CS276983B6 - Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors - Google Patents

Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors Download PDF

Info

Publication number
CS276983B6
CS276983B6 CS868192A CS819286A CS276983B6 CS 276983 B6 CS276983 B6 CS 276983B6 CS 868192 A CS868192 A CS 868192A CS 819286 A CS819286 A CS 819286A CS 276983 B6 CS276983 B6 CS 276983B6
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
those
antibiotic
culture
complex
medium
Prior art date
Application number
CS868192A
Other languages
English (en)
Other versions
CS819286A3 (en
Inventor
Floyd Milton Huber
Richard Louis Pieper
Anthony Joseph Tietz
Tom Edward Eaton
Lynda Maxine Ford
Otis Webster Gofrey Jr
Mary Louise Braun Huber
Milton Joseph Zmijewski
Original Assignee
Lilly Co Eli
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Lilly Co Eli filed Critical Lilly Co Eli
Publication of CS819286A3 publication Critical patent/CS819286A3/cs
Publication of CS276983B6 publication Critical patent/CS276983B6/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Treating Waste Gases (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)

Description

Oblast techniky
Vynález se týká způsobu výroby antibiotika A-21978C ve formě komplexu nebo jeho faktorů a mikroorganismu produkujícího antibiotikum.
Dosavadní stav techniky
Skupina antibiotik A-21978C jsou výborná antibakteriální činidla a lze je vyjádřit obecným vzorcem I
i í?
\/
HC'2
&
(I)
H
Přirozeně se vyskytující A-21978C faktory popsané v US patentu č. 4 331 594 jsou faktory CQ, Clz C2, C3, C4 a Cg. U faktorů Clz C2, C3, C4 a C5 je R ve vzorci I specifická alkanoylová skupina o 10 až 12 atomech uhlíku. A-21978C faktor CQ, dříve považovaný za sloučeninu, která má jediný větvený alkanoylový postranní řetězec o 10 atomech uhlíku, byl rozpoznán jako směs dvou složek v poměru přibližně 2:1. Větší složka má větvený postranní řetězec o 10 atomech uhlíku, menší složka přímý postranní řetězec o 10 atomech uhlíku.
Všeobecně kultury izolované v přirozeném stavu (divoký typ) produkují antibiotikum s nízkými výtěžky. Často je antibiotická produkce chybná. Kmeny mající zvýšenou schopnost a kmeny, které trvale produkují antibiotikum, jsou proto velmi hodnotné. Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je způsob výroby komplexu antibiotika A-21978C ve formě komplexu nebo jeho faktorů pěstováním mikroorganismu v živném prostředí, obsahujícím využitelné zdroje uhlíku, dusíku a anorganických solí v submersní kultuře za aerobních podmínek, přičemž se v živném prostředí pěstuje Streptomyces roseosporus NRRL 15998 nebo jeho mutanta, varianta nebo rekombinanta, produkující uvedené antibiotikum při teplotě 20 až 40 °C a pH 6,5 až 7,0, načež se popřípadě komplex antibiotika A-21978C oddělí a popřípadě se z komplexu izolují jeho jednotlivé faktory.
Streptomyces roseosporus kmen NRRL 15998 (A-21978.65), který rovněž tvoří podstatu vynálezu, je užitečným A-21978C produkující kulturou. Tato kultura je součástí sbírky zásobních kultur Severního regionálního výzkumného centra (Northern Regional Research Center, U.S. Department of Agricultura) Zemědělská výzkumná služba (Agricultural Research Service), Peoria, Illinois 61604, ve které je přístupna veřejnosti pod přírůstkovým číslem NRRL 15998.
Mikroorganismus byl označen A 21978.65. Tento kmen byl vyvinut kmenovou selekcí a mutací z kultury označené A-21978.6 (NRRL 11379). Kmen A-21978.6, který byl studován Frederikem P. Mertzem a Ralphem E. Kastnerem z Lilly Research Laboratoires, byl vyvinut z rodičovského kmene z hory Arrarat v Turecku. Kmen A-21978.6 byl klasifikován jako nový kmen Streptomyces roseosporus, Falcao de Morias a Dalia Maia 1971. Tato klasifikace byla učiněna po srovnání s publikovanými popisy (R.E. Buchanan a N.E. Gibbons, Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, The Williams and Wilkins Company, 8. vydání 1974; a E.B. Shirling a D. Gottlieb, Cooperative Descriptions of Type Strains of Streptomyces, Intern. Journal of Systematic Bacteriology, 808-809, 1972).
Kultura Streptomyces roseorsporus NRRL 11379 a podmínky pro její použití při výrobě A-21978C antibiotik je popsána Robertem L. Hamillem a Marvinem M. Hoehnem v U.S. patentu č. 4 331 594 zahrnutém zde jako odkaz.
Klasifikace byla založena na metodách doporučených pro Mezinárodní Streptomycetový projekt (Ε. B. Shirling a D. Gottlieb
Λ
CS 276983 Β6
Methods of Characterisation of Streptomyces Species, Intern. Journal of Systematic Bacteriology 16, 313 - 340, 1966) současně s některými doplňkovými testy.
Využití uhlíku bylo stanoveno na ISP 9 basálním mediu, ke kterému uhlíkové zdroje byly přidány, aby vytvořily konečnou koncentraci, 1,0 %. Uhlíkové zdroje byly sterilizovány filtrací, basální medium bylo sterilizováno v autoklávu. Plotny byly odčítány po 14 dnech inkubace při teplotě 30 °C. Cukry buněčných stěn byly stanoveny s použitím modifikace metody podle Lechevaliera (M.P. Lechevalier, Chemical Methods as Criteria for the Separation of Actinomycetes into Genera pracovní setkání uspořádané pod patronací Podvýrobu aktinomycet Americké mikrobiologické společnosti Dr. Thomas O. Pridham, Convenor, konané na Institute of Microbiology, Rutgers University, The State University of New Jersey, New Brunswick, New Jersey, 1971. (Isomer diaminopimelové kyseliny byl stanoven s použitím metody Beckera a spol. - B. Becker et al., Rapid Differentiation Between Norcadia and Streptomvces by Paper Chromatography of Whole Cell Hydrolysates, Appl. Microbiol. 11, 421 - 423, 1964). Analýza aminokyselin byla provedena s promytými fragmenty buněčných stěn. Melanoidní pigmenty byly určeny s použitím ISP 1 (Trypronový kvasinkový kultivační bujón ISP 6) peptonový kvasinkový železitý agar), ISP 7 (tyrosinový agar), ISP 7 modifikovaný (ISP 7 bez tyrosinu) a tyrosinovou zkouškou (Yuzuru Mikami a další, Modified Arai and Mikani Melanin Formation Test of Streptomyces, Intern. Journal of Systematic Bacteriology, 27 (3). 290, 1977). Hydrolýza škrobu byla stanovena testováním přítomnosti škrobu jodem.
Teplotní rozsah tolerance chloridu sodného, rozsah pH a antibiotická citlivost byly provedeny s použitím ISP 2 agarového média. Rozsah teplot byl 25, 28, 30, 34, 37, 40, 45, 50 a 55 °C. Tolerance chloridu sodného byla měřena přidáním k agaru v podílu: 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10 a 12%. Vzorky byly inkubovány při 30 °C. Rozsah pH byl měřen úpravou agaru od pH 3.0 až 11,0 při přírůstcích o 1,0 pH jednotku, právě před nasypáním. Antibiotická citlivost byla určena s použitím kotoučů uložených na naočkované agarové plotny.
Jména barev byla určena podle ISCC-NBS metody (K. L. Kelly a D. B. Judd, The ISCC-NBS Methods of Designationg Colors and a Dictionary of Color Names, U.S. Department of Commerce Circ. 553, Washington, D. C., 1955).
Číslice v závorkách odkazují na Tresnerovy a Backusovy barevné serie (H. D. Tresner and E. J. Backus, System of Color Wheals for Streptomyces Taxonomy. Appl. Microbiol. 11. 335 - 338, 1956). Barevná typová označení jsou podtržena. Maerzovy a Paulovy barevné bloky jsou obsaženy v závorkách (A. Maerz a M.
R. Paul, Dictonary of Color, McGraw-Hill Book Company, lne., New York, Ν. Y., 1950).
Morfologie
Morfologie kultury A-21978.6 je tvořena sporoforami, jež jsou Recturs-Flexibilis (RF) klasifikace. Řetězce spor mají více než 10 spor na řetězec. Povrch spor je hladký.
Kultura A-21978.6 je charakterizována, a to vytvářením převážně červené vzdušné sporové masy s červenavěhnědou zadní stranou. Světle hnědý ve vodě rozpustný pigment je rovněž přítomen. Tyto charakteristiky jsou vykazovány na třech ze 14 agarových růstových prostředcích ISP 2, ISP 7, TPO. Tato tři prostředí jsou jediná, jež podporují abudantní vzdušný a vegetativní růst.
Dvě agarová růstová prostředí, ISP 4 a glukosoasparaginový agar, vytvářejí bílé až šedé vzdušné sporové hmoty se žlutou zadní stranou. Žádný ve vodě rozpustný pigment nebyl pozorován. Tato dvě media podporovala dobrý, ale ne abudantní vzdušný a vegetativní růst.
Devět dalších agarových růstových prostředí bylo užito, ale ty poskytovaly chudý až žádný růst a spolupráci. Barva vzdušného mycelia byla-li přítomna, byla v bílé až šedé sérii.
Melanoidní pigmenty jsou nepřítomny. Hlavními složkami buněčné stěny jsou: LL-DAP, glycin, glukóza a ribóza. To značí typ I buněčné stěny a typ C cukrového obrazu (R. E. Buchanan and Ν. E. Gibbons, Eds. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology The Williams Willkins Company, 8th edition, 1974, str. 658).
Následujících pět kultur bylo porovnáno v laboratorních testech s A-21978.6:
Streptomyces albovinaceous ISP 5136, ATCC 15833
Streptomyces cendidus ISP 5141, ATCC 19891
Streptomyces moderatus ISP 5529, ATCC 23443
Streptomyces roseosporus ISP 5122, ATTC 23958
Streptomyces setonii ISP 5395, ATCC 25497
Tyto kultury patří k bílé a červené barevným sériím, mají RF typ sporofořové morfologie, hladkou povrchovou ornamentaci spor a podle ISP popisů jsou melamin negativní a nemají zvláštní barvu zadní strany nebo ve vodě rozpustné pigmenty. Tyto vlastnosti, spolu s utilisací uhlíku a ostatními druhotnými znaky odpovídají kultuře A-21978.6.
Když tyto kultury byly srovnány s A-21978.6 za laboratorních podmínek, čtyři byly zavrhnuty. S. candidus a S. setonii vykazovaly žluté vzdušné sporové masy na mnohých médiích, čímž se odlišovaly od kultury A-21978.6. S. Albovinaceous a S. moderatus vykazovaly tmavou odlišitelnou barvu zadní strany, ve vodě rozpustné pigmenty a produkovaly melanoidní pigmenty, které všechny byly odlišné od kultury A-21978.6. ISP popis S. moderatus vykazuje červenavě hnědou nebo silně hnědou barvu zadní strany, ale nevykazuje takové jaké jsou charakteristické pro S. albovinaceous. Žádná z kultur není uvedena jako melaminpositivní.
Kultura A-21978.6 byla proto klasifikována jako kmen Streptomyces roseosporus, Falcao de Morias a Dalia Maia 1961. Tato klasifikace je založena na srovnání s publikovanými popisy a přímým laboratorními srovnáními. Následující vlastnosti kultur sumarizují přímé srovnávací studie.
Vlastnosti kultur
Morfolofie
A21978.6
S. roseosporus
Sporophory přímé až zahnuté (RF), bez pozorovaných háčků, kliček nebo spirál. Řetězec spor > 10. Povrch spor hladký, jak bylo stanoveno běžnou elektronovou mikroskopií.
Spory: podlouhlé až oválné
Průměr: 0,85 x 1,78 μΜ
Rozsah: 0,65 - 0,97 x x 0,97 - 2,6 μΜ podlouhlé až cylindrické 1,01 X 2,47 μΜ
0,97 - 1,3 x x 1,63 - 3,25 μΜ 'tti
Ό >0)
'Cti 43
Ό 1
><D ><D
3 >
43 C
'(ti 0 '(ti >K
3 +J 3 3
3 , (ti
'(ti r—1 '(ti Ll
>N >N >N 0
Vlastnosti kultur (pokračování) cn
Li
O a
cn o
Φ cn o
Li cn cn °3
Li n
>
(ti >
Li cti n
LO
co rσ i—I
CN
4->
cn •3
Li
N >
44 •P
3 3
ω a)
g g
ui u
•H H
Cl CL
'>(
3 3
44 +J
cn '>1 cn
3 3 3
CL >0 CL
N (ti N
0 3 0
Li N Li
'>1 '>1 '>1 '>1 H '>1
3 Li 3 3 44 3
Ό 43 Ό cn Ό
xti 0 '(ti 3 '(ti O '(ti
>N Ό >N Li >N >N
0
Ή '(ti 43 '(ti
> > g >
44 0 (ti 0
Li >N Li >N
g •3 43 »3
D Li
N N
0) 0 <u U
>L| —- 'Cti >Li '(ti
'(ti Ό '(ti Ό
Ό >CD Ό ><D
CD 3 CD 3
>cn >cn
'>i >cn
Ό
N >
'>!
Li
O
Ό
g '>1
U 3
•rl 44
CL cn
3
'>1 CL
3 N
44 0
cn Li
3
CL '>
Ή N Ή
3 0 3 >CD
44 Li 44 3 44
3 3 43 3
(ti '>1 (ti 0 CD
Ό 3 Ό > g
3 Ό 3 (ti U
43 '(ti 43 g •H
(ti >N '>1 (0 44 CL
Li
·· 43 ··
Ή 0 Ή
3 Ό 3
> >
•H ·· •H
44 '>1 44
(0 3 (ti
44 >cn 44
CD 3 CD
U Ό U
CD N CD
> > >
(0 >
X rd
X
>φ Ό vd >Φ X Φ 'td 4-> β '<d X >Φ
νΰ φ β ι—1 ι—1 e β
I—1 ι—1 Φ X >Ν 4-) X
'rl X ι—1 0 r—i
X Φ tn > >Φ
r—ι Ν ο 0 >
td 04 0 η >Ν Γ** 0
00 4-) β X >
Ο β #**»> td 04 •rl
£ β±4 ι—1 Ρί H i-l 1—1
>Ν 0 0
ϋ •rl β
tn <d >
X
N
Vlastnosti kultur (pokračování) tn β
O
O tn
O
Φ tn
O •
tn
X tn n
N >
<d >
(d
X
Ό <d
X tn co r· cn
X <
X tn °β
Ν >
X
X <d n
X
X
Φ <d
Φ β
O
X
CL
X tn <d
O1 '>1 β
X tn β
CL
N
O <d o
X β
tn <tí >
X
N '>Ί β
X tn β
CL
Ν
Ο
CU tn
H
X β
'>( '>1 '>1 φ
X X β S
β β X tn
X X νΰ •rl
0 υ >Ν CL
>Φ X Mti
xd Φ β
1—I r-Ί Φ
Ή XI ι—Ι
XI Φ Ν
td| ΓΊ—ř 0
X
ο β
5 πΗ r-1
J-1 >Ν
X
X td
4-1
X
Φ tn td tn cl tn
H '>1
Ό
Μ >Φ
β β β
4-> X X X
β β Φ β
td id ι—1 φ
X X X ε
β β >Φ β)
XI X > -Η
(d td tn CL
'td
• xd X
>4 > • >Φ
β> 0 4-) β
>N r~4 X
χ| °β 0
ο| ID M 0 β φ
4-) rH >
β Q 14
Pí ι—1 in φ
>N u_i >0
'>1 Μ '>1 X >Φ
'>1 β β β
β X X X X
>υ tn β β Φ
td '>1 β φ Ή td X
β 14 β CL ε β X X
Ν X X Ν tn X β >φ
0 'td 0 •Η β X >
-ρΗ X >Ν 14 CL td td tn
X X
tn ·· β ··
0 Ή X 'rl
X β td β
> >
·· •rl ·· •rl
'>Ί X '>1 X
β <d β <d
>tn X >tn X
β φ β Φ
X β> X tn
Ν φ Ν φ
> > > >
rozpustný pigment
Φ >
μ
Φ x
«Φ Ό Φ >ιη «φ χ β χ >Ν >Φ >
>Φ ϊ> Φ β >Φ Ό ' Φ «φ χ β ι—I
«Φ φ rH >Ν Φ
χ rH X Ό
χ φ >Φ Φ
X Ν CN > >ιη
Φ| >Φ 0 ΓΌ 0 »Ν Πη*
Ό β τ—1
Φ Φ r*H
ι—1 <**» X ·μ Μ μ 0 jrH>
Vlastnosti kultur (pokračování) tn β
μ o
CL tn o
φ in o
μ cn x
V) «β μ
Ν >
β
Ο β
Ο ε
β ο
c ιη
Φ >
ο ιη μ
φ tr
'>ϊ
'>1 β >ο φ β Ν β X ιη X Ν 0 μ χ
'>1 •μ '>1 β φ
Ό X β ε
β ιη τι &>
X 0 «φ •Η
Ο Ό >Ν X
φ >
μ
Φ
X fa ω
Η
X Μ >φ τι «φ
X φ >
Φ| rH X 0 >Ν
»β μ
0
ο χ
I“) ο
W •μ ε
Ο •μ β
Φ
CP μ
ο β
φ φ
ε φ
χ ο
μ >ιη φ
ιη μ
Φ
CP >1 μ
χ ο
τ) «μ β
X β
φ
τ) β
X
Φ '>1 β
X ιη β
X
Ν
Ο μ
'>1 β
Ό «Φ >Ν
X β
φ ε
&>
Ή
X «φ >Ν fa
W
Η
X >φ 'μ Ό
X Φ χ
XI X is m ·—' ο «φ β
φ
X φ
Ν
Ο
X
ΙΟ σ
γ—Ι
CN
X ιη «β μ
Ν >
χ β
'>1 β >0 Φ '>1 Ό >φ φ ε ϋ1 Ή X '>1 Ν 0 μ '>! τι >φ χ β φ ε &> •μ
'>1 β β β β X
β Ν X X X
>ο φ ιη φ '>1
φ μ χ β '>1 χ β
β X X X μ X X
Ν ιη >φ Ν χ >φ ιη
0 > 0 0 > β
•μ Ό ιη μ >1 Ό ιη X
X μ
ιη ·· χ ·«
0 X 0 Μ
τΙ β τι β
> >
• · μ ·· Ή
X '>1 X
β Φ β φ
>ιη X >ιη X
β φ β φ
Ό εη Ό tn
Ν φ Ν φ
> > > >
,9
xd '2
4-) 1
2 3 >Φ
1—1 Γ—1 2
>N >N Λ
0
>0) • 4J
xd > X 2
i—1 2 P r—1
Ή 2 2 >N
XI CD Λ >
ΛΙ >cn 0 Lf) 0 >N 77?
1 cm’ °2 w
«»·» u Li rH
!5 o X 0 T-1
-P β—-B
Vlastnosti kultur (pokračování) tn
Li
P ω
Φ cn o
Li cn
P cn
Li n
>
>
Li
Λ
MO co rcn r4
CM
4J cn «2
Li
N >
Li (0
P 'X >
O rl
P (4
P cn (U
I r—I o
Li (D
O >1 r4
O
SX
P cn
P
N
O
Li
'X
2 SX
>U 2
2 ><D
2 2
N XS 4-)
Φ 2
•rl SX I“1 Φ
P Li P g
cn X) >Φ P
0 0 > rl
2 2 cn P
X cn
H
1 xd r4 'rl 1
2 XI 2
2 2 Φ r-1 r—l >N xd
Λ >φ • >
m > X 0
rH 0 P >N
_ rH fú 7^ «2 Li
•H X 0
m +4
Li
P
SX >
o •rl cn o
Li
X cn
H
'r| Ή
2 2
4J 4-)
2 2
2 2
2 2
2 2
X) XI
2 1 2 '2
2 2
i—1 • >Φ
>04 2 2
xd 0 X!
XI > ε 0
0 CD 0 >N 77 2 Φ
»2 r-4 >
Li XI Li
X 0 [ Φ
4-) <—> >0
'X +J cn
P rozpustný světlehnědý rozpustný
N 0 'rl SX 2
SX 54 2 >Φ
2 4-> -P 2 44
>O SX 2 2 x: 2
2 SX > Φ 'rl 2 0 Φ
2 Li 0 ε 2. 2 > ε
N XI >N P P 2 2 P
0 »2 rl 2 X2 ε •H
•rl 2 54 P 2 2 4-> P
•P 2
cn ·· 2 ··
0 Ή X3 Ή
2 2 2 2
> >
·· •H ·· •rl
SX 4-1 SX | >
2 2 2 2
>cn -P >cn -P
2 Φ 2 Φ
2 P 2 P
N Φ N Φ
> > > >
i
r—1
>N
0 >φ
Ό >
Φ 3 Ytí
>tn Ό rp
'3 Φ Ή
X > >cn XI
0 m oz '3 3|
•3 Q -P
P rH 3
Pí 0 CZÍí i—1 £
—' P » .wJ >N -
Vlastnosti kultur (pokračování) tn
P
O a
tn o
φ tn
O
P •
w
4->
tn »3
P
N >
>
P
X
P tn '>
β >
O
J4 •P •r-l n
o ε
>
»3
4-1
4J
Φ β
β
Φ m
Ή β
4->
β
Ό
X to co
Γ σι r-4 (Ν
4-1 β
Φ ε
&>
•H a
'>1 β
+j tn a
N o
P >1
Ό
Ή >φ β Φ ι—I
Ό -Ρ >Φ
X >
tn ι
ι—I >Ν ^3 Ό >φ >φ Ό β Φ X r-Ι ο X! -Ρ
Ρ
ΙΤ '> -Ρ 3 β Φ X 'β > Ο β >0 φ I—I X 3 1-3 '>)
Ό
X
Ο
-Ρ β
Φ '>!
Ό
X
'>1 0
β •ΰ ··
'3 Ή
>N β
** > •Η
+J
P β 3
tn >tn 4J
•3 3 Φ
P Ό 13
N Ν Φ
> > >
•Η '>1 β
•Ρ tn
Ν
Ο
Ρ '>ι β
Ό '3 >Ν '>Ί β
Ό *3 >Ν '>1 β
>tn
Ό
Ν >
vegetativní: dosti značný [7L12] mod. chudý bleděžlutozelená světlehnědý rozpustný červenohnědý bleděžlutozelený rozpustný pigment pigment
1 £ r—i >N Xtí 4-4 £ i—1 >N
>1 «
Cn >1
'(tí Cn
Λ >
0 m 0 >N T?
’£ tH
£ fH
X 0 i—1
4-4 Uaí
Vlastnosti kultur (pokračování) tn £
£
O a
tn
O
Φ tn o
£ cn +j tn °£ £
N >
>
£ (tí
Λ
0)
Λί
O
+)
N
O £
ε >
o
O£
N
U
CQ £
£
CP
Cl
'>1 '>1
£ £
Ό
xtí xtí
>N >N
Xtí xtí rd '£
nH Λ
M -Q >Φ
<tí| > (tí
£ •H
CL
>tn
£ (tí
Cn ttí >
·£ fl
O tn £
Φ ε
w
Ή £
4-) £
(tí
Ό £
Λ ttí
4-1 £
Φ ε
Cn •r4
CL '>1 £
4J tn £
CL
N
O £
ID co [ σ 1—i <N c
Ό £ £ Ό
X3 xtí '>1 O >N Ό £ ·· '>1
Ό £
abudantní fL3L6j abudantní žádný rozpustný pigment světlehnědý rozpustný pigment
r£ Ή ,£ M
U £ ϋ £
> >
·· -H ·· -£
'>1 4-) '>1 4-)
4-) £ (0 £ (tí
tn >tn -Ρ >tn 4-1
°£ £ Φ £ Φ
£ Ό tP Ό Cn
N N Φ N Φ
i tí
xtí r—l >N ><U Mtí
1—1 CD 1—1
Ή '(tí 'r-l
Λ Λ tí Λ
Λ T? O ΛΙ
PQ CN CD N
& l±| O 5
-tí —'
Vlastnosti kultur'(pokračování) «3 tí tí a
O
CD
O
Li *
cn
-P »2 tí
N >
(tí >
tí (tí
Λ
-μ tí cd •r) a
tí
tí 4->
(tí 03 tí
tr tí tí (tí
(tí >U ft tr
(tí N ctí
tí O
> N tí '>
0 >
tí •tí '>1 '>1 O
•tí 4-> tí tí tí
tr 03 Λ Ό •H
(tí O O '(tí υ
tí Ό Π >N
(tí rtí
P tr
03 1
(tí r-l
1 xtí O
O r-l • tí
03 'tí >1 CD
O Λ tr 0
Λ! tí Λ <7? '(tí >1 r-l
r—1 PQ 4-1 0
0 CN tí
!S r“l, rtí
I—1 >N
M tí
-P tí (tí t
tí
Λ (0
+) c
CD to rσ>
i—I CN •r!
a 'ttí tí •p tí
P
N
O tí
P •tí tí
N >
'>1 '>1 tí Λ 0 t 'ítí tí '(tí >N '>1
tí X3 ·· tí
0 Ή 43
T3 C t)
·· > •rl ··
'řtí 4-1 '>1
tí (tí tí
>03 tí >03
tí CD tí
n tr n
N CD N
> > >
vegetativní: abudantní [8L12J tma- abudantní [10G3J světlevá gy. hnědá žlutá hnědý rozpustný pigment světlehnědý rozpustný pigment
'(ti '(ti Φ >co O
ι—1 •P
Ή G
£) rp
ΛΙ >N >Φ
ti Φ
§ ι—1
Λ
Vlastnosti kultur (pokračování) co
G
Li &
co
Φ to o
Li cn
G
Φ £
•rl
Ch
-P co •G
P
N >
» '>1 G •P
'>1 CO
G G
>0 Ch
(ti N
G 0
N P
rrl '>1 '>1
4-1 P G
CO Λ t
0 0 '(ti
t ts >N
G
O
G
O £
G
O
G co
Φ >
O (ti •P (ti >0 •n (ti
Li
N (ti >
P (ti
Λ
CT 1
(ti lu
'> >N '(ti
G t
> >Φ >Φ
•rd t G
XSl 1 >Φ rG
1 H 0
1 Λ -P
Φ (ti rd
P o
Ll
CL co
Ll (ti <1 •
co rσ t—i CN p
co •G
Ll
N dušný: abudantní (R) 5cb gy. abudantní (R) 5cb gy žlutožlutorůžová růžová getativní: abudantní ^8L12j dk. gy. abudantní (*12L7j žlutohnědá hnědá hnědý rozpustný pigment hnědý rozpustný pigment •P
G Φ £
Í7>
•rl
Ch '>1
G •P CO G Ch N O Ll '>1 '>1 t G
G 't η 'Φ '>1 O >N
G
Ό ·· '(ti Ή >N G >
·· -rl '>i -P G (ti >co -P G Φ t tn
N Φ N Φ
Utilizace uhlíku
Substrát A21978.6 S.roseosporus
L-arabinosa + +
D-fruktosa + -
D-galaktosa + +
D-glukosa + +
i-Inositol - -
D-Mannitol + -
D-rafinosa - -
L-rhamnosa + ' +
Salicin + +
Sacharosa - -
D-xylosa + +
Klíč:
+ = positivní utilizace
- = negativní utilizace
A21978.6 S.roseosporus (0
03 U
>1 Η 0 γΗ 0 ΙΓ)
Η γ—1 χτ dP
Ό >1 + 1 1 + 40
Λ '(ti 44 Λ Φ rH m ιη 04
u
(ti γΗ ο
03 >1 γΉ dP
+ --4 + 0 1 1 1 1 Ο ι—Ι
Η Ό >1 44 χΰ 44 ,β 4) Γ—1 ιη ιη 04
o
H β
«5 >
OJ +1 β
+J
X
Φ g
O
444 β
X
4) g
O β
O
4->
>1
4-1
4)
N
4) 'Ú >N —
g ω
β o
Φ β
β •Η
O
Η >1 ~ 44
Ο β ν iji ο (ti 43
Ο 'Φ '4) β
>4)
Ό
4)
4-1 β
+1 β Ή θ' 44 Η >0
4) Ό Μ υ > >03 44 44 β Μ
03 g Φ Ό ι“4 0 Pj β (β 03 43 Ν •β
Οϊ >Η Φ β β ω Ο ι-4 Ό Ο Φ 44
0 •Η +) >Η 03 •Η Η 44 Φ 0 Η g Xti
Oj 44 44 (ΰ 03 Ν >Ν 44 Ν Ο
β 03 03 > Ο β >03 Ο 44
Μ 0 0 44 0 • xti. Ή β Ή Η •Η
+1 β 0 Ο >1 Ό > β β Ν β
Ό Oj Oj Ν 44 Ο Ο >Φ Ή 03 Φ Μ
03 Ή •—· g β β β >1 g β Φ
0 •Η Γ—1 Φ Γ—| Ν +1 Φ
(ΰ β r-t LD r~ Γ ω 43 0 Ο Ο 44
(0 0 Oj 0 Μ Η ι—Ι β
-—Ι ι—1 Λ Pj Pj Pj 0 (ΰ 03 Ό Oj Ό
4) U3 ω ω ω >1 44 »β >1 a Φ Φ
> 2 Η Η Η Η E-t Ν Pj W Oj 44 Η
NaCl-tolerance: růst až do ω
Li
CL ω
Φ ω
Li cn co rσ
CN
Citlivost na antibiotika
• •4ti > 0 •d '(ti > 0 '(ti > 0
'(ti '(ti CQ 3
> > > 0 •d •H
0 0 0 '(ti 'Cti 44 i—1 44
t g > > >1 44 CL
•rl cti •d 0 0 rd >1 Φ
rd 44 CQ 3 Ό u 0 CL
0 44 0 Φ •d 0 (ti 0
Ll (ti 44 >1 44 3 Ll 44
r—1 >1 ι—1 CL •d 44 >1
(ti 1 rd 0 Φ g Φ rd
g u CL CL (ti 44 tJi
X cn w
Q
Φ
O (ti
Li
-P
Φ
Φ
O
X
3
Ό Ό
u u U Φ Φ U u tn
3^_ •r-i o 3- 3_
in o CN o O o o o
rd CO O rd o m rd Cd cd
g 3
3 d 3
44 υ •r| CQ
•d 43 •d
44 g 44 υ
0 0 0 >1
•d d rd g
43 43 (ti 0
•d 44 43 u
44 >1 CL cn
3 . d Φ d
H U
03 3 •d u >1 3 •d r-l 3 •d
3 •d g 44 0
d 0 >1 >d
44 >i 44 υ g
(ti g CL (ti 0
44 Φ d u
cn rd d 44 cn
řď 0 44 Φ (ti
s X cn Ed >
Φ υ
•H •H •d >1 '0
N (žádné zóny inhibice)
M 'd CJ
4-1 > 3 •d Φ
-P 44 •d CQ
CQ -d
CQ
Φ Φ
CQ Ll
II II + I
Jisté vlastnosti kmene A-21978.6 se liší od vlastností publikovaných pro S. roseosporus! Kultura A-21978.6 se odlišuje od publikovaných kmenů velikosti spor, vzrůstem na bramboru a mrkvi, NaCl tolerancí a v redukci nitrátů.
A-21978.65 kmen podle tohoto vynálezu má identifikační vlastnosti kmene kmene A-21978.6, ale liší se od něj v množství produkovaného antibiotika A-21978.6. Předchozí kmen při nejlepším produkoval ne více než 100 μg antibiotika A-21978C na ml fermentačního media. Zlepšený A-21978.65 kmen podle tohoto vynálezu produkuje nejméně 2,5 x větší množství při fermentaoi v tancích a produkoval více než 18 při fermentací v třepacích lahvích. S touto zvýšenou A-21978C produkující vlastností nový kmen poskytuje značně zlepšenou metodu k získání těchto antibiotik.
Tak jako je to běžné i u ostatních organismů, vlastnosti nové A-21978C produkující kultury podle tohoto vynálezu, Streptomyces roseosporu NRRL 15998 podléhají změnám. Rekombinanty, varianty a mutanty kmene NRRL 15998 mohou být získány různými mutageny jako ultrafialovými paprsky, X-paprsky, Vysokofrekvenčními vlnami, radioaktivním zářením a chemikáliemi. Přirozené a indukované varianty, mutanty a rekombinanty Streptomyces roseosporus NRRL 15998, které si podržují vlastnost produkce antibiotik A-21978C ve vysokém výtěžku, mohou být rovněž použity při provádění způsobu podle vynálezu.
Živné prostředí, užité ke vzrůstu Streptomyces roseosporus NRRL 15998 kultury, může být kterékoliv z řady médií. Pro ekonomii ve výrobě, optimální výtěžek a snadnost isolace produktu jsou však jistá kultivační média preferována. Tak například preferovaným zdrojem uhlíku při fermentaoi ve velkém měřítku je tapiokový (západoindické ságo), dextrin, ačkoliv glukosa, fruktosa, galaktosa, maltosa, mannosa, olej z bavlněných semen, methyloleát, glycerol, čištěný sojový olej a podobně mohou být užity rovněž. Preferovaným zdrojem dusíku je enzymaticky hydrolysovaný kasein, ačkoliv rozpustný masový pepton, sojová mouka, sojový hydrolysát, sojová krupice, kvasinky, aminokyseliny jako L-asparagin a DL-leucin a podobné jsou rovněž užitečné. Živné anorganické sole, jež mohou být zahrnuty do kultivačního média, jsou rozpustné sole poskytující draslík, amoniumchlorid, sulfát, nitrát a podobné ionty. Mezi nimi K2SO4 je zejména užitný pro produkci antibiotika. Melasový popel, popelový dialysát a syntetická minerální směs jsou rovněž užitečné.
K výrobě antibiotika A-21978C je výhodné používat destilovanou nebo deionisovanou vodu do fermentačního media. Některé minerály ve vodě z vodovodu, jako je například kalcium a uhličitany, znesnadňují výrobu antibiotika.
Základní stopové prvky jsou také nezbytné pro růst a vývoj organismu a musí být zavzaty do kultivačního media. Takové stopové prvky obecně se objevují jako nečistoty v ostatních složkách média v množství dostatečném splnit růstové požadavky organismu.
Přidání malého množství (např. 0,2 ml/litr) protipěnového činidla, jakým je propylenglykol, k fermentačnímu médiu ve velkém může být nezbytné, když pěnění začne vytvářet těžkosti.
K výrobě velkých množství antibiotika A-21978C je s výhodou používáno submersní aerobní fermentace v tancích. Malá množství antibiotik A-21978C mohou být získána z kultur v třepacích lahvích. Pro časové zpoždění v produkci antibiotika běžně spojeného s inokulaci velkých tanků sporovou formou organismu je lepší použít vegetativní inokulum. Vegetativní inokulum se připraví inokulaci malého objemu kultivačního media sporovou formou nebo myceliálními fragmenty organismu získanými z čerstvých, aktivně rostoucích kultur organismu. Vegetativní inokulum se pak přenese do větších tanků.
Nový A-21978C produkující organismus, může být pěstován při teplotách mezi 20 °C až do 40 °C. Optimální produkce antibiotika A-21978C je při teplotách 30 až 32 °C.
Jak je obvyklé při aerobním submersním kultivačním způsobu je sterilní vzduch proháněn kultivačním prostředím. K účinné produkci antibiotik A-21978C procento saturace vzduchem pro výrobu v tancích musí být nad 20 %, přednostně nad 30 % při 30 °C á atmosférickém tlaku.
Pro fermentaci v tanku je výhodné udržovat pH fermentačního média v rozsahu 6,5 až 7,0. To se dosáhne přidáním přiměřených množství, například hydroxidu sodného (v časových stadiích) a chlorovodíkové kyseliny (v pozdějších stadiích).
Výroba antibiotik A-21978C může být sledována v průběhu fermentace testováním vzorků média nebo extraktů mycelia na antibiotickou účinnost proti mikroorganismům, jež jsou na tato antibiotika citlivá. Jedním zkušebním mikroorganismem užitečným v testování těchto antibiotik je Micrococcus luteus. Biologická titrace je s výhodou prováděna pomocí stanovení papírovými disky na agarových plotnách.
Druhou možností je, že pevné části kultury počítaje v to složky média a myselium, mohou být užity bez extrakce nebo separace, ale s výhodou po odstranění vody, jako zdroj antibiotik A-21978C. Například po prokázání A-21978C antibiotické aktivity kultivační medium může být sušeno lyofylisací a namícháno přímo do přísady do krmivá.
Sloučeniny vzorce I jsou výtečné antibakteriální látky.
Vynález bude osvětlen následujícími příklady:
Příklad 1
Produkce komplexu A-21978C
Zásobní kultura se připraví a udržuje v parní fázi kapalného dusíku. Streptomyces roseosporus NRRL 15998, udržovaný v parní fázi kapalného dusíku se užije k naočkování 50 ml vegetativního živného prostředí následujícího složení:
složka množství % sójový bujón s tryptikázoux 3,0
Dextrin 2,5 voda (deionizovaná) 94,5 xBaltimore Biological Laboratories, Cockeysville MD.
Naočkované živné prostředí se inkubuje v Erlenmeyerových baňkách při teplotě 30 °C celkem 48 hodin na rotační třepačce s výkyvem 5 cm při 250 otáčkách/min. Zralá vegetativní kultura se rozdělí do většího počtu nádobek po 0,5 ml a nádobky se skladují v parné fázi kapalného dusíku.
K získání většího množství stejnorodého materiálu se užije 1 ml kultury, skladované v kapalném dusíku k naočkování 80 ml svrchu uvedeného živného prostředí. Naočkované vegetativní prostředí se inkubuje v Erlenmeyerových baňkách o objemu 250 ml celkem 48 hodin při teplotě 30 °C na rotační třepačce o výkyvu 5 cm při 250 otáčkách/min.
ml takové kultury bylo užito k inokulací 450 ml druhostupňového vegetativního růstového prostředí, které má stejné složení jako primární svrchu popsané vegetativní prostředí. Druhostupňové vegetativní prostředí bylo inkubováno v 2-litrových Erlenmeyerových lahvích po dobu 24 hodin při teplotě 30 °C na rotační třepačce rotující s výkyvem 5 cm při 250 otáčkách za minutu.
Jeden litr druhostupňové vegetativní kultury byl užit k inokulací 39 litrů sterilního terciárního prostředí pro získání očkovací kultury s následujícím složením:
složka množství (%) sojová mouka 0,5 extrakt z kvasnic a 0,5 kalciumglukonát 1,0
KClb 0,02
MgSO4.7H2Ob 0,02
FeSO4.7H2Ob 0,0004
Sag 471 (protipěnové činidlo)0 0,03 voda 979.296 aDifco Laboratories, Detroit MI bStopové prvky byly připraveny takto:
FeSO4.7H2O (7,6 g) byl rozpuštěn v konc. HC1 (76 ml).
MgSO4.7H2O (380 g), KCl (380 g) a deionisované vodou byly přidány do celkového objemu 3800 ml. Aby se získaly specifikované minerály, použije se 80 ml roztoku na 39 litrů terciárního stupně.
°Union Carbide, Danbury CT.
Inokulované prostředí bylo inokulováno 24 hodin v nádobě z nerezavé oceli při teplotě 30 °C. Prostředí bylo provzdušňováno sterilním vzduchem rychlostí 0,85 objemu na objem prostředí za minutu a mícháno ^běžným míchadlem při 250 otáčkách za minutu. Tlak v nádobě byl udržován na hodnotě 35 kPa.
Jeden litr inkubovaného terciárního stupně byl použit k inokulaci 119 litrů steriálního výrobního prostředí následujícího složení:
složka množství (%)
sojová mouka 2,2
Fe(NH4)2SO4.6H2O 0,066
dextróza 0,825
Sag 471 0,022
bramborový dextrin 3,3
melasa (blackstrap) 0,275
voda z vodovodu 93.312
pH bylo upraveno na 7,0 po přidání prvých dvou složek a potom opět po přidání všech složek bezprostředně před sterilisací.
Naočkované výrobní prostředí bylo inkubováno 6 dní v nerezové ocelové nádobě při 30 °C a provzdušňováno sterilním vzduchem rychlostí 0,5 objemu na objem prostředí (min.). Medium bylo protřepáváno konvenčními míchadly při 250 otáčkách/min. od 0 do 15 hodin a při 350 otáčkách/min. po 15 hodinách. pH bylo udržováno na nebo nad 6,5 přidáváním roztoku hydroxidu amonného. Výtěžek A21978C komplexu byl 0,282 g na litr media na konci fermentace. Faktor distribuce je popsán v tabulce 1.
Vliv různých lipidových substrátů na produkci A-21978C fl |—í e
o
I I I I I I O I cCn u
C' σι ι—I CM I oo
U in
U oo
U
CM
O
0 t Ό Ό
CM O O o CM σ co m
r-1 Γ' σ 00 o oo <—1 r**
i—1 in CM [· i—1
oo
I I 00 I I I I I
I <H I | I I I I
r- m CM r- I—1 co 00 CM
r- σ Γ' in σ r- r-
τ—1 t—1 CM CM oo
CM •šP LD OD to 00 00 i—l
r-~ 1—1 CM tn CM tn
CM i—1 1—1 CM 1—1 r—1
CM Γ O to i—1 to to
rH i—l r· LO sp' r· o 00
i—1 OO τ—1 CM 00 CM CM
Γ- to Γ tn 00 tn oo >?
>3< oo to oo to O
CM i—1 τ—1 i—1 00 r—1 CM
XD >
o fl •H
Li
Λ fl >i fl fl <d fl o
+> fl fl ti •H
Md •H fl Ή |—1 1—1 fl
Li ι—1 •H ι—1 <D 4-1 Φ fl
4-> 0 i—1 Φ W Ά tn •r4
ω ω Φ ω >1 0 >1 i—1
Λ >1 ω >1 44 G 44 Φ
fl 44 >1 44 fl tn
tn 44 Li 44 xd
'id Ά Φ Φ > 44
'>1 > Ά > 4-1 Ό 0
> 0 > 0 tn S fl Ά
0 r—1 0 G Φ fl fl >
Ό '>1 >1 fl •rd r—1 •H 44 0
•H c Li fl Li >1 fl Φ Li
Cu Ό CL fl Λ Λ 0 t fl
•H Md fl 0 fl 4-> s fl fl
fll >N 44 c 44 Φ a fl 1—1
t
(d
i—1
44 t—1 CM 00 LD to r> 00
aKoncentrace složek ve zfiltrováném prostředí byla stanovena vysokotlakou kapalinovou chromatografii, jednotlivé složky byly prokazovány absorpcí v ultrafialovém světle.
bCQ, Clz C2, C3 a C5 = přírodně se vyskytující 2-21978C faktory;
Cg, C9, C-j^q a C-jj = sloučeniny vzorce I, kde R = Cg, Cg, C1Q a C-L! - acylové skupiny.
cpřírodní faktor CQ df jde zejména o R = n-dekanoyl.
Příklad 2
Výroba komplexu A-21978C v třepacích lahvích
Obecný postup popsaný v příkladu 1 je použit, ale za podmínek použití třepacích lahví s následujícím fermentačním médiem: složka množství (g/litr) glukóza dextrina enzymatický hydrolyzovaný peptonc melasa deiontovaná voda
7.5 h 30 kasein° 5
2.5 až do 1 litru a Stadex 11, A. E. Staley Co., Decatur 1L b NZ Amine A, Humko Sheffield Chemical, Lyndhurst NJ c Biosate, Baltimore Biological Laboratories, Cockeysville ND.
Výtěžek komplexu A-21978C z této fermentace byl 1800 μg na ml kultivačního média.
Biologická účinnost jednotlivých faktorů antibiotika A 21978 bude uvedena v následujících tabulkách, kde v Tabulce 2 je uvedena minimální inhibiční koncentrace /MIC/ pro anaerobní organismy, v Tabulce 3 MIC pro aerobní mikroorganismy, v Tabulce 4 je shrnuto srovnání účinnosti in vivo a in vitro proti některým aerobním mikroorganismům a v Tabulce 5 je uvedena toxicita těchto látek pro myš a krysu.
Tabulka 2
MIC ^g/ml/
Organismus
/anaerobní/ C0 C1 C2 C3 C4 C5 Kom- plex
Actinomyces israelii 2 4 1,0 1,0 1,0 0,5 1,0
Clostridium perfringens 2 16 8 8 1,0 0,5 8
Clostridium septicum 4 4 1,0 1,0 1,0 0,5 1,0
Eubacterium aerofaciens 4 16 8 4 2 0,5 8
Peptococcus asaccharolyticus 4 4 2 1,0 1,0 0,5 1,0
Peptococcus prevoti 4 2 1,0 <0,5 2 0,5 <0,5
Peptostreptococcus anaerobius 0,25 2 1,0 1,0 0,25 0,25 1,0
Peptostreptococcus intermedius 2 4 1,0 <0,5 1,0 0,25 1,0
Propionibacterium acnes 1 8 2 1,0 0,5 0,25 2
Bacteriodes fragilis >128 >128 >128 >128 >128 >128 >128
Fusobacterium symbiosum 4 >128 >128 16 4 2 >128
Fusobacterium necrophorum 2 64 64 32 4 0,5 >128
Tabulka 3
MIC /^g/ml/
Organismus
/aerobní/ Komplex C0 C1 C2 c3 C4 C5
Staphylococcus aureus 3055 0,13 1,0 0,5 0,13 0,06 0,25 0,13
Streptococcus 282 D 0,25 2,0 1,0 0,25 0,13 1,0 0,13
Streptococcus pyogenes C203 0,13 0,25 0,13 0,13 0,25 0,13 0,06
Streptococcus pneumoniae Park I 0,13 0,5 0,13 0,25 0,13 0,5 0,06
Viridans Streptococcus 9943 0,5 1,0 0,5 1,0 0,5 1,0 0,13
Neisseria genorrhoeae 111076-4 8,0 NT+ 16,0 4,0 4,0 NT NT
NT = netestováno
Tabulka 4
Srovnání účinku in vitro a in vivo
Anti- bioticum MIC1 ed50 2 MIC ed50 2 ed503 MIC ED50
A21978C1 0,5 0,22 0,13 0,064 93 0,13 0,3
A21978C2 0,13 0,16 0,13 0,032 59 0,13 0,14
A21978C3 0,06 0,08 0,06 0,032 66 0,03 0,09
A21978Cq 0,25 0,16 0,5 0,88
A21978C4 0,13 0,10 0,5 0,36
A21978C5 0,06 0,053 0,06 0,17
A21978C 0,13 0,18 <0,03 0,043 0,13 0,1
komplex Erythromy- cin 0,13 0,5 0,13 0,64 0,5 7,3
1 MIC = minimální inhibiční koncentrace v p.g/ml v ředění na agaru
O podkožně o , peroralně
Tabulka 5
Toxicita A-21978C
LD5q /mg/kg/
Myš Krysa
A-21978C IV SC IV
Faktor C1 > 250 > 365 479 + 32
Faktor C2 150 - 250 175 204 + 17
Faktor C3 < 50 70 - 75 < 160
Komplex 150 175 - 190 169 + 10

Claims (3)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Způsob výroby komplexu antibiotika A-21978C ve formě komplexu nebo jeho faktorů pěstováním mikroorganismu v živném prostředí, obsahujícím využitelné zdroje uhlíku, dusíku a anorganických solí v submersní kultuře za aerobních podmínek, vyznačující se tím, že se v živném prostředí pěstuje Streptomyces roseosporus NRRL 15998 nebo jeho mutanta, varianta nebo rekombinanta, produkující uvedené antibiotikum při teplotě 20 až 40 °C a pH 6,5 až 7,0, načež se popřípadě komplex antibiotika A-21978C oddělí a popřípadě se z komplexu izolují jeho jednotlivé faktory.
  2. 2. Biologicky čistá kultura Streptomyces roseosporus NRRL 15998 nebo její mutanta, varianta nebo rekombinanta.
  3. 3. Streptomyces roseosporus NRRL 15998.
    Konec dokumentu
CS868192A 1984-10-09 1985-10-08 Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors CS276983B6 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US65897984A 1984-10-09 1984-10-09

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS819286A3 CS819286A3 (en) 1992-03-18
CS276983B6 true CS276983B6 (en) 1992-11-18

Family

ID=24643546

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS868192A CS276983B6 (en) 1984-10-09 1985-10-08 Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors
CS857198A CS276978B6 (en) 1984-10-09 1985-10-08 Process for preparing a-21978c antibiotic derivative

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS857198A CS276978B6 (en) 1984-10-09 1985-10-08 Process for preparing a-21978c antibiotic derivative

Country Status (27)

Country Link
EP (1) EP0178152B1 (cs)
JP (1) JPH0787796B2 (cs)
KR (1) KR890000800B1 (cs)
CN (2) CN1051200A (cs)
AT (1) ATE67788T1 (cs)
AU (2) AU4837785A (cs)
BG (1) BG47040A3 (cs)
CS (2) CS276983B6 (cs)
CY (1) CY1633A (cs)
DD (2) DD238068A5 (cs)
DE (1) DE3584218D1 (cs)
DK (2) DK165416C (cs)
EG (1) EG17619A (cs)
ES (2) ES8700862A1 (cs)
FI (1) FI82075C (cs)
GR (1) GR852432B (cs)
HK (1) HK24292A (cs)
HU (1) HU196845B (cs)
IE (1) IE58655B1 (cs)
IL (1) IL76608A (cs)
NZ (1) NZ213731A (cs)
PH (1) PH21217A (cs)
PL (1) PL152359B1 (cs)
PT (1) PT81265B (cs)
SG (1) SG3292G (cs)
SU (1) SU1452484A3 (cs)
ZA (1) ZA857759B (cs)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0294990A3 (en) * 1987-06-10 1990-05-09 Eli Lilly And Company Chromatographic purification process
US4930494A (en) * 1988-03-09 1990-06-05 Olympus Optical Co., Ltd. Apparatus for bending an insertion section of an endoscope using a shape memory alloy
US4977083A (en) * 1988-04-11 1990-12-11 Eli Lilly And Company Processes for preparing A54145 compounds
DE3832362A1 (de) * 1988-09-23 1990-03-29 Sandoz Ag Neue cyclopeptolide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
JP2003517480A (ja) 1999-12-15 2003-05-27 キュービスト ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 抗菌剤としてのリポペプチド
CN1425025A (zh) 1999-12-15 2003-06-18 卡比斯特制药公司 作为抗菌剂的新颖的脂肽
US6696412B1 (en) * 2000-01-20 2004-02-24 Cubist Pharmaceuticals, Inc. High purity lipopeptides, Lipopeptide micelles and processes for preparing same
US20060014674A1 (en) 2000-12-18 2006-01-19 Dennis Keith Methods for preparing purified lipopeptides
BRPI0923567A2 (pt) 2008-12-22 2016-09-27 Cubist Pharm Inc agentes antibactericidas novos para o tratamento de infecções gram positivas
TWI606838B (zh) 2009-11-23 2017-12-01 庫比斯特製藥有限責任公司 達托黴素（ｄａｐｔｏｍｙｃｉｎ）組合物及相關方法
EA032840B8 (ru) 2011-06-22 2020-06-18 Вайоми Терапеутикс Лимитед Пролекарства на основе конъюгатов противогрибковых агентов и их применение
IT201600127655A1 (it) 2016-12-16 2018-06-16 Gnosis Spa Processo per la purificazione di antibiotici lipopolipeptidici
CN107964557B (zh) * 2018-01-17 2020-11-20 自然资源部第三海洋研究所 一种提高芽孢杆菌抗菌脂肽产量的发酵方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4208403A (en) * 1978-10-16 1980-06-17 Eli Lilly And Company A-21978 Antibiotics and process for their production
IL68700A0 (en) * 1982-05-21 1983-09-30 Lilly Co Eli Improvements relating to a-21978c cyclic peptide derivatives and their production

Also Published As

Publication number Publication date
CS719885A3 (en) 1992-03-18
HUT39782A (en) 1986-10-29
EP0178152A3 (en) 1988-11-02
KR860003335A (ko) 1986-05-23
DD247023A5 (de) 1987-06-24
ES8700862A1 (es) 1986-11-16
FI853910L (fi) 1986-04-10
JPH0787796B2 (ja) 1995-09-27
FI853910A0 (fi) 1985-10-08
DE3584218D1 (de) 1991-10-31
GR852432B (cs) 1986-02-10
IE852466L (en) 1986-04-09
DK165416C (da) 1993-04-05
DK148791A (da) 1991-08-21
DK148791D0 (da) 1991-08-21
ES8800362A1 (es) 1987-11-01
HK24292A (en) 1992-04-10
DK457585D0 (da) 1985-10-08
SG3292G (en) 1992-03-20
CS276978B6 (en) 1992-11-18
IL76608A (en) 1991-03-10
DK165757B (da) 1993-01-11
SU1452484A3 (ru) 1989-01-15
NZ213731A (en) 1988-04-29
CN85107552A (zh) 1987-05-20
PH21217A (en) 1987-08-21
IE58655B1 (en) 1993-11-03
AU5375290A (en) 1990-11-01
IL76608A0 (en) 1986-02-28
EP0178152A2 (en) 1986-04-16
BG47040A3 (en) 1990-04-16
ATE67788T1 (de) 1991-10-15
DD238068A5 (de) 1986-08-06
ES547689A0 (es) 1986-11-16
PL152359B1 (en) 1990-12-31
FI82075C (fi) 1991-01-10
ZA857759B (en) 1987-05-27
HU196845B (en) 1989-01-30
EP0178152B1 (en) 1991-09-25
JPS6192588A (ja) 1986-05-10
DK457585A (da) 1986-04-10
AU4837785A (en) 1986-04-17
EG17619A (en) 1991-03-30
DK165757C (da) 1993-06-07
FI82075B (fi) 1990-09-28
ES553603A0 (es) 1987-11-01
PT81265A (en) 1985-11-01
KR890000800B1 (ko) 1989-04-07
CY1633A (en) 1992-11-06
CN1013120B (zh) 1991-07-10
DK165416B (da) 1992-11-23
AU634766B2 (en) 1993-03-04
CN1051200A (zh) 1991-05-08
PT81265B (pt) 1988-02-17
PL255683A1 (en) 1986-07-29
CS819286A3 (en) 1992-03-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU624458B2 (en) Macrolide compounds
HU198964B (en) Process for producing glycopeptide antibiotics and pharmaceutical compositions comprising same
CS276983B6 (en) Process for preparing a-21978c antibiotic in the form of a complex or its factors
IL109917A (en) Lipopeptides from actinoplanes sp with pharmacological action process for their preparation and the use thereof
JPH04261140A (ja) 新規α−グルコシダーゼ阻害物質、プラジマイシンＱ
US4800157A (en) Process for producing the A-21978C antibiotics
IE873390L (en) Antibiotic a10255 complex
USRE32333E (en) A-21978 Antibiotics and process for their production
US5071749A (en) Glycopetide antibiotic pa-45052-b
IE841760L (en) Antibiotics produced by kibdelosporangium aridum
HUT57832A (en) Process for producing macrolide compound and parasiticidal composition comprising same as active ingredient
RONG-YANG et al. NEIHUMICIN, A NEW CYTOTOXIC ANTIBIOTIC FROM MICROMONOSPORA NEIHUENSIS I. THE PRODUCING ORGANISM, FERMENTATION, ISOLATION AND BIOLOGICAL PROPERTIES
EP0235795B1 (en) Antibiotic f-0769, process for its production, and its use as a growth accelerating and feed efficiency increasing agent and as an antitumour agent
PL87754B1 (cs)
KR870000248B1 (ko) 항생물질 a39079 인자 s-1의 제조방법
DK166024B (da) Antibiotikum a42125, fremgangsmaade til fremstilling deraf, nocardia aerocolonigenes stamme nrrl 18049 til brug ved fremgangsmaaden samt foderpraeparat indeholdende antibiotiket
WO1988000200A2 (en) Process for the preparation of antibiotics 10381b
CA1274795A (en) Process for producing the a-21978c antibiotics
CA1090728A (en) Antibiotic a-7413 mixture comprising factors a,b,c and d and a process for producing it
US5021549A (en) Physiologically active substances, probestin and prostatin and production thereof
IE51169B1 (en) Process for preparing polyether antibiotic
PL152518B1 (pl) Sposób wytwarzania kompleksu antybiotycznego A-21978C i jego czynników
US3780016A (en) Dipeptide antibiotic and method for the production thereof
Ohno et al. Improvement of the productivity of elasnin, a specific elastase inhibitor, by Streptomyces noboritoensis KM-2753
HU189578B (en) Process for preparing narasin

Legal Events

Date Code Title Description
IF00 In force as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20051008