PT2794600T - Derivados de 2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazina e compostos relacionados como inibidores de fosfoinositídeo-3-cinase (pi3k) para o tratamento de, por exemplo, artrite reumatoide - Google Patents

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Description

Até à data, foram identificadas oito Pl3Ks de mamífero, divididas em três classes principais (I, II e III) com base na sua sequência genética, estrutura, moléculas adaptadoras, expressão, modo de ativação e substrato preferido. A PI3K5 é uma cinase de lípidos que pertence à família de PI3K de classe I (PI3K α, β, γ e δ) que gera sinais de segundo mensageiro a jusante dos recetores ligados a tirosina-cinase. A PI3K5 é um heterodímero constituído por uma proteína adaptadora e uma subunidade catalítica pllOõ que converte o fosfatidilinositol-4,5-bis-fosfato (PtdInsP2) em fosfatidilinositol-3,4,5-tri-fosfato (PtdInsP3). As proteínas efetoras interagem com o PtdInsP3 e desencadeiam vias de sinalização específicas envolvidas na ativação, diferenciação, migração e sobrevivência celular.
Expressão das subunidades catalíticas pllOõ e ρΙΙΟγ é preferencial para os leucócitos. A expressão é também observada em células do músculo liso, miócitos e células endoteliais. Pelo contrário, as pllOa e ρΙΙΟβ são expressas por todos os tipos de células (Marone et ai. Biochimica et Biophysica Acta 1784:159 (2008)). A PI3K5 está associada ao desenvolvimento e função de células B (Okkenhaug et ai. Science 297:1031 (2002)).
As células B desempenham também um papel crítico na patogénese de um número de doenças autoimunes e alérgicas, assim como no processo de rejeição de transplantes (Martin e Chan, Annu. Rev. Immunol. 24:467 (2006) ) . A quimiotaxia está envolvida em muitas doenças autoimunes ou inflamatórias, na angiogénese, invasão/metástase, neurodegeneração ou cura de feridas (Gerard et al. Nat. Immunol. 2:108 (2001)). Os eventos temporalmente distintos na migração de leucócitos em resposta a quimiocinas são totalmente dependentes de P13K5 e Ρΐ3Κγ (Liu et al. Blood 110:1191 (2007)). A Pl3Ka e a Ρΐ3Κβ desempenham um papel essencial na manutenção da homeostasia e a inibição farmacológica destes alvos molecular foi associada à terapia de cancro (Maira et al. Expert Opin. Ther. Os alvos 12:223 (2008)). A Pl3Ka está envolvida nas vias de sinalização de insulina e crescimento celular (Foukas et al. Nature 441:366 (2006)). Prevê-se que a inibição seletiva da isoforma PI3K5 evite efeitos secundários potenciais tais como hiperglicemia, e desregulação metabólica ou do crescimento.
As infeções parasitárias continuam a representar uma das causas mais importantes de morbidade e mortalidade à escala mundial. Entre os parasitas que provocam patologia humana e animal o filo apicomplexa compreende um grupo de parasitas com origem no vetor que é responsável por uma grande variedade de doenças graves incluindo malária, leishmaniose e tripanossomiase. A malária sozinha infeta 5-10% da humanidade e provoca cerca de dois milhões de mortes por ano. /"Schofield et ai, "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005J, /"Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], /"Mishra et al, "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], /"Bottieau et al, "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011].
Os recetores de tipo Toll (TLRs) são moléculas filogeneticamente antigas codificadas pela linha germinal, que reconhecem moléculas estruturalmente relevantes conservadas evolutivamente (conhecidas como padrões moleculares associados a agentes patogénicos (PAMPs)) dentro dos agentes patogénicos microbianos. Vários tipos diferentes de células, incluindo células do sistema imunitário, expressam TLRs e são, desse modo, capazes de detetar a presença de PAMPs. Até agora foram descritos 10 membros funcionais da família TLR (TLRl-10) em humanos, todos os quais reconhecem moléculas PAMP específicas. Após reconhecimento destes PAMPs específicos, os TLRs induzem e orquestram a resposta imunológica do hospedeiro contra infeções com bactérias, virus, fungos e parasitas. /"Hedayat et ai, "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", revisão, Lancet Infectious disease 2011], /"Kwai et al, "TLRs and their crosstalk with other innate receptors in infection and impunity" revisão, Immunity maio-2011J. 0 sistema imunitário do hospedeiro infetado responde à infeção com a produção induzida por TLR de citocinas pró-inflamatórias principalmente do tipo auxiliar T 1 (Thl). Embora quantidades adequadas destas citocinas sejam benéficas e necessárias para eliminar a infeção, uma produção excessiva destes mediadores é prejudicial para o hospedeiro e está associada a patologia mediada imunologicamente incluindo neuropatologia e dano tecidular com consequências graves e frequentemente fatais. Um exemplo proeminente e altamente relevante dessa patologia mediada imunologicamente é a malária aguda e cerebral (CM) que origina sintomas clínicos graves e é frequentemente fatal. /"Schofield et al, "Immunological processes in malaria pathogenesis", Nat Rev Imm 2005J, /"Schofiled L, "Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], /"Mishra et al, "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009], /"Bottieau et al, "Therapy of vector-borne protozoan infections in nonendemic settings", Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011] /"Hedayat et al, "Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease", revisão, Lancet Infectious disease 2011]. Apesar do progresso efetuado no tratamento e erradicação da malária, a taxa de mortalidade que está associada a malária grave, incluindo CM permanece inaceitavelmente alta. Por conseguinte, as estratégias dirigidas exclusivamente à erradicação do parasita no hospedeiro podem não ser suficientes para prevenir complicações neurológicas e a morte em todos os casos de CM. 0 desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas complementares inovadoras para reduzir eficazmente a mortalidade e morbidade associadas à CM que é provocada, em parte, por imunopatologia mediada pelo hospedeiro permanece, portanto, uma necessidade médica urgente. /"Higgins et ai, "Immunopathogenesis of falciparum malaria: implications for adjunctive therapy in the management of severe and cerebral malaria", Expert Rev. Anti Infect. Ther. 2011J.
Recentemente foi proporcionada evidência adicional de que o TLR9 desempenha um papel chave no reconhecimento e resposta a parasitas incluindo Plasmodium, Leishmania, Trypanosoma e Toxoplasma /"Gowda et ai, "The Nucleosome is the TLR9-specific Immunostimulatory component of plasmodium falciparum that activates DCs", PLoS ONE, June 2OII7, /"Peixoto-Rangel et al, "Candidate gene analysis of ocular toxoplasmosis in Brazil: evidence for a role for TLR9", Mem Inst Oswaldo Cruz 20097 , /"Pellegrini et al, "The role of TLRs and adoptive immunity in the development of protective or pathological immune response triggered by the Trypanosoma cruzi protozoan", Future Microbiol 20117 e de que a interferência com a ativação de TLRs, incluindo 0 TLR9, representa uma estratégia promissora para prevenir as respostas inflamatórias prejudiciais na malária grave e cerebral [Franklin et ai, "Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing TLRs prevents experimental cerebral malaria", PNAS 2011].
Malária é uma doença infecciosa provocada por quatro parasitas protozoários: Plasmodium falciparum; Plasmodium vivax; Plasmodium ovale; e Plasmodium malaria. Estes quatro parasitas são tipicamente transmitidos pela picada de um mosquito Anopheles fêmea infetado. A malária é um problema em muitas partes do mundo e, nas últimas décadas, o peso da malária tem aumentado de forma continua. Estima-se que 1-3 milhões de pessoas morram todos os anos de malária - principalmente crianças com menos de 5 anos de idade. Este aumento na mortalidade por malária é devido, em parte, ao facto de o Plasmodium falciparum, o parasita da malária mais letal, ter adquirido resistência contra quase todos os fármacos antimaláricos disponíveis, com a exceção dos derivados de artemisinina. A Leishmaniose é provocada por um ou mais de 20 variedades de protozoários parasitários que pertencem ao género Leishmania, e é transmitida pela picada de flebotomíneos fêmeas. A Leishmaniose é endémica em aproximadamente 88 países, incluindo muitas áreas tropicais e subtropicais. Existem quatro formas principais de Leishmaniose. A Leishmaniose visceral, também chamada kala-azar, é a forma mais grave e é provocada pelo parasita
Leishmania donovani. Os doentes que desenvolvem leishmaniose visceral podem morrer em meses a menos que recebam tratamento. As duas terapias principais para a leishmaniose visceral são os derivados de antimónio de estibogluconato de sódio (Pentostam®) e antimoniato de meglumina (Glucantim®). 0 estibogluconato de sódio foi utilizado durante cerca de 70 anos e a resistência a este fármaco é um problema crescente. Além disso, o tratamento é relativamente longo e doloroso, e pode originar efeitos secundários indesejáveis. A Tripanossomíase Africana Humana, também conhecida como doença do sono, é uma doença parasitária com origem em vetores. Os parasitas em questão são protozoários pertencentes ao Género Trypanosoma. São transmitidos aos seres humanos pelas picadas da mosca tsé-tsé (Glossina Genus) que adquiriu a sua infeção de seres humanos ou de animais que alojam os parasitas patogénicos humanos. A doença de Chagas (também chamada de Tripanossomíase Americana) é outra doença parasitária humana que é endémica entre populações pobres do continente Americano. A doença é provocada pelo parasita protozoário Trypanosoma cruzi, o qual é transmitido aos humanos por insetos sugadores de sangue. A doença humana ocorre em duas etapas: a etapa aguda, que ocorre pouco depois da infeção e a etapa crónica, que pode desenvolver-se ao longo de muitos anos. As infeções crónicas resultam em vários distúrbios neurológicos, incluindo demência, dano do músculo cardíaco e, por vezes, dilatação do aparelho digestivo, assim como perda de peso. A doença crónica não tratada é frequentemente fatal. Os fármacos atualmente disponíveis para tratar a doença de Chagas são o Nifurtimox e o benzonidazol. No entanto, os problemas com estas terapias atuais incluem os seus vários efeitos secundários, a duração do tratamento e a necessidade de supervisão médica durante o tratamento. Além disso, o tratamento é apenas realmente eficaz quando administrado durante a etapa aguda da doença. Já ocorreu resistência aos dois fármacos de primeira linha. 0 agente antifúngico Anfotericina b foi proposto como um fármaco de segunda linha, mas este fármaco é dispendioso e relativamente tóxico. A toxoplasmose é endémica a quase todo o mundo, a qual pode infetar uma grande proporção da população adulta.1,2 No entanto, a sua prevalência difere em países diferentes.3 Estima-se que infete pelo menos 10% dos adultos nos países temperados do norte e mais de metade dos adultos nos países do Mediterrâneo e tropicais.4 O Toxoplasma gondii é um protozoário intracelular obrigatório, ubíquo e considera-se que é a causa mais comum de retinite infecciosa em humanos, a qual depende de uma variedade de fatores, incluindo o clima, higiene e hábitos alimentares.5-7 O curso da doença em adultos imunocompetentes é geralmente assintomático e autolimitativo. Assim que tenha ocorrido infeção, o parasita forma quistos latentes na retina e noutros órgãos do corpo, os quais podem reativar-se anos depois da infeção
inicial, originando a retinocoroidite aguda e à formação de novas lesões retinocoroidal. /"Arevalo et ai, "Ocular Toxoplasmosis in the developing world", Internat. Ophthal. Clin 2010J
A neurocisticercose é a doença parasitária mais comum do SNC (incidência ~2,5 milhões à escala mundial) provocada pelas larvas de Taenia solium. A doença tem uma fase assintomática longa em humanos que se caracteriza pela ausência de uma resposta inflamatória detetável em torno do parasita. A resposta imunológica global durante a fase assintomática é do fenótipo Th2. No entanto, a destruição de larvas por tratamento terapêutico ou pelo desgaste normal do parasita origina uma forte resposta inflamatória, que consiste frequentemente numa reação granulomatosa crónica e manifestação dos sintomas típicos da doença. A resposta imunológica no SNC de doentes sintomáticos consiste em um fenótipo Thl evidente ou uma resposta mista de Thl, Th2 e Th3, dependendo da ausência ou presença de granulomas. A resposta hiperinflamatória prevalecente durante a fase sintomática no SNC é responsável pela neuropatologia grave e mortalidade associada à neurocisticercose. /"Mishra et ai, "TLRs in CNS Parasitic infections", Curr Top Micro Imm 2009J Há uma necessidade proporcionar novos inibidores de PI3K que sejam bons candidatos a fármacos. Em particular, os compostos da invenção devem ligar-se de forma potente a PI3K, enquanto exibem pouca afinidade para outros recetores e exibem atividade funcional como inibidores. Devem ser absorvidos a partir do trato gastrointestinal, ser metabolicamente estáveis e possuir propriedades farmacocinéticas favoráveis. Quando dirigidos contra recetores no sistema nervoso central, devem atravessar a barreira hematoencefálica livremente e quando dirigidos seletivamente contra recetores no sistema nervoso periférico não devem atravessar a barreira hematoencefálica. Não devem ser tóxicos e devem demonstrar poucos efeitos secundários. Além disso, o candidato a fármaco ideal existirá numa forma física que é estável, não higroscópico e facilmente formulado. A WO 2008/044022 refere-se a inibidores de PI3K de benzoxazina com um padrão de substituição diferente.
Os compostos da invenção exibem um certo nível de seletividade contra os diferentes parálogos PI3K α, β, γ e δ. Em particular, exibem um certo nível de seletividade para a isoforma PI3K5.
Por conseguinte, os compostos da presente invenção são potencialmente úteis no tratamento de uma grande gama de distúrbios, em particular distúrbios que incluem distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doença ou infeção associada a imunopatologias, doenças das vias aéreas, tais como asma e COPD, rejeição de transplantes, cancros, e.g., de origem hematopoiética ou tumores sólidos. A invenção refere-se também ao tratamento, quer sozinho ou em associação, com um ou mais compostos farmacologicamente ativos diferentes, incluindo os métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios em que uma ou mais das funções das células B, tais como a produção de anticorpos, apresentação de antigénios, produção de citocinas ou organogénese linfoide são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar e as doenças relacionadas, púrpura trombocitopénica idiopática, lúpus eritematoso disseminado, esclerose múltipla, miastenia grave, sindrome de Sjõgren, anemia hemolitica autoimune, vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, púrpura trombocitopénica trombótica, urticária autoimune crónica, alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), rejeição de transplantes hiperaguda, aguda e crónica mediada por células B e cancros de origem hematopoiética incluindo mieloma múltiplo; leucemia mielógena aguda; leucemia mielógena crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem, assim como na imunopatologia associada a doenças ou infeções.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO A invenção refere-se a compostos de di-hidro-benzo-oxazina e di-hidro-pirido-oxazina da fórmula (I) e/ou sais e/ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos,
(l) em que Y é selecionado de 0 ou NH; V é selecionado de CR5 ou N; W é selecionado de CH2 ou 0; U é selecionado de N ou CH; Q é selecionado de N ou CRô; em que U e Q não são ambos N; R1 é selecionado de fenilo, piridilo, pirimininilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-triazinilo, 1,3,5-triazinilo, ou -X-R4 em que X é selecionado de C(0), S(0)2 ou CH2 e R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, ciano-alquilo-Ci-C8, N, N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-C1-C8, alquil-Ci-C4-sulfonil-alquilo-Ci-C8, fenilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, heterociclil- alquilo-Ci-Cs, cicloalquilo-C3-Ci2, cicloalquiloxilo-C3-C12, cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8, heteroarilo, heteroariloxilo, heteroaril-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-C8, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino ou N,N-di-alquil-Ci -Cs-amino, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-Cs-amino e em N,N-di-alquil-Ci-C8-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-C8-alquilo-Ci-C8, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs-carbonilo, halo-alquil-Ci-C8-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-Cs- carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que o 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é um sistema de anel monociclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-C8, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N,N-di-alquil-Ci-C8-amino, alquil-Ci-Cs-carbonilo, halo-ai quil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-C8-alquil-Ci-C8-carbonilo; em que o 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação; R6 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-Ci-C4, alcoxilo-Ci-C4, alquil-Ci-C4-sulfonilo, alquil-Ci-C4_sulf inilo, alquil-Ci-C4-sulfanilo, halo- alcoxilo-Ci-C4, alcoxi-Ci-C4-alquilo-Ci-C4, amino, N-alquil-C1-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino; R7 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, ciano, nitro, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-Ci-C4, alcoxilo-Ci-C4, N(R8)2~ sulfonilo, alquil-Ci-C4_sulfonilo, alquil-Ci-C4_sulfonil-amino, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino ou N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino; ou R6 e R7, em conjunto são CH=CH-CH=CH, em que R8 é independentemente selecionado de hidrogénio, alquilo-Ci-C4, alcoxilo-Ci-C4 ou dois R8 em conjunto com o azoto ao qual estão ligados formam um anel heterocíclico de 4 a 7 membros que contém 1-2 heteroátomos selecionados de N, 0, S, que não está substituído ou está substituído com 1-3 substituintes selecionados de alquilo-Ci-C4; R5 é independentemente selecionado de H, D, F ou alquilo-C1-C2; R30 é independentemente selecionado de H, D ou F.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A Figura 1 é o Padrão de Difração de Raios X sobre Pó do Exemplo Fl, forma anidra cristalina A Figura 2 é o gráfico de calorimetria diferencial de varrimento do Exemplo Exemplo Fl, forma anidra cristalina
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Salvo indicação em contrário, o termo "compostos da presente invenção" refere-se a compostos de fórmula (I) e subfórmulas dos mesmos, sais do composto, hidratos ou solvatos dos compostos e/ou sais, assim como todos os estereoisómeros (incluindo diastereoisómeros e enantiómeros), tautómeros e compostos marcados isotopicamente (incluindo substituições com deutério). Os compostos da presente invenção compreendem ainda polimorfos de compostos de fórmula (I) (ou subfórmulas dos mesmos) e sais dos mesmos. Quando se menciona os compostos de fórmula (I), isto destina-se a incluir também os tautómeros e N-óxidos dos compostos de fórmula (I). A invenção pode ser mais totalmente entendida por referência à seguinte descrição, incluindo o seguinte glossário de termos e os exemplos finais. Como aqui utilizados, os termos "que incluem", "que contêm" e "que compreendem" são aqui utilizados no seu sentido aberto, não limitativo.
Tautómeros, tais como os tautómeros entre a forma ceto e enol, a forma lactama e lactima, a forma amida e a forma ácido imidico ou a forma enamina e a forma imina, podem estar presentes, por exemplo, na porção R1 dos compostos de fórmula (I). Os resíduos heterociclilo que contêm azoto e heteroarilo podem formar N-óxidos.
Quando se utiliza a forma plural para compostos ou sais, considera-se que esta também significa um único composto, sal ou semelhantes.
Os termos gerais utilizados acima e a seguir têm preferencialmente, dentro do contexto desta divulgação, os significados seguintes, salvo indicação em contrário:
Como aqui utilizado, o termo "alquilo" refere-se a uma unidade hidrocarboneto não ramificada ou ramificada, incluindo ramificações simples ou múltiplas, totalmente saturada com até 20 átomos de carbono. A menos que proporcionado de outro modo, alquilo refere-se a unidades hidrocarboneto com 1 a 16 átomos de carbono, 1 a 10 átomos de carbono, 1 a 7 átomos de carbono ou 1 a 4 átomos de carbono.
Os exemplos representativos de alquilo incluem metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, sec-butilo, iso-butilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, neopentilo, n-hexilo, 3-metil-hexilo, 2,2-dimetilpentilo, 2,3-dimetilpentilo, n-heptilo, n-octilo, n-nonilo e n-decilo. Tipicamente, os grupos alquilo têm 1-7, mais preferencialmente 1-4 carbonos.
Como aqui utilizado, o termo "halo-alquilo" refere-se a um alquilo como aqui definido, o qual está substituído com um ou mais grupos halo como aqui definidos. 0 halo-alquilo pode ser mono-halo-alquilo, di-halo-alquilo ou poli-halo-alquilo incluindo per-halo-alquilo. Um mono-halo-alquilo pode ter um iodo, bromo, cloro ou flúor no grupo alquilo. Os grupos di-halo-alquilo e poli-halo-alquilo podem ter dois ou mais átomos halo iguais ou uma combinação de grupos halo diferentes no alquilo. Tipicamente, o poli-halo-alquilo contém até 12, ou 10, ou 8, ou 6, ou 4, ou 3, ou 2 grupos halo. Os exemplos não limitativos de halo-alquilo incluem fluoro-metilo, di-fluoro-metilo, tri-fluoro-metilo, cloro-metilo, di-cloro-metilo, tri-cloro-metilo, penta-fluoro-etilo, hepta-fluoro-propilo, di-fluoro-cloro-metilo, di-cloro-fluoro-metilo, di-fluoro-etilo, di-fluoro-propilo, di-cloro-etilo e dicloro-propilo. Um per-halo-alquilo refere-se a um alquilo que tem todos os átomos de hidrogénio substituídos com átomos halo.
Como aqui utilizado, o termo "heterociclilo" ou "heterocíclico" refere-se a um sistema de anéis ou anel monocíclico de 3 a 7 membros ou de 7 a 10 membros saturado ou parcialmente saturado, que contém pelo menos um heteroátomo selecionado de N, O e S, em que o N e S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação. 'Heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou a um átomo de carbono. 'Heterociclilo' pode incluir anéis fundidos ou em ponte, assim como anéis espirociclicos.
No contexto de R4, os exemplos de heterociclos incluem oxiranilo, aziridinilo, oxetanilo, tietanilo, acetitinilo, pirrolidinilo, tetra-hidrofuranilo, tetra-hidrotiofenilo, 2,3-di-hidrofuranilo, 2,5-di-hidrofuranilo, 2,3-di-hidrotiofenilo, 1-pirrolinilo, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, tetra-hidropiranilo, piperidinilo, tetra-hidrotiopiranilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, oxatianilo, dioxanilo, piperazinilo, di-hidropiranilo, tetra-hidropiridinilo, di-hidrotiopiranilo, azepanilo, tiepanilo e oxepanilo.
No contexto de R8, os exemplos de heterociclos incluem pirrolinilo, piperidinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, piperazinilo, tetra-hidropiridinilo e azepanilo.
Como aqui utilizado, o termo "heteroarilo" ou "heteroarí lico" refere-se a um anel ou sistema de anéis insaturado monociclico de 4, 5, 6 ou 7 membros, biciclico de 7, 8, 9, 10, 11 ou 12 membros ou triciclico de 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 membros - que tem o número mais alto possível de ligações duplas conjugadas no anel/anéis, que contém pelo menos um heteroátomo selecionado de N, O e S, em que o N e S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação. 'Heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono. 'Heteroarilo' pode incluir anéis fundidos ou em ponte, assim como anéis espirocíclicos. Os exemplos de heteroarilo incluem furanilo, tiofenilo, pirrolilo, imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,3-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, 1,2,5-tiadiazolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, 1.2.3- tiadiazolilo, 1,3,4-tiadiazolilo, 1,2,3-triazolilo, 1.2.4- triazolilo, 1,2,5-triazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-triazinilo e 1,3,5-triazinilo.
Como aqui utilizado, o termo "cicloalquilo" refere-se a grupos hidrocarboneto monociclicos, biciclicos ou triciclicos saturados ou parcialmente insaturados de 3-12 átomos de carbono. A menos que proporcionado de outro modo, cicloalquilo refere-se a grupos hidrocarboneto cíclicos com entre 3 e 10 átomos de carbono endocíclicos ou entre 3 e 7 átomos de carbono endocíclicos. Os grupos hidrocarboneto biciclicos ilustrativos incluem octa-hidroindilo, deca-hidronaftilo. Hidrocarbonetos triciclicos ilustrativos biciclo[2.1.1]hexilo, biciclo[2.2.1]heptilo, biciclo[2.2.1]heptenilo, 6,6-dimetilbiciclo[3.1.1]heptilo, 2,6,6-trimetilbiciclo[3.1.1]heptilo, biciclo[2.2.2]octilo. Os grupos hidrocarboneto tetracíclicos ilustrativos incluem adamantilo.
Como aqui utilizado, o termo "oxi" refere-se a um grupo de ligação -0-.
Como aqui utilizado, o termo "carboxi" ou "carboxilo" é -C00H.
Como aqui utilizados, todos os substituintes são escritos de maneira a mostrar a ordem dos grupos funcionais (grupos) que os constituem. Os grupos funcionais são definidos acima. São aqui descritas várias formas de realização enumeradas da invenção. Reconhecer-se-á que as caracteristicas especificadas em cada forma de realização podem ser combinadas com outras caracteristicas especificadas para proporcionar outras formas de realização da presente invenção.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (!')
em que R1, R5, R7, R30, Y, V, W, U e Q são como definidos acima.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ia)
em que R1, R5, R7, R30, Y, V, U e Q são como definidos acima.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ia')
em que R1, R5, R7, R30, Y, V, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ib)
em que R1, R5, R7, R30, V, W, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ib')
em que R1, R5, R7, R30, V, W, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ic)
em que R1, R5, R7, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ic')
em que R1, R5, R7, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Id)
em que R1, R5, R7, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Id')
em que R1, R5, R7, U e Q são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ie)
em que R1, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ie')
em que R1, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (If)
em que R1, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (If')
em que R1, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ig)
em que X, R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ig')
em que X, R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ih)
em que X, R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ih')
em que X, R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (li)
em que R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (li')
em que R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ij)
em que R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto da fórmula (I) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, selecionado de um composto da fórmula (Ij')
em que R4, R5, R6 e R7 são como definidos acima.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij' ) e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di- alquil-Ci-C4 -amino -alquilo -Ci -Cs, alquil-Ci-C4_sulfonil- alquilo-Ci-C8, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-
Ci-C8, alcoxilo-Ci-C8, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que ' heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, que não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-C8, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-C8, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-C8-carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N,N-di-alquil-Ci-C8-amino, alquil-Ci-Cs-carbonilo, halo-ai quil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-C8-alquil-Ci-C8-carbonilo; em que o 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij') e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-C8-alquilo-Ci-C8, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di-alquil-Ci-C4 -amino -alquilo -Ci -Cs, alquil-Ci-C4-sulfonil- alquilo-Ci-C8, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-C1-C8, alcoxilo-Ci-C8, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é selecionado de pirrolidinilo, tetra-hidrofuranilo, tetra-hidrotiofenilo, tetra-hidropiranilo, piperidinilo, tetra-hidrotiopiranilo, morfolinilo, dioxanilo ou di-hidropiranilo, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-3 substituintes selecionados de oxo, alquilo-Ci-Cs ou alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é selecionado de imidazolilo, pirazolilo, tiazolilo, oxazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, 1,3,4-oxadiazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,l-
b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-3 substituintes selecionados de alquilo-Ci-C8, hidroxilo ou amino; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij') e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R6 é selecionado de halogéneo, alcoxilo-Ci-C4, alquil-Ci-C4_sulf onilo ou halo-alcoxilo-Ci-C4 ·
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if'), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij' ) e/ou urn sal e/ou urn solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R7 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-Ci-C4 ou alcoxilo-Ci-C4.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij') e/ou urn sal e/ou urn solvato f armaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-Ci-Os, alquil-Ci-C4_sulfonil- alquilo-Ci-Cs, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-C1-C8, alcoxilo-Ci-C8, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, que não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-C8-carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é um sistema de anel monociclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-C8, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N,N-di-alquil-Ci-C8-amino, alquil-Ci-Cs-carbonilo, halo-ai quil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-C8-alquil-Ci-C8-carbonilo; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação; e R6 é selecionado de halogéneo, alcoxilo-Ci-C4, alquil-Ci-C4-sulfonilo ou halo-alcoxilo-Ci-C4.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij') e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-C8-alquilo-Ci-C8, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-Ci-Os, alquil-Ci-C4-sulfonil- alquilo-Ci-Cs, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-C1-C8, alcoxilo-Ci-Cs, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, que não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-C8-carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é um sistema de anel monociclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-C8, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N,N-di-alquil-Ci-C8-amino, alquil-Ci-Cs-carbonilo, halo-ai quil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-C8-alquil-Ci-C8-carbonilo; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação; e R7 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-Ci-C4 ou alcoxilo-Ci-C4.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto das fórmulas (I), (I'), (Ia), (la'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (if), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (if), (ij) ou (Ij') e/ou um sal e/ou um solvato farmaceuticamente aceitáveis do mesmo, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-C8-alquilo-Ci-C8, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-Ci-Os, alquil-Ci-C4-sulfonil- alquilo-Ci-Cs, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-C1-C8, alcoxilo-Ci-Cs, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, que não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-C8-carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é um sistema de anel monociclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-C8, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N,N-di-alquil-Ci-C8-amino, alquil-Ci-Cs-carbonilo, halo-ai quil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-C8-alquil-Ci-C8-carbonilo; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação; R6 é selecionado de halogéneo, alcoxilo-Ci-C4, alquil-Ci-C4-sulfonilo ou halo-alcoxilo-Ci-C4 e R7 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-C1-C4 ou alcoxilo-Ci-C4.
Noutra forma de realização individual, os compostos de acordo com a invenção são aqueles listados na secção de Exemplos abaixo.
Como aqui utilizado, o termo "um isómero ótico" ou "um estereoisómero" refere-se a qualquer uma das várias configurações estereoisoméricas que possam existir para um determinado composto da presente invenção e inclui os isómeros geométricos. Entende-se que um substituinte pode estar ligado a um centro quiral de um átomo de carbono. 0 termo "quiral" refere-se a moléculas que têm a propriedade de não serem sobreponíveis com o seu parceiro de imagem no espelho, enquanto o termo "aquiral" refere-se a moléculas que são sobreponíveis com o seu parceiro de imagem no espelho. Por conseguinte, a invenção inclui enantiómeros, diastereómeros ou racematos do composto. "Enantiómeros" são um par de estereoisómeros que são imagens no espelho não sobreponíveis um do outro. Uma mistura 1:1 de um par de enantiómeros é uma mistura "racémica". 0 termo é utilizado para designar uma mistura racémica, quando apropriado. "Diastereoisómeros" são estereoisómeros que têm pelo menos dois átomos assimétricos, mas que não são imagens no espelho um do outro. A estereoquímica absoluta é especificada de acordo com o sistema R-S de Cahn-Ingold-Prelog. Quando um composto é um enantiómero puro a estereoquímica em cada carbono quiral pode ser especificada por R ou S. Os compostos resolvidos cuja configuração absoluta é desconhecida podem ser designados (+) ou (-) dependendo da direção (dextro- ou levógira) em que rodam o plano da luz polarizada ao comprimento de onda da linha D do sódio. Certos compostos aqui descritos contêm um ou mais centros ou eixos assimétricos e, desse modo, podem dar origem a enantiómeros, diastereómeros e outras formas estereoisoméricas que podem ser definidas, em termos de estereoquimica absoluta, como (R)- ou (S)-.
Dependendo da escolha dos materiais de partida e procedimentos, os compostos podem estar presentes na forma de um dos isómeros possíveis ou como misturas dos mesmos, por exemplo como isómeros óticos puros, ou como misturas de isómeros, tais como racematos e misturas de diastereoisómeros, dependendo do número de átomos de carbono assimétricos. A presente invenção destina-se a incluir todos esses isómeros possíveis, incluindo misturas racémicas, misturas diastereoméricas e formas oticamente puras. Os isómeros (R) e (S) oticamente ativos podem ser preparados utilizando sintões ou reagentes quirais quirais, ou resolvidos utilizando técnicas convencionais. Se o composto contém uma ligação dupla, o substituinte pode estar na configuração E ou Z. Se o composto contém um cicloalquilo dissubstituído, o substituinte cicloalquilo pode ter uma configuração cis ou trans. Todas as formas tautoméricas destinam-se também a estar incluídas.
Como aqui utilizados, os termos "sal" ou "sais" refere-se a um sal de adição de ácido ou adição de base de um composto da invenção. "Sais" incluem em particular "sais farmaceuticamente aceitáveis". 0 termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" refere-se a sais que retêm a eficácia e as propriedades biológicas dos compostos desta invenção e que, tipicamente, não são biologicamente ou, de outro modo, indesejáveis. Em muitos casos, os compostos da presente invenção são capazes de formar sais de ácidos e/ou bases em virtude da presença de grupos amino e/ou carboxilo ou grupos semelhantes àqueles.
Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados com ácidos inorgânicos e ácidos orgânicos, e.g., os sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, brometo/bromidrato, bicarbonato/ carbonato, bissulfato/sulfato, canforsulfonato, cloreto/ cloridrato, cloroteofilonato, citrato, etanodissulfonato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hipurato, iodidrato/iodeto, isetionato, lactato, lactobionato, laurilsulfato, malato, maleato, malonato, mandelato, mesilato, metilsulfato, naftoato, napsilato, nicotinato, nitrato, octadecanoato, oleato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrogenofosfato/di-hidrogenofosfato, poligalacturonato, propionato, estearato, succinato, sulfossalicilato, tartrato, tosilato e trifluoroacetato.
Os ácidos inorgânicos a partir dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico e ácido fosfórico.
Os ácidos orgânicos a partir dos quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, ácido acético, ácido propiónico, ácido glicólico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido malónico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzoico, ácido mandélico, ácido metanossulfónico, ácido etanossulfónico, ácido toluenossulfónico e ácido sulfossalicílico. Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados com bases inorgânicas e orgânicas.
As bases inorgânicas a partir das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, sais de amónio e de metais das colunas I a XII da tabela periódica. Em certas formas de realização, os sais são derivados de sódio, potássio, amónio, cálcio, magnésio, ferro, prata, zinco e cobre; os sais particularmente adequados incluem sais de amónio, potássio, sódio, cálcio e magnésio.
As bases orgânicas a partir das quais os sais podem ser derivados incluem, por exemplo, aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídas incluindo aminas substituídas naturais, aminas cíclicas e resinas de troca iónica básicas. Certas aminas orgânicas incluem isopropilamina, benzatina, colinato, dietanolamina, dietilamina, lisina, meglumina, piperazina e trometamina.
Os sais farmaceuticamente aceitáveis da presente invenção podem ser sintetizados a partir de uma unidade básica ou ácida, por métodos químicos convencionais. Em geral, esses sais podem ser preparados fazendo reagir as formas de ácido livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base apropriada (tal como hidróxido, carbonato, bicarbonato de Na, Ca, Mg ou K, ou semelhantes), ou fazendo reagir as formas de base livre destes compostos com uma quantidade estequiométrica do ácido apropriado. Tais reações são tipicamente realizadas em água ou num solvente orgânico, ou numa mistura dos dois. Em geral, a utilização de meios não aquosos como éter, acetato de etilo, etanol, isopropanol ou acetonitrilo é desejável, quando praticável. Listas de sais adequados adicionais podem ser encontradas, e.g., em "Remington's Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); e em "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" por Stahl e Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Alemanha, 2002).
Qualquer fórmula aqui proporcionada destina-se também a representar formas não marcadas, assim como formas marcadas isotopicamente dos compostos. Os compostos marcados isotopicamente têm estruturas representadas pelas fórmulas aqui proporcionadas exceto que um ou mais átomos estão substituídos por um átomo com uma massa atómica ou número de massa selecionado. Os exemplos de isótopos que podem ser incorporados nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogénio, carbono, azoto, oxigénio, fósforo, flúor e cloro, tais como 2H, 3H, 1]-C, 13C, 14C, 15N, 18F 31P, 32P, 35S, 36C1, 125I, respetivamente. A invenção inclui vários compostos marcados isotopicamente como aqui definidos, por exemplo aqueles em que estão presentes isótopos radioativos, tais como 3H e 14C, ou aqueles em que estão presentes isótopos não radioativos, tais como 2H e 13C. Tais compostos marcados isotopicamente são úteis em estudos metabólicos (com 14C) , estudos de cinética de reação (com, por exemplo, 2H ou 3H) , deteção ou técnicas de imagiologia, tais como tomografia por emissão de positrões (PET) ou tomografia computorizada por emissão de fotão único (SPECT) incluindo ensaios de distribuição de fármaco ou substrato no tecido, ou no tratamento radioativo de doentes. Em particular, um composto marcado com 18F ou pode ser particularmente desejável para estudos por PET ou SPECT. Os compostos marcados isotopicamente de fórmula (I) podem ser geralmente preparados por técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas na técnica ou por processos análogos aos descritos nos Exemplos e Preparações apensos utilizando um reagente marcado isotopicamente apropriado em vez do reagente não marcado anteriormente utilizado.
Além disso, a substituição com isótopos mais pesados, em particular deutério (i.e., 2H ou D) podem proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, por exemplo maior semivida in vivo ou menores requisitos de dosagem ou uma melhoria do índice terapêutico. Neste contexto, entende-se que o deutério é considerado como um substituinte de um composto da fórmula (I) . A concentração de um tal isótopo mais pesado, especificamente deutério, pode ser definida pelo fator de enriquecimento isotópico. 0 termo "fator de enriquecimento isotópico" como aqui utilizado significa a razão entre a abundância isotópica e a abundância natural de um isótopo especificado. Se um substituinte num composto desta invenção é denotado com deutério, esse composto tem um fator de enriquecimento isotópico para cada átomo de deutério designado de pelo menos 3500 (52,5% de incorporação de deutério em cada átomo de deutério designado), pelo menos 4000 (60% de incorporação de deutério), pelo menos 4500 (67,5% de incorporação de deutério), pelo menos 5000 (75% de incorporação de deutério), pelo menos 5500 (82,5% de incorporação de deutério), pelo menos 6000 (90% de incorporação de deutério), pelo menos 6333,3 (95% de incorporação de deutério), pelo menos 6466,7 (97% de incorporação de deutério), pelo menos 6600 (99% de incorporação de deutério) ou pelo menos 6633,3 (99,5% de incorporação de deutério).
Os solvatos farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a invenção incluem aqueles em que o solvente de cristalização pode estar substituído isotopicamente, e.g. D2O, d6-acetona, DMSO-d6.
Os compostos da invenção, i.e. compostos de fórmula (I) que contêm grupos capazes de atuar como doadores e/ou aceitadores para ligações de hidrogénio podem ser capazes de formar cocristais com agentes de formação de cocristais adequados. Estes cocristais podem ser preparados a partir de compostos de fórmula (I) por procedimentos de formação de cocristais conhecidos. Tais procedimentos incluem trituração, aquecimento, cossublimação, cofusão ou a colocação em contacto em solução dos compostos de fórmula (I) com o agente de formação de cocristais sob condições de cristalização e o isolamento dos cocristais assim obtidos. Os agentes de formação de cocristais adequados incluem aqueles descritos em WO 2004/078163. Assim, a invenção proporciona ainda cocristais que compreendem um composto de fórmula (I).
Como aqui utilizado, o termo "veiculo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer um e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, tensioativos, antioxidantes, conservantes (e.g., agentes antibacterianos, agentes antifúngicos), agentes isotónicos, agentes retardadores da absorção, sais, conservantes, estabilizantes de fármaco, aglutinantes, excipientes, desintegrantes, lubrificantes, edulcorantes, aromatizantes e corantes, e combinações dos mesmos, como seria conhecido pelos especialistas na técnica (ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289- 1329). Exceto na medida em que qualquer veiculo convencional seja incompatível com o ingrediente ativo, considera-se a sua utilização nas composições terapêuticas ou farmacêuticas. O termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" de um composto da presente invenção refere-se a uma quantidade do composto da presente invenção que desencadeará a resposta biológica ou médica de um indivíduo, por exemplo, redução ou inibição da atividade de uma enzima ou uma proteína, ou melhoria de sintomas, alívio de condições, abrandamento ou atraso da evolução da doença, ou prevenção de uma doença, etc. Numa forma de realização não limitativa, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrada a um indivíduo, é eficaz para (1) pelo menos aliviar, inibir, prevenir e/ou melhorar parcialmente uma condição, ou um distúrbio ou uma doença (i) mediado por PI3K ou (ii) associado à atividade de PI3K, ou (iii) caracterizado pela atividade (normal ou anormal) de PI3K ou (2) reduzir ou inibir a atividade de PI3K ou (3) reduzir ou inibir a expressão de PI3K. Noutra forma de realização não limitativa, o termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" refere-se à quantidade do composto da presente invenção que, quando administrada a uma célula, ou um tecido, ou um material biológico não celular, ou um meio, é eficaz para reduzir ou inibir pelo menos parcialmente a atividade de PI3K; ou reduzir ou inibir pelo menos parcialmente a expressão de PI3K. 0 significado do termo "uma quantidade terapeuticamente eficaz" como ilustrado na forma de realização anterior para PI3K também se aplica, pelo mesmo meio, a qualquer outras proteínas/péptidos/enzimas relevantes.
Como aqui utilizado, o termo "indivíduo" refere-se a um animal. Tipicamente, o animal é um mamífero. Um indivíduo refere-se também a, por exemplo, primatas (e.g., humanos, machos ou fêmeas), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratazanas, murganhos, peixes e aves. Em certas formas de realização, o indivíduo é um primata. Ainda noutras formas de realização, o indivíduo é um humano.
Como aqui utilizado, o termo "inibir", "inibição" ou "inibindo" refere-se à redução ou supressão de uma determinada condição, sintoma ou distúrbio, ou doença, ou a uma diminuição significativa na atividade de base de uma atividade ou processo biológico.
Como aqui utilizado, o termo "tratar", "tratando" ou "tratamento" de qualquer doença ou distúrbio refere-se, numa forma de realização, ao melhoramento da doença ou distúrbio (i.e., abrandamento ou paragem ou redução do desenvolvimento da doença ou de pelo menos um dos sintomas clínicos da mesma). Noutra forma de realização "tratar", "tratando" ou "tratamento" refere-se ao alívio ou melhoramento de, pelo menos, um parâmetro físico que inclui aqueles que possam não ser discerníveis pelo doente. Ainda noutra forma de realização, "tratar", "tratando" ou "tratamento" refere-se à modulação da doença ou do distúrbio, quer fisicamente, (e.g., estabilização de um sintoma discernível), fisiologicamente, (e.g., estabilização de um parâmetro físico), ou ambos. Ainda noutra forma de realização, "tratar", "tratando" ou "tratamento" refere-se à prevenção ou atraso do início ou desenvolvimento ou progressão da doença ou distúrbio.
Como aqui utilizado, um indivíduo está "necessitado de" um tratamento se esse indivíduo beneficiasse biologicamente, medicamente ou em qualidade de vida desse tratamento.
Como aqui utilizado, o termo "um," "uma," "o, " "a" e termos semelhantes utilizados no contexto da presente invenção (especialmente no contexto das reivindicações) são para ser interpretados como abrangendo tanto o singular como o plural, salvo indicação em contrário aqui ou claramente contrariado pelo contexto.
Todos os métodos aqui descritos podem ser realizados por qualquer ordem adequada, salvo indicação em contrário neste documento ou de outro modo claramente contrariado pelo contexto. A utilização de qualquer um e de todos exemplos, ou linguagem ilustrativa (e.g. "tal como") aqui proporcionada destina-se apenas a esclarecer melhor a invenção e não impõe uma limitação ao âmbito da invenção, de outro modo reivindicada.
Qualquer átomo assimétrico (e.g., carbono ou semelhantes) do(s) composto(s) da presente invenção pode estar presente na configuração racémica ou enantiomericamente enriquecida, por exemplo (R) , (S) ou (R,S) . Em certas formas de realização, cada átomo assimétrico tem pelo menos 50% de excesso enantiomérico, pelo menos 60% de excesso enantiomérico, pelo menos 70% de excesso enantiomérico, pelo menos 80% de excesso enantiomérico, pelo menos 90% de excesso enantiomérico, pelo menos 95% de excesso enantiomérico ou pelo menos 99% de excesso enantiomérico na configuração (R) ou (5) . Caso seja possível, os substituintes em átomos com ligações duplas insaturadas podem estar presentes na forma cis (Z) ou trans (E).
Por conseguinte, como aqui utilizado um composto da presente invenção pode estar na forma de um dos isómeros, rotâmeros, atropisómeros, tautómeros possíveis ou misturas dos mesmos, por exemplo, como isómeros geométricos (cis ou trans), diastereómeros, isómeros óticos (antípodas) substancialmente puros, racematos ou misturas dos mesmos.
Quaisquer misturas resultantes de isómeros podem ser separadas com base nas diferenças físico-químicas dos constituintes, nos isómeros geométricos ou óticos, diastereómeros, racematos puros ou substancialmente puros, por exemplo, por cromatografia e/ou cristalização fracionada.
Quaisquer racematos resultantes de produtos finais ou intermediários podem ser resolvidos nos antípodas óticos por métodos conhecidos, e.g., por separação dos sais diastereoméricos dos mesmos, obtidos com um ácido ou base oticamente ativo e libertação do composto ácido ou básico oticamente ativo. Em particular, uma unidade básica pode ser assim utilizada para resolver os compostos da presente invenção nos seus antípodas óticos, e.g., por cristalização fracionada de um sal preparado com um ácido oticamente ativo, e.g., ácido tartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido diacetiltartárico, ácido di-0,0 '-p-toluoiltartárico, ácido mandélico, ácido málico ou ácido canfor-10-sulfónico. Os produtos racémicos podem ser também resolvidos por cromatografia quiral, e.g., cromatografia liquida de alta pressão (HPLC) utilizando um adsorvente quiral.
Além disso, os compostos da presente invenção, incluindo os seus sais, podem ser também obtidos na forma dos seus hidratos, ou incluir outros solventes utilizados para a sua cristalização. Os compostos da presente invenção podem formar, inerentemente ou por conceção, solvatos com solventes farmaceuticamente aceitáveis (incluindo água); por conseguinte, pretende-se que a invenção abranja tanto as formas solvatadas como as não solvatadas. 0 termo "solvato" refere-se a um complexo molecular de um composto da presente invenção (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos) com uma ou mais moléculas de solvente. Tais moléculas de solvente são aquelas comummente utilizadas na técnica farmacêutica, as quais são conhecidas como sendo inócuas para o recetor, e.g., água ou etanol. 0 termo "hidrato" refere-se ao complexo, onde a molécula de solvente é água.
Os compostos da presente invenção, incluindo os sais, hidratos e solvatos dos mesmos, podem formar, inerentemente ou por conceção, polimorfos.
Tipicamente, os compostos de fórmula (I) podem ser preparados de acordo com os métodos proporcionados infra.
Esquema A
Numa forma de realização, a invenção refere-se a um processo de fabrico de um composto de fórmula (I) (Método A) que compreende os passos a, b, c, d. 0 composto de fórmula (I) é obtido através do passo c de desproteção de PG1 do composto de fórmula (F), em que PG1 representa um grupo de proteção adequado, tal como um grupo Boc, e os outros substituintes são como definidos acima,
seguido do passo da reação de acoplamento d com R1-Act1, passo cl: Quando R1 é -C(0)-R4 ou -S(0)2-R4, em que R4 é definido acima, e Act1 representa um grupo de ativação ou um grupo hidroxilo: A reação de acoplamento é uma formação de amida, ureia, éster carbâmico ou sulfonamida. Há muitas maneiras conhecidas para preparar amidas, ureias, ésteres carbâmicos ou sulfonamidas. 0 passo da reação de acoplamento pode ser realizado com Act1 representando um grupo de ativação, preferencialmente em um procedimento de um passo, ou com Act1 representando um grupo hidroxilo envolvendo um procedimento de um ou dois passos. Para exemplos de formações de ligação amida, ver Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), ppl0827-10852 e referências citadas no mesmo. Para exemplos de síntese de ureias, ver Sartori, G.; Maggi, R. Acyclic and cyclic ureas, Science of Synthesis (2005), 18, 665-758; Gallou, Isabelle. Unsymmetrical ureas Synthetic methodologies and application in drug design, Organic Preparations and Procedures International (2007), 39(4), 355-383. Para exemplos de síntese de carbamatos ver Adams, Philip; Baron, Frank A. Esters of carbamic acid, Chemical Reviews (1965), 65(5), 567-602. Os exemplos aqui proporcionados não se destinam, assim, a ser exaustivos, mas apenas ilustrativos; passo c2: Quando R1 é selecionado de fenilo, piridilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-triazinilo ou 1,3,5-triazinilo e Act1 representa halogéneo, em particular iodo ou bromo: A reação de acoplamento é realizada na presença de uma base de amina tal como N, N-diisopropiletilamina. A reação é realizada na presença de um solvente orgânico ou sem um solvente sob aquecimento com micro-ondas. Alternativamente, a reação é realizada sob condições de Buchwald-Hartwig habituais tais como as condições descritas acima. A reação é preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. 0 composto de fórmula (F) é obtido através do passo b de acoplamento do composto de fórmula (C) , em que PG1 representa um grupo de proteção adequado, tal como um Boc, e os outros substituintes são como definidos acima,
com um composto de fórmula (D), em que X' representa halogéneo, tal como iodo ou bromo e os outros substituintes são como definidos acima,
sob condições de Buchwald-Hartwig habituais utilizando uma combinação adequada de catalisador de Pd/ligando tal como Pd2 (dba) 3/2-(diciclo-hexilf osf ino) bifenilo ou Pd2(dba)3/2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-bifenilo,
Pd2 (dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)- BINAP ou bis (tri-t-butilfosfina)paládio e uma base adequada, tal como NaOtBu, CS2CO3 ou K3PO4 e solvente orgânico tal como tolueno, dioxano ou THF. A reação é agitada a uma temperatura de aproximadamente 60-140 °C, por exemplo a 100 °C a 110 °C e é opcionalmente realizada num reator de micro-ondas. A reação é preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. O composto de fórmula (C) é obtido através do passo a de acoplamento do composto de fórmula (A) , em que os substituintes são como definidos acima com um composto de fórmula (B) , em que PG1 representa um grupo de proteção adequado, tal como um grupo Boc e Act2 é um grupo de ativação ou H, e os outros substituintes são como definidos acima,
passo al: Quando Y é O e Act2 representa um grupo de ativação tal como um mesilato: A reação ocorre na presença de uma base adequada tal como hidróxido de sódio (NaH) , K2CO3 ou t-butóxido de potássio (tBuOK) num solvente orgânico polar adequado tal como DMF, THF, 2-metiltetra- hidrofurano ou Dioxano a uma temperatura adequada tal como ta - 100 °C. passo a2: Quando Y é O e Act2 representa Η: A reação ocorre utilizando condições de Mitsunobu habituais, por exemplo utilizando Ph3P e DEAD num solvente orgânico tal como THF sob condições de gás inerte a temperatura elevada tal como 70 °C. passo a3: Quando Y é NH e e Act2 representa H: Utiliza-se uma reação de acoplamento de fosfónio promovida por base, por meio da qual um composto da fórmula (A) num solvente adequado tal como acetonitrilo é feito reagir com um sal de fosfónio tal como hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris(dimetilamino)fosfónio (BOP) na presença de uma base tal como 1,8-diaza-7-biciclo[5.4.0]undeceno (DBU) seguida de adição de um composto da fórmula (B). A mistura reacional é agitada a uma temperatura de 20 °C a 100 °C.
Noutra forma de realização, a invenção refere-se a um processo de fabrico de um composto de fórmula (I) (Método A-a) que compreende os passos a e b como definidos acima para o Método A, utilizando um composto de fórmula (B) em que PG1 representa R1.
Noutra forma de realização, a invenção refere-se a um processo de fabrico de um composto de fórmula (I) (Método B) que compreende os passos e, b, f, a, c e d. 0 composto de fórmula (I) é obtido através dos passos c e d como descritos acima para o Método A do composto de fórmula (F). 0 composto de fórmula (F) é obtido através do passo f de desproteção de PG2 do composto de fórmula (E), em que PG2 é um grupo de proteção adequado, tal como um grupo de proteção sililo, e os outros substituintes são como definidos acima
seguido do passo da reação de acoplamento a, como descrito acima para o Método A, com o composto de fórmula (B). 0 composto de fórmula (E) é obtido através do passo e de proteção do composto de fórmula (A) com um grupo de proteção adequado PG2, seguido do composto de fórmula (E) , em que PG2 é um grupo de proteção adequado, tal como um grupo de proteção sililo, seguido do passo da reação de acoplamento b, como descrito acima para o Método A com o composto de fórmula (D).
Noutra forma de realização, a invenção refere-se a um processo de fabrico de um composto de fórmula (I) (Método B-a) que compreende os passos e, b e f como definidos acima para o Método B, utilizando um composto de fórmula (B) em que PG1 representa R1.
Noutra forma de realização, a invenção refere-se a um processo de fabrico de um composto de fórmula (I) (Método C) utilizando um composto de fórmula (A'), em que X" representa halogéneo e os outros substituintes são como definidos acima
que compreende os passos b, c e d como definidos acima para o Método B, utilizando um composto de fórmula (B) e um passo a4 modificado: passo a4: Quando Y é NH e Act2 é Η: A reação ocorre na presença de uma base adequada tal como, por exemplo, carbonato de potássio ou uma base de amina adequada tal como trietilamina ou N,N-diisopropiletilamina a temperatura elevada tal como 100 °C a 140 °C. Alternativamente, a reação é realizada sob condições de Buchwald-Hartwig habituais tais como as condições descritas acima. A reação é preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon.
Noutra forma de realização, a invenção refere-se a um processo de fabrico de um composto de fórmula (I) (Método C-a) que compreende os passos b, a4, c e d como definidos acima para o Método B1, utilizando um composto de fórmula (B) em que PG1 representa R1. 0 termo "grupo de ativação" como aqui utilizado refere-se a um grupo que pode ativar um derivado de ácido carboxilico, ácido carbónico ou ácido carbâmico, para acoplamento com uma unidade amina para formar uma unidade amida, ureia ou éster carbâmico, respetivamente (Act1) ou a um grupo que pode ativar um grupo hidroxilo para acoplamento com outra unidade hidroxilo para formar um éter (Act2) .
Os grupos que podem ativar um derivado de ácido carboxilico, ácido carbónico ou ácido carbâmico, para acoplamento com uma unidade amina para formar uma unidade amida, ureia ou éster carbâmico são cloretos, ou grupos que resultam da reação do derivado ácido com um agente de ativação. Os agentes de ativação adequados são conhecidos pelo especialista, exemplos desses reagentes de ativação são derivados de carbodiimida, derivados de éster pentafluorofenílico, derivados de triazole, derivados de imidazole.
Os grupos que podem ativar um grupo hidroxilo para acoplamento com outra unidade hidroxilo para formar um éter são grupos que são conhecidos pelo especialista, exemplos desses grupos de ativação são mesilatos e tosilatos. 0 termo "grupo de proteção" como aqui utilizado refere-se a um grupo que protege um grupo funcional que está presente nos materiais de partida e que não se destina a tomar parte na reação. Nos passos de processo adicionais, realizados consoante desejado, os grupos funcionais dos compostos de partida que não devam tomar parte na reação podem estar presentes na forma não protegida ou podem estar protegidos, por exemplo, com um ou mais grupos de proteção. Os grupos de proteção são então total ou parcialmente removidos de acordo com um dos métodos conhecidos. Os grupos de proteção, e a maneira pela qual são introduzidos e removidos são descritos, por exemplo, em "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, London, New York 1973, e em "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl, 4th edition, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 e em Theodora W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York 1981. Uma caracteristica dos grupos de proteção é que podem ser facilmente removidos, i.e. sem a ocorrência de reações secundárias indesejadas, por exemplo por solvólise, redução, fotólise ou, alternativamente, sob condições fisiológicas. A invenção inclui ainda qualquer variante dos presentes processos, na qual um produto intermediário que possa ser obtido em qualquer etapa da mesma é utilizado como material de partida e são realizados os restantes passos, ou na qual os materiais de partida são preparados in situ nas condições reacionais, ou na qual os componentes reacionais são utilizados na forma dos seus sais ou material oticamente puro.
Os compostos da invenção e intermediários podem ser também convertidos entre si de acordo com métodos geralmente conhecidos pelos especialistas na técnica.
Os intermediários e produtos finais podem ser processados e/ou purificados de acordo com métodos padrão, e.g. utilizando métodos cromatográficos, métodos de distribuição ou (re-)cristalização. 0 seguinte aplica-se, em geral, a todos os processos mencionado acima e a seguir.
Todos os passos de processo supramencionados podem ser realizados sob condições reacionais que são conhecidas pelos especialistas na técnica, incluindo aquelas mencionadas especificamente, na ausência ou, habitualmente, na presença de solventes ou diluentes, incluindo, por exemplo, solventes ou diluentes que são inertes para os reagentes utilizados e os dissolvem, na ausência ou presença de catalisadores, agentes de condensação ou neutralizantes, por exemplo permutadores iónicos, tais como permutadores de catiões, e.g. na forma de H+, dependendo da natureza da reação e/ou dos reagentes a temperatura reduzida, normal ou elevada, por exemplo numa gama de temperatura que vai desde cerca de -100 °C a cerca de 190 °C, incluindo, por exemplo, desde aproximadamente -80 °C a aproximadamente 150 °C, por exemplo desde -80 a -60 °C, à temperatura ambiente, desde -20 a 40 °C ou à temperatura de refluxo, sob pressão atmosférica ou num recipiente fechado, quando apropriado sob pressão, e/ou numa atmosfera inerte, por exemplo sob um atmosfera de árgon ou azoto.
Em todas as etapas das reações, as misturas de isómeros que se formem podem ser separadas nos isómeros individuais, por exemplo diastereoisómeros ou enantiómeros, ou em qualquer misturas de isómeros desejadas, por exemplo racematos ou misturas de diastereoisómeros, por exemplo de forma análoga aos métodos descritos acima.
Os solventes a partir dos quais aqueles solventes que são adequados para qualquer reação particular podem ser selecionados incluem aqueles mencionados especificamente ou, por exemplo, água, ésteres, tais como alcanoatos inferiores de alquilo inferior, por exemplo acetato de etilo, éteres, tais como éteres alifáticos, por exemplo éter dietilico, ou éteres cíclicos, por exemplo tetra-hidrofurano ou dioxano, hidrocarbonetos aromáticos líquidos, tais como benzeno ou tolueno, álcoois, tais como metanol, etanol ou 1 ou 2-propanol, nitrilos, tais como acetonitrilo, hidrocarbonetos halogenados, tais como cloreto de metileno ou clorofórmio, amidas de ácidos, tais como dimetilformamida ou dimetilacetamida, bases, tais como bases heterocíclicas de azoto, por exemplo piridina ou N-metilpirrolidin-2-ona, anidridos de ácidos carboxílicos, tais como anidridos de ácido alcanoico inferior, por exemplo anidrido acético, hidrocarbonetos cíclicos, lineares ou ramificados, tais como ciclo-hexano, hexano ou isopentano, metilciclo-hexano, ou misturas daqueles solventes, por exemplo soluções aquosas, salvo indicação em contrário na descrição dos processos. Tais misturas de solventes podem ser também utilizadas no processamento, por exemplo, por cromatografia ou partição.
Os compostos, incluindo os seus sais, podem ser também obtidos na forma de hidratos, ou os seus cristais podem incluir, por exemplo, o solvente utilizado para cristalização. Podem estar presentes diferentes formas cristalinas. A invenção refere-se também àquelas formas do processo em que um composto que possa ser obtido como um intermediário em qualquer etapa do processo é utilizado como material de partida e são realizados os restantes passos do processo, ou em que se forma um material de partida nas condições reacionais ou se utiliza na forma de um derivado, por exemplo numa forma protegida ou na forma de um sal, ou um composto que possa ser obtido pelo processo de acordo com a invenção é produzido nas condições de processo e processado adicionalmente in situ.
Noutro aspeto, a presente invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um veículo farmaceuticamente aceitável. A composição farmacêutica pode ser formulada para vias de administração particulares, tais como administração oral, administração parentérica e administração retal, etc. Além disso, as composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas numa forma sólida (incluindo sem limitação cápsulas, comprimidos, pílulas, granulados, pós ou supositórios), ou numa forma líquida (incluindo sem limitação soluções, suspensões ou emulsões). As composições farmacêuticas podem ser submetidas a operações farmacêuticas convencionais, tais como esterilização, e/ou podem conter diluentes inertes, lubrificantes ou agentes tampão convencionais, assim como adjuvantes, tais como conservantes, estabilizantes, humectantes, emulsionantes e tampões, etc.
Tipicamente, as composições farmacêuticas são comprimidos ou cápsulas de gelatina que compreendem o ingrediente ativo em conjunto com a) diluentes, e.g., lactose, dextrose, sacarose, manitol, sorbitol, celulose e/ou glicina; b) lubrificantes, e.g., sílica, talco, ácido esteárico, o seu sal de magnésio ou cálcio, e/ou polietileno glicol; para comprimidos também c) aglutinantes, e.g., silicato de alumínio e magnésio, pasta de amido, gelatina, tragacanta, metilcelulose, carboximetilcelulose sódica e/ou polivinilpirrolidona; caso se pretenda d) desintegrantes, e.g., amidos, ágar, ácido algínico ou seu sal de sódio, ou misturas efervescentes; e/ou e) absorventes, corantes, aromas e edulcorantes.
Os comprimidos podem ser revestidos por película ou revestidos entericamente de acordo com métodos conhecidos na técnica.
As composições adequadas para administração oral incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção na forma de comprimidos, pastilhas, suspensões aquosas ou oleosas, pós ou granulados dispersíveis, emulsão, cápsulas duras ou moles, ou xaropes ou elixires. As composições que se destinam a utilização oral são preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para o fabrico de composições farmacêuticas e tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em edulcorantes, aromatizantes, corantes e conservantes para proporcionar preparações farmaceuticamente elegantes e agradáveis ao paladar. Os comprimidos podem conter o ingrediente ativo em mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis não tóxicos que são adequados para o fabrico de comprimidos. Estes excipientes são, por exemplo, diluentes inertes, tais como carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; aglutinantes, por exemplo, amido, gelatina ou goma-arábica; e lubrificantes, por exemplo estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos não são revestidos ou são revestidos por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e, desse modo, proporcionar uma ação sustentada ao longo de um período mais prolongado. Por exemplo, pode ser utilizado um material de retardamento tal como monoestearato de glicerilo ou diestearato de glicerilo. As formulações para utilização oral podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina dura em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulino, ou como cápsulas de gelatina mole em que o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite.
Certas composições injetáveis são soluções ou suspensões isotónicas aquosas, e os supositórios são vantajosamente preparados a partir de emulsões ou suspensões oleosos. As referidas composições podem ser esterilizadas e/ou conter adjuvantes, tais como conservantes, estabilizantes, humectantes ou emulsionantes, promotores de solução, sais para regular a pressão osmótica e/ou tampões. Além disso, podem conter também outras substâncias terapeuticamente valiosas. As referidas composições são preparadas de acordo com métodos de mistura, granulação ou revestimento convencionais, respetivamente, e contêm cerca de 0,1-75%, ou contêm cerca de 1-50%, do ingrediente ativo.
As composições adequadas para aplicação transdérmica incluem uma quantidade eficaz de um composto da invenção com um veículo adequado. Os veículos adequados para administração transdérmica incluem solventes farmacologicamente aceitáveis absorvíveis para ajudar na passagem através da pele do hospedeiro. Por exemplo, os dispositivos transdérmicos estão na forma de uma ligadura que compreende um membro de suporte, um reservatório que contém o composto opcionalmente com veículos, opcionalmente uma barreira de controlo da velocidade para administrar o composto na pele do hospedeiro a uma velocidade predeterminada e controlada ao longo de um intervalo de tempo prolongado, e meios para segurar o dispositivo à pele.
As composições adequadas para aplicação tópica, e.g., à pele e olhos, incluem soluções aquosas, suspensões, pomadas, cremes, geles ou formulações para pulverização, e.g., para administração por aerossol ou semelhantes. Tais sistemas de administração tópica serão, em particular, apropriadas para aplicação dérmica, e.g., para o tratamento de cancro da pele, e.g., para utilização profilática em cremes, loções e formulações para pulverização solares. Assim, aquelas são particularmente adequadas para utilização em formulações tópicas, incluindo cosméticas, bem conhecidas na técnica. Aquelas podem conter solubilizantes, estabilizantes, agentes de melhoramento da tonicidade, tampões e conservantes.
Como aqui utilizada uma aplicação tópica pode referir-se também a uma aplicação por inalação ou intranasal. Estas podem ser convenientemente administradas na forma de um pó seco (quer sozinho, como uma mistura, por exemplo uma mistura seca com lactose, ou uma partícula de componente misto, por exemplo com fosfolípidos) a partir de um inalador de pó seco ou uma apresentação para pulverização de aerossol a partir de um recipiente pressurizado, bomba, formulação para pulverização, atomizador ou nebulizador, com ou sem a utilização de um propulsor adequado. A presente invenção proporciona ainda composições farmacêuticas anidras e formas de dosagem que compreendem os compostos da presente invenção como ingredientes ativos, uma vez que a água pode facilitar a degradação de certos compostos.
As composições e formas de dosagem farmacêuticas anidras da invenção podem ser preparadas utilizando ingredientes anidros ou com baixo teor de humidade e condições de baixo teor de vapor de água ou baixa humidade.
Uma composição farmacêutica anidra pode ser preparada e armazenada de tal forma que a sua natureza anidra é mantida. Por conseguinte, as composições anidras são empacotadas utilizando materiais conhecidos por prevenir a exposição à água de tal forma que podem ser incluídos em kits de formulação adequados. Os exemplos de embalagens adequadas incluem folhas metálicas, plásticos, recipientes de dose unitária (e.g., frascos), embalagens blister, e embalagens em tira hermeticamente selados. A invenção proporciona ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem um ou mais agentes que reduzem a velocidade à qual o composto da presente invenção, como um ingrediente ativo, se decomporá. Tais agentes, os quais são aqui referidos como "estabilizantes, " incluem antioxidantes tais como ácido ascórbico, tampões de pH ou tampões salinos, etc.
Os compostos de fórmula I na forma livre ou na forma de sal, exibem propriedades farmacológicas valiosas, e.g. propriedades de modulação de PI3K, e.g. como indicado nos ensaios in vitro e in vivo como proporcionados nas secções seguintes e, por conseguinte, são indicados para terapia ou para utilização como produtos químicos de investigação, e.g. como compostos ferramenta.
Os compostos da invenção podem ser úteis no tratamento de condições, doenças ou distúrbios que incluem imunopatologias associadas a doenças ou infeções em que uma ou mais das funções de células B, tais como produção de anticorpos, apresentação de antigénios, produção de citocinas ou organogénese linfoide, são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar e doenças relacionadas, púrpura trombocitopénica idiopática, lúpus eritematoso disseminado, esclerose múltipla, miastenia grave, síndrome de Sjõgren, anemia hemolítica autoimune, vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, púrpura trombocitopénica trombótica, urticária autoimune crónica, alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), rejeição de transplantes hiperaguda, aguda e crónica mediada por células B e cancros de origem hematopoiética incluindo mieloma múltiplo; leucemia mielógena aguda; leucemia mielógena crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem. A invenção inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios em que uma ou mais das funções de neutrófilos, tais como libertação de superóxido, exocitose estimulada ou migração quimiotática, são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, septicemia, distúrbios pulmonares ou respiratórios tais como asma, dermatoses inflamatórias tais como psoríase, assim como em imunopatologias associadas a doenças ou infeções e outras. A invenção inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios em que uma ou mais das funções de basófilos e mastócitos, tais como migração quimiotática ou desgranulação mediada por alergénio-IgE, são anormais ou são indesejáveis incluindo doenças alérgicas (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica) assim como outros distúrbios tais como COPD, asma ou enfisema. A invenção inclui métodos de tratamento de condições, doenças ou distúrbios em que uma ou mais das funções de células T, tais como produção de citocinas ou citotoxicidade mediada por células, são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, esclerose múltipla, rejeição aguda ou crónica de enxertos de células, tecidos ou órgãos, ou cancros de origem hematopoiética, assim como em imunopatologias associadas a doenças ou infeções.
Além disso, a invenção inclui métodos de tratamento de doenças neurodegenerativas, doenças cardiovasculares e de agregação de plaquetas.
Além disso, a invenção inclui métodos de tratamento de doenças da pele tais como porfiria cutânea tarda, erupção polimórfica à luz, dermatomiosite, urticária solar, líquen plano oral, paniculite, esclerodermia, vasculite urticariana.
Além disso, a invenção inclui métodos de tratamento de doenças inflamatórias crónicas tais como sarcoidose, granuloma anular.
Noutras formas de realização, a condição ou distúrbio (e.g. mediada por PI3K) é selecionado do grupo que consiste em: policitemia vera, trombocitemia essencial, mielofibrose com metaplasia mieloide, asma, COPD, ARDS, síndrome de Loffler, pneumonia eosinofílica, infestação parasitária (em particular, metazoários) (incluindo eosinofilia tropical), aspergilose broncopulmonar, poliarterite nodosa (incluindo síndrome de Churg-Strauss), granuloma eosinofílico, distúrbios relacionados com eosinófilos que afetam as vias aéreas ocasionadas por reação a fármacos, psoríase, dermatite de contacto, dermatite atópica, alopecia areata, eritema multiforme, dermatite herpetiforme, esclerodermia, vitiligo, angeíte de hipersensibilidade, urticária, penfigoide bolhoso, lúpus eritematoso, pênfigo, epidermólise bolhosa adquirida, distúrbios hematológicos autoimunes (e.g. anemia hemolítica, anemia aplástica, anemia pura de glóbulos vermelhos e trombocitopenia idiopática) , lúpus eritematoso disseminado, policondrite, esclerodermia, granulomatose de Wegener, dermatomiosite, hepatite ativa crónica, miastenia grave, síndrome Steven-Johnson, sprue idiopático, doença inflamatória autoimune do intestino (e.g. colite ulcerosa e doença de Crohn), oftalmopatia endócrina, doença de Grave, sarcoidose, alveolite, pneumonite de hipersensibilidade crónica, esclerose múltipla, cirrose biliar primária, uveíte (anterior e posterior), fibrose pulmonar intersticial, artrite psoriática, glomerulonefrite, doenças cardiovasculares, aterosclerose, hipertensão, trombose venosa profunda, acidente vascular cerebral, enfarte do miocárdio, angina instável, tromboembolismo, embolia pulmonar, doenças tromboliticas, isquemia arterial aguda, oclusões trombóticas periféricas e doença arterial coronariana, lesões por reperfusão, retinopatia, tal como retinopatia diabética ou retinopatia induzida por oxigénio hiperbárico, e condições caracterizadas por elevada pressão intraocular ou secreção de humor aquoso ocular, tal como glaucoma.
Noutra forma de realização, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento, prevenção ou melhoria de doença autoimune e de condições inflamatórias, em particular condições inflamatórias com uma etiologia incluindo um componente autoimune tal como artrite (por exemplo, artrite reumatoide, artrite crónica progressiva e artrite deformante) e doenças reumáticas, incluindo condições inflamatórias e doenças reumáticas que envolvem perda óssea, dor inflamatória, espondiloartropatias incluindo espondilite anquilosante, sindrome de Reiter, artrite reativa, artrite psoriática e artrite enteropática, hipersensibilidade (incluindo hipersensibilidade das vias aéreas e hipersensibilidade dérmica) e alergias. Doenças autoimunes especificas para as quais se podem utilizar os anticorpos da invenção incluem distúrbios hematológicos autoimunes (incluindo e.g. anemia hemolitica, anemia aplástica, anemia pura de glóbulos vermelhos e trombocitopenia idiopática) , hemofilia A adquirida, doença das aglutininas frias, crioglobulinemia, púrpura trombocitopénica trombótica, sindrome de Sjogren, lúpus eritematoso disseminado, distúrbios musculares inflamatórios, policondrite, esclerodermia, vasculite associada a anticorpos citoplasmáticos antineutrófilos, neuropatia mediada por IgM, sindrome de mioclonia opsoclonia, granulomatose de Wegener, dermatomiosite, hepatite ativa crónica, miastenia grave, psoríase, sindrome de Steven-Johnson, pênfigo vulgar, pênfigo foliáceo, sprue idiopático, doença inflamatória autoimune do intestino (incluindo e.g. colite ulcerosa, doença de Crohn e Sindrome do Intestino Irritável), oftalmopatia endócrina, doença de Graves, sarcoidose, esclerose múltipla, neuromielite ótica, cirrose biliar primária, diabetes juvenil (diabetes mellitus tipo I), uveite (anterior, intermédia e posterior, assim como panuveite), queratoconjuntivite seca e queratoconjuntivite vernal, fibrose pulmonar intersticial, artrite psoriática e glomerulonefrite (com e sem sindrome nefrótica, e.g. incluindo sindrome nefrótica idiopática ou nefropatia com alteração minima), tumores, doença inflamatória da pele e córnea, miosite, relaxamento de implantes ósseos, distúrbios metabólicos, tais como aterosclerose, diabetes e dislipidemia.
Noutra forma de realização, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de condições ou distúrbios selecionados do grupo que consiste em, linfoma de células B cutâneo primário, doença imunobolhosa, pênfigo vulgar, pênfigo foliáceo, forma endémica de pênfigo Brasileiro (Fogo selvagem), pênfigo paraneoplásico, penfigoide bolhoso, penfigoide da membrana mucosa, epidermólise bolhosa adquirida, doença crónica do enxerto contra o hospedeiro, dermatomiosite, lúpus eritematoso disseminado, vasculite, vasculite dos pequenos vasos, vasculite urticariana hipocomplementémica, vasculite de anticorpos citoplasmáticos antineutrófilos, crioglobulinemia, sindrome de Schnitzler, macroglobulinemia de Waldenstrom, angioedema, vitiligo, lúpus eritematoso disseminado, púrpura trombocitopénica idiopática, esclerose múltipla, doença das aglutininas frias, anemia hemolitica autoimune, vasculite associada a anticorpos citoplasmáticos antineutrófilos, doença do enxerto contra o hospedeiro, crioglobulinemia e trombocitopenia trombótica.
Assim, como uma outra forma de realização, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmulas (I), (I'), (Ia), (Ia'), (Ib), (Ib') (Ic), (IC), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (If), (If), (Ig), (Ig'), (Ih), (Ih'), (li), (li'), (Ij) ou (I j ' ) em terapia. Numa outra forma de realização, a terapia é selecionada de uma doença que pode ser tratada pela inibição de PI3K. Noutra forma de realização, a doença é selecionada da lista supramencionada, de modo adequado de distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doenças das vias aéreas, tais como asma e COPD, rejeição de transplantes; produção de anticorpos, apresentação de antigénios, produção de citocinas ou organogénese linfoide são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar, púrpura trombocitopénica idiopática, lúpus eritematoso disseminado, esclerose múltipla, miastenia grave, sindrome de Sjõgren, anemia hemolitica autoimune, vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, púrpura trombocitopénica trombótica, urticária autoimune crónica, alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), rejeição de transplantes hiperaguda, aguda e crónica mediada por células B e cancros de origem hematopoiética incluindo mieloma múltiplo; uma leucemia; leucemia mielógena aguda; leucemia mielógena crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem; de modo mais adequado de artrite reumatoide (RA), pênfigo vulgar (PV), púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), púrpura trombocitopénica trombótica (TTP), anemia hemolitica autoimune (AIHA), hemofilia tipo A adquirida (AHA), lúpus eritematoso disseminado (SLE), esclerose múltipla (MS), miastenia grave (MG), sindrome de Sjõgren (SS), vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, urticária autoimune crónica (CAU), alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, rejeição de transplantes e cancros de origem hematopoiética, assim como em imunopatologias associadas a doenças ou infeções, por exemplo em malária grave e cerebral, tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
Noutra forma de realização, a invenção proporciona um composto de fórmulas (I), (I'), (Ia), (Ia'), (Ib), (Ib') (Ic), (Ic'), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (If), (if), (ig), (ig'), (ih), (ih'), (ii), (i i'), (ij) ou (i j') para utilização num método de tratamento de uma doença que é tratada pela inibição de PI3K. Numa outra forma de realização, a doença é selecionada da lista supramencionada, de modo adequado de distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doenças das vias aéreas, tais como asma e COPD, rejeição de transplantes; produção de anticorpos, apresentação de antigénios, produção de citocinas ou organogénese linfoide são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar, púrpura trombocitopénica idiopática, lúpus eritematoso disseminado, esclerose múltipla, miastenia grave, síndrome de Sjõgren, anemia hemolítica autoimune, vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, púrpura trombocitopénica trombótica, urticária autoimune crónica, alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), síndrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), rejeição de transplantes hiperaguda, aguda e crónica mediada por células B e cancros de origem hematopoiética incluindo mieloma múltiplo; uma leucemia; leucemia mielógena aguda; leucemia mielógena crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem; de modo mais adequado de artrite reumatoide (RA), pênfigo vulgar (PV), púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), púrpura trombocitopénica trombótica (TTP), anemia hemolitica autoimune (AIHA), hemofilia tipo A adquirida (AHA), lúpus eritematoso disseminado (SLE), esclerose múltipla (MS), miastenia grave (MG), sindrome de Sjogren (SS), vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, urticária autoimune crónica (CAU), alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, rejeição de transplantes e cancros de origem hematopoiética, assim como em imunopatologias associadas a doenças ou infeções, por exemplo em malária grave e cerebral, tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
Assim, como uma outra forma de realização, a presente invenção proporciona a utilização de um composto de fórmulas (I), (I'), (Ia), (Ia'), (Ib), (Ib') (Ic), (IC), (Id), (Id'), (Ie), (Ie'), (If), (If), (Ig), (Ig'), (Ih), (Ih'), (li), (If), (Ij) ou (I j ' ) para o fabrico de um medicamento. Numa outra forma de realização, o medicamento é para o tratamento de uma doença que pode ser tratada pela inibição de PI3K. Noutra forma de realização, a doença é selecionada da lista supramencionada, de modo adequado de distúrbios autoimunes, doenças inflamatórias, doenças alérgicas, doenças das vias aéreas, tais como asma e COPD, rejeição de transplantes; produção de anticorpos, apresentação de antigénios, produção de citocinas ou organogénese linfoide são anormais ou são indesejáveis incluindo artrite reumatoide, pênfigo vulgar, púrpura trombocitopénica idiopática, lúpus eritematoso disseminado, esclerose múltipla, miastenia grave, sindrome de Sjõgren, anemia hemolitica autoimune, vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, púrpura trombocitopénica trombótica, urticária autoimune crónica, alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, AMR (rejeição de transplante mediada por anticorpos), rejeição de transplantes hiperaguda, aguda e crónica mediada por células B e cancros de origem hematopoiética incluindo mieloma múltiplo; uma leucemia; leucemia mielógena aguda; leucemia mielógena crónica; leucemia linfocítica; leucemia mieloide; linfoma não-Hodgkin; linfomas; policitemia vera; trombocitemia essencial; mielofibrose com metaplasia mieloide; e doença de Walden Stroem; de modo mais adequado de artrite reumatoide (RA), pênfigo vulgar (PV), púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), púrpura trombocitopénica trombótica (TTP), anemia hemolitica autoimune (AIHA), hemofilia tipo A adquirida (AHA), lúpus eritematoso disseminado (SLE) , esclerose múltipla (MS), miastenia grave (MG), sindrome de Sjõgren (SS), vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, urticária autoimune crónica (CAU), alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, rejeição de transplantes e cancros de origem hematopoiética, assim como em imunopatologias associadas a doenças ou infeções, por exemplo em malária grave e cerebral, tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose. A composição farmacêutica ou combinação da presente invenção pode estar numa dosagem unitária de cerca de 1-1000 mg de ingrediente(s) ativo(s) para um indivíduo de cerca de 50-70 kg, ou cerca de 1-500 mg ou cerca de 1-250 mg ou cerca de 1-150 mg ou cerca de 0,5-100 mg, ou cerca de 1-50 mg de ingredientes ativos. A dosagem terapeuticamente eficaz de um composto, da composição farmacêutica ou das associações do mesmo, depende da espécie do indivíduo, do peso corporal, idade e condição individual, do distúrbio ou doença ou da gravidade do mesmo, que é tratado. Um especialista médico, clínico ou veterinário com conhecimentos médios pode determinar facilmente a quantidade eficaz de cada um dos ingredientes ativos necessários para prevenir, tratar ou inibir o progresso do distúrbio ou doença.
As propriedades de dosagem supramencionadas podem ser demonstradas em ensaios in vitro e in vivo utilizando vantajosamente mamíferos, e.g., murganhos, ratazanas, cães, macacos ou órgãos, tecidos e preparações isolados dos mesmos. Os compostos da presente invenção podem ser aplicados in vitro na forma de soluções, e.g., soluções aquosas, e in vivo quer por via entérica, parentérica, vantajosamente por via intravenosa, e.g., como uma suspensão ou em solução aquosa. A dosagem in vitro pode variar entre concentrações de cerca de 10-3 molar e IO-9 molar. Uma quantidade terapeuticamente eficaz in vivo pode variar em função da via de administração, entre cerca de 0,1-500 mg/kg, ou entre cerca de 1-100 mg/kg. O composto da presente invenção pode ser administrado quer simultaneamente com, ou antes ou após, um ou mais agentes terapêuticos diferentes. O composto da presente invenção pode ser administrado separadamente, pela mesma ou por vias de administração diferentes, ou em conjunto na mesma composição farmacêutica que os outros agentes.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um produto que compreende um composto de fórmula (I) e pelo menos um outro agente terapêutico como a preparação associada para utilização simultânea, separada ou sequencial em terapia. Numa forma de realização, a terapia é o tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K. Os produtos proporcionados como uma preparação associada incluem uma composição que compreende o composto de fórmula (I) e o(s) outro (s) agente (s) terapêutico (s) em conjunto na mesma composição farmacêutica, ou o composto de fórmula (I) e o(s) outro (s) agente (s) terapêutico (s) na forma separada, e.g. na forma de um kit.
Numa forma de realização, a invenção proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula (I) e outro (s) agente (s) terapêutico(s) .
Opcionalmente, a composição farmacêutica pode compreender um veiculo farmaceuticamente aceitável, como descrito acima.
Numa forma de realização, a invenção proporciona um kit que compreende duas ou mais composições farmacêuticas separadas, pelo menos uma das quais contém um composto de fórmula (I) . Numa forma de realização, o kit compreende meios para reter separadamente as referidas composições, tais como um recipiente, frasco dividido ou embalagem em folha metálica dividida. Um exemplo de um kit desse tipo é uma embalagem blister, como tipicamente utilizada para a embalagem de comprimidos ou cápsulas. 0 kit da invenção pode ser utilizado para administrar diferentes formas de dosagem, por exemplo, orais e parentéricas, para administrar as composições separadas em diferentes intervalos de dosagem, ou para titular as composições separadas uma em relação à outra. Para ajudar à adesão, o kit da invenção compreende tipicamente instruções para administração.
Nas terapias de associação da invenção, o composto da invenção e o outro agente terapêutico podem ser fabricados e/ou formulados pelo mesmo ou por fabricantes diferentes. Além do mais, o composto da invenção e o outro agente terapêutico podem ser colocados em conjunto numa terapia de associação: (i) antes de libertar o produto de associação para os médicos (e.g. no caso de um kit que compreende o composto da invenção e o outro agente terapêutico); (ii) pelos próprios médicos (ou sob a orientação do médico) imediatamente antes administração; (iii) pelos próprios doentes, e.g. durante a administração sequencial do composto da invenção e do outro agente terapêutico.
Por conseguinte, a invenção proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) para tratar uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K, em que o medicamento é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também proporciona a utilização de outro agente terapêutico para tratar uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K, em que o medicamento é administrado com um composto de fórmula (I). A invenção também proporciona um composto de fórmula (I) para utilização num método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K, em que o composto de fórmula (I) é preparado para administração com outro agente terapêutico. A invenção também proporciona outro agente terapêutico para utilização num método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K, em que o outro agente terapêutico é preparado para administração com um composto de fórmula (I) . A invenção também proporciona um composto de fórmula (I) para utilização num método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K em que o composto de fórmula (I) é administrado com outro agente terapêutico. A invenção também proporciona outro agente terapêutico para utilização num método de tratamento de uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K em que o outro agente terapêutico é administrado com um composto de fórmula (I). A invenção também proporciona a utilização de um composto de fórmula (I) para tratar uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K, em que o doente foi previamente (e.g. dentro de 24 horas) tratado com outro agente terapêutico. A invenção também proporciona a utilização de outro agente terapêutico para tratar uma doença ou condição mediada pela atividade das enzimas PI3K, em que o doente foi previamente (e.g. dentro de 24 horas) tratado com um composto de fórmula (I).
Os compostos de fórmula I podem ser administrados como o único ingrediente ativo ou em conjunto com, e.g. como um adjuvante para, outros fármacos e.g. agentes imunossupressores ou imunomoduladores ou outros agentes anti-inflamatórios, e.g. para o tratamento ou prevenção de rejeição aguda ou crónica de alo- ou xenoenxertos ou distúrbios inflamatórios ou autoimunes, ou um agente quimioterapêutico, e.g. um agente antiproliferativo de células malignas. Por exemplo, os compostos de fórmula I podem ser utilizados em associação com um inibidor de calcineurina, e.g. ciclosporina A ou FK 506; um inibidor de mTOR, e.g. rapamicina, 40-0-(2-hidroxietil)-rapamicina, CCI779, ABT578, AP23573, TAFA-93, biolimus-7 ou biolimus-9; uma ascomicina com propriedades imunossupressoras, e.g. ABT-281, ASM981, etc.; corticosteroides; ciclofosfamida; azatiopreno; metotrexato; leflunomida; mizoribina; ácido micofenólico ou sal; micofenolato de mofetil; 15-desoxispergualina ou um homólogo, análogo ou derivado imunossupressor do mesmo; um inibidor de PKC, e.g. como divulgado na WO 02/38561 ou WO 03/82859, e.g. o composto do Exemplo 56 ou 70; um inibidor da cinase JAK3, e.g. N-benzil-3,4-di-hidroxi-benzilideno-cianoacetamida a-ciano-(3,4-di-hidroxi)-]N-benzilcinamamida (Tirfostina AG 490), prodigiosina 25-C (PNU156804), [4-(4'-hidroxifenil)-amino- 6, 7-dimetoxiquinazolina] (WHI-P131), [4-(3'-bromo-4'- hidroxilfenil)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] (WHI-P154), [4-(3',5'-dibromo-4'-hidroxilfenil)-amino-6,7-dimetoxiquinazolina] WHI-P97, KRX-211, 3-{ (3R,4R)-4-metil- 3-[metil-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-amino]-piperidin-l-il}-3-oxo-propionitrilo, na forma livre ou numa forma de sal farmaceuticamente aceitável, e.g. monocitrato (também chamado CP-690,550), ou um composto como divulgado na WO 04/052359 ou WO 05/066156; anticorpos monoclonais imunossupressores, e.g., anticorpos monoclonais para recetores de leucócitos, e.g., MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD52, CD58, CD80, CD86 ou seus ligandos; outros compostos imunomoduladores, e.g. uma molécula de ligação recombinante que tem pelo menos uma porção do domínio extracelular de CTLA4 ou um mutante da mesma, e.g. pelo menos uma porção extracelular de CTLA4 ou um mutante da mesma unida a uma sequência de proteína não- CTLA4, e.g. CTLA4lg (por ex. designada ATCC 68629) ou um mutante da mesma, e.g. LEA29Y; inibidores da molécula de adesão, e.g. antagonistas de LFA-1, antagonistas de ICAM-1 ou -3, antagonistas de VCAM-4 ou antagonistas de VLA-4; ou anti-histaminicos; ou antitússicos, ou um agente broncodilatador; ou um bloqueador do recetor de angiotensina; ou um agente anti-infeccioso.
Quando os compostos de formula I são administrados em conjunto com outra terapia imunossupressora / imunomoduladora, anti-inflamatória, quimioterapêutica ou anti-infecciosa, as doses do composto imunossupressor, imunomodulador, anti-inflamatório, quimioterapêutico ou anti-infeccioso coadministrado variarão, evidentemente, dependendo do tipo de cofármaco utilizado, e.g. se é um esteroide ou um inibidor de calcineurina, do fármaco especifico utilizado, da condição a ser tratada e outros mais.
Um composto da fórmula (I) pode ser também utilizado com vantagem em associação entre si ou em associação com outros agentes terapêuticos, especialmente outros agentes antiproliferativos. Tais agentes antiproliferativos incluem inibidores de aromatase; antiestrogénios; inibidores de topoisomerase I; inibidores de topoisomerase II; agentes ativos de microtúbulos; agentes alquilantes; inibidores de histona-desacetilase; compostos que induzem processos de diferenciação celular; inibidores da ciclooxigenase; inibidores de MMP; inibidores de mTOR; antimetabolitos antineoplásicos; compostos de platina; compostos que visam/diminuem uma atividade cinase de proteínas ou lípidos e outros compostos antiangiogénicos; compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de uma fosfatase de proteínas ou lípidos; agonistas de gonadorrelina; antiandrogénios; inibidores de metionina-aminopeptidase; bisfosfonatos; modificadores da resposta biológica; anticorpos antiproliferativos; inibidores de heparanase; inibidores de isoformas oncogénicas de Ras; inibidores de telomerase; inibidores de proteassoma; agentes utilizados no tratamento de malignidades hematológicas; compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de Flt-3; inibidores de Hsp90; temozolomida (TEMODAL®); e leucovorina. 0 termo "inibidor de aromatase", como aqui utilizado, refere-se a um composto que inibe a produção de estrogénios, i.e., a conversão dos substratos androstenodiona e testosterona em estrona e estradiol, respetivamente. 0 termo inclui esteroides, especialmente atamestano, exemestano e formestano; e, em particular, não-esteroides, especialmente aminoglutetimida, rogletimida, piridoglutetimida, trilostano, testolactona, cetoconazole, vorozole, fadrozole, anastrozole e letrozole. 0 exemestano pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial AROMASIN. 0 formestano pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial LENTARON. 0 fadrozole pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial AFEMA. 0 anastrozole pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial ARIMIDEX. 0 letrozole pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial FEMARA ou FEMAR. A aminoglutetimida pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial ORIMETEN. Uma associação da invenção que compreende um agente quimioterapêutico que é um inibidor de aromatase é particularmente útil para o tratamento de tumores positivos para os recetores de hormonas, e.g., tumores da mama. 0 termo "antiestrogénio", como aqui utilizado, refere-se a um composto que antagoniza o efeito de estrogénios ao nivel do recetor de estrogénios. 0 termo inclui tamoxifeno, fulvestrante, raloxifeno e cloridrato de raloxifeno. 0 tamoxifeno pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial NOLVADEX. 0 cloridrato de raloxifeno pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial EVISTA. 0 fulvestrante pode ser formulado como divulgado na Patente U.S. N.° 4,659,516 ou pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial FASLODEX. Uma associação da invenção que compreende um agente quimioterapêutico que é um antiestrogénio é particularmente útil para o tratamento de tumores positivos para o recetor de estrogénio, e.g., tumores da mama. 0 termo "antiandrogénio", como aqui utilizado, refere-se a qualquer substância que é capaz de inibir os efeitos biológicos de hormonas androgénicas e inclui bicalutamida (CASODEX) , a qual pode ser formulada, e.g., como divulgado na Patente U.S. N.° 4, 636, 505. O termo "agonista de gonadorrelina", como aqui utilizado, inclui abarelix, goserrelina e acetato de goserrelina. A goserrelina é divulgada na Patente U.S. N.° 4,100,274 e pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial ZOLADEX. O abarelix pode ser formulado, e.g., como divulgado na Patente U.S. N.° 5,843,901. O termo "inibidor de topoisomerase I", como aqui utilizado, inclui topotecano, gimatecano, irinotecano, camptotecina e seus análogos, 9-nitrocamptotecina e o conjugado de camptotecina macromolecular PNU-166148 (composto Al na WO 99/17804) . O trinotecano pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial CAMPTOSAR. O topotecano pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial HYCAMTIN. O termo "inibidor de topoisomerase II", como aqui utilizado, inclui as antraciclinas, tais como doxorrubicina, incluindo a formulação lipossómica, e.g., CAELYX; daunorrubicina; epirrubicina; idarrubicina; nemorrubicina; as antraquinonas mitoxantrona e losoxantrona; e as podofilotoxinas etoposido e teniposido. 0 etoposido pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial ETOPOPHOS. 0 teniposido pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial VM 26-BRISTOL. A doxorrubicina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial ADRIBLASTINA ou ADRIAMICINA. A epirrubicina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial FARMORUBICINA. A idarrubicina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial ZAVEDOS. A mitoxantrona pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial NOVANTRONE.
0 termo "agente ativo de microtúbulos" refere-se a agentes de estabilização de microtúbulos, desestabilização de microtúbulos e inibidores da polimerização de microtubulina incluindo taxanos, e.g., paclitaxel e docetaxel; alcaloides de vinca, e.g., vinblastina, especialmente sulfato de vinblastina; vincristina, especialmente sulfato de vincristina e vinorrelbina; discodermolidas; colquicina; e epotilonas e derivados das mesmas, e.g., epotilona B ou D ou derivados da mesma. 0 paclitaxel pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., TAXOL. 0 docetaxel pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial TAXOTERE. 0 sulfato de vinblastina pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial VINBLASTINA R.P. 0 sulfato de vincristina pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial FARMISTIN. A discodermolida pode ser obtida, e.g., como divulgado na Patente U.S. N.° 5,010,099. Estão também
incluídos os derivados de epotilonas que são divulgados nas WO 98/10121, Patente U.S. N.° 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 e WO 00/31247. A epotilona A e/ou B são especialmente preferidas. O termo "agente alquilante", como aqui utilizado, inclui ciclofosfamida, ifosfamida, melfalano ou nitrosoureia (BCNU ou Gliadel). A ciclofosfamida pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial CICLOSTINA. A ifosfamida pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial HOLOXAN. O termo "inibidores de histona-desacetilase" ou "inibidores de HDAC" refere-se a compostos que inibem a histona-desacetilase e que possuem atividade antiproliferativa. Isto inclui os compostos divulgados na WO 02/22577, especialmente 77-hidroxi-3-[4-[ [ (2- hidroxietil)[2-(lA-indol-3-il)etil]-amino]metil]fenil]-2E- 2-propenamida, 2V-hidroxi-3- [4- [ [ [2- (2-metil-li7-indol-3-il) -etil]-amino] metil] fenil]-2E'-2-propenamida e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos. Ainda inclui especialmente o ácido suberoilanilida-hidroxâmico (SAHA). 0 termo "antimetabolito antineoplásico" inclui 5-fluorouracilo ou 5-FU; capecitabina; gencitabina; agentes de desmetilação de ADN, tais como 5-azacitidina e decitabina; metotrexato e edatrexato; e antagonistas de ácido fólico, tais como pemetrexedo. A capecitabina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial XELODA. A gencitabina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial GEMZAR. É também incluído o anticorpo monoclonal trastuzumab que pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial HERCEPTIN. 0 termo " composto de platina", como aqui utilizado, inclui carboplatina, cis-platina, cisplatina e oxaliplatina. A carboplatina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial CARBOPLAT. A oxaliplatina pode ser administrada, e.g., na forma como é comercializada, e.g., sob a marca comercial ELOXATIN. 0 termo "compostos que visam/diminuem uma atividade cinase de proteínas ou lípidos; ou uma atividade fosfatase de proteínas ou lípidos; ou outros compostos antiangiogénicos", como aqui utilizado, inclui inibidores de proteína tirosina-cinase e/ou serina e/ou treonina-cinase ou inibidores de lípido-cinase, e.g., a) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade dos recetores do fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGFR), tais como os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de PDGFR, especialmente compostos que inibem o recetor de PDGF, e.g., um derivado de iF-fenil-2-pirimidina-amina, e.g., imatinib, SU101, SU6668 e GFB-111; b) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade dos recetores do fator de crescimento de fibroblastos (FGFR); c) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade do recetor do fator de crescimento análogo a insulina I (IGF-IR), tais como os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de IGF-IR, especialmente os compostos que inibem o recetor de IGF-IR, tais como os compostos divulgados na WO 02/092599; d) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade da família de recetores tirosina-cinase Trk; e) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade da família de recetores tirosina-cinase Axl; f) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade do recetor de c-Met; g) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade do recetor tirosina-cinase Kit/SCFR; h) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de recetores tirosina-cinase C-kit - (parte da família PDGFR), tais como os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade da família de recetores tirosina-cinase c-Kit, especialmente compostos que inibem o recetor c-Kit, e.g., imatinib; i) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de membros da família c-Abl e seus produtos de fusão de genes, e.g., cinase BCR-Abl, tais como os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade dos membros da família c-Abl e seus produtos de fusão de genes, e.g., um derivado de N-fenil-2-pirimidina-amina, e.g., imatinib, PD180970, AG957, NSC 680410 ou PD173955 de ParkeDavis; j) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de membros da proteína-cinase C (PKC) e família Raf de serina/treonina-cinases, membros de MEK, SRC, JAK, FAK, PDK e membros da família Ras/MAPK, ou família de cinases PI (3), ou da família de cinases relacionadas com a cinase PI(3) e/ou membros da família de cinases dependentes de ciclina (CDK) e são especialmente os derivados de estaurosporina divulgados na Patente U.S. N.° 5,093,330, e.g., midostaurina; exemplos de outros compostos incluem, e.g., UCN-01; safingol; BAY 43-9006; Briostatina 1; Perifosina; Ilmofosina; RO 318220 e RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; compostos de isochinolina, tais como os divulgados na WO 00/09495; FTIs; PD184352; ou QAN697 (um inibidor de P13K); k) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de inibidores de proteína tirosina-cinase, tais como os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de inibidores de proteína tirosina-cinase incluem o mesilato de imatinib (GLIVEC) ou tirfostina. Uma tirfostina é preferencialmente um composto de baixo peso molecular (Mr < 1500), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, especialmente um composto selecionado da classe de benzilidenomalonitrilos ou S-arilbenzenomalonitrilos ou da classe de compostos de bissubstrato de quinolina, mais especialmente qualquer composto selecionado do grupo que consiste em Tirfostina A23/RG-50810, AG 99, Tirfostina AG 213, Tirfostina AG 1748, Tirfostina AG 490, Tirfostina B44, enantiómero ( + )de Tirfostina B44, Tirfostina AG 555, AG 494, Tirfostina AG 556, AG957 e adafostina éster adamantílico do ácido (4—{[(2,5—di— hidroxifenil)metil]amino}-benzoico, NSC 680410, adafostina; e
1) compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade da família do fator de crescimento epidérmico dos recetores tirosina-cinase (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 como homo- ou heterodímeros) , tais como os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade da família dos recetores do fator de crescimento epidérmico são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem membros da família dos recetores tirosina-cinase de EGF, e.g., recetor de EGF, ErbB2, ErbB3 e ErbB4 ou ligam-se a ligandos relacionados com EGF ou EGF, e são em particular os compostos, proteínas ou anticorpos monoclonais genérica e especificamente divulgados na WO 97/02266, e.g., o composto do Exemplo 39, ou nas EP 0 564 409; WO 99/03854; EP 0520722; EP 0 566 226; EP 0 787 722; EP 0 837 063; Patente U.S. N.° 5,747,498; WO 98/10767; WO 97/30034; WO 97/49688; WO 97/38983 e, especialmente, WO 96/30347, e.g., o composto conhecido como CP 358774; WO 96/33980, e.g., o composto ZD 1839; e WO 95/03283, e.g., o composto ZM105180, e.g., trastuzumab (HERCEPTIN), cetuximab,
Iressa, Tarceva, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016,
El.l, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.ll, E6.3 ou E7.6.3; e derivados de 7íí-pirrolo-[2,3-d] pirimidina que são divulgados na WO 03/013541.
Outros compostos antiangiogénicos incluem compostos que têm outro mecanismo para a sua atividade, e.g., não relacionado com a inibição de cinases de proteínas ou lípidos, e.g., talidomida (THALOMID) e TNP-470 .
Os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de uma fosfatase de proteínas ou lípidos são, e.g., inibidores de fosfatase 1, fosfatase 2A, PTEN ou CDC25, e.g., ácido ocadaico ou um derivado do mesmo.
Os compostos que induzem processos de diferenciação celular são e.g. ácido retinoico, α- γ- ou δ-tocoferol ou a- γ- ou δ-tocotrienol. O termo inibidor da ciclooxigenase, como aqui utilizado, inclui e.g., inibidores de Cox-2, ácido 2-arilaminofenilacético substituído com 5-alquilo e derivados, tais como celecoxib (CELEBREX), rofecoxib (VIOXX), etoricoxib, valdecoxib ou um ácido 5-alquil-2-arilaminofenilacético, e.g., ácido 5-metil-2-(2'-cloro-6'-fluoroanilino)fenilacético ou lumiracoxib. O termo "bisfosfonatos", como aqui utilizado, inclui ácido etridónico, clodrónico, tiludrónico, pamidrónico, alendrónico, ibandrónico, risedrónico e zoledrónico. O "ácido etridónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial DIDRONEL. O "ácido clodrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial BONEFOS. 0 "ácido tiludrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial SKELID. 0 "ácido pamidrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial AREDIA™. 0 "ácido alendrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial FOSAMAX. 0 "ácido ibandrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial BONDRANAT. 0 "ácido risedrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial ACTONEL. 0 "ácido zoledrónico" pode ser administrado, e.g., na forma como é comercializado, e.g., sob a marca comercial ZOMETA. 0 termo "inibidores de mTOR" refere-se a compostos que inibem o alvo mamífero da rapamicina (mTOR) e que possuem atividade antiproliferativa, tais como o sirolimus (Rapamune®), everolimus (Certican™), CCI-779 e ABT578. 0 termo "inibidor de heparanase", como aqui utilizado, refere-se a compostos que visam, diminuem ou inibem a degradação do sulfato de heparina. 0 termo inclui PI-88 . 0 termo "modificador da resposta biológica", como aqui utilizado, refere-se a uma linfocina ou interferões, e.g., interferão γ. 0 termo "inibidor de isoformas oncogénicas de Ras", e.g., H-Ras, K-Ras ou N-Ras, como aqui utilizado, refere-se a compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade oncogénica de Ras, e.g., um "inibidor da farnesil-transferase", e.g., L-744832, DK8G557 ou R115777 (Zarnestra). 0 termo " inibidor de telomerase", como aqui utilizado, refere-se a compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de telomerase. Os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de telomerase são especialmente compostos que inibem o recetor de telomerase, e.g., telomestatina. 0 termo "inibidor de metionina-aminopeptidase", como aqui utilizado, refere-se a compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de metionina-aminopeptidase. Os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de metionina-aminopeptidase são, e.g., bengamida ou um seu derivado. 0 termo "inibidor de proteassoma", como aqui utilizado, refere-se a compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade do proteassoma. Os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade do proteassoma incluem, e.g., PS-341 e MLN 341. 0 termo "inibidor de metaloproteinases da matriz" ou "inibidor de MMP", como aqui utilizado, inclui inibidores peptidomiméticos e não peptidomiméticos de colagénio, derivados de tetraciclina, e.g., o inibidor peptidomimético de hidroxamato batimastat e o seu análogo biodisponivel por via oral marimastat (BB-2516), prinomastat (AG3340), metastat (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B ou AAJ996. 0 termo "agentes utilizados no tratamento de malignidades hematológicas", como aqui utilizado, inclui inibidores de tirosina-cinase semelhantes a FMS, e.g., compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de recetores tirosina-cinase semelhantes a FMS (Flt-3R); interferão, l-b-D-arabinofuranosilcitosina (ara-c) e bissulfano; e inibidores de ALK, e.g., compostos que visam, diminuem ou inibem a cinase de linfoma anaplásico.
Os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade de recetores tirosina-cinase semelhantes a FMS (Flt-3R) são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem membros da família de recetores-cinase Flt-3R, e.g., PKC412, midostaurina, um derivado de estaurosporina, SU11248 e MLN518. 0 termo "inibidores de HSP90", como aqui utilizado, inclui compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade ATPase intrínseca de HSP90; degradando, visando, diminuindo ou inibindo as proteínas clientes de HSP90 através da via do proteassoma ubiquitina. Os compostos que visam, diminuem ou inibem a atividade ATPase intrínseca de HSP90 são especialmente compostos, proteínas ou anticorpos que inibem a atividade ATPase de HSP90, e.g., 17-alilamino,17-desmetoxigeldanamicina (17AAG), um derivado de geldanamicina, outros compostos relacionados com geldanamicina, radicicol e inibidores de HDAC. 0 termo "anticorpos antiproliferativos", como aqui utilizado, inclui trastuzumab (Herceptin™), Trastuzumab-DMl, erlotinib (Tarceva™), bevacizumab (Avastin™), rituximab (Rituxan®), PR064553 (anti-CD40) e anticorpo 2C4. Por anticorpos entende-se, e.g., anticorpos monoclonais intactos, anticorpos policlonais, anticorpos multiespecíficos preparados a partir de pelo menos dois anticorpos intactos, e fragmentos de anticorpos desde que exibam a atividade biológica desejada.
Para o tratamento de leucemia mieloide aguda (AML), os compostos de fórmula (I) podem ser utilizados em associação com terapias para leucemia padrão, especialmente em associação com terapias utilizadas para o tratamento de AML. Em particular, os compostos de fórmula (I) podem ser administrados em associação com, e.g., inibidores da farnesil-transferase e/ou outros fármacos úteis para o tratamento de AML, tais como Daunorrubicina, Adriamicina, Ara-C, VP-16, Teniposido, Mitoxantrona, Idarrubicina, Carboplatina e PKC412.
Um composto da fórmula (I) pode ser também utilizado com vantagem em associação entre si ou em associação com outros agentes terapêuticos, especialmente outros agentes antimaláricos. Tais agentes antimaláricos incluem proguanil, clorproguanil, trimetoprim, cloroquina, mefloquina, lumefantrina, atovaquona, pirimetamina-sulfadoxina, pirimetamina-dapsona, halofantrina, quinina, quinidina, amodiaquina, amopiroquina, sulfonamidas, artemisinina, artefleno, arteméter, artesunato, primaquina, NO inalado, L-arginina, Dipropilenotriamina NONOato (doador de NO) , Rosiglitazona (agonista de PPARy), carvão ativado, Eritropoietina, Levamisol e pironaridina.
Um composto da fórmula (I) pode ser também utilizado com vantagem em associação entre si ou em associação com outros agentes terapêuticos, tais como utilizados para o tratamento de Leishmaniose, Tripanossomíase, Toxoplasmose e Neurocisticercose. Tais agentes incluem sulfato de cloroquina, atovaquona-proguanil, arteméter-lumefantrina, sulfato de quinina, artesunato, quinina, doxiciclina, clindamicina, antimoniato de meglumina, estibogluconato de sódio, miltefosina, cetoconazole, pentamidina, anfotericina B (AmB), lipossómico, paromomicina, eflornitina, nifurtimox, suramina, melarsoprol, prednisolona, benzonidazole, sulfadiazina, pirimetamina, clindamicina, trimetropim, sulfametoxazole, azitromicina, atovaquona, dexametasona, praziquantel, albendazole, beta-lactamas, fluoroquinolonas, macrólidos, aminoglicbsidos, sulfadiazina e pirimetamina. A estrutura dos agentes ativos identificados pelo n.° de código, nomes genéricos ou comerciais podem ser obtidos a partir da edição atual do compêndio de referência "The Merck índex" ou de bases de dados, e.g., Patents International, e.g., IMS World Publications.
Os compostos supramencionados que podem ser utilizados em associação com um composto da fórmula (I) podem ser preparados e administrados como descrito na técnica, tal como nos documentos citados acima.
Um composto da fórmula (I) pode ser também utilizado com vantagem em associação com processos terapêuticos conhecidos, e.g., a administração de hormonas ou, especialmente, radiação.
Um composto de fórmula (I) pode ser, em particular, utilizado como um radiossensibilizador, especialmente para o tratamento de tumores que exibem má sensibilidade à radioterapia.
Por "associação", pretende-se referir uma associação fixa numa forma de unidade de dosagem, ou um kit de partes para a administração associada, em que um composto da fórmula (I) e um parceiro de associação podem ser administrados independentemente ao mesmo tempo ou separadamente dentro de intervalos de tempo que permitem, em especial, que os parceiros de associação exibam um efeito cooperativo, e.g., sinérgico, ou qualquer combinação dos mesmos. Os termos "coadministração" ou "administração associada" ou semelhantes como aqui utilizados destinam-se a abranger a administração do parceiro de associação selecionado a um único indivíduo que o necessita (e.g. um doente), e destinam-se a incluir regimes de tratamento em que os agentes não são necessariamente administrados pela mesma via de administração ou ao mesmo tempo. 0 termo "associação farmacêutica" como aqui utilizada significa um produto que resulta da mistura ou combinação de mais do que um ingrediente ativo e inclui tanto associações fixas como não fixas dos ingredientes ativos. 0 termo "associação fixa" significa que os ingredientes ativos, e.g. um composto de fórmula I e um parceiro de associação, são ambos administrados a um doente simultaneamente na forma de uma única entidade ou dosagem. 0 termo "associação não fixa" significa que os ingredientes ativos, e.g. um composto de fórmula (I) e um parceiro de associação, são ambos administrados a um doente como entidades separadas simultaneamente, concomitantemente ou sequencialmente sem limites de tempo específicos, em que essa administração proporciona níveis terapeuticamente eficazes dos dois compostos no corpo do doente. A última também se aplica à terapia cocktail, e.g. a administração de três ou mais ingredientes ativos.
EXEMPLOS
Pormenores experimentais:
Os seguintes exemplos destinam-se a ilustrar a invenção e não são para ser interpretados como sendo limitativos da mesma. As temperaturas são indicadas em graus Celsius. Se não for mencionado de outro modo, todas as evaporações são realizadas sob pressão reduzida, tipicamente entre cerca de 15 mm Hg e 100 mm Hg (= 20-133 mbar). A estrutura dos produtos finais, intermediários e materiais de partida é confirmada por métodos analíticos padrão, e.g., microanálise e características espetroscópicas, e.g., MS, IR, RMN. As abreviaturas utilizadas são aquelas convencionais na técnica.
Todos os materiais de partida, unidades estruturais, reagentes, ácidos, bases, agentes desidratantes, solventes e catalisadores utilizados na síntese dos compostos da presente invenção estão comercialmente disponíveis ou podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos por um especialista com conhecimentos médios na matéria (Houben-Weyl 4th Ed. 1952, Methods of Organic Synthesis, Thieme, Volume 21) . Além disso, os compostos da presente invenção podem ser produzidos por métodos de síntese orgânica conhecidos por um especialista com conhecimentos médios na matéria como se mostra nos exemplos seguintes.
Abreviaturas ACN acetonitrilo
AcOH acético ácido aq. aquosa
Boc terc-butoxicarbonilo B0C2O dicarbonato de di-terc-butilo tBu terc-butilo tBuOH terc-butanol
BrettPhos 2-(Diciclo-hexilfosfino)-3,6- dimetoxi-2'-4'-6'-triisopropil-1,1'-bitenilo s 1 singleto largo COMU hexafluorofosfato de (l-ciano-2- etoxi-2- oxoetilidenaminooxi)dimetilamino-morfolino-carbénio cone. concentrada d dia(s) d dupleto dd dupleto de dupletos dba dibenzilidenoacetona DCM diclorometano DEA dietilamina DEAD azodicarboxilato de dietilo DEAP dietilaminopiridina DIPEA diisopropiletilamina DMF dimetilformamida DMME dimetoximetano DMSO dimetilsulfóxido DPPA azida de difenilfosforilo DPPF 1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno EDC cloridrato de 1-(3- dimetilaminopropil) -3-etilcarbodiimida eq. equivalente (s) ESI ionização por eletropulverização
Et3N trietilamina
Et20 éter dietilico
AcOEt acetato de etilo
EtOH etanol h hora (s) HATU hexafluorofosfato de 0- (7- azabenzotriazol-l-il) -Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurónio HBTU hexafluorofosfato de 0-(lH- benzotriazol-l-il) -Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurónio HMDS hexametildissilazano HOBT 1-hidroxi-benztriazole HPLC cromatografia liquida de alta eficiência IPA isopropanol LCMS cromatografia liquida com espetrometria de massa mCPBA ácido meta-cloroperoxibenzoico
MeOH metanol m multipleto min minuto (s) MS espetrometria de massa mw micro-onda RMN espetrometria de ressonância magnética nuclear
NaOtBu terc-butóxido de sódio NP fase normal OBD densidade de leito ótima
Pd2 (dba)3 tris(dibenzilidenoacetona) dipaládio PL-HCO3 MP SPE Cartucho de bicarbonato suportado em polímero para remoção de ácido prep. preparativa PPh3 trifenilfosfina q quarteto
Rac-BINAP 2,2'-bis(di-p-tolilfosfino) -1,1'- binaftilo racémico RP fase inversa
Tr tempo de retenção ta temperatura ambiente
RuPhos 2-diciclo-hexilfosfino-2',6'-di- isopropoxi-1,1'-bifenilo sat. saturado SCX-2 poliestireno macroporoso de ácido sulfónico suportado em polímero sol. solução t tripleto TBME éter terc-butílico e metílico TBAF fluoreto de tetrabutilamónio TBDMSC1 cloreto de terc- butildimetilsililo
Tetrametil-t-butil-XPhos 2-di-t-butilfosfino-3,4,5,6- tetrametil-2',4',6'— triisopropilbifenilo TFA ácido trifluoroacético THF tetra-hidrofurano TLC cromatografia em camada fina UPLC cromatografia líquida de ultra eficiência XPhos 2-diciclo-hexilfosfino-2' , 4' , 6 ' - triisopropilbifenilo
Pd[RuPhos] (2-diciclo-hexilfosfino-2',6'- diisopropil-1,1'-bifenil) (2-(2-aminoetil)fenil)paládio(II) 0 equipamento de micro-ondas utilizado é um
Biotage Initiator®
Todos os compostos são denominados utilizando o
AutoNom.
Preparação de Exemplos - Procedimentos Gerais
a) (R)-pirrolidin-3-ol e um cloreto de ácido de fórmula R4C(0)C1 ou ácido carboxílico de fórmula R4C(0)0H foram feitos reagir para preparar uma amida de fórmula geral II. Os especialistas na técnica aperceber-se-ão que há muitas maneiras conhecidas para preparar amidas. Por exemplo, ver Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), ppl0827- 10852 e referências citadas no mesmo. Foram utilizados os seguintes métodos gerais i - ii. i. Uma sol. do ácido carboxílico e DMF (1 eq.) em DCM foi tratada com cloreto de oxalilo (1,5 eq.) durante lha 3 °C. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, dissolvida em DCM e adicionada a uma sol. de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-ol (1,0 eq.) e Et3N (2,5 eq.) em DCM a 3 °C. A mistura resultante foi agitada vigorosamente a 3 °C durante 1 h, em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com AcOEt e filtrado. 0 resíduo foi lavado com AcOEt, e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida e purificados por cromatografia flash. ii. Uma sol. de um cloreto de ácido comercial (1,0 eq.) em DCM foi adicionada a uma sol. de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-ol (1,0 eq.) e Et3N (2,5 eq.) em DCM a 3 °C. A mistura resultante foi agitada vigorosamente a 3 °C durante 1 h, em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com AcOEt e filtrado. O resíduo foi lavado com AcOEt e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida e purificados por cromatografia flash. As condições típicas para as reações de formação de ligação amida são exemplificadas na secção B) Condições de formação de ligação amida abaixo. b) Os mesilatos dos compostos de fórmula geral II foram preparados por condições habituais, preferencialmente por reação de II com cloreto de metanossulfonilo (2 eq.) e Et3N (2 eq.) em DCM a 0 °C. c) Os compostos de fórmula geral V foram preparados fazendo reagir 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol IV com compostos de fórmula geral III na presença de uma base adequada tal como hidreto de sódio (NaH) e solvente orgânico polar tal como DMF sob condições de gás inerte a 50 °C. As condições típicas para essas reações são exemplificadas na secção C) Condições de introdução da cadeia lateral abaixo. d) O acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig entre V e um halogeneto de arilo da fórmula geral R2-X', onde X'=bromo ou iodo foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais utilizando uma combinação de catalisador de Pd/ligando, tal como preferencialmente Pd2(dba)3/2-(diciclo-hexilfosfino)bifenilo ou Pd2 (dba)3/2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-triisopropil-bifenilo ou bis (tri-t-butilfosfina)paládio e uma base, tal como preferencialmente NaOtBu, e solvente orgânico tal como preferencialmente tolueno. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 80-120 °C, preferencialmente 110 °C e foi preferencialmente realizada num reator de micro-ondas. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. Os compostos finais foram purificados por cromatografia de fase normal ou inversa. As condições típicas para as reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na secção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo.
Esquema 2
a) (S)-3-((3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6- il)oxi)pirrolidina-l-carboxilato de terc-butilo (composto VIII) foi preparado fazendo reagir 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol IV com um composto de fórmula geral VII por um dos seguintes métodos 1) para X=mesilato, os compostos IV e VII foram feitos reagir na presença de uma base adequada tal como hidreto de sódio (NaH) e um solvente orgânico polar DMF sob condições de gás inerte à temperatura ambiente ii) para X = H, os compostos de fórmula geral IV e VII foram feitos reagir utilizando condições de Mitsunobu habituais, preferencialmente utilizando Ph3P (1,4 eq.) e DEAD (1,4 eq.) num solvente orgânico tal como THF sob condições de gás inerte a uma temperatura de preferencialmente 70 °C. As condições típicas para essas reações são exemplificadas na secção C) Condições de introdução da cadeia lateral abaixo. b) O acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig entre VIII e um halogeneto de arilo da fórmula geral R2-X' em que X'=bromo ou iodo foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais utilizando uma combinação de catalisador de Pd/ligando tal como preferencialmente Pd2 (dba) 3/X-Phos, Pd2 (dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)-BINAP ou bis(tri-t-butilfosfina)paládio e uma base, tal como preferencialmente NaOtBu, CS2CO3 ou K3PO4 e um solvente orgânico tal como preferencialmente tolueno, dioxano ou THF. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 60-120 °C e foi preferencialmente realizada num reator de micro-ondas. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. As condições típicas para as reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na secção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo. c) A desproteção do N-BOC de compostos de fórmula geral IX foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais utilizando, entre os ácidos possíveis, preferencialmente ácido trifluoroacético e solvente orgânico, preferencialmente DCM. A reação foi preferencialmente realizada à temperatura ambiente. d) Um composto da fórmula geral X e um cloreto de ácido de fórmula R4C(0)C1 ou um ácido carboxílico de fórmula R4C(0)0H foram feitos reagir para preparar uma amida de fórmula geral VI utilizando condições de acoplamento de amida habituais: além dos métodos descritos no Esquema 1, passo a) , os reagentes de acoplamento preferidos foram HBTU, HOBt/EDC, COMU/DIPEA. Os acoplamentos foram realizados num solvente orgânico tal como preferencialmente DMF ou DCM e os compostos finais foram purificados por cromatografia de fase normal ou inversa. As condições típicas para as reações de formação de ligação amida são exemplificadas na secção B) condições de formação de ligação amida abaixo.
Esquema 3
a) 3,4-Di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol IV foi protegido no O utilizando procedimentos de sililação padrão, utilizando um reagente de sililação, preferencialmente TBDMSC1 e uma base, preferencialmente NaH, num solvente orgânico, preferencialmente THF à temperatura ambiente. b) 0 acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig entre XI e um halogeneto de arilo da fórmula geral R2-X', em que X'=bromo ou iodo foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais utilizando uma combinação de catalisador de Pd/ligando tal como preferencialmente Pd2 (dba) 3/X-Phos, Pd2 (dba) 3/diciclo-hexilfosfino-2 ' , 4 ' , 6 ' - triisopropilbifenilo ou bis(tri-t-butilfosfina)-paládio e uma base, tal como preferencialmente NaOtBu e um solvente orgânico tal como preferencialmente tolueno. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 110-140 °C e foi preferencialmente realizada num reator de micro-ondas. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. As condições típicas para as reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na secção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo. c) A desproteção do O-TBDMS de compostos de fórmula geral XII foi realizada sob condições de desproteção habituais utilizando preferencialmente TBAF e um solvente orgânico, preferencialmente THF. A reação foi preferencialmente realizada à temperatura ambiente d) Os compostos de fórmula geral XIII foram acoplados com mesilatos de fórmula geral III utilizando uma base adequada tal como preferencialmente hidreto de sódio (NaH) ou K2CO3 e solvente orgânico polar tal como DMF sob condições de gás inerte à temperatura ambiente ou temperaturas elevadas até 100 °C. Os compostos finais foram purificados por cromatografia de fase normal ou inversa. As condições típicas para essas reações são exemplificadas na secção C) Condições de introdução da cadeia lateral abaixo.
Esquema 4
a) Compostos de fórmula geral XIII (preparados como se descreve no Esquema 3) foram feitos reagir com compostos de fórmula geral por um dos seguintes métodos 1) para X=mesilato, os compostos XIII e VII foram feitos reagir na presença de uma base adequada tal como hidreto de sódio (NaH) e um solvente orgânico polar DMF sob condições de gás inerte à temperatura ambiente ii) para X = H, os compostos de fórmula geral XIII e VII foram feitos reagir utilizando condições de Mitsunobu habituais, preferencialmente utilizando Ph3P (1,4 eg.) e DEAD (1,4 eq.) num solvente orgânico tal como THF sob condições de gás inerte a uma temperatura de preferencialmente 70 °C. As condições típicas para essas reações são exemplificadas na secção C) Condições de introdução da cadeia lateral abaixo. b) A desproteção do N-BOC foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais utilizando, entre os ácidos possíveis, preferencialmente o ácido trifluoroacético e um solvente orgânico preferencialmente CH2CI2. A reação foi preferencialmente realizada à temperatura ambiente. c) A formação da ligação amida foi realizada utilizando compostos de fórmula geral XV e um cloreto de ácido de fórmula R4C(0)C1 ou ácido carboxílico de fórmula R4C(0)0H para preparar uma amida de fórmula geral VI; foram utilizadas condições de acoplamento de ligação amida habituais, como se descreve no Esquema 1, passo a) . Além dos métodos descritos no Esquema 1, passo a), foi utilizado o acoplamento de ácidos carboxílicos utilizando HOBt/EDC ou o acoplamento utilizando cloroformatos ou cloretos carbâmicos. Os acoplamentos foram realizados num solvente orgânico tal como preferencialmente DMF ou DCM e os compostos finais foram purificados por cromatografia de fase normal ou inversa. As condições típicas para as reações de formação de ligação amida são exemplificadas na secção B) Condições de formação de ligação amida abaixo.
Esquema δ
a) 7-Cloro-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [l,4]oxazina XVII foi preparada a partir de 7-cloro-lH-pirido[3,4- b] [1,4]oxazin-2-ona XVI por métodos de redução habituais, utilizando como agente de redução preferencialmente BH3*THF e como solvente preferencialmente THF. XVI fica disponível através da nitração em fluxo de 1-óxido de 2-cloro-5-(2-metoxi-2-oxoetoxi)piridina, seguido de redução e ciclização. b) 0 acoplamento cruzado entre XVII e um halogeneto de arilo da fórmula geral R2-X', em que X'=bromo ou iodo foi realizado sob condições de Buchwald-Hartwig habituais utilizando uma combinação de catalisador de Pd/ligando tal como preferencialmente Pd2 (dba) 3/X-Phos, e uma base, tal como preferencialmente CS2CO3 e um solvente orgânico tal como preferencialmente dioxano. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 100 °C e poderia ser realizada num reator de micro-ondas. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. As condições típicas para as reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na secção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo. c) A hidroxilação de XVIII foi realizada utilizando KOH aq. e uma combinação de catalisador de Pd/ligando tal como preferencialmente Pd2 (dba)3/tetrametil-terc-butil-Xphos e um solvente orgânico tal como preferencialmente dioxano. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 100 °C. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. d) O acoplamento de um composto de fórmula geral XIX com um composto de fórmula geral VII foi realizado utilizando uma base adequada tal como hidreto de sódio (NaH, CS2CO3, K2CO3) e solvente orgânico polar tal como DMF sob condições de gás inerte a uma temperatura de preferencialmente 60-80 °C. As condições típicas para essas reações são exemplificadas na secção C) Condições de introdução da cadeia lateral abaixo. e) A desproteção do N-BOC foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais utilizando, entre os ácidos possíveis, preferencialmente ácido trifluoroacético e um solvente orgânico preferencialmente CH2CI2. A reação foi preferencialmente realizada à temperatura ambiente. f) A formação da ligação amida foi realizada utilizando compostos de fórmula geral XXI e um cloreto de ácido de fórmula R4C(0)C1 ou ácido carboxílico de fórmula R4C(0)0H para preparar uma amida de fórmula geral XXII; foram utilizadas condições de acoplamento de ligação amida habituais, como se descreve no Esquema 1, passo a), além disso, foi aplicado o acoplamento de ácidos carboxílicos utilizando HOBt/EDC. Os acoplamentos foram realizados num solvente orgânico tal como preferencialmente DMF ou DCM e os compostos finais foram purificados por cromatografia de fase normal ou inversa. As condições típicas para as reações de formação de ligação amida são exemplificadas na secção B) Condições de formação de ligação amida abaixo.
Esquema 6
a) A hidroxilação de 7-cloro-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b] [l,4]oxazina XVII para dar 2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-ol XXIII foi realizada utilizando KOH aq. e uma combinação de catalisador de Pd/ligando tal como preferencialmente Pd2 (dba)3/tetrametil-terc-butil-Xphos e um solvente orgânico tal como preferencialmente dioxano. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 100 °C. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. b) O acoplamento do composto XXIII com mesilato VII foi efetuado utilizando uma base adequada tal como hidreto de sódio (NaH) e solvente orgânico polar tal como DMF sob condições de gás inerte a uma temperatura de preferencialmente 80 °C. As condições típicas para essas reações são exemplificadas na secção C) Condições de introdução da cadeia lateral abaixo. c) O acoplamento cruzado entre XXIV e um halogeneto de arilo da fórmula geral R2-X', em que X'=bromo ou iodo foi realizada sob condições de Buchwald-Hartwig habituais utilizando uma combinação de catalisador de Pd/ligando tal como preferencialmente Pd2 (dba) 3/X-Phos ou Pd2 (dba) 3/ (rac) -BINAP, e uma base, tal como preferencialmente CS2CO3 ou NaOtBu e um solvente orgânico tal como preferencialmente dioxano ou tolueno. A reação foi preferencialmente agitada a uma temperatura de aproximadamente 100 °C e poderia ser realizada num reator de micro-ondas. A reação foi preferencialmente realizada sob um gás inerte tal como azoto ou árgon. As condições típicas para as reações de acoplamento cruzado de Buchwald-Hartwig são exemplificadas na secção A) Aminações ou hidroxilações de Buchwald abaixo. d) A desproteção do N-BOC foi realizada sob condições de desproteção de BOC habituais utilizando, entre os ácidos possíveis, preferencialmente ácido trifluoroacético e solvente orgânico preferencialmente CH2CI2. A reação foi preferencialmente realizada à temperatura ambiente e) A formação da ligação amida foi realizada utilizando compostos de fórmula geral XXI e um cloreto de ácido de fórmula R4C(0)C1 ou ácido carboxílico de fórmula R4C(0)0H para preparar uma amida de fórmula geral XXII; foram utilizadas condições de acoplamento de ligação amida habituais, como se descreve no Esquema 1, passo a) ou foi aplicado o acoplamento de ácidos carboxílicos utilizando HBTU, HOBt/EDC ou HATU. Os acoplamentos foram realizados num solvente orgânico tal como preferencialmente DMF ou DCM e os compostos finais foram purificados por cromatografia de fase normal ou inversa. As condições típicas para as reações de formação de ligação amida são exemplificadas na secção B) Condições de formação de ligação amida abaixo.
Informação geral sobre cromatografia Método de LCMS Ml (TrMi) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 50 mm HPLC-tipo de coluna: Acquity UPLC HSS T3, 1,8 ym HPLC-eluente: A) água + 0,05% em volume de ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM B) ACN + 0,04% em volume de ácido fórmico
HPLC-gradiente: 2 - 98% B em 1,4 min, 98% B
0,45 min, caudal =1,2 mL / min HPLC-temperatura da coluna: 50 °C Método de LCMS M2 (TrM2) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18, 2,7 ym HPLC-eluente A) água + 0,05% em volume de ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM B) ACN + 0,04% em volume de ácido fórmico HPLC-gradiente: 2 - 98% B em 1,4 min, 0,75 min 98% B, caudal =1,2 mL / min
HPLC-temperatura da coluna: 50 °C Método de LCMS M3 (TrM3) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18, 2,7 ym HPLC-eluente A) água + 0,05% em volume de ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM B) ACN + 0,04% em volume de ácido fórmico HPLC-gradiente: 2 - 98% B em 8,5 min, 1 min 98%
B, caudal = 1,2 mL / min HPLC-temperatura da coluna: 50 °C Método de LCMS M4 (TrM4) HPLC-dimensões da coluna: 4,6 x 50 mm HPLC-tipo de coluna: SunFire C18, 5 ym HPLC-eluente A) água + 0,1% em volume de
TFA, B) ACN + 0,1% em volume de TFA HPLC-gradiente: 5 - 100% B em 8,0 min B, caudal = 2 mL / min
HPLC-temperatura da coluna: 40 °C Método de LCMS M5 (TrM5) HPLC-dimensões da coluna: 0,46x25 cm HPLC-tipo de coluna: Chiralcel OJ-H (1189) HPLC-eluente EtOH/MeOH 60:40 HPLC-gradiente: isocrático, caudal=0,5 mL/min
Detetor: UV 220 nm Método de LCMS M6 (TrMe) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18, 2,7 ym HPLC-eluente A) água + 0,05% TFA, B) ACN +
0,04% TFA HPLC-gradiente: 2 - 98% B em 1,4 min, 0,75 min 98% B, caudal =1,2 mL / min
HPLC-temperatura da coluna: 50 °C Método de LCMS M7 (TrM7) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18, 2,7 ym HPLC-eluente A) água + 0,05% TFA, B) ACN +
0,04% TFA HPLC-gradiente: 10 - 95% B em 3,0 min, 1 min 95% B, caudal =1,2 mL / min
HPLC-temperatura da coluna: 50 °C Método de LCMS M8 (TrMs) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18 2,7 ym HPLC-eluente: A) água + 0,05% ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM, B) acetonitrilo + 0,04% ácido fórmico HPLC-gradiente: 10 - 95% B em 3,0 min, caudal = 1,2 mL/min Método de LCMS M9 (TrM9)
Método de LCMS MIO (TrMio) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 50 mm HPLC-tipo de coluna: Acquity UPLC BEH C18 1,7 ym HPLC-eluente: A) água + 0,1% em volume de ácido fórmico, B) acetonitrilo HPLC-gradiente: 20 - 25% B em 1,00 min, em seguida 25 - 95% B em 3,20 min, em seguida 95 - 100% B em 0,10 min, em seguida 100% durante 0,20 min, caudal =0,7 mL/min Método de LCMS Mil (TrMii) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 50 mm HPLC-tipo de coluna: Acquity UPLC BEH C18 1,7 ym HPLC-eluente: A) água + 0,1% em volume de ácido fórmico, B) acetonitrilo HPLC-gradiente: 5 - 10% B em 1,00 min, em seguida 10 - 90% B em 3,00 min, em seguida 90 - 100% B em 0,10 min, em seguida 100% durante 0,40 min, caudal = 0,7 mL/min Método de LCMS M12 (TrMi2) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18 2,7 ym HPLC-eluente: A) água + 0,1% em volume de TFA, B) acetonitrilo HPLC-gradiente: 10 -95% B ao longo de 1,7 min e 1.2 mL/min como caudal de solvente e, em seguida, 95% B ao longo de 0,7 min, caudal = 1,4 mL/min. Método de LCMS M13 (TrMi3) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18 2,7 ym HPLC-eluente: A) água + 0,05% ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM, B) acetonitrilo + 0,04% ácido fórmico HPLC-gradiente: 10 - 95% B em 3,7 min, caudal = 1.2 mL / min Método de LCMS Ml4 (TrMi4) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 30 mm HPLC-tipo de coluna: Ascentis Express C18, 2,7 ym HPLC-eluente A) água + 0,05% ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM, B) acetonitrilo + 0,04% ácido fórmico HPLC-gradiente: 10 - 95% B em 1,5 min, 1 min 95% B, caudal =1,2 mL / min Método de LCMS M15 (TrMis) HPLC-dimensões da coluna: 0,46x25 cm HPLC-tipo de coluna: Chiralcel OD-H (1194)
HPLC-eluente Hexano/EtOH 50:50 + 0,05% DEA HPLC-gradiente: isocrático, caudal=0,5 mL/min
Detetor: UV 220 nm Método de LCMS Ml 6 (TrMie) HPLC-dimensões da coluna: 2,1 x 50 mm HPLC-tipo de coluna: Acquity UPLC HSS T3, 1,8 ym HPLC-eluente: A) água + 0,05% em volume de ácido fórmico + acetato de amónio 3,75 mM B) ACN + 0,04% em volume de ácido fórmico HPLC-gradiente: 5 - 98% B em 1,4 min, 98% B 0,4
min, caudal = 1,0 mL / min HPLC-temperatura da coluna: 60 °C
Difração de raios X sobre pó
Instrumentação:
Método XI
Instrumento Bruker D8 GADDS Discover
Irradiação CuKa (40 kV, 40 mA)
Detetor HI-STAR Area detector
Gama de varrimento 6°-39° (valor 2 teta)
Determinação do ponto de fusão: O ponto de fusão foi determinado por Calorimetria Diferencial de Varrimento (DSC) . A DSC foi como registada num DSC Q2000 da TA Instruments utilizando uma velocidade de aquecimento de 10 °C/min. Uma amostra de 0,6 mg foi pesada para um recipiente de alumínio padrão (recipiente + tampa, TA 900786.901, 900779.901). O instrumento foi posto a funcionar utilizando o Térmico Vantagem Q-Series software V,2,6,0,367 e o software Thermal Advantage V4.6.9. Os eventos térmicos foram caracterizados utilizando Universal Analysis V4.3A Construção 4.3.0.6. A amostra foi medida contra um recipiente de amostra sem orifício. A amostra foi tratada de acordo com o protocolo a seguir:
Passo 1: EQUILIBRAR A 0 °C
Passo 2: Subir a 10 °C/min até 300 °C
Preparação de exemplos
Nos casos em que é especificado que os compostos foram preparados da maneira descrita para um exemplo anterior, o especialista aperceber-se-á que os tempos de reação, o número de equivalentes de reagentes e as temperaturas de reação podem ser modificados para cada reação especifica, e que, mesmo assim, pode ser necessário ou desejável utilizar diferentes condições de processamento ou purificação.
Exemplo AI: (S)-(3-((4-(6-metoxi-5-metilpiridin- 3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin-l-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona (de acordo com o Esquema 1) al) (R)-(3-hidroxipirrolidin-l-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona
Uma solução, mantida sob agitação, de ácido tetra-hidro-2H-pirano-4-carboxílico (registo CAS 5337-03-1) (0,200 g, 1,537 mmol) e DMF (0,012 mL, 0,154 mmol) em DCM (3 mL) foi tratada com cloreto de oxalilo (0,202 mL, 2,305 mmol) a 3 °C. Após 1 h a 3 °C, a mistura reacional foi
concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi então dissolvido em DCM (2 mL) e adicionado a uma solução, mantida sob agitação, de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-ol (registo CAS 104706-47-0) (0,190 g, 1,537 mmol), Et3N (0,535 mL, 3,84 mmol) em DCM (3 mL) a 3 °C. Após lha 3 °C, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com AcOEt (10 mL) e filtrado. O resíduo foi lavado com AcOEt, e os filtrados combinados foram concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (gradiente de DCM / metanol) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. ESIMS : 200 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 4,61-4,50 (m, 1H) , 4,10-4,02 (m, 2H) , 3,77-3,40 (m, 6H) , 2,70-2,53 (m, 1H) , 2,20-1,85 (m, 4H), 1,75-1,69 (m, 3H). método alternativo a2: em vez de preparar o cloreto de ácido in situ, foi utilizado um cloreto de ácido comercialmente disponível como o cloreto de propanoílo (registo CAS 79-03-8). bl) (R)-metanossulfonato de 1-(tetra-hidro-2H-pirano-4-carbonil)pirrolidin-3-ilo
Uma solução, mantida sob agitação, de (R)—(3— hidroxipirrolidin-l-il) (tetra-hidro-2H-pirano-4-il) metanona (0,245 g, 1,230 mmol) em DCM (10 mL) foi tratada com Et3N (0,343 mL, 2,459 mmol) e cloreto de metanossulfonilo (0,192 mL, 2,45 9 mmol) a 0 °C. Após 1 h a 0 °C, foi adicionada água (20 mL) . A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de NaCl (20 mL) , seca com MgSCh, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por trituração com éter dietílico para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. ESIMS : 278 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 5,40-, 5,29 (m, 1H) , 4,10-4,02 (m, 2H) , 3, 94-3, 87 (m, 1H) , 3,82-3,56 (m. 3H) , 3,52-3,41 (m, 2H) , 3,11-3,04 (m, 3H) , 2,70-2,10 (m, 3H) , 2,02-2,87 (m, 2H), 1,72-1,57 (m, 2H). cl) (S)-(3-((3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin- 6-il)oxi)pirrolidin-l-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona
Uma solução, mantida sob agitação, de 3,4-di-hidro-2H-benzoxazin-6-ol (registo CAS 26021-57-8) (0,140 g, 0,926 mmol) em DMF (3 mL) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 0,445 g, 1,111 mmol) à ta. Após 10 min à ta, foi adicionado metanossulfonato de (R)-1-(tetra-hidro-2H-pirano-4-carbonil)pirrolidin-3-ilo (0,283 g, 1,019 mmol) . O frasco foi tapado e aquecido a 50 °C durante 3 h. Nesta altura, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em AcOEt (50 mL) e foi adicionada água (50 mL). A camada orgânica foi lavada com uma solução saturada de NaCl (20 mL) , seca com MgSCh, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (gradiente de DCM / metanol) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido cinzento amorfo. HPLC TrMio= 2,07 min; ESIMS: 333 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 6, 55-6, 50 (m, 1Η) , 6,15-6,11 (m, 1H) , 6, 07-6, 00 (m, 1H) , 5,77 (s 1, 1H) , 4, 88-4,74 (m, 1H) , 4,06-4,01 (m, 2H) , 3, 90-3,22 (m, 10H), 2,75-2,58 (m, 1H), 2,15-1,95 (m, 2H), 1,65-1,45 (m, 4H). dl) (S)-(3-((4-(6-metoxi-5-metilpiridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin-1-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona
Uma solução, mantida sob agitação, de (S) — (3 — ((3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin- 1-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona (0,050 g, 0,150 mmol) em tolueno (1 mL) foi tratada com 5-bromo-2-metoxi-3-metilpiridina (registo CAS 760207-87-2) (0,030 g, 0,150 mmol), NaOtBu (0,022 g, 0,226 mmol), 2-(diciclo-hexilfosfino)bifenilo (registo CAS 247940-06-3) e Pd2(dba)3 (0,004 g, 0,005 mmol) à ta sob árgon. O frasco reacional foi tapado e aquecido a 110 °C num reator de micro-ondas durante 3 h. Nesta altura, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (gradiente de ciclo-hexano / AcOEt) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado. HPLC TrMio= 2,85 min; ESIMS: 454 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) : δ 7, 90-7,85 (m, 1H) , 7,49-7,44 (m, 1H) , 6, 76-6, 69 (m, 1H) , 6, 32-6, 24 (m, 1H) , 6, 07-6, 02 (m, 1H) , 4, 86-4,73 (m, 1H) , 4,29-4,23 (m, 2H) , 4,02-3, 92 (m, 5H) , 3, 80-3,40 (m, 8H) , 2,85-2, 60 (m, 1H) , 2,25-1,91 (m, 5H), 1,85-1,50 (m, 4H). método alternativo d2: 2-(diciclo- hexilfosfino)bifenilo (registo CAS 247940-06-3) foi substituído por 2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'- triisopropilbifenilo (registo CAS 564483-18-7) método alternativo d3: 2-(diciclo- hexilfosfino)bifenilo (registo CAS 247940-06-3) e Pd2(dba)3 foi substituído por bis(tri-t-butilfosfina)paládio (registo CAS 53199-31-8)
Exemplos A2 a A43: Os compostos listados na Tabela 1 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo Al.
Tabela 1
Exemplo BI: {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona (de acordo com o Esquema 2)
a) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-1-carboxilico
Uma solução de 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (registo CAS 26021-57-8) (4, 0 g, 26,5 mmol) em DMF (150 mL) foi tratada com NaH (2,117 g, 52,9 mmol) durante 20 min a 20 °C. Foi adicionado éster terc-butilico do ácido (R)-3-metanossulfoniloxi-pirrolidina-l-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (9,13 g, 34,4 mmol). Depois de agitar durante 22 h à ta a mistura reacional foi concentrada até à secura, em seguida retomada com AcOEt, filtrada através de hyflo e o filtrado foi lavado com solução aq. sat. de Na2C03. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / isopropanol 100:0 a 85:15 em 40 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo. HPLC TrM8 =1,84 min; ESIMS: 321 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO): 6,52 (d, 1H), 6,12 (d, 1H) , 6,02 (m, 1H) , 5,76 (m, 1H) , 4,75 (s 1, 1H) , 4,01-40,5 (m, 2H) , 3,27-3,50 (m, 4H) , 3, 22-3,26 (m, 2H) , 1,95-2,08 (m, 2H), 1,39 (m, 9H). b) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma mistura de (S)-éster terc-butilico do ácido 3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-l-carboxilico (2,12 g, 6,62 mmol), 5-bromo-2-metanossulfonil- 3-metil-piridina (Intermediário IAl) (2,091 g, 7,94 mmol), NaOtBu (1,272 g, 13,23 mmol), ligando XPhos (0,158 g, 0,331 mmol) e Pd2(dba)3 (0,303 g, 0,331 mmol) em dioxano (3,5 mL) foi desgaseif icada e agitada durante 12 h a 110 °C. Foi adicionada solução aq. sat. de NaHCCb e a mistura reacional foi extraida com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de
sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre silica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 50:50) para proporcionar o composto em epígrafe. HPLC TrMi4 =1,25 min; ESIMS: 490 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,33 (d, 1H) , 7,43 (d, 1H) , 6,86 (d, 1H) , 6,59 (d, 1H) , 6,47 (m, 1H) , 4,69- 4,73 (m,12H), 4,23-4,28 (m, 2H) , 3,73-3,78 (m, 2H), 3,41- 3,58 (m, 4H) , 3,34 (s, 3H) , 2,69 (s, 3H) , 1,96-2,17 (m, 2H), 1,46 (s, 9H). c) 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de (S)-éster terc-butílico do ácido 3- [4- ( 6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxílico (1,5 g, 3,0 6 mmol) e TFA (0,23 6 mL, 3,0 6 mmol) em DCM (15 mL) foi agitada durante 1 h à ta. A mistura reacional foi arrefecida até 0 °C, foi adicionada solução sat. Na2C03 e a mistura reacional foram extraídos com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas para proporcionar o composto em epígrafe. HPLC TrM2=0, 6 6 min; ESIMS: 390 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,33 (d, 1H) , 7,43 (d, 1H) , 6,86 (d, 1H) , 6,58 (d, 1H) , 6,47 (m, 1H) , 4,68 (m, 1H) , 4,22-4,27 (m, 2H) , 3,73-3, 78 (m, 2H) , 3,33 (s, 3H) , 3,12-3,22 (m, 2H), 2, 86-3, 04 (m, 2H) , 2,68 (s, 3H), 1,88- 2,08 (m, 2H). d) {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin- 3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin- 1-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
Uma mistura de 4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (0,085 g, 0,218 mmol), cloreto de tetra-hidro-2H-pirano-4-carbonilo (registo CAS 40191-32-0) (0,049 mg, 0,327 mmol) e Et3N (0,046 mL, 0,327 mmol) em DCM (4 mL) foi agitada à ta durante 15 min. A mistura reacional foi concentrada até à secura. 0 produto em bruto foi purificado por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18, H2O + 0,1% de TFA / ACN + 0,1% de TFA 90:10 a 30:70 em 12 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco. HPLC TrM7 =1,62 min; ESIMS: 502 [ (M+H)+] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO) : δ 8,38-8,42 (m, 1H) , 7,72 (m, 1H) , 6,84 (d, 1H) , 6,67 (m, 1H) , 6, 50-6, 57 (m, 1H) , 4,82-4, 94 (m, 1H) , 4,20 (m, 2H) , 3,31 (s, 3H) , 3,28- 3,88 (m, 10H), 2,59-2,73 (m, 1H), 2,56 (s, 3H), 1,95-2,13 (m, 2H), 1,44-1, 62 (m, 4H) .
Exemplos B2 a B122: Os compostos listados na Tabela 2 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo Bl. _Tabela 2_
Exemplo Cl: 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro- pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo (de acordo com o Esquema 3)
a) 6-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-3,4-di- hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Sob árgon, NaH (2,96 g, 74,1 mmol) foi adicionado em porções a uma solução de 3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ol (registo CAS 26021-57-8) (5,60 g, 37,0 mmol) em THF (200 mL). Depois de agitar à ta durante 20 min, foi lentamente adicionado TBDMSC1 (registo CAS 18162-48-6) (7,26 g, 48,2 mmol) e a agitação foi prosseguida durante 1 h. A mistura reacional foi diluída com Et20, lavada com uma sol. aq. sat. de NaHCCb e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A fase orgânica foi seca sobre MgSCb, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 60:40 ao longo de 15 min) como um óleo amarelo (9,20 g, 94% de rendimento). HPLC TrMio= 3,65 min; ESIMS: 266 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,46 (d, 1H) , 6,08 (d, 1H) , 5,91 (m, 1H) , 5,71 (s 1, 1H) , 3,91-4,12 (m, 2H) , 3,12-3,28 (m, 2H) , 0,87-1,01 (s, 9H) , 0,03-0,21 (s, 3H) . b) 5-[6-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinonitrilo
Sob árgon, XPhos (registo CAS 564483-18-7) (0,79 g, 1,7 mmol) e Pd2(dba)3 (registo CAS 51364-51-3) (1,52 g, 1,7 mmol) foram adicionados a uma suspensão de 6-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (9,00 g, 33,2 mmol), 5-bromo-2-metoxi-nicotinonitrilo (registo CAS 941294-54-8) (7,79 g, 36,6 mmol), NaOtBu (4,79 g, 49,8 mmol) em tolueno (270 mL). A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante 1 h e foi concentrada para proporcionar um sólido castanho que foi lavado com uma mistura de DCM/MeOH (8:2) e eliminado por filtração. O filtrado foi concentrado, o resíduo obtido foi dissolvido em DCM/MeOH (8:2), filtrada sobre hyflo, o filtrado foi concentrado e triturado com MeOH para proporcionar o composto em epígrafe como sólido amarelo (10,14 g, 77% de rendimento). HPLC TrMn =3,89 min; ESIMS: 398 [ (M+H)+] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,35-8,51 (m, 1Η) , 8,16-8,31 (m, 1H) , 6, 60-6, 79 (m, 1H) , 6,15-6,32 (m, 1H) , 5, 92-6, 09 (m, 1H) , 4,00 (s, 3H) , 3,51-3,74 (m, 2H) , 0,87 (s, 9H), 0,07 (s, 6H). c) 5-(6-hidroxi-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metoxi-nicotinonitrilo
Foi adicionado TBAF (1M em THF) (37,7 mL, 37,7 mmol) a uma solução de 5-[ 6-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinonitrilo (10 g, 25,2 mmol) dissolvido em THF (200 mL). A solução foi agitada à ta durante 30 min, diluída com AcOEt, lavada com sol. aq. sat. de NaHC03 e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. As camadas aquosas foram retroextraídas com AcOEt, concentração das fases orgânicas após secagem sobre MgSCh proporcionou um resíduo castanho que foi dissolvido em DCM/MeOH (1:1) e filtrado sobre hyflo. A concentração e trituração com Et2<3 do filtrado proporcionaram o composto em epígrafe como um sólido castanho (6,63 g, 93% de rendimento). HPLC TrMio=2,56 min; ESIMS: 284 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,70 (s 1, 1Η) , 8,44 (d, 1H) , 8,28 (d, 1H) , 6,62 (d, 1H) , 6,12 (m, 1H) , 6,01 (d, 1H) , 4,11-4,32 (m, 2H) , 4,01 (s, 3H) , 3,54-3,68 (m, 2H). d) 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo
Sob árgon, foi adicionado NaH (31 mg, 0,78 mmol) a uma solução de 5-(6-hidroxi-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metoxi-nicotinonitrilo (100 mg, 0,35 mmol) em DMF (2 mL) e agitada à ta durante 5 min. Foi adicionado éster (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ίlico do ácido metanossulfónico (intermediário IC1) (98,0 mg, 0,35 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 4 h. Depois de arrefecer, foi adicionado NaH (0,5 eq., 8,47 mg, 0,21 mmol), a mistura reacional foi agitada à ta durante 5 min e foi adicionada éster (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ίlico do ácido metanossulfónico (intermediário IC1) (49,0 mg, 0,18 mmol). A mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 1 h. A concentração e purificação por RP-HPLC prep. (Sunfire PrepC18 OBD 30xl00mm, 5 ym; solvente A: H2O+0,l% em volume de TFA; solvente B: CH3CN + 0,1% em volume de TFA) proporcionou, após basificação das frações combinadas e extração com AcOEt, o composto em epígrafe como um sólido amarelo (72 mg, 43% de rendimento). HPLC TrMio=2,7 2 min; ESIMS: 465 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) : δ 8,36 (d, 1H) , 8,06 (t, 1H) , 6,78 (m, 1H) , 6,37 (m, 1H) , 6,17 (m, 1H) , 4,81 (s 1, 1H) , 4,17-4,37 (m, 2H), 4,08 (s, 3H), 3, 90-4,03 (m, 2H), 3,56-3,81 (m, 5H) , 3,39-3,54 (m, 3H) , 2,59-2,89 (m, 1H) , 1,87-2,29 (m, 2H), 1,48-1,87 (m, 4H).
Exemplos C2 a C26: Os compostos listados na Tabela 3 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo Cl.
Tabela 3
Exemplo Dl: (S)-2-metoxi-5-(6-((1-(1-metil-lH- imidazole-4-carbonil)pirrolidin-3-il)oxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo (de acordo com o Esquema 4) al) 6-((terc-butildimetilsilil)oxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][l,4]oxazina
Uma solução, mantida sob agitação, de 3,4-di-hidro-2H-l,4-benzoxazin-6-ol (registo CAS 226021-57-8) (6,00 g, 39,70 mmol) em THF (200 mL) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 3,18 g, 79,00 mmol) à ta. Após 20 min à ta, foi adicionado TBDMSC1 (7,78 g, 51,6 mmol) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 1,5 h. Após esse tempo, foram adicionados éter dietílico (500 mL) e uma sol. aq. sat. de NaHCCb (100 mL) . A camada aq. foi extraída com éter dietílico e os extratos orgânicos combinados foram secos com MgSCL, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (gradiente de ciclo-hexano / AcOEt) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo. HPLC TrMn = 3,37 min; ESIMS: 266 [ (M+H)+] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 6, 48-6, 44 (m, 1H) , 6, 09-6, 05 (m, 1H) , 5, 94-5, 89 (m, 1H) , 5,76-5,70 (m, 1H) , 4, 06-4, 00 (m, 2H) , 3,25-3,19 (m, 2H) , 0,92 (s, 9H) , 0, 12 (s, 6H) . bl) 5-(6-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2H- benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)-2-metoxinicotinonitrilo
Uma solução, mantida sob agitação, de 6-((terc-butildimetilsilil ) oxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazina (8,88 g, 32,80 mmol) em tolueno (270 mL) foi tratada com 5-bromo-2-metoxinicotinonitrilo (registo CAS 941294-54-8) (7,68 g, 36,10 mmol), NaOtBu (4,87 g, 49,2 mmol), 2-diciclo-hexilfosfino-2',4',6'-triisopropilbifenilo (registo CAS 564483-18-7) (0,806 g, 1,64 mmol) e Pd2dba3 (1,501 g, 1,64 mmol) à ta sob árgon. A mistura reacional foi aquecida até 110 °C durante 1,5 h. Após esse tempo, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (200 mL) , filtrado através de uma almofada de celite e concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em MeOH e submetido a ultrassons várias vezes para dar um precipitado amarelo/laranja. O resíduo foi filtrado, lavado com metanol e seco sob vácuo para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. HPLC TrMn = 3,90 min; ESIMS: 398 [ (M+H)+] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,45-8,42 (m, 1H) , 8,28-8,24 (m, 1H) , 6, 72-6, 68 (m, 1H) , 6,24-6,19 (m, 1H) , 6, 06-6, 03 (m, 1H) , 4,24-4,18 (m, 2H) , 4,00 (s, 3H) , 3,66-3,61 (m, 2H), 0,87 (s, 9H), 0,07 (s, 6H). método alternativo b2: diciclo-hexilfosfino- 2 ' ,4',6'-triisopropilbifenilo (registo CAS 564483-18-7) e Pd2(dba)3 foram substituídos por bis (tri-t- butilfosfina)paládio (registo CAS 53199-31-8) cl) 5-(6-hidroxi-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)-2-metoxinicotinonitrilo
Uma solução, mantida sob agitação, de 5 —(6 — ((terc-butildimetilsilil)oxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)-2-metoxinicotinonitrilo (10,85 g, 27,30 mmol) em THF (220 mL) foi tratada com TBAF (1,0 M em THF, 40,9 mL, 40,90 mmol) à ta. Após 40 min à ta, foram adicionados AcOEt (300 mL) e uma sol. aq. sat. de NaHCCb (200 mL) . Os extratos orgânicos foram secos com MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por trituração com éter dietilico para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido castanho-pálido. HPLC TrMn = 2,00 min; ESIMS: 284 [ (M+H)+] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,71 (s, 1Η) , 8,44 (d, 1H) , 8,29 (d, 1H) , 6,61 (d, 1H) , 6,12 (dd, 1H) , 6,01 (d, 1H) , 4,21-4,16 (m, 2H) , 4,01 (s, 3H) , 3,64-3,59 (m, 2H). dl) (S)-3-((4-(5-ciano-6-metoxipiridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidina-1-carboxilato de terc-butilo
Uma solução, mantida sob agitação, de 5 —(6 — hidroxi-2H-benzo[b] [1,4]oxazin-4(3H)-il)-2- metoxinicotinonitrilo (3,70 g, 13,06 mmol) em DMF (60 mL) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 1,31 g, 32,70 mmol) à ta. A mistura reacional foi agitada à ta durante 15 min. Após esse tempo, (R)-l-Boc-3- metanossulfoniloxipirrolidina (registo CAS 141699-57-2) (5,36 g, 19,59 mmol) foi adicionada, e a mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 3 h. Após esse tempo, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (gradiente de ciclo-hexano / acetona) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. HPLC TrMn = 3,13 min; ESIMS: 453 [ (M+H)+] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,31 (d, 1H) , 7,81 (d, 1H) , 6,82 (d, 1H) , 6,32 (dd, 1H) , 6,14 (d, 1H) , 4,74- 4,68 (m, 1H) , 4,32-4,28 (m, 2H) , 4,09 (s, 3H) , 3,67-3,62 (m, 2H) , 3,59-3,39 (m, 4H) , 2,17-1,92 (m, 2H) , 1,47 (s, 9H) . método alternativo d2: o álcool mesilado, hidreto de sódio e DMF foram substituídos pela hidroxi-isoxazolidina correspondente, DEAD e THF utilizando as condições de Mitsunobu descritas no método CC4 el) (S)-2-metoxi-5-(6-(pirrolidin-3-iloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo
Uma solução, mantida sob agitação, de (S)—3— ( (4 — (5-ciano-6-metoxipiridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b] [ 1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidina-l-carboxilato de terc-butilo (4,35 g, 9,32 mmol) em DCM (160 mL) foi tratada com TFA (35,9 mL, 466 mmol) à ta. A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 h. Após esse tempo, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (500 mL) e foi adicionada uma solução aquosa saturada de NaHCCb (500 mL) . Os extratos orgânicos foram lavados com uma solução aquosa saturada de NaCl (50 mL), secos com MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto (composto em epígrafe, sólido amarelo) foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. HPLC TrMio= 2,06 min; ESIMS: 353 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,31 (d, 1H) , 7,82 (d, 1H) , 6,82 (d, 1H) , 6,32 (dd, 1H) , 6,12 (d, 1H) , 4,71- 4,65 (m, 1H) , 4,32-4,27 (m, 2H) , 4,09 (s, 3H) , 3,67-3,62 (m, 2H) , 3,22-2, 90 (m, 4H), 2,08-1, 88 (m, 2H) . fl) (S)-2-metoxi-5-(6-((1-(1-metil-lH-imidazole- 4-carbonil)pirrolidin-3-il)oxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo
Uma solução, mantida sob agitação, de ácido 1-metil-lH-imidazole-4-carboxílico (registo CAS 41716-18-1) (0,578 g, 4,45 mmol) em DMF (40 mL) foi tratada com HOBT (0, 695 g, 4,45 mmol) , EDC (0, 870 g, 4,45 mmol) e Et3N (1,24 mL, 8,90 mmol) à ta. A mistura reacional foi agitada à ta durante 15 min. Após esse tempo, foi adicionado (S)— 2 — metoxi-5-(6-(pirrolidin-3-iloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo (1,10 g, 2,97 mmol) e a mistura reacional foi agitada durante 3 h 15 min à ta. Após esse tempo, a mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DCM (200 mL) e foi adicionada uma sol. aq. sat. de NaHCCb (200 mL) . Os extratos orgânicos foram secos com MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (gradiente de DCM / metanol) e HPLC preparativa (coluna SunFire C18, gradiente de CH3CN / 1% de TFA em H2O, as frações puras foram tratadas com DCM e uma solução aquosa saturada NaHCOs; os extratos orgânicos combinados foram secos com MgS04, filtrados e concentrados sob pressão reduzida) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido amarelo. HPLC TrMio= 2,27 min; ESIMS: 461 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,46-8,41 (m, 1Η) , 8,30-8,26 (m, 1H) , 7, 66-7,59 (m, 2H) , 6, 77-6, 72 (m, 1H) , 6, 37-6, 29 (m, 1H) , 6,14-6,07 (m, 1H) , 4, 90-4,79 (m, 1H) , 4,25-4,11 (m, 3H) , 3,99 (s, 3H) , 3, 98-3,78 (m, 1H) , 3,70-3,41 (m, 7H), 2,10-1,93 (m, 2H).
método alternativo f2: o ácido carboxilico, HOBT, EDC e DMF foram substituídos pelo cloreto de ácido carboxilico e DCM
método alternativo f3: o ácido carboxilico, HOBT, EDC e DMF foram substituídos por um cloroformato e DCM método alternativo f4: o ácido carboxilico, HOBT e EDC foram substituídos por um cloreto carbâmico
Exemplos D2 a D40: Os compostos listados na Tabela 4 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo Dl.
Tabela 4
Exemplo El: {(S)-3-[1-(6-Metoxi-5-metil-piridin- 3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona (de acordo com o Esquema 5)
a) 7-Cloro-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazina
Uma mistura de 7-cloro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-2-ona (registo CAS 928118-43-8) (630 mg, 3,41 mmol) e BH3*THF (1 M em THF) (10,2 mL, 10,2 mmol) em THF (20 mL) foi agitada durante 2 h a 80 °C. A mistura reacional foi desativada com MeOH, foi adicionada solução aq. de NaOH 1 M e a mistura foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 100:0 a 50:50 em 12 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco (432 mg, 74% de rendimento). HPLC TrMi =0,47 min; ESIMS: 171 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 7,74 (s, 1H) , 6,46 (s, 1H) , 4,43 (s 1, 1H) 4,21-4,25 (m, 2H) , 3,48-3,51 (m, 2H) . b) 7-Cloro-l-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]-oxazina
Uma mistura de 7-cloro-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][l,4]oxazina (127 mg, 0,74 mmol), 5-bromo-2-metoxi-3-metilpiridina (registo CAS 760207-87-2) (0,196 g, 0, 986 mmol), CS2CO3 (534 mg, 1,64 mmol) e XPhos (28 mg, 0,06 mmol) em dioxano (3,5 mL) foi desgaseifiçada com árgon e foi adicionado Pd2(dba)3 (27 mg, 0,03 mmol). Depois de agitar durante 3,5 h a 100 °C a mistura reacional foi filtrada sobre hyflo, foi adicionada sol. aq. sat. de NaHCCh e a mistura foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 95:5 a 40:60 in 14 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido de cor pálida (190 mg, 87% de rendimento). HPLC TrMi =1,04 min; ESIMS: 292 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 7,94 (d, 1H) , 7,80 (s, 1H) , 7,31 (d, 1H) , 6,31 (s, 1H) , 4,34-4,37 (m, 2H) , 4,01 (s, 3H), 3, 68-3,72 (m, 2H), 2,24 (s, 3H) . c) 1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di- hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ol
Uma mistura de 7-cloro-l-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazina (190 mg, 0,65 mmol), tetrametil-t-butil-XPhos (13 mg, 0,03 mmol) em dioxano (3 mL) e sol. aq. KOH 5M (0,04 mL, 1,95 mmol) foi desgaseifiçada com árgon e foi adicionado Pd2(dba)3 (6 mg, 0,01 mmol) . Depois de agitar durante 17,5 h a 100 °C a mistura reacional foi filtrada sobre hyflo, o filtrado foi seco sobre Na2S04, filtrado e evaporado. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (AcOEt / MeOH 100:0 a 85:15 em 17 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido branco (111 mg, 62% de rendimento). HPLC TrMi =0,67 min; ESIMS: 274 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 10,32 (s 1, 1H) , 8,02 (d, 1H) , 7,62 (m, 1H) , 6,89 (s, 1H) , 4,84 (s, 1H) , 4,17-4,21 (m, 2H) , 3,91 (s, 3H) , 3,61-3,66 (m, 2H) , 2,17 (s, 3H). d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[l-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma solução de 1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [ 1,4]oxazin-7-ol (111 mg, 0,41 mmol) em DMF (3 mL) foi tratada com NaH (33 mg, 0,81 mmol) durante 10 min a 20 °C. Foi adicionado (R) -éster terc-butilico do ácido 3-metanossulfoniloxi-pirrolidina-1-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (162 mg, 0,61 mmol).
Depois de agitar durante 19 h a 60 °C e 18 h a 80 °C foi adicionada sol. aq. sat. de NaHCCb e a mistura reacional foi extraída com TBME. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 93:7 a 40:60 em 13,5 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-pálido (107 mg, 59% de rendimento). HPLC TrMi =1,21 min; ESIMS: 443 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,93 (d, 1H) , 7,61 (s 1, 1H) , 7,32 (s 1 1H) , 5,71 (s, 1H) , 5,41 (s 1, 1H) , 4,32 (s 1, 2H) , 3,99 (s, 3H) , 3, 65-3,70 (m, 2H) , 3,37-3,61 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 1,58 (s, 9H), 0,82-0,97 (m, 2H). e) 1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)- pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazina
Uma solução de (S)-éster terc-butílico do ácido 3-[1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]-oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-1-carboxílico (103 mg, 0,23 mmol) e TFA (0,179 mL, 2,33 mmol) em DCM (1,8 mL) foi agitada durante 18 h à ta. Foi adicionada sol. aq. sat. de Na2C03 e a mistura reacional foi extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas, o composto em epígrafe foi como uma espuma amarelo-pálida (72 mg, 90% de rendimento). HPLC TrMi =0,64 min; ESIMS: 343 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 7,93 (d, 1H) , 7,62 (s, 1H) , 7,32 (m, 1H) , 5,70 (s, 1H) , 5,29-5,35 (m, 1H) , 4,29-4,33 (m, 2H) , 3,99 (s, 3H) , 3, 65-3, 69 (m, 2H) , 2,82- 3,14 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,80-2,10 (m, 2H). f) {(S)-3-[1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-1-il}-(l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona
Uma mistura de ácido l-metil-lH-imidazole-4-carboxílico (registo CAS 41716-18-1) (15 mg, 0,12 mmol), HBTU (53 mg, 0,14 mmol) e DIPEA (0,025 mL, 0,14 mmol) em DMF (0,6 mL) foi agitada à ta durante 5 min. Foi adicionada uma solução de 1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [1,4]oxazina (0,037 g, 0,11 mmol) em DMF (0,6 mL) . Depois de agitar durante 20 h à ta foi adicionada água e a mistura reacional e foi extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de sódio, secas sobre Na2S04, filtradas e evaporadas. O produto em bruto foi purificado por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18, H2O + 0,1% TFA / ACN + 0,1% TFA 90:10 a 60:40 em 16 min) para proporcionar o composto em epígrafe como uma espuma amarelo-pálida (24 mg, 49% de rendimento). HPLC TrMi =0,74 min; ESIMS: 451 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO): δ 8,00 (m, 1H), 7,58- 7,63 (m, 3H) , 7,53 (d, 1H) , 5,51 (d, 1H) , 5,29-5,40 (m, 1H) , 4,23-4,29 (m, 2H) , 3,99 (s, 3H) , 3,77-4,19 (m, 2H) , 3,66 (m, 5H) , 3,39-3, 63 (m, 2H) , 2,15 (s, 3H) , 1,89-2,11 (m, 2H).
Exemplos E2 a 11: Os compostos listados na Tabela 5 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo El.
Tabela 5
Exemplos de Referência E12 a E13: Os compostos listados na Tabela 5a foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo El, aplicando estratégias adequadas de grupo de proteção.
Exemplo FI: (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*- tiopirano-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)- 2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona (de acordo com o Esquema 6)
a) 7-Cloro-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazina
Uma solução de 7-cloro-lH-pirido[3,4- b] [1,4]oxazin-2-ona (registo CAS 928118-43-8) (3,70 g, 20 mmol) em THF (63 mL) foi tratada com BH3*THF (1M em THF, 47 mL, 47 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 75 °C durante 1 h, em seguida arrefecida até à ta e desativada com metanol (24 mL, 600 mmol) . A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi retomado com AcOEt e lavado com sol. aq. sat. de NaHCCb A camada orgânica foi seca sobre MgSCb, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto em epígrafe como um sólido amarelo-pálido (3,3 g, 96% de rendimento). UPLC RtMi =0,47 min; ESIMS: 171 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,53 (s, 1Η) , 7,11 (s 1, 1H) , 6,47 (s, 1H) , 4,09 (t, 2H) , 3,17-3,38 (m, 2H) . b) 2,3-Di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ol
Uma mistura de 7-cloro-2,3-di-hidro-lH- pirido[3,4-b][l,4]oxazina (1,08 g, 6,33 mmol), sol. aq. KOH (1,07 g, 19 mmol KOH em 5,4 mL de água), 2-di-t-butilfosfino-3,4,5,6-tetrametil-2' , 4' , 6-tri-i-propilbifenilo a 98% (0,30 g, 0,63 mmol) e Pd2(dba)3 (0,29 g, 0,32 mmol) em dioxano (32,5 mL) foi desgaseificada três vezes com azoto, o tubo foi selado e a mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 5 h. Depois de arrefecer até ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com AcOEt e metanol. Os filtrados foram concentrados e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH, 98:2 a 75:25) como um resíduo laranja (660 mg, 69% de rendimento) UPLC RtMi =0,34 min; ESIMS: 153 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 10,33 (s 1, 1H) , 7,03 (s 1, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 5,15 (s, 1H) , 3,95 (t, 2H) , 3,25 (m, 2H). c) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-(2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico
Uma solução seca de 2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ol (0,66 g, 4,34 mmol) e (R)-éster terc-butílico do ácido 3-metanossulfoniloxi-pirrolidina-1-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (1,73 g, 6,51 mmol) em DMF (40 mL) foi tratada com hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 0,21 g, 8,68 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 18 h. Depois de arrefecer até ta, a mistura reacional foi diluída com TBME e lavada com sol. aq. sat. NaHCCh. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 95:5 a 30:70) como um óleo amarelo (1,035 g, 75% pureza, 56% de rendimento) UPLC RtMi =0,65 min; ESIMS: 322 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,54 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 5,42 (s 1, 1H) , 4,25-4,41 (m, 1H) , 4,19 (t, 2H) , 3,38-3,66 (m, 6H), 2,00-2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H). d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[l-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma mistura de (S)-éster terc-butilico do ácido 3-(2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi)-pirrolidina-l-carboxilico (254 mg, 0,79 mmol), 5-bromo-2-metoxi-3-metilpiridina (registo CAS 760207-87-2) (208 mg, 1,03 mmol), XPhos (30 mg, 0,06 mmol) e NaOtBu (167 mg, 1,74 mmol) em dioxano (6 mL) foi desgaseifiçada com árgon durante 5 min, em seguida foi adicionado Pd2(dba)3 (29 mg, 0,03 mmol). O tubo foi cheio com árgon, selado e a mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com AcOEt e os filtrados foram lavados com sol. aq. sat. de NaHCCh. A camada aq. foi extraída duas vezes com AcOEt, as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04, filtradas, concentradas e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt, 100:0 a 50:50) como uma goma transparente (274 mg, 78% de rendimento). UPLC RtMi =1,20 min; ESIMS: 443 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,93 (d, 1H) , 7,61 (s 1, 1H) , 7,30-7,35 (m, 1H), 5,71 (s, 1H) , 5,34-5,46 (m, 1H) , 4,31 (s 1, 2H) , 3,99 (s, 3H) , 3,68 (t, 2H) , 3,34-3,62 (m, 4H), 2,23 (s, 3H), 2,01-2,09 (m, 2H), 1,44 (s, 9H). e) 1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)- pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazina
Uma solução de (S)-éster terc-butílico do ácido 3-[1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-l-carboxílico (364 mg, 0,82 mmol) em DCM (6 mL) foi tratada com TFA (0,63 mL, 8,23 mmol) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 18 h, em seguida desativada com sol. aq. sat. de NaHCCb e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre MgSCb, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto em epígrafe como um óleo vermelho, que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação (313 mg, 90% pureza, rendimento quantitativo). UPLC RtMi =0,65 min; ESIMS: 343 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 7,93 (d, 1H) , 7,62 (s, 1H) , 7,32 (d, 1H) , 5,70 (s, 1H) , 5,26-5,36 (m, 1H) , 4,31 (t, 2H) , 3,99 (s, 3H) , 3,67 (t, 2H) , 2,95-3,15 (m, 3H) , 2,81-2,92 (m, 1H) , 2,22 (s, 3H) , 1,98-2,10 (m, 1H) , 1,79-1,90 (m, 1H). f) (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4- il)-{(S)-3-[1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-ΙΗ-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
Uma solução de ácido 1,1-dioxo-hexa-hidro- llambda*6*-tiopirano-4-carboxílico (registo CAS 64096-87-3) (106 mg, 0,59 mmol) em DMF (4 mL) foi tratada com HBTU (225 mg, 0,59 mmol) e DIPEA (0,24 mL, 1,37 mmol) . A solução laranja resultante foi agitada à ta durante 5 min, em seguida foi adicionada uma solução de 1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][l,4]oxazina (156 mg, 0,46 mmol) em DMF (2 mL) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 1 h, em seguida concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi retomado com DCM e lavado com sol. aq. sat. de NaHCCh. A camada orgânica foi seca passando-a através de um cartucho de separação de fases, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia SFC (coluna DEAP (250mm x 30mm, 60A, 5ym) Princeton, gradiente 11 - 16% de metanol em CO2 supercrítico em 6 min) como um sólido ligeiramente colorido (112 mg, 49% de rendimento). UPLC RtMi =0,81 min; ESIMS: 503 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,01 (s, 1H) , 7,61 (m, 1H) , 7,52 (d, 1H) , 5,52 (d, 1H) , 5,24-5,43 (m, 1H), 4,26 (s 1, 2H), 3,89 (s, 3H), 3,59-3,79 (m, 3H), 3,41- 3,56 (m, 2H) , 3,21-3,39 (m, 1H) , 2,98-3,21 (m, 4H) , 2,67- 2,83 (m, 1H), 1,84-2,20 (m, 9H). RMN de XH (600 MHz, DMSO-de): δ 8,01 (s, 1H) , 7, 63-7,59 (m, 1H) , 7,55-7,51 (m, 1H) , 5,55-5,51 (m, 1H) , 5,43-5,24 (m, 1H) , 4,29-4,22 (m, 2H), 3,90 (s, 3H) , 3,80- 3,60 (m, 2H) , 3, 56-3, 37 (m, 3H) , 3,28-2, 99 (m, 5H) , 2,89- 2,66 (m, 1H) , 2,19-2,09 (m, 4H) , 2,08-1, 98 (m, 2H) , 1,98- 1,86 (m, 3H) .
Cristalização do Exemplo FI aquecendo e arrefecendo em isopropanol / éter dietilico
Foi suspenso 474 mg do Exemplo Fl amorfo em
1,4 mL de isopropanol. A mistura foi aquecida até 70 °C e agitada a 70 °C para permitir a dissolução completa do Exemplo Fl. A solução foi arrefecida até à TA, formou-se um resíduo pegajoso. Foram adicionados 2 mL de éter dietílico e a pasta fluida foi agitada durante 48 h. Formou-se uma suspensão branca. A suspensão foi filtrada e o sólido foi seco a 40 °C, 15 mbar. Foi obtido um pó branco fino. O material contém apenas uma ligeira quantidade de solvente residual (<0,5%). Foi obtida uma forma anidra cristalina do Exemplo Fl com um início de fusão de 148,77 °C.
Lista dos picos 2-Teta mais significativos do padrão de difração de raios X sobre pó com tolerâncias ±0,5 da forma anidra do Exemplo Fl (Método Ml) (incluindo picos pequenos/fracos para informação). Nota: Esta lista de picos não é exaustiva, mas são apenas "inter alia".
Exemplos F2 a F15: Os compostos listados na
Tabela 6 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo Fl. _Tabela 6_
Exemplo G1: Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-{(S)-3- [1-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
a) 7-Bromo-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazina
Uma solução de 7-bromo-lH-pirido[3,4- b] [ 1,4]oxazin-2-ona (registo CAS 943995-72-0) (2, 93 g, 12,79 mmol) em THF (40 mL) foi tratada com BH3*THF (1M em THF, 30 mL, 30 mmol) . A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 1,5 h, em seguida arrefecida até à ta e desativada com metanol. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi retomado com AcOEt e lavado com sol. aq. de NaOH 1M. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto em epígrafe como um sólido branco. (2,48 g, 90% de rendimento). UPLC RtMi =0,49 min; ESIMS: 217 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,72 (s, 1H) , 6,60 (s, 1H), 4,42 (s 1, 1H), 4,20-4,24 (m, 2H), 3,49 (m, 2H). b) Éster benzilico do ácido 7-bromo-2,3-di-hidro-pirido[3,4-b][1,4]oxazina-l-carboxilico
Uma solução seca de 7-bromo-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][l,4]oxazina (1,85 g, 8,60 mmol) em THF (50 mL) foi tratada em porções a 0 °C com NaH a 60% em óleo mineral (0,52 g, 12,90 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 h. Foi adicionado gota a gota cloroformato de benzilo (registo CAS 501-53-1) (1,40 mL, 9,85 mmol) e a mistura reacional foi deixada aquecer até à ta e agitar durante 20 h, finalmente desativada com metanol e em seguida diluída com sol. aq. sat. de NaHCCb e extraída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt, 100:0 a 60:40) como um sólido branco (2,06 g, 68% de rendimento). UPLC RtMi =1,14 min; ESIMS: 349 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,28 (s 1, 1H) , 7,98 (s, 1H) , 7,35-7,46 (m, 5H) , 5,30 (s, 2H) , 4,20-4,27 (m, 2H), 3,92-4,01 (m, 2H). c) 2,3-Di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-ol
Uma mistura de éster benzilico do ácido 7-bromo- 2,3-di-hidro-pirido[3,4-b][1,4]oxazina-l-carboxílico (1,27 g, 3,63 mmol), sol. aq. KOH (0,90 g, 16 mmol KOH em 3,2 mL de água), 2-di-t-butilfosfino-3,4,5,6-tetrametil-2',4' , 6-tri-i-propilbifenilo a 98% (0,26 g, 0,54 mmol) em dioxano (16 mL) foi desgaseif içada com árgon durante 5 min, em seguida foi adicionado Pd2(dba)3 (0,25 g, 0,27 mmol). O tubo foi cheio com árgon, em seguida selado e a mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 19 h. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com AcOEt e metanol. Os filtrados foram secos sobre Na2S04, filtrados, concentrados e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH, 95:5 a 60:40) como um resíduo laranja (262 mg, 47% de rendimento). UPLC RtMi =0,32 min; ESIMS: 153 [ (M+H) +] RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 10,33 (s 1, 1H) , 7,03 (s 1, 1H) , 6,71 (s, 1H) , 5,15 (s, 1H) , 3,95 (t, 2H) , 3,25 (td, 2H) . d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-(2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi)-pirrolidina-1-carboxilico
Uma solução seca de 2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [ 1,4]oxazin-7-ol (200 mg, 0,66 mmol) e (R)-éster terc-butilico do ácido 3-metanossulfoniloxi-pirrolidina-1-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (262 mg, 0,99 mmol) em DMF (6 mL) foi tratada com hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (53 mg, 1,33 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 17 h. Depois de arrefecer até ta, a mistura reacional foi diluída com TBME e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt, 88:12 a 0:100) como um óleo (140 mg, 66% de rendimento). UPLC RtMi =0,66 min; ESIMS: 322 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 7,54 (s, 1H) , 5,86 (s, 1H) , 5,42 (s 1, 1H) , 4,25-4,41 (m, 1H) , 4,19 (t, 2H) , 3,38-3,66 (m, 6H), 2,00-2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H). e) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[1-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma mistura de (S)-éster terc-butilico do ácido 3-(2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi)-pirrolidina-l-carboxilico (115 mg, 0,36 mmol), 5-bromo-2-metoxi-3-trifluorometilpiridina (registo CAS 1214377-42-0) (119 mg, 0,47 mmol), XPhos (14 mg, 0,03 mmol) e NaOtBu (76 mg, 0,79 mmol) em dioxano (2,5 mL) foi desgaseificada com árgon durante 5 min, em seguida foi adicionado Pd2(dba)3 (13 mg, 0,01 mmol) . O tubo foi cheio com árgon, em seguida selado e a mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 2 h. Depois de arrefecer até ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com AcOEt e os filtrados foram lavados com sol. aq. sat. de NaHCCh. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt, 93:7 a 40:60) como uma goma transparente. (91 mg, 51% de rendimento). UPLC RtMi =1,27 min; ESIMS: 497 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,29 (d, 1H) , 7,79 (d, 1H) , 7,64 (d, 1H) , 5,70 (s, 1H) , 5,36-5,46 (m, 1H) , 4,34 (s 1, 2H) , 4,09 (s, 3H) , 3,70 (t, 2H) , 3,34-3, 62 (m, 4H) , 2,02-2,11 (m, 2H), 1,44 (s, 9H) . f) 1-(6-Metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazina
Uma solução de (S)-éster terc-butilico do ácido 3-[1-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][l,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico (88 mg, 0,18 mmol) em DCM (1,3 mL) foi tratada com TFA (0,14 mL, 1,77 mmol) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 17 h, em seguida desativada com sol. aq. sat. de Na2C03 e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o composto em epígrafe (66 mg, 94% de rendimento) . UPLC RtMi =0,72 min; ESIMS: 397 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,28 (d, 1H) , 7,79 (d, 1H) , 7,65 (s, 1H) , 5,68 (s, 1H) , 5,31-5,39 (m, 1H) , 4,31-4,37 (m, 2H) , 4,08 (s, 3H) , 3, 67-3,72 (m, 2H) , 3,01- 3,18 (m, 3H) , 2, 85-2, 97 (m, 1H) , 2,01-2,13 (m, 1H) , 1,82- 1, 95 (m, 1H) . g) Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-{(S)-3-[1-(6-metoxi- 5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
Uma solução de ácido imidazo[2,1-b]tiazole-6-carboxílico, bromidrato (1:1) (registo CAS 725234-39-9)
(25 mg, 0,10 mmol) em DMF (0,45 mL) foi tratada com HBTU (41 mg, 0,11 mmol) e DIPEA (0,04 mL, 0,21 mmol). A solução laranja resultante foi agitada à ta durante 5 min, em seguida foi adicionada uma solução de 1-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-7-((S)-pirrolidin-3-iloxi) - 2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][l,4]oxazina (32 mg, 0,08 mmol) em DMF (0,45 mL) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 17 h, em seguida concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi retomado com AcOEt e lavado com solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após RP HPLC prep. (Sunfire PrepC18 30x100 mm, 5 ym; solvente A: H2O+0,l% em volume de TFA; solvente B: CH3CN +0,1% em volume de TFA, gradiente 15-45% B em 16 min) . Após filtração sobre um cartucho PL-HCO3 MP SPE da Agilent, o composto em epígrafe foi obtido como um sólido (23 mg, 52% de rendimento). UPLC RtMi =1,00 min; ESIMS: 547 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,49 (dd, 1Η) , 8,16-8,20 (m, 2H) , 7,92 (dd, 1H) , 7,57 (d, 1H) , 7,37 (dd, 1H) , 5,63 (d, 1H) , 5,33-5,45 (m, 1H) , 4,25-4,31 (m, 2H) , 3,52-4,14 (m, 9H), 1,88-2,12 (m, 2H).
Exemplos G2 a G3: Os compostos listados na Tabela 7 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo G1.
Tabela 7
Exemplos Hl a Hl6: Os compostos listados na
Tabela 8 foram preparados por separação cromatográfica de diastereómeros.
Tabela 8
Exemplo II: (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*- tiopirano-4-il)-{(S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
a) 5-Fluoro-6-metoxi-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
Uma solução de 6-bromo-5-fluoro-4H- benzo[1,4]oxazin-3-ona (registo CAS 1029421-36-0) (5,0 g, 20 mmol) em MeOH (10 mL) foi tratada com solução de metóxido de sódio (30% em MeOH, 11,3 mL, 61 mmol) e Cul (0,4 g, 2 mmol). Depois de agitar durante 20 h a 80 °C, a reação foi desativada com sol. aq. sat. de NaHCCh e extraída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para obter um sólido amarelo-pálido. (2,2 g, 92% de rendimento). UPLC RtMi =0,64 min. RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,74 (m, 2H) , 4,53 (s, 2H), 3,79 (s, 3H). b) 5-Fluoro-6-hidroxi-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
Uma solução de 5-fluoro-6-metoxi-4H- benzo[1,4]oxazin-3-ona (2,0 g, 10 mmol) em DCM (50 mL) foi tratada a 0 °C com tribrometo de boro (9,6 mL, 101 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 17 h, em seguida arrefecida até 0 °C e desativada com metanol. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida e o resíduo foi retomado com AcOEt e lavado com sol. aq. sat. de NaHC03. A camada orgânica foi lavada com sol. aq. Na2S204 a 10%, seca sobre
Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. O composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (hexano / AcOEt, 100:0 a 60:40) como um sólido castanho (780 mg, 42% de rendimento). UPLC RtMi =0,49 min; ESIMS: 228 [(M+HCOO)-]. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de): δ 11,00 (s, 1H) , 6,65 (d, 1H) , 6,45 (t, 1H) , 4,50 (s, 2H) . c) 5-Fluoro-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
Uma solução de 5-fluoro-6-hidroxi-4H- benzo [ 1,4] oxazin-3-ona (780 mg, 4,2 mmol) em THF (10 mL) foi tratada com BH3*THF (1M em THF, 12,8 mL, 12,8 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 17 h, em seguida arrefecida até 0 °C e desativada com metanol (30 mL) . A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida para obter um óleo castanho (720 mg, rendimento quantitativo). UPLC RtMi =0,54 min; ESIMS: 170 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,95 (s, 1Η) , 6,45 (d, 1H) , 6,00 (t, 1H) , 4,09 (m, 2H) , 3,45 (m, 2H) . d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3- (5-fluoro- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico
Uma solução de trifenilfosfina (1,5 g, 5,7 mmol) em THF (20 mL) foi tratada a 0 °C com DEAD (0, 900 mL, 5,69). A solução laranja foi agitada ao longo de 10 min à ta, em seguida foram adicionados 5-fluoro-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (740 mg, 4,37 mmol) e (R)-3- hidroxipirrolidina-l-carboxilato de terc-butilo (1065 mg, 5,69 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 19 h a 60 °C e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (Hexano / AcOEt, 100:0 a 70:30) como um óleo incolor (1,1 g, 74% de rendimento). UPLC RtMi =1,07 min; ESIMS: 339 [ (M+H) +] RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,45 (d, 1Η) , 6,00 (t, 1H) , 5,42 (s 1, 1H) , 4,25-4,41 (m, 1H) , 4,19 (t, 2H), 3,38-3,66 (m, 6H), 2,00-2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H) e) (S)Éster terc-butilico do ácido 3-[5-fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma mistura de (S)-éster terc-butílico do ácido 3- (5-fluoro-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-l-carboxílico (100 mg, 0,296 mmol), 5-bromo-2-metoxi-3-metilpiridina (registo CAS 760207-87-2, 179 mg, 0,887 mmol), RuPhos (6,90 mg, 0,015 mmol), NaOtBu (85 mg, 0,887 mmol) e (2-diciclohilfosfino-2' 6'-diisopropil-1 1'- bifenil) (2-(2-aminoetil)fenil)paládio(II) (12,07 mg, 0,015 mmol) em dioxano (2 mL) foi desgaseifiçada com árgon, em seguida selada e a mistura reacional foi agitada a 100 °C durante 23 h. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com AcOEt e os filtrados foram lavados com sol. aq. sat. de NaHC03. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (Hexano / AcOEt, 100:0 a 70:30) como um óleo amarelo(123 mg, 63% de rendimento). UPLC RtMi =1,29 min; ESIMS: 460 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,75 (d, 1Η),7,45 (d, 1Η) , 6,55 (t, 1H) , 6,35 (d, 1H) , 4,75 (m, 1H) , 4,15 (t, 2H) , 3,84 (s, 3H) , 3,60 (t, 2H) , 3,38-3, 66 (m, 4H) , 2,12 (s, 3H) , 2,00-2,18 (m, 2H), 1,46 (d, 9H) . f) 5-Fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de (S)-éster terc-butílico do ácido 3-[5-fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxílico (123 mg, 0,185 mmol) em DCM (2 mL) foi tratada com HC1 4N/dioxano (0,046 mL, 0,185 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 3 d, em seguida concentrada sob pressão reduzida para se obter um óleo preto (100 mg, 79% de rendimento). UPLC RtMi =0,73 min; ESIMS: 360 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de): δ 7,75 (d, 1H),7,45 (d, 1H) , 6,80 (m, 1H) , 6,75 (m, 1H) , 5,20 (m, 1H) , 4,15 (t, 2H) , 3,84 (s, 3H) , 3,60 (t, 2H) , 3,38-3, 66 (m, 4H) , 2,12 (s, 3H), 2,00-2,18 (m, 2H). g) (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{(S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
Uma solução de ácido 1,1-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-carboxílico (registo CAS 64096-87-3) (33,9 mg, 0,15 mmol) em DCM (2 mL) foi tratada à ta com Et3N (0,061 mL, 0,440 mmol) e HATU (55,7 mg, 0,147 mmol). A solução laranja resultante foi agitada à ta durante 20 min, em seguida foi adicionada uma solução de 5-fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirrolidin-3-iloxi) - 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (100 mg, 0,147 mmol) em DCM (2 mL) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 1,5 h, em seguida diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHC03. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18 OBD 5 mm 30xl00mm, gradiente 25% a 45% de ACN em 16 min) . As frações foram liofilizadas e filtradas sobre um cartucho PL-HCO3 MP SPE para dar um sólido castanho (54 mg, 71% de rendimento). UPLC RtMi =0,94 min; ESIMS: 520 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,75 (d, 1Η),7,45 (d, 1Η) , 6,55 (t, 1H) , 6,35 (d, 1H) , 4,75 (m, 1H) , 4,15 (t, 2H) , 3,84 (s, 3H) , 3,59-3,79 (m, 3H) , 3,41-3,56 (m, 2H) , 3,21-3,39 (m, 1H) , 2,98-3,21 (m, 4H) , 2,67-2,83 (m, 1H) , 1,84-2,20 (m, 9H).
Exemplos 12 a 13: Os compostos listados na Tabela 9 foram preparados por um procedimento análogo ao utilizado no Exemplo 11. __Tabela 9___
Exemplo J: 5-{6-[(S)-1-((S)-1-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]-oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo
Uma solução de 2-metoxi-5-{ 6-[ (S)-1-((S)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo (Exemplo D39; 23 mg, 0,051 mmol) em DCM (1 mL) foi tratada com Et3N (0,014 mL, 10,4 mg, 0,102 mmol). A solução foi agitada à ta durante 10 min, em seguida foi adicionado cloreto de acetilo (0,0044 mL, 4,87 mg, 0,061 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 1,5 h. Foram adicionados mais 2 eq. de Et3N (0,014 mL, 10,4 mg, 0,102 mmol) e 1 eq. de cloreto de acetilo ((0,0037 mL, 4,06 mg, 0,051 mmol), a agitação foi prosseguida à ta durante 1,5 h. A mistura reacional foi diluída com DCM e sol. aq. sat. de NaHCCb, em seguida feita passar através de um separador de fases, a camada aq. foi extraída duas vezes com DCM, as camadas org. combinadas foram concentradas para dar o composto em epígrafe como um óleo amarelo que foi purificado por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18, 10-85% ACN em 20 min) . As frações foram extraídas com DCM/NaHC03, secas sobre MgS04, concentradas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe como uma espuma amarela (14 mg, 53% de rendimento). HPLC TrMio=2,55 min; ESIMS: 492 [ (M+H) +] .
Exemplo K: 5-{6-[(S)-1-((R)-1-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo
Este exemplo foi preparado por analogia ao Exemplo J, partindo de 2-metoxi-5-{6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo (Exemplo D40). HPLC TrMio=2,55 min; ESIMS: 492 [ (M+H) +] .
Exemplo L: 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-((R)-1-metil- pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo
Uma solução de 2-metoxi-5-{6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo (Exemplo D40, 26 mg, 0,058 mmol) em MeOH (1 mL) foi tratada com uma sol. aq. de formaldeído a 37% (0,043 mL, 46,9 mg, 0,578 mmol) e ácido acético (0, 004 mL, 4,17 mg, 0, 0069 mmol) . A solução foi agitada sob árgon à ta durante 45 min, em seguida foi adicionado NaBtRCN (5,65 mg de um sólido a 90%, 0,081 mmol) . A mistura resultante foi agitada à ta durante 45 min, diluída com DCM e sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada aq. foi reextraída duas vezes com DCM, as camadas org. combinadas foram secas sobre MgSCb e concentradas para dar o composto em epígrafe em bruto que foi purificado por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18, gradiente 5-75% ACN em 20 min) . As frações foram extraídas com DCM/sol. aq. sat. de NaHCCb, secas sobre MgSCb, concentradas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe como uma espuma amarela (20 mg, 72% de rendimento). HPLC TrMn=2,2 4 min; ESIMS: 464 [ (M+H) +] .
Exemplo M; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-l-piridin-2-il-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-l-piridin-2-il-pirrolidin-3-iloxi) - 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (preparada como se descreve no exemplo Bl; 60 mg, 0,154 mmol), 2-cloropiridina (CAS 109-09-1, 0,017 mL, 21,0 mg, 0,185 mmol), Xphos (8,81 mg, 0,018 mmol) e CS2CO3 (125 mg, 0,385 mmol) em dioxano (1 mL) foi desgaseifiçada com árgon, em seguida foi adicionado Pd2(dba)3 (7,05 mg, 0,0077 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 80 °C durante 6 h, foi adicionado XPhos (8,81 mg, 0,018 mmol), a mistura foi novamente desgaseifiçada com árgon e foi adicionado Pd2(dba)3 (7,05 mg, 0, 0077 mmol) . A agitação foi prosseguida de um dia para o outro a 80 °C. A mistura foi filtrada através de celite e concentrada para dar o composto em epígrafe que foi purificado por NP-HPLC (coluna Grace Grom Saphir 65 Si, gradiente de heptano:AcOEt:MeOH 68:30:2 a 0:65:35 em 12 min), rendimento 32 mg (45%). HPLC TrMi =0,72 min; ESIMS: 467 [ (M+H) +] RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 8,32 (d, 1H), 8,14- 8,12 (m, 1H) , 7,49-7,39 (m, 2H) , 6,86 (d, 1H) , 6,61 (d, 1H) , 6, 57-6, 46 (m, 2H) , 6,37 (d, 1H) , 4,92-4,85 (m, 1H) , 4,26-4,24 (m, 2H), 3, 76-3,74 (m, 2H), 3,71 (d, 2H) , 3,63- 3,55 (m, 2H) , 3,32 (s, 3H) , 2,67 (s, 3H) , 2,35-2,27 (m, 1H), 2,26-2,15 (m, 1H).
Exemplo N; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-l-pirimidin-2-il-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-l-piridin-2-il-pirrolidin-3-iloxi)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (preparada como se descreve no exemplo Bl; 60 mg, 0,154 mmol), 2- cloropirimidina (CAS 1722-12-9, 24,7 mg, 0,216 mmol) e DIPEA (0,054 mL, 39,8 mg, 0,308 mmol) em ACN (1 mL) foi aquecida a 140 °C durante 30 min num reator de micro-ondas. O produto foi extraído com sol. aq. sat. de NaHCCh e AcOEt, filtrada e concentrada para produzir o composto em epígrafe que foi purificado por NP-HPLC prep. (coluna Grace Grom Saphir 65 Si, gradiente de heptano:AcOEt:MeOH 68:30:2 a 0:65:35 em 12 min), rendimento 45 mg (63%) HPLC TrMi=0, 97 min; ESIMS: 468 [ (M+H) +] RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8, 37-8,26 (m, 3H) , 7,44 (d, 1H) , 6,87 (d, 1H) , 6,62 (d, 1H) , 6, 56-6, 46 (m, 2H) , 4, 92-4, 84 (m, 1H) , 4,27-4,25 (m, 2H) , 3, 90-3, 63 (m, 6H), 3,33 (s, 3H), 2,69 (s, 3H), 2,37-2,13 (m, 2H).
Exemplo 01: 2-Metoxi-5-{2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo
a) N-(5-Benziloxi-2-hidroxi-fenil)-2-cloro- propionamida
Uma solução de ácido 2-cloro-propiónico (registo CAS 598-78-7) (0,914 mL, 7,53 mmol) em DMF (2 0 mL) foi tratada com Et3N (1,259 mL, 9,03 mmol) e HATU (3,05 g, 8,03 mmol) . A solução resultante foi agitada à ta durante 30 min, em seguida foi adicionado 2-amino-4-benziloxi-fenol (registo CAS 102580-07-4) (1, 08 g, 5,02 mmol) . A mistura reacional foi agitada à ta durante 5 min, diluída com AcOEt e concentrada. 0 composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 50:50) como sólido laranja (617 mg, 40% de rendimento). UPLC RtMi4 =1,32 min; ESIMS: 306 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 9,50 (d, 1H) , 7,70 (s 1, 1H) , 7,45 (m, 5H) , 6,80 (d, 1H) , 6,65 (dd, 1H) , 5,00 (s, 2H) , 2,65 (s, 3H) . b) 6-Benziloxi-2-metil-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
Uma solução seca de N-(5-benziloxi-2-hidroxi-fenil)-2-cloro-propionamida (617 mg, 2,0 mmol) em DMF (15 mL) foi tratada a 0 °C com hidreto de sódio a 95% (58,1 mg, 2,4 mmol). Depois de agitar à ta durante 1 h, a mistura reacional foi diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 80:20) como um sólido branco (146 mg, 27% de rendimento). UPLC RtMi4 =1,30 min; ESIMS: 270 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de): δ 10,80 (s, 1H) , 7,45 (m, 5H) , 6,85 (d, 1H) , 6,65 (m, 2H) , 5,00 (s, 2H) , 4,55 (q, 1H), 1,45 (d, 3H) . c) 6-Benziloxi-2-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 6-benziloxi-2-metil-4H- benzo [ 1,4] oxazin-3-ona (146 mg, 0,54 mmol) em THF (4 mL) foi tratada a 0 °C com BH3*THF (1M em THF, 0,813 mL, 0,813 mmol) . Depois de agitar a 35 °C durante 1 h, a mistura reacional foi arrefecida até 0 °C, desativada com água (0,5 mL) e uma sol. Aquosa de NaOH 4N (0,5 mL) e em seguida diluída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido como um sólido branco (125 mg, 90% de rendimento). UPLC RtMi4 =1,40 min; ESIMS: 256 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,45 (m, 5Η) , 6,50 (d, 1Η) , 6,20 (d, 1H) , 6,10 (dd, 1H) , 5,35 (s, 1H) , 4,90 (s, 2H) , 4,00 (m, 1H) , 3,25 (m, 1H) , 2,90 (m, 1H) , 1,35 (d, 3H) . d) 2-Metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
Uma solução de 6-benziloxi-2-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo [ 1,4 ] oxazina (124 mg, 0,486 mmol) em MeOH (10 mL) foi tratada à ta com formato de amónio (276 mg, 4,37 mmol) e Pd(OH)2 (68,2 mg, 0,486 mmol). A mistura reacional foi agitada a 60 °C durante 15 min. Depois de arrefecer até ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com DCM e MeOH e, em seguida, os filtrados foram concentrados. 0 composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH, 100:0 a 90:10) como um sólido castanho. (69,4 mg, 87% de rendimento). UPLC RtMi4 =0,56 min; ESIMS: 166 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,50 (s, 1H) , 6,45 (d, 1H) , 6,00 (d, 1H) , 5,85 (dd, 1H) , 5,25 (s, 1H) , 4,00 (m, 1H), 3,25 (m, 1H), 2,90 (m, 1H), 1,35 (d, 3H). e) [(S)-3-(2-Metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidin-l-il]-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
Uma solução seca de 2-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (69 mg, 0,42 mmol) e (R)- metanossulfonato de 1-(tetra-hidro-2H-pirano-4- carbonil)pirrolidin-3-ilo (intermediário Cl, 209 mg, 0,75 mmol) em DMF (1,4 mL) foi tratada com hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (15,8 mg, 0,63 mmol) e a mistura reacional foi agitada a 50 °C durante 18 h. A mistura reacional foi diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCh. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH, 100:0 a 95:5) como um sólido vermelho laranja pegajoso (128 mg, 88% de rendimento). UPLC RtMi4=l, 01 min; ESIMS: 347 [ (M+H) +] RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,50 (d, 1H) , 6,25 (d, 1H) , 6,00 (d, 1H) , 6,05 (m, 1H) , 5,65 (m, 2H) , 5,35 (d, 2H) , 4,45 (d, 2H) , 3, 00-4, 00 (m, 6H) , 2,00-2,40 (m, 4H), 1,5 (m, 4H) f) 2-Metoxi-5-{2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro- pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo
Uma mistura de (S)- (3-(2-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-iloxi)pirrolidin-l-il)(tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona (128 mg, 0,369 mmol), 5-bromo-2-metoxinicotinonitrilo (registo CAS 941294-54-8, IA12), (94 mg, 0,443 mmol), XPhos (8,81 mg, 0,018 mmol), NaOtBu (53,3 mg, 0,554 mmol) e Pd2(dba)3 (16,92 mg, 0,018 mmol) em tolueno (2,5 mL) foi desgaseifiçada com árgon. A mistura reacional foi agitada a 80 °C durante 20 min. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi filtrada através de hyflo, lavada com AcOEt e os filtrados foram lavados com sol. aq. sat. de NaHCCh. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O composto em epígrafe foi obtido após RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18 OBD 5 mm 30xl00mm, gradiente 32% a 67% de ACN em 15 min) . As frações foram liofilizadas e filtradas sobre um cartucho PL-HCO3 MP SPE para dar um sólido castanho (39,1 mg, 22% de rendimento). UPLC RtMi4 =1,10 min; ESIMS: 479 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de, 394 K) : δ 8,40-8,30 (m, 1H) , 8,10-8,00 (m, 1H) , 6,75 (d, 1H) , 6,35 (m, 1H) , 6,15 (m, 1H) , 4,75 (m, 1H) , 4,00 (s, 3H) , 3,85 (m, 1H) , 3,75-3, 00 (m, 5H) , 2,65 (m, 1H) , 2,00 (m, 1H) , 1,65 (m, 2H), 1,44 (d, 3H).
Exemplos 02 a 03: Os compostos listados na Tabela 10 foram preparados por separação cromatográfica de diastereómeros.
Tabela 10
Exemplo P: 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-
piperidin-4-ilmetil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo a) (S)-4-((3-(4-(5-Ciano-6-metoxipiridin-3-il)- 3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-iloxi)pirrolidin-1-il)metil)piperidina-l-carboxilato de terc-butilo
Uma solução de 2-metoxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo (ver análogo Bl, c), 95 mg, 0,270 mmol) em DCE (4,5 mL) foi tratada com 4-formilpiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (60 mg, 0,281 mmol). Depois de agitar durante 2 d à ta, a mistura reacional foi diluída com DCM e sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 0:100), rendimento 66 mg, (40%). UPLC RtMi =1,66 min; ESIMS: 550 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,35 (d, 1Η) , 7,75 (d, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 6,35 (dd, 1H) , 6,10 (d, 1H) , 4,65 (m, 1H) , 4,45 (m, 2H) , 3,60 (m, 2H) , 2,75-2,15 (m, 4H), 1,50 (s, 9H) . b) (S)-2-metoxi-5-(6-(1-(piperidin-4-ilmetil)pirrolidin-3-iloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo
Uma solução de (S)-4-((3-(4-(5-ciano-6-metoxipiridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b][1,4]oxazin-6-iloxi)pirrolidin-l-il)metil)piperidina-l-carboxilato) de terc-butilo (66 mg, 0,120 mmol) em DCM (2 mL) foi tratada com TFA (0,093 mL, 1,20 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 17 h, em seguida desativada com sol. aq. sat. de Na2C03 e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto em epígrafe (36 mg, 67% de rendimento). UPLC RtMi =1,03 min; ESIMS: 450 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,35 (d, 1Η) , 7,80 (d, 1H) , 7,25 (s, 1H) , 6,80 (d, 1H) , 6,25 (m, 1H) , 6,15 (d, 1H) , 4,65 (m, 1H) , 4,45 (m, 2H) , 3,60 (m, 2H) , 2,75-2,15 (m, 4H). c) (S)-2-metoxi-5-(6-(1-((l-metilpiperidin-4-il)metil)pirrolidin-3-iloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)-il)nicotinonitrilo
Uma solução de (S)-2-metoxi-5-(6-(1-(piperidin-4-ilmetil)pirrolidin-3-iloxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)- il) nicotinonitrilo (36 mg, 0, 080 mmol) em DCE (2 mL) foi tratada com uma sol. aq. de formaldeido a 37% (8,94 yL, 0,120 mmol) . A solução foi agitada sob árgon à ta durante 15 min, em seguida foi adicionado NaBtRCN (50,9 mg, 0,240 mmol) . A mistura resultante foi agitada à ta durante 30 min, diluída com DCM e sol. aq. sat. de NaHC03. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04 e concentrada. O composto em epígrafe foi obtido após purificação por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18, gradiente 15-50% ACN em 15 min) . As frações foram extraídas com DCM/sol. aq. sat. de NaHCCb, secas sobre Na2S04, concentradas e liofilizadas para dar o composto em epígrafe (18 mg, 48% de rendimento). UPLC RtMi =1,04 min; ESIMS: 464 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,35 (d, 1H) , 7,85 (d, 1H) , 7,45 (s, 1H) , 6,75 (d, 1H) , 6,35 (dd, 1H) , 6,15 (d, 1H) , 4,65 (m, 1H) , 4,45 (m, 2H) , 3,25 (m, 2H) , 2,75- 2,15 (m, 4H) , 2,65 (s, 3H) , 1,95 (m, 2H) , 1,65 (m, 2H) .
Exemplo Q: {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-1-11}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
a) 6-(terc-Butil-dimetil-silaniloxi)-4H- benzo[1,4]oxazin-3-ona
Uma solução de 6-hidroxi-2H-benzo[b][l,4]oxazin-3(4H)-ona (registo CAS 53412-38-7) (1076 mg, 6,52 mmol) em DMF (8 mL) foi tratada à ta com TBDMSC1 (1080 mg, 7,17 mmol) e imidazole (532 mg, 7,82 mmol) . Depois de agitar durante 18 h à ta, a mistura reacional foi diluída com DCM e lavada com água. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 50:50) como um sólido branco (1,18 g, 65% de rendimento). UPLC RtM2 =1,91 min; ESIMS: 280 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,85 (s 1, 1H) , 7,35 (s, 1H) , 6,85 (d, 1H) , 6,45 (m, 1H) , 6,30 (d, 1H) , 4,50 (s, 2H), 1,00 (s, 9H), 0,25 (s, 6H). b) 3,3-Dideutero-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazin-6-ol
Uma solução de 6-(terc-butil-dimetil-silaniloxi)-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona (8,34 g, 29,8 mmol) em THF (100 mL) foi tratada a 0 °C com deutereto de alumínio lítio (2,26 g, 59,7 mmol). Depois de agitar durante 18 h à ta a mistura reacional foi adicionada a uma sol. aquosa 1 M de sal de Rochelle fria e foi extraída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 0:100) como um sólido branco (1,40 g, 31% de rendimento). UPLC RtMg =0,69 min; ESIMS: 154 [ (M+H) +] . RMN de χΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,50 (s 1H) , 6,45 (d, 1H) , 6,00 (d, 1H) , 5,85 (m, 1H) , 5,15 (s, 1H) , 4,00 (s, 2H) . c) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-(3,3-dideutero-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-1-carboxilico
Uma solução seca de 3,3-dideutero-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (1,44 g, 9,40 mmol) e (R)-éster terc-butilico do ácido 3-metanossulfoniloxi-pirrolidina-1-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (5,49 g, 20,68 mmol) em DMF (10 mL) foi tratada com hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (0,752 g, 18,80 mmol) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 2 d. A mistura reacional foi diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 0:100), para produzir 4,12 g, (rendimento quantitativo) do composto em epígrafe. UPLC RtMi =1,07 min; ESIMS: 323 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 6,65 (m, 1H) , 6,15 (m, 2H) , 5,35 (m, 1H) , 4,85 (m, 2H) , 3,50 (m, 4H) , 2,15 (m, 2H), 1,50 (s, 9H). d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,3-dideutero-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Este exemplo foi preparado por analogia ao
Exemplo G1, e). UPLC RtMi =2,00 min; ESIMS: 444 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 7,95 (s 1, 1H) , 7.45 (s 1, 1H) , 6,80 (m, 1H) , 6,25 (m, 1H) , 4,75 (m, 1H) , 4.35 (s, 2H) , 4,00 (s, 3H) , 3,50 (m, 4H) , 2,25 (m, 2H) , 1,50 (s, 9H). e) 4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,3-dideutero-6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo- [1,4]oxazina
Este exemplo foi preparado por analogia ao
Exemplo G1, f). UPLC RtMi =1,26 min; ESIMS: 342 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 7,95 (s 1, 1H) , 7.45 (s 1, 1H) , 6,80 (m, 1H) , 6,25 (m, 1H) , 4,75 (m, 1H) , 4.35 (s, 2H) , 4,00 (s, 3H) , 3,15 (m, 2H) , 2,75 (m, 2H) , 2,25 (m, 2H). f) {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
Este exemplo foi preparado por analogia ao
Exemplo BI, d). UPLC RtMi =1,65 min; ESIMS: 456 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13, 298 K) : δ 8,45 (m, 1Η) , 8,29 (s, 1H) , 7,21 (t, 1H) , 6,20 (t, 1H) , 6,10 (s, 1H) , 5,00 (d, 1H) , 4,37 (t, 2H) , 4,00 (m, 3H) , 3,39-3,74 (m, 4H), 2,50 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 1,09-2,10 (m, 5H).
Exemplo R: 5-{6-[(S)-1-(4-Hidroxi-ciclo- hexanocarbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo
Este exemplo foi preparado por analogia ao
Exemplo J, partindo de 2-metoxi-5-{6-[(S)-1-((S)- pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo. UPLC RtMi4 =0,91 min; ESIMS: 478 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,43 (d, 1H) , 8.28 (d, 1H) , 6,73 (m, 1H) , 6,34 (m, 1H) , 6,08 (dd, 1H) , 4,76 (d, 1H) , 4,51 (m, 1H) , 4,22 (s, 2H) , 4,00 (s, 3H) , 3,20-3,71 (m, 9H), 1,09-2,10 (m, 10H).
Exemplo S: 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(2-piridin-4-il-acetil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin- 4-11}-nicotinonitrilo
Este exemplo foi preparado por analogia ao Exemplo J, partindo de 2-metoxi-5-{6-[(S)-1-((S)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo. UPLC RtMi4 =0,82 min; ESIMS: 471 [ (M+H) +] RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-d6) : δ 8,45 (m, 3H) , 8.29 (s, 1H) , 7,21 (m, 2H) , 6,74 (m, 1H) , 6,33 (m, 1H) , 6,10 (m, 1H) , 4,87 (d, 1H) , 4,22 (s, 2H) , 4,00 (s, 3H) , 3,39-3,74 (m, 8H), 1,09-2,10 (m, 2H).
Exemplo T: {(S)-3-[4-(5-Amino-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-1-il}-(l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona a) Éster metilico do ácido 5-[6-((S)-1-terc-butoxicarbonil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotínico
Sob árgon, foram adicionados K3PO4 (815 mg, 2,00 mmol) e bis-(t-butilfosfina)paládio (29,4 mg. 0,06 mmol) a uma solução de éster terc-butilico do ácido (S)-3-(3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico (preparado como se descreve no passo a) exemplo B) (615 mg, 1,92 mmol) e éster metilico do ácido 5-bromo-2-metoxi-nicotínico (IA 22, registo CAS 122433-41-4) (614 mg, 1,30 mmol) em tolueno (6 mL) . A mistura reacional foi desgaseifiçada com árgon durante 15 min, em seguida agitada a 110 °C durante 18 h, diluída com AcOEt e lavada com uma sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre MgSCb e concentrada para proporcionar o composto em epígrafe em bruto que foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 90:10 a 0:100) para dar uma goma amarela (474 mg, 51% de rendimento). UPLC RtM2 =1,36 min; ESIMS: 486 [ (M+H) +] . b) Ácido 5-[6-((S)-1-terc-butoxicarbonil- pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinico
Uma solução de éster metilico do ácido 5— [6— ( (S) — l-terc-butoxicarbonil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo [ 1 , 4 ] oxazin-4-il ] -2-metoxi-nicotinico (483 mg, 0,99 mmol) em dioxano (5 mL) foi tratada com uma solução de pastilhas de hidróxido de sódio (119 mg, 2,98 mmol) em água (2 mL) . A solução foi agitada a 80 °C durante 1 h. A mistura reacional foi acidificada até pH 3 com sol. aq. HC1 IN e extraida com AcOEt. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCh e concentradas para proporcionar o composto em epígrafe após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 100:0 a 0:100, em seguida AcOEt/MeOH 90:10 a 80:20) como um sólido (370 mg, 79% de rendimento). UPLC RtM6 =1,79 min; ESIMS: 372 [(M+H-100)+] RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,22-8,48 (m, 2H) , 6,82 (d, 1H) , 6,33 (m, 1H) , 6,21 (d, 1H) , 4, 60-4,76 (m, 1H) , 4,27-4,41 (m, 2H) , 4,15-4,27 (m, 3H) , 3, 62-3,77 (m, 2H) , 3,31-3,58 (m, 5H) , 1,85-2,19 (m, 2H), 1,34-1,56 (m, 9H) c)(S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(5-terc-butoxicarbonilamino-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma solução de ácido 5-[ 6-( (S)-1-terc-butoxicarbonil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinico (370 mg, 0,78 mmol) e Et3N (0,28 mL, 1,96 mmol) em tBuOH (5 mL) foi tratada com DPPA (registo CAS 26386-88-9) (0, 17 mL, 0,78 mmol) e agitada a 100 °C durante 6 h. Foram adicionados DCM e sol. aq. sat. de NaHCCb, a camada orgânica foi separada por eluição através de um cartucho de separação de fases e concentrada para proporcionar o composto em epígrafe após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 100:0 a 50:50) como uma goma cor-de-rosa (114 mg, 24%). UPLC RtM2 =1,36 min; ESIMS: 486 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,42 (s 1, 1H) , 7,75 (d, 1H) , 7,02 (s, 1H) , 6,78 (d, 1H) , 6,15-6,41 (m, 1H), 4,71 (s 1, 1H), 4,23-4,39 (m, 2H), 4,09-4,22 (m, 3H), 3, 62-3,75 (m, 2H) , 3,31-3,58 (m, 4H) , 1,86-2,26 (m, 2H) , 1,40-1,60 (m, 18H). d) 2-Metoxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridin-3-ilamina
Uma solução de (S)-éster terc-butilico do ácido 3-[4- (5-terc-butoxicarbonilamino-6-metoxi-piridin-3-il) - 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-1-carboxilico (130 mg, 0,24 mmol) em DCM (2 mL) foi tratada com TFA (registo CAS 76-05-1) e agitada à ta durante 1 h. A mistura reacional foi concentrada para proporcionar o composto em epígrafe após eluição de um cartucho Isolute SCX-2 de 2 g (eluente MeOH, em seguida NH3 2M/MeOH) como uma goma amarela (88 mg, quant, em bruto). UPLC RtM2 =1,25 min; ESIMS: 343 [ (M+H) +] . e) {(S)-3-[4-(5-Amino-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona
Uma solução de ácido l-metil-lH-imidazole-4-carboxílico (registo CAS 41716-18-1) (36,0 mg, 0,26 mmol) e
Et3N (0,11 mL, 0,78 mmol) em DMF (1 mL) foi tratada com HBTU (registo CAS 94790-37) (107 mg, 0,28 mmol). Depois de agitar à ta durante 20 min, a mistura reacional foi arrefecida até 5 °C e foi adicionada uma solução de 2-metoxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridin-3-ilamina (88 mg, 0,26 mmol) em DMF (3 mL). A mistura reacional foi agitada à ta durante 1 h, concentrada e o resíduo foi retomado em DCM (10 mL) , lavado com um sol. aq. sat. de NaHCCb (5 mL) , a camada orgânica foi separada por eluição através de um cartucho de separação de fases e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 100:0 a 0:100), as frações combinadas foram concentradas, dissolvidas em tBuOH/fhO e liofilizadas para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido incolor (21 mg, 37% de rendimento). UPLC RtM2 =0,85 min; ESIMS: 451 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CD3OD) : δ 7,64 (s, 1H) , 7,62 (s, 1H) , 7,65 m, 1H) , 6,93 (m, 1H) , 6,70 (m, 1H) , 6,20-6,34 (m, 1H) , 6,15 (m, 1H) , 4,81 (m, 1H) , 4,19-4,31 (m, 2H) , 3, 90-4,05 (m, 4H) , 3,55-3, 83 (m, 8H), 2,04-2,28 (m, 2H) .
Exemplo U: N-(2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-lH-imidazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-piridin-3-il)-metanossulfonamida
Uma solução de { (S)-3-[4-(5-Amino-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]-oxaziniloxi]-pirrolidin-l-il}-(l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona (22,9 mg, 0,05 mmol) em piridina (1 mL) foi tratada com cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (0,08 mL, 0,97 mmol) e agitada a 50 °C durante 18 h. A mistura reacional foi diluida com DCM e H2O, a camada orgânica foi separada por eluição através de um cartucho de separação de fases e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt 100:0 a 0:100, em seguida AcOEt/MeOH 90:10 a 80:20), as frações combinadas foram concentradas, dissolvidas em tBuOH/fLO e liofilizadas para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido incolor (14 mg, 49%). UPLC RtM2 =1,39 min; ESIMS: 529 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD): δ 7,87 (d, 1H), 7,41- 7,76 (m, 3H) , 6,73 (m, 1H) , 6, 02-6, 44 (m, 2H) , 4,14-4,39 (m, 2H) , 3,87-4,12 (m, 5H) , 3,55-3,84 (m, 8H) , 2,85-3,08 (m, 3H), 1,75-2,40 (m, 2H).
Exemplo V: (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*- tiopirano-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)- 5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
a) 6-Metoxi-5-metil-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
Uma solução de 6-bromo-5-metil-4H- benzo[1,4]oxazin-3-ona (registo CAS 1154740-47-2) (1000 mg, 4,13 mmol) e Cul (79 mg, 0,41 mmol) em NaOMe a 30% em MeOH (8,1 mL) foi agitada a 130 °C durante 5 h. A mistura laranja/castanha foi arrefecida até à ta, diluída com AcOEt e lavada com um sol. aq. sat. de NaHCCb. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCb e concentradas para proporcionar um sólido laranja. A trituração com ciclo-hexano proporcionou o composto em epígrafe como um sólido cor-de-rosa (647 mg, 70% de rendimento). HPLC TrMi =0,73 min. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 10,21 (s, 1Η) , 6,76 (d, 1H) , 6,53 (d, 1H) , 4,42 (s, 2H) , 3,71 (s, 3H) , 2,05 (s, 3H). b) 6-Hidroxi-5-metil-4H-benzo[1,4]oxazin-3-ona
Uma suspensão de 6-metoxi-5-metil-4H- benzo [ 1,4] oxazin-3-ona (647 mg, 3,35 mmol) em DCM (30 mL) foi tratada sob árgon à ta com BBr3 (3,16 mL, 33,5 mmol) e agitada durante 18 h à ta. A mistura reacional foi desativada por adição gota a gota de MeOH a 0 °C, até à obtenção de uma solução transparente. Após remoção dos solventes, o resíduo foi vertido sobre gelo/ sol. aq. sat. de NaHC03 e extraído com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre MgS04 e concentrada para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido castanho (647 mg, em bruto), que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. HPLC TrMi =0,4 9 min. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 10,11 (s, 1Η) , 6,43 (d, 1H) , 5,98 (d, 1H) , 4,57 (s, 2H) , 1,89 (s, 3H) . c) 5-Metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
Uma solução de 6-hidroxi-5-metil-4H- benzo [ 1,4] oxazin-3-ona (647 mg, 3,61 mmol) em THF (20 mL) foi tratada sob árgon a 0 °C com BH3*THF (1M em THF, 10.83 mL, 10,83 mmol) e agitada durante 18 h à ta. Foi adicionado MeOH e a solução foi agitada à ta durante 1 h, concentrada para proporcionar um resíduo que foi dissolvido em THF (20 mL) , tratado com BH3*THF (1M em THF, 10,83 mL, 10.83 mmol) e agitado à ta durante 18 h. Foi adicionado MeOH, a solução foi agitada à ta durante 4 h, concentrada até à secura para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido castanho (600 mg, em bruto), que foi utilizado no passo seguinte sem mais purificação. HPLC TrMi =0,49 min; ESIMS: 166 [ (M+H) +] . d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-(5-metil- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico
Uma solução de trifenilfosfina (1,33 g, 5,09 mmol) em THF (10 mL) foi tratada com DEAD (0,8 mL, 5,09 mmol), seguido de (R)-éster terc-butílico do ácido 3-hidroxi-pirrolidina-l-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (1 g, 5,45 mmol) e 5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (600 mg, 3,63 mmol). A solução vermelha/castanha resultante foi agitada a 70 °C durante 18 h. A mistura castanha foi arrefecida, diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCh. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCh, filtradas e concentradas para proporcionar um óleo castanho. O produto em bruto foi purificado três vezes por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 90:10 a 40:60) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo incolor (130 mg, 11 % de rendimento) HPLC TrMi =1,09 min; ESIMS: 335 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,44 (d, 1Η) , 6, 22-6, 04 (m, 1H) , 5,24 (s 1, 1H) , 4,75 (s 1, 1H) , 4,07- 3,93 (m, 2H) , 3,45-3,33 (m, 3H) , 3,28 (d, 7H) , 2,00 (d, 2H), 1,83 (d, 3H), 1,46-1,32 (m, 9H). e) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma solução de (S)-éster terc-butílico do ácido 3-(5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi)-pirrolidina-1-carboxílico (120 mg, 0,36 mmol), 5-bromo-2-metoxi-3-metilpiridina (registo CAS 760207-87-2) (145 mg, 0,72 mmol), NaOtBu (103 mg, 1,08 mmol), RuPhos (registo CAS 787618-22-8) (8 mg, 0,02 mmol) e [RuPhos]paladaciclo (registo CAS 787618-22-8) (15 mg, 0,02 mmol) em dioxano (2 mL) foi agitada a 100 °C durante 18 h. A mistura laranja/castanha foi arrefecida, diluída com AcOEt e lavada com água. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, filtradas e concentradas para proporcionar um óleo castanho. O produto em bruto foi purificado três vezes por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 95:05 a 60:40) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (97 mg, 60% de rendimento) HPLC TrMi =1,37 min; ESIMS: 456 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,40 (d, 1H) , 7,28-7,07 (m, 1H), 6,74 (s, 2H), 4,84 (s 1, 1H), 3,96 (s 1, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,57 (s 1, 2H), 3,44-3,19 (m, 10H), 2,08 (s, 3H) , 2,05-1, 92 (m, 2H) , 1,60 (d, 3H) , 1,34 (d, 9H) . f) (1,1 -Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
Uma solução de (S)-éster terc-butílico do ácido 3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxílico (97 mg, 0,21 mmol) em DCM (3 mL) foi tratada sob árgon à ta com TFA (0,16 mL, 2,13 mmol) e agitada durante 6 h. A mistura reacional foi desativada com sol. aq. sat. de NaHCCb e a solução orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fases proporcionando uma solução amarela. Foram adicionados ácido 1,1-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-carboxílico (registo CAS 64096-87-3) (49 mg, 0,28 mmol) , Et3N (0,09 mL, 0,64 mmol) , EDC (62 mg, 0,32 mmol), HOBT (49 mg, 0,32 mmol) à solução amarela e agitada à ta durante 18 h. A mistura reacional foi desativada com sol. aq. sat. de NaHCCh e a camada orgânica foi separada fazendo-a passar através de um cartucho de separação de fases, em seguida concentrada e purificada por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18 OBD 5 mm 30xl00mm, Solvente A: H20 (0,1% TFA) Solvente B: CH3CN (0,1% TFA) proporcionou o composto em epígrafe como sólido branco (76 mg, 70% de rendimento) HPLC TrMi =0,98 min; ESIMS: 516 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de, 375K) : δ 7,44 (s 1, 1H) , 7,18 (s 1, 1H) , 6,75 (s, 2H) , 4,88 (s 1, 1H) , 4,02 (t, 2H) , 3,86 (s, 3H) , 3,81-3,33 (m, 6H) , 3,24-3, 06 (m, 4H) , 2,83 (s 1, 1H), 1,66 (s, 3H). Rotâmeros.
Exemplo W: {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil- piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6- iloxi]-pirrolidin-l-il}- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona Le
a) 6-Bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 6-bromo-5-metil-4H- benzo[1,4]oxazin-3-ona (registo CAS 1154740-47-2) (425 mg, 1,56 mmol) em THF (9 mL) foi tratada sob árgon a 0 °C com BH3*THF (1M em THF, 4,7 mL, 4,69 mmol) e agitada durante 18 h à ta. Foi adicionado BH3.THF 1M (2 mL) e a agitação foi prosseguida durante mais 24 h. A mistura reacional foi concentrada e purificada por cromatografia flash sobre silica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 80:20) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (324 mg, 86% de rendimento) HPLC TrMi =1,04 min; ESIMS: 228, 230 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,68 (d, 1Η) , 6,48 (d, 1H) , 5,54 (s 1, 1H) , 4,04 (t, 2H) , 3,36-3,26 (m, 2H), 2,11 (s, 3H). b) 6-Bromo-4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 6-bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo [ 1,4]oxazina (324 mg, 1,42 mmol), Intermediário IAl (391 mg, 1,56 mmol), CS2CO3 (1018 mg, 3,13 mmol), BINAP (registo CAS 98327-87-8) (44 mg, 0,07 mmol), Pd(OAc)2 (registo CAS 3375-31-3) (32 mg, 0,14 mmol) em tolueno (13 mL) foi agitada a 100 °C durante 18 h. Foram novamente introduzidos catalisador e ligando e a agitação foi prosseguida durante mais 24 h a 100°c. A mistura reacional foi arrefecida até à ta, diluída com AcOEt e lavada com água. A concentração da camada orgânica e purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 97:03 a 40:60) proporcionou o composto em epígrafe como um sólido laranja (345 mg, 58% de rendimento). HPLC TrMi =1,13 min; ESIMS: 397,399 [(M+H)+]. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,99 (s 1, 1Η) , 7,37 (d, 1H) , 7,24 (s 1, 1H) , 6,83 (d, 1H) , 4,13 (t, 2H) , 3, 97-3, 86 (m, 2H) , 3,30 (s, 3H) , 2,52 (s, 3H) , 1,93 (s, 3H) . c) Benzil-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-amina
Uma solução de 6-bromo-4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (324 mg, 0,82 mmol), benzilamina (350 mg, 3,26 mmol), NaOtBu (157 mg, 1,63 mmol), RuPhos (registo CAS 787618-22-8) (30 mg, 0,06 mmol) e [BrettPhos]paladaciclo (registo CAS 1148148-01-9) (52 mg, 0,06 mmol) em dioxano (16 mL) foi agitada a 80 °C durante 0,5 h. A filtração, concentração do filtrado e purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 88:12 a 35:65) proporcionou o composto em epígrafe como um óleo amarelo (228 mg, 66% de rendimento). HPLC TrMi =1,13 min; ESIMS: 424 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de): δ 7,94 (s 1, 1H) , 7,40-7,33 (m, 2H) , 7,30 (t, 2H) , 7,19 (t, 2H) , 6,58 (d, 1H) , 6,30 (d, 1H) , 5,25 (t, 1H) , 4,30 (d, 2H) , 4,04-3,97 (m, 2H) , 3,90 (d, 2H) , 3,29 (s, 3H) , 2,51 (s 1, 3H) , 1,76 (s, 3H). d) 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilamina
Uma solução de benzil-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-il]-amina (228 mg, 0,53 mmol), ácido acético (0,21 mL, 3,70 mmol), Pd/C em MeOH/THF (2,5/2,5 mL) foi hidrogenada com H2 à ta durante 65 h. A filtração e concentração do filtrado proporcionaram o composto em epígrafe como um óleo verde (200 mg, em bruto, que contionha AcOH remanescente). HPLC TrMi =0,64 min; ESIMS: 334 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,96 (s 1, 1Η) , 7,17 (s 1, 1H) , 6, 62-6, 54 (d, 1H) , 6, 54-6, 45(d, 1H) , 4,48 (s 1, 2H), 4,01 (t, 2H), 3,88 (s 1, 2H), 3,28 (s, 3H) , 1,88 (d, 3H), 1,63 (s, 3H) . e) 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
Uma solução de 4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilamina (200 mg, 0,60 mmol) em água (3,5 mL) e H2SO4 (0,32 mL) foi adicionada gota a gota a uma solução de nitrito de sódio (49,7 mg, 0,72 mmol) em água (10 mL) a 0 °C. A mistura foi agitada à ta durante 3 d. A mistura reacional foi filtrada e o filtrado foi desativado com sol. aq. sat. de NaHC03 e extraído com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre MgSCA, filtrada e concentrada para proporcionar um óleo castanho. A purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH 88:12 a 80:20) proporcionou o composto em epígrafe como um óleo castanho (50 mg, 25% de rendimento). HPLC TrMi =0,78 min; ESIMS: 335 [ (M+H) +] . f) (1,1 l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano- 4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona
Uma solução de trifenilfosfina (55 mg, 0,21 mmol) em THF (2,5 mL) foi tratada com DEAD (0,03 mL, 0,21 mmol), seguida de (R)-éster terc-butílico do ácido 3-hidroxi-pirrolidina-l-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (33 mg, 0,18 mmol) e 4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (50 mg, 0,15 mmol). A solução vermelha/castanha resultante foi agitada a 70 °C durante 18 h. A mistura reacional foi arrefecida até à ta, diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHC03. A camada orgânica foi seca sobre MgS04, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 90:10 a 40:60) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (44 mg, 58% de rendimento) HPLC TrMi =1,16 min; ESIMS: 504 [ (M+H) +] . g) {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
Uma solução de (1,1-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)- 5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona (44 mg, 0,09 mmol) em DCM (4 mL) foi tratada sob árgon à ta com TFA (0,07 mL, 0,17 mmol) e agitada durante 18 h. A mistura reacional foi desativada com sol. aq. sat. de NaHCCb e a solução orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fases, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH 100:0 a 90:10). O produto obtido foi dissolvido em DCM (4 mL) e foi adicionada Et3N. Foi adicionado cloreto de tetra-hidropirano-4-carbonilo (registo CAS 40191-32-0) (15 mg, 0,10 mmol) à mistura reacional a 0 °C e a solução laranja resultante foi agitada à ta durante 4 h. A mistura reacional foi desativada com sol. aq. sat. de NaHC03 e a camada orgânica foi separada por eluição através de um cartucho de separação de fases, concentrada e purificada por SFC (coluna NH2 (250 x 30mm (1 x w) , 60A, 5ym, Princeton, gradiente de metanol em CO2 supercrítico) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (15 mg, 32% de rendimento) HPLC TrMi =0,88 min; ESIMS: 516 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de, 375K) : δ 7,98 (s 1, 1 Η), 7,19 (s 1, 1 Η), 6, 92 - 6, 85 (m, 1 Η), 6,85 - 6,77 (m, 1 Η), 4,95 (s 1, 1 Η), 4,12 (t, 2 Η), 3,92 (t, 2 Η), 3,88 (s 1, 2 Η), 3,61 (s 1, 3 Η), 3,38 (td, 2 Η), 3,27 (s, 3 Η), 2,68 (d, 1 Η), 2,56 (s, 3 Η), 2,17 (s 1, 2 Η), 1,73 (s, 3 Η), 1,58 (s 1, 4 Η). Rotâmeros.
Exemplo X: {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoxi- piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,l-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona
a) 6-Bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H- benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 6-bromo-5-metil-4H- benzo[1,4]oxazin-3-ona (registo CAS 1154740-47-2) (2,8 g, 11,56 mmol) em THF (50 mL) foi tratada sob árgon com BH3*THF (1M em THF, 34,7 mL, 34,70 mmol) e aquecida sob refluxo durante 2 h. Foi adicionado MeOH e a solução foi agitada à ta durante 1 h, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 80:20) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (1,8 g, 68% de rendimento). HPLC TrMi =1,04 min; ESIMS: 228, 230 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 6,68 (d, 1H) , 6,48 (d, 1H) , 5,54 (s 1, 1H) , 4,04 (t, 2H) , 3,36-3,26 (m, 2H), 2,11 (s, 3H). b) 6-Bromo-4-(5-difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina
Uma solução de 6-bromo-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo [ 1,4]oxazina (500 mg, 2,19 mmol), Intermediário IA6 (574 mg, 2,41 mmol), NaOtBu (421 mg, 4,38 mmol), BrettPhos (registo CAS 1070663-78-3) (59 mg, 0,11 mmol) e [BrettPhos]paladaciclo (registo CAS 1148148-01-9) (88 mg, 0,11 mmol) em dioxano (11 mL) foi agitada a 100 °C durante 18 h. Foram novamente introduzidos catalisador e ligando e a agitação foi prosseguida a 100 °C durante 48 h. A mistura reacional foi arrefecida até à ta, diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHC03. A camada orgânica foi seca sobre MgS04, concentrada para proporcionar um óleo castanho. A purificação por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 80:20) proporcionou o composto em epígrafe como um óleo castanho (150 mg, 18% de rendimento). HPLC TrMi =1,34 min; ESIMS: 385, 387 [ (M+H) +] . c) 4-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol
Uma mistura de 6-bromo-4-(5-difluorometil-6- metoxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo [ 1,4] oxazina (150 mg, 0,39 mmol) , KOH (65 mg, 1,17 mmol) em água (0,33 mL) , tetrametil-t-butil-XPhos (registo CAS 857356-94-6) (18,72 mg, 0,04 mmol) e Pd2(dba)3 (17,83 mg, 0,02 mmol) em dioxano (2 mL) foi desgaseifiçada com azoto e aquecida a 100 °C durante 18 h. A filtração, concentração e purificação por cromatografia flash sobre silica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 70:30) proporcionou o composto em epígrafe como um óleo laranja (65 mg, 52% de rendimento). HPLC TrMi =1,01 min; ESIMS: 323 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,83 (s, 1H) , 7,89 (d, 1H) , 7,36 (d, 1H) , 7,00 (t, 1H) , 6,61 (d, 1H) , 6,55 (d, 1H) , 3,93 (t, 2H) , 3,88 (s, 3H) , 3,65 (t, 2H) , 1, 60 (s, 3H) . d) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(5- difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma solução de trifenilfosfina (74 mg, 0,28 mmol) em THF (2 mL) foi tratada com DEAD (0,04 mL, 0,28 mmol), seguido de (R)-éster terc-butilico do ácido 3-hidroxi-pirrolidina-l-carboxílico (registo CAS 127423-61-4) (45 mg, 0,24 mmol) e 4-(5-difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5- metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ol (65 mg, 0,20 mmol). A solução vermelha/castanha resultante foi agitada a 70 °C durante 18 h, arrefecida até à ta, diluída com AcOEt e lavada com sol. aq. sat. de NaHC03 A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 70:30) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido amarelo (51 mg, 42% de rendimento). HPLC TrMi =1,36 min; ESIMS: 492 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,92-7,75 (m, 1Η) , 7,46-7,33 (m, 1H) , 7,19-6,84 (t, 1H) , 6,77 (s, 2H) , 4,86 (s 1, 1H) , 3,98 (s 1, 2H) , 3,88 (s, 3H) , 3,73-3, 55 (m, 2H) , 3,46-3,33 (m, 2H) , 2,12-1,95 (m, 2H) , 1,65-1,55 (m, 3H), 1,34 (s 1, 9H). Rotâmeros. e) { (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,l-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona
Uma solução de (S)-éster terc-butilico do ácido 3- [4- (5-difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-1-carboxilico (51 mg, 0,10 mmol) em DCM (3 mL) foi tratada sob árgon à ta com TFA (0,08 mL, 1,10 mmol) e agitada durante 18 h. A mistura reacional foi desativada com sol. aq. sat. de NaHCCh e a solução orgânica foi separada
através de uma separação de fases proporcionando uma solução amarela. Foram adicionados ácido 1,1-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-carboxílico (registo CAS 64096-87-3) (25 mg, 0,14 mmol), Et3N (0,05 mL, 0,33 mmol), EDC (31 mg, 0,16 mmol) e HOBT (25 mg, 0,16 mmol) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 3 h. A mistura reacional foi desativada com sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi separada por eluição através de um cartucho de separação de fases, o produto em bruto foi purificado sobre SFC (coluna Reprosil NH2 (250 x 30mm (1 x w), 60A, 5ym, Princeton, gradiente de metanol em CO2 supercritico) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo (19 mg, 30% de rendimento) HPLC TrMi =1,00 min; ESIMS: 552 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de, 375K): δ 7,85 (s 1, 1 Η), 7,43 (s 1, 1 Η), 6,96 (t, 1 Η), 6,80 (s, 2Η) , 5,11- 4,71 (m, 1 Η), 4,04 (t, 2 Η), 3,94 (s, 3Η), 3,70 (d, 2 Η), 3,63 (s 1, 2 Η), 3,52 (s 1, 2 Η), 3,23-3, 04 (m, 4Η) , 2,92- 2,73 (m, 1 Η), 2,16 (s 1, 2 Η), 2,06 (s 1, 4Η) , 1,67 (s, 3 Η), Rotâmeros.
Exemplo Υ: 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro- pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilamino]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo
a) 5-Iodo-2-metoxi-nicotinonitrilo
Uma mistura de 2-metoxi-nicotinonitrilo (registo CAS 7254-34-4) (10 g, 74,6 mmol) e N-iodossuccinimida (registo CAS 516-12-1) (25,2 g, 112 mmol) foi tratada com ácido trifluoroacético (registo CAS 76-05-1) (68,9 mL, 895 mmol) e anidrido trifluoroacético (registo CAS 407-25-0) (31,6 mL, 224 mmol) e a mistura reacional foi aquecida a 90 °C durante 18 h, em seguida arrefecida até ta e vertida sobre gelo. A mistura foi lentamente basificada utilizando sol. aq. de NaOH a 30%, diluída com água e extraída com AcOEt. A camada orgânica foi sucessivamente lavada com sol. aq. de 20% tiossulfato de sódio a 20% e sol. aq. sat. de NaHC03, seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada. O composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 20:80) como um sólido (12,2 g, 63% de rendimento) UPLC RtMi4 =1,30 min; ESIMS: 261 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,54 (d, 1H) , 8,11 (d, 1H), 4,06 (s, 3H). b) 5-(6-Bromo-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metoxi-nicotinonitrilo
Uma mistura de 6-bromo-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina (registo CAS 105655-01-4) (5,0 g, 23,36 mmol), 5-iodo-2-metoxi-nicotinonitrilo (12,2 g, 46,7 mmol) e NaOtBu (2,69 g, 28,0 mmol) em tolueno (50 mL) foi desgaseifiçada com árgon durante 10 min, em seguida foi adicionado bis (tri-terc-butilfosfina)-paládio(0) (0,36 g, 0,70 mmol). A mistura reacional agitada a 110 °C durante 18 h sob árgon. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi filtrada através de celite, lavada com AcOEt e os filtrados foram lavados com sol. aq. sat. NaHC03. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre silica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 50:50) para produzir o composto em epígrafe (4,2 g, 52% de rendimento). UPLC RtMi4 =1,55 min; ESIMS: 348 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,31 (d, 1H) , 7,80 (d, 1H) , 6,89 (dd, 1H) , 6,78 (d, 1H) , 6,67 (d, 1H) , 4,30- 4,35 (m, 2H) , 4,10 (s, 3H) , 3,61-3,66 (m, 2H) . c) (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(5-ciano-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilamino]-pirrolidina-l-carboxilico
Uma mistura de 5-( 6-bromo-2,3-di-hidro- benzo[1,4]oxazin-4-il)-2-metoxi-nicotinonitrilo (300 mg, 0,87 mmol), (S)-éster terc-butílico do ácido 3-amino- pirrolidina-l-carboxílico (registo CAS 147081-44-5) (0,26 mL, 1,47 mmol), 2-(diciclo-hexilfosfino)bifenilo (registo CAS 247940-06-3) (18,2 mg, 0,05 mmol) e NaOtBu (100 mg, 1,04 mmol) em tolueno (10 mL) foi desgaseifiçada com árgon durante 10 min, em seguida foi adicionado Pd2(dba)3 (23,8 mg, 0,03 mmol). A mistura reacional foi agitada a 110 °C durante 1 h sob árgon. Depois de arrefecer até à ta, a mistura reacional foi filtrada através de celite, lavada com AcOEt e os filtrados foram concentrados. O composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt, 100:0 a 70:30) como uma espuma amarela (150 mg, 37% de rendimento). UPLC RtMii = 2,73 min; ESIMS: 452 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CD3OD) : δ 8,36 (d, 1H) , 8,04 (d, 1H) , 6,68 (s, 1H) , 6,19 (dd, 1H) , 6,03 (s, 1H) , 4,19- 4,24 (m, 2H) , 4,06 (s, 3H) , 3,81-3,89 (m, 1H) , 3,62-3,68 (m, 2H) , 3,48-3,56 (m, 1H) , 3,35-3,48 (m, 2H) , 3,08-3,18 (m, 1H) , 2,05-2,18 (m, 1H) , 1,75-1, 87 (m, 1H) , 1,46 (s, 9H) . d) 2-Metoxi-5-[6-((S)-pirrolidin-3-ilamino)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo
Uma solução de (S)-éster terc-butilico do ácido 3-[4-(5-ciano-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-ilamino]-pirrolidina-l-carboxílico (144 mg, 0,32 mmol) em CH2CI2 (4 mL) foi tratada com TFA (0,49 mL, 6,38 mmol). A mistura reacional foi agitada à ta durante 2 h, desativada com sol. aq. sat. de NaHCCb e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto em epígrafe como uma espuma amarela (120 mg, 100% de rendimento). UPLC RtMii = 2,06 min; ESIMS: 352 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CD3OD) : δ 8,36 (d, 1H) , 8,04 (d, 1H) , 6,69 (d, 1H) , 6,17 (dd, 1H) , 6,00 (d, 1H) , 4,19- 4,26 (m, 2H) , 4,06 (s, 3H) , 3, 80-3, 90 (m, 1H) , 3,62-3,69 (m, 2H) , 3,10-3,20 (m, 2H) , 2,98-3,09 (m, 1H) , 2,82-2,90 (m, 1H), 2,06-2,18 (m, 1H), 1,70-1,81 (m, 1H) . e) 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4- carbonil)-pirrolidin-3-ilamino]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo A 0 °C, uma solução de 2-metoxi-5-[6-((S)- pirrolidin-3-ilamino)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo (27 mg, 0,08 mmol) em CH2CI2 (1 mL) foi tratada com Et3N (0,02 mL, 0,12 mmol) e cloreto de tetra-hidro-pirano-4-carbonilo (registo CAS 40191-32-0) (11 yL, 0,09 mmol). A mistura reacional foi agitada a 0 °C durante 1 h, em seguida desativada com sol. aq. sat. de NaHCCb e extraida com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada e concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após RP-HPLC prep. (coluna Sunfire PrepC18 OBD 30x100 mm, 5 pm; solvente A: H2O+0,l% em volume de TFA; solvente B: CH3CN +0,1% em volume de TFA, gradiente 5-60% B em 20 min) e filtração sobre cartuchos PL-HCO3 MP SPE Agilent como um sólido amarelo (9 mg, 25% de rendimento). UPLC RtM2 = 1,19 min; ESIMS: 464 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CD3OD) : δ 8,36 (d, 1H) , 8,05 (m, 1H) , 6,69 (dd, 1H) , 6,15-6,23 (m, 1H) , 5, 97-6, 07 (m, 1H) , 4,15-4,29 (m, 2H) , 4,06 (s, 3H) , 3,82-4,03 (m, 3H) , 3,35-3, 80 (m, 8H) , 2, 65-2,84 (m, 1H) , 2,03-2,28 (m, 1H) , 1,49-2,03 (m, 5H).
Condições de acoplamento Ά) Aminações ou hidroxilações de Buchwald
B) Condições de formação de ligação amida
C) Condições de introdução da cadeia lateral CC1) Utilizando mesilato À ta, uma solução seca do intermediário piridin- 2-ol (1 eq.) e do intermediário mesilato (1,1 - 2 eq.) em DMF (0,17 M) foi tratada com NaH em óleo mineral (2-3 eq.) e a mistura reacional foi agitada a 20-80 °C durante 4 a 72 h. CC2) Utilizando mesilato À ta, uma solução seca do intermediário aril-6-ol (1 eq.) e do intermediário mesilato (1,1 - 2 eq.) em DMF (0,17 M) foi tratada com NaH em óleo mineral (2-3 eq.) e a mistura reacional foi agitada a 50-80 °C durante 4 a 72 h. CC3) Utilizando mesilato À ta, uma solução seca do intermediário aril-6-ol (1 eq.) e do intermediário mesilato (2,5 eq.) em DMF (0,06 M) foi tratada com K2CO3 (4 eq.) e a mistura reacional foi agitada a 85 °C a 100 °C durante 4 a 50 h. CC4) Utilizando Mitsunobu À ta, DEAD (1,4 eq.), éster terc-butílico do ácido (R)-3-hidroxi-pirrolidina-1-carboxí1ico (1,5 eq.) e o intermediário aril-6-ol (1 eq.) foram adicionados a uma solução de trifenilfosfina (1,4 eq.) em THF (0,30 M) . A solução vermelha/castanha foi agitada a 70 °C durante 18 h. D) Condições para a cromatografia de separação quiral
Preparação de Intermediários
IA) Brometos aromáticos
Intermediário IA1: 5-bromo-2-metanossulfonil-3-metil-piridina
Uma solução de 5-bromo-2-metilsulfanil-3-metil-piridina (9,04 g, 41,4 mmol) em DCM (83 mL) foi tratada a 0 °C com mCPBA (21,46 g, 124 mmol). Depois de agitar durante 18 h à ta, a mistura reacional foi adicionada a sol. aq. de NaOH 2N e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após trituração com ciclo-hexano para proporcionar um sólido branco (9,25 g, 89% de rendimento). UPLC RtMi =0,81 min; MS (ESI, m/z): 250,1 [ (M+H+] RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,68 (d, 1Η) , 8,30 (d, 1H), 3,37 (s, 3H), 2,58 (s, 3H).
Intermediário_IA2 : 5-bromo-3-fluoro2- metanossulfonil-piridina
Uma solução de 5-bromo-3-fluoro-2-metilsulfanil-piridina (222 mg, 1,0 mmol) em DCM (5 mL) foi tratada a 0 °C com mCPBA (518 mg, 3,0 mmol). Depois de agitar durante 1,5 h à ta a mistura reacional foi adicionada a sol. aq. de NaOH 2N e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido como um sólido branco (241 mg, 95% de rendimento) que foi utilizado sem mais purificação. UPLC RtMi =0,63 min; RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,75 (d, 1H) , 8, 60 (d, 1H), 3,40 (s, 3H) .
Intermediário IA3: 5-Bromo-2-metanossulfonil-3-trifluorometil-piridina
Uma solução de 5-bromo-2-metilsulfanil-3-trifluorometil-piridina (1,40 g, 1,16 mmol) em DCM (30 mL) foi tratada a 0 °C com mCPBA (2,67 g, 15,48 mmol). Depois de agitar durante 18 h à ta a mistura reacional foi adicionada a uma sol. aq. de NaOH 4N e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (hexano / AcOEt, 100:0 a 70:30) como um sólido branco (940 mg, 60% de rendimento). UPLC RtMi =0,87 min; MS (ESI, m/z): 323,0 [ (M+NH4) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 9,45 (d, 1H) , 8,76 (d, 1H), 3,57 (s, 3H).
Intermediário IA4: 5-Bromo-3-difluorometil-2- metanossulfonil-piridina a) 2,5-Dibromo-3-difluorometil-piridina
Uma solução de trifluoreto de Et3N (1,80 mL, 11,3 mmol) em DCM (40 mL) foi tratada a 0 °C com Xtalfluor-E (2,67 g, 15,5 mmol) e 2,5-dibromo-piridina-3-carbaldeido (1,0 g, 3,77 mmol) . Depois de agitar durante 19 h à ta a mistura reacional foi diluida com TBME e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada para deixar um óleo amarelo (950 mg, 88% de rendimento) que foi utilizado sem mais purificação. UPLC RtMi=l, 05 min; RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,57 (d, 1Η) , 8,48 (d, 1H), 7,14 (t, 1H), 3,35 (s, 3H) . b) 5-Bromo-3-difluorometil-2-metanossulfonil- piridina
Uma solução de 2,5-dibromo-3-difluorometil- piridina (1400 mg, 1,16 mmol) em DMF (10 mL) foi tratada a 0 °C com metanotiolato de sódio (348 mg, 4,97 mmol). Depois de agitar durante 1,5 h à ta, a reação foi arrefecida a 0 °C e foi adicionado mCPBA (2857 mg, 16,56 mmol) à mistura reacional. Depois de agitar durante 1 h à ta a mistura reacional foi adicionada a uma sol. aq. de NaOH 4N e foi extraída com TBME. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (hexano / AcOEt, 100/0 a 80/20) como um sólido branco (498 mg, 53% de rendimento). UPLC RtMi =0,8 6 min; RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 8,67 (d, 1H) , 8,45 (d, 1H), 7,37 (t, 1H), 3,37 (s, 3H).
Intermediário_IA5 : 5-Bromo-3-fluorometil-2- metanossulfonil-piridina a) 5-Bromo-2-cloro-3-fluorometil-piridina
Uma solução de trifluoreto de Et3N (1,76 mL, 10,79 mmol) em DCM (20 mL) foi tratada a 0 °C com
Xtalfluor-E (1,65 g, 7,19 mmol) e (5-bromo-2-cloro-piridin- 3-il)-metanol (0,80 g, 3,60 mmol). Depois de agitar durante 18 h à ta a mistura reacional foi diluida com TBME e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (hexano / AcOEt, 100/0 a 90/10) como um óleo incolor (286 mg, 35% de rendimento). UPLC RtMi =0,9 8 min; RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 8,53 (d, 1H) , 8,45 (d, 1H), 5,52 (d, 1H) b) 5-Bromo-3-fluorometil-2-metanossulfonil- piridina
Uma solução de 2,5-dibromo-3-difluorometil- piridina (1,4 g, 1,16 mmol) em DMF (10 mL) foi tratada a 0 °C com metanotiolato de sódio (348 mg, 4,97 mmol). Depois de agitar à ta durante 1,5 h, a reação foi arrefecida até 0 °C e foi introduzido mCPBA (2857 mg, 16,56 mmol) na mistura reacional. Depois de agitar durante 1 h à ta a mistura reacional foi adicionada a uma sol. aq. de NaOH 4N e foi extraída com TBME. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (hexano / AcOEt, 100/0 a 80/20) como um sólido branco (498 mg, 53% de rendimento) UPLC RtMi =0,8 6 min; RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 8,67 (d, 1H) , 8,45 (d, 1H), 7,37 (t, 1H), 3,37 (s, 3H).
Intermediário_IA7 : 5-Bromo-3-fluorometil-2- metoxi-piridina
Uma solução de (5-bromo-2-metoxi-piridin-3-il)-metanol (343 mg, 1,57 mmol) em DCM (7 mL) foi tratada a 0 °C com desoxofluor (1,5 mL, 3,46 mmol) e EtOH (27,6 yL, 0,47 mmol) . A mistura reacional foi agitada à ta, desativada com sol. aq. sat. de NaHCCh e foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, concentrada para proporcionar o composto em epígrafe após cromatografia flash sobre sílica gel (hexano/AcOEt 80:20) como um óleo amarelo (80 mg, 23%rendimento). UPLC RtMi=l, 07 min; RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,32 (t, 1Η) , 8,00 (t, 1H) , 5,37 (d, 2H) , 3,89 (s, 3Η) .
Intermediário IA24: 1-(5-Bromo-2-metoxi-piridina-3-sulfonil)-4-metil-piperazina a)(5-Bromo-2-metanossulfonil-piridin-3-il)-metil- amina
Uma solução de cloreto de 5-bromo-2-cloro-piridina-3-sulfonilo (registo CAS 1146290-19-8) (580 mg, 1,99 mmol) e Et3N (0,55 mL, 3,99 mmol) em DCM (20 mL) a 0 °C foi tratada com 1-metil-piperazina (0,33 mL, 2,99 mmol), a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 20 min e à ta durante 18 h. A mistura foi diluída com DCM (30 mL) e lavada com sol. aq. sat. de NaHCCb. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH 100:0 a 90:10) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (420 mg, 59% de rendimento). HPLC TrM2 =1,49 min; ESIMS: 356 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,62 (d, 1H) , 8,50 (d, 1H) , 3,57-3,29 (t, 4H) , 2,50 (t, 4H) , 2,33(s, 3H) . b)1-(5-Bromo-2-metoxi-piridina-3-sulfonil)-4-metil-piperazina
Uma solução de 1-(5-bromo-2-cloro-piridina-3-sulfonil)-4-metil-piperazina (420 mg, 1,18 mmol) em THF (10 mL) foi tratada em porções com metóxido de sódio (192 mg, 3,55 mmol). A mistura resultante foi agitada à ta durante 18 h. A mistura foi desativada por adição de água e extraída com AcOEt. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com sol. aq. sat. de NaHCCh e secas sobre MgSCh, concentradas e purificadas por cromatografia flash sobre sílica gel (DCM / MeOH 100:0 a 90:10) para proporcionar o composto em epígrafe (358 mg, 85% de rendimento). HPLC TrM2 =1,47 min; ESIMS: 350, 352 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,36 (d, 1H) , 8,28 (d, 1H) , 4,05 (s, 3H) , 3,35 (s 1, 4 H) , 2,49 (s 1, 4 H) , 2,33 (s, 3H).
Intermediário_IA30 : 3-Bromo-5-(propano-2- sulfonil)-piridina
Uma solução de 3,5-dibromo-piridina (registo CAS 625-92-3) (495 mg, 2,09 mmol) em NMP (5 mL) foi tratada com propano-2-tiolato de sódio (registo CAS 20607-43-6) (205 mg, 2,09 mmol), a mistura resultante foi agitada a 80 °C durante 2 h. A mistura foi arrefecida e diluída com AcOEt, lavada com água (2x), em seguida solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A camada orgânica foi seca sobre MgS04 e concentrada. O resíduo obtido foi dissolvido em DCM (10 mL) , tratado com mCPBA (1083 mg, 6,27 mmol) e agitado à ta durante 18 h, foi adicionada sol. aq. sulfito de sódio a 10% e a mistura foi agitada à ta durante 1 h. As fases foram separadas e a camada orgânica foi lavada com sol. aq. sat. de NaHC03, seca sobre MgS04, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 00:100) para proporcionar o composto em epígrafe (364 mg, 59% de rendimento). HPLC TrM2=0,77 min; ESIMS: 264, 266 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDC13) : δ 8,98 (dd, 2H) , 8,33 (t, 1H) , 3, 34-3, 17 (m, 1H), 1,37 (d, 6H) .
Intermediário IA44: 5-Bromo-2-etanossulfinil- piridina a)5-Bromo-2-etilsulfanil-piridina
Uma mistura de 2,5-dibromo-piridina (registo CAS 588729-99-1) (1,15 g, 4,85 mmol) e etanotiolato de sódio (registo CAS 811-51-8) (2,04 g, 24,27 mmol) em DMSO (15 mL) foi agitada à ta durante 18 h. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca passando-a através de um cartucho de separação de fases, foi concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 70:30) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo laranja (1,09 g, 92% de rendimento). HPLC TrM2 =1,25 min; ESIMS: 218, 220 [ (M+H) +] . b) 5-Bromo-2-etanossulfinil-piridina
Uma solução de 5-Bromo-2-etilsulfanil-piridina (1,09 g, 4,49 mmol) em DCM (15 mL) foi tratada com mCPBA (1,55 g, 8,98 mmol). A solução resultante foi agitada à ta durante 15 min. A mistura foi desativada por adição de sol. aq. de NaOH 2M, e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCb e concentradas. O composto foi purificado por RP-HPLC prep. (coluna SunFire C18 OBD, gradiente 5-60% ACN em 15 min) para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo incolor (490 mg, 45% de rendimento). HPLC TrM2=0, 65 min; ESIMS: 234, 236 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,85 (d, 1Η) , 8,37 (dd, 1H) , 7,80 (d, 1H) , 3,33 (s, 2H) , 3,27-3,10 (m, 1H), 2, 94-2,72 (m, 1 Η), 1,01 (t, 3 H) .
Intermediário IA45: 5-Bromo-2-metanossulfonil-3-metoxipiridina a)5-Bromo-3-metoxi-2-metilsulfanil-piridina
Uma mistura de 2,5-dibromo-3-metoxi-piridina (registo CAS 1142191-57-8) (550 mg, 2,06 mmol) e metanotiolato de sódio (registo CAS 5188-07-8 ) (722 mg, 10,30 mmol) em DMSO (1,5 mL) foi agitada à ta durante 0,5 h. Foi adicionada água e a mistura foi extraída com DCM. A camada orgânica foi seca passando-a através de um cartucho de separação de fases e foi concentrada para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo incolor (1,50 g, 93% de rendimento, em bruto). RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,19 (d, 1Η) , 7,53 (d, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,32 (s, 3H). b) 5-Bromo-2-metanossulfonil-3-metoxipiridina
Uma solução de 5-bromo-3-metoxi-2-metilsulfanil-piridina (1,50 g, 2,24 mmol) em DCM (10 mL) foi tratada com mCPBA (1,55 g, 8,97 mmol). A mistura resultante foi agitada à ta durante 18 h. A mistura foi desativada por adição de sol. aq. de NaOH 2M e extraída com DCM. A camada orgânica foi seca fazendo-a passar através de um cartucho de separação de fases e concentrada para proporcionar o composto em epígrafe (400 mg, 33% de rendimento como em bruto). HPLC TrM2=0,75 min; ESIMS: 268 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,41 (d, 1Η) , 8,17 (s, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,30 (s, 3H).
Intermediário IA51: (5-Bromo-2-metanossulfonil- piridin-3-il)-metil-amina a) (5-Bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina
Uma solução de 5-bromo-2-cloro-piridin-3-ilamina (registo CAS 588729-99-1) (565 mg, 2,72 mmol) em THF (4 mL) a 0 °C foi tratada com BuLi 1,6M em hexano (0,17 mL, 0,17 mmol), a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 0,5 h, em seguida foi lentamente adicionado iodeto de metilo (0,17 mL, 2,72 mmol). A mistura reacional foi deixada aquecer até à ta e foi agitada durante 18 h. A mistura laranja/castanha foi vertida para sol. aq. sat. de NaHCCb, e extraída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre MgSCh, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre silica gel (ciclo-hexano / AcOEt 95:5 a 60:40) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (354 mg, 59% de rendimento). HPLC T rMi =0,94 min; ESIMS: 221, 223, 225 [ (M+H)+] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,65 (d, 1Η) , 7,14 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 2,74 (d, 3H) . b) (5-Bromo-2-metanossulfonil-piridin-3-il)- metil-amina
Uma solução de (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina (354 mg, 1,60 mmol) em DMF (2,6 mL) foi tratada com metanotiolato de sódio (168 mg, 2,40 mmol) a 0 °C. A solução resultante foi agitada à ta durante 2 d e aquecida a 60 °C durante 4 d. A mistura foi desativada a 0 °C por adição de sol. aq. de NaOH 2M, e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCh e concentradas para proporcionar um óleo laranja que foi dissolvido em DCM (5 mL) e tratado a 0 °C com mCPBA (registo CAS 937-14-4) (827 mg, 4,79 mmol) e agitado durante 18 h à ta. A mistura foi desativada a 0 °C por adição de sol. aq. de NaOH 2M e extraída com DCM. Os orgânicos combinados foram secos sobre MgS04, concentrados e purificados por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 92:8 a 32:68) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (174 mg, 41% de rendimento). HPLC TrMi =0,78 min; ESIMS: 265, 267 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,95 (d, 1Η) , 7,50 (d, 1H) , 6, 70-6, 59 (m, 1H) , 3,26 (s, 3H) , 2,82 (d, 3H) .
Intermediário IA52: (5-Bromo-2-metanossulfonil- piridin-3-il)-dimetil-amina a) (5-Bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina
Uma solução de 5-bromo-2-cloro-piridin-3-ilamina (registo CAS 588729-99-1) (1 g, 4,82 mmol) em THF (7 mL) a 0 °C foi tratada com BuLi 1,6 M em hexano (6 mL, 9,64 mmol), a mistura resultante foi agitada a 0 °C durante 0,5 h, em seguida foi lentamente adicionado iodeto de metilo (0,60 mL, 9,64 mmol). A mistura reacional foi deixada aquecer até à ta e foi agitada durante 18 h. A mistura laranja/castanha foi vertida sobre sol. aq. sat. de NaHCCb, e extraída com AcOEt, a camada orgânica foi seca sobre MgSCh, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 95:05 a 70:30) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (182 mg, 17% de rendimento). HPLC TrMi =0,94 min; ESIMS: 221, 223[(M+H)+]. RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 7,65 (d, 1Η) , 7,14 (d, 1H), 6,11 (d, 1H), 2,74 (d, 3H) . b) (5-Bromo-2-cloro-piridin-3-il)-dimetil-amina
Uma solução de (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-metil-amina (182 mg, 0,82 mmol) em DMF (4 mL) foi tratada com NaH (23 mg, 0,99 mmol) à ta, e a mistura foi agitada à ta durante 0,5 h, foi adicionado iodeto de metilo (0,06 mL, 0,99 mmol) e a mistura resultante foi agitada à ta durante 1 h. A mistura foi diluída com TBME e lavada com uma sol. aq. sat. de NaHCCb, a camada orgânica foi seca sobre MgSCh e concentrada para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo laranja (174 mg, 90% de rendimento). Foi utilizado sem mais purificação. HPLC TrMi =1,03 min; ESIMS: 235, 237 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,10 (d, 1Η) , 7,70 (d, 1H), 2,78 (s, 6H) . c) (5-Bromo-2-metanossulfonil-piridin-3-il)- metil-amina
Uma solução de (5-bromo-2-cloro-piridin-3-il)-dimetil-amina (174 mg, 0,74 mmol) em DMF (5 mL) foi tratada com metanotiolato de sódio (104 mg, 1,48 mmol) à ta, a solução resultante foi agitada a 80 °C durante 18 h. A 0 °C, a mistura foi desativada por adição de sol. aq. de NaOH 2M, em seguida extraída com TBME. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCA e concentradas para proporcionar um óleo laranja que foi dissolvido em DCM (5 mL) , tratado a 0 °C com mCPBA (registo CAS 937-14-4) (382 mg, 2,21 mmol) e agitado durante 18 h à ta. A 0 °C, a mistura foi desativada por adição de sol. aq. de NaOH 2M, em seguida extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04, concentradas e purificadas por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 88:12 a 00:100) para proporcionar o composto em epígrafe como um sólido laranja (50 mg, 24% de rendimento). HPLC TrMi =0,83 min; ESIMS: 279, 281 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 8,25 (d, 1Η) , 7,90 (d, 1H) , 3,29 (s, 3H) , 2,91 (s, 6H) .
Intermediário_IA65 : 5-Bromo-2,N-dimetoxi- benzenossulfonamida
Uma solução de cloreto de 5-bromo-2-metoxi-benzenossulfonilo (registo CAS 23095-05-8) (218 mg, 0,76 mmol) e Et3N (0,55 mL, 3,99 mmol) em DCM (20 mL) a 0 °C foi agitada durante 15 min e tratada com O-metil-hidroxilamina (36 mg, 0,76 mmol), a mistura resultante foi agitada à ta durante 18 h. A mistura foi partilhada entre AcOEt e água. A camada orgânica foi lavada com sol. aq. sat. de NaHC03, seca sobre MgS04, concentrada e purificada por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 100:0 a 0:100) para proporcionar o composto em epígrafe (189 mg, 84% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 8,10 (d, 1 Η), 7,78 (s, 1 Η), 7,72 (dd, 1 Η), 6,97 (d, 1 Η), 4,01 (s, 3 Η), 3, 81 (s, 3 Η) . IB) Ácidos carboxilicos ou cloretos de ácidos
Exemplo IB1/IB2: (S)-Ácido tetra-hidro-furan-3-carboxílico / (R)-Ácido tetra-hidro-furan-3-carboxílico a) Éster benzilico do ácido tetra-hidro-furan-3-carboxílico
Uma solução de ácido tetra-hidro-furan-3-carboxílico (registo CAS 89364-31-8) (4,00 g, 34,40 mmol) em DMF (20 mL) foi tratada com K2CO3 (9,52 g, 68,9 mmol) e brometo de benzilo (registo CAS 100-39-0) (8,18 mL, 68,9 mmol) a 100 °C durante 18 h. A mistura foi arrefecida até à ta, diluída com AcOEt, lavada com água e solução aquosa saturada de cloreto de sódio. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCb, concentradas e purificadas por cromatografia flash sobre sílica gel (ciclo-hexano / AcOEt 92:8 a 34:66) para proporcionar o composto em epígrafe como óleo incolor (6,93 g, 98% de rendimento) HPLC TrM2=0,94 min; ESIMS: 207 [(M+H)+]. RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 7, 50-7,26 (m, 5H) , 5,17 (m, 2H) , 4,05-3,75 (m, 4H) , 3,29-3,05(m, 1H) , 2,36- 2,09 (m, 2H) . b) Separação de enantiómeros do éster benzilico do ácido tetra-hidro-furano-3-carboxílico
Informação do método:
Coluna: Chiralpak AD-PREP Solvente: HEPTANO/ETOH/MEOH 95/2,5/2,5 Caudal: 1,0 mL/min Comprimento de onda: 210 nm Equipamento: Agilent 1200 DAD Magellan Solução EtOH
Após separação de 6, 347 g de racémico, foram obtidos 2 picos: pico 1 a 9,086 min (2,43 g, ee>99%) e pico 2 a 10,584 min (2,19 g, ee>99%). HPLC (pico 1 ou 2) RtM2 =0,92 min; ESIMS: 207 [ (M+H) +] . RMN de XH (pico 1) (400 MHz, CDC13) : δ 7,48-7,29 (m, 5H), 5,23-5, 07 (m, 2H), 4,05-3,77 (m, 4H) , 3,23-3,10(m, 1H), 2,35-2,06 (m, 2H). RMN de XH (pico 2) (400 MHz, CDCI3) : δ 7,51-7,31 (m, 5H) , 5,23-5,09 (m, 2H) , 4,07-3,77 (m, 4H) , 3,24-3,07 (m, 1H), 2,35-2,06 (m, 2H). c) (S)-Ácido tetra-hidro-furan-3-carboxilico / (R)-Ácido tetra -hidro-furan-3-carboxílico
Uma solução de um éster benzílico do ácido tetra-hidro-furan-3-carboxílico enantiomericamente puro (pico 1 ou pico 2, 200 mg, 0,97 mmol), Pd/C (103 mg, 0,97 mmol) em EtOH (2 mL) foi hidrogenada com H2 à ta durante 18 h. A filtração da mistura reacional e concentração do filtrado proporcionou o composto em epígrafe como um óleo incolor (125 mg (Pico 1), 111 mg (Pico 2), em bruto). RMN de 1H (ambos os enantiómeros) (400 MHz, DMSO- dõ) : δ 12,40 (s 1, 1H) , 3, 84-3,59 (m, 4H) , 3,00 (m, 1H) , 2,08-1,92(m, 1H).
Exemplo IB3): Ácido 5-terc-butoxicarbonilamino-l-metil-lH-imidazole-4-carboxílico a) Éster etílico do ácido 5-di(terc-butoxicarbonil)amino-1-metil-lH-imidazole-4-carboxílico
Uma solução de éster etílico do ácido 5-amino-l-metil-lH-imidazole-4-carboxílico (registo CAS 54147-04-5) (82 mg, 0,49 mmol) em THF (4 mL) foi tratada a -50 °C com LiHMDS 1M em sol. Em THF (0,97 mL, 0,97 mmol) e a mistura reacional foi agitada a -50 °C durante 10 min, em seguida foi adicionada uma solução de B0C2O (237 mg, 1,07 mmol) em THF (1,5 mL). A mistura reacional foi deixada aquecer lentamente até à ta, em seguida até 50 °C e agitar durante 15 h a 50 °C. A mistura reacional foi arrefecida até à ta, diluída com AcOEt e desativada com H2O. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (heptano / AcOEt, 85:15 a 0:100) como um sólido branco (140 mg, 78% de rendimento). UPLC RtMi =0,96 min; ESIMS: 370 [ (M+H) +] RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3, 298 K) : δ 4,33 (q, 2Η), 3,50 (s, 3Η), 1,41 (s, 18Η), 1,35 (t, 3H). b) Ácido 5-terc-butoxicarbonilamino-l-metil-lH-imidazole-4-carboxilico
Uma solução de éster etílico do ácido 5-di(terc-butoxicarbonil)amino-l-metil-lH-imidazole-4-carboxílico (167 mg, 0,452 mmol) em THF (2,2 mL) e H2O (2,2 mL) foi tratada com LiOH (54,1 mg, 2,26 mmol) e a mistura reacional foi agitada à ta durante 18 h, em seguida desativada com sol. aq. HC1 1M para atingir pH 2 e extraída com AcOEt. A camada orgânica foi seca sobre Na2S04, filtrada, concentrada para proporcionar o composto em epígrafe. (70 mg, 65% de rendimento). UPLC RtMi =0,47 min; ESIMS: 242 [ (M+H) +] RMN de ΧΗ (400 MHz, DMSO-de) : δ 12,42 (s 1., 1Η) , 8,98 (s 1., 1H), 7,82 (s, 1H), 3,45 (s, 3H), 1,41 (s, 9H). IC) Derivados ou análogos de pirrolidinol
Intermediário IC1: Éster (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico a) ((R)-3-Hidroxi-pirrolidin-l-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
Foi adicionado cloreto de oxalilo (0,20 mL, 3,84 mmol) a uma solução de ácido tetra-hidro-pirano-4- carboxílico (registo CAS 5337-03-1) e DMF (0,012 mL, 0,15 mmol). A mistura reacional foi agitada a 3 °C durante 1 h. A concentração da mistura reacional sob pressão reduzida (170 mbar) a 40 °C (banho de água) proporcionou ο intermediário acilo como um óleo incolor. O intermediário foi dissolvido em DCM (2 mL) e adicionado a uma solução de cloridrato de (R)-pirrolidin-3-ol (registo CAS 104706-47-0) (190 mg, 1,54 mmol) em DCM (3 mL), arrefecido até 3 °C, a suspensão branca que se formou foi agitada a 3 °C durante 1 h. A mistura reacional foi concentrada; foi adicionado AcOEt ao resíduo que foi filtrado e lavado com AcOEt. A concentração e purificação do filtrado por cromatografia flash sobre sílica gel (DCM /DCM: MeOH (9:1), 100:0 a 60:40 ao longo de 11 min) proporcionaram o composto em epígrafe como sólido branco (250 mg, 82% de rendimento). ESIMS : 200 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 4,43 - 4,65 (m, 1H) , 3,95-4,16 (m, 2H) , 3,30-3, 82 (m, 6H) , 2,45-2,75 (m, 1H), 1,83-2,30 (m, 4H), 1,54-1,78 (m, 3H). b) Éster (R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico
Sob árgon, foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (3,52 mL, 45,2 mmol) a uma solução de ((R)-3-hidroxi-pirrolidin-l-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona (6 g, 22,6 mmol) e Et3N (6,30 mL, 45,2 mmol) em DCM (100 mL) a -10 °C. A solução foi agitada a 0 °C durante 1 h, diluída com H2O e DCM, a camada orgânica foi lavada duas vezes com H2O e solução aquosa saturada de cloreto de sódio e seca sobre MgSCL. A concentração e a trituração do óleo resultante com éter dietílico proporcionaram o composto em epígrafe como um sólido esbranquiçado (5,3 g, 84%). ESIMS : 278 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 5, 22-5,44 (m, 1H) , 3,96-4,13 (m, 2H) , 3, 85-3, 96 (m, 1H) , 3,56-3, 83 (m, 3H) , 3,36-3,53 (m, 2H) , 3,08 (d, 3H) , 2,07-2,75 (m, 3H) , 1,93 (m, 2H), 1,51-1,75 (m, 3H).
Intermediário IC2: Éster (S)- (tetra-hidro-pirano- 4-carbonil)-pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico a) ((S)-3-Hidroxi-pirrolidin-l-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona
Uma solução de cloreto de tetra-hidro-pirano-4-carbonilo (registo CAS 40191-32-0) (316 mg, 2,02 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionada gota a gota (0 °C <T <10 °C) a
uma solução de (S)-pirrolidin-3-ol (registo CAS 100243-39-8) (250 mg, 2,02 mmol) e Et3N (0,62 mL, 4,45 mmol) em DCM (5 mL). A mistura reacional foi agitada a 3 °C durante 1 h. Os voláteis foram concentrados e foi adicionado AcOEt ao resíduo, o sólido remanescente foi filtrado e lavado com AcOEt, a concentração do filtrado proporcionou o composto em epígrafe como um sólido branco (390 mg, 97% de rendimento) . ESIMS: 200 [ (M+H)+] . RMN de XH (400 MHz, CDC13) : δ 4,55 (d, 1H) , 3,96- 4,11 (m, 2H), 3,36-3,80 (m, 6H), 2,48-2,74 (m, 1H), 1,52- 2,20 (m, 7H). b) Éster (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico
Sob árgon, foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (0,23 mL, 2,94 mmol) a uma solução de ((S)-3-hidroxi-pirrolidin-l-il)-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona (0,39 g, 1,96 mmol) e Et3N (0,55 mL, 3,91 mmol) em DCM (10 mL) a -10 °C. A solução foi agitada a 3 °C durante 1 h, diluída com H2O e DCM, a camada orgânica foi lavada duas vezes com H2O e solução aquosa saturada de cloreto de sódio, em seguida seca sobre MgSCL. A concentração e trituração do óleo resultante com éter dietilico proporcionaram o composto em epígrafe como sólido branco (0,45 g, 83% de rendimento). ESIMS : 278 [ (M+H) +] . RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 5, 25-5,44 (m, 1H) , 3,99-4,16 (m, 2H) , 3, 85-3, 95 (m, 1H) , 3,56-3, 83 (m, 3H) , 3,37-3,54 (m, 2H) , 3,08 (d, 3H) , 2,09-2,78 (m, 3H) , 1,93 (m, 2H) , 1,51-1,76 (m, 2H)
Intermediário_IC3 : Éster (S)-1-propionil- pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico a) 1-((S)-3-Hidroxi-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona
Foi adicionado gota a gota cloreto de propionilo (registo CAS 79-03-8) (4,78 mL, 54,8 mmol) ao longo de um
período de 15 min a uma solução de (S) -pirrolidin-3-ol (registo CAS 100243-39-8) (4,8 g, 55,9 mmol) e Et3N (8,74 mL, 63,1 mmol) a 5 °C, a solução foi deixada aquecer até à ta e foi agitada durante 1 h. Foram adicionados H2O (10 mL) e sol. aq. sat. de NaHC03 (10 mL) à solução, a fase orgânica foi lavada com solução aquosa saturada de cloreto de sódio (10 mL) e uma sol. aq. de HC1 0,25 M (20 mL). As camadas aquosas combinadas foram concentradas e extraídas com AcOEt (2x 100 mL), as fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgSCb e concentradas para proporcionar o composto em epígrafe como um óleo amarelo-pálido (4,80 g, 54% de rendimento). RMN de ΧΗ (400 MHz, CDCI3) : δ 4,54 (d, 1H) , 3,31-3,73 (m, 3H), 3,12 (m, 1H), 1,82-2,46 (m, 5H), 1,17 (t, 3H) b) Éster (S)-l-propionil-pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico
Sob árgon, foi adicionado cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (1,36 mL, 17,46 mmol) ao longo de um período de 10 min a uma solução de 1- ((S)-3-hidroxi-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona (2,5 g, 17,4 mmol) e Et3N (2,43 mL, 17,4 mmol) em DCM (50 mL) a 5 °C. A solução foi deixada aquecer até à ta e foi agitada durante 18 h, foram em seguida adicionados cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (1,36 mL, 17,46 mmol) e Et3N (2,43 mL, 17,4 mmol) à mistura reacional que foi agitada durante 48 h à ta. Foram adicionados DCM e H2O à solução e a fase orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fases, concentrada e o composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (AcOEt / MeOH 100:0 a 95:5 ao longo de 40 min) como um óleo incolor (2,7 g, 66% de rendimento). RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 5,19-5,42 (m, 1H) , 3,48-3, 99 (m, 4H) , 3,06 (d, 3H) . 2,04-2,54 (m, 4H) , 1,16 (t, 3H).
Intermediário_IC4 : Éster (R)-1-propionil- pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico a) 1-((R)-3-Hidroxi-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona
Foi adicionado cloreto de propionilo (registo CAS 79-03-8) (7,06 mL, 81 mmol) (0 °C <T <10 °C) ao longo de um período de 15 min a uma suspensão de (R)-pirrolidin-3-ol (registo CAS 2799-21-5) (10 g, 81 mmol) e Et3N (23,6 mL, 170 mmol) em DCM (150 mL) que foi pré-arrefecida a -10 °C. A suspensão esbranquiçada foi agitada a 0 °C durante 2 h, foi adicionado MeOH (9,82 mL, 243 mmol) e a mistura foi deixada agitar à ta durante 1 h. A concentração e diluição do resíduo com Et20 (200 mL) proporcionou, após filtração e concentração do filtrado, o composto em epígrafe como um óleo amarelo (11,2 g, 95%). ESIMS : 144 [ (M+H) +] . RMN de XH (400 MHz, DMSO-de) : δ 4,81-5,04 (m, 1H) , 4,15-4,38 (m, 1H) , 3,35-3,59 (m, 2H) , 3,16-3,29 (m, 2H) , 2,11-2,33 (m, 2H) , 1, 65-2,00 (m, 2H) , 0,98 (td, 3H) . b) Éster (R)-l-propionil-pirrolidin-3-ílico do ácido metanossulfónico
Sob árgon, foi adicionado gota a gota cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (0,16 mL, 2,09 mmol) ao longo de um período de 5 min a uma solução de 1-((R)-3-hidroxi-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona (300 mg, 2,09
mmol) e Et3N (0,29 mL, 2,09 mmol) em DCM (10 mL) a 5 °C, a mistura reacional foi deixada agitar à ta durante 18 h. Foram em seguida adicionados cloreto de metanossulfonilo (registo CAS 124-63-0) (0,16 mL, 2,09 mmol) e Et3N (0,29 mL, 2,09 mmol) à mistura reacional que foi agitada à ta durante 48 h. Foram adicionados DCM e H2O à solução e a fase orgânica foi separada através de um cartucho de separação de fases e concentrada. O composto em epígrafe foi obtido após cromatografia flash sobre sílica gel (AcOEt / MeOH 100:0 a 95:5 ao longo de 25 min) como um óleo incolor (420 mg, 86%). RMN de XH (400 MHz, CDCI3) : δ 5,21-5,44 (m, 1H) . 3,49-4,03 (m, 4H) , 2,98-3,12 (m, 3H) , 1, 97-2,54 (m, 4H) , 1, 18 (t, 3H) .
IP) Derivados ou análogos de DBO
Avaliação biológica A atividade de um composto de acordo com a presente invenção pode ser avaliada pelos seguintes métodos in vitro &amp; in vivo.
Ensaios biológicos 1 Determinação da inibição da isoforma PI3K alfa e PI3K delta enzimática 1.1 Teste da atividade lípido-cinase A eficácia dos compostos dos exemplos 1-117 como inibidores da Pl3-cinase pode ser demonstrada como se segue: A reação de cinase é realizada num volume final de 50 pL por poço de metade da área da placa de 96 poços, COSTAR. As concentrações finais de ATP e fosfatidilinositol no ensaio são de 5 μΜ e 6 pg/mL, respetivamente. A reação é iniciada pela adição de Pl3-cinase, e.g. Pl3-cinase δ. ρΙΙΟδ. Os componentes do ensaio são adicionados por poço como se segue: • 10 pL de composto de ensaio em DMSO a 5% por poço nas colunas 2-1. • A atividade total é determinada por adição de 10 pL de DMSO a 5% vol/vol nos primeiros 4 poços da coluna 1 e nos últimos 4 poços da coluna 12. • O valor de base é determinado por adição de 10 μΜ de composto de controlo aos últimos 4 poços da coluna 1 e aos primeiros 4 poços da coluna 12. • São preparados 2 mL de 'Mistura de ensaio' por placa:
1,912 mL de tampão de ensaio HEPES 8,33 pL de solução-mãe 3 mM de ATP, o que dá uma concentração final de 5 μΜ por poço 1 pL de [33P]ATP nos dados de atividade, o que dá 0,05 pCi por poço 30 pL de solução-mãe a 1 mg/mL de PI, o que dá uma concentração final de 6 pg/mL por poço 5 pL de solução-mãe a 1 M de MgCl2, o que dá uma concentração final de 1 mM por poço • São adicionados 20 pL da mistura de ensaio por poço. • São preparados 2 mL de 'Mistura de enzimas' por placa (x* pL de Pl3-cinase ρΙΙΟβ em 2 mL de tampão de cinase). A 'Mistura de enzimas' é mantida sobre gelo durante a adição às placas de ensaio. • São adicionados 20 pL de 'Mistura de enzimas' /poço para iniciar a reação. • A placa é em seguida incubada à temperatura ambiente durante 90 minutos. • A reação é terminada pela adição de 50 pL de suspensão de esférulas de WGA-SPA (esférulas para Ensaio de
Proximidade de Cintilação revestidas com aglutinina de gérmen de trigo) por poço. • A placa de ensaio é selada utilizando TopSeal-S (selante térmico para microplacas de poliestireno, PerkinElmer LAS [Deutschland] GmbH, Rodgau, Alemanha) e incubada à temperatura ambiente durante pelo menos 60 minutos. • A placa de ensaio é em seguida centrifugada a 1500 rpm durante 2 minutos utilizando a centrifugadora de bancada Jouan (Jouan Inc., Nantes, França). • A placa de ensaio é contada utilizando um TopCount Packard, sendo cada poço contado durante 20 segundos. * O volume de enzima depende da atividade enzimática do lote em utilização.
Num ensaio mais preferido, a reação de cinase é realizada num volume final de 10 pL por poço de uma placa preta de 384 poços CORNING, não ligante de baixo volume (N.° Cat. #3676). As concentrações finais de ATP e fosfatidilinositol (PI) no ensaio são de 1 μΜ e 10 pg/mL, respetivamente. A reação é iniciada pela adição de ATP.
Os componentes do ensaio são adicionados por poço como se segue: 50 nL de compostos de ensaio em DMSO a 90% por poço, nas colunas 1-20, 8 concentrações (passo de diluição sucessiva de 1/3 e 1/3,33) simples. • Baixo controlo: 50 nL de DMSO a 90% em metade dos poços das colunas 23-24 (0,45% no final). • Alto controlo: 50 nL do composto de referência (e.g. composto do Exemplo 7 na WO 2006/122806) noutra metade das colunas 23-24 (2,5 μΜ no final). • Padrão: 50 nL do composto de referência como mencionado diluído como os compostos de ensaio nas colunas 21-22. • São preparados 20 mL de 'tampão' por ensaio : 200 pL de TRIS HC1 1M, pH7,5 (10 mM no final) 60 pL de MgCl2 1M (3 mM no final) 500 pL de NaCl 2M (50 mM no final) 100 pL de CHAPS a 10% (0,05% no final) 200 pL de DTT 100 mM (1 mM no final) 18,94 mL de água nanopura • São preparados 10 mL de 'PI' por ensaio:
200 pL de I-alfa-Fosfatidilinositol a 1 mg/mL (Fígado Bovino, Avanti Polar Lipids N.° Cat. 840042C MM=909,12) preparado em OctilGlucosídeo a 3% (10 pg/mL no final) 9,8 mL de 'tampão' • São preparados 10 mL de ΆΤΡ' por ensaio : 6,7 pL de solução-mãe 3 mM de ΑΤΡ, o que dá uma concentração final de 1 μΜ por poço 10 mL de 'tampão' • São preparados 2,5 mL de cada construção de PI3K por ensaio em 'PI' com a seguinte concentração final :
P13K alfa EMV B1075 10 nM beta EMV BV949 25 nM delta EMV BV1060 10 nM gama EMV BV950 150 nM • São adicionados 5 pL de 'PI/PI3K' por poço. • São adicionados 5 pL de ΆΤΡ' por poço para iniciar a reação. • As placas são em seguida incubadas à temperatura ambiente durante 60 minutos (alfa, beta, delta) ou 120 minutos (gama). • A reação é terminada pela adição de 10 pL de Kinase-Glo (Promega N.° Cat. #6714). • As placas de ensaio são lidas após 10 minutos num leitor Synergy 2 (BioTek, Vermont EUA) com um tempo de integração de 100 milissegundos e sensibilidade ajustada a 191. • Saida: O Alto controlo é arredondado a 60 000 contagens e o Baixo controlo é 30 000 ou menos • Este ensaio de luminescência ensaio dá uma razão Z' útil entre 0,4 e 0,7 0 valor de Z' é uma medida universal da robustez de um ensaio. Um Z' entre 0,5 e 1,0 é considerado um excelente ensaio.
Para este ensaio, as construções de PI3K mencionadas são preparadas como se segue: 1.2 Geração de construções de genes São utilizadas duas construções diferentes, BV 1052 e BV 1075, para gerar as proteínas Pl3-cinase α para triagem de compostos.
Pl3Ka BV-1052 p85(iSH2)-unidade de ligação de Gly-pllOa(D20aa)-etiqueta de His C-terminal
Os produtos de PCR para o domínio inter SH2 (iSH2) da subunidade p85 e para a subunidade pllO-a (com uma supressão dos primeiros 20 aminoácidos) são gerados e fundidos por PCR de sobreposição. O produto de PCR iSH2 é gerado a partir da primeira cadeia de ADNc utilizando inicialmente os iniciadores gwG130-p01 (5'-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3') (SEQ ID NO: 1) e gwG130-p02 (5 ' -TGGTTT- AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 2).
Subsequentemente numa segunda reação de PCR, Gateway (Invitrogen AG, Basel, Suíça) são adicionados sítios AttBl de recombinação e sequências de ligação na extremidade 5' e extremidade 3' do fragmento iSH2 de p85, respetivamente, utilizando iniciadores gwG130-p03 (5'— GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATAT-GCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3') (SEQ ID NO: 3) e gwG152-p04 (5'-TACCATAATTCCACCACCACCACCGGAAATTCCCCCTGGTTT- AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 4). 0 fragmento pllO-a é também gerado a partir da primeira cadeia de ADNc, utilizando inicialmente os iniciadores gwG152-p01 (5'- CTAGTGGAATGTTTACTACCAAATGG-3') (SEQ ID NO: 5) e gwG152-p02 (5'- GTTCAATG- CATGCTGTTTAATTGTGT -3') (SEQ ID NO: 6).
Numa reação de PCR subsequente, são adicionadas a sequência de ligação e uma etiqueta de histidina na extremidade 5' e extremidade 3' do fragmento pllO-a respetivamente, utilizando os iniciadores gwl52-p03 (5'- GGGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTATGGTAC-TAGTGGAATGTTTACTACC-AAATGGA-3') (SEQ ID NO: 7) e gwG152-p06 (5'- AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCGTTCAATG-CATGCTGTTTAATTGTGT-3 ' ) (SEQ ID NO: 8) . A proteína de fusão p85-iSH2/pllO-a é montada numa terceira reação de PCR pelas unidades de ligação de sobreposição na extremidade 3' do fragmento iSH2 e na extremidade 5' do fragmento pllO-a, utilizando o iniciador gwG130-p03 supramencionado e um iniciador que contém uma etiqueta de Histidina sobreposta e as sequências de recombinação de AttB2 (5’- GGGACCACTTT GT ACAAGAAAGCT GGGTTT AAGCT CCGT GATGGT GAT GGT GAT -GTGCTCC-3’) (SEQ ID NO: 9).
Este produto final é recombinado numa reação OR (Invitrogen) no vetor doador pDONR201 para gerar o clone de entrada ORF318. Este clone é verificado por sequenciação e utilizado numa reação LR Gateway para transferir a inserção para o vetor pBlueBac4.5 adaptado a Gateway (Invitrogen) para a geração do vetor de expressão de baculovirus LR410.
Pl3Ka BV-1075 p85(iSH2)-unidade de ligação de 12X Gly-pllOa(D20aa)-etiqueta de His C-terminal A construção para o Baculovirus BV-1075 é gerada por uma ligação de três partes constituídas por um fragmento p85 e um fragmento pllO-a clonado no vetor pBlueBac4.5. 0 fragmento p85 é derivado do plasmídeo pl661-2 digerido com Nhe/Spe. 0 fragmento pllO-a derivado de LR410 (ver acima) como um fragmento Spel/HindIII. 0 vetor de clonagem pBlueBac4.5 (Invitrogen) é digerido com Nhe/HindIII. Isto resulta na construção PED 153.8 0 componente p85 (iSH2) é gerado por PCR utilizando ORF 318 (descrita acima) como uma cadeia molde e um iniciador direto KAC1028 (5'— GCTAGCATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAATATACC) (SEQ ID NO: 10) e dois iniciadores inversos, KAC1029 (5' — GCCTCCACCACCTCCGCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC) (SEQ ID NO: 11) e KAC1039 (5'- TACTAGTCCGCCTCCACCACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC) (SEQ ID NO: 12) .
Os dois iniciadores inversos sobrepõem-se e incorporam a unidade de ligação 12x Gly e a sequência N-terminal do gene pllOa no sitio Spel. A unidade de ligação 12x Gly substitui a unidade de ligação na construção BV1052. O fragmento de PCR é clonado em pCR2.1 TOPO (Invitrogen). Dos clones resultantes, o pl661-2 é determinado como sendo o correto. Este plasmídeo é digerido com Nhe e Spel e o fragmento resultante é isolado em gel e purificado para subclonagem. O fragmento de clonagem pllO-a é gerado por digestão enzimática do clone LR410 (ver acima) com Spe I e HindIII. O sitio Spel encontra-se na região codificante do gene pllOa. O fragmento resultante é isolado em gel e purificado para subclonagem. O vetor de clonagem, pBlueBac4.5 (Invitrogen) é preparado por digestão enzimática com Nhe e HindIII. O vetor de corte é purificado com uma coluna Qiagen (Quiagen N.V, Venlo, Países Baixos) e, em seguida, defosforilado com fosfatase alcalina de Intestino de Vitelo (CIP) (New England BioLabs, Ipswich, MA). Depois de concluída a reação CIP o vetor de corte é novamente purificado por coluna para gerar o vetor final. É realizada uma ligação de 3 partes utilizando a ligase Roche Rapid e as especificações do fornecedor. Ρΐ3Κβ BV-949 p85(iSH2)-unidade de ligação de Gly-pllOb(comprimento total)-etiqueta de His C-terminal
Os produtos de PCR para o domínio inter SH2 (iSH2) da subunidade p85 e para a subunidade pllO-b de comprimento total são gerados e fundidos por PCR de sobreposição. 0 produto de PCR iSH2 é gerado a partir da primeira cadeia de ADNc utilizando inicialmente os iniciadores gwG130-p01 (5'-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3') (SEQ ID NO: 1) e gwG130-p02 (5 ' -TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 2).
Subsequentemente, numa segunda reação de PCR são adicionados sítios AttBl de recombinação Gateway (Invitrogen) e sequências de ligação na extremidade 5' e extremidade 3' do fragmento iSH2 de p85 respetivamente, utilizando iniciadores gwG130-p03 (5' — GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATA- TACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3') (SEQ ID NO: 3) e gwG130-p05 (5'-ACTGAAGCATCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAAT-GCTGTTCATACGTTTGTC-3') (SEQ ID NO: 13). 0 fragmento pllO-b é também gerado a partir da primeira cadeia de ADNc utilizando inicialmente os iniciadores gwG130-p04 (5'-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGAT-GCTTCAGTTTCATAATGCCTCCTGCT-3') (SEQ ID NO: 4) que contém as sequências de ligação e a extremidade 5' de pllO-b e gwG130-p06 (5'-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATCTGTAG-TCTTTCCGAACTGTGTG -3') (SEQ ID NO: 14) que contém as sequências da extremidade 3' de pllO-b fundida com uma etiqueta de histidina. A proteína de fusão p85-iSH2/pl10-b é montada por uma reação de PCR de sobreposição das unidades de ligação na extremidade 3' do fragmento iSH2 e a extremidade 5' do fragmento pllO-b, utilizando o iniciador gwG130-p03 supramencionado e um iniciador que contém uma etiqueta de Histidina sobreposta e a sequência de recombinação AttB2 (5'-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCTCC-3') (SEQ ID NO: 15).
Este produto final é recombinado numa reação OR Gateway (Invitrogen) no vetor doador pDONR201 para gerar o clone de entrada ORF253. Este clone é verificado por sequenciação e utilizado numa reação LR Gateway para transferir a inserção para o vetor pBlueBac4.5 adaptado a Gateway (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR280. PI3K5 BV-1060 p85(iSH2)-unidade de ligação de Gly-pllOd(comprimento total)-etiqueta de His C-terminal
Os produtos de PCR para o domínio inter SH2 (iSH2) da subunidade p85 e para a subunidade pllO-d de comprimento total são gerados e fundidos por PCR de sobreposição. 0 produto de PCR iSH2 é gerado a partir da primeira cadeia de ADNc utilizando inicialmente os iniciadores gwG130-p01 (5'-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3') (SEQ ID NO: 1) e gwG130-p02 (5'-TGGTTTAATGCTGTTCATACGTT- TGTCAAT-3') (SEQ ID NO: 2).
Subsequentemente, numa segunda reação de PCR Gateway (Invitrogen) são adicionados sítios AttBl de recombinação e sequências de ligação na extremidade 5' e extremidade 3' do fragmento iSH2 de p85, respetivamente, utilizando os iniciadores gwG130-p03 (5' — GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATATGCGAGAATATGA TAGATTATATGAAGAAT-3 ' ) (SEQ ID NO: 3) e gwG154-p04 (5'- TCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC - 3') (SEQ ID NO: 16). 0 fragmento pllO-a é também gerado a partir da primeira cadeia de ADNc utilizando inicialmente os iniciadores gwG154-p01 (5'- ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT -3')
(SEQ ID NO: 17) e gwG154-p02 (5'-CTACTGCCTGTTGTCTTTGGACACGT -3') (SEQ ID NO: 18).
Numa reação de PCR subsequente são adicionadas sequências de ligação e uma etiqueta de histidina na extremidade 5' e extremidade 3' do fragmento pllO-d respetivamente, utilizando iniciadores gwl54-p03 (5' — ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGACTGCCCCATGGA -3') (SEQ ID NO: 19) e gwG154-p06 (5'-AGCTCCGTGATGGTGAT- GGTGATGTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT -3') (SEQ ID NO: 20) . A proteína de fusão p85-iSH2/pllO-d é montada numa terceira reação de PCR pelas unidades de ligação de sobreposição na extremidade 3' do fragmento iSH2 e na extremidade 5' do fragmento pllO-d, utilizando o iniciador gwG130-p03 supramencionado e um iniciador que contém uma etiqueta de Histidina sobreposta e a sequência de recombinação AttB2 Gateway (Invitrogen) (5'-GGGACCACTTTGTA-CAAGAAAGCTGGGTTT-AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3') (SEQ ID NO: 21).
Este produto final é recombinado numa reação OR Gateway (Invitrogen) no vetor doador pDONR201 para gerar o clone de entrada ORF319. Este clone é verificado por sequenciação e utilizado numa reação LR Gateway para transferir a inserção para o vetor pBlueBac4.5 adaptado a Gateway (Invitrogen) para geração do vetor de expressão de baculovírus LR415.
Pl3Ky BV-950 pllO g (Dl44aa) -etiqueta de His C- terminal
Esta construção é obtida a partir de Roger Williams lab, MRC Laboratory of Molecular Biology, Cambridge, RU (novembro, 2003) . Descrição da construção em: Pacold Μ. E. et ai. (2000) Célula 103, 931-943. 1.3 Expressão e purificação de proteínas Métodos para gerar baculovirus e proteína recombinante para as isoformas de PI3K:
Os plasmideos pBlue-Bac4.5 (para as isoformas a, bed) ou pVLl393 (for g) que contêm os diferentes genes de Pl3-cinase são cotransfetados com ADN genómico BaculoGold WT (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, EUA) utilizando os métodos recomendados pelo fornecedor.
Subsequentemente, o baculovirus recombinante obtido a partir da transfeção é purificado em placa sobre células de insetos Sf9 para produzir vários isolados que expressam a proteína recombinante.
Os clones positivos são selecionados por Western com anticorpo anti-HIS ou anti-isoforma. Para as isoformas PI3K alfa e delta, é realizada uma segunda purificação em placa sobre as primeiras culturas-mãe de vírus clonal de PI3K. A amplificação de todos os isolados de baculovirus é realizada a baixa multiplicidade de infeção (moi) para gerar culturas-mãe de baixa passagem, alto título para a produção de proteínas. Os baculovírus são designados BV1052 (a) e BV1075 (a), BV949 (β), BV1060 (δ) e BV950 (γ). A produção de proteína envolve a infeção (passagem 3 ou menor) de células Tn5 (Trichoplusia ni) ou TiniPro (Sistemas de Expressão, LLC, Woodland, CA, EUA) suspensas em meios sem proteínas a uma moi de 2-10 para 39-48 horas em balões Erlenmyer em vidro de 2 L (110 rpm) ou biorreatores de onda (22-25 rpm) . Inicialmente, biorreatores de onda com 10 L de volume de trabalho são inoculados a uma densidade of 3e5 células/mL a metade da capacidade (5 L) . O reator é abanado a 15 rpm durante a fase de crescimento de células durante 72 horas, suplementado com 5% de oxigénio misturado com ar (0,2 L por minuto). Imediatamente antes da infeção, as culturas do reator de onda são analisadas quanto à densidade, viabilidade e diluídas até aproximadamente l,5e6 células/mL. São adicionados 100-500 mL de vírus de baixa passagem, alto título após 2-4 horas de cultura adicional. O oxigénio é aumentado até 35% para o período de infeção de 39-48 horas e as rpm da plataforma de oscilação aumentadas para 25. Durante a infeção, células são monitorizadas pelo bioprocesso do analisador de viabilidade Vicell (Beckman Coulter, Inc, Fullerton, CA, EUA) para a viabilidade, diâmetro e densidade. São efetuadas leituras no Nova Bioanalyzer (NOVA Biomedical Corp., Waltham, MA, EUA) de vários parâmetros e metabolitos (pH, saturação de O2, glicose, etc.) a cada 12-18 horas até à colheita.
As células do biorreator de onda são recolhidas dentro de 40 horas após infeção. As células são recolhidas por centrifugação (4 graus C a 1500 rpm), e subsequentemente mantidas sobre gelo durante agrupamento dos sedimentos para lise e purificação. Os acervos de sedimentos são feitos com quantidades pequenas de meios Grace não suplementados, frios (c/s inibidores de protease) .
Protocolo de Purificação PI3K alfa Para HTS (BV1052) Ο PI3K alfa é purificado em três passos cromatográficos: cromatografia de afinidade de metal
imobilizada sobre uma resina Sepharose de Ni (GE
Healthcare, pertencente a General Electric Company, Fairfield, CT, EUA), filtração em gel utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare), e finalmente um passo de troca catiónica numa coluna SP-XL (GE Healthcare). Todos os tampões são arrefecidos a 4 °C e a lise é realizada arrefecida sobre gelo. O fracionamento em coluna é realizado rapidamente à temperatura ambiente.
Tipicamente células de insetos congeladas são sujeitas a lise num tampão de lise hipertónico e aplicadas a uma coluna IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido de 3-5 volumes de tampão de lavagem de coluna contendo imidazole 45 mM, e a proteína alvo é, em seguida, eluída com um tampão que contém imidazole 250 mM. As frações são analisadas por geles SDS-PAGE revelados com Coomassie e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas e aplicadas a uma coluna GFC preparada. As frações da coluna de GFC são analisadas por geles SDS-PAGE revelados com Coomassie e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas. O agrupamento da coluna de GFC é diluído num tampão de sal baixo e aplicado a uma coluna SP-XL preparada. A coluna é lavada com tampão de sal baixo até se conseguir uma absorvância de base a A280 estável, e eluída utilizando um gradiente de 20 volumes de coluna desde NaCl 0 mM a NaCl 500 mM. Mais uma vez, as frações da coluna SP-XL são analisadas por geles SDS-PAGE revelados com Coomassie e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas. O agrupamento final é submetido a diálise num tampão de conservação que contém 50% de glicerol e armazenado a -20 °C. O agrupamento final é analisado quanto à atividade num ensaio de fosfoinosititol-cinase.
Protocolo de Purificação de PI3K beta Para HTS (BV949) A PI3K beta é purificada em dois passos cromatográficos: cromatografia de afinidade de metal imobilizado (IMAC) sobre uma resina Sepharose de Ni (GE Healthcare) e filtração em gel (GFC) utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare). Todos os tampões são arrefecidos até 4 °C e a lise é realizada arrefecida sobre gelo. 0 fracionamento em coluna é realizado rapidamente à temperatura ambiente.
Tipicamente, células de insetos congeladas são sujeitas a lise num tampão de lise hipertónico e aplicadas numa coluna IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguida de 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem que contém imidazole 45 mM, e a proteína alvo é, em seguida, eluída com um tampão que contém imidazole 250 mM. As frações são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas e aplicadas numa coluna GFC preparada. As frações da coluna GFC são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm proteína alvo são agrupadas. O agrupamento final é submetido a diálise num tampão de conservação que contém 50% de glicerol e armazenado a -20 °C. O agrupamento final é analisado quanto à atividade no ensaio de fosfoinositol-cinase.
Protocolo de Purificação de PI3K gama Para HTS (BV950) A PI3K gama é purificada em dois passos cromatográficos: cromatografia de afinidade de metal imobilizado (IMAC) sobre uma resina Sepharose de Ni (GE Healthcare) e filtração em gel (GFC) utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare). Todos os tampões são arrefecidos até 4 °C e a lise é realizada arrefecida sobre gelo. 0 fracionamento em coluna é realizado rapidamente à temperatura ambiente. Tipicamente, as células de insetos congeladas são sujeitas a lise num tampão de lise hipertónico e aplicadas numa coluna IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido de 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem que contém imidazole 45 mM, e a proteína alvo é em seguida eluído com um tampão que contém imidazole 250 mM.
As frações são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas e aplicadas numa coluna GFC preparada. As frações da coluna de GFC são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas. O agrupamento final é submetido a diálise num tampão de conservação que contém 50% de glicerol e armazenado a -20 °C. O agrupamento final é analisado quanto à atividade no ensaio de fosfoinositol-cinase.
Protocolo de Purificação de PI3K delta Para HTS (BV1060) A PI3K delta é purificada em três passos cromatográficos: cromatografia de afinidade de metal
imobilizado sobre uma resina Sepharose de Ni (GE
Healthcare), filtração em gel utilizando uma coluna Superdex 200 26/60 (GE Healthcare), e finalmente um passo de troca aniónica sobre uma coluna Q-HP (GE Healthcare).
Todos os tampões são arrefecidos até 4 °C e a lise é realizada arrefecida sobre gelo. 0 fracionamento em coluna é realizado rapidamente à temperatura ambiente. Tipicamente, as células de insetos congeladas são sujeitas a lise num tampão de lise hipertónico e aplicadas numa coluna IMAC preparada. A resina é lavada com 3-5 volumes de coluna de tampão de lise, seguido de 3-5 volumes de coluna de tampão de lavagem que contém imidazole 45 mM, e a proteína alvo é em seguida eluída com um tampão que contém imidazole 250 mM. As frações são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas e aplicadas numa coluna GFC preparada. As frações da coluna GFC são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas. O agrupamento da coluna GFC é diluído num tampão de sal baixo e aplicado a uma coluna Q-HP preparada. A coluna é lavada com tampão de sal baixo até se conseguir uma absorvância de base A280 estável, e eluída utilizando um gradiente de 20 volumes de coluna desde NaCl 0 mM até NaCl 500 mM. Mais uma vez, as frações da coluna Q-HP são analisadas por geles de SDS-PAGE revelados com Coomassie, e as frações que contêm a proteína alvo são agrupadas. O agrupamento final é submetido a diálise num tampão de conservação que contém 50% de glicerol e armazenado a -20 °C. O agrupamento final é analisado quanto à atividade no ensaio de fosfoinositol-cinase. A IC50 é determinada por uma rotina de ajuste de curva de quatro parâmetros que vem juntamente com o "ajuste excel". É utilizada uma equação logística de quatro parâmetros para calcular os valores de IC50 (IDBS XLfit) da percentagem de inibição de cada composto a 8 concentrações (geralmente 10, 3, 0, 1, 0, 0,3, 0, 1, 0,030, 0, 010 e 0,003 μΜ) . Alternativamente, os valores de IC50 são calculados utilizando idbsXLfit modelo 204, o qual é um modelo logístico de 4 parâmetros.
Ainda alternativamente, para um ensaio de depleção de ATP, os compostos da fórmula I a serem testados são dissolvidos em DMSO e distribuídos diretamente para uma placa de 384 poços brancos a 0,5 pL por poço. Para iniciar a reação, são adicionados 10 pL de Pl3-cinase 10 nM e 5 pg/mL de 1-alfa-fosfatidilinositol (PI) em cada poço, seguido de 10 pL de ATP 2 μΜ. A reação é realizada até se esgotar aprox. 50% do ATP e, em seguida, parada pela adição de 20 pL de solução Kinase-Glo (Promega Corp., Madison, WI, EUA) . A reação parada é incubada durante 5 minutos e o ATP remanescente é em seguida detetado via luminescência. Os valores de IC50 são em seguida determinados.
Numa forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio enzimático de PI3K delta é de é entre 1 nM e 500 nM.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio enzimático de PI3K delta é desde é entre 1 nM e 100 nM.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio enzimático de PI3K delta é desde é entre 0,5nM e 10 nM.
Numa forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio celular de PI3K delta é desde é entre 1 nM e 1000 nM.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio celular de PI3K delta é desde é entre 1 nM e 500 nM.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K em que o inibidor exibe uma seletividade para a isoforma delta de PI3K sobre uma ou mais das outras isoformas em que esta seletividade é pelo menos de 10 vezes.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que o inibidor exibe uma seletividade para a isoforma delta de PI3K sobre uma ou mais das outras isoformas em que esta seletividade é pelo menos de 20 vezes.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que o inibidor exibe uma seletividade para a isoforma delta de PI3K sobre os diferentes parálogos PI3K α e β, em que esta seletividade é pelo menos de 10 vezes.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que o inibidor exibe uma seletividade para a isoforma delta de PI3K sobre os diferentes parálogos PI3K α e β, em que esta seletividade é pelo menos de 20 vezes.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio celular de PI3K delta é desde é entre 1 nM e 500 nM e em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que o inibidor exibe uma seletividade para a isoforma delta de PI3K sobre os diferentes parálogos PI3K α e β, em que esta seletividade é pelo menos de 10 vezes.
Noutra forma de realização da presente invenção, o inibidor de PI3K, em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que a gama de atividade, exprimida como IC50, no ensaio celular de PI3K delta é desde é entre 1 nM e 500 nM e em que o referido inibidor tem uma ação inibidora sobre a isoforma delta de PI3K, em que o inibidor exibe uma seletividade para a isoforma delta de PI3K sobre os diferentes parálogos PI3K α e β, em que esta seletividade é pelo menos de 20 vezes. 2. Ensaios Celulares 2.1 Fosforilação de Akt 1/2 (S473) mediada por fosfoinositideo-3-cinase (PI3K) em células de Ratazana-1 Células de ratazana-1 que sobreexpressa de forma estável uma forma miristoilada da subunidade catalítica da fosfoinositídeo-3-cinase (PI3K) alfa, beta ou delta humana foram plaqueadas em placas de 384 poços a uma densidade de 7500 (PI3K alfa), 6200 (PI3K beta) ou 4000 (PI3K delta) células em 30 uL de meio de crescimento completo (meio de Eagle modificado por Dulbecco (DMEM glicose alta) suplementado com 10% (v/v) de soro fetal bovino, 1% (v/v) de aminoácidos não essenciais MEM, HEPES 10 mM, L-glutamina 2 mM, 10 yg/mL de puromicina e 1% (v/v) de
Penicilina/Estreptomicina) e foram incubadas a 37 °C / 5% de CO2 / 95% de humidade durante 24 h.
Os compostos foram diluídos em placas de compostos de 384 poços para se obter diluições sucessivas de 8 pontos para 40 compostos de ensaio em DMSO a 90%, assim como 4 compostos de referência mais 16 controlos altos e 16 (inibido) controlos baixos. As placas de pré-diluição foram preparadas pipetando 250 nL das soluções de compostos para placas de polipropileno com 384 poços utilizando um distribuidor de nanolitros Hummingwell. Os compostos foram pré-diluídos pela adição de 49,75 uL de meio de crescimento completo. Foram transferidos 10 uL da solução de composto pré-diluído para a placa de células utilizando uma pipeta de 384 poços, que resultam numa concentração final de DMSO de 0,11%.
As células foram incubadas durante lha 37%C / 5%C02 / 95% de humidade. O sobrenadante foi removido, as células foram sujeitas a lise em 20 uL de tampão de lise para deteção por AlphaScreen® SureFire®.
Para a deteção de p-AKT(Ser473), foi utilizado o Kit de Ensaio SureFire® p-Akt 1/2 (Ser473) (PerkinElmer, E.U.A.). Foram transferidos 5 uL de lisado celular para Proxiplates de 384 poços de baixo volume para deteção utilizando uma pipeta de 384 poços. A adição de reagentes AlphaScreen® SureFire® foi efetuada de acordo com o protocolo do fabricante. Primeiro, foram adicionados 5 uL de mistura de tampão de reação mais tampão de ativação que continha esférulas aceitadoras AlphaScreen®, a placa foi selada e incubada num agitador de placas durante 2 horas à temperatura ambiente. Segundo, foram adicionados 2 uL do tampão de diluição que continha esférulas doadoras AlphaScreen® e a placa foi incubada no agitador de placas como acima durante mais 2 horas. A placa foi lida num leitor de placas compatível AlphaScreen®, utilizando ajustes AlphaScreen® padrão. 2.2 Determinação da ativação de células B de murideas
Foi reconhecido que a PI3K5 modula a função de células B quando as células são estimuladas através do recetor de células B (BCR) (Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002). Para avaliar a propriedade inibidora dos compostos sobre a ativação de células B, a regulação positiva dos marcadores de ativação CD86 e CD69 em células B murideas derivadas de anticorpo do baço de murganho é medida após estimulação com anti-IgM. O CD69 é um marcador de ativação bem conhecido para células B e T (Sancho et al. Trends Immunol. 26:136 (2005). O CD86 (também conhecido como B7-2) é principalmente expresso sobre células apresentadoras de antigénios, incluindo células B. As células B em repouso expressam o CD86 em níveis baixos, mas regulam positivamente o mesmo após estimulação e.g. do BCR ou recetor de IL-4. O CD86 numa célula B interage com o CD28 nas células T. Esta interação é necessária para a ativação ótima de células T e para a geração de uma resposta ótima de IgGl (Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)).
Os baços de murganhos Balb/c são recolhidos, os esplenócitos são isolados e lavados duas vezes com RPMI que contém 10% de soro fetal bovino (FBS) , HEPES 10 mM, 100 Unidades/mL de penicilina/estreptomicina. O RPMI suplementado desta maneira é subsequentemente referido como meio. As células são ajustadas a 2,5 X 106 células/mL no meio e são adicionados 200 pL da suspensão de células (5xl06 células) aos poços apropriados de placas de 96 poços.
Em seguida, as células são estimuladas adicionando 50 pL de mAb anti-IgM em meio (concentração final: 30 pg/mL). Após incubação durante 24 horas a 37 °C, as células são reveladas com os seguintes cocktails de anticorpos: anti-CD86 de murganho-FITC, anti-CD69 de murganho-PerCP-Cy5.5, anti-CDl9 de murganho-PerCP para a avaliação de células B, e anti-CD3 de murganho-FITC, anti-CD69 de murganho-PE para a avaliação de células T (2 pL de cada anticorpo/poço) . Após uma hora à temperatura ambiente (ta) no escuro as células são transferidas para placas de 96 poços profundos. As células são lavadas uma vez com 1 mL de PBS que contém 2% de FBS e após ressuspensão em 200 pL as amostras são analisadas num citómetro de fluxo FACS Calibur. Os linfócitos são controlados no gráfico de pontos FSC/SSC de acordo com o tamanho e a granulosidade e adicionalmente analisados quanto à expressão de CD19, CD3 e marcadores de ativação (CD86, CD69) . Os dados são calculados a partir de transferências de manchas como percentagem de células reveladas positivamente para os marcadores de ativação dentro da população CD19+ ou CD3+ utilizando o Software BD CellQest.
Para avaliar a propriedade inibidora dos compostos, os compostos são primeiro dissolvidos e diluídos em DMSO, seguido de uma diluição a 1:50 em meio. Os esplenócitos de murganhos Balb/c são isolados, ressuspensos e transferidos para placas de 96 poços como descrito acima (200 pL/poço). Os compostos diluídos ou solvente são adicionados às placas (25 pL) e incubados a 37 °C durante 1 hora. Em seguida, as culturas são estimuladas com 25 pL de mAb anti-IgM/poço (concentração final 30 pg/mL) durante 24 horas a 37 °C e reveladas com anti-CD86 de murganho-FITC e anti-CDl9 de murganho-PerCP (2 pL de cada anticorpo/poço) . A expressão de CD86 em células B CDl9-positivas é quantificada por citometria de fluxo como descrito acima. 2.3 Determinação da ativação de células B em ratazana
Foi reconhecido que ο PI3K5 modula a função de células B quando as células são estimuladas através do recetor de células B (BCR) (Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002). Para avaliar a propriedade inibidora dos compostos sobre a ativação de células B, a regulação positiva dos marcadores de ativação CD86 em células B de ratazana derivadas de sangue inteiro é medida após estimulação com anti-IgM e IL-4 recombinante. A molécula de CD86 (também conhecida como B7-2) é principalmente expressada sobre células apresentadoras de antigénios, incluindo células B. As células B em repouso expressam o CD86 em níveis baixos, mas regulam positivamente o mesmo após estimulação e.g. do BCR ou recetor de IL-4. 0 CD86 sobre uma célula B interage com o CD28 sobre células T. Esta interação é necessária para a ativação ótima de células T e para a geração de uma resposta ótima de IgGl (Carreno et al. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)).
Colheita de sangue de ratazana
Sangue inteiro foi recolhido da aorta abdominal de ratazanas Lewis macho adultas (LEW/HanHsd) utilizando uma seringa de 10 mL com agulha hipodérmica pré-revestida com heparina de sódio. O sangue foi transferido para tubos Falcon de 50 mL e a concentração de anticoagulante foi ajustada a 100 U/mL.
Estimulação de células B de ratazana e tratamento com um especifico inibidor
Para a avaliação dos efeitos in vitro de fármacos imunossupressores, sangue heparinizado foi pré-diluído até 50% com meio. Como meio foi utilizado DMEM glicose alta (Animed #cat 1-26F01-I) suplementado com 100 U/mL de penicilina, 100 mg/mL de estreptomicina, L-glutamina 2 mM, 50 mg/mL de dextrano 40 e 5% de soro fetal de vitelo (FCS, Fetaclone I, Gibco #10270-106). Em seguida, 190 pL de sangue pré-diluído foi fortificado com 10 pL de composto de ensaio pré-diluído em placas de microtitulação de 96 poços de fundo em U (Nunc), o que resultou numa diluição sucessiva de três vezes com uma gama de concentração desde 20 a 0,0003 pM. Os poços de controlo foram pré-tratados com DMSO para se obter uma concentração final de 0,5% de DMSO. As culturas foram preparadas em duplicados, misturadas bem por agitação num agitador de placas (Heidolph Titramax 101; 30 segundos, velocidade 900), pipetando para cima e para baixo e novamente agitadas no agitador de placas. As culturas foram incubadas a 37 °C, 5% de CO2 durante 1 h. Em seguida, foram adicionados 20 pL de Ab policlonal de cabra anti-IgM de ratazana (Serotec, #cat 302001) e 10 pL de rlL-4 recombinante diluída (Immunotools # 340085) para se obter concentrações finais de 30 pg/mL e 5 ng/mL, respetivamente. As placas foram misturados por agitação num agitador de placas como acima e incubadas durante 24 h a 37 °C, 5% de C02.
Determinação da ativação de células B por citometria de fluxo
Após incubação, foram adicionados 15 pL de uma solução de EDTA 25 mM por poço e agitados durante 15 min para desprender as células aderentes. Para a análise dos marcadores de ativação na superfície, as amostras foram em seguida reveladas com anti-ratCD45RA marcado com PE-Cy5 (BD #cat 557015) para permitir o controlo de células B na análise por FACS. Além disso, as amostras foram reveladas com anti-CD86 de ratazana marcado com PE (BD #cat 551396) . Todos os procedimentos de revelação foram realizadas à ta durante 30 min no escuro. Após incubação, as amostras foram transferidas para placas de microtitulação de 96 poços profundos com fundo em V (Corning # 396096) que continham 2 mL/poço de Solução de Lise BD (BD # 349202) . Após lise dos eritrócitos, as amostras foram lavadas com 2 mL de CellWASH (BD # 349524) . Os dados foram adquiridos num citómetro de fluxo LSRII ou FACScalibur (BD Biosciences) utilizando o software Plus ou DIVA (versão 6.1.1) de Cellquest, respetivamente. Os linfócitos foram controlados na transferência de mancha FSC/SSC de acordo com o tamanho e a granulosidade e adicionalmente analisados quanto à expressão de CD45RA e marcadores de ativação. Os dados foram calculados a partir das transferências de manchas ou histogramas como percentagem de células reveladas positivamente para os marcadores de ativação dentro da população CD45RA+.
Avaliação estatística A percentagem de inibição da ativação de células B após exposição ao fármaco foi calculada pela seguinte fórmula: estimulação sem fármaco — estimulação com íarmace % Inibição — 100 X ---;- estimiiiâção sem armara — não estimuladas 0 software ORIGIN 7 (OriginLab Corporation, Northampton, MA) foi utilizado para ajuste de curva ded regressão não linear. A concentração de fármaco que resulta em 50% de inibição (IC50) foi obtida ajustando a equação de Hill aos dados de inibição. 2.4 Determinação de IL-6 induzida por TLR9 em esplenócitos de murganho
Preparação de suspensão de células únicas a partir de baço de murganho
Os baços foram dissecados de murganhos C57BL/6 imediatamente após eutanásia. A gordura em excesso foi cortada dos baços antes de esmagar o baço através de um crivo de células de 0,4 μΜ utilizando um êmbolo de uma seringa de 5 mL. Foi preparada uma suspensão de células únicas e o volume foi ajustado a 15 mL num tubo Falcon de 50 mL utilizando PBS frio. As células foram centrifugadas a 1500 rpm durante 5 minutos a 4 °C graus antes da remoção do sobrenadante e ressuspensão em 5 mL de tampão de lise de glóbulos vermelhos por baço e incubação durante 5 minutos à temperatura ambiente. Foi adicionado PBS gelado (30 mL) às células antes da centrifugação a 1500 rpm durante 5 minutos a 4 °C. O sobrenadante foi removido e as células foram lavadas duas vezes com 40 mL de meio de cultura de esplenócitos murídeos (MSCM). 0 MSCM consistiu em RPMI suplementado com 100 unidades/mL de Penicilina e 100 pg/mL de Estreptomicina, 1 x aminoácidos não essenciais, Piruvato de Sódio 1 mM, β-mercaptoetanol 0,05 mM e 10% de Soro Fetal Bovino (FBS) inativado termicamente. As células foram ressuspensas em 10-20 mL de MSCM e contadas utilizando um contador de células Countess. Foram obtidos aproximadamente 60xl06 esplenócitos a partir de um único baço de murganho C57BL/6.
Estimulação de esplenócitos murideos e tratamento com inibidor especifico
Os esplenócitos foram plaqueados a uma densidade final de 2xl05 células/poço num volume de 100 pL em placas 96 poços de fundo plano e incubados numa incubadora humidificada a 37 °C durante 2-4 horas. Depois disso, os compostos a serem testados foram transferidos utilizando um equipamento automático de manuseamento de líquidos utilizando placas-mãe de compostos previamente preparadas. As placas-mãe consistiam em compostos (em DMSO/ddfhO 90%/10%) organizados em 8-10 pontos utilizando diluições de 2 ou 3 vezes. O equipamento de manuseamento de líquidos transferiu 1 pL de cada diluição da placa fonte de compostos previamente preparada para o destino apropriado na placa de 96 poços. A concentração de partida final dos compostos na cultura de células foi de 10 pM. A concentração final de DMSO nas culturas de células foi de 0,5%. As células foram incubadas com os compostos durante 1 hora antes da adição de ligando TLR. Em seguida, foi adicionada uma concentração lOx ECso de CpG1826 num volume de 20 pL (para um volume de cultura final de 200 pL), após o que as culturas foram incubadas de um dia para o outro numa incubadora humidificada a 37 °C.
Determinação da Interleucina-6 por ELISA
Após cultura de um dia para o outro, as placas foram centrifugadas a 2000 rpm durante 5 minutos à temperatura ambiente. Subsequentemente, foram transferidos 150 pL de cada cultura para placas de 96 poços de fundo em V e os níveis de IL-6 foram medidos utilizando um kit de ELISA em sanduíche para IL-6 de murganho comercialmente disponível. Resumidamente, as placas foram revestidas de um dia para o outro com o anticorpo de captura antes de bloquear durante 1 hora com PBS/0,1% de BSA. As amostras e padrões foram adicionados num volume de 50 pL e a placa foi incubada durante 2 horas à temperatura ambiente. Após remoção dos padrões/amostras, a placa foi lavada utilizando PBS/0,05% de Tween, antes da adição de 50 pL do anticorpo de deteção biotinilado, após o que a placa foi incubada durante 2 horas à temperatura ambiente com agitação. As placas foram novamente lavadas antes da adição de 50 pL de estreptavidina-peroxidase de rábano-silvestre por poço durante 20 minutos. Após lavagens adicionais da placa, foram adicionados 50 pL de substrato TMB a cada poço e as placas foram incubadas durante 20 minutos antes da adição de 25 pL/poço de solução de terminação. Os níveis de IL-6 foram medidos utilizando um Leitor de Placas SpectraMax 190 (450 nm) e analisados utilizando o software SoftMax Pro e GraphPad Prism. 2.5 Determinação de IFNalfa induzido por TLR9 em células mononucleares de sangue periférico humano (PBMC)
Preparação de PBMC a partir de sangue humano fresco
Sangue humano (ca. 75 mL) foi recolhido em tubos 10 S-Monovette que continham Heparina (S-Monovette 7,5 mL de NH Heparina 16 IU/mL de sangue; Starstedt). Tubos Leucosep™ (30 mL #227290; Greiner Bio-one) foram preparados através da adição de 15 mL de meio de separação de linfócitos LSM1077™ por tubo (#Jl5-004; PAA Laboratories) e centrifugação durante 30 segundos a 1000 g. Cerca de 25 mL de sangue foram transferidos para tubos Leucosep™ após diluição com partes iguais de PBS (sem Ca2+/Mg2+; #14190- 094) . As amostras foram centrifugadas a 800 g durante 20 min a 22 °C utilizando uma centrifugadora 5810R Eppendorf, sem travão. A camada de PBMC foi cuidadosamente retirada da interface plasma:meio de separação e transferida para um tubo de 50 mL limpo. As células foram lavadas uma vez por adição de PBS (até 45 mL) e centrifugadas (1400rpm, 10 min a 22 °C) com travão (ajustado à velocidade 9) utilizando um Eppendorf 5810R. As células sedimentadas foram cuidadosamente ressuspensas em Meio (RPMI 1640+GlutaMAX-I, 2-mercaptoetanol 0,05 mM, HEPES 10 mM e 5% v/v de FCS) e as amostras agrupadas. Os componentes do meio 2-mercaptoetanol (#31350-010; 50 mM) , Hepes (#15630-056, 1M) e RPMI 1640 (lx) + GlutaMAX-I (#61870-010) foram obtidos a partir de Gibco. O FCS (#2-0lF36-l) foi obtido de Amimed. As PBMC foram contadas utilizando um contador de células automatizado Countess® (a amostra foi pré-diluída a 1:10 em Meio, antes da adição de igual volume (10 pL) de Azul de Tripano). As células foram diluídas até 4 x 106 células/mL e inoculadas em placas de 384 poços (#353962; Becton Dickinson AG) para dar um volume final de 25 pL (i.e. 1 x 105 células/poço).
Estimulação de PBMC e tratamento com um inibidor especifico
Os compostos foram pré-diluídos em DMSO a 100% v/v (#41640-100 mL; Sigma-Aldrich), seguido de transferência para Meio (para se conseguir uma concentração final de DMSO de 0,25%) . As células foram tratadas com a diluição de composto apropriado (5 pL) ou controlo de veiculo (5 pL) e incubadas durante 30 min a 37 °C numa incubadora humidificada em ar com 5% (v/v) de CO2. As células foram estimuladas com CpG2216 (0,3 pM; #tlrl-hodna; Invivogen) ou controlo de veiculo (10 pL/poço) e incubadas durante 20 h. As placas foram centrifugadas brevemente (200 x g durante 2 min a 22 °C) e retiradas amostras de sobrenadante (30 pL) para quantificação dos níveis de IFNa.
Quantificação de IFNa utilizando tecnologia
AlphaLisa
Para a quantificação de IFNalfa foi utilizado o Kit AlphaLISA de interferão humano (#AL264F) da PerkinElmer. Uma mistura de anticorpos que contém esférulas aceitadoras anti-IFNa (5 pg/mL final) e anticorpo anti-IFNa biotinilado (0,5 nM final) é preparada de fresco e distribuída (5 pL) para Optiplates™ de 384 poços (#6007299; PerkinElmer). Foram preparadas diluições de padrões conhecidos de IFNa (humano IFNa B (2b) ) e foram adicionados, em conjunto com os sobrenadantes das células (5 pL) , às placas anteriores. As placas foram centrifugadas brevemente (impulso a 200 g) , tapadas com película selante adesiva, agitadas em vórtice e incubadas 1 h à temperatura ambiente no escuro. Foram preparadas esférulas doadoras revestidas com estreptavidina (20 pg/mL final) e adicionadas a cada poço (5 pL) numa área escura (mistura sensível à luz). As placas foram incubadas 30 min à temperatura ambiente (as placas não devem ser centrifugadas ou tapadas) . Após incubação, as placas foram lidas com um leitor de múltiplas placas Envision™ equipado com a opção ALPHA utilizando os "ajustes padrão AlphaScreen" do instrumento (e.g. tempo de medição total: 550 ms, Tempo de excitação de laser a 680 nm: 180 ms, espelho: D640 as, filtro de emissão: M570w, comprimento de onda central 570 nm, largura de banda 100 nm, transmitância 75%) . Os dados foram recolhidos para análise e quantificação dos níveis de IFNa.
Avaliação e análise de dados
Os dados foram analisados utilizando o ajuste Excel XL 4.0 (Microsoft) com o suplemento XLfit (IDBS; versão 4.3.2). As concentrações específicas de IFNa foram determinadas após extrapolação para as curvas de calibração utilizando IFNa B humano (2b) . Os valores de IC50 particulares dos compostos foram determinados por regressão não linear após ajuste de curvas aos dados experimentais. 3 Determinação da produção de anticorpos contra glóbulos vermelhos de ovelhas (SRBC).
Em resumo, ratazanas OFA foram injetadas i.v. com eritrócitos de ovelha em dO e tratadas por via oral em quatro dias consecutivos (dO a d3) com os compostos sob investigação. Foram preparadas suspensões de células de baço em d4 e os linfócitos foram plaqueados sobre ágar mole na presença de células indicadoras (SRBC) e complemento. A lise das células indicadoras devido à secreção de anticorpo específico contra SRBC (predominantemente da subclasse de IgM) e à presença de complemento produziu placas. O número de placas por placa foi contado e exprimido como o número de placas por baço.
Imunização: Grupos de cinco ratazanas OFA fêmeas foram imunizadas no dia 0 com 2xl08/mL SRBC (obtidos de
Laboratory Animal Services LAS, Novartis Pharma AG) num volume de 0,5 mL por ratazana por injeção i.v..
Tratamento com composto: Os animais foram tratados com composto suspenso em 0,5% de CMC, 0,5% de Tween80 durante 4 dias consecutivos (dias 0, 1, 2 e 3) começando no dia de imunização. O composto foi administrado por via oral duas vezes por dia com 12 horas de intervalo entre doses num volume de aplicação de 5 mL/kg de peso corporal.
Preparação de suspensões de células de baço:
No dia 4, os animais foram sacrificados com CO2. Os baços foram retirados, pesados e depositados em tubos plásticos que continham 10 mL de solução salina equilibrada de Hank fria (4 °C) (HBSS; Gibco, pH 7,3, contendo 1 mg de Vermelho de fenol/100 mL) para cada baço de ratazana. Os baços foram homogeneizados com uma roda de vidro, deixados sobre gelo durante 5 minutos e 1 mL do sobrenadante foi transferido para um tubo novo. As células foram lavadas uma vez em 4 mL de HBSS, em seguida os sobrenadantes foram rejeitados e os sedimentos ressuspensos em 1 mL de HBSS. O número de linfócitos por baço foi determinado com um contador de células automatizado e as suspensões de células de baço foram ajustadas a uma concentração de células de 30xl06/mL.
Ensaio de formação de placas:
Foram preparadas placas de Petri com ágar molde com agarose a 0,7% (SERVA) em HBSS.
Além disso, um mL de agarose a 0,7% foi preparado em tubos plásticos e mantidos a 48 °C num banho de água. Foram adicionados cerca de 50 pL de uma suspensão de células de baço a 30xl06/mL e 50 pL de SRBC a 40 x 108/mL, misturados rapidamente (agitação em vórtice) e vertidos sobre as placas de agarose preparadas. As placas de Petri foram ligeiramente inclinadas para se conseguir uma distribuição homogénea da mistura de células sobre a camada de agarose. As placas foram deixadas à temperatura ambiente durante 15 minutos e foram em seguida incubadas a 37 °C durante 60 minutos. Em seguida, foram adicionados 1,4 mL de complemento de porquinho-da-índia (Harlan; 10%) e a incubação foi prosseguida durante mais 60 minutos a 37 °C. Os anticorpos específicos contra SRBC libertados pelas células B plaqueadas ligaram-se ao antigénio (SRBC) na sua vizinhança. Estes complexos de antigénio-anticorpo ativaram o complemento e conduziram à lise dos SRBC deixando uma mancha brilhante (placa) dentro da camada vermelha de eritrócitos. As placas foram contadas com um microscópio.
Foi utilizada a seguinte fórmula para determinar a inibição da formação de placas: % Inibição = C*100/V-100 com: V= número médio de placas/baço para o grupo de veículo; C= número médio de placas/baço para o grupo tratado com composto
Referências: N.K. Jerne &amp; A.A. Nordin (1963) Plaque formation in agar by single antibody-producing cells. Science 140:405. N.K. Jerne, A.A. Nordin &amp; C. Henry (1963) The agar plaque technique for recognizing antibody-producing cells. In: "Cell Bound Antibodies", B. Amos &amp; H. Koprowski, Eds., Wistar Inst. Press, Philadelphia pp.109-125.
Dados biológicos
Ensaio Enzimático
LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> Novartis AG <120> Derivados de Di-hidro-Benzo-Oxazina e Di-hidro-Pirido-Oxazina <130> PATO54 932P1 <160> 21 <170> Patentln versão 3.3 <210> 1 <211> 28 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 1 cgagaatatg atagattata tgaagaat 28 <210> 2 <211> 30 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 2 tggtttaatg ctgttcatac gtttgtcaat 30 <210> 3 <211> 76 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 3 gggacaagtt tgtacaaaaa agcaggctac gaaggagata tacatatgcg agaatatgat 60 agattatatg aagaat 76 <210> 4 <211> 66 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 4 taccataatt ccaccaccac caccggaaat tccccctggt ttaatgctgt tcatacgttt 60 gtcaat 66 <210> 5 <211> 26 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 5 ctagtggaat gtttactacc aaatgg 26 <210> 6 <211> 26 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 6 gttcaatgca tgctgtttaa ttgtgt 26 <210> 7 <211> 63 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 7 gggggâãttt ccggtggtgg tggtggaatt atggtactag tggaatgttt actaccaaat 60 gga 63 <210> 8 <211> 56 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 8 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc gttcaatgca tgctgtttaa ttgtgt 56 <210> 9 <211> 61 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 9 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 10 <211> 42 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 10 gctagcatgc gagaatatga tagattatat gaagaatata cc 42 <210> 11 <211> 45 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 11 gcctccacca cctccgcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 12 <211> 42 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 12 tactagtccg cctccaccac ctccgcctcc accacctccg cc 42 <210> 13 <211> 54 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 13 actgaagcat cctcctcctc ctcctcctgg tttaatgctg ttcatacgtt tgtc 54 <210> 14 <211> 57 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 14 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc agatctgtag tctttccgaa ctgtgtg 57 <210> 15 <211> 61 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 15 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61 <210> 16 <211> 45 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 16 tcctcctcct cctcctcctg gtttaatgct gttcatacgt ttgtc 45 <210> 17 <211> 26 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 17 atgccccctg gggtggactg ccccat 26 <210> 18 <211> 26 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 18 ctactgcctg ttgtctttgg acacgt 26 <210> 19 <211> 53 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4 0 0> 19 attaaaccag gaggaggagg aggaggaccc cctggggtgg actgccccat gga 53 <210> 20 <211> 56 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <400> 20 agctccgtga tggtgatggt gatgtgctcc ctgcctgttg tctttggaca cgttgt 56 <210> 21 <211> 61 <212> ADN <213> Artificial <22 0> <223> Iniciador <4Ο0> 21 gggaccactt tgtacaagaa agctgggttt aagctccgtg atggtgatgg tgatgtgctc 60 c 61
Lisboa, 06 de março de 2018
REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula (I)
(i) ou um sal do mesmo, em que Y é selecionado de 0 ou NH; V é selecionado de CR5 ou N; W é selecionado de CH2 ou 0; U é selecionado de N ou CH; Q é selecionado de N ou CRô; em que U e Q não são ambos N; R1 é selecionado de fenilo, piridilo, pirimininilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-triazinilo, 1,3,5-triazinilo, ou -X-R4 em que X é selecionado de C(0), S (0)2 ou CH2 e

Claims (17)

  1. R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-C8, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, ciano-alquilo-Ci-Os, N, N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-Ci-C8, alquil-Ci-C4_sulfonil-alquilo-Ci-C8, fenilo, heterociclilo, heterocicliloxilo, heterociclil-alquilo-Ci-Cs, cicloalquilo-C3-Ci2, cicloalquiloxilo-C3-Ci2, cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8, heteroarilo, heteroariloxilo, heteroaril-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino ou N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-Cs-amino e em N,N-di-alquil-Ci-C8-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 em cicloalquilo-C3-Ci2 e em cicloalquil-C3-Ci2-alquilo-Ci-C8 pode estar não substituído ou substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-C1-C8, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs- carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que ' heteroarilo' é um sistema de anel monociclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-C8, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-C8, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs- carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação; R6 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-Ci-C4, alcoxilo-Ci-C4, alquil-Ci-C4-sulfonilo, alquil-Ci-C4_sulf inilo, alquil-Ci-C4_sulfanilo, halo- alcoxilo-Ci-C4, alcoxi-Ci-C4-alquilo-Ci-C4, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino; R7 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, ciano, nitro, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-Ci-C4, alcoxilo-Ci-C4, N(R8)2~ sulfonilo, alquil-Ci-C4_sulfonilo, alquil-Ci-C4_sulfonil-amino, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-Cs-amino ou N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino; ou R6 e R7, em conjunto são CH=CH-CH=CH, em que R8 é independentemente selecionado de hidrogénio, alquilo-Ci-C4, alcoxilo-Ci-C4 ou dois R8 em conjunto com o azoto ao qual estão ligados formam um anel heterociclico de 4 a 7 membros que contém 1-2 heteroátomos selecionados de N, 0, S, que não está substituído ou está substituído com 1-3 substituintes selecionados de alquilo-Ci-C4; R5 é independentemente selecionado de H, D, F ou alquilo-C1-C2; R30 é independentemente selecionado de H, D ou F.
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal do mesmo, da fórmula (Ic')
  3. 3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou um sal do mesmo, da fórmula (Id')
  4. 4. Composto de acordo com qualquer um da reivindicação 1 ou 2 ou um sal do mesmo, da fórmula (Ie')
  5. 5. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 3 ou um sal do mesmo, da fórmula (If')
  6. 6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 ou um sal do mesmo, em que R1 é selecionado de fenilo, piridilo, pirimininilo, pirazinilo, piridazinilo, 1,2,3-triazinilo, 1,2,4-triazinilo, 1,3,5-triazinilo, ou -X-R4, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-C1-C8, alcoxi-Ci-C8-alquilo-Ci-C8, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-Ci-C8, alquil-Ci-C4-sulfonil-alquilo-Ci-C8, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-C1-C8, alcoxilo-Ci-Cs, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, que não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-C8, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs- carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que ' heteroarilo' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5-a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs- carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação.
  7. 7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 ou um sal do mesmo, em que R1 é selecionado de -X-R4, em que R4 é selecionado de alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-C1-C8, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, ciano-alquilo-Ci-Cs, N,N-di-alquil-Ci-C4-amino-alquilo-Ci-C8, alquil-Ci-C4_sulfonil-alquilo-Ci-Cs, fenilo, heterociclilo, heterociclil-alquilo-C1-C8, cicloalquilo-C3-Ci2, heteroarilo, heteroaril-alquilo-C1-C8, alcoxilo-Ci-Cs, em que alquilo-Ci-Cs em N-alquil-Ci-C8-amino e em N,N-di-alquil-Ci-Cs-amino pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4, em que cicloalquilo-C3-Ci2 pode estar não substituído ou substituído com halogéneo, hidroxilo ou alcoxilo-Ci-C4; em que 'heterociclilo' é um sistema de anel monocíclico saturado ou parcialmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, que não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de oxo, halogéneo, alquilo-Ci-C8, halo-alquilo-Ci-Cs, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-Cs, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs- carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heterociclilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação, em que 'heteroarilo' é um sistema de anel monocíclico totalmente insaturado de 3 a 7 membros que contém 1 a 3 heteroátomos selecionados de N, 0 ou S, ou pirazolo[1,5- a]pirimidina ou imidazo[2,1-b]tiazole, cada um dos quais não está substituído ou está substituído com 1-5 substituintes selecionados de halogéneo, alquilo-Ci-Cs, halo-alquilo-Ci-C8, hidroxi-alquilo-Ci-Cs, hidroxilo, alcoxilo-Ci-C8, alcoxi-Ci-Cs-alquilo-Ci-Cs, amino, N-alquil-Ci-C8-amino, N, N-di-alquil-Ci-Cs-amino, alquil-Ci-Cs- carbonilo, halo-alquil-Ci-Cs-carbonilo, hidroxi-alquil-Ci-C8-carbonilo ou alcoxi-Ci-Cs-alquil-Ci-Cs-carbonilo; em que 'heteroarilo' pode estar ligado a um heteroátomo ou um átomo de carbono e em que os heteroátomos N e/ou S podem estar também opcionalmente oxidados em vários estados de oxidação; R6 é selecionado de halogéneo, alcoxilo-Ci-C4, alquil-Ci-C4_ sulfonilo ou halo-alcoxilo-Ci-C4 e R7 é selecionado de hidrogénio, halogéneo, ciano, alquilo-Ci-C4, halo-alquilo-C1-C4 ou alcoxilo-Ci-C4.
  8. 8. Composto da reivindicação 1, o qual é selecionado do grupo que consiste em (S)-(3-((4-(6-Metoxi-5-metilpiridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b] [ 1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin-l-il) (tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona; Dimetilamida do ácido 5-{6-[ (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-piridina-3-sulfónico; ((S)-3-{4-[5-(Morfolina-4-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metil-5-nitro-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; (Tetra-hidro-pirano-4-il)-{(S)-3-[4-(5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; 5 —{6 — [ (S) -1-(Tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 1- { (S)—3— [4— ( 6-Metanossuitonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona;
    2- Metoxi-5-[6-((S)-l-propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3— [4— (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Amino-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona;
    2-Metoxi-N,N-dimetil-5-[6-((S)-l-propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-benzenossulfonamida; 1-{ (S)—3—[4—(3-MetanossuIfonil-4-metoxi-fenil)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—( 6-Amino-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-((S)— 3 —{4 —[6-Metoxi-5-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxil-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona; { (S)-3-[4-(2-Metil-piridin-4-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(6-Metoximetil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; (Tetra-hidro-pirano-4-il)-{ (S)-3-[4-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[4-(2-Metoxi-piridin-4-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-( 6-Amino-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 1-((S)— 3 —{4 —[4-Metil-3-(piperidina-l-sulfonil)-fenil]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)-propan-1-ona; 1-((S)— 3 —{4 —[4-Metoxi-3-(morfolina-4-sulfonil)-fenil]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il) -propan-1-ona; 1- ( (S)— 3 —{4 —[5-(Morfolina-4-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona; 1-((S)— 3 —{4 —[4-Metoxi-3-(4-metil-piperazina-l-sulfonil)-fenil]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxil-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona; 1-((S)— 3 —{4 —[5-(4-Metil-piperazina-l-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)-propan-l-ona; 2,N-Dimetoxi-N-metil-5-[6-((S)-l-propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-benzenossulfonamida; Metoxi-metil-amida do ácido 5-[6- ( (S)-1-propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-3-sulfónico; 2,N-Dimetoxi-5-[6-((S)-l-propionil-pirrolidin-3-iloxi) -2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-benzenossulfonamida; 5 - [6- ( (S)-l-Propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo; { (S)-3-[4-(5-Metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S) -3-[4-(5-Cloro-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(3,4-Dimetoxi-fenil)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-[ (S)-3-(4-Quinolin-3-il-3,4-di-hidro-2H-benzo[l,4]oxazin- 6-iloxi)-pirrolidin-l-il]-propan-l-ona; 1-{ (S)—3— [4— (5-Metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-l-ona; 1- { (S)—3—[4— (5-Trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-l-ona; Dimetilamida do ácido 5-[ 6-( (S)-l-propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-3-sulfbnico;
    2- Metil-5-[6- ( (S)-l-propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il]-benzonitrilo; 1-{ (S)—3—[4—(4-Metoxi-3-trifluorometil-fenil)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-l-ona; (Tetra-hidro-pirano-4-il)-{ (S)-3-[4- ( 6-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3, 4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(6-Etoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 4 - [6- ( (S)-l-Propionil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-piridina-2-carbonitrilo; 1-{ (S)—3—[4—(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1- ( (S)— 3 —{4 —[5 - (Propano-2-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)-propan-1-ona; ( (S)— 3 —{4 —[5 - (Propano-2-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3- [4- ( 6-Etanossulfinil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; (4,4-Difluoro-ciclo-hexil)-{(S)-3-[4-(6-metanossulfonil-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [4-(5-fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; { (S)-3- [4-(5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda* 6*-tiopirano-4-il)-metanona; (1,l-Dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiofen-3-il)-{ (S)-3- [4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1, l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [4-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il) -{ (S)-3-[4-(6-etoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; ({ (S)-3 - [4 - (5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [4-(5-etil-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-pirazol-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-pirazol-3-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-piridin-4-il-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-pirimidin-5-il-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-oxazol- 4- il-metanona; { (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3, 4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-oxazol- 5- il-metanona; (2,2-Dimetil-tetra-hidro-pirano-4-il) - { (S)-3 -[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiofen-3-il) -{ (S)-3- [4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiofen-3-il) -{ (S)-3-[4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)- ((S) — 3 —{4 — [5-(propano-2-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi}-pirrolidin-l-il)-metanona;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(1-metil-lH-imidazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-3,3-dideutero-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metoxi-etanona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metil-propan-l-ona; { (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3, 4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-fenil-metanona; (1,l-Dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiofen-3-il)-{ (S)-3- [4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; [1,4]Dioxan-2-il-{ (S)-3-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-metoxi-propan-1-ona; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S) -3-[4-(5, 6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-[1,4]dioxan-2-il-metanona; { (S) -3-[4-(5, 6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; { (S) -3-[4-(5, 6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-tetra-hidro-1lambda* 6*-tiofen-3-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-3-il)-metanona; { (S)-3-[4-(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-3-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metoxi-etanona; 1-{ (S)—3—[4—(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-metanossulfonil-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-metoxi-propan-1-ona; { (S) -3-[4-(5, 6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda* 6*-tiopirano-4-il)-metanona; { (S) -3-[4-(5, 6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; Ciclo-hexil-{(S)-3-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il }-metanona; (4-Hidroxi-ciclo-hexil)-{(S)-3-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il]-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; { (S)-3-[4-(6-Cloro-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4— ( 6-Cloro-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; { (S)-3- [4-(6-Cloro-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda* 6*-tiopirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4— ( 6-Cloro-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-hidroxi-propan-1-ona; { (S)-3 - [4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; { (S)-3 - [ 4 - ( 6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda* 6*-tiopirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-hidroxi-propan-l-ona; { (S)-3-[4-(6-Cloro-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; 5-{ (S)—3— [4— ( 6-Cloro-5-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-lH-piridin-2-ona; { (S)-3 - [4-(6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; 5-{ (S)—3—[4— ( 6-Cloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-lH-piridin-2-ona; { (S)-3-[4-(5,6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(4-hidroxi-ciclo-hexil)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(3-metil-piridin-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il) - 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-piridin-4-il-etanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-1-i1}— (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metanossulfonil-piridin-3-il) - 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(5-Fluorometil-6-metanossulfonil-piridin-3-il) - 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3 - [4-(6-Difluorometoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3 - [ 4 - ( 6-Difluorometoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-6-tiopirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3, 4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; { (S)-3- [4- (5-Difluorometil-6-metanossulfonil-piridin-3-il) - 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(R)-tetra-hidro-furan-3-il-metanona; { (S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metilamino-piridin-3-il) - 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(5-Dimetilamino-6-metanossulfonil-piridin-3-il) - 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(5-Cloro-6-metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; Ciclopropil-{ (S)-3-[4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il }-metanona; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-sulfonil)-pirrolidin-3-iloxi]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il) -6-[ (S)-1-(propano-2-sulfonil)-pirrolidin-3-iloxi]-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 6- ( (S)-l-Ciclopropanossulfonil-pirrolidin-3-iloxi)-4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 6- ( (S)-l-Etanossulfonil-pirrolidin-3-iloxi)-4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina; (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[4-(5-fluoro-6-metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-1-carboxílico; { (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3- [4- ( 6-Etanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(3-metil-3H-imidazol-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; 1— (4 —{ (S)—3—[4—(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-piperidin-l-il)-etanona; 4- { (S)—3—[4—(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-lH-piridin-2-ona; 5- { (S)—3—[4—(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-lH-piridin-2-ona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; 5-{ (S)—3—[4—(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-1-metil-lH-piridin-2-ona; 1-{ (S)-3 - [4 - (6-Etanossulfonil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metanossuitonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; { (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-3-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4—(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metoxi-etanona; { (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-oxazol-4-il-metanona; (1,l-Dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiofen-3-il)-{ (S)-3- [4-(5-fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; { (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-oxazol-5-il-metanona; { (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-pirimidin-5-il-metanona; { (S)-3-[4-(5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1, 1-dioxo-tetra-hidro-1lambda* 6*-tiofen-3-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[4— (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-metanossulfonil-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4— (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-hidroxi-propan-l-ona; { (S)-3- [4- (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-oxazol-5-il-metanona; 3-{ (S)—3— [4— (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-oxo-propionitrilo; 1-{ (S)—3—[4— (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metanossulfonil-etanona; 1-{ (S)—3—[4—(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metanossulfonil-etanona; 1-{ (S)—3—[4— (5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-metanossulfonil-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-hidroxi-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-metoxi-propan-1-ona; [1,4]Dioxan-2-il-{ (S)-3-[4-(5-fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il }-metanona; 3-{ (S)—3—[4—(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-3-oxo-propionitrilo; { (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(4-hidroxi-ciclo-hexil)-metanona; { (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1, 1-dioxo-hexa-hidro-6-tiopirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)-3 - [4 - (6-Etanossulfinil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1- ((R)-3-{(S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-l-carbonil}-pirrolidin-l-il)-etanona ;
    2- Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(R)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 1-{(R)-3-[4-(6-Metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona; 1-{ (S)—3—[4—(6-Metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-propan-1-ona;
    2-Metoxi-5-{3-metil-6-[ (S)-1- (tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5-{6- [ (S)-1- (Furazan-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(2-metil-2H-pirazole-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-enzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5-{6- [ (S)-1- (Isoxazole-5-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1- (lH-pirazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5 —{6 — [ (S) -1-(2-Metanossulfonil-acetil)-pirrolidin-3-iloxi]- 2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(5-metil-[1,3,4]oxadiazole-2-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(pirimidina-5-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(tiazole-5-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1- (pirazina-2-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(piridina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(piridina-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—(1,3-Dimetil-lH-pirazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(5-oxo-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—(2,4-Dimetil-oxazole-5-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—(6,6-Dimetil-4-oxo-5,6-di-hidro-4H-pirano-2-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6 —[ (S)-l-(pirazolo[l,5-a]pirimidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(5-oxo-pirrolidina-2-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—([1,4]Dioxano-2-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]- 2.3- di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—([1,4]Dioxano-2-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]- 2.3- di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; (S)-2-metoxi-5-(6-((1-(l-metil-lH-imidazole-4- carbonil)pirrolidin-3-il)oxi)-2H-benzo[b][1,4]oxazin-4(3H)- il)nicotinonitrilo; 1- { (S)—3—[4—(6-Metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-morfolin-4-il-etanona;
    2- Dimetilamino-l-{(S)-3-[4-(6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-etanona;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5 —{6 — [ (S) -1- (1-Acetil-piperidina-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 5 —{6 — [ (S) -1-(2-Dimetilamino-acetil)-pirrolidin-3-iloxi]- 2.3- di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(2-morfolin-4-il-acetil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5 - [ 6- ( (S)-l-Isobutiril-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinonitrilo; 5—{6—[ (S)—1—(3,3-Dimetil-butiril)-pirrolidin-3-iloxi] -2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2- Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(3-metil-butiril)-pirrolidin-3-iloxi]- 2.3- di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; (S)-Éster metilico do ácido 3-[4-(5-ciano-6-metoxi-piridin- 3- il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidina-1-carboxílico;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(2-metoxi-acetil)-pirrolidin-3-iloxi]- 2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5 - [ 6- ( (S)-l-Ciclo-hexanocarbonil-pirrolidin-3-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-2-metoxi-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-piperidina-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 5 —{6 — [ (S) -1-(2-Hidroxi-2-metil-propionil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—(1,1-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2- Metoxi-5-{6-[(S)-1-(l-metil-6-oxo-l,6-di-hidro-piridina- 3- carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1- (oxazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(l-metil-2-oxo-l,2-di-hidro-piridina- 4- carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(6-oxo-l,6-di-hidro-piridina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro- benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(2-oxo-l,2-di-hidro-piridina-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(R)-2-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-isoxazolidin-4-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-[6-((R)-2-propionil-isoxazolidin-4-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-2-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-isoxazolidin-4-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-[6-((S)-2-propionil-isoxazolidin-4-iloxi)-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(R)-2-(1-metil-lH-imidazole-4-carbonil)-isoxazolidin-4-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(l-metil-lH-pirazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro-furan-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo; {(S)-3-[4-(6-Metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(3-metil-3H-imidazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-[6-[ (S)-1- (oxazole-5-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(4-metil-oxazole-5-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(morfolina-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(4-metoxi-ciclo-hexanocarbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1-(4-metoxi-ciclo-hexanocarbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-(6-{(S)—1—[2—(l-metil-lH-imidazol-4-il)-acetil]-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il)-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(piperidina-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 2-Metoxi-5-{6-[ (S)-1- ( (S)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-((R)-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il]-nicotinonitrilo; {(S)-3-[1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; (S)-Éster terc-butilico do ácido 3-[1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidina-l-carboxilico; { (S)-3-[1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[1-(6-Difluorometoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}- (1,1-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[1-(5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-1lambda* 6*-tiopirano-4-il)-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il) -{ (S)-3- [1-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[1-(6-Metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}- (l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; { (S)-3-[1- (5-Cloro-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; { (S)-3 - [ 1-(6-Difluorometoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[1-(6-Difluorometoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}- (l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; Ciclopropil-{ (S)-3-[1-(6-difluorometoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1, l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [1-(6-hidroxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [1-(5-hidroximetil-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1, l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [1-(5-fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; { (S)-3-[1-(5-Fluoro-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona;
    2-Metoxi-5-{7-[ (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-pirido[3,4-b][1,4]oxazin- 1- il}-nicotinonitrilo;
    2- Metoxi-5-{7-[(S)-1-(l-metil-lH-imidazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-l-il}-nicotinonitrilo; {(S)-3-[1-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; { (S)-3 - [ 1- (5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-1- il}-(1,1-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona; { (S)-3 - [ 1-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-1-i1}— (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[1— (5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-1-il}-2-metoxi-etanona; { (S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-1-il}-(l-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; 1-{ (S)—3—[1—(5-Difluorometil-6-metanossulfonil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-2-metoxi-etanona; (1,1-Dioxo-hexa-hidro-llambda* 6*-tiopirano-4-il) —{3—[1—(6 — metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; 5—{7 — [ (S)—1—(1,1-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-pirido[3,4-b][l,4]oxazin-l-il]-2-metoxi-nicotinonitrilo; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{(R)-3-fluoro-4-[1- ( 6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [l,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-{(S)-3-[1-(6-metoxi-5- trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{(R)-3-[1-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (5-Amino-l-metil-lH-imidazol-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoxi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b] [1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; (1,l-Dioxo-tetra-hidro-llambda*6*-tiofen-3-il)-{ (S)-3- [1-(6-metanossuitonil-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; { (S) -3-[4-(5, 6-Dimetoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-furan-2-il)-metanona; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il) -{ (S)-3- [5-fluoro-4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; { (S) -3-[4-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-fluoro- 3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,l-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona; { (S)-3-[5-Fluoro-4-(6-metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}- (tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 5—{6—[ (S)—1—((S)-l-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]-oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo; 5—{6 — [ (S)—1—((R)-l-Acetil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6 —[ (S) -1- ((R)-l-metil-pirrolidina-3-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S) -1-piridin-2-il-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina; 4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-pirimidin-2-il-pirrolidin-3-iloxi)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazina;
    2-Metoxi-5-{2-metil-6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{ (S)-2-metil-6-[ (S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo [1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(l-metil-piperidin-4-ilmetil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; { (S)-3-[4-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-3, 4-di-hidro-2H-benzo [1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; 5 —{6 — [ (S) -1-(4-Hidroxi-ciclo-hexanocarbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-2-metoxi-nicotinonitrilo;
    2-Metoxi-5- {6- [ (S) -1- (2-piridin-4-il-acet.il) -pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[1,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; { (S)-3-[4-(5-Amino-6-metoxi-piridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona; N-(2-Metoxi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-lH-imidazole-4-carbonil)-pirrolidin-3-iloxi]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-piridin-3-il)-metanossulfonamida; (1,l-Dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-{ (S)-3- [4-(6-metoxi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona; {(S)-3-[4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil- 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoxi-piridin-3-il)-5-metil- 3.4- di-hidro-2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1,l-dioxo-hexa-hidro-llambda*6*-tiopirano-4-il)-metanona; ou
    2- Metoxi-5-{6-[(S)-1-(tetra-hidro-pirano-4-carbonil)-pirrolidin-3-ilamino]-2,3-di-hidro-benzo[l,4]oxazin-4-il}-nicotinonitrilo; ou urn sal do mesmo.
  9. 9. Composto da reivindicação 1 na forma cristalina .
  10. 10. Composto da reivindicação 1, o qual é (S)-(3-((4-(6-Metoxi-5-metilpiridin-3-il)-3,4-di-hidro-2H-benzo[b] [ 1,4]oxazin-6-il)oxi)pirrolidin-l-il) (tetra-hidro-2H-pirano-4-il)metanona ou um sal do mesmo.
  11. 11. Composto da reivindicação 1, o qual é { (S)- 3- [4-(6-Metanossulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-di-hidro- 2H-benzo[1,4]oxazin-6-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(tetra-hidro-pirano-4-il)-metanona ou um sal do mesmo.
  12. 12. Composto da reivindicação 1, o qual é { (S)- 3-[1-(6-Metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4-b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-(1-metil-lH-imidazol-4-il)-metanona ou um sal do mesmo.
  13. 13. Composto da reivindicação 1, o qual é (1,1— Dioxo-hexa-hidro-1lambda* 6*-tiopirano-4-il)-{ (S)—3 — [1— (6 — metoxi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-di-hidro-lH-pirido[3,4- b][1,4]oxazin-7-iloxi]-pirrolidin-l-il}-metanona ou um sal do mesmo.
  14. 14. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para utilização como um medicamento.
  15. 15. Associação que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais coagentes terapeuticamente ativos.
  16. 16. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, para utilização no tratamento de um distúrbio ou uma doença selecionada de artrite reumatoide (RA), pênfigo vulgar (PV), forma endémica de pênfigo Brasileiro (Fogo selvagem), púrpura trombocitopénica idiopática (ITP), púrpura trombocitopénica trombótica (TTP), anemia hemolitica autoimune (AIHA), hemofilia tipo A adquirida (AHA), lúpus eritematoso disseminado (SLE), esclerose múltipla (MS), miastenia grave (MG), sindrome de Sjogren (SS), vasculites associadas a ANCA, crioglobulinemia, urticária autoimune crónica (CAU), alergia (dermatite atópica, dermatite de contacto, rinite alérgica), sindrome de Goodpasture, rejeição de transplantes, cancros de origem hematopoiética, malária grave e cerebral, tripanossomíase, leishmaniose, toxoplasmose e neurocisticercose.
  17. 17. Composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
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