RS56891B1 - Derivati 2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazina i srodna jedinjenja kao inhibitori fosfoinozitid-3-kinaze (pik3) za lečenje, na primer, reumatoidnog artritisa - Google Patents

Derivati 2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazina i srodna jedinjenja kao inhibitori fosfoinozitid-3-kinaze (pik3) za lečenje, na primer, reumatoidnog artritisa

Info

Publication number
RS56891B1
RS56891B1 RS20180156A RSP20180156A RS56891B1 RS 56891 B1 RS56891 B1 RS 56891B1 RS 20180156 A RS20180156 A RS 20180156A RS P20180156 A RSP20180156 A RS P20180156A RS 56891 B1 RS56891 B1 RS 56891B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
oxazin
yloxy
pyrrolidin
dihydro
benzo
Prior art date
Application number
RS20180156A
Other languages
English (en)
Inventor
Giorgio Caravatti
Sylvie Chamoin
Pascal Furet
Klemens Högenauer
Konstanze Hurth
Christoph Kalis
Karen Kammertoens
Ian Lewis
Henrik Moebitz
Alexander Baxter Smith
Nicolas Soldermann
Romain Wolf
Frédéric Zecri
Original Assignee
Novartis Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Novartis Ag filed Critical Novartis Ag
Publication of RS56891B1 publication Critical patent/RS56891B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5383—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/538—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/10—Anti-acne agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D413/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/25—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving enzymes not classifiable in groups C12Q1/26 - C12Q1/66
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)

Description

DERIVATI 2,3-DIHIDRO-BENZO[1,4]OKSAZINA I SRODNA JEDINJENJA KAO INHIBITORI FOSFOINOZITID-3-KINAZE (PIK3) ZA LEČENJE, NA PRIMER, REUMATOIDNOG ARTRITISA
OBLAST PRONALASKA
[0001] Pronalazak se odnosi na dobijanje i upotrebu novih dihidro-benzo-oksazinskih i dihidro-pirido-oksazinskih derivata u svrhu odabiranja kandidata za lekove, u slobodnom obliku ili obliku njihovih farmaceutski prihvatljivih soli koji poseduju dragocene osobine koje imaju lekovi, kao što je npr. metabolička stabilnost i odgovarajuća farmakokinetika, zatim oblik koji ima sposobnost da moduliše, od čega je značajno inhibisanje aktivnosti ili funkcije fosfoinozitid 3' OH kinazne familije (u daljem tekstu PI3K).
OSNOVA PRONALASKA
[0002] Članovi familije fosfoinozitid-3-kinaza (PI3K) učestvuju u ćelijskoj proliferaciji, diferencijaciji, preživljavanju, remodelovanju citoskeleta i cirkulisanju intracelularnih organela u različitim tipovima ćelija (Okkenhaug and Wymann, Nature Rev. Immunol.3:317 (2003).
[0003] Do danas, identifikovano je osam sisarskih PI3K kinaza, i podeljene su u tri glavne klase (I, II i III) na osnovu njihove genske sekvence, strukture, adapterskih molekula, ekspresije, načina aktivacije, i najpoželjnijeg supstrata.
[0004] PI3Kδ je lipidna kinaza koja pripada I klasi familije PI3K (PI3K α, β, γ i δ), koja prenosi signale produkovanjem drugog glasnika nishodno od receptora povezanih sa tirozin-kinazom. PI3Kδ je heterodimer koji se sastoji od adapter-proteina i p110δ katalitičke subjedinice koja prevodi fosfatidilinozitol-4,5-bis-fosfat (PtdInsP2) u fosfatidilinozitol-3,4,5-trifosfat (PtdInsP3). Efektorski proteini interaguju sa PtdInsP3 i okidaju specifične signalne puteve koji su uključeni u ćelijsku aktivaciju, diferencijaciju, migraciju i preživljavanje ćelije.
[0005] Ekspresija katalitičkih subjedinica p110δ i p110γ je pretežno prisutna kod leukocita. Ekspresija je takodje zapažena u ćelijama glatkih mišića, miocitima i endotelnim ćelijama. Za razliku od ovih subjedinica, p110α i p110ß su eksprimirane u svim tipovima ćelija (Marone et al. Biochimica et Biophysica Acta 1784:159 (2008)).
[0006] PI3Kδ je povezana sa razvićem i funkcijom B-ćelija (Okkenhaug et al. Science 297:1031 (2002)). B-ćelije takodje imaju ključnu ulogu u patogenezi brojnih autoimunskih i alergijskih bolesti kao i u procesu odbacivanja transplantata (Martin and Chan, Annu. Rev. Immunol.24:467 (2006)).
[0007] Hemotaksa je uključena u mnoge autoimunske i inflamatorne bolesti, važna je u angiogenezi, invaziji/metastaziranju, neurodegenraciji i zarastanju rane (Gerard et al. Nat.
Immunol. 2:108 (2001)). Privremeni različiti dogadjaji kao odgovor na hemokine dovode do migracije leukocita, i koji u potpunosti zavise od PI3Kß i PI3Kγ (Liu et al. Blood 110:1191 (2007)).
[0008] PI3Kα i PI3Kß imaju esencijalnu ulogu u održavanju homeostaze i farmakološka inhibicija ovih ciljnih molekula je povezana sa terapijom kancera (Maira et al. Expert Opin. Ther. Targets 12:223 (2008)). PI3Kα je uključena u signalni put koji se aktiviše vezivanjem insulina i signalne puteve koji omogućavaju proliferaciju ćelija. (Foukas et al. Nature 441:366 (2006)). Očekuje se da bi se selektivnom inhibicijom PI3Kδ izoforme izbegli potencijalni neželjeni efekti kao što je hiperglikemija, i gubitak regulacije metabolizma ili proliferacije.
[0009] Parazitske infekcije još uvek predstavljaju jedan od najvažnijih uzroka oboljevanja i smrtnosti širom sveta. Medju parazitima koji izazivaju različita patološka stanja kod ljudi i životinja, tip apicomplexa obuhvata grupu parazita-prenosnika bolesti odgovornu za široku lepezu ozbiljnih oboljenja, uključujući malariju, leišmanijazu i tripanozomijazu. Samo malarijom je inficirano 5-10% svetskog stanovništva i ovo oboljenje uzrokuje oko dva miliona smrti godišnje. [Schofield i sar, “Immunological processes in malaria pathogenesis”, Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, “Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra i sar, “TLRs in CNS Parasitic infections”, Curr Top Micro Imm 2009],[Bottieau i sar, “Therapy of vectorborne protozoan infections in nonendemic settings”, Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011].
[0010] Receptori slični Toll receptoru (“Toll-like” (TLRs) su kodirani genima gameta, filogenetski drevni molekuli koji prepoznaju evoluciono konzervirane strukturno relevantne molekule (poznate kao molekularni motivi povezani sa patogenima (PAMPs)) kod mikrobioloških patogena. Različiti tipovi ćelija, uključujući ćelije imunog sistema, eksprimiraju TLRs i stoga mogu detektovati prisustvo PAMPs. Do sada je kod ljudi opisano postojanje 10 članova TLR familije na funkcionalnom nivou (TLR1-10), od kojih svi imaju sposobnost da prepoznaju PAMP molekule. Nakon prepoznavanja specifičnih PAMPs, TLRs indukuju i orkestriraju imuni odgovor domaćina na infekcije bakterijama, virusima, gljivicama i parazitima [Hedayat i sar, “Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease”, revijski članak, Lancet Infectious disease 2011], [Kwai i sar, “TLRs and their crosstalk with other innate receptors in infection and immunity”, revijski članak, Immunity May-2011]. Imuni sistem inficiranog domaćina reaguje na infekciju tako što proizvodi pro-zapaljenske citokine indukovane TLR-om, većinom tipa T-helper 1 (Th1). Dok su odgovarajuće količine ovih citokina korisne i potrebne u borbi protiv infekcije, preterana produkcija ovih medijatora je štetna za domaćina i povezana sa patologijom izazvanom imunim sistemom, uključujući neuropatologiju i oštećenja tkiva sa teškim i često fatalnim posledicama. Istaknuti i značajan primer takve patologije izazvane imunim sistemom je akutna i cerebralna malarija (CM) koja izaziva teške kliničke simptome i često je fatalna [Schofield i sar, “Immunological processes in malaria pathogenesis”, Nat Rev Imm 2005], [Schofiled L, “Intravascular infiltrates and organ-specific inflammation in malaria pathogenesis], [Mishra i sar, “TLRs in CNS Parasitic infections”, Curr Top Micro Imm 2009], [Bottieau i sar, “Therapy of vectorborne protozoan infections in nonendemic settings”, Expert Rev. Anti infect. Ther., 2011] [Hedayat i sar, “Targeting of TLRs: a decade of progress in combating infectious disease”, revijski članak, Lancet Infectious disease 2011]. Uprkos napretku u tretmanu i iskorenjivanju malarije, stopa smrtnosti koja je povezana sa teškom malarijom, uključujući CM, još uvek je neprihvatljivo visoka. Strategije usmerene samo na iskorenjivanje parazita kod domaćina stoga mogu biti nedovoljne da spreče neurološke komplikacije i smrtni ishod u svim slučajevima CM. Razvoj novih, inovativnih dodatnih terapijskih strategija za efikasno smanjenje stope oboljevanja i smrtnosti povezanih sa CM, a koje su delimično izazvane imunopatološkim odgovorom domaćina, ostaje stoga hitna medicinska potreba [Higgins i sar, “Immunopathogenesis of falciparum malaria: implications for adjunctive therapy in the management of severe and cerebral malaria”, Expert Rev. Anti Infect. Ther.2011]
[0011] U skorije vreme je dokazano da TLR9 ima ključnu ulogu u prepoznavanju i reakciji na parazite, uključujući plazmodijum, leišmaniju, tripanozomu i toksoplazme [Gowda i sar, “The Nucleosome is the TLR9-specific Immunostimulatory component of plasmodium falciparum that activates DCs”, PLoS ONE, June 2011], [Peixoto-Rangel i sar, ”Candidate gene analysis of ocular toxoplasmosis in Brazil: evidence for a role for TLR9”, Mem Inst Oswaldo Cruz 2009], [Pellegrini i sar, “The role of TLRs and adoptive immunity in the development of protective or pathological immune response triggered by the Trypanosoma cruzi protozoan”, Future Microbiol 2011] i da delovanje na nivou aktivacije TLRs uključujući TLR9 predstavlja obećavajuću strategiju u sprečavanju štetnih zapaljenskih reakcija kod teške i cerebralne malarije [Franklin i sar, ”Therapeutical targeting of nucleic acid-sensing TLRs prevents experimental cerebral malaria”, PNAS 2011]
[0012] Malarija je infektivno oboljenje koje izazivaju četiri parazita iz grupe protozoa: Plasmodium falciparum; Plasmodium vivax; Plasmodium ovale; i Plasmodium malaria. Ova četiri parazita obično ujedom prenosi inficirana ženka komarca Anopheles mosquito. Malarija predstavlja problem u mnogim delovima sveta koji je tokom nekoliko poslednjih dekada u stalnom porastu. Procene su da 1-3 miliona ljudi godišnje umre od malarije – većinom dece mladje od 5 godina. Ovo povećanje stope smrtnosti kod malarije je delom zasnovano na činjenici da je Plasmodium falciparum, najsmrtonosniji parazit kod malarije, postao rezistentan na praktično sve dostupne antimalarike, sa izuzetkom derivata artemisinina.
[0013] Leišmanijazu izazivaju jedna ili više od 20 vrsta parazitskih protozoa koje pripadaju rodu Leishmania, a prenosi se ujedom ženke flebotomusa. Leišmanijaza je endemsko oboljenje u oko 88 zemalja, uključujući mnoge tropske i suptropske oblasti. Postoje četiri osnovna oblika leišmanijaze. Visceralna leišmanijaza, poznata i kao kala-azar, je najteži oblik oboljenja i uzrokuje ga Leishmania donovani. Pacijenti kod kojih se razvije visceralna leišmanijaza mogu umreti za samo nekoliko meseci ukoliko ne prime terapiju. Dve osnovne vrste terapije kod visceralne leišmanijaze su derivati antimona natrijum stiboglukonat (Pentostam®) i meglumin antimonijat (Glucantim®). Natrijum stiboglukonat se koristi već oko 70 godina i rezistencija na ovaj lek je rastući problem. Dodatno, tretman je relativno dugotrajan i bolan, i mogu se javiti neželjeni sporedni efekti.
[0014] Humana afrička tripanozomijaza, poznata i kao bolest spavanja, je parazitsko oboljenje koje uključuje prenosnika oboljenja (vektora). Uzročnik je parazitska protozoa koja pripada rodu Trypanosoma. Ce-ce muva (Glossina Genus) ujedom prenosi ove parazite na čoveka, a sama se može zaraziti preko ljudi ili životinja u kojima humani patogeni paraziti obitavaju.
[0015] Šagasova bolest (poznata i kao američka tripanozomijaza) je još jedno parazitsko oboljenje kod ljudi koje se endemski javlja kod siromašne populacije na američkom kontinentu. Uzročnik je parazitska protozoa Trypanosoma cruzi, koju na ljude prenose insekti koji sisaju krv. Oboljenje se kod ljudi javlja u dve faze: akutnoj, koja se razvija ubrzo nakon infekcije i hroničnoj, koja se razvija tokom godina. Posledica hroničnih infekcija su različiti neurološki poremećaji, uključujući demenciju, oštećenja srčanog mišića i ponekad proširenje digestivnog trakta, kao i gubitak težine. Ako se ne tretira, hronično oboljenje je često fatalno. Trenutno dostupni lekovi za tretman Šagasove bolesti su Nifurtimox i benznidazol. Medjutim, problem sa ovim terapijama uključuju različite sporedne efekte, dužinu tretmana, kao i zahtev za medicinsko nadgledanje tokom tretmana. Zatim, tretman je praktično efikasan samo ukoliko se daje tokom akutne faze oboljenja. Rezistencija na ova dva osnovna leka je već zabeležena. Antifungalno sredstvo amfotericin b se predlaže kao druga linija terapije, no ovaj lek je skup i relativno toksičan.
[0016] Toksoplazmoza je endemska u većini delova sveta, a može da zarazi značajan deo odrasle populacije. 1,2 Medjutim, prevalenca se razlikuje od zemlje do zemlje.3 Procenjeno je da je zarazom obuhvaćeno barem 10% odrasle populacije u severnim zemljama umerenog pojasa i više od polovine odraslog stanovništva u mediteranskim i tropskim zemljama. 4 Toxoplasma gondii je čest, obligatni intracelularni parazit iz familije protozoa i smatra se najčešćim uzročnikom infektivnog retinitisa kod ljudi, koji zavisi od različitih faktora, uključujući klimu, higijenu i navike u ishrani. 5–7 Tok bolesti kod imunokompetentnih odraslih osoba je često asimptomatski i samoograničavajući. Čim se desi infekcija, parazit formira latentne ciste u retini i u drugim telesnim organima, koje se mogu reaktivirati godinama nakon početne infekcije i uzrokovati akutni retinohoroiditis i nastanak novih retinohoroidalnih lezija [Arevalo i sar, “Ocular Toxoplasmosis in the developing world”, Internat. Ophthal. Clin 2010]
[0017] Neurocisticerkoza je najčešće parazitsko oboljenje CNS-a (incidenca ~2,5 miliona širom sveta) koje izaziva larva Taenia solium. Oboljenje kod ljudi ima dugačku fazu bez simptoma čija je karakteristika odsustvo detektabilne zapaljenske reakcije u neposrednom okruženju parazita. Ukupni imuni odgovor tokom asimptomatske faze je zasnovan na Th2 fenotipu. Medjutim, uništenje larve terapijskim tretmanom ili normalnim izlaskom parazita izaziva snažnu imunu reakciju, koja se često sastoji od hronične granulomatozne reakcije i manifestacije tipičnih simptoma oboljenja. Imuna reakcija u CNS-u simptomatskih pacijenata sastoji se od otvorenog Th1 fenotipa ili mešovitog Th1, Th2, iTh3 odgovora, u zavisnosti od odsustva ili prisustva granuloma. Hiperzapaljenska reakcija koja preovladava tokom simptomatske faze u CNS-u je odgovorna za tešku neuropatologiju i stopu smrtnosti povezanu sa neurocisticerkozom [Mishra i sar, “TLRs in CNS Parasitic infections”, Curr Top Micro Imm 2009] .
[0018] Postoji potreba da se obezbede novi PI3K inhibitori koji su dobri kandidati za nove lekove. Konkretno, jedinjenja iz ovog pronalaska bi trebalo da se jako vezuju za PI3K a sa druge strane da imaju nizak afinitet za druge receptore, kao i da pokazuju inhibitornu aktivnost. Potrebno je da se dobro apsorbuju iz gastrointestinalnog trakta, da su metabolički stabilni kao i da imaju poželjne farmakokinetičke osobine. Ukoliko su im ciljni receptori u centralnom nervnom sistemu, potrebno je da slobodno prolaze kroz krvno-moždanu barijeru, dok ukoliko se ciljni receptori nalaze u perifernom nervnom sistemu ne bi trebalo da prolaze krvno-moždanu barijeru. Potrebno je da ne budu toksični, kao i da pokazuju što manji broj sporednih efekata. Nadalje, idealni kandidat za novi lek treba da postoji u fizičkom obliku koji je stabilan, nije higroskopan i koji se lako uklapa u različite formulacije. WO 2008/044022 se odnosi na benzoksazinske PI3K inhibitore sa različitim supstitucionim motivom.
[0019] Jedinjenja iz pronalaska pokazuju odredjeni nivo selektivnosti u odnosu na različite paraloge PI3K α, β, γ i δ. Naročito pokazuju odredjeni nivo selektivnosti prema izoformi PI3Kδ.
[0020] Jedinjenje iz datog pronalaska su stoga potencijalno korisna u lečenju širokog spektra poremećaja, naročito poremećaja koji uključuju autoimunske poremećaje, inflamatorne bolesti, alergijske bolesti, bolesti disajnih puteva, kao što je astma i COPD, odbacivanje transplantata, kanceri npr. hematopoetskog porekla ili solidni tumori.
[0021] Pronalazak se takodje odnosi na lečenje, bilo samostalno ili u kombinaciji, sa jednim ili više drugih farmakološki aktivnih jedinjenja, i obuhvata i postupke za lečenje stanja, bolesti ili poremećaja kod kojih je jedna ili više funkcija B-ćelija kao što je produkcija antitela, prezentacija antigena, produkcija citokina ili organogeneza limfoidnog tkiva, su atipične ili su nepoželjne uključujući reumatoidni artritis, pemfigus vulgaris, idiopatska trombocitopenija purpura, sistemski eritemski lupus, multipla skleroza, mijastenija gravis, Sjögren-ov sindrom, autoimunska hemolitička anemija, vaskulitis povezan sa ANCA, krioglobulinemija, trombotična trombocitopenijska purpura, hronična autoimunska urtikarija, alergija (atopijski dermatitits, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), sindrom „goodpasture“, odbacivanje transplantata posredovano antitelom (engl. antibody-mediated transplant rejection-AMR), B-ćelijama posredovano hiperakutno, akutno i hronično odbacivanje transplantata i kanceri hematopoetskog porekla koji obuhvataju između ostalog multipli mijelom, akutnu mijelogenu leukemiju; hroničnu mijelogenu leukemiju; limfocitnu leukemiju; mijeloidnu leukemiju; ne-Hodžkinov limfom; limfome; policitemija vera; esencijalnu trombocitemiju; mijelofibrozu sa mijeloidnim metaplazijama; Waldenstroem-ovu bolest kao i oboljenje ili infekcija u vezi sa imunopatologijom.
SUŠTINA PRONALASKA
[0022] Pronalazak se odnosi na jedinjenja dihidro-benzo-oksazina i dihidro-pirido-oksazina formule (I) i/ili njihove farmaceutski prihvatljive soli i/ili solvate,
u kojima je
Y odabran od O ili NH;
V odabran od CR<5>ili N;
W je odabran od CH2, ili O;
U odabran od N ili CH;
Q odabran od N ili CR6;
gde U i Q ne predstavljaju oboje N;
gde je R<1>odabran od fenila, piridila, pirimininila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila, 1,3,5-triazinila,
ili
-X-R<4>
gde je X odabran od C(O), S(O)2ili CH2
i
gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkil-amino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-oksi, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, C3-C12-cikloalkil-oksi, C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkil, heteroaril, heteroaril-oksi, heteroaril-C1-C8-alkil, hidroksi, C1-C8-alkoksi, amino, N-C1-C8-alkil-amino ili N,N-di-C1-C8-alkil-amino,
u kojoj C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi,
gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkilu i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkilu mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani sa 1-5 supstituenta koji su odabrani od halogena, hidroksi ili C1-C4-alkoksi;
u kojoj ‘heterociklil’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani od okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može biti spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu takodje, po slobodnom izboru, da se oksiduju do različitih oksidacionih stanja,
gde ‘heteroaril’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični prstenasti sistem koji sadrži od 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenta koji su odabrani iz grupe koju čine halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja;
gde je R<6>odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil, C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkil-sulfonil, C1-C4-alkil-sulfinil, C1-C4-alkil-sulfanil, halo-C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkoksi-C1-C4-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino;
gde je R<7>odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, cijano, nitro, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil, C1-C4-alkoksi, N(R<8>)2-sulfonil, C1-C4-alkil-sulfonil, C1-C4-alkil-sulfonil-amino, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, ili N,N-di-C1-C8-alkil-amino;
ili R<6>i R<7>, zajedno predstavljaju CH=CH-CH=CH,
gde je R<8>nezavisno odabran od vodonika, C1-C4-alkila, C1-C4-alkoksi ili dve R<8>zajedno sa azotom vezane su da grade 4 do 7-očlani heterociklični prsten sa 1-2 heteroatoma odabranih od N, O, S, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa 1-3 supstituenta odabranih od C1-C4-alkil;
gde je R<5>nezavisno odabran od H, D, F ili C1-C2-alkil;
gde je R<30>nezavisno odabran od H, D ili F.
KRATAK OPIS CRTEŽA
[0023] Slika 1 predstavlja mapu difrakcije X-zraka iz primera F1, za kristalni anhidrovani oblik
Slika 2 predstavlja diferencijalnu skanirajuću kalorimetriju, grafikon za primer F1, za kristalni anhidrovani oblik
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0024] Osim ukoliko nije drugačije naznačeno, izraz “jedinjenja iz datog pronalaska” odnosi se na jedinjenja formule (I) i njihove podformule, soli jedinjenja, hidrati ili solvati jedinjenja i/ili soli, kao i sve stereoizomere (uključujući dijastereoizomere i enantiomere), tautomere i izotopski obeležena jedinjenja (uključujući supstitucije deuterijuma). Jedinjenja iz datog pronalaska dalje obuhvataju polimorfe jedinjenja formule (I) (ili njihovu podformulu) i njegove soli. Gde se pominju jedinjenja formule (I), ovde treba uključiti i tautomere i N-okside jedinjenja formule (I).
[0025] Pronalazak se može potpunije shvatiti uz pomoć sledećeg opisa, uključujući pojmovnik termina i zaključne primere. U ovom tekstu, izrazi "uključuju", "sadrže" i "obuhvata" ovde se koriste u svom otvorenom, neograničavajućem smislu.
[0026] Tautomeri, kao što su tautomeri izmedju keto- i enolnog oblika, laktam- i laktimskog oblika, amidnog oblika i imidnog oblika ili enaminskog oblika i iminskog oblika, mogu na primer, da budu prisutni u R<1>delu od jedinjenja formule (I). Azot koji sadrži heterociklil i heteroarilne ostatke može da gradi N-okside.
[0027] Kada se množina koristi za jedinjenja ili soli, ovo taodje podrazumeva i jedno jedinjenje, so, ili slično.
[0028] Osim ukoliko drugačije nije naznačeno, opšti pojmovi koji se koriste ovde i u daljem tekstu, poželjno imaju unutar konteksta ovog pronalaska sledeća značenja:
[0029] U ovom tekstu, izraz “alkil” odnosi se na potpuno zasićene razgranate, uključujući jedno ili više grananja, ili nerazgrantu ugljovodoničnu grupu koja ima do 20 atoma ugljenika. Osim ukoliko drugačije nije predvidjeno, alkali se odnosi na ugljovodonične grupe sa 1 do 16 atoma ugljenika, 1 do 10 atoma ugljenika, 1 do 7 atoma ugljenika, ili 1 do 4 atoma ugljenika.
[0030] Reprezentnativni primeri za alkil uključuju metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, sekbutil, izo-butil, terc-butil, n-pentil, izopentil, neopentil, n-heksil, 3-metilheksil, 2,2- dimetilpentil, 2,3-dimetilpentil, n-heptil, n-oktil, n-nonil i n-decil. Alkil grupe obično imaju od 1-7, poželjnije od 1-4 ugljenika.
[0031] U ovom tekstu, izraz “halo-alkil” odnosi se na alkil kako je ovde definisan, koji je supstituisan sa jednom ili više halo grupa kako je ovde definisano. Halo-alkil može da bude mono-halo-alkil, di-halo-alkil ili poli-halo-alkil uključujući per-halo-alkil. Mono-halo-alkil može da ima jedan jod, brom, hlor ili fluor unutar alkil grupe. Di-halo-alkil i poli-halo-alkil grupe mogu imati dve ili više istih halo atoma ili kombinacija različitih halo grupa unutar alkila. Polihalo-alkil obično sadrži do 12, ili 10, ili 8, ili 6, ili 4, ili 3, ili 2 halo grupe. Neograničavajući primeri za halo-alkil uključuju fluoro-metil, di-fluoro-metil, tri-fluoro-metil, hloro-metil, di-hlorometil, tri-hloro-metil, penta-fluoro-etil, hepta-fluoro-propil, di-fluoro-hloro-metil, di-hloro-fluorometil, di-fluoro-etil, di-fluoro-propil, di-hloro-etil i dihloro-propil. Per-halo-alkil se odnosi na alkil koji ima atome vodonika koji su zamenjeni sa halo atomima.
[0032] U ovom tekstu, izraz “heterociklil” ili “heterociklični” odnosi se na 3 do 7-očlani monociklični ili 7-mo do 10-očlani zasićeni ili delimično zasićeni prsten ili prstenasti sistem, koji sadrži najmanje jedan heteroatom koji je odabran od N, O i S, gde N i S mogu opciono da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja. ‘Heterociklil’ može biti spojen za heteroatom ili atom ugljenika. ‘Heterociklil’ obuhvata kondenzovane ili premošćene prstenove kao i spirociklične prstenove. U kontekstu vezanom za R<4>, primeri za heterocikle uključuju oksiranil, aziridinil, oksetanil, tietanil, acetitinil, pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, 2,3-dihidrofuranil, 2,5-dihidrofuranil, 2,3-dihidrotiofenil, 1-pirolinil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, tetrahidropiranil, piperidinil, tetrahidrotiopiranil, morfolinil, tiomorfolinil, oksatianil, dioksanil, piperazinil, dihidropiranil, tetrahidropiridinil, dihidrotiopiranil, azepanil, tiepanil i oksepanil. U kontekstu vezanom za R<8>, primeri za heterocikle uključuju pirolinil, piperidinil, morfolinil, tiomorfolinil, piperazinil, tetrahidropiridinil i azepanil.
[0033] U ovom tekstu, izraz “heteroaril” ili “heteroarilni” odnosi se na 4-, 5-, 6-, ili 7-očlani monociklični, 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, ili 12-očlani biciklični ili 10-, 11-, 12-, 13-, 14- ili 15-očlani triciklični nezasićeni prsten ili prstenasti sistem – sa najvećim mogućim brojem konjugovanih dvostrukih veza u prstenu(ima), koji sadrži najmanje jedan heteroatom koji je odabran od N, O i S, gde N i S mogu takodje da budu opciono oksidovani do različitih oksidacionih stanja. ‘Heteroaril’ može da bude vezan za heteroatom ili za atom ugljenika. ‘Heteroaril’ obuhvata kondenzovane ili premošćene prstenove kao i spirociklične prstenove. Primeri za heteroaril uključuju furanil, tiofenil, pirolil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, izotiazolil, oksazolil, izoksazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, 1,2,3-triazinil, 1,2,4-triazinil i 1,3,5-triazinil.
[0034] U ovom tekstu, izraz "cikloalkil" odnosi se na zasićene ili na delimično nezasićene monociklične, biciklične ili triciklične ugljovodonične grupe od 3-12 atoma ugljenika.Osim ako nije drugačije predvidjeno, cikloalkil se odnosi na ciklične ugljovodonične grupe koje imaju izmedju 3 i 10 atoma ugljenika u prstenu ili izmedju 3 i 7 atoma ugljenika u prstenu. Primeri bicikličnih ugljovodoničnih grupa uključuju oktahidroindil, dekahidronaftil. Primeri tricikličnih ugljovodoničnih grupa su biciklo[2.1.1]heksil, biciklo[2.2.1]heptil, biciklo[2.2.1]heptenil, 6,6-dimetilbiciklo[3.1.1]heptil, 2,6,6-trimetilbiciklo[3.1.1]heptil, biciklo[2.2.2]okti. Primeri tetracikličnih ugljovodoničnih grupa uključuju adamantil.
[0035] U ovom tekstu, izraz “oksi” se odnosi na vezujuću grupu -O-.
[0036] U ovom tekstu, izraz “karboksi” ili “karboksil” predstavlja –COOH.
[0037] U ovom tekstu, svi supstituenti su napisani na način da pokažu redosled funkcionalnih grupa (grupa) od kojih su sastavljeni. Funkcionalne grupe su definisane gore u tekstu.
[0038] Ovde su opisana različita nabrojana izvodjenja pronalaska. Prepoznato je da se karakteristike odredjene u svakom izvodjenju mogu kombinovati sa ostalim specifičnim karakteristikama kako bi se obezbedila dalja izvodjenja datog pronalaska.
[0039] U jednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koji je odabran od jedinjenja formule (I’)
(I’),
u kojoj su R<1>, R<5>, R<7>, R<30>, Y, V, W, U i Q kao što je definisano ranije u tekstu.
[0040] U jednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koji je odabran od jedinjenja formule (Ia)
u kojoj R<1>, R<5>, R<7>, R<30>, Y, V, U i Q imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0041] U jednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koji je odabrano od jedinjenja formule (Ia’)
u kojoj R<1>, R<5>, R<7>, R<30>, Y, V, U i Q imaju značenja koja su definisana ranije u tekst.
[0042] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ib)
u kojoj R<1>, R<5>, R<7>, R<30>, V, W, U i Q imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0043] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koji je odabran od jedinjenja formule (Ib’)
u kojoj R<1>, R<5>, R<7>, R<30>, V, W, U i Q imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0044] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koja je odabrana od jedinjenja formule (Ic)
u kojoj R<1>, R<5>, R<7>, U i Q imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0045] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koja je odabrana od jedinjenja formule (Ic’)
gde R<1>, R<5>, R<7>, U i Q imaju ranije definisana značenja.
[0046] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koja je odabrana od jedinjenja formule (Id)
gde R<1>, R<5>, R<7>, U i Q imaju ranije definisana značenja.
[0047] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Id’)
gde R<1>, R<5>, R<7>, U i Q imaju ranije definisana značenja.
[0048] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ie)
u kojoj R<1>, R<5>, R<6>i R<7>imaju ranije definisana značenja.
[0049] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ie’)
u kojoj R<1>, R<5>, R<6>i R<7>imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0050] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (If)
u kojoj R<1>, R<5>, R<6>i R<7>imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0051] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (If’)
u kojoj R<1>, R<5>, R<6>i R<7>imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0052] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ig)
u kojoj X, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>imaju značenja koja su definisana ranije u tekstu.
[0053] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ig’)
u kojoj su X, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0054] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ih)
u kojoj su X, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0055] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrana od jedinjenja formule (Ih’)
u kojoj su X, R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0056 ] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koja je odabrana od jedinjenja formule (Ii)
u kojoj su R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0057] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koja je odabrana od jedinjenja formule (Ii’)
u kojoj su R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0058] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, koja je odabrana od jedinjenja formule (Ij)
u kojoj su R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0059] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formule (I) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, odabrano od jedinjenja formule (Ij’)
u kojoj su R<4>, R<5>, R<6>i R<7>definisani ranije u tekstu.
[0060] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje sa formulama
(I), (I’), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) i/ ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkilamino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, gde C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino može biti nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi,
gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkilu i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkilu može biti nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi;
gde ‘heterociklil’ predstavlja 3 do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma odabranih od N, O ili S, koji može biti nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenta odabranih uz grupe koju čine okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može biti vezan za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru biti oksidovani do različitih oksidacionih stanja,
gde ‘heteroaril’ predstavlja 3 do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma odabranih od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani iz grupe koju čine halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može biti vezan za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru biti oksidovani do različitih oksidacionih stanja.
[0061] U narednom izvodjenju, pronalaskom su obezbedjena jedinjenja formule (I), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) i/ili njihova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkil-amino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, gde C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino može da bude nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi,
gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkilu i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkilu može da bude nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi;
u kojoj je ‘heterociklil’ odabran iz grupe koju čine pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil, tetrahidropiranil, piperidinil, tetrahidrotiopiranil, morfolinil, dioksanil ili dihidropiranil, od kojih je svaka nesupstituisana ili supstituisana sa 1-3 supstituenta odabrana od okso, C1-C8-alkil ili C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može da bude spojen za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru biti oksidovani do različitih oksidacionih stanja,
gde je ‘heteroaril’ odabran iz grupe koju čine imidazolil, pirazolil, tiazolil, oksazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, piridil, pirimidinil, pirazinil, pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaka nesupstituisana ili supstituisana sa 1-3 supstituenata odabranih od C1-C8-alkil, hidroksil ili amino; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja.
[0062] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formula (I), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, u kojem je R<6>odabran iz grupe koju čine halogen, C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkil-sulfonil ili halo-C1-C4-alkoksi.
[0063] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formula (I), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, u kojem je R<7>odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, cijano, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil ili C1-C4-alkoksi.
[0064] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje formula (I), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) ) i/ili njegova farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkil-amino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, gde C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkul-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino može da bude nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi,
gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkil i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkil može biti nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi;
gde ‘heterociklil’ predstavlja 3 do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma odabranih od N, O ili S, koji je nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenta odabranih iz grupe koju čine okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može da bude spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja,
gde ‘heteroaril’ predstavlja 3 do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični sistem sa 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidina ili imidazo[2,1-b]tiazola, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani iz grupe koju čine halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja;
i gde je R<6>odabran od halogena, C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkil-sulfonil ili halo-C1-C4-alkoksi.
[0065] U jednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje sa formulama (I),
(Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) i/ili njena farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, gde je R<4>odabran iz grupe koju čine C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkilamino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, gde C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino mogu biti nesupstituisani ili supstituisani halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi,
gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkil i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkil mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi;
gde ‘heterociklil’ predstavlja 3 do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma odabranih od N, O ili S, koji može da bude nezasićen ili supstituisan sa 1-5 supstituenata odabranih iz grupe koju čine okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može da bude spojen za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja,
gde ‘heteroaril’ predstavlja 3 do 7-očlani u potpunosti nezasićeni monociklični prstenasti sistem koji sadrži 1 do 3 heteroatoma odabranih od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani iz grupe koju činehalogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može biti vezan za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru biti oksidovani za različita oksidaciona stanja;
i gde je R<7>odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, cijano, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil ili C1-C4-alkoksi.
[0066] U narednom izvodjenju, pronalaskom je obezbedjeno jedinjenje sa formulama (I),
(Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) i/ili njegova njena farmaceutski prihvatljiva so i/ili solvat, gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkilamino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, gde C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino može da bude nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi,
gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkil i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkil može da bude nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi;
gde je ‘heterociklil’ predstavlja 3 do 7-očlani zasićeni ili delimičnoi nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata odabranih iz grupe koju čine okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkilkarbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može da bude spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja,
gde ‘heteroaril’ predstavlja 3 do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma odabranih od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, odkojih je svaka nesupstituisana ili supstituisana sa 1-5 supstituenta koji su odabrani od halogena, C1-C8-alkila, halo-C1-C8-alkila, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkilkarbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkilkarbonila; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili za atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja;
gde je R<6>odabran od halogena, C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkil-sulfonil ili halo-C1-C4-alkoksi i gde je R<7>odabran od vodonika, halogena, cijano, C1-C4-alkila, halo-C1-C4-alkila ili C1-C4-alkoksi.
[0067] U još jednom izvodjenju pojedinačna jedinjenja prema pronalasku su ona navedena u odeljku sa Primerima koji su navedeni u delu teksta koji sledi.
[0068] U ovom tekstu, izraz “optički izomer” ili “stereoizomer” odnosi se na bilo koji od različitih stereoizomernih konfiguracija koje mogu da postoje za dato jedinjenje prikazanog pronalaska i koji uključuje geometrijske izomere. Jasno je da supstituenti može biti vezan za hiralni centar na atomu ugljenika. Izraz "hiralni" odnosi se na molekule koji imaju svojstvo nepreklopljivosti sa svojim likom u ogledalu, dok se izraz"ahiralni" odnosi na molekule koji mogu da se preklope sa svojim likom o ogledalu. Zbog toga, pronalazak uključuje enantiomere, diastereomere ili racemate jedinjenja. “Enantiomeri” su par stereoizomera koji predstavljaju nepreklopljive slike u ogledalu. Smeša para enantiomera u odnosu 1:1 je "racemska” smeša. Kada je pogodno, pojam se koristi da bi se označila racemska smeša. "Diastereoizomeri” su stereoizomeri koji imaju najmanje dva asimetrična atoma, ali koji se ne odnose jedno prema drugom, kao predmet i lik u ogledalu. Apsolutna stereohemija je označena prema Kanlngold- Prelog R-S sistemu. Kada je jedinjenje u obliku čistog enantiomera, stereohemija na svakom hiralnom atomu ugljenika može da se označava ili sa R ili sa S. Razdvojena jedinjenja čija je apsolutna konfiguracija nepoznata mogu da bude označena sa (+) ili (-) u zavisnosti od pravca (u desnu ili u levu stranu) gde rotiraju polarizujuće svetlo iz ravni na talasnim dužinama natrijumove D linije. Neka od ovde opisanih jedinjenja sadrže jedan ili više asimetričnih centara ili osa i stoga može da dodje do pojave enantiomera, diastereomera, i ostalih stereoizomernih oblika koji mogu da se definišu, u pogledu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)-.
[0069] U zavisnosti od izbora polaznih materijala ili procedura, jedinjenja mogu da budu prisutna u obliku jednog od mogućih izmoera ili u obliku njihove smeše, na primer kao čisti optički izmoeri, ili kao izomerne smeše, kao što su smeše racemata ili dijasteroizomera, u zavisnosti od broja asimetričnih ugljenikovih atoma. Podrazumeva se da dati pronalazak uključuje sve moguće izomere, ukljućujući racemske smeše, optički čiste oblike i intermedijerne smeše (smeše medjuproizvoda). Optički aktivni (R)- i (S)- izomeri mogu da se dobiju korišćenjem hiralnih sintona (osnovnih delova molekula koji predstavljaju osnovu za sintetički postupak) ili hiralnih reagenasa, ili mogu da se razdvoje korišćenjem uobičajenih tehnika. Ukoliko jedinjenje sadrži dvostruku vezu, supstituent može da ima E ili Z konfiguraciju. Ukoliko jedinjenje sadrži disupstituisani cikloalkil, cikloalkilni supstituent može da ima cis- ili trans-konfiguraciju. Svi tautomerni oblici takodje predstavljaju deo ovog pronalaska.
[0070] U ovom tekstu, pojam "so" ili " soli" odnosi se na kisele adicione ili bazne adicione soli jedinjenja iz pronalaska. Izraz "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva jedinjenja iz datog pronalaska i, koja nisu nepoželjna na biološki ili na neki drugi način. U mnogim slučajevima, jedinjenja iz datog pronalaska sposobna su da formiraju kisele i/ili bazne soli uz prisustvo amino i/ili karboksilnih grupa ili njima sličnih grupa.
[0071] Farmaceutski prihvatljive kisele adicione soli mogu da se grade sa neorganskim kiselinama i organskim kiselinama, kao što su na primer, acetatne, aspartatne, benzoatne, bezilatne, bromid/ hidrobromidne, bikarbonat/karbonatne, bisulfat/sulfatne, kamforsulfonatne, hlorid/hidrohloridne, hlorteofilonatne, citratne, etandisulfonatne fumaratne, gluceptatne, glukonatne, glukuronatne, hipuratne, hidrojodid/jodidne, izetionatne, laktatne, laktobionatne, laurilsulfatne, malatne, maleatne, malonatne, mandelatne, mezilatne, metilsulfatne, naftoatne, napzilatne, nikotinatne, nitratne, oktadekanoatne, oleatne, oksalatne, palmitatne, pamoatne, fosfat/hidrogen fosfat/dihidrogen fosfatne, poligalakturonatne, propionatne, stearatne, sukcinatne, sulfosalicilatne, tartratne, tozilatne i trifluoroacetatne soli.
[0072] Neogranske kiseline iz koje se izvode soli, obuhvataju na primer hlorovodoničnu, bromovodoničnu, sumpornu kiselinu, azotnu kiselinu i fosfornu kiselinu.
Organske kiseline iz kojih se mogu izvoditi soli obuhvataju na primer, sirćetnu kiselinu, propionsku kiselinu, glikolnu kiselinu, oksalnu kiselinu, maleinsku kiselinu, malonsku kiselinu, ćilibarnu kiselinu, fumarnu kiselinu, vinsku kiselinu, limunsku kiselinu, benzoevu kiselinu, bademovu kiselinu, metansulfonsku kiselinu, etansulfonsku kiselinu, toluensulfonsku kiselinu i sulfosalicilnu kiselinu. Farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli mogu da se formiraju sa neorganskim i organskim bazama.
[0073] Neorganske baze iz kojih se izvode soli obuhvataju na primer, amonijumske soli i metale iz kolone I do XII periodnog sistema elemenata. U izvesnim izvodjenjima, soli se mogu izvesti iz natrijuma, kalijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, gvoždja, srebra, cinka, i bakra; posebno pogodne soli obuhvataju amonijumske, kalijumove, natrijumove, kalcijumove i magnezijumove soli.
[0074] Organske baze iz kojih se mogu izvoditi soli obuhvataju na primer, primarne, sekundarne, i tercijalne amine, supstituisane amine koji obuhvataju supstituisane amine koji se javljaju u prirodi, ciklične amine, bazne jonoizmenjivačke smole i njima slično. Odredjeni organski amini obuhvataju izopropilamin, benzatin, holinat, dietanolamin, dietilamin, lizin, meglumin, piperazin i trometamin.
[0075] Farmaceutski prihvatljive soli iz datog pronalaska mogu da budu sintetizovane iz polaznog jedinjenja, bazne ili kisele grupe, uobičajenim hemijskim postupcima. Te soli se generalno mogu dobiti reakcijom slobodnih oblika kiseline tih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze (kao što su Na, Ca, Mg, ili K hidroksid, karbonat, bikarbonat ili slično), ili reakcijom slobodnih oblika baze tih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće kiseline. Takve reakcije se obično odigravaju u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u u njihovoj smeši. Gde je izvodljivo, poželjna je upotreba rastvarača u nevodenoj sredini, kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril. Lista dodatnih pogodnih soli može da se pronadje na primer, u "Remington’s Pharmaceutical Sciences", 20th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., (1985); i u "Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" od Stahl-a i Wermuth (Wiley- VCH, Weinheim, Germany, 2002).
[0076] Bilo koja ovde data formula predstavlja kako neobeležene oblike tako i izotopno obeležene oblike jedinjenja. Izotopno obeležena jedinjenja imaju strukture predstavljene formulama u okviru ovog teksta, kod kojih su jedan ili više atoma zamenjeni atomom odabrane atomske mase ili masenog broja. Primeri izotopa koji mogu biti uključeni u jedinjenja iz ovog pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, fluora i hlora, kao što su redom<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F,<31>P,<32>P,<18>F<35>S,<36>Cl,<125>I. Pronalazak obuhvata različita izotopno obeležena jedinjenja, na primer ona u koja su uključeni radioaktivni izotopi kao što su<3>H, i<14>C, ili ona u kojima su prisutni neradioaktivni izotopi poput<2>H i<13>C. Ovakva izotopno obeležena jedinjenja su korisna u metaboličkim studijama (najbolje sa<14>C), studijama kinetike reakcija (sa, na primer,<2>H ili<3>H), pri detekciji ili imidžing (“imaging”) tehnikama, kao što su pozitronska emisiona tomografija (PET) ili kompjuterska tomografija zasnovana na emisiji jednog fotona (SPECT) uključujući testove tkivne distribucije lekova ili supstrata, ili kod radioaktivnog tretmana pacijenata. Posebno,<18>F ili obeleženo jedinjenje su naročito poželjni za PET ili SPECT studije. Izotopno obeležena jedinjenja formule (I) i njihovi pro-lekovi mogu se generalno dobiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima ili postupcima analognim onima koji opisanim u pratećim primerima i postupcima dobijanja, zamenom lako dostupnog izotopno obeleženog reagensa ne-izotopno obeleženim reagensom.
[0077] Pored toga, supstitucija težim izotopima, naročito deuterijumom (tj.,<2>H ili D) može da proizvede odredjene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti, na primer povećanog in vivo poluživota ili smanjene potrebne doze ili poboljšanog terapijskog indeksa. Jasno je da se deuterijum u ovom konteksu posmatra kao supstituent jedinjenja formule (I). Koncentracija takvog težeg izotopa, naročito deuterijuma, može se definisati faktorom obogaćenja izotopa. Izraz " faktor obogaćenja izotopa " kako se ovde koristi predstavlja odnos izmedju zastupljenosti izotopa i prirodne zastupljenosti odredjenog izotopa. Ako je supstituent u jedinjenju ovog pronalaska označeni deuterijum, takvo jedinjenje ima faktor obogaćenja izotopa za svaki označeni atom deuterijuma od najmanje 3500 (52.5% ugradnje deuterijuma na svaki označeni atom deuterijuma), najmanje 4000 (60% ugradnje deuterijuma), najmanje 4500 (67.5% ugradnje deuterijuma), najmanje 5000 (75% ugradnje deuterijuma), najmanje 5500 (82.5% ugradnje deuterijuma), najmanje 6000 (90% ugradnje deuterijuma), najmanje 6333.3 (95% ugradnje deuterijuma), najmanje 6466.7 (97% ugradnje deuterijuma), najmanje 6600 (99% ugradnje deuterijuma), ili najmanje 6633.3 (99.5% ugradnje deuterijuma).
[0078] Farmaceutski prihvatljivi solvati u skladu sa pronalaskom uključuju one gde rastvarač za kristalizaciju može biti izotopski supstituisan, npr. D2O, d6-aceton, DMSO-d6.
[0079] Jedinjenja iz pronalaska, tj. jedinjenja formule (I) koja sadrže grupe koje mogu da se ponašaju kao donori i/ili akceptori pri gradjenju vodoničnih veza mogu da formiraju ko-kristale sa odgovarajućim supstancama za koje se zna da grade kokristale (tzv. „co-crystal formers“). Ovi kokristali mogu da se dobiju od jedinjenja formule (I) sprovodjenjem poznatih procedura za formiranje kokristala. U ove procedure se ubrajaju mlevenje, zagrevanje, ko-sublimacija, ko-topljenje, ili dovođenje u kontakt rastvora jedinjenja formule (I) sa kokristal-formerom pod uslovima za kristalizaciju, i izolovanje kokristala koj se pritom formiraju. U odgovarajuće kokristal-formere ubrajaju se oni koji su opisani u objavljenoj patentnoj prijavi WO 2004/078163. Stoga, pronalazak dalje opisuje kokristale koji sadrže jedinjenje formule (I).
[0080] U ovom tekstu, izraz “farmaceutski prihvatljiv nosač” se koristi u smislu ma kog i svih rastvarača, disperzionih medijuma, supstanci za oblaganje, surfaktanata, antioksidanasa, konzervanasa (npr., antibakterijska sredstva, antifungalna sredstva), izotonih sredstava, sredstava sa kasnom apsorpcijom, soli, konzervanasa, lekova, stabilizatora lekova, povezujućih sredstava (bajnderi), ekscipijenasa, sredstava za dezintegraciju, lubrikanata, zasladjivača, aroma, boja i tome slično, kao i njihovih kombinacija, što bi bilo poznato stručnjacima u oblasti (vidi, na primer, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. Mack Printing Company, 1990, pp. 1289-1329). Osim što je svaki nosač nekompatibilan sa aktivnim sastojkom, predvidjena je njegova upotreba u terapijskim ili farmaceutskim kompozicijama.
Izraz “terapijski efikasna količina” jedinjenja iz ovog pronalaska, odnosi se na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja će indukovati biološki ili medicinski odgovor ispitanika, na primer, inhibiciju ili redukciju aktivnosti enzima ili proteina, ili poboljšanje simptoma, olakšanje bolesti, usporavanje ili odlaganje progresije bolesti, ili sprečavanje bolesti, itd. U jednom neograničavajućem izvodjenju, izraz “terapijski efikasna količina” odnosi se na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja kada se primeni na ispitanika dovodi do (1) najmanje delimičnog ublažavanja, inhibisanja, sprečavanja i/ili poboljšanja stanja, ili poremećaja ili bolesti (i) posredovane PI3K ili (ii) povezane sa aktivnošću PI3K, ili (iii) karakterisane (normalnom ili abnormalnom) aktivnošću PI3K, ili
(2) redukovanja ili inhibisanja aktivnosti PI3K ili do (3) smanjenja ili inhibicije ekspresije PI3K.
U drugom neograničavajućem izvodjenju izraz “terapijski efikasna količina” se odnosi na količinu jedinjenja iz ovog pronalaska koja kada se primeni na ćeliju ili tkivo, ili nećelijski biološki material, ili na medijum (podlogu) ; i delotvoran je za bar delimičnu redukciju ili inhibiciju aktivnosti PI3K ili barem delimičnu redukciju ili inhibiciju ekspresije PI3K. Značenje izraza “terapijski efikasna količina” kako je ilustrovano kroz gore navedena izvodjenja za PI3K takodje se primenjuje sa istim sredstvima na bilo koji drugi relevantni protein/peptid/enzim.
[0081] U ovom tekstu, izraz “ispitanik” označava životinju. Najčešće životinja je sisar. Ispitanik takodje označava na primer, primate (npr., ljude, muškarce i žene), krave, ovce, koze, konje, pse, mačke, kuniće, pacove, miševe, ribe, i ptice. u odredjenim izvodjenjima, ispitanik je primat. U pak drugim, ispitanik je čovek.
[0082] U ovom tekstu izrazi “inhibisati”, “inhibicija” ili “inhibišući” se koriste tako da označavaju smanjenje ili supresiju datog stanja, simptoma, ili poremećaja, ili bolesti, ili značajno smanjenje bazne aktivnosti biološke aktivnosti ili procesa.
[0083] U ovom tekstu izraz “lečiti”, “lečenje” ili “tretman” ma koje bolesti ili poremećaja u jednom izvodjenju odnosi se na, poboljšanje bolesti ili poremećaja (tj., usporavanje ili zaustavljanje ili redukovanje razvoja bolesti ili bar najmanje jednog njenog kliničkog simptoma). U drugom izvodjenju “lečiti”, “lečenje” ili “tretman”odnosi se na ublažavanje ili poboljšanje najmanje jednog fizičkog parametra uključujući i one koje pacijent ne može da raspozna. U pak drugom izvodjenju, “lečiti”, “lečenje” ili “tretman (procedura)” označava modulisanje bolesti ili poremećaja, bilo fizičko, (npr., stabilizacija prepoznatljivog simptoma), fiziološko, (npr., stabilizacija fizičkih parametara), ili oba. U pak jednom drugom izvodjenju, “lečiti”, “lečenje” ili “tretman” označava sprečavanje ili odlaganje javljanja ili razvoja ili napredovanja bolesti ili poremećaja.
[0084] U ovom tekstu, ispitanik “kome je potreban tretman/lečenje” označava takvog ispitanika kome bi takav tretman doneo biološku, medicinsku dobrobit ili bi mu poboljšao kvalitet života.
[0085] U ovom tekstu, izrazi “a”, “an”, “the” (označavaju neodredjeni, odnosno određeni član u engleskom jeziku i u našem jeziku se ne prevode) i slični izrazi upotrebljeni u kontekstu ovog pronalska (naročito u kontekstu patentnih zahteva) treba pravilno da se tumače tako da obuhvataju i jedninu i množinu osim ako ovde nije drugačije naznačeno ili na osnovu konteksta nije jasno da je značenje kontradiktorno.
[0086] Svi ovde opisani postupci mogu da se izvedu bilo kojim odgovarajućim redosledom ukoliko nije drugačije naznačeno ili na osnovu konteksta nije jasno da je značenje kontradiktorno. Upotreba ma kog i svih primera, ili uzornog jezika (npr., “kao što je “) kojim je pisan ovaj tekst namenjen je jedino tome da baci bolje svetlo na pronalazak i ne nameće nikakva ograničenja na oblast pronalaska na koju inače pronalazak polaže pravo.
[0087] Svaki asimetrični atom (npr., ugljenik ili slično) jedinjenja prikazanog pronalaska može biti prikazan u racematnoj ili enantiomerski obogaćenoj, na primer (R)-, (S)- ili (R,S)- konfiguraciji. U odredjenim izvodjenjima, svaki asimetrični atom ima najmanje 50 % enantiomernog viška, najmanje 60 % enantiomernog viška, najmanje 70 % enantiomernog viška, najmanje 80 % enantiomernog viška, najmanje 90 % enantiomernog viška, najmanje 95 % enantiomernog viška, ili najmanje 99 % enantiomernog viška u (R)- ili (S)- konfiguraciji. Supstituenti na atomima sa nezasićenim vezama mogu, ako je moguće, da budu u cis- (Z)- ili trans- (E)- obliku.
[0088] Prema tome, kako se ovde koristi, jedinjenje prikazanog pronalaska može biti u obliku jednog od mogućih izomera, rotamera, atropizomera, tautomera ili njihove mešavine, na primer, kao supstancijalno čisti geometrijski (cis ili trans) izomeri, dijastereomeri, optički izomeri (antipodi), racemati ili njihove smeše.
[0089] Bilo koje rezultujuće smeše izomera mogu se razdvojiti na osnovu fizičko hemijskih razlika konstituenata, na čiste ili suštinski čiste geometrijske ili optičke izomere, dijastereoizomere, racemate, na primer, hromatografijom i/ili metodama frakcione kristalizacije.
[0090] Bilo koji nastali racemati finalnih proizvoda ili intermedijera mogu biti razdvojeni na optičke antipode poznatim metodama, npr., razdvajanjem njihovih diastereomernih soli, dobijenih sa optički aktivnom kiselinom ili bazom, i oslobadjanjem optički aktivnog kiselog ili baznog jedinjenja. Naročito, bazni ostatak može biti iskorišćen za razdvajanje jedinjenja prikazanog pronalaska na njihove optičke antipode, npr., frakcionom kristalizacijom soli obrazovane sa optički aktivnom kiselinom, npr., vinskom kiselinom, dibenzoil vinskom kiselinom, diacetil vinskom kiselinom, di-O,O'-p-toluoil vinskom kiselinom, bademovom kiselinom, jabučnom kiselinom ili kamfor-10-sulfonskom kiselinom. Racematni proizvodi se mogu takodje razdvojiti hiralnom hromatografijom, npr., tečnom hromatografijom pod visokim pritiskom (HPLC) korišćenjem hiralnog adsorbenta.
[0091] Osim toga, jedinjenja iz ovog pronalaska, uključuju i njihove soli, takodje mogu da se dobiju u obliku njihovih hidrata, ili uključuju druge rastvarače koji mogu da se koriste za njihovu kristalizaciju. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu sama po sebi ili planirano da grade solvate sa farmaceutski prihvatljivim solventima (uključujući vodu), stoga je namera da pronalazak obuhvati kako solvatisane tako i nesolvatisane oblike. Izraz „solvat“ se odnosi na molekulski kompleks jedinjenja iz ovog pronalaska (uključujući negove farmaceutski prihvatljive soli) sa jednim ili više molekula solventa. Takvi molekuli solventa su oni koji se uobičajeno koriste u farmaciji, a za koje se zna da su neškodljivi po primaoca, npr. voda etan
R eol i tome slično. Izraz „hidrat“ se odnosi na
kompleks gde molekul rastvarača predstavlja vodu. Jedinjenja iz ovog pronalaska, uključujući soli, njihove hidrate i solvate, mogu sama po sebi ili planirano da grade polimorfe.
[ R0092] Tipično, jedinjenja formule (I) mogu da se dobiju na osnovu postupaka koji su p Rcr R Redstavljeni niže u tekstu.
Shema A
U U je (D X)' O NH R b ( aC) R R) V Y R R R R R N W P R P
p UG
ro O Nnala R R RzFa Vk Y se R R
od
nje formule (I) se dobija putem NR R
fa W PG U O N R
n Rosi na ( R
p RE) V 1
ze c depr 2 O
ote) (D X)'
dnom izvodjenju, os A)) s s
t suttteeepp
pp Ra f)k z (Ba) W p Nro Pedinjenja formule (I) (Postupak A) koji obuhvata faze a, b, c, d.
Jedinje kc R YG
iz
ije PGGvodnju j
<1>iz jedinjenja formule (F), gde PG<1>predstavlja odgovarajuću zaštitnu grupu, kao što je Boc group, i ostale supstituente koji su definisani ranije u tekstu,
nakon čega sledi reakciona faza d sa kuplovanjem sa
R<1>-Act<1>,
Faza c1: Gde R<1>predstavlja -C(O)-R<4>, ili -S(O)2-R<4>, gde je R<4>definisan ranije u tekstu, i gde Act<1>predstavlja aktivacionu grupu ili hidroksi grupu: reakcija kuplovanja predstavlja formiranje amida, uree, estra karbaminske kiseline ili sulfonamida. Postoji mnogo poznatih načina za dobijanje amida, estara karbamiske kiseline (uree) ili sulfonamida.
Faza sprezanja se vrši sa Act koji predstavlja aktivirajuću grupu, po mogućstvu, kao jednofazni postupak ili sa Act<1>koji predstavlja hidroksi grupu koja uključuje postupak iz jedne ili dve faze. Kao primeri za formiranje amidne veze, videti Mantalbetti, C.A.G.N and Falque, V., Amide bond formation and peptide coupling, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852 i ovde navedene reference. Kao primeri za sintezu uree, videti Sartori, G.; Maggi, R. Acyclic i ciklične uree, Science of Synthesis (2005), 18, 665-758; Gallou, Isabelle. Unsymmetrical ureas Synthetic methodologies and application in drug design, Organic Preparations and Procedures International (2007), 39(4), 355-383. Kao primer za sinteze karbamata, videti Adams, Philip; Baron, Frank A. Esters of carbamic acid, Chemical Reviews (1965), 65(5), 567-602. Primeri predstavljeni u ovom tekstu, ne bi trebalo da budu iscrpni, već samo ilustrativni;
faza e2: Gde je R<1>odabran iz grupe koju čine fenil, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, 1,2,3-triazinil, 1,2,4-triazinil, 1,3,5-triazinil i gde Act predstavlja halogen, posebno jodo ili bromo: Gde se reakcija sprezanja (kuplovanja) vrši u prisustvu aminske baze kao što je N,N-diizopropiletilamin. Reakcija se vrši u prisustvu organskog rastvarača ili, po mogućstvu bez rastvarača u uslovima mikrotalasnog zagrevanja na temperaturi od 160<o>C tokom 20 min. Alternativno, reakcija se vrši prema uobičajenim uslovima za Buchwald-Hartwig-ovu reakciju kao što su uslovi opisani u prethodnom delu teksta.
Reakcija se po mogućstvu odigrava u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Jedinjenje formule (F) dobija se tako što obuhvata fazu b sprezanja jedinjenja formule (C), gde PG<1>predstavlja odgovarajuću zaštitnu grupu, na primer BOC, i gde su ostali supstituenti definisani ranije u tekstu,
sa jedinjenjem formule (D), gde X’ predstavlja halogen, kao što je jodo ili bromo i ostali supstituenti su definisani u prethodnom delu teksta,
prema uobičajenim uslovima za Buchwald-Hartwig-ovu reakciju korišćenjem odgovarajuće kombinacije Pd katalizator/ligand kao što je Pd2(dba)3/2-(dicikloheksilfosfino)bifenil ili Pd2(dba)3/2-dicikloheksilfosfino-2′,4′,6′-triizopropil-bifenil, Pd2(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)-BINAP ili bis(tri-t-butilfosfin)paladijuma i odgovarajuće baze, kao što je NaOtBu, Cs2CO3ili K3PO4i organskog rastvarača kao što je toluen, dioksan ili THF. Reakcija se po mogućstvu meša na temperaturi od približno 60-140°C, na primer na temperaturi od 100°C do 110°C i opciono se izvodi u mikrotalasnom reaktoru. Reakcija se po mogućstvu odigrava u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Jedinjenje formule (C) dobija se preko faze a kuplovanja (sprezanja) jedinjenja formule (A), gde su supstituenti kao što je prethodno definisano sa jedinjenjem formule (B), gde PG<1>predstavlja odgovarajuću zaštitnu grupu, kao što je Boc grupa i gde Act<2>predstavlja grupu za aktivaciju ili H, i gde su ostali supstituenti definisani u prethodnom delu teksta,
A
faza a1: Gde Y predstavlja O i Act<2>predstavlja grupu za aktivaciju kao što je mezilat:
Reakcija se odigrava u prisustvu odgovarajuće baze kao što je natrijum hidroksid (NaOH), K2CO3ili kalijum t-butoksid (tBuOK) u odgovarajućem polarnom organskom rastvaraču kao što je DMF, THF, 2-metiltetrahidrofuran ili dioksan na odgovarajućoj temperaturi kao što je sobna temperatura- 100°C. faza a2: Gde Y predstavlja O i Act<2>predstavlja H: Reakcija se vrši korišćenjem uobičajenih uslova za reakciju prema Mitsunobu, na primer, korišćenjem Ph3P i DEAD u organskom rastvaraču kao što je THF u uslovima inertnog gasa na povišenoj temperaturi kao što je na primer, temperatura od 70°C.
faza a3: Kada Y predstavlja NH i kada Act<2>predstavlja H: Koristi se baza koja proizvodi reakciju kuplovanja fosfonijuma, pri čemu jedinjenje formule (A) u odgovarajućem rastvaraču kao što je acetonitril reaguje sa fosfonijumovom soli kao što je benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat (BOP) u prisustvu baze kao što je 1,8-diaza-7-biciklo[5.4.0]undecen (DBU), što je praćeno dodatkom jedinjenja formule (B). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 20°C do 100°C.
[0093] U narednom izvodjenju, pronalazak se odnosi na postupak za proizvodnju jedinjenja formule (I) (Postupak A-a) koji obuhvata faze a i b kako je definisano ranije u tekstu za postupak A, korišćenjem jedinejnja formule (B) u kojoj PG<1>predstavlja R<1>.
[0094] U narednom izvodjenju, pronalazak se odnosi na postupak za proizvodnju jedinjenja formule (I) (Postupak B) koji obuhvata faze e, b, f, a, c i d.
Jedinjenja formule (I) se dobijaju putem faza c i d kao što je opisano ranije u tekstu za postupak A iz jedinjenja formule (F).
Jedinjenje formule (F) se dobija preko faze f deprotekcijom PG<2>iz jedinjenja formule (E), u kojoj PG<2>predstavlja odgovarajuću zaštitnu grupu, kao što je silil zaštitna grupa, i ostali supstituenti definisani ranije u tekstu
nakon čega sledi faza a sa reakcijom sprezanja, kao što je opisano ranije za postupak A, sa jedinjenjem formule (B).
Jedinjenje formule (E) se dobija preko faze e zaštitom jedinjenja formule (A) sa odgovarajućom zaštitnom grupom PG<2>, a zatim i jedinjenja formule (E), u kojoj PG<2>predstavlja odgovarajuću zaštitnu grupu, kao što je silil zaštitna grupa, nakon čega sledi faza b reakcije kouplovanja, kako je opisano ranije za postupak A sa jedinjenjem formule (D).
[0095] U narednom izvodjenju, pronalazak se odnosi na postupak za proizvodnju jedinjenja formule (I) (Postupak B-a) koji obuhvata faze e, b i f kako je definisano ranije za postupak B, korišćenjem jedinjenja formule (B) u kojoj PG<1>predstavlja R<1>.
[0096] U narednom izvodjenju, pronalazak se odnosi na postupak za proizvodnju jedinjenja formule (I) (Postupak C) korišćenjem jedinjenja formule (A<’>), u kojoj X’’ predstavlja halogen i ostale supstituente koji su definisani ranije u tekstu
koji obuhvata faze b, c i d kako je definisano ranije u tekstu za Postupak B, korišćenjem jedinjenja formule (B) i izmenjene faze a4:
faza a4: Gde Y predstavlja NH i Act<2>predstavlja H: Reakcija se vrši u prisustvu odgovarajuće baze kao što je na primer kalijum karbonat ili odgovarajuće aminske baze kao što je trietilamin ili N,N-diizopropiletilamin na povišenoj temperaturi kao što je 100<o>C do 140<o>C. Alternativno, reakcija se vrši pod uobičajenim uslovima za Buhvald-Hartvigovu reakciju kao što su uslovi opisani ranije u tekstu. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon.
[0097] U narednom izvodjenju, pronalazak se odnosi na postupak za proizvodnju jedinjenja
formule (I) (Postupak C-a) koji obuhvata faze b, a4, c i d kako je definisano ranije za Postupak
B<1>, korišćenjem jedinjenja formule (B) u kojoj PG<1>predstavlja R<1>.
[0098] Pojam “grupa za aktivaciju” kako se ovde koristi, odnosi se na grupu koja može da
aktivira derivat kakarboksilne kiseline, karbonske kiseline ili karbaminske kiseline, za
sprezanje za aminskom grupom da bi se formirao amid, urea ili estarska grupa karbaminske
kiseline, odnosno (Act<1>) ili na grupu koja može da aktivira hidroksilnu grupu za sprezanje sa
drugom hidroksi grupom da bi se formirao etar (Act<2>). Grupe koje aktiviraju derivat karboksilne
kiseline, derivat karbonske kiseline ili derivat karbaminske kiseline, za kuplovanje (sprezanje)
sa aminom, dajući amid, ureu ii estar karbaminske kiseline su hloridi, ili grupe koje proizilaze
iz reakcije kiselinskog derivata sa sredstvom za aktivaciju. Odgovarajuća sredstva za
aktivaciju poznata su stručnjacima, primeri za takve reagense su derivati karbodiimida,
derivati pentafluorofenil estra, derivati triazola, derivati imidazola.
Grupe koje mogu aktivirati hidroksi grupu za kuplovanje sa drugom hidroksi grupom da bi se
formirao etar su grupe koje su poznate stručnjacima, primeri takvih grupa za aktivaciju su
mezilati i tozilati.
[0099] U ovom tekstu, izraz “zaštitna grupa” odnosi se na grupu koja štiti funkcionalnu grupu
koja je prisutna u polaznim materijalima i koja ne učestvuje u reakciji. U dodatnim fazama
postupka, koje se odigravaju po potrebi, funkcionalne grupe u polaznim jedinjenjima koje ne
treba da uzmu učešća u reakciji, mogu da budu prisutne u nezaštićenom obliku ili npr. mogu
da budu zaštićene sa jednom ili više zaštitnih grupa. Zaštitne grupe se onda u potpunosti ili
delimično uklanjaju prema jednom od poznatih postupaka. Način na koji se zaštitne grupe
uvode i uklanjaju, opisan je na primer, u "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum
Press, London, New York 1973, and in "Methoden der organischen Chemie", Houben-Weyl,
4th edition, Vol. 15/1, Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart 1974 i u Theodora W. Greene,
"Protective Groups in Organic Synthesis", John Wiley & Sons, New York 1981. Karakteristika
zaštitnih grupa je u tome što se mogu lako ukloniti, tj. bez javljanja neželjenih sekundarnih
reakcija, kao što su na primer, solvoliza, redukcija, fotoliza ili alternativno prema fiziološkim
uslovima.
[0100] Pronalazak dalje uključuje bilo koju varijantu datog procesa, u kojoj se intermedijerni
proizvod koji se može dobiti u bilo kojoj fazi procesa koristi kao polazni materijal i gde se
izvode preostali koraci procesa, ili u kojim se polazni materijali formiraju in situ u reakcionim
uslovima, ili u kojoj se reakcione komponente koriste u obliku njihovih soli ili optički čistog
materijala.
Jedinjenja iz pronalaska i intermedijeri mogu da se prevode jedni u druge prema postupcima koji su generalno poznati stručnjacima.
[0101] Intermedijeri i finalni proizvodi mogu biti obradjeni i/ili prečišćeni prema standardnim postupcima, npr. korišćenjem hromatografskih metoda, metoda raspodele, (re-) kristalizacije.
[0102] Sledeće se uopšteno odnosi na sve procese koji su pomenuti ranije i kasnije u tekstu. Svi koraci procesa pomenuti u daljem tekstu mogu se izvesti pod uslovima reakcije koji su dobro poznati stručnjacima, uključujući one posebno pomenute, u odsustvu ili, uobičajeno, u prisustvu rastvarača ili diluenata, uključujući, na primer, rastvarače ili diluenate koji su inertni prema korišćenim reagensima i rastvaraju ih, u odsustvu ili prisustvu katalizatora, kondenzacionih ili neutralizacionih agenasa, na primer jonoizmenjivača, kao što su katijonski izmenjivači, npr. u H+ obliku, u zavisnosti od prirode reakcije i/ili reaktanata na sniženoj, normalnoj ili povišenoj temperaturi, na primer u temperaturnom opsegu od oko -100 ºC do oko 190 ºC, uključujući, na primer, od otprilike -80 ºC do otprilike 150 ºC, na primer od -80 do -60 ºC, na sobnoj temperaturi, od -20 do 40 ºC ili na temperaturi refluksa, pod atmosferskim pritiskom ili u zatvorenom sudu, gde je pogodno pod pritiskom, i/ili u inertnoj atmosferi, na primer u atmosferi argona ili azota.
U svim fazama reakcija, smeše izomera koje se formiraju, mogu da se razdvoje na individualne izomere, na primer dijastereoizomere ili enantiomere, ili na bilo koje željene smeše izomera, na primer racemate ili smeše diastereoizomera, analogno ovde opisanim postupcima.
Rastvarači od kojih oni rastvarači koji su pogodni za bilo koju odredjenu reakciju mogu biti izabrani, obuhvataju one koji su posebno pomenuti ili, na primer, vodu, estre, kao što su niži alkil alkanoati, na primer etil acetat, etri, kao što su alifatični etri, na primer dietil etar, ili ciklični etri, na primer tetrahidrofuran ili dioksan, tečni aromatični ugljovodonici, kao što su benzen ili toluen, alkoholi, kao što su metanol, etanol ili 1- ili 2-propanol, nitrili, kao što je acetonitril, halogenovani ugljovodonici, kao što su metilen hlorid ili hloroform, kiseli amidi, kao što su dimetilformamid ili dimetil acetamid, baze, kao što su heterociklične azotne baze, na primer piridin ili N-metilpirolidin-2-on, anhidridi karboksilne kiseline, kao što su anhidridi nižih alkanskih kiselina, na primer anhidrid sirćetne kiseline, ciklični, linearni ili razgranati ugljovodonici, kao što su cikloheksan, heksan ili izopentan, metilcikloheksan, ili smeše ovih rastvarača, na primer vodeni rastvori, osim ako nije drugačije naznačeno u opisu postupka. Ovakve smeše rastvarača mogu takodje da se koriste u fazama prečišćavanja, na primer hromatografijom ili raspodeljivanjem faza.
Jedinjenja, uključujući njihove soli, mogu takodje da se dobiju u obliku hidrata, ili njihovi kristali mogu, na primer, da uključuju rastvarač korišćen za kristalizaciju. Mogu da budu prisutni različiti kristalni oblici.
Pronalazak se odnosi takodje na one forme postupka u kojima se jedinjenje koje se dobija kao intermedijer u bilo kojoj fazi procesa koristi kao polazni materijal i gde se izvode preostale faze postupka, ili u kojima se poolazni materijal dobija pod uslovima reakcije ili se koristi u obliku derivata, na primer u zaštićenom obliku ili u obliku soli, ili se jedinjenje koje se može dobiti procesom prema pronalasku proizvodi u uslovima postupka i dodatno se obradjuje in situ.
[0103] U narednom aspektu, datim pronalaskom predstavljena je farmaceutska kompozicija koja se sastoji od jedinjenja prikazanog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljivog nosača. Farmaceutska kompozicija može biti formulisana za odredjeni način primene kao što je oralna primena, parenteralna primena, i rektalna primena, itd. Pored toga, farmaceutske kompozicije ovog pronalaska moguće je napraviti u čvrstom obliku (uključujući bez ograničenja kapsule, tablete, pilule, granule, praškovi ili supozitorije), ili u tečnom obliku (uključujuči bez ograničenja rastvore suspenzije ili emulzije). Farmaceutske kompozicije mogu biti podvrgnute uobičajenim farmaceutskim operacijama kao što je sterilizacija i/ili mogu da sadrže uobičajene inertne diluente, lubrikante, ili puferske agense, kao i adjuvanse, kao što su konzervansi, stabilizatori, sredstva za vlaženje, emulgatori i puferi itd. Tipično, farmaceutske kompozicije su u obliku tableta ili želatinskih kapsula koje sadrže aktivni sastojak zajedno sa
a) diluentima, kao npr., laktoza, dekstroza, saharoza, manitol, sorbitol, celuloza i/ili glicin; b) lubrikantima, kao npr., silika, talk, stearinska kiselina, njena so sa magnezijumom ili sa kalcijumom i/ili polietilenglikol, isto je i za tablete
c) vezujućim sredstvima, kao npr., magnezijum-aluminijum-silikat, skrobna pasta, želatin, tragakant, metil-celuloza, natrijum-karboksimetil-celluloza i/ ili polivinilpirolidon; i ukoliko je potrebno
d) sredstvima protiv zgrudnjavanja (dezintegranti), npr., skrobovi, agar, alginska kiselina ili njena natrijumova so, ili šumeće mešavine; i/ili
e) apsorbensima, bojama, pojačivačima ukusa i zaslađivačima.
[0104] Tablete mogu biti ili filmom obložene ili enterično obložene prema postupcima koji su poznati u stanju tehnike.
[0105] Odgovarajuće kompozicije za oralnu primenu obuhvataju efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska u obliku tableta, pastila, vodenih ili uljanih suspenzija, disperzibilnih praškova ili granula, emulzija, čvrstih ili mekih kapsula, ili sirupa ili eliksira. Kompozicije koje su namenjene za oralnu upotrebu su spremljene prema bilo kojem postupku poznatom u stanju tehnike za proizvodnju farmaceutskih kompozicija i takve kompozicije mogu da sadrže jedno ili više sredstava odabranih iz grupe koja sadrži zasladjivače, poboljšivače ukusa, boje i sredstva za konzervisanje kako bi omogućili dobijanje farmaceutski elegantnih i ukusnih preparata. Tablete mogu da sadrže aktivni sastojak pomešan sa netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji su pogodni za proizvodnju tableta. U ove ekscipijense ubrajaju se, na primer, inertni diluenti, kao što je kalcijum-karbonat, laktoza, kalcijum-fosfat ili natrijum-fosfat; sredstva za granulaciju i dezintegraciju, na primer, kukuruzni skrob, ili alginska kiselina, povezujuća sredstva, na primer, skrob, želatin ili akacija, i sredstva za podmazivanje, na primer magnezijum-stearat, stearinska kiselina ili talk. Tablete mogu biti neobložene ili obložene poznatim tehnikama, kako bi se odložila njihova dezintegracija i apsorpcija u gastrointestinalnom traktu i tako obezbedilo produženo delovanje. Na primer, mogu da se koriste materiali koji omogućavaju kasno delovanje kao što je gliceril-monosterat ili gliceril-distearat. Formulacije za oralnu upotrebu mogu da se predstave kao čvrste želatinske kapsule gde je aktivni sastojak pomešan sa inertnim čvrstim diluentom, kao što je na primer, kalcijum-kabonat, kalcijum-fosfat ili kaolin, ili kao mekane želatinske kapsule gde je aktivni sastojak pomešan sa vodom ili nekim uljanim medijumom, na primer, uljem kikirikija, tečnim parafinom ili maslinovim uljem.
[0106] Odredjene injektabilne kompozicije su vodeni izotonični rastvori ili suspenzije, i supozitorije su praktično pripremljene od masnih emulzija ili suspenzija. Pomenute kompozicije mogu da se sterilišu i/ili sadrže adjuvanse, kao što su sredstva za konzervisanje, stabilizaciju, regulisanje vlage ili emulgovanje, sredstva za olakšano rastvaranje, soli za regulisanje osmotskog pritiska i/ili puferi. Osim toga, oni mogu takodje da sadrže druge terapijski vredne supstance. Pomenute kompozicije su pripremljene u skladu sa uobičajenim postupcima za mešanje, granulaciju odnosno oblaganje, redom, i sadrže oko 0.1-75%, ili sadrže oko 1-50%, aktivnog sastojka.
[0107] Odgovarajuće kompozicije za transdermalnu primenu obuhvataju efikasnu količinu jedinjenja iz pronalaska sa odgovarajućim nosačem. Nosači koji su pogodni za transdermalno dostavljanje uključuju lako upijajuće farmakološki prihvatljive rastvarače čija je uloga da pomognu prolaz kroz kožu domaćina. Na primer sprave za transdermalnu primenu postoje u obliku poveske/zavoja koji poseduje zadnju potporu, rezervoar sa jedinjenjem i opciono nosačima, opciono barijeru kojom se kontroliše brzina dostavljanja i koja omogućava kontrolisanje brzine dostavljanja jedinjenja u kožu domaćina i njeno podešavanje na prethodno odredjenu vrednost tokom dužeg vremenskog perioda, zatim pomoćna sredstva koja treba da obezbedjuju spravu na koži.
[0108] Odgovarajuće kompozicije pogodne za topikalnu primenu, npr., na koži i očima, obuhvataju vodene rastvore, suspenzije, masti, kreme, gelove ili formulacije u spreju, npr., za dostavljanje u obliku aerosola ili tome slično. Takvi sistemi za dostavljanje će naročito biti podesni za dermalnu primenu, npr., u tetmanu raka kože, npr., za preventivnu upotrebu u kremama za sunčanje, losionima, sprejevima i tome slično. Oni su dakle naročito podešeni za upotrebu u topikalnim formulacijama, uključujući i kozmetičke, koje su dobro poznate u stanju tehnike. One mogu da sadrže sredstva za bolju rastvorljivost, stabilizatore, sredstva koja pojačavaju tonus, pufere i konzervanse.
[0109] U ovom tekstu topikalna primena može da se odnosi takodje na inhalaciju ili na intranazalnu primenu. Mogu biti povoljno dostavljeni u obliku suvog praška (bilo zasebno, ili u smeši, na primer suva mešavina sa laktozom, ili sastavna partikula u mešavini, na primer sa fosfolipidima, iz inhalatora sa suvim praškom ili aerosol za prskanje iz suda pod pritiskom, suda sa pumpom, sprejom, atomizerom ili nebulajzerom, sa ili bez upotebe odgovarajućeg propelenta (potisnog gasa).
[0110] U ovom pronalasku su dalje opisane anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozni oblici koji kao aktivne sastojke sadrže jedinjenja iz ovog pronalaska, budući da voda može da olakša degradaciju odredjenih jedinjenja.
[0111] Anhidrovane farmaceutske kompozicije i dozni oblici iz pronalaska mogu se pripremiti korišćenjem anhidrovanih ili sastojaka sa malim sadržajem vlage i pri uslovima sa niskim sadržajem vlage. Anhidrovanu farmaceutsku kompoziciju je moguće spremiti i čuvati tako da se sačuva njeno svojstvo da je anhidrovana. U skladu sa tim, anhidrovane kompozicije su pakovane u materijale za koje je poznato da sprečavaju izlaganje vodi tako da se omogući da ih odgovarajuće formulisani kompleti obuhvataju. U primere za odgovarajuća pakovanja se ubrajaju, ali nisu time ograničena, hermetički zapečaćeni kontejneri od folije, plastični, kontejneri za jedinične doze (npr. vajle), blister pakovanja, i strip pakovanja.
[0112] U pronalasku su dalje opisane farmaceutske kompozicije i dozni oblici koji se sastoje od jednog ili više sredstava koja usporavaju raspadanje jedinjenja iz ovog pronalaska kao aktivnog sastojka. Takva sredstva, koja se u tekstu označena kao "stabilizatori,” obuhvataju bez ograničenja, antioksidanse poput askorbinske kiseline, pH pufere, ili sone pufere, itd.
[0113] Jedinjenja formule I u slobodnom obliku ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli, pokazuju vredna farmakološka svojstva, npr. svojstva da moduliraju PI3K, kao što je npr. naznačeno u in vitro i in vivo testovima testovima koji su predstavljeni u sledećim odeljcima, i kao takva su indikovana za terapiju ili za upotrebu kao hemikalije za istraživanje, npr. tzv. jedinjenja „istraživačke alatke” (tool compounds).
[0114] Jedinjenja iz pronalaska mogu da budu korisna u lečenju stanja, oboljenja ili poremećaja uključujući oboljenja ili infekcije u vezi sa imunopatologijom kod kojih je jedna ili više funkcija B-ćelija kao što je produkcija antitela, prezentacija antigena, produkcija citokina ili organogeneza limfoidnog tkiva, su atipične ili su nepoželjne uključujući reumatoidni artritis, pemfigus vulgaris, idiopatska trombocitopenija purpura, sistemski eritemski lupus, multipla skleroza, mijastenija gravis, Sjögren-ov sindrom, autoimunska hemolitička anemija, vaskulitis povezan sa ANCA, krioglobulinemija, trombotična trombocitopenijska purpura, hronična autoimunska urtikarija, alergija (atopijski dermatitits, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), sindrom „goodpasture“, odbacivanje transplantata posredovano antitelom (engl. antibodymediated transplant rejection-AMR), B-ćelijama posredovano hiperakutno, akutno i hronično odbacivanje transplantata i kanceri hematopoetskog porekla koji obuhvataju izmedju ostalog multipli mijelom, akutnu mijelogenu leukemiju; hroničnu mijelogenu leukemiju; limfocitnu leukemiju; mijeloidnu leukemiju; ne-Hodžkinov limfom; limfome; policitemija vera; esencijalnu trombocitemiju; mijelofibrozu sa mijeloidnim metaplazijama; i Waldenstromovu bolest.
[0115] Pronalazak uključuje metode za tretman stanja, oboljenja ili poremećaja kod kojih su jedna ili više funkcija neutrofila, kao što su oslobadjanje superoksida, stimulisana egzocitoza ili migracija izazvana hemoatraktantima nenormalne ili pak nepoželjne, uključujući reumatoidni artritis, sepsu, plućne ili disajne poremećaje kao što su astma, zapaljenske dermatoze kao što je psorijaza kao i oboljenja ili infekcije u vezi sa imunopatologijom i druge.
[0116] Pronalazak uključuje postupke lečenja stanja, oboljenja ili poremećaja kod kojih su jedna ili više funkcija bazofila i mastocita, kao što su migracija pod dejstvom hemoatraktanata ili degranulacija posredovana alergenom i IgE, nenormalne ili pak nepoželjne, uključujući alergijska oboljenja (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis) kao i ostale poremećaje kao što su COPD, astma ili emfizem.
[0117] Pronalazak uključuje postupke lečenja stanja, oboljenja ili poremećaja kod kojih su jedna ili više funkcija T-ćelija, kao što su proizvodnja citokina ili citotoksičnost posredovana ćelijama nenormalne ili pak nepoželjne, uključujući reumatoidni artritis, multipnu sklerozu, akutno ili hronično odbacivanje graftova tkiva ili organa ili kancere hematopojetskog porekla kao i oboljenja ili infekcije u vezi sa imunopatologijom.
[0118] Zatim, pronalazak uključuje postupke lečenja neurodegenerativnih oboljenja, kardiovaskularnih oboljenja i agregacije krvnih pločica.
Zatim, pronalazak uključuje postupke lečenja kožnih oboljenja kao što su porfirija cutanea tarda, polimorfna blaga erupcija, dermatomiozitis, solarna urtikarija, oralni lišaj planus, panikulitis, skleroderma, urtikarijski vaskulitis.
[0119] Zatim, pronalazak uključuje postupke lečenja hroničnih zapaljenskih oboljenja kao što su sarkoidoza i granuloma annulare.
[0120] U drugim izvodjenjima, stanje ili poremećaj (npr. posredovan PI3K) je izabran iz grupe koja uključuje: pravu policitemiju, esencijalnu trombocitemiju, mijelofibrozu sa mijeloidnom metaplazijom, astmu, COPD, ARDS, Loflerov sindrom, eozinofilnu pneumoniju, parazitne infestacije (posebno metazoa) (uključujući tropsku eozinofiliju), bronhopulmonalnu aspergilozu, poliarteritis nodosa (uključujući Churg-Strauss-ov sindrom), eozinofilni granulom, eozinofilne poremećaje disajnih puteva izazvane reakcijom na lekove, psorijazu, kontaktni dermatitis, atopični dermatitits, alopeciju areatu, eritemu multiforme, dermatitis herpetiformis, sklerodermu, vitiligo, hipersenzitivni angiitis, urtikariju, bulozni pemfigoid, lupus eritematozis, pemphigus, stečenu buloznu epidermolizu, autoimmune hematološke poremećaje (npr. hemolitičnu anemiju, aplastičnu anemiju, čistu anemiju crvenih krvnih zrnaca i idiopatičnu trombocitopeniju), sistemski lupus eritematozis, polihondritis, sklerodermu, Wegenerovu granulomatozu, dermatomiozitis, hronični aktivni hepatitis, miasteniju gravis, Stiven-Džonsonov sindrom, idiopatsku celijakiju, autoimuno zapaljensko oboljenje creva (npr. ulcerativni kolitis i Kronova bolest), endokrinu oftalmopatiju, Grave-ovo oboljenje, sarkoidozu, alveolitis, hronični hipersenzitivni pneumonitis, multipnu sklerozu, primarnu bilijarnu cirozu, uveitis (anteriorni i posteriorni), intersticijalnu plućnu fibrozu, psorijatični artritis, glomerulonefritis, kardiovaskularna oboljenja, aterosklerozu, hipertenziju, trombozu dubokih vena, moždani udar, infarkt srčanog mišića, nestabilnu angina, tromboemboliju, plućnu emboliju, trombolitička oboljenja, akutnu arterijsku ishemiju, periferne trombotične okluzije i koronarno arterijsko oboljenje, reperfuzijske povrede, retinopatiju, kao što su dijabetična retinopatija ili hiperbarična retinopatija izazvana kiseonikom, kao i stanja koja se karakterišu povišenim intraokularnim pritiskom ili sekrecijom okularne tečnosti, kao što je glaukom.
[0121] U sledećem izvodjenju, jedinjenja iz ovog pronalaska su korisna u tretmanu, prevenciji ili ublažavanju autoimunog oboljenja i zapaljenskih stanja, posebno zapaljenskih stanja sa etiologijom koja uključuje autoimunu komponentu kao što su artritis (na primer reumatoidni artritis, hronični progresivni artritis i artritis deformans) i reumatska oboljenja, uključujući zapaljenska stanja i reumatska oboljenja koja obuhvataju gubitak kosti, zapaljenski bol, spondiloartropatije uključujući ankilozni spondilitis, Rajterov sindrom, reaktivni artritis, psorijatični artritis i enteropatski artritis, hipersenzitivnost (uključujući hipersenzitivnost disajnih puteva i dermalnu hipersenzitivnost) i alergije. Konkretna autoimuna oboljenja kod kojih se antitela iz ovog pronalaska mogu primeniti uključuju autoimmune hematološke poremećaje (uključujući npr. hemolitičku anemiju, aplastičnu anemiju, čistu anemiju crvenih krvnih zrnaca i idiopatsku trombocitopeniju), stečenu hemofiliju A, hladno aglutininsko oboljenje, krioglobulinemiju, trombotičnu trombocitopeničnu purpuru, Sjogrenov sindrom, sistemski lupus eritematozis, zapaljenska oboljenja mišića, polihondritis, sklerodermu, antineutrofilni citoplazmatski vaskulitis povezan sa antitelima, neuropatiju posredovanu IgM antitelima, sindrom opsoclonus-myoclonus, Wegener-ovu granulomatozu, dermatomiozitis, hronični aktivni hepatitis, miasteniju gravis, psorijazu, Stiven-Džonsonov sindrom, pemfigus vulgaris, folijatični pemphigus, idiopatsku celijakiju, autoimuno zapaljensko oboljenje creva (uključujući npr. ulcerativni kolitis, Kronovu bolest i sindrom iritabilnog creva), endokrinu oftalmopatiju, Grave-ovo oboljenje, sarkoidozu, multipnu sklerozu, neuromijelitis optica, primarnu bilijarnu cirozu, juvenilni dijabetes (diabetes mellitus tip I), uveitis (anteriorni, intermedijarni i posteriorni, kao i panuveitis), keratokonjuktivitis sicca i vernalni keratokonjuktivitis, intersticijalnu plućnu fibrozu, psorijatični artritis i glomerulonephritis (sa i bez nefrotičnog sindroma, npr. uključujući idiopatski nefrotični sindrom ili nefropatiju sa minimalnom promenom), tumore, zapaljensko oboljenje kože i kornee, miozitis, labavljenje koštanih implantata, metaboličke poremećaje kao što su ateroskleroza, dijabetes i dislipidemija.
[0122] U sledećem izvodjenju, jedinjenja iz ovog pronalaska su korisna u tretmanu stanja ili poremećaja izabranih iz grupe koja sadrži primarni kutani limfom B-ćelija, imunobulozno oboljenje, pemfigus vulgaris, folijačni pemfigus, endemski oblik Brazilskog pemfigusa (Fogo selvagem), paraneoplastični pemfigus, bulozni pemfigoid, pemfigoid mukozne membrane, stečenu buloznu epidermolizu, hronično oboljenje graft-domaćin, dermatomiozitis, sistemski lupus eritematozis, vaskulitis, vaskulitis malih krvnih sudova, hipokomplementemski urtikarijski vaskulitis, antineutrofilski citoplazmatski vaskulitis posredovan antitelima, krioglobulinemiju, Šniclerov sindrom, Waldenstrom-ovu makroglobulinemiju, angioedema, vitiligo, sistemski lupus eritematozis, idiopatsku trombocitopenijsku purpuru, multipnu sklerozu, hladnu aglutininsku bolest, autoimunu hemolitičku anemiju, antineutrofilni citoplazmatski vaskulitis posredovan antitelima, oboljenje graft protiv domaćina, krioglobulinemiju i trombotičnu trombocitopenijsku purpuru.
[0123] Stoga, kao dalje izvodjenje, ovaj pronalazak obezbedjuje upotrebu jedinjenja formula (I), (I’), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) u terapiji. U daljem izvodjenju, terapija je izabrana za oboljenje koje se može tretirati inhibicijom PI3K. U drugom izvodjenju, oboljenje je izabrano iz gorepomenute liste, odgovarajuće iz grupe koja obuhvata autoimune poremećaje, upalna oboljenja, alergijska oboljenja, oboljenja disajnih puteva, kao što su astma i COPD, odbacivanje transplanta; proizvodnju antitela, prezentaciju antigena, slučajeve kada su proizvodnja citokina ili limfoidna organogeneza nenormalni ili nepoželjni, na primer kod reumatoidnog artritisa, pemfigusa vulgarisa, idiopatske trombocitopenije purpura, sistemskog lupusa eritematozusa, multiple skleroze, mijastenije gravis, Sjögren-ovog sindroma, autoimune hemolitičke anemije, vaskulitisa povezanih sa ANCA, krioglobulinemije, trombotične trombocitopenije purpura, hronične autoimmune urtikarije, alergija (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, AMR (odbacivanje transplanta posredovano antitelima), hiperakutno, akutno i hronično odbacivanje transplanta posredovano B-ćelijama i kanceri hematopojetskog porekla uključujući multipni mijelom; leukemiju; akutnu mijelogensku leukemiju; hroničnu mijelogensku leukemiju; limfocitnu leukemiju; mijeloidnu leukemiju; nehočkinov limfom; limfome; policitemiju vera; esencijalnu trombocitemiju; mijelofibrozu sa mijeloidnom metaplazijom; i Waldenstroem oboljenje; više odgovarajuće iz grupe koja obuhvata reumatoidni artritis (RA), pemfigus vulgaris (PV), idiopatsku trombocitopeniju purpura (ITP), trombotičnu trombocitopeniju purpura (TTP), autoimunu hemolitičku anemiju (AIHA), stečenu hemofiliju tipa A (AHA), sistemski lupus eritematozus (SLE), multiplu sklerozu (MS), mijasteniju gravis (MG), Sjögren-ov sindrom (SS), vaskulitise povezane sa ANCA, krioglobulinemju, hroničnu autoimunu urtikariju (CAU), alergije (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, odbacivanje transplanta i kancere hematopojetskog porekla, kao i imunopatologije povezane sa oboljenjem ili infekcijom, na primer kod teške i cerebralne malarije, tripanozomijaze, leišmanijaze, toksoplazmoze i neurocisticerkoze.
[0124] U daljem izvodjenju, pronalazak obezbedjuje jedinjenje formula (I), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) za upotrebu u postupku lečenja oboljenja koje se može tretirati inhibicijom PI3K. U drugom izvodjenju, oboljenje je izabrano iz gorepomenute liste, odgovarajuće iz grupe koja obuhvata autoimune poremećaje, upalna oboljenja, alergijska oboljenja, oboljenja disajnih puteva, kao što su astma i COPD, odbacivanje transplanta; proizvodnju antitela, prezentaciju antigena, slučajeve kada su proizvodnja citokina ili limfoidna organogeneza nenormalni ili nepoželjni, na primer kod reumatoidnog artritisa, pemfigusa vulgarisa, idiopatske trombocitopenije purpura, sistemskog lupusa eritematozusa, multiple skleroze, mijastenije gravis, Sjögren-ovog sindroma, autoimune hemolitičke anemije, vaskulitisa povezanih sa ANCA, krioglobulinemije, trombotične trombocitopenije purpura, hronične autoimmune urtikarije, alergija (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, AMR (odbacivanje transplanta posredovano antitelima), hiperakutno, akutno i hronično odbacivanje transplanta posredovano B-ćelijama i kanceri hematopojetskog porekla uključujući multipni mijelom; leukemiju; akutnu mijelogensku leukemiju; hroničnu mijelogensku leukemiju; limfocitnu leukemiju; mijeloidnu leukemiju; nehočkinov limfom; limfome; policitemiju vera; esencijalnu trombocitemiju; mijelofibrozu sa mijeloidnom metaplazijom; i Waldenstroem oboljenje; više odgovarajuće iz grupe koja obuhvata reumatoidni artritis (RA), pemfigus vulgaris (PV), idiopatsku trombocitopeniju purpura (ITP), trombotičnu trombocitopeniju purpura (TTP), autoimunu hemolitičku anemiju (AIHA), stečenu hemofiliju tipa A (AHA), sistemski lupus eritematozus (SLE), multiplu sklerozu (MS), mijasteniju gravis (MG), Sjögren-ov sindrom (SS), vaskulitise povezane sa ANCA, krioglobulinemju, hroničnu autoimunu urtikariju (CAU), alergije (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, odbacivanje transplanta i kancere hematopojetskog porekla, kao i imunopatologije povezane sa oboljenjem ili infekcijom, na primer kod teške i cerebralne malarije, tripanozomijaze, leišmanijaze, toksoplazmoze i neurocisticerkoze.
[0125] Stoga, kao dalje izvodjenje, ovaj pronalazak obezbedjuje upotrebu jedinjenja formula (I), (I’), (Ia), (Ia’), (Ib), (Ib’) (Ic), (Ic’), (Id), (Id’), (Ie), (Ie’), (If), (If’), (Ig), (Ig’), (Ih), (Ih’), (Ii), (Ii’), (Ij) ili (Ij’) za proizvodnju leka. U daljem izvodjenju, lek se koristi za lečenje oboljenja koje se može tretirati inhibicijom PI3K.
U drugom izvodjenju, oboljenje je izabrano iz gorepomenute liste, odgovarajuće iz grupe koja obuhvata autoimune poremećaje, upalna oboljenja, alergijska oboljenja, oboljenja disajnih puteva, kao što su astma i COPD, odbacivanje transplanta; proizvodnju antitela, prezentaciju antigena, slučajeve kada su proizvodnja citokina ili limfoidna organogeneza nenormalni ili nepoželjni, na primer kod reumatoidnog artritisa, pemfigusa vulgarisa, idiopatske trombocitopenije purpura, sistemskog lupusa eritematozusa, multiple skleroze, mijastenije gravis, Sjögren-ovog sindroma, autoimune hemolitičke anemije, vaskulitisa povezanih sa ANCA, krioglobulinemije, trombotične trombocitopenije purpura, hronične autoimmune urtikarije, alergija (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, AMR (odbacivanje transplanta posredovano antitelima), hiperakutno, akutno i hronično odbacivanje transplanta posredovano B-ćelijama i kanceri hematopojetskog porekla uključujući multipni mijelom; leukemiju; akutnu mijelogensku leukemiju; hroničnu mijelogensku leukemiju; limfocitnu leukemiju; mijeloidnu leukemiju; nehočkinov limfom; limfome; policitemiju vera; esencijalnu trombocitemiju; mijelofibrozu sa mijeloidnom metaplazijom; i Waldenstroem oboljenje; više odgovarajuće iz grupe koja obuhvata reumatoidni artritis (RA), pemfigus vulgaris (PV), idiopatsku trombocitopeniju purpura (ITP), trombotičnu trombocitopeniju purpura (TTP), autoimunu hemolitičku anemiju (AIHA), stečenu hemofiliju tipa A (AHA), sistemski lupus eritematozus (SLE), multiplu sklerozu (MS), mijasteniju gravis (MG), Sjögren-ov sindrom (SS), vaskulitise povezane sa ANCA, krioglobulinemju, hroničnu autoimunu urtikariju (CAU), alergije (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, odbacivanje transplanta i kancere hematopojetskog porekla, kao i imunopatologije povezane sa oboljenjem ili infekcijom, na primer kod teške i cerebralne malarije, tripanozomijaze, leišmanijaze, toksoplazmoze i neurocisticerkoze.
[0126] Farmaceutska kompozicija ili kombinacija iz ovog pronalaska može biti po jedinici doziranja od oko 1-1000 mg aktivnog sastojka (sastojaka) za subjekta telesne težine od oko 50-70 kg, ili oko 1-500 mg ili oko 1-250 mg ili oko 1-150 mg ili oko 0,5-100 mg, ili oko 1-50 mg aktivnih sastojaka. Terapijski efikasna doza jedinjenja, farmaceutske kompozicije ili pak njihove kombinacije, zavisi od vrste subjekta, telesne težine, uzrasta i individualnog stanja, kao i od vrste poremećaja, oboljenja ili stepena ozbiljnosti stanja koja se tretiraju. Lekar, kliničar ili veterinar prosečnih sposobnosti može lako odrediti efikasnu količinu svakog od aktivnih sastojaka neophodnih u sprečavanju, tretmanu ili za inhibiranje napredovanja poremećaja ili oboljenja.
[0127] Gore pomenute osobine pojedinih doza mogu se pokazati u in vitro i in vivo eksperimentima na pretežno sisarskim vrstama, npr. miševima, pacovima, psima, majmunima ili na izolovanim organima, tkivima i njihovim preparatima. Jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se primeniti in vitro u obliku rastvora, npr. vodenih rastvora, kao i in vivo bilo preko digestivnog trakta ili parenteralno, poželjno intravenski, npr. u obliku suspenzije ili u vodenom rastvoru. Doziranje in vitro može varirati između oko 10<-3>molarnih i 10<-9>molarnih koncentracija. Terapijski efikasna količina in vivo može varirati u zavisnosti od načina primene izmedju oko 0,1-500 mg/kg, ili izmedju oko 1-100 mg/kg.
[0128] Jedinjenje iz datog pronalaska može da se primenjuje ili istovremeno sa, jednim ili više terapijskih sredstava ili pre ili kasnije. Jedinjenje iz datog pronalaska može da se primenjuje odvojeno, istim ili različitim načinom primene ili zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji kao ostala sredstva.
[0129] U jednom izvodjenju iz pronalaska, predstavljen je proizvod koji obuhvata jedinjenje formule (I), i najmanje jedno drugo terapijsko sredstvo kao kombinovani preparat za istovremeno, odvojeno ili sekvencijalnu upotrebu u terapiji. U jednom izvodjenju, terapija predstavlja treatman oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima. Proizvodi predstavljeni kao kombinovani preparat obuhvataju kompoziciju koja obuhvata jedinjenje iz datog pronalaska i druga terapijska sredstv(a) zajedno u istoj farmaceutskoj kompoziciji, ili jedinjenje iz datog pronalaska i druga terapijska sredstv(a) u odvojenom obliku, na primer, u obliku kita.
[0130] U jednom izvodjenju pronalaska, predstavljena je farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje formule (I) i drugo terapijsko sredstvo(a). Kako je opisano ranije u tekstu, farmaceutska kompozicija može opciono da sadrži farmaceutski prihvatljivi nosač.
[0131] U jednom izvodjenju, pronalazak obezbedjuje kit koji obuhvata dve ili više odvojenih farmaceutskih kompozicija, gde barem jedna od njih sadrži jedinjenje formule (I). U jednom izvodjenju, kit obuhvata sredstva za odvojeno zadržavanje tih kompozicija, kao što su kontejner, podeljena boca ili podeljeno pakovanje u foliji. Primer za takav kit je blister pakovanje, koje se obično koristi za pakovanje tableta, kapsula ili slično.
[0132] Kit može da se koristi za davanje različitih doznih oblika, na primer, oralno ili parenteralno, za davanje odvojenih kompozicija na različitim doznim intervalima, ili za tiraciju razdvojenih kompozicija jedne u odnosu na drugu. Da bi došlo do uskladjenosti, kit iz pronalaska obično obuhvata uputstva za primenu.
[0133] U kombinacionim terapijama, sredstvo iz pronalaska i drugo terapijsko sredstvo može da bude proizvedeno i/ili formulisano od strane istih ili različitih proizvodjača. Šta više, jedinjenje iz pronalaska i drugi terapeutik mogu da budu udruženi u kombinacionu terapiju: (i) pre nego što kombinacioni proizvod bude dostupan lekarima (npr. u slučaju kita koji se sastoji od jedinjenja iz pronalaska i drugog terapijskog sredstva); (ii) od strane samih lekara (ili pod rukovodstvom lekara) kratko pre primene; (iii) u samom pacijentu, npr. u toku sekvencijalne primene jedinjenja iz pronalaska i drugog terpijskog sredstva.
[0134] Shodno tome, pronalazak obezbedjuje upotrebu jedinjenja formule (I), za lečenje oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde se lek priprema za davanje sa drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje još jedno terapijsko sredstvo za upotrebu u lečenju oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde se lek daje sa jedinjenjem formule (I).
[0135] Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I) ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku lečenja oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde se jedinjenje formule (I) priprema za davanje sa drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugo terapijsko sredstvo za upotrebu u postupku lečenja oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde se terapijsko sredstvo dobija za primenu sa jedinjenjem formule (I). Pronalazak takodje obezbedjuje jedinjenje formule (I), ili njenu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku lečenja oboljenja ili stanja posredovanih posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde se jedinjenje formule (I), daje sa drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje drugo terapijsko sredstvo za upotrebu u postupku lečenja oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde se drugo terapijsko sredstvo daje sa jedinjenjem formule (I).
[0136] Pronalazak takodje obezbedjuje upotrebu jedinjenja formule (I), za lečenje oboljenja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde je pacijent predhodno bio lečen (na primer, tokom 24 časa) drugim terapijskim sredstvom. Pronalazak takodje obezbedjuje još jedno terapijsko sredstvo za upotrebu u lečenju oboljenja ili stanja posredovanih aktivnošću PI3K enzima, gde je pacijent predhodno bio lečen (na primer, tokom 24 časa) sa jedinjenjem formule formule (I).
[0137] Jedinjenja formule I mogu se primeniti kao jedini aktivni sastojak ili u vezi sa, npr. kao adjuvansom na druge lekove npr. imunosupresante ili imunomodulatore ili za druga protivupalna sredstva, npr. za tretman ili prevenciju akutnog ili hroničnog odbacivanja alo- ili ksenografta ili upalnih ili autoimunih poremećaja, ili na hemoterapeutsko sredstvo, npr. sredstvo sa antiproliferativnim dejstvom na maligne ćelije. Na primer, jedinjenja formule I mogu se koristiti u kombinaciji sa inhibitorom kalcineurina, npr. ciklosporinom A ili FK 506; inhibitorom mTOR, npr. rapamicinom, 40-O-(2-hidroksietill)-rapamicinom, CCI779, ABT578, AP23573, TAFA-93, biolimus-7 ili biolimus-9; sa askomicinom koji deluje imunosupresivno, npr. ABT-281, ASM981, itd.; sa kortikosteroidima; ciklofosfamidima; azatioprenima; metotreksatom; leflunomidom; mizoribinom; mikofenolnom kiselinom ili sa solju; mikofenolatmofetilom; 15-deoksispergualinom ili njegovim imunosupresivnim homologom, analogom ili derivatom; inhibitorom PKC, npr. kao što je publikovano u WO 02/38561 ili WO 03/82859, npr. jedinjenje iz primera 56 ili 70; inhibitor JAK3 kinaze, npr. N-benzil-3,4-dihidroksibenziliden-cijanoacetamid -cijano-(3,4-dihidroksi)-]N-benzilcinamamid (Tyrphostin AG 490), prodigiozin 25-C (PNU156804), [4-(4'-hidroksifenil)-amino-6,7-dimetoksikinazolin] (WHI-P131), [4-(3'-bromo-4'-hidroksilfenil)-amino-6,7-dimetoksikinazolin] (WHI-P154), [4-(3',5'-dibromo-4'-hidroksilfenil)-amino-6,7-dimetoksikinazolin] WHI-P97, KRX-211, 3-{(3R,4R)-4-metil-3-[metil-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-amino]-piperidin-1-il}-3-oksopropionitril, u slobodnom obliku ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli, npr. mono-citrata (poznat i kao CP-690,550), ili jedinjenje publikovano u WO 04/052359 ili WO 05/066156; sa imunosupresivnim monoklonskim antitelima, npr. monoklonskim antitelima na leukocitne receptore, npr. MHC, CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD25, CD28, CD40, CD45, CD52, CD58, CD80, CD86 ili na njihove ligande; drugim imunomodulatornim jedinjenjima, npr. rekombinantni vezujući molekul koji poseduje barem deo ekstracelularnog CTLA4 ili njegov mutant, npr. barem ekstracelularni deo CTLA4 ili njegovog mutanta pridružen ne--CTLA4 proteinskoj sekvenci, npr. CTLA4Ig (npr. dizajnirani ATCC 68629) ili njegov mutant, npr. LEA29Y; sa inhibitorima adhezionih molekula, npr. antagonistima LFA-1, ICAM-1 ili -3, antagonistima VCAM-4 ili VLA-4; ili antihistaminicima; ili antitusticima, ili sredstvom za bronhodilataciju; ili sa blokerima angiotenzinskog receptora; ili sa antiinfektivnim sredstvom.
[0138] U slučajevima kad se jedinjenja formule I primenjuju u sprezi sa drugim imunosupresivnim/imunomodulatornim, protivupalnim, hemo- i antiinfektivnim terapijama, doziranje u isto vreme primenjenog imunosupresivnog, imunomodulatornog, protivupalnog, hemoterapijskog i antiifektivnog jedinjenja će naravno varirati u zavisnosti od vrste primenjenog drugog leka (ko-leka), npr. da li se radi o steroidu ili o inhibitoru kalcineurina, od konkretnog primenjenog leka, od stanja koje se tretira itd.
[0139] Jedinjenje formule (I) može se takodje u cilju pozitivnog efekta primeniti u kombinaciji sa drugim jedinjenjima iste formule, kao i sa drugim terapijskim sredstvima, posebno ostalim antiproliferativnim sredstvima.Ovakva antiproliferativna sredstva uključuju, ali se ne ograničavaju na, inhibitore aromataze; antiestrogene; inhibitore topoizomeraze I; inhibitore topoizomeraze II; sredstva koja deluju na mikrotubule; alkilujuća sredstva; inhibitore histonske deacetilaze; jedinjenja koja indukuju procese ćelijske diferencijacije; inhibitore ciklooksigenaze; inhibitore MMP; inhibitore mTOR; antineoplastičke antimetabolite; jedinjenja platine; jedinjenja koja deluju/smanjuju dejstvo proteinske ili lipidne kinase kao i dalja antiangiogenska jedinjenja; jedinjenja koja ciljaju, snižavaju ili inhibiraju dejstvo proteinske ili lipidne fosfataze; agoniste gonadorelina; antiirogene; inhibitore metioninske aminopeptidaze; bisfosfonate; modifikatore biološkog odgovora; antiproliferativna antitela; inhibitore heparanaze; inhibitore Ras onkogenih izoformi; inhibitore telomeraze; inhibitore proteazoma; sredstva koja se koriste u tretmanu hematoloških maligniteta; jedinjenja koja ciljaju, snižavaju ili inhibiraju aktivnost Flt-3; inhibitore Hsp90; temozolomid (TEMODAL<®>); i leukovorin.
Pojam “inhibitor aromataza” kako je ovde korišćen odnosi se na jedinjenje koje inhibira produkciju estrogena, tj. konverziju supstrata androstenediona u estron i testosterona u estradiol. Pojam uključuje, ali nije ograničen na steroide, naročito atamestan, eksemestan i formestan i, naročito ne-steroide, naročito aminoglutetimid, rogletimid, piridoglutetimid, trilostan, testolakton, ketokonazol, vorozol, fadrozol, anastrozol i letrozol. Eksemestan može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom AROMASIN. Formestan može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom LENTARON. Fadrozol može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom AFEMA. Anastrozol može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ARIMIDEX. Letrozol može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FEMARA ili FEMAR. Aminoglutetimid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ORIMETEN. Kombinacija pronalaska koja obuhvata hemoterapeutsko sredstvo koje je inhibitor aromataza je naročito korisna za lečenje tumora koji ispoljavaju receptore hormona (hormon receptor pozitivni tumori), npr. tumori dojke.
U ovom tekstu, izraz “antiestrogen” odnosi se na jedinjenje koje antagonizuje (neutrališe) delovanje estrogena na nivou receptora za estrogen. Pojam uključuje, ali nije ograničen na tamoksifen, fulvestran, raloksifen i raloksifen hidrohlorid. Tamoksifen može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom NOLVADEX. Raloksifen hidrohlorid može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom EVISTA. Fulvestran može biti formulisan kao što je opisano u američkom patent br. US 4,659,516 ili može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FASLODEX. Kombinacija pronalaska koja obuhvata hemoterapeutsko sredstvo koje je antiestrogen je naročito korisna za lečenje tumora koji ispoljavaju receptore za estrogen (estrogen receptor pozitivni tumori) npr. tumori dojke.
U ovom tekstu, pojam “anti-androgen” odnosi se na bilo koju supstancu koja je sposobna da inhibira biološko delovanje androgenih hormona i uključuje, ali nije ograničen na, bikalutamid (CASODEX), koji može biti formulisan, npr. kako je opisano u američkoj patentnoj prijavi br. US 4,636,505. Pojam “agonista gonadorelina” kako je ovde korišćen uključuje, ali nije ograničen na abareliks, goserelin i goserelin acetat. Goserelin je opisan u američkoj patentnoj prijavi br. 4,100,274 i može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ZOLADEX. Abareliks može biti formulisan, npr. kao što je opisano u američkoj patentnoj prijavi br.5,843,901.
Termin "inhibitor topoizomeraze I", onako kako se ovde koristi, uključuje ali se ne ograničava na, topotekan, gimatekan, irinotekan, kamptotekan i njegove analoge, 9-nitrokamptotecin i makromolekularni kamptotecin konjugat PNU-166148 (jedinjenje A1 u objavljenoj prijavi WO 99/17804). Irinotekan se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom CAMPTOSAR. Topotekan se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom HYCAMTIN.
U ovom tekstu, izraz "inhibitor topoisomeraze II", uključuje ali se ne ograničava na, antracikline, kao što je doksorubicin, uključujući lipozomsku formulaciju npr. CAELYX; daunorubicin; epirubicin; idarubicin; nemorubicin; anthrahinone mitoksantron i lozoksantron; kao i podofilotoksine etopozid i tenipozid. Etopozid se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ETOPOPHOS. Tenipozid se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom VM 26-BRISTOL. Doksorubicin se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ADRIBLASTIN ili ADRIAMYCIN. Epirubicin se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FARMORUBICIN. Idarubicin se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ZAVEDOS.
Mitoksantron se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom NOVANTRON.
Termin "sredstvo koje deluje na mikrotubule” odnosi se na sredstva za stabilizaciju i za destabilizaciju mikrotubula, kao i na inhibitore polimerizacije mikrotubula uključujući, ali se ne ograničavajući na, taksane, npr. paklitaksel i docetaksel; vinka alkaloide, npr. vinblastin, posebno vinblastin sulfat; vinkristin, posebno vinkristin sulfat i vinorelbin; diskodermolide; cohicin; i epotilone i njihove derivate npr. epotilon B ili D ili njihove derivate. Paklitaksel se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom TAXOL. Docetaksel se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom TAXOTERE. Vinblastin sulfat se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom VINBLASTIN R.P. Vinkristin sulfat se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FARMISTIN. Diskodermolid se može dobiti npr. na način opisan u U.S. patentu br.5,010,099. Obuhvaćeni su takodje derivati epotilona opisani u objavljenoj prijavi WO 98/10121, U.S. patentima br. 6,194,181, WO 98/25929, WO 98/08849, WO 99/43653, WO 98/22461 i WO 00/31247. Posebno poželjni su epotilon A i/ili B.
U ovom tekstu, izraz "alkilujuće sredstvo", uključuje ali se ne ograničava na ciklofosfamide, ifosfamide, melfalan ili nitrozoureu (BCNU ili Gliadel). Ciklofosfamid se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom CYCLOSTIN. Ifosfamid se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom HOLOXAN.
Termin "inhibitori histonske deacetilaze" ili "HDAC inhibitori" odnosi se na jedinjenja koja inhibiraju histonsku deacetilazu i koja poseduju antiproliferativno dejstvo. Ovo uključuje jedinjenja opisana u objavljenoj prijavi WO 02/22577, posebno N-hidroksi-3-[4-[[(2-hidroksietil)[2-(1H-indol-3-il)etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamid, N-hidroksi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamid i njihove farmaceutski prihvatljive soli. Ovo nadalje uključuje suberoilanilid-hidroksamsku kiselinu (SAHA).
Termin "antineoplastični antimetabolit" uključuje, ali se ne ograničava na, 5-fluorouracil ili 5-FU; kapecitabin; gemcitabin; DNK-demetilujuća sredstva, kao što su 5-azacitidin i decitabin; metotreksat i edatreksat; kao i na antagoniste folne kiseline, kao što je permetreksed. Kapecitabin se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom XELODA. Gemcitabin se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom GEMZAR. Takoše obuhvaćeno je monoklonsko antitelo trastuzumab koje se može primeniti npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom HERCEPTIN.
U ovom tekstu, izraz “jedinjenje platine” uključuje, ali nije ograničen na, karboplatin, cis-platin, cisplatin i oksaliplatin. Karboplatin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom CARBOPLAT. Oksaliplatin može biti primenjen u obliku u kome se nalazi na tržištu, npr., pod zaštićenim imenom ELOXATIN.
Izraz "jedinjenja koja targetuju/snižavaju aktivnost proteinske ili lipidne kinaze; ili aktivnost proteinske ili lipidne fosfataze; ili daljih jedinjenja koja imaju anti-angiogenetsko dejstvo”, onako kako se ovde koristi, uključuje ali se ne ograničava na, inhibitore protein tirozin kinaze i/ili inhibitore serinske i/ili treoninske kinase ili pak inhibitore lipidne kinaze, npr
a) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora za faktor rasta iz krvnih pločica (PDGFR), kao što su jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju PDGFR, posebno jedinjenja koja inhibiraju PDGF receptor, npr. derivat N-fenil-2-pirimidin-amina, npr. imatinib, SU101, SU6668 i GFB-111;
b) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora za faktor rasta fibroblasta (FGFR);
c) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju receptora za faktor rasta sličnih insulinu I (IGF-IR), kao što su jedinjenja koja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora za IGF-IR, posebno jedinjenja koja inhibiraju IGF-IR receptor, kao što su jedinjenja opisana u objavljenoj prijavi WO 02/092599;
d) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije tirozinskih kinaza -receptora za Trk;
e) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije tirozin kinaznih receptora za Axl;
f) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost c-Met receptora;
g) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinazne familije receptora za Kit/SCFR;
h) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinaznih receptora za C-kit (deo PDGFR familije), kao što su jedinjenja koja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinazne familije receptora za c-Kit, posebno jedinjenja koja inhibiraju c-Kit receptor, npr. imatinib;
i) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova c-Abl familije i proizvoda njihove genske fuzije, npr. BCR-Abl kinazu, kao što su jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova c-AbI familije i proizvoda njihove genske fuzije, npr.derivat N-fenil-2-pirimidin-amina npr. imatinib, PD180970, AG957, NSC 680410 ili PD173955 od kompanije ParkeDavis;
j) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova familija proteinske kinaze C (PKC) i Raf familije serinskih/treoninskih kinaza, članovi MEK, SRC, JAK, FAK, PDK i Ras/MAPK familija, ili PI(3) familije kinaza, ili familije kinaza povezanih sa PI(3)-kinazom i/ili članova familije ciklin-zavisnih kinaza (CDK) i predstavljaju posebno one derivate staurosporina opisane u U.S. patentu br.5,093,330, npr. midostaurin; primeri daljih jedinjenja uključuju npr. UCN-01; safingol; BAY 43-9006; Briostatin 1; Perifozin; Ilmofozin; RO 318220 i RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; izohinolinska jedinjenja, kao što su ona opisana u WO 00/09495; više FTI; PD184352; ili QAN697 (inhibitor P13K);
k) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora protein-tirozin kinaze, kao što su jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora protein-tirozin kinaze i koja uključuju imatinib mezilat (GLEEVEC) ili tirfostin. Tirfostin je poželjno jedinjenje niske molekulske težine (Mr < 1500), ili pak njegova farmaceutski prihvatljiva so, posebno jedinjenje izabrano iz klase benzilidenmalonitrila ili S-arilbenzenmalonitrila ili bisupstrata hinolinske klase jedinjenja, posebno bilo koje jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od Tirfostina A23/RG-50810, AG 99, Tirfostina AG 213, Tirfostina AG 1748, Tirfostina AG 490, Tirfostina B44, Tirfostina B44 (+) enantiomera, Tirfostina AG 555, AG 494, Tirfostina AG 556, AG957 i adafostina adamantil estra (4-{[(2,5-dihidroksifenil)metil]amino}-benzoeve kiseline, NSC 680410, adafostina; i
l) jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije tirozin kinaznih receptora za epidermalni faktor rasta (EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4 kao homo- ili hetero-dimeri), kao što su jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije receptora za epidermalni faktor rasta a posebno jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju članove EGF receptorne familije tirozinskih kinaza, npr. EGF receptor, ErbB2, ErbB3 i ErbB4 ili se vezuju za EGF ili za ligande povezane sa EGF, a posebno ona jedinjenja, protein ili monoklonska antitela generički i konkretno opisana u objavljenoj prijavi WO 97/02266, npr. jedinjenje iz Primera 39, ili u EP 0564409; WO 99/03854; EP 0520722; EP 0566226; EP 0787722; EP 0837063; U.S. patentu br.5,747,498; WO 98/10767; WO 97/30034; WO 97/49688; WO 97/38983 i, posebno, WO 96/30347, npr. jedinjenje poznato kao CP 358774; WO 96/33980, npr. jedinjenje ZD 1839; i WO 95/03283, npr. jedinjenje ZM105180, npr. trastuzumab (HERCEPTIN), cetuksimab, Iressa, Tarceva, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 ili E7.6.3; i derivati 7H-pirolo-[2,3-d]pirimidina opisani u WO 03/013541.
Dalja anti-angiogenetska jedinjenja uključuju jedinjenja sa drugim mehanizmom aktivnosti, npr. nepovezanih sa inhibicijom proteinske ili lipidne kinase, npr. talidomid (THALOMID) i TNP-470. Jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteinske ili lipidne fosfataze su npr. inhibitori fosfataze 1, fosfataze 2A, PTEN ili CDC25, npr. okadaična kiselina ili njen derivat. Jedinjenja koja indukuju procese ćelijske diferencijacije su npr. retinoična kiselina, α- γ- ili δ-tokoferol ili α- γ- ili δ-tokotrienol.
U ovom tekstu, izraz inhibitor ciklooksigenaze, uključuje, ali se ne ograničava na, npr. Cox-2 inhibitore, 5-alkil supstituisanu 2-arilaminofenilsirćetnu kiselinu i derivate, kao što su celekoksib (CELEBREX), rofekoksib (VIOXX), etorikoksib, valdekoksib ili 5-alkil-2-arilaminofenilsirćetna kiselina, npr.5-metil-2-(2'-hloro-6'-fluoroanilino)fenil sirćetna kiselina ili lumirakoksib.
Termin "bisfosfonati", onako kako se ovde koristi, uključuje, ali se ne ograničava na, etridonsku, klodronsku, tiludronsku, pamidronsku, alendronsku, ibironsku, risedronsku i zoledronsku kiselinu. "Etridonska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom DIDRONEL. "Clodronska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom BONEFOS. "Tiludronska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom SKELID. "Pamidronska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom AREDIA™. "Alendronska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom FOSAMAX. "Ibironska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom BONDRANAT. "Risedronska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ACTONEL. "Zoledronska kiselina" može se primeniti, npr. u obliku u kojem se nalazi na tržištu, npr. pod zaštićenim imenom ZOMETA.
Termin "inhibitori mTOR " odnosi se na jedinjenja koja inhibiraju sisarsku metu rapamicina (mTOR) i koja poseduju antiproliferativni efekat, kao što su sirolimus (Rapamune<®>), everolimus (Certican™), CCI-779 i ABT578.
U ovom tekstu, izraz "inhibitor heparanaze", odnosi se na jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju degradaciju heparin sulfata. Termin uključuje, ali se ne ograničava na, PI-88.
Termin "modifikator biološkog odgovora ", onako kako se ovde koristi, odnosi se na limfokine ili interferone, npr. na interferon γ.
Termin "inhibitor Ras onkogenih izoformi", npr. H-Ras, K-Ras ili N-Ras, onako kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju onkogenu aktivnost Ras, npr. " inhibitor farnezil transferaze ", npr. L-744832, DK8G557 ili R115777 (Zarnestra).
Termin " inhibitor telomeraze ", onako kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost telomeraze. Jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost telomeraze su posebno jedinjenja koja inhibiraju receptor za telomerazu, npr. telomestatin.
Termin "inhibitor metionin-aminopeptidaze", onako kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost metionin-aminopeptidaze. Jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost metionin-aminopeptidaze su npr. bengamid ili njegov derivat.
Termin " inhibitor proteazoma", onako kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteazoma. Jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteazoma uključuju npr. PS-341 i MLN 341.
Termin " inhibitor matriks metaloproteinaze" ili " inhibitor MMP", onako kako se ovde koristi, uključuje, ali se ne ograničava na, kolagenske peptidomimetičke i nepeptidomimetičke inhibitore, derivate tetraciklina, npr. hidroksamatne peptidomimetičke inhibitore batimastat i njegove oralno biodostupne analoge marimastat (BB-2516), prinomastat (AG3340), metastat (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211, MMI270B ili AAJ996.
Termin "sredstva koja se koriste u tretmanu hematoloških maligniteta ", onako kako se ovde koristi, uključuje, ali se ne ograničava na, FMS-u slične inhibitore tirozin kinaze, npr. jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinaznih receptora sličnih FMS-u (Flt-3R); interferon, 1-b-D-arabinofuransilcitozin (ara-c) i bisulfan; kao i inhibitore ALK, npr. jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju kinazu anaplastičnog limfoma.
[0140] Jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinaznih receptora sličnih FMS-u (Flt-3R) su posebno jedinjenja, protein ili antitela koja inhibiraju članove familije Flt-3R kinaznih receptora, npr. PKC412, midostaurin, derivat staurosporina, SU11248 i MLN518.
Termin "inhibitori HSP90 ", onako kako se ovde koristi, uključuje, ali se ne ograničava na, jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju inherentnu ATPaznu aktivnost HSP90; razgradjujući, targetujući, smanjujući ili inhibirajući klijent-proteine HSP90 putem ubikvitinskog proteazomskog puta. Jedinjenja koja targetuju, smanjuju ili inhibiraju inherentnu ATPaznu aktivnost HSP90 su posebno jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju ATPaznu aktivnost HSP90, npr. 17-alilamino,17-demetoksigeldanamicin (17AAG), derivate geldanamicina, druga jedinjenja povezana sa geldanamicinom, radikikol i inhibitori HDAC.
U ovom tekstu, izraz "antiproliferativna antitela", uključuje, ali se ne ograničava na, trastuzumab (Herceptin™), Trastuzumab-DM1, erlotinib (Tarceva™), bevacizumab (Avastin™), rituximab (Rituxan<®>), PRO64553 (anti-CD40) i antitelo 2C4. Pod antitelima se podrazumevaju npr. intaktna monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifična antitela nastala iz barem dva intaktna antitela, kao i fragmenti antitela ukoliko ispoljavaju željenu biološku aktivnost.
Za tretman akutne mijeloidne leukemije (AML), jedinjenja formule (I) mogu se koristiti u kombinaciji sa standardnim terapijama za leukemiju, posebno u kombinaciji sa terpaijama koje se koriste u tretmanu AML. Konkretno, jedinjenja formule (I) mogu se primenjivati u kombinaciji sa npr. inhibitorima farnezil-transferaze i/ili drugim lekovima korisnim u tretmanu AML, kao što su Daunorubicin, Adriamicin, Ara-C, VP-16, Tenipozid, Mitoksantron, Idarubicin, Carboplatinum i PKC412.
[0141] Jedinjenja formule (I) takodje se mogu koristit u kombinaciji sa drugim ili u kombinaciju sa ostalim terapijskim agensima, naročito ostalim anti-malaricima. Takvi anti-malarici obuhvataju proguanil, hlorproguanil, trimetoprim, hlorokvin, meflokin, lumefantrin, atovakuon, pirimetamin-sulfadoksin, pirimetamin-dapson, halofantrin, hinin, hinidin, amodiakvin, amopirohin, sulfonamidi, artemisinin, arteflen, artemeter, artesunat, primahin, inhalaciju NO, L-arginin, Dipropilenetri-amin NONOat (NO donor), Rosiglitzon (PPARγ agonist), aktivni ugalj, Eritropoetin, Levamisol, i pironaridin.
[0142] Jedinjenja formule (I) mogu takodje da se koriste u kombinaciji jedno sa drugim ili u kombinaciji sa ostalim terapijskim agensima, kao što se koristi za tretman Leishmanioze, Tripanosomiaze, Toksoplasmoze i Neurocisticerkoze. Takva sredstva obuhvataju hlorokvin sulfat, atovaquon-proguanil, artemeter-lumefantrin, hinin-sulfat, artesunat, hinin, doksiciklin, clindamicin, meglumin antimoniat, natrijum stiboglukonat, miltefozin, ketoconazol, pentamidin, amfotericin B (AmB), liposomal-AmB, paromomicin, eflornitin, nifurtimoks, suramin, melarsoprol, prednisolon, benznidazol, sulfadiazin, pirimetamin, clindamicin, trimetropim, sulfametoksazol, azitromicin, atovakon, deksametazon, prazikvantel, albendazol, beta-laktami, fluorohinoloni, makrolidi, aminoglikozidi, sulfadiazin i pirimetamin.
[0143] Struktura aktivnih sastojaka identifikovana pomoću kodnih brojeva, generičkih ili trgovačkih marki može se pronaći u aktuelnom izdanju stiardnog kompendijuma " Merck-ov Indeks" ili u bazama podataka npr.kod Patents International, npr.u IMS World Publications. Gore pomenuta jedinjenja, koja se mogu koristit u kombinaciji sa jedinjenjem formule (I), mogu se pripremiti i primeniti na način opisan u stručnoj dokumentaciji, npr. u dokumentima citiranim u prethodnom tekstu.
Jedinjenje formule (I) može se takodje koristiti u pozitivnom smeru u kombinaciji sa poznatim terapijskim metodama, npr. sa primenom hormona ili posebno zračenja.
Jedinjenje formule (I) može se konkretno koristiti kao za podizanje osetljivosti na terapiju zračenjem (“radiosensitizer”), posebno u tretmanu tumora koji pokazuju slabu osetljivost na radioterapiju.
Pod "kombinacijom” se podrazumeva bilo fiksna kombinacija u zajedničkom doznom obliku ili pak komplet iz delova za kombinovanu primenu gde se jedinjenje formule (I) i kombinacioni partner mogu primeniti nezavisno a u isto vreme ili odvojeno u okviru odredjenih vremenskih intervala koji konkretno omogućavaju da partneri iz kombinacije iskažu kooperativni, tj. sinergijski efekat ili bilo koju njegovu kombinaciju. Termini “koadministracija” ili “kombinovana primena” ili slični onako kako se ovde koriste, uključuju primenu izabranih kombinacionih partnera kod pojedinačnih ispitanika koji imaju potrebu za tim (npr. pacijent), i podrazumevaju uključivanje i onih režima tretmana kod kojih sredstva ne moraju da imaju isti način primene ili se ne primenjuju u isto vreme.
Termin “farmaceutska kombinacija” onako kako se ovde koristi podrazumeva proizvod mešanja ili kombinovanja više od jednog aktivnog sastojka i uključuje kako fiksne tako i nefiksne kombinacije aktivnih sastojaka. Termin “fiksna kombinacija” znači da se aktivni sastojci, npr. jedinjenje formule I i kombinacioni partner oba istovremeno daju pacijentu u obliku jedinstvene doze. Termin “ne-fiksna kombinacija” označava da se aktivni sastojci, npr. jedinjenje formule (I) i kombinacioni partner, primenjuju odvojeno, bilo istovremeno, paralelno ili jedno nakon drugog bez konkretnih vremenskih ograničenja, i gde ovakva primena obezbedjuje terapijski efikasan nivo oba jedinjenja u telu pacijenta. Poslednje se takodje odnosi na tzv. koktel terapiju, tj.na primenu tri ili više aktivnih sastojaka.
Primeri
Eksperimentalni detalji:
[0144] Sledeći primeri imaju za cilj da ilustruju pronalazak i ne treba ih tumačiti kao ograničenje istog. Temperature su date u stepenima Celzijusa. Ako nije drugačije naglašeno, sva isparavanja su izvodjena pod sniženim pritiskom, poželjno izmedju oko 15 mm Hg i 100 mm Hg (= 20-133 mbar). Struktura finalnih proizvoda, intermedijera i polaznih materijala je potvrdjena standardnim analitičkim metodama, npr., mikroanalizom i spektroskopskim karakteristikama, npr., MS, IR, NMR. Skraćenice koje su ovde korišćene su uobičajene u stanju tehnike.
[0145] Svi polazni materijali, gradivni blokovi, reagensi, kiseline, baze, dehidrataciona sredstva, rastvarači i katalizatori korišćeni za sintezu jedinjenja iz datog pronalaska su ili komercijalno dostupni ili se mogu dobiti metodama organske sinteze koji su poznati stručnjacima (Houben-Weil 4<th>Ed. 1952, Metode organske sinteze, Thieme, Volumen 21). Dalje, jedinjenja iz ovog pronalska mogu da se dobiju postupcima organske sinteze koji su poznati stručnjacima kao što je prikazano u sledećim primerima.
Skraćenice
[0146]
ACN acetonitril
AcOH sirćetna kiselina
aq. vodeni
Boc terc-butoksikarbonil
Boc2O di-terc-butil dikarbonat
tBu terc-butil
tBuOH tert-butanol
BrettPhos 2-(Dicikloheksilfosfino)-3,6-dimetoksi-2'-4'-6'-triizopropil-1,1'-bifenil br s širok singlet
COMU (1-cijano-2-etoksi-2-oksoetilidenaminooksi)dimetilamino-morfolinokarbenijum heksafluorofosfat
conc. koncentrovani
d dan(i)
d dublet
dd dublet dubleta
dba dibenzilidenaceton
DCM dihlorometan
DEA dietilamin
DEAD dietil azodikarboksilat
DEAP dietilaminopiridin
DIPEA diizopropiletilamin
DMF dimetilformamid
DMME dimetoksimetan
DMSO dimetilsulfoksid
DPPA difenilfosforil azid
DPPF 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen
EDC 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid
eq. ekvivalent(i)
ESI jonizacija elektrosprejom
Et3N trietilamin
Et2O dietiletar
EtOAc etil acetat
EtOH etanol
h čas(ovi)
HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N′,N′-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HBTU O-(1H-benzotriazol-1-yl)-N,N,N’,N’-tetrametiluronijum heksafluorofosfat HMDS heksametildisilazan
HOBT 1-hidroksi-benztriazol
HPLC tečna hromatografija pod visokim pritiskom
IPA izopropanol
LCMS tečna hromatografija sa masenom spektrometrijom
mCPBA meta-hloroperoksibenzoeva kiselina
MeOH metanol
m multiplet
min minut(i)
MS masena spektrometrija
mw mikrotalasni
NMR nuklearna magnetna rezonanca spektrometrija
NaOtBu natrijum terc-butoksid
NP normalna faza
OBD optimalna gustina podloge
Pd2(dba)3tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum
PL-HCO3MP SPE bikarbonatni kartridž za uklanjanje kiseline podržan polimerom prep. preparativna
PPh3trifenilfosfin
q kvartet
Rac-BINAP racemski 2,2′-bis(di-p-tolilfosfino)-1,1′-binaftil
RP reverzna faza
Rt retenciono vreme
rt sobna temperatura
RuPhos 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-di-izopropoksi-1,1'-bifenil
sat. zasićeni
SCX-2 makroporozni polistiren sulfonske kiseline podržan polimerom soln. rastvor
t triplet
TBME terc-butil metil etar
TBAF tetrabutilamonijum fluorid
TBDMSCl terc-butildimetilsililhlorid
Tetrametil-t-butil
-XPhos 2-di-t-butilfosfino-3,4,5,6-tetrametil-2’,4’,6’-triizopropilbifenil TFA trifluorosirćetna kiselina
THF tetrahidrofuran
TLC tankoslojna hromatografija
UPLC tečna hromatografija izuzetno visokih performansi
XPhos 2-dicikloheksilfosfino-2’,4’,6’-triizopropilbifenil
Pd[RuPhos] (2-dicikloheksilfosfino-2' 6'-diizopropil-11'-bifenil)(2-(2-aminoetil)fenil)paladijum(II)
[0147] Korišćena oprema za mikrotalasno zračenje je Biotage Initiator Biotage Initiator<®>
[0148] Svim jedinjenjima su imena dodeljena pomoću AutoNom.
Preparativno dobijanje primera– opšti postupci
Shema 1
a) (R)-Pirolidin-3-ol i kiselinski hlorid formule R<4>C(O)Cl ili karboksilna kiselina formule R<4>C(O)OH su reagovali da bi se dobio amid opšte formule II. Stručnjacima u ovoj oblasti je poznato da postoje mnogi poznati načini za dobijanje amida. Na primer, videti kod Mantalbetti, C.A.G.N i Falque, V., Formiranje amidne veze i peptidno kuplovanje, Tetrahedron, 2005, 61(46), pp10827-10852, kao i u ovom delu citirane reference. Korišćeni su sledeći opšti postupci i – ii.
i. Rastvor karboksilne kiseline i DMF (1 ekviv.) u DCM se obradjuju sa oksalil hloridom (1.5 ekv.) tokom 1 h na temperaturi od 3°C. Reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku, rastvara u DCM-u i dodaje u rastvor (R)-pirolidin-3-ol hidrohlorida (1.0 ekv.) i Et3N (2.5 ekv.) u DCM-u na temperaturi od 3°C. Rezultujuća smeša se snažno meša na temperature od 3°C tokom 1h, zatim se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se obradjuje sa EtOAc i filtrira. Ostatak se ispire sa EtOAc, i kombinovani filtrati se koncentruju na sniženom pritisku i prečišćavaju fleš hromatografijom.
ii. Rastvor komercijalnog kiselinskog hlorida (1.0 ekv.) u DCM se dodaje u rastvor (R)-pirolidin-3-ol hidrohlorida (1.0 ekv.) i Et3N (2.5 ekv.) u DCM-u na temperaturi od 3°C. Rezultujuća smeša se snažno meša na temperaturi od 3°C u vremenu od 1 h, zatim se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se obradjuje sa EtOAc i filtrira. Ostatak se ispire sa EtOAc, i kombinovani filtrati se koncentruju na sniženom pritisku i prečišćavaju fleš hromatografijom. U odeljku B) koji se odnosi na formiranje amidnih veza prikazani su tipični uslovi za reakcije formiranja amidnih veza. b) Mezilati jedinjenja opšte formule II dobijaju seprema uobičajenim uslovima, najbolje reakcijom II sa metan sulfonil hloridom (2 ekv.) i Et3N (2 ekv.) u DCM-u na temperaturi od 0°C.
c) Jedinjenja opšte formule V se dobijaju reakcijom 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol IV sa jedinjenjima opšte formule III u prisustvu odgovarajuće baze kao što je natrijum hidrid (NaH) i polarnog organskog rastvarača kao što je DMF u atmosferi inertnog gasa na temperaturi od 50°C. Tipični uslovi za takve reakcije prikazani su niže u odeljku C) koji se odnosi na uslove uvodjenja bočnog lanca.
d) Buhvald-Hartwig ukršteno kuplovanje izmedju V i aril halogenida opšte formule R<2>-X’ gde X’= bromo ili jodo vrši se prema uobičajenim uslovima Buhwald-Hartvig reakcije uz upotrebu kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/2-(dicikloheksilfosfino)bifenil ili Pd2(dba)3/2-dicikloheksilfosfino-2′,4′,6′-triizopropil-bifenil ili bis(tri-t-butilfosfin)paladijum, i baze, kao što jê poželjno NaOtBu i organskog rastvarača kao što je toluen. Reakcija se poželjno meša na temperaturi od približno 80-120°C, najbolje 110°C i može se izvesti u reaktoru za mikrotalasno zračenje. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Tipični uslovi za Buhwald-Hartvigove reakcije ukrštenog kuplovanja prikazane su niže u odeljku A) kao Buhwaldove aminacije ili hidroksilacije.
Shema 2
X
VI
a) (S)-terc-butil 3-((3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-karboksilat (jedinjenje VIII) se dobija reakcijom 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol IV sa jedinjenjem opšte formule VII pomoću jednog od sledećih postupaka 1) za X= mezilat, jedinjenja IV i VII koja reaguju u prisustvu odgovarajuće baze kao što je natrijum hidrid (NaH) i polarnog organskog rastvarača DMF u uslovima inertnog gasa na sobnoj temperaturi ii) za X = H, jedinjenja opšte formule IV i VII reaguju koristeći uobičajene uslove za reakcju po Mitsunobu, najbolje korišćenjem Ph3P (1.4 ekv.) i DEAD (1.4 ekv.) u organskom rastvaraču kao što je THF u atmosferi inertnog gasa na poželjnoj temperaturi od 70°C. Tipični uslovi za takve reakcije prikazani su u odeljku koji se dalje u tekstu odnosi na C) uslove uvodjenja bočnog lanca.
b) Buhvald-Hartvigovo ukršteno kuplovanje izmedju VIII i aril halogenida opšte formule R<2>-X’ gde X’= bromo ili jodo vrši se prema uobičajenim uslovima Buhwald-Hartwig-ove reakcije uz upotrebu kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/(rac)-BINAP, Pd(OAc)2/(rac)-BINAP ili bis(tri-t-butilfosfin)paladijum, i baze, kao što je poželjno NaOtBu, Cs2CO3ili K3PO4i organskog rastvarača kao što je po mogućstvu toluene, dioksan ili THF. Reakcija se poželjno meša na temperaturi od približno 60-120°C, i može se izvesti u reaktoru za mikrotalasno zračenje. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Tipični uslovi za Buhwald-Hartwigove reakcije ukrštenog kuplovanja prikazane su niže u odeljku A) koji se odnosi na Buhvaldove aminacije ili hidroksilacije.
c) Skidanje (deprotekcija) N-BOC zaštitne grupe jedinjenja opšte formule IX izvodi se pod uslovima uobičajenim za BOC deprotekciju, uz upotrebu poželjno trifluorosirćetne kiseline i organskog rastvarača najbolje DCM. Poželjno je da se reakcija izvodi na sobnoj temperaturi. d) Jedinjenje opšte formule X i kiselinski hlorid formule R<4>C(O)Cl ili karboksilna kiselina formule R<4>C(O)OH reaguju da bi se dobio amid opšte formule VI korišćenjem uobičajenih uslova za reakciju amidnog kuplovanja (sprezanja): pored postupaka opisanih u Shemi 1, faza a) poželjni reagensi za kuplovanje su HBTU, HOBt/EDC, COMU/DIPEA. Reakcije kuplovanja se vrše u organskom rastvaraču kao što je po mogućstvu DMF ili DCM i finalna jedinjenja se prečišćavaju hromatografijom normalne ili reverzne faze. Tipični uslovi za reakcije formiranja amidne veze ilustrovani su niže u odeljku B) koji se odnosi na uslove za formiranje Amidne veze.
Shema 3
a) 3,4-Dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol IV je zaštićena na O korišćenjem standardnih postupaka za sililaciju, korišćenjem reagensa za sililaciju, najbolje TBDMSCl i baze, po mogućstvu NaH, u organskom rastvaraču, po mogućstvu THF na sobnoj temperaturi.
b) Buhwald-Hartwig reakcija ukrštenog kuplovanja izmedju XI i aril halogenida opšte formule R<2>-X’ gde X’=bromo ili iodo vrši seu uslovima uobičajenih za Buhwald-Hartwigovu reakciju uz upotrebu kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/X-Phos, Pd2(dba)3/dicikloheksilfosfino-2′,4′,6′-triizopropilbifenila ili bis(tri-t-butilfosfin)-paladijuma i baze, kao što je poželjno NaOtBuand i organskog rastvarača kao što je po mogućstvu toluen. Reakcija se poželjno meša na temperaturi od približno 110-140°C i može se izvesti u reaktoru za mikrotalasno zračenje. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Tipični uslovi za Buhwald-Hartwigove reakcije ukrštenog kuplovanja prikazane su u odeljku A) Buhwaldove aminacije ili hidroksilacije koji je prikazan niže.
c) O-TBDMS deprotekcija jedinjenja opšte formule XII izvršena je prema uobičajenim uslovima za deprotekciju korišćenjem po mogućstvu TBAF i organskog rastvarača, najbolje THF. Reakcija se poželjno izvodi na sobnoj temperaturi
d) Jedinjenje opšte formule XIII su kuplovana sa mezilatima opšte formule III korišćenjem odgovarajuće baze kao što je po mogućstvu natrijum hidrid (NaH) ili K2CO3i polarnog organskog rastvarača kao što je DMF u atmosferi inertnog gasa na sobnoj temperaturi ili na povišenim temperatura do 100°C. Finalna jedinjenja se prečišćavaju hromatografijom normalne ili reverzne faze. Tipični uslovi za takve reakcije prikazani su niže u odeljku C) koji se odnosi na uslove uvodjenja bočnog lanca.
Shema 4
X VVI
a) Jedinjenja opšte formule XIII (dobijena kako je opisano u Shemi 3) reaguju sa jedinjenjima opšte formule pomoću jednog od sledećih postupaka 1) za X= mezilat, jedinjenja XIII i VII koja reaguju u prisustvu odgovarajuće baze kao što je natrijum hidrid (NaH) i polarnog organskog rastvarača DMF u uslovima inertnog gasa na sobnoj temperaturi ii) za X = H, jedinjenja opšte formule XIII i VII koja reaguju korišćenjem uobičajenih uslova za reakcju po Mitsunobu, najbolje korišćenjem Ph3P (1.4 ekv.) i DEAD (1.4 ekv.) u organskom rastvaraču kao što je THF u atmosferi inertnog gasa na poželjnoj temperaturi od 70°C. Tipični uslovi za takve reakcije prikazani su u odeljku koji se dalje u tekstu odnosi na C) uslove uvodjenja bočnog lanca.
b) Skidanje N-BOC zaštitne grupe se izvodi pod uslovima uobičajenim za BOC deprotekciju, uz poželjnu upotrebu trifluorosirćetne kiseline i organskog rastvarača, najbolje CH2Cl2. Poželjno je da se reakcija izvodi na sobnoj temperaturi.
c) Formiranje amidne veze se vrši korišćenjem jedinjenja opšte formule XV i kiselinskog hlorida formule R<4>C(O)Cl ili karboksilne kiseline formule R<4>C(O)OH za dobijanje amida opšte formule VI; korišćeni su uobičajeni uslovi za vezivanje amidnih veza, kao što je opisano u Shemi 1, faza a). Pored postupaka opisanih u Shemi 1, faza a), koristi se kuplovanje karboksilnih kiselina korišćenjem HOBt/EDC ili kuplovanje korišćenjem hloroformata ili hlorida karbaminske kiseline. Reakcije kuplovanja se vrše u organskom rastvaraču kao što je po mogućstvu DMF ili DCM i finalna jedinjenja se prečišćavaju hromatografijom normalne ili reverzne faze. Tipični uslovi za reakcije formiranja amidne veze dati su kasnije u odeljku B) Uslovi za formiranje amidne veze.
Shema 5
a) 7-hloro-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin XVII se dobija iz 7-hloro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-2-ona XVI uobičajenim postupcima redukcije, korišćenjem redukcionog sredstva najbolje BH3*THF i rastvarača najbolje THF-a. XVI dostupan je putem nitratnog protoka 2-hloro-5-(2-metoksi-2-oksoetoksi)piridin-1-oksida, što je praćeno redukcijom i ciklizacijom.
b) Ukršteno kuplovanje XVII i aril halogenid opšte formule R<2>-X’ gde X’= bromo ili jodo vrši se prema uobičajenim uslovima Buchwald-Hartwig reakcije uz upotrebu kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/X-Phos, i baza, kao što jê poželjno Cs2CO3i organskog rastvarača kao što je dioksan. Reakcija se poželjno meša na temperaturi od približno 100°C i može se izvesti u reaktoru za mikrotalasno zračenje. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Tipični uslovi za Buhvald-Hartvigove reakcije ukrštenog kuplovanja prikazane su u odeljku A) Buhvaldove aminacije ili hidroksilacije koji je prikazan niže.
c) Hidroksilacija XVIII se vrši korišćenjem aq. KOH i kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/tetrametil-terc-butil-Xphos i organskog rastvarača kao što je poželjno dioksan. Reakciona smeša se poželjno meša na temperaturi od približno 100°C. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon.
d) Kuplovanje jedinjenja opšte formule XIX sa jedinjenjem opšte formule VII vrši se korišćenjem odgovarajuće baze kao što je natrijum hidrid (NaH, Cs2CO3, K2CO3) i polarni organski rastvarač kao što je DMF u uslovima inertnog gasa na temperaturi koja je poželjno u intervalu od 60-80°C. Tipični uslovi za takve reakcije su prikazane dalje u tekstu u odeljku C) uslovi za uvodjenje bočnog lanca.
e) Skidanje N-BOC zaštitne grupe se izvodi pod uslovima uobičajenim za BOC deprotekciju, uz upotrebu poželjno trifluorosirćetne kiseline i organskog rastvarača najbolje CH2Cl2. Poželjno je da se reakcija izvodi na sobnoj temperaturi.
f) Formiranje amidne veze se vrši korišćenjem jedinjenja opšte formule XXI i kiselinskog hlorida formule R<4>C(O)Cl ili karboksilne kiseline formule R<4>C(O)OH da bi se dobio amid opšte formule XXII; korišćeni su uobičajeni uslovi za vezivanje amidnih veza, kao što je opisano u Shemi 1, faza a), pored kuplovanja karboksilnih kiselina primenjuje se HOBt/EDC. Reakcije kuplovanja se vrše u organskom rastvaraču kao što je po mogućstvu DMF ili DCM i finalna jedinjenja se prečišćavaju hromatografijom normalne ili reverzne faze. Tipični uslovi za reakcije formiranja amidne veze dati su kasnije u odeljku B) Uslovi za formiranje amidne veze.
Sheme 6
<XXI>XXII
a) Hidroksilacija 7-hloro-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazina XVII da bi se dobio 2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol XXIII vrši se korišćenjem aq. KOH i kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/tetrametil-terc-butil-Xphos i organskog rastvarača kao što je poželjno dioksan. Reakciona smeša se poželjno meša na temperaturi od približno 100°C. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon.
b) Kuplovanje jedinjenja opšte formule XXIII sa mezilatom VII vrši se korišćenjem odgovarajuće baze kao što je natrijum hidrid (NaH) i polarnog organskog rastvarača kao što je DMF u uslovima inertnog gasa na temperaturi od poželjno 80°C. Tipični uslovi za takve reakcije su prikazane dalje u tekstu u odeljku C) uslovi za uvodjenje bočnog lanca.
c) Ukršteno kuplovanje XXIV i aril halogenid opšte formule R<2>-X’ gde X’= bromo ili jodo vrši se prema uobičajenim uslovima Buhvald-Hartvigove reakcije uz upotrebu kombinacije Pd katalizatora/liganda kao što je poželjno Pd2(dba)3/X-Phos, ili Pd2(dba)3/(rac)-BINAP i baze, kao što jê poželjno Cs2CO3ili NaOtBuand i organskog rastvarača kao što je poželjno dioksan ili toluen. Reakcija se poželjno meša na temperaturi od približno 100°C i može se izvesti u reaktoru za mikrotalasno zračenje. Poželjno je da se reakcija izvodi u atmosferi inertnog gasa kao što je azot ili argon. Tipični uslovi za Buhvald-Hartvigove reakcije ukrštenog kuplovanja prikazane su u odeljku A) Buhvaldove aminacije ili hidroksilacije koji je prikazan niže.
d) Skidanje N-BOC zaštitne grupe se izvodi pod uslovima uobičajenim za BOC deprotekciju, uz upotrebu poželjno trifluorosirćetne kiseline i organskog rastvarača najbolje CH2Cl2. Poželjno je da se reakcija izvodi na sobnoj temperaturi.
e) Formiranje amidne veze se vrši korišćenjem jedinjenja opšte formule XXI i kiselinskog hlorida formule R<4>C(O)Cl ili karboksilne kiseline formule R<4>C(O)OH da bi se dobio amid opšte formule XXII; korišćeni su uobičajeni uslovi za vezivanje amidnih veza, kao što je opisano u Shemi 1, faza a), pored kuplovanja karboksilnih kiselina primenjuje se HBTU, HOBt/EDC ili HATU. Reakcije kuplovanja se vrše u organskom rastvaraču kao što je po mogućstvu DMF ili DCM i finalna jedinjenja se prečišćavaju hromatografijom normalne ili reverzne faze. Tipični uslovi za reakcije formiranja amidne veze dati su kasnije u odeljku B) Uslovi za formiranje amidne veze.
Opšte informacije o hromatografiji
[0149]
LCMS postupak M1 (RtM1)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 50 mm
vrsta HPLC-kolone: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.05 Vol.-% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat B) ACN 0.04 Vol.-% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 2 - 98% B u 1.4 min, 98% B 0.45 min, protok = 1.2 ml / min temperatura HPLC-kolone: 50 °C
LCMS method M2 (RtM2)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolona: Ascentis Express C18, 2.7 µm
HPLC-eluent A) voda 0.05 Vol.-% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat B) ACN 0.04 Vol.-% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 2 - 98% B u 1.4 min, 0.75 min 98% B, protok = 1.2 ml / min temperatura HPLC-kolone: 50 °C
Postupak LCMS M3 (RtM3)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolone: Ascentis Express C18, 2.7 µm
HPLC-eluent A) voda+ 0.05 Vol.-% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat B) ACN 0.04 Vol.-% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 2 - 98% B u 8.5 min, 1 min 98% B, protok = 1.2 ml / min temperatura HPLC-kolone: 50 °C
LCMS postupak M4 (RtM4)
dimenzije HPLC-kolona: 4.6 x 50 mm
tip HPLC-kolone: SunFire C18, 5 µm
HPLC-eluent A) voda 0.1 Vol.-% TFA, B) ACN 0.1 Vol.-% TFA
HPLC-gradijent: 5 - 100% B u 8.0 min B, protok = 2 ml / min
temperatura HPLC-kolone: 40 °C
LCMS method M5 (RtM5)
dimenzije HPLC-kolone: 0.46x25 cm
tip HPLC-kolone: Chiralcel OJ-H (1189)
HPLC-eluent EtOH/MeOH 60:40
HPLC-gradijent: izokratski, protok =0.5ml/min
Detektor: UV 220 nm
postupak LCMS M6 (RtM6)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolone: Ascentis Express C18, 2.7 µm
HPLC-eluent A) voda 0.05% TFA, B) ACN 0.04% TFA
HPLC-gradijent: 2 - 98% B u 1.4 min, 0.75 min 98% B, protok = 1.2 ml / min temperatura HPLC-kolone: 50 °C
postupak LCMS M7 (RtM7)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolone: Ascentis Express C18, 2.7 µm
HPLC-eluent A) voda 0.05% TFA, B) ACN 0.04% TFA
HPLC-gradijent: 10 - 95% B u 3.0 min, 1 min 95% B, protok = 1.2 ml / min temperatura HPLC-kolone: 50 °C
postupak LCMS M8 (RtM8)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolone: Ascentis Express C182.7 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.05% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat, B) acetonitril 0.04% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 10 - 95% B u 3.0 min, protok = 1.2 ml/min
postupak LCMS M9 (RtM9)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolone: Ascentis Express C182.7 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.05% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat, B) acetonitril 0.04% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 10% B od 0.0 do 0.5 min zatim od 0.5 min do 3.0 min gradijent 10
- 95% B, protok = 1.2 ml/min
postupak LCMS M10 (RtM10)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 50 mm
tip HPLC-column: Acquity UPLC BEH C181.7 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.1 Vol.-% mravlja kiselina, B) acetonitril
HPLC-gradijent: 20 - 25% B u 1.00 min, zatim 25 - 95% B u 3.20 min, zatim 95 -100% B u 0.10 min, zatim 100% za 0.20 min, protok = 0.7 ml/min
postupak LCMS M11 (RtM11)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 50 mm
tip HPLC-kolone: Acquity UPLC BEH C181.7 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.1 Vol.-% mravlja kiselina, B) acetonitril
HPLC-gradijent: 5 - 10% B u 1.00 min, zatim 10 - 90% B in 3.00 min, zatim 90 -100% B u 0.10 min, zatim 100% za 0.40 min, protok = 0.7 ml/min
LCMS M12 (RtM12)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolona: Ascentis Express C182.7 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.1 Vol.-% TFA, B) acetonitril
HPLC-gradijent: 10 -95% B preko 1.7 min i 1.2 mL/min kao protok rastvarača i zatim 955 B preko 0.7 min, flow = 1.4 mL/min.
LCMS method M13 (RtM13)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolone: Ascentis Express C182.7 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.05% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat, B) acetonitril 0.04% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 10 - 95% B u 3.7 min, protok = 1.2 ml / min
LCMS M14 (RtM14)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 30 mm
tip HPLC-kolona: Ascentis Express C18, 2.7 µm
HPLC-eluent A) voda 0.05% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat, B) acetonitril 0.04% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 10 - 95% B u 1.5 min, 1 min 95% B, protok = 1.2 ml / min
LCMS M15 (RtM15)
dimenzije HPLC-kolone: 0.46x25 cm
vrsta HPLC-kolone: Chiralcel OD-H (1194)
HPLC-eluent Heksan/EtOH 50:50 0.05% DEA
HPLC-gradijent: izokratski, protok = 0.5ml/min
Detektor: UV 220 nm
LCMS M16 (RtM16)
dimenzije HPLC-kolone: 2.1 x 50 mm
tip HPLC-kolone: Acquity UPLC HSS T3, 1.8 µm
HPLC-eluent: A) voda 0.05 Vol.-% mravlja kiselina 3.75 mM amonijum acetat B) ACN 0.04 Vol.-% mravlja kiselina
HPLC-gradijent: 5 - 98% B u 1.4 min, 98% B 0.4 min, protok = 1.0 ml / min temperatura HPLC-kolone: 60 °C
Difrakcija Praha X-zracima
Instrumenti:
[0150]
Metoda X1
Instrument Bruker D8 GADDS Discover
<Zračenje>CuK α (40 kV, 40 mA)
Detektor HI-STAR Area detector
Opseg skeniranja 6°-39° (2 teta vrednost)
Odredjivanje tačke topljenja:
[0151]
Tačka topljenja je odredjena Diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC). DSC je snimljen na TA Instrumentu DSC Q2000 brzinom zagrevanja od 10°C/min. Uzorak od 0.6 mg je meren u standardnom aluminijumskom lončiću (lončić+ poklopac, TA 900786.901, 900779.901). Instrument korišćen primenom Thermal Advantage Q-Series softvera V.2.6.0.367 i Thermal Advantage softvera V4.6.9. Termički podaci su karakterisani korišćenjem Universal Analysis V4.3A Build 4.3.0.6. Uzorci su mereni u odnosu na uzorak lončića bez rupe. Uzorak je tretiran po proceduri ispod:
Korak 1: EQUILIBRATE AT 0°C
Korak 2: Interval zagrevanja 10°C/min do 300°C
Preparativno dobijanje jedinjenja iz primera
[0152] Gde je navedeno da su jedinjenja pripremljena na način opisan u ranijem primeru, stručnjak će znati da proceni reakciona vremena, broj ekvivalenata reagenasa i reakcionih temperatura koje se mogu izmeniti za svaku odredjenu reakciju, i da može biti neophodno ili poželjno da se upotrebe različiti uslovi za izvodjenje reakcije ili prečišćavanje.
Primer A1: (S)-(3-((4-(6-metoksi-5-metilpiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon
(prema Shemi 1)
a1) (R)-(3-hidroksipirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon
[0153] Mešani rastvor tetrahidro-2H-piran-4-karboksilne kiseline (CAS registar 5337-03-1) (0.200 g, 1.537 mmol) i DMF-a (0.012 ml, 0.154 mmol) u DCM-u (3 ml) obradjuje se sa oksalil hloridom (0.202 ml, 2.305 mmol) na temperaturi od 3°C. Nakon 1 h na temperaturi od 3°C, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se zatim rastvara u DCM-u (2 ml), i dodaje se u mešani rastvor (R)-pirolidin-3-ol hidrohlorida (CAS registar 104706-47-0) (0.190 g, 1.537 mmol), Et3N (0.535 ml, 3.84 mmol) u DCM-u (3 ml) na temperaturi od 3°C. Nakon 1 h na temperaturi od 3°C, rekciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se obradjuje sa EtOAc (10ml) i filtrira. Ostatak se ispire sa EtOAc, i kombinovani filtrati se koncentruju na sniženom pritisku. Sirovi ostatak se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent DCM / metanol) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje.
ESIMS: 200 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.61-4.50 (m, 1H), 4.10-4.02 (m, 2H), 3.77-3.40 (m, 6H), 2.70-2.53 (m, 1H), 2.20-1.85 (m, 4H), 1.75-1.69 (m, 3H).
alternativni postupak a2: umesto dobijanja kiselinskog hlorida in situ, koristi se komercijalno dostupan kiselinski hlorid kao što je propanoil hlorid (CAS registar 79-03-8).
b1) (R)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-karbonil)pirolidin-3-il metansulfonat
[0154] Mešani rastvor (R)-(3-hidroksipirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon (0.245 g, 1.230 mmol) u DCM-u (10 ml) obradjuje se sa Et3N (0.343 ml, 2.459 mmol) i metansulfonil hloridom (0.192 ml, 2.459 mmol) na temperaturi od 0 °C. Nakon 1 h na temperaturi od 0 °C, dodaje se voda (20 ml). Organski sloj se ispire sa zasićenim rastvorom NaCl (20 ml), suši sa MgSO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava trituracijom sa dietil etrom dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje.
ESIMS: 278 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.40-.5.29 (m, 1H), 4.10-4.02 (m, 2H), 3.94-3.87 (m, 1H), 3.82-3.56 (m. 3H), 3.52-3.41 (m, 2H), 3.11-3.04 (m, 3H), 2.70-2.10 (m, 3H), 2.02-2.87 (m, 2H), 1.72-1.57 (m, 2H).
c1) (S)-(3-((3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon
[0155] Mešani rastvor 3,4-dihidro-2H-benzoksazin-6-ol (CAS registar 26021-57-8) (0.140 g, 0.926 mmol) u DMF-u (3 ml) obradjuje se sa natrijum hidridom (60% u mineralnom ulju, 0.445 g, 1.111 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 10 min na sobnoj temperaturi, dodaje se (R)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-karbonil)pirolidin-3-il metansulfonat (0.283 g, 1.019 mmol). Fiola se zatvara i zagreva do temperature od 50°C tokom 3 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se rastvara u EtOAc (50 ml), i dodaje se voda (50 ml). Organski sloj se ispire sa zasićenim rastvorom NaCl (20 ml), suši sa MgSO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent DCM / metanol) dajući jedinjenje iz naslova u obliku amorfne supstance sive boje.
HPLC RtM10= 2.07 min; ESIMS: 333 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.55-6.50 (m, 1H), 6.15-6.11 (m, 1H), 6.07-6.00 (m, 1H), 5.77 (br s, 1H), 4.88-4.74 (m, 1H), 4.06-4.01 (m, 2H), 3.90-3.22 (m, 10H), 2.75-2.58 (m, 1H), 2.15-1.95 (m, 2H), 1.65-1.45 (m, 4H).
d1) (S)-(3-((4-(6-metoksi-5-metilpiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon
[0156] Mešani rastvor (S)-(3-((3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanona (0.050 g, 0.150 mmol) u toluenu (1 ml) se obradjuje sa 5-bromo-2-metoksi-3-metilpiridinom (CAS registar 760207-87-2) (0.030 g, 0.150 mmol), NaOtBu (0.022 g, 0.226 mmol), 2-(dicikloheksilfosfino)bifenil (CAS registar 247940-06-3) i Pd2(dba)3(0.004 g, 0.005 mmol) na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. Fiola se zatvara i zagreje do temperature od 110°C u mikrotalasnom reaktoru tokom 3 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent cikloheksan / EtOAc) dajući jedinjenje iz naslova u obliku beličastog čvrstog proizvoda.
HPLC RtM10= 2.85 min; ESIMS: 454 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.90-7.85 (m, 1H), 7.49-7.44 (m, 1H), 6.76-6.69 (m, 1H), 6.32-6.24 (m, 1H), 6.07-6.02 (m, 1H), 4.86-4.73 (m, 1H), 4.29-4.23 (m, 2H), 4.02-3.92 (m, 5H), 3.80-3.40 (m, 8H), 2.85-2.60 (m, 1H), 2.25-1.91 (m, 5H), 1.85-1.50 (m, 4H).
alternativni postupak d2: 2-(dicikloheksilfosfino)bifenil (CAS registar 247940-06-3) se zameni sa 2-dicikloheksilfosfino-2′,4′,6′-triizopropilbifenil (CAS regisatar 564483-18-7)
alternativni postupak d3: 2-(dicikloheksilfosfino)bifenil (CAS registar 247940-06-3) i Pd2(dba)3se zamene sa bis(tri-t-butilfosfin)paladijumom (CAS regisatar 53199-31-8)
[0157] Primeri A2 do A43: Jedinjenja koja su navedena u Tabeli 1 dobijaju se procedurom koja je analogna sa onom koja je korišćena u Primeru A1.
Tabela 1
Primer B1: {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon (prema Shemi 2)
[0158]
a) terc-butil estar (S)-3-(3,4-Dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0159] Rastvor 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol (CAS registar 26021-57-8) (4.0 g, 26.5 mmol) u DMF-u (150 ml) se obradjuje sa NaH (2.117 g, 52.9 mmol) tokom 20 min na temperaturi od 20 °C. Dodaje se terc-butil estar (R)-3-Metansulfoniloksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (9.13 g, 34.4 mmol). Nakon 22 h mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se koncentruje do suva, zatim sipa u EtOAc, filtrira kroz hyflo i filtrat se ispire sa zasić. vod. rastvor Na2CO3. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i upraravaju. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / izopropanol 100:0 do 85:15 u 40 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku ulja žute boje.
HPLC RtM8=1.84 min; ESIMS: 321 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO): 6.52 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 6.02 (m, 1H), 5.76 (m, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.01-40.5 (m, 2H), 3.27-3.50 (m, 4H), 3.22-3.26 (m, 2H), 1.95-2.08 (m, 2H), 1.39 (m, 9H).
b) terc-butil estar (S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0160] Smeša terc-butil estar (S)-3-(3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline (2.12 g, 6.62 mmol), 5-bromo-2-metansulfonil-3-metil-piridin (Intermedijer IA1) (2.091 g, 7.94 mmol), NaOtBu (1.272 g, 13.23 mmol), XPhos ligand (0.158 g, 0.331 mmol) i Pd2(dba)3(0.303 g, 0.331 mmol) u dioksanu (3.5 ml) se degazira i meša 12 h na temperaturi od 110 °C. Dodaje se zasić. vod. rastvor NaHCO3i reakciona smeša se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 50:50) dajući jedinjenje iz naslova.
HPLC RtM14=1.25 min; ESIMS: 490 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.33 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.59 (d, 1H), 6.47 (m, 1H), 4.69-4.73 (m,12H), 4.23-4.28 (m, 2H), 3.73-3.78 (m, 2H), 3.41-3.58 (m, 4H), 3.34 (s, 3H), 2.69 (s, 3H), 1.96-2.17 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
c) 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0161] Rastvor terc-butil estar (S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (1.5 g, 3.06 mmol) i TFA (0.236 ml, 3.06 mmol) u DCM-u (15 ml) meša se 1 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se ohladi do temperature od 0°C, dodaje se zasić. rastvor Na2CO3i reakciona smeša se ekstrahuje DCM-om. Kombinovani organski slojevi se suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju dajućijedinjenje iz naslova.
HPLC RtM2=0.66 min; ESIMS: 390 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.33 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.86 (d, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.47 (m, 1H), 4.68 (m, 1H), 4.22-4.27 (m, 2H), 3.73-3.78 (m, 2H), 3.33 (s, 3H), 3.12-3.22 (m, 2H), 2.86-3.04 (m, 2H), 2.68 (s, 3H), 1.88-2.08 (m, 2H).
d) {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
[0162] Smeša 4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (0.085 g, 0.218 mmol), tetrahidro-2H-piran-4-karbonil hlorida (CAS registar 40191-32-0) (0.049 mg, 0.327 mmol) i Et3N (0.046 ml, 0.327 mmol) u DCM-u (4 ml) meša se na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Reakciona smeša se koncentruje do suva. [0163 ] Sirovi proizvod se prečišćava prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18, H2O 0.1% TFA / ACN 0.1% TFA 90:10 do 30:70 u 12 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje. HPLC RtM7=1.62 min; ESIMS: 502 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ 8.38-8.42 (m, 1H), 7.72 (m, 1H), 6.84 (d, 1H), 6.67 (m, 1H), 6.50-6.57 (m, 1H), 4.82-4.94 (m, 1H), 4.20 (m, 2H), 3.31 (s, 3H), 3.28-3.88 (m, 10H), 2.59-2.73 (m, 1H), 2.56 (s, 3H), 1.95-2.13 (m, 2H), 1.44-1.62 (m, 4H).
[0164] Primeri B2 do B122: Jedinjenja navedena u Tabeli 2 se dobijaju postupkom analogono onom koji se koristi u Primeru B1.
Tabela 2
Primer C1: 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril (prema Shemi 3)
[0165]
a) 6-(terc-Butil-dimetil-silaniloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0166] U rastvor 3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol-a (CAS registar 26021-57-8) (5.60 g, 37.0 mmol) u THF-u (200 ml), dodaje se deo po deo, NaH (2.96 g, 74.1 mmol) u struji argona. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi u vremenu od 20 min, lagano se dodaje TBDMSCl (CAS registar 18162-48-6) (7.26 g, 48.2 mmol) i mešanje se nastavlja tokom 1 h. Reakciona smeša se razblažuje sa Et2O, ispire sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3i koncentrovanim rastvorom soli. Organska faza se suši na MgSO4, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 60:40 tokom 15 min) u obliku ulja žute boje (9.20 g, prinos 94%).
HPLC RtM10= 3.65 min; ESIMS: 266 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.46 (d, 1H), 6.08 (d, 1H), 5.91 (m, 1H), 5.71 (br s, 1H), 3.91-4.12 (m, 2H), 3.12-3.28 (m, 2H), 0.87-1.01 (s, 9H), 0.03-0.21 (s, 3H).
b) 5-[6-(terc-Butil-dimetil-silaniloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksi nikotinonitril
[0167] U suspenziju 6-(terc-butil-dimetil-silaniloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (9.00 g, 33.2 mmol), 5-bromo-2-metoksi-nikotinonitrila (CAS registar 941294-54-8) (7.79 g, 36.6 mmol), NaOtBu (4.79 g, 49.8 mmol) u toluenu (270 ml) u struji argona, dodaju se XPhos (CAS registar 564483-18-7) (0.79 g, 1.7 mmol) i Pd2(dba)3(CAS registar 51364-51-3) (1.52 g, 1.7 mmol).
Reakciona smeša se meša na temperaturi od 110°C u vremenu od 1 h i nakon toga se koncentruje dajući čvrsti proizvod braon boje koji se ispire sa smešom DCM/MeOH (8:2) i filtrira. Filtrat se koncentruje, dobijeni ostatak se rastvara u smeši rastvarača DCM/MeOH (8:2), filtrira kroz hyflo, filtrat se koncentruje i trituriše sa MeOH dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda žute boje (10.14 g, prinos 77%).
HPLC RtM11=3.89 min; ESIMS: 398 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.35-8.51 (m, 1H), 8.16-8.31 (m, 1H), 6.60-6.79 (m, 1H), 6.15-6.32 (m, 1H), 5.92-6.09 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.51-3.74 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).
b) 5-(6-hidroksi-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il)-2-metoksi-nikotinonitril
[0168] U rastvor 5-[6-(terc-butil-dimetil-silaniloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksinikotinonitrila (10 g, 25.2 mmol) rastvorenog u THF-u (200 ml) dodaje se TBAF (1M u THF) (37.7 ml, 37.7 mmol). Rastvor se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 30 min, razblažuje sa EtOAc, ispire sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3i koncentrovanim rastvorom soli. Vodeni slojevi se podvrgnu povratnoj ekstrakciji sa EtOAc, koncentrovanjem organskih faza nakon sušenja na MgSO4dobija se ostatak braon boje koji se rastvara u smeši DCM/MeOH (1:1) i filtriraju kroz hyflo. Koncentrovanjem i trituracijom filtrata sa Et2O dobija se jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda braon boje (6.63 g, prinos 93%).
HPLC RtM10=2.56 min; ESIMS: 284 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.70 (br. s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 6.62 (d, 1H), 6.12 (m, 1H), 6.01 (d, 1H), 4.11-4.32 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.54-3.68 (m, 2H).
d) 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0169] U rastvor 5-(6-hidroksi-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il)-2-metoksi-nikotinonitrila (100 mg, 0.35 mmol) u DMF-u (2 ml) u struji argona, dodaje se NaH (31 mg, 0.78 mmol) i smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 5 min. Dodaje se (R)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline (intermedijer IC1) (98.0 mg, 0.35 mmol) i reakciona smeša se meša na temperaturi od 50°C u vremenu od 4 h. Nakon hladjenja, dodaje se NaH (0.5 ekviv., 8.47 mg, 0.21 mmol), reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 5 min i dodaje se (R)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline (intermedijer IC1) (49.0 mg, 0.18 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 50°C u vremenu od 1 h. Koncentrovanjem i prečišćavanjem prep. RP- HPLC (Sunfire PrepC18 OBD 30x100mm, 5 μm; rastvarač A: H2O+0.1 Vol.-% TFA; rastvarač B: CH3CN 0.1 Vol.-% TFA) dobija se nakon, bazifikacije kombinovanih frakcija i ekstrakcijom sa EtOAc, jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda žute boje (72 mg, prinos 43%).
HPLC RtM10=2.72 min; ESIMS: 465 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.36 (d, 1H), 8.06 (t, 1H), 6.78 (m, 1H), 6.37 (m, 1H), 6.17 (m, 1H), 4.81 ( br s, 1H), 4.17-4.37 (m, 2H), 4.08 (s, 3H), 3.90-4.03 (m, 2H), 3.56-3.81 (m, 5H), 3.39-3.54 (m, 3H), 2.59-2.89 (m, 1H), 1.87-2.29 (m, 2H), 1.48-1.87 (m, 4H).
[0170] Primeri C2 do C26: Jedinjenja navedena u Tabeli 3 dobijaju se postupkom analognim onom koji se koristi u Primeru C1.
Tabela 3
Primer D1: (S)-2-metoksi-5-(6-((1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)pirolidin-3-il)oksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril (prema Shemi 4)
a1) 6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin
[0171] Mešani rastvor 3,4-dihidro-2H-1,4-benzoksazin-6-ol-a (CAS registar 226021-57-8) (6.00 g, 39.70 mmol) u THF-u (200 ml) obradjuje se sa natrijum hidridom (60% u mineralnom ulju, 3.18 g, 79.00 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon 20 min stajanja na sobnoj temperaturi, dodaje se TBDMSCl (7.78 g, 51.6 mmol), i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 1.5 h. Nakon tog vremena, dodaju se dietil etar (500 ml) i zasić. vod. rastv. NaHCO3(100 ml). Vod. sloj se ekstrahuje sa dietil etrom, i kombinovani organski ekstrakti se suše sa MgSO4, filtriraju i koncentruju na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent cikloheksan / EtOAc) dajući jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja.
HPLC RtM11= 3.37 min; ESIMS: 266 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.48-6.44 (m, 1H), 6.09-6.05 (m, 1H), 5.94-5.89 (m, 1H), 5.76-5.70 (m, 1H), 4.06-4.00 (m, 2H), 3.25-3.19 (m, 2H), 0.92 (s, 9H), 0.12 (s, 6H).
b1) 5-(6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)-2-metoksinikotinonitril
[0172] Mešani rastvor 6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazina (8.88 g, 32.80 mmol) u toluenu (270 ml) obradjuje sa 5-bromo-2-metoksinikotinonitrilom (CAS registar 941294-54-8) (7.68 g, 36.10 mmol), NaOtBu (4.87 g, 49.2 mmol), 2-dicikloheksilfosfino-2′,4′,6′-triizopropilbifenil (CAS registar 564483-18-7) (0.806 g, 1.64 mmol), i Pd2dba3(1.501 g, 1.64 mmol) na sobnoj temperaturi u atmosferi argona. Reakciona smeša se zagreva do temperature od 110°C u vremenu od 1.5 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se rastvara u DCM-u (200 ml), filtrira kroz sloj celita, i koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se rastvara u MeOH, i sonifikuje nekoliko puta dajući talog žuto/narandžaste boje. Ostatak se filtrira, ispire sa metanolom, i suši na vakuumu dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda žute boje.
HPLC RtM11= 3.90 min; ESIMS: 398 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.45-8.42 (m, 1H), 8.28-8.24 (m, 1H), 6.72-6.68 (m, 1H), 6.24-6.19 (m, 1H), 6.06-6.03 (m, 1H), 4.24-4.18 (m, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.66-3.61 (m, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).
alternativni postupak b2: dicikloheksilfosfino-2′,4′,6′-triizopropilbifenil (CAS registar 564483-18-7) i Pd2(dba)3su zamenjeni sa bis(tri-t-butilfosfin)paladijumom (CAS registar 53199-31-8)
c1) 5-(6-hidroksi-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)-2-metoksinikotinonitril
[0173] Mešani rastvor 5-(6-((terc-butildimetilsilil)oksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)-2-metoksinikotinonitrila (10.85 g, 27.30 mmol) u THF-u (220 ml) se obradjuje na sobnoj temp. sa TBAF (1.0 M u THF, 40.9 ml, 40.90 mmol). Nakon 40 min na sobnoj temperaturi, dodaju se EtOAc (300 ml) i zas. vod. rastvor NaHCO3(200 ml). Organski ekstrakti se suše sa MgSO4, filtriraju i koncentruju na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava trituracijom sa dietil etrom dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bledo braon boje.
HPLC RtM11= 2.00 min; ESIMS: 284 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.71 (s, 1H), 8.44 (d, 1H), 8.29 (d, 1H), 6.61 (d, 1H), 6.12 (dd, 1H), 6.01 (d, 1H), 4.21-4.16 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.64-3.59 (m, 2H).
d1) (S)-terc-butil 3-((4-(5-cijano-6-metoksipiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-karboksilat
[0174] Mešani rastvor 5-(6-hidroksi-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)-2-metoksinikotinonitrila (3.70 g, 13.06 mmol) u DMF-u (60 ml) se obradjuje sa na sobnoj temperaturi sa natrijum hidridom (60% u mineralnom ulju, 1.31 g, 32.70 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 15 min. Nakon tog vremena, dodaje se (R)-1-Boc-3-metansulfoniloksipirolidin (CAS registar 141699-57-2) (5.36 g, 19.59 mmol), i reakciona smeša se meša na temperaturi od 50°C u vremenu od 3 h. Posle tog vremena, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent cikloheksan / aceton) dajući jedinjenje iz naslova obliku čvrstog proizvoda žute boje.
HPLC RtM11= 3.13 min; ESIMS: 453 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.31 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.32 (dd, 1H), 6.14 (d, 1H), 4.74-4.68 (m, 1H), 4.32-4.28 (m, 2H), 4.09 (s, 3H), 3.67-3.62 (m, 2H), 3.59-3.39 (m, 4H), 2.17-1.92 (m, 2H), 1.47 (s, 9H).
alternativni postupak d2: mezilovani alkohol, natrijum hidrid i DMF su zamenjeni sa odgovarajućim hidroksi-izoksazolidinom, DEAD i THF korišćenjem uslova za reakciju po Mitsunobu koji su opisani u postupku CC4
e1) (S)-2-metoksi-5-(6-(pirolidin-3-iloksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril [0175] Mešani rastvor (S)-terc-butil 3-((4-(5-cijano-6-metoksipiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-karboksilata (4.35 g, 9.32 mmol) u DCM-u (160 ml) se obradjuje sa TFA (35.9 ml, 466 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 2 h. Nakon tog vremena, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se rastvara u DCM-u (500 ml), i dodaje se zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(500 ml). Organski ekstrakti se ispiraju sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (50 ml), suše sa MgSO4, filtriraju i koncentruju na sniženom pritisku. Sirovi proizvod (jedinjenje iz naslova, čvrsti proizvod žute boje) se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
HPLC RtM10= 2.06 min; ESIMS: 353 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.31 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 6.82 (d, 1H), 6.32 (dd, 1H), 6.12 (d, 1H), 4.71-4.65 (m, 1H), 4.32-4.27 (m, 2H), 4.09 (s, 3H), 3.67-3.62 (m, 2H), 3.22-2.90 (m, 4H), 2.08-1.88 (m, 2H).
f1) (S)-2-metoksi-5-(6-((1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)pirolidin-3-il)oksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril
[0176] Mešani rastvor 1-metil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (CAS registar 41716-18-1) (0.578 g, 4.45 mmol) u DMF-u (40 ml) obradjuje se sa HOBT (0.695 g, 4.45 mmol), EDC (0.870 g, 4.45 mmol) i Et3N (1.24 ml, 8.90 mmol) na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Nakon tog vremena, dodaje se (S)-2-metoksi-5-(6-(pirolidin-3-iloksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril (1.10 g, 2.97 mmol), i reakciona smeša se meša u vremenu od 3 h 15 min na sobnoj temperaturi. Nakon tog vremena, reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku. Ostatak se rastvara u DCM-u (200 ml), i dodaje se zasić. vod. rastvor NaHCO3(200 ml). Organski ekstrakti se suše sa MgSO4, filtriraju i koncentruju na sniženom pritisku. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (gradijent DCM / metanol) i preparativnom HPLC (SunFire C18 kolona, CH3CN / 1%TFA u H2O gradijentu, čiste frakcije se obradjuju sa DCM-om i zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3; kombinovani organski ekstrakti se suše na MgSO4, filtriraju i koncentruju na sniženom pritisku) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda žute boje.
HPLC RtM10= 2.27 min; ESIMS: 461 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.46-8.41 (m, 1H), 8.30-8.26 (m, 1H), 7.66-7.59 (m, 2H), 6.77-6.72 (m, 1H), 6.37-6.29 (m, 1H), 6.14-6.07 (m, 1H), 4.90-4.79 (m, 1H), 4.25-4.11 (m, 3H), 3.99 (s, 3H), 3.98-3.78 (m, 1H), 3.70-3.41 (m, 7H), 2.10-1.93 (m, 2H).
alternativni postupak f2: karboksilna kiselina, HOBT, EDC i DMF su zamenjeni sa hloridom karboksilne kiseline i sa DCM-om
alternativni postupak f3: karboksilna kiselina, HOBT, EDC i DMF su zamenjeni sa hloroformatom i DCM-om
alternativni postupak f4: karboksilna kiselina, HOBT i EDC su zamenjeni sa hloridom karbaminske kiseline
[0177] Primeri D2 do D40: Jedinjenja navedena u Tabeli 4 dobijaju se postupku koji je analogan onome opisanom u Primeru D1.
Tabela 4
Primer E1: {(S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon (prema Shemi 5)
[0178]
a) 7-hloro-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin
[0179] Smeša 7-hloro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-2-ona (CAS registar 928118-43-8) (630 mg, 3.41 mmol) i BH3*THF (1 M in THF) (10.2 ml, 10.2 mmol) u THF-u (20 ml) meša se 2 h na temperaturi od 80°C. Reakciona smeša se kvenčuje sa MeOH, dodaje se 1 M vod. rastvorom NaOH i smeša se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (smeša rastvarača heptan / EtOAc 100:0 do 50:50 u 12 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje (432 mg, prinos 74%). HPLC RtM1=0.47 min; ESIMS: 171 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.74 (s, 1H), 6.46 (s, 1H), 4.43 (br s, 1H) 4.21-4.25 (m, 2H), 3.48-3.51 (m, 2H).
b) 7-hloro-1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]-oksazin [0180] Smeša 7-hloro-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin (127 mg, 0.74 mmol), 5-bromo-2-metoksi-3-metilpiridina (CAS registar 760207-87-2) (0.196 g, 0.986 mmol), Cs2CO3(534 mg, 1.64 mmol) i XPhos (28 mg, 0.06 mmol) u dioksanu (3.5 ml) se degazira sa argonom i dodaje se Pd2(dba)3(27 mg, 0.03 mmol). Nakon 3.5 h mešanja na temperaturi od 100 °C reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, dodaje se zasić. vod. rastvor NaHCO3i smeša se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (smeša rastvarača heptan / EtOAc 95:5 do 40:60 u 14 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog bledo obojenog proizvoda (190 mg, prinos 87%).
HPLC RtM1=1.04 min; ESIMS: 292 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.94 (d, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.31 (d, 1H), 6.31 (s, 1H), 4.34-4.37 (m, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.68-3.72 (m, 2H), 2.24 (s, 3H).
c) 1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol
[0181] Smeša 7-hloro-1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazina (190 mg, 0.65 mmol), tetrametil-t-buil-XPhos (13 mg, 0.03 mmol) u dioksanu (3 ml) i 5M vod. rastvora KOH (0.04 ml, 1.95 mmol) se degazira sa argonom i dodaje se Pd2(dba)3(6 mg, 0.01 mmol). Nakon 17.5 h na temperaturi od 100°C reakciona smeša se filtrira preko hyflo, filtrat se suši na Na2SO4, filtrira i uparava. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (EtOAc / MeOH 100:0 do 85:15 u 17 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje (111 mg, prinos 62%).
HPLC RtM1=0.67 min; ESIMS: 274 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.32 (br s, 1H), 8.02 (d, 1H), 7.62 (m, 1H), 6.89 (s, 1H), 4.84 (s, 1H), 4.17-4.21 (m, 2H), 3.91 (s, 3H), 3.61-3.66 (m, 2H), 2.17 (s, 3H).
d) terc-butil estar (S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0182] Rastvor 1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol (111 mg, 0.41 mmol) u DMF-u (3 ml) se obradjuje sa NaH (33 mg, 0.81 mmol) u vremenu od 10 min na temperaturi od 20°C. Dodaje se terc-butil estar (R)-3-Metansulfoniloksi-pirolidin-1karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (162 mg, 0.61 mmol). Nakon 19 h mešanja na temperaturi od 60°C i 18 h na 80°C dodaje se zasić. vod. rastvor NaHCO3i reakciona smeša se ekstrahuje sa TBME. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju. Sirovi proizvod se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (smeša rastvarača heptan / EtOAc 93:7 do 40:60 u 13.5 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bledožutog ulja (107 mg, prinos 59%).
HPLC RtM1=1.21 min; ESIMS: 443 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.93 (d, 1H), 7.61 (br s, 1H), 7.32 (br s 1H), 5.71 (s, 1H), 5.41 (br s, 1H), 4.32 (br s, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.65-3.70 (m, 2H), 3.37-3.61 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 1.58 (s, 9H), 0.82-0.97 (m, 2H).
e) 1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin
[0183] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]-oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (103 mg, 0.23 mmol) i TFA (0.179 ml, 2.33 mmol) u DCM-u (1.8 ml) se meša 18 h na sobnoj temperaturi. Dodaje se zasić. vod. rastvor Na2CO3i reakciona smeša se ekstrahuje sa DCM-om. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju, jedinjenje iz naslova se dobija u obliku pene bledožute boje (72 mg, prinos 90%).
HPLC RtM1=0.64 min; ESIMS: 343 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.93 (d, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.32 (m, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.29-5.35 (m, 1H), 4.29-4.33 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.65-3.69 (m, 2H), 2.82-3.14 (m, 4H), 2.22 (s, 3H), 1.80-2.10 (m, 2H).
f) {(S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon
[0184] Smeša 1-metil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (CAS registar 41716-18-1) (15 mg, 0.12 mmol), HBTU (53 mg, 0.14 mmol) i DIPEA (0.025 ml, 0.14 mmol) u DMF-u (0.6 ml) meša se na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Dodaje se rastvor 1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazina (0.037 g, 0.11 mmol) u DMF-u (0.6 ml). Nakon mešanja u vremenu od 20 h na sobnoj temperaturi dodaje se voda i reakciona smeša se ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa koncentrovanim rastvorom soli, suše na Na2SO4, filtriraju i uparavaju. Sirovi proizvod se prečišćava prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18, H2O 0.1% TFA / ACN 0.1% TFA 90:10 do 60:40 u 16 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku pene svetložute boje (24 mg, prinos 49%).
HPLC RtM1=0.74 min; ESIMS: 451 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO): δ 8.00 (m, 1H), 7.58-7.63 (m, 3H), 7.53 (d, 1H), 5.51 (d, 1H), 5.29-5.40 (m, 1H), 4.23-4.29 (m, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.77-4.19 (m, 2H), 3.66 (m, 5H), 3.39-3.63 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.89-2.11 (m, 2H).
[0185] Primeri E2 do 11: Jedinjenja navedena u Tabeli 5 se mogu dobiti postupkom koj je analogan sa onim koji je korišćen u primeru E1.
Tabela 5
[0186] Referentni primeri E12 do E13: Jedinjenja navedena u Tabeli 5a dobijena su postupkom koji je analogan onom koji se koristi u primeru E1, primenom adekvatnih strategija za zaštitnu grupu.
Tabela 5a
Primer F1: (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5 -metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon (prema Shemi 6)
xunos
a) 7-hloro-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin
[0188] Rastvor 7-hloro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-2-on (CAS registar 928118-43-8) (3.70 g, 20 mmol) u THF-u (63 ml) se obradjuje sa BH3*THF (1M u THF, 47 ml, 47 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 75<°>C tokom 1 h, onda se ohladi do sobne temperature i kvenčuje sa metanolom (24 ml, 600 mmol). Reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku i ostatak se sipa u EtOAc i ispire sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na MgSO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bledožute boje (3.3 g, prinos 96%).
UPLC RtM1=0.47 min; ESIMS: 171 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.53 (s, 1H), 7.11 (br s, 1H), 6.47 (s, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.17-3.38 (m, 2H).
b) 2,3-Dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol
[0189] Smeša 7-hloro-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazina (1.08 g, 6.33 mmol), vod. rast. KOH. (1.07 g, 19 mmol KOH u 5.4 ml vode), 2-di-t-butilfosfino-3,4,5,6-tetrametil-2’,4’,6-tri-ipropilbifenil 98% (0.30 g, 0.63 mmol) i Pd2(dba)3(0.29 g, 0.32 mmol) u dioksanu (32.5 ml) degazira se tri puta sa azotom, epruveta se zatvara i reakciona smeša se meša na temperaturi od 100<°>C tokom 5 h. Nakon hladjenja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa EtOAc i metanolom. Filtrati se koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (DCM / MeOH, 98:2 do 75:25) u obliku narandžastog ostatka (660 mg, prinos 69%)
UPLC RtM1=0.34 min; ESIMS: 153 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.33 (br s, 1H), 7.03 (br s, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.15 (s, 1H), 3.95 (t, 2H), 3.25 (m, 2H).
c) terc-butil estar (S)-3-(2,3-Dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0190] Suvi rastvor 2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol (0.66 g, 4.34 mmol) i terc-butil estra (R)-3-metansulfoniloksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (1.73 g, 6.51 mmol) u DMF-u (40 ml) obradjuje se sa natrijum hidridom (60% u mineralnom ulju, 0.21 g, 8.68 mmol) i reakciona smeša se meša na temperaturi od 80<°>C tokom 18 h. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se razblažuje sa TBME i ispire sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na MgSO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografijom na silika gelu (smeša rastvarača cikloheksan / EtOAc, 95:5 do 30:70) u obliku ulja žute boje (1.035 g, 75% čistoće,,prinos 56%)
UPLC RtM1=0.65 min; ESIMS: 322 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.54 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.42 (br s, 1H), 4.25-4.41 (m, 1H), 4.19 (t, 2H), 3.38-3.66 (m, 6H), 2.00-2.18 (m, 2H), 1.46 (d, 9H).
d) terc-butil estar (S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0191] Smeša terc-butil estra (S)-3-(2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline (254 mg, 0.79 mmol), 5-bromo-2-metoksi-3-metilpiridina (CAS registar 760207-87-2) (208 mg, 1.03 mmol), XPhos (30 mg, 0.06 mmol), i NaOtBu (167 mg, 1.74 mmol) u dioksanu (6 ml) se degazira sa argonom tokom 5 min, nakon toga se dodaje Pd2(dba)3(29 mg, 0.03 mmol). Epruveta se puni sa argonom, pa se zatvara i reakciona smeša se meša na temperaturi od 100<°>C tokom 2 h. Nakon hladjenja na sobnoj temperturi, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa EtOAc i filtrati se ispiru za zasić. vod. rastvorom NaHCO3. Vodeni sloj se dva puta reekstrahuje sa EtOAc, kombinovani organski slojevi se suše preko Na2SO4, filtriraju, koncentruju i jedinjenje iz naslova se dobija posle fleš hromatografijom na silika gelu (smeša rastvarača heptan / EtOAc, 100:0 do 50:50) u obliku bistrog gumastog/ smolastog proizvoda (274 mg, prinos 78%).UPLC RtM1=1.20 min; ESIMS: 443 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.93 (d, 1H), 7.61 (br s, 1H), 7.30-7.35 (m, 1H), 5.71 (s, 1H), 5.34-5.46 (m, 1H), 4.31 (br s, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.68 (t, 2H), 3.34-3.62 (m, 4H), 2.23 (s, 3H), 2.01-2.09 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
e) 1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin
[0192] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne (364 mg, 0.82 mmol) u DCM-u (6 ml) se obradjuje sa TFA (0.63 ml, 8.23 mmol) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h, zatim se kvenčuje sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3i ekstrahuje sa DCM-om. Organski sloj se suši na MgSO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku dajući jedinjenje iz naslova u obliku ulja crvene boje, koje se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja (313 mg, čistoća 90%, kvantitativni prinos).
UPLC RtM1=0.65 min; ESIMS: 343 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.93 (d, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.32 (d, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.26-5.36 (m, 1H), 4.31 (t, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 2.95-3.15 (m, 3H), 2.81-2.92 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.98-2.10 (m, 1H), 1.79-1.90 (m, 1H).
f) (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
[0193] Rastvor 1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-karboksilne kiseline (CAS registar 64096-87-3) (106 mg, 0.59 mmol) u DMF-u (4 ml) se obradjuje sa HBTU (225 mg, 0.59 mmol) i DIPEA (0.24 ml, 1.37 mmol). Rezultujući rastvor narandžaste boje se meša na sobnoj temperaturi tokom 5 min, zatim se dodaje rastvor 1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-7-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin (156 mg, 0.46 mmol) u DMF-u (2 ml). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h nakon toga se koncentruje na sniženom pritisku i ostatak se obradjuje sa DCM-om i ispire sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši propuštanjem kroz kartridž za razdvajanje faza, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon SFC hromatografije (kolona DEAP (250mm x 30mm, 60A, 5µm) Princeton, gradijent 11 - 16% metanola u superkritičnom CO2u vremenu od 6 min) u vidu blago obojene čvrste supstance (112 mg, prinos 49%).
UPLC RtM1=0.81 min; ESIMS: 503 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.01 (s, 1H), 7.61 (m, 1H), 7.52 (d, 1H), 5.52 (d, 1H), 5.24-5.43 (m, 1H), 4.26 (br s, 2H), 3.89 (s, 3H), 3.59-3.79 (m, 3H), 3.41-3.56 (m, 2H), 3.21-3.39 (m, 1H), 2.98-3.21 (m, 4H), 2.67-2.83 (m, 1H), 1.84-2.20 (m, 9H).
<1>H NMR (600 MHz, DMSO-d6): δ 8.01 (s, 1H), 7.63-7.59 (m, 1H), 7.55-7.51 (m, 1H), 5.55-5.51 (m, 1H), 5.43-5.24 (m, 1H), 4.29-4.22 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.80-3.60 (m, 2H), 3.56-3.37 (m, 3H), 3.28-2.99 (m, 5H), 2.89-2.66 (m, 1H), 2.19-2.09 (m, 4H), 2.08-1.98 (m, 2H), 1.98-1.86 (m, 3H).
Kristalizacija jedinjenja iz primera F1 zagrevanjem i hladjenjem u smeši rastvarača izopropanol / dietil etar
[0194] 474mg amorfnog jedinjenja iz primera F1 se suspenduje u 1.4mL izopropanola. Smeša se zagreva do temperature od 70°C i meša na 70°C da bi se omogućilo potpuno rastvaranje jedinjenja iz primera F1. Rastvor je ohladjen do sobne temperature, formira se lepljivi ostatak. Dodaje se 2mL dietil etra i talog se meša tokom 48h. Formirana je bela suspenzija. Suspenzija se filtrira i čvrsti ostatak se suši na temperaturi od 40°C, i pritisku od 15 mbar. Dobijen je čist, beli prah. Materijal sadrži samo neznatnu količinu rastvarača (<0.5%). Dobija se kristalni anhidrovani oblik jedinjenja iz primera F1 sa početkom topljenja na temperaturi od 148.77°C.
[0195] Lista najznačajnijih 2-Teta pikova iz mape difrakcije X-zraka sa tolerancijom od ±0.5 iz Primera F1 anhidrovanog oblika (Postupak M1) (uključujući male/slabe pikove za informaciju). Opaska: Lista pikova nije iscrpna, već su to samo neki “medju ostalima”.
[0196] Primeri F2 do F15: Jedinjenja navedena u Tabeli 6 se pripremaju postupkom analognom onom koji se koristi u Primeru F1.
Tabela 6
Primer G1: Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
a) 7-Bromo-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin
[0198] Rastvor 7-bromo-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-2-on (CAS registar 943995-72-0) (2.93 g, 12.79 mmol) u THF-u (40 ml) obradjuje se sa BH3*THF (1M u THF, 30 ml, 30 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 80<°>C u vremenu od 1.5 h, zatim se ohladi do sobne temperature i kvenčuje sa metanolom. Reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku i ostatak se sipa u EtOAc i ispire sa vod. rastvorom 1M NaOH. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje. (2.48 g, prinos 90%).
UPLC RtM1=0.49 min; ESIMS: 217 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.72 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.42 (br s, 1H), 4.20-4.24 (m, 2H), 3.49 (m, 2H).
b) 7-Bromo-2,3-dihidro-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-1-karboksilne kiseline benzil ester [0199] Suvi rastvor 7-bromo-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazina (1.85 g, 8.60 mmol) u THF-a (50 ml) obradjuje se deo po deo, na temperaturi od 0<°>C sa 60% NaH u mineralnom ulju (0.52 g, 12.90 mmol) i reakciiona smeša se meša na temperaturi od 0<°>C tokom 1 h. Benzil hloroformat (CAS registar 501-53-1) (1.40 ml, 9.85 mmol) se dodaje u kapima i reakciona smeša se ostavlja da se zagreje do sobne temperature i meša u vremenu od 20 h, i na kraju se kvenčuje sa metanolom i zatim razblažuje sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3soln. i ekstrahuje EtOAc. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heptan / EtOAc, 100:0 do 60:40) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (2.06 g, prinos 68%).
UPLC RtM1=1.14 min; ESIMS: 349 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.28 (br s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.35-7.46 (m, 5H), 5.30 (s, 2H), 4.20-4.27 (m, 2H), 3.92-4.01 (m, 2H).
c) 2,3-Dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol
[0200] Smeša benzil estar 7-bromo-2,3-dihidro-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-1-karboksilne kiseline (1.27 g, 3.63 mmol), vod. rastv. KOH (0.90 g, 16 mmol KOH u 3.2 ml vode), 98%-tni 2-di-tbutilfosfino-3,4,5,6-tetrametil-2’,4’,6-tri-i-propilbifenila (0.26 g, 0.54 mmol) u dioksanu (16 ml) se degazira sa argonom tokom 5 min, zatim se dodaje Pd2(dba)3(0.25 g, 0.27 mmol). Epruveta je napunjena sa argonom, zatim se zatvara i reakciona smeša se meša na temperaturi od 100<°>C tokom 19 h. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa EtOAc i metanolom. Filtrati se suši na Na2SO4, filtriraju, koncentruju i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (DCM / MeOH, 95:5 to 60:40) u obliku narandžastog ostataka (262 mg, prinos 47%).
UPLC RtM1=0.32 min; ESIMS: 153 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.33 (br.s, 1H), 7.03 (br.s, 1H), 6.71 (s, 1H), 5.15 (s, 1H), 3.95 (t, 2H), 3.25 (td, 2H).
d) terc-butil estar (S)-3-(2,3-Dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0201] Suvi rastvor terc-butil estra 2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-ol (200 mg, 0.66 mmol) i (R)-3-metansulfoniloksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (262 mg, 0.99 mmol) u DMF-u (6 ml) obradjuje se sa 60%-tnim natrijum hidrid u mineralnom ulju (53 mg, 1.33 mmol) i reakciona smeša se meša na temperaturi od 80<°>C tokom 17 h. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se razblažuje sa TBME i ispire sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heptan / EtOAc, 88:12 do 0:100) u obliku ulja (140 mg, prinos 66%).
UPLC RtM1=0.66 min; ESIMS: 322 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.54 (s, 1H), 5.86 (s, 1H), 5.42 (br.s, 1H), 4.25-4.41 (m, 1H), 4.19 (t, 2H), 3.38-3.66 (m, 6H), 2.00-2.18 (m, 2H), 1.46 (d, 9H).
e) terc-butil estar (S)-3-[1-(6-Metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0202] Smeša terc-butil estra (S)-3-(2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline (115 mg, 0.36 mmol), 5-bromo-2-metoksi-3-trifluorometilpiridina (CAS registar 1214377-42-0) (119 mg, 0.47 mmol), XPhos (14 mg, 0.03 mmol), i NaOtBu (76 mg, 0.79 mmol) u dioksanu (2.5 ml) degazira se argonom u vremenu od 5 min, zatim se dodaje Pd2(dba)3(13 mg, 0.01 mmol). Epruveta je napunjena sa argonom, zatvorena i reakciona smeša se meša na temperaturi od 100<°>C u vremenu od 2 h. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa EtOAc i filtrati se ispiraju sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heptan / EtOAc, 93:7 do 40:60) kao bistar smolasti proizvod. (91 mg, prinos 51%).
UPLC RtM1=1.27 min; ESIMS: 497 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.29 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.64 (d, 1H), 5.70 (s, 1H), 5.36-5.46 (m, 1H), 4.34 (br s, 2H), 4.09 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.34-3.62 (m, 4H), 2.02-2.11 (m, 2H), 1.44 (s, 9H).
f) 1-(6-Metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-7-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin
[0203] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (88 mg, 0.18 mmol) u DCM-u (1.3 ml) obradjuje se sa TFA (0.14 ml, 1.77 mmol) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 17 h, zatim se kvenčuje sa zas. vod. rastvorom Na2CO3i ekstrahuje sa DCM-om. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku dajući jedinjenje iz naslova (66 mg, prinos 94%).
UPLC RtM1=0.72 min; ESIMS: 397 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.28 (d, 1H), 7.79 (d, 1H), 7.65 (s, 1H), 5.68 (s, 1H), 5.31-5.39 (m, 1H), 4.31-4.37 (m, 2H), 4.08 (s, 3H), 3.67-3.72 (m, 2H), 3.01-3.18 (m, 3H), 2.85-2.97 (m, 1H), 2.01-2.13 (m, 1H), 1.82-1.95 (m, 1H).
g) Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
[0204] Rastvor imidazo[2,1-b]tiazol-6-karboksilne kiseline, hidrobromida (1:1) (CAS registar 725234-39-9) (25 mg, 0.10 mmol) u DMF-u (0.45 ml) obradjuje se sa HBTU (41 mg, 0.11 mmol) i DIPEA (0.04 ml, 0.21 mmol). Dobijeni rezultujući rastvor narandžaste boje se meša na sobnoj temperaturi tokom 5 min, zatim se dodaje rastvor 1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-7-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazina (32 mg, 0.08 mmol) u DMF-u (0.45 ml). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 17 h, zatim se koncentruje na sniženom pritisku i ostatak se sipa u EtOAc i ispire sa koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira i koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija posle RP prep. HPLC (Sunfire PrepC1830x100 mm, 5 μm; rastvarač A: H2O+0.1 Vol.-% TFA; rastvarač B: CH3CN 0.1 Vol.-% TFA, gradijent 15–45% B u 16 min). Nakon filtriranja preko kartridža Agilent PL-HCO3MP SPE (bikarbonatni kartridž za uklanjanje kiseline podržan polimerom), jedinjenje iz naslova se dobija u obliku čvrstog proizvoda (23 mg, prinos 52%).
UPLC RtM1=1.00 min; ESIMS: 547 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.49 (dd, 1H), 8.16-8.20 (m, 2H), 7.92 (dd, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.37 (dd, 1H), 5.63 (d, 1H), 5.33-5.45 (m, 1H), 4.25-4.31 (m, 2H), 3.52-4.14 (m, 9H), 1.88-2.12 (m, 2H).
[0205] Primeri G2 do G3: Jedinjenja navedena u Tabeli 7 se dobijaju postupkom koji je analogan sa onim koji je korišćen u primeru G1.
Tabela 7
[0206] Primeri H1 do H16: Jedinjenja navedena u Tabeli 8 se dobijaju hromatografskom separacijom dijastereomera.
Tabela 8
Primer I1: (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
a) 5-Fluoro-6-metoksi-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on
[0208] Rastvor 6-bromo-5-fluoro-4H-benzo[1,4]oksazin-3-ona (CAS registar 1029421-36-0) (5.0 g, 20 mmol) u MeOH (10 ml) obradjuje se sa rastvorom natrijum metoksida (30% u MeOH, 11.3 ml, 61 mmol) i CuI (0.4 g, 2 mmol). Nakon mešanja u vremenu od 20 h na temperaturi od 80<°>C, reakciona smeša se kvenčuje sa zas. vod. rastvorom NaHCO3i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku dajući čvrsti proizvod bledožute boje. (2.2 g, prinos 92%).
UPLC RtM1=0.64 min.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.74 (m, 2H), 4.53 (s, 2H), 3.79 (s, 3H).
b) 5-Fluoro-6-hidroksi-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on
[0209] Rastvor 5-fluoro-6-metoksi-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (2.0 g, 10 mmol) u DCM-u (50 ml) obradjuje se na temperaturi od 0<°>C sa bor tribromidom (9.6 ml, 101 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 17 h, zatim se ohladi do temperature od 0<°>C i kvenčuje sa metanolom. Smeša se koncentruje na sniženom pritisku i ostatak se sipa u EtOAc i ispire sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se ispire sa 10% vod. rastvorom Na2S2O4, suši na Na2SO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heksan / EtOAc, 100:0 to 60:40) u obliku čvrstog proizvoda braon boje (780 mg, prinos 42%).
UPLC RtM1=0.49 min; ESIMS: 228 [(M+HCOO)-].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.00 (s, 1H), 6.65 (d, 1H), 6.45 (t, 1H), 4.50 (s, 2H).
c) 5-Fluoro-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol
[0210] Rastvor 5-fluoro-6-hidroksi-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (780 mg, 4.2 mmol) u THF-u (10 ml) se obradjuje sa BH3*THF (1M in THF, 12.8 ml, 12.8 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 17 h, zatim se ohladi do temperature od 0<°>C i kvenčuje sa metanolom (30 ml). Reakciona smeša se koncentruje na sniženom pritisku da bi se dobilo ulje braon boje (720 mg, kvantitativni prinos).
UPLC RtM1=0.54 min; ESIMS: 170 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.95 (s, 1H), 6.45 (d, 1H), 6.00 (t, 1H), 4.09 (m, 2H), 3.45 (m, 2H).
d) terc-butil estar (S)-3-(5-Fluoro-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0211] Rastvor trifenilfosfina (1.5 g, 5.7 mmol) u THF-u (20 ml) obradjuje se na temperaturi od 0°C sa DEAD (0.900 ml, 5.69). Organski rastvor se meša tokom 10 min na sobnoj temperaturi, zatim se dodaju 5-fluoro-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol (740 mg, 4.37 mmol) i (R)-tercbutil 3-hidroksipirolidin-1-karboksilat (1065 mg, 5.69 mmol. Reakciona smeša se meša tokom 19 h na temperaturi od 60<°>C i onda se koncentruje na sniženom pritisku. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (Heksan / EtOAc, 100:0 do 70:30) u vidu bezbojnog ulja (1.1 g, prinos 74%).
UPLC RtM1=1.07 min; ESIMS: 339 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.45 (d, 1H), 6.00 (t, 1H), 5.42 (br.s, 1H), 4.25-4.41 (m, 1H), 4.19 (t, 2H), 3.38-3.66 (m, 6H), 2.00-2.18 (m, 2H), 1.46 (d, 9H)
e) terc-butil estar (S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0212] Smeša terc-butil estra (S)-3-(5-fluoro-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline (100 mg, 0.296 mmol), 5-bromo-2-metoksi-3-metilpiridina (CAS registar 760207-87-2, 179 mg, 0.887 mmol), RuPhos (6.90 mg, 0.015 mmol), NaOtBu (85 mg, 0.887 mmol) i (2-dicikloilfosfino-2' 6'-diizopropil-11'-bifenil)(2-(2-aminoetil)fenil)paladijum(II) (12.07 mg, 0.015 mmol) u dioksanu (2 ml) se degaziraju sa argonom, zatim je zapečaćena i reakciona smeša se meša na temperaturi od 100<°>C tokom 23 h. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa EtOAc i filtrati se ispiraju sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografijom na silika gelu (Heksan / EtOAc, 100:0 do 70:30) u obliku ulja žute boje (123 mg, prinos 63%).
UPLC RtM1=1.29 min; ESIMS: 460 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.75 (d, 1H),7.45 (d, 1H), 6.55 (t, 1H), 6.35 (d, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.15 (t, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.60 (t, 2H), 3.38-3.66 (m, 4H), 2.12 (s, 3H), 2.00-2.18 (m, 2H), 1.46 (d, 9H).
f) 5-Fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0213] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (123 mg, 0.185 mmol) u DCM-u (2 ml) se obradjuje sa 4N HCl/dioksanom (0.046 ml, 0.185 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 3 dana, nakon toga se koncentruje na sniženom pritisku da bi se dobilo ulje crne boje (100 mg, prinos 79%).
UPLC RtM1=0.73 min; ESIMS: 360 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.75 (d, 1H),7.45 (d, 1H), 6.80 (m, 1H), 6.75 (m, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.15 (t, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.60 (t, 2H), 3.38-3.66 (m, 4H), 2.12 (s, 3H), 2.00-2.18 (m, 2H).
g) (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
[0214] Rastvor 1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-karboksilne kiseline (CAS registar 64096-87-3) (33.9 mg, 0.15 mmol) u DCM-u (2 ml) obradjuje se na sobnoj temperaturi sa Et3N (0.061 ml, 0.440 mmol) i HATU (55.7 mg, 0.147 mmol). Rezultujući rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 20 min, zatim se dodaje rastvor 5-fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (100 mg, 0.147 mmol) u DCM-u (2 ml). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h, zatim se razblažuje sa EtOAc i ispire sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon prep. RP-HPLC (SunFire C18 kolona OBD 5 mm 30x100mm, gradijent 25% do 45% ACN u 16 min). Frakcije se liofilizuju i filtriraju preko PL-HCO3MP SPE kartridža (bikarbonatni kartridž za uklanjanje kiseline podržan polimerom) dajući čvrsti proizvod braon boje (54 mg, prinos 71%).
UPLC RtM1=0.94 min; ESIMS: 520 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.75 (d, 1H),7.45 (d, 1H), 6.55 (t, 1H), 6.35 (d, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.15 (t, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.59-3.79 (m, 3H), 3.41-3.56 (m, 2H), 3.21-3.39 (m, 1H), 2.98-3.21 (m, 4H), 2.67-2.83 (m, 1H), 1.84-2.20 (m, 9H).
[0215] Primeri I2 do I3: Jedinjenja navedena u Tabeli 9 se dobijaju na osnovu postupka koji je analogan sa onim koji je korišćen u Primeru I1.
Tabela 9
Primer J: 5-{6-[(S)-1-((S)-1-Acetil-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]-oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril
[0216]
[0217] Rastvor 2-metoksi-5-{6-[(S)-1-((S)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitrila (Primer D39; 23 mg, 0.051 mmol) u DCM-u (1 ml) se obradjuje sa Et3N (0.014 ml, 10.4 mg, 0.102 mmol). Rastvor se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 10 min, nakon toga se dodaje acetil hlorid (0.0044 ml, 4.87 mg, 0.061 mmol).
Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h. Dodaju se naredna 2 ekviv. Et3N (0.014 ml, 10.4 mg, 0.102 mmol). i 1 ekv. acetil hlorida ((0.0037 ml, 4.06 mg, 0.051 mmol), mešanje se nastavlja na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h. Reakciona smeša se razblažuje sa DCM-om i zasić. vod. rastvor NaHCO3, zatim se propušta kroz fazni separator, vod. sloj se dva puta ekstrahuje sa DCM-om, kombinovani org. slojevi se koncentruju dajući jedinjenje iz naslova u obliku žutog ulja koje se prečišćava prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18, 10-85% ACN u 20 min). Frakcije se ekstrahuju sa smešom rastvarača DCM/NaHCO3, suše na MgSO4, koncentruju i liofilizuju dajući jedinjenje iz naslova u obliku pene žute boje (14 mg, prinos 53%). HPLC RtM10=2.55 min; ESIMS: 492 [(M+H)<+>].
Primer K: 5-{6-[(S)-1-((R)-1-Acetil-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril
[0218]
[0219] Ovaj primer se dobija analogno primeru J, polazeći od 2-metoksi-5-{6-[(S)-1-((R)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril (Primer D40).
HPLC RtM10=2.55 min; ESIMS: 492 [(M+H)<+>].
Primer L: 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-((R)-1-metil-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0221] Rastvor 2-metoksi-5-{6-[(S)-1-((R)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitrila (Primer D40, 26 mg, 0.058 mmol) u MeOH (1 ml) obradjuje se sa 37%-tnim vod. rastvorom formaldehida (0.043 ml, 46.9 mg, 0.578 mmol) i sirćetne kiseline (0.004 ml, 4.17 mg, 0.0069 mmol). Rastvor se meša u struji argona na sobnoj temperaturi tokom 45 min, nakon toga se dodaje NaBH3CN (5.65 mg 90% čvrsti proizvod, 0.081 mmol). Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 45 min, razblažuje sa DCM-om i zas. vod. rastvor NaHCO3. Vodeni sloj se dva puta reekstrahuje sa DCM-om, kombinovani org. slojevi se suše na MgSO4i koncentruju dajući sirovo jedinjenje iz naslova koje se prečišćava prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18, gradijent 5-75% ACNu vremenu od 20 min). Frakcije se ekstrahuju sa DCM/zas. vod. rastvor NaHCO3, suše na MgSO4, koncentruju i liofilizuju dajući jedinjenje iz naslova u obliku pene žute boje (20 mg, prinos 72%).
HPLC RtM11=2.24 min; ESIMS: 464 [(M+H)<+>].
Primer M; 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-piridin-2-il-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0222]
[0223] Rastvor 4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-piridin-2-il-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (dobijenog kako je opisano u primeru B1; 60 mg, 0.154 mmol), 2-hloropiridina (CAS 109-09-1, 0.017 ml, 21.0 mg, 0.185 mmol), Xphos (8.81 mg, 0.018 mmol) i Cs2CO3(125 mg, 0.385 mmol) u dioksanu (1 ml) se degazira sa argonom, nakon toga se dodaje Pd2(dba)3(7.05 mg, 0.0077 mmol). Reakciona smeša se zagreva do temperature od 80°C tokom 6 h, dodaje se XPhos (8.81 mg, 0.018 mmol), smeša se ponovo degazira sa argonom i dodaje se Pd2(dba)3(7.05 mg, 0.0077 mmol). Mešanje se nastavlja tokom noći na temperaturi od 80°C.
Smeša se filtrira kroz sloj celita i koncentruje dajući jedinjenje iz naslova koje se prečišćava pomoću NP-HPLC (kolona Grace Grom Saphir 65 Si, gradijent heptan:EtOAc:MeOH 68:30:2 do 0:65:35 u 12 min), prinos 32 mg (45%).
HPLC RtM1=0.72 min; ESIMS: 467 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.32 (d, 1H), 8.14-8.12 (m, 1H), 7.49-7.39 (m, 2H), 6.86 (d, 1H), 6.61 (d, 1H), 6.57-6.46 (m, 2H), 6.37 (d, 1H), 4.92-4.85 (m, 1H), 4.26-4.24 (m, 2H), 3.76-3.74 (m, 2H), 3.71 (d, 2H), 3.63-3.55 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 2.35-2.27 (m, 1H), 2.26-2.15 (m, 1H).
Primer N; 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-pirimidin-2-il-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0224]
[0225] Rastvor 4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-piridin-2-il-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin (dobijen kako je opisano u primeru B1; 60 mg, 0.154 mmol), 2-hloropirimidina (CAS 1722-12-9, 24.7 mg, 0.216 mmol) i DIPEA (0.054 ml, 39.8 mg, 0.308 mmol) u ACN (1 ml) se zagreva tokom 30 min na temperaturi od 140 °C u reaktoru za mikrotalasno zračenje. Proizvod se ekstrahuje sa zas. vod. rastvorom NaHCO3i EtOAc, filtrira i koncentruje dajući jedinjenje iz naslova koje se prečišćava prep. NP-HPLC (kolona Grace Grom Saphir 65 Si, gradijent heptan:EtOAc:MeOH 68:30:2 do 0:65:35 u 12 min), prinos 45 mg (63%) HPLC RtM1=0.97 min; ESIMS: 468 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.37-8.26 (m, 3H), 7.44 (d, 1H), 6.87 (d, 1H), 6.62 (d, 1H), 6.56-6.46 (m, 2H), 4.92-4.84 (m, 1H), 4.27-4.25 (m, 2H), 3.90-3.63 (m, 6H), 3.33 (s, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.37-2.13 (m, 2H).
Primer O1: 2-Metoksi-5-{2-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0226]
f)
a) N-(5-Benziloksi-2-hidroksi-fenil)-2-hloro-propionamid
[0227] Rastvor 2-hloro-propionske kiseline (CAS registar 598-78-7) (0.914 ml, 7.53 mmol) u DMF-u (20 ml) obradjuje se sa Et3N (1.259 ml, 9.03 mmol) i HATU (3.05 g, 8.03 mmol).
Rezultujući rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 30 min, zatim se dodaje 2-amino-4-benziloksi-fenol (CAS registar 102580-07-4) (1.08 g, 5.02 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 5 min, razblažuje sa EtOAc i koncentruje. Jedinjenje iz naslova se dobija posle fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 50:50) u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (617 mg, prinos 40%).
UPLC RtM14=1.32 min; ESIMS: 306 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.50 (d, 1H), 7.70 (br,s 1H), 7.45 (m, 5H), 6.80 (d, 1H), 6.65 (dd, 1H), 5.00 (s, 2H), 2.65 (s, 3H).
b) 6-Benziloksi-2-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on
[0228] Suvi rastvor N-(5-benziloksi-2-hidroksi-fenil)-2-hloro-propionamida (617 mg, 2.0 mmol) u DMF-u (15 ml) se obradjuje na temperaturi od 0<°>C sa natrijum hidridom 95% (58.1 mg, 2.4 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi u vremenu od 1 h, reakciona smeša se razblažuje sa DCM-om i ispire sa vodom. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 to 80:20) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (146 mg, prinos 27%).
UPLC RtM14=1.30 min; ESIMS: 270 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.80 (s, 1H), 7.45 (m, 5H), 6.85 (d, 1H), 6.65 (m, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.55 (q, 1H), 1.45 (d, 3H).
c) 6-Benziloksi-2-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0229] Rastvor 6-benziloksi-2-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (146 mg, 0.54 mmol) u THF-u (4 ml) se obradjuje na temperaturi od 0<°>C sa BH3*THF (1M u THF, 0.813 ml, 0.813 mmol).
Nakon mešanja na temperaturi od 35<°>C u vremenu od 1 h, reakciona smeša se ohladi do temperature od 0<°>C, kvenčuje sa vodom (0.5 ml) i 4N vodenim rastvorom NaOH (0.5 ml) i zatim se razblažuje sa EtOAc. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija u obliku čvrstog proizvoda bele boje (125 mg, prinos 90%).
UPLC RtM14=1.40 min; ESIMS: 256 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.45 (m, 5H), 6.50 (d, 1H), 6.20 (d, 1H), 6.10 (dd, 1H), 5.35 (s, 1H), 4.90 (s, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 1.35 (d, 3H).
d) 2-Metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol
[0230] Rastvor 6-benziloksi-2-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (124 mg, 0.486 mmol) u MeOH (10 ml) obradjuje se na sobnoj temperaturi sa amonijum formatom (276 mg, 4.37 mmol) i Pd(OH)2(68.2 mg, 0.486 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 60<°>C tokom 15 min. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa DCM i MeOH i tada se filtrati koncentruju. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (DCM / MeOH, 100:0 do 90:10) u obliku čvrstog proizvoda braon boje. (69.4 mg, prinos 87%).
UPLC RtM14=0.56 min; ESIMS: 166 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.50 (s, 1H), 6.45 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 5.85 (dd, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 2.90 (m, 1H), 1.35 (d, 3H).
e) [(S)-3-(2-Metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-il]-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
[0231] Suvi rastvor 2-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol-a (69 mg, 0.42 mmol) i (R)-1-(tetrahidro-2H-piran-4-karbonil)pirolidin-3-il metansulfonata (intermedijer C1, 209 mg, 0.75 mmol) u DMF-u (1.4 ml) se obradjuje sa 60%-tnim natrijum hidridom u mineralnom ulju (15.8 mg, 0.63 mmol) i reakciona smeša se meša na temperaturi od 50°C tokom 18 h. Reakciona smeša se razblažuje sa EtOAc i ispire sa zas. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (DCM / MeOH, 100:0 do 95:5) u obliku lepljivog čvrstog proizvoda crvenkasto-narandžaste boje (128 mg, prinos 88%).
UPLC RtM14=1.01 min; ESIMS: 347 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.50 (d, 1H), 6.25 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 6.05 (m, 1H), 5.65 (m, 2H), 5.35 (d, 2H), 4.45 (d, 2H), 3.00-4.00 (m, 6H), 2.00-2.40 (m, 4H), 1.5 (m, 4H)
f) 2-Metoksi-5-{2-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0232] Smeša (S)-(3-(2-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-iloksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanona (128 mg, 0.369 mmol), 5-bromo-2-metoksinikotinonitrila (CAS registar 941294-54-8, IA12), (94 mg, 0.443 mmol), XPhos (8.81 mg, 0.018 mmol), NaOtBu (53.3 mg, 0.554 mmol) i Pd2(dba)3(16.92 mg, 0.018 mmol) u toluenu (2.5 ml) se degazira sa argonom. Reakciona smeša se meša na temperaturi od 80<°>C u vremenu od 20 min. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz hyflo, ispire sa EtOAc i filtrati se ispiraju sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon prep. RP-HPLC (SunFire C18 kolona OBD 5 mm 30x100mm, gradijent 32% do 67% ACN u vremenu od 15 min). Frakcije su liofilizovane i filtrirane preko PL-HCO3MP SPE kartridrža (bikarbonatni kartridž za uklanjanje kiseline podržan polimerom) dajući čvrsti proizvod braon boje (39.1 mg, prinos 22%).
UPLC RtM14=1.10 min; ESIMS: 479 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6,394 K): δ 8.40-8.30 (m, 1H), 8.10-8.00 (m, 1H), 6.75 (d, 1H), 6.35 (m, 1H), 6.15 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.00 (s, 3H), 3.85 (m, 1H), 3.75-3.00 (m, 5H), 2.65 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.65 (m, 2H), 1.44 (d, 3H).
[0233] Primeri O2 do O3: Jedinjenja navedena u Tabeli 10 se dobijaju hromatografskom separacijom dijastereomera.
Tabela 10
Primer P: 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-piperidin-4-ilmetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0234]
a) (S)-terc-butil 4-((3-(4-(5-cijano-6-metoksipiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-iloksi)pirolidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilat
[0235] Rastvor 2-metoksi-5-[6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitrila (videti analog B1, c), 95 mg, 0.270 mmol) u DCE (4.5 ml) obradjuje se sa terc-butil 4-formilpiperidin-1-karboksilatom (60 mg, 0.281 mmol). Nakon mešanja tokom 2 dana na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se razblažuje sa DCM-om i zasić. vod. rastvorom NaHCO3.
Organski sloj se suši na Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 0:100), prinos 66 mg, (40%) .
UPLC RtM1=1.66 min; ESIMS: 550 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.35 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.85 (d, 1H), 6.35 (dd, 1H), 6.10 (d, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.45 (m, 2H), 3.60 (m, 2H), 2.75-2.15 (m, 4H), 1.50 (s, 9H).
b) (S)-2-metoksi-5-(6-(1-(piperidin-4-ilmetil)pirolidin-3-iloksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril
[0236] Rastvor (S)-terc-butil 4-((3-(4-(5-cijano-6-metoksipiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-iloksi)pirolidin-1-il)metil)piperidin-1-karboksilata) (66 mg, 0.120 mmol) u DCM-u (2 ml) se obradjuje sa TFA (0.093 ml, 1.20 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 17 h, zatim se kvenčuje sa zas. vodenim rastvorom Na2CO3i ekstrahuje sa DCM-om. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje na sniženom pritisku dajući jedinjenje iz naslova (36 mg, prinos 67%).
UPLC RtM1=1.03 min; ESIMS: 450 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.35 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.80 (d, 1H), 6.25 (m, 1H), 6.15 (d, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.45 (m, 2H), 3.60 (m, 2H), 2.75-2.15 (m, 4H).
c) (S)-2-metoksi-5-(6-(1-((1-metilpiperidin-4-il)metil)pirolidin-3-iloksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril
Rastvor (S)-2-metoksi-5-(6-(1-(piperidin-4-ilmetil)pirolidin-3-iloksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitrila (36 mg, 0.080 mmol) u DCE (2 ml) se obradjuje sa 37%-tnim vodenim rastvorom formaldehida (8.94 µl, 0.120 mmol). Rastvor se meša u atmosferi argona na sobnoj temperaturi u vremenu od 15 min, nakon toga se dodaje NaBH3CN (50.9 mg, 0.240 mmol). Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 30 min, razblažuje sa DCM-om i zasićenim vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na Na2SO4i koncentruje. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon prečišćavanja prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18, gradijent 15-50% ACN u 15 min). Frakcije se ekstrahuju sa DCM/zasić. vod. rastvorom NaHCO3, suše na Na2SO4, koncentruju i liofilizuju dajući jedinjenje iz naslova (18 mg, prinos 48%).
UPLC RtM1=1.04 min; ESIMS: 464 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.35 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.45 (s, 1H), 6.75 (d, 1H), 6.35 (dd, 1H), 6.15 (d, 1H), 4.65 (m, 1H), 4.45 (m, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.75-2.15 (m, 4H), 2.65 (s, 3H), 1.95 (m, 2H), 1.65 (m, 2H).
Primer Q: {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
[0238]
a) 6-(terc-Butil-dimetil-silaniloksi)-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on
[0239] Rastvor 6-hidroksi-2H-benzo[b][1,4]oksazin-3(4H)-on-a (CAS registar 53412-38-7) (1076 mg, 6.52 mmol) u DMF-u (8 ml) se obradjuje na sobnoj temperaturi sa TBDMSCl (1080 mg, 7.17 mmol) i imidazolom (532 mg, 7.82 mmol). Nakon mešanja u roku od 18 h na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se razblažuje sa DCM-om i ispire sa vodom. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 to 50:50) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (1.18 g, prinos 65%).
UPLC RtM2=1.91 min; ESIMS: 280 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.85 (br,s 1H), 7.35 (s, 1H), 6.85 (d, 1H), 6.45 (m, 1H), 6.30 (d, 1H), 4.50 (s, 2H), 1.00 (s, 9H), 0.25 (s, 6H).
b) 3,3-Dideutero-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol
[0240] Rastvor 6-(terc-butil-dimetil-silaniloksi)-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (8.34 g, 29.8 mmol) u THF-u (100 ml) obradjuje se na temperaturi od 0<o>C sa litijum aluminijum deuteridom (2.26 g, 59.7 mmol). Nakon 18 h mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se dodaje u hladni 1 M rastvor Rošelove soli i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 0:100) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (1.40 g, prinos 31%).
UPLC RtM9=0.69 min; ESIMS: 154 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.50 (s 1H), 6.45 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 5.85 (m, 1H), 5.15 (s, 1H), 4.00 (s, 2H).
c) terc-butil estar (S)-3-(3,3-Dideutero-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0241] Suvi rastvor terc-butil estra 3,3-dideutero-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol-a (1.44 g, 9.40 mmol) i (R)-3-metansulfoniloksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (5.49 g, 20.68 mmol) u DMF-u (10 ml) se obradjuje sa 60% natrijum hidridom u mineralnom ulju (0.752 g, 18.80 mmol) i reakciona smeša se meša 2 dana na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se razblažuje sa EtOAc i ispire za zasić vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 0:100), dajući 4.12 g, (kvantitativni prinos) jedinjenje iz naslova.
UPLC RtM1=1.07 min; ESIMS: 323 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 6.65 (m, 1H), 6.15 (m, 2H), 5.35 (m, 1H), 4.85 (m, 2H), 3.50 (m, 4H), 2.15 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
d) terc-butil estar (S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,3-dideutero-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0242] Ovaj primer se dobija analogno primeru G1, e).
UPLC RtM1=2.00 min; ESIMS: 444 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.95 (br.s, 1H), 7.45 (br.s, 1H), 6.80 (m, 1H), 6.25 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.50 (m, 4H), 2.25 (m, 2H), 1.50 (s, 9H).
e) 4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,3-dideutero-6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo-[1,4]oksazin
[0243] Ovaj primer se dobija na analogan način sa onim iz Primera G1, f).
UPLC RtM1=1.26 min; ESIMS: 342 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.95 (br.s, 1H), 7.45 (br.s, 1H), 6.80 (m, 1H), 6.25 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 4.35 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.15 (m, 2H), 2.75 (m, 2H), 2.25 (m, 2H).
f) {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
[0244] Ovaj primer se dobija na analogan način kao i onaj iz Primera B1, d). UPLC RtM1=1.65 min; ESIMS: 456 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 298 K): δ 8.45 (m, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.21 (t, 1H), 6.20 (t, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.00 (d, 1H), 4.37 (t, 2H), 4.00 (m, 3H), 3.39-3.74 (m, 4H), 2.50 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.09-2.10 (m, 5H).
Primer R: 5-{6-[(S)-1-(4-Hidroksi-cikloheksankarbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril
[0245]
[0246] Ovaj primer se dobija na analogan način kao i onaj iz Primera J, polazeći od 2-metoksi-5-{6-[(S)-1-((S)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitrila.
UPLC RtM14=0.91 min; ESIMS: 478 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.43 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 6.73 (m, 1H), 6.34 (m, 1H), 6.08 (dd, 1H), 4.76 (d, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.22 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.20-3.71 (m, 9H), 1.09-2.10 (m, 10H). Primer S: 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(2-piridin-4-il-acetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0247]
[0248] Ovaj primer se dobija na analogan način kao i onaj iz Primera J, polazeći od 2-metoksi-5-{6-[(S)-1-((S)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitrila.
UPLC RtM14=0.82 min; ESIMS: 471 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.45 (m, 3H), 8.29 (s, 1H), 7.21 (m, 2H), 6.74 (m, 1H), 6.33 (m, 1H), 6.10 (m, 1H), 4.87 (d, 1H), 4.22 (s, 2H), 4.00 (s, 3H), 3.39-3.74 (m, 8H), 1.09-2.10 (m, 2H).
Primer T: {(S)-3-[4-(5-Amino-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon
a) metil estar 5-[6-((S)-1-terc-Butoksikarbonil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksi-nikotinske kiseline
[0249]
[0250] U struji argona, dodaju se K3PO4(815 mg, 2.00 mmol) i bis-(t-butilfosfin)paladijum (29.4 mg. 0.06 mmol) u rastvor terc-butil estra (S)-3-(3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline (pripremljen kao što je opisano u fazi a) primera B) (615 mg, 1.92 mmol) i metil estra 5-bromo-2-metoksi-nikotinske kiseline (IA 22, CAS registar 122433-41-4) (614 mg, 1.30 mmol) u toluenu (6 ml). Reakciona smeša se degazira sa argonom tokom 15 min, nakon toga se meša na temperaturi od 110°C tokom 18 h, razblažuje sa EtOAc i ispire sa zasić. vodenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko MgSO4, i koncentruje i da bi se dobilo jedinjenje iz naslova koje se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (heptan / EtOAc 90:10 do 0:100) dajući smolasti proizvod žute boje (474 mg, prinos 51%).
UPLC RtM2=1.36 min; ESIMS: 486 [(M+H)<+>].
b)5-[6-((S)-1-terc-Butoksikarbonil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksi-nikotinska kiselina
[0251]
[0252] Rastvor metil estra 5-[6-((S)-1-terc-butoksikarbonil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksi-nikotinske kiseline (483 mg, 0.99 mmol) u dioksanu (5 ml) se obradjuje sa rastvorom natrijum hidroksida u granulama (119mg, 2.98 mmol) u vodi (2 ml). Rastvor se meša na temperaturi od 80°C u vremenu od 1 h. Reakciona smeša se zakiseli do pH3 sa vod. rastvorom 1N HCl i ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovane organske faze se suše na MgSO4i koncentruju dajući jedinjenje iz naslova nakon fleš hromatografije na silika gelu (heptan / EtOAc 100:0 do 0:100 nakon toga EtOAc/MeOH 90:10 to 80:20) u obliku čvrstog proizvoda (370mg, prinos 79%).
UPLC RtM6=1.79 min; ESIMS: 372 [(M+H-100)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.22-8.48 (m, 2H), 6.82 (d, 1H), 6.33 (m,1H), 6.21 (d, 1H), 4.60-4.76 (m, 1H), 4.27-4.41 (m, 2H), 4.15-4.27 (m, 3H), 3.62-3.77 (m, 2H), 3.31-3.58 (m, 5H), 1.85-2.19 (m, 2H), 1.34-1.56 (m, 9H)
c) terc-butil estar (S)-3-[4-(5-terc-Butoksikarbonilamino-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0253]
[0254] Rastvor 5-[6-((S)-1-terc-butoksikarbonil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksi-nikotinske kiseline (370 mg, 0.78 mmol) i Et3N (0.28 ml, 1.96 mmol) u tBuOH (5 ml) obradjuje sa DPPA (CAS registar 26386-88-9) (0.17 ml, 0.78 mmol) i meša na temperaturi od 100°C tokom 6 h. Dodaju se DCM i zasićeni rastvor NaHCO3, organski sloj se razdvaja elucijom kroz kartridž za razdvajanje faza i koncentruju dajući jedinjenje iz naslova nakon fleš hromatografije na silika gelu (heptan / EtOAc 100:0 do 50:50) u obliku smolastog proizvoda ružićaste boje (114 mg, 24%).
UPLC RtM2=1.36 min; ESIMS: 486 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.42 (br s, 1H), 7.75 (d, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.15-6.41 (m, 1H), 4.71 (br s, 1H), 4.23-4.39 (m, 2H), 4.09-4.22 (m, 3H), 3.62-3.75 (m, 2H), 3.31-3.58 (m, 4H), 1.86-2.26 (m, 2H), 1.40-1.60 (m, 18H).
d) 2-Metoksi-5-[6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-piridin-3-ilamin
[0255]
[0256] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[4-(5-terc-Butoksikarbonilamino-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (130 mg, 0.24 mmol) u DCM (2 ml) se obradjuje sa TFA (CAS registar 76-05-1) i meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša se koncentruje dajući jedinjenje iz naslova nakon elucije na Isolute SCX-2 kartridžu (2 g) (eluent MeOH, then 2M NH3/MeOH) u obliku smolastog proizvoda žute boje (88 mg, kvant. sirovi).
UPLC RtM2=1.25 min; ESIMS: 343 [(M+H)<+>].
e) {(S)-3-[4-(5-Amino-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon
[0257]
[0258] Rastvor 1-metil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (CAS registar 41716-18-1) (36.0 mg, 0.26 mmol) i Et3N (0.11 ml, 0.78 mmol) u DMF-u (1 ml) se obradjuje sa HBTU (CAS registar 94790-37) (107 mg, 0.28 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 20 min, reakciona smeša se ohladi do temperature od 5°C i dodaje se rastvor 2-metoksi-5-[6-((S)-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-piridin-3-ilamina (88 mg, 0.26 mmol) u DMF-u (3 ml). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h, koncentruje i ostatak se sipa u DCM (10 ml), ispire sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(5 ml), organski sloj se razdvaja elucijom kroz kartridž za razdvajanje faza i koncentruje. Ostatak se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (heptan / EtOAc 100:0 to 0:100), kombinovane frakcije se koncentruju, rastvaraju u tBuOH/H2O i liofilizuju dajući jedinjenje iz naslova u obliku bezbojnog čvrstog proizvoda (21 mg, prinos 37%).
UPLC RtM2=0.85 min; ESIMS: 451 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.64 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.65 m, 1H), 6.93 (m, 1H), 6.70 (m, 1H), 6.20-6.34 (m, 1H), 6.15 (m, 1H), 4.81 (m, 1H), 4.19-4.31 (m, 2H), 3.90-4.05 (m, 4H), 3.55-3.83 (m, 8H), 2.04-2.28 (m, 2H).
Primer U: N-(2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-piridin-3-il)-metansulfonamid
[0259]
[0260] Rastvor {(S)-3-[4-(5-Amino-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanona (22.9 mg, 0.05 mmol) u piridinu (1ml) se obradjuje sa metansulfonil hloridom (CAS registar 124-63-0) (0.08 ml, 0.97 mmol) i meša na temperaturi od 50°C tokom 18 h. Reakciona smeša se razblažuje sa DCM i H2O, organski sloj se razdvaja elucijom kroz kartridž za razdvajanje faza i koncentruje. Ostatak se prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (heptan / EtOAc 100:0 do 0:100 zatim sa EtOAc/MeOH 90:10 do 80:20), kombinovane frakcije se koncentruju, rastvaraju u tBuOH/H2O i liofilizuju dajući jedinjenje iz naslova u obliku bezbojnog čvrstog proizvoda (14 mg, 49%).
UPLC RtM2=1.39 min; ESIMS: 529 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 7.87 (d, 1H), 7.41-7.76 (m, 3H), 6.73 (m, 1H), 6.02-6.44 (m, 2H), 4.14-4.39 (m, 2H), 3.87-4.12 (m, 5H), 3.55-3.84 (m, 8H), 2.85-3.08 (m, 3H), 1.75-2.40 (m, 2H).
Primer V: (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metilpiridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
[0261]
a) 6-Metoksi-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on
[0262] Rastvor 6-bromo-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (CAS registar 1154740-47-2) (1000 mg, 4.13 mmol) i CuI (79 mg, 0.41 mmol) u 30% NaOMe u MeOH (8.1 ml) mešaju se na temperaturi od 130°C tokom 5 h. Smeša narandžasto/braon boje se ohladu do sobne temperature, razblažuje sa EtOAc i ispire sa zasić. vodenim rastvorom NaHCO3. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, i koncentruju dajući čvrsti proizvod narandžaste boje. Trituracijom sa cikloheksanom dobija se jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda ružičaste boje (647 mg, prinos 70%).
HPLC RtM1=0.73 min.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.21 (s, 1H), 6.76 (d, 1H), 6.53 (d, 1H), 4.42 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 2.05 (s, 3H).
b) 6-Hidroksi-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on
[0263] Suspenzija 6-metoksi-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (647 mg, 3.35 mmol) u DCM-u (30 ml) obradjuje se u struji argona na sobnoj temperaturi sa BBr3(3.16 ml, 33.5 mmol) i meša 18 h na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša se kvenčuje dodavanjem u kapima MeOH na temperaturi od 0°C dok se ne dobije bistar rastvor. Nakon uklanjanja rastvarača, ostatak se sipa preko smeše koju čine led/ zasić. vodeni rastvor NaHCO3i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši na MgSO4i koncentruje da bi se dobilo jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda braon boje (647 mg, sirovi), koji se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
HPLC RtM1=0.49 min.
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 10.11 (s, 1H), 6.43 (d, 1H), 5.98 (d, 1H), 4.57 (s, 2H), 1.89 (s, 3H).
c) 5-Metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol
[0264] Rastvor 6-hidroksi-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (647 mg, 3.61 mmol) u THF-u (20 ml) se obradjuje u struji argona na temperaturi od 0°C sa BH3*THF (1M in THF, 10.83 ml, 10.83 mmol) i meša 18 h na sobnoj temperaturi. Dodaje se MeOH i rastvor se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 1 h, koncentruje dajući ostatak koji se rastvara u THF-u (20 ml), obradjuje sa BH3*THF (1M u THF, 10.83 ml, 10.83 mmol) i meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dodaje se MeOH, rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 4 h, koncentruje do suva dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda braon boje (600 mg, sirovi), koji se koristi u sledećoj fazi bez daljeg prečišćavanja.
HPLC RtM1=0.49 min; ESIMS: 166 [(M+H)<+>].
d) terc-butil estar (S)-3-(5-Metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0265] Rastvor trifenilfosfina (1.33 g, 5.09 mmol) u THF-u (10 ml) se obradjuje sa DEAD (0.8 ml, 5.09 mmol) a zatim sa terc-butil estrom (R)-3-hidroksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (1 g, 5.45 mmol) i 5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol (600 mg, 3.63 mmol). Rezultujući crveno/braon rastvor se meša na temperaturi od 70°C tokom 18 h. Smeša braon boje se ohladi, razblažuje sa EtOAc i ispire sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju dajući ulje braon boje. Sirovi proizvod se prečišćava tri puta sa fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 90:10 do 40:60) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bezbojnog ulja (130 mg, prinos 11%) HPLC RtM1=1.09 min; ESIMS: 335 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.44 (d, 1H), 6.22-6.04 (m, 1H), 5.24 (br s, 1H), 4.75 (br s, 1H), 4.07-3.93 (m, 2H), 3.45-3.33 (m, 3H), 3.28 (d, 7H), 2.00 (d, 2H), 1.83 (d, 3H), 1.46-1.32 (m, 9H).
e) terc-butil estar (S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0266] Rastvor terc-butil estra (S)-3-(5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-karboksilne kiseline (120 mg, 0.36 mmol), 5-bromo-2-metoksi-3-metilpiridin (CAS registar 760207-87-2) (145 mg, 0.72 mmol), NaOtBu (103 mg, 1.08 mmol), RuPhos (CAS registar 787618-22-8) (8 mg, 0.02 mmol) i[RuPhos]palladacycle (ciklična jedinjenja paladijuma) (CAS registar 787618-22-8) (15 mg, 0.02 mmol) u dioksanu (2 ml) se meša na temperaturi od 100°C tokom 18 h. Smeša narandžasto/braon boje se ohladi, razblažuje sa EtOAc i ispire sa vodom. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruje dajući ulje braon boje. Sirovi proizvod se tri puta prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 95:05 do 60:40) dajući jedinjenje iz naslova u obliku jedinjenja iz naslova u obliku ulja žute boje (97 mg, prinos 60%)
HPLC RtM1=1.37 min; ESIMS: 456 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.40 (d, 1H), 7.28-7.07 (m, 1H), 6.74 (s, 2H), 4.84 (br s, 1H), 3.96 (br s, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.57 (br s, 2H), 3.44-3.19 (m, 10H), 2.08 (s, 3H), 2.05-1.92 (m, 2H), 1.60 (d, 3H), 1.34 (d, 9H).
f) (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
[0267] Rastvor terc-butil estar (S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (97 mg, 0.21 mmol) u DCM-u (3 ml) se obradjuje u struji argona na sobnoj temperaturi sa TFA (0.16 ml, 2.13 mmol) i meša u vremenu od 6 h. Reakciona smeša se kvenčuje sa zasić. vodenim rastvorom NaHCO3i organski rastvor se razdvaja kroz kartridž za razdvajanje faza dajući rastvor žute boje.1,1-Dioksoheksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-karboksilne kiseline (CAS registar 64096-87-3) (49 mg, 0.28 mmol), Et3N (0.09 ml, 0.64 mmol), EDC (62 mg, 0.32 mmol), HOBT (49 mg, 0.32 mmol) se dodaju u žuti rastvor i meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 18 h. Reakciona smeša se kvenčuje sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i organski sloj se razdvaja propuštanjem kroz kartridž za razdvajanje faza, nakon toga se koncentruje i prečišćava prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18 OBD 5 mm 30x100mm, Rastvarač A: H2O (0.1% TFA) Rastvarač B:
CH3CN (0.1% TFA) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje (76 mg, prinos 70%)
HPLC RtM1=0.98 min; ESIMS: 516 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6,375K): δ 7.44 (br s, 1H), 7.18 (br s, 1H), 6.75 (s, 2H), 4.88 (br s, 1 H), 4.02 (t, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.81-3.33 (m, 6H), 3.24-3.06 (m, 4H), 2.83 (br s, 1H), 1.66 (s, 3H). Rotameri.
Primer W: {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon Le
[0268]
a) 6-Bromo-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0269] Rastvor 6-bromo-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (CAS registar 1154740-47-2) (425 mg, 1.56 mmol) u THF-u (9 ml) obradjuje se u atmosferi argona na temperaturi od 0°C sa BH3*THF (1M in THF, 4.7 ml, 4.69 mmol) i meša 18 h na sobnoj temperaturi. Dodaje se THF 1M (2 ml) i mešanje se nastavlja naredna 24 h. Reakciona smeša se koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu ( cikloheksan / EtOAc 100:0 do 80:20) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (324 mg, prinos 86%)
HPLC RtM1=1.04 min; ESIMS: 228, 230 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.68 (d, 1H), 6.48 (d, 1H), 5.54 (br s, 1H), 4.04 (t, 2H), 3.36-3.26 (m, 2H), 2.11(s, 3H).
b) 6-Bromo-4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0270] Rastvor 6-bromo-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (324 mg, 1.42 mmol), Intermedijera IA1 (391 mg, 1.56 mmol), Cs2CO3(1018 mg, 3.13 mmol), BINAP (CAS registar 98327-87-8) (44 mg, 0.07 mmol), Pd(OAc)2(CAS registar 3375-31-3) (32 mg, 0.14 mmol) u toluenu (13 ml) meša se na temperaturi od 100°C tokom 18 h. Katalizatori i ligandi se dodaju i mešanje se nastavlja naredna 24 h na temperaturi od 100°C. Reakciona smeša se hladi do sobne temperature, razblažuje sa EtOAc i ispire sa vodom. Koncentrovanjem organskog sloja i prečišćavanjem fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 97:03 do 40:60) dobija se jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (345 mg, prinos 58%). HPLC RtM1=1.13 min; ESIMS: 397,399 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.99 (br. s, 1H), 7.37 (d, 1H), 7.24 (br. s, 1H), 6.83 (d, 1H), 4.13 (t, 2H), 3.97-3.86 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 2.52 (s, 3H), 1.93 (s, 3H).
c) Benzil-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-il]-amin
[0271] Rastvor 6-Bromo-4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (324 mg, 0.82 mmol), benzilamina (350 mg, 3.26 mmol), NaOtBu (157 mg, 1.63 mmol), RuPhos (CAS registar 787618-22-8) (30 mg, 0.06mmol) i [BrettPhos]palladacycle ((ciklična jedinjenja paladijuma) (CAS registar 1148148-01-9) (52 mg, 0.06 mmol) u dioksanu (16 ml) se meša na tempeaturi od 80°C tokom 0.5 h. Filtriranjem, koncentracijom filtrata i prečišćavanjem fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 88:12 do 35:65) dobija se jedinjenje iz naslova u obliku ulja žute boje (228 mg, prinos 66%).
HPLC RtM1=1.13 min; ESIMS: 424 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.94 (br s, 1H), 7.40-7.33 (m, 2H), 7.30 (t, 2H), 7.19 (t, 2H), 6.58 (d, 1H), 6.30 (d, 1H), 5.25 (t, 1H), 4.30 (d, 2H), 4.04-3.97 (m, 2H), 3.90 (d, 2H), 3.29 (s, 3H), 2.51 (br s, 3H), 1.76 (s, 3H).
d) 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ilamin [0272] Rastvor benzil-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-il]-amina (228 mg, 0.53 mmol), sirćetne kiseline (0.21 ml, 3.70 mmol), Pd/C u MeOH/THF (2.5/2.5 ml) se hidrogenizuje sa H2na sobnoj temperaturi tokom 65 h. Filtriranjem i koncentrovanjem filtrata dobija se jedinjenje iz naslova u obliku ulja zelene boje (200 mg, sirovi, uključujući preostali AcOH).
HPLC RtM1=0.64 min; ESIMS: 334 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.96 (br s, 1H), 7.17 (br s, 1H), 6.62-6.54 (d, 1H), 6.54-6.45(d, 1H), 4.48 (br s, 2H), 4.01 (t, 2H), 3.88 (br s, 2H), 3.28 (s, 3H), 1.88 (d, 3H), 1.63 (s, 3H).
e) 4-(6-Metanesulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol [0273] Rastvor 4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksa zin-6-ilamina (200 mg, 0.60 mmol) u vodi (3.5 ml) i H2SO4(0.32 ml) se dodaje u kapima u rastvor natrijum nitrita (49.7 mg, 0.72 mmol) u vodi (10 ml) na temperaturi od 0°C. Smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 3 dana. Reakciona smeša se filtrira i filtrat se kvenčuje sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši MgSO4, filtrira i koncentruje dajući ulje braon boje. Prečišćavanje fleš hromatografijom na silika gelu (DCM / MeOH 88:12 do 80:20) dobija se jedinjenje iz naslova u obliku ulja braon boje (50 mg, prinos 25%).
HPLC RtM1=0.78 min; ESIMS: 335 [(M+H)<+>].
f) (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon
[0274] Rastvor trifenilfosfina (55 mg, 0.21 mmol) u THF-u (2.5 ml) se obradjuje sa DEAD (0.03 ml, 0.21 mmol), a za tim sa terc-butil estar (R)-3-hidroksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (33 mg, 0.18 mmol) i 4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol (50 mg, 0.15 mmol). Rezultujući crvenkasto/
braon rastvor se meša na temperaturi od 70°C tokom 18 h. Reakciona smeša se ohladi do sobne temperature, razblažuje sa EtOAc i ispire sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na MgSO4. koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 90:10 do 40:60) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (44 mg, prinos 58%)
HPLC RtM1=1.16 min; ESIMS: 504 [(M+H)<+>].
g) {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
[0275] Rastvor (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metilpiridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon (44 mg, 0.09 mmol) u DCM-u (4 ml) se obradjuje pod argonom na sobnoj temperaturi sa TFA (0.07 ml, 0.17 mmol) i meša 18 h. Reakciona smeša se kvenčuje sa zasić. vodenim rastvorom NaHCO3i organski rastvor se razdvaja propuštanjem kroz kartridž za razdvajanje faza, nakon toga se koncentruje i prečišćava flaš hromatografijom na silika gelu (DCM / MeOH 100:0 to 90:10). Dobijeni proizvod se rastvara u DCM-u (4 ml) i dodaje se Et3N. U reakcionu smešu na temperaturi od 0°C dodaje se tetrahidro-piran-4-karbonil hlorid (CAS registar 40191-32-0) (15 mg, 0.10 mmol) i rezultujući rastvor narandžaste boje se meša na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Reakciona smeša se kvenčuje zasićenim vod. rastvorom NaHCO3i organski sloj se razdvaja elucijom kroz kartridž za razdvajanje faza, zatim se koncentruje i prečišćava SFC (kolona NH2(250 x 30mm (l x w), 60A, 5µm, Princeton, gradijent metanola u superkritičnom CO2) dajuči jedinjenje iz naslova u obliku ulja žute boje (15 mg, prinos 32%)
HPLC RtM1=0.88 min; ESIMS: 516 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6,375K): δ 7.98 (br s, 1 H), 7.19 (br s, 1 H), 6.92 - 6.85 (m, 1 H), 6.85 - 6.77 (m, 1 H), 4.95 (br s, 1 H), 4.12 (t, 2 H), 3.92 (t, 2 H), 3.88 (br s, 2 H), 3.61 (br s, 3 H), 3.38 (td, 2 H), 3.27 (s, 3 H), 2.68 (d, 1 H), 2.56 (s, 3 H), 2.17 (br s, 2 H), 1.73 (s, 3 H), 1.58 (br s, 4 H). Rotameri.
Primer X: {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon
[0276]
a) 6-Bromo-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0277] Rastvor 6-bromo-5-metil-4H-benzo[1,4]oksazin-3-on-a (CAS registar 1154740-47-2) (2.8 g, 11.56 mmol) u THF-u (50 ml) obradjuje se u argonu sa BH3*THF (1M in THF, 34.7 ml, 34.70 mmol) i zagreva na refluksu tokom 2 h. Dodaje se MeOH i rastvor se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 1 h, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 80:20) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (1.8 g, prinos 68%).
HPLC RtM1=1.04 min; ESIMS: 228, 230 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.68 (d, 1H), 6.48 (d, 1H), 5.54 (br s, 1H), 4.04 (t, 2H), 3.36-3.26 (m, 2H), 2.11 (s, 3H).
b) 6-Bromo-4-(5-difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin
[0278] Rastvor 6-bromo-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (500 mg, 2.19 mmol), Intermedijera IA6 (574 mg, 2.41 mmol), NaOtBu (421 mg, 4.38 mmol), BrettPhos (CAS registry 1070663-78-3) (59 mg, 0.11 mmol) i [BrettPhos]palladacycle (ciklična jedinjenja paladijuma) (CAS registar 1148148-01-9) (88 mg, 0.11 mmol) u dioksanu (11 ml) se meša na temperaturi od 100°C u vremenu od 18 h. Katalizatori i ligandi se dodaju i mešanje se nastavlja 48 h na temperaturi od 100°c. Reakciona smeša se hladi do sobne temperature, razblažuje sa EtOAc i ispire sa zasić. vodenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko MgSO4,koncentruje dajući ulje braon boje. Prečišćavanje fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 80:20) dobija se jedinjenje iz naslova u obliku ulja braon boje (150 mg, prinos 18%). HPLC RtM1=1.34 min; ESIMS: 385, 387 [(M+H)<+>].
c) 4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol [0279] Smeša 6-bromo-4-(5-difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (150 mg, 0.39 mmol), KOH (65 mg, 1.17 mmol) u vodi (0.33 ml), tetrametil-tbutil-XPhos (CAS registar 857356-94-6) (18.72 mg, 0.04 mmol) i Pd2(dba)3(17.83 mg, 0.02 mmol) u dioksanu (2 ml) se degazira sa azotom i zagreva na temperaturi od 100°C tokom 18 h. Filtriranje, koncentrovanje i prečišćavanje fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 70:30) kao rezultat ima dobijanje jedinjenja iz naslova u obliku ulja narandžaste boje (65 mg, prinos 52%).
HPLC RtM1=1.01 min; ESIMS: 323 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.83 (s, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.00 (t, 1H), 6.61 (d, 1H), 6.55 (d, 1H), 3.93 (t, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 1.60 (s, 3H).
d) terc-butil estar (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0280] Rastvor trifenilfosfina (74 mg, 0.28 mmol) u THF-u (2 ml) se obradjuje sa DEAD (0.04 ml, 0.28 mmol) a zatim i sa terc-butil estrom (R)-3-hidroksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 127423-61-4) (45 mg, 0.24 mmol) i 4-(5-difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ol (65 mg, 0.20 mmol). Rezultujući crvenkasto/ braon rastvor se meša na temperaturi od 70°C tokom 18 h, zatim se se ohladi do sobne temperature, razblažuje sa EtOAc i ispire sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši na MgSO4. koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 90:10 do 40:60) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda žute boje (51 mg, prinos 42%). HPLC RtM1=1.36 min; ESIMS: 492 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.92-7.75 (m, 1H), 7.46-7.33 (m, 1H), 7.19-6.84 (t, 1H), 6.77 (s, 2H), 4.86 (br s, 1H), 3.98 (br s, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.73-3.55 (m, 2H), 3.46-3.33 (m, 2H), 2.12-1.95 (m, 2H), 1.65-1.55 (m, 3H), 1.34 (br s, 9H). Rotamers.
e) {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon
[0281] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (51 mg, 0.10 mmol) u DCM-u (3 ml) obradjuje se u argonu na sobnoj temperaturi sa TFA (0.08 ml, 1.10 mmol) i meša 18 h. Reakciona smeša se kvenčuje zasićenim vod. rastvorom NaHCO3i organski rastvor se razdvaja pomoću kartridža za razdvajanje faza, što za rezultat ima dobijanje rastvora žute boje. Dodaju se 1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-karboksilna kiselina (CAS registar 64096-87-3) (25 mg, 0.14 mmol), Et3N (0.05 ml, 0.33 mmol), EDC (31 mg, 0.16 mmol) i HOBT (25 mg, 0.16 mmol) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakciona smeša se kvenčuje sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3.
Organski sloj se razdvaja elucijom kroz kartridž za razdvajanje faza, sirovi ostatak se prečišćava SFC (column Reprosil NH2(250 x 30mm (l x w), 60A, 5µm, Princeton, gradijent metanola u superkritičnom CO2) dajuči jedinjenje iz naslova u obliku ulja žute boje (19 mg, prinos 30%) HPLC RtM1=1.00 min; ESIMS: 552 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6,375K): δ 7.85 (br s, 1 H), 7.43 (br s, 1H), 6.96 (t, 1H), 6.80 (s, 2H), 5.11-4.71 (m, 1H), 4.04 (t, 2 H), 3.94 (s, 3H), 3.70 (d, 2 H), 3.63 (br s, 2 H), 3.52 (br s, 2 H), 3.23-3.04 (m, 4H), 2.92-2.73 (m, 1H), 2.16 (br s, 2 H), 2.06 (br s, 4H), 1.67 (s, 3 H), Rotamer.
Primer Y: 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-ilamino]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0282]
a) 5-Jodo-2-metoksi-nikotinonitril
[0283] Smeša 2-metoksi-nikotinonitrila (CAS registar 7254-34-4) (10 g, 74.6 mmol) i N-jodosukcinimida (CAS registar 516-12-1) (25.2 g, 112 mmol) se obradjuje sa trifluorosirćetnom kiselinom (CAS registar 76-05-1) (68.9 ml, 895 mmol) i anhidridom trifluorosirćetne kiseline (CAS registar 407-25-0) (31.6 ml, 224 mmol) i reakciona smeša se zagreva do temperature od 90<°>C u vremenu od 18 h, zatim se hladi do sobne temperature i sipa preko leda. Smeša se lagano učini baznom korišćenjem 30% vodenog rastvora NaOH, razblažuje sa vodom i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se uzastopno ispire sa 20%-tnim vod. rastvorom natrijum tiosulfata, i zasić. vodenim rastvorom NaHCO3, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 20:80) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (12.2 g, prinos 63%)
UPLC RtM14=1.30 min; ESIMS: 261 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.54 (d, 1H), 8.11 (d, 1H), 4.06 (s, 3H).
b) 5-(6-Bromo-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il)-2-metoksi-nikotinonitril
[0284] Smeša 6-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazina (CAS registar 105655-01-4) (5.0 g, 23.36 mmol), 5-jodo-2-metoksi-nikotinonitrila (12.2 g, 46.7 mmol) i NaOtBu (2.69 g, 28.0 mmol) u toluenu (50 ml) se degazira sa argonom tokom 10 min, zatim se dodaje bis(tri-terc-butilfosfin)-paladijum(0) (0.36 g, 0.70 mmol). Reakciona smeša se meša u argonu na temperaturi od 110<°>C tokom 18 h. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz sloj celita, ispire sa EtOAc i filtrati se ispiraju sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 50:50) dajući jedinjenje iz naslova (4.2 g, prinos 52%).
UPLC RtM14=1.55 min; ESIMS: 348 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.31 (d, 1H), 7.80 (d, 1H), 6.89 (dd, 1H), 6.78 (d, 1H), 6.67 (d, 1H), 4.30-4.35 (m, 2H), 4.10 (s, 3H), 3.61-3.66 (m, 2H).
c) terc-butil estar (S)-3-[4-(5-Cijano-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ilamino]-pirolidin-1-karboksilne kiseline
[0285] Smeša 5-(6-Bromo-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il)-2-metoksi-nikotinonitrila
(300 mg, 0.87 mmol), terc-butil estra (S)-3-amino-pirolidin-1-karboksilne kiseline (CAS registar 147081-44-5) (0.26 ml, 1.47 mmol), 2-(dicikloheksilfosfino)bifenila (CAS registar 247940-06-3) (18.2 mg, 0.05 mmol) i NaOtBu (100 mg, 1.04 mmol) u toluenu (10 ml) se degazira sa argonom tokom 10 min, zatim se dodaje Pd2(dba)3(23.8 mg, 0.03 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 110<°>C tokom 1 h u argonu. Nakon hladjenja do sobne temperature, reakciona smeša se filtrira kroz sloj celita, ispire sa EtOAc i filtrati se koncentruju. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (cikloheksan / EtOAc, 100:0 do 70:30) u obliku ulja žute boje (150 mg, prinos 37%).
UPLC RtM11= 2.73 min; ESIMS: 452 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.36 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 6.68 (s, 1H), 6.19 (dd, 1H), 6.03 (s, 1H), 4.19-4.24 (m, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.81-3.89 (m, 1H), 3.62-3.68 (m, 2H), 3.48-3.56 (m, 1H), 3.35-3.48 (m, 2H), 3.08-3.18 (m, 1H), 2.05-2.18 (m, 1H), 1.75-1.87 (m, 1H), 1.46 (s, 9H).
d) 2-Metoksi-5-[6-((S)-pirolidin-3-ilamino)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitril [0286] Rastvor terc-butil estra (S)-3-[4-(5-cijano-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-ilamino]-pirolidin-1-karboksilne kiseline (144 mg, 0.32 mmol) u CH2Cl2(4 ml) se obradjuje sa TFA (0.49 ml, 6.38 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h, kvenčuje sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrahuje sa DCM. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentrovanje na sniženom pritisku dobija se jedinjenje iz naslova u obliku pene žute boje (120 mg, prinos 100%).
UPLC RtM11= 2.06 min; ESIMS: 352 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.36 (d, 1H), 8.04 (d, 1H), 6.69 (d, 1H), 6.17 (dd, 1H), 6.00 (d, 1H), 4.19-4.26 (m, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.80-3.90 (m, 1H), 3.62-3.69 (m, 2H), 3.10-3.20 (m, 2H), 2.98-3.09 (m, 1H), 2.82-2.90 (m, 1H), 2.06-2.18 (m, 1H), 1.70-1.81 (m, 1H).
e) 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-ilamino]-2,3-dihydrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril
[0287] Na temperaturi od 0<°>C, rastvor 2-Metoksi-5-[6-((S)-pirolidin-3-ilamino)-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitrila (27 mg, 0.08 mmol) u CH2Cl2(1 ml) se obradjuje sa Et3N (0.02 ml, 0.12 mmol) i tetrahidro-piran-4-karbonil hloridom (CAS registar 40191-32-0) (11 µl, 0.09 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 0<°>C tokom 1 h, zatim se kvenčuje sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrahuje sa DCM-om. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon prep. RP-HPLC (kolona Sunfire PrepC18 OBD 30x100 mm, 5 μm; rastvarač A: H2O+0.1 Vol.-% TFA; rastvarač B: CH3CN 0.1 Vol.-% TFA, gradijent 5–60% B u 20 min) i filtracijom u Agilent PL-HCO3MP SPE kartridžu u obliku čvrstog proizvoda žute boje (9 mg, prinos 25%).
UPLC RtM2= 1.19 min; ESIMS: 464 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.36 (d, 1H), 8.05 (m, 1H), 6.69 (dd, 1H), 6.15-6.23 (m, 1H), 5.97-6.07 (m, 1H), 4.15-4.29 (m, 2H), 4.06 (s, 3H), 3.82-4.03 (m, 3H), 3.35-3.80 (m, 8H), 2.65-2.84 (m, 1H), 2.03-2.28 (m, 1H), 1.49-2.03 (m, 5H).
Uslovi za reakciju kuplovanja
Buhvaldove aminacije ili hidroksilacije
[0288]
B) Uslovi za formiranje amidne veze
[0289]
C) Uslovi za uvodjenje bočnog lanca
CC1) Korišćenje mezilata
[0290] Na sobnoj temperaturi, suvi rastvor intermedijera piridin-2-ol (1 ekv.) i intermedijera mezilata (1.1 - 2 ekv.) u DMF-u (0.17 M) obradjuje se sa NaH u mineralnom ulju (2 - 3 ekviv.) i reakciona smeša se meša na 20-80<°>C u vremenu od 4 do 72 h.
CC2) Korišćenje mezilata
[0291] Na sobnoj temperaturi, suvi rastvor intermedijera aril-6-ol (1 ekv.) i intermedijera mezilata (1.1 - 2 ekviv.) u DMF-u (0.17M) obradjuje se sa NaH u mineralnom ulju (2 - 3 ekviv.) i reakciona smeša se meša na temperaturi od 50-80<°>C u periodu od 4 do 72 h.
CC3) Korišćenje mezilata
[0292] Na sobnoj temperaturi, suvi rastvor aril-6-ol intermedijera (1 ekv.) i intermedijera mezilata (2.5 ekv.) u DMF-u (0.06M) obradjuje se sa K2CO3(4 ekv.) i reakciona smeša se meša na temperaturi od 85°C do 100°C u vremenu od 4 do 50 h.
CC4) Korišćenje Mitsunobu [0293 ]
Na sobnoj temperaturi, dodaju se DEAD (1.4 ekviv.), terc-butil estar (R)-3-Hidroksi-pirolidin-1-karboksilne kiseline (1.5 eq.) i aril-6-ol intermedijer (1 ekviv.) u rastvor trifenilfosfina (1.4 ekv.) u THF-u (0.30M) . Crveni/braon rastvor se meša na temperaturi od 70 °C tokom 18 h.
D) Uslovi za hiralnu hromatografiju (metoda separacije)
[0294]
Dobijanje Intermedijera IA) Aromatični bromidi
[0295]
Intermedijer IA1: 5-bromo-2-metansulfonil-3-metil-piridin
[0296] Rastvor 5-bromo-2-metilsulfanil-3-metil-piridina (9.04 g, 41.4 mmol) u DCM-u (83 ml) se obradjuje na temperaturi od 0°C sa mCPBA (21.46 g, 124 mmol). Nako 18 h mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se dodaje u 2N vod. rastvor NaOH i ona se ekstrahuje sa DCM-om. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon trituracije sa cikloheksanom dajući čvrsti proizvod bele boje (9.25 g, prinos 89%).
UPLC RtM1=0.81 min; MS (ESI, m/z): 250.1 [(M+H<+>]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.68 (d, 1H), 8.30 (d, 1H), 3.37 (s, 3H), 2.58 (s, 3H).
Intermedijer IA2: 5-bromo-3-fluoro2-metansulfonil-piridin
[0297] Rastvor 5-bromo-3-fluoro-2-metilsulfanil-piridina (222 mg, 1.0 mmol) u DCM-u (5 ml) se obradjuje na temperaturi od 0 °C sa mCPBA (518 mg, 3.0 mmol). Nakon mešanja u vremenu od 1.5 h na sobnoj temperaturi reakciona smeša se dodaje u 2N vod. rastvor NaOH i ekstrahuje sa DCM. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija u obliku čvrstog proizvoda bele boje (241 mg, prinos 95%) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja.
UPLC RtM1=0.63 min;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.75 (d, 1H), 8.60 (d, 1H), 3.40 (s, 3H).
Intermedijer IA3: 5-Bromo-2-metansulfonil-3-trifluorometil-piridin
[0298] Rastvor 5-bromo-2-metilsulfanil-3-trifluorometil-piridina (1.40 g, 1.16 mmol) u DCM-u (30 ml) se obradjuje na temperaturi od 0°C sa mCPBA (2.67 g, 15.48 mmol). Nakon mešanja u vremenu od 18 h na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se dodaje u 4N vod. rastvor NaOH i ekstrahuje se DCM-om. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heksan / EtOAc, 100:0 do 70:30) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (940 mg, prinos 60%).
UPLC RtM1=0.87 min; MS (ESI, m/z): 323.0 [(M+NH4)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.45 (d, 1H), 8.76 (d, 1H), 3.57 (s, 3H).
Intermedijer IA4: 5-Bromo-3-difluorometil-2-metansulfonil-piridin
a) 2,5-Dibromo-3-difluorometil-piridin
[0299] Rastvor Et3N trifluorida (1.80 ml, 11.3 mmol) u DCM-u (40ml) se obradjuje na temperaturi od 0 °C sa Xtalfluor-E (2.67 g, 15.5 mmol) i 2,5-dibromo-piridin-3-karbaldehidom (1.0 g, 3.77 mmol). Nakon 19 h mešanja na sobnoj temperaturi reakciona smeša se razblažuje sa TBME i ispire sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje da bi preostalo ulje žute boje (950 mg, prinos 88%) koji se koristi bez daljeg prečišćavanja.
UPLC RtM1=1.05 min;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.57 (d, 1H), 8.48 (d, 1H), 7.14 (t, 1H), 3.35 (s, 3H).
b) 5-Bromo-3-difluorometil-2-metansulfonil-piridin
[0300] Rastvor 2,5-dibromo-3-difluorometil-piridina (1400 mg, 1.16 mmol) u DMF-u (10ml) se obradjuje na temperaturi od 0°C sa natrijum metantiolatom (348 mg, 4.97 mmol). Nakon 1,5 h mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša se hladi do temperature od 0°C i u reakcionu smešuse dodaje mCPBA (2857 mg, 16.56 mmol). Nakon 1 h mešanja na sobnoj temperaturi reakciona smeša se dodaje u 4N vod. rastvor NaOH i nakon toga se ekstrahuje sa TBME.
Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heksan / EtOAc, 100/0 do 80/20) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (498 mg, prinos 53%).
UPLC RtM1=0.86 min;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.67 (d, 1H), 8.45 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 3.37 (s, 3H).
Intermedijer IA5: 5-Bromo-3-fluorometil-2-metansulfonil-piridin
a) 5-Bromo-2-hloro-3-fluorometil-piridin
[0301] Rastvor Et3N trifluorida (1.76 ml, 10.79 mmol) u DCM-u (20 ml) se obradjuje na temperaturi od 0°C sa Xtalfluor-E (1.65 g, 7.19 mmol) i (5-bromo-2-hloro-piridin-3-il)-metanolom (0.80 g, 3.60 mmol). Nakon 18 h mešanja na sobnoj temperaturi reakciona smeša se razblažuje sa TBME i ispire sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heksan / EtOAc, 100/0 do 90/10) u obliku bezbojnog ulja (286 mg, prinos 35% yield).
UPLC RtM1=0.98 min;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.53 (d, 1H), 8.45 (d, 1H), 5.52 (d, 1H)
b) 5-Bromo-3-fluorometil-2-metansulfonil-piridin
[0302] Rastvor 2,5-dibromo-3-difluorometil-piridina (1.4 g, 1.16 mmol) u DMF-u (10 ml) se obradjuje na temperaturi od 0°C sa natrijum metantiolatom (348 mg, 4.97 mmol). Nakon mešanja na sobnoj temperaturi u vremenu od 1.5 h, reakciona smeša se hladi do temperature od 0°C i uvodi se mCPBA (2857 mg, 16.56 mmol) u reakcionu smešu. Nakon 1 h mešanja na sobnoj temperaturi reakciona smeša se dodaje u 4N vod. rastvor NaOH i ekstrahuje se sa TBME. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filitrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heksan / EtOAc, 100/0 do 80/20) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (498 mg, prinos 53%)
UPLC RtM1=0.86 min;
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.67 (d, 1H), 8.45 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 3.37 (s, 3H).
Intermedijer IA7: 5-Bromo-3-fluorometil-2-metoksi-piridin
[0303] Rastvor (5-bromo-2-metoksi-piridin-3-il)-metanola (343 mg, 1.57 mmol) u DCM-u (7 ml) obradjuje na temperaturi od 0°C sa deoksofluorom (1.5 ml, 3.46 mmol) i EtOH (27.6 μl, 0.47 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi, kvenčuje sa zas. vodenim rastvorom NaHCO3i ekstrahuje sa DCM. Organski sloj se suši preko Na2SO4, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heksan/EtOAc 80:20) u obliku ulja žute boje (80 mg, prinos 23%).
UPLC RtM1=1.07 min;
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.32 (t, 1H), 8.00 (t, 1H), 5.37 (d, 2H), 3.89 (s, 3H).
Intermedijer IA24: 1-(5-Bromo-2-metoksi-piridin-3-sulfonil)-4-metil-piperazin
a) (5-Bromo-2-metansulfonil-piridin-3-il)-metil-amin
[0304]
r
[0305] Rastvor 5-bromo-2-hloro-piridin-3-sulfonil hlorida (CAS registar 1146290-19-8) ( 580 mg, 1.99 mmol) i Et3N (0.55 ml, 3.99 mmol) u DCM-u (20 ml) na temperaturi od 0°C obradjuje se sa 1-metil-piperazinom (0.33 ml, 2.99 mmol), rezultujuša smeša se meša na temperaturi od 0°C tokom 20 min i na sobnoj temperaturi u vremenu od 18 h. Smeša se razblažuje sa DCM (30 ml) i ispire za zasić. vodenim rastvorom NaHCO3. Organski sloj se suši preko MgSO4, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (DCM / MeOH, 100/0 do 90:10) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (420 mg, prinos 59%).
HPLC RtM2=1.49 min; ESIMS: 356 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.62 (d, 1H), 8.50 (d, 1H), 3.57-3.29 (t, 4H), 2.50 (t, 4H), 2.33(s, 3H).
b)1-(5-Bromo-2-metoksi-piridin-3-sulfonil)-4-metil-piperazin
[0306]
[0307] Rastvor 1-(5-bromo-2-hloro-piridin-3-sulfonil)-4-metil-piperazina (420 mg, 1.18 mmol) u THF-u (10 ml) se obradjuje deo po deo sa natrijum metoksidom (192 mg, 3.55 mmol).
Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Smeša se kvenčuje dodatkom vode i ekstrahuje sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi se ispiraju sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3i suše preko MgSO4, koncentruju i prečišćavaju fleš hromatografijom na silika gelu (DCM / MeOH 100:0 do 90:10) dajući jedinjenje iz naslova (358 mg, prinos 85%).
HPLC RtM2=1.47 min; ESIMS: 350, 352 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.36 (d, 1H), 8.28 (d, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.35 (br s, 4 H), 2.49 (br s, 4 H), 2.33 (s, 3H).
Intermedijer IA30: 3-Bromo-5-(propan-2-sulfonil)-piridin
[0308]
[0309] Rastvor 3,5-dibromo-piridina (CAS registar 625-92-3) ( 495 mg, 2.09 mmol) u NMP-u (5 ml) obradjuje se sa natrijum propan-2-tiolatom (CAS registar 20607-43-6) (205 mg, 2.09 mmol), rezultujuća smeša se meša na temperaturi od 80°C tokom 2 h. Smeša se ohladi i razblažuje EtOAc, ispire sa vodom (2x), nakon toga sa koncentrovanim rastvorom soli. Organski sloj se suši preko MgSO4i koncentruje. Dobijeni ostatak se rastvara u DCM-u (10 ml), obradjuje sa mCPBA (1083 mg, 6.27 mmol) i meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dodaje se 10% vod. rastvor natrijum sulfita i smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Faze se razdvajaju i organski sloj se ispire sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3, suši preko MgSO4, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 00:100) dajući jedinjenje iz naslova (364 mg, prinos 59%).
HPLC RtM2=0.77 min; ESIMS: 264, 266 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.98 (dd, 2H), 8.33 (t, 1H),3.34-3.17 (m, 1H), 1.37 (d, 6H).
Intermedijer IA44: 5-Bromo-2-etansulfinil-piridin
[0310]
a)5-Bromo-2-etilsulfanil-piridin
[0310]
[0311] Smeša 2,5-dibromo-piridina (CAS registar 588729-99-1) (1.15 g, 4.85 mmol) i natrijum etantiolata (CAS registar 811-51-8 )(2.04 g, 24.27 mmol) u DMSO-u (15 ml) meša se na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa DCM. Organski sloj se suši propuštanjem kroz kertridž za razdvajanje faza, zatim se koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 70:30) dajući jedinjenje iz naslova u obliku ulja narandžaste boje (1.09 g, prinos 92%).
HPLC RtM2=1.25 min; ESIMS: 218, 220 [(M+H)<+>].
b) 5-Bromo-2-etansulfinil-piridin
[0312]
[0313] Rastvor 5-Bromo-2-etilsulfanil-piridina (1.09 g, 4.49 mmol) u DCM-u (15 ml) obradjuje se sa mCPBA (1.55 g, 8.98 mmol). Rezultujući rastvor se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 15 min. Smeša se kvenčuje dodatkom 2M vod. rastvora NaOH, i ekstrahuje sa DCM-om. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4i koncentruju. Jedinjenje se prečišćava prep. RP-HPLC (kolona SunFire C18 OBD, gradijent 5-60% ACN u 15 min) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bezbojnog ulja (490 mg, prinos 45%).
HPLC RtM2=0.65 min; ESIMS: 234, 236 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.85 (d, 1H), 8.37 (dd, 1H), 7.80 (d, 1H), 3.33 (s, 2H), 3.27-3.10 (m, 1H), 2.94-2.72 (m, 1 H), 1.01 (t, 3 H).
Intermedijer IA45: 5-Bromo-2-metansulfonil-3-metoksipiridin
a)5-Bromo-3-metoksi-2-metilsulfanil-piridin
[0314]
[0315] Smeša 2,5-dibromo-3-metoksi-piridina (CAS registar 1142191-57-8) (550 mg, 2.06 mmol) i natrijum metantiolata (CAS registar 5188-07-8 )(722 mg, 10.30 mmol) u DMSO (1.5 ml) meša se na sobnoj temperaturi u vremenu od 0.5 h. Dodaje se voda i smeša se ekstrahuje sa DCM. Organski sloj se suši propuštanjem kroz kertridž za razdvajanje faza i koncentruje dajući jedinjenje iz naslova u obliku bezbojnog ulja (1.50 g, prinos 93%, sirov).
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.19 (d, 1H), 7.53 (d, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.32 (s, 3H).
b) 5-Bromo-2-metansulfonil-3-metoksipiridin
[0316]
Br
[0317] Rastvor 5-bromo-3-metoksi-2-metilsulfanil-piridina (1.50 g, 2.24 mmol) u DCM-u (10 ml) se obradjuje sa mCPBA (1.55 g, 8.97 mmol). Rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 18 h. Smeša se kvenčuje dodatkom vod. rastvora 2M NaOH, i ekstrahuje sa DCM. Organski sloj se suši propuštanjem kroz kertridž za razdvajanje faze i koncentruje dajući jedinjenje iz naslova (400 mg, prinos 33% kao sirov).
HPLC RtM2=0.75 min; ESIMS: 268[(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.41 (d, 1H), 8.17 (s, 1H), 4.01 (s, 3H), 3.30 (s, 3H).
Intermedijer IA51: (5-Bromo-2-metansulfonil-piridin-3-il)-metil-amin
a) (5-Bromo-2-hloro-piridin-3-il)-metil-amin
[0318]
[0319] Rastvor 5-bromo-2-hloro-piridin-3-ilamina (CAS registar 588729-99-1) (565 mg, 2.72 mmol) u THF (4 ml) na temperaturi od 0°C obradjuje se sa 1.6M BuLi u heksanu (0.17 ml, 0.17 mmol), rezultujuća smeša se meša na temperaturi od 0°C u vremenu od 0.5 h, nakon toga se lagano dodaje metil jodid (0.17 ml, 2.72 mmol). Reakciona smeša se ostavlja da se zagreje do sobne temperature i meša u vremenu od 18 h. Narandžasto/braon smeša se sipa u zasić vod. rastvor NaHCO3, i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši preko MgSO4, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 95:5 do 60:40) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (354 mg, prinos 59%).
HPLC RtM1=0.94 min; ESIMS: 221, 223, 225 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.65 (d, 1H), 7.14 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 2.74 (d, 3H).
b) (5-Bromo-2-metansulfonil-piridin-3-il)-metil-amin
[0320]
[0321] Rastvor (5-bromo-2-hloro-piridin-3-il)-metil-amina (354 mg, 1.60 mmol) u DMF-u (2.6 ml) obradjuje se sa natrijum metanetiolatom (168 mg, 2.40 mmol) na temperaturi od 0°C.
Rezultujući rastvor se meša na sobnoj temperaturi tokom 2 d i zagreva na temperaturi od 60°C tokom 4 d. Smeša se kvenčuje na temperaturi od 0°C dodatkom 2M vod. rastvora NaOH, i ekstrahuje sa DCM-om. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4i koncentruju dajući ulje narandžaste boje koje se rastvara u DCM-u (5 ml) i obradjuje na temperaturi od 0°C sa mCPBA (CAS registar 937-14-4) (827 mg, 4.79 mmol) i meša tokom 18 h na sobnoj temperaturi. Smeša se kvenčuje na temperaturi od 0°C dodatkom vod. rastvora NaOH 2M i ekstrahuje sa DCM. Kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, koncentruju i prečišćavaju fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 92:8 do 32:68) dajuću jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (174 mg, prinos 41%).
HPLC RtM1=0.78 min; ESIMS: 265, 267 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.95 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.70-6.59 (m, 1H), 3.26 (s, 3H), 2.82 (d, 3H).
Intermedijer IA52: (5-Bromo-2-metansulfonil-piridin-3-il)-dimetil-amin
a) (5-Bromo-2-hloro-piridin-3-il)-metil-amin
[0322]
[0323] Rastvor 5-bromo-2-hloro-piridin-3-ilamina (CAS registar 588729-99-1) (1 g, 4.82 mmol) u THF-u (7 ml) na temperaturi od 0°C se obradjuje sa 1.6M BuLi u heksanu (6 ml, 9.64 mmol), rezultujuća smeša se meša na temperaturi od 0°C tokom 0.5 h, zatim se lagano dodaje metil jodid (0.60 ml, 9.64 mmol). Reakciona smeša se ostavlja da se zagreva do sobne temperature i meša tokom 18 h. Narandžasto/braon smeša se sipa preko zasić. vodenog rastvora NaHCO3, i ekstrahuje sa EtOAc, organski sloj se suši na MgSO4, koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 95:05 do 70:30) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (182 mg, prinos 17%).
HPLC RtM1=0.94 min; ESIMS: 221, 223[(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 7.65 (d, 1H), 7.14 (d, 1H), 6.11 (d, 1H), 2.74 (d, 3H).
b) (5-Bromo-2-hloro-piridin-3-il)-dimetil-amin
[0324]
[0325] Rastvor (5-bromo-2-hloro-piridin-3-il)-metil-amina (182 mg, 0.82 mmol) u DMF-u (4 ml) obradjuje se sa NaH (23 mg, 0.99 mmol) na sobnoj temperaturi, i smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 0.5 h, dodaje se metil jodid (0.06 ml, 0.99 mmol) i rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Smeša se razblažuje sa TBME i ispire sa zasićenim vod. rastvorom NaHCO3, organski sloj se suši preko MgSO4i koncentruje dajući jedinjenje iz naslova u obliku ulja narandžaste boje (174 mg, prinos 90%). Ulje se koristi bez daljeg prečišćavanja. HPLC RtM1=1.03 min; ESIMS: 235, 237 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.10 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 2.78 (s, 6H).
c) (5-Bromo-2-metansulfonil-piridin-3-il)-metil-amin
[0326]
[0327] Rastvor (5-bromo-2-hloro-piridin-3-il)-dimetil-amina (174 mg, 0.74 mmol) u DMF-u (5 ml) se obradjuje sa metantiolatom (104 mg, 1.48 mmol) na sobnoj temperaturi, rezultujući rastvor se meša na temperaturi od 80°C u vremenu od 18 h. Na temperaturi od 0°C, smeša se kvenčuje dodatkom 2M vod. rastvora NaOH i zatim se ekstrahuje sa TBME. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4i koncentruju dajući ulje narandžaste boje koje se rastvara u DCM-u (5 ml), obradjuje na temperaturi od 0°C sa mCPBA (CAS registar 937-14-4) (382 mg, 2.21 mmol) i mešaju se 18 h na sobnoj temperaturi. Na 0°C, smeša se kvenčuje dodatkom 2M vod. rastvora NaOH, nakon toga se ekstrahuje DCM-om. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, koncentruju i prečišćavaju fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 88:12 do 00:100) dajući jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda narandžaste boje (50 mg, prinos 24%).
HPLC RtM1=0.83 min; ESIMS: 279, 281 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.25 (d, 1H), 7.90 (d, 1H), 3.29 (s, 3H), 2.91 (s, 6H).
Intermedijer IA65: 5-Bromo-2,N-dimetoksi-benzensulfonamid
[0328]
r
[0329] Rastvor 5-bromo-2-metoksi-benzensulfonil hlorida (CAS registar 23095-05-8) (218 mg, 0.76 mmol) i Et3N (0.55 ml, 3.99 mmol) u DCM-u (20 ml) na temperaturi od 0°C meša se tokom 15 min i obradjuje sa O-metilhidroksilaminom (36 mg, 0.76 mmol), rezultujuća smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Smeša se raspodeljuje izmedju EtOAc i vode. Organski sloj se ispire sa zasić. vod. rastvorom NaHCO3, suši preko MgSO4koncentruje i prečišćava fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 100:0 do 0:100) dajući jedinjenje iz naslova (189 mg, prinos 84%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.10 (d, 1 H), 7.78 (s, 1 H), 7.72 (dd, 1 H), 6.97 (d, 1 H), 4.01 (s, 3 H), 3.81 (s, 3 H).
IB) Karboksilne kiseline ili kiselinski hloridi
[0330]
Primer IB1/IB2: (S)-Tetrahidro-furan-3-karboksilna kiselina / (R)-Tetrahidro-furan-3-karboksilna kiselina
a) benzil estar tetrahidro-furan-3-karboksilne kiseline
[0331]
[0332] Rastvor tetrahidro-furan-3-karboksilne kiseline (CAS registar 89364-31-8) (4.00 g, 34.40 mmol) u DMF-u (20 ml) se obradjuje sa K2CO3(9.52 g, 68.9 mmol) i benzil bromidom (CAS registar 100-39-0) (8.18 ml, 68.9 mmol) na temperaturi od 100°C tokom 18 h. Smeša se hladi do sobnoj temperaturi, razblažuje sa EtOAc, ispire sa vodom i koncentrovanim rastvorom soli. Kombinovani organski slojevi se suše preko MgSO4, koncentruju i prečišćavaju fleš hromatografijom na silika gelu (cikloheksan / EtOAc 92:8 do 34:66) dajući jedinjenje iz naslova u obliku bezbojnog ulja (6.93 g, prinos 98%)
HPLC RtM2=0.94 min; ESIMS: 207 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.50-7.26 (m, 5H), 5.17 (m, 2H), 4.05-3.75 (m, 4H), 3.29-3.05(m, 1H), 2.36-2.09 (m, 2H).
b) Enantiomerno razdvajanje benzil estra tetrahidro-furan-3-karboksilne kiseline [0333]
peak 1 peak 2
[0334]
Podaci o postupku:
Kolona: Chiralpak AD-PREP
Rastvarač: HEPTANE/ETOH/MEOH 95/2.5/2.5
Protok: 1.0 ml/min
Talasna dužina: 210 nm
Uredjaj: Agilent 1200 DAD Magellan
Rastvor EtOH
[0335] Nakon razdvajanja 6.347 g racemske smeše, dobijaju se 2 pika: pik 1 na 9.086 min (2.43 g, ee>99%) i pik 2 na 10.584 min (2.19 g, ee>99%).
HPLC (pik 1 ili 2) RtM2=0.92 min; ESIMS: 207 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (pik 1) (400 MHz, CDCl3): δ 7.48-7.29 (m, 5H), 5.23-5.07 (m, 2H), 4.05-3.77 (m, 4H), 3.23-3.10(m, 1H), 2.35-2.06 (m, 2H).
<1>H NMR (pik 2) (400 MHz, CDCl3): δ 7.51-7.31 (m, 5H), 5.23-5.09 (m, 2H), 4.07-3.77 (m, 4H), 3.24-3.07 (m, 1H), 2.35-2.06 (m, 2H).
c) (S)-Tetrahidro-furan-3-karboksilna kiselina / (R)-Tetrahidro-furan-3-karboksilna kiselina [0336]
peak 2 IB2
[0337] Rastvor enantiomerno čistog benzil estra tetrahidro-furan-3-karboksilne kiseline (pik 1 ili pik 2, 200 mg, 0.97 mmol), Pd/C (103 mg, 0.97 mmol) u EtOH (2 ml) se hidrogenizuje sa H2na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Filtriranje reakcione smeše i koncentrovanje filtrata dovodi do dobijanja jedinjenja iz naslova u obliku bezbojnog ulja (125 mg (Pik 1), 111mg (Pik 2), sirov).<1>H NMR (oba enantiomera) (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.40 (br s, 1H), 3.84-3.59 (m, 4H), 3.00 (m, 1H), 2.08-1.92(m, 1H).
Primer IB3): 5-terc-Butoksikarbonilamino-1-metil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina a) etil estar 5-di(terc-Butoksikarbonil)amino-1-metil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline
[0338]
[0339] Rastvor etil estra 5-amino-1-metil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (CAS registar 54147-04-5) (82 mg, 0.49 mmol) u THF-u (4 ml) se obradjuje na temperaturi od - 50<°>C sa 1M LiHMDS u rastvoru THF-a(0.97 ml, 0.97 mmol) i reakciona smeša se meša na temperaturi od -50<°>C tokom 10 min, nakon toga se dodaje rastvor Boc2O (237 mg, 1.07 mmol) u THF-u (1.5 ml). Reakciona smeša se ostavlja da se lagano zagreje do sobne temperature, zatim do 50<°>C i meša se 15 h na temp. od 50°C. Reakciona smeša se hladi do sobne temperature, razblažuje sa EtOAc i kvenčuje sa H2O. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (heptan / EtOAc, 85:15 do 0:100) u obliku čvrstog proizvoda bele boje (140 mg, prinos 78%).
UPLC RtM1=0.96 min; ESIMS: 370 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, 298 K): δ 4.33 (q, 2H), 3.50 (s, 3H), 1.41 (s, 18H), 1.35 (t, 3H).
b) 5-terc-Butoksikarbonilamino-1-metil-1H-imidazol-4-karboksilna kiselina
[0340]
[0341] Rastvor etil estra 5-di(terc-butoksikarbonil)amino-1-metil-1H-imidazol-4-karboksilne kiseline (167 mg, 0.452 mmol) u THF-u (2.2 ml) i H2O (2.2 ml) se obradjuje sa LiOH (54.1 mg, 2.26 mmol) i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h, zatim kvenčuje sa 1M vod. rastvorom HCl da bi se postigla pH vrednost 2 i ekstrahuje sa EtOAc. Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje da bi se dobilo jedinjenje iz naslova. (70 mg, prinos 65%).
UPLC RtM1=0.47 min; ESIMS: 242 [(M+H)<+>]
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.42 (br.s., 1H), 8.98 (br.s., 1H), 7.82 (s, 1H), 3.45 (s, 3H), 1.41 (s, 9H).
IC) Derivati pirolidinola ili analozi
[0342]
Intermedijer IC1: (R)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
a) ((R)-3-Hidroksi-pirolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
U rastvor tetrahidro-piran-4-karboksilne kiseline (CAS registar 5337-03-1) i DMF-a (0.012 ml, 0.15 mmol) dodaje se oksalil hlorid (0.20 ml, 3.84 mmol). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 3°C tokom 1 h. Koncentrovanje reakcione smeše na sniženom pritisku (170 mbar) na temperaturi od 40°C (vodeno kupatilo) dajući acil intermedijer u obliku bezbojnog ulja. Intermedijer se rastvara u DCM-u (2ml) i dodaje u rastvor (R)-pirolidin-3-ol hidrohlorida (CAS registar 104706-47-0) (190 mg, 1.54 mmol) u DCM-u (3 ml), ohladi do temperature od 3°C, formirana suspenzija bele boje se meša na temperaturi od 3°C tokom 1 h. Reakciona smeša se koncentruje; dodaje se EtOAc u ostatak koji se otfiltrira i ispire sa EtOAc. Koncentrovanje i prečišćavanje filtrata fleš hromatografijom na silika gelu (DCM /DCM: MeOH (9:1), 100:0 do 60:40 tokom 11 min) ima za rezultat dobijanje jedinjenja iz naslova u oblku čvrstog proizvoda bele boje (250 mg, prinos 82%). ESIMS: 200 [(M+H)<+>].
H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.43 - 4.65 (m, 1H), 3.95-4.16 (m, 2H), 3.30-3.82 (m, 6H), 2.45-.75 (m, 1H), 1.83-2.30 (m, 4H), 1.54-1.78 (m, 3H).
c) (R)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
[0345]
[0346] U rastvor ((R)-3-hidroksi-pirolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-metanona (6 g, 22.6 mmol) i Et3N (6.30 ml, 45.2 mmol) u DCM-u (100 ml) na temperaturi od -10°C, dodaje se metansulfonil hlorid (CAS registar 124-63-0) u argonu (3.52ml, 45.2 mmol). Rastvor se meša na temperaturi od 0°C tokom 1 h, razblažuje sa H2O i DCM, organski sloj se dva puta ispire sa H2O i koncentrovanim rastvorom soli i suši na MgSO4. Koncentrovanjem i trituracijom rezultujućeg ulja sa dietil etrom dobija se jedinjenje iz naslova u obliku beličastog čvrstog proizvoda (5.3 g, 84%).
ESIMS: 278 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.22-5.44 (m, 1H), 3.96-4.13 (m, 2H), 3.85-3.96 (m, 1H), 3.56-3.83 (m, 3H), 3.36-3.53 (m, 2H), 3.08 (d, 3H), 2.07-2.75 (m, 3H), 1.93 (m, 2H), 1.51-1.75 (m, 3H).
Intermedijer IC2: (S)-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-il estar
Metansulfonske kiseline
a) ((S)-3-Hidroksi-pirolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon
[0347]
[0348] Rastvor tetrahidro-piran-4-karbonil hlorida (CAS registar 40191-32-0) (316 mg, 2.02 mmol) u DCM-u (2ml) dodaje se u kapima (0°C <T <10°C) u rastvor (S)-pirolidin-3-ol (CAS registar 100243-39-8) (250 mg, 2.02 mmol) i Et3N (0.62 ml, 4.45 mmol) u DCM-u (5 ml). Reakciona smeša se meša na temperaturi od 3°C tokom 1 h. Isparljive supstance se koncentruju i dodaje se EtOAc u ostatak, preostali čvrsti ostatak se filtrira i ispire sa EtOAc, koncentrovanjem filtrata dobija se jedinjenje iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje (390 mg, prinos 97%).
ESIMS: 200 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.55 (d, 1H), 3.96-4.11 (m, 2H), 3.36-3.80 (m, 6H), 2.48-2.74 (m, 1H), 1.52-2.20 (m, 7H).
b) (S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
[0349]
[0350] Metansulfonil hlorid (CAS registar 124-63-0) (0.23 ml, 2.94 mmol) se u argonu dodaje u rastvor ((S)-3-hidroksi-pirolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-metanona (0.39 g, 1.96 mmol) i Et3N (0.55 ml, 3.91 mmol) u DCM (10 ml) na temperaturi od -10°C. Rastvor se meša na temperaturi od 3°C tokom 1 h, razblažuje sa H2O i DCM, organski sloj se ispire dva puta sa H2O i koncentrovanim rastvorom soli, nakon toga se suši preko MgSO4. Koncentrovanje i trituracija rezultujućeg ulja sa dietil etrom dovodi do dobijanja jedinjenja iz naslova u obliku čvrstog proizvoda bele boje (0.45 g, prinos 83%).
ESIMS: 278 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.25-5.44 (m, 1H), 3.99-4.16 (m, 2H), 3.85-3.95 (m, 1H), 3.56-3.83 (m, 3H), 3.37-3.54 (m, 2H), 3.08 (d, 3H), 2.09-2.78 (m, 3H), 1.93 (m, 2H), 1.51-1.76 (m, 2H)
Intermedijer IC3: (S)-1-propionil-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
a) 1-((S)-3-Hidroksi-pirolidin-1-il)-propan-1-on
[0351]
[0352] U rastvor (S)-pirolidin-3-ol (CAS registar 100243-39-8) (4.8 g, 55.9 mmol) i Et3N (8.74 ml, 63.1 mmol) na temperaturi od 5°C dodaje se u kapima tokom 15 min propionil hlorid (CAS registar 79-03-8) (4.78 ml, 54.8 mmol), rastvor se ostavlja da se zagreje do sobne temperature i meša se tokom 1 h. U rastvor se dodaju se H2O (10ml) i zasić. vod. rastvor NaHCO3(10 ml), organska faza se ispire sa koncentrovanim rastvorom soli (10 ml) i 0.25M vod. rastvorom HCl (20 ml). Kombinovani vodeni slojevi se koncentruju i ekstrahuju sa EtOAc (2x 100ml), kombinovane organske faze se suše preko MgSO4i koncentruju dajući jedinjenje iz naslova u obliku bledožutog ulja (4.80 g, prinos 54%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 4.54 (d, 1H), 3.31-3.73 (m, 3H), 3.12 (m, 1H), 1.82-2.46 (m, 5H), 1.17 (t, 3H)
b) (S)-1-propionil-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
[0353]
[0354] U rastvor 1-((S)-3-hidroksi-pirolidin-1-il)-propan-1-on (2.5 g, 17.4 mmol) i Et3N (2.43 ml, 17.4 mmol) u DCM-u (50 ml) na temperaturi od 5°C, dodaje se tokom perioda od 10 min metansulfonil hlorid (CAS registar 124-63-0) (1.36 ml, 17.46 mmol) u argonu. Rastvor se ostavlja da se zagreje do sobne temperature i meša se tokom 18 h, tada se u reakcionu smešu dodaju metansulfonil hlorid (CAS registar 124-63-0) (1.36 ml, 17.46 mmol) i Et3N (2.43 ml, 17.4 mmol) koji se mešaju tokom 48 h na sobnoj temperaturi. U rastvor se dodaju DCM i H2O i organska faza se razdvaja uz pomoć kartridža za faznu separaciju, koncentruje i jedinjenje iz naslova se dobija pomoću fleš hromatografije na silika gelu (EtOAc / MeOH 100:0 do 95:5 tokom 40 min) u obliku bezbojnog ulja (2.7 g, prinos 66%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.19-5.42 (m, 1H), 3.48-3.99 (m, 4H), 3.06 (d, 3H).2.04-2.54 (m, 4H), 1.16 (t, 3H).
Intermedijer IC4: (R)-1-propionil-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
a) 1-((R)-3-Hidroksi-pirolidin-1-il)-propan-1-on
[0355]
[0356] Dodaje se propionil hlorid (CAS registar 79-03-8) (7.06 ml, 81 mmol) (0°C <T <10°C) tokom perioda od 15 min u suspenziju (R)-pirolidin-3-ol (CAS registar 2799-21-5) (10 g, 81 mmol) i Et3N (23.6 ml, 170 mmol) u DCM-u (150 ml) koji se prethodno hladi na temperaturi od -10°C. Beličasta suspezija se meša na temperaturi od 0°C tokom 2 h, dodaje se MeOH (9.82 ml, 243 mmol) i smeša se ostavlja da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Koncentrovanje i razblaživanje ostatak sa Et2O (200 ml), daje nakon filtracije i koncentrovanja filtrata, jedinjenje iz naslova u obliku ulja žute boje (11.2 g, 95%).
ESIMS: 144 [(M+H)<+>].
<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 4.81-5.04 (m, 1H), 4.15-4.38 (m, 1H), 3.35-3.59 (m, 2H), 3.16-3.29 (m, 2H), 2.11-2.33 (m, 2H), 1.65-2.00 (m, 2H), 0.98 (td, 3H).
b) (R)-1-propionil-pirolidin-3-il estar metansulfonske kiseline
[0357]
[358] Metansulfonil hlorid (CAS registar 124-63-0) (0.16 ml, 2.09 mmol) u argonu, dodaje se u kapima tokom 5 min u rastvor 1-((R)-3-hidroksi-pirolidin-1-il)-propan-1-on (300 mg, 2.09 mmol) i Et3N (0.29 ml, 2.09 mmol) u DCM-u (10ml) na temperaturi od 5°C, reakciona smeša se ostavlja da se meša na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Tada se u reakcionu smešu koja se meša na sobnoj temperaturi u vremenu od 48 h dodaju metanesulfonil hlorid (CAS registar 124-63-0) (0.16 ml, 2.09 mmol) i Et3N (0.29 ml, 2.09 mmol). Dodaju se DCM i H2O u rastvor i organska faza se razdvaja pomoću kertridža za faznu separaciju i koncentruje. Jedinjenje iz naslova se dobija nakon fleš hromatografije na silika gelu (EtOAc / MeOH 100:0 do 95:5 tokom 25 min) u obliku bezbojnog ulja (420 mg, 86%).
<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 5.21-5.44 (m, 1H).3.49-4.03 (m, 4H), 2.98-3.12 (m, 3H), 1.97-2.54 (m, 4H), 1.18 (t, 3H).
ID) DBO derivati ili analozi
[0359]
Biološka procena
[0360] Dejstvo jedinjenja iz ovog pronalaska može se odrediti sledećim in vitro & in vivo postupcima.
Biološki testovi
1 Odredjivanje stepena enzimske inhibicije izoformi PI3K alfa i PI3K delta
1.1 Test aktivnosti lipidne kinaze
[0361] Efikasnost jedinjenja iz primera 1-117 kao inhibitora PI3 kinaze može se pokazati na sledeći način:
[0362] Reakcija sa kinazom se izvodi u konačnoj zapremini od 50 μl po bunarčiću na polovini ploče COSTAR sa 96 bunarčića. Konačne koncentracije ATP-a i fosfatidil inozitola u testu su redosledom 5 μM i 6 μg/mL. Reakcija počinje dodavanjem PI3 kinaze, npr. PI3 kinaze δ.
[0363] p110 δ. Komponente testa se dodaju po bunarčiću prema sledećem rasporedu:
● 10 μl test jedinjenja u 5% DMSO-u po bunarčiću u kolone 2-1.
● Ukupna aktivnost se odredjuje dodatkom 10 μl 5% vol/vol DMSO-a u prva 4 bunarčića kolone 1 i u poslednja 4 bunarčića kolone 12.
● Bazna linija se odredjuje dodavanjem 10 μM kontrolnog jedinjenja u poslednja 4 bunarčića kolone 1 i u prva 4 bunarčića kolone 12.
● Za jednu ploču je potrebno pripremiti 2 mL “test smese”:
1,912 mL HEPES test pufera
8,33 μl 3 mM stok-rastvora ATP koji daje finalnu koncentraciju od 5 μM u bunarčiću
1 μl [<33>P] ATP sa aktivitetom od 0,05 μCi po bunarčiću na dan merenja aktivnosti
30 μl 1 mg/mL PI stok-rastvora koji daje 6 μg/mL u bunarčiću
5 μl 1 M stok-rastvora MgCl2koji daje finalnu koncentraciju 1 mM u bunarčiću ● 20 μl test smese se dodaje po bunarčiću.
● 2 mL “enzimskog miksa” se priprema za jednu ploču (x<*>μl PI3 kinaze p110 β u 2 mL pufera za kinaze). “Enzimski miks” se drži na ledu tokom dodavanja na test ploče.
● 20 μl “enzimskog miksa” se dodaje po bunarčiću da bi se započela reakcija.
● Ploča se zatim inkubira 90 minuta na sobnoj temperaturi.
● Reakcija se okončava dodavanjem 50 μl WGA-SPA kuglica (perlice za scintilacioni test blizine, prekrivene aglutininom iz pšenice) u suspenziju.
● Test ploča se zatvara TopSeal-S (folija otporna na toplotu za polistirenske mikroploče, PerkinElmer LAS [Nemačka] GmbH, Rodgau, Nemačka) i inkubira najmanje 60 minuta na sobnoj temperaturi
● Test ploča se zatim centrifugira na 1500 rpm tokom 2 minuta u Jouan stonoj centrifugi (Jouan Inc., Nant, Francuska).
● Test ploča se meri u Packard TopCount-u, svaki bunarčić po 20 sekundi.
* Zapremina enzima zavisi od enzimske aktivnosti serije u upotrebi.
[0364] U poželjnijem testu, kinazna reakcija se izvodi u konačnoj zapremini od 10 μl po bunarčiću niskozapreminske inertne CORNING tamne ploče sa 384 bunarčića (Kat. br. #3676). Finalne koncentracije ATP-a i fosfatidil inozitola (PI) u testu su 1 μM i 10 μg/mL, redosledom. Reakcija otpočinje dodatkom ATP-a.
[0365] Komponente testa se dodaju po bunarčiću prema opisu koji sledi:
50 nl test jedinjenja u 90% DMSO-u po bunarčiću, u kolone 1-20, 8 koncentracija (1/3 i 1/3,33 serijska razblaženja) u po jednom primerku.
● Niska kontrola: 50 nl 90% DMSO-a u polovinu broja bunarčića u kolonama 23-24 (0,45% konačna koncentracija).
● Visoka kontrola: 50 nl referentnog jedinjenja (npr. jedinjenje iz Primera 7 kod WO 2006/122806) u drugu polovinu kolona 23-24 (2,5 µM konačna koncentracija).
● Standard: 50 nl referentnog jedinjenja kao što je pomenuto, razblaženo kao test jedinjenja u kolonama 21-22.
● 20 mL ‘pufera’ se priprema za jedan test :
200 µl 1M TRIS HCl pH7,5 (10 mM finalna)
60 µl 1M MgCl2(3 mM finalna)
500 µl 2M NaCl (50 mM finalna)
100 µl 10% CHAPS-a (0,05% finalna)
200 µl 100mM DTT (1mM finalna)
18,94 mL nanočiste vode
● 10 mL ‘PI’ se priprema za jedan test :
200 µl 1 mg/mL l-alfa-fosfatidilinozitola (Liver Bovine, Avanti Polar Lipids Cat. No.
840042C MW=909.12) pripremljenog u 3% oktilglikozidu (konačna koncentracija 10 µg/mL)
9.8 mL “pufera”
● 10 mL ‘ATP’ rastvora se priprema za jedan test :
6,7 μl 3 mM stok-rastvora ATP koji daje finalnu koncentraciju od 1 μM po bunarčiću
10 mL “pufera”
● 2,5 mL svakog PI3K konstrukta se priprema za jedan “PI” test sa sledećim finalnim koncentracijama :
10 nM PI3K alfa EMV B1075
25 nM beta EMV BV949
10 nM delta EMV BV1060
150 nM gama EMV BV950
● 5 μl ‘PI/PI3K’ se dodaje po bunarčiću.
● 5 μl ‘ATP’ se dodaje po bunarčiću.
● Ploče se zatim inkubiraju na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta (alfa, beta, delta) ili 120 minuta (gama).
● Reakcija se prekida dodatkom 10 μl „Kinase-Glo“ proizvoda (Promega Kat. Br. #6714). ● Test ploče se očitavaju nakon 10 minuta u Synergy 2 čitaču (BioTek, Vermont, SAD) sa integracionim vremenom od 100 milisekundi i osetljivošću 191.
● Rezultat : Visoka kontrola je oko 60’000 otkucaja a Niska kontrola je 30’000 ili manje ● Ovaj test luminescencije daje koristan Z’ odnos izmedju 0,4 i 0,7
Z’ vrednost je univerzalna mera robustnosti testa. Vrednost Z’ izmedju 0,5 i 1,0 se smatra odličnim testom.
[0366] Za ovaj test, pomenuti PI3K konstrukti se pripremaju na sledeći način:
1.2 Dobijanje genskih konstrukata
[0367] Dva različita konstrukta, BV 1052 i BV 1075, koriste se za dobijanje α proteina PI3 kinaze za skrining jedinjenja.
PI3Kα BV-1052 p85(iSH2)-Gly linker-p110a(D20aa)-C-terminus His tag
[0368] Najpre se kreiraju PCR proizvodi za inter-SH2 domen (iSH2) p85 podjedinice kao i za p110-a podjedinicu (sa delecijom prvih 20 aminokiselina) a zatim fuzionišu preklapajućom PCR.
[0369] iSH2 PCR proizvod se kreira iz prvog lanca cDNK pomoću početnih prajmera gwG130-p01 (5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID NO: 1) i gwG130-p02 (5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’) (SEQ ID NO: 2). [0370] Zatim se, u sekundarnoj PCR reakciji, dodaju Gateway (Invitrogen AG, Bazel, Švajcarska) rekombinaciona AttB1 mesta i linker sekvence redosledom na 5’kraj i 3’kraj p85 iSH2 fragmenta, pomoću prajmera
gwG130-p03 (5’-GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACATAT-GCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3’) (SEQ ID NO: 3) i
gwG152-p04 (5’- TACCATAATTCCACCACCACCACCGGAAATTCCCCCTGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’) (SEQ ID NO: 4).
[0371] p110-a fragment se takodje kreira iz prvog lanca cDNK, pomoću početnih prajmera gwG152-p01 (5’- CTAGTGGAATGTTTACTACCAAATGG-3’) (SEQ ID NO: 5) i gwG152-p02 (5’- GTTCAATG-CATGCTGTTTAATTGTGT -3’) (SEQ ID NO: 6).
[0372] U PCR reakciji koja sledi, dodaju se linker sekvenca i histidinski tag redosledom na 5’kraj i 3’kraj p110-a fragmenta, pomoću prajmera
gw152-p03 (5’-GGGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTATGGTAC-TAGTGGAATGTTTACTACC-AAATGGA-3’) (SEQ ID NO: 7) i
gwG152-p06 (5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCGTTCAATG-CATGCTGTTTAATTGTGT-3’) (SEQ ID NO: 8).
[0373] p85-iSH2/p110-a fuzioni protein se kreira u trećoj PCR reakciji pomoću preklapajućih linkera na 3’kraju iSH2 fragmenta i 5’kraju p110-a fragmenta, pomoću gore pomenutog gwG130-p03 prajmera i prajmera sa preklapajućim histidinskim tagom i AttB2 rekombinacionim sekvencama
(5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTAAGCTCCGTGATGGTGATGGTGAT-GTGCTCC-3’) (SEQ ID NO: 9).
[0374] Ovaj konačni proizvod je rekombinovan u (Invitrogen) OR reakciji u donorski vektor pDONR201 da bi se dobio ORF318 ulazni klon. Ovaj klon je potvrdjen sekvenciranjem i korišćen u Gateway LR reakciji za prenos inserta u Gateway-adaptiran pBlueBac4.5 (Invitrogen) vektor za dobijanje bakulovirusog ekspresionog vektora LR410.
PI3Kα BV-1075 p85(iSH2)-12 XGly linker-p110a(D20aa)-C-terminus His tag [0375] Konstrukt za Bakulovirus BV-1075 se kreira trodelnom ligacijom gde su delovi za ligaciju p85 fragment i p110-a fragment kloniran u vektor pBlueBac4.5. p85 fragment se izvodi iz plazmida p1661-2 sečenog Nhe/Spe. p110-a fragment izveden je iz LR410 (videti gore) kao SpeI/HindIII fragment. Klonski vektor pBlueBac4.5 (Invitrogen) se seče Nhe/HindIII. Dobija se konstrukt PED 153.8
[0376] p85 komponenta (iSH2) se dobija PCR-om uz korišćenje ORF 318 (opisan u gornjem tekstu) kao templejta i jednog “forward” prajmera
KAC1028 (5’- GCTAGCATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAATATACC) (SEQ ID NO: 10) i dva “reverse” prajmera,
KAC1029 (5’- GCCTCCACCACCTCCGCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC) (SEQ ID NO: 11) i
KAC1039 (5’-TACTAGTCCGCCTCCACCACCTCCGCCTCCACCACCTCCGCC)
(SEQ ID NO: 12).
[0377] Dva “reverse” prajmera se preklapaju i uključuju 12x Gly linker i N-terminalnu sekvencu p110a gena za SpeI lokus. 12x Gly linker zamenjuje linker u BV1052 konstruktu. PCR fragment je kloniran u pCR2.1 TOPO (Invitrogen). Od dobijenih klona, p1661-2 je potvrdjen za poželjan. Ovaj plazmid se seče Nhe i SpeI i dobijeni fragment se izoluje na gelu i prečišćava subkloniranjem.
[0378] p110-a fragment za kloniranje se dobija enzimskim sečenjem klona LR410 (videti gornji tekst) pomoću Spe I i HindIII. Spe I mesto je u kodirajućem regionu p110a gena.
[0379] Dobijeni fragment se izoluje na gelu i prečišćava subkloniranjem.
[0380] Vektor za kloniranje, pBlueBac4.5 (Invitrogen) se priprema enzimskom digestijom Nhe i HindIII. Sečeni vektor se prečišćava na Qiagen (Quiagen N.V, Venlo, Holandija) koloni a zatim defosforiluje alkalnom fosfatazom iz telećih creva (CIP) (New England BioLabs, Ipswich, MA). Nakon završetka CIP reakcije sečeni vektor se zatim takodje prečišćava na koloni da bi se dobio konačni vektor. Ligacija 3 dela se izvodi pomoću Roche brze ligaze po uputstvu proizvodjača.
PI3Kβ BV-949 p85(iSH2)-Gly linker-p110b(puna dužina)-C-terminus His tag [0381] Najpre se kreiraju PCR proizvodi za inter SH2 domen (iSH2) p85 podjedinice kao i za p110-a podjedinicu pune dužine, a zatim fuzionišu preklapajućom PCR.
[0382] iSH2 PCR proizvod je kreiran iz prvog lanca cDNK najpre pomoću prajmera gwG130-p01 (5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID NO: 1) i gwG130-p02 (5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’) (SEQ ID NO: 2). [0383] Zatim, u sekundarnoj PCR reakciji, dodaju se Gateway (Invitrogen) rekombinantna AttB1 mesta i linker sekvence redom na 5’kraj i 3’kraj p85 iSH2 fragmenta, pomoću prajmera
gwG130-p03 (5’- GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATA-TACATATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3’) (SEQ ID NO: 3) i
gwG130-p05 (5’-ACTGAAGCATCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAAT-GCTGTTCATACGTTTGTC-3’) (SEQ ID NO: 13).
[0384] p110-b fragment se takodje dobija iz prvog lanca cDNK na početku pomoću prajmera gwG130-p04 (5’-ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGATGCTTCAGTTTCATAATGCC-TCCTGCT -3’) (SEQ ID NO: 4)
Koji sadrži linker sekvence i 5’kraj p110-b i
gwG130-p06 (5’-AGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCCAGATCTGTAGTCTTT-CCGAACTGTGTG -3’) (SEQ ID NO: 14)
koji sadrži sekvence 3’kraja p110-b fuzionisane sa histidinskim tagom.
[0385] p85-iSH2/p110-b fuzioni protein se dobija preklapajućom PCR reakcijom linkera na 3’kraju iSH2 fragmenta i 5’kraju p110-b fragmenta, pomoću gore pomenutog prajmera gwG130-p03 i prajmera koji sadrži preklapajući histidinski tag i AttB2 rekombinacione sekvence (5’-GGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTT-AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3’) (SEQ ID NO: 15).
[0386] Ovaj konačni proizvod je rekombinovan u Gateway (Invitrogen) OR reakciji u donorski vektor pDONR201 da bi se dobio ORF253 ulazni klon. Ovaj klon je potvrdjen sekvenciranjem i korišćen u Gateway LR reakciji za prenos inserta u Gateway-adaptiran pBlueBac4.5 (Invitrogen) vektor za dobijanje bakulovirusog ekspresionog vektora LR280.
PI3Kδ BV-1060 p85(iSH2)-Gly linker-p110d(full-length)-C-term His tag
[0387] Najpre se kreiraju PCR proizvodi za inter SH2 domen (iSH2) p85 podjedinice kao i za p110-a podjedinicu pune dužine, a zatim fuzionišu preklapajućom PCR.
[0388] iSH2 PCR proizvod se dobija iz prvog lanca cDNK najpre pomoću prajmera gwG130-p01 (5’-CGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT-3’) (SEQ ID NO: 1) i gwG130-p02 (5’-TGGTTT-AATGCTGTTCATACGTTTGTCAAT-3’) (SEQ ID NO: 2). [0389] Zatim, u sekundarnoj PCR reakciji, dodaju se Gateway (Invitrogen) rekombinantna AttB1 mesta i linker sekvence redom na 5’kraj i 3’kraj p85 iSH2 fragmenta, pomoću prajmera gwG130-p03 (5’- GGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTACGAAGGAGATATACAT-ATGCGAGAATATGATAGATTATATGAAGAAT -3’) (SEQ ID NO: 3) i
gwG154-p04 (5’- TCCTCCTCCTCCTCCTCCTGGTTTAATGCTGTTCATACGTTTGTC -3’) (SEQ ID NO: 16).
[0390] p110-a fragment se takodje dobija iz prvog lanca cDNK najpre pomoću prajmera gwG154-p01 (5’- ATGCCCCCTGGGGTGGACTGCCCCAT -3’) (SEQ ID NO: 17) i gwG154-p02 (5’- CTACTG-CCTGTTGTCTTTGGACACGT -3’) (SEQ ID NO: 18).
[0391] U sledećoj PCR reakciji linker sekvence i histidinski tag redosledom dodati su na 5’kraj i 3’kraj p110-d fragmenta, pomoću prajmera
gw154-p03 (5’- ATTAAACCAGGAGGAGGAGGAGGAGGACCCCCTGGGGTGGAC-TGCCCCATGGA -3’) (SEQ ID NO: 19) i gwG154-p06 (5’-AGCTCCGTGATGGTGAT-GGTGATGTGCT-CCCTGCCTGTTGTCTTTGGACACGTTGT -3’) (SEQ ID NO: 20).
[0392] p85-iSH2/p110-d fuzioni protein se dobija u trećoj PCR reakciji pomoću preklapajućih linkera na 3’kraju iSH2 fragmenta i 5’kraju p110-b fragmenta, pomoću gore pomenutog prajmera gwG130-p03 i prajmera koji sadrži preklapajući histidinski tag i Gateway (Invitrogen) AttB2 rekombinacione sekvence (5’-GGGACCACTTTGTA-CAAGAAAGCTGGGTTT-AAGCTCCGTGATGGTGATGGTGATGTGCTCC-3’) (SEQ ID NO: 21).
[0393] Ovaj konačni proizvod je rekombinovan u Gateway (Invitrogen) OR reakciji u donorski vektor pDONR201 da bi se dobio ORF319 ulazni klon. Ovaj klon je potvrdjen sekvenciranjem i korišćen u Gateway LR reakciji za prenos inserta u Gateway-adaptiran pBlueBac4.5 (Invitrogen) vektor za dobijanje bakulovirusog ekspresionog vektora LR415.
PI3Kγ BV-950 p110g(D144aa)-C-terminus His tag
[0394] Ovaj konstrukt je dobijen iz laboratorije Roger-a Williams-a, MRC laboratorija za molekularnu biologiju, Kejmbridž, Velika Britanija (novembar, 2003). Opis konstrukta u: Pacold M. E. i sar. (2000) Cell 103, 931-943.
1.3 Ekspresija i prečišćavanje proteina
[0395] Postupci za dobijanje rekombinantnog bakulovirusa i proteina za PI3K izoforme:
[0396] pBlue-Bac4.5 (za a, b i d izoformu) ili pVL1393 (za g) plazmidi koji sadrže gene za različite PI3 kinaze se ko-transfektuju sa BaculoGold WT genomskom DNK (BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ, SAD) postupcima preporučenim od strane prodavca.
[0397] Zatim se transfekcijom dobijeni rekombinantni bakulovirus prečišćava na plakama Sf9 insekatskih ćelija da bi se dobilo nekoliko izolata koji eksprimiraju rekombinantni protein.
[0398] Pozitivni klonovi se selektuju anti-HIS ili anti-izoformnim antitelima na western-u. Za PI3K alfa i delta izoforme, sekundarno prečišćavanje na plakama se izvodi na prvom klonskom virusnom stoku PI3K. Umnožavanje svih bakulovirusnih izolata izvodi se pri niskom umnošku infekcije - “multiplicity of infection” (moi) da bi se dobio visokotitarski stok sa malo pasaža za proizvodnju proteina. Bakulovirusi su označeni kao BV1052 (α) i BV1075 (α), BV949 (β), BV1060 (δ) i BV950 (γ).
[0399] Proizvodnja proteina uključuje infekciju (pasaž 3 ili niži) suspendovanih Tn5 (Trichoplusia ni) ili TiniPro (Expression Systems, LLC, Woodland, CA, SAD) ćelija u medijumu bez proteina pri moi od 2-10 tokom 39-48 sati u staklenim Erlenmajer sudovima od 2 l (110 rpm) ili u wave-bioreaktorima (22-25 rpm). Na početku, wave-bioreaktori sa 10 l radne zapremine se zasejavaju pri gustini od 3e5 ćelija/mL na polovini kapaciteta (5L). Reaktor se ljulja 72 sata na 15 rpm tokom faze ćelijskog rasta, uz dodavanje 5% kiseonika pomešanog sa vazduhom (0,2 l u minuti). Neposredno pre infekcije, kulture u wave-reaktoru se analiziraju na gustinu i vijabilnost a zatim se razblažuju na otprilike 1,5e6 ćelija/mL.100-500 mL virusa visokog titra i malog broja pasaža se dodaje a zatim se kultura ostavlja sledeća 2-4 sata. Količina kiseonika se povećava na 35% tokom 39-48 sati perioda infekcije a brzina ljuljanja na platformi povećava na 25 rpm. Tokom infekcije, vrši se monitoring ćelija na Vicell analizatoru vijabilnosti (Beckman Coulter, Inc, Fullerton, CA, SAD) na vijabilnost, prečnik i gustinu. Očitavanje različitih parametara i metabolita (pH, zasićenje O2, glukoza, itd.) vrši se na Nova bioanalizatoru (NOVA Biomedical Corp., Waltham, MA, SAD) svakih 12-18 sati do žetve.
[0400] Ćelije iz wave-bioreaktora se prikupljaju 40 sati nakon infekcije. Ćelije se prikupljaju centrifugiranjem (4 stepena C na 1500 rpm), a zatim čuvaju na ledu tokom pulovanja peleta za dalju lizu i prečišćavanje. Pulovi peleta se prave sa malom količinom hladnog Grejs medijuma bez suplemenata (bez inhibitora proteaza).
PI3K alfa protokol prečišćavanja za HTS (BV1052)
[0401] PI3K alfa se prečišćava u tri hromatografska koraka: imobilizovanom metalnom afinitetnom hromatografijom na rezinu Ni-Sefaroze (GE Healthcare, koja pripada General Electric Company, Fairfield, CT, SAD), gel filtracijom na Superdex 200 26/60 koloni (GE Healthcare), i konačno korakom katjonske izmene na SP-XL koloni (GE Healthcare). Svi puferi se hlade na 4ºC a liza se vrši na ledu. Kolonsko razdvajanje se izvodi brzo na sobnoj temperaturi.
[0402] Obično se smrznute insekatske ćelije liziraju u hipertoničnom puferu za lizu i nanose na pripremljenu IMAC kolonu. Rezin se ispira puferom za lizu (3-5 zapremina kolone), a zatim istom količinom pufera za ispiranje sa 45 mM imidazolom, a ciljni protein se eluira puferom sa 250 mM imidazola. Frakcije se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju i nanose na pripremljenu GFC kolonu. Frakcije sa GFC kolone se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, i frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju. Pul sa GFC kolone se razblaži puferom sa niskim sadržajem soli i nanosi na SP-XL kolonu. Kolona se ispira puferom sa niskim sadržajem soli sve dok se ne postigne stabilna bazna apsorbanca na A280, a eluira zapreminskim gradijentom od 20 zapremina kolone od 0 mM NaCl do 500 mM NaCl. Opet se frakcije sa SP-XL kolone analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom i frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju. Finalni pul se dijalizira u pufer za skladištenje koji sadrži 50% glicerola i čuva na -20ºC. Finalni pul se testira na aktivnost testom fosfoinozitol kinaze.
PI3K beta protokol za prečišćavanje za HTS (BV949)
[0403] PI3K beta se prečišćava u dva hromatografska koraka: imobilizovanom metalnom afinitetnom hromatografijom (IMAC) na rezinu Ni-sefaroze (GE Healthcare) i gel filtracijom (GFC) na Superdex 20026/60 koloni (GE Healthcare). Svi puferi se hlade na 4ºC a liza se izvodi na ledu. Razdvajanje na koloni se izvodi brzo na sobnoj temperaturi.
[0404] Obično se smrznute insekatske ćelije liziraju u hipertoničnom puferu za lizu i nanose na pripremljenu IMAC kolonu. Rezin se ispira puferom za lizu (3-5 zapremina kolone), a zatim istom količinom pufera za ispiranje sa 45 mM imidazolom, a ciljni protein se eluira puferom sa 250 mM imidazola. Frakcije se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju i nanose na pripremljenu GFC kolonu. Frakcije sa GFC kolone se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, i frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju. Finalni pul se dijalizira u pufer za skladištenje koji sadrži 50% glicerola i čuva na -20ºC. Finalni pul se testira na aktivnost testom fosfoinozitol kinaze.
PI3K gama protokol za prečišćavanje za HTS (BV950)
[0405] PI3K gama se prečišćava u dva hromatografska koraka: imobilizovanom metalnom afinitetnom hromatografijom (IMAC) na rezinu Ni-sefaroze (GE Healthcare) i gel filtracijom (GFC) na Superdex 20026/60 koloni (GE Healthcare). Svi puferi se hlade na 4ºC a liza se izvodi na ledu. Razdvajanje na koloni se izvodi brzo na sobnoj temperaturi. Obično se smrznute insekatske ćelije liziraju u hipertoničnom puferu za lizu i nanose na pripremljenu IMAC kolonu. Rezin se ispira puferom za lizu (3-5 zapremina kolone), a zatim istom količinom pufera za ispiranje sa 45 mM imidazolom, a ciljni protein se eluira puferom sa 250 mM imidazola.
[406] Frakcije se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju i nanose na pripremljenu GFC kolonu. Frakcije sa GFC kolone se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, i frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju. Finalni pul se dijalizira u pufer za skladištenje koji sadrži 50% glicerola i čuva na -20ºC. Finalni pul se testira na aktivnost testom fosfoinozitol kinaze.
PI3K delta protokol za prečišćavanje za HTS (BV1060)
[0407] PI3K delta se prečišćava u tri hromatografska koraka: imobilizovanom metalnom afinitetnom hromatografijom (IMAC) na rezinu Ni-sefaroze (GE Healthcare), gel filtracijom (GFC) na Superdex 200 26/60 koloni (GE Healthcare) i konačno anjon izmenjivačkom hromatografijom na Q-HP koloni (GE Healthcare). Svi puferi se hlade na 4ºC a liza se izvodi na ledu. Razdvajanje na koloni se izvodi brzo na sobnoj temperaturi. Obično se smrznute insekatske ćelije liziraju u hipertoničnom puferu za lizu i nanose na pripremljenu IMAC kolonu. Rezin se ispira puferom za lizu (3-5 zapremina kolone), a zatim istom količinom pufera za ispiranje sa 45 mM imidazolom, a ciljni protein se eluira puferom sa 250 mM imidazola. Frakcije se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju i nanose na pripremljenu GFC kolonu. Frakcije sa GFC kolone se analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, i frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju. Pul sa GFC kolone se razblaže u pufer sa niskim sadržajem soli i nanosi na pripremljenu Q-HP kolonu. Kolona se ispira puferom sa niskim sadržajem soli dok se ne postigne bazna apsorbanca na A280, i eluira gradijentom od 20 zapremina kolone od 0 mM NaCl do 500 mM NaCl. Zatim se frakcije sa Q-HP kolone analiziraju na SDS-PAGE gelovima bojenim Komasi bojom, i frakcije koje sadrže ciljni protein se puluju. Finalni pul se dijalizira u pufer za skladištenje koji sadrži 50% glicerola i čuva na -20ºC. Finalni pul se testira na aktivnost testom fosfoinozitol kinaze.
IC50se odredjuje rutinski fitingom na krivoj sa četiri parametra koji je dostupan u paketu sa "excel fit". Logistička jednačina sa četiri parametra se upotrebljava za izračunavanje vrednosti IC50(IDBS XLfit) procenta inhibicije svakog jedinjenja na 8 različitih koncentracija (obično 10, 3.0, 1.0, 0.3, 0.1, 0.030, 0.010 i 0.003 µM). Alternativno, vrednosti IC50se računaju pomoću idbsXLfit modela 204, koji predstavlja logistički model sa 4 parametra.
[0408] Alternativno, za test ATP iskorišćenja, test jedinjenja formule I se rastvaraju u DMSO-u i direktno rasporedjuju na beloj ploči sa 384 bunarčića i to 0,5 µl po bunarčiću. Za počinjanje reakcije, 10 µl 10 nM PI3 kinaze i 5 µg/mL 1-alfa-fosfatidilinozitola (PI) se dodaju u svaki bunarčić, a zatim i 10 µl 2 µM ATP-a. Reakcija se odvija dok se ne potroši otprilike 50% količine ATP -a, a zatim se zaustavlja dodavanjem 20 µl “Kinaza-Glo” rastvora (Promega Corp., Madison, WI, SAD). Prekinuta reakcija se inkubira 5 minuta i preostali ATP se zatim meri luminescencijom. Zatim se odredjuju vrednosti IC50.
U jednom izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktivnosti, izražen kao IC50, u enzimskom PI3K delta testu izmedju 1 nM i 500 nM.
[0409] U drugom izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktivnosti, izražen kao IC50, u enzimskom PI3K delta testu izmedju 1 nM i 100 nM.
[0410] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktivnosti, izražen kao IC50, u enzimskom PI3K delta testu izmedju 0,5nM i 10 nM.
[0411] U jednom izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktivnosti, izražen kao IC50, u enzimskom PI3K delta testu izmedju 1 nM i 1000 nM.
[0412] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktivnosti, izražen kao IC50, u enzimskom PI3K delta testu izmedju 1 nM i 500 nM.
[0413] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde inhibitor pokazuje selektivnost za PI3K izoformu delta u odnosu na jednu ili više drugih izoformi i gde je ova selektivnost najmanje 10 puta veća.
[0414] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde inhibitor pokazuje selektivnost za PI3K izoformu delta u odnosu na jednu ili više drugih izoformi i gde je ova selektivnost najmanje 20 puta veća.
[0415] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde inhibitor pokazuje selektivnost za PI3K izoformu delta u odnosu na različite paraloge PI3K α� i β.�gde je ova selektivnost najmanje 10 puta veća.
[0416] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde inhibitor pokazuje selektivnost za PI3K izoformu delta u odnosu na različite paraloge PI3K α� i β,�gde je ova selektivnost najmanje 20 puta veća.
[0417] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktiviteta, izražen kao IC50, u ćelijskom PI3K delta testu izmedju 1 nM i 500 nM i gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta i gde inhibitor pokazuje selektivnost za PI3K izoformu delta u odnosu na različite paraloge PI3K α� i β,�gde je ova selektivnost najmanje 10 puta veća.
[0418] U sledećem izvodjenju ovog pronalaska, PI3K inhibitor, gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta, gde je opseg aktiviteta, izražen kao IC50, u ćelijskom PI3K delta testu izmedju 1 nM i 500 nM i gde navedeni inhibitor inhibira PI3K izoformu delta i gde inhibitor pokazuje selektivnost za PI3K izoformu delta u odnosu na različite paraloge PI3K α� i β ,�gde je ova selektivnost najmanje 20 puta veća.
2. Ćelijski testovi
2.1 Fosforilacija Akt 1/2 (S473) posredovana fosfoinozitid-3 kinazom (PI3K)- u Rat-1 ćelijama
[0419] Rat-1 ćelije koje stabilno overeksprimiraju miristoilovani oblik katalitičke subjedinice humane fosfoinozitid-3 kinaze (PI3K) alfa, beta ili delta su zasejane na ploče sa 384 bunarčića pri gustini od 7500 (PI3K alfa), 6200 (PI3K beta) ili 4000 (PI3K delta) ćelija u 30ul kompletnog medijuma za rast (Dulbecco-v modifikovani Eagle medijum (DMEM visoka koncentracija glukoze) u koji su dodati 10% (v/v) fetalni govedji serum, 1% (v/v) MEM neesencijalne aminokiseline, 10mM HEPES, 2mM L-glutamin, 10 μg/mL puromicin i 1% (v/v) penicillin/streptomicin) i inkubirane 24h pri 37%C / 5%CO2/ 95% vlažnosti.
[0420] Jedinjenja su razblažena na pločama sa 384 bunarčića da se dobiju serijska razblaženja u 8 tačaka za 40 test jedinjenja u 90% DMSO-u, kao i 4 referentna jedinjenja plus 16 visokih kontrola i 16 niskih (inhibitranih) kontrola. Ploče za predkorak razblaživanja su pripremljene tako što je pipetom dodavano po 250 nl rastvora jedinjenja na polipropilenske ploče sa 384 bunarčića pomoću Hummingwell nanolitarskog dispenzera. Jedinjenja su bila predrazblažena dodatkom 49,75 ul kompletnog medijuma rasta. 10ul predrazblaženih rastvora jedinjenja su preneseni na ploču sa ćelijama pomoću pipetora za 384 bunarčića, tako da se dobije finalna koncentracija DMSO od 0,11%.
[0421] Ćelije su inkubirane 1 h na 37%C / 5%CO2/ 95% vlažnosti. Supernatant je uklonjen, ćelije lizirane u 20ul pufera za lizu za detekciju postupkom AlphaScreen® SureFire®.
[0422] Za detekciju p-AKT(Ser473), korišćen je SureFire® p-Akt 1/2 (Ser473) komplet za testiranje (PerkinElmer, SAD). 5ul ćelijskog lizata je prebačeno na Proksi-ploče sa 384 bunarčića male zapremine za detekciju, pomoću pipetora za 384 bunarčića. Dodavanje AlphaScreen® SureFire® reagenasa je radjeno prema uputstvu proizvodjača. Najpre su dodati 5ul reakcionog pufera i smesa pufera za aktivaciju sa AlphaScreen® akceptorskim perlama, ploča je zatvorena parafilmom i inkubirana na šejkeru za ploče 2h na sobnoj temperaturi. Zatim je dodato 2ul pufera za razblaživanje koji sadrži AlphaScreen® donorske perle, i ploča je inkubirana na šejkeru za ploče kao u gornjem tekstu tokom sledeća 2 sata. Ploča je očitavana na AlphaScreen® čitaču kompatibilnom sa pločama, pri standardnim AlphaScreen® podešavanjima.
2.2 Odredjivanje stepena aktivacije mišjih B-ćelija
[0423] Za PI3K δ je poznato da modulira funkciju B ćelija kada su ćelije stimulisane putem B-ćelijskog receptora (BCR) (Okkenhaug i sar. Science 297:1031 (2002). Za odredjivanje inhibitornih svojstava jedinjenja na aktivaciju B-ćelija, merena je upregulacija aktivacionih markera CD86 i CD69 na mišje B-ćelije dobijene iz mišje slezine. Merenje je vršeno nakon stimulacije anti-IgM-om. CD69 je dobro poznati aktivacioni marker za B i T ćelije (Sancho i sar. Trends Immunol.26:136 (2005). CD86 (takodje poznat kao B7-2) je primarno eksprimiran na antigen-prezentujućim ćelijama, uključujući B-ćelije. Neaktivirane B-ćelije eksprimiraju nizak nivo CD86, ali imaju mogućnost upregulacije nakon stimulacije npr. BCR ili IL-4 receptora. CD86 na B-ćeliji interaguje sa CD28 na T-ćeliji. Ova interakcija je neophodna za optimalnu aktivaciju T-ćelija, kao i za generisanje optimalnog IgG1 odgovora (Carreno i sar. Annu Rev Immunol.20:29 (2002)).
[0424] Slezine Balb/c miševa su sakupljene, splenociti izolovani i dva puta isprani RPMI sa 10% fetalnog govedjeg seruma (FBS), 10 mM HEPES, 100 jedinica/mL penicilina/streptomicina. RPMI obogaćen na ovaj način je označen u daljem tekstu kao medijum. Gustina ćelija je prilagodjena na 2,5 X 10<6>ćelija/mL u medijumu i po 200 μl ćelijske suspenzije (5 x10<6>ćelija) se dodaje u odgovarajuće bunarčiće na pločama sa 96 bunarčića.
[0425] Zatim su ćelije stimulisane dodavanjem 50 μl anti-IgM mAb u medijum (finalna koncentracija: 30 μg/mL). Nakon inkubacije 24h na 37°C, ćelije su bojene sledećim koktelom antitela: anti-mišji CD86-FITC, anti-mišji CD69-PerCP-Cy5.5, anti-mišji CD19-PerCP za odredjivanje stanja B ćelija, kao i CD3-FITC, anti-mišji CD69-PE za odredjivanje T-ćelija (po 2 μl svakog antitela/bunarčić). Nakon sat vremena na sobnoj temperaturi (rt) u mraku, ćelije su prebačene na Deepwell ploče sa 96 bunarčića.
[0426] Ćelije su isprane jedanput 1 mL PBS-om sa 2% FBS i nakon resuspenzije u 200 μl uzorci su analizirani na protočnom citometru FACS Calibur. Limfociti su razvrstavani na FSC/SSC “dot plot-u” prema veličini i granularitetu i dalje analizirani na ekspresiju CD19, CD3 i aktivacionih markera (CD86, CD69). Vrednosti su izračunavane sa dot blotova kao procenat ćelija sa pozitivnim bojenjem na aktivacione markere u okviru CD19+ ili CD3+ populaciju pomoću BD CellQest softvera.
[0427] Za odredjivanje inhibitornih osobina jedinjenja, ta jedinjenja se najpre rastvaraju i razblažuju u DMSO-u, a zatim 1:50 razblaženjem u medijumu. Splenociti iz Balb/c miševa su izolovani, resuspendovani i prebačeni na ploče sa 96 bunarčića kako je opisano u gornjem tekstu (200 μl/bunarčić). Razblažena jedinjenja ili rastvarač su dodati na ploče (25 μl) i inkubirani 1 sat na 37°C. Zatim su kulture stimulisane 25 μl anti-IgM mAb/bunarčić (finalna koncentracija 30 μg/mL) tokom 24 sata na 37°C i bojene sa anti-mišjim CD86-FITC i antimišjim CD19-PerCP (2 μl od svakog antitela/bunarčić). CD86 ekspresija na CD19 pozitivnim B ćelijama je kvantifikovana protočnom citometrijom kako je opisano u gornjem tekstu.
2.3 Odredjivanje stepena aktivacije B-ćelija pacova
[0428] Za PI3K δ je poznato da modulira funkciju B ćelija kada su ćelije stimulisane putem B-ćelijskog receptora (BCR) (Okkenhaug i sar. Science 297:1031 (2002). Za odredjivanje inhibitornih svojstava jedinjenja na aktivaciju B-ćelija, merena je upregulacija aktivacionih markera CD86 na B-ćelije pacova dobijene iz cele krvi. Merenje je vršeno nakon stimulacije anti-IgM i rekombinantnim IL-4. Molekul CD86 (takodje poznat kao B7-2) je primarno eksprimiran na antigen-prezentujućim ćelijama, uključujući B-ćelije. Neaktivne B-ćelije eksprimiraju nizak nivo CD86, ali se proizvodnja povećava nakon stimulacije npr. BCR ili IL-4 receptora. CD86 na površini B-ćelije interaguje sa CD28 na T-ćelijama. Ova interakcija je neophodna za optimalnu aktivaciju T-ćelija i za nastanak optimalnog IgG1 odgovora (Carreno i sar. Annu Rev Immunol. 20:29 (2002)).
Sakupljanje krvi pacova
[0429] Puna krv je sakupljana iz abdominalne aorte odraslih mužjaka Lewis pacova (LEW/HanHsd) pomoću šprica od 10 ml sa hipodermijskom iglom prethodno obloženim natrijum heparinom. Krv je prenesena u Falcon epruvete od 50 ml i koncentracija antikoagulanta podešena na 100 U/ml.
Stimulacija B-ćelija kod pacova i tretman specifičnim inhibitorom
[0430] Za odredjivanje in vitro efekata imunosupresivnih lekova, heparinizovana krv se prethodno razblaži na 50% pomoću medijuma. Kao medijum upotrebljen je DMEM sa visokom koncentracijom glukoze (Animed kat# 1-26F01-I) u koji su dodati 100 U/ml penicilin, 100 mg/ml streptomicin, 2 mM L-glutamin, 50 mg/ml dekstran 40 i 5% fetalni teleći serum (FCS, Fetaclone I, Gibco #10270-106). Zatim, 190 μl razblažene krvi je spajkovano sa 10 μl razblaženog test jedinjenja na mikrotitar pločama sa U-dnom i 96 bunarčića (Nunc), tako da se dobije trostruko serijsko razblaženje sa opsegom koncentracija od 20 do 0,0003 μM. Kontrolni bunarčići bili su prethodno tretirani DMSO-m da bi se dobila finalna koncentracija od 0,5% DMSO-a. Kulture su uspostavljene u duplikatu, dobro promešane mešanjem na šejkeru za ploče (Heidolph Titramax 101; 30 sek, brzina 900), pipetiranjem gore-dole i ponovnim mešanjem na šejkeru za ploče. Kulture su inkubirane 1 sat na 37°C i 5% CO2.Zatim je dodato 20 μl poliklonskog kozjeg antitela na pacovski IgM (Serotec, kat# 302001) i 10 μl razblaženog rekombinantnog rIL-4 (Immunotools # 340085) da bi se dobile finalne koncentracije od 30 µg/ml i 5 ng/ml, redosledom. Ploče su mešane na šejkeru za ploče kao u gornjem tekstu i inkubirane 24 h na 37°C i 5% CO2.
Odredjivanje stepena aktivacije B-ćelija protočnom citometrijom
[0431] Nakon inkubacije, dodato je 15 μl 25 mM EDTA rastvora po bunarčiću i mešano 15 min da bi se ćelije odlepile od podloge. Za analizu površinskih aktivacionih markera, uzorci su zatim bojeni PE-Cy5-označenim anti-pacovskim CD45RA (BD kat# 557015) da bi se zajazile B-ćelije kod FACS analize. Dodatno, uzorci su bojeni PE-označenim anti-pacovskim CD86 (BD kat# 551396). Svi postupci bojenja su vršeni na sobnoj temperaturi tokom 30 min u mraku. Nakon inkubacije, uzorci su preneseni na mikrotitar ploče sa 96 dubokih bunarčića sa V-dnom (Corning # 396096) koji sadrže 2 ml/bunarčić BD rastvora za lizu (BD # 349202). Nakon lize eritrocita, uzorci su isprani sa 2 ml CellWASH (BD # 349524). Merenje je vršeno na LSRII ili FACScalibur protočnom citometru (BD Biosciences) pomoću Cellquest Plus ili DIVA (verzija 6.1.1) softvera, redosledom. Limfociti su zajaženi u FSC/SSC dot-blotu prema veličini i granulaciji i dalje analizirani na ekspresiju CD45RA i aktivacione markere. Rezultati su računati iz dot-blotova ili histograma kao procenat ćelija pozitivno bojenih na aktivacione markere u okviru CD45RA+ populacije.
Statističko odredjivanje
[0432] Procenat inhibicije aktivacije B-ćelija nakon izlaganja leku je računat pomoću sledeće formule:
% inhibicije = 100 x stimulacija u odsustvu leka – stimulacija sa lekom
stimulacija u odsustvu leka – nestimulisani
[0433] ORIGIN 7 softver (OriginLab Corporation, Northampton, MA) korišćen je za fitovanje krive ne-linearnom regresijom. Koncentracija leka koja daje 50% inhibicije (IC50) dobijena je fitovanjem Hilove jednačine na sirovim podacima za inhibiciju.
2.4 Odredjivanje IL-6 indukovanog TLR9 u mišjim splenocitima
Dobijanje suspenzije pojedinačnih ćelija iz mišje slezine
[0434] Slezine su disektovane iz C57BL/6 miševa odmah nakon eutanazije. Višak masti je uklonjen sa slezina pre propuštanja kroz ćelijsko sito od 0,4 µM pomoću klipa iz šprica od ml. Dobijena je suspenzija pojedinačnih ćelija i zapremina je podešena hladnim PBS-om na 15 ml u Falcon tubi od 50 ml. Ćelije su centrifugirane 5 min na 1500 rpm na 4°C pre uklanjanja supernatanta i resuspendovanja u 5 ml pufera za lizu crvenih krvnih zrnaca po slezini i 5 minuta inkubacije na sobnoj temperaturi. Ledeno hladan PBS (30 ml) je dodat na ćelije pre centrifugiranja na 1500 rpm, 5 minuta na 4°C. Supernatant je uklonjen i ćelije su dvaput isprane sa 40 ml medijuma za ćelijsku kulturu mišjih splenocita (MSCM). MSCM se sastojao od RPMI u koji je dodato 100 jedinica/ml penicilina i 100 µg/ml streptomicina, 1 x neesencijalnih aminokiselina, 1 mM natrijum piruvata, 0,05 mM β-merkaptoetanola i 10% fetalnog govedjeg seruma deaktiviranog zagrevanjem (FBS). Ćelije su resuspendovane u 10-20 ml MSCM-a i brojane u Countess ćelijskom brojaču. Otprilike 60x10<6>splenocita je dobijeno iz jedne C57BL/6 mišje slezine.
Stimulacija mišjih splenocita i tretman specifičnim inhibitorom
[0435] Splenociti su zasejani pri finalnoj gustini od 2x10<5>ćelija/bunarčić u zapremini od 100 µl na ploče sa 96 bunarčića sa ravnim dnom i inkubirane 2-4 sata u inkubatoru na 37°C i odgovarajućim stepenom vlage. Nakon toga, dodata su jedinjenja za testiranje pomoću automatske mašine za tečne uzorke, sa prethodno pripremljenih ploča sa stok rastvorima jedinjenja. Ploče sa stok rastvorima su sadržale jedinjenja (u 90%/10% DMSO/ddH20) poredjana na 8-10 tačaka, sa razblaženjima od 2- ili 3 puta. Mašina za tečne uzorke je dodavala po 1 µl svakog razblaženja sa prethodno pripremljene ploče sa jedinjenjima u odgovarajući ciljni bunarčić na ploči sa 96 bunarčića. Finalna početna koncentracija jedinjenja u ćelijskoj kulturi je bila 10 µM. Finalna koncentracija DMSO-a u ćelijskim kulturama je bila 0,5%. Ćelije su inkubirane sa jedinjenjima tokom 1 sata pre dodavanja TLR liganda. Zatim je dodat CpG1826 u koncentraciji od 10x EC80i zapremini od 20 µl (za finalnu zapreminu kulture od 200 µl) a zatim su kulture inkubirane preko noći u inkubatoru na 37°C i odgovarajućim stepenom vlage.
Odredjivanje interleukina-6 ELISA testom
[0436] Nakon inkubacije preko noći, ploče su centrifugirane 5 minuta na 2000 rpm na sobnoj temperaturi. Zatim je 150 µl svake ćelijske kulture preneseno na ploče sa 96 bunarčića sa V-dnom i IL-6 nivo je meren pomoću komercijalno dostupnog sendvič ELISA kompleta za mišji IL-6. Ukratko, ploče su oblagane preko noći “capture” antitelom pre blokiranja rastvorom PBS/0,1% BSA tokom 1 sata. Uzorci i standardi su dodati u zapreminu od 50 µl i ploča je inkubirana 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon uklanjanja uzoraka/standarda, ploča je isprana rastvorom PBS/0,05% Tween pre dodavanja 50 µl biotinilovanog antitela a zatim inkubirana dalja 2 sata na sobnoj temperaturi uz mešanje. Ploče su opet isprane pre dodavanja 50 µl streptavidinperoksidaze (ren) po bunarčiću i inkubacije 20 minuta. Zatim su ploče još jednom isprane, a potom je dodato po 50 µl TMB supstrata u svaki bunarčić i ploče su inkubirane sledećih 20 minuta pre dodavanja 25 µl rastvora za zaustavljanje u svaki bunarčić. Nivo IL-6 je meren u SpectraMax 190 čitaču ploča (450 nm) i analiziran SoftMax Pro i GraphPad Prism softverom.
2.5 Odredjivanje IFNalfa indukovanog TLR9 u mononuklearima humane periferne krvi (PBMC)
Dobijanje PBMC iz sveže humane krvi
[0437] Humana krv (oko 75 ml) je sakupljana u 10 S-Monovette tubama koje su sadržale heparin (S-Monovette 7,5 mL NH Heparin 16 IU/mL krvi; Starstedt). Leucosep™ tube (30 mL #227290; Greiner Bio-one) su pripremljene dodavanjem 15 ml medijuma za odvajanje limfocita LSM1077™ po tubi (#J15-004; PAA Laboratories) i centrifugiranjem 30 sek na 1000g. Oko 25 ml krvi je preneseno u Leucosep™ tube a zatim razblaženo jednakom zapreminom PBS-a (bez Ca2+/Mg2+; #14190-094). Uzorci su centrifugirani na 800g tokom 20 min na 22 °C u Eppendorf 5810R centrifugi bez kočnica. PBMC sloj je pažljivo uklonjen sa dodirne površine plazme i medijuma za odvajanje i prenesen u čistu tubu od 50 ml. Ćelije su jedanput isprane dodavanjem PBS-a (do 45 ml) i centrifugirane (1400rpm, 10 min na 22 °C) sa kočnicom (podešenom na brzinu 9) u Eppendorf 5810R centrifugi. Peleti sa ćelijama su pažljivo resuspendovani u Media medijumu (RPMI 1640+GlutaMAX-I, 0,05 mM 2-merkaptoetanol, 10 mM HEPES i 5% v/v FCS) i uzorci su pulovani. Sastojci medijuma 2-merkaptoetanol (#31350-010; 50 mM), Hepes (#15630-056, 1M) i RPMI 1640 (1x) GlutaMAX-I (#61870-010) su nabavljeni od Gibco kompanije. FCS (#2-01F36-1) je dobijen od kompanije Amimed. PBMC su brojani u Countess® automatizovanom ćelijskom brojaču (uzorak je bio prethodno razblažen 1:10 u Media medijumu, pre dodavanja jednake zapremine (10 µl) Tripan plavog). Ćelije su razblažene do 4 x 10<6>ćelija/ml i zasejane na ploče sa 384 bunarčića (#353962; Becton Dickinson AG) da bi se dobila finalna zapremina od 25 µl (tj.1 x 10<5>ćelija/bunarčić).
Stimulacija PBMC i tretman specifičnim inhibitorom
[0438] Jedinjenja su bila najpre razblažena u 100% v/v DMSO-u (#41640-100mL; Sigma-Aldrich), a zatim prenesena u Media medijum (da se dostigne finalna DMSO koncentracija od 0,25%). Ćelije su tretirane odgovarajućim razblaženjem jedinjenja (5 µl) ili kontrolom sa nosačem (5 µl) i inkubirane 30 min na 37 °C u inkubatoru odgovarajuće vlažnosti u atmosferi vazduha sa 5% (v/v) CO2. Ćelije su stimulisane CpG2216 (0,3 µM; #tlrl-hodna; Invivogen) ili kontrolom sa nosačem (10 µl/bunarčić) inkubirane 20 h. Ploče su kratko centrifugirane (200 x g tokom 2 min na 22 °C) i uzorci supernatanta (30 µl) sakupljeni za dalju kvantifikaciju nivoa IFNα .
Kvantifikacija nivoa IFN α AlfaLisa tehnologijom
[0439] Za kvantifikaciju nivoa IFNalfa korišćen je humani interferon AlfaLISA Kit (#AL264F) kompanije PerkinElmer. Miks antitela koji je sadržao anti-IFNα akceptorske perle (5 μg/ml finalna koncentracija) i biotinilovano antitelo anti-IFNα (0,5 nM finalna koncentracija) pripremljen je svež i rasporedjen (po 5 µl) na ploče sa 384 bunarčića Optiplates™ (#6007299; PerkinElmer). Pripremljena su razblaženja poznatih IFNα standarda (humani IFNα B (2b)) i zajedno sa ćelijskim supernatantima (5 µl) dodata na gorepomenute ploče. Ploče su kratko centrifugirane (pulsno na 200g), prekrivene adhezivnim prekrivajućim filmom, vorteksovane i inkubirane 1 h na sobnoj temperaturi u mraku. Donorske perle obložene streptavidinom (20 μg/ml finalna koncentracija) su pripremljene i dodate u svaki bunarčić (5 µl) u tamnijem prostoru (smesa osetljiva na svetlost). Ploče su inkubirane 30 min na sobnoj temperaturi (ploče ne treba da se centrifugiraju niti pokrivaju). Nakon inkubacije, ploče se očitavaju u EnVision™ čitaču za ploče opremljenim ALPHA opcijom koristeći “AlphaScreen standardna podešavanja” instrumenta (npr. ukupno vreme merenja: 550 ms, Laser 680 nm vreme ekscitacije: 180 ms, ogledalo: D640 as, emisioni filter: M570w, centralna talasna dužina 570 nm, širina trake 100 nm, transmitanca 75%). Rezultati merenja su prikupljeni za analizu i kvantifikaciju nivoa IFNα.
Evaluacija podataka i analiza
[0440] Podaci su analizirani softverom Excel XL fit 4.0 (Microsoft) sa XLfit dodatkom (IDBS; verzija 4.3.2). Specifične IFNα koncentracije su odredjivane ekstrapolacijom standardnih krivih dobijenih pomoću IFNα B (2b). Pojedinačne IC50vrednosti za jedinjenja su odredjivane nonlinearnom regresijom nakon fitovanja krivih na eksperimentalne podatke.
3 Odredjivanje nivoa proizvodnje antitela na ovčija crvena krvna zrnca (SRBC).
[0441] Ukratko, OFA pacovima se injektuju i.v. ovčiji eritrociti na d0 a zatim se oralno tretiraju četiri uzastopna dana (d0 do d3) test jedinjenjima. Suspenzije ćelija slezine se pripremaju na d4 i limfociti zasejavaju na meki agar u prisustvu indikatoskih ćelija (SRBC) i komplementa. Liza indikatorskih ćelija kao posledica sekrecije SRBC-specifičnih antitela (uglavnom IgM podklase) i prisustvo komplementa imaju za posledicu stvaranje plaka. Broj plaka po jednoj ploči se prebroji i izražava kao broj plaka po slezini.
[0442] Imunizacija: Grupe od po pet ženki OFA pacova su imunizovane na dan 02x10<8>/ml SRBC (dobijenim od Laboratory Animal Services LAS, Novartis Pharma AG) u zapremini od 0,5ml po životinji putem i.v. injekcije.
Tretman jedinjenjima: Životinje su tretirane jedinjenjima suspendovanim u 0,5% CMC-u, 0,5% Tween80 tokom 4 uzastopna dana (dani 0, 1, 2 i 3) počevši od dana imunizacije. Jedinjenje je davano oralno dvaput dnevno sa intervalima od 12 sati izmedju doza, u zapremini od 5 ml/kg telesne težine.
Priprema suspenzija ćelija slezine:
[0443] Na dan 4, životinje su eutanazirane CO2.Slezine su uklonjene, izvagane i prenesene u plastične epruvete sa po 10 ml hladnog (4 °C) Hank-ovog balansiranog slanog rastvora (HBSS; Gibco, pH 7,3, sadrži 1mg fenolcrvenog/100ml) za svaku pacovsku slezinu pojedinačno. Slezine su homogenizovane staklenim poterom, ostavljene 5 min na ledu i 1 ml supernatanta je prebačen u novu epruvetu. Ćelije su jedanput isprane u 4 ml HBSS-u a zatim su supernatanti odbačeni i peleti resuspendovani u 1 ml HBSS-a. Broj limfocita po slezini je odredjivan u automatskom ćelijskom brojaču i suspenzije ćelija slezine su podešene na koncentraciju ćelija od 30x10<6>/ml.
Test nastanka plaka:
[0444] Petri sudovi sa mekim agarom su pripremljeni sa 0,7% agarozom (SERVA) u HBSS-u.
[0445] Dodatno, jedan ml 0,7% agaroze je pripremljen u plastičnim epruvetama i držan na 48°C u vodenom kupatilu. Nekih 50 μl 30x10<6>/ml suspenzije ćelija slezinei 50 μl SRBC pri 40 x 10<8>/ml su dodati, brzo izmešani (Vorteks) i razliveni u pripremljene Petri sudove sa agarozom. Petri sudovi su pomerani ukrug da bi se postigla ravnomerna raspodela ćelijske mešavine na površini agaroze. Sudovi su ostavljeni 15 minuta na sobnoj temperaturi a zatim inkubirani na 37°C tokom sledećih 60 minuta. Zatim je dodato 1,4ml komplementa morskog praseta (Harlan; 10%) i inkubacija je nastavljena sledećih 60 minuta na 37 °C. SRBC-specifična antitela koja oslobadjaju zasejane B -ćelije vezane za antigen (SRBC) u njihovoj blizini. Ovi kompleksi antigen-antitelo su aktivirali komplement i dovodili do lize SRBC ostavljajući svetlu mrlju (plaku) u okviru crvenog sloja eritrocita. Plake su brojane pomoću mikroskopa.
[0446] Sledeća formula za odredjivanje inhibicije formiranja plaka je korišćena: %inhibicije = C*100/V-100
sa: V= srednji broj plaka/slezina za grupu sa nosačem; C= srednji broj plaka/slezina za grupu tretiranu jedinjenjem
Reference:
[0447]
N.K. Jerne & A.A. Nordin (1963) Plaque formation in agar by single antibody-producing cells. Science 140:405.
N.K. Jerne, A.A. Nordin & C. Henry (1963) The agar plaque technique for recognizing antibody-producing cells. In: "Cell Bound Antibodies", B. Amos & H. Koprowski, Eds., Wistar Inst. Press, Philadelphia pp.109-125.
Biološki podaci
Enzimski test
Ćelijski testovi
LISTING SEKVENCI [0449]

Claims (17)

  1. PATENTNI ZAHTEVI: 1. Jedinjenje formule (I)
  2. ili njegova so, u kojoj je Y odabran od O ili NH; V odabran od CR<5>ili N; W je odabran od CH2, ili O; U odabran od N ili CH; Q odabran od N ili CR6; gde U i Q ne predstavljaju oboje N; gde je R<1>odabran od fenila, piridila, pirimininila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila, 1,3,5-triazinila, ili -X-R<4> gde je X odabran od C(O), S(O)2ili CH2 i gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkil-amino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-oksi, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, C3-C12-cikloalkil-oksi, C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkil, heteroaril, heteroaril-oksi, heteroaril-C1-C8-alkil, hidroksi, C1-C8-alkoksi, amino, N-C1-C8-alkil-amino ili N,N-di-C1-C8-alkil-amino, u kojoj C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi, gde C3-C12-cikloalkil u C3-C12-cikloalkilu i u C3-C12-cikloalkil-C1-C8-alkilu mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani sa 1-5 supstituenta koji su odabrani od halogena, hidroksi ili C1-C4-alkoksi; u kojoj ‘heterociklil’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani od okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, NC1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može biti spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu takodje, po slobodnom izboru, da se oksiduju do različitih oksidacionih stanja, gde ‘heteroaril’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični prstenasti sistem koji sadrži od 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenta koji su odabrani iz grupe koju čine halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja; gde je R<6>odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil, C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkil-sulfonil, C1-C4-alkil-sulfinil, C1-C4-alkil-sulfanil, halo-C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkoksi-C1-C4-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino; gde je R<7>odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, cijano, nitro, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil, C1-C4-alkoksi, N(R<8>)2-sulfonil, C1-C4-alkil-sulfonil, C1-C4-alkil-sulfonil-amino, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, ili N,N-di-C1-C8-alkil-amino; ili R<6>i R<7>, zajedno predstavljaju CH=CH-CH=CH, gde je R<8>nezavisno odabran od vodonika, C1-C4-alkila, C1-C4-alkoksi ili dve R<8>zajedno sa azotom vezane su da grade 4 do 7-očlani heterociklični prsten sa 1-2 heteroatoma odabranih od N, O, S, koji može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa 1-3 supstituenta odabranih od C1-C4-alkil; gde je R<5>nezavisno odabran od H, D, F ili C1-C2-alkil; gde je R<30>nezavisno odabran od H, D ili F. 2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, formule (Ic’)
  3. 3. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili njegova so, formule (Id’)
  4. 4. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 ili 2 ili njegova so, formule (Ie’)
  5. 5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 ili 3 ili njegova so, formule (If’)
  6. 6. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 do 5 ili njegova so, nanzačen time, što je R<1>odabran od fenila, piridila, pirimininila, pirazinila, piridazinila, 1,2,3-triazinila, 1,2,4-triazinila, 1,3,5-triazinila, ili -X-R<4> gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkil-amino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, u kojoj C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi, gde C3-C12-cikloalkil može da budu nesupstituisan ili supstituisan sa halogen, hidroksi ili C1-C4-alkoksi; u kojoj ‘heterociklil’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani od okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može biti spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu takodje, po slobodnom izboru, da se oksiduju do različitih oksidacionih stanja, gde ‘heteroaril’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični prstenasti sistem koji sadrži od 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenta koji su odabrani iz grupe koju čine halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja.
  7. 7. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 6 ili njegova so, naznačen time, što je R1 odabran od -X-R4, gde je R<4>odabran od C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, cijano-C1-C8-alkil, N,N-di-C1-C4-alkil-amino-C1-C8-alkil, C1-C4-alkil-sulfonil-C1-C8-alkil, fenil, heterociklil, heterociklil-C1-C8-alkil, C3-C12-cikloalkil, heteroaril, heteroaril-C1-C8-alkil, C1-C8-alkoksi, u kojoj C1-C8-alkil u N-C1-C8-alkil-amino i u N,N-di-C1-C8-alkil-amino mogu da budu nesupstituisani ili supstituisani halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi, u kojoj C3-C12-cikloalkil može da bude nesupstituisan ili supstituisan halogenom, hidroksi ili C1-C4-alkoksi; u kojoj ‘heterociklil’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani zasićeni ili delimično nezasićeni monociklični prstenasti sistem sa 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenata koji su odabrani od okso, halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1-C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heterociklil’ može biti spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu takodje, po slobodnom izboru, da se oksiduju do različitih oksidacionih stanja, gde ‘heteroaril’ predstavlja 3-očlani do 7-očlani potpuno nezasićeni monociklični prstenasti sistem koji sadrži od 1 do 3 heteroatoma koji su odabrani od N, O ili S, ili pirazolo[1,5-a]pirimidin ili imidazo[2,1-b]tiazol, od kojih je svaki nesupstituisan ili supstituisan sa 1-5 supstituenta koji su odabrani iz grupe koju čine halogen, C1-C8-alkil, halo-C1-C8-alkil, hidroksi-C1-C8-alkil, hidroksil, C1-C8-alkoksi, C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil, amino, N-C1-C8-alkil-amino, N,N-di-C1-C8-alkil-amino, C1C8-alkil-karbonil, halo-C1-C8-alkil-karbonil, hidroksi-C1-C8-alkil-karbonil ili C1-C8-alkoksi-C1-C8-alkil-karbonil; gde ‘heteroaril’ može da bude spojen za heteroatom ili atom ugljenika i gde N i/ili S heteroatomi mogu po slobodnom izboru da budu oksidovani do različitih oksidacionih stanja; gde je R<6>odabran iz grupe koju čine halogen, C1-C4-alkoksi, C1-C4-alkil-sulfonil ili halo-C1-C4-alkoksi i gde je R7 odabran iz grupe koju čine vodonik, halogen, cijano, C1-C4-alkil, halo-C1-C4-alkil ili C1-C4-alkoksi.
  8. 8. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje je odabran iz grupe koju čine (S)-(3-((4-(6-Metoksi-5-metilpiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon; dimetilamid 5-{6-[(S)-1-(Tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-piridin-3-sulfonske kiseline; ((S)-3-{4-[5-(Morfolin-4-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metil-5-nitro-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; (Tetrahidro-piran-4-il)-{(S)-3-[4-(5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; 5-{6-[(S)-1-(Tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 1-{(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 2-Metoksi-5-[6-((S)-1-propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitril; 1-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(6-Amino-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 2-Metoksi-N,N-dimetil-5-[6-((S)-1-propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-benzensulfonamid; 1-{(S)-3-[4-(3-Metansulfonil-4-metoksi-fenil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(6-Amino-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-((S)-3-{4-[6-Metoksi-5-(4-metil-piperazin-1-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksil-pirolidin-1-il)-propan-1-on; {(S)-3-[4-(2-Metil-piridin-4-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksimetil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; (Tetrahidro-piran-4-il)-{(S)-3-[4-(2-trifluorometil-piridin-4-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(2-Metoksi-piridin-4-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Amino-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 1-((S)-3-{4-[4-Metil-3-(piperidin-1-sulfonil)-fenil]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-propan-1-on; 1-((S)-3-{4-[4-Metoksi-3-(morfolin-4-sulfonil)-fenil]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-propan-1-on; 1-((S)-3-{4-[5-(Morfolin-4-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-propan-1-on; 1-((S)-3-{4-[4-Metoksi-3-(4-metil-piperazin-1-sulfonil)-fenil]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksilpirolidin-1-il)-propan-1-on; 1-((S)-3-{4-[5-(4-Metil-piperazin-1-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-propan-1-on; 2,N-Dimetoksi-N-metil-5-[6-((S)-1-propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-benzensulfonamid; metoksimetil-amid 5-[6-((S)-1-Propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-piridin-3-sulfonske kiseline; 2,N-Dimetoksi-5-[6-((S)-1-propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-benzenesulfonamid; 5-[6-((S)-1-Propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitril; {(S)-3-[4-(5-Metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-hloro-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(3,4-Dimetoksi-fenil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-[(S)-3-(4-hinolin-3-il-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi)-pirolidin-1-il]-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-Metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-Trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; dimetilamid 5-[6-((S)-1-Propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-piridin-3-sulfonske kiseline; 2-Metil-5-[6-((S)-1-propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-benzonitril; 1-{(S)-3-[4-(4-Metoksi-3-trifluorometil-fenil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; (Tetrahidro-piran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Etoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 4-[6-((S)-1-Propionil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-piridin-2-karbonitril; 1-{(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-((S)-3-{4-[5-(Propan-2-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-propan-1-on; ((S)-3-{4-[5-(Propan-2-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Etansulfinil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; (4,4-Difluoro-cikloheksil)-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirrolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2Hbenzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; (1,1-Diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2Hbenzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-furan-3-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-furan-3-il)-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-etoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2Hbenzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; ({(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon ; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(5-etil-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2Hbenzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-pirazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-pirazol-3-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-piridin-4-il-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-pirimidin-5-il-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-oksazol-4-il-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-oksazol-5-il-metanon; (2,2-Dimetil-tetrahidro-piran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Dikso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-((S)-3-{4-[5-(propan-2-sulfonil)-piridin-3-il]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi}-pirolidin-1-il)-metanon; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-3,3-dideutero-2,3dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-furan-3-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metoksi-etanon; 1-{(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metil-propan-1-on; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-fenil-metanon; (1,1-Diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-l}-metanon; [1,4]Dioksan-2-il-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon ; 1-{(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-metoksi-propan-1-on; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-[1,4]dioksan-2-il-metanon; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidrofuran-3-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-3-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-3-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metoksietanon; 1-{(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-metansulfonil-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-metoksipropan-1-on; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-dioksoheksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; Cikloheksil-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (4-Hidroksi-cikloheksil)-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-furan-3-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-hloro-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-hloro-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; {(S)-3-[4-(6-hloro-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-hloro-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-hidroksi-propan-1-on; {(S)-3-[4-(6-hloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-hloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; {(S)-3-[4-(6-hloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-hloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-hidroksi-propan-1-on; {(S)-3-[4-(6-hloro-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; 5-{(S)-3-[4-(6-hloro-5-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-1H-piridin-2-on; {(S)-3-[4-(6-hloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; 5-{(S)-3-[4-(6-hloro-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-1H-piridin-2-on; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(4-hidroksicikloheksil)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(3-metil-piridin-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-piridin-4-il-etanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-trifluorometil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Fluorometil-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Difluorometoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Difluorometoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-6-tiopiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(R)-tetrahidro-furan-3-il-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metilamino-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Dimetilamino-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-hloro-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; Ciklopropil-{(S)-3-[4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-sulfonil)-pirolidin-3-iloksi]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin; 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-[(S)-1-(propan-2-sulfonil)-pirolidin-3-iloksi]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin; 6-((S)-1-Ciklopropansulfonil-pirolidin-3-iloksi)-4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin; 6-((S)-1-Etansulfonil-pirolidin-3-iloksi)-4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin; terc-butil estar (S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Etansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidropiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(3-metil-3H-imidazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; 1-(4-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-piperidin-1-il)-etanon; 4-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-1H-piridin-2-on; 5-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-1H-piridin-2-on; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-furan-3-il)-metanon; 5-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-1-metil-1H-piridin-2-on; 1-{(S)-3-[4-(6-Etansulfonil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-furan-3-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metoksi-etanon; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-oksazol-4-il-metanon; (1,1-Diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-{(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihdro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-oksazol-5-il-metanon; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-pirimidin-5-il-metanon; {(S)-3-[4-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-metansulfonil-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-Hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1il}-3-hidroksi-propan-1-on; {(S)-3-[4-(5-Hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-oksazol-5-il-metanon; 3-{(S)-3-[4-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-oksopropionitril; 1-{(S)-3-[4-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metansulfonil-etanon; 1-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metansulfonil-etanon; 1-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-metansulfonil-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-hidroksi-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-metoksi-propan-1-on; [1,4]Dioksan-2-il-{(S)-3-[4-(5-fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; 3-{(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-3-oksopropionitril; {(S)-3-[4-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(4-hidroksi-cikloheksil)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-6-tiopiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[4-(6-Etansulfinil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-((R)-3-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karbonil}-pirolidin-1-il)-etanon; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(R)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-niotinonitril; 1-{(R)-3-[4-(6-Metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 1-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-propan-1-on; 2-Metoksi-5-{3-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(Furazan-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksinikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(2-metil-2H-pirazol-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidroenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(Izoksazol-5-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksinikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1H-pirazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(2-Metansulfonil-acetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(5-metil-[1,3,4]oksadiazol-2-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(pirimidin-5-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tiazol-5-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(pirazin-2-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(piridin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(piridin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(1,3-Dimetil-1H-pirazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(5-okso-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(2,4-Dimetil-oksazol-5-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(6,6-Dimetil-4-okso-5,6-dihidro-4H-piran-2-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(5-okso-pirolidin-2-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-([1,4]Dioksan-2-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2metoksi-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-([1,4]Dioksan-2-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; (S)-2-metoksi-5-(6-((1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)pirolidin-3-il)oksi)-2H-benzo[b][1,4]oksazin-4(3H)-il)nikotinonitril; 1-{(S)-3-[4-(6-Metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-morfolin-4-il-etanon; 2-Dimetilamino-1-{(S)-3-[4-(6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-etanon; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(1-Acetil-piperidin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksinikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(2-Dimetilamino-acetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(2-morfolin-4-il-acetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-[6-((S)-1-Izobutiril-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksi-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(3,3-Dimetil-butiril)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksinikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(3-metil-butiril)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; metil estar (S)-3-[4-(5-Cijano-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(2-metoksi-acetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-[6-((S)-1-Cikloheksankarbonil-pirolidin-3-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-2-metoksinikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-piperidin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(2-Hidroksi-2-metil-propionil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksinikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-(1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-6-okso-1,6-dihidro-piridin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(oksazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-2-okso-1,2-dihidro-piridin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(6-okso-1,6-dihidro-piridin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(2-okso-1,2-dihidro-piridin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(R)-2-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-izoksazolidin-4-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-[6-((R)-2-propionil-izoksazolidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-2-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-izoksazolidin-4-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-[6-((S)-2-propionil-izoksazolidin-4-iloksi)-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il]-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(R)-2-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)-izoksazolidin-4-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-1H-pirazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-furan-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(3-metil-3H-imidazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(oksazol-5-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(4-metil-oksazol-5-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(morfolin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(4-metoksi-cikloheksankarbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(4-metoksi-cikloheksankarbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-(6-{(S)-1-[2-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-acetil]-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il)-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(piperidin-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-((S)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-((R)-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; {(S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; terc-butil estar (S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-karboksilne kiseline; {(S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(6-Difluorometoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[1-(6-Metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(5-hloro-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(6-Difluorometoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(6-Difluorometoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; Ciklopropil-{(S)-3-[1-(6-difluorometoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(6-hidroksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(5-hidroksimetil-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(5-fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3dihidro-1Hpirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[1-(5-Fluoro-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; 2-Metoksi-5-{7-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-1-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{7-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-1-il}-nikotinonitril; {(S)-3-[1-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metoksi-etanon; {(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; 1-{(S)-3-[1-(5-Difluorometil-6-metansulfonil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-2-metoksi-etanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiiopiran-4-il)-{3-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; 5-{7-[(S)-1-(1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidropirido[3,4-b][1,4]oksazin-1-il}-2-metoksi-nikotinonitril; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(R)-3-fluoro-4-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; Imidazo[2,1-b]tiazol-6-il-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(R)-3-[1-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (5-Amino-1-metil-1H-imidazol-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-trifluorometil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; (1,1-Diokso-tetrahidro-1lambda*6*-tiofen-3-il)-{(S)-3-[1-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(5,6-Dimetoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidrofuran-2-il)-metanon; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[5-fluoro-4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-fluoro-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiiopiran-4-il)-metanon; {(S)-3-[5-Fluoro-4-(6-metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-l)-metanon; 5-{6-[(S)-1-((S)-1-Acetil-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]-oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 5-{6-[(S)-1-((R)-1-Acetil-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-((R)-1-metil-pirolidin-3-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-piridin-2-il-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin; 4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-6-((S)-1-pirimidin-2-il-pirolidin-3-iloksi)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin; 2-Metoksi-5-{2-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{(S)-2-metil-6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-piperidin-4-ilmetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; {(S)-3-[4-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; 5-{6-[(S)-1-(4-Hidroksi-cikloheksankarbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-2-metoksi-nikotinonitril; 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(2-piridin-4-il-acetil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; {(S)-3-[4-(5-Amino-6-metoksi-piridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon; N-(2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(1-metil-1H-imidazol-4-karbonil)-pirolidin-3-iloksi]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-piridin-3-il)-metansulfonamid; (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[4-(6-metoksi-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon; {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metil-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon; {(S)-3-[4-(5-Difluorometil-6-metoksi-piridin-3-il)-5-metil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1,1-diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-metanon; ili 2-Metoksi-5-{6-[(S)-1-(tetrahidro-piran-4-karbonil)-pirolidin-3-ilamino]-2,3-dihidrobenzo[1,4]oksazin-4-il}-nikotinonitril; ili njegova so.
  9. 9. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 u kristalnom obliku.
  10. 10. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje predstavlja (S)-(3-((4-(6-Metoksi-5-metilpiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[b][1,4]oksazin-6-il)oksi)pirolidin-1-il)(tetrahidro-2H-piran-4-il)metanon ili njegova so.
  11. 11. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje predstavlja {(S)-3-[4-(6-Metansulfonil-5-metilpiridin-3-il)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oksazin-6-iloksi]-pirolidin-1-il}-(tetrahidro-piran-4-il)-metanon ili njegova so.
  12. 12. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje predstavlja {(S)-3-[1-(6-Metoksi-5-metil-piridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-(1-metil-1H-imidazol-4-il)-metanon ili njegova so.
  13. 13. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, koje predstavlja (1,1-Diokso-heksahidro-1lambda*6*-tiopiran-4-il)-{(S)-3-[1-(6-metoksi-5-metilpiridin-3-il)-2,3-dihidro-1H-pirido[3,4-b][1,4]oksazin-7-iloksi]-pirolidin-1-il}-metanon ili njegova so.
  14. 14. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu kao leka.
  15. 15. Kombinacija koja obuhvata terapijski efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, i jedan ili više terapijski aktivnih ko-agenasa.
  16. 16. Jedinjenje prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju poremećaja ili oboljenja odabranih iz grupe koju čine reumatoidni artritis (RA), pemfigus vulgaris (PV), endemski oblik Brazilskog pemfigusa (Fogo selvagem), idiopatsku trombocitopeniju purpura (ITP), trombotičnu trombocitopeniju purpura (TTP), autoimunu hemolitičku anemiju (AIHA), stečenu hemofiliju tipa A (AHA), sistemski lupus eritematozus (SLE), multiplu sklerozu (MS), mijasteniju gravis (MG), Sjögren-ov sindrom (SS), vaskulitise povezane sa ANCA, krioglobulinemju, hroničnu autoimunu urtikariju (CAU), alergije (atopični dermatitis, kontaktni dermatitis, alergijski rinitis), Goodpasture sindrom, odbacivanje transplanta i kancere hematopojetskog porekla, cerebralna malarija, tripanozomijaza, leišmanijaze, toksoplazmoze i neurocisticerkoze.
  17. 17. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata terapijski efikasnu količinu jedinjenja prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 13, ili njena farmaceutski prihvatljiva so, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
RS20180156A 2011-12-22 2012-12-20 Derivati 2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazina i srodna jedinjenja kao inhibitori fosfoinozitid-3-kinaze (pik3) za lečenje, na primer, reumatoidnog artritisa RS56891B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161579231P 2011-12-22 2011-12-22
PCT/IB2012/057554 WO2013093849A1 (en) 2011-12-22 2012-12-20 Dihydro-benzo-oxazine and dihydro-pyrido-oxazine derivatives
EP12823036.4A EP2794600B1 (en) 2011-12-22 2012-12-20 2,3-Dihydro-benzo[1,4]oxazine derivatives and related compounds as phosphoinositide-3 kinase (PI3K) inhibitors for the treatment of e.g. rheumatoid arthritis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS56891B1 true RS56891B1 (sr) 2018-04-30

Family

ID=47678928

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20180156A RS56891B1 (sr) 2011-12-22 2012-12-20 Derivati 2,3-dihidro-benzo[1,4]oksazina i srodna jedinjenja kao inhibitori fosfoinozitid-3-kinaze (pik3) za lečenje, na primer, reumatoidnog artritisa

Country Status (42)

Country Link
US (2) US9539260B2 (sr)
EP (1) EP2794600B1 (sr)
JP (1) JP5903499B2 (sr)
KR (1) KR101656592B1 (sr)
CN (1) CN104011045B (sr)
AP (1) AP4055A (sr)
AR (1) AR089424A1 (sr)
AU (1) AU2012356083B2 (sr)
BR (1) BR112014015103B1 (sr)
CA (1) CA2859764C (sr)
CL (1) CL2014001452A1 (sr)
CO (1) CO6990717A2 (sr)
CR (2) CR20200286A (sr)
CU (1) CU20140072A7 (sr)
CY (1) CY1119939T1 (sr)
DK (1) DK2794600T3 (sr)
EA (1) EA025322B1 (sr)
EC (1) ECSP14009999A (sr)
ES (1) ES2661864T3 (sr)
GT (1) GT201400131A (sr)
HR (1) HRP20180384T1 (sr)
HU (1) HUE036953T2 (sr)
IL (1) IL233117A (sr)
IN (1) IN2014CN04174A (sr)
JO (1) JO3398B1 (sr)
LT (1) LT2794600T (sr)
MA (1) MA37142B1 (sr)
MX (1) MX353342B (sr)
MY (1) MY170922A (sr)
NO (1) NO2809782T3 (sr)
PE (1) PE20141598A1 (sr)
PH (1) PH12014501417A1 (sr)
PL (1) PL2794600T3 (sr)
PT (1) PT2794600T (sr)
RS (1) RS56891B1 (sr)
SG (1) SG11201402237WA (sr)
SI (1) SI2794600T1 (sr)
TN (1) TN2014000210A1 (sr)
TW (1) TWI577674B (sr)
UA (1) UA112558C2 (sr)
UY (1) UY34541A (sr)
WO (1) WO2013093849A1 (sr)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IN2014CN04174A (sr) 2011-12-22 2015-09-04 Novartis Ag
SG10201610936RA (en) 2011-12-22 2017-02-27 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
AR089284A1 (es) 2011-12-22 2014-08-13 Galapagos Nv Dihidropirimidinoisoquinolinonas y composiciones farmaceuticas de las mismas para el tratamiento de trastornos inflamatorios
USRE48171E1 (en) 2012-03-21 2020-08-25 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9441007B2 (en) 2012-03-21 2016-09-13 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
HRP20171573T1 (hr) * 2012-11-26 2017-11-17 Novartis Ag Čvrsti oblik derivata dihidro-pirido-oksazina
TW201422625A (zh) * 2012-11-26 2014-06-16 Novartis Ag 二氫－吡啶并－□衍生物之固體形式
CN105541698B (zh) * 2015-12-23 2018-07-10 滨海康杰化学有限公司 一种5-溴-2-三氟甲基吡啶的制备方法
GB2550437B (en) * 2016-05-20 2021-06-23 Bugworks Res Inc Heterocyclic compounds useful as anti-bacterial agents and method for production
RU2020124136A (ru) * 2017-12-22 2022-01-25 Хиберселл, Инк. Производные хроменопиридина в качестве ингибиторов фосфатидилинозитолфосфаткиназы
EP3837263B1 (en) 2018-08-13 2024-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG New heterocyclic compounds as monoacylglycerol lipase inhibitors
EP3883936B1 (en) 2018-11-22 2023-07-12 F. Hoffmann-La Roche AG New heterocyclic compounds
BR112021007421A2 (pt) 2018-12-06 2021-08-03 Daiichi Sankyo Company, Limited derivado de cicloalcano-1,3-diamina
TW202112784A (zh) 2019-06-17 2021-04-01 美商佩特拉製藥公司 作為磷脂酸肌醇磷酸激酶抑制劑之𠳭唏并嘧啶衍生物
US11814375B2 (en) 2019-09-12 2023-11-14 Hoffmann-La Roche Inc. Heterocyclic compounds
WO2021099406A1 (en) * 2019-11-20 2021-05-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Spiro(isobenzofuranazetidine) compounds for the treatment of autoimmune disease
US20240116947A1 (en) 2020-07-15 2024-04-11 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Pyrido oxazine derivatives as alk5 inhibitors
AU2023232562A1 (en) 2022-03-08 2024-09-05 Equashield Medical Ltd Fluid transfer station in a robotic pharmaceutical preparation system
CN116535436B (zh) * 2023-05-06 2024-04-30 遵义医科大学 一种氟离子荧光探针及其合成方法和应用
WO2025099111A1 (en) * 2023-11-10 2025-05-15 Wella Germany Gmbh New telescoping syntheses of 6-hydroxy-benzomorpholine (3,4-dihydro-2h-1,4-benzoxazin-6-ol)
WO2025161263A1 (zh) * 2024-01-31 2025-08-07 深圳晶蛋生物医药科技有限公司 一种苯并吗啉类化合物及其应用

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1524747A (en) 1976-05-11 1978-09-13 Ici Ltd Polypeptide
ATE28864T1 (de) 1982-07-23 1987-08-15 Ici Plc Amide-derivate.
GB8327256D0 (en) 1983-10-12 1983-11-16 Ici Plc Steroid derivatives
US5093330A (en) 1987-06-15 1992-03-03 Ciba-Geigy Corporation Staurosporine derivatives substituted at methylamino nitrogen
US5010099A (en) 1989-08-11 1991-04-23 Harbor Branch Oceanographic Institution, Inc. Discodermolide compounds, compositions containing same and method of preparation and use
TW224941B (sr) 1989-11-08 1994-06-11 Yamanouchi Pharma Co Ltd
NZ243082A (en) 1991-06-28 1995-02-24 Ici Plc 4-anilino-quinazoline derivatives; pharmaceutical compositions, preparatory processes, and use thereof
AU661533B2 (en) 1992-01-20 1995-07-27 Astrazeneca Ab Quinazoline derivatives
TW225528B (sr) 1992-04-03 1994-06-21 Ciba Geigy Ag
GB9309716D0 (en) 1993-05-12 1993-06-23 Zeneca Ltd Heterocyclic derivatives
GB9314893D0 (en) 1993-07-19 1993-09-01 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
DE69522717T2 (de) 1995-03-30 2002-02-14 Pfizer Inc., New York Chinazolinderivate
GB9508538D0 (en) 1995-04-27 1995-06-14 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
US5747498A (en) 1996-05-28 1998-05-05 Pfizer Inc. Alkynyl and azido-substituted 4-anilinoquinazolines
US5843901A (en) 1995-06-07 1998-12-01 Advanced Research & Technology Institute LHRH antagonist peptides
ATE212993T1 (de) 1995-07-06 2002-02-15 Novartis Erfind Verwalt Gmbh Pyrolopyrimidine und verfahren zu ihrer herstellung
US5760041A (en) 1996-02-05 1998-06-02 American Cyanamid Company 4-aminoquinazoline EGFR Inhibitors
GB9603095D0 (en) 1996-02-14 1996-04-10 Zeneca Ltd Quinazoline derivatives
HU228446B1 (en) 1996-04-12 2013-03-28 Warner Lambert Co Kinazoline derivatives as irreversible inhibitors of protein-kinase, pharmaceutical compositions containing these compounds and use thereof
DE69734513T2 (de) 1996-06-24 2006-07-27 Pfizer Inc. Phenylamino-substituierte tricyclische derivate zur behandlung hyperproliferativer krankheiten
EP0923583A1 (de) 1996-08-30 1999-06-23 Novartis AG Verfahren zur herstellung von epothilonen und zwischenprodukte innerhalb des verfahrens
EP0938597B1 (en) 1996-09-06 2003-08-20 Obducat Aktiebolag Method for anisotropic etching of structures in conducting materials
WO1998010767A2 (en) 1996-09-13 1998-03-19 Sugen, Inc. Use of quinazoline derivatives for the manufacture of a medicament in the treatment of hyperproliferative skin disorders
EP0837063A1 (en) 1996-10-17 1998-04-22 Pfizer Inc. 4-Aminoquinazoline derivatives
ES2312695T3 (es) 1996-11-18 2009-03-01 Gesellschaft Fur Biotechnologische Forschung Mbh (Gbf) Epotilones e y f.
US6441186B1 (en) 1996-12-13 2002-08-27 The Scripps Research Institute Epothilone analogs
CO4940418A1 (es) 1997-07-18 2000-07-24 Novartis Ag Modificacion de cristal de un derivado de n-fenil-2- pirimidinamina, procesos para su fabricacion y su uso
GB9721069D0 (en) 1997-10-03 1997-12-03 Pharmacia & Upjohn Spa Polymeric derivatives of camptothecin
US6194181B1 (en) 1998-02-19 2001-02-27 Novartis Ag Fermentative preparation process for and crystal forms of cytostatics
IL138113A0 (en) 1998-02-25 2001-10-31 Sloan Kettering Inst Cancer Synthesis of epothilones, intermediates thereto and analogues thereof
WO2000009495A1 (en) 1998-08-11 2000-02-24 Novartis Ag Isoquinoline derivatives with angiogenesis inhibiting activity
US6303342B1 (en) 1998-11-20 2001-10-16 Kason Biosciences, Inc. Recombinant methods and materials for producing epothilones C and D
ES2297943T3 (es) 1998-12-23 2008-05-01 Aventis Pharma Limited Dihidro-benzo(1,4)oxacinas y tetrahidroquinoxalinas.
ES2258476T3 (es) 1999-09-30 2006-09-01 Neurogen Corporation Ciertos heterociclos sustituidos con alquilendiaminas.
WO2001057003A1 (en) 2000-02-01 2001-08-09 Cor Therapeutics, Inc. 3,4-DIHYDRO-2H-BENZO[1,4]OXAZINE INHIBITORS OF FACTOR Xa
PE20020354A1 (es) 2000-09-01 2002-06-12 Novartis Ag Compuestos de hidroxamato como inhibidores de histona-desacetilasa (hda)
ES2332770T3 (es) 2000-11-07 2010-02-12 Novartis Ag Derivados de indolilmaleimida como inhibidores de la proteina quinasa c.
WO2002072049A1 (en) 2001-02-27 2002-09-19 Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd. Medicinal compositions for stimulating hair growth
TWI238824B (en) 2001-05-14 2005-09-01 Novartis Ag 4-amino-5-phenyl-7-cyclobutyl-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine derivatives
GB0119249D0 (en) 2001-08-07 2001-10-03 Novartis Ag Organic compounds
PE20040079A1 (es) 2002-04-03 2004-04-19 Novartis Ag Derivados de indolilmaleimida
BR0316386A (pt) 2002-12-06 2005-09-27 Warner Lambert Co Benzoxazin-3-onas e seus derivados como inibidores de p13k
EP1578411A4 (en) 2002-12-09 2007-05-02 Univ Texas PROCESS FOR THE SELECTIVE INHIBITION OF JANUS TYROSINE KINASE3 (JAK3)
JP2006512357A (ja) * 2002-12-20 2006-04-13 ワーナー−ランバート・カンパニー、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー Ｐｉ３ｋの阻害剤としてのベンゾキサジンおよびその誘導体
CA2514733A1 (en) 2003-02-28 2004-09-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical co-crystal compositions of drugs such as carbamazepine, celecoxib, olanzapine, itraconazole, topiramate, modafinil, 5-fluorouracil, hydrochlorothiazide, acetaminophen, aspirin, flurbiprofen, phenytoin and ibuprofen
BRPI0408420A (pt) 2003-04-03 2006-03-21 Merck Patent Gmbh compostos de carbonila
US20070208166A1 (en) 2003-10-24 2007-09-06 Exelixis, Inc. Tao Kinase Modulators And Method Of Use
DK1704145T3 (da) 2004-01-12 2012-09-24 Ym Biosciences Australia Pty Selektive kinaseinhibitorer
EP1777225A4 (en) 2004-07-15 2009-06-24 Japan Tobacco Inc FUSED BENZAMIDE COMPOUND AND INHIBITOR OF VANILLOID RECEPTOR 1 (VR1) ACTIVITY
DE102004045796A1 (de) 2004-09-22 2006-03-23 Merck Patent Gmbh Arzneimittel enthaltend Carbonylverbindungen sowie deren Verwendung
DE102004047254A1 (de) 2004-09-29 2006-04-13 Merck Patent Gmbh Carbonylverbindungen
CN101056633A (zh) 2004-10-12 2007-10-17 应用研究系统Ars股份公司 用于贫血治疗的PI3激酶γ抑制剂
US20080269204A1 (en) 2004-11-01 2008-10-30 Tatyana Dyakonov Compounds and Methods of Use Thereof
US20060161001A1 (en) 2004-12-20 2006-07-20 Amgen Inc. Substituted heterocyclic compounds and methods of use
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
CN101300047A (zh) * 2005-09-07 2008-11-05 雪兰诺实验室有限公司 Pi3k抑制剂用于子宫内膜异位症的治疗
TWI385161B (zh) 2006-02-02 2013-02-11 Mitsubishi Tanabe Pharma Corp 含氮雜雙環化合物
WO2008001076A1 (en) 2006-06-26 2008-01-03 Ucb Pharma S.A. Fused thiazole derivatives as kinase inhibitors
GB0620059D0 (en) * 2006-10-10 2006-11-22 Ucb Sa Therapeutic agents
NZ576278A (en) 2006-10-19 2011-12-22 Signal Pharm Llc Heteroaryl compounds, compositions thereof, and their use as protein kinase inhibitors
ES2381895T3 (es) 2007-02-06 2012-06-01 Novartis Ag Inhibidores de PI 3-quinasa y métodos para su uso
CA2680173A1 (en) 2007-03-07 2008-09-12 Alantos Pharmaceuticals Holding, Inc. Metalloprotease inhibitors containing a heterocyclic moiety
US9603848B2 (en) 2007-06-08 2017-03-28 Senomyx, Inc. Modulation of chemosensory receptors and ligands associated therewith
WO2009026444A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 President And Fellows Of Harvard College Ryanodine channel binders and uses thereof
WO2009071895A1 (en) 2007-12-04 2009-06-11 Ucb Pharma S.A. Fused thiazole and thiophene derivatives as kinase inhibitors
WO2009157196A1 (ja) 2008-06-25 2009-12-30 武田薬品工業株式会社 アミド化合物
US20110172217A1 (en) * 2008-09-05 2011-07-14 Shionogi & Co., Ltd. Ring-fused morpholine derivative having pi3k-inhibiting activity
WO2010068881A1 (en) 2008-12-12 2010-06-17 Forest Laboratories Holdings Limited Novel benzodioxane and benzoxazine derivatives useful as cc chemokine receptor ligands
EP2415767B1 (en) 2009-03-27 2014-09-03 Takeda Pharmaceutical Company Limited Poly (ADP-ribose) Polymerase (PARP) Inhibitors
TW201102391A (en) 2009-03-31 2011-01-16 Biogen Idec Inc Certain substituted pyrimidines, pharmaceutical compositions thereof, and methods for their use
JP2012531436A (ja) * 2009-06-25 2012-12-10 アムジエン・インコーポレーテツド 複素環式化合物およびそれらのｐｉ３ｋ活性阻害剤としての使用
US8497265B2 (en) 2010-05-13 2013-07-30 Amgen Inc. Heteroaryloxyheterocyclyl compounds as PDE10 inhibitors
UA112517C2 (uk) 2010-07-06 2016-09-26 Новартіс Аг Тетрагідропіридопіримідинові похідні
KR20120018236A (ko) 2010-07-23 2012-03-02 현대약품 주식회사 치환된 피리미디닐 유도체 및 이의 제조방법
US20140080810A1 (en) 2010-11-15 2014-03-20 Exelixis, Inc. Benzoxazepines as Inhibitors of PI3K/mTOR and Methods of Their Use and Manufacture
US20140066431A1 (en) 2010-11-15 2014-03-06 Exelixis, Inc. Benzoxazepines as Inhibitors of PI3K/mTOR and Methods of Their Use and Manufacture
CN102731525A (zh) 2011-04-08 2012-10-17 上海艾力斯医药科技有限公司 苯并吗啉衍生物
IN2014CN04174A (sr) 2011-12-22 2015-09-04 Novartis Ag
TW201422625A (zh) 2012-11-26 2014-06-16 Novartis Ag 二氫－吡啶并－□衍生物之固體形式

Also Published As

Publication number Publication date
ECSP14009999A (es) 2018-10-31
HRP20180384T1 (hr) 2018-04-06
AU2012356083B2 (en) 2015-01-22
DK2794600T3 (en) 2018-03-12
GT201400131A (es) 2015-06-02
CN104011045A (zh) 2014-08-27
IN2014CN04174A (sr) 2015-09-04
SI2794600T1 (en) 2018-03-30
JP5903499B2 (ja) 2016-04-13
US20130165436A1 (en) 2013-06-27
PH12014501417B1 (en) 2014-09-22
CA2859764C (en) 2019-12-31
SG11201402237WA (en) 2014-09-26
CN104011045B (zh) 2016-08-24
HUE036953T2 (hu) 2018-08-28
AP2014007658A0 (en) 2014-05-31
CL2014001452A1 (es) 2014-10-24
MX2014007687A (es) 2014-07-30
LT2794600T (lt) 2018-02-26
UA112558C2 (uk) 2016-09-26
KR20140107500A (ko) 2014-09-04
WO2013093849A1 (en) 2013-06-27
AR089424A1 (es) 2014-08-20
UY34541A (es) 2013-09-02
PE20141598A1 (es) 2014-11-14
IL233117A (en) 2017-02-28
JP2015506344A (ja) 2015-03-02
EA025322B1 (ru) 2016-12-30
MA37142A2 (fr) 2016-07-29
EP2794600A1 (en) 2014-10-29
CR20200286A (es) 2020-09-23
PH12014501417A1 (en) 2014-09-22
MY170922A (en) 2019-09-18
EP2794600B1 (en) 2017-12-06
CA2859764A1 (en) 2013-06-27
PT2794600T (pt) 2018-03-13
MA37142B1 (fr) 2019-07-31
CO6990717A2 (es) 2014-07-10
TW201333000A (zh) 2013-08-16
BR112014015103B1 (pt) 2022-06-28
KR101656592B1 (ko) 2016-09-23
MX353342B (es) 2018-01-08
PL2794600T3 (pl) 2018-06-29
IL233117A0 (en) 2014-07-31
EA201491247A1 (ru) 2014-09-30
CU20140072A7 (es) 2014-10-02
CR20140294A (es) 2014-08-13
JO3398B1 (ar) 2019-10-20
NO2809782T3 (sr) 2018-01-20
US20160106753A1 (en) 2016-04-21
US9763952B2 (en) 2017-09-19
CY1119939T1 (el) 2018-12-12
AP4055A (en) 2017-03-07
AU2012356083A1 (en) 2014-06-26
ES2661864T3 (es) 2018-04-04
NZ624872A (en) 2015-07-31
TN2014000210A1 (en) 2015-09-30
TWI577674B (zh) 2017-04-11
US9539260B2 (en) 2017-01-10
BR112014015103A2 (pt) 2020-10-27
MA37142A3 (fr) 2018-05-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250059181A1 (en) Tetrahydro-Pyrido-Pyrimidine Derivatives
TWI577674B (zh) 二氫－苯并－及二氫－吡啶并－衍生物
AU2014295538B2 (en) Substituted quinazolin-4-one derivatives
EP2794594A1 (en) Quinoline derivatives
HK1197409B (en) 2,3-dihydro-benzo[1,4]oxazine derivatives and related compounds as phosphoinositide-3 kinase (pi3k) inhibitors for the treatment of e.g. rheumatoid arthritis
HK1197409A (en) 2,3-dihydro-benzo[1,4]oxazine derivatives and related compounds as phosphoinositide-3 kinase (pi3k) inhibitors for the treatment of e.g. rheumatoid arthritis
NZ624872B2 (en) Dihydro-benzo-oxazine and dihydro-pyrido-oxazine derivatives