ES2297943T3

ES2297943T3 - Dihidro-benzo(1,4)oxacinas y tetrahidroquinoxalinas.

Info

Publication number: ES2297943T3
Application number: ES99962463T
Authority: ES
Inventors: Jean-Dominique Rhone-Poulenc Rorer Bourzat; Alain Rhone-Poulenc Rorer Commercon; Bruno Jacques C. Rhone-Poulenc Rorer Filoche; Neil Victor Rhone-Poulenc Rorer Limited Harris; Thomas David Rhone-Poulenc Rorer Limited Pallin; Keith A. J. Rhone-Poulenc Rorer Ltd Stuttle
Original assignee: Aventis Pharma Ltd
Current assignee: Sanofi Aventis UK Holdings Ltd
Priority date: 1998-12-23
Filing date: 1999-12-23
Publication date: 2008-05-01
Anticipated expiration: 2019-12-23
Also published as: HUP0200481A3; BG104786A; AU1881900A; EP1056728B1; EP1056728A1; WO2000039103A1; DE69937603T2; SK14192000A3; AP2000001924A0; WO2000039103B1; DE69937603D1; US6632814B1; HUP0200481A2

Abstract

Un compuesto de la fórmula (Ia): en el que: R2 significa hidrógeno, halógeno, alquilo-(C1-4) o alcoxi-(C1-4); R3 es arilo opcionalmente sustituido; A1 significa etileno; Ar1 es fenileno opcionalmente sustituido; L1 significa un enlace de etileno, sustituido opcionalmente con alquilo-(C1-4), o arilo opcionalmente sustituido; L4 significa alquileno-(C1-4); Y es carboxi; Z1 significa O; y "arilo" como grupo o parte de un grupo, significa: (i) un resto carbocíclico aromático, monocíclico o multicíclico, opcionalmente sustituido, de 6 a 14 átomos de carbono; o (ii) un resto carbocíclico aromático, multicíclico, parcialmente saturado y opcionalmente sustituido, en el que un arilo y un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo están fusionados para formar una estructura cíclica, en donde el grupo arilo está opcionalmente sustituido con uno o múltiples sustituyentes arilo seleccionados de acilo, acilamino, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilen-dioxi, alquil-sulfinilo, alquil-sulfonilo, alquiltio, aroílo, aroil-amino, arilo, aril-alquiloxi, aril-alquil-oxicarbonilo, aril-alquiltio, ariloxi, aril-oxicarbonilo, aril-sulfinilo, aril-sulfonilo, ariltio, carboxi, ciano, halo, heteroaroílo, heteroarilo, heteroaril-alquiloxi, heteroaroilamino, heteroariloxi, hidroxi, nitro, trifluorometilo, y alquilo opcionalmente sustituido con arilo, heteroarilo, hidroxilo; y los correspondientes N-óxidos; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de tales compuestos y sus N-óxidos.

Description

Dihidro-benzo(1,4)oxacinas y tetrahidroquinoxalinas.

Esta invención se dirige a aza-biciclos, a su preparación, a composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, y a su uso farmacéutico en el tratamiento de estados patológicos susceptibles de ser modulados por la inhibición de la adhesión celular.

La adhesión celular es un proceso mediante el cual las células se asocian entre sí, migran hacia objetivos específicos, o se localizan dentro de la matriz extracelular. Muchas de las interacciones célula-célula y célula-matriz extracelular están mediadas por ligandos de proteínas (por ejemplo, fibronectina, VCAM-1 y vitronectina) y sus receptores de integrina [por ejemplo, \alpha5\beta1 (VLA-5), \alpha4\beta1 (VLA-4) y \alphaV\beta3]. Estudios recientes han demostrado que estas interacciones juegan un papel importante en muchas situaciones fisiológicas (por ejemplo, desarrollo embrionario y cicatrización de heridas) y patológicas (por ejemplo, invasión de células tumorales y metástasis, inflamación, aterosclerosis, y enfermedades autoinmunes).

Una extensa gama de proteínas actúan como ligandos para los receptores de integrina. En general, las proteínas reconocidas por las integrinas pertenecen a una de las tres clases siguientes: proteínas de la matriz extracelular, proteínas plasmáticas y proteínas de la superficie celular. Las proteínas de la matriz extracelular tales como colágeno, fibronectina, fibrinógeno, laminina, trombospondina y vitronectina, se unen a una serie de integrinas. Muchas de las proteínas adhesivas circulan también en el plasma y se unen a células hemáticas activadas. Componentes plasmáticos adicionales que actúan como ligandos para las integrinas incluyen fibrinógeno y factor X. El complemento C3bi unido a las células y varias proteínas transmembranosas, tales como la molécula de adhesión celular semejante a Ig (ICAM-1,2,3) y la molécula de adhesión a células vasculares (VCAM-1), que son miembros de la superfamilia Ig, actúan también como ligandos de la superficie celular para algunas integrinas.

Las integrinas son receptores heterodímeros de la superficie celular, consistentes en dos subunidades denominadas \alpha y \beta. Existen al menos quince subunidades \alpha diferentes (\alpha1-\alpha9, \alpha-L, \alpha-M, \alpha-X, \alpha-IIb, \alpha-V y \alpha-E), y al menos siete subunidades \beta diferentes (\beta1-\beta7). La familia de las integrinas se puede subdividir en clases basadas en estas subunidades \beta, que pueden estar asociadas con una o más subunidades \alpha. Las integrinas más extensamente distribuidas pertenecen a la clase \beta1, también conocida como los antígenos muy tardíos (VLA, por sus siglas en inglés). La segunda clase de integrinas está formada por receptores específicos para leucocitos, y consisten en una de tres subunidades \alpha (\alpha-L, \alpha-M o \alpha-X), formando complejo con proteínas \beta2. Las citoadhesinas \alpha-IIb\beta3 y \alpha-V\beta3 constituyen la tercera clase de integrinas.

La presente invención se refiere principalmente a agentes que modulan la interacción del ligando VCAM-1 con su receptor de integrina \alpha4\beta1 (VLA-4), que se expresa en numerosas células hematopoyéticas y líneas celulares establecidas, incluidos los precursores hematopoyéticos, linfocitos T periféricos y citotóxicos, linfocitos B, monocitos, timocitos, y eosinófilos.

La integrina \alpha4\beta1 media interacciones tanto célula-célula como célula-matriz. Las células que expresan \alpha4\beta1 se unen al dominio carboxi-terminal de unión celular (CS-1) de la proteína de la matriz extracelular fibronectina, a la proteína de superficie de las células endoteliales inducibles por citoquinas VCAM-1, y entre sí para promover la agregación homotípica. La expresión de VCAM-1 por células endoteliales está regulada positivamente por citoquinas proinflamatorias tales como INF-\gamma, TNF-\alpha, IL-1\beta, e IL-4.

La regulación de la adhesión celular mediada por \alpha4\beta1 es importante en numerosos procesos fisiológicos, incluida la proliferación de células T, localización de células B a centros germinales, y adhesión de células T y eosinófilos activados a células endoteliales. Mediante la investigación del papel del péptido CS-1 (la región variable de fibronectina a la que se une \alpha4\beta1 a través de la secuencia Leu-Asp-Val) y de anticuerpos específicos contra VLA-4 o VCAM-1 en diversos modelos experimentales in vitro e in vivo de inflamación, se han acumulado pruebas de la implicación de la interacción VLA-4/VCAM-1 en diversos procesos patológicos tales como la división de células del melanoma en metástasis, infiltración de células T de las membranas sinoviales en la artritis reumatoide, diabetes autoinmune, colitis, y penetración de leucocitos en la barrera hemático-cerebral en la encefalomielitis autoinmune, aterosclerosis, vasculopatías periféricas, enfermedades cardiovasculares y esclerosis múltiple experimentales. Por ejemplo, en un modelo experimental de artritis en la rata, inducido por la pared celular estreptocócica, la administración intravenosa de CS-1 al inicio de la artritis suprime la inflamación tanto aguda como crónica (S.M. Wahl et al., J. Clin. Invest., 1994, 94, páginas 655-662). En el modelo de inflamación por sensibilización con oxazalona (respuesta de contacto de hipersensibilidad) en el ratón, la administración intravenosa de anticuerpos monoclonales anti-\alpha4 específicos inhibió de forma significativa (reducción de 50-60% de la respuesta de inflamación de la oreja) la respuesta eferente (P.L. Chisholm et al., J. Immunol., 1993, 23, páginas 682-688). En un modelo ovino de broncoconstricción alérgica, HP1/2, un anticuerpo monoclonal anti-\alpha4 administrado por vía intravenosa o por aerosol, bloqueó la respuesta tardía y el desarrollo de una hiperrespuesta de las vías aéreas (W.M. Abraham et al., J. Clin. Invest., 1994, 93, páginas 776-787).

Los presentes inventores han encontrado ahora un nuevo grupo de aza-biciclos que tienen valiosas propiedades farmacéuticas, en particular, la capacidad de regular la interacción de VCAM-1 y fibronectina con la integrina VLA-4 (\alpha4\beta1).

De esta forma, en un aspecto, la presente invención se dirige a aza-biciclos de la fórmula general (Ia):

1

en la cual:

R^{2} significa hidrógeno, halógeno, alquilo-(C_{1-4}) o alcoxi-(C_{1-4});

R^{3} es arilo opcionalmente sustituido;

A^{1} significa etileno;

Ar^{1} es fenileno opcionalmente sustituido;

L^{1} significa un enlace de etileno, sustituido opcionalmente con alquilo-(C_{1-4}), o arilo opcionalmente sustituido;

L^{4} significa alquileno-(C_{1-4});

Y es carboxi;

Z^{1} significa O; y

"arilo" como grupo o parte de un grupo, significa: (i) un resto carbocíclico aromático, monocíclico o multicíclico, opcionalmente sustituido de 6 a 14 átomos de carbono; o (ii) un resto carbocíclico aromático, multicíclico, parcialmente saturado y opcionalmente sustituido, en el que un arilo y un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo están fusionados para formar una estructura cíclica, en donde el grupo arilo está opcionalmente sustituido con uno o múltiples sustituyentes arilo seleccionados de acilo, acilamino, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquileno-dioxi, alquil-sulfinilo, alquil-sulfonilo, alquiltio, aroílo, aroil-amino, arilo, aril-alquiloxi, aril-alquil-oxicarbonilo, aril-alquiltio, ariloxi, aril-oxicarbonilo, aril-sulfinilo, aril-sulfonilo, ariltio, carboxi, ciano, halo, heteroaroílo, heteroarilo, heteroaril-alquiloxi, heteroaroilamino, heteroariloxi, hidroxi, nitro, trifluorometilo, y alquilo opcionalmente sustituido con arilo, heteroarilo, hidroxilo;

y los correspondientes N-óxidos; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de tales compuestos.

En la presente especificación, se entiende que la expresión "compuestos según la invención", y expresiones equivalentes, comprenden compuestos de la fórmula general (Ia) tales como los descritos anteriormente, en donde la expresión incluye los derivados protegidos de los compuestos de la fórmula (Ia) que contienen uno o múltiples grupos ácidos funcionales y/o cadenas laterales de aminoácidos, las sales y los solvatos farmacéuticamente aceptables, por ejemplo, hidratos, cuando el contexto así lo permite. De manera similar, se entiende que la referencia a intermedios, tanto si están reivindicados o no en sí mismos, comprende sus sales y solvatos, cuando el contexto así lo permite. Por razones de claridad, cuando el contexto lo permite, en ocasiones se indican ejemplos particulares en el texto, si bien estos ejemplos son meramente ilustrativos y no pretenden excluir otros ejemplos, cuando el contexto así lo permite.

Como se utiliza anteriormente, y a lo largo de toda la descripción de la invención, se entenderá que los siguientes términos o expresiones, a menos que se indique lo contrario, deben tener los siguientes significados:

"Paciente" incluye tanto seres humanos como otros mamíferos.

"Grupo ácido funcional" significa un grupo con un hidrógeno ácido en su estructura. Los "correspondientes derivados protegidos" son aquéllos en los que el átomo de hidrógeno ácido ha sido sustituido con un grupo protector apropiado. Como grupos protectores apropiados véase T.W. Greene y P.G.M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991. Ejemplos de grupos ácidos funcionales incluyen carboxilo (y bioésteres ácidos), hidroxi, mercapto e imidazol. Ejemplos de derivados protegidos incluyen ésteres de grupos carboxi (es decir, -CO_{2}R^{14}), éteres de grupos hidroxi (es decir, -OR^{14}), tioéteres de grupos mercapto (es decir, -SR^{14}), y derivados N-bencílicos de imidazoles.

"Acilo" significa un grupo H-CO- o alquil-CO, en donde el grupo alquilo es como se describe en este documento.

"Acilamino" es un grupo acil-NH, en donde acilo es como se define en este documento.

"Alquenilo" significa un grupo hidrocarburo alifático que contiene un doble enlace carbono-carbono, y que puede ser lineal o ramificado, con aproximadamente 12 hasta aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Grupos alquenilo preferidos tienen 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y, más preferentemente, aproximadamente 2 hasta aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. "Ramificado", tal como se usa en este documento y en todo el texto, significa que uno o múltiples grupos alquilo inferiores tales como metilo, etilo o propilo se encuentran unidos a una cadena lineal; en este caso, una cadena de alquenilo lineal. "Alquenilo inferior" significa la presencia de aproximadamente 2 hasta aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena, que puede ser lineal o ramificada. Ejemplos de grupos alquenilo incluyen etenilo, propenilo, n-butenilo, i-butenilo, 3-metilbutil-2-enilo, n-pentenilo, heptenilo, octenilo, ciclohexilbutenilo, y decenilo.

"Alquenileno" significa un radical alifático, derivado de un grupo alquenilo lineal o ramificado, en el cual el grupo alquenilo es como se describe en este documento. Ejemplos de radicales alquenileno incluyen vinileno y propileno.

"Alcoxi" significa un grupo alquil-O en el que el grupo alquilo es como se describe en este documento. Ejemplos de grupos alcoxi incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, y heptoxi.

"Alcoxicarbonilo" significa un grupo alquil-O-CO-, en el que el grupo alquilo es como se describe en este documento. Ejemplos de grupos alcoxicarbonilo incluyen metoxicarbonilo y etoxicarbonilo.

"Alquilo" significa, a menos que se especifique lo contrario, un grupo hidrocarburo alifático que puede ser lineal o ramificado, y que tiene aproximadamente 1 hasta aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena y, cuando así se especifique, está opcionalmente sustituido con alcoxi o con uno o múltiples átomos de halógeno. Grupos alquilo particulares tienen de 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. "Alquilo inferior" como grupo o parte de un grupo alcoxi inferior, alquiltio inferior, alquilsulfinilo inferior o alquilsulfonilo inferior significa, a menos que se indique lo contrario, un grupo hidrocarburo alifático que puede ser lineal o ramificado, y que tiene aproximadamente 1 hasta aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ejemplos de grupos alquilo incluyen metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, s-butilo, t-butilo, n-pentilo, 3-pentilo, heptilo, octilo, nonilo, decilo, y dodecilo.

"Alquileno" significa un radical bivalente alifático, derivado de un grupo alquilo lineal o ramificado, en el que el grupo alquilo es como se describe en este documento. Ejemplos de radicales alquileno incluyen metileno, etileno, y trimetileno.

"Alquilen-dioxi" significa un grupo -O-alquil-O-, en el que el grupo alquilo es como se ha definido anteriormente. Ejemplos de grupos alquilen-dioxi incluyen metilen-dioxi y etilen-dioxi.

"Alquilsulfinilo" significa un grupo alquil-SO- en el que el grupo alquilo es como se ha descrito anteriormente. Grupos alquilsulfinilo preferidos son aquéllos en los que el grupo alquilo es alquilo-(C_{1-4}).

"Alquilsulfonilo" significa un grupo alquil-SO_{2}- en el que el grupo alquilo es como se ha definido anteriormente. Grupos alquilsulfonilo preferidos son aquéllos en los que el grupo alquilo es alquilo-(C_{1-4}).

"Alquilsulfonil-carbamoílo" significa un grupo alquil-SO_{2}-NH-C(=O)- en el que el grupo alquilo es como se ha descrito anteriormente. Grupos alquilsulfonil-carbamoílo preferidos son aquéllos en los que el grupo alquilo es alquilo-(C_{1-4}).

"Alquiltio" significa un grupo alquil-S- en el que el grupo alquilo es como se ha descrito anteriormente. Ejemplos de grupos alquiltio incluyen metiltio, etiltio, isopropiltio y heptiltio.

"Alquinilo" significa u grupo hidrocarburo alifático que contiene un triple enlace carbono-carbono, y que puede ser lineal o ramificado, con aproximadamente 2 hasta aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Grupos alquinilo preferidos tienen 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y, más preferentemente, aproximadamente 2 hasta aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ejemplos de grupos alquinilo incluyen etinilo, propinilo, n-butinilo, i-butinilo, 3-metilbut-2-inilo, y n-pentinilo.

"Alquinileno" significa un radical alifático bivalente derivado de un grupo alquinilo lineal o ramificado, en el que el grupo alquinilo es como se describe en este documento. Ejemplos de radicales alquinileno incluyen etinileno y propinileno.

"Cadenas laterales de aminoácidos" significan el sustituyente hallado en el carbono entre los grupos amino y carboxi en aminoácidos \alpha. Como ejemplos de "correspondientes derivados protegidos" de cadenas laterales de aminoácidos, véase T.W. Greene y P.G.M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991.

"Aroílo" significa un grupo aril-CO- en el que el grupo arilo es como se describe en este documento. Ejemplos de grupos aroílo incluyen benzoílo y 1- y 2-naftoílo.

"Aroilamino" es un grupo aroílo-NH- en el que aroílo es como se ha definido anteriormente.

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"Arilo" como grupo o parte de un grupo significa: (i) un resto carbocíclico aromático, monocíclico o multicíclico, opcionalmente sustituido, de aproximadamente 6 hasta aproximadamente 14 átomos de carbono, tales como fenilo o naftilo; o (ii) un resto carbocíclico aromático multicíclico, parcialmente saturado y opcionalmente sustituido, en el que un grupo arilo y un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo están fusionados para formar una estructura cíclica tal como tetrahidronaftilo, indenilo o anillo indanilo. Los grupos arilo pueden estar sustituidos con uno o múltiples sustituyentes del grupo arilo, que pueden ser idénticos o diferentes, en donde los "sustituyentes del grupo arilo" incluyen, por ejemplo, acilo, Acilamino, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilen-dioxi, alquilsulfinilo, alquilsulfonilo, alquiltio, aroílo, aroilamino, arilo, arilalquil-oxi, arilalquil-oxicarbonilo, aril-alquiltio, ariloxi, aril-oxicarbonilo, arilsulfinilo, arilsulfonilo, ariltio, carboxi, ciano, halo, heteroaroílo, heteroarilo, heteroarilalquil-oxi, heteroaroilamino, heteroariloxi, hidroxi, nitro, trifluorometilo, o alquilo opcionalmente sustituido con arilo, heteroarilo, hidroxi.

"Arilalquenilo" significa un grupo aril-alquenil- en el cual arilo y alquenilo son como se han descrito anteriormente. Arilalquenilos preferidos contienen un resto alquenilo inferior. Ejemplos de grupos arilalquenilo incluyen estirilo y fenilalilo.

"Arilalquilo" significa un grupo aril-alquil- en el cual los restos arilo y alquilo son como se han descrito anteriormente. Grupos arilalquilo preferidos contienen un resto alquilo-(C_{1-4}). Ejemplos de grupos arilalquilo incluyen bencilo, 2-fenetilo y naftilen-metilo.

"Arilalquil-oxi" significa un grupo arilalquil-O- en el que los grupos arilalquilo son como se han descrito anteriormente. Ejemplos de grupo arilalquil-oxi incluyen benciloxi y 1- o 2-naftalen-metoxi.

"Arilalquil-oxicarbonilo" significa un grupo arilalquil-O-CO- en el cual los grupos arilalquilo son como se han descrito anteriormente. Un ejemplo de grupo arilalquil-oxicarbonilo es benciloxicarbonilo.

"Arilalquil-tio" significa un grupo arilalquil-S- en el cual el grupo arilalquilo es como se ha descrito anteriormente. Un ejemplo de grupo arilalquil-tio es benciltio.

"Arilalquinilo" significa un grupo aril-alquinil- en el cual los grupos arilo y alquinilo son como se han descrito anteriormente. Ejemplos de grupos arilalquinilo incluyen fenil-etinilo y 3-fenilbut-2-inilo.

"Arileno" significa un radical bivalente, opcionalmente sustituido, derivado de un grupo arilo. Ejemplos de grupos arileno incluyen fenileno, naftileno e indanileno opcionalmente sustituidos. Cuando Ar^{1} es arileno, puede representar especialmente un fenileno opcionalmente sustituido. Sustituyentes apropiados incluyen uno o múltiples "sustituyentes del grupo arilo" como se han definido anteriormente, en particular halógeno, metilo o metoxi.

"Ariloxi" significa un grupo aril-O- en el que el grupo arilo es como se ha descrito anteriormente. Ejemplos de grupos ariloxi incluyen fenoxi y naftoxi opcionalmente sustituidos.

"Aril-oxicarbonilo" significa un grupo aril-O-C(=O)-, en el cual el grupo arilo es como se ha descrito anteriormente. Ejemplos de grupos aril-oxicarbonilo incluyen fenoxi-carbonilo y naftoxi-carbonilo.

"Arilsulfinilo" significa un grupo aril-SO- en el que el grupo arilo es como se ha descrito anteriormente.

"Arilsulfonilo" significa un grupo aril-SO_{2}- en el que el grupo arilo es como se ha descrito anteriormente.

"Arilsulfonil-carbamoílo" significa un grupo aril-SO_{2}-NH-C(=O)- en el que el grupo arilo es como se ha descrito anteriormente.

"Ariltio" significa un grupo aril-S- en el que el grupo arilo es como se ha descrito anteriormente. Ejemplos de grupos ariltio incluyen feniltio y naftiltio.

"Azaheteroarilo" significa un resto carbocíclico aromático de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 miembros de anillo, en el cual uno de los miembros de anillo es nitrógeno, y los restantes miembros de anillo se seleccionan de carbono, oxígeno, azufre o nitrógeno. Ejemplos de grupo azaheteroarilo incluyen piridilo, pirimidinilo, quinolinilo, isoquinolinilo, quinazolinilo, imidazolilo, y benzimidazolilo.

"Azaheteroarildiilo" significa un radical bivalente, opcionalmente sustituido, derivado de un grupo heteroarilo.

"Amina cíclica" significa un sistema de anillo cicloalquilo monocíclico, de 3 a 8 miembros, en el que uno de los átomos de carbono del anillo está sustituido por nitrógeno y que (i) puede contener, opcionalmente, un heteroátomo adicional seleccionado de O, S o NY^{3} (en donde Y^{3} es hidrógeno, alquilo, arilalquilo, y arilo), y (ii) puede estar fusionado con un anillo arilo o heteroarilo adicional para formar un sistema de anillo bicíclico. Ejemplos de aminas cíclicas incluyen pirrolidina, piperidina, morfolina, piperazina, indolino y pirindolino.

"Cicloalquenilo" significa un sistema de anillo monocíclico o multicíclico, no aromático, que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono, y tiene aproximadamente 3 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono. Ejemplos de anillos cicloalquenilo monocíclicos incluyen ciclopentenilo, ciclohexenilo o cicloheptenilo.

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"Cicloalquenil-alquilo" significa un grupo cicloalquenil-alquil- en el que los restos cicloalquenilo y alquilo son como se han descrito previamente. Ejemplos de grupos cicloalquenil-alquilo incluyen ciclopentenil-metilo, ciclohexenil-metilo o cicloheptenil-metilo.

"Cicloalquenileno" significa un radical bivalente derivado de un hidrocarburo monocíclico insaturado de aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 átomos de carbono, por la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada uno de dos diferentes átomos de carbono del anillo. Ejemplos de radicales cicloalquenileno incluyen ciclopentenileno y ciclohexenileno.

"Cicloalquilo" significa un sistema de anillo monocíclico o bicíclico saturado de aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 átomos de carbono, sustituidos opcionalmente con oxo. Ejemplos de anillos cicloalquilo monocíclicos incluyen anillos de cicloalquilo-(C_{3-8}) tales como ciclopropilo, ciclopentilo, ciclohexilo, y cicloheptilo.

"Cicloalquil-alquenilo" significa un grupo cicloalquil-alquenil- en el que los restos cicloalquilo y alquenilo son como se han descrito anteriormente. Ejemplos de grupos cicloalquil-alquenilo monocíclicos incluyen ciclopentil-vinileno y ciclohexil-vinileno.

"Cicloalquil-alquilo" significa un grupo cicloalquil-alquil- en el que los restos cicloalquilo y alquilo son como se han descrito anteriormente. Ejemplos de grupos cicloalquil-alquilo monocíclicos incluyen ciclopropil-metilo, ciclopentil-metilo, ciclohexil-metilo, y cicloheptil-metilo.

"Cicloalquil-alquinilo" significa un grupo cicloalquil-alquinil- en el que los restos cicloalquilo y alquinilo son como se han descrito anteriormente. Ejemplos de grupos cicloalquil-alquinilo monocíclicos incluyen ciclopropil-etinilo, ciclopentil-etinilo, y ciclohexil-etinilo.

"Cicloalquileno" significa un radical bivalente derivado de un hidrocarburo monocíclico saturado de aproximadamente 3 hasta aproximadamente 10 átomos de carbono, por la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada uno de dos diferentes átomos de carbono del anillo. Ejemplos de radicales cicloalquileno incluyen ciclopentileno y ciclohexileno.

"Halo" o "halógeno" significa flúor, cloro, bromo o yodo. Se prefiere flúor o cloro.

"Heteroaroílo" significa un grupo heteroaril-C(=O)- en el que el grupo heteroarilo es como se describe en este documento. Ejemplos de grupos incluyen piridil-carbonilo.

"Heteroaroil-amino" significa un grupo heteroaroil-NH- en el que el resto heteroaroílo es como se ha descrito anteriormente.

"Heteroarilo" como grupo o parte de un grupo indica: (o) un resto orgánico aromático, monocíclico o multicíclico, opcionalmente sustituido, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 miembros de anillo, en el que uno o múltiples miembros del anillo es/son elemento(s) diferentes del carbono, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno o azufre (ejemplos de tales grupos incluyen benzimidazolilo, benztiazolilo, furilo, imidazolilo, indolilo, indolizinilo, isoxazolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, pirazinilo, piridazinilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo, 1,3,4-tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo y grupos triazolilo, opcionalmente sustituidos con uno o múltiples sustituyentes del grupo arilo como se han definido anteriormente; (ii) un resto heterocarbocíclico multicíclico, parcialmente saturado y opcionalmente sustituido, en el que un heteroarilo y un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo están fusionados para formar una estructura cíclica (ejemplos de tales grupos incluyen grupos pirindanilo). Sustituyentes opcionales incluyen uno o múltiples "sustituyentes del grupo arilo" como se han definido anteriormente.

"Heteroaril-alquenilo" significa un grupo heteroaril-alquenil- en el que los restos heteroarilo y alquenilo son como se han descrito anteriormente. Los grupos heteroaril-alquenilo preferidos contienen un resto alquenilo inferior. Ejemplos de grupo heteroaril-alquenilo incluyen piridil-etenilo y piridil-alilo.

"Heteroarilalquilo" significa un grupo heteroaril-alquil- en el que los restos heteroarilo y alquilo son como se han descrito anteriormente. Los grupos heteroarilalquilo preferidos contienen un resto alquilo-(C_{1-4}). Ejemplos de grupos heteroaril-alquilo incluyen piridil-metilo.

"Heteroarilalquil-oxi" significa un grupo heteroarilalquil-O- en el que el grupo heteroarilalquilo es como se ha descrito anteriormente. Ejemplos de grupos heteroarilalquil-oxi incluyen piridil-metoxi opcionalmente sustituido.

"Heteroaril-alquinilo" significa un grupo heteroaril-alquinil- en el que los restos heteroarilo y alquinilo son como se han descrito anteriormente. Ejemplos de grupos heteroaril-alquinilo incluyen piridil-etinilo y 3-piridilbut-2-inilo.

"Heteroarildiilo" significa un radical bivalente derivado de un resto orgánico aromático, monocíclico o multicíclico, de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 10 miembros de anillo, en el que uno o múltiples miembros del anillo es/son elemento(s) diferentes del carbono, por ejemplo, nitrógeno, oxígeno o azufre, y sustituido opcionalmente con uno o múltiples "sustituyentes del grupo arilo", como se han definido anteriormente. Cuando Ar^{1} es un grupo heteroarildiilo opcionalmente sustituido, éste puede representar, en particular, un grupo "azaheteroarildiilo" opcionalmente sustituido.

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"Heteroariloxi" significa un grupo heteroaril-O- en el que el grupo heteroarilo es como se ha descrito anteriormente. Ejemplos de grupos heteroariloxi incluyen piridiloxi opcionalmente sustituido.

"Heteroaril-sulfonilcarbonilo" significa un grupo heteroaril-SO_{2}-NH-C(=O)-, en el que el grupo heteroarilo es como se ha descrito anteriormente.

"Heterocicloalquilo" significa: (i) un grupo cicloalquilo de aproximadamente 3 a 7 miembros de anillo, que contiene uno o múltiples heteroátomos seleccionados de O, S o NY^{3}, y que puede estar opcionalmente sustituido con oxo; (ii) un resto heterocarbocíclico multicíclico, parcialmente saturado y opcionalmente sustituido, en el que un arilo (o anillo heteroarilo) y un grupo heterocicloalquilo se fusionan para formar una estructura cíclica (ejemplos de tales grupos incluyen los grupos cromanilo, dihidrobenzofuranilo, indolinilo, y pirindolinilo).

"Heterocicloalquil-alquilo" significa un grupo heterocicloalquil-alquil- en el que los restos heterocicloalquilo y alquilo son como se han descrito anteriormente.

"Heterociclo-alquileno" significa un radical bivalente derivado de un hidrocarburo monocíclico saturado de aproximadamente 5 hasta aproximadamente 7 átomos, que contiene uno o múltiples heteroátomos seleccionados de O, S o NY^{3} y está opcionalmente sustituido con oxo, por la eliminación de un átomo de hidrógeno de cada uno de dos diferentes átomos de carbono del anillo, o cuando NY^{3} es NH, por la eliminación de un átomo de hidrógeno de un átomo de carbono del anillo y de un átomo de hidrógeno de NH, o cuando el anillo contiene dos heteroátomos NY^{3} y NY^{3} es NH, por la eliminación de un átomo de hidrógeno de ambos átomos de nitrógeno. Cuando L^{1} es un grupo heterociclo-alquileno, éste puede representar, en especial, un radical bivalente derivado de pirrolidina, en particular 3,4-pirrolidinodiilo.

"Profármaco estérico" significa un compuesto éster que es convertible in vivo, por medios metabólicos (por ejemplo, por hidrólisis) en compuestos de la fórmula (Ia), incluyendo sus N-óxidos. Por ejemplo, un éster de un compuesto de la fórmula (Ia) que contiene un grupo hidroxi, puede ser convertible por hidrólisis in vivo en la molécula parental. De manera alternativa, un éster de un compuesto de la fórmula (Ia) que contiene un grupo carboxi puede ser convertible por hidrólisis in vivo en la molécula parental.

Ésteres apropiados de compuestos de la fórmula (Ia) que contienen un grupo hidroxi son, por ejemplo, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metilen-bis-\beta-hidroxinaftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-tolil-tartratos, metanosulfonatos, etanosulfonatos, bencenosulfonatos, p-toluenosulfonatos, ciclohexil-sulfamatos y quinatos.

Ésteres apropiados de compuestos de la fórmula (Ia) que contienen un grupo carboxi son, por ejemplo, los descritos por F.J. Leinweber, Drug Metab. Res., 1987, 18, página 379.

Ésteres apropiados de compuestos de la fórmula (Ia) que contienen tanto un grupo carboxi como un grupo hidroxi en el resto -L^{1}-Y- incluyen lactonas, formadas por la pérdida de agua entre dichos grupos carboxi e hidroxi. Ejemplos de lactonas incluyen caprolactonas y butirolactonas.

Es posible formar una clase especialmente útil de ésteres de compuestos de la fórmula (Ia) que contienen un grupo hidroxi a partir de restos ácidos seleccionados de los descritos por Bundgaard et al., J. Med. Chem., 1989, 32, páginas 2503-2507, e incluye benzoatos de aminometilo sustituidos, por ejemplo, benzoatos de dialquilamino-metilo, en los que los dos grupos alquilo pueden estar unidos y/o interrumpidos por un átomo de oxígeno o por un átomo de nitrógeno opcionalmente sustituido, por ejemplo, un átomo de nitrógeno alquilado, más especialmente benzoatos de morfolino-metilo, por ejemplo, benzoatos de 3- ó 4-(morfolino-metilo), y benzoatos de (4-alquil-piperazin-1-ilo), por ejemplo, benzoatos de 3- ó 4-(4-alquil-piperazin-1-ilo).

Cuando el compuesto según la invención contiene un grupo carboxi, se pueden formar sales por adición de bases y son, sencillamente, una forma más conveniente para utilizar; y en la práctica, el uso de la forma de sal equivalente, de manera inherente, al uso de la forma ácida libre. Las bases que se pueden utilizar para preparar las sales por adición de bases incluyen, preferentemente, aquéllas que producen, cuando se les combina con el ácido libre, sales farmacéuticamente aceptables, es decir, sales cuyos cationes son atóxicos para el paciente a dosis farmacéuticas de las sales, de manera que los efectos inhibitorios beneficiosos inherentes de la base libre no resulten afectados por efectos secundarios atribuibles a los cationes. Sales farmacéuticamente aceptables, incluidas las derivadas de sales de metales alcalino y alcalino-térreos, dentro del alcance de la invención, incluyen los derivados de las siguientes bases: hidruro sódico, hidróxido sódico, hidróxido de potasio, hidróxido de calcio, hidróxido de aluminio, hidróxido de litio, hidróxido de magnesio, hidróxido de cinc, amoniaco, etilendiamina, N-metil-glucamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N'-dibencil-etilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-bencil-fenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)-aminometano, hidróxido de tetrametilamonio, y similares.

Algunos de los compuestos de la presente invención son básicos, y tales compuestos son de utilidad en forma de la base libre o en forma de sales de adición de ácido, farmacéuticamente aceptables, de las mismas.

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Las sales de adición de ácido son una forma más conveniente de uso; y en la práctica, la forma de sal equivale de manera inherente al uso de la forma de base libre. Los ácidos que se pueden utilizar para preparar las sales de adición de ácido incluyen, preferentemente, aquéllos que producen, cuando se les combina con la base libre, sales farmacéuticamente aceptables, es decir, sales cuyos aniones sean atóxicos para el paciente a dosis farmacéuticas de las sales, de forma que el efecto inhibitorio beneficioso inherente de la base libre no resulte afectado por efectos secundarios atribuibles a los aniones. Aun cuando se prefieren sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos básicos, todas las citadas sales de adición de ácido son útiles como fuentes de la forma de base libre, incluso si la sal particular, por sí misma, resulta deseable sólo como producto intermedio como, por ejemplo, cuando la sal se forma sólo a efectos de purificación e identificación, o cuando se utiliza como intermedio en la preparación de una sal farmacéuticamente aceptable por procedimientos de intercambio iónico. Sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención incluyen las derivadas de ácidos minerales y ácidos orgánicos, e incluyen hidrohaluros, por ejemplo, hidrocloruros e hidrobromuros, sulfatos, fosfatos, nitratos, sulfamatos, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos, salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metilen-bis-b-hidroxinaftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-tolil-tartratos, metanosulfonatos, etanosulfonatos, bencenosulfonatos, p-toluenosulfonatos, ciclohexil-sulfamatos y quinatos.

Además de ser útiles en sí mismas como compuestos activos, las sales de los compuestos según la invención son útiles con fines de purificación de los compuestos, por ejemplo, por la explotación de las diferencias de solubilidad entre las sales y los compuestos parentales, productos secundarios y/o materiales de partida, mediante técnicas bien conocidas por los expertos.

Con referencia a la fórmula (Ia) anterior, las siguientes son agrupaciones particulares y preferidas.

Se debe entender que esta invención abarca todas las combinaciones apropiadas de las agrupaciones particulares y preferidas a las que se hace referencia en este documento.

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que R^{3} representa un grupo arilo opcionalmente sustituido, en especial un grupo fenilo opcionalmente sustituido tal como fenilo 2-sustituido, especialmente 2-metilfenilo.

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que Ar^{1} representa un fenileno opcionalmente sustituido, en especial m- o p-fenileno opcionalmente sustituido, más especialmente p-fenileno opcionalmente sustituido. Se prefieren especialmente los compuestos de la fórmula (Ia) en los que Ar^{1} representa p-fenileno 3-sustituido, en donde el sustituyente es orto con respecto al grupo R^{3}-NH-C(=O)-NH-. Sustituyentes opcionales preferidos incluyen halo, alquilo-(C_{1-4}), alcoxi-(C_{1-4}), alquil-(C_{1-4})-tio, alquil-(C_{1-4})-sulfinilo, y alquil-(C_{1-4})-sulfonilo, especialmente cloro, metilo, etilo, metoxi, metiltio, metilsulfinilo y metilsulfonilo.

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que L^{4} representa una cadena de alquileno-(C_{1-4}) tal como metileno o etileno, especialmente metileno.

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que R^{2} representa hidrógeno.

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que L^{1} representa etileno opcionalmente sustituido, en especial etileno opcionalmente sustituido con alquilo inferior, o arilo opcionalmente sustituido. En una realización preferida, L^{1} es un grupo

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en donde R^{5} es hidrógeno o alquilo inferior (por ejemplo, metilo), y R^{15} representa hidrógeno o alquilo inferior, o en donde R^{5} es hidrógeno y R^{15} representa arilo opcionalmente sustituido y es, más preferentemente, un grupo

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en particular

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en donde R^{15} representa hidrógeno, alquilo inferior o arilo opcionalmente sustituido. En otra realización preferida, L^{1} es un grupo

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en el que R^{5} es hidrógeno o alquilo inferior (por ejemplo, metilo) y R^{15a} representa alquilo inferior, o en donde R^{5} es hidrógeno y R^{15a} representa arilo opcionalmente sustituido.

Un grupo preferido de compuestos según la invención son compuestos de la fórmula (Ia) en los que: R^{2} es hidrógeno; R^{3} es un fenilo 2-sustituido [en especial, 2-metil (o metoxi)-fenilo; A^{1} es etileno; Ar^{1} es m- o p-fenileno opcionalmente sustituido (en especial, 3-cloro-p-fenileno, 3-metil-p-fenileno, 3-etil-p-fenileno, 3-metoxi-p-fenileno, 3-metiltio-p-fenileno, 3-metilsulfinil-p-fenileno, y 3-metilsulfonil-p-fenileno); L^{1} es un grupo

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en particular, un grupo

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en donde R^{15} representa hidrógeno, alquilo inferior o arilo opcionalmente sustituido; L^{4} representa una cadena de alquileno-(C_{1-4}) lineal o ramificada, en especial metileno; Y representa carboxi; y Z^{1} representa O; y los correspondientes N-óxidos, y sus profármacos estéricos; y sales y solvatos (por ejemplo, hidratos) farmacéuticamente aceptables de tales compuestos, y sus N-óxidos y profármacos estéricos.

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que R^{15} representa hidrógeno.

Se prefieren también los compuestos de la fórmula (Ia) en los que R^{15} representa alquilo inferior (por ejemplo, metilo, etilo, propilo, butilo).

Se prefieren los compuestos de la fórmula (Ia) en los que R^{15} representa arilo opcionalmente sustituido (por ejemplo, fenilo opcionalmente sustituido).

Compuestos particulares según la invención se seleccionan de los compuestos formados por la unión del átomo de carbono de acilo (C*) de uno de los fragmentos (A1 a A5) que se muestran en la Tabla 1, con el átomo de nitrógeno (N*) de uno de los fragmentos aza-bicíclicos (B1 a B2) que se muestran en la Tabla 2, y uniendo el átomo de carbono (C*) del anillo fenilo en uno de los fragmentos aza-bicíclicos (B1 a B2) que se muestran en la Tabla 2, con el átomo de carbono (C*) de uno de los fragmentos ácidos (C1 a C10) que aparecen en la Tabla 3.

TABLA 1

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TABLA 2

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TABLA 3

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Compuestos particulares de la invención son:

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De esta forma, por ejemplo, en la lista anterior el compuesto reseñado como A1-B1-C1 es el producto de la combinación del grupo A1 en la Tabla 1, B1 de la Tabla 2, y C1 de la Tabla 3, a saber

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Compuestos preferidos de la invención son:

ácido 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-hexanoico;

ácido 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-propanoico;

ácido 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-propa-
noico;

ácido 3-(4-([3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoico;

ácido 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoico;

y los correspondientes N-óxidos, y sus profármacos estéricos; y sales y solvatos (por ejemplo, hidratos) farmacéuticamente aceptables de tales compuestos, y sus N-óxidos y profármacos estéricos.

Los compuestos según la invención muestran una actividad farmacéutica útil y, en consecuencia, se incorporan en composiciones farmacéuticas, y se utilizan en el tratamiento de pacientes que padecen determinados trastornos médicos. Por lo tanto, la presente invención ofrece, de acuerdo con un aspecto adicional, compuestos según la invención y composiciones que contienen compuestos según la invención para su uso terapéutico.

Los compuestos dentro del alcance de la presente invención bloquean la interacción del ligando VCAM-1 a su receptor de integrina VLA-4 (\alpha4\beta1) de acuerdo con ensayos descritos en la bibliografía, y procedimientos in vitro e in vivo descritos a continuación en este documento, y se considera que los resultados de dichos ensayos se correlacionan con la actividad farmacológica en el ser humano y otros mamíferos. De este modo, en una realización adicional, la presente invención proporciona compuestos según la invención y composiciones que contienen compuestos según la invención para utilizar en el tratamiento de un paciente que padece, o se encuentra sometido a afecciones que pueden ser mejoradas por la administración de un inhibidor de la adhesión celular mediada por \alpha4\beta1. Por ejemplo, los compuestos de la presente invención son de utilidad en el tratamiento de enfermedades inflamatorias, por ejemplo, inflamación articular, incluida artritis, artritis reumatoide y otros trastornos artríticos tales como espondilitis reumatoide, artritis gotosa, artritis traumática, artritis de rubéola, artritis psoriásica, y osteoartritis. Adicionalmente, los compuestos pueden ser de utilidad en el tratamiento de la sinovitis aguda, diabetes autoinmune, encefalomielitis autoinmune, colitis, aterosclerosis, enfermedad vascular periférica, enfermedades cardiovasculares, esclerosis múltiple, asma, re-estenosis psoriásica, miocarditis, enfermedad intestinal inflamatoria, y la división de células del melanoma en metástasis.

Una realización especial de los métodos terapéuticos según la presente invención es el tratamiento del asma.

Otra realización especial de los métodos terapéuticos de la presente invención es el tratamiento de la inflamación articular.

Otra realización especial de los métodos terapéuticos de la presente invención es el tratamiento de la enfermedad inflamatoria del intestino.

De acuerdo con una característica adicional de la invención, se ofrece el uso de una cantidad efectiva de un compuesto según la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos que pueden ser mejorados por la administración de un inhibidor de la interacción del ligando VCAM-1 con su receptor de integrina VLA-4 (\alpha4\beta1), por ejemplo, trastornos que se han descrito anteriormente. "Cantidad efectiva" pretende describir una cantidad de compuesto de la presente invención, efectiva para inhibir la interacción del ligando VCAM-1 con su receptor de integrina VLA-4 (\alpha4\beta1), produciendo, de esta forma, el efecto terapéutico deseado.

Se debe entender que las referencias al tratamiento en este documento incluyen tanto el tratamiento profiláctico como el tratamiento de trastornos establecidos.

La presente invención incluye también, dentro de su alcance, composiciones farmacéuticas que comprenden al menos uno de los compuestos según la invención en asociación con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Los compuestos según la invención se pueden administrar por cualquier medio apropiado. En la práctica, los compuestos de la presente invención se deben administrar, en general, por vía parenteral, tópica, rectal, oral o por inhalación, en especial por vía oral.

Las composiciones según la invención se pueden preparar de acuerdo con métodos convencionales, utilizando uno o múltiples coadyuvantes o excipientes farmacéuticamente aceptables. Los coadyuvantes comprenden, entre otros, diluyentes, medios acuosos estériles, y los diversos disolventes orgánicos atóxicos. Las composiciones se pueden presentar en forma de comprimidos, píldoras, gránulos, polvos, soluciones o suspensiones acuosas, soluciones inyectables, elixires o jarabes, y pueden contener uno o múltiples agentes seleccionados del grupo que comprende edulcorantes, saborizantes, colorantes, o estabilizadores, al objeto de obtener preparaciones farmacéuticamente aceptables. La elección del vehículo y el contenido de sustancia activa en el vehículo se determinan, por lo general, de acuerdo con la solubilidad y propiedades químicas del compuesto activo, la vía de administración particular, y las provisiones que se han de observar en la práctica farmacéutica. Por ejemplo, excipientes tales como lactosa, citrato sódico, carbonato de calcio, fosfato dicálcico, y desintegrantes tales como almidón, ácidos algínicos, y determinados silicatos complejos combinados con lubricantes tales como estearato de magnesio, laurilsulfato sódico, y talco se pueden utilizar para la preparación de comprimidos. Para preparar una cápsula, es conveniente utilizar lactosa y polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se utilizan suspensiones acuosas, éstas pueden contener agentes emulsionantes o agentes que facilitan la suspensión. También se pueden usar diluyentes tales como sacarosa, etanol, polietilenglicol, propilenglicol, glicerol, y cloroformo, o mezclas de los mismos.

Para la administración parenteral, se usan emulsiones, suspensiones o soluciones de los productos según la invención en aceite vegetal, por ejemplo, aceite de sésamo, aceite de cacahuete o aceite de oliva, o soluciones acuoso-orgánicas tales como agua y propilenglicol, ésteres orgánicos inyectables tales como oleato etílico, así como soluciones acuosas estériles de las sales farmacéuticamente aceptables. Las soluciones de las sales de los productos según la invención son especialmente útiles para la administración por vía intramuscular o subcutánea. Las soluciones acuosas, que comprenden también soluciones de las sales en agua destilada pura, se pueden utilizar para la administración intravenosa, con la condición de que su pH esté adecuadamente ajustado, que hayan sido sometidas a un cuidadoso tamponamiento y convertidas en isotónicas con una cantidad suficiente de glucosa o cloruro sódico, y que estén esterilizadas por calor, irradiación o microfiltración.

Para la administración tópica, pueden usarse geles (con base acuosa o alcohólica), cremas o ungüentos que contienen los compuestos según la invención. Los compuestos según la invención se pueden incorporar también en un gel o base de matriz para su aplicación mediante parches, lo que permitiría una liberación controlada del compuesto a través de la barrera transdérmica.

Para la administración por inhalación, los compuestos según la invención se pueden disolver o suspender en un vehículo apropiado para ser usado en un nebulizador o un aerosol de suspensiones o soluciones, o pueden ser absorbidos o adsorbidos en un vehículo sólido adecuado, para ser utilizados en un inhalador de polvo seco.

Las composiciones sólidas para administración rectal incluyen supositorios formulados de acuerdo con métodos conocidos, y que contienen al menos un compuesto según la invención.

El porcentaje de ingrediente activo en las composiciones según la invención puede variar, siendo necesario que represente una proporción tal que permita obtener una dosificación apropiada. Evidentemente, es posible administrar varias formas de dosificación unitaria de manera aproximadamente simultánea. La dosis utilizada será determinada por el médico, y depende del efecto terapéutico deseado, la vía de administración, la duración del tratamiento, y del estado del paciente. EN el adulto, las dosis se encuentran generalmente dentro del intervalo de aproximadamente 0,001 hasta aproximadamente 50, preferentemente alrededor de 0,001 hasta aproximadamente 5 mg/kg de peso corporal al día por inhalación, desde aproximadamente 0,01 hasta aproximadamente 100, preferentemente 0,1 hasta 70, más especialmente 0,5 hasta 10 mg/kg de peso corporal en la administración oral, y desde aproximadamente 0,001 hasta aproximadamente 10, preferentemente 0,01 a 1 mg/kg de peso corporal en la administración intravenosa. En cada caso particular, las dosis se determinarán de acuerdo con los factores distintos del sujeto a tratar tales como edad, peso, estado general de salud, y otras características que pueden influir sobre la eficacia del producto medicinal.

Los compuestos según la invención se pueden administrar tan frecuentemente como sea necesario para obtener el efecto terapéutico deseado. Algunos pacientes pueden responder rápidamente a una dosis mayor o menor, pudiendo encontrar adecuadas las dosis de mantenimiento más bajas. Para otros pacientes, puede ser preciso instaurar tratamientos a largo plazo, con una frecuencia de 1 a 4 dosis al día, de acuerdo con los requisitos fisiológicos de cada paciente en particular. En general, el producto activo se puede administrar por vía oral 1 a 4 veces al día. Por supuesto, en el caso de algunos pacientes, será necesario prescribir no más de una o dos dosis al día.

Los compuestos según la invención se pueden preparar por la aplicación o adaptación de métodos conocidos, es decir, métodos utilizados hasta la fecha o descritos en la bibliografía, por ejemplo, los que describe R.C. Larock en Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers, 1989.

En las reacciones descritas a continuación, puede ser necesario proteger grupos funcionales reactivos, por ejemplo, los grupos hidroxi, amino, imino, tio o carboxi, cuando se desea que estén presentes en el producto final, para evitar su participación no deseada en las reacciones. Se pueden usar grupos protectores convencionales de acuerdo con prácticas convencionales; véase, por ejemplo, T.W. Greene y P.G.M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley and Sons, 1991.

Los compuestos de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, y en los que Y es carboxi, pueden prepararse por hidrólisis de ésteres de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, e Y es un grupo -CO_{2}R^{16} (en donde R^{16} es alquilo, alquenilo o arilalquilo). La hidrólisis se puede llevar a cabo, convenientemente, por hidrólisis alcalina, usando una base tal como un hidróxido de metal alcalino, por ejemplo, hidróxido de litio, o un carbonato de metal alcalino, por ejemplo, carbonato de potasio, en presencia de una mezcla de disolventes acuosos/orgánicos, utilizando disolventes orgánicos tales como dioxano, tetrahidrofurano o metanol, a una temperatura de aproximadamente ambiente a aproximadamente de reflujo. La hidrólisis de los ésteres se puede llevar a cabo también por hidrólisis ácida, usando un ácido inorgánico tal como ácido clorhídrico, en presencia de una mezcla de disolventes acuosos/orgánicos inertes, empleando disolventes orgánicos tales como dioxano o tetrahidrofurano, a una temperatura de aproximadamente 50ºC hasta aproximadamente 80ºC.

Como ejemplo adicional, los compuestos de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, y en los que Y es carboxi, se pueden preparar por la separación catalizada por ácido del grupo terc-butilo de los ésteres terc-butílicos de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, e Y es un grupo -CO_{2}R^{16} (en donde R^{16} es terc-butilo), utilizando condiciones convencionales de reacción, por ejemplo, reacción con ácido trifluoroacético a una temperatura de aproximadamente temperatura ambiente.

Como otro ejemplo adicional, los compuestos de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, y en los que Y es carboxi, se pueden preparar por hidrogenación de compuestos de la fórmula (Ia) en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, y en los que Y es un grupo -CO_{2}R^{16} (en donde R^{16} es arilmetilo, por ejemplo, bencilo). La reacción se puede llevar a cabo en presencia de formiato de amonio y un catalizador metálico apropiado, por ejemplo, paladio, soportado sobre un vehículo inerte tal como carbón, preferentemente en un disolvente tal como metanol o etanol, y a una temperatura de aproximadamente temperatura de reflujo. De manera alternativa, la reacción se puede llevar a cabo en presencia de un catalizador metálico apropiado, por ejemplo, paladio o paladio opcionalmente soportado sobre un vehículo inerte tal como carbón, preferentemente en un disolvente tal como metanol o etanol. Esta reacción es especialmente adecuada para compuestos de la fórmula (Ia) en los que L^{1} no contiene enlaces múltiples de carbono-carbono.

En un proceso A, se pueden preparar compuestos de la fórmula (Ia) que contienen un enlace amida, mediante el acoplamiento de un ácido [o un haluro (o anhídrido) ácido] con una amina, para dar un enlace amida, utilizando procedimientos convencionales de acoplamiento de péptidos, tal como se describe más adelante.

Como un ejemplo del proceso A, se pueden preparar ésteres de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, e Y es un grupo -CO_{2}R^{16} (en donde R^{16} es como se ha definido anteriormente), haciendo reaccionar un compuesto de la fórmula (II):

(II)R^{18}-C(=O)-X^{1}

en la cual R^{18} es R^{3}-NH-C(=O)-NH-Ar^{1}-L^{4} (en donde R^{3}, Ar^{1} y L^{4} son como se han definido anteriormente), y X^{1} es un grupo hidroxi, un halógeno, preferentemente un átomo de cloro, con una amina de la fórmula (III):

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en donde R^{2}, R^{16}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente. Cuando X^{1} es un grupo hidroxi, la reacción se puede llevar a cabo usando procedimientos convencionales de acoplamiento de péptidos, por ejemplo, acoplamiento en presencia de hexafluorofosfato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio y trietilamina (o diisopropil-etilamina) en tetrahidrofurano (o dimetilformamida), a temperatura ambiente. Cuando X^{1} es un átomo de halógeno, la reacción de acilación se puede llevar a cabo con ayuda de una base tal como piridina, preferentemente en un disolvente tal como tetrahidrofurano, y a una temperatura de aproximadamente temperatura ambiente. Los ésteres de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, e Y es un grupo -CO_{2}R^{16} (en donde R^{16} es como se ha definido anteriormente), se pueden preparar por sulfonilación de un compuesto de la fórmula (III), en donde R^{2}, R^{16}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, utilizando un cloruro de sulfonilo de la fórmula (IV):

(IV)R^{18}-SO_{2}-Cl

en donde R^{18} es como se ha definido anteriormente. La reacción se lleva a cabo, preferentemente, con ayuda de una base tal como una amina terciaria, por ejemplo trietilamina, preferentemente en un disolvente tal como tetrahidrofurano, y a una temperatura de aproximadamente 0ºC hasta aproximadamente temperatura ambiente.

De acuerdo con una característica adicional de la presente invención, los compuestos según la invención se pueden preparar por interconversión de otros compuestos según la invención.

Por ejemplo, los compuestos de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, e Y es un grupo -C(=O)-NHOH, se pueden preparar haciendo reaccionar compuestos de la fórmula (Ia), en los que R^{2}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, e Y es carboxi, con hidroxilamina, usando procedimientos convencionales de acoplamiento de péptidos tales como tratamiento con carbodiimida, por ejemplo, diciclohexil-carbodiimida, en presencia de trietilamina, en un disolvente inerte tal como diclorometano o tetrahidrofurano, y a una temperatura de aproximadamente temperatura ambiente. Igualmente, el acoplamiento se puede llevar a cabo usando 1-hidroxibenzotriazol y 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida en diclorometano a temperatura ambiente. Asimismo, la preparación se puede efectuar usando una hidroxilamina O-protegida tal como O-(trimetilsilil)-hidroxilamina, O-(t-butil-dimetilsilil)-hidroxilamina, u O-(tetrahidroxipiranil)-hidroxilamina, seguido de tratamiento con ácido.

Como un ejemplo adicional del proceso de interconversión, se pueden preparar compuestos de la fórmula (Ia) que contienen enlaces sulfóxido por la oxidación de compuestos correspondientes que contienen enlaces -S-. Por ejemplo, la oxidación se puede llevar a cabo de manera conveniente mediante una reacción con un peroxiácido, por ejemplo, ácido 3-cloroperbenzoico, preferentemente en un disolvente inerte, por ejemplo, diclorometano, preferentemente a temperatura ambiente o próxima a ésta o, de manera alternativa, por medio de hidrógeno-peroxomonosulfato de potasio (PÁG. 26, línea 26) en un medio tal como metanol acuoso, tamponado a aproximadamente pH 5, a una temperatura entre aproximadamente 0ºC y temperatura ambiente. Este último método es preferible para compuestos que contienen un grupo lábil a ácidos.

Como un ejemplo adicional del proceso de interconversión, se pueden preparar compuestos de la fórmula (Ia) que contienen enlaces sulfona por la oxidación de compuestos correspondientes que contienen enlaces -S- o sulfóxido. Por ejemplo, la oxidación se puede llevar a cabo, de forma conveniente, por medio de una reacción con un peroxiácido, por ejemplo, ácido 3-cloro-perbenzoico, preferentemente en un disolvente inerte, por ejemplo diclorometano, preferentemente a temperatura ambiente o próxima a ésta.

Como otro ejemplo del proceso de interconversión, se pueden preparar compuestos de la fórmula (Ia) en la que R^{2}, A^{1}, Z^{1} e Y son como se han definido anteriormente, y L^{1} es etileno opcionalmente sustituido, por hidrogenación de los correspondientes compuestos de la fórmula (Ia), en la que L^{1} es el correspondiente etileno opcionalmente sustituido. La hidrogenación se puede llevar a cabo utilizando hidrógeno (opcionalmente, bajo presión), en presencia de un catalizador metálico apropiado, por ejemplo, platino o paladio, opcionalmente sobre un soporte inerte tal como carbón, preferentemente en un disolvente tal como metanol o etanol, y a una temperatura de aproximadamente temperatura ambiente.

Como ejemplo adicional del proceso de interconversión, se pueden oxidar compuestos según la invención que contienen un grupo heterocíclico, en donde el heteroátomo es un átomo de nitrógeno, para formar sus correspondientes N-óxidos. De manera conveniente, la oxidación se puede llevar a cabo mediante la reacción con una mezcla de peróxido de hidrógeno y un ácido orgánico, por ejemplo, ácido acético, preferentemente a temperatura ambiente o superior, por ejemplo, a una temperatura de aproximadamente 60-90ºC. De manera alternativa, la oxidación se puede llevar a cabo mediante reacción con un perácido, por ejemplo, ácido peracético o ácido m-cloro-perbenzoico, en un disolvente inerte tal como cloroformo o diclorometano, a una temperatura desde aproximadamente temperatura ambiente hasta reflujo, preferentemente a temperatura elevada. De manera alternativa, la oxidación se puede llevar a cabo por reacción con peróxido de hidrógeno en presencia de tungstato sódico, a temperaturas entre temperatura ambiente y aproximadamente 60ºC.

Se podrá apreciar que los compuestos de la presente invención pueden contener centros asimétricos. Estos centros asimétricos pueden estar, de forma independiente, en la configuración R o S. Para los expertos en la técnica, resultará evidente que determinados compuestos según la invención pueden exhibir, igualmente, isomerismo geométrico. Se debe entender que la presente invención incluye isómeros y estereoisómeros geométricos y mezclas de los mismos, incluidas mezclas racémicas, de los compuestos de la fórmula (Ia) anterior. Estos isómeros se pueden separar de sus mezclas mediante la aplicación o adaptación de métodos conocidos, por ejemplo técnicas cromatográficas y técnicas de recristalización, o se preparan por separado a partir de los isómeros apropiados de sus intermedios.

De acuerdo con una característica adicional de la invención, las sales de adición de ácido de los compuestos según esta invención se pueden preparar por la reacción de la base libre con el ácido apropiado, mediante la aplicación o la adaptación de métodos conocidos. Por ejemplo, las sales de adición de ácido de los compuestos de esta invención se pueden preparar disolviendo la base libre en agua o una solución alcohólica acuosa, u otros disolventes adecuados que contienen el ácido apropiado, y aislando la sal por evaporación de la solución, o haciendo reaccionar la base libre y el ácido en un disolvente orgánico, en cuyo caso la sal se separar directamente, o se puede obtener por la concentración de la solución.

Las sales de adición de ácido de los compuestos según esta invención se pueden regenerar a partir de las sales mediante la aplicación o adaptación de métodos conocidos. Por ejemplo, los compuestos parentales de la invención se pueden regenerar a partir de sus sales de adición de ácido mediante tratamiento con un álcali, por ejemplo, una solución acuosa de bicarbonato sódico, o una solución acuosa de amoniaco.

Los compuestos según esta invención se pueden regenerar a partir de sus sales de adición de base mediante la aplicación o adaptación de métodos conocidos. Por ejemplo, es posible regenerar los compuestos parentales de la invención a partir de sus sales de adición de base por tratamiento con un ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico.

Los compuestos de la presente invención se pueden preparar convenientemente, o generar durante el proceso de la invención, en forma de solvatos (por ejemplo, hidratos). Los hidratos de compuestos según la presente invención se pueden preparar, de manera conveniente, por recristalización de una mezcla de disolventes acuosos/orgánicos, utilizando disolventes orgánicos tales como dioxano, tetrahidrofurano o metanol.

De acuerdo con una característica adicional de la invención, se pueden preparar sales de adición de base de los compuestos según esta invención por la reacción del ácido libre con la base apropiada, mediante la aplicación o adaptación de métodos conocidos. Por ejemplo, las sales de adición de base de los compuestos de esta invención se pueden preparar disolviendo el ácido libre en agua o en una solución alcohólica acuosa, u otros disolventes apropiados que contienen la base adecuada, y aislando la sal por evaporación de la solución, o haciendo reaccionar el ácido libre y la base en un disolvente orgánico, en cuyo caso la sal se separar directamente, o se puede obtener por la concentración de la solución.

Los materiales de partida e intermedios se pueden preparar por la aplicación o adaptación de métodos conocidos, por ejemplo métodos como los descritos en los Ejemplos de Referencia o sus equivalentes químicos evidentes.

Los compuestos de la fórmula (II), en los que R^{18} es el grupo R^{3}-NH-C(=O)-NH-Ar^{1}-L^{4} (en donde R^{3}, L^{4} y Ar^{1} son como se han definido anteriormente), se pueden preparar por la aplicación o adaptación de métodos descritos en la especificación de la Publicación de Solicitud de Patente Internacional Nº WO 96/22966.

Los cloruros ácidos de la fórmula (II), en los que R^{18} es como se ha definido anteriormente y X^{1} es un átomo de cloro, se pueden preparar a partir de los correspondientes ácidos de la fórmula (II), en la que R^{18} es como se ha definido anteriormente y X^{1} es hidroxi, mediante la aplicación de procedimientos convencionales para la conversión de ácidos en cloruros ácidos, por ejemplo, por reacción con cloruro de oxalilo.

Se pueden preparar compuestos de la fórmula (III), en la que R^{2}, R^{16}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, por medio de la separación catalizada con ácido del grupo terc-butil-oxicarbonilo en compuestos de la fórmula (2):

16

en donde R^{2}, R^{16}, A^{1}, L^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, y R^{20} es -COO^{t}Bu. La reacción se puede llevar a cabo, convenientemente, usando ácido trifluoroacético en un disolvente inerte tal como diclorometano, a una temperatura de aproximadamente 0ºC.

Los compuestos de la fórmula (III), en donde R^{2}, A^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, R^{16} es alquilo y L^{1} es etileno, se pueden preparar por hidrogenación de compuestos de la fórmula (2), en los que R^{2}, A^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, R^{16}es alquilo, R^{20} es H [o un grupo protector (por ejemplo, bencilo) que se separa convenientemente durante la hidrogenación], y L^{1} es etenileno o etinileno. La hidrogenación se puede llevar a cabo usando hidrógeno (opcionalmente, bajo presión), en presencia de un catalizador adecuado, por ejemplo hidróxido de paladio soportado sobre un vehículo inerte tal como carbón, en ácido acético y, opcionalmente, en presencia de un co-disolvente tal como metanol o etanol, ya una temperatura de aproximadamente temperatura ambiente.

Los compuestos de la fórmula (2), en donde R^{2}, A^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, R^{16} es alquilo, R^{20} es un grupo protector adecuado tal como terc-butil-oxicarbonilo, y L^{1} es etileno, se pueden preparar por la reducción de compuestos de la fórmula (2) en donde R^{2}, A^{1} y Z^{1} son como se han definido anteriormente, R^{16} es alquilo, R^{20} es un grupo protector adecuado tal como terc-butil-oxicarbonilo, y L^{1} es etenileno o etinileno. La reducción se puede llevar a cabo en presencia de formiato de amonio y un catalizador metálico apropiado, por ejemplo paladio soportado sobre un vehículo inerte tal como carbón, preferentemente en un disolvente tal como metanol o etanol, y a una temperatura de aproximadamente temperatura de reflujo.

El intermedio de la fórmula (III) es un compuesto nuevo y, como tal, (III) y su proceso descrito en este documento para su preparación, representan una característica adicional de la presente invención.

Adicionalmente, la presente invención se ejemplifica por medio de los siguientes Ejemplos ilustrativos y Ejemplos de Referencia.

Los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN) ^{1}H a 400 MHz se registraron en un dispositivo Bruker 400 DMX. Los espectros de resonancia magnética nuclear ^{1}H a 300 MHz se registraron en un dispositivo Bruker 300 AC o un dispositivo Bruker 300 DPX. En los espectros de resonancia magnética nuclear (RMN), las desviaciones químicas (\delta) se expresan en ppm en relación con tetrametilsilano. Las abreviaturas tienen los siguientes significados: s = singlete; d = doblete; t = triplete; m = multiplete; q = cuartete; dd = doblete o dobletes; ddd = doblete de dobles dobletes.

Los Espectros de Masa por Impacto de Electrones, MS (EI), se registraron en un espectrómetro Finnigan SSQ 7000 a 70 eV.

Los Espectros de Masa de Ionización Química por Desorción, MS(CI), se registraron en un espectrómetro Finnigan SSQ 7000, usando amoniaco como gas de reacción.

Los Espectros de Masa de Iones Secundarios Líquidos, MS(LSIMS), se registraron en un espectrómetro VG AutoSpec, usando una mezcla de glicerol-tioglicerol 50/50 como matriz.

Los Espectros de Masa por Electrospray, MS(ES), se registraron en un espectrómetro Micromass Platform II.

Ejemplo 1 (a) Ácido 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propiónico

Una solución de 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico (0,16 g, Ejemplo de Referencia 1) en etanol anhidro (3 ml), a 25ºC, se trató, gota a gota, con una solución de hidróxido de litio monohidrato (22 mg) en agua destilada (1 ml). Después de agitar durante 4 horas a 25ºC, se agregó una porción adicional (10 mg) de hidróxido de litio monohidrato, y se prosiguió la agitación durante 16 horas a 25ºC. La mezcla de reacción se evaporó bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC, y se trató el residuo con agua destilada (40 ml). La solución resultante se lavó dos veces con éter dietílico (20 ml), se acidificó a continuación a pH 3 por adición de ácido clorhídrico (1,3 ml, 1N) y, seguidamente, se extrajo tres veces con acetato etílico (25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron dos veces con agua (5 ml), se secaron entonces sobre sulfato de magnesio, y a continuación se evaporaron bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC para dar el compuesto del título (132 mg) en forma de sólido espumoso. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO]: \delta 2,2 (s, 3H); 2,5 (bq, 2H); 2,7 (t ancho, 2H); 3,2 (s ancho, 2H); 3,65 (s ancho, 2H); 3,8 (s, 5H); 6,1 (s ancho, 1H); 6,4 (s ancho, 1H); 6,45 (s ancho, 1H); 6,7 (s muy ancho, 1H); 6,9 (t, J = 8 Hz, 1H); 7,15 (m, 3H); 7,8 (d, J = 8 Hz, 1H); 8 (s ancho, 1H); 8,45 (s, 1H); 8,6 (s, 1H); 12,1 (s ancho, 1H), MS (LSIMS: glicerol + tioglicerol): 503 (MH^{+}).

b) Procediendo de manera similar al Ejemplo 1(a), pero utilizando 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-butanoato etílico (Ejemplo de Referencia 17), y tras someter el producto bruto a cromatografía preparativa de capa gruesa sobre sílice (placas de 20 x 20 cm, 0,25 mm de espesor), por elución con acetato etílico se preparó ácido 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-butírico en forma de polvo blanco. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, una mezcla de rotámeros]: \delta 1,18 (d, J = 7 Hz, 3H); 2,26 (s, 3H); 2,43 (m, 2H); 3,00 (banda ancha, 1H); 3,20 (banda ancha, 2H); 3,67 (m, 2H); 3,83 (banda ancha, 2H); 3,83 (s, 3H); desde 6,00 hasta 7,60 (m, 9H); 7,80 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,01 (banda ancha, 1H); 8,48 (s ancho, 1H); 8,58 (s ancho, 1H). MS (EI): 516 (M^{+}).

(c) Procediendo de la manera similar al Ejemplo 1(a), pero utilizando 3-(4-acetil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico [Ejemplo de Referencia 16(b)], y tras someter el producto de reacción a cromatografía preparativa de capa gruesa sobre sílice (placas de 20 x 20 cm, 0,25 mm de espesor), por elución con una mezcla de diclorometano y metanol, 9:1, v/v, se preparó ácido 3-(4-acetil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propiónico, en forma de espuma blanca después de triturar con éter diisopropílico. ^{1}H RMN [300 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, una mezcla de rotámeros]: \delta 2,01 (banda ancha, 3H); 2,26 (s, 3H); 2,56 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 2,83 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); desde 3,70 hasta 3,95 (m, 9H); desde 6,45 hasta 6,85 (banda muy ancha, 2H); 6,95 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); desde 7,05 hasta 7,25 (m, 3H); desde 7,20 hasta 7,70 (banda muy ancha, 2H); 7,80 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 7,96 (d muy ancho, J = 8 Hz, 1H); 8,47 (s ancho, 1H); 8,55 (s ancho, 1H). MS (CI): 545 (MH^{+}).

(d) Procediendo de manera similar al Ejemplo 1(a), pero utilizando 3-(4-benzoil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico [Ejemplo de Referencia 16(c)], seguido por trituración del producto de reacción con éter diisopropílico, se preparó ácido 3-(4-benzoil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propiónico en forma de polvo blanco. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a una temperatura de 373ºK):\delta 2,19 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 2,27 (s, 3H); 2,58 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 3,83 (s, 3H); 3,92 (m, 2H); 3,95 (s, 2H); 4,00 (M, 2H); 6,65 (s ancho, 1H); 6,76 (dd, J = 8 y 1,5 Hz, 1H); 6,88 (d, J = 1,5 Hz, 1H); desde 6,95 hasta 7,05 (m, 2H); desde 7,15 hasta 7,25 (m, 4H); 7,34 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 7,42 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); 7,45 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,77 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 8,02 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,21 (s ancho, 1H); 8,27 (s ancho, 1H). MS, LSIMS 607 (MH^{+}).

(e) Procediendo de manera similar al Ejemplo 1(a), pero utilizando 4-(7-(2-etoxicarbonil-etil)-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-il)-4-oxo-butanoato etílico [Ejemplo de Referencia 16(d)], y tras someter el producto de reacción a HPLC de fase inversa [columna RP-C18 Uptisphere 3 \mu, Pieza nº UP30DB-10M Interchim, Montluçon, Francia; tamaño 10 x 100 mm; Caudal: 2 ml/minuto, acetonitrilo:agua, 80:20, v/v durante 5 min y, a continuación hasta 50:50, v/v en 3 min y, seguidamente durante 30 minutos, longitud de onda 254 nm), se preparó ácido 4-(7-(2-carboxi-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-il)-4-oxo-butírico, en forma de espuma blanca. HPLC: R_{T} = 24,07 minutos.

(f) Procediendo de manera similar al Ejemplo 1(a), pero utilizando 3-(4-(3-dimetilamino-propionil)-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-4-propanoato etílico [Ejemplo de Referencia 21], y tras someter el producto de reacción a cromatografía preparativa de capa gruesa sobre sílice (placas de 20 x 20 cm, 1 mm de espesor) y eluir con una mezcla de diclorometano y metanol, 9:1, v/v, se preparó ácido 3-(4-(3-dimetilamino-propionil)-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propiónico en forma de espuma blanca. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a una temperatura de 373ºK):\delta 2,19 (s, 6H); 2,28 (s, 3H); desde 2,50 hasta 2,60 (m, 4H); 2,65 (t ancho, J = 6,5 Hz, 2H); 2,90 (t, J = 7,5 Hz, 2H); desde 3,80 hasta 3,90 (m, 7H); 3,91 (m, 2H); 6,69 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 6,81 (s ancho, 1H); 6,98 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); desde 7,10 hasta 7,20 (m, 3H); 7,40 (s ancho, 1H); 7,56 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,68 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,22 (banda ancha, 1H); 8,29 (s ancho, 1H). MS, LSIMS 602 (MH^{+}).

(g) Procediendo de manera similar al Ejemplo 1(a), pero utilizando éster terc-butílico del ácido 7-(2-etoxicarbonil-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico (Ejemplo de Referencia 2), se preparó éster terc-butílico del ácido 7-(2-carboxi-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico en forma de sólido blanco. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, una mezcla de rotámeros]: \delta 1,48 (s, 9H); 2,26 (s, 3H); 2,55 (m, 2H); 2,83 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 3,63 (m, 2H); desde 3,75 hasta 3,90 (m, 7H); desde 6,55 hasta 6,85 (banda muy ancha, 2H); desde 6,90 hasta 7,05 (m, 2H); desde 7,10 hasta 7,25 (m, 2H); 7,45 (banda ancha, 1H); 7,63 (s ancho, 1H); 7,78 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,03 d ancho, J = 8 Hz, 1H); 8,50 (s, 1H); 8,56 (s ancho, 1H); desde 11,80 hasta 12,60 (banda muy ancha, 1H). MS (DCI): 620 (MNH_{4}^{+}), 603 (MH^{+}).

Ejemplo 2 (A) Ácido (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5 metil-hexanoico

Una solución de (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-hexanoato etílico [95 mg, Ejemplo de Referencia 10(a)] en metanol (20 ml) se trató con solución acuosa de hidróxido de litio (2 ml, 2M). Después de agitar a temperatura ambiente durante 16 horas, la mezcla se calentó a 50ºC durante 1 hora, a continuación se evaporó a un volumen bajo y, entonces, se trató con agua. La solución se acidificó a pH = 1 por adición de ácido clorhídrico acuoso (1M). Se recogió el precipitado, se secó por aspiración y, a continuación, se secó en un desecador a 60ºC para dar el compuesto del título (85 mg). LC-MS: R_{T} = 3,74 min (89% de por ELSD); MS (ES^{+}) 559 (MH^{+}).

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo 2, pero utilizando (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-propanoato etílico [Ejemplo de Referencia 10(c)] se preparó ácido (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-propanoico, en forma de un sólido semi-blanco. LC-MS: R_{T} = 3,59 min (99% por ELSD); MS (ES^{+}) 580 (MH^{+}), 602 (MNa^{+}).

(c) Procediendo de manera similar al Ejemplo 2, pero utilizando (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-propanoato etílico [Ejemplo de Referencia 10(d)] se preparó ácido (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-propanoico, en forma de un sólido blanco. LC-MS: R_{T} = 3,67 min (100% por ELSD); MS (ES^{+}) 594 (MH^{+}), 616 (MNa^{+}).

(d) Procediendo de manera similar al Ejemplo 2, pero utilizando (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoato etílico [Ejemplo de Referencia 10(e)] se preparó ácido (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoico, en forma de un sólido blancuzco. LC-MS: R_{T} = 3,36 min (95% por ELSD); MS (ES^{+}) 518 (MH^{+}), 540 (MNa^{+}).

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Ejemplo 3 (a) Ácido (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoico

Una solución de (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoato etílico [100 mg, Ejemplo de Referencia 10(b)] en metanol (20 ml) se trató con hidróxido sódico acuoso (3 ml, 1M). La mezcla se calentó a 50ºC durante 1 hora, a continuación se dejó reposar a temperatura ambiente durante 16 horas y, seguidamente, se evaporó a un volumen bajo y, entonces, se trató con agua (20 ml). La solución se acidificó a pH = 1 por adición de ácido clorhídrico acuoso (1M), y se recogió el precipitado resultante, se secó por aspiración y, a continuación, se secó en un desecador a 60ºC para dar el compuesto del título (80 mg) en forma de sólido blanco. LC-MS: R_{T} = 3,62 min (100% de por ELSD); MS (ES^{+}) 546 (MH^{+}), 568 (MNa^{+}).

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo 3(a), pero utilizando (R,S)-3-{4-[3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)-propionil]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il}-butanoato etílico [Ejemplo de Referencia 10(f)] se preparó ácido 3-{4-[3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)-propionil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoico. LC-MS: R_{T} = 3,43 min (100% por ELSD); MS (ES^{+}) 500 (MH^{+}).

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Ejemplo 4 Ácido 3-(4-benzoil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-butírico

Una solución agitada de 3-(4-benzoil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-butanoato etílico ]0,124 g, Ejemplo de Referencia 16(a)] en metanol (5 ml) se trató con solución de hidróxido sódico (764 \mul, al 15%). La mezcla resultante se calentó a reflujo durante 30 min, a continuación se enfrió a 40ºC y, seguidamente, se evaporó (40 mbar, 40ºC). El residuo se trató con agua destilada (40 ml), y la solución acuosa se lavó tres veces con éter (20 ml), luego se trató con ácido clorhídrico (4 ml, 1M) y, entonces, se extrajo tres veces con acetato etílico (25 ml). Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y, a continuación, se evaporaron hasta sequedad (40 mbar, 40ºC). El residuo bruto (91 mg) se sometió a cromatografía preparativa de capa fina sobre sílice (placas de 20 x 20 cm, espesor de 0,25 mm), se eluyó con una mezcla de diclorometano y metanol (9:1, v/v) para dar el compuesto del título en forma de polvo blanco (15 mg). ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a una temperatura de 373ºK):\delta 0,92 (d, J = 7 Hz, 3H); 2,16 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 2,27 (s, 3H); 2,80 a 3,05 (m, 1H); 3,84 (s, 3H); 3,94 (m, 2H); 3,96 (s, 2H); 4,01 (m, 2H); 6,60 (s ancho, 1H); 6,76 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 6,88 (s ancho, 1H); 6,95 a 7,05 (m, 2H); 7,10 a 7,20 (m, 4H); 7,33 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 7,40 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); 7,56 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,68 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 8,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,23 (s ancho, 1H). MS (ES): 621 (MH^{+}).

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Ejemplo de referencia 1

3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico

Una solución de éster terc-butílico de ácido 7-(2-etoxicarbonil-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-ace-
til}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico (0,3 g, Ejemplo de Referencia 2) en diclorometano (3 ml), a 0ºC, se trató, gota a gota, con ácido trifluoroacético (0,5 ml). Después de agitar durante 2 horas a 0ºC, se agregó una porción adicional de ácido trifluoroacético (0,5 ml) y se continuó la agitación durante una hora más, a 10ºC. La mezcla de reacción se vertió sobre hielo triturado (50 ml), se ajustó el pH de esta mezcla a 8 mediante la adición, gota a gota. de hidróxido sódico (20 ml, 1N) y, a continuación, la mezcla se extrajo dos veces con diclorometano (25 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron dos veces con agua (5 ml), se secaron, entonces, sobre sulfato de magnesio, y seguidamente se evaporaron bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. El sólido espumoso de color blanco resultante (235 mg) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (0,040-0,063 mm), eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (99:1, v/v), para dar el compuesto del título (170 mg) en forma de sólido espumoso blanco. ^{1}H RMN, 300 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 1,2 (t, 3H); 2,3 (s, 3H); 2,6 (t, 2H); 2,8 (t, 2H); 3,25 (m, 2H); 3,7 (t, 2H); 3,85 (s, 2H); 3,9 (s, 3H); 4,1 (q, 2H); 5,8 (s ancho, 1H); 6,4 (dd, J = 8 Hz y 1,5 Hz, 1H); 6,5 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 6,7 (dd, J = 8 Hz y 1,5 Hz, 1H); 6,85 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 7 (ddd, J = 8,8 y 1,5 Hz, 1H); 7,2 (m, 3H); 7,7 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 8 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,25 (s, 1H); 8,35 (s, 1H). MS (CI, NH_{3}): MNH_{4}^{+} 548, MH^{+} 531.

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Ejemplo de referencia 2

Éster terc-butílico de ácido 7-(2-etoxicarbonil-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico

Una mezcla agitada de éster terc-butílico de ácido 4-bencil-7-(2-etoxicarbonil-vinil)-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-1-carboxílico (1,83 g, Ejemplo de Referencia 4), ácido acético (2 ml), metanol (40 ml), y dihidróxido de paladio al 20% sobre polvo de carbón (0,49 g) se hidrogenó en un reactor de presión de acero inoxidable de 250 ml, a una presión de 30 bar de hidrógeno. Después de agitar durante 20 horas a 25ºC, la mezcla de reacción se filtró a través de una almohadilla de celita y la almohadilla de filtro se lavó con diclorometano (25 ml), a continuación, con metanol (25 ml). El filtrado y los lavados combinados se evaporaron bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. El aceite pardo resultante (1,99 g) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (0,040-0,063 mm), eluyendo inicialmente con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (9:1, v/v) y, luego, con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (7:3, v/v) para dar el compuesto del título (0,856 g) en forma de aceite amarillo.

^{1}H RMN, 300 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 1,2 (t, 3H); 1,5 (s, 9H); 2,5 (t, 2H); 2,7 (t, 2H); 3,25 (m, 2H); 3,6 (t ancho, 2H); 4,1 (q, 2H); 6 (s ancho, 1H); 6,5 (d, J = 8 Hz, 1H); 6,7 (dd, J = 8 Hz y 1,5 Hz, 1H); 7,2 (s ancho, 1H). MS (EI): M^{+} 334 (40%), 278 (20%), 234 (100%), 189 (10%), 159 (19%), 147 (40%), 57 (40%).

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Ejemplo de referencia 4

(a) Éster terc-butílico de ácido 4-bencil-7-(2-etoxicarbonil-vinil)-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-1-carboxílico

Una mezcla de éster terc-butílico de ácido 4-bencil-7-bromo-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-1-carboxílico (2,4 g, Ejemplo de Referencia 5), tri-o-tolil-fosfina (96 mg), acetato de paladio (II) (24 mg), y acrilato etílico (1,3 ml) en tributilamina (20 ml) se calentó a 110ºC. Después de agitar durante 2 horas a 110ºC, la mezcla se trató con porciones adicionales de acrilato etílico (1,3 ml), tri-o-tolil-fosfina (96mg), y acetato de paladio (II) (24 mg), y se prosiguió la agitación durante otras 16 horas a 110ºC. La mezcla de reacción se trató, entonces, con acrilato etílico (2,6 ml) y se continuó agitando durante 5 horas adicionales a 110ºC. La mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, se acidificó entonces a pH 2 por la adición de ácido clorhídrico (50 ml, 1N) y, a continuación, se extrajo tres veces con acetato etílico (50 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de hidrógeno-carbonato sódico (20 ml), luego tres veces con agua (20 ml), se secó, entonces, sobre sulfato de magnesio y, seguidamente, se evaporó bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. El aceite pardo resultante (5 g) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (0,040-0,063 mm), eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (9:1, v/v) para dar el compuesto del título (1,83 g) en forma de aceite amarillo. ^{1}H RMN, 400 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 1,3 (t, 3H); 1,5 (s, 9H); 3,5 (t ancho, 2H); 3,8 (t ancho, 2H); 4,15 (q, 2H); 4,65 (s, 2H); 6,25 (d, J = 16 Hz, 1H); 6,65 (d J = 8 Hz, 1H); 7,3 (m, 4H); 7,4 (t, 2H); 7,5 (d, J = 16 Hz, 1H); 7,7 (s ancho, 1H). MS (EI): M^{+} 422 (50%), 366 (60%), 322 (40%), 277 (20%), 231 (40%), 185 (10%), 157 (15%), 91 (100%), 57 (40%).

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 4(a), pero utilizando 4-terc-butil-oxicarbonil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina [Ejemplo de Referencia 5(b)] y (E)-5-metil-hex-2-enoato etílico, y llevando a cabo la reacción en dimetilformamida a 140ºC, se preparó el éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-hex-2-enoico (240 mg).

(c) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 4(a), pero utilizando 4-terc-butil-oxicarbonil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina [Ejemplo de Referencia 5(b)] y (E)-5-metil-pent-2-enoato etílico, y llevando a cabo la reacción en dimetilformamida a 140ºC, se preparó el éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-pent-2-enoico (240 mg).

(d) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 4(a), pero utilizando 4-terc-butil-oxicarbonil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina [Ejemplo de Referencia 5(b)] y cinamato etílico, y llevando a cabo la reacción en dimetilformamida a 140ºC, se preparó el éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-prop-2-enoico.

(e) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 4(a), pero utilizando 4-terc-butil-oxicarbonil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina [Ejemplo de Referencia 5(b)] y (E)-3-(2-metilfenil)-prop-2-enoato etílico, y llevando a cabo la reacción en dimetilformamida a 140ºC, se preparó el éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-prop-2-enoico.

(f) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 4(a), pero utilizando 4-terc-butil-oxicarbonil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina [Ejemplo de Referencia 5(b)] y crotonoato etílico, y llevando a cabo la reacción en dimetilformamida a 130ºC, se preparó el éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-but-2-enoico.

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Ejemplo de referencia 5

(a) Éster terc-butílico de ácido 4-bencil-7-bromo-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-1-carboxílico

Una mezcla de 4-bencil-7-bromo-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalina (3,28 g, Ejemplo de Referencia 6), dicarbonato di-terc-butílico (2,71 g), e hidrógeno-carbonato sódico (0,91 g) en diclorometano anhidro (20 ml), se agitó durante 16 horas a 25ºC, a continuación, se agregaron porciones adicionales de dicarbonato di-terc-butílico (2,71 g) e hidrógeno-carbonato sódico (0,91 g), y la agitación se continuó durante 72 horas a 25ºC. La mezcla de reacción se trató con agua destilada (50 ml) y se separó la fase orgánica. La fase acuosa se extrajo dos veces con diclorometano (20 ml), y las fases orgánicas combinadas se lavaron tres veces con agua (20 ml), se secaron, entonces, sobre sulfato de magnesio, y a continuación, se evaporaron bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. El sólido residual (7,4 g) recristalizó en éter diisopropílico para dar el compuesto del título (3,5 g) en forma de sólido de color marrón claro. ^{1}H RMN, 400 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 1,5 (s, 9H); 3,5 t ancho, 2H); 3,8 (t ancho, 2H); 4,6 (s, 2H); 6,6 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,0 (dd, J = 8 Hz y J = 1,5 Hz, 1H); 7,2 (m, 3H); 7,4 (t, 2H); 7,6 (s ancho, 1H). MS (EI): M^{+} 404 y 402 (20%), 348 y 346 (90%), 303 y 301 (15%), 257 y 255 (20%), 213 y 211 (20%), 91 (100%), 57 (40%).

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 5(a), pero utilizando 7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina (Ejemplo de Referencia 12), y llevando a cabo la reacción en ausencia de hidrógeno-carbonato sódico en tetrahidrofurano a 50ºC, se preparó 4-terc-butil-oxicarbonil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina en forma de sólido cristalino blanco.

Ejemplo de referencia 6

4-Bencil-7-bromo-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalina

Una mezcla agitada de bencil-(4-bromo.2.nitro-fenil)-(2-yodo-etil)-amina (23,55 g, Ejemplo de Referencia 7), cloruro de estaño (II) dihidrato (41,48 g), ácido clorhídrico 12N (21,28 ml) y agua destilada (45 ml) se calentó a 80ºC durante una hora y, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se trató, seguidamente, con agua destilada (200 ml). La mezcla de reacción se neutralizó a pH 7-8 por la adición de una solución acuosa de amonio al 32% (50 ml), y se filtró a través de una almohadilla de celita. La almohadilla de filtro se lavó tres veces con diclorometano (250 ml). Se combinaron el filtrado y los lavados. Se separó la fase orgánica y se lavó, entonces, cuatro veces con agua destilada (200 ml), y se secó sobre sulfato de magnesio y, a continuación se evaporó bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. El aceite pardo resultante (14,47 g) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (0,040-0,063 mm), eluyendo inicialmente con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (9:1, v/v) y, seguidamente, con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (7:3, v/v) para dar el compuesto del título (3,28 g) en forma de sólido de color marrón claro. ^{1}H RMN, 300 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 3,1 (s ancho, 4H); 4,2 (s, 2H); 5,6 (s ancho, 1H); 6,1 (d, J = 8 Hz, 1H); 6,2 (dd, J = 8 Hz y J = 1,5 Hz, 1H); 6,3 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 7,25 (m, 5H). MS (EI): M^{+} 304 y 302 (100%); 213 y 211 (100%), 132 (85%), 91 (60%).

Ejemplo de referencia 7

Bencil-(4-bromo-2-nitro-fenil)-(2-yodo-etil)-amina

Una mezcla de éster 2-[bencil-(4-bromo-2-nitro-fenil)-amino]-etílico de ácido metanosulfónico (25 g, Ejemplo de Referencia 8) y yoduro sódico (16,23 g) en acetona anhidra (100 ml) se calentó a reflujo durante 4 horas, cuando se agregó una porción adicional de yoduro sódico (8,12 g), y se continuó el reflujo durante otras 16 horas. La mezcla de reacción se evaporó bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC, y el residuo se trató con agua destilada (200 ml). La mezcla resultante se extrajo tres veces con diclorometano (150 ml). Los extractos orgánicos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y, a continuación, se evaporaron bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. El aceite pardo resultante (29,16 g) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (0,040-0,063 mm), eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (9:1, v/v), para dar el compuesto del título (23,55 g) en forma de aceite amarillo. ^{1}H RMN, 300 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 3,3 (m, 4H); 4,4 (s, 2H); 7,25 (m, 5H); 7,4 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,6 (dd, J = 8 Hz y J = 1,5 Hz, 1H); 8 (d, J = 1,5 Hz, 1H). MS (EI): M^{+} 462 y 460 (5%), 445 y 443 (20%), 321 y 319 (10%), 91 (100%).

Ejemplo de referencia 8

Éster 2-[bencil-(4-bromo-2-nitro-fenil)-amino]-etílico de ácido metanosulfónico

Una solución de 2-[bencil-(4-bromo-2-nitro-fenil)-amino]-etanol (19,25 g, Ejemplo de Referencia 9) y trietilamina (7,8 ml) en tetrahidrofurano anhidro (95 ml), a 25ºC, se trató, gota a gota, con cloruro de metanosulfonilo (4,75 ml). Después de agitar durante 4 horas a 25ºC, se agregó una porción adicional de cloruro de metanosulfonilo (4,75 ml), y se prosiguió la agitación durante otras 16 horas a 25ºC. La mezcla de reacción se trató con agua (100 ml), se separó la fase orgánica, y la fase acuosa se extrajo tres veces con acetato etílico (150 ml). Las fases orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de hidrógeno-carbonato sódico (50 ml) y, a continuación, tres veces con agua destilada (50 ml), se secaron entonces sobre sulfato de magnesio y, seguidamente, se evaporaron bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC para dar el compuesto del título (25,41 g) en forma de aceite pardo. ^{1}H RMN, 300 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 3,1 (s, 3H); 3,4 (t, 2H); 4,2 (t, 2H); 4,4 (s, 2H); 7,2 (m, 5H); 7,4 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,7 (dd, J = 8 Hz y J = 1,5 Hz, 1H); 8 (d, J = 1,5 Hz, 1H). MS (EI): M^{+} 430 y 428 (5%), 321 y 319 (20%), 91 (100%).

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Ejemplo de referencia 9

2-[Bencil-(4-bromo-2-nitro-fenil)-amino]-etanol

Una mezcla de 2,5-dibromo-nitrobenceno (40 mg) y N-bencil-etanolamina (40,4 ml) en 1-butanol (160 ml) se calentó a reflujo durante 18 horas, entonces se agregó una porción adicional (20,2 ml) de N-bencil-etanolamina y se continuó el reflujo durante una hora más. La mezcla de reacción se evaporó bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC y el residuo se trató con agua (500 ml) y, seguidamente, la mezcla se extrajo tres veces con éter dietílico (250 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con ácido clorhídrico (180 ml, 1N), a continuación, con una solución acuosa de hidrógeno-carbonato sódico (20 ml, al 5%) y, entonces, dos veces con agua destilada (50 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y se evaporaron, luego, bajo presión reducida (2,7 kPa) a 40ºC. EL aceite pardo resultante (47,1 g) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (0,040-0,063 mm), eluyendo con diclorometano para dar el compuesto del título (19,66 g) en forma de aceite rojo. ^{1}H RMN, 400 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 3,1 (t, 2H); 3,5 (q, 2H); 4,5 (s, 2H); 4,6 (t, 1H); 7,3 (m, 6H); 7,6 (dd, J = 8 Hz y J = 1,5 Hz, 1H); 8 (d, J = 1,5 Hz, 1H). MS (EI): M^{+} 352 y 350 (5%), 321 y 319 (20%), 91 (100%).

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Ejemplo de referencia 10

(a) (R,S)-3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]-oxacin-7-il)-5-metil-hexanoato etílico

Una solución de éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-hexanoico [90 mg, Ejemplo de Referencia 11(a)] en diclorometano (5 ml), se trató con ácido trifluoroacético (2 ml). Después de agitar durante 30 min, la mezcla se evaporó a sequedad. El residuo se disolvió en dimetilformamida (10 ml), y la solución se trató con diisopropil-etilamina (96 mg), luego con ácido [3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil-acético (80 mg), y luego con hexafluorofosfato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3,tetrametil-uronio (96 mg). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, y a continuación, se dividió entre acetato etílico (50 ml) y ácido clorhídrico acuoso (50 ml, 1M). La fase orgánica se lavó con bicarbonato sódico acuoso (50 ml), luego se secó sobre sulfato de magnesio y, a continuación, se evaporó. El residuo se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice, eluyendo con una mezcla de acetato etílico y ciclohexano (1:1, v/v) para dar el compuesto del título (95 mg) en forma de aceite incoloro.

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 10(a), pero utilizando éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoico [Ejemplo de Referencia 11(b)], se preparó (R,S) 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoato etílico, en forma de espuma de color crema.

(c) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 10(a), pero utilizando éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-propanoico [Ejemplo de Referencia 11(c)], se preparó (R,S) 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-propanoato etílico, en forma de sólido blanco.

(d) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 10(a), pero utilizando éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-propanoico [Ejemplo de Referencia 11(d)], se preparó (R,S) 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-propanoato etílico, en forma de sólido blanco.

(e) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 10(a), pero utilizando éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoico [Ejemplo de Referencia 11(e)], se preparó (R,S) 3-(4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoato etílico, en forma de aceite incoloro.

(f) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 10(a), pero utilizando éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoico [Ejemplo de Referencia 11(e)], y ácido 3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)-propanoico (Ejemplo de Referencia 14) se preparó (R,S) 3-(4-[3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)-propionil]-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoato etílico, en forma de goma incolora.

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Ejemplo de referencia 11

(a) Éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-hexanoico

Una mezcla de éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-5-metil-hex-2-enoico [240 mg, Ejemplo de Referencia 4(b)] y 10% de paladio sobre carbón (40 mg) en etanol (30 ml), se trató con formiato de amonio sólido (2 g), y se calentó a 60ºC durante 1 hora. Se agregaron partes alícuotas adicionales de paladio sobre carbón (40 mg) a intervalos horarios durante 5 horas. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas, y el filtrado se evaporó a bajo volumen y, luego, se dividió entre acetato etílico (50 ml) y agua (50 ml). La fase orgánica se secó sobre sulfato de magnesio y se evaporó para dar el compuesto del título (200 mg).

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 11(a), pero utilizando éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pent-2-enoico [Ejemplo de Referencia 4(c)], se preparó éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoico.

(c) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 11(a), pero utilizando éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-prop-2-enoico [Ejemplo de Referencia 4(d)], se preparó éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-fenil-propanoico.

(d) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 11(a), pero utilizando éster etílico de ácido (E)- y (Z)-
3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o--tolil-prop-2-enoico [Ejemplo de Referencia
4(e)], se preparó éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-3-o-tolil-propanoico.

(e) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 11(a), pero utilizando éster etílico de ácido (E)- y (Z)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-but-2-enoico [Ejemplo de Referencia 4(f)], se preparó éster etílico de ácido (R,S)-3-(4-terc-butil-oxicarbonil-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-butanoico, en forma de aceite incoloro.

Ejemplo de referencia 12

7-Bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]-oxacina

Una solución de 4-acetil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacina (9,5 g, Ejemplo de Referencia 13) en metanol (200 ml), se trató con hidróxido sódico acuoso (50 ml, 3M), y se agitó a 50ºC durante 2 horas. La mezcla se evaporó hasta escaso volumen y luego se diluyó con agua (100 ml) y, entonces, se extrajo tres veces con diclorometano (200 ml). Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio y, a continuación, se evaporaron para dar el compuesto del título (6,0 g) en forma de aceite pardo.

Ejemplo de referencia 13

4-Acetil-7-bromo-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]-oxacina

Una mezcla de 4-bromo-2-hidroxiacetanilida (9,4 g), hidróxido sódico en polvo (6,56 g), aliquat 336 (2,0 g) y 1,2-dibromo-etano (30,8 g), en una mezcla de diclorometano (100 ml) y acetonitrilo (60 ml), se agitó a temperatura ambiente durante 16 horas, y se dejó reposar, a continuación, durante 24 horas. La mezcla se filtró a través de tierra de diatomeas y la almohadilla de filtro se lavó con diclorometano. El filtrado y los lavados combinados se evaporaron y el residuo se purificó por cromatografía instantánea (sílice, usando acetato etílico/ciclohexano 1:1, v/v como eluyente), para dar el compuesto del título (9,5 g) en forma de aceite claro.

Ejemplo de referencia 14

Ácido 3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)propanoico

Una solución de 3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)propanoato etílico (Ejemplo de Referencia 15) en metanol (50 ml) se trató con hidróxido sódico acuoso (5 ml, 1M). Después de agitar a 40ºC durante 2 horas, la mezcla se evaporó hasta bajo volumen y se dividió entre acetato etílico (50 ml) y agua (50 ml). La fase acuosa se separó y acidificó con ácido clorhídrico acuoso (10 ml, 1M). El precipitado resultante se secó a 60ºC para dar el compuesto del título (1,1 g).

Ejemplo de referencia 15

3-(2-o-tolil-amino-benzoxazol-6-il)propanoato etílico

Una solución de 3-(4-amino-3-hidroxifenil)-propionato etílico (1,94 g) en etanol (50 ml) se trató con isotiocianato de o-tolilo (1,66 g) y, luego, se calentó a 40ºC durante 2 horas. La mezcla se evaporó y, a continuación, se trató con etanol (50 ml), luego con diisopropil-carbodiimida (3 ml) y, luego, se agitó a 40ºC durante 1 hora. La mezcla se evaporó y el residuo se trató con éter dietílico (50 ml) y, seguidamente, se filtró. El filtrado se evaporó a sequedad y el residuo se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice, eluyendo con una mezcla de acetato etílico y ciclohexano (2:2, v/v) para dar el compuesto del título (1,6 g) en forma de aceite incoloro.

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Ejemplo de referencia 16

(a) Éster etílico de ácido 3-(4-benzoil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-butírico

A una mezcla agitada de éster etílico de ácido 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-butírico (0,110 g, Ejemplo de Referencia 17) y trietilamina (87,8 \mul) en tetrahidrofurano (10 ml), enfriada a 0ºC, y bajo atmósfera de argón, se agregó cloruro de benzoílo (22 \mul). La mezcla se agitó durante 1 hora a 0ºC, se dejó calentar a 20ºC, se agitó, entonces, a esta temperatura durante 2 horas y, a continuación, se trató con una parte alícuota adicional de cloruro de benzoílo (11 \mul). Después de agitar durante la noche, la mezcla de reacción se trató con agua (20 ml) y, luego, se extrajo tres veces con acetato etílico (25 ml). Los extractos combinados se secaron sobre sulfato de magnesio, se evaporaron (40ºC, 40 mbar). El residuo bruto (147 mg) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (20 mg, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula), eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (99:1, v/v) para dar el compuesto del título en forma de espuma blanca (132 mg). TLC: R_{F} 13/56 (ciclohexano:acetato etílico, 9:1, v/v). ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a una temperatura de 388ºK]: \delta 0,96 (d, J = 7 Hz, 3H); 1,16 (t, J = 7 Hz, 3H); 2,24 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 2,28 (s, 3H); 2,93 (m, 1H); 3,83 (s, 3H); 3,94 (m, 2H); 3,96 (s, 2H); 4,02 (m, 2H); 4,04 (q, J = 7 Hz, 2H); 6,63 (s ancho, 1H); 6,76 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 6,90 (s ancho, 1H); 6,99 (m, 2H); desde 7,10 hasta 7,20 (m, 4H); 7,34 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 7,41 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); 7,57 (d, J = 8 Hz, 1H); 7,67 (d, ancho, J = 9 Hz, 1H); 8,02 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,16 (s ancho, 1H); 8,24 (s ancho, 1H). MS (EI): 648 (M^{+}).

(b) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 16(a), pero utilizando cloruro de acetilo y 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico (Ejemplo de Referencia 1), y tras someter el producto de reacción a cromatografía instantánea sobre sílice, eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (6:4 a 7:3, v/v), se preparó éster etílico de ácido 3-(4-acetil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propiónico, en forma de espuma blanca. ^{1}H RMN [300 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, una mezcla de rotámeros]: \delta 1,17 (d, J = 7 Hz, 3H); desde 1,85 hasta 2,15 (banda ancha, 3H); 2,26 (s, 3H); 2,65 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 2,86 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); desde 3,70 hasta 3,95 (m, 9H); 4,06 (m, 2H); desde 6,40 hasta 7,70 (m, 8H); 7,81 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 7,95 (banda ancha, 1H); 8,48 (s ancho, 1H); 8,56 (banda ancha, 1H). MS (ES): 572 (M^{+}).

(c) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 16(a), pero utilizando 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico (Ejemplo de Referencia 1), se preparó 3-(4-benzoil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico, en forma de polvo blanco después de la trituración con éter diisopropílico. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, una mezcla de rotámeros]: \delta 1,17 (d, J = 7 Hz, 3H); 2,14 (t ancho, J = 7 Hz, 3H); 2,24 (s, 3H); 2,51 (m, 2H); 3,80 (s, 3H); 3,89 (m, 2H); desde 3,90 hasta 4,00 (m, 2H); 3,97 (s, 2H); 4,02 (m, 2H); 6,48 (banda ancha, 1H); 6,71 (banda ancha, 1H); 6,83 (banda ancha, 1H); desde 6,90 hasta 7,25 (m, 6H); 7,31 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); 7,40 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); 7,60 (banda ancha, 1H); 7,77 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 8,06 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,47 (s ancho, 1H); 8,54 (s ancho, 1H). MS (EI): 634 (M^{+}).

(d) Procediendo de manera similar al Ejemplo de Referencia 16(a), pero utilizando cloruro de succinil-etilo y 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico (Ejemplo de Referencia 1), y tras someter el producto de reacción a cromatografía instantánea sobre sílice, eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (9:1 a 1:1, v/v), se preparó 4-(7-(2-etoxicarbonil-etil)-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-il)-4-oxo-butanoato etílico, en forma de espuma blanca. ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, una mezcla de rotámeros]: \delta 1,16 (m, 6H); 2,26 (s, 3H); 2,52 (m, 2H); 2,64 (t ancho, J = 7,5 Hz, 4H); 2,87 (t ancho, J = 7,5 Hz, 2H); desde 3,75 hasya 3,90 (m, 9H); 4,05 (m, 4H); desde 6,50 hasta 6,85 (banda muy ancha, 2H); 6,95 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); desde 7,05 hasta 7,20 (m, 3H); desde 7,30 hasta 7,75 (banda muy ancha, 2H); 7,79 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,00 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 8,21 (s ancho, 1H); 8,27 (banda ancha, 1H). MS (EI): 658 (M^{+}).

Ejemplo de referencia 17

Éster etílico de ácido 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il-butírico

A una solución agitada de éster terc-butílico de ácido 7-(2-etoxicarbonil-1-metil-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-il)-carboxílico (376 mg, Ejemplo de Referencia 18) en diclorometano (4 ml) a 0ºC, se agregó ácido trifluoroacético (574 \mul). Después de agitar a 0ºC durante 2 horas, se agregó una parte alícuota adicional de ácido trifluoroacético (3,5 ml), y se prosiguió la agitación a 0ºC durante 4 horas más. La mezcla de reacción se vertió sobre una mezcla de hielo (75 ml) y solución de hidróxido sódico (55 ml, 1M). La mezcla resultante se extrajo tres veces con diclorometano (50 ml). Los extractos combinados se lavaron dos veces con agua (20 ml), se secaron, a continuación, sobre sulfato de magnesio, y se evaporaron, entonces, (40 mbar, 40ºC). EL residuo se sometió a cromatografía instantánea (20 g de sílice, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula), eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (99:1, v/v) para dar el compuesto del título en forma de polvo blanco (279 mg). TLC: R_{F} = 43/64 (diclorometano:metanol, 9:1). ^{1}H RMN [250 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a una temperatura de 373ºK)]: \delta 1,16 (t, J = 7 Hz, 3H); 1,23 (d, J = 7,5 Hz, 3H); 2,28 (s, 3H); desde 2,45 hasta 2,55 (m, 2H); 3,06 (m, 1H); 3,25 (m, 2H); 3,69 (m, 2H); 3,82 (s, 2H); 3,85 (s, 3H); 4,05 (q, J = 7 Hz, 2H); 5,73 (banda ancha, 1H); 6,43 (dd, J = 8 y 2 Hz, 1H); 6,50 (d, J = 2 Hz, 1H); 6,70 (dd, J = 9 y 1,5 Hz, 1H); 6,81 (d, J = 1,5 Hz, 1H); 6,97 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); desde 7,10 hasta 7,30 (m, 3H); 7,71 (d ancho, J = 9 Hz, 1H); d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,25 (s ancho, 1H); 8,29 (s ancho, 1H). MS (EI): 544 (M^{+}).

Ejemplo de referencia 18

Éster terc-butílico de ácido 7-(2-etoxicarbonil-1-metil-etil)-4-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-il-carboxílico

Una mezcla de ácido [3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acético (0,536 g) y éster terc-butílico de ácido 7-(2-etoxicarbonil-1-metil-etil)-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico (396 mg, Ejemplo de Referencia 19) en tetrahidrofurano (10 ml), que contiene tamices moleculares de 4 Angström (0,5 g), se trató con trietilamina (638 \mul), hexafluorofosfato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (518 mg) y 4-dimetil-aminopiridina (14 mg). Después de agitar durante 5 horas, se agregaron partes alícuotas adicionales de ácido [3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acético (0,178 g) y hexafluorofosfato de O-(7-aza-benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametil-uronio (172 mg), y se continuó agitando durante 18 horas más. La mezcla de reacción se filtró a través de celita y la almohadilla del filtro se lavó con acetato etílico (50 ml). El filtrado y lavados combinados se lavaron tres veces con cloruro de amonio acuoso saturado (20 ml), se secaron a continuación sobre sulfato de magnesio, y luego, se evaporaron (40ºC, 40 mbar). El residuo (1,2 g) se sometió a cromatografía (36 g de sílice, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula), eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (70:30, v/v) para dar el compuesto del título, en forma de polvo blanco (379 mg). TLC: R_{F} = 15/65 (ciclohexano:acetato etílico, 1:1). ^{1}H RMN (400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a temperatura ambiente, los presentes inventores observan una mezcla de rotámeros): \delta 1,14 (t, J = 7 Hz, 3H); 1,24 (d, J = 7 Hz, 3H); 1,48 (s, 9H); 2,26 (s, 3H); 2,58 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 3,17 (m, 1H); 3,64 (m, 2H); desde 3,75 hasta 3,90 (m, 7H); 4,04 (q, J = 7 Hz, 2H); desde 6,55 hasta 6,85 (banda muy ancha, 2H); 6,96 (t, J = 7,5 Hz, 1H); 7,00 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); desde 7,10 hasta 7,20 (m, 2H); 7,46 (banda ancha, 1H); 7,64 (s ancho, 1H); 7,78 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,01 (d, J = 8 Hz, 1H); 8,48 (s, 1H); 8,54 (s ancho, 1H). MS (EI): 644 (M^{+}).

Ejemplo de referencia 19

Éster terc-butílico de ácido 7-(2-etoxicarbonil-1-metil-etil)-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico

A una suspensión agitada de dihidróxido de paladio sobre carbón (240 mg, al 20%) en ácido acético, se agregó éster terc-butílico de ácido 4-bencil-7-(2-etoxicarbonil-1-metil-vinil)-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico (0,905 g, Ejemplo de Referencia 20), y se sometió a hidrogenación (30 bar) a 15ºC durante la noche. La mezcla bruta resultante se filtró a través de celita y la almohadilla de filtro se lavó con acetato etílico. El filtrado y los lavados combinados se evaporaron (40 mbar, 40ºC). EL residuo se sometió a cromatografía (30 g de sílice, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula), eluyendo con diclorometano para dar el compuesto del título en forma de aceite incoloro (485 mg). TLC: R_{F} = 25/65 (ciclohexano:acetato etílico, 7:3, v/v). ^{1}H RMN (400 MHz, (CD_{3})_{2}SO): \delta 1,14 (m, 6H); 1,48 (s, 9H); 2,47 (d, J = 7,5 Hz, 2H); 3,00 (m, 1H); 3,22 (m, 2H); 3,57 (m, 2H); 4,01 (q, J = 7 Hz, 2H); 5,90 (banda ancha, 1H); 6,47 (d, J = 8 Hz, 1H); 6,70 (dd, J = 8 y 2 Hz, 1H); 7,20 (banda ancha, 1H). MS (EI): 348 (M^{+}).

Ejemplo de referencia 20

Éster terc-butílico de ácido 4-bencil-7-(2-etoxicarbonil-1-metil-vinil)-3,4-dihidro-2H-quinoxalin-1-carboxílico

Una mezcla de 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propionato etílico (4,4 g, Ejemplo de Referencia 1), tributilamina (50 ml), tri-orto-tolil-fosfina (177 mg), y acetato de paladio (444 mg), se calentó durante 15 min a 80ºC, a continuación, se trató con crotonato etílico (2,74 ml), y la mezcla resultante se calentó durante la noche a 120ºC. Después de enfriar a 20ºC, la mezcla de reacción se trató con ácido clorhídrico (350 ml, 1M), y se extrajo cuatro veces con acetato etílico (200 ml). Los extractos combinados se lavaron con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (200 ml), luego con agua (200 ml) y, seguidamente, se secaron sobre sulfato de magnesio, y se evaporaron. El residuo se sometió a cromatografía sobre sílice (260 g, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula), eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (95:5, v/v), para dar el compuesto del título en forma de aceite incoloro (910 mg). Espectro de ^{1}H RMN (400 MHz, (CD_{3})_{2}SO: \delta 1,23 (t, J = 7 Hz, 3H); 1,49 (s, 9H); 2,47 (d, J = 1,5 Hz, 3H); 3,49 (m, 2H); 3,78 (m, 2H); 4,11 (q, J = 7 Hz, 2H); 4,62 (s, 2H); 6,04 (m, 1H); 6,64 (d, J = 9 Hz, 1H); 7,19 (dd, J = 9 y 1 Hz, 1H); 7,27 (m, 3H); 7,36 (t ancho, J = 7,5 Hzz, 2H); 7,63 (s ancho, 1H). MS (EI): 436 (M^{+}).

Ejemplo de referencia 21

3-(4-(3-dimetilamino-propionil)-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)- propanoato etílico

Una mezcla agitada de 3-(4-acriloil-1-{[2-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil]-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico (283 mg, Ejemplo de Referencia 22), y metilamina (115 \mul) en etanol (5 ml), se calentó a reflujo durante 8 horas, se trató, a continuación, con una parte alícuota adicional de metilamina (50 \mul), y se calentó entonces a reflujo durante 2 horas más. La mezcla de reacción se enfrió a 20ºC, se diluyó seguidamente con acetato etílico, se trató con ácido clorhídrico (50 ml, 0,1M), y se separó. La fase de acetato etílico se lavó con bicarbonato sódico acuoso saturado (10 ml), se lavó, a continuación, tres veces con agua (10 ml), se secó sobre sulfato de magnesio, y se evaporó bajo presión reducida. La fase acuosa anterior se extrajo tres veces con diclorometano (50 ml). Los extractos de diclorometano se combinaron con el anterior residuo de acetato etílico, se secó sobre sulfato de magnesio, y seguidamente, se evaporó bajo presión reducida. El residuo bruto (331 mg) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (30 g, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula),eluyendo con una mezcla de diclorometano y metanol (99:1 a 96:4, v/v), para dar el compuesto del título, en forma de espuma blanca (275 mg). ^{1}H RMN, [400 MHz, (CD_{3})_{2}
SO, a una temperatura de 383ºK]: \delta 1,20 (t, J = 7 Hz, 3H); 2,19 (s, 6H); 2,28 (s, 3H); desde 2,55 hasta 2,70 (m, 6H); desde 2,75 hasta 3,00 (m, 2H); desde 3,80 hasta 3,90 (m, 2H); 3,83 (s, 2H); 3,86 (s, 3H); 3,90 (m, 2H); 4,11 (q, J = 7 Hz, 2H); 6,67 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 6,81 (s ancho, 1H); 6,99 (t ancho, J = 7,5 Hz, 1H); desde 7,05 hasta 7,25 (m, 3H); 7,42 (s ancho, 1H); 7,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,69 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 7,98 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,17 (s ancho, 1H); 8,25 (s ancho, 1H). MS (CI): 630 (MH^{+}).

Ejemplo de referencia 22

3-(4-acriloil-1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propanoato etílico

A una suspensión agitada de éster etílico de ácido 3-(1-{[3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil}-1,2,3,4-tetrahidro-quinoxalin-6-il)-propiónico (0,229 g, Ejemplo de Referencia 1) y trietilamina (680 \mul) en tetrahidrofurano (10 ml), enfriada a 0ºC, y bajo atmósfera de argón, se agregó bromuro de 3-bromo-propionilo (262 \mul). Después de agitar a 0ºC durante 1 hora y, a continuación, a 20ºC durante la noche, la mezcla se trató con bromuro de 3-bromo-propionilo (90 \mul) y se continuó la agitación durante 2 horas a 21ºC. La mezcla de reacción se trató con agua (25 ml) y, después de agitar durante 15 min a 20ºC, la mezcla se extrajo tres veces con acetato etílico (25 ml). Los extractos combinados se lavaron con bicarbonato sódico acuoso saturado (10 ml), se lavaron, entonces, cuatro veces con agua (10 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio y, a continuación, se evaporaron a sequedad bajo presión reducida (40ºC, 40 mbar). El residuo (1,7 g) se sometió a cromatografía instantánea sobre sílice (50 g, 0,040-0,063 mm de tamaño de partícula), eluyendo con una mezcla de ciclohexano y acetato etílico (1;1, v/v), para dar el compuesto del título en forma de espuma amarilla (550 mg). TLC: R_{F} = 30/72, sílice, elución con una mezcla de diclorometano y metanol (9:1, v/v). ^{1}H RMN [400 MHz, (CD_{3})_{2}SO, a una temperatura de 373ºK]: \delta 1,20 (t, J = 7 Hz, 3H); 2,28 (s, 3H); 2,64 (t. J = 7,5 Hz, 2H); 2,91 (t, J = 7,5 Hz, 2H); 3,81 (s, 3H); 3,84 (s, 2H); 3,87 (m, 2H); 3,93 (m, 2H); 4,11 (q, J = 7 Hz, 2H); 5,68 (dd, J = 10,5 y 2 Hz, 1H); 6,21 (dd, J = 17 y 2 Hz, 1H); 6,38 (dd, J = 17 y 10,5 Hz, 1H); 6,58 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 6,75 (s ancho, 1H); 6,99 (t ancho, J = 7,6 Hz, 1H); desde 7,10 hasta 7,25 (m, 4H); 7,57 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 7,69 (d ancho, J = 8 Hz, 1H); 7,92 (d, J = 8,5 Hz, 1H); 8,18 (s ancho, 1H); 8,28 (s ancho, 1H). MS (EI): 584 (M^{+}).

Procedimientos de ensayo in vitro e in vivo 1. Efectos inhibitorios de los compuestos sobre la adhesión celular, dependiente de VLA4, a fibronectina y VCAM 1.1 Marcado metabólico de células RAMOS

Las células RAMOS (una línea celular pre-B de ECACC, Porton Down, RU) se cultivan en medio de cultivo RPMI (Gibco, RU), suplementado con suero de ternero fetal al 5% (FCS, Gibco, RU). Antes del ensayo, las células se suspenden a una concentración de 0,5 x 10^{6} células/ml de RPMI y se marcan con 400 \muCi/100 ml de [^{3}H]-metionina (Amersham, RU) durante 18 horas a 37ºC.

1.2 Preparación de placas de 96 pocillos para ensayos de adhesión

Placas Cytostar (Amersham, RU) se recubrieron con 50 \mul/pocillo de 3 \mug/ml VCAM-1 soluble humano (R&D Systems Ltd., RU) o 28,8 \mug/ml de fibronectina tisular humana (Sigma, RU). En los pocillos de unión inespecífica de control, se agregaron 50 \mul de solución salina tamponada con fosfato. Las placas se dejaron secar, entonces, en un incubador a 25ºC durante la noche. Al día siguiente, las placas se bloquearon con 200 \mul/pocillo de tampón Pucks (Gibco, RU), suplementado con BSA al 1% (sigma, RU). Las placas se dejaron a temperatura ambiente, en la oscuridad, durante 2 horas. A continuación, se retiró el tampón de bloqueo y las placas se secaron invirtiéndolas y dando suaves golpes sobre un pañuelo de papel. Se agregaron 50 \mul/pocillo de dimetilsulfóxido al 3,6% en tampón Pucks, suplementado con cloruro de manganeso 5 mM (para activar el receptor de integrina, Sigma, RU) y BSA al 0,2% (Sigma, RU) a los pocillos de ensayo de unión de control y de unión no específica apropiados. Se agregaron a los pocillos de ensayo 50 \mul/pocillo de los compuestos de ensayo a las concentraciones adecuadas, diluidos en dimetilsulfóxido al 3,6%, en tampón Pucks suplementado con cloruro de manganeso 5 mM y BSA al 0,2%.

Las células marcadas metabólicamente se suspendieron a 4 x 10^{6} células/ml en tampón Pucks, que se suplementó con cloruro de manganeso y BSA de la forma descrita anteriormente. Se agregaron a todos los pocillos de placas 50 \mul/pocillo de células en dimetilsulfóxido al 3,6% en tampón Pucks, y los correspondientes suplementos.

Se encuentra disponible el mismo procedimiento para placas recubiertas con VCAM-1 o fibronectina, y los datos se determinan para la inhibición mediante los compuestos de la unión celular a ambos sustratos.

1.3 Rendimiento del ensayo y análisis de datos

Las placas que contienen células en los ensayos de control o de compuestos se incuban en la oscuridad a temperatura ambiente durante 1 hora.

A continuación, las placas se someten a recuento sobre un contador de escintilación Wallac Microbeta (Wallac, RU) y los datos recopilados se procesan en Microsoft Excel (Microsoft, EE.UU.). Los datos se expresaron como CI_{50}, a saber, la concentración de inhibidor a la que se produce 50% de la unión de control. La unión porcentual se determina a partir de la ecuación:

\{[(C_{TB} - C_{NS}) - (C_{I} - C_{NS})]/(C_{TB} - C_{NS})\} \ x \ 100 = % \ de \ unión

en donde C_{TB} es el recuento de unión a pocillos recubiertos con fibronectina (o VCAM-1) sin presencia de inhibidor, C_{NS} es el recuento registrado en pocillos sin sustrato, y C_{I} es el recuento presente en los pocillos que contienen un inhibidor de la adhesión celular.

"Los datos compuestos de esta invención se expresan para CI_{50} para la inhibición de la adhesión celular a fibronectina y VCAM-1. Compuestos particulares de la invención inhiben la adhesión celular a fibronectina y VCAM-1 con CI_{50} dentro del intervalo de 100 micromolar a 0,1 nanomolar. Compuestos preferidos de la invención inhiben la adhesión celular a fibronectina y VCAM-1 con CI_{50} dentro del intervalo de 10 nanomolar a 0,1 nanomolar".

2. Inhibición de la inflamación de las vías respiratorias en el ratón y la rata, inducida por antígeno 2.1 Sensibilización de los animales

Las ratas (Brown Norway, Harland Olac, RU) se sensibilizan los días 0, 12 y 21 con ovalbúmina (100 \mug, intraperitoneal [i.p.], Sigma, RU), administrada con coadyuvante de hidróxido de aluminio (100 mg, i.p., Sigma, RU), en solución salina (1 ml, i.p).

Adicionalmente, los ratones (C57) se sensibilizan los días 0 y 12 con ovalbúmina (10 \mug, i.p.), administrada con coadyuvante de hidróxido de aluminio (20 mg, i.p.) en solución salina (0,2 ml, i.p.).

2.2 Estimulación antigénica

Las ratas son estimuladas cualquier día entre los días 28-38, en tanto que los ratones lo son cualquier día entre los días 20-30.

La estimulación de los animales se lleva a cabo por exposición durante 30 min (ratas) o 1 hora (ratones) a un aerosol de ovalbúmina (10 g/l), generado por un nebulizador ultrasónico (de Vilbiss Ultraneb, EE.UU.) y transferido a una cámara de exposición.

2.3 Protocolos de tratamiento

Los animales son tratados de la forma requerida, antes o después de la estimulación antigénica. Los compuestos hidrosolubles de esta invención se pueden preparar en agua (para administración oral, p.o), o en solución salina (para administración intratraqueal, i.t.). Los compuestos no solubles se preparan como suspensiones, triturando y degradación ultrasónica del sólido en metilcelulosa al 0,5% / polisorbato 80 al 0,2% en agua (para administración p.o., ambos de Merck UK Ltd. RU), o solución salina (para administración i.t.). Los volúmenes de dosis son: para la rata, 1 ml/kg p.o. o 0,5 mg/kg i.t.; en el caso del ratón, 10 ml/kg, p.o., o 1 ml/kg, i.t.

2.4 Evaluación de la inflamación de las vías respiratorias

La acumulación celular en los pulmones se evalúa 24 horas después de la estimulación (ratas), o 48-72 horas después de la estimulación (ratones). Los animales son sacrificados por eutanasia con pentobarbital sódico (200 mg/kg, i.p., Pasteur Merieux, Francia) y la tráquea se canula de inmediato. Se recuperan células de la luz de las vías respiratorias por lavado bronco-alveolar (BAL) y del tejido pulmonar por desagregación enzimática (colagenasa, Sigma, RU), de la forma siguiente:

La técnica BAL se lleva a cabo haciendo pasar a través de las vías respiratorias 2 partes alícuotas (cada una de 10 ml/kg) de medio RPMI 1640 (Gibco, RU), que contiene suero bovino fetal al 10% (FCS, Serotec Ltd., RU). Las partes alícuotas de BAL recuperadas se combinan y se procede al recuento celular de la forma descrita más adelante.

Inmediatamente después del BAL, se hace pasar RPMI 1640/FCS a través de los vasos sanguíneos pulmonares para separar la combinación hemática de células. Se retiran los lóbulos pulmonares y se cortan en secciones de 0,5 mm. Las muestras (ratas: 400 mg; ratones: 150 mg) de tejido pulmonar homogéneo de incuban en RPMI 1640/FCS con colagenasa (20 U/ml durante 2 horas y, a continuación, 60 U/ml durante 1 hora, 37ºC) para desagregar las células del tejido. Las células recuperadas se lavan en RPMI 1640/FCS.

El recuento de leucocitos totales recuperados de la luz de las vías respiratorias y del tejido pulmonar se lleva a cabo en un contador automático de células (Cobas Argos, EE.UU.). Se efectúan recuentos diferenciales de eosinófilos, neutrófilos y células mononucleares por microscopia óptica de preparaciones de cito-centrifugación teñidas con tinción de Wright-Giemsa (Sigma, RU). Las células T se cuentan por citometría de flujo (EPICS XL, Coulter Electronics, EE.UU.), usando anticuerpos marcados con fluoróforos contra CD2 (un marcador global de células T usado para cuantificar el total de células T), CD4, CD8 y CD25 (un marcador de células T activadas). Todos los anticuerpos fueron suministrados por Serotec Ltd., RU.

2.5 Análisis de datos

Los datos celulares se expresaron como número medio de células en grupos no estimulados, estimulados y tratados con vehículo, y en grupos estimulados y tratados con compuestos, incluido el error estándar de las medias. El análisis estadístico de la diferencia entre los grupos de tratamiento se evaluó usando el análisis de una sola vía de varianza a través del ensayo de Mann-Whitney. Cuando p < 0,05, no hubo significación estadística.

Claims

1. Un compuesto de la fórmula (Ia):

\vskip1.000000\baselineskip

17

\vskip1.000000\baselineskip

en el que:

R^{2} significa hidrógeno, halógeno, alquilo-(C_{1-4}) o alcoxi-(C_{1-4});

R^{3} es arilo opcionalmente sustituido;

A^{1} significa etileno;

Ar^{1} es fenileno opcionalmente sustituido;

L^{4} significa alquileno-(C_{1-4});

Y es carboxi;

Z^{1} significa O; y

"arilo" como grupo o parte de un grupo, significa: (i) un resto carbocíclico aromático, monocíclico o multicíclico, opcionalmente sustituido, de 6 a 14 átomos de carbono; o (ii) un resto carbocíclico aromático, multicíclico, parcialmente saturado y opcionalmente sustituido, en el que un arilo y un grupo cicloalquilo o cicloalquenilo están fusionados para formar una estructura cíclica, en donde el grupo arilo está opcionalmente sustituido con uno o múltiples sustituyentes arilo seleccionados de acilo, acilamino, alcoxi, alcoxicarbonilo, alquilen-dioxi, alquil-sulfinilo, alquil-sulfonilo, alquiltio, aroílo, aroil-amino, arilo, aril-alquiloxi, aril-alquil-oxicarbonilo, aril-alquiltio, ariloxi, aril-oxicarbonilo, aril-sulfinilo, aril-sulfonilo, ariltio, carboxi, ciano, halo, heteroaroílo, heteroarilo, heteroaril-alquiloxi, heteroaroilamino, heteroariloxi, hidroxi, nitro, trifluorometilo, y alquilo opcionalmente sustituido con arilo, heteroarilo,
hidroxilo;

y los correspondientes N-óxidos; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de tales compuestos y sus N-óxidos.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{3} es fenilo o fenilo sustituido con uno o dos grupos ariloxi, ciano, halo, alcoxi-(C_{1-4}), alquilo-(C_{1-4}), nitro o CF_{3}.

3. Un compuesto según la reivindicación 2, en el que R^{3} es fenilo sustituido en posición 2 con alquilo-(C_{1-4}).

4. Un compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que Ar^{1} es p-fenileno o p-fenileno sustituido en posición 3 con halo, alquilo-(C_{1-4}), alcoxi-(C_{1-4}), alquil-(C_{1-4})-tio, alquil-(C_{1-4})-sulfinilo, o alquil-(C_{1-4})-sulfonilo.

5. Un compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que L^{4} es metileno.

6. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que L^{4} es metileno, Ar^{1} es p-fenileno opcionalmente sustituido, y R^{3} es fenilo opcionalmente sustituido.

7. Un compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que R^{2} es hidrógeno.

\newpage

8. Un compuesto según cualquier reivindicación anterior, en el que L^{1} es un grupo

18

en el cual R^{5} es hidrógeno o alquilo-(C_{1-4}), y R^{15} es hidrógeno o alquilo-(C_{1-4}), en donde R^{5} es hidrógeno y R^{15} es arilo opcionalmente sustituido.

9. Un compuesto según la reivindicación 8, en el que L^{1} es un grupo

19

en el cual R^{15} es hidrógeno, alquilo-(C_{1-4}), o arilo opcionalmente sustituido.

10. Un compuesto según la reivindicación 9, en el que L^{1} es un grupo

20

11. Un compuesto según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en el que L^{1} es un grupo

21

en el cual R^{5} es hidrógeno o alquilo-(C_{1-4}), y R^{15a} es hidrógeno o alquilo-(C_{1-4}), o en donde R^{5} es hidrógeno y R^{15a} significa arilo opcionalmente sustituido.

12. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que R^{2} es hidrógeno, R^{3} es fenilo 2-sustituido, Ar^{1} es m-fenileno o p-fenileno opcionalmente sustituido, y L^{1} es un grupo

22

en el cual R^{15} significa hidrógeno, alquilo-(C_{1-4}), o arilo opcionalmente sustituido; y los correspondientes N-óxidos y sus profármacos estéricos; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos, y sus N-óxidos y profármacos estéricos.

13. Un compuesto según la reivindicación 1, seleccionado de:

\newpage

ácido 3-(4-([3-metoxi-4-(3-o-tolil-ureido)-fenil]-acetil)-3,4-dihidro-2H-benzo[1,4]oxacin-7-il)-4-metil-pentanoico;

y los correspondientes N-óxidos, y sus profármacos estéricos; y sales y solvatos farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos, y de sus N-óxidos y profármacos estéricos.

14. Una composición farmacéutica que comprende una dosis efectiva de un compuesto según la reivindicación 1, o un correspondiente N-óxido, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, o de su N-óxido, en asociación con un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

15. Un compuesto según la reivindicación 1, o un correspondiente N-óxido, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, o del N-óxido del mismo, para ser usado en terapia.

16. Un compuesto según la reivindicación 1, o un correspondiente N-óxido del mismo; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, o del N-óxido del mismo, para ser usado en el tratamiento de un paciente afectado por, o sometido a trastornos que pueden mejorar por la administración de un inhibidor de la adhesión celular mediada por \alpha4\beta1.

17. Una composición según la reivindicación 14, para ser usada en el tratamiento de un paciente afectado por, o sometido a trastornos que pueden mejorar por la administración de un inhibidor de la adhesión celular mediada por \alpha4\beta1.

18. Un compuesto o composición según la reivindicación 1 ó 14, respectivamente, para ser usado en el tratamiento de enfermedades inflamatorias.

19. Un compuesto o composición según la reivindicación 1 ó 14, respectivamente, para ser usado en el tratamiento del asma.

20. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, o un correspondiente N-óxido del mismo; o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o del N-óxido del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de un paciente afectado por, o sometido a un trastorno que pueden mejorar por la administración de un inhibidor de la adhesión celular mediada por \alpha4\beta1, en donde dicho trastorno se selecciona del grupo consistente en inflamación articular, sinovitis aguda, diabetes autoinmune, encefalomielitis autoinmune, colitis, aterosclerosis, vasculopatías periféricas, enfermedades cardiovasculares, esclerosis múltiple, asma, psoriasis, re-estenosis, miocarditis, enfermedad intestinal inflamatoria, y división de células de melanoma en metástasis.

21. Uso de un compuesto según la reivindicación 1, o un correspondiente N-óxido del mismo; o de una sal o solvato farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto o de su N-óxido, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento del asma.