KR100530196B1 - 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는화합물, 그의 제법 및 그의 용도 - Google Patents

구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는화합물, 그의 제법 및 그의 용도 Download PDF

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Abstract

1) 화학식 1 로 나타내는 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체 구조를 갖는 화합물, 그의 약학적으로 허용가능한 염 및 상기 화합물의 용매 화합물 또는 상기 염의 용매 화합물; 2) 화합물 1) 의 제조 방법; 3) 화합물 1) 을 포함하는 의약 조성물; 4) 측쇄 구조로서 하나 이상의 화합물 1) 을 갖는 중합체; 5) 활성 성분으로서 하나 이상의 화합물 1) 또는 그의 중합체를 포함하는 코팅제; 및 6) 중합체 4) 및/또는 코팅제 5) 를 사용하여 제조된 성형 물품, 인공 장기, 의료 기구 및 세포 배양 장치.

Description

구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 화합물, 그의 제법 및 그의 용도{COMPOUNDS HAVING GLUCURONIC ACID DERIVATIVES AND GLUCOSAMINE DERIVATIVES IN THE STRUCTURE, PROCESS FOR PRODUCING THE SAME AND UTILIZATION THEREOF}
본 발명은 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 신규한 화합물, 상기 화합물의 제조 방법, 상기 화합물을 포함하는 약학적 조성물 및 그의 측쇄로서 상기 화합물을 포함하는 중합체, 그를 사용하여 제조된 성형물, 및 인공 장기, 의료 장치, 및 성분으로서 성형물을 사용하여 제조된 세포 배양 장치에 관한 것이다.
혈전증은 최근 서방국 및 일본에서 사망의 주요 원인 중 하나가 되었다. 그 원인에 심근경색 및 뇌경색과 같은 동맥성 질병이 포함된다면, 암을 능가하는 사망의 원인이 된다. 혈전증에는 각종 인자가 포함되어 있는데, 동맥경화증과 같은 혈관 장애가 종종 혈전증의 근거를 이룬다. 정상 혈관은 혈관 내피 세포에 의해 고도로 항혈전성이다. 그러나, 혈소판이 동맥경화증의 병소와 같은 혈관 장애 부위에서 활성화된 혈관 내피 세포, 또는 손상에 의해 노출된 혈관 내피하 조직에 점착해서, 병리학적 혈전을 형성하도록 한다. 병리학적 혈전 형성을 억제하는 약물로서, 혈소판 점착 또는 응집을 억제하는 약물, 즉, "항혈소판제" 가 주목되어 왔고, 폭넓은 임상 용도를 발견해왔다. 항혈소판제의 역사는 비교적 짧고, 상기 형태의 더 나은 약물의 개발이 요구된다.
상기한 바와 같이, 정상 혈관은 혈관 내피 세포에 의해 고도로 항혈전성이도록 되어 있다. 혈관 내피 세포의 역할에 대해서는 더욱 자세하게 논의될 것이다. 혈관 내피 세포는 전신성 혈관 내강을 계속적으로 덮는 단일층 세포군이다. 정상 혈관 내피 세포는 광범위한 역할, 예를 들어 ① 혈관 투과성 억제, ② 혈관 내강의 항-혈전작용, ③ 혈관 평활근의 수축 및 이완 조절, 및 ④ 혈관벽 세포의 성장 또는 유주를 통제한다. 따라서, 혈관 내피 세포는 이와같은 혈관을 만드는데 있어서 중추적이라고 말할 수 있다.
인간은 혈관과 함께 나이가 들고, 혈관벽은 나이와 함께 손상된다고 말한다. 혈관벽이 손상되고 파열된 경우, 혈관 붕괴는 심혈관성 질병, 예를 들어 심근경색, 대동맥류, 뇌졸중, 또는 괴사로서 나타난다. 혈관벽 파열의 가장 중요한 원인은 동맥경화증이다.
현재의 동맥경화증 예방 또는 치료는 대개 지질 대사 개선의 측면으로부터 접근되고, 약물로서 일반적으로 항고지방혈제가 사용된다. 동맥경화증 부위의 혈관 차단을 예방하기 위해 투여되는 다른 약물로는 항혈소판제 또는 항응고제가 있다. 그러나, 상기 약물은 혈관벽 파열을 긍정적으로 치료하지 않는다. 상기 약물은 파열의 원인이 되는 과지질혈증, 또는 파열 진행의 원인이 되는 혈전 형성을 억제함으로써 파열 진행을 예방하는 간접적 활성을 보인다.
동맥경화증의 발병 또는 진행에 대해, 혈관 내피 세포의 손상 또는 기능적 손실이 중요하고 필수불가결한 것으로 여겨진다. 전술한 바와 같이, 통상적인 치료법으로는, 혈관 파열의 근본적인 원인 제거를 위해, 단지 신체의 기능 회복만이 치료의 가장 중요한 척도인 혈관 내피 세포의 재생 및 기능 회복에 의존해 왔다. 따라서, 손상을 입고 그의 내인성 기능을 손실한 혈관 내피 세포의 기능적 회복 및 재생을 증진시키기 위한 치료법인 "혈관 내피 재생 치료법" 은, 통상적인 치료법의 결점을 극복할 수 있는 매우 유용한 치료법인 것으로 여겨진다. 그러나, 혈관 내피 재생 치료법에 사용가능한 약물이 실용화되지 않았고, 고품질의 약물 개발이 요구된다. 혈관 내피 재생 치료법의 예로서, 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 의 유전자가, 실험적으로 손상을 입힌 토끼의 혈관 내피 손상 부위에 도입되어 VEGF 를 발현하고, 그 효능이 조사된 연구 보고서 (Asahara, T. 등, Circulation, 94, 3291, 1996) 에 있다.
경피 경관 관상 혈관성형술 (PTCA) 은 혈관에 삽입된 기구 (氣球) 카테터를 팽창시켜서 (즉, 공기주입법) 동맥경화증의 진행 결과 형성된 좁은 부위를 팽창시키는 방법이다. 상기 방법은 관상 동맥경화증에 대한 확정된 치료법 중 하나이다. 그러나, 수술 6 개월 안에 30 내지 50 %의 환자에게서 재발협착증이 발견되어, 상기 방법은 중요한 문제를 나타내었다. 재발협착증은 공기주입법에 의해 야기되는 동맥경화증의 한 종류인 것으로 이해되며, 빠르게 진행된다. 공기주입법 기술을 위한 장치 및 카테터의 개선 외에도, 각종 약물을 사용한 치료가 지금까지 시도되었다. 이들은 아직 불충분하고, 더 나은 치료법 및 약물 개발이 요구된다. 혈관 내피 재생 치료법은 후-PTCA 재발협착증을 효과적으로 예방할 수 있고 (Asahara 등에 의한 보고서 참조), 상기 치료법에 사용되는 탁월한 약물 개발이 요구된다.
허혈성 질병, 예를 들어 심근경색의 예후는 많은 인자에 의해 영향받는데, 측부혈관 개발 정도가 예후에 대한 가장 중요한 결정 인자 중 하나인 것으로 생각되어 왔다. 측부혈관에 대한 충분한 개발의 존재 하에서는, 협착 또는 차단저해 (경색) 가 일어나더라도, 조직의 괴사 또는 허혈이 저해되고, 경색 크기 축소 및 예후 개선이 이루어진다. 측부 혈관 형성의 메카니즘으로서, 혈관내압 및 혈류 상의 변화가 강조되어 왔다. 그러나, 측부혈관이 형성되는 동안 혈관 내피 세포 또는 혈관 평활근 세포에서 관찰되는 DNA 합성에 수반되는 세포 분열상에 관한 보고서가 있다. 측부 혈관 형성 과정은 단순히 존재하는 문합성형된 혈관을 물리적 인자에 의해 팽창시키는 것이 아니라, 어느 정도의 과정은 혈관벽에 기여하는 세포 성장이 포함된 혈관신생 과정인 것으로 이해된다. 최근, "혈관형성 치료법" (예를 들어, Yanagisawa-Miwa, A. 등, Science, 257, 1401, 1992) 이라 불리는 새로운 치료법에 의해 허혈성 심장 질병을 치료하는 시도가 있었다. 혈관형성 치료법은 허혈 조직 주변의 혈관형성을 증진시킴으로써 측부혈관을 긍정적으로 안전히 하고 허혈 조직을 보호하는 시도이다. 그것은 소위 "약리학적 바이패스 치료법" 이라 불리는 새로운 치료법이다. 그러나, 상기 치료법은 아직 실용화되지 않았고, 탁월한 약물 및 그에 알맞는 사용가능한 치료 방법 개발이 요구된다. 상처 치료를 위한 혈관형성성 성장 인자 (예를 들어, 섬유아세포 성장 인자) 를 이용하는 시도 또한 있었다 (예를 들어, Hockel, M. 등, Arch. Surg., 128, 423, 1993 참조).
인공 장기는 인공 재료를 사용한 성형물에 의해 각종 생조직 및 장기, 예를 들어 심장, 혈관, 심장판, 폐, 췌장, 신장, 간, 피부, 및 점막, 또는 성분으로서 그를 사용한 장치의 기능을 보완하거나 대신하도록 고안된다. 인공 장기는 생체내 이식되거나, 혈관에 캐뉼라삽입함으로써 유도된 혈액과 접촉할 경우 그 기능을 나타낸다. 따라서, 그에 사용되는 재료는 신체에 해를 끼치지 않고 사용될 수 있는 성질, 즉, 생체적합성을 지녀야 한다. 인공 장기의 생체적합성을 정의하는 가장 중요한 생체내 반응은 혈전 형성 반응이다.
혈소판 점착 및 응집은 혈액 응고 단백질의 활성화와 함께 혈전 형성 반응에 참여하는 중요한 생물학적 반응에 속한다. 상기 반응은 정상 생체내 방어 시스템에 필수불가결한 지혈 기능을 위해 존재한다. 또한 혈액이 인공 장기와 접촉할 경우, 혈소판 점착 및 응집으로 인한 혈전 형성이 일어날 가능성이 있다. 혈전 헝성 후, 인공 장기는 그의 고유 기능을 수행할 수 없다. 혈전 형성돠 같은 불리함을 피하기 위해, 점착도 응집도 일으키지 않는 혈소판 재료, 즉, 항혈전성 재료를 개발하기 위한 시도가 있어왔다. 각종 연구가 활발히 이루어졌으나, 재료에 관한 연구는 아직 미흡하다. 탁월한 인공 장기 개발에 필수불가결한 더 나은 항혈전성 재료 개발이 요구된다.
혈전 형성을 피하기 위해, 혈액과 접촉 후 혈전을 형성하지 않는 재료, 즉, 항혈전성 재료를 개발하기 위한 시도가 있어왔다. 생체내 혈액에 직접적으로 접촉하는 것은 혈관 내피를 구성하는 혈관 내피 세포이고, 정상 혈관 내피 세포 상에서는 혈전이 형성되지 않는다. 물론, 가장 좋은 항혈전성 물질은 천연 항혈전성 물질인 혈관 내피 세포이다. 본래의 장기가 그렇듯, 혈액과 접촉하는 인공 장기의 표면이 혈관 내피 세포로 코팅되어 있다면, 혈전 형성 반응은 일어나지 않는다. 혈관 내피 세포의 항혈전성 특성을 긍정적으로 활용하는 인공 장기를 개발하려는 시도로서, 신생 혈관내막 치유 촉진성 인공 혈관의 임상적인 적용이 시도되었고, 몇가지 성공적인 결과가 있었다 (예를 들어, Noishiki, Y. 등, Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs., 27, 309, 1986). 고도의 세포친화성 물질 사용, 및 세포 침투 촉진을 위한, 다공성이 증가된 성형물과 같은 접근이 시도되었다. 그러나, 상기 세포 성장을 촉진하는 물질을 사용함으로써 혈관 내피 세포로 코팅을 촉진하는 시도는 거의 없었다.
인공 장기 외에도, 혈액과 접촉하게되는 의료 장치는, 혈액과의 접촉할 경우, 혈소판 점착 및 응집을 일으키는 불리함때문에, 바람직하게는 항혈전성 물질을 사용해야한다. 상기 이유로 보다 나은 항혈전성물질 개발이 요구된다.
또한, 혈관 내피 세포 성장을 촉진하는 활성을 갖는 물질이 세포 배양 조성물 또는 세포 배양 장치 재로로서 사용될 수 있다.
앞서 설명한 바로부터 분명해졌듯이, 탁월한 항혈전제 및 탁월한 항혈전성 물질을 제공하기 위한 의학적 실습은 중요한 문제이다.
또한, 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 물질 및 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 갖는 탁월한 고분자 물질을 제공하는 것은 세포 생물학에 있어서 의학적 실습 및 실험에 대해 중요한 문제이다.
상기 문제를 해결하기 위해, 본 발명의 발명자들이 예의 연구 하였다. 그 결과, 화학식 1 의 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물이 탁월한 혈소판 점착/응집 억제 활성을 갖는다는 것을 발견해냈다. 또한 탁월한 혈소판 점착 억제 활성을 갖는 측쇄 구조로서 상기 화합물을 갖는 중합체를 발견해냈다. 상기 발견으로부터 본 발명을 완성했다.
본 발명자들은 또한 화학식 1 의 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물이 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성 및 탁월한 혈관형성 촉진 활성을 갖는다는 것을 발견해냈다. 또한 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 갖는 측쇄 구조로서 상기 화합물을 갖는 고분자 물질을 발견해냈다. 상기 발견으로부터 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 하기 화학식 1 의 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물을 제공한다.
본 발명은 또한 히알루로난 또는 그 염을 해중합하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 화학식 1 의 화합물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 하나 이상의 하기 화학식 1 의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물은 혈전증 치료 및 예방을 위한 약물, 심혈관 질병 치료 및 예방을 위한 약물, 대뇌혈관 장애 치료 및 예방을 위한 약물, 및 말초 혈관 장애 치료 및 예방을 위한 약물에 유용하다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 하나 이상의 화학식 1 의 화합물을 포함하는 항혈소판제를 제공한다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 화학식 1 의 화합물을 포함하는 혈관 내피 세포 성장 촉진제를 제공한다. 혈관 내피 세포 성장 촉진제는 혈관 내피 재생 치료법을 위한 치료제 또는 예방제, 또는 혈관형성성 치료법을 위한 치료제 또는 예방제로서 유용하다.
본 발명은 또한 측쇄 구조로서 하나 이상의 화학식 1 의 화합물을 갖는 중합체를 제공한다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 하나 이상의 화학식 1 의 화합물 또는 상기 중합체를 포함하는 코팅제를 제공한다.
본 발명은 또한 재료로서 하나 이상의 상기 중합체를 사용한 성형물을 제공한다.
본 발명은 또한 하나 이상의 코팅제를 사용하여 제조된 성형물을 제공한다.
본 발명은 또한 성분으로서 하나 이상의 상기 성형물을 사용한 인공 장기를 제공한다.
본 발명은 또한 성분으로서 하나 이상의 상기 성형물을 사용한 의료 장치를 제공한다.
본 발명은 또한 활성 성분으로서 상기 중합체를 포함하는 세포 배양 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 성형물 및/또는 코팅제를 사용하여 제조된 세포 배양 장치를 제공한다.
본 발명을 실시하는 최상의 형태
[본 발명의 화합물]
본 발명의 화합물은 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 그 염의 용매화합물인 하기 화학식 1 의 화합물이다.
[식 중,
R1 은 보호기, 또는 임의의 하기 화학식 2 내지 5 를 나타내고 (식 중, R10 은 수소 원자, 보호기, 또는 임의의 하기 화학식 6 내지 8 을 나타내고, R11 은 수소 원자 또는 보호기를 나타내고, 단, R10 및 R11 이 각각 수소 원자 또는 보호기인 경우, R1 이 COOR4 에 대해 트랜스 형태 또는 시스 형태로 결합될 수 있거나,
-OR10
-NHR11
-CH2R11
-SR11
또는 R10 이 임의의 화학식 6 내지 8 일 경우, 화학식 6 내지 8 중, R13, R17 , R26 을 제외한 R12 내지 R28 이 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고, R13, R17 및 R26 은 각각 아지도기 또는 하기 화학식 9 를 나타낸다
-NR29R30
(식 중, R29 및 R30 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타냄)),
R2 내지 R8 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고,
R9 는 수소 원자, 보호기, 또는 하기 화학식 10 또는 11 을 나타내고
(식 중, R31 내지 R37 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타냄),
n 은 0 내지 25 의 정수를 나타내고, 단, n 이 0 일 경우, R1 은 화학식 2 의 기이고, R10 은 화학식 8 의 기이고, R9 는 화학식 10 또는 11 의 기를 나타내고,
단, 화학식 1, 6 내지 8, 및 10 내지 11 에서, 보호기는 동일하거나 상이하고, 각각 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알케닐, 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 아실, 임의 치환된 방향족 아실, 또는 임의 치환된 방향족 알킬을 나타내고,
R13, R17 및 R26 을 제외한 R2 내지 R37 의 보호기 중 임의의 둘은, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 알킬리덴, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 시클릭 알킬리덴, 임의 치환된 벤질리덴, 또는 임의 치환된 프탈로일을 함께 형성할 수 있고,
n 이 2 이상일 경우, R2 내지 R8 은 반복 단위체 내에서 동일하거나 상이할 수 있다].
즉, 화학식 1 로 나타내는 본 발명의 화합물은 함께 결합된 화학식 12 의 D-글루코사민 유도체 및 화학식 13 의 D-글루쿠론산 유도체를 포함하는 구조를 갖는다.
[식 중, R38 내지 R43 은 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다]
[식 중, R44 는 히드록실기 또는 보호기를 나타내고, R45 내지 R48 은 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타낸다]
화학식 1 에서, n 은 0 내지 25 의 정수를 나타내고, n 이 0 인 경우, R1 은 화학식 2 의 기이고, R10 은 화학식 8 의 기이고, R9 는 화학식 10 또는 11 의 기이다. 즉, 화학식 1 의 화합물은 하기 화학식 14 또는 15 로 나타낸다.
본원에서 보호기는 [Theodra W. Green "Productive Groups in Organic Synthesis"; 2 판; 1991] 에 있는 각종 보호기를 포함한다.
화학식 1 내지 11 에 나타낸 보호기는 하기와 같다: 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 3차 부틸, 펜틸, 옥틸, 메톡시메틸, 3차 부틸티오메틸, 1-에톡시에틸, 실록시메틸, 및 2-메톡시에톡시메틸이다. 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알케닐의 예는 에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 부테닐, 및 옥테닐이다. 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 아실의 예는 포르밀, 아세틸, 프로피오닐, 부티릴, 발레릴 또는 피발로일, 및 할로아실이고, 할로아실의 예는 클로로아세틸, 디클로로아세틸, 트리클로로아세틸, 및 트리플루오로아세틸이다. 임의 치환된 방향족 아실의 예는 벤조일, 및 파라클로로벤조일이다. 임의 치환된 방향족 알킬의 예는 임의 치환된 벤질, 임의 치환된 디페닐메틸, 또는 임의 치환된 트리페닐메틸이고, 임의 치환된 벤질의 예는 4-메톡시벤질이다. 화학식 1 내지 11 에 나타낸 보호기와 관련하여, R13, R17 및 R26 을 제외한, R2 내지 R37 중 임의의 두개의 보호기는 함께 하나의 보호기, 즉 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 알킬리덴, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 시클릭 알킬리덴, 임의 치환된 벤질리덴, 또는 임의 치환된 프탈로일을 형성할 수 있다. 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 알킬리덴의 예는 프로필리덴, 부틸리덴, 및 옥틸리덴이다. 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 시클릭 알킬리덴의 예는 시클로펜틸리덴, 시클로헥실리덴, 및 시클로헵틸리덴이다. 다른 예로는 임의 치환된 벤질리덴, 및 임의 치환된 프탈로일을 들 수 있다. 히드록실기에 대한 보호기로서 바람직한 것은 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 아실, 임의 치환된 방향족 알킬, 2 개 이상의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알케닐, 또는 임의 치환된 벤질리덴이다. 더욱 바람직한 것은 아세틸, 벤질, 1-프로페닐, 또는 벤질리덴이다. 아미노기에 대한 보호기로서 바람직한 것은 1 개 이상의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 아실, 또는 임의 치환된 프탈로일이다. 더욱 바람직한 것은 아세틸 또는 프탈로일이다. 카르복실기에 대한 보호기로서 바람직한 것은 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 또는 임의 치환된 방향족 알킬이다. 더욱 바람직한 것은 메톡실, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 펜틸, 이소펜틸, 또는 디페닐메틸이다. 상기 보호기는 동일한 화합물 내에서 동일하거나 상이할 수 있고, 독립적으로 선택될 수 있다.
화학식 1 에서, n 은 0 내지 25, 바람직하게는 0 내지 10, 특히 바람직하게는 0 내지 5 의 정수이다.
R9 는 앞서 설명한 바와 같고, 바람직하게는 화학식 11 이다. 즉, 화학식 1 의 화합물은 바람직하게는 화학식 16 이다.
여기서, 화학식 11 에서, R1 은 임의의 화학식 6 내지 8 인 것, 즉 화학식 1 의 화합물이 임의의 하기 화학식 17 내지 19 인 것이 더욱 바람직하다.
또한, 화학식 17 내지 19 에서, R13, R17 및 R26 이 화학식 9 인 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 화합물은 두개의 다른 범주의 활성, (A) 혈소판 점착/응집 억제 활성, 및 (B) 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성 및 혈관형성 촉진 활성을 갖는다. 화합물이 (B) 목적을 위해 사용되는 경우, 화합식 (16) 의 화합물이 특히 바람직하다.
본원의 약리학적으로 허용가능한 염은 본 발명의 화합물이 치료적으로 필요한 투여량으로 투여되었을 경우 신체에 나쁜 영향을 미치지 않는 염, 또는 본 화합물이 염 형태로 전환되었을 경우 본 발명의 화합물의 유효한 약리학적 성질이 손상되지 않는 염을 의미한다. 상기 염의 예는 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염, 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 및 칼슘염; 히드로할로겐산염, 예를 들어 히드로플루오라이드, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 및 히드로요오다이드; 저급 알킬술포네이트, 예를 들어 메탄술포네이트, 트리플루오로메탄술포네이트, 및 에탄술포네이트; 아릴술포네이트, 예를 들어 벤젠술포네이트, 및 p-톨루엔술포네이트; 유기산염, 예를 들어 푸마레이트, 숙시네이트, 시트레이트, 타르트레이트, 옥살레이트, 및 말레에리트; 및 아미노산염, 예를 들어 글루타메이트 및 아스파르테이트가 있다. 또한, 본 발명의 화합물 및 그의 염은 각종 약리학적으로 허용가능한 용매, 예를 들어 물, 유기 용매, 및 완충액과의 용매 화합물, 및 다형성인 것들을 포함한다.
본 발명의 화합물은 치환기의 형태에 따라 비대칭 탄소 원자를 포함할 수 있고, 비대칭 중심의 존재를 기준으로 광학 이성질체로서 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 각각의 모든 이성질체 및 그의 혼합물을 포함한다. 예를 들어, 본 화합물은 특정 광학 이성질체 및 그의 거울상이성질체의 혼합물, 특히 동량의 D 및 L 이성질체의 혼합물인 라세미화 변형체, 또는 특정 광학 이성질체 및 그의 부분입체이성질체의 혼합물을 포함한다.
[본 발명의 화합물의 제조 방법]
물론, 각종 방법으로 본 발명의 화합물을 수득할 수 있다. 상기 방법의 예는 유기 화학 방법, 즉 출발 물질로서 글루코사민 유도체 및 글루쿠론산 유도체를 사용하여 유기 화학 기술에 의해 중간체 또는 목적 화합물을 변형시키거나 합성시키는 방법, 또는 다당류를 산 또는 알칼리로 분해시켜서 중간체 또는 목적 화합물을 수득하는 방법; 생화학적 방법, 즉 출발 물질로서 글루쿠론산 및 N-아세틸글루코사민을 사용하여 전이효소 또는 해중합 효소의 역반응을 이용한, 중간체 또는 목적 화합물의 합성 또는 변형 방법, 또는 다당류를 효소로 해중합시킴으로써 중간체 또는 목적 화합물을 수득하는 방법; 및 유전자 공학 기술을 포함하는 방법, 즉 효소에 대한 유전자를 미생물 또는 세포에 도입함으로써 합성 또는 변형에 사용되는 효소, 중간체 또는 목적 화합물, 출발 물질을 수득하는 방법을 포함한다. 상기 방법은 단독으로 또는 배합하여 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 상기 제조 방법에 제한되지 않음은 물론이고, 목적 화합물이 수득되는 한 임의의 방법이 사용될 수 있다.
각종 제조 방법 중에서, 출발 물질 또는 중간체로서 천연 물질, 특히 다당류 또는 올리고당류를 사용하는 제조 방법이 가장 효율적인 방법이고, 바람직하다. 또한, 동물 조직 또는 미생물 배양으로부터 히알루로난 또는 그의 염을 추출한 후, 필요할 경우 정제하여 출발 물질로서 사용하고, 히알루로난은 해중합되어 해중합 생성물을 수득하고, 상기 생성물을 중간체 또는 목적 화합물로서 사용하는 방법을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 해중합 방법은, 예를 들어 열 또는 초음파처리를 사용한 물리적 방법, 산 또는 알칼리를 사용한 화학적 방법, 또는 효소를 사용한 생화학적 방법일 수 있다. 상기 방법은 단독으로 또는 배합되어 사용될 수 있다. 상기 방법 중, 반응의 특이성, 효율성 또는 안전성의 이유로, 효소를 사용한 방법이 바람직하다. 사용되는 효소는 히알루로난의 해중합 반응을 촉매하는 활성을 갖는 것이 사용되겠지만, 그에 한정되는 것은 아니다. 상기 효소는 목적에 따라 단독으로 또는 복수 형태로 배합되어 사용될 수 있다. 효소의 예는 동물 조직 근원의 효소, 예를 들어 정소의 히알루로니다제 (EC 3.2.1.35), 거머리 히알루로니다제 (EC 3.2.1.36), 이니미쿠스 자포니쿠스 (Inimicus japonicus) 의 독액 (EC 3.2.1) 내 히알루로니다제, β-글루쿠로니다제 (EC 3.2.1.31), 및 β-N-아세틸헥소사미니다제 (EC 3.2.1.52), 및 미생물근원의 효소, 예를 들어 스트렙토미세스 히알루롤리티쿠스 (Streptomyces hyalurolyticus) (EC 4.2.2.1), 히알루로니다제 SD (EC 4.2.2), 콘드로이티나제 ABC (EC 4.2.2.4), 콘드로이티나제 AC I (EC 4.2.2.5), 및 콘드로이티나제 AC Ⅱ (EC 4.2.2.5) 가 있다. 상기 효소 중, 안정한 특질을 갖고 안정하게 공급될 수 있는 이점때문에 미생물-근원의 효소가 바람직하다. 그 중에서, 스트렙토미세스 히알루롤리티쿠스가 특히 바람직하다.
효소 반응은 온도 및 pH 와 같이 효소의 특성에 따라 결정되는 각종 조건에서 수행될 수 있다. 후속되는 분류, 정제 또는 변형을 수행하는데 있어서 고도로 요구되는 탈염 단계를 생략하기 위해서는, 반응이, 실질적으로 염이 없는 상태, 또는 비휘발성 염 및 유기 용매에 불용성인 염이 실질적으로 없는 상태에서 수행되는 것이 바람직하다. 실질적으로 염이 없는 상태란 효소 반응 후 탈염 단계를 수행하지 않고도 후속되는 분류, 정제 또는 변형 단계를 용이하게 수행할 수 있는 만큼의 양을 초과하는 염을 포함하지 않는 상태를 말한다. 바람직하게는, 반응 혼합물 중 염 함유량은 목적 화합물의 10 % (w/w) 이하, 더욱 바람직하게는 1 % (w/w) 이하이다. 본원의 반응 혼합물의 염은 이온 강도 및 pH 조절에 사용되는 완충액 성분, 예를 들어 아세트산나트륨, 인산나트륨, 시트르산칼륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 및 염화칼슘을 말한다. 본원의 비휘발성염이란 감압 단계에 의해 비교적 용이하게 휘발가능한 휘발성염, 예를 들어 아세트산암모늄 및 중탄산암모늄이 아닌 염을 말한다. 휘발성 염을 사용하면 감압 등에 의해 중간체 또는 목적 화합물의 용액으로부터 액체 성분을 제거하는 동시에 염을 제거할 수 있다. 본원에서 유기 용매에 불용성인 염은 물 및 유기 용매 (예를 들어 에탄올, 메탄올, 및 프로판올) 에 용해성인 염, 예를 들어 아세트산암모늄, 아세트산나트륨, 아세트산칼륨, 및 아세트산칼슘이 아닌 염을 말한다. 유기 용매에 용해성인 염이 사용될 경우, 유기 용매에 용해성인 염을 포함하는 물에는 용해성이지만 유기 용매에는 불용성인, 중간체 또는 목적 화합물을 포함하는 혼합물은, 적절한 유기 용매로 세척됨으로써 포함하는 염을 용이하게 분리할 수 있다.
필요할 경우, 생성된 해중합 생성물을 통상적인 방법, 예를 들어 추출, 응축, 여과, 재결정화, 재침전, 또는 크로마토그래피에 의해 분리 및 정제할 수 있다. 높은 효율성 때문에, 크로마토그래피, 더욱 바람직하게는 이온 교환 크로마토그래피에 의한 분리 및 정제 단계를 포함하는 것이 바람직하다. 담체로서 음이온 교환체를 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 크로마토그래프는 배치형, 순환형, 이동층형, 또는 유사 이동층형으로서 사용가능하고, 조건에 따라 광학적인 것이 선택될 수 있다. 크로마토그래피에 사용되는 용출액은 사용되는 방법에 따라 광학 조성물을 가질 수 있다. 후속하는 정제 또는 변형을 수행하는데 고도로 요구되는 탈염 단계를 생략하기 위해, 실질적으로 비휘발성염 및 유기 용매에 불용성인 염이 없는 용출액을 사용하는 것이 바람직하다. "비휘발성인염 및 유기 용매에 불용성인 염이 실질적으로 없는 용출액" 이란, 비휘발성염 또는 유기 용매에 불용성인 염을 포함하지 않는 용출액을 말하고, 여기서 염은 크로마토그래피 후 탈염 단계를 수행하지 않고도, 후속하는 분류, 정제 또는 변형 단계를 용이하게 수행할 수 있는 만큼의 양보다 초과량인 염이다. 바람직하게는, 용출액 중 각 염의 함유량은 0.5 M 이하, 더욱 바람직하게는 0.1 M 이하이다. 통상적으로, 이온 교환 크로마토그래피에 사용되는 용출액은 이온 강도 및 pH 조절을 위한 염을 포함한다. 염을 포함하는 용출액이 사용될 경우, 염으로서 실질적으로 휘발성인 염만을 포함하는 용출액을 사용하는 것이 바람직하다. 휘발성 염으로서, 취급상 용이함, 안전성, 취득의 용이함, 및 비용의 관점에서 암모늄염이 바람직하다. 아세트산암모늄이 더욱 바람직하다. 별법으로, 염으로서 실질적으로 유기 용매에 용해성인 염만을 포함하는 용출액을 사용하는 것이 바람직하다. 유기 용매에 용해성인 염으로서, 취급상 용이함, 안전성, 취득의 용이함, 및 비용의 관점에서 아세트산염이 바람직하다. 아세트산암모늄 또는 아세트산나트륨이 더욱 바람직하다.
생성된 중간체는 각종 방법, 예를 들어 유기 화학 방법 또는 생화학적 방법 또는 이들의 배합 형태를 사용하여 정제 또는 변형에 의해 목적 화합물로 전환될 수 있다.
[본 발명의 화합물의 투여 방법, 투여량 및 투여 형태]
본 발명의 화합물, 그의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물은 통상적으로 전신 또는 국소, 경구 또는 비경구 투여된다. 투여량으로서, 최상의 투여량은 조건, 예를 들어 치료받는 환자의 질병의 형태, 증상의 심각성, 연령 및 체중을 기준으로 총체적인 판단에 따라 결정되어야 한다. 투여량은 제한되어 있지 않지만, 어른의 경우, 통상 일일 투여량은 경구로 0.01 내지 100 mg/kg, 또는 비경구로 0.001 내지 10 mg/kg 이다. 투여량은 하루에 한번 또는 필요할 경우 분할 투여량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물, 그의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물은 임의의 형태, 예를 들어 고체 조성물, 액체 조성물, 및 다른 조성물을 포함하는 경구 형태, 또는 주사제, 외부적으로 사용되는 제제, 및 좌제을 포함하는 비경구 형태로 투여될 수 있다. 가장 적절한 형태는 필요에 따라 선택된다. 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함하는 약학적 조성물, 그의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 그 염의 용매 화합물은 담체, 부형제 및 통상적인 약학적 제조에 사용되는 다른 첨가제를 사용하여 제조될 수 있다. 제조를 위한 담체 및 부형제의 예는 락토스, 마그네슘 스테아레이트, 전분, 탈크, 젤라틴, 아가, 펙틴, 아카시아, 올리브유, 참깨유, 카카오 버터, 에틸렌 글리콜 및 통상적으로 사용되는 다른 재료들이다.
경구 투여를 위한 고체 조성물로서, 정제, 환제, 캡슐, 분말 및 과립이 사용된다. 상기 고체 조성물에서, 하나 이상의 활성 물질 (활성 성분) 이 하나 이상의 불활성 희석제, 예를 들어 락토스, 만니톨, 글루코스, 히드록시프로필셀룰로스, 크리스탈라이트 셀룰로스, 전분, 폴리비닐피롤리돈, 또는 마그네슘 메타실리케이트/알루미네이트와 혼합된다. 통상적인 방법에 따라, 조성물은 불활성 희석제 이외의 다른 첨가제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제, 칼슘 카르복시메틸셀룰로스와 같은 붕괴제, 및 글루탐산 또는 아스파르트산과 같은 용액 보조제를 포함할 수 있다. 필요할 경우, 정제 또는 환제가 수크로스, 젤라틴, 히드록시프로필 메틸셀룰로스 프탈레이트 등을 포함하는 위-용해성 또는 장-용해성 필름 또는 슈가 코팅으로 코팅될 수 있다. 별법으로, 정제 또는 환제를 2 개 이상의 층으로 코팅할 수 있다. 또한, 젤라틴과 같은 흡수가능한 물질의 캡슐도 포함된다.
경구 투여를 위한 액체 조성물은 약학적으로 허용가능한 에멀션, 용액, 현탁액, 시럽, 및 엘릭시르를 포함하고, 일반적으로 사용되는 불활성 희석제, 예를 들어 정제된 물 및 에탄올을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 불활성 희석제 뿐만 아니라, 보조제, 예를 들어 습윤제 또는 현탁제, 감미제, 향미료, 방향제 및 보존제를 포함할 수 있다.
비경구 투여를 위한 주사제는 무균의 수성 또는 비수성 용해제, 현탁제, 또는 에멀션화제를 포함한다. 상기 수성 용해제 및 현탁제의 예는 주사제를 위한 물, 및 주사제를 위한 생리 식염수이다. 상기 비수성 용해제 및 현탁제의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물유, 예를 들어 올리브유, 알콜, 예를 들어 에탄올, 및 POLYSORBATE 80 (등록 상표) 이다. 상기 조성물은 또한 보조제, 예를 들어 보존제, 습윤제, 에멀션화제, 분산제, 안정화제 (예를 들어, 락토스), 및 용액 보조제 (예를 들어, 글루탐산 및 아스파르트산) 을 포함할 수 있다. 상기 제제는 통상적인 살균 방법, 예를 들어 마이크로여과막을 이용한 여과 살균, 가열 살균, 예를 들어 습열 살균, 또는 살균제 첨가에 의해 살균될 수 있다. 별법으로, 무균 고체 조성물이 제조되어, 사용되기 전 주사제를 위한 무균 용액 또는 무균 물에 용해된 후 사용될 수 있다.
비경구 투여를 위한 다른 약학적 조성물은 활성 성분으로서 본 발명의 하나 이상의 화합물을 포함한다. 외부적 사용을 위한 액체, 연고, 리니멘트제, 좌제, 경피성 제제, 및 안(眼)용액을 포함한다.
[본 발명의 중합체 및 그 제조 방법]
본 발명의 중합체는 측쇄 구조로서 본 발명의 화합물을 갖는 고분자 화합물이고, 항혈전성을 갖는 중합 물질로서 사용될 수 있다. 본 발명의 중합체 제조에 사용되는 주 사슬로서의 중합체는 바람직하게는 생체적합성 중합체이다. 상기 중합체의 예는 폴리에틸렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 폴리비닐 클로라이드, 에틸렌-비닐 아세트산염 공중합체, 폴리프로필렌, 폴리카르보네이트, 실리콘, 폴리메틸 메트아크릴레이트 ,폴리테트라플루오로에틸렌, 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 폴리아미드, 폴리술폰, ABS 수지, 폴리아세탈, 및 상기 중합체의 유도체이다. 적절한 스페이서가 주사슬 및 측쇄 사이에 삽입될 수 있고, 그에 의해 항혈전성을 갖는 측쇄에 유연성이 부여될 수 있다. 별법으로, 중합체는 측쇄 구조에 본 발명의 화합물을 갖는 다수의 중합체성 화합물의 블록 공중합체일 수 있다. 또한, 상기 중합체는 본 발명의 화합물 외에도 그에 결합하는 항혈전성 물질을 가질 수 있으며, 여기서 항혈전성 물질의 예로서 혈전 형성 억제 물질, 예를 들어 헤파린, 또는 혈전융해 효소, 예를 들어 우로키나제일 수 있다.
물론, 본 발명의 중합체는 상기 제조 방법에 제한되는 것은 아니고, 목적 생성물이 수득되는 한 임의의 방법을 사용할 수 있다. 본 발명의 중합체를 수득하기 위해 각종 방법이 사용가능하고, 상기 방법은 단독으로 또는 배합되어 사용될 수 있다. 상기 제조 방법은 당 업계의 숙련된 사람에게 공지되어 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물이, 주사슬이 될 중합체의 단량체에 결합된 후, 주사슬 중합체를 형성하기 위한 중합 반응이 수행될 수 있다. 별법으로, 본 발명의 화합물은 주사슬 중합체에 결합될 수 있다.
본 발명의 화합물은 그 구조상에, 신체 성분의 유도체, 예를 들어 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는다. 상기 사실로부터, 본 발명의 화합물은 매우 생체적합성이 있고, 생체에 최소한의 불리한 영향을 미치고, 심지어 본 발명의 화합물의 중합체가 깨진다고 하더라도 최소한의 불리한 영향을 미친다.
[본 발명의 코팅제 및 성형물, 및 그의 제조 방법]
본 발명은 또한 활성 성분으로서 하나 이상의 본 발명의 화합물을 포함하는 코팅제, 및 활성 성분으로서 하나 이상의 본 발명의 중합체를 포함하는 코팅제를 제공한다. 상기 코팅제는 적절한 용매에 본 발명의 중합체 또는 화합물을 분산시키거나 용해시키고, 생성된 용액 또는 분산액을 코팅, 주입, 또는 스프레이 코팅과 같은 방법에 의해 인공 장기 또는 의료 장치에 적용함으로써 코팅될 수 있다.
본 발명의 성형물은 재료로서 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 중합체를 사용함으로써 제조되고, 용도의 목적에 따라 제조된다. 따라서, 성형물은 물질의 본성이 손상되지 않는한 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 본 발명의 성형물을 얻기 위해서는, 예를들어 본 화합물 또는 중합체를 개별적으로 제조된 성형물에 코팅시키는 것; 본 화합물을 개별적으로 제조된 성형물에 결합시키는 것; 및 본 화합물 또는 중합체를 포함하는 물질로부터 직접적으로 성형하는 것과 같은 다양한 방법이 사용가능하다. 상기 방법은 단독으로 또는 배합되어 사용될 수 있다.
본 발명의 성형물은 높은 항혈전성을 갖기 때문에, 인공 장기 또는 의료 장치의 성분으로서 사용될 수 있거나, 그 자체로 인공 장기 또는 의료 장치로서 사용될 수 있다. 성형물의 모양은 사용되는 물질의 성질에 따라 다르고, 사용되는 목적에 따라 하기: 필름, 막, 튜브, 플레이트, 망, 섬유, 또는 직물 중 하나일 수 있다.
[본 발명의 인공 장기 및 그의 제조 방법]
본 발명의 인공 장기는 재료로서 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 중합체를 사용하거나, 성분으로서 하나 이상의 본 발명의 성형물을 사용하여 제조된다. 사용되는 목적에 따라 제조된다. 또한 본 발명의 코팅제를, 제조된 인공 장기, 또는 다른 방법에 의해 제조된 통상적인 인공 장기에 코팅함으로써 제조될 수 있다. 따라서, 인공 장기는 재료 또는 성분의 본성이 손상되지 않는 한 임의의 방법으로 제조될 수 있다.
본 발명의 인공 장기의 예는 인공 혈관, 인공 심장, 심박조율기, 보철 심장판, 인공 신장, 인공 폐, 인공 심장-폐 기계, 인공 췌장, 인공 뼈, 인공 관절, 인공 인대이다.
[본 발명의 의료 장치 및 그의 제조 방법]
본 발명의 의료 장치는 재료로서 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 중합체를 사용하거나, 성분으로서 하나 이상의 본 발명의 성형물을 사용하여 제조된다. 사용되는 목적에 따라 제조된다. 따라서, 의료 장치는, 재료 또는 성분의 본성이 손상되지 않는 한 임의의 방법으로 제조될 수 있다.
본 발명의 의료 장치의 예는 주사제 시린지, 주사제 바늘, 투석을 위한 내재성 바늘, 내재성 바늘, 주입 셋트, 주입/혈액 여과기, 혈액 주머니, 튜브 카테터 (영양물 섭취용, 위/식도용, 담관용, 호흡용, 비뇨기과용, 혈액용, 심장용, 흡인/주사/배액용 등), 혈액투석기 하우징, 혈액투석기 함요 방사, 혈액투석기막, 체외 순환 혈액 회로, 외부 션트, 인공 폐막, 창상 코팅 재료, 및 스텐트이다.
[본 발명의 세포 배양 조성물]
본 발명에 따른 세포 배양 조성물은 측쇄 구조로서 하나 이상의 본 발명의 화합물을 갖는 본 발명의 화합물 또는 중합체를, 통상적인 세포 배양 조성물에 첨가함으로써 제조될 수 있다. 측쇄 구조로서 하나 이상의 본 발명의 화합물을 갖는 중합체 또는 본 발명의 화합물을 첨가하게 되는, 세포 배양을 위한 배양 배지의 예는, 199 배지, MEM (Eagle 의 최소 필수 배지), BME (Eagle 의 기초 배지), DMEM (Dulbecco-변형된 Eagle 의 배지), RPMI1640, Ham's F12 배지, MCDB104, 및 MCDB153 이 있지만 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 세포 배양 조성물을 사용하여 배양될 수 있는 세포는 척추동물 세포, 예를 들어 어류 세포, 양서류 세포, 조류 세포, 및 포유류 세포가 있지만 그에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 화합물은 뛰어난 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성, 및 뛰어난 혈관형성 촉진 활성을 갖는다. 따라서, 본 발명의 세포 배양 조성물은 시험 및 연구를 위한 배양을 목적으로 하는 포유류 세포, 특히 혈관 내피 세포 배양에 사용될 수 있다. 본 조성물은 또한 유용한 물질, 예를 들어 세포 성장 인자 (예를 들어, VEGF), 및 치료 조직, 예를 들어 화상 치료를 위한 인공 배양된 피부 제조에 사용될 수 있다.
[본 발명의 세포 배양 장치]
본 발명에 따른 세포 배양 장치는 재료로서 하나 이상의 본 발명의 화합물 또는 중합체를 사용하거나, 성분으로서 하나 이상의 본 발명의 성형물을 사용함으로써 제조된다. 사용되는 목적에 따라 제조된다. 또한 제조된 세포 배양 장치에, 또는 다른 방법에 의해 제조된 통상적인 세포 배양 장치에 본 발명의 코팅제를 코팅함으로써 제조될 수 있다. 따라서, 본 장치는 재료 또는 성분의 본성이 손상되지 않는한, 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
본 발명의 세포 배양 장치의 예는 페트리 접시, 플라스크, 마이크로플레이트, 및 병이다.
[본 발명의 화합물 및 중합체의 혈소판 응집 억제 활성 및 혈소판 점착 억제 활성]
본 발명의 화합물의 혈소판 응집 억제 활성 (화합물 예 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10) 을 토끼의 혈소판이 풍부한 혈장을 사용하여 Born and O'Brien [Born, G., V., R.: Nature (London), 194, 924 (1962)], [O'Brien, J., R.: J. Clin. Pathol., 15, 556 (1962)] 방법에 따라 측정했다. 비교를 위한 대조구로서, 동일한 시험을 항혈소판제인 염산티클로피딘 상에서 수행했다. 결과로서, 본 발명의 화합물은 낮은 농도에서도 모두 우수한 혈소판 응집 억제 활성을 나타냈다.
측쇄 구조로서 본 발명의 화합물을 갖는 중합체성 화합물 (중합체 예 2 내지 4) 의 혈소판 점착 억제 활성을 토끼의 혈소판이 풍부한 혈장을 사용하여 마이크로스피어 컬럼 방법 [Kataoka, K., Maeda, M., Nishimura, T., Nitadori, Y., Tsuruta, T., Akaike, T., Sakurai, Y.: J. Biomed. Mater. Res., 14, 817 (1980)] 을 사용하여 측정했다. 결과로서, 본 발명의 중합체는 우수한 혈소판 점착억제 활성을 나타냈다.
또한, 본 발명의 화합물과 폴리에틸렌이민 활성된 폴리에틸렌 튜브를 반응시킴으로써 그에 고정된 본 발명의 화합물을 갖는 성형물을 수득하고, 혈소판 점착율을 측정했다. 본 발명의 화합물이 고정되지 않은 미처리 튜브와 비교하여 혈소판 점착이 전혀 검출되지 않았다. 성형물은 탁월한 항혈전성을 나타냈다.
[본 발명의 화합물 및 중합체의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성]
본 발명의 화합물의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 소의 대동맥 내피 세포를 사용하여 측정했다. 결과로서, 시험에 사용된 본 발명의 화합물 모두 낮은 농도에서도 탁월한 성장 증진 활성을 보였다. 또한, 본 발명의 화합물은 혈관 내피 세포 인자 (VEGF), 혈관 내피 세포에 특이적으로 작용하고 상기 세포의 성장을 촉진하는 것으로 알려진 사이토카인과 상승 효과를 일으킴으로써 보다 나은 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 나타낸다. 이는 본 발명의 화합물이 치료 목적으로 투여되거나 유도된 신체-근원의 내부의 VEGF 및 외부의 VEGF 와 상승 작용함으로써 보다 나은 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 나타낸다는 것을 증명한다.
소의 대동맥 내피 세포를 본 발명에서 사용된 상기 중합체로 코팅한 마이크로플레이트에서 배양하고, 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 측정했다. 결과로서, 본 발명의 중합체 (본 발명의 성형물) 모두가 탁월한 성장 촉진 활성을 나타냈다.
[본 발명의 화합물의 혈관형성 촉진 활성]
본 발명의 화합물의 혈관형성 촉진 활성을 소의 대동맥 내피 세포를 사용하여 측정했다. 결과로서, 본 발명의 화합물 모두 탁월한 혈관형성 촉진 활성을 나타냈다.
본 발명의 효과
화학식 1 의 화합물, 상기 화합물의 약학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물은 탁월한 혈소판 점착/응집 억제 활성을 가지며, 상기 활성에 기재한 치료제, 즉 항혈소판제로서 유용하다. 구체적으로, 상기 화합물은 혈전증 진행 억제, 재발 예방, 혈전증에 대한 위험 요소를 갖는 환자에 있어서 혈전증의 2차적 예방, 및 건강한 사람에 있어서 혈전증의 1차적 예방을 위한 치료에 사용될 수 있다. 더욱 구체적으로는, 심혈관성 질병 (급성 심근경색, 불안정성 협심증, 만성 안정성 협심증, 오래된 심근경색, 심방세동에 의한 혈전색전증, 산재성 혈관내 응고 증후군 (DIC), 관상 바이패스 수술 후 이식편 폐쇄증, 경피 경관 관상 혈관성형술 (PTCA) 후 관상 협착증 및 폐쇄증, 보철 심장판 복위 후 혈전증 합병증 (혈전색전증, 혈전증 이환 판), 폐의 혈전색전증, 체외 순환 혈액 중 혈소판의 활성화, 대뇌혈관 장애 (대뇌의 일과성 허혈성 발작 (TIA), 뇌경색), 말초 동맥 폐쇄증 (폐쇄성 동맥경화증, 폐쇄성 혈전혈관염, 혈관재생 후 폐쇄증), 사구체신염, 신증후군, 및 다른 혈전증 (본태성 혈소판혈증, 혈전성 혈소판감소성자반 (TPP), 용혈성 요독성증후군, 항-인지질 항체 증후군, 가와사끼 (Kawasaki) 병, 자간증, 베세트병) 의 치료 및 예방에 효과적이다. 본 발명은 또한 상기 탁월한 화합물을 제조하는데 유용한 제조 방법을 제공한다.
화학식 1 의 화합물, 특히 화학식 16 의 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물은 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성, 및 탁월한 혈관형성 촉진 활성을 갖는다. 이들은 상기 활성에 기재한 치료제로서 유용하다. 구체적으로는, 이들은 혈관 내피 재생 치료 또는 혈관형성 치료에 사용되는 치료제 및 예방제 (혈관 내피 세포 성장 촉진제, 혈관형성 촉진제) 로서 유용하다. 더욱 구체적으로는, 이들은 뇌혈관 질병 (급성 심근경색, 불안정성 협심증, 만성 안정성 협심증, 오래된 심근경색, 심방세동에 의한 혈전색전증, 산재성 혈관내 응고 증후군 (DIC), 관상 바이패스 수술 후 이식편 폐쇄증, 경피 경관 관상 혈관성형술 (PTCA) 후 관상 협착증 및 폐쇄증, 보철 심장판 복위 후 혈전증 합병증 (혈전색전증, 혈전증 이환 판), 폐의 혈전색전증, 대뇌혈관 장애 (대뇌의 일과성 허혈성 발작 (TIA), 뇌경색), 말초 동맥 폐쇄증 (폐쇄성 동맥경화증, 폐쇄성 혈전혈관염, 혈관재생 후 폐쇄증), 사구체신염, 신증후군, 및 다른 혈전증 (본태성 혈소판혈증, 혈전성 혈소판감소성자반 (TPP), 용혈성 요독성증후군, 항-인지질 항체 증후군, 가와사끼 (Kawasaki) 병, 자간증, 베세트병) 치료 및 예방; 및 창상 (욕창, 당뇨병궤양, 화상, 각막 창상, 화학요법 또는 방사선요법을 받는 암환자의 구강점막염, 각종 수술 후 창상, 예를 들어 피부이식편, 위장 조직 손상 등의 만성 피부 궤양) 치료에 효과적이다.
본 발명의 화합물 및 중합체는 탁월한 항혈전성을 갖는다. 따라서, 이들은 항혈전성을 요구하는 성형물을 제조하기 위한 재료 또는 코팅제로서 유용하다.
본 발명의 화합물, 중합체 및 성형물은 탁월한 항혈전성을 갖는다. 따라서, 이들은 항혈전성을 요구하는 인공 장기 및 의료 장치를 위한 성분, 또는 인공 장기 및 의료 장치 그 자체로서 유용하다. 구체적으로는, 이들은 인공 장기, 예를 들어 인공 혈관, 인공 심장, 심박조율기, 보철 심장판, 인공 신장, 인공 폐, 인공 심장-폐 기계, 인공 췌장, 인공 뼈, 인공 관절, 및 인공 인대; 및 의료 장치, 예를 들어 주사제 시린지, 주사제 바늘, 투석을 위한 내재성 바늘, 내재성 바늘, 주입 셋트, 주입/혈액 여과기, 혈액 주머니, 튜브 카테터 (영양물 섭취용, 위/식도용, 담관용, 호흡용, 비뇨기과용, 혈액용, 심장용, 흡인/주사/배액용 등), 혈액투석기 하우징, 혈액투석기 함요 방사, 혈액투석기막, 체외 순환 혈액 회로, 외부 션트, 인공 폐막, 창상 코팅 재료, 및 스텐트의 재료 및 성분으로서 유용하다.
본 발명의 화합물, 및 측쇄 구조로서 그를 갖는 중합체는 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 가지며, 혈관 내피 세포로의 코팅을 촉진한다. 따라서, 이들은 항혈전성을 요구하는 성형물을 제조를 위한 코팅제 또는 재료로서 유용하다. 이외에도, 상기 화합물, 중합체, 및 성형물은 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 가지며, 혈관 내피 세포로의 코팅을 촉진한다. 따라서, 이들은 항혈전성을 요구하는 의료 장치 및 인공 장기를 위한 성분, 또는 인공 장기 및 의료 장치 그 자체로서 유용하다.
또한, 본 발명의 화합물, 또는 측쇄 구조로서 하나 이상의 본 화합물을 갖는 중합체는 세포 배양을 위한 조성물 성분으로서 유용하다. 본 발명의 화합물, 및 측쇄 구조로서 본 화합물을 갖는 중합체는 세포 배양 장치로서 사용될 수 있다.
하기 실시예에서, 본 발명은 화합물 제조예, 중합체 제조예, 성형물 제조예, 항혈전성 활성 시험, 및 제제 제조예를 통하여 훨씬 상세히 설명될 것이다. 물론, 본 발명은 하기 실시예에 기재된 물질, 제형물 및 방법에 제한되는 것은 아니며, 청구항의 범위에 포함되는 물질, 제형물 및 방법 모두를 포함한다.
실시예 1: 화합물 제조예 1
4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노스 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3 GlcNAc (화합물 예 1)], 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노스 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc (화합물 예 2)], 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노스 [ΔHexA β1→3Glc NAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc (화합물 예 3)], 및 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노스 [[ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc (화합물 예 4) 의 제조
나트륨 히알루로네이트 30 g (KIBUN FOOD CHEMIFA 제품; 상표명 "Hyaluronic acid FCH") 을 증류수 3 L 에 용해시키고, 용액을 40 ℃ 로 가열했다. 용액의 pH 를 0.1 M 수산화나트륨 수용액을 사용하여 6.0 으로 조절했다. 그 후, 스트렙토미세스 히알루롤리티쿠스 근원의 히알루로니다제 (Amano Pharmaceutical 제품; 상표명 "Hyaluronidase "Amano"") 를 나트륨 히알루로네이트 1 mg 당 0.5 의 혼탁도 감소 단위로 첨가하고, 40 ℃ 에서 100 시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 효소를 10k 의 매우 작은 분자 차단 장치인 친수성 폴리에테르술폰 한외여과막 (Millipore 제품) 을 사용하여 용액으로부터 제거했다. 용매를 동결 건조하여 제거하고 해중합 생성물을 수득했다 (27.4 g).
해중합 생성물을 음이온 교환 크로마토그래피 (컬럼: YMC-Pack IEC-AX, 용출액: A; 물, B; 0.4 M NaCl; 선형 구배 (30 분), 검출: UV (232 nm)) (화합물 예 1, 2, 3 및 4 를 상기 순서로 용출시킴) 하여 화합물 예 1 내지 4 를 포함하는 분획을 수득했다. 각각의 분획을 겔 여과 (겔: Sephadex G-10, 용출액: 물) 로 탈염시킨 후, 동결 건조시켜 화합물 1 내지 4 (백색 분말) 를 수득했다. 수율은 각각 화합물 예 1: 1.7 g, 화합물 예 2: 5.9 g, 화합물 예 3: 3.4 g, 및 화합물 예 4: 2.2 g 이다. 각각의 화합물을 나트륨염으로서 수득했다.
화합물 예 1 내지 4 는 n 이 1 내지 4 의 정수인 하기 화학식 20 으로 나타낸다. 상기 화학식은 n 이 1 인 경우 화합물 예 1 을, n 이 2 인 경우 화합물 예 2 를, n 이 3 인 경우 화합물 예 3 을, n 이 4 인 경우 화합물 예 4 를 나타낸다.
고성능 액체 크로마토그래피 (컬럼: TSK겔 DEAE-5PW, 용출액: A; 물, B; 0.3 M NaCl; 선형 구배 (20 분), 검출: UV (232 nm); 면적 백분율 방법) 로 측정한 각 화합물의 순도가 97 % 이상이었다. 표준 생성물로서 글루쿠로노락톤을 사용하여 화합물 예 1 내지 4 각각의 우론산 함유량을 Bitter and Muir 방법 (Bitter, T., Muir, H.: Anal. Biochem., 4, 330 (1962)) 으로 분석했다. 100 ℃ 에서 3 N 염산중 16 시간 동안의 가수분해 후 표준 생성물로서 글루코사민 히드로클로라이드를 사용하여 화합물 예 1 내지 4 의 각각의 헥소사민 함유량을 Boas (수지 미처리; Boas, N., F.: J. Biol. Chem., 204, 553 (1953).) 방법으로 분석했다. 분석에 의해 구한 각각의 화합물 예의 값이 이론값과 거의 일치했다.
실시예 2: 화합물 제조예 2
4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노스 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3 GlcNAc (화합물 예1)], 및 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노스 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc (화합물 예 2)] 의 제조
나트륨 히알루로네이트 (KIBUN FOOD CHEMIFA 제품; 상표명 "Hyaluronic acid FCH") 60 g 을 증류수 3 L 에 용해시키고, 용액을 40 ℃ 로 가열했다. 0.1 M 수산화나트륨 수용액을 사용하여 용액의 pH 를 6.0 으로 조절했다. 그 후, 스트렙토미세스 히알루롤리티쿠스 근원의 히알루로니다제 (Amano Pharmaceutical 제품; 상표명 "Hyaluronidase "Amaco"") 를 나트륨 히알루로네이트 1 mg 당 1 의 혼탁도 감소 단위로 첨가하고, 40 ℃ 에서 100 시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 효소를 10k 의 매우 작은 분자 차단 장치인 친수성 폴리에테르술폰 한외여과막 (Millipore 제품) 을 사용하여 용액으로부터 제거했다. 용매를 동결 건조하여 제거하고 해중합 생성물을 수득했다 (53.7 g).
해중합 생성물을 음이온 교환 크로마토그래피 (컬럼: TSK겔 DEAE-5PW, 용출액: A; 물, B; 0.5 M 아세트산나트륨 수용액; 선형 구배 (A/B (90/10) →A/B (60/40); 40 분), 검출: UV (232 nm)) (화합물 예 1 및 2 를 상기 순서로 용출시킴) 하여 화합물 예 1 및 2 를 포함하는 분획을 수득했다. 각각의 분획을 동결 건조시켜 물을 제거했다. 동결건조된 분획을 탈염을 위해 에탄올로 세척하고, 다시 물에 용해시킨 후, 동결건조시켜서 화합물 예 1 및 2 (백색 분말) 를 수득했다. 수율은 각각 화합물 예 1: 18.1 g, 화합물 예 2: 29.5 g 이다. 각각의 화합물을 나트륨염으로서 수득했다.
고성능 액체 크로마토그래피 (컬럼: TSK겔 Amide-80, 용출액: 아세토니트릴/물/아세트산/트리에틸아민 (65/35/2/1, v/v), 유동 속도: 1.0 mL/분, 컬럼 온도: 80 ℃, 검출: UV (232 nm); 면적 백분율 방법) 로 측정한 각 화합물의 순도가 97 % 이상이었다. 화합물 예 1 및 2 각각의 우론산 함유량 및 헥소사민 함유량을 실시예 1 에 나타낸 방법으로 분석했다. 값이 이론값과 거의 일치했다.
실시예 3: 화합물 제조예 3
4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라니톨 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3 GlcNAc OH(화합물 예 5)], 및 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실 -(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라니톨 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc OH (화합물 예 6)] 의 제조
50 mg 의 화합물 예 1 을 3 mg/mL 의 나트륨 보로히드라이드 수용액 50 mL 에 용해시키고, 용액을 실온에서 1 시간 동안 처리했다. 6 M 아세트산 5 mL 을 첨가하여 반응을 종료시켰다. 메탄올 50 mL 첨가 후, 혼합물을 증발기로 건조 증발시켰다. 또한, 50 mL 의 메탄올을 첨가하고 증발 건조시키는 것을 2 회 반복했다. 건조 증발 후 잔류하는 고체 물질을 물 5 mL 에 용해시켰다. 용액을 실시예 1 과 동일한 방법으로 겔 여과하여 탈염시킨 후, 동결 건조시켜 화합물 예 5 를 수득했다 (백식 분말: 44.7 mg).
동일한 방법으로 출발 물질로서 화합물 예 2 를 사용하여 화합물 예 6 을 수득했다.
화합물 예 5 및 화합물 예 6 은 n 이 1 내지 2 의 정수인 하기 화학식 21 로 나타내는 화합물이다. 상기 화학식은 n 이 1 일 경우 화합물 5 를, n 이 2 인 경우 화합물 6 을 나타낸다.
화합물 5 및 6 각각의 순도를 실시예 2 에 나타낸 방법으로 측정하여 98 % 이상임을 발견했다. 상기 화합물의 우론산 함유량 및 헥소사민 함유량을 실시예 1 에 나타낸 방법으로 분석했다. 분석에 의한 값이 이론값과 거의 일치했다.
실시예 4: 화합물 제조예 4
4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누론산 [ΔHexA β1→3Glc NAc β1→4GlcA (화합물 예 7)], 및 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누론산 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4 GlcA (화합물 예 8)] 의 제조
화합물 예 1 을 Ressig 등 (Reissig, J., L., Strominger, J. L., Leloir, L., F.: J. Biol. Chem., 217, 959 (1953).) 의 방법에 따라 pH 9 의 붕산염 완충액에서 가열했다. 반응 혼합물 중 붕산을 실시예 3 과 동일한 방법으로 메틸 붕산염으로서 제거했다. 잔류하는 혼합물을 실시예 1 과 동일한 방법으로 겔 여과하여 탈염시킨 후, 동결 건조시켜 화합물 예 7 (백색 분말) 을 수득했다. 50 mg 의 화합물 예 1 이 출발 물질로서 사용되는 경우, 43.1 mg 의 화합물 예 7 을 수득했다.
유사하게, 출발물질로서 50 mg 의 화합물 예 2 를 사용할 경우, 44.8 mg 의 화합물 예 8 (백색 분말) 을 수득했다.
화합물 예 7 및 화합물 예 8 은 n 이 0 내지 1 의 정수를 나타내는 하기 화학식 22 로 나타내는 화합물이다. 상기 화학식은 n 이 0 인 경우 화합물 7 을, n 이 1 인 경우 화합물 8 을 나타낸다.
화합물 예 7 및 8 각각의 순도를 실시예 2 에 나타낸 방법으로 측정하여, 98 % 이상임을 발견했다. 상기 화합물의 우론산 함유량 및 헥소사민 함유량을 실시예 1 에 나타낸 방법으로 분석했다. 분석값은 이론값과 거의 일치했다.
실시예 5: 화합물 제조예 5
4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로니톨 [ΔHexA β1→3 GlcNAc β1→4GlcA OH (화합물 예 9)], 및 4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로니톨 [ΔHexA β1→3GlcNAc β1→4GlcA β1→3GlcNAc β1→4GlcA OH (화합물 예 10)] 의 제조
화합물 예 7 을 실시예 3 과 동일한 방법으로 처리하여 화합물 예 9 (백색 분말) 을 수득했다. 20 mg 의 화합물 예 7 을 출발 물질로서 사용할 경우, 15.9 mg 의 화합물 예 9 를 수득했다.
유사하게, 20 mg 의 화합물 예 8 을 출발 물질로서 사용할 경우, 17.8 mg 의 화합물 예 10 (백색 분말) 을 수득했다.
화합물 예 9 및 화합물 예 10 은 n 이 0 내지 1 의 정수인 하기 화학식 23 으로 나타내는 화합물이다. 상기 화학식은 n 이 0 인 경우 화합물 9 를, n 이 1 인 경우 화합물 10 을 나타낸다.
화합물 9 및 10 각각의 순도를 실시예 2 에 나타낸 방법으로 측정하여 98 % 이상임을 발견했다. 상기 화합물의 우론산 함유량 및 헥소사민 함유량을 실시예 1 에 나타낸 방법으로 분석했다. 분석값은 이론값과 거의 일치했다.
실시예 6: 중합체성 화합물의 제조예
폴리(N-p-비닐벤질-[O-4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루콘아미드]) (중합체 예 1), 폴리(N-p-비닐벤질-[O-4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루콘아미드]) (중합체 예 2), 폴리(N-p-비닐벤질-[O-4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루콘아미드]) (중합체 예 3), 및 폴리(N-p-비닐벤질-[O-4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-에네피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루콘아미드]) (중합체 예 4) 의 제조
10 g 의 화합물 예 1 을 증류수 5 mL 에 용해시키고, 메탄올 45 mL 를 첨가한 후 혼합했다. 혼합물을 40 ℃ 로 가열한, 요오드의 메탄올 용액 (17.1 g/200 mL) 에 첨가하고, 생성된 혼합물을 40 ℃ 에서 30 분간 정치시켰다. 요오드의 색깔이 사라질 때까지 수산화칼륨의 4 % 메탄올 용액을 서서히 첨가했다. 반응 혼합물을 얼음으로 냉각시키고, 형성된 침전을 여과하여 수합했다. 침전물을 차가운 에탄올 및 차가운 에테르의 순서로 세척하고, 에탄올-물 (90/10, w/w) 로 재결정화하여 칼륨염을 수득했다. 칼륨염을 50 mL 의 증류수에 용해시키고, 용액을 이온 교환 수지 (Amberlite IR-12B (H+ 형태)) 로 패킹된 컬럼을 통과시킨 후 동결 건조시켰다. 메탄올을 동결 건조 생성물에 첨가하고, 혼합물을 감압하에 농축시켜서 결정을 수득했다. 소량의 메탄올을 결정에 첨가하여 용해시키고, 에탄올을 더 첨가한 후, 탈수 및 농축시켰다. 상기 과정을 5 회 반복한 후, 잔류물을 감압하에 건조 증발시켜서 락톤화된 화합물 예 1 (7.4 g) 를 수득했다.
7 g 의 락톤화 화합물 예 1 을 50 mL 의 메탄올에 용해시키고, 가열하면서 p-아미노메틸스티렌의 메탄올 용액 (2.5 g/0.5 mL) 을 환류하에 첨가했다. 120 분간 가열 환류시킨 후, 200 mL 의 아세톤을 결정화를 위해 첨가했다. 메탄올로부터 결정을 2 회 재결정화하여, 정제된 결정 (N-p-비닐벤질-[O-4-데옥시-α-L-트레오-헥사-4-엔에피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루코피라노실-(1→4)-3-O-β-D-글루코피라누로노실-(1→3)-O-2-아세트아미드-2-데옥시-β-D-글루콘아미드]; 3.3 g) 을 수득했다.
정제된 결정 2 g 을 2 mL 의 물에 용해시키고, 칼륨 퍼옥소디술페이트 (0.2 mol%) 를 중합화 개시제로서 첨가했다. 질소 흐름 하에 혼합물을 60 ℃ 에서 24 시간 동안 가열하여 중합화 반응을 수행했다. 중합화 후, 액체를 메탄올에 부어서 생성된 중합체를 침전시켰다. 메탄올을 기울여따르기로 제거하여 중합체를 분리했다. 중합체를 재결정화 방법에 적용하여 중합체를 물에 용해시키고, 메탄올로부터 결정화시켰다. 결과로서, 중합체를 정제하여 중합체 예 1 (1.4 g) 을 수득했다.
동일한 방법으로, 출발 물질로서 화합물 예 2 를 사용하여 중합체 예 2 를 수득하고, 출발 물질로서 화합물 예 3 을 사용하여 중합체 예 3 을 수득하고, 출발 물질로서 화합물 예 4 를 사용하여 중합체 예 4 를 수득했다.
중합체 예 1 내지 4 는 n 이 1 내지 4 의 정수인 하기 화학식 24 로 나타내는 화합물이다. 상기 화학식은 n 이 1 인 경우 중합체 예 1 을, n 이 2 인 경우 중합체 예 2 를, n 이 3 인 경우 중합체 예 3 을, n 이 4 인 경우 중합체 예 4 를 나타낸다.
중합체 예 1 내지 4 의 중량 평균 분자량은 광산란법으로 측정하여 약 40,000 임을 밝혀냈다.
실시예 7: 성형물 제조 예
그에 고정된 화합물 예 1 내지 4 를 갖는 폴리에틸렌 튜브의 제조 (성형물 예 1 내지 4)
Larm 등 (Larm, O., Lasson, R., Olsson, P.: Biomat. Med. Dev. Art. Org., 11, 161 (1983)) 의 방법에 따라 제조했다. 50 ℃ 및 pH 3.5 에서 화합물 예 1 및 폴리에틸렌이민 활성된 폴리에틸렌 튜브 (1.8 mm ID ×100 ㎝ L) 를 0.15 M NaCl 중 NaB(CN)H3 과 2 시간 동안 반응시켜 화합물 예 1-고정된 폴리에틸렌 튜브 (성형물 예 1) 를 수득했다.
동일한 방법으로, 출발 물질로서 화합물 예 2 를 사용하여 성형물 예 2 를, 출발 물질로서 화합물 예 3 을 사용하여 성형물 예 3 을, 출발 물질로서 화합물 예 4 을 사용하여 성형물 예 4 를 수득했다.
실시예 8: 본 발명의 화합물의 혈소판 응집 억제 활성
3.8 % 의 시트르산나트륨 수용액 1 부피 당 혈액 9 부피의 양으로 토끼의 대동맥으로부터 혈액을 채취했다. 혈액 샘플을 즉시 원심분리 (50 ×g, 10 분, 실온) 하여 상층액으로서 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP) 를 수득했다. PRP 100 μL 에, 본 발명의 각각의 화합물 1 내지 7 의 용액 10 μL 를 각각의 농도로 첨가했다. 혼합물을 37 ℃ 에서 1 분간 유지시킨 후, 10 ㎍/mL 의 콜라겐 (소의 건(腱) 콜라겐: Meiji Yakuhin 제품) 10 μL 를 응집 유도제로서 첨가했다. 응집 커브를 첨가 후 7 분에 걸쳐 기록했다. 혈소판 응집을 Born and O'Brien (Born, G., V., R.: Nature (London), 194, 924 (1962)., O'Brien, J., R.: J. Clin. Pathol., 15, 556 (1962)) 방법으로, 응집검출계 (MC Medical 에 의해 제조됨) 를 사용하여 측정했다. 비교를 위한 대조구로서, 대표적인 항혈전제로서 티클로피딘 히드로클로라이드에 관하여 동일한 검사를 수행했다. 결과를 하기 표 1 에 나타냈다.
시험 화합물 50 % 억제 농도 (μM)
화합물 예 1 2.7
화합물 예 2 0.0032
화합물 예 3 0.0052
화합물 예 4 0.0044
화합물 예 6 0.0027
화합물 예 8 0.0038
화합물 예 10 0.0035
티클로피딘 히드로클로라이드 427
표 1 에서 보듯이, 본 발명의 화합물은 탁월한 혈소판 응집 억제 활성을 보였다.
실시예 9: 본 발명의 화합물의 심각한 독성
본 발명의 화합물의 대표적인 예 (즉, 화합물 예 1 내지 10) 의 심각한 독성을 랫트 (체중 300 내지 400 g, Wistar, 숫놈) 를 사용하여 시험했다. 그의 LD50 값은 500 mg/kg 이상이었다.
실시예 10: 본 발명의 중합체의 혈소판 점착 억제 활성
중합체 예 2 내지 4 의 혈소판 점착 억제 활성을 마이크로스피어 컬럼 방법 (Kataoka, K., Maeda, M., Nishimura, T., Nitadori, Y., Tsuruta, T., Akaike, T., Sakurai, Y.: J. Biomed. Mater. Res., 14, 817 (1980)) 으로 평가했다. 실시예 8 에서와 동일한 방법으로 수득한 PRP 를 1,200 G 에서 7 분간 2 회 수행된 원심분리에 의해 Dubecco PBS 로 세척하여 최종 농도 1 ×105 혈소판/μL 의 혈소판 현탁액을 제조했다. 각종 농도의 각각의 중합체 수용액을 폴리스티렌 비드 (직경 150 μm, 20 % 의 디비닐벤젠이 가교결합됨, 비다공성) 로 채워진 마이크로스피어 컬럼 (Teflon 컬럼 (3 ID mm ×50 mm L) 에 붓고, 흡수시켰다. 흡수 후, 컬럼을 중류수로 완전히 린스했다. 혈소판 현탁액을 상기 컬럼 (유동 속도 0.5 mL/분, 실온) 에 통과시켰다. 통과 후 현탁액 중 혈소판 농도를 측정하고, 혈소판 점착율을 계산했다. 그 결과를 표 2 내지 4 에 나타냈다.
중합체 예 2
농도 (%) 혈소판 점착율 (%)
0 99.7
0.001 90.2
0.00125 63.9
0.0025 28.4
0.005 0
0.01 0
0.02 0
중합체 예 3
농도 (%) 혈소판 점착율 (%)
0 99.6
0.001 91.5
0.00125 62.9
0.0025 29.0
0.005 0
0.01 0
0.02 0
중합체 예 4
농도 (%) 혈소판 점착율 (%)
0 99.8
0.001 90.2
0.00125 60.8
0.0025 27.3
0.005 0
0.01 0
0.02 0
표 2 내지 4 에서 보듯이, 본 발명의 화합물은 탁월한 혈소판 점착 억제 활성을 나타낸다.
실시예 11: 본 발명의 성형물의 항혈전성
성형물 예 2 내지 4 의 항혈전성을 측정했다. 실시예 10 과 동일한 방법으로, 최종 농도 1 ×105 혈소판/μL 의 혈소판 현탁액을 제조했다. 혈소판 현탁액을 성형물 예 2 내지 4 및 미처리 폴리에틸렌 튜브 (미처리 튜브) (유동 속도 0.5 mL/분, 1 시간, 실온) 에 통과 및 순환시켰다.
통과 후 용액 중 혈소판 수 및 농도를 측정하고, 미처리 튜브 및 성형물 예 2 내지 4 의 혈소판 점착율을 계산했다. 결과를 하기 표 5 에 나타냈다.
시험 성형물 혈소판 점착율 (%)
미처리 튜브 98.1
성형물 예 2 0
성형물 예 3 0
성형물 예 4 0
표 5 에서 보듯이, 성형물 예 2 내지 4 는 혈소판 점착율에 관하여 미처리 튜브보다 확실히 낮았다. 상기 결과는 본 발명의 성형물이 탁월한 항혈전성을 나타낸다는 것을 증명한다.
실시예 12: 본 발명의 화합물의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성 1
본 시험은 세포로서 소의 대동맥 혈관 내피 세포 (통과 번호 3) 를, 배양 배지로서 10 % FCS (소태아 혈청), 100 단위/mL 페니실린 G, 및 100 ㎍/mL 스트렙토미신 함유 MEM 을 사용했다. 96-웰 마이크로플레이트에 4 ×103 세포/웰 (4 ×104/mL; 100μL ) 양의 세포를 심고, 및 화학식 1 의 화합물 (화합물 예 1 내지 10) (10 μL; 배양 배지에 용해됨) 을 각각 미리 정한 최종 농도 (0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10 ㎍/mL) 로 첨가했다. 37 ℃, 및 5 % CO2 에서 20 시간 동안 배양한 후, 혈관 내피 세포 성장에 대한 본 화합물의 효과를 "Cell Growth ELISA, BrdU Color Development Kit" (Boehringer Mannheim) (지시약으로서 5-브로모데옥시우리딘 (BrdU) 을 사용됨) 를 사용하여 측정했다.
대조구로서, 비교 화합물 1 및 2 를 동일하게 시험했다. 비교 화합물은 n 이 1 또는 2 의 정수인 화학식 25 로 나타내는 화합물이다. 상기 화학식은 n 이 1 일 경우 비교 화합물 1 (하기 표 중 비교 1) 을, n 이 2 일 경우 비교 화합물 2 (하기 표 중 비교 2) 를 나타낸다. 비교 화합물 1 및 2 를 실시예 2 에 따라 제조했다. 그러나, 히알루로니다제는 소의 고환 근원이고, 206 nm 에서 검출을 수행했다. 각 화합물의 순도는 97 % 이상이었다. 상기 화합물의 우론산 함유량 및 헥소사민 함유량은 이론값과 거의 일치했다.
각 화합물의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 하기 식으로부터 계산했다:
촉진율 (%) = {(화합물 첨가 시험에 있어서 BrdU 이용 증가량)/(대조구 시험에 있어서 BrdU 사용 증가량)} ×100
결과를 표 6 에 나타냈다.
표 6 에서 보듯이, 화합물 예 1 내지 10 모두는 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 나타냈다.
실시예 13: 본 발명의 화합물의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성 2
본 발명의 화합물과 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 와의 상호작용을 조사하기 위한 시험을 수행했다. VEGF 로서, 인간의 재조합 VEGF 를 사용했다 (Vascular Endothelial Growth Factor, Human, Recombinant, For Biochemical Use: Wako Pure Chemical Industries 제품).
VEGF (최종 농도 10 ng/mL) 를 본 화합물과 동시에 첨가한 것을 제외하고는 실시예 12 에서와 동일한 방법으로 시험을 수행했다. 비교 시험으로서, VEGF 단독 첨가 시험 (VEGF 만 첨가되는 시험) 및 음성 대조구 시험 (VEGF 도 본 화합물도 첨가되지 않는 시험) 을 수행했다. 혈관 내피 세포 성장에 대한 효과를 실시예 12 와 동일한 방법으로 수행했다.
각 화합물의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 하기 식으로부터 측정했다:
촉진율 (%) = {(본 화합물 첨가 시험 중 BrdU 사용 증가량)/(음성 대조구 시험 중 BrdU 사용 증가량)} ×100
결과를 하기 표 7 에 나타냈다.
표 7 에서, 화합물 농도 0 에 대해 컬럼에 나타난 촉진율은 VEGF 가 단독으로 첨가될 경우 수득된 촉진율을 나타낸다. 본 발명의 화합물의 단독 첨가 시험의 결과를 나타내는 표 6 및 표 7 을 기준으로, 시험 화합물 모두는 VEGF 와 상승작용하였고, 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 보였다.
실시예 14: 본 발명의 화합물의 혈관형성 촉진 활성 1
냉수 조에서 냉각하면서 재구성 완충액 (500 mM NaOH, 260 mM NaHCO3, 200 mM HEPES) 1 부피를 NaHCO3 가 없는 1/10-농도의 MEM 1 부피와 혼합했다. 그 후, 콜라겐 (pH 3.0) 의 0.3 % 염산 용액 8 부피를 첨가 한 후, 완전히 혼합하고 콜라겐 용액을 제조했다. 콜라겐 용액 (0.5 mL) 을 24-웰 마이크로플레이트에 분배하고, 겔화를 위해 37 ℃ 에서 30 분간 인큐베이션 하였다. 콜라겐 겔 상에서, 소의 대동맥 혈관 내피 세포 (통과 번호 3 내지 8) 를 5 ×104 세포/웰 의 양으로 심었다. 37 ℃ 에서 3 시간 동안 배양하여 세포가 점착되도록 하였다. 그 후, 배양 배지를 제거하고, 0.5 mL 의 콜라겐 용액을 오버레이 (overlay) 한 후, 37 ℃ 에서 30 분간 인큐베이션 하여 계를 겔화하였다. 그 후, 각종 농도로 각 화합물 예 1 내지 4 를 포함하는 2 % FBS-MEM 배지 1 mL/웰 을 첨가했다. 혼합물을 37 ℃ 의 CO2 인큐베이터에서 3 일간 배양했다. 3 일간의 배양 후, 역상 현미경으로, 형성된 혈관-유사한 강 (lumina) (신생 혈관) 을 100 배 확대하여 사진찍었다. 사진을 확인하고, Microcomputer Imaging Device (Neuroscience 제품) 를 사용해서 상을 분석하여 단위 면적 당 혈관-유사한 강의 길이를 측정했다. 대조구 시험으로서, 동일한 방법으로 본 화합물이 없는 배지에서 배양된 세포를 혈관-유사한 강의 길이에 대해 측정했다.
각 화합물의 혈관형성 촉진 활성을 하기 식으로부터 측정했다:
촉진율 (%) = {(각 시험에서 강 (lumina) 의 길이) - (대조구 시험에서의 강의 길이)]/(대조구 시험에서의 강의 길이)} ×100
결과를 하기 표 8 에 나타냈다.
표 8 에서 보듯이, 화합물 1 내지 4 모두 탁월한 혈관형성 촉진 활성을 보였다.
실시예 15: 본 발명의 화합물의 혈관형성 촉진 활성 2
화합물 예 1 및 2 의 혈관형성 촉진 활성을, 랫트를 사용하여 확산 용기 방법으로 측정했다. 즉, 확산 용기 (막의 공기 지름 0.45 ㎛; Millipore 제품) 를 모으고, 각종 농도 (0, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 M) 의 화합물 1 및 2 의 200 μL 의 생리식염수 용액을 그 안에 밀봉했다.
Wistar 랫트 (숫놈, 체중 200 내지 250 g) 에 펜토바르비탈을 복강내 투여 (10 mg/동물 1 마리) 함으로써 마취하였다. 그 후, 동물의 등을 면도하고, 묽은 요오드 색으로 소독했다. 근육을 손상시키지 않고 피부를 절개하고, 상기 용액-밀봉 확산 용기를 피하 면적 및 근막 사이에 이식했다. 절개 부위를 봉합하고, 동물을 1 주간 사육했다. 그 후, 마취한 랫트의 등을 절개하여 용기를 드러냈다. 혈관형성의 존재를 관찰한 후, 용기를 근육을 따라 잘라내고, 포르말린에 고정시켰다.
결과를 표 4 에 나타냈다. 표에서, +, ±, 및 - 는 각각 혈관형성 유도가 양성, 허위양성, 음성인 것이다.
표에서 보듯이, 화합물 1 및 2 모두 탁월한 혈관형성 촉진 활성을 보였다.
실시예 16: 중합체성 화합물로부터 제조된 성형물의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성
각각의 중합체 예 1 내지 4 의 0.01 w/v% 수용액을 제조하고, 0.5 mL/웰 의 양으로 96-웰 폴리스티렌 마이크로플레이트에 분배했다. 마이크로플레이트를 실온에서 밤새 정치시킨 후, 용액을 제거하여 플레이트를 코팅했다. 코팅된 플레이트를 사용하여 실시예 8 과 동일한 방법으로 소의 대동맥 혈관 내피 세포를 배양했다. 대조구 시험으로서, 미코팅된 플레이트를 사용하여 배양했다. 실시예 12 와 동일한 방법으로 성장 촉진 활성을 측정하고, 하기 식을 사용하여 중합체 예 (성형물) 의 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 계산했다:
촉진율 (%) = {(각 시험에서의 BrdU 의 사용 증가량)/(대조구 시험에서의 BrdU 의 사용 증가량)} ×100
결과를 하기 표 10 에 나타냈다.
코팅된 중합체 예 촉진율 (%)
1 198.1
2 184.9
3 179.8
4- - - - - - - - - - - - - - - - - - - -미코팅 182.4- - - - - - - - - - - - - - - - - - - -100.0
표 10 에서 보듯이, 중합체 예 1 내지 4 모두 탁월한 혈관 내피 세포 성장 촉진 활성을 보였다.
실시예 16: 제제의 제조예
정제 제조 1
화합물 예 1 10 g
폴리에틸렌 글리콜 6000 10 g
나트륨 라우릴 술페이트 1.5 g
옥수수 전분 3 g
락토스 25 g
마그네슘 스테아레이트 0.5 g
상기 성분을 칭량했다. 폴리에틸렌 글리콜 6000 을 70 내지 80 ℃ 로 가열하고, 화합물 예 1, 나트륨 라우릴 술페이트, 옥수수 전분, 및 락토스와 혼합한 후 냉각시켰다. 고체화된 혼합물을 분쇄기로 과립화하여 과립을 수득했다. 과립을 마그네슘 스테아레이트와 혼합한 후, 압축 정제화하여 250 mg 중량의 정제를 제조했다.
정제 제조 2
화합물 예 2 30 g
락토스 55 g
감자 전분 12 g
폴리비닐 알콜 1.5 g
마그네슘 스테아레이트 1.5 g
상기 성분을 칭량했다. 화합물 예 2, 락토스, 및 감자 전분을 균일하게 혼합했다. 폴리비닐 알콜의 수용액을 상기 혼합액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 습성 과립화함으로써 과립으로 만들었다. 과립을 건조시키고, 마그네슘 스테아레이트와 혼합했다. 그 후, 혼합물을 압축 정제화하여 200 mg 중량의 정제를 제조했다.
캡슐의 제조
화합물 예 3 10 g
락토스 25 g
옥수수 전분 5 g
마이크로결정 셀룰로스 9.5 g
마그네슘 스테아레이트 0.5 g
상기 성분을 칭량했다. 마그네슘 스테아레이트를 제외한 4 개의 성분을 균일하게 혼합했다. 마그네슘 스테아레이트를 첨가한 후, 성분을 몇 분 더 혼합했다. 혼합물을 200 mg/캡슐 의 양으로 No.1 단단한 캡슐에 채워서 캡슐을 제조했다.
분말의 제조
화합물 예 4 20 g
락토스 79 g
마그네슘 스테아레이트 1 g
상기 성분을 칭량했다. 모든 성분을 균일하게 혼합하여 20 % 분말을 제조했다
좌제의 제조
화합물 예 2 10 g
폴리에틸렌 글리콜 1500 18 g
폴리에틸렌 글리콜 4000 72 g
화합물 예 2 를 유발에서 완전히 갈아 미세 분말을 제조하고, 용융법에 의해 1 g 의 직장 좌제을 제조했다.
주사제의 제조
화합물 예 6 0.1 g
염화나트륨 0.9 g
수산화나트륨 적당량
주사제를 위한 물 100 mL
상기 성분을 칭량했다. 3 개의 성분을, 주사제를 위한 물에 용해시키고, 용액을 여과에 의해 무균화시켰다. 그 후, 용액을 앰풀 당 5 mL 양으로 10 mL 앰풀에 분배했다. 앰풀을 가열 밀봉하여 주사제를 제조했다.

Claims (38)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 하기 화학식 1 의 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 그 염의 용매화합물:
    [화학식 1]
    [식 중, R1 은 하기 화학식 2 를 나타내고 (식 중, R10 은 하기 화학식 7을 나타내고,
    [화학식 2]
    -OR10
    [화학식 7]
    식중, R17을 제외한 R16 내지 R20 이 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고, R17은 아지도기 또는 하기 화학식 9 를 나타낸다
    [화학식 9]
    -NR29R30
    (식 중, R29 및 R30 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타냄)),
    R2 내지 R8 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고,
    R35 내지 R37 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고,
    n 은 0 내지 25 의 정수를 나타내고,
    단, 화학식 1 및 7에서, 보호기는 동일하거나 상이하고, 각각 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알케닐, 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 아실, 임의 치환된 방향족 아실, 또는 임의 치환된 방향족 알킬을 나타내고,
    R17 을 제외한 R2 내지 R8, R16 내지 R20, R29, R30, R35 내지 R37의 보호기 중 임의의 둘은, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 알킬리덴, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 시클릭 알킬리덴, 임의 치환된 벤질리덴, 또는 임의 치환된 프탈로일을 함께 형성할 수 있고,
    n 이 2 이상일 경우, R2 내지 R8 은 반복 단위체 내에서 동일하거나 상이할 수 있다].
  6. 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 하기 화학식 1 의 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 그 염의 용매화합물:
    [화학식 1]
    [식 중, R1 은 하기 화학식 2를 나타내고 (식 중, R10 은 하기 화학식 8 을 나타내고,
    [화학식 2]
    -OR10
    [화학식 8]
    식중, R26 을 제외한 R21 내지 R28 이 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고,R26 은 아지도기 또는 하기 화학식 9 를 나타낸다
    [화학식 9]
    -NR29R30
    (식 중, R29 및 R30 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타냄)),
    R2 내지 R8 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고,
    R35 내지 R37 은 동일하거나 상이하고, 각각 수소 원자 또는 보호기를 나타내고,
    n 은 0 내지 25 의 정수를 나타내고,
    단, 화학식 1 및 8 에서, 보호기는 동일하거나 상이하고, 각각 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알킬, 2 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 직쇄 또는 분지쇄 알케닐, 1 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 아실, 임의 치환된 방향족 아실, 또는 임의 치환된 방향족 알킬을 나타내고,
    R26 을 제외한 R2 내지 R8, R21 내지 R30, R35 내지 R37의 보호기 중 임의의 둘은, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 알킬리덴, 3 내지 8 개의 탄소 원자를 갖는 임의 치환된 시클릭 알킬리덴, 임의 치환된 벤질리덴, 또는 임의 치환된 프탈로일을 함께 형성할 수 있고,
    n 이 2 이상일 경우, R2 내지 R8 은 반복 단위체 내에서 동일하거나 상이할 수 있다].
  7. 삭제
  8. 제 5 항에 있어서, R17 이 화학식 9 인 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물.
  9. 제 6 항에 있어서, R26 이 화학식 9 인 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는 화합물, 상기 화합물의 약리학적으로 허용가능한 염 및 용매 화합물, 또는 상기 염의 용매 화합물.
  10. 삭제
  11. 삭제
  12. 삭제
  13. 삭제
  14. 삭제
  15. 삭제
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 삭제
  21. 삭제
  22. 삭제
  23. 활성 성분으로서 하나 이상의 제 5 항 또는 제 6 항의 화합물을 포함하는, 항혈소판 작용과 관련된, 혈전증, 뇌혈관 질병, 대뇌혈관 장애, 및 말초 혈관 장애 치료 및 예방을 위한 약학적 조성물.
  24. 삭제
  25. 활성 성분으로서, 제 5 항 또는 제 6 항의 화합물로서, 식중, n이 1 또는 2인 화합물을 포함하고, 혈관 내피 세포 성장 촉진 작용 또는 혈관 형성 촉진 작용과 관련된, 심혈관 질환(급성 심근경색, 불안정성 협심증, 만성 안정성 협심증, 오래된 심근경색, 심방세동에 의한 혈전색전증, 산재성 혈관내 응고 증후군(DIC), 관상 바이패스 수술 후 이식편 폐쇄증, 경피 경관 관상 혈관성형술(PTCA) 후 관상 협착증 및 폐쇄증, 보철 심장판 복위 후 혈전증 합병증(혈전색전증, 혈전증 이환 판), 폐의 혈전색전증, 대뇌혈관장애(대뇌의 일과성 허혈성 발작(TIA), 뇌경색), 말초 동맥 폐쇄증(폐쇄성 동맥 경화증, 폐쇄성 혈전혈관염, 혈관재생 후 폐쇄증), 사구체신염, 신증후군, 및 다른 혈전증(본태성 혈소판혈증, 혈전성 혈소판감소성자반(TPP), 용혈성 요독성증후군, 항인지질 항체 증후군, 가와사끼병, 자간증, 베세트병) 치료 및 예방; 및 창상(욕창, 당뇨병궤양, 화상, 각막 창상, 화학요법 또는 방사선 요법을 받는 암환자의 구강점막염, 수술 후 창상, 예를 들어 피부이식편, 위장 조직 손상 등의 만성 피부 궤양) 치료 및 예방을 위한 약학적 조성물.
  26. 삭제
  27. 삭제
  28. 삭제
  29. 측쇄 구조로서 하나 이상의 제 5 항의 화합물을 갖는 중합체.
  30. 활성 성분으로서 하나 이상의 제 5 항의 화합물 또는 제 29 항의 중합체를 포함하는 코팅제.
  31. 재료로서 하나 이상의 제 29 항의 중합체를 사용한 성형물.
  32. 하나 이상의 제 30 항의 코팅제를 사용하여 제조된 성형물.
  33. 성분으로서 하나 이상의 제 31 항 또는 제 32 항의 성형물을 사용하는 인공 장기.
  34. 제 33 항에 있어서, 체외 순환형 인공 장기, 또는 이식가능한 인공 장기인 것을 특징으로 하는 인공 장기.
  35. 성분으로서 하나 이상의 제 31 항 또는 제 32 항의 성형물을 사용하는 의료 장치.
  36. 제 35 항에 있어서, 체외 의료 장치, 신체 내부에 연결된 체외 의료 장치, 또는 이식가능한 의료 장치인 것을 특징으로 하는 의료 장치.
  37. 활성 성분으로서 제 29 항의 중합체를 포함하는 세포 배양 조성물.
  38. 재료로서 하나 이상의 제 29 항의 중합체를 사용한 성형물, 활성 성분으로서 하나 이상의 제 5 항의 화합물 또는 제 29 항의 중합체, 또는 이들 모두를 포함하는 코팅제를 사용하여 제조된 세포 배양 장치.
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