JPS636463A - 反応性重合体粒子の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は水媒体中で分散安定性のよい反応性重合体粒子
を製造する方法に関する、特に酵素、細菌、ウィルス、
毒素、薬物、及び免疫活性物質などを固定化して診断用
試薬として好適に使用しつる反応性重合体粒子の製造方
法を提供するものである。

〔従来の技術及び発明が解決しようとする問題点〕

抗原・抗体叉応を利用する免疫学的検査において、凝集
反応は沈降反応、補体結合反応と共に、あるいはこれら
に比して著しく簡便かつ鋭敏な反応として利用されてい
る。そして、凝集反応は、遊離細胞や細菌展表面に局在
する抗原を検出する反応と共に、抗原精製技術の進歩に
より特異性の高い抗血清が得られることによって、特異
性の高い抗体を血球粒子、ベントナイト粒子、カオリン
粒子、ラテックス粒子などの粒子担体に固定させておき
、対応する抗原を凝集反応によって検査するなど、臨床
検査における応用範囲が著しく拡大している。

免疫学的凝集反応用としての担体は種々のものが公知で
、該担体を使用した種々の診断用試薬が知られている。

これらを大別すると免疫活性物質を物理的に吸着した診
断用試薬と免疫活性物質を共有結合で結合させた診断用
試薬になる。これらの試薬にはそれぞれ一長一短があり
現在なお完全に満足出来る診断用試薬は存在しない。

診断用試薬の担体としては、−般に重合体粒子が用いら
れており、診断用試薬に適した重合体粒子の開発が望ま
れている。

かくして、免疫活性物質を固定化した担体の非特異的凝
集反応を抑制することと、保存安定性を高めるために数
多くの方法が開発されている。これらの方法は、免疫活
性物質を固定化した担体に保護コルイドを添加する方法
と、担体を親水性重合体粒子にする方法に大別される。

前者の方法については、例えば、免疫活性物質な担体に
固定化した後に、牛血清アルブミン、ゼラチンなどの親
水性蛋白質を添加する方法が一般的によく採用されてい
るが、検定混合物中で非特異的な蛋白質−蛋白質相互作
用に起因する妨害作用が指摘されている（特開昭５６−
１５８９４７号公報）。

また後者の方法について、例えば、特開昭５６−３０４
０５号公報、特開昭５６−１４１５５９号公報には繰返
し単位が２．３−ジオキシプロピルメタクリレート単位
から成る親水性架橋共重合体粒子を用いる方法が、また
特開昭５７−１３５８０１号公報にはスチレン−グリシ
ジルメタクリレート共重合体粒子を合成し、エポキシ基
を加水分解してジヒドロキジル基に変換して親水性重合
体粒子を得る方法が提案されている。これらの方法は極
めて秀れた方法である。しかし、親水性基であ、るジヒ
ドロ牛シル基濃度を増加させると重合体粒子の安定性を
向上させることが可能であるが、免疫活性物質を共有結
合させる活性点濃度が減少するために免疫活性物質の固
定化量が減少するとか、あるいは免疫活性物質を吸着固
定化するに有効な疎水性表面が減少するために、免疫学
的凝集反応の鋭敏性が著しく低下する欠点がある。この
ように免疫活性物質の固定化担体の免疫学的凝集反応性
と物理的安定性を同時に満足させることは従来極めて困
難であった。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者等は免疫学的凝集反応の鋭敏性に優れると共に
、非特異的凝集反応が低く、かつ保存安定性の優れた免
疫活性物質の固定化担体となる反応性重合体粒子の製造
方法について鋭意研究を重ねて来た結果、グリシジル（
メタ）アクリレート単量体単位を有する重合体粒子にメ
ルカプト基とさらにエポキシ基を導入することにより、
前記要望を満す優れた反応性重合体粒子が得られること
を見い出した。

即ち、本発明は、グリシジル（メタ）アクリレート単量
体単位を有する重合体粒子と、（２）分子中にメルカプ
ト基を有し、該メルカプト基のイオウ原子に結合する水
素原子の数の合計が２個である含イオウ化合物 及び／又は （６）　分子中にメルカプト基とイミノ基を有し、該メ
ルカプト基のイオウ原子及び該イミノ基の窒素原子に結
合する水素原子の数の合計が２個である含イオウ化合物 とを反応させ、次いで得られた重合体粒子゛と分子中に
エポキシ基を３個以上有するエポキシ化合物とを反応さ
せることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法であ
る。

また、本発明は、グリシジル（メタ）アクリレート単量
体単位を有する重合体粒子と、（Ａ）　分子中にメルカ
プト基を有し、該メルカプト基のイオウ原子に結合する
水素原子の数の合計が３個以上である含イオウ化合物Ｃ
Ｂ）　　分子中にメルカプト基とイミノ基を有し、該メ
ルカプト基のイオウ原子及び該イミノ基の窒素原子に結
合する水素原子の数の合計が３個以上である含イオウ化
合物 及び （）　分子中にメルカプト基とアミノ基とを有する含イ
オウ化合物から選ばれた少くとも１種の含イオウ化合物
とを反応させ、次いで得られた重合体粒子と分子中にエ
ポキシ基を２個以上有するエポキシ化合物とを反応させ
ることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法である
。

本発明に於ける重合体粒子は、次式 （但し、Ｒは水素原子又はメチル基である。）で示され
るグリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有する
。本発明の重合体粒子は、上記したグリシジル（メタ）
アクリレート単量体単位のみを有するものであってもよ
く、該グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位と他
の単量体単位とを有するものであっても良い。上記した
他の単量体単位としては、グリシジル（メタ）アクリレ
ートと共重合可能なモノマーで示される単量体単位であ
ればどのようなものでもよい。就中５本発明に於いて好
ましい他の単量体単位は、次式 （但し、Ｒ１は水素原子又はアルキル基であり、Ｒ２は
ハロゲン原子、置換若しくは非置換のフェニル基、アル
コキシカルボニル基又はアシルオキシ基である。） で示される疎水性ビニル系単量体単位である。

ここで、フェニル基の置換基としては特に限定されない
が、ハロゲン原子、ハロアル牛ル基、アルキル基等を挙
げることができる。このような疎水性ビニル系単量体単
位の中でもＲ２が置換若しくは非置換のフェニル基、又
は塩素原子である疎水性ビニル系単量体単位が好ましい
。また、他の単量体単位としては次式 （但し、Ｒ３は水素原子又はカルボキシル基であり、Ｒ
４は水素原子又はアルキル基であり、Ｒ５はカルボキシ
ル基、スルホニルフェニル基、ヒドロキシアルコキシカ
ルボ二ル基。

又バーＣ−０−（Ｒ’−ｏｗＨテ示すレル基（但し、Ｒ
′はアルキレン基、ｎは１〜２０の整数である。）であ
る。） で示される親水性ビニル系単量体単位を採用することが
できる。

上記したグリシジル（メタ）アクリレート単量体単位の
重合体粒子に占める割合は特に限定されないが、得られ
る反応性重合体粒子に免疫活性物質を吸看させて診断用
試薬として使用する場合は、グリシジル（メタ）アクリ
レート単量体単位が０．０５〜２０モル％。

さらに０．１〜１５モル％であることが好ましい。また
、免疫活性物質を共有結合させることによって診断用試
薬として使用する場合は２０〜１００モル％、さらに３
０〜９９モル％であることが好ましい。

上記したグリシジル（メタ）アクリレート単量体単位以
外の他の単量体単位としては、前記した疎水性ビニル系
単量体単位及び親水性ビニル系単量体単位を用いること
が好ましいが、親水性ビニル系単量体単位の割合が多く
なり過ぎると反応性重合体粒子の分散安定性に不都合を
生じることがある。従って、本発明の反応性重合体粒子
を吸着による診断用試薬として用いる場合は、親水性ビ
ニル系単量体単位はグリシジル（メタ）アクリレート単
量体単位に対して０〜２０モル％の範囲で、また、共有
結合による診断用試薬として用いる場合は、グリシジル
（メタ）アクリレート単量体単位に対して０〜５０モル
％の範囲で用いることが好ましい。

以上のような組成とすることによって、−般に、表面の
エポキシ基が０．０５〜４００μｍｏｌｅ／ｆｉ−重合
体粒子、より好ましくは０．１〜２００μｍｏｌｅ／１
／−重合体粒子の重合体粒子を得ることができる。

以上に述べた重合体粒子の製造方法は、公知の方法が何
ら制限なく使用し得る。即ち、グリシジル（メタ）アク
リレートを単独で重合することによって、或いは、グリ
シジル（メタ）アクリレートと共重合可能なビニル系単
量体とを共重合させることによって、上記の重合体粒子
を得ることができる。グリシジル（メタ）アクリレート
と共重合させるビニル系単量体の代表的なものを挙げれ
ば、スチレン、ビニルトルエン、クロルメチルスチレン
。

り田ルスチレン、塩化ビニル、臭化ビニル。

メチル（メタ）アクリレート、エチル（メタ）アクリレ
ート、プロピル（メタ）アクリレート、酢酸ビニル等の
疎水性ビニル系単量体；また、アクリル酸、メタクリル
酸、マレイン酸、スチレンスルホン酸、２−ヒドロキシ
エチルメタアクリレート、グリセロールモノメタクリレ
ート、ポリエチレングリコールモノメタクリレート等の
親水性ビニル系単量体などが例示される。これらのビニ
ル系単量体は２種以上を混合して用いることもできる。

さらにまた、必要に応じて、ジビニルベンゼン。

・　エチレングリコールジメタクリレート、ジエチレン
グリコールジメタクリレート、ビスフェノールＡジグリ
シジルエーテル等の架橋性単量体も好適に使用できる。

これらの単量体を用いて重合体粒子を得るための重合方
法は特に限定されず、公知の方法が好適に採用される。

例えば、アニオン性界面活性剤、非イオン系界面活性剤
の存在下に水媒体中で水溶性ラジカル開始剤を用いて乳
化重合する方法、界面活性剤を使わずに水媒体中で水溶
性ラジカル開始剤を用いて不均一重合する方法、部分鹸
化ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等の保
護コロイド存在下に懸濁重合する方法、ビニル系単量体
は溶解するが重合体は溶解しない有機溶媒中で沈澱重合
する方法等が採用される。

本発明で使用する反応性重合体粒子の平均粒子径は特に
限定されないが、凝集反応による診断用試薬に用いる場
合には、その鋭敏性や保存安定性を良好にするために一
般には０．０５乃至１０ミクロンの範囲内にあることが
好ましい。さらにまた、該反応性重合体粒子は、粒子径
の分散の小さい方が、再現性が良いために望ましい。従
って、このような粒子径となるような重合体粒子を得る
ことが好ましい。

次に、前記したグリシジル（メタ）アクリレート単量体
単位を有する重合体粒子と反応させる含イオウ化合物に
ついて説明する。

本発明に於いて、分子中にメルカプト基を有し、該メル
カプト基のイオウ原子に結合する水素原子の数の合計が
２個である含イオウ化合物としては、公知の化合物が何
ら制限なく採用される。具体的には、エタンジチオール
、１，３−プロパンジチオール＝　　ｉｔ　２−プロパ
ンジチオール、１．４−ブタンジチオール、ジチオスレ
イトール、等が好適に使用される。

また、本発明に於いて、分子中にメルカプト基とイミノ
基を有し、該メルカプト基のイオウ原子及び該イミノ基
の窒素原子に結合する水素原子の数の合計が２個である
含イオウ化合物としては、公知の化合物を特に制限なく
使用し得る。具体的に例示すると、Ｎ−メチル−２−ア
ミノエタンチオール、Ｎ−エチル−２−アミノエタンチ
オール、Ｎ−メチル−３−アミノプロパンチオール、２
−メルカプトベンズイミダゾール、３−メルカプト−１
，２，４−）ＩＪアゾール、等の公知の含イオウ化合物
を挙げることができる。

さらに、本発明に於いて、分子中にメルカプト基を有し
、該メルカプト基のイオウ原子に結合する水素原子の数
の合計が３個以上である含イオウ化合物としては、公知
の化合物が特に制限されずに採用し得る。例えば、ペン
タエリスリトールトリー（３−メルカプトプロピオネー
ト）、ペンタエリスリトールテトラ−（３−メルカプト
プロピオネート）。

トリメチロールエタントリ　（３−メルカプトプロピオ
ネート）、ペンタエリスリトールテトラチオグリコレー
ト、トリメチロールエタントリチオグリコレート、トリ
メチロールプロパントリ　（３−メルカプトプロピオネ
ート）。

トリメチロールプロパントリチオグリコレート、ペンタ
エリスリトールテトラ（メルカプトアセテート）、セル
ローストリ　（α−メルカプトアセテ−））、１，２．
３−プロパン−トリチオール、１．２．３．４−ネオペ
ンタン−テトラチオール、１．２．３．４．５゜６−メ
ルカプトポリ　（エチレンオキシ）エチル（ソルビター
ル）、ジペンタエリスリトールヘキサ（３−メルカプト
プロピオネート）等の公知の含イオウ化合物を挙げるこ
とができる。

さらにまた、本発明に於いて、分子中にメルカプト基と
イミノ基を有し、該メルカプト基のイオウ原子及び該イ
ミノ基の窒素原子に結合する水素原子の数の合計が３個
以上である含イオウ化合物としては、公知の化合物が伺
ら制限されず使用でき、具体的には、ジー（Ａ−メルカ
プトベンジル）−アミン、　Ｎ　−（３，４−ジメルカ
プト）ベンジルアニリン。

Ｎ−（３，４−ジメルカプト）フェニルヒドロキシアミ
ン等の含イオウ化合物を挙げることができる。

さらに、本発明に於いて、分子中にメルカプト基とアミ
ノ基とを有する含イオウ化合物としては、公知のものが
特に制限なく使用でき、具体的には、２−アミノエタン
チオール。

３−アミノプロパンチオール、３．３’−ジアミノプロ
ピルメルカプタン１等の公知の含イオウ化合物を挙げろ
ことができる。

本発明に於いて、エポキシ基を２個以上有するエポキシ
化合物としては、公知のエポキシ化合物が採用される。

例えば、１．３−ブタジエンジエポキシド、１，４−ブ
タンジグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリ
シジルエーテル、セカンダリ−ブチルフェノールジグリ
シジルエーテル、プロピレングリコールジグリシジルエ
ーテル、グリセロールジグリシジルエーテル、１，６−
ヘキサンシオールジグリシジルエーテル、ポリエチレン
グリコールジグリシジルエーテル、グリセロールトリグ
リシジルエーテル、トリメチロールプロパントリグリシ
ジルエーテル、ペンタエリスリトールトリグリシジルエ
ーテル。

ペンタエリスリトールテトラグリシジルエーテル、グル
コーストリグリシジルエーテル。

グルコーステトラグリシジルエーテル、グルコシドトリ
グリシジルエーテル、グリシジル（メタ）アクリレート
、等の多価エポキシ化合物を挙げることができる。

グリシジル（メタ）アク１ｙレート単量体単位を有する
重合体粒子と含イオウ化合物との反応は、グリシジル（
メタ）アクリレート単量体単位のエポキシ基と含イオウ
化合物のメルカプト基、イミノ基又はアミノ基との反応
を利用するものである。この反応は下記ＣＩ）〜（Ｖ）
　　のように進行しているものと推測できる。

−ＣＨ−ＣＨ２−８−Ｒ６−８Ｈ（Ｉ）ＯＨ リ −ＣＨ−ＣＨ２−８−Ｒ７−ＮＨ−Ｒ８０Ｈ（ｎ） 又は、 −ＣＨ−ＣＨ２−Ｎ−Ｒ７−８Ｒ ＯＨ ＯＨ ＯＨ −ＣＨ−ＣＨ２−８−Ｒ，−８Ｈ（ｍ）ＯＨ ＯＨ す Ｒ −ＣＨ−ＣＨ２−８−Ｒｌｏ−ＮＨ−Ｒ１□菖 ＯＨ（ＩＶ） ＯＨ υ −ＣＨ−ＣＨ２−８−Ｒ１□−ＮＨ４ Ｉ ０　Ｈ（Ｖ） 又は、 −ＣＨ−ＣＨ２−ＮＨ−Ｒ，□−８Ｈ ＯＨ 具体的な反応の操作としては、重合体粒子と反応させる
べき含イオウ化合物とを水媒体中、エポキシ基に不活性
な緩衝液中、あるいはエポキシ基と反応性の極めて乏し
くかつ重合体粒子を溶解させないメタノール、エタノー
ル、イソプロパツール、アセトン、酢酸メチル、酢酸エ
チル、等の水と親和性の大きい有機溶媒中、あるいはこ
れらの混合媒体中で混合して反応させればよい。特に水
媒体中での反応が好ましく採用される。また、反応温度
は重合体粒子の分子構造やエポキシ基濃度。

含イオウ化合物の分子構造、及び反応媒体によって異な
るが、−般的には４℃乃至１００℃、好ましくは４℃乃
至６０℃の範囲が好適に採用される。反応媒体に有機溶
媒を用いる場合には重合体粒子を溶解させない反応温度
を選ぶことが重要である。さらにまた、有機化合物の濃
度は重合体粒子の分子構造、エポキシ基濃度、含イオウ
化合物の分子構造、及び反応条件によって異なるが、重
合体粒子のエポキシ基濃度に対して２乃至５００モル倍
となるように選べば良い。さらにまた、重合体粒子と含
イオウ化合物の混合方法は特に限定的でない。−般的に
は、重合体粒子の懸濁媒体中へ含イオウ化合物の溶液を
一括して添加する方法、もしくは滴々添加する方法、あ
るいは含イオウ化合物の溶液中へ重合体粒子の懸濁液を
一括もしくは滴々添加する方法が好ましく採用される。

このようにして導入されたメルカプト基。

アミノ基又はイミノ基を、複数個のエポキシ基を有する
エポキシ化合物のエポキシ基の一つとの反応に利用され
、さらにエポキシ基の導入が行なわれる。この場合、先
にメルカプト基、アミノ基又はイミノ基の導入を行なう
ために用いられた含イオウ化合物のメルカプト基又はイ
ミノ基のイオウ原子又は窒素原子に結合する水素原子の
数の合計が２個である場合には、エポキシ基を分子中に
３個以上有するエポキシ化合物を用いる。また、メルカ
プト基、イミノ基又はアミノ基のイオウ原子又は窒素に
結合する水素原子の数が３個以上である含イオウ化合物
を用いた場合には、分子中にエポキシ基を２個以上有す
るエポキシ化合物が用いられる。この反応は前記（ｒ）
及び（ＩＩＩ）の反応で得られた重合体粒子を例にとっ
て説明すると、次の（ＶＩ）又は〔■〕のように進行し
ているものと推測される。

メルカプト基、アミノ基又はイミノ基が導入された重合
体粒子とエポキシ基を複数個有するエポキシ化合物の反
応は、重合体粒子のメルカプト基、アミノ基又はイミノ
基と反応させるべきエポキシ化合物を水媒体中、エポキ
シ基に不活性な緩衝液中、あるいはエポキシ基と反応性
の極めて乏しくかつ重合体粒子を溶解すせないメタノー
ル、エタノール、インプロパツール、アセトン、酢酸メ
チル、酢酸エチル、等の水と親和性の大きい有機溶媒中
、あるいはこれらの混合媒体中で混合して反応すればよ
い。特に水媒体中での反応が好ましく採用される。また
、反応温度は重合体粒子の分子構造やメルカプト基、ア
ミノ基又はイミノ基濃度、含イオウ化合物の分子構造及
び反応媒体によって異なるが、−般的には４℃乃至１０
０℃、好ましくは４℃乃至６０℃の範囲が好適に採用さ
れる。反応媒体に有機溶媒を用いる場合には重合体粒子
を溶解させない反応温度を選ぶことが重要である。さら
にまた、エポキシ化合物の濃度は重合体粒子の分子構造
、メルカプト基、アミノ基又はイミノ基濃度、エポキシ
化合物の分子構造。

及び反応条件によって異なるが、重合体粒子の粒子表面
のメルカプト基、アミノ基又はイミノ基濃度に対して１
０乃至５００モル倍の範囲が好適に採用される。さらに
また、反応時間は一概に限定できないが、−般には】０
分乃至１００時間が好ましく、更には３０分乃至５０時
間がより好ましく採用される。

このようにしてエポキシ基を導入することにより、当初
の重合体粒子のグリシジル（メタ）アクリレート単量体
単位に基づくエポキシ基の濃度よりも高い濃度のエポキ
シ基を反応性重合体粒子に導入することができる。即ち
、反応性重合体粒子の表面に於けるエポキシ基の濃度を
ＣＩＣｐＸ　（μｍｏｌｅ　／　Ｉ−反応性重合体粒子
）とし、メルカプト基、エポキシ基の導入前の重合体粒
子のグリシジル（メタ）アクリレート単量体単位に基づ
くエポキシ基の濃度をＣＺｐｘ　２　　（μｍｏｌａ／
Ｊｌ−反応性重合体粒子）とすると、重合体粒子中のグ
リシジル（メタ）アクリレート単量体単位が２０〜１０
０モル％の重合体粒子を用いた場合にはを満たすエポキ
シ基の濃度を有する反応性重合体粒子とすることができ
、重合体粒子中のグリシジル（メタ）アクリレート単量
体単位が０．０５〜２０モル襲の重合体粒子を用いた場
合には、次式 ＣＫｐｚ≧２０　　Ｘ　ＣＥＰＸ　　２を満たす反応性
重合体粒子とすることも可能である。

しかも、メルカプト基、アミノ基又はイミノ基とエポキ
シ基の導入により親水性である水酸基が生成し、このた
めに分散安定性の優れた反応性重合体粒子が得られる。

本発明により得られた反応性重合体粒子の有するエポキ
シ基は、反応性重合体粒子に免疫活性物質を吸着して診
断用試薬とする場合にはその大部分を、また、免疫活性
物質を共有結合により結合して診断用試薬とする場合に
は免疫活性物質の共有結合に使用した残りの大部分を以
下の方法によって親水基に変換することができる。

以下の方法により反応性重合体粒子のエポキシ基を親木
基に変換することにより、診断用試薬の免疫学的凝集反
応の鋭敏性が優れると共に、非特異的凝集反応が低く、
かつ保存安定性に優れる特徴がある。

０ン　反応性重合体粒子を加熱加水分解するか、もしく
は酸性水溶液中で加水分解することによりエポキシ基を
ジヒドロキジル基に変換する。

（２）　２−メルカプトエタノール、２−メルカプトプ
ロパツール、３−メルカプト−１゜２−プロパンジオー
ル、メルカプトペンタエリスリトール等のメルカプトア
ルカノール類と反応することにより、エポキシ基をヒド
ロキシル基に変換する。

（３）　　エタノールアミン、プロパツールアミン。

ジェタノールアミン、２−アミノ−２−エチル−１，３
−プロパンジオール、トリス（ヒドロキシエチル）アミ
ノメタン等のヒドロキシアミン類と反応することにより
、エポキシ基をヒドロキシル基に変換する。

（Ａ）　チオグリコール酸、チオプロピオン酸。

等のメルカプトカルボン酸類と反応することにより、エ
ポキシ基をカルボキシル基に変換する。

（５〕　　グリシン、Ｎ−トリス（ヒドロキシメチル）
メチルグリシン、等のカルボキシル化アミン類と反応す
ることにより、エポキシ基をカルボキシル基に変換する
。

（１）〜（５）の反応条件は、本発明で用いる重合体粒
子に含イオウ化合物を反応させる条件に、準じて行なえ
ばよい。さらにまた、本発明で得られた反応性重合体粒
子に上述の（］）〜（５）の親水化反応を行なう前に、
前記した方法により含イオウ化合物を反応させ次いでエ
ポキシ化合物を反応させる方法をｍ数回繰返し行なうこ
とも可能である。

このようにして得られた反応性重合体粒子のエポキシ基
の濃度は、０１〜１０００μｍｏｌｅ／ｇ−反応性重合
体粒子、より好ましくは０．２〜５００μｍｏｌｅ　／
　Ｉ−反応性重合体粒子であることが、診断用試薬とし
て用いた場合に、分散安定性及び鋭敏性の点で良好であ
る。

本発明により得られた反応性重合体粒子は、水媒体中で
の疎水性有機化合物の吸着剤、生体内での各種細胞１組
織による貧食作用の観察用粒子、及び酵素、蛋白質ある
いは免疫活性物質の固定化用粒子等に応用でき、特に免
疫活性物質を吸着法もしくは共有結合法で固定化した診
断用試薬は免疫学的凝集反応性が大きいだけでなく、分
散安定性と保存安定性に優れる特徴がある。

以下に、本発明で得られた反応性重合体粒子を診断用試
薬として用いた場合について説明する。

本発明で得られた反応性重合体粒子に吸着法もしくは共
有結合法によって固定化する免疫活性物質としては、特
に限定的でなく公知のものが使用出来る。代表的なもの
を例示すれば、例えば、変性ガンマグロブリン、抗核因
子、ヒトアルブミン、抗ヒトアルブミン抗体、イムノグ
ロブリンＧ　（ＩｇＧ）、　ｍヒトＩｇＧ抗体、イムノ
グロブリンＡ　（ＩｇＡ）、　抗ヒトＩｇＡ抗体、イム
ノグロブリンＭ（ＩｇＭ）、抗ヒトＩｇＭ抗体、ストレ
プトリジンＯ，ストレプトキナーゼ、ヒアルロンダーゼ
、抗ストレプトリジン０抗体、Ｃ−反応性蛋白、抗Ｃ−
反応性蛋白抗体、アルファーフェトプロティン（ＡＦＰ
）、抗ＡＦＰ抗体、癌胎児性抗厘（ＣＥＡ）　、抗ＣＥ
Ａ抗体、ヒト繊毛性ゴナドトロピン（ＨＣＧ）　、抗Ｈ
ＣＧ抗体、抗エストロゲン抗体、抗インシュリン抗体、
Ｂを肝炎表面抗原（ＨＢａ）、抗ＨＢｓ抗体、梅毒トレ
ボネマ抗原、風疹抗原、インフルエンザ抗原、補体成分
Ｃ１ｑ＋抗Ｃ１ｑ抗体、抗Ｃ３（Ｌ抗体２等の公知の免
疫活性物質をあげることができる。

本発明で得られた反応性重合体粒子に固定化される該免
疫活性物質の量は、各検査項目に適している割合で反応
性重合体粒子に固定化させればよく、−概に限定されな
い。−般には、該免疫活性物質の量が多い程、診断用試
薬の鋭敏性が上がるため、鋭敏性を要求する場合には、
前記の反応性重合体粒子に飽和する迄、免疫活性物質を
吸着又は共有結合させることが好ましい。

本発明により得られた反応性重合体粒子は免疫活性物質
の固定化能力と親水性のバランスが極めて良く調節され
ているので、抗原又は抗体と反応性重合体粒子を緩衝液
又は生理食塩水などの水媒体中で混合し、抗原又は抗体
が化学的に変化しないように、そしてそれらの免疫学的
性質を保持させるように、非常に温和な条件下に抗原又
は抗体な反応性重合体粒子表面に固定化させることがで
きるだけでなく、該媒体中で極めて安定性が高い特徴が
ある。反応性重合体粒子表面に固定化された免疫活性物
質の量は、重合体粒子の蛋白結合部位を飽和又はブロッ
クされるように選ぶことが好ましいが、残存する蛋白結
合部位を免疫学的に不活性な適当な物質でブロック又は
不活性化させることができる。

〔効果及び作用〕

本発明により得られた反応性重合体粒子を用いた診断用
試薬は、免疫学的凝集反応の鋭敏性が大きいだけでなく
、分散安定性や保存安定性がすぐれるという特徴がある
。その理由は必ずしも明らかではないが、本発明者等は
次のように推洞している。本発明の方法で得られる反応
性重合体粒子は免疫活性物質を共有結合法で固定化する
エポキシ基等の官能基の数或いは免疫活性物質を吸着す
る表面のエリアの広さと、分散安定性と保存安定性に寄
与する水酸基等の親木基の数とが独立函数となっており
、そのどちらも大きくすることができるという特徴を有
する。この事実は診断用試薬の合成上極めて重要な因子
である。

免疫活性物質を固定化する官能基濃度或いは表面のエリ
アの広さが多ければ多い程、診断用試薬の鋭敏性は向上
するが、重合体粒子の分散安定性と保存安定性が低下す
る欠点がある。−方、重合体粒子の親水基濃度が多けれ
ば多い程診断用試薬の分散安定性と保存安定性が増加す
るが、鋭敏性が著しく低下する欠点が生じる。しかしな
がら、本発明により得られた反応性重合体粒子は、これ
らの矛盾を解決し、鋭敏性及び分散安定性の共に優れた
ものである。従って、本発明により得られた反応性重合
体粒子は、新規な診断用試薬の開発に於いて極めて重要
な位置を占めるものである。

以下に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限
定されるものではない。

尚、実施例及び比較例に於けるエポキシ基の定量は以下
の方法により行なった。

０）エポキシ基濃度の定量 重合体粒子及び反応性重合体粒子を１重量％濃度で蒸留
水に分散した懸濁液１容とｔ−アミノカプロン酸を０．
５Ｍ濃度に溶解した水溶液１容を混合し、ＰＨ＝８に調
製した後、６０℃で２４時間攪拌下に反応した。

反応後室温で１週間蒸留水中で透析を繰返した後、遠心
分離して重合体粒子を回収し、乾燥後、三菱化成■製の
微量窒素分析装置（モデル、ＴＮ−０２型）を利用して
エポ午シ基と反応したε−アミノカルボン酸量を測定し
、ε−アミノカプロン酸を反応しない重合体粒子のブラ
ンク値を差し引くことにより、重合体粒子及び反応性重
合体粒子の表面に於けるエポキシ基の濃度を分析した。

実施例　１〜５　及び比較例１〜２ （１）重合体粒子の調製 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ＣＩ：加えて７０’Ｃに保った後に、窒素雰
囲気下、攪拌下に過硫酸カリウムを＆Ｏミリモル／ｌ濃
度になるように添加した。次いでジー２−エチルへキシ
ルスルホコハク酸Ｌ５９を乳化剤トして添加した後、７
０　”Ｃに加温したグリシジルメタクリレート３０ミリ
モル、メタクリル酸３ミリモル、及びスチレン１００ミ
リモルの混合物を添加して１時間重合を行なった。その
後スチレン２，６モルを定量ポンプで滴々添加してから
７０’Ｃで２９時間攪拌下に重合した。重合後、室温ま
で冷却してから、得られた重合体粒子を濾紙憔２）で濾
別して大きな凝集体を除いた。次いで透析を行なった後
に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を繰返した後に
、イオン交換樹脂で脱イオン操作を行ない、更に遠心分
離と洗浄を行なって重合体粒子を精製した。得られた重
合体粒子の粒子径は０、２３２μｍであった。また、該
□重合体粒子の表面に於けるエポキシ基濃度（（：］Ｃ
ｐｘ２　）は１．６μｍｏｌｅ／Ｊｉ’重合体粒子であ
った。

（２）反応性重合体粒子の調製 得られた１合体粒子を２重量％濃度で蒸留水に分散させ
た懸濁液２００−と第１表に示す如くの本発明の含イオ
ウ化合物を溶かした水溶液５０−を混合し、室温で７２
時間攪拌下に反応した。反応後、重合体粒子を遠心分離
、蒸留水への再分散の操作を繰返した後に、窒素置換し
てから９８℃で２時間加熱することにより重合体粒子の
未筐応のエポキシ基を加水分解した。次いで、該重合体
粒子を２重量％濃度で蒸留水に分散させた懸濁液１００
−と第１表に示した如くの本発明のエポキシ化合物を溶
かした水溶液ＩＱＱｍを混合し、室温で攪拌下に７２時
間反応した。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散の操
作を３回繰返して精製することにより本発明の反応性重
合体粒子を得た。得られた反応性重合体粒子のエポキシ
基の濃度（ＣＥｐｘ）　　は第１表に示す通りであった
。さらに、該反応性重合体粒子を９８℃で２時間加熱す
ることにより反応性重合体粒子のエポキシ基を加水分解
した。

次いで、反応性重合体粒子を線繊（Ａ；２）で濾別した
後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操作を３回繰返し
て精製した。

（３）　　と）ＩｇＧを固定化した反応性重合体粒子の
調製 鰺）で得られた本発明の反応性重合体粒子を固型分濃度
１％でグリシン緩衝液に分散した。本発明に於いてグリ
シン緩衝液とはグリシン０．０５モル及び食塩α０５モ
ルを水１ノに溶解し、次いで２規定水酸化ナトリウム水
溶液でＰＨを＆２に調製し、さらにアジ化ナトリウムを
１１添加したものである。

本発明に於いてと）ＩｇＧは、ヒト血清を飽和硫安で塩
析し、さらに透析を行ない精製したものを用いた。

ヒ）ＩｇＧをグリシン緩衝液により希釈しＩＱ／−に調
整する。次いで倍数希釈法によりヒトＩｇＧをグリシン
緩衝液により希釈してヒ）ＩｇＧ希釈液を調製する。１
重量％濃度の反応性重合体粒子分散液１容にヒ）ＩｇＧ
希釈液１容を加え攪拌し、室温下２時間放置する。次い
で遠心分離、グリシン緩衝液への再分散の操作を繰り返
すことによりヒ）ＩｇＧを固定化した反応性重合体粒子
を洗浄した後に、グリシン緩衝液に固型分濃度を０，５
重量％になるように再分散させ、４℃で保存した。

（Ａ）　　抗原・抗体反応 ヒ）ＩｇＧをウサギに免疫して得た抗ヒ）ＩｇＧウサギ
全血清を６０℃、３０分非動化処理を行なった。この血
清を以下抗ヒ）ＩｇＧウサギ血清と呼ぶ。

抗ヒ）ＩｇＧウサギ血清をグリシン緩衝液で２０倍に希
釈したものを原液とし、倍数希釈法により抗ヒ）ＩｇＧ
ウサギ血清をグリシン緩衝液で希釈して抗ヒトＩｇＧウ
サギ血清希釈液を調製する。抗原・抗体反応を行なうた
めにガラス製１０大のホールグラスを用意し、グリシン
緩衝液で希釈した抗ヒトＩｇＧウサギ血清を各ホールに
０．０４１１１７加える。次いでヒ）ＩｇＧを固定化し
た反応性重合体粒子のグリシン緩衝液分散液を各ホール
にＱ、Ｑ４Ｖ！加える。この後直ちに平沢製作所製テー
バー式攪拌機によりホールグラスを１分間に１２０回転
の速度で水平回転し攪拌を行なう。抗原・抗体反応によ
り反応性重合体粒子の凝集の有無から、ヒ）ＩｇＧを固
定化した反応性重合体粒子の特性である鋭敏性を評価し
た。

ホールグラスを用いた実施例１の反応性重合体粒子の凝
集試験の結果を第１図に示す。

第１図は１０分間の攪拌後の凝集状態を示す。凝集が全
く認められない場合−１凝集の有無が判定しがたい場合
（ト）、明らかに凝集が認められる場合、凝集の強い順
に＋神。

→、十と判定した。図中Ｃは抗原もしくは抗体を全く含
まないことを示す。凝集試験の結果、明らかに凝集の認
められたホールに於ける抗ヒ）ＩｇＧウサギ血清希釈液
の最高希釈倍数をもって、反応性重合体粒子の鋭敏性を
評価した。

反応性重合体粒子の特性として、さらに反応性重合体粒
子の分散安定性を評価した。

すなわち、反応性重合体粒子にヒ）ＩｇＧ希釈液を加え
室温で１日放置した後の反応性重合体粒子の分散状態を
もって反応性重合体粒子のヒ）ＩｇＧ固定化時の分散安
定性を評価した。又ヒ）ＩｇＧ固定化後３ケ月経過した
後の反応性重合体粒子の分散状態をもってヒトＩｇＧを
固定化した反応性重合体粒子の保存中の分散安定性を評
価した。

尚、比較例１として、０）で得られた重合体粒子に実施
例１と同様の操作で本発明に於ける含イオウ化合物及び
エポキシ化合物以外の化合物を用いて、反応性重合体粒
子を得た。

得られた反応性重合体粒子を実施例１と同様の操作で性
能を調べた。その結果を第１表に示す。

また、比較例２として、（１）で得られた重合体粒子を
９８℃で２時間加熱することによりエポキシ基を加水分
解した。次いで重合体粒子を濾に−（Ａ　２　）で濾別
した後に、遠心分離。

蒸留水への再分散の操作を３回繰返して精製した。得ら
れた重合体粒子を実施例１と同様の操作で性能を調べた
。その結果を第１表に示す。

第１表の結果から明らかな如く、本発明の反応性重合体
粒子はヒ）ＩｇＧを吸着で固定化した後に残存する結合
部位を親水性の蛋白。

例えば、ウシ血清アルブミンなどで、ブロックさせるこ
となく、分数安定性がよく、かつ鋭敏性が高いという特
徴がある。

実施例　６ （１）　　反応性重合体粒子の調製 実施例１で得られた反応性重合体粒子（粒子表面のエポ
キシ基濃度（Ｃ１ｅｐｘ）　＝　１７μｍｏｌｅ　／　
ｌ・反応性重合体粒子）を２重量％濃度で蒸留水に分散
させた懸濁液５０１と３００μｍｏｌｅのα−チオグリ
セロールの水溶液１０１を混合し、室温で４８時間攪拌
下に反応した。反応後、反応性重合体粒子を遠心分離、
蒸留水への再分数の操作を５回繰返して精製した。

０）で得られた反応性重合体粒子を固型分濃度１重量％
でＰＨ＝＆２に調製したグリシン緩衝液に分散させた。

次いでヤギの産生した抗ＣＲＰ血清を塩析と透析でγ−
グロブリンに濃縮した後アフィニティクロマトにより精
製して得た精製ＣＲＰ抗体を１０００μＬ〜　濃度に含
有するグリシン緩衝液を調製した後に倍数希釈法により
希釈してＣＲＰ抗体希釈液を調製した。反応性重合体粒
子分散液１容と精製ＣＲＰ抗体の希釈液１容とを加え、
攪拌し、室温下２時間放置した。次いで遠心分離、グリ
シン緩衝液への再分散の操作を繰り返して洗浄した後、
ＣＲＰ抗体を固定化した反応性重合体粒子をグリシン緩
衝液に固型分濃度を０．５重量％になるように調製した
。

（３Ｊ　　抗原・抗体反応 検体として既知濃度のヒ）ＣＲＰ血清を５６℃で３０分
間加熱処理して非動化した後、グリシン緩衝液で希釈系
列を調節した。

実施例１と同様の操作で、ガラス製１０大のホールグラ
スを利用して抗原・抗体反応を調べた。そのＭ呆、鋭敏
性は７日後及び３ケ月後共に５μｍ１／ｘｉであった。

また、分散安定性は７日後１本、３ケ月後に２本の非特
異的凝集が認められた。

実施例　７ （１）重合体粒子の調製 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ｃｃを加えて７５℃に保った後に、窒素雰囲
気下、攪拌下に過硫酸カリウム５ミリモル／１．チオ硫
酸ナトリウム５ミリモル／ｌ、硫酸（［０，２５ミリモ
ル／）を添加した。次いで７５℃に加温したグリシジル
アクリレート１５ミリモル及びメチルメタクリレート２
５０ミリモルの混合物を添加して７５℃で３０分間攪拌
下に重合した。その後、メチルメタクリレート２，６モ
ルを定量ポンプで滴々添加して、更に７５℃で２時間攪
拌下に重合した。その後の操作は実施例１と同様の操作
を行なった。得られた重合体粒子の粒子径は０．２０８
μｍであった。この重合体粒子の表面におけるエポキシ
基濃度（ＣＫｐｚ２）は０．８μｍｏｌｅ　／　ｌ　　
重合体粒子であった。

■）　反応性重合体粒子の調製 得られた重合体粒子を２重鐘％濃度で蒸留水に分散させ
た懸濁液２００ｄと２００μｍｏｌｅの１．２．３−プ
ロパントリチオールを溶かした水溶液５ＯＮを混合し、
室温で７２時間攪拌下に反応した。反応後、重合体粒子
を遠心分離、蒸留水への再分散操作を繰返した後に、２
重１％濃度で蒸留水に分散させた懸濁液２００−と４０
０μｍｏｌｅのグリセロールジグリシジルエーテルの水
溶液１００１１１７を混合し、室温で攪拌下に５０時間
反応した。反応後、遠心分離、蒸留水への再分散操作を
繰返して精製した反応性重合体粒子を得た。得られた反
応性重合体粒子に上記反応を全く同様の操作を繰返して
、分絃数の多い反応性重合体粒子を合成した。かくして
得られた反応性重合体粒子のエポキシ基の濃度（（ｕｐ
工）はλ１μｍｏｌｅ／ＩＭ応性重合体粒子であった。

さらに該反応性重合体粒子を９８℃で２時間、窒素雰囲
気下で加熱することにより反応性重合体粒子のエポキシ
基を加水分解した。次いで反応性重合体粒子を濾Ｕ（Ａ
２）で濾別した後に、遠心分離、蒸留水への再分散の操
作を３回繰返して精製した。

（３７熱変性ヒトＩｇＧの固定化 （２）で得た反応性重合体粒子をグリシン緩衝液に０．
５重量％になるように分散させた。

次いで６０℃で１０分間加熱処理したヒトＩｇＧをグリ
シン緩衝液により希釈し１巧／−に調整した。０．５重
１％濃度の反応性重合体粒子分散液１容に熱変性したヒ
）ＩｇＧ希釈液１容を加え、攪拌し、室温下２時間放置
した。その後、遠心分離して洗浄した後、固型分濃度が
０．５重量％になるように０．０５重量％濃度の牛血清
アルブミンを含むグリシン緩衝液に再分散した。

（Ａ）　　リウマチ因子の測定 検体として非動化慢性関節リウマチ患者プール血清をグ
リシン緩衝液で２０倍に希釈したものを厘液として、実
施例１と同様にしてガラス製１０大のホールグラスにグ
リシン緩衝液で希釈した慢性関節リウマチ患者血清を各
ホールに０．０４−を加え、次いで熱変性ヒ）ＩｇＧを
固定化した反応性重合体粒子をグリシン緩衝液で希釈し
た分散液を各ホールに０．０４１１４加えて実施例１と
同様の操作で鋭敏性及び分散安定性を調べた。その結果
、鋭敏性は１５後Ｘ２５６０゜３ケ月後Ｘ２５６０．で
あり、分散安定性は１日後及び３ケ月後に共に非特異凝
集反応は認められなかった。

尚、比較例３として比較例１で用いた重　−合体粒子を
用いて上記と同様の操作でテストすると、鋭敏性は１日
後Ｘ１２８０．３ケ月後は非特異凝集のため評価できな
かった。

実施例　８ 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７０００Ｃ加えて７０℃に保った後に、窒素雰囲気
下、攪拌下に過硫酸カリウム１０ミリモル／ｌ濃度にな
るように添加した。次いで７０℃に加温したグリシジル
メタアクリレート１００ミリモル及びクロルメチルスチ
レン４００ミリモルの混合物を添加して７０℃で１時間
攪拌下に重合した。その後スチレン２５モルを定量ポン
プで滴々添加してから、７０°Ｃで２９時間攪拌下に重
合した。その後の操作は実施例１と同様の操作を行なっ
た。得られた重合体粒子の粒子径は０、３２４μｍであ
った。重合体粒子表面におけるエポキシ基濃度ＣΣｐ工
２は３．５μｍｏｌｅ／Ｆ重合体粒子であった。

得られた重合体粒子を実施例１と同様の操作で１．２．
３−プロパントリチオール、１゜４−ブタンジグリシジ
ルエーテルを反応させ、ＣＩＣｐｘ＝：　ａ、ｓ　、ｕ
ｍｏｌｓ／、ｐ反応性重合体粒子となる反応性重合体粒
子を合成した。かくして、得られた反応性重合体粒子を
実施例】と同様の操作でと）ＩｇＧを固定化し、抗ヒ）
ＩｇＧウサギ血清との抗原・抗体反応を行なった。

その結果、鋭敏性は１５後Ｘ１２８０．３ケ月後Ｘ１２
８０．ｔた分散安定性は１日後と３ケ月後共非特異的凝
集が認められなかった。

実施例　９ 攪拌機付きガラス製７ラスフを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ｃｃを加えて７０℃に保った後に、窒素雰囲
気下、攪拌下に過硫酸カリウム４ミリモル／ｌ、チオ硫
酸ナトリウム２ミリモル／１．及び硫酸＠０．２ミＩＪ
モル／ｌを添加した。次いで７０℃に加温したグリシジ
ルメタクリレ−）１５モル及びスチレン０．５モルの混
合物を添加して７０℃で６時間重合した。重合後、室温
まで冷却してから得られた重合体粒子を濾紙（／Ｉ＆２
）で濾別して大きな凝集体を除いた。次いで透析を行な
った後に遠心分離。

蒸留水への再分散の操作を繰返した後に、イオン交換樹
脂で脱イオン操作を行ない、更に遠心分離と洗浄を行な
って重合体粒子を精製した。得られた重合体粒子の粒子
径は０．３０４　ｐｍであった。またＣＮｐｘ２は８４
μｍｏｌ＠／、９重合体粒子であった。

（２）　　反応性重合体粒子の調製 得られた重合体粒子を２重量％濃度で蒸留水に分散した
懸濁液２００′ＩＬｔと３μｍｏｌｅの３，３′−ジア
ミノプロピルメルカプタンの水溶液２００−を混合し、
室温で４８時間攪拌下に反応した。３．３′−ジアミノ
プロピルメルカプタンと反応した重合体粒子のエポキシ
基は３．０μＨｏ１ｅ／Ｉ！−重合体粒子であった。反
応後、重合体粒子を遠心分離。

蒸留水への再分散の操作を３回繰返した後に、９８℃で
２時間加熱することにより、重合体粒子の未反応のエポ
キシ基を加水分解した。次いで、得られた重合体粒子を
２重量％濃度に再調製した懸濁液１００１Ｌ（に過ヨウ
素駿ナトリウム１５　ｍｍｏｌｅと酢液１５　ｍｍｏｌ
ｅの混合物５（１７を添加し、４０℃で一夜攪拌した後
、ＰＨがａ５以上になるまで透析をつづけて精製して、
重合体粒子のジヒドロキジル基をホルミル化した。

得られたホルミル化重合体粒子を１．５１敞％濃度に再
調製した懸濁液１００Ｒ１に２５０μｍｏｌｅのテトラ
エチレングリコールジグリシジルエーテル水溶液２０Ｍ
１を加えて、室温で７２時間攪拌下に反応した後に、ｉ
！１ｌ−４（Ａ２）で濾別し、次いで遠心分離。

蒸留水への再分散の操作を３回繰返して精製した。かく
して得られた反応性重合体粒子のＣＩＣｐＸは１αｇｐ
ｍｏｌｅ／１１−反応性重合体粒子であった。

（３）　　抗原・抗体反応 （２）で得られた反応性重合体粒子を１重量≦濃度に再
調製した懸濁液５０１１１ｊに８０　、ｃｃｍｏ］のε
−アミノカプロン酸水溶液５０１１１ｊを加えて、ＰＨ
＝＆４に調製し、室温で７２時間攪拌下に反応した。次
いで’ａ　練（、％　２　）で濾別した後、遠心分離、
蒸留水への再分散の操作を３回繰返して精製することに
より、エポ午シ基をカルボキシル基に変換した反応性重
合体粒子を得た。

ヤギの産生じたアルファーフェトプルナイン（以下ＡＦ
Ｐと略す）の抗体をアフィニテイクロマトにより精製し
て得た精製ＡＦＰ抗体を１貫９／１濃度に含有するホウ
酸緩衝液を調製した後に倍数希釈法により希釈してＡＦ
Ｐ抗体希釈液を調製した。１ｘ量％濃度の反応性重合体
粒子の懸濁液１容にＡＦＰ抗体希釈液１容を加え攪拌下
に室温で４時間放置した。そして、遠心分離した後に固
型分濃度が０．５］ｉ量弧となるようにグリシン緩衝液
に調製し４℃に保存した。

検体としてヒト血清中のＡＦＰ濃度か に＠　　　１０００μＩ／Ｍｌ　であるものを原液とし
、グリシン緩衝液で希釈系列を調製した。実施例１と同
様にしてガラス製１０大のホールグラスにグリシン緩衝
液で希釈したＡＦＰを各ホールにＱ、Ｑ４ｉｄ加え、次
いでＡＦＰ抗体を固定化した診断用試薬の分散液を各ホ
ールに０．０４−加えて実施例１と同様の操作で鋭敏性
１分散安定性を調べた。その結果、鋭敏性は１日後、３
カ月後共に２５μＩ／ｄであった。分散安定性は１８後
１２０本、３カ月１２１本の特異凝集は認められた。

実施例　１０ （］）重合体粒子の調製 攪拌機付きガラス製フラスコを窒素置換した後に、蒸留
水２７００ｅｅを加えて７０℃に保った後に、窒素雰囲
気下に過硫酸カリウム５．０ミリモル／１．千オ硫酸ナ
トリウム５，０ミリモル／１．硫酸銅０．２５　ミリモ
ル／１．及びメルカプトエタノールｏ、ｓミリモル／ｌ
を添加した。次いで７０”Ｃに加温したグリシジルメタ
クリレ−８２０モル及びエチレングリコールジメタクリ
レー）４０４リモルの混合物を添加して７０℃で２時間
攪拌下に重合した。その後の操作は実施例１と同様の操
作な行なった。得られた重合体粒子の粒子径は０．２４
５μｍであった。また、ＣＫｐＸ２は１２０　／ｊｍｏ
ｌｅ／ｊ９−重合体粒子であった。

（２）　　反応性重合体粒子の調製 得られた重合体粒子を２重量％濃度で蒸留水に分散した
懸濁液２００′ＩＬｔと８ｍｍｏ１ｓの１，２．３−７
’ロパントリチオ一ル水溶液２００ｍ１を混合し、室温
で４８時間攪拌下に反応した。反応後、遠心分離、蒸留
水への再分散の操作を３回繰返して精製した。

得られた重合体粒子を２ＸＩｋ％濃度で蒸留水２００ｊ
Ｌ１！に分散させ、４０　ｍｍｏｌｅのエチμ＞ｙｖ　
：７−ルシグリシジルエ−７−Ａ／２０ＯＮと混合して
室温で７２時間攪拌下に反応した後に、濾Ｍｔ　（Ａ　
２　）で濾別した。次いで遠心分離、蒸留水への再分散
の操作な３回繰返して精製した。かくして得られた反応
性重合体粒子のＣＫｐＸは１７０μｍＯ工ｅ／Ｉ反応性
重合体粒子であった。

（３］　　旦に」じ（【匠 （２）で得られた反応性重合体粒子を２重量％濃度で蒸
留水に分散した懸濁液１００νに５−アミノカプロン酸
、５ｍｍｏｌｅを加え、ＰＨ＝＆２に調節して室温で７
２時間攪拌下に反応した。反応後、遠心分離、蒸留水へ
の再分散の操作を３回繰返して精製した。

かくして、得られたカルボキシル化重合体粒子を固型分
濃度１重量％でＰＨ＝６．０のリン酸緩衝液に分散した
。次いでヒト胎盤ラクトゲン（ｈＰＬ）を１０００Ｉｔ
Ｊ／ｍｕ濃度に含有するリン酸緩衝液を調製した後に倍
数希釈法により希釈したｈＰＬ希釈溶液１容と１重量％
濃度のカルボキシル化重合体粒子１容を混合し、４℃で
２月間攪拌下にＪｊＬｊｔした。次いで遠心分離した後
に、リン酸緩衝液（ＰＨ＝７．４）に再分散し、固槃分
濃度をα５重量％に調製した。

抗ｈＰＬウサギ抗体をリン酸緩衝液（ＰＨ＝７．４）で
２０倍に希釈したものを原液とし、倍数希釈法により抗
ｈＰＬウサギ抗体をリン酸緩衝液（ＰＨ＝７．４）で希
釈して抗ｈＰＬ抗体希釈液を調製する。その後、実施例
１と同様の操作で鋭敏性と分散安定性を評価した。その
結果、鋭敏性は７８後Ｘ８０，３ケ月後Ｘ８０であった
。また、分散安定性は７日後及び３ケ月後共に保存中に
全く非特異的凝集が認められなかった。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１で得られた反応性重合体粒子を担体
とした診断用試薬の凝集試験の結果を示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有
   する重合体粒子と、 （Ａ）分子中にメルカプト基を有し、該メルカプト基の
   イオウ原子に結合する水素原子の数の合計が２個である
   含イオウ化合物及び／又は （Ｂ）分子中にメルカプト基とイミノ基を有し、該メル
   カプト基のイオウ原子及び該イミノ基の窒素原子に結合
   する水素原子の数の合計が２個である含イオウ化合物 とを反応させ、次いで得られた重合体粒子と分子中にエ
   ポキシ基を３個以上有するエポキシ化合物とを反応させ
   ることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。
2. （２）グリシジル（メタ）アクリレート単量体単位を有
   する重合体粒子と、 （Ａ）分子中にメルカプト基を有し、該メルカプト基の
   イオウ原子に結合する水素原子の数の合計が３個以上で
   ある含イオウ化合物 （Ｂ）分子中にメルカプト基とイミノ基を有し、該メル
   カプト基のイオウ原子及び該イミノ基の窒素原子に結合
   する水素原子の数の合計が３個以上である含イオウ化合
   物 及び （Ｃ）分子中にメルカプト基とアミノ基とを有する含イ
   オウ化合物から選ばれた少くとも１種の含イオウ化合物
   とを反応させ、次いで得られた重合体粒子と分子中にエ
   ポキシ基を２個以上有するエポキシ化合物とを反応させ
   ることを特徴とする反応性重合体粒子の製造方法。