JP4301602B2 - 血管内皮細胞増殖促進剤 - Google Patents
血管内皮細胞増殖促進剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4301602B2 JP4301602B2 JP27389598A JP27389598A JP4301602B2 JP 4301602 B2 JP4301602 B2 JP 4301602B2 JP 27389598 A JP27389598 A JP 27389598A JP 27389598 A JP27389598 A JP 27389598A JP 4301602 B2 JP4301602 B2 JP 4301602B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- formula
- protecting group
- hydrogen atom
- optionally substituted
- different
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 0 *CCC1OC(*)C(*)C(*)C1* Chemical compound *CCC1OC(*)C(*)C(*)C1* 0.000 description 6
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、グルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物を有効成分として含む血管内皮細胞増殖促進剤および細胞培養用組成物に関する。また、前記化合物を側鎖構造にもつ高分子物質を用いて製造した血管内皮細胞被覆型人工臓器、血管内皮細胞被覆型医療用具および細胞培養用器材に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血管内皮細胞は、全身の血管内腔を連続して被覆する一層の細胞群である。正常な血管内皮細胞は、▲１▼血管透過性の抑制、▲２▼血管内腔の抗血栓化、▲３▼血管平滑筋の弛緩、収縮の調節、▲４▼血管壁細胞の遊走や増殖の制御のような多彩な機能を果たしており、血管内皮細胞は血管を血管たらしめる中心的存在であると言われている。
【０００３】
ヒトは血管とともに老いるといわれており、血管壁は年齢とともに障害を受ける。血管壁が障害を受けて破綻すると、血管の破綻は心筋梗塞、大動脈瘤、脳卒中、あるいは壊死といった循環器疾患の形で現れる。血管壁の破綻の最大の原因は動脈硬化である。
【０００４】
現在の動脈硬化の治療又は予防は、そのほとんどが脂質代謝の改善という面からのアプローチであり、薬剤としては抗高脂血症剤が汎用されている。その他、動脈硬化部位の血管の閉塞を防ぐ目的で抗血小板剤や抗血液凝固剤が投与される。しかし、これらの薬剤は、血管壁の破綻を積極的に治療するものではなく、破綻の原因の一つである高脂血症あるいは破綻の進展原因の一つである血栓形成を押さえ込むことによって破綻の進展を防ぐという間接的な作用を期待するものである。
【０００５】
動脈硬化の発症、進展には、血管内皮細胞の損傷や機能喪失が重要かつ不可欠であるとされている。前述のように、従来の療法では、治療を行ううえで最も重要な血管の破綻の根本的原因の解消、即ち血管内皮細胞の再生および機能回復については単純に生体がもつ修復機能に依存するのみであった。従って、損傷を受けて本来の機能を喪失した血管内皮細胞の再生や機能回復を促進する、いわゆる「血管内皮再生療法」は従来の治療法の欠点を克服し得る極めて有用な治療法であるといえる。しかし、血管内皮再生療法に利用しうる薬剤は実用化されておらず、優れた薬剤の開発が望まれている。血管内皮再生療法の例としては、実験的に傷害したウサギの血管内皮障害部位に血管内皮細胞成長因子（VEGF）の遺伝子を導入してVEGFを発現させ、その有効性を検討した報告（Asahara, T. et al., Circulation, 94, 3291, 1996）などがある。
【０００６】
経皮経管的冠動脈形成術（PTCA）は、血管内に入れたバルーンカテーテルを膨らませ（バルーニング）、動脈硬化の進展によってできた狭窄部位を拡張する手法であり、冠動脈硬化症の確立された治療法の一つである。しかし、術後６ヶ月以内に３０〜５０％の患者に再狭窄が認められ、大きな問題となっている。再狭窄は、バルーニングによって引き起こされ、急激に進行する一種の動脈硬化症であるといえる。これまで、バルーニングの手技の工夫やカテーテルの改良などとともに様々な薬剤を用いた治療が試みられてきたが、未だに充分であるとは言い難く、より優れた治療法や薬剤の開発が期待されている。血管内皮再生療法ならば、PTCA後の再狭窄を効果的に予防できると考えられ（前記のAsaharaらの報告を参照されたい）、これに用いる優れた薬剤の開発が期待されている。
【０００７】
心筋梗塞などの虚血性疾患の予後は、多くの因子によって影響を受けるが、側副血行路の発達の程度は、最も重要な予後決定因子の一つであると考えられている。側副血行路の充分な発達があれば、狭窄や閉塞（梗塞）が生じても、虚血や組織の壊死が押さえられ、梗塞サイズの縮小や予後の改善が得られる。従来、側副血行路形成の機序として、血管内圧や血流の変化が重要視されてきたが、側副血行路形成時に血管内皮細胞や血管平滑筋細胞にＤＮＡ合成を伴う細胞分裂像が認められることが報告され、側副血行路の形成過程は、単に既存の吻合血管の物理的要因による拡張だけでなく、少なくともその一部は血管壁構成細胞の増殖が関与する血管新生過程であると理解されるようになっている。近年、「血管新生療法」という新しい治療法によって虚血性心疾患を治療しようとする試みがなされている（例えば、Yanagisawa-Miwa, A. et al., Science, 257, 1401, 1992）。血管新生療法とは、虚血組織周辺の血管新生を促進することによって積極的に側副血行路を確保し、虚血組織を保護しようとする試みであり、"pharmacological bypass therapy(薬物投与によるバイパス形成療法）"ともいえる新しい治療法である。しかし、未だに実用化には至っておらず、これに用いることのできる優れた薬剤や治療法の開発が期待されている。また、血管新生促進活性をもつ物質（例えば、線維芽細胞成長因子）を創傷の治療に利用する試みがなされている（Hockel, M. et al., Arch. Surg., 128, 423, 1993などを参照されたい）。
【０００８】
人工臓器とは、心臓、血管、心臓弁、肺、膵臓、腎臓、肝臓、皮膚、粘膜などの各種の生体組織および臓器の機能を人工的な材料を用いた成型物やそれを部品として用いた装置によって補助あるいは代行しようとするものである。人工臓器は、生体内に埋入したり、血管へのカニュレーションによって引き出した血液を接触させることによってその機能を発揮するため、それらに用いる材料は生体に害を与えることなく使用できる性質、つまり、生体適合性をもたなければならない。人工臓器の生体適合性を規定する最も重要な生体の反応は血栓形成反応である。血栓形成を避けるために、血液と接触しても血栓を形成しない材料、すなわち、抗血栓性材料の開発が試みられてきた。体内で血液と直接触れるのは血管内皮を構成する血管内皮細胞であり、正常な血管内皮細胞の上では血栓は形成されない。当然のことではあるが、最も優れた抗血栓性材料は天然の抗血栓性材料である血管内皮細胞といえる。本来の臓器と同様に人工臓器の血液接触面が血管内皮細胞で被覆されていれば、血栓形成反応は起こらない。血管内皮細胞の抗血栓性を積極的に利用した人工臓器を開発する試みとして新生内膜治癒促進型人工血管などの臨床応用が試みられており、ある程度の成果が得られている（例えば、Noishiki, Y. et al., Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs., 27, 309, 1986）。これまで、細胞親和性の高い材料を用いたり、成型物の有孔性を高くすることによって細胞侵入を促進するなどといった方法でアプローチがなされているが、血管内皮細胞の成長を促進する物質を利用して血管内皮細胞の被覆を促進するといった試みはほとんどなされていない。
【０００９】
また、人工臓器以外にも、血液と接触する機会のある医療用具にも抗血栓性をもつ材料を用いることが望ましい。特に、ステントのように血管内に留置される体内埋め込み用医療用具は長期間血液と接触し続けることからも高い生体適合性（抗血栓性）をもつことが要求される。これらの理由からも、より優れた抗血栓性材料の開発が期待されている。
【００１０】
さらに、血管内皮細胞の成長促進作用をもつ物質は細胞培養用組成物や細胞培養用器材の材料としても利用可能である。
【００１１】
なお、本発明者らは、特願平10-120425号において本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に使用する式（１）の化合物が血小板粘着凝集抑制作用を有することを示したが、血管内皮細胞増殖促進作用については開示していない。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
上記の記述から明らかなように、優れた血管内皮細胞増殖促進物質および血管内皮細胞増殖促進作用をもつ高分子物質の提供は医療上ならびに細胞生物学的実験を行ううえでの重要な課題である。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、かかる課題を解決するために鋭意研究を重ねてきた結果、一般式（１）に示される化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物が優れた血管内皮細胞増殖促進作用および血管新生促進作用を有することを見いだし、さらに、その化合物を側鎖構造として有する高分子物質が優れた血管内皮細胞増殖促進作用を有することを見いだして本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は一般式（１）で表されるグルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物を有効成分として含む血管内皮細胞増殖促進剤を提供する。
【００１５】
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は血管内皮再生療法または血管新生療法のための治療薬または予防薬として有用である。
【００１６】
本発明はまた、一般式（１）で表される化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を有効成分として含む細胞培養用組成物を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、一般式（１）で表される化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を有効成分とする血管内皮細胞増殖促進用コーティング剤を提供する。
【００１８】
本発明はさらに、一般式（１）で表される化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を材料として用いた血管内皮細胞増殖促進用成型物を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、前記成型物および／または前記コーティング剤を使用して製造した血管内皮細胞被覆型人工臓器を提供する。
【００２０】
本発明はさらに、前記成型物および／または前記コーティング剤を使用して製造した血管内皮細胞被覆型医療用具を提供する。
【００２１】
本発明はさらに、前記成型物および／または前記コーティング剤を使用して製造した細胞培養用器材を提供する。
【００２２】
【発明の実施の形態】
［本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に使用する化合物］
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤中に有効成分として含まれる化合物は、下記一般式（１）で表される グルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物である。
【００２３】
式（１）
【化１７】
［式（１）中、R1は保護基または下記式（２）〜（５）を表す。式（２）〜（５）中、R12は水素原子、保護基または下記式（６）〜（８）を表し、R13は水素原子または保護基を表す。ただし、R12およびR13が水素原子または保護基である場合、R1はCOOR4に対してトランス結合あるいはシス結合のどちらであってもよい。
【００２４】
式（２）
−OR12
式（３）
−NHR13
式（４）
−CH2R13
式（５）
−SR13
式（６）
【化１８】
式（７）
【化１９】
式（８）
【化２０】
また、R12が式（６）〜（８）である場合、式（６）〜（８）中、R15、R19およびR28を除くR14〜R30は同一または異なって水素原子または保護基を表し、R15、R19およびR28はアジド基または下記式（９）を表す。
【００２５】
式（９）
−NR31R32
式（９）中、R31およびR32は、同一または異なり水素原子または保護基を表す。
【００２６】
式（１）中、R2〜R8は同一または異なって水素原子または保護基を表す。
【００２７】
式（１）中、R9〜R11は、同一または異なって水素原子または保護基を表す。
【００２８】
式（１）中、nは０〜２５の整数を表す。
（ただし、nが０のときは、R1は式（２）、R12は式（８）で表される基である。）
【００２９】
式（１）および式（６）〜（８）中、保護基は互いに同一または異なり、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭素原子数１〜８のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、または置換されていてもよい芳香族アルキルであり、またR15、R19およびR28を除くR2〜R30の任意の保護基２つが一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。
【００３０】
また、nが２〜２５の場合、R2〜R8は、繰り返し単位ごとに同一であっても異なっていてもよい。］
すなわち、本発明の血管内皮細胞増殖促進剤中に有効成分として含まれる式（１）で表される化合物は、下記式（10）で表されるD-グルコサミン誘導体と式（11）で表されるD-グルクロン酸誘導体が結合した構造を有する。
【００３１】
式（10）
【化２１】
［式（10）中、Ｒ31〜R36は水素原子または保護基を表す。］
式（11）
【化２２】
［式（11）中、R37は水酸基または保護基を表し、R38〜R41は水素原子または保護基を表す。］
式（１）において、nは０〜２５の整数を表すが、nが０のときR1は式（２）、R12は式（８）で表される基である。すなわち、式（１）の化合物は下記式（12）で表される。
【００３２】
式（12）
【化２３】
本発明でいう保護基とは、Theodra W. Green著の“Productive Groups in Organic synthesis”；第２判；1991年刊に表されている各種の保護基を含むものである。
【００３３】
上記式（１）〜（12）中で示される保護基は、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキルとしては例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、第三級ブチル、ペンチル、オクチル、メトキシメチル、第三級ブチルチオメチル、1-エトキシエチル、シロキシメチルまたは2-メトキシエトキシメチルなどを表し、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニルとしては、例えば、エテニル、1-プロペニル、２-プロペニル、ブテニルまたはオクテニルなどを表し、置換されていてもよい１〜８の直鎖または分枝鎖のアシルとしては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリルまたはピバロイル、またはハロゲン化アシルなどを表し、ハロゲン化アシルとしては例えば、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチルなどを表し、置換されていてもよい芳香族アシルとしては例えば、ベンゾイル、パラクロロベンゾイルなどを表し、置換されていてもよい芳香族アルキルとしては、例えば置換されていてもよいベンジル、置換されていてもよいジフェニルメチルまたは置換されていてもよいトリフェニルメチルなどを表し、置換されていてもよいベンジルとしては、例えば4-メトキシベンジルなどを表す。さらに、式（１）〜（12）中で示される保護基は、R15、R19およびR28を除くR2〜R30の任意の保護基２つが一緒になって、１つの保護基を表してもよく、即ち置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデンとしては例えば、プロピリデン、ブチリデンまたはオクチリデンなどを表し、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデンとしては例えば、シクロペンチリデン、シクロヘキシリデンまたはシクロヘプチリデンなどを表す。水酸基の保護基としては置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖アシル、置換されていてもよい芳香族アルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたは置換されていてもよいベンジリデンなどが好ましく、さらに好ましくはアセチル、ベンジル、1-プロペニルまたはベンジリデンなどを表し、アミノ基の保護基としては、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアシルまたは置換されていてもよいフタロイルなどが好ましく、さらに好ましくはアセチルまたはフタロイルなどを表し、カルボキシル基の保護基としては、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキルまたは置換されていてもよい芳香族アルキルなどが好ましく、さらに好ましくは、メトキシル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、イソペンチルまたはジフェニルメチルなどを表す。上記の保護基は、同一の化合物中で互いに同一でも異なっていてもよく、任意に選ばれる。
【００３４】
式（１）中のnは０〜２５の整数であり、好ましくは、０〜 １０、特に好ましくは０〜５、さらに好ましくは０〜２である。
【００３５】
R1は上記の記載に合致するものであればよいが、特に、前記式（6）〜（8）であること、すなわち、式（１）の化合物が下記式（13）〜（15）であることが好ましい。
【００３６】
式（13）
【化２４】
式（14）
【化２５】
式（15）
【化２６】
また、さらに前記式（13）〜（15）において、R15、R19、R28が前記式（９）であることが特に好ましい。
【００３７】
本発明における薬理学的に許容される塩とは、式（１）の化合物を治療に必要な量を投与する場合に、生体に対して悪影響を及ぼさない、あるいは、式（１）の化合物の有効な薬理学的な性質を塩としたことで損なわない塩であることを意味する。具体例としては、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩；フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩；フマル酸塩、コハク酸、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；およびグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩をあげることができる。またさらに、式（１）の化合物およびその塩は、薬理学的に許容される各種の溶媒、例えば水、有機溶媒、緩衝液などとの溶媒和物や結晶多形のものなども含まれる。
【００３８】
式（１）の化合物は置換基の種類によって不斉炭素原子を有し、不斉中心の存在に基づく光学異性体が存在する場合がある。本発明の化合物には、各々の異性体、および、それらの混合物のすべてが含まれる。例えば、ある光学異性体とその鏡像異性体（エナンチオマー）との混合物、特に、等量混合物であるラセミ体、また、あるいは、ある光学異性体とそのジアステレオマーとの混合物も含まれる。
【００３９】
［式（１）の化合物の製造法］
当然のことではあるが、本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に使用する化合物を得る方法には種々の方法がある。例えば、グルクロン酸誘導体やグルコサミン誘導体などを原料にして有機化学的手法によって中間体あるいは目的化合物を合成・修飾する方法や多糖を酸やアルカリなどを用いて分解して中間体あるいは目的化合物を得る方法などの有機化学的手法、グルクロン酸やN-アセチルグルコサミンなどを原料にして転移酵素や分解酵素の逆反応などを利用して中間体あるいは目的化合物を合成・修飾する方法や多糖を酵素を用いて分解して中間体あるいは目的化合物を得る方法などの生化学的手法、あるいは、微生物や細胞に酵素の遺伝子を導入して原料、中間体あるいは目的化合物、または合成・修飾に用いる酵素を得るなどの遺伝子工学的手法などを、単独あるいは組み合わせて用いる方法をあげることができる。
【００４０】
式（１）の化合物の好ましい製造法は前記の特願平10-120425号に詳しく記載されている。
【００４１】
［本発明の血管内皮細胞増殖促進剤、およびその投与方法、投与量および剤形］本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は、式（１）の化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物の少なくとも一つをを有効成分として含む。
【００４２】
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は、通常、全身的または局所的に、そして経口的または非経口的に投与される。投与量は、疾患の種類、症状の程度、投与対象の年齢や体重などの諸条件をもとに総合的に判断し、最適な量を適宜決定するべきであり、特に限定されない。しかし、通常、本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に有効成分として含まれる式（１）の化合物の量として、成人では１日当たり経口投与の場合0.01〜100mg/kg、非経口投与の場合0.001〜10mg/kgである。投与は必要に応じて１日１回ないし複数回に分けて行われる。
【００４３】
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤の投与は、固体組成物、液体組成物およびその他の組成物の経口投与、注射剤、外用剤、坐剤などの非経口投与のいずれの形態であってもよく、必要に応じて最適な方法が選択される。本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は、式（１）の化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物の少なくともひとつを有効成分として含有し、これに通常の製剤化に用いられる担体、賦形剤、その他の添加剤を加えて当業者に公知の方法で調製することができる。製剤用の担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげることができる。
【００４４】
経口投与のための固体組成物としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などが用いられる。このような固体組成物においては、少なくともひとつの活性物質（有効成分）が少なくともひとつの不活性な希釈剤、例えば、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどと混合される。組成物は、常法にしたがって不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、グルタミン酸またはアスパラギン酸のような溶解補助剤を含んでいてもよい。錠剤または丸剤は、必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣や胃溶性または腸溶性物質のフィルムで被覆してもよいし、２つ以上の層で被覆してもよい。さらに、ゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも含まれる。
【００４５】
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などを含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールなどを含んでいてもよい。この組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤などを含んでいてもよい。
【００４６】
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤が含まれる。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば、注射用水および注射用生理食塩液が含まれる。非水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート80（登録商標）などが含まれる。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、乳糖）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。これらは、例えば、精密ろ過膜によるろ過滅菌、高圧蒸気滅菌のような加熱滅菌、あるいは、殺菌剤の配合などの通常の滅菌方法によって無菌化することが可能である。また、無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００４７】
非経口投与のためのその他の血管内皮細胞増殖促進剤としては式（１）の化合物の少なくともひとつを有効成分として含み、常法によって処方される外用液剤、軟膏剤、塗布剤、坐剤、経皮剤、点眼剤などが含まれる。
【００４８】
［本発明で使用する高分子およびその製造法］
本発明で使用する高分子とは、式（１）の化合物を側鎖構造として有する高分子化合物のことである。これらの高分子の製造に用いる主鎖となるポリマーは生体適合性ポリマーであることが好ましく、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル、エチレン酢酸ビニル、ポリプロピレン、ポリカーボネイト、シリコン、ポリメチルメタクリレート、ポリ四フッ化エチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリアミド、ポリスルホン、ＡＢＳ樹脂、ポリアセタールおよびこれらの誘導体を挙げることができる。主鎖と側鎖の間には適当なスペーサを入れることもでき、これによって側鎖に柔軟性を付与することができる。また、式（１）の化合物を側鎖構造に有する複数の高分子化合物のブロックコポリマーであってもよい。さらには、式（１）の化合物に加えて、ヘパリンなどの血栓形成抑制物質やウロキナーゼなどの血栓溶解酵素などの抗血栓作用を有する物質を併せて結合してもよい。
【００４９】
当然のことながら、本発明で使用する高分子は製造法によって限定されるものではなく、目的とするものが得られるのであれば、どのような方法を用いても差し支えない。これらの高分子を得るには種々の方法があり、それらの方法を単独あるいは組み合わせて用いることができる。これらの製造法は当業者に公知である。例えば、主鎖となるポリマーのモノマーに本発明の化合物を結合した後、重合反応を行い主鎖ポリマーを形成してもよく、あるいは主鎖ポリマーに本発明の化合物を結合してもよい。
【００５０】
式（１）の化合物はグルクロン酸誘導体やグルコサミン誘導体といった生体成分の誘導体をその構造中にもつことからもわかるように生体適合性が高く、生体に悪影響を及ぼすことが少なく、仮に高分子から式（１）の化合物が脱落したとしても生体に悪影響を及ぼすことが少ない。
【００５１】
［本発明のコーティング剤、成型物およびその製造法］
本発明はさらに、式（１）の化合物または前記高分子の少なくともひとつを有効成分とする血管内皮細胞増殖促進用コーティング剤を提供する。このようなコーティング剤は式（１）の化合物または高分子を適当な溶媒に溶解、分散し、人工臓器や医療用具などに塗布、含浸、スプレーコーティングなどの方法によりコーティングすることができる。
【００５２】
本発明の血管内皮細胞増殖促進用成型物は、式（１）の化合物または前記高分子の少なくともひとつを材料として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。したがって、材料のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。本発明の成型物を得るには、化合物や高分子を別に製造した成型物にコーティングする方法、化合物を別に製造した成型物と結合させる方法、化合物や高分子を含む材料から直接成型する方法など、種々の方法があり、それらの方法を単独あるいは組み合わせて用いることができる。
【００５３】
本発明の成型物は、優れた血管内皮細胞成長促進作用を有するため、人工臓器、医療用具の部品あるいはそれ自体として用いることができる。成型物の形状は用いる材料の性質にもよるが、その使用目的に応じて、フィルム状物、膜状物、管状物、板状物、網状物、繊維状物、布状物などのいずれかの形状にすることができる。
【００５４】
［本発明の人工臓器およびその製造法］
本発明の血管内皮細胞被覆型人工臓器は、式（１）本発明の化合物あるいは本発明の高分子の少なくともひとつを材料として、または、本発明の成型物の少なくともひとつを部品として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。また、このようにして製造された人工臓器あるいはその他の方法で製造された従来型の人工臓器に、さらに本発明のコーティング剤を塗布して製造することもできる。したがって、材料あるいは部品のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。
【００５５】
本発明の血管内皮細胞被覆型人工臓器の例としては、人工血管、人工心臓、心臓ペースメーカー、人工心臓弁、人工腎臓、人工肺、人工心肺、人工膵臓、人工骨、人工関節、人工靭帯などをあげることができる。
【００５６】
［本発明の医療用具およびその製造法］
本発明の血管内皮細胞被覆型医療用具は、式（１）本発明の化合物あるいは本発明の高分子の少なくともひとつを材料として、または、本発明の成型物の少なくともひとつを部品として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。また、このようにして製造された医療用具あるいはその他の方法で製造された従来型の医療用具に、さらに本発明のコーティング剤を塗布して製造することもできる。したがって、材料あるいは部品のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。
【００５７】
本発明の血管内皮細胞被覆型医療用具の例としては、カニューレやステントなどをあげることができる。
【００５８】
［本発明の細胞培養用組成物］
本発明の細胞培養用組成物は従来の細胞培養用組成物に式（１）の化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を添加して製造することができる。式（１）の化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を添加する細胞培養用培地には、例えば199培地、MEM（イーグルの最小必須培地）、BME（イーグルの基本培地）、DMEM（ダルベッコ変法イーグル培地）、RPMI1640，Ham's F12培地、MCDB104，MCDB153を含むがこれに限定されない。本発明の細胞培養用組成物を用いて培養することのできる細胞には、魚類細胞、両生類細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞などの脊椎動物の細胞を含むが、これに限定されない。式（１）の化合物は顕著な血管内皮細胞増殖促進作用および血管新生促進作用を有することから、本発明の細胞培養用組成物は哺乳動物細胞、特に血管内皮細胞の培養時に用いて、試験研究用の培養に利用できることはもちろんのこと、細胞成長因子（例えば、VEGF）のような有用物質の生産に用いたり、火傷の治療用の人工培養皮膚のような治療用組織の製造にも利用することができる。
【００５９】
［本発明の細胞培養用器材］
本発明の細胞培養用器材は、式（１）の化合物あるいは本発明の高分子の少なくともひとつを材料として、または、本発明の成型物の少なくともひとつを部品として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。また、このようにして製造された細胞培養用器材あるいはその他の方法で製造された従来型の細胞培養用器材に、さらに本発明のコーティング剤を塗布して製造することもできる。したがって、材料あるいは部品のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。
【００６０】
本発明の細胞培養用器材の例としては、シャーレ、フラスコ、マイクロプレート、ボトルなどをあげることができる。
【００６１】
［式（１）の化合物および高分子の血管内皮細胞増殖促進作用］
種々の式（１）の化合物の血管内皮細胞増殖促進作用をウシ大動脈内皮細胞を用いて測定した。その結果、試験に用いた式（１）の化合物はいずれも低濃度で優れた増殖促進作用を示した。また、式（１）の化合物は、血管内皮細胞に特異的に作用し、血管内皮細胞の増殖を促進するサイトカインとして知られる血管内皮細胞成長因子（VEGF）と相乗的に作用し、より優れた血管内皮細胞増殖促進作用を示した。これは、式（１）の化合物が生体由来の内因性および治療目的で投与あるいは誘導された外因性のVEGFと相乗的に作用することによって、より優れた血管内皮細胞増殖促進作用を発現することを示すものである。
【００６２】
本発明で使用する前記高分子をコーティングしたマイクロプレートでウシ大動脈内皮細胞を培養し、血管内皮細胞増殖促進作用を測定した。その結果、本発明の高分子（本発明の成型物）はいずれも優れた増殖促進作用を示した。
【００６３】
［式（１）の化合物の血管新生促進作用］
種々の式（１）の化合物の血管新生促進作用をウシ大動脈内皮細胞を用いて測定した。その結果、式（１）の化合物はいずれも優れた血管新生促進作用を示した。
【００６４】
【発明の効果】
式（１）の化合物およびその薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物は、優れた血管内皮細胞増殖促進作用と優れた血管新生促進作用を有し、これらの作用に基づく治療薬として有用である。具体的には、血管内皮再生療法あるいは血管新生療法に用いる治療薬および予防薬（血管内皮細胞増殖促進剤、血管新生促進剤）として有用である。さらに具体的には、循環器疾患（急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性安定型狭心症、陳旧性心筋梗塞、心房細動による血栓塞栓症、汎発性血管内血液凝固症候群（DIC）、冠動脈バイパス術後のグラフト閉塞、経皮的冠動脈形成術（PTCA）後の冠動脈の狭窄および閉塞、人工心臓弁置換術後の血栓性合併症（血栓栓塞症、血栓弁）、肺血栓・栓塞症、脳血管障害（一過性脳虚血発作（TIA）、脳梗塞）、末梢動脈閉塞症（閉塞性動脈硬化症、閉塞性血栓血管炎、血行再建術後の閉塞）、糸球体腎炎，ネフローゼ症候群、その他の血栓症など（本態性血小板症、血栓性血小板減少性紫斑病（TPP）、溶血性尿毒症症候群、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、子癇、ベーチェット病）の治療および予防、創傷（褥瘡などを含む慢性皮膚潰瘍、糖尿病性潰瘍、火傷、角膜創傷、化学療法・放射線療法を受けた癌患者の口腔粘膜炎、皮膚移植などの各種手術後の創傷、胃腸組織の損傷など）の治療に対して有効である。
【００６５】
式（１）の化合物およびこれを側鎖構造として有する高分子は優れた血管内皮細胞増殖促進作用を有し、血管内皮細胞の被覆を促進するため、抗血栓性を必要とする成型物をつくるための材料あるいはコーティング剤として有用である。また、これらの化合物、高分子および成型物は優れた血管内皮細胞増殖促進作用を有し、血管内皮細胞の被覆を促進するため、抗血栓性を必要とする人工臓器、医療用具の部品あるいはそれ自体として有用である。
【００６６】
さらに、式（１）の化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子は細胞培養用組成物の成分として有用であり、式（１）の化合物およびこれを側鎖構造として有する高分子は細胞培養用器材としての利用が期待できる。
【００６７】
【実施例】
以下の実施例において、化合物製造例、高分子製造例、成型物製造例、血管内皮細胞増殖促進作用試験例、血管新生促進作用試験例および製剤製造例、をあげて本発明をさら詳しく説明する。なお、当然のことではあるが、本発明は以下の実施例に記載された物質、処方および方法に限定されるものではなく、特許の請求の範囲に含まれるすべての物質、処方および方法を含むものである。
【００６８】
実施例１：化合物製造例１
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例１）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例２）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例３）］および4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例４）］の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（紀文フードケミファ製；商品名「ヒアルロン酸FCH」）30ｇを蒸留水３Lに溶解し、40℃となるように加温した。0.1M水酸化ナトリウム水溶液で溶液のpHを6.0に調整した後、Streptomyces hyalurolyticus由来のヒアルロニダーゼ（天野製薬製；商品名「ヒアルロニダーゼ“アマノ”」）をヒアルロン酸ナトリウム１mgあたり0.5濁度減少単位となるように添加し、40℃で100時間反応を行った。反応後、公称分画分子量10ｋの親水性ポリエーテルスルフォン製の限外ろ過（ミリポア製）によって溶液中から酵素を除去した。凍結乾燥することによって溶媒を除去し、分解物（27.4ｇ）を得た。
【００６９】
分解物を陰イオン交換クロマトグラフ法（カラム：YMC-Pack IEC-AX，溶離液：A;水,B;0.4M NaCl;リニアグラジェント（30分），検出:UV(232nm)）によって分画し（化合物例１、２、３、４の順に溶出）、化合物例１〜４を含む画分を得た。各画分をゲルろ過法（担体：セファデックスG-10，溶離液：水）によって脱塩後、凍結乾燥して化合物１〜４（白色粉末）を得た。収量は、それぞれ、化合物例１:1.7g,化合物例２:5.9g,化合物例３:3.4g,化合物例４:2.2gであった。各化合物はナトリウム塩として得られた。
【００７０】
化合物例１〜4は下記式（16）で表される化合物である。式（16）において、nは１〜４の整数を示し、nが１のとき化合物例１、２のとき化合物例２、３のとき化合物例３、４のとき化合物例４を示す。
【００７１】
下記式（16）
【化２７】
高速液体クロマトグラフ法（カラム:TSKgel DEAE-5PW，溶離液：A;水,B;0.3M NaCl;リニアグラジェント（20分），検出:UV(232nm);面積百分率法）によって測定した各化合物の純度は97％以上であった。化合物例１〜４の各々のウロン酸含量をグルクロノラクトンを標準品としてBitterとMuirの方法（Bitter,T.,Muir,H.:Anal.Biochem.,4,330(1962).） によって、ヘキソサミン含量を3N塩酸中100℃で16時間加水分解後、グルコサミン塩酸塩を標準品としてBoasの方法（ただし、樹脂処理なし；Boas,N.,F.:J.Biol.Chem.,204,553(1953).）によって分析したところ、各化合物例の分析値はほぼ理論値通りであった。
【００７２】
実施例２：化合物製造例２
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例１）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例２）］の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（紀文フードケミファ製；商品名「ヒアルロン酸FCH」）60ｇを蒸留水３Lに溶解し、40℃となるように加温した。0.1M水酸化ナトリウム水溶液で溶液のpHを6.0に調整した後、Streptomyces hyalurolyticus由来のヒアルロニダーゼ（天野製薬製；商品名「ヒアルロニダーゼ“アマノ”」）をヒアルロン酸ナトリウム１mgあたり１濁度減少単位となるように添加し、40℃で100時間反応を行った。反応後、公称分画分子量10ｋの親水性ポリエーテルスルフォン製の限外ろ過（ミリポア製）によって溶液中から酵素を除去した。凍結乾燥することによって溶媒を除去し、分解物（53.7ｇ）を得た。
【００７３】
分解物を陰イオン交換クロマトグラフ法（カラム：TSKgel DEAE-5PW，溶離液：A;水,B;0.5M 酢酸ナトリウム水溶液;リニアグラジェント（A/B(90/10)→A/B(60/40)；40分），検出:UV(232nm)）によって分画し（化合物例１、２の順に溶出）、化合物例１および２を含む画分を得た。各画分から凍結乾燥することによって水を除去した。凍結乾燥した各画分をエタノールで洗浄して塩を除去し、再度水に溶解した後に凍結乾燥して化合物例１、２（白色粉末）を得た。収量は、それぞれ、化合物例１:18.1g,化合物例２:29.5gであった。各化合物はナトリウム塩として得られた。
【００７４】
高速液体クロマトグラフ法（カラム:TSKgel Amide-80，溶離液：アセトニトリル/水/酢酸/トリエチルアミン(65/35/2/1,v/v)，流速：1.0mL/分，カラム温度：80℃，検出：UV(232nm);面積百分率法）によって測定した各化合物の純度は97％以上であった。ウロン酸含量とヘキソサミン含量を実施例１に示した方法によって分析したところ、値はほぼ理論値通りであった。
【００７５】
実施例３：化合物製造例３
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcOH（化合物例５）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcOH（化合物例６）］の製造
50mgの化合物例１を50mLの３mg/mL水素化ホウ素ナトリウム水溶液に溶解し、室温で１時間処理した。５mLの６M酢酸を加えて反応を停止し、50mLのメタノールを加えた後、エバポレーターを用いて乾固した。さらに、50mLのメタノールの添加および乾固を２回繰り返した。乾固によって残った固形物を５mLの水に溶解し、実施例１と同様にゲルろ過法によって脱塩後、凍結乾燥して化合物例５（白色粉末；44.7mg）を得た。
【００７６】
同様の方法で化合物例２を原料として用いて化合物例６を得た。
【００７７】
化合物例５および化合物例６は式（17）で表される化合物である。式（17）において、ｎは１〜２の整数を示し、ｎが１のとき化合物５を、２のとき化合物６を示す。
【００７８】
式（17）
【化２８】
化合物５および６の純度を実施例２に示した方法によって測定したところ、98％以上であった。ウロン酸含量とヘキソサミン含量を実施例１に示した方法によって分析したところ、分析値はほぼ理論値通りであった。
【００７９】
実施例４：化合物製造例４
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロン酸［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcA（化合物例７）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロン酸［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcA（化合物例８）の製造
化合物例１をReissigらの方法（Reissig,J.,L.,Strominger,J.L.,Leloir,L.,F.:J.Biol.Chem.,217,959(1953).）に準じてpH９のホウ酸緩衝液中で加熱した。反応液中のホウ酸を実施例３と同様にホウ酸メチルとして除去し、実施例１と同様にゲルろ過法によって脱塩後、凍結乾燥して化合物例７（白色粉末）を得た。50mgの化合物例１を原料としたとき、43.1mgの化合物例７を得た。
【００８０】
同様に、50mgの化合物例２を原料としたとき、44.8mgの化合物例８（白色粉末）を得た。
【００８１】
化合物例７および化合物８はは式（18）で表される化合物である。式（18）において、ｎは０〜１の整数を示し、ｎが０のとき化合物７を、１のとき化合物８を示す。
【００８２】
式（18）
【化２９】
化合物例７および８の純度を実施例２に示した方法によって測定したところ、98％以上であった。ウロン酸含量とヘキソサミン含量を実施例１に示した方法によって分析したところ、分析値はほぼ理論値通りであった。
【００８３】
実施例５：化合物製造例５
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAOH（化合物例９）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAOH（化合物例１０）］の製造
化合物例７を実施例３と同様の方法で処理して化合物例９（白色粉末）を得た。20mgの化合物例７を原料としたとき、15.9mgの化合物例９を得た。
【００８４】
同様に、20mgの化合物例８を原料としたとき、17.8mgの化合物例１０（白色粉末）を得た。
【００８５】
化合物例９および化合物１０はは式（19）で表される化合物である。式（19）において、ｎは０〜１の整数を示し、ｎが０のとき化合物９を、１のとき化合物１０を示す。
【００８６】
式（19）
【化３０】
化合物９および１０の純度を実施例２に示した方法によって測定したところ、98％以上であった。ウロン酸含量とヘキソサミン含量を実施例１に示した方法によって分析したところ、分析値はほぼ理論値通りであった。
【００８７】
実施例６：高分子化合物製造例
ポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例１）、ポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例２）、ポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例３）およびポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例４）の製造
10ｇの化合物例１を蒸留水５mLに溶解し、メタノール45mLを加えて混和した。その液を40℃に加温したヨウ素のメタノール溶液（17.1ｇ/200mL）に加えて40℃で30分間放置した。４％水酸化カリウム/メタノール溶液をヨウ素の色が消失するまで徐々に添加した。反応液を氷冷し、析出した沈殿をろ取した。沈殿を冷エタノール、冷エーテルの順で洗浄し、エタノール/水（90/10,w/w）から再結晶することによってカリウム塩を得た。カリウム塩を蒸留水50mLに溶解し、イオン交換樹脂（アンバーライトIR-12B（H+型））を充填したカラムに通液して凍結乾燥した。凍結乾燥物にメタノールを加えて減圧濃縮して結晶を得た。結晶に少量のメタノールを加えて溶かし、さらにエタノールを加えて脱水濃縮するという操作を５回繰り返した後、減圧乾固してラクトン化した化合物例１（7.4ｇ）を得た。
【００８８】
7ｇのラクトン化した化合物例１をメタノール50mLに溶解し、p-アミノメチルスチレンのメタノール溶液（2.5ｇ/0.5mL）を加熱還流下で加えた。120分間加熱還流した後、アセトン200mLを加えて結晶化した。結晶をメタノールより２回再結晶させて精製結晶（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］；3.3ｇ）を得た。
【００８９】
２ｇの精製結晶を水２mLに溶解し、重合開始剤としてペルオキソ二硫酸カリウム（0.2mol％）を添加した。窒素下で60℃にて24時間加熱して重合反応を行った。重合後、液をメタノール中に注入して、重合体を析出させた。メタノールをデカンテーションで除き、重合体を分離した。重合体を水に溶解し、メタノールから析出させる再沈殿法によって重合体を精製して高分子例１（1.4ｇ）を得た。
【００９０】
同様の方法で化合物例２を原料として用いて高分子例２を、化合物例３を原料として用いて高分子例３を、化合物例４を原料として用いて高分子例４を得た。
【００９１】
高分子例１〜４は下記式（20）で表される化合物である。式（20）において、ｎは１〜４の整数を示し、ｎが１のとき高分子例１、２のとき高分子例２、３のとき高分子例３、４のとき高分子例４を示す。
【００９２】
光散乱法によって高分子例１〜４の重量平均分子量を測定したところ、約４万であった。
【００９３】
式（20）
【化３１】
【００９４】
実施例７：成型物製造例
化合物例１〜４固定ポリエチレン管（成型物例１〜４）の製造
Larmら（Larm,O.,Lasson,R.,Olsson,P.:Biomat.Med.Dev.Art.Org.,11,161(1983).）の方法に準じて製造を行った。化合物例１とポリエチレンイミン活性化ポリエチレン管（1.8mmID×100cmL）を0.15M NaCl中、NaB(CN)H3とpH3.5，50℃で２時間反応させて化合物例１固定ポリエチレン管（成型物例１）を得た。
【００９５】
同様の方法で、化合物例２を原料として成型物例２、化合物例３を原料として成型物例３、化合物例４を原料として成型物例４を得た。
【００９６】
実施例８：式（１）の化合物の血管内皮細胞増殖促進作用１
試験には、細胞としてウシ大動脈血管内皮細胞（継代数３）、培地として10% FCS（ウシ胎児血清）、100 units／mLペニシリンＧ、100μｇ／mLストレプトマイシンを含むMEMを用いた。９６ウエルのマイクロプレートに細胞を4x103個／ウエル（4x104／mL;100μL）となるように播種し、既定の終濃度（0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10 μｇ／mL）となるように式（１）の化合物（化合物例１〜１０）（10μL；培地に溶解）を添加した。37℃、5% CO2の条件下で２０時間培養した後、化合物の血管内皮細胞増殖に対する作用（指標として、5-ブロモデオキシウリジン（BrdU）の取り込み量を採用）を「細胞増殖ELISA, BrdU発色キット」（ベーリンガー・マンハイム社製）を用いて測定した。
【００９７】
比較例として、比較化合物１および２についても同様に試験を行った。比較化合物は下記の式（21）で示される化合物である。式（21）において、ｎは１または２の整数を示し、１のとき比較化合物１（表中、比較１）、２のとき比較化合物２（表中、比較２）を示す。比較化合物１および２は、実施例２に準じて調製した。ただし、ヒアルロニダーゼにはウシ睾丸由来のものを用い、検出は206nmにて行った。化合物の純度は97%以上であり、ウロン酸含量とヘキソサミン含量はほぼ理論値とおりであった。
【００９８】
式（21）
【化３２】
次の式を用いて、各化合物の血管内皮細胞増殖促進作用を評価した。
【００９９】
促進率（％）＝（各化合物添加試験のBrdU取り込みの増加量）÷（対照試験のBrdU取り込みの増加量）ｘ１００
得られた結果を表１に示した。
【０１００】
【表１】
表１に示したように、化合物例１〜１０はいずれも優れた血管内皮細胞増殖促進作用を示した。
【０１０１】
実施例９：式（１）の化合物の血管内皮細胞増殖促進作用２
血管内皮細胞成長因子（VEGF）との相互作用を検討するために試験を行った。VEGFにはヒト組換え型のもの（血管内皮細胞成長因子、ヒト、組換体、生化学用：和光純薬製）を用いた。
【０１０２】
試験は実施例８と同様に行ったが、化合物添加と同時にVEGF（終濃度10ng／mL）を添加した。比較試験として、VEGF単独添加試験（VEGFのみ添加の試験）および陰性対照試験（化合物もVEGFも無添加の試験）も行った。血管内皮細胞増殖に対する作用は実施例８と同様に測定した。
【０１０３】
次の式を用いて、各化合物の血管内皮細胞増殖促進作用を評価した。
【０１０４】
促進率（％）＝（各化合物添加試験のBrdU取り込みの増加量）÷（陰性対照試験のBrdU取り込みの増加量）ｘ１００
得られた結果を表２に示した。
【０１０５】
【表２】
なお、表２において、化合物濃度０の欄に示す促進率は、VEGFを単独添加した場合の促進率を示す。式（１）の化合物の単独添加試験の結果を示す表１および表２の結果から、試験した化合物はいずれもVEGFと相乗的に作用し、優れた血管内皮細胞増殖促進作用を示した。
【０１０６】
実施例１０：式（１）の化合物の血管新生促進作用１
氷水浴中で冷却しながらNaHCO3不含の１０倍濃縮MEM 1容量に対して再構成緩衝液（500mM NaOH, 260mM NaHCO3, 200mM HEPES）１容量を混和した後、0.3%コラーゲン塩酸溶液（pH3.0）８容量を加えてよく混和し、コラーゲン溶液とした。２４ウエルのマイクロプレートにコラーゲン溶液0.5mLを分注し、37℃、30分間保温してゲルを固めた。コラーゲンゲル上にウシ大動脈血管内皮細胞（継代数３〜８）を5x104個／ウエルで播種し、37℃で約３時間培養して細胞を接着させた。その後、培地を取り除き、コラーゲン溶液0.5mLを重層して37℃、30分間保温してゲルを固めた後、各濃度の化合物例１〜４を含む１ｍＬ／ウエルの2% FBS-MEM培地を加えて37℃で３日間CO2インキュベーター内で培養した。３日間培養後、形成された血管様の管腔（新生血管）を位相差顕微鏡下、倍率１００倍で撮影した。写真をトレースし、マイクロコンピューターイメージングデバイス（ニューロサイエンス社製）を用いて画像解析を行い、単位面積当たりの血管様管腔の長さを測定した。対照試験として、化合物を含まない培地で培養したものについて同様に血管様管腔の長さを測定した。
【０１０７】
次の式を用いて、各化合物のもつ血管新生促進作用を評価した。
【０１０８】
促進率（％）＝｛（各試験の管腔長）−（対照試験の管腔長）｝÷（対照試験の管腔長）ｘ１００
得られた結果を表３に示す。
【０１０９】
【表３】
表３に示すように、化合物１〜４はいずれも優れた血管新生促進作用を示した。
【０１１０】
実施例１１：式（１）の化合物の血管新生促進作用２
化合物例１および２の血管新生促進作用をラットを用いたディフュージョンチャンバー法によって評価した。すなわち、ディフュージョンチャンバー（膜孔径0.45μm;ミリポア社製）を組み立て、各濃度（0, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 M）の化合物１および２の生理食塩液溶液200μLを封入した。
【０１１１】
Wistar系ラット（オス；体重200-250g）にペントバルビタールを腹腔内投与（10mg／匹）して麻酔した後、背部を刈毛して希ヨードチンキで消毒した。筋肉を傷つけないように皮膚を切開し、上記の液封入済みディフュージョンチャンバー皮下と筋膜との間に移植した。切開部を縫合し、１週間飼育後、麻酔したラットの背部を切開しチャンバーを露出させ、血管新生の様子を観察後、チャンバーを筋肉ごと切除してホルマリンで固定した。
【０１１２】
結果を表４に示した。表中、＋、±、−はそれぞれ新生血管誘導が陽性、擬陽性、陰性であったことを示す。
【０１１３】
【表４】
表に示すように、化合物例１および２はいずれも優れた血管新生促進作用を示した。
【０１１４】
実施例１２：本発明の化合物の急性毒性
本発明化合物の代表例（化合物例１〜１０）について、ラット（体重300〜400ｇ，Wistar系，オス）を用いて急性毒性試験を行ったところ、LD50は500mg/kg以上であった。
【０１１５】
実施例１３：高分子化合物から製造される成型物の血管内皮細胞増殖促進作用
高分子例１〜４の0.01w/v%水溶液をそれぞれ調製し、９６ウエルのポリスチレン製マイクロプレートに0.5mL／ウエルで分注、室温で一晩静置後、液を除去することによりプレートのコートを行った。これらのコート済みプレートを用いて実施例８と同様にウシ大動脈由来の血管内皮細胞の培養を行った。対照試験として未コートのプレートを用いた培養を行った。増殖促進作用を実施例８と同様に測定し、次の式を用いて各高分子例（各成型物）の血管内皮細胞増殖促進作用を評価した。
【０１１６】
促進率（％）＝（各試験のBrdU取り込みの増加量）÷（対照試験のBrdU取り込みの増加量）ｘ１００
得られた結果を表５に示した。
【０１１７】
【表５】
表５に示したように、高分子例１〜４はいずれも優れた血管内皮細胞増殖促進作用を示した。
【０１１８】
実施例１４：製剤製造例
錠剤の製造１
化合物例１ 10ｇ
ポリエチレングリコール6000 10ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム 1.5ｇ
トウモロコシデンプン 3ｇ
乳糖 25ｇ
ステアリン酸マグネシウム 0.5ｇ
上記成分を秤量する。ポリエチレングリコール6000を70〜80℃に加熱し、そこに化合物例１、ラウリル硫酸ナトリウム、トウモロコシデンプンおよび乳糖を混合した後、冷却する。固化した混合物を粉砕器にかけ造粒し、顆粒を得る。顆粒をステアリン酸マグネシウムと混合後、圧縮打錠して重量250mgの錠剤とする。
【０１１９】
錠剤の製造２
化合物例２ 30ｇ
乳糖 55ｇ
ジャガイモデンプン 12ｇ
ポリビニルアルコール 1.5ｇ
ステアリン酸マグネシウム 1.5ｇ
上記の成分を秤量する。化合物例２、乳糖、ジャガイモデンプンを均一に混合する。混合物にポリビニルアルコールの水溶液を加え、湿式顆粒造粒法により顆粒を調製する。顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウムを混合後、圧縮打錠して重量200mgの錠剤とする。
【０１２０】
カプセル剤の製造
化合物例３ 10ｇ
乳糖 25ｇ
トウモロコシデンプン 5ｇ
微結晶セルロース 9.5ｇ
ステアリン酸マグネシウム 0.5ｇ
上記の成分を秤量する。ステアリン酸マグネシウム以外の４成分を均一に混合する。ステアリン酸マグネシウムを加えた後、さらに数分間混合する。混合物をNo.１のハードカプセルに200mgずつ充填し、カプセル剤とする。
【０１２１】
散剤の製造
化合物例４ 20ｇ
乳糖 79ｇ
ステアリン酸マグネシウム 1ｇ
上記成分を秤量する。すべての成分を均一に混合して20％散剤とする。
【０１２２】
坐剤の製造
化合物例２ 10ｇ
ポリエチレングリコール1500 18ｇ
ポリエチレングリコール4000 72ｇ
化合物例２を乳鉢でよく研磨して微細な粉末とした後、熔融法によって１ｇの直腸坐剤とする。
【０１２３】
注射剤の製造
化合物例６ 0.1ｇ
塩化ナトリウム 0.9ｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 100mL
上記成分を秤量する。３成分を注射用水に溶解、ろ過滅菌後、10mLアンプルに５mLずつ分注し、熔封して注射剤とする。
【発明の属する技術分野】
本発明は、グルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物を有効成分として含む血管内皮細胞増殖促進剤および細胞培養用組成物に関する。また、前記化合物を側鎖構造にもつ高分子物質を用いて製造した血管内皮細胞被覆型人工臓器、血管内皮細胞被覆型医療用具および細胞培養用器材に関する。
【０００２】
【従来の技術】
血管内皮細胞は、全身の血管内腔を連続して被覆する一層の細胞群である。正常な血管内皮細胞は、▲１▼血管透過性の抑制、▲２▼血管内腔の抗血栓化、▲３▼血管平滑筋の弛緩、収縮の調節、▲４▼血管壁細胞の遊走や増殖の制御のような多彩な機能を果たしており、血管内皮細胞は血管を血管たらしめる中心的存在であると言われている。
【０００３】
ヒトは血管とともに老いるといわれており、血管壁は年齢とともに障害を受ける。血管壁が障害を受けて破綻すると、血管の破綻は心筋梗塞、大動脈瘤、脳卒中、あるいは壊死といった循環器疾患の形で現れる。血管壁の破綻の最大の原因は動脈硬化である。
【０００４】
現在の動脈硬化の治療又は予防は、そのほとんどが脂質代謝の改善という面からのアプローチであり、薬剤としては抗高脂血症剤が汎用されている。その他、動脈硬化部位の血管の閉塞を防ぐ目的で抗血小板剤や抗血液凝固剤が投与される。しかし、これらの薬剤は、血管壁の破綻を積極的に治療するものではなく、破綻の原因の一つである高脂血症あるいは破綻の進展原因の一つである血栓形成を押さえ込むことによって破綻の進展を防ぐという間接的な作用を期待するものである。
【０００５】
動脈硬化の発症、進展には、血管内皮細胞の損傷や機能喪失が重要かつ不可欠であるとされている。前述のように、従来の療法では、治療を行ううえで最も重要な血管の破綻の根本的原因の解消、即ち血管内皮細胞の再生および機能回復については単純に生体がもつ修復機能に依存するのみであった。従って、損傷を受けて本来の機能を喪失した血管内皮細胞の再生や機能回復を促進する、いわゆる「血管内皮再生療法」は従来の治療法の欠点を克服し得る極めて有用な治療法であるといえる。しかし、血管内皮再生療法に利用しうる薬剤は実用化されておらず、優れた薬剤の開発が望まれている。血管内皮再生療法の例としては、実験的に傷害したウサギの血管内皮障害部位に血管内皮細胞成長因子（VEGF）の遺伝子を導入してVEGFを発現させ、その有効性を検討した報告（Asahara, T. et al., Circulation, 94, 3291, 1996）などがある。
【０００６】
経皮経管的冠動脈形成術（PTCA）は、血管内に入れたバルーンカテーテルを膨らませ（バルーニング）、動脈硬化の進展によってできた狭窄部位を拡張する手法であり、冠動脈硬化症の確立された治療法の一つである。しかし、術後６ヶ月以内に３０〜５０％の患者に再狭窄が認められ、大きな問題となっている。再狭窄は、バルーニングによって引き起こされ、急激に進行する一種の動脈硬化症であるといえる。これまで、バルーニングの手技の工夫やカテーテルの改良などとともに様々な薬剤を用いた治療が試みられてきたが、未だに充分であるとは言い難く、より優れた治療法や薬剤の開発が期待されている。血管内皮再生療法ならば、PTCA後の再狭窄を効果的に予防できると考えられ（前記のAsaharaらの報告を参照されたい）、これに用いる優れた薬剤の開発が期待されている。
【０００７】
心筋梗塞などの虚血性疾患の予後は、多くの因子によって影響を受けるが、側副血行路の発達の程度は、最も重要な予後決定因子の一つであると考えられている。側副血行路の充分な発達があれば、狭窄や閉塞（梗塞）が生じても、虚血や組織の壊死が押さえられ、梗塞サイズの縮小や予後の改善が得られる。従来、側副血行路形成の機序として、血管内圧や血流の変化が重要視されてきたが、側副血行路形成時に血管内皮細胞や血管平滑筋細胞にＤＮＡ合成を伴う細胞分裂像が認められることが報告され、側副血行路の形成過程は、単に既存の吻合血管の物理的要因による拡張だけでなく、少なくともその一部は血管壁構成細胞の増殖が関与する血管新生過程であると理解されるようになっている。近年、「血管新生療法」という新しい治療法によって虚血性心疾患を治療しようとする試みがなされている（例えば、Yanagisawa-Miwa, A. et al., Science, 257, 1401, 1992）。血管新生療法とは、虚血組織周辺の血管新生を促進することによって積極的に側副血行路を確保し、虚血組織を保護しようとする試みであり、"pharmacological bypass therapy(薬物投与によるバイパス形成療法）"ともいえる新しい治療法である。しかし、未だに実用化には至っておらず、これに用いることのできる優れた薬剤や治療法の開発が期待されている。また、血管新生促進活性をもつ物質（例えば、線維芽細胞成長因子）を創傷の治療に利用する試みがなされている（Hockel, M. et al., Arch. Surg., 128, 423, 1993などを参照されたい）。
【０００８】
人工臓器とは、心臓、血管、心臓弁、肺、膵臓、腎臓、肝臓、皮膚、粘膜などの各種の生体組織および臓器の機能を人工的な材料を用いた成型物やそれを部品として用いた装置によって補助あるいは代行しようとするものである。人工臓器は、生体内に埋入したり、血管へのカニュレーションによって引き出した血液を接触させることによってその機能を発揮するため、それらに用いる材料は生体に害を与えることなく使用できる性質、つまり、生体適合性をもたなければならない。人工臓器の生体適合性を規定する最も重要な生体の反応は血栓形成反応である。血栓形成を避けるために、血液と接触しても血栓を形成しない材料、すなわち、抗血栓性材料の開発が試みられてきた。体内で血液と直接触れるのは血管内皮を構成する血管内皮細胞であり、正常な血管内皮細胞の上では血栓は形成されない。当然のことではあるが、最も優れた抗血栓性材料は天然の抗血栓性材料である血管内皮細胞といえる。本来の臓器と同様に人工臓器の血液接触面が血管内皮細胞で被覆されていれば、血栓形成反応は起こらない。血管内皮細胞の抗血栓性を積極的に利用した人工臓器を開発する試みとして新生内膜治癒促進型人工血管などの臨床応用が試みられており、ある程度の成果が得られている（例えば、Noishiki, Y. et al., Trans. Am. Soc. Artif. Intern. Organs., 27, 309, 1986）。これまで、細胞親和性の高い材料を用いたり、成型物の有孔性を高くすることによって細胞侵入を促進するなどといった方法でアプローチがなされているが、血管内皮細胞の成長を促進する物質を利用して血管内皮細胞の被覆を促進するといった試みはほとんどなされていない。
【０００９】
また、人工臓器以外にも、血液と接触する機会のある医療用具にも抗血栓性をもつ材料を用いることが望ましい。特に、ステントのように血管内に留置される体内埋め込み用医療用具は長期間血液と接触し続けることからも高い生体適合性（抗血栓性）をもつことが要求される。これらの理由からも、より優れた抗血栓性材料の開発が期待されている。
【００１０】
さらに、血管内皮細胞の成長促進作用をもつ物質は細胞培養用組成物や細胞培養用器材の材料としても利用可能である。
【００１１】
なお、本発明者らは、特願平10-120425号において本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に使用する式（１）の化合物が血小板粘着凝集抑制作用を有することを示したが、血管内皮細胞増殖促進作用については開示していない。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
上記の記述から明らかなように、優れた血管内皮細胞増殖促進物質および血管内皮細胞増殖促進作用をもつ高分子物質の提供は医療上ならびに細胞生物学的実験を行ううえでの重要な課題である。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、かかる課題を解決するために鋭意研究を重ねてきた結果、一般式（１）に示される化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物が優れた血管内皮細胞増殖促進作用および血管新生促進作用を有することを見いだし、さらに、その化合物を側鎖構造として有する高分子物質が優れた血管内皮細胞増殖促進作用を有することを見いだして本発明を完成するに至った。
【００１４】
すなわち、本発明は一般式（１）で表されるグルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物を有効成分として含む血管内皮細胞増殖促進剤を提供する。
【００１５】
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は血管内皮再生療法または血管新生療法のための治療薬または予防薬として有用である。
【００１６】
本発明はまた、一般式（１）で表される化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を有効成分として含む細胞培養用組成物を提供する。
【００１７】
本発明はさらに、一般式（１）で表される化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を有効成分とする血管内皮細胞増殖促進用コーティング剤を提供する。
【００１８】
本発明はさらに、一般式（１）で表される化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を材料として用いた血管内皮細胞増殖促進用成型物を提供する。
【００１９】
本発明はさらに、前記成型物および／または前記コーティング剤を使用して製造した血管内皮細胞被覆型人工臓器を提供する。
【００２０】
本発明はさらに、前記成型物および／または前記コーティング剤を使用して製造した血管内皮細胞被覆型医療用具を提供する。
【００２１】
本発明はさらに、前記成型物および／または前記コーティング剤を使用して製造した細胞培養用器材を提供する。
【００２２】
【発明の実施の形態】
［本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に使用する化合物］
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤中に有効成分として含まれる化合物は、下記一般式（１）で表される グルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物である。
【００２３】
式（１）
【化１７】
【００２４】
式（２）
−OR12
式（３）
−NHR13
式（４）
−CH2R13
式（５）
−SR13
式（６）
【化１８】
【化１９】
【化２０】
【００２５】
式（９）
−NR31R32
式（９）中、R31およびR32は、同一または異なり水素原子または保護基を表す。
【００２６】
式（１）中、R2〜R8は同一または異なって水素原子または保護基を表す。
【００２７】
式（１）中、R9〜R11は、同一または異なって水素原子または保護基を表す。
【００２８】
式（１）中、nは０〜２５の整数を表す。
（ただし、nが０のときは、R1は式（２）、R12は式（８）で表される基である。）
【００２９】
式（１）および式（６）〜（８）中、保護基は互いに同一または異なり、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭素原子数１〜８のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、または置換されていてもよい芳香族アルキルであり、またR15、R19およびR28を除くR2〜R30の任意の保護基２つが一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。
【００３０】
また、nが２〜２５の場合、R2〜R8は、繰り返し単位ごとに同一であっても異なっていてもよい。］
すなわち、本発明の血管内皮細胞増殖促進剤中に有効成分として含まれる式（１）で表される化合物は、下記式（10）で表されるD-グルコサミン誘導体と式（11）で表されるD-グルクロン酸誘導体が結合した構造を有する。
【００３１】
式（10）
【化２１】
式（11）
【化２２】
式（１）において、nは０〜２５の整数を表すが、nが０のときR1は式（２）、R12は式（８）で表される基である。すなわち、式（１）の化合物は下記式（12）で表される。
【００３２】
式（12）
【化２３】
【００３３】
上記式（１）〜（12）中で示される保護基は、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキルとしては例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、第三級ブチル、ペンチル、オクチル、メトキシメチル、第三級ブチルチオメチル、1-エトキシエチル、シロキシメチルまたは2-メトキシエトキシメチルなどを表し、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニルとしては、例えば、エテニル、1-プロペニル、２-プロペニル、ブテニルまたはオクテニルなどを表し、置換されていてもよい１〜８の直鎖または分枝鎖のアシルとしては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリルまたはピバロイル、またはハロゲン化アシルなどを表し、ハロゲン化アシルとしては例えば、クロロアセチル、ジクロロアセチル、トリクロロアセチル、トリフルオロアセチルなどを表し、置換されていてもよい芳香族アシルとしては例えば、ベンゾイル、パラクロロベンゾイルなどを表し、置換されていてもよい芳香族アルキルとしては、例えば置換されていてもよいベンジル、置換されていてもよいジフェニルメチルまたは置換されていてもよいトリフェニルメチルなどを表し、置換されていてもよいベンジルとしては、例えば4-メトキシベンジルなどを表す。さらに、式（１）〜（12）中で示される保護基は、R15、R19およびR28を除くR2〜R30の任意の保護基２つが一緒になって、１つの保護基を表してもよく、即ち置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデンとしては例えば、プロピリデン、ブチリデンまたはオクチリデンなどを表し、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデンとしては例えば、シクロペンチリデン、シクロヘキシリデンまたはシクロヘプチリデンなどを表す。水酸基の保護基としては置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖アシル、置換されていてもよい芳香族アルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニルまたは置換されていてもよいベンジリデンなどが好ましく、さらに好ましくはアセチル、ベンジル、1-プロペニルまたはベンジリデンなどを表し、アミノ基の保護基としては、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアシルまたは置換されていてもよいフタロイルなどが好ましく、さらに好ましくはアセチルまたはフタロイルなどを表し、カルボキシル基の保護基としては、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキルまたは置換されていてもよい芳香族アルキルなどが好ましく、さらに好ましくは、メトキシル、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、ペンチル、イソペンチルまたはジフェニルメチルなどを表す。上記の保護基は、同一の化合物中で互いに同一でも異なっていてもよく、任意に選ばれる。
【００３４】
式（１）中のnは０〜２５の整数であり、好ましくは、０〜 １０、特に好ましくは０〜５、さらに好ましくは０〜２である。
【００３５】
R1は上記の記載に合致するものであればよいが、特に、前記式（6）〜（8）であること、すなわち、式（１）の化合物が下記式（13）〜（15）であることが好ましい。
【００３６】
式（13）
【化２４】
【化２５】
【化２６】
【００３７】
本発明における薬理学的に許容される塩とは、式（１）の化合物を治療に必要な量を投与する場合に、生体に対して悪影響を及ぼさない、あるいは、式（１）の化合物の有効な薬理学的な性質を塩としたことで損なわない塩であることを意味する。具体例としては、ナトリウム塩、カリウム塩またはカルシウム塩などのアルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩；フッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩などのハロゲン化水素酸塩；メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩などの低級アルキルスルホン酸塩；ベンゼンスルホン酸塩、p-トルエンスルホン酸塩などのアリールスルホン酸塩；フマル酸塩、コハク酸、クエン酸塩、酒石酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸塩；およびグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩などのアミノ酸塩をあげることができる。またさらに、式（１）の化合物およびその塩は、薬理学的に許容される各種の溶媒、例えば水、有機溶媒、緩衝液などとの溶媒和物や結晶多形のものなども含まれる。
【００３８】
式（１）の化合物は置換基の種類によって不斉炭素原子を有し、不斉中心の存在に基づく光学異性体が存在する場合がある。本発明の化合物には、各々の異性体、および、それらの混合物のすべてが含まれる。例えば、ある光学異性体とその鏡像異性体（エナンチオマー）との混合物、特に、等量混合物であるラセミ体、また、あるいは、ある光学異性体とそのジアステレオマーとの混合物も含まれる。
【００３９】
［式（１）の化合物の製造法］
当然のことではあるが、本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に使用する化合物を得る方法には種々の方法がある。例えば、グルクロン酸誘導体やグルコサミン誘導体などを原料にして有機化学的手法によって中間体あるいは目的化合物を合成・修飾する方法や多糖を酸やアルカリなどを用いて分解して中間体あるいは目的化合物を得る方法などの有機化学的手法、グルクロン酸やN-アセチルグルコサミンなどを原料にして転移酵素や分解酵素の逆反応などを利用して中間体あるいは目的化合物を合成・修飾する方法や多糖を酵素を用いて分解して中間体あるいは目的化合物を得る方法などの生化学的手法、あるいは、微生物や細胞に酵素の遺伝子を導入して原料、中間体あるいは目的化合物、または合成・修飾に用いる酵素を得るなどの遺伝子工学的手法などを、単独あるいは組み合わせて用いる方法をあげることができる。
【００４０】
式（１）の化合物の好ましい製造法は前記の特願平10-120425号に詳しく記載されている。
【００４１】
［本発明の血管内皮細胞増殖促進剤、およびその投与方法、投与量および剤形］本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は、式（１）の化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物の少なくとも一つをを有効成分として含む。
【００４２】
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は、通常、全身的または局所的に、そして経口的または非経口的に投与される。投与量は、疾患の種類、症状の程度、投与対象の年齢や体重などの諸条件をもとに総合的に判断し、最適な量を適宜決定するべきであり、特に限定されない。しかし、通常、本発明の血管内皮細胞増殖促進剤に有効成分として含まれる式（１）の化合物の量として、成人では１日当たり経口投与の場合0.01〜100mg/kg、非経口投与の場合0.001〜10mg/kgである。投与は必要に応じて１日１回ないし複数回に分けて行われる。
【００４３】
本発明の血管内皮細胞増殖促進剤の投与は、固体組成物、液体組成物およびその他の組成物の経口投与、注射剤、外用剤、坐剤などの非経口投与のいずれの形態であってもよく、必要に応じて最適な方法が選択される。本発明の血管内皮細胞増殖促進剤は、式（１）の化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物の少なくともひとつを有効成分として含有し、これに通常の製剤化に用いられる担体、賦形剤、その他の添加剤を加えて当業者に公知の方法で調製することができる。製剤用の担体や賦形剤としては、例えば、乳糖、ステアリン酸マグネシウム、デンプン、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、オリーブ油、ゴマ油、カカオバター、エチレングリコールなどやその他常用されるものをあげることができる。
【００４４】
経口投与のための固体組成物としては、錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤などが用いられる。このような固体組成物においては、少なくともひとつの活性物質（有効成分）が少なくともひとつの不活性な希釈剤、例えば、乳糖、マンニトール、ブドウ糖、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、デンプン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マグネシウムなどと混合される。組成物は、常法にしたがって不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、繊維素グリコール酸カルシウムのような崩壊剤、グルタミン酸またはアスパラギン酸のような溶解補助剤を含んでいてもよい。錠剤または丸剤は、必要によりショ糖、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの糖衣や胃溶性または腸溶性物質のフィルムで被覆してもよいし、２つ以上の層で被覆してもよい。さらに、ゼラチンのような吸収されうる物質のカプセルも含まれる。
【００４５】
経口投与のための液体組成物は、薬剤的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤などを含み、一般的に用いられる不活性な希釈剤、例えば精製水、エタノールなどを含んでいてもよい。この組成物は、不活性な希釈剤以外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、芳香剤、防腐剤などを含んでいてもよい。
【００４６】
非経口投与のための注射剤としては、無菌の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤が含まれる。水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば、注射用水および注射用生理食塩液が含まれる。非水性の溶液剤、懸濁剤としては、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノールのようなアルコール類、ポリソルベート80（登録商標）などが含まれる。このような組成物は、さらに防腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、乳糖）、溶解補助剤（例えば、グルタミン酸、アスパラギン酸）のような補助剤を含んでいてもよい。これらは、例えば、精密ろ過膜によるろ過滅菌、高圧蒸気滅菌のような加熱滅菌、あるいは、殺菌剤の配合などの通常の滅菌方法によって無菌化することが可能である。また、無菌の固体組成物を製造し、使用前に無菌水または無菌の注射用溶媒に溶解して使用することもできる。
【００４７】
非経口投与のためのその他の血管内皮細胞増殖促進剤としては式（１）の化合物の少なくともひとつを有効成分として含み、常法によって処方される外用液剤、軟膏剤、塗布剤、坐剤、経皮剤、点眼剤などが含まれる。
【００４８】
［本発明で使用する高分子およびその製造法］
本発明で使用する高分子とは、式（１）の化合物を側鎖構造として有する高分子化合物のことである。これらの高分子の製造に用いる主鎖となるポリマーは生体適合性ポリマーであることが好ましく、例えば、ポリエチレン、ポリスチレン、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル、エチレン酢酸ビニル、ポリプロピレン、ポリカーボネイト、シリコン、ポリメチルメタクリレート、ポリ四フッ化エチレン、ポリエチレンテレフタレート、ポリアミド、ポリスルホン、ＡＢＳ樹脂、ポリアセタールおよびこれらの誘導体を挙げることができる。主鎖と側鎖の間には適当なスペーサを入れることもでき、これによって側鎖に柔軟性を付与することができる。また、式（１）の化合物を側鎖構造に有する複数の高分子化合物のブロックコポリマーであってもよい。さらには、式（１）の化合物に加えて、ヘパリンなどの血栓形成抑制物質やウロキナーゼなどの血栓溶解酵素などの抗血栓作用を有する物質を併せて結合してもよい。
【００４９】
当然のことながら、本発明で使用する高分子は製造法によって限定されるものではなく、目的とするものが得られるのであれば、どのような方法を用いても差し支えない。これらの高分子を得るには種々の方法があり、それらの方法を単独あるいは組み合わせて用いることができる。これらの製造法は当業者に公知である。例えば、主鎖となるポリマーのモノマーに本発明の化合物を結合した後、重合反応を行い主鎖ポリマーを形成してもよく、あるいは主鎖ポリマーに本発明の化合物を結合してもよい。
【００５０】
式（１）の化合物はグルクロン酸誘導体やグルコサミン誘導体といった生体成分の誘導体をその構造中にもつことからもわかるように生体適合性が高く、生体に悪影響を及ぼすことが少なく、仮に高分子から式（１）の化合物が脱落したとしても生体に悪影響を及ぼすことが少ない。
【００５１】
［本発明のコーティング剤、成型物およびその製造法］
本発明はさらに、式（１）の化合物または前記高分子の少なくともひとつを有効成分とする血管内皮細胞増殖促進用コーティング剤を提供する。このようなコーティング剤は式（１）の化合物または高分子を適当な溶媒に溶解、分散し、人工臓器や医療用具などに塗布、含浸、スプレーコーティングなどの方法によりコーティングすることができる。
【００５２】
本発明の血管内皮細胞増殖促進用成型物は、式（１）の化合物または前記高分子の少なくともひとつを材料として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。したがって、材料のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。本発明の成型物を得るには、化合物や高分子を別に製造した成型物にコーティングする方法、化合物を別に製造した成型物と結合させる方法、化合物や高分子を含む材料から直接成型する方法など、種々の方法があり、それらの方法を単独あるいは組み合わせて用いることができる。
【００５３】
本発明の成型物は、優れた血管内皮細胞成長促進作用を有するため、人工臓器、医療用具の部品あるいはそれ自体として用いることができる。成型物の形状は用いる材料の性質にもよるが、その使用目的に応じて、フィルム状物、膜状物、管状物、板状物、網状物、繊維状物、布状物などのいずれかの形状にすることができる。
【００５４】
［本発明の人工臓器およびその製造法］
本発明の血管内皮細胞被覆型人工臓器は、式（１）本発明の化合物あるいは本発明の高分子の少なくともひとつを材料として、または、本発明の成型物の少なくともひとつを部品として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。また、このようにして製造された人工臓器あるいはその他の方法で製造された従来型の人工臓器に、さらに本発明のコーティング剤を塗布して製造することもできる。したがって、材料あるいは部品のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。
【００５５】
本発明の血管内皮細胞被覆型人工臓器の例としては、人工血管、人工心臓、心臓ペースメーカー、人工心臓弁、人工腎臓、人工肺、人工心肺、人工膵臓、人工骨、人工関節、人工靭帯などをあげることができる。
【００５６】
［本発明の医療用具およびその製造法］
本発明の血管内皮細胞被覆型医療用具は、式（１）本発明の化合物あるいは本発明の高分子の少なくともひとつを材料として、または、本発明の成型物の少なくともひとつを部品として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。また、このようにして製造された医療用具あるいはその他の方法で製造された従来型の医療用具に、さらに本発明のコーティング剤を塗布して製造することもできる。したがって、材料あるいは部品のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。
【００５７】
本発明の血管内皮細胞被覆型医療用具の例としては、カニューレやステントなどをあげることができる。
【００５８】
［本発明の細胞培養用組成物］
本発明の細胞培養用組成物は従来の細胞培養用組成物に式（１）の化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を添加して製造することができる。式（１）の化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を添加する細胞培養用培地には、例えば199培地、MEM（イーグルの最小必須培地）、BME（イーグルの基本培地）、DMEM（ダルベッコ変法イーグル培地）、RPMI1640，Ham's F12培地、MCDB104，MCDB153を含むがこれに限定されない。本発明の細胞培養用組成物を用いて培養することのできる細胞には、魚類細胞、両生類細胞、鳥類細胞、哺乳動物細胞などの脊椎動物の細胞を含むが、これに限定されない。式（１）の化合物は顕著な血管内皮細胞増殖促進作用および血管新生促進作用を有することから、本発明の細胞培養用組成物は哺乳動物細胞、特に血管内皮細胞の培養時に用いて、試験研究用の培養に利用できることはもちろんのこと、細胞成長因子（例えば、VEGF）のような有用物質の生産に用いたり、火傷の治療用の人工培養皮膚のような治療用組織の製造にも利用することができる。
【００５９】
［本発明の細胞培養用器材］
本発明の細胞培養用器材は、式（１）の化合物あるいは本発明の高分子の少なくともひとつを材料として、または、本発明の成型物の少なくともひとつを部品として用いて製造されるものであり、その使用目的に応じてつくられる。また、このようにして製造された細胞培養用器材あるいはその他の方法で製造された従来型の細胞培養用器材に、さらに本発明のコーティング剤を塗布して製造することもできる。したがって、材料あるいは部品のもつ本来の性質を損ねない範囲であれば、どのような方法によってつくられても差し支えない。
【００６０】
本発明の細胞培養用器材の例としては、シャーレ、フラスコ、マイクロプレート、ボトルなどをあげることができる。
【００６１】
［式（１）の化合物および高分子の血管内皮細胞増殖促進作用］
種々の式（１）の化合物の血管内皮細胞増殖促進作用をウシ大動脈内皮細胞を用いて測定した。その結果、試験に用いた式（１）の化合物はいずれも低濃度で優れた増殖促進作用を示した。また、式（１）の化合物は、血管内皮細胞に特異的に作用し、血管内皮細胞の増殖を促進するサイトカインとして知られる血管内皮細胞成長因子（VEGF）と相乗的に作用し、より優れた血管内皮細胞増殖促進作用を示した。これは、式（１）の化合物が生体由来の内因性および治療目的で投与あるいは誘導された外因性のVEGFと相乗的に作用することによって、より優れた血管内皮細胞増殖促進作用を発現することを示すものである。
【００６２】
本発明で使用する前記高分子をコーティングしたマイクロプレートでウシ大動脈内皮細胞を培養し、血管内皮細胞増殖促進作用を測定した。その結果、本発明の高分子（本発明の成型物）はいずれも優れた増殖促進作用を示した。
【００６３】
［式（１）の化合物の血管新生促進作用］
種々の式（１）の化合物の血管新生促進作用をウシ大動脈内皮細胞を用いて測定した。その結果、式（１）の化合物はいずれも優れた血管新生促進作用を示した。
【００６４】
【発明の効果】
式（１）の化合物およびその薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物は、優れた血管内皮細胞増殖促進作用と優れた血管新生促進作用を有し、これらの作用に基づく治療薬として有用である。具体的には、血管内皮再生療法あるいは血管新生療法に用いる治療薬および予防薬（血管内皮細胞増殖促進剤、血管新生促進剤）として有用である。さらに具体的には、循環器疾患（急性心筋梗塞、不安定狭心症、慢性安定型狭心症、陳旧性心筋梗塞、心房細動による血栓塞栓症、汎発性血管内血液凝固症候群（DIC）、冠動脈バイパス術後のグラフト閉塞、経皮的冠動脈形成術（PTCA）後の冠動脈の狭窄および閉塞、人工心臓弁置換術後の血栓性合併症（血栓栓塞症、血栓弁）、肺血栓・栓塞症、脳血管障害（一過性脳虚血発作（TIA）、脳梗塞）、末梢動脈閉塞症（閉塞性動脈硬化症、閉塞性血栓血管炎、血行再建術後の閉塞）、糸球体腎炎，ネフローゼ症候群、その他の血栓症など（本態性血小板症、血栓性血小板減少性紫斑病（TPP）、溶血性尿毒症症候群、抗リン脂質抗体症候群、川崎病、子癇、ベーチェット病）の治療および予防、創傷（褥瘡などを含む慢性皮膚潰瘍、糖尿病性潰瘍、火傷、角膜創傷、化学療法・放射線療法を受けた癌患者の口腔粘膜炎、皮膚移植などの各種手術後の創傷、胃腸組織の損傷など）の治療に対して有効である。
【００６５】
式（１）の化合物およびこれを側鎖構造として有する高分子は優れた血管内皮細胞増殖促進作用を有し、血管内皮細胞の被覆を促進するため、抗血栓性を必要とする成型物をつくるための材料あるいはコーティング剤として有用である。また、これらの化合物、高分子および成型物は優れた血管内皮細胞増殖促進作用を有し、血管内皮細胞の被覆を促進するため、抗血栓性を必要とする人工臓器、医療用具の部品あるいはそれ自体として有用である。
【００６６】
さらに、式（１）の化合物または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子は細胞培養用組成物の成分として有用であり、式（１）の化合物およびこれを側鎖構造として有する高分子は細胞培養用器材としての利用が期待できる。
【００６７】
【実施例】
以下の実施例において、化合物製造例、高分子製造例、成型物製造例、血管内皮細胞増殖促進作用試験例、血管新生促進作用試験例および製剤製造例、をあげて本発明をさら詳しく説明する。なお、当然のことではあるが、本発明は以下の実施例に記載された物質、処方および方法に限定されるものではなく、特許の請求の範囲に含まれるすべての物質、処方および方法を含むものである。
【００６８】
実施例１：化合物製造例１
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例１）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例２）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例３）］および4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例４）］の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（紀文フードケミファ製；商品名「ヒアルロン酸FCH」）30ｇを蒸留水３Lに溶解し、40℃となるように加温した。0.1M水酸化ナトリウム水溶液で溶液のpHを6.0に調整した後、Streptomyces hyalurolyticus由来のヒアルロニダーゼ（天野製薬製；商品名「ヒアルロニダーゼ“アマノ”」）をヒアルロン酸ナトリウム１mgあたり0.5濁度減少単位となるように添加し、40℃で100時間反応を行った。反応後、公称分画分子量10ｋの親水性ポリエーテルスルフォン製の限外ろ過（ミリポア製）によって溶液中から酵素を除去した。凍結乾燥することによって溶媒を除去し、分解物（27.4ｇ）を得た。
【００６９】
分解物を陰イオン交換クロマトグラフ法（カラム：YMC-Pack IEC-AX，溶離液：A;水,B;0.4M NaCl;リニアグラジェント（30分），検出:UV(232nm)）によって分画し（化合物例１、２、３、４の順に溶出）、化合物例１〜４を含む画分を得た。各画分をゲルろ過法（担体：セファデックスG-10，溶離液：水）によって脱塩後、凍結乾燥して化合物１〜４（白色粉末）を得た。収量は、それぞれ、化合物例１:1.7g,化合物例２:5.9g,化合物例３:3.4g,化合物例４:2.2gであった。各化合物はナトリウム塩として得られた。
【００７０】
化合物例１〜4は下記式（16）で表される化合物である。式（16）において、nは１〜４の整数を示し、nが１のとき化合物例１、２のとき化合物例２、３のとき化合物例３、４のとき化合物例４を示す。
【００７１】
下記式（16）
【化２７】
【００７２】
実施例２：化合物製造例２
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例１）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノース［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAc（化合物例２）］の製造
ヒアルロン酸ナトリウム（紀文フードケミファ製；商品名「ヒアルロン酸FCH」）60ｇを蒸留水３Lに溶解し、40℃となるように加温した。0.1M水酸化ナトリウム水溶液で溶液のpHを6.0に調整した後、Streptomyces hyalurolyticus由来のヒアルロニダーゼ（天野製薬製；商品名「ヒアルロニダーゼ“アマノ”」）をヒアルロン酸ナトリウム１mgあたり１濁度減少単位となるように添加し、40℃で100時間反応を行った。反応後、公称分画分子量10ｋの親水性ポリエーテルスルフォン製の限外ろ過（ミリポア製）によって溶液中から酵素を除去した。凍結乾燥することによって溶媒を除去し、分解物（53.7ｇ）を得た。
【００７３】
分解物を陰イオン交換クロマトグラフ法（カラム：TSKgel DEAE-5PW，溶離液：A;水,B;0.5M 酢酸ナトリウム水溶液;リニアグラジェント（A/B(90/10)→A/B(60/40)；40分），検出:UV(232nm)）によって分画し（化合物例１、２の順に溶出）、化合物例１および２を含む画分を得た。各画分から凍結乾燥することによって水を除去した。凍結乾燥した各画分をエタノールで洗浄して塩を除去し、再度水に溶解した後に凍結乾燥して化合物例１、２（白色粉末）を得た。収量は、それぞれ、化合物例１:18.1g,化合物例２:29.5gであった。各化合物はナトリウム塩として得られた。
【００７４】
高速液体クロマトグラフ法（カラム:TSKgel Amide-80，溶離液：アセトニトリル/水/酢酸/トリエチルアミン(65/35/2/1,v/v)，流速：1.0mL/分，カラム温度：80℃，検出：UV(232nm);面積百分率法）によって測定した各化合物の純度は97％以上であった。ウロン酸含量とヘキソサミン含量を実施例１に示した方法によって分析したところ、値はほぼ理論値通りであった。
【００７５】
実施例３：化合物製造例３
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcOH（化合物例５）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcOH（化合物例６）］の製造
50mgの化合物例１を50mLの３mg/mL水素化ホウ素ナトリウム水溶液に溶解し、室温で１時間処理した。５mLの６M酢酸を加えて反応を停止し、50mLのメタノールを加えた後、エバポレーターを用いて乾固した。さらに、50mLのメタノールの添加および乾固を２回繰り返した。乾固によって残った固形物を５mLの水に溶解し、実施例１と同様にゲルろ過法によって脱塩後、凍結乾燥して化合物例５（白色粉末；44.7mg）を得た。
【００７６】
同様の方法で化合物例２を原料として用いて化合物例６を得た。
【００７７】
化合物例５および化合物例６は式（17）で表される化合物である。式（17）において、ｎは１〜２の整数を示し、ｎが１のとき化合物５を、２のとき化合物６を示す。
【００７８】
式（17）
【化２８】
【００７９】
実施例４：化合物製造例４
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロン酸［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcA（化合物例７）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロン酸［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcA（化合物例８）の製造
化合物例１をReissigらの方法（Reissig,J.,L.,Strominger,J.L.,Leloir,L.,F.:J.Biol.Chem.,217,959(1953).）に準じてpH９のホウ酸緩衝液中で加熱した。反応液中のホウ酸を実施例３と同様にホウ酸メチルとして除去し、実施例１と同様にゲルろ過法によって脱塩後、凍結乾燥して化合物例７（白色粉末）を得た。50mgの化合物例１を原料としたとき、43.1mgの化合物例７を得た。
【００８０】
同様に、50mgの化合物例２を原料としたとき、44.8mgの化合物例８（白色粉末）を得た。
【００８１】
化合物例７および化合物８はは式（18）で表される化合物である。式（18）において、ｎは０〜１の整数を示し、ｎが０のとき化合物７を、１のとき化合物８を示す。
【００８２】
式（18）
【化２９】
【００８３】
実施例５：化合物製造例５
4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAOH（化合物例９）］、4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロニトール［ΔHexAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAβ1→3GlcNAcβ1→4GlcAOH（化合物例１０）］の製造
化合物例７を実施例３と同様の方法で処理して化合物例９（白色粉末）を得た。20mgの化合物例７を原料としたとき、15.9mgの化合物例９を得た。
【００８４】
同様に、20mgの化合物例８を原料としたとき、17.8mgの化合物例１０（白色粉末）を得た。
【００８５】
化合物例９および化合物１０はは式（19）で表される化合物である。式（19）において、ｎは０〜１の整数を示し、ｎが０のとき化合物９を、１のとき化合物１０を示す。
【００８６】
式（19）
【化３０】
【００８７】
実施例６：高分子化合物製造例
ポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例１）、ポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例２）、ポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例３）およびポリ（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］）（高分子例４）の製造
10ｇの化合物例１を蒸留水５mLに溶解し、メタノール45mLを加えて混和した。その液を40℃に加温したヨウ素のメタノール溶液（17.1ｇ/200mL）に加えて40℃で30分間放置した。４％水酸化カリウム/メタノール溶液をヨウ素の色が消失するまで徐々に添加した。反応液を氷冷し、析出した沈殿をろ取した。沈殿を冷エタノール、冷エーテルの順で洗浄し、エタノール/水（90/10,w/w）から再結晶することによってカリウム塩を得た。カリウム塩を蒸留水50mLに溶解し、イオン交換樹脂（アンバーライトIR-12B（H+型））を充填したカラムに通液して凍結乾燥した。凍結乾燥物にメタノールを加えて減圧濃縮して結晶を得た。結晶に少量のメタノールを加えて溶かし、さらにエタノールを加えて脱水濃縮するという操作を５回繰り返した後、減圧乾固してラクトン化した化合物例１（7.4ｇ）を得た。
【００８８】
7ｇのラクトン化した化合物例１をメタノール50mLに溶解し、p-アミノメチルスチレンのメタノール溶液（2.5ｇ/0.5mL）を加熱還流下で加えた。120分間加熱還流した後、アセトン200mLを加えて結晶化した。結晶をメタノールより２回再結晶させて精製結晶（N-p-ビニルベンジル-［O-4-デオキシ-α-L-スレオ-ヘキサ-4-エンピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコピラノシル-(1→4)-3-O-β-D-グルコピランウロノシル-(1→3)-O-2-アセトアミド-２-デオキシ-β-D-グルコンアミド］；3.3ｇ）を得た。
【００８９】
２ｇの精製結晶を水２mLに溶解し、重合開始剤としてペルオキソ二硫酸カリウム（0.2mol％）を添加した。窒素下で60℃にて24時間加熱して重合反応を行った。重合後、液をメタノール中に注入して、重合体を析出させた。メタノールをデカンテーションで除き、重合体を分離した。重合体を水に溶解し、メタノールから析出させる再沈殿法によって重合体を精製して高分子例１（1.4ｇ）を得た。
【００９０】
同様の方法で化合物例２を原料として用いて高分子例２を、化合物例３を原料として用いて高分子例３を、化合物例４を原料として用いて高分子例４を得た。
【００９１】
高分子例１〜４は下記式（20）で表される化合物である。式（20）において、ｎは１〜４の整数を示し、ｎが１のとき高分子例１、２のとき高分子例２、３のとき高分子例３、４のとき高分子例４を示す。
【００９２】
光散乱法によって高分子例１〜４の重量平均分子量を測定したところ、約４万であった。
【００９３】
式（20）
【化３１】
実施例７：成型物製造例
化合物例１〜４固定ポリエチレン管（成型物例１〜４）の製造
Larmら（Larm,O.,Lasson,R.,Olsson,P.:Biomat.Med.Dev.Art.Org.,11,161(1983).）の方法に準じて製造を行った。化合物例１とポリエチレンイミン活性化ポリエチレン管（1.8mmID×100cmL）を0.15M NaCl中、NaB(CN)H3とpH3.5，50℃で２時間反応させて化合物例１固定ポリエチレン管（成型物例１）を得た。
【００９５】
同様の方法で、化合物例２を原料として成型物例２、化合物例３を原料として成型物例３、化合物例４を原料として成型物例４を得た。
【００９６】
実施例８：式（１）の化合物の血管内皮細胞増殖促進作用１
試験には、細胞としてウシ大動脈血管内皮細胞（継代数３）、培地として10% FCS（ウシ胎児血清）、100 units／mLペニシリンＧ、100μｇ／mLストレプトマイシンを含むMEMを用いた。９６ウエルのマイクロプレートに細胞を4x103個／ウエル（4x104／mL;100μL）となるように播種し、既定の終濃度（0, 0.1, 0.5, 1, 5, 10 μｇ／mL）となるように式（１）の化合物（化合物例１〜１０）（10μL；培地に溶解）を添加した。37℃、5% CO2の条件下で２０時間培養した後、化合物の血管内皮細胞増殖に対する作用（指標として、5-ブロモデオキシウリジン（BrdU）の取り込み量を採用）を「細胞増殖ELISA, BrdU発色キット」（ベーリンガー・マンハイム社製）を用いて測定した。
【００９７】
比較例として、比較化合物１および２についても同様に試験を行った。比較化合物は下記の式（21）で示される化合物である。式（21）において、ｎは１または２の整数を示し、１のとき比較化合物１（表中、比較１）、２のとき比較化合物２（表中、比較２）を示す。比較化合物１および２は、実施例２に準じて調製した。ただし、ヒアルロニダーゼにはウシ睾丸由来のものを用い、検出は206nmにて行った。化合物の純度は97%以上であり、ウロン酸含量とヘキソサミン含量はほぼ理論値とおりであった。
【００９８】
式（21）
【化３２】
【００９９】
促進率（％）＝（各化合物添加試験のBrdU取り込みの増加量）÷（対照試験のBrdU取り込みの増加量）ｘ１００
得られた結果を表１に示した。
【０１００】
【表１】
【０１０１】
実施例９：式（１）の化合物の血管内皮細胞増殖促進作用２
血管内皮細胞成長因子（VEGF）との相互作用を検討するために試験を行った。VEGFにはヒト組換え型のもの（血管内皮細胞成長因子、ヒト、組換体、生化学用：和光純薬製）を用いた。
【０１０２】
試験は実施例８と同様に行ったが、化合物添加と同時にVEGF（終濃度10ng／mL）を添加した。比較試験として、VEGF単独添加試験（VEGFのみ添加の試験）および陰性対照試験（化合物もVEGFも無添加の試験）も行った。血管内皮細胞増殖に対する作用は実施例８と同様に測定した。
【０１０３】
次の式を用いて、各化合物の血管内皮細胞増殖促進作用を評価した。
【０１０４】
促進率（％）＝（各化合物添加試験のBrdU取り込みの増加量）÷（陰性対照試験のBrdU取り込みの増加量）ｘ１００
得られた結果を表２に示した。
【０１０５】
【表２】
【０１０６】
実施例１０：式（１）の化合物の血管新生促進作用１
氷水浴中で冷却しながらNaHCO3不含の１０倍濃縮MEM 1容量に対して再構成緩衝液（500mM NaOH, 260mM NaHCO3, 200mM HEPES）１容量を混和した後、0.3%コラーゲン塩酸溶液（pH3.0）８容量を加えてよく混和し、コラーゲン溶液とした。２４ウエルのマイクロプレートにコラーゲン溶液0.5mLを分注し、37℃、30分間保温してゲルを固めた。コラーゲンゲル上にウシ大動脈血管内皮細胞（継代数３〜８）を5x104個／ウエルで播種し、37℃で約３時間培養して細胞を接着させた。その後、培地を取り除き、コラーゲン溶液0.5mLを重層して37℃、30分間保温してゲルを固めた後、各濃度の化合物例１〜４を含む１ｍＬ／ウエルの2% FBS-MEM培地を加えて37℃で３日間CO2インキュベーター内で培養した。３日間培養後、形成された血管様の管腔（新生血管）を位相差顕微鏡下、倍率１００倍で撮影した。写真をトレースし、マイクロコンピューターイメージングデバイス（ニューロサイエンス社製）を用いて画像解析を行い、単位面積当たりの血管様管腔の長さを測定した。対照試験として、化合物を含まない培地で培養したものについて同様に血管様管腔の長さを測定した。
【０１０７】
次の式を用いて、各化合物のもつ血管新生促進作用を評価した。
【０１０８】
促進率（％）＝｛（各試験の管腔長）−（対照試験の管腔長）｝÷（対照試験の管腔長）ｘ１００
得られた結果を表３に示す。
【０１０９】
【表３】
【０１１０】
実施例１１：式（１）の化合物の血管新生促進作用２
化合物例１および２の血管新生促進作用をラットを用いたディフュージョンチャンバー法によって評価した。すなわち、ディフュージョンチャンバー（膜孔径0.45μm;ミリポア社製）を組み立て、各濃度（0, 10-8, 10-7, 10-6, 10-5 M）の化合物１および２の生理食塩液溶液200μLを封入した。
【０１１１】
Wistar系ラット（オス；体重200-250g）にペントバルビタールを腹腔内投与（10mg／匹）して麻酔した後、背部を刈毛して希ヨードチンキで消毒した。筋肉を傷つけないように皮膚を切開し、上記の液封入済みディフュージョンチャンバー皮下と筋膜との間に移植した。切開部を縫合し、１週間飼育後、麻酔したラットの背部を切開しチャンバーを露出させ、血管新生の様子を観察後、チャンバーを筋肉ごと切除してホルマリンで固定した。
【０１１２】
結果を表４に示した。表中、＋、±、−はそれぞれ新生血管誘導が陽性、擬陽性、陰性であったことを示す。
【０１１３】
【表４】
【０１１４】
実施例１２：本発明の化合物の急性毒性
本発明化合物の代表例（化合物例１〜１０）について、ラット（体重300〜400ｇ，Wistar系，オス）を用いて急性毒性試験を行ったところ、LD50は500mg/kg以上であった。
【０１１５】
実施例１３：高分子化合物から製造される成型物の血管内皮細胞増殖促進作用
高分子例１〜４の0.01w/v%水溶液をそれぞれ調製し、９６ウエルのポリスチレン製マイクロプレートに0.5mL／ウエルで分注、室温で一晩静置後、液を除去することによりプレートのコートを行った。これらのコート済みプレートを用いて実施例８と同様にウシ大動脈由来の血管内皮細胞の培養を行った。対照試験として未コートのプレートを用いた培養を行った。増殖促進作用を実施例８と同様に測定し、次の式を用いて各高分子例（各成型物）の血管内皮細胞増殖促進作用を評価した。
【０１１６】
促進率（％）＝（各試験のBrdU取り込みの増加量）÷（対照試験のBrdU取り込みの増加量）ｘ１００
得られた結果を表５に示した。
【０１１７】
【表５】
【０１１８】
実施例１４：製剤製造例
錠剤の製造１
化合物例１ 10ｇ
ポリエチレングリコール6000 10ｇ
ラウリル硫酸ナトリウム 1.5ｇ
トウモロコシデンプン 3ｇ
乳糖 25ｇ
ステアリン酸マグネシウム 0.5ｇ
上記成分を秤量する。ポリエチレングリコール6000を70〜80℃に加熱し、そこに化合物例１、ラウリル硫酸ナトリウム、トウモロコシデンプンおよび乳糖を混合した後、冷却する。固化した混合物を粉砕器にかけ造粒し、顆粒を得る。顆粒をステアリン酸マグネシウムと混合後、圧縮打錠して重量250mgの錠剤とする。
【０１１９】
錠剤の製造２
化合物例２ 30ｇ
乳糖 55ｇ
ジャガイモデンプン 12ｇ
ポリビニルアルコール 1.5ｇ
ステアリン酸マグネシウム 1.5ｇ
上記の成分を秤量する。化合物例２、乳糖、ジャガイモデンプンを均一に混合する。混合物にポリビニルアルコールの水溶液を加え、湿式顆粒造粒法により顆粒を調製する。顆粒を乾燥し、ステアリン酸マグネシウムを混合後、圧縮打錠して重量200mgの錠剤とする。
【０１２０】
カプセル剤の製造
化合物例３ 10ｇ
乳糖 25ｇ
トウモロコシデンプン 5ｇ
微結晶セルロース 9.5ｇ
ステアリン酸マグネシウム 0.5ｇ
上記の成分を秤量する。ステアリン酸マグネシウム以外の４成分を均一に混合する。ステアリン酸マグネシウムを加えた後、さらに数分間混合する。混合物をNo.１のハードカプセルに200mgずつ充填し、カプセル剤とする。
【０１２１】
散剤の製造
化合物例４ 20ｇ
乳糖 79ｇ
ステアリン酸マグネシウム 1ｇ
上記成分を秤量する。すべての成分を均一に混合して20％散剤とする。
【０１２２】
坐剤の製造
化合物例２ 10ｇ
ポリエチレングリコール1500 18ｇ
ポリエチレングリコール4000 72ｇ
化合物例２を乳鉢でよく研磨して微細な粉末とした後、熔融法によって１ｇの直腸坐剤とする。
【０１２３】
注射剤の製造
化合物例６ 0.1ｇ
塩化ナトリウム 0.9ｇ
水酸化ナトリウム 適量
注射用水 100mL
上記成分を秤量する。３成分を注射用水に溶解、ろ過滅菌後、10mLアンプルに５mLずつ分注し、熔封して注射剤とする。
Claims (9)
- 下記一般式（１）で表されるグルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物を有効成分として含む血管内皮細胞増殖促進剤。
式（２）
−OR１２
式（３）
−NHR１３
式（４）
−CH２R１３
式（５）
−SR１３
式（６）
式（９）
−NR３１R３２
式（９）中、R３１およびR３２は、同一または異なり水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R２〜R８は同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R９〜R１１は、同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、nは０，１，２，４，５，６，７，８，９または１０を表す。
（ただし、nが０のときは、R１は式（２）、R１２は式（８）で表される基である。）
式（１）および式（６）〜（８）中、保護基は互いに同一または異なり、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭素原子数１〜８のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、または置換されていてもよい芳香族アルキルであり、またR１５、R１９およびR２８を除くR２〜R３０の任意の保護基２つが一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。
また、nが２，４，５，６，７，８，９または１０の場合、R２〜R８は、繰り返し単位ごとに同一であっても異なっていてもよい。］ - 血管内皮再生療法のための治療薬または予防薬として使用する請求項１記載の血管内皮細胞増殖促進剤。
- 血管新生療法のための治療薬または予防薬として使用する請求項１記載の血管内皮細胞増殖促進剤。
- 下記一般式（１）で表されるグルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物：
式（１）
式（２）
−OR１２
式（３）
−NHR１３
式（４）
−CH２R１３
式（５）
−SR１３
式（６）
式（９）
−NR３１R３２
式（９）中、R３１およびR３２は、同一または異なり水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R２〜R８は同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R９〜R１１は、同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、nは０〜２５の整数を表す。
（ただし、nが０のときは、R１は式（２）、R１２は式（８）で表される基である。）
式（１）および式（６）〜（８）中、保護基は互いに同一または異なり、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭素原子数１〜８のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、または置換されていてもよい芳香族アルキルであり、またR１５、R１９およびR２８を除くR２〜R３０の任意の保護基２つが一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。
また、nが２〜２５の場合、R２〜R８は、繰り返し単位ごとに同一であっても異なっていてもよい。］
または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を有効成分として含む細胞培養用組成物。 - 下記一般式（１）で表されるグルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物：
式（１）
式（２）
−OR１２
式（３）
−NHR１３
式（４）
−CH２R１３
式（５）
−SR１３
式（６）
式（９）
−NR３１R３２
式（９）中、R３１およびR３２は、同一または異なり水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R２〜R８は同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R９〜R１１は、同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、nは０〜２５の整数を表す。
（ただし、nが０のときは、R１は式（２）、R１２は式（８）で表される基である。）
式（１）および式（６）〜（８）中、保護基は互いに同一または異なり、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭素原子数１〜８のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、または置換されていてもよい芳香族アルキルであり、またR１５、R１９およびR２８を除くR２〜R３０の任意の保護基２つが一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。
また、nが２〜２５の場合、R２〜R８は、繰り返し単位ごとに同一であっても異なっていてもよい。］
または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を有効成分とする血管内皮細胞増殖促進用コーティング剤。 - 下記一般式（１）で表されるグルクロン酸誘導体およびグルコサミン誘導体を構造中に有する化合物、その薬理学的に許容される塩および溶媒和物または塩の溶媒和物：
式（１）
式（２）
−OR１２
式（３）
−NHR１３
式（４）
−CH２R１３
式（５）
−SR１３
式（６）
式（９）
−NR３１R３２
式（９）中、R３１およびR３２は、同一または異なり水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R２〜R８は同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、R９〜R１１は、同一または異なって水素原子または保護基を表す。
式（１）中、nは０〜２５の整数を表す。
（ただし、nが０のときは、R１は式（２）、R１２は式（８）で表される基である。）
式（１）および式（６）〜（８）中、保護基は互いに同一または異なり、置換されていてもよい炭素原子数１〜８の直鎖または分枝鎖のアルキル、置換されていてもよい炭素原子数２〜８の直鎖または分枝鎖のアルケニル、置換されていてもよい炭素原子数１〜８のアシル、置換されていてもよい芳香族アシル、または置換されていてもよい芳香族アルキルであり、またR１５、R１９およびR２８を除くR２〜R３０の任意の保護基２つが一緒になって、置換されていてもよい炭素原子数３〜８のアルキリデン、置換されていてもよい炭素原子数３〜８の環状アルキリデン、置換されていてもよいベンジリデン、または、置換されていてもよいフタロイルを形成してもよい。
また、nが２〜２５の場合、R２〜R８は、繰り返し単位ごとに同一であっても異なっていてもよい。］
または前記化合物の少なくともひとつを側鎖構造として有する高分子を材料として用いた血管内皮細胞増殖促進用成型物。 - 請求項６記載の成型物および／または請求項５記載のコーティング剤を使用して製造した血管内皮細胞被覆型人工臓器。
- 請求項６記載の成型物および／または請求項５記載のコーティング剤を使用して製造した血管内皮細胞被覆型医療用具。
- 請求項６記載の成型物および／または請求項５記載のコーティング剤を使用して製造した細胞培養用器材。
Priority Applications (13)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27389598A JP4301602B2 (ja) | 1998-09-28 | 1998-09-28 | 血管内皮細胞増殖促進剤 |
| US09/674,252 US6613897B1 (en) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Compounds having glucuronic acid derivatives and glucosamine derivative in the structure, process for producing the same and utilization thereof |
| DE69926876T DE69926876T2 (de) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Verbindungen, deren struktur derivate von glukuronsäure und glukosamin enthält, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| AU36274/99A AU758575C (en) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Compounds having glucuronic acid derivative and glucosamine derivative in structure thereof, method for producing the compounds, and uses of the compounds |
| RU2000130301/15A RU2218922C2 (ru) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Соединения, имеющие в своей структуре фрагмент производного глюкуроновой кислоты и фрагмент производного глюкозамина, способы получения этих соединений и применение этих соединений |
| CNB998067571A CN1185352C (zh) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | 在其结构中具有葡糖醛酸衍生物和葡糖胺衍生物的化合物、其制备方法及其用途 |
| AT99918275T ATE302785T1 (de) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Verbindungen, deren struktur derivate von glukuronsäure und glukosamin enthält, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung |
| PCT/JP1999/002306 WO1999057301A1 (fr) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Composes dont la structure comporte des derives d'acide glucuronique et des derives de glucosamine, leur procede de preparation et d'utilisation |
| BR9910574-8A BR9910574A (pt) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Compostos tendo derivado de ácido glicurÈnico e derivado de glicosamina em sua estrutura, método para a produção dos compostos, e uso dos compostos |
| EP99918275A EP1074631B1 (en) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Compounds having glucuronic acid derivatives and glucosamine derivatives in the structure, process for producing the same and utilization thereof |
| KR10-2000-7012086A KR100530196B1 (ko) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | 구조내 글루쿠론산 유도체 및 글루코사민 유도체를 갖는화합물, 그의 제법 및 그의 용도 |
| CA002330388A CA2330388A1 (en) | 1998-04-30 | 1999-04-30 | Compounds having glucuronic acid derivative and glucosamine derivative in structure thereof, method for producing the compounds, and uses of the compounds |
| NO20005402A NO20005402L (no) | 1998-04-30 | 2000-10-26 | Forbindelser med glukoronsyrederivater og glukosaminderivater i deres struktur, fremgangsmåte for fremstilling derav samt anvendelse |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27389598A JP4301602B2 (ja) | 1998-09-28 | 1998-09-28 | 血管内皮細胞増殖促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000103738A JP2000103738A (ja) | 2000-04-11 |
| JP4301602B2 true JP4301602B2 (ja) | 2009-07-22 |
Family
ID=17534077
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27389598A Expired - Fee Related JP4301602B2 (ja) | 1998-04-30 | 1998-09-28 | 血管内皮細胞増殖促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4301602B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4450456B2 (ja) | 1999-09-27 | 2010-04-14 | 株式会社マルハニチロ水産 | 皮脂産生抑制剤 |
| ATE453655T1 (de) | 2000-07-07 | 2010-01-15 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Hyaluronsäure oligosaccharid fraktionen und medikamente, die diese enthalten |
| WO2003020215A2 (en) * | 2001-08-29 | 2003-03-13 | Regenerx Biopharmaceuticals, Inc. | Methods of treating mycocardial event related coditions with thymosin beta 4 |
| JP2005200386A (ja) * | 2004-01-19 | 2005-07-28 | Chisso Corp | リパーゼ阻害効果、脂肪吸収抑制効果及びコレステロール吸収抑制効果を有する薬剤 |
-
1998
- 1998-09-28 JP JP27389598A patent/JP4301602B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2000103738A (ja) | 2000-04-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6613897B1 (en) | Compounds having glucuronic acid derivatives and glucosamine derivative in the structure, process for producing the same and utilization thereof | |
| JP2806454B2 (ja) | 脈管形成阻止剤 | |
| JP5165298B2 (ja) | 新規なヘパリン様硫酸化多糖類 | |
| EP1117695B1 (fr) | Polymeres biocompatibles, les compositions les contenant et leur utilisation pour la préparation de médicaments | |
| US6608043B1 (en) | Remedies for joint diseases | |
| CA2002814A1 (en) | Angiostatic agents | |
| JP4301602B2 (ja) | 血管内皮細胞増殖促進剤 | |
| KR100854985B1 (ko) | 혈친화성 코팅을 함유하는 의료기, 이의 제조 방법 및 용도 | |
| JP4301591B2 (ja) | 新規な血小板粘着凝集抑制物質、その製造法およびその用途 | |
| JP4450456B2 (ja) | 皮脂産生抑制剤 | |
| JP3455783B2 (ja) | 血管内膜肥厚抑制剤 | |
| JPS6354282B2 (ja) | ||
| JPH08511041A (ja) | 哺乳動物生組織の増殖に作用する方法、及びそのための化合物ならびに組成物 | |
| MXPA00010694A (en) | Compounds having glucuronic acid derivatives and glucosamine derivatives in the structure, process for producing the same and utilization thereof | |
| JPH02223525A (ja) | 血管新生阻害剤 | |
| JPS6354283B2 (ja) | ||
| JP2000191538A (ja) | 白血球―血管内皮細胞接着抑制剤 | |
| Kivalo | The effect of heparin‐surface‐modification on scar‐tissue formation around a subconjunctival polymethylmethacrylate implant in the rabbit | |
| JPH07179349A (ja) | コンドロイチン硫酸のアシル誘導体 | |
| IL98028A (en) | Pharmaceuticals containing low molecular weight heparin (HWML) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20050627 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20080812 |
|
| A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20081014 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20090323 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20090421 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120501 Year of fee payment: 3 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120501 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130501 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130501 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140501 Year of fee payment: 5 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
| S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
| R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |