CS276983B6 - Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors - Google Patents
Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors Download PDFInfo
- Publication number
- CS276983B6 CS276983B6 CS868192A CS819286A CS276983B6 CS 276983 B6 CS276983 B6 CS 276983B6 CS 868192 A CS868192 A CS 868192A CS 819286 A CS819286 A CS 819286A CS 276983 B6 CS276983 B6 CS 276983B6
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- those
- antibiotic
- culture
- complex
- medium
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Treating Waste Gases (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká způsobu výroby antibiotika A-21978C ve formě komplexu nebo jeho faktorů a mikroorganismu produkujícího antibiotikum.
Dosavadní stav techniky
Skupina antibiotik A-21978C jsou výborná antibakteriální činidla a lze je vyjádřit obecným vzorcem I
i í?
\/
HC'2
&
(I)
H
Přirozeně se vyskytující A-21978C faktory popsané v US patentu č. 4 331 594 jsou faktory CQ, Clz C2, C3, C4 a Cg. U faktorů Clz C2, C3, C4 a C5 je R ve vzorci I specifická alkanoylová skupina o 10 až 12 atomech uhlíku. A-21978C faktor CQ, dříve považovaný za sloučeninu, která má jediný větvený alkanoylový postranní řetězec o 10 atomech uhlíku, byl rozpoznán jako směs dvou složek v poměru přibližně 2:1. Větší složka má větvený postranní řetězec o 10 atomech uhlíku, menší složka přímý postranní řetězec o 10 atomech uhlíku.
Všeobecně kultury izolované v přirozeném stavu (divoký typ) produkují antibiotikum s nízkými výtěžky. Často je antibiotická produkce chybná. Kmeny mající zvýšenou schopnost a kmeny, které trvale produkují antibiotikum, jsou proto velmi hodnotné. Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je způsob výroby komplexu antibiotika A-21978C ve formě komplexu nebo jeho faktorů pěstováním mikroorganismu v živném prostředí, obsahujícím využitelné zdroje uhlíku, dusíku a anorganických solí v submersní kultuře za aerobních podmínek, přičemž se v živném prostředí pěstuje Streptomyces roseosporus NRRL 15998 nebo jeho mutanta, varianta nebo rekombinanta, produkující uvedené antibiotikum při teplotě 20 až 40 °C a pH 6,5 až 7,0, načež se popřípadě komplex antibiotika A-21978C oddělí a popřípadě se z komplexu izolují jeho jednotlivé faktory.
Streptomyces roseosporus kmen NRRL 15998 (A-21978.65), který rovněž tvoří podstatu vynálezu, je užitečným A-21978C produkující kulturou. Tato kultura je součástí sbírky zásobních kultur Severního regionálního výzkumného centra (Northern Regional Research Center, U.S. Department of Agricultura) Zemědělská výzkumná služba (Agricultural Research Service), Peoria, Illinois 61604, ve které je přístupna veřejnosti pod přírůstkovým číslem NRRL 15998.
Mikroorganismus byl označen A 21978.65. Tento kmen byl vyvinut kmenovou selekcí a mutací z kultury označené A-21978.6 (NRRL 11379). Kmen A-21978.6, který byl studován Frederikem P. Mertzem a Ralphem E. Kastnerem z Lilly Research Laboratoires, byl vyvinut z rodičovského kmene z hory Arrarat v Turecku. Kmen A-21978.6 byl klasifikován jako nový kmen Streptomyces roseosporus, Falcao de Morias a Dalia Maia 1971. Tato klasifikace byla učiněna po srovnání s publikovanými popisy (R.E. Buchanan a N.E. Gibbons, Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, The Williams and Wilkins Company, 8. vydání 1974; a E.B. Shirling a D. Gottlieb, Cooperative Descriptions of Type Strains of Streptomyces, Intern. Journal of Systematic Bacteriology, 808-809, 1972).
Kultura Streptomyces roseorsporus NRRL 11379 a podmínky pro její použití při výrobě A-21978C antibiotik je popsána Robertem L. Hamillem a Marvinem M. Hoehnem v U.S. patentu č. 4 331 594 zahrnutém zde jako odkaz.
Klasifikace byla založena na metodách doporučených pro Mezinárodní Streptomycetový projekt (Ε. B. Shirling a D. Gottlieb
Λ
CS 276983 Β6
Methods of Characterisation of Streptomyces Species, Intern. Journal of Systematic Bacteriology 16, 313 - 340, 1966) současně s některými doplňkovými testy.
Využití uhlíku bylo stanoveno na ISP 9 basálním mediu, ke kterému uhlíkové zdroje byly přidány, aby vytvořily konečnou koncentraci, 1,0 %. Uhlíkové zdroje byly sterilizovány filtrací, basální medium bylo sterilizováno v autoklávu. Plotny byly odčítány po 14 dnech inkubace při teplotě 30 °C. Cukry buněčných stěn byly stanoveny s použitím modifikace metody podle Lechevaliera (M.P. Lechevalier, Chemical Methods as Criteria for the Separation of Actinomycetes into Genera pracovní setkání uspořádané pod patronací Podvýrobu aktinomycet Americké mikrobiologické společnosti Dr. Thomas O. Pridham, Convenor, konané na Institute of Microbiology, Rutgers University, The State University of New Jersey, New Brunswick, New Jersey, 1971. (Isomer diaminopimelové kyseliny byl stanoven s použitím metody Beckera a spol. - B. Becker et al., Rapid Differentiation Between Norcadia and Streptomvces by Paper Chromatography of Whole Cell Hydrolysates, Appl. Microbiol. 11, 421 - 423, 1964). Analýza aminokyselin byla provedena s promytými fragmenty buněčných stěn. Melanoidní pigmenty byly určeny s použitím ISP 1 (Trypronový kvasinkový kultivační bujón ISP 6) peptonový kvasinkový železitý agar), ISP 7 (tyrosinový agar), ISP 7 modifikovaný (ISP 7 bez tyrosinu) a tyrosinovou zkouškou (Yuzuru Mikami a další, Modified Arai and Mikani Melanin Formation Test of Streptomyces, Intern. Journal of Systematic Bacteriology, 27 (3). 290, 1977). Hydrolýza škrobu byla stanovena testováním přítomnosti škrobu jodem.
Teplotní rozsah tolerance chloridu sodného, rozsah pH a antibiotická citlivost byly provedeny s použitím ISP 2 agarového média. Rozsah teplot byl 25, 28, 30, 34, 37, 40, 45, 50 a 55 °C. Tolerance chloridu sodného byla měřena přidáním k agaru v podílu: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 a 12%. Vzorky byly inkubovány při 30 °C. Rozsah pH byl měřen úpravou agaru od pH 3.0 až 11,0 při přírůstcích o 1,0 pH jednotku, právě před nasypáním. Antibiotická citlivost byla určena s použitím kotoučů uložených na naočkované agarové plotny.
Jména barev byla určena podle ISCC-NBS metody (K. L. Kelly a D. B. Judd, The ISCC-NBS Methods of Designationg Colors and a Dictionary of Color Names, U.S. Department of Commerce Circ. 553, Washington, D. C., 1955).
Číslice v závorkách odkazují na Tresnerovy a Backusovy barevné serie (H. D. Tresner and E. J. Backus, System of Color Wheals for Streptomyces Taxonomy. Appl. Microbiol. 11. 335 - 338, 1956). Barevná typová označení jsou podtržena. Maerzovy a Paulovy barevné bloky jsou obsaženy v závorkách (A. Maerz a M.
R. Paul, Dictonary of Color, McGraw-Hill Book Company, lne., New York, Ν. Y., 1950).
Morfologie
Morfologie kultury A-21978.6 je tvořena sporoforami, jež jsou Recturs-Flexibilis (RF) klasifikace. Řetězce spor mají více než 10 spor na řetězec. Povrch spor je hladký.
Kultura A-21978.6 je charakterizována, a to vytvářením převážně červené vzdušné sporové masy s červenavěhnědou zadní stranou. Světle hnědý ve vodě rozpustný pigment je rovněž přítomen. Tyto charakteristiky jsou vykazovány na třech ze 14 agarových růstových prostředcích ISP 2, ISP 7, TPO. Tato tři prostředí jsou jediná, jež podporují abudantní vzdušný a vegetativní růst.
Dvě agarová růstová prostředí, ISP 4 a glukosoasparaginový agar, vytvářejí bílé až šedé vzdušné sporové hmoty se žlutou zadní stranou. Žádný ve vodě rozpustný pigment nebyl pozorován. Tato dvě media podporovala dobrý, ale ne abudantní vzdušný a vegetativní růst.
Devět dalších agarových růstových prostředí bylo užito, ale ty poskytovaly chudý až žádný růst a spolupráci. Barva vzdušného mycelia byla-li přítomna, byla v bílé až šedé sérii.
Melanoidní pigmenty jsou nepřítomny. Hlavními složkami buněčné stěny jsou: LL-DAP, glycin, glukóza a ribóza. To značí typ I buněčné stěny a typ C cukrového obrazu (R. E. Buchanan and Ν. E. Gibbons, Eds. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology The Williams Willkins Company, 8th edition, 1974, str. 658).
Následujících pět kultur bylo porovnáno v laboratorních testech s A-21978.6:
Streptomyces albovinaceous ISP 5136, ATCC 15833
Streptomyces cendidus ISP 5141, ATCC 19891
Streptomyces moderatus ISP 5529, ATCC 23443
Streptomyces roseosporus ISP 5122, ATTC 23958
Streptomyces setonii ISP 5395, ATCC 25497
Tyto kultury patří k bílé a červené barevným sériím, mají RF typ sporofořové morfologie, hladkou povrchovou ornamentaci spor a podle ISP popisů jsou melamin negativní a nemají zvláštní barvu zadní strany nebo ve vodě rozpustné pigmenty. Tyto vlastnosti, spolu s utilisací uhlíku a ostatními druhotnými znaky odpovídají kultuře A-21978.6.
Když tyto kultury byly srovnány s A-21978.6 za laboratorních podmínek, čtyři byly zavrhnuty. S. candidus a S. setonii vykazovaly žluté vzdušné sporové masy na mnohých médiích, čímž se odlišovaly od kultury A-21978.6. S. Albovinaceous a S. moderatus vykazovaly tmavou odlišitelnou barvu zadní strany, ve vodě rozpustné pigmenty a produkovaly melanoidní pigmenty, které všechny byly odlišné od kultury A-21978.6. ISP popis S. moderatus vykazuje červenavě hnědou nebo silně hnědou barvu zadní strany, ale nevykazuje takové jaké jsou charakteristické pro S. albovinaceous. Žádná z kultur není uvedena jako melaminpositivní.
Kultura A-21978.6 byla proto klasifikována jako kmen Streptomyces roseosporus, Falcao de Morias a Dalia Maia 1961. Tato klasifikace je založena na srovnání s publikovanými popisy a přímým laboratorními srovnáními. Následující vlastnosti kultur sumarizují přímé srovnávací studie.
Vlastnosti kultur
Morfolofie
A21978.6
S. roseosporus
Sporophory přímé až zahnuté (RF), bez pozorovaných háčků, kliček nebo spirál. Řetězec spor > 10. Povrch spor hladký, jak bylo stanoveno běžnou elektronovou mikroskopií.
Spory: podlouhlé až oválné
Průměr: 0,85 x 1,78 μΜ
Rozsah: 0,65 - 0,97 x x 0,97 - 2,6 μΜ podlouhlé až cylindrické 1,01 X 2,47 μΜ
0,97 - 1,3 x x 1,63 - 3,25 μΜ 'tti
Ό >0)
| 'Cti | 43 | ||
| Ό | 1 | ||
| ><D | ><D | ||
| 3 | > | ||
| 43 | C | ||
| '(ti | 0 | '(ti | >K |
| 3 | +J | 3 | 3 |
| 3 , | (ti | ||
| '(ti | r—1 | '(ti | Ll |
| >N | >N | >N | 0 |
Vlastnosti kultur (pokračování) cn
Li
O a
cn o
Φ cn o
Li cn cn °3
Li n
>
(ti >
Li cti n
LO
co rσ i—I
CN
4->
cn •3
Li
N >
| 44 | •P | |
| 3 | 3 | |
| ω | a) | |
| g | g | |
| ui | u | |
| •H | H | |
| Cl | CL | |
| '>( | ||
| 3 | 3 | |
| 44 | +J | |
| cn | '>1 | cn |
| 3 | 3 | 3 |
| CL | >0 | CL |
| N | (ti | N |
| 0 | 3 | 0 |
| Li | N | Li |
| '>1 | '>1 | '>1 | '>1 | H | '>1 | ||
| 3 | Li | 3 | 3 | 44 | 3 | ||
| Ό | 43 | Ό | cn | Ό | |||
| xti | 0 | '(ti | 3 | '(ti | O | '(ti | |
| >N | Ό | >N | Li | >N | >N | ||
| 0 | |||||||
| Ή | '(ti | 43 | '(ti | ||||
| > | > | g | > | ||||
| 44 | 0 | (ti | 0 | ||||
| Li | >N | Li | >N | ||||
| g | •3 | 43 | »3 | ||||
| D | Li | ||||||
| N | N | ||||||
| 0) | 0 | <u | U | ||||
| >L| | —- | 'Cti | >Li | '(ti | |||
| '(ti | Ό | '(ti | Ό | ||||
| Ό | >CD | Ό | ><D | ||||
| CD | 3 | CD | 3 | ||||
| >cn | >cn |
'>i >cn
Ό
N >
'>!
Li
O
Ό
| g | '>1 | ||||
| U | 3 | ||||
| •rl | 44 | ||||
| CL | cn | ||||
| 3 | |||||
| '>1 | CL | ||||
| 3 | N | ||||
| 44 | 0 | ||||
| cn | Li | ||||
| 3 | |||||
| CL | '> | ||||
| Ή | N | Ή | |||
| 3 | 0 | 3 | >CD | ||
| 44 | Li | 44 | 3 | 44 | |
| 3 | 3 | 43 | 3 | ||
| (ti | '>1 | (ti | 0 | CD | |
| Ό | 3 | Ό | > | g | |
| 3 | Ό | 3 | (ti | U | |
| 43 | '(ti | 43 | g | •H | |
| (ti | >N | '>1 | (0 | 44 | CL |
| Li | |||||
| ·· | 43 | ·· | |||
| Ή | 0 | Ή | |||
| 3 | Ό | 3 | |||
| > | > |
| •H | ·· | •H |
| 44 | '>1 | 44 |
| (0 | 3 | (ti |
| 44 | >cn | 44 |
| CD | 3 | CD |
| U | Ό | U |
| CD | N | CD |
| > | > | > |
(0 >
X rd
X
| >φ Ό | vd | >Φ X Φ | 'td 4-> β | '<d X >Φ | ||
| νΰ | φ | β | ι—1 | ι—1 | e | β |
| I—1 | ι—1 | Φ | X | >Ν | 4-) | X |
| 'rl | X | ι—1 | 0 | r—i | ||
| X | Φ | tn | > | >Φ | ||
| r—ι | Ν | ο | 0 | > | ||
| td | 04 | 0 | η | >Ν | Γ** | 0 |
| 00 | 4-) | β | X | > | ||
| Ο | β | #**»> | td | 04 | •rl | |
| £ | β±4 | ι—1 | Ρί | H | i-l | 1—1 |
| >Ν | 0 | 0 |
ϋ •rl β
tn <d >
X
N
Vlastnosti kultur (pokračování) tn β
O
O tn
O
Φ tn
O •
tn
X tn n
N >
<d >
(d
X
Ό <d
X tn co r· cn
X <
X tn °β
Ν >
X
X <d n
X
X
Φ <d
Φ β
O
X
CL
X tn <d
O1 '>1 β
X tn β
CL
N
O <d o
X β
tn <tí >
X
N '>Ί β
X tn β
CL
Ν
Ο
CU tn
H
X β
| '>( | '>1 | '>1 | φ |
| X | X | β | S |
| β | β | X | tn |
| X | X | νΰ | •rl |
| 0 | υ | >Ν | CL |
| >Φ X | Mti | |
| xd | Φ | β |
| 1—I | r-Ί | Φ |
| Ή | XI | ι—Ι |
| XI | Φ Ν | |
| td| | ΓΊ—ř | 0 |
| X | ||
| ο | β | |
| 5 | πΗ | r-1 |
| J-1 | >Ν |
X
X td
4-1
X
Φ tn td tn cl tn
H '>1
Ό
| Μ | >Φ | |||
| β | β | β | ||
| 4-> | X | X | X | |
| β | β | Φ | β | |
| td | id | ι—1 | φ | |
| X | X | X | ε | |
| β | β | >Φ | β) | |
| XI | X | > | -Η | |
| (d | td | tn | CL | |
| 'td | ||||
| • | xd | X | ||
| >4 | > | • | >Φ | |
| β> | 0 | 4-) | β | |
| >N | r~4 | X | ||
| χ| | °β | 0 | ||
| ο| ID | M 0 | β φ | ||
| 4-) | rH | > | ||
| β | Q | 14 | ||
| Pí | ι—1 | in | φ | |
| >N | u_i | >0 |
| '>1 | Μ | '>1 X >Φ | |||||
| '>1 | β | β | β | ||||
| β | X | X | X | X | |||
| >υ | tn | β | β | Φ | |||
| td | '>1 | β | φ | Ή | td | X | |
| β | 14 | β | CL | ε | β | X | X |
| Ν | X | X | Ν | tn | X | β | >φ |
| 0 | 'td | 0 | •Η | β | X | > | |
| -ρΗ | X | >Ν | 14 | CL | td | td | tn |
| X | X | ||||||
| tn | ·· | β | ·· | ||||
| 0 | Ή | X | 'rl | ||||
| X | β | td | β | ||||
| > | > | ||||||
| ·· | •rl | ·· | •rl | ||||
| '>Ί | X | '>1 | X | ||||
| β | <d | β | <d | ||||
| >tn | X | >tn | X | ||||
| β | φ | β | Φ | ||||
| X | β> | X | tn | ||||
| Ν | φ | Ν | φ | ||||
| > | > | > | > |
rozpustný pigment
Φ >
μ
Φ x
| «Φ Ό Φ >ιη | «φ χ β χ >Ν >Φ > | |||
| >Φ ϊ> Φ β | >Φ Ό ' Φ | «φ χ β ι—I | ||
| «Φ | φ | rH | >Ν | Φ |
| χ | rH | X | Ό | |
| χ | φ | >Φ | Φ | |
| X | Ν | CN | > | >ιη |
| Φ| | >Φ | 0 ΓΌ | 0 »Ν | Πη* |
| Ό | β | τ—1 | ||
| Φ | Φ | r*H | ||
| ι—1 <**» X ·μ | Μ | μ 0 | jrH> |
Vlastnosti kultur (pokračování) tn β
μ o
CL tn o
φ in o
μ cn x
V) «β μ
Ν >
β
Ο β
Ο ε
β ο
c ιη
Φ >
ο ιη μ
φ tr
| '>ϊ | |||
| '>1 β >ο φ β Ν | β X ιη X Ν 0 μ | χ | |
| '>1 | •μ | '>1 | β φ |
| Ό | X | β | ε |
| β | ιη | τι | &> |
| X | 0 | «φ | •Η |
| Ο | Ό | >Ν | X |
φ >
μ
Φ
X fa ω
Η
| X Μ | >φ τι | «φ |
| X | φ | > |
| Φ| | rH X | 0 >Ν |
| »β μ | ||
| 0 | ||
| ο | χ |
I“) ο
W •μ ε
Ο •μ β
Φ
CP μ
ο β
φ φ
ε φ
χ ο
μ >ιη φ
ιη μ
Φ
CP >1 μ
χ ο
τ) «μ β
X β
φ
τ) β
X
Φ '>1 β
X ιη β
X
Ν
Ο μ
'>1 β
Ό «Φ >Ν
X β
φ ε
&>
Ή
X «φ >Ν fa
W
Η
X >φ 'μ Ό
X Φ χ
XI X is m ·—' ο «φ β
φ
X φ
Ν
Ο
X
ΙΟ σ
γ—Ι
CN
X ιη «β μ
Ν >
χ β
| '>1 β >0 Φ | '>1 Ό >φ | φ ε ϋ1 Ή X '>1 | Ν 0 μ '>! τι >φ | χ β φ ε &> •μ | |||
| '>1 | β | β | β | β | X | ||
| β | Ν | X | X | X | |||
| >ο | φ | ιη | φ | '>1 | |||
| φ | μ | χ | β | '>1 | χ | β | |
| β | X | X | X | μ | X | X | |
| Ν | ιη | >φ | Ν | χ | >φ | ιη | |
| 0 | > | 0 | 0 | > | β | ||
| •μ | Ό | ιη | μ | >1 | Ό | ιη | X |
| X | μ | ||||||
| ιη | ·· | χ | ·« | ||||
| 0 | X | 0 | Μ | ||||
| τΙ | β | τι | β | ||||
| > | > | ||||||
| • · | μ | ·· | Ή | ||||
| X | '>1 | X | |||||
| β | Φ | β | φ | ||||
| >ιη | X | >ιη | X | ||||
| β | φ | β | φ | ||||
| Ό | εη | Ό | tn | ||||
| Ν | φ | Ν | φ | ||||
| > | > | > | > |
,9
| xd | '2 | |||
| 4-) | 1 | |||
| 2 | 3 | >Φ | ||
| 1—1 | Γ—1 | 2 | ||
| >N | >N | Λ | ||
| 0 | ||||
| >0) | • | 4J | ||
| xd | > | X | 2 | |
| i—1 | 2 | P | r—1 | |
| Ή | 2 | 2 | >N | |
| XI | CD | Λ | > | |
| ΛΙ | >cn | 0 Lf) | 0 >N | 77? |
| 1 cm’ | °2 | w | ||
| «»·» | u | Li | rH | |
| !5 | o | X | 0 | T-1 |
| -P | β—-B |
Vlastnosti kultur (pokračování) tn
Li
P ω
Φ cn o
Li cn
P cn
Li n
>
>
Li
Λ
MO co rcn r4
CM
4J cn «2
Li
N >
Li (0
P 'X >
O rl
P (4
P cn (U
I r—I o
Li (D
O >1 r4
O
SX
P cn
P
N
O
Li
| 'X | |||
| 2 | SX | ||
| >U | 2 | ||
| 2 | ><D | ||
| 2 | 2 | ||
| N | XS | 4-) | |
| Φ | 2 | ||
| •rl | SX | I“1 | Φ |
| P | Li | P | g |
| cn | X) | >Φ | P |
| 0 | 0 | > | rl |
| 2 | 2 | cn | P |
X cn
H
| 1 | xd r4 'rl | 1 | |
| 2 | XI | 2 | |
| 2 2 | Φ r-1 | r—l >N | xd |
| Λ | >φ | • | > |
| m | > | X | 0 |
| rH | 0 | P | >N |
| _ | rH fú | 7^ | «2 Li |
| •H | X | 0 | |
| m | +4 |
Li
P
SX >
o •rl cn o
Li
X cn
H
| 'r| | Ή | ||
| 2 | 2 | ||
| 4J | 4-) | ||
| 2 | 2 | ||
| 2 | 2 | ||
| 2 | 2 | ||
| 2 | 2 | ||
| X) | XI | ||
| 2 1 | 2 | '2 | |
| 2 | 2 | ||
| i—1 | • | >Φ | |
| >04 | 2 | 2 | |
| xd | 0 | X! | |
| XI | > | ε | 0 |
| 0 CD | 0 >N | 77 | 2 Φ |
| »2 | r-4 | > | |
| Li | XI | Li | |
| X | 0 | [ | Φ |
| 4-) | <—> | >0 |
'X +J cn
P rozpustný světlehnědý rozpustný
| N 0 | 'rl | SX 2 | |||||
| SX | 54 | 2 | >Φ | ||||
| 2 | 4-> | -P | 2 | 44 | |||
| >O | SX | 2 | 2 | x: | 2 | ||
| 2 | SX | > | Φ | 'rl | 2 | 0 | Φ |
| 2 | Li | 0 | ε | 2. | 2 | > | ε |
| N | XI | >N | P | P | 2 | 2 | P |
| 0 | »2 | rl | 2 | X2 | ε | •H | |
| •rl | 2 | 54 | P | 2 | 2 | 4-> | P |
| •P | 2 | ||||||
| cn | ·· | 2 | ·· | ||||
| 0 | Ή | X3 | Ή | ||||
| 2 | 2 | 2 | 2 | ||||
| > | > | ||||||
| ·· | •H | ·· | •rl | ||||
| SX | 4-1 | SX | | > | ||||
| 2 | 2 | 2 | 2 | ||||
| >cn | -P | >cn | -P | ||||
| 2 | Φ | 2 | Φ | ||||
| 2 | P | 2 | P | ||||
| N | Φ | N | Φ | ||||
| > | > | > | > |
i
| r—1 | ||||
| >N | ||||
| 0 | >φ | |||
| Ό | > | |||
| Φ | 3 | Ytí | ||
| >tn | Ό | rp | ||
| '3 | Φ | Ή | ||
| X | > | >cn | XI | |
| 0 m | oz | '3 | 3| | |
| •3 | Q | -P | ||
| P | rH | 3 | ||
| Pí | 0 | CZÍí | i—1 | £ |
| —' | P | » .wJ | >N | - |
Vlastnosti kultur (pokračování) tn
P
O a
tn o
φ tn
O
P •
w
4->
tn »3
P
N >
>
P
X
P tn '>
β >
O
J4 •P •r-l n
o ε
>
»3
4-1
4J
Φ β
β
Φ m
Ή β
4->
β
Ό
X to co
Γ σι r-4 (Ν
4-1 β
Φ ε
&>
•H a
'>1 β
+j tn a
N o
P >1
Ό
Ή >φ β Φ ι—I
Ό -Ρ >Φ
X >
tn ι
ι—I >Ν ^3 Ό >φ >φ Ό β Φ X r-Ι ο X! -Ρ
Ρ
ΙΤ '> -Ρ 3 β Φ X 'β > Ο β >0 φ I—I X 3 1-3 '>)
Ό
X
Ο
-Ρ β
Φ '>!
Ό
X
| '>1 | 0 | |
| β •ΰ | ·· | |
| '3 | Ή | |
| >N | β | |
| ** | > •Η | |
| +J | ||
| P | β | 3 |
| tn | >tn | 4J |
| •3 | 3 | Φ |
| P | Ό | 13 |
| N | Ν | Φ |
| > | > | > |
•Η '>1 β
•Ρ tn
Ν
Ο
Ρ '>ι β
Ό '3 >Ν '>Ί β
Ό *3 >Ν '>1 β
>tn
Ό
Ν >
vegetativní: dosti značný [7L12] mod. chudý bleděžlutozelená světlehnědý rozpustný červenohnědý bleděžlutozelený rozpustný pigment pigment
| 1 £ r—i >N | Xtí 4-4 £ i—1 >N | |
| >1 | « | |
| Cn | >1 | |
| '(tí | Cn | |
| Λ | > | |
| 0 m | 0 >N | T? |
| ’£ | tH | |
| £ | fH | |
| X | 0 | i—1 |
| 4-4 | Uaí |
Vlastnosti kultur (pokračování) tn £
£
O a
tn
O
Φ tn o
£ cn +j tn °£ £
N >
>
£ (tí
Λ
0)
Λί
O
+)
N
O £
ε >
o
O£
N
U
CQ £
£
CP
Cl
| '>1 | '>1 |
| £ | £ |
| Ό | |
| xtí | xtí |
| >N | >N |
| Xtí | xtí rd '£ |
| nH | Λ |
| M -Q | >Φ |
| <tí| | > (tí |
| £ •H | |
| CL | |
| >tn |
£ (tí
Cn ttí >
·£ fl
O tn £
Φ ε
w
Ή £
4-) £
(tí
Ό £
Λ ttí
4-1 £
Φ ε
Cn •r4
CL '>1 £
4J tn £
CL
N
O £
ID co [ σ 1—i <N c
Ό £ £ Ό
X3 xtí '>1 O >N Ό £ ·· '>1
Ό £
abudantní fL3L6j abudantní žádný rozpustný pigment světlehnědý rozpustný pigment
| r£ | Ή | ,£ | M | |
| U | £ | ϋ | £ | |
| > | > | |||
| ·· | -H | ·· | -£ | |
| '>1 | 4-) | '>1 | 4-) | |
| 4-) | £ | (0 | £ | (tí |
| tn | >tn | -Ρ | >tn | 4-1 |
| °£ | £ | Φ | £ | Φ |
| £ | Ό | tP | Ό | Cn |
| N | N | Φ | N | Φ |
i tí
| xtí | r—l >N ><U | Mtí | |
| 1—1 | CD | 1—1 | |
| Ή | '(tí | 'r-l | |
| Λ | Λ | tí | Λ |
| Λ | T? | O | ΛΙ |
| PQ CN | CD N | ||
| & | l±| | O | 5 |
| -tí | —' |
Vlastnosti kultur'(pokračování) «3 tí tí a
O
CD
O
Li *
cn
-P »2 tí
N >
(tí >
tí (tí
Λ
-μ tí cd •r) a
tí
| tí | 4-> | ||||
| (tí | 03 | tí | |||
| tr | tí | tí | (tí | ||
| (tí | >U | ft | tr | ||
| (tí | N | ctí | |||
| tí | O | ||||
| > | N | tí | '> | ||
| 0 | > | ||||
| tí | •tí | '>1 | '>1 | O | |
| •tí | 4-> | tí | tí | tí | |
| tr | 03 | Λ | Ό | •H | |
| (tí | O | O | '(tí | υ | |
| tí | Ό | Π | >N | ||
| (tí | rtí | ||||
| P | tr | ||||
| 03 | 1 | ||||
| (tí | r-l | ||||
| 1 | xtí | O | |||
| O | r-l | • | tí | ||
| 03 | 'tí | >1 | CD | ||
| O | Λ | tr | 0 | ||
| Λ! tí | Λ | <7? | '(tí | >1 r-l | |
| r—1 | PQ | 4-1 | 0 | ||
| 0 | CN | tí | |||
| !S | r“l, | rtí | |||
| I—1 | >N |
M tí
-P tí (tí t
tí
Λ (0
+) c
CD to rσ>
i—I CN •r!
a 'ttí tí •p tí
P
N
O tí
P •tí tí
N >
| '>1 | '>1 tí Λ 0 t | 'ítí tí '(tí >N | '>1 |
| tí X3 | ·· | tí | |
| 0 | Ή | 43 | |
| T3 | C | t) | |
| ·· | > •rl | ·· | |
| 'řtí | 4-1 | '>1 | |
| tí | (tí | tí | |
| >03 | tí | >03 | |
| tí | CD | tí | |
| n | tr | n | |
| N | CD | N | |
| > | > | > |
vegetativní: abudantní [8L12J tma- abudantní [10G3J světlevá gy. hnědá žlutá hnědý rozpustný pigment světlehnědý rozpustný pigment
| '(ti | '(ti Φ >co O |
| ι—1 | •P |
| Ή | G |
| £) | rp |
| ΛΙ | >N >Φ |
| ti Φ | |
| § | ι—1 |
| Λ |
Vlastnosti kultur (pokračování) co
G
Li &
co
Φ to o
Li cn
G
Φ £
•rl
Ch
-P co •G
P
N >
» '>1 G •P
| '>1 | CO | |
| G | G | |
| >0 | Ch | |
| (ti | N | |
| G | 0 | |
| N | P | |
| rrl | '>1 | '>1 |
| 4-1 | P | G |
| CO | Λ | t |
| 0 | 0 | '(ti |
| t | ts | >N |
G
O
G
O £
G
O
G co
Φ >
O (ti •P (ti >0 •n (ti
Li
N (ti >
P (ti
Λ
| CT | 1 | |
| (ti | lu | |
| '> | >N | '(ti |
| G | t | |
| > | >Φ | >Φ |
| •rd | t | G |
| XSl | 1 >Φ | rG |
| 1 H | 0 | |
| 1 Λ | -P |
Φ (ti rd
P o
Ll
CL co
Ll (ti <1 •
co rσ t—i CN p
co •G
Ll
N dušný: abudantní (R) 5cb gy. abudantní (R) 5cb gy žlutožlutorůžová růžová getativní: abudantní ^8L12j dk. gy. abudantní (*12L7j žlutohnědá hnědá hnědý rozpustný pigment hnědý rozpustný pigment •P
G Φ £
Í7>
•rl
Ch '>1
G •P CO G Ch N O Ll '>1 '>1 t G
G 't η 'Φ '>1 O >N
G
Ό ·· '(ti Ή >N G >
·· -rl '>i -P G (ti >co -P G Φ t tn
N Φ N Φ
Utilizace uhlíku
| Substrát | A21978.6 | S.roseosporus |
| L-arabinosa | + | + |
| D-fruktosa | + | - |
| D-galaktosa | + | + |
| D-glukosa | + | + |
| i-Inositol | - | - |
| D-Mannitol | + | - |
| D-rafinosa | - | - |
| L-rhamnosa | + ' | + |
| Salicin | + | + |
| Sacharosa | - | - |
| D-xylosa | + | + |
| Klíč: | ||
| + = | positivní utilizace | |
| - = | negativní utilizace |
A21978.6 S.roseosporus (0
| 03 | U | ||
| >1 Η 0 | γΗ | 0 ΙΓ) | |
| Η | γ—1 | χτ | dP |
| Ό >1 + | 1 | 1 | + 40 |
| Λ '(ti 44 Λ Φ rH | m | ιη 04 |
u
| (ti | γΗ | ο | |
| 03 >1 | γΉ | dP | |
| + --4 + 0 | 1 | 1 1 | 1 Ο ι—Ι |
| Η Ό >1 44 χΰ 44 ,β 4) Γ—1 | ιη | ιη 04 |
o
H β
«5 >
OJ +1 β
+J
X
Φ g
O
444 β
X
4) g
O β
O
4->
>1
4-1
4)
N
4) 'Ú >N —
g ω
β o
Φ β
β •Η
O
Η >1 ~ 44
Ο β ν iji ο (ti 43
Ο 'Φ '4) β
>4)
Ό
4)
4-1 β
| +1 | β | Ή | θ' | 44 | Η | >0 | |||||||
| 4) | Ό | Μ | υ | > | >03 | 44 | 44 | β | Μ | ||||
| 03 | g | Φ | Ό | ι“4 | 0 | Pj | β | (β | 03 | 43 | Ν | •β | |
| Οϊ | >Η | Φ | β | β | ω | Ο | ι-4 | Ό | Ο | Φ | 44 | ||
| 0 | •Η | +) | >Η | 03 | •Η | Η | 44 | Φ | 0 | Η | g | Xti | |
| Oj | 44 | 44 | (ΰ | 03 | Ν | >Ν | 44 | Ν | Ο | ||||
| β | 03 | 03 | > | Ο | β | >03 | Ο | 44 | |||||
| Μ | 0 | 0 | 44 | 0 | • | xti. | Ή | β | Ή | Η | •Η | ||
| +1 | β | 0 | Ο | >1 | Ό | > | β | β | Ν | β | |||
| Ό | Oj | Oj | Ν | 44 | Ο | Ο | >Φ | Ή | 03 | Φ | Μ | ||
| 03 | Ή | •—· | g | β | β | β | >1 | g | β | Φ | |||
| 0 | •Η | Γ—1 | Φ | Γ—| | Ν | +1 | Φ | ||||||
| (ΰ | β | r-t | LD | r~ | Γ | ω | 43 | 0 | Ο | Ο | 44 | ||
| (0 | 0 | Oj | 0 | Μ | Η | ι—Ι | β | ||||||
| -—Ι | ι—1 | Λ | Pj | Pj | Pj | 0 | (ΰ | 03 | Ό | Oj | Ό | ||
| 4) | U3 | ω | ω | ω | >1 | 44 | »β | >1 | a | Φ | Φ | ||
| > | 2 | Η | Η | Η | Η | E-t | Ν | Pj | W | Oj | 44 | Η |
NaCl-tolerance: růst až do ω
Li
CL ω
Φ ω
Li cn co rσ
CN
Citlivost na antibiotika
| • | •4ti > 0 •d | '(ti > 0 | '(ti > 0 | ||||
| '(ti | '(ti | CQ | 3 | ||||
| > | > | > | 0 | •d | •H | ||
| 0 | 0 | 0 | '(ti | 'Cti | 44 | i—1 | 44 |
| t | g | > | > | >1 | 44 | CL | |
| •rl | cti | •d | 0 | 0 | rd | >1 | Φ |
| rd | 44 | CQ | 3 | Ό | u | 0 | CL |
| 0 | 44 | 0 | Φ | •d | 0 | (ti | 0 |
| Ll | (ti | 44 | >1 | 44 | 3 | Ll | 44 |
| r—1 | >1 | ι—1 | CL | •d | 44 | >1 | |
| (ti | 1 | rd | 0 | Φ | g | Φ | rd |
| g | u | CL | CL | (ti | 44 | tJi |
X cn w
Q
Φ
O (ti
Li
-P
Φ
Φ
O
X
3
| Ό | Ό | ||||||
| u | u | U | Φ | Φ | U | u | tn |
| 3^_ | •r-i | o | 3- | 3_ | |||
| in | o | CN | o | O | o | o | o |
| rd | CO | O rd | o m | rd | Cd | cd |
| g | 3 | ||
| 3 | d | 3 | |
| 44 | υ | •r| | CQ |
| •d | 43 | •d | |
| 44 | g | 44 | υ |
| 0 | 0 | 0 | >1 |
| •d | d | rd | g |
| 43 | 43 | (ti | 0 |
| •d | 44 | 43 | u |
| 44 | >1 | CL | cn |
| 3 . | d | Φ | d |
| H | U |
| 03 3 | •d u >1 | 3 •d r-l | 3 •d | |
| 3 | •d | g | 44 | 0 |
| d | 0 | >1 | >d | |
| 44 | >i | 44 | υ | g |
| (ti | g | CL | (ti | 0 |
| 44 | Φ | d | u | |
| cn | rd | d | 44 | cn |
| řď | 0 | 44 | Φ | (ti |
| s | X | cn | Ed | > |
Φ υ
•H •H •d >1 '0
N (žádné zóny inhibice)
M 'd CJ
4-1 > 3 •d Φ
-P 44 •d CQ
CQ -d
CQ
Φ Φ
CQ Ll
II II + I
Jisté vlastnosti kmene A-21978.6 se liší od vlastností publikovaných pro S. roseosporus! Kultura A-21978.6 se odlišuje od publikovaných kmenů velikosti spor, vzrůstem na bramboru a mrkvi, NaCl tolerancí a v redukci nitrátů.
A-21978.65 kmen podle tohoto vynálezu má identifikační vlastnosti kmene kmene A-21978.6, ale liší se od něj v množství produkovaného antibiotika A-21978.6. Předchozí kmen při nejlepším produkoval ne více než 100 μg antibiotika A-21978C na ml fermentačního media. Zlepšený A-21978.65 kmen podle tohoto vynálezu produkuje nejméně 2,5 x větší množství při fermentaoi v tancích a produkoval více než 18 při fermentací v třepacích lahvích. S touto zvýšenou A-21978C produkující vlastností nový kmen poskytuje značně zlepšenou metodu k získání těchto antibiotik.
Tak jako je to běžné i u ostatních organismů, vlastnosti nové A-21978C produkující kultury podle tohoto vynálezu, Streptomyces roseosporu NRRL 15998 podléhají změnám. Rekombinanty, varianty a mutanty kmene NRRL 15998 mohou být získány různými mutageny jako ultrafialovými paprsky, X-paprsky, Vysokofrekvenčními vlnami, radioaktivním zářením a chemikáliemi. Přirozené a indukované varianty, mutanty a rekombinanty Streptomyces roseosporus NRRL 15998, které si podržují vlastnost produkce antibiotik A-21978C ve vysokém výtěžku, mohou být rovněž použity při provádění způsobu podle vynálezu.
Živné prostředí, užité ke vzrůstu Streptomyces roseosporus NRRL 15998 kultury, může být kterékoliv z řady médií. Pro ekonomii ve výrobě, optimální výtěžek a snadnost isolace produktu jsou však jistá kultivační média preferována. Tak například preferovaným zdrojem uhlíku při fermentaoi ve velkém měřítku je tapiokový (západoindické ságo), dextrin, ačkoliv glukosa, fruktosa, galaktosa, maltosa, mannosa, olej z bavlněných semen, methyloleát, glycerol, čištěný sojový olej a podobně mohou být užity rovněž. Preferovaným zdrojem dusíku je enzymaticky hydrolysovaný kasein, ačkoliv rozpustný masový pepton, sojová mouka, sojový hydrolysát, sojová krupice, kvasinky, aminokyseliny jako L-asparagin a DL-leucin a podobné jsou rovněž užitečné. Živné anorganické sole, jež mohou být zahrnuty do kultivačního média, jsou rozpustné sole poskytující draslík, amoniumchlorid, sulfát, nitrát a podobné ionty. Mezi nimi K2SO4 je zejména užitný pro produkci antibiotika. Melasový popel, popelový dialysát a syntetická minerální směs jsou rovněž užitečné.
K výrobě antibiotika A-21978C je výhodné používat destilovanou nebo deionisovanou vodu do fermentačního media. Některé minerály ve vodě z vodovodu, jako je například kalcium a uhličitany, znesnadňují výrobu antibiotika.
Základní stopové prvky jsou také nezbytné pro růst a vývoj organismu a musí být zavzaty do kultivačního media. Takové stopové prvky obecně se objevují jako nečistoty v ostatních složkách média v množství dostatečném splnit růstové požadavky organismu.
Přidání malého množství (např. 0,2 ml/litr) protipěnového činidla, jakým je propylenglykol, k fermentačnímu médiu ve velkém může být nezbytné, když pěnění začne vytvářet těžkosti.
K výrobě velkých množství antibiotika A-21978C je s výhodou používáno submersní aerobní fermentace v tancích. Malá množství antibiotik A-21978C mohou být získána z kultur v třepacích lahvích. Pro časové zpoždění v produkci antibiotika běžně spojeného s inokulaci velkých tanků sporovou formou organismu je lepší použít vegetativní inokulum. Vegetativní inokulum se připraví inokulaci malého objemu kultivačního media sporovou formou nebo myceliálními fragmenty organismu získanými z čerstvých, aktivně rostoucích kultur organismu. Vegetativní inokulum se pak přenese do větších tanků.
Nový A-21978C produkující organismus, může být pěstován při teplotách mezi 20 °C až do 40 °C. Optimální produkce antibiotika A-21978C je při teplotách 30 až 32 °C.
Jak je obvyklé při aerobním submersním kultivačním způsobu je sterilní vzduch proháněn kultivačním prostředím. K účinné produkci antibiotik A-21978C procento saturace vzduchem pro výrobu v tancích musí být nad 20 %, přednostně nad 30 % při 30 °C á atmosférickém tlaku.
Pro fermentaci v tanku je výhodné udržovat pH fermentačního média v rozsahu 6,5 až 7,0. To se dosáhne přidáním přiměřených množství, například hydroxidu sodného (v časových stadiích) a chlorovodíkové kyseliny (v pozdějších stadiích).
Výroba antibiotik A-21978C může být sledována v průběhu fermentace testováním vzorků média nebo extraktů mycelia na antibiotickou účinnost proti mikroorganismům, jež jsou na tato antibiotika citlivá. Jedním zkušebním mikroorganismem užitečným v testování těchto antibiotik je Micrococcus luteus. Biologická titrace je s výhodou prováděna pomocí stanovení papírovými disky na agarových plotnách.
Druhou možností je, že pevné části kultury počítaje v to složky média a myselium, mohou být užity bez extrakce nebo separace, ale s výhodou po odstranění vody, jako zdroj antibiotik A-21978C. Například po prokázání A-21978C antibiotické aktivity kultivační medium může být sušeno lyofylisací a namícháno přímo do přísady do krmivá.
Sloučeniny vzorce I jsou výtečné antibakteriální látky.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady:
Příklad 1
Produkce komplexu A-21978C
Zásobní kultura se připraví a udržuje v parní fázi kapalného dusíku. Streptomyces roseosporus NRRL 15998, udržovaný v parní fázi kapalného dusíku se užije k naočkování 50 ml vegetativního živného prostředí následujícího složení:
složka množství % sójový bujón s tryptikázoux 3,0
Dextrin 2,5 voda (deionizovaná) 94,5 xBaltimore Biological Laboratories, Cockeysville MD.
Naočkované živné prostředí se inkubuje v Erlenmeyerových baňkách při teplotě 30 °C celkem 48 hodin na rotační třepačce s výkyvem 5 cm při 250 otáčkách/min. Zralá vegetativní kultura se rozdělí do většího počtu nádobek po 0,5 ml a nádobky se skladují v parné fázi kapalného dusíku.
K získání většího množství stejnorodého materiálu se užije 1 ml kultury, skladované v kapalném dusíku k naočkování 80 ml svrchu uvedeného živného prostředí. Naočkované vegetativní prostředí se inkubuje v Erlenmeyerových baňkách o objemu 250 ml celkem 48 hodin při teplotě 30 °C na rotační třepačce o výkyvu 5 cm při 250 otáčkách/min.
ml takové kultury bylo užito k inokulací 450 ml druhostupňového vegetativního růstového prostředí, které má stejné složení jako primární svrchu popsané vegetativní prostředí. Druhostupňové vegetativní prostředí bylo inkubováno v 2-litrových Erlenmeyerových lahvích po dobu 24 hodin při teplotě 30 °C na rotační třepačce rotující s výkyvem 5 cm při 250 otáčkách za minutu.
Jeden litr druhostupňové vegetativní kultury byl užit k inokulací 39 litrů sterilního terciárního prostředí pro získání očkovací kultury s následujícím složením:
složka množství (%) sojová mouka 0,5 extrakt z kvasnic a 0,5 kalciumglukonát 1,0
KClb 0,02
MgSO4.7H2Ob 0,02
FeSO4.7H2Ob 0,0004
Sag 471 (protipěnové činidlo)0 0,03 voda 979.296 aDifco Laboratories, Detroit MI bStopové prvky byly připraveny takto:
FeSO4.7H2O (7,6 g) byl rozpuštěn v konc. HC1 (76 ml).
MgSO4.7H2O (380 g), KCl (380 g) a deionisované vodou byly přidány do celkového objemu 3800 ml. Aby se získaly specifikované minerály, použije se 80 ml roztoku na 39 litrů terciárního stupně.
°Union Carbide, Danbury CT.
Inokulované prostředí bylo inokulováno 24 hodin v nádobě z nerezavé oceli při teplotě 30 °C. Prostředí bylo provzdušňováno sterilním vzduchem rychlostí 0,85 objemu na objem prostředí za minutu a mícháno ^běžným míchadlem při 250 otáčkách za minutu. Tlak v nádobě byl udržován na hodnotě 35 kPa.
Jeden litr inkubovaného terciárního stupně byl použit k inokulaci 119 litrů steriálního výrobního prostředí následujícího složení:
složka množství (%)
| sojová mouka | 2,2 |
| Fe(NH4)2SO4.6H2O | 0,066 |
| dextróza | 0,825 |
| Sag 471 | 0,022 |
| bramborový dextrin | 3,3 |
| melasa (blackstrap) | 0,275 |
| voda z vodovodu | 93.312 |
pH bylo upraveno na 7,0 po přidání prvých dvou složek a potom opět po přidání všech složek bezprostředně před sterilisací.
Naočkované výrobní prostředí bylo inkubováno 6 dní v nerezové ocelové nádobě při 30 °C a provzdušňováno sterilním vzduchem rychlostí 0,5 objemu na objem prostředí (min.). Medium bylo protřepáváno konvenčními míchadly při 250 otáčkách/min. od 0 do 15 hodin a při 350 otáčkách/min. po 15 hodinách. pH bylo udržováno na nebo nad 6,5 přidáváním roztoku hydroxidu amonného. Výtěžek A21978C komplexu byl 0,282 g na litr media na konci fermentace. Faktor distribuce je popsán v tabulce 1.
Vliv různých lipidových substrátů na produkci A-21978C fl |—í e
o
I I I I I I O I cCn u
C' σι ι—I CM I oo
U in
U oo
U
CM
O
| 0 | t | Ό | Ό | ||||
| CM | O | O | o | CM | σ | co | m |
| r-1 | Γ' | σ | 00 | o | oo | <—1 | r** |
| i—1 | in | CM | [· | i—1 |
oo
I I 00 I I I I I
I <H I | I I I I
| r- | m | CM | r- | I—1 | co | 00 | CM |
| r- | σ | Γ' | in | σ | r- | r- | |
| τ—1 | t—1 | CM | CM | oo |
| CM | •šP | LD | OD | to | 00 | 00 | i—l |
| r-~ | 1—1 | CM | tn | CM | tn | ||
| CM | i—1 | 1—1 | CM | 1—1 | r—1 |
| CM | Γ | O | to | i—1 | to | to | |
| rH | i—l | r· | LO | sp' | r· | o | 00 |
| i—1 | OO | τ—1 | CM | 00 | CM | CM |
| Γ- | to | Γ | tn | 00 | tn | oo | >? |
| >3< | oo | to | oo | to | O | ||
| CM | i—1 | τ—1 | i—1 | 00 | r—1 | CM |
XD >
o fl •H
Li
Λ fl >i fl fl <d fl o
| +> | fl | fl | ti | •H | ||||
| Md | •H | fl | Ή | |—1 | 1—1 | fl | ||
| Li | ι—1 | •H | ι—1 | <D | 4-1 | Φ | fl | |
| 4-> | 0 | i—1 | Φ | W | Ά | tn | •r4 | |
| ω | ω | Φ | ω | >1 | 0 | >1 | i—1 | |
| Λ | >1 | ω | >1 | 44 | G | 44 | Φ | |
| fl | 44 | >1 | 44 | fl | tn | |||
| tn | 44 | Li | 44 | xd | ||||
| 'id | Ά | Φ | Φ | > | 44 | |||
| '>1 | > | Ά | > | 4-1 | Ό | 0 | ||
| > | 0 | > | 0 | tn | S | fl | Ά | |
| 0 | r—1 | 0 | G | Φ | fl | fl | > | |
| Ό | '>1 | >1 | fl | •rd | r—1 | •H | 44 | 0 |
| •H | c | Li | fl | Li | >1 | fl | Φ | Li |
| Cu | Ό | CL | fl | Λ | Λ | 0 | t | fl |
| •H | Md | fl | 0 | fl | 4-> | s | fl | fl |
| fll | >N | 44 | c | 44 | Φ | a | fl | 1—1 |
| t | ||||||||
| (d | ||||||||
| i—1 | ||||||||
| 44 | t—1 | CM | 00 | LD | to | r> | 00 |
aKoncentrace složek ve zfiltrováném prostředí byla stanovena vysokotlakou kapalinovou chromatografii, jednotlivé složky byly prokazovány absorpcí v ultrafialovém světle.
bCQ, Clz C2, C3 a C5 = přírodně se vyskytující 2-21978C faktory;
Cg, C9, C-j^q a C-jj = sloučeniny vzorce I, kde R = Cg, Cg, C1Q a C-L! - acylové skupiny.
cpřírodní faktor CQ df jde zejména o R = n-dekanoyl.
Příklad 2
Výroba komplexu A-21978C v třepacích lahvích
Obecný postup popsaný v příkladu 1 je použit, ale za podmínek použití třepacích lahví s následujícím fermentačním médiem: složka množství (g/litr) glukóza dextrina enzymatický hydrolyzovaný peptonc melasa deiontovaná voda
7.5 h 30 kasein° 5
2.5 až do 1 litru a Stadex 11, A. E. Staley Co., Decatur 1L b NZ Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst NJ c Biosate, Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville ND.
Výtěžek komplexu A-21978C z této fermentace byl 1800 μg na ml kultivačního média.
Biologická účinnost jednotlivých faktorů antibiotika A 21978 bude uvedena v následujících tabulkách, kde v Tabulce 2 je uvedena minimální inhibiční koncentrace /MIC/ pro anaerobní organismy, v Tabulce 3 MIC pro aerobní mikroorganismy, v Tabulce 4 je shrnuto srovnání účinnosti in vivo a in vitro proti některým aerobním mikroorganismům a v Tabulce 5 je uvedena toxicita těchto látek pro myš a krysu.
Tabulka 2
MIC ^g/ml/
Organismus
| /anaerobní/ | C0 | C1 | C2 | C3 | C4 | C5 | Kom- plex |
| Actinomyces israelii | 2 | 4 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 1,0 |
| Clostridium perfringens | 2 | 16 | 8 | 8 | 1,0 | 0,5 | 8 |
| Clostridium septicum | 4 | 4 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 1,0 |
| Eubacterium aerofaciens | 4 | 16 | 8 | 4 | 2 | 0,5 | 8 |
| Peptococcus asaccharolyticus | 4 | 4 | 2 | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 1,0 |
| Peptococcus prevoti | 4 | 2 | 1,0 | <0,5 | 2 | 0,5 | <0,5 |
| Peptostreptococcus anaerobius | 0,25 | 2 | 1,0 | 1,0 | 0,25 | 0,25 | 1,0 |
| Peptostreptococcus intermedius | 2 | 4 | 1,0 | <0,5 | 1,0 | 0,25 | 1,0 |
| Propionibacterium acnes | 1 | 8 | 2 | 1,0 | 0,5 | 0,25 | 2 |
| Bacteriodes fragilis | >128 | >128 | >128 | >128 | >128 | >128 | >128 |
| Fusobacterium symbiosum | 4 | >128 | >128 | 16 | 4 | 2 | >128 |
| Fusobacterium necrophorum | 2 | 64 | 64 | 32 | 4 | 0,5 | >128 |
Tabulka 3
MIC /^g/ml/
Organismus
| /aerobní/ | Komplex | C0 | C1 | C2 | c3 | C4 | C5 |
| Staphylococcus aureus 3055 | 0,13 | 1,0 | 0,5 | 0,13 | 0,06 | 0,25 | 0,13 |
| Streptococcus 282 D | 0,25 | 2,0 | 1,0 | 0,25 | 0,13 | 1,0 | 0,13 |
| Streptococcus pyogenes C203 | 0,13 | 0,25 | 0,13 | 0,13 | 0,25 | 0,13 | 0,06 |
| Streptococcus pneumoniae Park I | 0,13 | 0,5 | 0,13 | 0,25 | 0,13 | 0,5 | 0,06 |
| Viridans Streptococcus 9943 | 0,5 | 1,0 | 0,5 | 1,0 | 0,5 | 1,0 | 0,13 |
| Neisseria genorrhoeae 111076-4 | 8,0 | NT+ | 16,0 | 4,0 | 4,0 | NT | NT |
NT = netestováno
Tabulka 4
Srovnání účinku in vitro a in vivo
| Anti- bioticum | MIC1 | ed50 2 | MIC | ed50 2 | ed503 | MIC | ED50 |
| A21978C1 | 0,5 | 0,22 | 0,13 | 0,064 | 93 | 0,13 | 0,3 |
| A21978C2 | 0,13 | 0,16 | 0,13 | 0,032 | 59 | 0,13 | 0,14 |
| A21978C3 | 0,06 | 0,08 | 0,06 | 0,032 | 66 | 0,03 | 0,09 |
| A21978Cq | 0,25 | 0,16 | 0,5 | 0,88 | |||
| A21978C4 | 0,13 | 0,10 | 0,5 | 0,36 | |||
| A21978C5 | 0,06 | 0,053 | 0,06 | 0,17 | |||
| A21978C | 0,13 | 0,18 | <0,03 | 0,043 | 0,13 | 0,1 | |
| komplex Erythromy- cin | 0,13 | 0,5 | 0,13 | 0,64 | 0,5 | 7,3 |
1 MIC = minimální inhibiční koncentrace v p.g/ml v ředění na agaru
O podkožně o , peroralně
Tabulka 5
Toxicita A-21978C
LD5q /mg/kg/
Myš Krysa
A-21978C IV SC IV
| Faktor | C1 | > 250 | > 365 | 479 | + | 32 |
| Faktor | C2 | 150 - 250 | 175 | 204 | + | 17 |
| Faktor | C3 | < 50 | 70 - 75 | < | 160 | |
| Komplex | 150 | 175 - 190 | 169 | + | 10 |
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob výroby komplexu antibiotika A-21978C ve formě komplexu nebo jeho faktorů pěstováním mikroorganismu v živném prostředí, obsahujícím využitelné zdroje uhlíku, dusíku a anorganických solí v submersní kultuře za aerobních podmínek, vyznačující se tím, že se v živném prostředí pěstuje Streptomyces roseosporus NRRL 15998 nebo jeho mutanta, varianta nebo rekombinanta, produkující uvedené antibiotikum při teplotě 20 až 40 °C a pH 6,5 až 7,0, načež se popřípadě komplex antibiotika A-21978C oddělí a popřípadě se z komplexu izolují jeho jednotlivé faktory.
- 2. Biologicky čistá kultura Streptomyces roseosporus NRRL 15998 nebo její mutanta, varianta nebo rekombinanta.
- 3. Streptomyces roseosporus NRRL 15998.Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US65897984A | 1984-10-09 | 1984-10-09 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS819286A3 CS819286A3 (en) | 1992-03-18 |
| CS276983B6 true CS276983B6 (en) | 1992-11-18 |
Family
ID=24643546
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS857198A CS276978B6 (en) | 1984-10-09 | 1985-10-08 | Process for preparing a-21978c antibiotic derivative |
| CS868192A CS276983B6 (en) | 1984-10-09 | 1985-10-08 | Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS857198A CS276978B6 (en) | 1984-10-09 | 1985-10-08 | Process for preparing a-21978c antibiotic derivative |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0178152B1 (cs) |
| JP (1) | JPH0787796B2 (cs) |
| KR (1) | KR890000800B1 (cs) |
| CN (2) | CN1051200A (cs) |
| AT (1) | ATE67788T1 (cs) |
| AU (2) | AU4837785A (cs) |
| BG (1) | BG47040A3 (cs) |
| CS (2) | CS276978B6 (cs) |
| CY (1) | CY1633A (cs) |
| DD (2) | DD238068A5 (cs) |
| DE (1) | DE3584218D1 (cs) |
| DK (2) | DK165416C (cs) |
| EG (1) | EG17619A (cs) |
| ES (2) | ES8700862A1 (cs) |
| FI (1) | FI82075C (cs) |
| GR (1) | GR852432B (cs) |
| HK (1) | HK24292A (cs) |
| HU (1) | HU196845B (cs) |
| IE (1) | IE58655B1 (cs) |
| IL (1) | IL76608A (cs) |
| NZ (1) | NZ213731A (cs) |
| PH (1) | PH21217A (cs) |
| PL (1) | PL152359B1 (cs) |
| PT (1) | PT81265B (cs) |
| SG (1) | SG3292G (cs) |
| SU (1) | SU1452484A3 (cs) |
| ZA (1) | ZA857759B (cs) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0294990A3 (en) * | 1987-06-10 | 1990-05-09 | Eli Lilly And Company | Chromatographic purification process |
| US4930494A (en) * | 1988-03-09 | 1990-06-05 | Olympus Optical Co., Ltd. | Apparatus for bending an insertion section of an endoscope using a shape memory alloy |
| US4977083A (en) * | 1988-04-11 | 1990-12-11 | Eli Lilly And Company | Processes for preparing A54145 compounds |
| DE3832362A1 (de) * | 1988-09-23 | 1990-03-29 | Sandoz Ag | Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung |
| AU784755B2 (en) | 1999-12-15 | 2006-06-08 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Daptomycin Analogs as antibacterial agents |
| JP2003517480A (ja) | 1999-12-15 | 2003-05-27 | キュービスト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 抗菌剤としてのリポペプチド |
| US6696412B1 (en) | 2000-01-20 | 2004-02-24 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same |
| US20060014674A1 (en) | 2000-12-18 | 2006-01-19 | Dennis Keith | Methods for preparing purified lipopeptides |
| EP2379580B1 (en) | 2008-12-22 | 2013-10-23 | Cubist Pharmaceuticals, Inc. | Novel antibacterial agents for the treatment of gram positive infections |
| ES2686331T5 (es) | 2009-11-23 | 2024-03-27 | Cubist Pharmaceuticals Llc | Composiciones de lipopéptidos y métodos relacionados |
| CN103857440B (zh) * | 2011-06-22 | 2018-09-25 | 维奥姆生物科学有限公司 | 基于缀合物的抗真菌和抗细菌前药 |
| IT201600127655A1 (it) | 2016-12-16 | 2018-06-16 | Gnosis Spa | Processo per la purificazione di antibiotici lipopolipeptidici |
| CN107964557B (zh) * | 2018-01-17 | 2020-11-20 | 自然资源部第三海洋研究所 | 一种提高芽孢杆菌抗菌脂肽产量的发酵方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4208403A (en) * | 1978-10-16 | 1980-06-17 | Eli Lilly And Company | A-21978 Antibiotics and process for their production |
| IL68700A0 (en) * | 1982-05-21 | 1983-09-30 | Lilly Co Eli | Improvements relating to a-21978c cyclic peptide derivatives and their production |
-
1985
- 1985-10-08 DD DD85281515A patent/DD238068A5/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 ZA ZA857759A patent/ZA857759B/xx unknown
- 1985-10-08 AU AU48377/85A patent/AU4837785A/en not_active Abandoned
- 1985-10-08 EP EP85307185A patent/EP0178152B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 NZ NZ213731A patent/NZ213731A/en unknown
- 1985-10-08 IE IE246685A patent/IE58655B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 ES ES547689A patent/ES8700862A1/es not_active Expired
- 1985-10-08 PL PL1985255683A patent/PL152359B1/pl unknown
- 1985-10-08 DK DK457585A patent/DK165416C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 KR KR1019850007397A patent/KR890000800B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 AT AT85307185T patent/ATE67788T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 PH PH32894A patent/PH21217A/en unknown
- 1985-10-08 HU HU853912A patent/HU196845B/hu unknown
- 1985-10-08 FI FI853910A patent/FI82075C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 IL IL76608A patent/IL76608A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 CN CN90109304A patent/CN1051200A/zh active Pending
- 1985-10-08 GR GR852432A patent/GR852432B/el unknown
- 1985-10-08 CS CS857198A patent/CS276978B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 PT PT81265A patent/PT81265B/pt unknown
- 1985-10-08 JP JP60225925A patent/JPH0787796B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 DE DE8585307185T patent/DE3584218D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-10-08 BG BG071957A patent/BG47040A3/xx unknown
- 1985-10-08 CS CS868192A patent/CS276983B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1985-10-08 EG EG634/85A patent/EG17619A/xx active
- 1985-10-08 SU SU853964395A patent/SU1452484A3/ru active
- 1985-10-08 CN CN85107552A patent/CN1013120B/zh not_active Expired
-
1986
- 1986-03-25 DD DD86288284A patent/DD247023A5/de unknown
- 1986-04-01 ES ES553603A patent/ES8800362A1/es not_active Expired
-
1990
- 1990-04-20 AU AU53752/90A patent/AU634766B2/en not_active Expired
-
1991
- 1991-08-21 DK DK148791A patent/DK165757C/da not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-01-11 SG SG32/92A patent/SG3292G/en unknown
- 1992-04-02 HK HK242/92A patent/HK24292A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-11-06 CY CY1633A patent/CY1633A/xx unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU624458B2 (en) | Macrolide compounds | |
| HU198964B (en) | Process for producing glycopeptide antibiotics and pharmaceutical compositions comprising same | |
| CS276983B6 (en) | Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors | |
| JPH04261140A (ja) | 新規α−グルコシダーゼ阻害物質、プラジマイシンＱ | |
| IL109917A (en) | Lipopeptides derived from Actinoplanes sp. Having pharmacological activity, a process for their production and use | |
| US4800157A (en) | Process for producing the A-21978C antibiotics | |
| USRE32333E (en) | A-21978 Antibiotics and process for their production | |
| US5071749A (en) | Glycopetide antibiotic pa-45052-b | |
| IE841760L (en) | Antibiotics produced by kibdelosporangium aridum | |
| HUT57832A (en) | Process for producing macrolide compound and parasiticidal composition comprising same as active ingredient | |
| IE873390L (en) | Antibiotic a10255 complex | |
| RONG-YANG et al. | NEIHUMICIN, A NEW CYTOTOXIC ANTIBIOTIC FROM MICROMONOSPORA NEIHUENSIS I. THE PRODUCING ORGANISM, FERMENTATION, ISOLATION AND BIOLOGICAL PROPERTIES | |
| EP0235795B1 (en) | Antibiotic f-0769, process for its production, and its use as a growth accelerating and feed efficiency increasing agent and as an antitumour agent | |
| KR870000248B1 (ko) | 항생물질 a39079 인자 s-1의 제조방법 | |
| DK166024B (da) | Antibiotikum a42125, fremgangsmaade til fremstilling deraf, nocardia aerocolonigenes stamme nrrl 18049 til brug ved fremgangsmaaden samt foderpraeparat indeholdende antibiotiket | |
| WO1988000200A2 (en) | Process for the preparation of antibiotics 10381b | |
| CA1274795A (en) | Process for producing the a-21978c antibiotics | |
| CA1090728A (en) | Antibiotic a-7413 mixture comprising factors a,b,c and d and a process for producing it | |
| US5021549A (en) | Physiologically active substances, probestin and prostatin and production thereof | |
| US4608343A (en) | Biologically pure culture of Streptomyces majorciensis Labeda | |
| US4880735A (en) | Process for producing antibiotic A47934 | |
| IE51169B1 (en) | Process for preparing polyether antibiotic | |
| PL152518B1 (pl) | Sposób wytwarzania kompleksu antybiotycznego A-21978C i jego czynników | |
| US3780016A (en) | Dipeptide antibiotic and method for the production thereof | |
| HU189578B (en) | Process for preparing narasin |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20051008 |