KR100620148B1

KR100620148B1 - 잔토실룸 번지아눔의 추출물 및 이들을 함유한 약제와화장품 조성물

Info

Publication number: KR100620148B1
Application number: KR1020017000047A
Authority: KR
Inventors: 에지오 봄바르델리; 가베타부루노
Original assignee: 인데나 에스피아
Priority date: 1998-07-07
Filing date: 1999-04-07
Publication date: 2006-09-05
Also published as: ATE213949T1; HUP0104923A2; RU2214817C2; AU749947B2; IL140702A; DE69900999D1; DK1096944T3; IL140702A0; NO20010033D0; JP2002520289A; AU3420699A; SK72001A3; CZ200121A3; EP1096944A1; EP1096944B1; PT1096944E; HUP0104923A3; PL191160B1; ITMI981542A1; CZ292523B6

Abstract

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 과피를 초임계 조건하 CO₂로 추출하여 얻어지는 추출물로서, 개선된 약리학적 특징을 갖는다.

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum), 초임계 ＣＯ₂추출, 진통제.

Description

잔토실룸 번지아눔의 추출물 및 이들을 함유한 약제와 화장품 조성물 {Extracts of Zanthoxylum Bungeanum, Pharmaceutical and Cosmetic formulations Containing Them}

도 1은 본 발명의 추출물의 고속액체클로마토그라피에 의한 클로마토그램 (HPLC chromatogram)이다.

본 발명은 잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 과피(pericarp)를 이산화탄소(carbon dioxide)로 추출(extraction)하여 얻은 신규의 추출물 및 이들을 함유한 약제와 화장품 조성물에 관한 것이다.

잔토실룸 번지아눔 과피는 통상 계절식품으로 스파이스(spices)로서 중국에서 사용되고 있다. 더우기, 중국이나 인도의 민속약으로 국소마취 및 이질치료시 사용되어 왔다. 나아가 1,8-시몰(1,8-cimol), 리나룰(linalool), 4-텔피놀(4-terpinol), 카리오필렌(caryophyllene), 리모넨(limonene)등과 같은 모노텔펜류 화합물을 함유한 정유는 곤충의 강한 구충제(repellent)라고 보고되어 있다.

최근, 유럽특허(EP) 제568,001호에는 이 과실이 피부에 항균효과가 있다고 기재되어 있다.

미국(US) 특허 제5,137,912호에는, 잔토실룸 시물런스(Zanthoxylum simulans)(Z.bungeanum의 동의어)의 뿌리껍질에서 추출된 켈크리스린 (chelcrythrine)은 혈전증(thrombosis) 방지에 유효하다고 개시되어 있으며, 일본(JP) 제01294657호(JP A₂ 平 1-294657)에 의하면, 유기용매에 의한 과피추출은 혀(tongue)에 적용시 30 초 이내에 국소마취효과를 나타내기 시작하여 20∼80 분간 지속되는 이소부틸아마이드류(isobutylamides)를 함유한 추출물을 제공하고 있다.

본 발명자들은 초임계 조건하 이산화탄소로 추출하여 얻어진 잔토실룸 번지아눔과피 추출물은 용매류에 의해 얻어진 추출물의 특징적 성질인 국소마취 효과의 발현없이 현저한 진통효과(analgesic activity)를 갖는다는 놀라운 사실을 발견하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 제품은 잔토실룸 번지아눔 과피를 이산화탄소로 150∼300 바, 바람직하게는 180∼230 바의 압력조건에서, 35∼55 ℃, 바람직하게는 35∼40 ℃의 온도에서 추출하고, 미세분말화하거나 펠렛화하여 제조한다.

얻어진 추출물은 추출수를 제거한후, 그대로 사용될 수 있으며 또는 지방족 알콜 및 지방족 탄화수소, 바람직하게는 n-헥산 또는 석유에텔과 같은 불혼화성 용매로 분배하여 정제하여 사용될 수 있다.

얻어진 추출물은 인체에 경피적으로 투여시 현저한 진통효과(analgesic activity)를 발휘하며; 따라서 약제 및 화장품 분야 둘다에서 유용하다.

약제분야에서는, 당뇨성 세관이상(diabetic microangiopathy)시 통증의 경감을 위해서, 치질통증, 화상통증 및 국소통증의 경감을 위해서 사용된다.

본 발명의 추출물의 또다른 적용분야는 소양증(itching) 치료시에도 사용된다는 것이다.

화장품분야에서는, 본 발명에 따른 추출물은, 탈모제크림(depilatory creams), 태양광선 노출후 사용될 수 있는 제형, 면도후 로숀 및 크림, 및 국소진통 및 항소양작용을 필요로하는 피부치료제로 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 추출물의 항소양효과(anti-itching activity)를 평가하였는바, 생체외에서 쥐를 모델로하여 좌골 신경-근육의 신근 디기토름 장근(extensor digitorum longus, EDL)을 사용하는 전기 생리학 측정장치로 평가하였다.

실험 쥐(랫트)로는 성장한 스프레이규-돌리(Sprague-Dawley) 랫트를 사용하고 심장내에 펜토탈(Penthotal) 과량을 투여하여 사망시켰다. 좌골신경의 장관(long tract)을 갖는 EDL근육을 해부하고, 링거용액이 채워진 전기 생리학측정을 위한 콘테이너에 담근후, 매 10 분마다 치환시켰다.

실험추출물은, 계면활성제를 첨가하고, 신경섬유, 신경근 연접점 및 근육에 접촉할 수 있도록 농도를 달리하여 분산시켰다. 전기 생리학적실험(electro physiological tests)을 위해서, 3M KCl로 채워진 세포내 마이크로전극 (intracellular microelectrode)을 전기현상(근육세포의 소형 단판전위-miniature endplate potentials; 단판전위-endplate potentials; 세포막전위-membrane potentials)의 자발적과 동시에 신경자극에 의한 유도를 기록하기 위하여 근육세포 내에 설치한다.

이와같은 목적을 위해서 신경은 자극인자(stimulator)와 연결시키고, 임의로 초당 한번 자극시켰다. 근육세포중 전기이벤트(electric events)를 신호증폭기 (signal amplifier)와 연결된 마이크로전극(microelectrode)으로 측정하였으며, 디지탈 역전류검출관(digital oscilloscope)를 통하여 볼 수 있도록 하였다.

본 발명의 추출물은 0.0005 내지 0.002 % 범위내 농도에서 실험할때 소형 단판전위의 주파수 증가 및 자발적 단판전위 출현이 있었는바, 신경근 연접 전달(neuromuscular synatic transmission)에 관한 강한 일과성 활성작용을 보이고 있음이 입증되었다.

대조적으로, 용매처리로 얻은 국소마취작용을 갖는 추출물은 신경충격의 전달을 감소시키고 억제하였다.

실험추출물의 진통작용을 10 명의 건강한 지원자를 대상으로하여 평가실험 또는 피부열감수성(skin thermal sensitivity)을 통하여 평가하였다.

가열이 진행중인 열소식자(thermal probe)를 실험약물과 대조약으로 견갑골부분(scapular area)을 각각 처리한 30 분후 설치하였다. 설치후 통증을 느낄 수 있는 온도를 측정하였다. 하기 실시예 1에 따라 제조된 잔토실룸 번지아눔 추출물을 0.5 % 함유한 하기 실시예 7에 따라 제조된 에물젼(emulsion) 0.5 ㎖를 투여하였다. 얻어진 결과는 다음과 같으며, 본 발명의 실험추출물의 진통효과를 하기 표 1에 나타내였다.

(표 1)

처치	To분	T₃₀분
대조군	45.7±1.0	45.3±0.4
본 발명의 추출물	46.0±0.8	47.2±0.4

본 발명의 추출물은 피부나 점막에 적용할 수 있도록 크림, 로숀, 폼, 겔의 제형으로 제제화할 수 있으며, 또한 연질 젤라틴캅셀, 경질젤라틴캅셀, 정제 또는 좌제등으로 제제화할 수 있으며; 바람직하게는 본 발명의 조성물은 추출물을 적당한 부형제와 함께 조성하여 피부(cutaneous) 치료용 크림 또는 폼으로 제제화하거나 전신경로(systemic route)용 연질-켈라틴캅셀, 츄어블정제 또는 좌제로 제제화할 수 있다.

전신경로용 투여를 위한 제형에서는 단일용량당 추출물을 5∼100 ㎎용량범위를 함유토록 하고, 반면 국소용 제형에서는 0.05 내지 1 %의 추출물을 함유토록 한다.

본 발명을 보다 상세히 예시하기 위하여 하기와 같은 실시예를 기재하며, 본발명이 이들 실시예로 한정되는 것은 아니다.

실시예 I

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 소수성 추출물의 제조.

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 과피 10 ㎏를, 하기 방법에 따라, 초임계 가스를 적용할 수 있고 추출물을 분획시킬 수 있는 응축기(condensers) 로서 2 개의 분리기(separators)가 장착된 20 L용 추출기에서 추출한다:

과피 10 ㎏을 수확한후 60 ℃이하의 온도에서 기계적으로 건조시키고, 큐브(cubes) 중에서 압출시킨후 다음과 같은 실험조건하 초임계조건에서 이산화탄소(CO₂)로 추출한다.

-온도: 추출기 중에서 35 ℃, 1 차 분리기 중에서는 30 ℃ 그리고 2 차 분리기 중에서는 20 ℃를 유지하고;

-압력: 추출기 중에서는 180 바, 1 차 분리기 중에서는 100 바 그리고 2 차 분리기 중에서는 50 바를 유지한다.

CO₂ 흐름은 45 분간 분당 10 L를 유지한다. 추출물을 2 차 분리기에서 농축시키고, 식물 매트릭스(Vegetable matrix) 중에 존재하는 대부분의 수분은 1 차 분리기에서 농축시킨다.

추출물을 2 차 분리기에서 진공하 40 ℃ 이하의 온도에서 건조하여 페이스트상 추출물 1.5 ㎏을 얻으며, 이는 약한 황색색상을 띄고, 강한 향내가 나며 이소부틸아마이드류가 약 25 중량% 함유되어 있다.

Hibar RT LiChrospher 100 RP-18 컬럼상에서 용리 푸로파일(1 ㎖/min)를 이용하여 HPLC 분석한 수치를 하기 표 2에 기재하였다. 주입량은 2 ㎎/㎖ 농도의 용액 5 μL였다. 클로마토그램은 도 1에 나타내었다.

(표 2)

시간 (분)	수분 (%)	아세토니트릴 (%)	경사곡선의 수 (No. of Gradientcurve)
0	60	40	-
20	60	40	6
30	10	90	6
35	60	40	6
40	60	40	6

실시예 Ⅱ

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 소수성추출물의 제조.

과피 10 ㎏을 수확한후 60 ℃ 이하의 온도에서 기계적으로 건조시키고, 큐브(cubes) 중에서 압출시킨후 다음과 같은 실험조건하 초임계 조건에서 이산화탄소(CO₂)로 추출한다:

-온도: 추출기 중에서 40 ℃, 1 차 분리기 중에서는 30 ℃ 그리고 2 차 분리기 중에서는 20 ℃를 유지하고;

-압력: 추출기 중에서는 205 바, 1 차 분리기 중에서는 100 바 그리고 2 차 분리기 중에서는 50 바를 유지한다.

CO₂ 흐름은 45 분간 분당 10 L를 유지한다. 추출물을 2 차 분리기에서 농축시키고, 식물 매트릭스(Vegetable matrix) 중에 존재하는 대부분의 수분은 1 차 분리기에서 농축시킨다. 추출물을 2 차 분리기에서 진공하 40 ℃ 이하의 온도에서 건조하여 페이스트상 추출물 1.5 ㎏을 얻으며, 이는 약한 황색/녹색 색상을 띄고, 실시예 I에서 얻은 추출물과 동일한 물리화학적 특성을 갖으며, 이소부틸아마이드류의 함량은 약 20 중량%였다.

실시예 Ⅲ

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 소수성추출물의 제조.

과피 10 ㎏을 수확한후 60 ℃ 이하의 온도에서 기계적으로 건조시키고, 큐브(cubes) 중에서 압출시킨후 다음과 같은 실험조건하 초임계 조건에서 이산화탄소(CO₂)로 추출한다 : 추출기 중에서 온도는 40 ℃이고, 압력은 230바 였다. 추출할 약물의 추출을 하기 위해 사용한 CO₂의 비율은 약물 ㎏당 27-45 ㎏이었다. 추출물은 20 ℃에서 50 바 조건으로 분리기에서 농축시킨다. 40 ℃ 이하의 온도에서 진공하 건조하여 페이스트상 추출물 1.3 ㎏을 얻으며, 이는 약한 황색/녹색 색상을 띄고, 실시예 I에서 얻은 추출물과 동일한 물리화학적 특성을 갖는다.

실시예 IV

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum)의 정제된 소수성추출물의 제조.

실시예 I에 따라 제조된 잔토실룸 번지아눔 과피의 소수성 추출물 0.5 ㎏을 95 % 수용성 메탄올 2.5 L중에 용해시키고 n-헥산 0.5 L씩으로 3 회 추출한다. 헥산층을 메탄올층 중에 잔여하는 이소부틸아마이드류를 표식자로 사용하여 메탄올로 역세척한다. 불활성 헥산층을 제거하고, 메탄올 층들을 모은후 물 0.6 L로 희석시키고 n-헥산 0.6 L로 2 회 재추출한다. 모아진 헥산층은 0.3 % 차콜로 탈색시키고 Na₂SO₄상에서 건조시킨후, 진공하 40 ℃ 이하 온도에서 기름상으로 농축시켜 꿀과 같은 점도의 기름상 추출물 0.02 ㎏을 얻으며, 이소부틸아마이드류가 약 50 중량% 함유되어 있다.

실시예 V

잔토실룸 번지아눔 알콜성 용액

100 ㎖ 중:

잔토실룸 번지아눔(오레일알콜중 20 %용액) 0.50 g

사이클로메치콘 20.00 g

알콜 적 량

-----------

100.0 ㎖

실시예 VI

잔토실룸 번지아눔 무알콜성 용액

100 ㎖ 중:

잔토실룸 번지아눔(오레일알콜중 20 %용액) 0.50 g

PPG-26 Buteth 26 및 5.00 g

PEG-40 수산화 피마자유

메틸클로로이소티아졸리논 및 0.10 g

메틸이소티아졸리논

정제수 적 량

-----------

100.0 ㎖

실시예 VII

잔토실룸 번지아눔 에물젼

100 g 중:

잔토실룸 번지아눔(오레일알콜중 20 %용액) 0.50 g

이소헥사데칸 5.00 g

글리세린 4.00 g

C_12-15알킬벤조에이트 2.00 g

사이클로메치콘 2.00 g

PEG-20 글리세릴 스테아레이트 및

글리세릴 스테아레이트 2.00 g

라노린 왁스 1.00 g

아크릴레이트/

C_10-30알킬아크릴레이트 클로스폴리머 0.50 g

세틸알콜 0.50 g

이미다졸리디닐유레아 0.30 g

페녹시에탄올 0.50 g

메틸파라벤 0.20 g

토코페롤 0.10 g

디소디움 EDTA 0.10 g

정제수 적 량

----------

100.0 g

실시예 Ⅷ

잔토실룸 번지아눔 유동성 에물젼

100 g 중:

잔토실룸 번지아눔(오레일알콜중 20 %용액) 0.50 g

PEG-20 글리세릴 스테아레이트 및

글리세릴 스테아레이트 10.00 g

C_10-18트리글리세라이드류 10.00 g

글리세린 5.00 g

맥아유 2.00 g

디메치콘 2.00 g

PPG-25 Laureth-25 2.00 g

세틸알콜 1.00 g

히드록실화된 라놀린 0.50 g

이미다졸리디닐 유리아 0.30 g

헥토라이트 (이)(Hectorite (e)) 하이드록시에틸 0.50 g

페녹시에탄올 및 메틸파라벤 및 에틸파라벤

및 푸로필파라벤 및 부틸파라벤 0.50 g

토코페롤 0.10 g

정제수 적 량

----------

100.0 g

Claims

잔토실룸 번지아눔(Zanthoxylum bungeanum) 과피를 35 내지 55 ℃의 온도범위에서 150 내지 300 바의 압력범위하에 초임계 조건하 CO₂로 추출하여 얻어지는, 이소부틸 아마이드류 (isobutyl amides)를 20 내지 50 중량% 범위로 포함된, 진통작용과 항소양작용을 갖는 잔토실룸 번지아눔 추출물.
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유효성분으로 제1항의 추출물과 부형제로 구성된 진통작용과 항소양작용을 갖는 약제학적 조성물.
유효성분으로 제1항의 추출물과 부형제로 구성된 화장품 조성물.