JPWO2006090613A1

JPWO2006090613A1 - 頭髪化粧料

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Publication number: JPWO2006090613A1
Application number: JP2007504673A
Authority: JP
Inventors: 潤野嶋; 康夫三宅; 信明大戸
Original assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Maruzen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2005-02-22
Filing date: 2006-02-14
Publication date: 2008-07-24
Also published as: CN101137344A; EP1859774A1; KR20070106569A; US7910557B2; CN101137344B; EP1859774A4; US20100048703A1; HK1117040A1; WO2006090613A1; US20090054522A1; KR101315813B1

Abstract

テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用又は骨形成因子−２産生促進作用を有する物質を見出し、当該物質を配合した頭髪化粧料、並びに当該物質を有効成分とする育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤及び骨形成因子−２産生促進剤を提供することを目的とし、本発明の頭髪化粧料に、コロソリン酸を配合し、本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤又は骨形成因子−２産生促進剤に、コロソリン酸を有効成分として含有せしめる。【選択図】なし

Description

本発明は、育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成因子−２産生促進剤及び頭髪化粧料に関するものである。

多くのステロイドホルモンは産生臓器から分泌された分子型で受容体と結合してその作用を発現するが、アンドロゲンと総称される男性ホルモンの場合、例えば、テストステロンは標的臓器の細胞内に入ってテストステロン５α−リダクターゼにより５α−ジヒドロテストステロンに還元され（５α−ＤＨＴ）、その５α−ＤＨＴが受容体と結合し、アンドロゲンとしての作用を発現する。

アンドロゲンは重要なホルモンであるが、それが過度に作用すると、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等、さまざまな好ましくない症状を誘発する。そこで、従来から、これらの各種症状を改善するために、過剰のアンドロゲンの作用を抑制する方法、具体的には、テストステロンを活性型５α−ＤＨＴに還元するテストステロン５α−リダクターゼの作用を阻害することにより、活性型５α−ＤＨＴの発生を抑制する方法が採られている。このようなテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有する生薬としては、例えば、コエロスポンディアス（Choerospondias）属に属する植物からの抽出物（特許文献１参照）、マジト及び／又はカチュアからの抽出物（特許文献２参照）、五斂子からの抽出物（特許文献３参照）、紅豆杉、鳥欖、幌傘楓及び穿心蓮からなる群より選ばれた１種又は２種以上の植物からの抽出物（特許文献４参照）等が知られている。

毛髪は、成長期、退行期及び休止期からなる周期的なヘアサイクル（毛周期）に従って成長及び脱落を繰り返している。このヘアサイクルのうち、休止期から成長期にかけての新たな毛包が形成されるステージが、発毛に最も重要であると考えられており、このステージにおける毛包上皮系細胞の増殖・分化に重要な役割を果たしているのが、毛乳頭細胞であると考えられている。毛乳頭細胞は、毛根近傍にある外毛根鞘細胞とマトリックス細胞とからなる毛包上皮系細胞の内側にあって、基底膜に包まれている毛根の根幹部分に位置する細胞であり、毛包上皮系細胞に働きかけてその増殖を促進する等、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を担っている（非特許文献１参照）。

このように、毛乳頭細胞は、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成において重要な役割を果たしており、毛乳頭細胞の増殖を促進することで、脱毛症を予防・改善することができると考えられる。従来、毛乳頭細胞増殖促進作用を有する生薬として、例えば、オウギ抽出物、オウレン抽出物、クマノギク抽出物等が知られている（特許文献５及び特許文献６参照）。

線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）は、線維芽細胞に対する増殖活性を有するだけではなく、様々な細胞に対する細胞増殖・分化活性を有する形態形成因子、組織障害のときに働く組織修復因子、生体の恒常性を維持するための代謝調節因子等として重要な役割を果たしている多機能性分泌因子である。このようなＦＧＦとしては、例えば、ＦＧＦ−７が挙げられる。ＦＧＦ−７は、男性型脱毛症における毛乳頭細胞での発現低下が知られている（非特許文献２参照）。そのため、ＦＧＦ−７の産生を促進することで、脱毛症等を予防・改善することができると考えられる。このようなＦＧＦ−７産生促進作用を有するものとして、ローヤルゼリー等が知られている（特許文献７参照）。

毛髪の成長が止まっている休止期の毛根周囲や毛乳頭細胞では、毛細血管の数が激減しているが、毛髪が成長している成長期の毛根周囲や毛乳頭細胞では、多数の毛細血管が新生していることが知られている。このことから、毛髪の成長、発毛、育毛等には、血管新生が密接に関連していると考えられている。

血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）は、分子量３４〜４６ｋＤａの糖蛋白質であり、血管内皮細胞に特異的な増殖因子として、脳下垂体の濾胞細胞の培養液から発見され、血管透過性因子（ＶＰＦ）と同一物質であることが知られている。このＶＥＧＦは、下垂体細胞以外にも、毛乳頭細胞で産生されることが知られている。このようにして産生されたＶＥＧＦは、血管内皮細胞にはたらき、血管内皮細胞の増殖・遊走を促進したり、血管を新生したりする作用を有する。そのため、ＶＥＧＦの産生を促進することで、脱毛症等を予防・改善することができると考えられる。ＶＥＧＦ産生促進作用を有する植物エキスとしては、ヒルガオ科のアサガオカラクサ属植物が知られている（特許文献８参照）。

骨形成蛋白（ＢＭＰ）は、骨、軟骨、腱、及び骨中に存在するその他の組織を形成させるタンパク質である。このタンパク質には特有の誘導活性があり、骨中に存在しているということから、これは骨修復過程の重要な制御因子であり、骨組織の正常な維持に関与しているということが示唆されている。そのようなタンパク質は数多く知られており、いくつかのサブファミリーに分類することができる（非特許文献３参照）。そのようなＢＭＰとして、例えばＢＭＰ−２がある。このＢＭＰ−２は、近年、毛包形成との関わりが指摘され、このＢＭＰ−２の育毛・養毛作用に関心がもたれている（特許文献９参照）。
特開２００３−５５１６２号公報特開２００２−２４１２９７号公報特開２００２−２４１２９６号公報特開２００２−８７９７６号公報特開平９−２０８４３１号公報特開平１１−１２１３４号公報特開２００３−１９２５４１号公報特開２００３−１６０５０３号公報特開２００５−２０６８号公報「Trends Genet」，1992年，第8巻，p.56-61 「アンチエイジングシリーズＮｏ．１白髪・脱毛・育毛の実際」，株式会社エヌ・ティー・エス，2005年，p.91-104 Reddi A.H.，「Cytokine Growth Factor Reviews 8」，1997年，p.11-20

本発明は、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、又は骨形成因子（ＢＭＰ−２）産生促進作用を有する物質を見出し、当該物質を配合した頭髪化粧料、並びに当該物質を有効成分として含有する育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤及び骨形成因子−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤を提供することを目的とする。

本発明の頭髪化粧料は、コロソリン酸を配合したことを特徴とする。また、本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤又は骨形成因子−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤は、コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とする。

本発明によれば、コロソリン酸を配合した頭髪化粧料、並びにコロソリン酸を有効成分として含有する育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤及び骨形成因子−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤が提供される。

本発明の頭髪化粧料は、コロソリン酸が有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用により、男性ホルモンが関与する疾患を予防・改善することができるとともに、コロソリン酸が有する毛乳頭細胞増殖促進作用により、脱毛症を予防・改善することができる。また、本発明の頭髪化粧料は、コロソリン酸が有する線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用又は骨形成因子−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用により、脱毛症を予防・改善することができる。

本発明の育毛剤は、有効成分であるコロソリン酸が有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用により、男性ホルモンの作用を抑制し、脱毛症を予防・改善することができるとともに、有効成分であるコロソリン酸が有する毛乳頭細胞増殖促進作用により、育毛・養毛を促進し、脱毛症を予防・改善することができる。本発明の育毛剤は、有効成分であるコロソリン酸が有する線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用又は骨形成因子−２産生促進作用により、男性型脱毛症を予防・改善することができる。また、本発明のテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤は、有効成分であるコロソリン酸が有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用により、男性ホルモンの作用を抑制し、男性ホルモンが関与する疾患を予防・改善することができる。さらに、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、有効成分であるコロソリン酸が有する毛乳頭細胞増殖促進作用により、毛乳頭細胞の増殖を促進し、脱毛症を予防・改善することができる。さらにまた、本発明の線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進剤は、有効成分であるコロソリン酸が有する線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用により、線維芽細胞増殖因子−７の産生を促進し、脱毛症等を予防・改善することができる。また、本発明の血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進剤は、血管内皮増殖因子の産生を促進し、脱毛症等を予防・改善することができる。さらに、本発明の骨形成因子−２（ＢＭＰ−２）産生促進剤は、骨形成因子−２の産生を促進し、脱毛症等を予防・改善することができる。

以下、本発明について説明する。
〔育毛剤，テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤，毛乳頭細胞増殖促進剤，線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤，血管内皮増殖因子産生促進剤，骨形成因子−２産生促進剤〕
本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤は、コロソリン酸を有効成分として含有する。

コロソリン酸（corosolic acid）は、次式で表される化学構造を有するトリテルペノイド類化合物の一種である。

コロソリン酸は、コロソリン酸を含有する植物抽出物から単離・精製することにより製造することもできるし、合成により製造することもできる。なお、合成により製造する場合、その合成方法は特に限定されるものではなく、公知の方法により合成することができる（特開２００５−２９５７０号公報参照）。

コロソリン酸を含有する植物抽出物は、植物の抽出に一般に用いられている抽出方法によって得ることができる。コロソリン酸を含有する植物としては、例えば、ビワ（学名：Eriobotrya japonica）、バナバ（学名：Lagerstroemia speciosa）等が挙げられる。

ビワ（Eriobotrya japonica）は、バラ科の常緑高木であり、果実部は食用にされ、葉部は胃腸虚弱、神経痛、下痢等の治療等に用いられている。ビワは、日本、台湾、中国等に自生しており、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るビワの構成部位は、特に限定されるものではなく、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、種子部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、これらのうち葉部を用いるのが好ましい。

バナバ（Lagerstroemia speciosa）は、フィリピンやオーストラリア等の熱帯・亜熱帯地域に広く分布するミソハギ科の植物であり、これらの地域から容易に入手することができる。抽出原料として使用し得るバナバの構成部位は、特に限定されるものではなく、例えば、葉部、枝部、樹皮部、幹部、茎部、果実部、種子部、花部等の地上部、根部又はこれらの部位の混合物等が挙げられるが、これらのうち葉部を用いるのが好ましい。

コロソリン酸を含有する植物抽出物は、抽出原料を乾燥した後、そのまま又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、植物の極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。

抽出溶媒としては、極性溶媒を使用するのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。

抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。

抽出溶媒として使用し得る親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。

２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１０〜９０質量部を混合することが好ましい。

抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液から溶媒を留去するとペースト状の濃縮物が得られ、この濃縮物をさらに乾燥すると乾燥物が得られる。

以上のようにして得られた抽出液、当該抽出液の濃縮物又は当該抽出液の乾燥物からコロソリン酸を単離・精製する方法は、特に限定されるものではなく、常法により行うことができる。例えば、植物抽出物を、シリカゲルやアルミナ等の多孔質物質、スチレン−ジビニルベンゼン共重合体やポリメタクリレート等の多孔性樹脂等を用いたカラムクロマトグラフィーに付して、水、アルコール、アセトンの順で溶出させ、アルコール及びアセトンで溶出される画分として得ることができる。カラムクロマトグラフィーにて溶出液として用いられるアルコールは、特に限定されるものではなく、例えば、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール又はそれらの水溶液等が挙げられる。さらに、カラムクロマトグラフィーにより得られた画分を、ＯＤＳを用いた逆相シリカゲルクロマトグラフィー、再結晶、液−液向流抽出、イオン交換樹脂を用いたカラムクロマトグラフィー等の任意の有機化合物精製手段を用いて精製してもよい。

以上のようにして得られるコロソリン酸は、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７（ＦＧＦ−７）産生促進作用、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）産生促進作用、又は骨形成因子−２（ＢＭＰ−２）産生促進作用を有しているため、それらの作用を利用して育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤として使用することができる。なお、抽出処理により得られた植物抽出物はコロソリン酸を含有しており、そのまま育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤の有効成分として使用し得るが、精製してコロソリン酸の純度を高めたものを使用することが好ましい。コロソリン酸の純度を高めたものを有効成分として使用することによって、より一層使用効果に優れた育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤を得ることができる。コロソリン酸を含有する植物抽出物には、コロソリン酸を含有する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。

本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤は、コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物のみからなるものでもよいし、コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物を製剤化したものでもよい。

コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物を製剤化した育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤の形態としては、例えば、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等が挙げられる。

なお、本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤は、必要に応じて、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用、又は骨形成因子−２産生促進作用を有する天然抽出物等を、コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物とともに配合して有効成分として用いることができる。

本発明の育毛剤は、コロソリン酸が有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を通じて、男性ホルモンの作用を抑制し、男性ホルモンが関与する疾患を予防・改善することができるとともに、コロソリン酸が有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、育毛・養毛を促進し、脱毛症を予防・改善することができる。また、本発明の育毛剤は、コロソリン酸が有する線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用を通じて、線維芽細胞増殖因子−７の産生を促進し、脱毛症を予防・改善することができる。さらに、本発明の育毛剤は、コロソリン酸が有する血管内皮増殖因子産生促進作用を通じて、血管内皮増殖因子の産生を促進し、脱毛症を予防・改善することができる。さらにまた、本発明の育毛剤は、骨形成因子−２産生促進作用を通じて、骨形成因子−２の産生を促進し、脱毛症を予防・改善することができる。本発明の育毛剤が予防・改善可能な男性ホルモンが関与する疾患としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等が挙げられ、本発明の育毛剤が予防・改善可能な脱毛症としては、例えば、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等が挙げられる。ただし、本発明の育毛剤は、これらの用途以外にも、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用又は骨形成因子−２産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明のテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤は、コロソリン酸が有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を通じて、テストステロン５α−リダクターゼの活性を阻害することができる。これにより、男性ホルモンの作用を抑制することができ、男性ホルモンが関与する疾患を予防・改善することができる。本発明のテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤が予防・改善可能な疾患としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等が挙げられる。ただし、本発明のテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤は、これらの用途以外にも、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、コロソリン酸が有する毛乳頭細胞増殖促進作用を通じて、毛乳頭細胞を活性化し、毛包上皮系細胞の増殖・分化及び毛髪の形成を促進することができるとともに、毛周期において成長期から退行期及び休止期へと移行するのを防ぎ、成長期を延長させることができる。これにより、脱毛症を予防・改善することができる。本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤が予防・改善可能な脱毛症としては、例えば、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等が挙げられる。ただし、本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤は、これらの用途以外にも、毛乳頭細胞増殖促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤は、コロソリン酸が有する線維芽細胞増殖促進因子−７産生促進作用を通じて、毛乳頭細胞における線維芽細胞増殖因子−７の産生を促進し、脱毛症等を予防・改善することができる。ただし、本発明の線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤は、これらの用途以外にも、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の血管内皮増殖因子産生促進剤は、コロソリン酸が有する血管内皮増殖因子産生促進作用を通じて、毛乳頭細胞での血管内皮増殖因子の産生を促進し、毛乳頭細胞において毛細血管を新生することができる。これにより、発毛・育毛を促進し、脱毛症等を予防・改善することができる。ただし、本発明の血管内皮増殖因子産生促進剤は、これらの用途以外にも、血管内皮増殖因子産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

本発明の骨形成因子−２産生促進剤は、コロソリン酸が有する骨形成因子−２産生促進作用を通じて、骨形成因子−２の産生を促進し、育毛・養毛を促進することができる。これにより、脱毛症等を予防・改善することができる。ただし、本発明の骨形成因子−２産生促進剤は、これらの用途以外にも、骨形成因子−２産生促進作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。

〔頭髪化粧料〕
本発明の頭髪化粧料は、コロソリン酸を配合したものである。
コロソリン酸は、テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用、又は骨形成因子−２産生促進作用を有しており、頭皮に適用した場合の使用感及び安全性に優れているため、頭髪化粧料に配合するのに好適である。この場合、コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物をそのまま配合してもよいし、コロソリン酸又はコロソリン酸を含有する植物抽出物から製剤化した育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、又は骨形成因子−２産生促進剤を配合してもよい。コロソリン酸、コロソリン酸から製剤化した育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤若しくは骨形成因子−２産生促進剤、又はコロソリン酸を含有する植物抽出物を頭髪化粧料に配合することによって、頭髪化粧料にテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用、毛乳頭細胞増殖促進作用、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用、又は骨形成因子−２産生促進作用を付与することができる。

本発明の頭髪化粧料の形態は特に限定されるものではないが、その具体例としては、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド、シャンプー、リンス、ポマード等が挙げられる。

頭髪化粧料中における有効成分の配合量は、その使用目的、性別、年齢等を考慮して適宜調整することができるが、好適な配合率は標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％である。

本発明の頭髪化粧料は、コロソリン酸とともに、用途に応じた任意の生理活性物質や助剤、例えば収斂剤、殺菌・抗菌剤、紫外線吸収剤、保湿剤、細胞賦活剤、消炎・抗アレルギー剤、抗酸化・活性酸素消去剤等を併用することができる。これらの助剤等を併用することで、併用された他の有効成分との間の相乗作用が通常期待される以上の優れた効果をもたらすことがある。

本発明の頭髪化粧料によれば、コロソリン酸が有するテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用により、男性ホルモンが関与する疾患を予防・改善することができるとともに、コロソリン酸が有する毛乳頭細胞増殖促進作用により、脱毛症を予防・改善することもできる。また、本発明の頭髪化粧料によれば、コロソリン酸が有する線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子促進作用、又は骨形成因子−２産生促進作用により、男性型脱毛症を予防・改善することができる。本発明の頭髪化粧料が予防・改善可能な男性ホルモンが関与する疾患としては、例えば、男性型脱毛症、多毛症、脂漏症、座瘡（ニキビなど）、前立腺肥大症、前立腺腫瘍、男児性早熟等が挙げられ、本発明の頭髪化粧料が予防・改善可能な脱毛症としては、例えば、男性型脱毛症、円形脱毛症、トリコチロマニア等が挙げられる。

なお、本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成因子−２産生促進剤又は頭髪化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。

以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。

〔製造例１〕コロソリン酸の製造
細切りにしたビワの葉部３００ｇにエタノール３０００ｍＬを加え、９５℃にて２時間加熱還流抽出を行い、熱時濾過した。得られた濾液をエバポレーターで濃縮・乾固させ、ビワ葉部抽出物８３ｇを得た。得られたビワ葉部抽出物を多孔性吸着樹脂（製品名：ダイヤイオンＨＰ−２０，三菱化学社製）に付し、水５０００ｍＬ、５０質量％メタノール２０００ｍＬ、メタノール２０００ｍＬ、アセトン２０００ｍＬの順で溶出させた。これらの溶出部を薄層クロマトグラフィー（商品名：シリカゲルＦ６０，Ｍｅｒｃｋ社製）に付したところ、メタノール溶出部及びアセトン溶出部にコロソリン酸が含まれていることが確認されたため、これらの溶出部をあわせて（固形分２７．６ｇ）、シリカゲルカラム（移動相：クロロホルム：メタノール＝２０：１から３０：１，富士シリシア社製）を用いて分離・精製し、精製物１５２ｍｇを得た（試料１）。この精製物を^１３Ｃ−ＮＭＲにより分析した結果を以下に示す。

＜^１３Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）＞
17.2（25-C），17.7（24-C），17.8（29-C），17.8（26-C），19.1（6-C），21.6（30-C），24.0（11-C），24.1（27-C），25.1（16-C），28.9（15-C），29.5（23-C），31.3（21-C），33.7（7-C），37.6（22-C），38.7（10-C），38.8（19-C），39.6（4-C），40.1（20-C），40.3（8-C），42.8（14-C），48.1（9-C），48.2（1-C），48.3（17-C），53.7（18-C），56.1（5-C），68.7（2-C），84.0（3-C），125.6（12-C），139.3（13-C），179.8（28-C）

以上の^１３Ｃ−ＮＭＲによる分析結果から、製造例１で得られた精製物が、コロソリン酸であることが確認できた。

〔製造例２〕３％コロソリン酸の製造
細切りにしたビワの葉部１００ｇに８０質量％エタノール１０００ｍＬを加え、９５℃にて２時間加熱還流抽出を行い、熱時濾過した。得られた抽出液をエバポレーターで濃縮・乾固させ、ビワ葉部抽出物１６ｇを得た。得られたビワ葉部抽出物を、下記の条件にて液体クロマトグラフィーを用いて分析した結果、当該抽出物にコロソリン酸が３質量％含まれていた（試料２）。

＜液体クロマトグラフィー条件＞
製品名：Agilent 1100（Agilent Technologies社製）
固定相：Wakosil-II 5C18HG（和光純薬工業社製）
カラム径：４．６ｍｍ
カラム長：２５０ｍｍ
移動相：６５％アセトニトリル
移動相流速：１．２ｍＬ／分
検出器：ＵＶ

〔製造例３〕１０％コロソリン酸の製造
細切りにしたビワの葉部１００ｇに９０質量％エタノール１０００ｍＬを加え、９５℃にて２時間加熱還流抽出を行った後、活性炭（製品名：カルボラフィン，日本エンバイロケミカルズ社製）を用いて濾過した。得られた濾液をエバポレーターで濃縮・乾固させ、５０質量％エタノールに懸濁させ、当該懸濁液を珪藻土で濾過した。残渣を９０質量％エタノールで抽出し、得られた抽出液をエバポレーターで濃縮・乾固させ、ビワ葉部抽出物１．８ｇを得た。得られたビワ葉部抽出物を、下記の条件にて液体クロマトグラフィーを用いて分析した結果、当該抽出物中にコロソリン酸が１０質量％含まれていた（試料３）。

〔試験例１〕テストステロン５α−リダクターゼ阻害作用試験
製造例１〜３で得られたコロソリン酸（試料１〜３）について、以下のようにしてテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を試験した。

蓋付Ｖ底試験管にて、テストステロン（和光純薬工業社製）４．２ｍｇをプロピレングリコール１ｍＬに溶解し、その２０μＬと、１ｍｇ／ｍＬのＮＡＤＰＨを含有する５ｍｍｏｌ／ｍＬのトリス塩酸緩衝液（ｐＨ７．１３）８２５μＬとを混合した。

さらに、各試料のエタノール水溶液８０μＬ及びＳ−９（ラット肝臓ホモジネート，オリエンタル酵母工業社製）７５μＬを加えて混合し、３７℃にて３０分間インキュベートした。その後、塩化メチレン１ｍＬを加えて反応を停止させた。これを遠心分離し（１６００×ｇ，１０分間）、塩化メチレン層を分取して、分取した塩化メチレン層について、下記の条件にてガスクロマトグラフィー分析をし、３α−アンドロスタンジオール、５α−ジヒドロテストステロン（５α−ＤＨＴ）及びテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）を定量した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶媒を同量（８０μＬ）用いて同様に処理し、ガスクロマトグラフィー分析をした。

＜ガスクロマトグラフィー条件＞
使用装置：Shimadzu GC-7A（島津製作所社製）
カラム：ＤＢ−１７０１（内径：０．５３ｍｍ，長さ：３０ｍ，膜厚：１．０μｍ，J&W Scientific社製）
カラム温度：２４０℃
注入口温度：３００℃
検出器：ＦＩＤ
試料注入量：１μＬ
スプリット比：１：２
キャリアガス：窒素ガス
キャリアガス流速：３ｍＬ／ｍｉｎ

３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの濃度の定量は、下記の方法により行った。
３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンの標準品を塩化メチレンに溶解し、当該溶液についてガスクロマトグラフィー分析をし、これらの化合物の濃度（μｇ／ｍＬ）及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとＳ−９との反応後の３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ及びテストステロンそれぞれのピーク面積あたりの濃度を、予め求めておいた対応関係を利用して、次式（１）に基づき、算出した。

Ａ＝Ｂ×Ｃ／Ｄ・・・（１）
式中、Ａは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｂは「３α−アンドロスタンジオール、５α−ＤＨＴ又はテストステロンのピーク面積」を表し、Ｃは「標準品の濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｄは「標準品のピーク面積」を表す。

式（１）に基づいて算出された化合物濃度を用いて、次式（２）に基づき、変換率（テストステロン５α−リダクターゼによりテストステロンが還元されて生成した３α−アンドロスタンジオール及び５α−ＤＨＴの濃度と、テストステロンの初期濃度との濃度比）を算出した。
変換率(％)＝(Ｅ＋Ｆ)／(Ｅ＋Ｆ＋Ｇ)・・・（２）
式中、Ｅは「３α−アンドロスタンジオールの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｆは「５α−ＤＨＴの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表し、Ｇは「テストステロンの濃度（μｇ／ｍＬ）」を表す。

式（２）に基づいて算出された変換率を用いて、次式（３）に基づき、テストステロン５α−リダクターゼ阻害率（％）を算出した。
阻害率(％)＝(１−Ｈ／Ｉ)×１００・・・（３）
式中、Ｈは「試料添加時の変換率」を表し、Ｉは「コントロールの変換率」を表す。

試料濃度を段階的に減少させて上記阻害率の測定を行い、テストステロン５α−リダクターゼの阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ_５０（μｇ／ｍＬ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表１に示す。

表１に示すように、コロソリン酸は、優れたテストステロン５α−リダクターゼ阻害作用を有することが確認された。

〔試験例２〕毛乳頭細胞増殖促進作用試験
製造例１〜３により得られたコロソリン酸（試料１〜３）について、以下のようにして毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。

正常ヒト頭髪毛乳頭細胞を、２％牛胎児血清（ＦＢＳ）及び増殖添加剤を含有した毛乳頭細胞増殖培地（Cell Application Inc.製）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用いて１．０×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度に希釈した後、コラーゲンコートした９６ウェルプレートに１ウェルあたり２００μＬずつ播種し、３日間培養した。培養後、培地を抜き、各試料を無血清ＤＭＥＭに溶解した試料溶液を各ウェルに２００μＬずつ添加し、さらに４日間培養した。

毛乳頭細胞増殖促進作用は、ＭＴＴアッセイを用いて測定した。培養終了後、培地を除き、無血清ＤＭＥＭに溶解したＭＴＴ（終濃度０．４ｍｇ／ｍＬ）を、各ウェルに１００μＬずつ添加した。２時間培養した後に、細胞内に生成したブルーホルマザンを２−プロパノール１００μＬで抽出した。抽出後、波長５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。同時に濁度として波長６５０ｎｍにおける吸光度を測定し、両者の差をもってブルーホルマザン生成量とした。なお、コントロールとして、試料溶液の代わりに無血清ＤＭＥＭを添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、次式に基づき、毛乳頭細胞増殖促進率（％）を算出した。

毛乳頭細胞増殖促進率(％)＝Ａ／Ｂ×１００
式中、Ａは「試料添加時の吸光度」を表し、Ｂは「試料無添加時の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表２に示す。

表２に示すように、コロソリン酸は、毛乳頭細胞増殖促進作用を有することが確認された。

〔試験例３〕ＦＧＦ−７増殖促進作用試験、ＶＥＧＦ増殖促進作用試験及びＢＭＰ−２増殖促進作用試験
製造例１，２により得られたコロソリン酸（試料１，２）について、以下のようにしてＦＧＦ−７増殖促進作用、ＶＥＧＦ増殖促進作用及びＢＭＰ−２増殖促進作用を試験した。

ヒト正常毛乳頭細胞（ＨＦＤＰＣ）を、ヒト正常毛乳頭細胞増殖培地（ＰＣＧＭ）を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を２×１０^５個／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地で希釈した後、直径６０ｍｍのシャーレに５ｍＬずつ播種し、一晩培養した。

培養終了後、試料（試料１，２）を添加した無血清ＤＭＥＭ培地に交換して２時間培養した後、細胞を１ｍＬのＲＮＡ抽出用試薬（ＴＲＩｚｏｌ，インビトロジェン株式会社製）にて溶解し、クロロホルムを２００μＬ添加後、遠心（１２０００回転、４℃、１５分間）にて上層ＲＮＡ層を単離した。次いで、イソプロパノールで濃縮した。濃縮沈殿させた総ＲＮＡをＴＥ溶液（１０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ／１ｍＭのＥＤＴＡ，ｐＨ８．０）に溶解して、ＦＧＦ−７遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子及びＢＭＰ−２遺伝子のｍＲＮＡ発現量を測定するための定量的ＲＴ−ＰＣＲ法の鋳型に使用する総ＲＮＡ標品（配列番号１〜３）とした。一方、対照として試料を添加せずに培養した細胞について、上記と同様にして総ＲＮＡを調製した。

次に、ＰＣＲ装置（ＴａＫａＲａＰＣＲＴｈｅｍａｌＣｙｃｌｅｒＭＰ，ＴＡＫＡＲＡ社製）を用いて、総ＲＮＡ５００ｎｇより一本鎖ＤＮＡを合成した後、一本鎖ＤＮＡからＦＧＦ−７遺伝子（配列番号４）、ＶＥＧＦ遺伝子（配列番号５）、ＢＭＰ−２遺伝子（配列番号６）及び内部標準としてのＧ３ＰＤＨ遺伝子を、それぞれの遺伝子に特異的なセンスプライマー（配列番号７〜９）及びアンチセンスプライマー（配列番号１０〜１２）を用いてＰＣＲ反応で増幅を行い、その増幅産物１０μＬを１．２％アガロースゲルにて電気泳動した。電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色し、これをトランスイルミネーター下でＤＣ１２０ＺｏｏｍＤｉｇｉｔａｌｃａｍｅｒａ（ＫＯＤＡＫ社製）を用いて撮影後、ＫＯＤＡＫ１ＤＩｍａｇｅＡｎａｌｙｓｉｓＳｏｆｔｗａｒｅＥＤＡＳ２９０Ｖｅｒｓｉｏｎ３．５にてＲＴ−ＰＣＲ産物を定量的に測定した。なお、ＰＣＲの反応液は、試薬（ＴａＫａＲａＲＮＡＰＣＲＫｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ３．０）添付資料に従って調製した。

試料を添加せずに、また試料を添加してそれぞれ培養した細胞から調製した総ＲＮＡ標品を基にして、ＲＴ−ＰＣＲ反応により増幅させたＦＧＦ−７遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子及びＢＭＰ−２遺伝子のバンド強度値をＧ３ＰＤＨ遺伝子のバンド強度値で除して補正値を求めた。そして、下記式に基づいて、ＦＧＦ−７遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子及びＢＭＰ−２遺伝子のｍＲＮＡ発現促進率を求めた。

ｍＲＮＡ発現促進率(％)＝(Ａ／Ｂ)×１００
ただし、式中、Ａは「試料添加時の補正値」を表し、Ｂは「試料無添加時（対照）の補正値」を表す。
結果を表３に示す

表３に示すように、コロソリン酸は、ＦＧＦ−７遺伝子、ＶＥＧＦ遺伝子及びＢＭＰ−２遺伝子のｍＲＮＡの発現を促進することが確認された。このことから、コロソリン酸は、線維芽細胞増殖因子−７産生促進作用、血管内皮増殖因子産生促進作用又は骨形成因子−２産生促進作用を有することが確認された。

〔配合例１〕
下記組成のヘアトニックを常法により製造した。
コロソリン酸（製造例１）０．１ｇ
塩酸ピリドキシン０．１ｇ
レゾルシン０．０１ｇ
Ｄ−パントテニルアルコール０．１ｇ
グリチルリチン酸ジカリウム０．１ｇ
センブリ抽出液０．２ｇ
Ｌ−メントール０．０５ｇ
１，３−ブチレングリコール４．０ｇ
ニンジンエキス０．５ｇ
クジンエキス０．３ｇ
カミツレ抽出液０．２ｇ
サリチル酸０．２ｇ
ピロリドンカルボン酸ナトリウム１．０ｇ
エタノール２５．０ｇ
香料適量
精製水残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例２〕
下記組成のヘアローションを常法により製造した。
コロソリン酸（製造例１）０．０１ｇ
１，３−ブチレングリコール６．０ｇ
エタノール８．０ｇ
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（40E.O.）１．０ｇ
ポリオキシソルビタンモノステアレート（20E.O.）１．５ｇ
ステアリルグリチルレチネート０．２ｇ
エンメイソウエキス０．５ｇ
油溶性甘草抽出液０．０２ｇ
ヒノキチオール０．０５ｇ
尿素３．０ｇ
ナイアシン０．１ｇ
塩酸ジフェンヒドラミン０．１ｇ
酢酸トコフェロール０．０５ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１ｇ
フェノキシエタノール０．３ｇ
Ｌ−メントール０．２ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例３〕
下記組成の育毛剤を常法により製造した。
コロソリン酸（製造例１）０．５ｇ
ヒノキチオール０．１ｇ
グリチルレチン酸０．１ｇ
セファランチン０．０２ｇ
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（20E.O.）１．５ｇ
１，３−ブチレングリコール３．０ｇ
エタノール６０．０ｇ
酢酸トコフェロール０．１ｇ
ニンジンエキス０．１ｇ
トウガラシチンキ２．０ｇ
ニンニクエキス０．５ｇ
感光素３０１号０．００５ｇ
塩酸ピリドキシン０．０５ｇ
Ｄ，Ｌ−メントール０．３ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）

〔配合例４〕
下記組成のシャンプーを常法により製造した。
コロソリン酸（製造例１）１．０ｇ
ポリオキシエチレンラウリル硫酸トリエタノールアミン塩１４．０ｇ
エチレングリコールジステアレート２．０ｇ
ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン４．０ｇ
ラウリン酸ジエタノールアミド５．０ｇ
グリセリン２．０ｇ
ケラチン加水分解物３．０ｇ
ムクロジエキス０．２ｇ
キラヤ抽出液１．０ｇ
黄杞エキス０．５ｇ
オウバクエキス０．３ｇ
ローズマリーエキス０．５ｇ
アロエ抽出液０．２ｇ
モモ葉抽出液０．３ｇ
海藻（褐藻）抽出液０．５ｇ
マロニエ種子抽出液０．３ｇ
パラオキシ安息香酸メチル０．１ｇ
香料０．０５ｇ
精製水残部（全量を１００ｇとする）

本発明の育毛剤、テストステロン５α−リダクターゼ阻害剤、毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤、血管内皮増殖因子産生促進剤、骨形成因子−２産生促進剤又は頭髪化粧料は、男性ホルモンが関与する疾患、脱毛症等の予防・改善に大きく貢献できる。

Claims

コロソリン酸を配合したことを特徴とする頭髪化粧料。
コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とするテストステロン５α−リダクターゼ阻害剤。
コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とする線維芽細胞増殖因子−７産生促進剤。
コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子産生促進剤。
コロソリン酸を有効成分として含有することを特徴とする骨形成因子−２産生促進剤。