JPS6192588A - Ａ‐２１９７８ｃ誘導体の改良製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はＡ−２１９７８に誘導体の改良製造法。

更に詳しくは、式： 〔式中、ＲはＣ：２〜Ｃ１４−アルカノイルを表わす〕 で示されるＡ−２１９７８に環式ペプチド抗生物質の誘
導体の改良された製造法に関する。特にこの改良された
製造法は、発酵の間、Ａ−２１９７８Ｃを産生ずる培養
物に６２〜Ｃ１４−アルカン酸を供給することから成る
。この製造法の利点は、（Ｉ）従来の製造法よりその丁
程数か少なく、（２１生成物の収率が高くなり、（３）
必要な処理時間が短かいことにある。

この種のＡ−２１９７８Ｇ抗生物質はすぐれた抗菌剤で
ある。特に重要なＡ−２１９７８Ｇ誘導体は式（ＩＪで
示される誘導体である〔米国特許第４，５３７，７１７
号（発明者：バーナード・ジエイ・アボット（Ｂｅｒｎ
ａｒｄ　Ｊ、　Ａｂｂｏｔｔ　）、ディピトーｚ７．・
フクダ（Ｉ）ａｖｉｄ　Ｓ　、Ｆｕｋｕｄａ　）　　お
よびマニュエル春デボノ（Ｍａｎｕｅｌ　　Ｄｅｂｏｎ
ｏ　）　）参照〕。

従来技術 従来、上記誘導体の製造は多段階の工程を要し、時間が
かかり、収率が低く、かつ高価についた。

本発明はＡ−２１９７８Ｃ誘導体を直接製造するための
改良された製造法を提供するものである。

Ａ−２１９７８Ｃのｎ−デカノイル誘導体のような誘導
体〔１〕を得るための従来の製造法には、次の工程が必
要であった； １、Ａ−２１９７８Ｇを産生ずる培養物の発酵ａ、液体
窒素アンプルで作業開始 す、第１接種材玉程（４８時間） Ｃ２第２接種材工程（２４時間） ｄ、第３接種材工程（２４時間） ｅ１発酵（Ｉ４０時間） ２、−過、樹脂吸着および溶離ならびに濃縮３、ｔ−Ｂ
ｏｃ（ｔ−ブトキシカルボニルで保護した）複合物の製
造 ４、保護された複合物（コンプレックス）の濃縮５、た
とえばアクチノプラネス・ウタヘンシス（Ａｃｔｉｎｏ
ｐｌａｎｅｓ　　ｕｔａｈｅｎｓｉｓ　）を用いる脱ア
シル化培養物の発酵 ａ、　１体窒素アンプルで作業開始 す、第１接種材工程（７２時間） Ｃ０第２接種材工程（４８時間） ｄ０発酵（６７時間） ６、複合物の脱アシル化培養物による脱アシル化７６ρ
過、樹脂吸着および溶離ならびに濃縮８、再アシル化 ９、保護基の加水分解 １０、最終精製 発明の構成と効「長 本発明の新規製造法は、発酵製造工程（前記工程１ｅ）
の間に、Ａ−２１９７８Ｇを産生ずる培養物に０２〜Ｃ
□４アルカン酸（Ｒが前記のような基である化合物：Ｒ
ＯＩＩ）またはそのエステルもしくは塩を加えて、対応
する化合物（Ｉ）を得ることから成る製造法である。こ
の製造法を用いることにより、従来の製造法の工程３．
４．５．６．７．８および９を省略することができる。

加つるに本発明の新規製造法において、その得られる収
量は従来の製造法を用いて得られる収量を上回って実質
的に増大する。

ストレプトミセス・ロセオスボルス（Ｓｔｒｅｐ−ｔｏ
ｍｙｃｅｓ　ｒｏｓｅｏｓｐｏｒｕｓ　）株ＮＲＲＬ１
１３７９（Ａ−２１９７８，６（寄託日：１９７８年８
月２９日））およびＮＲＲＬ１５９９８（Ａ−２１９７
８，６５（寄託日：１９８５年９月５日））、およびＮ
ＲＲＬ１１３７９の突然変異株は、有用な八−２１９７
８Ｇ産生性培養株である。これらの培養株は、イリノイ
州６１６０４ペオリア（Ｐｅｏｒｉａ）在、米国農務省
農学研究部（ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＲｅｓｅａｒｃ
ｈ　５ｅｒｖｉｃｅ　）北部研究センター（Ｎｏｒｔｈ
ｅｒｎ　Ｒｅｇｉｏｎａｌ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｅｎ
ｔｅｒ　）の寄託菌株コレクションの一部を構成し、該
センターから受理番号ＮＲＲＬＩ　１３７９およびＮＲ
ＲＬ１５９９８の下、一般に入手することができる。

ストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬＩＩ３７９
培養物およびＡ−２１９７８Ｃ抗生物質の製造にこの菌
を用いるための条件は、米国特許第４．３３１，５９４
号（発明者：ロバート・エル、ハミル（Ｒｏｂｅｒｔ　
Ｌ、Ｉ（ａｍｉｌｌ　）　　およびマービン・エム、　
ヘーン（Ｍａｒｖｉｎ　Ｍ、　Ｈｏｅｈｎ　）　）に開
示、されており、その記Ｓの一部を本明細中で引用した
。

本発明の製造法で優先的に選ばれる微生物菌株は、Ａ−
２１９７８，６またはＡ−２１９７８，６５と命名され
た菌株であるが、Ａ−２１９７８Ｇを産生ずる培養物で
あればいずれの培養物でも使用することができる。当業
者ならばどの菌株が本発明の目的のために有用であるか
を認識することができる。

米国特許第４，３３１，５９４号明細書に記載の天然に
産生されるＡ−２１９７８Ｃ要素は、要素（生化学的物
質）　Ｃ’ｏ　、　Ｃｔ、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４およびＣ５
である。要素Ｃ０、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４およびＣ５におい
て、式ＣＩＪ中のｋはＣ１ｏ−Ｃ１２−アルカノイル基
に特定される。以前に、唯一個の分枝したＣ１ｏ−アル
カノイル側鎖を有すると考えられていたＡ−２１９７８
Ｇ要素Ｃｏは、約２：１の比から成る２成分の混合物で
あることが見いたされた。その主成分は分校状Ｃ工。−
側鎖ををし、少量の成分は直鎖状Ｃ０゜−側鎖を有する
。

本発明の製造法によって製造する際には、説明の都合上
、化合物（ＩＪをＡ−２１９７８Ｃ要素とも呼称する。

天然に産生される要素を除き、要素を指名するのに側鎖
の長さを用いる。すなわち、本発明方法により製造され
るとき、たとえばＲかオクタノイルである化合物ＣＩ）
はＡ　−２１９７８０８要素と呼ばれる。

本発明の製造法で用いられる６２〜Ｃ１４アルカン酸、
そのエステルまたは塩（基質）のアルキル部分は、直鎖
もしくは分枝鎖であってよい。天然に産生されるＡ−２
１９７８Ｇ要素Ｃ工、Ｃ２またはＣ３を製造するために
は、たとえば８−メチルデカン酸、１０−メチルドデカ
ン酸または１〇−メチルウンデカン酸、そのエステル体
もしくは塩を使用すればよい。この製造法で使用するに
は、Ｃ２〜Ｃ１４直鎖酸、そのエステルおよび塩が、そ
の使い易さおよび低価格の故に推奨される。特に好まし
い基質はｎ−デカン酸、そのエステルまたは塩である。

０２〜Ｃ１４アルカン酸エステルを用いるとき、そのエ
ステル部分は６１〜Ｃ４−アルキルエステあってよい。

本発明の製造法で用いることかできる０２〜Ｃ１４−ア
ルカン酸の適当な代表的な塩は、アルカリ金属（たとえ
ばナトリウム、カリウム、リチウム、セシウム、ルビジ
ウム）またはアルカリ土類金属（たとえばバリウム、カ
ルシウムもしくはマグネシウム）から形成される塩頑を
包含する。適当なアミン塩は、アンモニウム塩、第１、
第２または第３Ｇ１〜Ｃ４−アルキルアンモニウム塩お
よびヒドロキシ−Ｃ２〜Ｃ４−アルキルアンモニウム塩
ヲ包含する。

基質は、好ましくはこれを滅菌溶液の形で発酵液に加え
る。この目的のために特に有用な溶媒はオレイン酸メチ
ルであるか、エタノール、酢酸エチルおよび不飽和脂肪
酸のＣ□〜Ｃ４エステル類を使用しでもよい。もし基質
が発酵温度で適当な液状であるならば、これを直接加え
ることができる。

この基質の添加速度は、発酵に毒作用が現われるのを避
けるのに充分な程、遅くなければならないが、所望の化
合物［ＩＪの収量を増加させるのに充分な程速くなけれ
ばならない。約０．０５〜０．５ｍｌ／Ｉｃ発酵ブロス
）７１時間の添加速度が推奨される。約０．１〜０．２
ｒｎｌ／ｌ（発酵ブロス）７１時間の添加速度が好まし
い。

発酵製造工程の間、発育するＡ−２１９７８Ｇ産生培地
に、約１５〜３２時間で基質の添加を開始し、発酵処理
が終るまで添加を続ける。基質は種々の方法により添加
することができるが、好ましくは一定の流速に最も近づ
くような方法で添加する。

発酵処理に次いで、所望により、生成した化合物（Ｉ１
をこの技術分野で知られた方法（たとえば米国特許第４
，３３１，５９４号参照）により回収することができる
。

本発明はまた、新規な微生物である、前記ストレフトミ
セス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１５９９８を提供するも
のである。この微生物もまたＡ−２１９７８Ｇ抗生物質
を産生ずる。特に本発明は、好気的液中発酵条件下、実
質的濃度のＡ−２１９７８６抗生物質が生産されるまで
新規な菌株、ストレフトミセス・ロセオスポルスＮＲＲ
Ｌ１５９９８を培養することからなるＡ−２１９７８に
抗生物質の新規な製造法を提供するものである。この発
酵培地および菌糸体から、極性有礪溶媒でＡ−２１９７
８Ｃ抗生物質復合物を抽出することができる。またＡ−
２１９７８Ｇの個々の要素を分離し、カラムクロマトグ
ラフィーのような当業者にとって常套の方法により更に
精製することができる。

通常、天然状態から４Ｌ離された培養物（野生型（ｗｉ
ｌｄｔγｐｃ））はその抗生物質の収量が低い。

抗生物質の産生がしばしば不定する。それ故増強された
活力を有する菌株および抗生物質を確実に産生ずる菌株
の価値は大きい。

上記のような観点において、本発明は、同化しうる炭素
源、窒素源および無機塩類を含有する培地中、好気的液
中培養条件下、Ａ−２１９７８Ｃ抗生物質が生産される
までストレプトミセス・ロセオスボルスＮＲＲ１１５９
９Ｂまたはその、Ａ−２１９７８Ｃを産生ずる突然変異
体、変異体（変異株）もしくは組換え体を培養すること
からなる、Ａ−２１９７８Ｇ抗生物質の順序に改良され
た製造法を提供するものである。この技術分野で理解さ
れる種々の分離法および精製法を用い、Ａ−２１９７８
Ｃ抗生物質復合物またはその個々の要素を回収すること
ができる。

本発明の上記部分に関連する微生物はＡ−２１９７８，
６５と命名された。この菌株は、Ａ−２１９７８，６と
命名された培養物（ＮＲＲＬ１１３７９）から、菌株選
択および突然変異により開発されたものである。Ａ−２
１９７８，６菌株は、リリー研究所（Ｌｉ１ｌｙ　Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）のフレデ
リック・ピー、　７−７　（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ　Ｐ。

Ｍｅｒｔｚ）　　およびラルフ・イー・カスナー（Ｒａ
ｌｐｈ　Ｉｉ、　Ｋａｓｔｎｅｒ　）により研究され、
特性化された菌株であって、トルコ国アララット山（Ｎ
ｌｏｕｎｔ　　Ａｒａｒａｊ　）の土壌から単離された
親菌株から順次開発されたものである。Ａ−２１９７８
゜６菌株は、ストレプトミセス・ロセオスポルス・ファ
ルカオ・ド・モリア・アンド・ダリア・マイア１　ｇ　
６１　（ＳｔｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　ｒ０５ｅＯ５ｐｏ
ｒｕｓＦａｌｃａｏｄｅ　Ｍｏｒｉａｓ　ａｎｄ　Ｄａ
ｌｉ’ａ　Ｍａｉａ　ｌ　９５１　）と命名された新規
菌株として分類される。この分類は刊行物〔ブキャナン
（Ｒ，Ｅ、Ｂｕｃｈａｎａｎ　　）およびギボンズ（Ｎ
、Ｅ、　Ｇｉｂｂｏｎｓ　）　：バーゲイズ・マニュア
ル・オフ゛・デタミ不−テイフ゛・バタテリオロジー（
Ｂｅｒｇｃｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　　ｏｆ　Ｄｅｔｅ
ｒｍｉ　−ｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　
）　、　　ザ・ウィリアムズ・アンド・ウイルキンス・
カンパニー（ＴｈｅＷｉｌｌｉａｍｓ　ａｎｄ　Ｗｉｌ
ｋｉｎｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ　）第８版（Ｉ９７４年）な
らびにシャーリング（Ｉ！、、Ｂ。

Ｓｈｉｒｌｉｎｇ　）およびゴツトリーブ（Ｄ、Ｇｏｔ
ｔｉｅｂ　）「コオペレーテイブ・デスクリプジョン・
サブ・タイプ・ストレインズ・サブ・ストレプトミセス
（Ｃｏｏｐｃｒａｔｉｖｃ　Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　
ｏｆ　ＴｙｐｅＳｔｒａｉｎｓ　　ｏｆ　　Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　）　Ｊインターナショナル・ジャーナ
ル・サブ・システマテク・バクテリオロジー（Ｉｎｔｅ
ｒｎ：　　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　５ｙｓｔｅ　−ｍａ
ｔｉｃ　　Ｂａｃｔｃｒｉｏｌ、　）　８０８〜８０９
　（Ｉ９７２年）参照〕と比較した後、行なわれた。

この分類は、ザ・インターナショナル・ストレプトミセ
ス・プロジェクト（ｔｈｅ　　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ−
ｎａＪ　　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　　Ｐｒｏｊｅｃ
ｔ　）として推奨されている方法〔シャーリング（Ｅ、
Ｂ、Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およびゴツトリーブ（Ｄ、Ｇｏ
ｔｔｌｉｅｂ）　　［メ７ツズ・サブ・キャラクタライ
ゼイション・サブ・ストレプトミセス・スペーシイズ（
Ｍｅｔｈｏｄｓｏｆ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＳｐｅｃｉｅｓ　
）　Ｊ　　インタナショナル・ジャーナル・サブ・シス
テマテク・バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅｒｎ、Ｊｏｕｒ
ｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　　Ｂａｃｔｅ−
ｒｉｏｌ、　）　　第１６巻３１３〜３４０（Ｉ９６６
年）〕に話つき、ある補足的な試験結果を考慮して行わ
れた。炭素利用は、最終濃度か１．０％に等しくなる様
、炭素源を加えたＩ　Ｓ　Ｐｇｇｇ礎培地Ｅで測定され
た。炭素源を一過することにより滅菌し；法礎培地を、
オートクレーブで処理することにより滅菌した。３０℃
で１４日間熟成した後、プレートを読んだ。細胞壁糖類
はレッチェバリャ−（Ｌｅｃｈｅｖａｌ　ｉｅｒ　）法
〔米国ニューシャーシー州ニュウブランズビック（Ｎｅ
ｗ　Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ　）在ニューシャーシ州立大学
うトガーズ・ユニバージティー（Ｒｕｔｇｅｒｓ　Ｕｎ
ｉｖｅｒｓｉｔｙ　）　　微生物学研究所（ｔｈｅ　Ｉ
ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　
）で開催されたザ・サブコミティ・オン・アクチノミセ
テス・サブ・ジ・アメリカン・ソサエティ・サブ・ミク
ロバイオロジイ（ｔｈｅ　Ｓｕｂｃｏｒｒｍｉｔｔｅｅ
ｏｎ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａ
ｍｅｒｉｃａｎＳｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌｏｇｙ　）分科会議長トーツス・ジー・プリダＬ　
（Ｔｈｏｍａｓ　Ｇ、Ｐｒｉｄｈａｍ　）博士の発起に
よる研究集会報：エム・ピー・レッチェバリャー（Ｍ、
Ｐ、　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ　）編［ケミカル・メン
ツズ・アズ・クリテリア・フォア・ザ・セパレイジョン
・オフ・アクチノミセテス・インツー・ジエネラ（Ｃｈ
ｅｍｉｃａｌ　〜Ｉｅｔｈｏｄｓ　ａｓＣｒｉｔｅｒｉ
ａ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　　５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　
Ａｃｔｉｎｏ　−ｍｙｃｅｔｅｓ　　１ｎｔｏ　Ｇｅｎ
ｅｒａ　）　Ｊ　参照〕の改良法を用いて測定した。ジ
アミノピメリン酸の異性体は、インツーらの方法〔ピー
・インツー（Ｂ、　Ｂｃｃｋｃｒ）ら著「ラピッド・デ
フアレンジエイジョン・ビトウイーン・ノカルジア・ア
ンド・ストレプトミセス・パイ・ペーパー・クロマトグ
ラフィー・サブ・ホール−セル・ヒドロリセーツ（Ｒａ
ｐｉｄＤｅｆｆｃｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　　Ｂｅｔｗｅ
ｅｎ　　Ｎｏｒｃａｒｄｉａ　　ａｎｄＳｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ　　ｂｙ　　Ｉ’ａｐｅｒ　　Ｃｈｒｏｍａ
ｔｏｇｒａｐｈｙｏｆ　Ｗｈｏｌｅ　Ｃｅ１ｌ　Ｈｙｄ
ｒｏｌｙｓａｔｅｓ　）　　Ｊ　７プライド・ミクロバ
イオロジー（Ａｐｐｌ　１Ｍ１ｃｒｏｂｉｏｌ　、）第
１１巻４２１〜４２３頁（Ｉ９６４年）参照〕を用いて
測定した。アミノ酸分析は洗浄した細胞壁断片を用いて
行った。メラノイド色素はＩＳＰ＃１（トリプトン−酵
母エキス液体培地）　、　ＩＳＰ＃６（ペプトン−酵母
エキス鉄寒天）、ＩｓＰ＃７（チロシン寒天）、改良Ｉ
　Ｓ　Ｐ＄７　（チロシンを含まない１ｓＰｓ７）およ
びチロシン分析〔ユズ／Ｌ／−ミカミ（Ｙｕｚｕｒｕ　
Ｍｉｋａｍｉ　）ら著「モデファイト・アライ・アンド
・ミカミ・メラニン・フオーメイション・テスト・サブ
・ストレプトミセス（Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　Ａｒａｉ　ａ
ｎｄ　Ｍｉｋａｎｉ　ＭｅｌａｎｉｎＦｏｒｍａｔｉｏ
ｎ　Ｔｅ５ｔ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　）　
Ｊインターナショナル・ジャーナル・サブ・システマテ
イク・バクテリオロジ−（Ｉｎｔｅｒｎ、　Ｊｏｕｒｎ
ａｌｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
＋）第２７（３）巻２９０頁（Ｉ９７７年）参照〕を用
いて測定した。殿粉加水分解は、殿粉の存在をヨウ素で
試験することにより測定した。

温度範囲、塩化ナトリウム耐性、ｐＨ範囲および抗生物
質感受性（ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ　５ｅｎｓｉｔｉｖｉ
ｔｙ）は、Ｉ　Ｓ　Ｐ＃２寒天培地を用いて行なった。

ｌｌｉＬ度範囲は２５．２８．３０．３４．３７．４０
．４５．５０および５５℃であった。塩化ナトリウム耐
性は、寒天に塩化ナトリウムがＯｌｌ、２．３．４．５
．６．８．１０および１２％と等しくなるように加える
ことにより測定した。これらを３０℃で熟成した。ｐ　
Ｈ範囲は寒天をｐｉ−１３，Ｑ〜１１．０の範囲で、ｌ
、ＱｐＨ単位の増加毎に添加直前に調節することにより
測定した。抗生物質感受性は、接種した寒天プレート上
に感受性ディスクを敷き詰めて使用し、測定した。

色名は、ｌ５ＣＣ−ＮＢＳ法〔ワシントン（Ｗａｓｈｉ
ｎｇｔｏｎ　Ｄ、　Ｃ０在米国商務省回報（Ｃ１ｒｃ、
）５５３：ケー・エル、ケリー（Ｋ、Ｉ２．Ｋｅｌｌｙ
　）およびディー・ビー・ジャド（Ｄ、　Ｂ、　Ｊｕｄ
ｄ　）編「ジ・ｌ５ＣＣ−ＮＢＳ・メソッズ・サブ・デ
シグネーテイング・カラーズ・アンド・ア・デクショナ
リー・サブ・カラー・ネームズ（ＴｈｅｌＳＣＣ−Ｎ　
Ｂ　Ｓ　　Ｍｅｔｈｏｄｓ　　ｏｆ　Ｄｅｓｉｇｎａｔ
ｉｎｇ　Ｃｏ１ｏｒｓａｎｄ　ａ　Ｉ）ｉｃｔｉｏｎａ
ｒｙ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｒ　Ｎａｍｅｓ　）　Ｊ参照〕に
従って指名した。

丸括弧内のアラビア数字はトレスナーおよびパックスの
カラーシリーズ〔エイチ・ディ・トレスナ−（Ｉ−１，
Ｄ、Ｔｒｅｓｎｅｒ　）　　およびイー・ジエイ・パッ
クス（Ｅ、　Ｊ、Ｂａｃｋｕｓ　）編［システム・サブ
・カラー・ホイールズ・フォア・ストレプトミセス・タ
クソノミイ（Ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｃｏｌｏｒ　Ｗｈｅ
ｅｌｓＦｏｒ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｃｔｅ　Ｔａｘｏ
ｎｏｍｙ　）　Ｊ　アプライド・ミクロバイオロジ−（
Ａｐｐｌ　、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　）第１１巻３３５
〜３３８頁（Ｉ９５６年）参照〕を引用した。色記録（
ｃｏｌｏｒ　ｔａｂ　）の名称はそれに下線を付したウ
メルツおよびポールの色集団（ｃｏｌｏｒ　ｂｌｏｃｋ
ｓ　）　　は角括弧で包んだ〔エイ・メルフ（Ａ、〜１
ａｅｒｚ　）およびエムφアールーボール（Ｍ、　Ｒ０
Ｉ’ａｕｌ　’）編「ディクショナリイ・サブ・カラー
（Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ　ｏｆ　Ｃｏ１ｏｒ　）　Ｊ　
ニューヨーり州ニューヨーク在マクグロウーヒル・ブッ
ク・カンパニイ・インコーホレイテッド（ＭｃＧｒａｗ
−Ｈｉｌｌ　Ｂｏｏｋ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｉｎｃ、　
）　（Ｉ９５Ｑ年）参照〕。

形態 培養物Ａ−２１９７８，６の形態は、レクタスーフレキ
シビリス（Ｒｅｃｔｕｓ−Ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｓ　　（
ＲＦ））分類法による担胞子体から成る。胞子鎖はその
鎖１本当り１０個以上の胞子を有する。胞子の表面は平
滑である。

培養物Ａ−２１９７８，６は気生胞子塊が強い赤色を現
わし、裏面が赤色を帯びた褐色を有することが特徴であ
る。また明褐色の水溶性色素か存在する。これらの特徴
は寒天平板培地１４個のうちの３個（ＩＳＰ＃２、Ｉ　
Ｓ　Ｐ＃７、ＴＰＯ）に現われる。この３個の培地だけ
か豊富な好気的および栄養的発育を支える培地である。

寒天平板培地２種（ＩＳＰ＃４およびクルコース−アス
パラギン寒天）は、気生胞子塊か白色ないし灰色を呈し
、その裏面は黄色を呈する。水溶性色素は観察されない
。この２個の培地は、豊富ではないが良好な好気的およ
び栄養的発育を支持する。

他の寒天平板培ｌｌｔ！！９種を用いたが発育は貧弱な
いし皆無であって胞子形成はなし）。気生菌体の色は白
色ないし灰色の連続的色調を呈する。

メラノイド色素は認められない。細胞壁の主要成分は、
ＬＬ−ＤＡＰ、グリシン、グルコースおよびリボースで
ある。これはＩ型細胞壁およびＣ型糖頌パターン〔アー
ル・イー・ブキャナン（Ｒ。

Ｅ、Ｂｕｃｈａｎａｎ　）およびエヌ・イー・キホンス
（Ｎ、Ｅ、　Ｇｉｂｂｏｎｓ　）編［バーゲイズ・マニ
ュアル・サブ・デクミネーテイブ・バクテリオロジ−（
Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍ
ｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）　Ｊ　　
ザ・’フイリアムス・アント・ウイルキンス・カンパ＝
　−（Ｔｈｅ　Ｗｉ　Ｉ　ｌ　ｉａｍｓ＆　Ｗｉｌｋｉ
ｎｓ　Ｃｏｍｐａｎｙ　）第８版（Ｉ９７４年）６５８
頁参照Ｊを示す。

実験室試験でＡ−２１９７８，６に対して次の５種の培
養物を比較した： ストレプトミセス・アルボビナセオウス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ　ａｌｂｏｖｉｎａｃｅｏｕｓ　）　ｌ５
Ｐ５１３５：ＡＴ’ｃｃ１５８３３ ストレプトミセス・カンジダス（Ｓ、　ｃａｎｄｉｄｕ
ｓ）：　ｌ５Ｐ５１４１　：Ａ’ｌ’にＣ１９８９１ス
トレプトミセス・モデラトス（Ｓｌｍｏｄｅｒａ　−ｔ
ｕｓ　）ＩＳＰ５５２９　：　ＡＴＣＣ２３４４３スト
レプトミセス・ロセオスボルス（Ｓ、ｒｏｓｅ−ｏｓｐ
ｏｒｕｓ）ＩＳＰ５１２２　：　ＡＴＣＣ　２３９５８
ストレプトミセス・セトニイ（Ｓ、５ｅｔｏｎｉｉ　）
ｌｓＰ５３９５　：ＡＴＣＣ２５４９７これらの培養物
は白色および赤色シリーズに属し、ＲＦ型担胞子体形態
と平滑な胞チ表面修飾物を有し、ＩｓＰ記載に従ってメ
ラニン陰性であって、識別し得る裏面色または水溶性色
素はない。

これらの特色は、炭素利用パターンおよび他の二次的特
色と共に、Ａ−２１９７８，６培養物の特色と調和する
。

これらの培養物を実験室条件下にＡ−２１９７８，６と
比較したとき、４種のものは有用性かないものとして捨
てられた。カンジダス（Ｓ、ｃａｎ−ｄｉｄｕｓ　）と
セトニイ（Ｓ、　５ｅｔｏｎｉｉ　）は多くの培地上、
黄色の気生胞子塊を現わし、それ故Ａ−２１９７８，６
培養と異なる。アルボビナセオウス（Ｓ、ａｌｂｏｖｉ
ｎａｃｅｏｕｓ　）　　およびモデラトス（Ｓｌｍｏｄ
ｅｒａｔｕｓ　）　　は裏面が特有の暗色、水溶性色素
を現わし、メラノイド色素を産生じ、これらのすべては
Ａ−２１９７８，６培養物と異なる。モデラ）　ス（Ｓ
ｌｍｏｄｅｒａｔｕｓ　）は、ＩＳＰ記載によると、赤
色を帯びた褐色または強い褐色の裏面色に関連するが、
７　ＪＬ／ボビナセオウス（Ｓ、ａｌｂｏｖｉｎａｃｅ
　−ｏｕｓ　）はそのような特性に関連がない。メラニ
ン陽性として記録される培養物はない。

それ故Ａ−２１９７８゜６培養物は、ストレプトミセス
・ロセオスボルス・ファルカオ・ド・モリア・アンド・
ダリア・マイア１９６１の菌株として分類される。この
分類は公表された記載および実験室的直接比較に基礎を
置くものである。以下に示す培養物の特性は直接比較研
究を要約したものである。

覇　か　・ｐ 炭素利用 Ｌ−アラビノース　　　　　＋　　　　　　　　　＋Ｄ
−フルクトース　　　　　十　　　　　　　　　　−Ｄ
−ガデクトース　　　　　＋　　　　　　　　　　＋Ｄ
−グルコース　　　　　　＋　　　　　　　　　＋ｌ−
イノシトール　　　　− Ｄ−マンニトール　　　　十　　　　　　　　−Ｄ−ラ
フィノース　　　　− Ｌ−ラムノース　　　　　千　　　　　　　　　十サル
シン　　　　　　＋　　　　　　　　＋シュクロース　
　　　　− Ｄ−キシロース　　　　　　＋　　　　　　　　　＋注
、＋：利用陽性 ｍ：利用陰性 ｉ　　ヤ　　コ　　・ト　　モ　　ベ　　１ト　　くＡ
−２１９７８，６菌株のある種の特性は、ロセオスポル
ス（Ｓ、ｒｏｓｅｏｓｐｏｒｕｓ　）のそれとして公表
されている特性と異なる。Ａ−２１９７８，６の培養物
は胞子の大きさ、ニンジンまたはポテト詰め物における
発育、塩化ナトリウム耐性および硝酸塩還元の点で公表
された菌株と異なる。

本発明のＡ−２１９７８，６５菌株は、Ａ−２１９７８
，６菌株と同一の特性を有するか、産生ずるＡ−２１９
７８０抗生物質の量でＡ−２１９７８，６菌株と異なる
。以前の菌株は、最も良くてもせいぜい発酵培地−当り
ｔ　ｏ　ｏ　ｍｃｇ以下のＡ−２１９７８Ｇ抗生物質を
産生ずるに過ぎなかった。

本発明の改良されたＡ−２１９７８，６５菌株はタンク
発酵における上記用の少なくとも２．５倍、振盪フラス
コ発酵における上記機のちょうど１８倍の量を生産する
。このようにＡ−２１９７８Ｃの生産を高める特性を有
するので、新しい菌株はこの抗生物質を得るための非常
に改良された方法を提供するものである。

他の微生物の場合と同様に、新規Ａ−２１９７８Ｃ産生
培谷物（Ｓｔｒｃｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｒｏｓｅｏｓｐｏ
ｒｕｓＮＲｋＬ１５９９８）の特性は変異する。ＮＲＲ
Ｌ１５９９８菌株の唾会蝉組換え体、変異体および突然
変異体は、紫外線、Ｘ線、高周波、放射線および化学薬
品のような種々の公知変異源による処理で得ることがで
きる。ストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１５
９９８の自然にまたは誘導的に得られた変異体、突然変
異体および唾恰蝉組換え体は高い収量のＡ−２１９７８
に産生特性を保持し、かかる変異株はすべて本発明で使
用することができる。

ストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１５９９８
培養物を発育させるために用いる培地は、多くの培地の
いずれであってもよい。しかし生産経済、最適収率およ
び生成物単離のしやすさのため、ある種の培地が好まし
い。たとえば大規模発酵における好ましい炭素源はタピ
オカデキストリンで、Ｆ＋ルが、グルコース、フルクト
ース、ガラクトース、マルトース、マンノース、綿実油
、オレイン酸メチル、グリセロール、精製大豆油なども
使用することができる。好ましい窒素源は酵素加水分解
カゼインであるが、司溶性肉ペプトン、大豆粉、大豆氷
解物、大豆粗粉、酵母、アミノ酸（たとえば、Ｌ−アス
パラギン、ＤＬ−ロイシン）なども有用である。培地に
配合することかできる栄養無機塩類は、カリウムまたは
アンモニウムイオン、クロリドイオン、硫酸または硝酸
イオンなどを生成することができる可溶性塩類である。

これらのうち硫酸カリウムが抗生物・ａ生産のため特に
有用である。また糖密灰（ｍｏｌａｓｓｅｓ　ａｓｈ　
）　、灰分透析生成物（ａｓｈ　ｄｉａｌｙｓａｔｅ　
）および合成−鉱物性混合物も有用である。

Ａ−２１９７８Ｇ抗生物質の生産のため、発酵培地中に
蒸留水または脱イオン水を使用するのが好ましい。水道
水中のたとえばカルシウムおよび炭酸塩のような幾らか
の鉱物質は抗生物・貢産生を減退させるように思われる
。

しかしまた微生物の増殖および発育に必要な本質的微量
元素をも培地中に含めるべきである。かかる微量元素は
通常、培地中の他の成分の中に不純物として、微生物の
発育要求に応するに充分な量、存在している。

もし発泡か問題となるならば、ポリプロピレングリコー
ルのような消泡剤を少量（たとえば０．２ｒｄ／ｌ）、
大規模発酵培地に加えることも必要かもしれない。

実ＩＣ量のＡ−２１９７８Ｇ抗生物質を生産するために
はタンク内液中好気的発酵が好ましい。しかしながら、
少量のＡ−２１９７８Ｇ抗生物質は、振盪フラスコ培養
によって得ることができる。大タンク内での抗生物質の
製造においては、胞子型微生物を接種することに通常付
随する時間遅延を避けるため、栄養的接種材料を使用す
るのが好ましい。小容量の培地に微生物の胞子型または
菌糸体片を接種して微生物の新鮮な活力ある発育培地を
得ることにより、栄養的接種材料を製造する。

この栄養的接種材料を大タンクに移す。

Ａ　−２’４９７８　Ｇを産生ずる新規微生物は２０〜
４０℃で発育させることができる。Ａ−２１９７８Ｇの
最適な生産は約３０〜３２℃で得られる。

好気的液中培養法で通常行なわれるように、滅菌空気を
培地に通して分散させる。Ａ−２１９７８０抗生物質の
有効な生産のため、タンク内生産における空気飽和９６
は２０％以上、好ましくは３０゛％以上（３０℃、１気
圧の場合）とすべきである。

タンク発酵のため、発酵培地のｐＨ水準を約６゜５〜７
．０の範囲に維持するのが好ましい。これはたとえば水
酸化す）　ＩＪウム（前段階）および塩酸（後段階）の
適当量を添加することにより行なうことができる。

発酵の間、抗生物質に感受性を有することで知られた微
生物に対する培地試料または菌糸体固体の抽出液試料の
抗生物質活性を試験することにより、Ａ−２１９７８Ｇ
抗生物質の生産を追跡することができる。かかる抗生物
質活性を試験するのに有用な供試微生物は、ミクロコッ
クス・ルテウス（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　　Ｉｕｔｅ
ｕｓ　）である。寒天平板上、ペーパーディスク分析法
で生物試験を行なうのが好ましい。

またはＡ−２１９７８０抗生物質源としてこれを抽出も
しくは分離することなく（シかし好ましくは水を除いた
後）、培地成分および菌糸体を含む培養固体を使用する
ことかできる。たとえばＡ−２１９７８Ｇ抗生物質活性
が生産されてから、培養物を凍結して乾燥し、食物また
は飼料プレミックスと直接混合することができる。

化合物［Ｉ）はすくれた抗菌剤である。

次に実施例をあけて、本発明の処理方法を更に完全に説
明する。実施例は本発明の技術的範囲に制限を加えるも
のではない。

実施例Ｉ Ａ−２１９７８Ｇ複合物の製造 保管培養物を製造し、液体窒素中に保持する。

前に液体窒素中に保管しておいたストレプトミセス・ロ
セオスボルスＮＲＲＬ１５９９８を、次の組成の栄養培
地５０ｒｎｌに接種するために使用する： 成分　　　　　　量（％） トリブチカーゼ人豆培地“　　　　　　３．０デキスト
リン　　　　　　　　　　　　　　２゜５水（脱イオン
水）　　　　　　　　　　９４．５＊印：メリーランド
州カッキースピル（にｏｃｋ−ｅｙｓｖｉｌｌｅ在ボル
チモア生物学研究所（Ｂａｌ　ｔ　ｉｍｏｒｅＢｉｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）。

接種した培地を２５０４エルレンマイヤーフラスコ中、
２インチの弧を描き、２５０　ｒｐｍ　　の速度で回転
する振盪機上において、３０℃で４８時間熟成する。熟
成を終った栄養培地を多数の容器（０，５ｍ／／１容器
）中に分散させて入れ、液体窒素の気相中に保管する。

保管した物質をより大量に、均一な状態で供給するため
、液体窒素中に保管した培養物１−を用いて上記同様の
栄養培地８０−に接種する。接種した栄養培地を２５０
−エルシンマイヤーフラスコ中、２インチの弧を描き、
２５０　ｒｐｍ　　の速度で回転する振盪機上、３０℃
で４８時間で熟成する。

上記のような培養物１０ｒｎｌを用いて前記第１の栄養
培地と同様の組成を有する第２段階の栄養発育培地４５
０−に接種する。この第２段階の培地を、２１エルレン
マイヤーフラスコ中、２インチの弧を描き、２５０　ｒ
ｐｍ　　の速度で回転する振盪機上、３０℃で２４時間
熟成する。

上記第２段階の栄養培地１１を用い、次の組成を有する
第３の接種材料の滅菌発育培地３９１に接種する： 大豆粉　　　　　　　　　　　　　　０．５酵母エキス
ａ０．５ グルコン酸カルシウム　　　　　　　１．０塩化カリウ
ムｂ０．０２ 硫酸マグネシウム・上水化物　　　　０．０２硫酸第一
鉄・上水化物ｂＯ，ＯＯ０４ サグ（Ｓａｇ　）　４７１　（消泡剤）ｃＯ，０３水　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９７．９２
９６注、ａＨミシガン州デトロイト在ディフコ研究所（
Ｄｉｆｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ　）。

ｂ：微計金属は次のように製造する。Ｆ　ｅ　Ｓ　Ｏ、
ｉ−７Ｈ２０（７−６ｇ　）を濃塩酸７６ｒｎｌに溶解
する。

これにＭ　ｇ　Ｓ　０４・７　Ｈ２０（３，８０ｇ　）
、ＫＣ／　（３ｓｏｇ）　　および脱イオン水を加えて
全容量３８００−にする。第３の接種材料発育段階の培
地３９／当り電液８０−を用いて上記の徴用物質を製す
る。

Ｃ：コネチカット州ダンバリイ在ユニオン・カーバイド
（Ｕｎｉｏｎ　　Ｃａｒｂｉｄｅ　）。

接種した培地をステンレススチール容器中、３０℃で２
４時間熟成する。容器中に滅菌空気を０．８５　ｖ　／
　ｖ　／　ｍの速度で通気し、通常の攪拌機を用い３５
０〜４５０　ｒｐｍで攪拌する。容器内の圧力は５ＰＳ
ＩＧに保持する。

熟成を終った第３段階の接種材料１／を用い、次の組成
を有する滅菌生産培地１１９１に接種する。

成分　　　　　量（％） 大豆粉　　　　　　　　　　　　　　　２．２Ｆｅ（Ｎ
Ｈ４）２Ｓｏ４．６Ｈ２００，０６６デキストロース　
　　　　　　　　　　　０．８２５サグ４７１　　　　
　　　　　　　　０，０２２ポテトデキストリン　　　
　　　　　　３．３糖密（廃糖蜜）　　　　　　　　　
　　０．２７５水道水　　　　　　　　　　　　　　９
３．３１２最初の２成分を加えた後、ｐＨ７に調節し、
再びすべての成分を加えた直後に滅菌する。

接種した生産培地を、ステンレススチール容器中、滅菌
空気をＱ、５ｖ／ｖ／ｍの速度で通気しながら３０℃で
６日間熟成する。通常の攪拌機を用いてこの培地を２５
Ｏｒｐｍで０〜１５時間、１５時間抜３５０ｒｐｍで攪
拌する。水酸化アンモニウム溶液を加えることによりｐ
Ｈ６，５以上に保持する。発酵終期におけるＡ−２１９
７８Ｃ複合物の収量は、培養液１１当り０．２８２ｇで
ある。複合物の各要素の分布を表１に示す。

実施例２ Ａ−２１９７８Ｃ８の増強生産 実施例１と同様に第１．２および３発育段階の処理を行
なう。

生産段階の処理を実施例１と同様に開始する。

ただし５０％ｖ　／　ｖカプリル酸（オクタン酸）を含
む滅菌溶液を用い２８時間で処理を開始し、発酵液にオ
レイン酸メチルを０．１３ｍ１／ｌ！（発酵培地）７１
時間の速度で添加し、この速度で発酵終期まで１４４時
間維持する。Ａ−２１９７８Ｃ：複合物の収量は１．２
５５　ｇ／ｌ　（培養液）、実施例１の場合の収量を越
えて４４５％の増収であった。

この方法で製せられたＡ−２１９７８Ｃ複合物全量のう
ち、要素Ａ−２１９７８ＣＢ　　（Ｒがオクタノイルで
ある化合物〔工〕）は９％であった。これに対して実施
例１の方法で製せられたＡ−２１９７８Ｃ複合物中、Ａ
−２１９７８Ｃｇは検出されなかった。

実施例３ Ａ−２１９７８Ｃ９の増強生産 実施例１と同様に第１１２および３の接種材料発育段階
の処理を行なう。生産段階の処理を実施例１と同様に開
始する。ただし２５％ｖ　／　ｖノナン酸を含む滅菌溶
液を用い、２８時間で処理を開始し、発酵液に７５％オ
レイン酸メチルを０．１３．１／／Ｉｃ発酵培地）７１
時間の速度で添加し、この速度で発酵終期まで１４４時
間維持する。Ａ−２１９７８Ｃ複合物の我社はｏ、ｓ　
２１　ｇ／ｚ　（培養液）、実施例１の場合の収量を越
えて２９３％の増収であった。この方法で製せられたＡ
−２１９７８Ｃ複合物全所゛のうち、要素Ａ−２１９７
８Ｃ９（Ｒが７ナメイルである化合物〔工〕）は１０％
であった。これに対して実施例１の方法で製せられたＡ
−２１９７８Ｃ複合物中、Ａ−２１９７８６９は検出さ
れなかった。

実施例４ Ａ−２１９７８Ｃ１ｏ　要素（ｋがｎ−デカノイルであ
る化合物〔Ｉ〕）の増強生産 実施例１と同様に第１および２段階の栄養発育培地を培
養する。第３段階において、第２段階の接種材料培養物
８００−を用い、次の組成を有する第３段階の滅菌接種
材料発育培地９５０１に接種する： 成分　　　　　　量（％） デキストロース　　　　　　　　　　　２．０炭酸カル
シウム　　　　　　　　　　０．２大豆粉　　　　　　
　　　　　　　　２．０酵母エキス　　　　　　　　　
　　　０．１塩化カリウムａ０．０２ 硫酸マグネシウム・上水化物ａ０．０２硫酸鉄・上水化
物ａ　　　　　　　　Ｏ，０００４サグ４７１（消泡剤
）　　　　　　　０．０２水　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　９５．６３９６注、ａ＝実施例１と同
様に処理して微量物置の溶液を製する。

接種した培地をステンレススチール容器中、３０℃で２
４時間熟成する。この容器内に滅菌空気を、０．８Ｖ／
Ｖ／ｍの速度で通気し、通常の攪拌機で攪拌する。この
第３段階の接種材料を用いて実施例１記載のような組成
を有する生産段階の培地１１９１に接種する。また生産
段階の処理を実施例１と同様に開始する。ただし５０％
ｖ　／　ｖカプリン酸（デカン酸）を含む滅菌溶液を用
い２８時間で処理を開始し、発酵液に５０％オレイン酸
メチルをｏ、２６ｍｔ／ｌ（発酵培地）７１時間の速度
で添加し、この速度で発酵終期まで２８３時間維持する
。Ａ−２１９７８Ｃ複合物の収量は１．９４ｇ／ｌ　（
発酵液）、実施例１の場合の収量を越えて６８７９６の
増収であった。Ａ　　２１９７８Ｃ１゜要Ａ　（Ｒがｎ
−デカノイルである化合物〔■〕）の濃度は１．６３ｇ
／ｌ、またはＡ−２１９７８Ｃ複合物全朧の８４％であ
った。これは実施例１の処理により製せられたＡ−２１
９７８Ｃ１゜の量より１３５８３％大であった。

実施例５ Ａ　　２１９７８Ｃ１ｏの増強生産の別法実施例１と同
様に第１．２および３の接種材料発育段階の処理を行な
う。生産段階の処理を実施例１と同様に開始する。ただ
し２５％ｖ　／　ｖカプリン酸エチルエステルを含む滅
菌溶液を用いて２８時間で処理を開始し、発酵液に７５
９６オレイン酸メチルを０．１３ｍ／／／（発泡培地）
７１時間の速度で添加し、この速度で発酵終期まで１４
４時間維持する。Ａ−２１９７８Ｃ復合物の収量は１．
０２２ｇ／／、実施例１の場合の収量を越えて３６２％
の増収であった。要素Ａ−２１９７８Ｃ１０の濃度はｏ
、２０２ｇ／ｌ！またはＡ−２１９７８Ｃ複合物全量の
２０％であった。これは実施例１の処理により製せられ
たＡ−２１９７８Ｃ□。の濃度より１６８３％大であっ
た。

実施例６ Ａ−２１９７８Ｃ１０の増強生産の別法実施例１と同様
に第１および２段階の栄養発育培地を培養する。次いで
実施例４と同様に第３段階の接種材料を培養する。ただ
し培地容量を１９００１とし、この段階の処理時間を４
８時間に拡げる。通気速度をＱ、３ｖ／ｖ／ｍで０〜２
４時間、ｏ、４ｓｖ／ｖ／ｍで２４〜４０時間および０
．９０ｖ／ｖ／ｍで４０〜４８時間とする。生産段階の
処理を実施例１と同様に開始する。２３時間後、０．０
０４％酵母エキスの滅菌スラリーを発酵液に一度に添加
する。３６時間からグリセロールとデカン酸アンモニウ
ムの溶液を０．８４ｍ１／ｌ（発酵液）７１時間の速度
で供給する。供給する溶液はグリセロール３６００　ｇ
、脱イオン水９０００ｎ／、カプリン酸１０００−およ
び濃水酸化アンモニウム溶液６２０ｍ／を含有するもの
である。この速度で発酵か１４３時間で終るまで供給を
続ける。Ａ−２１９７８Ｃ複合物の収量はＬ７７２ｇ／
ｌであって、実施例１で得られた収量を越えて６２８％
の増収である。要素Ａ−２１９７８Ｃ工。の濃度を測定
した結果、０．７３９９／１１またはＡ−２１９７８Ｃ
複合物全量の４２％であった。これは実施例１の方法で
製せられたときのＡ−２１９７８Ｃ０゜の濃度より６１
５８％大であった。

実施例７ Ａ−２１９７８Ｃ□、の増強生産 実施例１と同様に第１．２および３段階の接種材料の処
理を行なう。次いで生産段階の処理を実施例１と同様に
開始する、たたし２５％ｖ　／　ｖウンデカン酸を含む
滅菌溶液を用い、２８時間で処理を開始し、発酵液に７
５％オレイン酸メチルを０．１３ｍ１／／（発酵培地）
７１時間の速度で１４４時間の発酵終期まで添加する。

Ａ−２１９７８Ｃ複合物の収量は１．６２！／ｌであっ
て、実施例１で得られた収量を越えて５７４％の増収で
ある。

要素Ａ−２１９７８Ｇ’１１（Ｒがウンデカノイルであ
る化合物〔工〕）の濃度を測定した結果、０．７０ｇ／
１．またはＡ−２１９７８Ｃ複合物全量の４３％である
。これに対して実施例１の方法で製せられたＡ−２１９
７８Ｇ複合物中には、要素Ａ−２１９７８Ｃ１１は検出
されなかった。

実施例８ Ａ−２１９７８Ｃ５の増強生産 実施例１と同様に第１．２および３段階の接種を行なう
。生産段階の処理を実施例１と同様に開始する。ただし
２５％ｖ　／　ｖラウリン酸を含む滅菌溶液を用い２８
時間で処理を開始し、発酵培地に７５％オレイン酸メチ
ルを０．１３ｍ１／ｌ（発酵培地）７１時間の速度で１
４４時間の発酵終期まで添加する。Ａ−２１９７８Ｃ複
合物の収量は１゜ｉ　２　ｇ７ｉであって、実施例１で
得られた収量を越えて４００％の増収である。Ａ−２１
９７８Ｃ５（Ｒがドデカノイルである化合物〔■〕）の
濃度を測定した結果、０．３７２７／ｊ、Ａ−２１９７
８Ｃ褒合物全川の３３％であった。これは実施例１の方
法で製せられたＡ−２１９７８Ｇ複合物中に見いだされ
たＡ−２１９７８Ｃ５の濃度より５３１４％大であった
。

表１の注 ａニー過した培養液中の抗生物質の成分濃度は高性能液
体クロマトグラフィーにより評価した。

種々の成分は紫外線吸収分析により検出した。

ｂ：ｃ　　　ＣＣＣおよびＣ５は天然に０・　　１・　
　２・　　３ 産生された各Ａ−２１９７８Ｇ要素。Ｃ８、Ｃ９、Ｃ１
ｏ　およびＣ１１は、それぞれＫがＣ８、Ｃ９、Ｃおよ
びＣ１□　アシル基である化合物（Ｉｌ。

Ｃ：自然要素Ｃ８ ｄ、Ｒが実質的にｎ−デカノイルであることが見いたさ
れた。

実施例９ Ａ−２１９７８Ｃ複合物製造の別法 ストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１１３７９
培養物を使用し、実施例１と同様に処理してＡ−２１９
７８Ｃ複合物を得た。

実施例１０ Ａ　−２１９７８Ｃ１０の増強生産のための別法ストレ
プトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬＩ１３７９培養物
を使用し、実施例６と同様に処理してＡ−２１９７８Ｃ
１ｏ　を得た。

実施例１１ Ａ−２１９７８Ｃ複合物の振全フラスコ生産振盪フラス
コ条件下、下記発酵培地を用い実施例１の一般的方法で
処理するニ ゲルコース　　　　　　　　　　　　　　　７，５デキ
ストリンａ　　　　　　　　　　　３゜酵素加水分解カ
ゼイン５５ ペプトンｃ５ 糖蜜　　　　　　　　　　　　　　　　２．５脱イオン
水　　　　　　　　（全ｉ１１となる量）注、ａ：スタ
デツクス（５ｔａｄｅｘ）　　１１　（イリノイ州ジケ
イタ（Ｄｅｃａｔｕｒ　）在エイ・イー・スタンレイ・
カンパニー（Ａ、　Ｅ、　５ｃａｌｅｙ　Ｃｏ、）　）
。

ｂ：ＮＺアミンＡにュージャージー州リントバースト（
Ｌｙｎｄｈｕｒｓｔ　）在フムコ・シエフィールＩ’　
・）ｒ　ミｈ　７Ｌ／　（Ｉｌｕｍｋｏ　５ｈｅｆｆｉ
ｅｌｄ　Ｃｈｅｍｉｃａ＋　））。

Ｃ：バイオセー）　（Ｂｉｏｓａｔｅ　）（メリーラン
ド州カッキースピル在ボルチモア生物学研究所）。

この発酵から得られたＡ−２１ｇ７ｓＣｆｆ１合物の収
量は１８００ｍＣｇ／ｒｎｌ　（培養液）であった。

特許出願人　　イーライ・リリー・アンド・カンノぐニ
ー

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔 I 〕 〔式中、ＲはＣ＿２〜Ｃ＿１＿４−アルカノイルを表わ
   す〕 で示されるＡ−２１９７８Ｃ誘導体〔 I 〕を製造する
   に当り、Ａ−２１９７８Ｃを産生する培養物に、対応す
   るＣ＿２〜Ｃ＿１＿４−アルカン酸、そのエステルまた
   は塩を供給することを特徴とする前記Ａ−２１９７８Ｃ
   誘導体〔 I 〕の製造法。 ２、Ｃ＿２〜Ｃ＿１＿４−アルカン酸を使用する特許請
   求の範囲第１項記載の製造法。 ３、Ｃ＿２〜Ｃ＿１＿４−アルカン酸のＣ＿１〜Ｃ＿４
   −アルキルエステルを使用する特許請求の範囲第１項記
   載の製造法。 ４、Ｃ＿２〜Ｃ＿１＿４−アルカン酸の塩を使用する特
   許請求の範囲第１項記載の製造法。 ５、カプリン酸、そのエステルまたは塩を使用する特許
   請求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の製造法。 ６、使用するＣ＿２〜Ｃ＿１＿４−アルカン酸がカプリ
   ル酸、ノナン酸、ウンデカン酸、ラウリン酸またはこれ
   らのエステルもしくは塩である特許請求の範囲第１項記
   載の製造法。 ７、Ａ−２１９７８Ｃを産生する培養物がストレプトミ
   セス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１１３７９またはその突
   然変異体、変異体もしくは組換え体を包含する特許請求
   の範囲第１〜６項のいずれかに記載の製造法。 ８、培養物がストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲ
   Ｌ１５９９８またはＡ−２１９７８Ｃを産生する突然変
   異体、変異体もしくは組換え体を包含する特許請求の範
   囲第７項記載の製造法。 ９、同化しうる炭素源、窒素源および無機塩類を含有す
   る培地中、好気的液中発酵条件下、Ａ−２１９７８Ｃ抗
   生物質が生産されるまでストレプトミセス・ロセオスポ
   ルスＮＲＲＬ１５９９８またはＡ−２１９７８Ｃ産生性
   の突然変異体、変異体もしくは組換え体を培養し、所望
   により産生されたＡ−２１９７８Ｃ複合物を分離し、更
   に所望により、この複合物から個々のＡ−２１９７８Ｃ
   要素を分離することを特徴とする抗生物質Ａ−２１９７
   ８Ｃ複合物またはその個々の要素の製造法。 １０、培地からＡ−２１９７８Ｃ複合物を分離する追加
   工程を包含する第９項記載の抗生物質Ａ−２１９７８Ｃ
   複合物の製造法。 １１、Ａ−２１９７８Ｃ抗生物質複合物から個々の抗生
   物質要素を分離する追加的工程を包含する第９または１
   ０項記載の、個々の抗生物質Ａ−２１９７８Ｃ要素Ｃ＿
   ０、Ｃ＿１、Ｃ＿２、Ｃ＿３、Ｃ＿４もしくはＣ＿５の
   製造法。 １２、ストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１５
   ９９８、その突然変異体、変異体または組換え体の生物
   学的に純粋な培養物。 １３、ストレプトミセス・ロセオスポルスＮＲＲＬ１５
   ９９８。 １４、第１〜８項のいずれかに記載の製造法により生産
   されたＡ−２１９７８Ｃ誘導体〔 I 〕。 １５、第９〜１１項のいずれかに記載の製造法により生
   産されたＡ−２１９７８Ｃ複合物または個々のＡ−２１
   ９７８抗生物質要素。