIMS: 292 [(M+H)'].
[00406] 'H RMN (400 MHz, CDCI;): 5 7,94 (d, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,31 (d, 1H), 6,31 (s, 1H), 4,34-4,37 (m, 2H), 4,01 (s, 3H), 3,68-3,72 (m, 2H), 2,24 (s, 3H). c) 1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-o]l
[00407] Uma mistura de 7-cloro-1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3- di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina (190 mg, 0,65 mmol), tetrametil-t- butil-XPhos (13 mg, 0,03 mmol) em dioxano (3 ml) e solução aquosa de KOH a 5M (0,04 ml, 1,95 mmol) foi desgaseificada com argônio e Pd>2(dba); (6 mg, 0,01 mmol) foi adicionado. Após agitação durante 17,5 h a 100, a mistura de reação foi filtrada so bre hyflo, o filtrado foi seco sobre Na7sSO,, filtrado e evaporado. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (EtOAc/MeOH 100:0 a 85:15 em 17 min) para proporcionar o composto do título como um sólido branco (111 mg, rendimento de 62%).
[00408] HPLC Rtv,=0,67 min; ESIMS: 274 [(M+H)"].
[00409] —H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 10,32 (br s, 1H), 8,02 (d, 1H), 7,62 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 4,84 (s, 1H), 4,17-4,21 (m, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,61-3,66 (m, 2H), 2,17 (s, 3H). d) terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidina-1- carboxílico
[00410] Uma solução de 1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-1)-2,3-di-hidro- 1H-pirido[3,4-b][1 4]Joxazin-7-0l (111 mg, 0,41 mmol) em DMF (3 ml) foi tratada com NaH (33 mg, 0,81 mmol) durante 10 min a 20. Terc-butil éster de ácido (R)-3-Metanossulfonilóxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-61-44) (162 mg, 0,61 mmol) foi adicionado. Após agitação durante 19 h a 60€T e 18 h a 80CT, solução de NaHCO ;3 saturada aquosa foi adicionada e a mistura de reação foi extraída com TBME. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na7SO,, filtradas e evaporadas. O produto bruto foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc 93:7 a 40:60 em 13,5 min) para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo-claro (107 mg, rendimento de 59%).
[00411] HPLC Rtvw,=1,21 min; ESIMS: 443 [(M+H)'].
[00412] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 7,93 (d, 1H), 7,61 (br s, 1H), 7,32 (br s 1H), 5,71 (s, 1H), 5,41 (br s, 1H), 4,32 (br s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,65-3,70 (m, 2H), 3,37-3,61 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,58 (s, 9H), 0,82-0,97 (m, 2H).
[00413] E)1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3- ilóxi)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina
[00414] “Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi- 5-metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]-0xazin-7-ilóxi]-
pirrolidina-1-carboxílico (103 mg, 0,23 mmol) e TFA (0,179 ml, 2,33 mmol) em DCM (1,8 ml) foi agitada durante 18 h em temperatura ambiente. Solução de NaCO; saturada aquosa foi adicionada e a mistura de reação foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na,SO,, filtradas e evaporadas. O composto do título foi obtido como uma espuma amarela clara (72 mg, rendimento de 90%).
[00415] — HPLC Rtv,=0,64 min; ESIMS: 343 [(M+H)'].
[00416] 'H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,93 (d, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,32 (m, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,29-5,35 (m, 1H), 4,29-4,33 (m, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,65-3,69 (m, 2H), 2,82-3,14 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,80-2,10 (m, 2H). f) ((S)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1H-imidazo|-4-i])- metanona
[00417] Uma mistura de ácido 1-metil-1H-imidazol-4-carboxílico (Registro CAS 41716-18-1) (15 mg, 0,42 mmol), HBTU (53 mg, 0,14 mmol) e DIPEA (0,025 ml, 0,14 mmol) em DMF (0,6 ml) foi agitada em temperatura ambiente durante 5 min. Uma solução de 1-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-i1)-7-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]Oxazina (0,037 g, 0,11 mmol) em DMF (0,6 ml) foi adicionada. Após agitação durante 20 h em temperatura ambiente, água foi adicionada e a mistura de reação foi extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre Na>SO;, filtradas e evaporadas. O produto bruto foi purificado por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18, HyO + TFA a 0,1%/ACN + TFA a 0,1% a 90:10 a 60:40 em 16 min) para proporcionar o composto do título como uma espuma amarela-clara (24 mg, rendimento de 49%).
[00418] HPLC Rtv,=0,74 min; ESIMS: 451 [(M+H)"].
[00419] H RMN (400 MHz, DMSO): 5 8,00 (m, 1H), 7,58-7,63 (m,
3H), 7,53 (d, 1H), 5,51 (d, 1H), 5,29-5,40 (m, 1H), 4,23-4,29 (m, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,77-4,19 (m, 2H), 3,66 (m, 5H), 3,39-3,63 (m, 2H), 2,15 (s, 3H), 1,89-2,11 (m, 2H). Exemplos E2 a 11: Os compostos listados na Tabela 5 foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no Exemplo D1. TABELA 5 Composto / Temperatura MS Condições d . ambiente de HPLC| [m/z; ondições de reação [min] (método) | (M+1)' o ns É Prá N o o RO", nÁ Cro terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi-5- 1,19 (M1 243 metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- 19 (M1) b][1,4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidina-1-carboxílico Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, IA9, 127423-61-4 o
NS Í Prá NAO», o
COMO o ZN o 1(S)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di- 0,84 (M1) 455 hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]- ' pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4, IA9, cloreto de acila 40191-32-0
Composto / Temperatura MS io " ambiente de HPLC| [m/z; Condições de reação [min] (método) (M+1)'] " O “"F
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COI O o 4N So o 1(8)-3-[1-(6-Difluorometóxi-5-metil-piridin-3-il)- 1,09 (M1) 328 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxil- pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*- tiopirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, IA8, 127423-61-4, 64096-87-3 o Ns cl | Prá N o o
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CX O o Z4N $-o o 1(S)-3-[1-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-2,3-di- 0,79 (M1) 523 hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxil- pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-. tiopirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4, IA11, 64096-87-3
Composto / Temperatura MS io " ambiente de HPLC| [m/z; Condições de reação [min] (método) (M+1)'] Du
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CO O o 4N S=O n o E6 (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- 0,92 (M1) 557 IN((S)-3-[1-(6-metóxi-5-trifluorometil-piridin-3-il). 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxil- pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8/127423. 61-4/IA21/64096-87-3
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N | E7 1(8)-3-[1-(6-metóxi-S-trifluorometil-piridin-3-il)- 0,87 (M1) 505 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-i1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8/127423. 61-4/IA21/41716-18-1
Composto / Temperatura MS Cc io " ambiente de HPLC| [m/z; ondições de reação [min] (método) (M+1)] o NO Cc! | Prá NAO, o CA "
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N | E8 1(S)-3-[1-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-2,3-di- 0,75 (M1) 471 hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-i1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: cc Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4, IA11, 41716-18-1
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CI O o 4N o 0,95 (M1) 491 1(S)-3-[1-(6-Difluorometóxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 4Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccec1 Precursores usados: CAS 928118-43-8/127423- 61-4/IA8/5337-03-1
Composto / Temperatura MS io " ambiente de HPLC| [m/z; Condições de reação [min] (método) (M+1)']
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N | E10 0,84 (M1) 487 1(S)-3-[1-(6-Difluorometóxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Cceo1 Precursores usados: CAS 928118-43-8/127423 61-4/IA8/41716-18-1
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DD N O, Pp COMA, o Ciclopropil-((S)-3-[1-(6-difluorometóxi-5-metil- piridin-31)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- 1,01 (M1) 447 b][1,4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8/127423. 61-4/IA8/Cloreto de acila : 4023-34-1 Exemplos de Referência E12 a E13: Os compostos listados na Tabela 5a foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no Exemplo D1, aplicando estratégias adequadas de grupos de proteção.
TABELA 5A Exemplo temperatura ms Composto / ambiente de 1 - : [m/z; Referência Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) oH N O, Pp
OT s=0 o (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*- tiopirano-4-il)-((S)-3-[1-(6-hidróxi-S-metil- piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- 0,54 (M16) 489 b][1 ,AJoxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB7 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc1 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA69/64096-87-3 o NS oH > o
ÇA OA o ZN ;S=O o (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*- tiopirano-4-il)-[((S)-3-[1-(S-hidroximetil-6- 0,63 (M16) metóxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-1H- pirido[3,4-b][1 4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1- il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA: Condição para ligação de amida: CB7 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc1 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA70/64096-87-3 Exemplo F1: (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-il) -(S)-
3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona (de acordo com o Esquema 6) Pdídba), “ " (CH),-t butil-X-Phos BH,.THF,THF, — o N KOH, dioxano / H;O MOS 1h,75C TX J 5h, 100 N Es e N ————————— Noto : o õ o o 4h ú AT o ã N OH NaH, DMF. N O. ? CÚ TO 18 h/ 80ºC ( Cs CA A FAO E A) o =N , S Ao o nO Pd.(dba),., XPhos, De TFA, DCM NaOt, dioxano y o > 18 h. temperatura ambiente hn. o x. “ DÃO ns Í NA E d) CA O o-& “. o NOS Si, |! | o o > . RAE ANA N o. MF, 1h SEE O CN Ds pp EI Í CIO O" , CI O ta s=0 o a) 7-Cloro-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina
[00420] Uma solução de 7-cloro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-2-ona (Registro CAS 928118-43-8) (3,70 g, 20 mmol) em THF (63 ml) foi tratada com BH3*THF (1M em THF, 47 ml, 47 mmol). A mistura de reação foi agitada a 75C durante 1 h e, então, esfriada para a temperatura ambiente e dissipada com metanol (24 ml, 600 mmol). À mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi captado com EtOAc e lavado com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto-título como um sólido amarelo claro (3,3 g, rendimento de 96%).
[00421] —UPLC Rtv,=0,47 min; ESIMS: 171 [((M+H)"].
[00422] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 7,53 (s, 1H), 7,11 (br s, 1H), 6,47 (s, 1H), 4,09 (t, 2H), 3,17-3,38 (m, 2H). b) 2,3-Di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-o0]
[00423] Uma mistura de 7-cloro-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]Oxazina (1,08 g, 6,33 mmol), solução de KOH aquosa (1,07 9, 19 mmol KOH em 5,4 ml de água), 2-di-t-butilfosfofino-3,4,5,6- tetrametil-2',4' ,6-tri-i-propilbifenila a 98% (0,30 g, 0,68 mmol) e Pd2(dba);3 (0,29 g, 0,32 mmol) em dioxano (32,5 ml) foi desgaseificada três vezes com nitrogênio, o tubo foi selado e a mistura de reação foi agitada a 100'C durante 5 h. Após esfriar para temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com EtOAc e metanol. Os filtrados foram concentrados e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH, 98:2 a 75:25) como um resíduo laranja (660 mg, rendimento de 69%)
[00424] UPLC Rtyv,=0,34 min; ESIMS: 153 [(M+H)'].
[00425] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 10,33 (br s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 6,71 (s, 1H), 5,15 (s, 1H), 3,95 (t, 2H), 3,25 (m, 2H). c) terc-butil éster de ácido (S)-3-(2,3-Di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico
[00426] Uma solução seca de 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,4]oxazin-7-01 (0,66 g, 4,34 mmol) e terc-butil éster de ácido (R)-3- Metanossulfonilóxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-61-
4) (1,73 g, 6,51 mmol) em DMF (40 ml) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 0,21 g, 8,68 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 80 C durante 18 h. Após esfriar para temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com TBME e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre síilica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 95:5 a 30:70) como um óleo amarelo (1,035 g, pureza de 75%, rendimento de 56%)
[00427] —UPLC Rtv,=0,65 min; ESIMS: 322 [(M+H)"].
[00428] 'H RMN (400 MHz, CDCIs): 5 7,54 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,42 (br s, 1H), 4,25-4,41 (m, 1H), 4,19 (t, 2H), 3,38-3,66 (m, 6H), 2,00- 2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H). d) Terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidina-1- carboxílico
[00429] “Uma mistura de terc-butil éster de ácido (S)-3-(2,3-di-hidro- 1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico (254 mo, 0,79 mmol), 5-bromo-2-metóxi-3-metilpiridina (Registro CAS 760207- 87-2) (208 mg, 1,03 mmol), XPhos (30 mg, 0,06 mmol) e NaOtBu (167 mg, 1,74 mmol) em dioxano (6 ml) foi desgaseificada com argônio durante 5 min e, então, Pd2(dba); (29 mg, 0,03 mmol) foi adicionado. O tubo foi enchido com argônio, selado e a mistura de reação foi agitada a 100C durante 2 h. Após esfriar para temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com EtOAc e os filtrados foram lavados com solução de NaHCO;3 saturada aquosa. A camada aquosa foi reextraída duas vezes com EtOAc, as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre NazSO,, filtradas, concentradas e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc, 100:0 a 50:50) como uma goma clara (274 mg, rendimento de 78%).
[00430] —“UPLC Rtv,=1,20 min; ESIMS: 443 [(M+H)"].
[00431] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,93 (d, 1H), 7,61 (br s, 1H), 7,30-7,35 (m, 1H), 5,71 (s, 1H), 5,34-5,46 (m, 1H), 4,31 (br s, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,68 (t, 2H), 3,34-3,62 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,01-2,09 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). e) 1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-7-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di- hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina
[00432] “Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi- 5-metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxi]- pirrolidina-1-carboxílico (364 mg, 0,82 mmol) em DCM (6 ml) foi tratada com TFA (0,63 ml, 8,23 mmol) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h e, então, dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre MgSO;,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto-título como um óleo amarelo, o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional (313mg, pureza de 90%, rendimento quantitativo).
[00433] —“UPLC Rtv,=0,65 min; ESIMS: 343 [(M+H)'].
[00434] H RMN (400 MHz, CDCI;): 5 7,93 (d, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,32 (d, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,26-5,36 (m, 1H), 4,31 (t, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,67 (t, 2H), 2,95-3,15 (m, 3H), 2,81-2,92 (m, 1H), 2,22 (s, 3H), 1,98- 2,10 (m, 1H), 1,79-1,90 (m, 1H). f) (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-i1)-((S)-3-[1-(6- metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin- 7-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona
[00435] Uma solução de ácido 1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*- tiopirano-4- carboxílico (Registro CAS 64096-87-3) (106 mg, 0,59 mmol) em DMF (4 ml) foi tratada com HBTU (225 mg, 0,59 mmol) e DIPEA (0,24 ml, 1,37 mmol). A solução laranja resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 5 min e, então, uma solução de 1- (6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro-1H- pirido[3,4-b][1 4]Oxazina (156 mg, 0,46 mmol) em DMF (2 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h e, então, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi captado com DCM e lavado com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca passando-a através de um cartucho de separação de fase, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia SFC (coluna DEAP (250 mm x 30 mm, 60A, sum) Princeton, gradiente de metanol a 11 - 16% em CO, supercrítico em 6 min) como um sólido levemente colorido (112 mg, rendimento de 49%).
[00436] UPLC Rtv,=0,81 min; ESIMS: 503 [(M+H)'].
[00437] HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,01 (s, 1H), 7,61 (m, 1H), 7,52 (d, 1H), 5,52 (d, 1H), 5,24-5,43 (m, 1H), 4,26 (br s, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,59-3,79 (m, 3H), 3,41-3,56 (m, 2H), 3,21-3,39 (m, 1H), 2,98-3,21 (m, 4H), 2,67-2,83 (m, 1H), 1,84-2,20 (m, 9H).
[00438] —H RMN (600 MHz, DMSO-d;s): 5 8,01 (s, 1H), 7,63-7,59 (m, 1H), 7,55-7,51 (m, 1H), 5,55-5,51 (m, 1H), 5,43-5,24 (m, 1H), 4,29-4,22 (m, 2H), 3,90 (s, 3H), 3,80-3,60 (m, 2H), 3,56-3,37 (m, 3H), 3,28-2,99 (m, 5H), 2,89-2,66 (m, 1H), 2,19-2,09 (m, 4H), 2,08-1,98 (m, 2H), 1,98- 1,86 (m, 3H). CRISTALIZAÇÃO DO EXEMPLO 1 ATRAVÉS DE AQUECIMENTO E RESFRIAMENTO EM ISOPROPANOL/DIETIL ÉTER
[00439] 474 mgdo Exemplo F1 amorfo foram suspensos em 1,4 mL de isopropanol. A mistura foi aquecida para 70T e agitada a 70T para permitir dissolução completa do Exemplo F1. A solução foi esfriada para a temperatura ambiente, um resíduo de goma foi formado. 2 mL de dietil éter foram adicionados e a pasta foi agitada durante 48h. Uma suspensão branca foi formada. A suspensão foi filtrada e o sólido foi seco a 40, 15 mbar. Um pó branco fino foi obtido. O material continha apenas um solvente residual leve (<0,5%). Uma forma anidra cristalina do Exemplo F1 com ponto de fusão inicial de 148,77 foi obtido.
[00440] Lista dos picos 2-teta mais significativos a partir do Padrão de Difração de Pó por Raios X com tolerâncias de +05 da forma anidra do Exemplo F1 (método M1) (incluindo picos baixos/fracos para informação). Nota: essa lista de picos não é exaustiva, mas apenas "inter alia". Exemplos F2 a F15: Os compostos listados na Tabela 6 foram preparados através de um procedimento análogo àquele usado no Exemplo F1.
TABELA 6 Temperatura ms Composto / ambiente de Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) o” Pra NAO, o SO Os (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano- 4-11)-((S)-3-[1-(5-fluoro-6-metóxi-piridin-3-il)- || 0,79 (M1) 507 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Joxazin-7- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB2 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA10/64096-87-3 o
NOS > N O, o CÁ, o / v » | 1(S)-3-[1-(5-Fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-2,3- di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 A4Joxazin-7-ilóxil- | 0.73 (M1) 455 pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-i1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB2 Condição para introdução de cadeia lateral: co Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA10/41716-18-1
Temperatura MS Composto / ambiente de Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) o NOS Po | P o
ÇÃO o ZN o F4 2-metóxi-5-(7-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4- 0,83 (M1) 466 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- pirido[3,4-b][1 4]Joxazin-1-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: co1 Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4, IA12, cloreto de acila 40191- 32-0
É o AN
NOS o Oo C Cro 7 AN / NS
N | 2-metóxi-5-(7-1(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4- || 0,73 (M1) 462 carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- pirido[3,4-b][1 4]Joxazin-1-il)-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4,1A12, 41716-18-1
Temperatura MS Composto / ambiente de ia = : Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) | O=S=O0
NÓS > N O, o
CX O
AN o 1(S)-3-[1-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3- 11)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-7- | 9.76 (M1) 503 ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-i1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4, IA1, cloreto de acila 40191-32- o
DO EF
NS F >
H No o o
IX
RAN $=o Oo F7 1(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3- 0,82 (M1) 539 i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 4]oxazin-7- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexa-hidro- 1lambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB2 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA6/64096-87-3
Temperatura MS Composto / ambiente de Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método)
DO EF
NS E >
H NAO o
ÇA o RN o 1(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3- F8 i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-7- | 0,88 (M1) 491 ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-i1)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA6/Cloreto de acila 40191- 32-0 “Oo F
NS DE > Cad | +» o RN % 1-((S8)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin- 3-11)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin- | 0,83 (M1) 451 7-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-2-metóxi-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA6/Cloreto de acila : 38870- 89-2
Temperatura MS Composto / ambiente de Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) “O F
NOS F >
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N | 1(S)-3-[1-(S-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3- 0,77 (M1) 487 i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 AJoxazin-7- ilóxil-pirrolidin-1-i)-(1-metil-1 H-imidazol-4-i)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB3 Condição para introdução de cadeia lateral: co1 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA6/41716-18-1 | O=S-=O F
NÓSFDE > CX be
EO o VW N o 1-1(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6- F11 Metanossulfonil-piridin-3-11)-2,3-di-hidro-1 n 0,76 (M1) 499 pirido[3,4-b][1 4]oxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il)- 2-metóxi-etanona Condição para aminação de Buchwald: CA1 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43- 8/127423-61-4/IA4/Cloreto de acila : 38870- 89-2
Temperatura MS Composto / ambiente de Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) o
NS > NAO o
EP
AN $-Oo o F12 (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano- 4-i)-(3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i)-2,3- | 981 (M1) Sos di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 4]Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il;-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA4 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: co1 Precursores usados: CAS 928118-43- 8/141699-57-2/IA9/64096-87-3 Pr o AN
NS > NA Or, o
CIA O o ZN jo Oo F13 547-[(S)-1-(1,1-Dioxo-hexa-hidro- 1,12 (M1) 454 1lambda*6*-tiopirano-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-di-hidro-pirido[3,4-b][1 ,4Joxazin-1- il-2-metóxi-nicotinonitrilo Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 928118-43-8, 127423-61-4,1A12,64096-87-3
Temperatura MS Composto / ambiente de Im/z; Condições de reação HPLC [min] (MH) (método) o” rá CAL, o F ão (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano- F14 4-i)-((R)-3-fluoro-4-[1-(6-metóxi-5-metil- 0,89 (M1) so piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- 35,9 (CD12) b][1 ,A4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: co Precursores usados: CAS 869481-93- 6/1174020-51-9 Método de separação quiral: CD12 o o
É JE COCO
AN (1, 1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano- 4-il)-((R)-3-fluoro-4-[1-(6-metóxi-5-metil- 0,89 (M1) 521 piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- 45,8 (CD12) b][1 ,Aloxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: ce Precursores usados: CAS 869481-93- 6/1174020-51-9 Método de separação quiral: CD12
Exemplo G1: Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-[(S)-3-[1-(6-metóxi-5- trifluorometil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona b) o em OS BH,THF.THF Bro ns " Nati, THF F o . JN ” oO LEX Id, + ma sc Nao º o 80ºC, 17h Fe F ” "oO E. AD nr ANO, esmas [ ( n NA, NaOtBu, XPhos, Pd.(dba), Ni o. o o xs dioxano, 100ºC, 2 h CX E eat: “o F SAN. o > , ns : o A, ' À kt TFA DCM E HBTU, DIPEA, DWF DA emperatura ambiente, (NR ON temperatura ambiente, 17h N o. o ÇA CÁ, o É X.
NOS =) a) 7-Bromo-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina
[00441] Uma solução de 7-bromo-1H-pirido[3,4-b][1,4]Joxazin-2-ona (Registro CAS 943995-72-0) (2,93 g, 12,79 mmol) em THF (40 ml) foi tratada com BH3*THF (1M em THF, 30 ml, 30 mmol). A mistura de reação foi agitada a 80 C durante 1,5 h e, então, esfriada para a temperatura ambiente e dissipada com metanol. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi captado com EtOAc e lavado com solução de NaOH aquoso a 1 M. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO;,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto-título como um sólido branco (2,48 g, rendimento de 90%).
[00442] —“UPLCyÓ,=0,49 min; ESIMS: 217 [((M+H)'].
[00443] H RMN (400 MHz, CDCIs): 5 7,72 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 4,42 (br s, 1H), 4,20-4,24 (m, 2H), 3,49 (m, 2H). b) benzil éster de ácido 7-Bromo-2,3-di-hidro-pirido[3,4- b][1,4]Oxazina-1-carboxílico
[00444] Uma solução seca de 7-bromo-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]Oxazina (1,85 g, 8,60 mmol) em THF (50 ml) foi tratada aos poucos a 0 C com NaH em óleo mineral a 60% (0,52 g, 12,90 mmol) e a mistura de reação foi agitada a OC durante 1 h. Cloroformato de benzila (Registro CAS 501-53-1) (1,40 ml, 9,85 mmol) foi adicionado gota a gota e a mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e agitada durante 20 h, finalmente dissipada com metanol e, então, diluída com solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre NazSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc, 100:0 a 60:40) como um sólido branco (2,06 g, rendimento de 68%).
[00445] — UPLCÓ,=1,14 min; ESIMS: 349 [(M+H)'].
[00446] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,28 (br s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,35-7,46 (m, 5H), 5,30 (s, 2H), 4,20-4,27 (m, 2H), 3,92-4,01 (m, 2H). c) 2,3-Di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-o]
[00447] “Uma mistura de benzil éster de ácido 7-bromo-2,3-di-hidro- pirido[3,4-b][1 4]Oxazina-1-carboxílico (1,27 g, 3,63 mmol), solução de KOH aquosa (0,90 g, 16 mmol KOH em 3,2 ml de água), 2-di-t- butilfosfofino-3,4,5,6-tetrametil-2',4' 6-tri-i-propilbifenila a 98% (0,26 9, 0,54 mmol) em dioxano (16 ml) foi desgaseificada com argônio durante min e, então, Pd2(dba); (0,25 g, 0,27 mmol) foi adicionado. O tubo foi enchido com argônio e, então, selado e a mistura de reação foi agitada a 100C durante 19 h. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com EtOAc e metanol. O filtrados foram secos sobre Na,SO,, filtrados, concentrados e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH, 95:5 a 60:40) como um resíduo laranja (262 mg, rendimento de 47%).
[00448] —“UPLCRiv,=0,32 min; ESIMS: 153 [((M+H)"]
[00449] 'H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 10,33 (br.s, 1H), 7,03 (br.s, 1H), 6,71 (s, 1H), 5,15 (s, 1H), 3,95 (t, 2H), 3,25 (td, 2H). d) Terc-butil éster de ácido (S)-3-(2,3-Di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico
[00450] Uma solução seca de 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,4Joxazin-7-ol (200 mg, 0,66 mmol) e terc-butil éster de ácido (R)-3- Metanossulfonilóxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-61- 4) (262 mg, 0,99 mmol) em DMF (6 ml) foi tratada com hidreto de sódio em óleo mineral a 60% (53 mg, 1,33 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 80C durante 17 h. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com TBME e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na7SO;,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc, 88:12 a 0:100) como um óleo (140 mg, rendimento de 66%).
[00451] —UPLCRiv,=0,66 min; ESIMS: 322 [(M+H)*].
[00452] H RMN (400 MHz, CDCIs): 5 7,54 (s, 1H), 5,86 (s, 1H), 5,42 (br.s, 1H), 4,25-4,41 (m, 1H), 4,19 (t, 2H), 3,38-3,66 (m, 6H), 2,00- 2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H). e) terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi-5-trifluorometil- piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]- pirrolidina-1-carboxílico
[00453] “Uma mistura de terc-butil éster de ácido (S)-3-(2,3-di-hidro- 1H-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico (115 mg, 0,386 mmol), 5-bromo-2-metóxi-3-trifluorometilpiridina (Registro CAS 1214377-42-0) (119 mg, 0,47 mmol), XPhos (14 mg, 0,03 mmol) e NaOtBu (76 mg, 0,79 mmol) em dioxano (2,5 ml) foi desgaseificada com argônio durante 5 min e, então, Pd2(dba); (13 mg, 0,01 mmol) foi adicionado. O tubo foi enchido com argônio e, então, selado e a mistura de reação foi agitada a 100 C durante 2 h. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com EtOAc e os filtrados foram lavados com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre NasSO;,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc, 93:7 a 40:60) como uma goma clara. (91 mg, rendimento de 51%).
[00454] —UPLCRiv, =1,27 min; ESIMS: 497 [(M+H)*].
[00455] —H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,29 (d, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,64 (d, 1H), 5,70 (s, 1H), 5,36-5,46 (m, 1H), 4,34 (br s, 2H), 4,09 (s, 3H), 3,70 (t, 2H), 3,34-3,62 (m, 4H), 2,02-2,11 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). f) 1-(6-metóxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-7 -((S)-pirrolidin-3-ilóxi)- 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina
[00456] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[1-(6-metóxi- 5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-7- ilóxil-pirrolidina-1-carboxílico (88 mg, 0,18 mmol) em DCM (1,3 ml) foi tratada com TFA (0,14 ml, 1,77 mmol) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 17 h e, então, dissipada com solução de Na,CO; saturada aquosa e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto do título (66 mg, rendimento de 94%).
[00457] —UPLCRiv,=0,72 min; ESIMS: 397 [(M+H)*].
[00458] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,28 (d, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,65 (s, 1H), 5,68 (s, 1H), 5,31-5,39 (m, 1H), 4,31-4,37 (m, 2H), 4,08 (s, 3H), 3,67-3,72 (m, 2H), 3,01-3,18 (m, 3H), 2,85-2,97 (m, 1H), 2,01- 2,13 (m, 1H), 1,82-1,95 (m, 1H). g) Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-[(S)-3-[1-(6-metóxi-5-trifluorometil- piridin-3-i1)-2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona
[00459] Uma solução de hidrobrometo de ácido imidazo[2,1-b]tiazol- 6-carboxílico (1:1) (Registro CAS 725234-39-9) (25 mg, 0,10 mmol) em DMF (0,45 ml) foi tratada com HBTU (41 mg, 0,11 mmol) e DIPEA (0,04 ml, 0,21 mmol). A solução laranja resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 5 min e, então, uma solução de 1-(6- metóxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro- 1H-pirido[3,4-b][1,4]Oxazina (32 mg, 0,08 mmol) em DMF (0,45 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 17 h e, então, concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi captado com EtOAc e lavado com salmoura. A camada orgânica foi seca sobre Na7SO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após RP-HPLC prep. (Sunfire PrepC18 30 x 100 mm, 5 um; solvente A: H/O+TFA a 0,1% em vol.; solvente B;: CH;CN + TFA a 0,1% em vol., gradiente 1545% de B em 16 min). Após filtração sobre um cartucho Agilent PL-HCO;3 MP SPE, o composto do título foi obtido como um sólido (23 mg, rendimento de52%).
[00460] —UPLCRiv, =1,00 min; ESIMS: 547 [(M+H)*].
[00461] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,49 (dd, 1H), 8,16-8,20 (m, 2H), 7,92 (dd, 1H), 7,57 (d, 1H), 7,37 (dd, 1H), 5,63 (d, 1H), 5,33- 5,45 (m, 1H), 4,25-4,31 (m, 2H), 3,52-4,14 (m, 9H), 1,88-2,12 (m, 2H). Exemplos G2 a G3: Os compostos listados na Tabela 7 foram preparados através do procedimento análogo àquele usado no Exemplo G1.
TABELA 7 Temperatura || MS Composto / ambiente de | [m/z; Condições de reação HPLC [min] | (M+1)* (método) ] o 2
COMA
TO S-o [) (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4- iN)-((R)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3- di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,AJoxazin-zilóxiz- | 9.80 (M1) | 503 pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: ce1 Precursores usados: CAS 943995-72- 0/132945-75-6/IA9/64096-87-3 Do EF F
Z NRO, P
E TA HN y (5-Amino-1-metil-1H-imidazol-4-il)-((S)-3-[1-(6- metóxi-5-trifluorometil-piridin-3-i1)-2,3-di-hidro- 1H-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1- 0,86 (MIM1) 520 il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA2 Condição para ligação de amida: CB1 Condição para introdução de cadeia lateral: Cce1 Precursores usados: CAS 943995-72- 0/127423-61-4/1A21/IB3)/Produto obtido após reação Deboc usando TFA em CH,2CL feito da forma convencional Exemplos H1 a H16: Os compostos listados na Tabela 8 foram preparados através de separação cromatográfica de diastereômeros.
TABELA 8 tha ms Composto / a ambiente [m/z; o . de HPLC + Condições de reação Imin] (M+1) (método) ] 1 O=S=O
NS l Prá N O, o OT o o No o H1 (1,1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- 1(S)-3-[1-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 0,87 (M2) 531 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4]Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA1,CAS 127423-61- 4/64096-87-3 Método de separação quiral: CDS o=$b=0
NS Ê Pra N o o
O OA o ão o (1,1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- H2 1(S)-3-[1-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 0,87 (M2) 536 2,3-di-hidro-1H-pirido[3,4-b][1,4Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA1,CAS 127423-61- 4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD5 e MS Composto / a amulente [m/z; Condições d 2 de HPLC (M+1)* ondições de reação [min] | (método) | O=S-O
NS > N O, Oo
SS OS o o o H3 [1 4]Dioxan-2-il-[((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5- 0,88 (M2) 504 metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA1,CAS 127423-61- 4/89364-41-0 Método de separação quiral: CD6 | O=S-=O
NS > N O, O O Cri. o > H4 [1 4]Dioxan-2-il-[(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5- 0,88 (M2) 504 metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA1),CAS 127423-61- 4/89364-41-0 Método de separação quiral: CD6 e MS Composto / a amplente [m/z; Condições d . de HPLC (M+1)* ondições de reação [min] | (método) o NS o > N O, o O O. o o H5 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 0,91 (M2) 472 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i)- [1 A]dioxan-2-il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA31, CAS 52605-98-8, 127423-61-4/89364-41-0 Método de separação quiral: CD1 o
NS > N O, Oo O ão o o H6 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 0,91 (M2) 472 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- [1 4]dioxan-2-il-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA31,CAS 52605-98-8, 127423-61-4/89364-41-0 Método de separação quiral: CD1
Temperatur MS Composto / a ambiente [m/z; de HPLC + Condições de reação [min] om (método) o NOS o > N o O CI o, o O H7 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro- 0,91 (M2) 472 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra- hidro-furan-2-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA9 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA29, CAS 52605-98-8, 127423-61-4/1264293-76-6 Método de separação quiral: CD1 o
NOSSOS > N O, o
O O H8 ((S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- | 991 (12) | 472 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra- hidro-furan-2-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA29, CAS 52605-98-8, 127423-61-4/1264293-76-6 Método de separação quiral: CD1
Temperatur MS Composto / a ambiente [m/z; o . de HPLC + Condições de reação [min] om (método) o no
WU N o o Co o “e o 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- H9 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1-(1,1- 0,91 (M2) 504 dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA29, CAS 52605-98-8, 127423-61-4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD1 o | NOS º > N O, o CS oA o so Oo H1o 1(S)-3-[4-(5,6-dimetóxi-piridin-3-i)-3,4-di-hidro- 0,91 (M2) 504 2H-benzo[1 4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-iI-(1,1- ' dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB4 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA29, CAS 52605-98-8, 127423-61-4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD1
Temperatur MS Composto / a ambiente [m/z; de HPLC + Condições de reação [min] (M+1) (método) 1 o
NS F
O N o o
O EA º “Te o (1,1-Dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- H11 1(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- | 3,26(M2) | 492 hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA10,CAS 124432-70-8, 127423-61-4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD1 o
NOS E >
CS OX o o o H12 (1,1-Dioxo-tetra-hidro-1 lambda"6*-tiofen-3-l)- 3,25 (M2) 192 1(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di- ' hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA10,CAS 124432-70-8, 127423-61-4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD1 e MS Composto / a amplente [m/z; A . de HPLC Condições de reação [min] (M+1) (método) 1 o NR! | > N O, O COD o o o s Oo 1(8)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- H13 | hidro-2H-benzo[1 4Joxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-in- | 3.52 (M2) | 508 (1,1-dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA11,CAS 848366-28-9, 127423-61-4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD2 o
NR > N O, O CD o o o s Oo 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di- H14 | hidro-aH-benzo[1 AJoxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-in- || 3.52 (M2) | 508 (1,1-dioxo-tetra-hidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA11,CAS 848366-28-9, 127423-61-4/64096-87-3 Método de separação quiral: CD2 e MS Composto / a amplente [m/z; Condições d . de HPLC (M+1)* ondições de reação [min] | (método) o
NS F > N O, o SS O. o o H15 [1 ,4]Dioxan-2-il-[(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi- 3,28 (M2) 460 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA10,CAS 124432-70-8, 127423-61-4/89364-41-0 Método de separação quiral: CD1 o nO E > N O, O SS O, o o) H16 [1 4]Dioxan-2-il-[(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metóxi- 3,32 (M2) 460 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4Joxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB5 Condição para introdução de cadeia lateral: CC2 Precursores usados: IA10,CAS 124432-70-8, 127423-61-4/89364-41-0 Método de separação quiral: CD1 Exemplo 11: (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-i1)-K(S)-
3-[5-fluoro-4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona a) b) o” meoHeNC2N vb *? Ho o d
HT NA o to H VT A. Jd Í tl BH; THF, THF N DC totemperatura CO tecido A l; o ambiente, 17h THF, 0ºCto60ºC 19h o; e) o o o” [RUPhoSpaladacicio 2 A 8. pegón Taimeno Í E oh NaotBu dioxano, Co De tempera ambiente, Sd CÊ Or 100ºC, 23h >» 9 + Ho o o
AX NO TEA, HATU, N o H o 2 f N 0%, 1.5h ” Db Ta $=O0
É a) 5-Fluoro-6-metóxi-4H-benzo[1,4]Joxazin-3-ona
[00462] Uma solução de 6-bromo-5-fluoro-4H-benzo[1,4]0xazin-3- ona (Registro CAS 1029421-36-0) (5,0 g, 20 mmol) em MeOH (10 ml) foi tratada com solução de metóxido de sódio (30% em MeOH, 11,3 ml, 61 mmol) e Cul (0,4 g, 2 mmol). Após agitação durante 20 h a 80 C, a reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um sólido amarelo-claro. (2,2 g, rendimento de 92%).
[00463] —“UPLCRtiv,=0,64 min.
[00464] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,74 (m, 2H), 4,53 (s, 2H),
3,79 (s, 3H). b) 5-Fluoro-6-hidróxi-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
[00465] Uma solução de 5-fluoro-6-metóxi-4H-benzo[1,4]/0xazin-3- ona (2,0 g, 10 mmol) em DCM (50 ml) foi tratada a 0 C com tribrometo de boro (9,6 ml, 101 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 17 h e, então, resfriada para 0C e dissipada com metanol. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi captado com EtOAc e lavado com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi lavada com solução de Na7sS,O, aquoso a 10%, seca sobre Na7SO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (hexano/EtOAc, 100:0 a 60:40) como um sólido marrom (780 mg, rendimento de 42%).
[00466] “UPLCRiv,=0,49 min; ESIMS: 228 [([M+HCOO)].
[00467] HRMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 11,00 (s, 1H), 6,65 (d, 1H), 6,45 (t, 1H), 4,50 (s, 2H). c) 5-Fluoro-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
[00468] Uma solução de 5-fluoro-6-hidróxi-4H-benzo[1,4]0xazin-3- ona (780 mg, 4,2 mmol) em THF (10 ml) foi tratada com BH3;*THF (1M em THF, 12,8 ml, 12,8 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 17 h e, então, resfriada para 0C e dissipada com metanol (30 ml). A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida para obter um óleo marrom (720 mg, rendimento quantitativo).
[00469] — UPLCRiv, =0,54 min; ESIMS: 170 [(M+H)*].
[00470] HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,95 (s, 1H), 6,45 (d, 1H), 6,00 (t, 1H), 4,09 (m, 2H), 3,45 (m, 2H). d) (S)-3-(5-Fluoro-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)- pirrolidina-1-carboxílico terc-butil éster de ácido
[00471] Uma solução de trifenilfosfina (1,5 g, 5,7 mmol) em THF (20 ml) foi tratada a 0*C com DEAD (0,900 ml, 5,69). A solução laranja foi agitada durante 10 min em temperatura ambiente e, então, 5-fluoro- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-0l (740 mg, 4,37 mmol) e 3- hidroxipirrolidina-1-carboxilato de (R)-terc-butila (1065 mg, 5,69 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada durante 19 ha 60C e, então, concentrada sob pressão reduzida. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Hexano/EtOAc, 100:0 a 70:30) como um óleo incolor (1,1 9, rendimento de 74%).
[00472] —“UPLCRinv,=1,07 min; ESIMS: 339 [(M+H)"]
[00473] HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,45 (d, 1H), 6,00 (t, 1H), 5,42 (br.s, 1H), 4,25-4,41 (m, 1H), 4,19 (t, 2H), 3,38-3,66 (m, 6H), 2,00- 2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H) e) terc-butil éster de ácido (S)-3-[5-fluoro-4-(6-metóxi-5-metil- piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carboxílico
[00474] Uma mistura de terc-butil éster de ácido (S)-3-(5-fluoro-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico (100 ma, 0,296 mmol), 5-bromo-2-metóxi-3-metilpiridina (Registro CAS 760207- 87-2, 179 mg, 0,887 mmol), RuPhos (6,90 mg, 0,015 mmol), NaOtBu (85 mg, 0,887 mmol) e (2-diciclo-hilfosfofino-2' 6'-di-isopropil-1 1"- bifenil)(2-(2-aminoetil )fenil)paládio(Ill) (12,07 mg, 0,015 mmol) em dioxano (2 ml) foi desgaseificada com argônio e, então, selada e a mistura de reação foi agitada a 100 C durante 23 h. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com EtOAc e os filtrados foram lavados com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO;,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Hexano/EtOAc, 100:0 a 70:30) como um óleo amarelo (123 mg, rendimento de 63%).
[00475] —“UPLCRiv,=1,29 min; ESIMS: 460 [(M+H)*].
[00476] HRMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 7,75 (d, 1H),7,45 (d, 1H), 6,55 (t, 1H), 6,35 (d, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,15 (t, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,60 (t, 2H), 3,38-3,66 (m, 4H), 2,12 (s, 3H), 2,00-2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H). f) 5-Fluoro-4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00477] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[5-fluoro-4- (6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidina-1-carboxílico (123 mg, 0,185 mmol) em DCM (2 ml) foi tratada com HCl/dioxano a 4N (0,046 ml, 0,185 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 3 dias e, então, concentrada sob pressão reduzida para obter um óleo negro (100 mg, rendimento de 79%).
[00478] —“UPLCRinv,=0,73 min; ESIMS: 360 [(M+H)"].
[00479] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 7,75 (d, 1H),7,45 (d, 1H), 6,80 (m, 1H), 6,75 (m, 1H), 5,20 (m, 1H), 4,15 (t, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,60 (t, 2H), 3,38-3,66 (m, 4H), 2,12 (s, 3H), 2,00-2,18 (m, 2H). g) (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-i1) Á(S)-3-[5-fluoro- 4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6- ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-metanona
[00480] Uma solução de ácido 1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*- tiopirano-4- carboxílico (Registro CAS 64096-87-3) (33,9 mg, 0,15 mmol) em DCM (2 ml) foi tratada em temperatura ambiente com Et;N (0,061 ml, 0,440 mmol) e HATU (55,7 mg, 0,147 mmol). A solução laranja resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 20 min e, então, uma solução de 5-fluoro-4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-6-((S)- pirrolidin-3-ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4)Oxazina (100 mg, 0,147 mmol) em DCM (2 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 h e, então, diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após RP-HPLC preparativa (SunFire C18 coluna OBD 5 mm 30 x 100 mm, gradiente de ACN a 25% a 45% em 16 min). As frações foram liofiizadas e filttadas sobre um cartucho PL-HCO; MP SPE para proporcionar um sólido marrom (54 mg, rendimento de 71%).
[00481] —“UPLCRiv,=0,94 min; ESIMS: 520 [(M+H)*].
[00482] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 7,75 (d, 1H),7,45 (d, 1H), 6,55 (t, 1H), 6,35 (d, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,15 (t, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,59- 3,79 (m, 3H), 3,41-3,56 (m, 2H), 3,21-3,39 (m, 1H), 2,98-3,21 (m, 4H), 2,67-2,83 (m, 1H), 1,84-2,20 (m, 9H). Exemplos 12 a 13: Os compostos listados na Tabela 9 foram preparados através do procedimento análogo àquele usado no Exemplo 1. TABELA 9
MS Composto / HPLCRt [m/z; Condições de reaçã Pin qarery Ondiçõoes de reação (método) ] “Oo EF
NOS F | Prá F H o
O N
DP F=o o 12 1(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)- 0,97 (Ma 556 5-fluoro-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6- 97 (M2) ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexa-hidro- 1lambda*6*-tiopirano-4-il)-mnetanona Condição para aminação de Buchwald: CA11 Condição para ligação de amida: CB3 Condição para introdução de cadeia lateral: Ccc4 Precursores usados: IA6,CAS 1254123-51- 7/127423-61-4,/64096-87-3
MS Composto / HPLCRt [m/z; z [min] (M+1)* Condições de reação (método) 1 | O=S=O
NS > : N or o
CID o o IB 1(S)-3-[5-Fluoro-4-(6-Metanossulfonil-5-metil- | 0,85 (M2) 520 piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-i)- metanona Condição para aminação de Buchwald: CA11 Condição para ligação de amida: CB3 Condição para introdução de cadeia lateral: Precursores usados:!A1,CAS 127423-61- 4/Cloreto de acila 40191-32-0 Exemplo J: 546-[(S)-1-((S)-1-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]-oxazin-4-11)-2-metóxi- nicotinonitrila o Ns
ÁN
O N. O, o CIO,
N %
[00483] Uma solução de 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-((S)-pirrolidina-3- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)- nicotinonitrila (Exemplo D39; 23 mg, 0,051 mmol) em DCM (1 ml) foi tratada com Et;N (0,014 ml, 10,4 mg, 0,102 mmol). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante 10 min e, então, cloreto de acetila (0,0044 ml, 4,87 mg, 0,061 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1,5 h. Mais 2 equivalentes de Et;N (0,014 ml, 10,4 mg, 0,102 mmol) e 1 equivalente de cloreto de acetila ((0,0037 ml, 4,06 mg, 0,051 mmol) foram adicionados, agitação foi continuada em temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura de reação foi diluída com DCM e solução de NaHCO; saturada aquosa e, então, passada através de um separador de fases, a camada aquosa foi extraída duas vezes com DCM, as camadas orgânicas combinadas foram concentradas para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo, o qual foi purificado por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18, ACN a 10-85% em 20 min). As frações foram extraídas com DCM/NaHCO;, secas sobre MgSO,, concentradas e liofiizadas para proporcionar o composto do título como uma espuma amarela (14 mg, rendimento de 53%).
[00484] — HPLCRti m10=22,55 min; ESIMS: 492 [(M+H)']. Exemplo K: 5-(6-[(S)-1-((R)-1-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi- nicotinonitrila Na o ÇA, o %
[00485] Este exemplo foi preparado em analogia ao Exemplo J, começando a partir de 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila (Exemplo D40).
[00486] —HPLCRt m10=2,55 min; ESIMS: 492 [(M+H)']. Exemplo L: 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-((R)-1-metil-pirrolidina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila
Ns o ÇA, o N—
[00487] Uma solução de 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)- nicotinonitrila (Exemplo D40, 26 mg, 0,058 mmol) em MeOH (1 ml) foi tratada com a solução de formaldeído aquoso a 37% (0,043 ml, 46,9 mg, 0,578 mmol) e ácido acético (0,004 ml, 4,17 mg, 0,0069 mmol). À solução foi agitada sob argônio em temperatura ambiente durante 45 min e, então, NaBH;CN (5,65 mg de um sólido a 90%, 0,081 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 45 min, diluída com DCM e solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada aquosa foi reextraída duas vezes com DCM, as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas para proporcionar o composto do título bruto, o qual foi purificado por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18, gradiente de ACN a 5-75% em 20 min). As frações foram extraídas com solução de NaHCO; saturada aquosa/DCM, secas sobre MgSO,, concentradas e liofiizadas para proporcionar o composto do título como uma espuma amarela (20 mg, rendimento de 72%).
[00488] —HPLCRiv11=2,24 min; ESIMS: 464 [(M+H)']. Exemplo M: 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1- piridin-2-il-pirrolidin-3-ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina o=8=0 rá N O, =
ÇDSO
[00489] Uma solução de 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-
((S)-1-piridin-2-il-pirrolidin-3-ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina (preparada conforme descrito no Exemplo B1; 60 mg, 0,154 mmol), 2- cloropiridina (CAS 109-09-1, 0,017 ml, 21,0 mg, 0,185 mmol), Xphos (8,81 mg, 0,018 mmol) e Cs,CO;3 (125 mg, 0,385 mmol) em dioxano (1 ml) foi desgaseificada com argônio e, então, Pd.(dba); (7,05 mg, 0,0077 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi aquecida a 80T durante 6 h, XPhos (8,81 mg, 0,018 mmol) foi adicionado, a mistura foi novamente desgaseificada com argônio e Pd2(dba)3 (7,05 mg, 0,0077 mmol) foi adicionado. Agitação foi continuada durante a noite a 80. A mistura foi filtrada através de celite e concentrada para proporcionar o composto do título, o qual foi purificado através de NP-HPLC (coluna Grace Grom Saphir 65 Si, gradiente de Heptano:EtOAc:MeOH a 68:30:2 a 0:65:35 em 12 min), rendimento de 32 mg (45%).
[00490] — HPLCRtu,=0,72 min; ESIMS: 467 [((M+H)*]
[00491] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,32 (d, 1H), 8,14-8,12 (m, 1H), 7,49-7,39 (m, 2H), 6,86 (d, 1H), 6,61 (d, 1H), 6,57-6,46 (m, 2H), 6,37 (d, 1H), 4,92-4,85 (m, 1H), 4,26-4,24 (m, 2H), 3,76-3,74 (m, 2H), 3,71 (d, 2H), 3,63-3,55 (m, 2H), 3,32 (s, 3H), 2,67 (s, 3H), 2,35-2,27 (m, 1H), 2,26-2,15 (m, 1H). Exemplo N; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-6-((S)-1- pirimidin-2-il-pirrolidin-3-ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina | O=S=O
NS
OS N=
COMO o N
[00492] Uma solução de 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-6- ((S)-1-piridin-2-il-pirrolidin-3-ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina (preparada conforme descrito no Exemplo B1; 60 mg, 0,154 mmol), 2-
cloropirimidina (CAS 1722-12-9, 24,7 mg, 0,216 mmol) e DIPEA (0,054 ml, 39,8 mg, 0,308 mmol) em ACN (1 ml) foi aquecida a 140 C€ durante 30 min em um reator de micro-ondas. O produto foi extraído com solução de NaHCO; saturada aquosa e EtOAc, filtrado e concentrado para proporcionar o composto do título, o qual foi purificado através de NP-HPLC preparativa (coluna Grace Grom Saphir 65 Si, gradiente de Heptano: ELOAc:MeOH a 68:30:2 a 0:65:35 em 12 min), rendimento de 45 mg (63%)
[00493] —HPLCRt h1=0,97 min; ESIMS: 468 [(M+H)"]
[00494] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,37-8,26 (m, 3H), 7,44 (d, 1H), 6,87 (d, 1H), 6,62 (d, 1H), 6,56-6,46 (m, 2H), 4,92-4,84 (m, 1H), 4,27-4,25 (m, 2H), 3,90-3,63 (m, 6H), 3,33 (s, 3H), 2,69 (s, 3H), 2,37- 2,13 (m, 2H). Exemplo O1: 2-metóxi-5-(2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)- nicotinonitrila Não o Dx e N O ;
LOSS
O O o [D) HN LO e. ox LI) Mantis, c) H BH,THF, THF K o É ] oo Temo LAO o=b=0 o. 9 IO j PA(OH), formato de amônio N ou: " E N + o MeOH, 60ºC, 15 min N LIS o DMF, 60ºC, £L O n É Ch e > N O” Br N o o
MOI N EEE, LO O O 100ºC, 18h o a) N-(5-Benzilóxi-2-hidróxi-fenil)-2-cloro-propionamida
[00495] Uma solução de ácido 2-cloro-propiônico (Registro CAS 598-78-7) (0,914 ml, 7,53 mmol) em DMF (20 ml) foi tratada com Et;N (1,259 ml, 9,08 mmol) e HATU (3,05 g, 8,08 mmol). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min e, então, 2-amino-4-benzilóxi-fenol (Registro CAS 102580-07-4) (1,08 g, 5,02 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 5 min, diluída com EtOAc e concentrada. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 50:50) como um sólido laranja (617 mg, rendimento de 40%).
[00496] —“UPLCRini1=1,32 min; ESIMS: 306 [(M+H)'].
[00497] —HRMN (400 MHz, DMSO-d;): 5 9,50 (d, 1H), 7,70 (br,s 1H), 7,45 (m, 5H), 6,80 (d, 1H), 6,65 (dd, 1H), 5,00 (s, 2H), 2,65 (s, 3H).
b) 6-benzilóxi-2-metil-4H-benzo[1,4]Joxazin-3-ona
[00498] “Uma solução seca de N-(5-benzilóxi-2-hidróxi-fenil)-2-cloro- propionamida (617 mg, 2,0 mmol) em DMF (15 ml) foi tratada a OC com hidreto de sódio a 95% (58,1 mg, 2,4 mmol). Após agitação em temperatura ambiente durante 1 h, a mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre NasSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 80:20) como um sólido branco (146 mg, rendimento de 27%).
[00499] — UPLCRin11=1,30 min; ESIMS: 270 [(M+H)'].
[00500] *H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 10,80 (s, 1H), 7,45 (m, 5H), 6,85 (d, 1H), 6,65 (m, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,55 (q, 1H), 1,45 (d, 3H). c) 6-Benzilóxi-2-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00501] Uma solução de 6-benzilóxi-2-metil-4H-benzo[1,4]0xazin-3- ona (146 mg, 0,54 mmol) em THF (4 ml) foi tratada a OC com BH3*THF (1M em THF, 0,813 ml, 0,813 mmol). Após agitação a 35 C durante 1 h, a mistura de reação foi resfriada para O C, dissipada com água (0,5 ml) e uma solução de NaOH a 4N aquosa (0,5 ml) e, então, diluída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido como um sólido branco (125 mg, rendimento de 90%).
[00502] — UPLCRini1=1,40 min; ESIMS: 256 [(M+H)'].
[00503] —*HRMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 7,45 (m, 5H), 6,50 (d, 1H), 6,20 (d, 1H), 6,10 (dd, 1H), 5,35 (s, 1H), 4,90 (s, 2H), 4,00 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 1,35 (d, 3H). d) 2-Metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
[00504] Uma solução de 6-benzilóxi-2-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4)Oxazina (124 mg, 0,486 mmol) em MeOH (10 ml) foi tratada em temperatura ambiente com formato de amônio (276 mg, 4,37 mmol) e Pd(OH), (68,2 mg, 0,486 mmol). A mistura de reação foi agitada a 60 C durante 15 min. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com DCM e MeOH e, então, os filtrados foram concentrados. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH, 100:0 a 90:10) como um sólido marrom. (69,4 mg, rendimento de 87%).
[00505] —UPLCRin11=0,56 min; ESIMS: 166 [(M+H)'].
[00506] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,50 (s, 1H), 6,45 (d, 1H), 6,00 (d, 1H), 5,85 (dd, 1H), 5,25 (s, 1H), 4,00 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 1,35 (d, 3H). e) [(8S)-3-(2-Metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)- pirrolidin-1-il]-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
[00507] Uma solução seca de 2-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ol (69 mg, 0,42 mmol) e metanossulfonato de (R)- 1-(tetra-hidro-2H-pirano-4-carbonil)pirrolidin-3-ila — (intermediário — C1, 209 mg, 0,75 mmol) em DMF (1,4 ml) foi tratada com hidreto de sódio 60% em óleo mineral (15,8 mg, 0,63 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 50€T durante 18 h. A mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH, 100:0 a 95:5) como um sólido vermelho-alaranjado pegajoso (128 mg, rendimento de 88%).
[00508] —UPLCRivi2=1,01 min; ESIMS: 347 [(M+H)*]
[00509] —*H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,50 (d, 1H), 6,25 (d, 1H), 6,00 (d, 1H), 6,05 (m, 1H), 5,65 (m, 2H), 5,35 (d, 2H), 4,45 (d, 2H), 3,00-4,00 (m, 6H), 2,00-2,40 (m, 4H), 1,5 (m, 4H) f) 2-metóxi-5-(2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila
[00510] Uma mistura de (S)-(3-(2-metil-3,4-di-hidro-2H-
benzol[b][1,4]oxazin-6-ilóxi)pirrolidin-1-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4- il)metanona (128 mg, 0,369 mmol), 5-bromo-2-metoxinicotinonitrila (Registro CAS 941294-54-8, IA12), (94 mg, 0,443 mmol), XPhos (8,81 mg, 0,018 mmol), NaOtBu (53,3 mg, 0,554 mmol) e Pd2(dba); (16,92 mg, 0,018 mmol) em tolueno (2,5 ml) foi desgaseificada com argônio. A mistura de reação foi agitada a 80 C durante 20 min. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de hyflo, enxaguada com EtOAc e os filtrados foram lavados com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO;,, filtrada e concentrada. O composto do título foi obtido após RP-HPLC preparativa (SunFire C18 coluna OBD 5 mm 30 x 100 mm, gradiente de ACN a 32% a 67% em 15 min). As frações foram liofilizadas e filtradas sobre um cartucho PL-HCO3 MP SPE para proporcionar um sólido marrom (39,1 mg, rendimento de 22%).
[00511] —UPLCRini1=21,10 min; ESIMS: 479 [(M+H)'].
[00512] H RMN (400 MHz, DMSO-ds, 394 K): 5 8,40-8,30 (m, 1H), 8,10-8,00 (m, 1H), 6,75 (d, 1H), 6,35 (m, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,85 (m, 1H), 3,75-3,00 (m, 5H), 2,65 (m, 1H), 2,00 (m, 1H), 1,65 (m, 2H), 1,44 (d, 3H).
Exemplos 02 a 03: Os compostos listados na Tabela 10 foram preparados — através de separação cromatográfica de diastereômeros.
TABELA 10 Composto / HPLCRt [min] Im: Condições de reação (método) (MH) v SS ) o N Or VN
LISO Separação de diastereômero de pico 1 2-metóxi-5-((S)-2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro- pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- o2 benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo 19,89 (M15) Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: IO, IA12, CAS 104706-47-) O/ cloreto de acila 40191-32-0 Separação de diastereômero cromatográfico: CD11 NS Do
É N O , N Or VN
LS Pico 2 diastereômero separation 2-metóxi-5-((R)-2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro- pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro- os benzo[1 ,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo 27,33 (M15) Condição para aminação de Buchwald: CA6 Condição para ligação de amida: CB6 Condição para introdução de cadeia lateral: cc2 Precursores usados: IO, IA12, CAS 104706-47- 0/ Cloreto de acila 40191-32-0 Separação de diastereômero cromatográfico: CD11
Exemplo P: 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-piperidin-4-ilmetil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila NS o
XÁ N ” N O,
O PA o
N a) 4-((3-(4-(5-ciano-6-metoxipiridin-3-11)-3,4-di-hidro-2H- benzo[b][1,4]oxazin-6-ilóxi)pirrolidin-1-il)metil)piperidina-1- carboxilato de (S)-terc-butila
[00513] Uma solução de 2-metóxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di- hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrila (vide análogo B1, c), 95 ma, 0,270 mmol) em DCE (4,5 ml) foi tratada com 4-formilpiperidina-1- carboxilato de terc-butila (60 mg, 0,281 mmol). Após agitação durante 2 dias em temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com DCM e solução de NaHCO; saturada aquosa A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 0:100), rendimento de 66 mg, (40%).
[00514] —UPLCRiv, =1,66 min; ESIMS: 550 [(M+H)*].
[00515] —H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,35 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,85 (d, 1H), 6,35 (dd, 1H), 6,10 (d, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 2,75-2,15 (m, 4H), 1,50 (s, 9H). b) (S)-2-metóxi-5-(6-(1-(piperidin-4-ilmetil)pirrolidin-3-ilóxi)-2H- benzo[b][1,4]Joxazin-4(3H)-il)nicotinonitrila
[00516] Uma solução de 4-((3-(4-(5-ciano-6-metoxipiridin-3-i1)-3,4- di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-ilóxi)pirrolidin-1-il)|metil )piperidina-1- carboxilato de (S)-terc-butila (66 mg, 0,120 mmol) em DCM (2 ml) foi tratada com TFA (0,093 ml, 1,20 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 17 h e, então, dissipada com solução de NaCO;z saturada aquosa e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto-título (36 mg, rendimento de 67%).
[00517] —“UPLCRiv,=1,03 min; ESIMS: 450 [(M+H)*].
[00518] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,35 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,80 (d, 1H), 6,25 (m, 1H), 6,15 (d, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 3,60 (m, 2H), 2,75-2,15 (m, 4H). c) (S)-2-metóxi-5-(6-(1-((1-metilpiperidin-4-il) metil)pirrolidin-3- ilóxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrila
[00519] “Uma solução —“de (S)-2-metóxi-5-(6-(1-(piperidin-4- ilmetil)pirrolidin-3-ilóxi)-2H-benzo[b][1,4Joxazin-4(3H)-il)nicotinonitrila (36 mg, 0,080 mmol) em DCE (2 ml) foi tratada com uma solução de formaldeído aquosa a 37% (8,94 ul, 0,120 mmol). A solução foi agitada sob argônio em temperatura ambiente durante 15 min e, então, NaBH;3CN (50,9 mg, 0,240 mmol) foi adicionado. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, diluída com DCM e solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO, e concentrada. O composto do título foi obtido após purificação por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18, gradiente de ACN a 15-50% em 15 min). As frações foram extraídas com solução de NaHCO; saturada aquosa em DCM, secas sobre NazSO;,, concentradas e liofilizadas para proporcionar o composto do título (18 mg, rendimento de 48%).
[00520] — UPLCRiv, =1,04 min; ESIMS: 464 [(M+H)*].
[00521] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,35 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,45 (s, 1H), 6,75 (d, 1H), 6,35 (dd, 1H), 6,15 (d, 1H), 4,65 (m, 1H), 4,45 (m, 2H), 3,25 (m, 2H), 2,75-2,15 (m, 4H), 2,65 (s, 3H), 1,95 (m, 2H), 1,65 (m, 2H).
o
XÁ N SS j Oo
D N Ou, N Dx CC O o Exemplo Q: ((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona TBDMSCI, a DA na O eat É ut Bien LOS === 10
À errado o À ox NaH DMF. pH temperatura ambiente, 2d W õ.. o LIS = AKI DL o a” - >. 2 NaOtBu XPhos, Pd.(dba), Ls À dioxano ,100ºC, 2h o 6 s
T NA 9 LT Ce o - o a q TFA,DOM, = ) ELN DOM Í temperatura ambiente, || O temperstura amsiente, 19min Pa * e) D É o n E o 6 o T'WH p On 3 AKI Q o b a) 6-(terc-Butil-dimetil-silanilóxi)-4H-benzo[1,4]Joxazin-3-ona
[00522] Uma solução de 6-hidróxi-2H-benzo[b][1,4]Joxazin-3(4H)- ona (Registro CAS 53412-38-7) (1076 mg, 6,52 mmol) em DMF (8 ml)
foi tratada em temperatura ambiente com TBDMSCI (1080 mg, 7,17 mmol) e imidazol (532 mg, 7,82 mmol). Após agitação durante 18 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre NasSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 50:50) como um sólido branco (1,18 g, rendimento de 65%).
[00523] —UPLCRinv2=1,91 min; ESIMS: 280 [(M+H)"].
[00524] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,85 (br,s 1H), 7,35 (s, 1H), 6,85 (d, 1H), 6,45 (m, 1H), 6,30 (d, 1H), 4,50 (s, 2H), 1,00 (s, 9H), 0,25 (s, 6H) b) 3,3-Dideutero-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-o]l
[00525] Uma solução — de 6-(terc-butil-dimetil-silanilóxi)-4H- benzo[1,4]/oxazin-3-ona (8,34 g, 29,8 mmol) em THF (100 ml) foi tratada a 0ºC com deuterida de lítio alumínio (2,26 9, 59,7 mmol). Após agitação durante 18 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi adicionada a uma solução de sal de Rochelle a 1 M aquosa gelada e foi extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na7SO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 0:100) como um sólido branco (1,40 g, rendimento de 31%).
[00526] —“UPLCRinvs=0,69 min; ESIMS: 154 [(M+H)"].
[00527] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,50 (s 1H), 6,45 (d, 1H), 6,00 (d, 1H), 5,85 (m, 1H), 5,15 (s, 1H), 4,00 (s, 2H). c) (8S)-3-(3,3-Dideutero-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)- pirrolidina-1-carboxílico terc-butil éster de ácido
[00528] Uma solução seca de 3,3-dideutero-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ol (1,44 g, 9,40 mmol) e terc-butil éster de ácido (R)-3-Metanossulfonilóxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-61-4) (5,49 g, 20,68 mmol) em DMF (10 ml) foi tratada com hidreto de sódio em óleo mineral a 60% (0,752 g, 18,80 mmol) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2d. À mistura de reação foi diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO;,, filtrada, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 0:100) para proporcionar 4,12 g, (rendimento quantitativo) do composto do título.
[00529] — UPLCRiv,=1,07 min; ESIMS: 323 [(M+H)"].
[00530] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 6,65 (m, 1H), 6,45 (m, 2H), 5,35 (m, 1H), 4,85 (m, 2H), 3,50 (m, 4H), 2,15 (m, 2H), 1,50 (s, 9H). d) terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)- 3,3-dideutero-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina- 1-carboxílico
[00531] Este exemplo foi preparado em analogia ao Exemplo G1 e).
[00532] —“UPLCRiv,=2,00 min; ESIMS: 444 [(M+H)*].
[00533] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,95 (br.s, 1H), 7,45 (br.s, 1H), 6,80 (m, 1H), 6,25 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,35 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,50 (m, 4H), 2,25 (m, 2H), 1,50 (s, 9H). e) 4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,3-dideutero-6-((S)-pirrolidin-3- ilóxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo-[1,4]Oxazina
[00534] Este exemplo foi preparado em analogia ao Exemplo G1, f).
[00535] —UPLCRiv,=1,26 min; ESIMS: 342 [(M+H)*].
[00536] 'H RMN (400 MHz, CDCIs): 5 7,95 (br.s, 1H), 7,45 (br.s, 1H), 6,80 (m, 1H), 6,25 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 4,35 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,15 (m, 2H), 2,75 (m, 2H), 2,25 (m, 2H). f) 1(S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)- metanona
[00537] Este exemplo foi preparado em analogia ao Exemplo B1, d).
[00538] —“UPLCRiv,=1,65 min; ESIMS: 456 [((M+H)"].
[00539] H RMN (400 MHz, CDCI;3, 298 K): 5 8,45 (m, 1H), 8,29 (s, 1H), 7,21 (t, 1H), 6,20 (t, 1H), 6,10 (s, 1H), 5,00 (d, 1H), 4,37 (t, 2H), 4,00 (m, 3H), 3,39-3,74 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,09-2,10 (m, 5H). g) Exemplo R: 5-f6-[(S)1-(4-Hidróxi-ciclo-hexanocarbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi- nicotinonitrila o
NOS SN PH Se.
COS" Cr 4 o
[00540] Este exemplo foi preparado em analogia ao Exemplo J, começando a partir de 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-((S)-pirrolidina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila.
[00541] —UPLCRinvi1=0,91 min; ESIMS: 478 [(M+H)'].
[00542] H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,43 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 6,73 (m, 1H), 6,34 (m, 1H), 6,08 (dd, 1H), 4,76 (d, 1H), 4,51 (m, 1H), 4,22 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,20-3,71 (m, 9H), 1,09-2,10 (m, 10H). Exemplo S: 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-piridin-4-il-acetil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila o rá = ES oO o o
[00543] Este exemplo foi preparado em analogia ao Exemplo J,
começando a partir de 2-metóxi-5-f6-[(S)-1-((S)-pirrolidina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila.
[00544] — UPLCRinv11=0,82 min; ESIMS: 471 [(M+H)*]
[00545] —H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 5 8,45 (m, 3H), 8,29 (s, 1H), 7,21 (m, 2H), 6,74 (m, 1H), 6,33 (m, 1H), 6,10 (m, 1H), 4,87 (d, 1H), 4,22 (s, 2H), 4,00 (s, 3H), 3,39-3,74 (m, 8H), 1,09-2,10 (m, 2H). Exemplo T: 4(S)-3-[4-(5-Amino-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4- il)-nmnetanona a) metil éster de ácido 5-[6-((S)-1-terc-Butoxicarbonil-pirrolidin-3- ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1]-2-metóxi-nicotínico E NA à o & a * TES Z E os ÁS mah, Lo Neg CS
[00546] Sob argônio, K;PO, (815 mg, 2,00 mmol) e bis-(t- butilfosfina)paládio (29,4 mg. 0,06 mmol) foram adicionados a uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-(3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico (preparado conforme descrito em etapa a), Exemplo B) (615 mg, 1,92 mmol) e metil éster de ácido 5-bromo-2-metóxi-nicotínico (IA 22, Registro CAS 122433-41-4) (614 mg, 1,380 mmol) em tolueno (6 ml). A mistura de reação foi desgaseificada com argônio durante 15 min e, então, agitada a 110€C durante 18 h, diluída com EtOAc e lavada com a solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO, e concentrada para proporcionar o composto do título bruto, o qual foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 90:10 a 0:100) para proporcionar uma goma amarela (474 mg, rendimento de 51%).
[00547] —“UPLCRiv2=1,36 min; ESIMS: 486 [(M+H)*].
b) ácido 5-[6-((S)-1I-terc-Butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di- hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metóxi-nicotínico H Pp la ioxano/H, o 9x x ETA Ox OH x AA — 24
DO DO N tN to LP.
[00548] Uma solução de metil éster de ácido 5-[6-((S)-1-terc- butoxicarbonil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-11]-2- metóxi-nicotínico (483 mg, 0,99 mmol) em dioxano (5 ml) foi tratada com uma solução de pellets de hidróxido de sódio (119mg, 2,98 mmol) em água (2 ml). A solução foi agitada a 80 durante 1 h. A mistura de reação foi acidificada para um pH de 3 com solução aquosa de HCl a IN e extraída com EtOAc. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas para proporcionar o composto do título após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 100:0 a 0:100 e, então, EtOAc/MeOH a 90:10 a 80:20) como um sólido (370 mg, rendimento de 79%).
[00549] — UPLCRinvs=1,79 min; ESIMS: 372 [(M+H-100)']
[00550] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,22-8,48 (m, 2H), 6,82 (d, 1H), 6,33 (m,1H), 6,21 (d, 1H), 4,60-4,76 (m, 1H), 4,27-4,41 (m, 2H), 4,15-4,27 (m, 3H), 3,62-3,77 (m, 2H), 3,31-3,58 (m, 5H), 1,85-2,19 (m, 2H), 1,34-1,56 (m, 9H) c) terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5-terc-Butoxicarbonilamino-6- metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidina-1-carboxílico Oo. o ONO ELN, t.BuOH, 100T x ONA o ox 6h o N o ox o = Tr o. =
N N Lo (o
[00551] Uma solução de ácido 5-[6-((S)1-terc-butoxicarbonil-
pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1]-2-metóxi-nicotínico (370 mg, 0,78 mmol) e Et;N (0,28 ml, 1,96 mmol) em tBuOH (5 ml) foi tratada com DPPA (Registro CAS 26386-88-9) (0,17 ml, 0,78 mmol) e agitada a 100 durante 6 h. DOM e solução de NaHCO ;3 saturada aquosa foram adicionados, a camada orgânica foi separada por meio de eluição através de um cartucho de fase reversa e concentrada para proporcionar o composto do título após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 100:0 a 50:50) como uma goma rosa (114 mg, 24%).
[00552] — UPLCRinv2=1,36 min; ESIMS: 486 [(M+H)*].
[00553] —H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,42 (br s, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,02 (s, 1H), 6,78 (d, 1H), 6,15-6,41 (m, 1H), 4,71 (br s, 1H), 4,23-4,39 (m, 2H), 4,09-4,22 (m, 3H), 3,62-3,75 (m, 2H), 3,31-3,58 (m, 4H), 1,86- 2,26 (m, 2H), 1,40-1,60 (m, 18H). d) 2-metóxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridin-3-ilamina Pão qro , 9 Dx TEADOMSmPStas: — NA, 7. OZ —— , ambiente 1ho
DO DO ko Leão
[00554] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5-terc- butoxicarbonilamino-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1-carboxílico (130 mg, 0,24 mmol) em DCM (2 ml) foi tratada com TFA (Registro CAS 76-05-1) e agitada em temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada para proporcionar o composto do título após eluição em um cartucho Isolute SCX-2 de 2 g (Eluente MeOH e, então, NH/MeOH a 2M) como uma goma amarela (88 mg, quantitativo bruto).
[00555] — UPLCRin2=1,25 min; ESIMS: 343 [(M+H)"].
e) 1(S)-3-[4-(5-Amino-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1H-imidazo|-4-i1)- metanona Nº No om Do or mens a PD evo ÃO ON OO No CS
[00556] Uma solução de ácido 1-metil-1H-imidazol-4-carboxílico (Registro CAS 41716-18-1) (36,0 mg, 0,26 mmol) e Et;N (0,11 ml, 0,78 mmol) em DMF (1 ml) foi tratada com HBTU (Registro CAS 94790-37) (107 mg, 0,28 mmol). Após agitação em temperatura ambiente durante min, a mistura de reação foi resfriada para 5ºC e uma solução de 2- metóxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- piridin-3-ilamina (88 mg, 0,26 mmol) em DMF (3 ml) foi adicionada. À mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h, concentrada e o resíduo foi captado em DCM (10 ml), lavado com solução de NaHCO; saturada aquosa (5 ml), a camada orgânica foi separada por meio de eluição através de um cartucho de fase reversa e concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 100:0 a 0:100), as frações combinadas foram concentradas, dissolvidas em tBuOH/H,yO e liofiizadas para proporcionar o composto do título como um sólido incolor (21 mg, rendimento de 37%).
[00557] —UPLCRiv2=0,85 min; ESIMS: 451 [(M+H)*].
[00558] H RMN (400 MHz, CD;OD): 5 7,64 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,65 m, 1H), 6,93 (m, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,20-6,34 (m, 1H), 6,15 (m, 1H), 4,81 (m, 1H), 4,19-4,31 (m, 2H), 3,90-4,05 (m, 4H), 3,55-3,83 (m, 8H), 2,04-2,28 (m, 2H). Exemplo U: N-(2-metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazo|-4-
carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)- piridin-3-il)-metanossulfonamida no" o N No 2 DA mes od, LD É. O O o PE O Ne, Ne |) . Lo lo
[00559] Uma solução de ((S)-3-[4-(5-Amino-6-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]-oxazinilóxi]l-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1H- imidazol-4-il)-netanona (22,9 mg, 0,05 mmol) em piridina (iml) foi tratada com cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124-63-0) (0,08 ml, 0,97 mmol) e agitada a 50T durante 18 h. A mis tura de reação foi diluída com DCM e H,O, a camada orgânica foi separada por meio de eluição através de um cartucho de fase reversa e concentrada. O resíduo foi purificado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc a 100:0 a 0:100 e, então, EtOAc/MeOH a 90:10 a 80:20), as frações combinadas foram concentradas, dissolvidas em tBuOH/H,O e liofilizadas para proporcionar o composto do título como um sólido incolor (14 mg, 49%).
[00560] —UPLCRin2=1,39 min; ESIMS: 529 [(M+H)"].
[00561] H RMN (400 MHz, CD3OD): 5 7,87 (d, 1H), 7,41-7,76 (m, 3H), 6,73 (m, 1H), 6,02-6,44 (m, 2H), 4,14-4,39 (m, 2H), 3,87-4,12 (m, 5H), 3,55-3,84 (m, 8H), 2,85-3,08 (m, 3H), 1,75-2,40 (m, 2H). Exemplo V: (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-i1) -((S)- 3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona são "” ÁS fabo sn o Eos nho! o ã o ? o
HO R enem, A on OA en AAONÇE EA means (OO o” oe NaOtBu dioxano, NS 1.TFA, DCM NOS (Ruetasta -) o 9, 2EEREE O e —— CE TA C ty Dr & o "A o Foo E e. a) 6-metóxi-5-metil-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
[00562] Uma solução de 6-bromo-5-metil-4H-benzo[1,4]Joxazin-3- ona (Registro CAS 1154740-47-2) (1000 mg, 4,13 mmol) e Cul (79 mg, 0,41 mmol) em NaOMe a 30% em MeOH (8,1 ml) foi agitada a 130T durante 5 h. A mistura marrom/laranja foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc e lavada com a solução de NaHCO;3 saturada aquosa. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas para proporcionar um sólido laranja. Trituração com ciclo-hexano proporcionou o composto do título como um sólido rosa (647 mg, rendimento de 70%).
[00563] —HPLCRty,=0,73 min.
[00564] HRMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 10,21 (s, 1H), 6,76 (d, 1H), 6,53 (d, 1H), 4,42 (s, 2H), 3,71 (s, 3H), 2,05 (s, 3H). b) 6-hidróxi-5-metil-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
[00565] “Uma suspensão de 6-metóxi-5-metil-4H-benzo[1,4]oxazin- 3-ona (647 mg, 3,35 mmol) em DCM (30 ml) foi tratada sob argônio em temperatura ambiente com BBr; (3,16 ml, 33,5 mmol) e agitada durante 18 h em temperatura ambiente. A mistura de reação foi dissipada através da adição gota a gota de MeOH a OT, até que uma solução clara fosse obtida. Após remoção dos solventes, o resíduo foi entornado em uma solução de NaHCO; saturada aquosa gelada e extraído com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO, e concentrada para proporcionar o composto do título como um sólido marrom (647 mg, bruto), o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00566] —HPLCRty,=0,49 min.
[00567] HRMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 10,11 (s, 1H), 6,43 (d, 1H), 5,98 (d, 1H), 4,57 (s, 2H), 1,89 (s, 3H). c) 5-Metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
[00568] Uma solução de 6-hidróxi-5-metil-4H-benzo[1,4]0xazin-3- ona (647 mg, 3,61 mmol) em THF (20 ml) foi tratada sob argônio a 0ºC com BH3*THF (1M em THF, 10,83 ml, 10,83 mmol) e agitada durante 18 h em temperatura ambiente. MeOH foi adicionado e a solução foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h e concentrada para proporcionar um resíduo, o qual foi dissolvido em THF (20 ml), tratado com BH3*THF (1M em THF, 10,83 ml, 10,83 mmol) e agitada em temperatura ambiente durante 18 h. MeOH foi adicionado, a solução foi agitada em temperatura ambiente durante 4 h e concentrada até secagem para proporcionar o composto do título como um sólido marrom (600 mg, bruto), o qual foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional.
[00569] — HPLCRtv,=0,49 min; ESIMS: 166 [(M+H)*]. d) terc-butil éster de ácido (S)-3-(5-Metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico
[00570] Uma solução de trifenilfosfina (1,33 g, 5,09 mmol) em THF (10 ml) foi tratada com DEAD (0,8 ml, 5,09 mmol), seguido por terc- butil éster de ácido (R)-3-hidróxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-614) (1 g) 545 mmol) e 5-metil-3,4-di-hidro-2H-
benzo[1,4]oxazin-6-0| (600 mg 363 mmol. A solução marrom/vermelha resultante foi agitada a 70 durante 18 h. A mistura marrom foi esfriada, diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO,, filtradas e concentradas para proporcionar um óleo marrom. O produto bruto foi purificado três vezes por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 90:10 a 40:60) para proporcionar o composto do título como um óleo incolor (130 mg, rendimento de 11%)
[00571] —HPLCRtv,=1,09 min; ESIMS: 335 [(M+H)*].
[00572] HRMN (400 MHz, DMSO-d;): 5 6,44 (d, 1H), 6,22-6,04 (m, 1H), 5,24 (br s, 1H), 4,75 (br s, 1H), 4,07-3,93 (m, 2H), 3,45-3,33 (m, 3H), 3,28 (d, 7H), 2,00 (d, 2H), 1,83 (d, 3H), 1,46-1,32 (m, 9H). e) terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-11)-5- metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1- carboxílico
[00573] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-(5-metil-3,4- di-hidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-ilóxi)-pirrolidina-1-carboxílico (120 ma, 0,36 mmol), 5-bromo-2-metóxi-3-metilpiridina (Registro CAS 760207- 87-2) (145 mg, 0,72 mmol), NaOtBu (103 mg, 1,08 mmol), RuPhos (Registro CAS 787618-22-8) (8 mg, 0,02 mmol) e [RuPhos]paládio (Registro CAS 787618-22-8) (15 mg, 0,02 mmol) em dioxano (2 ml) foi agitada a 100 durante 18 h. A mistura marrom/lara nja foi esfriada, diluída com EtOAc e lavada com água. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO;,, filtradas e concentradas para proporcionar um óleo marrom. O produto bruto foi purificado três vezes por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 95:05 a 60:40) para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo (97 mg, rendimento de 60%)
[00574] —HPLCRtiv,=1,37 min; ESIMS: 456 [(M+H)*].
[00575] HRMN (400 MHz, DMSO-d;): 5 7,40 (d, 1H), 7,28-7,07 (m, 1H), 6,74 (s, 2H), 4,84 (br s, 1H), 3,96 (br s, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,57 (br s, 2H), 3,44-3,19 (m, 10H), 2,08 (s, 3H), 2,05-1,92 (m, 2H), 1,60 (d, 3H), 1,34 (d, 9H). f) (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-i1)-[((S)-3-[4-(6- metóxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona
[00576] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(6-metóxi- B-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidina-1-carboxílico (97 mg, 0,21 mmol) em DCM (3 ml) foi tratada sob argônio em temperatura ambiente com TFA (0,16 ml, 2,13 mmol) e agitada durante 6 h. A mistura de reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e a solução orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fase, proporcionando uma solução amarela. Ácido 1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda”*6*-tiopirano-4- carboxílico (Registro CAS 64096-87-3) (49 mg, 0,28 mmol), Et;N (0,09 ml, 0,64 mmol), DC (62 mg, 0,32 mmol) e HOBT (49 mg, 0,32 mmol) foram adicionados à solução amarela e agitados em temperatura ambiente durante 18 h. A mistura de reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e a camada orgânica foi separada através de passagem em um cartucho de separação de fase e, então, concentrada e purificada por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18 OBD 5 mm 30x 100 mm, Solvente A: HO (TFA a 0,1%) Solvente B: CH;CN (TFA a 0,1%), proporcionando o composto do título como um sólido branco (76 mg, rendimento de 70%)
[00577] —HPLCRtv,=0,98 min; ESIMS: 516 [(M+H)"].
[00578] HRMN (400 MHz, DMSO-ds, 375K): 5 7,44 (br s, 1H), 7,18 (br s, 1H), 6,75 (s, 2H), 4,88 (br s, 1 H), 4,02 (t, 2H), 3,86 (s, 3H), 3,81- 3,33 (m, 6H), 3,24-3,06 (m, 4H), 2,83 (br s, 1H), 1,66 (s, 3H). Rotâmeros.
Exemplo W: ((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5- metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-nmetanona ostso CsCO,, BINAP 7 BH, THF PA(OAC) í THF,0º Cem temperatura Tolueno ,100ºC FF o N Br ambiente 2dias — N gr 26 NV Br COTA co OO o=d:o o=&=0 Eee 0) O O Dioxano , 100"C, 0.5h = PdC, H, ACOH = (BrettPhos)Pd, RuPhos i à Rio acao 1 NÃ > S no: | | 0=8$=0 HOR O o=$=0 1,SO,, NaNO, SN —É o É gu, É te V oH f V O. o OS CX od Ea. TEA. cremperataras = 0 O CHJCh, ambiente, 18h “N º V O. 9 Co
DI VS a) 6-Bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00579] Uma solução de 6-bromo-5-metil-4H-benzo[1,4]0xazin-3- ona (Registro CAS 1154740-47-2) (425 mg, 1,56 mmol) em THF (9 ml) foi tratada sob argônio a OT com BH 3*THF (1M em THF, 4,7 ml, 4,69 mmol) e agitada durante 18 h em temperatura ambiente. BH;*THF a 1M (2 ml) foi adicionado e agitação foi continuada durante mais 24 h. À mistura de reação foi concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel ( ciclo-hexano/EtOAc a 100:0 a
80:20) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (324 mg, rendimento de 86%)
[00580] — HPLCRtiv,=1,04 min; ESIMS: 228, 230 [(M+H)'].
[00581] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,68 (d, 1H), 6,48 (d, 1H), 5,54 (br s, 1H), 4,04 (t, 2H), 3,36-3,26 (m, 2H), 2,11(s, 3H). b) 6-Bromo-4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00582] Uma solução de 6-bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]Oxazina (324 mg, 1,42 mmol), Intermediário IA1 (391 mg, 1,56 mmol), Cs,CO;3 (1018 mg, 3,13 mmol), BINAP (Registro CAS 98327-87-8) (44 mg, 0,07 mmol), Pd(OAc), (Registro CAS 3375-31-3) (32 mg, 0,14 mmol) em tolueno (13 ml) foi agitada a 100€T durante 18 h. Catalisador e ligante foram recarregados e a agitação foi continuada durante mais 24 h a 100%€. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc e lavada com água. Concentração da camada orgânica e purificação por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 97:03 a 40:60) proporcionaram o composto do título como um sólido laranja (345 mg, rendimento de 58%).
[00583] — HPLCRtiv,=1,13 min; ESIMS: 397,399 [(M+H)"].
[00584] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 7,99 (br. s, 1H), 7,37 (d, 1H), 7,24 (br. s, 1H), 6,83 (d, 1H), 4,13 (t, 2H), 3,97-3,86 (m, 2H), 3,30 (s, 3H), 2,52 (s, 3H), 1,93 (s, 3H). c) Benzil-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-amina
[00585] Uma solução de G6-bromo-4-(6-Metanossulfonil-5-metil- piridin-3-i1)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4)Oxazina (324 mg, 0,82 mmol), benzilamina (350 mg, 3,26 mmol), NaOtBu (157 mg, 1,63 mmol), RuPhos (Registro CAS 787618-22-8) (30 mg, 0,06 mmol) e [BrettPhos]paládio (Registro CAS 1148148-01-9) (52 mg, 0,06 mmol)
em dioxano (16 ml) foi agitada a 80€C durante 0,5 h. Filtração, concentração do filtrado e purificação por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 88:12 a 35:65) proporcionaram o composto do título como um óleo amarelo (228 mg, rendimento de 66%).
[00586] —HPLCRtv,=1,13 min; ESIMS: 424 [(M+H)"].
[00587] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 7,94 (br s, 1H), 7,40-7,33 (m, 2H), 7,30 (t, 2H), 7,19 (t, 2H), 6,58 (d, 1H), 6,30 (d, 1H), 5,25 (t, 1H), 4,30 (d, 2H), 4,04-3,97 (m, 2H), 3,90 (d, 2H), 3,29 (s, 3H), 2,51 (br s, 3H), 1,76 (s, 3H). d) 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilamina
[00588] “Uma solução de benzil-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin- 3-i1)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-amina (228 mg, 0,53 mmol), ácido acético (0,21 ml, 3,70 mmol), Pd/C em MeOH/THF (2,5/2,5 ml) foi hidrogenada com H, em temperatura ambiente durante 65 h. Filtração e concentração do filtrado proporcionaram o composto do título como um óleo verde (200 mg, bruto, incluindo AcOH restante).
[00589] — HPLCRtv,=0,64 min; ESIMS: 334 [(M+H)*].
[00590] — *H RMN (400 MHz, DMSO-d;): 5 7,96 (br s, 1H), 7,17 (br s, 1H), 6,62-6,54 (d, 1H), 6,54-6,45(d, 1H), 4,48 (br s, 2H), 4,01 (t, 2H), 3,88 (br s, 2H), 3,28 (s, 3H), 1,88 (d, 3H), 1,63 (s, 3H). e) 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ol
[00591] Uma solução de 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5- metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilamina (200 mg, 0,60 mmol) em água (3,5 ml) e H;SO, (0,32 ml) foi adicionada gota a gota a uma solução de nitrito de sódio (49,7 mg, 0,72 mmol) em água (10 ml) a OUT. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 dias. À mistura de reação foi filtrada e o filtrado foi dissipado com solução de NaHCO; saturada aquosa e extraído com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, filtrada e concentrada para proporcionar um óleo marrom. Purificação por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH a 88:12 a 80:20) proporcionou o composto do título como um óleo marrom (50 mg, rendimento de 25%).
[00592] — HPLCRtiv,=0,78 min; ESIMS: 335 [(M+H)*]. f) (1,1-Dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-i1)-[(S)-3-[4-(6- metóxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-metanona
[00593] “Uma solução de trifenilfosfina (55 mg, 0,21 mmol) em THF (2,5 ml) foi tratada com DEAD (0,03 ml, 0,21 mmol), seguido por terc- butil éster de ácido (R)-3-hidróxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-61-4) (33 mg, 0,18 mmol) e 4-(6-Metanossulfonil-5-metil- piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-0l (50 mg, 0,15 mmol). A solução vermelha/marrom resultante foi agitada a 70T durante 18 h. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO;z saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre Sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 90:10 a 40:60) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (44 mg, rendimento de 58%)
[00594] — HPLCRtiv,=1,16 min; ESIMS: 504 [(M+H)*]. g) ((S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro- pirano-4-il)-mnetanona
[00595] Uma solução de (1,I-dioxo-hexa-hidro-1lambda*6*- tiopirano-4-il)-((S)-3-[4-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona (44 mg,
0,09 mmol) em DCM (4 ml) foi tratada sob argônio em temperatura ambiente com TFA (0,07 ml, 0,17 mmol) e agitada durante 18 h. À mistura de reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e a solução orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fase, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre síilica-gel (DCM/MeOH a100:0 a 90:10). O produto obtido foi dissolvido em DCM (4 ml) e EN foi adicionado. Cloreto de tetra-hidro-pirano-4-carbonila (Registro CAS 40191-32-0) (15 mg, 0,10 mmol) foi adicionado à mistura de reação a OT e a solução laranja resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 4 h. A mistura de reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e a camada orgânica foi separada por meio de eluição através de um cartucho de separação de fase, concentrada e purificada por SFC (coluna de NH, (250 x 30 mm (| x w), 60A, 5um, Princeton, gradiente de metanol em CO, supercrítico) para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo (15 mg, rendimento de 32%)
[00596] —HPLCRtv,=0,88 min; ESIMS: 516 [(M+H)*].
[00597] HRMN (400 MHz, DMSO-ds, 375K): 5 7,98 (br s, 1 H), 7,19 (br s, 1 H), 6,92 - 6,85 (m, 1 H), 6,85 - 6,77 (m, 1 H), 4,95 (br s, 1 H), 4,12 (t, 2 H), 3,92 (t, 2 H), 3,88 (br s, 2 H), 3,61 (br s, 3 H), 3,38 (td, 2 H), 3,27 (s, 3 H), 2,68 (d, 1 H), 2,56 (s, 3 H), 2,17 (br s, 2H), 1,73 (s, 3 H), 1,58 (br s, 4 H). Rotâmeros. Exemplo X: ((S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-metil- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo- hexa-hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona o rF BH, THF NaO'Bu O THF,0'C temperatura Dioxano, 100ºC, 3dias rã Ox Br ambiente2dias N ur BRISA AuPhOs Br
TO EO OO o” F o r Pd.(dba),, (CH,)BuXPhos — NÓS ME no É a Nº UE <OH, dioxano / HO eae! TO ok = 100ºC, 18h À OH N O. A OO > OA 1,TFA CH.CL, temperatura o * * ambiente, 18h v F 2, EDC, HoBt, EtN CH, temperatura O ambiente, 18h E — Ê o . 9 O x s=0o a) 6-Bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00598] Uma solução de 6-bromo-5-metil-4H-benzo[1,4]Joxazin-3- ona (Registro CAS 1154740-47-2) (2,8 g, 11,56 mmol) em THF (50 ml) foi tratada sob argônio com BH3*THF (1M em THF, 34,7 ml, 34,70 mmol) e aquecida sob refluxo durante 2 h. MeOH foi adicionado e a solução foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo- hexano/EtOAc a 100:0 a 80:20) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (1,8 g, rendimento de 68%).
[00599] — HPLCRiv,=1,04 min; ESIMS: 228, 230 [(M+H)'].
[00600] —H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 6,68 (d, 1H), 6,48 (d, 1H), 5,54 (br s, 1H), 4,04 (t, 2H), 3,36-3,26 (m, 2H), 2,11 (s, 3H). b) 6-Bromo44-(5-difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina
[00601] Uma solução de 6-bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]Oxazina (500 mg, 2,19 mmol), Intermediário IA6 (574 mg,
2,41 mmol), NaOtBu (421 mg, 4,38 mmol), BrettPhos (Registro CAS 1070663-78-3) (59 mg, 0,11 mmol) e [BrettPhos]paládio (Registro CAS 1148148-01-9) (88 mg, 0,11 mmol) em dioxano (11 ml) foi agitada a 100% durante 18 h. Catalisador e ligante foram rec arregados e agitação foi continuada a 100 durante 48 h. A mis tura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, concentrada para proporcionar um óleo marrom. Purificação por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel ( ciclo- hexano/EtOAc a 100:0 a 80:20) proporcionou o composto do título como um óleo marrom (150 mg, rendimento de 18%).
[00602] — HPLCRtiv,=1,34 min; ESIMS: 385, 387 [([M+H)']. c) 4-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ol
[00603] “Uma mistura de 6-bromo-4-(5-difluorometil-6-metóxi-piridin- 3-i1)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Oxazina (150 mg, 0,39 mmol), KOH (65 mg, 1,17 mmol) em água (0,33 ml), tetrametil-t-butil-XPhos (Registro CAS 857356-94-6) (18,72 mg, 0,04 mmol) e Pd2(dba); (17,83 mg, 0,02 mmol) em dioxano (2 ml) foi desgaseificada com nitrogênio e aquecida a 100€T durante 18 h. Filtração, concentra ção e purificação por cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 100:0 a 70:30) proporcionaram o composto do título como um óleo laranja (65 mg, rendimento de 52%).
[00604] — HPLCRtiv,=1,01 min; ESIMS: 323 [(M+H)*].
[00605] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,83 (s, 1H), 7,89 (d, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,00 (t, 1H), 6,61 (d, 1H), 6,55 (d, 1H), 3,93 (t, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,65 (t, 2H), 1,60 (s, 3H). d) terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metóxi- piridin-3-i1)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidina-1-carboxílico
[00606] Uma solução de trifenilfosfina (74 mg, 0,28 mmol) em THF (2 ml) foi tratada com DEAD (0,04 ml, 0,28 mmol), seguido por terc- butil éster de ácido (R)-3-hidróxi-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 127423-61-4) (45 mg, 0,24 mmol) e 4-(5-difluorometil-6-metóxi-piridin- 3-i1)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-o0l (65 mg, 0,20 mmol). A solução vermelha/marrom resultante foi agitada a 70ºC durante 18 h, esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 100:0 a 70:30) para proporcionar o composto do título como um sólido amarelo (51 mg, rendimento de 42%).
[00607] —HPLCRtiv,=1,36 min; ESIMS: 492 [(M+H)*].
[00608] 'H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 7,92-7,75 (m, 1H), 7,46- 7,33 (m, 1H), 7,19-6,84 (t, 1H), 6,77 (s, 2H), 4,86 (br s, 1H), 3,98 (br s, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,73-3,55 (m, 2H), 3,46-3,33 (m, 2H), 2,12-1,95 (m, 2H), 1,65-1,55 (m, 3H), 1,34 (br s, 9H). Rotâmeros. e) 1(8S8)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-hexa- hidro-1lambda*6*-tiopirano-4-il)-netanona
[00609] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5- difluorometil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1-carboxílico (51 mg, 0,410 mmol) em DCM (3 ml) foi tratada sob argônio em temperatura ambiente com TFA (0,08 ml, 1,40 mmol) e agitada durante 18 h. A mistura de reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e a solução orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fase, proporcionando uma solução amarela. Ácido 1,1-Dioxo-hexa-hidro- 1lambda*6*-tiopirano-4-carboxílico (Registro CAS 64096-87-3) (25 mg, 0,14 mmol), Et;dN (0,05 ml, 0,33 mmol), DC (31 mg, 0,416 mmol) e
HOBT (25 mg, 0,16 mmol) foram adicionados e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h. A mistura de reação foi dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi separada por meio de eluição através de um cartucho de separação de fase, o produto bruto foi purificado sobre SFC (coluna Reprosil NH, (250 x 30 mm (| x w), 60A, 5um, Princeton, gradiente de metanol em CO, supercrítico) para proporcionar o composto do título como um óleo amarelo (19 mg, rendimento de 30%)
[00610] — HPLCRtv,=1,00 min; ESIMS: 552 [(M+H)*].
[00611] HRMN (400 MHz, DMSO-ds, 375K): 5 7,85 (br s, 1 H), 7,43 (br s, 1H), 6,96 (t, 1H), 6,80 (s, 2H), 5,11-4,71 (m, 1H), 4,04 (t, 2 H), 3,94 (s, 3H), 3,70 (d, 2 H), 3,63 (br s, 2 H), 3,52 (br s, 2 H), 3,23-3,04 (m, 4H), 2,92-2,73 (m, 1H), 2,16 (br s, 2 H), 2,06 (br s, 4H), 1,67 (s, 3 H), Rotâmeros. Exemplo Y: 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilamino]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)- nicotinonitrilo
N Br 2 OO LC. o 9 NOS o Na O NIS,TFA, TFAA "O Falta E 1 o ————.0 a SS N Br 90%C 18h 110ºC, 18 h
COS
À BN, fm
CÁ XX 2- diciclohexilfosfinobi- ; Ps TFA, CHzClz, fenila , NaOtBu,Pd,(dba), N RN o pp—— . Temperatura tolueno 110º, 1h CO EA ambiente, 2h o” À o” 2N nos 4 e) O | É u EN, CH;CI, í y 5 N N F— "a T NH 0º, 1h CO C, * C Ta o a) 5-lodo-2-metóxi-nicotinonitrila
[00612] Uma mistura de 2-metóxi-nicotinonitrila (Registro CAS 7254-34-4) (10 g, 74,6 mmol) e N-iodosuccinimida (Registro CAS 516- 12-1) (25,2 g, 112 mmol) foi tratada com ácido trifluoroacético (Registro CAS 76-05-1) (68,9 ml, 895 mmol) e anidrido trifluoroacético (Registro CAS 407-25-0) (31,6 ml, 224 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 90 C durante 18 h e, então, esfriada para a temperatura ambiente e entornada sobre gelo. A mistura foi lentamente basificada usando solução de NaOH aquosa a 30%, diluída com água e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi sucessivamente lavada com solução de tiossulfato de sódio aquoso a 20% e solução de NaHCO; saturada aquosa, seca sobre Na,SO,, filtrada e concentrada. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 20:80) como um sólido (12,2 9, rendimento de 63%)
[00613] —“UPLCR m14=1,30 min; ESIMS: 261 [(M+H)"].
[00614] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,54 (d, 1H), 8,11 (d, 1H), 4,06 (s, 3H). b) 5-(6-Bromo-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi- nicotinonitrila
[00615] Uma mistura de 6-bromo-3 ,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]Oxazina (Registro CAS 105655-01-4) (5,0 g, 23,36 mmol), 5-iodo-2-metóxi-nicotinonitrilo (12,2 g, 46,7 mmol) e NaOtBu (2,69 9, 28,0 mmol) em tolueno (50 ml) foi desgaseificada com argônio durante min e, então, bis(tri-terc-butilfosfina)-paládio(0) (0,36 g, 0,70 mmol) foi adicionado. A mistura de reação agitada a 110 C durante 18 h sob argônio. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de celite, enxaguada com EtOAc e os filtrados foram lavados com solução de NaHCO; saturada aquosa. À camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, filtrada, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo- hexano/EtOAc, 100:0 a 50:50) para proporcionar o composto do título (4,2 9, rendimento de 52%).
[00616] —“UPLCRI um4=1,55 min; ESIMS: 348 [(M+H)'].
[00617] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,31 (d, 1H), 7,80 (d, 1H), 6,89 (dd, 1H), 6,78 (d, 1H), 6,67 (d, 1H), 4,30-4,35 (m, 2H), 4,10 (s, 3H), 3,61-3,66 (m, 2H). c) Terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5-Ciano-6-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]Joxazin-6-ilamino]-pirrolidina-1- carboxílico
[00618] Uma mistura de 5-(6-bromo-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila (300 mg, 0,87 mmol), terc-butil éster de ácido (S)-3-amino-pirrolidina-1-carboxílico (Registro CAS 147081-44-5) (0,26 ml, 1,A7 mmol), 2-(diciclo-hexilfosfofino)bifenila (Registro CAS 247940-06-3) (18,2 mg, 0,05 mmol) e NaOtBu (100 mg, 1,04 mmol)
em tolueno (10 ml) foi desgaseificada com argônio durante 10 min e, então, Pd2(dba); (23,8 mg, 0,03 mmol) foi adicionada. A mistura de reação foi agitada a 110 C durante 1 h sob argônio. Após esfriar para a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de celite, enxaguada com EtOAc e os filtrados foram concentrados. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc, 100:0 a 70:30) como uma espuma amarela (150 mg, rendimento de 37%).
[00619] “UPLCRI v,=2,73 min; ESIMS: 452 [(M+H)"].
[00620] H RMN (400 MHz, CD;OD): 5 8,36 (d, 1H), 8,04 (d, 1H), 6,68 (s, 1H), 6,19 (dd, 1H), 6,03 (s, 1H), 4,19-4,24 (m, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,81-3,89 (m, 1H), 3,62-3,68 (m, 2H), 3,48-3,56 (m, 1H), 3,35-3,48 (m, 2H), 3,08-3,18 (m, 1H), 2,05-2,18 (m, 1H), 1,75-1,87 (m, 1H), 1,46 (s, 9H). d) 2-metóxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-ilamino)-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrila
[00621] Uma solução de terc-butil éster de ácido (S)-3-[4-(5-ciano- 6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilamino]- pirrolidina-1-carboxílico (144 mg, 0,32 mmol) in CH.Clz (4 ml) foi tratada com TFA (0,49 ml, 6,38 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h, dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na,sSO,, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto-título como uma espuma amarela (120 mg, rendimento de 100%).
[00622] —“UPLCRt uv =2,06 min; ESIMS: 352 [(M+H)"].
[00623] H RMN (400 MHz, CD;OD): 5 8,36 (d, 1H), 8,04 (d, 1H), 6,69 (d, 1H), 6,17 (dd, 1H), 6,00 (d, 1H), 4,19-4,26 (m, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,80-3,90 (m, 1H), 3,62-3,69 (m, 2H), 3,10-3,20 (m, 2H), 2,98-3,09 (m, 1H), 2,82-2,90 (m, 1H), 2,06-2,18 (m, 1H), 1,70-1,81 (m, 1H).
e) 2-metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilamino]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila
[00624] A OC, uma solução de 2-metóxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3- ilamino)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrila (27 mg, 0,08 mmol) em CHCl; (1 ml) foi tratada com Et3N (0,02 ml, 0,12 mmol) e cloreto de tetra-hidro-pirano-4-carbonila (Registro CAS 40191-32-0) (11 ul, 0,09 mmol).A mistura de reação foi agitada a O C durante 1 he, então, dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na7SO,, filtrada e concentrada e o composto do título foi obtido após RP-HPLC preparativa (coluna Sunfire PrepC18 OBD 30 x100 mm, 5 um; Solvente A: HyO + TFA a 0,1% em vol.; Solvente B: CH;CN + TFA à 0,1% em vol., gradiente 5—-60% de B em 20 min) e filtração sobre um cartucho Agilent PL-HCO3 MP SPE como um sólido amarelo (9 mg, rendimento de 25%).
[00625] —UPLCRh2=1,19 min; ESIMS: 464 [(M+H)'].
[00626] H RMN (400 MHz, CD3;OD): 5 8,36 (d, 1H), 8,05 (m, 1H), 6,69 (dd, 1H), 6,15-6,23 (m, 1H), 5,97-6,07 (m, 1H), 4,15-4,29 (m, 2H), 4,06 (s, 3H), 3,82-4,03 (m, 3H), 3,35-3,80 (m, 8H), 2,65-2,84 (m, 1H), 2,03-2,28 (m, 1H), 1,49-2,03 (m, 5H).
CONDIÇÕES DE ACOPLAMENTO A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald padrão | cas Pddbal| XPhos |CsCOs | tolueno | 100€ |)
Tempo de Solventes condão ponte Fº | como | sue PO Tr [rocao" usados | a Padrão - padrão 2 Pd(P(tB i » . 1 neo temo | 12 2 [e fardas] XPros — TNaoBS | tovero f125T (mo) CAIO — |PA(OAc); | Rac-BINAP 60-100T 2 cms Paxaba): 100€ cata fPadba)| XPros | PO, | tólueno [110120€ es fp neem] ne | nec 2 B) Condições para formação de ligação de amida 1 Reagentes de Temperatura Tempo de Condição ft Solventes usados > reação acoplamento Padrão = padrão ambiente CB2 HOBT e DC DMF temperatura 1h-18h ambiente 0ºC para a CB3 HATU CH,Cl temperatura 30 min ambiente HoBTeDº Her ambiente CcB5 — | COMU, DIPEA DMF temperatura 12h ambiente eme 1h ú " ambiente cB7 HBTU CHxCb temperatura | = 39 min ambiente C) Condições para introdução de cadeia laterais CC1) Usando mesilato
[00627] Em temperatura ambiente, uma solução seca de intermediário piridin-2-o0l (1 eq.) e intermediário mesilato (1,1 - 2 eq.) em DMF (0,17 M) foi tratada com NaH em óleo mineral (2 - 3 eq.) ea mistura de reação foi agitada a 20-80 C durante 4 a 72 h. CC2) Usando mesilato
[00628] Em temperatura ambiente, uma solução seca de intermediário aril-6-0l (1 eq.) e intermediário mesilato (1,1 - 2 eq.) em DMF (0,17M) foi tratada com NaH em óleo mineral (2 - 3 eq) ea mistura de reação foi agitada a 50-80 C durante 4 a 72 h. CC3) Usando mesilato
[00629] Em temperatura ambiente, uma solução seca de intermediário aril-6-ol (1 eq.) e intermediário mesilato (2,5 eq.) em DMF (0,06M) foi tratada com K2CO; (4 eq.) e a mistura de reação foi agitada a 85ZC a 100% durante 4 a 50 h. CC4) Usando Mitsunobu
[00630] Em temperatura ambiente, DEAD (1,4 eq.), terc-butil éster de ácido (R)-3-Hidróxi-pirrolidina-1-carboxílico (1,5 eq.) e intermediário aril-6-0l (1 eq.) foram adicionados a uma solução de trifenilfosfina (1,4 eq.) em THF (0,30M). A solução vermelha/marrom foi agitada a 70 C durante 18 h. D) Condições para cromatografia de separação quiral mm, 5um mm, 5 um mm, 5um
FLII o IEEE n- cpD7 Quiraipalk r 2x Heptano/DMME/EtOH/DEA | 240 nm PP a 40:50:10:0,05 cpog | Quiraleel OD-H, 46X | 5 5a 2 70:30 (isocrático)| — 215 nm 250 mm Quiralpak AD-H, sum | — Heptano/EtoH 60:40 [= Quiralpak IC 250x46 DMME/IPA/MeOH/DEA a som 70:25:5:0,05, CD11 Quiralcel ODH 250x20 EtoH/MeOH a 60:40 mm, 5 um Quiralpak IC CD12 EtoH/MeOH 5a 0:50 210 nm 765x37,5 cm, 20 um
PREPARO DE INTERMEDIÁRIOS IA) Brometos aromáticos Intermediário IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese = | — ooo B5-Bromo-2- 1 etapa de CAS IA1 N NS Metanossulfonil-3-| 1289270-74-1 Prá metil-piridina Br — | —, 90=5=F0 F 5-Bromo-3-fluoro- | 1 etapa de CAS N Da 2-Metanossulfonil-| 1289007-85-7 E piridina Br | O=S-=O F F 5-Bromo-2- IA3 Ns F Metanossuifonil-3- 1 etapa de CAS | > trifluorometil- 211122-42-8 piridina Br | O=S=O F 5-Bromo-3- NES F difluorometil-2- | 2 etapas de CAS | z Metanossulfonil- 852181-11-4 piridina Br
1A) Estruti d Cc tári Intermediário H ) Estrutura dos Nome AutoNom omentário Brometos Aromáticos sobre a síntese | O=S-O 5-Bromo-3- IA5 NES F fluorometil-2- | 2 etapas de CAS | 2 Metanossulfonil- 742100-75-0 piridina Br oO F NS E PS Bromo-s- CAS 1254123- | difluorometil-2- 517 Z metóxi-piridina Br o 5-Bromo-3- NÓS F ; 1 etapa de CAS IA7 fi |-2- > Juorometir 351410-47-4 metóxi-piridina Br
À qr 5-Bromo-2- e CAS 1214337- NES difluorometóxi-3- | did: 94-6 PÁ metil-piridina Br o NÓS 5-Bromo-2-metóxi-| CAS 760207-87- Do 3-metil-piridina 2 Br o NÓS F 5-Bromo-3-fluoro- | CAS 124432-70- | 2-metóxi-piridina 8 Br o nO 5-Bromo-3-cloro- | CAS 848366-28- > 2-metóxi-piridina 9 Br
Intermediário H IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese o nO ON 5-Bromo-2-metóxi-| CAS 941294-54- | A nicotinonitrila 8 Br | dia: %N dimetilamida de | cas 896160-99- NÓIS ácido 5-Bromo- 9 | o ido A piridina-3- sulfônico Br o E Cs 4-(5-Bromo- WS. e | CAS 889676-35- N o piridina-3-sulfonil)- 1 rá Morfolina Br NO. 1 N = ? 5-Bromo-2-metil- | CAS 911434-05- rá 3-nitro-piridina 4 Br NOS -| -2-metil- | SBromo-2mMeti" | cas 3430-135 Pra piridina Br Ns CN IA17 V OBM — | cas 35590-37-5 nicotinonitrila Br x 5-bromo: NOS : 1. | CAS 436799-33- | — trifluorometilpiridin 6 a Br
Intermediário tt IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese o —. | CAS610279-03- W 5-Bromo-2-etóxi- 3 N 3-metil-piridina ” Br o NES B5-bromo-2- CAS 13472-85-0 > metoxipiridina Br
É o Fr 5-bromo-2-metóxi- NOS F 3- CAS 1214377- | Z trifluorometilpiridin 42-0 a Br
É 0 o il é Metil éster de =) cas 122433-41- NÓS o ácido de 5-Bromo- 4 | P Í 2-metóxi- nicotínico Br NF F 2-amino-5-bromo- nó 3- CAS 79456-34-1 1A23 | F . did; RW trifluorometilpiridin Br a
É o. O 1-(5-Bromo-2- Ns & metóxi-piridina-3- | z sulfonil)-4-metil- piperazina Br | o 5-Bromo-2- CAS 1000787- NOS metoximetil- 43-8 | PÁ piridina Br
Intermediário t IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese
F LF 2 CAS 436799-32- NS | S-bromo-: A 5 | P triflurometilpiridina Br NH, 1no7 N à 5-Bromo-3-metil- | CAS 3430-21-5 7 piridin-2-ilamina Br
CN N WS 5-Bromo-piridina- | CAS 97483-77-7 DD 2-carbonitrila Br
É o NS SBromo-23- | cas 52605-988 A dimetóxi-piridina Br o. A “ Ss 3-Bromo-5- N o (propano-2- Z sulfonil)-piridina Br o O 1-(5-Bromo-2- | cas 364736-61- Ss. metil- 8 o benzenossulfonil)- piperidina Br 2 fo CAN 4 (5-Bromo-2- | cas 325809-68- 1A32 Ss. metóxi- 5 o benzenossulfonil)- Morfolina Br
Intermediário H IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese fo CN 4-(5-Bromo- | CAS 889676-35- 1433 NS o piridina-3-sulfonil)- 1 Z Morfolina Br o q ON CAN 1-(5-Bromo-2- | cas 325809-71- Ss. metóxi- o o benzenossulfonil)- 4-metil-piperazina Br
ON NA 1-(5-Bromo- — | CAS 1007212- NOS o piridina-3-sulfonil)- 08-9 ” 4-metil-piperazina Br a Nor SBromo-2N- | cas 1247891- S dimetóxi-N-metil- [o] 51-5 benzenossulfona mida Br o metóxi-metil- “e No | 1 CAS 1248282- IA37 NOS > amida de ácido 5- 54-3 A Bromo-piridina-3- sulfônico Br NOS o > 3-Bromo-5-metóxi-| CAS 50720-12-2 piridina Br Ns Cc! > 3-Bromo-5-cloro- | CAS 73583-39-8 piridina Br
Intermediário IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese o=$-0 Rs S-Bromo-2: — | cas 98626-95-0 N Metanossulfonil- DD piridina Br o | o NS dimetilamida de CAS 896160-99- NOS ácido 5-Bromo- 9 | fo] id: PP piridina-3- sulfônico Br NESS NH, > 5-Bromo-piridin-3- | CAS 13535-01-8 ilamina Br 2 N NAS etilamida de ácido | CAS 1065074- | Z o 5-Bromo-piridina- 78-3 3-sulfônico Br 0, Ss 5-Bromo-2- NOS Etanossulfinil- | A piridina Br 0=8=0 TT o 5-Bromo-2- N > Metanossulfonil-3- ” metóxi-piridina Br NH, N O 5-Bromo-3-metóxi-| CAS 42409-58-5 ” piridin-2-ilamina Br
Intermediário H IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese > — | — Do aa CAS 1083327- 1847 NS metóxi-piridin-3-i Y 58-5 Í metanossulfonami
A da Br Oo . CAS 1256788- 1A48 N à S-Bromo-3-etil-2- 92-7 A metóxi-piridina Br Cl o N NS 5-Bromo-2-cloro- | CAS 286947-03- ” 3-metóxi-piridina 3 Br Cl NOS 5-Bromo-2-cloro- O 3-metilpiridina É) CAS 29241-60-9 Br | O=S=O H (5-Bromo-2- Ns No Metanossuifonil- | 2 piridin-3-i)-metil- amina Br | O=S=0O | (5-Bromo-2- NR No Metanossulfonil- | 2 piridin-3-il)-dimetil- amina Br 0=8=0 q 5-Bromo-3-cloro- IA53 N EC 2-Metanossulfonil- 1335052-54-4 ” piridina Br
Intermediário H IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese Ns | CASS332-241 3-Bromo-quinolina ” Br 2% NAS: 3-Bromo-5- CAS 445491-71- O a O Metanossutfonil- 4 piridina Br CN . CAS 156001-51 5-Bromo-2-metil- a3 benzonitrila Br o F F " F 4-Bromo-1 metóxi- CAS 1514-11-0 IA57 2-trifluorometil- benzeno Br O=S=O 5-Bromo-2- CAS 223556-06- NOS Etanossulfonil- 7 : PÁ piridina Br oo > s 4-Bromo-2- — | cas 90531-99-0 o Metanossulfonil-1- metóxi-benzeno Br oo | óxi.
SN S-Bromo-2-metóxi-| cas 871269-16- S N ,N-dimetil- o 8 benzenossulfona mida Br Nx | 4-Bromo-2-metil- | CAS 22282-99-1 piridina Br
Intermediário tt IA) Estrutura dos Nome AutoNom Comentário Brometos Aromáticos sobre a síntese Í Não 4B . , | CAS 100367-39- Z - romo-2-metóxi- 3 piridina Br
F Ns C 4-Bromo-2- CAS 887583-90- > tifuoromett- 6 iridina Br Pp
NON | P” 4-Bromo-piridina- | CAS 62150-45-2 2-carbonitrila Br x 9 o A P 5-Bromo-2,N- $ o dimetóxi- o benzenossulfona mida Br Oo ox 4-Bromo-1,2- | CAS 2859-78-1 dimetóxi-benzeno Br NH CAS 914358-73- NS ? 5-Bromo-2-metil- IA67 | do go 9 Ca piridin-3-ilamina Br | ns Ns (5-Bromo-2-metil- | CAS 1280592- IA68 > piridin-3-il)-dimetil- 37-1 amina Br o 2-(Benzilóxi)-5- CAS 1289270- bromo-3- id: 73-0 NOS metilpiridina > Br
Do “O IA7TO o (dimetomman)-2- cas Eos Z metoxipiridina Br Intermediário IA1: 5-bromo-2-Metanossulfonil-3-metil-piridina
[00631] Uma solução de 5-bromo-2-metilssulfanil-3-metil-piridina (9,04 g, 41,4 mmol) em DCM (83 ml) foi tratada a 0ºC com mCPBA (21,46 g, 124 mmol). Após agitação durante 18 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi adicionada à solução de NaOH aquosaa 2N e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na7SO,, concentrada e o composto do título foi obtido após trituração com ciclo-hexano para proporcionar um sólido branco (9,25 g, rendimento de 89%).
[00632] —“UPLCRiv,=0,81 min; MS (ESI, m/z): 250,1 [(M+H*]
[00633] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,68 (d, 1H), 8,30 (d, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,58 (s, 3H). Intermediário IA2: 5-bromo-3-fluoro2-Metanossulfonil-piridina
[00634] Uma solução de 5-bromo-3-fluoro-2-metilssulfanil-piridina (222 mg, 1,0 mmol) em DCM (5 ml) foi tratada a O CC com mCPBA (518 mg, 3,0 mmol). Após agitação durante 1,5 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi adicionada à solução de NaOH aquosa a 2N e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na7SO,, concentrada e o composto do título foi obtido como um sólido branco (241 mg, rendimento de 95%), o qual foi usado sem purificação adicional.
[00635] —UPLCRtiyv,=0,63 min;
[00636] HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,75 (d, 1H), 8,60 (d, 1H), 3,40 (s, 3H). Intermediário |A3: 5-Bromo-2-Metanossulfonil-3-trifluorometil-
piridina
[00637] Uma solução de 5-bromo-2-metilssulfanil-3-trifluorometil- piridina (1,40 g, 1,416 mmol) em DCM (30 ml) foi tratada a OT com mCPBA (2,67 g, 1548 mmol). Após agitação durante 18 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi adicionada a uma solução de NaOH aquosa a 4N e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre NazsSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (hexano/EtOAc, 100:0 a 70:30) como um sólido branco (940 mg, rendimento de 60%).
[00638] —“UPLCRtiv,=0,87 min; MS (ESI, m/z): 323,0 [(M+NH,)'].
[00639] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 9,45 (d, 1H), 8,76 (d, 1H), 3,57 (s, 3H). Intermediário [A4: 5-Bromo-3-difluorometil-2-Metanossulfonil- piridina a) 2,5-Dibromo-3-difluorometil-piridina
[00640] “Uma solução de trifluoreto de Et;N (1,80 ml, 11,3 mmol) em DCM (40 ml) foi tratada a O C com Xtalfluor-E (2,6 7 g, 15,5 mmol) e 2,5-dibromo-piridina-3-carbaldeído (1,0 g, 3,77 mmol). Após agitação durante 19 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com TBME e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, concentrada para proporcionar um óleo amarelo (950 mg, rendimento de 88%), o qual foi usado sem purificação adicional.
[00641] —UPLCRtiv,=1,05 min;
[00642] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,57 (d, 1H), 8,48 (d, 1H), 7,14 (t, 1H), 3,35 (s, 3H). b) 5-Bromo-3-difluorometil-2-Metanossulfonil-piridina
[00643] Uma solução de 2,5-dibromo-3-difluorometil-piridina (1400 mg, 1,46 mmol) em DMF (10 ml) foi tratada a OT com metanotiolato de sódio (348 mg, 4,97 mmol). Após agitação durante 1,5 h em temperatura ambiente, a reação foi resfriada a OT e mCPBA (2857 mg, 16,56 mmol) foi adicionado à mistura de reação. Após agitação durante 1 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi adicionada a uma solução de NaOH aquosa a 4N e foi extraída com TBME. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (hexano/EtOAc, 100/0 a 80/20) como um sólido branco (498 mg, rendimento de 53%).
[00644] “UPLCRty,=0,86 min;
[00645] 'H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,67 (d, 1H), 8,45 (d, 1H), 7,37 (t, 1H), 3,37 (s, 3H). Intermediário IA5: 5-Bromo-3-fluorometil-2-Metanossulfonil- piridina a) 5-Bromo-2-cloro-3-fluorometil-piridina
[00646] Uma solução de trifluoreto de Et;N (1,76 ml, 10,79 mmol) em DCM (20 ml) foi tratada a 0º*C com Xtalfluor-E (1,65 g, 7,19 mmol) e (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metanol (0,80 g, 3,60 mmol). Após agitação durante 18 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi diluída com TBME e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre Na7-SO,, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (hexano/EtOAc, 100/0 a 90/10) como um óleo incolor (286 mg, rendimento de 35%).
[00647] —“UPLCRiyv,=0,98 min;
[00648] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,53 (d, 1H), 8,45 (d, 1H), 5,52 (d, 1H) b) 5-Bromo-3-fluorometil-2-Metanossulfonil-piridina
[00649] “Uma solução de 2,5-dibromo-3-difluorometil-piridina (1,4 9, 1,16 mmol) em DMF (10 ml) foi tratada a OC com met anotiolato de sódio (348 mg, 4,97 mmol). Após agitação em temperatura ambiente durante 1,5 h, a reação foi resfriada para 0C e mC PBA (2857 mg, 16,56 mmol) foi introduzido na mistura de reação. Após agitação durante 1 h em temperatura ambiente, a mistura de reação foi adicionada a uma solução de NaOH aquosa a 4N e foi extraída com TBME. A camada orgânica foi seca sobre Na,/SO,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (hexano/EtOAc, 100/0 a 80/20) como um sólido branco (498 mg, rendimento de 53%)
[00650] — UPLCRty,=0,86 min;
[00651] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,67 (d, 1H), 8,45 (d, 1H), 7,37 (t, 1H), 3,37 (s, 3H). Intermediário IA7: 5-Bromo-3-fluorometil-2-metóxi-piridina
[00652] Uma solução de (5-bromo-2-metóxi-piridin-3-il)-metanol (343 mg, 1,57 mmol) em DCM (7 ml) foi tratada a OT com deoxifluoro (1,5 ml, 3,46 mmol) e EtoH (27,6 ul, 0,47 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente, dissipada com solução de NaHCO; saturada aquosa e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, concentrada para proporcionar o composto do título após cromatografia rápida sobre sílica-gel (hexano/EtOAc a 80:20) como um óleo amarelo (80 mg, rendimento de 23%).
[00653] —UPLCRiv,=1,07 min;
[00654] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,32 (t, 1H), 8,00 (t, 1H), 5,37 (d, 2H), 3,89 (s, 3H). Intermediário [A24: 1-(5-Bromo-2-metóxi-piridina-3-sulfonil)-4- metil-piperazina a)(5-Bromo-2-Metanossulfonil-piridin-3-il)-metil-amina
' À à N f 2 o=$=0 C À º ds a EA Ng, TEA, DCM u a. 0ºC em temperatura Br ambiente, 18h
[00655] Uma solução de cloreto de 5-bromo-2-cloro-piridina-3- sulfonila (Registro CAS 1146290-19-8) (580 mg, 1,99 mmol) e Et;N (0,55 ml, 3,99 mmol) em DCM (20 ml) a OC foi tratada com 1-metil- piperazina (0,33 ml, 2,99 mmol), a mistura resultante foi agitada a OC durante 20 min e em temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi diluída com DCM (30 ml) e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa. A camada orgânica foi seca sobre MgSO, , concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH a 100:0 a 90:10) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (420 mg, rendimento de 59%).
[00656] —HPLCRtv2=1,49 min; ESIMS: 356 [(M+H)*].
[00657] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 8,62 (d, 1H), 8,50 (d, 1H), 3,57-3,29 (t, 4H), 2,50 (t, 4H), 2,33(s, 3H). b) 1-(5-Bromo-2-metóxi-piridina-3-sulfonil)-4-metil-piperazina
À À + NaOMe Co O0=8=0 THF, temperatura Oo=$=0 o ambiente. 18h “O Ne Br E Br
[00658] Uma solução de 1-(5-bromo-2-cloro-piridina-3-sulfonil)-4- metil-piperazina (420 mg, 1,48 mmol) em THF (10 ml) foi tratada aos poucos com metóxido de sódio (192 mg, 3,55 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi dissipada através da adição de água e extraída com EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução de NaHCO; saturada aquosa e secas sobre MgSO,, concentradas e purificadas por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM/MeOH a 100:0 a 90:10) para proporcionar o composto do título (358 mg, rendimento de 85%).
[00659] — HPLCRiv2=1,47 min; ESIMS: 350, 352 [(M+H)'].
[00660] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,36 (d, 1H), 8,28 (d, 1H), 4,05 (s, 3H), 3,35 (br s, 4 H), 2,49 (br s, 4 H), 2,33 (s, 3H). Intermediário IA30: 3-Bromo-5-(propano-2-sulfonil)-piridina
1. propano-2- tiolato de sódio Br NMP, 80C, 2ºC o. o AA 2 menos, DCM OT qr a Br Br
[00661] Uma solução de 3,5-dibromo-piridina (Registro CAS 625- 92-3) (495 mg, 2,09 mmol) em NMP (5 ml) foi tratada com propano-2- tiolato de sódio (Registro CAS 20607-43-6) (205 mg, 2,09 mmol), a mistura resultante foi agitada a 80T durante 2 h. A mistura foi resfriada e diluída com EtOAc, lavada com água (2x) e, então, Ssalmoura. A camada orgânica foi seca sobre MgSO, e concentrada. O resíduo obtido foi dissolvido em DCM (10 ml), tratado com mCPBA (1083 mg, 6,27 mmol) e agitado em temperatura ambiente durante 18 h. Solução de sulfeto de sódio aquoso a 10% foi adicionada e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com solução de NaHCO;3 saturada aquosa, seca sobre MgSO, , concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo- hexano/EtOAc a 100:0 a 00:100) para proporcionar o composto do título (364 mg, rendimento de 59%).
[00662] — HPLCRin2=0,77 min; ESIMS: 264, 266 [((M+H)'].
[00663] 'H RMN (400 MHz, CDCI3;): 5 8,98 (dd, 2H), 8,33 (t, 1H),3,34-3,17 (m, 1H), 1,37 (d, 6H). Intermediário IA44: 5-Bromo-2-Etanossulfinil-piridina a)5-Bromo-2-etil-sulfanil-piridina É DSO MIBR Td e = E
[00664] Uma mistura de 2,5-dibromo-piridina (Registro CAS 588729-99-1) (1,15 g, 4,85 mmol) e etantiolato de sódio (Registro CAS 811-51-8) (2,04 g, 24,27 mmol) em DMSO (15 ml) foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca passando-a através de um cartucho de separação de fase, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 100:0 a 70:30) para proporcionar o composto do título como um óleo laranja (1,09 g, rendimento de 92%).
[00665] — HPLCRin2=1,25 min; ESIMS: 218, 220 [(M+H)']. 5-Bromo-2-Etanossulfinil-piridina > mCPBA 2eq, DCM ns 5 SN semi ambientes as. Tel, O Br
[00666] Uma solução de 5-Bromo-2-etilssulfanil-piridina (1,09 9, 4,49 mmol) em DCM (15 ml) foi tratada com mCPBA (1,55 g, 8,98 mmol). A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min.
[00667] A mistura foi dissipada através da adição de solução de NaOH a 2M aquosa e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas. O composto foi purificado por meio de RP-HPLC preparativa (coluna SunFire C18 OBD, gradiente de ACN a 5-60% em 15 min) para proporcionar o composto do título como um óleo incolor (490 mg, rendimento de 45%).
[00668] — HPLCRtiv2=0,65 min; ESIMS: 234, 236 [(M+H)'].
[00669] 'H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,85 (d, 1H), 8,37 (dd, 1H), 7,80 (d, 1H), 3,33 (s, 2H), 3,27-3,10 (m, 1H), 2,94-2,72 (m, 1 H), 1,01 (t 3H). Intermediário 1A45: 5-Bromo-2-Metanossulfonil-3-metoxipiridina a)5-Bromo-3-metóxi-2-metilssulfanil-piridina no Metantiolato de sódio so Ns —— DMSO,RT,05h NRO
EEE Br Br
[00670] Uma mistura de 2,5-dibromo-3-metóxi-piridina (Registro CAS 1142191-57-8) (550 mg, 2,06 mmol) e metanotiolato de sódio (Registro CAS 5188-07-8) (722 mg, 10,30 mmol) em DMSO (1,5 ml) foi agitada em temperatura ambiente durante 0,5 h. Água foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca através de passagem em um cartucho de separação de fase e foi concentrada para proporcionar o composto do título como um óleo incolor (1,50 g, rendimento de 93%, bruto).
[00671] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,19 (d, 1H), 7,53 (d, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,32 (s, 3H). b) 5-Bromo-2-Metanossulfonil-3-metoxipiridina
SS o 7 õ m-CPBA 4eq "SO NS - DCM, temperatura fo] O ambiente, 18h - >= o. pr Br
[00672] Uma solução de 5-bromo-3-metóxi-2-metil-sulfanil-piridina (1,50 g, 2,24 mmol) em DCM (10 ml) foi tratada com mCPBA (1,55 9, 8,97 mmol). A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h.A mistura foi dissipada através da adição de solução de NaOH a 2M aquosa e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca através de passagem em um cartucho de separação de fase e concentrada para proporcionar o composto do título (400 mg, rendimento de 33%, bruto).
[00673] —“HPLCRiv2=0,75 min; ESIMS: 268[(M+H)"].
[00674] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,41 (d, 1H), 8,17 (s, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,30 (s, 3H). Intermediário IA51: (5-Bromo-2-Metanossulfonil-piridin-3-il)-metil- amina a) (5-Bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina NH, ir (1.6M, 1eq) Sem A EmA Ns Br O "= Br
[00675] “Uma solução de 5-bromo-2-cloro-piridin-3-ilamina (Registro CAS 588729-99-1) (565 mg, 2,72 mmol) em THF (4 ml) a OC foi tratada com BuLi 1,6M em hexano (0,17 ml, 0,417 mmol), a mistura resultante foi agitada a OC durante 0,5 h e, então, iodeto de metila (0,17 ml, 2,72 mmol) foi lentamente adicionado. A mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada durante 18 h. A mistura marrom/laranja foi entornada solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre MgSO,, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 95:5 a 60:40) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (354 mg, rendimento de 59%).
[00676] —“HPLCRtiv,=0,94 min; ESIMS: 221, 223, 225 [(M+H)'].
[00677] HRMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 7,65 (d, 1H), 7,14 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 2,74 (d, 3H). b) (5-Bromo-2-Metanossulfonil-piridin-3-il)-metil-amina O 2a Ee DOM "O Õ o Br O Br
[00678] Uma solução de (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina (354 mg, 1,60 mmol) em DMF (2,6 ml) foi tratada com metanotiolato de sódio (168 mg, 2,40 mmol) a 0º. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias e aquecida a 60C durante 4 dias. A mistura foi dissipada a OT através da adição de solução de NaOH a 2M aquosa e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas para proporcionar um óleo laranja, o qual foi dissolvido em DCM (5 ml) e tratado a OT com mCPBA (Registro CAS 937-14-4) (827 mg, 4,79 mmol) e agitado durante 18 h em temperatura ambiente. A mistura foi dissipada a OC através da adição de solução de NaO H aquosa a 2M e extraída com DCM. Os orgânicos combinados foram secos sobre MgSO,, concentrados e purificados por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 92:8 a 32:68) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (174 mg, rendimento de 41%).
[00679] HPLCRiv,=0,78 min; ESIMS: 265, 267 [(M+H)'].
[00680] H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 7,95 (d, 1H), 7,50 (d, 1H),
6,70-6,59 (m, 1H), 3,26 (s, 3H), 2,82 (d, 3H). Intermediário 1IA52: (5-Bromo-2-Metanossulfonil-piridin-3-il)- dimetil-amina a) (5-Bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina BuLi (1.6M, 1eqg) NH, Mel >NH Cs THF,0C em =, Ns Br "s Br
[00681] Uma solução de 5-bromo-2-cloro-piridin-3-ilamina (Registro CAS 588729-99-1) (1 g, 4,82 mmol) em THF (7 ml) a OT foi tratada com BuLi 1,6M em hexano (6 ml, 9,64 mmol), a mistura resultante foi agitada a OC durante 0,5 h e, então, iodeto de metila (0,60 ml, 9,64 mmol) foi lentamente adicionado. A mistura de reação foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada durante 18 h. À mistura marrom/laranja foi entornada em solução de NaHCO; saturada aquosa e extraída com EtOAc, a camada orgânica foi seca sobre MgSO;,, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 95:05 a 70:30) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (182 mg, rendimento de 17%).
[00682] —HPLCRtiy,=0,94 min; ESIMS: 221, 223[(M+H)"].
[00683] HH RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 7,65 (d, 1H), 7,14 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 2,74 (d, 3H). b) (5-Bromo-2-cloro-piridin-3-il)-dimetil-amina foi] Mig ge TáRISI Ç
[00684] Uma solução de (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina (182 mg, 0,82 mmol) em DMF (4 ml) foi tratada com NaH (23 mg, 0,99 mmol) em temperatura ambiente e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 0,5 h, iodeto de metila (0,06 ml, 0,99 mmol) foi adicionado e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. A mistura foi diluída com TBME e lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa, a camada orgânica foi seca sobre MgSO, e concentrada para proporcionar o composto do título como um óleo laranja (174 mg, rendimento de 90%). Este foi usado sem purificação adicional.
[00685] — HPLCRiv,=1,03 min; ESIMS: 235, 237 [(M+H)'].
[00686] HH RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 8,10 (d, 1H), 7,70 (d, 1H), 2,78 (s, 6H). c) (5-Bromo-2-Metanossulfonil-piridin-3-il)-metil-amina SS 1. NaSMe, DMF, 80C, 18h [o=dso NRO 2. m-CPBA, DCM, temperatura = N h O st e Br
[00687] Uma solução de (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-dimetil-amina (174 mg, 0,74 mmol) em DMF (5 ml) foi tratada com metanotiolato de sódio (104 mg, 1,48 mmol) em temperatura ambiente, a solução resultante foi agitada a 80T durante 18 h. A OT, a mistura foi dissipada através da adição de solução de NaOH a 2M aquosa e, então, extraída com TBME. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas para proporcionar um óleo laranja, o qual foi dissolvido em DCM (5 ml), tratado a 0€ com mCPBA (Registro CAS 937-14-4) (382 mg, 2,21 mmol) e agitado durante 18 h em temperatura ambiente. A 0, a mistura foi dissi pada através da adição de solução de NaOH a 2M aquosa e, então, extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO;,, concentradas e purificadas por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 88:12 a 00:100) para proporcionar o composto do título como um sólido laranja (50 mg, rendimento de 24%).
[00688] —HPLCRtiv,=0,83 min; ESIMS: 279, 281 [((M+H)'].
[00689] 'H RMN (400 MHz, DMSO-d;s): 5 8,25 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 3,29 (s, 3H), 2,91 (s, 6H). Intermediário IA65: 5-Bromo-2,N-dimetóxi-benzenossulfonamida CI à O0=8=0 O- metilhidroxilamina N o TEA, THF, rt, 18h o=$-0 ” à, TE. Br Br
[00690] Uma solução de cloreto de 5-bromo-2-metóxi- benzenossulfonila (Registro CAS 23095-05-8) (218 mg, 0,76 mmol) e Et3N (0,55 ml, 3,99 mmol) em DCM (20 ml) a 0% foi agitada durante min e tratada com O-metil-hidroxilamina (36 mg, 0,76 mmol), a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h. A mistura foi dividida entre EtOAc e água. A camada orgânica foi lavada com solução de NaHCO; saturada aquosa, seca sobre MgSO;,, concentrada e purificada por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 100:0 a 0:100) para proporcionar o composto do título (189 mg, rendimento de 84%).
[00691] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 8,10 (d, 1 H), 7,78 (s, 1 H), 7,72 (dd, 1 H), 6,97 (d, 1 H), 4,01 (s, 3 H), 3,81 (s, 3 H). IB) Ácidos carboxílicos ou cloretos ácidos IB) Estrutura de Intermediário %| Ácidos carboxílicos ou Nome AutoNom Cloretos ácidos o ácido Tetra-hidro-furano-
O O on 3- carboxílico enantiômero 1 (enantiômero puro)
pena Aa me Intermediário %| Ácidos carboxílicos ou Nome AutoNom Cloretos ácidos ácido Tetra-hidro-furano- = E ES] enantiômero (enantiômero puro) O áci | -
A E P» º metil-1H-imidazol-4- o) carboxílico Exemplo IB1/IB2: ácido (S)-Tetra-hidro-furano-3- carboxílico/ácido (R)-Tetra-hidro-furano-3- carboxílico a) benzil éster de ácido tetra-hidro-furano-3-carboxílico o BnBr, K,CO; Oo ao DMF, 100%, 18h Ts
[00692] Uma solução de ácido tetra-hidro-furano-3-carboxílico (Registro CAS 89364-31-8) (4,00 g, 34,40 mmol) em DMF (20 ml) foi tratada com K2CO; (9,52 g, 68,9 mmol) e brometo de benzila (Registro CAS 100-39-0) (8,18 ml, 68,9 mmol) a 100% durante 18 h. A mistura foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc, lavada com água e salmoura. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO,, concentradas e purificadas por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (ciclo-hexano/EtOAc a 92:8 a 34:66) para proporcionar o composto do título como um líquido incolor (6,93 g, rendimento de 98%)
[00693] — HPLCRtiv2=0,94 min; ESIMS: 207 [(M+H)*].
[00694] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 7,50-7,26 (m, 5H), 5,17 (m, 2H), 4,05-3,75 (m, 4H), 3,29-3,05(m, 1H), 2,36-2,09 (m, 2H). b) Separação do enantiômero de benzil éster de ácido tetra-hidro- furano-3- carboxílico o o o qnt O qt, . Que o (rac) o >99% ee B >99% ee o pico 1 pico 2
[00695] Informação do método:
[00696] “Coluna: QuiralphakAD-PREP
[00697] — Solvente: HEPTANO/ETOH/MEOH a 95/2,5/2,5
[00698] — Fluxo: 1,0 mi/min
[00699] — Comprimento de onda: 210 nm
[00700] Motor: Agilent 1200 DAD Magellan
[00701] Solução EtoH
[00702] Após separação de 6,347 g de racêmico, 2 picos foram obtidos: pico 1 a 9,086 min (2,43 g e e>99%) e pico 2 a 10,584 min (2,19 g e e>99%).
[00703] —“HPLCRt (pico 1 ou 2) 12=0,92 min; ESIMS: 207 [(M+H)'].
[00704] H RMN (pico 1) (400 MHz, CDCI3): 5 7,48-7,29 (m, 5H), 5,23-5,07 (m, 2H), 4,05-3,77 (m, 4H), 3,23-3,10(m, 1H), 2,35-2,06 (m, 2H).
[00705] H RMN (pico 2) (400 MHz, CDCI3): 5 7,51-7,31 (m, 5H), 5,23-5,09 (m, 2H), 4,07-3,77 (m, 4H), 3,24-3,07 (m, 1H), 2,35-2,06 (m, 2H). c) ácido (S)-Tetra-hidro-furano-3- carboxílico/ácido (R)-Tetra- hidro-furano-3- carboxílico o o aà Non PdiC, H2 >99% ee O EtOH, temperatura ambiente, 18h pico 1 IB1 o o NÃo PdiC, H2 CE on — O EtOH, temperatura ambiente, 18h >99% ee pico 2 IB2
[00706] Uma solução de benzil éster de ácido tetra-hidro-furano-3- carboxílico enantiomericamente puro (pico 1 ou pico 2, 200 mg, 0,97 mmol), Pd/C (103 mg, 0,97 mmol) em EtOH (2 ml) foi hidrogenada com H,; em temperatura ambiente durante 18 h. Filtração da mistura de reação e concentração do filtrado proporcionaram o composto do título como um líquido incolor (125 mg (Pico 1), 111mg (Pico 2), bruto).
[00707] HRMN (ambos os enantiômeros) (400 MHz, DMSO-d;s): 5 12,40 (br s, 1H), 3,84-3,59 (m, 4H), 3,00 (m, 1H), 2,08-1,92(m, 1H). Exemplo 1B3): ácido 5-terc-Butoxicarbonilamino-1-metil-1H- imidazol-4- carboxílico a) Etil éster de ácido 5-di(terc-Butoxicarbonil)amino-1-metil-1H- imidazol-4- carboxílico o R 08” — LiHMDS, BOC,O, THF N o N º > É 1 Ah *, N NH 19 h, -50ºC ->temperatura " x > ambiente > 50º*C | X
[00708] Uma solução de etil éster de ácido 5-amino-1-metil-1H- imidazol-4-carboxílico (Registro CAS 54147-04-5) (82 mg, 0,49 mmol)
em THF (4 ml) foi tratada a - 50 C com solução de THF em LIHMDS a 1M (0,97 ml, 0,97 mmol) e a mistura de reação foi agitada a - 50 C durante 10 min e, então, uma solução de Boc,O (237 mg, 1,07 mmol) em THF (1,5 ml) foi adicionada. A mistura de reação foi deixada aquecer lentamente para a temperatura ambiente e, então, para 50 C e agitada durante 15 h a 50C. A mistura de reação foi esfriada para a temperatura ambiente, diluída com EtOAc e dissipada com HO. A camada orgânica foi seca sobre Na7sSO;,, filtrada, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (Heptano/EtOAc, 85:15 0:100) como um sólido branco (140 mg, rendimento de 78%).
[00709] —“UPLCRtiv,=0,96 min; ESIMS: 370 [(M+H)"]
[00710] H RMN (400 MHz, CDCI3, 298 K): 5 4,33 (q, 2H), 3,50 (s, 3H), 1,41 (s, 18H), 1,35 (t, 3H). b) ácido 5-terc-Butoxicarbonilamino-1-metil-1H-imidazo|l-4- carboxílico õ %& 3 OH IR LiOH, THF/H;O a i o” tensas 2
[00711] Uma solução de etil éster de ácido 5-di(terc- butoxicarbonil)amino-1-metil-1H-imidazol-4-carboxílico (167 mg, 0,452 mmol) em THF (2,2 ml) e HO (2,2 ml) foi tratada com LiOH (54,1 mg, 2,26 mmol) e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 18 h e, então, dissipada com solução de HCI aquosa a IM para atingir um pH de 2 e extraída com EtOAc. A camada orgânica foi seca sobre Na,SO,, filtrada, concentrada para proporcionar o composto do título. (70 mg, rendimento de 65%).
[00712] —UPLCRiv,=0,47 min; ESIMS: 242 [(M+H)"]
[00713] 'H RMN (400 MHz, DMSO-d;): 5 12,42 (br.s., 1H), 8,98 (br.s., 1H), 7,82 (s, 1H), 3,45 (s, 3H), 1,41 (s, 9H). IC) Análogos ou derivados de Pirrolidinol Usados por Comentário Intermediário t Nome AutoNom Pp sobre a exemplo É ç síntese A atanoimtana) patas de OP po cinco CAS 104706- éster de ácido a 47-0 metanossulfônico areonipimolidia 2 etapas de IC2 Ontrpirro c2 CAS 100243- éster de ácido a 39-8 metanossulfônico (S)-1-propionil-pirrolidin-3- 2 etapas de I1C3 il éster de ácido c3 CAS 100243- metanossulfônico 39-8 (R)-1-propionil-pirrolidin-3- 2 etapas de IC4 il éster de ácido Cc4 CAS 2799-21- metanossulfônico 5 Intermediário IC1: (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3- il éster de ácido metanossulfônico a) ((R)-3-Hidróxi-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-i])-metanona V 1) DMF cat, DCM, cloreto de oxatita, 3ºC, 1h QU e Hs 2) EGN, DCM, 3ºC, 1h Ss o o
[00714] Cloreto de oxalila (0,20 ml, 3,84 mmol) foi adicionado a uma solução de ácido tetra-hidro-pirano-4-carboxílico (Registro CAS 5337- 03-1) e DMF (0,012 ml, 0,45 mmol). A mistura de reação foi agitada a 3ºC durante 1 h. Concentração de uma mistura de rea ção sob pressão reduzida (170 mbar) a 40€T (banho de água) proporcionou o intermediário de acila como um óleo incolor. O intermediário foi dissolvido em DCM (2 ml) e adicionado a uma solução de cloridrato de
(R)-pirrolidin-3-ol (Registro CAS 104706-47-0) (190 mg, 1,54 mmol) em DCM (3 ml), resfriada para 3C, a suspensão branca formada foi agitada a 3ºC durante 1 h. A mistura de reação foi concentrada; EtOAc foi adicionado ao resíduo, o qual foi filtrado e lavado com EtOAc. Concentração e purificação do filtrado por meio de cromatografia rápida sobre sílica-gel (DCM /DCM: MeOH (9:1), 100:0 a 60:40 durante 11 min) proporcionou o composto do título como um sólido branco (250 mg, rendimento de 82%).
[00715] —ESIMS: 200 [(M+H)'].
[00716] HRMN (400 MHz, CDCI;3): 5 4,43 - 4,65 (m, 1H), 3,95-4,16 (m, 2H), 3,30-3,82 (m, 6H), 2,45-2,75 (m, 1H), 1,83-2,30 (m, 4H), 1,54- 1,78 (m, 3H). b) (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico ? Ho | O o ES & O N —S N Oo o
[00717] Sob argônio, cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124-63-0) (3,52ml, 45,2 mmol) foi adicionado a uma solução de ((R)-3- hidróxi-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona (6 gg, 22,6 mmol) e Et;N (6,30 ml, 45,2 mmol) em DCM (100 ml) a -10T. À solução foi agitada a OT durante 1 h, diluída com HO e DCM, à camada orgânica foi lavada duas vezes com H,O e salmoura e seca sobre MgSO,. Concentração e trituração do óleo resultante com dietil éter proporcionou o composto do título como um sólido esbranquiçado (5,3 g, 84%).
[00718] —ESIMS: 278 [(M+H)"].
[00719] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 5,22-5,44 (m, 1H), 3,96-4,13 (m, 2H), 3,85-3,96 (m, 1H), 3,56-3,83 (m, 3H), 3,36-3,53 (m, 2H), 3,08
(d, 3H), 2,07-2,75 (m, 3H), 1,93 (m, 2H), 1,51-1,75 (m, 3H). Intermediário IC2: (S)-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico a) ((S)-3-Hidróxi-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona o EN ,CH,CL, 3, 1h & o HO OUNHO + o. — LO OQ: !
[00720] Uma solução de cloreto de tetra-hidro-pirano-4-carbonila (Registro CAS 40191-32-0) (316 mg, 2,02 mmol) em DCM (2 ml) foi adicionada gota a gota (0*C <T <10ºC) a uma solução de (S)-pirrolidin- 3-ol (Registro CAS 100243-39-8) (250 mg, 2,02 mmol) e Et3N (0,62 ml, 4,45 mmol) em DCM (5 ml). A mistura de reação foi agitada a 3C durante 1 h. Os voláteis foram concentrados e EtOAc foi adicionado ao resíduo, o sólido restante foi filtrado e lavado com EtOAc. Concentração do filtrado proporcionou o composto do título como um sólido branco (390 mg, rendimento de 97%).
[00721] —ESIMS: 200 [(M+H)'].
[00722] H RMN (400 MHz, CDCI;3): 5 4,55 (d, 1H), 3,96-4,11 (m, 2H), 3,36-3,80 (m, 6H), 2,48-2,74 (m, 1H), 1,52-2,20 (m, 7H). b) (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico ? Ho —s-o MSC, EtLN,CH,CL,, O , CG LD 1h,3T CG DL O Oo
[00723] Sob argônio, cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124-63-0) (0,23 ml, 2,94 mmol) foi adicionado a uma solução de ((S)-3- hidróxi-pirrolidin-1-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-netanona (0,39 g, 1,96 mmol) e Et;N (0,55 ml, 3,91 mmol) em DCM (10 ml) a -10ºC. A so lução foi agitada a 3T durante 1 h, diluída com H7O e DCM, a camada orgânica foi lavada duas vezes com H,O e salmoura e, então, seca sobre MgSO,. Concentração e trituração do óleo resultante com dietil éter proporcionou o composto do título como um sólido branco (0,45 9, rendimento de 83%).
[00724] ESIMS: 278 [(M+H)'].
[00725] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 5,25-5,44 (m, 1H), 3,99-4,16 (m, 2H), 3,85-3,95 (m, 1H), 3,56-3,83 (m, 3H), 3,37-3,54 (m, 2H), 3,08 (d, 3H), 2,09-2,78 (m, 3H), 1,93 (m, 2H), 1,51-1,76 (m, 2H) Intermediário IC3: (S)-1-propionil-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico a) 1-((S)-3-Hidróxi-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona ou DOM. EN, 50€ Õ Qo A TT | N fo] DD
[00726] Cloreto de propionila (Registro CAS 79-03-8) (4,78 ml, 54,8 mmol) foi adicionado gota a gota durante um período de 15 min a uma solução de (S)-pirrolidin-3-o0l (Registro CAS 100243-39-8) (4,8 g, 55,9 mmol) e Et;N (8,74 ml, 63,1 mmol) a 5€, a solução foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada durante 1 h. HO (10 ml) e solução de NaHCO; saturada aquosa (10 ml) foram adicionadas à solução, a fase orgânica foi lavada com salmoura (10 ml) e uma solução de HCl aquoso a 0,25M (20 ml). As camadas aquosas combinadas foram concentradas e extraídas com EtOAc (2x 100 ml), as fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgSO, e concentradas para proporcionar o composto do título óleo amarelo claro (4,80 g, rendimento de 54%).
[00727] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 4,54 (d, 1H), 3,31-3,73 (m, 3H), 3,12 (m, 1H), 1,82-2,46 (m, 5H), 1,17 (t, 3H) b) (S)-1-propionil-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico
Ro MSC, EtN os Ro HOmÇON CH,CL,, rt, 48h ON
[00728] Sob argônio, cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124-63-0) (1,36 ml, 17,46 mmol) foi adicionado durante um período de min a uma solução de 1-((S)-3-hidróxi-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona (2,5 g, 17,4 mmol) e Et;N (2,43 ml, 17,4 mmol) em DCM (50 ml) a 5€. A solução foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada durante 18 h, cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124- 63-0) (1,36 ml, 17,46 mmol) e Et3N (2,43 ml, 17,4 mmol) foram, então, adicionados à mistura de reação, a qual foi agitada durante 48 h em temperatura ambiente. DOM e H,O foram adicionados à solução e a fase orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fase, concentrada e o composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (EtOAc/MeOH a 100:0 a 95:5 durante 40 min) como um óleo incolor (2,7 g, rendimento de 66%).
[00729] H RMN (400 MHz, CDCI;): 5 5,19-5,42 (m, 1H), 3,48-3,99 (m, 4H), 3,06 (d, 3H). 2,04-2,54 (m, 4H), 1,16 (t, 3H). Intermediário IC4: (R)-1-propionil-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico a) 1-((R)-3-Hidróxi-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona OH DOM. EN, 0T Q AO ú N o DD
[00730] Cloreto de propionila (Registro CAS 79-03-8) (7,06 ml, 81 mmol) foi adicionado (0% <T <10T) durante um perí odo de 15 min a uma suspensão de (R)-pirrolidin-3-ol (Registro CAS 2799-21-5) (10 g, 81 mmol) e Et;N (23,6 ml, 170 mmol) em DCM (150 ml), a qual foi pré- resfriada para -10C. A suspensão esbranquiçada foi agitada a OT durante 2 h, MeOH (9,82 ml, 243 mmol) foi adicionado e a mistura foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 1 h. Concentração e diluição do resíduo com Et,O (200 ml) proporcionou, após filtração e concentração do filtrado, o composto do título como um óleo amarelo (11,2 g, 95%).
[00731] —ESIMS: 144 [(M+H)"].
[00732] H RMN (400 MHz, DMSO-ds): 5 4,81-5,04 (m, 1H), 4,15- 4,38 (m, 1H), 3,35-3,59 (m, 2H), 3,16-3,29 (m, 2H), 2,11-2,33 (m, 2H), 1,65-2,00 (m, 2H), 0,98 (td, 3H). b) (R)-1-propionil-pirrolidin-3-il éster de ácido metanossulfônico do MsCI, ELN geo 4 no N CHE: o N O nbtenes, 450 O
[00733] Sob argônio, cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124-63-0) (0,16 ml, 2,09 mmol) foi adicionado gota a gota durante um período de 5 min a uma solução de 1-((R)-3-hidróxi-pirrolidin-1-il)- propan-1-ona (300 mg, 2,09 mmol) e Et;N (0,29 ml, 2,09 mmol) em DCM (10 ml) a 5€, a mistura de reação foi deixada agitar em temperatura ambiente durante 18 h. Cloreto de metanossulfonila (Registro CAS 124-63-0) (0,16 ml, 2,09 mmol) e Et;N (0,29 ml, 2,09 mmol) foram, então, adicionados à mistura de reação, a qual foi agitada em temperatura ambiente durante 48 h. DCM e H,O foram adicionados à solução e a fase orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fase reversa e concentrada. O composto do título foi obtido após cromatografia rápida sobre sílica-gel (EtOAc/MeOH a 100:0 a 95:5 durante 25 min) como um óleo incolor (420 mg, 86%).
[00734] H RMN (400 MHz, CDCI3): 5 5,21-5,44 (m, 1H). 3,49-4,03 (m, 4H), 2,98-3,12 (m, 3H), 1,97-2,54 (m, 4H), 1,18 (t, 3H). ID) Análogos ou derivados de DBO síntese o o benzo[1,4]oxazin-6-ol 7, vide Exemplo Q etapas a), b)
AVALIAÇÃO BIOLÓGICA
[00735] A atividade de um composto de acordo com a presente invenção pode ser avaliada através de métodos in vivo e in vitro.
ENSAIOS BIOLÓGICOS 1 DETERMINAÇÃO DE INIBIÇÃO ENZIMÁTICA DE ISOFORMA PI3K
ALFA E PISK DELTA
1.1 Ensaio de atividade de quinase de lipídio
[00736] A eficácia dos compostos de acordo com os Exemplos 1- 117 como inibidores de quinase PI3 pode ser demonstrada como segue:
[00737] A reação de quinase é realizada em um volume final de 50 ul por cavidade de metade de uma placa COSTAR com 96 cavidades. As concentrações finais de ATP e fosfatidil-inositol no ensaio são de 5 um e 6 ug/ml, respectivamente. A reação é iniciada mediante a adição de quinase PI3, por exemplo, quinase PI3 ô.
[00738] p1108. Os componentes do ensaio são adicionados por cavidade como segue:
[00739] 10 ul de composto de teste em DMSO a 5% por cavidade nas colunas 2-1.
[00740] Atividade total é determinada mediante a adição de 10 ml de DMSO a 5% vol/vol às primeiras quatro cavidades da coluna 1 e às últimas quatro cavidades da coluna 12.
[00741] A base é determinada mediante a adição de composto de controle a 10 mM às últimas quatro cavidades da coluna | e às primeiras quatro cavidades da coluna 12.
[00742] 2mLde'mistura de Ensaio' são preparados por placa:
[00743] 1,912mL de tampão de ensaio de HEPES
[00744] 8,33 ulde estoque de ATP a 3 mM, proporcionando uma concentração final de 5 uM por cavidade
[00745] 1 ulde[*P]ATP na data de atividade, proporcionando 0,05 uCi por cavidade
[00746] 30 ul de estoque a 1 mg/ml de PI, proporcionando uma concentração final de 6 mg/ml por cavidade
[00747] 5 ul de estoque de MgACl,; a 1 M, proporcionando uma concentração final de 1 mM por cavidade
[00748] 20ulda mistura de ensaio são adicionados por cavidade.
[00749] 2mbL de 'misturade Enzimas' são preparados por placa (xX* ul de quinase PI3 p1105) em 2 mL de tampão de quinase). A 'mistura de Enzimas' é mantida em gelo durante adição às placas de ensaio.
[00750] 20 ul de 'mistura de Enzimas' são adicionados/cavidade para iniciar a reação.
[00751] A placa é, então, incubada em temperatura ambiente durante 90 minutos.
[00752] A reação é terminada mediante a adição de 50 ul de suspensão de esferas WGA-SPA (esferas para Ensaio de Proximidade de Cintilação revestidas com aglutinina de germe de trigo) por cavidade.
[00753] A placa de ensaio é selada usando TopSeal-S (selante térmico para microplacas de poliestireno, PerkinElmer LAS [Deutschland] GmbH, Rodgau, Alemanha) e incubada em temperatura ambiente durante pelo menos 60 minutos.
[00754] A placa de ensaio é, então, centrifugada a 1500 rpm durante 2 minutos usando uma centrífuga de bancada Jouan (Jouan Inc., Nantes, França).
[00755] A placa de ensaio é contada usando um Packard
TopCount, cada cavidade sendo contada durante 20 segundos.
[00756] O volume de enzima é dependente da atividade enzimática do lote em uso.
[00757] Em um ensaio mais preferido, a reação de quinase é realizada em um volume final de 10 ul por cavidade de uma placa preta com 384 cavidades CORNING sem ligação tendo um volume mais baixo (Cat. fé 3676). As concentrações finais de ATP e fosfatidil- inositol (PI) no ensaio são de 1 uM e 10 ug/ml, respectivamente. À reação é iniciada mediante a adição de ATP.
[00758] Os componentes do ensaio são adicionados por cavidade como segue:
[00759] 950 nl de compostos de teste em DMSO a 90% por cavidade, em colunas 1-20, 8 concentrações (diluição gradual serial de 1/3 e 1/3,33) por vez.
[00760] Baixo controle: 50 nl de DMSO a 90% em metade das cavidades das colunas 23-24 (0,45% ao final).
[00761] Alto controle: 50 nl de composto de referência (por exemplo, o composto do Exemplo 7 no documento WO 2006/122806) na outra metade das colunas 23-24 (2,5 uM ao final).
[00762] Padrão: 50 nl de composto de referência já mencionado diluído como os compostos de teste nas colunas 21-22.
[00763] 20mbL de'tampão'são preparados por ensaio:
[00764] 200 ulde Tris-HCl a 1M, pH de 7,5 (10 mM ao final)
[00765] 60uldeMgCl,a1M (3 mM ao final)
[00766] 500 ulde NaCla2M (50 mM ao final)
[00767] 100uldeCHAPS a 10% (0,05% ao final)
[00768] 200 uldeDTTa100mM (1mM ao final)
[00769] 18,94 mL de água nanopura
[00770] 10 mL de 'PI' são preparados por ensaio:
[00771] 200 ul de L-alfa-fosfatidilinositol a 1 mg/mL (Fígado Bovino,
Avanti Polar Lipids Cat. Nº 840042C, MW = 909,12) preparado em octilglucosídeo a 3% (10 ug/mL ao final)
[00772] 98mLde'tampão'
[00773] 10mLde'ATP'são preparados por ensaio:
[00774] 6,7 ul de estoque de ATP a 3 mM, proporcionando uma concentração final de 1 uM por cavidade
[00775] 10mLde'tampão'
[00776] 2,5 mL de cada construto de PI3BK são preparados por ensaio em 'PI' com as seguintes concentrações finais:
[00777] PlI3KalfaEMV B1075a10nM
[00778] betaEMV BV949 a 25 nM
[00779] delta EMV BV1060 a 10 nM
[00780] “gama EMV BV950 a 150 nM
[00781] 5ulde'Pl/PI3SK' são adicionados por cavidade.
[00782] 5u de'ATP' são adicionados por cavidade para iniciar a reação.
[00783] As placas são, então, incubadas em temperatura ambiente durante 60 minutos (alfa, beta, delta) ou 120 minutos (gama).
[00784] A reação é terminada mediante a adição de 10 ul de Kinase-Glo (Promega Cat. Nº* 6714).
[00785] As placas de ensaio são lidas após 10 minutos no leitor Synergy 2 (BioTek, Vermont, EUA) com um tempo de integração de 100 milissegundos e sensibilidade ajustada em 191.
[00786] Resultados: O controle alto é cerca de 60.000 contagens e o controle baixo é 30.000 ou menor.
[00787] Este ensaio de luminescência fornece uma proporção Z' útil entre 0,4 e 0,7.
[00788] O valor de Z' é uma medida universal da robustez de um ensaio. Um Z' entre 0,5 e 1,0 é considerado um excelente ensaio.
[00789] Para este ensaio, os construtos de PI3BK mencionados são preparados como segue.
1.2 Geração de Construtos Gênicos
[00790] Dois construtos diferentes, BV 1052 e BV 1075, são usados para gerar as proteínas quinase PI3 a para rastreio de compostos. PI3Ka BV-1052 p85(iSH2)-ligante Gly-p110a(D20aa)- marcador His C-term
[00791] Os produtos de PCR para o domínio SH2 (iSH2) da subunidade p85 e para a subunidade p110-a (com uma deleção dos primeiros 20 aminoácidos) são gerados e fundidos por PCR de sobreposição.
[00792] O produto de PCR de iSH2 é gerado a partir de cCDONA de primeira fita usando primeiramente os iniciadores:
[00793] “gwG130-p01 (S"-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT- 3' (SEQID NO: 1) e
[00794] gwG130-po2 (5-TGGTTT- AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 2).
[00795] —Subsequentemente, em uma reação de PCR secundária Gateway (Invitrogen AG, Basel, Suíça), sítios de recombinação AttB1 e sequências ligantes são adicionados na extremidade 5' e na extremidade 3' do fragmento p85 de iSH2, respectivamente, usando os iniciadores:
[00796] gwG130-po3 (5"-
GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACAT AT-GCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3') (SEQ ID NO: 3) e
[00797] gwG152-p04 (5"- TACCATAATTCCACCACCACCACCGGAAATTCCCCCTGGTTT- AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 4).
[00798] O fragmento p110-a também é gerado a partir de CDNA de primeira fita primeiramente usando iniciadores:
[00799] “gwG152-p01 (5- CTAGTGGAATGTTTACTACCAAATGG -3
') (SEQID NO: 5) e
[00800] “gwG152-p02 (5- GTTCAATG - CATGCTGTTTAATTGTGT - 3') (SEQ ID NO: 6).
[00801] Em uma reação de PCR subsequente, sequência ligante e de um marcador de histidina são adicionados na extremidade 5' e extremidade 3' do fragmento p110-a, respectivamente, usando os iniciadores;
[00802] gw152-po3 (5"- GGGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTATGGTAC- TAGTGGAATGTTTACTACC-AAATGGA-3') (SEQ ID NO: 7) e
[00803] gwG152-po6 (5"- AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCGTTCAATG- CATGCTGTTTAATTGTGT-3') (SEQ ID NO: 8).
[00804] A proteína de fusão p85-iSH2/p110-a é montada em uma terceira reação de PCR por meio de sobreposição dos ligantes na extremidade 3' do fragmento de iSH2 e na extremidade 5' do fragmento p110-a usando o iniciador gwG130-p03 mencionado acima e um iniciador que contém uma sobreposição de marcador de histidina e as sequências de recombinação attB2:
[00805] (5-
GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGT GATGGTGAT-GTGCTCC-3') (SEQ ID NO: 9).
[00806] Este produto final é recombinado em uma reação OR (Invitrogen) ou no vetor doador pDONR201 para gerar o clone de entrada ORF318. Este clone foi verificado por meio de sequenciamento e usado em uma reação Gateway LR para transferir o inserto para o vetor Gateway adaptado pBlueBaca4.5 (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR410. PI3Ka BV-1075 p85(iSH2)-ligante 12 XGly-p110a(D20aa)- marcador His C-term
[00807] O construto para baculovírus BV-1075 é gerado por uma ligação em três partes compreendida de um fragmento pê5 e um fragmento p110-a clonados no vetor pBlueBac4.5. O fragmento p85 é derivado a partir do plasmídeo p1661-2 digerido com Nhel/Spel. O fragmento p1i10-a é derivado de LR410 (vide acima) como um fragmento Spel/Hindlll. O vetor de clonagem pBlueBaca4.5 (Invitrogen) foi digerido com Nhel/Hind III. Isso resulta no construto PED 153.8.
[00808] O componente p85 (iSH2) é gerado através de PCR usando ORF 318 (descrito acima) como um modelo e um iniciador direto:
[00809] “KAC1028 (5'- GCTAGCATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAATATACC) (SEQ ID NO: 10)
[00810] edois iniciadores reversos:
[00811] KAC1029 (5"- GCCTCCACCACCTCCGCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC) (SEQ ID NO: 11) e
[00812] KAC1039 [6X TACTAGTCCGCCTCCACCACCTCCGCCTCCACCACCTCOCGCC) (SEQ ID NO: 12).
[00813] Os dois iniciadores reversos se sobrepõem e incorporam o ligante 12x Gly e a sequência N-terminal do gene de p110a ao sítio Spel. O ligante 12x Gly substitui o ligante no construto BV1052. O fragmento de PCR foi clonado no pCR2.1 TOPO (Invitrogen). Dos clones resultantes, p1661-2 é determinado como estando correto. Este plasmídeo é digerido com Nhel e Spel e o fragmento resultante é isolado em gel e purificado para subclonagem.
[00814] O fragmento de clonagem p110-a é gerado por meio de digestão enzimática do clone LR410 (vide acima) com Spel e Hindlll. O sítio Spel está na região de codificação do gene de p110a. O fragmento resultante é isolado em gel e purificado para subclonagem.
[00815] O vetor de clonagem pBlueBaca4.5 (Invitrogen) é preparado por meio de digestão enzimática com Nhel e Hindlll. O vetor de corte é purificado com uma coluna Qiagen (Quiagen N.V, Venlo, Holanda) e, então, desfosforilado com fosfatase alcalina de intestino de vitelo (CIP) (New England BioLabs, Ipswich, MA). Após término da reação com CIP, o vetor de corte é purificado novamente em coluna para gerar o vetor final.Uma ligação em 3 partes é realizada usando ligase Roche Rapid e as especificações do fornecedor. PISKB BV-949 p85(iSH2)-ligante Gly-p110b(comprimento completo)-marcador His C-term
[00816] Os produtos de PCR para o interdomínio SH2 (iSH2) da subunidade p85 e para a subunidade p110-b de comprimento total são gerados e fundidos por PCR de sobreposição.
[00817] O produto de PCR de iSH2 é gerado a partir de CDONA de primeira fita primeiramente usando iniciadores:
[00818] —“gwG130-po1 (S-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT- 3' (SEQID NO: 1) e
[00819] gwG130-po2 (5-TGGTTT- AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 2).
[00820] Subsequentemente, em uma reação de PCR Gateway secundária (Invitrogen), sítios de recombinação attB1 e sequências Iligantes são adicionados na extremidade 5' e na extremidade 3' do fragmento p85 de iSH2, respectivamente, usando os iniciadores:
[00821] gwG130-po3 (5"- GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATA- TACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3') (SEQ |D NO: 3) e
[00822] “gwG130-po5s (5"- ACTGAAGCATCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAAT-
GCTGTTCATACGTTTGTC-3') (SEQ ID NO: 13).
[00823] O fragmento p110-b também é gerado a partir de cDNA de primeira fita primeiramente usando iniciadores:
[00824] “ gwG130-po4 (5"-
ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTTCAGTTTCATAATG CC-TCCTGCT -3') (SEQ ID NO: 4)
[00825] os quais contém sequências de ligação e a extremidade 5' de p110-be
[00826] gwG130-po6 (5"- AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATCTGTAGTCTTT- CCGAACTGTGTG -3') (SEQ ID NO: 14)
[00827] o qualcontém as sequências da extremidade 3' de p110-b fundidas a um marcador de Histidina.
[00828] A proteína de fusão p85-iSH2/p110-b é montada por uma reação de PCR de sobreposição dos ligantes na extremidade 3' do fragmento de iSH2 e na extremidade 5' do fragmento p110-b usando o iniciador gwG130-p03 mencionado acima e um iniciador contendo um marcador de histidihna de sobreposição e as sequências de recombinação attB2:
[00829] (5-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTT- AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3') (SEQ ID NO: 15).
[00830] Este produto final é recombinado em uma reação OR Gateway (Invitrogen) no vetor doador pPDONR201 para gerar o clone de entrada ORF253. Este clone foi verificado por meio de sequenciamento e usado em uma reação LR Gateway para transferir o inserto para o vetor Gateway adaptado pBlueBaca4.5 (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR280. PIS3SK5 BV-1060 p85(iSH2)-ligante Gly-p110d(comprimento completo)-marcador His C-term
[00831] Os produtos de PCR para o interdomínio SH2 (iSH2) da subunidade p85 e para a subunidade p110-d de comprimento total são gerados e fundidos por PCR de sobreposição.
[00832] O produto de PCR de iSH2 é gerado a partir de CONA de primeira fita usando primeiramente os iniciadores:
[00833] “gwG130-po1 (S-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT- 3' (SEQID NO: 1) e
[00834] gwG130-po2 (5-TGGTTT- AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 2).
[00835] Subsequentemente, em uma reação de PCR secundária Gateway (lInvitrogen), sítios de recombinação attB1i e sequências ligantes são adicionadas na extremidade 5' e na extremidade 3' do fragmento p85 de iSH2, respectivamente, usando os iniciadores:
[00836] gwG130-po3 (5"- GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACAT- ATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3') (SEQ ID NO: 3) e
[00837] —“gwG154-p04 (5"- TCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGIC - 3') (SEQ ID NO: 16).
[00838] O fragmento p110-a é gerado a partir de cDNA de primeira fita usando primeiramente os iniciadores:
[00839] “gwG154-p01 (5- ATGCCCCCTGGGGTEGGACTGCCCCAT -3') (SEQ ID NO: 17) e
[00840] “gwG154-p02 (5- CTACTG-CCTGTTGTCTTTGGACACGT - 3') (SEQ ID NO: 18).
[00841] Em uma reação de PCR subsequente, sequências ligantes e um marcador de histidina são adicionados na extremidade 5' e na extremidade 3' do fragmento p110-d, respectivamente, usando os iniciadores:
[00842] “gw154-po03 (5"- ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-
TGCCCCATGGA -3') (SEQ ID NO: 19) e
[00843] “ gwG154-po6 (S-AGCTCCGTGATGGTGAT- GGTGATGTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT -3') (SEQ ID NO: 20).
[00844] A proteína de fusão p85-iSH2/p110-d é montada em uma terceira reação de PCR pelos ligantes de sobreposição na extremidade 3' do fragmento de iSH2 e na extremidade 5' do fragmento p110-d usando o iniciador gwG130-p03 mencionado acima e um iniciador contendo um marcador de histidina de sobreposição e as sequências de recombinação attB2 Gateway (Invitrogen):
[00845] —(5S-GGGACCACTTTGTA-CAAGAAAGCTGGGTTT- AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3') (SEQ ID NO: 21).
[00846] Este produto final é recombinado em uma reação OR Gateway (Invitrogen) no vetor doador pPDONR201 para gerar o clone de entrada ORF319. Este clone foi verificado por meio de sequenciamento e usado em uma reação LR Gateway para transferir o inserto para o vetor Gateway adaptado pBlueBaca4.5 (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR415. PISKy BV-950 p110g(D144aa)-marcador His C-term
[00847] Este construto é obtido de Roger Williams Lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, Reino Unido (Novembro de 2003). Descrição do construto em: Pacold M. E. et al. (2000) Cell 103, 931-943.
1.3 Expressão e Purificação de Proteínas
[00848] “Métodos para gerar baculovírus recombinante e proteína para as isoformas de PISK:
[00849] Os plasmídeos pBlue-Bac4.5 (para isoformas a, b e d) ou pVL1393 (para g) contendo diferentes os genes de quinase PI3 são cotransfectados com DNA genômico BaculoGold WT (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, EUA) usando métodos recomendados pelo fornecedor. Subsequentemente, o baculovírus recombinante obtido a partir da transfecção é purificado em placa sobre células de insetos Sf9 para produzir vários isolados que expressam a proteína recombinante. Os clones positivos são selecionados por Western com anticorpo anti-HIS ou anti-isoforma. Para as isoformas alfa e delta de PISK, uma purificação secundária em placa é realizada nos primeiros estoques de vírus clonais de PI3K. Amplificação de todos os isolados de baculovírus é realizada em baixa multiplicidade de infecção (Multiplicity Of Infection - MOI) para gerar estoque de baixa passagem, alta titulação para produção de proteína. Os baculovírus são designados BV1052 (a) e BV1075 (a), BV949 (B), BV1060 (5) e BV950 (Y).
[00850] — Produção de proteínas envolve a infecção (3 passagens ou menos) de células Tn5 (Trichoplusia ni) ou TiniPro (Expression Systems, LLC, Woodland, CA, EUA) em suspensão em meio isento de proteína em uma MOI de 2-10 durante 39-48 horas em frascos Erlenmeyer de vidro de 2 | (110 rpm) ou biorreatores de ondas (22-25 rpm). Inicialmente, biorreatores de ondas com volume de trabalho de | foram cultivados em uma densidade de 3e5 células/ml em metade da capacidade (5L). O reator é agitado a 15 rom durante a fase de crescimento das células por 72 horas, suplementado com ar misturado com 5% de oxigênio (0,2 | por minuto). Imediatamente antes de infecção, as culturas de reator de ondas são analisadas quanto à densidade, viabilidade e diluídas para aproximadamente 1,5e6 células/mL. 100-500 mL de vírus de baixa passagem, alta titulação são adicionados após 2-4 horas de cultura adicional. O oxigênio é aumentado para 35% durante o período de 39-48 horas de infecção e a agitação na plataforma é aumentada para 25 rpm. Durante infecção, as células são monitoradas pelo bioprocesso de analisador de viabilidade Vicell (Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA, EUA) quanto à viabilidade, diâmetro e densidade. Leituras no Nova Bioanalyzer (NOVA Biomedical Corp., Waltham, MA, EUA) de vários parâmetros e metabólitos (pH, saturação de O,, glicose, etc.) são realizadas a cada 12-18 horas até coleta. As células no biorreator de ondas são coletadas dentro de 40 horas após infecção. As células são coletadas por meio de centrifugação (4 “C a 1500 rpm) e, então, mantidas sobre gelo durante agregação de pellets para lise e purificação. Aglomerados de pellets são feitos com pequenas quantidades de meio de Grace não suplementado gelado (sem inibidores de protease). Protocolo de Purificação de PI3K alfa para HTS (BV1052)
[00851] PI3SK alfa é purificada em três etapas cromatográficas: cromatografia de afinidade de metal imobilizada sobre uma resina de Ni Sepharose (GE Healthcare, pertencente à General Electric Company, Fairfield, CT, EUA), filtração em gel utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare) e, finalmente, uma etapa de permuta catiônica sobre uma coluna SP-XL (GE Healthcare). Todos os tampões são resfriados para 4 € e lise é realizada sob resfriamento em gelo. Fracionamento em coluna é realizado rapidamente em temperatura ambiente.
[00852] Tipicamente, células de inseto congeladas são submetidas à lise em um tampão de lise hipertônico e aplicadas a uma coluna de IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido por 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem contendo imidazol a 45 mM e a proteína alvo é, então, eluída com um tampão contendo imidazol a 250 mM. As frações são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo proteína alvo são reunidas e aplicadas a uma coluna de GFC preparada. As frações da coluna de GFC são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo proteína alvo são reunidas. O aglomerado da coluna de GFC é diluído em um tampão de baixa concentração de sal e aplicado a uma coluna SP-XL preparada. A coluna é lavada com tampão de baixo teor de sal até que uma absorbância de linha de base de Axo seja alcançada e eluída usando um gradiente de 20 volumes de coluna de NaCl a O mM a NaCl a 500 mM. Novamente, as frações da coluna SP-XL são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo a proteína alvo são reunidas. O aglomerado final é submetido à diálise em um tampão de armazenamento contendo glicerol a 50% e armazenado a -20 ºC. O aglomerado final é ensaiado quanto à atividade em um ensaio de quinase de fosfoinosititol. Protocolo de Purificação de PI3K para HTS (BV949)
[00853] PISK beta é purificada em duas etapas cromatográficas: cromatografia de afinidade de metal imobilizada (Immobilized Metal Affinity Chromatography - IMAC) em uma resina de Ni-Sepharose (GE Healthcare) e filtração em gel (GFC) utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare). Todos os tampões são resfriados para 4 CT e lise é realizada sobre gelo. Fracionamento em coluna é realizado rapidamente em temperatura ambiente.
[00854] Tipicamente, células de inseto congeladas são submetidas à lise em um tampão de lise hipertônico e aplicadas a uma coluna de IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido por 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem contendo imidazol a 45 mM e a proteína alvo é, então, eluída com um tampão contendo imidazol a 250 mM. As frações são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo proteína alvo são reunidas e aplicadas a uma coluna de GFC preparada. As frações da coluna de GFC são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo proteína alvo são reunidas. O aglomerado final é submetido à diálise em um tampão de armazenamento contendo glicerol a 50% e armazenado a -20 ºC. O aglomerado final é ensaiado quanto à atividade em um ensaio de quinase de fosfoinosititol.
Protocolo de Purificação de PI3K gama para HTS (BV950)
[00855] —PISK gama é purificada em duas etapas cromatográficas: cromatografia de afinidade de metal imobilizada (Immobilized Metal Affinity Chromatography - IMAC) em uma resina de Ni-Sepharose (GE Healthcare) e filtração em gel (CFG) utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare). Todos os tampões são resfriados para 4 CT e lise é realizada resfriada sobre gelo. Fracion amento em coluna é realizado rapidamente em temperatura ambiente. Tipicamente, células de inseto congeladas são submetidas à lise em um tampão de lise hipertônico e aplicadas a uma coluna de IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido por 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem contendo imidazol a 45 mM e a proteína alvo é, então, eluída com um tampão contendo imidazol a 250 mM. As frações são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo proteína alvo são reunidas e aplicadas a uma coluna de GFC preparada. As frações da coluna de GFC são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo proteína alvo são reunidas. O aglomerado final é submetido à diálise em um tampão de armazenamento contendo glicerol a 50% e armazenado a -20 ºC. O aglomerado final é ensaiado quanto à atividade em um ensaio de quinase de fosfoinosititol. Protocolo de Purificação de PI3K delta para HTS (BV1060)
[00856] PI3SK delta é purificada em três etapas cromatográficas: cromatografia de afinidade de metal imobilizada em uma resina de Ni- Sepharose (GE Healthcare), filtração em gel utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare) e, finalmente, uma etapa de permuta aniônica em uma coluna Q-HP (GE Healthcare). Todos os tampões são resfriados para 4 € e lise é realizada resfriada sobre gelo. Fracionamento em coluna é realizado rapidamente em temperatura ambiente. Tipicamente, células de inseto congeladas são submetidas à lise em um tampão de lise hipertônico e aplicadas a uma coluna de IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido por 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem contendo imidazol a 45 mM e a proteína alvo é, então, eluída com um tampão contendo imidazol a 250 mM. As frações são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo a proteína alvo são reunidas e aplicadas a uma coluna de GFC preparadA. As frações da coluna de GFC são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo a proteína alvo são reunidas. O aglomerado da coluna de GFC é diluído em um tampão de baixa concentração de sal e aplicado a uma coluna Q-HP preparada. A coluna é lavada com tampão de baixo teor de sal até que uma absorbância de linha de base de A>go estável seja alcançada e eluída usando um gradiente de 20 volumes de coluna de NaCl a O MM a NaCl a 500 mM. Novamente, as frações da coluna Q-HP são analisadas por géis de SDS-PAGE corados com Coomassie e as frações contendo a proteína alvo são reunidas. O aglomerado final é submetido à diálise em um tampão de armazenamento contendo glicerol a 50% e armazenado a -20 ºC. O aglomerado final é ensaiado quanto à atividade em um ensaio de quinase de fosfoinosititol.
[00857] AICsº é determinada por uma rotina de ajuste de curva com quatro parâmetros que vem junto com o "Excel Fit". Uma equação logística de quatro parâmetros é usada para calcular os valores de IC5o (IDBS XLfitj) da inibição percentual de cada composto em 8 concentrações (normalmente 10, 3,0, 1,0, 0,3, 0,1, 0,030, 0,010 e 0,003 uM). Alternativamente, os valores de ICsº são calculados usando idbsXLfit modelo 204, o qual é um modelo logístico de 4 parâmetros.
[00858] Ainda alternativamente, para um ensaio de depleção de ATP, os compostos de fórmula | a serem testados são dissolvidos em DMSO e diretamente distribuídos em uma placa branca com 384 cavidade a 0,5 ul por cavidade. Para iniciar a reação, 10 ul de quinase PI3 a 10 nM e 5 ug/ml de 1-alfa-fosfatidilinositol (PI) são adicionados a cada cavidade, seguido por 10 ul de ATP a 2 uM. A reação é realizada até aproximadamente 50% do ATP estar esgotado e, então, interrompida mediante a adição de 20 ul de solução de Kinase-Glo (Promega Corp, Madison, WI, EUA). A reação interrompida foi incubada durante 5 minutos e o ATP restante é, em seguida, detectado por meio de luminescência. Os valores de ICs,5 são, então, determinados.
[00859] Em uma modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICrso, no ensaio enzimático de PI3K delta é de entre 1 nM e 500 nM.
[00860] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICro, no ensaio enzimático de PI3K delta é de entre 1 nM e 100 nM.
[00861] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICrso, no ensaio de PISK delta enzimático é de entre 0,5 nM e 10 nM.
[00862] Em uma modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICro, no ensaio celular PI3K delta é de entre 1 nM e 1000 nM.
[00863] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICrso, no ensaio celular PI3K delta é de entre 1 nM e 500 nM.
[00864] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PISK delta, onde o inibidor mostra uma seletividade pela isoforma PI3K delta em relação a uma ou mais das outras isoformas, em que essa seletividade é de pelo menos 10 vezes.
[00865] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PISK delta, onde o inibidor mostra uma seletividade pela isoforma PI3K delta em relação a uma ou mais das outras isoformas, em que essa seletividade é de pelo menos 20 vezes.
[00866] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, onde o inibidor mostra uma seletividade pela isoforma PI3K delta em relação a diferentes parálogos de PISKL e D), em que esta seletividade é de pelo menos 10 vezes.
[00867] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, onde o inibidor mostra uma seletividade pela isoforma PI3K delta em relação a diferentes parálogos de PISKL e D, em que esta seletividade é de pelo menos 20 vezes.
[00868] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICrso, no ensaio celular de PI3K delta, é de entre 1 nM e 500 nM e em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3SK delta, onde o inibidor mostra uma seletividade pela isoforma PI3SK delta em relação a diferentes parálogos de PI3SK à e À, em que essa seletividade é de pelo menos 10 vezes.
[00869] Em outra modalidade da presente invenção, o inibidor de PISK, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, em que a faixa de atividade, expressa como ICro, no ensaio celular de PI3K delta, é de entre 1 nM e 500 nM e em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma PI3K delta, onde o inibidor mostra uma seletividade pela isoforma PISK delta em relação a diferentes parálogos de PI3SK a e À, em que essa seletividade é de pelo menos 20 vezes.
2. ENSAIOS CELULARES
2.1 Fosforilação de AKkti/2 (S473) mediada por quinase de fosfoinositídeo-3 (PISK) em células Rat-1
[00870] Células Rat-1 que superexpressam estavelmente uma forma miristoilada da subunidade catalíica de quinase de fosfoinositídeo-3 (PI3K) humana alfa, beta ou delta foram colocadas em placas com 384 cavidades em uma densidade de 7500 (alfa PISK), 6200 (PISK beta) ou 4000 (PISK delta) células em 30 ul de meio de crescimento completo (meio de Eagle modificado de Dulbecco (DMEM com alto teor de glicose) suplementado com soro fetal bovino a 10% (v/v), aminoácidos não essenciais MEM a 1% (v/v), HEPES a 10 mM, L-olutamina a 2 mM, 10 ugml de puromiciha e penicilina/estreptomicina a 1% (v/v)) e foram incubadas a 37 C/5% de CO2/95% de umidade durante 24 horas. Os compostos foram diluídos em placas com 384 cavidades para obter diluições seriais de 8 pontos para 40 compostos de teste em DMSO a 90%, bem como 4 compostos de referência, mais 16 controles altos e 16 controles baixos (inibidos). Placas pré-diluição foram preparadas dispersando, com uma pipeta, 250 nl de soluções de compostos em placas com 384 cavidades de polipropileno usando uma Hummingwell Nanoliter Dispensor. Os compostos foram pré-diluídos mediante a adição de 49,75 ul de meio de crescimento completo. 10 ul da solução de composto pré-diluído foram transferidos para a placa de células usando uma pipeta de 384 cavidades, resultando em uma concentração final de DMSO de 0,11%. As células foram incubadas durante 1 h, a 37 C/5% de CO7/95% de umidade. O sobrenadante foi removido, as células foram submetidas à lise em 20 ul de tampão de lise para detecção AlphaScreenO SureFire€.
[00871] Para detecção de p-AKT(Ser473), foi utilizado o kit SureFire& p-Akt 1/2 (Ser473) Assay Kit (PerkinElmer, EUA). 5 ul de lisato celular foram transferidos para Proxiplates com 384 cavidades de baixo volume de detecção usando uma pipeta de 384 cavidades. À adição de reagentes AlphaScreenO SureFireA foi feita de acordo com o protocolo do fabricante. Primeiro, 5 ul de tampão de reação mais mistura de tampão de ativação contendo esferas aceitadoras AlphaScreenO foram adicionados, a placa foi selada e incubada em um agitador de placas durante 2 horas em temperatura ambiente. Segundo, 2 ul de tampão de diluição contendo esferas doadoras AlphaScreenO foram adicionados e a placa foi incubada em um agitador de placas conforme anteriormente durante mais 2 horas. À placa foi lida em um leitor de placas AlphaScreen& compatível usando as configurações padrões para AlphaScreen€.
2.2 Determinação de ativação de células B de murino
[00872] —PISKô foi reconhecida por modular a função de células B quando as células são estimuladas através do receptor de células B (B Cell Receptor - BCR) (Okkenhaug et al. Science 297: 1031 (2002). Para avaliar a propriedade inibidora dos compostos sobre a ativação de células B, a regulação positiva de marcadores de ativação CD86 e CD69 em células B de murino derivadas de anticorpos de baço de camundongo é medida após estimulação com anti-lgM. CD69 é um marcador de ativação bem conhecido para células B e T (Sancho et al. Trends Immunol. 26: 136 (2005). CD86 (também conhecida como B7-
2) é expressa principalmente em células apresentadoras de antígeno, incluindo células B. Células B em repouso expressam CD86 em níveis baixos, mas regulam positivamente a mesma após estimulação, por exemplo, do receptor BCR ou de IL-4. CD86 em células B interage com CD28 em células T. Esta interação é necessária para ativação ótima de células T e para produção de uma resposta de IgG1 ótima (Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20: 29 (2002)).
[00873] Os baços de camundongos Balb/c são coletados, esplenócitos são isolados e lavados duas vezes com meio RPMI contendo soro fetal bovino (Fetal Bovine Serum - FBS) a 10%, HEPES a 10 mM, 100 Unidades/ml de penicilina/estreptomicina. RPMI suplementado desta forma é posteriormente referido como meio. As células são ajustadas para 2,5 x 10º células/ml em meio de suspensão de células e 200 ul (5 x 10º células) são adicionados à cavidades apropriadas de placas com 96 cavidades.
[00874] Em seguida, as células são estimuladas mediante a adição de 50 ul de mAb anti-lgM no meio (concentração final: 30 ug/ml). Após incubação durante 24 horas a 37 O, as células são coradas com as seguintes misturas de anticorpos: anti-CD86 de camundongo-FITC, anti-CD69 de camundongo-PerCP-Cy5.5, anti-CD19 de camundongo- PerCP para avaliação de células B e anti-CD3 de camundongo-FITC, anti-CD69 de camundongo-PE para avaliação de células T (2 ul de cada anticorpo/cavidade). Após uma hora em temperatura ambiente (RT) no escuro, as células são transferidas para placas com 96 cavidades profundas. As células são lavadas uma vez com 1 mL de PBS contendo FBS a 2% e, após ressuspensão em 200 ul, as amostras são analisadas em um citômetro de fluxo FACS Calibur. Os linfócitos são ativados no gráfico de pontos de FSC/SSC de acordo com o tamanho e granulosidade e depois analisados quanto à expressão de CD19, CD3 e marcadores de ativação (CD86, CD69).
Os dados são calculados a partir de manchas de pontos como a percentagem de células positivamente coradas para os marcadores de ativação na população CD19+ ou CD3+ usando o Software BD CellQest.
[00875] Para avaliação da propriedade inibidora de compostos, os compostos são primeiro dissolvidos e diluídos em DMSO, seguido por uma diluição a 1:50 em meio. Esplenócitos de camundongos Balb/c são isolados, ressuspensos e transferidos para placas com 96 cavidades conforme descrito acima (200 ul/cavidade). Os compostos diluídos ou solvente são adicionados às placas (25 ul) e incubados a 37 C durante 1 hora. Em seguida, as culturas foram estimuladas com ul de mAb anti-lgM/cavidade (concentração final de 30 ug/ml) durante 24 horas a 37 C e coradas com anti-CD85 de camundongo- FITC e antircCDI9 de camundongo-PerCP (2 ul de cada anticorpo/cavidade). Expressão de CD86 em células B positivas para CD19 é quantificada por meio de citometria de fluxo, conforme descrito acima.
2.3 Determinação de ativação de células B de rato
[00876] PI3Kô foi reconhecida por modular a função de células B quando as células são estimuladas através do receptor de células B (BCR) (Okkenhaug et al. Science 297: 1031 (2002). Para avaliar a propriedade inibidora dos compostos sobre a ativação de células B, a regulação positiva de marcadores de ativação CD86 em células B de rato derivadas de sangue total é medida após estimulação com anti- IgM e IL-4 recombinante. A molécula CD86 (também conhecida como B7-2) é expressa principalmente em células apresentadoras de antígeno, incluindo células B. Células B em repouso expressam CD86 em níveis baixos, mas regulam positivamente as mesmas após estimulação, por exemplo, do receptor BCR ou de I|L-4. CD86 em células B interage com CD28 em células T. Esta interação é necessária para ativação ótima de células T e para geração de uma resposta de IgG1 ótima (Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20: 29 (2002)).
COLETA DE SANGUE DE RATO
[00877] Sangue total foi coletado da aorta abdominal de ratos Lewis machos adultos (LEW/HanHsd) usando uma seringa de 10 ml com agulha hipodérmica pré-revestida com heparina sódica. O sangue foi transferido para tubos Falcon de 50 ml e a concentração de anticoagulante foi ajustada para 100 U/ml.
ESTIMULAÇÃO DE CÉLULAS B DE RATO E TRATAMENTO COM INIBIDOR ESPECÍFICO
[00878] Para avaliação dos efeitos in vitro de fármacos imunossupressores, o sangue heparinizado foi pré-diluído a 50% com meio. Como meio serviu DMEM com alto teor de glicose (Animed cat t 1-26FO01-1) suplementado com 100 U/ml de penicilina, 100 mg/ml de estreptomicina, L-glutamina a 2 mM, 50 mg/ml de dextrano 40 e soro fetal de vitelo (FCS, Fetaclone |, Gibco % 10270-106) a 5%. Em seguida, 190 ul de sangue pré-diluído foram enriquecidos com 10 ul de composto de teste pré-diluído em placas de microtitulação de fundo U com 96 cavidades (Nunc), resultando em uma diluição serial de 3 vezes com uma faixa de concentração de 20 a 0,0003 uM. Cavidades de controle foram pré-tratadas com DMSO para obter uma concentração final de DMSO de 0,5%. As culturas foram ajustadas em duplicata, bem misturadas por meio de agitação em um agitador de placas (Heidolph Titramax 101; 30 segundos, velocidade 900), pipetando para cima e para baixo e agitadas no agitador de placas novamente. As culturas foram incubadas a 37 C, 5% de CO, durante 1 hora. Em seguida, 20 ul de Ab policlonal de cabra anti-lgM de rato (Serotec, cat %& 302001) e 10 ul de ril4 recombinante diluída (Immunotools ft 340085) foram adicionados para obter concentrações finais de 30 ugml e 5 ng/ml, respectivamente. As placas foram misturadas por meio de agitação em um agitador de placa conforme acima e incubadas durante 24 horas a 37 C, 5% de C O,.
DETERMINAÇÃO DE ATIVAÇÃO DE CÉLULAS B POR CITOMETRIA DE FLUXO
[00879] Após incubação, 15 ul de uma solução de EDTA a 25 mM foram adicionados por cavidade e agitados durante 15 minutos para separar as células aderentes. Para análise de marcadores de ativação na superfície, as amostras foram, então, coradas com anticorpo anti- CDA45RA de rato marcado co PE-Cy5 (BD cat *% 557015) para permitir ativação em células B em análise FACS. Além disso, as amostras foram coradas com anti-CD86 de rato marcado com PE (BD cat * 551396). Todos os procedimentos de coloração foram realizados em temperatura ambiente durante 30 min no escuro. Após incubação, as amostras foram transferidas para placas de microtitulação de fundo em V com 96 cavidades profundas (Corning ft 396096) contendo 2 ml/cavidade de Solução de Lise BD (BD ft 349202). Após lise de eritrócitos, as amostras foram lavadas com 2 ml de Cellwash (BD * 349524). Os dados foram adquiridos em um citômetro de fluxo LSRII ou FACSCAalibur (BD Biosciences) usando o software CellQuest Plus ou DIVA (versão 6.1.1), respectivamente. Os linfócitos foram ativados no gráfico de pontos de FSC/SSC de acordo com tamanho e granulosidade e depois analisados quanto à expressão de CD45RA e marcadores de ativação. Os dados foram calculados a partir de manchas de pontos ou histogramas como a percentagem de células positivamente coradas para os marcadores de ativação dentro da população CD45RA+.
AVALIAÇÃO ESTATÍSTICA
[00880] A percentagem de inibição de ativação de células B após exposição ao fármaco foi calculada pela fórmula a seguir:
[00881] Estimulação sem fármaco - estimulação com fármaco Estimulação sem fármaco - estimulação com fármaco Inibição % = 100 X ESUNMUNSÇO SSTATANNSOS UNROGSUMARCS!
[00882] O software ORIGIN 7 (OriginLab Corporation, Northampton, MA) foi usado para adaptação de curva por regressão não linear. À concentração de fármaco que resulta em inibição de 50% (ICs5o5) foi obtida ajustando a equação de Hill aos dados de inibição.
2.4 Determinação de IL-6 induzida por TLR9 em esplenócitos de rato
PREPARO DE SUSPENSÃO DE CÉLULAS ISOLADAS A PARTIR DO BAÇO DE CAMUNDONGO
[00883] Os baços foram dissecados a partir de camundongos C57BL/6 imediatamente após eutanásia. O excesso de gordura nos baços foi reduzido antes de triturar o baço através de um filtro de células de 0,4 uM usando um êmbolo de uma seringa de 5 ml. Uma suspensão de células isoladas foi preparada e o volume foi ajustado para 15 ml em um tubo Falcon de 50 ml com PBS gelado. As células foram centrifugadas a 1500 rpm durante 5 minutos a 4 CT antes de remoção do sobrenadante e ressuspensão em 5 ml de tampão de lise de glóbulos vermelhos por cada baço e incubação durante 5 minutos em temperatura ambiente. PBS gelado (30 ml) foi adicionado às células antes de centrifugação a 1500 rpm durante 5 minutos a 4 TC. O sobrenadante foi removido e as células foram lavadas duas vezes com 40 ml de meio de cultura de esplenócitos de murino (MSCM). MSCM consistia de meio RPMI suplementado com 100 unidades/ml de penicilina e 100 ug/ml de estreptomicina, 1 x aminoácidos não essenciais, piruvato de sódio a 1 mM, B-mercaptoetanol| a 0,05 uM e soro fetal bovino (Fetal Bovine Serum - FBS) a 10% termicamente inativado. As células foram novamente suspensas em 10-20 ml de MSCM e contadas usando um contador de células Condessa.
Aproximadamente 60 x10º esplenócitos foram obtidos a partir do baço de um único camundongo C57BL/6.
ESTIMULAÇÃO DE ESPLENÓCITOS DE MURINO E TRATAMENTO COM INIBIDOR ESPECÍFICO
[00884] Os esplenócitos foram colocados em placas em uma densidade final de 2 x 10º células/cavidade em um volume de 100 ul em placas com 96 cavidades de fundo plano e incubados em uma incubadora com atmosfera úmida a 37 *C durante 24 horas. Em seguida, os compostos a serem testados foram distribuídos usando um dispositivo de manipulação de líquidos automatizado empregando placas de estoque de composto previamente preparadas. As placas de estoque consistiam de compostos (em DMSO/ddH,O a 90%/10%) dispostas em 8-10 pontos usando diluições de 2 ou 3 vezes. O dispositivo de manipulação de líquidos distribuiu 1 ul de cada diluição a partir da placa fonte de composto previamente preparada para a cavidade de destino apropriada na placa com 96 cavidades. A concentração final dos compostos na cultura de células foi de 10 uM. À concentração final de DMSO nas culturas de células foi de 0,5%. As células foram incubadas com os compostos durante 1 hora antes da adição de ligante TLR. Em seguida, uma concentração 10 x ECg, de CpG1826 foi adicionada em um volume de 20 u! (para um volume final de cultura de 200 ul), após o que as culturas foram incubadas durante a noite em uma incubadora com atmosfera umidificada a 37 “C. DETERMINAÇÃO DE INTERLEUCINA-6 POR ELISA
[00885] — Após cultura durante a noite, as placas foram centrifugadas a 2000 rpm durante 5 minutos em temperatura ambiente. Subsequentemente, 150 mL de cada cultura foram transferidos para placas com 96 cavidades de fundo em V e IL-6 foi medida usando um kit comercialmente disponível para ELISA em sanduíche de IL-6 de camundongo. Resumidamente, as placas foram revestidas durante a noite com o anticorpo de captura antes de bloqueio durante 1 hora com PBS/BSA a 0,1%. As amostras e padrões foram adicionados em um volume de 50 ul e a placa foi incubada durante 2 horas em temperatura ambiente. Após remoção dos padrões/amostras, a placa foi lavada usando PBS/Tween a 0,05% antes da adição de 50 ul do anticorpo de detecção biotinilado, após o que a placa foi incubada durante 2 horas em temperatura ambiente com agitação. As placas foram lavadas novamente antes da adição de 50 ul de estreptavidina- peroxidase de rábano por cavidade durante 20 minutos. Após lavagens adicionais da placa, 50 ul de substrato TMB foram adicionados a cada cavidade e as placas foram incubadas durante 20 minutos antes da adição de 25 ul/cavidade de solução de interrupção. IL-6 foi medida usando um leitor de placas SpectraMax 190 (450 nm) e analisada usando os softwares SoftMax Pro e GraphPad Prism.
2.5 Determinação de IFNalfa induzido por TLR9 em células mononucleares de sanque periférico (PBMC) humano
PREPARO DE PBMC A PARTIR DE SANGUE HUMANO FRESCO
[00886] Sangue humano (aproximadamente 75 ml) foi coletado em tubos S-Monovette contendo heparina (S-Monovette 7,5 mL NH Heparina 16 IU/mL de sangue; Starstedt). Tubos Leucosep'“Y (30 mL H 227290; Greiner Bio-one) foram preparados mediante a adição de 15 ml de meio de separação de linfócitos LSM1077'Y por tubo (4 J15- 004; PAA Laboratories) e centrifugação durante 30 segundos a 1000 g. 25 ml de sangue foram transferidos para tubos Leucosep'" após diluição com partes iguais de PBS (sem Ca2+/Mg2+; ft 14190-094). As amostras foram centrifugadas a 800 g durante 20 minutos a 22 C€ usando uma centrífuga Eppendorf 5810R sem trava. A camada de PBMC foi cuidadosamente removida da interface plasma:meio de separação e transferida para um tubo limpo de 50 ml. As células foram lavadas uma vez mediante a adição de PBS (até 45 ml) e centrifugadas (1400 rpm, 10 min a 22 CO) com a trava (ajustada em uma velocidade 9) usando uma Eppendorf 5810R. As células sedimentadas foram cuidadosamente ressuspensas em Meio (RPMI 1640 + GlutaMAX -l, 2-mercaptoetanol a 0,05 mM, HEPES a 10 mM e FCS a 5% v/v) e as amostras reunidas. Os componentes do meio 2- mercaptoetanol (4 31350-010, 50 mM), Hepes (% 15630-056, IM) e RPMI 1640 (1x) + GlutaMAX-| (% 61870-010) foram obtidos da Gibco. FCS (ft 2-01F36-1) foi obtido da Amimed. As PBMCs foram contadas usando um contador de células automatizado CondessaO (amostra foi pré-diluída a 1:10 em Meio antes da adição de um volume igual (10 ul) de azul de tripano). As células foram diluídas para 4 x 10º células/ml e cultivadas em placas com 384 cavidades (ft 353962; Becton Dickinson AG) para proporcionar um volume final de 25 ul (ou seja, 1 x 10º células/cavidade).
ESTIMULAÇÃO DE PBMC E TRATAMENTO COM INIBIDOR ESPECÍFICO
[00887] Os compostos foram pré-diluídos em DMSO a 100% v/v (tt 41640 - 100 mL; Sigma-Aldrich), seguido por transferência em Meio (para conseguir uma concentração final de DMSO de 0,25%). As células foram tratadas com uma diluição adequada do composto (5 ul) ou controle de veículo (5 ul) e incubadas durante 30 min a 37 C em uma incubadora umidificada em atmosfera com 5% (v/v) de CO,>. As células foram estimuladas com CpG2216 (0,3 uM; * tlrl-hodna; Invivogen) ou controle de veículo (10 ul/cavidade) e incubadas durante h. As placas foram rapidamente centrifugadas (200 x g durante 2 min a 22 C€) e amostras de sobrenadante (30 ul) removidas para quantificação dos níveis de IFNoa. QUANTIFICAÇÃO DE IFNa USANDO A TECNOLOGIA ALPHALISA
[00888] Para quantificação de IFNalfa foi usado o kit de interferon humano AIphaLISA (tt AL264F) da PerkinElmer. Uma mistura de anticorpo contendo esferas aceitadoras anti-|IFNoa (5 mg/ml final) e o anticorpo biotinilado anti-IFNa (0,5 nM final) é preparada e distribuída (5 ul) em OptiPlates'Y com 384 cavidades (% 6007299; PerkinElmer). Diluições de padrões de IFNa conhecidos (IFNa B humano (2b)) foram preparadas e, junto com os sobrenadantes das células (5 ul), foram adicionados às placas acima. As placas foram centrifugadas brevemente (pulso a 200 g), cobertar com filme de vedação adesivo, agitadas e incubadas 1 h em temperatura ambiente no escuro. Esferas doadoras revestidas com estreptavidina (20 ug/mL final) foram preparadas e adicionadas a cada cavidade (5 ul) em uma área escura iluminada (mistura sensível à luz). As placas foram incubadas 30 min em temperatura ambiente (as placas não devem ser centrifugadas ou cobertas). Após incubação, as placas foram lidas com um leitor EnvVision'y Multiplate equipado com a opção ALPHA usando as "Configurações Padrões AlphaScreen" do próprio instrumento (por exemplo, tempo total de medição: 550 ms, Laser: 680 nm, tempo de excitação: 180 ms, espelho: D640, filtro de emissão: M570w, centro de comprimento de onda: 570 nm, largura de banda: 100 nm, transmitância de 75%). Os dados foram coletados para análise e quantificação dos níveis de IFNo.
AVALIAÇÃO E ANÁLISE DE DADOS
[00889] Os dados foram analisados usando o Excel XL fit 4.0 (Microsoft) com add-in XLfi (IDBS; versão 4.3.2). Concentrações específicas de IFNa foram determinadas após extrapolação para curvas padrões usando IFNa B humana (2b). Os valores de ICs9 dos compostos individuais foram determinados por regressão não linear após adaptação das curvas aos dados experimentais.
3. Determinação da produção de anticorpos contra glóbulos vermelhos de ovelha (SRBC)
[00890] Em resumo, ratos OFA foram injetados i.v. com eritrócitos de ovelha no dO e tratados por via oral em quatro dias consecutivos (dO a d3) com os compostos sob investigação. Suspensões de células do baço foram preparadas no d4 e os linfócitos foram colocados em placas em agar macio na presença de células indicadoras (Sheep Red Blood Cell - SRBC) e complemento. Lise das células indicadoras em virtude de secreção de anticorpos específicos para SRBC (predominantemente da subclasse IgM) e na presença de complemento produziu placas. O número de placas por placa de agar foi contado e expresso como o número de placas por baço. IMUNIZAÇÃO:
[00891] Grupos de cinco ratos OFA fêmeas foram imunizados no dia O com 2 x 10º/ml de SRBC (obtidos do Laboratory Animal Services LAS, Novartis Pharma AG) em um volume de 0,5 ml por rato via injeção i.v. TRATAMENTO COM COMPOSTO:
[00892] Os animais foram tratados com o composto suspenso em CMC a 0,5%, Tween 80 a 0,5% em 4 dias consecutivos (dias 0, 1,2 e 3) começando no dia de imunização. Composto foi administrado por via oral duas vezes por dia com intervalos de 12 horas entre as doses em um volume de aplicação de 5 ml/kg de peso corporal. PREPARO DE SUSPENSÕES DE CÉLULAS DE BAÇO:
[00893] Nodiad4,os animais foram sacrificados com CO». Os baços foram removidos, pesados e depositados em tubos de plástico contendo 10 ml de solução salina equilibrada de Hank (HBSS; Gibco, pH de 7,3, contendo 1 mg de vermelho de Fenol/100 ml) gelada (4 CT) para cada baço de rato. Os baços foram homogeneizadas com um homogeneizador de vidro, deixados sobre gelo durante 5 minutos e 1 ml de sobrenadante foi transferido para um novo tubo. As células foram lavadas uma vez em 4 mL de HBSS, em seguida, os sobrenadantes foram descartados e os pellets ressuspensos em 1 ml de HBSS. O número de linfócitos por baço foi determinado por um contador de células automatizado e suspensões de células de baço foram ajustadas para uma concentração de células de 30 x 10º/ml. ENSAIO DE FORMAÇÃO EM PLACA:
[00894] Placas de Petri de agar macio foram preparadas com agarose a0,7% (Serva) em HBSS. Além disso, um ml de agarose a 0,7% foi preparado em tubos de plástico e mantido a 48 TC em um banho de água. Cerca de 50 ul de uma suspensão de células de baço a 30 x 10ºml e 50 ul de CGVO a 40 x 10º/ml foram adicionados, misturados rapidamente (vórtice) e entornados sobre as placas de agarose preparadas. As Placas de Petri foram ligeiramente inclinadas para conseguir uma distribuição uniforme da mistura de células sobre a camada de agarose. As placas foram deixadas em temperatura ambiente durante 15 minutos e, em seguida, foram incubadas a 37 T durante 60 minutos. Então, 1,4 ml de complemento de porquinho-da- índia (Harlan, 10%) foram adicionados e a incubação continuada por mais 60 minutos a 37 CT. Anticorpos SRBC-específico s liberados pelas células B nas placas se ligaram ao antígeno (SRBC) em sua proximidade. Estes complexos de antígeno-anticorpo ativaram complemento e levaram à lise de SRBC, deixando um ponto brilhante (placa) no interior da camada de eritrócitos vermelhos. As placas foram contadas com um microscópio.
[00895] A fórmula a seguir para determinação de inibição da formação de placa bacteriana foi usada:
[00896] —Inibição% =C*100/V-100
[00897] com:V = número médio de placas/baço para o grupo com veículo; C = número médio de placas/baço para o grupo tratado com composto. REFERÊNCIAS: N.K. Jerne & A.A. Nordin (1963) Plaque formation in agar by single antibody-producing cells. Science 140: 405.
N.K. Jerne, A.A. Nordin & C. Henry (1963) The agar plaque technique for recognizing antibody-producing cells. Em: "Cell Bound Antibodies"”, B. Amos & H. Koprowski eds., Wistar Inst. Press, Filadélfia, páginas 109-125.
DADOS BIOLÓGICOS
EXPERIMENTO ENZIMÁTICO [memplo | PRA) | PeKGEGM | om | se o AR [o o as | os ess a To as [eo oo as [om os a 1 se Mo a o mo amo [o om o am | a os am [cn ss ams | e o ae o os as | os om mo | o oa | ao sa | aero ar | | aB o | oz | ooero | as a
[memo | PoKaRGM | PK | Mo o amo Bs rs Rs e oo Rr sa Rm o 0 a ao oo Ro oa mto Rm ee 9 seo Ao AB ao ame amo o oo Ro am am Ro sao Mo Mm a o AB o ao mo o om Br o os Bo Ro Roo oo Bs os os OB a eo a Am a Bo om os
[memo | PoKaRGM | PK | Br ass ato a oe NE a oa o Bs Ro amo me amo oo Bm o os Bm o oo Br os a Br os 0 Bo e om BM om am Bs os Mo Bo o soma Ba os Mo Bo om om mo ao om Br oa oa Bo a soma Bo ars os Bs o ao Be mm somo Bo om ato
[memo | PoKamGM | PK | BR se as Bm a ao Bs o emo Bo os om Br es om CB os 50 Bo os os Ba or ato eso eo os Be Ao amo Bo a oo Bm ae oo BR as ato Bm o o Bs or as
[memo | PoKaRGM | PEKGIEÇAO | ess *““="="" Bm some Br os om Bm ow om Bs ass o
[memo | PoKamGM | PK | emo mo os Be oa om ams ore eo meo as om Bm os en Emo os oo emo ano aro Bm o amo mms os om Bm om om Bm o am ma o om mA o ao om meo es ao LR e
[memo | PoKaRmGM | PK | Dr aa Ts mo eo eo Om ao om a as OD ae oe me a om or a o as o mm Ho os mo os oe om oa a DR eo some
[memo | pKa) | PiKaAÇ) | mm [sã om oa [os os [om oe os om me oo am o [o o o [o eo Bm o o Dm so E A Nr oa [Os o Ds so ao o so o o [mo eo os [os o o [O o an [os o Dr o Bm mo oa [o o os [om om Bs o o [o om ma ow o NC 7 mo oe o Le TO
[memo | PoKamGM | PEKGIEÇAO | DB dO Ro somo E oa o Ds E os o [E =""“==m" EB ss o mo om o emo o som mo e ams FR ars os FR a em CR dao om OF aaa os or as om FR os os FR os o FR o som mo a om mo o some A or om e e oo e mo amo Rm os o mo os om Rm as om OR eme ato Ns mo amo
[memo | PoKaRGM | PK | OR os oo CR a o ER os ar mo om oo mo o om me as a ma am om mae e ams ms a om me om as | Rr e ms CR a om | CB os o A os os E os os CR ss o a a oo e seo o PR os om a dm om CR de amo Es se as Re os CR ea os
[memo | PKamGOM) | PiKaRaÇ) |
EXPERIMENTOS CELULARES Célula PI3Kd/IC50 RWB/IC50 CD86 oem E mera | CR e o e oa O Como do Ro mo wo o EB as A LR an RB a a as a

Claims (18)

REIVINDICAÇÕES
1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (1) ves Rº
RÀ R
DO & o o N , R ' O) ou um sal do mesmo, na qual: Y é selecionado dentre O ou NH; V é selecionado dentre CRº ou N; W é selecionado dentre CH, ou O; U é selecionado dentre N ou CH; Q é selecionado dentre N ou CR; em que U e Q não são ambos N; R' é selecionado dentre fenila, piridila, pirimininila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila, 1,3,5-triazinila, ou X-Rº na qual X é selecionado dentre C(O), S(O), ou CH>, e Rº é selecionado dentre C,-Cs-alquila, halo-C,-Ca-alquila, hidróxi-C,-Cs-alquila, Ci-Cg-alcóxi-C,-Cz-alquila, ciano-C,-Cs-alquila, N ,N-di-C1-C,-alquil-amino-C,-Cz-alquila, C1-C,-alquil-sulfonil-C,-Ca- alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-óxi, heterociclil-C1-Cs-alquila, C3-Cap-cicloalquila, — Ca-Cia-cicloalquil-óxi, — Ca-Cia-cicloalquil-C,-Cg- alquila, heteroarila, heteroaril-óxi, heteroaril-C,-Cz-alquila, hidróxi, C,- Cg-alcóxi, amino, N-C,-C;z-alquil-amino ou N,N-di-C,-C;-alquil-amino,
sendo que C,-Cs-alguila em N-C,-C;z-alquil-amino e em N,N-di-C,-Cg-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C,-C,-alcóxi,
sendo que C;3-C,>-cicloalquila em C;3-Ci>-cicloalquila e em C3-Ca2-cicloalquil-C,-Ca-alquila pode ser substituída ou não substituída por 1 a 5 substituintes selecionados dentre halogênio, hidróxi ou C,- Ca-alcóxi;
sendo que 'heterociclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre N, O ou S, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados dentre oxo, halogênio, C,-Cg-alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Cg- alquila, hidroxila, C,-Ca-alcóxi, Cy-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,- Cz-alquil-amino, — N,N-di-C,-C;-alquil-amino, — C7-Ci-alquil-carbonila, halo-C,-Ca-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou C,-Cs- alcóxi-C,-Cz-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação,
sendo que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre N, O ou S ou pirazolo[1,5- alpirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados dentre halogênio, C,-Csg-alguila, halo-C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Ca-alquila, hidroxila, C,-Cs-alcóxi, C,-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C;-Csg- alquil-amino, N,N-di-C,-Cg-alquil-amino, C,-Cg-alquil-carbonila, halo- C,-Cz-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cs-alquil-carbonila ou C,-C;a-alcóxi- C,-Cz-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou
S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação; Rº é selecionado dentre hidrogênio, halogênio, Cr-C, alquila, halo-C,-C,-alquila, C,-Ca-alcóxi, C1-C,-alquil-sulfonila, C1-C,- alquil-sulfinila, C,-Ca-alquil-sulfanila, halo-C,-C,-alcóxi, C1-Ca-alcóxi-C,- C,-alquila, amino, N-C,-Cz-alquil-amino, N,N-di-C,-Cs-alquil-amino; R' é selecionado dentre hidrogênio, halogênio, ciano, nitro, C1-C,-alquila, halo-C,-C,-alquila, Cy-Ca-alcóxi, N(Rº)>-sulfonila, C1-Ca- alquil-sulfonila, Cr-C,-alquil-sulfonil-amino, Ci-Cg-alcóxi-C,-C;-alquila, amino, N-C,-C;z-alquil-amino ou N,N-di-C,-Cz-alquil-amino; ou Rº e R, unidos são CH=CH-CH=CH, sendo que Rº é independentemente selecionado dentre hidrogênio, C,-Ca,-alguila, Cy-Ca,-alcóxi ou dois Rô, junto com o nitrogênio ao qual eles estão presos, formam um anel heterocíclico de 4 a 7 elementos contendo 1-2 heteroátomos selecionados dentre N, O, S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 3 substituintes selecionados dentre C,-C,-alquila; Rº é independentemente selecionado dentre H, D, F ou Cr- C,-alquila; e R*º é independentemente selecionado dentre H, D ou F.
2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (Ic'): us « Cc
SO Ç 2 R (lo).
3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, ou um sal do mesmo caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (Id'):
SO | PÁ Ró
CCO
N o Z NW 1 R (Id).
4. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (le"): Rº 7
NS R | Pá Rn
CU SO o N 1 R (le).
5. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 3, ou um sal do mesmo caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (If): Rº 7
NOS R | Pá Ré
COS
N o ZÉ N 1 R (IP).
6. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, ou um sal do mesmo caracterizado pelo fato de que: R' é selecionado dentre fenila, piridila, pirimininila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila, 1,3,5-triazinila,
ou
-X-Rº na qual
Rº é selecionado dentre C,-C-alquila, hidróxi-C,-C-alquila, C1-Ca-alcóxi-C,-Cg-alquila, — ciano-C,-Ca-alquila, — N,N-di-C1-C,-alquil- amino-C,-C;-alquila, C1-C,a-alquil-sulfonil-C,-Cz-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C,-Cg-alquila, C3-C,>-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,-Cg-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-Cs-alquila em N-C,- Cz-alquil-amino e em N,N-di-C,-C;-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi,
sendo que C3-Ci7-cicloalquila em C3-Chi>-cicloalquila e em C3-C,2-cicloalquil-C,-Cg-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C,-Ca-alcóxi;
sendo que 'heterociclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre N, O ou S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados dentre oxo, halogênio, C,-Cz-alquila, halo-C,-Cz-alquila, hidróxi-C,-Cg- alquila, hidroxila, Cy-Cg-alcóxi, C1-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,- Cz-alquil-amino, — N,N-di-C,-C;-alquil-amino, — C7-Cg-alquil-carbonila, halo-C,-Cg-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cag-alquil-carbonila ou C,-Cs- alcóxi-C,-Cs-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação, e sendo que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre N, O ou S ou pirazolo[1,5- alpirimidina ou imidazo[2,1-b]ltiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados dentre halogênio, C,-Cig-alquila, halo-C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C,-Cs-alcóxi, Ci-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquila, amino, N-C;-Czg- alquil-amino, N,N-di-C,-Cg-alquil-amino, C,-Cg-alquil-carbonila, halo- C,-Cz-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cg-alquil-carbonila ou C,-Cig-alcóxi- C,-Cz-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação.
7. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, ou um sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que: R' é selecionado dentre X-R na qual Rº é selecionado dentre C,-C-alquila, hidróxi-C,-Ca-alquila, C,1-Cg-alcóxi-C,-Ca-alquila, — ciano-C,-Ca-alquila, — N,N-di-C1-C,-alquil- amino-C,-C;-alquila, C1-C,-alquil-sulfonil-C,-Cz-alquila, fenila, heterociclila, heterociclil-C,-Cg-alquila, C3-C,>-cicloalquila, heteroarila, heteroaril-C,-Cg-alquila, C,-Cg-alcóxi em que C,-Cs-alquila em N-C,- Cz-alquil-amino e em N,N-di-C,-Cz-alquil-amino pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C1-Ca-alcóxi, sendo que C3-Ci7cicloalquila em C3-Ci>-cicloalquila e em C3-C7-cicloalquil-C,-Ca-alquila pode ser substituída ou não substituída por halogênio, hidróxi ou C,-Ca-alcóxi; sendo que 'heterociclila' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre N, O ou S, o qual é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados dentre oxo, halogênio, C,-Cs-alquila, halo-C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cg- alquila, hidroxila, C,-Cg-alcóxi, C,-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C,-
Cz-alquil-amino, — N,N-di-C,-C;-alquil-amino, — C7-Ci-alquil-carbonila, halo-C,-Ca-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Ca-alquil-carbonila ou C;-Cs- alcóxi-C,-Cs-alquil-carbonila; em que 'heterociclila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação, sendo que 'heteroarila' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 elementos contendo de 1 a 3 heteroátomos selecionados dentre N, O ou S ou pirazolo[1,5- alpirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazol, cada um dos quais é substituído ou não substituído por 1 a 5 substituintes selecionados dentre halogênio, C,-Csg-alguila, halo-C,-Cs-alquila, hidróxi-C,-Cz-alquila, hidroxila, C,-Cs-alcóxi, Ci-Cg-alcóxi-C,-Cs-alquila, amino, N-C;-Czg- alquil-amino, N,N-di-C,-Cs-alquil-amino, C,-Ca-alquil-carbonila, halo- C,-Cz-alquil-carbonila, hidróxi-C,-Cg-alquil-carbonila ou Ci -C;g-alcóxi- C,-Cz-alquil-carbonila; em que 'heteroarila' pode estar presa ao heteroátomo ou um átomo de carbono e onde os heteroátomos N e/ou S também podem ser opcionalmente oxidados em diversos estados de oxidação; Rº é selecionado dentre halogênio, Ci-C,-alcóxi, Cr-Ca- alquil-sulfonila ou halo-C,-C,-alcóxi, e R' é selecionado dentre hidrogênio, halogênio, ciano, C,- Ca-alquila, halo-C,-C,-alquila ou C1-Ca-alcóxi.
8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo em: (S)-(3-((4-(6-Metóxi-5-metilpiridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzol[b][1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4- il)metanona; dimetilamida do ácido —5(6-[(S)-1-(Tetrahidro-piran-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]0oxazin-4-il)-piridina-3-sulfônico;
((S)-3-f4-[5-(Morfolino-4-sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metil-5-nitro-piridin-3-11)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; (Tetrahidro-piran-4-il)-((S)-3-[4-(5-triflúor-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-metanona; 5-16-[(S)-1-(Tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 1-((S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 2-Metóxi-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrila; 1-((S)-3-[4-(6-Metóxi-5-trifltor-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 14(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1((S)-3-[4-(6-Amino-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 2-Metóxi-N N-dimetil-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1 ,4]oxazin-4-il]-benzenesulfonamida; 1-((S)-3-[4-(3-Metano-sulfonil-4-metóxi-fenil)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S)-3-[4-(6-Amino-5-triflior-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona;
1-((S)-3-(4-[6-Metóxi-5-(4-metil-piperazina-1-sulfonil)-piridin-3-11])-3,4- dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(2-Metil-piridin-4-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; (Tetrahidro-piran-4-il)-((S)-3-[4-(2-triflúor-metil-piridin-4-i1)-3,4-dihidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(2-Metóxi-piridin-4-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Amino-5-triflúor-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1-((S)-3-(4-[4-Metil-3-(piperidina-1-sulfonil)-fenil]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S)-3-(4-[4-Metóxi-3-(morfolino-4-sulfonil)-fenil]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S8)-3-(4-[5-(Morfolino-4-sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S)-3-f4-[4-Metóxi-3-(4-metil-piperazina-1-sulfonil)-fenil]-3,4-dihidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((S)-3-f4-[5-(4-Metil-piperazina-1-sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 2,N-Dimetóxi-N-metil-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-benzenesulfonamida; metóxi-metil-amida do ácido 5-[6-((S)-1-Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-3-sulfônico;
2, N-Dimetóxi-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-benzenesulfonamida; 5-[6-((S)-1-Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- nicotinonitrila;
1(S)-3-[4-(5-Metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Cloro-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0xazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1-((S)-3-[4-(3,4-Dimetóxi-fenil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4])0xazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-[(S)-3-(4-Quinolin-3-il-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)- pirrolidin-1-il]-propan-1-ona; 1-f(S)-3-[4-(5-Metano-sulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-f(S)-3-[4-(5-Triflúor-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; dimetilamida do ácido 5-[6-((S)-1-Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-3-sulfônico; 2-Metil-5-[6-((S)-1-propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-benzonitrila; 14(S)-3-[4-(4-Metóxi-3-triflúor-metil-fenil)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; (Tetrahidro-piran-4-il)-((S)-3-[4-(6-triflúor-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro- 2H-benzo[1 ,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Etoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4dihidro-2H-benzo[1,4])0xazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 4-[6-((S)-1-Propionil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]- piridina-2-carbonitrila; 1-f(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona;
1-((S)-3-f4-[5-(Propano-2-sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; ((S)-3-(4-[5-(Propano-2-sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Etano-sulfinil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-i)-(1-metil-1H-imidazol|-4-i1)- metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)- netanona; (4,4-Diflúor-ciclohexil)-((S)-3-[4-(6-metano-sulfonil-5-metóxi-piridin-3-il)- 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona;
(1, 1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-[((S)-3-[4-(5-flúor-6- metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- il)-metanona;
1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-hexahidro- 1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanona; (1,1-Dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-((S)-3-[4-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-i1)- metanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-[(S)-3-[4-(6-metóxi-5- triflior-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-11)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]Joxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)-netanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-[(S)-3-[4-(6-etoxi-5-
metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i1)- metanona;
(1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-11)-((S)-3-[4-(5-etil-6- metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1- il)-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1 H-pirazol-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1 H-pirazol-3-il)- netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-piridin-4-il-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-pirimidin-5-il-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-oxazol-4-il-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-oxazol-5-il-metanona; (2,2-Dimetil-tetrahidro-piran-4-il)-((S)-3-[4-(6-metano-sulfonil-5-metil- piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona;
(1, 1-Dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-i1)-((S)-3-[4-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i1)- metanona; (1,1-Dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-((S)-3-[4-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)- metanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-((S)-3-f4-[5-(propano-2- sulfonil)-piridin-3-i1]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi)-pirrolidin-1-
il)-metanona; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 3,3-dideutero-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)- netanona; 1-1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-2-metóxi-etanona; 14(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-2-metil-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-fenil-metanona; (1,1-Dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-((S)-3-[4-(6-metano- sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; [1, 4]Dioxan-2-il-[(S)-3-[4-(6-metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4- dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona; 1-f(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-3-metóxi-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-[1 ,4Jdioxan-2-il-metanona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)- metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]0oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-3-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6-
ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-3-il)-netanona; 1-((S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4])oxazin- 6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-2-metóxi-etanona; 1-1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-3-metano-sulfonil-propan-1-ona; 1-1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-3-metóxi-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)- metanona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)-netanona; Ciclohexil-[(S)-3-[4-(6-metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-metanona; (4-Hidróxi-ciclohexil)-((S)-3-[4-(6-metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)- 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)- netanona; 1-((S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexahidro- 1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanona; 1-41(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-3-hidróxi-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1-((S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-11)-3,4-dihidro-2H-
benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4])oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)- metanona; 1-((S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-3-hidróxi-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-i)-(1-metil-1H-imidazol|-4-i1)- metanona; 5-1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidina-1-carbonil)-1H-piridin-2-ona; 1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1 ,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-netanona; 5-1(S)-3-[4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1-carbonil)-1H-piridin-2-ona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(4-hidróxi-ciclohexil)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(3-metil-piridin-4-il)-netanona; 1-((S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-2-piridin-4-il-etanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-triflior-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Diflúor-metil-6-metano-sulfonil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-metil-6-metano-sulfonil-piridin-3-11)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Diflúor-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Diflúor-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-
benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexahidro-6-tiopiran- 4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-iI)-(1-metil-1H-imidazol-4-i1)- metanona; 1(S)-3-[4-(5-Diflúor-metil-6-metano-sulfonil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-(R)-tetrahidro-furan-3-il- metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metilamino-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Dimetilamino-6-metano-sulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metano-sulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; Ciclopropil-((S)-3-[4-(6-metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-metanona; 4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4- sulfonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-[(S)-1-(propano-2-sulfonil)- pirrolidin-3-ilóxi]l-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 6-((S)-1-Ciclopropanosulfonil-pirrolidin-3-ilóxi)-4-(6-metano-sulfonil-5- metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 6-((S)-1-Etano-sulfonil-pirrolidin-3-ilóxi)-4-(6-metano-sulfonil-5-metil- piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina; terc-butil éster do ácido (S)-3-[4-(5-Flúor-6-metano-sulfonil-piridin-3-il)- 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1-carboxílico; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metano-sulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Etano-sulfonil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona;
1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-(3-metil-38H-imidazol-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-11)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]Joxazin- 6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-netanona; 1-(4-((S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1-carbonil)-piperidin-1-il)-etanona; 4-((S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1-carbonil)-1H-piridin-2-ona; 5-1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1-carbonil)-1H-piridin-2-ona;
(1, 1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-[((S)-3-[4-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)- metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)-netanona; 5-1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidina-1-carbonil)-1-metil-1H-piridin-2- ona;
1-((S)-3-[4-(6-Etano-sulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-3-il)-netanona; 1-((S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-11)-2-metóxi-etanona; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-oxazol-4-il-metanona;
(1, 1-Dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-[(S)-3-[4-(5-flúor-6G-metóxi- piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i)-
metanona; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-oxazol-5-il-metanona; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-pirimidin-5-il-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-tetrahidro- 1lambda*6*-tiofen-3-il)-metanona; 1-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-3-metano-sulfonil-propan-1-ona; 1-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-3-hidróxi-propan-1-ona; 1(S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-oxazol-5-il-metanona; 3-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-3-oxo-propionitrila; 1-((S)-3-[4-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-11)-2-metano-sulfonil-etanona; 1-((S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-i1)-2-metano-sulfonil-etanona; 1-((S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-3-metano-sulfonil-propan-1-ona; 1-((S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-3-hidróxi-propan-1-ona; 1-((S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-3-metóxi-propan-1-ona; [1 4]Dioxan-2-il-[(S)-3-[4-(5-flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona;
3-1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-3-oxo-propionitrila; 1(S)-3-[4-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin- 6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(4-hidróxi-ciclohexil)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexahidro-6-tiopiran- 4-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 1-((S)-3-[4-(6-Etano-sulfinil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-((R)-3-[(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidina-1-carbonil)-pirrolidin-1-il)-etanona; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(R)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 14(R)-3-[4-(6-Metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0xazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 1-1(S)-3-[4-(6-Metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-propan-1-ona; 2-Metóxi-5-(3-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(Furazan-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(2-metil-2H-pirazol-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-enzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-16-[(S)-1-(Isoxazol-5-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]0oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(1H-pirazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-
dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(2-Metano-sulfonil-acetil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol|-2-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(pirimidina-S-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(tiazol-5-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(pirazina-2-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(piridina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(piridina-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 56-[(S)-1-(1,3-Dimetil-1H-pirazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(5-oxo-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(2,4-Dimetil-oxazol-5-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 5-16-[(S)-1-(6,6-Dimetil-4-0x0-5,6-dihidro-4H-piran-2-carbonil)-pirrolidin- 3-ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(pirazolo[1,5-a]pirimidina-3-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxil-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(5-oxo-pirrolidina-2-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-16-[(S)-1-([1,4]Dioxano-2-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]0oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 546-[(S)-1-([1 4]Dioxano-2-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro-
benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; (S)-2-metóxi-5-(6-((1-(1-metil-1H-imidazol-4-carbonil)pirrolidin-3-il)oxi)- 2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrila; 1-1(S)-3-[4-(6-Metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-2-morfolin-4-il-etanona; 2-Dimetilamino-1-((S)-3-[4-(6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-etanona; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(1-Acetil-piperidina-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 5-16-[(S)-1-(2-Dimetilamino-acetil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-morfolin-4-il-acetil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-[6-((S)-1-Isobutiril-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro-benzo[1,4])oxazin-4-il]- 2-metóxi-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(3,3-Dimetil-butiril)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(3-metil-butiril)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; metil éster do ácido (S)-3-[4-(5-Cyano-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidina-1-carboxílico; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-metóxi-acetil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1 ,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-[6-((S)-1-Ciclohexano-carbonil-pirrolidin-3-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]0oxazin-4-il]-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-piperidina-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-
dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(2-Hidróxi-2-metil-propionil)-pirrolidin-3-ilóxi]l-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 5-(6-[(S)-1-(1,1-Dioxo-hexahidro-1/lambda”*6*-tiopiran-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-11)-2-metóxi- nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-6-0x0-1,6-dihidro-piridina-3-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(oxazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-2-0x0-1,2-dihidro-piridina-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(6-0x0-1,6-dihidro-piridina-3-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(2-0x0-1,2-dihidro-piridina-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(R)-2-(tetrahidro-piran4-carbonil)-isoxazolidin-4-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-[6-((R)-2-propionil-isoxazolidin-4-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-2-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-isoxazolidin-4-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-[6-((S)-2-propionil-isoxazolidin-4-ilóxi)-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(R)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-carbonil)-isoxazolidin-4- ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-1H-pirazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(tetrahidro-furan-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila;
1(S)-3-[4-(6-Metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0xazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(3-metil-38H-imidazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(oxazol-5-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(4-metil-oxazol-5-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(morfolino-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(4-metóxi-ciclohexano-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(4-metóxi-ciclohexano-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-1(S)-1-[2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-acetil]-pirrolidin-3- ilóxi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(piperidina-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1 ,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-((S)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 1(S)-3-[1-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-
b][1 4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)- netanona; terc-butil éster do ácido (S)-3-[1-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3- dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidina-1-carboxílico; 1(S)-3-[1-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-
b][1 ,4]Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-mnetanona; 1(S)-3-[1-(6-Diflúor-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1 H-pirido[3,4- b][1 ,A4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-hexahidro-1lambda*6*-
tiopiran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[1-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 AJoxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-hexahidro-1lambda*6*- tiopiran-4-il)-metanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-[((S)-3-[1-(6-metóxi-5- triflior-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxi]l- pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[1-(6-Metóxi-S-triflior-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,A4Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)-netanona; 1(S)-3-[1-(5-Cloro-6-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 4]Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)- netanona; 1(S)-3-[1-(6-Diflúor-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,4]Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-mnetanona; 1(S)-3-[1-(6-Diflúor-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 A4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)- netanona; Ciclopropil-((S)-3-[1-(6-diflúor-metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H- pirido[3,4-b][1 ,4]Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-((S)-3-[1-(6-hidróxi-5- metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1/lambda*6*-tiopiran-4-i1)-((S)-3-[1-(5-hidróximetil- 6-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]Joxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-[((S)-3-[1-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona;
(1, 1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-((S)-3-[1-(5-flúor-6- metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[1-(5-Flúor-6-metóxi-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-
b][1 A4Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-i1)-(1-metil-1 H-imidazol-4-il)- netanona; 2-Metóxi-5-(7-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-1-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(7-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-1-il)-nicotinonitrila; 1(S)-3-[1-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H- pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)- metanona; 1(S)-3-[1-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 4Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-hexahidro-1lambda*6*- tiopiran-4-il)-netanona; 1(S)-3-[1-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b][1 ,4]Joxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-mnetanona; 1-((S)-3-[1-(5-Diflúor-metil-S-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H- pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-2-metóxi-etanona; 1(S)-3-[1-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4- b1[1 ,AJoxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1-(1-metil-1H-imidazol-4-il)- netanona; 1-((S)-3-[1-(S5-Diflúor-metil-6-metano-sulfonil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H- pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-i1)-2-metóxi-etanona; (1, 1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-11)-(3-[1-(6-metóxi-5-metil- piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona; 5-(7-[(S)-1-(1, 1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-carbonil)- pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-1-11)-2-metóxi- nicotinonitrila; (1, 1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-i1)-((R)-3-flúor-4-[1-(6- metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona; Imidazo[2, 1-b]tiazol-6-il-[(S)-3-[1-(6-metóxi-S-triflúor-metil-piridin-3-il)- 2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona;
(1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-[((R)-3-[1-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 4]oxazin-7-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; (5-Amino-1-metil-1H-imidazol|-4-i1)-((S)-3-[1-(6-metóxi-5-trifltor-metil- piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 4]Joxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il)- metanona;
(1, 1-Dioxo-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-((S)-3-[1-(6-metano- sulfonil-5-metil-piridin-3-i1)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1 ,4]Joxazin-7- ilóxil-pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(5,6-Dimetóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]0oxazin-6- ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-furan-2-il)-netanona; (1,1-Dioxo-hexahidro-1/lambda*6*-tiopiran-4-il)-((S)-3-[5-flúor-4-(6- metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-flúor-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(1,1-dioxo-hexahidro- 1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanona; 1(S)-3-[5-Flúor-4-(6-metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-11)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; 5-(6-[(S)-1-((S)-1-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]-oxazin-4-il1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 5-16-[(S)-1-((R)-1-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-((R)-1-metil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-piridin-2-il-pirrolidin-3- ilóxi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-pirimidin-2-il-pirrolidin- 3-ilóxi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 2-Metóxi-5-(2-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-
ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-((S)-2-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(1-metil-piperidin-4-ilmetil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 1(S)-3-[4-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]Joxazin- 6-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-netanona; 5-16-[(S)-1-(4-Hidróxi-ciclohexano-carbonil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3- dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-i1)-2-metóxi-nicotinonitrila; 2-Metóxi-5-(6-[(S)-1-(2-piridin-4-il-acetil)-pirrolidin-3-ilóxi]-2,3-dihidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrila; 1(S)-3-[4-(5-Amino-6-metóxi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]-pirrolidin-1-iI)-(1-metil-1H-imidazol|-4-11)- metanona; N-(2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-carbonil)-pirrolidin-3- ilóxi]l-2,3-dihidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-piridin-3-il)-netano- sulfonamida; (1, 1-Dioxo-hexahidro-1/lambda*6*-tiopiran-4-il)-[(S)-3-[4-(6-metóxi-5- metil-piridin-3-i1)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]- pirrolidin-1-il)-metanona; 1(S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-1l)-netanona; 1(S)-3-[4-(5-Diflúor-metil-6-metóxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ilóxi]l-pirrolidin-1-i1)-(1,1-dioxo-hexahidro- 1lambda*6*-tiopiran-4-il)-mnetanona; or 2-Metóxi-5-f6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilamino]- 2,3-dihidro-benzo[1,4]0xazin-4-il)-nicotinonitrila; ou um sal do mesmo.
9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que está em uma forma cristalina.
10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é (S)-(3-((4-(6-Metóxi-5-metilpiridin-3-il)- 3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin-1-il)(tetrahidro-2H- piran-4-il)metanona, ou um sal do mesmo.
11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é ((S)-3-[4-(6-Metano-sulfonil-5-metil- piridin-3-i1)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilóxil-pirrolidin-1-il)- (tetrahidro-piran-4-il)-netanona, ou um sal do mesmo.
12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é ((S)-3-[1-(6-Metóxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ilóxil-pirrolidin-1-il)-(1-metil- 1H-imidazol-4-il)-netanona, ou um sal do mesmo.
13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é (1,1-Dioxo-hexahidro-1lambda*6*- tiopiran-4-i1)-((S)-3-[1-(6-metóxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H- pirido[3,4-b][1 ,4]oxazin-7-ilóxi]-pirrolidin-1-il)-metanona, ou um sal do mesmo.
14. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso como um medicamento.
15. Combinação, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais coagentes terapeuticamente eficazes.
16. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é para uso no tratamento de uma doença ou distúrbio selecionado dentre artrite reumatoide (AR),
pênfigo vulgar (PV) e forma endêmica de pênfigo brasileiros (fogo selvagem), púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), anemia hemolítica autoimune (AIHA), hemofilia de tipo A adquirida (AHA), lupus eritematoso sistêmico (LES), esclerose múltipla (MS), miastenia gravis (MG), síndrome — de Sjógren (SS), vasculite — ANCA-associada, crioglobulinemia, urticária crônica autoimune (UCA), alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, rejeição de transplante, cânceres de origem hematopoiética, malária cerebral e grave, tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
17. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
18. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de que é na fabricação de um medicamento para tratamento de uma doença ou distúrbio selecionado dentre artrite reumatoide (AR), pênfigo vulgar (PV) e forma endêmica de pênfigo brasileiros (fogo selvagem), púrpura trombocitopênica idiopática (ITP), púrpura trombocitopênica trombótica (TTP), anemia hemolítica autoimune (AIHA), hemofilia de tipo A adquirida (AHA), lupus eritematoso sistêmico (LES), esclerose múltipla (MS), miastenia gravis (MG), síndrome de Sjógren (SS), vasculite ANCA-associada, crioglobulinemia, urticária crônica autoimune (UCA), alergia (dermatite atópica, dermatite de contato, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, rejeição de transplante, cânceres de origem hematopoiética, malária cerebral e grave, tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
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