CZ2012664A3 - Enzym hyaluronan-lyáza, zpusob jeho výroby, pouzití a zpusob prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu - Google Patents
Enzym hyaluronan-lyáza, zpusob jeho výroby, pouzití a zpusob prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ2012664A3 CZ2012664A3 CZ20120664A CZ2012664A CZ2012664A3 CZ 2012664 A3 CZ2012664 A3 CZ 2012664A3 CZ 20120664 A CZ20120664 A CZ 20120664A CZ 2012664 A CZ2012664 A CZ 2012664A CZ 2012664 A3 CZ2012664 A3 CZ 2012664A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- enzyme
- hyaluronan
- molecular weight
- fistulina
- hyaluronic acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 title claims description 30
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 9
- WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-3-[(2s,3r,5s,6r)-3-acetamido-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,5,6-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1C[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O WCDDVEOXEIYWFB-VXORFPGASA-N 0.000 title 1
- 229940014041 hyaluronate Drugs 0.000 title 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 81
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 81
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims abstract description 49
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims abstract description 34
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims abstract description 31
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 19
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 claims abstract description 18
- 241000123205 Fistulina Species 0.000 claims abstract description 11
- 241000123208 Fistulina hepatica Species 0.000 claims abstract description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 27
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 claims description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical group C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims 1
- 239000003961 penetration enhancing agent Substances 0.000 claims 1
- XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M potassium benzoate Chemical compound [K+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 XAEFZNCEHLXOMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 abstract description 8
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 abstract description 8
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 5
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 abstract description 3
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 76
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 18
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 18
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 10
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 10
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 10
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 9
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 7
- 108050009363 Hyaluronidases Proteins 0.000 description 6
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 150000002016 disaccharides Chemical group 0.000 description 4
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- -1 Na or K Chemical class 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000194042 Streptococcus dysgalactiae Species 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 238000000184 acid digestion Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 229940115920 streptococcus dysgalactiae Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000545744 Hirudinea Species 0.000 description 1
- 102100039285 Hyaluronidase-2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007068 beta-elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 210000001520 comb Anatomy 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 229910001431 copper ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004044 tetrasaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y402/00—Carbon-oxygen lyases (4.2)
- C12Y402/02—Carbon-oxygen lyases (4.2) acting on polysaccharides (4.2.2)
- C12Y402/02001—Hyaluronate lyase (4.2.2.1)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Resení se týká enzymu schopného stepit kyselinu hyaluronovou, který je produkován houbami rodu Fistulina (zejména Fistulina hepatica). Degradace probíhá lyázovým mechanismem, pri nemz vznikají dvojné vazby mezi C4 a C5 kyseliny glukuronové. Dále je popsán zpusob prípravy a cistení enzymu a jeho mozné praktické vyuzití pro prípravu nízkomolekulárního hyaluronanu nebo kosmetických ci farmaceutických prostredku. Resení se rovnez týká zpusobu prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu.
Description
Enzym hyaluronan-lyáza, způsob jeho výroby, použití a způsob přípravy nízkomolekulárního hyaluronanu
Oblast techniky
Vynález se týká enzymu, případně enzymového preparátu schopného degradovat kyselinu hyaluronovou (hyaluronan). Rovněž je popsán způsob výroby enzymu kultivací houby patřící do rodu Fistulina, jeho využití a způsob přípravy nízkomolekulárního hyaluronanu.
Dosavadní stav techniky
Kyselina hyaluronová je lineární polysacharid tvořený disacharidovými jednotkami složenými z kyseliny glukuronové a N-acetylglukosaminu. Touto strukturou se řadí mezi glykosaminoglykany. Vyskytuje se v extracelulární matrix měkkých pojivových tkání, kde vykazuje stabilizační a hydratační funkci. V současnosti se kyselina hyaluronová nejčastěji získává biotechnologickou cestou.
Hyaluronidázy jsou enzymy, které jsou schopné štěpit kyselinu hyaluronovou nebo její soli na nižší fragmenty. Pojem hyaluronidáza je nadřazený pojmům označujícím jednotlivé skupiny enzymů s degradační aktivitou vůči hyaluronanu. Dle mechanismu účinku na polysacharid lze hyaluronidázy rozdělit na několik typů. Do první skupiny řadíme savčí enzymy (EC 3.2.1.35), které štěpí β-1-4 vazbu kyseliny hyaluronové za vzniku tetrasacharidů. Mechanismus štěpení těmito enzymy je hydrolytický. Druhá skupina je tvořena hyaluronát-3-glykanohydrolázami pijavic (EC 3.2.1.36), které tvoří tetra a hexasacharidy. I v tomto případě je kyselina hyaluronová degradována hydrolyticky. Třetí skupinou jsou bakteriální hyaluronidázy (EC 4.2.2.1). Tyto enzymy jsou nazývány hyaluronan-lyázy a degradují kyselinu hyaluronovou mechanismem β-eliminace za vzniku dvojné vazby mezi C4 a C5 kyseliny glukuronové. Tento typ štěpení byl dosud popsán pouze u bakterií. Tato přihláška vynálezu popisuje hyaluronan-lyázu z nového (nebakteriálního) zdroje.
Níže uvedené patentové spisy pojednávají o bakteriálních hyaluronan lyázách. Ve všech případech je chráněna výroba enzymů fermentační cestou. Vždy se jedná o bakterie z rodů Streptococcus nebo Streptomyces. Veškeré hyaluronidázy jsou produkovány extracelulárně. Aplikace jsou vesměs popisovány jako přímé medicínské, kosmetické nebo farmaceutické využití enzymů v určitých kompozicích. Nejčastěji se jedná o pomocnou látku pro průnik léčiva do pokožky při topické * S % $
2. · C ·* í < « · * ·: » ' -í * · < < 4 · aplikaci. Oproti hyaluronidázám s hydrolytickým mechanismem štěpení jsou lyázy často velice specifické vůči kyselině hyaluronové.
CH 628088 se zabývá přípravou několika produktů produkovaných streptokoky. Jedním z těchto produktů je i hyaluronan lyáza.
JP 63044883 pojednává o hyaluronan-lyáze SD-678 produkované druhem Streptococcus dysgalactiae. Enzym má optimum aktivity v rozmezí pH 5,8-6,6 při teplotě 37 °C. lonty, které inhibují hyaluronidázovou aktivitu, jsou např Fe2+ nebo Cu2+.
JP 62104579 popisuje hyaluronan-lyázu produkovanou skupinou C rodu Streptococcus, mezi něž patří i Streptococcus dysgalactiae. Molekulová hmotnost enzymu je 80 kDa. Tento enzym je vysoce specifický vůči kyselině hyaluronové. Optimum aktivity bylo pozorováno při pH 6-7 a teplotě 35-45 °C. Rovněž je prokázaná stabilita při 40 °C při pH 6,0 po dobu 15 min.
US 3728223 popisuje produkci hyaluronan-lyázy druhem Streptomyces hyalurolyticus. Tento enzym je schopen selektivně štěpit kyselinu hyaluronovou. Optimální pH je 5,0 a optimální teplota 60 °C. Aktivita je však zachována i po záhřevu na 70 °C.
US 6902548 se zabývá využitím hyaluronan-lyázy produkované druhem Streptomyces hyalurolyticus v očním lékařství. Po purifikaci již enzymový preparát neobsahuje proteázy, které byly pro takovou aplikaci dosud překážkou.
US 4258134 se týká hyaluronan-lyázy BMP-8231. Tento enzym je produkován Streptomyces koganiensis. Je specifický vůči kyselině hyaluronové. Optimální pH je 4,0, avšak stabilita byla pozorována v rozmezí pH 4,0-11,3. Optimální teplota pro štěpení je 60 °C. Rovněž je enzym stabilní vůči proteázám.
WO 2010/130810 popisuje hyaluronidázu produkovanou druhem Streptomyces koganiensis ATCC 31394. Molekulová hmotnost je 21,6 kDa. Isoelektrický bod je v rozmezí 4,4-4,8. Aktivita enzymu je 40000 I.U./mg nebo vyšší. Vynález kromě procesu izolace a purifikace popisuje i využití enzymu pro přípravu farmaceutických kompozic nebo analytických činidel.
US 6719986 patentuje přípravek obsahující hyaluronan lyázu napomáhající penetraci léčiv do kůže. Produkce lyázy zde není blíže popsána. Je zmíněn pouze produkční a * 8 » « 9«
Λ . Λ 8 »«-*»·»>
’ Ο ’ 1 * * »>
. i Μ S »druh Streptococcus agalactiae. Molekulová hmotnost enzymu je 116 kDa a isoelektrický bod 8,6.
US 2010/0172892 popisuje hyaluronan-lyázu produkovanou Streptomyces actinocidus77. Je zde detailně popsána struktura enzymu, která je chráněna patentovými nároky. Je patentováno použití enzymu pro přípravu kompozic využitelných v kosmetice, medicíně nebo farmacii, přednostně s topickou aplikací. Optimální podmínky štěpení jsou: pH 6,5 - 7,0 a teplota 50;60 °C. Enzym má isoelektrický bod při pH 4,4 a molekulovou hmotnost 44 kDa. Má nízkou nebo žádnou aktivitu vůči chondroitin sulfátu nebo heparinu. Aktivita enzymu je inhibována ionty železa a mědi. Shodný enzym popisuje i WO 2009/037566.
Příprava nízkomolekulárního hyaluronanu pomocí lyáz bakterií (Streptomyces hyalurolyticus) je zmíněna v patentu US 6613897. Jedná se však pouze o přípravu oligosacharidů před jejich následnou chemickou modifikací.
Žádná odborná literatura ani patent dosud nepopisuje hyaluronidázy s eliminačním (lyázovým) mechanismem štěpení produkované jinými organismy než bakteriemi.
Podstata vynálezu
Vynález se týká nové hyaluronidázy produkované houbami, která má lyázový (eliminační) mechanismus štěpení. Tento enzym může být produkován houbami rodu Fistulina, obzvláště Fistulina hepatica.
Předložený vynález se dále týká způsobu získávání enzymu a jeho možného využití. Způsob kultivace hub a izolace enzymu není striktně daný, zásadním parametrem je zdroj enzymu, tj. houby rodu Fistulina, který vede k hyaluronan-lyáze. Jedním z možných způsobů produkce enzymu je například submersní kultivace hub. Kultivace optimálně probíhá při 20 až 30 °C podobu 5 až 11 dní. Je možné ji provádět jak v třepaných Erlenmeyerových baňkách, tak i ve fermentoru. Kultivační médium obsahuje zdroj uhlíku, například sacharózu, dále zdroj dusíku, například kvasničný autolyzát, a anorganické soli, například Na2HPO4.12 H2O a MgSO4.7H2O. Enzym se může izolovat z kultivačního média po odstranění mycelia a/nebo extrakcí z mycelia po jeho desintegraci. Po centrifugaci je enzym dále čištěn v oboru známými metodami, například promytím pufrem o pH 7,0. Před chromatografickou separací je roztok obsahující enzym zaměněn za vhodný pufr, potřebný pro její optimální průběh. Jako nejvhodnější se jevila separace na anexových sorbentech. Lze však použít i jiné typy chromatografie. V případě vyššího požadavku na čistotu preparátu lze využít gelovou permeační chromatografií.
Lyáza produkovaná houbami se vyznačuje aktivitou v širokém rozmezí pH (3,5-8,0), s optimem při pH 4,0, a v širokém rozmezí teplot (5 až 50 °C), s optimem při teplotě 20 °C. Enzym je za podmínek štěpení stabilní až několik týdnů. Aktivitu enzymu lze zvýšit o 10-30 % přídavkem MgSO4, MnCI2, KOI nebo CuSO4, a to v množství 5 mM až 20 mM vzhledem k roztoku kyseliny. U jiných enzymů (JP 63044883, WO 2009/037566) je Cu2+ často inhibitorem.
Produkce hyaluronan-lyázy z Fistulina hepatica je výhodná, protože se jedná o dřevokaznou houbu, tzv. brown rot fungi. Tato houba neprodukuje žádné toxické metabolity ani endotoxiny, jako tomu může být u bakterií.
Enzym lze využít pro přípravu nízkomolekulárního hyaluronanu nebo jeho derivátů. Molekulovou hmotnost výsledných produktů je možné ovlivnit podmínkami degradace jako je čas, teplota, koncentrace kyseliny hyaluronové v roztoku nebo poměr enzymu a kyseliny. Štěpení probíhá ve vodném roztoku v rozmezí pH 3,5 až 8,0 a teplotě 5 až 50 °C po dobu 1 minuty až 30 dní. Optimálně probíhá štěpení ph pH 4,0 a teplotě 20 °C po dobu 24 až 168 h. Použitá kyselina hyaluronová může pocházet z různých zdrojů (kohoutí hřebínky, Streptococcus zooepidermicus, Streptococcus equismilis) a mít libovolnou molekulovou hmotnost, například v rozmezí 1,5 až 2,2 MDa, nicméně pojmem vysokomolekulární HA je míněna HA, která má hmotnostně střední molekulovou hmotnost 0,8 MDa nebo vyšší. Roztok kyseliny může být připraven v koncentraci od 0,1 do 10 %hmotn. Kromě nativní kyseliny hyaluronové lze rovněž použít její soli, např. Na nebo K, nebo deriváty, např. acylderiváty, a připravit tak funkčně specifické oligosacharidy nebo jiné nízkomolekulární produkty.
Dále lze připravený enzym použít i pro přípravu farmaceutických nebo kosmetických kompozic jakožto látku napomáhající penetraci látek do tkání.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 znázorňuje mechanismus štěpení kyseliny hyaluronové hyaluronan-lyázou podle vynálezu.
Obr. 2 znázorňuje chromatogramy oligosacharidů vzniklých štěpením kyseliny hyaluronové. Detekce při 210 a 232 nm.
i * s « « a
Obr. 3 znázorňuje závislost relativní aktivity enzymu na pH, přičemž relativní aktivita enzymu je poměr aktivity enzymu při daném pH k maximální aktivitě enzymu, tj. při optimálním pH 4,0, x 100 %.
Obr. 4 znázorňuje závislost relativní aktivity enzymu na teplotě, přičemž relativní aktivita enzymu je poměr aktivity enzymu při dané teplotě k maximální aktivitě enzymu, tj. při optimální teplotě 20 °C, x 100 %.
Obr. 5 znázorňuje zvýšení aktivity enzymu po přídavku solí, kde je vynesena závislost relativní aktivity enzymu na přídavku konkrétní soli v konkrétním množství, přičemž relativní aktivita je poměr aktivity enzymu s přídavkem soli k aktivitě enzymu bez přídavku soli, x 100 %.
Příklady provedení vynálezu
Vynález objasňují, avšak neomezují, následující příklady praktického provedení.
Je-li v popise uvedena molekulová hmotnost (Mr), například hyaluronanu, je míněna hmotnostně střední molekulová hmotnost. Výraz „vysokomolekulární“ hyaluronan zahrnuje hyaluronan o Mr vyšší než 0,8 MDa. Výraz „nízkomolekulámí“ hyaluronan zahrnuje hyaluronan o Mr v rozsahu přibližně 0,3 až 500 kDa. Výraz „hyaluronan“ zahrnuje jak kyselinu hyaluronovou, tak i její soli (např. Na nebo K).
Příklad 1
Kultivace hub (Fistulina hepatica) za účelem výroby enzymu nebo enzymového preparátu probíhala v tekutém médiu o složení 35 g/l sacharózy, 3 g/l kvasničného autolyzátu, 2,5 g/l Na2HPO4 · I2H2O a 0,5 g/l MgSO4 · 7H2O, přičemž uváděná množství složek se vztahují na 1 I média. Kultivace byla prováděna při 25 °C po dobu 6 dní. Byly použity Erlenmeyerovy baňky o objemu 1 I, které obsahovaly 500 ml kultivačního média. Pro inokulaci baněk byla použita vždy 1 kulturou porostlá Petriho miska o průměru 9 cm na 1 I kultivačního média. Baňky byly buď přímo použity pro izolaci enzymu, nebo pro zaočkování fermentoru.
Po kultivaci bylo z média odstraněno mycelium, např. pomocí centrifugace nebo filtrace přes polyamidovou plachetku. Enzym lze získat i z mycelia, avšak v podstatně menším množství, a proto je dále popisováno získávání enzymu z kultivačního média. V případě získávání enzymu z mycelia se provede desintegrace mycelia, t a 4 * j
-,ι » 9 * -i ř * » * Q » í « » v s · · 4 · a ' s například prudkým zmražením a třením v třecí misce, pomocí ultrazvuku nebo jinými metodami.
Pro účely purifikace bylo kultivační médium vyměněno za pufr o pH 7,0, a to tak, že se médium nejprve odfiltrovalo za pomocí membrány a vzorek se pak alespoň jednou promyl pufrem (2 I), například fosfátovým. Enzym lze dále ihned použít pro další purifikaci chromatografickou separací. Není-li enzym dále purifikován, je zde nazýván „enzymový preparát“. Pro štěpení kyseliny hyaluronové lze využít i takto připravený hrubý enzymový preparát.
Příklad 2
Pro dosažení vyšší čistoty byl enzymový preparát připravený způsobem podle Příkladu 1 dále separován pomocí chromatografických technik. S výhodou byla využita anion výměnná chromatografie. Eluce byla provedena lineárním gradientem NaCI v rozmezí Ofl mol/L Pro nejlepší čistotu byly frakce dále separovány pomocí gelové permeační chromatografie.
Množství vyprodukovaného enzymu po chromatografii se pohybovalo v rozmezí 600 ± 200 pg/ml, což činí přibližně 1 mg čistého enzymu na 1 I kultivačního média.
Příklad 3
Štěpení kyseliny hyaluronové bylo provedeno v 0,1M acetátovém pufru o pH 4,0. Pro tyto účely byl připraven 1% roztok vysokomolekulární kyseliny hyaluronové (2 MDa). Substrát byl připraven biotechnologicky. 4 ml roztoku vysokomolekulární kyseliny hyaluronové byly smíseny s 200 pl roztoku enzymu v 0,02 M fosfátovém pufru o pH 7,0 po chromatografii o koncentraci enzymu 600 pg/ml. Štěpení probíhalo při 20 °C 3 dny. Vzniklými produkty byly oligosacharidy hyaluronanu, převážně směs disacharidů až dodeka-sacharidů s dvojnou vazbou mezi C4 a C5 koncové kyseliny glukuronové. Střední molekulová hmotnost oligosacharidů stanovená gelovou permeační chromatografii se pohybovala v rozmezí 0,3 až 300 kDa a koncové kyseliny glukuronové měly dvojnou vazbu mezi C4 a C5.
Příklad 4
Vzniklé nízkomolekulární fragmenty kyseliny hyaluronové byly kvantifikovány pomocí RP-HPLC. Detekce byla provedena UV detektorem při 210 a 232 nm. Analýzou vzniklých produktů byl prokázán lyázový mechanismus štěpení. Je známo, že
I 4 ’ * » ,ϊ •r 4 - 4.i
7» f * · i ·ί« « · < * 3«
- ί ί · - * i Λ« « ( vznikající nenasycené vazby vykazují zvýšenou absorbanci při 232 nm. Dále bylo potvrzeno, že veškerá kyselina, která byla do reakční směsi dodána, byla rozštěpena na oligosacharidy.
Příklad 5
Štěpení derivátu kyseliny hyaluronové bylo provedeno v 0,1M acetátovém pufru o pH 4,0. Pro tyto účely byl připraven 1% roztok palmitoylhyaluronanu (2 MDa). 4 ml tohoto roztoku byly smíseny s 200 pl roztoku enzymu v 0,02 M fosfátovém pufru o pH 7,0 po chromatografii o koncentraci enzymu 600 pg/ml. Substrát byl připraven chemickou syntézou z biotechnologicky vyrobené kyseliny hyaluronové. Štěpení probíhalo při 20 °C 3 dny. Vzniklými produkty byly acylované oligosacharidy hyaluronanu, konkrétně směs disacharidů až dodeka-sacharidů s dvojnou vazbou mezi C4 a C5 koncové kyseliny glukuronové. Střední molekulová hmotnost oligosacharidů stanovená gelovou permeační chromatografii se opět pohybovala v rozmezí 0,3 až 300 kDa a koncové kyseliny glukuronové měly dvojnou vazbu mezi C4 a C5.
Příklad 6
Aktivita enzymu v závislosti na teplotě, na pH a přidaných solích byla sledována pomocí reometru. Byl sledován pokles viskozity reakční směsi v čase. Pro veškeré pokusy byl připraven 1% roztok HA v příslušném pufru (pH), k němuž byl pipetován roztok enzymu po chromatografické separaci (0,02M fosfátový pufr, 600 μg/ml enzymu). Objem roztoku kyseliny hyaluronové byl 460 μΙ a objem enzymu 40 μΙ. V případě testování závislosti aktivity enzymu na teplotě a stanovení optimální teploty štěpení byl použit pufr o pH 4,0. Závislost aktivity enzymu na pH byla testována při teplotě 37 °C. Testování vlivu solí bylo provedeno přídavkem příslušné soli do roztoku kyseliny hyaluronové. Zjištěné výsledky byly vyneseny do grafů - viz Obr. 3, Obr. 4. a Obr. 5. Z grafů je zřejmé, že optimální teplota pro štěpení je přibližně 20 °C, optimální pH je přibližně 4,0.
Příklad 7
Štěpení kyseliny hyaluronové bylo provedeno v 0,1M acetátovém pufru o pH 4,0, do kterého byla přidána jedna ze solí do koncentrace až 20 mM. Solemi byly MgSO4, MnCh, KOI, CuSO4. Pro štěpení byl připraven 1% roztok vysokomolekulární kyseliny hyaluronové v takto modifikovaném pufru. Substrát byl připraven biotechnologicky.
ml roztoku vysokomolekulární kyseliny hyaluronové byly smíseny s 200 μΙ roztoku enzymu v 0,02 M fosfátovém pufru o pH 7,0 po chromatografii o koncentraci enzymu 600 pg/ml. Štěpení probíhalo při 20 °C 3 dny. Vzniklými produkty byly oligosacharidy hyaluronanu, převážně směs disacharidů až dodekasacharidů s dvojnou vazbou mezi C4 a C5 koncové kyseliny glukuronové. Střední molekulová hmotnost oligosacharidů stanovená gelovou permeační chromatografii se pohybovala v rozmezí 0,3 až 300 kDa a koncové kyseliny glukuronové měly dvojnou vazbu mezi C4 a C5.
Claims (17)
- Patentové nároky1. Způsob přípravy hyaluronan-lyázy, vyznačující se tím, že se získá submersní kultivací houby patřící do rodu Fistulina při teplotě 20 až 30 °C po dobu 5 až 11 dní.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že houba patřící do rodu Fistulina je druhu Fistulina hepatica.
- 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že kultivační médium obsahuje zdroj uhlíku, zdroj dusíku a anorganické soli.
- 4. Způsob podle nároku 3, vyznačující se tím, že zdrojem uhlíku je sacharóza, zdrojem dusíku je kvasničný autolyzát a anorganické soli jsou Na2HPO4.12 H2O a MgSO4.7H2O.
- 5. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že se enzym izoluje z kultivačního média po odstranění mycelia a/nebo extrakcí z mycelia po desintegraci mycelia.
- 6. Způsob podle nároku 5, vyznačující se tím, že se enzym dále alespoň jednou promyje pufrem o pH 7,0.
- 7. Způsob podle nároku 6, vyznačující se tím, že se enzym dále purifikuje pomocí chromatografické separace.
- 8. Hyaluronan-lyáza připravitelná způsobem podle nároku 1 submerzní kultivací houby patřící do rodu Fistulina v kultivačním roztoku.
- 9. Hyaluronan-lyáza podle nároku 8, vyznačující se- tím, že houbou rodu Fistulina je Fistulina hepatica.
- 10. Hyaluronan-lyáza podle nároku 8 nebo 9, vyznačující setím, že má optimální aktivitu při pH 4,0 a teplotě 20 °C.
- 11. Použití enzymu hyaluronan-lyázy připravené způsobem podle nároku 1 kultivací houby patřící do rodu Fistulina pro štěpení hyaluronanu nebo jeho derivátu.-10 ·
- 12. Použití enzymu hyaluronan-lyázy připravené způsobem podle nároku 1 kultivací houby patřící do rodu Fistulina pro přípravu farmaceutických nebo kosmetických kompozic jako látka napomáhající penetraci látek do tkání.
- 13. Způsob přípravy nízkomolekulárního hyaluronanu, vyznačující se tím, že se připraví 0,1 až 10%hmotn. vodný roztok vysokomolekulární kyseliny hyaluronové, její soli nebo jejího derivátu o pH v rozmezí 3,5 až 8,0, přidá se vodný roztok enzymu hyaluronan-lyázy připravené způsobem podle nároku 1 kultivací houby patřící do rodu Fistulina, a nechá se probíhat reakce při teplotě 5 až 50 °C po dobu 1 minuty až 30 dní.
- 14. Způsob podle nároku 13, vyznačující se tím, že se reakce nechá probíhat při pH 4,0 a teplotě 20 °C po dobu 24 až 168 h.
- 15. Způsob podle nároku 13 nebo 14, vyznačující se tím, že vysokomolekulární kyselina hyaluronová, její sůl nebo její derivát má molekulovou hmotnost v rozmezí 1,5 až 2,2 MDa.
- 16. Způsob podle kteréhokoli z nároků 13 až 15, vyznačující se tím, že solí kyseliny hyaluronové je sodná nebo draselná sůl a derivátem hyaluronanu je acylovaný hyaluronan.
- 17. Způsob podle kteréhokoli z nároků 13 až 16, vyznačující se tím, že se do 0,1 až 10%hmotn. roztoku vysokomolekulární kyseliny hyaluronové, její soli nebo derivátu, a enzymu hyaluronan-lyázy přidá 5 až 20 mM soli vybrané ze skupiny zahrnující MgSO4, MnCI2, KCI, CuSO4.
Priority Applications (9)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20120664A CZ304140B6 (cs) | 2012-09-27 | 2012-09-27 | Enzym hyaluronan-lyáza, zpusob jeho výroby, pouzití a zpusob prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu |
| JP2015533449A JP2015530099A (ja) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | 酵素ヒアルロナン‐リアーゼ，その生成方法及び使用，並びに低分子ヒアルロナンの調製方法 |
| EP13786150.6A EP2900816A1 (en) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | Enzyme hyaluronan-lyase, method of production thereof, use thereof and method of preparation of low-molecular hyaluronan |
| RU2015113473A RU2015113473A (ru) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | Фермент гиалуронанлиаза, способ его получения, его применение и способ получения низкомолекулярного гиалуронана |
| US14/430,731 US20150344926A1 (en) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | Enzyme Hyaluronan-Lyase, Method of Production Thereof, Use Thereof and Method of Preparation of Low-Molecular Hyaluronan |
| PCT/CZ2013/000116 WO2014048406A1 (en) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | Enzyme hyaluronan-lyase, method of production thereof, use thereof and method of preparation of low-molecular hyaluronan |
| KR1020157008026A KR20150063057A (ko) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | 히알루로난-리아제 효소, 이의 생산 방법, 이의 용도, 및 저분자량의 히알루로난의 제조 방법 |
| BR112015005957A BR112015005957A2 (pt) | 2012-09-27 | 2013-09-26 | método de preparação de hialuronato-liase, hialuronato-liase, uso da enzima hialuronato-liase e método de preparação de hialuronato de baixo peso molecular |
| ARP130103474A AR092702A1 (es) | 2012-09-27 | 2013-09-27 | Enzima hialuronano-liasa, metodo para producirla, su uso y metodo para preparar un hialuronano con un peso molecular bajo |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CZ20120664A CZ304140B6 (cs) | 2012-09-27 | 2012-09-27 | Enzym hyaluronan-lyáza, zpusob jeho výroby, pouzití a zpusob prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2012664A3 true CZ2012664A3 (cs) | 2013-11-13 |
| CZ304140B6 CZ304140B6 (cs) | 2013-11-13 |
Family
ID=49518625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20120664A CZ304140B6 (cs) | 2012-09-27 | 2012-09-27 | Enzym hyaluronan-lyáza, zpusob jeho výroby, pouzití a zpusob prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20150344926A1 (cs) |
| EP (1) | EP2900816A1 (cs) |
| JP (1) | JP2015530099A (cs) |
| KR (1) | KR20150063057A (cs) |
| AR (1) | AR092702A1 (cs) |
| BR (1) | BR112015005957A2 (cs) |
| CZ (1) | CZ304140B6 (cs) |
| RU (1) | RU2015113473A (cs) |
| WO (1) | WO2014048406A1 (cs) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP3596224A1 (en) * | 2017-03-16 | 2020-01-22 | Contipro a.s. | Method of determination of hyaluronic acid |
| CN114457061A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-05-10 | 中国海洋大学 | 一种透明质酸裂解酶及其应用 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3728223A (en) | 1971-10-08 | 1973-04-17 | Amano Pharma Co Ltd | Production of hyaluronidase from a strain of streptomyces |
| CH628088A5 (en) | 1975-09-17 | 1982-02-15 | Dresden Arzneimittel | Process for obtaining streptococcal metabolic products |
| JPS6033474B2 (ja) | 1978-05-11 | 1985-08-02 | 藤沢薬品工業株式会社 | 新規なヒアルロニダ−ゼｂｍｐ−８２３１およびその製造法 |
| JPS5968402A (ja) | 1982-10-08 | 1984-04-18 | 日本通運株式会社 | Ｐｃ桁の布設用門構吊上機 |
| JPS62104579A (ja) | 1985-10-30 | 1987-05-15 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | ヒアルロニダ−ゼの製造法 |
| NL9700003A (nl) * | 1993-09-28 | 1997-07-01 | House Foods Corp | Werkwijze voor het inoculeren van Fistulina hepatica. |
| BR9910574A (pt) | 1998-04-30 | 2001-09-11 | Maruha Corp | Compostos tendo derivado de ácido glicurÈnico e derivado de glicosamina em sua estrutura, método para a produção dos compostos, e uso dos compostos |
| EP1140199B1 (de) * | 1998-12-23 | 2003-07-23 | Esparma GmbH | Hyaluronatlyase als penetrationsförderer in topischen mitteln |
| US6902548B1 (en) | 2001-03-19 | 2005-06-07 | Ed Schuler | Use of Streptomyces hyalurolyticus enzyme in ophthalmic treatments |
| US20070202570A1 (en) * | 2006-02-24 | 2007-08-30 | Kikkoman Corporation | Enzyme composition, low molecular weight hyaluronan and process for preparing the same |
| RU2471867C2 (ru) * | 2007-06-19 | 2013-01-10 | Тамара П. Уваркина | Гиалуронидаза и способ ее применения |
| US20120219554A2 (en) | 2009-05-14 | 2012-08-30 | Fidia Farmaceutici S.P.A. | Extracellular yaluronidase from streptomyces koganeiensis |
-
2012
- 2012-09-27 CZ CZ20120664A patent/CZ304140B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-09-26 BR BR112015005957A patent/BR112015005957A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2013-09-26 US US14/430,731 patent/US20150344926A1/en not_active Abandoned
- 2013-09-26 RU RU2015113473A patent/RU2015113473A/ru not_active Application Discontinuation
- 2013-09-26 WO PCT/CZ2013/000116 patent/WO2014048406A1/en active Application Filing
- 2013-09-26 KR KR1020157008026A patent/KR20150063057A/ko not_active Withdrawn
- 2013-09-26 JP JP2015533449A patent/JP2015530099A/ja not_active Withdrawn
- 2013-09-26 EP EP13786150.6A patent/EP2900816A1/en not_active Withdrawn
- 2013-09-27 AR ARP130103474A patent/AR092702A1/es unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2014048406A1 (en) | 2014-04-03 |
| EP2900816A1 (en) | 2015-08-05 |
| JP2015530099A (ja) | 2015-10-15 |
| CZ304140B6 (cs) | 2013-11-13 |
| BR112015005957A2 (pt) | 2017-07-04 |
| RU2015113473A (ru) | 2016-11-20 |
| AR092702A1 (es) | 2015-04-29 |
| US20150344926A1 (en) | 2015-12-03 |
| KR20150063057A (ko) | 2015-06-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Schiraldi et al. | Biotechnological production and application of hyaluronan | |
| KR101200571B1 (ko) | 테라박터 속 유래의 신규한 진세노시드 글리코시다제 및 이의 용도 | |
| Zhao et al. | High-level extracellular expression of κ-carrageenase in Brevibacillus choshinensis for the production of a series of κ-carrageenan oligosaccharides | |
| Selyanin et al. | The history of hyaluronic acid discovery, foundational research and initial use | |
| Kulakovskaya et al. | Extracellular glycolipids of yeasts: biodiversity, biochemistry, and prospects | |
| Hofinger et al. | Isoenzyme-specific differences in the degradation of hyaluronic acid by mammalian-type hyaluronidases | |
| Dobrynina et al. | Disruption of bacterial biofilms using recombinant dispersin B | |
| Kale et al. | Chondroitin lyase from a marine Arthrobacter sp. MAT3885 for the production of chondroitin sulfate disaccharides | |
| US4904594A (en) | Enzyme preparation capable of degrading glycosamino-glycan, and a method for producing said preparation | |
| CZ2012664A3 (cs) | Enzym hyaluronan-lyáza, zpusob jeho výroby, pouzití a zpusob prípravy nízkomolekulárního hyaluronanu | |
| CN111518795A (zh) | 褐藻胶裂解酶alb02668及基因、重组质粒、工程菌株和在拮抗病原微生物中的应用 | |
| KR102581542B1 (ko) | 신규 미생물 스트렙토코커스 균주 및 이로부터 유래한 히알루로니데이즈 | |
| EP0642795B1 (en) | Remedy for cystic fibrosis | |
| KR101654810B1 (ko) | 신규미생물 비브리오 스플린디더스 ｂｓｔ３９８ 및 이를 이용한 저분자 히알루론산의 제조방법 | |
| EP3512942B1 (fr) | Nouvelle ulvane lyase et son utilisation pour cliver des polysaccharides | |
| CN103038339A (zh) | 透明质酸的脱乙酰基水解酶、由脱乙酰基水解酶脱乙酰化的透明质酸及其衍生物 | |
| US20100310633A1 (en) | Chitinosanase | |
| Howlader et al. | Fermentation optimization, purification and biochemical characterization of a porphyran degrading enzyme with funoran side-activity from Zobellia uliginosa | |
| CN116042547A (zh) | 一种黄酮3′-羟基化酶及其应用 | |
| Burtseva et al. | Distribution of O-glycosylhydrolases in marine fungi of the Sea of Japan and the Sea of Okhotsk: characterization of exocellular N-acetyl-β-D-glucosaminidase of the marine fungus Penicillium canescens | |
| Cescutti et al. | First report of a lyase for cepacian, the polysaccharide produced by Burkholderia cepacia complex bacteria | |
| Sivaramakrishnan et al. | Purification of 57kDa hyaluronidase from the venom of Conus betulinus (linnaeus, 1758) | |
| KR102780203B1 (ko) | 페니바실러스 균주 및 이로부터 유래한 신규한 효소 | |
| JPH06277085A (ja) | 低分子量分岐β−１，３−グルカン及び分岐ラミナリオリゴ糖の製造方法 | |
| Senan | Biocatalytic Potential of Enzymes Involved the Modification of Glucosamine in Chemotherapeutical Intermediates Synthesis |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20190927 |