JP5676837B2 - 毛乳頭細胞増殖促進剤、線維芽細胞増殖因子−7(fgf−7)産生促進剤、血管内皮増殖因子(vegf)産生促進剤、抗男性ホルモン剤、育毛剤及び頭髪化粧料 - Google Patents
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Description
〔毛乳頭細胞増殖促進剤,線維芽細胞増殖因子(FGF−7)産生促進剤,血管内皮増殖因子(VEGF)産生促進剤,抗男性ホルモン剤,育毛剤〕
本発明の毛乳頭細胞増殖促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。また、本発明の線維芽細胞増殖因子(FGF−7)産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志及び白眉草からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。さらに、本発明の血管内皮増殖因子(VEGF)産生促進剤は、金不換、ヒメハギ、小花遠志、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有する。
金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物は、毛乳頭細胞増殖促進作用、FGF−7産生促進作用、VEGF産生促進作用、テストステロン5α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を有しており、頭髪又は頭皮に適用した場合の使用感と安全性とに優れているため、頭髪化粧料に配合するのに好適である。この場合、頭髪化粧料には、金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物が配合されていてもよいし、当該抽出物から製剤化した毛乳頭細胞増殖促進剤、FGF−7産生促進剤、VEGF産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤が配合されていてもよい。金不換、ヒメハギ、小花遠志、鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物、毛乳頭細胞増殖促進剤、FGF−7産生促進剤、VEGF産生促進剤、抗男性ホルモン剤又は育毛剤を頭髪化粧料に配合することによって、頭髪化粧料に毛乳頭細胞増殖促進作用、FGF−7産生促進作用、VEGF産生促進作用、テストステロン5α−レダクターゼ阻害作用、アンドロゲン受容体結合阻害作用、抗男性ホルモン作用又は育毛作用を付与することができる。
金不換の地上部の粗粉砕物100gに抽出溶媒1000mLを加え、穏やかに攪拌しながら80℃にて2時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を40℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して金不換地上部抽出物を得た(試料1〜3)。抽出溶媒として、水、50容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:1)、80容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:4)を用いたときの各抽出物の収率を表1に示す。
ヒメハギの地上部の粗粉砕物100gに抽出溶媒1000mLを加え、穏やかに攪拌しながら80℃にて2時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を40℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥してヒメハギ地上部抽出物を得た(試料4〜6)。抽出溶媒として、水、50容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:1)、80容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:4)を用いたときの各抽出物の収率を表2に示す。
小花遠志の地上部の粗粉砕物100gに抽出溶媒1000mLを加え、穏やかに攪拌しながら80℃にて2時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を40℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して小花遠志地上部抽出物を得た(試料7〜9)。抽出溶媒として、水、50容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:1)、80容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:4)を用いたときの各抽出物の収率を表3に示す。
白眉草の全草の粗粉砕物100gに抽出溶媒1000mLを加え、穏やかに攪拌しながら80℃にて2時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を40℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して白眉草全草抽出物を得た(試料10〜12)。抽出溶媒として、水、50容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:1)、80容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:4)を用いたときの各抽出物の収率を表4に示す。
鳳凰木の葉部の粗粉砕物100gに抽出溶媒1000mLを加え、穏やかに攪拌しながら80℃にて2時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を40℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して鳳凰木葉部抽出物を得た(試料13〜15)。抽出溶媒として、水、50容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:1)、80容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:4)を用いたときの各抽出物の収率を表5に示す。
仮鷹爪の葉部の粗粉砕物100gに抽出溶媒1000mLを加え、穏やかに攪拌しながら80℃にて2時間保ち、熱時濾過した。得られた抽出液を40℃で減圧下にて濃縮し、減圧乾燥機で乾燥して仮鷹爪葉部抽出物を得た(試料16〜18)。抽出溶媒として、水、50容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:1)、80容量%エタノール(水とエタノールとの容量比=1:4)を用いたときの各抽出物の収率を表6に示す。
製造例1により得られた金不換地上部抽出物(試料1〜3)、製造例2により得られたヒメハギ地上部抽出物(試料4〜6)、製造例3により得られた小花遠志地上物抽出物(試料7〜9)、製造例4により得られた白眉草全草抽出物(試料10〜12)、製造例5により得られた鳳凰木葉部抽出物(試料13〜15)及び製造例6により得られた仮鷹爪葉部抽出物(試料16〜18)について、以下のようにして毛乳頭細胞増殖促進作用を試験した。
式中、Aは「試料添加時の吸光度」を表し、Bは「試料無添加時の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表7に示す。
製造例1により得られた金不換地上部抽出物(試料1〜3)、製造例2により得られたヒメハギ地上部抽出物(試料4〜6)、製造例3により得られた小花遠志地上物抽出物(試料7〜9)、製造例4により得られた白眉草全草抽出物(試料10〜12)、製造例5により得られた鳳凰木葉部抽出物(試料13〜15)及び製造例6により得られた仮鷹爪葉部抽出物(試料16〜18)について、以下のようにしてテストステロン5α−レダクターゼ阻害作用を試験した。
使用装置:Shimadzu GC-7A(島津製作所社製)
カラム:DB−1701(内径:0.53mm,長さ:30m,膜厚:1.0μm,J&W Scientific社製)
カラム温度:240℃
注入口温度:300℃
検出器:FID
試料注入量:1μL
スプリット比:1:2
キャリアガス:窒素ガス
キャリアガス流速:3mL/min
3α−アンドロスタンジオール、5α−DHT及びテストステロンの標準品を塩化メチレンに溶解し、当該溶液についてガスクロマトグラフィー分析をし、これらの化合物の濃度(μg/mL)及びピーク面積から、ピーク面積と化合物の濃度との対応関係を予め求めておいた。そして、テストステロンとS−9との反応後の3α−アンドロスタンジオール、5α−DHT及びテストステロンそれぞれのピーク面積あたりの濃度(μg/mL)を、予め求めておいた対応関係を利用して、下記式(1)に基づき、算出した。
式中、Aは「3α−アンドロスタンジオール、5α−DHT又はテストステロンの濃度(μg/mL)」を表し、Bは「3α−アンドロスタンジオール、5α−DHT又はテストステロンのピーク面積」を表し、Cは「標準品の濃度(μg/mL)」を表し、Dは「標準品のピーク面積」を表す。
変換率(%)=(E+F)/(E+F+G)・・・(2)
式中、Eは「3α−アンドロスタンジオールの濃度(μg/mL)」を表し、Fは「5α−DHTの濃度(μg/mL)」を表し、Gは「テストステロンの濃度(μg/mL)」を表す。
阻害率(%)=(1−H/I)×100・・・(3)
式中、Hは「試料添加時の変換率」を表し、Iは「コントロールの変換率」を表す。
上記試験の結果を表8に示す。
製造例5により得られた鳳凰木葉部抽出物(試料13〜15)について、以下のようにしてアンドロゲン受容体結合阻害作用を試験した。
式中、Aは「DHT添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Bは「DHT無添加・試料無添加の場合の吸光度」を表し、Cは「DHT添加・試料添加の場合の吸光度」を表し、Dは「DHT無添加・試料添加の場合の吸光度」を表す。
上記試験の結果を表9に示す
製造例1により得られた金不換地上部50容量%エタノール抽出物(試料2)、製造例2により得られたヒメハギ地上部50容量%エタノール抽出物(試料5)、製造例3により得られた小花遠志地上物50容量%エタノール抽出物(試料8)、製造例4により得られた白眉草全草50容量%エタノール抽出物(試料11)及び製造例6により得られた仮鷹爪葉部50容量%エタノール抽出物(試料17)について、以下のようにして線維芽細胞増殖因子−7(FGF−7)及び血管内皮細胞増殖因子(VEGF)mRNA発現促進作用を試験した。なお、線維芽細胞増殖因子−7(FGF−7)産生促進作用及び血管内皮細胞増殖因子(VEGF)産生促進作用の評価は、mRNAの発現を評価することによって行った。
正常ヒト頭髪毛乳頭細胞(TOYOBO社製,CA60205)を、毛乳頭細胞増殖培地(TOYOBO社製,TPGM-250)を用いて培養した後、トリプシン処理により細胞を回収した。回収した細胞を2×105個/mLの細胞密度になるように10%FBS含有DMEM培地で希釈した後、直径60mmシャーレに5mLずつ播種し、一晩培養した。
FGF−7遺伝子増幅用プライマーとして下記の配列を有するセンスプライマー及びアンチセンスプライマーを作製した(タカラバイオ社製)。
センスプライマー:5'-tctgtcgaacacagtggtacctgag-3'
アンチセンスプライマー:5'-gccactgtcctgatttccatga-3'
センスプライマー:5'-gagccttgccttgctgctctac-3'
アンチセンスプライマー:5'-caccagggtctcgattggatg-3'
センスプライマー:5'-gcaccgtcaaggctgagaac-3'
アンチセンスプライマー:5'-atggtggtgaagacgccagt-3'
各サイクルのサイバーグリーン色素の発光量からFGF−7、VEGF及びG3PDHのそれぞれをコードするDNA断片の増幅曲線を作成した。検量線作成用一本鎖DNA溶液の希釈系列の増幅曲線から横軸に濃度、縦軸に増幅曲線の2次導関数が最大となるサイクル数をとった検量線を作成した。各発現定量用サンプルについては増幅曲線の2次導関数が最大となるサイクル数を検量線上にプロットし、相対的な発現量を算出した。FGF−7及びVEGF発現量は、同一サンプルにおけるG3PDHの発現量の値で補正を行った後、さらに「試料無添加」の補正値を100とした時の「試料添加」の補正値を算出した。FGF−7mRNA発現促進率(%)及びVEGFmRNA発現促進率(%)は、下記式に基づいて算出した。
式中、Aは「試料無添加時の補正値」を表し、Bは「試料添加時の補正値」を表す。
上記試験の結果を表10に示す。
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
金不換50容量%エタノール抽出物(製造例1) 0.5g
白眉草80容量%エタノール抽出物(製造例4) 0.3g
塩酸ピリドキシン 0.1g
レゾルシン 0.01g
D−パントテニルアルコール 0.1g
グリチルリチン酸ジカリウム 0.1g
L−メントール 0.05g
1,3−ブチレングリコール 4.0g
ニンジンエキス 0.2g
エタノール 25.0g
香料 適量
精製水 残部(全量を100gとする)
下記組成の養毛ヘアートニックを常法により製造した。
ヒメハギ80容量%エタノール抽出物(製造例2) 0.4g
鳳凰木50容量%エタノール抽出物(製造例5) 0.3g
仮鷹爪50容量%エタノール抽出物(製造例6) 0.3g
酢酸トコフェロール 適量
セファラチン 0.002g
イソプロピルメチルフェノール 0.1g
ヒアルロン酸ナトリウム 0.15g
グリセリン 15.0g
エタノール 15.0g
香料 適量
キレート剤(エデト酸ナトリウム) 適量
防腐剤(ヒノキチオール) 適量
可溶化剤(ポリオキシエチレンセチルエーテル) 適量
精製水 残部(全量を100gとする)
下記組成の育毛シャンプーを常法により製造した。
小花遠志水抽出物(製造例3) 0.2g
白眉草水抽出物(製造例4) 0.3g
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム 10.0g
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン 10.0g
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム 20.0g
ヤシ油脂肪酸ジエタノールアミド 4.0g
プロピレングリコール 2.0g
香料 適量
精製水 残部(全量を100gとする)
下記組成の育毛シャンプーを常法により製造した。
金不換水抽出物(製造例1) 0.4g
鳳凰木50容量%エタノール抽出物(製造例5) 0.3g
仮鷹爪水抽出物(製造例6) 0.3g
ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸ナトリウム 30.0g
ヤシ油脂肪酸アミドプロピルベタイン 30.0g
ヤシ油脂肪酸メチルタウリンナトリウム 20.0g
ヤシ油ジエタノールアミド 3.0g
ジステアリン酸エチレングリコール 2.0g
香料 適量
防腐剤(パラオキシ安息香酸メチル) 0.15g
1,3−ブチレングリコール 3.0g
精製水 残部(全量を100gとする)
Claims (7)
- 鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする毛乳頭細胞増殖促進剤。
- 白眉草からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする線維芽細胞増殖因子−7(FGF−7)産生促進剤。
- 白眉草及び/又は仮鷹爪からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする血管内皮増殖因子(VEGF)産生促進剤。
- 鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗男性ホルモン剤。
- 前記植物からの抽出物が、テストステロン5α−レダクターゼ阻害作用を有し、前記鳳凰木からの抽出物が、アンドロゲン受容体結合阻害作用をさらに有することを特徴とする請求項4に記載の抗男性ホルモン剤。
- 鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする育毛剤。
- 鳳凰木、白眉草及び仮鷹爪からなる群より選ばれる1種又は2種以上の植物からの抽出物を配合したことを特徴とする頭髪化粧料。
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